CN112004557A - 类固醇类化合物及其抗体偶联物 - Google Patents

类固醇类化合物及其抗体偶联物 Download PDF

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Abstract

本发明描述了蛋白质类固醇偶联物，其可用于例如将糖皮质激素(GC)靶向特异性递送至细胞。

Description

类固醇类化合物及其抗体偶联物
相关申请的交叉引用
本申请要求并享有于2018年1月8日提交的、发明名称为“Steroids and AntibodyConjugates Thereof”的美国临时专利申请号62/614,905的优先权。此临时专利申请的内容通过引用其全文并入本发明用于所有目的。
序列表
本申请包含序列表，所述序列表已经由EFS-Web以ASCII格式提交，并通过引用其全部内容并入本发明。所述ASCII副本创建于2019年1月3日，命名为114581_00228_ST25.txt，大小为11,186字节。
发明领域
本发明提供了类固醇类化合物，其蛋白质(例如抗体)偶联物，以及用于治疗疾病、病症和病况的方法，包括施用所述类固醇类化合物和偶联物。
发明背景
抗体-药物偶联物(ADC)是与生物活性小分子药物共价连接的抗体，因此可将抗体的靶向特异性与小分子药物的作用模式和效力相结合。ADC的治疗作用已在癌症治疗中得到验证，并且是研究的主要持续焦点。
Figure BDA0002666727490000011
(bentruximab vedotin)和
Figure BDA0002666727490000012
(ado-曲妥珠单抗emtansine偶联物(ado-trastuzumab emtansine))均是经批准用于治疗某些癌症类型的ADC，目前还有其他几种ADC正在临床开发中。
糖皮质激素(GC)是与糖皮质激素受体(GR)结合的小分子类固醇类化合物，并且用于抗炎和免疫抑制疗法。然而，由于糖皮质激素受体在许多细胞类型中普遍表达，糖皮质激素治疗受到大多数器官系统毒性的影响。因此，需要新的糖皮质激素以及使糖皮质激素给药引起的副作用(特别是那些由非靶细胞中的糖皮质激素受体激活引起的副作用)最小化的新疗法。本发明提供了对上述需求以及本发明所涉及的领域中的其他未满足需求的解决方案。本发明内容包括含有糖皮质激素有效负载的抗体-药物偶联物。
发明摘要
本发明提供了可用于治疗各种疾病、病症或病况的化合物和方法。
第一方面涉及式(III)所示化合物：
Figure BDA0002666727490000021
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或衍生物，
其中：
R4是烷基、芳基、芳基烷基、或含N的杂环烷基；
两个Rx均为H；和SP是-C(O)-C1-C10-亚烷基-C(O)-，-C(O)-N(C1-6烷基)-C1-C10-亚烷基-X1-、其中X1与式(III)中的L连接，-C(O)-N(H)-(C1-C10-亚烷基)-S-、其中S与式(III)中的L连接，-C(O)-N(C1-6烷基)-(C1-C10-亚烷基)-S-、其中S与式(III)中的L连接，
Figure BDA0002666727490000022
其中右手边的附接点(即N处)与式(III)中的L连接，-CH2-NH-、其中所述N与式(III)中的L连接，
Figure BDA0002666727490000023
其中所述N与式(III)中的L连接和其中Ar是任选取代的亚芳基或任选取代的亚杂芳基，-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(III)中的L连接，-C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(III)中的L连接和其中各C1-C10-亚烷基独立任选地被一个或多个羟基取代，-C(O)-N(R5)-C1-C10-亚烷基-C(O)NH-X2-、其中X2与式(III)中的L连接，或
Figure BDA0002666727490000024
其中X4与式(III)中的L连接；或
两个Rx均为F；和SP是-C(O)-C1-C10-亚烷基-C(O)-，-C(O)-N(C1-6烷基)-C1-C10-亚烷基-X1b-、其中X1b与式(III)中的L连接，-C(O)-N(H)-(C1-C10-亚烷基)-X1b-、其中X1b与式(III)中的L连接，
Figure BDA0002666727490000025
其中右手边的附接点(即N处)与式(III)中的L连接，-CH2-NH-、其中所述N与式(III)中的L连接，
Figure BDA0002666727490000026
其中所述N与式(III)中的L连接和其中Ar是任选取代的亚芳基或任选取代的亚杂芳基，-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(III)中的L连接，-C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(III)中的L连接和其中各C1-C10-亚烷基独立任选地被一个或多个羟基取代，-C(O)-N(R5)-(C1-C10-亚烷基)-C(O)NH-X2-、其中X2与式(III)中的L连接，或
Figure BDA0002666727490000031
其中X4与式(III)中的L连接；和
X1是-N(C1-6烷基)-；
X1b是-S-、-NH-、或-N(C1-6烷基)-；
X2是-NH-；
X3是-CH2-，X3是-CH2-O-(C1-C10-亚烷基)-C(O)-、其中所述C(O)与X4连接，或X3是-C(O)-；
X4是-O-；
R5是H、-OH、-OCH3、或C1-6烷基；
R50和R50a分别独立地为H或C1-C6-烷基；
Rd、Re和Rf分别独立地为-H、-OH、羟基烷基、烷氧基羰基、-C(O)OH、或-CH2ORg，其中各Rg分别独立地为-CH2C(O)OH或-CH2C(O)O(烷基)；和
m是0或1；
z是选自1-30(包括1和30)的整数；
L是连接体；和
BA是结合剂。
第二方面涉及式(I)所示化合物：
Figure BDA0002666727490000032
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或衍生物，
其中：
R4是烷基、芳基、芳基烷基、或含N的杂环烷基；
a)两个Rx均为H；和
R3是-C(O)RZ；-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50aR50b；-CH2NH2；或
Figure BDA0002666727490000033
RZ是-C4-10-亚烷基-C(O)OH；-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50aR50b，其中各C1-C10-亚烷基独立任选地被一个或多个羟基取代；
Figure BDA0002666727490000041
其中Ar是任选取代的芳基或杂芳基；或NR15R15a；
R15是H或C1-C6烷基，和R15a是-(C1-C10-亚烷基)-SH或-(C1-6-亚烷基)-C(O)NHNH2；
b)两个Rx均为F；和
R3是-C(O)RZ；-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50aR50b；-CH2NH2；或
Figure BDA0002666727490000042
RZ是-C4-10-亚烷基-C(O)OH；-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50aR50b，其中各C1-C10-亚烷基独立任选地被一个或多个羟基取代；
Figure BDA0002666727490000043
其中Ar是任选取代的芳基或杂芳基；或NR16R16a；
R16是H或C1-C6烷基，和R16a是-(C1-C10-亚烷基)-SH、-(C1-C10-亚烷基)-NH2、-(C1-C10-亚烷基)-NH(C1-6烷基)、
Figure BDA0002666727490000044
或-(C1-6-亚烷基)-C(O)NHNH2；和
各R50、R50a和R50b分别独立地为H或C1-C6-烷基；
Rc、Rd、Re和Rf中的一个是-CH2ORg，而其他分别独立地为-H、-OH、羟基烷基、-C(O)OH、或-CH2ORg，其中各Rg分别独立地为-(C1-6-亚烷基)-C(O)OH或-(C1-6-亚烷基)-C(O)O(烷基)；或Rc、Rd、Re和Rf中的一个是羟基烷基，而其他均为-H；和
m是0或1。
第三方面涉及式(II)所示化合物：
Figure BDA0002666727490000045
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或衍生物，
其中：
R4是烷基、芳基、芳基烷基、或含N的杂环烷基；
两个Rx均为H；和SP是-C(O)-C1-C10-亚烷基-C(O)-，-C(O)-N(C1-6烷基)-C1-C10-亚烷基-X1-、其中X1与式(II)中的(L3)0-1连接，-C(O)-N(H)-(C1-C10-亚烷基)-S-、其中S与式(II)中的(L3)0-1连接，-C(O)-N(C1-6烷基)-(C1-C10-亚烷基)-S-、其中S与式(II)中的(L3)0-1连接，
Figure BDA0002666727490000051
其中右手边的附接点(即N处)与式(II)中的(L3)0-1连接，-CH2-NH-、其中所述N与式(II)中的(L3)0-1连接，
Figure BDA0002666727490000052
其中所述N与式(II)中的(L3)0-1连接和其中Ar是任选取代的亚芳基或任选取代的亚杂芳基，-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(II)中的(L3)0-1连接，-C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(II)中的(L3)0-1连接和其中各C1-C10-亚烷基独立任选地被一个或多个羟基取代，-C(O)-N(R5)-C1-C10-亚烷基-C(O)NH-X2-、其中X2与式(II)中的(L3)0-1连接，或
Figure BDA0002666727490000053
其中X4与式(II)中的L3连接；或
两个Rx均为F；和SP是-C(O)-C1-C10-亚烷基-C(O)-，-C(O)-N(C1-6烷基)-C1-C10-亚烷基-X1b-、其中X1b与式(II)中的(L3)0-1连接，-C(O)-N(H)-(C1-C10-亚烷基)-X1b-、其中X1b与式(II)中的(L3)0-1连接，
Figure BDA0002666727490000054
其中右手边的附接点(即N处)与式(II)中的(L3)0-1连接，-CH2-NH-、其中所述N与式(II)中的(L3)0-1连接，
Figure BDA0002666727490000055
其中所述N与式(II)中的(L3)0-1连接和其中Ar是任选取代的亚芳基或任选取代的亚杂芳基，-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(II)中的(L3)0-1连接，-C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(II)中的(L3)0-1连接和其中各C1-C10-亚烷基独立任选地被一个或多个羟基取代，-C(O)-N(R5)-(C1-C10-亚烷基)-C(O)NH-X2-、其中X2与式(II)中的(L3)0-1连接，或
Figure BDA0002666727490000056
其中X4与式(II)中的(L3)0-1连接；和
X1是-N(C1-6烷基)-；
X1b是-S-、-NH-、或-N(C1-6烷基)-；
X2是-NH-；
X3是-CH2-，X3是-CH2-O-(C1-C10-亚烷基)-C(O)-、其中所述C(O)与X4连接，或X3是-C(O)-；
X4是-O-；
R5是H、-OH、-OCH3、或C1-6烷基；
R50和R50a分别独立地为H或C1-C6-烷基；
Rd、Re和Rf分别独立地为-H、-OH、羟基烷基、烷氧基羰基、-C(O)OH、或-CH2ORg，其中各Rg分别独立地为-CH2C(O)OH或-CH2C(O)O(烷基)；和
m是0或1；
RG是活性基团；
L2是连接用连接体；和
L3当存在时，是自分解连接体(self-immolativelinker)。
另一方面涉及药物组合物，所述药物组合物包含式(I)、式I-P、式I-P-1、式(III-P)、式III-P-1、式(3000)、或式(III)所示化合物，以及药学上可接受的载体、稀释剂、和/或辅料。
另一方面涉及用于治疗各种疾病、病症或病况的方法，其包含施用式I、式I-P、式I-P-1、式(III-P)、式III-P-1、式(3000)、或式(III)所示化合物，或施用包含式I、式I-P、式I-P-1、式(III-P)、式III-P-1、式(3000)、或式(III)所示化合物以及药学上可接受的载体、稀释剂、和/或辅料的药物组合物。
附图简要说明
图1A、1B和1C以及图2示出了如实施例7中测试的类固醇-ADC的GR激活。
图3示出了方案1。间隔基-布地奈德1c-1e、1g-1i和1j-1l的合成。
发明详述
A.定义
本发明使用的“烷基”是指一价且饱和的烃基基团部分。除非另有说明，否则烷基是任选取代的，且可以是直链、支链或环状的，即环烷基。烷基包括但不限于具有1-20个碳原子，即C1-20烷基；1-12个碳原子，即C1-12烷基；1-8个碳原子，即C1-8烷基；1-6个碳原子，即C1-6烷基；和1-3个碳原子，即C1-3烷基的那些基团。环烷基是烷基的子集，包括但不限于具有3-20个碳原子，即C3-20烷基；3-12个碳原子，即C3-12烷基；3-10个碳原子，即C3-10烷基；3-8个碳原子，即C3-8烷基；和3-6个碳原子，即C3-6烷基的基团。烷基基团部分的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、异丁基、戊基基团部分、己基基团部分、环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
“亚烷基”是二价烷基，其中烷基如本发明所定义。
本发明使用的“氨基烷基”是指被一个或两个-NH2基团取代的烷基基团。
本发明使用的“烯基”是指包含至少两个碳原子和一个或多个非芳族碳-碳双键的一价烃基基团部分。除非另有说明，否则烯基是任选取代的，且可以是直链、支链或环状的。烯基包括但不限于具有2-20个碳原子，即C2-20烯基；2-12个碳原子，即C2-12烯基；2-8个碳原子，即C2-8烯基；2-6个碳原子，即C2-6烯基；和2-4个碳原子，即C2-4烯基的那些基团。环烯基是烯基的子集，包括但不限于具有3-20个碳原子，即C3-20烯基；3-12个碳原子，即C3-12烯基；3-10个碳原子，即C3-10烯基；3-8个碳原子，即C3-8烯基；和3-6个碳原子，即C3-6烯基的基团。烯基基团部分的实例包括但不限于乙烯基、丙烯基、丁烯基和环己烯基。
“亚烯基”是二价烯基，其中烯基如本发明所定义。
本发明使用的“炔基”是指包含至少两个碳原子和一个或多个碳-碳三键的一价烃基基团部分。除非另有说明，否则炔基是任选取代的，且可以是直链、支链或环状的。炔基包括但不限于具有2-20个碳原子，即C2-20炔基；2-12个碳原子，即C2-12炔基；2-8个碳原子，即C2-8炔基；2-6个碳原子，即C2-6炔基；和2-4个碳原子，即C2-4炔基的那些基团。环炔基是炔基的子集，包括但不限于具有3-20个碳原子，即C3-20炔基；3-12个碳原子，即C3-12炔基；3-10个碳原子，即C3-10炔基；3-8个碳原子，即C3-8炔基；和3-6个碳原子，即C3-6炔基的基团。炔基基团部分的实例包括但不限于乙炔基、丙炔基和丁炔基。
“亚炔基”是二价炔基，其中炔基如本发明所定义。
本发明使用的“烷氧基”是指一价且饱和的烃基基团部分，其中所述烃包括与氧原子连接的单键，和其中所述自由基位于氧原子上，例如乙氧基CH3CH2-O·。烷氧基取代基与它们通过所述烷氧基取代基的氧原子取代的化合物连接。除非另有说明，否则烷氧基是任选取代的，且可以是直链、支链或环状的，即环烷氧基。烷氧基包括但不限于具有1-20个碳原子，即C1-20烷氧基；1-12个碳原子，即C1-12烷氧基；1-8个碳原子，即C1-8烷氧基；1-6个碳原子，即C1-6烷氧基；和1-3个碳原子，即C1-3烷氧基的那些。环烷氧基是烷氧基的子集，包括但不限于具有3-20个碳原子，即C3-20烷氧基；3-12个碳原子，即C3-12烷氧基；3-10个碳原子，即C3-10烷氧基；3-8个碳原子，即C3-8烷氧基；和3-6个碳原子，即C3-6烷氧基的基团。烷氧基基团部分的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、异丁氧基、戊氧基基团部分、己氧基基团部分、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基和环己氧基。
本发明使用的“芳基”是指为单环或多环体系的原子团的一价基团部分，其包含至少一个芳香环，其中所述环原子为碳原子。芳基是任选取代的。当芳基为单环时，芳基为苯基。当芳基是多环的，例如双环或三环时，至少一个环是芳族的，而其他环可以是芳族的或部分不饱和的。芳基基团部分的实例包括但不限于具有6至20个环碳原子，即C6-20芳基；6至15个环碳原子，即C6-15芳基，和6至10个环碳原子，即C6-10芳基的那些。芳基基团部分的实例包括但不限于苯基、萘基、四氢萘基、芴基、薁基、蒽基、菲基和芘基。
本发明使用的“亚芳基”是指二价芳基基团，其中芳基如本发明所定义。在一些实施方案，所述亚芳基任选地在不提供与分子其余部分连接的连接点的所述碳原子之一上进行取代。在一些实施方案，所述亚芳基未被任选地取代。在一些实施方案，所述亚芳基是亚苯基。在一些实施方案，所述亚芳基是
Figure BDA0002666727490000081
其是任选取代的。在一些实施方案，所述亚芳基是
Figure BDA0002666727490000082
其未被任选地取代。在一些实施方案，
Figure BDA0002666727490000083
中的所述亚苯基是任选取代的。在一些实施方案，
Figure BDA0002666727490000084
中的所述亚苯基未被任选地取代。
本发明使用的“芳基烷基”或“芳烷基”是指烷基化合物原子团的一价基团部分，其中所述烷基化合物被芳基取代基取代，即，所述芳香族化合物包括与烷基基团连接的单键，和其中所述自由基位于所述烷基基团上。芳基烷基基团通过所述烷基基团与所示的化学结构连接。在一些实施方案，芳基烷基包括苄基、苯基乙-1-基和苯基乙-2-基等。除非另有说明，否则芳基烷基是未取代的。然而，当被取代时，芳基烷基，即所述芳基基团和/或所述烷基基团，如本发明所公开的那样进行取代。芳基烷基的实例包括但不限于苄基。
本发明使用的“卤代烷基”是指本发明所定义的烷基，其中所述烷基包括至少一个选自卤素例如F、Cl、Br、或I的取代基。在一些实施方案，所述烷基被1、2、3或4个独立选择的卤原子取代。
本发明使用的“卤代烷氧基”是指如上所定义的烷氧基，其中所述烷氧基包括至少一个选自卤素例如F、Cl、Br或I的取代基。
本发明使用的“杂烷基”是指其中一个或多个碳原子被杂原子替换的烷基。本发明使用的“杂烯基”是指其中一个或多个碳原子被杂原子替换的烯基。本发明使用的“杂炔基”是指其中一个或多个碳原子被杂原子替换的炔基。合适的杂原子包括但不限于独立选择的氮、氧和硫原子。除非另有说明，否则杂烷基是任选取代的。杂烷基基团部分的实例包括但不限于氨基烷基、磺酰基烷基、亚磺酰基烷基。杂烷基基团部分的实例还包括但不限于甲氨基、甲磺酰基和甲基亚磺酰基。
本发明使用的“杂芳基”是指芳族化合物原子团的一价基团部分，其中所述环原子包含碳原子和至少一个氧、硫、氮或磷原子。杂芳基包括单环、稠合双环或稠合三环基团，其中包含单环基团的环是芳香族的，和其中包含双环或三环基团的稠环中的至少一个是芳香族的。稠合双环基团包括桥环体系。杂芳基基团部分的实例包括但不限于具有5至20个环原子，5至15个环原子，和5至10个环原子的那些。杂芳基是任选取代的。在一些实施方案，所述杂芳基环包含1、2、3或4个(在一些实施方案为1、2或3；在一些实施方案为1或2；在一些实施方案为1)独立选择的氧、硫、氮和/或磷原子。在一些实施方案，杂芳基是1,2,4-三唑基，1,3,5-三唑基，邻苯二甲酰亚胺基，吡啶基，吡咯基，咪唑基，噻吩基，呋喃基，吲哚基，2,3-二氢-1H-吲哚基(包括例如，2,3-二氢-1H-吲哚-2-基或2,3-二氢-1H-吲哚-5-基等)，异吲哚基，二氢吲哚基，异二氢吲哚基，苯并咪唑基，苯并二噁唑-4-基，苯并呋喃基，噌啉基，吲嗪基，萘啶-3-基，酞嗪-3-基，酞嗪-4-基，蝶啶基，嘌呤基，喹唑啉基，喹喔啉基，四唑基，吡唑基，吡嗪基，嘧啶基，哒嗪基，噁唑基，异噁唑基，噁二唑基，苯并噁唑基，喹啉基，异喹啉基，四氢异喹啉基(包括例如，四氢异喹啉-4-基或四氢异喹啉-6基等)，吡咯并[3,2-c]吡啶基(包括例如，吡咯并[3,2-c]吡啶-2-基或吡咯并[3,2-c]吡啶-7-基等)，苯并吡喃基，噻唑基，异噻唑基，噻二唑基，苯并噻唑基，苯并噻吩基。
本发明使用的“亚杂芳基”是指二价杂芳基，其中杂芳基如本发明所定义。在一些实施方案，所述亚杂芳基任选地在不提供与分子其余部分连接的连接点的碳原子或可取代氮原子之一上进行取代。在一些实施方案，所述亚杂芳基未被任选地取代。在一些实施方案，所述亚杂芳基是吡啶二基。
本发明使用的“杂环烷基”是指其中一个或多个碳原子被独立选择的杂原子替换的上述所定义的“烷基”中的环烷基。合适的杂原子包括但不限于氮、氧和硫原子。除非另有说明，否则杂环烷基是任选取代的。杂环烷基基团部分的实例包括但不限于吗啉基、哌啶基、四氢吡喃基、吡咯烷基、咪唑烷基、噁唑烷基、噻唑烷基、二氧杂环戊烷基、二硫杂环戊烷基、四氢吡喃基或四氢噻喃基。
本发明使用的“羟基亚烷基”是指如本发明所定义的亚烷基，其中所述亚烷基包括至少一个羟基。在一些实施方案，所述亚烷基被1、2、3或4个羟基基团取代。
本发明使用的“含N的杂环烷基”是指其中一个或多个碳原子被杂原子替代、和其中至少一个杂原子是氮原子的如上所定义的“烷基”中的环烷基。独立选择的合适的杂原子除氮原子之外，还包括但不限于氧原子和硫原子。含N的杂环烷基是任选取代的。含N的杂环烷基基团部分的实例包括但不限于吗啉基、哌啶基、吡咯烷基、咪唑烷基、噁唑烷基、或噻唑烷基。
本发明使用的“任选取代的”，当用于描述基团部分(例如任选取代的亚芳基、任选取代的亚杂芳基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的烷基、和任选取代的芳基烷基)时，是指此基团部分任选地与此基团部分中任何可取代原子上的一个或多个取代基连接。此类取代基的实例包括但不限于卤素，氰基，硝基，卤代烷基，叠氮基，环氧基，任选取代的杂芳基，任选取代的杂环烷基，
Figure BDA0002666727490000091
Figure BDA0002666727490000092
Figure BDA0002666727490000093
其中RA、RB和RC在每次出现时，分别独立地为氢原子、烷基、烯基、炔基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、杂烷基、杂芳基、或杂环烷基，或RA和RB同与它们连接的原子一起形成饱和或不饱和的杂环(即杂环烷基或杂芳基)，其中所述环是任选取代的，和其中除氮环原子外，一个或多个环原子任选地是独立地选自氮、氧、硫和磷的杂原子。在某些实施方案，当基团部分任选地被任选取代的杂芳基、任选取代的杂环烷基或任选取代的饱和或不饱和杂环(即杂环烷基或杂芳基)取代时，所述任选取代的杂芳基、任选取代的杂环烷基或任选取代的饱和或不饱和杂环(即杂环烷基或杂芳基)上的取代基，如果它们被取代，则不被进一步任选地被另外的取代基取代的取代基所取代。在一些实施方案，当本发明所述的基团任选地被取代时，除非另有说明，与所述基团连接的取代基是未被取代的，即任选取代的亚芳基作为取代基不进一步被取代的亚芳基取代。
本发明使用的“结合剂”是指能够与给定结合配偶体特异性结合的任何基于蛋白质或基于肽的分子。在一些实施方案，所述结合剂是抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案，所述结合剂不为白蛋白。
本发明使用的“酰胺合成条件”是指适于促进形成酰胺，譬如，通过羧酸、活化的羧酸、或酰卤与胺进行反应的反应条件。在一些实施方案，“酰胺合成条件”是指适于在羧酸和胺之间促进形成酰胺键的反应条件。在所述这些实施方案的一些中，所述羧酸首先在活化羧酸与胺反应形成酰胺之前转化为活化羧酸。实现酰胺形成的适宜条件包括，但不限于，利用试剂来实现羧酸与胺之间反应的那些，包括但不限于，二环己基碳二亚胺(DCC)、二异丙基碳二亚胺(DIC)、(苯并三氮唑-1-基氧基)三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐(BOP)、(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(PyBOP)、(7-偶氮苯并三氮唑-1-基氧基)三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(PyAOP)、三吡咯烷基溴化鏻六氟磷酸盐(PyBrOP)、O-(苯并三氮唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)、O-(苯并三氮唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟硼酸盐(TBTU)、1-[双(二甲氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三氮唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化六氟磷酸盐(HATU)、2-乙氧基-1-乙氧羰基-1,2-二氢喹啉(EEDQ)，1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺(EDC)、2-氯-1,3-二甲基咪唑鎓六氟磷酸盐(CIP)、2-氯-4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪(CDMT)、和羰二咪唑(CDI)。在一些实施方案，首先将羧酸转化为活化的羧酸酯，然后与胺反应形成酰胺键。在一些实施方案，羧酸与试剂反应。所述试剂通过使羧酸去质子来活化羧酸，然后与胺反应形成酰胺键。在某些实施方案，所述羧酸与试剂反应。所述试剂通过使羧酸去质子化，然后由于去质子化的羧酸对质子化试剂的亲核进攻，从而与去质子化的羧酸形成产物复合物，来活化羧酸。对于某些羧酸，相较羧酸转化成活化酯之前，所述活化羧酸酯更容易受到胺的亲核进攻。此举导致酰胺键形成。因此，所述羧酸被描述为活化的。示例性试剂包括DCC和DIC。
本发明使用的“治疗有效量”是指足以在患者治疗或控制疾病或病症，或延迟或最小化与疾病或病症相关的一种或多种症状时，提供治疗益处的(化合物的)量。
本发明使用的“药学上可接受的盐”是指适于施用于患者的任何盐。合适的盐包括但不限于在Berge et al.,"Pharmaceutical Salts",J.Pharm.Sci.,1977,66:1中公开的那些，其通过引用并入本发明作为参考。盐的实例包括但不限于酸衍生的、碱衍生的、有机的、无机的、胺、和碱金属或碱土金属盐类，包括但不限于钙盐，镁盐，钾盐，钠盐，盐酸盐，氢溴酸盐，硫酸盐，硝酸盐，磷酸盐，乙酸盐，丙酸盐，乙醇酸盐，丙酮酸盐，草酸盐，马来酸盐，丙二酸盐，琥珀酸盐，富马酸盐，酒石酸盐，柠檬酸盐，苯甲酸盐，肉桂酸盐，扁桃酸盐，甲磺酸盐，乙磺酸盐，对甲苯磺酸盐和水杨酸盐等。
某些基团、分子/基团部分、取代基、和原子被描述为具有与键相交或覆盖在键上的波浪线，以指示所述基团、分子/基团部分、取代基、原子通过其进行连接的原子。譬如，被丙基基团取代的苯基基团可表示为：
Figure BDA0002666727490000111
具有下述结构：
Figure BDA0002666727490000112
本发明使用的，通过环原子之间的键连接到环状基团(例如，芳环、杂芳环、稠环、和饱和或不饱和环烷基或杂环烷基)的取代基的例示说明意在表示，除非另有说明，环状基团可根据本发明所阐述的技术或即时公开的涉及本领域已知的技术，在环状基团的任何环位置或稠环基团的任何环上被取代基取代。譬如，所述基团
Figure BDA0002666727490000113
其中下标q是从0至4(包括0和4)的整数，和其中取代基R1的位置一般性地描述，即不直接连接至键合线结构的任何顶点，即特定的环碳原子，包括以下，其中取代基R1与特定环碳原子连接的基团的非限制性实例：
Figure BDA0002666727490000114
Figure BDA0002666727490000115
Figure BDA0002666727490000121
当化合物命名与结构式冲突或与结构式不一致时，以结构式为准，除非上下文例如NMR表征数据所提供的数据可能另有规定。
短语“活性(反应性)基团”(reactive group，“RG”)是指与抗体、经修饰的抗体或其抗原结合片段的活性(反应性)部分反应的官能团或基团部分。在某些实施方案，所述“活性基团”是与抗体或其抗原结合片段的半胱氨酸残基或赖氨酸残基反应的官能团或基团部分(例如，马来酰亚胺或NHS酯)。在某些实施方案，所述“活性基团”是能够进行点击化学反应的官能团或基团部分。在所述点击化学反应的一些实施方案中，所述活性基团包含能够与叠氮化物进行1,3-环加成反应的炔。此类合适的活性基团包括但不限于应变炔烃类，例如适用于应变促进的炔-叠氮化物环加成(SPAAC)的那些，环炔烃类例如环辛炔类，苯并环化的炔烃类，以及在没有铜催化剂的情况下能够与叠氮化物进行1,3-环加成反应的炔烃类。合适的炔烃类还包括但不限于DIBAC(其中DIBAC基团部分的所述-C(O)CH2CH2C(O)-部分被L2涵盖)，DIBO(其中DIBO基团部分的所述-O-部分被L2涵盖)，BARAC(其中BARAC基团部分的所述
Figure BDA0002666727490000122
部分被L2涵盖)，DIFO(其中所述-O-部分被L2涵盖)，取代的炔烃类例如氟化炔烃类，氮杂-环炔烃类，BCN，及其衍生物。包含此类活性基团的连接体-有效负载可用于偶联已用叠氮基官能化的抗体。此类官能化抗体包括用叠氮基-聚乙二醇基团官能化的抗体。在某些实施方案，此类官能化抗体通过在酶转谷氨酰胺酶存在下，使包含至少一个谷氨酰胺残基(例如重链Q295(EU编号))的抗体与式H2N-LL-N3所示化合物反应而得到，其中LL是二价聚乙二醇基团。
在一些实施方案，所述活性基团(RG)是炔烃，例如
Figure BDA0002666727490000123
其可通过点击化学与叠氮化物(例如
Figure BDA0002666727490000124
)反应，以形成点击化学产物，例如
Figure BDA0002666727490000125
其区域异构体、或其混合物。在一些实施方案，所述活性基团是炔烃，例如
Figure BDA0002666727490000131
(其中L2包含-OCH2C(O)-)，其可通过点击化学与叠氮化物(例如
Figure BDA0002666727490000132
)反应，以形成点击化学产物，例如
Figure BDA0002666727490000133
在一些实施方案，所述活性基团是炔烃，例如
Figure BDA0002666727490000134
其可通过点击化学与叠氮化物(例如
Figure BDA0002666727490000135
)反应，以形成点击化学产物，例如
Figure BDA0002666727490000136
其区域异构体、或其混合物。在一些实施方案，所述活性基团是官能团，例如
Figure BDA0002666727490000137
其与抗体或其抗原结合片段上的半胱氨酸残基反应，与其形成键，例如
Figure BDA0002666727490000138
其中Ab是指抗体或其抗原结合片段，S是指半胱氨酸残基上的S原子，所述官能团通过此半胱氨酸残基上的S原子与Ab结合。在一些实施方案，所述活性基团是官能团，例如
Figure BDA0002666727490000139
其与抗体或其抗原结合片段上的赖氨酸残基反应，与其形成键，例如
Figure BDA00026667274900001310
其中Ab是指抗体或其抗原结合片段，N是指赖氨酸残基上的N原子，所述官能团通过此赖氨酸残基上的N原子与Ab结合。
本发明使用的短语“活性基团残基”(-L1-)是指连接体基团部分中的官能团与结合剂(BA)的活性部分进行反应的产物，包括点击化学产物。所述活性基团残基通过结合剂的氨基酸上的活性基团的反应，并附接于所述结合剂(例如抗体)且附接于所述连接用连接体而形成。在一些实施方案，所述活性基团残基是包含1,2,3-四唑的基团，即其通过炔与叠氮化物的反应而形成。在一些实施方案，所述活性基团残基是
Figure BDA00026667274900001311
(a)其中S是指半胱氨酸残基上的S原子，(a)通过此半胱氨酸残基上的S原子与Ab连接，并且其是通过
Figure BDA0002666727490000141
与抗体或其抗原结合片段上的半胱氨酸残基反应而形成。在一些实施方案，所述活性基团残基是
Figure BDA0002666727490000142
其中N是指赖氨酸残基上的N原子，并且其是通过官能团例如
Figure BDA0002666727490000143
与抗体或其抗原结合片段上的赖氨酸残基反应而形成。
在一些实施方案，连接体-L-包含具有以下基团部分的活性基团残基，并且L1是具有以下基团部分的活性基团残基：
Figure BDA0002666727490000144
其区域异构体、或其混合物，其中
Figure BDA0002666727490000145
是与所述结合剂连接的键。在一些实施方案，连接体-L-包含具有以下基团部分的活性基团残基，并且L1是具有以下基团部分的活性基团残基：
Figure BDA0002666727490000146
其区域异构体、或其混合物，其中
Figure BDA0002666727490000147
是与所述结合剂连接的键。在一些实施方案，连接体-L-包含具有以下基团部分的活性基团残基，并且L1是具有以下基团部分的活性基团残基：
Figure BDA0002666727490000148
其中-OCH2C(O)-包含在L2中，其区域异构体、或其混合物，其中
Figure BDA0002666727490000149
是与所述结合剂连接的键。在一些实施方案，连接体-L-包含具有以下基团部分的活性基团残基，并且L1是具有以下基团部分的活性基团残基：
Figure BDA00026667274900001410
其区域异构体、或其混合物，其中
Figure BDA00026667274900001411
是与所述结合剂连接的键。在一些实施方案，连接体-L-包含具有以下基团部分的活性基团残基，并且L1是具有以下基团部分的活性基团残基：
Figure BDA00026667274900001412
其中
Figure BDA00026667274900001413
是与所述抗体或其抗原结合片段的半胱氨酸连接的键。在一些实施方案，连接体-L-包含具有以下基团部分的活性基团残基，并且L1是具有以下基团部分的活性基团残基：
Figure BDA00026667274900001414
其中
Figure BDA0002666727490000151
是与所述抗体或其抗原结合片段的赖氨酸连接的键。在这些实施例中，与所述结合剂连接的键是直接连接的或通过连接体进行连接。在特定实施方案，用叠氮化物修饰所述结合剂以促进与连接体-L-或L1键合以形成活性基团残基。
本发明使用的“连接用连接体”(L2)是指可切割或不可切割的二价基团。可切割的连接体是通过在内化后(例如通过水解、还原或酶促反应切割)的细胞内代谢进行切割的连接体。不可切割的连接体是在内化后通过抗体的溶酶体降解而释放附接的有效负载的连接体。合适的连接用连接体包括但不限于酸不稳定连接体、水解不稳定连接体、酶促可切割连接体、还原不稳定连接体、和不可切割连接体。合适的连接体还包括但不限于，是或包含葡糖苷酸类、琥珀酰亚胺-硫醚类、聚乙二醇(PEG)单元类、腙类、马来酰亚胺-己酰基(mal-caproyl)单元类、二硫键单元类(例如，-S-S-、-S-C(R1bR2b)-，其中R1b和R2b分别独立地为H或烃基)、氨基甲酸酯单元类、对氨基苄基单元类(PAB)、磷酸酯单元类(例如单-、双-或三-磷酸酯单元类)、和肽单元类(例如包含2、3、4、5、6、7、8个、或更多个氨基酸残基的肽单元类，包括但不限于缬氨酸-瓜氨酸残基单元类)。本发明使用的“己酰基”是指-(CH2)5-C(O)-基团。在一些实施方案，L2包含环糊精(CD)。在一些实施方案，L2包含-C(O)CH2CH2C(O)-、-C(O)CH2CH2CH2C(O)-、-OCH2C(O)-、-O-、或
Figure BDA0002666727490000152
本发明使用的“自分解连接体(self-immolativelinker)”是指本领域技术人员已知的任何此类基团。在特定实施方案，所述自分解基团是对氨基苄基(PAB)，即
Figure BDA0002666727490000153
或其衍生物。有用的衍生物包括对氨基苄氧基，即
Figure BDA0002666727490000154
和对氨基苄氧基羰基(PABC)，即
Figure BDA0002666727490000155
本领域技术人员将认识到，自分解基团能够进行化学反应，所述化学反应从有效负载释放连接体的其余原子。
B.类固醇有效负载
适用于本发明所述偶联物的类固醇包括布地奈德及其前药、布地奈德类似物或衍生物(包括氟化类似物及衍生物)及其前药、以及表A中列出的类固醇及其前药。在一些实施方案，结合抗体的靶抗原后，抗体-药物偶联物释放布地奈德、布地奈德的前药、布地奈德类似物或衍生物(包括氟化类似物及衍生物)、布地奈德类似物或衍生物(包括氟化类似物及衍生物)的前药、表A中的类固醇、或表A中类固醇的前药。在表A中，以下化合物通过-C(O)CH2OH基团的羟基(即通过-C(O)CH2-O-SP-L-)、或通过Mapracorat的羟基(即通过-O-SP-L-)连接至式(III)、式(III-P)、式III-P-1、或(3000)所示化合物的BA；或通过-C(O)CH2OH基团的羟基(即通过-C(O)CH2-O-SP-(L3)0-1-L2-)、或通过Mapracorat的羟基(即通过-O-SP-(L3)0-1-L2-)连接至式(II)、式(II-P)、式II-P-1、或(2000)所示化合物的RG。
表A
Figure BDA0002666727490000161
Figure BDA0002666727490000171
Figure BDA0002666727490000181
Figure BDA0002666727490000191
Figure BDA0002666727490000201
在一些或任一实施方案，式(3000)或式(2000)所示化合物包含表A中类固醇的前药，其中SP是-C(O)-C1-C10-亚烷基-C(O)-，-C(O)-N(C1-6烷基)-C1-C10-亚烷基-X1b-、其中X1b与式(3000)中的L或与式(2000)中的(L3)0-1连接，-C(O)-N(H)-(C1-C10-亚烷基)-X1b-、其中X1b与式(3000)中的L或与式(2000)中的(L3)0-1连接，
Figure BDA0002666727490000202
其中右手边的附接点(即N处)与式(3000)中的L或与式(2000)中的(L3)0-1连接，-CH2-NH-、其中N与式(3000)中的L或与式(2000)中的(L3)0-1连接，
Figure BDA0002666727490000211
其中N与式(3000)中的L或与式(2000)中的(L3)0-1连接，-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(3000)中的L或与式(2000)中的(L3)0-1连接，-C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(3000)中的L或与式(2000)中的(L3)0-1连接和其中各C1-C10-亚烷基独立任选地被一个或多个羟基取代，-C(O)-N(R5)-(C1-C10-亚烷基)-C(O)NH-X2-、其中X2与式(3000)中的L或与式(2000)中的(L3)0-1连接，或
Figure BDA0002666727490000212
其中X4与式(3000)中的L或与式(2000)中的(L3)0-1连接。
在一些实施方案，本发明提供了式(I-P)所示化合物：
Figure BDA0002666727490000213
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或衍生物，
其中：
R4是烷基、芳基、芳基烷基、或含N的杂环烷基；
R3是-C(O)RZ或
Figure BDA0002666727490000214
RZ是-C4-10-亚烷基-C(O)OH或NR15R15a；
R15是H或烷基，和R15a是-(C1-6-亚烷基)-C(O)NHNH2；
Rc、Rd、Re和Rf中的一个是-CH2ORg，而其他分别独立地为-H、-OH、羟基烷基、-C(O)OH、或-CH2ORg，其中各Rg分别独立地为-(C1-6-亚烷基)-C(O)OH或-(C1-6-亚烷基)-C(O)O(烷基)；或Rc、Rd、Re和Rf中的一个是羟基烷基，而其他均为-H；和
m是0或1。
在一些实施方案，本发明提供了式(I-P-1)所示化合物：
Figure BDA0002666727490000221
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或衍生物，
其中：
R4是烷基、芳基、芳基烷基、或含N的杂环烷基；
R3是-C(O)RZ或
Figure BDA0002666727490000222
RZ是-C4-10-亚烷基-C(O)OH或NR5R5a；
R15是H或烷基，和R15a是-(C1-6-亚烷基)-C(O)NHNH2；
Rc、Rd、Re和Rf中的一个是-CH2ORg，而其他分别独立地为-H、-OH、羟基烷基、-C(O)OH、或-CH2ORg，其中各Rg分别独立地为-(C1-6-亚烷基)-C(O)OH或-(C1-6-亚烷基)-C(O)O(烷基)；或Rc、Rd、Re和Rf中的一个是羟基烷基，而其他均为-H；和
m是0或1。
在一些实施方案，本发明提供了式(I)、式(I-P)、或式(I-P-1)所示化合物，其中R4是烷基。在一些实施方案，R4不为环烷基。在这些实施方案的一些中，R4是直链或支链烷基。在这些实施方案的一些中，R4是芳基。在这些实施方案的一些中，R4是芳基烷基。在这些实施方案的一些中，R4是含N的杂环烷基。在一些实施方案，R4是烷基，例如但不限于甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基或壬基。在一些实施方案，R4是甲基。在一些实施方案，R4是乙基。在一些实施方案，R4是正丙基。在一些实施方案，R4是异丙基。在一些实施方案，R4是正丁基。在一些实施方案，R4是异丁基。在一些实施方案，R4是叔丁基。在一些实施方案，R4是仲丁基。在一些实施方案，R4是戊基。在一些实施方案，R4是己基。在一些实施方案，R4是庚基。在一些实施方案，R4是辛基或壬基。在一些实施方案，R4是芳基，例如但不限于苯基、苯酚或萘基。在一些实施方案，R4是苯基。在一些实施方案，R4是萘基。在一些实施方案，R4是杂芳基，例如但不限于噻吩基。在一些实施方案，R4是芳基烷基，例如但不限于苄基。在一些实施方案，R4是含N的杂环烷基，例如但不限于哌啶基。在式(I)的一些实施方案中，两个Rx均为H。在式(I)的一些实施方案中，两个Rx均为F。
在一些或任一实施方案，本发明提供了式(I)所示化合物，其中两个Rx均为F，和R3是-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50aR50b或-C(O)RZ，和RZ是NR16R16a或-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50aR50b、其中各C1-C10-亚烷基独立任选地被一个或多个羟基取代。
在式(I)、式(I-P)、或式(I-P-1)的一些实施方案中，两个Rx均为H，和R3是-C(O)RZ。在式(I)、(I-P)、或(I-P-1)的一些或任一实施方案中，RZ是-C4-10-亚烷基-C(O)OH。在式(I)、(I-P)、或(I-P-1)的一些或任一实施方案中，RZ是-C4-6-亚烷基-C(O)OH。在式(I)、(I-P)、或(I-P-1)的一些或任一实施方案中，RZ是-C4-亚烷基-C(O)OH。在式(I)、(I-P)、或(I-P-1)的一些或任一实施方案中，RZ是-C5-亚烷基-C(O)OH。在式(I)、(I-P)、或(I-P-1)的一些或任一实施方案中，RZ是-C6-亚烷基-C(O)OH。在式(I)、(I-P)、或(I-P-1)的一些或任一实施方案中，RZ是NR15R15a。在式(I)、(I-P)、或(I-P-1)的一些或任一实施方案中，R15是H或C1-3-烷基，和R15a是-(C1-3-亚烷基)-C(O)NHNH2。在式(I)、(I-P)、或(I-P-1)的一些或任一实施方案中，R15是H或甲基，和R15a是-(C1-3-亚烷基)-C(O)NHNH2。在式(I)、(I-P)、或(I-P-1)的一些或任一实施方案中，R15是H，和R15a是-(C1-3-亚烷基)-C(O)NHNH2。在式(I)、(I-P)、或(I-P-1)的一些或任一实施方案中，R15是甲基，和R15a是-(C1-3-亚烷基)-C(O)NHNH2。在式(I)、(I-P)、或(I-P-1)的一些或任一实施方案中，R15是H，和R15a是-(C1-亚烷基)-C(O)NHNH2。在式(I)、(I-P)、或(I-P-1)的一些或任一实施方案中，R15是甲基，和R15a是-(C1-亚烷基)-C(O)NHNH2。在式(I)的一些或任一实施方案中，R15是H或C1-C6烷基，和R15a是-(C1-C10-亚烷基)-SH。在式(I)的一些或任一实施方案中，R15是H或C1-C3烷基，和R15a是-(C1-C10-亚烷基)-SH。在式(I)的一些或任一实施方案中，R15是H或CH3，和R15a是-(C1-C10-亚烷基)-SH。在式(I)的一些或任一实施方案中，RZ是-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50aR50b、其中各C1-C10-亚烷基独立任选地被一个或多个羟基取代。在式(I)的一些或任一实施方案中，RZ是-(支链C1-C6-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C6-羟基亚烷基)-NR50aR50b。在式(I)的一些或任一实施方案中，RZ是-(支链C1-C6-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C6-亚烷基)-NR50aR50b。
在一些实施方案，本发明提供了式(I)所示化合物，其中
a)两个Rx均为H；和
R3是-C(O)RZ；-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50aR50b；或
Figure BDA0002666727490000231
RZ是-C4-10-亚烷基-C(O)OH；-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50aR50b，其中各C1-C10-亚烷基独立任选地被一个或多个羟基取代；或NR15R15a；
R15是H或C1-C6烷基，和R15a是-(C1-C10-亚烷基)-SH或-(C1-6-亚烷基)-C(O)NHNH2；或
b)两个Rx均为F；和
R3是-C(O)RZ；-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50aR50b；或
Figure BDA0002666727490000232
RZ是-C4-10-亚烷基-C(O)OH；-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50aR50b，其中各C1-C10-亚烷基独立任选地被一个或多个羟基取代；或NR16R16a；
R16是H或C1-C6烷基，和R16a是-(C1-C10-亚烷基)-SH、-(C1-C10-亚烷基)-NH2、-(C1-C10-亚烷基)-NH(C1-6烷基)、
Figure BDA0002666727490000241
或-(C1-6-亚烷基)-C(O)NHNH2；和
各R50、R50a和R50b分别独立地为H或C1-C6-烷基；
Rc、Rd、Re和Rf中的一个是-CH2ORg，而其他分别独立地为-H、-OH、羟基烷基、-C(O)OH、或-CH2ORg，其中各Rg分别独立地为-(C1-6-亚烷基)-C(O)OH或-(C1-6-亚烷基)-C(O)O(烷基)；或Rc、Rd、Re和Rf中的一个是羟基烷基，而其他均为-H；和
m是0或1。
在式(I)的一些实施方案中，两个Rx均为F，和R3是-C(O)RZ。在一些或任一实施方案，Rz是
Figure BDA0002666727490000242
在式(I)的一些或任一实施方案中，RZ是-C4-10-亚烷基-C(O)OH。在式(I)的一些或任一实施方案中，RZ是-C4-6-亚烷基-C(O)OH。在式(I)的一些或任一实施方案中，RZ是-C4-亚烷基-C(O)OH。在式(I)的一些或任一实施方案中，RZ是-C5-亚烷基-C(O)OH。在式(I)的一些或任一实施方案中，RZ是-C6-亚烷基-C(O)OH。在式(I)的一些或任一实施方案中，RZ是NR16R16a。在式(I)的一些或任一实施方案中，R16是H或C1-3-烷基，和R16a是-(C1-3-亚烷基)-C(O)NHNH2。在式(I)的一些或任一实施方案中，R16是H或甲基，和R16a是-(C1-3-亚烷基)-C(O)NHNH2。在式(I)的一些或任一实施方案中，R16是H，和R16a是-(C1-3-亚烷基)-C(O)NHNH2。在式(I)的一些或任一实施方案中，R16是甲基，和R16a是-(C1-3-亚烷基)-C(O)NHNH2。在式(I)的一些或任一实施方案中，R16是H，和R16a是-(C1-亚烷基)-C(O)NHNH2。在式(I)的一些或任一实施方案中，R16是甲基，和R16a是-(C1-亚烷基)-C(O)NHNH2。在式(I)的一些或任一实施方案中，R16是H或C1-C6烷基，和R16a是-(C1-C10-亚烷基)-SH。在式(I)的一些或任一实施方案中，R16是H或C1-C3烷基，和R16a是-(C1-C10-亚烷基)-SH。在式(I)的一些或任一实施方案中，R16是H或CH3，和R16a是-(C1-C10-亚烷基)-SH。在式(I)的一些或任一实施方案中，R16是H或C1-C6烷基，和R16a是-(C1-C10-亚烷基)-NH2。在式(I)的一些或任一实施方案中，R16是H或C1-C3烷基，和R16a是-(C1-C10-亚烷基)-NH2。在式(I)的一些或任一实施方案中，R16是H或CH3，和R16a是-(C1-C10-亚烷基)-NH2。在式(I)的一些或任一实施方案中，R16是H或C1-C6烷基，和R16a是-(C1-C10-亚烷基)-NH(C1-6烷基)。在式(I)的一些或任一实施方案中，R16是H或C1-C3烷基，和R16a是-(C1-C10-亚烷基)-NH(C1-6烷基)。在式(I)的一些或任一实施方案中，R16是H或CH3，和R16a是-(C1-C10-亚烷基)-NH(C1-6烷基)。在式(I)的一些或任一实施方案中，RZ是-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50aR50b，其中各C1-C10-亚烷基独立任选地被一个或多个羟基取代。在式(I)的一些或任一实施方案中，RZ是-(支链C1-C6-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C6-羟基亚烷基)-NR50aR50b。在式(I)的一些或任一实施方案中，RZ是-(支链C1-C6-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C6-亚烷基)-NR50aR50b。
在式(I)、(I-P)、或(I-P-1)的一些实施方案中，两个Rx均为H，和R3是-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50aR50b。在式(I)、(I-P)、或(I-P-1)的一些或任一实施方案中，R3是-(C1-C6-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C6-亚烷基)-NR50aR50b。在式(I)、(I-P)、或(I-P-1)的一些或任一实施方案中，R3是-(C1-C3-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C3-亚烷基)-NR50aR50b。在式(I)、(I-P)、或(I-P-1)的一些或任一实施方案中，R3是-(直链C1-C3-亚烷基)-NR50C(O)-(直链C1-C3-亚烷基)-NR50aR50b。
在式(I)的一些实施方案中，两个Rx均为F，和R3是-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50aR50b。在式(I)的一些或任一实施方案中，R3是-(C1-C6-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C6-亚烷基)-NR50aR50b。在式(I)的一些或任一实施方案中，R3是-(C1-C3-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C3-亚烷基)-NR50aR50b。在式(I)的一些或任一实施方案中，R3是-(直链C1-C3-亚烷基)-NR50C(O)-(直链C1-C3-亚烷基)-NR50aR50b。
在式(I)、(I-P)、或(I-P-1)的一些实施方案中，两个Rx均为H，和R3是
Figure BDA0002666727490000251
在式(I)、(I-P)、或(I-P-1)的一些实施方案中，m是0。在式(I)、(I-P)、或(I-P-1)的一些实施方案中，m是1。在式(I)、(I-P)、或(I-P-1)的一些实施方案中，m是1，和Rf是-H或-OH。在式(I)、(I-P)、或(I-P-1)的一些实施方案中，m是1。在式(I)、(I-P)、或(I-P-1)的一些实施方案中，m是1，和Rc、Rd、Re和Rf中的一个是-CH2ORg，而其他分别独立地为-H、-OH、羟基烷基、-C(O)OH、或-CH2ORg，其中各Rg分别独立地为-(C1-6-亚烷基)-C(O)OH或-(C1-6-亚烷基)-C(O)O(烷基)。在式(I)、(I-P)、或(I-P-1)的一些实施方案中，m是1，和Rc是-CH2ORg，而其他分别独立地为-H、-OH、或羟基烷基。在式(I)、(I-P)、或(I-P-1)的一些实施方案中，m是1，和Rc、Rd、Re和Rf中的一个是羟基烷基，而其他均为-H。在式(I)、(I-P)、或(I-P-1)的一些实施方案中，m是1，和Rc是羟基烷基，和Rd、Re和Rf均为-H。
在式(I)的一些实施方案中，两个Rx均为F，和R3是
Figure BDA0002666727490000252
在式(I)的一些实施方案中，m是0。在式(I)的一些实施方案中，m是1。在式(I)的一些实施方案中，m是1，和Rf是-H或-OH。在式(I)的一些实施方案中，m是1。在式(I)的一些实施方案中，m是1，和Rc、Rd、Re和Rf中的一个是-CH2ORg，而其他分别独立地为-H、-OH、羟基烷基、-C(O)OH、或-CH2ORg，其中各Rg分别独立地为-(C1-6-亚烷基)-C(O)OH或-(C1-6-亚烷基)-C(O)O(烷基)。在式(I)的一些实施方案中，m是1，和Rc是-CH2ORg，而其他分别独立地为-H、-OH、或羟基烷基。在式(I)的一些实施方案中，m是1，和Rc、Rd、Re和Rf中的一个是羟基烷基，而其他均为-H。在式(I)的一些实施方案中，m是1，和Rc是羟基烷基，和Rd、Re和Rf均为-H。
在式(I)的一些实施方案中，两个Rx均为F，和R3是
Figure BDA0002666727490000261
在一些或任一实施方案，本发明提供了式(Z)所示化合物：
Figure BDA0002666727490000262
其中
R4是烷基、芳基、芳基烷基、或含N的杂环烷基；
两个Rx均为H，或两个Rx均为F；和
SP是-CH2NH-、其中所述NH与H连接，或SP是
Figure BDA0002666727490000263
其中SP的所述NH与式(Z)中的H连接，或SP是
Figure BDA0002666727490000264
其中SP的所述N与式(Z)中的H连接。在一些或任一实施方案，两个Rx均为H。在一些或任一实施方案，两个Rx均为F。在一些或任一实施方案，R4是烷基。在一些或任一实施方案，R4是直链烷基。在一些或任一实施方案，R4是烷基，例如但不限于甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基或壬基。在一些实施方案，R4是甲基。在一些实施方案，R4是乙基。在一些实施方案，R4是正丙基。在一些实施方案，R4是异丙基。在一些实施方案，R4是正丁基。在一些实施方案，R4是异丁基。在一些实施方案，R4是叔丁基。在一些实施方案，R4是仲丁基。在一些实施方案，R4是戊基。在一些实施方案，R4是己基。在一些实施方案，R4是庚基。在一些实施方案，R4是辛基或壬基。在一些或任一实施方案，SP是-CH2NH-，其中所述NH与H连接。在一些或任一实施方案，SP是
