JPS5867627A - 高純度抗血友病性因子の製造法 - Google Patents
高純度抗血友病性因子の製造法Info
- Publication number
- JPS5867627A JPS5867627A JP56162571A JP16257181A JPS5867627A JP S5867627 A JPS5867627 A JP S5867627A JP 56162571 A JP56162571 A JP 56162571A JP 16257181 A JP16257181 A JP 16257181A JP S5867627 A JPS5867627 A JP S5867627A
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- JP
- Japan
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- factor
- antihemophilic
- protein
- activity
- units per
- Prior art date
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- Pending
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はヒト血漿中に存在する抗血友病性因子（＃ ）
に関する。特に本発明は高活性、高純度で、且つ変性さ
れたＡＨＦ奮実質上含まないＡＩＩＦｋ含有する組成物
とその製造法に関する。
に関する。特に本発明は高活性、高純度で、且つ変性さ
れたＡＨＦ奮実質上含まないＡＩＩＦｋ含有する組成物
とその製造法に関する。
血漿中に存在する他の蛋白からのＡＨＦの分離は既に知
られている。従来例によると、カラムクロマトグラフィ
ー、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）又紘ポリプロピ
レングリコール（ＰＰＧ）による沈澱、グリシンによる
（又は他のアミノ酸による）沈澱、アルコールによる沈
澱等にょクフイブリノゲン及び他の蛋白から部分的又は
全体的に分離する方法がおる。英国特許第１，５０７，
１９８号、米国特許第３．９７３，００２号ではｐＨと
温度調節を利用してＡＨＦの精Ｈｅ行なっている。しか
しこれらの方法では本発明とは異なる出発物質を用いて
おシ、中間純度の低活性製剤が得られるにすぎない。こ
れらの特許に記載された方法では低温沈澱物ではなく低
温法撤物から抽出した７ラクシヨンを利用している。ま
たｐＨと冷却調節が一循環すると分別を中止している。
られている。従来例によると、カラムクロマトグラフィ
ー、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）又紘ポリプロピ
レングリコール（ＰＰＧ）による沈澱、グリシンによる
（又は他のアミノ酸による）沈澱、アルコールによる沈
澱等にょクフイブリノゲン及び他の蛋白から部分的又は
全体的に分離する方法がおる。英国特許第１，５０７，
１９８号、米国特許第３．９７３，００２号ではｐＨと
温度調節を利用してＡＨＦの精Ｈｅ行なっている。しか
しこれらの方法では本発明とは異なる出発物質を用いて
おシ、中間純度の低活性製剤が得られるにすぎない。こ
れらの特許に記載された方法では低温沈澱物ではなく低
温法撤物から抽出した７ラクシヨンを利用している。ま
たｐＨと冷却調節が一循環すると分別を中止している。
他の従来例でも一循環のｐＨと冷却調節の効果を確認し
ている（ Ｊ−に、Ｓｍｔｔｈ他、Ｔｒａｎｓｆｉｔｓ
ｉｏｎ、 １９．２９９−３０６．（１９７９））。
ている（ Ｊ−に、Ｓｍｔｔｈ他、Ｔｒａｎｓｆｉｔｓ
ｉｏｎ、 １９．２９９−３０６．（１９７９））。
上記した従来例の方法で得られたＡＨＦ組成物は比較的
低濃度（１−当少約５〜１５単位 のＡＨＦ活性）且つ
低純度（蛋白１岬当、りＡＨＦ活性１単位未満）であシ
、望ましぐなり不純物として変性ＡＨＦｆ含有する。
低濃度（１−当少約５〜１５単位 のＡＨＦ活性）且つ
