DK155568B - Fremgangsmaade til stabilisering af koagulationsfaktorerne ii, viii, xiii og antithrombin iii samt plasminogen, og saaledes at disse er fibrinogen-fri og fri for risiko for en hepatitis-overfoering - Google Patents
Fremgangsmaade til stabilisering af koagulationsfaktorerne ii, viii, xiii og antithrombin iii samt plasminogen, og saaledes at disse er fibrinogen-fri og fri for risiko for en hepatitis-overfoering Download PDFInfo
- Publication number
- DK155568B DK155568B DK176280AA DK176280A DK155568B DK 155568 B DK155568 B DK 155568B DK 176280A A DK176280A A DK 176280AA DK 176280 A DK176280 A DK 176280A DK 155568 B DK155568 B DK 155568B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- solution
- factor
- free
- fibrinogen
- xiii
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1025—Acyltransferases (2.3)
- C12N9/104—Aminoacyltransferases (2.3.2)
- C12N9/1044—Protein-glutamine gamma-glutamyltransferase (2.3.2.13), i.e. transglutaminase or factor XIII
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/13—Amines
- A61K31/14—Quaternary ammonium compounds, e.g. edrophonium, choline
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/005—Enzyme inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2/00—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor
- A61L2/0005—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor for pharmaceuticals, biologicals or living parts
- A61L2/0011—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor for pharmaceuticals, biologicals or living parts using physical methods
- A61L2/0023—Heat
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2/00—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor
- A61L2/02—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor using physical phenomena
- A61L2/04—Heat
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/75—Fibrinogen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/81—Protease inhibitors
- C07K14/8107—Endopeptidase (E.C. 3.4.21-99) inhibitors
- C07K14/811—Serine protease (E.C. 3.4.21) inhibitors
- C07K14/8121—Serpins
- C07K14/8128—Antithrombin III
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/6429—Thrombin (3.4.21.5)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/6435—Plasmin (3.4.21.7), i.e. fibrinolysin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12Y304/21005—Thrombin (3.4.21.5)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12Y304/21007—Plasmin (3.4.21.7), i.e. fibrinolysin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/829—Blood
- Y10S530/83—Plasma; serum
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/829—Blood
- Y10S530/83—Plasma; serum
- Y10S530/831—Cohn fractions
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/85—Reproductive organs or embryos
- Y10S530/851—Placenta; amniotic fluid
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
Description
1 DK 155568B
O
Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til stabilisering af koagulationsfaktorerne II, VIII, XIII og antithrombin III samt plasminogen, og således at disse er fibrinogen-fri og fri for risiko for en hepatitis-over-5 føring.
Koagulationen af blodet er en kompliceret proces, som forløber trinvis og udløses af forskellige fysiologiske og pathologiske årsager, og hvis forløb afhænger af ca. 20 fremmende og hæmmende faktorer. Ved formindskelse 10 eller forøgelse af disse koagulationsfaktorer opstår der forstyrrelser i koagulationen, som delvis manifesterer sig som sygdomme.
Således bevirker f.eks. en sygdom i leveren med forringet synteseydelse af dette organ en nedsættelse af 15 plasma-prothrombin (= faktor II)-spejlet, en proces, som kan føre til spontane, livstruende blødninger. Prothrombin-koncentrater er her midlet, der vælges til en hurtigt virkende terapi.
Hæmofili A er betinget af en formindskelse af blod-20 koagulationsfaktoren VIII og er karakteriseret ved blødninger, især i leddene og muskulaturen. Det har i de senere år vist sig, at prognosen for personer, der er blevet syge af denne hæmofili, kan forbedres væsentligt ved substituerende terapi med præparater indeholdende 25 faktor VIII.
Koagulationsfaktoren XIII griber ind i den sidste fase af koagulationen på en sådan måde, at der polymerise-res monomert fibrin. Faktor XIII bliver derfor også hyppigt kaldt fibrinstabiliserende faktor. Et ved mangel på 30 faktor XIII dannet fibrinkoagulat er relativt let at nedbryde med en dårlig sårheling til følge. Faktor XIII-præparaterne anvendes derfor klinisk til patienter med en medfødt eller erhvervet faktor XIIl-mangelsygdom.
Antithrombin III virker inhiberende på thrombin 35 og aktiveret faktor X (F Xa) samt andre serinproteaser i rækken af koagulationsfaktorerne. Det har derfor stor
2 DK 155568 B
O
betydning ved reguleringen af koagulationen af blodet.
Allerede relativt ringe formindskelser af antithrombinind-holdet i blodet bevirker en betydelig forøgelse af thrombo-se-risikoen.
5 Plasminogenet er det centrale protein i plasmaets fibrinolytiske aktivitet. Det er zymogenet for plasmin, en protease med en høj specifitet for fibrin og fibrinogen. Efter endt thrombusdannelse og påbegyndelse af sårhelingen nedbrydes fibrinkoagulationen i en lokal proteolyse ved 10 hjælp af plasmin. Plasminogenmangler, således som de f.eks. optræder forbigående ved en fibrinolyseterapi, kan med godt resultat behandles med plasminogen-koncentrater.
Der kendes forskellige fremgangsmåder til fremstilling af humane faktor II-, VIII-, XIII- og antithrombin 15 III- samt plasminogen-koncentrater af blod, blodplasma eller placentaer.
Således kan et faktor ΙΙ-^præparat fremstilles efter metoden ifølge Soulier et al.: Thrombosis Diath. Haemorrh. Suppl. 35, 62 (1969). Fremstillingen af faktor VIII-kon-20 centrat er f,.eks. mulig ifølge den såkaldte metode IV
(Johnson, A.J.: Blood 28, 1011 (1966)) under anvendelse af polyethylenglycol.
Faktor XIII kan f.eks. udvindes ifølge H. Bohn;
Blut 25, 235 (1972) af humane placentaer. I henhold til 25 et japansk patent (Fukushima, R. et al., nr. Sho 51-134878, 1976) kan faktor XIII-koncentrater opvarmes til 60°C i 10 timer i nærværelse af aminosyrer, monosaccharider eller sukkeralkoholer med tilsvarende tab af aktivitet (ca. 50%). Herved har hver af de tre komponenter en stabiliserings-30 effekt for faktor XIII.
Antithrombin III og plasminogen kan fremstilles ifølge fremgangsmåder, der beskrives af H.G. Schwick og N. Heimburger i "Antithrombin, uterine Håmostase, Herz und Blutgerinnung", Verhandlungen der Dt. Arbeitsgemein-35 schaft fur Blutgerinnung, 1971, s. 1-16, af Andersson, L.K. et al., DE-fremlæggelsesskrift nr. 2.343.688, eller
3 DK 155568 B
O
af D.G. Deutsch og E.T. Mertz, Science 170, 1095 (1970) eller af Heimburger, N., DE-patentskrift nr. 2.057.401.
For alle de præparater, der er fremstillet ifølge de beskrevne fremgangsmåder, gælder det, at de ikke er fri 5 for risikoen for hepatitis-overføring. Ved en fremgangsmåde til albuminfremstilling, der regnes som hepatitis-sikker (Gellis, S.S. et al.: J. Clin. Invest. 27, 239 (1948)) betragtes opvarmningen som væsentlig. Som følge heraf måtte koncentraterne af koagulationsfaktorerne også opvarmes i 10 ét fremgangsmådetrin i mindst 10 timer til 60°C i vandig opløsning. En sådan behandling af faktor XIII er ganske vist allerede beskrevet i det ovennævnte japanske patent, men dette fører dog til betydelige udbyttetab. For alle andre præparater er sådanne stabiliseringsfremgangsmåder 15 med opvarmning hidtil ukendte. Især har man med hensyn til faktor VIII hidtil været af den mening, at den, som en af de mest varme-labile koagulationsfaktorer, overhovedet ikke tåler en opvarmning uden aktivitetstab eller denaturering.
En yderligere mangel ved de kendte fremgangsmåder, navnlig 20 i forbindelse med faktor VIII, er fraskillelsen af denne fra ledsagende fibrinogen. Begge proteiner har lignende fysisk-kemiske egenskaber og kan ikke skilles kvantitativt fra hinanden med metoder, som kan anvendes i produktionsmålestok.
25 Det er allerede kendt, at det prothrombin, som er gjort ansvarligt for instabiliteten af blodkoagulationsfaktorerne, kan fjernes med adsorptionsmidler eller fældningsmidler fra plasmafraktioner. Dette gælder fremfor alt for fraktionen indeholdende faktor VIII. Det er ligeledes 30 kendt, at faktor VIII sammen med fibrinogen kan udfældes med glycin, at aminosyrer, navnlig β-alanin, er særligt egnede til en partiel fraskillelse af fibrinogenet fra faktor VIII, og endelig, at mineralske adsorptionsmidler er i stand til at binde forureninger, som ledsager faktor 35 VIII-præparatet, under bestemte betingelser.
4 DK 155568 B
O
Alle disse kendte enkeltforanstaltninger og deres kombinationer har imidlertid ikke kunnet løse problemerne med instabiliteten af blodkoagulationsfaktorerne mod varme og deres modtagelighed for angreb af proteaser tilfredsstil-5 lende. Heller ikke en supplering af disse foranstaltninger med yderligere fældnings- og fraktioneringstrin har ført til noget gennemgribende resultat. Det har især vist sig, at den som fældningsmiddel anvendte β-alanin med stor sandsynlighed er årsag til forskellige uforenelighedsreaktioner.
10 Af denne grund forbyder anvendelsen af dette fældningsmiddel sig ved præparater, der anvendes til den menneskelige terapi.
Fra R.H. Wagner et al.; Thromb. Diath. Håmor 11,
64-74 (1964) er det kendt, at faktor VIII kan udfældes ved 15 hjælp af bestemte aminosyrer. Derefter er det imidlertid ikke muligt at skille fibrinogen og faktor VIII kvantitativt fra hinanden ved hjælp af en aminosyrefældning. Selv de reneste faktor VIII-koncentrater, som for tiden findes på markedet, indeholder yderligere betydelige mængder af 20 fibrinogen. Dette gælder også for de ifølge metode IV
(Johnson, A.J.: Blood 28, 1011 (1966)) under anvendelse af polyethylenglycol fremstillede koncentrater.
På overraskende måde har det nu vist sig, at de mangler, der knytter sig til de kendte fremgangsmåder til 25 faktor VIII-fremstillingen, kan fjernes ved simple modifikationer, og at det helt igennem er muligt at fremstille et fibrinogen-frit og hepatitis-sikkert faktor VIII-kon-centrat.
