CN110049779A - 抗体-药物缀合物和免疫检查点抑制剂的组合 - Google Patents

抗体-药物缀合物和免疫检查点抑制剂的组合 Download PDF

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Abstract

药物组合物和治疗方法，其中组合施用抗体‑药物缀合物和免疫检查点抑制剂，且所述抗体‑药物缀合物是这样的抗体‑药物缀合物，其中由下式代表的药物‑接头(其中A代表与抗体的连接位置)经由硫醚键与所述抗体缀合：和用于治疗可通过抗肿瘤免疫‑活化作用改善的疾病的药物组合物和治疗方法，其中包括抗体‑药物缀合物。

Description

抗体-药物缀合物和免疫检查点抑制剂的组合
技术领域
本发明涉及其中组合施用特定抗体-药物缀合物和免疫检查点抑制剂的药物组合物和治疗方法，以及用于治疗可通过抗肿瘤免疫-活化作用改善的疾病的药物组合物和治疗方法，其中包括特定抗体-药物缀合物。
背景技术
抗体-药物缀合物(ADC)，具有与抗体缀合的具有细胞毒性的药物，其抗原在癌细胞的表面上表达并且还结合能够细胞内化的抗原，且因此可以将药物选择性递送至癌细胞，因此预期其引起药物在癌细胞内积累并杀死癌细胞(非专利文献1至5)。
作为此类抗体-药物缀合物之一，已知包含抗体和作为拓扑异构酶I抑制剂的依喜替康的抗体-药物缀合物作为组分(专利文献1至7)。这些中，发挥特别优异的抗肿瘤作用和安全性的抗HER2抗体-药物缀合物(非专利文献6、7)目前正在进行临床研究。
免疫检查点抑制剂是抑制免疫抑制系统和活化抗肿瘤免疫的药剂(非专利文献8至10)。免疫检查点抑制剂的已知实例包括纳武单抗(专利文献8)和派姆单抗(专利文献9)(其各自都是抗PD-1抗体)；阿特朱单抗(专利文献10)、德瓦鲁单抗(专利文献11)和阿维鲁单抗(专利文献12)(其各自都是抗PD-L1抗体)；和伊匹单抗(专利文献13)和曲美木单抗(tremelimumab)(专利文献14)(其各自都是抗CTLA-4抗体)。
作为其中组合施用抗体-药物缀合物和免疫检查点抑制剂的情况，已知关于组合使用曲妥珠单抗-美坦新偶联物(T-DM1)和抗CTLA-4/PD-1抗体的研究(非-专利文献11)。
引文列表
专利文献
专利文献1：国际公开号WO 2014/057687
专利文献2：国际公开号WO 2014/061277
专利文献3：国际公开号WO 2015/098099
专利文献4：国际公开号WO 2015/115091
专利文献5：国际公开号WO 2015/146132
专利文献6：国际公开号WO 2015/155976
专利文献7：国际公开号WO 2015/155998
专利文献8：国际公开号WO 2006/121168
专利文献9：国际公开号WO 2008/156712
专利文献10：国际公开号WO 2010/077634
专利文献11：国际公开号WO 2011/066389
专利文献12：国际公开号WO 2013/079174
专利文献13：国际公开号WO 2001/014424
专利文献14：国际公开号WO 2000/037504
非专利文献
非专利文献1：Ducry, L., 等人, Bioconjugate Chem. (2010) 21, 5-13.
非专利文献2：Alley, S. C., 等人, Current Opinion in Chemical Biology(2010) 14, 529-537.
非专利文献3：Damle N. K. Expert Opin. Biol. Ther. (2004) 4, 1445-1452.
非专利文献4：Senter P. D., 等人, Nature Biotechnology (2012) 30, 631-637.
非专利文献5：Howard A. 等人, J Clin Oncol 29 : 398-405.
非专利文献6：Ogitani Y. 等人, Clinical Cancer Research (2016) 22(20),5097-5108.
非专利文献7：Ogitani Y. 等人, Cancer Science (2016) 107, 1039-1046.
非专利文献8：Menon S. 等人, Cancers (2016) 8, 106.
非专利文献9：Pardoll DM., Nat Rev Cancer (2012) 12, 252-264.
非专利文献10：Wolchok JD., Cell (2015) 162, 937.
非专利文献11：Muller P. 等人, Science Translational Medicine (2015) 7(315), 315ra188。
发明概述
技术问题
本发明的一个目的是提供药物组合物和治疗方法，其通过组合施用抗体-药物缀合物和免疫检查点抑制剂而发挥特别优异的抗肿瘤作用和安全性。本发明的另一个目的是提供用于治疗可通过抗肿瘤免疫-活化作用改善的疾病的药物组合物和治疗方法，其中包括特定抗体-药物缀合物。
问题的解决方案
本发明人发现，通过组合施用特定抗体-药物缀合物和免疫检查点抑制剂而发挥优异的抗肿瘤作用；并且进一步发现抗体-药物缀合物具有抗肿瘤免疫-活化作用。
具体地，本发明涉及以下内容。
[1]药物组合物，其中组合施用抗体-药物缀合物和免疫检查点抑制剂，且所述抗体-药物缀合物是这样的抗体-药物缀合物，其中由下式代表的药物-接头经由硫醚键与所述抗体缀合：
[式1]
其中A代表与抗体的连接位置。
[2]根据[1]所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中的抗体是抗HER2抗体、抗HER3抗体、抗TROP2抗体或抗B7-H3抗体。
[3]根据[2]所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中的抗体是抗HER2抗体。
[4]根据[2]或[3]所述的药物组合物，其中所述抗HER2抗体是包含重链和轻链的抗体，所述重链由SEQ ID NO:1的氨基酸残基1至449组成的氨基酸序列组成，且所述轻链由SEQ ID NO:2的氨基酸残基1至214组成的氨基酸序列组成。
[5]根据[2]或[3]所述的药物组合物，其中所述抗HER2抗体是包含由SEQ ID NO:1代表的氨基酸序列组成的重链和由SEQ ID NO:2代表的氨基酸序列组成的轻链的抗体。
[6]根据[1]至[5]中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目在2至8的范围内。
[7]根据[1]至[5]中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目在7至8的范围内。
[8]根据[1]至[5]中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目在7.5至8的范围内。
[9]根据[1]至[8]中任一项所述的药物组合物，其中所述免疫检查点抑制剂是抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体或抗CTLA-4抗体。
[10] 根据[9]所述的药物组合物，其中所述免疫检查点抑制剂是抗PD-1抗体。
[11] 根据[9]所述的药物组合物，其中所述免疫检查点抑制剂是抗PD-L1抗体。
[12] 根据[9]所述的药物组合物，其中所述免疫检查点抑制剂是抗CTLA-4抗体。
[13] 根据[1]至[12]中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物和所述免疫检查点抑制剂分别作为活性组分包含在不同制剂中，并且同时或不同时施用。
[14] 根据[1]至[12]中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物和所述免疫检查点抑制剂作为活性组分包含在单一制剂中并施用。
[15] 根据[1]至[14]中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物用于治疗癌症。
[16] 根据[15]所述的药物组合物，其中所述癌症是选自以下的至少一种：肺癌、尿路上皮癌、结肠直肠癌、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、胃癌、食管胃交界腺癌、胃肠道间质瘤、子宫颈癌、食管癌、鳞状细胞癌、腹膜癌、肝癌、肝细胞癌、子宫内膜癌、子宫癌、唾液腺癌、肾癌、外阴癌、甲状腺癌、阴茎癌、白血病、恶性淋巴瘤、浆细胞瘤、骨髓瘤、神经上皮组织肿瘤、神经鞘肿瘤、头颈癌、皮肤癌、咽癌、胆囊癌、胆管癌、间皮瘤、佩吉特氏病和肉瘤。
[17] 根据[16]所述的药物组合物，其中所述癌症是结肠直肠癌。
[18] 根据[16]所述的药物组合物，其中所述癌症是乳腺癌。
[19] 根据[1]至[18]中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物具有抗肿瘤免疫-活化作用。
[20] 根据[1]至[19]中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物具有至少一种选自以下的作用：
(1)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的生长的促进作用；和
(2)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的活化作用。
[21] 根据[1]至[20]中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物对形成针对肿瘤的免疫记忆具有促进作用。
[22] 根据[21]所述的药物组合物，其中所述肿瘤表达所述抗体-药物缀合物中的抗体的抗原。
[23] 根据[21]所述的药物组合物，其中所述肿瘤的一部分细胞不表达所述抗体-药物缀合物中的抗体的抗原。
[24] 根据[1]至[23]中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物具有至少一种选自以下的作用：
(1)对肿瘤中的树突细胞的数目的增加的促进作用；
(2)对树突细胞的活化作用；和
(3)对癌细胞上的MHC I类的表达水平的升高的促进作用。
[25] 根据[1]至[24]中任一项所述的药物组合物，其中所述免疫检查点抑制剂使通过所述抗体-药物缀合物促进的癌细胞上PD-L1的表达水平的升高而生成的免疫抑制信号失活，且由此所述抗体-药物缀合物表现出更高的抗肿瘤作用。
[26] 用于治疗可通过抗肿瘤免疫-活化作用改善的疾病的药物组合物，其中所述药物组合物含有抗体-药物缀合物，其中由下式代表的药物-接头经由硫醚键与所述抗体缀合：
[式2]
其中A代表与抗体的连接位置。
[27] 根据[26]所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物具有至少一种选自以下的作用：
(1)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的生长的促进作用；和
(2)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的活化作用。
[28] 根据[26]或[27]所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物对形成针对肿瘤的免疫记忆具有促进作用。
[29] 根据[28]所述的药物组合物，其中所述肿瘤表达所述抗体-药物缀合物中的抗体的抗原。
[30] 根据[28]所述的药物组合物，其中所述肿瘤的一部分细胞不表达所述抗体-药物缀合物中的抗体的抗原。
[31] 根据[26]至[30]中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物具有至少一种选自以下的作用：
(1)对肿瘤中的树突细胞的数目的增加的促进作用；
(2)对树突细胞的活化作用；和
(3)对癌细胞上的MHC I类的表达水平的升高的促进作用。
[32] 根据[26]至[31]中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中的抗体是抗HER2抗体、抗HER3抗体、抗TROP2抗体或抗B7-H3抗体。
[33] 根据[32]所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中的抗体是抗HER2抗体。
[34] 根据[32]或[33]所述的药物组合物，其中所述抗HER2抗体是包含重链和轻链的抗体，所述重链由SEQ ID NO:1的氨基酸残基1至449组成的氨基酸序列组成，且所述轻链由SEQ ID NO:2的氨基酸残基1至214组成的氨基酸序列组成。
[35] 根据[32]或[33]所述的药物组合物，其中所述抗HER2抗体是包含由SEQ IDNO:1代表的氨基酸序列组成的重链和由SEQ ID NO:2代表的氨基酸序列组成的轻链的抗体。
[36] 根据[26]至[35]中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目在2至8的范围内。
[37] 根据[26]至[35]中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目在7至8的范围内。
[38] 根据[26]至[35]中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目在7.5至8的范围内。
[39] 根据[26]至[38]中任一项所述的药物组合物，其中所述疾病是选自以下的至少一种：肺癌、尿路上皮癌、结肠直肠癌、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、胃癌、食管胃交界腺癌、胃肠道间质瘤、子宫颈癌、食管癌、鳞状细胞癌、腹膜癌、肝癌、肝细胞癌、子宫内膜癌、子宫癌、唾液腺癌、肾癌、外阴癌、甲状腺癌、阴茎癌、白血病、恶性淋巴瘤、浆细胞瘤、骨髓瘤、神经上皮组织肿瘤、神经鞘肿瘤、头颈癌、皮肤癌、咽癌、胆囊癌、胆管癌、间皮瘤、佩吉特氏病和肉瘤。
[40] 根据[39]所述的药物组合物，其中所述疾病是结肠直肠癌。
[41] 根据[39]所述的药物组合物，其中所述疾病是乳腺癌。
[42] 用于治疗可通过抗肿瘤免疫-活化作用改善的疾病的药物组合物，其中所述药物组合物在肿瘤中释放由下式代表的化合物：
[式3]
。
[43] 根据[42]所述的药物组合物，其中所述化合物具有至少一种选自以下的作用：
(1)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的生长的促进作用；和
(2)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的活化作用。
[44] 根据[42]或[43]所述的药物组合物，其中所述化合物对形成针对肿瘤的免疫记忆具有促进作用。
[45] 根据[42]至[44]中任一项所述的药物组合物，其中所述化合物具有至少一种选自以下的作用：
(1)对肿瘤中的树突细胞的数目的增加的促进作用；
(2)对树突细胞的活化作用；和
(3)对癌细胞上的MHC I类的表达水平的升高的促进作用。
[46] 根据[42]至[45]中任一项所述的药物组合物，其中所述疾病是选自以下的至少一种：肺癌、尿路上皮癌、结肠直肠癌、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、胃癌、食管胃交界腺癌、胃肠道间质瘤、子宫颈癌、食管癌、鳞状细胞癌、腹膜癌、肝癌、肝细胞癌、子宫内膜癌、子宫癌、唾液腺癌、肾癌、外阴癌、甲状腺癌、阴茎癌、白血病、恶性淋巴瘤、浆细胞瘤、骨髓瘤、神经上皮组织肿瘤、神经鞘肿瘤、头颈癌、皮肤癌、咽癌、胆囊癌、胆管癌、间皮瘤、佩吉特氏病和肉瘤。
[47] 治疗方法，其中组合施用抗体-药物缀合物和免疫检查点抑制剂，且所述抗体-药物缀合物是这样的抗体-药物缀合物，其中由下式代表的药物-接头经由硫醚键与所述抗体缀合：
[式4]
其中A代表与抗体的连接位置。
[48] 根据[47]所述的治疗方法，其中所述抗体-药物缀合物中的抗体是抗HER2抗体、抗HER3抗体、抗TROP2抗体或抗B7-H3抗体。
[49] 根据[48]所述的治疗方法，其中所述抗体-药物缀合物中的抗体是抗HER2抗体。
[50] 根据[48]或[49]所述的治疗方法，其中所述抗HER2抗体是包含重链和轻链的抗体，所述重链由SEQ ID NO:1的氨基酸残基1至449组成的氨基酸序列组成，且所述轻链由SEQ ID NO:2的氨基酸残基1至214组成的氨基酸序列组成。
[51] 根据[48]或[49]所述的治疗方法，其中所述抗HER2抗体是包含由SEQ IDNO:1代表的氨基酸序列组成的重链和由SEQ ID NO:2代表的氨基酸序列组成的轻链的抗体。
[52] 根据[47]至[51]中任一项所述的治疗方法，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目在2至8的范围内。
[53] 根据[47]至[51]中任一项所述的治疗方法，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目在7至8的范围内。
[54] 根据[47]至[51]中任一项所述的治疗方法，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目在7.5至8的范围内。
[55] 根据[47]至[54]中任一项所述的治疗方法，其中所述免疫检查点抑制剂是抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体或抗CTLA-4抗体。