Figure BDA0002666727490000265
其中NH与式(Z)中的H连接。在一些或任一实施方案，R4是烷基，两个Rx均为F，和SP是
Figure BDA0002666727490000271
其中NH与式(Z)中的H连接。在一些实施方案，式(Z)所示化合物是
Figure BDA0002666727490000272
在一些实施方案，式(Z)所示化合物是
Figure BDA0002666727490000273
在一些实施方案，式(Z)所示化合物是
Figure BDA0002666727490000274
在一些实施方案，式(Z)所示化合物是
Figure BDA0002666727490000275
适用于本发明所述偶联物的类固醇类化合物包括下表中的那些。
表1.布地奈德-间隔基(布地奈德-SP)
Figure BDA0002666727490000276
Figure BDA0002666727490000281
Figure BDA0002666727490000291
Figure BDA0002666727490000301
Figure BDA0002666727490000311
或其立体异构体或立体异构体的混合物；以及任选的其药学上可接受的盐、溶剂化物或立体异构体。在一些实施例，在上述每个结构式中
Figure BDA0002666727490000312
的所述正丙基是R构型，即，在由星号指示的碳处为R构型。在一些实施例，在上述每个结构式中
Figure BDA0002666727490000313
的所述正丙基是S构型，即，在由星号指示的碳处为S构型。在一些实施例，在上述每个结构式中
Figure BDA0002666727490000314
的所述正丙基是R构型和S构型的混合物，即，在由星号指示的碳处为R构型和S构型的混合物。在一些实施例，在上述每个结构式中
Figure BDA0002666727490000315
的所述正丙基是R构型和S构型的混合物，即，在由星号指示的碳处为R构型和S构型的混合物，其中R：S混合物为约1：1，约2：1，约3：1，约4：1，约5：1，约6：1，约7：1，约8：1，约9：1，或约10：1。
在式(I)的一些实施方案中，本发明提供了式1d、1e、1g、1h、101a、101b、101c、101d、102c、102d、102e、102f、103a、103b、104a、或104b所示化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体。在式(I)的一些实施方案中，本发明提供了式1d、1e、1g、或1h所示化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体。在一些实施方案，式1d、1e、1g、1h、101a、101b、101c、101d、102c、102d、102e、102f、103a、103b、104a、和104b所示化合物的所述正丙基是R构型。在一些实施方案，式1d、1e、1g、1h、101a、101b、101c、101d、102c、102d、102e、102f、103a、103b、104a、和104b所示化合物的所述正丙基是S构型。在一些实施方案，式1d、1e、1g、1h、101a、101b、101c、101d、102c、102d、102e、102f、103a、103b、104a、和104b所示化合物的所述正丙基是R构型和S构型的混合物。在一些实施方案，式1d、1e、1g、1h、101a、101b、101c、101d、102c、102d、102e、102f、103a、103b、104a、和104b所示化合物的所述正丙基是R构型和S构型的混合物，其中R：S混合物为约1：1，约2：1，约3：1，约4：1，约5：1，约6：1，约7：1，约8：1，约9：1，或约10：1。
在本发明范围内包括本发明所述的类固醇有效负载的药学上可接受的盐、溶剂化物、结晶形式、无定形形式、多晶型形式、区域异构体、立体异构体、代谢产物和生理加合物。
C.蛋白质类固醇偶联物
本发明提供了本发明所述类固醇类化合物的蛋白质偶联物。此类偶联物包括蛋白质，例如抗体或其抗原结合片段，其例如通过本发明所述的-L-和-L1-L2-(L3)0-1-与上文B章节中所述的化合物共价连接。
在一些或任一实施方案，本发明提供了式(3000)所示化合物：
BA-(L-SP-D)z
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或衍生物，
其中，
D选自
a)
Figure BDA0002666727490000321
其中式(a)中的两个Rx均为H；R4是烷基、芳基、芳基烷基、或含N的杂环烷基；和SP是-C(O)-C1-C10-亚烷基-C(O)-，-C(O)-N(C1-6烷基)-C1-C10-亚烷基-X1-、其中X1与式(3000)中的L连接，-C(O)-N(H)-(C1-C10-亚烷基)-S-、其中S与式(3000)中的L连接，-C(O)-N(C1-6烷基)-(C1-C10-亚烷基)-S-、其中S与式(3000)中的L连接，
Figure BDA0002666727490000322
其中右手边的附接点(即N处)与式(3000)中的L连接，-CH2-NH-、其中所述N与式(3000)中的L连接，
Figure BDA0002666727490000331
其中所述N与式(3000)中的L连接和其中Ar是任选取代的亚芳基(在一些实施方案为
Figure BDA0002666727490000332
)或任选取代的亚杂芳基，-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(3000)中的L连接，-C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(3000)中的L连接和其中各C1-C10-亚烷基独立任选地被一个或多个羟基取代，-C(O)-N(R5)-C1-C10-亚烷基-C(O)NH-X2-、其中X2与式(3000)中的L连接，或
Figure BDA0002666727490000333
其中X4与式(3000)中的L连接；或
其中式(a)中的两个Rx均为F；R4是烷基、芳基、芳基烷基、或含N的杂环烷基；和SP是-C(O)-C1-C10-亚烷基-C(O)-，-C(O)-N(C1-6烷基)-C1-C10-亚烷基-X1b-、其中X1b与式(3000)中的L连接，-C(O)-N(H)-(C1-C10-亚烷基)-X1b-、其中X1b与式(3000)中的L连接，
Figure BDA0002666727490000334
其中右手边的附接点(即N处)与式(3000)中的L连接，-CH2-NH-、其中N与式(3000)中的L连接，
Figure BDA0002666727490000335
其中所述N与式(3000)中的L连接和其中Ar是任选取代的亚芳基(在一些实施方案为
Figure BDA0002666727490000336
)或任选取代的亚杂芳基，-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(3000)中的L连接，-C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(3000)中的L连接和其中各C1-C10-亚烷基独立任选地被一个或多个羟基取代，-C(O)-N(R5)-C1-C10-亚烷基-C(O)NH-X2-、其中X2与式(3000)中的L连接，或
Figure BDA0002666727490000337
其中X4与式(3000)中的L连接；和
b)上表A中的化合物，其中表A中的化合物通过-C(O)CH2OH基团的羟基(即通过-C(O)CH2-O-SP-L-)、或通过Mapracorat的羟基(即通过-O-SP-L-)与式(3000)所示化合物的BA连接；
X1是-N(C1-6烷基)-；
X1b是-S-、-NH-、或-N(C1-6烷基)-；
X2是-NH-；
X3是-CH2-，X3是-CH2-O-(C1-C10-亚烷基)-C(O)-、其中所述C(O)与X4连接，或X3是-C(O)-；
X4是-O-；
R5是H、-OH、-OCH3、或C1-6烷基；
R50和R50a分别独立地为H或C1-C6-烷基；
Rd、Re和Rf分别独立地为-H、-OH、羟基烷基、烷氧基羰基、-C(O)OH、或-CH2ORg，其中各Rg分别独立地为-CH2C(O)OH或-CH2C(O)O(烷基)；和
m是0或1；
z是选自1-30(包括1和30)的整数；
L是连接体；和
BA是结合剂。
在一些或任一实施方案，本发明提供了式(III-P)所示化合物：
Figure BDA0002666727490000341
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或衍生物，其中：
R4是烷基、芳基、芳基烷基、或含N的杂环烷基；
SP是-C(O)-C1-C10-亚烷基-C(O)-，-C(O)-N(C1-3烷基)-C1-C10-亚烷基-X1-、其中X1与式(III)中的L连接，-C(O)-N(R5)-C1-C10-亚烷基-C(O)NH-X2-、其中X2与式(III)中的L连接，或
Figure BDA0002666727490000342
其中X4与式(III)中的L连接；
X1是-N(C1-3烷基)-；
X2是-NH-；
X3是-CH2-，X3是-CH2-O-(C1-C10-亚烷基)-C(O)-、其中所述C(O)与X4连接，或X3是-C(O)-；
X4是-O-；
R5是H、-OH、-OCH3、或烷基；
Rd、Re和Rf分别独立地为-H、-OH、羟基烷基、烷氧基羰基、-C(O)OH、或-CH2ORg，其中各Rg分别独立地为-CH2C(O)OH或-CH2C(O)O(烷基)；和
m是0或1；
z是选自1-30(包括1和30)的整数；
L是连接体；和
BA是结合剂。
在一些或任一实施方案，本发明提供了式(III-P-1)所示化合物：
Figure BDA0002666727490000351
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或衍生物，
其中：
R4是烷基、芳基、芳基烷基、或含N的杂环烷基；
SP是-C(O)-C1-C10-亚烷基-C(O)-，-C(O)-N(C1-3烷基)-C1-C10-亚烷基-X1-、其中X1与式(III)中的L连接，-C(O)-N(R5)-C1-C10-亚烷基-C(O)NH-X2-、其中X2与式(III)中的L连接，或
Figure BDA0002666727490000352
其中X4与式(III)中的L连接；
X1是-N(C1-3烷基)-；
X2是-NH-；
X3是-CH2-，X3是-CH2-O-(C1-C10-亚烷基)-C(O)-、其中所述C(O)与X4连接，或X3是-C(O)-；
X4是-O-；
R5是H、-OH、-OCH3、或烷基；
Rd、Re和Rf分别独立地为-H、-OH、羟基烷基、烷氧基羰基、-C(O)OH、或-CH2ORg，其中各Rg分别独立地为-CH2C(O)OH或-CH2C(O)O(烷基)；和
m是0或1；
z是选自1-30(包括1和30)的整数；
L是连接体；和
BA是结合剂。
在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中R4是烷基。在一些实施方案，R4不为环烷基。在这些实施方案的一些中，R4是直链或支链烷基。在这些实施方案的一些中，R4是芳基。在这些实施方案的一些中，R4是芳基烷基。在这些实施方案的一些中，R4是含N的杂环烷基。在一些实施方案，R4是烷基，例如但不限于甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基或壬基。在一些实施方案，R4是甲基。在一些实施方案，R4是乙基。在一些实施方案，R4是正丙基。在一些实施方案，R4是异丙基。在一些实施方案，R4是正丁基。在一些实施方案，R4是异丁基。在一些实施方案，R4是叔丁基。在一些实施方案，R4是仲丁基。在一些实施方案，R4是戊基。在一些实施方案，R4是己基。在一些实施方案，R4是庚基。在一些实施方案，R4是辛基或壬基。在一些实施方案，R4是芳基，例如但不限于苯基、苯酚或萘基。在一些实施方案，R4是苯基。在一些实施方案，R4是萘基。在一些实施方案，R4是杂芳基，例如但不限于噻吩基。在一些实施方案，R4是芳基烷基，例如但不限于苄基。在一些实施方案，R4是含N的杂环烷基，例如但不限于哌啶基。在一些或任一实施方案，两个Rx均为H。在一些或任一实施方案，两个Rx均为F。在一些实施方案，R4是R构型。在一些实施方案，R4是S构型。在一些实施方案，R4是R构型和S构型的混合物。在一些实施方案，R4是R构型和S构型的混合物，其中R：S混合物为约1：1，约2：1，约3：1，约4：1，约5：1，约6：1，约7：1，约8：1，约9：1，或约10：1。
在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中
两个Rx均为H；和SP是-C(O)-C1-C10-亚烷基-C(O)-，-C(O)-N(C1-6烷基)-C1-C10-亚烷基-X1-、其中X1与式(III)、(III-P)、或(III-P-1)中的L连接；-C(O)-N(H)-(C1-C10-亚烷基)-S-、其中S与式(III)、(III-P)、或(III-P-1)中的L连接；-C(O)-N(C1-6烷基)-(C1-C10-亚烷基)-S-、其中S与式(III)、(III-P)、或(III-P-1)中的L连接；-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(III)、(III-P)、或(III-P-1)中的L连接；-C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(III)、(III-P)、或(III-P-1)中的L连接和其中各C1-C10-亚烷基独立任选地被一个或多个羟基取代；-C(O)-N(R5)-C1-C10-亚烷基-C(O)NH-X2-、其中X2与式(III)、(III-P)、或(III-P-1)中的L连接；或
Figure BDA0002666727490000371
其中X4与式(III)、(III-P)、或(III-P-1)中的L连接；或
两个Rx均为F；和SP是-C(O)-N(C1-6烷基)-C1-C10-亚烷基-X1b-、其中X1b与式(III)、(III-P)、或(III-P-1)中的L连接；-C(O)-N(H)-(C1-C10-亚烷基)-X1b-、其中X1b与式(III)、(III-P)、或(III-P-1)中的L连接；
Figure BDA0002666727490000372
其中右手边的附接点(即N处)与式(III)中的L连接；-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(III)、(III-P)、或(III-P-1)中的L连接；-C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(III)、(III-P)、或(III-P-1)中的L连接和其中各C1-C10-亚烷基独立任选地被一个或多个羟基取代，或-C(O)-N(R5)-C1-C10-亚烷基-C(O)NH-X2-、其中X2与式(III)、(III-P)、或(III-P-1)中的L连接。
在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中两个Rx均为H，和SP是-C(O)-C1-C10-亚烷基-C(O)-。在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中SP是-C(O)-C2-C5-亚烷基-C(O)-。在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中SP是-C(O)-CH2CH2-C(O)-。
在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中两个Rx均为F，和SP是-C(O)-C1-C10-亚烷基-C(O)-。在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中SP是-C(O)-C2-C5-亚烷基-C(O)-。在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中SP是-C(O)-CH2CH2-C(O)-。
在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中两个Rx均为H，和SP是-C(O)-N(C1-6烷基)-C1-C10-亚烷基-X1-，其中X1与式(III)、(III-P)、或(III-P-1)中的L3连接。在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(C1-3烷基)-C1-C10-亚烷基-X1-，其中X1与式(III)、(III-P)、或(III-P-1)中的L3连接。在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中X1是-N(C1-3烷基)-。在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(C1-3烷基)-C2-C5-亚烷基-X1-。在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(C1-3烷基)-CH2CH2-X1-。在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(CH3)-C2-C5-亚烷基-N(CH3)-。在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(CH3)-CH2CH2-N(CH3)-。
在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中两个Rx均为F，和SP是-C(O)-N(C1-6烷基)-C1-C10-亚烷基-X1b-、其中X1b与式(III)中的L3连接，或-C(O)-N(H)-(C1-C10-亚烷基)-X1b-、其中X1b与式(III)中的L连接。在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(H)-C1-C10-亚烷基-X1b-，其中X1b与式(III)中的L3连接。在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(H)-C1-C6-亚烷基-X1b-，其中X1b与式(III)中的L3连接。在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(H)-C1-C3-亚烷基-X1b-，其中X1b与式(III)中的L3连接。在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(H)-CH2CH2-X1b-。在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(H)-C2-C5-亚烷基-N(CH3)-。在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(H)-C2-C5-亚烷基-N(CH2CH3)-。在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(H)-CH2CH2-N(CH3)-。
在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中两个Rx均为F，和SP是-C(O)-N(C1-6烷基)-C1-C10-亚烷基-X1b-、其中X1b与式(III)中的L3连接。在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(C1-3烷基)-C1-C6-亚烷基-X1b-，其中X1b与式(III)中的L3连接。在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(C1-3烷基)-C1-C3-亚烷基-X1b-，其中X1b与式(III)中的L3连接。在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中X1b是-N(C1-3烷基)-。在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(C1-3烷基)-C2-C5-亚烷基-X1b-。在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(C1-3烷基)-CH2CH2-X1b-。在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(CH3)-C2-C5-亚烷基-N(CH3)-。在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(CH2CH3)-C2-C5-亚烷基-N(CH2CH3)-。在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(CH3)-CH2CH2-N(CH3)-。
在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中两个Rx均为F，和SP是
Figure BDA0002666727490000381
其中右手边的附接点(即N处)与式(III)中的L连接。
在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中两个Rx均为H，和SP是-C(O)-N(H)-(C1-C10-亚烷基)-S-、其中S与式(III)中的L连接，或-C(O)-N(C1-6烷基)-(C1-C10-亚烷基)-S-、其中S与式(III)中的L连接。在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(H)-(C1-C6-亚烷基)-S-、其中S与式(III)中的L连接，或-C(O)-N(C1-3烷基)-(C1-C6-亚烷基)-S-、其中S与式(III)中的L连接。在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(H)-(C1-C10-亚烷基)-S-、其中S与式(III)中的L连接。在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(H)-(C1-C6-亚烷基)-S-、其中S与式(III)中的L连接。在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(C1-6烷基)-(C1-C10-亚烷基)-S-、其中S与式(III)中的L连接。在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(C1-3烷基)-(C1-C6-亚烷基)-S-、其中S与式(III)中的L连接。
在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中两个Rx均为F，和SP是-C(O)-N(H)-(C1-C10-亚烷基)-S-、其中S与式(III)中的L连接，或-C(O)-N(C1-6烷基)-(C1-C10-亚烷基)-S-、其中S与式(III)中的L连接。在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(H)-(C1-C6-亚烷基)-S-、其中S与式(III)中的L连接，或-C(O)-N(C1-3烷基)-(C1-C6-亚烷基)-S-、其中S与式(III)中的L连接。在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(H)-(C1-C10-亚烷基)-S-、其中S与式(III)中的L连接。在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(H)-(C1-C6-亚烷基)-S-、其中S与式(III)中的L连接。在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(C1-6烷基)-(C1-C10-亚烷基)-S-、其中S与式(III)中的L连接。在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(C1-3烷基)-(C1-C6-亚烷基)-S-、其中S与式(III)中的L连接。
在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中两个Rx均为H，和SP是-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(III)中的L连接。在式(I)的一些或任一实施方案中，SP是-(C1-C6-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C6-亚烷基)-NR50a-。在式(III)的一些或任一实施方案中，SP是-(C1-C3-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C3-亚烷基)-NR50a-。在式(III)的一些或任一实施方案中，SP是-(直链C1-C3-亚烷基)-NR50C(O)-(直链C1-C3-亚烷基)-NR50a-。
在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中两个Rx均为F，和SP是-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(III)中的L连接。在式(I)的一些或任一实施方案中，SP是-(C1-C6-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C6-亚烷基)-NR50a-。在式(III)的一些或任一实施方案中，SP是-(C1-C3-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C3-亚烷基)-NR50a-。在式(III)的一些或任一实施方案中，SP是-(直链C1-C3-亚烷基)-NR50C(O)-(直链C1-C3-亚烷基)-NR50a-。
在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中两个Rx均为H，和SP是-C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a-与式(III)中的L连接和其中各C1-C10-亚烷基独立任选地被一个或多个羟基取代。在式(III)的一些或任一实施方案中，SP是-(支链C1-C6-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C6-羟基亚烷基)-NR50a-。在式(III)的一些或任一实施方案中，SP是-(支链C1-C6-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C6-亚烷基)-NR50a-。
在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中两个Rx均为F，和SP是-C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a-与式(III)中的L连接和其中各C1-C10-亚烷基独立任选地被一个或多个羟基取代。在式(III)的一些或任一实施方案中，SP是-(支链C1-C6-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C6-羟基亚烷基)-NR50a-。在式(III)的一些或任一实施方案中，SP是-(支链C1-C6-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C6-亚烷基)-NR50a-。
在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中两个Rx均为H，和SP是-C(O)-N(R5)-C1-C10-亚烷基-C(O)NH-X2-、其中X2与式(III)中的L3连接。在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(R5)-C1-C5-亚烷基-C(O)NH-NH-。在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(R5)-CH2-C(O)NH-NH-。在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中R5是H或烷基。在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中R5是H或CH3。
在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中两个Rx均为F，和SP是-C(O)-N(R5)-C1-C10-亚烷基-C(O)NH-X2-、其中X2与式(III)中的L3连接。在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(R5)-C1-C5-亚烷基-C(O)NH-NH-。在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(R5)-CH2-C(O)NH-NH-。在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中R5是H或烷基。在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中R5是H或CH3。
在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中两个Rx均为H，和SP是
Figure BDA0002666727490000401
其中X4与式(III)、(III-P)、或(III-P-1)中的L3连接。在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中两个Rx均为F，和SP是
Figure BDA0002666727490000402
其中X4与式(III)、(III-P)、或(III-P-1)中的L3连接。在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中SP是
Figure BDA0002666727490000403
和X3是-CH2-。在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中SP是
Figure BDA0002666727490000404
和X3是-CH2-O-(C1-C10-亚烷基)-C(O)-、其中所述C(O)与X4连接。在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中SP是
Figure BDA0002666727490000411
和X3是-C(O)-。在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中Rd、Re和Rf分别独立地为-H、-OH、羟基烷基、烷氧基羰基、-C(O)OH、或-CH2ORg，其中各Rg分别独立地为-CH2C(O)OH或-CH2C(O)O(烷基)。在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中Rd和Re分别独立地为-H或-OH。在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中m是0。在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中m是1。在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中m是1，和Rf是-H或-OH。
在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中两个Rx均为H，和SP是-C(O)-N(C1-3烷基)-C1-C10-亚烷基-X1-、其中X1与式(III)、(III-P)、或(III-P-1)中的L3连接；SP是
Figure BDA0002666727490000412
其中X3是-CH2-，m是1，和Rd、Re和Rf均为-H；或SP是
Figure BDA0002666727490000413
其中X3是-CH2-O-(C1-C10-亚烷基)-C(O)-、其中所述C(O)与X4连接，m是1，和Rd、Re和Rf均为-H。在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(CH3)-CH2CH2-N(CH3)-、
Figure BDA0002666727490000414
在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中两个Rx均为F，和SP是-C(O)-N(C1-3烷基)-C1-C10-亚烷基-X1-、其中X1与式(III)、(III-P)、或(III-P-1)中的L3连接；SP是
Figure BDA0002666727490000415
其中X3是-CH2-，m是1，和Rd、Re和Rf均为-H；或SP是
Figure BDA0002666727490000416
其中X3是-CH2-O-(C1-C10-亚烷基)-C(O)-、其中所述C(O)与X4连接，m是1，和Rd、Re和Rf均为-H。在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(CH3)-CH2CH2-N(CH3)-、
Figure BDA0002666727490000421
在一些实施方案，本发明提供了式(III)所示化合物，其中两个Rx均为F或两个Rx均为H，或Rx如本段所指明的；SP是
Figure BDA0002666727490000422
Figure BDA0002666727490000423
(其中两个Rx均为F)，
Figure BDA0002666727490000424
(其中两个Rx均为F)，
Figure BDA0002666727490000425
Figure BDA0002666727490000426
在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中z是1。在某些实施方案，z是2。在一些其他实施方案，z是3。在某些实施方案，z是4。在某些实施方案，z是5。在一些其他实施方案，z是6。在某些实施方案，z是7。在一些其他实施方案，z是8。在某些实施方案，z是9。在一些实施方案，z是10。在一些其他实施方案，z是11。在一些其他实施方案，z是12。在一些其他实施方案，z是13。在一些其他实施方案，z是14。在一些其他实施方案，z是15。在一些其他实施方案，z是15。在一些其他实施方案，z是16。在一些其他实施方案，z是17。在一些其他实施方案，z是18。在某些实施方案，z是19。在一些其他实施方案，z是20。在一些其他实施方案，z是21。在一些其他实施方案，z是22。在一些其他实施方案，z是23。在一些其他实施方案，z是24。在一些其他实施方案，z是25。在一些其他实施方案，z是26。在一些其他实施方案，z是27。在一些其他实施方案，z是28。在一些其他实施方案，z是29。在一些其他实施方案，z是30。在一些实施方案，z是选自1-15(包括1和15)的整数。在某些实施方案，z选自1-10。在某些实施方案，z选自1-5。在某些实施方案，z选自2-5。在某些实施方案，z选自2-4。
在一些实施方案，式(III)、(III-P)、或(III-P-1)中的-L-或-L1-L2-(L3)0-1-，是指使结合剂(例如，抗体或其抗原结合片段)连接、附接或结合本发明所述的有效负载化合物(例如，类固醇)的任何二价基团或基团部分。通常，本发明所述的抗体偶联物的合适-L-或-L1-L2-(L3)0-1-是足以稳定以利用抗体的循环半衰期，并且同时能够在抗原介导的偶联物内化后释放其有效负载的那些。连接体可以是可切割的或不可切割的。可切割连接体是内化后由细胞内代谢切割的连接体，例如通过水解、还原或酶促反应进行切割。不可切割的连接体是通过内化后抗体的溶酶体降解来释放附接的有效负载的连接体。合适的连接体包括但不限于酸不稳定连接体，水解不稳定连接体，酶促可切割连接体，还原不稳定连接体，自分解连接体和不可切割连接体。合适的连接体还包括但不限于，是或包含葡糖苷酸类，琥珀酰亚胺-硫醚类，聚乙二醇(PEG)单元类，氨基甲酸酯类，腙类，马来酰亚胺-己酰基单元类(mal-caproylunits)，二硫键单元类(例如，-S-S-，-S-S-C(R1)(R2)-，其中R1和R2分别独立地为氢或烃基)，对氨基苄基(PAB)单元类，磷酸酯单元类，例如单-、双-或三-磷酸酯单元类，和肽类，例如含有2、3、4、5、6、7、8、或更多个氨基酸单元的肽单元类，包括但不限于缬氨酸-瓜氨酸单元类，缬氨酸-丙氨酸单元类，缬氨酸-精氨酸单元类，缬氨酸-赖氨酸单元类，-赖氨酸-缬氨酸-瓜氨酸单元类和-赖氨酸-缬氨酸-丙氨酸单元类。在一些实施方案，-L-和-L1-L2-(L3)0-1-均衍生自式(II)的“活性基团”(RG)(及其实施方案)与抗体的活性部分的反应。连接基团是将BA桥接至有效负载的任何二价基团部分。连接基团也可以是桥接BA、有效负载和环糊精基团部分的任何三价基团部分。在一些实施方案，-L-和-L1-L2-(L3)0-1-均是三价的并且包括与所述连接基团中的三价基团(例如赖氨酸残基)连接的环糊精部分。-L-和-L1-L2-(L3)0-1-均包含活性基团残基，其是与抗体、经修饰的抗体或其抗原结合片段的活性部分反应的官能团或基团部分。
在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中L和-L1-L2-(L3)0-1-均包含
Figure BDA0002666727490000431
或其区域异构体或异构体的混合物；
Figure BDA0002666727490000432
或其立体异构体或立体异构体的混合物，其中S是指半胱氨酸残基上的所述S原子，所述活性基团残基通过此半胱氨酸残基上的S原子与BA连接；或
Figure BDA0002666727490000433
其中N是指赖氨酸残基上的所述N原子，所述活性基团残基通过此赖氨酸残基上的N原子与BA连接。
在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中L和-L1-L2-(L3)0-1-均包含
Figure BDA0002666727490000434
在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中L和-L1-L2-(L3)0-1-均包含
Figure BDA0002666727490000435
或其区域异构体或异构体的混合物；
Figure BDA0002666727490000436
Figure BDA0002666727490000441
或其立体异构体或立体异构体的混合物，其中S是指半胱氨酸残基上的所述S原子，所述活性基团残基通过此半胱氨酸残基上的S原子与BA连接；或
Figure BDA0002666727490000442
其中N是指赖氨酸残基上的所述N原子，所述活性基团残基通过此赖氨酸残基上的N原子与BA连接；和L与-L1-L2-(L3)0-1-均包含
Figure BDA0002666727490000443
在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中L是-L1-L2-(L3)0-1-。在一些实施方案，存在L3。在一些实施方案，L3不存在。
在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中L是-L1-L2-(L3)0-1-，和L1选自
Figure BDA0002666727490000444
或其区域异构体或异构体的混合物；
Figure BDA0002666727490000445
Figure BDA0002666727490000446
或其立体异构体或立体异构体的混合物，其中S是指半胱氨酸残基上的所述S原子，所述活性基团残基通过此半胱氨酸残基上的S原子与BA连接；或
Figure BDA0002666727490000447
其中N是指赖氨酸残基上的所述N原子，所述活性基团残基通过此赖氨酸残基上的N原子与BA连接。在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中L是-L1-L2-(L3)0-1-，和L1是
Figure BDA0002666727490000448
在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中L是-L1-L2-(L3)0-1-，和L1是
Figure BDA0002666727490000449
在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中L是-L1-L2-(L3)0-1-，和L1是
Figure BDA0002666727490000451
在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中L是-L1-L2-(L3)0-1-，和L1是
Figure BDA0002666727490000452
在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中L是-L1-L2-(L3)0-1-，和L1是
Figure BDA0002666727490000453
在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中L是-L1-L2-(L3)0-1-，和L3是
Figure BDA0002666727490000454
其中所述NH基团与L2连接，当SP为-C(O)-C1-C10-亚烷基-C(O)-；或L3是
Figure BDA0002666727490000455
其中所述NH基团与L2连接，当SP为-C(O)-N(C1-3烷基)-C1-C10-亚烷基-X1-或-C(O)-N(R5)-C1-C10-亚烷基-C(O)NH-X2-；或L3不存在，当SP为
Figure BDA0002666727490000456
在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中L是-L1-L2-(L3)-，和L3是
Figure BDA0002666727490000457
其中所述NH基团与L2连接，当SP为-C(O)-C1-C10-亚烷基-C(O)-。在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中L是-L1-L2-(L3)0-1-，和L3是
Figure BDA0002666727490000458
其中所述NH基团与L2连接，当SP为-C(O)-N(C1-3烷基)-C1-C10-亚烷基-X1-或-C(O)-N(R5)-C1-C10-亚烷基-C(O)NH-X2-。在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中L是-L1-L2-(L3)0-1-，和L3不存在，当SP为
Figure BDA0002666727490000459
在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中L是-L1-L2-(L3)0-1-，和L2包含
Figure BDA0002666727490000461
Figure BDA0002666727490000462
Figure BDA0002666727490000463
-C(O)CH2CH2C(O)NH-、
Figure BDA0002666727490000464
Figure BDA0002666727490000465
Figure BDA0002666727490000466
-OCH2C(O)-、或环糊精残基(CD)；或其组合。在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中L是-L1-L2-(L3)0-1-，和L2包含
Figure BDA0002666727490000467
Figure BDA0002666727490000468
或CD、或其组合。在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中L是-L1-L2-(L3)0-1-，和L2包含CD，其中CD选自由以下组成的组：
Figure BDA0002666727490000471
Figure BDA0002666727490000481
在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中L是-L1-L2-(L3)0-1-，和-L2-(L3)0-1-包含
Figure BDA0002666727490000482
Figure BDA0002666727490000491
Figure BDA0002666727490000501
Figure BDA0002666727490000511
在一些实施方案，本发明提供了式(III)、(III-P)、或(III-P-1)所示化合物，其中L2包含
Figure BDA0002666727490000512
L1a是活性基团残基；
CD是环糊精；
AA4是三价连接体；
AA5是肽残基；
PEG是聚乙二醇；
a是选自0至5(包括0和5)的整数。
在一些实施方案，AA4是氨基酸残基；AA5是二肽残基、三肽残基、四肽残基、或五肽残基；PEG是聚乙二醇残基；其中所述
Figure BDA0002666727490000513
表示所示化学基团通过其与所述通式中相邻基团连接的原子，CD在每种情况下，分别独立地不存在，或分别独立地为环糊精残基，其中存在至少一个CD，下标a是选自0至5(包括0和5)的整数；在这些实施例中，下标a是0、1、2、3、4、或5。在一些实施方案，下标a是0。在一些实施方案，下标a是1。在一些实施方案，下标a是2。在一些实施方案，下标a是3。在一些实施方案，下标a是4。在一些实施方案，下标a是5。在一些实施方案，AA4或AA5中的任一个在每种情况下分别独立地包含选自丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸或瓜氨酸的氨基酸、其衍生物、或其组合。在某些实施方案，AA4是选自丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸或瓜氨酸的氨基酸、其衍生物、或其组合。在某些实施方案，AA4是赖氨酸或赖氨酸的衍生物。在某些实施方案，AA4是赖氨酸。在某些实施方案，AA4是D-赖氨酸。在某些实施方案，AA4是L-赖氨酸。在某些实施方案，所述AA5是二肽残基。在某些实施方案，所述AA5是缬氨酸-瓜氨酸。在某些实施方案，所述AA5是瓜氨酸-缬氨酸。在某些实施方案，所述AA5是缬氨酸-丙氨酸。在某些实施方案，所述AA5是丙氨酸-缬氨酸。在某些实施方案，所述AA5是缬氨酸-甘氨酸。在某些实施方案，所述AA5是甘氨酸-缬氨酸。在某些实施方案，所述AA5是三肽残基。在某些实施方案，所述AA5是谷氨酸-缬氨酸-瓜氨酸。在一些实施方案，所述AA5是谷氨酰胺-缬氨酸-瓜氨酸。在一些实施方案，所述AA5是赖氨酸-缬氨酸-丙氨酸。在一些实施方案，所述AA5是赖氨酸-缬氨酸-瓜氨酸。在一些实施方案，所述AA5是谷氨酸-缬氨酸-瓜氨酸。在一些实施方案，所述AA5是四肽残基。在一些实施方案，所述AA5是甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸。在一些实施方案，所述AA5是五肽残基。在一些实施方案，所述AA5是甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸。
在某些实施方案，活性基团残基衍生自RG与抗体或其抗原结合片段的半胱氨酸残基或赖氨酸残基的反应。在某些实施方案，活性基团残基衍生自点击化学反应。在所述点击化学反应的一些实施方案中，L1衍生自炔与叠氮化物之间的1,3-环加成反应。此类活性基团残基的非限制性实例包括衍生自应变炔烃类，例如适用于应变促进的炔-叠氮化物环加成(SPAAC)的那些，环炔烃类例如环辛炔类，苯并环化的炔烃类，以及在没有铜催化剂的情况下能够与叠氮化物进行1,3-环加成反应的炔烃类。合适的L1还包括但不限于衍生自DIBAC(其中DIBAC基团部分的所述-C(O)CH2CH2C(O)-部分被L2涵盖)，DIBO(其中DIBO基团部分的所述-O-部分被L2涵盖)，BARAC(其中BARAC基团部分的所述
Figure BDA0002666727490000521
部分被L2涵盖)，取代的炔烃类例如氟化炔烃类，氮杂-环炔烃类，BCN，及其衍生物的基团部分。包含此类活性基团残基的偶联物可衍生自已用叠氮基官能化的抗体。此类官能化抗体包括用叠氮基-聚乙二醇基团官能化的抗体。在某些实施方案，此类官能化抗体衍生自在酶转谷氨酰胺酶(例如微生物转谷氨酰胺酶)存在下，使包含至少一个谷氨酰胺残基的抗体与式H2N-LL-N3所示化合物反应，其中LL是二价聚乙二醇基团。抗体的合适的谷氨酰胺残基包括Q295，或通过插入或突变例如N297Q突变衍生的那些。
在一些实施方案，本发明所述偶联物的BA是抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案，本发明所述偶联物衍生自叠氮基官能化的抗体。在某些实施方案，本发明所述偶联物的BA是：
Figure BDA0002666727490000531
其中Ab是抗体或其抗原结合片段，n是选自1至10(包括1和10)的整数，z是连接体有效负载基团部分的数目，和
Figure BDA0002666727490000532
是与L或-L1-L2-(L3)0-1-连接的键，例如，是与衍生自炔和叠氮化物之间1,3-环加成反应的基团部分连接的键。在某些实施方案，z是3。在某些实施方案，z是2或4，即所述偶联物包含2或4个连接体有效负载基团部分。
在一些实施方案，-L-和-L1-L2-L3-均为式(LA)所示的二价基团部分；
-L1-(SP1)q-(A)z-(NRa)s-(B)t-(CH2)u-(O)v-(SP2)w-
(LA)；
其中L1具有本发明所述定义；
A是氨基酸或肽；
Ra是H或烷基；
B是芳基、杂芳基、或杂环烷基，其中芳基、杂芳基、或杂环烷基任选地被烷基、-OH、或-NRaRb取代；
SP1和SP2分别独立地为间隔基团；和q、z、s、t、u、v和w在每种情况下，分别独立地为0或1。
在一些其他实施方案，-L-和-L1-L2-L3-均为式(LB)所示的三价基团部分；
-L1-(SP1)q-(A)z-(NRa)s-(B)t-(CH2)u-(O)v-(SP2)w-
(LB)；
其中L1具有本发明所述定义；
A是三肽或四肽，其中所述三肽或四肽中的至少一个氨基酸直接或间接连接至环糊精基团部分；
Ra是H或烷基；
B是芳基、杂芳基、或杂环烷基，其中芳基、杂芳基、或杂环烷基任选地被烷基、-OH、或-NRaRb取代；
SP1和SP2分别独立地为间隔基团；和q、z、s、t、u、v和w在每种情况下，分别独立地为0或1。
在一些实施方案，所述环糊精(CD)直接连接至氨基酸残基，例如赖氨酸氨基酸残基。这意味着所述CD与所述赖氨酸氨基酸共价连接体相距一个键位置。在所述这些实施方案的一些中，所述共价连接体还直接连接至有效负载基团部分。这意味着所述共价连接体与有效负载(例如但不限于本发明所述的类固醇有效负载)相距一个键位置。在所述这些实施方案的一些中，所述共价连接体还直接连接至CD基团部分。这意味着所述共价连接体与CD(例如本发明所述的CD)相距一个键位置。在所述这些实施方案的一些中，所述共价连接体是赖氨酸氨基酸或其衍生物。
在一些实施方案，所述CD间接连接至连接基团(例如L、-L2-(L3)0-1-和-L1-L2-(L3)0-1)中的共价连接体上。这意味着所述CD与所述共价连接体相距多于一个键位置。这还意味着所述CD通过另一基团部分与所述共价连接体连接。例如，所述CD可以与马来酰亚胺基团连接，所述马来酰亚胺基团与聚乙二醇基团连接，所述聚乙二醇基团与所述共价连接体连接。在这些实施方案的一些中，所述共价连接体还间接连接至有效负载基团部分。这意味着所述共价连接体与有效负载(例如但不限于，本发明所述的类固醇有效负载)相距多于一个键位置。这还意味着所述共价连接体通过另一基团部分与所述有效负载连接。例如，所述共价连接体可以与二肽连接，例如但不限于Val-Ala或Val-Cit，其可与对氨基苯甲酰基连接，所述对氨基苯甲酰基可与所述有效负载连接。在这些实施方案的一些中，所述共价连接体还间接与环糊精基团部分连接。这意味着所述共价连接体与环糊精(例如本发明所述的环糊精)相距多于一个键位置。这还意味着所述共价连接体通过另一基团部分与所述环糊精连接。例如，所述共价连接体可与聚乙二醇基团连接，所述聚乙二醇基团可与活性基团连接，所述活性基团可与所述环糊精连接。在这些实施方案的一些中，所述共价连接体是赖氨酸氨基酸或其衍生物。
在一些实施方案，-L-和-L1-L2-(L3)0-1-均为-L1-(SP1)q-(A)z-。在一些实施方案，-L-和-L1-L2-(L3)0-1-均为-L1-(SP1)q-(A)2-。在一些实施方案，-L-和-L1-L2-(L3)0-1-均为式(LA1)所示的基团部分：
Figure BDA0002666727490000541
其中RAA1和RAA2各自独立地为氨基酸侧链。在式LA1的一些实施方案中，SP1是二价聚乙二醇基团，和L1是炔类化合物与叠氮化物之间反应的1,3-环加成反应产物。
在一些实施方案，-L-和-L1-L2-(L3)0-1-均为-L1-(SP1)q-(A)z-。在一些实施方案，-L-和-L1-L2-(L3)0-1-均为-L1-(SP1)q-(A)2-。在一些实施方案，-L-和-L1-L2-(L3)0-1-均为式(LB1)所示的基团部分：
Figure BDA0002666727490000542
Figure BDA0002666727490000551
其中RAA1和RAA2各自独立地为氨基酸侧链。RAA3是直接或间接与环糊精基团部分连接的氨基酸侧链。在式LB1的一些实施方案中，SP1是二价聚乙二醇基团，和L1是炔类化合物与叠氮化物之间反应的1,3-环加成反应产物。
在一些实施方案，-L-或-L1-L2-L3-具有以下结构：
-L1-(SP1)q-Z1-Z2-Z3 0-1-
其中：
L1和SP1均具有本发明所述定义；
q是0或1；
Z1是聚乙二醇基团或己酰基基团；
Z2是二肽、三肽、或四肽；和
Z3是PAB基团。
在一些实施方案，L1衍生自点击化学活性基团，和Z1是聚乙二醇基团。在某些实施方案，L1-(SP1)q-Z1-是：
Figure BDA0002666727490000552
或其混合物；或
Figure BDA0002666727490000553
在一些实施方案，所述二肽是缬氨酸-瓜氨酸或缬氨酸-丙氨酸。在一些实施方案，所述三肽是谷氨酸-缬氨酸-瓜氨酸。在一些实施方案，所述四肽是甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸。
在一些实施方案，本发明的L1衍生自点击化学活性基团。在一些实施方案，L1是：
Figure BDA0002666727490000554
或其混合物；
Figure BDA0002666727490000561
Figure BDA0002666727490000562
或其混合物；其中
Figure BDA0002666727490000563
是与结合剂连接的键。
在一些其他实施例，本发明的L1选自与抗体或其抗原结合片段上的半胱氨酸残基或赖氨酸残基反应的基团。在一些实施方案，L1是
Figure BDA0002666727490000564
其中
Figure BDA0002666727490000565
是与结合剂(例如抗体)的半胱氨酸连接的键。在一些实施方案，L1是
Figure BDA0002666727490000566
在一些实施方案，SP1选自：
Figure BDA0002666727490000567
在一些实施方案，SP1是
Figure BDA0002666727490000568
在一些其他实施例，SP1是
Figure BDA0002666727490000569
在其他实施例，SP1是
Figure BDA00026667274900005610
在其他实施例，SP1是
Figure BDA00026667274900005611
在一些其他实施例，SP1是
Figure BDA00026667274900005612
在任一上述实施例中，下标a、b和c在每种情况下，分别独立地为选自1至20(包括1和20)的整数。
在一些实施方案，RAA3选自
Figure BDA0002666727490000571
其中CD是环糊精基团部分。在一些实施方案，RAA3选自
