KR20000036002A - 혈장 단백질 함유 약제를 제조하는 방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 시트레이트 혈장 또는 시트레이트 함유 혈장 분획물중 원하지 않는 금속이 실질적으로, 함유되지 않는 혈장 단백질 함유 약제를 제조하는 방법에 관한 것이다. 이러한 방법은, 비침전 조건하에서, 혈장 단백질 함유 용액중 시트레이트 및 선택적으로, 시트레이트 결합된 금속을 수용성 모노카르복실레이트 또는 디카르복실레이트, 또는 유기 모노카르복실산 또는 디카르복실산으로 대체시키는 단계, 혈장 단백질(들)을 생성시키는 단계 및 약제를 생성시키는 단계를 포함한다.

Description

혈장 단백질 함유 약제를 제조하는 방법 {PROCESS FOR PRODUCING A PLASMA PROTEIN-CONTAINING MEDICAMENT}

본 발명은 시트레이트화된 혈장 또는 시트레이트 함유 혈장 분획물로부터 혈장 단백질 함유 약제를 제조하는 방법에 관한 것이며, 상기 약제는 실질적으로 원하지 않는 금속을 함유하지 않는다.

35-50g/l의 농도를 갖는 사람 알부민은 혈장의 주요 성분이다. 치료학적 사용에 있어서, 예를 들어, 혈액 또는 혈장의 급성 감소의 경우 또는 혈관운동 조절의 실패의 경우에 알부민이 투여된다는 것은 오랫 동안 공지되어 왔었다. 20%(25%) 알부민 용액의 삼투압이 정상인의 혈청보다 약 4배(5배)이기 때문에, 알부민의 효과는 주로 삼투압을 유지하는 이들의 능력에 기초를 두고 있다.

사람 알부민 제조물은 다중 분별, 예를 들어, 콘(Cohn)에 따른 분별에 의해 사람 혈장으로부터 제조되거나, 재조합 방법에 의해 제조된다. 이들의 제조 동안 사용되는 다양한 물질 때문에, 또는 알부민 용액을 유리 용기에 저장할 경우, 각각의 제조물중의 알부민의 최종 함량이 아주 상당하게 되도록 알부민은 알부민 제조물로 된다.

자연적으로 가장 빈번하게 발생하는 요소중 하나인 알부민은 최근에 사람의 다양한 질병, 주로, 신경 및 뼈 시스템에 관련된 질병과 점점 더 관련된 것으로 알려져 왔다. 폐 및 위장관이 알부민을 흡수하기에 효과적인 벽을 형성하지만, 이 벽은 정맥내 제조물을 수용하는 환자에게 더이상 효과적이지 않으며, 투여된 제조물중에 존재할 수 있는 알루미늄이 아무런 방해 없이 흡수될 것이다. 따라서, 예를 들어, 디.에스. 밀리너(D.S. Milliner) 등의 문헌[N. Engl. J. Med. (1985), 312, pp. 165-167]에는 다량의 알루미늄을 포함하는 어떤 알부민 생성물은 뼈 질환 또는 뇌염을 초래한다는 것이 기재되어 있다. 알루미늄은 또한, 알츠하이머 병과 더욱 관련있다.

따라서, 예를 들어, 알부민 제조물중의 알루미늄 함량을 낮게 유지하고자 하는 노력을 기울여 왔다. 미국 특허 제 5,372,997 호에는, 한편으로는 특정한 유리 용기를 사용하고, 다른 한편으로는 음이온 교환제를 처리함으로써 알부민 제조물중의 알루미늄 함량을 감소시키는 방법이 기재되어 있다. 알루미늄에 불량한 특정 유리를 사용하고, 황산암모늄 용액 또는 아황산으로 이들의 내부 표면을 탈알칼리화시킴으로써, 알루미늄이 유리 용기에 용해되는 것을 방지한다. 게다가, 양이온 교환제로의 처리가 수행된다. 최종적으로, 알부민 용액을 열처리 하기 위해, 일반적으로 사용되는 안정화제, 예를 들어, 나트륨 N-아세틸 트립토판 또는 나트륨 카프릴레이트와 혼합된다.

