JPS5959626A - 抗血友病因子濃縮物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は！Ｉｌ規な抗血友病因子濃縮物およびその製造
力泳に関し、かつそれらを提供することを目的とする。

庫拍明のはかの目的は、１．ノ、下の説明から明らかと
なるでりろう。特記しないかぎり、部および百分幕は重
量による。

境仕、抗血友病因子（ＡＭ１勺、あるいは因子■として
知られている、はヒトの血漿から調製される。低温沈１
ｐｑｇ　（（、”ｒｌｌｏｐｒｅｃｔ、ｐｉｔａｔｅ）
を新らしく凍結したヒト血漿の融解プールから遠心分離
により回収し、グイサーにかけ（ｄｉｃｅｄ）、洗浄し
て可溶性クン・セフ賀勿除去する。次いで、低温沈殿物
を水で抽出または可溶化する。この水浴液のｐＨをわず
かに酸性にし、この溶液を冷却して１４負の非ＡＨＦタ
ンパク質な公爵する。次に、水浴液を水酸化アルミニウ
ムで処理して、望筐しくないタンパク買、とくにグロト
ロンビン複合タンパク質を除去する。このアルミニウム
水酸化物を用いる精製技術は、Ｅｅｒｓｈｇｏｌｄ　ｅ
ｔ　ａｌ、　Ｊ、　Ｌａｂ。

３２ページ［Ｍｏｚｅｎ著、ｔｈｅ　Ｔｗｅｎｔｙ−Ｆ
ｏｕｒｔん。

Ａｎｎｕａｌ　Ｗａｙｎｅ　５ｔａｔｅ　Ｕｎｉｖｅｒ
ｓｉｔｙ　Ｓｙｒｎｐｏ−ｓｉｎｍ　　ｏｎ　Ｂｌｏｏ
ｄ、Ｄｅｔｒｏｉｔ、Ｍｉｃｈｉｇａｎ（Ｊａｎｕａｒ
ｖｌ　９７６　）およびＸＶ　　Ｃｏ？１．ｇｒｅｓｓ
　ｏｆｔｈｔｔ　Ｉｎｔｇｒｎａ、ｔｉｏｎａｌ　　５
ｏｃｉｅｔｙ　ｏｆＩｉｅｍａｔｏ−１ｏｇｙ、　Ｊｅ
ｒｕｓａｌｅｍ、　ｌ５ｒａｅｌ　’（１９７４）　］
および米し１特許第４．１７０．６３９号（Ｌｉｕ　ａ
ｔ　ａｌ。

１９７９年１０月）に記載された。塩および緩衝剤を水
溶液に加え、次いでこの水溶沿のｐＥｔわずかに酸性に
ｈ）４整した後、これを凍結乾燥する。

大川、極の処理において、水性ＡＥＩ”濃縮から水を除
去した後、それを凍結乾燥することが望ましい。この目
的に、ＡＥＦ濃縮物を再沈殿させた後、凍結乾燥する。

水溶液を冷エタノール、ポリエチレングリコーノへまた
はグリシンで処理し、これによシＡＨＦタンパク質を沈
殿させる。沈殿を遠心分離によシ集め、水、緩衝剤、生
理的食塩水、および酸と混合し、そして凍結乾燥する。

米国％許第４．１７０．６３９号（ＬｊｌＬ）は、水性
ＡＨＦ抽出液を、水酸化アルミニウムで和製し、緩衝液
および生理的食塩水で書構取し、そして酸性ｐＥＫ訴整
した後、限外ｖ５過して濃縮し、次いで凍結乾燥できる
ことを開がしでいる。限外渥過ｔよ、酸性ｐ７７にｒＡ
整し、再イ・ｈ成しブヒＡ　ＨＦ　１１４１出液につい
てのみ、分子ｂ；カットオフ　（ｃｕｔ−ｏｆｆ　）が
１００力ダルトンでりる膜を用いて実施される。