[56] 根据[55]所述的治疗方法，其中所述免疫检查点抑制剂是抗PD-1抗体。
[57] 根据[55]所述的治疗方法，其中所述免疫检查点抑制剂是抗PD-L1抗体。
[58] 根据[55]所述的治疗方法，其中所述免疫检查点抑制剂是抗CTLA-4抗体。
[59] 根据[47]至[58]中任一项所述的治疗方法，其中所述抗体-药物缀合物和所述免疫检查点抑制剂分别作为活性组分包含在不同制剂中，并且同时或不同时施用。
[60] 根据[47]至[58]中任一项所述的治疗方法，其中所述抗体-药物缀合物和所述免疫检查点抑制剂作为活性组分包含在单一制剂中并施用。
[61] 根据[47]至[60]中任一项所述的治疗方法，其中所述治疗方法用于治疗癌症。
[62] 根据[61]所述的治疗方法，其中所述癌症是选自以下的至少一种：肺癌、尿路上皮癌、结肠直肠癌、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、胃癌、食管胃交界腺癌、胃肠道间质瘤、子宫颈癌、食管癌、鳞状细胞癌、腹膜癌、肝癌、肝细胞癌、子宫内膜癌、子宫癌、唾液腺癌、肾癌、外阴癌、甲状腺癌、阴茎癌、白血病、恶性淋巴瘤、浆细胞瘤、骨髓瘤、神经上皮组织肿瘤、神经鞘肿瘤、头颈癌、皮肤癌、咽癌、胆囊癌、胆管癌、间皮瘤、佩吉特氏病和肉瘤。
[63] 根据[62]所述的治疗方法，其中所述癌症是结肠直肠癌。
[64] 根据[62]所述的治疗方法，其中所述癌症是乳腺癌。
[65] 根据[47]至[64]中任一项所述的治疗方法，其中所述抗体-药物缀合物具有抗肿瘤免疫-活化作用。
[66] 根据[47]至[65]中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物具有至少一种选自以下的作用：
(1)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的生长的促进作用；和
(2)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的活化作用。
[67] 根据[47]至[66]中任一项所述的治疗方法，其中所述抗体-药物缀合物对形成针对肿瘤的免疫记忆具有促进作用。
[68] 根据[67]所述的治疗方法，其中所述肿瘤表达所述抗体-药物缀合物中的抗体的抗原。
[69] 根据[67]所述的治疗方法，其中所述肿瘤的一部分细胞不表达所述抗体-药物缀合物中的抗体的抗原。
[70] 根据[47]至[69]中任一项所述的治疗方法，其中所述抗体-药物缀合物具有至少一种选自以下的作用：
(1)对肿瘤中的树突细胞的数目的增加的促进作用；
(2)对树突细胞的活化作用；和
(3)对癌细胞上的MHC I类的表达水平的升高的促进作用。
[71] 根据[47]至[70]中任一项所述的治疗方法，其中所述免疫检查点抑制剂使通过所述抗体-药物缀合物促进的癌细胞上PD-L1的表达水平的升高而生成的免疫抑制信号失活，且由此所述抗体-药物缀合物表现出更高的抗肿瘤作用。
[72] 用于治疗可通过抗肿瘤免疫-活化作用改善的疾病的治疗方法，其中施用其中由下式代表的药物-接头经由硫醚键与所述抗体缀合的抗体-药物缀合物：
[式5]
其中A代表与抗体的连接位置。
[73] 根据[72]所述的治疗方法，其中所述抗体-药物缀合物具有至少一种选自以下的作用：
(1)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的生长的促进作用；和
(2)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的活化作用。
[74] 根据[72]或[73]所述的治疗方法，其中所述抗体-药物缀合物对形成针对肿瘤的免疫记忆具有促进作用。
[75] 根据[74]所述的治疗方法，其中所述肿瘤表达所述抗体-药物缀合物中的抗体的抗原。
[76] 根据[74]所述的治疗方法，其中所述肿瘤的一部分细胞不表达所述抗体-药物缀合物中的抗体的抗原。
[77] 根据[72]至[76]中任一项所述的治疗方法，其中所述抗体-药物缀合物具有至少一种选自以下的作用：
(1)对肿瘤中的树突细胞的数目的增加的促进作用；
(2)对树突细胞的活化作用；和
(3)对癌细胞上的MHC I类的表达水平的升高的促进作用。
[78] 根据[72]至[77]中任一项所述的治疗方法，其中所述抗体-药物缀合物中的抗体是抗HER2抗体、抗HER3抗体、抗TROP2抗体或抗B7-H3抗体。
[79] 根据[78]所述的治疗方法，其中所述抗体-药物缀合物中的抗体是抗HER2抗体。
[80] 根据[78]或[79]所述的治疗方法，其中所述抗HER2抗体是包含重链和轻链的抗体，所述重链由SEQ ID NO:1的氨基酸残基1至449组成的氨基酸序列组成，且所述轻链由SEQ ID NO:2的氨基酸残基1至214组成的氨基酸序列组成。
[81] 根据[78]或[79]所述的治疗方法，其中所述抗HER2抗体是包含由SEQ IDNO:1代表的氨基酸序列组成的重链和由SEQ ID NO:2代表的氨基酸序列组成的轻链的抗体。
[82] 根据[72]至[81]中任一项所述的治疗方法，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目在2至8的范围内。
[83] 根据[72]至[81]中任一项所述的治疗方法，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目在7至8的范围内。
[84] 根据[72]至[81]中任一项所述的治疗方法，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目在7.5至8的范围内。
[85] 根据[72]至[84]中任一项所述的治疗方法，其中所述疾病是选自以下的至少一种：肺癌、尿路上皮癌、结肠直肠癌、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、胃癌、食管胃交界腺癌、胃肠道间质瘤、子宫颈癌、食管癌、鳞状细胞癌、腹膜癌、肝癌、肝细胞癌、子宫内膜癌、子宫癌、唾液腺癌、肾癌、外阴癌、甲状腺癌、阴茎癌、白血病、恶性淋巴瘤、浆细胞瘤、骨髓瘤、神经上皮组织肿瘤、神经鞘肿瘤、头颈癌、皮肤癌、咽癌、胆囊癌、胆管癌、间皮瘤、佩吉特氏病和肉瘤。
[86] 根据[85]所述的治疗方法，其中所述疾病是结肠直肠癌。
[87] 根据[85]所述的治疗方法，其中所述疾病是乳腺癌。
[88] 用于治疗可通过抗肿瘤免疫-活化作用改善的疾病的治疗方法，其中所述治疗方法在肿瘤中释放由下式代表的化合物：
[式6]
。
[89] 根据[88]所述的治疗方法，其中所述化合物具有至少一种选自以下的作用：
(1)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的生长的促进作用；和
(2)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的活化作用。
[90] 根据[88]或[89]所述的治疗方法，其中所述化合物对形成针对肿瘤的免疫记忆具有促进作用。
[91] 根据[88]至[90]中任一项所述的治疗方法，其中所述化合物具有至少一种选自以下的作用：
(1)对肿瘤中的树突细胞的数目的增加的促进作用；
(2)对树突细胞的活化作用；和
(3)对癌细胞上的MHC I类的表达水平的升高的促进作用。
[92] 根据[88]至[91]中任一项所述的治疗方法，其中所述疾病是选自以下的至少一种：肺癌、尿路上皮癌、结肠直肠癌、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、胃癌、食管胃交界腺癌、胃肠道间质瘤、子宫颈癌、食管癌、鳞状细胞癌、腹膜癌、肝癌、肝细胞癌、子宫内膜癌、子宫癌、唾液腺癌、肾癌、外阴癌、甲状腺癌、阴茎癌、白血病、恶性淋巴瘤、浆细胞瘤、骨髓瘤、神经上皮组织肿瘤、神经鞘肿瘤、头颈癌、皮肤癌、咽癌、胆囊癌、胆管癌、间皮瘤、佩吉特氏病和肉瘤。
[93] 抗体-药物缀合物，其用于通过与免疫检查点抑制剂组合施用来治疗疾病，其中在所述抗体-药物缀合物中，由下式代表的药物-接头经由硫醚键与所述抗体缀合：
[式7]
其中A代表与抗体的连接位置。
[94] 根据[93]所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物中的抗体是抗HER2抗体、抗HER3抗体、抗TROP2抗体或抗B7-H3抗体。
[95] 根据[94]所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物中的抗体是抗HER2抗体。
[96] 根据[94]或[95]所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗HER2抗体是包含重链和轻链的抗体，所述重链由SEQ ID NO:1的氨基酸残基1至449组成的氨基酸序列组成，且所述轻链由SEQ ID NO:2的氨基酸残基1至214组成的氨基酸序列组成。
[97] 根据[94]或[95]所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗HER2抗体是包含由SEQ ID NO:1代表的氨基酸序列组成的重链和由SEQ ID NO:2代表的氨基酸序列组成的轻链的抗体。
[98] 根据[93]至[97]中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目在2至8的范围内。
[99] 根据[93]至[97]中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目在7至8的范围内。
[100]根据[93]至[97]中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目在7.5至8的范围内。
[101]根据[93]至[100]中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述免疫检查点抑制剂是抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体或抗CTLA-4抗体。
[102]根据[101]所述的抗体-药物缀合物，其中所述免疫检查点抑制剂是抗PD-1抗体。
[103]根据[101]所述的抗体-药物缀合物，其中所述免疫检查点抑制剂是抗PD-L1抗体。
[104]根据[101]所述的抗体-药物缀合物，其中所述免疫检查点抑制剂是抗CTLA-4抗体。
[105]根据[93]至[104]中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物和所述免疫检查点抑制剂分别作为活性组分包含在不同制剂中，并且同时或不同时施用。
[106]根据[93]至[104]中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物和所述免疫检查点抑制剂作为活性组分包含在单一制剂中并施用。
[107]根据[93]至[106]中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物用于治疗癌症。
[108]根据[107]所述的抗体-药物缀合物，其中所述癌症是选自以下的至少一种：肺癌、尿路上皮癌、结肠直肠癌、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、胃癌、食管胃交界腺癌、胃肠道间质瘤、子宫颈癌、食管癌、鳞状细胞癌、腹膜癌、肝癌、肝细胞癌、子宫内膜癌、子宫癌、唾液腺癌、肾癌、外阴癌、甲状腺癌、阴茎癌、白血病、恶性淋巴瘤、浆细胞瘤、骨髓瘤、神经上皮组织肿瘤、神经鞘肿瘤、头颈癌、皮肤癌、咽癌、胆囊癌、胆管癌、间皮瘤、佩吉特氏病和肉瘤。
[109]根据[108]所述的抗体-药物缀合物，其中所述癌症是结肠直肠癌。
[110]根据[108]所述的抗体-药物缀合物，其中所述癌症是乳腺癌。
[111]根据[93]至[110]中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物具有抗肿瘤免疫-活化作用。
[112]根据[93]至[111]中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物具有至少一种选自以下的作用：
(1)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的生长的促进作用；和
(2)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的活化作用。
[113]根据[93]至[112]中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物对形成针对肿瘤的免疫记忆具有促进作用。
[114]根据[113]所述的抗体-药物缀合物，其中所述肿瘤表达所述抗体-药物缀合物中的抗体的抗原。
[115]根据[113]所述的抗体-药物缀合物，其中所述肿瘤的一部分细胞不表达所述抗体-药物缀合物中的抗体的抗原。
[116]根据[93]至[115]中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物具有至少一种选自以下的作用：
(1)对肿瘤中的树突细胞的数目的增加的促进作用；
(2)对树突细胞的活化作用；和
(3)对癌细胞上的MHC I类的表达水平的升高的促进作用。
[117]根据[93]至[116]中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述免疫检查点抑制剂使通过所述抗体-药物缀合物促进的癌细胞上PD-L1的表达水平的升高而生成的免疫抑制信号失活，且由此所述抗体-药物缀合物表现出更高的抗肿瘤作用。
[118]用于治疗可通过抗肿瘤免疫-活化作用改善的疾病的抗体-药物缀合物，其中由下式代表的药物-接头经由硫醚键与所述抗体缀合：
[式8]
其中A代表与抗体的连接位置。
[119]根据[118]所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物具有至少一种选自以下的作用：
(1)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的生长的促进作用；和
(2)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的活化作用。
[120]根据[118]或[119]所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物对形成针对肿瘤的免疫记忆具有促进作用。
[121]根据权利要求[120]所述的抗体-药物缀合物，其中所述肿瘤表达所述抗体-药物缀合物中的抗体的抗原。
[122]根据[120]所述的抗体-药物缀合物，其中所述肿瘤的一部分细胞不表达所述抗体-药物缀合物中的抗体的抗原。
[123]根据[118]至[122]中任一项所述的抗体-药物缀合物，其用于治疗可通过至少一种选自以下的作用改善的疾病：
(1)对肿瘤中的树突细胞的数目的增加的促进作用；
(2)对树突细胞的活化作用；和
(3)对癌细胞上的MHC I类的表达水平的升高的促进作用。
[124]根据[118]至[123]中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物中的抗体是抗HER2抗体、抗HER3抗体、抗TROP2抗体或抗B7-H3抗体。
[125]根据[124]所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物中的抗体是抗HER2抗体。
[126]根据[124]或[125]所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗HER2抗体是包含重链和轻链的抗体，所述重链由SEQ ID NO:1的氨基酸残基1至449组成的氨基酸序列组成，且所述轻链由SEQ ID NO:2的氨基酸残基1至214组成的氨基酸序列组成。
[127]根据[124]或[125]所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗HER2抗体是包含由SEQ ID NO:1代表的氨基酸序列组成的重链和由SEQ ID NO:2代表的氨基酸序列组成的轻链的抗体。
[128]根据[118]至[127]中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目在2至8的范围内。
[129]根据[118]至[127]中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目在7至8的范围内。
[130]根据[118]至[127]中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目在7.5至8的范围内。
[131]根据[118]至[130]中任一项所述的抗体-药物缀合物，其中所述疾病是选自以下的至少一种：肺癌、尿路上皮癌、结肠直肠癌、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、胃癌、食管胃交界腺癌、胃肠道间质瘤、子宫颈癌、食管癌、鳞状细胞癌、腹膜癌、肝癌、肝细胞癌、子宫内膜癌、子宫癌、唾液腺癌、肾癌、外阴癌、甲状腺癌、阴茎癌、白血病、恶性淋巴瘤、浆细胞瘤、骨髓瘤、神经上皮组织肿瘤、神经鞘肿瘤、头颈癌、皮肤癌、咽癌、胆囊癌、胆管癌、间皮瘤、佩吉特氏病和肉瘤。
