TW527183B - Drug complex - Google Patents

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527183 Α7 Β7 五、發明説明（1 ) 本發明係有闞具備»藥有益用途之藥物複合體者。具 體而言，本發明係有翮由多醣類衍生物之羧基Ci-4烷基葡 聚糖聚醇與抗腫瘍劑或抗炎症劑等醫藥化合物介由間隔群 (spacer)结合而形成之蕖物複合體者。 治療肺癌或消化器官之癌症等固形癌或白血病等血液 癌時，使用之抗腫瘍劑一般係介由靜脈注射方式或經口方 式等投藥、經由全身而移行至特定腫瘍部位，然後抑制或 阻礙癌细胞之增殖而發揮治療效果。然而循環在全身的抗 腫瘍劑會從血液中迅速被肝臓·網内糸ϋ器吸收、或經由 尿液快速排泄，因而降低血液中之湄度，往往不能充分移 行至腫瘍部位而發揮其功能。另外，一般抗腫瘍劑本身對 於腫瘍部位的移行選擇性（亦即對腫瘤之選擇性）較低，抗 腫瘍劑會完全分散到全身之各種细胞或組織而對正常细胞 或組織產生细胞毒作用，以致高頻率地發生嘔吐、發燒或 脫毛等副作用，因而造成嚴重問題。因此，將抗腫瘍劑有 效率且選擇性地移行至腫瘍部位之方法急待研究開發。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 有效方法之一為利用高分子多醏類和抗腫瘍劑结合， 使抗腫瘍劑在血液中延缓其消失速度，且提高其對癌組織 方向之移動性等。例如日本專利的特公平7 -84 4 8 1號公報 中記載有介由薛佛氏驗（Schiff’s base)或醯胺结合將道 諾魯比辛（Daunarubicin),多克索魯比辛（Doxorubicin), 米特徽素C(Mitomycin C)或布雷歐黴素（Bleoaycin)等導 入經羧甲基化的甘露型聚葡糖（Man nog In can)衍生物所構 成的藥物複合體。該發明中的甘露型聚葡糖衍生物係採用 3 (修正頁） 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） 527183 Α7 Β7 五、發明説明（2 ) ， 經羧甲基化的甘露型聚葡糖聚醇。然而該公報中所記載甘 露型聚葡糖衍生物支鏈甚多而構造複雜，很難取得適合翳 藥品製造用途之品質均一的化合物。 另外，國際專利中的V0 9 4/ 1 9 376號公報記載具有羧 基的多糖在其羧基上结合有肽鐽（胺基酸數目為1〜8個）， 再介由肽鏈结合多克索魯比辛、道諾魯比辛、米特徽素C 或布雷歃黴素等而構成藥物複合體。具有羧基的多糖類除 了在其構造中原本具有羧基的多糖類（例如玻璃糖醛酸等） 外，另外亦包括構造中原本不具有羧基.的多糖類（例如支 鏈澱粉，葡聚糖，幾丁質等）於其羥基上導入有羧基Ci-4 烷基，或藉丙二酸或琥珀酸等多元酸之酯結合而製得之具 有羧基的多糖類。該藥物複合體係由多克索魯比辛等藥劑 與上述多糖構造介由間隔群而结合作為構造上之特徵，因 此，多克索魯比辛能發揮優異的抗腫瘍效果，同時也能減 輕毒性及副作用等。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 其他有關利用聚醇化多糖類衍生物作為傳遞藥物之載 劑使用之藥物複合物相關技術包括，例如，「多糖-肽-多 克索魯比辛複合物有闞研究，多糖載劑之血液中穩定性及 抗腫瘍效果之相闢性」（日本第1 0屆D D S學會講演摘要輯， 27 9頁，1 994年>;「多糖-肽-多克索魯比辛複合體有翮研 究-體內動態和抗腫瘍效果」（日本第九屆藥物動態學會年 會演講摘要輯，292頁，1994年；日本第19屆研究開發趨勢 研討會（日本翳藥品機構主辦）摘要輯，D-9, 1995年）；Μ 及「利用多糖載髖傳遞藥物到腫瘤有闞研究」（日本第12 4 (修正頁） 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ：297公釐） 527183 A7 B7 五、發明説明（3 ) 屆膠質界面技術研討會，日本化學會主辦，演講摘要輯， 51, 19 95年）等各種報告。 等 C 化 劑體藥 症合醫 炎複等 抗物劑 或藥症 劑的炎 瘍能抗 腫功或 抗等劑 將位瘍 bb β 證 種瘍抗 一 腫 含 供至供 提行提 在移僳 的地明 目性發 之擇本 明選 ， 發分 ^一一 口 本成而 效體 有具 滯化 間藥 時醫 長該 中入 液導 血性 在擇 能選 , 有 體具 合位 複部 物症 藥炎 的或 構位 結部 部瘍 局腫 其於 為對 做 且 物 ， 合 留 具 供 提 係 的 ΠΠ 1 另 之 〇 明法 發方 本造 ，製 又的 〇 體 體合 合 複 複物 物藥 藥之 的徵 能特 功述 物上 合有 中 利 專 際 國 於 力 致 而 題 問 述 上 決 解 為 者 究 研 明 發 本 現 發 果 結 究 研 良 改 之 體 合 複 物 藥 之 告 公 所 號 葡 之 化 醇 聚 糖 聚 葡 將 以 改 類 糖 多 的 基 羧 有 具 之 中 利 專 該 將 基 羧 以 施 物 生 衍 糖 聚 用 使 物 生 衍 類 糖 多 為 作 者 化 基 烷 同此 ， 〇 下性 態擇 狀選 度置 濃位 高 的 在位 間部 時症 長炎 持或 維位 能部 分瘍 域 腫 藥於 醫對 的善 後改 與幡 投大 , rtEC 時時 (請先閱讀背面之注意事項\^寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 反 介 相 或 , 群 強 。隔 增明間 著發為 顯本作 效成酸 藥完基 要而胺 主現個 之發 一 等上由 果以介 效於供 瘍基提 腫 。偽 抗等明 中輕發 物減本 合則 ， 化性即 該毒亦 , 其 外地 個 8 基 烷 。 成 體構 T 合所 C1複體 基藥合 羧翳複 使的物 , 成藥 群而述 隔合上 間結由 為基供 作殘提 肽的為 胜物態 之合形 成化種 構藥 一 酸醫另 基與之 胺醇明 聚發 糖本 i聚， 由«又 成 組 藥 0 的 分 成 效 有 為 作 Map 合 複 物 藥 述 上 含 及 以 藥 醫 的 滴體 點 合 或複 用物 射藥 注述 的上 態 供 形提 品為 燥態 乾形 結 一 凍另 的之 中明 瓶發 曲本 在 ， 充又 填 〇 如等 例劑 , 製 物用 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 5 3 8 9 5 3 527183 A7 B7 五、發明説明（4 ) 之製造方法。 上述本發明之較佳形態包括：構成羧基（^-4烷基葡聚 糖聚醇的葡聚糖聚醇偽在實質上能完全聚醇化之條件下處 理葡聚糖所製得之葡聚糖聚醇的上述藥物複合體；羧基 Ci-4烷基葡聚糖聚醇僳羧甲基葡聚糖聚醇之上述藥物複合 體；醫藥化合物偽抗腫瘍劑或抗炎症劑之上述藥物複合體 ;醫藥化合物偽依賴濃度而表現抗腫瘍作用的抗腫瘍劑（ 在更高濃度下能表現更強抗腫作用的抗腫瘍劑：本發明說 明中又稱為濃度依賴型抗腫瘍劑）的上述藥物複合體；醫 藥化合物偽依賴時間而表現更強抗腫瘍作用的抗腫瘍劑： 本發明說明書中又稱為時間依賴型抗腫瘍劑）的上述藥物 複合體；以及抗腫瘍劑僳多克索魯比辛或（1S,9S)_卜胺基 -9-乙基-5-氟-2,3-二氫-9-羥基-4-甲基-111,1211-苯駢[ de]吡喃基[3Ί:6,7]吲睬 B秦[l,2-b]nf 啉-10,13(9H,15) -二酮的上述藥物複合體等。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 另外，和上述同樣的較佳形態包括：間隔群偽由- X-Z所示之二肽基[-X-Z偽分別由疏水性胺基酸（X)和親水性 胺基酸（Z)之N末端和C末端形成胜肽結合之二肽的N末 端胺基及C末端羧基分別去除一個氫原子和一個羥基而成 的殘基]或含有該二肽基為局部肽序列之胜肽基作為間隔 群的上述藥物複合體；該疏水性胺基酸偽苯丙胺酸、而親 水性胺基酸係甘胺酸的上述藥物複合體；該間隔群係（N未 端）-Gly-Gly-Phe-Gly的上述藥物複合體；以及抗腫瘍殘 基的導入量偽1〜15重量％,較佳為3〜10重量％,最好是 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 6 3 8 9 5 3 527183 A7 B7 五、發明説明（5 5〜6重量％範圍之上述藥物複合體等。 本發明之最佳形態包括：以H2H-Gly-Gly-Phe-Gly-COOH所示胜肽之N末端偽與羧甲基Μ聚糖聚醇之羧基形成 醯胺結合，及該胜肽之C末端偽與US,9S)-；l -胺基-9-乙 基-5-氟-2,3-二氫-9-羥基-4-甲基_1队12卜苯駢[06]吡喃 基[3’4，：6,7]»3丨睬嗪[1,2-1>]卩查啉-1〇,13(911,15[〇-二_的 卜胺基形成醯胺結合之上述藥物複合體；（1S,9S)-1-胺基 -9-乙基-5-氟-2,3-二氫-9-羥基-4-甲基-111,12[]-苯駢[(^ ]€ 喃基[3 f , 4 f : 6，7 ]吲睬嗪[1 , 2 - b ] 〇1 啉 - 1 0 , 1 3 ( 9 Η , 1 5 Η )-二_殘基之導入量為2〜10重量％範圍之上述藥物複合體； 以及羧基Ci-4烷基葡聚糖聚醇的分子量偽5,000〜500,000 範圍，較佳偽50,000〜450,000範圍，最佳傺200,000〜 400,〇〇〇範圍之羧甲基葡聚糖聚醇，及羧甲基化程度為構 成糖殘基之0.01〜2.0範圍，較佳為〇.1〜1·〇範圍，最佳 為0.3〜0.5範圍之上述藥物複合體。 按照本發明之另一形態，可提供由羧基Cl-4烷基葡聚 糖聚醇所構成之傳遞藥物之載劑。本發明之較佳形態為該 羧基Ci-4烷基葡聚糖聚醇之分子量為5,000〜500,000範圍 ，其中較佳為50,000〜450,000範圍，最佳為200,000〜 400,000範圍；羧基Ci-4烷基化程度以構成糖之殘基計算 為0.01〜2.0範圍，較佳為0.1〜1.0範圍，最佳為〇·3〜 0.5範圍。其中，羧甲基葡聚糖聚醇可作為最佳載劑而提 供本發明用途。又從本發明之另一觀點而言，本發明可提 供使醫藥化合物殘基與羧基Cl-4烷基葡聚糖聚醇結合而製 請 先 閲 讀 背 & 之 注 意 事 項 馬 本 頁 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 7 3 8 9 5 3 527183 A7 B7 五、發明説明（6 ) 造藥物複合體之羧基Ci-4烷基葡聚糖聚醇的用途。 本發明之較佳形態可提供使醫藥化合物殘基與羧基 Ci-4烷基葡聚糖聚醇介由間隔群而結合成藥物複合體之製 造所使用之羧基Ci-4烷基葡聚糖聚醇之用途；以及介由胺 基酸作為間隔群或介由2〜8個胺基酸之胜肽作為間隔群， 由羧基Ci-4烷基葡聚糖聚醇和醫藥化合物殘基結合而成醫 藥複合體為特激之製造上所使用之羧基Ci-4烷基葡聚糖聚 醇的用途。 圖而夕簡Μ說明 第1圖示本發明之藥物複合體（實施例8所製成者）之 GPC 譜。 第2圖示本發明之藥物複合體（實施例8所製成者）之 紫外光吸收譜。 第3圖示本發明之藥物複合體（實施例9所製成者）之 GPC譜… 第4圖示本發明之藥物複合體（實施例9所製成者）之 紫外光吸收譜。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 第5圖示本發明之藥物複合體（實施例10所製成者）之 紫外光吸收譜。 第6圖示本發明之藥物複合體（實施例15所製成者）之 GPC 譜。 第7圖示本發明之藥物複合體（實施例15所製成者）之 紫外光吸收譜。 第8圖示本發明之藥物複合體（實施例28所製成者）之 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 8 3 8 9 5 3 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 527183 A7 B7 五、發明説明（7 ) GPC 譜。 第9圖示本發明之藥物複合體（實施例28所製成者）之 紫外光吸收譜。 第10圖示本發明之藥物複合體（實施例29所製成者）之 GPC 譜。 第11圖示本發明之藥物複合體（實施例29所製成者）之 紫外光吸收譜。 第12圖示本發明之藥物複合體（實施例34所製成者）之 GPC 譜。 第13圖示本發明之藥物複合體（實施例34所製成者）之 紫外光吸收譜。 第14圖示本發明之藥物複合體（實施例39所製成者）之 G P C 譜。 第15圖示本發明之藥物複合體（實施例39所製成者）之 紫外光吸收譜。 第16圖示本發明之藥物複合體（實施例41所製成者）之 GPC 譜。 第17圖示本發明之藥物複合體（實施例41所製成者）之 紫外光吸收譜。 第18圖示本發明之藥物複合體（實施例44所製成者）之 GPC 譜。 第19圖示本發明之藥物複合體（實施例44所製成者）之 紫外光吸收譜。 第20圖示本發明之藥物複合體（實施例47所製成者）之 (請先閱讀背面之注意事項\^寫本頁) 裝- ill 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 9 3 8 9 5 3 527183 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（8 ) GPC 譜。 第21圖示本發明之藥物複合體（實施例47所製成者）之 紫外光吸收譜。 第22圖示本發明之藥物複合體（實施例55所製成者）之 GPC 譜。 第23圖示本發明之藥物複合體（實施例55所製成者）之 紫外光吸收譜。 第24圖示本發明之藥物複合體（實施例15所製成者）在 體内之動態圖。圖中各點示三重複之平均值。 實施本發明之最佳形態： 本發明之藥物複合體的特徽在於將羧基Ci-4烷基葡聚 糖聚醇與醫藥化合物殘基介由胺基酸作為間隔群或介由2 〜8個胺基酸構成之胜肽作為間隔群結合而構成。本發明 之藥物複合體所含醫藥化合物之殘基偽指，例如，抗腫瘍 劑、抗炎症劑、抗菌劑等醫藥而提供包括人類在内的哺乳 類動物的治療及/或預防用途之醫藥化合物之主要化學結 構部分。 當然，該醫藥化合物之用途不限制在上述範圍。換言 之，任何醫藥化合物祗要具有能與間隔群結合的一個或二 個以上的反應性官能基（例如胺基、羧基、羥基、硫醇基 、酯基等）均可適用。醫藥化合物殘基除了可與間隔基之 N末端胺基或C末端羧基結合之外，亦可與構成間隔基之 胺基酸上的反應性官能基結合。另外，本發明説明書中所 述之醫藥化合物尚包括含有化合物之主要化學結構部分作 (請先閱讀背面之注意事項\^寫本頁)

P 裝· 訂 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 10 3 8 9 5 3 527183 A7 B7 五、發明説明（9 ) 為其局部化學結構部分，而後可在生物體内再轉化成該醫 藥化合物之所謂醫藥前驅體（prodrug)。 本發明說明書中所述之醫藥化合物殘基，乃假定間隔 群與醫藥化合物殘基之結合傺由於醫藥化合物中之反應性 官能基與間隔群中之反應性官能基間之相互反應（例如脱 水縮合反應等）而構成時，存在於結合後之化合物中之源 自醫藥化合物的局部化學結構部分。例如醫藥化合物偽以 D-HH2, D-COOH, D-COOR , D-OH , D-SH , D-C0NH2 , D-NHC00RU示低级烷基等）表示時，醫藥化合物之殘基分 別由 D-NH-(D-NH-C〇-Q等），D-C〇-(D-C〇-NH-Q, D-C0-0-Q, D-C0-S-Q等），D-0-(D-0-C0-Q, D-0-Q等），D-S-(D-S_C〇- Q,卜S-Q等），D-C0NH_(D^C0-NH-C0-Q等），D-NH_C〇-(D-NH-CO-O-Q, D-HH-C0HQ等）表示（括弧内乃示間隔群與 醫藥化合物殘基間之結合，Q示由間隔群去除反應性官能 基所殘餘之局部化學結構部分）。當然，間隔群與醫藥化 合物殘基間之結合種類不限定在上述範圍内。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 醫藥化合物殘基可例舉如：多比克魯比辛，道魯比辛 ，米特徽素C,布雷歐徽素，環胞^MCyclocytidine),長 春新麟（Vincristine),長春馘（Vinblastine),甲 S 喋脸 (Methatrexate),白金条抗腫瘍劑[順氛®餡（Cisplatin) 或其衍生物）]、紫杉酚（Taxol)或其衍生物，喜樹鹹（ Camptothecine)或其衍生物（特開平6-87746號公報所記載 之抗腫瘍劑等，其中以申請專利範圍第2項中所記載之（ 1$,95)-1-胺基-9-乙基-5-氟-2,3-二氫-9_經基-4_甲基- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 3 8 9 5 3 11 527183 Α7 Β7 五、發明説明（1 〇 ) 1Η,12Η -苯駢[de]fltt 喃基[3、4’：6,7]吲睬嗦[l,2-b]〇f 啉-10,13(9H,15H)_二酮等之抗腫瘍劑殘基較為適用。又例如 琥珀醇氫化皮質醇，琥珀酸氣化潑尼松等之類固醇条抗炎 症劑，或甲灰酸（Mefenamic acid),氣灰酸（Flufenamic acid),雙氛芬酸（Diclofenac),衣布洛芬（Ibupro fen), 替諾立定（Tinoridine)等非類固醇条抗炎症藥物之殘基也 甚適用。 結合在醫藥化合物殘基之間隔群可採用由一個胺基酸 作為間隔群或由2〜8個胺基酸構成之胜肽作為間隔群。具 體而言，間隔群乃具有一値胺基酸殘基（意指由胺基酸之 胺基和錢基分別去除一個氫原子和一個羥基之殘基），或 具有肽結合之2至8個胺基酸所構成之低聚肽之殘基（意 指由N末端胺基和C末端羧基分別去除一個氫原子和一個 羥基之殘基）之形態者。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) 較佳的間隔群為由2〜6個胺基酸所構成之低聚肽的殘 基。構成間隔群的胺基酸種類並無特別限制，例如L -或D-胺基酸，其中以使用L -胺基酸為較佳。除α-胺基酸外， /?-丙胺酸，ε -胺基己酸，7-胺基丁酸等均可適用。上 述ex-胺基酸以外的胺基酸以配置在靠近多糖衍生物之位 置較佳。 間隔群之結合方向並無特別限制，一般而言，僳將羧 基（^-4烷基葡聚糖聚醇之羧基與間隔群之Ν末端胺基形成 醯胺結合，醫藥化合物之胺基與間隔群之C末端羧基形成 醯胺結合而成。又，例如肽間隔群之構成單位含有賴胺酸 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 12 3 8 9 5 3 527183 A7 B7 五、發明説明（11 ) 殘基，將賴胺酸殘基之 胺基和 胺基分別和其他胺基 請 先 閱 讀 背 ιέ 之 注 意 事 項 酸之羧基結合成醯胺結合時，肽間隔群之兩末端會成為N 末端，而可與醫藥化合物之羧基進行結合。此外，亦可使 間隔群中含1個或2値以上的二胺化合物或二元酸化合物 之殘基（例如乙二胺等二胺殘基或琥珀酸等二元酸殘基）作 為構成單位，分別作為兩末端皆為Η末端之間隔群或兩末 端皆為C末端之間隔群。 間隔群之胺基酸序列並無特別限制。例如間隔群可適 用以- Χ-Ζ-所代表之二肽殘基[意指X示疏水性胺基酸殘基 ,Ζ示親水性胺基酸殘基，-Χ-Ζ-分別示疏水性胺基酸（X) 與親水性胺基酸（Ζ)之Ν末端和C末端形成肽結合之二肽 的Ν末端之胺基和C末端之羧基分別去除一個氫原子和一 個羥基而成之殘基],或將該二肽之殘基作為局部肽序列 所構成之胜肽殘基作為間隔群。疏水性胺基酸可例舉如苯 丙胺酸、酪胺酸、白胺酸等；親水性胺基酸可例舉如甘胺 酸、丙胺酸等，間隔群亦可具備上述二肽殘基之重複序列 如 Ζ- 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 時解 群水 隔被 間位 的部 構症 結炎 肽或 二 位 述部 上瘍 有 腫 j 含的 伊 RP S ( ffn S 者使肽 態有 形富 等 較高 在有 會 位 群部 隔該 間在 該而 藥體 醫 合 與複 群物 隔藥 間明 肽發 二 本 述像 上乃 有構 含結 〇 學 來化 出分 離部 游的 物成 合 形 化而 藥合 醫結 的物 度 合 濃化 結 學 3 二 化劑述 分瘍上 部腫之 佳抗示 較之所 之型 〇〇 例 肽 賴 _ 結 依-X分 度用部 濃使為 用是基 利好殘 當 最 肽 中 ，二 基時該 殘 } 有 物 含 合b或 複b群 魯 藥?1£ i 索 1 醫=間。Η * 構Θ殘 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐） 3 11 3 8 9 5 3 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 527183 A7 B7 五、發明説明（12 ) 構的間隔群。 另外，當利用在作用時間内必須維持一定濃度以上之 醫藥有效成分的所謂時間依賴型的抗腫瘍劑時，可藉利用 上述間隔群而逹成高抗腫瘍效果，例如特開平6 - 8 7 7 4 6號 公報所記載之抗腫瘍劑，其中，該申請專利範圍第2項所 記載之抗腫瘍劑尤能達到此種目的。一般而言，並非限定 於上述間隔群範圍，而像依據抗腫瘍劑之作用機制，生體 内動態或毒性表現特性，生體内抗腫瘍劑之游離特性等觀 點而選擇較適宜之間隔群。 間隔群之具體例舉示於表1中，但本發明之藥物複合 體所使用之間隔群不限制在該範圍内。使用者應依據能否 獲得最佳醫藥化合物之游離速度而選擇適當的間隔群不待 多言。表1中，肽序列之左側為N末端，醫藥化合物殘基 結合在C末端。D-Phe示D-苯基丙胺酸殘基，其他胺基酸 皆代表L-胺基酸。另外，游離速度之大小偽以結合有多克 索魯比辛之藥物複合體對於Walker 256癌症鼠之藥效顯示 程度，或在Walker 256癌症鼠之腫瘍部位的游離多克索魯 比辛的濃度而判定者。該間隔群中，對於多克索魯比辛而 言，以採用能在短時間内游離高濃度醫藥化合物性能的間 隔群為適宜，例如（N末端）-G 1 y - G 1 y - P h e - G 1 y -等。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 3 8 9 5 3 (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) 裝·