Det er endvidere overraskende, at den for faktor 30 VIII bundne modifikation også med hensyn til faktor XIII
fører til en forbedring af stabiliseringen, også i forhold til fremgangsmåden fra Fukushima, og at fremgangsmåden derudover ikke blot kan anvendes til faktor VIII og faktor XIII, men også til faktor II, antithrombin III og plasminogen. 35 Det har endelig vist sig, at en opvarmning i nærvæ relse af en bestemt stabilisatorkombination både gør det
5 DK 155568 B
O
fremkomne præparat hepatitis-sikkert, dvs. fri for risiko for en hepatitis-overføring, og fjerner det koagulations-dygtige fibrinogen praktisk taget kvantitativt. Den foreliggende opfindelse kan derfor både anses som en fremgangs-5 måde til stabilisering af koagulationsfaktorerne i vandig opløsning mod varme og som en fremgangsmåde til fremstilling af et fibrinogenfrit og hepatitis-sikkert præparat af koagulationsfaktorer.
Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde 10 af den allerede angivne art, og denne fremgangsmåde er ejendommelig ved, at man til eri opløsning af en sådan koagulationsfaktor sætter eri aminosyre og et oligosaccharid eller en sukkeralkohol og opvarmer i ca. 10 timer til en temperatur på ca. 60°C.
15 Den opnåede stabilisering resulterer i, at den vandige opløsning af koagulationsfaktorerne kan opvarmes i så lang tid, at en overførsel af hepatitis-fremkaldere ifølge den nuværende viden praktisk, taget kan udelukkes. Dette gælder fremfor alt i forbindelse med fældningsfremgangsmåder, ved 2o hvilke det aktive stof forbliver i ovenstående væske, og hepatitisviruset kan fraskilles' sammen med det uopløselige bundfald. Et præparat, som i ca. 10 timer holdes ved ca. 60°C i vandig opløsning, gælder i dag som praktisk taget hepatitis-sikkert, forstået som ovenfor angivet.
25 Ved en i praksis foretrukken udførelsesform for den her omhandlede fremgangsmåde går man frem på den måde, at der til en opløsning indeholdende koagulationsfaktorerne II, VIII, XIII, antithrombin III og/eller plasminogen sættes 1,0 til 3,0 mol/liter af mindst én af aminosyrerne 30 glycin, a- eller β-alanin, hydroxyprolin, prolin, glutamin, α-, β- eller ^-aminosmørsyre, men fortrinsvis glycin, og 20-60% w/w af et oligosaccharid eller eri sukkeralkohol, fortrinsvis 1,0-3,0 mol/liter glycin og 20-60% w/w saccharose, og at der opvarmes til en temperatur på ca. 60°C i ca.
35 10 timer. For at opnå et maksimalt udbytte må pH-værdien indstilles specifikt på de enkelte i opløsningen foreliggende 6
DK 155568B
O
koagulationsfaktorer. I almindelighed bør pH-værdien holdes inden for grænserne mellem 6,5 og 8,0.
Afhængigt af opløseligheden af aminosyren eller kulhydratet kan værdien øges fra 3,0 mol/liter eller 5 60°/o w/w til højere koncentrationer, når den enkelte amino syre eller kulhydratet ved den ønskede temperatur har en tilsvarende højere opløselighed.
Med henblik på den terapeutiske anvendelse af præparaterne kan opløsningen indeholdende koagulationsfak-10 torerne renses yderligere med gængse biokemiske metoder, idet der. eventuelt til opløsningen kan sættes protein-stabiliserende forbindelser, og den kan filtreres sterilt og/eller lyofiliseres. Til præparatfremstillingen anvendes de til fremstillingen af parenteralt anvendelige præparater 15 sædvanlige foranstaltninger.
Med den foretrukne anvendte kombination af gly-cin og saccharose opnås der under følgende betingelser et for koagulationsdygtigt fibrinogen frit præparat: 20 1,0-2,5 mol/liter glycin og kO-60°/o w/w saccharose ved en behandling i ca. 10 timer ved ca. 60°C ved en pH-værdi fra 6,8 til 7,5.
Til fremstillingen af et hepatitis-sikkert præparat er opvarmingen i ca. 10 timer til ca. 60°C i nærværelse 25 af saccharose i en koncentration på 40-60°/o w/w og en gly- cin-koncentration på 1,0-2,5 mol/liter nødvendig. Hensigtsmæssigt gås der ud fra fraktioner, i hvilke den faktor, der skal stabiliseres, i henhold til den citerede metode er isoleret j for faktor VIII f.eks. af en sådan, som opnås i hen-30 hold til den som metode VI kendte fremgangsmåde af Cohn (j. Amer. Chem. So c., 6_8, 459 ff (l966)). Denne fraktion udfældes af plasma ved hjælp af 8°/o ethanol under de af Cohn angivne betingelser og indeholder foruden forskellige glo- buliner fibrinogen og faktor VIII. På samme måde er som 35 o udgangsmateriale en kuldefældning af plasmaet, det såkaldte kryopræcipitat, egnet. Dette kan opnås ifølge J.G. Pool
DK 155568 B
7
O
et al.: New England J. Med. 2J1, 1443-1447 (1965). Til udvinding af kryopræcipitatet bringes frisk plasma først på en temperatur på -30°C og derefter på +4°C, og den derved fremkomne remanens udvindes. Hver af de nævnte fældninger 5 indeholder mere eller mindre prothrombin, som let kan aktiveres og gøres ansvarligt for aktivitetstabet i faktor VIII--præparater. Det betaler sig derfor at fjerne prothrombinet inden anvendelsen af fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse, f.eks. ved adsorption på aluminiumhydroxid 10 eller bariumsulfat, ved fældning med acridinbaser eller ved chromatografi på ionbytterharpikser. Aluminiumhydroxid i gelsuspension er imidlertid foretrukket.
Kontrollen af foranstaltninger til isolering og rensning af faktor VIII er velkendt for fagmanden med kend-Ί5 skab til bestemmelsesmetoder for de pågældende forbindelser. Ved anvendelse af disse kontrolmetoder kan fremgangsmådebetingelserne være bestemmende for synspunktet for et tilfredsstillende udbytte og en tilfredsstillende renhed af produktet.
20 Både til bestemmelsen af fibrinogenet og fakto ren VIII er der i litteraturen beskrevet flere metoder. Fibrinogenet bestemmes hensigtsmæssigt efter følgende forskrift : I et centrifugerør fortyndes 1 ml af opløsningen 25 indeholdende fibrinogen med 9 ml fysiologisk NaCl-opløs-ning og bringes til at koagulere med 0,6 ml af en opløsning af 60 enheder thrombin/ml. Efter 60 minutters henstand ved 37°C behandles udgangsmaterialet i 30 minutter ved ca. 150.000 RCF (relativ centrifugalacceleration) 30 i ultracentrifuge. Den ovenstående væske dekanteres, og sedimentet vaskes tre gange med 50 ml fysiologisk NaCl-opløsning på et Nutsch-filter. Efter tørring af sedimentet natten over i vakuum omregnes der ved bestemmelse af nitrogenindholdet ifølge Kjeldahl på proteinbestanddelen 35 i mg, der angives som fibrinogen.
8
DK 155568 B
O
Bestemmelsen af* faktor VXXI sker f.eks. efter følgende metode: 1 del, f.eks. 0,1 ml partielt thromboplastin, f.eks. fremstillet ifølge DE-offentliggørelsesskrift nr. 2.316.430 5 blandes med én del faktor VIII-mangelplasma og én del fortyndet normalplasma. Denne blanding holdes ved 37°C i 6 minutter. Efter tilsætning af én del af en til 37°C foropvarmet 0,025 molær calciumchlorid-opløsning bestemmes den tid, der forløber fra tilsætningen af calciumchlorid-10 -opløsningen til fremkomsten af en blanding. Til kvantitativ konstatering aflæses den af opløsningen indeholdende faktor VIII resulterende koagulationstid i henhold til en med en normalplasma-fortyndingsrække opnået målekurve.
1 international enhed (=1 IE) faktor VIII sva-15 rer til faktor VIII-aktiviteten af 1 ml normalplasma.
Til den yderligere rensning af et ved aminosyre--fældningen, fortrinsvis ved en glycin-fældning, med 1-3 mol/liter ved forhøjede temperaturer for fibrinogen befriet faktor VHI-præparat kan der gås frem efter for-20 skellige metoder, idet aktiviteten for faktor VIII altid
står i forgrunden. Det har vist sig at være særlig fordelagtigt, at der til den aminosyre-indeholdende opløsning af det fibrinogenfrie faktor VHI-præparat sættes et neutralsalt i en koncentration, der fortrænger faktor VIII
25 fra den vandige opløsning. Fældningen af faktor VIII udføres med fordel med natriumchlorid eller kaliumchlorid.
Saltet tilsættes hensigtsmæssigt som fast salt. Det kan også tilsættes i en koncentreret opløsning. Ved en slutkon-centration på 10-20% (w/v) af saltet udfældes faktor VIII.
30 Remanensen kan udvindes ved centrifugering eller filtrering.
Til opnåelse af et hepatitis-sikkert præparat opvarmes remanensen i en opløsning af 1-3 mol/liter glycin og 10-60% w/s saccharose i mindst 10 timer til ca. 60°C.
Herved kan der også anvendes faktor VHI-præparater, som er 35 udvundet efter en anden fremgangsmåde end den beskrevne (se eksempel 2). En centrifugering med højt omdrejningstal 9
DK 155568 B
O
kan ofte forbedre præparatets kvalitet yderligere. Produktet er derefter særdeles proteinfattigt. Der kan opnås specifikke aktiviteter på 20-40 enheder faktor VIII pr. mg protein. Til anvendelse på et menneske må præparaterne være 5 underkastet en sterilfiltrering.
Endelig kan præparatet, der' er underkastet den omhandlede 'behandling, gøres tilgængeligt i frysetørret form.
Det her omhandlede produkt er i en til farmaceutisk anvendelse egnet opløsning et lægemiddel til behand-10 ling af koagulationspatologiske tilstande og kan anvendes intravenøst, fortrinsvis ved infusion, til terapi og profylakse af blødninger betinget af mangel på faktor VIII, f.eks. på Hæmofili-A-patienter.
Til udvinding af et faktor XIII-koncentrat kan 15 der gås ud fra en fraktion af humane placentaer, således som de f.eks. fremstilles ifølge en fremgangsmåde af Bohn, H. et al. (DE-patentskrift nr. 2.063.069). Herved ekstraheres frosne humane placentaer med en 0,5 °/o' s NaCl-opløsning, og faktor XIII udfældes fra den ovenstå-20 ende vævsfrie væske med en acridinbase.
