JPS647051B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は免疫グロブリン誘導体の組成物に関す
る。更に詳しくは本発明は、Ｓ−スルホン化免疫
グロブリンと特定の有機化合物の塩とからなる、
Ｓ−スルホン化免疫グロブリンの凝集体の生成が
抑制され、安定性に優れたＳ−スルホン化免疫グ
ロブリン組成物に関するものである。 免疫グロブリンは体液性免疫の担い手として医
学的に重要な意義を有し、種々の病原微生物に対
する免疫活性を有する。従つて、この免疫グロブ
リンの投与により麻疹、ウイルス性肝炎等のウイ
ルス感染症をはじめ、黄色ブドウ球菌の如き抗生
物質耐性細菌による感染症等も予防並びに治療す
ることができる。そしてこれらの予防並びに治療
に際しては、大量投与の可能性と速効性という点
で、筋注よりも静注による投与の方が好ましい。
しかしながら、人血漿より分画、調製された免疫
グロブリンを静注により投与した場合には、血圧
降下、意寒発熱、呼吸困難、頭痛等を伴なうアナ
フイラキシー様副作用を生じるという問題があ
る。これは、人血漿より分画して集められた免疫
グロブリンはその分子が一部凝集して大分子（凝
集体）となつていることが多く、また製剤化工程
においても免疫グロブリンは徐々に凝集する傾向
があり、これらの凝集体が血液中の補体成分を結
合し（抗補体活性）、それを活性化して、アナフ
イラトキシン様物質や血管透過性因子などの生物
活性因子を遊離するためである。 かかる凝集体による副作用を除去若しくは軽減
するために種々の方法が提案されているが、これ
らの中で優れた方法として、免疫グロブリンに亜
硫酸ナトリウムとテトラチオン酸ナトリウムとを
反応させ、免疫グロブリンのペプチド鎖間SS結
合を切断し、Ｓ−スルホン化することにより、各
種抗体活性を保持したまゝ、抗補体活性を低減さ
せた、静注可能なスルホン化免疫グロブリンを得
る方法が知られている（例えば、特開昭51−1630
号参照）。免疫グロブリンのＳ−スルホン化反応
では、免疫グロブリンの凝集体は除去されるわけ
ではなく、凝集体もＳ−スルホン化され、抗補体
活性が低減し、安全な製剤になるものと考えられ
る。 しかしながら、Ｓ−スルホン化免疫グロブリン
の凝集体は、免疫グロブリンの凝集体に比べれば
抗補体価が低く安全性は高いが、なお若干の補体
結合能力を有しているので、多量に含まれている
場合には副作用を惹起する可能性がある。したが
つて、上記方法は、凝集体が比較的少ない免疫グ
ロブリンをスルホン化反応の原料とする場合には
問題はないが、工業的に入手可能な免疫グロブリ
ン、例えばコーンのエタノール分画法によつて得
られる免疫グロブリンは凝集体が多く、これをそ
のまゝＳ−スルホン化反応の原料とした場合に
は、抗補体活性が必ずしも十分低減せず、静注時
の安全性になお問題が残るという欠点があつた。 本発明者らは、工業的に入手可能な免疫グロブ
リンから、抗補体価の低い安全性の高いＳ−スル
ホン化免疫グロブリンを得るために、前述の反応
で得られたＳ−スルホン化免疫グロブリンから公
知の方法でＳ−スルホン化免疫グロブリンの凝集
体を除去あるいは単量体に解離させることを試み
たが、いずれも下記のごとき欠点を有していた。
Ｓ−スルホン化免疫グロブリンからＳ−スルホン
化免疫グロブリンの凝集体を除く方法として、硫
安等を用いる塩析による方法、ポリエチレングリ
コール等の高分子物質を用いる方法、アクリノー
ルを用いる方法等が考えられるが、いずれの方法
も凝集体を共に多くの単量体を除いてしまうた
め、これは貴重な人血を原料としていることを考
えると非常にデメリツトである。更にこれらの方