、1T 527183 A7 B7 五、發明説明（13 ) 表1

群 隔 間 的 ftl I I度lyly」 -GGGPGPGPG 11 I I I I I I I I 隹 ureyyyeey @86 y h 1 11 1 h h 11 LTPGGGPPG iil 一 I I I I I I I e e y y y e 11 1* 1* 群 隔 間 的 快 較 度 遵 离 游 y έ, 1 群 _-G隔 Θ y 1 h 1 aB p G I I ^ hely慢 -PT 較 lyly度 G G I I 3 .---_ -—I 離 -G-G游 (請先閲讀背面之注意事項寫本頁) 裝· 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 群 隔 間 的 慢 度 Λ?ι S 離 游 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 15 3 8 95 3 527183 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（14 ) 構成本發明藥物複合體之多糖類衍生物部分的羧基 Ci-4烷基葡聚糖聚醇之聚醇化程度並無特別限制，但構成 羧基Ci-4烷基葡聚耱聚醇的葡聚糖聚醇以在實質上能完全 聚醇化條件下處理葡聚糖而製得之葡聚糖聚醇為宜。例如 ,於«聚糖中依序加入過量的過碘酸鈉和硼氫化鈉作用， 使葡聚糖在實質上能完全聚醇化而製得的葡聚糖聚醇適用 於本發明之藥物複合體之原料化合物用途。當然，葡聚糖 之聚醇化方法並非限定於上述方法，而是可採用任何可達 成目的之方法。 葡聚糖之種類並無特別限制，可為含有任意OC-D-1,6-結合比率之葡聚糖。例如可利用α-D-l,6 -結合比率 為85 %以上、90%以上，或95 %以上等任何比率之葡聚糖 。葡聚糖之分子量無特別限制，例如從分子量1 0 , 0 0 0左右 到2,000,000左右範圍，其中以使用分子量為50,000左右 至800,000左右者為適宜。構成羧基（：1-4烷基中之（：1-4烷 基可包括直鏈或支鏈Ci-4烷基，具體而言，例如甲基，乙 基，正丙基，異丙基，正丁基，第二丁基等均可適用，其 中以甲基較佳。關於羧基Ci-4烷基化作用，可採用，例如 ,以氯化乙酸，溴化乙酸，α-氯化丙酸，α -甲基-α-氯 化丙酸，/3 -氣化丙酸，α -甲基-Θ -氯化丙酸，α -氯化 丁酸，/3-氯化丁酸，氯化丁酸等鹵化Cl-4烷基羧酸與 葡聚糖聚醇反應而使該羥基局部或全部轉化成羧基（^-4院 基而達成。其中較好是使用氯化乙酸。 例如溶解葡聚耱聚醇於不影饗反應的不活性溶劑（例 16 (請先閱讀背面之注意事項^^寫本頁) -裝· 訂 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 3 8 9 5 3 527183 92.L 0 3 A7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 B7_ 五、發明說明（15 ) 如水，Ν,Ν -二甲基甲醯胺，二甲亞碾等）中，在鹼之共存 下（例如氫氧化鈉，氫氧化鉀等），添加鹵化C ί - 4烷基羧酸 或其塩類，於冰冷至ιοου左右溫度範圍内反應數分鐘至 數天而達成。導入羧基Ci-4烷基之程度可容易地藉羧基 Ci-4烷基化之反應溫度或作為反應劑之鹵化d-4烷基羧酸 或其塩類之用量而調整之，這種方法皆為周知技藝，不待 細逑。對於蔔聚糖聚醇之羥基的羧基Ci-4烷基化程度雖無 特別限制，但一般而言，例如Μ構成糖殘基計算，宜為 0.01〜2.0範圍，Κ 0.1〜1.0範圍較宜，最好為0.3〜0.5 範圍。羧基Ci-4烷基葡聚糖聚醇之分子量Μ膠溏法測定時 ，為 5,000 〜500,000 左右，Μ 50,000 〜450,000 左右為較 宜，最好為200,000〜400, 000範圍。 上述之羧基Cl-4烷基葡聚糖聚酵作為藥物傳遞之載劑 時極為有用。翳藥化合物和羧基C i - 4烷基葡聚糖聚醇結合 而成之藥物複合體具有，例如，對腫瘍選擇性等具備優異 的部位選擇性、能長時間維持血液中高藥物濃度之儍點。 醫藥化合物與羧基C ! - 4烷基葡聚糖聚醇間之結合可採用， 例如，酯結合將二者直接加K結合在一起，或上述利用間 隔群等藉適當間隔群而將二者加Μ結合等之方法。 就介間隔群而結合的藥物複合體而言，本發明的藥物 複合體可藉將上逑所得羧甲基葡聚糖聚醇之羧基與結合有 間隔群的翳藥化合物殘基結合而製得。間隔群和羧甲基葡 聚糖聚醇之羧基間的结合。一般係由間隔群之Ν末端胺基 與羧甲基葡聚糖聚醇之羧基藉醯胺鍵而結合。當然，間隔 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） 17 (修正頁）38953 -------------——： (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂---------線—邊 527183 A7 B7 五、發明説明（1 6 ) 群和羧甲基葡聚糖聚醇之羧基間的結合方式不限制於上述 範圍，可以按照其他化學結合方式或利用1個或2個以上 之間隔群而結合。例如由間隔群的C末端羧基和羧甲基葡 聚糖聚醇之羧基形成酐的結合方式，或以乙二胺等二胺化 合物作為間隔群而分別使羧基與二胺化合物之各個胺基形 成醯胺結合。 當間隔群之N末端胺基與羧甲基葡聚糖聚醇之羧基藉 醯胺結合而結合時，除可採用肽鏈合成上常使用之脱水縮 合劑，例如H -二環己基碩化二亞胺（簡稱為DCC)等Ν,Ν’ -二環烷基磺化二胺類，1-乙基- 3- (3 -二甲胺基丙基）碩化 二亞胺（簡稱EDAPC)等碩化二亞胺衍生物，1-羥基苯駢三 唑（簡稱為ΗΟΒΤ)等苯駢三唑衍生物之外，亦可採用1-乙氧 基羰基-2-乙氣基-1,2-二羥基咐（簡稱EEDQ)等方法。另 外，也可以採用活性酯法或醯基鹵法等。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項^^寫本頁) 接至羧甲基葡聚糖聚醇中之醫藥化合物殘基的導入量 並無特別限制，一般視醫藥化合物殘基之物理化學性質， 以及本發明藥物複合體在生體内動態，藥效及毒性等而選 擇適當比率。通常在0.1〜30重量％範圍，其中以1〜15重 量％為適宜，以3〜10重量％為較宜，最好為5〜6重量％ 左右。導入羧甲基葡聚糖聚醇中之醫藥化合物殘基之比率 ，可利用吸光度分析等方法容易地測得。 關於本發明藥物複合體之製造方法，以導入記載於特 開平6 - 8 7 7 46號公報中申請專利範圍第2項之抗腫瘍劑之 醫藥化合物殘基為例，可採用下文中之製造流程，但本發 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 18 3 8 9 5 3 527183 A7 B7 五、發明説明（1 7 ) 明藥物複合體之製造方法並不限定於該製造流程所示範圍 。於下列製造流程中，醫藥化合物殘基之導入量為1〜15 重量％範圍，其中以2〜10重量％左右為較宜。又，在下 列製造流程中，聚醇類之構成單位僅顯示導入一個或二個 羧甲基的構成單位，但本發明之藥物複合體之多糖體衍生 物部分實非由上述構成單位之重複而構成，此點應予暸解 (請先閱讀背面之注意事項^^寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 19 3 8 9 5 3 527183 A7 B7 五、發明説明（18)

HO 标聚塘 2) NaQH4 葡聚糖聚醇

HO Ο-

CICH2COOH/NaOH -Pt〇- 羧甲基葡聚糖聚醇筘塩 / Rl 示-Η 或-CH2C00Na R2 示-Η 或-CH2C0QNa BloFlad AG 50W-X2(h〇 菅柱 Λ—Ο.α 羧曱基《聚塘聚醇

Ri 示-Η 或-CH2C00li R2 示-Η 或-CH2COOH ν&3 Η,(Τ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 ^-α r2o °~ 袋曱基«聚塘聚醇三乙技塩

Rt 示’-Η 或-CH2C0QH · HEt3 R2 示-Η 或-CH2COOH · HEt3

1) Gly-Gly-Phe-Giy-NH-A EEDQ 2) NaOH 本發明之铤物頊合饅

=NH-A Ο 20 (修正頁） 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210 X 297公釐） 527183 A 7 B7 五、發明説明（19 ) 本發明之藥物複合體

(請先閲讀背面之注意事項^^寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 上述醫藥化合物在酸性水溶性溶劑中（例如pH 3左右） 時平衡傺偏向於形成内酯環構造化合物（即閉環狀結構）； 相反地，在鹼性水溶性溶劑中（例如pH 10左右），其平衡 偽偏向於内酯環呈開環的化合物（即裂環狀結構）。然而， 於此等閉璟化合物及裂璟化合物中導入相同藥物殘基時， 其藥物複合體皆具有相同的抗腫瘍效果。此等藥物複合物 皆包括在本發明範圍内自不待說明。又，反應条中有内酯 璟及開璟者共存時，來自内酯環的羧基和來自間隔群的胺 基之間會發生縮合反應，使反應收率顯著下降，甚至得不 到均一的藥物複合體。但這種不利的副作用可藉選擇性的 利用閉環化合物而加以避免。 亦即，將羧甲基葡聚糖聚醇之鈉塩轉換成三乙胺塩後 ,再於非水条溶劑（不含水的有機溶劑）中，將羧甲基葡聚 糖聚醇之羧基與含有上述醫藥化合物殘基之間隔群的N末 端胺基行縮合反應，如此則可抑制副反應而達到高效率製 成目的化合物之目標。可溶解在有機溶劑中的羧甲基«聚 糖聚醇之塩的種類可例舉如三乙胺塩或三甲胺塩等三烷基 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 21 3 8 9 5 3 527183 A7 B7五、發明説明（2 0 )胺塩，此外，他如Ν -甲基吡咯烷， -甲基嗎咐，二甲基胺 劑 溶 機 有 〇 用 採 可 均 類 塩 之 鹼 機 有 等 \—/ Ρ A Μ D 為 稱 簡 /fv ¢ llth 基 抗 如 例 /(V 類 til 種 基 〇 殘 等物 0 合 亞化 甲藥 二 醫 , 隨 胺體 醯合 甲複 基物 甲藥 二 之 N-明 H,發 用本 使 可 局 基體 殘身 之等 物位 合 部 化症 藥炎 醫或 等位 劑部 症瘍 炎 腫 抗在 或性 劑活 瘍藥 腫醫 使 可 而 望 希 現 顯 地 性 擇 選 部 特分 受部 非物 雖生 〇 衍 點 類 優糖 等多 性的 毒 體 之 合 身複 本物 物藥 合 明 化發 藥本 0 , 低束 降拘 有之 具上 時論 同理 , 定 對 及 性 留 滯 中 液 血 的 異 優 極 有 具 \1/ 醇 聚 糖 聚 0 基 甲 羧 如 例 用擇 ί 有選酶 為位白 極部蛋 劑症富 載炎豐 遞和有 傳性位 物擇部 藥選症 為瘍炎 作腫或 此有位 因具部 , 體瘍 性合腫 集複在 聚物測 之藥推 位之據 部明 ， 症發外 炎本另 瘍而 。 B , t 一 1 , 栏 .被 地 易 容 艮 可 群 隔 間 的 體 合 複 物 藥 之 明 發 本 在 存 \J/ 酶 肽 形 品 燥 乾 C ο 效冷 藥以 揮偽 發常 可通 即劑 物藥 合 的 化體 藥合 醫複 的物 離.藥 游明 所發 , 本 解有 分含 水 加 滴造 點製 或 。 劑用 藥使 用上 射學 注醫 成床 解臨 溶供 時提 用而 使劑 〇 製 中用 器與 容投 等口 瓶經 小非 在等 裝劑 填製 態用 (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) •裝· 、1Τ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 , 與 劑投 助藥 解醫 溶之 如明 例發 , 本 物 〇 加用 添使 的可 用均 使等 可劑 上化 學定 劑安 製 ， , 劑 時整 劑調 藥值 述鹸 上酸 制 限 別 特 無 並 量 劑 醫 之 基 殘 物 合 化 藥 醫 成 構 慮 考 須 般 合 化 藥 0 之 中 體 合 複 物 藥 明 發 本 在 入 導 量 與 投 物 合 化 藥 例 Ο 之 定 選 善 妥 而 子 因 等 類 、Γ\ 1A 種 病 疾 或 情 病 量 含 基 殘 物 平 開 特 如 •II 腫 抗 之 項 2 第 圍 範 利 專 請 申 之 中 報 以 若 基 殘 劑 瘍 藥 之 明 發 本 的 成 而 入 導 右 左 % 量 3 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） 22 3 8 9 5 3 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 527183 A7 B7 五、發明説明（2 1 ) 物複合體為例而言，非經口投與時，一般而言，每日每1 m2的身體表面積約投與1〜500nig左右，其中以一次投與大 約10〜lOOmg範圍，繼绩投與3〜4星期為宜。 奮施例 本發明藉實施例更具體說明如下。但本發明之範圍並 非局限在下述實施例範圍。實施例中，在「A-NH-」代表 特開平6 - 8 7 7 46號公報中之申請專利範圍第2項所記載之 醫藥化合物（實施例中或稱「DX-8591」）等具有内酯環之 醫藥化合物之情形，内酯環呈閉環之翳藥化合物以A-NH2 代表時，此醫藥化合物殘基之一例舉為上述製造流程中以 A - NH -所示之基（形成内酯環結構者）。又，A’-NH-傺代表 以A-NH -所示醫藥化合物殘基中之内酯環為閉環型或裂璟 型之任意結構或其混合形態者。-DXR示多克索魯比辛來源 之殘基，-D5 1-7059示實施例55中源自紫杉猶衍生物之殘 基。 、 另外，實施例中無特別聲明時，羧甲基葡聚糖聚醇之 羧甲基化程度（結構糖殘基計算，羧甲基之取代程度）乃偽 將羧甲基葡聚糖聚醇之鈉塩轉換成游離型後，溶解於0.1N 氫氣化鈉水溶液，再以0.1N塩酸滴定而求得。羧甲基葡聚 糖聚醇之鈉塩水溶液經Bio-Rad AG50W-X2(H +型）分離管處 理，將其通過液凍結乾燥後供作試料用途。該試料溶解於 固定量之0.1N氫氧化銷水溶液，以酚酞試劑為指示藥，用 0.1N塩酸滴定之。假設試料用量為S(mg), 0.1N氫氣化鈉 水溶液之固定量為a(ml), 0.1N塩酸之滴定量為b(ml)時， (請先閲讀背面之注意事項^^寫本頁) •裝·

、1T 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐） 23 3 8 9 5 3 527183 A7 B7五、發明説明（22 ) 錢甲基化程度可依下式求得。 13.4(a-b) / [s-5.8 (a-b)] 另外，藥物之導入量（重量％)偽利用藥物之吸收特性 由其吸光度（362ηιη附近波長）求得。又膠濾法之條件如下： 分離管：TSK gel G4000 PWxl,溶出液：0.1Μ氯化鈉， 流速：〇·8 inl/inin,分離管溫度：40t!。 實施例 1 : 3 * - (Bo〇"(il v-Gly-Phe-Gly) - HH-A (A-KH2 = DX-8 9 )之製诰： (請先閲讀背面之注意事項寫本頁) 裝· Η

訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 將 Boc**Gly-Gly-Phe-Gly(600rog)和 經基琥泊醯亞胺 (160mg)溶解於η,Ν-二甲基甲醯胺（20ffll)中，冷却至41〇, 加入Ν,Ν -二環己基磺化二亞胺（280mg),於該溶液中加入 溶解有特開平6-87746號公報中申請專利範圍第2項所記載 之醫藥化合物之甲磺酸塩（600mg:上述公報中實施例50所 記載之化合物）和三乙胺（〇.16ml)之Ν,Ν-二甲基甲醯胺溶 液（3 0 m 1 ),遮光下在室溫攪拌進行反應1 6小時。該反應液 經減壓乾燥。殘渣以矽膠管柱層析法（洗提液：含〇·5%乙 酸的二氯甲烷和甲醇混合（10:1)溶液）精製而得目的化合 物（1 · 〇g) 〇 24 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) a4規格（2ΐ〇χ297公釐） 38 9 5 3 527183 A7 B7 五、發明説明（2 3 ) 1H-NMR(DMS0-d6)8： 8.40(d,lH,J = 8.3Hz), 8.10-8. 17(m, 2H), 7·91-8.01(ιη,1Η), 7.78(d,lH,J = 10.75Hz)。7·32( s,lH), 6.94-6.96(m,lH), 6.50(s,lH), 5.57(t,lH,J= 4.5Hz), 5.43(s,2H), 5.23(s,2H), 3.77(dd,2H,J=5.85

Hz，J=8.80Hz), 3.70(d,2H，J=4.40Hz), 3.65(d,2H,J= 5.35Hz), 3.56(d,2H,J=5^85), 3.15-3.25(m,2H), 2.40( s,3H), 2.05-2.25(m,lH), 1.86(m,2H), l*35(s,9H), 0·88 (t,3H , J = 7 · 35) 〇 Mass(FAB)； m/e854(M+l) 奮施例2 3f-K-(B〇n-Gly-Glv-Gly-PhG)HAU-NH2 = DX_89 5 lP1 成： 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 溶解 Boc-Gly-Gly-Gly-Phe(600ing)和 N-羥基琥珀醯亞 胺（160mg)於N,N-二甲基甲醯胺（20ml)中，冷却至4¾、加 入N , N f -二環己基磺化二亞胺（2 8 0 m g )。於該溶液中加入溶 解有DX-8951之磺酸塩（600mg)和三乙胺（0.16mg)之Ν,Ν -二 甲基甲醯胺（3 0 m 1 )溶液，在遮光下室溫中攪拌進行1 6小時 之反應。將反應液凍結乾燥，殘渣以矽膠管柱層析法（洗 提液：含0,5%乙酸之二氯甲烷和甲醇之混合（10:1)溶液） 精製而得目的化合物（7 0 0 )。 ^-NMRCDMSO-de)?： 8.57(d,lH,J=7.8Hz), 8.19(d,lH), 8.05-8.07(m,2H), 7.79(d,lH,J=11.2Hz), 7.32(s,lH), 7.10(d,2H,J=7*8Hz), 6.93-7.03(m,4H), 6.51(s,lH), 5.52-5.55(m,lH), 5.44(s,2H), 5.18(d,lH,J=18.5Hz), 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 2 5 3 8 9 5 3 527183 A7 B7 五、發明説明（24 ) 4.84(d,lH,J = 18.5Hz), 4.57-4.59(πι,1Η), 3.57-3.71 (m, 6Η), 3.15-3.25(m,2H), 3.00-3.02(m,lH), 2.80-2.90( m，lH), 2.40(s,3H), 2·05-2·25(ιη,1Η), 1.86(m,2H), 1.35(s,9H), 0.88(t,3H,J=7.35Hz) Mass(FAB); m/e854(M+l) 審施例3 3,-N-(Boc-G1y-G1v-G1y-G1y)-KH-A(A-MH2=DX-8951)^ (請先閱讀背面之注意事項；！ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 成： 溶解 Boc-Gly-Gly-Gly-Gly(120mg)和 N-羥基琥珀醱亞 胺（39mg)於Ν,Ν -二甲基甲醯胺（20ml)中，冷却至4°C,加 入H , N ’ -二璟己基磺化二亞胺（7 0 m g )。於該溶液中加入溶 解有DX-8951之甲磺酸塩（150mg)和三乙胺（0.039ml)2N, N -二甲基甲醯胺（lOinl)溶液，遮光下室溫中攪拌進行反應 1 6小時。將反應液減壓乾燥，殘渣以矽膠管柱層析法（洗 提液：二氣甲烷和甲醇之混合（1 0 : 1 )溶液）精製而得目的化 合物（lOOmg)。 ^-NMRiDMSO-de)?： 8.40(d,lH,J=8.3Hz), 8.1〇-8.17(m, 2Η), 7.91-8.01(m,lH), 7.78(d,lH,J=10.75Hz), 7.32( s,lH), 6.94-6.96(m,lH), 6.50(s,lH), 5.57(t,lH,J= 4.5Hz), 5.43(s,2H), 5,23(s,2H), 3.77(dd,2H,J=5.85 Hz,J=8.80Hz), 3.70(d,2H,J=4.40Hz), 3.65(d,2H,J= 5.35Hz), 3.56(d,2H,J=5.85Hz), 3.15-3.25(m,2H), 2.40(s,3H), 2.05 - 2.25U,1H), 1·86(πι,2Η), 1.35(s, 9H) , 0 · 88 (t , 3H , J = 7 · 35Hz)。 I裝-- 譯寫本買)

、1T 線 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） 26 3 8 9 5 3 527183 A7 B7 五、發明説明（25 )

Mass(FAB) ； m/e764(M + l) 奮旃例4 3,-N-(G1y-G1vG1v-G1v)-NH-A(A-NH2 = DX-89 5 1)H Μ Z, m 塩之合成：