Efter oplukning af acridin-additionsproduktet med en 2,5^'s NaCl-opløsning renses den faktor XIII-holdige opløsning med cetylpyridiniumchlorid for sure ledsageprote-iner og lipider, og efter fornyet behandling med acridin-25 basen, oplukning med 2,5^’s NaCl-opløsning og koncentration ved udfældning med ammoniumsulfat og gelfiltrering renses den nævnte opløsning yderligere. De faktor XIII-aktive fraktioner forenes og koncentreres ved trykfiltrering eller fornyet neutralsaltfældning.
30
Aktiviteten af faktor XIII bestemmes ved hjælp af et fortyndingsforsøg (jfr. Thromb. diathes. haemorrh.
23, 455 (1970)). Herved drager man nytte af den forskellige opløselighed af det tværbundne og (i mangel af fibrinsta- biliserende faktor) ikke tværbundne fibrin i l$'s chlor-35 eddikesyre. Med stigende fortyndinger af den opløsning, der skal bestemmes, frembringes der til at begynde med 10
DK 155568B
o ud fra faktor XIII-frit fibrinogen fibrinkoagulation ved hjælp af thrombin, og der inkuberes med l^’s chloreddike-syre. Derefter bestemmes den fortynding, i hvilken fibrin-koagulationen lige netop bibeholdes. Denne er faktor 5 XIII-koncentrationen, der netop er tilstrækkelig til tværbinding. I den næsthøjeste fortynding opløses fibrinkoagu-latet.
Som referencestof tjener normalt blandingsplasma. Den i 1 ml indeholdte faktor XXII-aktivitet 10 er defineret som én enhed. Den søgte fibrinstabiliserende aktivitet beregnes ud fra forholdet af grænseværdierne for fortyndingen af blandingsplasma og forsøgsopløsning.
Til fremstilling af et hepatitis-sikkert præparat sættes der til det således karakteriserede faktor XIII-15 -koncentrat glycin og saccharose, og der opvarmes under samme betingelser som beskrevet for faktor VIII. Herved er det vigtigt for udbyttet at holde pH-værdien over 6,8. Under disse betingelser er den her omhandlede fremgangsmåde overlegen i forhold til fremgangsmåden ifølge Fukushima et al.
20
Som følgende tabel viser, fører den til væsentligt større udbytter, idet det bemærkes, at ved opvarmningen udfældes det tilstedeværende koagulationsdygtige fibrinogen, hvorfor produkterne er i det væsentlige fibrinogen-fri.
25 1 35
11 DK 155568 B
O
Metode ifølge Metode ifølge
Fukushima opfindelsen
Pat. Sho 51-134878 pH-værdi 7,0 8,0 6,3 6,3 7,0 8,0 5 ______.___
Stabilisatorer
Saccharose °/o w/w --- --- 50 30 50
Glycin mol/l —- 2,6 2 2,6 2 2
Mannit °/o 20 --- — 20 — — 10______
Akt. før opvarm- 133 100 50 42 83 83 ning E/ml
Akt. efter op- 0 33 17 5 50 50 15 varmning i 10 ti-
mer/60°C
E/ml
Udbytte 0 33 34 12 60 60 20 ___
Til den yderligere rensning af det således behandlede faktor XIII-koncentrat kan der gås frem som beskrevet for faktor VIII. Til fældning af faktor XIII med neutral-25 salt har det vist sig at være fordelagtigt at anvende ammoniumsulfat i en slu tkoncentrat ion på 10-40 °/o w/v.
Til anvendelse på mennesker, underkastes produktet en sterilfiltrering. Til stabilisering til frysetørring sættes der til den faktor Xlll-holdige opløsning proteiner og carbonhydrater, fortrinsvis human-albumin og glucose.
Eor at opnå et hepatitis-sikkert faktor II-kon- centrat gås der ud fra en fraktion som f.eks. den ifølge fremgangsmåden af Soulier, J.P. et al.; Thromb. diath.
haemorrh. Suppl. 35, 61 (1969) opnåede. Herved adsorberer 35 —
O
12
DK 155S68B
man plasma, som er udvundet fra med 0,01 mol/liter med EDTA (= ethylendiamino-tetra-acetat) antikoagulationsbehandlet blod, med tri-calciumphosphat, hvorefter der fraskilles ved centrifugering. Herved bindes faktor II kvantitativt til adsorp-5 tionsmidlet og kan atter udvindes ved eluering flere gange med 0,2 mol/liter tri-natriumcitrat. De forenede eluater renses yderligere ved kombinerede alkohol- og eddikesyrefældninger ved temperaturer fra -8°C til +4°C. Herved koncentreres samtidigt faktor II, 10 Koncentratet optages i et egnet pufferstof, for trinsvis en blanding af kogsalt og natriumcitrat, og aktiviteten for faktor II bestemmes.
Aktivitetsbestemmelsen er i almindelighed kendt af fagmanden. Den kan f.eks. udføres i henhold til Kolier, 15 F. et al. (Dtsch. med. ¥schr. Hl, 516 (1956)). I denne forbindelse blandes dh del, f.eks. 0,1 ml faktor II-mangel-plasma og 1 del fortyndet normalplasma. Denne blanding holdes ved +37°C i 30 sekunder. Derefter tilsættes der 2 dele calciumholdigt thromboplastin, f.eks. fremstillet i 20 henhold til DE-patentskrift nr. 2.356.493, og den tid, der forløber, indtil der opstår koagulation, bestemmes. Til kvantitativ konstatering aflæses den af opløsningen indeholdende faktor II resulterende koagulationstid i henhold til en med en normalplasma-fortyndingsrække opnået måle-25 kurve.
Én enhed faktor II svarer til faktor Il-aktiviteten af 1 ml normalplasma.
Til udryddelse af hepatitis-viruserne sættes der glycin og saccharose til den således karakteriserede 30 faktor Il-opløsning og opvarmes under samme betingelser som beskrevet for faktor VIII.
Til den yderligere rensning centrifugeres eventuelt den opvarmede faktor Il-opløsning, og den aktive komponent koncentreres ved udfældning med neutralsalt 35 eller alkohol, fortrinsvis v/v, ved en pH-værdi på 5»0-6,5· Til anvendelse på mennesker underkastes produktet en sterilfiltrering. Til stabilisering ved fryse-
13 DK 155568B
O
tørringen kan det være fordelagtigt at tilsætte antikoagu-lationsmidler, f.eks. heparin.
For at opnå et antithrombin III-præparat, der er frit for infektiøs virus, kan der f.eks. gås ud fra en frem-5 gangsmåde som den af Andersson, L.K. et al.(DE-fremlæggelses-skrift nr. 2.243.688) beskrevne. I henhold hertil gøres dextransulfat, heparin eller chondroitinsulfat, hver for sig eller i nærværelse af agarose eller lysin-agarose, uopløseligt med bromcyan i alkalisk medium ved tværbinding. Efter 10 ækvilibrering af et af disse materialer i en chromatografi-søjle med et egnet pufferstof adsorberes der herved citrat--plasma. Gelen vaskes fri for plasma, og den antithrombin Ill-holdige fraktion elueres med et pufferstof med høj molari-tet. Præparatet kan eventuelt renses yderligere ved gelfiltre-15 ring ved hjælp af en molekylærsigte. Efter koncentration ved en neutralsaltfældning, fortrinsvis ammoniumsulfat, bestemmes aktiviteten af antithrombin Ill-koncentratet.
I denne forbindelse er både immunologiske og funktionelle forsøgsmetoder kendt for fagmanden. Fortrins-20 vis anvendes den af Heimburger, N. et al. i Laboratoriums-blåtter 28, 65 (1978) beskrevne metode? 2 dele, f.eks.
0,2 ml, antithrombin Ill-reaktionsmiddel blandes med 2 dele fortyndet normalplasma og holdes ved +37°C i 4 minutter. 1 del af dette udgangsmateriale sættes deref-25 ter til 3 dele af en standardiseret oksefibrinogenopløs-ning, og den tid, der forløber til dannelse af et koagu-lat, måles.
Til kvantitativ bestemmelse aflæses den af opløsningen indeholdende antithrombin III resulterende 30 koagulationstid i henhold til en med en normalplasma-fortyndingsrække opnået målekurve. 1 enhed antithrombin III svarer til dettes aktivitet i 1 ml normalplasma.
Til udryddelse af hepatitisviruserne sættes der glycin og saccharose til det således karakteriserede 35 antithrombin III-koncentrat på samme måde som beskrevet for faktor VIII. Efter opvarmningen kan der eventuelt fjernes denatureret protein ved centrifugering. Antithrombinet
DK 155568B
14
O
III koncentreres ved trykdialyse eller omkrystallisation med neutralsalt, fortrinsvis med 50-80°/o w/v ammoniumsulfat, og renses yderligere. Til anvendelse på mennesker dialyseres det nævnte præparat til fysiologisk saltkoncentra-5 tion, hvorefter det sterilfiltreres og også kan lyofili-seres til længere tids opbevaring.
Et hepatitis-sikkert plasminogen-præparat kan f.eks. fremstilles ud fra fremgangsmåden ifølge Heimbur-g$r, N. (DE-patentskrift nr. 2.057.401). Herved fremstilles 10 der et vanduopløseligt copolymerisat, hvori der er indpolyme-riseret en aminocarboxylsyre med en £-stillet aminogruppe.
Humant plasma bringes i kontakt med dette adsorptionsmiddel, hvorhos plasminogenet renses på adsorptionsmidlet og kan udvindes ved eluering.
15 Aktiviteten af denne fraktion kan f.eks. bestem mes efter metoden ifølge Jacobi, E. et al. (Med. Welt 26, 1996 (1975))· Herefter blandes 2 dele, f.eks. 0,2 ml plasminogenreaktionsmiddel, med 1 del fortyndet normalplasma. Denne blanding holdes ved +37°C i 3 minutter.
20 Derpå tilsættes der 1,5 internationale enheder thrombin, og den tid, der forløber til dannelse af koagulat, bestemmes. Til kvantitativ bestemmelse aflæses den af opløsningen indeholdende plasminogen resulterende koagulationstid i henhold til en med en normalplasma-fortyndingsrække 25 opnået målekurve. 1 enhed plasminogen er defineret som den fibrinolytiske aktivitet, der er indeholdt i 1 ml normalplasma. Den svarer til 5000 Christensen-enheder.
Til en således karakteriseret plasminogen-rig fraktion sættes der inden for et pH-område fra 6,5 til 30 8,0 saccharose og glycin, og der opvarmes under samme betingelser som beskrevet for faktor VIII.
Efter fortynding af opløsningen og eventuelt fraskillelse ved centrifugering af fremkommet, denatureret protein udfældes plasminogenet med neutralsalt, 35 fortrinsvis ammoniumsulfat, hvorpå det efter dialyse mod en isotonisk saltopløsning kan sterilfiltreres og frysetørres.
