JPH08333277A - ヒト血液凝固第ｘｉｉｉ因子の安定化された水性液製剤 - Google Patents
ヒト血液凝固第ｘｉｉｉ因子の安定化された水性液製剤Info
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- JPH08333277A JPH08333277A JP7137863A JP13786395A JPH08333277A JP H08333277 A JPH08333277 A JP H08333277A JP 7137863 A JP7137863 A JP 7137863A JP 13786395 A JP13786395 A JP 13786395A JP H08333277 A JPH08333277 A JP H08333277A
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- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
- A61K9/4841—Filling excipients; Inactive ingredients
- A61K9/4858—Organic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
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- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/45—Transferases (2)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
Abstract
(57)【要約】
【構成】 安定化剤としてガラクトース、シュクロー
ス、ソルビトール、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩
およびヒスチジンの少なくとも１種を含有する遺伝子組
換え技術により製造されたヒト血液凝固第ＸIII因子の
安定化された水性液製剤。 【効果】 長期間保存しても生物学的活性の低下が少な
い、遺伝子組換え技術により製造されたヒト血液凝固第
ＸIII因子の安定な水性液製剤が得られる。
ス、ソルビトール、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩
およびヒスチジンの少なくとも１種を含有する遺伝子組
換え技術により製造されたヒト血液凝固第ＸIII因子の
安定化された水性液製剤。 【効果】 長期間保存しても生物学的活性の低下が少な
い、遺伝子組換え技術により製造されたヒト血液凝固第
ＸIII因子の安定な水性液製剤が得られる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、安定化剤としてガラク
トース、シュクロース、ソルビトール、グルタミン酸
塩、アスパラギン酸塩およびヒスチジンの少なくとも１
種を含有する遺伝子組換え技術により製造されたヒト血
液凝固第XIII因子の安定化された水性液製剤に関する。
トース、シュクロース、ソルビトール、グルタミン酸
塩、アスパラギン酸塩およびヒスチジンの少なくとも１
種を含有する遺伝子組換え技術により製造されたヒト血
液凝固第XIII因子の安定化された水性液製剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】ヒト血液凝固第ＸIII因子（以下第ＸIII
因子と呼ぶ）は、ヒト血漿またはヒト胎盤等に広く存在
し、トロンビンおよびＣａ2+によって活性化され、ε−
（γ−グルタミル）リジン結合を種々の蛋白質間に形成
し、分子同士を架橋結合させる。この活性型凝固第ＸII
I因子によるフィブリンγ鎖同士の二量体化およびα鎖
の多量体化はフィブリンに強度と弾性を与え、止血機構
に関与する。さらに、この活性型第ＸIII因子は、フィ