本発す」者らは、Ａｎｐタンパク質の水溶液を精製して
望ましくないタンパク賀を除去した後であるが、それを
緩衝剤および生理的食塩水と混合しかつそれを酸性のｐ
Ｈに調整する前に、前記Ａ１１ｐ′水浴液を限外沖過す
ることによりそれから水を効果的に除去できることを見
出した。

本発明者らの研究によると、水の除去は本発明の方法Ｑ
・−おいてＡノｌＦタン・ぐり貿の活性を有意に変化さ
せないで達成されることが示された。先行技術の方法に
おいて用いられる限外沖過技術は、ＡＩＩＦ活性の収率
を減少させ、この蕗少は本発明の方法により予期されな
いＩユとに回避される。

本発明の王な利点は、Ａｌ１Ｆ活性を本質的に完全に回
収するということである。従来の再沈殿および限外沖過
法は、因子■を不完全に回収し、これは多分、４　ｎ　
ｐタンパク貿の俊１哩によるものと思われる。％　Ｑｊ
剤訃よひ生理的食塩水との混合および７）　ＨＷＩ”ｌ
整の少なくとも５時間前において、限外濾過を通用する
本発明の方法において、Ａ　／／　’Ｆ活性の有意の減
少は観測されない。先行技術の限外ｐ過汰は、抗血友病
因子の約１５％以上の損失を生する。

本発明のさらに他の利点は、不発明の方法の生成物中の
ホン・ウイレプラント　（ＶａｎＷｉｌ　ｌ　ｅｂｒａ
ｎｄｔ　）因子（■Ｒ：＃／′ｐ°）ノ含誓が有意に高
いということでめる。実質的に同じ比率で■Ｒ：ｌＦ’
Ｆおよびプロコアギュラント　（ｐｒｏｃｏ−ａｇｒｂ
ｌａｎｔ　）因子（■：Ｃ）を官有する生成物を得るこ
とが可能である。このような生成物は、自然の■：Ｃ′
の状態にいっそう近接して近づき、ホン・ウイレプラン
ト恵者、うなわぢ、ホン・ウイレプラントの病気に悩−
よ嘔れる恵省に逸するであろう。芒らに、この生成物の
生体内の半減期は増加する。一般に、本発明の生成物中
の■：Ｃ゛／■Ｒ：　ｔｊ／　Ｆ’比は約１　／　０．
５〜ｌのル１）凹円、通常約１／ｌでｂ＃）、これＩ／
Ｃヌ・Ｊしてアルコール沈殿法において上の比は約１７
０．１〜０．４、通常１　／　０．２でおる。本発明の
生成物中の■Ｒ：　ｌｉ　Ｆの濃度は、１５、Ｍｉ位／
−より大きく、一般に約１５〜３０単位／―であシ、時
にはｉｏｏ単位／ゴ程度に高い。

たとえｄ゛、＃縮のアルコール沈殿工４￥を用いて倚ら
γした■Ｒ：ｉメｌ゛の両度は、一般Ｖご１５卑位／彪
より小、すなわち約５〜ｌＯ里位／屑ｅでのる。

小鎖明の他の利点は、ＡｆｌＦタンノ七タ負対フイプリ
ノーケ゛ンのミリグラム数の比がＣ３！艮ｄｒＬゐとい
９ことでめる。従来の丹沈紋τ用いて付しれるものより
も増大したＡ、／７Ｆｃ脂舶物の収率は、率位投力風当
シのフイグリノーケ゛ンの鮒を巾慈１こ増大する。こう
して、大きい体積のＡＩＩＦ碗相物を受は取る思考にお
けるフィブリノ−ダンり過剰投与は、＋−拍明の生成物
ケ用いるごとＶ（°より回雁することができる。本究明
の生ｊμ物のＡｉｉ　Ｆタンパクη対フィブリノ−ダン
のミリグラム数の比（■：ｃ　７雫ψ）Ｖユ、約２．６
〜４０／１の卸凹円、運常約３．０　／　ｌに低下する
。元イゴ代１ト］ｖ仁より用いられる小組のアルコール
や）沈殿性（メヒ：ｂ・いて、板長生成物の■ｕ　：　
Ｃ／　ｍｙψ比は約１．０〜２．．５／１．−ｉに約１
．５／Ｉテ、ｌｂ、６゜改良サレ；／ｃＶＩｌ　：　Ｃ
’　７ｗ　Ｒ：　ＷＦ“および■：Ｃ’／ｌｖφを有す
る本発明の生成物は、従来入手できなかった。

