JPH11199511A

JPH11199511A - 室温保存製剤

Info

Publication number: JPH11199511A
Application number: JP30097298A
Authority: JP
Inventors: Yutaka Hirao; 豊平尾; Motonori Hashimoto; 元範橋本; Tae Kitamura; 妙北村; Yatsuhiro Kamimura; 八尋上村
Original assignee: Welfide Corp
Current assignee: Welfide Corp
Priority date: 1997-10-23
Filing date: 1998-10-22
Publication date: 1999-07-27
Anticipated expiration: 2018-10-22
Also published as: JP4359352B2

Abstract

(57)【要約】【解決手段】ｐＨ４．５〜６．５、イオン強度０．０
００１〜０．１Ｍ、分子量１，０００〜１０，０００の
ポリエチレングリコール４〜１０ｗ／ｖ％、温度０〜４
℃の条件下で分画処理して上清画分を回収し、該上清画
分をｐＨ３．５〜５．０の条件下で濃縮処理する工程を
含んでなる静注用免疫グロブリン製剤の製造方法および
当該製造方法により調製される免疫グロブリン含有製
剤。【効果】室温保存時での安定性の改善が図られ、さら
に夾雑するアルブミンの除去あるいは不溶性異物を形成
する核となりうる微粒子を除去することにより、不溶性
異物の生成を抑えて、溶液状態における免疫グロブリン
の安定性をさらに改善した製剤、特に液状製剤を提供す
ることができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は静注用免疫グロブリ
ン製剤に関するものである。より詳細には室温保存可能
な静注用免疫グロブリン液状製剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】血漿蛋白成分であるγ−グロブリンのう
ち、特にＩｇＧを主成分とする免疫グロブリン製剤は、
これまで広く各種感染症の予防並びに治療に役立てられ
てきた。ところで、免疫グロブリンは溶液状態において
不安定であり、免疫グロブリンの凝集、即ち重合体や二
量体の生成により、特に分別操作の間に生じる変性の結
果として、抗補体活性とよばれる免疫グロブリンの補体
結合能力が著しく増加し、人体に静脈内投与すると血清
補体濃度の低下を生じ、あるいはアナフィラキシーショ
ック等の重篤な副作用を起こすことが知られている。従
って、免疫グロブリンは液状製剤ではなく、乾燥製剤、
特に凍結乾燥の態様で製剤化されていた。しかし、乾燥
製剤は使用時には注射用蒸留水等に溶解する必要があっ
たため、簡単に投与することができないという問題があ
った。

【０００３】一方、液状製剤は乾燥製剤に比べると注射
用蒸留水等への溶解の必要性もなく、簡単に投与できる
等の利点があるが、上記の如く免疫グロブリンの安定性
に劣るという欠点があった。従って、溶液状態において
も安定性のある静注用免疫グロブリン液状組成物の開発
が従来より試みられている。

【０００４】例えば、特開昭６３−１９２７２４号公報
には、低電導度、ｐＨ５．５±０．２、および安定化剤
としてのソルビトールの使用を組み合わせることによ
り、溶液状態においても安定性のある静注用免疫グロブ
リン液状組成物が提案されている。

【０００５】特開昭５８−４３９１４号公報において
は、免疫グロブリンの凝集物を実質的に含有せず、免疫
血清グロブリンの単量体濃度が約９０％よりも大である
免疫グロブリン組成物（製剤）を得るために、免疫血清
グロブリン溶液のイオン強度を０．００１未満に、ｐＨ
を３．５〜５．０にする工程が開示されている。特開平
９−１２４５０７号公報には、トリ−ｎ−ブチルホスフ
ェート（ＴＮＢＰ）処理によるウイルス不活化工程後
に、抗補体価の低下を目的として、ｐＨ３．５〜５．０
の条件下でイオン強度を低下させる工程が開示されてい
る。

【０００６】また、特開平７−２３８０３６号公報に
は、安定性を改善するために、酸処理あるいは室温保存
により免疫グロブリンの凝集、即ち、重合体だけでなく
二量体の増加をも抑制する方法が開示されている。

【０００７】バクスター特許（特表昭５９−５０１５４
６）にはｐＨ５〜５．６、ポリエチレングリコール（Ｐ
ＥＧ）０．０５〜２ｗ／ｖ％の存在下に限外濾過処理を
行うことが開示されている。

【０００８】しかしながら、上述の開示は、各工程にお
ける効果を示したものにすぎず、未だ室温での保存、特
に溶液状態での免疫グロブリン製剤における保存安定性
には改善の余地が残されていた。

【０００９】また一方、特開昭６３−８３４０号公報に
は後天性免疫不全ウイルスを実質的に含まない免疫血清
グロブリンの製造方法、即ち、約５．４に等しいか、ま
たはそれ以下のｐＨにおいて冷エタノール分画法を用い
ることにより、ヒトの血漿源から免疫血清グロブリンを
調製し、次いでこの免疫血清グロブリンを、感染性のレ
トロウイルスを実質的に含まないよう、約４．２５に等
しいかまたはそれ以下のｐＨにおいて少なくとも約３日
間貯蔵するか、または約６．８に等しいかまたはそれ以
下のｐＨで少なくとも４５℃の温度下に貯蔵する工程を
含んでなる製造方法が開示されている。しかし、この発
明はレトロウイルスの不活性化を目的としており、調製
された免疫グロブリン製剤において免疫グロブリンの凝
集が改善されたという報告はされていない。

【００１０】さらに、特表平９−５００８９４号公報に
は夾雑するアルブミンを実質的に含まない製剤が開示さ
れているが、当該特許で開示された測定方法の感度では
相対比として１％以下の夾雑するアルブミンを検出する
ことはできない。特開昭６３−１８３５３９号公報に
は、加熱処理工程とＰＥＧ４〜１０％分画処理による上
清画分の回収工程、ＰＥＧ１０〜１５％分画処理による
沈澱画分の回収工程を組合わせてなることを特徴とする
静注用免疫グロブリン製剤の製造方法を開示している。