[132]根据[131]所述的抗体-药物缀合物，其中所述疾病是结肠直肠癌。
[133]根据[131]所述的抗体-药物缀合物，其中所述疾病是乳腺癌。
[134]用于治疗可通过抗肿瘤免疫-活化作用改善的疾病的化合物，其中所述化合物由下式代表并在肿瘤中释放：
[式9]
。
[135]根据[134]所述的化合物，其中所述化合物具有至少一种选自以下的作用：
(1)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的生长的促进作用；和
(2)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的活化作用。
[136]根据[134]或[135]所述的化合物，其中所述化合物对形成针对肿瘤的免疫记忆具有促进作用。
[137]根据[134]至[136]中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有至少一种选自以下的作用：
(1)对肿瘤中的树突细胞的数目的增加的促进作用；
(2)对树突细胞的活化作用；和
(3)对癌细胞上的MHC I类的表达水平的升高的促进作用。
[138]根据[134]至[137]中任一项所述的化合物，其中所述疾病是选自以下的至少一种：肺癌、尿路上皮癌、结肠直肠癌、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、胃癌、食管胃交界腺癌、胃肠道间质瘤、子宫颈癌、食管癌、鳞状细胞癌、腹膜癌、肝癌、肝细胞癌、子宫内膜癌、子宫癌、唾液腺癌、肾癌、外阴癌、甲状腺癌、阴茎癌、白血病、恶性淋巴瘤、浆细胞瘤、骨髓瘤、神经上皮组织肿瘤、神经鞘肿瘤、头颈癌、皮肤癌、咽癌、胆囊癌、胆管癌、间皮瘤、佩吉特氏病和肉瘤。
[139]抗体-药物缀合物用于生产药物的用途，所述药物用于通过与免疫检查点抑制剂组合施用来治疗疾病，其中在所述抗体-药物缀合物中，由下式代表的药物-接头经由硫醚键与所述抗体缀合：
[式10]
其中A代表与抗体的连接位置。
[140]根据[139]所述的用途，其中所述抗体-药物缀合物中的抗体是抗HER2抗体、抗HER3抗体、抗TROP2抗体或抗B7-H3抗体。
[141]根据[140]所述的用途，其中所述抗体-药物缀合物中的抗体是抗HER2抗体。
[142]根据[140]或[141]所述的用途，其中所述抗HER2抗体是包含重链和轻链的抗体，所述重链由SEQ ID NO:1的氨基酸残基1至449组成的氨基酸序列组成，且所述轻链由SEQ ID NO:2的氨基酸残基1至214组成的氨基酸序列组成。
[143]根据[140]或[141]所述的用途，其中所述抗HER2抗体是包含由SEQ ID NO:1代表的氨基酸序列组成的重链和由SEQ ID NO:2代表的氨基酸序列组成的轻链的抗体。
[144]根据[139]至[143]中任一项所述的用途，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目在2至8的范围内。
[145]根据[139]至[143]中任一项所述的用途，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目在7至8的范围内。
[146]根据[139]至[143]中任一项所述的用途，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目在7.5至8的范围内。
[147]根据[139]至[146]中任一项所述的用途，其中所述免疫检查点抑制剂是抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体或抗CTLA-4抗体。
[148]根据[147]所述的用途，其中所述免疫检查点抑制剂是抗PD-1抗体。
[149]根据[147]所述的用途，其中所述免疫检查点抑制剂是抗PD-L1抗体。
[150]根据[147]所述的用途，其中所述免疫检查点抑制剂是抗CTLA-4抗体。
[151]根据[139]至[150]中任一项所述的用途，其中所述抗体-药物缀合物和所述免疫检查点抑制剂分别作为活性组分包含在不同制剂中，并且同时或不同时施用。
[152]根据[139]至[150]中任一项所述的用途，其中所述抗体-药物缀合物和所述免疫检查点抑制剂作为活性组分包含在单一制剂中并施用。
[153]根据[139]至[152]中任一项所述的用途，其中所述用途用于治疗癌症。
[154]根据[153]所述的用途，其中所述癌症是选自以下的至少一种：肺癌、尿路上皮癌、结肠直肠癌、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、胃癌、食管胃交界腺癌、胃肠道间质瘤、子宫颈癌、食管癌、鳞状细胞癌、腹膜癌、肝癌、肝细胞癌、子宫内膜癌、子宫癌、唾液腺癌、肾癌、外阴癌、甲状腺癌、阴茎癌、白血病、恶性淋巴瘤、浆细胞瘤、骨髓瘤、神经上皮组织肿瘤、神经鞘肿瘤、头颈癌、皮肤癌、咽癌、胆囊癌、胆管癌、间皮瘤、佩吉特氏病和肉瘤。
[155]根据[154]所述的用途，其中所述癌症是结肠直肠癌。
[156]根据[154]所述的用途，其中所述癌症是乳腺癌。
[157]根据[139]至[156]中任一项所述的用途，其中所述抗体-药物缀合物具有抗肿瘤免疫-活化作用。
[158]根据[139]至[157]中任一项所述的用途，其中所述抗体-药物缀合物具有至少一种选自以下的作用：
(1)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的生长的促进作用；和
(2)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的活化作用。
[159]根据[139]至[158]中任一项所述的用途，其中所述抗体-药物缀合物对形成针对肿瘤的免疫记忆具有促进作用。
[160]根据[159]所述的用途，其中所述肿瘤表达所述抗体-药物缀合物中的抗体的抗原。
[161]根据[159]所述的用途，其中所述肿瘤的一部分细胞不表达所述抗体-药物缀合物中的抗体的抗原。
[162]根据[139]至[161]中任一项所述的用途，其中所述抗体-药物缀合物具有至少一种选自以下的作用：
(1)对肿瘤中的树突细胞的数目的增加的促进作用；
(2)对树突细胞的活化作用；和
(3)对癌细胞上的MHC I类的表达水平的升高的促进作用。
[163]根据[139]至[162]中任一项所述的用途，其中所述免疫检查点抑制剂使通过所述抗体-药物缀合物促进的癌细胞上PD-L1的表达水平的升高而生成的免疫抑制信号失活，且由此所述抗体-药物缀合物表现出更高的抗肿瘤作用。
[164]抗体-药物缀合物用于生产药物的用途，所述药物用于治疗可通过抗肿瘤免疫-活化作用改善的疾病，其中在所述抗体-药物缀合物中，由下式代表的药物-接头经由硫醚键与所述抗体缀合：
[式11]
其中A代表与抗体的连接位置。
[165]根据[164]所述的用途，其中所述抗体-药物缀合物具有至少一种选自以下的作用：
(1)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的生长的促进作用；和
(2)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的活化作用。
[166]根据[164]或[165]所述的用途，其中所述抗体-药物缀合物对形成针对肿瘤的免疫记忆具有促进作用。
[167]根据[166]所述的用途，其中所述肿瘤表达所述抗体-药物缀合物中的抗体的抗原。
[168]根据[166]所述的用途，其中所述肿瘤的一部分细胞不表达所述抗体-药物缀合物中的抗体的抗原。
[169]根据[164]至[168]中任一项所述的用途，其中所述用途用于生产药物，所述药物用于治疗可通过至少一种选自以下的作用改善的疾病：
(1)对肿瘤中的树突细胞的数目的增加的促进作用；
(2)对树突细胞的活化作用；和
(3)对癌细胞上的MHC I类的表达水平的升高的促进作用。
[170]根据[164]至[169]中任一项所述的用途，其中所述抗体-药物缀合物中的抗体是抗HER2抗体、抗HER3抗体、抗TROP2抗体或抗B7-H3抗体。
[171]根据[170]所述的用途，其中所述抗体-药物缀合物中的抗体是抗HER2抗体。
[172]根据[170]或[171]所述的用途，其中所述抗HER2抗体是包含重链和轻链的抗体，所述重链由SEQ ID NO:1的氨基酸残基1至449组成的氨基酸序列组成，且所述轻链由SEQ ID NO:2的氨基酸残基1至214组成的氨基酸序列组成。
[173]根据[170]或[171]所述的用途，其中所述抗HER2抗体是包含由SEQ ID NO:1代表的氨基酸序列组成的重链和由SEQ ID NO:2代表的氨基酸序列组成的轻链的抗体。
[174]根据[164]至[173]中任一项所述的用途，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目在2至8的范围内。
[175]根据[164]至[173]中任一项所述的用途，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目在7至8的范围内。
[176]根据[164]至[173]中任一项所述的用途，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目在7.5至8的范围内。
[177]根据[164]至[176]中任一项所述的用途，其中所述疾病是选自以下的至少一种：肺癌、尿路上皮癌、结肠直肠癌、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、胃癌、食管胃交界腺癌、胃肠道间质瘤、子宫颈癌、食管癌、鳞状细胞癌、腹膜癌、肝癌、肝细胞癌、子宫内膜癌、子宫癌、唾液腺癌、肾癌、外阴癌、甲状腺癌、阴茎癌、白血病、恶性淋巴瘤、浆细胞瘤、骨髓瘤、神经上皮组织肿瘤、神经鞘肿瘤、头颈癌、皮肤癌、咽癌、胆囊癌、胆管癌、间皮瘤、佩吉特氏病和肉瘤。
[178]根据[177]所述的用途，其中所述疾病是结肠直肠癌。
[179]根据[177]所述的用途，其中所述疾病是乳腺癌。
[180]化合物用于生产药物的用途，所述药物用于治疗可通过抗肿瘤免疫-活化作用改善的疾病，其中所述化合物由下式代表并在肿瘤中释放：
[式12]
。
[181]根据[180]所述的用途，其中所述化合物具有至少一种选自以下的作用：
(1)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的生长的促进作用；和
(2)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的活化作用。
[182]根据[180]或[181]所述的用途，其中所述化合物对形成针对肿瘤的免疫记忆具有促进作用。
[183]根据[180]至[182]中任一项所述的用途，其中所述化合物具有至少一种选自以下的作用：
(1)对肿瘤中的树突细胞的数目的增加的促进作用；
(2)对树突细胞的活化作用；和
(3)对癌细胞上的MHC I类的表达水平的升高的促进作用。
[184]根据[180]至[183]中任一项所述的用途，其中所述疾病是选自以下的至少一种：肺癌、尿路上皮癌、结肠直肠癌、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、胃癌、食管胃交界腺癌、胃肠道间质瘤、子宫颈癌、食管癌、鳞状细胞癌、腹膜癌、肝癌、肝细胞癌、子宫内膜癌、子宫癌、唾液腺癌、肾癌、外阴癌、甲状腺癌、阴茎癌、白血病、恶性淋巴瘤、浆细胞瘤、骨髓瘤、神经上皮组织肿瘤、神经鞘肿瘤、头颈癌、皮肤癌、咽癌、胆囊癌、胆管癌、间皮瘤、佩吉特氏病和肉瘤。
本发明的有利效果
本发明可以提供药物组合物和治疗方法，其通过组合施用特定抗体-药物缀合物和免疫检查点抑制剂而发挥特别优异的抗肿瘤作用和安全性。此外，本发明可以提供用于治疗可通过对针对肿瘤的免疫记忆的形成的促进作用而改善的疾病的药物组合物和治疗方法，其中包括特定抗体-药物缀合物。
附图简述
[图1]图1显示人源化抗HER2抗体的重链的氨基酸序列(SEQ ID NO:1)。
[图2]图2显示人源化抗HER2抗体的轻链的氨基酸序列(SEQ ID NO:2)。
[图3]图3是显示不同药剂对皮下移植CT26.WT-hHER2细胞的小鼠的生命延长作用的图。对用抗体-药物缀合物(1)和抗PD-1抗体(克隆RMP1-14)各自的单一施用组和组合施用组之间的生命延长作用进行比较。
[图4]图4是显示不同药剂对皮下移植CT26.WT-hHER2细胞的小鼠的生命延长作用的图。对用抗体-药物缀合物(1)和抗PD-1抗体(克隆RMP1-14)各自的单一施用组和组合施用组之间的生命延长作用进行比较。
[图5]图5是显示皮下移植(再移植)CT26.WT-hHER2细胞或CT26.WT-模拟细胞的抗体-药物缀合物(1)治疗的治愈小鼠和对照小鼠中的肿瘤体积的转变的图。
[图6]图6是显示皮下移植(再移植)CT26.WT-hHER2细胞的抗体-药物缀合物(1)治疗的治愈小鼠和对照小鼠中的对来自CT26.WT-hHER2细胞的抗原的免疫应答(产生IFNγ的脾细胞数目)的图。
[图7]图7是显示皮下移植(再移植)CT26.WT-hHER2细胞的抗体-药物缀合物(1)治疗的治愈小鼠和对照小鼠中的对来自CT26.WT-模拟细胞的抗原的免疫应答(产生IFNγ的脾细胞数目)的图。
[图8]图8是显示皮下移植(再移植)CT26.WT-模拟细胞的抗体-药物缀合物(1)治疗的治愈小鼠和对照小鼠中的对来自CT26.WT-hHER2细胞的抗原的免疫应答(产生IFNγ的脾细胞数目)的图。
[图9]图9是显示皮下移植(再移植)CT26.WT-模拟细胞的抗体-药物缀合物(1)治疗的治愈小鼠和对照小鼠中的对来自CT26.WT-模拟细胞的抗原的免疫应答(产生IFNγ的脾细胞数目)的图。
[图10]图10是显示如用流式细胞术测定的用化合物(A)处理的骨髓来源的树突细胞和用DMSO处理的骨髓来源的树突细胞中CD86的表达水平的一系列图。
[图11]图11是显示如用流式细胞术测定的用化合物(A)处理的骨髓来源的树突细胞和用DMSO处理的骨髓来源的树突细胞中MHC II类的表达水平的一系列图。
[图12]图12是显示如用流式细胞术测定的皮下移植CT26.WT-hHER2细胞的小鼠的抗体-药物缀合物(1)施用组和其对照组的肿瘤内淋巴细胞中树突细胞数目的图。
[图13]图13是显示如用流式细胞术测定的皮下移植CT26.WT-hHER2细胞的小鼠的抗体-药物缀合物(1)施用组和其对照组的肿瘤内树突细胞中CD86-阳性细胞数目的图。
[图14]图14是显示如用流式细胞术测定且表示为MFI的皮下移植CT26.WT-hHER2细胞的小鼠的抗体-药物缀合物(1)施用组和其对照组的肿瘤内树突细胞上CD86的表达水平的图。
[图15]图15是显示如用流式细胞术测定且表示为MFI的皮下移植CT26.WT-hHER2细胞的小鼠的抗体-药物缀合物(1)施用组和其对照组的癌细胞(人HER2-阳性细胞)上MHCI类的表达水平的图。
[图16]图16是显示如用流式细胞术测定且表示为MFI的皮下移植CT26.WT-hHER2细胞的小鼠的抗体-药物缀合物(1)施用组和其对照组的癌细胞(人HER2-阳性细胞)上PD-L1的表达水平的图。
[图17]图17是显示如用流式细胞术测定的用化合物(A)处理的癌细胞和用DMSO处理的那些的MHC I类的表达水平的图。
[图18]图18是显示皮下移植CT26.WT-hHER2细胞的裸小鼠的小鼠模型的抗体-药物缀合物(1)施用组及其对照组的肿瘤体积的转变的图。
[图19]图19是显示皮下移植CT26.WT-hHER2细胞的小鼠的抗体-药物缀合物(1)施用组、其对照抗体-药物缀合物施用组及其对照组的肿瘤体积的转变的图。
[图20]图20是显示用抗体-药物缀合物(1)和抗PD-1抗体(克隆RMP1-14)各自的皮下移植EMT6-hHER2细胞的小鼠的单一施用组及其组合施用组的肿瘤体积的转变的图。
[图21]图21是显示不同药剂对皮下移植CT26.WT-hHER2细胞的小鼠的生命延长作用的图。对用抗体-药物缀合物(1)和抗PD-L1抗体(克隆10F.9G2)各自的单一施用组和组合施用组之间的生命延长作用进行比较。
[图22]图22是显示不同药剂对皮下移植EMT6-hHER2细胞的小鼠的生命延长作用的图。对用抗体-药物缀合物(1)和抗PD-L1抗体(克隆10F.9G2)各自的单一施用组和组合施用组之间的生命延长作用进行比较。
[图23]图23是显示用抗体-药物缀合物(1)和抗CD4抗体各自的皮下移植CT26.WT-hHER2细胞的小鼠的单次施用组及其组合施用组的肿瘤体积的转变的图。
[图24]图24是显示用抗体-药物缀合物(1)和抗CD8抗体各自的皮下移植CT26.WT-hHER2细胞的小鼠的单一施用组及其组合施用组的肿瘤体积的转变的图。
[图25]图25是显示如用流式细胞术测定的皮下移植CT26.WT-hHER2细胞的小鼠的抗体-药物缀合物(1)施用组和其对照组的肿瘤内活细胞中CD8-阳性T细胞的分数的图。
[图26]图26是显示如用流式细胞术测定的皮下移植CT26.WT-hHER2细胞的小鼠的抗体-药物缀合物(1)施用组和其对照组的肿瘤内CD8-阳性T细胞中粒酶B-阳性细胞的分数的图。
[图27]图27是显示如用流式细胞术测定的皮下移植CT26.WT-hHER2细胞的小鼠的抗体-药物缀合物(1)施用组和其对照组的肿瘤内活细胞中粒酶B-阳性的CD8-阳性T细胞的分数的图。
[图28]图28是显示如用流式细胞术测定的皮下移植CT26.WT-hHER2细胞的小鼠的抗体-药物缀合物(1)施用组和其对照组的肿瘤内活细胞中CD4-阳性T细胞的分数的图。
[图29]图29是皮下移植CT26.WT-hHER2细胞的小鼠的抗体-药物缀合物(1)施用组及其对照组的用抗CD8抗体染色的切除肿瘤的一系列图像。
