SK32899A3

SK32899A3 - Process for producing a plasma protein-containing medicament

Info

Publication number: SK32899A3
Application number: SK328-99A
Authority: SK
Inventors: Wolfgang Teschner; Yendra Linnau; Sonja Svatos; Herwig Igel
Original assignee: Immuno Ag
Priority date: 1996-09-16
Filing date: 1997-09-10
Publication date: 1999-08-06
Also published as: US20050249815A1; HUP0002265A2; PT927195E; CN1230967A; NO991198L; CA2265936A1; JP2001500867A; AU4289997A; WO1998012225A3; PL332159A1; AR009582A1; AT403989B; AU732519B2; KR20000036002A; IN187314B; EP0927195B1; HUP0002265A3; DE59710700D1; US8709492B2; IL128770A0

Description

SPÔSOB VÝROBY LIEČIVA, OBSAHUJÚCEHO BIELKOVINU Z PLAZMY A LIEČIVO TÝMTO SPÔSOBOM ZÍSKANÉ

Oblasť techniky

Vynález sa týka spôsobu výroby liečiva, obsahujúceho bielkovinu z plazmy, ktoré je v podstate bez nežiaducich kovov, z citranovej plazmy, alebo frakcie plazmy, obsahujúce citran a liečivá týmto spôsobom získané.

Doterajší stav techniky

Ľudský albumín predstavuje svojou koncentráciou 35 až 50 g/l hlavnú zložku plazmy. Jeho terapeutické použitie je už dlho známe, podávanie albumínu je napríklad indikované pri akútnej strate krvi alebo plazmy, alebo pri zlyhaní vazomotorickej regulácie. Pretože osmotický tlak 20 % (25 %) roztoku albumínu je približne štvornásobný (päťnásobný) tlaku normálneho ľudského séra, účinok albumínu spočíva prevažne v jeho schopnosti upravovať osmotický tlak.

Preparáty s ľudským albumínom sa získavajú z ľudskej plazmy viacnásobnou frakcionáciou, napríklad frakcionáciou podľa Cohna, alebo sa vyrábajú rekombinačným postupom. Vplyvom rôznych materiálov počas výroby, alebo pri skladovaní roztoku albumínu v sklenených nádobách, sa do preparátov s albumínom dostáva hliník, takže konečný obsah hliníka v zodpovedajúcich preparátoch môže byť značný.

Hliník, ktorý je jedným z prvkov, ktoré sa v prírode najčastejšie vyskytujú, sa v poslednej dobe stále častejšie uvádza v súvislosti s rôznymi ochoreniami ľudského tela, prevažne s ochorením nervového a kostného systému. Zatiaľ čo pľúca a gastrointestinálny trakt tvoria účinnú prekážku proti príjmu hliníka, táto prekážka u pacientov, ktorým sú podávané intravenózne preparáty, už nie je účinná a hliník, ktorý je prípadne v podávaných preparátoch, môže byť bez prekážok prijímaný. Tak napríklad D.S.Milliner a kol. (N. Engl. J. Med. (1985),

31180/H

312, s. 165-167) uvádza, že niektoré albumínové produkty s veľkým množstvom hliníka vedú k ochoreniam kostí alebo k encefalitíde. Hliník sa stále častejšie uvádza do súvislosti s Alzheimerovou chorobou.

Preto bolo vyvinuté úsilie, udržovať obsah hliníka, napríklad v preparátoch albumínu, čo najnižší. Zo spisu US-PS 5 372 997 je napríklad známy postup na zníženie obsahu hliníka v albumínových preparátoch použitím špeciálnych sklenených nádob na jednej strane a na druhej strane pomocou spracovania aniónmeniča. Uvoľňovaniu hliníka zo sklenených nádob sa zabráni použitím špeciálneho skla, chudobného na hliník, alebo deakalizáciou vnútorného povrchu roztokom síranu amónneho alebo kyselinou siričitou. Ďalej sa uskutočňuje spracovanie katiónmeničom. Do tepelného spracovania roztoku albumínu sa potom nakoniec pridávajú k tomu vhodné stabilizátory, ako je Nacetyltryptofán sodný, alebo kaprylát sodný.

