BR112020013492A2 - Esteroides e conjugados de anticorpo dos mesmos - Google Patents

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Abstract

A presente invenção refere-se a conjugados esteroides de proteína que são úteis, por exemplo, para a liberação específica no alvo de glicocorticoides (GCs) às células.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "ESTEROIDES E CONJUGADOS DE ANTICORPO DOS MESMOS".
REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS
[0001] Este pedido reivindica a prioridade e o benefício do Pedido de Patente Norte-americano provisório Nº. 62/614,905, intitulado Esteroides e conjugados de anticorpo dos mesmos, o qual foi depositado em 8 de janeiro de 2018. O teor deste pedido de patente provisório é incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade para todas as finalidades.
LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS
[0002] O presente pedido contém uma listagem de sequências que foi submetida em formato ASCII através de EFS-Web e é incorporada no presente documento a título de referência em sua totalidade. À referida cópia ASCII, criada em 3 de janeiro 2019, é nomeada 114581 00228 ST25.txt e tem 11,186 bytes.
CAMPO
[0003] A presente invenção refere-se a esteroides, conjugados de proteína (por exemplo, anticorpo) dos mesmos, e métodos para tratar doenças, distúrbios e condições, compreendendo administrar os esteroides e conjugados.
ANTECEDENTES
[0004] Os conjugados de anticorpo-fármaco (ADCs) são anticorpos que são covalentemente ligados a fármacos de molécula pequena biologicamente ativos, combinando assim a especificidade alvo dos anticorpos com o modo de ação e potência dos fármacos de molécula pequena. A utilidade terapêutica dos ADC(s) foi validada no tratamento do câncer e é um principal foco de estudo em andamento. ADCETRISº (bentruximabe vedotina) e KADCYLA?º (ado-trastuzumabe emtansina) são ADCs aprovados para o tratamento de certos tipos de câncer, e vários outros ADCs estão atualmente em desenvolvimento clínico.
[0005] Glicocorticoides (GCs) são esteroides de molécula pequena que se ligam aos receptores de glicocorticoide (GRs) e são utilizados em terapias anti-inflamatórias e imunossupressoras. No entanto, devido à expressão ubíqua dos receptores de glicocorticoides em muitos tipos celulares, os tratamentos com glicocorticoides são comprometidos por toxicidades a maior parte dos sistemas de órgãos. Sendo assim, existe uma necessidade por ambos novos glicocorticoides assim como novas terapias que minimizam os efeitos colaterais que surgem da administração de glicocorticoides, particularmente aqueles que surgem da ativação dos receptores de glicocorticoides em células não alvo. À presente descrição provê soluções para as necessidades antes mencionadas assim como outras necessidades não atendidas no campo ao qual a presente descrição pertence. Estão incluídos na presente descrição conjugados de anticorpo-fármaco compreendendo cargas úteis de glicocorticoide.
SUMÁRIO
[0006] São providos no presente documento compostos e métodos úteis para o tratamento de várias doenças, distúrbios ou condições.
[0007] Um primeiro aspecto se refere a um composto de Fórmula (II): o q H | ADA: BA pospoo o OH z (11); ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, estereoisômero ou derivado do mesmo,
[0008] em que:
[0009] R4 é alquila, arila, arilalquila, ou uma heterocicloalquila contendo N;
[00010] ambos Rx são hidrogênio; e SP é -C(O)-C1-C10-alquileno- C(O)-, -C(O)-N(C1-6alquil)-C 1-C10-alquileno-X1- onde X1 é ligado ao L na fórmula (III), -C(O)-N(H)-(C1-C10-alquileno)-S- onde S é ligado ao L na fórmula (II), -C(O)-N(C1-6alquil)-(C1-C10-alquileno)-S- onde S é o
NO ligado ao L na fórmula (III), SN onde o ponto de ligação na lateral direita (isto é, em N) é ao L na fórmula (III), -CH2-NH- onde o N Aa, é ligado ao L na fórmula (Ill), O onde o N é ligado ao L na fórmula (Il) e onde Ar é arileno opcionalmente substituído ou heteroarileno — opcionalmente — substituído, — -(C1-C10-alquileno)- NR50C(O)-(C1-C10-alquileno)-NR50a- onde NR50A é ligado ao L na fórmula (III), -C(O)-(C1-C10-alquileno)-NR50C(O)-(C1-C10-alquileno)- NR50a- onde NR50A é ligado ao L na fórmula (Ill) e onde cada C1- C10-alquileno é independentemente opcionalmente substituído com um ou mais hidróxi, -C(O)-N(R5)-C1-C10-alquileno-C(O)NH-X2- onde X2 é Re Rº E» , , iXI-X8 O É 1 ligado ao L na fórmula (III), ou onde X4 é ligado ao L na fórmula (Ill); ou
[00011] ambos Rx são flúor; e SP é -C(O)-C1-C10-alquileno-C(O)-, -C(O)-N(C1-6alquil)- C1-C10-alquileno-X1b- onde X1B é ligado ao L na fórmula (III), -C(O)-N(H)-(C1-C10-alquileno)-X1b- onde X1B é ligado ao o
NO L na fórmula (Ill), SN onde o ponto de ligação na lateral direita(isto é em N) ao L na fórmula (III), -CH2-NH- onde o N é ligado ao
H q Ar Ns L na fórmula (III), — O onde o N é ligado ao L na fórmula (Ill) e onde Ar é arileno opcionalmente substituído ou heteroarileno opcionalmente substituído, -(C1-C10-alquileno)-NR50C(O)-(C1-C10- alquileno)-NR50a- onde NR50A é ligado ao L na fórmula (III), -C(O)- (C1-C10-alquileno)- NR50C(O)-(C1-C10-alquileno)-NR50a- onde NR50A é ligado ao L na fórmula (Ill) e onde cada C1-C10-alquileno é independentemente opcionalmente substituído com um ou mais hidróxi, -C(O)-N(R5)-(C1-C10-alquileno)-C(O)NH-X2- onde X2 é ligado ao L na fórmula (III), Re Rº E» xao ONA 1 s ou onde X4 é ligado ao L na fórmula (Il); e
[00012] X1é-N(C1-6alquil)-;
[00013] X1Bé-S-,-NH-, ou -N(C1-6alquil)-;
[00014] X2é-NH-;
[00015] X3é-CH2-, X3 é -CH2-0-(C1-C10-alquileno)-C(O)- onde o C(O) é ligado ao X4, ou X3 é -C(O)-;
[00016] X4é-O-;
[00017] R5 é H, -OH, -OCH3, ou C1-6alquila;
[00018] R50eR50a são independentemente hidrogênio ou C1-C6- alquila;Rd, Re e Rf são independentemente -H, -OH, hidroxialquila, alcoxicarbonila, -C(O)JOH, ou -CH2O0Rg, onde cada Rg é independentemente -CH2C(0)OH ou -CH2C(O0)O(alquil); e
[00019] mébdou;
[00020] zéum inteiro selecionado a partir de 1-30, inclusive;
[00021] Léumligante;e
[00022] BAé um agente de ligação.
[00023] Um segundo aspecto se refere a um composto de acordo com a fórmula (1): o UL V
TAN Ro. o dy (1); ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, estereoisômero ou derivado do mesmo,
[00024] em que:
[00025] R4 é alquila, arila, arilalquila, ou uma heterocicloalquila contendo N;
[00026] a)ambos Rx são hidrogênio; e
[00027] R3 é -C(O)RZ; -(C1-C10-alquileno)-NR50C(O)-(C1-C10- Re Ri A Y R hm alquileno)- NR50aR50b; -CH2NH2; ou ROX
[00028] RZ é -C4-10-alquileno-C(O0)OH; -(C1-C10-alquileno)- NR50C(O)-(C1-C10-alquileno)-NR50aR50b onde cada C1-C10- alquileno é independentemente opcionalmente substituído com um ou mais hidróxi; t-Ar—CcHNH2 onde Ar é arila ou heteroarila opcionalmente substituída; ou NRI15R15a;
[00029] R15é Hou Cl1l-C6alquila e RI5A é -(C1-C10-alquileno)-SH ou -(C1-6-alquileno)-C(O)NHNH2;
[00030] b)ambos Rx são flúor; e
[00031] R3 é -C(O)RZ; -(C1-C10-alquileno)-NR50C(O)-(C1-C10- Re R$ Y R hm alquileno)- NR50aR50b; -CH2NH2; ou RO 7
[00032] RZ é -C4-10-alguileno-C(O0)JOH; -(C1-C10-alquileno)- NR50C(O)-(C1-C10-alquileno)-NR50aR50b onde cada C1-C10-
alquileno é independentemente opcionalmente substituído com um ou mais hidróxi; tFar-erNH: onde Ar é arila ou heteroarila opcionalmente substituída; ou NR16R16a;
[00033] R16éHouCl1-C6alquilaeRI1I6A é -(C1-C10-alquileno)-SH, -(C1-C10-alquileno)-NH2, -(C1-C10-alquileno)-NH(C1-6alquil), Ás NON, ou -(C1-6-alquileno)-C(O)NHNH2; e
[00034] cada R50,R50ae R50b são independentemente hidrogênio ou C1-C6-alquila;
[00035] um de Rc, Rd, Re e Rf é -CH2O0Rg e os outros são independentemente -H, -OH, hidroxialquila, -C(O)OH, ou -CH20Rg, onde cada Rg é independentemente -(C1-6-alquileno)-C(O)OH ou -(C1- 6-alquileno)-C(O)O(alquil); ou um de Rc, Rd, Re e Rf é hidroxialquila e os outros são -H; e
[00036] mébobou.
[00037] Um terceiro aspecto se refere a um composto de fórmula (II):
H R o HA R<, QDO) o o REL) —sPO O OH (1); um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, estereoisômero ou derivado do mesmo,
[00038] em que:
[00039] R4 é alquila, arila, arilalquila, ou uma heterocicloalquila contendo N;
[00040] ambos Rx são hidrogênio; SP é -C(O0)-C1-C10-alquileno- C(O)-, -C(O)-N(C1-6alquil)-C1-C10-alquileno-X1- onde X1 é ligado ao (L3)0-1 na fórmula (II), -C(O)-N(H)-(C1-C10-alquileno)-S- onde S é ligado ao (L3)0O-1 na fórmula (II), -C(O)-N(C1-6alquil)-(C1-C10-
7TI344 o
NO alquileno)-S- onde S é ligado ao (L3)O0-1 na fórmula (Il), Ns onde o ponto de ligação na lateral direita (isto é, em N) é ao (L3)0-1 na fórmula (II), -CH2-NH- onde o N é ligado ao (L3)O0O-1 na fórmula (II),
AP o onde o N é ligado ao (L3)0-1 na fórmula (II) e onde Ar é arileno opcionalmente substituído ou heteroarileno opcionalmente substituído, -(C1-C10-alquileno)-NR50C(O)-(C1-C10-alquileno)- NR50a- onde NR50A é ligado ao (L3)O0-1 na fórmula (II), -C(O0)-(C1- C10-alquileno)-NR50C(O)-(C1-C10-alquileno)-NR50a- onde NR50A é ligado ao (L3)0-1 na fórmula (Il) e onde cada C1-C10-alquileno é independentemente opcionalmente substituído com um ou mais hidróxi, -C(O)-N(R5)-C1-C10-alquileno-C(O)NH-X2- onde X2 é ligado ao (L3)O- Re so : txtnxs DONA se 1 na fórmula (II), ou onde X4 é ligado ao L3 na fórmula (Il); ou
[00041] ambos Rx são flúor; SP é -C(O)-C1-C10-alquileno-C(O)-, -C(O)-N(C1-6alquil)-C1-C10-alquileno-X1b- onde X1B é ligado ao (L3)0-1 na fórmula (II), -C(O)-N(H)-(C1-C10-alquileno)-X1b- onde X1B o
NO é ligado ao (L3)0-1 na fórmula (Il), Ny onde o ponto de ligação na lateral direita (isto é, em N) é ao (L3)0-1 na fórmula (II), -CH2-NH- Ad, onde o N é ligado ao (L3)0-1 na fórmula (Il), O onde o N é ligado ao (L3)0-1 na fórmula (Il) e onde Ar é arileno opcionalmente substituído ou heteroarileno opcionalmente substituído, -(C1-C10-
alquileno)-NR50C(O)-(C1-C10-alquileno)-NR50a- onde NR50A é ligado ao (L3)0-1 na fórmula (II), -C(O)-(C1-C10-alquileno)-NR50C(O)- (C1-C10-alquileno)-NR50a- onde NR50A é ligado ao (L3)O0O-1 na fórmula (Il) e onde cada C1-C1i0-alquileno é independentemente opcionalmente substituído com um ou mais hidróxi, -C(O)-N(R5)-(C1- C10-alquileno)-C(O)NH-X2- onde X2 é ligado ao (L3)0-1 na fórmula (II), Re Rº E» iXI-X8 O * 1 , : or onde X4 é ligado ao (L3)0-1 na fórmula (11); e
[00042] X1é-N(C1-6alquil)-;
[00043] X1IB é-S-,-NH-, ou -N(C1-6alquil)-;
[00044] X2é-NH-;
[00045] X3é-CH2-, X3 é -CH2-0-(C1-C10-alquileno)-C(O)- onde o C(O) é ligado ao X4, ou X3 é -C(O)-;
[00046] X4é-O-;
[00047] R5 é H, -OH, -OCH3 ou C1-6alquila;
[00048] R50 e R50a são independentemente hidrogênio ou C1-C6- alquila;
[00049] Rd,ReeRfsãoindependentemente -H, -OH, hidroxialquila, alcoxicarbonila, -C(O)JOH, ou -CH2O0Rg, onde cada Rg é independentemente -CH2C(0)OH ou -CH2C(O0)O(alquil); e
[00050] méboboui;
[00051] RGé um grupo reativo;
[00052] L2éligantede conexão; e
[00053] L3,quando presente, é um ligante autoimolativo.
[00054] Um outro aspecto se refere a composições farmacêuticas compreendendo o composto de fórmula (1), Fórmula |-P, Fórmula |-P-1, Fórmula (III-P), Fórmula 111I-P-1, Fórmula (3000) ou Fórmula (Ill) e um veículo, diluente e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
[00055] Um outro aspecto se refere a métodos úteis para o tratamento de várias doenças, distúrbios ou condições compreendendo administrar um composto de Fórmula |, Fórmula |-P, Fórmula 1-P-1, Fórmula (III-P), Fórmula 111I-P-1, Fórmula (3000) ou Fórmula (Ill) ou administrar uma composição farmacêutica compreendendo um composto de Fórmula |, Fórmula |-P, Fórmula 1|-P-1, Fórmula (III-P), Fórmula 111|-P-1, Fórmula (3000) ou Fórmula (Ill) e um veículo, diluente e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
BREVES DESCRIÇÕES DOS DESENHOS
[00056] AsFiguras1A,1Be1Ce2 mostram a ativação GR de ADCs- esteroides conforme testado no Exemplo 7.
[00057] A Figura3 mostra o esquema 1. Síntese da budenosida com espaçador 1c-1e, 19-11 e 1j-11.
DESCRIÇÃO DETALHADA A. DEFINIÇÕES
[00058] “Conforme usado no presente documento, "alquila" se refere a uma porção do radical hidrocarboneto monovalente e saturado. À menos que especificado de outra forma, alquila é não substituída e pode ser linear, ramificada ou cíclica, isto é, cicloalquila. Alquila inclui, porém não se limita, àquelas tendo 1-—20 átomos de carbono, isto é, C1-20 alquila; 1-12 átomos de carbono, isto é, C1-12 alquila; 1-8 átomos de carbono, isto é, C1-8 alquila; 1-6 átomos de carbono, isto é, C1-6 alquila; e 1—3 átomos de carbono, isto é, C1-3 alquila. Cicloalquila, que é um subconjunto da alquila inclui, porém não se limita a, grupos tendo 3—-20 átomos de carbono, isto é, C3-20 alquila; 3-12 átomos de carbono, isto é, C3—12 alquila; 3-10 átomos de carbono, isto é, C3-10 alquila; 3-8 átomos de carbono, isto é, C3—8 alquila; e 3-6 átomos de carbono, isto é, C3-6 alquila. Exemplos de porções alquila incluem, porém não se limitam a metila, etila, n-propila, i-propila, n-butila, s- butila, tbutila, i-butila, uma porção pentila, uma porção hexila, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila e ciclo-hexila.
[00059] —"“Alquileno" é alquila divalente, conforme definido no presente documento.
[00060] "“Aminoalquila" conforme usado no presente documento, significa um grupo alquila substituído com um ou dois grupos -NH2.
[00061] “Conforme usado no presente documento, "alquenila" se refere a uma porção de radical hidrocarboneto monovalente contendo pelo menos dois átomos de carbono e uma ou mais ligações duplas carbono-carbono não aromáticas. Alquenila é não substituída, a menos que especificado de outra forma, e pode ser linear, ramificada ou cíclica. Alquenila inclui, porém não se limita àquelas tendo 2—20 átomos de carbono, isto é, C2—20 alquenila; 2—12 átomos de carbono, isto é, C2— 12 alquenila; 2-8 átomos de carbono, isto é, C2—8 alquenila; 2-6 átomos de carbono, isto é, C2—6 alquenila; e 224 átomos de carbono, isto é, C2-4 alquenila. Cicloalquenila, que é um subconjunto de alquenila inclui, porém não se limita a, grupos tendo 3-20 átomos de carbono, isto é, C3-20 alquenila; 312 átomos de carbono, isto é, C3- 12 alquenila; 3-10 átomos de carbono, isto é, C3-10 alquenila; 3-8 átomos de carbono, isto é, C3—8 alquenila; e 3-6 átomos de carbono, isto é, C3-6 alquenila. Exemplos de porções de alquenila incluem, porém não se limitam a vinila, propenila, butenila e ciclo-hexenila.
[00062] "Alquenileno" é alquenila divalente, conforme definida no presente documento.
[00063] “Conforme usado no presente documento, "alquinila" se refere a uma porção de radical hidrocarboneto monovalente contendo pleo menos dois átomos de carbono e uma ou mais ligações triplas carbono-carbono. Alquinila é não substituída, a menos que especificado de outra forma, e pode ser linear, ramificada ou cíclica. Alquinila inclui, porém não se limita àquelas tendo 2—20 átomos de carbono, isto é, C2— alquinila; 212 átomos de carbono, isto é, C2-12 alquinila; 2-8 átomos de carbono, isto é, C2—8 alquinila; 2-6 átomos de carbono, isto é, C2—6 alquinila; e 2H átomos de carbono, isto é, C2H4 alquinila. Cicloalquinila, que é um subconjunto de alquinila inclui, porém não se limita a, grupos tendo 3—20 átomos de carbono, isto é, C3—20 alquinila; 3—12 átomos de carbono, isto é, C3—-12 alquinila; 3-10 átomos de carbono, isto é, C3—10 alquinila; 3-8 átomos de carbono, isto é, C3-8 alquinila; e 3-6 átomos de carbono, isto é, C3—6 alquinila. Exemplos de porções de alquinila incluem, porém não se limitam a etinila, propinila e butinila.
[00064] "“Alquinileno" é alquinila divalente, conforme definido no presente documento.
[00065] “Conforme usado no presente documento, "alcóxi" se refere a uma porção de radical hidrocarboneto monovalente e saturado em que o hidrocarboneto inclui uma ligação única a um átomo de oxigênio e em que o radical está localizado no átomo de oxigênio, por exemplo, CH3CH2-O- para etóxi. Os substituintes de alcóxi se ligam ao composto que eles substituem através deste átomo de oxigênio do substituinte de alcóxi. Alcóxi é não substituído, a menos que especificado de outra forma, e pode ser linear, ramificado ou cíclico, isto é, cicloalcóxi. Alcóxi inclui, porém não se limita àqueles tendo 1—20 átomos de carbono, isto é, C1-20 alcóxi; 1-12 átomos de carbono, isto é, C1-12 alcóxi; 1-8 átomos de carbono, isto é, C1-8 alcóxi; 1-6 átomos de carbono, isto é, C1-6 alcóxi; e 1-3 átomos de carbono, isto é, C1—3 alcóxi. Cicloalcóxi, que é um subconjunto de alcóxi inclui, porém não se limita a, grupos tendo 3-20 átomos de carbono, isto é, C3-20 alcóxi; 3—-12 átomos de carbono, isto é, C3—12 alcóxi; 3-10 átomos de carbono, isto é, C3-10 alcóxi; 3-8 átomos de carbono, isto é, C3—8 alcóxi; e 3-6 átomos de carbono, isto é, C3-6 alcóxi. Exemplos de porções alcóxi incluem, porém não se limitam a metóxi, etóxi, n-propóxi, i-propóxi, n-butóxi, s- butóxi, t-butóxi, i-butóxi, uma porção pentilóxi, uma porção hexilóxi, ciclopropilóxi, ciclobutilóxi, ciclopentilóxi e ciclo-hexilóxi.
[00066] “Conforme usado no presente documento, "arila" se refere a uma porção monovalente que é um radical de um sistema de anel monocíclico ou policícico compreendendo pelo menos um anel aromático em que os átomos de anel são átomos de carbono. Arila é opcionalmente substituída. Quando arila é monocíclica, arila é fenila. Quando arila é policíclica, por exemplo, bicíclica ou tricíclica, pelo menos um dos anéis é aromático e os outros anéis podem ser aromáticos ou parcialmente insaturados. Exemplos de porções arila incluem, porém não se limitam àquelas tendo 6 a 20 átomos de anel de carbono, isto é, C6—20 arila; 6 a 15 átomos de anel de carbono, isto é, C6—15 arila, e 6 a 10 átomos de anel de carbono, isto é, C6—10 arila. Exemplos de porções arila incluem, porém não se limitam a fenila, naftila, tetraidronaftila, fluorenila, azulenila, antrila, fenantrila e pirenila.
[00067] Conforme usado no presente documento, "arileno" se refere a um grupo arila divalente, conforme definido no presente documento. Em algumas modalidades, o arileno é opcionalmente substituído em um dos carbonos que não provê um ponto de ligação ao resto da molécula. Em algumas modalidades, o arileno não é opcionalmente substituído. Em algumas modalidades, o arileno é fenileno. Em algumas
à q modalidades, o arileno é * o qual é opcionalmente substituído.
Á q Em algumas modalidades, o arileno é S o qual não é opcionalmente substituído. Em algumas modalidades, o fenileno em
NÓ
O o é opcionalmente substituído. Em algumas
É modalidades, o fenileno em o não é opcionalmente substituído.
[00068] “Conforme usado no presente documento, "arilalquila" se refere a uma porção monovalente que é um radical de um composto alquila, em que o composto alquila é substituído com um substituinte arila, isto é, o composto aromático inclui uma ligação única a um grupo alquila e em que o radical é localizado no grupo alquila. Um grupo arilalquila se liga à estrutura química ilustrada através do grupo alquila. Em algumas modalidades, arilalquila inclui benzila, fenilet-1-ila, e fenilet- 2-ila, e similar. Salvo indicação ao contrário, arilalquila é não substituída. No entanto, quando substituída, arilalquila, isto é, o grupo arila e/ou o grupo alquila, é substituído conforme descrito no presente documento. Exemplos de arilalquila include, porém não se limitam a, benzila.
[00069] “Conforme usado no presente documento, "haloalquila" se refere à alquila, conforme definido no presente documento, em que a alquila inclui pelo menos um substituinte selecionado a partir de um halogênio, por exemplo, F, Cl, Br ou |. Em algumas modalidades, a alquila é substituída com 1, 2, 3 ou 4 átomos halo que são independentemente selecionados.
[00070] Conforme usado no presente documento, "haloalcóxi" se refere a alcóxi, conforme definido acima, em que o alcóxi inclui pelo menos um substituinte selecionado a partir de um halogênio, por exemplo, F, CI, Br ou |.
[00071] Conforme usado no presente documento, "heteroalquila" se refere a uma alquila na qual um ou mais átomos de carbono são substituídos por heteroátomos. Conforme usado no presente documento, "heteroalquenila" se refere a uma alquenila na qual um ou mais átomos de carbono são substituídos por heteroátomos. Conforme usado no presente documento, "heteroalquinila" se refere a uma alquinila na qual um ou mais átomos de carbono são substituídos por heteroátomos. Os heteroátomos adequados incluem, porém não se limitam aos átomos de nitrogênio, oxigênio e enxofre, que são independentemente selecionados. Heteroalquila é não substituída, a menos que especificado de outra forma. Exemplos de porções de heteroalquila incluem, porém não se limitam a, aminoalquila, sulfonilalquila, sulfinilalquila. Exemplos de porções de heteroalquila também incluem, porém não se limitam a, metilamino, metilsulfonila e metilsulfinila.
[00072] “Conforme usado no presente documento, "heteroarila" se refere a uma porção monovalente que é um radical de um composto aromático em que os átomos de anel contêm átomos de carbono e pelo menos um átomo de oxigênio, enxofre, nitrogênio ou fósforo. Heteroarila inclui radicais monocíclicos, bicíclicos fundidos, ou tricíclicos fundidos, em que o anel compreendendo um radical monocíclico é aromático e em que pelo menos um dos anéis fundidos compreendendo um radical bicíclico ou tricíclico é aromático. O radical bicíclico fundido inclui sistemas de anel em ponte. Exemplos de porções heteroarila incluem, porém não se limitam àqueles tendo 5 a 20 átomos de anel; 5 a 15 átomos de anel; e 5 a 10 átomos de anel. Heteroarila é opcionalmente substituída. Em algumas modalidades, o anel heteroarila compreende 1, 2, 3 ou 4 (em algumas modalidades, 1, 2 ou 3; em algumas modalidades 1 ou 2; em algumas modalidades 1) átomos de oxigênio, enxofre, nitrogênio e/ou fósforo, que são independentemente selecionados. Em algumas modalidades, heteroarila é 1,2,4-triazolila, 1,3,5-triazolila, ftalimídila, piridinila, pirrolila, imidazolila, tienila, furanila, indolila, 2,3-di-hidro-1H-indolila (incluindo, por exemplo, 2,3-di-hidro-1H- indol-2-ila ou 2,3-di-hidro-1H-indol-5-ila, e similar), isoindolila, indolinila, isoindolinila, — benzimidazolila, — benzodioxol-4-ila, — benzofuranila,
cinolinila, indolizinila, = naftiridin-3-ila, ftalazin-3-ila, ftalazin-4-ila, pteridinila, purinila, quinazolinila, quinoxalinila, tetrazoila, pirazolila, pirazinila, pirimidinila, piridazinila, oxazolila, isoxazolila, oxadiazolila, benzoxazolila, quinolinila, isoquinolinila, tetraidroisoquinolinila (incluindo, por exemplo, tetraidroisoquinolin-4-ila ou tetraidroisoquinolin- 6-ila, e similar), pirrolo[3,2-c]piridinila (incluindo, por exemplo, pirrolo[3,2-c]piridin-2-la => ou — pirrolo[3,2-c]piridin-7-ila e similar), benzopiranila, tiazolila, isotiazolila, tiadiazolila, benzotiazolila, benzotienila.
[00073] Conforme usado no presente documento, "heteroarileno" se refere a uma heteroarila divalente, conforme definido no presente documento. Em algumas modalidades, o heteroarileno é opcionalmente substituído em um dos carbonos ou nitrogênios substituíveis que não proveem um ponto de ligação ao resto da molécula. Em algumas modalidades, o heteroarileno não é opcionalmente substituído. Em algumas modalidades, o heteroarileno é piridindila.
[00074] Conforme usado no presente documento, "heterocicloalquila" se refere a uma cicloalquila, conforme definido acima em "alquila" na qual um ou mais átomos de carbono são substituídos por heteroátomos, que são independentemente selecionados. Os heteroátomos adequados incluem, porém não se limitam a átomos de nitrogênio, oxigênio e enxofre. A menos que especificado de outra forma, heterocicloalquila é não substituída. Exemplos de porções heterocicloalquila incluem, porém não se limitam a morfolinila, piperidinila, tetraidropiranila, pirrolidinila, imidazolidinila, oxazolidinila, tiazolidinila, dioxolanila, ditiolanila, oxanila ou tianila.
[00075] Conforme usado no presente documento, "hidroxialquileno" se refere a alquileno, conforme definido no presente documento, em que o alquileno inclui pelo menos um hidróxi. Em algumas modalidades, o alquileno é substituído com 1, 2, 3 ou 4 átomos de hidróxi.
[00076] Conforme usado no presente documento, "heterocicloalquila contendo N" se refere a uma cicloalquila, conforme definido acima na "alquila" na qual um ou mais átomos de carbono são substituídos por heteroátomos e em que pelo menos um heteroátomo é um átomo de nitrogênio. Heteroátomos adequados, que são independentemente selecionados, além do nitrogênio, incluem, porém não se limitam a átomos de oxigênio e enxofre. A heterocicloalquila contendo N é opcionalmente substituída. Exemplos de porções de heterocicloalquila contendo N incluem, porém não se limitam a, morfolinila, piperidinila, pirrolidinila, imidazolidinila, oxazolidinila ou tiazolidinila.
[00077] Conforme usado no presente documento, "opcionalmente substituído", quando usado para descrever uma porção radical (por exemplo, arileno — opcionalmente substituído, heteroarileno opcionalmente substituído, arila opcionalmente substituída, heteroarila opcionalmente substituída, alquila opcionalmente substituída, e arilalquila opcionalmente substituída) significa que a referida porção é opcionalmente ligada a um ou mais substituintes em qualquer átomo substituível na porção. Exemplos dos referidos substituintes incluem, porém não se limitam a halo, ciano, nitro, haloalquila, azido, epóxi, heteroarila opcionalmente substituída, heterocicloalquila opcionalmente o o o substituída, Fo, tsrt dare Homo cloro crlieeo o N N tnrel ga gl nRAR: tnrel nRraRe —i-s(o)-Rº cÍi-s(0)-RA “a 2 R “vm, “, ou “”, em que RA, RB e RC são, independentemente, em cada ocorrência, um átomo de hidrogênio, alquila, alquenila, alquinila, arila, —alquilarla, arilalquila, heteroalquila, heteroarila — ou heterocicloalquila, ou RA e RB, juntos com os átomos aos quais eles estão ligados, formam um anel heterocíclico saturado ou insaturado (isto é, heterocicloalquila ou heteroarila), em que o anel é opcionalmente substituído e em que, além do átomo de anel de nitrogênio, um ou mais átomos de anel são opcionalmente um heteroátomo independentemente selecionado a partir de nitrogênio, oxigênio, enxofre e fósforo. Em certas modalidades, quando uma porção radical é opcionalmente substituída com uma heteroarila opcionalmente substituída, heterocicloalquila opcionalmente substituída ou anel heterocíclico opcionalmente substituído saturado ou insaturado (isto é, heterocicloalquila ou heteroarila), os substituintes na heteroarila opcionalmente substituída, heterocicloalquila opcionalmente substituída ou anel heterocíclico opcionalmente — substituído — saturado ou insaturado (isto é, heterocicloalquila ou heteroarila), se eles são substituídos, são não substituídos com substituintes que são também opcionalmente substituídos com substituintes adicionais. Em algumas modalidades, quando um grupo descrito no presente documento é opcionalmente substituído, o substituinte ligado ao grupo é não substituído a menos que especificado de outra forma, isto é, arileno opcionalmente substituído como um substituinte não é também substituído com um arileno substituído.
[00078] Conforme usado no presente documento, "agente de ligação" se refere a qualquer molécula à base de proteína ou à base de peptídeo capaz de se ligar com especificidade a um dado parceiro de ligação. Em algumas modalidades, o agente de ligação é um anticorpo, ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Em algumas modalidades, o agente de ligação não é albumina.
[00079] Conforme usado no presente documento, "condições de síntese da amida" se refere a condições de reação adequadas para facilitar a formação de uma amida, por exemplo, através da reação de um ácido carboxílico, ácido carboxílico ativado ou haleto de acila com uma amina. Em algumas modalidades, as "condições de síntese da amida" se referem a condições de reação adequadas para facilitar a formação de uma ligação de amida entre um ácido carboxílico e uma amina.
Em algumas dessas modalidades, o ácido carboxílico é primeiro convertido em um ácido carboxílico ativado antes do ácido carboxílico ativado reagir com uma amina para formar uma amida.
As condições adequadas para efetuar a formação de uma amida incluem, porém não se limitam àquelas utilizando reagentes para efetuar a reação entre um ácido carboxílico e uma amina, incluindo, porém sem se limitar a, diciclo- hexilcarbodiimida (DCC), diisopropilcarbodiimida (DIC), hexafluorofosfato de (benzotriazol-1-ilóxi)Dtris(dimetilamino)fosfônio (BOP), hexafluorofosfato de (benzotriazol-1-ilóxi)tripirrolidinofosfônio (PyYBOP), hexafluorofosfato de (7-azabenzotriazol-1-ilóxi)tripirrolidinofosfônio (PYAOP), hexafluorofosfato de bromotripirrolidinofosfônio (PyBrOP), hexafluorofosfato de O- (benzotriazol-1-il)-N,N,N' N'-tetrametilurônio (HBTU), tetrafluoroborato de O-(benzotriazol-1-il)-N,N,N' N'=tetrametilurônio (TBTU), 3-óxido de hexafluorofosfato de 1-bis(dimetilamino)metileno]1H-1,2,3-triazolo[4,5- blpiridínio (HATU), 2-etóxi-1-etoxicarbonil-1,2—di-hidroquinolina (EEDO), 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC), hexafluorofosfato de 2-cloro-1,3-dimetilimidazolidínio (CIP), 2-cloro- 4,6-dimetóxi—1,3,5-triazina (CDMT) e carbonildiimidazol (CDI). Em algumas modalidades, um ácido carboxílico é primeiro convertido em um éster carboxílico ativado antes de reagir com uma amina para formar uma ligação amida.
Em certas modalidades, o ácido carboxílico é reagido com um reagente.
O reagente ativa o ácido carboxílico ao desprotonar o ácido carboxílico e então formar um produto complexo com o ácido carboxílico desprotonado como um resultado de ataque nucleofílico pelo ácido carboxílico desprotonado no reagente protonado.
Para certos ácidos carboxílicos, este éster ativado é mais suscetível subsequentemente ao ataque nucleofílico por uma amina do que o ácido carboxílico é antes de ser convertido.
Isto resulta na formação da ligação amida.
Como tal, o ácido carboxílico é descrito como ativado.
Os reagentes exemplificadores incluem DCC e DIC.
[00080] Conforme usado no presente documento, "quantidade terapeuticamente eficaz" se refere a uma quantidade (de um composto) que é suficiente para prover um benefício terapêutico a um paciente no tratamento ou gerenciamento de uma doença ou distúrbio, ou para retardar ou minimizar um ou mais sintomas associados com a doença ou distúrbio.
[00081] Conforme usado no presente documento, "sal farmaceuticamente aceitável" se refere a qualquer sal adequado para a administração a um paciente. Os sais adequados incluem, porém não se limitam àqueles descritos em Berge et al., "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci., 1977, 66:1, incorporado no presente documento a título de referência. Exemplos de sais incluem, porém não se limitam a sais de metal alcalino ou metal alcalinoterroso derivados de ácido, derivados de base, orgânicos, inorgânicos, de amina, incluindo porém sem se limitar a sais de cálcio, sais de magnésio, sais de potássio, sais de sódio, sais de ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, ácido acético, ácido propiônico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido maleico, ácido malônico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido cinâmico, ácido mandélico, ácido metanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácido p-toluenossulfônico e ácido salicílico, e similar.
[00082] Certos grupos, porções, substituintes, e átomos são apresentados como uma linha ondulada que cruza ou capeia uma ligação ou ligações para indicar o átomo através do qual os grupos, porções, substituintes, átomos são ligados. Por exemplo, um grupo fenila que é substituído com um grupo propila apresentado como: CH; t CH3 A, ou x, tem a seguinte estrutura:
CE
[00083] CH3, Conforme usado no presente documento, as ilustrações mostrando substituintes ligados a um grupo cíclico (por exemplo, cicloalquila ou heterocicloalquila aromática, heteroaromática, de anel fundido e saturada ou insaturada) através de uma ligação entre átomos de anel pretendem indicar, a menos que especificado de outra forma, que o grupo cíclico pode ser substituído com aquele substituinte em qualquer posição do anel no grupo cíclico ou em qualquer anel no grupo de anel fundido, de acordo com técnicas apresentadas no presente documento ou que são conhecidas no campo ao qual a (R'k presente descrição pertence. Por exemplo, o grupo, — —*", em que subscrito q é um inteiro selecionado a partir de O a 4, inclusive e no qual as posições do substituinte R1 são descritas genericamente, isto é, não diretamente ligadas a qualquer vértice da estrutura da linha de ligação, isto é, átomo de carbono de anel específico, inclui os exemplos não limitantes que seguem dos, grupos nos quais o substituinte R1 é ligado Rº a um átomo de carbono de anel específico: +1O+ Or R' Rº RURI RR Rr RO R 2 R 2 RR + NI Ds R,OR ; Ri Rº Ri Ri O x e d+ + e e PS RR, R RR, RO, RR +
Rº R' R' R' Da
BF OQEO R' R' Rº QL 145 Ro RO, OR e RR
[00084] Onde o nome e a estrutura do composto conflitam ou são inconsistentes, a estrutura prevalece, exceto onde o contexto, por exemplo, conforme provido pelos dados de caracterização RMN, pode informar de outra forma.
[00085] “Conforme usado no presente documento, a frase "grupo reativo" ("RG"), se refere a um grupo ou porção funcional que reage com uma porção reativa de um anticorpo, anticorpo modificado, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Em certas modalidades, o "grupo reativo" é um grupo ou porção funcional (por exemplo, maleimida ou NHS éster) que reage com um resíduo de cisteína ou lisina de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Em certas modalidades, o "grupo reativo" é um grupo ou porção funcional que é capaz de sofrer uma reação química "click". Em algumas modalidades da referida reação química "click", o grupo reativo compreende uma alcino que é capaz de sofrer uma reação de 1,3 cicloadição com uma azida. Os grupos reativos adequados incluem, porém não se limitam a, alcinos estirados, por exemplo aqueles adequados para cicloadições de alcino-azida promovidos pelo estiramento (SPAAC), cicloalcinos, por exemplo, ciclooctinos, alcinos benzanulados, e alcinos capazes de sofrer reações de 1,3 cicloadição com azidas na ausência de catalisadores de cobre. Os alcinos adequados também incluem, porém não se limitam a, DIBAC (onde a porção -C(O)CH2CH2C(O)- da porção DIBAC é coberta por L2), DIBO (onde a porção -O- da porção DIBO é
OO * o $ coberta por L2), BARAC (onde a porção N da porção BARAC é coberta por L2), DIFO (onde a porção -O- é coberta por L2), alcinos substituídos, por exemplo, alcinos fluorados, aza- cicloalcinos, BCN e derivados dos mesmos. As cargas úteis-ligantes compreendendo os referidos grupos reativos são úteis para conjugar anticorpos que têm sido funcionalizados com grupos azido. Os referidos anticorpos funcionalizados incluem anticorpos funcionalizados com grupos de azido-polietileno glicol. Em certas modalidades, o referido anticorpo funcionalizado é derivado através da reação de um anticorpo compreendendo pelo menos um resíduo de glutamina, por exemplo, Q295 de cadeia pesada (numeração EU), com um composto de acordo com a fórmula H2N—LL—-N3, em que LL é um grupo de polietileno glicol divalente, na ausência da enzima transglutaminase.
[00086] Em algumas modalidades, o grupo reativo (RG) é um alcino, por exemplo, * O, que pode reagir através da química "click" com uma azida, por exemplo, Nes, para formar um produto da química
W "click", por exemplo, AA O seu regioisômero, ou mistura dos mesmos. Em algumas modalidades, o grupo reativo é um alcino, por % O
SO exemplo, N ou (onde L2 abrange -OCH2C(O)-), que pode reagir através da química "click" com uma azida, por exemplo, na para formar um produto da química
4 OT "Click", por exemplo, Ns . Em algumas modalidades, o grupo
À reativo é um alcino, por exemplo, CH , que pode reagir através da química "click" com uma azida, por exemplo, EA para formar um + produto da química "click", por exemplo, 7 , Seu regioisômero, ou mistura dos mesmos. Em algumas modalidades, o grupo reativo é o 1 um grupo funcional, por exemplo, O , que reage com um resíduo de cisteína em um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do Abs o mesmo, para formar uma ligação a ele, por exemplo, O , em que Ab se refere a um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo e S se refere ao átomo S em um resíduo de cisteína através do qual o grupo funcional se liga a Ab. Em algumas modalidades, o grupo o A, reativo é um grupo funcional, por exemplo, O ,que reage com um resíduo de lisina em um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, para formar uma ligação a ele, por exemplo, erlo *. em que Ab se refere a um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo e N se refere ao átomo de N em um resíduo de lisina através do qual o grupo funcional se liga a Ab.
[00087] “Conforme usado no presente documento, a frase "resíduo do grupo reativo" (-L1-) se refere a um produto da reação de um grupo funcional na porção ligante com a porção reativa de um agente de ligação (BA), incluindo o produto da química "click". O resíduo do grupo reativo é formado pela reação de um grupo reativo em um aminoácido do agente de ligação, e é ligado ao agente de ligação (por exemplo, anticorpo) e ao ligante de conexão. Em algumas modalidades, o resíduo do grupo reativo é um grupo que compreende 1,2,3-tetrazol, isto é, é formado pela reação de um alcino com uma azida. Em algumas s 7
N modalidades, o resíduo do grupo reativo é º (a) emqueS se refere ao átomo de S em um resíduo de cisteína através do qual (a) se o 1 liga a Ab, e o qual é formado pela reação de O com um resíduo de cisteína em um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do o
NJ mesmo. Em algumas modalidades, o resíduo do grupo reativo é em que N se refere ao átomo de N em um resíduo de lisina, e o qual é º o
FA formado pela reação de um grupo funcional, por exemplo, O , com um resíduo de lisina em um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
[00088] Em algumas modalidades, o ligante-L- compreende e L1 é o resíduo do grupo reativo de acordo com a seguinte porção: ATO o ; à , Seu regioisômero, ou mistura dos mesmos, em que “ é a ligação ao agente ligante. Em algumas modalidades, o ligante-L-
compreende e L1 é o resíduo do grupo reativo de acordo com a seguinte Pr ” Nm porção: Ny , Seu regioisômero, ou mistura dos mesmos, em 1 que $ é a ligação ao agente ligante. Em algumas modalidades, o ligante-L- compreende e L1 é o resíduo do grupo reativo de acordo com a seguinte porção: 1! onde -OCH2C(O)- está abrangido por 1 L2, seu regioisômero, ou mistura dos mesmos, em que Í é a ligação ao agente ligante. Em algumas modalidades, o ligante-L- compreende e L1 é o resíduo do grupo reativo de acordo com a seguinte porção: 1
KR
OA Í "N , Seu regioisômero, ou mistura dos mesmos, em que $ éa ligação ao agente ligante. Em algumas modalidades, o ligante-L- compreende e L1 é o resíduo do grupo reativo de acordo com a seguinte 1 so o o 1 porção: O , em que :$ é a ligação à cisteína do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Em algumas modalidades, o ligante-L- compreende e L1 é o resíduo do grupo reativo de acordo a 1 : zo. À É $$ 4a linmaeão à lici com a seguinte porção: , em que é a ligação à lisina do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Nesses exemplos, a ligação ao agente ligante é direta ou através de um ligante. Em modalidades específicas, o agente ligante é modificado com uma azida para facilitar ao ligante -L- ou L1 formar o resíduo do grupo reativo.
[00089] “Conforme usado no presente documento, "ligante de conexão" (L2) se refere a grupos divalentes que são cliváveis ou não cliváveis. Os ligantes cliváveis são ligantes que são clivados pelo metabolismo intracelular em seguida à internalização, por exemplo, clivagem através de hidrólise, redução ou reação enzimática. Os ligantes não cliváveis são ligantes que liberam uma carga útil ligada através da degradação lisossômica do anticorpo em seguida à internalização. Os ligantes de conexão adequados incluem, porém não se limitam a, ligantes ácido-lábeis, ligantes hidrólise-lábeis, ligantes enzimaticamente cliváveis, ligantes de redução lábeis e ligantes não cliváveis. Os ligantes adequados também incluem, porém não se limitam àqueles que são ou compreendem glicuronídeos, succinimida— tioéteres, unidades de polietileno glicol (PEG), hidrazonas, unidades de mal-caproíla, unidades de dissulfeto (por exemplo, -S-S-, —S-C(RIbR2b) , em que Rib e R2b são independentemente hidrogênio ou hidrocarbila), unidades de carbamato, unidades de para- amino-benzila (PAB), unidades de fosfato, por exemplo, unidades de mono-, bis-, ou trisfosfato e unidades de peptídeo, por exemplo, unidades de peptídeo contendo dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito ou mais resíduos de aminoácido, incluindo porém sem se limitar a unidades de resíduo de valina-citrulina. Conforme usado no presente documento, "caproíla" significa um grupo -(CH2)5-C(O)-. Em algumas modalidades, L2 compreende ciclodextrina (CD) Em algumas modalidades, L2 compreende -C(0)CH2CH2C(O)-, -C(O0)CH2CH2CH2C(0O)-, -OCH2C(O)-, -O- ou OS = o
[00090] “Conforme usado no presente documento, "ligante auto- immolativo" em (L3) se refere a qualquer referido grupo conhecido daqueles versados na técnica. Em modalidades específicas, o grupo
SS” No autoimolativo é p-aminobenzila (PAB), isto é À , Ou UM derivado do mesmo. Os derivados úteis incluem p-aminobenzilóxi, isto
H “O
O é É , e p-aminobenziloxicarbonila (PABC), isto é
N “Cho.