ブロネクチンのフィブリンα鎖またはコラーゲンへの架
橋結合を触媒し、創傷治癒の過程で重要な役割を果たし
ている（松田、昭和52年、日本血液学会雑誌、第40巻第
６号、p.995〜1002）。
因子と呼ぶ）は、ヒト血漿またはヒト胎盤等に広く存在
し、トロンビンおよびＣａ2+によって活性化され、ε−
（γ−グルタミル）リジン結合を種々の蛋白質間に形成
し、分子同士を架橋結合させる。この活性型凝固第ＸII
I因子によるフィブリンγ鎖同士の二量体化およびα鎖
の多量体化はフィブリンに強度と弾性を与え、止血機構
に関与する。さらに、この活性型第ＸIII因子は、フィ
ブロネクチンのフィブリンα鎖またはコラーゲンへの架
橋結合を触媒し、創傷治癒の過程で重要な役割を果たし
ている（松田、昭和52年、日本血液学会雑誌、第40巻第
６号、p.995〜1002）。
【０００３】第ＸIII因子はヒト胎盤あるいはヒト血漿
から抽出、精製分離され、パスツリゼーション（液状加
熱、60℃、10時間処理）を施すことにより、各種ウイル
ス（Ｂ型肝炎ウイルス、HIV−１等のレトロウイルス
等）を不活化して製剤化される。第ＸIII因子は製造過
程および保存時に容易にその活性が減じることが一般に
知られている。とりわけパスツリゼーション処理時に著
しく活性が減じるため安定化剤としてアミノ酸１.０〜
３.０Ｍおよび単糖類またはオリゴ糖類２０〜６０w／w
％を加えることは知られている（ＵＳ４,２９７,３４
４)。液剤のまま保存すると不安定であるので、貯蔵の
ためにはさらに安定化剤としてヒト血清アルブミンおよ
びブドウ糖を添加した後、凍結乾燥を行っている。現在
は凍結乾燥製剤とその溶解液として日局注射用水が添付
される形で市場に出ている。臨床医によって患者に投与
する直前に凍結乾燥製剤を注射用水に溶解する手間を必
要とするばかりでなく均一な溶液にするための溶解時間
が必要なため、急を要する患者に投与する場合大きな問
題点となっている。
から抽出、精製分離され、パスツリゼーション（液状加
熱、60℃、10時間処理）を施すことにより、各種ウイル
ス（Ｂ型肝炎ウイルス、HIV−１等のレトロウイルス
等）を不活化して製剤化される。第ＸIII因子は製造過
程および保存時に容易にその活性が減じることが一般に
知られている。とりわけパスツリゼーション処理時に著
しく活性が減じるため安定化剤としてアミノ酸１.０〜
３.０Ｍおよび単糖類またはオリゴ糖類２０〜６０w／w
％を加えることは知られている（ＵＳ４,２９７,３４
４)。液剤のまま保存すると不安定であるので、貯蔵の
ためにはさらに安定化剤としてヒト血清アルブミンおよ
びブドウ糖を添加した後、凍結乾燥を行っている。現在
は凍結乾燥製剤とその溶解液として日局注射用水が添付
される形で市場に出ている。臨床医によって患者に投与
する直前に凍結乾燥製剤を注射用水に溶解する手間を必
要とするばかりでなく均一な溶液にするための溶解時間
が必要なため、急を要する患者に投与する場合大きな問
題点となっている。
【０００４】遺伝子組換え技術により製造された第ＸII
I因子は、ウイルスなどの病原菌を含まないので、加熱
殺菌の必要はないが、その水溶液は不安定である。
I因子は、ウイルスなどの病原菌を含まないので、加熱
殺菌の必要はないが、その水溶液は不安定である。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】そこで、本発明は、遺
伝子組換え技術により製造された第ＸIII因子を凍結乾
燥することなく、水性液の形態で長期間保存可能な安定
化された水性液製剤を提供することを目的とするもので
ある。
伝子組換え技術により製造された第ＸIII因子を凍結乾
燥することなく、水性液の形態で長期間保存可能な安定
化された水性液製剤を提供することを目的とするもので
ある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明は安定化剤として
ガラクトース、シュクロース、ソルビトール、グルタミ
ン酸塩、アスパラギン酸塩およびヒスチジンの少なくと