EP-0 484 464-B1에는 알부민에 결합된 다가의 금속 이온을 1가 금속 이온, 예를 들어, 암모늄 또는 알칼린 금속 이온으로 치환함으로써, 알부민을 정제하는 방법이 기재되어 있다.

또한, 미국 특허 제 5,250,663 호에는 실질적으로 알루미늄을 함유하지 않는 알부민을 수득할 수 있는 방법이 기재되어 있다. 이러한 방법은 예를 들어, 알부민 함유 분획물, 즉, 콘 분획물로 시작되고, 우선 다양한 침전을 수행한다. 안정화제로서 나트륨 카프릴레이트와 10 내지 20% 에탄올의 존재하에 열쇼크 처리를 수행한다. 최종적으로, 이러한 용액을 한외여과 및 투석여과(diafiltration) 처리한다. 투석여과 후, 알루미늄 및 다른 불순물은 제거되며, 3% NaCl, 나트륨 아세테이트, 예를 들어, 나트륨 카프릴레이트 용액과 같은 묽은 염용액이 이러한 투석여과에 사용된다. 이러한 카프필레이트를 사용하면, 염의 교환이 발생하지 않는데, 그 이유는 카프릴레이트가 투석여과 전에 열쇼크 처리를 위해 안정화제로서 이미 혼합되었기 때문이며, 따라서, 제조물중의 시트레이트 이온의 실질적인 양이 그대로 유지될 것이다.

제이.씨. 메이(J.C. May)(1992) 등의 문헌[Vox Sang., 62, pp. 65-69]에 설명된 바와 같이, 알루미늄에 높은 친화력을 갖는 시트레이트 이온의 존재는 알루미늄의 흡입에 실질적인 역할을 수행하며(알.비. 마틴(1986)의 문헌[J. Inorgan. Biochem., 28, pp. 181-187 참조), 따라서, 단순한 시트레이트 이온의 존재는 모든 제조물에 대한 금속 이온 오염의 일반적을 위험성을 갖게한다.

EP-0 696 595-A1에는 카프릴레이트가 알부민의 분별에 사용되는 방법에서 DEAE 세파덱스 크로마토그래피 동안, 시트레이트 이온을 제거하는 방법이 기재되어 있다. 다른 이온에 대한 시트레이트 이온의 단순한 교환은 발생하지 않지만, DEAE 세파덱스 음이온 교환의 높은 비용 때문에, 고가의 시트레이트 분리가 수행된다.

본 발명의 목적은 혈장 단백질 함유 약제에서 원하지 않은 금속을 각각 제거하거나 감소시키는 신규하고, 간단한 방법을 제공하는데 있으며, 이 둘 모두에서 원하지 않은 금속은 제조 방법 동안 제거되고, 금속 함유 용기에 저장하는 동안 마무리된 제조물의 오염은 각각 방지되거나 감소된다.

본 발명에 따라서, 본 목적은 하기 단계를 포함하는 초기에 정의된 종류의 방법에 의해 달성된다:

- 비침전 조건하에, 혈장 단백질 함유 용액중의 시트레이트 및 선택적으로 시트레이트 결합 금속을 수용성 모노카르복실레이트 또는 디카르복실레이트, 또는 모노카르복실산 또는 디카르복실산으로 교환시키는 단계;

- 혈장 단백질(들)을 회수하는 단계; 및

- 약제를 마무리하는 단계.

놀랍게도, 혈장 단백질 함유 용액내에 함유된 음이온이 금속 양이온의 제거에 결정적으로 기여한다는 것을 발견하였다.

미국 특허 제 5,250,663 호에 설명된 방법과는 달리, 시트레이트 함유 용액 또는 시트레이트 함유 침전물에 첨가되는 나트륨 카프릴레이트 뿐만 아니라, 한편으로는 복합된 형태의 결합 금속 이온을 운반할 수 있으며, 다른 한편으로는 제조 방법의 경로내에서 또는 마무리된 약제의 저장 동안 원하는 않는 금속의 분해를 유도하는 시트레이트가 수용성 모노카르복실레이트 또는 디카르복실레이트에 의해 대체된다.