低純度（蛋白１岬当、りＡＨＦ活性１単位未満）であシ
、望ましぐなり不純物として変性ＡＨＦｆ含有する。
本発明はヒト血漿から得られるＡＨＦ含有水性組成物か
ら高活性、高純度で且つ変ｔｇＥＡＨＦｋ実質上含有し
ないＡＨＦ組成物を製造する改良法を提供するものであ
る。
ら高活性、高純度で且つ変ｔｇＥＡＨＦｋ実質上含有し
ないＡＨＦ組成物を製造する改良法を提供するものであ
る。
本発明は下記の方法によって高濃度（１ｍｌ！当り約２
０〜４５単位のＡＨＦ活性）で、高活性（蛋白１１１ｇ
当シ少なくとも１単位のＡＨＦ活性つな水性組成物と蛋
白１Ｎ９肖り１〜１０単位のＡＨＦｆ有する乾燥組成物
（これら組成物は実質上変性ＡＨＦｔ−含有しない）を
ヒト血漿から製造する。
０〜４５単位のＡＨＦ活性）で、高活性（蛋白１１１ｇ
当シ少なくとも１単位のＡＨＦ活性つな水性組成物と蛋
白１Ｎ９肖り１〜１０単位のＡＨＦｆ有する乾燥組成物
（これら組成物は実質上変性ＡＨＦｔ−含有しない）を
ヒト血漿から製造する。
本発明方法は１−当り約５〜１５単位のＡＨＦ活性を有
し且つ蛋白１１ｇ当シ約０．３〜１．０単位のＡＨＦ活
性の比活性（ａｐｅｅｔｆｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ）
２有するＡＨＦｆ）水性組成物に適用されうる。
し且つ蛋白１１ｇ当シ約０．３〜１．０単位のＡＨＦ活
性の比活性（ａｐｅｅｔｆｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ）
２有するＡＨＦｆ）水性組成物に適用されうる。
これらの水性組成物は本発明方法に従かい次の工程に供
される。
される。
（ロ））出発溶液濃度ｔ−２〜１０倍に濃縮しく６）
該濃縮溶液のｐＨＹ約５．０〜６．０Ｋｉｌｌｊ節Ｌ
、（６） 得られる溶液を約０〜１４℃に冷却し、（
ロ）＃ｐＨと温度で生ずる沈澱を除き、０）溶液【濾過
又は他の均等的手段にょシさらに清澄しそして、 （１）ｐＨ＊−約７．０に調節する。
該濃縮溶液のｐＨＹ約５．０〜６．０Ｋｉｌｌｊ節Ｌ
、（６） 得られる溶液を約０〜１４℃に冷却し、（
ロ）＃ｐＨと温度で生ずる沈澱を除き、０）溶液【濾過
又は他の均等的手段にょシさらに清澄しそして、 （１）ｐＨ＊−約７．０に調節する。
得られた溶液は無１ｉ濾過に供さねそれから得られたＦ
液社直接無菌小瓶に入れてもよく、凍結乾燥して無菌乾
燥製剤にしてもよい。溶液又は乾燥製剤はそのまま市場
に供しうる。
液社直接無菌小瓶に入れてもよく、凍結乾燥して無菌乾
燥製剤にしてもよい。溶液又は乾燥製剤はそのまま市場
に供しうる。
次に本発明方法を１図１ｔ−参照して以下に説明する。
図ＩＦｉ公知法の工程と本発明方法の工程を示すフロー
シートである。これらの説明及び記載はもちろん例示の
ものでありこれらに限定するものではない。
シートである。これらの説明及び記載はもちろん例示の
ものでありこれらに限定するものではない。
ヒト血漿を凍結、解凍、遠心法に供し、低温沈澱を除く
。
。
生理的ｐＨ及び温度（ｐＨ７〜７．４．室温〜３７℃）
にて、低温沈澱（４）をバッファー（たとえばトリス塩
酸塩又はグリシンと食塩及びクエン酸ナトリウム等）に
溶かし均一溶液とする。低温沈澱又は低温沈澱からの濃
縮フラクション社凝固した蛋白（ＡＨＦｆ含む）、フイ
プリノゲン、アルブミン及び他の蛋白の複雑な混合物で
ある。再懸濁させた低温沈ｍ６）ｔ−酸性化（ｐＨｓ、
ｏ〜６．８に）シ（工程８）、次いで冷却（５〜１５℃
に）シ（工程９）、ある種の蛋白（フイプリノゲ７等）
と低温不溶性グロブリンを沈澱させる（工程１０）。上
記した適正な条件（ｐＨ６〜６．８．温度５〜１５℃）
を慎重に選ぶことにより、ＡＨＦ″を上澄液に残すこと
ができる（エフ）Ｈが６．４よシも酸性になり、溶液が
冷却されると（工程８〜１２）、より多くの蛋白が沈澱
し溶液から除かれうる。
にて、低温沈澱（４）をバッファー（たとえばトリス塩
酸塩又はグリシンと食塩及びクエン酸ナトリウム等）に
溶かし均一溶液とする。低温沈澱又は低温沈澱からの濃
縮フラクション社凝固した蛋白（ＡＨＦｆ含む）、フイ
プリノゲン、アルブミン及び他の蛋白の複雑な混合物で