も１種を含有することを特徴とする遺伝子組換え技術に
より製造されたヒト血液凝固第ＸIII因子の安定化され
た水性液製剤からなる。
ガラクトース、シュクロース、ソルビトール、グルタミ
ン酸塩、アスパラギン酸塩およびヒスチジンの少なくと
も１種を含有することを特徴とする遺伝子組換え技術に
より製造されたヒト血液凝固第ＸIII因子の安定化され
た水性液製剤からなる。
【０００７】本発明において使用される安定化剤として
は、ガラクトース、シュクロース、ソルビトール、グル
タミン酸塩、アスパラギン酸塩およびヒスチジンがあげ
られる。これらは単独であるいは２種もしくはそれ以上
を組み合わせて用いられる。グルタミン酸塩およびアス
パラギン酸塩は好ましくはそれらのアルカリ金属塩また
はアルカリ土類金属塩、例えば、カリウム塩、ナトリウ
ム塩またはマグネシウム塩の形態で使用される。ヒト胎
盤またはヒト血漿から抽出、精製された天然の第ＸIII
因子を加熱殺菌する際に用いられるグリシン、アラニ
ン、ヒドロキシプロリン、グルタミン、α−、β−およ
びγ−アミノブチル酸やグルコースなどは意外にも遺伝
子組換え技術により製造された第ＸIII因子の保存安定
化剤としては有効でなかった。
は、ガラクトース、シュクロース、ソルビトール、グル
タミン酸塩、アスパラギン酸塩およびヒスチジンがあげ
られる。これらは単独であるいは２種もしくはそれ以上
を組み合わせて用いられる。グルタミン酸塩およびアス
パラギン酸塩は好ましくはそれらのアルカリ金属塩また
はアルカリ土類金属塩、例えば、カリウム塩、ナトリウ
ム塩またはマグネシウム塩の形態で使用される。ヒト胎
盤またはヒト血漿から抽出、精製された天然の第ＸIII
因子を加熱殺菌する際に用いられるグリシン、アラニ
ン、ヒドロキシプロリン、グルタミン、α−、β−およ
びγ−アミノブチル酸やグルコースなどは意外にも遺伝
子組換え技術により製造された第ＸIII因子の保存安定
化剤としては有効でなかった。
【０００８】本発明により安定化される第ＸIII因子は
遺伝子組換え技術により製造された第ＸIII因子および
血液凝固活性を有するその類似体である。このような因
子としては、例えば、ドイツ特許 DE 3804890A1に記載
の第ＸIII因子があげられる。この第ＸIII因子のアミノ
酸配列は、グルンドマンらによりProc. Natl. Acad. Sc
i.USA（1986), VOL.83, p.8024-8028に報告された第ＸI
II因子の第３図に記載されたアミノ酸配列のうち、１番
目のＳｅｒから731番目のＭｅｔまでのアミノ酸配列を
有し、かつ、８８番目のＬｅｕがＰｈｅに置換されたも
のである。
遺伝子組換え技術により製造された第ＸIII因子および
血液凝固活性を有するその類似体である。このような因
子としては、例えば、ドイツ特許 DE 3804890A1に記載
の第ＸIII因子があげられる。この第ＸIII因子のアミノ
酸配列は、グルンドマンらによりProc. Natl. Acad. Sc
i.USA（1986), VOL.83, p.8024-8028に報告された第ＸI
II因子の第３図に記載されたアミノ酸配列のうち、１番
目のＳｅｒから731番目のＭｅｔまでのアミノ酸配列を
有し、かつ、８８番目のＬｅｕがＰｈｅに置換されたも
のである。
【０００９】このアミノ酸配列をコードとするＤＮＡ配
列を酵母用の発現ベクターであるpEMBLyex4（J．K．Sel
ton，Genetic Engineering（1987），Plenum Publishin
g Co.,vol．9，p.135〜154）のポリリンカーサイトのSs
tＩからHind IIIの間に挿入し、第ＸIII因子の生産用プ
ラスミドとする。得られた生産用プラスミドにより、酵
母宿主であるCL3ABYS86（ドイツ特許 DE 3804890A1）を
形質転換し、酵母細胞内に組換え第ＸIII因子を産生さ
せ、酵母破壊上清より組換え第ＸIII因子を精製し、生
物学的に活性な第ＸIII因子を含む抽出液が得られる。