【００１１】

【発明が解決しようとする課題】このように、免疫グロ
ブリンは、本来不安定な蛋白質であり、液状組成物を調
製した際、その安定性が最も懸念される課題の１つであ
る。本発明はこのような課題を解決するものであり、す
なわち本発明の目的は、溶液状態においても保存安定性
の良好な免疫グロブリン製剤を提供することである。

【００１２】

【課題を解決するための手段】本発明は以下の特徴を有
する。（１）ｐＨ４．５〜６．５、イオン強度０．０００１〜
０．１Ｍ、分子量１，０００〜１０，０００のポリエチ
レングリコール４〜１０ｗ／ｖ％、温度０〜４℃の条件
下で分画処理して上清画分を回収し、該上清画分をｐＨ
３．５〜５．０の条件下で濃縮処理する工程を含んでな
る静注用免疫グロブリン製剤の製造方法。（２）上記（１）記載の製造方法に、ウイルス不活化処
理する工程、陰イオン交換体で処理して非吸着画分を回
収する工程、平均孔径１〜１００ｎｍの多孔性膜を用い
て濾過処理する工程、およびコロイド珪酸を用いて接触
処理して非吸着画分を回収する工程のすくなくとも１つ
の工程をさらに含んでなる、就中全工程を含んでなる静
注用免疫グロブリン製剤の製造方法。（３）上記（１）または（２）記載の製造方法により調
製される静注用免疫グロブリン製剤、就中非化学修飾完
全分子型免疫グロブリンを含んでなり、ｐＨ５〜６、電
導度１ｍｍｈｏ以下（８℃での換算時）を有する静注用
免疫グロブリン製剤であって、製造後から少なくとも１
年間は室温保存が可能であり、その期間中は常に抗補体
価が２０単位以下、免疫グロブリンのダイマー含量が７
％以下を維持可能な静注用免疫グロブリン液状製剤。（４）液状で室温において少なくとも１年間安定であ
り、ヒト血清アルブミン含量が５μｇ／ｍｌ以下、ＭＣ
Ｐ−１（Human Monocyte Chemotactic Protein-1）含量
が１６ｐｇ／ｍｌ以下、補体Ｃ３ａ含量が３μｇ／ｍｌ
以下、ポリエチレングリコール含量が１ｍｇ／ｄｌ以下
である静注用免疫グロブリン製剤。

【００１３】

【発明の実施の形態】（１）出発原料本発明製剤の出発原料としては、免疫グロブリンを含む
画分が使用され、これはヒト血漿由来であって、免疫グ
ロブリン画分を含むものであれば特に限定されない。具
体的には、コーンのエタノール分画により得られる画分
ＩＩ＋ＩＩＩ、画分ＩＩ、および免疫グロブリンを含む
これらと同等の画分のペースト等が挙げられる。また、
この出発原料は、ヒト血液型抗体、カリクレイン、プレ
カリクレイン、ＩｇＭ、ＩｇＧ重合体等を含んでいても
よい。

【００１４】（２）製法本発明製剤を得るための製造方法は、好ましくは以下の
処理工程よりなる。ＰＥＧ処理工程本工程は出発原料をポリエチレングリコール（ＰＥＧ）
で処理し、上清を回収する工程である。まず、出発原料
を適当な水性溶媒に懸濁して、免疫グロブリンを抽出す
る。この時当該出発原料の少なくとも２倍容量以上、好
ましくは５倍容量以上の水性溶媒が使用される。ここで
使用される水性溶媒の溶質としては、例えば、塩化ナト
リウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、酢酸、酢
酸ナトリウム、クエン酸、クエン酸ナトリウム等が挙げ
られ、ｐＨは４．５〜６．５、イオン強度は０．０００
１〜０．１Ｍが好ましい。この懸濁液を分子量１，００
０〜１０，０００（好適には約２，０００〜６，００
０）のＰＥＧで処理する（例えば両者を混合する）。処
理条件としては、ＰＥＧ濃度４〜１０ｗ／ｖ％（特に４
〜８ｗ／ｖ％）、ｐＨ４．５〜６．５（特にｐＨ５〜
６）、イオン強度０．０００１〜０．１Ｍ（特に０．０
００１〜０．０１Ｍ）であることが好ましい。この際、
懸濁液中の蛋白濃度は１〜２０ｗ／ｖ％（特に５〜１５
ｗ／ｖ％）であることが好ましい。当該処理は、０〜４
℃程度で通常３０分〜６時間程度攪拌することによって
行われる。その後、例えば遠心分離（６，０００〜８，
０００ｒｐｍ、１０〜３０分間）して上清を回収する。

【００１５】酸性ｐＨでの濃縮工程本工程はの工程で得られた上清画分をｐＨ３．５〜
５．０（好ましくはｐＨ４〜４．５）の条件下で濃縮す
る工程である。具体的には分画分子量１０万程度の限外
濾過膜を用いて濃縮処理を行う。加圧条件としては１〜
１０ｋｇ／ｍ²が例示される。

【００１６】陰イオン交換体処理工程本工程は陰イオン交換体で接触処理して非吸着画分を回
収する工程である。本工程は、ＩｇＭ、ＩｇＧ重合体を
除くために行われる。 (i) 陰イオン交換体の調製陰イオン交換体は陰イオン交換基を不溶性担体に結合し
たものであるが、陰イオン交換基としてはジエチルアミ
ノエチル（ＤＥＡＥ）基、四級アミノエチル（ＱＡＥ）
基等を、不溶性担体としてはアガロース、セルロース、
デキストラン、ポリアクリルアミド等を用いることがで
きる。その結合は公知の方法で行われる。

