JPS59176215A - 静脈内に適用するための副作用のないＩ↓ｇＧ−免疫グロブリン溶液の製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、静脈内注射用の安定な透明水溶液の形で使え
る、自然血漿と比較して元のままの補体結合作用を示す
、化学的に修飾されていない、副作用のない、非常に純
粋な１．工ｙａ−免疫グロブリン分画を製造するだめの
改良方法に関する。

免疫グロブリンの通常の分類はＢｕ工工、Ｗ＜）ｒｌａ
Ｈｅａｌｔｈ　Ｏｒｇ　３０．１９６４．４４７に従っ
てメイ７−りラスと該グロブリンに在存するポリペプチ
ド鎖とを表わす記号を含む名称によって行われる。従っ
て本発明では工ｆという記号を免疫グロブリンのために
使用し、それぞれの免疫グロブリンのクラスを更に詳し
く表示するために大文字を後に置く。単量体の工ｆＧ−
免疫グロブリンは文献では７Ｓ工ｇＧと表示されている
。

プールした血漿からの工ｙａで表示する免疫グロブリン
分画は、桟々の病原性微生物に対する抗体を含有し、な
かんずくウィルス感染及び細菌感染の予防及び治療に使
用される。それ故、ＩｆＧ−免疫グロブリンの単離及び
精製は、受動免疫化製剤の調製のために医学において特
に重要である。

人間の血漿まだは血清から免疫グロブリンを得る種々の
方法が既に知られている。例えば工ｙＧ−免疫ｆロフリ
ンはコーン等のアルコール沈殿法（Ｊ、　Ａｍ、　Ｏｈ
ｅｍ、　８ｏｃ、　６８．４５９−４７５゜１９６４及
び同誌７２　、４．６５〜４７４゜１９５０、米国特許
第３．５９７．４０９号明細書で更に発展している）に
よって血漿分画■又は１１＋Ｉに富化することができる
。他の既知の方法は、沈殿処理とりパノール及び硫酸ア
ンモニウムとを組合わせることにある（　Ｊ、　Ｈｏｒ
ｅｊｉｓｉ。

Ｒ，Ｓｍｅｔａｎａ；　Ａｃｔａ　Ｍｅｄ、　５ｃａｎ
ｄ、、　Ｂａ、　１５５．６５〜７ｏ、　１ｑ５６）　
。

更に、前記諸方法によって製造した免疫グロブリン製剤
は補体を非特異的に固定する（これについてはＳ、　Ｂ
ａｒａａｕｎ、ガンマグロブリン療法。

Ｋａｒｇｅｒ　出版バーゼル、１９６４を参照）ので筋
肉内投与にだけ適するということが知られている。静脈
内に投薬すると、特に無ガンマグロブリン血症の患者達
で、多分ショックにまでなる急性の反応が起シうる。自
然の＃量体の７８−　工ｙａ−免疫グロブリンから血漿
分画化の過程で一部分ダイマー及びオリゴマーの免疫グ
ロプリンアグリゲートが生じ、これが静脈内注射の際に
補体の系を活性化するということが既に証明された。こ
の現象は抗拒補的活性と言われ。

前記反応の原因になる。他方、大抵の症例で治療上必要
な免疫グロブリン濃度は静脈内投与によってだけ達成さ
れる；なぜなら筋肉内注射したＩＪＧは、注射の場所で
の悪い吸収性及びタンパク質加水分解の減成反応のため
に、遅れて一部分だけ血液循環に入るにすぎないからで
ある。

従って、静脈内で和合する製剤を得るために、既に拙々
の方法が開発された；それらの方法は、分画化後の抗拒
補的特性を減らすこと又は従来の分画化処理の間の免疫
グロプリンアグリゲートの生成を阻止することを目ざし
ている。