Zo spisu EP-0 484 464-B1 je známy spôsob čistenia albumínu od viacmocných kovových iónov, ktoré sú na ne viazané tým, že sa nahradia ióny jednomocných kovov, napríklad iónmi amóniovými alebo iónmi alkalických kovov.

Tiež zo spisu US-PS 5 250 663 je známy spôsob, ktorým sa môže získať albumín v podstate bez hliníka. Pri tomto spôsobe sa vychádza z frakcie, obsahujúcej albumín, napríklad zCohnovej frakcie a najprv sa uskutočňujú rôzne zrážania. Medzi iným sa uskutočňuje spracovanie tepelným nárazom v prítomnosti kaprylátu sodného ako stabilizátora a 10 až 20 % etanolu. Tento roztok sa nakoniec podrobí ultrafiltrácii a diafiltrácii. Po diafiltrácii sú odstránené hliník a ďalšie nečistoty a ako soli sa na diafiltráciu používajú slabé roztoky solí, ako je napríklad 3 % NaCI, roztok octanu sodného, alebo v niektorých prípadoch roztok kaprylátu sodného. Pri tomto použití kaprylátu však nedochádza k žiadnej výmene solí, pretože už pred diafiltráciou bol pridaný kaprylát ako stabilizátor pre spracovanie tepelným šokom; preto sú stále ešte v preparáte značné množstvá citranových iónov.

Ako opisujú napríklad J. C. May a kol., (1992) (Vox Sang., 62, s. 65 69), hrá podstatnú úlohu pri prijímaní hliníka prítomnosť citranových iónov,

31180/H ktoré vykazujú vysokú afinitu k hliníku (viď k tomu tiež napríklad R. B. Martin, (1986), J. Inorgan. Biochem. 28, s. 181 - 187) a pri tom predstavuje sama prítomnosť citranových iónov všeobecné riziko pre znečistenie kovovými iónmi.

V EP-0 696 595-A1 sa pri jednom postupe, pri ktorom sa používa kaprylát na frakcionovanie albumínu, citranové ióny odstraňujú v priebehu chromatografíe na DEAE-Sephadexu. Pri tom však nedochádza k výmene citranových iónov za iné ióny, ale k nákladnému oddeľovaniu citranu v dôsledku vysokej ceny DEAE-sephadexového aniónmeniča.

Podstata vynálezu

Predložený vynález má za úlohu poskytnúť nový a jednoduchý spôsob odstránenia, prípadne redukcie nežiaducich iónov kovov v liečivách, obsahujúcich plazmovú bielkovinu, pri ktorom sa v priebehu výrobného postupu odstránia ako nežiaduce kovy, tak sa i zabráni, prípadne zníži znečistenie hotových preparátov pri skladovaní v nádobách, obsahujúcich kov.

Táto úloha bola podľa vynálezu vyriešená spôsobom vyššie zmieneného druhu, ktorá zahrňuje nasledujúce kroky :

- výmena citranu a prípadne kovov, viazaných na citran v roztoku, obsahujúcom plazmovú bielkovinu, za vo vode rozpustný monokarboxylát, alebo dikarboxylát, prípadne za organickú monokarboxylovú kyselinu, alebo dikarboxylovú kyselinu, za nezrážavých podmienok,

- získanie plazmovej bielkoviny alebo plazmových bielkovín a

- zhotovenie liečiva.

Prekvapivo bolo zistené, že na odstránenie katiónov kovov prispievajú rozhodujúcim spôsobom práve anióny, obsiahnuté v roztoku, obsahujúcom plazmovú bielkovinu.

Na rozdiel od postupu, opísaného v US-PS 5 250 663, sa do roztoku, obsahujúceho citrany, prípadne citrany obsahujúce zrazeninu, pridáva nielen kaprylát sodný, ale citran, ktorý jednak môže niesť viazané ióny kovov vo forme

3118OZH komplexu a jednak je zodpovedný za uvoľňovanie nežiaducich kovov v rámci výrobného postupu, prípadne pri skladovaní hotového liečiva, je nahradený vo vode rozpustným monokarboxylátom, alebo dikarboxyiátom.