Figure BDA0002666727490000572
在一些实施方案，SP1选自：
Figure BDA0002666727490000573
在一些实施方案，SP1是
Figure BDA0002666727490000574
在一些实施方案，SP1是
Figure BDA0002666727490000575
在一些实施方案，SP1是
Figure BDA0002666727490000576
在一些实施方案，SP1是
Figure BDA0002666727490000581
在一些实施方案，SP1是
Figure BDA0002666727490000582
在一些实施方案，SP1是
Figure BDA0002666727490000583
在一些实施方案，SP1是
Figure BDA0002666727490000584
在一些实施方案，SP1是
Figure BDA0002666727490000585
在一些实施方案，SP1是
Figure BDA0002666727490000586
在一些实施方案，SP1是
Figure BDA0002666727490000587
在一些实施方案，SP1是
Figure BDA0002666727490000588
在一些实施方案，SP1是
Figure BDA0002666727490000589
在一些实施方案，-L1-L2-包含：
Figure BDA00026667274900005810
或其混合物；
Figure BDA00026667274900005811
或其混合物；
Figure BDA00026667274900005812
Figure BDA00026667274900005813
Figure BDA0002666727490000591
或其混合物；
Figure BDA0002666727490000592
其中b、c和d在每种情况下，分别独立地选自1至20(包括1和20)的整数。在这些实施方案的一些中，下标b、c和d在每种情况下，分别独立地选自1至6(包括1和6)的整数。
在一些实施方案，-SP1选自：
Figure BDA0002666727490000593
Figure BDA0002666727490000594
或其混合物；
Figure BDA0002666727490000595
Figure BDA0002666727490000596
Figure BDA0002666727490000597
或其混合物；
Figure BDA0002666727490000601
Figure BDA0002666727490000602
在一些实施方案，A是选自缬氨酸-瓜氨酸，瓜氨酸-缬氨酸，赖氨酸-苯丙氨酸，苯丙氨酸-赖氨酸，缬氨酸-天冬酰胺，天冬酰胺-缬氨酸，苏氨酸-天冬酰胺，天冬酰胺-苏氨酸，丝氨酸-天冬酰胺，天冬酰胺-丝氨酸，苯丙氨酸-天冬酰胺，天冬酰胺-苯丙氨酸，亮氨酸-天冬酰胺，天冬酰胺-亮氨酸，异亮氨酸-天冬酰胺，天冬酰胺-异亮氨酸，甘氨酸-天冬酰胺，天冬酰胺-甘氨酸，谷氨酸-天冬酰胺，天冬酰胺-谷氨酸，瓜氨酸-天冬酰胺，天冬酰胺-瓜氨酸，丙氨酸-天冬酰胺，或天冬酰胺-丙氨酸的肽。
在一些实施方案，A是缬氨酸-瓜氨酸，或瓜氨酸-缬氨酸。
在一些实施方案，A是缬氨酸-丙氨酸，或丙氨酸-缬氨酸。
在一些实施方案，A是赖氨酸-缬氨酸-丙氨酸，或丙氨酸-缬氨酸-赖氨酸。
在一些实施方案，A是赖氨酸-缬氨酸-瓜氨酸，或瓜氨酸-缬氨酸-赖氨酸。
在一些实施方案，A是谷氨酸-缬氨酸-瓜氨酸，或瓜氨酸-缬氨酸-谷氨酸。
在一些实施方案，A是缬氨酸。
在一些实施方案，A是丙氨酸。
在一些实施方案，A是瓜氨酸。
在一些实施方案，A是
Figure BDA0002666727490000603
在这些实施方案的一些中，RAA1是氨基酸侧链，和其中RAA2是氨基酸侧链。
在一些实施方案，A是
Figure BDA0002666727490000604
在这些实施方案的一些中，RAA1是氨基酸侧链，RAA2是氨基酸侧链，和RAA3是直接或间接与环糊精基团部分连接的氨基酸侧链。
在一些实施方案，A是
Figure BDA0002666727490000605
在一些实施方案，A是
Figure BDA0002666727490000611
在一些实施方案，A是
Figure BDA0002666727490000612
在一些实施方案，A是
Figure BDA0002666727490000613
其中
Figure BDA0002666727490000614
表示直接或间接与环糊精基团部分连接的键。
在一些实施方案，包括任一前述实施方案，CD在每种情况下，分别独立地选自
Figure BDA0002666727490000615
Figure BDA0002666727490000621
在一些实施方案，所述CD是
Figure BDA0002666727490000631
在一些实施方案，所述CD是
Figure BDA0002666727490000632
在一些实施方案，所述CD是
Figure BDA0002666727490000633
在一些实施方案，所述CD是
Figure BDA0002666727490000641
在一些实施方案，所述CD是
Figure BDA0002666727490000642
在一些实施方案，所述CD是
Figure BDA0002666727490000643
在一些实施方案，A是
Figure BDA0002666727490000651
或其异构体。
在一些实施方案，Ra是H。
在一些实施方案，Ra是烷基。
在一些实施方案，Ra是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、或戊基。
在一些实施方案，B是芳基。
在一些实施方案，B是苯基。
在一些实施方案，B是苯基或吡啶基。
在本发明的一些实施方案中，B是：
Figure BDA0002666727490000652
在这些实施例中，R10是烷基、烯基、炔基、烷氧基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、杂芳基、杂环烷基、羟基、氰基、硝基、
Figure BDA0002666727490000653
NRaRb、或叠氮基。在这些实施例中，下标p和m在每种情况下，分别独立地选自从0至4(包括0和4)的整数。
在本发明的一些实施方案中，B是：
Figure BDA0002666727490000654
在这些实施例中，p是0、1、2、3或4。在这些实施方案的一些中，R1在每次出现时，独立地为烷基、烷氧基、卤代烷基、或卤素。在一些实施方案，R1是烷基。在一些实施方案，R1是烷氧基。在一些实施方案，R1是卤代烷基。在一些实施方案，R1是卤素。
在式(LA)的一些实施方案中，所述-(NRa)s-(B)t-(CH2)u-(O)v-(SP2)w是：
Figure BDA0002666727490000661
在本发明所述的L或L1-L2-(L3)0-1的任一实施方案中，一个或多个增强基团(enhancement group)可与L或L1-L2-(L3)0-1中任何氨基酸的侧链连接。用于连接增强基团的有用氨基酸包括赖氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、和瓜氨酸。与增强基团的连接可以是直接与氨基酸侧链连接的键，或者所述连接可经由间隔基团和/或活性基团间接连接。有用的间隔基团和活性基团包括本发明所述的任何间隔基团和活性基团。增强基团可以是本领域技术人员认为有用的任何基团。例如，增强基团可以是赋予化合物、有效负载、连接体有效负载、或抗体偶联物有益作用的任何基团，包括但不限于生物学、生化、合成、增溶、成像、检测和反应性作用等等。在某些实施方案，增强基团是亲水性基团。在某些实施方案，增强基团是环糊精。在某些实施方案，增强基团是烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、杂亚烷基磺酸、杂亚烷基牛磺酸、杂亚烷基磷酸或磷酸酯、杂亚烷基胺(例如，季胺)、或杂亚烷基糖。在某些实施方案，糖类包括但不限于单糖类、二糖类和多糖类。示例性单糖类包括葡萄糖、核糖、脱氧核糖、木糖、阿拉伯糖、甘露糖、半乳糖、果糖等等。在某些实施方案，糖类包括糖酸类，例如葡糖醛酸，还包括偶联形式，例如葡糖苷酸类(即，通过葡糖苷酸化)。示例性二糖类包括麦芽糖、蔗糖、乳糖、乳果糖、海藻糖等。示例性多糖类包括直链淀粉、支链淀粉、糖原、菊粉、纤维素等。环糊精可以是技术人员已知的任何环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是α环糊精、β环糊精、或γ环糊精、或其混合物。在某些实施方案，所述环糊精是α环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是β环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是γ环糊精。在某些实施方案，增强基团能够改善偶联物其余部分的溶解性。
在某些实施方案，增强基团是烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、杂亚烷基磺酸、杂亚烷基牛磺酸、杂亚烷基磷酸或磷酸酯、杂亚烷基胺(例如，季胺)、或杂亚烷基糖。在某些实施方案，糖类包括但不限于单糖类、二糖类和多糖类。示例性单糖类包括葡萄糖、核糖、脱氧核糖、木糖、阿拉伯糖、甘露糖、半乳糖、果糖等等。在某些实施方案，糖类包括糖酸类，例如葡糖醛酸，还包括偶联形式，例如葡糖苷酸类(即，通过葡糖苷酸化)。示例性二糖类包括麦芽糖、蔗糖、乳糖、乳果糖、海藻糖等。示例性多糖类包括直链淀粉、支链淀粉、糖原、菊粉、纤维素等。环糊精可以是技术人员已知的任何环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是α环糊精、β环糊精、或γ环糊精、或其混合物。在某些实施方案，所述环糊精是α环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是β环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是γ环糊精。在某些实施方案，增强基团能够改善偶联物其余部分的溶解性。在某些实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或杂亚烷基磺酸是取代的或未取代的。在某些实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或杂亚烷基磺酸是-(CH2)1-5SO3H、-(CH2)n-NH-(CH2)1-5SO3H、-(CH2)n-C(O)NH-(CH2)1-5SO3H、-(CH2CH2O)m-C(O)NH-(CH2)1-5SO3H、-(CH2)n-N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2、-(CH2)n-C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2、或-(CH2CH2O)m-C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n是1、2、3、4、或5，和m是1、2、3、4、或5。在一个实施方案，所述烷基磺酸或亚烷基磺酸是-(CH2)1-5SO3H。在另一实施方案，所述杂烷基磺酸或杂亚烷基磺酸是-(CH2)n-NH-(CH2)1-5SO3H，其中n是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或杂亚烷基磺酸是-(CH2)n-C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，其中n是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或杂亚烷基磺酸是-(CH2CH2O)m-C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，其中m是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或杂亚烷基磺酸是-(CH2)n-N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或杂亚烷基磺酸是-(CH2)n-C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或杂亚烷基磺酸是-(CH2CH2O)m-C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中m是1、2、3、4、或5。
本发明提供了抗体-药物偶联物，其包含与选自表1的化合物偶联的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案，所述化合物具有式1d、1e、1g或1h所示结构。
本发明还提供了式Ab-L-SP-D或BA-L-SP-D所示的抗体-药物偶联物，其中D是布地奈德前药或布地奈德类似物或衍生物(包括氟化类似物及衍生物)的前药，和其中Ab、BA、L和SP均具有本发明所述的任何实施方案中所述定义。在一些实施方案，Ab-L-SP-D和BA-L-SP-D中的D以及式(II)和(III)中的
Figure BDA0002666727490000671
选自：
Figure BDA0002666727490000672
Figure BDA0002666727490000681
Figure BDA0002666727490000691
Figure BDA0002666727490000692
在Ab-L-SP-D、BA-L-SP-D和式(III)的一些实施方案中，SP是能够释放D或
Figure BDA0002666727490000693
的基团部分。在一些实施方案，在生理条件下，L和SP之间的键被切割以释放类固醇前药，即H-SP-D或
Figure BDA0002666727490000694
和SP和D之间的所述键或SP和
Figure BDA0002666727490000695
之间的所述键随后被切割以释放生物活性类固醇。在一些实施方案，在上述每个结构式中
Figure BDA0002666727490000696
的所述正丙基是R构型，即，在由星号指示的碳处为R构型。在一些实施方案，在上述每个结构式中
Figure BDA0002666727490000697
的所述正丙基是S构型，即，在由星号指示的碳处为S构型。在一些实施方案，在上述每个结构式中
Figure BDA0002666727490000698
的所述正丙基是R构型和S构型的混合物，即，在由星号指示的碳处为R构型和S构型的混合物。在一些实施方案，在上述每个结构式中
Figure BDA0002666727490000699
的所述正丙基是R构型和S构型的混合物，即，在由星号指示的碳处为R构型和S构型的混合物，其中R：S混合物为约1：1，约2：1，约3：1，约4：1，约5：1，约6：1，约7：1，约8：1，约9：1，或约10：1。
表3.抗体-药物偶联物
本发明还提供了具有下式所示结构的抗体-类固醇偶联物：
Figure BDA0002666727490000701
Figure BDA0002666727490000711
Figure BDA0002666727490000721
Figure BDA0002666727490000731
Figure BDA0002666727490000741
Figure BDA0002666727490000751
Figure BDA0002666727490000761
Figure BDA0002666727490000771
Figure BDA0002666727490000781
Figure BDA0002666727490000791
其中BA包含具有以下结构
Figure BDA0002666727490000792
的抗体，其中Ab是单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段、或双特异性抗体；R是C2-4-亚烷基；和n是选自2至4(包括2和4)的整数。在一些实施方案，在上述每个结构式中
Figure BDA0002666727490000801
的所述正丙基是R构型，即，在由星号指示的碳处为R构型。在一些实施方案，在上述每个结构式中
Figure BDA0002666727490000802
的所述正丙基是S构型，即，在由星号指示的碳处为S构型。在一些实施方案，在上述每个结构式中
Figure BDA0002666727490000803
的所述正丙基是R构型和S构型的混合物，即，在由星号指示的碳处为R构型和S构型的混合物。在一些实施方案，在上述每个结构式中
Figure BDA0002666727490000804
的所述正丙基是R构型和S构型的混合物，即，在由星号指示的碳处为R构型和S构型的混合物，其中R：S混合物为约1：1，约2：1，约3：1，约4：1，约5：1，约6：1，约7：1，约8：1，约9：1，或约10：1。
在特定实施方案，BA是抗体，和z是选自1-30(包括1和30)的整数。在一些实施方案，z是选自1至4(包括1和4)的整数。在一些实施方案，z是4。在一些实施方案，z是2。
本发明还提供了布地奈德、布地奈德前药、布地奈德类似物或衍生物(包括氟化类似物及衍生物)、或布地奈德类似物或衍生物(包括氟化类似物及衍生物)的前药的结合剂偶联物。
本发明中提供的任何偶联物的合适结合剂包括但不限于抗体类，淋巴因子类，激素类，生长因子类，病毒受体类，白细胞介素类，或任何其他细胞结合分子类或物质类或肽结合分子类或物质类。
在一些实施方案，所述结合剂是抗体。本发明使用的术语“抗体”意指包含至少一个互补决定区(CDR)的任何抗原结合分子或分子复合物，所述互补决定区(CDR)与特定抗原特异性结合或相互作用。术语“抗体”包括免疫球蛋白分子，所述免疫球蛋白分子包含四条多肽链，通过二硫键相互连接的两条重(H)链和两条轻(L)链，以及其多聚体(例如IgM)。每条重链包含重链可变区(本发明缩写为HCVR或VH)和重链恒定区。所述重链恒定区包含三个结构域，CH1、CH2和CH3。每条轻链包含轻链可变区(本发明中缩写为LCVR或VL)和轻链恒定区。所述轻链恒定区包含一个结构域(CL1)。所述VH和VL区可进一步细分为高变区，称为互补决定区(CDR)，散布有更保守的区域，称为框架区(FR)。各VH和VL分别由三个CDR和四个FR组成，按照以下顺序从氨基端到羧基端排列：FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3，FR4。在一些实施方案，所述抗体(或其抗原结合部分)的FR可以与人种系序列相同，或者可以是天然、或人工修饰的。可基于两个或更多个CDR的并列分析来定义氨基酸共有序列。
本发明使用的术语“抗体”还包括完整抗体分子的抗原结合片段。本发明使用的术语抗体的“抗原结合部分”，抗体的“抗原结合片段”等包括任何天然存在的、可酶促得到的、合成的、或基因工程化的多肽或糖蛋白，其特异性结合抗原形成复合物。抗体的抗原结合片段可以例如使用任何合适的标准技术，例如涉及操纵和表达编码抗体可变结构域和任选恒定结构域的DNA的蛋白水解消化或重组基因工程技术，由完整抗体分子衍生得到。此种DNA是已知的和/或容易从例如商业来源，DNA文库(包括例如噬菌体-抗体文库)得到，或可以合成得到。可对DNA进行测序和化学操作或通过使用分子生物学技术进行操作，例如，将一个或多个可变结构域和/或恒定结构域排列成合适的构型，或引入密码子，产生半胱氨酸残基，修饰、添加或删除氨基酸等。
抗体的氨基酸序列可使用任何已知的编号方案进行编号，包括由Kabat等人描述的方案(“卡巴(Kabat)”编号方案)；Al-Lazikani et al.,1997,J.Mol.Biol.,273:927-948中描述的方案(“柯西亚(Chothia)”编号方案)；MacCallum et al.,1996,J.Mol.Biol.262:732-745中描述的方案(“接触(Contact)”编号方案)；Lefrancetal.,Dev.Comp.Immunol.,2003,27:55-77中描述的方案(“IMGT”编号方案)；以及Honegge and Plückthun,J.Mol.Biol.,2001,309:657-70中描述的方案(“AHo”编号方案)。除非另有说明，否则本发明中使用的编号方案是卡巴(Kabat)编号方案。当提及抗体重链恒定区中的残基时，通常使用“EU编号方案”(例如，如Kabat等人所报告，见上文)。然而，编号方案的选择并不旨在暗示不存在它们的序列的差异，并且本领域技术人员可以通过检查一个或多个抗体的氨基酸序列来容易地确认序列位置。
在一些实施方案，所述BA抗体是具有以下结构的官能化抗体：
Figure BDA0002666727490000811
在一些实施方案，R是亚烷基、亚烯基、或亚炔基。在一些实施方案，R是亚烷基。在一些实施方案，R是C2-4-亚烷基。在某些实施方案，R是亚乙基。在某些实施方案，n是3。在某些实施方案，z是2或4。
在一些实施方案，所述BA抗体不为抗PSMA抗体或抗CD70抗体。
BA抗原结合片段的非限制性实例包括：(i)Fab片段；(ii)F(ab')2片段；(iii)Fd片段；(iv)Fv片段；(v)单链Fv(scFv)分子；(vi)dAb片段；和(vii)由模拟抗体(例如，分离的互补决定区(CDR)，例如CDR3肽)或受约束的FR3-CDR3-FR4肽的高变区的氨基酸残基组成的最小识别单元。其他工程化分子，如结构域特异性抗体类，单结构域抗体类，骆驼科动物抗体类(VHH片段)，结构域缺失抗体类，嵌合抗体类，CDR嫁接抗体类，双抗体类，三抗体类，四抗体类，微抗体类，纳米抗体类(例如一价纳米抗体类，二价纳米抗体类等)，小型模块化免疫药物(SMIP)和鲨鱼可变IgNAR结构域也包含在本发明所使用的表达“抗原结合片段”内。
抗体的抗原结合片段通常包含至少一个可变结构域。所述可变结构域可具有任何大小或氨基酸组成，并且通常包含至少一个CDR，所述至少一个CDR与一个或多个框架序列相邻或在框内的。在具有与VL结构域相关的VH结构域的抗原结合片段中，所述VH和VL结构域可以任何合适的排列相对于彼此进行定位。譬如，所述可变区可以是二聚的并含有VH-VH、VH-VL或VL-VL二聚体。或者，所述抗体的抗原结合片段可包含单体VH或VL结构域。
在某些实施方案，抗体的抗原结合片段可包含至少一个可变结构域，所述可变结构域与至少一个恒定结构域共价连接。可在本发明公开的抗体的抗原结合片段内获悉的可变结构域和恒定结构域的非限制性示例性构型包括：(i)VH-CH1；(ii)VH-CH2；(iii)VH-CH3；(iv)VH-CH1-CH2；(v)VH-CH1-CH2-CH3；(vi)VH-CH2-CH3；(vii)VH-CL；(viii)VL-CH1；(ix)VL-CH2；(x)VL-CH3；(xi)VL-CH1-CH2；(xii)VL-CH1-CH2-CH3；(xiii)VL-CH2-CH3；和(xiv)VL-CL。在可变结构域和恒定结构域的任何构型中，包括上文列出的任何示例性构型，所述可变结构域和恒定结构域可以彼此直接连接或可以通过完整或部分铰链或连接体区域进行连接。铰链区可由至少2个(例如，5、10、15、20、40、60个或更多个)氨基酸组成，所述氨基酸导致单个多肽分子中相邻可变结构域和/或恒定结构域之间的柔性或半柔性连接。此外，本发明公开的抗体的抗原结合片段可包含上文列出的任何可变结构域和恒定结构域的同二聚体或异二聚体(或其他多聚体)，其彼此非共价结合和/或与具有一个或多个单体VH或VL结构域(例如，通过二硫键)非共价结合。
与完整抗体分子一样，抗原结合片段可以是单特异性的或多特异性的(例如，双特异性的)。抗体的多特异性抗原结合片段通常包含至少两个不同的可变结构域，其中每个可变结构域能够特异性结合单独的抗原或结合同一抗原上的不同表位。任何多特异性抗体形式，包括本发明公开的示例性双特异性抗体形式，可使用本领域可用的常规技术，适于在本发明公开的抗体的抗原结合片段的背景下使用。
本发明所述抗体可通过补体依赖性细胞毒性(CDC)或抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)而起作用。“补体依赖性细胞毒性”(CDC)是指在补体存在下，本发明的抗体对表达抗原的细胞的裂解。“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”(ADCC)是指细胞介导的反应，其中表达Fc受体(FcR)的非特异性细胞毒性细胞(例如，自然杀伤(Natural Killer，NK)细胞、中性粒细胞和巨噬细胞)识别靶细胞上的结合抗体，从而导致靶细胞裂解。可使用本领域熟知和可用的测定方法来测定CDC和ADCC。(参见例如，美国专利号5,500,362和5,821,337，以及Clynes et al.(1998)Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)95:652-656)。抗体的恒定区在抗体固定补体和介导细胞依赖性细胞毒性的能力中是重要的。因此，可基于抗体是否需要介导细胞毒性来选择抗体的同种型。
可用于本发明化合物的抗体包括人抗体。本发明使用的术语“人抗体”旨在包括具有衍生自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。人抗体可包括不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变而引入的突变)，例如在CDR中，特别是在CDR3中。然而，本发明使用的术语“人抗体”不旨在包括其中衍生自另一种哺乳动物物种(例如小鼠)的种系的CDR序列已移植到人框架序列上的抗体。术语“人抗体”不包括在天然存在的、未经修饰的生物体中通常不经修饰或人为干预/操作而存在的天然存在的分子。
在一些实施方案，所述抗体可以是重组人抗体。本发明使用的术语“重组人抗体”旨在包括通过重组方式制备、表达、产生或分离的所有人抗体，例如使用转染到宿主细胞中的重组表达载体表达的抗体(下文进一步描述)；从重组、组合人抗体文库分离的抗体(下文进一步描述)；从动物(例如小鼠)分离的抗体，所述动物是人免疫球蛋白基因的转基因动物(参见例如，Taylor et al.(1992)Nucl.Acids Res.20:6287-6295)；或通过涉及将人免疫球蛋白基因序列剪接到其他DNA序列的任何其他方法制备、表达、产生或分离的抗体。此类重组人抗体具有衍生自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区。然而，在某些实施方案，对此种重组人抗体进行体外诱变(或者，当使用转基因人Ig序列的动物时，进行体内体细胞诱变)，并因此所述重组抗体的VH和VL区的氨基酸序列是衍生自人种系VH和VL序列并与之相关的序列，其在体内可不天然存在于人抗体种系库中。
人抗体可以与铰链异质性相关的两种形式存在。在一种形式中，免疫球蛋白分子包含约150-160kDa的稳定四链构建体，其中二聚体通过链间重链二硫键连接在一起。在第二种形式中，所述二聚体不通过链间二硫键连接，并且形成约75-80kDa的分子，其由共价偶联的轻链和重链(半抗体)组成。即使在亲和纯化后，这些形式也极难分离。
在各种完整IgG同种型中出现第二种形式的频率是由于但不限于与抗体的铰链区同种型相关的结构差异。人IgG4铰链的铰链区中的单个氨基酸置换可以显著地将第二种形式(Angal et al.(1993)Molecular Immunology30:105)的出现降低至通常使用人IgG1铰链观察到的水平。本发明公开内容包括在铰链、CH2或CH3区域中具有一个或多个突变的抗体，所述突变可能是例如在生成中所需的，以提高所需抗体形式的产量。
可用于本发明化合物的抗体可以是分离的抗体。本发明使用的“分离的抗体”是指已经从其天然环境的至少一种组分中鉴定和分离和/或回收的抗体。例如，为了本发明的目的，已从生物体的至少一种组分或从其中天然存在或天然产生的抗体的组织或细胞中分离或除去的抗体是“分离的抗体”。分离的抗体还包括重组细胞内的原位抗体。分离的抗体是已经过至少一个纯化或分离步骤的抗体。根据某些实施方案，分离的抗体可以基本上不含其他细胞材料和/或化学物质。
与衍生抗体的相应种系序列相比，可用于本发明所述化合物的抗体可在重链和轻链可变结构域的框架和/或CDR区中包含一个或多个氨基酸置换、插入和/或缺失。通过将本发明公开的氨基酸序列与可从例如公共抗体序列数据库获得的种系序列进行比较，可以容易地确定此类突变。本发明包括抗体及其抗原结合片段，其衍生自本发明的任何氨基酸序列，其中一个或多个框架和/或CDR区内的一个或多个氨基酸突变为衍生抗体的种系序列的相应残基，或突变为另一个人种系序列的相应残基，或突变为相应种系残基的保守氨基酸置换(此类序列变化在本发明中统称为“种系突变”)。本领域普通技术人员从本发明公开的重链和轻链可变区序列开始，可以容易地生成许多抗体和抗原结合片段，所述抗体和抗原结合片段包含一个或多个个体种系突变或其组合。在某些实施方案，VH和/或VL结构域内的所有框架和/或CDR残基突变回在衍生抗体的原始种系序列中发现的残基。在其他实施方案，仅有某些残基突变回原始种系序列，例如，仅在FR1的前8个氨基酸内或在FR4的最后8个氨基酸内发现的突变残基，或仅在CDR1、CDR2或CDR3中发现的突变残基。在其他实施方案，将一个或多个框架和/或CDR残基突变为不同种系序列(即，种系序列不同于最初衍生抗体的种系序列)的相应残基。此外，本发明所述抗体可包含框架和/或CDR区内的两个或更多个种系突变的任何组合，例如，其中某些个体残基突变为特定种系序列的相应残基，而某些与原始种系序列不同的其他残基保持或突变为不同种系序列的相应残基。一旦得到，可容易地测试含有一个或多个种系突变的抗体和抗原结合片段的一种或多种所需特性，例如改善的结合特异性，增加的结合亲和力，改善或增强的拮抗性或激动性生物学特性(视情况而定)，降低的免疫原性等。
在一些实施方案，所述抗体是单克隆抗体，多克隆抗体，抗体片段(Fab、Fab’、和F(ab)2，微抗体，双抗体，三抗体等)或双特异性抗体。本发明所述的抗体可以使用美国专利号6,596,541和美国公开号2012/0096572中所述的方法进行人源化，各专利/申请通过引用其整体并入本发明。
当结合剂是抗体时，其结合作为多肽的抗原结合配偶体，其可以是跨膜分子(例如，受体)或可以是可被糖基化或磷酸化的生长因子。
所述结合剂结合的合适靶标包括需要选择性递送类固醇的任何靶标。在一些实施方案，所述结合剂是抗体、经修饰的抗体或其抗原结合片段，其结合选自以下的靶标：AXL，BAFFR，BCMA，BCR-列表组分(BCR-list components)，BDCA2，BDCA4，BTLA，BTNL2BTNL3，BTNL8，BTNL9，C10orf54，CCR1，CCR3，CCR4，CCR5，CCR6，CCR7，CCR9，CCR10，CD11c，CD137，CD138，CD14，CD168，CD177，CD19，CD20，CD209，CD209L，CD22，CD226，CD248，CD25，CD27，CD274，CD276，CD28，CD30，CD300A，CD33，CD37，CD38，CD4，CD40，CD44，CD45，CD46，CD47，CD48，CD5，CD52，CD55，CD56，CD59，CD62E，CD68，CD69，CD70，CD74，CD79a，CD79b，CD8，CD80，CD86，CD90.2，CD96，CLEC12A，CLEC12B，CLEC7A，CLEC9A，CR1，CR3，CRTAM，CSF1R，CTLA4，CXCR1/2，CXCR4，CXCR5，DDR1，DDR2，DEC-205，DLL4，DR6，FAP，FCamR，FCMR，FcR's，Fire，GITR，HHLA2，HLAII类，HVEM，ICOSLG，IFNLR1，IL10R1，IL10R2，IL12R，IL13RA1，IL13RA2，IL15R，IL17RA，IL17RB，IL17RC，IL17RE，IL20R1，IL20R2，IL21R，IL22R1，IL22RA，IL23R，IL27R，IL29R，IL2Rg，IL31R，IL36R，IL3RA，IL4R，IL6R，IL5R，IL7R，IL9R，整合素(Integrins)，LAG3，LIFR，MAG/Siglec-4，MMR，MSR1，NCR3LG1，NKG2D，NKp30，NKp46，PDCD1，PROKR1，PVR，PVRIG，PVRL2，PVRL3，RELT，SIGIRR，Siglec-1(唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-1)，Siglec-10，Siglec-5，Siglec-6，Siglec-7，Siglec-8，Siglec-9，SIRPA，SLAMF7，TACI，TCR-列表组分/assoc，PTCRA，TCRb，CD3z，CD3，TEK，TGFBR1，TGFBR2，TGFBR3，TIGIT，TLR2，TLR4，TROY，TSLPR，TYRO，VLDLR，VSIG4和VTCN1。在一些实施方案，所述结合剂是阿达木单抗(adalimumab)或英夫利昔单抗(infliximab)。在一些实施方案，所述结合剂是阿仑单抗(alemtuzumab)、莫罗莫那(muromonab)、利妥昔单抗(rituximab)、托妥珠单抗(tosituzumab)或激动性抗体类(其中免疫刺激可能是预期作用机制的一部分)。
本发明使用的表达催乳素受体“PRLR”等是指人催乳素受体，其包含如WO2015026907(其通过引用其全文并入本发明)的SEQ ID NO：404所示的氨基酸序列。表述“PRLR”包括单体PRLR分子和多聚体PRLR分子。本发明使用的表述“单体人PRLR”是指PRLR蛋白质或其部分，其不包含或不具有任何多聚结构域，并且在正常条件下以单个PRLR分子形式存在，而没有与另一PRLR分子进行直接物理连接。示例性单体PRLR分子是本发明称为“hPRLR.mmh”的分子，其包含WO2015026907的SEQ ID NO：401的氨基酸序列(参见例如，WO2015026907的实施例3)。本发明使用的表述“二聚体人PRLR”是指包含两个PRLR分子的构建体，所述两个PRLR分子通过连接体、共价键、非共价键或通过多聚结构域例如抗体Fc结构域彼此连接。示例性二聚体PRLR分子是本发明称为“hPRLR.mFc”的分子，其包含WO2015026907的SEQ ID NO：402的氨基酸序列(参见例如，WO2015026907的实施例3)。
示例性抗PRLR抗体在WO2015026907的表1中列出，示出了氨基酸序列标识符-或其与之具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的基本相似的序列-示例性抗PRLR抗体的重链可变区(HCVR)、轻链可变区(LCVR)、重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)、和轻链互补决定区(LCDR1、LCDR2和LCDR3)。WO2015026907的表2列出了核酸序列标识符-或其与之具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的基本相似的序列-示例性抗PRLR抗体的HCVR、LCVR、HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在一些实施方案，与连接体-有效负载或有效负载偶联的抗体或其抗原结合片段可以是靶向人催乳素受体(PRLR)的抗体。示例性抗PRLR抗体可在例如WO2015/026907中获悉。在一些实施方案，抗PRLR抗体包含：重链互补决定区(HCDR)-1，其包含SEQ ID NO：17；HCDR2，其包含SEQ ID NO：19；HCDR3，其包含SEQ ID NO：20；轻链互补决定区(LCDR)-1，其包含SEQ ID NO：22；LCDR2，其包含SEQ ID NO：23；以及LCDR3，其包含SEQ ID NO：24。在一些实施方案，抗PRLR抗体包含：含SEQ ID NO：17的重链可变区(HCVR)和含SEQ ID NO：21的轻链可变区(LCVR)。在任一前述实施方案中，所述抗PRLR抗体可通过定点诱变以在位点插入谷氨酰胺残基，而不会导致抗体功能或结合能力丧失而制备得到。例如，在任一前述实施方案中，所述抗PRLR抗体可包含Asn297Gln(N297Q)突变。具有N297Q突变的此类抗体还可在其可变区中包含一个或多个其他天然存在的谷氨酰胺残基，转谷氨酰胺酶可接近这些残基，并因此能够与有效负载或连接体-有效负载偶联(表B)。
表B.示例性抗体H1H6958N(抗PRLR)的序列
Figure BDA0002666727490000851
Figure BDA0002666727490000861
在所提供的任何化合物或偶联物实施方案中，BA是结合PRLR的抗体或其抗原结合片段。在所提供的任何化合物或偶联物实施方案中，BA是抗体或其抗原结合片段，并且通过至少一个Q295残基进行偶联。在所提供的任何化合物或偶联物实施方案中，BA是抗体或其抗原结合片段，并且通过两个Q295残基进行偶联。在所提供的任何化合物或偶联物实施方案中，BA是N297Q抗体或其抗原结合片段。在所提供的任何化合物或偶联物实施方案中，BA是N297Q抗体或其抗原结合片段，并且通过至少一个Q295残基和至少一个Q297残基进行偶联。在所提供的任何化合物或偶联物实施方案中，BA是N297Q抗体或其抗原结合片段，并且通过两个Q295残基和两个Q297残基进行偶联。在特定实施方案，根据EU编号系统进行编号。
在上述任一实施方案中，BA是抗MSR1抗体。在某些实施方案，BA是抗MSR1抗体H1H21234N。在某些实施方案，BA是抗MSR1抗体H1H21234NN297Q。在某些实施方案，BA是抗MSR1抗体，其包含根据SEQ ID NO：2的HCVR和根据SEQ ID NO：10的LCVR。在某些实施方案，BA是抗MSR1抗体，其包含分别根据SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、和SEQ ID NO：16的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、和LCDR3中的1、2、3、4、5、或6个。在某些实施方案，HCVR由SEQ ID NO：1编码。在某些实施方案，LCVR由SEQ IDNO：9编码。在某些实施方案，HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、和LCDR3中的1、2、3、4、5、或6个分别由多核苷酸序列SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：11、SEQ IDNO：13和SEQ ID NO：15编码。N297Q表示一个或多个残基297从天冬酰胺(N)突变为谷氨酰胺(Q)。优选地，每个残基297被突变为Q。在优选实施方案，根据EU编号系统进行编号。在本段的某些实施方案中，z是1至4。在某些实施方案，z是1、2、3或4。在某些实施方案，z是2。在某些实施方案，z是4。
Figure BDA0002666727490000871
Figure BDA0002666727490000881
所述结合剂(例如，抗体或抗原结合分子)可通过抗体或抗原结合分子内特定氨基酸处的附接而与所述结合剂连接。可在本发明此方面的上下文中使用的示例性氨基酸附接包括，例如，赖氨酸(参见例如，US 5,208,020；US 2010/0129314；Hollander et al.,Bioconjugate Chem.,2008,19:358-361；WO 2005/089808；US 5,714,586；US 2013/0101546；和US 2012/0585592)，半胱氨酸(参见例如，US 2007/0258987；WO 2013/055993；WO 2013/055990；WO 2013/053873；WO 2013/053872；WO 2011/130598；US 2013/0101546；和US 7,750,116)，硒代半胱氨酸(参见例如，WO 2008/122039；和Hofer et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,2008,105:12451-12456)，甲酰甘氨酸(参见例如，Carrico etal.,Nat.Chem.Biol.,2007,3:321-322；Agarwal et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,2013,110:46-51，和Rabuka et al.,Nat.Protocols,2012,10:1052-1067)，非天然氨基酸(参见例如，WO 2013/068874，和WO 2012/166559)，和酸性氨基酸(参见例如，WO 2012/05982)。连接体可通过谷氨酰胺经由基于转谷氨酰胺酶的化学-酶偶联来进行偶联(参见例如，Dennler et al.,Bioconjugate Chem.2014,25,569-578)。连接体也可通过与碳水化合物的附接而与抗原结合蛋白偶联(参见例如，US 2008/0305497，WO 2014/065661，和Ryanet al.,Food&Agriculture Immunol.,2001,13:127-130)，以及通过与二硫化物连接体的附接而与抗原结合蛋白偶联(参见例如，WO 2013/085925，WO 2010/010324，WO 2011/018611，WO 2014/197854，和Shaunak et al.,Nat.Chem.Biol.,2006,2:312-313)。在一些实施方案，所述结合剂是抗体，并且所述抗体通过赖氨酸残基连接至所述连接体。在一些实施方案，所述抗体通过半胱氨酸残基连接至所述连接体。
在上述任一实施方案中，BA是抗PRLR抗体。在某些实施方案，BA是抗PRLR抗体H1H6958N。在某些实施方案，BA是抗PRLR抗体H1H6958N N297Q。在某些实施方案，BA是抗PRLR抗体，其包含根据SEQ ID NO：17的HCVR和根据SEQ ID NO：21的LCVR。在某些实施方案，BA是抗PRLR抗体，其包含分别根据SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ IDNO：22、SEQ ID NO：23、和SEQ ID NO：24的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、和LCDR3中的1、2、3、4、5、或6个。N297Q表示一个或多个残基297从天冬酰胺(N)突变为谷氨酰胺(Q)。优选地，每个残基297被突变为Q。在优选实施方案，根据EU编号系统进行编号。在本段的某些实施方案中，k是1至4。在某些实施方案，k是1、2、3或4。在某些实施方案，k是4。
D.制备化合物的方法
本发明所述的偶联物可通过在标准偶联条件下，将本发明所述的连接体-有效负载与结合剂例如抗体偶联来合成得到(参见例如，Drug Deliv.2016Jun；23(5):1662-6；AAPS Journal,Vol.17,No.2,March2015；和Int.J.Mol.Sci.2016,17,561，其均通过引用其全部内容并入本发明)。连接体-有效负载是合成中间体，其包含目的有效负载和连接基团部分，所述连接基团部分最终用作将结合剂与有效负载连接的基团部分(或其部分)。连接体-有效负载包含与结合剂反应以形成本发明所述偶联物的活性基团。当所述结合剂是抗体时，所述抗体可通过抗体的一个或多个半胱氨酸残基、赖氨酸残基或其他残基偶联至连接体-有效负载。连接体-有效负载可以，例如通过使抗体经受还原剂(例如二硫苏糖醇)的作用以切割抗体的二硫键，例如通过凝胶过滤纯化所述还原的抗体，然后用含有合适的活性基团部分(例如马来酰亚胺基基团)的连接体-有效负载与所述抗体反应，从而与半胱氨酸残基偶联。合适的溶剂包括但不限于水、DMA、DMF、和DMSO。含有活性基团例如活化酯或酰基卤基团的连接体-有效负载可以与抗体的赖氨酸残基偶联。合适的溶剂包括但不限于水、DMA、DMF、和DMSO。偶联物可使用已知的蛋白质技术进行纯化，包括例如体积排除色谱法、透析法和超滤/渗滤法。
连接体-类固醇中间体
本发明提供了式(2000)所示的连接体-类固醇，
RG-L2-(L3)0-1-SP-D
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或衍生物，
其可用于制备抗体-药物偶联物，
其中，
D选自
a)
Figure BDA0002666727490000901
其中式(a)中的两个Rx均为H；R4是烷基、芳基、芳基烷基、或含N的杂环烷基；和SP是-C(O)-C1-C10-亚烷基-C(O)-，-C(O)-N(C1-6烷基)-C1-C10-亚烷基-X1-、其中X1与式(2000)中的(L3)0-1连接，-C(O)-N(H)-(C1-C10-亚烷基)-S-、其中S与式(2000)中的(L3)0-1连接，-C(O)-N(C1-6烷基)-(C1-C10-亚烷基)-S-、其中S与式(2000)中的(L3)0-1连接，
Figure BDA0002666727490000902
其中右手边的附接点(即N处)与式(2000)中的(L3)0-1连接，-CH2-NH-、其中N与式(2000)中的(L3)0-1连接，
Figure BDA0002666727490000903
其中所述N与式(2000)中的(L3)0-1连接和其中Ar是任选取代的亚芳基(在一些实施方案为
Figure BDA0002666727490000904
)或任选取代的亚杂芳基，-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(2000)中的(L3)0-1连接，-C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(2000)中的(L3)0-1连接和其中各C1-C10-亚烷基独立任选地被一个或多个羟基取代，-C(O)-N(R5)-C1-C10-亚烷基-C(O)NH-X2-、其中X2与式(2000)中的(L3)0-1连接，或
Figure BDA0002666727490000905
其中X4与式(2000)中的(L3)0-1连接；或
其中式(a)中的两个Rx均为F；R4是烷基、芳基、芳基烷基、或含N的杂环烷基；和SP是-C(O)-C1-C10-亚烷基-C(O)-，-C(O)-N(C1-6烷基)-C1-C10-亚烷基-X1b-、其中X1b与式(2000)中的(L3)0-1连接，-C(O)-N(H)-(C1-C10-亚烷基)-X1b-、其中X1b与式(2000)中的(L3)0-1连接，
Figure BDA0002666727490000906
其中右手边的附接点(即N处)与式(2000)中的(L3)0-1连接，-CH2-NH-、其中N与式(2000)中的(L3)0-1连接，
Figure BDA0002666727490000907
其中所述N与式(2000)中的(L3)0-1连接和其中Ar是任选取代的亚芳基(在一些实施方案为
Figure BDA0002666727490000911
)或任选取代的亚杂芳基，-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(2000)中的(L3)0-1连接，-C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(2000)中的(L3)0-1连接和其中各C1-C10-亚烷基独立任选地被一个或多个羟基取代，-C(O)-N(R5)-C1-C10-亚烷基-C(O)NH-X2-、其中X2与式(2000)中的(L3)0-1连接，或
Figure BDA0002666727490000912
其中X4与式(2000)中的(L3)0-1连接；和
b)上表A中的化合物，其中表A中的化合物通过-C(O)CH2OH基团的羟基(即通过-C(O)CH2-O-SP-(L3)0-1-)、或通过Mapracorat的羟基(即通过-O-SP-(L3)0-1-)与式(2000)所示化合物的RG连接；
X1是-N(C1-6烷基)-；
X1b是-S-、-NH-、或-N(C1-6烷基)-；
X2是-NH-；
X3是-CH2-，X3是-CH2-O-(C1-C10-亚烷基)-C(O)-、其中所述C(O)与X4连接，或X3是-C(O)-；
X4是-O-；
R5是H、-OH、-OCH3、或C1-6烷基；
R50和R50a分别独立地为H或C1-C6-烷基；
Rd、Re和Rf分别独立地为-H、-OH、羟基烷基、烷氧基羰基、-C(O)OH、或-CH2ORg，其中各Rg分别独立地为-CH2C(O)OH或-CH2C(O)O(烷基)；和
m是0或1；
RG是活性基团；
L2是连接用连接体，和
L3当存在时，为自分解连接体(self-immolativelinker)。
本发明提供了式(II)所示的连接体-类固醇，
Figure BDA0002666727490000913
其可用于制备抗体-药物偶联物；其中RG、L2、L3、SP、R4和Rx均具有本发明所述定义。
在一些或任一实施方案，式(II-P)所示化合物如下所示：
Figure BDA0002666727490000921
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或衍生物，
其中：
R4是烷基、芳基、芳基烷基、或含N的杂环烷基；
SP是-C(O)-C1-C10-亚烷基-C(O)-，-C(O)-N(C1-3烷基)-C1-C10-亚烷基-X1-、其中X1与式(II)中的L3连接，-C(O)-N(R5)-C1-C10-亚烷基-C(O)NH-X2-、其中X2与式(II)中的L3连接，或
Figure BDA0002666727490000922
其中X4与式(II)中的L3连接；
X1是-N(C1-3烷基)-；
X2是-NH-；
X3是-CH2-，X3是-CH2-O-(C1-C10-亚烷基)-C(O)-、其中所述C(O)与X4连接，或X3是-C(O)-；
X4是-O-；
R5是H、-OH、-OCH3、或烷基；
Rd、Re和Rf分别独立地为-H、-OH、羟基烷基、烷氧基羰基、-C(O)OH、或-CH2ORg，其中各Rg分别独立地为-CH2C(O)OH或-CH2C(O)O(烷基)；和
m是0或1；
RG是活性基团；
L2是连接用连接体，和
L3当存在时，为自分解连接体(self-immolative linker)。
在一些或任一实施方案，式(II-P-1)所示化合物如下所示：
Figure BDA0002666727490000931
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或衍生物，
其中：
R4是烷基、芳基、芳基烷基、或含N的杂环烷基；
SP是-C(O)-C1-C10-亚烷基-C(O)-，-C(O)-N(C1-3烷基)-C1-C10-亚烷基-X1-、其中X1与式(II)中的L3连接，-C(O)-N(R5)-C1-C10-亚烷基-C(O)NH-X2-、其中X2与式(II)中的L3连接，或
Figure BDA0002666727490000932
其中X4与式(II)中的L3连接；
X1是-N(C1-3烷基)-；
X2是-NH-；
X3是-CH2-，X3是-CH2-O-(C1-C10-亚烷基)-C(O)-、其中所述C(O)与X4连接，或X3是-C(O)-；
X4是-O-；
R5是H、-OH、-OCH3、或烷基；
Rd、Re和Rf分别独立地为-H、-OH、羟基烷基、烷氧基羰基、-C(O)OH、或-CH2ORg，其中各Rg分别独立地为-CH2C(O)OH或-CH2C(O)O(烷基)；和
m是0或1；
RG是活性基团；
L2是连接用连接体，和
L3当存在时，为自分解连接体(self-immolative linker)。
在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中两个Rx均为H。在一些或任一实施方案，两个Rx均为F。
在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)和(II-P-1)所示化合物，其中R4是烷基。在一些实施方案，R4不为环烷基。在这些实施方案的一些中，R4是直链或支链烷基。在这些实施方案的一些中，R4是芳基。在这些实施方案的一些中，R4是芳基烷基。在这些实施方案的一些中，R4是含N的杂环烷基。在一些实施方案，R4是烷基，例如但不限于甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基或壬基。在一些实施方案，R4是甲基。在一些实施方案，R4是乙基。在一些实施方案，R4是正丙基。在一些实施方案，R4是异丙基。在一些实施方案，R4是正丁基。在一些实施方案，R4是异丁基。在一些实施方案，R4是叔丁基。在一些实施方案，R4是仲丁基。在一些实施方案，R4是戊基。在一些实施方案，R4是己基。在一些实施方案，R4是庚基。在一些实施方案，R4是辛基或壬基。在一些实施方案，R4是芳基，例如但不限于苯基、苯酚或萘基。在一些实施方案，R4是苯基。在一些实施方案，R4是萘基。在一些实施方案，R4是杂芳基，例如但不限于噻吩基。在一些实施方案，R4是芳基烷基，例如但不限于苄基。在一些实施方案，R4是含N的杂环烷基，例如但不限于哌啶基。在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中两个Rx均为H。在一些或任一实施方案，两个Rx均为F。在一些实施方案，R4是R构型。在一些实施方案，R4是S构型。在一些实施方案，R4是R构型和S构型的混合物。在一些实施方案，R4是R构型和S构型的混合物，其中R：S混合物为约1：1，约2：1，约3：1，约4：1，约5：1，约6：1，约7：1，约8：1，约9：1，或约10：1。
在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中
两个Rx均为H；和SP是-C(O)-C1-C10-亚烷基-C(O)-，-C(O)-N(C1-6烷基)-C1-C10-亚烷基-X1-、其中X1与式(II)中的L连接，-C(O)-N(H)-(C1-C10-亚烷基)-S-、其中S与式(II)中的L连接，-C(O)-N(C1-6烷基)-(C1-C10-亚烷基)-S-、其中S与式(II)中的L连接，-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(II)中的L连接，-C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(II)中的L连接和其中各C1-C10-亚烷基独立任选地被一个或多个羟基取代，-C(O)-N(R5)-C1-C10-亚烷基-C(O)NH-X2-、其中X2与式(II)中的L连接，或
Figure BDA0002666727490000941
其中X4与式(II)中的L连接；或
两个Rx均为F；和SP是-C(O)-N(C1-6烷基)-C1-C10-亚烷基-X1b-、其中X1b与式(II)中的L连接，-C(O)-N(H)-(C1-C10-亚烷基)-X1b-、其中X1b与式(II)中的L连接，
Figure BDA0002666727490000942
其中右手边的附接点(即N处)与式(II)中的L连接，-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(II)中的L连接，-C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(III)中的L连接和其中各C1-C10-亚烷基独立任选地被一个或多个羟基取代，或-C(O)-N(R5)-C1-C10-亚烷基-C(O)NH-X2-、其中X2与式(II)中的L连接。
在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中两个Rx均为H，和SP是-C(O)-C1-C10-亚烷基-C(O)-。在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中SP是-C(O)-C2-C5-亚烷基-C(O)-。在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中SP是-C(O)-CH2CH2-C(O)-。
在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中两个Rx均为F，和SP是-C(O)-C1-C10-亚烷基-C(O)-。在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中SP是-C(O)-C2-C5-亚烷基-C(O)-。在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中SP是-C(O)-CH2CH2-C(O)-。
在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中两个Rx均为H，和SP是-C(O)-N(C1-6烷基)-C1-C10-亚烷基-X1-、其中X1与式(II)、(II-P)、或(II-P-1)中的L3连接。在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(C1-3烷基)-C1-C10-亚烷基-X1-，其中X1与式(II)、(II-P)、或(II-P-1)中的L3连接。在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中X1是-N(C1-3烷基)-。在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(C1-3烷基)-C2-C5-亚烷基-X1-。在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(C1-3烷基)-CH2CH2-X1-。在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(CH3)-C2-C5-亚烷基-N(CH3)-。在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(CH3)-CH2CH2-N(CH3)-。