[图30]图30是显示如通过分析用抗CD8抗体染色的切除肿瘤的图像所计数的皮下移植CT26.WT-hHER2细胞的小鼠的抗体-药物缀合物(1)施用组及其对照组的肿瘤中每单位面积的CD8-阳性细胞数目的图。
[图31]图31是显示如用流式细胞术测定的用化合物(A)处理的癌细胞、用DM1-SMe处理的那些、用DM4-SMe处理的那些、用MMAE处理的那些和用DMSO处理的那些的MHC I类的表达水平的图。
[图32]图32是显示用抗体-药物缀合物(1)和抗CTLA-4抗体(克隆9H10)各自的皮下移植EMT6-hHER2细胞的小鼠的单一施用组及其组合施用组的肿瘤体积的转变的图。
实施方案的描述
在下文中，参考附图描述用于实施本发明的优选模式。给出下面描述的实施方案仅仅用于举例说明本发明的典型实施方案的一个实例，而非旨在限制本发明的范围。
[抗体-药物缀合物]
本发明中使用的抗体-药物缀合物是这样的抗体-药物缀合物，其中由下式代表的药物-接头经由硫醚键与所述抗体缀合：
[式13]
其中A代表与抗体的连接位置。
在本发明中，所述抗体-药物缀合物中的由接头和药物组成的部分结构被称为“药物-接头”。所述药物-接头与在链间二硫键位点(重链之间的两个位点，重链和轻链之间的两个位点)形成的硫醇基(thiol group)(换句话说，半胱氨酸残基的硫原子)连接。
本发明的药物-接头包括作为拓扑异构酶I抑制剂的依喜替康(IUPAC名称：(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-1,2,3,9,12,15-六氢-9-羟基-4-甲基-10H,13H-苯并[脱]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮，(也表示为化学名：(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2,3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H,12H-苯并[脱]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13(9H,15H)-二酮))作为组分。依喜替康是一种具有抗肿瘤作用的喜树碱衍生物，其由下式代表：
[式14]
。
本发明中使用的抗体-药物缀合物也可以由下式代表。
[式15]
此处，所述药物-接头经由硫醚键与抗体缀合。n的含义与所谓的缀合的药物分子的平均数目(DAR；药物：抗体比)的含义相同，并且表示每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目。
本发明中使用的抗体-药物缀合物具有抗肿瘤免疫-活化作用。
在本发明中，术语“抗肿瘤免疫-活化”是指通过活化至少一种选自T细胞和B细胞的细胞来促进发挥抗肿瘤作用的特性(Bracci L.等人, Cell Death Differ. (2014) 21,15-25, Chen DS.等人, Immunity (2013) 39, 1-10, Andersen MH.等人, Journal ofInvestigative Dermatology (2006) 126, 32-41)。
可以通过在具有正常免疫功能的小鼠中的抗肿瘤作用与T细胞和B细胞的免疫功能受损的小鼠(裸小鼠)中的抗肿瘤作用之间比较本发明中使用的抗体-药物缀合物来证实这样的情况：本发明中使用的抗体-药物缀合物通过活化至少一种选自T细胞和B细胞的细胞来促进发挥抗肿瘤作用。
本发明中使用的抗体-药物缀合物具有至少一种选自以下的作用：
(1)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的生长的促进作用；和
(2)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的活化作用。
本发明中使用的抗体-药物缀合物所具有的“对肿瘤内CD8-阳性T细胞的生长的促进作用”可以例如通过如下来证实：用流式细胞术测定活细胞中的CD45-、CD3-、CD8-阳性细胞(CD8-阳性T细胞)的分数，以检查荷瘤小鼠的抗体-药物缀合物施用组及其对照组的增加率。或者，该作用可以通过如下来证实：分析用抗CD8抗体染色的切除肿瘤的图像并计数肿瘤中每单位面积的CD8-阳性细胞的数目，以检查荷瘤小鼠的抗体-药物缀合物施用组及其对照组的增加率。
本发明中使用的抗体-药物缀合物所具有的“对肿瘤内CD8-阳性T细胞的活化作用”可以例如通过如下来证实：用流式细胞术测定CD8-阳性T细胞中的粒酶B-阳性细胞的分数，以检查荷瘤小鼠的抗体-药物缀合物施用组及其对照组的增加率。或者，该作用可以通过如下来证实：用流式细胞术测定活细胞中粒酶B-阳性细胞的分数，以检查增加率。
本发明中使用的抗体-药物缀合物对形成针对肿瘤的免疫记忆具有促进作用。该作用有助于上述“抗肿瘤免疫-活化作用”。
在从树突细胞或癌细胞呈递肿瘤来源的抗原时，T细胞被活化以引起免疫应答，发挥抗肿瘤作用。
在本发明中，短语“针对肿瘤的免疫记忆的形成”是指呈递有肿瘤来源的抗原的T细胞从其生成记忆T细胞并由此形成针对抗原的免疫应答的记忆的现象。该现象允许发挥针对具有抗原的肿瘤的持续的抗肿瘤作用，并且进一步允许再次发挥对具有抗原的肿瘤的复发的抗肿瘤作用。
本发明中使用的抗体-药物缀合物所具有的“对针对肿瘤的免疫记忆的形成的促进作用”可以例如通过如下来证实：将抗体-药物缀合物施用于荷瘤小鼠并将肿瘤再植入已经历完全肿瘤消退的小鼠中以测定肿瘤增殖(消退)-抑制率。或者，该作用可以通过如下来证实：从每只小鼠切除脾脏并将肿瘤来源的抗原添加至脾脏以测定免疫应答(例如，产生IFNγ的脾细胞的数目)的增加率。
本发明中使用的抗体-药物缀合物具有对免疫记忆的形成的促进作用，在相同个体中，所述免疫记忆不仅针对表达所述抗体-药物缀合物中的抗体的抗原的肿瘤，而且针对不表达所述抗体-药物缀合物中的抗体的抗原的肿瘤。
例如，在所述抗体-药物缀合物中的抗体是抗HER2抗体的情况下，在相同个体中，本发明中使用的抗体-药物缀合物不仅对针对表达HER2的肿瘤的免疫记忆的形成具有促进作用，而且对针对不表达HER2的肿瘤的免疫记忆的形成也具有促进作用。
此外，本发明中使用的抗体-药物缀合物具有至少一种选自以下的作用：
(1)对肿瘤中的树突细胞的数目的增加的促进作用；
(2)对树突细胞的活化作用；和
(3)对癌细胞上的MHC I类的表达水平的升高的促进作用。
这些作用有助于上述“对针对肿瘤的免疫记忆的形成的促进作用”，并最终有助于上述“抗肿瘤免疫-活化作用”。
本发明中使用的抗体-药物缀合物所具有的“对肿瘤中树突细胞的数目的增加的促进作用”可以例如通过如下来证实：用流式细胞术测定CD45-阳性细胞(淋巴细胞)中的CD11c-、MHC II类-、CD45-阳性细胞(树突细胞，DC)的分数，以检查荷瘤小鼠的抗体-药物缀合物施用组及其对照组的增加率。
本发明中使用的抗体-药物缀合物所具有的“对树突细胞的活化作用”可以例如通过如下来证实：用流式细胞术测定表达CD86(活化标志物)的树突细胞的分数，以检查荷瘤小鼠的抗体-药物缀合物施用组及其对照组的增加率。或者，该作用可以通过如下来证实：用流式细胞术测定树突细胞上的CD86的表达水平(MFI(平均荧光强度))，以检查荷瘤小鼠的抗体-药物缀合物施用组及其对照组的增加率。
本发明中使用的抗体-药物缀合物所具有的“对癌细胞上的MHC I类的表达水平的升高的促进作用”可以例如通过如下来证实：用流式细胞术测定癌细胞上的MHC I类的表达水平(MFI)，以检查荷瘤小鼠的抗体-药物缀合物施用组及其对照组的增加率。
本发明中使用的抗体-药物缀合物偶尔具有对癌细胞上的PD-L1的表达水平的升高的促进作用。免疫检查点抑制剂使通过该作用生成的免疫抑制信号失活，且由此所述抗体-药物缀合物可以表现出更高的抗肿瘤作用。因此，如果与免疫检查点抑制剂组合使用，预期本发明中使用的抗体-药物缀合物表现出更高的抗肿瘤作用。
本发明中使用的抗体-药物缀合物所具有的“对癌细胞上的PD-L1的表达水平的升高的促进作用”可以例如通过如下来证实：用流式细胞术测定癌细胞上的PD-L1的表达水平(MFI)，以检查荷瘤小鼠的抗体-药物缀合物施用组及其对照组的增加率。
在迁移至癌细胞中之后，本发明中使用的抗体-药物缀合物在接头部分处切割，以释放由下式代表的化合物：
[式16]
(下文中，称为“化合物(A)”)。
推测化合物(A)是本发明中使用的抗体-药物缀合物的抗肿瘤活性的原始来源，并且已经证实其具有拓扑异构酶I抑制作用(Ogitani Y.等人, Clinical Cancer Research,2016, Oct 15;22(20):5097-5108, Epub 2016 Mar 29)。
化合物(A)具有对树突细胞的活化作用和对癌细胞上的MHC I类的表达水平的升高的促进作用。
化合物(A)所具有的“对树突细胞的活化作用”可以例如通过如下来证实：用流式细胞术测定CD86的表达水平，以检查用化合物(A)处理的骨髓来源的树突细胞和用DMSO处理的那些的增加率。
化合物(A)所具有的“对癌细胞上的MHC I类的表达水平的升高的促进作用”可以例如通过如下来证实：用流式细胞术测定MHC I类的表达水平，以检查用化合物(A)处理的癌细胞和用DMSO处理的那些的增加率。
化合物(A)所具有的“对树突细胞的活化作用”和“对癌细胞上的MHC I类的表达水平的升高的促进作用”是与本发明中使用的抗体-药物缀合物所具有的“对树突细胞的活化作用”和“对癌细胞上的MHC I类的表达水平的升高的促进作用”相关的作用。如上所述，化合物(A)是在本发明中使用的抗体-药物缀合物迁移至癌细胞之后从本发明中使用的抗体-药物缀合物释放的化合物。
因此，预期在肿瘤中释放化合物(A)的药物组合物如同本发明中使用的抗体-药物缀合物一样具有至少一种选自以下的作用：
(1)对肿瘤中的树突细胞的数目的增加的促进作用；
(2)对树突细胞的活化作用；和
(3)对癌细胞上的MHC I类的表达水平的升高的促进作用。
进一步，如同本发明中使用的抗体-药物缀合物一样，预期在肿瘤中释放化合物(A)的药物组合物具有对针对肿瘤的免疫记忆的形成的促进作用。
如上所述，化合物(A)是在本发明中使用的抗体-药物缀合物迁移至癌细胞之后从本发明中使用的抗体-药物缀合物生成的化合物。
因此，预期在肿瘤中释放化合物(A)的药物组合物如同本发明中使用的抗体-药物缀合物一样具有至少一种选自以下的作用：
(1)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的生长的促进作用；和
(2)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的活化作用，
并且此外预期其具有“抗肿瘤免疫-活化作用”。
已知本发明中使用的抗体-药物缀合物具有旁观者效应(Ogitani Y.等人,Cancer Science (2016) 107, 1039-1046)。
通过一种方法发挥旁观者效应，使得本发明中使用的抗体-药物缀合物在表达靶标的癌细胞中内化，且然后释放的化合物(A)也对存在于其周围且不表达靶标的癌细胞发挥抗肿瘤作用。
甚至当与免疫检查点抑制剂组合使用时，也发挥本发明中使用的抗体-药物缀合物所具有的旁观者作用作为优异的抗肿瘤作用。
[用于抗体-药物缀合物产生的抗体]
用于产生根据本发明的抗体-药物缀合物的抗体可以源自任何物种，并且优选是源自人、大鼠、小鼠或兔的抗体。在当抗体源自人物种以外的物种的情况下，其优选使用众所周知的技术进行嵌合或人源化。本发明的抗体可以是多克隆抗体或单克隆抗体，并且优选为单克隆抗体。
用于产生根据本发明的抗体-药物缀合物的抗体是优选具有能够靶向癌细胞的特征的抗体，且优选为具有例如识别癌细胞的特性、结合癌细胞的特性、内化于癌细胞中的特性和/或针对癌细胞的杀细胞活性的抗体。
可以使用流式细胞术证实抗体针对癌细胞的结合活性。抗体至肿瘤细胞中的内化可以使用如下证实：(1)使用结合治疗性抗体的二抗(荧光标记的)在荧光显微镜下显现掺入细胞中的抗体的测定法(Cell Death and Differentiation (2008) 15, 751-761)，(2)使用结合治疗性抗体的二抗(荧光标记的)测量掺入细胞的荧光强度的测定法(MolecularBiology of the Cell, Vol. 15, 5268-5282, December 2004)，或(3)使用结合治疗性抗体的免疫毒素的Mab-ZAP测定法，其中毒素在掺入细胞后释放以抑制细胞生长(BioTechniques 28: 162-165, January 2000)。 作为免疫毒素，可以使用白喉毒素催化结构域和蛋白G的重组复合蛋白。
可以通过测定针对细胞生长的抑制活性在体外证实抗体的抗肿瘤活性。例如，培养过表达抗体的靶蛋白的癌细胞系，并将抗体以不同浓度添加至培养系统中以测定针对病灶形成、集落形成和球状体生长的抑制活性。抗肿瘤活性可以例如通过如下在体内证实：将抗体施用于移植高度表达靶蛋白的癌细胞系的裸小鼠，并测定癌细胞中的变化。
由于在抗体-药物缀合物中缀合的化合物发挥抗肿瘤作用，所以优选但不是必需的是，抗体本身应当具有抗肿瘤作用。为了特异性和选择性发挥抗肿瘤化合物针对癌细胞的细胞毒性活性的目的，重要且还优选的是，抗体应当具有内化以迁移至癌细胞中的特性。
用于产生根据本发明的抗体-药物缀合物的抗体可以通过本领域已知的程序获得。例如，可以使用本领域通常实施的方法获得本发明的抗体，所述方法涉及用抗原多肽免疫动物并收集和纯化体内产生的抗体。抗原的来源不限于人，并且可以用源自非人动物诸如小鼠、大鼠等的抗原免疫动物。在这种情况下，可以测试结合获得的异源抗原的抗体与人抗原的交叉反应性，以筛选适用于人类疾病的抗体。
或者，根据本领域已知的方法将产生针对抗原的抗体的抗体产生细胞与骨髓瘤细胞融合(例如，Kohler和Milstein, Nature (1975) 256, p. 495-497; 和Kennet, R.编,Monoclonal Antibodies, p. 365-367, Plenum Press, N.Y. (1980))以建立杂交瘤，从其中进而可以获得单克隆抗体。
可以通过基因工程改造宿主细胞以产生编码抗原蛋白的基因来获得抗原。具体地，制备允许抗原基因的表达的载体并将其转移至宿主细胞中，使得表达基因。可以纯化因此表达的抗原。还可以通过用上述基因工程改造的表达抗原的细胞或表达抗原的细胞系免疫动物的方法获得抗体。
用于产生根据本发明的抗体-药物缀合物的抗体优选为通过出于降低对人的异源抗原性的目的而人工修饰获得的重组抗体，诸如嵌合抗体或人源化抗体，或者优选为仅具有源自人的抗体的基因序列的抗体，即人抗体。可以使用已知的方法产生这些抗体。
作为嵌合抗体，可以例举其中抗体可变区和恒定区源自不同物种的抗体，例如，其中小鼠或大鼠来源的抗体可变区与人来源的抗体恒定区连接的嵌合抗体(Proc. Natl.Acad. Sci. USA, 81, 6851-6855, (1984))。
作为人源化抗体，可以例举通过仅将异源抗体的互补决定区(CDR)整合至人来源的抗体中获得的抗体(Nature (1986) 321, pp.522-525)，和通过通过CDR移植方法将异源抗体的框架的氨基酸残基的部分以及异源抗体的CDR序列移植至人抗体而获得的抗体(WO90/07861)，以及使用基因转化诱变策略人源化的抗体(US专利号5821337)。
作为人抗体，可以例举通过使用具有包括人抗体的重链和轻链的基因的人染色体片段的产生人抗体的小鼠生成的抗体(参见Tomizuka, K.等人, Nature Genetics (1997)16, p.133-143; Kuroiwa, Y.等人, Nucl. Acids Res. (1998) 26, p.3447-3448;Yoshida, H.等人, Animal Cell Technology:Basic and Applied Aspects vol.10,p.69-73 (Kitagawa, Y., Matsuda, T. 和Iijima, S.编), Kluwer AcademicPublishers, 1999; Tomizuka, K.等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (2000) 97,p.722-727, 等)。作为替代方案，可以例举通过噬菌体展示获得的抗体，所述抗体选自人抗体文库(参见Wormstone, I. M.等人, Investigative Ophthalmology & VisualScience. (2002)43 (7), p.2301-2308; Carmen, S.等人, Briefings in FunctionalGenomics and Proteomics (2002), 1(2), p.189-203; Siriwardena, D.等人,Ophthalmology (2002) 109(3), p.427-431, 等)。
在本发明中，还包括用于产生根据本发明的抗体-药物缀合物的抗体的修饰变体。修饰的变体是指通过对根据本发明的抗体进行化学或生物修饰而获得的变体。化学修饰的变体的实例包括包含化学部分连接至氨基酸骨架的变体，包含化学部分连接至N-连接或O-连接的碳水化合物链的变体，等。生物学修饰的变体的实例包括通过翻译后修饰(诸如N-连接或O-连接的糖基化、N-或C-末端加工、脱酰胺、天冬氨酸的异构化或甲硫氨酸的氧化)获得的变体，以及其中通过在原核宿主细胞中表达而将甲硫氨酸残基添加至N末端的的变体。进一步，修饰的变体的含义中还包括标记以便使得能够检测或分离根据本发明的抗体或抗原的抗体，例如酶标记的抗体、荧光标记的抗体和亲和标记的抗体。这种根据本发明的抗体的修饰变体可用于提高抗体的稳定性和血液保留，降低其抗原性，检测或分离抗体或抗原，等等。