Ｈ，Ｅ、５ｃｈｕｌｔｚｅ（Ｄｔｓｃｈ、　ｍｅｄ、　
Ｗｏｃｈｅｎｓｃｈｒｉｆｔ８７．１６４３〜１６５０
，１９６２）によってそして後にＡ、　Ｎ１５ｏｎｏｆ
ｆ　（５ｃｉｅｎｃｅ　１３２，１７７０゜１９７０）
によって提案された方法では、ペプシンで処理すること
によって工ｆＧ−分画から抗拒補的活性を除くことがう
まくいく。しかし、ペプシンのほかにプラスミン（Ｓ、
　Ｂａｒａｎｄｕｎ等２　　。

Ｖｏｘ、　Ｓａｎｇ、　２８．１５７．１９７５　）も
提案された免疫グロブリンの酵素処理では、タンパク質
が著しく個々の抗体断片、抗体分子のＦ　（ａｂ）　２
一部分、Ｆａｂ一部分及びＦＣ一部分に分解され、自然
免疫グロブリンに比して著しく短い半減期及び狭い生物
学的効果を示す製剤が生じる（これについてはＥ、　Ｍ
ｅｒｌｅｒ等の研究論文、　Ｖｏｘ　Ｓａｎｇ、　１３
　。

１０２　、１９６７を参照）。

Ｓ、　Ｂａｒａｎａｕｎ等の研究論文（Ｖｏｘ　Ｓａｎ
ｇ　７゜１５７〜１７４．１９６２）から、補体を不活
化する免疫グロブリン分画が６．８〜４の部位での酸処
理によってその抗拒補的活性を一時的に失うということ
が既に知られている。酵素分解と比較して酸処理には、
ｘｙＧ−分子が極度に無傷のままであって修飾されない
という長所がある）Ｊ、ＲＯｍ１９ｒ等、　Ｖｏｘ　−
Ｓａｎｇ、　４２．６２〜７５゜１９８２）。しかしバ
ランダンが記載したやシ方では、中性領域へのｐＨ値の
リセットによって花色の溶液として得られる、比較的長
く放置すると沈殿を析出する、貯蔵中に再び抗拒補性に
なる傾向のある、従って静脈内注射のだめの使用可能性
の制限される、製剤が得られる。

更に、Ｊ、ｌ：ｍｍｕｎｏｌ、　８９．５５６〜５４５
．１９６２のＬ、　Ｈ，Ｆｒｏｍｍｈａｇｅｎ　等の研
究論文から、自然血清中の事情によっては存在する抗拒
補的活性を無くするために人間の全血清を６３℃で２０
分間熱処理するのが適切であるということが知られてい
る。ドイツ特許第２，５２７，０６４号明細書には、出
発物質として使用する人血漿又は−血清を比較的長い時
間５０〜６０℃に殊に２時間５６℃に加熱した後にガン
マグロブリン分画を通常の分別法例えばコーンのアルコ
ール沈殿法又はリバノールー硫酸アンモニウムー分画化
によって分離する静脈内に適用するだめの自然免疫グロ
ブリンの製造法が記載されている。しかし、出発物質を
比較的長く加熱することには、人血清の個々の血漿タン
パク質が変性によって一部分凝結及び凝降しうるので、
後続の分画化を著しく困難にし且つ血漿分画化の他の生
成物の利用可能性を制限するという欠点がある。

そのほかに前記諸方法は単に従来の分画化法例えばコー
ンのアルコール沈殿法又はソバノール−硫酸アンモニウ
ム−法によって分別されだ免疫グロブリンの抗拒補的活
性を下ける教示に止まっている。しかしこれらの方法で
得られた製剤は単一でなく、出発物質及び分画化法の種
類に応じて大量のエダＧ−免疫グロブリンのほかに真性
グロブリン並びに工ｆＭ−及びＩＡ−免疫グロブリンも
種々の量で含有する。工ｙｈ−分画は同様に一定のウィ
ルスに対する免疫学的防御成分を有するが、抗−工ｇＡ
−抗体をもつ患者では急性の望ましくない副作用を生じ
うる（これについてはＳ、Ｂａｒａｎａｕｎ等、　ＶＯ
Ｘ　Ｓｏｎｇ、　７゜１５７７−１７４．１９６２を参
照）。従って、工ＰＧ−免疫グロブリンを用いる細菌及
びウィルス感染の免疫療法のだめに、工ｆＡ−含有量が
できるだけ減った製剤を使用することが好ましい。ドイ
ツ特許出願公開第４４０４．２６５号明細書にはクラス
によって分離した免疫グロブリン濃厚液を得る改良法が
記載されておシ、該方法では真性グロブリンを、アルコ
ール沈殿法で得た粗製免疫グロブリン分画の溶液から、
５．ＯＸ　１０　　ないし８．ＯＸ　１０３μｓの導電
率及び４．５ないし６、殊に５．１のｐＨ値に調節する
ことによって、沈殿させ且つ大きな部分を占める工ｙＡ
を、水酸化アルミニウムに吸着させることによって分離
することができ、それによシタ５チ程度の免疫グロブリ
ンが得られる。しかしこのドイツ特許出願公開第２．４
０４．２６５号明細書には抗拒補的活性を下げる方法が
記載されていないので、この製剤は明らかに筋肉内で使
用することだけが好ましい。