“É ** , Aqueles versados na técnica reconhecerão que um grupo autoimolativo é capaz de realizar uma reação química que libera os átomos restantes de um ligante a partir de uma carga útil. B. CARGAS ÚTEIS ESTEROIDES
[00091] Os esteroides adequados para os conjugados descritos no presente documento incluem budesonida e profármacos do mesmo, análogos ou derivados de budesonida (incluindo análogos e derivados fluorados) e profármacos dos mesmos, e esteroides listados na Tabela A e profáêmacos dos mesmos. Em algumas modalidades, os conjugados de anticorpo-fármaco liberam budesonida, um profármaco de budesonida, um análogo ou derivado de budesonida (incluindo análogos e derivados fluorados), um profármaco de um análogo ou derivado de budesonida (incluindo análogos ou derivados fluorados), um esteroide na tabela A, ou um profármaco de um esteroide na tabela A, depois da ligação do antígeno alvo do anticorpo. Na tabela A, os compostos que seguem são ligados ao BA do composto de fórmula (III), Fórmula (III-P), Fórmula I1I-P-1 ou (3000) através do hidróxi do grupo -C(O0)CH20OH, isto é através de -C(O)CH2-O-SP-L-, ou através do hidróxi de Mapracorat, isto é através de -O-SP-L-; ou são ligados ao RG do composto de fórmula (II), Fórmula (II-P), Fórmula 11-P-1, ou (2000) através do hidróxi do grupo -C(O)CH20OH, isto é através de -C(O0)CH2-
O-SP-(L3)0-1-L2-, ou através do hidróxi de Mapracorat, isto é através de -O-SP-(L3)0-1-L2-. Tabela A Nome comercial Estrutura no o Butirato de hidrocortisona ã - Dex
PA Locoidº CET
PP no À oH Halometasona mao! nro Sicortenº/ " D o) Fi Pa (C-48401-Ba) O Betametasona —. Celestoneº/Rinderonº%/Diprosone + o Fê e Ni (NSC-39470; Sch-4831) o Ho Fluclorolona Acetonida o A - ci XY TT Cutanitº&/Topiconº 7, y ES (RS-2252) ” A f
Ê
Nome comercial Estrutura Fluocinolona Acetonida Flucortº/FluonidNluvien/Retisert vo AL S/Synalar/Synalar- É n À Va ] H HPº%/Synemolº O i (NSC-92339; DF-277) so »P , A ol Flunisolida " DO 3 (RS-3999; R$-1320) É + aja
Ê no oH Cloprednol SS) MA”
FIV (RS-4691) AA
AA er Triamcinolona Ho fio Aristocortº/Kenacortº a ' a dae
Nome comercial Estrutura : ro 1º Budesonida Da Ó H ) H oH Flurandrenolida "os o NE
HAHA Cordranº LIES it o, Pº Desoximetasona r
HO ANAL À Topicortº E O 5 (DSXS) POUL =. o Benzoato de betametasona 2 0*7o) oH Uticortº Ho. í (W-5975) ri o
Nome comercial Estrutura ' no Pp , Desonida Ho DEF Desonateº É ] X EL
AA (D-2083) Ê A no % on
OA HT Meprednisona E O (NSC-527579; Sch-4358) LIS i Prednisolona o. Yoon Delta-Cortefº . > a $ (NCS-9120) AD" no P /
MAOS Triamcinolona Acetonida ALL? ro
Í SEJA
SÊ SÊ NE Metilprednisolona ! You Depo-Medrol; Medrol; Urbasonº K ão (NSC-19987) FÊ
Nome comercial Estrutura Prednisona CX 3 OH Decortin&/Deltasone/Lodotraº/M ss a) ço AN> eticortenº/Rayosº J Há HÁ [a E (NSC-10023) Dexametasona - Decadronº “ or (FT-4145; ENV-1105; IB1I-10090; « Í DO ISV-305; OTO-104) NR eo - Valerato de hidrocortisona Ho e AD y o Westcortº Cf ! Se PAP. Mapracorat b (BOL-242X; BOL-303242-X; ZK- oH 245186; BAY-865319; BOL-| [NS q N 303242-X) FEF e.
OX Benzodrocortisona o $
IE AA
[00092] Em algumas ou quaisquer modalidades, o composto de fórmula (3000) ou Fórmula (2000) compreende um profármaco de um esteroide na tabela A, onde SP é -C(O)-C1-C10-alquileno-C(O)-, -C(O)- N(C1-6alquil)-C1-C10-alquileno-X1b- onde X1B é ligado ao L na fórmula (3000) ou (L3)0-1 na fórmula (2000), -C(O)-N(H)-(C1-C10- alquileno)-X1b- onde X1B é ligado ao L na fórmula (3000) ou (L3)0-1 o
NO na fórmula (2000), NON onde o ponto de ligação na lateral direita (isto é, em N) é ao L na fórmula (3000) ou (L3)0-1 na fórmula (2000), -CH2-NH- onde N é ligado ao L na fórmula (3000) ou (L3)0-1 na
É fórmula (2000), O onde N é ligado ao L na fórmula (3000) ou (L3)0-1 na fórmula (2000), -(C1-C10-alquileno)-NR50C(O)- (C1-C10-alquileno)-NR50a- onde NR50A é ligado ao L na fórmula (3000) ou (L3)0O-1 na fórmula (2000), -C(O)-(C1-C10-alquileno)- NR50C(O)-(C1-C10-alquileno)-NR50a- onde NR50A é ligado ao L na fórmula (3000) ou (L3)0-1 na fórmula (2000) e onde cada C1-C10- alquileno é independentemente opcionalmente substituído com um ou mais hidróxi, -C(O)-N(R5)-(C1-C10-alquileno)-C(O)NH-X2- onde X2 é ligado ao L na fórmula (3000) ou (L3)0O-1 na fórmula (2000), ou Re Rº E» ixtoxs MONÊ se s onde X4 é ligado ao L na fórmula (3000) ou (L3)O- 1 na fórmula (2000).
[00093] Em algumas modalidades, um composto de acordo com a fórmula (1-P):
oi ge | AR SS o Í A! O o —A ceH 1 CH; Ro O (-P); ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, estereoisômero ou derivado do mesmo,
[00094] em que:
[00095] R4 é alquila, arila, arilalquila, ou uma heterocicloalquila contendo N; Re So»
[00096] R3é-C(O)RZou Rº O É
[00097] RZé-C4-10-alguileno-C(O)OH ou NRI5R15a;
[00098] R15éHoualquilaeR1I5A é -(C1-6-alquileno)-C(O)NHNH2;
[00099] um de Rc, Rd, Re e Rf é -CH2O0Rg e os outros são independentemente -H, -OH, hidroxialquila, -C(O)OH, ou -CH20Rg, onde cada Rg é independentemente -(C1-6-alquileno)-C(O)OH ou -(C1- 6-alquileno)-C(O)O(alquil); ou um de Rc, Rd, Re e Rf é hidroxialquila e os outros são -H; e
[000100] méobou.
[000101] Em algumas modalidades, um composto de acordo com a Fórmula (1-P-1): o T H Ri. À S o R$ O o (I-P-1);
[000102] ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, estereoisômero ou derivado do mesmo,
[000103] em que:
[000104] R4 é alquila, arila, arilalquila, ou uma heterocicloalquila contendo N; Re REATOR hm
[000105] R3é-C(O)RZouFfR o E
[000106] RZ é -C4-10-alquileno-C(O0)OH ou NR5R5a;
[000107] R15éH ou alquila e RI5A é -(C1-6-alquileno)-C(O)NHNH2;
[000108] um de Rc, Rd, Re e Rf é -CH20Rg e os outros são independentemente -H, -OH, hidroxialquila, -C(O)OH, ou -CH20Rg, onde cada Rg é independentemente -(C1-6-alquileno)-C(O)OH ou -(C1- 6-alquileno)-C(O)O(alquil); ou um de Rc, Rd, Re e Rf é hidroxialquila e os outros são -H; e
[000109] méboul.
[000110] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (1), fórmula (I-P) ou fórmula (1I-P-1), onde R4 é alquila. Em algumas modalidades, R4 não é cicloalquila. Em algumas dessas modalidades, R4 é alquila linear ou ramificada. Em algumas dessas modalidades, R4 é arila. Em algumas dessas modalidades, R4 é arilalquila. Em algumas dessas modalidades, R4 é heterocicloalquila contendo N. Em algumas modalidades, R4 é alquila tal como, porém sem se limitar a, metila, etila, propila, butila, pentila, hexila, heptila, octila ou nonila. Em algumas modalidades, R4 é metila. Em algumas modalidades, R4 é etila. Em algumas modalidades, R4 é n-—propila. Em algumas modalidades, R4 é i-propila. Em algumas modalidades, R4 é n-butila. Em algumas modalidades, R4 é i-butila. Em algumas modalidades, R4 é t-butila. Em algumas modalidades, R4 é sec-butila. Em algumas modalidades, R4 é pentila. Em algumas modalidades, R4 é hexila. Em algumas modalidades, R4 é heptila. Em algumas modalidades, R4 é octila ou nonila. Em algumas modalidades, R4 é arila tal como, porém, não limitada a fenila, fenol ou naftila. Em algumas modalidades, R4 é fenila. Em algumas modalidades, R4 é naftila. Em algumas modalidades, R4 é heteroarila — tal como, porém, não limitado a tienila. Em algumas modalidades, R4 é arilalquila — tal como, porém, não limitado a benzila. Em algumas modalidades, R4 é heterocicloalquila contendo N tal como, porém, não limitado a piperidinila. Em algumas modalidades da fórmula (1), ambos Rx são hidrogênio. Em algumas modalidades da fórmula (1), ambos Rx são flúor.
[000111] Em algumas ou quaisquer modalidades, é apresentado um composto de fórmula (1I), onde ambos Rx são flúor e R3 é -(C1-C10- alquileno)-NR50C(O)-(C1-C10-alquileno)-NR50aR50b ou -C(O)RZ e RZ é NRI6RI6a ou -(C1I-C1iO0-alquileno)-NR50C(O)-(C1-C10- alquileno)- NR50aR50b onde cada C1-C10-alquileno é independentemente opcionalmente substituído com um ou mais hidróxi.
[000112] Em algumas modalidades da fórmula (1), (I-P) ou (I-P-1), ambos Rx são hidrogênio e R3 é -C(O)RZ. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), (I-P) ou (I-P-1), RZ é -C4-10-alqguileno- C(O0)OH. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), (I-P) ou (I-P-1), RZ é —C4-6-alquileno-C(O0)OH. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), (I-P) ou (I-P-1), RZ é -C4-alquileno-C(O0)OH. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), (I-P) ou (I-P-1), RZ é —C5-alquileno-C(O0)OH. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), (I-P) ou (I-P-1), RZ é —-C6-alquileno-C(O) OH. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), (I-P) ou (I-P-1), RZ é NR15R15a. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), (I-P) ou (I-P-1), RI5 é H ou C1-3-alguila e RISA é -(C1-3-alquileno)- C(O)NHNH?2. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), (lI- P) ou (I-P-1), R15 é H ou metila e R15A é -(C1-3-alquileno)- C(O)NHNH?2. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), (l- P) ou (I-P-1), RI5 é H e R15A é -(C1-3-alguileno)-C(O)NHNH2. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), (I-P) ou (I-P-1), R15 é metila e RI5A é -(C1-3-alquileno)-C(O)NHNH2. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), (I-P) ou (I-P-1), RI5é He R15A é -(C1-alquileno)-C(O)NHNH2. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), (I-P) ou (I-P-1), R15 é metila e R15A é -(C1i-alquileno)- C(O)NHNH2. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), R15 é H ou C1-C6alquila e RI5A é -(C1-C10-alquileno)-SH. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), RI5 é H ou C1- C3alquila e RI15A é -(C1-C10-alquileno)-SH. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), RI5 é H ou CH3 e R15A é -(C1-C10- alquileno)-SH. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), RZ é -(C1-C10-alquileno)-NR50C(O)-(C1-C10-alquileno)-NR50aR50b onde cada C1-C1i0-alquileno é independentemente opcionalmente substituído com um ou mais hidróxi. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), RZ é -(C1-C6-alquileno ramificado)- NR50C(O)-(C1-C6-Hidróxi-alquileno)- NR$50aR50b. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), RZ é -(C1-C6-alquileno ramificado)- NR50C(O)-(C1-C6-alquileno)-NR50aR50b.
[000113] Em algumas modalidades, é provido um composto de fórmula (1), onde
[000114] a) ambos Rx são hidrogênio; e
[000115] R3 é -C(O)RZ; -(C1-C10-alquileno)-NR50C(O)-(C1-C10- Re RAL Rd alquileno)-NR50aR50b; ou Rº OX
[000116] RZ é -C4-10-alquileno-C(O0)OH; -(C1-C10-alquileno)- NR50C(O)-(C1-C10-alquileno)-NR50aR50b onde cada C1-C10- alquileno é independentemente opcionalmente substituído com um ou mais hidróxi; ou NRI5R15a;
[000117] R15é H ou C1-C6alquila e RI5A é -(C1-C10-alquileno)-SH ou -(C1-6-alquileno)- C(O)NHNH2; ou
[000118] b) ambos Rx são flúor; e
[000119] R3 é -C(O)RZ; -(C1-C10-alquileno)-NR50C(O)-(C1-C10- Ré REATOR hm alquileno)-NR50aR50b; ou RO ;
[000120] RZ é -C4-10-alqguileno-C(O)JOH; -(C1-C10-alquileno)- NR50C(O)-(C1-C10-alquileno)-NR50aR50b onde cada C1-C10- alquileno é independentemente opcionalmente substituído com um ou mais hidróxi; ou NR16R16a;
[000121] R16é H ou C1-C6alquila e R16A é -(C1-C10-alquileno)-SH, -(C1-C10-alquileno)-NH2, -(C1-C10-alquileno)-NH(C1-6alquil), Ss LON , ou -(C1-6-alquileno)-C(O)NHNH2; e
[000122] cada R50,R50a e R50b são independentemente hidrogênio ou C1-C6-alquila;
[000123] um de Rc, Rd, Re e Rf é -CH2O0Rg e os outros são independentemente -H, -OH, hidroxialquila, -C(O)OH, ou -CH20Rg, onde cada Rg é independentemente -(C1-6-alquileno)-C(O)OH ou -(C1- 6-alquileno)-C(O)O(alquil); ou um de Rc, Rd, Re e Rf é hidroxialquila e os outros são -H; e
[000124] méoboul.
[000125] Em algumas modalidades da fórmula (1), ambos Rx são flúor So e R3 é -C(O)RZ. Em algumas ou quaisquer modalidades, Rz é LON . Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), RZ é -C4-10- alquileno-C(O)OH. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), RZ é —C4-6-alquileno-C(O0)JOH. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), RZ é -C4-alquileno-C(O0)OH. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), RZ é -C5-alquileno-C(0)OH. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), RZ é —C6- alquileno-C(O)OH. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula
(1), RZ é NRI6R16a.
Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), R16 é H ou C1-3-alquila e R16A é -(C1-3-alquileno)-C(O)NHNH2. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), R16 é H ou metila e R16A é -(C1-3-alquileno)-C(O)NHNH2. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), RI6 é H e R16A é -(C1-3-alquileno)- C(O)NHNH2. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), R16 é metila e R16A é -(C1-3-alquileno)-C(O)NHNH2. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), RI6 é H e R16A é -(C1- alquileno)-C(O)NHNH2. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), R16 é metila e R16A é -(C1-alquileno)-C(O)NHNH2. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), R16 é H ou C1- C6alquila e R16A é -(C1-C10-alquileno)-SH.
Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), R16 é H ou C1-C3alquila e R16A é -(C1- C10-alquileno)-SH.
Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), RI16 é H ou CH3 e R16A é -(C1-C10-alquileno)-SH.
Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), R16 é H ou C1-C6alquila e RIG6A é -(C1-C10-alquileno)-NH2. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), RI16 é H ou C1-C3alquila e RI6A é -(C1-C10-alquileno)- NH2. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), RI6 é H ou CH3 e RI16A é -(C1-C10-alquileno)-NH2. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), RI6 é H ou C1-C6alquila e RI6A é -(C1- C10-alquileno)- NH(C1-6alquil). Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), R16 é H ou C1-C3alquila e R16A é -(C1-C10-alquileno)- NH(C1-6alquil). Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), R16 é H ou CH3 e R16A é -(C1-C10-alquileno)-NH(C1-6alquil). Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), RZ é -(C1-C10- alquileno)-NR50C(O)-(C1-C10-alquileno)-NR50aR50b onde cada C1- C10-alquileno é independentemente opcionalmente substituído com um ou mais hidróxi.
Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), RZ é -(C1-C6-alquileno ramificado)-NR50C(O)-(C1-C6-Hidróxi-
alquileno)- NR50aR50b. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), RZ é -(C1-C6-alquileno ramificado)-NR50C(O)-(C1-C6- alquileno)- NR50aR50b.
[000126] Em algumas modalidades da fórmula (1), (I-P) ou (I-P-1), ambos Rx são hidrogênio e R3 é -(C1-C10-alquileno)-NR50C(O)-(C1- C10-alquileno)- NR50aR50b. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), (I-P) ou (I-P-1), R3 é -(C1-C6-alquileno)- NR50C(O)-(C1-C6- alquileno)-NR50aR50b. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), (I-P) ou (I-P-1), R3 é -(C1-C3-alquileno)-NR50C(O0)-(C1-C3- alquileno)-NR50aR50b. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), (I-P) ou (I-P-1), R3 é -(C1-C3-alquileno linear)-NR50C(O)- (C1-C3-alquileno linear)- NR50aR50b.
[000127] Em algumas modalidades da fórmula (1), ambos Rx são flúor e R3 é -(C1-C10-alquileno)-NR50C(O)-(C1-C10-alquileno)- NR50aR50b. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), R3 é -(C1-C6-alquileno)-NR50C(O)-(C1-C6-alquileno)-NR50aR50b. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), R3 é -(C1-C3- alquileno)-NR50C(O)-(C1-C3-alquileno)- NR50aR50b. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), R3 é -(C1-C3-alquileno linear)- NR50C(O)-(C1-C3-alquileno linear)-NR50aR50b.
[000128] Em algumas modalidades da fórmula (1), (I-P) ou (I-P-1), Re R$ & R hm ambos Rx são hidrogênio e R3 é R 9” . Em algumas modalidades da fórmula (1), (I-P) ou (I-P-1), m é O. Em algumas modalidades da fórmula (1), (I-P) ou (I-P-1), m é 1. Em algumas modalidades da fórmula (1), (I-P) ou (I-P-1), m é 1 e RF é -H ou -OH. Em algumas modalidades da fórmula (1), (I-P) ou (I-P-1), m é 1. Em algumas modalidades da fórmula (1), (I-P) ou (I-P-1), m é 1 e um de Rc, Rd, Re e Rf é -CH20Rg e os outros são independentemente -H, -OH, hidroxialquila, “ -C(O)JOH, ou -CH2O0Rg, onde cada Rg é independentemente -(C1-6-alquileno)-C(O)JOH ou -(C1-6-alquileno)- C(0)O(alquil). Em algumas modalidades da fórmula (1), (I-P) ou (I-P-1), m é 1 e Rc é -CH2O0Rg e os outros são independentemente -H, -OH, ou hidroxialquila. Em algumas modalidades da fórmula (1), (I-P) ou (1-P-1), mé 1eum de Rc, Rd, Re e Rf é hidroxialquila e os outros são -H. Em algumas modalidades da fórmula (1), (I-P) ou (-P-1) mé 1eRcé hidroxialquila e Rd, Re e Rf são -H.
[000129] Em algumas modalidades da fórmula (1), ambos Rx são flúor Re Ri Y R hm eR3éR º* Emalgumas modalidades da fórmula (I),m é O. Em algumas modalidades da fórmula (1), m é 1. Em algumas modalidades da fórmula (1), m é 1 e RF é -H ou -OH. Em algumas modalidades da fórmula (1), m é 1. Em algumas modalidades da fórmula (1), mé 1 e um de Rc, Rd, Re e Rf é -CH2O0Rg e os outros são independentemente -H, -OH, hidroxialquila, -C(O)OH, ou -CH20Rg, onde cada Rg é independentemente -(C1-6-alquileno)-C(O)JOH ou -(C1-6-alquileno)- C(O0)O(alquil). Em algumas modalidades da fórmula (I),) mé 1 e Rc é -CH2O0Rg e os outros são independentemente -H, -OH ou hidroxialquila. Em algumas modalidades da fórmula (1), m é 1 e um de Rc, Rd, Re e Rf é hidroxialquila e os outros são -H. Em algumas modalidades da fórmula (1), m é 1 e Rc é hidroxialquila, e Rd, Re e Rf são -H.
[000130] Em algumas modalidades da fórmula (1), ambos Rx são flúor o
NO eR3é LONA
[000131] Em algumas ou quaisquer modalidades, o composto de acordo com a Fórmula (Z):
ol Ed & RÁ, QE, o pospoo O OH (Z) onde
[000132] R4 é alquila, arila, arilalquila, ou uma heterocicloalquila contendo N;
[000133] ambos Rx são hidrogênio ou ambos Rx são flúor; e
[000134] SP é -CH2NH- onde o NH é conectado ao H, ou SP é
É o onde o NH de SP é conectado ao H na fórmula (Z), x À ou SP é onde o N de SP é conectado ao H na fórmula (Z). Em algumas ou quaisquer modalidades, ambos Rx são hidrogênio. Em algumas ou quaisquer modalidades, ambos Rx são flúor. Em algumas ou quaisquer modalidades, R4 é alquila. Em algumas dessas modalidades, R4 é alquila linear. Em algumas modalidades, R4 é alquila tal como, porém sem se limitar a, metila, etila, propila, butila, pentila, hexila, heptila, octila ou nonila. Em algumas modalidades, R4 é metila. Em algumas modalidades, R4 é etila. Em algumas modalidades, R4 é n-—propila. Em algumas modalidades, R4 é i-propila. Em algumas modalidades, R4 é n-—butila. Em algumas modalidades, R4 é i-butila. Em algumas modalidades, R4 é t-butila. Em algumas modalidades, R4 é sec-butila. Em algumas modalidades, R4 é pentila. Em algumas modalidades, R4 é hexila. Em algumas modalidades, R4 é heptila. Em algumas modalidades, R4 é octila ou nonila. Em algumas ou quaisquer modalidades, SP é -CH2NH- onde o NH é conectado ao H. Em algumas
Pr
N
É ou quaisquer modalidades, SP é o onde NH é conectado ao H na fórmula (Z). Em algumas ou quaisquer modalidades,
E N
É R4 é alquila, ambos Rx são flúor, e SPé O onde NH é conectado ao H na fórmula (Z). Em algumas modalidades, o composto H H [3 Oo - doa RO O o OH de fórmula (Z) é O . Em algumas modalidades, o composto de fórmula (Z) é
F H > H : CIA)
TRIO
HAN ? TO o OH o . Em algumas modalidades, o
H H + H :
DAE
ARO composto de fórmula (2) é HaNº o OH . Em algumas modalidades, o composto de fórmula (Z) é
H H FS NLIDVAL, TA DA HANO O OH :
[000135] Os esteroides adequados para os conjugados descritos no presente documento incluem aqueles na tabela a seguir.
Tabela 1. Budesonida com espaçador (Budesonida-SP) 4 H " ADA MAX, A OS o (Budesonida) Ho o wu
H H
DE o TRIO oo o OH o
H H ADDED
RIO VV o NA o oH nº o
H
H o | a DÁRIO H2N. AN o. N Y o OH o
LD
OSAKA Ho. o o o b 4 H o > Le ARO x“ O. o o o o OH
H ms A o - o o H no Do 9 OH Ho" “om
OH H uy DA Cc o o E o OO o H Ho oH Ho" “om
OH H
AL HH do. í º
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OH
H o 2 AL o fo) : o : o o
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ROTAS IA o Na o OH o Na* o ao [em Hà F o + 100 O <, RD) o Ho O om
F
HH HHA o d
O ANO Y Oo ou
F
HH HHA o o ANO Y O on Fo o o
RO N YÇ o or
VOO º OH o mo DE o (Oo O. - | o HS' NY Oo
[compaes | eme
NMADÉ 102d | ' O º N Oo
HS Y KO. AN o o oH
HS Y NEDUS. 102f O: Ad Oo oH
HS Y
HH a E 103a H o * o HNOIE = o Ph Oo
NANLT ERA 103b H e magia o x Oo Oo H Fera Pq aF H FP. o
Composto Nº. Estrutura OoH o H " H mA NS ndF o
E H | NLIXK) 105a o TAL IAD HoN ? O Oo OH Oo
H É o H 106a MC QDO o o HANO: o OH
H S o H 107a «< QD o o HANÇO o OH
[000136] ou um estereoisômero ou mistura de estereoisômeros dos mesmos; e opcionalmente um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, ou estereoisômero do mesmo. Em alguns exemplos, a n-propila de
NÉ o em cada uma das estruturas acima está na configuração R, isto é no carbono indicado pelo asterisco. Em alguns exemplos, a n-
AE propila de o em cada uma das estruturas acima está na configuração S, isto é no carbono indicado pelo asterisco. Em alguns
NÉ exemplos, a n-propila de o em cada uma das estruturas acima está na mistura das configurações R e S, isto é no carbono indicado
NÉ pelo asterisco. Em alguns exemplos, a n-propila de o em cada uma das estruturas acima está na mistura das configurações Re S, isto é no carbono indicado pelo asterisco, em que a mistura R:S é de cerca de 1:1, cerca de 2:1, cerca de 3;1, cerca de 4:1, cerca de 5:1, cerca de 6;1, cerca de 7:1, cerca de 8:1, cerca de 9:1 ou cerca de 10:1.
[000137] Em algumas modalidades da fórmula (1), é provido um composto de fórmula 1d, 1e, 1g, 1h, 101a, 101b, 101c, 101d, 102c, 102d, 102e, 102f, 103a, 103b, 104a ou 104b, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou estereoisômero do mesmo. Em algumas modalidades da fórmula (1), é provido um composto de fórmula 1d, 1e, 1g ou 1h, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou estereoisômero do mesmo. Em algumas modalidades, a n-propila dos compostos de fórmula 1d, 1e, 1g, 1h, 101a, 101b, 101c, 101d, 102c, 102d, 102e€, 102f, 103a, 103b, 104a e 104B está na configuração R. Em algumas modalidades, a n-propila dos compostos de fórmula 1d, 1e, 1g, 1h, 101a, 101b, 101c, 101d, 102c, 102d, 102e, 102f, 103a, 103b, 104a e 104B está na configuração S. Em algumas modalidades, a n-propila dos compostos de fórmula 1d, 1e, 1g, 1h, 101a, 101b, 101c, 101d, 102c, 102d, 102e, 102f, 103a, 103b, 104a e 104B está na mistura das configurações R e S. Em algumas modalidades, a n-propila dos compostos de fórmula 1d, 1e, 1g, 1h, 101a, 101b, 101c, 101d, 102c, 102d, 102e, 102f, 103a, 103b, 104a e 104B está na mistura das configurações R e S, em que a mistura R:S é de cerca de 1:1, cerca de 2:1, cerca de 3;1, cerca de 4:1, cerca de 5:1, cerca de 6;1, cerca de 7:1, cerca de 8:1, cerca de 9:1 ou cerca de 10:1.
[000138] Estão incluídos dentro do escopo da descrição os sais farmaceuticamente aceitáveis, solvatos, formas cristalinas, formas amorfas, formas polimórficas, regioisômeros, estereoisômeros, metabólitos e adutos fisiológicos das cargas úteis esteroides descritas no presente documento. C. CONJUGADOS ESTEROIDES DA PROTEÍNA
[000139] São providos no presente documento conjugados de proteína dos esteroides descritos no presente documento. Os referidos conjugados incluem proteínas, por exemplo, anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno, que são covalentemente ligados, por exemplo, através de -L- e -L1-L2-(L3)O0-1-descritos no presente documento, aos compostos descritos na seção B acima.
[000140] Em algumas ou quaisquer modalidades, é apresentado um composto de fórmula (3000): BA-(L-SP-D)z ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, estereoisômero ou derivado do mesmo,
[000141] em que
[000142] Dé selecionado a partir de o E : RR:
[000143] a) o o or fórmula (a),
[000144] onde ambos Rx na fórmula (a) são hidrogênio; R4 é alquila, arila, arilalquila, ou uma heterocicloalquila contendo N; e SP é -C(O)- C1-C10-alquileno-C(O)-, -C(O)-N(C1-6alquil)-C1-C10-alquileno-X1- onde X1 é ligado ao L na fórmula (3000), -C(O)-N(H)(C1-C10- alquileno)-S- onde S é ligado ao L na fórmula (3000), -C(O)-N(C1- 6alquil)-(C1-C10-alquileno)-S- onde S é ligado ao L na fórmula (3000),
o o
N * onde o ponto de ligação na lateral direita (isto é, em N) é ao L na fórmula (3000), -CH2-NH- onde o N é ligado ao L na fórmula
H
AN (3000), O onde o N é ligado ao L na fórmula (3000) e onde Ar é arileno opcionalmente substituído (em algumas modalidades
O ) ou heteroarileno opcionalmente substituído,, -(C1-C10- alquileno)-NR50C(O)-(C1-C10-alquileno)-NR50a- onde NR50A é ligado ao L na fórmula (3000), -C(O)-(C1-C10-alquileno)-NR50C(O)-(C1-C10- alquileno)-NR50a- onde NR50A é ligado ao L na fórmula (3000) e onde cada C1-Cio-alguileno é independentemente opcionalmente substituído com um ou mais hidróxi, -C(O)-N(R5)-C1-C10-alquileno- C(O)NH-X2- onde X2 é ligado ao L na fórmula (3000), ou Re Rº Rº xo XISTO FP se s onde X4 é ligado ao L na fórmula (3000); ou
[000145] onde ambos Rx na fórmula (a) são flúorflúor; R4 é alquila, arila, arilalquila, ou uma heterocicloalquila contendo N; e SP é -C(O)- C1-C10-alquileno-C(O)-, — -C(O)-N(C1-6alquil)-C 1-C10-alquileno-X1b- onde X1B é ligado ao L na fórmula (3000), -C(O)-N(H)-(C1-C10- o “O No alquileno)-X1b- onde X1B é ligado ao L na fórmula (3000), * onde o ponto de ligação na lateral direita (isto é, em N) é ao L na fórmula
H Ar N & NR v (3000), -CH2-NH- onde N é ligado ao L na fórmula (3000), O onde o N é ligado ao L na fórmula (3000) e onde Ar é arileno
O opcionalmente substituído (em algumas modalidades ) ou heteroarileno — opcionalmente — substituído, — -(C1-C10-alquileno)- NR50C(O)-(C1-C10-alquileno)-NR50a- onde NR50A é ligado ao L na fórmula (3000), -C(O)-(C1-C10-alquileno)- NR50C(O)-(C1-C10- alquileno)-NR50a- onde NR50A é ligado ao L na fórmula (3000) e onde cada C1-Cil-alquileno é independentemente opcionalmente substituído com um ou mais hidróxi, -C(O)-N(R5)-(C1-C10-alquileno)- C(O)NH-X2- onde X2 é ligado ao L na fórmula (3000), ou Re RE R) m eo so s : onde X4 é ligado ao L na fórmula (3000); e
[000146] b) os compostos na tabela A acima, onde os compostos na tabela A são ligados ao BA do composto de fórmula (3000) através do hidróxi do grupo -C(O)CH20H, isto é através de -C(O0)CH2-O0-SP-L-, ou através do hidróxi de Mapracorat, isto é através de -O-SP-L-:
[000147] X1 é -N(C1-6alquil)-;
[000148] X1B é -S-, -NH-, ou -N(C1-6alquil)-;
[000149] X2 é -NH-;
[000150] X3 é -CH2-, X3 é -CH2-0-(C1-C10-alquileno)-C(O)- onde o C(O) é ligado ao X4, ou X3 é -C(O)-;
[000151] X4é-O-;
[000152] R5 é H,-OH,-OCH3, ou C1-6alquila;
[000153] R50 e R50a são independentemente hidrogênio ou C1-C6- alquila;
[000154] Rd, Re e Rfsão independentemente -H, -OH, hidroxialquila, alcoxicarbonila, -C(O0OJOH ou -CH2ORg, onde cada Rg é independentemente -CH2C(0)OH ou -CH2C(O0)O(alquil); e
[000155] méboui;
[000156] zé um inteiro selecionado a partir de 1-30, inclusive;
[000157] Lé um ligante; e
[000158] BA é um agente de ligação.
[000159] Em algumas ou quaisquer modalidades, é apresentado um composto de fórmula (III-P): / oil À
CHA CHA lee —o oO OH kh (I11-P); ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, estereoisômero ou derivado do mesmo,
[000160] em que:
[000161] R4 é alquila, arila, arilalquila, ou uma heterocicloalquila contendo N;
[000162] SP é -C(0)-C1-C10-alquileno-C(O)-, -C(O)-N(C1-3alquil)- C1-C10-alquileno-X1- onde X1 é ligado ao L na fórmula (III), -C(O)- N(R5)-C1-C10-alquileno-C(O)NH-X2- onde X2 é ligado ao L na fórmula Re se iXI-X8 O * q s . (Il), ou onde X4 é ligado ao L na fórmula (Ill);
[000163] X1 é -N(C1-3alquil)-;
[000164] X2 é -NH-;
[000165] X3 é -CH2-, X3 é -CH2-O0-(C1-C10-alquileno)-C(O)- onde o C(O) é ligado ao X4, ou X3 é -C(O)-;
[000166] X4é-O-;
[000167] R5 é H,-OH,-OCH3 ou alquila;
[000168] Rd,Re e Rfsão independentemente -H, -OH, hidroxialquila, alcoxicarbonila, -C(O)JOH, ou -CH2O0Rg, onde cada Rg é independentemente -CH2C(0)OH ou -CH2C(O)O(alquil); e
[000169] mébou;
[000170] zé um inteiro selecionado a partir de 1-30, inclusive;
[000171] Léum ligante; e
[000172] BA é um agente de ligação.
[000173] Em algumas ou quaisquer modalidades, é apresentado um composto de fórmula (III-P-1): o Y À
AO BA pospoo O or (II-P-1); ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, estereoisômero ou derivado do mesmo,
[000174] em que:
[000175] R4 é alquila, arila, arilalquila, ou uma heterocicloalquila contendo N;
[000176] SP é -C(0)-C1-C10-alquileno-C(O)-, -C(O)-N(C1-3alquil)- C1-C10-alquileno-X1- onde X1 é ligado ao L na fórmula (III), -C(O)- N(R5)-C1-C10-alquileno-C(O)NH-X2- onde X2 é ligado ao L na fórmula (111), Re sa XI o É o s ou onde X4 é ligado ao L na fórmula (1);
[000177] X1é-N(C1-3alquil)-;
[000178] X2 é -NH-;
[000179] X3 é -CH2-, X3 é -CH2-O0-(C1-C10-alquileno)-C(O)- onde o C(O) é ligado ao X4, ou X3 é -C(O)-;
[000180] X4é-O-;
[000181] R5éH, -OH,-OCH3 ou alquila;
[000182] Rd, Re e Rfsão independentemente -H, -OH, hidroxialquila, alcoxicarbonila, -C(O0)JOH, ou -CH2O0Rg, onde cada Rg é independentemente -CH2C(0)OH ou -CH2C(O)O(alquil); e
[000183] mébou!;
[000184] zé um inteiro selecionado a partir de 1-30, inclusive;
[000185] Lé um ligante; e
[000186] BA é um agente de ligação.
[000187] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (III), (III-P) ou (III-P-1), onde R4 é alquila. Em algumas modalidades, R4 não é cicloalquila. Em algumas dessas modalidades, R4 é alquila linear ou ramificada. Em algumas dessas modalidades, R4 é arila. Em algumas dessas modalidades, R4 é arilalquila. Em algumas dessas modalidades, R4 é heterocicloalquila contendo N. Em algumas modalidades, R4 é alquila tal como, porém sem se limitar a, metila, etila, propila, butila, pentila, hexila, heptila, octila ou nonila. Em algumas modalidades, R4 é metila. Em algumas modalidades, R4 é etila. Em algumas modalidades, R4 é n-propila. Em algumas modalidades, R4 é i-propila. Em algumas modalidades, R4 é n-—butila. Em algumas modalidades, R4 é i-butila. Em algumas modalidades, R4 é t-butila. Em algumas modalidades, R4 é sec-butila. Em algumas modalidades, R4 é pentila. Em algumas modalidades, R4 é hexila. Em algumas modalidades, R4 é heptila. Em algumas modalidades, R4 é octila ou nonila. Em algumas modalidades, R4 é arila tal como, porém, não limitada a fenila, fenol ou naftila. Em algumas modalidades, R4 é fenila. Em algumas modalidades, R4 é naftila. Em algumas modalidades, R4 é heteroarila — tal como, porém, não limitado a tienila. Em algumas modalidades, R4 é arilalquila — tal como, porém, não limitado a benzila Em algumas modalidades, R4 é heterocicloalquila contendo N tal como, porém, não limitado a piperidinila. Em algumas ou quaisquer modalidades, ambos Rx são hidrogênio. Em algumas ou quaisquer modalidades, ambos Rx são flúor. Em algumas modalidades, R4 está na configuração R. Em algumas modalidades, R4 está na configuração S. Em algumas modalidades, R4 é uma mistura das configurações R e S. Em algumas modalidades, R4 é uma mistura das configurações R e S, em que a mistura R:S é de cerca de 1:1, cerca de 2:1, cerca de 3;1, cerca de 4:1, cerca de 5:1, cerca de 6;1, cerca de 7:1, cerca de 8:1, cerca de 9:1 ou cerca de 10:1.
[000188] Em algumas modalidades, é provido um composto de fórmula (Ill), onde
[000189] ambos Rx são hidrogênio; e SP é -C(O0)-C1-C10-alquileno- C(O)-, -C(O)-N(C1-6alquil)-C 1-C10-alquileno-X1- onde X1 é ligado ao L na fórmula (III), (IN-P), ou (III-P-1); -C(O)-N(H)-(C1-C10-alquileno)-S- onde S é ligado ao L na fórmula (III), (INI-P), ou (III-P-1); -C(O)-N(C1- 6alquil)-(C1-C10-alquileno)-S- onde S é ligado ao L na fórmula (III), (Ill- P) ou (III-P-1); -(C1-C10-alquileno)-NR50C(O)-(C1-C10-alquileno)- NR50a- onde NR50A é ligado ao L na fórmula (III), (III-P) ou (III-P-1); -C(0)-(C1-C10-alquileno)- NR50C(O)-(C1-C10-alquileno)-NR50a- onde NR50A é ligado ao L na fórmula (III), (III-P) ou (III-P-1), e onde cada C1- C10-alquileno é independentemente opcionalmente substituído com um ou mais hidróxi; -C(O)-N(R5)-C1-C10-alquileno-C(O)NH-X2- onde X2 é Re RE R) m , s . eo ligado ao L na fórmula (III), (IIN-P) ou (III-P-1); ou onde X4 é ligado ao L na fórmula (III), (IN-P) ou (II1I-P-1); ou
[000190] ambos Rx são flúorflior; e SP é -C(O)-N(C1-6alquil)-C1- C10-alquileno-X1b- onde X1B é ligado ao L na fórmula (III), (III-P) ou (INI-P-1); -C(O)-N(H)-(C1-C10-alquileno)-X1b- onde X1B é ligado ao L o
NO s LON na fórmula (III), (IN-P) ou (III-P-1); onde o ponto de ligação na lateral direita (isto é, em N) é ao L na fórmula (III); -(C1-C10- alquileno)-NR50C(O)-(C1-C10-alquileno)-NR50a- onde NR50A é ligado ao L na fórmula (III), (IN-P) ou (III-P-1); -C(O)-(C1-C10-alquileno)- NR50C(O)-(C1-C10-alquileno)-NR50a- onde NR50A é ligado ao L na fórmula (III), (III-P), ou (IIl-P-1) e onde cada C1-Ci0-alquileno é independentemente opcionalmente substituído com um ou mais hidróxi, ou -C(O)-N(R5)-(C1-C10-alquileno)-C(O)NH-X2- onde X2 é ligado ao L na fórmula (III), (III-P) ou (III-P-1);.
[000191] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (III), (III-P) ou (III-P-1), onde ambos Rx são hidrogênio e SP é -C(O0)-C1-C10-alquileno-C(O)-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (III), (IN-P) ou (III-P-1), onde SP é -C(O0)-C2-C5-alquileno-C(O)- . Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (III), (III-P) ou (III-P-1), onde SP é -C(0)-CH2CH2- C(O)-.
[000192] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (III), onde ambos Rx são flúor e SP é -C(0)-C1-C10-alguileno-C(O0). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Ill), onde SP é -C(0)-C2-C5-alquileno-C(O)-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), onde SP é -C(0)-CH2CH2-C(O)-.
[000193] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (III), (III-P) ou (III-P-1), onde ambos Rx são hidrogênio e SP é -C(O)-N(C1-6alquil)-C1-C10-alquileno-X1- onde X1 é ligado ao L3 na fórmula (III), (III-P) ou (III-P-1). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (III), (II-P) ou (III-P-1), onde SP é -C(O)-N(C1-3alquil)-C1-C10- alquileno-X1- onde X1 é ligado ao L3 na fórmula (III), (III-P) ou (III-P-1). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (III), (III-P) ou (III-P-1), onde X1 é -N(C1-3alquil)-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (III), (III-P) ou (III-P-1), onde SP é -C(O)-N(C1- 3alquil)-C2-C5-alquileno-X1-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (III), (III-P) ou (III-P-1), onde SP é -C(O)N(C1-3alguil)--CH2CH2-X1-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (III), (IIN-P) ou (III-P-1), onde SP é -C(O)-N(CH3)-C2-C5- alquileno-N(CH3)-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (III), (III-P) ou (III-P-1), onde SP é -C(O)-N(CH3)-CH2CH2-N(CH3)-.
[000194] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (III), onde ambos Rx são flúor e SP é -C(O)-N(C1-6alquil)-C1-C10-alquileno-X1b- onde X1B é ligado ao L3 na fórmula (Ill) ou -C(O)-N(H)-(C1-C10-alquileno)-X1b- onde X1B é ligado ao L na fórmula (Ill). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Ill), onde SP é -C(O)- N(H)-C1-C10-alquileno-X1b- onde X1B é ligado ao L3 na fórmula (Ill). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (III), onde SP é -C(O)-N(H)-C1-C6-alquileno-X1b- onde X1B é ligado ao L3 na fórmula (Ill). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Ill), onde SP é -C(O)-N(H)-C1-C3-alquileno-X1b- onde X1B é ligado ao L3 na fórmula (Il). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Ill), onde SP é -C(O)-N(H)- CH2CH2-X1b-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Ill), onde SP é -C(O)-N(H)-C2-C5- alquileno-N(CH3)-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Ill), onde SP é -C(O)- N(H)-C2-C5-alquileno-N(CH2CH3)-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (III), onde SP é -C(O)-N(H)-CH2CH2-N(CH3)-.
[000195] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Ill), onde ambos Rx são flúor e SP é -C(O)-N(C1-6alquil)-C1-C10-alquileno-X1b- onde X1B é ligado ao L3 na fórmula (Ill). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Ill), onde SP é -C(O)-N(C1- 3alquil)-C1-C6-alquileno-X1b- onde X1B é ligado ao L3 na fórmula (III). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Ill), onde SP é -C(O)-N(C1-3alquil)-C1-C3- alquileno-X1b- onde X1B é ligado ao L3 na fórmula (III). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Ill), onde X1B é -N(C1-3alquil)-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (III), onde SP é -C(O)-N(C1-3alquil)-C2-C5-alquileno-X1b-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Ill), onde SP é -C(O)-N(C1-3alquil)-CH2CH2-X1b-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Ill), onde SP é -C(O)-N(CH3)-C2-C5-alquileno- N(CH3)-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Ill), onde SP é -C(O)-N(CH2CH3)- C2-C5-alquileno-N(CH2CH3)-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Ill), onde SP é -C(O)-N(CH3)-CH2CH2-N(CH3)-.
[000196] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Ill), onde ambos Rx são flúor e SP o
NO é SN onde o ponto de ligação na lateral direita (isto é, em N) é ao L na fórmula (Ill).
[000197] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Ill), onde ambos Rx são hidrogênio e SP é -C(O)-N(H)-(C1-C10-alquileno)-S- onde S é ligado ao L na fórmula (III), ou -C(O)-N(C1-6alquil)-(C1-C10-alquileno)-S- onde S é ligado ao L na fórmula (Ill). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Ill), onde SP é -C(O)-N(H)-(C1-C6-alquileno)-S- onde S é ligado ao L na fórmula (III), ou -C(O)-N(C1-3alquil)-(C1-C6-alquileno)-S- onde S é ligado ao L na fórmula (Ill). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Ill), onde SP é -C(O)-N(H)-(C1- C10-alquileno)-S- onde S é ligado ao L na fórmula (Ill). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Ill), onde SP é -C(O)-N(H)-(C1-C6-alquileno)-S- onde S é ligado ao L na fórmula (Ill). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Ill), onde SP é -C(O)- N(C1-6alquil)-(C1-C10-alquileno)-S- onde S é ligado ao L na fórmula (Ill). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Ill), onde SP é -C(O)-N(C1-3alquil)-(C1-C6- alquileno)-S- onde S é ligado ao L na fórmula (Ill).
[000198] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Ill), onde ambos Rx são flúor e SP é -C(O)-N(H)-(C1-C10-alquileno)-S- onde S é ligado ao L na fórmula (II), ou -C(O)-N(C1-6alquil)-(C1-C10-alquileno)-S- onde S é ligado ao L na fórmula (Ill). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Ill), onde SP é -C(O)-N(H)-(C1- C6-alquileno)-S- onde S é ligado ao L na fórmula (Ill), ou -C(O)-N(C1-
3alquil)-(C1-C6-alquileno)-S- onde S é ligado ao L na fórmula (Ill). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Ill), onde SP é -C(O)-N(H)-(C1-C10-alquileno)-S- onde S é ligado ao L na fórmula (Ill). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (III), onde SP é -C(O)-N(H)-(C1-C6-alquileno)-S- onde S é ligado ao L na fórmula (Il). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Ill), onde SP é -C(O)-N(C1-6alquil)-(C1-C10- alquileno)-S- onde S é ligado ao L na fórmula (Ill). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Ill), onde SP é -C(O)-N(C1-3alquil)-(C1-C6-alquileno)-S- onde S é ligado ao L na fórmula (Ill).
[000199] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Ill), onde ambos Rx são hidrogênio e SP é -(C1-C10-alquileno)-NR50C(O)-(C1-C10-alquileno)- NR50a- onde NR50A é ligado ao L na fórmula (Ill). Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), SP é -(C1-C6-alquileno)- NR50C(O)-(C1-C6-alquileno)-NR50a-- Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (Ill), SP é -(C1-C3-alquileno)-NR50C(O)-(C1- C3-alquileno)-NR50a-. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (Il), SP é -(C1-C3-alguileno linear)-NR50C(O)-(C1-C3- alquileno linear)-NR50a-.
[000200] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Ill), onde ambos Rx são flúor e SP é -(C1-C10-alquileno)-NR50C(O)-(C1-C10-alquileno)-NR50a- onde NR50A é ligado ao L na fórmula (Ill). Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), SP é -(C1-C6-alquileno)-NR50C(O)-(C1- C6-alquileno)-NR50a-. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (Il), SP é -(C1-C3-alquileno)-NR50C(O)-(C1-C3-alquileno)- NR50a-. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (III), SP é
-(C1-C3-alquileno linear)-NR50C(O)-(C1-C3-alquileno linear)-NR50a-.
[000201] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula(Ill), onde ambos Rx são hidrogênio e SP é -C(O0)(C1I-C10-alquileno)-NR50C(O)-(C1-C10-alquileno)- NR50a- onde NR50a- é ligado ao L na fórmula (Ill) e onde cada C1- C10-alquileno é independentemente opcionalmente substituído com um ou mais hidróxi. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (III), SP é -(C1-C6-alguileno ramificado)-NR50C(O)-(C1-C6-Hidróxi-alquileno)- NR50a-. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (III), SP é - (C1-C6-alquileno ramificado)- NR50C(O)-(C1-C6-alquileno)-NR50a-.