만약, 시트레이트 이온 함유 제조물을 침전시킨 후, 시트레이트 이온이 없는 완충액에서 넣으면, 새로운 용액은 여전히 상당량의 시트레이트 이온을 함유한다는 것은 알려져 있다. 혈장으로부터 약제학적 제조물을 회수하는 대부분의 분별 방법(추출 동안 거의 항상 시트레이트가 첨가됨)은 한 단계 또는 몇 단계의 침전 단계를 포함하기 때문에, 시트레이트 이온에 대한 발명적인 교환 방법은 이미 성립된 공정에 용이하게 통합될 수 있는 간단하고, 저렴하고 효과적인 시트레이트 이온의 제거법으로 이루어진다.

혈장 분획물, 예를 들어, 콘 분별에 따라 수득된 분획물이 제공될 것이다. 알부민의 제조물, 예를 들어, 콘 분별로부터의 알부민 함유 침전물이 사용된다.

가능하면 완전한 시트레이트 교환을 가능하게 하기 위해, 교환 단계는 비침전 조건하에서 수행되어야 하는데, 그 이유는, 그렇지 않으면, 이미 언급된 바와 같이, 시트레이트가 침천된 단백질에 대한 이들의 높은 친화력 때문에 단지 불충분하게 제거될 수 있는 위험이 있기 때문이다. 바람직하게는, 시트레이트의 교환은 제조 방법의 초기에 발생할 것이다.

본 발명에 따른 방법의 바람직한 구체예에 따라, 혈장 단백질 함유 약제로서, 응고작용 인자, 섬유소분해 인자, 면역글로불린, 글리코단백질 및/또는 알부민을 한가지 또는 여러가지 포함하는 약제가 제조된다. 특히, 헤파린, 헤파리노이드 또는 쿠마린 유도체와 같은 항응고제, 스트렙토키나아제, 유로키나아제, 프로-유로키나아제, t-PA 또는 플라스민과 같은 섬유소분해제, 프로-피브리노겐, 프로트롬빈, 인자 Ⅴ, Ⅶ, Ⅷ, Ⅸ, Ⅹ, ⅩⅠ, ⅩⅡ 및 ⅩⅢ(선택적으로, 이들의 활성화된 형태), 빌러브란트씨 인자가 응고 및 섬유소분해 인자로서 여겨질 수 있다. 면역글로불린으로서, 선택적으로, 높은 적정농도의 IgG, IgA, IgM 및 이들의 혼합물 부류의 면역글로불린을 포함하는 다양한 제조물이 제조될 수 있다.

글리코단백질로서, 예를 들어, 오로소뮤코이드가 사용될 수 있다.

바람직하게는, 탄소수가 2 내지 20개인 유기 카르복실산의 염이 시트레이트 교환에 사용되며, 카프릴레이트, 타르트레이트 또는 이들의 혼합물이 특히 바람직하다.

본 발명의 목적에 있어서, 또한, 유기 모노카르복실산 또는 디카르복실산이 모노카르복실레이트 또는 디카르복실레이트로서 인지되는데, 그 이유는, 어쨌튼, 용액중의 시트레이트 교환이 항상 산의 음이온에 대한 것이기 때문이다. 바람직하게는, 탄소수가 2 내지 4개인 유기 모노카르복실산 또는 디카르복실산이 시트레이트를 교환하는데 사용된다.

본 발명에 따른 방법은 혈장 단백질 함유 약제의 제조에 특히 적합한 것으로 입증되었으며, 상기 약제는 임의의 검출가능할 정도의 알루미늄을 함유하지 않음으로써, 특히 이들의 알루미늄 오염에 대해 우수한 특성을 나타낸다.