Ukázalo sa totiž, že keď sa preparáty, obsahujúce citranové ióny, vyzrážajú a potom sa rozpustia v pufri, bez citranových iónov, môže nový roztok stále ešte obsahovať značný podiel citranových iónov. Pretože väčšina frakcionačných postupov pri získavaní farmaceutických preparátov z plazmy, ku ktorej sa bez výnimky pri odbere pridáva citran, má jeden alebo viac zrážacích krokov, predstavuje preto výmenný postup citranových iónov podľa predloženého vynálezu zaujímavú možnosť jednoduchého, nenákladného a účinného odstránenia citranových iónov, ktorá sa môže ľahko zahrnúť do už zavedených výrobných postupov.

Za plazmovú frakciu slúži napríklad frakcia, ktorá bola získaná frakcionáciou podľa Cohna. Napríklad sa na výrobu albumínu použije zrazenina z frakcionácie podľa Cohna, obsahujúca albumín.

Aby sa docielila čo najúplnejšia zámena citranu, musí sa krok výmeny previesť za nezrážajúcich podmienok, pretože inak, ako bolo zmienené, hrozí nebezpečie, že citran môže byť odstránený len nedostatočne v dôsledku svojej vysokej afinity ku zrazenej bielkovine. Výhodne prebieha zámena citranu na počiatku výrobného postupu.

Podľa výhodnej formy uskutočnenia spôsobu podľa vynálezu sa ako liečivo, obsahujúce plazmovú bielkovinu, vyrobí liečivo, ktoré obsahuje jeden alebo viac faktorov zrážania a fibrinolýzy, imunoglobulíny, glykoproteíny a/alebo albumín. Ako faktory zrážania a fibrinolýzy prichádzajú pri tom do úvahy najmä fibrínogén, protrombín, faktory V, VII, VIII, IX, X, XI, XII a XIII, prípadne vo svojej aktivovanej forme, faktor von Willebranda, ale tiež antikoagulanty, ako je heparín, heparinoidy, deriváty kumarínu, alebo fibrinolytiká, ako je streptokináza, urokináza, pro-urokináza, t-PA, alebo plazmín. Ako imunoglobulíny sa môžu vyrobiť rôzne preparáty, obsahujúce imunoglobulíny triedy IgG, IgA, IgM a ich zmesi, prípadne s vysokými titrami.

31180/H

Ako glykoproteín prichádza do úvahy napríklad orozomukoid.

Na výmenu citranu sa výhodne použije soľ niektorej organickej karboxylovej kyseliny s 2 až 20 atómami uhlíka, pričom obzvlášť výhodný je kaprylát alebo vínan alebo ich zmesi.

Pre účely predloženého vynálezu sa monokarboxylátom, alebo dikarboxylátom, rozumie tiež niektorá organická monokarboxylová alebo dikarboxylová kyselina, pretože zámena citranu v roztoku prebieha vždy za anión kyseliny. Výhodne sa na výmenu citranu používa organická monokarboxylová alebo dikarboxylová kyselina s 2 až 4 atómami uhlíka.

Spôsob podľa vynálezu sa ukázal ako zvlášť vhodný na výrobu liečiv, obsahujúcich plazmovú bielkovinu, ktoré najmä s ohľadom na svoje znečistenie hliníkom vykazujú vynikajúce vlastnosti, pretože sú v podstate zbavené akéhokoľvek zistiteľného hliníka.

Ako bolo zmienené, musí zámena citranu prebiehať za nezrážajúcich podmienok. Výhodne sa krok výmeny uskutočňuje počas diafiltrácie, ultrafiltrácie, prípadne počas chromatografického postupu, pretože sa tieto kroky ukázali ako zvlášť vhodné na jednoduchú, nenákladnú a účinnú výmenu.

Podmienky počas kroku výmeny závisia od použitého postupu a volia sa najmä tak, aby výmena citranu a prípadne tiež kovov, viazaných na citran, prebiehala čo najúplnejšie. Preto sa musia optimalizovať zodpovedajúce prevádzkové parametre, najmä teplota, trvanie výmenného kroku a koncentrácia príslušného monokarboxylátu, prípadne dikarboxylátu, prípadne monokarboxylovej alebo dikarboxylovej kyseliny.