(請先閱讀背面之注意事項^^寫本頁) 裝· 訂 ，，3’-N-(Boc-Gly-Gly-Gly-Gly)-NH-AU-NH2 = DX-8 9 5 1 ) ( 7 9 m g )於三氟乙酸（3 m 1 )中，放置1小時。蒸餾去除 溶劑，用甲醇（30inl)共沸處理二次，再用乙醇（30m Ο共沸 處理二次。殘渣用乙醚洗淨，而得目的化合物（8 0 m g )。 1H-NMR(DMS0-d6)5： 8.59-8.61(m,lH), 8.50(d,lH,J=8.3

Hz), 8.21-8.27(m,2H), 7.91-8.01(br,3H), 7.81(d,lH, J=11.2Hz), 7.32(s,lH), 6.5〇-6.52(br,lH), 5.57-5.59 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (m,lH), 5.43(s,2H), 5.23(s,2H), 3.80-3.82(m,3H), 3.70-3.75(m,3H), 3.15-3.25(m,2H), 2.41(s,3H), 2.05 -2.25(m,lH), 1.86-1.88(m,2H), 0.88(t,3H,J=7.35Hz)

O 窨施例5 羧甲基a聚镰聚醇三乙胺煊之合成： 溶解葡聚糖T2000(10g, Pharmacia公司製品，平均分 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 27 3 8 9 5 3 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 527183 A7 B7 五、發明説明（26 ) 子量為2,000,000)於0.1M乙酸缓衝液（pH5. 5, 1000ml)中， 添加過碘酸鈉（33.0g)之水溶液（1000ml)。遮光，在4C下 攪拌反應10日，添加乙二醇（7.0ml),攪拌一夜。反應液 在冰冷下用8 Μ氫氣化鈉水溶液調整為p Η 7 . 5。加硼氫化鈉（ 14g),溶解後在室溫下攪拌一夜，反應液冰冷後用乙酸調 整為PH5.5,在4C下攪拌1小時，再於冰冷下用8M氫氣化 鈉水溶液調整為PH7.5。所得水溶液用Bio-Max-30膜（ Millipoce公司製品）進行過濾而去除低分子量部分。將高 分量部分凍結乾燥而得葡聚糖聚醇。該Μ聚糖聚醇在pH 3.0下處理1小時後，用Bio-Max-50膜去除低分子量部分， 繼之，用Bio-max-100膜去除高分子量部分，凍結乾燥而 得精製葡聚糖聚醇，（2.0g)。該物質之分子量（膠濾法， 葡聚糖為準）為2 2 0 K。 將該精製葡聚糖聚醇（1.8g)加至以水（45ml)溶解氫氧 化鈉（1 05 g )所成之水溶液，在室溫下溶解。於冰冷下添 加一氛乙酸（1 5 g )溶解後在室溫下反應2 0小時。該反應液 用乙酸調整為PH8,利用Bio-Max-10膜過濾去除低分子量 部分。高分子量部分經凍結乾燥而得羧甲基葡聚糖聚醇鈉 塩（1.8g)。該物之分子量（膠濾，葡聚糖為準）為3301(。羧 甲基化程度為0 . 8。 溶解上述羧甲基葡聚糖聚醇鈉塩（ 3 0 0 mg)於水中，用 Bio-Rad AG50W-Xz(200-400篩目，H+型）分離管（1·5Χ8·6 cm)處理，以水洗提。於洗提液中加三乙胺（0.5ml)凍結乾 燥而得羧甲基葡聚糖聚醇之三乙胺塩（380nig)。將羧甲基 (請先閱讀背面之注意事項^^寫本頁) •裝- 訂 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 28 3 8 9 5 3 527183 A7 B7 五、發明説明（2 7 ) 葡聚糖聚醇鈉塩（各300mg)按照上述相同管柱層析處理， 分別得羧甲基葡聚糖聚醇之三乙胺塩（380mg, 400mg)。 奮旅例6 筠甲甚gj聚耱聚醇納煊^会成： 將實施例5所得羧甲基葡聚糖聚醇銷塩（0.15g)添加至 溶解有氫氧化鈉（1.05g)於水（4.5ml)中而成之水溶液中， 在室溫下溶解後，於冰冷下添加一氣乙酸（1 . 5 g ),溶解後 在室溫下反應18小時。該反應液用乙酸調整為pH8,將其 滴至9 0 m 1甲醇中，添加3 Μ氯化鈉水溶液（0 · 1 5 m 1 ),離心（ 3500rpm,8分鐘）收集沈澱。該沈澱以甲醇洗淨，溶解於水 (5 m 1 )中，加3 Μ之氯化鈉水溶液（0 . 1 5 m 1 )。該水溶液用徹 孔濾器（0 · 4 5 μ m )過濾，將濾液滴至3 5 m 1之乙醇中，離心（ 3500rpm，8分鐘）收集沈澱該沈澱用乙醇洗淨，溶解於水 中，用透析膜（Spectrapore I,去除分子量界限為6000〜 8000),以純水透析之。透析内液用微孔濾器（0.22μιη)過 (請先閲讀背面之注意事項d •裝—— π寫本頁) 訂 物 該Η 為 ο \—/ g)值 18得 ο測 ί 法 塩 € ί 定 銷 J-C? 醇 gi鹼 聚 { 糖度 聚程 葡 化 基基 甲甲 錢羧 得之 而算 燥計 乾基 結殘 凍糖 後以 渡質 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 例 施 審 成 合 之 塩 鈉0 聚 糖 聚 某 甲0 將實施例5所得精製葡聚糖聚醇（0.2g)加至溶解氫氣 化鈉（0.84g)於水（6ml)中所成之水溶液中，在室溫下溶解 之。於冰冷下添加一氯乙酸（1 . 2 g )並使之溶解，在室溫下 反應18小時。該反應液用乙酸調整為pH8,將其滴至120ml 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 29 3 8 9 5 3 527183 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、 發明説明（28 ) 1 I 之 甲 醇 中 ， 再 加 3Μ的氣 化 鈉 水溶液 (0 .2ml) ,離 心 ( 3 5 0 0 I 1 I Γ P m , 8分 鐘 )收集沈澱該沈澱用甲醇洗淨， 溶解 於 水（5 m 1 ) 1 1 1 中 9 再 加 3M 之 氯 化 鈉水 溶 液 (0.2ml)〇 該水 溶液 用 撤孔濾 1 I 請 1 I 器 (0 .45μ m ) 過 濾 $ 將濾 液 滴 至 35m 1 之 乙醇中，離心（ 3 5 0 0 先 閱 1 I 讀 1 I Γ P m , 8分 鐘 )收集沈澱該沈澱用乙醇洗淨， 溶解 水 中，用 背 ιέ 1 I 之 1 透 析 膜 (S P e c t r a Ρ 〇 re I ， 去 除分子 量 界限為600 0〜8 0 0 0 ), 注 意 1 1 事 1 1 對 純 水 進 行 透 析 〇 透析 内 液 用徹孔 濾 器（〇· 2 2 μ m )過濾，經 項 1 1 凍 結 乾 燥 而 得 羧 甲 基葡 聚 糖 聚醇鈉 塩 (0 · 2 0 g ) 〇 該 物質之 寫 本 百 裝 I 羧 甲 基 化 程 度 以 糖 殘基 計 (以鹸滴定法測得 值）為0 .4〇 貝 1 1 I 奮 施 例 8 1 1 I 羧 甲 基 聚 耱 聚 醇 -G 1 v -G 1 y -G 1 γ - P h e -NH-A f ( A - NH 2 = Ι)Χ- 1 I 8 9 5 1 )会成： 1 訂 i 將 實 施 例 5所得羧甲基葡聚糖聚醇之三 乙胺 塩 (3 8 0 in g , 1 1 羥 甲 基 化 程 度 為 0 . 8)溶 於 N , 二甲 基 甲醯胺（30 in 1 )中。於 1 I 該 溶 液 中 依 序 像 加 含有 3 f -Η -(Gly- G 1 y-G 1 y -P h e )- HH-A (A- % 1 I 1 線 NH 2 = DX - 895 1) 之 三 氟乙 酸 塩 (4 9 m g ) 之 N , N -二甲基甲醯胺（ 1 5 m 1 ) 溶 液 ， 三 乙 胺 (0.0 17 ml) , 1-乙氣基羰 基-2 -乙氧基- 1 1 1 , 二 羥 基 Df 咐 (3 8 0 in g )， 然後在室溫下攪 拌反 應 一夜。 1 1 將 反 應 液 以 1 Μ之 氫 氧化 鈉 水 溶液調 整 為PHI 0 ,以每5 in 1量 1 1 滴 至 25ml 之 乙 醇 中 〇加 3M 氛 化鈉水 溶 液（1 m 1 ), 二 乙醚（ 1 | 5 m 1) 至 上 述 混 合 液 中， 離 心 (3500r pm ,8分 鐘）收集沈澱。 1 1 溶 解 該 沈 澱 物 於水 中 ， 用透析 膜 (Spec trap 0 Γ el, 去 1 1 I 除 分 子 量 界 限 為 6 0 0 0 〜 8000)對純水進行透 析， 透 析内液 1 1 I 以 微 孔 濾 器 (0 .22μ m )過 濾 1 凍結乾 燥 ，將所得粗製物溶解 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 30 3 8 9 5 3 527183 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（2 9 ) 於水（3 Ο πι 1 )中，用0 . 1 Μ之氫氣化鈉水溶液調整為p Η 9 ,在 3 7 t：下處理1小時。將該處理液按照上述相同方法進行透 析。透析内液用徹孔濾器（0 . 2 2 μ m )過濾，凍結乾燥而得標 題所示化合物（2 8 9 ία g )。將此化合物溶解於0 . 1 Μ之氯化鈉 水溶液，利用GPC (分離管：東曹公司製品TSK Gel PW-4000 XL,溶劑：0.1M氯化鈉，流速：0.8ml/fflin)分析之結果，以 及本化合物之紫外光吸收譜（0.1M, Tris緩衝液，PH9.0, 0 . 2 5 ni g / m 1 )分別示於第1圖和第2圖。本化合物之醫藥化合 物殘基含量據在0.1M之Tris緩衝液（PH9.0)中測定其362ηια 波長之吸光度所定量之結果為5.3% (W/tf)。 奮施例9 羧甲基蕕聚耱聚醇-GlY-Gly-Phe-Glv_NH-AWA-02=：DX-8 9 5 ΐ )之合成： 將按照實施例4所示相同方法由3〜Ν - ( Β 〇 c - G 1 y - G 1 y -Phe-Gly)-NH-A(A-HH2 = DX-8951) (50mg)去除 Boc基所得之 3’-N-(Gly-Gly-Phe-Gly)-NH_A之三氣乙酸塩，依實施例 8所示相同方法，導入至實施例5所得羧甲基葡聚糖聚醇之 三乙胺塩（380mg)中，而得標題所示化合物（300mg)。溶解 本化合物於0.1M之氯化鈉水溶液，利用GPC(分離管：東曹 公司製品，TSK Gel PW-4000XL,溶劑：0.1M氯化鈉，流速 :0.8ml/iniri)分析之結果以及本化合物之紫外光吸收譜（ 0.1M Tris缓衝液，pH9.0, 0.19i^/ml)分別示於第3圖和 第4圖。本化合物之醫藥化合物殘基含量依據在0.1M Tris 缓衝液（PH9.0)中，362nm處之吸收度定量結果為5.3%(W/ 31 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 3 8 9 5 3 (請先閱讀背面之注意事項^^寫本頁) 裝· 訂 527183 A7 B7 五、發明説明（3 0 ) W) 〇 奮旆例1 0 將按照實施例4中所示相同方法由3f-N-(Boc-Gly-Gly -Gly-Gly)-NH-A(A-NH2 = DX-8951) (41mg)去除 Boc基而得之 3^N-(Gly-Gly-Gly-Gly)-NH-A之三氣乙酸塩，按照實施 例8中所示相同方法導入至實施例5所得羧甲基葡聚糖聚醇 之三乙胺塩（380mg)中，而得標題所示化合物（190mg)。本 化合物之紫外光吸收譜（0.1M T>is缓衝液，PH9.0, 0.34 nis/ffll)示於第5圖。本化合物之醫藥化合物殘基含量依據 在0.1M Tris缓衝液中（pH9.0), 362nm處之吸光度所定量 結果為 5,3% (W/li)。 審施例1 ΐ 木發明夕藥物複会鵲夕杭睡瘍作用 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 將鼠纖維肉腫瘤Meth Α細胞取其lx 106個移植在 BALB/C条雄鼠（7週齡）之右鼠蹊部皮下而造成患有Meth A 癌症之鼠群（每一群為7隻雄鼠）。從第7日起，將實施例9 中所得之藥物複合體溶解於注射用蒸餾水中，每隔四日在 患有Meth A癌症之雄鼠尾靜脈内投與四次。移植後第21日 摘日取腫瘤測定其重量，然後按照下式計算其腫瘍增殖抑 制率。 腫瘍增殖抑制率（％ ) = [1-(檢體投與群之平均腫瘍重 量/對照群之平均腫瘍重量）]x 100。結果顯示實施例9所 得本發明之藥物複合體在不發生毒性（體重減輕）下，較之 該翳藥化合物本身（無間隔群及多糖類衍生物存在之情形） 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 32 3 8 9 5 3 527183 A7 B7 五、發明説明（3 1 ) 大幅地增強其抗腫瘍效果。多糖類衍生物本身（實施例5所 得）以及僅導入間隔群之醫藥化合物殘基[從實施例1之化 合物按照實施例4之方法去除Boc所得之H2N-Gly-Gly-Phe-Gly-NH-A(A-NH2 = DX-8951)之三氣乙酸塩]顯示沒有藥效。 表2 被檢化合物 投與量（in g / k g ) 抑制率（％ ) (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) -裝· 醫藥化合物本身 7.5 X 4 76 1.875 X 4 46 0.9375X4 36 實施例9之化合 94 物 0 · 7 1〉X 4 5 9 0.351^ 4 41 訂 計 算 換 物 合 化 藥 醫 以 例 施 奮 線 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 用 作 瘍 ffi 抗 之 鵲 会 複0 翳 明0 本 有 患 得 獲 法 方 同 相 示 所 1X 1X 例 施 實 照 按 第 在 ο 隻 6 群 每 其 較 比 體 合 複 群 鼠 症 癌 物作 藥瘍 得腫 所抗 9 甚 例果 結 施 其 實 和00 8 用 例作 施瘍 Will 腫 與抗 投之 別與 分投 日次