상기에 언급된 바와 같이, 시트레이트의 교환은 비침전 조건하에 달성되어야 한다. 바람직하게는, 교환 단계는 투석여과, 한외여과 동안, 또는 크로마토그래피 공정 동안 달성되는데, 그 이유는, 이러한 단계가 간단하고, 저렴하고 효과적인 교환에 특히 적합한 것으로 입증되었기 때문이다.

교환 단계 동안의 조건은 사용되는 방법에 의존적이며, 특히, 시트레이트 및 선택적으로 시트레이트 결합된 금속물의 시트레이트 교환이 가능한 완전하게 일어나도록 선택될 것이다. 따라서, 방법을 결정하는 각각의 변수, 특히, 온도, 교환 단계의 기간 및 모노디카르복실레이트 또는 디카르복실레이트, 또는 모노카르복실산 또는 디카르복실산 각각의 농도가 최적이어야 한다.

교환 동안, 온도는 바람직하게는, 0 내지 50℃, 더욱 바람직하게는, 10 내지 30℃, 가장 바람직하게는, 거의 실온이다. 각각의 교환 시간은 특히, 교환될 부피 대 막 표면의 비 및 온도에 특히 의존적이며, 바람직하게는, 30분 이상이며, 특히 바람직한 시간은 30분 내지 몇 시간이다.

일반적으로, 시간과 같은 변수는 본 물질의 각각의 교환 부피에 의존적이다. 바람직하게는, 교환 부피는 초기 용액의 부피의 5배 이상, 가장 바람직하게는, 30배 이상이며, 교환 시간이 이에 따라 선택될 것이다.

모노카르복실레이트 또는 디카르복실레이트, 또는 모노카르복실산 또는 디카르복실산의 농도는 바람직하게는, 0.001 내지 10 mol/l, 가장 바람직하게는, 0.001 내지 1 mol/l이다.

예를 들어, 나트륨 카프릴레이트는 1.0 mmol/l 내지 1.5 mol/l, 바람직하게는, 1.0 mmol/l 내지 25 mmol/l의 농도로 첨가된다.

예를 들어, 나트륨 아세테이트는 1 mmol/l 내지 5.5 mol/l, 바람직하게는, 50 mmol/l 내지 1.0 mol/l의 농도로 첨가된다.

예를 들어, 헥사노산의 나트륨 염은 1.0 mmol/l 내지 1.0 mol/l, 바람직하게는, 5.0 mmol/l 내지 0.1 mol/l의 농도로 첨가된다.

나트륨 타르트레이트는 1.0 mmol/l 내지 1.2 mol/l, 바람직하게는, 10.0 mmol/l 내지 0.2 mol/l의 농도로 첨가될 수 있다.

따라서, 고급 산의 염의 효과적인 양은 0.001 내지 0.1 mol/l로 이미 밝혀졌지만, 저급 산의 염은 바람직하게는, 다소 높은 농도로 첨가된다.

방법에 결정적인 추가적인 변수는 용액의 pH이다. pH는 바람직하게는, 6 내지 8, 가장 바람직하게는, 6.5 내지 7.5이다.

또한, 카르복실레이트 또는 카르복실산 이외에, 각각 예를 들어, 나트륨 또는 칼륨 염과 같은 무기질 염이 용액의 이온 강도를 증가시키기 위해 용액에 첨가될 수 있다. 예를 들어, 4% 이상의 염화나트륨 용액이 함유된다. 게다가, 다양한 완충 염이 함유될 수 있다.

각각의 교환 방법에 대한 재료로서, 특히 시중에서 구입 가능한 재료, 예를 들어, 투석여과 요소, 한외여과 유닛, 다양한 크로마토그래피 겔, 분자 체 등이 사용될 수 있다. 이러한 모든 재료는 유기질 또는 무기질 물질에 기초를 둘 수 있다; 이들은 생물학적 기원의 합성물일 수 있다.

본 발명에 따른 방법은 만약, 혈정 단백질 함유 용액이 교환 전에 정제되고/거나 원심분리된다면, 특히 유리할 것이다.