进一步，通过调节与根据本发明的抗体连接的聚糖的修饰(糖基化、去岩藻糖基化等)，可以增强抗体依赖性的细胞的细胞毒性活性。作为调节抗体的聚糖的修饰的技术，WO99/54342、WO 00/61739、WO 02/31140等是已知的。然而，该技术不限于此。在根据本发明的抗体中，还包括其中调节聚糖的修饰的抗体。
已知将在培养的哺乳动物细胞中产生的抗体重链的羧基末端的赖氨酸残基缺失(Journal of Chromatography A, 705: 129-134 (1995))，并且还已知将在培养的哺乳动物细胞中产生的抗体重链的羧基末端的两个氨基酸残基(甘氨酸和赖氨酸)缺失并将新位于羧基末端的脯氨酸残基酰胺化(Analytical Biochemistry, 360: 75-83 (2007))。 然而，重链序列的这种缺失和修饰不影响抗体的抗原结合亲和力和效应子功能(补体的活化，抗体依赖性细胞毒性等)。因此，在根据本发明的抗体中，还包括经受这种修饰的抗体和该抗体的功能片段，并且还包括其中在重链的羧基末端已缺失一个或两个氨基酸的缺失变体、通过缺失变体的酰胺化而获得的变体(例如，其中羧基末端脯氨酸残基已被酰胺化的重链)等。在根据本发明的抗体重链的羧基末端具有缺失的缺失变体的类型不限于上述变体，只要抗原结合亲和力和效应子功能是保守的。构成根据本发明的抗体的两条重链可以是选自全长重链和上述缺失变体的一种类型，或者可以是选自其中的两种类型的组合。每种缺失变体的量的比率可以受产生根据本发明的抗体的培养的哺乳动物细胞的类型和培养条件的影响；然而，可以优选例举其中在根据本发明的抗体中的两条重链的两者中已缺失在羧基末端的一个氨基酸残基的抗体。
作为根据本发明的抗体的同种型，例如，可以列举IgG (IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)，并且可以优选列举IgG1或IgG2。
适合于产生根据本发明的抗体-药物缀合物的抗体的实例可以包括但不特别限于抗HER2抗体、抗HER3抗体、抗TROP2抗体、抗B7-H3抗体、抗CD3抗体、抗CD30抗体、抗CD33抗体、抗CD37抗体、抗CD56抗体、抗CD98抗体、抗DR5抗体、抗EGFR抗体、抗EPHA2抗体、抗FGFR2抗体、抗FGFR4抗体、抗FOLR1抗体、抗VEGF抗体、抗CD20抗体、抗CD22抗体、抗CD70抗体、抗PSMA抗体、抗CEA抗体和抗间皮素抗体，并且可以优选例举抗HER2抗体、抗HER3抗体、抗TROP2抗体和抗B7-H3抗体，并且更优选例举抗HER2抗体。
在本发明中，术语“抗HER2抗体”是指特异性结合HER2(人表皮生长因子受体2型；ErbB-2)并且优选具有通过结合HER2而在表达HER2的细胞中内化的活性的抗体。
抗HER2抗体的实例包括曲妥珠单抗(美国专利号5821337)和帕妥珠单抗(国际公开号WO 01/00245)，并且优选例举曲妥珠单抗。
在本发明中，术语“曲妥珠单抗”也称为HERCEPTIN(注册商标)、huMAb4D5-8或rhuMAb4D5-8，并且是包含重链和轻链的人源化抗HER2抗体，所述重链由SEQ ID NO:1的氨基酸残基1至449组成的氨基酸序列组成(图1)，且所述轻链由SEQ ID NO:2的氨基酸残基1至214组成的氨基酸序列组成(图2)。
用于产生根据本发明的抗体-药物缀合物的优选的抗HER2抗体是：
(1)包含重链和轻链的抗体，所述重链由SEQ ID NO:1的氨基酸残基1至449组成的氨基酸序列组成，且所述轻链由SEQ ID NO:2的氨基酸残基1至214组成的氨基酸序列组成；或
(2)包含由SEQ ID NO:1代表的氨基酸序列组成的重链和由SEQ ID NO:2代表的氨基酸序列组成的轻链的抗体。
在本发明中，术语“抗HER3抗体”是指特异性结合HER3(人表皮生长因子受体3型；ErbB-3)并且优选具有通过结合HER3而在表达HER3的细胞中内化的活性的抗体。
抗HER3抗体的实例包括patritumab (U3-1287)、U1-59(国际公开号WO 2007/077028)、MM-121 (seribantumab)、国际公开号WO 2008/100624中描述的抗ERBB3抗体、RG-7116 (lumretuzumab)和LJM-716(elgemtumab)，并且可以优选例举patritumab和U1-59。
在本发明中，术语“抗TROP2抗体”是指特异性结合TROP2 (TACSTD2：肿瘤相关的钙信号转导物2；EGP-1)并且优选具有通过结合TROP2而在表达TROP2的细胞中内化的活性的抗体。
抗TROP2抗体的实例包括hTINA1-H1L1 (国际公开号WO 2015/098099)。
在本发明中，术语“抗B7-H3抗体”是指特异性结合B7-H3并且优选具有通过结合B7-H3而在表达B7-H3的细胞中内化的活性的抗体。
抗B7-H3抗体的实例包括M30-H1-L4(国际公开号WO2014/057687)。
[用于抗体-药物缀合物产生的药物-接头中间体]
用于产生根据本发明的抗体-药物缀合物的药物-接头中间体由下式代表。
[式17]
所述药物-接头中间体可以表示为化学名N- [6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]甘氨酰基甘氨酰基-L-苯丙氨酰基-N-[(2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[脱]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-1-基]氨基}-2-氧代乙氧基)甲基]甘氨酰胺，并且可参考国际公开号WO2014/057687、国际公开号WO 2015/098099、国际公开号WO 2015/115091、国际公开号WO2015/155998等等中的描述来产生。
[抗体和药物-接头中间体的缀合]
本发明中使用的抗体-药物缀合物可以通过使上述药物-连接物中间体和具有硫醇基(或称为巯基)的抗体反应来产生。
具有巯基的抗体可通过本领域中众所周知的方法获得(Hermanson, G. T,Bioconjugate Techniques, pp. 56-136, pp. 456-493, Academic Press (1996))。 例如，在抗体内每个链间二硫化物使用0.3至3摩尔当量的还原剂诸如三(2-羧乙基)膦盐酸盐(TCEP)并在含有螯合剂诸如乙二胺四乙酸(EDTA)的缓冲溶液中与抗体反应，可以获得在抗体内具有巯基的抗体，所述巯基具有部分或完全还原的链间二硫化物。
进一步，通过每个具有巯基的抗体使用2至20摩尔当量的药物-接头中间体，可以产生其中每个抗体分子缀合2至8个药物分子的抗体-药物缀合物。
产生的抗体-药物缀合物的每个抗体分子的缀合药物分子的平均数目可以例如通过如下来测定：基于抗体-药物缀合物及其缀合前体在280nm和370nm的两个波长下的UV吸光度的测量值的计算方法(UV方法)，或基于对通过用还原剂处理抗体-药物缀合物获得的片段的HPLC测量值定量的计算方法(HPLC方法)。
抗体和药物-接头中间体之间的缀合和抗体-药物缀合物的每个抗体分子的缀合药物分子的平均数目的计算可以参考国际公开号WO 2014/057687、国际公开号WO 2015/098099、国际公开号WO 2015/115091、国际公开号WO 2015/155998等等中的描述来进行。
在本发明中，术语“抗HER2抗体-药物缀合物”是指这样的抗体-药物缀合物，使得抗体-药物缀合物中的抗体是抗HER2抗体。
本发明中使用的抗HER2抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目优选为2至8，更优选为3至8，甚至更优选为7至8，甚至更优选为7.5至8，且甚至更优选为约8。
本发明中使用的抗HER2抗体-药物缀合物可以参考国际公开号WO 2015/115091等等中的描述来产生。
在本发明中，术语“抗HER3抗体-药物缀合物”是指这样的抗体-药物缀合物，使得抗体-药物缀合物中的抗体是抗HER3抗体。
本发明中使用的抗HER3抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目优选为2至8，更优选为3至8，甚至更优选为7至8，甚至更优选为7.5至8，且甚至更优选为约8。
本发明中使用的抗HER3抗体-药物缀合物可以参考国际公开号WO 2015/155998等等中的描述来产生。
在本发明中，术语“抗TROP2抗体-药物缀合物”是指这样的抗体-药物缀合物，使得抗体-药物缀合物中的抗体是抗TROP2抗体。
本发明中使用的抗TROP2抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目优选为2至8，更优选为3至5，甚至更优选为3.5至4.5，且甚至更优选为约4。
本发明中使用的抗TROP2抗体-药物缀合物可以参考国际公开号WO 2015/098099等等中的描述来产生。
在本发明中，术语“抗B7-H3抗体-药物缀合物”是指这样的抗体-药物缀合物，使得抗体-药物缀合物中的抗体是抗B7-H3抗体。
本发明中使用的抗B7-H3抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目优选为2至8，更优选为3至5，甚至更优选为3.5至4.5，且甚至更优选为约4。
本发明中使用的抗B7-H3抗体-药物缀合物可以参考国际公开号WO 2014/057687等等中的描述来产生。
[免疫检查点抑制剂]
在本发明中，术语“免疫检查点抑制剂”是指抑制免疫抑制系统以活化肿瘤免疫的药剂。
本发明中使用的免疫检查点抑制剂的优选实例可以包括但不特别限于抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体和抗CTLA-4抗体，并且可以更优选例举抗PD-1抗体和抗PD-L1抗体。
在本发明中，术语“抗PD-1抗体”是指特异性结合PD-1(程序性细胞死亡-1；CD279；PDCD1)并且具有减少、抑制和/或干扰由PD-1和作为结合配偶体的PD-L1或PD-L2之间的相互作用引起的信号转导的活性的抗体。本发明中使用的抗PD-1抗体没有特别限制，只要已证实其临床效力和安全性，并且可以优选例举纳武单抗(国际公开号WO 2006/121168等)和派姆单抗(国际公开号WO 2008/156712等)。为了在临床前研究中证实与本发明中使用的抗体-药物缀合物组合使用的效果的目的，可以使用市售的用于研究的抗PD-1抗体(例如，克隆RMP1-14)等。
在本发明中，术语“抗PD-L1抗体”是指特异性结合PD-L1(程序性细胞死亡配体1；CD274；B7-H1)并且具有减少、抑制和/或干扰由PD-L1和作为结合配偶体的PD-1或B7.1(CD80)之间的相互作用引起的信号转导的活性的抗体。本发明中使用的抗PD-L1抗体没有特别限制，只要已证实其临床效力和安全性，并且可以优选例举阿特朱单抗(国际公开号WO2010/077634等)、德瓦鲁单抗(国际公开号WO 2011/066389等)和阿维鲁单抗(国际公开号WO 2013/079174等)。为了在临床前研究中证实与本发明中使用的抗体-药物缀合物组合使用的效果的目的，可以使用市售的用于研究的抗PD-L1抗体(例如，克隆10F.9G2)等。
在本发明中，术语“抗-CTLA-4抗体”是指特异性结合CTLA-4(细胞毒性T-淋巴细胞相关蛋白4；CD152)并且具有减少、抑制和/或干扰由CTLA-4和作为结合配偶体的B7.1(CD80)或B7.2 (CD86)之间的相互作用引起的信号转导的活性的抗体。本发明中使用的抗CTLA-4抗体没有特别限制，只要已证实其临床效力和安全性，并且可以优选例举伊匹单抗(国际公开号WO 2001/014424等)和曲美木单抗(国际公开号WO 2000/037504等)。为了在临床前研究中证实与本发明中使用的抗体-药物缀合物组合使用的效果的目的，可以使用市售的用于研究的抗CTLA-4抗体(例如，克隆9H10)等。
[药物]
以下描述了其中组合施用根据本发明的抗体-药物缀合物和免疫检查点抑制剂的药物组合物和治疗方法，以及用于治疗可通过抗肿瘤免疫-活化作用改善的疾病的药物组合物和治疗方法，其中包括根据本发明的抗体-药物缀合物。
本发明的药物组合物和治疗方法可特征在于所述抗体-药物缀合物和所述免疫检查点抑制剂作为活性组分分别包含在不同的制剂中，并且同时或不同时施用，或者特征在于所述抗体-药物缀合物和所述免疫检查点抑制剂作为活性组分包含在单一制剂中并施用。根据本发明的药物组合物和治疗方法可以使得根据本发明的抗体-药物缀合物作为活性组分包含在单一制剂中并且施用用于治疗可通过抗肿瘤免疫-活化作用改善的疾病。
本发明的药物组合物和治疗方法可用于治疗癌症，并且可优选用于治疗至少一种选自以下的疾病：肺癌(包括非小细胞肺癌)、尿路上皮癌、结肠直肠癌(也称为结肠和直肠癌，并且包括结肠癌和直肠癌)、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、胃癌(也称为胃腺癌)、食管胃交界腺癌、胃肠道间质瘤、子宫颈癌、食管癌、鳞状细胞癌、腹膜癌、肝癌、肝细胞癌、子宫内膜癌、子宫癌、唾液腺癌、肾癌、外阴癌、甲状腺癌、阴茎癌、白血病、恶性淋巴瘤、浆细胞瘤、骨髓瘤、神经上皮组织肿瘤、神经鞘肿瘤、头颈癌、皮肤癌、咽癌、胆囊癌、胆管癌、间皮瘤、佩吉特氏病和肉瘤。
本发明的药物组合物和治疗方法可以选择性用作药物疗法的药剂，其为治疗癌症的主要方法，且作为结果，可以延迟癌细胞的发育，抑制其生长，并进一步杀死癌细胞。这些作用可以使癌症患者免于由癌症引起的症状或实现癌症患者的QOL的提高，并通过维持癌症患者的生命来获得治疗效果。即使本发明的药物组合物和治疗方法不能完成杀死癌细胞，它们也可以通过抑制或控制癌细胞的生长来实现癌症患者的更高的QOL，同时实现长期存活。
在这种药物疗法中，本发明的药物组合物和治疗方法可以单独用作药剂，并且此外，它们可以作为药剂与辅助疗法中的额外疗法组合使用，并且可以与外科手术、放射疗法、激素疗法等组合。此外，它们还可以用作用于新辅助疗法中的药物疗法的药剂。
除了如上所述的治疗用途以外，例如，对于根据本发明的药物组合物和治疗方法，还可以预期预防效果诸如抑制小转移癌细胞的生长和进一步杀死它们。例如，可以预期在转移过程中抑制和杀死体液中的癌细胞的效果或者例如在植入任何组织后立即抑制和杀死小癌细胞的效果。因此，可以预期癌症转移或预防效果的抑制，特别是在手术除去癌症之后。
可以预期本发明的药物组合物和治疗方法通过作为全身疗法应用于患者并且额外通过局部应用于癌组织来发挥治疗效果。
本发明的药物组合物和治疗方法可以优选用于哺乳动物，但更优选用于人。
本发明的药物组合物可以作为含有至少一种药学上合适的成分的药物组合物施用。鉴于剂量或施用浓度，本发明的药物组合物中使用的物质可以从本领域通常使用的制剂添加剂等中适当选择和应用。例如，上述药物组合物通常含有至少一种药物载体(例如，无菌液体)。本文中，液体包括例如水和油(石油和动物来源、植物来源或合成来源的油)。所述油可以是例如花生油、大豆油、矿物油或芝麻油。当静脉内施用上述药物组合物时，水是更典型的载体。盐水溶液、右旋糖水溶液和甘油水溶液也可用作液体载体，特别是用于注射溶液。合适的药物媒介物可以选自本领域中已知的媒介物。如果期望，上述组合物还可以含有痕量的保湿剂、乳化剂或pH缓冲剂。合适的药物载体的实例公开于E. W. Martin的"Remington's Pharmaceutical Sciences"中。所述制剂对应于施用模式。
各种递送系统是已知的，并且它们可用于施用本发明的药物组合物。施用途径的实例可以包括皮内、肌内、腹膜内、静脉内和皮下途径，但不限于此。例如，可以通过注射或推注进行施用。根据一个具体的优选实施方案，本发明中使用的抗体-药物缀合物和免疫检查点抑制剂的施用通过注射进行。肠胃外施用是优选的施用途径。
根据代表性实施方案，根据常规程序，将药物组合物作为适合于静脉内施用于人的药物组合物开处方。用于静脉内施用的组合物通常是无菌和等渗水性缓冲溶液中的溶液。如果必要，所述药物组合物可以含有增溶剂和局部麻醉剂以减轻注射部位处的疼痛(例如，利多卡因)。通常，上述成分提供为单独包含在容器中的冻干粉末或无水浓缩物中的任一种(其通过在具有一定量的活性剂的安瓿或小袋中密封而获得)或单位剂型的混合物。当药物组合物待通过注射施用时，其可以从含有无菌药物级的水或盐水的注射瓶施用。当通过注射施用药物组合物时，可以提供一安瓿的注射用无菌水或盐水，使得前述成分在施用前与彼此混合。
本发明的药物组合物和治疗方法可以包括除了根据本发明的抗体-药物缀合物和免疫检查点抑制剂以外的癌症治疗剂。本发明的药物组合物和治疗方法可以与其他癌症治疗剂组合施用。因此可以增强抗癌作用。用于此目的的其他抗癌剂可以与本发明的药物组合物同时、分开或随后施用于个体，并且可以在改变各自的施用间隔的同时施用。癌症治疗剂的实例包括但不限于5-氟尿嘧啶(5-FU)、帕妥珠单抗、曲妥珠单抗、紫杉醇、卡铂、顺铂、吉西他滨、卡培他滨、伊立替康(CPT-11)、多西他赛、培美曲塞、索拉非尼、长春碱、长春瑞滨、依维莫司、坦螺旋霉素(tanespimycin)、贝伐单抗、奥沙利铂、拉帕替尼、曲妥珠单抗-美坦新偶联物(T-DM1)或国际公开号WO 2003/038043中描述的药剂、LH-RH类似物(亮丙瑞林、戈舍瑞林等)、雌莫司汀磷酸盐、雌激素拮抗剂(他莫昔芬、雷洛昔芬等)和芳香酶抑制剂(阿那曲唑、来曲唑、依西美坦等)，只要它们是具有抗肿瘤活性的药剂。
药物组合物可以配制成冻干制剂或液体制剂，作为具有期望组成和所需纯度的制剂。当配制为冻干制剂时，其可以是含有本领域中使用的合适制剂添加剂的制剂。同样对于液体制剂，其可以配制为含有本领域中使用的各种制剂添加剂的液体制剂。