1/ € 物 h 生-P 衍ly 類？ 糖ly r G 多 I 衍隔 類間 糖由 多介 /IN > 不 聚0 基 甲 羧 ο之 體 L 本例 物施 合實 化至 藥入 醫導 ,>基 -A殘 NH物 e 合 h J P 化 厂藥 G1醫 .將 接 直 為物而 用生群 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 33 3 8 9 5 3 527183 A7 B7 五、發明説明（32 ) 糖聚醇之羧基的化合物（翳藥化合物殘基導入量：6. 2重量 % )者無效。 表3 被檢化合物 投與量（mg/kg) 抑制率（％) 醫藥化合物本身 6 0 7 7 2 0 5 9 實施例8之化合物 10 1 2 3 > 85 5 1 y 7 6 實施例9之化合物 5〃 98 2 . 51) 8 7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 34 3 8 9 5 3 1 >以醫藥化合物換算計 奮旆例 2 筠甲某葡聚耱聚醇夕三乙胺鹽^合成： 3 溶解葡聚糖T500(10g, Pharmacia公司製品，分子量 500K)於0.1M乙酸缓衝液（pH5.5, 1000ml)中，加過碘酸鈉 4 (33g)之水溶液1000ml)。於遮光，4¾下S拌10日後，加 乙二醇（7.0ml),再攪拌一夜。將反應液用8M之氫氣化鈉 水溶液調整為PH7 . 5。加硼氫化鈉（14g),溶解後攪拌一夜 。反應液經冰冷，以乙酸調整為PH5.5,在4¾下攪拌一夜 後，用8 Μ之氫氧化鈉水溶液調整為p Η 7 . 5而得溶液（1 )。另 外，就葡聚搪T5 0 0(10g, Pharmacia公司製品，分子量500 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 527183 A7 B7 五、發明説明（33 ) K)進行上述一連串操作而得溶液（2)。又用葡聚糖T250(各 10g, Pharmacia公司製品，分子量250Κ),進行上述一連 串操作而得溶液（3 )和溶液（4 )。將上述溶液（1 )〜（4 )合併 利用Bio-Max-50膜進行超濾而去除低分子量部分。高分子 量部分經凍結乾燥而得葡聚糖聚醇（25g)。該物質之分子 量（膠濾，以支鏈澱粉為準）為1 6 3 K。 將上述葡聚糖聚醇（llg)加至溶解有氫氣化鈉（46.2g) 的水（3 3 0 m 1 )溶液中，在室溫下加以溶解。於該溶液中在 冰冷下添加一氯乙酸（6 6 g ),溶解後在室溫下反應一夜。 該反應液用乙酸調整為PH9,以Bio-Max-30膜超濾去除塩 類。不能通過膜的殘留溶液經凍結乾燥，而得羧甲基葡聚 糖聚醇鈉塩（13g)。該物質之分子量（膠濾，以支鏈澱粉為 準）為228K。其羧甲基化程度為0.4。 溶解該羧甲基葡聚糖聚醇鈉塩（ 6 0 0 mg)於水中，放入 Bio-Rad、AG50W-XZ(200〜400篩目，H +型）管柱（直徑為 44 mm,長度為210mm)用水洗提之。於該洗提液中添加三乙胺 (0 · 9 3 m 1 ),凍結乾燥而得標題所示化合物（6 9 0 m g )。 審施例1 4 危之合成： 溶解實施例 1 所得 3 f - N - ( B 〇 c - G 1 y - G 1 y - P h e - G 1 y ) - N Η -A(A-NH2 = DX-8951)(79mg)於三氟乙酸（3ml)中，放置1小時 。蒸餾去除溶劑，用甲醇（30ml)共沸處理2次。再用乙醇（ 30ml)共沸處理2次。殘渣用乙醚洗淨，而得標題所示化合 (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) 裝· 、11 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 35 3 8 9 5 3 527183 A7 B7 五、發明説明（34 ) 物（8 0 in g ) 〇 1H-NMR(DMS0-de)5： 8.53(d,lH,J=8.3Hz), 8.4〇-8.48(m, 2H), 8.28(d,lH,J=8.3Hz), 7.95〜8.07(br,3H), 7.81(d ,lH,J = 10.2Hz), 7.30-7.37(ni,2H), 7.15-7.30(ni,5H), 6.50-6.55(br,lH), 5.5〇-5.57(m,lH), 5.41(d,2H,J= 7.82Hz), 5.25(s,2H), 4.55-4.62(m，lH), 3.55-3.92(m, 6H), 3. 15-3.25(br,2H), 2.98-3.03(in,lH), 2.73-2.82( m,lH), 2 .40(s,3H), 2.05-2.25U,lH), 1.84-1.92U, 2H) , 0 · 88 (t , 3H , J = 7 · 35Hz) 〇 審旆例1 5 羧甲基 ® 聚耱聚醇-Gly-GlY-Phe-GlY-NH-A4A-NH2=DX- I .~裝-- (請先閱讀背面之注意事項^^寫本買) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 8 9 5 1 )之合成： 將實施例13所得羧甲基葡聚糖聚醇銷塩UOOmg)轉換 為三乙胺塩（470mg),然後溶解在Ν,Ν -二甲基甲醯胺（30ml )中。於該溶液中，依序添加實施例14所得3’-N-(Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A(A_NH2 = DX-8951)之三氟乙酸塩（62mg) 之Ν,Ν -二甲基甲醯胺溶液（5ml),三乙胺（0.02ml), 1-乙 氧基羰基-2-乙氧基-1,2 -二羥基呤啉（470mg)。於遮光， 室溫下攪拌反應一夜。該反應液分批以5ml滴加至各ΙΟπιΙ 之乙醇中。加3M氯化鈉水溶液（2·5ιη1),乙醚（20ml)，離 心收集析出之沈澱。溶解該沈澱物於0 . 5 Μ之氯化鈉水溶液 中，冰冷下用0 . 1 Μ之氫氧化鈉水溶液調整為ρ Η 9 ,以透析 膜（Spectrapore I,去除分子量界限為6000-8000)對純水 進行透析。透析内液用徹孔濾器（〇 . 2 2 p m )過濾，凍結乾燥 線 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 36 3 8 9 5 3 527183 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A 7 B7 五、發明説明（3 5 ) 而得標題所示化合物（600nig)。將本化合物溶解在0.1M氯 化鈉水溶液，用GPC (管柱：東曹TSK Gel PW-4000XL,溶劑 :〇.1Μ氯化鈉，流速：0.8ml/inin)分析之結果，以及本化合 物之紫外光吸收譜（0.1M Tris缓衝液，pH9.0, O.lmg/inl) 分別示於第6圖和第7圖。本化合物之醫藥化合物殘基含量 依據在（KIM Tris缓衝液UH9.0)中波長362nm處之吸光度 定量結果為5.8 % (W/W)。 奮施例1 6 3、卜（Glv-Glv-Glv-Phe)-NH-A(A-NH2 = DX-8 9fn)三氩乙酴 塩之合成： 溶解實施例 2所得 n-(Boc-Gly-Gly_Gly-Phe)-NH-A(A-NH2 = DX-8951)(79mg)於三氟乙酸（3ml)中，放置1小時 。蒸餾去除溶劑，利用甲醇（30ml)共沸處理2次，再用乙 醇（30ml)共沸處理2次。殘渣用乙醚洗淨而得標題所示化 合物（8 0 m g )。 1H-NMR(DMS0-d6)5： 8.62-8.66(m,2H), 8.23(d,lH,J=8.3 Hz), 8.18-8.20(in,lH), 7.98-8. 10(br,2H), 7.79(d,lH, J=10.7Hz),7.32(s,lH),7.09(d,2H,J=7.3Hz),6.93-7.03(m,4H), 6.50-6.60(br,lH), 5.52-5.55(m,lH), 5.44(s,2H), 5.18(d,lH,J=18.5Hz), 4.80(d,lH,J=18.5 Hz), 4.57'4·59(ιη,1Η), 3·57-3·71(ιη,6Η), 3·15-3·25( m,2H), 3·00-3·02(ιη,1Η), 2·80-2·90(ιη，1Η), 2.50(s，3H ),2.05-2.25U,lH), 1·86-2·00(ιη,2Η), 0,88(t,3H，J = 7 · 35Hz) 〇 請 先 閲 讀 背 面 之 注 意 事 I· 寫 本 頁 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 37 3 8 9 5 3 527183 A7 B7 經濟部中夬標準局員工消費合作社印製 五、 發明説明（36 ) 1 1 菁 m 例 17 1 1 I 甲 棊 聚 糖 聚 醇 -G 1 y - G 1 y -G 1 γ -p h e -Ν Η - A， (A - N Η 2 = DX- 1 1 51 )之合成 ^—ν 1 1 請 dr 1 I 將 實 施 例 13所 得 羧 甲 基 葡 聚 糖 聚 醇鈉塩 (1 .0 g ) 轉 化 為 先 閱 1 I 1 I 三 乙 胺 塩 (1 .2g) $ 將 其 溶 m 在 N , N _ 二 甲基甲 醯 胺 (9 0 in 1 ) 溶 η τέ 1 I 之 I 1 液 中 〇 依 序 添 加 含 有 實 施 例 16所 得 3， -H- (G 1 y - G 1 y - G 1 y - 注 意 1 I 事 1 I Phe) -N Η - A ( A- NH 2 = DX -895 1) 三 氟 乙 酸 塩（158 m g )之 N ,Η 項遽 Μ 甲 基 甲 醯 胺 (1 5 m 1) 溶 液 9 三 乙 胺 (0 .05ml), 1 - 乙 氧 基 羰 基 寫 本 裝 頁 1 -2 -乙氣基- 1， 2_ 二 羥 基 Df 啉 (1 .2g) 0 於遮光 、 室 溫 下 攪 拌 vW/ 1 1 反 應 一 夜 〇 該 反 應 液 分 批 各 取 5 in 1滴至各為1 0 m 1之乙醇中 1 1 I 〇 加 3Μ之 氯 化 鈉 水 溶 液 (2 .5 ml), 乙» ( 2 0 in 1 )離心收集所 1 1 訂 1 析 出 之 沈 0 溶 解 該 沈 澱 物 於 0 . 5M之 氯化鈉 水 溶 液 中 0 冰. 冷 下 用 0 . 1M之 氫 氣 化 m 水 溶 液 調 整 為 PH9,用透析膜（ 1 1 S P e c t r a p or e I) ， 去 除 分 子 量 界 限 為 6000-8000) 對 純 水 進 1 | 行 透 析 〇 透 析 内 液 用 徹 孔 濾 器 (0 .22μ ffl)過濾 凍 結 乾 燥 而 i I丨 線 得 標 題 所 示 化 合 物 (1 .4 g ) 〇 本 化 合 物 之翳藥 化 合 物 殘 基 含 1 I 量 依 據 在 0 . 1M T r i s緩衝液（p Η 9 . 0) 中 362nm處之吸光度所 1 1 定 量 結 果 為 5 . 1% ( W/W) 0 1 1 實 旅 例 1 δ 1 1 Bo c - Q 1 y - Ph e - Le u - OH 之 Λ 成 • 1 I 將 H- G 1 y - Ph e - Le u - OH (3 .0 g ) 加 至 50 %之 二 嚼 烷 水 溶 液 1 I (48m 1) 中 9 以 冰 冷 却 之 Ο 於 該 溶 液 中 添加含 有 (B 0 C )2 0 ( 1 1 I 2 . 27 g) 之 二 m 烷 (24m 1 ) 溶 液 和 1 N 之 氫 氧化鈉 水 溶 液 (9 • 45 1 1 I m 1 )0 攪拌- -夜。 於反應液中加1 Ν之塩酸（9 · 45 ml), 蒸餾 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 38 3 8 9 5 3 527183 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A 7 _ B7 五、發明説明（37 ) 去除溶劑，所得殘渣用矽顧管柱層析法（洗提液：二氯甲烷 和甲醇之混合（5 ·· 1)溶液）精製而得目的化合物（2 . 5 g )。 啻袖j例19 Boc-Gly-Phe-Leu-Glv-OBzl之合成： 溶解實施例 18 所得 Boc~*Gly-Phe_Leu-〇H(2.4g)和 N -翔 基琥珀醯亞胺（656mg)於Ν,Ν-二甲基甲醯胺（50ml)中，冷 却至41C,加N,Nf -二環己基磺化二亞胺（1.17g),攪拌2小 時。於該溶液中添加Η - G 1 y - 0 B z 1之甲苯磺酸塩（1 . 9 g )和溶 解有三乙胺（1.79ml)之Ν,Ν -二甲基甲醯胺（40ml)溶液，在 室溫下攪拌反應16小時。將反應液減壓乾燥，殘渣用矽膠 管柱層析法（洗提液：二氯甲烷和甲醇之混合（50:1)溶液） 精製而得標題所示化合物（2.0g)。 1H-NMR(DMS0-d6)§： 8.20-8.30(m,lH), 8.12(d,lH,J=8.3 Hz), 7.83(d,lH,J=8.3Hz), 7.32-7.37(m,5H), 6.89- 6·95(ιη,1Η), 5.12(s,lH), 4.52-4.59(br,lH), 4.34(dd, 1H , J = 7 . 3Hz , J = 15 · 1Hz) , 3.93 ( dd , 1 H , J = 5 . 5Hz , J = 1 7 , 2Hz) ,3.84(dd,lH,J=5.5Hz,J=17.2Hz), 3.54(dd,lH,J=5.9Hz ,J=5.9Hz,J=16.7Hz), 3.42(dd,J=5.9Hz,J=16.7Hz), 3.00(dd,lH,J=4.4Hz,13.7Hz), 2.78(dd,lH,J=8.8Hz,J= 13·2Ηζ), 1·50-1·65(ιη,1Η), 1.45(t,2H,J = 7.3Hz), 1·36 (s,9H), 0.86(d,3H,J=6.4Hz), 0.82(d,3H,J=6,4Hz)。 奮施例20 Boc~Gly-Phe-Leu-Gly-OH之合成 * 溶解實施例 19中得 Boc-Gly-Phe-Leu-0B2l(1.7g)於乙 請 先 閲 讀 背 面 之 注 意 事 I·I裝 頁 訂 線 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 39 3 8 9 5 3 527183 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（38 ) 酸乙酯（3 0 m 1 )和甲醇（3 0 m 1 )之混合溶液中，加5 %之把-磺 (1.5g)進行催化還原。將反應液過濾，減壓乾燥而得標題 所示化合物（1 · 1 5 g )。 審旆例21 3f-N-(Roc-Glv-Phft-Lftu-Glv)-KH-A(A-KH2=DX~8951)^ ^ 成： 溶解實施例 20所得 Boc-Gly-Phe-Leu-Gly-0H(200n^) 和N-羥基琥珀醯亞胺（58mg)於Ν,Ν-二甲基甲醯胺（5ml)中， 冷却至4 t!,加N , N f -二環己基碩化二亞胺並加以溶解。於 該溶液中添加溶解有DX-8951之磺酸塩（224mg)和三乙胺（ 0 . 0 5 9 m 1 )之N , N -二甲基甲醯胺（5 m 1 )溶液，於遮光及室溫 下攪拌反應16小時。將反應液減壓乾燥，殘渣以矽顧管柱 層析法（洗提液：含0.5%乙酸之二氯甲烷和甲醇之混合（10 :1)溶液）精製而得標題所示之化合物（200mg)。 1H-MMR(DMS0-d6)5： 8.35(d,lH,J = 7,8Hz), 8,08-8.18(m, 2H), 7.75-7.85(ib,2H), 7.32(s,1H), 7.10(d,2H,J = 6.8 Hz), 7·08-7·13(ιβ,3Η), 6·85-6·95(1>γ,1Η), 6·40-6·65( br,lH), 5.52-5.55(m,lH), 5.46(d,lH,J=18.5Hz), 5.37 (d,lH,J = 18-5Hz), 5-24(s,2H), 4.44-4.52(ια,1Η), 4.15 〜4.25(m,lH), 3·68-3.72(ιη,2Η), 3,40-3·52(ιη,2Η), 3.15-3.25(br,2H), 2.85-2.95(m,lH), 2.65-2,75(m,lH) ,2.40(s,3H), 2·05-2·25(ιη,1Η), 1.80-1.91(m,2H), 1·50-1·65(ιη,1Η), 1.45(t,2H,J = 7.3Hz), 1.35(s,9H), 0.88(t,3H,J=7.4), 0.86(d,3H,J=6.4Hz), 0.82(d,3H,J= (請先閲讀背面之注意事項寫本頁) -裝· 訂 線 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 40 3 8 9 5 3 527183 A 7 B7 五、發明説明（3 9 ) 6. 4Hz) 〇 奮施例22 3f-N-(GlY-Phe-[^u-Glv)-HH-A(A-NH2 = DX-89 5 1)^ Μ 7, m 塩之合成： 溶解實施例 21 所得 3f-N-[Boc-Gly-Phe-Leu-Gly)-NH-A(A-NH2 = DX-8951)(97mg)於三氟乙酸（3ml)中，放置1小時 。蒸餾去除溶劑，用甲醇（30ml)共沸處理2次，再用乙醇（ 30ml)共沸處理2次。殘渣用乙醚洗淨而得標題所示化合物 (9 5 m g ) 〇 1H-NMR(DMS0-de)5： 8.57(d,lH,J=8.3Hz), 8.47(d,lH,J= 8.3Hz), 8.32(d,lH,J=7.8Hz), 8.17(t,lH,J=5,5Hz), 7.81-7.91(br,3H), 7.79(d,lH,J=10.7Hz), 7.32(s,lH), 7.21-7.23(m,5H), 7.12-7.17(m,lH), 6.45-6.55(br,lH) ,5.57(q，lH,J = 4.4Hz), 5.43(d,lH，J = 16.1Hz), 5.34(c), 1H,J=16;1Hz), 5.23(s,2H), 4.67(dt,lH,J=4.0Hz,J=9.0

Hz), 4.31(dd,lH,J=8.5Hz,J=15.0Hz), 4.0-4*4(br,lH), 3.74-3.76(in,2H), 3.56(dd,lH,J = 6.0Hz,J = 16.0Hz), 3.41(dd,lH,J=6.0Hz,J=16.0Hz)〇 3.17-3.19(br,2H), 3.02(dd,lH,J=4.0Hz,J=14.0Hz), 2.70(dd,lH,J=10,0Hz,

J = 14.0Hz), 2.40(s,3H), 2*05-2.15(m,lH), 1.85(dt,2H ,J=7.0Hz,J=14.0Hz), 1.50-1.55(m,lH), l,45(t,2H,J= 6,0Hz), 1.35(s,9H), 0.88(t,3H,J=7.4), 0.85(d,3H,J= 6 · 4Hz) , 0 · 80 (d , 3H , J = 6 · 4Hz) 〇 (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) •裝· 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨OX 297公釐） 4 1 3 8 9 5 3 527183 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（40 ) 羧 φ ^ a ?g % Έ m -Glv-Phe-L^u-G]v-HH-Af (A~NH2=DX-8 9 5 ΐ )之会成： 溶解實施例13所得羧甲基葡聚糖聚醇之三乙胺塩（ 6 9 0 m g )於Ν , Ν -二甲基甲醯胺（5 0 m 1 )溶液中。於該溶液中依 序添加實施例 22所得之 3f-H-(Gly-Phe-Leu-Gly)-NH-A(A-NH2 = DX-8951)三氣乙酸塩（95mg)溶解在Ν,Ν -二甲基甲醯胺 (10ml)中之溶液、三乙胺（0.03ml), 1-乙氧基羰基-2-乙 氧基-1,2 -二羥基〇f啉（690mg)。在室溫下攪拌反應一夜。 將反應液分批各取5 m 1分別滴至各1 0 m 1之乙醇中。再加3 Μ 之氯化鈉水溶液（2.5ml),二乙醚（20ml),離心收集所析 出之沈澱物將沈澱物溶於0 . 5 Μ之氯化銷水溶液，冰冷下以 0.1Μ之氫氧化鈉水溶液調整為ρΗ9,用透析膜（ Spectrapore I,去除分子量界限為6000-8000)對純水進 行透析。透析内液用徹孔濾器（〇,22μιη)過濾，將濾液凍結 乾燥而得標題所示化合物（600mg)。本化合物之醫藥化合 物殘基含量依據在0.1M Tris缓衝液（PH9.0)中362nm處之 吸光度定量結果為4.8 % (tf/W)。 奮施例24 筠甲某蕕聚耱聚醇三乙胺塩^合成： 溶解葡聚糖T500(50g, Pharmacia公司製品，分子量 為500K)於0.1M之乙酸缓衝液（pH5.5, 5000ml)中，添加過 碘酸鈉（165.0g)之水溶液（5000ml)。於遮光，41下攪拌 10曰，加乙二醇（35.0ml),攪拌反應一夜。反應液用8Μ之 氫氣化鈉水溶液調整為p Η 7 . 5。加硼氫化鈉（7 0 g )並予以溶 (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 4 2 3 8 9 5 3 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 527183 A7 B7 五、發明説明Ui ) 解，攪拌一夜。反應液冰冷後用乙酸調整為pH5.5。在4t! 下攪拌1小時，用8 Μ之氫氣化鈉水溶液調整為p Η 7 . 5。所得 水溶液用Bio-Max-50膜超濾法去除低分子量部分。高分子 量部分經凍結乾燥，而得葡聚糖聚醇（27.1g)。該物質之 分子量（膠濾，以支鏈澱粉為準）為140K。 將該葡聚糖聚醇（5g)加至溶解有氫氧化鈉（21g)的水（ 1 5 0 m 1 )溶液中，在室溫下溶解之。於該溶液中在冰冷下添 加一氯乙酸（30g)並加以溶解，然後在室溫下反應一夜。 該反應液用乙酸調整為f>H8,以Bio-Max-50膜超濾法去除 塩類。不能通過膜的殘留溶液經凍結乾燥而得羧甲基《聚 糖聚醇鈉塩（5.6g)。該物質之分子量（膠濾，以支鏈殿粉 為準）為263K。其羧甲基化程度為0.4。 溶解該羧甲基葡聚糖聚醇鈉塩（2.0g)於水中，甩Bio-Rad AG50W-XZ(200-400 篩眼 ， H+型） 管柱 （直徑 44mm, 長度 為2 1 0 m m )以水洗提之。於該洗提液中添加三乙胺（4 m 1 ), 凍結乾燥而得標題所示化合物（2 . 2 g )。 曹旆例25 羧甲甚嚭聚耱聚醇三甲胺塩夕合成： 溶解實施例24所得羧甲基葡聚糖聚醇鈉塩（l.Og)於水 中，用 Bio-Rad /\G50W-XZ(200-400筛目，MesNFT型）分離， 以水洗提之。該洗提液經凍結乾燥而得標題所示化合物（ 9 5 0 m g ) 〇 奮施例2 ft 3’-H- mY-G1v-Phe-Glv)HA(A-NH2 = DX-89 5 1)塩酴塩之 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· -一口 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 43 3 8 9 5 3 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 527183 A7 B7 五、發明説明U2 ) 合成： 按照實施例14所不相同方法，將由3夂H-(Boc_Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-AU-HH2 = DX-8951) (400mg)製得之 3’-N-(Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A三氣乙酸塩溶解於水和甲醇之混 合（1:4)溶液中，以 Bio-Rad AG 1-Ζ8(200-400篩眼，C1· 型）管柱（1.5cmx 8.6cm)使用上述溶劑洗提。將洗提液濃 縮、凍結乾燥而得標題所示化合物（3 1 0 g )。 1H-HMR (DMSO-de) δ ： 8. 53 (d, 1 Η , J = 8 . 5Ηζ) , 8·46-8 · 48 ( ιη,ΙΗ), 8.37-8.39(m,lH), 7.95(d,lH,J = 8.0Hz), 7.80( s,3H), 7.78(d,lH,J=ll.lHz), 7.34(s,lH), 7.14-7.24( m,5H)，6,50(s,lH), 5·56-5·60(ιη,1Η), 5,35-5·40(ιη, 2H), 5.24(s,2H), 4 . 5 1 - 4 . 5 6 (in , 1H) , 3.86(dd,J = 4.8, 13.5Hz, 1H), 2.78(dd,J=9.6,3.5Hz,lH), 2.41(s,3H), 2·12-2·23(ιη,2Η), 1·81-1·89(ιη,2Η), 0.88(t,3H,J = 7,2 H z ) 〇 、

Mass (FAB) ; m/e 7 5 3 (M + l) 窨施例27 羧甲甚蕕聚= 8 9 5 1 )之合成： 溶解實施例25所得羧甲基葡聚糖聚醇三乙胺塩（O.lg) 於Ν,Ν -二甲基甲醯胺（6ml)中。於此溶液中依序添加實施 例 26所得之 3f-H-(Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A(A-NH2=DX-8951)塩酸塩（24mg)之Ν,Ν-二甲基甲醯胺（ΙΟπιΙ)溶液，三 乙胺（5ml), 1-乙氣基羰基-2-乙氣基-1,2-二羥基時咐（ (請先閱讀背面之注意事項.寫本頁) 裝· 線 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 44 3 8 9 5 3 527183 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（43 ) O.lg),在室溫下攪拌反應一夜。將此反應液分批各取5ml 分別滴至各1 0 in 1之乙醇中。再添加3 Μ之氯化鈉水溶液（2 . 5 ml), 2_(20ml),離心（3500rpm, 8分鐘）牧集析出之沉 澱。將此沉澱物溶解於0 . 5 Μ之氯化鈉水溶液中，冰冷下用 0 . 1 Μ之氫氧化鈉水溶液調整為ρ Η 9。所得水溶液以B i 〇 - M a X -3 0膜進行超過濾脫塩。不能通過膜的殘留溶液以微孔濾 器（0.22/i m)過濾後凍結乾燥而得標題所示化合物（90mg) 。此化合物之醫藥化合物殘基含量依據在0.1 M Tris緩衝 液（PH9.0)中之362ηιη吸光度定量結果為11% (W/W)。 審施例28 W 甲基 gj 聚耱聚醇-G1”G1y-Phe-Glv-NH-A’（A-NH2 = D)(-8 9 5 U之合成： 溶解實施例25所得羧甲基葡聚糖聚醇三甲胺塩（O.lg) 於Ν,Ν -二甲基甲_胺（6ml)中。於該溶液中依序添加實施 例 26所得之 3’-N-(Gly-Gly-Phe-Gly)-HH-A(NH2=DX-8951) 塩酸塩（36mg)之Ν,Ν -二甲基甲醯胺溶液（ΙΟπιΙ),三乙胺（ 8/il), 1-乙氧基羰基-2-乙氣基-1,2-二羥基〇f啉（O.lg), 於室溫下攪拌反應一夜。將該反應液分批各取5ml分別滴 至各為10ml之乙醇中，再添加3M之氯化鈉水溶液（2.5ml), 乙醚（20ml),離心（3500rpm, 8分鐘）收集析出之沉澱。將 該沉澱物溶解於0.5M之氣化鈉水溶液中，冰冷下用0.1M之 氫氣化鈉水溶液調整為PH12。所得水溶液用Bio-Max-30膜 進行超漉去除塩類。將不能通過膜的殘留溶液用徹孔濾器 (0 . 2 2 /i m )過濾後凍結乾燥而得標題所示化合物（8 0 m g )。 (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) -裝·

、1T 線 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210 X 297公釐） 45 3 8 9 5 3 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 527183 A7 B7 五、發明説明（44 ) 將此化合物溶解於0.1M之氣化鈉水溶液中後用GPC(分離管 :東曹- TSK Gel PW-4000XL,溶劑：0.1M氯化鈉，流速： 0.8ml/min)分析結果以及本化合物之紫外光吸收譜（0.1M T r i s缓衝液，p Η 9 · 0 , 3 6以g / m 1 )分別示於第8圖和第9圖。 此化合物之醫藥化合物殘基含量依據在0.1M之Tris緩衝液 (PH9.0)中之362nm吸光度所定量結果為15涔（W/W)。 奮旆例29 筠 g 某葡聚耱聚醇-Glv_Glv-GlY_Phe-NH-A’（A-NH2=DX-8 9 5 1 )之合成： 溶解葡聚糖T250(20g, ExtraSynthese公司製品，平 均分子量為250k)於0.1M之乙酸缓衝液（pH5,5, 2000ml)中 ，添加過碘酸鈉（6 6 . 0 g )之溶液（2 0 0 0 ία 1 )。於遮光，4 °C下 攪拌10日，加乙二醇（14.0ml),攪拌一夜。將反應液在冰 冷下以8M之氫氧化鈉水溶液調整為pH7.5。添加硼氫化鈉（ 28g)並使之溶解，然後在室溫下攪拌一夜。將反應液冰冷 後用乙酸調整為p Η 5 . 5 ,在4 °C下攪拌1小時，於冰冷下以 8 Μ之氫氧化鈉水溶液調整為p Η 7 . 5。所得水溶液用B i 〇 - M a X -30膜進行超濾去除低分子量部分而得不能通過膜的殘留 溶液（1)。S 外，溶解 ® 聚糖 T250(50g, ExtraSynthese 公 司製品，平均分子量為250k)於0.1M之乙酸缓衝液（PH5.5, 5000ml)中，添加過碘酸鈉（165g)之水溶液（5000ml)。於 遮光，4 °C下攪拌10日，加乙二醇（35.0ml),攪拌一夜。 反應液在冰冷下用8M之氫氧化鈉水溶液調整為pH7. 5。加 硼氫化鈉（70g)並使之溶解後，然在室溫下攪拌一夜。將 (請先閲讀背面之注意事項寫本頁) 裝·