Teplota počas výmeny výhodne leží v rozmedzí medzi 0 °C a 50 °C, výhodnejšie v rozmedzí od 10 °C do 30 °C a najvýhodnejšie pri teplote miestnosti. Zodpovedajúci časový interval na výmenu je závislý najmä od pomeru vymieňaného objemu k povrchu membrány a od teploty a je výhodne najmenej 30 minút, najmä potom je časový interval v rozmedzí medzi 30 minútami a niekoľkými hodinami.

31180/H

Všeobecne je parameter, ako je časový interval, závislý tiež priamo na danom výmennom objeme zodpovedajúcej látky. Výhodne je výmenný objem najmenej päťnásobok, výhodnejšie najmenej tridsaťnásobok východiskového roztoku a časový interval na výmenu sa určí podľa toho.

Koncentrácia monokarboxylátu alebo dikarboxylátu, prípadne monokarboxylovej alebo dikarboxylovej kyseliny, leží výhodne v rozmedzí od 0,001 a 10 mol/l, výhodnejšie v rozmedzí od 0,001 do 1 mol/l.

Napríklad sa pridáva kaprylát sodný v koncentrácii medzi 1,0 mmol/l a

1.5 mol/l, výhodne v rozmedzí medzi 1,0 mmol/l a 25 mmol/l.

Octan sodný sa napríklad pridáva v koncentrácii v rozmedzí 1 mmol/l a

5.5 mmol/l, výhodne medzi 50 mmol/l a 1,0 mol/l.

Sodná soľ kyseliny hexánovej sa napríklad pridáva v koncentrácii medzi 1,0 mmol/l a 1,0 mol/l, výhodne v rozmedzí medzi 5,0 mmol/l a 0,1 mol/l.

Vínan sodný sa môže pridávať v koncentrácii v rozmedzí 1,0 mmol/l a 1,2 mol/l, výhodne v rozmedzí 10,0 mmol/l a 0,2 mol/l.

Vsoliach vyšších kyselín sa teda účinné množstvá nachádzajú už v rozmedzí od 0,001 do 0,1 mol/l, zatiaľ čo soli nižších kyselín sa výhodne pridávajú v trocha vyšších koncentráciách.

Ďalším parametrom, určujúcim postup, je hodnota pH roztoku. Táto hodnota je výhodne v rozmedzí pH 6 až 8, obzvlášť výhodne 6,5 až 7,5.

V roztoku môžu byť vedľa karboxylátu, prípadne karboxylovej kyseliny, obsiahnuté tiež anorganické soli, ako napríklad soli sodíka, alebo draslíka, na zvýšenie iónovej sily. Napríklad je obsiahnutý najmenej 4 % roztok chloridu sodného. Navyše tu môžu byť obsiahnuté tiež rôzne pufrovacie soli.

Ako materiály na príslušný výmenný postup prichádzajú najmä do úvahy komerčné dostupné materiály, ako sú napríklad membrány na diafiltráciu, jednotky na ultrafiltráciu, rôzne chromatografické gély, molekulové sitá a ďalšie. Všetky tieto materiály môžu byť organického alebo anorganického pôvodu; môžu byť syntetického alebo biologického pôvodu.

31180/H

Ukázalo sa, že spôsob podľa predloženého vynálezu je zvlášť výhodný vtedy, keď roztok, obsahujúci plazmu, je pred výmenou vyčistený, a/alebo skoncentrovaný.

Ako pri všetkých liečivách, ktoré vychádzajú z plazmy ako suroviny, musí sa tiež v rámci výrobného spôsobu podľa predloženého vynálezu počítať s jedným alebo viacerými krokmi na inaktiváciu prípadne prítomných vírusov.