在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中两个Rx均为F，和SP是-C(O)-N(C1-6烷基)-C1-C10-亚烷基-X1b-、其中X1b与式(II)中的L3连接，或-C(O)-N(H)-(C1-C10-亚烷基)-X1b-、其中X1b与式(II)中的L3连接。在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(H)-C1-C10-亚烷基-X1b-，其中X1b与式(II)中的L3连接。在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(H)-C1-C6-亚烷基-X1b-，其中X1b与式(II)中的L3连接。在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(H)-C1-C3-亚烷基-X1b-，其中X1b与式(II)中的L3连接。在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(H)-CH2CH2-X1b-。在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(H)-C2-C5-亚烷基-N(CH3)-。在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(H)-C2-C5-亚烷基-N(CH2CH3)-。在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(H)-CH2CH2-N(CH3)-。
在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中两个Rx均为F，和SP是-C(O)-N(C1-6烷基)-C1-C10-亚烷基-X1b-、其中X1b与式(II)中的L3连接。在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(C1-3烷基)-C1-C6-亚烷基-X1b-，其中X1b与式(II)中的L3连接。在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(C1-3烷基)-C1-C3-亚烷基-X1b-，其中X1b与式(II)中的L3连接。在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中X1b是-N(C1-3烷基)-。在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(C1-3烷基)-C2-C5-亚烷基-X1b-。在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(C1-3烷基)-CH2CH2-X1b-。在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(CH3)-C2-C5-亚烷基-N(CH3)-。在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(CH2CH3)-C2-C5-亚烷基-N(CH2CH3)-。在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(CH3)-CH2CH2-N(CH3)-。
在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中两个Rx均为F，和SP是
Figure BDA0002666727490000961
其中右手边的附接点(即N处)与式(II)中的L连接。
在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中两个Rx均为H，和SP是-C(O)-N(H)-(C1-C10-亚烷基)-S-、其中S与式(II)中的L3连接，或-C(O)-N(C1-6烷基)-(C1-C10-亚烷基)-S-、其中S与式(II)中的L3连接。在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(H)-(C1-C6-亚烷基)-S-、其中S与式(II)中的L3连接，或-C(O)-N(C1-3烷基)-(C1-C6-亚烷基)-S-、其中S与式(II)中的L3连接。在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(H)-(C1-C10-亚烷基)-S-、其中S与式(II)中的L3连接。在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(H)-(C1-C6-亚烷基)-S-、其中S与式(II)中的L3连接。在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(C1-6烷基)-(C1-C10-亚烷基)-S-、其中S与式(II)中的L3连接。在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(C1-3烷基)-(C1-C6-亚烷基)-S-、其中S与式(II)中的L3连接。
在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中两个Rx均为F，和SP是-C(O)-N(H)-(C1-C10-亚烷基)-S-、其中S与式(II)中的L3连接，或-C(O)-N(C1-6烷基)-(C1-C10-亚烷基)-S-、其中S与式(II)中的L3连接。在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(H)-(C1-C6-亚烷基)-S-、其中S与式(II)中的L3连接，或-C(O)-N(C1-3烷基)-(C1-C6-亚烷基)-S-、其中S与式(II)中的L3连接。在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(H)-(C1-C10-亚烷基)-S-、其中S与式(II)中的L3连接。在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(H)-(C1-C6-亚烷基)-S-、其中S与式(II)中的L3连接。在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(C1-6烷基)-(C1-C10-亚烷基)-S-、其中S与式(II)中的L3连接。在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(C1-3烷基)-(C1-C6-亚烷基)-S-、其中S与式(II)中的L3连接。
在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中两个Rx均为H，和SP是-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(II)中的L3连接。在一些或任一实施方案，本发明提供了式(I)所示化合物，SP是-(C1-C6-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C6-亚烷基)-NR50a-。在式(II)的一些或任一实施方案中，SP是-(C1-C3-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C3-亚烷基)-NR50a-。在式(II)的一些或任一实施方案中，SP是-(直链C1-C3-亚烷基)-NR50C(O)-(直链C1-C3-亚烷基)-NR50a-。
在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中两个Rx均为F，和SP是-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(II)中的L3连接。在式(I)的一些或任一实施方案中，SP是-(C1-C6-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C6-亚烷基)-NR50a-。在式(II)的一些或任一实施方案中，SP是-(C1-C3-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C3-亚烷基)-NR50a-。在式(II)的一些或任一实施方案中，SP是-(直链C1-C3-亚烷基)-NR50C(O)-(直链C1-C3-亚烷基)-NR50a-。
在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中两个Rx均为H，和SP是-C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a-与式(II)中的L3连接和其中各C1-C10-亚烷基独立任选地被一个或多个羟基取代。在式(II)的一些或任一实施方案中，SP是-(支链C1-C6-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C6-羟基亚烷基)-NR50a-。在式(II)的一些或任一实施方案中，SP是-(支链C1-C6-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C6-亚烷基)-NR50a-。
在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中两个Rx均为F，和SP是-C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a-与式(II)中的L3连接和其中各C1-C10-亚烷基独立任选地被一个或多个羟基取代。在式(II)的一些或任一实施方案中，SP是-(支链C1-C6-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C6-羟基亚烷基)-NR50a-。在式(II)的一些或任一实施方案中，SP是-(支链C1-C6-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C6-亚烷基)-NR50a-。
在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中两个Rx均为H，和SP是-C(O)-N(R5)-C1-C10-亚烷基-C(O)NH-X2-、其中X2与式(II)、(II-P)、或(II-P-1)中的L3连接。在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(R5)-C1-C5-亚烷基-C(O)NH-NH-。在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(R5)-CH2-C(O)NH-NH-。在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中R5是H或烷基。在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中R5是H或CH3。
在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中两个Rx均为F，和SP是-C(O)-N(R5)-C1-C10-亚烷基-C(O)NH-X2-、其中X2与式(II)中的L3连接。在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(R5)-C1-C5-亚烷基-C(O)NH-NH-。在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(R5)-CH2-C(O)NH-NH-。在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中R5是H或烷基。在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中R5是H或CH3。
在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中两个Rx均为H，和SP是
Figure BDA0002666727490000981
其中X4与式(II)、(II-P)、或(II-P-1)中的L3连接。在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中两个Rx均为F，和SP是
Figure BDA0002666727490000982
其中X4与式(II)、(II-P)、或(II-P-1)中的L3连接。在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中SP是
Figure BDA0002666727490000983
和X3是-CH2-。在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中SP是
Figure BDA0002666727490000984
和X3是-CH2-O-(C1-C10-亚烷基)-C(O)-、其中所述C(O)与X4连接。在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中SP是
Figure BDA0002666727490000985
和X3是-C(O)-。在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中Rd、Re和Rf分别独立地为-H、-OH、羟基烷基、烷氧基羰基、-C(O)OH、或-CH2ORg，其中各Rg分别独立地为-CH2C(O)OH或-CH2C(O)O(烷基)。在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中Rd和Re分别独立地为-H或-OH。在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中m是0。在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中m是1。在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中m是1，和Rf是-H或-OH。
在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中两个Rx均为H，和SP是-C(O)-N(C1-3烷基)-C1-C10-亚烷基-X1-、其中X1与式(II)、(II-P)、或(II-P-1)中的L3连接；SP是
Figure BDA0002666727490000991
其中X3是-CH2-，m是1，和Rd、Re和Rf均为-H；或SP是
Figure BDA0002666727490000992
其中X3是-CH2-O-(C1-C10-亚烷基)-C(O)-、其中所述C(O)与X4连接，m是1，和Rd、Re和Rf均为-H。在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(CH3)-CH2CH2-N(CH3)-，
Figure BDA0002666727490000993
在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中两个Rx均为F，和SP是-C(O)-N(C1-3烷基)-C1-C10-亚烷基-X1-、其中X1与式(II)、(II-P)、或(II-P-1)中的L3连接；SP是
Figure BDA0002666727490000994
其中X3是-CH2-，m是1，和Rd、Re和Rf均为-H；或SP是
Figure BDA0002666727490000995
其中X3是-CH2-O-(C1-C10-亚烷基)-C(O)-，其中所述C(O)与X4连接，m是1，和Rd、Re和Rf均为-H。在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中SP是-C(O)-N(CH3)-CH2CH2-N(CH3)-，
Figure BDA0002666727490000996
在一些实施方案，本发明提供了式(II)所示化合物，其中两个Rx均为F或两个Rx均为H，或Rx如本段所指明的；SP是
Figure BDA0002666727490000997
Figure BDA0002666727490000998
(其中两个Rx均为F)，
Figure BDA0002666727490000999
(其中两个Rx均为F)，
Figure BDA0002666727490001001
Figure BDA0002666727490001002
在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中RG是选自
Figure BDA0002666727490001003
的活性基团。在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中RG是
Figure BDA0002666727490001004
在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中RG是
Figure BDA0002666727490001005
在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中RG是
Figure BDA0002666727490001006
在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中RG是
Figure BDA0002666727490001007
在一些实施方案，式(II)、(II-P)、或(II-P-1)中的-L2-(L3)0-1-，是指使活性基团(例如，式(II)、(II-P)、或(II-P-1)中的RG)连接、附接或结合本发明所述的有效负载化合物(例如，类固醇)的任何二价基团或基团部分。通常，合适的-L2-(L3)0-1-是足以稳定以利用抗体的循环半衰期，并且同时能够在抗原介导的偶联物内化后释放其有效负载的那些。-L2-(L3)0-1-可以是可切割的或不可切割的。可切割连接体是内化后由细胞内代谢切割的连接体，例如通过水解、还原或酶促反应切割。不可切割的连接体是通过内化后抗体的溶酶体降解来释放附接的有效负载的连接体。合适的连接体包括但不限于酸不稳定连接体，水解不稳定连接体，酶促可切割连接体，还原不稳定连接体，自分解连接体和不可切割连接体。合适的连接体还包括但不限于，是或包含葡糖苷酸类，琥珀酰亚胺-硫醚类，聚乙二醇(PEG)单元类，氨基甲酸酯类，腙类，马来酰亚胺-己酰基单元类(mal-caproylunits)，二硫键单元类(例如，-S-S-，-S-S-C(R1)(R2)-，其中R1和R2分别独立地为氢或烃基)，对氨基苄基(PAB)单元类，磷酸酯单元类，例如单-、双-或三-磷酸酯单元类，和肽类，例如含有2、3、4、5、6、7、8、或更多个氨基酸单元的肽单元类，包括但不限于缬氨酸-瓜氨酸单元类，缬氨酸-丙氨酸单元类，缬氨酸-精氨酸单元类，缬氨酸-赖氨酸单元类，-赖氨酸-缬氨酸-瓜氨酸单元类和-赖氨酸-缬氨酸-丙氨酸单元类。在一些实施方案，-L2-(L3)0-1-是三价的并且包括与-L2-(L3)0-1-中的三价基团(例如赖氨酸残基)连接的环糊精基团部分。在一些实施方案，存在L3。在一些实施方案，L3不存在。
在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中L2包含
Figure BDA0002666727490001011
Figure BDA0002666727490001012
-C(O)CH2CH2C(O)NH-，
Figure BDA0002666727490001013
Figure BDA0002666727490001014
Figure BDA0002666727490001015
或环糊精残基(CD)；或其组合。在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中L2包含
Figure BDA0002666727490001016
Figure BDA0002666727490001017
Figure BDA0002666727490001021
或CD，或其组合。在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中L2包含CD，其中CD选自由以下组成的组：
Figure BDA0002666727490001022
Figure BDA0002666727490001031
在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中-L2-(L3)0-1-包含
Figure BDA0002666727490001032
Figure BDA0002666727490001041
Figure BDA0002666727490001051
在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中当SP是-C(O)-C1-C10-亚烷基-C(O)-时，L3是
Figure BDA0002666727490001052
其中所述NH基团与L2连接；或当SP是-C(O)-N(C1-3烷基)-C1-C10-亚烷基-X1-、或-C(O)-N(R5)-C1-C10-亚烷基-C(O)NH-X2-时，L3是
Figure BDA0002666727490001053
其中所述NH基团与L2连接；或当SP是
Figure BDA0002666727490001054
时，L3不存在。在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中当SP是-C(O)-C1-C10-亚烷基-C(O)-时，L3是
Figure BDA0002666727490001055
其中所述NH基团与L2连接。在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中当SP是-C(O)-N(C1-3烷基)-C1-C10-亚烷基-X1-、或-C(O)-N(R5)-C1-C10-亚烷基-C(O)NH-X2-时，L3是
Figure BDA0002666727490001061
其中所述NH基团与L2连接。在一些实施方案，本发明提供了式(II)、(II-P)、或(II-P-1)所示化合物，其中当SP是
Figure BDA0002666727490001062
时，L3不存在。
本发明还提供了具有以下结构的化合物：
表2.布地奈德-间隔基-连接体-活性基团
Figure BDA0002666727490001063
Figure BDA0002666727490001071
Figure BDA0002666727490001081
Figure BDA0002666727490001091
Figure BDA0002666727490001101
Figure BDA0002666727490001111
Figure BDA0002666727490001121
Figure BDA0002666727490001131
结合剂(例如抗体)亦可通过点击化学反应进行偶联。在所述点击化学反应的一些实施方案中，连接体-有效负载包含能够与叠氮化物进行1,3-环加成反应的活性基团(例如炔)。此类合适的活性基团包括，但不限于应变炔烃类，例如适用于应变促进的炔烃-叠氮化物环加成(SPAAC)的那些，环炔烃类例如环辛炔类，苯并环化的炔烃类，和在没有铜催化剂的情况下能够与叠氮化物进行1,3-环加成反应的炔烃类。合适的炔烃类还包括但不限于DIBAC，DIBO，BARAC，DIFO，取代的炔烃类例如氟化炔烃类，氮杂-环炔烃类，BCN，及其衍生物。包含此类活性基团的连接体-有效负载可用于偶联已用叠氮基官能化的抗体。此类官能化抗体包括用叠氮基-聚乙二醇基团进行官能化的抗体。在某些实施方案，此种官能化抗体通过在酶转谷氨酰胺酶存在下，使包含至少一个谷氨酰胺残基(例如重链Q295)的抗体与式H2N-LL-N3所示化合物(其中LL是二价聚乙二醇基团)反应而得到。为方便起见，在本发明的某些通式中，抗体Ab是带有一个或多个共价连接的-LL-N3基团或其残基的经修饰的抗体。优选地，每个-LL-N3共价连接至抗体的谷氨酰胺残基的氨基酸侧链。进一步优选地，-LL-N3是活性基团RG或可与活性基团RG反应以形成与连接体-有效负载连接的共价键。同样为了方便起见，在本发明的某些通式中，明确示出了-LL-N3基团。
本发明提供了合成本发明所述偶联物的方法，所述方法包括使结合剂例如抗体与本发明所述的连接体-有效负载接触。在某些实施方案，所述连接体-有效负载包括环糊精基团部分。
式(II)、(II-P)或(II-P-1)所示化合物是连接体-有效负载，可用作本发明所述偶联物合成中的合成中间体。所述这些连接体-有效负载包含可与抗体反应以形成本发明所述偶联物的活性基团。
在式(II)、(II-P)或(II-P-1)的一些实施方案中，R4是烷基。在式(II)、(II-P)或(II-P-1)的一些实施方案中，R4是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、异丁基、戊基基团部分、己基基团部分、环丙基、环丁基、环戊基、或环己基。在式(II)、(II-P)或(II-P-1)的一些实施方案中，R4是烷基。在式(II)、(II-P)或(II-P-1)的一些实施方案中，R4是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、异丁基、戊基基团部分、或己基基团部分。在式(II)、(II-P)或(II-P-1)的一些实施方案中，R4是正丙基。
在某些实施方案，
RG-L2-(L3)0-1-是
Figure BDA0002666727490001141
Figure BDA0002666727490001142
是芳基或杂芳基；RG是活性基团，如下所定义；SP1和SP2在每种情况下，各自独立地不存在，或各自独立地为间隔基团残基，和其中SP1包含三价连接体；AA1是包含氨基酸残基的三价连接体；AA2是肽残基；PEG是聚乙二醇残基；其中所述
Figure BDA0002666727490001143
表示所示化学基团通过其与所述通式中相邻基团连接的原子，CD在每种情况下，分别独立地不存在，或分别独立地为环糊精残基，其中存在至少一个CD，下标q是选自0至5(包括0和5)的整数。在这些实施例中，下标q是0、1、2、3、4、或5。在一些实施方案，下标q是0。在一些实施方案，下标q是1。在一些实施方案，下标q是2。在一些实施方案，下标q是3。在一些实施方案，下标q是4。在一些实施方案，下标q是5。在一些实施方案，AA1或AA2中的任一个在每种情况下分别独立地包含选自丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸或瓜氨酸的氨基酸、其衍生物、或其组合。在某些实施方案，AA1是选自丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸或瓜氨酸的氨基酸、其衍生物、或其组合。在某些实施方案，AA1是赖氨酸或赖氨酸的衍生物。在某些实施方案，AA1是赖氨酸。在某些实施方案，AA1是D-赖氨酸。在某些实施方案，AA1是L-赖氨酸。在某些实施方案，所述AA2是二肽残基、三肽残基、四肽残基、或五肽残基。在某些实施方案，所述AA2是二肽残基。在某些实施方案，所述AA2是缬氨酸-瓜氨酸。在某些实施方案，所述AA2是瓜氨酸-缬氨酸。在某些实施方案，所述AA2是缬氨酸-丙氨酸。在某些实施方案，所述AA2是丙氨酸-缬氨酸。在某些实施方案，所述AA2是缬氨酸-甘氨酸。在某些实施方案，所述AA2是甘氨酸-缬氨酸。在某些实施方案，所述AA2是三肽残基。在某些实施方案，所述AA2是谷氨酸-缬氨酸-瓜氨酸。在一些实施方案，所述AA2是谷氨酰胺-缬氨酸-瓜氨酸。在一些实施方案，所述AA2是赖氨酸-缬氨酸-丙氨酸。在一些实施方案，所述AA2是赖氨酸-缬氨酸-瓜氨酸。在一些实施方案，所述AA2是谷氨酸-缬氨酸-瓜氨酸。在一些实施方案，所述AA2是四肽残基。在一些实施方案，所述AA2是甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸。在一些实施方案，所述AA2是五肽残基。在一些实施方案，所述AA2是甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸。在一些实施方案，SP1在每种情况下，分别独立地选自由以下组成的组：C1-6亚烷基、-NH-、-C(O)-、(-CH2-CH2-O)e、-NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-、-C(O)-(CH2)u-C(O)-、-C(O)-NH-(CH2)v-、和其组合，其中下标e选自0至4(包括0和4)的整数，下标u选自1至8(包括1和8)的整数，和下标v选自1至8(包括1和8)的整数。在一些实施方案，SP2在每种情况下，分别独立地选自由以下组成的组：C1-6亚烷基、-NH-、-C(O)-、(-CH2-CH2-O)e、-NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-、-C(O)-(CH2)u-C(O)-、-C(O)-NH-(CH2)v-、和其组合，其中下标e选自0至4(包括0和4)的整数，下标u选自1至8(包括1和8)的整数，和下标v选自1至8(包括1和8)的整数。
在某些实施方案，本发明提供了具有式(IIIc-R)所示结构的化合物：
Figure BDA0002666727490001151
RG是活性基团；
CD是环糊精；
SP1是间隔基团；
AA4是氨基酸残基；
AA5是二肽残基；
PEG是聚乙二醇；
q是选自0至5(包括0和5)的整数；
x是选自0至30(包括0和30)的整数；
R4具有本发明所述定义；
SP1和SP2在每种情况下，各自独立地不存在，或各自独立地为间隔基团残基，和其中SP1包含三价连接体；AA4是包含氨基酸残基的三价连接体；AA5是二肽残基；PEG是聚乙二醇残基；其中所述
Figure BDA0002666727490001152
表示所示化学基团通过其与所述通式中相邻基团连接的原子，CD在每种情况下，分别独立地不存在，或分别独立地为环糊精残基，其中存在至少一个CD，下标q是选自0至5(包括0和5)的整数。在这些实施例中，下标q是0、1、2、3、4、或5。在一些实施方案，下标q是0。在一些实施方案，下标q是1。在一些实施方案，下标q是2。在一些实施方案，下标q是3。在一些实施方案，下标q是4。在一些实施方案，下标q是5。在一些实施方案，AA4或AA5中的任一个在每种情况下分别独立地包含选自丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸或瓜氨酸的氨基酸、其衍生物、或其组合。在某些实施方案，AA4是选自丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸或瓜氨酸的氨基酸、其衍生物、或其组合。在某些实施方案，AA4是赖氨酸。在某些实施方案，AA4是赖氨酸或赖氨酸的衍生物。在某些实施方案，所述AA5是缬氨酸-瓜氨酸。在一些实施方案，所述AA5是瓜氨酸-缬氨酸。在一些实施方案，所述AA5是缬氨酸-丙氨酸。在一些实施方案，所述AA5是丙氨酸-缬氨酸。在一些实施方案，所述AA5是缬氨酸-甘氨酸。在一些实施方案，所述AA5是甘氨酸-缬氨酸。在一些实施方案，所述AA5是谷氨酸-缬氨酸-瓜氨酸。在一些实施方案，所述AA5是谷氨酰胺-缬氨酸-瓜氨酸。在一些实施方案，所述AA5是赖氨酸-缬氨酸-丙氨酸。在一些实施方案，所述AA5是赖氨酸-缬氨酸-瓜氨酸。在一些实施方案，所述AA5是谷氨酸-缬氨酸-瓜氨酸。在一些实施方案，SP1在每种情况下，分别独立地选自由以下组成的组：C1-6亚烷基、-NH-、-C(O)-、(-CH2-CH2-O)e、-NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-、-C(O)-(CH2)u-C(O)-、-C(O)-NH-(CH2)v-、和其组合，其中下标e选自0至4(包括0和4)的整数，下标u选自1至8(包括1和8)的整数，和下标v选自1至8(包括1和8)的整数。在一些实施方案，SP2在每种情况下，分别独立地选自由以下组成的组：C1-6亚烷基、-NH-、-C(O)-、(-CH2-CH2-O)e、-NH-CH2-CH2-(-O-CH2-CH2)e-C(O)-、-C(O)-(CH2)u-C(O)-、-C(O)-NH-(CH2)v-、和其组合，其中下标e选自0至4(包括0和4)的整数，下标u选自1至8(包括1和8)的整数，和下标v选自1至8(包括1和8)的整数。活性基团(RG)是与抗体、经修饰的抗体或其抗原结合片段的活性(反应性)部分反应的官能团或基团部分。在某些实施方案，所述“活性基团”是与抗体或其抗原结合片段的半胱氨酸或赖氨酸残基反应的官能团或基团部分(例如，马来酰亚胺或NHS酯)。在某些实施方案，所述“活性基团”是能够进行点击化学反应的官能团或基团部分。在所述点击化学反应的一些实施方案中，所述活性基团是能够与叠氮化物进行1,3-环加成反应的炔烃。此类合适的活性基团包括但不限于应变炔烃类，例如适用于应变促进的炔-叠氮化物环加成(SPAAC)的那些，环炔烃类例如环辛炔类，苯并环化的炔烃类，以及在没有铜催化剂的情况下能够与叠氮化物进行1,3-环加成反应的炔烃类。合适的炔烃类还包括但不限于DIBAC，DIBO，BARAC，取代的炔烃类例如氟化炔烃类，氮杂-环炔烃类，BCN，及其衍生物。包含此类活性基团的连接体-有效负载可用于偶联已用叠氮基官能化的抗体。此类官能化抗体包括用叠氮基-聚乙二醇基团官能化的抗体。在某些实施方案，此类官能化抗体通过在酶转谷氨酰胺酶存在下，使包含至少一个谷氨酰胺残基(例如重链Q295)的抗体与式H2N-LL-N3所示化合物反应而得到，其中LL是，例如，二价聚乙二醇基团，或其中LL是包括聚乙二醇和环糊精基团部分的三价基团。在一些实施方案，所述活性基团是炔烃，例如
Figure BDA0002666727490001161
其可通过点击化学与叠氮化物(例如
Figure BDA0002666727490001162
)反应，以形成点击化学产物，例如
Figure BDA0002666727490001163
其区域异构体、或其混合物。在一些实施方案，所述活性基团是炔烃，例如
Figure BDA0002666727490001171
其可通过点击化学与叠氮化物(例如
Figure BDA0002666727490001172
)反应，以形成点击化学产物，例如
Figure BDA0002666727490001173
在一些实施方案，所述活性基团是炔烃，例如
Figure BDA0002666727490001174
其可通过点击化学与叠氮化物(例如
Figure BDA0002666727490001175
)反应，以形成点击化学产物，例如
Figure BDA0002666727490001176
其区域异构体、或其混合物。在一些实施方案，所述活性基团是官能团，例如
Figure BDA0002666727490001177
其与抗体或其抗原结合片段上的半胱氨酸残基反应，与其形成键，例如
Figure BDA0002666727490001178
其中Ab是指抗体或其抗原结合片段，S是指半胱氨酸残基上的S原子，所述官能团通过此半胱氨酸残基上的S原子与Ab结合。在一些实施方案，所述活性基团是官能团，例如
Figure BDA0002666727490001179
其与抗体或其抗原结合片段上的赖氨酸残基反应，与其形成键，例如
Figure BDA00026667274900011710
其中Ab是指抗体或其抗原结合片段，-NH-是指赖氨酸残基的末端，所述官能团通过此赖氨酸残基的末端与Ab结合。在一些实施方案，所述官能团通过赖氨酸残基上的此N原子在本发明中表示为键上方的字母N，例如
Figure BDA00026667274900011711
在一些实施方案，RG-L2-(L3)0-1-是式(LA)所示的一价基团部分；
RG-(SP1)q-(A)z-(NRa)s-(B)t-(CH2)u-(O)v-(SP2)w-
(LA)；
其中，RG是活性基团；
A是氨基酸或肽；
Ra是H或烷基；
B是芳基、杂芳基、或杂环烷基，其中芳基、杂芳基、或杂环烷基任选地被烷基、-OH、或-N-RaRb取代；
SP1和SP2分别独立地为间隔基团；和q、z、s、t、u、v和w在每种情况下，分别独立地为0或1。
在一些实施方案，RG-L2-(L3)0-1-是RG-(SP1)q-(A)z-。在一些实施方案，RG-L2-(L3)0-1-是RG-(SP1)q-(A)2-。在一些实施方案，RG-L2-(L3)0-1-是式(LA1)所示的基团部分：
Figure BDA0002666727490001181
其中RAA1和RAA2各自独立地为氨基酸侧链。在式LA1的一些实施方案中，SP1是二价聚乙二醇基团，和RG是包含能够与叠氮化物进行1,3-环加成反应的炔烃的基团。
在一些实施方案，RG-L2-(L3)0-1-具有以下结构：
RG-(SP1)q-Z1-Z2-Z3 0-1-
其中：
RG、SP1和q均具有本发明所述定义；
Z1是聚乙二醇基团或己酰基基团；
Z2是二肽；和
Z3是PAB基团。
在一些其他实施方案，-L1-L2-(L3)0-1-是式(LB)所示的三价基团部分；
-L1-(SP1)q-(A)z-(NRa)s-(B)t-(CH2)u-(O)v-(SP2)w-
(LB)；
其中L1具有本发明所述定义；
A是三肽或四肽，其中所述三肽或四肽中的至少一个氨基酸直接或间接连接至环糊精基团部分；
Ra是H或烷基；
B是芳基、杂芳基、或杂环烷基，其中芳基、杂芳基、或杂环烷基任选地被烷基、-OH、或-NRaRb取代；SP1和SP2分别独立地为间隔基团；和在式LB中，q、z、s、t、u、v和w在每种情况下，分别独立地为0或1。
在一些实施方案，所述环糊精(CD)直接连接至氨基酸残基，例如赖氨酸氨基酸残基。这意味着CD与赖氨酸氨基酸共价连接体相距一个键位置。在所述这些实施方案的一些中，所述共价连接体还直接连接至有效负载基团部分。这意味着所述共价连接体与有效负载(例如但不限于本发明所述的类固醇有效负载)相距一个键位置。在所述这些实施方案的一些中，所述共价连接体还直接连接至CD基团部分。这意味着所述共价连接体与CD(例如本发明所述的CD)相距一个键位置。在所述这些实施方案的一些中，所述共价连接体是赖氨酸氨基酸或其衍生物。
在一些实施方案，所述CD间接连接至连接基团(例如L、-L2-(L3)0-1-和-L1-L2-(L3)0-1)中的共价连接体上。这意味着所述CD与所述共价连接体相距多于一个键位置。这还意味着所述CD通过另一基团部分与所述共价连接体连接。例如，所述CD可以与马来酰亚胺基团连接，所述马来酰亚胺基团与聚乙二醇基团连接，所述聚乙二醇基团与所述共价连接体连接。在这些实施方案的一些中，所述共价连接体还间接连接至有效负载基团部分。这意味着所述共价连接体与有效负载(例如但不限于，本发明所述的类固醇有效负载)相距多于一个键位置。这还意味着所述共价连接体通过另一基团部分与所述有效负载连接。例如，所述共价连接体可以与二肽连接，例如但不限于Val-Ala或Val-Cit，其可与对氨基苯甲酰基连接，所述对氨基苯甲酰基可与所述有效负载连接。在这些实施方案的一些中，所述共价连接体还间接与环糊精基团部分连接。这意味着所述共价连接体与环糊精(例如本发明所述的环糊精)相距多于一个键位置。这还意味着所述共价连接体通过另一基团部分与所述环糊精连接。例如，所述共价连接体可与聚乙二醇基团连接，所述聚乙二醇基团可与活性基团连接，所述活性基团可与所述环糊精连接。在这些实施方案的一些中，所述共价连接体是赖氨酸氨基酸或其衍生物。
在一些实施方案，-L1-L2-(L3)0-1-是-L1-(SP1)q-(A)z-。在一些实施方案，-L1-L2-(L3)0-1-是-L1-(SP1)q-(A)2-。在一些实施方案，-L1-L2-(L3)0-1-是式(LB1)所示的基团部分：
Figure BDA0002666727490001191
其中RAA1和RAA2各自独立地为氨基酸侧链。RAA3是直接或间接与环糊精基团部分连接的氨基酸侧链。在式LB1的一些实施方案中，SP1是二价聚乙二醇基团，和L1是炔与叠氮化物之间反应的1,3-环加成反应产物。
在一些实施方案，A是
Figure BDA0002666727490001192
在所述这些实施方案的一些中，RAA1是氨基酸侧链，RAA2是氨基酸侧链，和RAA3是直接或间接与环糊精基团部分连接的氨基酸侧链。
在一些实施方案，A是
Figure BDA0002666727490001193
其中
Figure BDA0002666727490001194
表示直接或间接与环糊精基团部分连接的键。
在一些实施方案，包括前述任一实施方案，CD在每种情况下，分别独立地选自
Figure BDA0002666727490001201
Figure BDA0002666727490001211
在一些实施方案，所述CD是
Figure BDA0002666727490001212
在一些实施方案，所述CD是
Figure BDA0002666727490001221
在一些实施方案，所述CD是
Figure BDA0002666727490001222
在一些实施方案，所述CD是
Figure BDA0002666727490001231
在一些实施方案，所述CD是
Figure BDA0002666727490001232
在一些实施方案，所述CD是
Figure BDA0002666727490001241
在一些实施方案，A是
Figure BDA0002666727490001242
在一些实施方案，本发明的RG选自点击化学活性基团。
在一些其他实施例，本发明的RG选自与抗体或其抗原结合片段上的半胱氨酸残基或赖氨酸残基反应的基团。
在一些实施方案，RG是
Figure BDA0002666727490001251
(其中所述-OCH2C(O)-包含在-L2-中)，
Figure BDA0002666727490001252
Figure BDA0002666727490001253
在一些实施方案，RG是
Figure BDA0002666727490001254
在其他实施例，RG是
Figure BDA0002666727490001255
在一些其他实施例，RG是
Figure BDA0002666727490001256
在一些实施方案，RG是
Figure BDA0002666727490001257
在其他实施例，RG是
Figure BDA0002666727490001258
在其他实施例，RG是
Figure BDA0002666727490001259
其中所述-OCH2C(O)-包含在-L2-中。
在一些实施方案，SP1包含在-L2-中。在一些实施方案，SP1可选自：
Figure BDA00026667274900012510
在一些实施方案，SP1是
Figure BDA00026667274900012511
在一些其他实施例，SP1是
Figure BDA00026667274900012512
在其他实施例，SP1是
Figure BDA00026667274900012513
在其他实施例，SP1是
Figure BDA00026667274900012514
在一些其他实施例，SP1是
Figure BDA00026667274900012515
在以上任何实施例中，下标a、b和c在每种情况下，分别独立地为选自1至20(包括1和20)的整数。
在一些实施方案，SP1包含在-L2-中。在任一所述化合物中，SP1是：
Figure BDA0002666727490001261
Figure BDA0002666727490001262
在一些实施方案，SP1包含在-L2-中。在一些实施方案，SP1是
Figure BDA0002666727490001263
在一些实施方案，SP1是
Figure BDA0002666727490001264
在一些实施方案，SP1是
Figure BDA0002666727490001265
在一些实施方案，SP1是
Figure BDA0002666727490001266
在一些实施方案，SP1是
Figure BDA0002666727490001267
在一些实施方案，SP1是
Figure BDA0002666727490001268
在一些实施方案，SP1是
Figure BDA0002666727490001269
在一些实施方案，SP1是
Figure BDA00026667274900012610
在一些实施方案，SP1是
Figure BDA00026667274900012611
在一些实施方案，SP1是
Figure BDA00026667274900012612
在一些实施方案，SP1是
Figure BDA00026667274900012613
在一些实施方案，SP1包含在-L2-中。在一些实施方案，SP1是
Figure BDA0002666727490001271
在一些实施方案，SP1是
Figure BDA0002666727490001272
在一些实施方案，SP1是
Figure BDA0002666727490001273
在一些实施方案，SP1是
Figure BDA0002666727490001274
在一些实施方案，SP1是
Figure BDA0002666727490001275
在一些实施方案，SP1是
Figure BDA0002666727490001276
在一些实施方案，RG-SP1(其中SP1包含在-L2-中)可选自由以下组成的组：
Figure BDA0002666727490001277
Figure BDA0002666727490001278
其中b、c和d在每种情况下，分别独立地为选自1至20(包括1和20)的整数。在所述这些实施方案的一些中，下标b、c和d在每种情况下，分别独立地为选自1至6(包括1和6)的整数。
在一些实施方案，RG-SP1-是
Figure BDA0002666727490001279
在一些实施方案，RG-SP1是
Figure BDA00026667274900012710
在一些实施方案，RG-SP1是
Figure BDA0002666727490001281
在一些实施方案，RG-SP1是
Figure BDA0002666727490001282
在一些实施方案，RG-SP1是
Figure BDA0002666727490001283
在一些实施方案，RG-SP1是
Figure BDA0002666727490001284
在一些实施方案，RG-SP1是
Figure BDA0002666727490001285
在一些实施方案，RG-SP1是
Figure BDA0002666727490001286
在任一所述化合物中，RG-SP1是：
Figure BDA0002666727490001287
Figure BDA0002666727490001291
在一些实施方案，A是选自缬氨酸-瓜氨酸，瓜氨酸-缬氨酸，赖氨酸-苯丙氨酸，苯丙氨酸-赖氨酸，缬氨酸-天冬酰胺，天冬酰胺-缬氨酸，苏氨酸-天冬酰胺，天冬酰胺-苏氨酸，丝氨酸-天冬酰胺，天冬酰胺-丝氨酸，苯丙氨酸-天冬酰胺，天冬酰胺-苯丙氨酸，亮氨酸-天冬酰胺，天冬酰胺-亮氨酸，异亮氨酸-天冬酰胺，天冬酰胺-异亮氨酸，甘氨酸-天冬酰胺，天冬酰胺-甘氨酸，谷氨酸-天冬酰胺，天冬酰胺-谷氨酸，瓜氨酸-天冬酰胺，天冬酰胺-瓜氨酸，丙氨酸-天冬酰胺，或天冬酰胺-丙氨酸的肽。
在一些实施方案，A是缬氨酸-瓜氨酸，或瓜氨酸-缬氨酸。
在一些实施方案，A是缬氨酸-丙氨酸，或丙氨酸-缬氨酸。
在一些实施方案，A是谷氨酸-缬氨酸-瓜氨酸，或瓜氨酸-缬氨酸-谷氨酸。
在一些实施方案，A是缬氨酸。
在一些实施方案，A是丙氨酸。
在一些实施方案，A是瓜氨酸。
在一些实施方案，A是
Figure BDA0002666727490001292
在所述这些实施方案的一些中，RAA1是氨基酸侧链，和其中RAA2是氨基酸侧链。
在一些实施方案，A是
Figure BDA0002666727490001293
在一些实施方案，A是
Figure BDA0002666727490001301
在一些实施方案，Ra是H。
在一些实施方案，Ra是烷基。
在一些实施方案，Ra是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、或戊基。
在一些实施方案，B是芳基。
在一些实施方案，B是苯基。
在一些实施方案，B是苯基或吡啶基。
在本发明的一些实施方案中，B是：
Figure BDA0002666727490001302
在这些实施例中，R10是烷基、烯基、炔基、烷氧基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、杂芳基、杂环烷基、羟基、氰基、硝基、
Figure BDA0002666727490001303
NRaRb、或叠氮基。在这些实施例中，下标p和m在每种情况下，分别独立地为选自0至4(包括0和4)的整数。在本发明的一些实施方案中，B是：
Figure BDA0002666727490001304
在这些实施例中，p是0、1、2、3或4。在所述这些实施方案的一些中，R1每次出现时，分别独立地为烷基、烷氧基、卤代烷基、或卤素。在一些实施方案，R1是烷基。在一些实施方案，R1是烷氧基。在一些实施方案，R1是卤代烷基。在一些实施方案，R1是卤素。
在式(LA)的一些实施方案中，所述-(NRa)s-(B)t-(CH2)u-(O)v-(SP2)w是：
Figure BDA0002666727490001305
本发明还提供了布地奈德、布地奈德前药、布地奈德类似物或衍生物(包括氟化类似物及衍生物)、或布地奈德类似物或衍生物(包括氟化类似物及衍生物)的前药的连接体-有效负载。在一些实施方案，本发明提供了具有以下结构的连接体-有效负载：
Figure BDA0002666727490001311
其中RG、R4、L2、L3和SP均具有本发明所述定义。
E.药物组合物和治疗方法
本发明包括治疗疾病、病况或病症(例如炎性疾病和自身免疫性病症)，或控制其症状的方法，包括施用治疗有效量的本发明公开的一种或多种化合物。包括与糖皮质激素受体、糖皮质激素结合和/或糖皮质激素受体信号传导相关的任何疾病、病症或病况。此类方法包括向患者施用本发明所述的类固醇有效负载或其蛋白质偶联物。因此，包括在本发明中的是治疗与糖皮质激素受体相关的疾病、病症或病况的方法，包括向患有所述疾病、病症或病况的患者施用式(I)、式I-P、式I-P-1、式(III-P)、式III-P-1、式(3000)、或式(III)的化合物。
本发明包括预防某些疾病或病症的方法，所述方法包括施用治疗有效量的本发明公开的一种或多种化合物(即，预防用途)。实例包括但不限于预防CD3双特异性细胞因子释放综合征，以及过继性细胞疗法例如CART细胞，全身性IL-2给药，移植物抗宿主病，以及术后恶心和呕吐。实例还包括但不限于治疗性抗体，例如阿仑单抗(alemtuzumab)、莫罗莫那(muromonab)、利妥昔单抗(rituximab)、托妥珠单抗(tosituzumab)、或激动性Ab类(其中免疫刺激可能是预期作用机制的一部分)。
在一些实施方案，所述疾病、病症或病况是过敏状态，包括但不限于哮喘，特应性皮炎，接触性皮炎，药物过敏反应，过敏性鼻炎，常年性或季节性过敏性鼻炎，和血清病；皮肤病，包括但不限于皮肤瘙痒，脂溢性皮炎，神经性皮炎，湿疹，大疱性疱疹性皮炎，剥脱性红皮病，蕈样真菌病，天疱疮，和多形性严重红斑(Stevens-Johnson综合征)；内分泌失调，包括但不限于原发性或继发性肾上腺皮质功能不全，先天性肾上腺增生，与癌症相关的高钙血症，和非化脓性甲状腺炎；胃肠道疾病；血液系统疾病，包括但不限于获得性(自身免疫性)溶血性贫血，先天性(红系)发育不良性贫血(Diamond-Blackfan贫血)，成人特发性血小板减少性紫癜，纯红细胞再生障碍，和继发性血小板减少症；旋毛虫病；结核性脑膜炎伴蛛网膜下腔阻滞或即将阻滞；肿瘤性疾病，包括但不限于白血病和淋巴瘤；神经系统疾病，包括但不限于多发性硬化症的急性加重，与原发性或转移性脑肿瘤相关的脑水肿，开颅手术，或头部损伤；眼科疾病，包括但不限于交感性眼炎，颞动脉炎，葡萄膜炎，干眼病，和对局部皮质类固醇无反应的眼部炎症；肾脏疾病，包括但不限于诱发特发性肾病综合征或红斑狼疮引起的利尿或蛋白尿缓解；呼吸系统疾病，包括但不限于铍中毒，与适当的抗结核化疗同时使用时的暴发性或播散性肺结核，特发性嗜酸性粒细胞性肺炎，症状性结节病；和风湿性疾病，包括但不限于用于急性痛风性关节炎，急性风湿性心脏炎，强直性脊柱炎，银屑病性关节炎，类风湿性关节炎，包括青少年类风湿性关节炎的短期给药的辅助治疗(使患者渡过急性发作或恶化)，以及用于皮肌炎，多肌炎，口腔炎和系统性红斑狼疮的治疗。
在一些实施方案，本发明提供了用于治疗疾病、病症或病况的方法，所述疾病、病症或病况选自自身免疫性疾病，过敏(变态反应)，关节炎，哮喘，呼吸障碍，血液疾病，癌症，胶原病，结缔组织疾病，皮肤疾病，眼病，内分泌问题，免疫疾病，炎性疾病，肠道疾病，胃肠道疾病，神经疾病，器官移植病症，类风湿性疾病，皮肤病，肿胀病症，伤口愈合病症，及其组合，包括施用本发明所述的类固醇有效负载或其偶联物。
在一些实施方案，所述自身免疫性疾病选自多发性硬化症，自身免疫性肝炎，带状疱疹，系统性红斑狼疮(即狼疮)，重症肌无力，杜氏肌营养不良，和结节病。在一些实施方案，所述呼吸障碍选自哮喘，慢性呼吸道疾病，慢性阻塞性肺病，支气管炎症，和急性支气管炎。在一些实施方案，所述癌症选自白血病，淋巴细胞白血病，急性淋巴细胞白血病，慢性淋巴细胞白血病，霍奇金淋巴瘤，非霍奇金淋巴瘤(NHL)，和多发性骨髓瘤。在一些实施方案，所述胶原疾病是系统性红斑狼疮。在一些实施方案，所述眼病是角膜炎。在一些实施方案，所述内分泌问题选自爱迪生氏病(Addison'sDisease)，肾上腺功能不全，肾上腺皮质功能不全，肾上腺皮质和先天性肾上腺增生。在一些实施方案，所述炎性疾病选自白内障术后炎症，关节炎症，免疫性炎症，肌腱炎症，滑囊炎，上髁炎，克罗恩病(Crohn'sdisease)，炎性肠病，脂性肺炎甲状腺炎，荨麻疹，心包炎，肾病综合征，和葡萄膜炎。在一些实施方案，所述肠道疾病选自胶原性结肠炎，溃疡性结肠炎，克罗恩病和炎性肠病。在一些实施方案，所述类风湿性疾病选自类风湿性关节炎，风湿性多肌痛，银屑病性关节炎，强直性脊柱炎，和系统性红斑狼疮。在一些实施方案，所述皮肤病选自牛皮癣，湿疹，和接触毒漆引起的皮疹(poisonivy)。在一些实施方案，所述神经疾病是慢性炎性脱髓鞘性多发性神经根神经病。
在一些实施方案，向患者施用本发明所述的化合物以治疗急性炎症性事件，包括但不限于休克，脑水肿和移植物抗宿主病。在一些实施方案，施用本发明所述的化合物以治疗淋巴溶解作用，包括但不限于与血液恶性肿瘤相关的那些，例如白血病、淋巴瘤和骨髓瘤。
在一些实施方案，本发明提供了用于减轻有此需要的受试者的炎症的方法，其包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的本发明所述的类固醇或其偶联物。在一些实施方案，本发明提供了用于调节有此需要的受试者的免疫系统的方法，其包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的本发明所述的类固醇或其偶联物。在一些实施方案，本发明提供了用于调节有此需要的受试者的皮质醇水平的方法，其包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的本发明所述的类固醇或其偶联物。在一些实施方案，本发明提供了减少有此需要的受试者中淋巴细胞迁移的方法，其包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的本发明所述的类固醇或其偶联物。在一些实施方案，本发明提供了治疗由癌症引起的高钙血症，梅尼埃病(Meniere's disease)，偏头痛，丛集性头痛，严重口疮性溃疡，喉炎，严重结核病，对梅毒的Herxheimer反应，失代偿性心力衰竭，过敏性鼻炎或鼻息肉的方法，其包括向有此需要的受试者施用本发明所述的类固醇有效负载或其偶联物。在一些实施方案，本发明公开的化合物可用于治疗炎性肠病，克罗恩病或溃疡性结肠炎。在一些实施方案，所述疾病、病症或病况是慢性炎性疾病，包括但不限于哮喘，皮肤感染和眼部感染。在一些实施方案，本发明所述的化合物用于进行器官移植的患者的免疫抑制。
在一些实施方案，将本发明所述的类固醇有效负载及其偶联物施用于患者以治疗与GR信号传导相关的神经病症，包括但不限于精神疾病例如精神分裂症，药物成瘾，创伤后应激障碍(PTSD)，情绪障碍，药物滥用，压力和焦虑。