15
DK 155568 B
o
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen illustreres nærmere 1 de følgende, eksempler:
Eksempel 1 5
Hepatitis-sikkert faktor VIII-koncentrat af humanplasma 3,9 liter plasma afkøles hurtigt til -30°C og bringes efter 24 timers forløb på en temperatur på +4°C.
10 Derefter behandles og udvindes remanensen ved +4°C i en centrifuge ved 2.000 x g (l5 minutter). Det fremkomne kryo-præcipitat, 47 g, opløses i 175 ml af en med natriumcitrat pufret kogsaltopløsning med en pH-værdi på 7*0 ved 25°C.
Der fås en 2,5°/o's proteinopløsning. Til denne proteinop-15 løsning sættes der l/lO rumfangsdel af en 25°/>' s Al(OH)^-suspension (British Drug House, England), og der omrøres i 20 minutter. Opslæmningen centrifugeres i 30 minutter ved 3*000 x g, og fældningen kastes bort. Derpå sættes der til den ovenstående væske fast glycin indtil en slutkon-20 centration på 2,2 mol/liter, og der opvarmes derefter hurtigt til 37°C. Efter 30 minutter ved denne temperatur afkøles udgangsmaterialet lige så hurtigt til +5°C. Den herved fremkomne fældning fraskilles ved centrifugering i 30 minutter ved 3*000 x g og kastes bort. Derpå opvar-25 mes den ovenstående opløsning endnu en gang, denne gang til 56°C, og den bibeholdes ved denne temperatur i 5 minutter, hvorefter den afkøles til 20°C. Ved denne foranstaltning udfældes det resterende fibrinogen sammen med globuliner. Der fraskilles ved centrifugering ved 30 3*000 x g (30 minutter). Den ovenstående faktor VIII- -opløsning bringes til en slutkoncentration på 15°/o (w/v) med fast kogsalt og bibeholdes ved en temperatur på 20°C i ca. 1 time; herved udfældes faktor VHI-aktiviteten. Opløsningen fraskilles ved centrifugering i 30 minutter 35 ved 3*000 x g. Remanensen opløses i 15 ml af en med natriumcitrat pufret kogsaltopløsning med en pH-værdi på 7*
Efter centrifugering og rensningsfiltrering sættes der til
DK 155568 B
O
16 filtratet 50% w/w saccharose og 2 mol/liter glycin, og den viskose opløsning opvarmes til 60°C i 10 timer. Den opvarmede opløsning fortyndes til nedsættelse af viskositeten med samme rumfang af et pufferstof, som indeholder 5 2,2 mol/liter glycin, 0,02 mol/liter citrat og 0,06 mol/liter
NaCl og har en pH-værdi på 6,8-7. Fra denne opløsning udfældes faktoren VIII med kogsaltopløsningj hertil anvendes der en opløsning med 35% (w/v) NaCl, som ved en pH-værdi på 6,8-7 indeholder 2,2 mol/liter glycin og 0,02 mol/liter 10 citrat. Af denne pufrede kogsaltopløsning tilsættes der så meget af den faktor VIII-holdige opløsning, at der opnås en slutkoncentration på 15% (vr/v). Fældningen behandles ved 3.000 x g og optages i 12 ml citrat-NaCl-puffer-stof med 2% glycin og 0,5% human-albumin. Af denne opløs-15 ning bestemmes faktor VIII-aktiviteten. Opløsningen indeholder 30 IE/ml, og 1 IE svarer til aktiviteten af 1 ml frisk normalplasma fra sunde donorer.
Eksempel 2 20
Opvarmning af et efter fremgangsmåden ifølge Johnson et al. (Blood 28, 1011 (1966)) fremstillet, faktor Vlll-præparat til inaktivering af hepatitis virus 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Lyofilisatet af k portioner faktor VIII-kon- 2 centrat med hver ca. 250 IE optages ved 37°C i kO ml af 3 en vandig opløsning, som indeholder 2,2 mol/liter glycin 4 og 1 g/ml saccharose. Efter fuldstændig opløsning af ind 5 holdet lukkes portionen lufttæt og inkuberes i vandbad 6 i 10 timer ved 60°C.
7
Den tyktflydende opløsning dialyseres efter 8 afkøling ved stuetemperatur 3x3 timer mod det 50-dob- 9 belte rumfang citratpufferstof, 0,02 mol/liter, som inde 10 holder 0,06 mol/liter NaCl og 10 mg/ml glycin.
11
Det under opvarmningen udfældede protein, over vejende fibrinogen, fraskilles ved centrifugering, og den klare opløsning filtreres steril og lyofiliseres. Akti-
DK 155568B
17
O
viteten af lyofilisatet efter opløsning i 20 ml destilleret vand ligger ved 26 IE/ml. I overensstemmelse hermed kan der af 4 portioner faktor VIII-koncentrat med i ca. 250 IE fremstilles en portion med hepajtitis-sikkert 5 materiale på ca. 500 IE.
Eksempel 3
Fremstilling af et hepatitis-sikkert faktor XIII-koncen-10 trat af human-placentaer 15 kg frosne placentaer fra mennesker (denne mængde svarer til ca. 24 placentaer) findeles og røres sammen med 15 liter af en 0,5^'s natriumchloridopløsning.
15 Den fremkomne blanding opvarmes til 10°C og centrifugeres.
Fra den vævsfrie ovenstående væske fældes den fibrinsta-biliserende aktivitet ved pH=6,0 ved hjælp af en y/ox s diaminoethoxyacridinlactat-opløsning til en koncentration på 8°/o diaminoethoxyacridinlactat, beregnet på protein, 20 og isoleres ved centrifugering.
Centrifugatet suspenderes i 9 liter vand ved pH=7,0, vaskes og centrifugeres på ny. Remanensen optages i 8 liter af en 2,5^'s natriumchloridopløsning, som yderligere indeholder 0,125°/o ethylendiamintetraeddikesyre 25 (EDTA) og er indstillet på en pH-værdi på 7»5» røres sammen og skilles fra det uopløste materiale efter 4 timers forløb. Den ovenstående væske fyldes op med vand til 15 liter. Til denne opløsning sættes der 0,3 liter af en 3°/' s N-cetyl-pyridiniumchlorid-opløsning ved 30 pH=7,0, Herved udfælder der ledsageproteiner og mucopoly- saccharider. De fjernes ved centrifugering. Til den ovenstående opløsning sættes der 0,75 liter af en 3°/'s diamino-ethoxy-acridinlactat-opløsning, hvorved den fibrinstabilise-rende aktivitet udfældes. Ved fjernelse af den ovenstående 35 væske opløses diaminoethoxy-acridinlactat-fældningen med 1 liter af en 5°/o1 s natriumchloridopløsning, som indeholder 25 g EDTA og har en pH-værdi på 7>5, ved 2 timers omrøring.
DK 155568B
18
O
Det udskilte diaminoethoxy-acridinlactat-chlorid fraskilles ved filtrering. Fra filtratet udfældes den fibrinstabilise-rende faktor langsomt ved tilsætning af 25$ fast ammoniumsulfat under omrøring.
5 Indtil denne ammoniuitisulfatfaeldning ma oparbejd ningen af placentaerne ske hurtigst muligt og ved temperaturer mellem 5 og 10°C for at undgå større aktivitetstab, Bundfaldet fra ammoniumsulfatfældningen fraskilles ved centrifugering efter 4 timers henstand.
10 Til yderligere rensning røres 8 g af ammoniumsul- fatpastaen sammen med 0,01 molær EDTA-opløsning (pH=7,0) til en grød, og dette dialyseres ved 4°C mod et 0,005 molært tris(hydroxymethyl)-aminomethan-saltsyre-(tris-HCl)--pufferstof (pH=7,0), som indeholder 0,005 mol EDTA/liter 15 pufferstof og 0,05$ natriumazid. Derefter indstilles opløsningen på en pH-værdi på 6,0. Den herved fremkomne fældning centrifugeres fra og kastes bort. Den ovenstående væske indstilles på pH=7,0 og renses ved hjælp af søjlechroma-t ograf i på tværbundet dextran, hvilket kan fås tinder det 20 registrerede varemærke sephadex ® G 150. Til eluering anvendes der en 0,005 molær tris-HCl-pufferopløsniiig (pH=7,0), som indeholder 0,005 mol EDTA/liter pufferstof og 0,1$ natriumazid. De aktive fraktioner samles efter gennemstrømningen, og den fibrinstabiliserende faktor fældes derfra med 25 ammoniumsulfat, hvortil 25 g pr. 100 ml eluat er nødvendigt. Fældningen isoleres og opløses i 0,005 molært tris-EDTA--pufferstof ved pH=7,0.
Efter 20 timers dialyse mod 0,005 molært tris--EDTA-pufferstof ved pH=7,0 udfældes den fibrinstabili-30 serende faktor ved indstilling af pH-værdien på 5,0 som euglobulin. Den efter centrifugering fremkomne remanens opløses i 2 ml fysiologisk natriumchloridopløsning, som indeholder 0,01 mol EDTA/liter opløsning og er indstillet på pH=7,0 med 0,2 n-natriumhydroxidopløsning.
35 Til denne opløsning sættes der 2 g fast saccha rose, og efter fuldstændig opløsning tilsættes der yderligere 0,6 g glycin i fast form. pH-værdien indstilles
DK 155568B
19
O
på 7» O. Denne opløsning opvarmes til 60°C i 10 timer.
Efter opvarmning fortyndes der med samme rumfang destilleret vand, og faktor XIII udfældes ved indrøring af 0,25 g ammoniumsulfat pr. 1 ml opløsning. Fældningen udvin- g des ved centrifugering og optages i 2 ml 0,8^°/o kogsaltopløsning, som indeholder 0,01 mol/liter EDTA.
Efter tilsætning af 0,1 ml 20^* s human-albumin sterilfiltreres opløsningen gennem et bakterietæt filter og dialyseres i rækkefølge mod fysiologisk natriumchlorid- 10 -opløsning og mod fysiologisk natriumchlorid-opløsning med 0,5°/> glucose. Den fibrinstabiliserende aktivitet for opløsningen bestemmes nu i sammenligning med humanplasma og fortyndes så meget med glucoseholdig natriumchloridop- løsning, at aktiviteten for 4 ml opløsning svarer til ak-15 tiviteten for 250 til 3°0 ml blandingsplasma. Pr. 25 ml fortyndingsopløsning tilsættes der desuden yderligere 1 ml 2Q°/o's human-albumin. Efter sterilfiltrering påfyldes der i portioner på 4 ml og lyofiliseres,
Den samlede ud fra 15 kg placenta udvundne fi- 20 brinstabiliserende aktivitet giver 12 portioner med hver 250 ml plasmaaktivitet. For at isolere samme mængde fibrintværbindende aktivitet fra plasma vil ca. 40 til 60 liter blod være nødvendig, hvilket svarer til portioner fra ca. 80 til 120 bloddonorer å 500 ml blod.