[000202] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (III), onde ambos Rx são flúor e SP é -C(0)-(C1-C10-alquileno)- NR50C(O)-(C1-C10-alquileno)-NR50a- onde NR50a- é ligado ao L na fórmula (Ill) e onde cada C1-C10- alquileno é independentemente opcionalmente substituído com um ou mais hidróxi. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (Ill), SP é -(C1-C6-alquileno ramificado)-NR50C(O)-(C1-C6-Hidróxi-alquileno)- NR50a-. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (III), SP é -(C1-C6-alquileno ramificado)- NR50C(O)-(C1-C6-alquileno)-NR50a-.
[000203] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Ill), onde ambos Rx são hidrogênio e SP é -C(O)-N(R5)-C1-C10-alquileno-C(O)NH-X2- onde X2 é ligado ao L3 na fórmula (III). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Ill), onde SP é -C(O)- N(R5)-C1-C5-alquileno-C(O)NH-NH-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Ill), onde SP é -C(O)-N(R5)-CH2-C(O)NH-NH-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (III), onde R5 é H ou alquila. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Ill), onde R5 é H ou CH3.
[000204] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Ill), onde ambos Rx são flúor e SP é -C(O)-N(R5)-C1-C10-alquileno-C(O)NH-X2- onde X2 é ligado ao L3 na fórmula (Ill). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Ill), onde SP é -C(O)-N(R5)-C1- C5-alquileno-C(O)NH-NH-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Ill), onde SP é -C(O)- N(R5)-CH2-C(O)NH-NH-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (III), onde R5 é H ou alquila. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Ill), onde R5 é H ou CH3.
[000205] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (III), (III-P) ou (III-P-1), onde ambos Re Rº J/ RO Y /m PA An: 24 IP XIIXE O 4 Rx são hidrogênio e SP é onde X4 é ligado ao L3 na fórmula (III), (I-P) ou (I-P-1). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (III), (IIl- Re Rº J/ RO Y /m PN 4 XIX O P) ou (III-P-1), onde ambos Rx são flúor e SP é onde X4 é ligado ao L3 na fórmula (III), (III-P) ou (III-P-1). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de Re Rº J/ RO Y /m 4 a XIX O 4 fórmula (III), (III-P) ou (IIIl-P-1), onde SP é eXdé -CH2-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (III), (III-P) ou (III-P-1), onde SP é
Re Rº (RI) T m Ext o e X3 é -CH2-0-(C1-C10-alquileno)-C(O)- onde o C(O) é ligado ao X4. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (III), (III-P) ou (III-P-1), Re Rº A / R') T T m onde sp é XX O e X3 é -C(O). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), (IM-P) ou (Il-P-1)) onde Rd, Re e Rf são independentemente -H, -OH, hidroxialquila, alcoxicarbonila, -C(O0)OH ou -CH2O0Rg, onde cada Rg é independentemente -CH2C(O0)OH ou -CH2C(0)O(alquil)). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (III), (III-P) ou (III-P-1), onde Rd e Re são independentemente -H ou -OH. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (III), (III-P) ou (III-P-1), onde m é O. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (III), (III-P) ou (III-P-1), onde m é 1. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (III), (III-P) ou (III-P-1), onde m é 1 e Rf é -H ou -OH.
[000206] Em algumas modalidades, é provido um composto de fórmula (III), (IN-P) ou (III-P-1), onde ambos Rx são hidrogênio e SP é -C(O)-N(C1-3alquil)-C1-C10-alquileno-X1- onde X1 é ligado ao L3 na Re Rº (RI) T m fórmula (III), (IN-P) ou (III-P-1); SP é xt-xa o onde X3 é
Re Rº J/ RO Y /m 2 = , XxX O -CH2-, m é 1, e Rd, Re e Rf são -H; ou SP é onde X3 é -CH2-0-(C1-C10-alquileno)-C(O)- onde o C(O) é ligado ao X4, m é 1, e Rd, Re e Rf são -H. Em algumas modalidades, é provido um composto de fórmula (III), (II-P) ou (II-P-1)) onde SP é o o -C(O)-N(CH3)-CH2CH2-N(CH3)-, * ; ou o sd o dh A o o . Em algumas modalidades, é provido um composto de fórmula (III), (III-P) ou (III-P-1), onde ambos Rx são flúor e SP é -C(O)-N(C1-3alquil)-C1-C10-alquileno-X1- onde X1 é ligado ao L3 Re Rº D/ RI “XY hm 4 4 -XI-NE O 4 na fórmula (III), (III-P) ou (III-P-1); SP é onde X3 é Re Rº / RO CR. z " , XXI Oo -CH2-, mé 1, e Rd, Re e Rf são -H; ou SP é onde X3 é -CH2-O0-(C1-C10-alquileno)-C(O)- onde o C(O) é ligado ao X4, m é 1,e Rd, Re e Rf são -H. Em algumas modalidades, é provido um composto de fórmula (III), (II-P) ou (II-P1)) onde SP é o o -C(O)-N(CH3)-CH2CH2-N(CH3)-, * ; ou o gor o o” |
[000207] Em algumas modalidades, é provido um composto de fórmula (Ill), onde ambos Rx são flúor ou ambos Rx são hidrogênio, ou
À, AN Rx é como especificado neste parágrafo; SP é ! oO, o o & NANA ÁgooA A RNA
OP AEAP OO A
AR (onde ambos Rx são flúor), O —(ondeambos Rx são flúor),
É NO NA 9 o A É Da Es SOS
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FIPS
[000208] Em algumas modalidades, é provido um composto de fórmula (III), (III-P) ou (III-P-1), onde z é 1. Em certas modalidades, z é
2. Em algumas outras modalidades, z é 3. Em certas modalidades, z é
4. Em algumas modalidades, z é 5. Em algumas outras modalidades, z é 6. Em certas modalidades, z é 7. Em algumas outras modalidades, z é 8. Em certas modalidades, z é 9. Em algumas modalidades, z é 10. Em algumas outras modalidades, z é 11. Em algumas outras modalidades, z é 12. Em algumas outras modalidades, z é 13. Em algumas outras modalidades, z é 14. Em algumas outras modalidades, z é 15. Em algumas outras modalidades, z é 15. Em algumas outras modalidades, z é 16. Em algumas outras modalidades, z é 17. Em algumas outras modalidades, z é 18. Em certas modalidades, z é 19. Em algumas outras modalidades, z é 20. Em algumas outras modalidades, z é 21. Em algumas outras modalidades, z é 22. Em algumas outras modalidades, z é 23. Em algumas outras modalidades, z é 24. Em algumas outras modalidades, z é 25. Em algumas outras modalidades, z é 26. Em algumas outras modalidades, z é 27. Em algumas outras modalidades, z é 28. Em algumas outras modalidades, z é 29. Em algumas outras modalidades, z é 30. Em algumas modalidades, z é um inteiro selecionado a partir de 1—15, inclusive. Em certas modalidades, z é selecionado a partir de 1-10. Em certas modalidades, z é selecionado a partir de 1-5. Em certas modalidades, z é selecionado a partir de 2-5. Em certas modalidades, z é selecionado a partir de 2-4.
[000209] Em algumas modalidades, -L- ou -L1-L2-(L3)0-1- na fórmula (II), (INI-P) ou (III-P-1), se refere a qualquer grupo ou porção divalente que une, conecta ou liga um agente de ligação (por exemplo, um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo) com um composto de carga útil apresentado no presente documento (por exemplo, esteroide). Em geral, -L- e -L1-L2-(L3)0-1- para os conjugados de anticorpo descritos no presente documento são aqueles que são suficientemente estáveis para explorar a meia-vida circulante do anticorpo e, ao mesmo tempo, capazes de liberar a sua carga útil depois da internalização mediada por antígeno do conjugado. Os ligantes podem ser cliváveis ou não cliváveis. Os ligantes cliváveis são ligantes que são clivados pelo metabolismo intracelular em seguida à internalização, por exemplo, clivagem através da hidrólise, redução ou reação enzimática. Os ligantes não cliváveis são ligantes que liberam uma carga útil presa através da degradação lisossômica do anticorpo em seguida à internalização. Os ligantes adequados incluem, porém não se limitam a, ligantes ácido-lábeis, ligantes hidrólise-lábeis, ligantes enzimaticamente cliváveis, ligantes de redução lábeis, ligantes autoimolativos e ligantes não cliváveis. Os ligantes adequados também incluem, porém não se limitam àqueles que são ou compreendem glicuronídeos, succinimida-tioéteres, unidades de polietileno glicol (PEG), carbamatos, hidrazonas, unidades de mal-caproíla, unidades de dissulfeto (por exemplo, -S-S-, —S-S-C(R1b)(R2b)-, em que R1b e R2b são independentemente hidrogênio ou hidrocarbila), unidades de para- amino-benzila (PAB), unidades de fosfato, por exemplo, unidades de mono-, bis- e tris-fosfato, peptídeos, por exemplo, unidades de peptídeo contendo duas, três, quatro, cinco, seis, sete, oito ou mais unidades de aminoácido, incluindo porém sem se limitar a unidades de valina- citrulina, unidades de valina-alanina, unidades de valina-arginina, unidades de valina-lisina, unidades de lisina-valina-citrulina e unidades de lisina-valina-alanina. Em algumas modalidades, -L- e -L1-L2-(L3)O- 1- são derivados a partir da reação de um "grupo reativo" (RG) de Fórmula (II) (e modalidades do mesmo) com uma porção reativa de um anticorpo. O grupo de ligação é qualquer porção divalente que liga BA à carga útil. O grupo de ligação também pode ser qualquer porção trivalente que liga BA, a carga útil, e uma porção de ciclodextrina. Em algumas modalidades, -L- e -L1-L2-(L3)0-1- são trivalentes e incluem uma porção de ciclodextrina ligada a um grupo trivalente (por exemplo, um resíduo de lisina) no grupo de ligação. -L- e -L1-L2-(L3)0-1- contêm um resíduo de grupo reativo, que é um grupo ou porção funcional que reage com uma porção reativa de um anticorpo, anticorpo modificado ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
[000210] Em algumas modalidades, é provido um composto de fórmula (III), (III-P), ou (III-P-1), onde L e -L1-L2-(L3)0-1- compreende, TO qu um regioiss i isô ; gioisômero ou mistura de isômeros dos mesmos; Ss e ST q RV TC te ND W A : ; ; O ,ouumestereoisômero ou mistura de estereoisômeros dos mesmos, onde S se refere ao átomo S em um resíduo de cisteína através do qual o resíduo do grupo reativo é ligado o o ao BA; ou * onde N se refere ao átomo de N em um resíduo de lisina através do qual o resíduo do grupo reativo é ligado ao BA.
[000211] Em algumas modalidades, é provido um composto de fórmula (III), (INI-P), ou (III-P-1), onde L e -L1-L2-L3- compreendem o S* O" Ay AAA H ou | :
[000212] Em algumas modalidades, é provido um composto de fórmula (III), (III-P), ou (III-P-1), onde L e -L1-L2-(L3)0-1- compreendem
NS IO de ou um regioisômero ou mistura de isômeros dos mesmos; ss q, q NY TC ds) Ns e ; ; ; O ouumestereoisômero ou mistura de estereoisômeros dos mesmos, onde S se refere ao átomo de S em um resíduo de cisteína através do qual o resíduo do grupo reativo é o
N : sl É , : ligado ao BA; ou * onde N se refere ao átomo de N em um resíduo de lisina através do qual o resíduo do grupo reativo é ligado ao BA; e L o
AI e -L1-L2-(L3)0-1- compreendem H ou o
SS PO N H .
[000213] Em algumas modalidades, é provido um composto de fórmula (III), (III-P), ou (III-P-1), onde L é -L1-L2-(L3)0-1-. Em algumas modalidades, L3 está presente. Em algumas modalidades, L3 não está presente.
[000214] Em algumas modalidades, é provido um composto de fórmula (III), (III-P), ou (III-P-1), onde L é -L1-L2-(L3)0-1- e L1 é
SNS ! ATO o ! selecionado a partir de ou um regioisômero ou mistura de s o Es NA Ni
NS ID A Ns, Na isômeros dos mesmos; ; ; O ,ouum estereoisômero ou mistura de estereoisômeros dos mesmos, onde S se refere ao átomo de S em um resíduo de cisteína através do qual o o
N D A P. resíduo do grupo reativo é ligado ao BA; e * onde N se refere ao átomo de N em um resíduo de lisina através do qual o resíduo do grupo reativo é ligado ao BA. Em algumas modalidades, é provido um composto de fórmula (Ill), (NMI-P) ou (I-P-I)) onde L é
Q
TO n is NaN . n -L1-L2-(L3)0-1- e L1 é - . Em algumas modalidades, é provido um composto de fórmula (III), (III-P) ou (III-P-1), onde L é -L1- q ; ) L2-(L3)0-1- e LI é Ns . Em algumas modalidades, é provido um composto de fórmula (III), (III-P) ou (III-P-1), onde L é -L1-L2-(L3)O-
7T1/344 fa 1-eL1é 7 . Em algumas modalidades, é provido um composto de fórmula (III), (III-P) ou (III-P-1), onde L é -L1-L2-(L3)0-1- e L1 é o
ASA a o . Em algumas modalidades, é provido um composto de fórmula o AN, (II), (IN-P) ou (III-P-1), onde L é -L1-L2-(L3)0-1-e LIM é *
[000215] Em algumas modalidades, é provido um composto de fórmula (III), (II-P) ou (III-P-1), onde L é -L1-L2-(L3)0-1- e L3 é
DS E | Nº PÁ H onde o grupo NH é ligado ao L2, quando SP é -C(O)-
À
ROS 4 C1-C10-alquileno-C(O0)-; ou L3 é 4 onde o grupo NH é ligado ao L2, quando SP é -C(O)-N(C1-3alquil)-C1-C10-alquileno-X1- ou -C(O)-N(R5)-C1-C10-alquileno-C(O)NH-X2-; ou L3 não está Re Rº J/ RO Y /m 2 o XI-XE O : presente quando SP é . Em algumas modalidades, é provido um composto de fórmula (III), (III-P) ou (III-P-1), onde L é -L1- Ss o E | Nº PÁ L2-(L3)- e L3 é H onde o grupo NH é ligado ao L2, quando SP é -C(O)-C1-C10-alquileno-C(O)-. Em algumas modalidades, é provido um composto de fórmula (III), (III-P) ou (III-P-1), onde L é -L1-
o aaa Ea L2-(L3)0-1-eL3é Hà onde o grupo NH é ligado ao L2, quando SP é -C(O)-N(C1-3alquil)-C1-C10-alquileno-X1- ou -C(O)- N(R5)-C1-C10-alquileno-C(O)NH-X2-. Em algumas modalidades, é provido um composto de fórmula (III), (III-P) ou (III-P-1), onde L é -L1- Re Rº J/ RO W m x À a txt oO A L2-(L3)0-1- e L3 não está presente quando SP é .
[000216] Em algumas modalidades, é provido um composto de fórmula (II), (IN-P) ou (III-P-1), onde L é -L1-L2-(L3)0O-1- e L2 o o sem As alho NO compreende ; ..., o o o A > A o ao AAA FR AMA Çã E C (S) É O (R) É o mm x AX so N o , Ho%o , Hoí%o ;
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N N FO N N O o N MO o ND A TO * o W o o H o VN No JAs Ox Aos o ; o , -OCH2C(O)-,
T3/344 ou resíduo de ciclodextrina (CD); ou combinações dos mesmos. Em algumas modalidades, é provido um composto de fórmula (III), (III-P) ou o À sem As (INI-P-1), onde L é -L1-L2-(L3)0-1- e L2 compreende
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Y Oo ah ; ' t WO WO o, H HS 1-10 * do UA À AoA O Ao o Me O , ou CD, ou combinações dos mesmos. Em algumas modalidades, é provido um composto de fórmula (III), (III-P) ou (III-P-1), onde L é -L1-L2-(L3)0-1- e L2 compreende CD em que CD é selecionado a partir do grupo consistindo em 7
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[000217] Em algumas modalidades, é provido um composto de fórmula (III), (IN-P) ou (III-P-1), onde L é -L1-L2-(L3)0-1- e -L2-(L3)0-1- compreendem ox NH,
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[000218] Em algumas modalidades, é provido um composto de fórmula (III), (III-P) ou (III-P-1), onde L2 compreende ; e /AA Prieto 3 —PEG) AA AAS-NH VZ HN. O Ss La Co
[000219] L1A é um resíduo de grupo reativo;
[000220] CD é uma ciclodextrina;
[000221] AAA é ligante trivalente;
[000222] AAS5 é um resíduo de peptídeo;
[000223] PEG é polietileno glicol;
[000224] Aé um inteiro selecionado a partir de O a 5, inclusive.
[000225] Em algumas modalidades, AA4 é um resíduo de aminoácido; AA5 é um resíduo dipeptídico, um resíduo tripeptídico, resíduo tetrapeptídico ou resíduo pentapeptídico; PEG é um resíduo de polietileno glicol; em que o KR indica o átomo através do qual o grupo químico indicado é ligado aos grupos adjacentes na fórmula, CD é, independentemente em cada caso, ausente ou um resíduo de ciclodextrina, em que pelo menos um CD está presente, o subscrito A é um inteiro selecionado a partir de O a 5, inclusive; nesses exemplos, o subscrito A é 0, 1, 2, 3,4 ou 5. Em algumas modalidades, o subscrito À é 0. Em algumas modalidades, o subscrito A é 1. Em algumas modalidades, o subscrito A é 2. Em algumas modalidades, o subscrito A é 3. Em algumas modalidades, o subscrito A é 4. Em algumas modalidades, o subscrito A é 5. Em algumas modalidades, qualquer um de AA4 ou AA5 compreende, independentemente em cada caso, um aminoácido selecionado a partir de alanina, valina, leucina, isoleucina, metionina, triptofano, fenilalanina, prolina, serina, treonina, cisteína, tirosina, asparagina, glutamina, ácido aspártico, ácido glutâmico, lisina, arginina, histidina ou citrulina, um derivado dos mesmos ou uma combinação dos mesmos.
Em certas modalidades, AA4 é um aminoácido selecionado a partir de alanina, valina, leucina, isoleucina, metionina, triptofano, fenilalanina, prolina, serina, treonina, cisteína, tirosina, asparagina, glutamina, ácido aspártico, ácido glutâmico, lisina, arginina, histidina ou citrulina, um derivado dos mesmos ou uma combinação dos mesmos.
Em certas modalidades, AAA4 é lisina ou um derivado de lisina.
Em certas modalidades, AAA4 é lisina.
Em certas modalidades, AA4 é D-lisina.
Em certas modalidades, AAA4 é L-lisina.
Em certas modalidades, o AA5 é um resíduo dipeptídico.
Em certas modalidades, o AAS é valina-citrulina.
Em algumas modalidades, o AA5 é citrulina-valina.
Em algumas modalidades, o AAS é valina-alanina.
Em algumas “modalidades, o AA5 é alanina-valinan Em algumas modalidades, o AAS5 é valina-glicina.
Em algumas modalidades, o AA5 é glicina-valiha.
Em certas modalidades, o AA5 é um resíduo tripeptídico.
Em algumas modalidades, o AA5 é glutamato-valina- citrulina.
Em algumas modalidades, o AAS5 é glutamina-valina-citrulina.
Em algumas modalidades, o AAS5 é lisina-valina-alanina. Em algumas modalidades, o AAS é lisina-valina-citrulina. Em algumas modalidades, o AAS5 é glutamato-valina-citrulina. Em algumas modalidades, o AAS5 é um resíduo tetrapeptídico. Em algumas modalidades, o AAS5 é glicina- glicina-fenilalanina-glicina. Em algumas modalidades, o AAS5S é um resíduo tetrapeptídico. Em algumas modalidades, o AA5 é glicina- glicina-glicina-glicina-glicina.
[000226] Em certas modalidades, o resíduo do grupo reativo é derivado a partir da reação de RG com um resíduo de cisteína ou lisina de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Em certas modalidades, o resíduo do grupo reativo é derivado a partir de uma reação química "click". Em algumas modalidades da referida reação química "click", L1 é derivado de uma reação de 1,3 cicloadição entre um alcino e uma azida. Os exemplos não limitantes dos referidos resíduos de grupos reativos incluem aqueles descritos a partir de alcinos estirados, por exemplo, aqueles adequados para cicloadições de alcino- azida promovidas por estiramento (SPAAC), cicloalcinos, por exemplo, ciclooctinos, alcinos benzanulados e alcinos capazes de sofrer reações de 1,3 cicloadição com azidas na ausência de catalisadores de cobre. Os L1s adequados também incluem, porém não se limitam a porções derivadas de DIBAC (onde a porção -C(O)CH2CH2C(O)- da porção DIBAC é coberta por L2), DIBO (onde a porção -O- da porção DIBO é
FO A DA coberta por L2), BARAC (onde a porção RD” da porção BARAC é coberta por L2), alcinos substituídos, por exemplo, alcinos fluorados, aza-cicloalcinos, BON, e derivados dos mesmos. Os conjugados contendo os referidos resíduos de grupos reativos podem ser derivados de anticorpos que foram funcionalizados com grupos azido. Os referidos anticorpos funcionalizados incluem anticorpos funcionalizados com grupos azido-polietileno glicol. Em certas modalidades, o referido anticorpo funcionalizado é derivado através da reação de um anticorpo compreendendo pelo menos um resíduo de glutamina com um composto de acordo com a fórmula H2N—LL—N3, em que LL é um grupo divalente de polietileno glicol, na presença da enzima transglutaminase, por exemplo, transglutaminase microbiana. Os resíduos adequados de glutamina de um anticorpo incluem Q295, ou aqueles derivados através da inserção ou mutação, por exemplo, mutação N297Q.
[000227] Em algumas modalidades, BA dos conjugados descritos no presente documento é um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Em algumas modalidades, os conjugados descritos no presente documento são derivados de anticorpos azido- funcionalizados. Em certas modalidades, BA dos conjugados descritos no presente documento é: est Zz
[000228] em que AB é um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, n é um inteiro selecionado a partir de 1 a 10, inclusive, z é o número de porções de carga útil ligante, e $ é uma ligação ao L, ou -L1-L2-(L3)0-1-, por exemplo, ligação a uma porção derivada de uma reação de 1,3-cicloadição entre um alcino e azida. Em certas modalidades, z é 3. Em certas modalidades, z é 2 ou 4, isto é, o conjugado compreende 2 ou 4 porções de carga útil ligante.
[000229] Em algumas modalidades, -L- e -L1-L2-L3- são uma porção divalente de fórmula (LA); —-L1HÁHSP1)9H(A)2e (NRa)s(B)tH(CH2)U(O)v SP2)w- (LA); em que L1 é como definido no presente documento;
[000230] Aé um aminoácido ou peptídeo;
[000231] RAé H ou alquila;
[000232] B é arila, heteroarila ou heterocicloalquila, em que arila, heteroarila ou heterocicloalquila é opcionalmente substituída com alquila, -OH, ou -NRaRb;
[000233] SP1.e SP2 são, independentemente, um grupo espaçador; eq,z,s,t, u, ve w são, independentemente em cada caso, O ou 1.
[000234] Em algumas outras modalidades, -L- e -L1-L2-(L3)0-1- são uma porção trivalente de fórmula (LB); —L1HSP1)9-(A)2a—(NRa)sB)t(CH2)U(O)v—( SP2)w- (LB); em que L1 é como definido no presente documento;
[000235] A é um tripeptídeo ou um tetrapeptídeo, em que pelo menos um dos aminoácidos no tripeptídeo ou tetrapeptídeo é ligado diretamente ou indiretamente a uma porção de ciclodextrina;
[000236] RA é H ou alquila;
[000237] B é arila, heteroarila ou heterocicloalquila, em que arila, heteroarila ou heterocicloalquila é opcionalmente substituída com alquila, -=OH ou -NRaRb;
[000238] SP1.e SP2 são, independentemente, um grupo espaçador; eq,z,S,t, u,ve w são, independentemente em cada caso, O ou 1.
[000239] Em algumas modalidades, a ciclodextrina (CD) é ligada diretamente a um resíduo de aminoácido, tal como um resíduo do aminoácido lisina. Isto significa que a CD está uma posição de ligação longe do ligante covalente do aminoácido lisina. Em algumas dessas modalidades, o ligante covalente também está ligado diretamente a uma porção de carga útil. Isto significa que o ligante covalente está em uma posição de ligação longe de uma carga útil tal como, porém sem se limitar a uma carga útil esteroide apresentada no presente documento. Em algumas dessas modalidades, o ligante covalente também está ligado diretamente a uma porção CD. Isto significa que o ligante covalente está em uma posição de ligação longe de uma CD, tal como a(s) CD(s) apresentada(s) no presente documento. Em algumas dessas modalidades, o ligante covalente é um aminoácido lisina ou um derivado do mesmo.
[000240] Em algumas modalidades, a CD é ligada indiretamente a um ligante covalente em um grupo de ligação (por exemplo, L, -L2-(L3)0-1- e —L1-L2-(L3)0-1). Isto significa que a CD está mais uma posição de ligação longe do ligante covalente. Isto também significa que a CD é ligada através de uma outra porção ao ligante covalente. Por exemplo, a CD pode ser ligada a um grupo maleimida que é ligado a um grupo de polietileno glicol que é ligado ao ligante covalente. Em algumas dessas modalidades, o ligante covalente também está ligado indiretamente a uma porção de carga útil. Isto significa que o ligante covalente está mais de uma posição de ligação longe de uma carga útil tal como, porém sem se limitar a uma carga útil esteroide apresentada no presente documento. Isto também significa que o ligante covalente é ligado através de uma outra porção à carga útil. Por exemplo, o ligante covalente pode ser ligado a um dipeptídeo, tal como, porém, não limitado a Val-Ala ou Val-Cit, que pode ser ligado a para-amino benzoíla que pode ser ligada à carga útil. Em algumas dessas modalidades, o ligante covalente também é ligado indiretamente a uma porção de ciclodextrina. Isto significa que o ligante covalente está mais de uma posição de ligação longe de uma ciclodextrina, tal como as ciclodextrinas apresentadas no presente documento. Isto também significa que o ligante covalente é ligado através de uma outra porção à ciclodextrina. Por exemplo, o ligante covalente pode ser ligado a um grupo de polietileno glicol que pode ser ligado ao grupo reativo que pode ser ligado à ciclodextrina. Em algumas dessas modalidades, o ligante covalente é um aminoácido lisina ou um derivado do mesmo.
[000241] Em algumas modalidades, -L- e -L1-L2-(L3)0-1- são -L1—
(SP1)g9-(A)z-. Em algumas modalidades, -L- e -L1-L2-(L3)0-1- são — L1H(SP1)9—(A)2-. Em algumas modalidades, -L- e -L1-L2-(L3)0-1- são uma porção da fórmula (LA1) eh RE —LI—(SP') a. VP (L A1) em que RAAI e RAA2 são cada, independentemente, cadeias laterais de aminoácido. Em algumas modalidades da fórmula LA1, SP1 é um grupo de polietileno glicol divalente e L1 é um produto de reação de 1,3—cicloadição da reação entre um alcino e uma azida.
[000242] Em algumas modalidades, -L- e -L1-L2-(L3)0-1- são -L1— (SP1)g9—(A)z-. Em algumas modalidades, -L- e -L1-L2-(L3)0-1- são — L1H(SP1)9—(A)2-. Em algumas modalidades, -L- e -L1-L2-(L3)0-1- são uma porção da fórmula (LB1) o RM, O ue AAA, RAA3 RARA? (L B1) em que RAA1I e RAA2 são cada, independentemente, cadeias laterais de aminoácido. RAA3 é uma cadeia lateral de aminoácidos que é ligada diretamente ou indiretamente a uma porção de ciclodextrina. Em algumas modalidades da fórmula LB1, SP1 é um grupo de polietileno glicol divalente e L1 é um produto de reação da 1,3- cicloadição da reação entre um alcino e uma azida.
[000243] Em algumas modalidades, -L- ou —-L1-L2-L3- tem a seguinte estrutura: —L1IHSP1)g—-21-22—230—-1- em que:
[000244] L1,SP1,são como definidos no presente documento;
[000245] qgé0boui;
[000246] Z1é um grupo polietileno glicol ou caproíla;
[000247] Z2é um dipeptídeo, tripeptídeo ou tetrapeptídeo; e
[000248] Z3é um grupoPAB.
[000249] Em certas modalidades, L1 é derivado a partir de um grupo reativo da química "click" e Z1 é um grupo de polietileno glicol. Em certas modalidades, L1-(SP1)q-21- é: 4 2 nº o o
N NA A e “o N o o Ny NA AA
ZE ou mistura dos mesmos; ou o o
ANA AA ss 4 4 dd *N . Em algumas modalidades, o dipeptídeo é valina-citrtuliha ou valina alaninaz Em algumas modalidades, o tripeptídeo é glutamato-valina-citrulihna. Em algumas modalidades, o tetrapeptídeo é glicina-glicina-fenilalanina-glicina.
[000250] Em algumas modalidades, no presente documento L1 é derivado de um grupo reativo da química "click". Em algumas modalidades, L1 é: C? Ne C? Não
XY NS O Net O
EN N NEN ; esa , ou mistura dos mesmos;
Pr 2
N "N ; ou
N 2 DS “. Y
BA dd “BA : 2 o N ; , ou mistura dos mesmos; em que “é é uma ligação a um agente de ligação.
[000251] Em alguns outros exemplos, no presente documento L1 é selecionado a partir de um grupo que reage com um resíduo de cisteíina ou lisina em um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do Ss Al o «o Ss mesmo. Em algumas modalidades, L1 é O ; em que $ é uma ligação à cisteína de um agente de ligação, por exemplo, anticorpo. Em | À. algumas modalidades, L1 é -
[000252] Em algumas modalidades, SP1 é selecionado a partir de: o o o o. o o (CH) Ali ENA DC TT 2)a HH b o d o o. o o NO AC e $-(CH2) Lt o in rerH) ai
[000253] Em algumas modalidades, SP1 é o . Em o Oo o o
A alguns outros exemplos, SP1 é a . Em outros o so exemplos, SP1 é . Em ainda outros exemplos, SP1 é o
CNAE 4 br. Em alguns outros exemplos, SP1 é Oo $ (CH). : . Em qualquer um dos exemplos acima, os subscritos a, b e c são independentemente, em cada caso, um inteiro selecionado a partir de 1 a 20, inclusive.
[000254] Em algumas modalidades, RAA3 é selecionado a partir de
2. o No Ns, N-CD s = ; ; N , em que CD é uma porção de ciclodextrina. Em algumas modalidades, RAA3 é selecionado a partir de ( HO HN É o o o o oro oH == y os Ny oH o
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OH Oo HO 27 OH :
[000255] Em algumas modalidades, SP1 é selecionado a partir de: o o H nm
PA ON A ONO o o o o AAA AAA NANA OOo o se < o o no “om ºN C ANA OH q * o
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[000256] Em algumas modalidades, SP1 é O .Emalgumas o ONA a A modalidades, SP1 é o o
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O Em algumas modalidades, SP1 é “ O >, Em algumas
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O DVI ÇA DN modalidades, sP1 é * º N º º Em Ho NO QxA Ho"NoH om algumas modalidades, SP1 é OH ” . Em o
SOS algumas modalidades, SP1 é o
[000257] Em algumas modalidades, SP1 é NV Em algumas 7 o modalidades, SP1 é No Em algumas modalidades, SP1 é o â o A Em algumas modalidades, SP1 é A Em o algumas — modalidades, SP1 é Ay Em algumas o
ARIANA modalidades, SP1 é *.
[000258] Em algumas modalidades, -L1-L2- compreendem: o Oo o Ore, Soy N a N Oo b ns O NÓS Na N=N O ; do ; ou mistura dos mesmos; o Qdo, RW º '
NO N=N ; H o CD O Aos W º
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[000259] ou O º ondeb,ced são independentemente, em cada caso, um inteiro selecionado a partir de 1 a 20, inclusive. Em algumas dessas modalidades, os subscritos b, c e d são independentemente, em cada caso, um inteiro selecionado a partir de 1 a 6, inclusive.
[000260] Em algumas modalidades, -SP1 é selecionado a partir de: Qi A o ANO Pr ! “
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O Ne > ; ou mistura dos mesmos; o o " AA A nas í Ns :
o o à No a * N Oo Mm Ney : o. o Ho A Ho O LO o Ho"N"oH O V À, o. du Ds Ho" "OH o Ne ê o Nº N Y. Wen o | AX A ou mistura dos mesmos; ; À o fo) * AA o a 3 NH PN * “N ;ou O .:
[000261] Em algumas modalidades, A é um peptídeo selecionado a partir" de valina-citrulihay citruliha-valina, lisina-fenilalanina, fenilalanina-lisina, valina-asparagina, asparagina-valina, treonina asparagina, asparagina-treonina, serina-asparagina, asparagina- serina, fenilalanina-asparagina, asparagina-fenilalanina, leucina- asparagina, asparagina-leucina, isoleucina-asparagina, asparagina— isoleucina, glicina-asparagina, asparagina-glicina, ácido glutâmico asparagina, asparagina- ácido glutâmico, citrulina-asparagina, asparagina-citrulina, alanina-asparagina ou asparagina-alanina.
[000262] Em algumas modalidades, A é valina-citrulina ou citrulina- valina.
[000263] Em algumas modalidades, A é valina-alanina ou alanina- valina.
[000264] Em algumas modalidades, A é lisina-valina-alanina ou alanina-—valina-lisina.
[000265] Em algumas modalidades, A é lisina-valina-citrulina ou citrulina—valina-lisina.
[000266] Em algumas modalidades, A é glutamato-valina-citrulina ou citrulina—valina- glutamato.
[000267] Em algumas modalidades, A é valina.
[000268] Em algumas modalidades, A é alanina.
[000269] Em algumas modalidades, A é citrulina. RAA2 dA,
[000270] Em algumas modalidades, A é Ro Em algumas dessas modalidades, RAAI é uma cadeia lateral de aminoácidos, e em que RAA2 é uma cadeia lateral de aminoácidos.
RL A AS
[000271] Em algumas modalidades, A é RA? o Rº Em algumas dessas modalidades, RAAI é uma cadeia lateral de aminoácidos, RAA2 é uma cadeia lateral de aminoácidos, e RAA3 é uma cadeia lateral de aminoácidos que é ligada diretamente ou indiretamente a uma porção de ciclodextrina. nu o RAA2 Ah
[000272] Em algumas modalidades, A é HeMeH O . ox NH
NH SAN
[000273] Em algumas modalidades, A é HeMen O :
HO o HN : À Às,
[000274] Em algumas modalidades, A é HN ÃO ou NG N ” * o HoTSo HN uno o o F. RN. % N * o
NH
[000275] Em algumas modalidades, A é + CD , em que “CD representa uma ligação direta ou indireta a uma porção de ciclodextrina.
[000276] Em algumas modalidades, incluindo qualquer uma das anteriores, CD é, independentemente, em cada caso, selecionada a partir de Co HO o o es ” º NX o o. Ho OH Ho o o Ho by o o o o Ho ou H O. o o OH oH ge OH Ho bH OH o HO ; H Eraad
HO
> > Ho O o. N o O
OH Ho & Ho o o o Ho oH OH o Ter o! o o o Ho. oh Ho OH OH o o(|oH o o Pp no oh OH OH o
HO OH o OH HO o o PO! o o H Ho o OXTonHoHO Za OH o Ho ; o Ho o Ho ;
FT Ho Oo mos O, O O. o! N o no o Ho OH Ho OH HO Or, o oH or o o Ho S ol oH o Ho o 0 HO O bH fo OH Ho oH o OH oH Ho, OH OH 70H o Oror HO N SO o oh o o o Ho HO o OH o Ho e " oz HOHO, o oHy o Ho o Ho .
[000277] Em algumas modalidades, a CD é Ho O o. oH9 o o S “e
O
O HO OH, OH oo
H o Ho oH7 4 OH Ho .
[000278] Em algumas modalidades, a CD é -
CS ”” Ho O o. oHº o o S “e o o Ho oh OoH o o
H o 9Ho.oH7) OH HO '
[000279] Em algumas modalidades, a CD é nm Ho O o. or oHo no” oH
OH & fe) HO. Ol OoH o o o 1 Ho Se us od» q o Ho .
[000280] Em algumas modalidades, a CD é 7
CO ” nº RSA o o
HO OH o oH
É Ho o S of
H Sra ” o Ho '
[000281] Em algumas modalidades, a CD é HO o Oo o o 2 fo 1 o so fot “e o OH oH Oo O o! o, or o oH HO OHZ) OH HO o HO .
[000282] Em algumas modalidades, a CD é 7
OC 2 Ho o O. o SARA, é HO O OH Ho oH É oh M
O HO e. OI P Enero” Oo Ho > Ho .
[000283] Em algumas modalidades, A é o o
A o HN o "8 Y Ebagaão
L É NO Nao OH Xi oH o A o o HO o rose oH ou um isômero do mesmo.
[000284] Em algumas modalidades, RA é H.
[000285] Em algumas modalidades, RA é alquila.
[000286] Em algumas modalidades, RA é metila, etila, n-propila, i—propila, n-butila, t-butila, i-butila ou pentila.
[000287] Em algumas modalidades, B é arila.
[000288] Em algumas modalidades, B é fenila.
[000289] Em algumas modalidades, B é fenila ou piridinila.
[000290] Em algumas modalidades no presente documento, B é: (RO), (Rm &. ou .
[000291] Nesses exemplos, R10 é alquila, alquenila, alquinila, alcóxi, arila, alquilarila, arilalquila, halo, haloalquila, haloalcóxi, heteroarila, o heterocicloalquila, hidroxila, ciano, nitro, dorm EsoRt AR NRaRb, ou azido. Nesses exemplos, subscritos p e m são independentemente, em cada caso, selecionados a partir de um inteiro selecionado a partir de O a 4, inclusive.
[000292] Em algumas modalidades no presente documento, B é: (Rº),
[000293] Nesses exemplos, p é 0, 1, 2, 3 ou 4. Em algumas dessas modalidades, R1 é, independentemente em cada ocorrência, alquila, alcóxi, haloalquila ou halo. Em algumas modalidades, R1 é alquila. Em algumas modalidades, R1 é alcóxi. Em algumas modalidades, R1 é haloalquila. Em algumas modalidades, R1 é halo.
[000294] Em algumas modalidades da fórmula (LA), o (NRa)s—(B)t- (CH2)U(O)vx SP2)w é:
O H ol
HA
[000295] Em qualquer uma das modalidades de L ou L1- L2-(L3)O-1 descrito no presente documento, um ou mais grupos intensificadores podem ser ligados à cadeia lateral de qualquer aminoácido em L ou L1- L2-(L3)0-1. Os aminoácidos úteis para ligar grupos intensificadores incluem lisina, asparagina, aspartato, glutamina, glutamato e citrulina. À ligação ao grupo intensificador pode ser uma ligação direta à cadeia lateral de aminoácido, ou a ligação pode ser indireta através de um grupo espaçador e/ou reativo. Os grupos espaçadores e reativos úteis incluem qualquer um descrito no presente documento. O grupo intensificador pode ser qualquer grupo considerado útil por aqueles versados na técnica. Por exemplo, o grupo intensificador pode ser qualquer grupo que produza um efeito benéfico ao composto, carga útil, carga útil ligante ou conjugado de anticorpo incluindo, porém sem se limitar a efeitos biológicos, bioquímicos, sintéticos, solubilizantes, de produção de imagens, detecção e reatividade, e similar. Em certas modalidades, o grupo intensificador é um grupo hidrofílico. Em certas modalidades, o grupo intensificador é uma ciclodextrina. Em certas modalidades, o grupo intensificador é uma alquila, heteroalquila, alquillenila, ácido heteroalquilenil sulfônico, heteroalquilenil taurina, ácido heteroalquilenil fosfórico ou fosfato, heteroalquilenil amina (por exemplo, amina quaternária), ou heteroalquilenil açúcar. Em certas modalidades, os açúcares incluem, sem limitação, monossacarídeos, dissacarídeos e polissacarídeos. Os monossacarídeos exemplificadores incluem glicose, ribose, desoxirribose, xilose, arabinose, manose, galactose, frutose e similar. Em certas modalidades, os açúcares incluem ácidos de açúcar tais como ácido glicurônico, também incluindo formas conjugadas tais como glicuronídeos (isto é, através da glicuronidação). Os dissacarídeos exemplificadores incluem maltose, sacarose, lactose, lactulose, trehalose e similar. Os polissacarídeos exemplificadores incluem amilose, amilopectina, glicogênio, inulina, celulose e similar. A ciclodextrina pode ser qualquer ciclodextrina conhecida daqueles versados na técnica. Em certas modalidades, a ciclodextrina é alfa ciclodextrina, beta ciclodextrina ou gamma ciclodextrina, ou misturas das mesmas. Em certas modalidades, a ciclodextrina é alfa ciclodextrina. Em certas modalidades, a ciclodextrina é beta ciclodextrina. Em certas modalidades, a ciclodextrina é gamma ciclodextrina. Em certas modalidades, o grupo intensificador é capaz de melhorar a solubilidade do restante do conjugado.
[000296] Em certas modalidades, o grupo intensificador é uma alquila, heteroalquila, alquilenila, ácido heteroalquilenil sulfônico, heteroalquilenil taurina, ácido heteroalquilenil fosfórico ou fosfato, heteroalquilenil amina (por exemplo, amina quaternária), ou heteroalquilenil açúcar. Em certas modalidades, os açúcares incluem, sem limitação, monossacarídeos, dissacarídeos e polissacarídeos. Os monossacarídeos — exemplificadores — incluem — glicose, ribose,
desoxirribose, xilose, arabinose, manose, galactose, frutose e similar.
Em certas modalidades, os açúcares incluem ácidos de açúcar tais como ácido glicurônico, também incluindo formas conjugadas tais como glicuronídeos (isto é, através da glicuronidação). Os dissacarídeos exemplificadores incluem maltose, sacarose, lactose, lactulose, trehalose e similar.
Os polissacarídeos exemplificadores incluem amilose, amilopectina, glicogênio, inulina, celulose e similar.
A ciclodextrina pode ser qualquer ciclodextrina conhecida daqueles versados na técnica.
Em certas modalidades, a ciclodextrina é alfa ciclodextrina, beta ciclodextrina ou gamma ciclodextrina, ou misturas das mesmas.
Em certas modalidades, a ciclodextrina é alfa ciclodextrina.
Em certas modalidades, a ciclodextrina é beta ciclodextrina.
Em certas modalidades, a ciclodextrina é gamma ciclodextrina.
Em certas modalidades, o grupo intensificador é capaz de melhorar a solubilidade do restante do conjugado.
Em certas modalidades, o ácido alquil, heteroalquil, alquilenil ou heteroalquilenil sulfônico é substituído ou não substituído.
Em certas modalidades, o ácido alquil, heteroalquil, alquilenil ou heteroalquilenil sulfônico é —(CH2)1-5S8S03H, —(CH2)n-NH-(CH2)1-5S8S03H, — —-(CH2)n-C(O)NH- (CH2)1-5S803H, (CH2CcCH20)m-C(O)NH-(CH2)1-5S03H, —(CH2)n- N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5S03H)2, HCH2)n-C(O)N((CH2)1- SC(O)NH(CH2)1-5S803H)2, ou (CH2CcCH20)m-C(O)N((CH2)1- SC(O)NH(CH2)1-5S8S03H)2, em que n é 1,2,3,4o0u 5, emé 1,2,3,4 ou 5. Em uma modalidade, o ácido alquil ou alquilenil sulfônico é H(CH2)1-5S03H.
Em uma outra modalidade, o ácido heteroalquil ou heteroalquilenil sulfônico é -(CH2)n-NH-(CH2)1-5803H, em que né 1, 2, 3,4 ou 5. Em uma outra modalidade, o ácido alquil, heteroalquil, alquilenil ou heteroalquilenil sulfônico é (CH2)n-C(O)NH-(CH2)1- 5SO3H, em que n é 1, 2, 3, 4 ou 5. Em uma outra modalidade, o ácido alquil, heteroalquil, alquilenil ou heteroalquilenil sulfônico é
(CH2CH20)m-C(O)NH-(CH2)1-58SO03H, em que m é 1,2,3,4 ou 5. Em uma outra modalidade, o ácido alquil, heteroalquil, alquilenil ou heteroalquilenil sulfônico é —(CH2)n-N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1- 5SO3H)2, em que n é 1, 2,3, 4 ou 5. Em uma outra modalidade, o ácido alquil, heteroalquil, alquilenil ou heteroalquilenil sulfônico é —(CH2)n-C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5S803H)2, em que n é 1,2,3, 4 ou 5. Em uma outra modalidade, o ácido alquil, heteroalquil, alquilenil ou heteroalquilenil sulfônico é —CH2CH20)m-C(O)N((CH2)1- S5C(O)NH(CH2)1-5S03H)2, em que m é 1,2,3,4 ou 5.
[000297] São providos no presente documento conjugados de anticorpo-fármaco compreendendo um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo conjugado a um composto selecionado a partir da Tabela 1. Em algumas modalidades, o composto está de acordo com a fórmula 1d, 1e, 1g ou 1h.
[000298] Também são providos no presente documento conjugados de anticorpo-fármaco de fórmula Ab-L-SP-D ou BA-L-SP-D, onde D é um profármaco de budesonida ou um profármaco de um análogo ou derivado de budesonida (incluindo análogos ou derivados fluorados), e onde Ab, BA, L e SP são como definidos em qualquer modalidade descrita no presente documento. Em algumas modalidades, D de Ab-L- o HY & RARO: 2º o SP-D e BA-L-SP-D e 4-SP oH de Fórmula (II) e (Ill) é selecionado a partir de: o E o DN MA, DO o uu o Mao QDO o No oH A o o OH ea ço 8 ;
ORE a RR PP” DNS o LIRA : H
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NA LA o - o Po o F : “x OH . Em algumas modalidades de Ab-L-SP-D, BA-L-SP-D, e Fórmula (Ill), SP é uma porção capaz de liberar D ou Rx
H NS 4 o o H-SPÓÍ oH . Em algumas modalidades, sob condições fisiológicas a ligação entre L e SP é clivada para liberar um R* H > 4 o o profármaco esteroide, isto é H-SP-D ou HsPO oH ;
R* H >
LIKE RL > TADÃD-o Oo 7 o e a ligação entre SP e D ou entre SP e % OH é subsequentemente clivada para liberar um esteroide biologicamente
NÉ ativo. Em algumas modalidades, a n-propila de o em cada uma das estruturas acima está na configuração R, isto é no carbono indicado pelo asterisco. Em algumas modalidades, a n-propila de
NAS o em cada uma das estruturas acima está na configuração S, isto é no carbono indicado pelo asterisco. Em algumas modalidades, a n-propila de o em cada uma das estruturas acima é uma mistura das configurações R e S, isto é no carbono indicado pelo asterisco. Em algumas modalidades, a n-propila de
NÉ o em cada uma das estruturas acima é uma mistura das configurações R e S, isto é no carbono indicado pelo asterisco, em que a mistura R:S é de cerca de 1:1, cerca de 2:1, cerca de 3;1, cerca de 4:1, cerca de 5:1, cerca de 6;1, cerca de 7:1, cerca de 8:1, cerca de 9:1, ou cerca de 10:1.