药物组合物的组成和浓度可以根据施用方法而变化。然而，当所述抗体-药物缀合物对抗原具有更高的亲和力(即，在对于抗原的解离常数(即，Kd值)的方面，更高的亲和力(= 更低的Kd值))时，甚至在小剂量下，本发明的药物组合物中包含的抗体-药物缀合物和免疫检查点抑制剂也可以表现出药效。因此，为了测定抗体-药物缀合物和免疫检查点抑制剂的剂量，可以鉴于与抗原的亲和力相关的情况确定剂量。当将根据本发明的抗体-药物缀合物和免疫检查点抑制剂施用于人时，例如，约0.001至100 mg/kg可以施用一次，或者以1至180天的间隔以几部分施用。
根据本发明的抗体-药物缀合物的施用方法的实例包括每三周施用0.8 mg/kg至8mg/kg一次的方法。剂量的实例包括0.8 mg/kg，1.6 mg/kg，3.2 mg/kg，5.4 mg/kg，6.4 mg/kg，7.4 mg/kg和8 mg/kg。尽管每三周施用一次(q3w)是足够的，但可以每周一次(q1w)、每两周一次(q2w)或每四周一次(q4w)进行施用。
实施例
鉴于以下所示的实施例具体描述了本发明。然而，本发明不限于这些。进一步，其决不以限制的方式进行解释。
[生产实施例1：抗体-药物缀合物的制备]
根据国际公开号WO 2015/115091中描述的生产方法，使用人源化抗HER2抗体(曲妥珠单抗)，产生抗体-药物缀合物(下文称为“抗体-药物缀合物(1)”)，其中由下式代表的药物-接头经由硫醚键与抗HER2抗体缀合：
[式18]
其中A代表与抗体的连接位置。
[生产实施例2：化合物(A)的制备]
根据国际公开号WO 2014/057687中描述的生产方法，产生由下式代表的化合物(化合物(A))：
[式19]
。
[评估实施例1：生命延长测试]
小鼠：对6周龄雌性BALB/c小鼠(BALB/c AnNCrlCrlj) (Charles River LaboratoriesJapan, Inc.)进行实验。
测定和计算表达式：通过使用电子数字卡尺(CD15-CX, Mitutoyo Corp.)每周两次测量肿瘤的长轴和短轴，并计算肿瘤体积(mm3)。计算表达式如下所示。
肿瘤体积(mm3) = 0.5 × 长轴(mm) × [短轴(mm)]2。
从动物测试伦理学的角度来看，将肿瘤体积超过3000 mm3的个体安乐死。
用特殊溶剂(10 mM组氨酸、10%海藻糖、0.02%聚山梨醇酯20，pH 5.5)稀释抗体-药物缀合物(1)(药物：抗体比：7.6)用于使用。抗PD-1抗体(克隆RMP1-14)购自Bio X Cell，并用DPBS (Sigma-Aldrich Co. LLC)稀释用于使用。在施用中，将10 mL/kg的剂量静脉内施用于每只小鼠的尾静脉。
将人HER2基因用逆转录病毒载体转染至购自美国典型培养物保藏中心的小鼠结肠直肠癌细胞系CT26.WT (CRL2638)中，以制备CT26.WT-hHER2细胞用于使用。这些细胞在其细胞膜上表达人HER2蛋白。将CT26.WT-hHER2细胞悬浮于生理盐水中，并将5.0 × 106个细胞皮下移植至每只BALB/c小鼠的右腋窝，且其后6天(第0天)将小鼠随机分组。在第0天和第7天，将抗体-药物缀合物(1)以10 mg/kg的剂量静脉内施用于每只小鼠的尾静脉，总共两次。在第0天、第3天、第7天、第10天和第14天，将抗PD-1抗体以2.5 mg/kg的剂量静脉内施用于每只小鼠的尾静脉，总共五次。建立用抗体-药物缀合物(1)和抗PD-1抗体的组合施用组，并且建立施用抗体-药物缀合物(1)的特殊溶剂的组作为对照组。每组中的小鼠数目为6，并且测量肿瘤体积，直至第43天。
结果显示于图3中。其中显示Kaplan-Meier曲线，其中当肿瘤体积超过3000 mm3的时间被认为是终点。纵坐标描绘存活率(%)，且横坐标描绘从初始施用之日起的天数。对于对照组，从第17天起发现退出，并且到第24天将所有小鼠确定为安乐死的主体。相比之下，对于抗体-药物缀合物(1)组，从第28天起发现退出，并且三只小鼠存活直至第43天。对于抗PD-1抗体组，从第21天起发现退出，并且两只小鼠存活直至第43天。此外，对于用这两种药剂的组合施用组，所有小鼠都存活直至第43天。对于该测试中的所有组中的小鼠无一观察到体重减轻。从结果来看，证实每种药剂的单次施用的抗肿瘤作用，并且进一步证实，通过组合使用两种药剂急剧增强这种效果。
[评估实施例2：生命延长测试]
以与评估实施例1中相同的方式进行测试。在第0天、第3天、第7天和第10天，将抗PD-1抗体以5 mg/kg的剂量静脉内施用于每只小鼠的尾静脉，总共四次，其中每组中的小鼠数目为20，并且测量肿瘤体积，直至第38天。通过使用Kaplan-Meier方法/时序检验(多组间的比较)，进行对照组以及抗体-药物缀合物(1)组和抗PD-1抗体组各自之间的药物作用的比较，以及抗体-药物缀合物(1)组和抗PD-1抗体组各自以及用两种药剂的组合施用组之间的药物作用的比较。当估计的肿瘤体积超过3000 mm3之日(安乐死日)被定义为事件发生之日(死亡日)。将针对多重性调整的P值表示为至小数点后第四位的数值，并且将P <0.05的值(双尾检验)视为显著差异。
结果显示于图4中。抗体-药物缀合物(1)组表现出显著优于对照组的抗肿瘤作用(P = 0.0001)。抗PD-1抗体组表现出显著优于对照组的抗肿瘤作用(P = 0.0010)。进一步，组合施用组表现出显著优于抗体-药物缀合物(1)组的抗肿瘤作用(P = 0.0006)。组合施用组表现出显著优于抗PD-1抗体组的抗肿瘤作用(P < 0.0001)。
[评估实施例3：再移植测试]
以与评估实施例1相同的方式将抗体-药物缀合物(1)施用于皮下移植CT26.WT-hHER2细胞的小鼠。在移植后5天将小鼠随机分组。从这些小鼠选择肿瘤完全消失的小鼠(下文称为“抗体-药物缀合物(1)治疗的治愈小鼠”)。未治疗的小鼠用于对照(下文称为“对照小鼠”)。
随后，将5.0 × 106个细胞的CT26.WT-hHER2细胞或CT26.WT-模拟细胞皮下移植至抗体-药物缀合物(1)治疗的治愈小鼠和对照小鼠各自的左腋窝(再移植，第0天)，并测量肿瘤体积直至第17天。每组中的小鼠数目为9。
结果显示于图5中。纵坐标描绘肿瘤体积(mm3)，且横坐标描绘从再移植之日起的天数。对于具有再移植的CT26.WT-hHER2细胞的对照小鼠和具有再移植的CT26.WT-模拟细胞的对照小鼠，发现肿瘤生长。相反，对于具有再移植的CT26.WT-hHER2细胞的抗体-药物缀合物(1)治疗的治愈小鼠和具有再移植的CT26.WT-模拟细胞的那些，发现几乎没有肿瘤生长，因此，发现肿瘤排斥。从这些结果来看，证实抗体-药物缀合物(1)的施用引起形成针对肿瘤的免疫记忆。
[评估实施例4：ELISPOT分析]
通过使用鼠IFNγ单色酶促ELISPOT测定进行该分析。从评估实施例3中使用的每只小鼠切下脾脏，并用CTL测试介质从其制备1.0 × 106个细胞/mL的脾细胞。将CT26.WT-hHER2细胞和CT26.WT-模拟细胞各自用10μg/mL丝裂霉素C处理2小时并洗涤，且然后收集细胞，并用CTL测试培养基制备1.0 × 106个细胞/mL的细胞，将其用作抗原。将脾细胞和抗原各自以100 μL/孔添加至抗-IFNγ抗体包被的PVDF-膜板中，并在37℃下共培养24小时，且然后计数产生IFNγ的脾细胞的数目。对照组和抗体-药物缀合物(1)组之间的比较通过使用Wilcoxon秩和检验进行，P值被表示为至小数点后第四位的数值，并且P < 0.05(双尾检验)的值被视为显著性差异。
结果显示于图6至9中。发现CT26.WT-hHER2细胞来源的抗原对于具有再移植的CT26.WT-hHER2细胞的抗体-药物缀合物(1)治疗的治愈小鼠的脾细胞比对于对照小鼠的脾细胞产生显著更大数目的产生IFNγ的脾细胞(P = 0.0012，图6)。还发现CT26.WT-模拟细胞来源的抗原产生显著更大数目的产生IFNγ的脾细胞(P = 0.0008，图7)。
进一步，甚至在涉及CT26.WT-模拟细胞的再移植的情况下，发现CT26.WT-hHER2细胞来源的抗原对于抗体-药物缀合物(1)治疗的治愈小鼠的脾细胞比对于对照小鼠的脾细胞产生显著更大数目的产生IFNγ的脾细胞(P = 0.0116，图8)。还发现CT26.WT-模拟细胞来源的抗原产生显著更大数目的产生IFNγ的脾细胞(P = 0.0052，图9)。
这些结果表明，在抗体-药物缀合物(1)治疗的治愈小鼠中已诱导识别除了人HER2以外的CT26.WT细胞来源的抗原的T细胞。
评估实施例3和4的结果表明抗体-药物缀合物(1)具有对针对肿瘤的免疫记忆的形成的促进作用。不仅对于表达HER2的肿瘤发现该作用，而且对于来自相同来源且不表达HER2的肿瘤也发现该作用。
因此，揭示了本发明中使用的抗体-药物缀合物具有对免疫记忆的形成的促进作用，所述免疫记忆不仅针对表达所述抗体-药物缀合物中的抗体的抗原的肿瘤，而且针对相同个体中的不表达所述抗体-药物缀合物中的抗体的抗原的肿瘤。
[评估实施例5：对体外树突细胞的作用的评估]
将BALB/c小鼠安乐死，且然后从每个股骨分离骨髓细胞，并用含有10% FBS、55 μM 2-巯基乙醇、100 U/mL青霉素、100 U/mL链霉素、1 mM丙酮酸钠、1 × 非必需氨基酸、2 mM L-谷氨酰胺和10 ng/mL小鼠GM-CSF的RPMI 1640培养基培养11天以诱导骨髓来源的树突细胞。向诱导的树突细胞的培养溶液中添加化合物(A)至0.0625 μM、0.125 μM、0.25 μM、0.5μM或1 μM的浓度。对于对照，添加量等于化合物(A)的量的DMSO。在24小时之后，通过使用Pacific Blue标记的抗小鼠CD45抗体(103126, BioLegend)、PE标记的抗小鼠CD86 (B7-2)(553692, Becton Dickinson)、APC标记的抗小鼠CD11c (550261, Becton Dickinson)和FITC标记的抗小鼠MHC II类(I-A/I-E) (11-5321-85, Thermo Fisher Scientific)进行染色，并通过使用FACS Canto II进行分析。死细胞已用购自Thermo Fisher Scientific的LIVE/DEAD可固定近红外死细胞染色试剂盒染色，并从分析中排除。
图10和11分别显示在CD86和MHC II类的表达水平的方面的CD11c-阳性细胞的流式细胞术的测量结果。发现与以DMSO作为对照的情况相比，用化合物(A)治疗提高CD86和MHC II类(其为树突细胞的成熟/活化标志物)两者的表达水平。
评估实施例5的结果表明化合物(A)具有对树突细胞的活化作用。
[评估实施例6：肿瘤内树突细胞的分析]
以与评估实施例1中相同的方式将CT26.WT-hHER2细胞移植至小鼠中，并在其后8天(第0天)将小鼠随机分组。在第0天，将抗体-药物缀合物(1)以10 mg/kg的剂量静脉内施用于每只小鼠的尾静脉。将施用抗体-药物缀合物(1)的特殊溶剂的组建立为对照组。每组中的小鼠数目为7只。在第8天将小鼠安乐死，并切除肿瘤。通过使用购自Miltenyi Biotec的肿瘤解离试剂盒(小鼠)从肿瘤制备单细胞悬浮液，并以与评估实施例5中相同的方式染色和分析。对照组和抗体-药物缀合物(1)组之间的比较通过使用Student氏t-检验进行，P值被表示为至小数点后第四位的数值，并且P < 0.05(双尾检验)的值被视为显著性差异。
结果显示于图12至14中。
发现通过施用抗体-药物缀合物(1)，肿瘤中CD45-阳性细胞(淋巴细胞)中的CD11c-、MHC II-类、CD45-阳性细胞(树突细胞，DC)的分数显著增加(图12)。
进一步，发现通过施用抗体-药物缀合物(1)，表达CD86(活化标志物)的树突细胞的数目显著增加(图13)。
此外，发现通过施用抗体-药物缀合物(1)，在MFI(平均荧光强度)的方面测定的树突细胞上CD86的表达水平显著升高(图14)。
这些结果表明，向荷瘤小鼠施用抗体-药物缀合物(1)导致肿瘤内淋巴细胞中树突细胞数目的增加，肿瘤内树突细胞中CD86阳性细胞数目的增加和树突细胞上CD86的表达水平的升高。
从评估实施例5的结果已证明，作为从抗体-药物缀合物(1)释放的药物的化合物(A)本身具有对树突细胞的活化作用。化合物(A)所具有的“对树突细胞的活化作用”是与本发明中使用的抗体-药物缀合物所具有的“对树突细胞的活化作用”相关的作用。化合物(A)是在本发明中使用的抗体-药物缀合物迁移至癌细胞之后从本发明中使用的抗体-药物缀合物生成的化合物。因此，预期化合物(A)具有相同的作用，甚至在其中抗体部分不是抗HER2抗体的抗体-药物缀合物中。
[评估实施例7：肿瘤内癌细胞的分析]
以与评估实施例6中相同的方式制备细胞悬浮液，且然后用PE标记的抗人Her2/neu(340552, Becton Dickinson)、APC标记的抗小鼠CD274 (B7-H1, PD-L1) (124312,BioLegend)和FITC标记的抗小鼠H-2Dd (110606, BioLegend)进行染色，并用流式细胞术测定癌细胞上MHC I类的表达水平和PD-L1的表达水平。死细胞已用购自Thermo FisherScientific的LIVE/DEAD可固定近红外死细胞染色试剂盒染色，并从分析中排除。对照组和抗体-药物缀合物(1)组之间的比较通过使用Student氏t-检验进行，P值被表示为至小数点后第四位的数值，并且P < 0.05(双尾检验)的值被视为显著性差异。
结果显示于图15和16中。
发现通过施用抗体-药物缀合物(1)，癌细胞(人HER2-阳性细胞)上的MHC I类的表达水平显著升高(图15)。当T细胞识别癌细胞时，MHC I类是必需的分子。因此，表明抗体-药物缀合物(1)通过促进癌细胞上MHC I类的表达水平的升高来活化抗肿瘤免疫。
进一步发现，抗体-药物缀合物(1)显著升高癌细胞上PD-L1的表达水平(图16)。已知PD-L1作用于T细胞上的PD-1以引发免疫抑制信号。因此，表明抗体-药物缀合物(1)通过促进癌细胞上PD-L1的表达水平的升高来活化抗肿瘤免疫，并且预期与PD-1抗体的组合使用使抑制信号失活，导致更高的抗肿瘤作用。
[评估实施例8：体外癌细胞的分析]
向CT26.WT-hHER2细胞的培养溶液中添加化合物(A)至0.0625 μM、0.125 μM、0.25 μM、0.5 μM或1 μM的浓度。对于对照，添加量等于化合物(A)的量的DMSO。在24小时之后，通过使用PE标记的抗人Her2/neu (340552, Becton Dickinson)和FITC标记的抗小鼠H-2Dd(110606, BioLegend)进行染色，并用流式细胞术测定癌细胞上MHC I类的表达水平。死细胞已用购自Thermo Fisher Scientific的LIVE/DEAD可固定近红外死细胞染色试剂盒染色，并从分析中排除。计算MHC I类的平均荧光强度(MFI)，并从染色细胞的MFI中减去用同种型对照处理的细胞的MFI，并将所得值用作经调整的MFI。对照组和化合物(A)组之间的比较通过使用Dunnett氏检验进行，P值被表示为至小数点后第四位的数值，并且P < 0.05(双尾检验)的值被视为显著性差异。
结果显示于图17中。
发现化合物(A)显著升高CT26.WT-hHER2细胞上MHC I类的表达水平(图17)。因此，表明化合物(A)通过促进癌细胞上MHC I类的表达水平的升高来活化抗肿瘤免疫。
[评估实施例9：使用裸小鼠的抗肿瘤测试]
小鼠：对6周龄雌性BALB/c-裸小鼠(CAnN.Cg-Foxn1[nu]/CrlCrlj [Foxn1nu/Foxn1nu]) (Charles River Laboratories Japan, Inc.)进行实验。
测定和计算表达式：通过使用电子数字卡尺(CD15-CX, Mitutoyo Corp.)每周两次测量肿瘤的长轴和短轴，并计算肿瘤体积(mm3)。计算表达式如下所示。
肿瘤体积(mm3) = 0.5 × 长轴(mm) × [短轴(mm)]2。
从动物测试伦理学的角度来看，将肿瘤体积超过3000 mm3的个体安乐死。
将抗体-药物缀合物(1)以10 mg/kg的剂量静脉内施用于每只小鼠的尾静脉。将CT26.WT-hHER2细胞悬浮于生理盐水中，并将5.0 × 106个细胞皮下移植至每只BALB/c-裸小鼠的右腋窝，且其后3天(第0天)将小鼠随机分组。在第0天和第7天，将抗体-药物缀合物(1)以10 mg/kg的剂量静脉内施用于每只小鼠的尾静脉，总共两次。将施用抗体-药物缀合物(1)的溶剂的组建立为对照组。每组中的小鼠数目为12，并且测量肿瘤体积，直至第13天。
结果显示于图18中。纵坐标描绘肿瘤体积(mm3)，且横坐标描绘从初始施用之日起的天数。对于BALB/c-裸小鼠，没有发现对于BALB/c小鼠已发现的通过施用抗体-药物缀合物(1)的抗肿瘤作用。从BALB/c-裸小鼠中T细胞的数目和B细胞的数目减少以及功能受损的发现推断，这些细胞对于抗体-药物缀合物(1)的抗肿瘤作用发挥重要作用。
[评估实施例10：抗肿瘤测试]
以与评估实施例1中相同的方式，对于抗体-药物缀合物(1)施用组、对照抗体-药物缀合物施用组和对照组，测定皮下移植CT26.WT-hHER2细胞的小鼠中的肿瘤体积的转变。
使用结合除了源自小鼠和人的那些以外的分子的人IgG1抗体，对照抗体-药物缀合物(药物：抗体比：7.8)用特殊溶剂稀释用于使用。在移植后5天(第0天)进行分组。在第0天和第7天，将对照抗体-药物缀合物或抗体-药物缀合物(1)以10 mg/kg的剂量静脉内施用于每只小鼠的尾静脉，总共两次。每组中的小鼠数目为10，并且测量肿瘤体积，直至第10天。对照抗体-药物缀合物组和抗体-药物缀合物(1)组之间的药物作用的比较通过使用Wilcoxon秩和检验进行，P值被表示为至小数点后第四位的数值，并且P < 0.05(双尾检验)的值被视为显著性差异。