前述のよりに、Ａｌ１Ｆ＠縮物はヒトの血漿から得られ
る。一般に、ＡＨＦ＠縮の訴製は、Ｈｅｒｓｈ−ｇｏｌ
ｄ　ｅｔ　ａｌ、　Ｊ、　Ｌａｂ、　Ｃ’ｌｉｎ、　Ｍ
ｅｄ、、ｓｗｐｒａ、に最初に記載されている方法の修
正および改善にょシ実施される。ヒトの新らしい凍結血
漿の５℃よシ低い痛１度において融解したプールから、
低温沈殿を除去する。低温沈殿を、ダイヤ”−にかけ、
緩衝液で洗浄し、次いで水中に可溶化する。水性ＡＥＦ
溶液のｐＨを、生物学的に１容憾れうる酸、この特定の
型の酸はこの分野でよく知られている、の添加によシロ
、４０〜６．９５の範囲内に調整することが好ましい。

１０℃より低く冷却した後、形成する沈殿がおるときは
、それをデカンテーションまたは遠心分離により除去す
る。活性ＡＩｌ　Ｆ）成分を官有する水浴液を、アルミ
ニウム水酸化物と混合して、望ましくないタンノリ１を
が択的に除去する。ｐ　１１が全体を辿じて帛実上−足
にとどまるといりことは、この処理のＩＰ′徴でわる。

アルミニウム水酸化物処理の結果、承ましくないタンパ
ク賀はＡ　Ｂ　ｌ？効力を夾質的に損失しないで水性Ａ
ＲＰ溶液から選択的に除去される。本発明の方法ケ増用
するのｅユ、この精製された水溶液でりる。

本発ψ」によれは、上のように処理した水性Ａｌ１Ｆ溶
液を限外濾過する。この浴液ケ特矩の半塩膜とに触さぜ
、これによシｎＩ望鼠の水を除去する。

すなわち、除去したとき、最終溶液の凍結乾燥を大きく
促進する缶の水を除去する。本発明の方法に、Ｉ＋：・
ＪするＩＩｒＡは、１００万ダルトンより小８い、好ま
しくは１０．０００〜３υｏ、　ｏ　ｏ　ｏダルトンの
範囲内の呼称分子ｉカットオフ（ｃｕｔ　−ｏｆ　ｆ’
　）をもつべきである。１００万ダルトンの分子かカッ
トオフをもつ膜はＡＨＦタンパク質を物理的に捕捉し、
こりして、Ａ　１１　Ｆ　ｙ、：′絹物の収量は減少す
る。本発明ＶＣおいて１すご用できる（対応する呼称分
子伊カットオフ（ｉ−もつ）典型的な限外ｒ過膜は、ア
ミコン（Ａｍｉｃｏｎ　）　ＸＭ　５０　　（５０，０
００ダルトン、アミコン・コーポレーション、マサテユ
セッッ州レジシントン、製）、アミコン７）ＭｌＯ（１
０，０００ダルトン）、アミコンＸ＃１ＯＯＡ　（１０
０，０００ダルトン）、アミコンＸＭ３００　　（３０
０，０００ダルトン）などである。本究明の好ましい実
施態様ＶＣおいて、水性ＡＨＦ＃液の限外濾過は、限外
ｐ逼装置において中空繊維を用いて、たとえば、アミコ
ンＩＪＣ’３０（３０士ガフィートの濾過面積）申窒繊
維装崗゛においてアミコンＨ１０Ｐ１０（１０，０００
ダルトン）　カートリッジのような限外濾過膜などを用
いて、実施する。