ある。再懸濁させた低温沈ｍ６）ｔ−酸性化（ｐＨｓ、
ｏ〜６．８に）シ（工程８）、次いで冷却（５〜１５℃
に）シ（工程９）、ある種の蛋白（フイプリノゲ７等）
と低温不溶性グロブリンを沈澱させる（工程１０）。上
記した適正な条件（ｐＨ６〜６．８．温度５〜１５℃）
を慎重に選ぶことにより、ＡＨＦ″を上澄液に残すこと
ができる（エフ）Ｈが６．４よシも酸性になり、溶液が
冷却されると（工程８〜１２）、より多くの蛋白が沈澱
し溶液から除かれうる。
しかしＡＨＦもまた沈澱゛する。公知法はこの段階で終
了している〃ζこれはｐＨと温度の連続した調節でさら
に精製することは不可能であると考えられていた所以で
ある。
了している〃ζこれはｐＨと温度の連続した調節でさら
に精製することは不可能であると考えられていた所以で
ある。
本発明方法に従かえば、高純度の濃縮物を以下に述べる
追加工程によって得ることができる。
追加工程によって得ることができる。
ＡｌＣ０Ｈ）、 吸着の後、分離したＡＨＦ溶液（１
２）ｉ濃縮・又は沈澱させる。濃縮したＡＨＦ溶液（１
４）は高活性（１−当夛２５〜４５単位）を有するが純
度は高いといえない（蛋白１ｑ当シＩＡＨＦ単位未満）
。この濃縮Ａ１１Ｆ溶液（１４）（又は濃縮再Ｓ濁ＡＨ
Ｆ溶液（１４） ）は次いでＴＬＨ５，０〜６，０に調
節され０〜１４℃に冷却され、沈澱を生ずる。沈澱（１
９）を除き、ＡＨＦ（２０）溶液を清澄ＬＡｐＨ７に調
節し、無菌濾過し、瓶づめ又は凍結乾燥する。
２）ｉ濃縮・又は沈澱させる。濃縮したＡＨＦ溶液（１
４）は高活性（１−当夛２５〜４５単位）を有するが純
度は高いといえない（蛋白１ｑ当シＩＡＨＦ単位未満）
。この濃縮Ａ１１Ｆ溶液（１４）（又は濃縮再Ｓ濁ＡＨ
Ｆ溶液（１４） ）は次いでＴＬＨ５，０〜６，０に調
節され０〜１４℃に冷却され、沈澱を生ずる。沈澱（１
９）を除き、ＡＨＦ（２０）溶液を清澄ＬＡｐＨ７に調
節し、無菌濾過し、瓶づめ又は凍結乾燥する。
凍結乾燥製剤は蛋白１１Ｉｖ当り約１〜１０単位ＡＨＦ
活性を有し且つ変性ＡＨＦｋＨＦ上含有しない。
活性を有し且つ変性ＡＨＦｋＨＦ上含有しない。
本発明によフ、酸性化及び冷却工程（工程８〜１２）か
らのＡＨＦ溶液ｖｒｐＨ７に再調節し濃縮すると、続い
ての＃に注化と冷却ｔＬ、さらに多量のフイプリノゲン
、プラズミノゲン及びプラズミン、低温不溶性グロブリ
ン及び他の蛋白’ｉ、ＡＨＦの共沈殿を伴なうことなく
、沈澱させて除去する作用をし、その結果、中間的な活
性と純度のＡＨＦ製剤から高活性、高純度のＡＨＦＨ剤
を得ることができるのである。
らのＡＨＦ溶液ｖｒｐＨ７に再調節し濃縮すると、続い
ての＃に注化と冷却ｔＬ、さらに多量のフイプリノゲン
、プラズミノゲン及びプラズミン、低温不溶性グロブリ
ン及び他の蛋白’ｉ、ＡＨＦの共沈殿を伴なうことなく
、沈澱させて除去する作用をし、その結果、中間的な活
性と純度のＡＨＦ製剤から高活性、高純度のＡＨＦＨ剤
を得ることができるのである。
この引き続く工程なしに第１の酸性化及び冷却（工程８
〜１２）ｔ−拡張しても効果はない。
〜１２）ｔ−拡張しても効果はない。
本発明方法の他の利点は穏やかな方法であることであり
、得られるＡＨＦ製剤が変質されてい危い特徴を有する
。即ち生成物は抗原因子■（Ｆ■コアギュラント抗原）
と因子■プロコアギュラント活性の比かはぼ１であル、
変性ＡＨＦ（不活性抗原因子■のレベルに対応）が存在
しないことを示している。
、得られるＡＨＦ製剤が変質されてい危い特徴を有する
。即ち生成物は抗原因子■（Ｆ■コアギュラント抗原）
と因子■プロコアギュラント活性の比かはぼ１であル、
変性ＡＨＦ（不活性抗原因子■のレベルに対応）が存在
しないことを示している。
【図面の簡単な説明】
図１は公知法と本発明方法とを示す工程図である。
特許出願人 アーマ−７アーマシユーテイカルカンパ
ニー ７１．−１、手続補正畳（
方式） 昭和５６年１１月１３日 特許庁長官 島 １）春 樹 殿 ｘ、６件の表示 昭和５６年特許願第１６２５７１号 ２、発明の名称 高純度抗血友病性因子の製造法 ３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 名称 アーマ−７アーマシユーテイカル カンパニ