【００１７】(ii)処理方法免疫グロブリンを含有する画分を適当な水性溶媒に溶解
する。水性溶媒はｐＨ５〜７（好ましくはｐＨ５．５〜
７）、低イオン強度（好ましくは０．０００１〜０．１
Ｍ）の水溶液であることが好ましい。当該水性溶媒は
の工程で記載したものと同様の溶質を含んでいてもよ
い。当該溶液中の蛋白濃度としては１〜１５ｗ／ｖ％
（特に、３〜１０ｗ／ｖ％）が好ましい。さらに、上記
の水性溶媒で平衡化した陰イオン交換体と接触処理す
る。その処理に際してはバッチ法、カラム法のどちらを
用いてもよい。例えばバッチ法では、陰イオン交換体１
ｍｌに対して処理対象溶液１０〜１００ｍｌ程度と混合
させ、０〜４℃で３０分〜２時間程度攪拌した後、遠心
分離（６，０００〜８，０００ｒｐｍ、１０〜３０分
間）して上清を回収する。カラム法でも、陰イオン交換
体１ｍｌに対して処理対象溶液１０〜１００ｍｌ程度を
接触させ、非吸着画分を回収する。本発明においては、
本の工程を所望により省略することもできるが、Ｉｇ
Ｍ、ＩｇＧ重合体の混入が懸念される場合には行うこと
が有利である。

【００１８】多孔性膜による濾過処理本発明の免疫グロブリン製剤は好ましくは、不溶性異物
の形成の核となり得る微粒子が除去されたものであり、
その除去方法としては、例えば、多孔性膜（例えば、中
空糸状、シート状等）等による濾過処理方法等が挙げら
れる。

【００１９】本発明に使用される多孔性膜の素材として
は、特に制限はないが、好ましくは再生セルロースが挙
げられる。またその形状としては、中空糸状、シート状
等が挙げられるが、好ましくは中空糸状である。例えば
該再生セルロースの多孔性中空糸は、好ましくはセルロ
ース銅アンモニア溶液からのミクロ相分離法〔アメリカ
ン・ケミカル・ソサイアティー（Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏ
ｃ．），９，１９７−２２８（１９８５）〕により調製
される。

【００２０】多孔性膜の平均孔径は１〜１００ｎｍ、好
ましくは１０〜７５ｎｍ、より好ましくは１０〜５０ｎ
ｍ、特に好ましくは３５±２ｎｍまたは１５±２ｎｍで
あり、膜厚は好ましくは３５±３．５μｍまたは２７±
３μｍであり、その膜は好ましくは多重層構造である。
多孔性膜が中空糸状である場合には、内径は好ましくは
３３０±３０μｍである。多孔性膜が中空糸状である場
合には、好ましくはモジュールの態様で使用される。該
モジュールは、膜面積が好ましくは０．００１〜１．０
ｍ²である多孔性中空糸膜とこれを充填するための容器
およびこれらを一体化するための接着剤により構成され
る。

【００２１】多孔性膜による濾過処理は、例えば以下の
ようにして行われる。まず、免疫グロブリンを含有する
画分を適当な水性溶媒に溶解する。水性溶媒はｐＨ４〜
７（特にｐＨ５〜６）、低イオン強度（特に０．０００
１〜０．１Ｍ）であることが好ましい。当該水性溶媒は
の工程で記載したものと同様の溶質を含んでいてもよ
い。当該溶液中の蛋白濃度としては０．１〜１５ｗ／ｖ
％（特に、３〜１０ｗ／ｖ％）が好ましい。

【００２２】当該免疫グロブリン溶液は、本発明の目的
に反しない範囲で通常医薬品に用いられる薬理的に許容
される添加剤（例えば担体、賦形剤、希釈剤等）、安定
化剤または製薬上必要な成分を含有していてもよい。安
定化剤としては、グルコース等の単糖類、サッカロー
ス、マルトース等の二糖類、マンニトール、ソルビトー
ル等の糖アルコール、塩化ナトリウム等の中性塩、グリ
シン等のアミノ酸、ポリエチレングリコール、ポリオキ
シエチレン−ポリオキシプロピレン共重合体（プルロニ
ック）、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル
（トゥイーン）等の非イオン系界面活性剤等が例示さ
れ、１〜１０ｗ／ｖ％程度が添加されていることが好ま
しい。

【００２３】上記の免疫グロブリン含有溶液を多孔性膜
を用いて濾過処理を行う。この時の濾過圧力は好ましく
は０．１〜１ｋｇｆ／ｃｍ²、より好ましくは０．１〜
０．５ｋｇｆ／ｃｍ²、特に好ましくは０．１〜０．３
ｋｇｆ／ｃｍ²である。また、処理温度は好ましくは４
〜５０℃であり、処理時間は１０分〜１０時間、好まし
くは１〜５時間である。濾過処理の態様としては、流体
にひずみ速度を与えながら濾過するクロスフロー濾過法
（循環式）とひずみ速度を与えずに濾過するデッドエン
ド法（非循環式）があるが、好ましくは加圧空気による
クロスフロー濾過法が採用される。また、このような濾
過処理は複数回行うことができる。さらに、この濾過処
理前に、予め免疫グロブリン含有溶液に、上述の中空糸
膜による濾過処理以外の濾過処理を施してもよい。この
ようにして調製された免疫グロブリン製剤は、不溶性異
物の形成の核となり得る、平均粒径１００ｎｍ以上、好
ましくは７５ｎｍ以上、より好ましくは３５ｎｍ以上の
不溶性の微粒子や、免疫グロブリンの分子量（約１５
万）よりも大きい分子量を有する可溶性の微粒子が除去
されているので、このような製剤を２５℃、３０日間保
存しても、免疫グロブリンの凝集、即ち、不溶性異物の
発生がなく保存安定性が良好となる。

【００２４】また、免疫グロブリンをさらに精製するた
めに公知の手法を用いてもよい。例えば、固定化ジアミ
ノ化合物を用いた処理（カリクレインまたはプレカリク
レインを除去するため）、固定化ヒト血液型物質を用い
た処理（ヒト血液型抗体を除去するため）等が例示され
る（特開平９−１７６０４５号公報参照）。本発明にお
いては本の工程を所望により省略することもできる。