ところで驚くべきことに、全く一定条件で行われる真性
グロブリン沈殿法とそれに続く吸着処理、その後の酸処
理及び熱処理とを組合わせ、２のようにして得られた溶
液から数回の分別沈殿によって再凝集性のタンパク質を
分離し且つその後の二度の吸着処理によって低分子量の
随伴物質及びタンパク質加水分解酵素並びに発熱性物質
を除くと、今まで抗拒補的活性の除去と結びついていた
欠点が避けられ且つ５％以下のＩｆＡ−含有量を示す貯
蔵に対して安定な９５％以上の純度のＩＪＧ−免疫グロ
ブリン分画が得られ改良した方法によって、静脈内で使
用するだめの化学的に修飾されていない副作用のない工
ｙａ−免疫グロブリン溶液を製造することができるとい
うことが見いだされた。

従って本発明の対象は、若干の工程例えば沈殿、濾過、
吸着及び透析で■ｇＧ−免疫グ四プリン分画を精製及び
富化することによって、自然血漿と比較して元のままの
補体結合作用と高い安定性と５重量％以下の工９人−免
疫グロブリン含有量とを有する。静脈内に適用するだめ
の化学的に修飾されていない、酵素的に処理されていな
い、副作用のない、残渣のない、非常に純粋な水性のｘ
ｙａ−免疫グロブリン溶液を生産する方法にして、 （、）　　コーンによる分画…十Ｎ（粗グロブリン）ま
たはりパノール−硫酸アンモニウム−法によって得られ
だ粗免疫グロブリン分画を水溶液にし、沈殿剤の除去の
ために透析しそして真性グロブリンを、５Ｘ１０２μｓ
以下の導電率及び５．３ないし５．５のｐＨ値に０〜１
０℃で調節することによって沈殿させ、上澄みから酵素
活性を鉱物性ＶＭ剤に吸着させることによって分離し、
このようにして得られた上澄みの免疫グロブリンの工ｙ
Ａ−分画の大部分を。

（１、５〜１．５ｇ／ＩＪのＤＥＡＥ　（ジエチルアミ
ノエチル）−イオン交換体に６．５ないし７゜５のｐＨ
値で吸着させることによって除きそｌ〜て該吸箔１ｆｌ
ｌ庖分離し５次に （ｂ）　　このようにして精製及び富化した工９Ｇ−免
疫グロブリン溶液を、ｐＨ２，５〜４．２で酸処理する
ことによって安定化させ、次に （・・）　この溶液を中和１−１はぼ中性のｐＨ値で２
０〜４０分間４０〜５０°Ｃに加熱し、冷却後に１９−
Ｍ　　の圧倒的部分、変性タンパク質断片または他の集
合体を二工程の分別沈殿によって除き、この各場合に高
分子量のタンパク質沈殿物を分離した後にその後の精製
操作の基臂−にすべきＩＧ−分画を沈殿させ、最後の沈
殿のｘｙＧ−分画を水に溶解させて透析し、次に （ａ）　　透析物を再び水溶液に変え、これを低分子量
の部分の除去のために活性炭でそして活性炭の分離後に
得られた溶液を発熱性物質の除去のためにその場で沈殿
させた水酸化アルミニウムで７．０ないし８．０のｐＨ
値で処理し、水酸化アルミニウムを分離し、得られた溶
液から工ｙａ−分画を沈殿させそして使用しうる溶液に
変えることを特徴とする方法である。