원료로서 혈장을 기재로하는 모든 약제에 있어서, 존재할 수 있는 바이러스를 불활성화시키는 한 단계 또는 몇 단계가 또한 본 발명에 따른 제조 방법의 범위내에 제공된다.

따라서, 본 발명에 따른 방법의 바람직한 구체예는 혈장 단백질 함유 용액을 교환 전 및/또는 후에 바람직하게는, 열처리하여, 존재할 수 있는 바이러스를 불활성화시키는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 범위내에서 이용될 수 있는 일반적인 바이러스 불활성 처리법은 EP-0 159 311, EP-0 519 901 또는 EP-0 674 531에 기재되어 있다.

만약, 바이러스 불활성 처리 전에, 회수된 혈장 단백질을 염 함량이 낮은 매질, 예를 들어, 물로 추가로 투석 처리하는 것이 특히 적합하다. 이는 모노카르복실레이트 또는 디카르복실레이트의 존재 때문에, 혈장 단백질의 추가적인 안정화 효과를 제공할 수 있다. 혈장 단백질(들)의 회수 및 약제의 마무리를 바람직하게는, 시트레이트 비함유 성분으로 배타적으로 수행하여, 오래 저장할 경우, 금속 이온으로 재개되는 오염을 초래하는, 시트레이트 이온으로의 제조물의 새로운 오염을 피해야한다.

본 발명에 따른 방법이 약제의 저장 동안, 알루미늄 이온을 제거하거나, 알루미늄 이온으로의 재개된 오염을 방지하는데 각각, 특히 적합한 것으로 입증되었다. 또한, 알루미늄형 금속, 카드뮴, 아연, 납, 철 등과 같은 혈장 단백질 함유 약제를 오염시킬 수 있는 것으로 공지된 다른 금속 이온이 효과적으로 감소될 수 있다.

따라서, 본 발명의 목적은 또한, 본 발명에 따라 수득가능하며, 원하지 않는 금속 함량이 원자 흡광 분석으로 측정할 경우, 100㎍/l 미만, 바람직하게는, 10 ㎍/l, 특히, 200 ng/l 미만이며, 이들의 최대 함량이 연장된 기간, 심지어 5년이 넘은 저장 기간 후에도 초과하지 않는 혈장 단백질 함유 약제이다.

본 발명의 혈장 단백질 함유 약제는 당해분야의 가장 변화하는 용기내에 저장될 수 있다. 이러한 용기는, 유리, 합성 물질, 금속 또는 이들의 조합물로 구성될 수 있다. 용기는 또한, 특히 선처리되어, 표면이 예를 들어, 실리콘화될 수 있다. 유리로서, 경질 유리 및 연질 유리(예를 들어, 유리의 분류 USP 23, P. 1781 참조) 둘 모두가 사용될 수 있다.

특히, 본 발명의 혈장 단백질 함유 약제는 경질 유리에 저장될 경우, 원하지 않는 금속의 낮은 함량을 가진다; 특히 바람직하게는, 후자는 100 ㎍/l 미만, 더욱 바람직하게는, 10 ㎍/l 미만, 가장 바람직하게는, 200 ng/l 미만이다.

본 발명은 하기 실시예에 의해 더욱 상세히 설명된 것이며, 그러나, 본 발명은 이것으로 제한되는 것은 아니다.

실시예 1:

순도가 95%를 초과하는 알부민을 함유하는 콘 분획의 침전물을 중성 pH에서 50 g/l의 NaCl에 1+2(w/v; 2 l에 1 kg)으로 용해하였다. 상기 용액을 +4℃에서 재생된 셀룰로오스막으로 물에 대해 연속적으로 투석여과하였다. 여기에, 단백질 g 당 0.1 mmol 카프릴레이트를 첨가하였다.

하기 표 1 a)에서, 카프릴레이트, 타르트레이트, 헥사노산의 염, 또는 아세테이트와 같은 카르복실레이트를 첨가하지 않고, 투석여과 후의, 알루미늄 및 시트레이트의 감소를 나타내었다.