结果显示于图19中。纵坐标描绘肿瘤体积(mm3)，且横坐标描绘从初始施用之日起的天数。在第10天，抗体-药物缀合物(1)组表现出显著优于对照抗体-药物缀合物组的抗肿瘤作用(P = 0.0003)。从该结果来看，发现抗体-药物缀合物(1)的抗肿瘤作用是靶标依赖性的。
[评估实施例11：抗肿瘤测试]
以与评估实施例1中相同的方式，对于用抗体-药物缀合物(1)和抗PD-1抗体(克隆RMP1-14)各自的单一施用组和组合施用组，测定皮下移植EMT6-hHER2细胞的小鼠中的肿瘤体积的转变。经由通过使用慢病毒载体将人HER2基因转染至购自美国典型培养物保藏中心的小鼠乳腺癌细胞系EMT6 (CRL-2755)中来制备EMT6-hHER2细胞。这些细胞在其细胞膜上表达人HER2蛋白。将EMT6-hHER2细胞悬浮于生理盐水中，并将1.0 × 106个细胞皮下移植至每只5周龄BALB/c小鼠的右腋窝，并在移植后4天(第0天)将小鼠随机分组。在第0天，将抗体-药物缀合物(1)以10 mg/kg的剂量一次静脉内施用于每只小鼠的尾静脉。将抗PD-1抗体(克隆RMP1-14)用D-PBS(-) (WAKO)制备，并且在第0天、第3天、第7天和第10天以5.0 mg/kg的剂量静脉内施用于每只小鼠的尾静脉，总共四次。建立用抗体-药物缀合物(1)和抗PD-1抗体的组合施用组，并且建立施用抗体-药物缀合物(1)的特殊溶剂的组作为对照组。每组中的小鼠数目为11只，并且测量肿瘤体积，直至第17天。通过使用Dunnett氏检验(多组间的比较)，进行对照组以及抗体-药物缀合物(1)组和抗PD-1抗体组各自之间的药物作用的比较，以及抗体-药物缀合物(1)组和抗PD-1抗体组各自以及用两种药剂的组合施用组之间的药物作用的比较。将针对多重性调整的P值表示为至小数点后第四位的数值，并且将P <0.05的值(双尾检验)视为显著差异。
结果显示于图20中。纵坐标描绘肿瘤体积(mm3)，且横坐标描绘从初始施用之日起的天数。在第17天，抗体-药物缀合物(1)组表现出显著优于对照组的抗肿瘤作用(P <0.0001)。抗PD-1抗体组表现出显著优于对照组的抗肿瘤作用(P < 0.0001)。进一步，组合施用组表现出显著优于抗体-药物缀合物(1)组的抗肿瘤作用(P = 0.0136)。组合施用组表现出显著优于抗PD-1抗体组的抗肿瘤作用(P = 0.0372)。对于该测试中的所有组中的小鼠无一观察到体重减轻。从结果来看，证实每种药剂的单一施用的抗肿瘤作用，并且进一步证实，通过组合使用两种药剂可以急剧增强这种效果。
[评估实施例12：生命延长测试]
以与评估实施例1中相同的方式，对于用抗体-药物缀合物(1)和抗PD-L1抗体各自的单一施用组和组合施用组，测定对皮下移植CT26.WT-hHER2细胞的小鼠的生命延长作用。抗PD-L1抗体(克隆10F.9G2)购自Bio X Cell，并用InVivoPure pH 6.5稀释缓冲液(Bio XCell)稀释用于使用。将小鼠在移植后6天(第0天)随机分组，并且在第0天和第7天，将抗体-药物缀合物(1)以10 mg/kg的剂量静脉内施用于每只小鼠的尾静脉，总共两次。在第0天和第3天，将抗PD-L1抗体以5 mg/kg的剂量静脉内施用于每只小鼠的尾静脉，总共两次。建立用抗体-药物缀合物(1)和抗PD-L1抗体的组合施用组，并且建立施用抗体-药物缀合物(1)的特殊溶剂的组作为对照组。每组中的小鼠数目为15只，并且测量肿瘤体积，直至第38天。当估计的肿瘤体积超过3000 mm3之日(安乐死日)被定义为事件发生之日(死亡日)，并且通过使用Kaplan-Meier方法/时序检验(多组间的比较)，进行对照组以及抗体-药物缀合物(1)组和抗PD-L1抗体组各自之间的存活时间的比较，以及抗体-药物缀合物(1)组和抗PD-L1抗体组各自以及用两种药剂的组合施用组之间的存活时间的比较。将针对多重性调整的P值表示为至小数点后第四位的数值，并且将P <0.05的值(双尾检验)视为显著差异。
结果显示于图21中。抗体-药物缀合物(1)组表现出显著优于对照组的抗肿瘤作用(P = 0.0069)。抗PD-L1抗体组表现出显著优于对照组的抗肿瘤作用(P = 0.0037)。进一步，组合施用组表现出显著优于抗体-药物缀合物(1)组的抗肿瘤作用(P = 0.0059)。组合施用组表现出显著优于抗PD-L1抗体组的抗肿瘤作用(P = 0.0091)。对于该测试中的所有组中的小鼠无一观察到体重减轻。从结果来看，证实每种药剂的单一施用的抗肿瘤作用，并且进一步证实，通过组合使用两种药剂可以急剧增强这种效果。
[评估实施例13：生命延长测试]
以与评估实施例11中相同的方式将EMT6-hHER2细胞皮下移植至小鼠中，并且以与评估实施例12中相同的方式，对于用抗体-药物缀合物(1)和抗PD-L1抗体各自的单一施用组和组合施用组，测定生命延长作用。将小鼠在移植后5天(第0天)随机分组，并且在第0天，将抗体-药物缀合物(1)以10 mg/kg的剂量一次静脉内施用于每只小鼠的尾静脉。在第0天和第3天，将抗PD-L1抗体以5 mg/kg的剂量静脉内施用于每只小鼠的尾静脉，总共两次。建立用抗体-药物缀合物(1)和抗PD-L1抗体的组合施用组，并且建立施用抗体-药物缀合物(1)的特殊溶剂的组作为对照组。每组中的小鼠数目为6只，并且测量肿瘤体积，直至第60天。通过使用Kaplan-Meier方法/时序检验(多组间的比较)，进行对照组以及抗体-药物缀合物(1)组和抗PD-L1抗体组各自之间的存活时间的比较，以及抗体-药物缀合物(1)组和抗PD-L1抗体组各自以及用两种药剂的组合施用组之间的存活时间的比较。将针对多重性调整的P值表示为至小数点后第四位的数值，并且将P <0.05的值(双尾检验)视为显著差异。
结果显示于图22中。抗体-药物缀合物(1)组表现出显著优于对照组的抗肿瘤作用(P = 0.0006)。抗PD-L1抗体组表现出显著优于对照组的抗肿瘤作用(P = 0.0227)。进一步，组合施用组表现出显著优于抗体-药物缀合物(1)组的抗肿瘤作用(P = 0.0039)。对于该测试中的所有组中的小鼠无一观察到体重减轻。从结果来看，证实每种药剂的单一施用的抗肿瘤作用，并且进一步证实，通过组合使用两种药剂可以急剧增强这种效果。
[评估实施例14：体内CD4/8耗竭测试]
以与评估实施例1中相同的方式，对于用抗体-药物缀合物(1)和抗CD4抗体各自的单一施用组和组合施用组，以及对于用抗体-药物缀合物(1)和抗CD8抗体各自的单一施用组和组合施用组，测定皮下移植CT26.WT-hHER2细胞的小鼠中的肿瘤体积的转变。制备抗体-药物缀合物(1)以达到10 mg/kg，并在临施用前用D-PBS(-)各自制备抗CD4抗体(Bio X Cell，克隆GK1.5)和抗CD8抗体(Bio X Cell，克隆53.6.7)(其各自是耗竭抗体)以达到1 mg/mL，并且在第0天和第7天将其各自以200 μg/头的剂量静脉内施用于每只小鼠的尾静脉。将施用抗体-药物缀合物(1)的特殊溶剂的组建立为对照组。在移植后5天(第0天)进行分组，测量肿瘤体积直至第11天。
结果显示于图23和24中。对于抗体-药物缀合物(1)组，在第11天的肿瘤体积为651mm3，并且对于用抗体-药物缀合物(1)和抗CD4抗体的组合施用组，在第11天的肿瘤体积为561 mm3，表明CD4阳性细胞对抗体-药物缀合物(1)的抗肿瘤作用没有贡献(图23)。对于抗体-药物缀合物(1)组，在第11天的肿瘤体积为651 mm3，并且对于用抗体-药物缀合物(1)和抗CD8抗体的组合施用组，在第11天的肿瘤体积为2247 mm3，表明CD8阳性细胞对抗体-药物缀合物(1)的抗肿瘤作用有贡献(图24)。在抗CD4抗体组和抗CD8抗体组中的一些个体中，肿瘤体积超过3000 mm3，且因此在测试期间将个体安乐死。因此，每个肿瘤生长曲线在安乐死的时候结束。与来自评估实施例9中使用免疫缺陷裸小鼠的肿瘤模型的发现（T细胞或B细胞部分参与抗体-药物缀合物(1)的药物作用）相组合，本结果表明CD8-阳性T细胞对抗体-药物缀合物(1)的抗肿瘤作用有贡献。
[评估实施例15：肿瘤内T细胞的分析]
对于将抗体-药物缀合物(1)施用于皮下移植CT26.WT-hHER2细胞的小鼠的情况，用流式细胞术测定肿瘤内活细胞中CD8-阳性T细胞的分数、肿瘤内CD8-阳性T细胞中粒酶B-阳性细胞的分数、肿瘤内活细胞中粒酶B-阳性的CD8-阳性T细胞的分数和肿瘤内活细胞中CD4-阳性T细胞的分数。以与评估实施例6中相同的方式制备细胞悬浮液，且然后用PacificBlue标记的抗小鼠CD45抗体(103126, BioLegend)、PE标记的抗小鼠CD3e抗体(553064,Becton Dickinson)、PerCP/Cy5.5标记的抗小鼠CD4抗体(100434, BioLegend)、PE-Cy 7标记的抗小鼠CD8a抗体(552877, Becton Dickinson)和Alexa FluorR 647标记的抗人/小鼠粒酶B抗体(515405, BioLegend)进行染色，并用流式细胞术测定。死细胞已用购自ThermoFisher Scientific的LIVE/DEAD可固定近红外死细胞染色试剂盒染色，并从分析中排除。对照组和抗体-药物缀合物(1)组之间的比较通过使用Student氏t-检验进行，P值被表示为至小数点后第四位的数值，并且P < 0.05(双尾检验)的值被视为显著性差异。
结果显示于图25至28中。发现通过施用抗体-药物缀合物(1)，活细胞中CD45-、CD3-、CD8-阳性细胞(CD8-阳性T细胞)的分数显著增加(图25)。发现通过施用抗体-药物缀合物(1)，CD8-阳性T细胞中粒酶B-阳性细胞的分数显著增加(图26)。发现通过施用抗体-药物缀合物(1)，活细胞中粒酶B-阳性的CD8-阳性T细胞的分数显著增加(图27)。尽管通过施用抗体-药物缀合物(1)，活细胞中CD45-、CD3-、CD4-阳性细胞(CD4-阳性T细胞)的分数具有渐增的趋势，但差异不显著(图28)。
因此，这些结果表明抗体-药物缀合物(1)通过增加肿瘤内CD8-阳性T细胞的数目和促进其活化来活化抗肿瘤免疫。
[评估实施例16：CD8 IHC分析]
对于将抗体-药物缀合物(1)施用于皮下移植CT26.WT-hHER2细胞的小鼠的情况，通过使用IHC计数肿瘤中每单位面积的CD8-阳性细胞的数目。以与评估实施例6中相同的方式，施用对照和抗体-药物缀合物(1)，并在施用后8天将小鼠安乐死。每组中的小鼠数目为5只，并从中间数目的小鼠(即3只小鼠)中切除肿瘤，并各自浸泡在多聚甲醛/磷酸盐缓冲液中以产生石蜡块。每个石蜡块用抗CD8抗体(克隆：4SM16)染色，并通过使用NanoZoomer 2.0-HT(Hamamatsu Photonics K.K.)拍摄样品图像，并通过使用图像分析软件Tissue Studio3.0(Definiens)分析整个组织区域。
结果显示于图29和30中。发现肿瘤中每单位面积的CD8-阳性细胞的数目倾向于通过抗体-药物缀合物(1)的作用而增加。
[评估实施例17：体外癌细胞的分析]
对于用不同化合物处理的癌细胞，测定MHC I类的表达水平。以与评估实施例8中相同的方式，将化合物(A)、DM1-SMe、DM4-SMe (J. Med. Chem. (2014), 57, 16, 6949-6964)和MMAE (Molecular Cancer Therapeutics (2011), 10, 9, 1728-1739)各自添加至20nM、100 nM或500nM的浓度，并用流式细胞术测定癌细胞上MHC I类的表达水平。所有实验一式三份进行。在每种浓度下的对照组和药剂组各自之间的比较通过使用Dunnett氏检验进行，P值被表示为至小数点后第四位的数值，并且P < 0.05(双尾检验)的值被视为显著性差异(***：P < 0.001，**：P < 0.01)。
结果显示于图31中。在检查的浓度(20 nM、100 nM、500 nM)下，发现所有评估的药剂与对照组相比显著升高CT26.WT-hHER2细胞上MHC I类的表达水平。其中，发现化合物(A)表现出对CT26.WT-hHER2细胞上的MHC I类的表达的最大升高作用。
[评估实施例18：抗肿瘤测试]
以与评估实施例11中相同的方式，对于用抗体-药物缀合物(1)和抗CTLA-4抗体各自的单一施用组和组合施用组，测定皮下移植EMT6-hHER2细胞的小鼠中的肿瘤体积的转变。抗CTLA-4抗体(克隆9H10)购自Bio X Cell，并用D-PBS(-)稀释用于使用。在移植后5天(第0天)进行分组。在第0天，将抗体-药物缀合物(1)以10 mg/kg的剂量一次静脉内施用于每只小鼠的尾静脉。在第0天、第3天和第7天，将抗CTLA-4抗体以5.0 mg/kg的剂量静脉内施用于每只小鼠的尾静脉，总共三次。建立用抗体-药物缀合物(1)和抗CTLA-4抗体的组合施用组，并且建立施用抗体-药物缀合物(1)的特殊溶剂的组作为对照组。每组中的小鼠数目为10只，并且测量肿瘤体积，直至第14天。通过使用Dunnett氏检验(多组间的比较)，进行对照组以及抗体-药物缀合物(1)组和抗CTLA-4抗体组各自之间的药物作用的比较，以及抗体-药物缀合物(1)组和抗CTLA-4抗体组各自以及用两种药剂的组合施用组之间的药物作用的比较。将针对多重性调整的P值表示为至小数点后第四位的数值，并且将P <0.05的值(双尾检验)视为显著差异。
结果显示于图32中。纵坐标描绘肿瘤体积(mm3)，且横坐标描绘从初始施用之日起的天数。在第14天，抗体-药物缀合物(1)组表现出显著优于对照组的抗肿瘤作用(P =0.0011)。抗CTLA-4抗体组表现出显著优于对照组的抗肿瘤作用(P = 0.0006)。进一步，组合施用组表现出显著优于抗体-药物缀合物(1)组的抗肿瘤作用(P = 0.0115)。组合施用组表现出显著优于抗CTLA-4抗体组的抗肿瘤作用(P = 0.0309)。从结果来看，证实每种药剂的单一施用的抗肿瘤作用，并且进一步证实，通过组合使用两种药剂可以急剧增强这种效果。
从上述实验结果来看，揭示本发明的抗体-药物缀合物通过与免疫检查点抑制剂组合施用而表现出极其优异的抗肿瘤作用。另外，表明根据本发明的抗体-药物缀合物具有抗肿瘤免疫-活化作用。因此，所述抗体-药物缀合物可以提供抗肿瘤作用和安全性优异的药物组合物和治疗方法。
序列表的自由文本
SEQ ID NO:1 - 人源化抗HER2抗体的重链的氨基酸序列
SEQ ID NO:2 - 人源化抗HER2抗体的轻链的氨基酸序列。
序列表
<110> DAIICHI SANKYO COMPANY, LIMITED
<120> 抗体-药物缀合物和免疫检查点抑制剂的组合
<130> FP1725
<150> JP2016-240442
<151> 2016-12-12
<150> JP2017-097067
<151> 2017-05-16
<150> JP2017-183149
<151> 2017-09-25
<160> 2
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化抗HER2抗体的重链
<400> 1
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 2
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化抗HER2抗体的轻链
<400> 2
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210

Claims (92)

1.药物组合物，其中组合施用抗体-药物缀合物和免疫检查点抑制剂，且所述抗体-药物缀合物是这样的抗体-药物缀合物，其中由下式代表的药物-接头经由硫醚键与抗体缀合：
[式1]
其中A代表与所述抗体的连接位置。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中的抗体是抗HER2抗体、抗HER3抗体、抗TROP2抗体或抗B7-H3抗体。
3.根据权利要求2所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中的抗体是抗HER2抗体。
4.根据权利要求2或3所述的药物组合物，其中所述抗HER2抗体是包含重链和轻链的抗体，所述重链由SEQ ID NO:1的氨基酸残基1至449组成的氨基酸序列组成，且所述轻链由SEQ ID NO:2的氨基酸残基1至214组成的氨基酸序列组成。
5.根据权利要求2或3所述的药物组合物，其中所述抗HER2抗体是包含由SEQ ID NO:1代表的氨基酸序列组成的重链和由SEQ ID NO:2代表的氨基酸序列组成的轻链的抗体。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目在2至8的范围内。
7.根据权利要求1至5中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目在7至8的范围内。
8.根据权利要求1至5中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目在7.5至8的范围内。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的药物组合物，其中所述免疫检查点抑制剂是抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体或抗CTLA-4抗体。
10.根据权利要求9所述的药物组合物，其中所述免疫检查点抑制剂是抗PD-1抗体。
11.根据权利要求9所述的药物组合物，其中所述免疫检查点抑制剂是抗PD-L1抗体。
12.根据权利要求9所述的药物组合物，其中所述免疫检查点抑制剂是抗CTLA-4抗体。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物和所述免疫检查点抑制剂分别作为活性组分包含在不同制剂中，并且同时或不同时施用。