本発明の対象は更に、この方法によって製造されたＩｆ
Ｇ−免疫グロブリン溶液、並びに上記工ｙＧ−免疫グロ
ブリン溶液を含有する製剤である。

出発物質として使用するコーンによる分画■＋■から又
はりパノール−硫酸アンモニウム−法によってイムられ
た粗免疫グロブリン分画からアルコールもしくは中性塩
を除去することは、ペースト状抑漿タンパク質を脱塩水
に懸濁させた後に４℃で６日間脱塩水に逆らって透析す
ることによって行われる。

真性グロブリンを沈殿させることについてドイツ特許出
願公開第２．４　ＣＩ　４．２６５号明細書には、ｓ、
ｏ　ｘｉｏ２　　ないし８゜ＯＸ　１０’μＳ　の導電
率及び４．５ないしろＯｐＨ値、殊に５．１のｐＨ値に
調節することが提案されている。ところで驚くべきこと
に、透析物を該透析物に対して１０ないし４０倍量、好
ましくは１５ないし２０倍量の脱塩水を加えることによ
って溶液にし１つ、希酸殊に２０係の酢酸で酸性にする
ことによって５．３ないし５，５．殊に５．４のｐＨ値
にそして６Ｘ１０　μｓ以下の導電率に調節し２且つ０
〜１０°Ｃ１殊に４℃で沈殿させると、ＩｇＧを同時に
共沈さぜることなく真性グロブリンを最適に沈殿させる
ことができるということが本発明による方法で確認され
／ζ。

傾斜、ｐ過せたけ遠心分離によって通常生じうる沈殿物
を分離した後、真性グロブリンを金子しない上澄みに、
（特にタンパク質加水分解酵素の）酵素活性を除くため
に、鉱物性吸着剤好ましくは硫酸バリウムを合目的的に
２０ないし５０１／ｌ、殊に５０９　／　ｌの量加えて
攪拌下で２ないし４時間作用させる。

吸着剤を分離した後、上澄みに０．５〜１．５７９／Ｉ
１．好まし７くは’＋、Ｏｇ／ｌのＤＥＡＥ　−イオン
交換体を加え、塩基好ましくは濃アンモニアでｐＨ値を
６．５〜７．５、殊に７．０に調節し、混合物を２万い
し４時間攪拌して工ＩＩＡの大部分をＤｍＡＥ−イオン
交換体に吸着させる。

既に非常に精製及び富化された工ｙａ−免疫グロブリン
溶液を含有するろ液に工程ｂ）で、抗拒補的活性の除去
のために、希薄な鉱酸で酸処理を行う。酸処理は、作用
の時間に応じて２．５ないし４゜２、好ましくは２．９
ないし３．９のｐＨ値で行うことができ、６．３ないし
３．５のｐＨ値に調節するのが特に好ましい。有利な実
施態様ではこの処理を、溶液を先ずｊ　Ｎ　Ｈｏｅで０
〜１０℃、好ましくは４℃で約２．９ないし６．１のｐ
Ｈ値にしそして５ないし１０分間このｐＨ値で放置する
ことによって二工程で行うことができる０次に塩基、好
ましくはアンモニアを加えることによって約６．６ない
し６．５のｐＨ値に調節し、透明な溶液を１２〜７２時
間、好ましくは１２ないし２４時間４℃に保つ。

酸処理によって確かに血漿の分画化の間に生じたダイマ
ー及びオリゴマーの免疫グロプリンアグリゲートは分解
されるが、７Ｓ−工ｙａ−成分自体はこの処理の際に驚
くべきことに極端に無傷である。特に、酸処理によって
、補体の系の比活性と十分な予防的効果の維持とのため
にＮ要な抗体分子のＦＣ一部分は、酵素的処理に抗して
分解されない（これについてはＪ、：Ｒｏｍｅｒ等、Ｖ
ｏｘ、　Ｓａｎｇ、　４２．７４〜８０．１９８２を参
照）。