列を酵母用の発現ベクターであるpEMBLyex4（J．K．Sel
ton，Genetic Engineering（1987），Plenum Publishin
g Co.,vol．9，p.135〜154）のポリリンカーサイトのSs
tＩからHind IIIの間に挿入し、第ＸIII因子の生産用プ
ラスミドとする。得られた生産用プラスミドにより、酵
母宿主であるCL3ABYS86（ドイツ特許 DE 3804890A1）を
形質転換し、酵母細胞内に組換え第ＸIII因子を産生さ
せ、酵母破壊上清より組換え第ＸIII因子を精製し、生
物学的に活性な第ＸIII因子を含む抽出液が得られる。
【００１０】類似体とは第ＸIII因子のアミノ酸配列が
アミノ酸の置換、削除、付加によって修飾されたものを
いう。従って、類似体は、これらの第ＸIII因子のアミ
ノ酸配列と均等な配列を持つタンパク質を含むことは当
然である。さらに類似体は、これらの第ＸIII因子の主
要な性質を保持する程度にこれらのアミノ酸配列の主要
な部分を持ったタンパク質とも定義される。
アミノ酸の置換、削除、付加によって修飾されたものを
いう。従って、類似体は、これらの第ＸIII因子のアミ
ノ酸配列と均等な配列を持つタンパク質を含むことは当
然である。さらに類似体は、これらの第ＸIII因子の主
要な性質を保持する程度にこれらのアミノ酸配列の主要
な部分を持ったタンパク質とも定義される。
【００１１】第ＸIII因子製剤は、現在、凍結乾燥製剤
として、先天性血液凝固第ＸIII因子を欠乏による出血
傾向の改善、血液凝固第ＸIII因子の低下による縫合不
全および瘻孔の治療およびシェーンライン・ヘノッホ紫
斑病における症状の改善に静脈内投与されている。国内
外における２万例以上の使用経験および下記表１の急性
毒性試験の結果から見て、通常２０〜５０単位／kg／人
／日での使用量では副作用・毒性等の心配は全くない。
として、先天性血液凝固第ＸIII因子を欠乏による出血
傾向の改善、血液凝固第ＸIII因子の低下による縫合不
全および瘻孔の治療およびシェーンライン・ヘノッホ紫
斑病における症状の改善に静脈内投与されている。国内
外における２万例以上の使用経験および下記表１の急性
毒性試験の結果から見て、通常２０〜５０単位／kg／人
／日での使用量では副作用・毒性等の心配は全くない。
【００１２】
【表１】
【００１３】本液剤の投与方法は、凍結乾燥製剤と同様
に静脈内投与はもちろんのこと、皮内投与、皮下投与、
筋肉内投与、皮膚外用剤の剤形などあらゆる方法で投与
することができる。本液製剤の保存方法は凍結乾燥製剤
と同様に冷暗所、好ましくは４℃前後で保存するのが好
ましい。
に静脈内投与はもちろんのこと、皮内投与、皮下投与、
筋肉内投与、皮膚外用剤の剤形などあらゆる方法で投与
することができる。本液製剤の保存方法は凍結乾燥製剤
と同様に冷暗所、好ましくは４℃前後で保存するのが好
ましい。
【００１４】本発明では前述の遺伝子組換え技術により
生産された第ＸIII因子（最終力価を100単位／mlに調
整）の水溶液にシュクロース、Ｄ−ソルビトール、Ｌ−
グルタミン酸ナトリウム、Ｌ−アスパラギン酸ナトリウ
ムまたはＬ−ヒスチジンをそれぞれ添加後、至適濃度を
検討した。その結果をもとに第ＸIII因子（最終力価を1
00単位／mlに調整）の添加剤として２０％Ｄ−ソルビー
ルを加えた液剤、１５％シュクロースを加えた液剤、
０.５％Ｌ−グルタミン酸ナトリウムを加えた液剤、１
％Ｌ−アスパラギン酸ナトリウムを加えた液剤、１％Ｌ
−ヒスチジンを加えた液剤、２０％Ｄ−ソルビールおよ
び０.５％Ｌ−グルタミン酸ナトリウムを加えた液剤、
２０％Ｄ−ソルビールおよび１％Ｌ−アスパラギン酸ナ
トリウムを加えた液剤、２０％Ｄ−ソルビールおよび１
％Ｌ−ヒスチジンを加えた液剤、１５％シュクロースお
よび０.５％Ｌ−グルタミン酸ナトリウムを加えた液
剤、１５％シュクロースおよび１％Ｌ−アスパラギン酸
ナトリウムを加えた液剤、１５％シュクロースおよび１
％Ｌ−ヒスチジンを加えた液剤さらに対照として日局注
射用水のみを加えた溶液について各々苛酷試験を行い、