Tabela 3. Conjugados de anticorpo-fármaco
[000299] Também são apresentados no presente documento conjugados de anticorpo-esteroide tendo as seguintes fórmulas: £ À ( ? o A
E ERVA NATAS oa AO VA s 6 Nos di AA ea ora 2 hd ve A IA, LIT AA SA ou uma mistura dos mesmos; HO HH o Ab—S o o PAU E AX o o o a
N nu o o À DO A, LL o o X H 2 O NH? z ou um estereoisômero ou mistura de estereoisômeros dos mesmos; FA ALL o elas o A IDR “o A A EE ! YZ º o wi Pu a EAN £ ? o ARO" o x SA A Cs o Âm ou uma mistura dos mesmos;
o [) . ABS H O, o o no ANNAN y NA ÇA ANA, Ho Hr o (no o “o W no ÇH) " Co No o z ou um estereoisômero ou mistura de estereoisômeros dos mesmos; Os NH, ds o o é V NU N O.
NODDY : N | o o 1 " OA o o.
Nono, “"H ads O v | o not o z ou um estereoisômero ou mistura de estereoisômeros dos mesmos; ; o AA AAA) AN Ap AAA $
H HH EPA: ARO" o nu LA AL o N N [)
CA N Y Y N o o
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VW HN o H Ho = o OH oro ON - o “ o O DZ N oH HO, N=N & OH HO oH eçer HO O: o! dão o oH z Ho uh o ARERO" o nu LIA OA o N. N. o
EA N Y Y N até Th Nº “NH, “ ns AA)
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NA Ho- o, oO NS oH O, o
HO Es o 5 A oHto. 9 o oH Ho z ou uma mistura dos mesmos
HH HH = ANN No o E, "| A. )=c D | NO” NA W=/ o É "no aprArAÇAÃ on HM cs Mo A NA oo ! o ' y NO NONO S ADA! L HE id onde L1 é um resíduo de grupo restivo compreendendo uma AN o porção triazol K 1 "NH St z ou uma mistura dos mesmos H o
DA ABTS o Fã N N Y AJ o o o X o No NH,
H Zz ou um estereoisômero ou mistura de estereoisômeros dos mesmos Ff Ss. o = = t AAA E CT À A Ro on so dA a A IA, RALO É
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DM SD. RSA ) Fa NT o o o o o NEN of “x - Node IA AI A OX O o o no” A NH o Po ou uma mistura dos mesmos 1 é Ab. o 4º à o OA d SH Alan y Y “Q Y o o NO NH, nOFZ + ad O o o NA a. No NO! s “oH HO = OH z
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[000300] onde BA compreende um anticorpo tendo a seguinte pt estrutura ? onde AB é um anticorpo monoclional, anticorpo policlonal, fragmento de anticorpo ou anticorpo biespecífico; R é C2-4-alquileno; e n é um inteiro selecionado a partir de 2 a 4,
NÉ inclusive. Em algumas modalidades, a n-propila de o em cada uma das estruturas acima está na configuração R, isto é no carbono indicado pelo asterisco. Em algumas modalidades, a n-propila
NÉ de o em cada uma das estruturas acima está na configuração S, isto é no carbono indicado pelo asterisco. Em algumas modalidades,
NÉ a n-propila de o em cada uma das estruturas acima é uma mistura das configurações R e S, isto é no carbono indicado pelo
NÉ asterisco. Em algumas modalidades, a n-propila de o em cada uma das estruturas acima é uma mistura das configurações Re S, isto é no carbono indicado pelo asterisco, em que a mistura R:S é de cerca de 1:1, cerca de 2:1, cerca de 3;1, cerca de 4:1, cerca de 5:1, cerca de 6;1, cerca de 7:1, cerca de 8:1, cerca de 9:1 ou cerca de 10:1.
[000301] Em modalidades específicas, BA é um anticorpo e z é um inteiro selecionado a partir de 1-30, inclusive. Em algumas modalidades, z é um inteiro selecionado a partir de 1 a 4, inclusive. Em algumas modalidades, z é 4. Em algumas modalidades, z é 2.
[000302] Também são providos no presente documento conjugados do agente de ligação de budesonida, um profármaco de budesonida, um análogo ou derivado de budesonida (incluindo análogos ou derivados fluorados), ou um profármaco de um análogo ou derivado de budesonida (incluindo análogos e derivados fluorados).
[000303] Os agentes de ligação adequados para qualquer um dos conjugados providos na presente descrição incluem, porém não se limitam a, anticorpos, linfocinas, hormônios, fatores de crescimento, receptores virais, interleucinas, ou qualquer outra molécula ou substância de ligação a célula ou peptídeo.
[000304] Em algumas modalidades, o agente ligante é um anticorpo. O termo "anticorpo" conforme usado no presente documento, significa qualquer molécula de ligação ao antígeno ou complexo molecular compreendendo “pelo menos uma região determinante de complementariedade (CDR) que especificamente se liga ou interage com um antígeno específico. O termo "anticorpo" inclui moléculas de imunoglobulina compreendendo quatro cadeias polipeptídicas, duas cadeias pesadas (H) e duas cadeias leves (L) interconectadas por ligações dissulfeto, assim como multímeros dos mesmos (por exemplo, IgM). Cada cadeia pesada compreende a região variável de cadeia pesada (abreviada no presente documento como HCVR ou VH) e a região constante de cadeia pesada. A região constante de cadeia pesada compreende três domínios, CH1, CH2 e CH3. Cada cadeia leve compreende a região variável de cadeia leve (abreviada no presente documento como LCVR ou VL) e a região constante de cadeia leve. À região constante de cadeia leve compreende um domínio (CL1). As regiões VH e VL podem ser ainda subdivididas em regiões de hipervariabilidades, — denominadas — regiões — determinantes — de complementariedade (CDRs), interespaçadas com regiões que são mais conservadas, denominadas regiões framework (FR). Cada VH e VL é composta de três CDRs e quatro FRs, dispostas a partir do terminal amino ao terminal carbóxi na ordem que segue: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Em algumas modalidades, as FRs do anticorpo (ou porção de ligação ao antígeno do mesmo) podem ser idênticas às sequências da linhagem germinativa humana, ou podem ser modificadas naturalmente ou artificialmente. Uma sequência de aminoácido consenso pode ser definida com base em uma análise lado- a-lado de duas ou mais CDRs.
[000305] O termo "anticorpo" conforme usado no presente documento, também inclui fragmentos de ligação ao antígeno de moléculas de anticorpo total. Os termos "porção de ligação ao antígeno" de um anticorpo, "fragmento de ligação ao antígeno" de um anticorpo, e similar, conforme usado no presente documento, incluem qualquer polipeptíideo — ou — glicoprotehna que ocorre naturalmente, enzimaticamente obtenível, sintético ou geneticamente engenheirado que especificamente liga um antígeno para formar um complexo. Os fragmentos de ligação ao antígeno de um anticorpo podem ser derivados, por exemplo, a partir de moléculas de anticorpo total usando qualquer técnica padrão adequada tal como digestão proteolítica ou técnicas de engenharia genética recombinantes envolvendo a manipulação e expressão de DNA codificando domínios variáveis e opcionalmente constantes de anticorpo. O referido DNA é conhecido e/ou está prontamente disponível a partir de, por exemplo, fontes comerciais, bibliotecas de DNA (incluindo, por exemplo, bibliotecas de fago-anticorpo), ou pode ser sintetizado. O DNA pode ser sequenciado e manipulado quimicamente ou com o uso de técnicas de biologia molecular, por exemplo, para dispor um ou mais domínios variáveis e/ou constantes em uma configuração adequada ou para introduzir códons, criar resíduos de cisteína, modificar, adicionar ou deletar aminoácidos, etc.
[000306] A sequência de aminoácido de um anticorpo pode ser numerada usando qualquer esquema de numeração conhecido, incluindo aqueles descritos por Kabat et al., ("Kabat" numbering esquema); Al-Lazikani et al., 1997, J. Mol. Biol., 273:927-948 ("Chothia" numbering esquema); MacCallum et al., 1996, J. Mol. Biol. 262:732-745 ("Contact" numbering esquema); Lefranc et al., Dev. Comp. Immunol., 2003, 27:55-77 ("IMGT" numbering esquema); e Honegge and Plúckthun, J. Mol. Biol., 2001, 309:657-70 ("AHo" numbering esquema). A menos que especificado de outra forma, o esquema de numeração usado no presente documento é o esquema de numeração Kabat. O "esquema de numeração EU" é geralmente usado quando se refere a um resíduo em uma região constante de cadeia pesada de anticorpo (por exemplo, conforme reportado em Kabat et al., supra). No entanto, a seleção de um esquema de numeração não pretende implicar diferenças nas sequências onde elas não existem, e um versado na técnica pode prontamente confirmar uma posição da sequência ao examinar a sequência de aminoácido de um ou mais anticorpos.
[000307] Em algumas modalidades, o anticorpo BA é um anticorpo funcionalizado que tem a seguinte estrutura: ep z
[000308] Em algumas modalidades, R é alquileno, alquenileno ou alquinileno. Em algumas modalidades, R é alquileno. Em algumas modalidades, R é C2-4-alquileno. Em certas modalidades, R é etileno. Em certas modalidades, n é 3. Em certas modalidades, z é 2 ou 4.
[000309] Em algumas modalidades, o anticorpo BA não é um anticorpo anti-PSMA ou um anticorpo anti-CD70.
[000310] Os exemplos não limitantes dos fragmentos de ligação ao antígeno de BA incluem: (i) fragmentos Fab; (ii) fragmentos F(ab')2; (iii) fragmentos Fd; (iv) fragmentos Fv; (v) moléculas Fv de cadeia única (scFv); (vi) fragmentos dAb; e (vii) unidades de reconhecimento mínimo consistindo dos resíduos de aminoácido que imitam a região hipervariável de um anticorpo (por exemplo, uma região determinante de complementariedade isolada (CDR) tal como um peptídeo CDR3), ou um peptídeo FR3-CDR3-FR4 restrito. Outras moléculas engenheiradas, tais como anticorpos de domínio específico, anticorpos de domínio único, anticorpos camelídeos (fragmentos VHH), anticorpos de domínio deletado, anticorpos quiméricos, anticorpos enxertados com CDR, diacorpos, triacorpos, tetracorpos, minicorpos, nanocorpos (por exemplo, nanocorpos monovalentes, nanocorpos bivalentes, etc.), imunofarmacêuticos modulares pequenos (SMIPs), e domínios I/NAR variáveis de tubarão, estão também abrangidos dentro da expressão "fragmento de ligação ao antígeno," conforme usado no presente documento.
[000311] Um fragmento de ligação ao antígeno de um anticorpo compreenderá tipicamente de pelo menos um domínio variável. O domínio variável pode ser de qualquer tamanho ou composição de aminoácido e geralmente compreenderá pelo menos uma CDR que é adjacente a ou enquadrada com uma ou mais sequências framework. Nos fragmentos de ligação ao antígeno tendo um domínio VH associado com um domínio VL, os domínios VH e VL podem estar situados em relação ao outro em qualquer disposição adequada. Por exemplo, a região variável pode ser dimérica e conter dímeros VH-VH, VH-VL ou VL-VL. Alternadamente, o fragmento de ligação ao antígeno de um anticorpo pode conter um domínio VH ou VL monomérico.
[000312] Em certas modalidades, um fragmento de ligação ao antígeno de um anticorpo pode conter pelo menos um domínio variável covalentemente ligado a pelo menos um domínio constante. As configurações exemplificadoras, não limitantes dos domínios variáveis e constantes que podem ser encontrados dentro de um fragmento de ligação ao antígeno de um anticorpo da presente descrição incluem: (i) VH-CH1; (ii) VAHA-CH2; (iii) VH-CH3; (iv) VH-CH1-CH2; (v) VH-CH1-CH2- CH3; (vi) VH-CH2-CH3; (vii) VH-CL; (viii) VL-CH1; (ix) VL-CH2; (x) VL-
CH3; (xi) VL-CH1-CH2; (xii) VL-CH1-CH2-CH3; (xiii) VL-CH2-CH3; e (xiv) VL-CL. Em qualquer configuração dos domínios variáveis e constantes, incluindo qualquer uma das configurações exemplificadoras listadas acima, os domínios variáveis e constantes podem estar tanto diretamente ligados um ao outro quanto podem ser ligados por uma região dobradiça ou ligante total ou parcial. Uma região dobradiça pode consistir de pelo menos 2 (por exemplo, 5, 10, 15, 20, 40, 60 ou mais) aminoácidos que resultam em uma ligação flexível ou semiflexível entre domínios variáveis e/ou constantes adjacentes em uma molécula polipeptídica única. Além do mais, um fragmento de ligação ao antígeno de um anticorpo da presente descrição pode compreender um homodímero ou heterodímero (ou outro multímero) de qualquer uma das configurações de domínio variável e constante listadas acima em associação não covalente um com o outro e/ou um ou mais domínio VH ou VL monomérico (por exemplo, através de ligação(ões) dissulfeto).
[000313] Como com moléculas de anticorpo total, os fragmentos de ligação ao antígeno podem ser monoespecíficos ou multipespecíficos (por exemplo, biespecíficos). Um fragmento de ligação ao antígeno multiespecífico de um anticorpo compreenderá tipicamente pelo menos dois domínios variáveis diferentes, em que cada domínio variável é capaz de se ligar especificamente a um antígeno separado ou a um epítopo diferente no mesmo antígeno. Qualquer formato de anticorpo multiespecífico, incluindo os formatos de anticorpo biespecíficos exemplificadores descritos no presente documento, podem ser adaptados para uso no contexto de um fragmento de ligação ao antígeno de um anticorpo da presente descrição usando técnicas de rotina disponíveis na técnica.
[000314] Os anticorpos da presente descrição podem funcionar através de citotoxicidade dependente de complemento (CDC) ou citotoxicidade mediada por célula dependente de anticorpo (ADCC). À
"citotoxicidade dependente de complemento" (CDC) se refere à lise das células que expressam antígeno por um anticorpo da presente descrição na presença de complemento. A "citotoxicidade mediada por célula dependente de anticorpo" (ADCC) se refere a uma reação mediada por célula na qual células citotóxicas não específicas que expressam receptores Fc (FcRs) (por exemplo, células exterminadoras naturais (NK), neutrófilos e macrófagos) reconhecem o anticorpo ligado em uma célula alvo e assim levam à lise da célula alvo. CDC e ADCC podem ser medidas usando ensaios que são bem conhecidos e disponíveis na técnica. (Vide, por exemplo, Patentes Norte-americanas Nos 5,500,362 e 5,821,337, e Clynes et a/. (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 95:652-656). A região constante de um anticorpo é importante na capacidade de um anticorpo para fixar complemento e mediar a citotoxicidade dependente da célula. Assim, o isotipo de um anticorpo pode ser selecionado com base em se é desejável para o anticorpo mediar a citotoxicidade.
[000315] Os anticorpos úteis para os compostos no presente documento incluem anticorpos humanos. O termo "anticorpo humano" conforme usado no presente documento, pretende incluir anticorpos tendo regiões variáveis e constantes derivadas de sequências de imunoglobulina da linhagem germinativa humana. Os anticorpos humanos podem incluir resíduos de aminoácido não codificados por sequências de imunoglobulina da linhagem germinativa humana (por exemplo, mutações introduzidas por mutagênese aleatória ou sítio- específica in vitro ou através da mutação somática in vivo), por exemplo nas CDRs e em particular CDR3. No entanto, o termo "anticorpo humano" conforme usado no presente documento, não pretende incluir anticorpos nos quais as sequências de CDR derivadas da linhagem germinativa de outra espécie de mamífero, tal como um camundongo, foram enxertadas em sequências framework humanas. O termo
"anticorpo humano" não inclui moléculas que ocorrem naturalmente que normalmente existem sem modificação ou intervenção/manipulação humana, em um organismo vivo que ocorre naturalmente, não modificado.
[000316] Os anticorpos podem, em algumas modalidades, ser anticorpos humanos recombinantes. O termo "anticorpo humano recombinante" conforme usado no presente documento, pretende incluir todos os anticorpos humanos que são preparados, expressados, criados ou isolados através de meios recombinantes, tais como anticorpos expressados usando um vetor de expressão recombinante transfectado em uma célula hospedeira (descrita adicionalmente abaixo), anticorpos isolados de uma biblioteca de anticorpos humanos combinatorial, recombinante (descrita adicionalmente abaixo), anticorpos isolados de um animal (por exemplo, um camundongo) que é transgênico para genes de imunoglobulina humana (vide por exemplo, Taylor et al. (1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295) ou anticorpos preparados, expressados, criados ou isolados por qualquer outro meio que envolva emenda das sequências genéticas de imunoglobulina humana em outras sequências de DNA. Os referidos anticorpos humanos recombinantes têm regiões variáveis e constantes derivadas de sequências de imunoglobulina de linhagem germinativa humana. Em certas modalidades, no entanto, os referidos anticorpos humanos recombinantes estão sujeitos a mutagênese in vitro (ou, quando um animal transgênico para sequências de l|g humana é usado, mutagênese somática in vivo) e assim as sequências de aminoácido das regiões VH e VL dos anticorpos recombinantes são sequências que, enquanto derivadas de e relacionadas a sequências VH e VL de linhagem germinativa humana, podem não existir naturalmente dentro do repertório da linhagem germinativa do anticorpo humano in vivo.
[000317] Os anticorpos humanos podem existir em duas formas que são associadas com heterogeneidade de dobradiça. Em uma forma, uma molécula de imunoglobulina compreende um construto de quatro cadeias estáveis de aproximadamente 150-160 kDa no qual os dímeros são mantidos juntos através de uma ligação dissulfeto de cadeia pesada intercadeia. Em uma segunda forma, os dímeros não são ligados através de ligações dissulfeto intercadeia e uma molécula de cerca de 75-80 kDA é formada composta de uma cadeia leve e pesada covalentemente acoplada (meio-anticorpo) Essas formas foram extremamente difíceis para separar, mesmo depois da purificação por afinidade.
[000318] A frequência da aparência da segunda forma em vários isotipos de IgG intactos é devido a, porém sem se limitar a, diferenças estruturais associadas com o isotipo da região dobradiça do anticorpo. Uma única substituição no aminoácido na região dobradiça da dobradiça de I9gG4 humana pode reduzir significativamente a aparência da segunda forma (Angal et a/. (1993) Molecular Immunology 30:105) para níveis tipicamente observados usando uma dobradiça de I19G1 humana. A presente descrição abrange anticorpos tendo uma ou mais mutações na região dobradiça CH2 ou CH3 que pode ser desejável, por exemplo, na produção, para melhorar o rendimento da forma de anticorpo desejada.
[000319] Os anticorpos úteis para os compostos no presente documento podem ser anticorpos isolados. Um "anticorpo isolado" conforme usado no presente documento, significa um anticorpo que foi identificado e separado e/ou recuperado de pelo menos um componente deste ambiente natural. Por exemplo, um anticorpo que foi separado ou removido de pelo menos um componente de um organismo, ou de um tecido ou célula na qual o anticorpo existe naturalmente ou é produzido naturalmente, é um "anticorpo isolado" para finalidades da presente descrição. Um anticorpo isolado também inclui um anticorpo in situ dentro de uma célula recombinante. Os anticorpos isolados são anticorpos que foram submetidos a pelo menos uma etapa de purificação ou isolamento. De acordo com certas modalidades, um anticorpo isolado pode estar substancialmente livre de outro material celular e/ou químicos.
[000320] Os anticorpos úteis para os compostos descritos no presente documento podem compreender uma ou mais substituições, inserções e/ou deleções no aminoácido nas regiões framework e/ou CDR dos domínios variáveis de cadeia pesada e leve conforme comparado com as sequências de linhagem germinativa correspondentes a partir das quais os anticorpos foram derivados. As referidas mutações podem ser prontamente verificadas ao se comparar as sequências de aminoácido divulgadas no presente documento com as sequências de linhagem germinativa disponíveis a partir de, por exemplo, base de dados de sequências de anticorpo. A presente descrição inclui anticorpos, e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos, que são derivados a partir de qualquer uma das sequências de aminoácido divulgadas no presente documento, em que um ou mais aminoácidos dentro de uma ou mais regiões framework e/ou CDR são mutados no(s) resíduo(s) correspondente(s) da sequência de linhagem germinativa a partir da qual o anticorpo foi derivado, ou no(s) resíduo(s) correspondente(s) de uma outra sequência de linhagem germinativa humana, ou para uma substituição de aminoácido conservadora do(s) resíduo(s) de linhagem germinativa correspondentes (as referidas mudanças na sequência são referidas no presente documento coletivamente como "mutações na linhagem germinativa"). Um versado na técnica, iniciando com as sequências da região variável de cadeia pesada e leve divulgadas no presente documento, pode facilmente produzir vários anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno que compreendem uma ou mais mutações da linhagem germinativa individual ou combinações das mesmas. Em certas modalidades, todos os resíduos framework e/ou CDR dentro dos domínios VH e/ou VL são mutados novamente para os resíduos encontrados na sequência de linhagem germinativa original a partir da qual o anticorpo foi derivado. Em outras modalidades, apenas certos resíduos são mutados novamente para a sequência de linhagem germinativa original, por exemplo, apenas os resíduos mutados encontrados dentro dos 8 primeiros aminoácidos de FR1 ou dentro dos 8 últimos aminoácidos de FR4, ou apenas os resíduos mutados encontrados dentro de CDR1, CDR2 ou CDR3. Em outras modalidades, um ou mais dos resíduo(s) framework e/ou CDR são mutados no(s) resíduo(s) correspondente(s) de uma sequência de linhagem germinativa diferente (isto é, uma sequência de linhagem germinativa que é diferente da sequência de linhagem germinativa a partir da qual o anticorpo foi originalmente derivado). Além disso, os anticorpos da presente descrição podem conter qualquer combinação de duas ou mais mutações de linhagem germinativa dentro das regiões framework e/ou CDR, por exemplo, em que certos resíduos individuais são mutados no resíduo correspondente de uma sequência de linhagem germinativa específica enquanto certos outros resíduos que diferem da sequência de linhagem germinativa original são mantidos ou são mutados no resíduo correspondente de uma sequência de linhagem germinativa diferente. Uma vez obtidos, os anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno que contêm uma ou mais mutações na linhagem germinativa podem ser facilmente testados quanto a uma ou mais propriedades desejadas tais como, especificidade de ligação melhorada, afinidade de ligação melhorada, propriedades biológicas antagonísticas ou agonísticas melhoradas ou aumentadas (conforme o caso), imunogenicidade reduzida, etc.
[000321] Em algumas modalidades, o anticorpo é um anticorpo monoclonal, anticorpo policlonal, fragmento de anticorpo (Fab, Fab' e
F(ab)2, minicorpo, diacorpo, tricorpo, e similar) ou anticorpo biespecífico. Os anticorpos no presente documento podem ser humanizados usando métodos descritos na Patente Norte Nº. 6.96.541 e publicação Norte-americana Nº. 2012/0096572, cada uma incorporada a título de referência em sua totalidade.
[000322] Onde o agente ligante é um anticorpo, ele se liga a um parceiro ligante do antígeno que é um polipeptídeo e pode ser uma molécula de transmembrana (por exemplo, receptor) ou um fator de crescimento que deve ser glicosilado ou fosforilado.
[000323] Os alvos adicionais aos quais o agente ligante se liga incluem qualquer alvo/antígeno para o qual a liberação seletiva de um esteroide é desejável. Em algumas modalidades, o agente ligante é um anticorpo, anticorpo modificado, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que liga um alvo selecionado a partir de: AXL, BAFFR, BCMA, componentes da lista BCR, BDCA2, BDCA4, BTLA, BTNL2 BTNL3, BTNL8, BTNL9, C100rf54, CCR1, CCR3, CCRA4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR9, CCR10, CD11c, CD137, CD138, CD14, CD168, CD1I77, CD19, CD20, CD209, CD209L, CD22, CD226, CD248, CD25, CD27, CD274, CD276, CD28, CD30, CD300A, CD33, CD37, CD38, CDA, CDA40, CD44, CD45, CD46, CD47, CD48, CD5, CD52, CD55, CD56, CD59, CD62E, CD68, CD69, CD70, CD74, CD79a, CD79b, CD8, CD80, CD86, CD90.2, CD96, CLEC12A, CLEC12B, CLEC7A, CLEC9A, CR1, CR3, CRTAM, CSFIR, CTLA4, CXCR1/2, CXCRA4, CXCR5, DDR1, DDR2, DEC-205, DLLA, DR6, FAP, FCamR, FOMR, FcR's, Fire, GITR, HER2, HHLA2, HLA classe Il, HVEM, ICOSLG, IFNLR1, ILI1O0R1, IL10R2, ILI2R, ILISRA1, ILISRA?2Z, ILISR, ILI7RA, ILI7RB, ILI7RC, ILI7RE, IL20R1, IL20R2, IL21R, IL22R1, IL22RA, I1L23R, IL27R, I1L29R, IL2Rg, IL31R, IL36R, ILSRA, IL4R, IL6R, ILSR, IL7R, IL9R, Integrinas, LAG3, LIFR, MAG/Siglec4, MMR, MSR1, NCR3LG1, NKG2D, NKp30, NKp46, PDCD1, PRLR, PROKR1, PVR, PVRIG, PVRL2, PVRL3, RELT,
SIGIRR, Siglec—1, Siglec-10, Siglec—5, Siglec—6, Siglec—7, Siglec—-8, Siglec-9, SIRPA, SLAMF7, TACI, componentes da lista TCR/assoc, PTCRA, TCRb, CD3z, CD3, TEK, TGFBR1, TGFBR2, TGFBR3, TIGIT, TLR2, TLRA4, TNF-a, TROY, TSLPR, TYRO, VLDLR, VSIG4 e VTCN1. Em algumas modalidades, o agente ligante é adalimumabe ou infliimabe. Em algumas modalidades, o agente ligante é alemtuzumabe, muromonabe, rituximabe, tosituzumabe ou anticorpos agonísticos (onde a estimulação imune deve fazer parte do mecanismo pretendido de ação).
[000324] O receptor da prolactina de expressão, "PRLR" e similar, conforme usado no presente documento, se refere ao receptor da prolactina humana, compreendendo a sequência de aminoácido como apresentada na SEQ |D Nº404 da Publicação Internacional WO2015026907, que é incorporada a título de referência no presente documento em sua totalidade. O "PRLR" de expressão inclui ambas as moléculas de PRLR monoméricas e multiméricas. Conforme usado no presente documento, o "PRLR humano monomérico" de expressão significa uma proteína de PRLR ou porção da mesma que não contém ou possui quaisquer domínios de multimerização e que existem sob condições normais como uma única molécula de PRLR sem uma conexão física direta a uma outra molécula de PRLR. Uma molécula de PRLR monomérica exemplificadora é a molécula referida no presente documento como "hPRLR.mmbh" compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ I|D Nº401 da Publicação internacional WO2015026907 (vide, por exemplo, Exemplo 3 da Publicação Internacional WO2015026907). Conforme usado no presente documento, a expressão "PRLR humano dimérico" significa um construto compreendendo duas moléculas de PRLR conectadas uma a outra através de um ligante, ligação covalente, ligação não covalente ou através de um domínio de multimerização tal como um domínio Fc de anticorpo. Uma molécula de PRLR dimérica exemplificadora é a molécula referida no presente documento como "hPRLR.mFc" compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID Nº:402 da Publicação Internacional WO2015026907 (vide, por exemplo, Exemplo 3 da Publicação Internacional WO2015026907).
[000325] Os anticorpos anticPRLR exemplificadores são listados na Tabela 1 da Publicação internacional WO2015026907 apresentam os identificadores da sequência de aminoácido — ou uma sequência substancialmente similar da mesma tendo pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade sequencial com esta — das regiões variáveis de cadeia pesada (HCVRs), regiões variáveis de cadeia leve (LCVRs), regiões determinantes de complementariedade de cadeia pesada (HCDR1, HCDR2 e HCDR3), e regiões determinantes de complementariedade de cadeia leve (LCDR1, LCDR?2 e LCDR3) dos anticorpos anti-PRLR exemplificadores. A Tabela 2 da Publicação internacional WO2015026907 apresenta os identificadores da sequência de ácido nucleico — ou uma sequência substancialmente similar da mesma tendo pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade sequencial com esta - das HCVRs, LCVRs, HCDR1, HCDR2 HCDR3, LCDR1, LCDR?2 e LCDR3 dos anticorpos anti-PRLR exemplificadores.
[000326] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, conjugado ligante-carga útil ou carga útil pode ser um anticorpo que direciona o receptor da prolactina humana (PRLR). Os anticorpos anti-PRLR exemplificadores podem ser encontrados, por — exemplo, na Publicação Internacional WO 2015/026907. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-PRLR compreende uma região determinante de complementariedade de cadeia pesada (HCDR)-1 compreendendo SEQ ID Nº: 17; uma HCDR2 compreendendo SEQ ID Nº: 19; uma HCDR3 compreendendo SEQ ID
Nº: 20; uma região determinante de complementariedade de cadeia leve (LCDR)-1 compreendendo SEQ ID Nº: 22; uma LCDR2 compreendendo SEQ ID Nº: 23; e uma LCDR3 compreendendo SEQ ID Nº: 24. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-PRLR compreende a região variável de cadeia pesada (HCVR) compreendendo SEQ ID Nº: 17 e a região variável de cadeia leve (LCVR) compreendendo SEQ ID Nº: 21. Em qualquer uma das modalidades anteriores, o anticorpo anti-PRLR pode ser preparado pela mutagênes sítio-específica para inserir um resíduo de glutamina em um sítio sem resultar na função ou ligação do anticorpo prejudicada.
Por exemplo, em qualquer uma das modalidades anteriores, o anticorpo anti-PRLR pode compreender uma mutação Asn297GInh (N297Q). Os referidos anticorpos tendo uma mutação N297Q também podem conter um ou mais resíduos de glutamina de ocorrência natural adicionais em suas regiões variáveis, que podem ser acessíveis à transglutaminase e deste modo capazes de conjugação a uma carga útil ou um ligante-carga útil (Tabela B).
Tabela B. Sequências do anticorpo exemplificador H1H6958N (anti- PRLR) Molécula /|Região |Sequência Anticorpo 7 H1iH6958N — |HCVR —|QVALVESGGGVVQPGRSLRLSCGASGFTFRNYG
MQWVRQGPGKGLEWVTLISFDGNDKYYADSVKG RFTISRDNSKNTLFLOMNSLRTEDTAVYYCARGGD
FDYWGQGTLVTVSS H1iH6958N — |HCDR1I |GFTFRNYG H1H6958N — |HCDR2 |ISFDGNDK |2o — JH1HSoseN HCDR3 |ARGGDFDY 21 H1iH6958N —[LCVR —|DIQMTASPSSLSASVGDRVTITCERASQDIRKDLGW
YQQKPGKAPKRLIYAASSLHSGVPSRFSGSGSGT EFTLTISSLOPEDFATYYCLQHNSYPMYTFGQGTK
LEIK H1H6958N — |LCDR1 |QDIRKD H1H6958N — |[LCDR3 |LQHNSYPMYT hPRLR ecto- MHRPRRRGTRPPPLALLAALLLAARGADAQLPPG
MMH KPEIFKCRSPNKETFTCWWRPGTDGGLPTNYSLT YHREGETLMHECPDYITGGPNSCHFGKQYTSMW RTYIMMVNATNQMGSSFSDELYVDVTYIVQPDPPL ELAVEVKQPEDRKPYLWIKWSPPTLIDLKTGWFTL LYEIRLKPEKAAEWEIHFAGQQTEFKILSLHPGQKY LVQVRCKPDHGYWSAWSPATFIQIPSDFTMNDEQ KLISEEDLGGEQKLISEEDLHHHHHH
[000327] Em qualquer uma das modalidades de composto ou conjugado providas, BA é um anticorpo, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, que liga PRLR. Em qualquer uma das modalidades de composto ou conjugado providas, BA é um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, e a conjugação é através de pelo menos um resíduo Q295. Em qualquer uma das modalidades de composto ou conjugado providas, BA é um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, e a conjugação é através de dois resíduos Q295. Em qualquer uma das modalidades de composto ou conjugado providas, BA é um anticorpo N297Q ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Em qualquer uma das modalidades de composto ou conjugado providas, BA é um anticorpo N297Q ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, e a conjugação é através de pelo menos um resíduo Q295 e pelo menos um resíduo Q297. Em qualquer uma das modalidades de composto ou conjugado providas, BA é um anticorpo N297Q ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, e a conjugação é através de dois resíduos Q295 e dois resíduos 0297. Em modalidades específicas, a numeração está de acordo com o sistema de numeração EU.
[000328] Em qualquer uma das modalidades acima, BA é um anticorpo anti-MSR1. Em certas modalidades, BA é o anticorpo anti- MSR1H1H21234N. Em certas modalidades, BA é o anticorpo anti- MSR1H1H21234N N297Q. Em certas modalidades, BA é um anticorpo anti-MSR1compreendendo uma HCVR de acordo com a SEQ ID Nº:2 e uma LCVR de acordo com a SEQ ID Nº:10. Em certas modalidades, BA é um anticorpo anti-MSR1 compreendendo uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 e LCDR3 de acordo com as SEQ ID Nº:4, 6, 8, 12, 14 e 16, respectivamente. Em certas modalidades, a HCVR é codificada pela SEQ ID Nº:1. Em certas modalidades, a LCVR é codificada pela SEQ ID Nº: 9. Em certas modalidades, uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 e LCDR3 são codificadas pelas sequências polinucleotídicas SEQ ID Nº: 3, 5, 7, 11, 13 e 15, respectivamente. N297Q indica que um ou mais resíduos 297 são mutados da asparagina (N) à glutamina (Q). Preferivelmente, cada resíduo 297 é mutado no Q. Em modalidades preferidas, a numeração está de acordo com o sistema de numeração EU. Em certas modalidades deste parágrafo, z é de 1 a 4. Em certas modalidades, z é 1,2, 3 ou 4. Em certas modalidades, z é 2. Em certas modalidades, z é
4.
Molécula /|Região | Sequência Anticorpo 1 caggtgcagc tagcaggagte gggccecagga ctggtgaage ctteggagac cctgteecte acctgcacta tcactagtgg ctccatcagt aggaactact ggagttagat ccggcagece ccagggaagg gactggaatg gattggatat atctattaca gtgggagtat cgactacaat ccctecetea agagtegagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctecetg aagctgagtt ctatgaccgc tgcggacacg gccgtatact actgtgcgag agatcggtgg aactggaaat acggtataga cgtctaggge caagggacca cggtcategt ctegtea 2 Gln Val GIh Leu Glh Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Gly Ser Ile Ser Arg Asn Tyr Trp Ser Trp lle Arg GIn Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Ile Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Met Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Arg Trp Asn Trp Lys Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly GIn Gly Thr Thr Val Ile Val Ser Ser BB ggtggcteca tragtaggaa ctac Pq gegagagatc ggtggaactg gaaatacggt atggacgte Br | Ala Arg Asp Arg Trp Asn Trp Lys Tyr Gly Met Asp
Molécula /|Região | Sequência Anticorpo Rj gaaattgtat tgacgcagtc tccaggcace ctgatetttgt ctccagggga aagagcecace ctetectgca gggecagtea gactgattaga aacaactact tagcctggta ccaccagaaa cctggecagg cteccaggcet ceteatetat ggtgcatcca gcagggccac tagcatceca gacagattca gtagcagtag gtctgggaca gacticactc tcaccatcag cagactggag cctgaagatt ttacagtgta ttactgtocac cagtatggta actcaccttg gacgattcggec caagggacca aaatggaaat caaacga Glu Ile Val Leu Thr GIh Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glh Thr Val Arg Asn Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr His GIn Lys Pro Gly Glnh Ala Pro Arg Leu Leu lle Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly lle Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Thr Val Tyr Tyr Cys His GIn Tyr Gly Asn Ser Pro Trp Thr Phe Gly GIn Gly Thr Lys Met Glu Ile Lys Arg Mo q cagactgtta gaaacaacta c E caccagtatg gtaactcacc ttggacg e do His GIh Tyr Gly Asn Ser Pro Trp Thr
[000329] O agente de ligação, por exemplo, anticorpo ou molécula de ligação ao antígeno, pode compreender um ligante ligado ao agente ligante através de uma ligação a um aminoácido específico dentro do anticorpo ou molécula de ligação ao antígeno. As ligações do aminoácido exemplificadoras que podem ser usadas no contexto deste aspecto da descrição incluem, por exemplo, lisina (vide, por exemplo, US 5,208,020; US 2010/0129314; Hollander et al., Bioconjugate Chem., 2008, 19:358—361; WO 2005/089808; US 5.714.586; US 2013/0101546; e US 2012/0585592), cisteína (vide, por exemplo, US 2007/0258987; WO 2013/055993; WO 2013/055990; WO 2013/0538/73; WO 2013/053872; WO 2011/130598; US 2013/0101546; e US 7.750.116), selenocisteína (vide, por exemplo, WO 2008/122039; e Hofer et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 2008, 105:12451—12456), formil glicina (vide, por exemplo, Carrico et al., Nat. Chem. Biol., 2007, 3:321—322; Agarwal et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 2013, 110:46-51, e Rabuka et al., Nat. Protocols, 2012, 10:1052—1067), aminoácidos não naturais (vide, por exemplo, WO 2013/0688/4 e WO 2012/166559), e aminoácidos acídicos (vide, por exemplo, WO 2012/05982). Os ligantes podem ser conjugados através de glutamina via conjugação quimio- enzimática baseada em transglutaminase (vide, por exemplo, Dennler et al., Bioconjugate Chem. 2014, 25, 569—578). Os ligantes também podem ser conjugados a uma proteína de ligação ao antígeno através da ligação aos carboidratos (vide, por exemplo, US 2008/0305497, WO 2014/065661, e Ryan et al., Food & Agriculture Immunol., 2001, 13:127—130) e ligantes dissulfeto (vide, por exemplo, WO 2013/085925, WO 2010/010324, WO 2011/018611, WO 2014/197854, e Shaunak et al., Nat. Chem. Biol., 2006, 2:312-313). Em algumas modalidades, o agente ligante é um anticorpo, e o anticorpo é ligado ao ligante através de um resíduo de lisina. Em algumas modalidades, o anticorpo é ligado ao ligante através de um resíduo de cisteína.
[000330] Em qualquer uma das modalidades acima, BA é um anticorpo anti-PRLR. Em certas modalidades, BA é o anticorpo anti- PRLRH1H6958N. Em certas modalidades, BA é o anticorpo anti-
PRLRH1H6958N N297Q. Em certas modalidades, BA é um anticorpo anti-PRLR compreendendo uma HCVR de acordo com a SEQ ID Nº:17 e uma LCVR de acordo com a SEQ ID Nº:21. Em certas modalidades, BA é um anticorpo anti-PRLR compreendendo uma, duas, três, quatro, cinco ou seis de HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 e LCDR3 de acordo com as SEQ ID Nº*:18, 19, 20, 22, 23 e 24, respectivamente. N297Q indica que um ou mais resíduos 297 são mutados de asparagina (N) à glutamina (Q). Preferivelmente, cada resíduo 297 é mutado em Q. Em modalidades preferidas, a numeração está de acordo com o sistema de numeração EU. Em certas modalidades deste parágrafo, ké de 1a
4. Em certas modalidades, k é 1, 2, 3 ou 4. Em certas modalidades, k é
4.
D. MÉTODOS DE PREPARAÇÃO DE COMPOSTOS
[000331] Os conjugados descritos no presente documento podem ser sintetizados ao se acoplar as cargas úteis ligantes descritos no presente documento com um agente de ligação, por exemplo, anticorpo sob condições de conjugação padrão (vide, por exemplo, Drug Deliv. 2016 Jun;23(5):1662-6; AAPS Journal, Vol. 17, Nº. 2, March 2015; e Int. J. Mol. Sci. 2016, 17, 561, cujas entidades são incorporadas no presente documento a título de referência) Cargas úteis ligantes são intermediários sintéticos compreendendo a carga útil de interesse e porção de ligação que por fim serve como a porção (ou porção da mesma) que conecta o agente ligante com a carga útil. As cargas úteis ligantes compreendem um grupo reativo que reage com o agente ligante para formar os conjugados descritos no presente documento. Quando o agente ligante é um anticorpo, o anticorpo pode ser acoplado a uma carga útil ligante através de um ou mais resíduos de cisteína, lisina ou outro resíduo do anticorpo. As cargas úteis ligantes podem ser acopladas aos resíduos de cisteína, por exemplo, ao submeter o anticorpo a um agente de redução, por exemplo, ditioteritol, para clivar as ligações dissulfeto do anticorpo, opcionalmente purificando o anticorpo reduzido, por exemplo, através da filttação em gel, e subsequentemente reagindo o anticorpo com a carga útil ligante contendo uma porção reativa, por exemplo, um grupo maleimido. Os solventes adequados incluem, porém não se limitam a água, DMA, DMF e DMSO. As cargas úteis ligantes contendo um grupo reativo, por exemplo, grupo de éster ativado ou haleto ácido, podem ser acopladas aos resíduos de lisina. Os solventes adequados incluem, porém não se limitam a água, DMA, DMF e DMSO. Os conjugados podem ser purificados usando técnicas de proteína conhecidas, incluindo, por exemplo, cromatografia por exclusão de tamanho, diálise e ultrafiltração/diafiltração.
INTERMEDIÁRIOS DE ESTEROIDE LIGANTE
[000332] São providos no presente documento esteroides ligantes de acordo com a Fórmula (2000), RG-L2-(L3)0-1-SP-D
[000333] ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, estereoisômero ou derivado do mesmo,
[000334] que são úteis na preparação de conjugados de anticorpo- fármaco,
[000335] em que
[000336] Dé selecionado a partir de ol HD R<, QDO o o o or fórmula (a),
[000337] onde ambos Rx na fórmula (a) são hidrogênio; R4 é alquila, arila, arilalquila, ou uma heterocicloalquila contendo N; e SP é -C(O)- C1-C10-alquileno-C(O)-, -C(O)-N(C1-6alquil)-C1-C10-alquileno-X1- onde X1 é ligado ao (L3)0-1 na fórmula (2000), -C(O)-N(H)-(C1-C10-
alquileno)-S- onde S é ligado ao (L3)0-1 na fórmula (2000), -C(O)-N(C1- 6alquil)-(C1-C10-alquileno)-S- onde S é ligado ao (L3)0-1 na fórmula o
PN (2000), Ny onde o ponto de ligação na lateral direita (isto é em N) é ao (L3)0-1 na fórmula (2000), -CH2-NH- onde N é ligado ao (L3)O0- Ad 1 na fórmula (2000), O onde o N é ligado ao (L3)O0-1 na fórmula (2000) e onde Ar é arileno opcionalmente substituído (em
O algumas modalidades, *) ou heteroarileno opcionalmente substituído, -(C1-C10-alquileno)-NR50C(O)-(C1-C10-alquileno)- NR50a- onde NR50A é ligado ao (L3)0-1 na fórmula (2000), -C(O)-(C1- C10-alquileno)-NR50C(O)-(C1-C10-alquileno)-NR50a- onde NR50A é ligado ao (L3)0-1 na fórmula (2000) e onde cada C1-C10-alquileno é independentemente opcionalmente substituído com um ou mais hidróxi, -C(O)-N(R5)-C1-C10-alquileno-C(O)NH-X2- onde X2 é ligado ao (L3)O- Re Rº El s ixtoxs ONA 4 1 na fórmula (2000), ou onde X4 é ligado ao (L3)O- 1 na fórmula (2000); ou
[000338] onde ambos Rx na fórmula (a) são flúorflúor; R4 é alquila, arila, arilalquila, ou uma heterocicloalquila contendo N; e SP é -C(O)- C1-C10-alquileno-C(O)-, — -C(O)-N(C1-6alquil)-C 1-C10-alquileno-X1b- onde X1B é ligado ao (L3)0-1 na fórmula (2000), -C(O)-N(H)-(C1-C10- alquileno)-X1b- onde X1B é ligado ao (L3)0-1 na fórmula (2000), o
TN Ny onde o ponto de ligação na lateral direita (isto é, em N) é ao (L3)0-1 na fórmula (2000), -CH2-NH- onde N é ligado ao (L3)0-1 na Ad fórmula (2000), O onde o N é ligado ao (L3)0-1 na fórmula (2000) e onde Ar é arileno opcionalmente substituído (em algumas
DD modalidades, F ) ou heteroarileno opcionalmente substituído, -(C1-C10-alquileno)- NR50C(O)-(C1-C10-alquileno)-NR50a- onde NR50A é ligado ao (L3)0-1 na fórmula (2000), -C(O)-(C1-C10- alquileno)-NR50C(O)-(C1-C10-alquileno)-NR50a- onde NR50A é ligado ao (L3)0-1 na fórmula (2000) e onde cada C1-C10-alquileno é independentemente opcionalmente substituído com um ou mais hidróxi, -C(O)-N(R5)-(C1-C10-alquileno)-C(O)NH-X2- onde X2 é ligado ao Re RE R) m . eo 1 (L3)O0-1 na fórmula (2000), ou onde X4 é ligado ao (L3)0-13 na fórmula (2000); e
[000339] b) os compostos na tabela A acima, onde os compostos na tabela A são ligados ao RG do composto de fórmula (2000) através do hidróxi do grupo -C(O)CH20OH, isto é através de -C(O0)CH2-0-SP- (L3)0-1-, ou através do hidróxi de Mapracorat, isto é, através de -O-SP- (L3)O-1-:
[000340] X1 é -N(C1-6alquil)-;
[000341] X1b é -S-, -NH-, ou -N(C1-6alquil)-;
[000342] X2 é -NH-;
[000343] X3 é -CH2-, X3 é -CH2-0-(C1-C10-alquileno)-C(O)- onde o C(O) é ligado ao X4, ou X3 é
[000344] -C(O)-;
[000345] X4é-O-;
[000346] R5 é H, -OH,-OCH3, ou C1-6alquila;
[000347] R50 e R50a are independentemente hidrogênio ou C1-C6- alquila;
[000348] Rad, Re e Rfare independentemente -H, -OH, hidroxialquila, alcoxicarbonila, -C(O0OJOH ou -CH2ORg, onde cada Rg é independentemente -CH2C(O0)OH ou -CH2C(O0)O(alquil); e
[000349] mébou!;
[000350] RG é um grupo reativo;
[000351] LZ2 é ligante de conexão; e
[000352] L3, quando presente, é um ligante autoimolativo.
[000353] São providos no presente documento esteroides ligantes de acordo com a Fórmula (II), o Hà FR
MAO Ref) spo O OH (11) o-1 que são úteis na preparação de conjugados de anticorpo- fármaco; em que RG, L2, L3, SP, R4 e Rx são como definidos no presente documento.