しかし、抗拒補的活性の除去による酸処理と結びついた
長所１は、今までに知られていた方法では、上記短所例
えば貯蔵中の抗拒補活性の再現、沈殿の生成、ｐＨ値が
中性の領域にリセットされることによる花色溶液の生成
によって相殺された。従って１本発明による方法の工程
（Ｃ）における工業的に非常に簡単に実施されるべき効
果の十分な処理によって上記短所を除くことができると
いうことは驚くべき結果である。６．５ないし７．５、
殊に７．０のｐＨ値に調節した溶液を４０℃ないし５０
℃に２０ないし４０分間、好ましくは４２℃ないし４５
℃に３０分間加熱することによって、溶液中に存在する
タンパク質断片は変性されて大部分のＩｇＭ及び他のア
グリゲートと一緒に分別沈殿によって溶液から除かれう
る。加熱は、任意の方法で行うことができるが、かく拌
した溶液の中へ蒸気を導入することによって行うのが好
ましい。

加熱時間のすぐ後に溶液を２０℃ないし２５℃に冷却し
、工ｇＧよシも高分子量のタンパク質例えば工ｆＭ、変
性したタンパク質断片又は他のまだ存在するアグリゲー
トを中性塩又は低級アルコールの添加によって、殊に１
５０Ｉｉ／／の濃度まで硫酸アンモニウムを加えること
によって、沈殿させる。本発明による方法での控え目な
短時間の加熱処理は、一方において精製及び富化した７
　５−ＩＧ−免疫グロブリンが変性も集合もしないとい
う利益をもたらし、又、他方において１分別しない人−
血漿または一血清を加熱する場合よりも著しく穏和な条
件で、精製したＩｙＧ−分画におりる酸処理後の抗拒補
的活性の再生をｌａｍ止することがうまくいくという利
益をもたらす。

上記沈殿のＰ液から工ｆＧ−分画を、塩濃度を高くする
か又は更にアルコール？加えることによって、殊に硫酸
アンモニウムを６ｏｏｉ７ｔｔの濃度まで加えることに
よって、沈殿させる。

遠心分離又は濾過によって分離した１ｙａ−沈殿を、特
に純粋な生成物を得るためにもう一罠溶液にし、１００
ないし１６０１／１１殊に約１２０＆／ｌの濃度までの
中性塩殊に懺歌アンモニウムでｐＨ４，０ないし４．５
殊にｐＨ４，２で分別沈殿を行うことによって、工ｙＧ
−免疫グロブリンよシも高分子量の今までにまだ分離さ
れなかったタンパク質及びアグリゲートを除く。中＊口
したＦ液において、純粋な工ｆＧ−分画を最後に、塩濃
度を高くするか又は史にアルコールを加えることによっ
て、殊に６００ｙ／ノの濃度まで硫酸アンモニウムを加
えることによって１分離しそして沈殿剤の除去のために
冷水に逆らって透析する。

安定性と発熱性物質のないこととは１本発明による方法
では驚くべきことに、活性炭及び水酸化アルミニウムで
次に工ＰＧ−免疫グロブリン溶液を処理することによっ
て達成することができる。工程（Ｃ）からの透析物を脱
塩水で１ないし２重量％のタンパク質を含有する溶液に
希釈し、これを希酢酸でｐＨ４，５〜５．０殊に約４．
８のｐＨに調節し、タンパク質１１１当ｆｉ　Ｏ，２，
９の活性炭を加え、次に２時間攪拌するように行うのが
好ましい。活性炭による処理は、低分子量の随伴物質及
びタンパク質加水分解酵素を全く含まない溶液を製造す
ることができるという利益をもたらすので、本発明によ
る溶液は非常に貯蔵安定になる。活性炭を好ましくは遠
心分離によって分離した後に、得られた溶液を塩基好ま
しくは濃アンモニアで７．０ないし７．５のｐＨ値に調
節し。