法では抗補体活性の低下が不十分でありかつ単量
体が再凝集しやすく、静注用製剤とするには問題
がある。 一方、凝集体を単量体に解離させる方法とし
て、例えばPH４処理が知られているが、これをＳ
−スルホン化グロブリンに適用した場合も、免疫
グロブリンの場合と同様、PH４処理後Ｓ−スルホ
ン化免疫グロブリン溶液のPHを中性に戻すと再び
単量体の凝集が速かに起り、PH４のまゝ長期間放
置するとＳ−スルホン化免疫グロブリンが変性を
受けるという欠点がある。 本発明者らは、従来技術の欠点を解消すべく鋭
意研究した結果、PKbが７以下の窒素塩基性有
機化合物の水溶性塩をＳ−スルホン化免疫グロブ
リンに添加すれば、速やかにＳ−スルホン化免疫
グロブリン中の凝集体が単量体に解離し、Ｓ−ス
ルホン化免疫グロブリンの抗補体価が低下するだ
けでなく、得られた混合物（Ｓ−スルホン化免疫
グロブリン組成物）は長期間にわたつて凝集体の
生成が抑制され、安定に存在しうることを知見
し、本発明に到達した。 すなわち、本発明はＳ−スルホン化免疫グロブ
リンと、Ｓ−スルホン化免疫グロブリンに対し10
〜600重量％の解離指数PKbが７以下の窒素塩基
性有機化合物の水溶性塩とからなる免疫グロブリ
ン組成物である。 本発明におけるＳ−スルホン化免疫グロブリン
は免疫グロブリンの鎖間SS結合が切断されＳ−
スルホン化されているものであればどのような方
法で製造されたものでもよいが、例えば、血清、
血漿又はその他の体液又は臓器抽出液から、コー
ンのエタノール分画法等公知の方法で得られるγ
−グロブリンを主体とする免疫グロブリン画分
に、亜硫酸ナトリウムとテトラチオン酸ナトリウ
ムあるいはトリチオン酸ナトリウムとを作用させ
ることにより得られる。得られたＳ−スルホン化
免疫グロブリンはそのまゝ、あるいは更にPH４処
理、塩析、アクリノール処理、イオン交換クロマ
トグラフイー等公知の方法で精製したものであつ
てもよい。 本発明において用いられる窒素塩基性有機化合
物は、そのPKbが７以下のものである。こゝで
PKbとは、PKb＝−ogKで定義される塩基性
化合物の解離指数である。 （Ｋ＝〔BH⁺〕／〔Ｂ〕〔H⁺〕〔Ｂ〕は塩基性化合物
の濃 度、〔H⁺〕は水素イオン濃度、〔BH⁺〕は共役酸
濃度を表わす。） これらの具体例としては、メチルアミン、エチ
ルアミン等の第一級アルキルアミン、ジメチルア
ミン、ジエチルアミン等の第二級アルキルアミ
ン、トリメチルアミン、トリエチルアミン等の第
三級アルキルアミン、ピペリジン、ピロリジン等
の環状飽和アミン、イミダゾール、２−メチルイ
ミダゾール、ピラゾール、トリアゾール等の含窒
素複素環化合物、グアニジン、メチルグアニジ
ン、ベンズアミジン等のグアニジン誘導体、リジ
ン、オルニチン、アルギニン等の塩基性アミノ
酸、ロイシンアミド、グリシンアミド、アラニン
アミド等の中性アミノ酸のアミド誘導体又は低級
アルキルエステル、Ｄ−グルコサミン等のグルコ
ースのアミン誘導体が挙げられる。特にアルギニ
ン、グアニジン、ロイシンアミド、イミダゾー
ル、２−メチルイミダゾール、Ｄ−グルコサミン
が好ましい。かかる窒素塩基性有機化合物は塩酸
塩、臭化水素酸塩等の水溶性塩の形で用いられ
る。 本発明におけるＳ−スルホン化免疫グロブリン
組成物は、前記Ｓ−スルホン化免疫グロブリン
と、このＳ−スルホン化免疫グロブリンに対し10
〜600重量％、好ましくは20〜400重量％の、前記
PKbが７以下の窒素塩基性有機化合物の水溶性
塩とからなる。窒素塩基性有機化合物の水溶性塩
の量が10重量％未満の場合には、本発明の効果が
十分には得られず、600重量％を越える場合には、