ーＭＩＫ添付の手書き明細書及び図面 ６、補正の内容 別紙のとおり手書き明細書をタイプ浄曹に補正した。 並びに正式図面も提出する。ただし、内容の補正はない
。 手続補正書 昭和５６年１１月２０日 特許庁長官 島 １）春 樹殿 １、事件の表示 昭和５６年特許願第１６２５７１号 ２、発明の名称 高純度抗血友病性因子の製造法 ３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 名称 アーマ−ファーマ舛−テイカル カンパニー明
ａ薔の発明の詳細な説明の掴 ６、補正の内容 （１）明＃１１ｘｅ頁１行と２行の間に次の文を挿入す
る。 「無−溶液はｌ−当り約２５〜４５単位を含み、蛋白１
ｓｔｐｍＤ約１〜１０率位ＡＨＦ活性を有し且つ変性Ａ
ＨＦＹｒ実質上含有しない。」
ニー ７１．−１、手続補正畳（
方式） 昭和５６年１１月１３日 特許庁長官 島 １）春 樹 殿 ｘ、６件の表示 昭和５６年特許願第１６２５７１号 ２、発明の名称 高純度抗血友病性因子の製造法 ３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 名称 アーマ−７アーマシユーテイカル カンパニ
ーＭＩＫ添付の手書き明細書及び図面 ６、補正の内容 別紙のとおり手書き明細書をタイプ浄曹に補正した。 並びに正式図面も提出する。ただし、内容の補正はない
。 手続補正書 昭和５６年１１月２０日 特許庁長官 島 １）春 樹殿 １、事件の表示 昭和５６年特許願第１６２５７１号 ２、発明の名称 高純度抗血友病性因子の製造法 ３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 名称 アーマ−ファーマ舛−テイカル カンパニー明
ａ薔の発明の詳細な説明の掴 ６、補正の内容 （１）明＃１１ｘｅ頁１行と２行の間に次の文を挿入す
る。 「無−溶液はｌ−当り約２５〜４５単位を含み、蛋白１
ｓｔｐｍＤ約１〜１０率位ＡＨＦ活性を有し且つ変性Ａ
ＨＦＹｒ実質上含有しない。」
Claims (5)
- （１）１−当り約２０〜４５単位の抗血友病性因子濃度
と、蛋白１キ当９少なくとも１単位の抗血友病因子比活
性ｔＷし、ヒト血漿から誘導された抗血友病因子の水溶
液から得られ、数本溶液が１−浩９約５〜１５単位の抗
血友病性因子濃度と、蛋白１１ｇ当多約０．１〜１．０
単位の抗血友病性因子比活性を有するものである抗血友
病性因子の水性組成物の製造法にして、（α）該低濃度
溶液を約２〜１０倍に濃縮し、（６） 該濃縮溶液の
’ＩｊＨ１を約５．０〜６．０に調節しくｃ） 得ら
れる溶液全豹Ｏ〜１４℃に冷却し、（山 該ｐＨと温度
に於て生ずる沈澱管線き、（＋） 工程ケ功為らの溶
液ｔさらに清澄しそして（１）ｐａ′を約７．０に調節
することｔ−特徴とする抗血友病性因子の水性組成物の
製造法。 - （２）１−当多約５〜１５単位の抗血友病性因子濃度と
蛋白１１１Ｆ当り約０．１〜１．０単位の抗血友病性因
子比活性ｉ有する抗血友病性因子の出発水溶液ｔζ （ａ） 抗血友病性因子を低温ｐ過ム（６） 低温
Ｆ遇物ｋｐＨ約７．０〜７．４でバッファーに溶解させ
、（ｃ） ｐＨｔ−約６．０〜６．８に、温度全豹５
〜１５℃に調節することＫよってフィブリノグンと低温
不溶性グロプレンを沈澱させそして沈澱を除き、 頓 水酸化アルミニウム上に吸着させることによって溶
液中のプ四トロンビンを除き、そして （＃）得られる溶液を回収することにょり血漿から得ら
れ友ものである特許請求の範囲第１項記載の方法。 - （３）１−当り約２０〜４５単位の抗血友病性因子濃度
と蛋白１１ｇ当多少なくとも１単位の抗血友病性因子比
活性を有するヒト血漿から誘導された抗血友病性因子の
水性組成物。 - （４）蛋白１１ｇ当シ約１〜１０単位の抗血友病性因子
活性を有し、抗原因子■と因子■プロコアギュラント活
性の比が１１ぼ１で実質上変性抗血友病性因子を含有し
ないことを特徴とするヒト血漿から誘導され次抗血友病
性因子の凍結乾燥組成物。 - （５） １ｗＩｔ当り約２０〜４５単位の抗血友病性