６７℃に加熱する。次に溶液にＡＪ塩例えばアルミニウ
ムミョウバンを殊にタンパク質１１当リ０．２９の幇加
えそして次に約７．０ないし８．０の弱塩基性のｐＨ値
に調節する。沈殿した水酸化アルミニウムはこの条件で
発熱性不純物を吸着し、工ｙａ−免疫グロブリンは上澄
みに残る。

ｐ液から最後に純粋な工ｙａ−分画を好ましくは中性塙
または低級アルコールを殊に硫酸アンモニウムを約３０
０　ｇ　／　ｉ　０ｆ）濃度まで加えることによって沈
殿させる。本発明により製造した工ｙＧ−免疫グロブリ
ンは、免疫グロブリンのために既に知られている方法で
、例えば約１．５チのグリシンと約０．７チの塩化ナト
リウムとを含有する溶液に溶解させ、無菌濾過し、タン
パクｆＡ含有量が例えは約５重量係の安定な水溶液とし
で静脈内に適用するだめのアンプルで使用に供する。

１４）られた生成物の純度及び収率は、ゲルクロマトグ
ラフィー法で測冠する。本発明によシ製造されブとｘｙ
ｏ−製剤はこれらの判断基準によれば全タンパク質に対
して９５％以上の純粋なｘｇＧ−免疫グロブリンと５チ
以下の工９八−免疫グロブリンとを含有する。エタＧ一
部分は９０チ以上が７８−成分から成り、１０％以下の
アグリゲートを含有する。

純粋な工ｙＧ−分画の収量は、１０００Ａ！の人血漿か
ら２０〜６０１′″′Ｃある。本発明によシ製造した水
性静脈工ｆＧ−免疫グロブリン製剤は、数個月以上元の
ままの状態で貯蔵することができ、特異的免疫予防剤及
び−治療剤として人間に静脈内投与するために非常によ
く適する。

以下例を誉げて本発明を更に詳しく説明するが、本発明
は例に制限されない。

例： ５（５，３ｇのｃｏＨＮＩＩ　＋　Ｉ沈殿（粗グロブリ
ン）を１００ｗａの脱ミネラル（ｄ、、ｍ、）水に溶解
させそして７２時間、流れる脱ミネラル水に逆らって＋
４℃で透析させる。２７００ｄのｄ、　ｍ。

水を加えることによってＬ９　Ｘ　１０　　μｓの導電
率に到達させ、次に酢酸で５．６５の部位に調節する。

生じた沈殿を、２４時間沈降させることによシ分離する
。上澄みに５０９／ｌの硫酸バリウムを加え、２時間か
く拌し、硫酸バリウムを次に旅心分前によって分離する
。遠心分離液を、濃アンモニアを加えることによってｐ
Ｈ７，１８にｉ”ｊ１節し、１．０１／ｌのＤＥＡＲ−
５ｅｐｈａｄｅｘ　Ａ−５０”を加え５６時間かく拌１
〜、負荷したＤＥＡＥ　−８ｅ　ｐｈａ　ｄθＸ　を同
様に迫心分離する。１Ｎ塩酸を加えることによって上澄
みのｐＨ値を３．０８に調節し、５分後に濃アンモニア
で３゜４５に修正し。

溶液を４８時間−１−４℃で放置する。ｐＨ値を、礎ア
ンモニアを更に加えることによって７．２に調節し１、
溶液を４２℃に加熱し、４０分間この温度に保つ。次に
２０℃に冷却させる。Ｉｓｏ＆／Ａノ硫酸アンモニウノ
・を添加することによって、高分子蕾の（工ｆＭ−免疫
グロブリン）部分及び変性した部分を溶液から沈殿させ
、濾過によって分離して捨てる。Ｆ液から、更に１５０
ｇ／１１の硫酸アンモニウムを加えることによって、既
に富化しｉ、工ｆＧ−免疫グロブリンを沈殿させそして
沖過によって単離する。