本発明の方法を実施するとさ、限外濾過膜壁における層
がｒ、および剪断のズ（１度は低いことが好ましい。２
０００より小ざいレイノルズ数、りｆましくは２００〜
３００の範囲内のレイノルズ数の壁における層流速度、
および１０００逆秒（ｓｅｃ−’）よシ小δい、好１し
くは２００〜３００　ｓｅ（’の軒５囲ビ」の壁におけ
る剪断速度を用いて、きわめてすぐれｆｃ精果が連成さ
れる。本発明に促うｙＫ浴偕の限外濾過の間に膜壁にお
いて、流速を筒＜シ、文゛の、８１ニエ果生する剪断を
高くすると、−縮されたＡＨ７ｆ’生成物はより短かい
処理Ｊ間で生することが、もちろん、絋められる。しか
しながら、ＡＨＦ濃縮物のｌ６肚は、こ７’Ｌらの菌い
速厳において、Ａ１１ツバタンパク質の変性のため、減
少する。これに関して、唸だ、ＡＩＩＦタンノクク臂の
渡性を最小とする目的で、空気の吸収および剪鵬の場Ｖ
（−おける他の界面効果、たとえＶよ、発泡などを最小
とするために、特別の注意をしなくてはならない。

限外Ｖ過の間に用いる型の再循環ポンプは、本発明の１
つの電装な面である。ダイヤフラムポンプはＡＨＦタン
ノクク質の変性を最小にし、これに対し、遠心ポンプは
その使用の間にＡＩＩＦタンＡ？り質の活性が過度に損
失するために望ましくない。

限外テ過工程において使用するのに適したポンプは、た
とえば、Ａｍ１ｃｏｎ　ＬＰ−２０（ＡｍｉｃｏｎＣｏ
ｒｐｏｒａｔｉｏｎ）空気圧作動ダイヤスラムポンプオ
ヨヒワレンーラップ・サンドバイＡ−（Ｗαγｒｅｎ−
Ｒｗｐｐ　Ｓ　ａｎｄｐｉｐｅｒ　）ポンプ（ＳＡ　１
−Ａ　−ＤＢ−１−ｓｓ型）　　（Ｔｈｏｍａｓ　ａｎ
ｄ　Ａｓ５ｏｃｉａｔｅｓ。

Ｃ″ｏｒｔｅ　Ｍａｄｅｒａ、　Ｃａ１ｉｆｏｒｎｉａ
　）である。

水性ＡＪ、ｉＦ溶液の限外ｐ過後、この溶液を、従来の
ように、緩衝液および生理的食塩水と混合する。この目
的に、塩化ナトリウムを水性抽出液に生理学的ＶＣ許容
されうる矩で、通常０．０５〜０．３０七ル、好’ＥＬ
＜は０，１５モルリレベルで加える。

さらに、赤当な生理学的に旧’＜−されうる緩衝剤、た
とえは、クエン醒・ナトリウムを、・これに０．００５
〜００３モル、々Ｊまｌ、、（ｉｏ、０１モルのレベル
で加える。心安に応じて、水性抽出液のｐＢを６゜４〜
７４０範匹１内〔食物および業物の投与（Ｆｏｏｄａｎ
ｄ　ｌ）ｒｕｇ　Ａｄｒｎｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）の
規則によシ確立された〕に生理学的に許容されうる酸の
添加によシ、＋＋・す整する。水性Ａ　ＨＩ”浴液を沢
過して粒子を除去し、次いで滅菌ｒ遇する。

水性Ａｌ１Ｆ溶液から水を除去するための限外ｐ過は、
溶液と緩衝液および生理的食塩水との混合前に、浴液へ
通用することに注意することが軍装である。でうでない
と、上に列埜した利益および利点、とくにｙｌ　ｌｉ　
Ｆ生成物の収率に関する、が実現８れない。

七のように処理された水性Ａ１１１＝梢液の滅菌濾過抜
、浴液を凍結乾燥する。溶液は、この分野でよくノ、１
１られているように、急速保給すべき過当な大きさの容
器へ無菌的に充填し、凍結９勿實を？Ｍ箱乾燥する。凍
結乾燥した物理を内部に鴇む容器を密閉し、生成物を使
用するびで約２〜８℃の温度で）ｔｉ’蔵する。