1 a) 카르복실레이트를 첨가하지 않음:

	알루미늄 함량	시트레이트 함량
샘플	㎍/g 단백질	%	μmol/g 단백질	%
투석여과 전	2.802	100.0	166	100.0
투석농축물(Diaconcentration)	0.704	25.1	8.6	5.2

하기 표 1 b)는 0.1mmol 카프릴레이트를 첨가하고, 투석여과 한 후의 알루미늄 감소 및 시트레이트 감소를 나타낸다.

1 b) 카프릴레이트 첨가:

	알루미늄 함량	시트레이트 함량
샘플	㎍/g 단백질	%	μmol/g 단백질	%
투석여과 전	2.999	100.0	139.5	100.0
투석농축물	0.096	3.2	1.1	0.8

표 1 a)의 상기 표, 즉, 카프릴레이트를 첨가하지 않은 것의 상대적인 감소와의 비교는 단백질 g 당 0.1 mmol 카프릴레이트의 첨가에 의해, 예를 들어, 카프릴레이트와 같은 카르복실레이트를 첨가하지 않은 경우보다, 시트레이트 및 알루미늄의 명백히 높은 감소가 달성될 수 있음을 보여준다.

실시예 2:

알부민 함유 침전물을 실시예 1에 설명된 바와 같이 용해한 후, 투석여과하였다. 단백질 g 당 0.5 mmol의 헥사노산의 나트륨 염을 첨가하였다. 투석여과 종료 후, 하기와 같은 알루미늄 및 시트레이트 감소를 나타냈다(표 2).

	알루미늄 함량	시트레이트 함량
샘플	㎍/g 단백질	%	μmol/g 단백질	%
투석여과 전	3.368	100.0	135	100.0
투석농축물	0.127	3.8	1.8	1.3

표 1 a)와 비교하면 명백히 알 수 있듯이, 단백질 g 당 0.5 mmol의 헥사노산의 나트륨염의 첨가에 의해, 헥사노산 염을 첨가하지 않은 경우보다, 시트레이트 및 알루미늄의 명백히 높은 감소가 달성될 수 있다.

실시예 3:

순도가 95%를 초과하는 알부민을 함유하는 콘 분획의 침전물을 중성 pH에서 50 g/l의 NaCl에 1+2(w/v; 2 l에 1 kg)으로 용해하였다. 상기 용액을 +4℃에서 재생된 셀룰로오스막으로 물에 대해 연속적으로 투석여과하였다. 여기에, 단백질 g 당 5 mmol 아세테이트를 첨가하였다.

하기 표 3에서, 단백질 g 당 5 mmol 아세테이트를 첨가하여, 투석여과 후의, 알루미늄 및 시트레이트의 감소를 나타내었다.

	알루미늄 함량	시트레이트 함량
샘플	㎍/g 단백질	%	μmol/g 단백질	%
투석여과 전	3.95	100.0	155	100.0
투석농축물	0.3	7.6	2.6	1.7

표 1 a)와 비교하면 명백히 알 수 있듯이, 단백질 g 당 5 mmol의 아세테이트의 첨가에 의해, 아세테이트를 첨가하지 않은 경우보다, 시트레이트 및 알루미늄의 명백히 높은 감소가 달성될 수 있다.

실시예 4:

알부민 함유 침전물을 실시예 1에 설명된 바와 같이 용해한 후, 투석여과하였다. 단백질 g 당 1.0 mmol의 타르트레이트를 첨가하였다. 투석여과 종료 후, 하기와 같은 알루미늄 및 시트레이트 감소를 나타냈다(표 4).

	알루미늄 함량	시트레이트 함량
샘플	㎍/g 단백질	%	μmol/g 단백질	%
투석여과 전	6.29	100.0	129	100.0
투석농축물	0.62	9.9	1.0	0.8

표 1 a)와 비교하면 명백히 알 수 있듯이, 단백질 g 당 1.0 mmol의 타르트레이트의 첨가에 의해, 타르트레이트를 첨가하지 않은 경우보다, 시트레이트 및 알루미늄의 명백히 높은 감소가 달성될 수 있다.