得られた沈殿を溶解させ、１Ｎ塩酸でｐＨ４，２５に調
節しそして１５０ｊｉ／ｌの硫酸アンモニウムを加える
。生じた沈殿を沢過によって除いて捨てる。涙液を中和
しく＋）Ｈ７゜ｉｏ）、更に１７０１／ｌの硫酸アンモ
ニウムを加えそして過度にアグリゲートフリーのＩｇＧ
−グロブリンを沈殿させる。得られた９、９ｇの沈殿（
１゜８９のタンパク質を含有する）をタンパク質が１．
５重量％になるように溶解させ、ｐＨ値を酢酸で４．８
に調節し、タンパクＪ１．ｇ当ｆｉ　０．２　ｇの活性
炭を加えそして２時間かく拌する。次に活性炭を遠心分
離によって分離する。

遠心分離液を濃アンモニアでｐＨ７，２に中和し、６７
℃に加熱し、タンパク質１１当り０．２．９のアンモニ
ウムミョウバンを加え、次に濃アンモニアを７，８の閑
値までに更に加えることによって水酸化アルミニウムを
その場で沈殿させる。

１時間のかく拌の後に水酸化アルミニウムを戸別し、免
疫グロブリンを、５００１／１３の硫酸アンモニウムで
沈殿させることによって涙液から沈殿させ、濾過によっ
て単離する。

得られた沈殿を７２時間ｄ、　ｍ、水に逆らって透析さ
せ、タンパク質５重量％、グリシン１．５重量％及び塩
化ナトリウム０．７重量％に調節し、ｐＨ値を塩酸で６
．９に修正しそして次に無菌沖過する。

収量ハ、静脈に適用可能な免疫グロブリン２４ｍ１であ
る。

以下、本発明の実施の態様を記載する：（１）％許請求
の範囲第１項から第１２項までのいずれかに記載の方法
によって製造された、静脈に適用するための■ノＧ−免
疫グロブリン溶液。