25
Eksempel 4
Fremstilling af et hepatitis-sikkert prothrombin-koncen- trat af humant EDTA-plasma 30
Idet der gås ud fra 400 bloddonorerportioner å 500 ml, hver gang antikoagulationsbehandlet med 50 ml af en opløsning af 0,07%'s EDTA-natrium og 0,65%'s kogsalt, udvindes der ca. 100 liter plasma, og der videreforarbejdes inden for 35 2 dage som følger:
Til plasmaet sættes der ved 20°C 800 g tri-“calciumphosphat, og der omrøres' i 20 minutter. Derefter
DK 155568 B
20
O
fraskilles adsorptionsmidlet ved centrifugering, og der sættes 5 liter tri-natriumcitratopløsning, 0,18 mol/liter, til den kompakte fældning. Der omrøres i 30 minutter ved 20°C og centrifugeres på ny. Den ovenstående væske (elu-5 at l) dekanteres, og remanensen omrøres på ny med 2,5 liter tri-natriumcitratopløsning i 30 minutter ved 20°C. Der centrifugeres og dekanteres atter, den ovenstående væske (eluat 2) forenes med eluat 1, og remanensen kastes bort.
10 Til fraskillelse af det fintfordelte adsorptions middel centrifugeres det forenede eluat 1 og 2 ved 2000 x g. Den klare ovenstående væske (7,3 liter) fortyndes med samme rumfang destilleret vand, og pH-værdien indstilles på 6,8 med 2 N eddikesyre. Derefter tilsættes der ved -8°C så megen 15 alkohol, at der opnås en slutkoncentration af alkohol på 16% v/v. Fældningen centrifugeres ved 0-4°C, den ovenstående væske indstilles på pH=5,2 ved hjælp af 2 N iseddike, og alko holkoncentrationen bringes ved -8°C på 25% v/v. Fældningen, der hovedsagelig indeholder faktor II, optages i 1,2 20 liter af et pufferstof, der består af 9 dele 0,5%'s kogsaltopløsning og 1 del 0,1 mol/liter tri-natriumcitrat. Opløsningen indstilles på pH=6,8, og der tilsættes 1 g pr. ml saccharose og derefter 0,15 g pr. ml glycin. I en lukket beholder opvarmes denne blanding i 10 timer ved 60°C. Der-25 efter fortyndes den nævnte blanding med samme rumfang destilleret vand, og der fraskilles denatureret protein ved centrifugering. Den ovenstående væske indstilles på ny på pH=5,2 og bringes ved -8°C på en slutkoncentration på 25^ v/v med alkohol. Fældningen centrifugeres, og den ovenstående 30 væske kastes bort.
Fældningen optages i 200 ml af det ovenfor beskrevne kogsalt/citrat-pufferstof med pH=6,8 og dialyseres natten over mod det 50-dobbelte af samme pufferstof.
Efter tilsætning af 10 USP-enheder heparin pr. ml steril-35 filtreres og lyofiliseres opløsningen. Der fas 10 portioner med hver 200 enheder faktor II.
O
DK 155568B
21
Eksempel 5
Fremstilling af et hepatitis-sikkert antithrombin III-kon-centrat af human-plasma 5 3
Til en opløsning af 100 cm dextransulfat
O
(20 mg/cmJ) sættes der 5 g BrCN. pH-værdien indstilles derefter ved hjælp af 5 M NaOH på 11,0, og denne pH-værdi opretholdes i flere minutter og sænkes derpå til pH=8,5 med 10 5 HC1, hvorefter blandingen får lov at henstå natten over under omrøring. Der fremkommer en hvid, kornet, gelagtig pasta. Pastaen anbringes i en lille søjle på 3 mm 0 x 8 cm og ækvilibreres med et pufferstof med en pH-værdi på 8,5, som indeholder 0,02 m TRIS, 0,01 M citrat og 0,15M NaCl.
1 c 3 lb 2 cm normalt plasma ledes gennem søjlen. Ved at strømme gennem søjlen har plasmaet mistet sin koagulationsevne.
Søjlen vaskes først med originalpufferstoffet og elueres derpå ved trinvis forøgelse af saltkoncentrationen til 1 M NaCl. Til eluatet sættes der 80 g ammoniumsulfat pr.
20 100 ml opløsning, hvorefter dette omrøres i 2 timer. Fæld ningen centrifugeres og optages i 1 ml destilleret vand.
Derpå tilsættes der 1 g saccharose, og efter dennes fuldstændige opløsning tilsættes der yderligere 0,3 g glycin.
Den antithrombin III-holdige opløsning opvarmes i 10 ti-25 mer til 60°C.
Efter tilsætning af k ml destilleret vand og 3 g ammoniumsulfat fraskilles efter 18 timers henstand ved 4°C den antithrombin III-holdige fældning ved centrifugering, og der optages 1 ml fysiologisk NaCl. Efter dialyse 30 mod fysiologisk kogsaltopløsning indeholder præparatet 1,6 enheder antithrombin III pr. ml, hvilket svarer til et udbytte på 80^.
35
DK 155568 B
O
22
Eksempel 6
Fremstilling af et hepatitis-sikkert plasminogen-koncen-trat af human-plasma 5 100 mg copolymerisat af propylen og maleinsyreanhy-drid - som beskrevet nærmere i DE-patentskrift nr. 2.057.401 -suspenderes fint i 0,15 mol/liter kaliumphosphatpufferopløsning med en pH-værdi på 7»5 i et samlet rumfang på 5 ml.
10 Derefter tilsættes der under omrøring 10 mg hexamethylen- diamin, som opløses i 1 ml af den ovenfor angivne phosphat-pufferopløsning. Derpå tilsættes der med pipette 5 ml af en 2,5°/o' s kaliumph.osphatpu.fret lysinopløsning med en pH-værdi på 7,5* og udgangsmaterialet omrøres i 24 timer 15 ved 4°C. Det uopløselige tværbindingsprodukt udvindes derefter ved centrifugering, vaskes fri for lysin med fysiologisk kogsaltopløsning, skylles med destilleret vand og tørres lyofilt.
100 mg af det lyofiliserede tværbindingsprodukt 20 suspenderes efter stigning med nogle ml humanplasma i 70 ml humanplasma, pH-værdien indstilles på 7,0 med fortyndet saltsyre, og udgangsmaterialet omrøres ved 37°C i 30 minutter. Adsorptionsmidlet behandles derpå i centrifugen og vaskes med 0,15 M natriumphosphatpufferopløsning 25 med en pH-værdi 6,4, indtil vaskevandet er proteinfrit. Elueringen af plasminogenet sker med 25 ml af en 0,1 mol/liter tris-(hydroxymethyl)-aminomethanopløsning med en pH-værdi på 10,0, som indeholder 0,05 mol/liter lysin. Eluatet neutraliseres med normal saltsyre og dia-30 lyseres under omrøring mod samme rumfang mættet ammonium-sulfatopløsning. Fældningen fraskilles ved centrifugering, optages i 2-3 ml 0,1 mol/liter dinatriumhydrogenphosphat-opløsning og dialyseres to gange i 12 timer mod hver gang det 100-dobbelte rumfang af samme opløsning.
35 Til dialysatet sættes der 1 g saccharose pr. ml, derefter 0,15 g glycin pr. ml opløsning, og det holdes ved 60°C i 10 timer. Opløsningen fortyndes derpå med samme
DK 155568B
23 o rumfang destilleret vand og dialyseres derefter mod det 20-dobbelte rumfang mættet ammoniumsulfatopløsning. Fældningen udvindes ved centrifugering, optages i 3 ml 0,1 mol/lit er dinatriumhydrogenphosphatopløsning og dialy-5 seres mod 0,1 mol/liter natriumphosphatpufferstof med pH=7,5 indtil elektrolytudligning.
Som slutprodukt fås der 3 ml af en 0,31^'s plas-minogenopløsning med 37300 Christensen-enheder (Chr-E)/ml og 12000 Chr-E/mg protein. Udgangsmaterialet har en plas-10 minogentiter på 4000 Chr-E/ml og 53 Chr-E/mg protein.
Eksempel 7-
Stabilisering -af faktor VTI'I' mod termisk inaktivering Ved hjælp af' saccharose og: forskellige 'aminosyrer 25 Opløsninger indeholdende 80 enheder faktor VIII pr.
ml, 60 g saccharose pr. 100 ml og i hvert enkelt tilfælde en bestemt aminosyre i en bestemt koncentration eller ingen aminosyre (kontrol) opvarmes til 60°C i 10 timer. pH-værdien indstilles hver gang på 7 til 7,2.
20 Den følgende tabel viser de nærmere enkeltheder og faktor Vlll-restaktiviteten efter opvarmningen i procent af udgangsværdien.