Výhodná forma uskutočnenia spôsobu podľa vynálezu sa teda týka spôsobu, ktorým sa roztok, obsahujúci plazmovú bielkovinu, pred a/alebo po výmene podrobí spracovaniu na inaktiváciu prípadne prítomných vírusov, výhodne tepelnému spracovaniu. Vhodné spracovania na inaktiváciu vírusov, ktoré sa môžu použiť v rámci tohto spôsobu, sú opísané v EP-0 159 311, EP-0 519 901, alebo v EP-0 674 531.

Je zvlášť výhodné, keď sa pred spracovaním na inaktiváciu vírusov, podrobí získaná plazmová bielkovina ešte dialýze proti prostrediu, chudobného na soli, napríklad vode. Pri tom môže stále ešte trvať dodatočný stabilizačný efekt na plazmovú bielkovinu v dôsledku prítomnosti monokarboxylátov alebo dikarboxylátov. Získavanie plazmovej bielkoviny alebo plazmových bielkovín a zhotovenie liečiva sa potom má uskutočňovať výhodne výhradne so zložkami, zbavených citranov, aby sa zabránilo novému znečisteniu preparátu iónmi citranu, ktoré sú pri dlhšom skladovaní zodpovedné za nové znečistenie iónov kovov.

Spôsob podľa vynálezu sa ukázal ako zvlášť vhodný na odstraňovanie iónov hliníka, pripadne na zabránenie nového znečistenia iónmi hliníka počas skladovania liečiva. Rovnako dobre sa však môžu účinne znížiť tiež iné ióny kovov, o ktorých je známe, že môžu znečisťovať liečivá, obsahujúce plazmovú bielkovinu, ako sú napríklad kovy podobné hliníku, kadmium, zinok, olovo, železo a ďalšie.

Predmetom predloženého vynálezu je také liečivo, obsahujúce plazmovú bielkovinu, ktoré je získateľné spôsobom podľa predloženého vynálezu a ktoré má obsah nežiaducich kovov nižší ako 100 μρ/Ι, výhodne nižší ako 10 μρ/Ι,

31180/H obzvlášť niž spektroskop skladovaní,^f

Liečiv, skladovať v stavu technr kombinácií, ŕ byť ich povrc tvrdé, tak i sl· ako 200 ng/1, napríklad podľa zistení atómovou absorpčnou pričom tento najvyšší obsah nie je prekročený ani po dlhšom .oncaani po skladovaní po 5 rokoch.

obsahujúce plazmovú bielkovinu podľa vynálezu, sa môžu .rôznqších nádobách (zásobníkoch), známych zo súčasného Takéto nádoby môžu byť zo skla, z plastov, kovov, alebo z ich doby tiež môžu byť vopred špeciálne ošetrené, napríklad môže vybavený vrstvou silikónu. Zo skiel sa môžu používať ako sklá mäkké (viď napríklad G/äser, Klassifikation USP, S.1781).

Liečive obsahujúce plazmovú bielkovinu podľa vynálezu, vykazuje najmä tiež p skladovaní v tvrdých sklách malý obsah nežiaducich kovov, výhodne tent obsah je menej ako 100 pg/l, obzvlášť menej ako 10 pg/l, obzvlášť výhc se menej ako 200 ng/l.

Vynále. ktoré však nie bude bližšie osvetlený pomocou nasledujúcich príkladov, na obnrcedzený.

Príklady ušku očnenia vynálezu

Príklad 1

Zrazenín z frakcionácie podľa Cohna, ktorá obsahuje albumín s čistotou > 95 %, sa rozpustí v roztoku s obsahom 50 g/l NaCI v pomere 1+2 (hmotnosť/objem; 1 kg v 2 litroch) pri neutrálnom pH. Roztok sa diafiltruje pri teplote 4 °C Kontinuálne proti vode pomocou membrány z regenerovanej celulózy. Pritom sa pridá 0,1 mol kaprylátu na jeden gram bielkoviny.

V nasledujúcej tabuľke 1 je za a) znázornené zníženie obsahu hliníka a obsahu citranu po diafiltrácii bez prídavku karboxylátu, ako je napríklad kaprylát, vínan, soľ kyseliny hexánovej, alebo octan.