、1T 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 46 3 8 9 5 3 527183 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（45 ) 反應液冰冷後用乙酸調整為P Η 5 . 5 ,在4 1C下攪拌1小時， 冰冷下用8 Μ之氫氣化鈉水溶液調整為ρ Η 7 . 5。所得水溶液 用Bio-Max-30膜進行超濾去除低分子量部分，而得不能通 過膜之殘留溶液（2)。將殘留溶液（1)和（2)合併，藉超濾 法將能通過Bio-Max-50膜的部分再用Bio-Max-30膜去除低 分子量部分，然後凍結乾燥而得葡聚耱聚醇（25.7g)。該 物質之分子量（膠濾法，以支鐽澱粉為標準）為47k。 將該葡聚糖聚醇（5g)添加至溶解有氫氯化鈉（35g)的 水（1 5 0 in 1 )溶液中，於室溫下加以溶解。於該溶液中在冰 冷下添加一氯乙酸（50g)並使之溶解，然後在室溫下反應 18小時。將該反應液以乙酸諝整為pH8,用Bio-Max-50膜 進行超濾去塩。將不能通過膜的殘留溶液凍結乾燥，而得 羧甲基葡聚糖聚醇鈉塩（7.2g)。該物質之分子量（顧濾法， 以支鏈澱粉為標準）為127k。其羧甲基化程度0.8。溶解該 羧甲基»聚糖聚醇鈉塩（2.2g)於水中。利用Bio-Rad AG 50W-Z2(200-400篩眼，H +型）管柱（直徑44mm,長度為210 mm)以水洗提之。於該洗提液中添加三乙胺（4ml),凍結乾 燥而得羧甲基葡聚糖聚醇三乙胺塩（2.69g)。 溶解該羧甲基葡聚糖聚醇三乙胺塩（2.67g)於Ν,Ν -二 甲基甲醯胺（200ml)中。於該溶液中依序加入實施例2相同 方法合成而得之 n-(Boc-Gly-Gly-Gly-Phe)-NH-A(A -N Η 2 = D X - 8 9 5 1 )( 3 5 0 m g )再按照實施例1 6所示丰目同方法去除 Boc基而得之 3’-N-(Gly-Gly-Gly-Phe)-HH-Af之三氟乙酸 塩與三乙胺（0.116ml)溶解於Ν,Ν -二甲基甲醯胺（10ml)而 47 (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) •裝· 、11 線 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 3 8 9 5 3 527183 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、 發明説明（46 ) 1 1 成 之 溶 液 1 -乙 氣基 羰 基-2 -乙氣基- 1,2- 二羥基Df啉 ( 1 1 2 . 67 g) 溶 解 在Ν， N -二 甲 基甲 醯 胺（1 0 m 1 )而 成之溶液， 妖 後 1 I 在 室 溫 下 攪 拌反 應一 夜 。於 該 反應液 中加 3 Μ之氯化鈉 水 溶 請 1 1 先 1 液 閱 讀 1 背 1 (1 00 ml), 將該反應液分批各取8ml分 別滴 至各30m 1之 乙 醇 1 注 I 中 0 分 別 添 加3 Μ之氯 化 鈉水 溶 液（lffll ),二乙醚（5m 1 ) 1 離 意 1 心 (3500r P m ,8分鐘） 收 集析 出 之沉澱 〇將 該沉澱物用 丙 酮 h 洗 淨 > 溶 解 於水 中， 加 3M之 氯 化鈉水 溶液 (ΙΟιη 1 ),然 後 用 寫 本 頁 裝 1 0 . 1M之 S 氧 化鈉 水溶 液 調整 為 P Η 9 , 3 7 °C處理1小時， 該 處 、W〆 1 | 理 液 用 B i 〇 _ M a X - 10膜 進 行超 濾 去塩。 不能 通過膜的殘 留 溶 1 i 液 用 微 孔 濾 器（0 .22 u m )過濾， 凍結乾燥， 而得標題所示 1 1 訂 化 合 物 (2 .3 0 g ) 〇 此化合物溶解在0 . 1 Μ之氮化鈉水溶液後 1 I 用 GPC (分 離 管·· 東曹 TSK Ge 1 PW- 40 0 0 XL , 溶劑：0 . 1 Μ氯 1 1 化 m 9 流 速 :0 . 8ml/ mi η )分 析 之結果 以及 本化合物之 紫 外 1 1 光 吸 收 譜 (0 .1M T r i s 緩 衝液 > PH9 . 0 , 0.20mg/ml)分別示 1 於 第 10和 11 圖。 本化 合 物之 醫 藥化合 物殘 基含量依據 在 1 I 0 . 1 Μ T Γ 1 s缓衝液（p Η 9 · 0 )中 之 3 6 2 n m吸光度定量結果為5 .8 1 1 I % (W/W) 〇 1 1 實 施 例 30 1 ! 羧 甲 革 葡 聚 耱聚 _三 乙 胺塩 之 合成： 1 I 於 含 有 葡聚 糖T1 0 (20g , P h a r m a c i a公 司製品，平 均 分 1 1 1 子 量 為 10k) 之0 · 1 Μ乙 酸 缓衝 液 (PH5 ♦ 5 )溶液（2 0 0 0 in 1 )中， 1 i 添 加 入 過 碘 酸鈉 (66 . 0 g )水溶液（2 0 0 0 m 1 ) 〇 於遮光，4它 下 1 I 攪 拌 1 0 曰 $ 添加 乙二 醇 (14 · 0 m 1),攪 拌一 夜。將反應 液 在 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 48 38953 527183 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（47 ) 冰冷下用8 Μ之氫氣化鈉水溶液諝整為p Η 7 . 5。加硼氫化鈉（ 2 8 g )並加以溶解。在室溫下攪拌一夜。反應液冰冷後用乙 酸調整為P Η 5 . 5 ,在4 °C下攪拌1小時，再於冰冷下用8 Μ之 氫氣化鈉水溶液調整為Ρ Η 7 . 5。所得水溶液用B i 〇 - M a X - 5膜 (Millipore公司製品）。進行超濾去除低分子量部分。將 不能通過膜的殘留溶液用B i 〇 - M a X - 3 0膜過濾，所得濾液進 行凍結乾燥而得葡聚糖聚醇（8.0g)。該物質之分子量（膠 濾法，以支鏈澱粉為標準）為13k。 將該《聚耱聚醇（3.7g)加至溶解有氫氧化鈉（25.9s) 的水（1 1 1 in 1 )溶液中，在室溫下加以溶解。於該溶液中， 在冰冷下加一氯乙酸（3 7 g ),加以溶解。在室溫下反應2 0 小時。將反應液用乙酸調整為ρΗδ,以Bio-Max-5膜進行超 濾去除塩。將不能通過膜的殘留溶液凍結乾燥而得羧甲基 葡聚糖聚醇鈉塩（6.2g)。該物質之分子量（膠濾法，以支 鍵澱粉為標準）為37k。其羧甲基化程度為0.9。 溶解該羧甲基葡聚糖聚醇銷塩（6.0g)於水中，用Bio-Rad AG 50W-Z2(200-400 篩目 ， H+型） 處理， 以水洗 提之。 於該洗提液中加三乙胺（9 . 3 ία 1 ),凍結乾燥而得標題所示 化合物（7 . 2 g )。 奮旆例31 链甲甚S聚糖聚醇三乙胺塩会成 將實施例30中所得葡聚糖聚醇（3.9g)加至溶解有氫氧 化鈉（1 6 . 3 g )的水（1 1 7 m 1 )溶液中，在室溫下加以溶解。於 該溶液中，在冰冷下添加一氯乙酸（2 3 . 4 g ),溶解後在室 (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) f填 裝-

、1T -線 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 49 3 8 9 5 3 527183 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（48 ) 溫下反應18小時。反應液用乙酸調整為pH8,用Bio-Max-5 膜進行超濾去除塩。將不能通過膜的殘留溶液凍結乾燥而 得羧甲基》聚糖聚醇鈉塩（5.Og)。該物質之分子量（膠濾， 以支鏈澱粉為準）為28k。其羧甲基化程度為0.5。將該羧 甲基葡聚糖聚醇鈉塩（4.8g)按照實施例30所示相同方法轉 換為三乙胺塩，而得標題所示化合物（5.6g)。 奮旆例32 筠甲某蘅聚搪聚_三乙胺塩^合成： 於含有葡聚糖4(20 g,船越公司製品，平均分子量為 4 k - 6 k )之0 . 1 Μ的乙酸緩衝液（p Η 5 . 5 )溶液（2 0 0 0 m 1 )中，添 加過碘酸鈉（66.0g)之水溶液（2000ml)。於遮光、4 °C下攪 拌10日，加乙二醇（14.0ml),攪拌一夜。反應液在冰冷下 用8M之氫氯化鈉水溶液調整為PH7.5。加硼氫化鈉（28g), 溶解後在室溫下攪拌一夜。反應液冰冷後用乙酸調整為 P Η 5 . 5，在4 °C下攪拌1小時，冰冷下用8 Μ之氫氧化鈉水溶 液調整為ΡΗ7. 5。所得水溶液用Bio-Max-3膜進行超濾去除 低分子量部分。將所得濾液凍結乾燥而得葡聚糖聚醇（6.0 g)。該物質之分子量（膠濾法，以支鏈澱粉為標準）為9k。 將該葡聚糖聚醇（2.7g)加至溶解有氫氣化銷（18.9g)的水（ 8 1 in 1 )溶液中，在室溫下溶解之。於該溶液中，在冰冷下 添加一氣乙酸（2 7 g ),溶解偽在室溫下反應2 0小時。將該 反應液用乙酸調整為PH8,用Bio-Max-5膜進行超濾去除塩 。將不能通過膜的殘留溶液凍結乾燥而得羧甲基葡聚糖聚 醇鈉塩（4.2g)。該物質之分子量（膠濾法，以支鏈澱粉為 (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) 裝· 訂 線 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 50 3 8 9 5 3 527183 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（49 ) 標準）為2 0 k。其羧甲基化程度為0 . 9。 將該羧甲基葡聚糖聚醇鈉塩（4.Og)按照實施例30所示 相同方法轉變為三乙胺塩而得標題所示化合物（4.8g)。 窨餱例33 羧g某葡聚糖聚醵三Z銨鹽之合成 將實施例3 2所得葡聚糖聚醇（2 . 7 g )加至溶解有氫氧化 鈉（1 1 . 3 g )的水（8 1 m 1 )溶液中，在室溫下溶解之。於該溶 液中，在冰冷下添加一氯乙酸（1 6 . 2 g )並使之溶解。在室 溫下反應1 8小時。將反應液Μ乙酸調整為p Η 8 ,用B i 〇 -Max _5膜進行超溏去除塩。將不能通過膜的殘留溶液凍結 乾燥而得羧甲基葡聚糖聚醇鈉塩（2.7g)。該物質之分子量 (膠滤法，K支鏈澱粉為標準）為1 6 k。其狻甲基化程度為 0.5 ◊將該羧甲基葡聚糖聚醇納塩（2.7g)按照實施例30所 示相同方法轉變為三乙胺塩而得標題所示化合物（3. lg)。 當？fe例34 羧甲甚葡聚辘聚 _ -G]Y-Gh-Phfi-G 丨 vHA’U-NH^DX-8 9 5 1 )之合成： 溶解實施例3 0所得羧甲基葡聚糖聚醇三乙胺塩（1 . 5 g ) 於Η,Ν -二甲基甲醯胺（90ml)中。於該溶液中依序添加含有 三乙胺（0.07ml)和 3，-N-(Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A(A-NH2: DX-8 9 51)三氟乙酸塩（210mg)之Ν,Ν -二甲基甲醯胺（40ml) 溶液，1 -乙氧基羰基-2 -乙氧基-1 , 2 -二羥基〇f啉（1 . 5 g ), 在室溫下攪拌反應一夜。將反應液分批各取5 in 1分別滴至 各為1 0 m I之乙醇中。分別添加3 Μ之氯化鈉水溶液（2 . 5 m 1 ), 二乙醚（2 0 m 1 ),離心（3 5 0 0 r p m , 8分鐘）收集析出之沉澱。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 5 1 (修正頁）3 8 9 5 3 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

527183 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（5 0 ) 。將該沉澱物溶解在0 . 5 Μ之氯化納水溶液中，冰冷下用 0 . 1 Μ之氫氧化鈉水溶液調整為ρ Η 9。所得水溶液用B i 〇 -Max-3膜進行超濾去除塩類。將不能通過膜的殘留溶液用 徹孔濾器（0 . 2 2 /i m )過濾、凍結乾燥而得標題所示化合物（ 1 . 3 g )。將此化合物溶解在0 . 1 Μ之氯化鈉水溶液後用G P C ( 分離管··東曹TSK Gel PW-4000XL,溶劑：0.1Μ氯化鈉， 流速：0.8inl/min)分析之結果以及該化合物之紫外光吸收 譜（0.1M Tris缓衝液，pH9.0, 65iug/ial)分別示於第12圖 和第13圖。此化合物之醫藥化合物殘基含量依據在0.1M Tris緩衝液（PH9.0)中之362ηιη吸光度定量結果為6·4知（W/ W) 〇 啻渝例35 锪甲某菇聚糖聚醇-Glv-GlY-Phe-Gly-HH-A’ （A-HH2=DX-8 9 5 η之合成： 溶解實施例31所得羧甲基葡聚糖聚醇三乙胺塩（1.2g) 於H,N -二甲基甲醯胺（90ml)中。於該溶液中依序添加含有 三乙胺（0·056βι1)和 3’- N-(Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A(A-HH2 = DX-8951)三氟乙酸塩（168mg)之Ν,Ν-二甲基甲醯胺（30ml) 溶液、1-乙氧基羰基-2-乙氧基-1,2 -二羥基時啉（1.2g), 在室溫下攪拌反應一夜。將反應液分批各取5ml滴至各為 1 0 m 1之乙醇中，再分別加3 Μ之氛化鈉水溶液（2 . 5 m 1 ),二 乙醚（20ml),離心（3500rpm, 8分鐘）收集柝出之沉澱。將 沉澱物溶解於0 . 5 Μ氯化鈉水溶液中，冰冷下用0 . 1 Μ之氫氧 化鈉水溶液調整為Ρ Η 9。所得水溶液用B i 〇 - M a X - 3膜進行超 52 (請先閱讀背面之注意事項\|1?寫本頁) .裝. 訂 線 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X29*7公釐） 3 8 9 5 3 527183 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 A7 B7 五、發明説明（5 1 ) 濾去除塩。不能通過膜的殘留溶液用徹孔濾器（0 . 2 2 W in) 過濾，凍結乾燥而得標題所示化合物（1 . 0 g )。此化合物之 醫藥化合物殘基含量依據在0.1M Tris緩衝液UH9.0)中之 362nm吸光度定量結果為4.8外（W/W)。 奮施例36 羧甲某蕻聚耱聚醇-Glv-Glv-Phe-Glv-NH-A’ （A_NH2=DX-8 9 5 1 )之合成： 溶解實施例32所得羧甲基葡聚糖聚醇三乙胺塩（1.2g) 於N，N -二甲基甲醯胺（90ml)中。於該溶液中依序添加含有 三乙胺（0·056πι1)和 3f-N-(Gly-Gly-Phe-Gly)-HH-A[A-NH2 = DX-8951)三氟乙酸塩（168mg)之Ν,Ν-二甲基甲醯胺（ 30ml)溶液，1-乙氣基羰基-2-乙氣基-1,2 -二羥基時啉（ 1.2g),、在室溫下攪拌反應一夜。將反應液分批各取5m 1滴 至各為1 0 m 1之乙醇中，再分別加3 Μ之氣化鈉水溶液（2 . 5 m 1 )，二乙醚（20ml)。離心（3 5 0 Orp®, 8分鐘）收集析出之沉 澱物。將沉澱物溶解在0 . 5 Μ之氯化鈉水溶液中，冰冷下用 0 . 1 Μ之氫氣化鈉水溶液調整為ρ Η 9。所得水溶液用B i 〇 -Max-3膜進行超濾去除塩。將不能通過膜的殘留溶液用徹 孔濾器（0.22MID)過濾，凍結乾燥而得標題所示化合物（ l.Od。本化合物之翳藥化合物殘基含量依據在0.1M Tris 緩衝液（口119.0)中之362^吸光度定量結果為5.9%1/1〇。 窨旃例37 筠甲基靜聚糖聚醇-Glv-Glv-Phe-Glv-NH-A’ （A-NH2=DX-8 9 5 η之合成： (請先閲讀背面之注意事項 本頁) -裝· 、1Τ 線 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210Χ 297公釐） 5 3 3 8 9 5 3 527183 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（5 2 ) 溶解實施例33所得羧甲基葡聚糖聚醇三乙胺塩（1.5g) 於N , N -二甲基甲醯胺（9 0 in 1 )中。於該溶液中依序添加含有 三乙胺（0·07π1)和 P-N-iGly-Gly-Phe-Gly^NH-AU-NF^-DX-SQSl) 三氟 乙酸塩 （210mg) 之 Ν,Ν-二甲基 甲醯胺 （40ml) 溶液，1-乙氣基羰基-2-乙氣基-1,2 -二羥基〇f咐（1.5 g ), 在室溫下攪拌反應一夜。將反應液分批各取5ml滴至分別 各為1 0 πι 1之乙醇中。分別添加3 Μ之氮化鈉水溶液（2 · 5 in 1 ) 、二乙醚（20ml),離心（3500rpm, 8分鐘）收集析出之沉澱 。溶解該沉澱物於0 . 5 Μ之氣化鈉水溶液中，冰冷下用0 . 1 Μ 之氫氣化鈉水溶液調整為Ρ Η 9。所得水溶液用B i 〇 - M a Χ - 3膜 進行超濾去除塩。不能通過膜的殘留溶液用徹孔濾器（ 0 . 2 2 a in)過濾、凍結乾燥、而得標題所示化合物（1 . 3 g )。 此化合物之翳藥化合物殘基含量依據在0.1M Tris緩衝液（ PH9.0)中之362nm吸光度定量結果為4.6% (W/W)。審旃例38 Boc-Glv-Gly-Phe-G1y-NH-A(A-NH2=DW-8286)夕合成： 溶解 Boc-Gly-Gly-Phe-Gly(42ing)和 N-羥基琥珀醯亞 胺（12mg)於Ν,Ν -二甲基甲醯胺（2π»1)中，冷却至4t：,添加 Ν , Ν ’ -二璟己基磺化二亞胺（2 2 m g )。於此溶液中添加溶解 有下式： (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) •裝· 、1Τ 線 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） 54 3 8 9 5 3 527183 Α7 Β7 五 、發明説明（”

C

CI 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 所示化合物[(1S,9S)-1-胺基-5-氯-9-乙基-2,3-二氫-9-羥基-lH,12H-苯駢[de]吡喃基[3·,4’：6,7]_睐嗪[l,2-b ]睹啉-10,13 (9H,15H)-二鼷：DW-8286]塩酸塩（50ms;)和三 乙胺（0 · 0 1 m 1 )之Η , Η -二甲基甲醸胺溶液（6 m 1 )，在遮、光、 室溫下攪拌反應1 6小時。將反應液減壓乾燥，殘渣用矽膠 管柱層析[洗提液：含0.5涔乙酸之二氯甲烷和甲醇之混合 (10:1)溶液]精製而得標題所示化合物（27g)。 ^-HMRiCDCls)^ ： 8.10-8.20(br,lH), 7.95-8,05 (br, 1H), 7.70-7.80(br,2H)， 7.50-7.60(br,lH)， 7.40-7.50 (br,lH)， 7.10-7.25(m,5H),7.05-7.15(br,lH),5.85-5 · 95 (br , 1 H) , 5 ♦ 50-5 · 60(br,lH), 5·40-5·50(ιβ, 1H)， 5·25-5·35(πι,1Η)，5,05-5·15(ϋ»,1Η), 4·90-5·00(ϋ,1Η), 4.70-4.80(br,lH), 4.10-4.25(br,2H)， 3.60-3.90(π,4Η )，3·10-3·40U,3H) , 2·95-3·05 (br, 1H) , 2·15-2 · 30 ( br，lH), 1.75-1.90(br,2H), 1.3 9(s,9H), 0·80-1·00(ιβ, 3H) 〇 蓳豳例^ it甲萆葡聚饑班驊-Glv-fily-Phe-GlvUA，（A-NH2 = Dtf- 請 先 閲 讀 背 之 注 意 事 項 再 頁 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐） 5 5 (修正貞1 527183 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（54 ) 8 2 8 6 )夕合成·· 將實施例24所得羧甲基葡聚糖聚醇三乙胺塩（175rag) 溶解於N , N -二甲基甲醯胺（2 0 in 1 )中。於該溶液中依序添加 含有實施例 38所得 3f-H-(Boc-Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A(A-NH2 = DW-8286) (27mg)按照實施例4所示相同方法去除Boc基 而得之 3’-N-(Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A三氣乙酸塩（29mg) 和三乙胺（9/il)之Ν,Ν -二甲基甲醯胺（5ml)溶液，1-乙氧 基羰基-2-乙氣基-1,2 -二羥基時咐（175mg),在室溫下攪 拌反應一夜。將反應液分批取5ml滴至分別各為10ml之乙 醇中，再加3M之氯化鈉水溶液（2.5ml),二乙醚（20ml)， 所析離心（3500rpm, 8分鐘）收集析出之沉澱。將沉澱物溶 解於0 . 5 Μ氯化鈉水溶液中，冰冷下用0 . 1 Μ之氫氣化鈉水溶 液調整為Ρ Η 9。所得水溶液用B i 〇 - M a X - 3 0膜進行超濾去除 塩。將不能通過膜的殘留溶液用徹孔濾器（〇.22/im)過濾 、凍結乾燥而得標題所示化合物（1 3 5 m g )。化合物溶解於 0.1M之氯化鈉水溶液後用GPC(分離管：東曹TSK Gel PW-4000XL,溶劑：0.1M氣化鈉，流速：0.8ml/fflin)分析之結 果以及此化合物之紫外光吸收譜（0.1M Tris緩衝液，pH 9.0, 99wg/ml)分別示於第14圖和第15圖。此化合物之醫 藥化合物殘基含量依據在0.1M Tris緩衝液UH9.0)中之 362nm吸光度定量結果為6.1〆（W/W)。 奮偷例40 -（Boc-G1y-G1y - Phe-GW) - = - 8089)之合 成： (請先閱讀背而之注意事項本頁) 裝· 、\# 線 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X 297公釐） 56 3 8 9 5 3 527183 五、發明説明（55 ) 溶解 Boc-Gly-Gly-Phe-Gly(163mg)和 N-淫基號泊醢亞 胺（45mg)於Ν,Η-二甲基甲醢胺（lOnl)中·冷却至4t：，加 Ν’-二環己基碳化二亞胺（79mg)。於此溶液中添加溶解 有下式所示化合物[(1S,9S)_卜胺基-9-乙基-2,3-二氫-9 -羥基苯駢[de]吡喃基[3’，4·: 6,7]吲睬嗪[1,2讪 ]睹咐-10,13(9H,15H)-二嗣；DW-8089]甲苯磺酸塩（170mg )及三乙胺（0.054ml)之Η,Ν-二甲基甲釀胺（30ml)溶液，於 遮光、室溫下攪拌反應一夜。將反應液減壓乾燥、殘渣用 矽膠管柱層析法[洗提液：含0.5〆乙酸的二氯甲烷和甲醇 的混合（94:6)溶液]精製而得標題所示化合物（100mg)° (請先閱讀背面之注意事項再填{^:頁)