注入りため、谷谷益の内容物を無酌蒸貿水中に再構成し
て、ｆｔＩま２５ＡＨＦ活性単位／ｍｌ會言有する溶液
を生成する。

再構成した敢、１１の凍結乾燥した生成物の５および珈
明吸を改良するために、前述の限外涙適佐、ダリシン沈
殿工程′＋ｃ実施ずゐことは、本発明の乾四ビ」であめ
。この目的ＶＬ１限外Ｆ’逸した水浴液をグリシンと、
約１６〜′２．．２モル、好１しくは１．９モルの１１
部７ｍ度に、Ｙ’Ｊ５〜２０℃においてン昆合する。必
賢に尾、して、この混合物をクエン酸ナトリウムおよび
生理的食塩水とで扛それ０．００５〜０．０３モルおよ
び０．０５〜０．３０モルの嬢肢に混合する。この混合
物を約３０分間功上、好ましくは３０〜１２０分間、最
適には６０分間保持する。

上の数示に従って調製した、凍結乾燥生成物を再構戚す
ると、それは淡黄色および８０％より大きい透明展′ｆ
ｆ：＋、ｔする。

前述のダリシン沈厳工桿は限外濾過したＡＨＦ浴液に遍
用しなくてはならないことは、注目するに値する。限外
ｒ過工杵ケ省略すると、ＡＨＦ活性のはは半分は最終生
成物にふいて失なわれる。

さらに、グリシンの処理が１仄功しかつＡ　Ｈｉｒ”活
性の損失が回か塾ｒしるためには、水伯二Ａ　１１　Ｆ
浴液Ｖ」、グリ７ンの処Ｌ＋４１ｆ」に、少なくとも５
０１ル？／ｄのり／バクηｆ：君南しなくてはならない
。

グリシン処理の結果とし１−形成する沈殿は、普通の手
段、たとえは、遠心分離、Ｐ遍などにより、Ａ１１Ｆ溶
液から分離され、そして沈殿は前述のように緩衝液およ
び生理的食塩水の中に溶解される。

上のようにｐＨを調整した後、水性ＡＨＦ溶液を凍結乾
燥して、乾燥したＡｌｉ　Ｆ＠縮絹物得る。

明らかなように、水分が減少した、限外濾過したＡＢＦ
溶液は、見金には乾燥していないが、ＡＩＩＦ＠紹１１
勿でりると考えられる。

実施例 本元明を次の実施例によシ、さらに鮫１明する。

実施例において、合計のタンパク芦は２８０ナノメータ
ーにおける吸収の測尾によ仄定量した。

プロコアギュラント活性（■：Ｃ“）は、Ｌａｎｇａｅ
ｌｌ　　ｅｔ　　ａｌ、　　ノ、Ｌａ　ｂ、Ｃ’　ｌ　
ｉｎ、Ｍａｄ、。

Ｖａｔ、４ｉ、６３７−６４７　（１９５３）およびＰ
ｒｏｃｔｏｒ　ｅｔ　ａｔ、　　Ａｍ、Ｊ、　Ｃ”ｌｉ
ｎ、ｐａｔｈ、、Ｖｏｌ。

３６．２１２　　（１９６１）の方法を修正した１段階
活性化部分的トロンボプラスチン時間（ｏｎｅｓｔａｇ
ｅ　Ａｃｔｉｖａｔｅｄ　Ｐａｒｔｉａｌ　Ｔｈｒｏｍ
ｂｏｐｌａｓｔｉｎＴｉｍｅ　（ＡＰＴＴ）：）試験に
より検定した。