31180/H

Tabuľka 1

a) bez prídavku karboxylátu :

	obsah hliníka	obsah citranu
Vzorka	μg/g bielkoviny	v %	μΓηοΙ/g bielkoviny	v %
pred diafiltráciou	2,802	100,0	166	100,0
diakoncentrát	0,704	25,1	8,6	5,2

Nasledujúca tabuľka 1 b) ukazuje zníženie obsahu hliníka a obsahu citranu po diafiltrácii s prídavkom 0,1 mmol kaprylátu.

b) s prídavkom kaprylátu

	obsah hliníka	obsah citranu
Vzorka	μg/g bielkoviny	v%	μΓηοΙ/g bielkoviny	v %
pred diafiltráciou	2,999	100,0	139,5	100,0
diakoncentrát	0,096	3,2	1,1	0,8

Porovnanie tejto tabuľky s tabuľkou 1 a), teda zodpovedajúceho ochudobnenia bez prídavku kaprylátu, zreteľne ukazuje, že pri prídavku 0,1 mmol kaprylátu na jeden gram bielkoviny sa dosahuje značne väčšieho zníženia obsahu citranu a hliníka, ako je tomu bez prídavku karboxylátu, ako napríklad kaprylátu.

Príklad 2

Zrazenina, obsahujúca albumín, sa ako v príklade 1 rozpustí a potom diafiltruje. Pritom sa pridá 0,5 mmol sodnej soli kyseliny hexánovej na jeden gram bielkoviny. Po ukončení diafiltrácie sa dosiahne nasledujúce zníženie obsahu hliníka a citranu (tabuľka 2).

31180/H

Tabuľka 2

	obsah hliníka	obsah citranu
Vzorka	μg/g bielkoviny	v%	μΐτιοΙ/g bielkoviny	v %
pred diafiltráciou	3,368	100,0	135	100,0
diakoncentrát	0,127	3,8	1.8	1.3 .

Z tejto tabuľky 2 v porovnaní s tabuľkou 1 a) zreteľne vyplýva, že sa dosahuje prídavkom 0,05 mmol sodnej soli kyseliny hexánovej zreteľne vyššie zníženie obsahu citranu a hliníka, ako by tomu bolo bez prídavku soli kyseliny hexánovej.

Príklad 3

Zrazenina z frakcionovania podľa Cohna, ktorá obsahuje albumín s čistotou > 95 %, sa rozpustí v roztoku 50 g/l NaCI v pomere 1+2 (hmotnosť/objem; 1 kg v 2 litroch) pri neutrálnom pH. Roztok sa diafiltruje pri teplote 4 °C kontinuálne proti vode pomocou membrány z regenerovanej celulózy. Pritom sa pridá 5 mmol octanu na jeden gram bielkoviny.

V nasledujúcej tabuľke 3 je znázornené zníženie obsahu hliníka a zníženie obsahu citranu po diafiltrácii bez prídavku 5 mmol na jeden gram bielkoviny.

Tabuľka 3

	obsah hliníka	obsah citranu
Vzorka	μg/g bielkoviny	v%	μηηοΙ/g bielkoviny	v%
pred diafiltráciou	3,95	100,0	155	100,0
diakoncentrát	0,3	7,6	2,6	1,7

31180/H

Ako z tejto tabuľky v porovnaní s tabuľkou 1 a) zreteľne vyplýva, dosahuje sa prídavkom 5 mmol octanu na g bielkoviny zreteľne vyššie zníženie obsahu citranu a hliníka, ako by tomu bolo bez prídavku octanu.

Príklad 4

Zrazenina, obsahujúca albumín, sa rozpustí a diafiltruje, ako je opísané v príklade 1. Pri tom sa pridá 1,0 mmol vínanu na jeden gram bielkoviny. Po ukončení diafiltrácie sa zistí nasledujúce zníženie obsahu hliníka a citranu (tabuľka 4).