【００２５】コロイド珪酸処理による方法本工程はコロイド珪酸で接触処理して非吸着画分を回収
する工程である。本工程は夾雑する血清アルブミンを除
去するために行われる。 (i) 吸着剤吸着剤として用いられるコロイド珪酸としては、シリカ
ゲル、軽質無水珪酸、ケイソウ土、酸性白土、ベントナ
イト、カオリン、珪酸アルミン酸マグネシウム等が挙げ
られる。好適には軽質無水珪酸〔商品名エアロジル（日
本エアロジル社製）、商品名デリピト（ゼータ社製）
等〕が用いられる。

【００２６】(ii)処理条件免疫グロブリンを含有する画分を適当な水性溶媒に溶解
する。水性溶媒はｐＨ４〜７（特にｐＨ５〜６）、低イ
オン強度（特に０．０００１〜０．１Ｍ）の水溶液であ
ることが好ましい。当該水性溶媒はの工程で記載した
ものと同様の溶質を含んでいてもよい。当該溶液中の蛋
白濃度としては１〜１５ｗ／ｖ％（特に、３〜１０ｗ／
ｖ％）が好ましい。当該免疫グロブリン溶液は、の工
程と同様に、本発明の目的に反しない範囲で通常医薬品
に用いられる薬理的に許容される添加剤、安定化剤また
は製薬上必要な成分を含有していてもよい。添加剤、安
定化剤等は、前述のの工程で述べたものと同様のもの
が同様の量で添加され得る。

【００２７】次いで、この免疫グロブリン溶液を上記の
吸着剤と接触処理する。接触条件としては、免疫グロブ
リン濃度１〜１００ｇ／リットル（好ましくは１０〜１
００ｇ／リットル）に対して吸着剤量１〜３０ｇ／リッ
トルが使用される。本処理はバッチ法、カラム法のどち
らでも行われ得るが、好ましくはバッチ法を用いる。バ
ッチ法の条件としては、例えば、５〜２５℃、５分〜１
時間程度、混和、攪拌する。その後、濾過または遠心分
離により上清（非吸着画分）を回収する。

【００２８】このように、血清アルブミンを除去する工
程を経て調製された免疫グロブリン製剤は、免疫グロブ
リン５０ｍｇ当たり血清アルブミンの夾雑量が１０μｇ
以下、好ましくは５μｇ以下の性状を有するものであ
り、例えば、免疫グロブリンの５ｗ／ｖ％濃度の溶液状
態においては、血清アルブミンの夾雑量が１０μｇ／ｍ
ｌ以下、好ましくは５μｇ／ｍｌ以下の性状を有する。
このような性状の免疫グロブリン製剤は従来のものと比
較して保存安定性が良好となり、例えば、３７℃、３９
日の保存においても、不溶性異物の生成が極めて少ない
ものとなる。また、免疫グロブリン製剤中の血清アルブ
ミンの定量法としては公知のものが利用でき、例えばＥ
ＬＩＳＡ法、マンシーニー法、比濁法等が採用され得
る。本発明においてはの工程を所望により省略するこ
ともできるが、血清アルブミンの夾雑が懸念される場合
には有利に行われ得る。

【００２９】ウイルス不活化処理工程本工程は、例えば所望の段階で安定化剤の存在下に免疫
グロブリンの抗体活性の減少は最小限にとどめるが、夾
雑するウイルス、例えばＨＢウイルス、ＡＩＤＳウイル
ス等は実質的に不活化する条件で加熱処理する工程が例
示される。このウイルス不活化処理は、例えば出発原料
の段階、各実施工程のいずれかの二工程の間、または各
実施工程全てを終了した段階等のいずれの処理段階にお
いても行うことができる。加熱処理は、含湿度３％以下
の乾燥状態（即ち、乾熱処理：乾燥状態で十分な時間加
熱処理することにより、ウイルスを不活化し得る）、ま
たは溶液状態、即ち免疫グロブリンの水溶液状態（即
ち、液状加熱処理）で行う。より好ましくは液状加熱処
理が推奨される。

【００３０】安定化剤としては、いずれの処理の場合
も、二糖類（例、サッカロース、マルトース）、糖アル
コール（例、ソルビトール、マンニトール）が好適に例
示される。より好ましくはソルビトールである。安定化
剤の添加量は、溶液状態での添加量として、乾熱処理法
では、二糖類、糖アルコール等を０．５〜５ｗ／ｖ％
（好ましくは、１〜３ｗ／ｖ％）、液状加熱処理法では
二糖類、糖アルコール等を１０ｗ／ｖ％以上（好ましく
は、１０〜５０ｗ／ｖ％）の添加が好適に例示される。

【００３１】加熱の対象となる免疫グロブリンの、溶液
状態における量としては、乾熱処理では、蛋白量として
１〜１０ｗ／ｖ％（好ましくは３〜７ｗ／ｖ％）となる
ように調整することが好適である。液状加熱処理では、
蛋白量として０．１〜３０ｗ／ｖ％（好ましくは５〜２
０ｗ／ｖ％）に調整することが好ましい。

【００３２】加熱処理は、乾熱処理の場合、安定化剤を
添加後、要すれば除菌濾過し、例えば凍結乾燥等によっ
て含水率３％以下、好ましくは１％以下とする。凍結乾
燥の条件としては０．５ｍｍＨｇの真空下、２０〜４０
℃で２４〜９６時間程度が例示される。次いで、例えば
５０〜７０℃（好ましくは６０℃程度）、１０〜２００
時間（好ましくは５０〜１００時間程度）で処理する。

【００３３】また、本加熱処理工程は不活性ガス雰囲気
下で行うことにより、加熱時の安定性をより高めること
ができる。不活性ガスとしては例えば、窒素ガス、アル
ゴン、ヘリウム等が挙げられる。