[000354] Em algumas ou quaisquer modalidades, o composto de fórmula (II-P) é apresentado abaixo: ain CH; 1 CH; RE-L2- (9) —sP —o oO OH (11-P); ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, estereoisômero ou derivado do mesmo,
[000355] em que:
[000356] R4 é alquila, arila, arilalquila, ou uma heterocicloalquila contendo N;
[000357] SP é -C(O0)-C1-C10-alquileno-C(O)-, -C(O)-N(C1-3alquil)- C1-C10-alquileno-X1- onde X1 é ligado ao L3 na fórmula (II), -C(O)- N(R5)-C1-C10-alquileno-C(O)NH-X2- onde X2 é ligado ao L3 na fórmula (11), Re
NM xx ON 1 .
ou onde X4 é ligado ao L3 na fórmula (1);
[000358] X1 é -N(C1-3alquil)-;
[000359] X2 é -NH-
[000360] X3 é -CH2-, X3 é -CH2-0-(C1-C10-alquileno)-C(O)- onde o C(O) é ligado ao X4, ou X3 é
[000361] -C(O)-;
[000362] X4é-O-;
[000363] R5 é H,-OH,-OCH3, ou alquila;
[000364] Rd, Re e Rfsão independentemente -H, -OH, hidroxialquila, alcoxicarbonila, -C(O)JOH, ou -CH2O0Rg, onde cada Rg é independentemente -CH2C(0)OH ou -CH2C(O0)O(alquil); e
[000365] mébOou!;
[000366] RG é um grupo reativo;
[000367] LZ2 é ligante de conexão; e
[000368] L3, quando presente, é um ligante autoimolativo.
[000369] Em algumas ou quaisquer modalidades, o composto de fórmula (II-P-1) é apresentado abaixo: o (DP & RÁ, QDO o o o Ret) — sp OH (11-P-1);
ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, estereoisômero ou derivado do mesmo,
[000370] em que:
[000371] R4 é alquila, arila, arilalquila, ou uma heterocicloalquila contendo N;
[000372] SP é -C(0)-C1-C10-alquileno-C(O)-, -C(O)-N(C1-3alquil)- C1-C10-alquileno-X1- onde X1 é ligado ao L3 na fórmula (II), -C(O)- N(R5)-C1-C10-alquileno-C(O)NH-X2- onde X2 é ligado ao L3 na fórmula (11), Re Rº ALR Lua ou EXPARTOS É onde X4 é ligado ao L3 na fórmula (11);
[000373] X1é-N(C1-3alquil)-;
[000374] X2é-NH-
[000375] X3 é -CH2-, X3 é -CH2-0-(C1-C10-alquileno)-C(O)- onde o C(O) é ligado ao X4, ou X3 é
[000376] -C(O)-;
[000377] X4é-O-;
[000378] R5éH, -OH,-OCH3, ou alquila;
[000379] Rd, Re e Rfsão independentemente -H, -OH, hidroxialquila, alcoxicarbonila, -C(O)JOH, ou -CH2O0Rg, onde cada Rg é independentemente -CH2C(0)OH ou -CH2C(O0)O(alquil); e
[000380] mébou;
[000381] RG é um grupo reativo;
[000382] L?2 é ligante de conexão; e
[000383] L3,quando presente, é um ligante autoimolativo.
[000384] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Il)) onde ambos Rx são hidrogênio. Em algumas ou quaisquer modalidades, ambos Rx são flúor.
[000385] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), (II-P) e (Il-P-1), onde R4 é alquila.
Em algumas modalidades, R4 não é cicloalquila.
Em algumas dessas modalidades, R4 é alquila linear ou ramificada.
Em algumas dessas modalidades, R4 é arila.
Em algumas dessas modalidades, R4 é arilalquila.
Em algumas dessas modalidades, R4 é heterocicloalquila contendo N.
Em algumas modalidades, R4 é alquila tal como, porém sem se limitar a, metila, etila, propila, butila, pentila, hexila, heptila, octila ou nonila.
Em algumas modalidades, R4 é metila.
Em algumas modalidades, R4 é etila.
Em algumas modalidades, R4 é n-—propila.
Em algumas modalidades, R4 é i-propila.
Em algumas modalidades, R4 é n-—butila.
Em algumas modalidades, R4 é i-butila.
Em algumas modalidades, R4 é t-butila.
Em algumas modalidades, R4 é sec-butila.
Em algumas modalidades, R4 é pentila.
Em algumas modalidades, R4 é hexila.
Em algumas modalidades, R4 é heptila.
Em algumas modalidades, R4 é octila ou nonila.
Em algumas modalidades, R4 é arila tal como, porém, não limitado a fenila, fenol ou naftila.
Em algumas modalidades, R4 é fenila.
Em algumas modalidades, R4 é naftla: Em algumas modalidades, R4 é heteroarila — tal como, porém, não limitado a tienila.
Em algumas modalidades, R4 é arilalquila — tal como, porém, não limitado a benzila.
Em algumas modalidades, R4 é heterocicloalquila contendo N tal como, porém, não limitado a piperidinila.
Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), onde ambos Rx são hidrogênio.
Em algumas ou quaisquer modalidades, ambos Rx são flúor.
Em algumas modalidades, R4 está na configuração R.
Em algumas modalidades, R4 está na configuração S.
Em algumas modalidades, R4 é uma mistura das configurações R e S.
Em algumas modalidades, R4 é uma mistura das configurações R e S, em que a mistura R:S é de cerca de 1:1, cerca de 2:1, cerca de 3;1, cerca de 4:1, cerca de 5:1, cerca de 6;1, cerca de 7:1, cerca de 8:1, cerca de 9:1 ou cerca de 10:1.
[000386] Em algumas modalidades, é provido um composto de fórmula (11) onde
[000387] ambos Rx são hidrogênio; e SP é -C(O)-C1-C10-alquileno- C(O)-, -C(O)-N(C1-6alquil)-C 1-C10-alquileno-X1- onde X1 é ligado ao L na fórmula (II), -C(O)-N(H)-(C1-C10-alquileno)-S- onde S é ligado ao L na fórmula (II), -C(O)-N(C1-6alquil)-(C1-C10-alquileno)-S- onde S é ligado ao L na fórmula (II), -(C1-C10-alquileno)- NR50C(O)-(C1-C10- alquileno)-NR50a- onde NR50A é ligado ao L na fórmula (II), -C(O)-(C1- C10-alquileno)-NR50C(O)-(C1-C10-alquileno)-NR50a- onde NR50A é ligado ao L na fórmula (Il) e onde cada C1-C1i0-alquileno é independentemente opcionalmente substituído com um ou mais hidróxi, -C(O)-N(R5)-C1-C10-alquileno-C(O)NH-X2- onde X2 é ligado ao L na fórmula (II), Re Rº E» xao ONA x s ou onde X4 é ligado ao L na fórmula (II); ou
[000388] ambos Rx são flúor; e SP é -C(O)-N(C1-6alquil)-C1-C10- alquileno-X1b- onde X1B é ligado ao L na fórmula (II), -C(O)-N(H)-(C1- C10-alquileno)-X1b- onde X1B é ligado ao L na fórmula (Il), o
NO No onde o ponto de ligação na lateral direita (isto é, em N) é ao L na fórmula (Il), -(C1-C10-alquileno)-NR50C(O)-(C1-C10- alquileno)-NR50a- onde NR50A é ligado ao L na fórmula (II), -C(O0)-(C1- C10-alquileno)-NR50C(O)-(C1-C10-alquileno)-NR50a- onde NR50A é ligado ao L na fórmula (Ill) e onde cada C1-Ci0-alquileno é independentemente opcionalmente substituído com um ou mais hidróxi, ou -C(O)-N(R5)-(C1-C10-alquileno)-C(O)NH-X2- onde X2 é ligado ao L na fórmula (II).
[000389] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), (II-P) ou (II-P-1), onde ambos Rx são hidrogênio e SP é -C(O)-C1-C10-alquileno-C(O)-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), (II-P) ou (II-P-1), onde SP é -C(O)-C2-C5-alquileno-C(O)-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), (II-P) ou (IIl-P-1), onde SP é -C(0)-CH2CH2- C(O)-.
[000390] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), (II-P) ou (IIl-P-1), onde ambos Rx são flúor e SP é -C(O0)-C1-C10-alquileno-C(O)-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), (II-P) ou (II-P-1), onde SP é -C(O)-C2-C5-alquileno-C(O)-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), (I|-P) ou (II-P-1), onde SP é -C(0)-CH2CH2- C(O)-.
[000391] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), (II-P) ou (II|-P-1), onde ambos Rx são hidrogênio e SP é -C(O)-N(C1-6alquil)-C1-C10-alquileno-X1- onde X1 é ligado ao L3 na fórmula (II), (II-P) ou (Il-P-1). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), (II-P) ou (II-P-1), onde SP é -C(O)-N(C1-3alquil)-C1-C10- alquileno-X1- onde X1 é ligado ao L3 na fórmula (II), (II-P) ou (I|--P-1). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), (II-P) ou (Il-P-1), onde X1 é -N(C1-3alquil)-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), (II-P) ou (Il-P-1), onde SP é -C(O)-N(C1-3alquil)- C2-C5-alquileno-X1-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), (II-P) ou (II-P-1), onde SP é -C(O)-N(C1-3alquil)-CH2CH2-X1-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), (II-P)
ou (Il-P-1), onde SP é -C(O)-N(CH3)-C2-C5-alquileno-N(CH3)-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), (I-P) ou (I-P-I) onde SP é -C(O)-N(CH3)-CH2CH2-N(CH3)-.
[000392] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Il), onde ambos Rx são flúor e SP é -C(O)-N(C1-6alquil)-C1-C10-alquileno-X1b- onde X1B é ligado ao L3 na fórmula (Il) ou -C(O)-N(H)-(C1-C10-alquileno)-X1b- onde X1B é ligado ao L3 na fórmula (II) na fórmula (II). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), onde SP é -C(O)-N(H)-C1-C10-alquileno-X1b- onde X1B é ligado ao L3 na fórmula (II). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), onde SP é -C(O)-N(H)-C1-C6- alquileno-X1b- onde X1B é ligado ao L3 na fórmula (II). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), onde SP é -C(O)-N(H)-C1-C3-alquileno-X1b- onde X1B é ligado ao L3 na fórmula (II). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), onde SP é -C(O)- N(H)-CH2CH2-X1b-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), onde SP é -C(O)- N(H)-C2-C5-alquileno-N(CH3)-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), onde SP é -C(O)-N(H)-C2-C5-alguileno-N(CH2CH3)-.. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), onde SP é -C(O)-N(H)-CH2CH2-N(CH3)-.
[000393] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), onde ambos Rx são flúor e SP é -C(O)-N(C1-6alquil)-C1-C10-alquileno-X1b- onde X1B é ligado ao L3 na fórmula (Il). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Il), onde SP é -C(O)-N(C1-
3alquil)-C1-C6-alquileno-X1b- onde X1B é ligado ao L3 na fórmula (II). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Il), onde SP é -C(O)-N(C1-3alquil)-C1-C3- alquileno-X1b- onde X1B é ligado ao L3 na fórmula (11). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), onde X1B é -N(C1-3alquil)-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), onde SP é -C(O)-N(C1-3alquil)-C2-C5-alquileno-X1b-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), onde SP é -C(O)-N(C1-3alquil)-CH2CH2-X1b-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Il), onde SP é -C(O)-N(CH3)-C2-C5-alquileno-N(CH3)-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (ll)) onde SP é -C(O)-N(CH2CH3)-C2-C5- alquileno-N(CH2CH3)-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), onde SP é -C(O)- N(CH3)-CH2CH2-N(CH3)-.
[000394] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), onde ambos Rx são flúor e SP o
NO é Ny onde o ponto de ligação na lateral direita (isto é, em N) é ao L na fórmula (II).
[000395] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), onde ambos Rx são hidrogênio e SP é -C(O)-N(H)-(C1-C10-alquileno)-S- onde S é ligado ao L3 na fórmula (II) na fórmula (II), ou -C(O)-N(C1-6alquil)-(C1-C10-alquileno)- S- onde S é ligado ao L3 na fórmula (II). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), onde SP é -C(O)-N(H)-(C1-C6-alquileno)-S- onde S é ligado ao L3 na fórmula
(II), ou -C(O)-N(C1-3alquil)-(C1-C6-alquileno)-S- onde S é ligado ao L3 na fórmula (II). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), onde SP é -C(O)-N(H)-(C1- C10-alquileno)-S- onde S é ligado ao L3 na fórmula (Il). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), onde SP é -C(O)-N(H)-(C1-C6-alquileno)-S- onde S é ligado ao L3 na fórmula (II). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), onde SP é -C(O)- N(C1-6alquil)-(C1-C10-alquileno)-S- onde S é ligado ao L3 na fórmula (Il). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), onde SP é -C(O)-N(C1-3alquil)-(C1-C6- alquileno)-S- onde S é ligado ao L3 na fórmula (II).
[000396] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), onde ambos Rx são flúor e SP é -C(O)-N(H)-(C1-C10-alquileno)-S- onde S é ligado ao L3 na fórmula (II), ou -C(O)-N(C1-6alquil)-(C1-C10-alquileno)-S- onde S é ligado ao L3 na fórmula (Il) na fórmula (Il). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), onde SP é -C(O)-N(H)-(C1-C6-alquileno)-S- onde S é ligado ao L3 na fórmula (II), ou -C(O)-N(C1-3alquil)-(C1-C6-alquileno)-S- onde S é ligado ao L3 na fórmula (II). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), onde SP é -C(O)-N(H)-(C1-C10- alquileno)-S- onde S é ligado ao L3 na fórmula (Il). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), onde SP é -C(O)-N(H)-(C1-C6-alquileno)-S- onde S é ligado ao L3 na fórmula (II). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), onde SP é -C(O)- N(C1-6alquil)-(C1-C10-alquileno)-S- onde S é ligado ao L3 na fórmula (Il). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), onde SP é -C(O)-N(C1-3alquil)-(C1-C6- alquileno)-S- onde S é ligado ao L3 na fórmula (II).
[000397] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), onde ambos Rx são hidrogênio e SP é HC1-Ci0-alquileno)-NR50C(O)-(C1-C10-alquileno)-NR50a- onde NR50A é ligado ao L3 na fórmula (II). Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), SP é -(C1-C6-alquileno)-NR50C(O)-(C1- C6-alquileno)-NR50a-. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), SP é —H(C1-C3-alquileno)-NR50C(O)-(C1-C3-alquileno)- NR50a-. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (II), SP é —(C1-C3-alquileno linear)-NR50C(O)-(C1-C3-alquileno linear)-NR50a-.
[000398] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), onde ambos Rx são flúor e SP é —(C1-C10-alquileno)-NR50C(O)-(C1-C10-alquileno)-NR50a- onde NR50A é ligado ao L3 na fórmula (Il). Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (1), SP é —-(C1-C6-alquileno)-NR50C(O)-(C1- C6-alquileno)-NR50a-. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (11), SP é H(C1-C3-alquileno)-NR50C(O)-(C1-C3-alquileno)- NR50a-. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (II), SP é —(linear C1-C3-alquileno)-NR50C(O)-(linear C1-C3-alquileno)-NR50a-.
[000399] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), onde ambos Rx são hidrogênio e SP é -C(O)(C1I-C10-alguileno)-NR50C(O)-(C1-C10-alquileno)- NR50a- onde NR50a- é ligado ao L3 na fórmula (Il) e onde cada C1- C10-alquileno é independentemente opcionalmente substituído com um ou mais hidróxi. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (II), SP é +HC1I-C6-alguileno ramificado)-NR50C(O)-(C1-C6-Hidróxi- alquileno)-NR50a-. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (Il), SP é -(C1-C6-alquileno ramificado)-NR50C(O)-(C1-C6-alquileno)- NR50a-.
[000400] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (Il), onde ambos Rx são flúor e SP é — —C(O0)(C1-C10-alquileno)-NR50C(O)-(C1-C10-alquileno)-NR50a- onde NR50a- é ligado ao L3 na fórmula (Il) e onde cada C1-C10- alquileno é independentemente opcionalmente substituído com um ou mais hidróxi. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (11), SP é —(C1-C6-alquileno ramificado)-NR50C(O)-(C1-C6-Hidróxi-alquileno)- NR50a-. Em algumas ou quaisquer modalidades da fórmula (II), SP é —(C1-C6-alquileno ramificado)-NR50C(O)-(C1-C6-alquileno)-NR50a-.
[000401] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), (II-P) ou (II|-P-1), onde ambos Rx são hidrogênio e SP é -C(O)-N(R5)-C1-C10-alquileno-C(O)NH-X2- onde X2 é ligado ao L3 na fórmula (II), (Il-P) ou (Il-P-1). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), (II-P) ou (IIl-P-1), onde SP é -C(O)-N(R5)-C1-C5-alquileno- C(O)NH-NH-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), (II-P) ou (Il-P-1), onde SP é —C(O)-N(R5)-CH2-C(O)NH-NH-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), (II-P) ou (II-P-1), onde R5 é H ou alqguila. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), (II-P) ou (II-P-1), onde R5 é H ou CH3.
[000402] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), (II-P) ou (II|-P-1), onde ambos Rx são flúor e SP é -C(O)-N(R5)-C1-C10-alquileno-C(O)NH-X2- onde X2 é ligado ao L3 na fórmula (Il). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), (II-P) ou (II-P-1), onde SP é -C(O)-N(R5)-C1-C5-alquileno-C(O)NH-NH-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), (II-P) ou (II|-P-1), onde SP é -C(O)-N(R5)-CH2- C(O)NH-NH-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), (II-P) ou (II-P-1), onde R5 é H ou alquila. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), (II-P) ou (II-P-1), onde R5 é H ou CH3.
[000403] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), (II-P) ou (II-P-1), onde ambos Re Rº J/ RO Y /m " An . -XI-XE OS E a Rx são hidrogênio e SP é onde X4 é ligado ao L3 na fórmula (II), (Il-P) ou (I-P-1). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), (II-P) Re Rº / RO CR. = - 2 t=XI-XS Oo ou (II-P-1), onde ambos Rx são flúor e SP é onde X4 é ligado ao L3 na fórmula (II), (II-P) ou (II-P-1). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de Re Rº J/ RO Y /m s 4 XINE OS . fórmula (II), (II-P) ou (Il-P-1), onde SP é eXx3é -CH2-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula(ll), (II-P) ou (Il-P-1), onde SP é Re Rº J/ RO Y /m NINE OS , ; e X3 é -CH2-0-(C1-C10-alquileno)-C(O)- onde o C(O) é ligado ao X4. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), (II-P) ou (II|-P-1), onde Re Rº D/ RI “XY hm 4 E XI-XE O 4 ; 4 SP é e X3 é -C(O)-. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), (II-P)
ou (Il-P-1), onde Rd, Re e Rf são independentemente —H, -OH, hidroxialquila, alcoxicarbonila, -C(O0)OH ou -CH2O0Rg, onde cada Rg é independentemente -CH2C(0)OH ou -CH2C(0)O(alquil). Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), (II-P) ou (II-P-1), onde Rd e Re são independentemente —-H ou -OH. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), (II-P) ou (Il-P-1), onde mé O. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), (II-P) ou (II-P-1), onde m é 1. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), (II-P) ou (Il-P-1), onde m é 1 e RF é -H ou -OH.
[000404] Em algumas modalidades, é provido um composto de fórmula (II), (II-P) ou (Il-P-1), onde ambos Rx são hidrogênio e SP é —C(O)-N(C1-3alquil)- C1-C10-alquileno-X1- onde X1 é ligado ao L3 na Re Rº L Rn). fórmula (II), (II-P), ou (I-P-1); SP é XX o onde X3 é -CH2-, Re Rº (RI) T m mé 1,e Rd, Re e Rfsão -H; ou spé XX O onde X3 é —CH2-0-(C1-C10-alquileno)-C(O)- onde o C(O) é ligado ao X4, mé 1, e Rd, Re e Rf são -H. Em algumas modalidades, é provido um composto de fórmula (II), (I-P) ou (I-P-1)) onde SP é O o -C(O)-N(CH3)-CH2CH2-N(CH3)-, * ; ou o o PTOS . Em algumas modalidades, é provido um composto de fórmula (II), (II-P) ou (II-P-1), onde ambos Rx são flúor e SP é -C(O)- N(C1-3alquil)-C1-C10-alquileno-X1- onde X1 é ligado ao L3 na fórmula
Re Rº AÍ RI (11), (II-P) ou (II-P-1); SP é XX 2 onde X3é-CH2-,mé,e Re Rº D/ RI “XY hm = 2 XIX O r Rd, Re e Rf são -H; ou SP é onde X3 é -CH2-O- (C1-C10-alquileno)-C(O)- onde o C(O) é ligado ao X4, m é 1, e Rd, Re e Rf são -H. Em algumas modalidades, é provido um composto de fórmula (II), (Il-P) ou (Il-P-1), onde SP é -C(O)-N(CH3)-CH2CH2- o o SE LO Ah, N(CH3), — 9 ou o oz.
[000405] Em algumas modalidades, é provido um composto de fórmula (II), onde ambos Rx são flúor ou ambos Rx são hidrogênio, ou |
ANA Rx é como especificado neste parágrafo; SP é | O, o o
H H H EN ANE ANS Ago o, n o. ; | o |
ALON (onde ambos Rx são flúor), n O — (ondeambos Rx são flúor),
PLA & AN Ps NO o o
N NA À é LL Y AAA ES * o Ato Qu À e <> > Ve x o & ESA X TT.
[000406] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), (II-P) ou (Il-P-1), onde RG é
OQ SO em? um grupo reativo selecionado a partir de , NAN=NO, > o o / o N W. VT Ny 2 CcHo eo . Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), (II-P) Qx
O ou (II-P-1), onde RG é . Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), (II-P) o
Á & ou (II-P-1),) onde RG é O . Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), (II-P) o ou (II-P-1), onde RG é . Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um composto de fórmula (II), (II-P) o o AA, ou (II-P-1), onde RG é O
[000407] Em algumas modalidades, -L2-(L3)0-1- na fórmula (II), (II-P) ou (II-P-1) se refere a qualquer grupo ou porção divalente que une, conecta ou liga um grupo reativo (RG na fórmula (II), (II-P) ou (II-P-1) com um composto de carga útil apresentado no presente documento (por exemplo, esteroide). Em geral, -L2-(L3)0-1- adequados são aqueles que são suficientemente estáveis para explorar a meia-vida circulante do anticorpo e, ao mesmo tempo, capazes de liberar a sua carga útil depois da internalização mediada por antígeno do conjugado.
-L2-(L3)0-1 podem ser ligantes cliváveis ou não cliváveis. Os ligantes cliváveis são ligantes que são clivados por metabolismo intracelular em seguida à internalização, por exemplo, clivagem através da hidrólise, redução ou reação enzimática. Os ligantes não cliváveis são ligantes que liberam uma carga útil ligada através da degradação lisossômica do anticorpo em seguida à internalização. Os ligantes adequados incluem, porém não se limitam a, ligantes ácido-lábeis, ligantes hidrólise-lábeis, ligantes enzimaticamente cliváveis, ligantes lábeis de redução, ligantes autoimolativos e ligantes não cliváveis. Os ligantes adequados também incluem, porém não se limitam àqueles que são ou compreendem glicuronídeos, succinimida-tioéteres, unidades de polietileno glicol (PEG), carbamatos, hidrazonas, unidades de mal-caproíla, unidades de dissulfeto (por exemplo, —S-S-, —-S-S-C(R1b)(R2b)-, em que R1b e R2b são independentemente hidrogênio ou hidrocarbila), unidades de para- amino-benzila (PAB), unidades de fosfato, por exemplo, unidades de mono-, bis- e tris- fosfato, peptídeos, por exemplo, unidades de peptídeo contendo duas, três, quatro, cinco, seis, sete, oito ou mais unidades de aminoácido, incluindo, porém sem se limitar a unidades de valina- citrulina, unidades de valina-alanina, unidades de valina-arginina, unidades de valina-lisina, unidades de lisina-valina-citrulina e unidades de lisina-valina-alanina. Em algumas modalidades, -L2-(L3)0-1- é trivalente e inclui uma porção ciclodextrina ligada a um grupo trivalente (por exemplo, um resíduo de lisina) em -L2-(L3)0-1-. Em algumas modalidades, L3 está presente. Em algumas modalidades, L3 não está presente.
[000408] Em algumas modalidades, é provido um composto de o fórmula (II), (I|-P) ou (Il-P-1), onde L2 compreende A ,
o Ao A H LL o o o ANA rodo o AA A O AX H Oo N o RE (S) F E (R) * o AMX A “q %“ So o , Ho , não ,
HN NA 2) Y o o HAN “x SN o o, n , — -C(O)CH2cCH2C(O)NH-, N N do Ú O o N MM o Ds Os TOY o H o H o N ZON JA. VN No JAs 7 Y o o O ; ou resíduo de ciclodextrina (CD); ou combinações dos mesmos. Em algumas modalidades, é provido um composto de fórmula (II), (II-P) ou (II-P-1),
HN NA
XY fo) o mn Als nm “x & onde L2 compreende ; nO ; ( o > H H H H CN —N o No FCO N o No
XI OO o H o
N VN No JAs O , ou CD, ou combinações dos mesmos.
Em algumas modalidades, é provido um composto de fórmula (II), (II-P) ou (II-P-1), onde L2 compreende CD em que CD é selecionada a partir do grupo consistindo em 7
CC ”” Ho O o Ho O q fo) OH. OH Ho O o ? O o R Ho oH OH Ho o OH o º P OB P no by o HO on o o o o!
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[000409] Em algumas modalidades, é provido um composto de fórmula (II), (II-P) ou (II-P-1), onde -L2-(L3)0-1- compreendem Oo NH
NH o H [ + N. NE
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[000410] Em algumas modalidades, é provido um composto de SS. fórmula (II), (I|-P) ou (Il-P-1) onde L3 é —H onde o grupo NH é ligado ao L2, quando SP é -C(O)-C1-C10-alquileno-C(O)-; ou L3 o os « 4 )
NOS é HH onde o grupo NH é ligado ao L2, quando SP é -C(O)-N(C1-3alquil)- C1-C10-alquileno-X1- ou -C(O)-N(R5)-C1-C10- alquileno-C(O)NH-X2-; ou L3 não está presente quando SP é Re Rº J/ RO Y /m -XI-XE OS E : 4 : . Em algumas modalidades, é provido um composto
NS « Nº PÁ de fórmula (II), (II-P) ou (IIl-P-1), onde L3 é H onde o grupo NH é ligado ao L2, quando SP é -C(O)-C1-C10-alquileno-C(O)-. Em algumas modalidades, é provido um composto de fórmula (II), (II-P) o ros
O ou (Il-P-1), onde Lâ3 é à onde o grupo NH é ligado ao L2, quando SP é -C(O)-N(C1-3alquil)-C1-C10-alquileno-X1- ou -C(O)- N(R5)-C1-C10-alquileno-C(O)NH-X2-. Em algumas modalidades, é provido um composto de fórmula (II), (II-P) ou (II|-P-1), onde L3 não está Rº Rº Í [ Ri) Y . m ii xtoxs OS presente quando SP é XIX .
[000411] São apresentados no presente documento compostos tendo as seguintes estruturas:
Tabela 2. Grupo reativo-ligante-espaçador de budesonida Q ns o Ha SA AO Pa NH º
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[000412] Os agentes de ligação, por exemplo, anticorpos, também podem ser conjugados através da reação química "click". Em algumas modalidades da referida reação química "click", a carga útil ligante compreende um grupo reativo, por exemplo, alcino que é capaz de sofrer uma reação de 1,3 cicloadição com uma azida. Os referidos grupos reativos adequados incluem, porém não se limitam a, alcinos estirados, por exemplo, aqueles adequados para cicloadições de alcino- azida promovidas por estiramento (SPAAC), cicloalcinos, por exemplo, ciclooctinos, alcinos benzanulados, e alcinos capazes de sofrer reações de 1,3 cicloadição com azidas na ausência de catalisadores de cobre. Os alcinos adequados incluem, porém não se limitam a, DIBAC, DIBO, BARAC, DIFO, alcinos substituídos, por exemplo, alcinos fluorados, aza-cicloalcinos, BON e derivados dos mesmos. As cargas úteis ligantes compreendendo os referidos grupos reativos são úteis para conjugar anticorpos que foram funcionalizados com grupos azido. Os referidos anticorpos funcionalizados incluem anticorpos funcionalizados com grupos azido-polietileno glicol. Em certas modalidades, o referido anticorpo funcionalizado é derivado através da reação de um anticorpo compreendendo pelo menos um resíduo de glutamina, por exemplo, Q295 de cadeia pesada, com um composto de acordo com a fórmula
H2N-LL—-N3, em que LL é um grupo polietileno glicol divalente, na presença da enzima transglutaminase. Para conveniência, em certas fórmulas no presente documento, o anticorpo AB é um anticorpo modificado com um ou mais grupos -LL—N3 covalentemente ligados, ou resíduos dos mesmos. Preferivelmente, cada —-LL—N3 é covalentemente ligado a uma cadeia lateral de aminoácido de um resíduo de glutamina do anticorpo. Também preferivelmente, o -LL—N3 é ou pode ser reagido com um grupo reativo RG para formar uma ligação covalente a uma carga útil ligante. Novamente para conveniência, em certas fórmulas no presente — documento, os grupos -LL-N3 são expressamente apresentados.
[000413] São apresentados no presente documento métodos de sintetização dos conjugados descritos no presente documento compreendendo contactar um agente de ligação, por exemplo, anticorpo, com uma carga útil ligante descrita no presente documento. Em certas modalidades, a carga útil ligante inclui uma porção ciclodextrina.
[000414] Os compostos de Fórmula (II), (II-P) ou (II-P-1) são cargas úteis ligantes que são úteis como intermediários sintéticos na síntese dos conjugados descritos no presente documento. Essas cargas úteis ligantes compreendem um grupo reativo que pode reagir com um anticorpo para formar os conjugados descritos no presente documento.
[000415] Em algumas modalidades da fórmula (II), (II-P) ou (II-P-1), R4 é alquila. Em algumas modalidades da fórmula (II), (II-P) ou (II-P-1), R4 é metila, etila, n-propila, i-propila, n-butila, s-butila, t-butila, ir butila, uma porção pentila, uma porção hexila, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila ou ciclo-hexila. Em algumas modalidades da fórmula (II), (Il- P) ou (II-P-1), R4 é alquila. Em algumas modalidades da fórmula (II), (Il- P) ou (II-P-1), R4 é metila, etila, n-propila, i-propila, n—butila, s-butila, t-butila, i-butila, uma porção pentila ou uma porção hexila. Em algumas modalidades da fórmula (II), (Il-P) ou (Il-P-1), R4 é n-propila.
[000416] Em certas modalidades, RG-L2-(L3)0-1- é RG— SP? (PEG) — SP? -AAI-AA?— A -CH,0—: Ga) cp cp 7 ; é arila ou heteroarila; RG é um grupo reativo, definido abaixo; SP1 e SP2 são cada, independentemente em cada caso, ausente ou um resíduo do grupo espaçador, e em que SP1 compreende um ligante trivalente; AA1 é um ligante trivalente compreendendo um resíduo de aminoácido; AA2 é um resíduo peptídico; PEG é um resíduo de polietileno glicol; em que o q indica que o átomo através do qual o grupo químico indicado é ligado aos grupos adjacentes na fórmula, CD é, independentemente em cada caso, ausente ou um resíduo de ciclodextrina, em que pelo menos uma CD está presente, subscrito q é um inteiro selecionado a partir de 0 a 5, inclusive. Nesses exemplos, subscrito q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5. Em algumas modalidades, subscrito q é 0. Em algumas modalidades, subscrito q é
1. Em algumas modalidades, subscrito q é 2. Em algumas modalidades, subscrito q é 3. Em algumas modalidades, subscrito q é 4. Em algumas modalidades, subscrito q é 5. Em algumas modalidades, qualquer um de AA1 ou AA2 compreende, independentemente em cada caso, um aminoácido selecionado a partir de alanina, valina, leucina, isoleucina, metionina, triptofano, fenilalanina, prolina, serina, treonina, cisteína, tirosina, asparagina, glutamina, ácido aspártico, ácido glutâmico, lisina, arginina, histidina ou citruliha, um derivado do mesmo ou uma combinação dos mesmos. Em certas modalidades, AAI é um aminoácido selecionado a partir de alanina, valina, leucina, isoleucina, metionina, triptofano, fenilalanina, prolina, glicina, serina, treonina, cisteína, tirosina, asparagina, glutamina, ácido aspártico, ácido glutâmico, lisina, arginina, histidina, ou citrulina, um derivado do mesmo ou uma combinação dos mesmos. Em certas modalidades, AA1 é lisina ou um derivado de lisina. Em certas modalidades, AA1 é lisina. Em certas modalidades, AA1 é D-lisina. Em certas modalidades, AA1 é L-
lisina.
Em certas modalidades, AA2 é um resíduo dipeptídico, um resíduo tripeptídico, resíduo tetrapeptídico ou resíduo penta-peptídico.
Em certas modalidades, o AA2 é um resíduo dipeptídico.
Em certas modalidades, o AA2 é valina-citrulina.
Em algumas modalidades, o AA2 é citrulina-valina.
Em algumas modalidades, o AA2 é valina-alanina.
Em algumas “modalidades, o AA2 é alanina-valinan Em algumas modalidades, o AA2Z é valina-glicina.
Em algumas modalidades, o AA2 é glicina-valiha.
Em certas modalidades, o AA2 é um resíduo tripeptídico.
Em algumas modalidades, o AA2 é glutamato-valina- citrulina.
Em algumas modalidades, o AA2 é glutamina-valina-citrulina.
Em algumas modalidades, o AA2Z é lisina-valina-alanina.
Em algumas modalidades, o AA?2 é lisina-valina-citrulina.
Em algumas modalidades, o AA2 é glutamato-valina-citrulina.
Em algumas modalidades, o AA2 é um resíduo tetra-peptídico.
Em algumas modalidades, o AA2 é glicina- glicina-fenilalanina-glicina.
Em algumas modalidades, o AA2 é um resíduo penta-peptídico.
Em algumas modalidades, o AA2 é glicina- glicina-glicina-glicina-glicina.
Em algumas modalidades, SP1 é independentemente em cada caso, selecionado a partir do grupo consistindo de C1-6 alquileno, -NH-, -C(O)-, -CH2-CH2-O)e, -NH-CH2- CH2-(-0-CH2-CH2)e-C(O)-, -C(O0)-(CH2)u-C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)v-, e combinações dos mesmos, em que subscrito e é um inteiro selecionado a partir de O a 4, inclusive, subscrito u é um inteiro selecionado a partir de 1 a 8, inclusive, e subscrito v é um inteiro selecionado a partir de 1a 8, inclusive.
Em algumas modalidades, SP2 é independentemente em cada caso, selecionado a partir do grupo consistindo de C1-6 alquileno, -NH-, -C(O)-, -CH2-CH2-O)e, -NH-CH2-CH2-(-0-CH2-CH2)e-C(O)-, -C(0)-(CH2)U-C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)v-, e combinações dos mesmos, em que subscrito e é um inteiro selecionado a partir de O a 4, inclusive, subscrito u é um inteiro selecionado a partir de 1 a 8, inclusive, e subscrito v é um inteiro selecionado a partir de 1 a 8, inclusive.
[000417] Em certas modalidades, é apresentado no presente documento um composto tendo a estrutura de Fórmula (Illc-R): o x HH Ri = — he RG-SP'(PEG)— AA-AA5-NHA — SS Í <a = /7O ' q) 4 OH
HN O Cas
RG CD .
Fórmula (Illc-R)
[000418] RG é um grupo reativo;
[000419] CD é uma ciclodextrina;
[000420] SP1 é um grupo espaçador;
[000421] AA4 é um resíduo de aminoácido;
[000422] AASB5 é um resíduo dipeptídico;
[000423] PEG é polietileno glicol;
[000424] qé um inteiro selecionado a partir de O a 5, inclusive;
[000425] xé um inteiro selecionado a partir de O a 30, inclusive;
[000426] R4 é como definido no presente documento;
[000427] SP1 e SP2 são cada, independentemente em cada caso, ausentes ou um resíduo do grupo espaçador, e em que SP1 compreende um ligante trivalente; AA4 é um ligate trivalente compreendendo um resíduo de aminoácido; AA5 é um resíduo dipeptídico; PEG é um resíduo de polietileno glicol; em que o q indica o átomo através do qual o grupo químico indicado é ligado aos grupos adjacentes na fórmula, CD é, independentemente em cada caso, ausente ou um resíduo de ciclodextrina, em que pelo menos uma CD está presente, subscrito q é um inteiro selecionado a partir de 0 a 5, inclusive; Nesses exemplos, subscrito q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5. Em algumas modalidades, subscrito q é 0. Em algumas modalidades, subscrito q é
1. Em algumas modalidades, subscrito q é 2. Em algumas modalidades, subscrito q é 3. Em algumas modalidades, subscrito q é 4. Em algumas modalidades, subscrito q é 5. Em algumas modalidades, qualquer um de AA4 ou AA5 compreende, independentemente em cada caso, um aminoácido selecionado a partir de alanina, valina, leucina, isoleucina, metionina, triptofano, fenilalanina, prolina, serina, treonina, cisteína, tirosina, asparagina, glutamina, ácido aspártico, ácido glutâmico, lisina, arginina, histidina ou citrulina, um derivado do mesmo ou uma combinação dos mesmos.
Em certas modalidades, AA4 é um aminoácido selecionado a partir de alanina, valina, leucina, isoleucina, metionina, triptofano, fenilalanina, prolina, glicina, serina, treonina, cisteína, tirosina, asparagina, glutamina, ácido aspártico, ácido glutâmico, lisina, arginina, histidina, ou citrulina, um derivado do mesmo ou uma combinação dos mesmos.
Em certas modalidades, AAA é lisina.
Em certas modalidades, AAA4 é lisina ou um derivado de lisina.
Em certas modalidades, o AAS é valina-citrulina.
Em algumas modalidades, o AAS5 é citrulina-valina.
Em algumas modalidades, o AAS5 é valina- alanina.
Em algumas modalidades, o AAB5 é alanina-valina.
Em algumas modalidades, o AAS5 é valina-glicina.
Em algumas modalidades, o AA5 é glicina-valina.
Em algumas modalidades, o AAS5 é glutamato-valina- citrulina.
Em algumas modalidades, o AAS5 é glutamina-valina-citrulina.
Em algumas modalidades, o AAS5 é lisina-valina-alanina.
Em algumas modalidades, o AAS5 é lisina-valina-citrulina.
Em algumas modalidades, o AAS5 é glutamato-valina-citrulina.
Em algumas modalidades, SP1 é independentemente em cada caso, selecionado a partir do grupo consistindo de C1-6 alquileno, -NH-, -C(O)-, -CH2-CH2-O0)e, -NH-CH2- CH2-(-0-CH2-CH2)e-C(O)-, -C(O0)-(CH2)u-C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)y-, e combinações dos mesmos, em que subscrito e é um inteiro selecionado a partir de O a 4, inclusive, subscrito u é um inteiro selecionado a partir de 1 a 8, inclusive, and subscrito v é um inteiro selecionado a partir de
1 a 8, inclusive.
Em algumas modalidades, SP2 é independentemente em cada caso, selecionado a partir do grupo consistindo de C1-6 alquileno, -NH-, -C(O)-, (-CH2-CH2-O0)ae, -NH-CH2-CH2-(-0-CH2- CH2)e-C(O)-, -C(O0)-(CH2)U-C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)v-, e combinações dos mesmos, em que subscrito e é um inteiro selecionado a partir de O a 4, inclusive, subscrito u é um inteiro selecionado a partir de 1 a 8, inclusive, e subscrito v é um inteiro selecionado a partir de 1 a 8, inclusive.
O grupo reativo (RG) é um grupo ou porção funcional que reage com uma porção reativa de um anticorpo, anticorpo modificado, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
Em certas modalidades, o "grupo reativo" é um grupo ou porção funcional (por exemplo, maleimida ou NHS éster) que reage com um resíduo de cisteína ou lisina de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
Em certas modalidades, o "grupo reativo" é um grupo ou porção funcional que é capaz de sofrer uma reação química "click". Em algumas modalidades da referida reação química "click", o grupo reativo é um alcino que é capaz de sofrer uma reação de 1,3 cicloadição com uma azida.
Os referidos grupos reativos adequados incluem, porém não se limitam a, alcinos estirados, por exemplo, aqueles adequados para cicloadições de alcino-azida promovidas por estiramento (SPAAC), cicloalcinos, por exemplo, ciclooctinos, alcinos benzanulados e alcinos capazes de sofrer reações de 1,3 cicloadição com alcinos na ausência de catalisadores de cobre.
Os alcinos adequados também incluem, porém não se limitam a, DIBAC, DIBO, BARAC, alcinos substituídos, por exemplo, alcinos fluorados, aza-cicloalcinos, BON e derivados dos mesmos.
As cargas úteis ligantes compreendendo os referidos grupos reativos são úteis para conjugar anticorpos que foram funcionalizados com grupos azido.
Os referidos anticorpos funcionalizados incluem anticorpos funcionalizados com grupos azido-polietileno glicol.
Em certas modalidades, o referido anticorpo funcionalizado é derivado através da reação de um anticorpo compreendendo pelo menos um resíduo de glutamina, por exemplo, 0295 de cadeia pesada, com um composto de acordo com a fórmula H2N—LL—N3, em que LL é, por exemplo, um grupo polietileno glicol divalente ou em que LL é um grupo trivalente que inclui polietileno glicol e uma porção de ciclodextrina, na presença da enzima transglutaminase. Em algumas modalidades, o
IA é ; O ; grupo reativo é um alcino, por exemplo, , que pode reagir À a ; a através da química "click" com uma azida, por exemplo, N=“N=N , para
RW a TITO formar um produto da química "click", por exemplo, , seu regioisômero, ou uma mistura dos mesmos. Em algumas modalidades,
CC o grupo reativo é um alcino, por exemplo, N , que pode reagir ; mica "click" ; Ne através da química "click" com uma azida, por exemplo, N=-N=N" "=> para í Ç ) formar um produto da química "click", por exemplo, . Em algumas modalidades, o grupo reativo é um alcino, por exemplo, — CH, que pode reagir através da química "click" com uma azida, por exemplo, EA para formar um produto da química "click", por exemplo, + 7 , Seu regioisômero, ou uma mistura dos mesmos. Em algumas modalidades, o grupo reativo é um grupo funcional, por exemplo,
o 1 os o , que reage com um resíduo cisteína em um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, para formar uma ligação Abs o a esta, por exemplo, O , em que Ab se refere a um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo e S se refere ao átomo de S em um resíduo de cisteína através do qual o grupo funcional se liga ao Ab. Em algumas modalidades, o grupo reativo é um grupo funcional, o o -. por exemplo, O , que reage com um resíduo de lisina em um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, para formar o Abs uma ligação a esta, por exemplo, á , em que Ab se refere a um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo e -NH- se refere à extremidade do resíduo de lisina através do qual o grupo funcional se liga ao Ab. Em algumas modalidades, este átomo de N em um resíduo de lisina através do qual o grupo funcional se liga é indicado no presente documento como a letra N acima de uma ligação, por nº exemplo, a” .
[000428] Em algumas modalidades, RG-L2-(L3)0-1- é uma porção monovalente de Fórmula (LA);
[000429] RGHSP1)9-(A)2HNRa)s—(B)t-(CH2)U—X(O)v—x( SP2)w-
[000430] (LA);
[000431] em que RG é um grupo reativo;
[000432] Aé um aminoácido ou um peptídeo;
[000433] RA é H ou alquila;
[000434] B é arila, heteroarila ou heterocicloalquila, em que arila, heteroarila ou heterocicloalquila é opcionalmente substituída com alquila, -=OH ou -N-RaRb;
[000435] SP1 e SP2 são, independentemente, um grupo espaçador; eq,z,S,t, u, ve w são, independentemente em cada caso, O ou 1.
[000436] Em algumas modalidades, RG-L2-(L3)0-1- é RGÁXSP1)a- (A)z-. Em algumas modalidades, RG-L2-(L3)0-1- é RGHSP1)g—(A)2-. Em algumas modalidades, RG-L2-(L3)0-1- é uma porção de Fórmula (LAI)
RA eme M LA RA? Oo (LAI) em que RAAI e RAA2 são cada, independentemente, cadeias laterais de aminoácido. Em algumas modalidades da fórmula LAI, SP1 é um grupo polietileno glicol divalente e RG é um grupo compreendendo um alcino que é capaz de sofrer uma reação de 1,3- cicloadição com uma azida.
[000437] Em algumas modalidades, RG-L2-(L3)0-1- tem a seguinte estrutura: RGHSP1)g—-21-22-230-1- em que:
[000438] RG,SP1 eq são como definidos no presente documento;
[000439] Z1é um grupo polietileno glicol ou caproíla;
[000440] 72 é um dipeptídeo; e
[000441] Z3é um grupo PAB.
[000442] Em algumas outras modalidades, -L1-L2-(L3)0-1- é uma porção trivalente de Fórmula (LB); —L1H(SP1)9(A)2NRa)s(B)t(CH2)UH(O)yvH SP2)w- (LB); em que L1 é como definido no presente documento;
[000443] A é tripeptídeo ou tetrapeptídeo, em que pelo menos um dos aminoácidos no tripeptídeo ou tetrapeptídeo é ligado diretamente ou indiretamente a uma porção de ciclodextrina;
[000444] RA é H ou alquila;
[000445] B é arila, heteroarila ou heterocicloalquila, em que arila, heteroarila ou heterocicloalquila é opcionalmente substituída com alquila, -=OH ou -NRaRb;
[000446] SP1.e SP2 são, independentemente, um grupo espaçador; e na fórmula LB, q, z, s, t, uy, ve w são, independentemente em cada caso, O ou 1.
[000447] Em algumas modalidades, a ciclodextrina (CD) é ligada diretamente a um resíduo de aminoácido, tal como um resíduo de aminoácido lisina. Isto significa que a CD está uma posição de ligação longe do ligante covalente do aminoácido lisina. Em algumas dessas modalidades, o ligante covalente também está ligado diretamente a uma porção de carga útil. Isto significa que o ligante covalente está uma posição de ligação longe de uma carga útil tal como, porém sem se limitar a uma carga útil esteroide apresentada no presente documento. Em algumas dessas modalidades, o ligante covalente também está ligado diretamente a uma porção de CD. Isto significa que o ligante covalente está uma posição de ligação longe de a CD, tal como a(s) CD(s) apresentadas no presente documento. Em algumas dessas modalidades, o ligante covalente é um aminoácido lisina ou um derivado do mesmo.