本発明の効果は得られても経済的あるいは操作的
に不利となるので好ましくない。 本発明におけるＳ−スルホン化免疫グロブリン
組成物は、例えば、Ｓ−スルホン化免疫グロブリ
ン溶液に窒素塩基性有機化合物の水溶性塩を添加
する方法、あるいはＳ−スルホン化免疫グロブリ
ン溶液と窒素塩基性有機化合物の水溶性塩の水溶
液とを混合する方法によつて調製することができ
る。 本発明のＳ−スルホン化免疫グロブリン組成物
は、従来公知の方法に従つて得られたＳ−スルホ
ン化免疫グロブリンよりも凝集体が少なく抗補体
価が著しく低いので、場合によつてはそのまま静
注用Ｓ−スルホン化免疫グロブリン製剤の調整た
めに用いることができる。例えば、−アルギニ
ン塩酸塩、Ｄ−グルコサミン塩酸塩等がＳ−スル
ホン化免疫グロブリンに対し10〜100重量％含ま
れている組成物は、そのまゝ静注用Ｓ−スルホン
化免疫グロブリン製剤に調整することができる。 そのまゝでは静注に好ましくない場合には、透
析、イオン交換等の処理で窒素塩基性有機化合物
を除くことにより、静注可能なＳ−スルホン化免
疫グロブリンとすることができる。 本発明で使用されるPKbが７以下の窒素塩基
性有機化合物の水溶性塩は、凝集体を単量体に解
離させるだけでなく、Ｓ−スルホン化免疫グロブ
リン中での凝集体の生成を長期間にわたつて抑制
しうるという特徴もある。したがつて、本発明は
静注用Ｓ−スルホン化免疫グロブリン製剤の製造
工程の初期に、PKbが７以下の窒素塩基性有機
化合物の水溶性塩を添加しておき、最後の凍結乾
燥工程になるべく近い段階で、透析等によつて窒
素塩基性有機化合物の水溶性塩を除去するという
方法にも利用することができる。 以下実施例により本発明を詳述する。 実施例中における％はすべて重量％を意味す
る。なお実施例中におけるＳ−スルホン化免疫グ
ロブリンの単量体含量の測定および抗補体価の測
定は以下の方法によつてなされたものである。 〔Ｓ−スルホン化免疫グロブリンの単量体含量〕 Ｓ−スルホン化免疫グロブリンの５％溶液0.3
mlを用いゲル過分析を行なうことによつて単量
体（沈降定数7S分子量約16万）の含量を求めた。
ゲルはセフアローズCL−6B（フアルマシア社製）
を用い、カラムは直径1.5cm長さ80cmのものを用
いた。溶液の流出速度は0.17ml／minであつた。 〔抗補体価〕 カパツトとマイヤー（Kabat and、Mayer）
著のエクスペリメンタルイムノケミストリー
（Experimental Immunochemistry）第225頁
（1961年発行）に記載された方法によつた。 実施例１〜10、比較例１〜４ 人免疫グロブリン（コーンのエタノール分画法
によるフラクシヨン）の15％溶液300mlに、テ
トラチオン酸ナトリウム7.5ｇをPH7.2食塩加0.1M
リン酸緩衝液50mlに溶解した溶液と亜硫酸ナトリ
ウム12.3ｇをPH7.2食塩加0.1Mリン酸緩衝液100ml
に溶解した溶液とを加え、42℃で4.5時間反応を
行つた。反応終了後反応液を氷冷し、0.9％食塩
水溶液に対して透析することによりＳ−スルホン
化免疫グロブリン溶液を得た。 このＳ−スルホン化免疫グロブリンの５％溶液
10mlに、第１表に示した如き添加剤（本発明にお
けるPKbが７以下の窒素塩基性有機化合物の水
溶性塩又は比較のための添加物）を所定量添加混
合した。そして添力１時間後と４℃で３週間放置
後に、Ｓ−スルホン化免疫グロブリン中の単量体
の含量と抗補体価の測定を行ない、それらの結果
を第１表に示した。

【表】 第１表からPKbが７以下の窒素塩基性有機化
合物の水溶性塩を添加して得られたＳ−スルホン