【００３４】液状加熱処理の場合は水溶液のｐＨを４．
５〜６．５、好ましくはｐＨ５〜６に調整し、イオン強
度を０．０００１〜０．１Ｍ（好ましくは０．０００１
〜０．０１Ｍ）として、５０〜７０℃（好ましくは６０
℃程度）で１０分間〜２０時間（好ましくは１０時間程
度）処理する。

【００３５】加熱処理の工程は、乾熱処理の場合は最終
工程で行うことが好ましい。液状加熱処理の場合は、出
発原料に対して行うのが好適である。

【００３６】また、免疫グロブリン含有組成物（出発原
料やの工程を経て得られた濃縮画分等が包含される）
をトリアルキルホスフェートに接触させることによって
もウイルスを不活化することができる。本発明のトリア
ルキルホスフェートとの接触時の免疫グロブリン含有組
成物の精製度は、特に限定されるものでなく、任意の精
製度のものに適用可能であり、従ってトリアルキルホス
フェートとの接触は前述の工程のどの段階に適用しても
よいが、好適には溶液状態の免疫グロブリン含有組成物
に接触させる。

【００３７】本発明に使用されるトリアルキルホスフェ
ートは特に限定されないが、好適にはトリ−（ｎ−ブチ
ル）ホスフェート、トリ−（ｔｅｒｔ−ブチル）ホスフ
ェート、トリ−（ｎ−ヘキシル）ホスフェート、トリ−
（２−エチルヘキシル）ホスフェート、トリ−（ｎ−デ
シル）ホスフェート等が挙げられる。特に好ましいトリ
アルキルホスフェートは、トリ−（ｎ−ブチル）ホスフ
ェート（以下ＴＮＢＰと言う）である。なお、２種類以
上の異なるトリアルキルホスフェートの混合物も使用す
ることができる。免疫グロブリンの量は、蛋白質として
０．１〜３０ｗ／ｖ％（好ましくは１〜２０ｗ／ｖ％）
に調整することが好適である。本発明に使用されるトリ
アルキルホスフェートは、０．０１〜１０ｗ／ｖ％の範
囲の量、好ましくは約０．１〜３ｗ／ｖ％の範囲の量に
おいて使用される。当該トリアルキルホスフェートは、
０〜６０℃（好ましくは２０〜４０℃）で、３０分間以
上（好ましくは１〜３０時間、より好ましくは３〜１０
時間）、ｐＨ６〜８程度の条件下で接触させる。

【００３８】トリアルキルホスフェートは界面活性剤を
伴ってまたは伴わないで使用することができる。好まし
くは、トリアルキルホスフェートは界面活性剤と組み合
わせて使用する。この界面活性剤はトリアルキルホスフ
ェートを免疫グロブリン含有組成物と接触する前、同
時、またはその後の任意の段階で添加することができ
る。界面活性剤の作用は、ウイルスとトリアルキルホス
フェートとの接触を強化することである。界面活性剤と
しては、脂肪酸のポリオキシエチレン誘導体、ソルビト
ール無水物の部分エステル（例えばトゥイーン８０、ト
ゥイーン２０およびポリソルベート８０等）、および非
イオン性Ｏ／Ｗ型界面活性剤（例えばトライトンＸ１０
０（オキシエチル化アルキルフェノール）等）等が挙げ
られる。さらにデオキシコール酸ナトリウム、およびス
ルホベタインとして周知の合成両性界面活性剤であるツ
ブイッタージェント（Ｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔｓ）（例
えばＮ−ドデシル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−アンモニオ
−１−エタンスルホネート、およびその同族体等）や非
イオン性界面活性剤（例えばオクチル−β、Ｄ−グルコ
ピラノシド等）等が挙げられる。界面活性剤を使用する
場合、その量は臨界的ではなく、例えば約０．００１％
〜約１０％、好ましくは約０．０１％〜３％の範囲で使
用することができる。

【００３９】トリアルキルホスフェート処理はエンベロ
ープウイルス、例えばＢ型肝炎ウイルス、非Ａ非Ｂ型肝
炎ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、水疱性
口内炎ウイルス（ＶｅｓｉｃｕｌａｒＳｔｏｍａｔｉ
ｔｉｓＶｉｒｕｓ）、シンドビスウイルス（Ｓｉｎｄ
ｂｉｓＶｉｒｕｓ）等の不活化に特に有用である。

【００４０】（３）最終製剤（特に液状製剤）について液状製剤の調製上述の本発明の静注用免疫グロブリン製剤の製造方法を
用いることにより、静注用免疫グロブリン製剤が得られ
る。特に非化学修飾完全分子型免疫グロブリンを常套手
段によって１〜１０ｗ／ｖ％（好ましくは３〜７ｗ／ｖ
％）になるように水溶液に調整し、さらに安定化剤、例
えばソルビトール１〜２０ｗ／ｖ％（好ましくは２〜１
０ｗ／ｖ％）、ｐＨ５．５±０．２（好ましくは約５．
５）、低電導度（好ましくは電導度１ｍｍｈｏ以下、特
に０．６ｍｍｈｏ以下、共に８℃換算）になるように、
自体既知の手段にて調整した後、通常の製剤化技術に基
づいて、除菌濾過、分注等を行い、静脈内投与可能な非
化学修飾完全分子型免疫ブロブリン液状組成物（製剤）
を調製することができる。かくして調製された製剤は、
非化学修飾完全分子型免疫グロブリンを含有し、ｐＨ５
〜６（好ましくは約５．５±０．２程度）、電導度１ｍ
ｍｈｏ以下（好ましくは０．６ｍｍｈｏ以下、ともに８
℃での換算時）を有し、製造後から少なくとも１年間は
室温保存が可能であり、その期間中は常に抗補体価が２
０単位以下、免疫グロブリンのダイマー含量が７％以下
を維持可能な静注用免疫グロブリン液状製剤を得ること
ができる。