[000448] Em algumas modalidades, a CD é ligada indiretamente a um ligante covalente em um grupo de ligação (por exemplo, L, -L2-(L3)0-1- e —-L1-L2-(L3)0-1). Isto significa que a CD está mais de uma posição de ligação longe do ligante covalente. Isto também significa que a CD é ligada através de uma outra porção ao ligante covalente. Por exemplo, a CD pode ser ligada a um grupo maleimida que é ligado a um grupo polietileno glicol que é ligado ao ligante covalente. Em algumas dessas modalidades, o ligante covalente é também ligado indiretamente a uma porção de carga útil. Isto significa que o ligante covalente está mais de uma posição de ligação longe de uma carga útil tal como, porém sem se limitar a uma carga útil esteroide apresentada no presente documento. Isto também significa que o ligante covalente é ligado através de uma outra porção à carga útil. Por exemplo, o ligante covalente pode ser ligado a um dipeptídeo, tal como, porém, não limitado a Val-Ala ou Val-Cit, que pode ser ligado à para-amino benzoíla que pode ser ligada à carga útil. Em algumas dessas modalidades, o ligante covalente é também ligado indiretamente a uma porção de ciclodextrina. Isto significa que o ligante covalente está mais de uma posição de ligação longe de uma ciclodextrina, tal como as ciclodextrinas apresentadas no presente documento. Isto também significa que o ligante covalente é ligado através de uma outra porção à ciclodextrina. Por exemplo, o ligante covalente pode ser ligado a um grupo polietileno glicol que pode ser ligado ao grupo reativo que pode ser ligado à ciclodextrina. Em algumas dessas modalidades, o ligante covalente é um aminoácido lisina ou um derivado do mesmo.
[000449] Em algumas modalidades, -L1-L2-(L3)0-1- é -L1Á4SP1)a- (A)z-. Em algumas modalidades, -L1-L2-(L3)0-1- é — LA(SP1)9H(A)2-. Em algumas modalidades, -L1-L2-(L3)0-1- é uma porção de Fórmula (LB1) o RAM o F visor Aros RÃAS o RAA? (LB1) em que RAAI e RAA2 são cada, independentemente, cadeias laterais de aminoácido. RAA3 é uma cadeia lateral de aminoácidos que é ligada diretamente ou indiretamente a uma porção de ciclodextrina. Em algumas modalidades da fórmula LB1, SP1 é um grupo polietileno glicol divalente e L1 é um produto de reação da 1,3- cicloadição da reação entre um alcino e uma azida.
AA " o R W o AAA As
[000450] Em algumas modalidades, A é RM O RA Em algumas dessas modalidades, RAA1 é uma cadeia lateral de aminoácidos, RAA2 é uma cadeia lateral de aminoácidos, e RAA3 é uma cadeia lateral de aminoácidos que é ligada diretamente ou indiretamente a uma porção de ciclodextrina. o H o
S À NH
[000451] Em algumas modalidades, A é CD , em que mCD representa uma ligação direta ou indireta a uma porção de ciclodextrina.
[000452] Em algumas modalidades, incluindo qualquer uma das anteriores, CD é, independentemente em cada caso, selecionada a partir de >
CC f & & Ho o. oro Ho O o,
HO FS o O o o OH “Se 6 Ho oH o. o O, o Ho OH o % e. OH
H H P o OHy7 oH o OH o OH OH Ô OH HO ; HO '
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CO 2 Ho O o. Ho O o. o o oH OH o o o o HO Ho OH Ho oH or oe! o o 8 D o OH o OH or S oro po H
OH Ho OH o oHno zo OH o onHoHOo Za OH o o o > Ho o Ho o HO ; Ho ;
T > C >» HO o O. o o o 7 to SA O! HO: PLZ HO Q 9H, *%% no oH no oH PESO Ho OH
OH OH *& OH o o o o o o ob Ho o ? oH rá Ho bn fo o OH Ho OH7 Í om H oH7 OH o o Ho HO SE E note o Ho 9 Ho o HO e HO .
[000453] Em algumas modalidades, a CD é Ho O o o
OH Ho & o o 6a Ho oH o. fo) HO bH OH o!
H o OHy OH OH o HO .
[000454] Em algumas modalidades, a CD é 7
O ” Ho O o or o O ÍS “o fo o Ho OH oh oro nad Soo QH7) OH HO .
[000455] Em algumas modalidades, a CD é Ho O TÃO O
HO (o)
O Ono HO OH
OH S Oo 8 OH
OH o O o OH Ho oH H Oo OH HO Oo o Q o HO o HO .
[000456] Em algumas modalidades, a CD é 7
CC 2 HO o O oo
O o Oo HO oH o OH
O Ho OH OH o o Oo
H o ouHoHOHZAS om a o HO o HO .
[000457] Em algumas modalidades, a CD é no ? oHI "
HO O 7 º o voos HO ) OH
OH 97 oH o o OH HO o OH p o oH Ho OH ó OH
HO o “o
O HO HO :
[000458] Em algumas modalidades, a CD é
T
CC 2) Ho O RO O
HO oH o 0 HO O
OH HO OH
OH Oo OH O O. OH HO ?
OH P H oH ó OH HOEHO, Oo OoHy o HO o HO :
[000459] Em algumas modalidades, A é o o
H
A EA À o Ho Dá Es o o orftio or — o Ns oH on,
R HO OH o o Ae o so o no OH o erro OH .
[000460] Em algumas modalidades, no presente documento RG é selecionado a partir de um grupo reativo da química "click".
[000461] Em alguns outros exemplos, no presente documento RG é selecionado a partir de um grupo que reage com um resíduo de cisteína ou lisina em um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
[000462] Em algumas modalidades, RG é (CD nO Es A CX É º 2 ; (onde o -OCH2C(0)- é o abrangido por —L2-), W o o f o (? No
O
[000463] Em algumas modalidades, RG é . Em outros á o exemplos, RG é o . Em alguns outros exemplos, RG é W o Em algumas modalidades, RG é O * Em outros exemplos, RG é o o px Ah o . Em outros exemplos, RG é onde o -OCH2C(O)- é abrangido por -L2-.
[000464] Em algumas modalidades, SP1 é abrangido por -L2-. Em algumas modalidades, SP1 pode ser selecionado a partir de:
o o o o. o o ir(er alt eg AC gg? Pela” p NO o d o o. o o OA AC ou Frerad+E o —r(cHa) Ai
[000465] Em algumas modalidades, SP1 é O . Em o o eg LAR HJ) H b alguns outros exemplos, SP1 é a . Em outros
À exemplos, SP1 é o * Em ainda outros exemplos, SP1 é o
CANADA 4 b . Em alguns outros exemplos, SP1 é Oo (CH)
[000466] Em qualquer um dos exemplos acima, subscritos a, be c são independentemente, em cada caso, um inteiro selecionado a partir de 1 a 20, inclusive.
[000467] Em algumas modalidades, SP1 é abrangido por -L2-. Em qualquer um dos compostos, SP1 é: o o NW o. o. PE o Po ng OA A ! sol A ão 9
O AAA AXA o o . Ne CAs oa AAA ESSVACIDAAS:
É O. N NÚ o o
NE DR Y (oq * AAA AAA AA NAAAS O. O o mo: < A À o Ho" “oH o = NU OH >» ou o
[000468] Em algumas modalidades, SP1 é abrangido por -L2-. Em o algumas modalidades, SP1 é O Em algumas modalidades, o o OA A AN Ad SP1 é o o ,S% O. Em algumas modalidades, SP1 é
À À
AD ASIAN ONO “Oo N o o É Em algumas modalidades, O Oo o Ho Qri Hom oH om E SP1 é oH ” . Em algumas modalidades, SP1 é
À À A RNA ”N . Em algumas modalidades, SP1 é E . Em
AX algumas modalidades, SP1 é * O. Em algumas modalidades, SP1 é AAA Em algumas modalidades, SP1 é o o AAA AMX A | N N . Em algumas modalidades,
N N 2 (rod > SP1 é 110 . Em algumas modalidades, SP1 é do N N Y (oq v
[000469] Em algumas modalidades, SP1 é abrangido por -L2-. Em o algumas modalidades, SP1 é A Em algumas modalidades, SP1 é o o AA Em algumas modalidades, SP1 é A Em algumas o modalidades, SP1 é AA Em algumas modalidades, SP1 é o 4 o TA, OA Em algumas modalidades, SP1 é *.
[000470] Em algumas modalidades, RG—SP1 (onde SP1 é abrangido por -L2-) pode ser selecionado a partir do grupo consistindo de: o o Qi
O o Qto, o. SW O o CS. AMX N o Ss , O , o o
AAA AAA QT me go Nono 0 Lo o SA oe 4 Ho" “oH 9 ” | OH N ou 1 º o
E o e onde b, c e d são independentemente, em cada caso, um inteiro selecionado a partir de 1 a 20, inclusive. Em algumas dessas modalidades, subscritos b, c e d são independentemente, em cada caso, um inteiro selecionado a partir de 1 a 6, inclusive.
[000471] Em algumas modalidades RG-SP1— é Io (CD? N h pgto
O . Em algumas modalidades RG—SP1 dA (CD no toa,
O é . Em algumas modalidades RG— o
AAA bo SP1 é N . Em algumas modalidades
H EN Ao DAN o O
O RG-SP1 é . Em algumas modalidades no O é Ho" “OH “À ' RG-SP1 é OH NY . Em algumas modalidades Oo o
NA A RG-SP1é O . Em algumas modalidades RG-SP1 x o DP CT" AA b é N , Em algumas modalidades o / Oo Us RG-SP1é O e
[000472] Em qualquer um dos compostos, RG—SP1 é: (2 AA AA “O ' : o o AAA a AAA
N o o AoA Pr
H HO
N y o o gta AN PÉ O 1, rs O CN Ud MM C Yo o ih aid - tias = o j lo À o. = NW F o A Ty e: NH? b VA N , o Ho o RNA h o Ho" “oH o A oH NX ou o .
[000473] Em algumas modalidades, A é um peptídeo selecionado a partir de valina-cittulihay citruliha-valina,y lisina-fenilalanina, fenilalanina-lisina, valina-asparagina, asparagina-—valina, treonina- asparagina, asparagina-treonina, serina-asparagina, asparagina- serina, fenilalanina-asparagina, asparagina-fenilalanina, leucina- asparagina, asparagina-leucina, isoleucina-asparagina, asparagina-
isoleucina, glicina-asparagina, asparagina-glicina, ácido glutâmico— asparagina, —asparagina-ácido — glutâmico, citruliha-asparagina, asparagina-citrulina, alanina-asparagina ou asparagina-alanina.
[000474] Em algumas modalidades, A é valina-citrulina ou citrulina—- valina.
[000475] Em algumas modalidades, A é valina-alanina ou alanina- valina.
[000476] Em algumas modalidades, A é glutamato-valina-citrulina ou citrulina—valina- glutamato.
[000477] Em algumas modalidades, A é valina.
[000478] Em algumas modalidades, A é alanina.
[000479] Em algumas modalidades, A é citrulina. Hu o RAA2 do
[000480] Em algumas modalidades, A é RA º . Em algumas dessas modalidades, RAAI é uma cadeia lateral de aminoácidos, e em que RAA2 é uma cadeia lateral de aminoácidos. nu o RA? ha
[000481] Em algumas modalidades, ré HaCTEHs O os NH2
NH Es
SO
[000482] Em algumas modalidades, A é Hen, O :
[000483] Em algumas modalidades, RA é H.
[000484] Em algumas modalidades, RA é alquila.
[000485] Em algumas modalidades, RA é metila, etila, n-propila, i- propila, n—butila, t-butila, i-butila ou pentila.
[000486] Em algumas modalidades, B é arila.
[000487] Em algumas modalidades, B é fenila.
[000488] Em algumas modalidades, B é fenila ou piridinila.
[000489] Em algumas modalidades no presente documento, B é: (RP, (Rm
OO ou .
[000490] Nesses exemplos, R10 é alquila, alquenila, alquinila, alcóxi, arila, alquilarila, arilalquila, halo, haloalquila, haloalcóxi, heteroarila, o heterocicloalquila, hidroxila, ciano, nitro, dor tsoRt Ro NRaRb, ou azido. Nesses exemplos, subscritos p e m são independentemente, em cada caso, selecionado a partir de um inteiro selecionado a partir de O a 4, inclusive. Em algumas modalidades no (R) presente documento, B é: +Ot
[000491] Nesses exemplos, p é 0, 1, 2, 3 ou 4. Em algumas dessas modalidades, R1 é, independentemente em cada ocorrência, alquila, alcóxi, haloalquila ou halo. Em algumas modalidades, R1 é alquila. Em algumas modalidades, R1 é alcóxi. Em algumas modalidades, R1 é haloalquila. Em algumas modalidades, R1 é halo.
[000492] Em algumas modalidades da fórmula (LA), o (NRa)s(B)t (CH2)U-(O)vH SP2)w é: y Í)
FRA
[000493] Também são providas cargas úteis ligantes de budesonida, um profármaco de budesonida, um análogo ou derivado de budesonida (incluindo análogos fluorados e derivados), ou um profármaco de um análogo ou derivado de budesonida (incluindo análogos e derivados fluorados). Em algumas modalidades, é provida no presente documento uma carga útil ligante tendo a seguinte estrutura: o Lt E & R<, QE, o Refil) spo O or 0-1 em que RG, R4, L2, L3 e SP são como definidos no presente documento. E. COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS E MÉTODOS DE
TRATAMENTO
[000494] A presente descrição inclui métodos de tratamento de doenças, condições ou distúrbios, por exemplo, doenças inflamatórias e distúrbios autoimunes ou gerenciamento dos sintomas dos mesmos, compreendendo administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais dos compostos descritos no presente documento. Estão incluídos qualquer doença, distúrbio ou condição associado com o receptor de glicocorticoide, ligação do glicocorticoide, e/ou sinalização do receptor de glicocorticoide. Os referidos métodos compreendem administrar uma carga útil esteroide ou conjugado de proteína do mesmo descrito no presente documento a um paciente. Sendo assim, estão incluídos nesta descrição os métodos de tratamento de uma doença, distúrbio ou condição associados com o receptor de glicocorticoide compreendendo administrar um composto de Fórmula (1), Fórmula |-P, Fórmula |-P-1, Fórmula (III-P), Fórmula 111-P-1, Fórmula (3000) ou (Ill), a um paciente que tem a referida doença, distúrbio ou condição.
[000495] A presente descrição inclui métodos de prevenção de certos distúrbios ou condições compreendendo administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais dos compostos descritos no presente documento (isto é, usos profiláticos). Os exemplos incluem, porém não se limitam a prevenir a síndrome de liberação de citocinas para CD3 biespecíficas, e terapias celulares adotivas tais como células CAR T, administração de |L-2 sistêmica, doença de enxerto-versus- hospedeiro e náusea e vômitos no pós-operatório. Exemplos também incluem, porém não se limitam a anticorpos terapêuticos tais como alemtuzumabe, “muromonabe, rituximabe, tositizumabe e Ab's agonistas onde a imunoestimulação deve ser parte do mecanismo pretendido de ação.
[000496] Em algumas modalidades, a doença, distúrbio ou condição é estado alérgico, incluindo porém sem se limitar a asma, dermatite atópica, dermatite de contato, dermatite alérgica, reações de hipersensibilidade a fármacos, rinite anafilática, rinite alérgica perene ou sazonal e doença do soro; doenças e condições dermatológicas, incluindo porém sem se limitar a coceira na pele, dermatite seborreica, neurodermatite, eczema, dermatite herpetiforme bolhosa, dermatite esfoliativa, micose fungoide, pênfigo e eritema multiforme grave (síndrome Stevens-Johnson); distúrbios endócrinos, incluindo porém sem se limitar a insuficiência adrenocortical primária ou secundária, hiperplasia adrenal congênita, hipercalcemia associada com câncer, e tireoidite não supurativa; doenças gastrointestinais; distúrbios hematológicos, incluindo porém sem se limitar a anemia hemolítica adquirida (autoimune), anemia hipoplástica (eritroide) congênita (anemia Diamond-Blackfan), púrpura trombocitopênica idiopática em adultos, aplasia pura de células vermelhas, e trombocitopenia secundária; triquinose; meningite tuberculosa com bloqueio subaracnóideo ou bloqueio iminente; doenças neoplásicas, incluindo porém sem se limitar a leucemias e linfomas; distúrbios do sistema nervoso, incluindo porém sem se limitar a exacerbações agudas de esclerose múltipla, edema cerebral associado com tumor cerebral primário ou metastático, craniotomia ou lesão na cabeça; doenças oftálmicas, incluindo porém sem se limitar a oftalmia simpatética, arterite temporal, uveite, xeroftalmia e condições inflamatórias oculares que não respondem aos corticoesteroides tópicos; doenças renais, incluindo porém sem se limitar a indução de diurese ou remissão de proteinuria na síndrome nefrótica idiopática ou que devido ao lúpus eritematoso; doenças respiratórias, incluindo porém sem se limitar a beriliose, tuberculose pulmonar fulminante ou disseminada quando usada de forma concomitante com quimioterapia antituberculosa adequada, pneumonias eosinofílicas idiopáticas, sarcoidose sintomática; e distúrbios reumáticos, incluindo porém sem se limitar ao uso como terapia adjunta para administração de curto prazo (para o paciente enfrentar um episódio agudo ou exacerbação) em artrite gotosa aguda, cardite reumática aguda, espondilite anquilosante, artrite psoriática, artrite reumatoide, incluindo artrite reumatoide juvenil e para uso em dermatomiosite, polimiosite, estomatite e lúpus eritematoso sistêmico.
[000497] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um método para tratar uma doença, distúrbio ou condição selecionado a partir de uma doença autoimune, uma alergia, artrite, asma, um distúrbio respiratório, um distúrbio sanguíneo, um câncer, uma doença do colágeno, distúrbios do tecido conectivo, uma doença dermatológica, uma doença ocular, um problema endócrino, uma doença imunológica, uma doença inflamatória, distúrbios intestinais, uma doença gastrointestinal, um distúrbio neurológico, uma condição de transplante de órgãos, um distúrbio reumatoide, um distúrbio de pele, uma condição de edema, uma condição de cicatrização de feridas, e uma combinação das mesmas compreendendo administrar uma carga útil esteroide ou conjugado do mesmo descrito no presente documento.
[000498] Em algumas modalidades, o distúrbio autoimune é selecionado a partir de esclerose múltipla, hepatite autoimune, herpes, lúpus eritematoso sistêmico (isto é, lúpus), miastenia gravis, distrofia muscular de Duchenne e sarcoidose. Em algumas modalidades, o distúrbio respiratório é selecionado a partir de asma, doença respiratória crônica, doença pulmonar obstrutiva crônica, inflamação brônquica e bronquite aguda. Em algumas modalidades, o câncer é selecionado a partir de leucemia, leucemia linfoblástica, leucemia linfoblástica aguda, leucemua linfoblástica crônica, linfoma de Hodgkin, linfoma não Hodgkin (NHL) e mieloma múltiplo. Em algumas modalidades, a doença do colágeno é lúpus eritematoso sistêmico. Em algumas modalidades, a doença ocular é ceratite. Em algumas modalidades, o problema endócrino é selecionado a partir de doença de Addison, insuficiência adrenal, disfunção cortical adrenal, adrenocortical, e hiperplasia adrenal congênita. Em algumas modalidades, a doença inflamatória é selecionada a partir de inflamação depois da cirurgia de catarata, inflamação nas articulações, inflamação imune, inflamação nos tendões, bursite, epicondilite, doença de Crohn, doença intestinal inflamatória, tireoidite pneumonite lipídica, urticária (eczemas), pericardite, síndrome nefrótica e uveíte. Em algumas modalidades, o distúrbio intestinal é selecionado a partir de colite colagenosa, colite ulcerativa, doença de Crohn e doança intestinal inflamatória. Em algumas modalidades, o distúrbio reumatoide é selecionado a partir de artrite reumatoide, polimialgia reumática, artrite psoriática, espondilite anquilosante e lúpus eritematoso sistêmico. Em algumas modalidades, o distúrbio de pele é selecionado a partir de psoríase, eczema e dermatite por contato com hera venenosa. Em algumas modalidades, o distúrbio — neurológico é polirradiculoneuropatia desmielinizante inflamatória crônica.
[000499] Em algumas modalidades, os compostos descritos no presente documento são administrados a um paciente para tratar um evento inflamatório agudo, incluindo, porém, sem se limitar a choque, edema cerebral, e doença do enxerto-vs-hospedeiro. Em algumas modalidades, os compostos descritos no presente documento são administrados para tratar efeitos linfolíticos, incluindo, porém, sem se limitar àqueles associados com malignidades hematológicas, por exemplo, leucemias, linfomas e mielomas.
[000500] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um método para reduzir inflamação em um indivíduo que necessita do mesmo, compreendendo administrar a um indivíduo que necessita do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um esteroide ou conjugado do mesmo descrito no presente documento. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um método para modular o sistema imune em um indivíduo que necessita do mesmo, compreendendo administrar a um indivíduo que necessita do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um esteroide ou conjugado do mesmo descrito no presente documento. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um método para modular os níveis de cortisol em um indivíduo que necessita do mesmo, compreendendo administrar a um indivíduo que necessita do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um esteroide ou conjugado do mesmo descrito no presente documento. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um método de redução da migração de linfócitos em um indivíduo que necessita do mesmo, compreendendo administrar a um indivíduo que necessita do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um esteroide ou conjugado do mesmo descrito no presente documento. Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um método de tratamento de hipercalcemia devido ao câncer, doença de Meniere, uma dor de cabeça do tipo enxaqueca, uma cefaleia em salvas, uma úlcera aftosa grave, laringite, tuberculose grave, uma reação Herxheimer à sífilis, uma insuficiência cardíaca descompensada, rinite alérgica ou pólipos nasais, compreendendo administrar a um indivíduo que necessita do mesmo uma carga útil de esteroide ou conjugado do mesmo descrito no presente documento. Em algumas modalidades, os compostos descritos no presente documento podem ser usados para tratar doença inflamatória intestinal, doença de Crohn ou colite ulcerativa. Em algumas modalidades, a doença, distúrbio ou condição é uma condição inflamatória crônica, incluindo, porém, sem se limitar a asma, infecções de pele, e infecções oculares. Em algumas modalidades, os compostos descritos no presente documento são usados para imunossupressão em pacientes que passaram por transplante de órgãos.
[000501] Em algumas modalidades, as cargas úteis esteroides e conjugados dos mesmos descritos no presente documento são administrados a um paciente para tratar um distúrbio nervoso associado com a sinalização GR, incluindo, porém, sem se limitar a distúrbios psiquiátricos tais como esquizofrenia, vício em drogas, distúrbio do estresse pós-traumático (PTSD) e distúrbios de humor, abuso de substâncias, estresse e ansiedade.
[000502] Em algumas modalidades, as cargas úteis esteroides e conjugados dos mesmos descritos no presente documento são administrados a um paciente para tratar um distúrbuo do sistema visual, incluindo porém sem se limitar a inflamação ocular (por exemplo, conjuntivite, ceratite, uveite), edema macular e degeneração macular. Em algumas modalidades, as cargas úteis esteroides e conjugados dos mesmos descritos no presente documento são administrados a um paciente para tratar um distúrbio cardiovascular. Em algumas modalidades, as cargas úteis esteroides e conjugados dos mesmos descritos no presente documento são administrados a um paciente para tratar um distúrbio do metabolismo da glicose e/ou fígado. Em algumas modalidades, as cargas úteis esteroides e conjugados dos mesmos descritos no presente documento são administrados a um paciente para tratar um distúrbio do sistema musculoesquelético. Em algumas modalidades, as cargas úteis esteroides e conjugados dos mesmos descritos no presente documento são administrados a um paciente para tratar uma condição inflamatória cutânea, tal como eczema e psoríase.
[000503] Os conjugados de proteína descritos no presente documento proveem um meio para a liberação direcionada da sua carga útil estereoide a células ou sistemas de órgãos específicos, reduzindo ou prevenindo assim efeitos colaterais que resultam da administração da carga útil estereoide não conjugada. Exemplos dos referidos efeitos colaterais potenciais a serem reduzidos ou prevenidos incluem aqueles listados na bula aprovada para o Decadronº (dexametasona), que é incorporada no presente documento a título de referência em sua totalidade. Em algumas modalidades, o efeito colateral a ser reduzido ou prevenido é selecionado a partir da elevação da pressão sanguínea; retenção do sódio; retenção de água/fluidos (edema, angioedema, edema pulmonar); excreção aumentada de potássio; supressão do eixo adrenal hipotalâmico-pituitário reversível (HPA); insuficiência potencial de corticoesteroide depois da retirada do tratamento; suscetibilidade a infecções; exacerbação de infecções fúngicas sistêmicas; piora da gravidade da catapora em pacientes pediátricos e adultos; piora da gravidade do sarampo em pacientes pediátricos e adultos; catarata subcapsular posterior; glaucoma com possível lesão aos nervos óticos; melhora do estabelecimento das infecções oculares secundárias devido a bactérias, fungos ou vírus; aumento em novos episódios de neurite ótica; sarcoma de Kaposi; insuficiência adrenocortical secundária induzida por fármaco; risco aumento de uma perfuração quando úlceras pépticas estão ativas ou latentes, diverticulite, anastomoses intestinais recentes e colite ulcerativa não específica, estão presentes; irritação peritoneal em seguida à perfuração gastrointestinal; formação óssea reduzida; reabsorção óssea aumentada; inibição da função de osteoblasto; inibição do crescimento ósseo em pacientes pediátricos; desenvolvimento de osteoporose em qualquer idade; miopatia aguda
(possivelmente envolvendo músculos oculares e respiratório, e potencialmente resultando em quadriparesia); elevação da creatinina quinase; riscos psicóticos, que variam de euforia, insônia, oscilações de humor, mudanças de personalidade, e depressão severa, e até manifestações psicóticas, agravações de instabilidade emocional existente ou tendências psicóticas; pressão intraocular elevada; bradicardia; parada cardíaca; arritmias cardíacas; expansão cardíaca; colapso circulatório; insuficiência cardíaca congestiva; embolia devido à gordura; hipertensão; cardiomiopatia hipertrófica em bebês prematuros; ruptura do miocárdio após infarto do miocárdio recente; sincope; taquicardia; tromboembolismo; tromboflebite; vasculite; acne; dermatite alérgica; pele escamosa seca; equimoses e petéquias; eritema; cicatrização de feridas prejudicada; suor aumentado; erupções; estrias; supressão de reações em testes de pele; pele frágil fina; queda de cabelo a partir do couro cabeludo; urticárias; tolerância reduzida a carboidratos e glicose; desenvolvimento de estado de cushingóide; hiperglicemia; — glicosuria; — hirsutismo; —hipertricose; requisitos aumentados para insulina ou agentes hipoglicêmicos orais em diabetes (resistência à insulina); manifestações de diabetes mellitus latente; irregularidades menstruais; falta de responsividade adrenocortical e pituitária secundária (particularmente em vezes de estresse; como em trauma; cirurgia; ou doença); supressão de crescimento em pacientes pediátricos; insuficiência cardíaca congestiva em pacientes susceptíveis; retenção de fluido; alcalinose hipocalêmica; perda de potássio; retenção de sódio; distensão abdominal; elevação em níveis de enzima do fígado no soro (usualmente reversível na descontinuação); hepatócitos; apetite aumentado; náusea; pancreatite; úlcera péptica com perfuração e hemorragia possíveis; perfuração do intestino delgado e grosso (particularmente em pacientes com doença inflamatória intestinal); colite ulcerativa; equilíbrio negativo de nitrogênio devido ao catabolismo da proteína; necrose asséptica das cabeças femoral e umeral; perda de massa muscular; fraqueza muscular; osteoporose; fratura patológica de ossos longos; miopatia esteroide; ruptura do tendão; fraturas de compressão vertebral; convulsões; depressão; instabilidade emocional; euforia; cefaleia; pressão intracraniana aumentada com papiledema (pseudotumor cerebral) geralmente após a descontinuação do tratamento; insônia; oscilações de humor; nefrite; neuropatia; parestesia; mudanças de personalidade; distúrbios psicóticos; vertigem; exoftalmos; glaucoma; pressão intraocular aumentada; catarata subcapsular posterior; depósitos anormais de gordura; resistência reduzida à infecção; soluços; motilidade aumentada ou reduzida e número de espermatozoides aumentados ou diminuídos; desconforto; face em lua; ganho de peso e aqueles efeitos colaterais associados com as interações fármaco- fármaco.
Em algumas modalidades, o efeito colateral a ser reduzido ou prevenido é aquele associado com as interações fármaco-fármaco.
Em algumas modalidades, o efeito colateral a ser reduzido ou prevenido é associado com as interações fármaco-fármaco a partir do uso de um corticosteroiide “com aminoglutetimida incluindo diminuição da supressão adrenal pelos corticosteroides; injeção de amfotericina B e agentes de depleção do potássio, incluindo desenvolvimento de hipocalemia, expansão cardíaca, e insuficiência cardíaca congestiva; antibióticos incluindo uma diminuição significativa na depuração do corticosteroide; anticolinérgicos incluindo a produção de fraqueza grave em pacientes com miastenia gravis; anticoagulantes orais incluindo a inibição da resposta à warfarina; antidiabéticos incluindo concentrações aumentadas de glicose no sangue; fármacos antituberculares incluindo concentrações diminuídas de isoniazida no soro; colestiramina incluindo depuração aumentada de corticosteroides; ciclosporina incluindo atividade aumentada de ambos ciclosporina e corticosteroides, e incidência de convulsões; interferência no teste de supressão da dexametasona (DST) incluindo resultados falso-negativos em pacientes sendo tratados com indometacina; glicosídeos digitalis incluindo risco aumentado de arritmias devido à hipocalemia; efedrina incluindo aumento da depuração metabólica de corticosteroides, resultando em níveis reduzidos de sangue e reduzida atividade psicológica; estrogênios, incluindo contraceptivos orais, incluindo metabolismo hepático de certos corticosteroides e aumento associado no seu efeito; indutores da enzima hepática, inibidores e substratos (fármacos que induzem a atividade enzimática do citocromo P450 3A4 (CYP 3A4) por exemplo, barbituratos, fenitoína, carbamazepina, rifampina), incluindo aumento do metabolismo dos corticosteroides; fármacos que inibem CYP 3A4 (por exemplo, cetoconazol, antibióticos macrolídeos tais como eritromicina), incluindo o potencial para concentrações aumentadas no plasma dos corticosteroides; fármacos que são metabolizados por CYP 3A4 (por exemplo, indinavir, eritromicina), incluindo aumento na sua depuração, resultando em concentração reduzida no plasma; cetoconazol incluindo metabolismo reduzido de certos corticosteroides em até 60%, levando a risco aumentado de efeitos colaterais de corticosteroides, e inibição da síntese de corticosteroides adrenais potencialmente causando insuficiência adrenal durante a retirada de corticosteroides; agentes anti-inflamatórios não-esteroidais (NSAIDS), incluindo risco aumentado de efeitos colaterais gastrointestinais e maior depuração de salicilatos; fenitoína, incluindo aumentos ou reduções no nível de fenitoína, controle alterado das convulsões; testes de pele, incluindo supressão de reações aos testes de pele; talidomida incluindo necrólise epidérmica tóxica; e vacinas incluindo uma resposta diminuída a toxoides e vacinas vivas ou inativadas devido à inibição da resposta do anticorpo ou potencialização da replicação de alguns organismos contidos nas vacinas vivas atenuadas).
[000504] Sendo assim, são providos no presente documento métodos para tratar uma doença, distúrbio ou condição associados com o receptor de glicocorticoide compreendendo administrar um conjugado de Fórmula (Ill), a um paciente que tem a referida doença, distúrbio ou condição, em que os efeitos colaterais associados com a administração da carga útil esteroide do referido conjugado são reduzidos. Além disso, são providos no presente documento métodos de liberação de um composto de Fórmula (III-P), Fórmula 11I-P-1, Fórmula (3000) ou Fórmula (Ill) a uma célula compreendendo colocar a referida célula em contato com um conjugado de proteína no composto de fórmula (III-P), Fórmula 111|-P-1, Fórmula (3000) ou Fórmula (Ill), em que o conjugado de proteína compreende um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que liga a um antígeno de superfície da referida célula.
[000505] Os compostos descritos no presente documento podem ser administrados sozinhos ou junto com um ou mais agentes terapêuticos adicionais. Um ou mais agentes terapêuticos adicionais podem ser administrados pouco antes, de forma concomitante com ou pouco depois da administração dos compostos descritos no presente documento. À presente descrição também inclui composições farmacêuticas compreendendo qualquer um dos compostos descritos no presente documento em combinação com um ou mais agentes terapêuticos adicionais e métodos de tratamento compreendendo administrar as referidas combinações aos indivíduos que necessitam dos mesmos.
[000506] Os agentes terapêuticos adequados incluem, porém não se limitam a: um segundo glicocorticoide, um agente terapêutico autoimune, um hormônio, um agente biológico ou um anticorpo monoclonal. Os agentes terapêuticos adequados também incluem, porém não se limitam a qualquer sal farmaceuticamente aceitável, ácido ou derivado de um composto apresentado no presente documento.
[000507] Os compostos descritos no presente documento também podem ser administrados e/ou co-formulados em combinação com antivirais, antibióticos, analgésicos, corticosteroides, esteroides, oxigênio, antioxidantes, inibidores de COX, cardioprotetores, quelantes metálicos, IFN-gamma, e/ou NSAIDs.
[000508] Em algumas modalidades dos métodos descritos no presente documento, múltiplas doses de um composto descrito no presente — documento — (ou uma composição farmacêutica compreendendo uma combinação de um composto descrito no presente documento e qualquer um dos agentes terapêuticos adicionais mencionados no presente documento) podem ser administrados a um indivíduo durante um período de tempo definido. Os métodos de acordo com este aspecto da descrição compreendem administrar sequencialmente a um indivíduo múltiplas doses de um composto descrito no presente documento. Conforme usado no presente documento, "administrar sequencialmente" significa que cada dose do composto é administrada ao indivíduo em um momento diferente, por exemplo, em dias diferentes separados por um intervalo predeterminado (por exemplo, horas, dias, semanas ou meses). À presente descrição inclui métodos que compreendem administrar sequencialmente ao paciente uma única dose inicial de um composto descrito no presente documento, seguido por uma ou mais doses secundárias do composto, e opcionalmente seguido por uma ou mais doses terciárias do composto.
[000509] Os termos "dose inicial", "doses secundárias" e "doses terciárias" se referem à sequência temporal de administração dos compostos descritos no presente documento. Sendo assim, a "dose inicial" é a dose que é administrada no início do regime de tratamento (também referido como a "dose da linha de base"); as "doses secundárias" são aquelas que são administradas depois da dose inicial;
e as "doses terciárias" são as doses que são administradas depois das doses secundárias. As doses iniciais, secundárias e terciárias podem todas conter a mesma quantidade do composto descrito no presente documento, mas geralmente podem se diferir uma das outras em termos de frequência de administração. Em certas modalidades, a quantidade do composto contido nas doses iniciais, secundárias e/ou terciárias varia de uma para outra (por exemplo, ajustadas para cima ou para baixo conforme apropriado) durante o curso do tratamento. Em certas modalidades, duas ou mais (por exemplo, 2, 3, 4 ou 5) doses são administradas no início do regime de tratamento como "doses de carregamento" seguidas por doses subsequentes que são administradas em uma base menos frequente (por exemplo, "doses de manutenção").
[000510] Em certas modalidades exemplificadoras da presente descrição, cada dose secundária e/ou terciária é administrada de 1 a 26 (por exemplo, 1, 1%, 2, 22, 3, 3/2, 4, 4/2, 5, 57/2, 6, 672, 7, 772, 8, 812,9, 9%, 10, 10%, 11, 11%, 12, 12%, 13, 1344, 14, 14%, 15, 15%, 16, 16%, 17, 177, 18, 1874, 19, 19%, 20, 20%, 21, 21%, 22, 22%, 23, 23%, 24, 247, 25, 257%, 26, 26%, ou mais) semanas depois da dose imediatamente precedente. A frase "a dose imediatamente precedente" conforme usada no presente documento, significa, em uma sequência de múltiplas administrações, a dose do composto que é administrada a um paciente antes da administração da dose muito próxima na sequência sem doses intervenientes.
[000511] Os métodos de acordo com este aspecto da descrição podem compreender administrar a um paciente qualquer número de doses secundárias e/ou terciárias do composto. Por exemplo, em certas modalidades, apenas uma única dose secundária é administrada ao paciente. Em outras modalidades, duas ou mais (por exemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 ou mais) doses secundárias são administradas ao paciente.
Da mesma forma, em certas modalidades, apenas uma única dose terciária é administrada ao paciente. Em outras modalidades, duas ou mais (por exemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 ou mais) doses terciárias são administradas ao paciente. O regime de administração pode ser realizado indefinidamente por um tempo de vida de um indivíduo específico, ou até que o referido tratamento não seja mais terapeuticamente necessário ou vantajoso.
[000512] Em modalidades envolvendo doses secundárias múltiplas, cada dose secundária pode ser administrada na mesma frequência que as outras doses secundárias. Por exemplo, cada dose secundária pode ser administrada ao paciente 1 a 2 semanas ou 1 a 2 meses depois da dose imediatamente precedente. Similarmente, em modalidades envolvendo doses terciárias, cada dose terciária pode ser administrada na mesma frequência que as outras doses terciárias. Por exemplo, cada dose terciária pode ser administrada ao paciente 2 a 12 semanas depois da dose imediatamente precedente. Em certas modalidades da descrição, a frequência na qual as doses secundárias e/ou terciárias são administradas a um paciente pode variar durante o curso do regime de tratamento. A frequência de administração também pode ser ajustada durante o curso do tratamento por um médico dependendo das necessidades do paciente individual seguindo o exame clínico.
[000513] A presente descrição inclui regimes de administração nos quais 2 a 6 doses de carga são administradas a um paciente em uma primeira frequência (por exemplo, uma vez por semana, uma vez a cada duas semanas, uma vez a cada três semanas, uma vez ao mês, uma vez a cada dois meses, etc.), seguido pela administração de duas ou mais doses de manutenção ao paciente em uma base menos frequente. Por exemplo, de acordo com este aspecto da descrição, se as doses de carga são administradas em uma frequência de uma vez ao mês, então as doses de manutenção podem ser administradas ao paciente uma vez a cada seis semanas, uma vez a cada dois meses, uma vez a cada três meses, etc.
[000514] A presente descrição inclui composições farmacêuticas dos compostos e/ou conjugados descritos no presente documento, por exemplo, os compostos de Fórmula (1), Fórmula |-P, Fórmula 1-P-1, Fórmula (II-P), Fórmula 11I-P-1, Fórmula (3000) e Fórmula (Ill), por exemplo, composições compreendendo um composto descrito no presente documento, um sal, estereoisômero, polimorfo do mesmo, e um veículo, diluente e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável. Exemplos de veículos, diluentes e excipientes adequados incluem, porém não se limitam a: tampões para manutenção de pH de composição própria (por exemplo, tampões de citrato, tampões de succinato, tampões de acetato, tampões de fosfato, tampões de lactato, tampões de oxalato e similares), proteínas veículo (por exemplo, albumina do soro humano), nanopartículas, solução fisiológica, polióis (por exemplo, trehalose, sacarose, xilitol, sorbitol, e similar), tensoativos (por exemplo, polissorbato 20, polissorbato 80, polioxolato e similar), antimicrobianos, e antioxidantes.
[000515] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um método para tratar uma doença, distúrbio ou condição incluindo administrar a um paciente que tem o referido distúrbio uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula (1), Fórmula |-P, Fórmula |-P-1, Fórmula (III-P), Fórmula 111I-P-1, Fórmula (3000) ou Fórmula (Ill), ou uma composição farmacêutica do mesmo.
[000516] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um método para tratar uma doença, distúrbio ou condição incluindo administrar a um paciente que tem o referido distúrbio uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto apresentado no presente documento, ou uma composição farmacêutica do mesmo.
[000517] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um método para tratar uma doença, distúrbio ou condição selecionado a partir do grupo consistindo de uma doença imunológica, doença autoimune, inflamação, asma ou um distúrbio intestinal inflamatório, doença de Crohn, colite ulcerativa.
[000518] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um método para tratar uma doença, distúrbio ou condição ao direcionar um antígeno, por exemplo, antígeno que expressa a superfície da célula, ao qual a liberação de esteroide pode alcançar um benefício terapêutico compreendendo administrar os conjugados descritos no presente documento. Em algumas modalidades, o antígeno é AXL, BAFFR, BCMA, componentes da lista BCR, BDCA2, BDCAA4, BTLA, BTNL2 BTNL3, BTNL8,BTNL9, C100rf54, CCR1, CCR3, CCRA, CCR5, CCR6, CCR7, CCR9, CCR1IO0, CD11c, CD137, CD138, CD1A4, CD168, CD177, CD19, CD20, CD209, CD209L, CD22, CD226, CD248, CD25, CD27, CD274, CD276, CD28, CD30, CD300A, CD33, CD37, CD38, CDA4, CD40, CD44, CD45, CD47, CD46, CD48, CD5, CD52, CD55, CD56, CD59, CD62E, CD68, CD69, CD70, CD74, CD79a, CD79b, CD8, CD80, CD86, CD90.2, CD96, CLEC12A, CLEC12B, CLEC7A, CLEC9A, CR1, CR3, CRTAM, CSF1IR, CTLA4, CXCR1/2, CXCRA4, CXCR5, DDR1, DDR?2, DEC-205, DLL4, DR6, FAP, FCamR, FOCMR, FcR's, Fire, GITR, HHLA?2, HLA classe Il, HVEM, ICOSLG, IFNLR1, ILIO0R1, ILIO0R2, ILI2R, ILI13RA1I, ILISRA?Z, ILISR, ILI7RA, ILI17RB, ILI7RC, ILI7RE, IL20R1, IL20R2, IL21R, IL22R1, IL22RA, I1L23R, IL27R, IL29R, IL2Rg, ILSIR, IL36R, IL3RA, IL4R, IL6R, ILSR, IL7R, IL9R, Integrinas, LAG3, LIFR, MAG/Siglec4, MMR, MSR1, NCR3LG1, NKG2D, NKp30, NKp46, PDCD1, PROKR1, PVR, PVRIG, PVRL2, PVRL3, RELT, SIGIRR, Siglec-1, Siglec—-10, Siglec-5, Siglec—6, Siglec-7, Siglec—8, Siglec-9, SIRPA, SLAMF7, TACI, componentes da lista TCOR/assoc, PTCRA, TCRb, CD3z, CD3, TEK, TGFBR1, TGFBR2, TGFBR3, TIGIT, TLR2, TLRA4, TROY, TSLPR, TYRO, VLDLR, VSIG4 ou VTCN1. Em algumas modalidades, o antígeno é IL2R—y.
[000519] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um método para tratar uma doença, distúrbio ou condição selecionado a partir de uma doença imunológica, uma doença autoimune, uma doença inflamatória, uma doença dermatológica ou uma doença gastrointestinal.
[000520] Em algumas modalidades, a doença é doença de Crohn, colite ulcerativa, síndrome de Cushing, insuficiência adrenal ou hiperplasia adrenal congênita.
[000521] Em algumas modalidades, a doença é inflamação, asma ou um distúrbio intestinal inflamatório.
[000522] Em algumas modalidades, a doença é uma doença autoimune selecionada a partir de esclerose múltipla, artrite reumatoide, doença intestinal inflamatória, colite ulcerativa, psoríase ou eczema.
[000523] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um método para reduzir ou melhorar os efeitos colateraia da quimioterapia, em que o método inclui administrar a um paciente que tem o referido distúrbio uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto ou uma composição descrita no presente documento.
[000524] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um método para reduzir ou melhorar os efeitos colaterais da terapia imunossupressora, em que o método inclui administrar a um paciente que tem o referido distúrbio uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto ou uma composição descrita no presente documento.
[000525] Em algumas modalidades, é apresentado no presente documento um método para tratar câncer, em que o método inclui administrar a um paciente que tem o referido distúrbio uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto ou uma composição descrita no presente documento. Em algumas modalidades, o câncer é selecionado a partir de leucemia linfoblástica aguda, leucemia linfoblástica crônica, linfoma de Hodgkin, linfoma não Hodgkin (NHL) ou mieloma múltiplo, assim como outros. F. EXEMPLOS
[000526] Certas modalidades são ilustradas pelos exemplos não limitantes que seguem.
[000527] Os reagentes e solventes foram obtidos a partir de fontes comerciais tais como Sinopharm Chemical Reagent Co. (SCRC), Sigma-Aldrich, Alfa, ou outros vendedores, a menos que explicitamente declarado de outra forma.
[000528] 1H RMN e outros espectros de RMN foram registrados em um Bruker AVII 400 ou Bruker AVIII 500. Os dados foram processados com software Nuts ou software MestReNova, medindo os deslocamentos de prótons em partes por milhão (ppm) a partir de um padrão interno de tetrametil silano.
[000529] As medições de HPLC-MS foram executadas em um sistema Agilent 1200 HPLC/6100 SQ usando as seguintes condições:
[000530] Método A para medição de HPLC—MS incluiu como a fase móvel: A: água (0,01% de ácido trifluoroacético TFA) e B: acetonitrila (0,01% TFA). A fase gradiente foi de 5% de B que foi aumentada até 95% de B por um período de tempo de 15 minutos (min) e em uma taxa de vazão de 1,0 mL/min. A coluna usada foi uma SunFire C18, 4.6x50 mm, 3.5 um. A temperatura da coluna foi de 50ºC. Os detectores incluíam um conversor analógico para digital ELSD (detector de varredura de luz evaporativa, aqui abaixo "ADC ELSD"), DAD (detector do feixe de diodos, 214 nm e 254 nm) e ionização por eletropulverização — ionização por pressão atmosférica (ES—API).
[000531] Método B para medições de HPLC—MS incluiu, como a fase móvel: A: água (10OmM NH4HCO3) e B: acetonitrila. A fase gradiente foi 5% de B que foi aumentada até 95% de B por um período de tempo de min e uma taxa de vazão de 1,0 mL/min. A coluna usada foi uma
XBridge C18, 4.6x50 mm, 3.5 um. A temperatura da coluna foi de 50ºC. Os detectores incluíram um ADC ELSD, DAD (214 nm e 254 nm), e um detector seletivo de massa (MSD ES-API).
[000532] A medição de LC—MS foi executada em um sistema Agilent 1200 HPLC/6100 SQ usando as seguintes condições:
[000533] Método A para medição de LC—-MS foi realizada em um instrumento WATERS 2767. A coluna foi uma Shimadzu Shim-—Pack, PRC-ODS, 20x250mm, 15upm, duas conectadas em série. A fase móvel foi A: água (0,01% TFA) e B: acetonitrila (0,01% TFA). A fase gradiente foi 5% de B que foi aumentada até 95% de B por um período de tempo de 3 min e uma taxa de vazão de 1,8 — 2,3 mL/min. A coluna usada foi uma SunFire C18, 4.6x50 mm, 3,5 um. A temperatura da coluna foi de 50ºC. Os detectores incluíram um conversor análogo para digital ELSD (detector de varredura de luz evaporativa), DAD (detector do feixe de diodos) (214 nm e 254 nm) e ES-API.
[000534] Método B para medição de LC-MS foi realizado em um instrumento Gilson GX-—281. A coluna foi uma Xbridge Prep C18 10 um OBD, 19x250 mm. A fase móvel foi A: água (1OMM NH4HCO3) e B: Acetonitrila. A fase gradiente foi 5% de B que foi aumentada até 95% de B por um período de tempo de de 3 min e em uma taxa de vazão de 1,8 — 2,3 mL/min. A coluna usada foi uma XBridge C18, 4,6xX50 mm, 3.5 um. A temperatura da coluna foi de 50ºC. Os detectores incluíam ADC ELSD, DAD (214 nm e 254 nm), e detector seletivo de massa (MSD) (ES-API).