因子活性の濃度と蛋白１１ｇ当多少なくとも１単位の抗
血友病性因子活性を有し、抗原因子■と因子■ブロコア
ギュラント活性の比がほぼ１で実質上変性抗血友病性因
子を含有しないことを特徴とする特許請求の範囲第３項
記載のヒト血漿から誘導された抗血友病性因子の水性組
成物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56162571A JPS5867627A (ja) | 1981-10-12 | 1981-10-12 | 高純度抗血友病性因子の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56162571A JPS5867627A (ja) | 1981-10-12 | 1981-10-12 | 高純度抗血友病性因子の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5867627A true JPS5867627A (ja) | 1983-04-22 |
Family
ID=15757112
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56162571A Pending JPS5867627A (ja) | 1981-10-12 | 1981-10-12 | 高純度抗血友病性因子の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5867627A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5959626A (ja) * | 1982-09-29 | 1984-04-05 | マイルス・ラボラトリ−ス・インコ−ポレ−テツド | 抗血友病因子濃縮物 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS50142719A (ja) * | 1974-04-12 | 1975-11-17 | ||
| US3973002A (en) * | 1974-04-12 | 1976-08-03 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Antihemophilic factor |
| JPS5326313A (en) * | 1976-08-14 | 1978-03-11 | Rushierushiyu Ematorojitsuku S | High yield and easy preparation of highlyypurified 8 factor concentrate |
-
1981
- 1981-10-12 JP JP56162571A patent/JPS5867627A/ja active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS50142719A (ja) * | 1974-04-12 | 1975-11-17 | ||
| US3973002A (en) * | 1974-04-12 | 1976-08-03 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Antihemophilic factor |
| JPS5326313A (en) * | 1976-08-14 | 1978-03-11 | Rushierushiyu Ematorojitsuku S | High yield and easy preparation of highlyypurified 8 factor concentrate |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5959626A (ja) * | 1982-09-29 | 1984-04-05 | マイルス・ラボラトリ−ス・インコ−ポレ−テツド | 抗血友病因子濃縮物 |
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