【００４１】本発明の静注用免疫グロブリン含有製剤に
含まれ得る非化学修飾完全分子型免疫グロブリンとは； (i) 自然のままで何らの修飾や変化もうけておらず、従
って免疫グロブリンのフラグメントであるＦａｂ、Ｆ
（ａｂ’）₂、Ｆｃ等を含まない、(ii)抗体価の低下が
なく、同時に抗体スペクトルの低下もない、(iii) 抗補
体作用（補体結合性）が日本国生物学的製剤基準（以
下、生基準ともいう）で安全と見なされる２０単位（Ｃ
Ｈ₅₀値）よりも十分に低い、という諸性状を備えたもの
をいう。

【００４２】非化学修飾完全分子型免疫グロブリンを含
有してなる静注用免疫グロブリン含有製剤について、グ
ロブリン二量体の含有率の安全域を考慮すると、その含
有率を７％以下、好ましくは６％以下、最も好ましくは
４％以下にする。

【００４３】さらに本発明の静注用免疫グロブリン製剤
の製造方法を用いることにより、保存安定性のよい、夾
雑物の低減された静注用免疫グロブリン製剤、特に液状
で室温において少なくとも１年間安定であり、ヒト血清
アルブミン含量が５μｇ／ｍｌ以下、ＭＣＰ−１（Huma
n Monocyte Chemotactic Protein-1）含量が１６ｐｇ／
ｍｌ以下、補体Ｃ３ａ含量が３μｇ／ｍｌ以下、ポリエ
チレングリコール含量が１ｍｇ／ｄｌ以下である静注用
免疫グロブリン製剤を得ることができる。

【００４４】本発明の製剤は、免疫グロブリンが実質的
に不活化されておらず、しかもＩｇＧ重合体や夾雑物は
含まれておらず、溶解性もよく、抗補体活性も十分に低
い等の性質を有し、加熱処理等のウイルス不活化を実施
することにより、昭和６０年度発行の生基準をパスでき
る安全な製剤である。本発明の製剤は、液状製剤の場合
はそのままで、あるいは適当な溶媒（例えば、注射用蒸
留水、生理食塩水、ぶどう糖液等）で希釈し、乾燥製剤
の場合は適当な溶媒（例えば注射用蒸留水）に溶解し
て、静脈内投与される。

【００４５】適応疾患の具体例１．低並びに無ガンマグロブリン血症２．重症感染症３．続発性血小板減少性紫斑病４．川崎病の急性期

【００４６】用法・用量本発明の製剤は点滴注射するか、または直接静注する。
直接静注する場合は、極めて徐々に行うことが望まし
い。通常成人に対しては、１回ヒト免疫グロブリンＧと
して２，５００〜５，０００ｍｇを、小児に対しては１
回ヒト免疫グロブリンＧとして１００〜１５０ｍｇ／ｋ
ｇ体重を使用する。症状によって適宜増減できる。続発
性血小板減少性紫斑病に用いる場合、通常１日に、ヒト
免疫グロブリンＧとして２００〜４００ｍｇ／ｋｇ体重
を投与する。年齢や症状に応じて適宜増減する。川崎病
に用いる場合、通常１日に、ヒト免疫グロブリンＧとし
て４００ｍｇ／ｋｇ体重を５日間投与する。なお、年齢
や症状に応じて適宜増減する。

【００４７】

【実施例】以下、実施例により本発明をより詳細に説明
するが、本発明はこれらに何ら限定されるものではな
い。

【００４８】実施例１ヒト血漿から冷エタノール法により得られたコーン画分
ＩＩ＋ＩＩＩ１ｋｇに水１０リットルを加え、さらに
この溶液１００ｍｌ当たりソルビトール５０ｇを添加
し、ｐＨ５．５に調整した後、６０℃で１０時間加熱処
理した。その後ｐＨ５．５に調整した後、冷注射用水に
て当該溶液を３倍に希釈し、ｐＨ５．５の条件下で、ポ
リエチレングリコール（平均分子量４，０００）を終濃
度が８％となるように添加し、２℃で遠心分離を行い上
清を得た。この上清をｐＨ４に調整した後、分画分子量
１０万の限外濾過膜（ペリコン２バイオマックス、ミリ
ポア社製）を用いて注射用水に対して溶液の濃縮を行っ
た。ｐＨ５〜７に調整した当該溶液に水で平衡化したＤ
ＥＡＥ−セファデックスを添加（溶液５０ｍｌ当たり２
ｍｌ）し、０〜４℃の条件下で約１時間接触処理し、処
理後濾過することによりＤＥＡＥ−セファデックスを除
去して濾過液（免疫グロブリン含有溶液）を回収した。
この免疫グロブリン含有溶液を注射用水で５ｗ／ｖ％に
調整し、酢酸ナトリウムでこの溶液のｐＨを約５．５に
調整し、さらにソルビトールを終濃度が５％となるよう
に添加した。この水溶液（電導度約１ｍｍｈｏ）を除菌
濾過し、静注用免疫グロブリン液状製剤を得た。

【００４９】実施例２実施例１で調製した５ｗ／ｖ％免疫グロブリン含有溶液
を、無水シリカを担持したフィルター（ゼータプラス・
デリピド、キュノ社製）に通して非吸着画分を回収し
た。さらに除菌濾過し、静注用免疫グロブリン液状製剤
を得た。このようにして得られた５ｗ／ｖ％免疫グロブ
リン含有溶液中の混入アルブミンは、マンシーニー法に
より定量したところ、５μｇ／ｍｌであった。