1H-NMR(DMSO-de) δ ： 8·51 (d,1 Η ,J = 8 . 5 Ηζ ) , 8.41(t,lH, 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 J=5.6Hz), 8.29(s,lH), 8.17(d,lH,J=8.0Hz), 8.03(d， lH，J=8.0Hz), 7.90(dd,lH,J=4.8,5.6Hz),7.79(t，lH，J= 5·6Ηζ), 7.53(d,lH,J = 7.2Hz), 7.36(s,lH), 7· 13-7.25( a,5H), 6·94-6·95(η,1Η), 5·60-5·63(ιι,1Η), 5.36-5.47 (ιη，2Η),5·21-5·30(ιη,2Η),4·42-4·47(ια，1Η),3·63-3·96(β,3Η), 3·51-3·59(ιπ,3Η)，3·31-3·40(π，1Η), 3·〇9 -3·21(··1Η)， 3.02(dd,lH,J=4.8,13.5Hz), 2·76-2·81( 5 7 (修正頁） 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210 X 297公釐） 527183 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 A7 B7 五、發明説明（56 ) 2·13_2·17(ιη,2Η), 1.85-1.90U，2H), 1.37(s, 9Η) , Ο · 89 (t , 3Η , J = 8 · ΟΗζ) 〇 Mass (FAB) ； m/e 8 2 2 (M + l) 審旅例41 筠甲基嚭聚= 8 0 8 9 )之合成： 溶解實施例24所得羧甲基葡聚糖聚醇三乙胺塩（1.6g) 於N，N -二甲基甲醯胺（6 0 m 1 )中。於此溶液中依序添加含有 實施例 40所得 3，-N-(Boc-Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A ( A-NH2 = DW-8089)(200mg)按照實施例4所示相同方法去除Boc基而 得之3’-H-(Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A之三氣乙酸塩及三乙 胺（0,07ml)之Ν,Ν-二甲基甲醯胺（20ml)溶液，1-乙氣基羰 基-2-乙氣基-1,2 -二羥基時啉（1.6g),在室溫下攪拌反應 一夜。將反應液分批各取5ml滴至分別各為10ml之乙醇中， 再分別加3M之氯化鈉水溶液（2.5ml),二乙醚（25ml),離 心（2500rpin, 8分鐘）收集析出之沉澱。將沉澱物用乙醇洗 淨，溶於水中，加3 Μ之氯化鈉水溶液（2 0 m 1 ),用0 . 1 Μ之氫 氣化鈉水溶液調整為Ρ Η 9。將該溶液用B i 〇 - M a X - 1 0膜進行 超濾去除塩。將不能通過膜的殘留溶液用徹孔濾器（0.22 /i m )過濾、凍結乾燥，而得標題所示化合物（1 . 2 0 g )。此 化合物溶解在0 . 1 Μ氯化鈉水溶液後用G P C (分離管：東曹 TSK Gel PW-4000XL,溶劑：0.1Μ氨化鈉，流速：0.8ml/ min)分析之結果以及化合物之紫外光吸收譜（0.1M Tris缓 衝液，PH9.0, 0.26mg/ml)分別示於第16圖和17圖。此化 (請先閱讀背面之注意事項 本頁) -裝.

、1T 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210Χ 297公釐） 58 3 8 9 5 3 527183 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（57 ) 合物之醫藥化合物殘基含量依據在0.1M Tris缓衝液（pH 9.0)中之362nm吸光度定量結果為5.0> (W/W)。 窗渝例42 Trt-GlY-Glv-Phe-GlvOH^ 合成： 將 Trt-Gly-Gly-Phe-Gly-0Bzl(670mg), 10>紐-磺（ lOOmg)和甲酸銨（200mg)加至二甲基甲醯胺（5ml)中攪拌3 小時。將反應液過濾，濾液經減壓乾涸，殘渣用矽膠管柱 層析法[洗提液：二氛甲烷和甲醇之混合（8 : 1 )溶液]精製 而得標題所示化合物（300mg)。 1 H-NMR (CD30D) δ ： 7. 16-7 . 45 (m , 20Η ) , 4 . 66 ( dd , 1 Η , J = 9.8,5·4Ηζ), 3.93(d,lH,J=16.6Hz), 3.80(d,lH,J= 17.6Hz), 3.78(d,lH,J=16.6Hz), 3.68(d,lH,J=17.1Hz), 3.23(dd,lH,J=14.2,5.4Hz), 2.90(d,lH,J=13.7Hz), 2 · 90 (s，1H) 〇 奮施例4 3 -Glv-Phe-Glv卜DXR煊酴塩之合成： 溶解 Trt-Gly-Gly-Phe-Gly-OH(lOOmg)和 N-經基琥珀 醯亞胺（22mg)於二甲基甲醯胺（4ml)中，冰冷下添加Ν,Ν’-二璟己基碩化二亞胺（4 0 m g ),在4 t攪拌2小時。於該溶液 中添加溶解有N -甲基嗎啉（0.019ml)和多克索魯比辛（DXR) 塩酸塩（92mg)之二甲基甲醯胺（20ml)溶液，在4t：攪拌16 小時。將反應液減壓乾燥，殘渣用矽_管柱層析法[洗提 液：二氯甲烷和甲醇之混合（2 0 : 1 )溶液]精製。所得化合 物溶解於7 5 %乙酸（1 m 1 )，攪拌1小時。加水（2 0 m 1 ),過濾 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 59 38953 (請先閱讀背vg之注意事項本頁) •裝· 、11 線 527183 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（58 ) 去除析出之固形物，將濾液凍結乾燥。所得粉狀物溶解水 (5ml)中。將溶液注入△0-1乂8((：1_型）分離管，以水洗提， 用二氨甲烷洗淨，水層經凍結乾燥而得標題所示化合物（ 4 Ο π g ) 〇 q-NMMChODU ·· 7.95(d，lH，J = 7.3Hz), 7.82(t,lH，J = 7.8Hz), 7.54(d,lH,J=8.3Hz), 7.16-7.26(m,5H), 5.43( d,lH,J=3.4Hz), 5.14(br，lH)， 4.72(s，2H), 4.42(dd, lH,J = 8.3,6.8Hz), 4.30(q,lH,J = 6,8Hz), 4·14-4·18(ιη, 1H), 4.03(d,lH,J=16.6Hz), 4.02(s,3H), 3.86(d,lH,J= 18·5Ηζ), 3.83(d,lH,J=17.1Hz), 3.75(d，lH,J=16.1Hz), 3.73(d，lH，J=16.1Hz), 3.62(br,lH), 3.58(d,lH,J=16.6 Hz), 3·10-3·15(ιη,2Η), 3.00(d,lH,J = 18.6Hz), 2·94( dd，lH，J=14.2， 8·8Ηζ), 2.38(d,lH,J=14.2Hz)， 2·18( dd,lH,J=14.2,4.4Hz), 1·94-2.00U,1H), 1.71(dd，lH, J=12.7,4.4Hz), l,28(d，3H，J=6.3Hz)〇 啻施例44 筠甲基蕕聚糖聚醇- Glv-Glv-Phe-Gly-DXR之合成： 將實施例24所得羧甲基葡聚糖聚醇鈉塩（1.5g)按照實 施例25中所示相同方法轉變為三甲胺塩（1.2g)。取其400 fflg溶於Ν,Ν -二甲基甲醯胺（24ml)中。於此溶液中依序添加 含有 3f-N-(Gly_Gly-Phe-Gly)-DXR塩酸塩（76mg)之 Ν,Ν-二 甲基甲醯胺（24ml)溶液，三乙胺（24μ1), 1-乙氣基羰基-2 -乙氧基-1,2-二羥基時啉（400mg),在室溫下搜拌反應一 夜。將反應液分批各取5 ml滴至分別各為10 ml之乙醇中， (請先閲讀背面之注意事項 本頁) •裝· 訂 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X297公釐） 60 3 8 9 5 3 527183 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（59 ) 再分別添加3M之氯化鈉水溶液（2.5ml),二乙醚（20ib1), 離心（3500 rpm, 8分鐘）收集析出之沈澱。將沈澱物溶解 於0 · 5 Μ氛化鈉水溶液中，以B i 〇 - M a X - 3 0膜超濾法去除塩、 不能通過膜的殘留溶液用徹孔濾器（0.22μιη)過濾，凍結乾 燥而得標題所示化合物（4 0 m g )。此化合物溶解於0 . 1 Μ氣化 鈉水溶液後使用GPC(分離管：東曹TSK Gel PW-4000XL, 溶劑：0.1M氣化鈉，流速：0.8ml/inin)分析之結果以及化 合物之紫外光吸收譜（0.01M Tris緩衝液，pH 7.4, 35Mg/ nil)分別示於第18圖和第19圖。此化合物之翳藥化合物殘 基含量依據在PBS(pH 7.4)中之480nra吸光度定量結果為 6 · 0 % ( W / W ) 〇 奮旃例45 羧甲基韶聚耱聚醇三乙胺塩之合成： 溶解葡聚糖T150(20g, Pharmacia公司製品，平均分 子量為150K)於（K1M乙酸缓衝液（pH 5.5, 2000ml)中，添 加含過碘酸鈉（6 6.0g)之水溶液（2000ml),於遮光，41C下 攪拌10日，加乙二醇（14.0ml),再攪拌一夜。將反應液在 冰冷下用8 Μ之氫氣化鈉水溶液調整為p Η 7 . 5。加硼氫化鈉 (2 8 g )並加以溶解，於室溫攪拌一夜。將反應液冰冷後用 乙酸調整為pH 5.5,在41C攪拌1小時。冰冷下用8M之氫 氯化鈉水溶液調整為P Η 7 . 5。所得水溶液以B i 〇 - M a X - 5膜（ M i 1 1 i p o r e公司製品）超濾法濃縮至5 0 0 m ]而得溶液（1 )。另 外，使用葡聚糖T 1 1 0 ( 2 0 g )按照上述相同一連串操作而得 溶液（2)。混合溶液（1)和（2),調整為pH 3·0,在4〇υ保 6 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐） 3 8 9 5 3 (請先閲讀背面之注意事項再本買) -裝_ 、1Τ 線 527183 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

五、發明説明（60 ) 溫4小時，調整為p Η 7而得到含有低分子化處理的蕕聚糖 聚醇溶液。使之通過Bio-Max-30膜，繼之用Bio-Max-5膜 去除塩，凍結乾燥而得《聚糖聚醇（4.6g)。該物質之分子 量（膠濾法，以支鏈澱粉為標準）為17K。 將該《聚糖聚醇（2 . 5 g )加至溶解有氫氣化鈉（1 7 . 5 g ) 的水（7 5 m 1 )溶液中，在室溫下使之溶解。於該溶液中，在 冰冷下添加一氣乙酸（2 5 g ),溶解後在室溫下反應2 0小時。 將反應液用乙酸調整為pH 9,以Bio-Max-5膜超濾法去除 塩。將不能通過膜的殘留溶液凍結乾燥而得羧甲基葡聚糖 聚醇鈉塩（4. 0g)。該物質之分子量（膠濾法，以支鏈澱粉 為標準）為45K。其羧甲基化程度為0.9 溶解該羧甲基葡聚糖聚醇鈉塩（3.7g)於水中，用Bio -Rad AG 50W-X2(200〜400篩目，H +型）處理，以水洗提。 於洗提液中加三乙胺（5 . 8 m 1 ),凍結乾燥而得標題所示化 合物（4 · 4 g )。 奮渝例46 锪甲某品聚 ^gg_-Glv-Glv-GlV-Phe-NH-A’（A-NH2=DX-8 9 5 1 )之合成： 一 溶解實施例45所得羧甲基葡聚糖聚醇三乙胺塩（4. 4g) 於Ν,Ν -二甲基甲醯胺（300ml)中。於該溶液中依序添加含 有三乙胺（0.19ml)和 3’-N-(Gly-Gly-Gly-Phe)-NH-A(A_ NH2 = DX-8951)三氣乙酸塩（580mg)之Ν,Ν-二甲基甲醯胺（ 45ml)溶液，1-乙氣基羰基-2 -乙氣基-1,2 -二羥基睹咐（ 4. 4g)。於遮光下室溫中攪拌反應一夜。於反應液中加1H (請先閲讀背面之注意事項再本頁) '裝_ 訂 線 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 6 2 3 8 9 5 3 527183 A7 B7 五、發明説明（6 1 ) 之氫氣化鈉水溶液調整為pH 10,分枇各取5ral滴至各為 25ml之乙醇中，再加3M之氯化納水溶液（linl),二乙醚（ 5ml),離心（3500 「pm, 8分鐘）收集析出之沈澱。將沈澱 物溶於水中，用透析膜（Spectrapore I,去除分子量界限 為6000-8000)對水進行透析。透析内液用撤孔濾器（0.2 2 Mm)過濾、凍結乾燥而得標題所示化合物（3. 4g)。此化合 物之醫藥化合物殘基含量依據在0.1H Tris緩衝液（PH9.0) 中之3 62rini吸光度定量結果為4.6% (W/W)。 奮旆例47 rr -甲某羧甲某菇聚耱聚醇-GlY-Gly-GlY-Phe-NH - A’（A -NH2 = DX-89 5 1)之合成： 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 將實施例4 5所得葡聚糖聚醇（2 g )加至溶解有氫氧化鈉 (14g)之水（60ml)溶液中，並在室溫下使之溶解。於該溶 液中，在冰冷下添加α -溴丙酸（1 9 in 1 )並加以溶解，在室 溫下反應1 8小時。將反應液用乙酸調整為p Η 8 ,以B i 〇 -Max -5 0膜超濾法去除塩。不能通過膜的殘留溶液經凍結乾 燥而得α-甲基羧甲基葡聚糖聚醇納塩（2. 95g)。該物質之 分子量（膠濾法，以支鐽澱粉為標準）為45K。以糖殘基計 算之α -甲基羧甲基化程度乃參考羧甲基葡聚糖聚醇依據 下述方法求得。先將ex -甲基羧甲基葡聚糖聚醇鈉塩水溶 液用8丨〇〜1?3(1&0 5(^42([1 +型）分離管處理，將通過分離 管之溶液凍結乾燥後作為試料用途。將試料使用所定過量 之0 . 1 Ν氫氯化鈉水溶液溶解，以酚酞為指示劑，以〇 . 1 Ν 塩酸滴定之。試料用量為5 m g , 0 . 1 Ν氫氯化鈉水溶液之所 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 63 3 8 9 5 3 527183 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（62 ) 定量為ami, 0.1N塩酸之滴定量為b ml時，依據下式可求 得〇(-甲基羧甲基化程度； 13.4(a-b)/[s-7.2(a-b)] 其結果，ex -甲基羧甲基化程度為0.8。 溶解該α -甲基羧甲基葡聚糖聚醇銷塩（2. 2g)於水中， 用 Bio-Rad AG 50W-X2(200-400篩目，H+型）分離管（直徑 為44rom,長度為210mm)處理，以水洗提之。於該洗提液中 加三乙胺（4inl),凍結乾燥而得a -甲基羧甲基葡聚糖聚醇 三乙胺塩（2.69g)。 溶解該α -甲基羧甲基葡聚糖聚醇三乙胺塩（2.68g)於 Ν,Ν -二甲基甲醯胺（60ml)中，於該溶液中依序添加溶有實 施例2所示相同方法合成而得之3f-N-(Boc-Gly-Gly-Gly -Phe)NH-A(A-NH2 = DX-8951) (350mg)再經實施例 16所示相 同方法去除Boc基而得之3’-N(Gly-Gly-Gly-Phe)-NH-A三 氟乙酸塩及三乙胺（〇.116ml)之H,N-二甲基甲醯胺（10ml) 溶液、1-乙氣基羰基-2-乙氣基-1,2 -二羥基Df啉（2.68g) 溶解在H , N -二甲基甲醯胺（1 0 π» 1 )而成之溶液，在室溫下攪 拌反應一夜。於該反~應液中加3 Μ之氣化鈉水溶液（4 0 m 1 ), 再將該溶液分枇各取6ml滴至各為30ml之乙醇中，再分別 添加3 Μ之氯化鈉水溶液（1 m 1 )、二乙醚（5 m 1 )、離心（3 5 0 0 rpm， 8分鐘）收集析出之沈澱。將沈澱物用丙酮洗淨，溶 解於水，加3M之氛化鈉水溶液（10ml),用0.1M之氫氣化鈉 水溶液調整為pH 9，在37¾處理1小時。該處理液Bio-Max - 1 0 膜 超濾法 去除塩 。不能 通過膜 之殘留 溶液用 徹孔濾

(請先閲讀背面之注意事項再本J -裝_ 、ar 線 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X 297公釐） 64 3 8 9 5 3 527183 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（63 ) 器（0.22μιη)過濾，凍結乾燥而得標題所示化合物（2.15g) 。此化合物溶解在0.1M氯化鈉水溶液後用GPC (分離管：東 曹 TSK Gel PW-4000XL,溶劑：0.1M 氣化鈉，流速：0.8 ml/inin)分析之結果以及此化合物之紫外光吸收譜（0.1H T r i s缓衝液，p Η 9 . 0 , 0 . 2 1 m g / m 1 )分別示於第2 0圖和第 21圖。此化合物之醫藥化合物殘基含量依據在0.1M Tris 緩衝液（pH 9·0)中之362nm吸光度定量結果為5.9% (W/W) Ο 奮_例48 3’-N-(GW-Phe-Glv) -KH - A(A-NH2 = DX-895n 三氩乙酴塩之 合成： 將 Phe-Gly-OBzl對-甲苯磺酸塩（3.06g), Boc-Gly-OH(l.lOg), N -羥基琥珀醯亞胺（941mg), N-甲基嗎咐（ 0.725ml), Ν,Ν-二甲基甲醯胺（40ml)之混合物冷却至41C, 然後添加Ν,Ν’-二環己基磺化二亞胺（1.56g)。於室溫攪拌 反應一夜，得反應液減壓乾洇，殘渣用矽_管柱層析法[ 洗提液：二氯甲烷和甲醇之混合（9 δ : 2 )溶液]精製，而得 Boc-Gly-Phe-Gly-〇Bzl (1.93g) 〇 iH-NMR(DMS0-d6)5 ·· 8.52(dd,lH,J = 5.6,6.4Hz), 7.97(d,lH,J=8.8Hz), 7.3〇-7.39(ra,5H), 7.15-7.26( ra,5H), 6.8 3 (t,lH,J = 5.6Hz), 5.14(s,lH), 4.52-4.57( m,lH), 3.87-3.96(m,2H), 3,57(dd,lH,J=5.6, 16.7Hz), 3 .43(dd, 1H，J = 5.6, 16·7Ηζ), 3.01(dd,lH,J = 4.8, 14.3Hz) ,2.77(dd,lH,J=5.6,14.3Hz), 1.37(s,9H)〇 (請先閲讀背面之注意事項再本頁) 裝· 訂 線 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 6 5 3 8 9 5 3 527183 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（64 ) 溶解所得 Boc-Gly_Phe_Gly-0BZl(1.78g)於乙酸乙酯( 6 0 m 1 )中，在5 %之耙-碩（1 · 8 g )共存下，催化還原2 4小時 。濾除催化劑，濾液經減壓濃縮而得Boc-Gly-Phe-Gly_OH (1 . 4 1 g ) 〇 1 H-HMR (DMSO-de) δ ： 8.35(t,lH,J = 5.6Hz), 7 . 94 (d , 1 Η , J = 8.8Hz), 7.15-7.26(ιη,5Η), 6.85(dd,lH,J = 5.6,6.4Hz) ,4.52-4.58(m,lH), 3.76(d,2H,J=5.6Hz), 3.56(dd,lH, J=6.4,16.7Hz), 3.43(dd,lH,J=5.6,16.7Hz),3.03(dd, 1H,J = 5,0, 13.5Hz), 2.79(dd,lH,J = 9.5，13.5Hz), 1.37( s , 9H) 〇 溶解上述所得Boc-Gly-Phe-Gly-0H(500mg)及N -羥基 琥珀醯亞胺（161mg)於H,N-二甲基甲醯胺（l〇ml)中。於溶 液中添加溶解有DX-8951甲磺酸塩（530mg)及三乙胺（ 0.146ml)之Ν,Ν-二甲基甲醯胺（50ral)溶液，冷却至4它， 加Ν,Ν’-二環己基碩化二亞胺（268mg),在遮光及室溫下攪 拌反應一夜。將反應液減壓乾燥，殘渣用矽膠管柱層析法 [洗提液：二氣甲烷和甲醇之混合（9 6 : 4 )溶液]精製而得 3’_N_(Boc-Gly-Phe:Gly)-HH-A(A-NH2 = DX-8951) (100mg) 〇 ' 1 H-HMR (DMSO-de) δ ： 8.39 (d, 1 Η , J = 8 . 0 Ηζ ) , 8 . 34 (t , 1Η , J=5.6Hz), 7.98(d,lH,J=7.2Hz), 7.78(d,lH,J=10.3Hz), 7.33(s,lH), 7.13-7.24(m,5H), 6.80(dd,lH,J=5.6,6.4 Hz), 5.55-5.61(m,lH), 5.44(d,lH,J=16.0Hz), 5.41( d,lH,J=16.0Hz), 5.25(s,2H), 4.43-4.46(ra,lH), 3.69- (請先閱讀背面之注意事項再本頁) -裝- 訂 線 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X297公釐） 66 3 8 9 5 3 527183 A7 B7 五、發明説明（6 5 ) 3.79(in,2H), 3.50(dd,lH,J = 5.6,16.7Hz), 3.41(dd,lH, J = 5.6,16.7Hz), 3.16-3.19(ni,2H), 2.98(dd,lH,J = 4.8, 14.3Hz), 2.79(dd,lH,J=9.5,14.3Hz), 2.41(s,3H), 2.19-2.25 (in, 1H), 2.10-2. 15U,1H), 1,82-1. 90(m,2H), 1 . 35 (s，9H) , 0 · 88 (t , 3H , J = 8 · 0Hz)。