第ＸIII因子の活性の変化を測定した。その結果、本発
明の安定化剤の添加により第ＸIII因子はほぼ１００％
に保たれた。
生産された第ＸIII因子（最終力価を100単位／mlに調
整）の水溶液にシュクロース、Ｄ−ソルビトール、Ｌ−
グルタミン酸ナトリウム、Ｌ−アスパラギン酸ナトリウ
ムまたはＬ−ヒスチジンをそれぞれ添加後、至適濃度を
検討した。その結果をもとに第ＸIII因子（最終力価を1
00単位／mlに調整）の添加剤として２０％Ｄ−ソルビー
ルを加えた液剤、１５％シュクロースを加えた液剤、
０.５％Ｌ−グルタミン酸ナトリウムを加えた液剤、１
％Ｌ−アスパラギン酸ナトリウムを加えた液剤、１％Ｌ
−ヒスチジンを加えた液剤、２０％Ｄ−ソルビールおよ
び０.５％Ｌ−グルタミン酸ナトリウムを加えた液剤、
２０％Ｄ−ソルビールおよび１％Ｌ−アスパラギン酸ナ
トリウムを加えた液剤、２０％Ｄ−ソルビールおよび１
％Ｌ−ヒスチジンを加えた液剤、１５％シュクロースお
よび０.５％Ｌ−グルタミン酸ナトリウムを加えた液
剤、１５％シュクロースおよび１％Ｌ−アスパラギン酸
ナトリウムを加えた液剤、１５％シュクロースおよび１
％Ｌ−ヒスチジンを加えた液剤さらに対照として日局注
射用水のみを加えた溶液について各々苛酷試験を行い、
第ＸIII因子の活性の変化を測定した。その結果、本発
明の安定化剤の添加により第ＸIII因子はほぼ１００％
に保たれた。
【００１５】さらに、本発明では前述の遺伝子組換え技
術により生産された第ＸIII因子（最終力価を100単位／
mlに調整）に添加剤として０.５％Ｌ−グルタミン酸ナ
トリウムを加えた液剤、１５％シュクロースおよび１％
Ｌ−アスパラギン酸ナトリウムを加えた液剤、１５％シ
ュクロースおよび１％Ｌ−ヒスチジンを加えた液剤、さ
らに対照として日局注射用水のみを加えた溶液について
各々加速試験を行い、第ＸIII因子の活性の長期的変化
を予測した。その結果、本発明の安定化剤の添加により
第ＸIII因子の活性の低下は見られなかった。
術により生産された第ＸIII因子（最終力価を100単位／
mlに調整）に添加剤として０.５％Ｌ−グルタミン酸ナ
トリウムを加えた液剤、１５％シュクロースおよび１％
Ｌ−アスパラギン酸ナトリウムを加えた液剤、１５％シ
ュクロースおよび１％Ｌ−ヒスチジンを加えた液剤、さ
らに対照として日局注射用水のみを加えた溶液について
各々加速試験を行い、第ＸIII因子の活性の長期的変化
を予測した。その結果、本発明の安定化剤の添加により
第ＸIII因子の活性の低下は見られなかった。
【００１６】第ＸIII因子の活性測定法としては、フィ
ブリン形成法、トランスグルタミナーゼ活性測定法また
は免疫学的な抗原量の測定法等あるが、本発明では、高
感度で活性型第ＸIII因子量を測定することができる西
田らのダンシルカダベリン(dansylcadaverine）法（文
献：Nishida J., et al. (1984), Thromb. Res., vol.3
6, p.123〜131）を用いた。ダンシルカダベリン（ヤト
ロン社より購入）は第ＸIII因子の基質となる蛍光アミ
ンであり、第ＸIII因子の作用によりカゼインとダンシ
ルカダベリン−カゼイン複合体を形成し、反応後、ゲル
濾過で分取した当該複合体の蛍光強度を測定すること
で、第ＸIII因子の活性を測定できる。なお、第ＸIII因
子の活性は単位で表示し、１単位とは、正常人の血漿１
ml中に含まれる第ＸIII因子の量を示す。
ブリン形成法、トランスグルタミナーゼ活性測定法また
は免疫学的な抗原量の測定法等あるが、本発明では、高
感度で活性型第ＸIII因子量を測定することができる西
田らのダンシルカダベリン(dansylcadaverine）法（文
献：Nishida J., et al. (1984), Thromb. Res., vol.3
6, p.123〜131）を用いた。ダンシルカダベリン（ヤト
ロン社より購入）は第ＸIII因子の基質となる蛍光アミ
ンであり、第ＸIII因子の作用によりカゼインとダンシ