25 1 35
DK 155568 B I
24 i i 0
Aminosyre Tilsætning i mol pr. Faktor VIII-rest- i mg or. 8 ml liter aktivitet __]_____±_%_
Neutral aminosyre: 1200 1,68 52 L-alanin 5 Hydroxyaminosyre: L-serin 50Q 0,6 62,5 L-threonin 950 1,0 56
Basisk aminosyre: L-lysin-HCL 1460 1,0 49
Sur aminosyre: L-asparaginsyre 50 0,047 34 10
Hydrofob aminosyre: L-valin 800 0,85 57
Sulfhydrylaminosyre; L-methionin 250 0,21 16
Aromatisk aminosyre: L-tyrosin 40 0,028 27 15 L-phenylalamin 140 0,1 16
Kontrol 12 jkj indeholder fra udgangsmaterialet 4 g glycin pr. 100 ml 20 Eksempel 8
Faktor VTXX-stabilitet Når der i eksempel 7 i stedet for saccharose tilsættes sukkeralkoholerne adonitol eller D-sorbitol og som aminosyre glycin (2 mol pr. liter), fås der følgende re-25 sultater:
Adonitol D-sorbitol Faktor VHI-rest gram pr. 100 ml gram pr. 100 ml__%_ 25 - 44 50 - 59 30 100 - 74 - 25 36 50 51 100 100 35
Claims (2)
1. Fremgangsmåde til stabilisering af koagulationsfaktorerne II, VIII, XIII og antithrombin III samt plasminogen, og således at disse er fibrinogen-fri og fri for risiko 5 for en hepatitis-overføring, kendetegnet ved, at man til en opløsning af en sådan koagulationsfaktor sætter en aminosyre og et oligosaccharid eller en sukkeralkohol og opvarmer i ca. 10 timer til en temperatur på ca. 60°C.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet 10 ved, at der til en opløsning indeholdende koagulationsfaktorerne II, VIII, XIII, antithrombin III og/eller plasminogen sættes 1,0 til 3,0 mol/liter af mindst én af amino-syrerne glycin, a- eller β-alanin, hydroxyprolin, prolin, glutamin, α-, β- eller ^-aminosmørsyre samt 20-60% w/w af 15 et oligosaccharid eller en sukkeralkohol, og at der opvarmes i ca. 10 timer til en temperatur på ca. 60°C. 20 25 1 35
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE2916711 | 1979-04-25 | ||
DE19792916711 DE2916711A1 (de) | 1979-04-25 | 1979-04-25 | Blutgerinnungsfaktoren und verfahren zu ihrer herstellung |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DK176280A DK176280A (da) | 1980-10-26 |
DK155568B true DK155568B (da) | 1989-04-24 |
DK155568C DK155568C (da) | 1989-10-09 |
Family
ID=6069217
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DK176280A DK155568C (da) | 1979-04-25 | 1980-04-24 | Fremgangsmaade til stabilisering af koagulationsfaktorerne ii, viii, xiii og antithrombin iii samt plasminogen, og saaledes at disse er fibrinogen-fri og fri for risiko for en hepatitis-overfoering |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4297344A (da) |
EP (1) | EP0018561B1 (da) |
JP (1) | JPS55145615A (da) |
AT (1) | ATE22396T1 (da) |
DE (2) | DE2916711A1 (da) |
DK (1) | DK155568C (da) |
ES (1) | ES490682A0 (da) |
IL (1) | IL59924A (da) |
Families Citing this family (140)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0035204B2 (en) * | 1980-03-05 | 1991-05-22 | Miles Inc. | Pasteurized therapeutically active protein compositions |
JPS56135418A (en) * | 1980-03-27 | 1981-10-22 | Green Cross Corp:The | Heat treatment of aqueous solution containing 8 factor of coagulation of blood derived from human |
US4305871A (en) * | 1980-09-02 | 1981-12-15 | Edward Shanbrom | Method of selectively increasing yield and purity of certain cryoprecipitate proteins by heating |
DE3043857A1 (de) * | 1980-11-21 | 1982-07-08 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Verfahren zur herstellung von blutgerinnungsfaktoren und danach hergestellte praeparation der faktoren ii und vii |
DE3045153A1 (de) * | 1980-11-29 | 1982-07-08 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Verfahren zur herstellung von blutgerinnungsfaktoren und danach hergestellte praeparation der faktoren ix und x |
IT1194135B (it) * | 1981-01-05 | 1988-09-14 | Novo Industri As | Composizioni di plasmina stabilizzata e metodo per la loro preparazione |
JPS57140724A (en) * | 1981-02-25 | 1982-08-31 | Green Cross Corp:The | Heat-treatment of aqueous solution containing cold insoluble globulin |
US4495278A (en) * | 1981-04-27 | 1985-01-22 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Process for making novel blood clotting enzyme compositions |
EP0286198B1 (en) * | 1981-04-27 | 1994-12-14 | BAXTER INTERNATIONAL INC. (a Delaware corporation) | Blood clotting enzyme compositions |
US4480029A (en) * | 1981-04-27 | 1984-10-30 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Biological indicators and their use |
DE3119157A1 (de) * | 1981-05-14 | 1982-12-09 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Verfahren zur herstellung von und danach hergestelltes plasminogen |
WO1982004395A1 (en) * | 1981-06-18 | 1982-12-23 | Erik Gustaf Birger Blombaeck | A process in purification and concentration of the factor viii complex |
JPS5874617A (ja) * | 1981-10-28 | 1983-05-06 | Green Cross Corp:The | 人由来血液凝固第7因子含有水溶液の加熱処理方法 |
US4845074A (en) * | 1982-05-13 | 1989-07-04 | Cedars Sinai Medical Center | Heat treatment of Factor VIII |
US4456590B2 (en) * | 1981-11-02 | 1989-05-30 | Heat treatment of lyphilized blood clotting factor viii concentrate | |
US4556558A (en) * | 1982-05-13 | 1985-12-03 | Cedars-Sinai Medical Center | Treatment of factor VIII concentrate to minimize the affect of undesirable microorganisms |
DE3230849A1 (de) * | 1982-08-19 | 1984-02-23 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Pasteurisiertes human-fibrinogen (hf) und verfahren zu dessen herstellung |
DE3237512A1 (de) * | 1982-10-09 | 1984-04-12 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Verfahren zur pasteurisierung von antihaemophilem kryopraezipitat (ahk) und danach hergestelltes antihaemophiles kryopraezipitat |
US4470968A (en) * | 1983-01-13 | 1984-09-11 | Miles Laboratories, Inc. | Pasteurized therapeutically active blood coagulation factor concentrates |
JPS59134730A (ja) * | 1983-01-20 | 1984-08-02 | Green Cross Corp:The | 血液凝固第8因子の加熱処理法 |
US4650858A (en) * | 1983-03-21 | 1987-03-17 | Nordisk Gentofte A/S | Concentrate of the antihemophilic factor VIII and a process for producing it |
AT376881B (de) * | 1983-05-02 | 1985-01-10 | Immuno Ag | Verfahren zur inaktivierung von vermehrungsfaehigen krankheitserregern |
EP0124506B1 (de) * | 1983-05-02 | 1988-08-17 | IMMUNO Aktiengesellschaft für chemisch-medizinische Produkte | Verfahren zur Inaktivierung von vermehrungsfähigen Krankheitserregern |
HUT40311A (en) * | 1983-06-03 | 1986-12-28 | Kiskunhalasi Aag | Process for producing protein concentrates, blood-curd and nutriments from blood and its elements |
DE3330770A1 (de) * | 1983-08-26 | 1985-03-14 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Verfahren zur pasteurisierung von humanplasma |
JPS6054287B2 (ja) * | 1983-10-19 | 1985-11-29 | 株式会社ミドリ十字 | 血漿蛋白の加熱処理方法 |
US4490361A (en) * | 1983-12-02 | 1984-12-25 | Alpha Therapeutic Corporation | Virus inactivating heat treatment of plasma fractions |
AT389815B (de) * | 1984-03-09 | 1990-02-12 | Immuno Ag | Verfahren zur inaktivierung von vermehrungsfaehigen filtrierbaren krankheitserregern in blutprodukten |
US5281579A (en) * | 1984-03-23 | 1994-01-25 | Baxter International Inc. | Purified virus-free hemoglobin solutions and method for making same |
US5043428A (en) * | 1984-08-31 | 1991-08-27 | Behringwerke Aktiengesellschaft | Pasteurized, isoagglutinin-free factor VIII preparation and a process for its production |
AT390001B (de) * | 1984-09-28 | 1990-03-12 | Immuno Ag | Verfahren zur inaktivierung von vermehrungsfaehigen filtrierbaren krankheitserregern |
DE3602688A1 (de) * | 1986-01-30 | 1987-08-06 | Behringwerke Ag | Verfahren zur gewinnung und herstellung eines pasteurisierten praeparates von (alpha)(pfeil abwaerts)2(pfeil abwaerts)-antiplasmin |
DE3621371A1 (de) * | 1986-03-12 | 1987-09-17 | Behringwerke Ag | Gentechnische herstellung von faktor xiiia |
JPH0725696B2 (ja) * | 1986-05-29 | 1995-03-22 | 株式会社ミドリ十字 | プラスミノ−ゲンの安定化方法 |
DE3622642A1 (de) * | 1986-07-05 | 1988-01-14 | Behringwerke Ag | Einkomponenten-gewebekleber sowie verfahren zu seiner herstellung |
CA1310267C (en) * | 1986-07-09 | 1992-11-17 | Yutaka Hirao | Process for heat treating chemically unmodified _-globulin |
US4749783A (en) * | 1986-07-11 | 1988-06-07 | Miles Laboratories, Inc. | Viral inactivation and purification of active proteins |
DE3625090A1 (de) * | 1986-07-24 | 1988-01-28 | Behringwerke Ag | Mittel zur therapie faktor viii-resistenter haemophilie a und verfahren zu seiner herstellung |
AT391808B (de) * | 1986-11-03 | 1990-12-10 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung einer faktor viii (ahf)-haeltigen fraktion |
JPS63243032A (ja) * | 1987-03-27 | 1988-10-07 | Green Cross Corp:The | トロンビンの加熱処理方法 |
US4876241A (en) * | 1987-05-22 | 1989-10-24 | Armour Pharmaceutical Company | Stabilization of biological and pharmaceutical products during thermal inactivation of viral and bacterial contaminants |
AU2423988A (en) * | 1987-08-17 | 1989-03-09 | Liposome Company, Inc., The | A sponge enzyme having transglutaminase-like activity |
DK18288D0 (da) * | 1988-01-15 | 1988-01-15 | Nordisk Gentofte | Fremgangsmaade til pasteurisering af vandige oploesninger af faktor viii |
US5763394A (en) * | 1988-04-15 | 1998-06-09 | Genentech, Inc. | Human growth hormone aqueous formulation |