[000535] Cromatografia líquida preparativa em alta pressão (Prep HPLC) foi realizada em um instrumento Gilson GX-—281. Dois sistemas solventes foram usados, um acídico e um básico. O sistema de solvente acídico incluiu uma coluna Waters SunFire 10 um C18 (100 À, 250 x 19 mm). O solvente A para prep-HPLC foi 0,05% de TFA em água e o solvente B foi acetonitrila. A condição de eluição foi um gradiente linear que aumentou o solvente B de 5% a 100% durante um período de tempo de 20 minutos e em uma taxa de vazão de 30 mL/min. O sistema de solvente básico incluiu uma coluna Waters Xbridge 10 um C18 (100 Á, 250 x 19 mm). O solvente A para prep-HPLC foi bicarbonato de amônio mM (NH4HCO3) em água e o solvente B foi acetonitrila. A condição de eluição foi um gradiente linear que aumentou o solvente B de 5% a 100% durante um período de tempo de 20 minutos e em uma taxa de vazão de 30 mL/min.
[000536] A cromatografia rápida foi realizada em um instrumento Biotage, com coluna Agela Flash de sílica-CS. A cromatografia rápida de fase reversa foi realizada em instrumento Biotage, com Boston ODS ou Agela C18, a menos que explicitamente indicado de outra forma.
[000537] As seguintes abreviações são usadas nos exemplos e ao longo do relatório descritivo: Anticorpo Thermo Scientific Prodff 28372, contendo fosfato de sódio 100 mM BupHTM e cloreto de sódio 150 mM, livre de potássio, pH foi ajustado de 7,2 po tcc [oe fam — ——“3S,
ou ácido dibenz|[b, flazocina-5(6H)-butanoico, 11,12-dideidro o tetrametilurônio o free 6 feet e fe
MÉTODOS DE PREPARAÇÃO EXEMPLO 1
[000538] O Esquema 1 na Figura 3 mostra a síntese de Budesonida com espaçadores contendo os grupos reativos, suc-ácido (composto 1c), análogos de carbamato (1d, 1e), análogos de THP (1g e 1h), análogos de glicose (1i e 1j), análogos de fosfato (1k e 11), e um análogo de fosfato comercial (1m). Intermediário 3a 1-[(02-[(18,28,A4R,88,98,118,128,13R)-11-Hidróxi-9,13-dimetil-16- oxo-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa- 14,17-dien-8-i1]-2-0xo0etóxi)carbonil)óxi]lpirrolidina-2,5-diona (3a)
RPI a 0 RO EX o Vu o o
[000539] A uma solução de budenosida 1a (0,10 g; 0,26 mmol) em DCM (1 mL) foram adicionados bis(2,5-dioxopirrolidin-1-il) carbonato (71 mg; 0,30 mmol), trietilamina (47 mg; 0,52 mmol) e DMAP (3,0 mg; cat.). A mistura de reação foi agitada em 15-25ºC por 12 horas até que a budesonida fosse consumida, a qual foi monitorada por LCMS. À mistura de reação foi então diluída com DCM e lavada com água. À solução orgânica foi seca sobre sulfato de sódio. Depois de filtrada, a solução foi concentrada in vacuo e o resíduo (bruto 3a) foi usado para a próxima etapa diretamente sem purificação. (93 mg, rendimento 71%). ESI m/z: 572,2 (M + H)+. Exemplo 1c Ácido 4-(2-[(18,28,4R,88,98,118,128,13R)-11-Hidróxi-9,13-dimetil- 16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa- 14,17-dien-8-i1]-2-0x0etóxi)-4-oxobutanoico (1c)
OH 3 /
O ro NET 7 ão. o g H TS" Oo
[000540] Vide WOZ2015005459; WOZ2013074988; Research in Pharmaceutical Science, 2011, 6(2), 107-116; e International Journal of Pharmaceutics, 2009, 365(1-2), 69-76.
[000541] A uma solução de budenosida (1a; 0,10 g; 0,26 mmol) em DCM (1 mL) foram adicionados anidrido succínico (30 mg; 0,30 mmol), trietilamina (47 mg; 0,52 mmol) e DMAP (3 mg, catalisador; 0,02 mmol). A mistura foi agitada em RT por 12 horas até que a budesonida fosse consumida, a qual foi monitorada por TLC e LCMS. A mistura de reação foi então diluída com DCM e lavada com água. A solução orgânica foi seca sobre sulfato de sódio. Depois de filtrada, a solução foi concentrada in vacuo e o resíduo foi purificado por prep-HPLC para dar o composto do título 1c (22 mg, rendimento 18%) como um sólido branco. ESI m/z: 531,3 (M + H)+. 1H RMN (500 MHz, CDCI3) ô 7,48 (d; J=10 Hz; 1H); 6,28-6,26 (m; 1H); 6,04-6,02 (m; 1H); 5,23-5,11 (m; 1H); 5,06-4,99 (m; 1H); 4,83-4,68 (m; 1H); 4,45-4,43 (m; 1H); 2,76-2,63 (m; 5H); 2,41-2,39 (m; 1H); 2,26-2,12 (m; 2H); 1,99-1,66 (m; 6H); 1,57-1,38 (m; 6H); 1,32 (s; 1H); 1,16-0,94 (m; 8H) ppm. Exemplo 1d 2-[(18,28,4R,88,98,118,128,13R)-11-Hidróxi-9,13-dimetil-16-0x0-6- propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17- dien-8-i1]-2-0x0etil N-metil-N-[2-(metilamino)etil|carbamato (1d) HN— Wa o Ss o
[000542] A uma solução de bruto intermediário 3a (63 mg; 0,11 mmol) em DCM (5 mL) foram adicionados N,N"-dimetiletano-1,2-diamina (28 mg; 0,32 mmol) e trietilamina (38 mg; 0,38 mmol) em RT. A mistura resultante foi agitada em RT por duas horas até que a maior parte de 3a fosse consumida, a qual foi monitorada por LCMS. Os voláteis foram removidos in vacuo e o resíduo foi purificado por prep-HPLC (método B) para dar 1d (4 mg, rendimento 4,5%) como um sólido branco. ES| m/z: 545,3 (M + H)+. 1H RMN (500 MHz, CDCI3) ó 7,32-7,30 (m; 1H); 6,28- 6,25 (m;1H); 6,02-6,01 (m; 1H); 4,42 (br s; 1H); 3,50-3,23 (m; 3H); 3,10- 3,02 (m; 3H); 2,82-2,71 (m; 3H); 2,57-2,55 (m; 1H); 2,35-2,33 (m; 1H); 2,15-2,06 (m; 2H); 1,96-1,79 (m; 12H); 1,60-1,56 (m; 3H); 1,46 (m; 3H); 1,37-1,33 (m; 2H); 1,23-1,04 (m; 4H); 0,92-0,86 (m; 3H) ppm.
Exemplo le 2-[(18,28,4R,8S8,98,118,13R)-11-Hidróxi-9,13-dimetil-16-0x0-6- propil-5,7-dioxapenta ciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17- dien-8-i1]-2-0x0etil N-[(hidrazinacarbonil)metil]|carbamato (1e) HN-NH? Ye o Ss o
[000543] A uma mistura de bruto 3a (0,16 g; 0,28 mmol) em DMF (3 mL) foram adicionados Boc-2-(2-aminoacetil)hidrazina (80 mg; 0,42 mmol) e trietilamina (85 mg, 0.84 mmol). A mistura de reação foi agitada em 25ºC por 16 horas e intermediário 3a foi consumido, o qual foi monitorado por LCMS. A mistura foi então temperada com água e extraída com acetato de etila. A solução orgânica combinada foi seca sobre sulfato de sódio anidro. Depois de filtrada, a solução foi concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (30-50% acetato de etila em éter de petróleo) para dar Boc-1e (70 mg) como um sólido branco (ESI m/z: 646 (M + H)+), o qual foi dissolvido em DCM (2 mL). À solução foi adicionado em gotas TFA (1 mL) a 0ºC. A mistura foi agitada em 25ºC por duas horas até que Boc-1e fosse consumido, a qual foi monitorada por LCMS. Os voláteis foram removidos in vacuo e o resíduo foi purificado por prep-HPLC para dar o composto do título 1e (7 mg, rendimento 12%) como um sólido branco. ESI m/z: 546 (M + H)+.
Exemplo 1g (18,28,4R,8S,98,118,128,13R)-11-Hidróxi-8-(24[6-(hidroximetil)oxan-2- illóxiLvacetil)-9,13-dimetil-6-propil-5,7-dioxapentaciclo [10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17-dien-16-ona (19) oH o o vo ED Ie o
[000544] A uma solução de budenosida (1a, 50 mg; 0,12 mmol) em DCM anidro (4 mL) foram adicionados (3,4-di-hidro-2H-piran-2- il)metano! (0,11 g; 0,93 mmol) e ácido p-toluenossulfônico (31 mg; 0,18 mmol) a 0ºC. A mistura de reação foi agitada em RT por 4 dias, a qual foi monitorada por LCMS. Os voláteis foram removidos in vacuo e o resíduo foi dissolvido em DMF e separado por prep-HPLC (método B) para dar o composto do título 1g (13 mg, rendimento 20%) como um sólido branco. ES| m/z: 545 (M + H)+. Exemplo 1h Metil 2-[(6-(2-[[18,28,4R,88,98,118,128,13R)-11-hidróxi-9,13-dimetil- 16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa- 14,17-dien-8-il]-2-0x0etóxil)oxan-2-il) metoxilacetato (1h) O, 3 OA o. Ho, a
CR o
[000545] A uma solução de (3,4-di-hidro-2H-piran-2-il)metanol (2,0 g; 18 mmols) em THF (30 mL) foi adicionado hidreto de sódio (60% em óleo mineral, 0,88 9; 22 mmols) em partes a 0ºC sob proteção de nitrogênio. A suspensão foi agitada em 0ºC até o final da evolução do hidrogênio. À mistura resultante foi então adicionada uma solução de etil 2-bromoacetato (4,0 g; 26 mmols) em THF (18 mL). A mistura foi agitada em RT de um dia para o outro até que o material de partida fosse predominantemente consumido de acordo com LCMS. Depois de resfriada até 0ºC, a reação foi temperada com água sob proteção de nitrogênio e extraída com acetato de etila. A solução orgânica combinada foi lavada com água e salmoura, seca sobre sulfato de sódio e concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia rápida (0-8% acetato de etila em éter de petróleo) para dar etil 2-((3,4- di-hidro-2H-piran-2-il )netóxi)acetato (0,70 g; 21% de rendimento) como óleo incolor. (1H RMN (500 MHz, DMSOd6) à 6,36 (d; J = 6,0 Hz; 1H); 4,67 (m; 1H); 4,16 (s; 2H); 3,92 (m; 1H); 3,65 (s; 3H); 3,57 (d; J= 5,5 Hz; 2H); 2,50-1,99 (m; 1H); 1,93-1,82 (m; 1H); 1,80 (m; 1H); 1,60 (m; 1H) ppm.)
[000546] A uma solução de budenosida (1a, 0,11 g; 0,25 mmol) em DCM anidro (8 mL) foram adicionados etil 2-((3,4-di-hidro-2H-piran-2- iNmetóxi)acetato (0,355 g; 1,9 mmol) obtido acima e ácido p- toluenossulfônico (66 mg; 0,35 mmol) a 0ºC. A mistura de reação foi agitada em RT por 4 horas, a qual foi monitorada por LCMS. Os voláteis foram removidos in vacuo e o resíduo foi dissolvido em DMF e separado por prep-HPLC (método A) para dar o composto do título 1h (46 mg, rendimento 29%) como um sólido branco. ESI m/z: 617 (M + H)+.
Exemplo 1i (18,28,4R,88S,98,118,128,13R)-11-Hidróxi-9,13-dimetil-6-propil-8- (24A[(2R,3R,4S,58,6R)-3,4,5-trildróxi-6-(hidroximetil)oxan-2-ilJóxi) acetil)-5,7-dioxapentaciclo[10,8,002,9,04,8,013,18]icosa-14,17-dien- 16-ona (1i, com epímeros) o sã o EA do no Son Ho br
[000547] A uma mistura de budesonida (1a, 0,22 g; 0,50 mmol) e acetobromo-a-D-glicose (0,33 g; 0,80 mmol) em DCM (15 mL) foi adicionado peneiras moleculares 4 À (1,0 g), e a mistura foi agitada em RT por meia hora seguido pela adição de trifluorometanossulfonato de prata (0,19 g; 0,75 mmol) a 0ºC. A suspensão foi agitada no escuro em RT durante o final de semana (72 horas) sob proteção de nitrogênio. À mistura foi filtrada através de Celite e o filtrado foi concentrado in vacuo. O resíduo foi purificado por prep-HPLC (método B) para dar Ac-1i (25 mg, rendimento 9,2%) como um sólido branco. ESI m/z: 761 (M + H)+. 1H RMN (DMSOd6, 400 MHz) (com epímeros) à 7,34-7,30 (m; 1H); 6,19-6,14 (m; 1H); 5,91 (s; 1H); 5,29 (t; J = 9,2 Hz; 1H); 5,17-5,15 (m; 0,5H); 5,03-5,01 (m; 0,5H); 4,96-4,90 (m; 1H); 4,85-4,74 (m; 3H); 4,70- 4,67 (m; 1H); 4,64-4,63 (m; 0,5H); 4,59-4,56 (m; 0,5H); 4,39-4,28 (m; 2H); 4,20-4,16 (m; 1H); 4,05-3,99 (m; 2H); 2,56-2,40 (m; 1H); 2,32-2,26 (m; 1H); 2,13-1,89 (m; 14H); 1,83-1,63 (m; 3H); 1,59-1,48 (m; 3H); 1,44- 1,21 (m; 6H); 1,15-0,91 (m; 2H); 0,86-0,81 (m; 6H) ppm.
[000548] A uma solução do composto Ac-1i (30 mg, 39 umol) obtido acima em água (1 mL) e metanol! (3 mL) foi adicionado hidróxido de lítio monoidratado (17 mg; 0,40 mmol) a 0ºC. Depois de agitada a 0ºC por uma hora, a mistura foi diretamente purificada por prep-HPLC (método B) para dar 1i (24 mg, 98% de rendimento) como um sólido branco. ESI m/z: 593 (M + H)+. 1H RMN (MeODd4, 400 MHz) (com epímeros) ô 7,46 (t; J = 10,4 Hz; 1H); 6,26 (dt; J = 10,0 e 2,0 Hz; 1H); 6,02 (s; 1H) 521 e 4,64 (t; J = 4,8 Hz; 1H); 5,16 (t; J = 7,2 Hz; 0,5H); 4,94-4,80 (m; 2,5H); 4,57-4,47 (m; 1H); 4,44-4,41 (m; 1H); 4,34-4,31 (m; 1H); 3,90-3,87 (m; 1H); 3,70-3,64 (m; 1H); 3,39-3,24 (m; 4H); 2,70-2,62 (m; 1H); 2,41-2,36 (m; 1H); 2,27-2,08 (m; 2H); 2,00-1,93 (m; 1H); 1,88-1,81 (m; 1H); 1,74- 1,32 (m; 9H); 1,22-0,90 (m; 8H) ppm. Exemplo 1j Ácido (28,38,4S,5R,6R)-3,4,5-triidróxi-6-(2- [18,28 4R,8S8,98,118,128,13R)-11-hidróxi-9,13-dimetil-16-o0x0-6-propil- 5,7-dioxapentaciclo[10,8,002,9,04,8,013,18]icosa-14,17-dien-8-i1]-2- oxoetóxiloxane-2-carboxílico (1), com epímeros) o hn es o oH HO h “oH HO by
[000549] Seguindo os procedimentos similares como 1i exceto substituindo metil éster de ácido acetobromo-a-D-glicurônico por acetobromo-a-D-glicose, o composto 1j (24 mg; 9,2% de rendimento em 2 etapas) como um sólido branco foi obtido. ES| m/z: 607 (M + H)+. 1H RMN (MeODd4, 400 MHz) 5 7,48 (t; J= 10,0 Hz; 1H); 6,28-6,24 (m; 1H); 6,02 (s; 1H); 5,22-5,15 (m; 1H); 4,98-4,81 (m; 2,5H); 4,65-4,56 (m; 1,5H); 4,45-4,39 (m; 2H); 3,62-3,59 (m; 1H); 3,52-3,46 (m; 1H); 3,41 (t; J=8,8 Hz; 1H); 3,30-3,28 (m; 1H); 2,70-2,62 (m; 1H); 2,40-2,36 (m; 1H); 2,27- 2,10 (m; 2H); 1,95-1,92 (m; 2H); 1,75-1,54 (m; 3H); 1,50 (s; 3H); 1,51- 1,32 (m; 3H); 1,12-0,90 (m; 8H) ppm.
Exemplo 1k Ácido (2, 2113etóxi)((2 1H)S,2S,A4R,8S,98,118,128,13R)13óxi)((2 1H), 3,30-3,28 (m, 1H), 2,70-262 (m, 1H), 2,40-2,36 (m, 1H)2,9,04,,013,18]icosa)((2 1H), 3,30-3,28 oxoetóxi))fosfínico (1k) o o a E
TS o
[000550] A uma solução de trietilamina (0,67 g; 6,6 mmoIs) em clorofórmio (4 mL) foi adicionado oxicloreto de fósforo (0,51 mg; 3,3 mmols) a 0ºC, seguido pela adição de uma solução de budesonida (1a, 1,3 g; 3,0 mmols) em clorofórmio (4 mL). Depois de agitada em 20ºC por duas horas, a mistura foi resfriada até 0ºC e foi adicionada uma solução de Boc-etanolamina (0,41 mg; 2,6 mmols) em clorofórmio (4 mL) e piridina (3 mL). Depois de agitada em 20ºC por uma hora até que a reação fosse completada de acordo com LCMS, a mistura de reação foi temperada com a adição de água (2 mL) a 0ºC. A mistura foi agitada em 20ºC de um dia para o outro. Os voláteis foram removidos in vacuo e o resíduo foi purificado por prep-HPLC (método B) para render Boc- 1k bruto (330 mg, 17%) como uma película amarela. ES| m/z: 676 (M + Na)+.
[000551] A uma solução de Boc-1k (0,18 g; 0,28 mmol) em DCM (5 mL) foi adicionado ácido trifluoroacético (0,5 mL) a 0ºC. A mistura resultante foi agitada em 23ºC por duas horas até que Boc fosse totalmente removido de acordo com LCMS. Os voláteis foram removidos in vacuo. O resíduo foi purificado por prep-HPLC (método B) para render 1k como um sólido branco (90 mg, 59% de rendimento). ESI| m/z: 554 (M + H)+. 1H RMN (500 MHz, MeODd4) ô 7,49 (d; J= 10,1 Hz; 1H); 6,28 (d; J = 10,1 Hz; 1H); 6,03 (s; 1H); 5,24-5,15 (m; 1H); 4,87-4,62 (m; 3H); 4,45 (d; J = 6,1 Hz; 1H); 4,18-4,15 (m; 2H); 3,22-3,20 (m; 2H); 2,71-2,64 (m; 1H); 2,40 (d; J = 13,4 Hz; 1H); 2,29-1,71 (m; 6H); 1,65-1,32 (m; 9H);
1,22-0,91 (m; 7H) ppm. Anal. HPLC: > 99,9%, Tempo de retenção: 3,90 min (método B). Exemplo 11 Ácido (2-([(9H-Fluoren-9-ilmetóxi)carbonilJaminoJetóxi)fosfônico
[000552] Vide J. Am. Chem. Soc., 2016, 138(4), 1430-1445; WOZ2015153401; e Phosphorus, Sulfur and Silicon and the Related Elements, 2000, 165, 83-90. o FmostiNs o Frou
[000553] A uma mistura de Fmoc-etanolamina (1,1 g; 3,9 mmols) em THF (16 mL) foi adicionado cloreto de difosforila (2,2 g; 8,8 mmols) com seringa a -40ºC. Depois de agitada em -40ºC por uma hora até que o material de partida fosse totalmente consumido, a qual foi monitorada por LCMS, a mistura de reação foi temperada com água (1 mL) a -400C, tratada com solução de bicarbonato de sódio aquoso saturado (200 mL) e mantida a 10-20ºC de um dia para o outro. A mistura resultante foi acidificada com HCI conc. até pH2 e foi então extraída com acetato de etila. A solução orgânica combinada foi seca sobre sulfato de sódio e concentrada para render o composto do título bruto (1,6 9, bruto) como um sólido branco, o qual foi usado para a próxima etapa sem purificação. ES| m/z: 364 (M + H)+.
Ácido (24[(9H-Fluoren-9-ilmetóxi)carbonil]JaminoJetóxi)(([hidróxi(f2- [18,2S8,4R,8S,98,118,128,13R)-11-hidróxi-9,13-dimetil-16-0x0-6- propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17-dien-8- i1]-2-0x0etóxi))fosforil]Jóxi))fosfínico (Fmoc-11) o E Pó oh Oo OH Se o
[000554] Seguindo o procedimento acima exceto substituindo budesonida (1a; 0,86 g; 20 mmols) por Fmoc-etanolamina, o intermediário de budesonida fosfônica 1a-PO3H2 (1,1 g; bruto) como um sólido branco (ESI m/z: 551 (M + H)+) foi obtido.
[000555] A uma solução de ácido (24[(9H-fluoren-9-ilmetóxi)carbonil] aminoletóxilfosfônico bruto (0,29 g; 0,80 mmol) em DMF (5 mL) foram adicionados trietilamina (81 mg; 0,80 mmol) e 1,1'-carbonildiimidazo!| (CDI; 0,32 g; 2,0 mmols) a 10ºC. A mistura foi agitada em 10-20ºC por minutos antes do intermediário de budesonida fosfônica 1a-PO3H2 obtido acima (0,41 g; 0,80 mmol) e cloreto de zinco (0,87 g; 6,4 mmoIis) foram adicionados na mistura de reação. A mistura resultante foi agitada em 10-20ºC de um dia para o outro e o material de partida foi totalmente consumido de acordo com LCMS. A reação foi então temperada com HCI aq. diluído (1 N, 50 mL) e extraída com acetato de etila. A solução orgânica combinada foi concentrada e o resíduo foi purificado por prep- HPLC (método B) para render Fmoc-11 (0.32 g, rendimento 47%) como um sólido branco. ESI m/z: 856 (M + H)+.
Ácido (2-aminoetóxi)(([hidróxi((2-[(18,28,4R,88,98,118,128,13R)-11-hidró- xi-9,13-dimetil-16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18] icosa-14,17-dien-8-i1]-2-0x0etóxi))fosforil]Jóxi))fosfínico (11) o A 6 om
O OH 2
LIES
[000556] Vide WO2015153401.
[000557] A uma solução de Fmoc-11 (0,10 g; 0,12 mmol) em DCM (2 mL) foi adicionada piperidina (67 mg; 0,79 mmol) a 10ºC. A mistura de reação foi agitada em 10-20ºC por 16 horas. O composto Fmoc-11 foi totalmente consumido de acordo com LCMS. Os voláteis foram removidos in vacuo e o resíduo foi purificado por prep-HPLC (método B) para render 11 (50 mg, rendimento 68%) como um sólido branco. ESI m/z: 634 (M + H)+. 1H RMN (500 MHz, MeODd4) ô 7,50 (d; J = 10,0 Hz; 1H); 6,28 (d; J = 9,9 Hz; 1H); 6,03 (s; 1H); 5,23-5,16 (m; 1H); 5,02-4,97 (m; 1H); 4,88-4,67 (m; 1H); 4,45 (d; J = 3,4 Hz; 1H); 4,23 (s; 2H); 3,24 (s; 2H); 2,67 (dd; JU = 13,5; 8,3 Hz; 1H); 2,40 (d; JU = 11,3 Hz; 1H); 2,28- 1,32 (m; 15H); 1,23-0,92 (m; 8H) ppm. Anal. HPLC: > 99,9%, Tempo de retenção: 2,74 min (método B).
[000558] A tabela 1a abaixo apresenta esteroides feitos usando os métodos descritos no presente documento.
Tabela 1a — Estrutura e propriedades físico-químicas dos compostos Pureza MW MS Estrutura cLogP | MF HPLC (Cal) | (MH) TERÁ: E 273 | casH3406 430,55 | 4313 HO. o bH
DE
PERDA 4 TRIO o 300 | c29H3809 530,25 | 631,2 o ol H
ERRO 1 os 292 | caoH44n2O7 544,69 | 545,3 AN o OH mo L od E AA | Da um É q RA Ds 2 100 144 | C28H39N308 545,62 | 546,2 aà Aio Si o A o E LO. ss AO 2 365 | C31H4408 544,68 | 545,3 no. QTO, — o oH
XP o LR 319 | c34H48010 61632 | SO "o o b : aos = 2
BH ey po oo Ao A 100 C31H44011 592,67 | 5934
OH ol HH MO, E = 4 o. x — 1,2 1H42012 o: o7, io ooo Nha 28 | c31H420 606,66 | 607,3
À no or
OH — dt e — o IL eo 100 118 | caTH40NOSP 553,58 | 554 papo o oH
Pureza MW MS cLogP | MF HPLC (Cal.) (M+H)
H —— o E = E 1º % oh lh 100 0,55 | C27TH41NO12P2 —) 63356 | 6340 o o 1 OH p-Pp=0
A OH Ho CR? RETAS AD o 100 115 | C21HI7Na208BP — | 484,39 | 590,3 o Na" 7-0 OH oO Na* o Ho FF o + ON QD o 10 244 | c25H32F206 466,51 | 467 Ho. o on
F
H HH o o C29H40F2N207,C AU - >95 240 663,66 | 567 Atos z 2HF302 HN o Y v oH
F
H HH o o C30H42F2N207,C MDA - >95 2,63 678,69 | 581 Atos F 2HF302 HN o oH
PO n F
HH SN P > C32H46F2N207,C SA O º 1100 3,34 722,74 No 2HF302 NOS o om K o no jp
SH NO 9 x 100 246 |Cc3oH4OFAN2O? | 57864 | 570 UN o.
FAAO o OH o NAL ss
O o O | >os 347 | ca8H39NOTS 533,68 | 531 oH ns Ao o
Pureza MW MS cLogP | MF HPLC (cal) | (MH)
RO o 9 |>96 369 | caoH41NO7TS 547,71 | 548 ú ó OH
HSOA Y Oo o H F
NES O O | >95 317 | casHaTFaNO7S | 56966 | 570 o N o OH
HSOA Y o o. HE «x RÃS o |>95 340 | cooM3INFaNO?TS | 58369 | 584 | o o asso o
AR EH 103a " RO 1,58 — | casH4oN2O7 51664 | 517 mama so o
F
ALTAS 1036 n = 129 | casHaBFaN2O? | 55262 | 553 mano So ou o a -
RA no o «e > 367 —|casHsoFaN208 | 66479 | 66s dé o >95 219 667 on o h a n en e SN c34HaBFaN2O9 — | 666,76
TV XY o
Esquema 2. Síntese de budenosida com espaçador VC-PAB ps + se” SOS £s ERROS Xu Rn dgumdsomao amo o o DO er Ss nO cre air 1 O sa IDE 2 da o a ITD E meme PA A ISTO EE 1 de TENS ecra: De | HATU, DIPER ou NMM, DMF, rt e feçao oe SI nu TA, 2 poa o: Esta us 1 é 2 a se ATA ALI TA) ARA RA o PO PO x LÃ A, : dA AN Ae" emo CO xs Tr do, é So a Procedimento geral A para síntese de MC-Budesonida com espaçador (2a & 2c) o e? J o o / R-NH7 (4 or 9) CÍ. R AAA DIPEA, DMF A o o rt, 16 hrs o 5a, X = CH. 2a,c 5b, X = (OCHCH2);O
[000559] A uma solução de vc PAB-Budesonida (4a A = CO, 1.0 equiv.) ou amina 9 (1,0 equiv.) no Esquema 2 em DMF (ca. 1 mL por 10 mg de amina) foram adicionados NHS éster ativado 5 (1,5-3,0 equiv.) na tabela abaixo e DIPEA (2,0 equiv.) em RT. A mistura de reação foi agitada em RT de um dia para o outro quando NHS éster e a maior parte da amina foram consumidos de acordo com os espectros LCMS. Depois da filtração, a solução de reação foi diretamente purificada por prep- HPLC ou cromatografia rápida de fase reversa para dar a amida desejada 2 (ca. 17% de rendimento) como um sólido branco.
fis [en emana a [veia ori [rias so mg 28mg,91 | DIPEA (23 mg, 0,18 | DMF (3 “6 PrepHPLC | 2a (10 mg, 56 umol umol mmol) mL) (método A) 17%) 88 mg | DIPEA (40 mg, 31 | DMF (1 Prep-HPLC 20 (35 mg, nn solução de 9 16 pmol umol) mL) (método A) 4%) c. sal de TEA Procedimento geral B para síntese de amidas do precursor 2b, 21, 2m a partir de ácido “Xx es E& à oz |H VÔ fe] PO toADS Pp Lg A LT” T FT AN, AQ ARS o R-COOH (5) HoN Ny N “ DA - o o no" t ) HATU, DIPEA A AN, — DUFOUTHF NONE n 316 horas 4a-o
NX Lea H É SO SÔSAA 2? q "uy o o É oo AD E pn XT H. A LI o L Y ) “NY N NÃ S e o HO “Rh ) L n WA, Ar o N NH? precursor 2b, 21, 2m bre Be
XY ESTIANO A ee | õ Q H j K
N temo 2m - rn | OQ NH me Ar qo >”
[000560] A uma solução de ácido 5 (1,0-1,5 equiv.) em DMF ou DCM ou THF (1 mL por 5 mg de 5) foram adicionados DIPEA (2,0-5,0 equiv.) e HATU (1,4-2,2 equiv.) em RT. A mistura resultante foi agitada nesta temperatura por 0,5-1 hora antes da vcPAB-Budesonida (4, 1,0 equiv.) ser adicionada. A mistura de reação foi agitada em RT por 3-16 horas até que a amina fosse totalmente consumida, a qual foi monitorada por LCMS. A mistura de reação foi filtrada através de membrana e a filtração foi então separada por prep-HPLC ou cromatografia rápida de fase reversa para dar a amida 2 (21-54% de rendimento) como um sólido branco. Na tabela abaixo estão os detalhes adicionais.
[mm Te Tem Ts [fomos [rms] team vm 10 mg, 18 | DIPEA (6,2 mg, 48 umol) | pmF (1 Prep-HPLC 4o |" sc 16 Á 2b (3,0 mg, 21%) ume! umol HATU (9,0 mg, 24 umol) | mL) (método B) se mo 37 mg, 67 OPEN (8 me 97 DMF (5 Prep-HPLC 61 mo mmol) G 3 ep 2i (21 mg, 24%) pmol mL) (método B) pmol HATU (34 mg, 89 umol) so mo 6,3 ma, | DIPEA (3,6 mg, 27 umol) | puF Prep-HPLC 94 16 . 21(7 mg, 54%) umol 14 umol | HaTU (8,0 mg, 20 umol) | ML) (método B) à no 13mg,21 | DIPEA (8,0 ma, 62 umol) | THF (5 16 Prep-HPLC | 2m - precursor pro! umol HATU (12 mg, 31 umol) | ML) (método A) | (5 mg) Procedimento geral C para síntese de intermediário 7 e 10 ox Aos o - R ê 9 TS, 2 1 AMP mena, a oo erro A AA mec EO, FAX PR ——— SM RENAL LI ha LA, Hd a 710 AZ o
0. AS 6a 7 Co Õ HN o A 2 í OoHO Fo
[000561] A uma solução de intermediário 6 (1,2-1,4 equiv.) em DMF foi adicionado HATU (1,5-1,7 equiv.) em RT. A solução obtida foi agitada em RT por uma hora. A esta suspensão foram adicionados uma solução de vcPAB-budesonida (4a; 1,0 equiv.) em DMF (0,10 mL por mg de 4a)
e subsequentemente NMM (2,3-3,0 equiv.). A mistura de reação foi agitada em RT por 16 horas e se tornou clara. A reação foi monitorada por LCMS até que o composto 4a fosse totalmente consumido. A uma mistura de reação foi então adicionada dietilamina (excesso), e a mistura resultante foi então agitada em RT por 1-3 horas até que Fmoc fosse removido de acordo com LCMS. Os voláteis foram removidos in vacuo e o resíduo foi purificado por prep-HPLC (método A) para dar o composto 7 (18% de rendimento a partir do composto 4a) ou purificado por prep-HPLC (método B) para dar o composto 10 (5-% de rendimento) como um sólido branco. Na tabela abaixo estão os detalhes adicionais. [ras Tea [Bsstegets — Tsorens [fere Trata [Pati ima [e er 60 mg, 64 46 mg, 86 DMF (3 prep-HPLC 7(13mg, 4a 6a HATU (41 mg, 0,11 mmol) depois 3 pmol pmol mL) (método A) 18%) depois Et2NH (0,5 mL) horas 015 go DMF (5 Prep-HPLC | 10 (13 mg, 0,20 HATU (0,11 g, 0,29 mmol) depois 1 0,24 mmol mL) (método B) | 5%) mmol depois Et2NH (1 mL) hr Procedimento geral D para síntese de carbamatos 2j, 2k, 2re 2s NO, 1 ks) | Ri'MR2"NH (1c-e, 1k-1) n À RI" Rm o o R esa RmTo ON n DIPEA, oB Rm a-c DMF, rt., 3-24 hrs 2j, 2k, 21, 2s
[000562] A mistura foi agitada em RT por 3-24 horas até que o PNP éster ativado fosse totalmente consumido, o qual foi monitorado por LCMS. A mistura de reação foi filtrada através de membrana e o filtrado foi separado diretamente por prep-HPLC para dar o composto 2 (com ou sem diastereoisômeros, 11-63% de rendimento) como um sólido(s) branco(s). Na tabela abaixo estão os detalhes adicionais.
budesonida Tempo Som espaçador | Éster ativado 23 Base/reagentes Solvente o Purificação | Produto 2 Fipe Em umo! umo! HOBt (4,0 mg, 30 umol) | ML) (método A) 20mg,37 22 ma, 3o | DIPEA (12 mg, 93 umol) | pve (1 Prep-HPLC | 2k-A (3,3 mg, 10%) raso es ie ss pmol upmol mmol) mL) (método B) | rendimento 61%) Síntese de 2a-d
[000563] Os |ligantesde budesonida 2a-d foram preparados a partir de três tentativas de acordo com o Esquema 2. A primeira tentativa foi diretamente reações de acoplamento de amida a partir de vcPAB- Budesonida (4a), a qual foi obtida a partir do éster ativado de budesonida 3a com ligantes 5. A segunda tentativa foi através das reações de acoplamento de amida iniciais a partir de vcPAB- Budesonida (4a) com intermediário 6a para gerar ligantes de budesonida 7, seguido por ciclização 3+2 com galactose-azida (8a) para gerar intermediários 9, e finalmente pelas reações de acoplamento da amida secundária com 5. A terceira tentativa foi através das reações de acoplamento da primeira amida de 4 com intermediário 6b, seguido pela formação de amida com 5b e sequencialmente desproteção da acetona para dar 2d.
Intermediário 4a o HH o TR O: ta AÇO pouomeç ore CERA. fo. PE o o 3a Áxm Boc-vcPAB x o ré u e zo o mA O Y "Oxads 5 OH 4a Í
[000564] 1,4 mmol) em DMF seca (10 mL) foram adicionados Boc-vc- PAB (12a) [WO2008/34124 A2] (0,59 g; 1,2 mmol), DMAP (0,30 g; 2,4 mmol) e piridina (0,29 g; 3,7 mmols). A mistura foi agitada em RT por 16 horas até que 3a fosse totalmente consumido de acordo com LCMS. À mistura de reação foi diretamente purificada por cromatografia rápida de fase reversa (50-80% de acetonitrila em água) para dar intermediário Boc-4a (0,74 g, rendimento 38%, ESI m/z: 936 (M + H)+) como um sólido branco, o qual foi dissolvido em DCM (40 mL). A 5 mL da solução de DCM (contendo 94 mg de Boc-4a) foi adicionado TFA (0,5 mL) em gotas a 0ºC. Depois de agitada em RT por 1,5 horas até que o Boc-4a fosse consumido, o qual foi monitorado por LCMS, A mistura resultante foi concentrada in vacuo para dar o produto título bruto 4a (83 mg, rendimento 34% a partir de budesonida) como seu sal de TFA como óleo incolor, que pode ser usado sem purificação para a próxima síntese da etapa. 20 mg do 4a bruto foram purificados por prep-HPLC (método B) para dar 4a puro (8 mg) como base livre para teste de estabilidade plasmática. ESI m/z: 836 (M + H)+. 1H RMN (400 MHz, DMSOd6) à 10,17 (s; 1H); 8,12 (br s; 1H); 7,62 (d; J = 8,5 Hz; 2H); 7,31 (d; J= 10,2 Hz; 3H); 6,17 (d; J= 10,1 Hz; 1H); 5,97 (t J = 5,7 Hz; 1H); 5,92 (s; 1H);
5,40 (s; 2H); 5,22-5,01 (m; 4H); 4,89-4,62 (m; 3H); 4,53-4,40 (m; 1H); 4,30 (s; 1H); 3,09-2,87 (m; 3H); 2,36-2,22 (m; 1H); 2,14-1,87 (m; 4H); 1,81 (d; J = 5,6 Hz; 2H); 1,75 (s; 2H); 1,62-1,52 (m; 4H); 1,51-1,41 (m; 2H); 1,40-1,19 (m; 8H); 1,18-0,92 (m; 2H); 0,92-0,82 (m; 9H); 0,78 (d; J = 6,8 Hz; 3H) ppm. Exemplo 2a N-[(18)-1-(I(18)-4-(carbamoilamino)-1-[(4-([((2-[(18,285,4R,85,98,118,128,13R)- 11-hidróxi-9,13-dimetil-16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18] icosa-14,17-dien-8-11]-2-0xo0etóxi)carbonil)óxilmetilYfenil)carbamoil]butil]Jcarba- moil)-2-metilpropil]-6-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)hexanamida (2a) «Nes RJ o o "nu o oo S SS LIXO Ph Ô 4 N de Oo
NONH
[000565] Seguindo o procedimento geral A, o composto do título 2a (10 mg, 17% de rendimento) foi obtido como um sólido branco. ES| m/z: 1029 (M + H)+. Anal. HPLC: 92,5%, Tempo de retenção: 7,66 min (método A).
Exemplo 2b 1-(4-(2-Azatriciclo[10,4,0,04,9]hexadeca-1(12),4(9),5,7,13,15-hexaen- 10-in-2-il)-4-oxobutanam-[(18,28,4R,8S,9S8,118,128,13R)-11-hidróxi- 9,13-dimetil-16-0x0-6-propil-5,7-ido)-N-[(1S)-1([(1S)-4-(carbamoil- amino)-1-[(4-([((2dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17- dien-8-il1]-2-0x0etóxi)carbonil)óxilmetilYfenil)carbamoil]butil]carba- moil)-2-metilpropil]-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-amida (2b) = A o HH. Cdr IX ALO fe GS o H “o Ç no" MU, Nº oÔ NH,
[000566] Seguindo o procedimento geral B, o composto do título 2b (3,0 mg, 21% de rendimento) foi obtido como um sólido branco. ESI m/z: 686 (M/2 + H)+. 1H RMN (400 MHz, DMSOd6) à 10,05 (s; 1H); 8,15 (d; J=7,5 Hz; 1H); 7,88 (d; J = 8,8 Hz; 1H); 7,77 (t J= 5,7 Hz; 1H); 7,71- 7,66 (m; 1H); 7,66-7,59 (m; 3H); 7,52-7,27 (m; 9H); 6,17 (d; J = 10,0 Hz; 1H); 6,03-5,95 (m; 1H); 5,92 (s; 1H); 5,79-5,74 (m; 1H); 5,43 (s; 2H); 5,22- 4,99 (m; 6H); 4,88-4,84 (m; 1H); 4,84-4,60 (m; 2H); 4,42-4,34 (m; 1H); 4,33- 4,26 (m; 1H); 4,26-4,20 (m; 1H); 3,65-3,55 (m; 3H); 3,48-3,44 (m; 12H); 3,32-3,26 (m; 2H); 3,12-2,91 (m; 4H); 2,63-2,54 (m; 1H); 2,41-2,19 (m; 3H); 2,03-1,94 (m; 4H); 1,84-1,78 (m; 2H); 1,63-1,22 (m; 14H); 1,03-0,82 (m; 15H) ppm. HPLC anal.: 96,9%, Tempo de retenção: 8,10 min (método B).
Exemplo 2c (2R)-2-amino-N-[(1S)-1([(1S)-4-(carbamoilamino)-1-[(4-f[[((2- [18,28 4R,8S8,98,118,128,13R)-11-hidróxi-9,13-dimetil-16-0x0-6-propil- 5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17-dien-8-il]-2- oxoetóxilcarbonil)óxilmetil)fenil)carbamoil]butil|carbamoil)-2- metilpropil]-6-[2-(ciclo-oct-2-in-1-ilóxi)acetamido]hexanamida (7) de H is Su Pl o no" NÓ, o HN o
CO
[000567] ESI m/z: 565 (M/2 + H)+. 1H RMN (500 MHz, DMSOd6) à 10,17-10,00 (m; 1H); 8,47-7,73 (m; 2H); 7,69-7,57 (m; 3H); 7,38-7,26 (m; 3H); 6,17 (d; J = 10,0 Hz; 1H); 5,99 (s; 1H); 5,92 (s; 1H); 5,76 (s; 1H); 5,42 (s; 2H); 5,23-5,01 (m; 4H); 4,88-4,61 (m; 3,4H); 4,43-4,16 (m; 4,6H); 3,85 (d; J = 14,7 Hz; 1H); 3,73 (d; J = 14,5 Hz; 1H); 3,23-3,18 (m; 1H); 3,09-2,90 (m; 4H); 2,33-2,18 (m; 3H); 2,18-2,04 (m; 3H); 2,03-1,66 (m; 10H); 1,64-1,50 (m; 7H); 1,49-1,22 (m; 13H); 1,17-0,90 (m; 4H); 0,90-0,79 (m; 12H) ppm.
(2R)-2-amino-N-[(1S)-14[(1S)-4-(carbamoilamino)-1-[(4-[[((2- [18,28,4R,8S,98,118,128,13R)-11-hidróxi-9,13-dimetil-16-0x0-6- propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17-dien-8- i1]-2-0xo0etóxi)carbonil)óxilmetil)fenil)carbamoil]butil]|carbamoil)-2- metilpropil]-6-[2-([1-[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-trildróxi-6-(hidroximetil) oxan-2-il]-1H,4H,5H,6H,7H,8H,9H-cicloocta[d][1,2,3]triazol-4-il)3óxi) acetamido]hexanamida (9) de h 9 H o o o E HoN K. o HO No 9º Dá "v "duo
HS
[000568] Depois de filtrada, a solução resultante de 9 foi diretamente usada para a próxima etapa. ESI m/z: 667 (M/2 + H)+.
N-[(1R)-14[(18)-14[(18)-4-(carbamoilamino)-1-[(4-f[[((2- [1S8,2S,4R,8S,98,118,128,13R)-11-hidróxi-9,13-dimetil-16-0x0-6- propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17-dien-8- i1]-2-0xo0etóxi) carbonil)óxilmetil)fenilJcarbamoil]butillcarbamoil)-2- metilpropill|carbamoil)| | -5-[2-((1-[(2R,3R,48,5R,6R)-3,4,5-triidróxi-6- (hidroximetil)oxan-2-i1]-4H,5H,6H,7H,8H,9H-ciclo-octa[d][1,2,3]triazol- 4-il)oxy)acetamido]pentil]-1-(2,5-dioxopirro|-1-1)-3,6,9,12- tetraoxapentadecan-15-amida (Mc-PEG4-N(açúcar-COT)Lys-vc-PAB- Budesonida) (2c) ; Ls " H Poa ER ES “o o Nº de Es TOoH º
[000569] ESI m/z: 831 (M/2 + H)+. 1H RMN (400 MHz, DMSOd6) à 9,73 (s; 1H); 8,21-8,07 (m; 3H); 7,94-7,82 (m; 1H); 7,71-7,59 (m; 3H); 7,39-7,26 (m; 4H); 7,02 (s; 1H); 6,17 (d; J= 10,0 Hz; 1H); 6,09-5,98 (m; 1H); 5,92 (s; 1H); 5,56-5,28 (m; 4H); 5,25-5,01 (m; 4H);4,90-4,62 (m; 5H); 4,39-4,13 (m; 5H); 3,84-3,69 (m; 4H); 3,59-3,40 (m; 16H); 3,17-2,79 (m; 9H); 2,43-1,71 (m; 13H); 1,71-1,42 (m; 15H); 1,40-1,19 (m; 11H); 1,04-0,77 (m; 15H) ppm. HPLC anal.: 97,6%, Tempo de retenção: 7,63 min (método A).
Exemplo 2d (2R)-2-Amino-N-[(1S)-1X[(1S)-4-(carbamoilamino)-1-[(4-f[((2- [(18,2S8,4R,8S,98,118,128,13R)-11-hidróxi-9,13-dimetil-16-0x0-6- propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17-dien-8- i1]-2-0xo0etóxi)carbonil)óxilmetilYfenil JCcarbamoil]butil|carbamoil)-2- metilpropil]-N'-[(2S8)-2-[(4R,5R)-5-[(4R)-2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il]- 2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il]-2-hidroxietil]pentanodiamida (10) Da “E OH Os NH> O. NH XL 2 o H nº ? iz NU | o MÁ HoN Y H 2 EX N Os 5 oH
[000570] Seguindo o procedimento geral C, o composto 10 (13 mg, 5% de rendimento) foi obtido como um sólido branco. ES! m/z: 605 (M/2 + H)+. 1H RMN (500 MHz, DMSOd6) ô 10,08 (s; 1H); 8,34-8,17 (m; 1H); 7,98 (s; 1H); 7,93-7,81 (m; 1H); 7,62 (d; J = 8,4 Hz; 2H); 7,42-7,26 (m; 3H); 6,17 (d; J = 10,1 Hz; 1H); 5,99 (s; 1H); 5,92 (s; 1H); 5,76 (s; 1H); 5,42 (s; 2H); 5,23-5,01 (m; 4H); 4,91-4,61 (m; 4H); 4,43-4,20 (m; 3H); 4,10-3,72 (m; 6H); 3,60-3,54 (m; 1H); 3,24-3,09 (m; 2H); 3,07-2,91 (m; 2H); 2,32-2,25 (m; 1H); 2,22-2,10 (m; 2H); 2,04-1,93 (m; 2H); 1,88-1,67 (m; 5H); 1,64-1,22 (m; 27H); 1,17-0,93 (m; 3H); 0,91-0,81 (m; 12H) ppm.