ルカダベリン−カゼイン複合体を形成し、反応後、ゲル
濾過で分取した当該複合体の蛍光強度を測定すること
で、第ＸIII因子の活性を測定できる。なお、第ＸIII因
子の活性は単位で表示し、１単位とは、正常人の血漿１
ml中に含まれる第ＸIII因子の量を示す。
【００１７】本発明の製剤において、ガラクトース、シ
ュクロース、ソルビールは１.２５〜４０w／v％、好ま
しくは１０〜２０w／v％の濃度で使用される。アミノ酸
は０.１２５〜１０w／v％、好ましくは０.５〜２w／v％
の濃度で使用される。第ＸIII因子は１〜２５００単位
／ml、好ましくは６０〜２００単位／mlの濃度で使用さ
れる。本発明の製剤にはpH調整剤および等張化の目的で
浸透圧調整剤を加えることができる。本発明の製剤のpH
は６〜９の範囲がよく特にｐＨ７〜８が好ましい。
ュクロース、ソルビールは１.２５〜４０w／v％、好ま
しくは１０〜２０w／v％の濃度で使用される。アミノ酸
は０.１２５〜１０w／v％、好ましくは０.５〜２w／v％
の濃度で使用される。第ＸIII因子は１〜２５００単位
／ml、好ましくは６０〜２００単位／mlの濃度で使用さ
れる。本発明の製剤にはpH調整剤および等張化の目的で
浸透圧調整剤を加えることができる。本発明の製剤のpH
は６〜９の範囲がよく特にｐＨ７〜８が好ましい。
【００１８】
【実施例】次に、製剤例および実施例を示して本発明の
効果を具体的に説明する。なお、本発明はこれらの実施
例により限定されるものではない。
効果を具体的に説明する。なお、本発明はこれらの実施
例により限定されるものではない。
【００１９】実施例 １ 本発明安定化剤の至適濃度を検討した。ガラクトース、
シュクロース、Ｄ−ソルビール、Ｌ−グルタミン酸ナト
リウム、Ｌ−アスパラギン酸ナトリウムおよびＬ−ヒス
チジンを、ドイツ特許 DE 3804890A1に記載の遺伝子組
換え技術により生産された第ＸIII因子（最終力価を日
局注射用水で100単位／mlに調整する）に添加し、６０
℃の湯浴中で３０分間加温後、第ＸIII因子の活性を測
定した。第ＸIII因子溶液を１００単位／mlに力価調整
した製剤の第ＸIII因子活性を１００％として第ＸIII因
子の活性残存率（％）を算出した。その結果を表２に示
す。
シュクロース、Ｄ−ソルビール、Ｌ−グルタミン酸ナト
リウム、Ｌ−アスパラギン酸ナトリウムおよびＬ−ヒス
チジンを、ドイツ特許 DE 3804890A1に記載の遺伝子組
換え技術により生産された第ＸIII因子（最終力価を日
局注射用水で100単位／mlに調整する）に添加し、６０
℃の湯浴中で３０分間加温後、第ＸIII因子の活性を測
定した。第ＸIII因子溶液を１００単位／mlに力価調整
した製剤の第ＸIII因子活性を１００％として第ＸIII因
子の活性残存率（％）を算出した。その結果を表２に示
す。
【００２０】ガラクトース、シュクロース、ソルビトー
ルの濃度は１.２５〜４０w／v％が有効であり、特に１
０〜２０w／v％が好ましい。アミノ酸の濃度は０.１２
５〜２０ｗ／ｖ％が有効であり、特に０.５〜２w／v％
が好ましい。この結果を基に下記に示す製剤例を調製し
た。
ルの濃度は１.２５〜４０w／v％が有効であり、特に１
０〜２０w／v％が好ましい。アミノ酸の濃度は０.１２
５〜２０ｗ／ｖ％が有効であり、特に０.５〜２w／v％
が好ましい。この結果を基に下記に示す製剤例を調製し
た。
【００２１】
【表２】
【００２２】製剤例 １ 精製した組換え第ＸIII因子溶液を２００単位／mlに力
価調整し、４０％Ｄ−ソルビトール溶液と等量ずつ混和
し、最終的に第ＸIII因子の力価が１００単位／mlと２
０％Ｄ−ソルビトール溶液を含む液剤を得た。
価調整し、４０％Ｄ−ソルビトール溶液と等量ずつ混和
し、最終的に第ＸIII因子の力価が１００単位／mlと２
０％Ｄ−ソルビトール溶液を含む液剤を得た。
【００２３】製剤例 ２〜１３ 製剤例１と同様に表３に示す安定化剤を使用し、最終的
に第ＸIII因子の力価が１００単位／mlと表３に示す濃