US5096885A (en) * | 1988-04-15 | 1992-03-17 | Genentech, Inc. | Human growth hormone formulation |
US5981485A (en) * | 1997-07-14 | 1999-11-09 | Genentech, Inc. | Human growth hormone aqueous formulation |
AU2684488A (en) | 1988-06-27 | 1990-01-04 | Carter-Wallace, Inc. | Test device and method for colored particle immunoassay |
JPH0341033A (ja) * | 1989-07-07 | 1991-02-21 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | 安定なモチリン類含有製剤 |
FR2650508A1 (fr) * | 1989-08-01 | 1991-02-08 | Fondation Nale Transfusion San | Colle pasteurisee pour reunir des tissus humain ou animal |
DE3926034C3 (de) * | 1989-08-07 | 1996-11-21 | Behringwerke Ag | Verfahren zur Herstellung eines stabilen Faktors VIII |
DE4001451A1 (de) * | 1990-01-19 | 1991-08-01 | Octapharma Ag | Stabile injizierbare loesungen von faktor viii und faktor ix |
JPH03240738A (ja) * | 1990-02-20 | 1991-10-28 | Hoechst Japan Ltd | 糖尿病性壊疽治療剤 |
JPH0813750B2 (ja) * | 1990-03-01 | 1996-02-14 | 持田製薬株式会社 | 経口用トロンビン製剤 |
FR2664165B1 (fr) | 1990-07-03 | 1992-10-16 | Lille Transfusion Sanguine | Composition pour stabiliser le plasma sanguin en cours de pasteurisation. |
US5314695A (en) † | 1990-11-13 | 1994-05-24 | Corvas International, Inc. | Tissue factor based prothrombin time reagent |
AT402891B (de) * | 1991-06-20 | 1997-09-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung eines inaktivierten blutproduktes |
US5792835A (en) * | 1991-09-05 | 1998-08-11 | Baxter International Inc. | Method of preparing a topical fibrinogen complex |
AT399818B (de) * | 1992-04-24 | 1995-07-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung einer hochgereinigten virussicheren faktor viii-präparation |
JP3133338B2 (ja) * | 1992-12-16 | 2001-02-05 | イムノ・アクチエンゲゼルシャフト | ウイルス的に安全な生物学的組成物の調製方法 |
PT686045E (pt) * | 1993-02-23 | 2001-04-30 | Genentech Inc | Estabilizacao por excipientes de polipeptidos tratados com solventes organicos |
US5330974A (en) * | 1993-03-01 | 1994-07-19 | Fibratek, Inc. | Therapeutic fibrinogen compositions |
US5589516A (en) * | 1993-04-05 | 1996-12-31 | The Green Cross Corporation | Liquid preparation of antithrombin-III and stabilizing method therefor |
DE4320294A1 (de) * | 1993-06-18 | 1994-12-22 | Immuno Ag | Verwendung von humanem Protein C zur Verhinderung und Behandlung von Thrombozytenablagerungen |
DE4325872C1 (de) * | 1993-08-02 | 1994-08-04 | Immuno Ag | Virusinaktivierte Faktor Xa-Präparation |
AT402788B (de) * | 1993-08-03 | 1997-08-25 | Immuno Ag | Virussichere blutgerinnungsfaktor xiii-präparation |
WO1996002571A1 (fr) * | 1994-07-14 | 1996-02-01 | Croix-Rouge De Belgique | Concentre de fibrinogene issu de plasma sanguin, procede et installation pour sa preparation |
US5580856A (en) * | 1994-07-15 | 1996-12-03 | Prestrelski; Steven J. | Formulation of a reconstituted protein, and method and kit for the production thereof |
US6399296B1 (en) * | 1994-07-20 | 2002-06-04 | The General Hospital Corporation | Interaction trap systems for detecting protein interactions |
ES2218553T3 (es) * | 1994-10-11 | 2004-11-16 | Ajinomoto Co., Inc. | Transglutaminasa estabilizada y preparacion enzimatica que la contiene. |
DE19508192A1 (de) * | 1995-03-09 | 1996-09-12 | Behringwerke Ag | Stabile Transglutaminasepräparate und Verfahren zu ihrer Herstellung |
SE9501189D0 (sv) * | 1995-03-31 | 1995-03-31 | Pharmacia Ab | Protein formulation |
JPH08333277A (ja) * | 1995-06-05 | 1996-12-17 | Hoechst Japan Ltd | ヒト血液凝固第xiii因子の安定化された水性液製剤 |
US6190608B1 (en) | 1995-07-14 | 2001-02-20 | Croix-Rouge De Beligique Departement Central De Fractionnement | Method and apparatus for inactivating contaminants in blood products |
US5733884A (en) | 1995-11-07 | 1998-03-31 | Nestec Ltd. | Enteral formulation designed for optimized wound healing |
JP2000509374A (ja) * | 1996-04-19 | 2000-07-25 | アルファ セラピュティック コーポレイション | 凍結乾燥した血液タンパク質のウイルス不活性化方法 |
EP0844254A3 (en) * | 1996-11-20 | 1999-05-12 | The Green Cross Corporation | Method for producing antithrombin-III, method for purifying it, and preparation containing it |
GB9711927D0 (en) * | 1997-06-09 | 1997-08-06 | Bristol Myers Squibb Co | Compositions useful as fibrin sealants |
AUPO871997A0 (en) * | 1997-08-25 | 1997-09-18 | Csl Limited | Dried biologically or therapeutically active preparations |
AT407484B (de) * | 1997-11-12 | 2001-03-26 | Bio Prod & Bio Eng Ag | Arzneimittel zur förderung der wundheilung |
WO1999055310A1 (en) | 1998-04-27 | 1999-11-04 | Altus Biologics Inc. | Stabilized protein crystals, formulations containing them and methods of making them |
CN1264575C (zh) | 1998-08-06 | 2006-07-19 | 山景药品公司 | 聚乙二醇或聚环氧乙烷-尿酸氧化酶结合物及其应用 |
DE19856443A1 (de) * | 1998-12-08 | 2000-06-21 | Centeon Pharma Gmbh | Stabilisiertes Antithrombin III-Präparat |
DK1820516T3 (da) | 1999-02-22 | 2013-10-28 | Univ Connecticut | Nye albuminfrie faktor VIII-præparater |
US6733985B1 (en) * | 1999-05-19 | 2004-05-11 | International Technidyne Corporation | Preparation of stable liquid and dried synthetic prothrombin time reagents |
US6586574B1 (en) * | 1999-08-17 | 2003-07-01 | Nn A/S | Stabilization of freeze-dried cake |
EP2368898B1 (en) | 1999-11-18 | 2014-10-01 | Ischemix, Inc | Compositions and methods for counteracting effects of reactive oxygen species and free radicals |
US6890896B1 (en) | 1999-11-18 | 2005-05-10 | Ceremedix, Inc. | Compositions and methods for counteracting effects of reactive oxygen species and free radicals |
CA2398497C (en) | 2000-01-28 | 2011-04-26 | Gerhard Breipohl | Process for the preparation of acetyl-amidiniophenylalanyl-cyclohexylglycyl-pyridinioalaninamides |
DE10012732A1 (de) * | 2000-03-18 | 2001-09-20 | Aventis Behring Gmbh | Thrombin-Zubereitungen und Verfahren zu ihrer Herstellung |
AU5911101A (en) | 2000-04-19 | 2001-10-30 | Genentech Inc | Sustained release formulations |
DE10022092A1 (de) | 2000-05-08 | 2001-11-15 | Aventis Behring Gmbh | Stabilisiertes Protein-Präparat und Verfahren zu seiner Herstellung |
US20020176796A1 (en) * | 2000-06-20 | 2002-11-28 | Purepulse Technologies, Inc. | Inactivation of microbes in biological fluids |
JP2002112765A (ja) * | 2000-08-01 | 2002-04-16 | Nihon Pharmaceutical Co Ltd | ウイルス不活化法 |
US20020146409A1 (en) * | 2001-01-30 | 2002-10-10 | Herring Steven W. | Methods for stabilizing lyophilized blood proteins |
WO2002067991A1 (en) * | 2001-02-23 | 2002-09-06 | Genentech, Inc. | Erodible polymers for injection |
US20050130902A1 (en) * | 2001-05-17 | 2005-06-16 | Shashoua Victor E. | Peptide compounds for counteracting reactive oxygen species and free radicals |
EP1397155B1 (en) * | 2001-06-21 | 2015-09-30 | Genentech, Inc. | Sustained release formulation |
UY27373A1 (es) * | 2001-07-09 | 2003-02-28 | Schering Ag | Formulaciones de interferón beta-humano |
AU2002351755A1 (en) * | 2001-12-21 | 2003-07-15 | Novo Nordisk A/S | Liquid composition of modified factor vii polypeptides |
BR0215216A (pt) | 2001-12-21 | 2004-11-16 | Novo Nordisk Healthcare Ag | Composição aquosa lìquida, método para preparar uma composição aquosa lìquida de um polipeptìdeo de fator vii, uso de uma composição aquosa lìquida, e, método para o tratamento de uma sìndrome de resposta ao fator vii |
KR20040065278A (ko) * | 2001-12-21 | 2004-07-21 | 노보 노르디스크 에이/에스 | 변경된 인자 ⅶ 폴리펩티드의 액체 조성물 |
US20040009918A1 (en) * | 2002-05-03 | 2004-01-15 | Hanne Nedergaard | Stabilised solid compositions of modified factor VII |
PT2283856T (pt) | 2002-06-21 | 2017-12-26 | Novo Nordisk Healthcare Ag | Composições sólidas estabilizadas de polipéptidos do fator viia |
AT501088A2 (de) * | 2002-12-18 | 2006-06-15 | Bio Prod & Bio Eng Ag | Stabile therapeutische proteine |
JP2006524195A (ja) * | 2003-03-18 | 2006-10-26 | ノボ ノルディスク ヘルス ケア アクチェンゲゼルシャフト | Vii因子ポリペプチドの液状水性医薬組成物 |
US7897734B2 (en) * | 2003-03-26 | 2011-03-01 | Novo Nordisk Healthcare Ag | Method for the production of proteins |
US7498130B2 (en) * | 2003-05-13 | 2009-03-03 | Massachusetts General Hospital | Method of reducing viral load |
US20040229778A1 (en) * | 2003-05-13 | 2004-11-18 | Elmaleh David R. | Pharmaceutical compositions of antithrombin III for the treatment of retroviral diseases |
WO2004103398A1 (en) * | 2003-05-23 | 2004-12-02 | Novo Nordisk Health Care Ag | Protein stabilization in solution |
JP4658041B2 (ja) * | 2003-06-25 | 2011-03-23 | ノボ ノルディスク ヘルス ケア アクチェンゲゼルシャフト | Vii因子ポリペプチドの液体組成物 |
DE602004023848D1 (de) * | 2003-07-01 | 2009-12-10 | Novo Nordisk Healthcare Ag | Von factor vii polypeptiden |
WO2005016365A2 (en) | 2003-08-14 | 2005-02-24 | Novo Nordisk Health Care Ag | Liquid, aqueous pharmaceutical composition of factor vii polypeptides |
TR201809670T4 (tr) * | 2003-12-19 | 2018-07-23 | Novo Nordisk Healthcare Ag | Faktör VII polipeptitlerinin stabilize edilmiş kompozisyonları. |
KR100624013B1 (ko) * | 2004-06-25 | 2006-09-19 | 주식회사 녹십자홀딩스 | 동결건조된 알부민 비함유 재조합 사람 혈액응고 제 8인자 제제 |
US8148123B2 (en) | 2005-04-11 | 2012-04-03 | Savient Pharmaceuticals, Inc. | Methods for lowering elevated uric acid levels using intravenous injections of PEG-uricase |
US20080159976A1 (en) * | 2005-04-11 | 2008-07-03 | Jacob Hartman | Methods for lowering elevated uric acid levels using intravenous injections of PEG-uricase |