リストセチ：ｙ　（Ｒｉｓｔｏｃｅｔｉｎ）−ウイレグ
ラントレ４子活性（■Ｒ：ＷＦ）は、０１ｓｏｎ　ｅｔ
旦。

８（１９７５）に従うケ゛ル濾過血小板を用いて検ボし
た。

短鎖的因子１抗原（■ｌＲ：Ａｇｌの足動は、−５２（
１９６６）の手順に従い実施した。

タンク’Ｊｔに関係する因子ｖＨｃ幻する抗拙Ｙ（〜は
、ベーリング・ノイアグノステツクス（Ｊゴｅｌ乙ｒ　
ｉｎｇＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、）　（Ｓｏｍｍｅｒｖ
ｉｌｌｅ、　Ｎｅｗ　Ｊｅｒｓｅｙ）から倚た。

タンパク餉種の分布は、酢酸セルロースの電気体動によ
９株厘した。

実施例 ヒトの新らしい血漿を５℃ｉＶ下で融解し、１５℃以下
に加温した。そのように加温した血漿を２℃に冷却し／
ζ。３時１０］後、不溶性低温沈殿を１０℃以下におけ
る遠心分離により集めた。

低温法Ｊｌ（ＩＫｙ）をグイサーにかけ、１０７の無菌
水中に３２℃において２向１１．ｉＪ以内に懸濁婆せた
。次いで、混合物’（ｉ　０．１１Ｖ塩酸の添加により
ｐｈ６８にｈｉし、５℃に冷却した。沈殿を５℃にふけ
る遠）し・分離によシ除去した。

水浴液（上７ｆｔ１に小水中のアルミニウム水酸化物の
３％の悉俺液と、０．１Ｆのアルミニウム水酸化物対ｉ
ｒのタンパク餉の比で混合した。この混合物を５℃で３
０分間かき１ぜ、アルミニウム水酸化物を？５過および
遠心分離によシ除去した。

実施例２ 細イ＋＜　＜Ｉｏｈ、ｉｎ　Ｃｈａｎｎｅｌ　）中のＡ
ＢＦ溶液の限外済過 実施例１７Ｊ・らの水溶液（３００ｒｎ！、）を、％定
した温ＩＷにおいてアミコンＴＣＰ−１０細いみぞ系に
あける柿々の細いみぞの限外濾過膜を辿して、限外沖過
して、５０ｍｅの体積に濃縮した。用いた膜はアミコン
ＸＭｓｏ、アミコンＸＭ１００Ａ。

およびアミコンＸＭ３００（ｆべてアミコン・コーポレ
ーション）、ミリポア（ＭｉＬｌｉｐｏｒｅ）　ＰＳＶ
Ｐ（ｌＯ’　　ダルトン、ミリボア・コーポレーション
、マサテユセッッ州ベトフォード）でめった。限外沖過
材料は、口１」述の方法により分析した。

結果を衣ｌに安約する。

実施例３ 中規模実験 実施例１におけるように調製した水性Ａ１１Ｆ溶液（２
０７）を、有効濾過面積がｌθ平方フィート（０，９３
ｍ’）　／カートリッジでありそして呼称分子保持限外
がＩ　Ｏ，０００ダルトンであるアミコアＨ１０７’Ｉ
Ｏカートリッジを用いる、アミコン１）Ｃ’３０中繊維
装匝にょシ限外濾過して、溶液を４ｔの体積に濃縮した
。

θ１１述の方法に関連す４限外ｐ過しだイΔ料の分析の
結果勿、表２に記載する。

限外濾過しだ材料をクエン酸ナトリウムおよび塩化ナト
リウムと、０．１５−Ｅルの塩化ナトリウムおよび０．
０１モルのクエン酸ナトリウムのレベルを得るために十
分な量で庇付した。次に、構成した拐料のｐ　Ｈｆ：ｌ
Ａ’塩酸の徐加により６，９に調整した。次いで、ＩＯ
−の各構成材料をバイアルに入れ、４００ミグロンよシ
低い圧力および一４０℃の出発貯′＃、温汲から＋３０
℃の完成貯蔵温度において凍結乾燥した。