Tabuľka 4

	obsah hliníka	obsah citranu
Vzorka	pg/g bielkoviny	v%	pmol/g bielkoviny	v%
pred diafiltráciou	6,29	100,0	129	100,0
diakoncentrát	0,62	7,6	1,0	0,8

Ako z porovnania tejto tabuľky s tabuľkou 1 a) zreteľne vyplýva, dosahuje sa prídavkom 1,0 mmol vínanu na jeden gram bielkoviny zreteľne vyššie zníženie obsahu citranu a hliníka, ako by tomu bolo bez prídavku vínanu.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Spôsob výroby liečiva, obsahujúci plazmovú bielkovinu, ktorá je v podstate bez nežiaducich kovov a ani pri skladovaní v kovových nádobách neprijíma žiadne kovy, z citranovej plazmy alebo z frakcie plazmy, obsahujúca citran, vyznačujúci sa tým, že zahrňuje tieto kroky :

- zámena citranu a prípadne kovov, viazaných na citran, v roztoku, obsahujúcom plazmovú bielkovinu, za vo vode rozpustný monokarboxylát, alebo dikarboxylát, prípadne organickú monokarboxylovú alebo dikarboxylovú kyselinu, za nezrážajúcich podmienok,

- získavanie plazmovej bielkoviny alebo plazmových bielkovín a

- zhotovenie liečiva.
2. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že ako liečivo obsahujúce plazmovú bielkovinu sa vyrába liečivo, ktoré obsahuje jednu alebo viac bielkovín z plazmy, zvolených zo zrážacích faktorov a faktorov fibrinolýzy, imunglobulínov, glykoproteínov a albumínu.
3. Spôsob podľa nároku 1 alebo 2, vyznačujúci sa tým, že sa na zámenu citranu použije soľ organickej karboxylovej kyseliny s 2 až 20 atómami uhlíka.
4. Spôsob podľa niektorého z nárokov 1 až 3, vyznačujúci sa tým, že sa na zámenu citranu použije kaprylát, a/alebo vínan.
5. Spôsob podľa niektorého z nárokov 1 až 3, vyznačujúci sa tým, že sa na zámenu citranu použije organická monokarboxylová alebo dikarboxylová kyselina s 2 až 4 atómami uhlíka.
6. Spôsob podľa niektorého z nárokov 1 až 5, vyznačujúci sa tým, že sa vyrába liečivo, obsahujúce plazmovú bielkovinu, ktoré je v podstate bez hliníka.

31180ZH
7. Spôsob podľa niektorého z nárokov 1 až 6, vyznačujúci sa tým, že sa zámena citranu uskutočňuje počas diafiltrácie, ultrafiltrácie, gélovej permeačnej chromatografie, prípadne počas niektorého chromatografického deliaceho postupu, ktoré umožňujú oddelenie bielkoviny od solí.
8. Spôsob podľa niektorého z nárokov 1 až 7, vyznačujúci sa tým, že sa roztok, obsahujúci plazmovú bielkovinu pred výmenou čistí a/alebo koncentruje.
9. Spôsob podľa niektorého z nárokov 1 až 8, vyznačujúci sa tým, že sa roztok, obsahujúci plazmovú bielkovinu pred a/alebo po výmene spracuje na inaktiváciu prípadne prítomných vírusov, výhodne spracovaním teplom.
10. Spôsob podľa niektorého z nárokov 1 až 9, vyznačujúci sa tým, že sa inaktivačné spracovanie proti vírusom uskutoční bezprostredne po získaní bielkoviny z plazmy v prítomnosti monokarboxylátu alebo dikarboxylátu.
11. Spôsob podľa niektorého z nárokov 1 až 10, vyznačujúci sa tým, že sa výroba liečiva uskutočňuje výhradne zo zložkami, ktoré sú bez citranu.
12. Spôsob podľa niektorého z nárokov 1 až 11, vyznačujúci sa tým, že sa výmena citranu uskutočňuje v prítomnosti chloridu sodného, výhodne roztoku chloridu sodného s koncentráciou najmenej 4 % hmotnostných.
13. Liečivo obsahujúce plazmovú bielkovinu, získateľné spôsobom podľa niektorého z nárokov 1 až 12, s obsahom nežiaducich kovov, najmä hliníka, nižším ako 100 μg/l, výhodne nižším ako 10 pg/l, obzvlášť nižším ako 200 ng/l.