US7811800B2 (en) | 2005-04-11 | 2010-10-12 | Savient Pharmaceuticals, Inc. | Variant form of urate oxidase and use thereof |
TWI366467B (en) | 2005-04-11 | 2012-06-21 | Savient Pharmaceuticals Inc | Variant forms of urate oxidase and use thereof |
EP1883425A1 (en) * | 2005-05-23 | 2008-02-06 | Universite De Geneve | Injectable superparamagnetic nanoparticles for treatment by hyperthermia and use for forming an hyperthermic implant |
JP5058160B2 (ja) * | 2005-06-30 | 2012-10-24 | ジーイー・ヘルスケア・バイオサイエンス・コーポレイション | 遺伝子発現の検出方法 |
PL2013225T3 (pl) * | 2006-04-12 | 2015-06-30 | Crealta Pharmaceuticals Llc | Oczyszczanie białek z zastosowaniem kationowego środka powierzchniowo czynnego |
AU2009240026B2 (en) * | 2008-04-21 | 2014-05-29 | Novo Nordisk Health Care Ag | Dry transglutaminase composition |
CN102202682B (zh) | 2008-11-04 | 2015-08-19 | Aska制药株式会社 | 含促卵泡激素的水性组合物 |
BRPI0921429B1 (pt) * | 2008-11-07 | 2022-07-12 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Formulação farmacêutica liofilizada estável, e, método para preparar um fator liofilizado estável |
RU2535038C2 (ru) | 2009-06-25 | 2014-12-10 | Криэлта Фармасьютикалз ЭлЭлСи | Способы и наборы для прогнозирования риска инфузионных реакций и опосредованной антителами потери ответа при терапии пэгилированной уриказой с помощью мониторинга содержания мочевой кислоты в сыворотке крови |
SG183561A1 (en) | 2010-04-27 | 2012-09-27 | Scil Technology Gmbh | Stable aqueous mia/cd-rap formulations |
IL213864A0 (en) | 2011-06-30 | 2011-08-31 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | Method for removing a lytic enzyme from a heterogeneous mixture |
AR093297A1 (es) | 2012-10-31 | 2015-05-27 | Amgen Res (Munich) Gmbh | Formulacion liquida que comprende un compuesto neutralizante de gm-csf |
EP2914289B1 (en) | 2012-10-31 | 2019-05-22 | Takeda GmbH | Lyophilized formulation comprising gm-csf neutralizing compound |
CN118178647A (zh) | 2013-08-30 | 2024-06-14 | 武田药品工业株式会社 | 用于治疗类风湿性关节炎或作为镇痛药的中和gm-csf的抗体 |
RU2556804C2 (ru) * | 2013-12-17 | 2015-07-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение Гематологический научный центр Министерства здравоохранения РФ | Способ получения концентрата фибриногена |
IL231230A0 (en) | 2014-02-27 | 2014-08-31 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | Fibrinogen preparation |
US11173208B2 (en) | 2014-05-07 | 2021-11-16 | Takeda Gmbh | Liquid formulation comprising GM-CSF neutralizing compound |
SG11201704839RA (en) * | 2014-12-19 | 2017-07-28 | Prometic Bio Therapeutics Inc | Pharmaceutical composition comprising plasminogen and uses thereof |
IL247821A0 (en) | 2016-09-14 | 2017-01-31 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | Adhesive preparations and their use |
EP3770254A4 (en) * | 2018-03-23 | 2021-12-29 | Ajinomoto Co., Inc. | Liquid preparation containing transglutaminase |
US20210379186A1 (en) * | 2018-04-16 | 2021-12-09 | Merck Patent Gmbh | Additives for protein formulations to improve thermal stability |
WO2020121290A1 (en) | 2018-12-12 | 2020-06-18 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd. | High concentrated protein compositions for preventing tissue adhesion |
IL263679A (en) | 2018-12-12 | 2019-03-31 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | Kits, methods, and ingredients for preventing tissue adhesion |
WO2023119277A1 (en) | 2021-12-21 | 2023-06-29 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd. | Highly soluble fibrinogen compositions |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2140362A2 (da) * | 1970-09-19 | 1973-01-19 | Dainippon Pharmaceutical Co | |
DE2316430A1 (de) * | 1973-04-02 | 1974-10-10 | Behringwerke Ag | Partielles thromboplasti seine verwendung als diagnostikum und verfahren zu seiner herstellung |
DE2653534A1 (de) * | 1975-12-22 | 1977-06-30 | Baxter Travenol Lab | Antihaemophilen faktor enthaltendes, festes mittel und verfahren zu seiner herstellung |
Family Cites Families (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3066079A (en) * | 1959-09-18 | 1962-11-27 | American Cyanamid Co | Methods for purifying plasminogen |
GB941019A (en) * | 1961-04-27 | 1963-11-06 | Crookes Lab Ltd | Improvements in and relating to the stability of anti-haemophilic globulin (factor viii) |
US3227626A (en) * | 1961-09-18 | 1966-01-04 | Merck & Co Inc | Plasminogen heat sterilization |
US3682881A (en) * | 1970-10-02 | 1972-08-08 | Baxter Laboratories Inc | Fractionation of plasma using glycine and polyethylene glycol |
US3732146A (en) * | 1970-12-22 | 1973-05-08 | Behringwerke Ag | Process for the isolation of native, highly purified plasminogen |
SE392038B (sv) | 1971-09-08 | 1977-03-14 | Kabi Ab | Forfarande for isolering av antitrombin ur blod eller blodprodukter |
JPS5226255B2 (da) * | 1973-05-07 | 1977-07-13 | ||
US3973002A (en) * | 1974-04-12 | 1976-08-03 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Antihemophilic factor |
JPS51118820A (en) * | 1975-04-08 | 1976-10-19 | Green Cross Corp:The | A process for preparing heat stable macroglobulin |
JPS5359018A (en) * | 1976-11-10 | 1978-05-27 | Green Cross Corp:The | Concentrated xiii-th blood coagulating factor derived from human placentaand its preparation |
JPS597693B2 (ja) * | 1978-01-07 | 1984-02-20 | 株式会社ミドリ十字 | 抗トロンビン製剤及びその製法 |
JPH05118819A (ja) * | 1991-10-29 | 1993-05-14 | Toshiba Corp | 視覚認識装置 |
-
1979
- 1979-04-25 DE DE19792916711 patent/DE2916711A1/de not_active Ceased
-
1980
- 1980-04-18 EP EP80102105A patent/EP0018561B1/de not_active Expired
- 1980-04-18 AT AT80102105T patent/ATE22396T1/de active
- 1980-04-18 DE DE8080102105T patent/DE3071773D1/de not_active Expired
- 1980-04-18 ES ES490682A patent/ES490682A0/es active Granted
- 1980-04-23 US US06/142,962 patent/US4297344A/en not_active Expired - Lifetime
- 1980-04-24 IL IL59924A patent/IL59924A/xx unknown
- 1980-04-24 DK DK176280A patent/DK155568C/da not_active IP Right Cessation
- 1980-04-25 JP JP5609880A patent/JPS55145615A/ja active Granted
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2140362A2 (da) * | 1970-09-19 | 1973-01-19 | Dainippon Pharmaceutical Co | |
DE2316430A1 (de) * | 1973-04-02 | 1974-10-10 | Behringwerke Ag | Partielles thromboplasti seine verwendung als diagnostikum und verfahren zu seiner herstellung |
DE2653534A1 (de) * | 1975-12-22 | 1977-06-30 | Baxter Travenol Lab | Antihaemophilen faktor enthaltendes, festes mittel und verfahren zu seiner herstellung |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
IL59924A0 (en) | 1980-06-30 |
DE2916711A1 (de) | 1980-11-06 |
JPS6254286B2 (da) | 1987-11-13 |
JPS55145615A (en) | 1980-11-13 |
US4297344A (en) | 1981-10-27 |
ATE22396T1 (de) | 1986-10-15 |
ES8100884A1 (es) | 1980-12-01 |
IL59924A (en) | 1983-06-15 |
EP0018561B1 (de) | 1986-09-24 |
ES490682A0 (es) | 1980-12-01 |
EP0018561A3 (en) | 1981-10-21 |
DK176280A (da) | 1980-10-26 |
DK155568C (da) | 1989-10-09 |
DE3071773D1 (en) | 1986-10-30 |
EP0018561A2 (de) | 1980-11-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DK155568B (da) | Fremgangsmaade til stabilisering af koagulationsfaktorerne ii, viii, xiii og antithrombin iii samt plasminogen, og saaledes at disse er fibrinogen-fri og fri for risiko for en hepatitis-overfoering | |
US4327086A (en) | Process for heat treatment of aqueous solution containing human blood coagulation factor XIII | |
CA1126652A (en) | Antithrombin preparation and process for the production thereof | |
US5099003A (en) | Method of preparing a sterile plasma-protein solution containing fibrinogen and factor xiii | |
CA2113660C (en) | Process for the obtention of biological adhesive made of concentrated coagulation factors by salting-out | |
US5854403A (en) | Method for isolation of highly pure von Willebrand Factor | |
US4160025A (en) | Method of producing a blood-coagulation-promoting preparation from human blood plasma | |
US4470969A (en) | Process for producing a concentrate of coagulation factors VII and VIIa | |
DK141274B (da) | Fremgangsmåde til isolering af blodkoagulationsfaktorerne. | |
DK174066B1 (da) | Fremgangsmåde til fremstilling af et faktor VIII-præparat | |
JPH0694419B2 (ja) | 低温殺菌されたヒトーフィブリノーゲンの製造方法 | |
JPH0543688B2 (da) | ||
DK167900B1 (da) | Middel til behandling og forebyggelse af haemostatiske forstyrrelser indeholdende vaevsprotein pp4 | |
CN105315360A (zh) | 一种同时制备高纯人凝血因子viii及人纤维蛋白原的方法 | |
MXPA05000395A (es) | Proceso para la preparacion de fibrinogeno. | |
JPH0348888B2 (da) | ||
US4348315A (en) | Process in purification and concentration of the factor VIII-complex | |
US3904751A (en) | Process for isolating a fibrin stabilizing factor from human placenta | |
KR101080622B1 (ko) | Viii:c 인자-함유 폰 빌레브란트 인자의 농축물 및 이의 제조방법 | |
US5043428A (en) | Pasteurized, isoagglutinin-free factor VIII preparation and a process for its production | |
US4822872A (en) | Method of purifying factor VIII | |
JPS61189228A (ja) | 血液凝固第8因子製剤の製法 | |
US5811279A (en) | Method for activating prothrombin with polyethylene glycol | |
EP0401232B1 (en) | A process for pasteurization of aqueous solutions of factor viii | |
JPS6396132A (ja) | 抗血液凝固物質及びその製法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PUP | Patent expired |