実施例４ 実施例１におけるように調製した水性ＡＨＦ溶沿ヲ、ア
ミコンＩｌ　ｌ　ＯＰ　１０カートリツジを用いるアミ
コンＤＣ中窒繊維の装−により限外濾過した。

３回の実験の結果を、下表に記載する。

′大流１ｕｌｌ　５ それぞれ実カニＩ帽ＩＪ　３、実ｈ１．２および３から
の限外濾過した濃縮物を、酢酸セルロースの電気泳動に
伺して、タン・ぞり買種の分布を決定した。

結果を下表４に要約する。

実施例６ 実施例４におけるように調製した限外沖過した４Ｊｔｐ
“溶液（８，６７３を１２℃に冷却し、クエン酸ナトリ
ウムと０．０１モルの濃度に混合し、塩化ナトリウムと
０．１５モルに混合し、そしてグリシンと１．９モルの
強度に混合した。混合物の温展を５℃に下げ、処理を通
じて５℃に維持した。１時向後、この混合物を５℃にお
いてスタティック（Ｓｔａｔｉｅ）　モードで８５００
Ｘｆにおいて３０分間遠心分離し、セしてペーストを流
出液から分離した。

ダリシン処理からのペーストを最終の容器の緩衝ｈ　（
ｏ、　ｏ　１モルのクエン酸ナトリウムおよび０゜１５
モルの生理的食塩水）中に溶かし、そしてこの溶液の一
部分を前述の手順に従い分析した。

上の溶液の残シの部分を一７０℃で３０日間凍結し、融
解し、上のように分析した。

結果を下表に要約する。

■：Ｃ゛　　　■Ｒ：ＷＦ 試料　　Ａｇｏ　　（μ／ｄ）（μ／−）限外濾過溶液
　　　８０．６０　　　４５．８　　　４４．２５溶解
したペースト グリシン処理後　４７．１０　　　３３．６　　　３９
．０凍結および融解　４７．１０　　　３１．７　　　
３５．０後 上からの凍結した溶液を融解し、予備濾過しだ。

テ゛キストローズな１％のレベルに加え、この浴液のｐ
Ｈを１モルの塩酸の添加により６．９に調整した。この
溶液を０．４５μ７０．２２μボール（ＰＧＡ１）フィ
ルターで濾過して無曲太餉槽に入れ、これら各１０ｍ＃
の溶液をバイアルに入れた。バイアルの内容物をストー
クス（Ｓｔａｋｅｓ）凍結乾燥器でｉｉＪ述のよりに凍
結乾鋏した。

１侶１のバイアルからの凍結乾燥物を、最終容器の緩衝
液中で楕成し、上のように分析した。

次の結果が得られた： 比油性（■：Ｃ゛基準）：　　　０．８９溶解時間：　
　　　　　　　３分３８秒〜佃Ｒ：ＷＦ＜μ／ｍ１） （ｉ二ｉｏｏ希釈）：２Ｚ５ ■ｌイ：Ａｒｔ　　（μ／−） （１：２００希釈）二８１ 透明度　　　　　　　　：〉８０％ 透明吸は５８０ナノメーターにおける試料の透過率の測
定によシ決定した。対照すなわち標準は水であシ、そし
て透明度は試料の透過率（５８０）／水の透過率（５８
０）ｘｔｏｏで表わした。

的ｒト出顔人　マイルス・ラボラドリース・インコーポ
レーテツド

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、　ボン・ウイレプラント因子およびプロコアギュラ
   ント因子ｔ　ｆＪｏ、　５〜１／ｌの比で君侶する抗血
   友病因子濃縮物。 ２　ホン・ウイレプラント因子の濃度が洞１５単位／−
   以上でめる儲ｒ＋一層末の卸、囲＄１項記載の生成物。 ３、　ホン・ウイレフ゛ラント因子対プロコアギュラン
   ト因子の比が幻ｌ／１である相許精求の＃ｌＩ’囲第１
   項第１項記載■物。 ４、　プロコアギュラント因子対ソイブリノーグンのミ
   リグラム７ｔの比が約２．８〜４／１である抗血友病因
   子濃縮物。