化免疫グロブリン組成物（実施例１〜10）は、比
較例のものに比べて凝集体が解離せしめられたた
めに単量体含量が高く、かつ抗補体価も非常に低
くなつていること、そしてかゝる状態は３週間経
過後も実質的に保持されていることがわかる。 実施例 11 Ｓ−スルホン化免疫グロブリン（実施例１のも
のと同じ）の10％溶液を、硫酸ナトリウムによる
塩析で精製したものの５％溶液10mlに、−アル
ギニン塩酸塩１ｇを加え４℃で１週間放置した。
このものの抗補体価は3.5、単量体含量は93.0％
であつた。−アルギニン塩酸塩を加えないもの
は、抗補体価が17.6、単量体含量が78.5％であつ
た。 実施例 12 Ｓ−スルホン化免疫グロブリン（実施例１のも
のと同じ）の10％溶液を、アクリノールで精製し
たものの５％溶液10mlに、−アルギニン塩酸塩
１ｇを加え４℃で１週間放置した。このものの抗
補体価は2.7、単量体含量は91.9％であつた。
−アルギニン塩酸塩を加えないものは、抗補体価
が15.1、単量体含量が77.5％であつた。 実施例13〜17、実施例５〜７ Ｓ−スルホン化免疫グロブリン（実施例１のも
のと同じ）の10％溶液10mlを、PH４の0.1M酢酸
緩衝液で透析した後、ハンソンらの方法（アクタ
ヒミカ スカンジナビア（Acta Chamica
Scandinavica）第22巻、第490〜496頁（1968年
発行）参照）に従つて酸処理を行い、その後PH
7.0の0.5M食塩加0.05Mリン酸緩衝液に対して透
析することによつて中性に戻し、PH４の酸処理Ｓ
−スルホン化免疫グロブリンを12.5ml得た（濃度
7.6％）。 この酸処理Ｓ−スルホン化免疫グロブリンの５
％溶液10mlに、第２表に示した如き添加剤（本発
明におけるPKbが７以下の窒素塩基性有機化合
物の水溶性塩又は比較のための添加物）を所定量
添加混合した。そして添加１時間後と４℃で１週
間後に、酸処理Ｓ−スルホン化免疫グロブリン中
の単量体含量と抗補体価の測定を行ない、それら
の結果を第２表に示した。

【表】 第２表からPKbが７以下の窒素塩基性有機化
合物の水溶性塩を添加して得られたＳ−スルホン
化免疫グロブリン組成物（実施例13〜17）は、比
較例のものに比べて、長期間にわたつて凝集体の
生成が抑制され、かつ抗補体価が低く維持されて
いることがわかる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ Ｓ−スルホン化免疫グロブリンと、Ｓ−スル
   ホン化免疫グロブリンに対し10〜600重量％の解
   離指数PKbが７以下の窒素塩基性有機化合物の
   水溶性塩とからなるＳ−スルホン化免疫グロブリ
   ン組成物。 ２ 窒素塩基性有機化合物が炭素数１〜４のアル
   キルアミンである、特許請求の範囲第１項記載の
   Ｓ−スルホン化免疫グロブリン組成物。 ３ 窒素塩基性有機化合物がイミダゾール又はそ
   の誘導体である、特許請求の範囲第１項記載のＳ
   −スルホン化免疫グロブリン組成物。 ４ 窒素塩基性有機化合物がグアニジン又はその
   誘導体である、特許請求の範囲第１項記載のＳ−
   スルホン化免疫グロブリン組成物。 ５ 窒素塩基性有機化合物が塩基性アミノ酸であ
   る、特許請求の範囲第１項記載のスルホン化免疫
   グロブリン組成物。 ６ 窒素塩基性有機化合物が中性アミノ酸のアミ
   ド誘導体である、特許請求の範囲第１項記載のＳ
   −スルホン化免疫グロブリン組成物。 ７ 窒素塩基性有機化合物がグルコースのアミン
   誘導体である、特許請求の範囲第１項記載のＳ−
   スルホン化免疫グロブリン組成物。