Claims (13)

1. 시트레이트화된 혈장 또는 시트레이트 함유 혈장 분획물으로부터 혈장 단백질 함유 약제를 제조하는 방법으로서,

   약제는 실질적으로, 원하지 않는 금속을 함유하지 않고, 금속 함유 용기에 저장할 경우, 어떤 금속도 흡수하지 않으며,

   - 비침전 조건하에, 혈장 단백질 함유 용액중의 시트레이트 및 선택적으로, 시트레이트 결합된 금속을 수용성 모노카르복실레이트 또는 디카르복실레이트, 또는 유기 모노카르복실산 또는 디카르복실산으로 교환하는 단계,

   - 혈장 단백질(들)을 회수하는 단계, 및

   -약제를 마무리하는 단계를 포함하는 방법.
2. 제 1 항에 있어서, 혈장 단백질 함유 약제로서, 응고작용 인자, 섬유소분해 인자, 면역글로불린, 글리코단백질 및 알부민으로 구성된 군으로부터 선택된 한가지 또는 여러 가지의 혈장 단백질을 포함하는 약제가 제조됨을 특징으로 하는 방법.
3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 탄소수가 2 내지 20개인 유기 카르복실산의 염이 시트레이트 교환에 사용됨을 특징으로 하는 방법.
4. 제 1 항 내지 제 3 항중의 어느 한 항에 있어서, 카프릴레이트 및/또는 타르트레이트가 시트레이트 교환에 사용됨을 특징으로 하는 방법.
5. 제 1 항 내지 제 3 항중의 어느 한 항에 있어서, 탄소수가 2 내지 4개인 유기 모노카르복실산 또는 디카르복실산이 시트레이트 교환에 사용됨을 특징으로 하는 방법.
6. 제 1 항 내지 제 5 항중의 어느 한 항에 있어서, 실질적으로, 알루미늄을 함유하지 않는 혈장 단백질 함유 약제가 제조됨을 특징으로 하는 방법.
7. 제 1 항 내지 제 6 항중의 어느 한 항에 있어서, 시트레이트의 교환이, 염으로부터 단백질을 분리해낼 수 있는 투석여과(diafiltration), 한외여과, 겔 투과 크로마토그래피 또는 크로마토그래프 분리 동안 각각 달성됨을 특징으로 하는 방법.
8. 제 1 항 내지 제 7 항중의 어느 한 항에 있어서, 시트레이트 교환 전에, 혈장 단백질 함유 용액이 정제되고/거나 농축됨을 특징으로 하는 방법.
9. 제 1 항 내지 제 8 항중의 어느 한 항에 있어서, 시트레이트 교환 전 및/또는 후에, 혈장 단백질 함유 용액이 바람직하게는, 열처리 되어, 존재할 수 있는 바이러스를 불활성화시킴을 특징으로 하는 방법.
10. 제 1 항 내지 제 9 항중의 어느 한 항에 있어서, 바이러스 불활성 처리가 모노카르복실레이트 또는 디카르복실레이트의 존재하에 혈장 단백질의 회수 직후에 수행됨을 특징으로 하는 방법.
11. 제 1 항 내지 제 10 항중의 어느 한 항에 있어서, 약제의 마무리가 시트레이트 비함유 성분으로 배타적으로 수행됨을 특징으로 하는 방법.
12. 제 1 항 내지 제 11 항중의 어느 한 항에 있어서, 시트레이트 교환이 염화나트륨, 바람직하게는, 4중량% 이상의 염화나트륨 용액의 존재하에 달성됨을 특징으로 하는 방법.
13. 제 1 항 내지 제 12 항중의 어느 한 항에 따른 방법에 의해 수득가능한 혈장 단백질 함유 약제로서, 원하지 않는 금속, 특히, 알루미늄의 함량이 100㎍/l 미만, 바람직하게는, 10㎍/l 미만, 특히 200ng/l 미만인 약제.