在一些实施方案，将本发明所述的类固醇有效负载及其偶联物施用于患者以治疗视觉系统疾病，包括但不限于眼部炎症(例如，结膜炎、角膜炎、葡萄膜炎)，黄斑水肿和黄斑变性。在一些实施方案，将本发明所述的类固醇有效负载及其偶联物施用于患者以治疗心血管疾病。在一些实施方案，将本发明所述的类固醇有效负载及其偶联物施用于患者以治疗葡萄糖和/或肝代谢紊乱。在一些实施方案，将本发明所述的类固醇有效负载及其偶联物施用于患者以治疗肌肉骨骼系统疾病。在一些实施方案，将本发明所述的类固醇有效负载及其偶联物施用于患者以治疗皮肤炎性病症，例如湿疹和牛皮癣。
本发明所述的蛋白质偶联物提供了将其类固醇有效负载靶向递送至特定细胞或器官系统的方法，从而减少或防止了由于施用游离未偶联的类固醇有效负载而引起的副作用。要减少或预防的此类潜在副作用的实例包括在批准的地塞米松
Figure BDA0002666727490001331
药物标签中列出的那些副作用，其全部内容通过引用并入本发明。在一些实施方案，要减少或预防的副作用选自血压升高；钠潴留；水/体液潴留(水肿、血管性水肿、肺水肿)；钾排泄增加；可逆性下丘脑-垂体肾上腺(HPA)轴抑制；停药后潜在的皮质类固醇不足；对感染的易感性；全身性真菌感染加重；小儿和成人患者水痘的严重程度恶化；小儿和成人患者的麻疹严重程度恶化；后囊下白内障；可能损害视神经的青光眼；由于细菌、真菌或病毒引起的继发性眼部感染的建立加强；视神经炎的新发作增加；卡波济(Kaposi’s)肉瘤；药物引起的继发性肾上腺皮质功能不全；当存在活动性或潜伏性消化性溃疡、憩室炎、新鲜肠吻合术和非特异性溃疡性结肠炎时，发生穿孔的风险增加；胃肠道穿孔后的腹膜刺激；骨形成减少；骨吸收增加；抑制成骨细胞功能；抑制小儿患者的骨生长；任何年龄段的骨质疏松症发展；急性肌病(可能累及眼和呼吸肌，并可能导致四肢瘫痪)；肌酐激酶升高；精神错乱，包括从欣快感、失眠、情绪波动、性格改变和严重的抑郁症到坦率的精神病表现；现有情绪不稳定或精神病倾向加重；眼内压升高；心动过缓；心脏停搏；心律不齐；心脏扩大；循环系统崩溃；充血性心力衰竭；脂肪栓塞；高血压；早产儿肥厚型心肌病；近期心肌梗塞后心肌破裂；昏厥；心动过速；血栓栓塞；血栓性静脉炎；血管炎；粉刺；过敏性皮炎；鳞状皮肤干燥症；瘀斑和瘀点；红斑；创面愈合不良；出汗增加；皮疹；条纹；抑制对皮肤测试的反应；脆弱的皮肤；稀疏头皮头发；荨麻疹；碳水化合物和葡萄糖耐量降低；库欣状态发展；高血糖症；糖尿；多毛症；毛过多；糖尿病患者对胰岛素或口服降糖药的需求增加(胰岛素抵抗)；潜在糖尿病表现；月经不调；继发性肾上腺皮质和垂体无反应(特别是在压力时期；如在创伤、手术或疾病期)；抑制小儿患者的生长；易感患者的充血性心力衰竭；体液潴留；低钾性碱中毒；钾流失；钠潴留；腹胀；血清肝酶水平升高(通常在停药后可逆)；肝肿大；食欲增加；恶心；胰腺炎；伴有可能穿孔和出血的消化性溃疡；小肠和大肠穿孔(特别是在炎症性肠病患者中)；溃疡性食管炎；蛋白质分解代谢导致负氮平衡；股骨头和肱骨头无菌性坏死；肌肉质量下降；肌无力；骨质疏松症；长骨病理性骨折；类固醇肌病；肌腱破裂；椎体压缩性骨折；抽搐；抑郁症；情绪不稳定；欣快感；头痛；通常在停药后伴有乳头水肿(假性脑瘤)的颅内压升高；失眠；情绪波动；神经炎；神经病；感觉异常；性格改变；精神障碍；眩晕；眼球突出；青光眼；眼内压升高；后囊下白内障；异常脂肪沉积；对感染的抵抗力下降；打嗝；精子的能动性和数量增加或减少；不适；月亮脸；和体重增加；以及那些与药物-药物相互作用相关的副作用。在一些实施方案，要减少或预防的副作用是与药物-药物相互作用相关的副作用。在一些实施方案，要减少或预防的副作用与使用皮质类固醇与氨鲁米特的药物-药物相互作用有关，包括减少与以下这些药物相互作用的副作用以及对肾上腺的抑制作用：皮质类固醇类；两性霉素B注射剂和耗钾剂药物类，包括低钾血症、心脏增大和充血性心力衰竭的发展；抗生素类，包括皮质类固醇清除率明显下降；抗胆碱酯酶类，包括在重症肌无力患者中产生严重无力；口服抗凝药物类，包括抑制对华法林的反应；抗糖尿病药物类，包括增加血糖浓度；抗结核药物类，包括降低异烟肼的血清浓度；消胆胺，包括增加皮质类固醇的清除率；环孢素，包括增加环孢素和皮质类固醇的活性，以及惊厥的发生率；地塞米松抑制试验(DST)干扰，包括使用吲哚美辛治疗的患者的假阴性结果；洋地黄苷类，包括由于低钾血症导致心律不齐的风险增加；麻黄碱，包括增强皮质类固醇的代谢清除率，导致血液水平降低和生理活性降低；雌激素类，包括口服避孕药类，包括某些皮质类固醇的肝代谢降低以及其作用相关增加；肝酶诱导剂类、抑制剂类和底物类(诱导细胞色素P4503A4(CYP3A4)酶活性的药物，例如巴比妥类药物、苯妥英、卡马西平、利福平)，包括增强皮质类固醇的代谢；抑制CYP3A4的药物类(例如酮康唑、大环内酯类抗生素如红霉素)，包括可能增加皮质类固醇的血浆浓度；由CYP3A4代谢的药物类(例如茚地那韦、红霉素)，包括其清除率增加，导致血浆浓度降低；酮康唑，包括某些皮质类固醇的新陈代谢降低高达60％，从而导致皮质类固醇副作用的风险增加，以及抑制肾上腺皮质类固醇合成，可能导致皮质类固醇戒断期间肾上腺功能不全；非甾体类抗炎药(NSAIDS)，包括增加胃肠道副作用风险和增加水杨酸的清除率；苯妥英，包括增加或降低苯妥英水平，改变了癫痫发作的控制；皮肤测试剂类，包括抑制对皮肤测试的反应；沙利度胺，包括中毒性表皮坏死松解症；以及疫苗类，包括对类毒素和活疫苗或灭活疫苗的反应减弱，这归因于减毒活疫苗中所含抗体反应的抑制或某些生物体复制的增强。
因此，本发明提供了用于治疗与糖皮质激素受体相关的疾病、病症或病况的方法，包括向患有所述疾病、病症或病况的患者施用式(III)所示偶联物，其中减少了与施用所述偶联物的游离类固醇有效负载相关的副作用。此外，本发明提供了将式(III-P)、式III-P-1、式(3000)或式(III)所示化合物递送至细胞的方法，包括使所述细胞与式(III-P)、式III-P-1、式(3000)或式(III)所示化合物的蛋白质偶联物接触，其中所述蛋白质偶联物包含结合所述细胞表面抗原的抗体或其抗原结合片段。
本发明所述的化合物可以单独给药或与一种或多种附加治疗剂一同给药。所述一种或多种附加治疗剂可在本发明所述化合物给药之前、同时给药，或给药不久之后进行给药。本发明还包括药物组合物，其包含本发明所述的任一化合物与一种或多种附加治疗剂组合使用/联用，以及治疗方法，其包含将此类组合施用于有此需要的患者。
合适的附加治疗剂包括但不限于：第二糖皮质激素，自身免疫性治疗剂，激素，生物制剂，或单克隆抗体。合适的治疗剂还包括但不限于本发明所述化合物的任何药学上可接受的盐类、酸类或衍生物类。
本发明所述化合物还可与抗病毒剂类、抗生素类、镇痛剂类、皮质类固醇类、类固醇类、氧分子、抗氧化剂类、COX抑制剂类、心脏保护剂类、金属螯合剂类、IFN-γ、和/或NSAID类组合/联合施用和/或共同配制。
在本发明所述方法的一些实施方案中，多剂量的本发明化合物(或包含本发明所述化合物与本发明提及的任何附加治疗剂的组合的药物组合物)可在规定时间内对受试者进行给药。本发明此方面的方法包括向受试者顺序施用多剂量的本发明所述化合物。本发明使用的“依次施用/给药”是指每种剂量的所述化合物在不同的时间点，例如在以预定间隔(如几小时、几天、几周、或几个月)分开的不同天数，对受试者进行给药。本发明包括方法，其包含对患者依次施用单个初始剂量的本发明所述化合物，随后施用一个或多个二次剂量的所述化合物，以及任选地后续施用一个或多个三次剂量的所述化合物。
术语“初始剂量”，“二次剂量”，和“三次剂量”是指本发明所述化合物的给药时间顺序。因此，“初始剂量”是在治疗方案开始时给药的剂量(也称为“基线剂量”)；“二次剂量”是在所述初始剂量给药后施用的剂量；和“三次剂量”是在所述二次剂量给药后施用的剂量。所述初始、二次和三次剂量均可含有相同量的本发明化合物，但通常可在给药频率方面彼此不同。在某些实施方案，在治疗过程中，所述初始、二次和/或三次剂量中所含的化合物的量彼此变化(例如，酌情上调或下调)。在某些实施方案，在治疗方案开始时，将两种或更多种(例如，2、3、4或5种)剂量施用为“负荷剂量”，随后以较不频繁的方式施用后续剂量(例如“维持剂量”)。
在本发明所述的一些示例性实施方案中，每个二次和/或三次剂量在紧随前述剂量之后进行给药1至26周(例如，1、11/2、2、21/2、3、31/2、4、41/2、5、51/2、6、61/2、7、71/2、8、81/2、9、91/2、10、101/2、11、111/2、12、121/2、13、131/2、14、141/2、15、151/2、16、161/2、17、171/2、18、181/2、19、191/2、20、201/2、21、211/2、22、221/2、23、231/2、24、241/2、25、251/2、26、261/2、或更多)。本发明使用的短语“紧随前述剂量”是指在多次给药的序列中，在施用紧邻下一个剂量之前，对患者施用本发明化合物的剂量，而在所述给药序列中不存在干预剂量。
本发明此方面的方法可包含向患者施用任何数量的二次和/或三次剂量的本发明化合物。譬如，在某些实施方案，仅向患者施用单次二次剂量。在其他实施方案，向患者施用两次或更多次(例如，2、3、4、5、6、7、8次或更多次)二次剂量。同理，在某些实施方案，仅向患者施用单次的三次剂量。在其他实施方案，向患者施用两次或更多次(例如，2、3、4、5、6、7、8次或更多次)三次剂量。给药方案可在特定受试者的寿命期内无限期地进行，或者直至此种治疗不再是治疗需要或有利的。
在涉及多个二次剂量的实施方案中，每个二次剂量可以与其他二次剂量相同的频率施用/给药。譬如，每个二次剂量可在紧随前述剂量之后，对患者进行给药1至2周或1至2个月。同理，在涉及多个三次剂量的实施方案中，每个三次剂量可以与其他三次剂量相同的频率施用/给药。譬如，每个三次剂量可在紧随前述剂量之后，对患者进行给药2至12周。在本发明的某些实施方案中，向患者施用二次和/或三次剂量的频率可在治疗方案的过程中变化。也可根据临床检查后的个体患者的需要，由医师在治疗过程中调整给药频率。
本发明包括其中以第一频率(例如，每周一次，每两周一次，每三周一次，每月一次，每两个月一次等)向患者施用2至6次负荷剂量，然后以较不频繁的方式向患者施用两次或更多次维持剂量的给药方案。例如，根据本发明的此方面，如果以每月一次的频率施用负荷剂量，那么维持剂量可以每6周施用一次，每两个月施用一次，每三个月施用一次等。
本发明包括本发明所述化合物和/或偶联物如式(I)、式I-P、式I-P-1、式(III-P)、式III-P-1、式(3000)、和式(III)所示化合物的药物组合物，譬如，组合物包含本发明所述化合物、其盐、立体异构体、多晶型物，和药学上可接受的载体、稀释剂、和/或辅料。合适的载体、稀释剂和辅料的实例包括，但不限于：用于维持适当组合物pH值的缓冲剂类(例如，柠檬酸盐缓冲液、琥珀酸盐缓冲液、乙酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、乳酸盐缓冲液、草酸盐缓冲液等)，载体蛋白质类(如人血清白蛋白)，纳米粒子类，盐水，多元醇类(例如，海藻糖、蔗糖、木糖醇、山梨糖醇等)，表面活性剂类(例如，聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、聚氧乙烯酸酯(polyoxolate)等)，抗微生物剂类，和抗氧化剂类。
在一些实施方案，本发明提供了治疗疾病、病症或病况的方法，包括向患有所述病症的患者施用治疗有效量的式(I)、式I-P、式I-P-1、式(III-P)、式III-P-1、式(3000)、或式(III)的化合物或其药物组合物。
在一些实施方案，本发明提供了治疗疾病、病症或病况的方法，包括向患有所述病症的患者施用治疗有效量的本发明所述化合物或其药物组合物。
在一些实施方案，本发明提供了治疗选自由免疫性疾病、自身免疫性疾病、炎症、哮喘、或炎性肠病、克罗恩病、溃疡性结肠炎组成的组的疾病、病症或病况的方法。
在一些实施方案，本发明提供了通过靶向抗原(例如表达细胞表面的抗原)来治疗疾病、病症或病况的方法，其中类固醇给药可实现治疗益处，包括施用本发明所述的偶联物。在一些实施方案，所述抗原是AXL，BAFFR，BCMA，BCR-列表组分(BCR-list components)，BDCA2，BDCA4，BTLA，BTNL2BTNL3，BTNL8,BTNL9，C10orf54，CCR1，CCR3，CCR4，CCR5，CCR6，CCR7，CCR9，CCR10，CD11c，CD137，CD138，CD14，CD168，CD177，CD19，CD20，CD209，CD209L，CD22，CD226，CD248，CD25，CD27，CD274，CD276，CD28，CD30，CD300A，CD33，CD37，CD38，CD4，CD40，CD44，CD45，CD47，CD46，CD48，CD5，CD52，CD55，CD56，CD59，CD62E，CD68，CD69，CD70，CD74，CD79a，CD79b，CD8，CD80，CD86，CD90.2，CD96，CLEC12A，CLEC12B，CLEC7A，CLEC9A，CR1，CR3，CRTAM，CSF1R，CTLA4，CXCR1/2，CXCR4，CXCR5，DDR1，DDR2，DEC-205，DLL4，DR6，FAP，FCamR，FCMR，FcR's，Fire，GITR，HHLA2，HLAII类，HVEM，ICOSLG，IFNLR1，IL10R1，IL10R2，IL12R，IL13RA1，IL13RA2，IL15R，IL17RA，IL17RB，IL17RC，IL17RE，IL20R1，IL20R2，IL21R，IL22R1，IL22RA，IL23R，IL27R，IL29R，IL2Rg，IL31R，IL36R，IL3RA，IL4R，IL6R，IL5R，IL7R，IL9R，整合素(Integrins)，LAG3，LIFR，MAG/Siglec-4(唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-4)，，MMR，MSR1，NCR3LG1，NKG2D，NKp30，NKp46，PDCD1，PROKR1，PVR，PVRIG，PVRL2，PVRL3，RELT，SIGIRR，Siglec-1(唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-1)，Siglec-10，Siglec-5，Siglec-6，Siglec-7，Siglec-8，Siglec-9，SIRPA，SLAMF7，TACI，TCR-列表组分/assoc(TCR-list components/assoc)，PTCRA，TCRb，CD3z，CD3，TEK，TGFBR1，TGFBR2，TGFBR3，TIGIT，TLR2，TLR4，TROY，TSLPR，TYRO，VLDLR，VSIG4，或VTCN1。在一些实施方案，所述抗原是IL2R-γ。
在一些实施方案，本发明提供了用于治疗选自免疫性疾病、自身免疫性疾病、炎性疾病、皮肤病，或胃肠道疾病的疾病、病症或病况的方法。
在一些实施方案，所述疾病是克罗恩病、溃疡性结肠炎、库欣综合征(Cushing'ssyndrome)、肾上腺皮质功能不全、或先天性肾上腺皮质增生症。
在一些实施方案，所述疾病是炎症、哮喘或炎性肠病。
在一些实施方案，所述疾病是选自多发性硬化症、类风湿性关节炎、炎性肠病、溃疡性结肠炎、牛皮癣、或湿疹的自身免疫性疾病。
在一些实施方案，本发明提供了用于减轻或改善化学疗法的副作用的方法，其中所述方法包括向患有所述病症的患者施用治疗有效量的本发明所述的化合物或组合物。
在一些实施方案，本发明提供了用于减轻或改善免疫抑制疗法的副作用的方法，其中所述方法包括向患有所述病症的患者施用治疗有效量的本发明所述的化合物或组合物。
在一些实施方案，本发明提供了用于治疗癌症的方法，其中所述方法包括向患有所述病症的患者施用治疗有效量的本发明所述的化合物或组合物。在一些实施方案，所述癌症选自急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、或多发性骨髓瘤，以及其他。
F.实施例
通过以下非限制性实施例来说明某些实施方案。
除非另有明确说明，否则试剂和溶剂均得自商业来源，例如国药集团化学试剂有限公司(Sinopharm Chemical ReagentCo.(SCRC))、Sigma-Aldrich、Alfa或其他供应商。
在Bruker AVIII 400或Bruker AVIII500上记录1H NMR和其他NMR光谱。用Nuts软件或MestReNova软件处理数据，测定内标四甲基硅烷低磁场的质子位移百万分率(ppm)。
HPLC-MS测定在Agilent1200HPLC/6100SQ系统上运行，使用以下条件：
用于HPLC-MS测定的方法A包括作为流动相：A：水(0.01％三氟乙酸TFA)和B：乙腈(0.01％TFA)。梯度相为5％的B，其在15分钟(min)的时间段内以1.0mL/min的流速增加至95％的B。使用的色谱柱是SunFireC18，4.6x50mm，3.5μm。柱温为50℃。检测器包括模数转换器ELSD(蒸发光散射检测器，下文称为“ADCELSD”)，DAD(二极管阵列检测器，214nm和254nm)和电喷雾电离-大气压电离(ES-API)。
用于HPLC-MS测定的方法B包括作为流动相：A：水(10mMNH4HCO3)和B：乙腈。梯度相为5％的B，其在15分钟(min)的时间段内以1.0mL/min的流速增加至95％的B。使用的色谱柱是XBridge C18，4.6x50mm，3.5μm。柱温为50℃。检测器包括ADCELSD，DAD(214nm和254nm)和质量检测器(MSDES-API)。
LC-MS测定在Agilent1200HPLC/6100SQ系统上运行，使用以下条件：
用于LC-MS测定的方法A在WATERS2767仪器上进行。色谱柱是ShimadzuShim-Pack，PRC-ODS，20x250mm，15μm，两个串联连接。流动相为A：水(0.01％TFA)和B：乙腈(0.01％TFA)。梯度相为5％的B，其在3分钟的时间段内以1.8-2.3mL/min的流速增加至95％的B。使用的色谱柱是SunFire C18，4.6x50mm，3.5μm。柱温为50℃。检测器包括模数转换器ELSD(蒸发光散射检测器)，DAD(二极管阵列检测器)(214nm和254nm)和ES-API。
用于LC-MS测定的方法B在Gilson GX-281仪器上进行。色谱柱是Xbridge PrepC18 10um OBD，19x250mm。流动相为A：水(10mM NH4HCO3)和B：乙腈。梯度相为5％的B，其在3分钟的时间段内以1.8-2.3mL/min的流速增加至95％的B。使用的色谱柱是XBridge C18，4.6x50mm，3.5μm。柱温为50℃。检测器包括ADC ELSD，DAD(214nm和254nm)和质量选择检测器(MSD)(ES-API)。
在Gilson GX-281仪器上进行制备型高压液相色谱(制备型HPLC)。使用两种溶剂体系，一种是酸性的，一种是碱性的。所述酸性溶剂体系包括Waters SunFire 10μm C18柱(
Figure BDA0002666727490001381
250x 19mm)。用于制备型HPLC的溶剂A是0.05％TFA的水溶液，溶剂B是乙腈。洗脱条件是线性梯度，其在20分钟的时间段内以30mL/min的流速，从5％的溶剂B增至100％的溶剂B。基本溶剂体系包括Waters Xbridge 10μm C18柱(
Figure BDA0002666727490001382
250x 19mm)。用于制备型HPLC的溶剂A是10mM碳酸氢铵(NH4HCO3)的水溶液，溶剂B是乙腈。洗脱条件是线性梯度，其在20分钟的时间段内以30mL/min的流速，从5％的溶剂B增至100％的溶剂B。
使用Agela Flash Column silica-CS在Biotage仪器上进行快速色谱法。除非另有明确说明，否则在Biotage仪器上使用Boston ODS或AgelaC18进行反相快速色谱法。
以下缩写词用于实施例和整个说明书：
Figure BDA0002666727490001391
Figure BDA0002666727490001401
制备方法
实施例1
图3中的方案1示出了含有活性基团、suc-酸(化合物1c)、氨基甲酸酯类似物(1d、1e)、THP-类似物(1g和1h)、葡萄糖类似物(1i和1j)、磷酸酯类似物(1k和1l)以及商购磷酸酯类似物(1m)的布地奈德-间隔基(Budesonide-spacer)的合成。
中间体3a
1-[({2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02,9.04,8.013,18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基}羰基)氧基]吡咯烷-2,5-二酮(3a)
Figure BDA0002666727490001411
向布地奈德1a(0.10g，0.26mmol)的DCM(1mL)溶液中加入双(2,5-二氧吡咯烷-1-基)碳酸酯(71mg，0.30mmol)、三乙胺(47mg，0.52mmol)和DMAP(3.0mg，催化量)。反应混合物在15-25℃下搅拌12小时，直至布地奈德耗尽，通过LCMS进行监测。然后将反应混合物用DCM稀释，并用水洗。有机溶液经硫酸钠干燥。过滤后，将溶液真空浓缩，残余物(粗品3a)不经纯化直接用于下一步骤(93mg，收率71％)。ESIm/z:572.2(M+H)+。
实施例1c
4-{2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02,9.04,8.013,18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基}-4-氧丁酸(1c)
Figure BDA0002666727490001412
参见WO2015005459；WO2013074988；Research in Pharmaceutical Science,2011,6(2),107-116；和International Journal of Pharmaceutics,2009,365(1-2),69-76。
向布地奈德(1a，0.10g，0.26mmol)的DCM(1mL)溶液中加入琥珀酸酐(30mg，0.30mmol)、三乙胺(47mg，0.52mmol)和DMAP(3mg，催化量，0.02mmol)。混合物在室温下搅拌12小时直至布地奈德耗尽，通过TLC和LCMS进行监测。然后将反应混合物用DCM稀释，并用水洗。有机溶液经硫酸钠干燥。过滤后，将溶液真空浓缩，所得残余物经制备型HPLC纯化，得到标题化合物1c(22mg，收率18％)为白色固体。ESIm/z:531.3(M+H)+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.48(d,J＝10Hz,1H),6.28-6.26(m,1H),6.04-6.02(m,1H),5.23-5.11(m,1H),5.06-4.99(m,1H),4.83-4.68(m,1H),4.45-4.43(m,1H),2.76-2.63(m,5H),2.41-2.39(m,1H),2.26-2.12(m,2H),1.99-1.66(m,6H),1.57-1.38(m,6H),1.32(s,1H),1.16-0.94(m,8H)ppm。
实施例1d
2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02,9.04,8.013,18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基N-甲基-N-[2-(甲基氨基)乙基]氨基甲酸酯(1d)
Figure BDA0002666727490001421
在室温下，向粗制中间体3a(63mg，0.11mmol)的DCM(5mL)溶液中加入N,N’-二甲基乙烷-1,2-二胺(28mg，0.32mmol)和三乙胺(38mg，0.38mmol)。所得混合物在室温下搅拌2小时，直至大部分3a耗尽，通过LCMS进行监测。真空除去挥发物，所得残余物经制备型HPLC(方法B)纯化，得到1d(4mg，收率4.5％)为白色固体。ESIm/z:545.3(M+H)+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.32-7.30(m,1H),6.28-6.25(m,1H),6.02-6.01(m,1H),4.42(brs,1H),3.50-3.23(m,3H),3.10-3.02(m,3H),2.82-2.71(m,3H),2.57-2.55(m,1H),2.35-2.33(m,1H),2.15-2.06(m,2H),1.96-1.79(m,12H),1.60-1.56(m,3H),1.46(m,3H),1.37-1.33(m,2H),1.23-1.04(m,4H),0.92-0.86(m,3H)ppm。
实施例1e
2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,13R)-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02,9.04,8.013,18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基N-[(肼羰基)甲基]氨基甲酸酯(1e)
Figure BDA0002666727490001422
向3a粗品(0.16g，0.28mmol)的DMF(3mL)混合物中加入Boc-2-(2-氨基乙酰基)肼(80mg，0.42mmol)和三乙胺(85mg，0.84mmol)。反应混合物在25℃下搅拌16小时，中间体3a耗尽，通过LCMS进行监测。然后将混合物用水淬灭，并用乙酸乙酯萃取。合并的有机溶液经无水硫酸钠干燥。过滤后，溶液真空浓缩。所得残余物经硅胶柱色谱法纯化(30-50％乙酸乙酯的石油醚溶液)，得到Boc-1e(70mg)为白色固体(ESIm/z:646(M+H)+)，将其溶于DCM(2mL)。在0℃下，向此溶液中滴加TFA(1mL)。混合物在25℃下搅拌2小时，直至Boc-1e耗尽，通过LCMS进行监测。真空除去挥发物，所得残余物经制备型HPLC纯化，得到标题化合物1e(7mg，收率12％)为白色固体。ESIm/z:546(M+H)+。
实施例1g
(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-羟基-8-(2-{[6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]氧基}乙酰基)-9,13-二甲基-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02,9.04,8.013,18]二十烷-14,17-二烯-16-酮(1g)
Figure BDA0002666727490001431
在0℃下，向布地奈德(1a，50mg，0.12mmol)的无水DCM(4mL)溶液中加入(3,4-二氢-2H-吡喃-2-基)甲醇(0.11g，0.93mmol)和对甲苯磺酸(31mg，0.18mmol)。反应混合物在室温下搅拌4天，通过LCMS进行监测。真空浓缩除去挥发物，将残余物溶于DMF，并通过制备型HPLC(方法B)进行分离，得到标题化合物1g(13mg，收率20％)为白色固体。ESIm/z:545(M+H)+。
实施例1h
2-[(6-{2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02,9.04,8.013,18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基}四氢吡喃-2-基)甲氧基]乙酸甲酯(1h)
Figure BDA0002666727490001432
在氮气保护下于0℃下，向(3,4-二氢-2H-吡喃-2-基)甲醇(2.0g，18mmol)的THF(30mL)溶液中分批加入氢化钠(60％的矿物油，0.88g，22mmol)。悬浮液在0℃下搅拌直至析氢结束。然后向所得混合物中加入2-溴乙酸乙酯(4.0g，26mmol)的THF(18mL)溶液。混合物在室温下搅拌过夜，直至根据LCMS监测大部分起始物料耗尽。冷却至0℃后，在氮气保护下用水淬灭反应，并用乙酸乙酯萃取。合并的有机溶液用水和盐水洗，经硫酸钠干燥，真空浓缩。所得残余物经快速色谱法纯化(0-8％乙酸乙酯的石油醚溶液)得到2-((3,4-二氢-2H-吡喃-2-基)甲氧基)乙酸乙酯(0.70g，21％收率)为无色油状物。(1H NMR(500MHz,DMSOd6)δ6.36(d,J＝6.0Hz,1H),4.67(m,1H),4.16(s,2H),3.92(m,1H),3.65(s,3H),3.57(d,J＝5.5Hz,2H),2.50-1.99(m,1H),1.93-1.82(m,1H),1.80(m,1H),1.60(m,1H)ppm.)
在0℃下，向布地奈德(1a，0.11g，0.25mmol)的无水DCM(8mL)溶液中加入如上获得的2-((3,4-二氢-2H-吡喃-2-基)甲氧基)乙酸乙酯(0.35g，1.9mmol)和对甲苯磺酸(66mg，0.35mmol)。反应混合物在室温下搅拌4小时，通过LCMS进行监测。真空浓缩除去挥发物，将残余物溶于DMF，并通过制备型HPLC(方法A)进行分离，得到标题化合物1h(46mg，收率29％)为白色固体。ESIm/z:617(M+H)+。
实施例1i
(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-羟基-9,13-二甲基-6-丙基-8-(2-{[(2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]氧基}乙酰基)-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02,9.04,8.013,18]二十烷-14,17-二烯-16-酮(1i，含差向异构体)
Figure BDA0002666727490001441
向布地奈德(1a，0.22g，0.50mmol)和乙酰溴-α-D-葡萄糖(0.33g，0.80mmol)的DCM(15mL)混合物中加入
Figure BDA0002666727490001442
分子筛(1.0g)，所得混合物在室温下搅拌半小时，然后在0℃下加入三氟甲磺酸银(0.19g，0.75mmol)。悬浮液在黑暗环境下在氮气保护下于室温搅拌一个周末(72小时)。将混合物通过硅藻土过滤，滤液真空浓缩。所得残余物经制备型HPLC(方法B)纯化，得到Ac-1i(25mg，收率9.2％)为白色固体。ESIm/z:761(M+H)+。1H NMR(DMSOd6,400MHz)(含差向异构体)δ7.34-7.30(m,1H),6.19-6.14(m,1H),5.91(s,1H),5.29(t,J＝9.2Hz,1H),5.17-5.15(m,0.5H),5.03-5.01(m,0.5H),4.96-4.90(m,1H),4.85-4.74(m,3H),4.70-4.67(m,1H),4.64-4.63(m,0.5H),4.59-4.56(m,0.5H),4.39-4.28(m,2H),4.20-4.16(m,1H),4.05-3.99(m,2H),2.56-2.40(m,1H),2.32-2.26(m,1H),2.13-1.89(m,14H),1.83-1.63(m,3H),1.59-1.48(m,3H),1.44-1.21(m,6H),1.15-0.91(m,2H),0.86-0.81(m,6H)ppm。
在0℃下，向以上获得的化合物Ac-1i(30mg，39μmol)的水(1mL)和甲醇(3mL)溶液中加入氢氧化锂一水合物(17mg，0.40mmol)。混合物在0℃下搅拌1小时后，将混合物直接通过制备型HPLC(方法B)进行纯化，得到1i(24mg，98％收率)为白色固体。ESIm/z:593(M+H)+。1H NMR(MeODd4,400MHz)(含差向异构体)δ7.46(t,J＝10.4Hz,1H),6.26(dt,J＝10.0和2.0Hz,1H),6.02(s,1H),5.21和4.64(t,J＝4.8Hz,1H),5.16(t,J＝7.2Hz,0.5H),4.94-4.80(m,2.5H),4.57-4.47(m,1H),4.44-4.41(m,1H),4.34-4.31(m,1H),3.90-3.87(m,1H),3.70-3.64(m,1H),3.39-3.24(m,4H),2.70-2.62(m,1H),2.41-2.36(m,1H),2.27-2.08(m,2H),2.00-1.93(m,1H),1.88-1.81(m,1H),1.74-1.32(m,9H),1.22-0.90(m,8H)ppm。
实施例1j
(2S,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-三羟基-6-{2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02,9.04,8.013,18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基}四氢吡喃-2-羧酸(1j，含差向异构体)
Figure BDA0002666727490001451
按照与1i相似的方法，不同之处在于用乙酰溴-α-D-葡萄糖醛酸甲酯代替乙酰溴-α-D-葡萄糖，得到化合物1j(24mg，2步收率为9.2％)为白色固体。ESIm/z:607(M+H)+。1H NMR(MeODd4,400MHz)δ7.48(t,J＝10.0Hz,1H),6.28-6.24(m,1H),6.02(s,1H),5.22-5.15(m,1H),4.98-4.81(m,2.5H),4.65-4.56(m,1.5H),4.45-4.39(m,2H),3.62-3.59(m,1H),3.52-3.46(m,1H),3.41(t,J＝8.8Hz,1H),3.30-3.28(m,1H),2.70-2.62(m,1H),2.40-2.36(m,1H),2.27-2.10(m,2H),1.95-1.92(m,2H),1.75-1.54(m,3H),1.50(s,3H),1.51-1.32(m,3H),1.12-0.90(m,8H)ppm。
实施例1k
(2,2113乙氧基)({21H)S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)13氧基)({21H),3.30-3.28(m,1H),2.70-2.62(m,1H),2.40-2.36(m,1H)2,9.04,8.013,18]二十烷)({21H),3.30-3.28氧乙氧基})次膦酸(1k)
Figure BDA0002666727490001452
在0℃下，向三乙胺(0.67g，6.6mmol)的氯仿(4mL)溶液中加入三氯氧化磷(0.51mg，3.3mmol)，然后加入布地奈德(1a，1.3g，3.0mmol)的氯仿(4mL)溶液。混合物在20℃下搅拌2小时后，将混合物冷却至0℃，并加入Boc-乙醇胺(0.41mg，2.6mmol)的氯仿(4mL)和吡啶(3mL)溶液。混合物在20℃下搅拌1小时直至根据LCMS监测反应完成后，通过在0℃下添加水(2mL)来淬灭反应混合物。将混合物在20℃下搅拌过夜。真空除去挥发物，所得残余物经制备型HPLC(方法B)纯化，得到粗制Boc-1k(330mg，17％)为黄色膜状物。ESIm/z:676(M+Na)+。
在0℃下，向Boc-1k(0.18g，0.28mmol)的DCM(5mL)溶液中加入三氟乙酸(0.5mL)。所得混合物在23℃下搅拌2小时，直至根据LCMS监测Boc已完全脱去。真空除去挥发物。所得残余物经制备型HPLC(方法B)纯化，得到1k为白色固体(90mg，59％收率)。ESIm/z:554(M+H)+。1H NMR(500MHz,MeODd4)δ7.49(d,J＝10.1Hz,1H),6.28(d,J＝10.1Hz,1H),6.03(s,1H),5.24-5.15(m,1H),4.87-4.62(m,3H),4.45(d,J＝6.1Hz,1H),4.18-4.15(m,2H),3.22-3.20(m,2H),2.71-2.64(m,1H),2.40(d,J＝13.4Hz,1H),2.29-1.71(m,6H),1.65-1.32(m,9H),1.22-0.91(m,7H)ppm。分析型HPLC：>99.9％，保留时间：3.90min(方法B)。
实施例1l
(2-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}乙氧基)膦酸
参见J.Am.Chem.Soc.,2016,138(4),1430-1445；WO2015153401；和Phosphorus,Sulfur and Silicon and the Related Elements,2000,165,83-90。
Figure BDA0002666727490001461
在-40℃下，通过注射器向Fmoc-乙醇胺(1.1g，3.9mmol)的THF(16mL)混合物中加入焦磷酰氯(2.2g，8.8mmol)。混合物在-40℃下搅拌1小时，直至通过LCMS监测起始物料完全耗尽，将反应混合物在-40℃下用水(1mL)淬灭，用饱和碳酸氢钠水溶液(200mL)处理，然后保持在10-20℃下过夜。所得混合物用浓盐酸酸化至pH 2，然后用乙酸乙酯萃取。合并的有机溶液经硫酸钠干燥，浓缩，得到粗制标题化合物(1.6g，粗品)为白色固体，其无需纯化即可用于下一步骤。ESI m/z:364(M+H)+。
(2-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}乙氧基)({[羟基({2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02,9.04,8.013,18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基})磷酰基]氧基})次膦酸(Fmoc-1l)
Figure BDA0002666727490001462
根据上述方法，不同之处在于用布地奈德(1a，0.86g，20mmol)代替Fmoc-乙醇胺外，得到膦酸布地奈德中间体1a-PO3H2(1.1g，粗品)为白色固体(ESI m/z:551(M+H)+)。
在10℃下，向粗制(2-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}乙氧基)膦酸(0.29g，0.80mmol)的DMF(5mL)溶液中加入三乙胺(81mg，0.80mmol)和1,1'-羰基二咪唑(CDI，0.32g，2.0mmol)。将混合物在10-20℃下搅拌30分钟，然后将以上获得的膦酸布地奈德中间体1a-PO3H2(0.41g，0.80mmol)和氯化锌(0.87g，6.4mmol)加入反应混合物中。将所得混合物在10-20℃下搅拌过夜，并根据LCMS监测起始物料完全耗尽。然后反应用稀释的HCl水溶液(1N，50mL)淬灭，用乙酸乙酯萃取。将合并的有机溶液浓缩，所得残余物经制备型HPLC(方法B)纯化，得到Fmoc-1l(0.32g，收率47％)为白色固体。ESI m/z:856(M+H)+。
(2-氨基乙氧基)({[羟基({2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02,9.04,8.013,18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基})磷酰基]氧基})次膦酸(1l)
Figure BDA0002666727490001471
参见WO2015153401。
在10℃下，向Fmoc-1l(0.10g，0.12mmol)的DCM(2mL)溶液中加入哌啶(67mg，0.79mmol)。反应混合物在10-20℃下搅拌16小时。根据LCMS监测，化合物Fmoc-11完全耗尽。真空除去挥发物，所得残余物经制备型HPLC(方法B)纯化，得到1l(50mg，收率68％)为白色固体。ESIm/z:634(M+H)+。1H NMR(500MHz,MeODd4)δ7.50(d,J＝10.0Hz,1H),6.28(d,J＝9.9Hz,1H),6.03(s,1H),5.23-5.16(m,1H),5.02-4.97(m,1H),4.88-4.67(m,1H),4.45(d,J＝3.4Hz,1H),4.23(s,2H),3.24(s,2H),2.67(dd,J＝13.5,8.3Hz,1H),2.40(d,J＝11.3Hz,1H),2.28-1.32(m,15H),1.23-0.92(m,8H)ppm。分析型HPLC：>99.9％，保留时间：2.74min(方法B)。
下表1a示出了使用本发明所述方法制得的类固醇类化合物。
表1a-化合物的结构式和化学物理性质
Figure BDA0002666727490001472
Figure BDA0002666727490001481
Figure BDA0002666727490001491
Figure BDA0002666727490001501
方案2.VC-PAB间隔基-布地奈德的合成
Figure BDA0002666727490001511
合成MC-间隔基-布地奈德(2a&2c)的一般方法A
Figure BDA0002666727490001512
在室温下，向方案2中的vcPAB-布地奈德(4aA＝CO，1.0当量)或胺9(1.0当量)的DMF溶液(约1mL/10mg胺)中加入下表中的活化NHS酯5(1.5-3.0当量)和DIPEA(2.0当量)。当根据LCMS光谱监测NHS酯和大部分胺耗尽时，将反应混合物在RT下搅拌过夜。过滤后，反应溶液经制备型HPLC或反相快速色谱法直接纯化，得到所需酰胺2(约17％收率)为白色固体。
Figure BDA0002666727490001513
c.TFA盐
由酸合成酰胺类化合物2b、2l、2m前体的一般方法B
Figure BDA0002666727490001521
Figure BDA0002666727490001522
在室温下，向酸5(1.0-1.5当量)的DMF或DCM或THF(1mL/5mg5)溶液中加入DIPEA(2.0-5.0当量)和HATU(1.4-2.2当量)。所得混合物在此温度下搅拌0.5-1小时，然后加入vcPAB-布地奈德(4，1.0当量)。反应混合物在室温下搅拌3-16小时，直到胺完全耗尽，通过LCMS进行监测。将反应混合物通过膜过滤，然后滤液经制备型HPLC或反相快速色谱法分离，得到酰胺2(21-54％收率)为白色固体。下表是其他详细信息。
Figure BDA0002666727490001523
Figure BDA0002666727490001531
合成中间体7和10的一般方法C
Figure BDA0002666727490001532
Figure BDA0002666727490001533
在室温下，向中间体6(1.2-1.4当量)的DMF溶液中加入HATU(1.5-1.7当量)。将所得溶液在室温下搅拌1小时。向此悬浮液中加入vcPAB-布地奈德(4a，1.0当量)的DMF溶液(0.10mL/mg4a)，随后加入NMM(2.3-3.0当量)。反应混合物在室温下搅拌16小时，变得澄清。通过LCMS监测反应，直至化合物4a完全耗尽。然后向反应混合物中加入二乙胺(过量)，将所得混合物在室温下搅拌1-3小时，直至根据LCMS监测已脱去Fmoc。真空除去挥发物，所得残余物经制备型HPLC(方法A)纯化，得到化合物7(由化合物4a得到的收率为18％)，或者经制备型HPLC(方法B)纯化，得到化合物10(收率为5％)为白色固体。下表是其他详细信息。
Figure BDA0002666727490001541
合成氨基甲酸酯类化合物2j、2k、2r和2s的一般方法D
Figure BDA0002666727490001542
将混合物在室温下搅拌3-24小时，直至PNP活化酯完全耗尽，通过LCMS进行监测。将反应混合物通过膜过滤，滤液经制备型HPLC直接分离，得到化合物2(含有或不含非对映异构体，收率11-63％)为白色固体。下表是其他详细信息。
Figure BDA0002666727490001543
2a-d的合成
根据方案2，可通过三种方法制备得到布地奈德-连接体2a-d。第一种方法是直接由vcPAB-布地奈德(4a)进行酰胺偶联反应，其是由布地奈德3a的活化酯与连接体5得到。第二种方法是通过vcPAB-布地奈德(4a)与中间体6a的初始酰胺偶联反应以生成布地奈德-连接体7，然后与半乳糖-叠氮化物(8a)进行3+2环化以生成中间体9，最后通过与5进行二次酰胺偶联反应。第三种方法是首先通过将4与中间体6b进行酰胺偶联反应，然后与5b形成酰胺，然后依次将丙酮脱保护得到2d。
中间体4a
Figure BDA0002666727490001551
向3a(1.4mmol)的干燥DMF(10mL)溶液中加入Boc-vc-PAB(12a)[WO2008/34124A2](0.59g，1.2mmol)、DMAP(0.30g，2.4mmol)和吡啶(0.29g，3.7mmol)。混合物在室温下搅拌16小时，直至根据LCMS监测3a完全耗尽。反应混合物经反相快速色谱法(50-80％乙腈的水溶液)直接纯化，得到中间体Boc-4a(0.74g，收率38％，ESIm/z:936(M+H)+)为白色固体，将其溶于DCM(40mL)。在0℃下，向5mL的DCM溶液(含有94mgBoc-4a)中滴加TFA(0.5mL)。混合物在室温下搅拌1.5小时直至Boc-4a耗尽，通过LCMS进行监测，将所得混合物真空浓缩，得到其TFA盐的粗制标题产物4a(83mg，由布地奈德得到的收率为34％)为无色油状物，其无需纯化即可用于下一步合成。20mg粗品4a经制备型HPLC(方法B)纯化，得到纯的4a(8mg)为游离碱，用于血浆稳定性测试。ESIm/z:836(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSOd6)δ10.17(s,1H),8.12(brs,1H),7.62(d,J＝8.5Hz,2H),7.31(d,J＝10.2Hz,3H),6.17(d,J＝10.1Hz,1H),5.97(t,J＝5.7Hz,1H),5.92(s,1H),5.40(s,2H),5.22-5.01(m,4H),4.89-4.62(m,3H),4.53-4.40(m,1H),4.30(s,1H),3.09-2.87(m,3H),2.36-2.22(m,1H),2.14-1.87(m,4H),1.81(d,J＝5.6Hz,2H),1.75(s,2H),1.62-1.52(m,4H),1.51-1.41(m,2H),1.40-1.19(m,8H),1.18-0.92(m,2H),0.92-0.82(m,9H),0.78(d,J＝6.8Hz,3H)ppm。
实施例2a
N-[(1S)-1-{[(1S)-4-(氨基甲酰基氨基)-1-[(4-{[({2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02,9.04,8.013,18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基}羰基)氧基]甲基}苯基)氨基甲酰基]丁基]氨基甲酰基}-2-甲基丙基]-6-(2,5-二氧-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺(2a)
Figure BDA0002666727490001561
根据一般方法A，得到标题化合物2a(10mg，17％收率)为白色固体。ESIm/z:1029(M+H)+。分析型HPLC：92.5％，保留时间：7.66min(方法A)。
实施例2b
1-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧丁酰胺基-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-)-N-[(1S)-1-{[(1S)-4-(氨基甲酰基氨基)-1-[(4-{[({2二氧杂五环[10.8.0.02,9.04 ,8.013,18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基}羰基)氧基]甲基}苯基)氨基甲酰基]丁基]氨基甲酰基}-2-甲基丙基]-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺(2b)
Figure BDA0002666727490001562
根据一般方法B，得到标题化合物2b(3.0mg，21％收率)为白色固体。ESIm/z:686(M/2+H)+。1H NMR(400MHz,DMSOd6)δ10.05(s,1H),8.15(d,J＝7.5Hz,1H),7.88(d,J＝8.8Hz,1H),7.77(t,J＝5.7Hz,1H),7.71-7.66(m,1H),7.66-7.59(m,3H),7.52-7.27(m,9H),6.17(d,J＝10.0Hz,1H),6.03-5.95(m,1H),5.92(s,1H),5.79-5.74(m,1H),5.43(s,2H),5.22-4.99(m,6H),4.88-4.84(m,1H),4.84-4.60(m,2H),4.42-4.34(m,1H),4.33-4.26(m,1H),4.26-4.20(m,1H),3.65-3.55(m,3H),3.48-3.44(m,12H),3.32-3.26(m,2H),3.12-2.91(m,4H),2.63-2.54(m,1H),2.41-2.19(m,3H),2.03-1.94(m,4H),1.84-1.78(m,2H),1.63-1.22(m,14H),1.03-0.82(m,15H)ppm。分析型HPLC：96.9％，保留时间：8.10min(方法B)。
实施例2c
(2R)-2-氨基-N-[(1S)-1-{[(1S)-4-(氨基甲酰基氨基)-1-[(4-{[({2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02 ,9.04,8.013,18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基}羰基)氧基]甲基}苯基)氨基甲酰基]丁基]氨基甲酰基}-2-甲基丙基]-6-[2-(环辛-2-炔-1-基氧基)乙酰胺基]己酰胺(7)
Figure BDA0002666727490001571
ESIm/z:565(M/2+H)+。1H NMR(500MHz,DMSOd6)δ10.17-10.00(m,1H),8.47-7.73(m,2H),7.69-7.57(m,3H),7.38-7.26(m,3H),6.17(d,J＝10.0Hz,1H),5.99(s,1H),5.92(s,1H),5.76(s,1H),5.42(s,2H),5.23-5.01(m,4H),4.88-4.61(m,3.4H),4.43-4.16(m,4.6H),3.85(d,J＝14.7Hz,1H),3.73(d,J＝14.5Hz,1H),3.23-3.18(m,1H),3.09-2.90(m,4H),2.33-2.18(m,3H),2.18-2.04(m,3H),2.03-1.66(m,10H),1.64-1.50(m,7H),1.49-1.22(m,13H),1.17-0.90(m,4H),0.90-0.79(m,12H)ppm。
(2R)-2-氨基-N-[(1S)-1-{[(1S)-4-(氨基甲酰基氨基)-1-[(4-{[({2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02 ,9.04,8.013,18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基}羰基)氧基]甲基}苯基)氨基甲酰基]丁基]氨基甲酰基}-2-甲基丙基]-6-[2-({1-[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]-1H,4H,5H,6H,7H,8H,9H-环辛并[d][1,2,3]三唑-4-基}氧基)乙酰胺基]己酰胺(9)
Figure BDA0002666727490001572
过滤后，将所得9的溶液直接用于下一步骤。ESIm/z:667(M/2+H)+。
N-[(1R)-1-{[(1S)-1-{[(1S)-4-(氨基甲酰基氨基)-1-[(4-{[({2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02,9.04 ,8.013,18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基}羰基)氧基]甲基}苯基)氨基甲酰基]丁基]氨基甲酰基}-2-甲基丙基]氨基甲酰基}-5-[2-({1-[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟基甲基)四氢吡喃-2-基]-4H,5H,6H,7H,8H,9H-环辛并[d][1,2,3]三唑-4-基}氧基)乙酰胺基]戊基]-1-(2,5-二氧吡咯-1-基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺(Mc-PEG4-N(糖-COT)Lys-vc-PAB-布地奈德)(2c)
Figure BDA0002666727490001581
ESIm/z:831(M/2+H)+。1H NMR(400MHz,DMSOd6)δ9.73(s,1H),8.21-8.07(m,3H),7.94-7.82(m,1H),7.71-7.59(m,3H),7.39-7.26(m,4H),7.02(s,1H),6.17(d,J＝10.0Hz,1H),6.09-5.98(m,1H),5.92(s,1H),5.56-5.28(m,4H),5.25-5.01(m,4H),4.90-4.62(m,5H),4.39-4.13(m,5H),3.84-3.69(m,4H),3.59-3.40(m,16H),3.17-2.79(m,9H),2.43-1.71(m,13H),1.71-1.42(m,15H),1.40-1.19(m,11H),1.04-0.77(m,15H)ppm。分析型HPLC：97.6％，保留时间：7.63min(方法A)。
实施例2d
(2R)-2-氨基-N-[(1S)-1-{[(1S)-4-(氨基甲酰基氨基)-1-[(4-{[({2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02 ,9.04,8.013,18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基}羰基)氧基]甲基}苯基)氨基甲酰基]丁基]氨基甲酰基}-2-甲基丙基]-N'-[(2S)-2-[(4R,5R)-5-[(4R)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基]-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊烷-4-基]-2-羟基乙基]戊二酰胺(10)
Figure BDA0002666727490001582
根据一般方法C，得到化合物10(13mg，5％收率)为白色固体。ESIm/z:605(M/2+H)+。1H NMR(500MHz,DMSOd6)δ10.08(s,1H),8.34-8.17(m,1H),7.98(s,1H),7.93-7.81(m,1H),7.62(d,J＝8.4Hz,2H),7.42-7.26(m,3H),6.17(d,J＝10.1Hz,1H),5.99(s,1H),5.92(s,1H),5.76(s,1H),5.42(s,2H),5.23-5.01(m,4H),4.91-4.61(m,4H),4.43-4.20(m,3H),4.10-3.72(m,6H),3.60-3.54(m,1H),3.24-3.09(m,2H),3.07-2.91(m,2H),2.32-2.25(m,1H),2.22-2.10(m,2H),2.04-1.93(m,2H),1.88-1.67(m,5H),1.64-1.22(m,27H),1.17-0.93(m,3H),0.91-0.81(m,12H)ppm。
(2R)-2-氨基-N-[(1S)-1-{[(1S)-4-(氨基甲酰基氨基)-1-[(4-{[({2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02 ,9.04,8.013,18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基}羰基)氧基]甲基}苯基)氨基甲酰基]丁基]氨基甲酰基}-2-甲基丙基]-N'-[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]戊二酰胺(10A)
Figure BDA0002666727490001591
向化合物10(13mg，11μmol)的DCM(1mL)混合物中滴加TFA(1mL)。混合物在室温下搅拌1小时，通过LCMS进行监测。真空除去挥发物，得到粗制脱保护产物10A(13mg)为浅黄色油状物，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。ESIm/z:565(M/2+H)+。
(2R)-N-[(1S)-1-{[(1S)-4-(氨基甲酰基氨基)-1-[(4-{[({2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02,9.04, 8.013,18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基}羰基)氧基]甲基}苯基)氨基甲酰基]丁基]氨基甲酰基}-2-甲基丙基]-2-[1-(2,5-二氧吡咯-1-基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基]-N'-[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基]戊二酰胺(2d)