Mass(FAB); in/e 797(M + 1) 將所得 3，-N-(Boc-Gly-Phe-Gly)-NH-A(A-NH2=DX-8951)(100mg)溶於三氣乙酸（3ml)中，放置1小時。蒸餾 去除溶劑，用甲醇（30ml)共沸處理2次，再用乙醇（30ml) 共沸處理2次，殘渣用乙醚洗淨，而得標題所示化合物（ 8 0 m g ) 〇 ^-NMR (DMSO-de) δ ： 8 · 52-8 · 62 (m , 1 Η ) , 7 . 94 (s , 3Η), 7.79(t,lH,J = ll.lHz), 7.34(s,lH,), 7.15-7.27(ιβ,5Η), 6.52(s,1H), 5·57-5·61(ιη,1Η), 5·36-5·46(ιο,2Η), 5.24(s,2H), 4·66 - 4·70(ιη，1Η)，3·69-3·81(ιη，2Η), 3.61-3.68(m,lH), 3.40-3.47(m,lH)，3.15-3. 23(ra,lH), 3.01(dd,lH,J = 4.0,13.5Hz), 2.77(dd,lH,J = 9.5,13.5Hz) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 ,2·12-2·23(ιη，2Η), 1.8 1-1.91(m,2H), 0.89(t,3H,J = 7 . 2Hz) 〇 M a s s ( F A B ) ； m / e ( M + 1 ) 奮旅例49 3T_卜（Phe_Gly)HA(A-NH2 = DX-8951)三氩乙酚塩之合成 溶解Boc-Phe-Gly(771mg)及N-羥基琥珀醯亞胺（300rag 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 3 8 9 5 3 67 527183 經濟部中央標準局員工消費合作社印繁 A7 B7 五、發明説明（66 ) )於N , N -二甲基甲醯胺（1 0 in 1 )中。於該溶液中添加溶解有 DX-8951甲磺酸塩（1058mg)及三乙胺（0.293ml)之Ν,Ν -二甲 基甲醯胺（50ιπ1)溶液，冷却至4C，加N,Nf -二環己基碩化 二亞胺（494mg),於遮光室溫下S拌反應一夜。將反應液 減壓乾燥，殘渣用矽膠管柱層析法[洗提液：二氯甲烷和 甲醇之混合（9 8 ·· 2 )溶液]精製而得3’1-(8〇(^[^6刊17卜 HH-A(A-HH2 = DX-89 5 1) (1.20g)〇 1H-NMR(DMS0-d6)5 ： 8.29(d,lH,J=8.0Hz), 8.21(t,lH, J=4.8Hz), 7.76(d,lH,J=10.3Hz), 7.32(s,lH), 7.13- 7.25(in,5H), 6.92(d,lH,J = 7.2Hz), 6.49(s,lH), 5.56- 5.61(m,lH), 5.44(d,lH,J=15.9Hz), 5.38(d,lH,J=15.9 Hz), 5.25(s,2H), 4.08-4.12U,lH), 3.78(d,lH,J = 4.8 Hz), 3.16-3.25(m,2H), 2^99(dd,lH,J=4-0, 13.5Hz), 2.72(dd,lH,J=10.3,13.5Hz), 2.40(s,3H), 2.09-2.35( m,2H), 1.80-1.91(m,2H), 1.16(s,9H), 0.88(t,3H, J = 8 . 0Hz) 〇 Mass (FAB) ； m/e 741 (M + l) 溶解上述所得 3，-N-(Boc-Phe-Gly)-NH-A(170mg)於三 氟乙酸（4ml)中，放置1小時。蒸餾去除溶劑，用甲醇（10 ml)共沸處理2次，用乙醇（10ml)共沸處理2次，殘渣用 乙醚洗淨，而得標題所示化合物（lOOmg)。 UMR(DMS0-d6)0' ·· 8.88(t,lH,J = 4.8Hz), 8.68(d,lH, J=8.7Hz), 8.05-8.15(m,3H), 7.79(d,lH,J=ll.lHz), 7.26-7.36(m,5H), 6.52(d,lH,J=7.2Hz), 5.57-5.62(m, (請先閱讀背面之注意事項 π本頁) •裝· 、訂 線 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4現格（210Χ 297公釐） 68 3 8 9 5 3 527183 A7 B7 五、發明説明（67 ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 1H), 5.43(d,lH,J=15.9Hz), 5.38(d,lH,J=15.9Hz), 5.19-5.28(id,1H), 4.1〇-4.18(m,lH), 3.93(dd,lH,J = 4.8 ,16.7Hz), 3.82(dd,lH,J = 4.8,16.7Hz), 3.17-3·24(πι, 2H), 3.14(dd，lH,J = 4.8, 13.5Hz), 2.95(dd，lH,J=8.0， 13.5Hz), 2.42(s,3H), 2.14-2.25(m,2H), 1.83-1.91( m，2H), 0.89(t,3H,J=8.0Hz)〇 Mass (FAB) ; m/e 6 40 (M + l) 啻施例50 3’-N-G1y-HH-A(A-HH2 = DX-8951)三氩 Z 酚煊之合成： 溶解DX-8951之甲磺酸塩（530mg)及三乙胺（0.28ml)於 N，N -二甲基甲醯胺（10ml)中，冷却至4t：,添加Boc-Gly之 N-羥基琥珀醯亞胺酯（327mg)。於遮光室溫下攪拌反應一 夜。將反應液減壓乾燥，殘渣用矽膠管柱層析法[洗提液： 二氛甲烷和甲醇之混合（9 8 : 2 )溶液]精製而得3 ’ - N - ( B 〇 c -Gly) -NH-AU-NH2 = DX-8951) (500mg)〇 ^-NHRiDMSO-de)^ ： 8.38(d,lH,J=8.3Hz), 7.77(d,lH, J=10.7Hz), 7.31(s,lH), 6.89-6.91(ro,lH), 6.49(s,lH) ,5.55-5.59(m,lH), 5.45(d,lH,J=16.1Hz), 5.38(d,lH, J=16.1Hz), 5.27(d,lH,J=19.0Hz), 5.18(d,lH,J=19.0Hz ),3.50-3.62(m,2H), 3.15-3.19(m,2H), 2.41(s,3H), 2.18-2.24U，1H), 2.08-2.12(m,lH), 1 . 81 - 1 . 91 (m, 2H), 1.31(s,9H), 0.87(t,3H,J=8.0Hz)。 Mass (FAB) ； in / e 5 9 3 (M + l ) 溶解上述所得3 ’ - N - ( B o c - G 1 y ) - N H - A ( 1 0 0 m g )於三氟乙 請 先 閱 背 面 之 注 意 事 I» 寫 本 頁

I 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X 297公釐） 69 3 8 9 5 3 527183 A7 B7 五、發明説明（6δ ) 酸（2 in 1)中，放置1小時。蒸餾去除溶劑，用甲醇（1 〇 m 1 ) 共沸處理2次，再用乙醇（lOnil)共沸處理2次。殘渣用乙 醚洗淨，而得標題所示化合物（7 0 m g )。 ^-NMR (DMSO-de) δ ： 8.88 (d, 1Η , J = 8 . 8Hz) , 8.08(s,3H), 7.81(d,lH,J=11.2Hz), 7.34(s,lH), 6.52(s,lH), 5.63- 5.67(m,lH), 5.45(d,lH,J=16.7Hz), 5.40(d,lH,J=16.7

Hz), 5.36(d,lH,J=19.1Hz), 5.25(d，lH,J=19.1Hz), 3.56(s,2H), 3.11-3. 19(m,2H), 2.43(s，3H), 2.23-2.28 2.11-2·19(ιη,1Η), 1.81-1.91(in,2H), 0.88(t, 3H,J=8.0Hz)〇 奮施例5 1 锪甲基gj聚耱聚醇三甲胺塩夕合成： 溶解葡聚糖T500(50g, Pharmacia公司製品，分子量 為500K)於0.1M之乙酸缓衝液（pH 5.5, 5000ml)中，添加 含有過碘酸鈉（165.0g)之溶液（5000ml)。於遮光41下攪 拌10日加乙二醇（35.0ml)並攪拌一夜。反應液用8Μ之氫氣 化鈉水溶液調整為P Η 7。加硼氫化鈉（7 0 g ),待溶解後攪 拌一夜。反應液冰冷係用乙酸調整為pH 5.5,在4t：攪拌 1小時，再用8 Μ之氫氣化鈉水溶液調整為ρ Η 7 . 5。所得水 溶液以Bio-Max-50膜超濾法去除塩。將不能通過膜的殘留 溶液凍結乾燥而得葡聚糖聚醇（2 0 . 2 g )。該物質之分子量（ 膠濾法，以支鐽澱粉為標準）為159K。 將該嚭聚糖聚醇（7.5g)加至溶解有氫氣化鈉（31.5g) 的水（2 2 5 in 1 )溶液中，在室溫下溶解之。於該溶液中，在 請 先 閱 讀 背 面 % 事 項一 寫 本 頁 經濟部中央標準局員工消費合作社印裂 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 70 3 8 9 5 3 527183 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（69 ) 冰冷下添加一氯乙酸（45g)，使之溶解，在室溫下反應一 夜。將反應液用乙酸調整為pH 8,以Bio-Max-50膜超濾法 去除塩。不能通過膜的殘留溶液經凍結乾燥而得羧甲基# 聚糖鈉塩（8. 5g)。該物質之分子量（膠濾法，以支鐽澱粉 為標準）為274K。其羧甲基化程度為0.4。溶解該羧甲基葡 聚糖聚醇鈉塩（2.0g)於水中，用Bio-Rad AG 50W-X2(200 〜400篩目，H +型）分離管（直徑為44mm,長度為210mm)處 理，以水洗提之。於洗提液中加三乙胺（4ml),凍結乾燥 而得標題所示化合物（2 . 2 g )。 奮旅例52 锪甲某 gj 聚耱聚醇- Gly-Phe-Gly-NH-A(A-NH2 = DX-8951) 之合成： 將實施例51所得羧甲基葡聚糖聚醇三乙胺塩（200rog) 溶解於N , N -二甲基甲醯胺（7 m 1 )中。於該溶液中依序添加 實施例 48所得 3’-N-(Gly-Phe-Gly)-NH-A’ （A-NH2=DX-8951)三氟乙酸塩（41mg)之Ν,Ν-二甲基甲醯胺（5rol)溶液， 三乙胺（0.014ml), 1-乙氣基羰基-2-乙氣基-1,2-二羥基 呤啉（100mg),在室溫下攪拌反應一夜。將反應液分枇各 取5ml滴至分別各為10ml之乙醇中，再分別加3M之氯化鈉 水溶液（2.0ml),二乙醚（25ml),離心（3500 rpm, 8分鐘 )收集析出之沈澱。將沈澱物溶解於0 . 5 Μ之氯化鈉水溶液 中，冰冷下用0 . 1 Μ之氫氣化鈉水溶液調整為ρ Η 9。所得水 溶液以B i 〇 - M a X - 5 0膜超濾法去除塩。不能通過膜的殘留溶 液用微孔濾器（0 . 2 2 μ m )過濾，經凍結乾燥而得標題所示化 71 (請先閱讀背面之注意事項寫本頁)

、1T 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） 3 8 9 5 3 527183 A7 B7 五、發明説明（7 0 ) 合物（190mg)。此化合物之醫藥化合物殘基含量依據在0.1 料1>丨5緩衝液&[19,0)中之362^吸光度定量結果為4.5% (W/W)〇 奮旅例53 W 甲某品聚糖聚醇-Phe-Glv - NH-A’（A_NHp，DX-8951)；^^ 成： 溶解實施例24所得羧甲基葡聚糖聚醇鈉塩（2. 5g)於水 中，用 Bio-Rad AG 50W-X2(200-400篩目，EtsNH♦型）分離 管處理，以水洗提之。將洗提液凍結乾燥而得羧甲基葡聚 糖聚醇三乙胺塩（2· 5g)。 將該羧甲基葡聚糖聚醇三乙胺塩（200mg)溶解於H,N-二甲基甲醯胺（12ml)中。於該溶液中依序添加含有實施例 49所得 3’-N-(Phe-Gly)-NH-A’ （A-NH2=DX-8951)三氟乙酸 塩（42mg)及三乙胺（0·016ιβ1)之Ν,Ν-二甲基甲醯胺（5ml)溶 液，1-乙氧基羰基-2-乙氣基-1,2-二羥基〇|啉（200mg)， 於遮光室溫下攪拌反應一夜。於反應液中加水（3 0 0 m 1 )。 的 膜 過 通 bb 不 ο 0 超 一了 進 品 司 公 隆 特 費 /(\ K ο 11 膜 濾 超 用 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 液 溶(0 留 膜 殘濾 用

6 1X PH以 為液 整濾 0 〇 液丨 溶 水 鈉 化 氣 氫 品 製 司 公 隆 特 費 物 合1M , 化 ο 塩示在 除所據 去題依 法標量 濾得含 器 濾 孔 徹 用 之 繼 濾 過 6 為 BK· 結 量 過 通 之 使 X a 超 膜 g f g 厶口 基 殘 物 合 化2n 藥36 醫之 之中 物0) 合 9 化 Η 此(Ρ 〇 液 g)衝 om緩 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X 297公釐） 72 3 8 9 5 3 527183 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（71 ) 羧甲某嚭聚耱聚醇~^1”0 4’（六-〇2 =[)父-8951)夕合成： 溶解實施例51所得羧甲基葡聚糖聚醇三乙胺塩（370mg )於Ν,Ν -二甲基甲醯胺（10ml)中。於該溶液中依序添加含 有實施例50所得3’-N-Gly-NH-A(A-NH2 = DX-8951)三氟乙酸 塩（57mg)之Ν,Ν -二甲基甲醯胺（3ml)溶液，三乙胺（0.027 ml), 1-乙氣基羰基-2-乙氣基-1,2 -二羥基啉（185mg), 在室溫下攪拌反應一夜。將反應液分批各取5 πι 1分別滴至 各為lOrol之乙醇中，再添加3M之氣化鈉水溶液（2.0ml), 二乙醚（25ral),離心（3500 rpm, 8分鐘）收集析出之沈澱 。將沈澱物溶於0 . 5 Μ之氯化鈉水溶液中，冰冷下用0 . 1 Μ之 氫氣化鈉水溶液調整為pH 9。所得水溶液以Bio-Max-50膜 超濾法去除塩。將不能通過膜的殘留溶液用撤孔濾器（ 0.22μιη)過濾，凍結乾燥而得標題所示化合物（290mg)。此 化合物之醫藥化合物殘基含量依據在0.1M Tris缓衝液（ pH 9.0)中之362ηιπ吸光度定量結果為0.5% (W/W)。 窨旃例55 筠甲基g聚糖聚醇-GlY-Gly-Phe - Glv - [)Γ) 1 - 7059之合成： 溶解 Boc-Gly-Gly-Phe-Gly-0H(200mg)於三氟乙酸（ 4ml)中，攪拌1.5小時。蒸餾去除溶劑，用甲醇（10ml)共 沸處理2次，再用乙醇（ΙΟπιΙ)共沸處理2次，殘渣用乙醚洗 淨而得Gly-Gly-Phe-Gly-ΟΗ之三氟乙酸塩（225mg)。 lH~NMR(DMS0-d6)5 ： 8.48(dd,lH,J=5.6,5.6Hz), 8.59( dd,lH,J=5.6,6-4Hz), 8.29(d,lH,J=4.8Hz), 7.23-7.26( m,4H), 7. 16-7.20( in, 1H), 4.58(ddd,lH,J = 4.8,4.8, 73 (請先閲讀背面之注意事項^^寫本頁) 裝·

、1T 線 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐） 3 8 9 5 3 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 527183 A7 B7 五、發明説明（72 ) 10·4Ηζ)，3.89(dd,lH，J = 5.6,16.7Hz), 3.76 - 3.79U，2H) ,3.67(dd,lH,J=5.6,16.7Hz)， 3.56(s,2H)〇 溶解上述所得Gly-Gly-Phe-Gly-OH之三氟化酸塩（200 mg)於水（ΙΟιπΙ)中，加三乙胺調整為PH9.0,添加含有9-驿 基甲基-N-羥基琥珀醯亞胺基碩酸塩（200nig)的乙腈（5ml) 溶液，繼之以三乙胺維持PH8.0-8, 5,在室溫中攪拌4小時 。於反應液中加1.5N之塩酸（50ml),過濾收集析出之沈澱 。用水洗淨，以矽膠管柱層析法[洗提液；二氯甲烷和甲 醇之混合（4 : 1 )溶劑]精製而得F m 〇 c - G 1 y - G 1 y - P h e - G 1 y - 0 Η ( 1 5 1 m g ) 〇 1 H-NMR (DHSO-de) δ ： 8 . 2 8 - 8 . 3 2 ( m , 1 H ) , 8 . 0 8 - 8 . 1 2 (in , 1H), 7·85-7·89(ιη,2Η), 7·68-7·72(ιη，2Η), 7·57-7·65( m,lH), 7.38-7.43(m,2H), 7.29-7.34(m,2H), 7.20-7.25 (m,4H), 7.14-7.17(in,lH), 4.45-4.52(m,lH), 4.26- 4.30(m,2H), 4.19-4.24(m,lH), 3.77(dd,lH,J=5.6,16.7

Hz), 3.58-3.69(m，4H), 3·42-3·52(πι,1Η), 3.06(dd，lH, J = 4. 0 , 13 . 5Hz) , 2.78(dd,lH,J = 4.0,13.5Hz)〇 將上述所得 Fmoc-Gly-Gly-Phe-Gly-0H(24mg)與下式 所示紫杉酚衍生物（D51-7059: 9, 10-0-(2-胺基亞乙基）- 13-0-[3-(第三丁氣基羰基胺基）-2-羥基-3-苯基]-丙醯基 -10-去乙醯基-9-二氫巴卡丁 III)(200rog), 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X 297公釐） 3 8 9 5 3 (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) 訂 527183 A7 B7

(請先閲讀背Vg之注意事項寫本頁 及N -羥基琥珀醯亞胺（7mg)溶解於Η, N-二甲基甲醯胺（lml) 中。冷却至4它，加Ν,Ν’-二環己基碩化二亞胺（9ng),在 室溫下攪拌反應一夜。將反應液減壓乾燥，殘渣用矽_管 柱層析法[洗提液：二氣甲烷和甲醇混合（9 6 : 4 )溶液]精製 ，而得 Fmoc-Gly-Gly-Phe-Gly-D51-7059(21mg)。 ^-NMRiCDCls)^： 8.06(d,2H,J=8.1Hz), 7.75(d,2H,J= 8.1Hz), 7.18~7.61(m,23H), 7.62(dd,lH,J=7.2,8.0Hz), 6.07(dd,lH,J=7.9,8.8Hz), 5.98(d,lH,J=4.8Hz), 5.63( d,lH,J = 8.8Hz), 5.00-5·40(ιη,4Η), 4.92(s,lH), 4.60- 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 4.69(ro,2H), 4.41(d,2H,J=6.4Hz), 4.35(d,lH,J=8.0Hz) ,4 . 29 (d , 1H , J = 8 . 0Hz) , 4.21(t,lH,J = 7.5Hz), 3.96- 4.07(m,3H)，3·73-3·86(ιπ,4Η), 3·37-3·41(ιη,1Η)，3·19 -3.23(m,lH), 3.00(dd,lH,J=8.0,13.5Hz), 2.85-2.89( m,3H), 2.29(s,3H), 2.05-2.40(m,4H), 1.57(s,3H), 1.56(s,3H), 1.53(s,3H), 1.40(s,9H), l,22(s,3、H)。

Mass (FAB) ; m/e 1413 (M + Na) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X297公釐） 7 5 3 8 9 5 3 527183 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（74 ) 溶解上述所得 Fmoc-Gly-Gly-Phe-Gly-D51-7059(21mg )於二氯甲烷（1.8ml)中，加哌B秦（〇.2ml),在室溫下反應 1小時。將反應液以矽膠管柱層析法[洗提液：二氣甲烷和 甲醇之混合（94:6)溶液]精製，而得Gly-Gly-Phe-Gly-D51 - 7 0 5 9 ( 1 6 mg) 〇 1 Η - Ν Μ R ( C D C 1 3 ) δ : 8 · 1 0 ( d , 2 Η , J = 8 · 1 Η ζ ) , 7 · 8 9 - 7 · 9 4 ( m , 1Η), 7.62(dd,lH,J=7^2,8.0Hz), 7.45-7.50(m,2H), 7·17-7·42(ιη,12Η), 7·10-7·16(ιη，1Η), 6.97(dd,lH, J=5.6,6.4Hz), 6.08(dd,lH,J=8.0,8.7Hz), 6.02(d,lH, J=4.8Hz), 5.62(d,lH,J=ll.lHz), 5.23-5.30(m,lH), 5.23(d,lH,J=7.2Hz), 5.10(s,lH), 4.98-5.00(m,lH), 4.60-4.63(m，1H), 4.38(d,lH，J = 8.8Hz), 4.33(d，lH,J = 8.8Hz), 4.13(s,lH), 4.04(dd,lH,J=5.6,16.7Hz), 3.93(dd，lH,J=5.6,16.7Hz), 3.82(d,lH,J=7.2Hz), 3·73-3·82(ιπ,2Η), 3·43-3·49(ιη,1Η), 3.30-3.38(ro,2H), 3.24(dd,lH,J=6.4,14*3Hz), 3.04(dd,lH,J=8.0,14.3Hz) ,2.89-3.07(ni,3H), 2.30(s,3H), 2.01-2.50(m,4H), 1.70(s,3H), 1.62(s,3H), 1.61(s,3H), 1.40(s,9H), 1 ·26 (s , 3H) 〇 Mass (FAB) ； m/e 1 169 (MM ) 將上述所合成之 Gly-Gly-Phe-Gly-D51-7059(33mg)溶 解於N，N -二甲基甲醯胺（0 . 5 m 1 )中。於溶液中依序添加含 有實施例24所得羧甲基葡聚糖聚醇三乙胺塩（180ing)之Ν,Ν -二甲基甲醯胺溶液（7ml), 1-乙氣基羰基-2-乙氣基-1,2- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 7 6 3 8 9 5 3 (請先閱讀背面之注意事項3寫本頁) -裝·