度の糖類、糖アルコール類およびアミノ酸溶液を含む液
剤を得た。
に第ＸIII因子の力価が１００単位／mlと表３に示す濃
度の糖類、糖アルコール類およびアミノ酸溶液を含む液
剤を得た。
【００２４】実施例２ 苛酷試験 製剤例１〜１３を６０℃の湯浴中で３０分間加熱後、第
ＸIII因子の活性を測定した。組換え第ＸIII因子溶液を
日局注射用水で１００単位／mlに力価調整した製剤の第
ＸIII因子活性を１００％として第ＸIII因子の活性残存
率(％)を算出した。その結果を表３に示す。６０℃、３
０分間加熱による第ＸIII因子の失活は、糖類、糖アル
コール類およびアミノ酸類の添加で防止され、ほぼ100
％活性が残存した。
ＸIII因子の活性を測定した。組換え第ＸIII因子溶液を
日局注射用水で１００単位／mlに力価調整した製剤の第
ＸIII因子活性を１００％として第ＸIII因子の活性残存
率(％)を算出した。その結果を表３に示す。６０℃、３
０分間加熱による第ＸIII因子の失活は、糖類、糖アル
コール類およびアミノ酸類の添加で防止され、ほぼ100
％活性が残存した。
【００２５】
【表３】
【００２６】表３に示す結果より、遺伝子組換え技術の
使用により製造された生物学的に活性な第ＸIII因子溶
液に、本発明の安定化剤の少なくとも一種を添加すると
第ＸIII因子残存活性が８４％以上の安定な溶液となっ
た。上記の通り、本発明の安定化剤の少なくとも一種を
添加することにより、安定で安全性の高い生物学的に活
性な第ＸIII因子を有効成分とする液剤が得られた。
使用により製造された生物学的に活性な第ＸIII因子溶
液に、本発明の安定化剤の少なくとも一種を添加すると
第ＸIII因子残存活性が８４％以上の安定な溶液となっ
た。上記の通り、本発明の安定化剤の少なくとも一種を
添加することにより、安定で安全性の高い生物学的に活
性な第ＸIII因子を有効成分とする液剤が得られた。
【００２７】実施例３ 加速試験 上述の製剤例３、１０および１１を各々４０℃に保存
し、開始時、１ヶ月後、２ヶ月後および３ヶ月後にサン
プリングを行い、第ＸIII因子の活性残存率(％)を算出
した。その結果を表４に示した。
し、開始時、１ヶ月後、２ヶ月後および３ヶ月後にサン
プリングを行い、第ＸIII因子の活性残存率(％)を算出
した。その結果を表４に示した。
【００２８】
【表４】
【００２９】表４に示した通り、遺伝子組換え技術によ
り製造されたヒト血液凝固第ＸIII因子液剤の活性は安
定化剤を添加しない対照では、４０℃保存で経時的に活
性が低下した。一方、本発明の安定化剤の少なくとも一
種類を添加した水性液製剤では、４０℃、３ヶ月後の第
ＸIII因子の残存活性が９０％以上であった。
り製造されたヒト血液凝固第ＸIII因子液剤の活性は安
定化剤を添加しない対照では、４０℃保存で経時的に活
性が低下した。一方、本発明の安定化剤の少なくとも一
種類を添加した水性液製剤では、４０℃、３ヶ月後の第
ＸIII因子の残存活性が９０％以上であった。
【００３０】
【発明の効果】本発明は第ＸIII因子を有効成分とし、
ガラクトース、シュクロース、ソルビトール、グルタミ
ン酸塩、アスパラギン酸塩およびヒスチジンから少なく
とも一種類を添加することで、安定なしかも安全な水性
液剤を提供する。これにより、生物学的活性を保ったま
ま液状で長期保存ができ、凍結乾燥品のように再溶解の
必要がないので、患者投与時における臨床医の手間を削
減できる。
ガラクトース、シュクロース、ソルビトール、グルタミ
ン酸塩、アスパラギン酸塩およびヒスチジンから少なく
とも一種類を添加することで、安定なしかも安全な水性
液剤を提供する。これにより、生物学的活性を保ったま
ま液状で長期保存ができ、凍結乾燥品のように再溶解の
必要がないので、患者投与時における臨床医の手間を削
減できる。
フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 47/26 Ａ６１Ｋ 47/26 Ｊ // Ｃ０７Ｋ 14/755 8517−4Ｈ Ｃ０７Ｋ 14/755 (Ａ６１Ｋ 47/10 47:16） (Ａ６１Ｋ 47/10 47:22） (Ａ６１Ｋ 47/26 47:16） (Ａ６１Ｋ 47/26 47:22）