（２）前記第（１）項記載の工ｇａ−免疫グロブリン溶
液を含有する免疫グロブリン製剤。

代理人江崎光好 代理人江崎光史

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　若干の工程例えば沈殿、濾過、吸着及び透析で工ｙ
   ａ−免疫グロブリン分画を精製及び富化することによっ
   て、自然血漿と比較して元のま１の抗補体活性、高い安
   定性及び５Ｍ量チ以下の工ｆＡ−免疫グロブリン含有量
   を有する、静脈内に適用するための化学的に修飾されて
   いない、酵素で処理されていない、副作用及び残置の彦
   い、非常に純粋な水性の工ｙａ−免疫グロブリン溶液を
   生産する方法にして、（ａ）　　コーンによる分画ｎ＋
   ｕ　　（粗クロプリン）またはりパノール−硫酸アンモ
   ニウム−法によって得られた粗免疫グロブリン分画を水
   溶液にし、沈殿剤の除去のために透析しそして真性グロ
   ブリンを、３Ｘ１０２μｓ以下の導電率及び５．６ない
   し５゜５のｐＨ値に０〜１０℃で調節することによって
   沈殿させ、上澄みから酵素活性を鉱物性吸着剤に吸着さ
   せることによって分離し、このようにして得うレタ上澄
   みの免疫グロブリンの工ｙｈ→画の大部分を、Ｄ、５〜
   ’＋、５ＶｌのＤＥＡＥ−イオン交換体に６．５ないし
   ７．５のｐＨ値で吸着させることによって除きそして該
   吸着剤を分離し、次に、 （ｂＪ　　このようにして精製及び富化した工ｙＧ−免
   疫グロブリン溶液を、ｐＨ２，５〜４．２で酸処理する
   ことによって安定化させ、次に、（Ｃ）　　この溶液を
   中和し、中性の部位で２０〜４０分間４０〜５０℃に加
   熱し、冷却後に工ｆＭの圧倒的部分か変性アグリゲート
   か他のアグリゲートを二工程の分別沈殿によって除き、
   この各場合に高分子量のタンパク質沈殿物を分離した後
   にその後の精製操作の基礎にすべき工ｔｉａ−分画を沈
   殿させ、最後の沈殿の工ｇＧ−分画を水に溶解させて透
   析し、次に。 （ｄ）透析物を再び水溶液に変え、これを低分子量の部
   分の除去のために活性炭でそして活性炭の分離後に得ら
   れた溶液を発熱性物質の除去のためにその場で沈殿させ
   た水酸化アルミニウムで７．０ないし８．０のｐＨ値で
   処理し、水酸化アルミニウムを分離し、得られた溶液か
   ら工ｙａ−分画を沈殿させそして使用しうる溶液に変え
   ることを特徴とする方法。 ２　工程（ａ）で真性グロブリンを粗免疫グロブリン分
   画の水溶液から５．４のｐＨ値で約４℃の温度で沈殿さ
   せる、特許請求の範囲第１項記載の方法。 ６、　工程（ａ）で鉱物性吸着剤として硫酸バリウムを
   使用し且つ約２０〜４０１／ｌの量使用する、特許請求
   の範囲第１項または第２項記載の方法。 ４、　工程（ａ）でＤＥＡＥ−イオン交換体を約１．０
   Ｖｌｌの量添加しそして約７．０のｐＨ値に調節する、
   特許請求の範囲第１項から第３項までのいずれかに記載
   の方法。 ５、　工程（ｂ）で酸処理を３．３ないし３．５の部位
   で行う、特許請求の範囲第１項から第４項までのいずれ
   かに記載の方法。 ＆　工程（ｂ）で酸処理を、ＩＮＨＣ！Ｊで４℃で５な
   いし１０分間で酸性にして約２．９ないし６．１のｐＨ
   値に調節し且つ次にｐＨ値をアンモニアで約６．３ない
   し３．５にリセットした後に１２ないし２４時間保温す
   ることによって二工程で行う、特許請求の範囲第１項か
   ら第４項までのいずれかに記載の方法。 Ｚ　工程（Ｃ）で溶液の加熱を７．０のμｓ値で行ない
   、その際約３０分間４２℃から４５℃までの温度を守る
   、特許請求の範囲第１項から第６項までのいずれかに記
   載の方法。 ８、　工程（Ｃ）で分別沈殿の第１工程を約１５０１１
   ７１の濃度まで硫酸アンモニウムを加えることによって
   行ない、次に上澄み中の沈殿の分離後に硫酸アンモニウ
   ムを約３０　Ｇ　Ｊｉｌ　／　ｌの全濃度まで加えるこ
   とによってｘｔｔａ−分画を沈殿させ、分離しそして再
   び溶解させる、特許請求の範囲第１項から第７項までの
   いずれかに記載の方法。 ９　工程（Ｃ）で分別精製沈殿の第２工程を４．０ない
   し４．５のｐＨ値で硫酸アンモニウムを１００ないし１
   ６０１１．／１１の濃度まで加えて行ない、次に上澄み
   中の沈殿の分離後に、硫酸アンモニウムを約５ｏｏｔ／
   ／Ｉｊの全濃度まで加えることによってＸ？ａ−分画を
   沈殿させる、特許請求の範囲第１項から第８項までのい
   ずれかに記載の方法。 １０　　工程（ａ）でＩｆＧ−免疫グロブリン分画を溶
   解させて１ないし２重量％のタンパク質含有量の溶液に
   し且つタンパク質１！！当り約０．２Ｉの活性炭量で約
   ４．８の所領で活性炭処理を行う、特許請求の範囲第１
   項から第９項までのいずれかに記載の方法。 １１　　工程（ｃｌ）で水酸化アルミニウム処理を、活
   性炭を除いた溶液にタンパク質１１当ｐ　Ｏ，２Ｉ！の
   アルミニウムミョウバンをｐＨ７，０及び６７℃で加え
   た後に所領を７．５ないし８．０に高めまでのいずれか
   に記載の方法。 １２−　約１．５チのグリシンと約０゜７チの塩化ナト
   リウムとを含有する水溶液に純粋な工ＰＧ−分画を溶解
   させそして無菌沢過することによって、静脈内に適用す
   るだめの、クンノ（り質を含有する安定な約５％の溶液
   を製造する特許請求の範囲第１項から第１１項までのい
   ずれかに記載の方法。