Figure BDA0002666727490001592
根据一般方法A，得到标题化合物2d(3.5mg，从4a得到的总收率为1％)为白色固体。ESIm/z:829.7(M/2+H)+。1H NMR(400MHz,DMSOd6)δ10.10(s,0.25H),9.79(s,0.75H),8.22(d,J＝7.1Hz,1H),8.12(d,J＝7.5Hz,1H),8.07(d,J＝7.8Hz,1H),7.79-7.71(m,1H),7.69-7.60(m,2H),7.38-7.27(m,4H),7.02(d,J＝1.4Hz,2H),6.17(dt,J＝7.6,1.6Hz,1H),6.03-5.97(m,1H),5.92(s,1H),5.46-5.40(m,2H),5.35-5.02(m,4H),4.89-4.61(m,4H),4.50-4.45(m,1H),4.40-4.16(m,7H),3.65-3.37(m,21H),3.07-2.90(m,3H),2.44-2.23(m,4H),2.17-1.93(m,6H),1.90-1.71(m,4H),1.62-1.20(m,15H),1.06-0.76(m,15H)ppm。分析型HPLC：>99％，保留时间：6.40min(方法A)。
方案3. 2e的合成
Figure BDA0002666727490001601
实施例2e
2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02,9.04,8.013,18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基N-[(4-氨基苯基)甲基]氨基甲酸酯(13)
Figure BDA0002666727490001602
在室温下，向4-氨基苄胺(9.7mg，79μmol)和DIPEA(12mg，93μmol)的THF(10mL)溶液中滴加3a(24mg，44μmol)的THF(5.0mL)溶液。混合物在室温下搅拌3小时，直至3a完全耗尽，通过LCMS进行监测。真空除去挥发物，所得残余物经制备型HPLC(方法B)纯化，得到化合物13(5.6mg，收率22％)为白色固体。ESIm/z:579.2(M+H)+。1H NMR(400MHz,MeODd4)δ7.48-7.45(m,3H),7.31-7.28(m,2H),6.27-6.24(m,1H),6.02(s,1H),5.22(m,1H),5.12-5.11(m,1H),4.96(m,1H),4.86-4.81(m,2H),4.66(m,1H),4.44-4.35(m,3H),2.66-2.65(m,1H),2.40-2.36(m,1H),2.15-2.10(m,2H),1.97-1.60(m,6H),1.53-1.36(m,6H),1.09-0.92(m,7H)ppm。
2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02,9.04,8.013,18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基N-({4-[(2S)-5-(氨基甲酰基氨基)-2-[(2S)-2-[6-(2,5-二氧-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基]-3-甲基丁酰胺基]戊酰胺基]苯基}甲基)氨基甲酸酯(2e)
Figure BDA0002666727490001603
在室温下，向MC-VC-OH5f(WO2014/191578A1)(5.7mg，12μmol)的干燥DMF(1.5mL)混合物中加入HATU(4.6mg，12μmol)和NMM(4.0mg，40μmol)。混合物在室温下搅拌10分钟，然后将化合物13(4.7mg，8.1μmol)加入反应混合物中。将所得混合物在室温下搅拌过夜。根据LCMS监测，化合物13完全耗尽并且所需产物检测为主要产物。混合物经制备型HPLC直接纯化，得到标题化合物2e(2.9mg，收率35％)为白色固体。ESm/z:1029.1(M+H)+,514.7(M/2+H)+。分析型HPLC：>99％，保留时间：7.54min(方法A)。
方案4.连接体-间隔基-布地奈德2f&2g的合成(通过酯)
Figure BDA0002666727490001611
化合物编号# R
2f MC
2g DIBAC-suc-PEG<sub>4</sub>
实施例2f
1-{4-[(2S)-5-(氨基甲酰基氨基)-2-[(2S)-2-[6-(2,5-二氧-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基]-3-甲基丁酰胺基]戊酰胺基]苯基}甲基4-{2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02,9.04,8.013,18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基}丁二酸酯(2f)
Figure BDA0002666727490001612
在室温下，向1c(20mg，38μmol)的DMF(2mL)溶液中加入MC-VCPAB(12b，0.11g，0.19mmol)、TBTU(63mg，0.19mmol)、HOBt(26mg，0.19mmol)和DIPEA(41mg，0.19mmol)。所得混合物在70℃下搅拌12小时。通过LCMS监测，不再形成产物2f。将反应混合物经制备型HPLC(方法A)直接纯化，得到标题化合物2f(2.6mg，收率6％)为白色固体。ESIm/z:1085.3(M+H)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.55-7.52(m,1H),7.34-7.30(m,1H),6.67(brs,1H),6.30-6.27(m,1H),6.03(brs,1H),5.16-5.11(m,2H),5.09-4.87(m,2H),4.80-4.61(m,1H),4.60-4.30(m,2H),3.47-3.44(m,1H),3.21-3.10(m,1H),3.03-2.96(m,2H),2.79-2.55(m,4H),2.35-1.73(m,28H),1.71-1.32(m,15H),1.29-1.07(m,4H),0.99-0.85(m,9H)ppm。
实施例2g
1-{4-[(2S)-2-[(2S)-2-[1-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧丁酰胺基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基]-3-甲基丁酰胺基]-5-(氨基甲酰基氨基)戊酰胺基]苯基}甲基4-{2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02,9.04,8.013,18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基}丁二酸酯(2g)
Figure BDA0002666727490001621
根据实施例2f的方法，不同之处在于用DIBAC-suc-PEG4-vc-PAB(12c)代替12b，得到标题化合物2g(15mg，收率19％)为白色固体。ESIm/z:714(M/2+H)+。1H NMR(500MHz,MeODd4)δ7.67-7.60(m,4H),7.48-7.46(m,4H),7.38-7.32(m,4H),7.26(d,J＝6.8Hz,1H),6.27(d,J＝10.0Hz,1H),6.03(s,1H),5.24-5.10(m,4H),5.02-4.97(m,1H),4.85-4.66(m,2H),4.61(s,1H),4.53(dd,J＝9.1,4.9Hz,1H),4.45-4.43(m,1H),4.22(dd,J＝6.7,4.7Hz,1H),3.78-3.69(m,3H),3.60-3.55(m,11H),3.47-3.40(m,2H),3.26-3.10(m,4H),2.78-2.54(m,8H),2.41-2.35(m,2H),2.25-2.11(m,4H),2.02-1.31(m,17H),1.21-0.92(m,14H)ppm。分析型HPLC：99.5％，保留时间：7.86min(方法B)。
方案5.连接体-间隔基-布地奈德2j-2n的合成(通过酰胺或氨基甲酸酯)
Figure BDA0002666727490001631
在方案5中，Bud是指布地奈德。
大多数具有VC-PAB基团部分的布地奈德-连接体(2)是通过酰胺或氨基甲酸酯由三种方法合成得到(方案5)。通过酰胺偶联将化合物1d、1e分别与连接体进行偶联以得到酰胺或氨基甲酸酯(方案5)。下表是其他详细信息。
Figure BDA0002666727490001632
Figure BDA0002666727490001641
中间体4c
2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02,9.04,8.013,18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基N-(2-{[({4-[(2S)-2-[(2S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺基]-5-(氨基甲酰基氨基)戊酰胺基]苯基}甲氧基)羰基](甲基)氨基}乙基)-N-甲基氨基甲酸酯(4c)
Figure BDA0002666727490001642
在室温下，向化合物1d(40mg，73μmol)的DMF(3mL)溶液中加入Fmoc-vcPAB-PNP(11d，60mg，78μmol)、DMAP(9.0mg，74μmol)和DIPEA(20mg，0.16mmol)。将此混合物在室温下搅拌3小时，直至大部分起始物料耗尽，通过LCMS进行监测。然后向反应混合物中加入哌啶(1mL)。在室温下搅拌1小时直至完成脱Fmoc反应(通过LCMS监测)后，将反应混合物经制备型HPLC(方法B)直接纯化，得到化合物4c(9.0mg，收率13％，LC中的第二个峰)为白色固体。ESIm/z:951(M+H)+,973(M+Na)+。
实施例2j
2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02,9.04,8.013,18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基N-({N'-[({4-[(2S)-5-(氨基甲酰基氨基)-2-[(2S)-2-[6-(2,5-二氧-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基]-3-甲基丁酰胺基]戊酰胺基]苯基}甲氧基)羰基]肼羰基}甲基)氨基甲酸酯(2j)
Figure BDA0002666727490001651
ESIm/z:1144.3(M+H)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.02(s,1H),9.77(s,1H),9.18(s,1H),8.12(d,J＝7.2Hz,1H),7.83(d,J＝8.4Hz,1H),7.73-7.70(m,1H),7.61-7.59(m,2H),7.32-7.29(m,3H),7.01(s,2H),6.19-6.16(m,1H),6.00-5.92(m,2H),5.05-5.00(m,2H),4.95-4.85(m,2H),4.71-4.62(m,2H),4.40-4.17(m,3H),3.71-3.58(m,2H),3.45-3.39(m,2H),3.06-2.89(m,3H),2.33-2.28(m,2H),2.20-2.07(m,3H),2.02-1.91(m,3H),1.81-1.75(m,2H),1.75-1.62(m,2H),1.60-1.44(m,11H),1.42-1.20(m,6H),1.19-1.12(m,4H),1.00-0.92(m,2H),0.88-0.81(m,10H)ppm。
实施例2k
2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02,9.04,8.013,18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基N-(2-{[({4-[(2S)-5-(氨基甲酰基氨基)-2-[(2S)-2-[6-(2,5-二氧-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基]-3-甲基丁酰胺基]戊酰胺基]苯基}甲氧基)羰基](甲基)氨基}乙基)-N-甲基氨基甲酸酯(2k-A和2k-B)
Figure BDA0002666727490001652
根据一般方法D，得到作为非对映异构体的标题化合物2k-A(3.3mg，收率10％，LC中的第二个峰)和2k-B(4.1mg，收率12％，LC中的第一个峰)，为白色固体。2k-A:ESIm/z:1143.4(M+H)+，保留时间：1.70min(方法A)。2k-B:ESIm/z:1143.4(M+H)+，保留时间：1.65min(方法A)。
实施例2l
二环[6.1.0]壬-4-炔-9-基甲基N-(14-{[(1S)-1-{[(1S)-4-(氨基甲酰基氨基)-1-[(4-{[({2-[({2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02,9.04,8.013,18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基}羰基)(甲基)氨基]乙基}(甲基)氨基甲酰基)氧基]甲基}苯基)氨基甲酰基]丁基]氨基甲酰基}-2-甲基丙基]氨基甲酰基}-3,6,9,12-四氧杂十四烷-1-基)氨基甲酸酯(2l)
Figure BDA0002666727490001661
ESIm/z:687.5(M/2+H)+，1396.8(M+Na)+(50％)。1H NMR(500MHz,MeODd4)δ7.66(d,J＝7.5Hz,2H),7.50(d,J＝10.0Hz,1H),7.36(d,J＝7.0Hz,2H),6.28(d,J＝10.0Hz,1H),6.04(s,1H),5.15-5.05(m,2H),4.87-4.62(m,4H),4.53(s,1H),4.46(s,1H),4.21(d,J＝6.5Hz,1H),4.16(d,J＝8.0Hz,2H),3.83-3.72(m,2H),3.66-3.60(m,12H),3.56-3.52(m,3H),3.49-3.42(m,1H),3.30(s,3H),3.25-3.09(m,3H),3.02-2.96(m,4H),2.87(dd,J＝16.6,4.8Hz,2H),2.72-2.64(m,1H),2.58(t,J＝6.0Hz,2H),2.40(d,J＝13.1Hz,1H),2.31-2.10(m,9H),2.01-1.91(m,3H),1.81-1.70(m,2H),1.63(s,7H),1.51(s,3H),1.48-1.30(m,4H),1.11(s,1H),1.02-0.91(m,15H)ppm。分析型HPLC：>99.9％，保留时间：9.40min(方法A)。
实施例2m
2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02,9.04,8.013,18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基N-(2-{[({4-[(2S)-2-[(2S)-2-[(2R)-6-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧丁酰胺基)-2-[6-(2,5-二氧-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基]己酰胺基]-3-甲基丁酰胺基]-5-(氨基甲酰基氨基)戊酰胺基]苯基}甲氧基)羰基](甲基)氨基}乙基)-N-甲基氨基甲酸酯(2m-前体)
Figure BDA0002666727490001662
根据一般方法B，得到粗制化合物2m-前体(2m的前体)(5mg)为浅黄色油状物，将其直接用于下一步骤。ESIm/z:780(M/2+H)+。
2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02,9.04,8.013,18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基N-(2-{[({4-[(2S)-5-(氨基甲酰基氨基)-2-[(2S)-2-[(2R)-2-[6-(2,5-二氧-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基]-6-[4-(3-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-十二羟基-10,15,20,25,30-五(羟甲基)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-十二氧杂七环[26.2.2.23,6.28,11.213, 16.218,21.223,26]四十二烷-5-基]甲基}-3,4,5,13-四氮杂四环[13.4.0.02,6.07,12]十九烷-1(15),2(6),4,7(12),8,10,16,18-八烯-13-基)-4-氧丁酰胺基]己酰胺基]-3-甲基丁酰胺基]戊酰胺基]苯基}甲氧基)羰基](甲基)氨基}乙基)-N-甲基氨基甲酸酯(2m)
Figure BDA0002666727490001671
向粗制的2m(5mg)的DMF(1mL)溶液中加入CD-N3(8b，63mg，63μmol)。所得混合物在室温下搅拌72小时，通过LCMS进行监测。将所得混合物经制备型HPLC(方法A)直接纯化，得到化合物2m(2mg，从4c得到的收率为4％)为白色固体。ESIm/z:1278.8(M/2+H)+。分析型HPLC：97.9％，保留时间：6.49min(方法A)。
实施例2n
2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02,9.04,8.013,18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基N-(2-{[({4-[(2S)-2-[(2S)-2-[(4R)-4-氨基-4-[(2-叠氮基乙基)氨基甲酰基]丁酰胺基]-3-甲基丁酰胺基]-5-(氨基甲酰基氨基)戊酰胺基]苯基}甲氧基)羰基](甲基)氨基}乙基)-N-甲基氨基甲酸酯(2n)
Figure BDA0002666727490001681
将反应混合物在室温下搅拌过夜。根据LCMS监测，化合物4c完全耗尽。混合物经制备型HPLC(方法A)进行分离，冻干后，得到Fmoc-2n(20mg)，将其溶于DMF(2mL)。向DMF溶液中加入二乙胺(4滴，约0.08mL)。反应混合物在室温下搅拌2小时，直至完成脱Fmoc反应，通过LCMS进行监测。将混合物通过滤膜过滤，溶液经制备型HPLC(方法A)纯化，得到标题化合物2n(10mg，收率8.4％)为白色固体。ESIm/z:1147(M+H)+。分析型HPLC：99.6％，保留时间：5.67min(方法A)；7.72min(方法B)。
方案6.连接体-布地奈德2q(THP类似物)的合成
Figure BDA0002666727490001682
Figure BDA0002666727490001691
实施例2q
(2S)-(3,4-二氢-2H-吡喃-2-基)甲基2-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基氨基)-5-脲基戊酸酯(15)
Figure BDA0002666727490001692
向Fmoc-Cit-OH(14，0.29g，0.73mmol)的DMF(5mL)混合物中加入DHP(0.10mg，0.88mmol)、TBTU(0.70g，2.2mmol)和三乙胺(0.37g，3.7mmol)。所得混合物在室温下搅拌24小时。通过LCMS检测到15％的所需质量。用水(30mL)淬灭反应，并用乙酸乙酯(10mL×3)萃取。合并的有机溶液用水和盐水洗，经硫酸钠干燥，真空浓缩。粗产物经反相快速色谱法(0-100％乙腈的水溶液)纯化，得到标题化合物15(110mg，收率30％)为无色油状物。ESIm/z:494(M+H)+。
(6-{2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02,9.04,8.013,18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基}四氢吡喃-2-基)甲基(2S)-2-氨基-5-(氨基甲酰基氨基)戊酸酯(16)
Figure BDA0002666727490001693
在室温下在氩气气球保护下，通过注射器向化合物15(80mg，0.16mmol)的无水DCM(3mL)溶液中加入布地奈德(1a，70mg，0.16mmol)和对甲苯磺酸(42mg，0.24mmol)的无水DCM(2mL)溶液。反应混合物于30℃下在氩气气球中搅拌12小时。根据LCMS监测，大部分化合物15耗尽。将反应混合物冷却至室温，并向反应混合物中加入二乙胺(1mL)。反应混合物在室温下搅拌1小时，直至完成脱Fmoc反应，通过LCMS进行监测。真空除去挥发物，所得残余物经制备型HPLC(方法B)纯化，得到标题化合物16(17mg，收率31％)为白色固体。ESIm/z:702(M+H)+。
(S)-2-(6-(2,5-二氧-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基)-3-甲基丁酸(5i)
Figure BDA0002666727490001701
在室温下，向L-缬氨酸(0.12g，1.0mmol)的无水DMF(2mL)溶液中加入化合物5a(0.31g，1.0mmol)和三乙胺(0.51g，5.0mmol)。反应混合物在室温下搅拌8小时，直至化合物5a完全耗尽，通过LCMS进行监测。将反应混合物通过滤膜过滤，滤液经制备型HPLC(方法A)直接纯化，得到标题化合物5i(0.14g，收率46％)为无色油状物。ESIm/z:311(M+H)+。
6-{2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02,9.04,8.013,18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基}四氢吡喃-2-基)甲基(2S)-5-(氨基甲酰基氨基)-2-[(2S)-2-[6-(2,5-二氧-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基]-3-甲基丁酰胺基]戊酸酯(2q)
Figure BDA0002666727490001702
在室温下，向化合物5i(5.8mg，19μmol)的DMF(1mL)溶液中加入HATU(10mg，26μmol)和DIPEA(6.6mg，51μmol)。混合物在室温下搅拌15分钟，然后在RT下向溶液中加入化合物16(12mg，17μmol)。所得混合物在室温下搅拌4小时，直至化合物5i完全耗尽，通过LCMS进行监测。然后将反应混合物通过滤膜过滤，滤液经制备型HPLC(方法A)直接纯化两次，得到标题化合物2q(2mg，收率12％)为白色固体。ESIm/z:995.3(M+H)+。分析型HPLC：83.5％，保留时间：10.36min(方法B)。
方案7.连接体-磷酸酯-布地奈德2r和2s的合成
Figure BDA0002666727490001703
使磷酸酯-布地奈德与BCN-PNP(11c)偶联，得到BCN-磷酸酯-布地奈德(化合物2r和2s)(方案7)。
实施例2r
{2-[({二环[6.1.0]壬-4-炔-9-基甲氧基}羰基)氨基]乙氧基}({2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02,9.04 ,8.013,18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基})次膦酸(2r)
Figure BDA0002666727490001711
根据一般方法D，得到化合物2r(40mg，61％收率)为白色固体。ESIm/z:730(M+H)+。1H NMR(500MHz,MeODd4)δ7.49(d,J＝10.1Hz,1H),6.29-6.26(m,1H),6.03(s,1H),5.23-5.16(m,1H),4.88-4.64(m,3H),4.45(dd,J＝8.0,3.1Hz,1H),4.23-4.13(m,2H),3.97(dd,J＝11.9,5.7Hz,2H),3.36(t,J＝4.7Hz,2H),2.67(td,J＝13.4,5.3Hz,1H),2.40(d,J＝9.6Hz,1H),2.30-1.34(m,23H),1.21-0.92(m,10H)ppm。分析型HPLC：>99.9％，保留时间：5.26min(方法B)。
实施例2s
{2-[({二环[6.1.0]壬-4-炔-9-基甲氧基}羰基)氨基]乙氧基}({[羟基({2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02,9.04,8.013,18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基})磷酰基]氧基})次膦酸(2s)
Figure BDA0002666727490001712
ESIm/z:810(M+H)+。1H NMR(500MHz,MeODd4)δ7.51(d,J＝10.1Hz,1H),6.28(d,J＝10.0Hz,1H),6.03(s,1H),5.22-5.16(m,1H),4.98-4.66(m,3H),4.46(s,1H),4.12(dt,J＝45.0,13.0Hz,4H),3.39(t,J＝11.9Hz,2H),2.67(dd,J＝13.3,8.0Hz,1H),2.40(d,J＝11.2Hz,1H),2.30-1.32(m,23H),1.22-0.92(m,10H)ppm。分析型HPLC：>99.9％，保留时间：4.03min(方法B)。
中间体的实验方法
表4.关键中间体和起始材料
Figure BDA0002666727490001713
Figure BDA0002666727490001721
Figure BDA0002666727490001731
Figure BDA0002666727490001741
Figure BDA0002666727490001751
方案8.5e的合成
Figure BDA0002666727490001752
(2R)-6-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六碳-1(12),4,6,8,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧丁酰胺基)-2-[6-(2,5-二氧-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺基]己酸(5e)
Figure BDA0002666727490001753
在室温下，向H-D-Lys(Boc)-OH(17，0.25g，1.0mmol)的DMF(10mL)混合物中加入6-马来酰亚胺基己酸-NHS(5a，0.31g，1.0mmol)和二异丙基乙胺(DIPEA，0.26g，2.0mmol)。在室温下搅拌反应过夜后，化合物5a完全耗尽。混合物经反相快速色谱法(0-100％乙腈的水溶液(0.05％TFA))直接分离，得到中间体Boc-18(ESIm/z:440(M+H)+)为无色油状物，将其溶于DCM(5mL)。在0℃下，向溶液中滴加TFA(0.5mL)，并将混合物在室温下搅拌1小时。通过LCMS监测反应，中间体Boc-18完全耗尽。真空除去挥发物，得到粗品18(ESIm/z:340(M/2+H)+)，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。在室温下，向粗制化合物18(0.21g，0.62mmol)的DMF(5mL)混合物中加入活化酯19(0.20g，0.50mmol)和DIPEA(50mg，0.39mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜后，化合物19完全耗尽，通过LCMS进行监测。然后将反应混合物经反相快速色谱法(0-100％乙腈的水溶液)直接分离，得到标题化合物5e(0.10g，从5a开始三步的收率为20％)为白色固体。ESIm/z:627(M+H)+。1H NMR(DMSOd6,400MHz):δ7.89(d,J＝13.2Hz,1H),7.69-7.62(m,3H),7.48-7.47(m,3H),7.36-7.28(m,3H),6.99(s,2H),5.03(d,J＝13.6Hz,1H),4.09-4.04(m,1H),3.60(d,J＝13.6Hz,1H),3.38-3.34(m,1H),2.90-2.87(m,2H),2.61-2.55(m,1H),2.25-2.17(m,1H),2.08-1.51(m,5H),1.46-1.15(m,12H)ppm。
方案9.5g的合成
Figure BDA0002666727490001761
(2S)-2-[(2S)-2-[1-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧丁酰胺基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基]-3-甲基丁酰胺基]-5-(氨基甲酰基氨基)戊酸(5g)
Figure BDA0002666727490001762
在室温下，向化合物5c(0.30g，0.54mmol)的DMF(10mL)溶液中加入HATU(0.31g，0.81mmol)和DIPEA(0.14g，1.1mmol)。混合物在室温下搅拌15分钟。在室温下，向反应溶液中加入Val-Cit-OH(20(CAS#159858-33-0)，0.21g，0.76mmol)，所得混合物在室温下搅拌3小时，直至消耗掉大部分物料，通过LCMS进行监控。将反应混合物通过滤膜过滤，滤液经反向快速色谱法直接纯化(0-100％乙腈的水溶液(含10mmol/L碳酸氢铵))，得到标题中间体5g(0.25g，收率57％)为白色固体。ESIm/z:809.5(M+H)+。
方案10.中间体5h的合成
Figure BDA0002666727490001763
(4R)-4-[(2-叠氮基乙基)氨基甲酰基]-4-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}丁酸叔丁酯(22)
Figure BDA0002666727490001764
在室温下，向Fmoc-D-Glu(OTBU)-OH(21，(104091-08-9)，0.30g，0.71mmol)和2-叠氮基乙胺(87156-40-9，73mg，0.85mmol)的DCM(50mL)混合物中加入HATU(0.41g，1.1mmol)和三乙胺(0.3mL)。反应混合物在室温下搅拌过夜。然后根据TLC和LCMS监测，大部分化合物21耗尽。将反应混合物在室温下用水(50mL)淬灭后，将有机溶液用水和盐水洗，经硫酸钠干燥，真空浓缩。所得残余物经制备型TLC(硅胶，用石油醚/乙酸乙酯(v/v＝1)洗脱)纯化，得到标题化合物22(0.30g，收率76％)为黄色粘性油状物。ESIm/z:494(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSOd6):δ8.09(m,1H),7.84-7.90(m,4H),7.33-7.44(m,4H),6.28(s,2H),3.35(m,6H),3.26(m,1H),2.50(m,2H),2.25(m,1H),1.80(m,1H),1.39(s,9H)ppm。
(4R)-4-[(2-氮杂乙基)氨基甲酰基]-4-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}丁酸(5h)
Figure BDA0002666727490001771
所得混合物在室温下搅拌2小时，直至化合物22完全耗尽，通过TLC和LCMS进行监测。真空除去挥发物，得到粗制化合物5h(17mg，收率96％)为黄色油状物，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。ESIm/z:438(M+H)+。
方案11.中间体6a的合成
Figure BDA0002666727490001772
(2R)-6-[2-(环辛-2-炔-1-基氧基)乙酰胺基]-2-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}己酸(6a)
Figure BDA0002666727490001773
向商购化合物23(65mg，0.23mmol，CAS：1425803-45-7)的DMF(2mL)混合物中加入Fmoc-D-Lys-OH(85mg，0.23mmol)和三乙胺(52mg，0.51mmol)。反应混合物在室温下搅拌30分钟。混合物经反相快速色谱法(0-100％乙腈的水溶液(0.05％TFA))直接分离，得到中间体6a(85mg，收率70％)为白色固体。ESIm/z:533(M+H)+。1H NMR(MeODd4,500MHz):δ7.70(d,J＝7.5Hz,2H),7.59(t,J＝8.0Hz,2H),7.30(t,J＝7.5Hz,2H),7.22(t,J＝7.4Hz,2H),4.35-4.22(m,2H),4.22-4.09(m,2H),4.09-3.99(m,1H),3.94-3.81(m,1H),3.79-3.67(m,1H),3.15(t,J＝6.9Hz,2H),2.17-1.96(m,3H),1.96-1.86(m,1H),1.85-1.66(m,4H),1.66-1.41(m,5H),1.41-1.25(m,3H)ppm。
方案12.中间体11b和12c的合成
Figure BDA0002666727490001781
1-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧丁酰胺基)-N-[(1S)-1-{[(1S)-4-(氨基甲酰基氨基)-1-{[4-(羟基甲基)苯基]氨基甲酰基}丁基]氨基甲酰基}-2-甲基丙基]-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺(12c)
Figure BDA0002666727490001782
将混合物在室温下搅拌15分钟。在室温下，向反应溶液中加入vc-PAB(24(159857-79-1)，0.21g，0.54mmol)，所得混合物在室温下搅拌3小时，直至大部分物料耗尽，通过LCMS进行监测。将反应混合物通过滤膜过滤，滤液直接经反向快速色谱法纯化(0-100％乙腈的水溶液(含10mmol/L碳酸氢铵))，得到标题中间体12c(0.30g，收率60％)为白色固体。ESIm/z:617(M+H)+。
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-[1-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧丁酰胺基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基]-3-甲基丁酰胺基]-5-(氨基甲酰基氨基)戊酰胺基]苯基}甲基4-硝基苯基碳酸酯(11b)
Figure BDA0002666727490001783
在0℃下，向化合物12c(0.15g，0.16mmol)的DMF(10mL)溶液中加入双(4-硝基苯基)碳酸酯(0.15g，0.49mmol)和DIPEA(63mg，0.49mmol)。然后将混合物在室温下搅拌3小时，直至12c大部分耗尽，通过LCMS进行监测。将反应混合物通过滤膜过滤，滤液直接经反向快速色谱法(0-100％乙腈的水溶液(含10mmol/L碳酸氢铵))纯化，得到标题中间体11b(50mg，收率28％)为白色固体。ESIm/z:1079(M+H)+。
下表5示出了使用本发明所述方法制得的连接体有效负载
表5.连接体-有效负载的实例
Figure BDA0002666727490001791
Figure BDA0002666727490001801
Figure BDA0002666727490001811
表6.连接体-有效负载的表征数据
Figure BDA0002666727490001812
Figure BDA0002666727490001821
连接体-有效负载LP1-4的合成
方案101.有效负载100、其间隔基-有效负载101a-d和连接体-有效负载LP1-4的合成
Figure BDA0002666727490001831
(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-8-(2-羟基乙酰基)-9,13-二甲基-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-16-酮(100)
Figure BDA0002666727490001832
在低于10℃的温度下，向醋酸氟轻松(10g，22mmol)和硅胶(100g)的庚烷(900mL)混合物中加入丁醛(3.0mL，33mmol)，所得悬浮液在10-20℃下搅拌30分钟。在0℃下，向混合物中滴加高氯酸(70％，7.6mL，91mmol)。然后将反应混合物在室温下搅拌过夜。根据TLC和LCMS监测，大部分醋酸氟轻松耗尽。反应混合物用石油醚稀释，并用饱和碳酸钠水溶液淬灭。将悬浮液过滤，所得固体用DCM/甲醇(v/v＝1:1)洗。合并的滤液真空浓缩。所得残余物经快速色谱法纯化(0-1.5％甲醇的DCM溶液)，得到化合物100(8.0g，收率78％)为白色固体。ESIm/z:467.1(M+H)+。
1-[({2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基}羰基)氧基]吡咯烷-2,5-二酮(101-1a)
Figure BDA0002666727490001841
向化合物100(0.47g，1.0mmol)的DCM(20mL)溶液中加入双(2,5-二氧吡咯烷-1-基)碳酸酯(0.28g，1.1mmol)、三乙胺(0.40g，4.0mmol)和DMAP(3.0mg，催化量)。将反应混合物在RT下搅拌4小时，直至化合物100耗尽，通过LCMS进行监测。然后将反应混合物用DCM稀释，并用水洗。有机溶液经硫酸钠干燥。过滤后，溶液真空浓缩，所得残余物(粗制101-1a)不经纯化直接用于下一步骤。ESIm/z:608.2(M+H)+。
(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-8-{2-[(4-硝基苯氧基羰基)氧基]乙酰基}-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02,9.04,8.013,18]二十烷-14,17-二烯-16-酮(101-1b)
Figure BDA0002666727490001842
将化合物100(0.80g，1.7mmol)、双(4-硝基苯基)碳酸酯(1.6g，5.2mmol)和DIPEA(1.1g，8.6mmol)的THF(20mL)混合物在室温下搅拌4小时，通过LCMS进行监测。将混合物真空浓缩。所得粗产物经硅胶柱色谱法纯化(50％乙酸乙酯的石油醚溶液)，得到化合物101-1b(0.75g，69％收率)为无色油状物。ESIm/z:632(M+H)+。
化合物101的一般合成方法
Figure BDA0002666727490001851
向化合物101-1a或101-1b(粗品，以1.0mmol计算)的DCM(20mL)溶液中加入二胺101-2(a、b、c或d)(1.1mmol)和DMAP(0.1mmol)。反应混合物在室温下搅拌4小时，然后加入TFA(1mL)。混合物在室温下搅拌半小时(对于R13＝Boc，搅拌反应直至Boc完全脱去，通过LCMS进行监测)。将所得混合物真空浓缩，残余物经反相快速色谱法纯化(50-80％乙腈的TFA水溶液(0.5％))，得到化合物101(a、b、c或d)为无色油状物。
2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基N-[2-(甲基氨基)乙基]氨基甲酸酯(101a)
Figure BDA0002666727490001852
根据一般方法，并使用化合物101-1a和Boc-二胺101-2a，得到化合物101a(0.38g，2步收率为57％，TFA盐)为无色油状物。ESIm/z:567(M+H)+。
2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基N-甲基-N-[2-(甲基氨基)乙基]氨基甲酸酯(101b)
Figure BDA0002666727490001853
根据一般方法，并使用化合物101-1a和二胺101-2b，得到化合物101b(0.45g，2步收率为66％，TFA盐)为无色油状物。ESIm/z:581(M+H)+。
2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基N-乙基-N-[2-(乙基氨基)乙基]氨基甲酸酯(101c)
Figure BDA0002666727490001861
根据一般方法，并使用化合物101-1b和二胺101-2c，得到化合物101c(24mg，2步收率为18％，TFA盐)为无色油状物。ESIm/z:609(M+H)+。1H NMR(500MHz,DMSOd6)δ8.38(s,2H),7.30(d,J＝10.5Hz,1H),6.24(dd,J＝10.5Hz,2.0Hz,1H),6.11(s,1H),5.70-5.54(m,2H),5.10-4.91(m,1H),4.85-4.65(m,3H),4.25-4.16(m,1H),3.60-3.40(m,2H),3.33-3.20(m,4H),3.20-2.90(m,4H),2.67-2.53(m,1H),2.30-2.20(m,1H),2.10-2.00(m,2H),1.80-1.70(m,1H),1.64-1.51(m,4H),1.49(s,3H),1.40-1.30(m,2H),1.20-1.10(m,4H),1.10-1.00(m,1H),0.90-0.80(m,6H)ppm。
2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基哌嗪-1-羧酸酯(101d)
Figure BDA0002666727490001862
根据一般方法，使用化合物101-1b和哌嗪(101-2d)，但不用TFA进行处理，并通过硅胶柱色谱法纯化(0-10％甲醇的DCM溶液)，得到化合物101d(0.21g，2步收率为49％，游离碱)为无色油状物。ESIm/z:579(M+H)+。
化合物101-3的一般合成方法
Figure BDA0002666727490001871
向化合物101a、101b或101d(0.20mmol)的DMF(3mL)溶液中加入Fmoc-VC-PAB-PNP11d(0.17g，0.22mmol)、HOBT(41mg，0.30mmol)和DIPEA(77mg，0.60mmol)。混合物在室温下搅拌3小时，通过LCMS进行监测。然后向混合物中加入哌啶(0.3mL)。将反应混合物在室温下搅拌1小时，直至根据LCMS监测Fmoc已完全脱去。所得混合物经反相快速色谱法直接纯化(50-80％乙腈的NH4HCO3水溶液(10mM))，得到化合物101-3a、101-3b或101-3d为白色固体。
2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02,9.04,8.013,18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基N-(2-{[({4-[(2S)-2-[(2S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺基]-5-(氨基甲酰基氨基)戊酰胺基]苯基}甲氧基)羰基](甲基)氨基}乙基)氨基甲酸酯(101-3a)
Figure BDA0002666727490001872
根据一般方法，使用化合物101a，得到化合物101-3a(0.11g，57％收率)为白色固体。ESIm/z:972(M+H)+。
2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，9.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基N-甲基-N-[2-(甲基氨基)乙基]氨基甲酸酯(101-3b)
Figure BDA0002666727490001881
根据一般方法，使用化合物101b，得到化合物101-3b(0.13g，65％收率)为白色固体。ESIm/z:986(M+H)+。
1-{4-[(2S)-2-[(2S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺基]-5-(氨基甲酰基氨基)戊酰胺基]苯基}甲基4-{2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基}哌嗪-1,4-二羧酸酯(101-3d)
Figure BDA0002666727490001882
根据一般方法，使用化合物101d(58mg，0.10mmol)，得到化合物101-3d(52mg，53％收率)为白色固体。ESIm/z:984(M+H)+。1H NMR(500MHz,DMSOd6)δ10.0(s,1H),8.14(d,J＝7.5Hz,1H),7.60(d,J＝8.5Hz,2H),7.31(d,J＝8.5Hz,2H),7.26(d,J＝8.5Hz,1H),6.30(dd,J＝1.5Hz,10.5Hz,1H),6.11(s,1H),6.02-5.88(m,1H),5.70-5.50(m,2H),5.42(s,2H),5.20-4.92(m,3H),4.80-4.62(m,3H),4.50-4.45(m,1H),4.25-4.15(m,1H),3.50-3.35(m,8H),3.05-2.90(m,3H),2.70-2.54(m,2H),2.32-2.20(m,1H),2.10-1.50(m,10H),1.46(s,3H),1.45-1.30(m,5H),0.95(d,J＝7.5Hz,1H),0.90-0.80(m,9H),0.77(d,J＝7.0Hz,3H)ppm。
化合物LP1、LP2和LP4的一般合成方法
Figure BDA0002666727490001891
向化合物5c(34mg，60μmol)的DMF(1mL)溶液中加入HATU(27mg，71μmol)和DIPEA(20mg，0.15mmol)。混合物在室温下搅拌5分钟，然后将化合物101-3a、101-3b或101-3d(50μmol)加入混合物中。将混合物在室温下搅拌2小时，通过LCMS进行监测。所得混合物经制备型HPLC(方法B)直接纯化，得到化合物LP1、LP2或LP4为白色固体。
2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基N-(2-{[({4-[(2S)-2-[(2S)-2-[1-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04，9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧丁酰胺基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基]-3-甲基丁酰胺基]-5-(氨基甲酰基氨基)戊酰胺基]苯基}甲氧基)羰基](甲基)氨基}乙基)氨基甲酸酯(LP1)
Figure BDA0002666727490001892
根据一般方法，使用化合物101-3a，得到连接体-有效负载LP1(20mg，26％收率)为白色固体。ESIm/z:754(M/2+H)+。
2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基N-(2-{[({4-[(2S)-2-[(2S)-2-[1-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04，9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧丁酰胺基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基]-3-甲基丁酰胺基]-5-(氨基甲酰基氨基)戊酰胺基]苯基}甲氧基)羰基](甲基)氨基}乙基)-N-甲基氨基甲酸酯(LP2)
Figure BDA0002666727490001901
根据一般方法，使用化合物101-3b，得到连接体-有效负载LP2(20mg，26％收率)为白色固体。ESIm/z:761(M/2+H)+。1H NMR(500MHz,DMSOd6)δ9.98(s,1H),8.12(d,J＝7.4Hz,1H),7.87(d,J＝8.6Hz,1H),7.76(t,J＝5.4Hz,1H),7.69-7.66(m,1H),7.64-7.57(m,3H),7.51-7.44(m,3H),7.40-7.33(m,2H),7.32-7.25(m,4H),6.33-6.27(m,1H),6.11(s,1H),5.98(t,J＝5.5Hz,1H),5.70-5.55(m,2H),5.41(s,2H),5.08-4.91(m,4H),4.79-4.66(m,2H),4.41-4.35m,1H),4.25-4.17(m,2H),3.64-3.56(m,3H),3.49-3.41(m,15H),3.30-3.27(m,2H),3.13-3.00(m,3H),2.98-2.75(m,8H),2.65-2.54(m,2H),2.48-2.43(m,1H),2.41-2.34(m,1H),2.28-2.19(m,2H),2.07-1.94(m,4H),1.81-1.67(m,3H),1.63-1.53(m,5H),1.48(s,3H),1.45-1.31(m,5H),0.88-0.82(m,13H)ppm。
1-{4-[(2S)-2-[(2S)-2-[1-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04，9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧丁酰胺基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基]-3-甲基丁酰胺基]-5-(氨基甲酰基氨基)戊酰胺基]苯基}甲基4-{2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02 ，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基}哌嗪-1,4-二羧酸酯(LP4)
Figure BDA0002666727490001902
根据一般方法，使用化合物101-3d，得到连接体-有效负载LP4(35mg，44％收率)为白色固体。ESIm/z:760(M/2+H)+。1H NMR(500MHz,DMSOd6)δ10.0(s,1H),8.14(d,J＝7.5Hz,1H),7.88(d,J＝8.5Hz,1H),7.77(t,J＝5.0Hz,1H),7.70-7.66(m,1H),7.63-7.55(m,3H),7.52-7.43(m,3H),7.40-7.27(m,6H),6.30(d,J＝10.5Hz,1H),6.11(s,1H),6.02-5.88(m,1H),5.70-5.50(m,2H),5.42(s,2H),5.20-4.92(m,4H),4.80-4.62(m,3H),4.40-4.35(m,1H),4.26-4.20(m,2H),3.64-3.55(m,3H),3.50-3.35(m,17H),3.30-3.25(m,3H),3.15-2.90(m,4H),2.64-2.54(m,2H),2.50-2.45(m,1H),2.41-2.34(m,1H),2.32-2.20(m,2H),2.10-1.92(m,4H),1.80-1.68(m,3H),1.62-1.50(m,5H),1.46(s,3H),1.45-1.40(m,2H),1.40-1.30(m,3H),1.22-1.20(m,1H),0.90-0.80(m,13H)ppm。
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-[1-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04，9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧丁酰胺基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基]-3-甲基丁酰胺基]-5-(氨基甲酰基氨基)戊酰胺基]苯基}甲基N-乙基-N-[2-(乙基氨基)乙基]氨基甲酸酯(101-4)
Figure BDA0002666727490001911
向DIBAC-suc-PEG4-vcPAB-PNP11b(0.11g，0.10mmol)的DMF(5mL)溶液中加入N,N’-二乙基乙二胺(58mg，0.50mmol)和DMAP(1mg，0.01mmol)。反应混合物在室温下搅拌4小时，通过LCMS进行监测。所得混合物经制备型HPLC(方法B)直接纯化，得到化合物101-4为无色油状物。ESIm/z:1056.6(M+H)+,529(M/2+H)+。
2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基N-(2-{[({4-[(2S)-2-[(2S)-2-[1-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04，9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧丁酰胺基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基]-3-甲基丁酰胺基]-5-(氨基甲酰基氨基)戊酰胺基]苯基}甲氧基)羰基](乙基)氨基}乙基)-N-乙基氨基甲酸酯(LP3)
Figure BDA0002666727490001912
将化合物101-4(16mg，15μmol)、101-1b(11mg，17μmol)和DIPEA(4.0mg，31μmol)的DMF(5mL)混合物在室温下搅拌4小时，通过LCMS进行监测。反应混合物经制备型HPLC(方法B)直接纯化，得到连接体-有效负载LP3(3mg，13％收率)为白色固体。ESIm/z:775(M/2+H)+。1H NMR(500MHz,DMSOd6)δ10.0(s,1H),8.14(d,J＝7.5Hz,1H),7.88(d,J＝8.5Hz,1H),7.77(t,J＝5.0Hz,1H),7.70-7.66(m,1H),7.63-7.55(m,3H),7.52-7.43(m,3H),7.40-7.27(m,7H),6.30(d,J＝10.5Hz,1H),6.11(s,1H),6.02-5.88(m,1H),5.70-5.50(m,2H),5.42(s,2H),5.20-4.92(m,4H),4.80-4.62(m,3H),4.40-4.35(m,1H),4.26-4.20(m,2H),3.64-3.55(m,4H),3.50-3.35(m,18H),3.12-2.90(m,7H),2.64-2.54(m,3H),2.41-2.34(m,2H),2.32-2.20(m,3H),2.10-1.92(m,5H),1.88-1.68(m,3H),1.62-1.50(m,6H),1.50-1.40(m,6H),1.40-1.30(m,4H),1.22-1.20(m,1H),1.02-0.90(m,4H),0.90-0.78(m,6H)ppm。
半胱胺前药的合成：连接体-有效负载LP5、LP6、LP7和LP8的合成
Figure BDA0002666727490001921
2-(吡啶-2-基二硫基)乙胺盐酸盐(102-1e)通过商购得到，其CAS号为83578-21-6。(2-巯基乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(102-1f)根据Eur.J.Med.Chem.,2015,95,483-491合成得到。
内型(endo)二环[6.1.0]壬-4-炔-9-基甲基N-(2-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)氨基甲酸酯(5f)根据WO2016168769合成得到。
2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基N-[2-(吡啶-2-基二硫基)乙基]氨基甲酸酯(102-3e)