、1T 線 527183 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（75 ) 二羥基咐（180mg),在室溫下攪拌反應一夜。將反應液 分批各取4 m 1滴至分別各為1 0 m 1之乙醇中，再分別加3 Μ之 氣化鈉水溶液（2·0πι1),二乙醚（25ml),離心（2500rpm, 8分鐘）收集析出之沈澱。將沈澱物用乙醇洗淨，溶解水中 ，用 Bio-Rad AG 501X2(200-400 篩眼，+型）分離管（直 徑為15mm,長度為85mm)處理，以水洗提而得洗提液（1)。 另外，溶解 Gly-Gly-Phe-Gly-D51-7059(10mg)於 Ν,Η -二甲 基甲醯胺（0.5ml)中，依序添加含有實施例24所得羧甲基 葡聚糖聚醇三乙胺塩（60rag)之Ν,Η-二甲基甲醯胺（5ml)溶 液，含1-乙氯基羰基-2-乙氧基-1,2-二羥基暗啉（60mg)之 Ν,Ν -二甲基甲醯胺（0.25ml)溶液，在室溫下攪拌反應一夜 。將反應液滴至乙醇（ΙΟιηΙ)中，加3M之氯化鈉水溶液（2.0 ml),二乙醚（25ml),離心（2500rpm, 8分鐘）收集析出之 沈澱。將沈澱物用乙醇洗淨，溶解於水，再以B i 〇 - R a d AG 50W-X2(200-400筛目，Na +型）分離管（直徑為15mm,長 度為85mm)處理，以水洗提，而得洗提液（2)。合併洗提液 (1)和（2),以Bio-Max-50膜超濾法去除塩。將不能通過膜 的殘留溶液用撤孔濾器（0 . 2 2 α πι)過濾，凍結乾燥而得標 題所示化合物（208mg)。將此化合物溶解於0.1Μ之氨化鈉 水溶液後用GPC(分離管：東曹TSK Gel PW-4000XL,溶劑： 0 . 1 Μ氯化鈉）流速·· 0 . 8 m 1 / m i η )分析之結果以及此化合物 之紫外光吸收譜（甲醇：水=1 〇 : 1溶液，1 . 6 9 in g / in 1 )分別示 於第22圖和第23圖。此化合物之醫藥化合物殘基含量依據 在甲醇和水之混合（10:1)溶液中之240nm吸光度定量結果 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X297公釐） n n 。。n c。 7 I 〇 〇 y 〇 〇 (請先閱讀背面之注意事項！^寫本頁) mi •裝· 、tr 線 527183 A7 __B7 五、發明説明（76 ) 為 5·3% (v/w)〇 奮施例56 太發明铤物複会體：>杭_瘍作用： 按照實施例1 1所示相同方法，獲得患有M e t h A癌症之 試驗用鼠（每一群為6隻），將實施例15所得藥物複合體按 照實施例1 2所示相同方法調査其單次投與時之抗腫瘍作用 。結果顯示，實施例15所得藥物複合體較之實施例12所得 醫藥化合物本身在抗腫瘍效果上具有顯著增強和擴大其有 效用量範圍。其結果如下表所示。 (請先閲讀背面之注意事項^^寫本頁) -裝. 、\# 被檢驗化合物 投與量（fflg/kg)^ 抑制率（％) 實施例1 5之化合物 10 100 5 99 2 . 5 95 1 · 25 83 線 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 〃換算成醫藥化合物計 奮_例57 太發明藥物複会體之杭膪瘍作ffi: 移植人胃癌SC_6腫瘤塊於裸鼠（BALB/C-nu/nii,雄鼠） 之右鼠蹊部皮下而獲得患有SC-6癌症之裸鼠（每群5隻）。 於移檀後第2 4日，將溶解在注射用蒸餾水之實施例1 5所得 藥物複合體進行靜脈内單次投藥，並與翳藥化合物本身比 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 3 8 9 5 3 78 527183 A7 B7五、發明説明（77 ) 較其抗腫瘍作用。結果顯示，實施例15之藥物複合體較之 醫藥化合物本身不會發生因毒性而死亡之情形，同時顯示 優異之抗腫瘍效果。 被撿驗化合物 投與量 (rog/kg) 抑制率 (% ) 死亡鼠數/使用鼠數 醫藥化合物本身 60 98 2/5 15 61 0/5 實施例15之化合物 81) 100 0/5 21) 71 0/5 (請先閲讀背面之注意事項^^寫本頁) 裝-

、1T 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 〃換算成醫藥化合物計 奮_例58 太發明藥物捃合體之杭腺瘍作用： 按照實施例5 7所示相同方法獲得患有人肺癌Q G - 9 0之 裸鼠（每群為5隻）。於移植後第16日，將實施例15所得藥 物複合體溶解於注射用蒸餾水中進行靜脈内單次投與，然 後與醫藥化合物本身比較其抗腫瘍作用。其結果實施例1 5 之藥物複合體較之醫藥化合物本身，顯示增強之抗腫瘍效 果並擴大其有效用量範圍。 線 衣纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210Χ297公釐） 3 8 9 5 3 527183 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（78 ) 被檢驗化合物 投與量 (ing/kg) 抑制率 (% ) 死亡鼠數/使用鼠數 醫藥化合物本身 50 60 0/5 12.5 51 0/5 實施例15之化合物 71) 98 0/5 1·75" 97 0/5 Μ換算成醫藥化合物計 奮施例59 太發明藥物複合鵲夕杭腺瘍作用： 按照實施例1 1所示相同方法獲得患有M e t h癌症之試驗 用鼠（每群為6隻），再按照實施例12所示相同方法，將實 (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) •裝·

、1T 施 例 41 所 得 藥 物 複 合 體 進 行 军 次 投 與 和 醫 藥 化 合物 本 身 比 較 其 抗 腫 瘍 作 用 〇 其 結 果 實 施 例 4 1 之 藥 物 複 合 體較 之 醫 藥 化 合 物 本 身 顯 示 增 強 抗 腫 瘍 效 果 並 擴 大 其 有 效 用量 範 圍 〇 被 撿 驗 化 合 物 投 與 量 抑 制率 ( m g /k g ) ( % ) 醫 藥 化 合 物 本 身 - 1 00 64 50 56 25 34 實 施 例 41 之 化 合 物 25 1 > 99 12 • 5 1 > 95 6 .251 8 1 3 .125 1 ) 60 η換算成醫藥化合物計 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) 格（210Χ 297公釐） 80 3 8 9 5 3 527183 A7 B7 五、發明説明（7 9 ) 奮旃例60 本發明藥物複合鵲之杭_瘍作用： 按照實施例1 1所示相同方法獲得患有M e t h A癌症之試 驗用鼠（每群為6隻），再依照實施例1 2所示相同方法，使 用實施例29,實施例46和實施例47之各藥物複合體分別進 行單次投與，調査其抗腫瘍作用。 其結果，所有藥物複合體均表現優異之抗腫瘍效果和 廣範圍的有效用量範圍。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 被檢驗化合物 投與量 抑制率 (m g / k g ) 1 ) (% ) 實施例2 9之化 合 物 30 99 20 99 10 89 5 79 實施例4 6之化 合 物 100 94 80 92 40 82 20 75 實施例47之化 合 物 100 96 80 94 40 97 20 75 〃換算成醫藥化合物計 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Μ規格（210X 297公釐） 8 1 3 8 9 5 3 527183 A7 B7 五、發明説明（80 ) 審施例61 本發明藥物複合體之杭腫瘍作用： 按照實施例1 1所示相同方法獲得患有M e t h Α癌症之試 驗用鼠（每群為6隻），就實施例44之藥物複合體，按照實 施例1 2所示相同方法進行單次投與，和醫藥化合物本身（ 羥柔紅比星）比較其抗腫瘍作用。結果實施例44之藥物複 合體較之翳藥化合物本身顯然增強之抗腫瘍效果並擴大其 有效用量範圍。 (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) HI* •裝· 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 被撿驗化合物 投與量 抑制率 死亡鼠數/使用鼠數 (mg/kg) (% ) 醫藥化合物本身 20 6/6 10 64 0/6 5 39 0/6 實施例44之化合物 40" 96 0/6 20" 96 0/6 10" 87 0/6 51) 76 0/6 1 >換算成醫藥化 合物計 奮掄例62 太發明藥物複合 鵲之體内 動熊： 按照實施例1 1所示相同方法獲得患有M e t h Α癌症之試 、11 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 82 3 8 9 5 3 527183 A7 B7 五、發明説明（81 ) 驗用鼠。使用實施例15之藥物複合體，依照實施例12所示 相同方法進行單次投與（換算成醫藥化合物計為1 0 0 in g / k g ) 結組 其瘍 &E 〇 賵 形對 情 ， 化性 變 留 度滯 濃中 的液 内血 織高 組一不 各顯 在體 體 合 合 複 複物 物藥 藥之 査15 調例 後施 然實 , 果 果 結 該 ο 性 擇 選 瘍 一1 高 有 腸 小 和 臓 .肝 於 對 和 〇 性中 行圖 移 2 高 第 之於 織示 瘍腫 0 g 抗異 有 優 入有 導具 如 ， 例體 , 合 ^一曰 複 而物 性藥 月 可發 用本 利的 上基 業殘 産物 就合 明化 發藥 本翳 之 劑 性 毒 輕 減 能 也 時 同 用 作 瘍 til 腹 抗 。 高點 揮優 發的 能 得 , 多 性可 擇不 選等 位現 部顯 瘍之 (請先閱讀背面之注意事項ιρί寫本頁) •裝- 訂 線 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 83 3 8 9 5 3

Claims (1)

1. 527183

   經濟部中央標準局員工福利委員會印制衣 第86107455號專利申請案 申請專利範圍修正本 (92年1月10日） L 一種藥物複合體，其特徵爲介由胺基酸作爲間隔群（spacer)或 介由2至6個選自苯基丙胺酸、白胺酸及甘胺酸之胺基酸構 成之胜肽作爲間隔群所構成之分子量爲1〇,000至450,000範 圍，羧基<^_4烷基化度爲0.1至1.5範圍之羧基Cb4烷基葡 聚糖聚醇與醫藥化合物殘基結合而成之藥物複合體。 2·如申請專利範圍第1項之藥物複合體，其中，構成羧基（^_4 烷基葡聚糖聚醇之葡聚糖聚醇係在實質上能完全聚醇化之條 件下處理葡聚糖而製得者。 3.如申請專利範圍第〗項或第2項之藥物複合體，其中，該羧 基Cp4烷基葡聚糖聚醇係羧甲基葡聚糖聚醇者。 4·如申請專利範圍第1項之藥物複合體，其中，該醫藥化合物 係抗腫瘍劑或抗炎症劑者。 5 .如申請專利範圍第4項之藥物複合體，其中，該醫藥化合物 係依賴濃度而顯現其抗腫瘍作用之抗腫瘍劑者。 6·如申請專利範圍第4項之藥物複合體’其中，該醫藥化合物 係依賴時間而顯現其抗腫瘍作用之抗腫瘍劑者。 7·如申請專利範圍第4項之藥物複合體’其中，該抗腫瘍劑係 多克索魯比辛((1〇\〇1*1113丨〇丨11)或（13593)-：1-胺基-9-乙基-5-氟-2,3-二氫-9-羥基-4-甲基苯駢[de]吡喃基[3’，4’ ： 6,7] 吲哚嗪[l，2-b]喹啉-10，13(9化1511)-二酮者。 8.如申請專利範圍第4項之藥物複合體’其中’該間隔群（sPacer) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS) A4規格（210 χ 297公釐） 38953 H3 係-X-Z-所示二肽基[-X-Z-係分別由疏水性胺基酸（X)和親水性 胺基酸（Z)之N末端和C末端形成肽結合之二肽，再由該二 肽之N末端之胺基和C末端之羧基分別除去一個氫原子和一 個羥基所成之殘基]或含有該二肽基作爲局部肽序列之胜肽基 者。 9. 如申請專利範圍第8項之藥物複合體，其中，該疏水性胺基 酸係苯丙胺酸、親水性胺基酸係甘胺酸者。 10. 如申請專利範圍第9項之藥物複合體，其中，該間隔群係（N 末端）-Gly-Gly-Phe-Gly-者。 11. 如申請專利範圍第5項至第10項中之任意一項之藥物複合 體，其中，該抗腫瘍劑殘基之導入量係1至1 5重量％範圍者。 12. 如申請專利範圍第5項至第10項中之任意一項之藥物複合 體，其中，該抗腫瘍劑殘基之導入量係3至1 0重量％範圍者。 13. 如申請專利範圍第5至第10項中之任意一項之藥物複合體， 其中，該抗腫瘍劑殘基之導入量係5至6重量％範圍者。 經濟部中央標準局員工福利委員會印製 14. 如申請專利範圍第1項之藥物複合體，其中，係以H2N-Gly-Gly-Phe-Gly-COOH所示胜肽之N末端與羧甲基葡聚糖聚醇 之羧基形成醯胺結合、及以該胜肽之C末端與（】S，9S)-1-胺基 -9-乙基-5-氟-2,3-二氫-9-羥基-4-甲基-1H,12H-苯駢[de]吡喃 基[3’，4’ ： 6,7]吲哚嗪[l，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮之 1-胺 基形成醯胺結合者。 15. 如申請專利範圍第14項之藥物複合體，其中，該（1S，9S)-1-胺基-9-乙基-5-氟-2,3-二氫-9-羥棊-4-甲基苯駢[de] 吡喃基[3’，4’ ： 6,7]吲哚嗪[1,2-b]喹啉-1〇,13(9Η，15Η)-二酮殘 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS) Α4規袼（210 x 297公釐） 38953 527183 H3 基之導入量係2至1 〇重量％範圍者。 16.如申請專利範圍第]4項或第15項之藥物複合體，其中，該 羧基烷基蔔聚糖聚醇係分子量爲10,000至450,000範圍 之羧甲基葡聚糖聚醇，及羧甲基化程度係0.3至1.5範圍者。 I7·如申請專利範圍第14項或第15項之藥物複合體，其中，該 羧基CU4烷基葡聚糖聚醇係分子量爲200,000至400,000範 圍之羧甲基葡聚糖聚醇，及羧曱基化程度係0.3至0.5範圍 者ό 18. 如申請專利範圍第14項之藥物複合體，其中，該（iS，9S)-l-胺基-9-乙基-5-氟-2,3-二氫-9-羥基-4-甲基-1H，12H-苯駢[de] 吡喃基[3’54f : 6,7]吲哚嗪[l，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮殘 基之導入量係5至6重量％範圍，羧基（^_4烷基葡聚糖聚醇 之分子量係大約228,000，及羧甲基化程度係大約0.4者。 19. 一種與醫藥化合物結合用之傳遞藥物之載劑，其特徵爲：由 分子量爲10,000至450,000範圍，羧基（V4烷基化度爲0.1 至I.5範圍之羧基C^4烷基葡聚糖聚醇所構成。 經濟部中央標準局員工福利委員會印制衣 20. 如申請專利範圍第〗9項之傳遞藥物之載劑，其中，該羧基Cp 烷基葡聚糖聚醇之分子量係10,000至450,000範圍，羧基CV 烷基化程度係0.1至1.5範圍者。 21. 如申請專利範圍第19項之傳遞藥物之載劑，其中，該羧基Cp 烷基葡聚糖聚醇之分子量係200,000至400,000範圍，羧基 烷基化程度係0.3至1.5範圍者。 22. 如申請專利範圍第1 9項至第2 1項中之任意一項之傳遞藥物 之載劑，其中，該羧基<^_4烷基葡聚糖聚醇係羧甲基葡聚糖 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS) A4規格（210 X 297公釐） 527183 H3 聚醇者。 23.—種藥物複合體之製造方法，其特徵爲：使羧基Ci_4烷基葡 聚糖聚醇與鹼共同與上述醫藥化合物混合攪拌，介由間隔群 與該醫藥化合物之殘基結合而成藥物複合體。 經濟部中央標準局員工福利委員會印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS) A4規格（210 X 297公釐） 527183 ea 7. ：κ) H3 經濟部中央標準局員工福利委員會印製 附件二 第 86107455 號專利申請案 補充試驗數據 (88年7月30日） 1 ·本發明之進步性 引證例W094/1 9376揭示之藥物傳遞載劑與本發 明中之藥物傳遞載劑（羧基（^_4烷基葡聚糠聚醇）應 用於同一藥物時，如以下說明所示，本發明載劑之一 方顯示可擴大所用藥物之有效量範圍，據此咸認該藥 物可實際應用於治療。 (a)使用（1S，9S)-1-胺基-9-乙基-5-氟-2,3-二氫-9 -羥基-4-甲基-1H，12H-苯駢[de]吡喃基[3，，4’ ·· 6, 7]吲 哚嗪[1，2-b]喹啉-10, 13(9H，15H)-二酮（DX-89 5 1 )作 為醫藥化合物時其結果如下。 化合物A係引證例WO94/1 9376揭示之羧甲基葡 聚糖鈉塩與-Gly-Gly-Phe-Gly-DX - 8951結合而成之 化合物，化合物B為本發明之藥物傳遞載劑··羧甲基 葡聚糖聚醇鈉塩與-Gly-Gly-Phe-Gly-DX-8 9 5 1結合 而成之化合物。依據本發明說明書中之試驗方法（如 實施例1 1 )，使用患有Meth A癌症之老鼠對化合物A 及B進行抗腫瘤效果之比較。結果如表1所示，由表 1可知化合物A有效且無死亡例出現之有效量範圍* 為5mg/kg，而認定有意差之下限為略低於2 · 5mg/kg 而大於1.25mg/kg之範圍，故其使用量擴大範圍為2 至3倍。另一方面，化合物B在l〇mg/kg亦無死亡例 出現，而甚至在1. 25mg/kg亦可確認其效果，其用量 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS )A4規格（210 X 297公發) 1 527183 H3 範圍增為8倍以上。由上述結果可知化合物B之有 效用量範 圍為化合物A之2 倍以上，且治療 用量範圍 與毒性用 量範圍 有相當大差 距， 故可確認係 一安全性 高之藥物 〇 表1 化合物 劑量 腫殤重量i BWLmaxa D/IP (xng/kg) 平均.土 SE(g) IR(°/〇) (%)〔天 J 對照組 0 1.882± 0.539 0 <0 0/6 化合物A 7.5 0.010 ±0.004^ 100 25.0 [13] 1/6 5 0.010 ±0.004 … 100 7.4 [10] 0/6 2.5 0.296 ±0.093~ 84 5.2 [10] 0/6 1.25 1.062± 0.113 44 3.3 Γ81 0/6 化合物B 10 0.008 ±0.002··· 100 15.5 [13] 0/6 2.5 0.036± 0.017^ 98 1.2 [9] 0/6 1.25 0.120 ±0.046^ 94 <0 0/6 將Meth A細胞經由皮下移 植至BALB/c系之老 鼠（第〇 天）。老 鼠於第7曰 接受單次注射， 由靜脈投 經濟部中央標準局員工福利委員會印製 與上述化合物。於第21日評定腫瘤重量。劑量係以 DX-8951計之。星號表示依據Dunnett’s test與對 照組相較有顯著差異（***P<0. 001)。 a體重減少之最大率（BffLmax)，括弧内之數字表示天 數。<0表示無體重之減少。 b毒性致死之老鼠數/使用之老鼠數。 I R :抑制率 (b)使用蒽醌環黴素（Anthracycl in)_之多克索魯比 辛（DXR)作為醫藥化合物時其結果如下。 本紙張认適用中國國錄準（c N s ) A 4規格（21〇 χ 297公楚）2 527183 H3 化合物C係引證例W094/ 1 9376揭示之羧甲基支 鏈殿粉之納塩與-Phe-Gly-DXR結合而成之化合物，化 合物D為本發明之藥物傳遞載劑：羧甲基葡聚糖聚醇 鈉塩與-Gly-Gly-Phe-Gly-DXR結合而成之化合物。 依據同上述（a)之試驗方法，使用患有Me t h A癌症之 老鼠對化合物C及D進行抗腫瘍效果之比較。結果 如表2所示，由表2可知化合物C之有效且無死亡例 出現之有效量範圍最大為20mg/kg，而認定有意差之 下限為5mg/kg之範圍，故其用量擴大範圍為4倍。 另一方面，化合物D在40mg/kg亦無死亡例出現，而 甚至在5mg/kg仍可確認其效果，其用量擴大範圍增 為8倍以上。由上述結果可知化合物D之有效用量 範圍為化合物C之2倍以上，且治療用量範圍與毒性 用量範圍有相當大差距，故可確認係一安全高之藥 物。 表2 化合物. 劑量 腫痛·重量 BWLmaxa D/Ub (mg/kg) 平均土 SE：(g) IE(%) (%)「天] 〈實驗1> 對照組 0 1.917± 0.434 0 <0 0/6 化合物 C 40 Toxicc 30.3 [18] 6/6 20 0.158± 0.029^ 92 4.1 [11] 0/6 10 0.273± 0.107^* 86 2.8 [11] 0/6 5 0.590±0.17r 69 <0 0/6 對照組〈實驗2> 0 1.454± 0.410 0 <0 0/6 化合物 D 40 0.060 ±0.011^ 96 22.6 [19] 0/6 20 0.062 ±0.013 … 96 4.1 [14] 0/6 10 0.187 ±0.045… 87 <0 0/6 5 0.349土 0.110" 76 <0 0/6 本紙張尺度適用中國國家標準（C N S ) A4規格（210 X 297公隻）〇 527183 H3 將Meth A細胞經由皮下移植至BALB/c系之老 鼠（第0天）。老鼠於第7曰接受單次注射，由靜脈投 與上述化合物。於第21日評定腫瘤之重量。劑量係 以DXR計之。星號表示依據Dunnett，s test與對照 組相較有顯著差異（"*P<〇.〇〇l，**P<0 · 0 1)。 a體重減少之最大率（BWLmax)，括弧内之數字表示天 數。<0表示無體重之減少。 b毒性致死之老鼠數/使用之老鼠數。 c所有老鼠均因毒性致死。 又，上述試驗所採用之化合物A，係使用依據引 例W0/ 1 9376之參考例17所述方法合成之羧甲基葡 聚糖鈉塩，依與本案說明書之實施例1 5相同之方法 合成者。化合物B則係依本案說明書實施例1 5所述 之方法合成。又，化合物C係依據引證例之實施例1 4 的方法合成，化合物D則係使用本案說明書實施例44 之藥物複合體。 經濟部中央標準局員工福利委員會印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS )A4規格（210 X 297公發) 4