【００５０】実施例３多孔性中空糸として旭化成（株）より購入した、平均孔
径３５±２ｎｍ、膜面積０．００１〜１．０ｍ²、中空
糸内径３３０±３０μｍ、膜厚３５±３．５μｍ、１５
０層以上の多重層構造であり、銅アンモニア法再生セル
ロースを原料とした多孔性中空糸〔ベンベルグマイク
ロポーラスメンブラン（ＢｅｍｂｅｒｇＭｉｃｒｏ
ｐｏｒｏｕｓＭｅｍｂｒａｎｅ）以下、ＢＭＭとい
う〕をモジュール化したＢＭＭモジュール（商品名：プ
ラノバ３５）を使用した。このＢＭＭモジュールは、ポ
リウレタン系接着剤により高圧蒸気滅菌可能なポリカー
ボネート製のプラスチック容器内に一体化されており、
モジュール内には注射用蒸留水が充填されている。プラ
ノバを構成する各種材料の安全性は、日本薬局方の定め
る方法により確認されている（ＢＭＭ商品説明書よ
り）。実施例１で調製した５ｗ／ｖ％免疫グロブリン含
有溶液に対して、滅菌濾過（孔径０．２μｍ、メンブラ
ン・フィルターによる濾過）を行った後に５℃、濾過圧
力０．２ｋｇｆ／ｃｍ²で１〜５時間の膜濾過処理（空
気圧を用いたデッドエンド濾過法）を行った。冷却後に
再度滅菌処理を行い、静注用のヒト免疫グロブリン液状
製剤を調製した。

【００５１】実施例４実施例１で調製した５ｗ／ｖ％免疫グロブリン含有溶液
を、細孔性／低Ａｌ性フィルター（ゼータプラスＬＡ９
０、キュノ社製）および無水シリカを担持したフィルタ
ー（ゼータプラス・デリピド、キュノ社製）に通して非
吸着画分を回収した。さらに除菌濾過し、静注用免疫グ
ロブリン液状製剤を得た。

【００５２】実施例５実施例１で調製した５ｗ／ｖ％免疫グロブリン含有溶液
を、細孔性／低Ａｌ性フィルター（ゼータプラスＬＡ９
０、キュノ社製）および無水シリカを担持したフィルタ
ー（ゼータプラス・デリピド、キュノ社製）に通して非
吸着画分を回収した。さらに実施例３に準じてＢＭＭ処
理を行った後に除菌濾過し、静注用免疫グロブリン液状
製剤を得た。

【００５３】実施例６実施例１において、ｐＨ５．５で６０℃１０時間の液状
加熱処理を行う代わりに、ｐＨ７でＴＮＢＰ（トリ−ｎ
−ブチルホスフェート）０．３ｗ／ｖ％およびポリオキ
シエチレンソルビタンオレイン酸モノエステル（トゥイ
ーン８０）１ｗ／ｖ％と３０℃で６時間接触させること
によりウイルス不活化処理を行う以外は実施例１に準じ
て行い、同様に静注用免疫グロブリン液状製剤を調製し
た。

【００５４】実施例７実施例１において、ｐＨ５．５に調整してソルビトール
を配合して液状製剤を調製する代わりに、ｐＨ６．４〜
７．２に調整した上で、０．６％塩化ナトリウム、２％
マンニトールおよび１％アルブミンを配合して凍結乾燥
を行う以外は実施例１に準じて行い、静注用免疫グロブ
リンの粉末製剤を調製した。

【００５５】実施例８実施例１においては、最初の工程でｐＨ５．５での６０
℃、１０時間の液状加熱処理を行い、製剤化工程でｐＨ
５．５に調整してソルビトールを配合して液状製剤を調
製するが、その代わりに最初の工程で液状加熱処理を行
わずに、最終工程で、ｐＨ６．４〜７．２に調整した上
で０．６％塩化ナトリウム、２％マンニトールおよび１
％アルブミンを配合して凍結乾燥を行い、６０℃、７２
時間の加熱処理を行う以外は実施例１に準じて行い、静
注用免疫グロブリンの粉末製剤を調製した。

【００５６】実験例１実施例１〜８で調製した静注用免疫グロブリン製剤につ
いてその性状を調べた。粉末製剤であるものについては
注射用水に溶解した状態で測定した。ｐＨはｐＨメータ
ー、電導度は電導度メーター、ダイマー／ポリマー含量
は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ、カラムはＴ
ＳＫ−Ｇ３０００ＰＷ、展開液は等張化リン酸緩衝液、
ＰＢＳ）を用いて測定した。濁度（ｔｕｒｂｉｄｉｔ
ｙ）は６００ｎｍの吸光度を測定した。抗補体価の測定
は、カパットとマイヤーの方法〔エクスペリメンタル
イムノケミストリー（Experimental Immunochemistry)
，２２５（１９６１）〕および西岡、岡田の方法〔免
疫の生化学，１０３，昭４６（共立出版）〕の方法に準
じた。すなわち、１００単位の補体が試料を加えること
によって何単位に減少するかを測定し、その減少単位を
抗補体価として表した。麻疹抗体価はヘマグルチネーシ
ョンインヒビションテスト(Hemagglutination Inhi
biton test) 法により測定し、国際単位（ＩＵ／１５０
ｍｇ）で表した。

【００５７】実施例１−６で調製された静注用免疫グロ
ブリン液状製剤の性状は以下のとおりである。性状ｐＨ５．５電導度１ｍｍｈｏ以下（８℃での換算時）ダイマー含量７ｗ／ｗ％以下ポリマー含量０．１ｗ／ｗ％以下抗補体価は２０単位／ｍｌ以下浸透圧比は約１（生理食塩液に対する比）外観は無色ないし淡黄色で澄明麻疹抗体価は４０ＩＵ以上濁度は０．０１以下本発明の液状製剤（実施例５）を３７℃で４０日間保存
した後も当該性状は保存前（調製直後）と同程度であっ
た。故に当該製剤は室温保存においては、少なくとも１
年間は安定であるものと推測された。

【００５８】実施例７または８で調製された静注用免疫
グロブリン粉末製剤の性状は以下のとおりである。性状ｐＨ６．４〜７．２ダイマー含量７ｗ／ｗ％以下ポリマー含量０．１ｗ／ｗ％以下抗補体価は２０単位／ｍｌ以下浸透圧比は約１（生理食塩液に対する比）外観は淡黄色で澄明またはわずかに混濁。肉眼的にはほ
とんど沈澱を認めない。麻疹抗体価は４０ＩＵ以上