Claims (4)
- 【請求項１】 安定化剤としてガラクトース、シュクロ
ース、ソルビトール、グルタミン酸塩、アスパラギン酸
塩およびヒスチジンの少なくとも１種を含有することを
特徴とする遺伝子組換え技術により製造されたヒト血液
凝固第ＸIII因子の安定化された水性液製剤。 - 【請求項２】 安定化剤としてシュクロース、ソルビト
ール、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩またはヒスチ
ジンを含有する請求項１記載の水性液製剤。 - 【請求項３】 安定化剤としてシュクロースとグルタミ
ン酸塩、アスパラギン酸塩またはヒスチジンとを含有す
る請求項１記載の水性液製剤。 - 【請求項４】 安定化剤としてソルビトールとグルタミ
ン酸塩、アスパラギン酸塩またはヒスチジンとを含有す
る請求項１記載の水性液製剤。
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|---|---|---|---|
| JP7137863A JPH08333277A (ja) | 1995-06-05 | 1995-06-05 | ヒト血液凝固第ｘｉｉｉ因子の安定化された水性液製剤 |
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| DE69631930T DE69631930T2 (de) | 1995-06-05 | 1996-06-03 | Stabilisiertes wässriges flüssiges Blutgerinnungsfaktor XIII-Präparat |
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|---|---|---|---|
| JP7137863A JPH08333277A (ja) | 1995-06-05 | 1995-06-05 | ヒト血液凝固第ｘｉｉｉ因子の安定化された水性液製剤 |
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|---|---|
| JPH08333277A true JPH08333277A (ja) | 1996-12-17 |
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-
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- 1996-06-03 EP EP96109167A patent/EP0754463B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-03 DK DK96109167T patent/DK0754463T3/da active
- 1996-06-03 AT AT96109167T patent/ATE262315T1/de active
- 1996-06-03 DE DE69631930T patent/DE69631930T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-04 CA CA002178144A patent/CA2178144C/en not_active Expired - Fee Related
- 1996-06-05 US US08/659,212 patent/US6084074A/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-05 AU AU54728/96A patent/AU722743B2/en not_active Ceased
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