Figure BDA0002666727490001922
向化合物101-1b(0.54g，0.86mmol)的乙腈(10mL)溶液中加入DIPEA(0.22g，1.7mmol)、102-1e(0.19g，0.86mmol)和DMAP(10mg，86μmol)。反应混合物在室温下搅拌48小时，直至根据LCMS监测101-1b完全耗尽。然后将混合物过滤，滤液真空浓缩。所得残余油状物经硅胶柱色谱法纯化(20-50％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到化合物102-3e(0.47g，80％收率)为白色固体。ESIm/z:679.2(M+H)+。
2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基N-甲基-N-[2-(吡啶-2-基二硫基)乙基]氨基甲酸酯(102-3f)
Figure BDA0002666727490001931
根据与102-3e相似的方法，不同之处在于用102-1f代替102-1e，得到化合物102-3f(0.45g，收率75％)为白色固体。ESIm/z:693.2(M+H)+。
2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基N-(2-巯基乙基)氨基甲酸酯(102e)
Figure BDA0002666727490001932
向化合物102-3e(1.4g，2.1mmol)的氯仿(30mL)溶液中加入三乙胺(0.82mL，5.9mmol)和1,4-二硫苏糖醇(克莱兰(Cleland’s)试剂，DTT)(1.2g，7.8mmol)。反应混合物在室温下于氮气氛下搅拌4小时，通过LCMS进行监测。将所得混合物真空浓缩。残余物经硅胶柱色谱法纯化(50-70％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到化合物102e(0.95g，83％收率)为白色固体。ESIm/z:570.2(M+H)+。
2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基N-甲基-N-(2-巯基乙基)氨基甲酸酯(102f)
Figure BDA0002666727490001933
根据与102e相似的方法，不同之处在于用102-3f代替102-3e，得到化合物102f(0.97g，收率83％)为白色固体。ESIm/z:584.3(M+H)+。
3-({2-[({2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基}羰基)氨基]乙基}二硫基)-3-甲基丁酸(102-5e)
Figure BDA0002666727490001941
向化合物102-3e(0.68g，1.0mmol)的甲醇(5mL)溶液中加入化合物102-4(0.13g，1.0mmol)。反应混合物在室温下搅拌18小时，通过LCMS进行监测。然后将所得混合物经制备型HPLC(方法B)直接纯化，得到化合物102-5e(0.39g，55％收率)为白色固体。ESIm/z:702.2(M+H)+。
3-({2-[({2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基}羰基)(甲基)氨基]乙基}二硫基)-3-甲基丁酸(102-5f)
Figure BDA0002666727490001942
根据与102-5e类似的方法，不同之处在于用102-3f代替102-3e，得到化合物102-5f(0.29g，40％收率)为白色固体。ESIm/z:716.3(M+H)+。
2,5-二氧吡咯烷-1-基3-({2-[({2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基}羰基)氨基]乙基}二硫基)-3-甲基丁酸酯(LP5)
Figure BDA0002666727490001943
向化合物102-5e(0.20g，0.29mmol)的DCM(10mL)溶液中加入HOSu(73mg，0.64mmol)和EDCI(0.12g，0.64mmol)，将混合物在室温下搅拌24小时，通过LCMS进行监测。所得混合物用DCM(50mL)稀释，有机溶液用水和盐水洗，经无水硫酸钠干燥，真空浓缩。所得残余物经制备型HPLC(方法A)纯化，得到LP5(85mg，37％收率)为无色油状物。ESIm/z:799.3(M+H)+。
2,5-二氧吡咯烷-1-基3-({2-[({2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基}羰基)(甲基)氨基]乙基}二硫基)-3-甲基丁酸酯(LP6)
Figure BDA0002666727490001951
根据与LP5类似的方法，不同之处在于用102-5f代替102-5e，得到化合物LP6(86mg，36％收率)为无色油状物。ESIm/z:813.3(M+H)+。
內型二环[6.1.0]壬-4-炔-9-基甲基N-{2-[2-(2-{2-[3-({2-[({2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基}羰基)氨基]乙基}二硫基)-3-甲基丁酰胺基]乙氧基}乙氧基)乙氧基]乙基}氨基甲酸酯(LP7)
Figure BDA0002666727490001952
向化合物102-5e(0.20g，0.29mmol)的DMF(10mL)溶液中加入HATU(0.11g，0.29mmol)和DIPEA(75mg，0.58mmol)。反应混合物在室温下搅拌10分钟，然后加入化合物5f(0.11g，0.29mmol)。将反应混合物在室温下搅拌18小时，通过LCMS进行监测。然后将所得混合物经制备型HPLC(方法B)直接纯化，得到化合物LP7(0.16g，55％收率)为白色固体。ESIm/z:526.7(M/2+H)+。
內型二环[6.1.0]壬-4-炔-9-基甲基N-{2-[2-(2-{2-[3-({2-[({2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基}羰基)(甲基)氨基]乙基}二硫基)-3-甲基丁酰胺基]乙氧基}乙氧基)乙氧基]乙基}氨基甲酸酯(LP8)
Figure BDA0002666727490001961
根据与LP7类似的方法，不同之处在于用102-5f代替102-5e，得到化合物LP8(0.13g，41％收率)为白色固体。ESIm/z:533.8(M/2+H)+。
AMO连接体-有效负载LP9-11的合成
方案103A.有效负载103a、103b和连接体-有效负载LP9-10的合成
Figure BDA0002666727490001962
(2-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基氨基)乙酰胺基)甲基乙酸酯(103-1)
Figure BDA0002666727490001963
向Fmoc-Gly-Gly-OH(4.3g，12mmol)的THF(0.12L)和甲苯(40mL)的混合物中加入吡啶(1.2mL，15mmol)和四乙酸铅(6.8g，15mmol)。将反应混合物回流5小时，通过LCMS进行监测。冷却至室温后，将反应混合物通过硅藻土过滤以除去不溶物，滤液真空浓缩。将残余物溶于乙酸乙酯，溶液用水和盐水洗。有机溶液经硫酸钠干燥，真空浓缩。所得残余物经硅胶柱色谱法纯化(10％乙酸乙酯的石油醚溶液)，得到化合物103-1(3.0g，67％收率)为无色固体。ESIm/z:391(M+Na)+。
9H-芴-9-基甲基N-{[({2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基}甲基)氨基甲酰基]甲基}氨基甲酸酯(103-2a)
Figure BDA0002666727490001971
在0℃下，向化合物103-1(0.37g，1.0mmol)和布地奈德1a(1.3g，3.0mmol)的THF(4mL)溶液中加入叔丁醇钾(0.22g，2.0mmol)。反应混合物在RT下搅拌15分钟，通过TLC进行监测。在0℃下，向反应溶液中加入乙酸乙酯和水，并用乙酸乙酯和氯仿萃取。合并的有机溶液经硫酸钠干燥，真空浓缩。所得残余物经硅胶柱色谱法纯化(30-35％乙酸乙酯的石油醚溶液)，得到化合物103-2a(0.19g，40％收率)为白色固体。ESIm/z:739(M+H)+。
9H-芴-9-基甲基N-{[({2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基}甲基)氨基甲酰基]甲基}氨基甲酸酯(103-2b)
Figure BDA0002666727490001972
在室温下，向密封管中加入化合物103-1(0.30g，0.81mmol)和化合物100(0.38g，0.81mmol)的DCM(4mL)与对甲苯磺酸吡啶鎓(21mg，81μmol)溶液。将反应管密封并在50℃下搅拌24小时，通过LCMS进行监测。冷却后，将反应混合物真空浓缩，残余物经制备型HPLC(方法A)纯化，得到化合物103-2b(0.23g，37％收率)为白色固体。ESIm/z:775(M+H)+。
2-氨基-N-({2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基}甲基)乙酰胺(103a)
Figure BDA0002666727490001973
向化合物103-2a(0.10g，0.14mmol)的DMF(2mL)溶液中加入哌啶(35mg，0.41mmol)。反应混合物在室温下搅拌2小时，直至完全脱去Fmoc，通过LCMS进行监测。所得混合物经反相快速色谱法直接纯化(0-100％乙腈的TFA(0.05％)水溶液)，得到化合物103a(50mg，70％收率)为白色固体。ESIm/z:517.6(M+H)+。
2-氨基-N-({2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基}甲基)乙酰胺(103b)
Figure BDA0002666727490001981
根据与103a类似的方法，不同之处在于用103-2b代替103-2a，得到化合物103b(0.26g，65％收率)为白色固体。ESIm/z:553.2(M/2+H)+。
Figure BDA0002666727490001982
化合物105(b)根据上述方法制备得到。
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-[1-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04，9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧丁酰胺基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基]-3-甲基丁酰胺基]-5-(氨基甲酰基氨基)戊酰胺基]苯基}甲基N-{[({2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12S,13R)-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基}甲基)氨基甲酰基]甲基}氨基甲酸酯(LP9)
Figure BDA0002666727490001991
向化合物103a(15mg，29μmol)的DMF(1.0mL)溶液中加入化合物11b(30mg，28μmol)、HOBT(2.0mg，15μmol)和DIPEA(7.7mg，60μmol)。反应混合物在室温下搅拌2小时，通过LCMS进行监测。混合物直接经制备型HPLC(方法B)纯化，得到连接体-有效负载LP9(5.0mg，11％收率)为白色固体。ESIm/z:729(M/2+H)+。
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-[1-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04，9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧丁酰胺基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基]-3-甲基丁酰胺基]-5-(氨基甲酰基氨基)戊酰胺基]苯基}甲基N-{[({2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02 ，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基}甲基)氨基甲酰基]甲基}氨基甲酸酯(LP10)
Figure BDA0002666727490001992
根据与LP9类似的方法，不同之处在于用103b代替103a，得到连接体-有效负载LP10(23mg，58％收率)为白色固体。ESIm/z:747.0(M/2+H)+；513.8(由LCMS裂解的片段，在NHCH2-O处裂解的碎片)。1H NMR(400MHz,DMSOd6)δ10.02(s,1H),8.80-8.72(m,1H),8.15(d,J＝6.8Hz,1H),7.89(d,J＝8.8Hz,1H),7.80-7.75(m,1H),7.68(d,J＝7.6Hz,1H),7.64-7.58(m,3H),7.54-7.22(m,9H),6.29(d,J＝10.0Hz,1H),6.10(s,1H),6.04-5.96(m,1H),5.78-4.10(m,15H),3.66-3.54(m,5H),3.54-3.42(m,13H),3.32-3.26(m,2H),3.20-2.50(m,7H),2.42-2.20(m,4H),2.05-1.90(m,4H),1.85-1.25(m,15H),0.90-0.80(m,13H)ppm。
方案103B.连接体-有效负载LP11的合成
Figure BDA0002666727490002001
(2S)-2-(2-{2-[1-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04，9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧丁酰胺基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基]乙酰胺基}乙酰胺基)-3-苯基丙酸(103-3)
Figure BDA0002666727490002002
向化合物5c(0.16g，0.29mmol)的DCM(20mL)溶液中加入HOSu(73mg，0.64mmol)和EDCI(0.12g，0.64mmol)。混合物在室温下搅拌24小时，直至根据LCMS监测化合物5c完全耗尽。所得混合物用DCM(50mL)稀释，有机溶液用水(50mL)和盐水(50mL)洗，经无水硫酸钠干燥，真空浓缩，得到OSu活性酯(0.16g，84％收率)为无色油状物，将其直接用于下一步骤。
向H-Gly-Gly-Phe-OH(10mg，36μmol)的DMF(0.5mL)溶液中加入上述获得的OSu活性酯(23mg，36μmol)和DIPEA(9.0mg，72μmol)。反应混合物在室温下搅拌过夜。混合物经制备型HPLC(方法B)直接纯化，得到化合物103-3(15mg，51％收率)为白色固体。ESIm/z:408.2(M/2+H)+。
1-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04，9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧丁酰胺基)-N-{[({[(1S)-1-({[({2-[(19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基}甲基)氨基甲酰基]甲基}氨基甲酰基)-2-苯乙基]氨基甲酰基}甲基)氨基甲酰基]甲基}-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺(LP11)
Figure BDA0002666727490002003
向化合物103-3(15mg，18μmol)的DMF(0.5mL)溶液中加入HATU(14mg，36μmol)和DIPEA(9.3mg，72μmol)。反应混合物在室温下搅拌10分钟，然后将化合物103b(10mg，18μmol)加至混合物中。将反应混合物在室温下搅拌过夜。所得混合物经制备型HPLC(方法B)直接纯化，得到连接体-有效负载LP11(5.0mg，20％收率)为白色固体。ESIm/z:420.2(M/3+H)+。
二肽前体药物的合成：连接体-有效负载LP12的合成
方案104A.有效负载104a的合成
Figure BDA0002666727490002011
α-叠氮基异丁酸104-1是根据Org.Lett.,2001,3(5),781-783合成得到。
2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基2-叠氮基-2-甲基丙酸酯(104-2a)
Figure BDA0002666727490002012
向化合物100(0.10g，0.21mmol)的DCM(30mL)溶液中加入化合物104-1(52mg，0.40mmol)、DCC(90mg，0.44mmol)和DMAP(10mg)，混合物在室温下搅拌过夜，通过LCMS进行监测。将所得混合物真空浓缩，残余物经制备型HPLC(方法A)纯化，得到化合物104-2a(80mg，70％收率)为白色固体。ESIm/z:578.3(M+H)+。
2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基2-氨基-2-甲基丙酸酯(104-3a)
Figure BDA0002666727490002013
向化合物104-2a(75mg，0.15mmol)的THF(5mL)溶液中加入PPh3(0.15g，0.57mmol)、水(5mL)和浓HCl(1滴)，反应混合物在RT下搅拌过夜。将混合物真空浓缩，并用DMF稀释。过滤除去沉淀物。滤液经制备型HPLC(方法A)纯化，得到化合物104-3a(45mg，54％收率)为白色固体。ESIm/z:552.3(M+H)+。
2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基2-[(2S)-2-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-4-甲基戊酰胺基]-2-甲基丙酸酯(104-4a)
Figure BDA0002666727490002021
向Boc-Leu-OH(20mg，87μmol)和HATU(50mg，0.13mmol)的DMF(3mL)混合物中加入DIPEA(30mg，0.23mmol)、DMAP(2mg)和化合物104-3a(30mg，54μmol)。混合物在室温下搅拌1小时，通过LCMS进行监测。所得混合物经制备型HPLC(方法A)直接纯化，得到化合物104-4a(25mg，55％收率)为白色固体。ESIm/z:787.4(M+Na)+。
2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基2-[(2S)-2-氨基-4-甲基戊酰胺基]-2-甲基丙酸酯(104a)
Figure BDA0002666727490002022
向化合物104-4a(25mg，33μmol)的DCM(1.5mL)混合物中加入TFA(0.15mL)，并将混合物在RT下搅拌1小时，直至根据LCMS监测Boc已完全脱去。将反应混合物真空浓缩，所得残余物经制备型HPLC(方法A)纯化，得到化合物104a(13mg，61％收率)为白色固体。ESIm/z:665.4(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSOd6)δ8.39(s,1H),8.26(s,1H),7.27(d,J＝10.0Hz,1H),6.31(d,J＝10.1Hz,1H),6.11(s,1H),5.63(t,J＝24.2Hz,2H),5.30-5.05(m,1H),4.96(d,J＝17.7Hz,1H),4.81-4.65(m,2H),4.20(s,1H),2.69-2.54(m,1H),2.36-2.15(m,1H),2.12-1.94(m,2H),1.85-1.63(m,2H),1.63-1.53(m,3H),1.52-1.41(m,11H),1.41-1.10(m,6H),0.97-0.76(m,12H)ppm。
方案104B.连接体-有效负载LP12的合成
Figure BDA0002666727490002031
(2S)-2-{[({4-[(2S)-5-(氨基甲酰基氨基)-2-[(2S)-2-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}-3-甲基丁酰胺基]戊酰胺基]苯基}甲氧基)羰基]氨基}-4-甲基戊酸叔丁酯(104-5)
Figure BDA0002666727490002032
向化合物11b(0.30g，0.39mmol)和H-Leu-OTBU-OH(0.14g，0.63mmol)的DMF(3mL)溶液中加入DIPEA(0.26g，2.0mmol)，反应混合物在室温下搅拌2小时。所得混合物经制备型HPLC(方法A)直接纯化，得到化合物104-5(0.11g，35％收率)为白色固体。ESIm/z:815.4(M+H)+。
(2S)-2-{[({4-[(2S)-5-(氨基甲酰基氨基)-2-[(2S)-2-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}-3-甲基丁酰胺基]戊酰胺基]苯基}甲氧基)羰基]氨基}-4-甲基戊酸(104-6)
Figure BDA0002666727490002041
向化合物104-5(25mg，31μmol)的DCM(4mL)溶液中加入TFA(0.8mL)，混合物在室温下搅拌2小时。将所得混合物真空浓缩，残余物经制备型HPLC(方法A)纯化，得到化合物104-6(15mg，67％收率)为白色固体。ESIm/z:759.3(M+H)+。
2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基2-[(2S)-2-{[({4-[(2S)-5-(氨基甲酰基氨基)-2-[(2S)-2-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}-3-甲基丁酰胺基]戊酰胺基]苯基}甲氧基)羰基]氨基}-4-甲基戊酰胺基]-2-甲基丙酸酯(104-7a)
Figure BDA0002666727490002042
向化合物104-5(20mg，26μmol)和化合物104-3(17mg，32μmol)的DMF(2mL)溶液中加入HATU(20mg，52μmol)、DIPEA(13mg，0.10mmol)和DMAP(1mg)，反应混合物在室温下搅拌1小时，通过LCMS进行监测。所得混合物经制备型HPLC(方法A)直接纯化，得到化合物104-7a(30mg，89％收率)为白色固体。ESIm/z:1293(M+H)+。
2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基2-[(2S)-2-{[({4-[(2S)-2-[(2S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺基]-5-(氨基甲酰基氨基)戊酰胺基]苯基}甲氧基)羰基]氨基}-4-甲基戊酰胺基]-2-甲基丙酸酯(104-8a)
Figure BDA0002666727490002051
向化合物104-7a(25mg，19μmol)的DMF(2mL)溶液中加入哌啶(0.2mL)，混合物在室温下搅拌半小时，直至根据LCMS监测已完全脱去Fmoc。将反应混合物立即通过反相快速色谱法纯化(0-50％乙腈的TFA(0.03％)水溶液)，得到化合物104-8a(20mg，95％收率)为白色固体。ESIm/z:1070.5(M+H)+。
2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基2-[(2S)-2-{[({4-[(2S)-2-[(2S)-2-[1-({[內型二环[6.1.0]壬-4-炔-9-基甲氧基]羰基}氨基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基]-3-甲基丁酰胺基]-5-(氨基甲酰基氨基)戊酰胺基]苯基}甲氧基)羰基]氨基}-4-甲基戊酰胺基]-2-甲基丙酸酯(LP12)
Figure BDA0002666727490002052
向化合物104-8a(20mg，26μmol)和化合物5d(14mg，32μmol)的DMF(2mL)溶液中加入HATU(22mg，58μmol)、DIPEA(15mg，0.12mmol)和DMAP(1mg)，反应混合物在RT下搅拌2小时，通过LCMS进行监测。所得混合物经制备型HPLC(方法A)直接纯化，得到连接体-有效负载LP12(10mg，21％收率)为白色固体。ESIm/z:747.6(M/2+H)+。1H NMR(400MHz,DMSOd6)δ9.97(s,1H),8.35-8.25(m,1H),8.11(d,J＝7.4Hz,1H),7.87(d,J＝8.6Hz,1H),7.58(d,J＝8.2Hz,2H),7.34-7.18(m,4H),7.17-7.04(m,1H),6.30(d,J＝10.1Hz,1H),6.11(s,1H),6.03-5.90(s,1H),5.72-5.50(m,2H),5.41(s,2H),5.34-3.91(m,12H),3.66-3.38(m,15H),3.15-2.88(m,4H),2.73-2.53(m,1H),2.50-2.45(m,1H),2.41-2.31(m,1H),2.30-1.90(m,9H),1.83-1.62(m,2H),1.63-1.17(m,27H),0.92-0.77(m,20H)ppm。
方案104C.有效负载104b及其连接体-有效负载LP13的合成
Figure BDA0002666727490002061
2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基(2S)-2-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}-4-甲基戊酸酯(104-2b)
Figure BDA0002666727490002062
向化合物100(0.47g，1.0mmol)和Fmoc-Leu-OH(0.39g，1.1mmol)的DCM(10mL)溶液中加入EDCI(0.23g，1.2mmol)和DMAP(12mg，0.10mmol)。混合物在室温下搅拌16小时，通过LCMS进行监测。所得混合物用水(50mL)稀释，并用DCM(50mL×2)萃取。合并的有机溶液经硫酸钠干燥，真空浓缩。所得残余物经硅胶柱色谱法纯化(10-50％乙酸乙酯的石油醚溶液)，得到化合物104-2b(0.52g，65％收率)为白色固体。ESIm/z:802.4(M+H)+。
2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基(2S)-2-氨基-4-甲基戊酸酯(104-3b)
Figure BDA0002666727490002071
向化合物104-2b(0.50g，0.62mmol)的DCM(9mL)溶液中加入哌啶(1mL)，反应混合物在RT下搅拌30分钟，直至根据LCMS监测Fmoc已完全脱去。将所得混合物真空浓缩。残余物经硅胶柱色谱法纯化(5-10％甲醇的DCM溶液)，得到化合物104-3b(0.32g，90％收率)为白色固体。ESIm/z:580.3(M+H)+。
2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基(2S)-2-[(2S)-2-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-3-羟基丙酰胺基]-4-甲基戊酸酯(104-4b)
Figure BDA0002666727490002072
在室温下，向化合物104-3b(0.32g，0.55mmol)和Boc-Ser-OH(0.14g，0.66mmol)的DMF(3mL)混合物中加入HATU(0.25g，0.66mmol)和DIPEA(0.21g，1.6mmol)。混合物在室温下搅拌6小时，通过LCMS进行监测。将所得混合物真空浓缩，残余物经硅胶柱色谱法纯化(10-50％乙酸乙酯的石油醚溶液)，得到化合物104-4b(0.34mg，80％收率)为白色固体。ESIm/z:767.4(M+H)+。
2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基(2S)-2-[(2S)-2-氨基-3-羟基丙酰胺基]-4-甲基戊酸酯三氟乙酸盐(104b)
Figure BDA0002666727490002081
向化合物104-4b(0.34g，0.44mmol)的DCM(5mL)溶液中加入TFA(1mL)。反应混合物在室温下搅拌2小时，直至根据LCMS监测Boc已完全脱去。将所得混合物浓缩，残余物(0.33g，95％收率)足够纯，可用于下一步骤。100mg粗产物经制备型HPLC(方法A)进一步纯化，得到化合物104b(80mg，80％收率)为黄色固体。ESIm/z:667.3(M+H)+。
2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基(2S)-2-[(2S)-2-{[({4-[(2S)-2-[(2S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺基]-5-(氨基甲酰基氨基)戊酰胺基]苯基}甲氧基)羰基]氨基}-3-羟基丙酰胺基]-4-甲基戊酸酯(104-8b)
Figure BDA0002666727490002082
在室温下，向以上新鲜获得的粗制化合物104b(0.10g，0.13mmol)的DMF(3mL)溶液中加入Fmoc-vcPAB-PNP(11d)(0.12g，0.16mmol)、DMAP(16mg，0.13mmol)和DIPEA(50mg，0.39mmol)。混合物在室温下搅拌3小时，直至消耗完大部分起始物料，通过LCMS进行监测。然后向反应混合物中加入哌啶(1mL)。在室温下搅拌1小时，直至根据LCMS监测Fmoc已完全脱去。反应混合物经制备型HPLC(方法B)直接纯化，得到化合物104-8b(28mg，20％收率)为白色固体。ESIm/z:536.8(M/2+H)+。
2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙基(2S)-2-[(2S)-2-{[({4-[(2S)-2-[(2S)-2-[1-({[內型二环[6.1.0]壬-4-炔-9-基甲氧基]羰基}氨基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基]-3-甲基丁酰胺基]-5-(氨基甲酰基氨基)戊酰胺基]苯基}甲氧基)羰基]氨基}-3-羟基丙酰胺基]-4-甲基戊酸酯(LP13)
Figure BDA0002666727490002091
在室温下，向化合物5d(10mg，22μmol)的DMF(1mL)溶液中依次加入HATU(9mg，22μmol)和DIPEA(8.0mg，62μmol)。混合物在室温下搅拌半小时，然后加入化合物104-8b(20mg，19μmol)的DMF(1mL)溶液。所得混合物在室温下搅拌2小时，直至化合物104-8b耗尽，通过LCMS进行监测。混合物通过膜过滤后，滤液直接经制备型HPLC(方法B)纯化，得到连接体-有效负载LP13(10mg，35％收率)为白色固体。ESIm/z:748.4(M/2+H)+。
方案105.LP18-21的合成
Figure BDA0002666727490002101
Figure BDA0002666727490002111
2,5-二氧吡咯烷-1-基1-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04，9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧丁酰胺基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酸酯(5-1c)
Figure BDA0002666727490002112
向化合物5c(160mg，0.290mmol)的DCM(20mL)溶液中加入HOSu(73.3mg，0.637mmol)和EDCI(122mg，0.637mmol)，混合物在室温下搅拌24小时，由LCMS进行监测。反应混合物用DCM(50mL)稀释，有机层用水(50mL)和盐水洗，经无水Na2SO4干燥，真空浓缩，得到化合物5-1c(159mg，84％收率)为无色油状物，其可直接用于下一步骤。ESIm/z:650(M+H)+。
2,5-二氧吡咯烷-1-基1-[({內型二环[6.1.0]壬-4-炔-9-基甲氧基}羰基)氨基]-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酸酯(5-1d)
Figure BDA0002666727490002113
根据与5-1c类似的方法，不同之处在于用5d代替5c，得到化合物5-1d(150mg，54％收率)为无色油状物，其无需进一步纯化即可直接用于下一步骤。ESIm/z:539(M+H)+。
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺基]-5-(氨基甲酰基氨基)戊酰胺基]苯基}甲基N-{[({2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基}甲基)氨基甲酰基]甲基}氨基甲酸酯(103-8b)
Figure BDA0002666727490002121
根据与104-8b类似的方法(参见方案104C)，不同之处在于用103b代替104b，得到化合物103-8b(28mg，20％收率)为白色固体。ESIm/z:480(M/2+H)+。
(4S)-4-氨基-4-{[(1S)-1-{[(1S)-4-(氨基甲酰基氨基)-1-[(4-{[({[({2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基}甲基)氨基甲酰基]甲基}氨基甲酰基)氧基]甲基}苯基)氨基甲酰基]丁基]氨基甲酰基}-2-甲基丙基]氨基甲酰基}丁酸(103-9a)
Figure BDA0002666727490002122
向化合物Boc-L-Glu(OTBU)-OH(0.15g，0.50mmol)的DMF(5mL)溶液中加入HATU(0.19g，0.50mmol)和DIPEA(0.13g，1.0mmol)。反应混合物在室温下搅拌10分钟，然后将化合物103-8b(0.48g，0.50mmol)加至反应混合物中。然后反应混合物在室温下搅拌3小时，直至根据LCMS监测103-8b完全耗尽。混合物用EtOAc萃取，合并的有机溶液用水洗，经无水硫酸钠干燥，真空浓缩。将残余物溶于DCM(10mL)。向溶液中加入TFA(2mL)，反应混合物在室温下搅拌3小时，通过LCMS进行监测。浓缩反应混合物，残余物经制备型HPLC(方法B)直接纯化，得到化合物103-9a(0.41g，75％收率)为白色固体。ESIm/z:536.8(M/2+H)+。
(4R)-4-氨基-4-{[(1S)-1-{[(1S)-4-(氨基甲酰基氨基)-1-[(4-{[({[({2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基}甲基)氨基甲酰基]甲基}氨基甲酰基)氧基]甲基}苯基)氨基甲酰基]丁基]氨基甲酰基}-2-甲基丙基]氨基甲酰基}丁酸(103-9b)
Figure BDA0002666727490002131
根据与103-9a类似的方法，不同之处在于用Boc-D-Glu(OTBU)-OH代替
Boc-L-Glu(OTBU)-OH，得到化合物103-9b(0.40g，74％收率)为白色固体。ESIm/z:536.8(M/2+H)+。(4S)-4-氨基-4-{[(1S)-1-{[(1S)-4-(氨基甲酰基氨基)-1-({4-[({[(1S)-1-{[(2S)-1-{2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基}-4-甲基-1-氧戊烷-2-基]氨基甲酰基}-2-羟基乙基]氨基甲酰基}氧基)甲基]苯基}氨基甲酰基)丁基]氨基甲酰基}-2-甲基丙基]氨基甲酰基}丁酸(104-9a)
Figure BDA0002666727490002132
根据与103-9a相似的方法，不同之处在于用104-8b代替103-8b，得到化合物104-9a(0.39g，65％收率)为白色固体。ESIm/z:601.3(M/2+H)+。
(4R)-4-氨基-4-{[(1S)-1-{[(1S)-4-(氨基甲酰基氨基)-1-({4-[({[(1S)-1-{[(2S)-1-{2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基}-4-甲基-1-氧戊烷-2-基]氨基甲酰基}-2-羟基乙基]氨基甲酰基}氧基)甲基]苯基}氨基甲酰基)丁基]氨基甲酰基}-2-甲基丙基]氨基甲酰基}丁酸(104-9b)
Figure BDA0002666727490002141
根据与103-9a相似的方法，不同之处在于用104-8b代替103-8b，以及用Boc-D-Glu(OTBU)-OH代替Boc-L-Glu(OTBU)-OH，得到化合物104-9b(0.39g，65％收率)为白色固体。ESIm/z:601.3(M/2+H)+。(4S)-4-[1-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04，9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧丁酰胺基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基]-4-{[(1S)-1-{[(1S)-4-(氨基甲酰基氨基)-1-[(4-{[({[({2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02 ，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基}甲基)氨基甲酰基]甲基}氨基甲酰基)氧基]甲基}苯基)氨基甲酰基]丁基]氨基甲酰基}-2-甲基丙基]氨基甲酰基}丁酸(LP18)
Figure BDA0002666727490002142
向化合物103-9a(57mg，53μmol)的DMF(1mL)溶液中加入化合物5-1c(36mg，56μmol)和DIPEA(27mg，0.21mmol)。反应混合物在室温下搅拌4小时，通过LCMS进行监测。然后将所得混合物经制备型HPLC(方法B)直接纯化，得到化合物LP18(12mg，15％收率)为白色固体。ESIm/z:811.4(M/2+H)+。
(4R)-4-[1-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04，9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧丁酰胺基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基]-4-{[(1S)-1-{[(1S)-4-(氨基甲酰基氨基)-1-[(4-{[({[({2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基}甲基)氨基甲酰基]甲基}氨基甲酰基)氧基]甲基}苯基)氨基甲酰基]丁基]氨基甲酰基}-2-甲基丙基]氨基甲酰基}丁酸(LP19)
Figure BDA0002666727490002151
根据与LP18类似的方法，不同之处在于用103-9b代替103-9a，得到化合物LP19(14mg，17％收率)为白色固体。ESIm/z:811.4(M/2+H)+。
(4S)-4-{1-[({內型二环[6.1.0]壬-4-炔-9-基甲氧基}羰基)氨基]-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基}-4-{[(1S)-1-{[(1S)-4-(氨基甲酰基氨基)-1-({4-[({[(1S)-1-{[(2S)-1-{2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基}-4-甲基-1-氧戊烷-2-基]氨基甲酰基}-2-羟基乙基]氨基甲酰基}氧基)甲基]苯基}氨基甲酰基)丁基]氨基甲酰基}-2-甲基丙基]氨基甲酰基}丁酸(LP20)
Figure BDA0002666727490002152
向化合物104-9a(64mg，53μmol)的DMF(1mL)溶液中加入化合物5-1d(30mg，56μmol)和DIPEA(27mg，0.21mmol)。反应混合物在室温下搅拌4小时，通过LCMS进行监测。然后将所得混合物经制备型HPLC(方法B)直接纯化，得到化合物LP20(17mg，20％收率)为白色固体。ESIm/z:813.0(M/2+H)+。
(4R)-4-{1-[({內型二环[6.1.0]壬-4-炔-9-基甲氧基}羰基)氨基]-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基}-4-{[(1S)-1-{[(1S)-4-(氨基甲酰基氨基)-1-({4-[({[(1S)-1-{[(2S)-1-{2-[(1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-12,19-二氟-11-羟基-9,13-二甲基-16-氧-6-丙基-5,7-二氧杂五环[10.8.0.02，9.04，8.013，18]二十烷-14,17-二烯-8-基]-2-氧乙氧基}-4-甲基-1-氧戊烷-2-基]氨基甲酰基}-2-羟基乙基]氨基甲酰基}氧基)甲基]苯基}氨基甲酰基)丁基]氨基甲酰基}-2-甲基丙基]氨基甲酰基}丁酸(LP21)
Figure BDA0002666727490002161
根据与LP20类似的方法，不同之处在于用104-9b代替104-9a，得到化合物LP21(14mg，17％收率)为白色固体。ESIm/z:813.0(M/2+H)+。
下表5a示出了使用本发明所述方法制得的连接体有效负载。
表5a.连接体-有效负载的实例
Figure BDA0002666727490002162
Figure BDA0002666727490002171
Figure BDA0002666727490002181
表6a.连接体-有效负载的表征数据
Figure BDA0002666727490002182
Figure BDA0002666727490002191
实施例2
本实施例示出了炔烃-连接体-有效负载与抗体的位点特异性偶联的特定方法。
在本实施例中，所述位点特异性偶联物分两步生成。第一步是将小分子，例如叠氮化物-PEG3-胺(同上)通过基于MTG的酶连接至具有Q标签(Q-tag)的抗体(例如，WO2017/147542)(以下称为“基于MTG”的偶联)。具有N297Q突变或N297D突变的抗体具有Q295/Q297或Q295，其尤其适合与MTG连接以进行基于酶的位点特异性偶联，其中Q295和/或Q297被定义为Q标签(Qtag)。第二步是通过[2+3]环加成，例如叠氮化物和环辛炔之间的1,3-偶极环加成(又称无铜点击化学反应)，将连接体-有效负载连接至叠氮基官能化抗体上。参见Baskin,J.M.；Prescher,J.A.；Laughlin,S.T.；Agard,N.J.；Chang,P.V.；Miller,I.A.；Lo,A.；Codelli,J.A.；Bertozzi,C.R.PNAS2007,104(43),16793-7，其全部内容通过引用其全文并入本发明用于所有目的。当活性基团(RG)是DIBAC基团部分时，通过[2+3]环加成反应与叠氮基官能化抗体进行偶联。此方法提供了位点特异性和化学计量的偶联物。
通过[2+3]点击反应的ADC偶联。
步骤1：叠氮基官能化抗体的制备
在PBS(pH6.5-8.0)中，将无糖基化的人抗体IgG(IgG1、IgG4等)或具有N297Q突变(EU编号)的人IgG1同种型与≥200摩尔当量的叠氮基-dPEG3-胺(MW＝218.26g/mol)混合。将所得溶液与MTG(来自德国(Germany)达姆施塔特(Darmstadt)Zedira的EC2.3.2.13，或ModernistPantry[L#210115A]-ACTIVATI包含来自日本(Japan)味之素(Ajinomoto)的麦芽糖糊精(Maltodextrin))(25U/mL；5U MTG/mg抗体)混合，使得最终抗体浓度为0.5-5mg/mL，然后将溶液在37℃下孵育4-24小时，同时轻轻振摇。反应通过ESI-MS进行监测。反应完成后，通过SEC或蛋白A柱色谱法除去过量的胺和MTG，生成叠氮基官能化抗体。此产品通过SDS-PAGE和ESI-MS进行表征。将叠氮基-dPEG3-胺添加至抗体的两个位点，使得2DAR抗体-PEG3-叠氮化物偶联物增加204Da。
步骤2：使用点击化学反应来制备药物与抗体的位点特异性偶联物。
通过叠氮基官能化抗体与含有连接体-有效负载的炔烃之间的[2+3]点击反应，制备得到表7中具有人IgG(IgG1、IgG4等)的位点特异性抗体药物偶联物。详细的偶联过程如下。通过将mAb-PEG3-N3(1-3mg/mL)在溶于适当有机溶剂(如DMSO、DMF或DMA)(即，反应混合物包含5-20％的有机溶剂，v/v)中的≥6摩尔当量LP的水性介质(例如PBS，含5％甘油的PBS，HBS)中，在24℃至37℃下孵育6小时，来制备具有连接体-有效负载(LP)的位点特异性抗体偶联物。通过ESI-MS监测反应进程，若不存在mAb-PEG3-N3，表明偶联完成。通过SEC用PBS进行洗脱，或通过蛋白A柱色谱用酸性缓冲液进行洗脱，然后用Tris(pH8.0)中和，来除去过量的LP和有机溶剂。
通过超速离心法浓缩最终产物，并通过UV、SEC、SDS-PAGE和ESI-MS进行表征。
实施例3
本实施例说明了使用硫醇-马来酰亚胺反应，使药物与抗体非特异性偶联的方法。
使用与MolPharm.2015Jun1；12(6):1863-71中记载的方法相似的方法，通过抗体半胱氨酸的偶联分两步进行。
用1mM二硫苏糖醇(0.006mg/mg抗体)或TCEP(相当于抗体2.5摩尔)在pH7.5下、于37℃下还原单克隆抗体(mAb，10mg/ml，50mM HEPES，150mM NaCl)30分钟。基于在Nanodrop(ThermoFisher Scientific)上在280nm处的吸光度和抗体的消光系数来计算抗体的浓度。凝胶过滤(G-25，pH 4.5乙酸钠)后，将LP化合物的DMSO溶液(10mg/mL)加至经还原的抗体中，混合物用1M HEPES(pH7.4)调至pH7.0。使反应物反应3-14小时。所得偶联物通过SEC进行纯化。DAR(UV)值是使用ncADC的吸光度以及抗体和LP化合物的消光系数来确定。
实施例4
ADC偶联物
在其中一个实施例，通过微生物转谷氨酰胺酶(MTG EC 2.3.2.13，Zedira，Darmstadt，Germany)(本本发明中称为“基于MTG”)两步偶联N297Q或N297D突变的抗体而生成位点特异性偶联物。在第一步骤中，通过基于MTG的酶促反应，用叠氮基-PEG3-胺使N297Q突变的抗体官能化。参见例如，于2017年2月24日提交的国际PCT专利申请号PCT/US17/19537，其通过引用其整体并入本发明用于所有目的。在第二步骤中，通过与经由[2+3]环化衍生的叠氮基官能化抗体偶联的[2+3]1,3-偶极环加成反应，将炔烃官能化的连接体-有效负载连接至叠氮基官能化的抗体上。此方法提供了位点特异性和化学计量的偶联物。
实施例5
以下实施例说明了制备表7中所列的叠氮基官能化抗体药物偶联物的方法。
Figure BDA0002666727490002211
将具有人IgG1同种型的无糖基化抗体的BupHTM溶液(pH7.6-7.8)与≥200摩尔当量的叠氮基-dPEG3-胺(MW.218.26g/mol)混合。将所得溶液与转谷氨酰胺酶(25U/mL；5U MTG/mg抗体)混合，使得抗体的终浓度为0.5-10mg/mL，然后将溶液在37℃下孵育4-24小时，同时轻轻振荡。通过SDS-PAGE或ESI-MS监测反应。反应完成后，通过体积排除色谱法(SEC)除去过量的胺和MTG，以生成叠氮基官能化抗体。此产物在SDS-PAGE和ESI-MS上进行分析。将叠氮基-dPEG3-胺添加至抗体的两个位点-Q295和Q297-，使得所述4DAR无糖基化的抗体-PEG3-叠氮化物偶联物增加804Da。
以下实施例说明了使用点击化学反应制备药物与抗体的位点特异性偶联物的方法。
通过叠氮基官能化抗体与含有连接体-有效负载的炔烃之间的[2+3]点击反应来制备具有含N297Q突变的人IgG1的位点特异性无糖基化抗体药物偶联物。具体而言，抗PRLRAb-PEG3-N3与2b、2g、2l、2r或2s进行偶联；以及抗HER2Ab-PEG3-N3与2b、2g、2l、2r或2s进行偶联。这些抗HER2抗体偶联物被合成以用作本发明所述测定试验中的同种型对照。在下文中，为了方便起见，将抗HER2抗体称为“同种型”抗体。
详细的偶联程序如下。通过将mAb-PEG3-N3(1-3mg/mL)在溶于适当有机溶剂(如DMSO、DMF或DMA)(即，反应混合物包含5-20％的有机溶剂，v/v)中的≥6摩尔当量LP的水性介质(例如PBS，含5％甘油的PBS，HBS)中，在24℃至37℃下孵育6小时，来制备具有连接体-有效负载(LP或2)的位点特异性抗体偶联物。通过ESI-MS监测反应进程，若不存在mAb-PEG3-N3，表明偶联完成。通过SEC用PBS进行洗脱，或通过蛋白A柱色谱用酸性缓冲液进行洗脱，然后用Tris(pH8.0)中和，来除去过量的LP和有机溶剂。所述经纯化的偶联物通过SEC、SDS-PAGE和ESI-MS进行分析。表7中列出了来自相应LP的类固醇抗体偶联物，其分子量和ESI-DAR值。
在具体实施例中，在室温下，用6摩尔当量的2b(浓度为10mg/mL的DMSO溶液)处理0.800mLPBSg(PBS，5％甘油，pH7.4)中的叠氮基官能化抗体(1mg)6至12小时，然后通过体积排除色谱法(SEC，Superdex200HR，GEHealthcare)除去过量的连接体有效负载(LP)。通过超速离心法浓缩最终产物，并通过UV、SEC、SDS-PAGE和ESI-MS进行表征。
实施例6
ADC的表征
SDS-PAGE用于分析ADC的完整性和纯度。
在其中一种方法，SDS-PAGE运行条件包括未经还原和经还原的样品(2-4μg)以及BenchMark预染色蛋白梯(BenchMark Pre-Stained Protein Ladder，Invitrogen，目录号10748-010；L#1671922.)，每个泳道的载量为(1.0mm x10孔)Novex 4-20％Tris-GlycineGel(甘氨酸凝胶)，并在180V、300mA下运行80分钟。使用Novex Tris-甘氨酸SDS缓冲液(2X，2倍)(Novex Tris-Glycine SDS buffer，Invitrogen，目录号LC2676)来制备未经还原的样品，并使用含10％2巯基乙醇的SDS样品缓冲液(2X，2倍)来制备经还原的样品。
在非还原和还原条件下测定SDS-PAGE上抗体和ncADC的分子量。在非还原条件下，质量变化可能并不明显，因为质量变化的百分比相对较小。然而，重链的质量从裸抗体到叠氮基官能化抗体，再到ncADC偶联物，均增加了。交联的材料可能会或可能不会被检测到。
通过体积排除色谱法(SEC)来分析ADC的纯度。
为了确定抗体药物偶联物的纯度，进行体积排除色谱法。使用Waters 600仪器在Superdex200(1.0x30cm)HR色谱柱上以0.80mL/min的流速使用PBSpH7.4进行分析型SEC实验，并使用Waters2998PDA在λ280nm处进行监测。分析样品由200μLPBS(pH7.4)和30-100μL测试样品组成。使用GE Healthcare的AKTA仪器在Superdex 200PG(2.6x60cm)色谱柱上以2mL/min的流速用pH7.4的PBSg洗脱，进行制备型SEC纯化，并在λ280nm处进行监测。
抗体和ADC通过LC-ESI-MS的完整质量分析进行分析，如下所述。
通过LC-ESI-MS对ADC样品的完整质量进行测定，以确定药物-有效负载分布曲线并计算平均DAR。将每个测试样品(20-50ng，5uL)上样到Acquity UPLC ProteinBEHC4色谱柱(10K psi，
Figure BDA0002666727490002232
1.7μm，75μm×100mm；目录号186003810)。脱盐3分钟后，洗脱蛋白质，并通过Waters Synapt G2-Si质谱仪得到质谱。
表7总结了来自相应LP(2b、2g、2l、2r和2s)的布地奈德-间隔基-连接体抗体偶联物，其裸抗体的分子量、叠氮基官能化的抗体、LP、类固醇ADC、以及ESI-DAR值的列表。在表中，Ab是指抗体，Ab-N3是指叠氮基官能化抗体，和Ab-类固醇偶联物是指具有相应LP的非细胞毒性类固醇抗体偶联物。如表7所示，大多数位点特异性ADC具有4DAR。
表7.
Figure BDA0002666727490002231
Figure BDA0002666727490002241
实施例7
基于糖皮质激素受体(GR)共激活剂荧光素酶报告细胞的测定法用于分析布地奈德和本发明所述的类固醇的GR激活与时间的函数。
为了生成测定细胞系，对HEK293细胞系进行了工程改造以表达人全长PRLR。然后用pBIND-GR载体(目录号E1581，Promega)和pGL4.35[Luc2P/9xGAL4UAS/Hygro]载体(目录号E1370，Promega)进一步转染此种稳定的细胞系，从而使类固醇与GR结合后转录荧光素酶基因。所得稳定细胞系在本发明中称为HEK293/PRLR/GRE-Luc。
加入测试试剂后，在孵育24、48和72小时时研究了HEK293/PRLR/GRE-Luc细胞中类固醇的活性。对于本测定试验，将20,000个细胞接种在96孔板中的培养基中，所述培养基含有DMEM，并补充有10％FBS和青霉素(pencillin)/链霉素(完全培养基)，并在37℃下、于5％CO2中生长过夜。为了生成游离类固醇和/或其ncADC的剂量响应曲线，将100nM至5.1pM的连续稀释试剂加至细胞中，并在37℃下孵育24、48和72小时。通过添加100uLOne-GloTM试剂(Promega，目录号E6130)，在室温下孵育5分钟，来测定萤光素酶活性，并在Victor光度计(Perkin Elmer)上测定相对光单位(RLU)。
在第一个测定试验运行中，使用上述方案，在一个试验运行中孵育24小时、48小时或72小时时，在基于HEK293/PRLR/GRE-Luc细胞的测定试验中测试了抗PRLR Ab的ncADC(抗PRLR Ab-2r、抗PRLR Ab-2s、和抗PRLR Ab-2b)，同种型Ab的ncADC(同种型Ab-2r、同种型Ab-2s、和同种型Ab-2b)，以及不含布地奈德的有效负载。在第二个测定试验运行中，使用上述方案，在孵育72小时时，在基于HEK293/PRLR/GRE-Luc细胞的测定试验中测试了抗PRLR Ab的ncADC(抗PRLR Ab-2b、抗PRLR Ab-2l、和抗PRLR Ab-2g)，同种型Ab的ncADC(同种型Ab-2b、同种型Ab-2l、和同种型Ab-2g)，仅抗体(抗PRLR Ab和同种型Ab)，以及不含布地奈德的有效负载。使用GraphPad Prism根据10点响应曲线上的四参数逻辑斯蒂方程(four-parameter logistic equation)来确定EC50值。类固醇的递送将导致HEK293/PRLR/GRE-Luc细胞中的Luc受体激活。
图1A-1C和表8示出了来自第一个测定试验运行的结果。如图1A-1C所示，抗PRLRAb-2b偶联物在24、48和72小时时诱导HEK293/PRLR/GRE-Luc细胞中的激活，在所有三个时间点的EC50值均小于或等于(≤)10nM，并相对于对照同种型-Ab-2b显示出约>15倍的选择性。抗PRLR Ab-2s偶联物在24、48和72小时时诱导HEK293/PRLR/GRE-Luc细胞中的激活，但相对于对照同种型-2s，其并没有表现出选择性。抗PRLR Ab-2r偶联物在24和48小时时诱导HEK293/PRLR/GRE-Luc细胞中的激活，其选择性<5倍，但仅在72小时时才具有增强的激活作用，其EC50为13.4nM。
在如图2和表9所示的第二个测定试验运行中，抗PRLR Ab-2b偶联物诱导HEK293/PRLR/GRE-Luc细胞中的激活，其EC50为0.48nM，相对于对照同种型-Ab-2b，显示出约14倍的选择性。抗PRLR Ab-2g偶联物诱导HEK293/PRLR/GRE-Luc细胞中的激活，其EC50为1.9nM，相对于对照同种型-Ab-2g，具有约3.7倍的选择性。抗PRLR Ab-2l偶联物诱导HEK293/PRLR/GRE-Luc细胞中的激活，其EC50为8.98nM，而同种型-Ab-2l在此测定试验中未表现出激活作用。
表8.
Figure BDA0002666727490002251
表9.