【００５９】実施例９実施例１において、最終製剤のｐＨを５．５に調整する
代わりに、ｐＨ４．２５に調整する以外は全て実施例１
に準じて行い、同様に静注用免疫グロブリン液状製剤を
調製した。

【００６０】実験例２実験例１の方法に準じて、実施例９で調製した静注用免
疫グロブリン液状製剤の性状について調べた。性状は以
下のとおりである。性状ｐＨ４．２５電導度１〜２ｍｍｈｏ（８℃での換算時）ダイマー含量７ｗ／ｗ％以下ポリマー含量０．１ｗ／ｗ％以下抗補体価は２０単位／ｍｌ以下浸透圧比は約１（生理食塩液に対する比）外観は無色澄明麻疹抗体価は４０ＩＵ以上濁度は０．０１以下

【００６１】実施例１０実施例１において、最終製剤のｐＨを５．５に調整する
代わりに、ｐＨ５．２に調整する以外は全て実施例１に
準じて行い、同様に静注用免疫グロブリン液状製剤を調
製した。

【００６２】実験例３１）性状実験例１の方法に準じて、実施例１０で調製した静注用
免疫グロブリン液状製剤の性状について調べた。性状は
以下のとおりである。性状ｐＨ５．２電導度１ｍｍｈｏ（８℃での換算時）ダイマー含量７ｗ／ｗ％以下ポリマー含量０．１ｗ／ｗ％以下抗補体価は２０単位／ｍｌ以下浸透圧比は約１（生理食塩液に対する比）外観は無色ないし淡黄色で澄明麻疹抗体価は４０ＩＵ以上濁度は０．０１以下本発明の液状製剤（実施例１０）を３０℃で６カ月保存
した後も当該性状は保存前（調製直後）と同程度であっ
た。

【００６３】２）夾雑物本発明の液状製剤（実施例１０）に夾雑する物質を定量
した。測定方法は以下のとおりである。ヒト血清アルブミン：比濁法ＭＣＰ−１（Human Monocyte Chemotactic Protein-
1）：ＥＬＩＳＡ法ヒト補体Ｃ３ａ：¹²⁵Ｉ−アルギニンを用いた放射活性
法ポリエチレングリコール：バリウムおよびヨウ素を用い
た比色法〔マイクロケミカル・ジャーナル，２０，１９
０〜１９２（１９７５）〕またはゲル濾過クロマト法結果を表１に示す。

【００６４】

【表１】

【００６５】

【発明の効果】本発明によれば、免疫グロブリンの収率
向上および室温保存時の安定性改善が図られている。ま
た、夾雑するアルブミンの除去あるいは不溶性異物を形
成する核となりうる微粒子を除去することにより、不溶
性異物の生成を抑えて、溶液状態における免疫グロブリ
ンの安定性をさらに改善した製剤、特に液状製剤を提供
することができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者上村八尋大阪府枚方市招提大谷２−25−１吉富製薬株式会社大阪研究所内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ｐＨ４．５〜６．５、イオン強度０．０
００１〜０．１Ｍ、分子量１，０００〜１０，０００の
ポリエチレングリコール４〜１０ｗ／ｖ％、温度０〜４
℃の条件下で分画処理して上清画分を回収し、該上清画
分をｐＨ３．５〜５．０の条件下で濃縮処理する工程を
含んでなる静注用免疫グロブリン製剤の製造方法。
【請求項２】さらにウイルス不活化処理をする工程を
含んでなる請求項１記載の静注用免疫グロブリン製剤の
製造方法。
【請求項３】さらに陰イオン交換体で処理して非吸着
画分を回収する工程を含んでなる請求項１または２記載
の静注用免疫グロブリン製剤の製造方法。
【請求項４】さらに平均孔径１〜１００ｎｍの多孔性
膜を用いて濾過処理する工程を含んでなる請求項１〜３
のいずれかに記載の静注用免疫グロブリン製剤の製造方
法。
【請求項５】さらにコロイド珪酸を用いて接触処理し
て非吸着画分を回収する工程を含んでなる請求項１〜４
のいずれかに記載の静注用免疫グロブリン製剤の製造方
法。
【請求項６】ａ）免疫グロブリンを含有する画分をウ
イルス不活化処理し、ｂ）ｐＨ４．５〜６．５、イオン
強度０．０００１〜０．１Ｍ、分子量１，０００〜１
０，０００のポリエチレングリコール４〜１０ｗ／ｖ
％、温度０〜４℃の条件下で分画処理して上清画分を回
収し、ｃ）該上清画分をｐＨ３．５〜５．０の条件下で
濃縮処理し、ｄ）陰イオン交換体で処理して非吸着画分
を回収し、ｅ）コロイド珪酸を用いて接触処理し、ｆ）
平均孔径１〜１００ｎｍの多孔性膜を用いて濾過処理し
て非吸着画分を回収することからなる静注用免疫グロブ
リン製剤の製造方法。
【請求項７】請求項１〜６のいずれかに記載の製造方
法により調製される静注用免疫グロブリン製剤。
【請求項８】非化学修飾完全分子型免疫グロブリンを
含んでなり、ｐＨ５〜６、電導度１ｍｍｈｏ以下（８℃
での換算時）を有する静注用免疫グロブリン液状製剤で
あって、製造後から少なくとも１年間は室温保存が可能
であり、その期間中は常に抗補体価が２０単位以下、免
疫グロブリンのダイマー含量が７％以下を維持可能な請
求項７記載の静注用免疫グロブリン製剤。
【請求項９】安定化剤を配合してなる請求項７または
８記載の静注用免疫グロブリン製剤。
【請求項１０】液状で室温において少なくとも１年間
安定であり、ヒト血清アルブミン含量が５μｇ／ｍｌ以
下、ＭＣＰ−１含量が１６ｐｇ／ｍｌ以下、補体Ｃ３ａ
含量が３μｇ／ｍｌ以下、ポリエチレングリコール含量
が１ｍｇ／ｄｌ以下である静注用免疫グロブリン製剤。