14.根据权利要求1至12中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物和所述免疫检查点抑制剂作为活性组分包含在单一制剂中并施用。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物用于治疗癌症。
16.根据权利要求15所述的药物组合物，其中所述癌症是选自以下的至少一种：肺癌、尿路上皮癌、结肠直肠癌、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、胃癌、食管胃交界腺癌、胃肠道间质瘤、子宫颈癌、食管癌、鳞状细胞癌、腹膜癌、肝癌、肝细胞癌、子宫内膜癌、子宫癌、唾液腺癌、肾癌、外阴癌、甲状腺癌、阴茎癌、白血病、恶性淋巴瘤、浆细胞瘤、骨髓瘤、神经上皮组织肿瘤、神经鞘肿瘤、头颈癌、皮肤癌、咽癌、胆囊癌、胆管癌、间皮瘤、佩吉特氏病和肉瘤。
17.根据权利要求16所述的药物组合物，其中所述癌症是结肠直肠癌。
18.根据权利要求16所述的药物组合物，其中所述癌症是乳腺癌。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物具有抗肿瘤免疫-活化作用。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物具有至少一种选自以下的作用：
(1)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的生长的促进作用；和
(2)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的活化作用。
21.根据权利要求1至20中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物对形成针对肿瘤的免疫记忆具有促进作用。
22.根据权利要求21所述的药物组合物，其中所述肿瘤表达所述抗体-药物缀合物中的抗体的抗原。
23.根据权利要求21所述的药物组合物，其中所述肿瘤的一部分细胞不表达所述抗体-药物缀合物中的抗体的抗原。
24.根据权利要求1至23中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物具有至少一种选自以下的作用：
(1)对肿瘤中的树突细胞的数目的增加的促进作用；
(2)对树突细胞的活化作用；和
(3)对癌细胞上的MHC I类的表达水平的升高的促进作用。
25.根据权利要求1至24中任一项所述的药物组合物，其中所述免疫检查点抑制剂使通过所述抗体-药物缀合物促进的癌细胞上PD-L1的表达水平的升高而生成的免疫抑制信号失活，且由此所述抗体-药物缀合物表现出更高的抗肿瘤作用。
26.用于治疗可通过抗肿瘤免疫-活化作用改善的疾病的药物组合物，其中所述药物组合物含有抗体-药物缀合物，其中由下式代表的药物-接头经由硫醚键与抗体缀合：
[式2]
其中A代表与所述抗体的连接位置。
27.根据权利要求26所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物具有至少一种选自以下的作用：
(1)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的生长的促进作用；和
(2)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的活化作用。
28.根据权利要求26或27所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物对形成针对肿瘤的免疫记忆具有促进作用。
29.根据权利要求28所述的药物组合物，其中所述肿瘤表达所述抗体-药物缀合物中的抗体的抗原。
30.根据权利要求28所述的药物组合物，其中所述肿瘤的一部分细胞不表达所述抗体-药物缀合物中的抗体的抗原。
31.根据权利要求26至30中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物具有至少一种选自以下的作用：
(1)对肿瘤中的树突细胞的数目的增加的促进作用；
(2)对树突细胞的活化作用；和
(3)对癌细胞上的MHC I类的表达水平的升高的促进作用。
32.根据权利要求26至31中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中的抗体是抗HER2抗体、抗HER3抗体、抗TROP2抗体或抗B7-H3抗体。
33.根据权利要求32所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中的抗体是抗HER2抗体。
34.根据权利要求32或33所述的药物组合物，其中所述抗HER2抗体是包含重链和轻链的抗体，所述重链由SEQ ID NO:1的氨基酸残基1至449组成的氨基酸序列组成，且所述轻链由SEQ ID NO:2的氨基酸残基1至214组成的氨基酸序列组成。
35.根据权利要求32或33所述的药物组合物，其中所述抗HER2抗体是包含由SEQ IDNO:1代表的氨基酸序列组成的重链和由SEQ ID NO:2代表的氨基酸序列组成的轻链的抗体。
36.根据权利要求26至35中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目在2至8的范围内。
37.根据权利要求26至35中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目在7至8的范围内。
38.根据权利要求26至35中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目在7.5至8的范围内。
39.根据权利要求26至38中任一项所述的药物组合物，其中所述疾病是选自以下的至少一种：肺癌、尿路上皮癌、结肠直肠癌、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、胃癌、食管胃交界腺癌、胃肠道间质瘤、子宫颈癌、食管癌、鳞状细胞癌、腹膜癌、肝癌、肝细胞癌、子宫内膜癌、子宫癌、唾液腺癌、肾癌、外阴癌、甲状腺癌、阴茎癌、白血病、恶性淋巴瘤、浆细胞瘤、骨髓瘤、神经上皮组织肿瘤、神经鞘肿瘤、头颈癌、皮肤癌、咽癌、胆囊癌、胆管癌、间皮瘤、佩吉特氏病和肉瘤。
40.根据权利要求39所述的药物组合物，其中所述疾病是结肠直肠癌。
41.根据权利要求39所述的药物组合物，其中所述疾病是乳腺癌。
42.用于治疗可通过抗肿瘤免疫-活化作用改善的疾病的药物组合物，其中所述药物组合物在肿瘤中释放由下式代表的化合物：
[式3]
。
43.根据权利要求42所述的药物组合物，其中所述化合物具有至少一种选自以下的作用：
(1)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的生长的促进作用；和
(2)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的活化作用。
44.根据权利要求42或43所述的药物组合物，其中所述化合物对形成针对肿瘤的免疫记忆具有促进作用。
45.根据权利要求42至44中任一项所述的药物组合物，其中所述化合物具有至少一种选自以下的作用：
(1)对肿瘤中的树突细胞的数目的增加的促进作用；
(2)对树突细胞的活化作用；和
(3)对癌细胞上的MHC I类的表达水平的升高的促进作用。
46.根据权利要求42至45中任一项所述的药物组合物，其中所述疾病是选自以下的至少一种：肺癌、尿路上皮癌、结肠直肠癌、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、胃癌、食管胃交界腺癌、胃肠道间质瘤、子宫颈癌、食管癌、鳞状细胞癌、腹膜癌、肝癌、肝细胞癌、子宫内膜癌、子宫癌、唾液腺癌、肾癌、外阴癌、甲状腺癌、阴茎癌、白血病、恶性淋巴瘤、浆细胞瘤、骨髓瘤、神经上皮组织肿瘤、神经鞘肿瘤、头颈癌、皮肤癌、咽癌、胆囊癌、胆管癌、间皮瘤、佩吉特氏病和肉瘤。
47.治疗方法，其中组合施用抗体-药物缀合物和免疫检查点抑制剂，且所述抗体-药物缀合物是这样的抗体-药物缀合物，其中由下式代表的药物-接头经由硫醚键与抗体缀合：
[式4]
其中A代表与所述抗体的连接位置。
48.根据权利要求47所述的治疗方法，其中所述抗体-药物缀合物中的抗体是抗HER2抗体、抗HER3抗体、抗TROP2抗体或抗B7-H3抗体。
49.根据权利要求48所述的治疗方法，其中所述抗体-药物缀合物中的抗体是抗HER2抗体。
50.根据权利要求48或49所述的治疗方法，其中所述抗HER2抗体是包含重链和轻链的抗体，所述重链由SEQ ID NO:1的氨基酸残基1至449组成的氨基酸序列组成，且所述轻链由SEQ ID NO:2的氨基酸残基1至214组成的氨基酸序列组成。
51.根据权利要求48或49所述的治疗方法，其中所述抗HER2抗体是包含由SEQ ID NO:1代表的氨基酸序列组成的重链和由SEQ ID NO:2代表的氨基酸序列组成的轻链的抗体。
52.根据权利要求47至51中任一项所述的治疗方法，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目在2至8的范围内。
53.根据权利要求47至51中任一项所述的治疗方法，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目在7至8的范围内。
54.根据权利要求47至51中任一项所述的治疗方法，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目在7.5至8的范围内。
55.根据权利要求47至54中任一项所述的治疗方法，其中所述免疫检查点抑制剂是抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体或抗CTLA-4抗体。
56.根据权利要求55所述的治疗方法，其中所述免疫检查点抑制剂是抗PD-1抗体。
57.根据权利要求55所述的治疗方法，其中所述免疫检查点抑制剂是抗PD-L1抗体。
58.根据权利要求55所述的治疗方法，其中所述免疫检查点抑制剂是抗CTLA-4抗体。
59.根据权利要求47至58中任一项所述的治疗方法，其中所述抗体-药物缀合物和所述免疫检查点抑制剂分别作为活性组分包含在不同制剂中，并且同时或不同时施用。
60.根据权利要求47至58中任一项所述的治疗方法，其中所述抗体-药物缀合物和所述免疫检查点抑制剂作为活性组分包含在单一制剂中并施用。
61.根据权利要求47至60中任一项所述的治疗方法，其中所述方法用于治疗癌症。
62.根据权利要求61所述的治疗方法，其中所述癌症是选自以下的至少一种：肺癌、尿路上皮癌、结肠直肠癌、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、胃癌、食管胃交界腺癌、胃肠道间质瘤、子宫颈癌、食管癌、鳞状细胞癌、腹膜癌、肝癌、肝细胞癌、子宫内膜癌、子宫癌、唾液腺癌、肾癌、外阴癌、甲状腺癌、阴茎癌、白血病、恶性淋巴瘤、浆细胞瘤、骨髓瘤、神经上皮组织肿瘤、神经鞘肿瘤、头颈癌、皮肤癌、咽癌、胆囊癌、胆管癌、间皮瘤、佩吉特氏病和肉瘤。
63.根据权利要求62所述的治疗方法，其中所述癌症是结肠直肠癌。
64.根据权利要求62所述的治疗方法，其中所述癌症是乳腺癌。
65.根据权利要求47至64中任一项所述的治疗方法，其中所述抗体-药物缀合物具有抗肿瘤免疫-活化作用。
66.根据权利要求47至65中任一项所述的治疗方法，其中所述抗体-药物缀合物具有至少一种选自以下的作用：
(1)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的生长的促进作用；和
(2)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的活化作用。
67.根据权利要求47至66中任一项所述的治疗方法，其中所述抗体-药物缀合物对形成针对肿瘤的免疫记忆具有促进作用。
68.根据权利要求67所述的治疗方法，其中所述肿瘤表达所述抗体-药物缀合物中的抗体的抗原。
69.根据权利要求67所述的治疗方法，其中所述肿瘤的一部分细胞不表达所述抗体-药物缀合物中的抗体的抗原。
70.根据权利要求47至69中任一项所述的治疗方法，其中所述抗体-药物缀合物具有至少一种选自以下的作用：
(1)对肿瘤中的树突细胞的数目的增加的促进作用；
(2)对树突细胞的活化作用；和
(3)对癌细胞上的MHC I类的表达水平的升高的促进作用。
71.根据权利要求47至70中任一项所述的治疗方法，其中所述免疫检查点抑制剂使通过所述抗体-药物缀合物促进的癌细胞上PD-L1的表达水平的升高而生成的免疫抑制信号失活，且由此所述抗体-药物缀合物表现出更高的抗肿瘤作用。
72.用于治疗可通过抗肿瘤免疫-活化作用改善的疾病的治疗方法，其中施用其中由下式代表的药物-接头经由硫醚键与抗体缀合的抗体-药物缀合物：
[式5]
其中A代表与所述抗体的连接位置。
73.根据权利要求72所述的治疗方法，其中所述抗体-药物缀合物具有至少一种选自以下的作用：
(1)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的生长的促进作用；和
(2)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的活化作用。
74.根据权利要求72或73所述的治疗方法，其中所述抗体-药物缀合物对形成针对肿瘤的免疫记忆具有促进作用。
75.根据权利要求74所述的治疗方法，其中所述肿瘤表达所述抗体-药物缀合物中的抗体的抗原。
76.根据权利要求74所述的治疗方法，其中所述肿瘤的一部分细胞不表达所述抗体-药物缀合物中的抗体的抗原。
77.根据权利要求72至76中任一项所述的治疗方法，其中所述抗体-药物缀合物具有至少一种选自以下的作用：
(1)对肿瘤中的树突细胞的数目的增加的促进作用；
(2)对树突细胞的活化作用；和
(3)对癌细胞上的MHC I类的表达水平的升高的促进作用。
78.根据权利要求72至77中任一项所述的治疗方法，其中所述抗体-药物缀合物中的抗体是抗HER2抗体、抗HER3抗体、抗TROP2抗体或抗B7-H3抗体。
79.根据权利要求78所述的治疗方法，其中所述抗体-药物缀合物中的抗体是抗HER2抗体。
80.根据权利要求78或79所述的治疗方法，其中所述抗HER2抗体是包含重链和轻链的抗体，所述重链由SEQ ID NO:1的氨基酸残基1至449组成的氨基酸序列组成，且所述轻链由SEQ ID NO:2的氨基酸残基1至214组成的氨基酸序列组成。
81.根据权利要求78或79所述的治疗方法，其中所述抗HER2抗体是包含由SEQ ID NO:1代表的氨基酸序列组成的重链和由SEQ ID NO:2代表的氨基酸序列组成的轻链的抗体。
82.根据权利要求72至81中任一项所述的治疗方法，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目在2至8的范围内。
83.根据权利要求72至81中任一项所述的治疗方法，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目在7至8的范围内。
84.根据权利要求72至81中任一项所述的治疗方法，其中所述抗体-药物缀合物中每个抗体分子缀合的药物-接头的单元的平均数目在7.5至8的范围内。
85.根据权利要求72至84中任一项所述的治疗方法，其中所述疾病是选自以下的至少一种：肺癌、尿路上皮癌、结肠直肠癌、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、胃癌、食管胃交界腺癌、胃肠道间质瘤、子宫颈癌、食管癌、鳞状细胞癌、腹膜癌、肝癌、肝细胞癌、子宫内膜癌、子宫癌、唾液腺癌、肾癌、外阴癌、甲状腺癌、阴茎癌、白血病、恶性淋巴瘤、浆细胞瘤、骨髓瘤、神经上皮组织肿瘤、神经鞘肿瘤、头颈癌、皮肤癌、咽癌、胆囊癌、胆管癌、间皮瘤、佩吉特氏病和肉瘤。
86.根据权利要求85所述的治疗方法，其中所述疾病是结肠直肠癌。
87.根据权利要求85所述的治疗方法，其中所述疾病是乳腺癌。
88.用于治疗可通过抗肿瘤免疫-活化作用改善的疾病的治疗方法，其中所述治疗方法在肿瘤中释放由下式代表的化合物：
[式6]
。
89.根据权利要求88所述的治疗方法，其中所述化合物具有至少一种选自以下的作用：
(1)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的生长的促进作用；和
(2)对肿瘤内CD8-阳性T细胞的活化作用。
90.根据权利要求88或89所述的治疗方法，其中所述化合物对形成针对肿瘤的免疫记忆具有促进作用。
91.根据权利要求88至90中任一项所述的治疗方法，其中所述化合物具有至少一种选自以下的作用：
(1)对肿瘤中的树突细胞的数目的增加的促进作用；
(2)对树突细胞的活化作用；和
(3)对癌细胞上的MHC I类的表达水平的升高的促进作用。
92.根据权利要求88至91中任一项所述的治疗方法，其中所述疾病是选自以下的至少一种：肺癌、尿路上皮癌、结肠直肠癌、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、胃癌、食管胃交界腺癌、胃肠道间质瘤、子宫颈癌、食管癌、鳞状细胞癌、腹膜癌、肝癌、肝细胞癌、子宫内膜癌、子宫癌、唾液腺癌、肾癌、外阴癌、甲状腺癌、阴茎癌、白血病、恶性淋巴瘤、浆细胞瘤、骨髓瘤、神经上皮组织肿瘤、神经鞘肿瘤、头颈癌、皮肤癌、咽癌、胆囊癌、胆管癌、间皮瘤、佩吉特氏病和肉瘤。
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