Figure BDA0002666727490002252
其中NA表示无活性
实施例8
本实施例描述了LPS诱导的细胞因子释放的小鼠模型。
本研究的目的是评估受试化合物对小鼠中LPS诱导的细胞因子释放的抑制。在LPS刺激前48小时、24小时和2小时时施用受试化合物，在LPS刺激后2小时和4小时时间点测定包括TNF-α和IL6的血液样品中的细胞因子水平。
物料和试剂
脂多糖(LPS)衍生自大肠杆菌(E.Coli)K12，其购自Invivogen(San Diego，California，USA，目录号Tlrl-eklps)，地塞米松购自ADAMAS(Emeryville，CA，USA，目录号50-02-2)。小鼠TNF-αELISA试剂盒购自ebioscience(ThermoFisher Scientific，目录号88-7324)。小鼠IL6ELISA试剂盒购自ebioscience(ThermoFisher Scientific，目录号88-7064)。
实验方法
动物饲养方法：
在此研究中使用总共18只空白C57BL/6j小鼠。动物均为雄性，在研究开始时体重为18-20g。动物购自中国科学院上海实验动物中心(SLAC)，并在SPF环境中饲养于睿智化学(ChemPartner)的动物室。到达后，检查动物的健康状况，包括表皮、四肢、孔口、以及姿势或运动的异常迹象，并适应环境7天以上。
将动物以每笼3只小鼠圈养在SPF环境中的IVC聚碳酸酯鞋盒笼中；将动物室的环境控制设定为保持温度为20-26℃，湿度为40-70％，以及12小时光照/12小时黑暗循环。
在整个研究期间随意提供标准食物(SLAC-M01，来自上海实验室动物中心)和纯化水(经过滤的，市政水质)。
实验程序
分组：在研究开始前将动物随机分配为6组(A-F)。每组包括3只小鼠。A组作为单纯对照；B组接受地塞米松并作为阳性对照；C组用受试化合物处理，以及D-F组用受试化合物处理。
实验程序
所有小鼠通过腹腔注射以0.5mpk的剂量接受溶解在PBS中的LPS。A组小鼠接受PBS，B组小鼠接受Dex(地塞米松，5mpk)，C组小鼠在LPS刺激前2小时时腹腔注射接受4b(5mpk)；D组、E组和F组中的小鼠分别在LPS刺激前2小时、24小时和48小时时，通过腹腔注射接受5mpk的剂量。
在LPS刺激后2小时和4小时时间点收集血液样品，置于含肝素的管中。将血液样品离心，收集血浆样品，并在分析前，于-80℃下储存。
使用ELISA试剂盒，按照制造商推荐的标准程序，测定血浆中TNFα的水平。测定了各种PK参数(例如Tmax、Cmax、终端t1/2、AUClast和AUCINF)。
LPS刺激后2小时和aa时收集血液样品；测定血浆中的TNF-α水平。通过单向ANOVA分析，数据表示为相对于A组的平均值±SEM，*p<0.05，**p<0.01。
实施例9
小鼠树突细胞
为了确定受试化合物对离体LPS诱导的炎性免疫应答的影响，从野生型C57Bl/6小鼠(Jackon Labs，档案号426.0)的脾中分离CD11c+树突细胞(DC)。使用胶原酶D消化(400U/mL胶原酶D(Roche目录号11088858001)，20μg/mL DNaseI(脱氧核糖核酸酶，Roche目录号10104159001)，2％FCS的HEPES-缓冲的RPMI-1640溶液)来分离脾DC，并在37℃下孵育25分钟。孵育后，用RPMI-1640清洗脾组织并通过70μm过滤器过滤，然后使用ACK裂解缓冲液(Gibco目录号A1049201)进行红细胞裂解，持续1分钟。随后使用RPMI-1640清洗细胞悬浮液两次。使用CD11c磁性微珠(magnetic MicroBeads，Milteny Biotec目录号130108338)从单核细胞悬浮液中分离得到经典DC。简言之，根据Milteny Biotec建立的方案，在4℃下用CD11c+磁微珠(MicroBeads)孵育30分钟之前，用autoMACS运行缓冲液(Milteny Biotec目录号130091221)清洗细胞悬浮液两次。通过阳性选择来分离CD11c+细胞，清洗，悬浮于完全RPMI[RPMI-1640(ThermoFisher Scientific，目录号15140122)，含有10％FBS(ThermoFisher Scientific，目录号10082147)和1％青霉素-链霉素(ThermoFisherScientific，目录号11875093)]中，并在培养之前以每孔2x105个细胞计数。将对照完全RPMI、受试化合物处理的完全RMPI(以10nM和100nM)、或地塞米松(Sigma，目录号D4902-25MG)处理的完全RMPI(以10nM和100nM)加至96孔培养皿的细胞中。将DC/对照、受试化合物或地塞米松处理的细胞在37℃下孵育24小时，然后用10ng/mLLPS刺激24小时。
人树突细胞
为了确定受试化合物对人体先天免疫细胞中离体LPS诱导的炎性免疫应答的影响，分离CD14+单核细胞(Lonza目录号2W-400C)并在补充有人IL4(50ng/mL)(MiltenyBiotec，目录号130-093-922)和人GM-CSF(100ng/mL)(Milteny Biotec，目录号130093866)的完全RPMI[RPMI-1640(ThermoFisher Scientific，目录号15140122)，含有10％FBS(ThermoFisher Scientific，目录号10082147)和1％青霉素-链霉素(ThermoFisherScientific，目录号11875093)]存在下进行培养，持续7天。每三天更换一次含有IL4和GM-CSF的完全RPMI。开发了两种特定的培养条件：条件1：用对照完全RPMI、受试化合物处理的完全RMPI(以10nM和100nM)、或地塞米松(Sigma)处理的完全RMPI(以10nM和100nM)孵育CD14+单核细胞整7天的培养；或条件2：在用对照完全RMPI、受试化合物处理的完全RMPI(以10nM和100nM)、或地塞米松(Sigma，目录号D4902-25MG)处理的完全RMPI(以10nM和100nM)孵育之前，用对照完全RPMI孵育CD14+单核细胞5天，直至第7天。在第7天，用10ng/mLLPS刺激各个实验组24小时。
LPS离体刺激后24小时时测定上清液中的细胞因子
在LPS刺激后24小时时将上清液收集到96孔圆底组织培养板中，并在-20℃下储存直至进一步分析。根据制造商的说明书，使用Pro-inflammatory Panel 1(促炎小组1，小鼠)多重免疫测定试剂盒(MesoScale Discovery，目录号K15048D)或Pro-inflammatoryPanel 1(促炎小组1，人类)多重免疫测定试剂盒(MesoScale Discovery，目录号K15049D)来测定上清液中的细胞因子浓度。简言之，将50μL/孔的校准物和样品(用稀释剂1：2进行稀释)加至预先用捕获抗体包被的板中，并在室温下孵育，同时以700rpm振荡2小时。然后将板用含有0.05％(w/v)吐温-20的1xPBS清洗3次，然后加入稀释在稀释剂45(Diluent 45)中的25μL检测抗体溶液(Detection Antibody Solution)。在室温下振荡孵育2小时后，将板清洗3次，并向每个孔中加入150μL的2x Read Buffer(读数缓冲液)。立即在MSD
Figure BDA0002666727490002281
仪器上读取电化学发光。使用GraphPad PrismTM软件进行数据分析。组内的统计学意义通过单向Anova分析与土耳其的多重比较后测试(Turkey’s multiple comparison post-test)和平均标准误差(SEM±)进行计算确定。测定了脾CD11c+DC生成的IL12p70、IL1β、IL6、KC-GRO和TNF-α。测定了由人单核细胞来源的DC表达的IL12p70、IL1β、IL6和TNF-α。
实施例10
103a的血浆稳定性
血浆稳定性可以根据以下方案进行测定。
将预热的0.05M磷酸钠和0.07M NaCl缓冲液，pH7.4：14.505g/L Na2HPO4_12H2O、1.483g/L NaH2PO4_2H2O和4.095g/L NaCl溶于去离子水中。然后将碱性溶液用磷酸滴定至pH7.40，并冷藏保存长达7天。在实验当天检查pH值，如果超出规格7.4+/-0.1，则将其进行调节。
血浆制备：将冷冻的血浆置于37℃下进行解冻。将血浆以3,000rpm离心8分钟以除去血凝块，移液，并将上清液合并为用于实验的血浆。检查并记录血浆的pH值，仅在pH7.4至pH8的范围内才使用。如果pH高于8，则将血浆丢弃。血浆的初始pH值未用酸调节至pH7.4或未通过鼓泡CO2调节至pH7.4。通过使用5％CO2孵化器和PBS缓冲液，经过4小时的平衡透析时间后，pH达到7.4。将血浆置于冰上直至使用。
受试化合物和参比化合物的加标溶液。0.5mM受试化合物的加标溶液A：将10μL的10mM受试化合物的储备溶液加至190μL DMSO中。0.02mM的加标溶液B：将40μL的加标溶液A加至960μL的含0.5％BSA的0.05mM磷酸钠缓冲液中。
将血浆和加标溶液B在37℃下预热5分钟。在所有指定时间点(0、0.25、1、8、24小时)向孔中加入10μL预热的加标溶液B。在0分钟，将400μL含IS的ACN加至0分钟孔板的孔中，然后加入90μL血浆。将90μL预热的血浆在指定时间点(0.25、1、8、24小时)加至孔中，并开始计时。在0.25、1、8、24小时时，分别将400μL含IS的ACN加至相应孔板的孔中，以终止反应。反应淬灭后，将板在振动器(IKA，MTS 2/4)上振荡10分钟(600rpm/min)，然后以5594g离心15分钟(Thermo Multifuge×3R)。将来自每个孔的50μL上清液转移至含50μL超纯水(Millipore，ZMQS50F01)的96孔样品板中，以进行LC/MS分析。
化合物103a的人血浆稳定性数据示出在下表中。
Figure BDA0002666727490002291
Figure BDA0002666727490002292
BQL：低于定量限制
实施例11
连接体-有效负载的pH稳定性
由于有效负载103a、103b及其连接体-有效负载LP9、LP10的溶解度较差(＜0.02mg/mLDMSO水溶液(20％))，因此未测试这些化合物的pH稳定性。用CD-N3淬灭LP9，得到以下化合物QLP9，其是水溶性的并且用于pH稳定性测试。
Figure BDA0002666727490002293
化合物QLP9的合成：向LP9(5mg，3.4μmol)的DMF(1.0mL)溶液中加入化合物CD-N3(7.0mg，6.8μmol)。将反应混合物在RT下搅拌过夜，通过LCMS进行监测。将反应混合物通过制备型HPLC直接纯化，得到化合物QLP9(5mg，60％收率)为白色固体。ESI m/z:819.0(M/3+H)+。
缓冲液中的pH稳定性：测试了QLP9在DMSO，pH值为5.0、7.4和8.5的PBS缓冲液(含20％DMSO)中的稳定性，并且测试了所述化合物在那些溶液中7天后的稳定。
实施例12
基于细胞的糖皮质激素受体(GR)荧光素酶报告基因测定法
基于细胞的GR响应性荧光素酶报告基因测定法用于测试本发明所述化合物的GR激动剂活性。
在本测定试验中，使用以下物料。
Figure BDA0002666727490002301
为了生成测定细胞系，将HEK293细胞与pBind-GR(Promega，目录号E158A)和pGL4.35[Luc2P/9xGAL4UAS/Hygro](Promega，目录号E137A)载体共转染。pBind-GR载体表达由酵母Gal4DNA结合结构域和GR配体结合结构域组成的融合蛋白，其可与萤光素酶表达载体中的Gal4上游激活序列(UAS)结合并在GR激动剂结合后诱导萤光素酶表达。细胞在G418+潮霉素中进行选择至少2周。所得细胞系称为HEK293/UASLuc/pBIND-GR。
在测定前一天，将细胞以20,000个细胞/孔的密度接种到96孔板的测定培养基(DME高葡萄糖，补充有10％FBS，100单位/mL青霉素，100μg/mL链霉素，53μg/mL谷氨酰胺，500μg/mLG418和100μg/mL潮霉素)中。在100％DMSO中制备受试化合物的三倍连续稀释液，将其转移至新鲜的测定培养基中，然后加至细胞中。DMSO的终浓度保持恒定在0.2％，受试化合物的终浓度为100nM至0.015nM。板中的最后一个孔用作空白对照，其仅含有测定培养基和0.2％DMSO(未处理的孔)，并绘制为连续3倍稀释的曲线。
48小时后，在添加One-GloTM试剂(Promega，目录号E6130)后，测定荧光素酶活性。在Envision发光计(PerkinElmer)上测定相对光单位(RLU)，并使用四参数逻辑斯蒂方程在10点剂量响应曲线(GraphPadPrism)上确定EC50值。信噪比(S/N)通过剂量响应曲线上最高RLU与未处理的孔中所述RLU的比值来确定。
如下表所示，EC50值的范围为51.8pM至3.24nM，S/N值的范围为12.4至17.3。受试化合物100的效力比1a(布地奈德)高5.6倍，比地塞米松高5.9倍。将间隔基连接至1a以生成103a，得到其EC50值与1a相当。同样，将间隔基连接至100以生成103b，得到其EC50值与100相当。将间隔基连接至100以生成105a，得到其EC50值比100低2.7倍。在所有受试化合物中，S/N值均相当。
GR激动剂的GR受体活性
受试化合物 EC<sub>50</sub>(M) S/N
地塞米松 3.24E-09 17.3
1a 3.06E-10 15.3
103a 4.84E-10 14.6
100 5.47E-11 14.5
103b 5.18E-11 16.6
105b 1.49E-10 12.4
上述实施方案和实施例旨在仅是说明性的而非限制性的。本领域技术人员将认识到或能够仅使用常规实验便可以确定具体化合物、材料/物料和程序/方法的许多等同物。所有此类等同物均认为包含在本发明范围内，并被所附权利要求书所涵盖。
Figure IDA0002666727550000011
Figure IDA0002666727550000021
Figure IDA0002666727550000031
Figure IDA0002666727550000041
Figure IDA0002666727550000051
Figure IDA0002666727550000061
Figure IDA0002666727550000071
Figure IDA0002666727550000081
Figure IDA0002666727550000091
Figure IDA0002666727550000101
Figure IDA0002666727550000111

Claims (101)

1.式(III)所示化合物：
Figure FDA0002666727480000011
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或衍生物，
其中：
R4是烷基、芳基、芳基烷基、或含N的杂环烷基；
两个Rx均为H；和SP是-C(O)-C1-C10-亚烷基-C(O)-，-C(O)-N(C1-6烷基)-C1-C10-亚烷基-X1-、其中X1与式(III)中的L连接，-C(O)-N(H)-(C1-C10-亚烷基)-S-、其中S与式(III)中的L连接，-C(O)-N(C1-6烷基)-(C1-C10-亚烷基)-S-、其中S与式(III)中的L连接，
Figure FDA0002666727480000012
其中右手边的附接点(即N处)与式(III)中的L连接，-CH2-NH-、其中N与式(III)中的L连接，
Figure FDA0002666727480000013
其中N与式(III)中的L连接，-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(III)中的L连接，-C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(III)中的L连接和其中各C1-C10-亚烷基独立任选地被一个或多个羟基取代，-C(O)-N(R5)-C1-C10-亚烷基-C(O)NH-X2-、其中X2与式(III)中的L连接，或
Figure FDA0002666727480000014
其中X4与式(III)中的L连接；或
两个Rx均为F；和SP是-C(O)-C1-C10-亚烷基-C(O)-，-C(O)-N(C1-6烷基)-C1-C10-亚烷基-X1b-、其中X1b与式(III)中的L连接，-C(O)-N(H)-(C1-C10-亚烷基)-X1b-、其中X1b与式(III)中的L连接，
Figure FDA0002666727480000015
其中右手边的附接点(即N处)与式(III)中的L连接，-CH2-NH-、其中N与式(III)中的L连接，
Figure FDA0002666727480000021
其中N与式(III)中的L连接，-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(III)中的L连接，-C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(III)中的L连接和其中各C1-C10-亚烷基独立任选地被一个或多个羟基取代，-C(O)-N(R5)-(C1-C10-亚烷基)-C(O)NH-X2-、其中X2与式(III)中的L连接，或
Figure FDA0002666727480000022
其中X4与式(III)中的L连接；和
X1是-N(C1-6烷基)-；
X1b是-S-、-NH-、或-N(C1-6烷基)-；
X2是-NH-；
X3是-CH2-，X3是-CH2-O-(C1-C10-亚烷基)-C(O)-、其中所述C(O)与X4连接，或X3是-C(O)-；
X4是-O-；
R5是H、-OH、-OCH3、或C1-6烷基；
R50和R50a分别独立地为H或C1-C6-烷基；
Rd、Re和Rf分别独立地为-H、-OH、羟基烷基、烷氧基羰基、-C(O)OH、或-CH2ORg，其中各Rg分别独立地为-CH2C(O)OH或-CH2C(O)O(烷基)；和
m是0或1；
z是选自1-30(包括1和30)的整数；
L是连接体；和
BA是结合剂。
2.式(II)所示化合物：
Figure FDA0002666727480000023
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或衍生物，
其中：
R4是烷基、芳基、芳基烷基、或含N的杂环烷基；
两个Rx均为H；和SP是-C(O)-C1-C10-亚烷基-C(O)-，-C(O)-N(C1-6烷基)-C1-C10-亚烷基-X1-、其中X1与式(II)中的(L3)0-1连接，-C(O)-N(H)-(C1-C10-亚烷基)-S-、其中S与式(II)中的(L3)0-1连接，-C(O)-N(C1-6烷基)-(C1-C10-亚烷基)-S-、其中S与式(II)中的(L3)0-1连接，
Figure FDA0002666727480000031
其中右手边的附接点(即N处)与式(II)中的(L3)0-1连接，-CH2-NH-、其中N与式(II)中的(L3)0-1连接，
Figure FDA0002666727480000032
其中N与式(II)中的(L3)0-1连接，-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(II)中的(L3)0-1连接，-C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(II)中的(L3)0-1连接和其中各C1-C10-亚烷基独立任选地被一个或多个羟基取代，-C(O)-N(R5)-C1-C10-亚烷基-C(O)NH-X2-、其中X2与式(II)中的(L3)0-1连接，或
Figure FDA0002666727480000033
其中X4与式(II)中的L3连接；或
两个Rx均为F；和SP是-C(O)-C1-C10-亚烷基-C(O)-，-C(O)-N(C1-6烷基)-C1-C10-亚烷基-X1b-、其中X1b与式(II)中的(L3)0-1连接，-C(O)-N(H)-(C1-C10-亚烷基)-X1b-、其中X1b与式(II)中的(L3)0-1连接，
Figure FDA0002666727480000034
其中右手边的附接点(即N处)与式(II)中的(L3)0-1连接，
Figure FDA0002666727480000035
-CH2-NH-、其中N与式(II)中的(L3)0-1连接，
Figure FDA0002666727480000036
其中N与式(II)中的(L3)0-1连接，-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(II)中的(L3)0-1连接，-C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(II)中的(L3)0-1连接和其中各C1-C10-亚烷基独立任选地被一个或多个羟基取代，-C(O)-N(R5)-(C1-C10-亚烷基)-C(O)NH-X2-、其中
X2与式(II)中的(L3)0-1连接，或
Figure FDA0002666727480000041
其中X4与式(II)中的(L3)0-1连接；和
X1是-N(C1-6烷基)-；
X1b是-S-、-NH-、或-N(C1-6烷基)-；
X2是-NH-；
X3是-CH2-，X3是-CH2-O-(C1-C10-亚烷基)-C(O)-、其中所述C(O)与X4连接，或X3是-C(O)-；
X4是-O-；
R5是H、-OH、-OCH3、或C1-6烷基；
R50和R50a分别独立地为H或C1-C6-烷基；
Rd、Re和Rf分别独立地为-H、-OH、羟基烷基、烷氧基羰基、-C(O)OH、或-CH2ORg，其中各Rg分别独立地为-CH2C(O)OH或-CH2C(O)O(烷基)；和
m是0或1；
RG是活性基团；
L2是连接用连接体；和
L3当存在时，为自分解连接体(self-immolative linker)。
3.根据权利要求1或2所述的化合物，其中，R4是直链或支链烷基。
4.根据权利要求1或2所述的化合物，其中，R4是芳基。
5.根据权利要求1或2所述的化合物，其中，R4是芳基烷基。
6.根据权利要求1或2所述的化合物，其中，R4是含N的杂环烷基。
7.根据权利要求1-6任一项所述的化合物，其中，R4是R构型。
8.根据权利要求1-7任一项所述的化合物，其中
两个Rx均为H；和SP是-C(O)-C1-C10-亚烷基-C(O)-，-C(O)-N(C1-6烷基)-C1-C10-亚烷基-X1-、其中X1与式(III)中的L或式(II)中的(L3)0-1连接，-C(O)-N(H)-(C1-C10-亚烷基)-S-、其中S与式(III)中的L或式(II)中的(L3)0-1连接，-C(O)-N(C1-6烷基)-(C1-C10-亚烷基)-S-、其中S与式(III)中的L或式(II)中的(L3)0-1连接，-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(III)中的L或式(II)中的(L3)0-1连接，-C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(III)中的L或式(II)中的(L3)0-1连接和其中各C1-C10-亚烷基独立任选地被一个或多个羟基取代，-C(O)-N(R5)-C1-C10-亚烷基-C(O)NH-X2-、其中X2与式(III)中的L或式(II)中的(L3)0-1连接，或
Figure FDA0002666727480000051
其中X4与式(III)中的L或式(II)中的(L3)0-1连接；或
两个Rx均为F；和SP是-C(O)-N(C1-6烷基)-C1-C10-亚烷基-X1b-、其中X1b与式(III)中的L或式(II)中的(L3)0-1连接，-C(O)-N(H)-(C1-C10-亚烷基)-X1b-、其中X1b与式(III)中的L或式(II)中的(L3)0-1连接，
Figure FDA0002666727480000052
其中所述右手边的附接点(即N处)与式(III)中的L或式(II)中的(L3)0-1连接，-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(III)中的L或式(II)中的(L3)0-1连接，-C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中NR50a与式(III)中的L或式(II)中的(L3)0-1连接和其中各C1-C10-亚烷基独立任选地被一个或多个羟基取代，或-C(O)-N(R5)-(C1-C10-亚烷基)-C(O)NH-X2-、其中X2与式(III)中的L或式(II)中的(L3)0-1连接。
9.根据权利要求1-8任一项所述的化合物，其中，SP是-C(O)-C1-C10-亚烷基-C(O)-。
10.根据权利要求1-9任一项所述的化合物，其中，SP是-C(O)-C2-C5-亚烷基-C(O)-。
11.根据权利要求1-10任一项所述的化合物，其中，SP是-C(O)-CH2CH2-C(O)-。
12.根据权利要求1-8任一项所述的化合物，其中，SP是-C(O)-N(R5)-C1-C10-亚烷基-C(O)NH-X2-。
13.根据权利要求1-8和12任一项所述的化合物，其中，SP是-C(O)-N(R5)-C1-C5-亚烷基-C(O)NH-NH-。
14.根据权利要求1-8、12和13任一项所述的化合物，其中，SP是-C(O)-N(R5)-CH2-C(O)NH-NH-。
15.根据权利要求1-8和12-14任一项所述的化合物，其中，R5是H或C1-6烷基。
16.根据权利要求1-8和12-15任一项所述的化合物，其中，R5是H或-CH3。
17.根据权利要求1-8任一项所述的化合物，其中，SP是
Figure FDA0002666727480000053
18.根据权利要求1-8任一项所述的化合物，其中，SP是
Figure FDA0002666727480000054
和m是1。
19.根据权利要求1-8任一项所述的化合物，其中，SP是
Figure FDA0002666727480000061
m是1，和Rf是-H或-OH。
20.根据权利要求1-8任一项所述的化合物，其中，SP是
Figure FDA0002666727480000062
m是1，和Rf是–H。
21.根据权利要求1-8任一项所述的化合物，其中，SP是
Figure FDA0002666727480000063
m是1，和Rf是–OH。
22.根据权利要求1-8任一项所述的化合物，其中，SP是
Figure FDA0002666727480000064
和m是0。
23.根据权利要求1-8和17-22任一项所述的化合物，其中，SP是
Figure FDA0002666727480000065
和X3是-CH2-。
24.根据权利要求1-8和17-22任一项所述的化合物，其中，SP是
Figure FDA0002666727480000066
和X3是-CH2-O-(C1-C10-亚烷基)-C(O)-。
25.根据权利要求1-8和17-22任一项所述的化合物，其中，SP是
Figure FDA0002666727480000067
和X3是-C(O)-。
26.根据权利要求1-8和17-25任一项所述的化合物，其中，Rd和Re分别独立地为-H或–OH。
27.根据权利要求1-8和17-25任一项所述的化合物，其中，Rd和Re均为-H。
28.根据权利要求1-8和17-25任一项所述的化合物，其中，Rd和Re均为-OH。
29.根据权利要求1-8任一项所述的化合物，其中，SP是-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-。
30.根据权利要求1-8任一项所述的化合物，其中，SP是-(直链C1-C3-亚烷基)-NR50C(O)-(直链C1-C3-亚烷基)-NR50a-。
31.根据权利要求1-8任一项所述的化合物，其中，SP是-C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-，和其中各C1-C10-亚烷基独立任选地被一个或多个羟基取代。
32.根据权利要求1-8任一项所述的化合物，其中，SP是-(支链C1-C6-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C6-羟基亚烷基)-NR50a。
33.根据权利要求1-8和29-32任一项所述的化合物，其中，R50和R50a分别独立地为H或甲基。
34.根据权利要求1-8和29-32任一项所述的化合物，其中，R50和R50a各自为H。
35.根据权利要求1-8和29-32任一项所述的化合物，其中，R50和R50a各自为甲基。
36.根据权利要求1-35任一项所述的化合物，其中，两个Rx均为H。
37.根据权利要求1-8任一项所述的化合物，其中，两个Rx均为H，和SP是-C(O)-N(H)-(C1-C10-亚烷基)-S-或-C(O)-N(C1-6烷基)-(C1-C10-亚烷基)-S-。
38.根据权利要求1-8任一项所述的化合物，其中，两个Rx均为H，和SP是-C(O)-N(C1-3烷基)-C1-C10-亚烷基-X1-。
39.根据权利要求1-8和38任一项所述的化合物，其中，两个Rx均为H，和SP是-C(O)-N(C1-3烷基)-C2-C5-亚烷基-X1-。
40.根据权利要求1-8、38和39任一项所述的化合物，其中，两个Rx均为H，和SP是-C(O)-N(C1-3烷基)-CH2CH2-X1-。
41.根据权利要求1-8、38和39任一项所述的化合物，其中，两个Rx均为H，和SP是-C(O)-N(CH3)-C2-C5-亚烷基-N(CH3)-。
42.根据权利要求1-8和38-41任一项所述的化合物，其中，两个Rx均为H，和SP是-C(O)-N(CH3)-CH2CH2-N(CH3)-。
43.根据权利要求1-35任一项所述的化合物，其中，两个Rx均为F。
44.根据权利要求1-8任一项所述的化合物，其中，两个Rx均为F，和SP是-C(O)-N(H)-(C1-C10-亚烷基)-X1b-或-C(O)-N(C1-6烷基)-(C1-C10-亚烷基)-X1b-。
45.根据权利要求44所述的化合物，其中，SP是-C(O)-N(H)-(C1-C6-亚烷基)-X1b-或-C(O)-N(C1-6烷基)-(C1-C6-亚烷基)-X1b-。
46.根据权利要求44或45所述的化合物，其中，X1b是S。
47.根据权利要求44或45所述的化合物，其中，X1b是NH或N(C1-6烷基)。
48.根据权利要求44或45所述的化合物，其中，X1b是NH或N(CH3)。
49.根据权利要求1-8任一项所述的化合物，其中，两个Rx均为F，和SP是
Figure FDA0002666727480000081
50.根据权利要求1-7任一项所述的化合物，其中，SP是-CH2-NH-。
51.根据权利要求1-7任一项所述的化合物，其中，SP是
Figure FDA0002666727480000082
52.根据权利要求1-7任一项所述的化合物，其中，两个Rx均为H或两个Rx均为F，和SP是
Figure FDA0002666727480000083
Figure FDA0002666727480000084
-CH2-NH-、或
Figure FDA0002666727480000085
或两个Rx均为F，和SP是
Figure FDA0002666727480000086
和其中上述结构中的左侧附接点与L或(L3)0-1连接。
53.根据权利要求1和3-52任一项所述的式(III)所示化合物，其中，z选自1-10(包括1和10)。
54.根据权利要求1和3-53任一项所述的式(III)所示化合物，其中，z选自2-4(包括2和4)。
55.根据权利要求1和3-54任一项所述的式(III)所示化合物，其中，z是4。
56.根据权利要求1和3-54任一项所述的式(III)所示化合物，其中，z是2。
57.根据权利要求1和3-56任一项所述的式(III)所示化合物，其中，BA包含抗体或抗体片段。
58.根据权利要求1和3-57任一项所述的式(III)所示化合物，其中，BA包含具有以下结构
Figure FDA0002666727480000091
的抗体，其中Ab是单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段、或双特异性抗体；R是C2-4-亚烷基，n是选自1至10(包括1和10)的整数，和z是选自1-10(包括1和10)的整数。
59.根据权利要求1和3-59任一项所述的式(III)所示化合物，其中，BA包含具有以下结构
Figure FDA0002666727480000092
的抗体，其中Ab是单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段、或双特异性抗体；R是C2-4-亚烷基；和n是选自2至4(包括2和4)的整数。
60.根据权利要求1和3-59任一项所述的式(III)所示化合物，其中，BA包含MSR1。
61.根据权利要求1和3-60任一项所述的式(III)所示化合物，其中，L是-L1-L2-(L3)0-1-，其中L1与BA连接，和L3与SP连接；和其中L1是活性基团残基；L2是连接用连接体；和L3当存在时，为自分解连接体(self-immolative linker)。
62.根据权利要求1和3-61任一项所述的式(III)所示化合物，其中，L是-L1-L2-L3-。
63.根据权利要求61或62所述的式(III)所示化合物，其中，L1选自
Figure FDA0002666727480000093
或其区域异构体或异构体的混合物；
Figure FDA0002666727480000094
或其立体异构体或立体异构体的混合物，其中S是指半胱氨酸残基上的所述S原子，所述活性基团残基通过此半胱氨酸残基上的S原子与BA连接；和
Figure FDA0002666727480000095
其中N是指赖氨酸残基上的所述N原子，所述活性基团残基通过此赖氨酸残基上的N原子与BA连接。
64.根据权利要求2-52任一项所述的式(II)所示化合物，其中，RG选自
Figure FDA0002666727480000101
Figure FDA0002666727480000102
65.根据权利要求2-52任一项所述的式(II)所示化合物，其中，RG是
Figure FDA0002666727480000103
66.根据权利要求2-52任一项所述的式(II)所示化合物，其中，RG是
Figure FDA0002666727480000104
67.根据权利要求2-52任一项所述的式(II)所示化合物，其中，RG是
Figure FDA0002666727480000105
68.根据权利要求1-67任一项所述的化合物，其中，对于式(III)所示化合物，L是-L1-L2-(L3)0-1-；和其中
当SP是-C(O)-C1-C10-亚烷基-C(O)-时，式(II)或(III)所示化合物中的L3是
Figure FDA0002666727480000106
其中所述NH基团与L2连接；或
当SP是-C(O)-N(C1-3烷基)-C1-C10-亚烷基-X1-，-C(O)-N(C1-3烷基)-C1-C10-亚烷基-X1b-、其中X1b是-NH-或-N(C1-6烷基)-，-C(O)-N(H)-(C1-C10-亚烷基)-X1b-、其中X1b是-NH-或-N(C1-6烷基)-，
Figure FDA0002666727480000107
-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-，-C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50a-、其中各C1-C10-亚烷基独立任选地被一个或多个羟基取代，或-C(O)-N(R5)-C1-C10-亚烷基-C(O)NH-X2-时，式(II)或(III)所示化合物中的L3是
Figure FDA0002666727480000111
其中所述NH基团与L2连接；或
式(II)或(III)所示化合物中的L3不存在。
69.根据权利要求1-68任一项所述的化合物，其中，对于式(III)所示化合物，L是-L1-L2-(L3)0-1-；和其中式(II)或(III)所示化合物中的L2包含PEG、二肽残基、三肽、四肽、五肽、-C(O)CH2CH2C(O)-、CD、或–CH2CH2CH2CH2CH2C(O)-、或其任何组合。
70.根据权利要求1-68任一项所述的化合物，其中，对于式(III)所示化合物，L是-L1-L2-(L3)0-1-；和其中式(II)或(III)所示化合物中的L2包含
Figure FDA0002666727480000112
Figure FDA0002666727480000113
Figure FDA0002666727480000114
-C(O)CH2CH2C(O)NH-、
Figure FDA0002666727480000115
Figure FDA0002666727480000116
Figure FDA0002666727480000117
或环糊精残基(CD)；或其任何组合。
71.根据权利要求1-68任一项所述的化合物，其中，对于式(III)所示化合物，L是-L1-L2-(L3)0-1-；和其中式(II)或(III)所示化合物中的L2包含
Figure FDA0002666727480000121
Figure FDA0002666727480000122
Figure FDA0002666727480000123
或CD、或其任何组合。
72.根据权利要求69-71任一项所述的化合物，其中，CD选自由以下组成的组：
Figure FDA0002666727480000124
Figure FDA0002666727480000131
73.根据权利要求1-67任一项所述的化合物，其中，对于式(III)所示化合物，L是-L1-L2-(L3)0-1-；和其中式(II)或(III)所示化合物中的-L2-(L3)0-1-包含
Figure FDA0002666727480000132
Figure FDA0002666727480000141
Figure FDA0002666727480000151
Figure FDA0002666727480000161
74.根据权利要求1所述的化合物，其中，所述化合物是：
Figure FDA0002666727480000162
Figure FDA0002666727480000171
Figure FDA0002666727480000181
Figure FDA0002666727480000191
Figure FDA0002666727480000201
其中BA包含具有以下结构
Figure FDA0002666727480000203
的抗体，其中Ab是单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段、或双特异性抗体；R是C2-4-亚烷基；和n是选自2至4(包括2和4)的整数。
75.根据权利要求74所述的化合物，其中，Ab是MSR1。
76.化合物，其选自：
Figure FDA0002666727480000202
Figure FDA0002666727480000211
Figure FDA0002666727480000221
Figure FDA0002666727480000231
Figure FDA0002666727480000241
Figure FDA0002666727480000251
Figure FDA0002666727480000261
77.式(I)所示化合物：
Figure FDA0002666727480000262
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、或衍生物，
其中：
R4是烷基、芳基、芳基烷基、或含N的杂环烷基；
a)两个Rx均为H；和
R3是-C(O)RZ；-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50aR50b；-CH2NH2；或
Figure FDA0002666727480000265
RZ是-C4-10-亚烷基-C(O)OH；-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50aR50b，其中各C1-C10-亚烷基独立任选地被一个或多个羟基取代；
Figure FDA0002666727480000263
或NR15R15a；
R15是H或C1-C6烷基，和R15a是-(C1-C10-亚烷基)-SH、或-(C1-6-亚烷基)-C(O)NHNH2；
b)两个Rx均为F；和
R3是-C(O)RZ；-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50aR50b；-CH2NH2；或
Figure FDA0002666727480000264
RZ是-C4-10-亚烷基-C(O)OH；-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50aR50b，其中各C1-C10-亚烷基独立任选地被一个或多个羟基取代；
Figure FDA0002666727480000271
或NR16R16a；
R16是H或C1-C6烷基，和R16a是-(C1-C10-亚烷基)-SH、-(C1-C10-亚烷基)-NH2、-(C1-C10-亚烷基)-NH(C1-6烷基)、
Figure FDA0002666727480000272
或-(C1-6-亚烷基)-C(O)NHNH2；和
各R50、R50a和R50b分别独立地为H或C1-C6-烷基；
Rc、Rd、Re和Rf中的一个是-CH2ORg，而其他分别独立地为-H、-OH、羟基烷基、-C(O)OH、或-CH2ORg，其中各Rg分别独立地为-(C1-6-亚烷基)-C(O)OH或-(C1-6-亚烷基)-C(O)O(烷基)；或Rc、Rd、Re和Rf中的一个是羟基烷基，而其他均为-H；和
m是0或1。
78.根据权利要求77所述的化合物，其中，R4是烷基。
79.根据权利要求77或78所述的化合物，其中，R4是R构型。
80.根据权利要求77-79任一项所述的化合物，其中
a)两个Rx均为H；和
R3是-C(O)RZ；-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50aR50b；或
Figure FDA0002666727480000273
RZ是-C4-10-亚烷基-C(O)OH；-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50aR50b，其中各C1-C10-亚烷基独立任选地被一个或多个羟基取代；或NR15R15a；
R15是H或C1-C6烷基，和R15a是-(C1-C10-亚烷基)-SH、或-(C1-6-亚烷基)-C(O)NHNH2；
b)两个Rx均为F；和
R3是-C(O)RZ；-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50aR50b；或
Figure FDA0002666727480000274
RZ是-C4-10-亚烷基-C(O)OH；-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50aR50b，其中各C1-C10-亚烷基独立任选地被一个或多个羟基取代；或NR16R16a；
R16是H或C1-C6烷基，和R16a是-(C1-C10-亚烷基)-SH、-(C1-C10-亚烷基)-NH2、-(C1-C10-亚烷基)-NH(C1-6烷基)、
Figure FDA0002666727480000275
或-(C1-6-亚烷基)-C(O)NHNH2。
81.根据权利要求77-79任一项所述的化合物，其中，R3是-C(O)RZ，和Rz是
Figure FDA0002666727480000281
或-CH2NH2。
82.根据权利要求77-80任一项所述的化合物，其中，R3是-C(O)RZ。
83.根据权利要求82所述的化合物，其中，RZ是-C4-10-亚烷基-C(O)OH。
84.根据权利要求82所述的化合物，其中，RZ是-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50aR50b，其中各C1-C10-亚烷基独立任选地被一个或多个羟基取代。
85.根据权利要求77-80任一项所述的化合物，其中，R3是
Figure FDA0002666727480000282
其中m是1。
86.根据权利要求77-80任一项所述的化合物，其中，R3是
Figure FDA0002666727480000283
m是1，和Rc、Rd、Re和Rf中的一个是-CH2ORg，而其他分别独立地为-H、-OH、或羟基烷基。
87.根据权利要求77-80任一项所述的化合物，其中，R3是
Figure FDA0002666727480000284
m是1，和Rc、Rd、Re和Rf中的一个是羟基烷基，而其他均为-H。
88.根据权利要求77-80任一项所述的化合物，其中，R3是-(C1-C10-亚烷基)-NR50C(O)-(C1-C10-亚烷基)-NR50aR50b。
89.根据权利要求77-88任一项所述的化合物，其中，两个Rx均为H。
90.根据权利要求77-88任一项所述的化合物，其中，两个Rx均为F。
91.根据权利要求77-80任一项所述的化合物，其中，两个Rx均为H，R3是-C(O)RZ，和RZ是NR15R15a。
92.根据权利要求91所述的化合物，其中，R15是H。
93.根据权利要求77-80任一项所述的化合物，其中，两个Rx均为F，R3是-C(O)RZ，和RZ是NR16R16a。
94.根据权利要求93所述的化合物，其中，R16是H。
95.化合物，其选自：
Figure FDA0002666727480000291
Figure FDA0002666727480000301
Figure FDA0002666727480000311
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体。
96.化合物，其选自
Figure FDA0002666727480000312
其中Ab是单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段、或双特异性抗体；或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体。
97.下列通式之一所示的化合物：
Figure FDA0002666727480000321
Figure FDA0002666727480000331
Figure FDA0002666727480000341
Figure FDA0002666727480000351
Figure FDA0002666727480000361
Figure FDA0002666727480000371
Figure FDA0002666727480000381
其中BA包含具有以下结构
Figure FDA0002666727480000382
的抗体，其中Ab是单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段、或双特异性抗体；R是C2-4-亚烷基；和n是选自2至4(包括2和4)的整数。
98.根据权利要求94或95所述的化合物，其中，Ab是MSR1。
99.治疗与糖皮质激素受体信号传导相关的疾病、病症或病况的方法，其包括向患有所述疾病、病症或病况的患者施用治疗有效量的权利要求1、63和68-75任一项所述的式(III)的化合物或权利要求96-98任一项所述的化合物。
100.根据权利要求99所述的方法，其中，所述疾病、病症或病况是炎性疾病、病症或病况。
101.根据权利要求99或100所述的方法，其中，减少了与施用所述化合物的所述未偶联的类固醇有效负载相关的副作用。
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WO (1) WO2019136487A2 (zh)

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113905767A (zh) * 2019-01-08 2022-01-07 里珍纳龙药品有限公司 无痕连接体及其蛋白质偶联物
WO2022135332A1 (zh) * 2020-12-21 2022-06-30 映恩生物制药（苏州）有限公司 一种甾体偶联物
WO2022166779A1 (zh) * 2021-02-04 2022-08-11 上海森辉医药有限公司 糖皮质激素受体激动剂的药物偶联物及其在医药上的应用
WO2022171101A1 (zh) * 2021-02-10 2022-08-18 映恩生物制药（苏州）有限公司 一种甾体偶联物
CN115785188A (zh) * 2022-12-20 2023-03-14 湖南醇健制药科技有限公司 一种布地奈德的制备方法
CN115785188B (zh) * 2022-12-20 2024-06-07 湖南科益新生物医药有限公司 一种布地奈德的制备方法

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP7330101B2 (ja) 2016-11-08 2023-08-21 レゲネロン ファーマシューティカルス，インコーポレーテッド ステロイド及びそのタンパク質コンジュゲート
CN110944718A (zh) 2017-05-18 2020-03-31 里珍纳龙药品有限公司 环糊精蛋白质药物偶联物
BR112020022400A2 (pt) * 2018-05-09 2021-02-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. anticorpos anti-msr1 e métodos de uso dos mesmos
IT202000006442A1 (it) * 2020-03-27 2021-09-27 Genetic S P A Budesonide 21-phosphate salts and pharmaceutical compositions containing the same
JP2023072104A (ja) * 2020-04-10 2023-05-24 小野薬品工業株式会社 抗体薬物複合体
JP2023537128A (ja) * 2020-08-10 2023-08-30 ピー．アイ．エフ． アントレプレナーズ エルティーディー マクロファージ標的薬物コンジュゲート
WO2022103724A1 (en) 2020-11-10 2022-05-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Selenium antibody conjugates
US11806405B1 (en) 2021-07-19 2023-11-07 Zeno Management, Inc. Immunoconjugates and methods
NL2029599B1 (en) * 2021-11-02 2023-06-01 Univ Leiden Glycosylated Prodrugs
WO2023173121A1 (en) 2022-03-11 2023-09-14 Firefly Bio, Inc. Phenyl maleimide linker agents

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040157810A1 (en) * 2002-08-23 2004-08-12 Teicher Martin H. Corticosteroid conjugates and uses thereof
CN1668339A (zh) * 2002-07-16 2005-09-14 梅德克斯股份有限公司 类固醇缀合物、其制剂及其用途
WO2010132743A1 (en) * 2009-05-15 2010-11-18 Gilead Sciences, Inc. Corticosteroid beta-agonist compounds for use in therapy
CN103044523A (zh) * 2012-12-13 2013-04-17 济南向惠医药技术有限公司 地塞米松-rgd多肽缀合物，其制备方法及应用
CN104203985A (zh) * 2012-01-31 2014-12-10 天蓝制药公司 用于治疗性递送的环糊精类聚合物
CN106459200A (zh) * 2014-03-21 2017-02-22 艾伯维公司 抗‑egfr抗体及抗体药物偶联物
WO2017062271A2 (en) * 2015-10-06 2017-04-13 Merck Sharp & Dohme Corp. Antibody drug conjugate for anti-inflammatory applications
WO2017189996A1 (en) * 2016-04-29 2017-11-02 Brandeis University Amino acid- and peptide-steroid conjugates and use thereof

Family Cites Families (51)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE1165595B (de) * 1958-03-04 1964-03-19 Olin Mathieson Verfahren zur Herstellung von Triamcinolonacetonid-21-hemisuccinat und dessen Salzen
GB889766A (en) * 1958-03-04 1962-02-21 Olin Mathieson Improvements in steroids and the synthesis thereof
NL7001308A (zh) * 1969-03-07 1970-09-09
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
DK0590058T3 (da) 1991-06-14 2004-03-29 Genentech Inc Humaniseret heregulin-antistof
KR960700266A (ko) * 1993-01-08 1996-01-19 클래스 빌헬름슨 신규 결장- 또는 회장-특이성 스테로이드 유도체(Novel Colon-or lleum-Specific Steroid Derivatives)
DE4311987A1 (de) * 1993-04-07 1994-10-13 Schering Ag Neue Glucocorticoide
US5714586A (en) 1995-06-07 1998-02-03 American Cyanamid Company Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US5837698A (en) * 1996-05-02 1998-11-17 G. D. Searle & Co. Steroid nitrite and nitrate ester derivatives useful as anti-inflammatory drugs
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US20070258987A1 (en) 2000-11-28 2007-11-08 Seattle Genetics, Inc. Recombinant Anti-Cd30 Antibodies and Uses Thereof
TW200539855A (en) 2004-03-15 2005-12-16 Wyeth Corp Calicheamicin conjugates
US7750116B1 (en) 2006-02-18 2010-07-06 Seattle Genetics, Inc. Antibody drug conjugate metabolites
EP2073820A4 (en) 2006-09-15 2014-07-16 Belrose Pharma Inc TARGETED POLYMER PRODRUGS WITH MULTIFUNCTIONAL CONNECTORS
WO2008122039A2 (en) 2007-04-02 2008-10-09 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Selenocysteine mediated hybrid antibody molecules
EP2167963B1 (en) 2007-05-23 2019-04-17 Ventana Medical Systems, Inc. Polymeric carriers for immunohistochemistry and in situ hybridization
BRPI0812970A2 (pt) * 2007-06-25 2019-09-24 Endocyte Inc conjugados contendo espaçadores hidrofílicos
CN101397328A (zh) * 2007-09-27 2009-04-01 天津药业研究院有限公司 一氧化氮供体型糖皮质激素
WO2009046446A2 (en) * 2007-10-05 2009-04-09 Wayne State University Dendrimers for sustained release of compounds
BRPI0911442A2 (pt) 2008-04-30 2019-03-12 Immunogen, Inc. conjugados potentes e ligantes hidrofílicos
AU2009275358C1 (en) 2008-07-21 2015-09-24 Polytherics Limited Novel reagents and method for conjugating biological molecules
KR101000067B1 (ko) 2008-12-30 2010-12-10 엘지전자 주식회사 고효율 태양전지용 레이저 소성장치 및 고효율 태양전지 제조방법
JP5412622B2 (ja) * 2009-03-09 2014-02-12 三笠製薬株式会社 ステロイド化合物
DK2889624T3 (en) 2009-08-10 2018-12-10 Ucl Business Plc Reversible covalent bonding of functional molecules
US20130028917A1 (en) 2010-04-15 2013-01-31 Spirogen Developments Sàrl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
WO2012005982A2 (en) 2010-07-06 2012-01-12 Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College Reporter for rna polymerase ii termination
NZ707327A (en) 2010-08-02 2017-01-27 Regeneron Pharma Mice that make binding proteins comprising vl domains
EP2714685B1 (en) 2011-05-27 2016-10-19 Ambrx, Inc. Compositions containing, methods involving, and uses of non-natural amino acid linked dolastatin derivatives
US8815226B2 (en) 2011-06-10 2014-08-26 Mersana Therapeutics, Inc. Protein-polymer-drug conjugates
KR101891859B1 (ko) 2011-10-14 2018-08-24 메디뮨 리미티드 피롤로벤조디아제핀
CN103997893B (zh) 2011-10-14 2019-04-12 西雅图基因公司 吡咯并苯并二氮杂卓和靶向结合物
WO2013053872A1 (en) 2011-10-14 2013-04-18 Spirogen Sàrl Synthesis method and intermediates useful in the preparation of pyrrolobenzodiazepines
WO2013055990A1 (en) 2011-10-14 2013-04-18 Seattle Genetics, Inc. Pyrrolobenzodiazepines and targeted conjugates
WO2013068874A1 (en) 2011-11-11 2013-05-16 Pfizer Inc. Antibody-drug conjugates
JP2015501802A (ja) 2011-11-17 2015-01-19 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ コロラド，ア ボディー コーポレイトＴＨＥ ＲＥＧＥＮＴＳ ＯＦ ＴＨＥ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＯＦ ＣＯＬＯＲＡＤＯ，ａ ｂｏｄｙ ｃｏｒｐｏｒａｔｅ 眼への薬物送達を向上させるための方法および組成物、ならびに徐放性送達製剤
IN2014CN04961A (zh) 2011-12-05 2015-09-18 Igenica Biotherapeutics Inc
CN110201186A (zh) 2012-10-23 2019-09-06 西纳福克斯股份有限公司 经修饰的抗体、抗体-缀合物及其制备方法
GB201309807D0 (en) 2013-05-31 2013-07-17 Pharma Mar Sau Antibody drug conjugates
WO2014197854A1 (en) 2013-06-06 2014-12-11 Igenica Biotherapeutics, Inc. Novel linkers for antibody-drug conjugates and related compounds, compositions, and methods of use
US20160158369A1 (en) 2013-07-10 2016-06-09 Seikagaku Corporation Pharmaceutical composition for respiratory administration
TWI641620B (zh) 2013-08-21 2018-11-21 再生元醫藥公司 抗－ｐｒｌｒ抗體及其用途
EP3125943A4 (en) 2014-04-04 2017-12-06 Merck Sharp & Dohme Corp. Phosphate based linkers for intracellular delivery of drug conjugates
WO2016168766A1 (en) 2015-04-15 2016-10-20 The California Institute For Biomedical Research Optimized chimeric receptor t cell switches and uses thereof
EP3407916B1 (en) * 2016-01-29 2023-12-20 Merck Sharp & Dohme LLC Phosphonate linkers and their use to facilitate cellular retention of compounds
WO2017147542A2 (en) 2016-02-26 2017-08-31 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Optimized transglutaminase site-specific antibody conjugation
CA3025377A1 (en) * 2016-06-02 2017-12-07 Abbvie Inc. Glucocorticoid receptor agonist and immunoconjugates thereof
JP7330101B2 (ja) * 2016-11-08 2023-08-21 レゲネロン ファーマシューティカルス，インコーポレーテッド ステロイド及びそのタンパク質コンジュゲート
CN110944718A (zh) * 2017-05-18 2020-03-31 里珍纳龙药品有限公司 环糊精蛋白质药物偶联物
BR112020022400A2 (pt) * 2018-05-09 2021-02-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. anticorpos anti-msr1 e métodos de uso dos mesmos
US20230119539A1 (en) * 2019-01-08 2023-04-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Traceless linkers and protein-conjugates thereof

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1668339A (zh) * 2002-07-16 2005-09-14 梅德克斯股份有限公司 类固醇缀合物、其制剂及其用途
US20040157810A1 (en) * 2002-08-23 2004-08-12 Teicher Martin H. Corticosteroid conjugates and uses thereof
WO2010132743A1 (en) * 2009-05-15 2010-11-18 Gilead Sciences, Inc. Corticosteroid beta-agonist compounds for use in therapy
CN104203985A (zh) * 2012-01-31 2014-12-10 天蓝制药公司 用于治疗性递送的环糊精类聚合物
CN103044523A (zh) * 2012-12-13 2013-04-17 济南向惠医药技术有限公司 地塞米松-rgd多肽缀合物，其制备方法及应用
CN106459200A (zh) * 2014-03-21 2017-02-22 艾伯维公司 抗‑egfr抗体及抗体药物偶联物
WO2017062271A2 (en) * 2015-10-06 2017-04-13 Merck Sharp & Dohme Corp. Antibody drug conjugate for anti-inflammatory applications
WO2017189996A1 (en) * 2016-04-29 2017-11-02 Brandeis University Amino acid- and peptide-steroid conjugates and use thereof

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
B.ARNE THALÉN等: "6α-Fluoro- and 6α,9α-difluoro-11β,21- dihydroxy-16α,17α-propylmethylenedioxypregn-4-ene-3,20-dione: Synthesis and evaluation of activity and kinetics of their C-22 epimers" *
JEFFREY C. KERN等: "Novel Phosphate Modified Cathepsin B Linkers: Improving Aqueous Solubility and Enhancing Payload Scope of ADCs" *
JONAS H GRAVERSEN等: "Targeting the hemoglobin scavenger receptor CD163 in macrophages highly increases the anti-inflammatory potency of dexamethasone" *
MAAIKE EVERTS等: "Selective Intracellular Delivery of Dexamethasone into Activated Endothelial Cells Using an E-Selectin-Directed Immunoconjugate" *
MARK FRIGERIO等: "The Chemical Design and Synthesis of Linkers Used in Antibody Drug Conjugates" *
张敏等: "靶向抗肿瘤单克隆抗体药物应用的现状和展望" *
董晓东等: "不同偶联方式的水溶性多糖高分子前药的应用" *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113905767A (zh) * 2019-01-08 2022-01-07 里珍纳龙药品有限公司 无痕连接体及其蛋白质偶联物
WO2022135332A1 (zh) * 2020-12-21 2022-06-30 映恩生物制药（苏州）有限公司 一种甾体偶联物
WO2022166779A1 (zh) * 2021-02-04 2022-08-11 上海森辉医药有限公司 糖皮质激素受体激动剂的药物偶联物及其在医药上的应用
WO2022171101A1 (zh) * 2021-02-10 2022-08-18 映恩生物制药（苏州）有限公司 一种甾体偶联物
CN115785188A (zh) * 2022-12-20 2023-03-14 湖南醇健制药科技有限公司 一种布地奈德的制备方法
CN115785188B (zh) * 2022-12-20 2024-06-07 湖南科益新生物医药有限公司 一种布地奈德的制备方法

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