(2R)-2-Amino-N-[(1S)-1X[(1S)-4-(carbamoilamino)-1-[(44[((2- [18,2S8,4R8S,98,118,128,13R)-11-Hidróxi-9,13-dimetil-16-0x0-6- propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17-dien-8- i1]-2-oxoetóxil)carbonil)óxilmetil)Yfenil)carbamoil]butil]|carbamoi!)-2- metilpro-pil]-N'-[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6- pentahidroxihexil]pentanodiamida (10A) ou no. ) pe: o NH, Fo RN oX TEME A O Y aa o
[000571] Auma mistura do composto 10 (13 mg, 11 umol) em DCM (1 mL) foi adicionado TFA (1 mL) em gotas. A mistura foi agitada em RT por uma hora a qual foi monitorada por LCMS. Os voláteis foram removidos in vacuo para dar o produto de desproteção bruto 10A (13 mg) como um óleo amarelo claro, que foi usado para a próxima etapa sem purificação adicional. ES| m/z: 565 (M/2 + H)+. (2R)-N-[(1S)-14[(1S)-4-(carbamoilamino)-1-[(4-([((2- [18,28 4R,8S8,98,118,128,13R)-11-hidróxi-9,13-dimetil-16-0x0-6-propil- 5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17-dien-8-il]-2- oxoetóxilcarbonil)óxilmetil)fenil)carbamoil]butil|carbamoil)-2-metilpro- pil]-2-[1-(2,5-dioxopirro|-1-11)-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-amido]-N"- [(28,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroxihexil]pentanodiamida (2d) e Á un o no sro mo SH Fra a AAA >. IDA E o o X HOH, o oÔ NH NH X mel ho > no "OH a on
[000572] Seguindo o procedimento geral A, o composto do título 2d (3,5 mg, 1% total rendimento a partir de 4a) foi obtido como um sólido branco. ES| m/z: 829,7 (M/2 + H)+. 1H RMN (400 MHz, DMSOd6) à 10,10 (s; 0,25H); 9,79 (s; 0,75H); 8,22 (d; J=7,1 Hz; 1H); 8,12 (d; J = 7,5 Hz; 1H); 8,07 (d; JU = 7,8 Hz; 1H);7,79-7,71 (m; 1H); 7,69-7,60 (m; 2H); 7,38-7,27 (m; 4H); 7,02 (d; J = 1,4 Hz; 2H); 6,17 (dt; J=7,6; 1,6 Hz; 1H); 6,03-5,97 (m; 1H); 5,92 (s; 1H); 5,46-5,40 (m; 2H); 5,35-5,02 (m; 4H); 4,89-4,61 (m; 4H); 4,50-4,45 (m; 1H); 4,40-4,16 (m; 7H); 3,65-3,37 (m; 21H); 3,07-2,90 (m; 3H); 2,44-2,23 (m; 4H); 2,17-1,93 (m; 6H); 1,90- 1,71 (m; 4H); 1,62-1,20 (m; 15H); 1,06-0,76 (m; 15H) ppm. HPLC anal.: >99%, Tempo de retenção: 6,40 min (método A). Esquema 3. Síntese de 2e o STA A )=o FÊ NH — PV VA ET RE aa A e IR O Crea, ox ss" “ S o o J — o. à SH rm MAO EO *,deumdiaparao o "a " q o: Exemplo 2e 2-[(18,28,4R,88,98,118,128,13R)-11-Hidróxi-9,13-dimetil-16-0x0-6- propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17- dien-8-il]-2-0x0etil N-[[4-aminofenil)metil|carbamato (13) SR ' º HJN. o > Out o GF º o
[000573] A uma solução de 4-aminobenzilamina (9,7 mg; 79 umol) e DIPEA (12 mg, 93 umol) em THF (10 mL) foi adicionada uma solução de 3a (24 mg, 44 umol) em THF (5,0 mL) em gotas em RT. A mistura foi agitada em RT for 3 horas até que 3a fosse totalmente consumido, a qual foi monitorada por LCMS. Os voláteis foram removidos in vacuo e o resíduo foi purificado através de prep-HPLC (método B) para dar o composto 13 (5,6 mg, rendimento 22%) como um sólido branco. ESI m/z: 579,2 (M + H)+. 1H RMN (400 MHz, MeODd4) ô 7,48-7,45 (m; 3H); 7,31-7,28 (m; 2H); 6,27-6,24 (m; 1H); 6,02 (s; 1H); 5,22 (m; 1H); 5,12- 5,11 (m; 1 H); 4,96 (m; 1 H); 4,86-4,81 (m; 2 H); 4,66 (m; 1 H); 4,44- 4,35 (m; 3 H); 2,66-2,65 (m; 1H); 2,40-2,36 (m; 1 H); 2,15-2,10 (m; 2 H); 1,97-1,60 (m; 6H); 1,53-1,36 (m; 6H); 1,09-0,92 (m; 7H) ppm. 2-[[(18,28,4R,88,98,118,128,13R)-11-hidróxi-9,13-dimetil-16-0x0-6- propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17- dien-8-il]-2-0x0etil N-((4-[(2S)-5-(carbamoilamino)-2-[(2S)-2-[6-(2,5- dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)hexanamido]-3-metilbutanamido] pentanamido]fenil)metil)carbamato (2e)
A o o é PRP o O AP O OH o
[000574] A uma mistura de MC-VC-OH 5f (WO2014/191578 A1) (5,7 mg; 12 umol) em DMF seca (1,5 mL) foram adicionados HATU (4,6 mg; 12 umol) e NMM (4,0 mg; 40 umol) em RT. A mistura foi agitada em RT por 10 minutos antes do composto 13 (4,7 mg; 8,1 umol) ser adicionado na mistura de reação. A mistura resultante foi agitada em RT de um dia para o outro. O composto 13 foi totalmente consumido e o produto desejado foi detectado como produto principal de acordo com LCMS. À mistura foi diretamente purificada por prep-HPLC para dar o composto do título 2e (2,9 mg; rendimento 35%) como um sólido branco. ES m/z: 1029,1 (M + H)+, 514,7 (M/2 + H)+. Anal. HPLC: >99%, Tempo de retenção: 7,54 min (método A).
Esquema 4. Síntese de budenosida ligante com espaçador (via éster) 2f & 2g Pp 1 PM me-ve-PAB (12b) o o [7 “ep DIBAC-suc-PEGA-ve-PAB (120) no” oo 1 ho TBTU, HOBt, DIPEA, DMF Ô oH 1t., 70 ºC, 12 hrs. te
H o! E o D 7 - E. o o o o E. º LA NI J 3 ou
ROM N Õ
NH o NH, 21,29 Exemplo 2f : 1-(4-[(2S)-5-(carbamoilamino)-2-[(2S)-2-[6-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H- pirrol-1-il)hexanamido]-3-metilbutanamido]pentanamido]fenil)metil 4-(2- [(18,28,4R,8S8,98,118,128,13R)-11-hidróxi-9,13-dimetil-16-0x0-6-propil- 5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17-dien-8-il]-2- oxoetil) butanodioato (2f) H HH o o AÍ G us o oo oH f o o o o
CAIN AA LIS A o HO à E HH à NH,
[000575] Auma solução de 1c (20 mg, 38 umol) em DMF (2 mL) foram adicionados MC-VCPAB (12b, 0,11 g; 0,419 mmol), TBTU (63 mg; 0,19 mmol), HOBt (26 mg; 0,19 mmol) e DIPEA (41 mg; 0,19 mmol) em RT.
A mistura resultante foi agitada em 70ºC por 12 horas. Nenhum outro produto 2f foi formado, o qual foi monitorado por LCMS. A mistura de reação foi diretamente purificada por prep-HPLC (método A) para dar o composto do título 2f (2,6 mg; rendimento 6%) como um sólido branco. ESI m/z: 1085,3 (M + H)+. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) ô 7,55-7,52 (m; 1H); 7,34-7,30 (m;1H); 6,67 (br s; 1H); 6,30-6,27 (m; 1H); 6,03 (br s; 1H); 5,16-5,11 (m; 2H); 5,09-4,87 (m; 2H); 4,80-4,61 (m; 1H); 4,60-4,30 (m; 2H); 3,47-3,44 (m; 1H); 3,21-3,10 (m; 1H); 3,03-2,96 (m; 2H); 2,79-2,55 (m; 4H); 2,35-1,73 (m; 28H); 1,71-1,32 (m; 15H); 1,29-1,07 (m; 4H); 0,99-0,85 (m; 9H) ppm. Exemplo 2g 1-(4-[(28)-2-[(28)-2-[1-(4-(2-Azatriciclo[10,4,0,0º *Jhexadeca-1(12), 4(9),5,7,13,15-hexaen-10-in-2-il)-4-oxobutanamido)-3,6,9,12-tetra- oxapentadecan-15-amido]-3-metilbutanamido]-5-(carbamoilamino) pentanamido]fenil)metil 4-(2-[[1S8,28,4R,8S,98,118,128,13R)-11-hidróxi- 9,13-dimetil-16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18] icosa-14,17-dien-8-il1]-2-0x0etil) butanedioato (29) 2 E O A AA & A SAMA
[000576] Seguindo os procedimentos do exemplo 2f exceto substituindo DIBAC-suc-PEG4-vc-PAB (12c) por 12b, o composto do título 2g (15 mg, rendimento 19%) como um sólido branco. ES| m/z: 714 (M/2 + H)+. 1H RMN (500 MHz, MeODd4) à 7,67-7,60 (m; 4H); 7,48- 7,46 (m; 4H); 7,38-7,32 (m; 4H); 7,26 (d; J = 6,8 Hz; 1H); 6,27 (dj J = 10,0 Hz; 1H); 6,03 (s; 1H); 5,24-5,10 (m; 4H); 5,02-4,97 (m; 1H); 4,85- 4,66 (m; 2H); 4,61 (s; 1H); 4,53 (dd; J = 9,1; 4,9 Hz; 1H); 4,45-4,43 (m; 1H); 4,22 (dd; J = 6,7; 4,7 Hz; 1H); 3,78-3,69 (m; 3H); 3,60-3,55 (m; 11H); 3,47-3,40 (m; 2H); 3,26-3,10 (m; 4H); 2,78-2,54 (m; 8H); 2,41-2,35
(m; 2H); 2,25-2,11 (m; 4H); 2,02-1,31 (m; 17H); 1,21-0,92 (m; 14H) ppm. HPLC anal.: 99,5%, Tempo de retenção: 7,86 min (método B). Esquema 5. Síntese de budesonida ligante com espaçador 2j-2n (através da amida ou carbamato) DIBAC-suc-PEG4-Val-CI-OH (59! HATU NMM DMF 11, 2S his ' o x MW spo À ED 2 DEACAUCFE GE PÁBAN (HD), ne N J AX x Í eo Dias endieba eau to ) 5 MRE eo UE bs 8otioth. lição R p Cspreuda, MAL beptancicoNHS (Sa ' vEMocwraseneara — 1 à 2 1 DIBAC-suc-PEG Ácido 5 DIPEA, DMAP. DMF ANTE E NOS SS AN DEGE SIA 2) piperídina 11, 1 hr - o y à É NH w. A à “sh on SEL 4b (vcPAB-11) o 4c (vcPAB-1d) MOdLySISUC-DIBAC)-OH (Se) emo CD-N, (8b
[000577] No Esquema 5, Bud se refere à budesonida.
[000578] A maioria dos ligantes de budesonida (2) tendo porção VC- PAB foram sintetizados a partir de três tentativas através da amida ou carbamato (Esquema 5). Os compostos 1d, 1e foram separadamente conjugados com ligantes através do acoplamento com amida para dar amida ou carbamato (Esquema 5). Na tabela abaixo, estão os detalhes adicionais.
RqNH- Composto budesonida Nº com espaçador o 1
NA o
O Co:
O H o
SANA AIN A
NY H o Li A
UA C o de 2 Ho o o OH m to gs
LOET SEN eo Ro Ss ou gor né PO Oo HAN o 2 x ÃAoy No o
Intermediário 4c 2-[(18,2S8,4R,88,98,118,128,13R)-11-Hidróxi-9,13-dimetil-16-0x0-6- propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17-dien- 8-i1]-2-0x0-etil N-(2-([((4-[(28)-2-[(28)-2-amino-3-metilbutanamido]-5- (carbamoilamino) pentanamido]fenil)metóxi)carbonil](metil)amino) etil)- N-metilcarbamato (4c)
H H H no OA o o
TD > O NH,
[000579] A uma solução do composto 1d (40 mg, 73 umol) em DMF (3 mL) foram adicionados Fmoc-vcPAB-PNP (11d, 60 mg, 78 umol), DMARP (9,0 mg; 74 umol) e DIPEA (20 mg; 0,16 mmol) em temperatura ambiente. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 3 horas até que maior parte dos materiais de partida fossem consumidos, a qual foi monitorada por LCMS. À mistura de reação foi então adicionada piperidina (1 mL). Depois de agitada em temperatura ambiente por uma hora até que a reação de-Fmoc estivesse completada, a qual foi monitorada por LCMS, a mistura de reação foi diretamente purificada por prep-HPLC (método B) para dar o composto 4c (9.0 mg, rendimento 13%, o 2º pico em LC) como um sólido branco. ESI m/z: 951 (M + H)+, 973 (M + Na)+.
Exemplo 2j 2-[(18,28,4R,8S8,98,118,128,13R)-11-Hidróxi-9,13-dimetil-16-0x0-6- propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17- dien-8-il]-2-0x0etil N-((N-[((4-[(2S)-5-(carbamoilamino)-2-[(28)-2-[6- (2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)hexanamido]-3-metilbutanami- do]pentanamido]fenil)metóxi)carbonil]hidrazinacarbonil)metil)car- bamato (2j) o o fs À Wo Y SA o o o)
HO de o nt, o
[000580] ESI m/z: 1144,3 (M + H)+. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) à 10,02 (s; 1H); 9,77 (s; 1H); 9,18 (s; 1H); 8,12 (d; J = 7,2 Hz; 1H); 7,83 (d; J = 8,4 Hz; 1H); 7,73-7,70 (m; 1H); 7,61-7,59 (m; 2H); 7,32-7,29 (m; 3H); 7,01 (s; 2H); 6,19-6,16 (m; 1H); 6,00-5,92 (m; 2H); 5,05-5,00 (m; 2H); 4,95-4,85 (m; 2H); 4,71-4,62 (m; 2H); 4,404,17 (m; 3H); 3,71-3,58 (m; 2H); 3,45-3,39 (m; 2H); 3,06-2,89 (m; 3H); 2,33-2,28 (m; 2H); 2,20- 2,07 (m; 3H); 2,02-1,91 (m; 3H); 1,81-1,75 (m; 2H); 1,75-1,62 (m; 2H); 1,60-1,44 (m; 11H); 1,42-1,20 (m; 6H); 1,19-1,12 (m; 4H); 1,00-0,92 (m; 2H); 0,88-0,81 (m; 10H) ppm.
Exemplo 2k 2-[(18,28,4R,8S8,98,118,128,13R)-11-Hidróxi-9,13-dimetil-16-0x0-6- propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17-dien-8- i1]-2-0x0etil N-(2-f[((4-[(28S)-5-(carbamoilamino)-2-[(28)-2-[6-(2,5-dioxo- 2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)nexanamido]-3-metilbutanamido]pentana- midol]fenilmetóxi)carbonil](metil)aminojetil)- N-metilcarbamato (2k-A e 2k-B) ou CITA Que do A, o ! o nd. o
[000581] Seguindo o procedimento geral D, os compostos títulos 2k- A (3,3 mg, rendimento 10%, o segundo pico em LC) e 2k-B (4,1 mg, rendimento 12%, o primeico pico em LC) como diastereoisômeros foram obtidos como sólidos brancos. 2k-A: ESI m/z: 1143,4 (M + H)+, Tempo de retenção: 1,70 min (método A). 2k-B: ESI m/z: 1143,4 (M + H)+, Tempo de retenção: 1,65 min (método A).
Exemplo 21 Biciclo[6.1.0]non-4-in-9-ilmetil N-(14-([(1S)-1([(1S)-4-(carbamoilamino)- 1-[(4[(62-[(12-[(18,28,4R,88,98,118,128,13R)-11-hidróxi-9,13-dimetil-16- oxo-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17- dien-8-il]-2-o0xoetóxi)carbonil)(metil)amino]Jetil)(metil)carbamoil)óxi] metil)fenil)carbamoil]butil]|carbamoil)-2-metilpropil]|carbamoil)-3,6,9,12- tetraoxatetradecan-1-il)carbamato (21) oo Aa ALA A LOTA SS" UV Ô NH,
[000582] ESIm/z:687,5(M/2 + H)+, 1396,8 (M + Na)+ (50%), 1H RMN (500 MHz, MeODd4) 5 7,66 (d; J = 7,5 Hz; 2H); 7,50 (d; J = 10,0 Hz; 1H); 7,36 (d; J = 7,0 Hz; 2H); 6,28 (d; J = 10,0 Hz; 1H); 6,04 (s; 1H); 5,15-5,05 (m; 2H); 4,87-4,62 (m; 4H); 4,53(s; 1H); 4,46(s; 1H); 4,21 (d; J =6,5 Hz; 1H); 4,16 (d; J = 8,0 Hz; 2H); 3,83-3,72 (m; 2H); 3,66-3,60 (m; 12H); 3,56-3,52 (m; 3H); 3,49-3,42 (m; 1H); 3,30 (s; 3H); 3,25-3,09 (m; 3H); 3,02-2,96 (m; 4H); 2,87 (dd; J = 16,6; 4,8 Hz; 2H); 2,72-2,64 (m; 1H); 2,58 (t; J = 6,0 Hz; 2H); 2,40 (d; J = 13,1 Hz; 1H); 2,31-2,10 (m; 9H); 2,01-1,91 (m; 3H); 1,81-1,70 (m; 2H); 1,63 (s; 7H); 1,51 (s; 3H); 1,48-1,30 (m; 4H); 1,11 (s; 1H); 1,02-0,91 (m; 15H) pom. HPLC anal.: > 99,9%, Tempo de retenção: 9,40 min (método A).
Exemplo 2m 2-[(18,28,4R,8S8,98,118,128,13R)-11-Hidróxi-9,13-dimetil-16-0x0-6- propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17- dien-8-i1]-2-0x0etil N-(2-([((4-[(28)-2-[(28)-2-[(2R)-6-(4(2- azatriciclo[10.4.0.04,9]hexadeca-1(12),4(9),5,7,13,15-hexaen-10-in- 2-il)-4-o0xobutanamido)-2-[6-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1- il)hexanamido]hexanamido]-3-metilbutanamido]-5- (carbamoilamino)pentanamido]fenil)metóxi)carbonil](metil) aminojetil)-N-metilcarbamato (2m-precursor) H nn o 14 DR" 3 TRCENOAADA RAI. N N o o x o NO NH, HN o H 2 O O?
[000583] Seguindo o procedimento geral B, o composto bruto 2m- precursor (o precursor de 2m) (5 mg) foi obtido como ólero amarelo, o qual foi usado diretamente para a próxima etapa. ESI m/z: 780 (M/2 + H)+
2-[(18,28,4R,8S8,98,118,128,13R)-11-Hidróxi-9,13-dimetil-16-0x0-6- propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17- dien-8-i1]-2-0x0etil N-(2-([((4-[(2S)-5-(carbamoilamino)-2-[(28)-2- [(2R)-2-[6-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-i)hexanamido]-6-[4-(3- 1[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41 ,42-dodecahidróxi-10,15,20,25,30- pentacis(hidroximetil)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-dodecaoxa- heptaciclo[26.2.2.23,6.28,11.213,16.218,21.223,26]dotetracontan-5- illmetil)-3,4,5,13-tetraazatetraciclo[13.4.0.02,6.07,12]nonadeca- 1(15),2(6),4,7(12),8,10,16,18-octaen-13-il)-4-oxobutanamido]hexa- namido]-3-metilbutanamido]pentanamido]fenil)metóxi) carbonil] (metil)aminojetil)-N-metilcarbamato (2m)
H HH o à o Xi o DAY AN EA Y KA ; [o] o HNL-O gos Ho o oH O Ox oH HO, O, ol AaaerÊ oH
[000584] A uma solução de bruto 2m (5 mg) em DMF (1 mL) foi adicionado CD-N3 (8b, 63 mg, 63 umol). A mistura resultante foi agitada em RT por 72 horas, a qual foi monitorada por LCMS. A mistura resultante foi diretamente purificada por prep-HPLC (método A) para dar o composto 2m (2 mg, 4% de rendimento a partir de 4c) como um sólido branco. ESI m/z: 1278,8 (M/2 + H)+. HPLC anal.: 97,9%, Tempo de retenção: 6,49 min (método A).
Exemplo 2n 2-[(18,28,4R,8S8,98,118,128,13R)-11-hidróxi-9,13-dimetil-16-0x0-6- propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17-dien-8- i1]-2-0x0etil N-(24[(f4-[(28)-2-[(28)-2-[(4R)-4-amino-4-[(2-azidoetil) carbamoil]butanamido]-3-metilbutanamido]-5-(carbamoilamino)penta namido]fenil)metóxi)carbonil](metil)aminojetil)- N-metilcarbamato (2n)
H HH P j o o o Autos o ú Mm ALAA DI TI ss te, no v o ' NÓ,
[000585] A mistura de reação foi então agitada em RT de um dia para o outro. O composto 4c foi totalmente consumido de acordo com LCMS. A mistura foi separada por prep-HPLC (método A) e depois da liofiização, Fmoc-2n foi obtido (20 mg), o qual foi dissolvido em DMF (2 mL). À solução de DMF foi adicionada dietilamina (4 gotas, c.a. 0,08 mL). A mistura de reação foi agitada em RT por duas horas até que a reação de de-Fmoc fosse completada, a qual foi monitorada por LCMS. A mistura foi filtrada através da membrana de filtro e a solução foi purificada por prep-HPLC (método A) para dar o composto do título 2n (10 mg, rendimento 8,4%) como um sólido branco. ESI m/z: 1147 (M + H)+. HPLC anal: 99,6%, Tempo de retenção: 5,67 min (método A); 7,72 min (método B).
Esquema 6. Síntese de Budesonida ligante 2q (análogo de THP) SOR DEN?) o o S Fmocrin JÁ Fmocrn À 9 2) ELSA DCM A hr oH DHP re. CY D q TBTU, EN, DV AX E NH ' ' NH Hen To Knco 14 15 4 H o RO te dono o sl O HATU, DIPEA, DMF ' X . oc ——D2A> as ( no à 16 7 FT q e Nero OH dE 5 si dia [unas OQ à Gone q H HH o o Ae, 7 h o o * A PAI o oH de — 2q Exemplo 2q -(3,4-Di-hidro-2H-piran-2-il)meti - -fluoren-9-il)]metóxi 2S)-(3,A-Di-hidro-2H-pi 2-il)metil 2-(((9H-fI 9-il)]metóxi carbonilamino)-5-ureidopentanoato (15) o Mena
LA uno
[000586] A uma mistura de Fmoc-Cit-OH (14; 0,29 g; 0,73 mmol) em DMF (5 mL) foram adicionados DHP (0,10 mg; 0,88 mmol), TBTU (0,70 g; 2,2 mmols) e trietilamina (0,37 g; 3,7 mmoIls) em RT. A mistura resultante foi agitada em RT por 24 horas. 15% da massa desejada foi detectada por LCMS. A reação foi temperada com água (30 mL) e extraída com acetato de etila (10 mL x 3). A solução orgânica combinada foi lavada com água e salmoura, seca sobre sulfato de sódio e concentrada in vacuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia rápida em fase reversa (0-100% de acetonitrila em água) para dar o composto do título 15 (110 mg, rendimento 30%) como óleo incolor. ES! m/z: 494 (M + H)+. (6-12-[(18,28,4R,8S,98,118,128,13R)-11-Hidróxi-9,13-dimetil-16-0x0-6- propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17-dien-8-il]- 2-0x0etóxil)oxan-2-il)]metil / (28)-2-amino-5-(carbamoilamino)pentanoato (16) NAL At MAS o
À tmnão
[000587] Auma solução do composto 15 (80 mg; 0,16 mmol) em DCM anidro (3 mL) foi adicionada uma solução de budesonida (1a, 70 mg; 0,16 mmol) e ácido p-toluenossulfônico (42 mg; 0,24 mmol) em DCM anidro (2 mL) com seringa sob a proteção de balão de argônio em RT. A mistura de reação foi agitada em 30ºC sob balão de argônio por 12 horas. A maior parte do composto 15 foi consumida de acordo com LCMS. A mistura de reação foi resfriada até RT, e à mistura de reação foi adicionada dietilamina (1 mL). A mistura de reação foi agitada em RT por 1 hora até que a reação de de-Fmoc fosse completada, a qual foi monitorada por LCMS. Os voláteis foram removidos in vacuo e o resíduo foi purificado por prep-HPLC (método B) para dar o composto do título 16 (17 mg, rendimento 31%) como um sólido branco. ES| m/z: 702 (M + H)+. Ácido (S)-2-(6-(2,5-Dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)hexanamido)-3- metilbutanoico (5i)
A Y N N Y oH
[000588] A uma solução de L-valina (0,12 g; 1,0 mmol) em DMF anidra (2 mL) foram adicionados composto 5a (0,31 g; 1,0 mmol) e trietilamina (0,51 g; 5,0 mmols) em RT. A mistura de reação foi agitada em RT por 8 horas até que o composto 5a fosse totalmente consumido, a qual foi monitorada por LCMS. A mistura de reação foi filtrada através de membrana de filtragem e o filtrado foi diretamente purificado por prep- HPLC (método A) para dar o composto do título 5i (0,14 g, rendimento 46%) como óleo incolor. ESI m/z: 311 (M + H)+. 6-(2-[(18,28,4R,88,98,118,128,13R)-11-Hidróxi-9,13-dimetil-16- oxo-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa- 14,17-dien-8-i1]-2-0x0etóxil)oxan-2-il)metil (2S)-5-(carbamoilamino)- 2-[(28)-2-[6-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)hexanamido]-3- metilbutanamido]pentanoato (2q) o o o A u CAIA AA o o oH o Wo:
[000589] A uma solução do composto 5i (5,8 mg; 19 umol) em DMF (1 mL) foram adicionados HATU (10 mg, 26 umol) e DIPEA (6,6 mg; 51 umol) em RT. A mistura foi agitada em RT por 15 minutos, e à solução foi adicionado composto 16 (12 mg, 17 umol) em RT. A mistura resultante foi agitada em RT por 4 horas até que o composto 5i fosse totalmente consumido, a qual foi monitorada por LCMS. A mistura de reação foi então filtrada através da membrana de filtração e o filtrado foi diretamente purificado por prep-HPLC (método A) duas vezes para dar o composto do título 2q (2 mg, rendimento 12%) como um sólido branco. ES! m/z: 995.3 (M + H)+. HPLC anal.: 83,5%, Tempo de retenção: 10,36 min (método B). Esquema 7. Síntese de fosfato-budenosida ligante 2r e 2s o H NOz H e ads H2N ou H o” o o OX Ns. ) b ne À, o Rol NA o dd de DIPEA, DMF o N dn da " o 20ºC, 3 hrs. NX Wn=s1 Un=2 2r,n=1 2s5,n=2
[000590] Fosfatos-budesonidas foram acopladas com BCN-PNP (11c) para dar BCN-fosfato-budesonidas (composto 2r e 2s) (esquema 7). Exemplo 2r Ácido (2-[((biciclo[6.1.0])non-4-in-9-ilmetoxi)carbonil )amino]Jetoxi)((2- [18,28,4R,88,98,118,128,13R)-11-Hidróxi-9,13-dimetil-16-0x0-6-pro- pil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17-dien-8-il]- 2-0x0etóxi))fosfínico (2r)
H
NAL H H o o - A oo ú º
O N P O OH H l N oH
[000591] Seguindo o procedimento geral D, o composto 2r (40 mg, 61% de rendimento) foi obtido como um sólido branco. ESI m/z: 730 (M + H)+. 1H RMN (500 MHz, MeODd4) à 7,49 (d; JU = 10,1 Hz; 1H); 6,29-
6,26 (m; 1H); 6,03 (s; 1H); 5,23-5,16 (m; 1H); 4,88-4,64 (m; 3H); 4,45 (dd; J = 8,0; 3,1 Hz; 1H); 4,23-4,13 (m; 2H); 3,97 (dd; J = 11,9; 5,7 Hz; 2H); 3,36 (t; J = 4,7 Hz; 2H); 2,67 (td; JU = 13,4; 5,3 Hz; 1H); 2,40 (d; J = 9,6 Hz; 1H); 2,30-1,34 (m; 23H); 1,21-0,92 (m; 10H) ppm. HPLC anal.: > 99,9%, Tempo de retenção: 5,26 min (método B). Exemplo 2s Ácido (2-[((biciclo[6.1.0]non-4-in-9-ilmetoxi)carbonil)amino]Jetóxi) (fIhidróxi(f2-[(18,28,4R,88,98,118,128,13R)-11-Hidróxi-9,13-dimetil- 16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa- 14,17-dien-8-il]-2-0x0etóxi))fosforil]Jóxi))fosfínico (2s) o H o do MS duto, H Ho º o é Co no"
O
[000592] ESIm/z:810(M+H)+. 1H RMN (500 MHz, MeODd4) ô 7,51 (d; J = 10,1 Hz; 1H); 6,28 (d; J = 10,0 Hz; 1H); 6,03 (s; 1H); 5,22-5,16 (m; 1H); 4,98-4,66 (m; 3H); 4,46 (s; 1H); 4,12 (dt; J = 45,0; 13,0 Hz; 4H); 3,39 (t; J = 11,9 Hz; 2H); 2,67 (dd; J = 13,3; 8,0 Hz; 1H); 2,40 (d; J = 11,2 Hz; 1H); 2,30-1,32 (m; 23H); 1,22-0,92 (m; 10H) ppm. HPLC anal.: > 99,9%, Tempo de retenção: 4,03 min (método B).
Procedimentos experimentais para Intermediários Tabela 4. Intermediários chave e materiais de partida Intermediário Referências — ou Estruturas Nº. síntese o nt Comercialmente H 1a (budesonida) — | disponível
IE O X-o (51333-22-3) Ho espNr
NH od HH 4a (cPAB-| 2 - Vide esquema mn N MC budesonida) 9 o O o. A AA Y o DD H fo]
H HH Pp ; o o nu o LOOAY. o OH no NA, o 4c (vcPAB-1d) vide esquema 5
JE Ls o o O, Comercialmente [ õ ; No 5a (mc-NHS) disponível o o (65750-63-5) o o %- Comercialmente EPA mon AA Sb (MAL-PEGA- | gisponível s NHS) o (1325208-25-0) IR ; — 5c Comercialmente [o] o disponível dae a, | emtesio ( ) o PEG4-ácido) (1537170-85-6) o o Comercialmente
H (TIA A aa, Sd (BCN-PEG4- | gisnonível H ácido) RW (1421932-54-8)
Intermediário Referências — ou Nº. síntese Ii ) o 4 Esquema 8
O NH Lo
N o OH o / o nº
NA N CÍ. N Aon o H o ; 5f (me-Val-Cit- | WO2014/191578 Ss OH) AM
HN o NH, à O o o nn o? 5g (DIBAC-suc- N. AO. AO. - N O O ga IN o ÍpeGAVaCk | Esquemas OH) Ps )
AN
[9] F HN. mo? nf on Esquema 10 Ns o o / o N A OH vide esquema 6 o no o FmocHN, OH Esquema 11 "CO o —
Intermediário Referências — ou Nº. síntese o o o J Org Chem FmocHN A 2010, 75, 3685- XxX o 3691
OH Ho To Nã/, PO Son Comercialmente OD “o disponível HO” > “oH OH (35899-89-9) Synth. Commun., 2002 — 320271), o 3367-3372 o oO o 3 oH bp J. Am. Chem. Soc, o oHO 2012, —134(46), OH o OH 19108-19117 fon oh) Tom J. Med. Chem, Sou o 1997, — 40(17), OH 2755-2761 OoHo o oH O J. Am. Chem. Soc.,
OH 1993, — 115(12), 5035-5040 NO; o ? Comercialmente o À, f o np o O” o disponível NA NANA Ma (MCVC o HH oos (159857-81-5) f PAB-PNP) nv WO2014/191578 Â NH, M Gs no, RR ex JA 11b (DIBAC-suc- NA h mono AA RA GS LUA a Ao NES NR PEG4-vc-PAB- — | Esquema 12 . PNP) oÔ NH No, WO2013/181697A
LOS 8 1 Angew. Chem. oo 11c (BCN-PNP) "y Int. Ed, 2010, 49 NY (49), 9422-9425
Intermediário Referências — ou Nº. síntese
O o oo C NH UU jomercialmente FmocHN “x 11d (Fmocve | gisnonível o PAB-PNP) 863971-53-3
NH CÊ Nºo Ho O oH N Comercialmente BocHN Va disponível Oo z7 H 12a (Boc-vc- 1sponivel Ss PAB) (870487-09-5) DX WO2008/34124 A2 O NH, o h o nu o O" SOS N N À N Comercialmente o H o ; H 12b — (MC-VC- disponível Ss PAB) HN 159857-80-4 nt,
R CALA ALA LI [12 DIBAc N. o. o. N S ec -suc- GS AO Ooo N OA Esquema 12 7º "s PEG4-vc-PAB) nº
Ê Esquema 8. Síntese de 5e
Ú | : Hã W ty FP” À ea, ATÉ a : é E o 2 RO À À, Ã "o É X e" Ev TOSA DE m Seutanenão NO CATE paraoouiro "x sa " e
Ácido (2R)-6-(4-(2-azatriciclo[10.4.0.0º,*Jhexadeca-1(12),4,6,8,13,15- hexaen-10-in-2-il)-4-oxobutanamido)-2-[6-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro- 1H-pirrol-1-il)hexanamido]hexanoico (5e) (2? o NH o Lot
H
[000593] A uma mistura de H-D-Lys(Boc)-OH (17; 0,25 g; 1,0 mmol) em DMF (10 mL) foram adicionados ácido 6-maleimidocarproico-NHS (5a; 0,31 g; 1,0 mmol) e diisopropiletilamina (DIPEA; 0,26 g; 2,0 mmolis) em RT. Depois que a reação foi agitada em RT de um dia para o outro, o composto 5a foi totalmente consumido. A mistura foi diretamente separada por cromatografia rápida de fase reversa (0-100% de acetonitrila em água (0,05% de TFA)) para dar intermediário Boc-18 (ESI m/z: 440 (M + H)+) como óleo incolor, o qual foi dissolvido em DCM (5 mL). À solução foi adicionado TFA (0,5 mL) em gotas a 0ºC, e a mistura foi agitada em RT por uma hora. A reação foi monitorada por LCMS e o intermediário Boc-18 foi totalmente consumido. Os voláteis foram removidos in vacuo para dar bruto 18 (ESI m/z: 340 (M/2 + H)+), o qual foi usado para a próxima etapa sem purificação adicional. À mistura do composto bruto 18 (0,21 g; 0,62 mmol) em DMF (5 mL) foi adicionado éster ativado 19 (0,20 g; 0,50 mmol) e DIPEA (50 mg; 0,39 mmol) em RT. Depois que a mistura de reação foi agitada em RT de um dia para o outro, o composto 19 foi totalmente consumido, o qual foi monitorado por LCMS. A mistura de reação foi então diretamente separada por cromatografia rápida em fase reversa (0-100% de acetonitrila em água) para dar o composto do título 5e (0,10 9g; 20% de rendimento em 3 etapas a partir de 5a) como um sólido branco. ESI m/z: 627 (M + H)+. 1H RMN (DMSOd6, 400 MHz): ô 7,89 (d; JU = 13,2 Hz; 1H); 7,69-7,62 (m; 3H); 7,48-7,47 (m; 3H); 7,36-7,28 (m; 3H); 6,99 (s; 2H); 5,03 (d; J = 13,6 Hz; 1H); 4,09-4,04 (m; 1H); 3,60 (d; J = 13,6 Hz; 1H); 3,38-3,34 (m; 1H); 2,90-2,87 (m; 2H); 2,61-2,55 (m; 1H); 2,25-2,17 (m; 1H); 2,08-1,51 (m; 5H); 1,46-1,15 (m; 12H) ppm. Esquema 9. Síntese de 5g Gala nan dora GA Ada - se E AN Ácido (28)-2-[(28)-2-[1-(4-(2-azatriciclo[10,4,0,0º *Jhexadeca- 1(12),4(9),5,7,13,15-hexaen-10-in-2-11)-4-oxobutanamido)-3,6,9,12- tetraoxapentadecan-15-amido]-3-metilbutanamido]-5-(carbamoil- amino)pentanoico (5g)
Q Qtd & We
[000594] A uma solução do composto 5c (0,30 g; 0,54 mmol) em DMF (10 mL) foram adicionados HATU (0,31 g; 0,81 mmol) e DIPEA (0,14 g; 1,1 mmol) em RT. A mistura foi agitada em RT por 15 minutos. À solução de reação foi adicionado Val-Cit-OH (20 (CASH 159858-33-0), 0,21 g; 0,76 mmol) em RT, e a mistura resultante foi agitada em RT por 3 horas até que a maior parte dos materiais fosse consumida, a qual foi monitorada por LCMS. A mistura de reação foi filtrada através da membrana de filtração e o filtrado foi diretamente purificado por cromatografia rápida em fase reversa (0-100% acetonitrila em água (com 10 mmol/L de bicarbonato de amônio)) para dar o intermediário título 59 (0,25 g; rendimento 57%) como um sólido branco. ESI m/z: 809,5 (M + H)+.
Esquema 10. Síntese de intermediários 5h Dos Fo ev Dor tendo —. tendo a 22 so (4R)-4-[(2-azidoetil)carbamoil]-4-([(9H-fluoren-9-ilmetóxi)etóxi) carbonilJlamino)butanoato de terc-butila (22) FmocHN Ad tenho
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[000595] A uma mistura de Fmoc-D-Glu(OTBU)-OH (21, (104091-08- 9), 0,30 g; 0,71 mmol) e 2-azidoetanamina (87156-40-9, 73 mg; 0,85 mmol) em DCM (50 mL) foram adicionados HATU (0,41 g; 1,4 mmol) e trietilamina (0,3 mL) em RT. A mistura de reação foi agitada em RT de um dia para o outro. A maior parte do composto 21 foi então consumida de acordo com TLC e LCMS. Depois que a mistura de reação foi temperada com água (50 mL) em RT, a solução orgânica foi lavada com água e salmoura, seca sobre sulfato de sódio e concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado por prep-TLC (sílica gel, eluição com éter de petróleo/acetato de etila (v/v = 1)) para dar o composto do título 22 (0,30 9, rendimento 76%) como óleo amarelo viscoso. ESI m/z: 494 (M + H)+. 1H RMN (400 MHz, DMSOd6): ô 8,09 (m; 1H); 7.84-7.90 (m; 4H); 7.33-
7.44 (m; 4H); 6.28 (s; 2H); 3.35 (m; 6H); 3.26 (m; 1H); 2.50 (m; 2H); 2.25 (m; 1H); 1.80 (m; 1H); 1.39 (s; 9H) pom. Ácido (4R)-4-[(2-azidoetil)carbamoil]-4-([(9H-fluoren-9- ilmetóxi)carbonilJamino)butanoico (5h) o meti on Nino
H
[000596] A mistura resultante foi agitada em RT por duas horas até que o composto 22 fosse totalmente consumido, a qual foi monitorada por TLC e LCMS. Os voláteis foram removidos in vacuo para dar o composto bruto 5h (17 mg, rendimento 96%) como óleo amarelo, o qual foi usado para a próxima etapa sem purificação adicional. ES| m/z: 438 (M + H)+. Esquema 11. Síntese de Intermediários 6a o o o tio ou TR = Aos, Fmoc-(DILyS OH H O CJ TENDE No 23 rt., 30 min. 6a o Ácido (2R)-6-[2-(ciclooct-2-in-1-ilóxi)acetamido]-24[(9H-fluoren-9- ilmetóxi)carbonilJamino)hexanoico (6a)
O Ns “e O O ==
[000597] Auma mistura de composto comercial 23 (65 mg; 0,23 mmol, CAS: 1425803-45-7) em DMF (2 mL) foram adicionados Fmoc-D-Lys- OH (85 mg; 0,23 mmol) e trietilamina (52 mg; 0,51 mmol). A mistura de reação foi agitada em RT por 30 minutos. A mistura foi diretamente separada por cromatografia rápida de fase reversa (0-100% acetonitrila em água (0,05% de TFA)) para dar intermediário 6a (85 mg, rendimento 70%) como um sólido branco. ESI| m/z: 533 (M + H)+. 1H RMN (MeODd4, 500 MHz): ó 7,70 (d; J = 7,5 Hz; 2H); 7,59 (t; J = 8,0 Hz; 2H); 7,30 (t; J=7,5 Hz; 2H); 7,22 (t J = 7,4 Hz; 2H); 4,35-4,22 (m; 2H); 4,22- 4,09 (m; 2H); 4,09-3,99 (m; 1H); 3,94-3,81 (m; 1H); 3,79-3,67 (m; 1H); 3,15 (t; J = 6,9 Hz; 2H); 2,17-1,96 (m; 3H); 1,96-1,86 (m; 1H); 1,85-1,66 (m; 4H); 1,66-1,41 (m; 5H); 1,41-1,25 (m; 3H) ppm.
Esquema 12. Síntese de intermediários 11b e 12c SETAS Ç—— POAccAo W E o NO; EE C ; AA & o " Ã 1-(4-(2-Azatriciclo[10.4.0.0º *Jhexadeca-1(12),4(9),5,7,13,15-hexaen- 10-in-2-i1)-4-oxobutanamido)-N-[(1S)-1[(1S)-4-(carbamoilamino)- 14[4-(hidroximetil)fenil]|carbamoil)butil]|carbamoil)-2-metilpropil]- 3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-amida (12c)
Q Qt AGO ” A o NÓ,
[000598] A mistura foi agitada em RT por 15 minutos. À solução da reação foi adicionado vc-PAB (24 (159857-79-1), 0,21 g; 0,54 mmol) em RT e a mistura resultante foi agitada em RT por 3 horas até que a maior parte dos materiais fosse consumida, a qual foi monitorada por LCMS. A mistura de reação foi filtrada através da membrana de filtração e o filtrado foi diretamente purificado por cromatografia rápida em fase reversa (0-100% acetonitrila em água (com 10 mmol/L de bicarbonato de amônio)) para dar o intermediário título 12c (0,30 g, rendimento 60%) como um sólido branco. ESI m/z: 617 (M + H)+.
(4-[(28)-2-[(28)-2-[1-(4-(2-Azatriciclo[10.4.0.0º *Jhexadeca-1(12),4(9), 5,7,13,15-hexaen-10-in-2-il)-4-0xobutanamido)-3,6,9,12-tetraoxapen- tadecan-15-amido]-3-metilbutanamido]-5-(carbamoilamino)pentana- mido]fenil)metil 4-nitrofenil carbonato (11b) NO, O Â.o en À oo CS PO Do ONO q O Wo
[000599] A uma solução do composto 12c (0,15 g; 0,416 mmol) em DMF (10 mL) foram adicionados bis(4-nitrofenil) carbonato (0,15 g; 0,49 mmol) e DIPEA (63 mg; 0,49 mmol) a 0ºC. A mistura foi então agitada em RT por 3 horas até que o 12c fosse principalmente consumido, a qual foi monitorada por LCMS. A mistura de reação foi filtrada através da membrana de filtração e o filtrado foi diretamente purificado por cromatografia rápida em fase reversa (0-100% acetonitrila em água (com 10 mmol/L de bicarbonato de amônio)) para dar o intermediário título 11b (50 mg, rendimento 28%) como um sólido branco. ESI m/z: 1079 (M + H)+.
[000600] A Tabela 5 apresenta abaixo cargas úteis ligantes feitas usando os métodos descritos no presente documento.
Tabela 5. Exemplos de cargas úteis ligantes Nome Carga LP do Estruturas útil ligante Aos o o H Mo-vc- |, 9 "o 0 o E NA NI o PAB N “zo é o Ho AH KH Di f Ho N "NH; o
H y pisac- | Ar 1 ) oO Bueve- — Led son AL, es o VA SE EO! SO PAB . " o Ps 1º A o 0 o dd mePEGA [CC on A IA AÇO (sugar- — |º o o x o 4 Hº coT)dLys- de em e c-PAB A e > NOS ron nO mMe-PEG4-| o À - - e | o Coen A AAA ADO AA (sugar2)d | o AAA VCOY +. o Em Glu-vc- CE A ' > PAB no nao o no. 'oH “om
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Tabela 6. Dados de caracterização para cargas úteis ligantes Pureza HPLC RT | MS (m/z) LP | cLogP | MF Maior pico m/z HPLC (%) | (min) 100% nm CT4H95N7018 1370,6 e e GB) 685,8 (M/2+H) | 685,8 (M/2+H) 2 103 | C8IH1I7NI1026 | 1660,9 830,8 (M/2+H) | 830,8 (M/2+H) 1456 (MH) -187 | CToHI02N8O25 — | 1455,6 | 100 648(A) | 728(M/2+H) (10%) ) [1 [os Jesemanos Jian fi [rs [renata [rssoçn 1,1 3,54 | C5TH7BNGO15 1085,2 1085,3 (M+H) | 1085,3 (M+H) (LCMS) 1427 — (MH) 477 | C77H99NTO19 1426,7 | >99 7,86(B) | 714,0 (M/2+H) (15% o) 1,57 216 | C57H77N9016 11443 1144,3(M+H) | 1144,3 (M+H) (LCMS) 1,70 3,54 —| C59H82N8015 11433 11434 (M+H) | 11434 (MH) (LCMS) 13968 (M+Na) 466 | C7IHIOANSO19 — | 13736 | 100 9,40(A) — | 687,5 (M/2+H) (50%) 12788 489 | C120HI6GBN14047 | 2556,7 | 100 6,49 (A) 1278,8 (M/2+H) (M/2+H) - " emana! o [os C52H75N5014 994,2 10,36(B) | 995,3(M+H) | 995,3(M+H) 686,2 (massa 488 — | C38H52NO11P 729,8 | 100 5,26 (B) 1459,1 (2M+H) fraca) 8101 — (MH) 055 | C38HS3NO14P2 | 8098 | 100 4,03(8) — | 766,1 (M-44) (0%) )
Síntese de Cargas úteis ligantes LP1-4 Esquema 101. Síntese de carga útil 100, sua carga útil com espaçador 101a-d e cargas úteis ligantes LP1-4
E " É - F E o o od! oa HA 5: - EIA, cucomecs ENA, o ae Y o C)H;CHO, TNHCIO, o ! 5H Ho. a S O a deumdlapara HO. 1) ESNOMAF DOM " EA vt ooutro 10142 Tess 100 i - ny
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GEO " H. SA UM R4 a P Neo 4 : ds 1041-224 REAÇÃO. z E El É] o —— 11101-224 EN OVAR, DONT à v H 1) 11d FHOST.DIFEA DME, n TA Io 101-2a, R'! = H, RU? = Me, RU = Bor 101a-d Fine aina o: 101-2h, RU =RV =Me RU =H 101a, RU =H,RU = Me 10126, RU = RE = E R* = Boc 101, e =Me tliniOoa pipe rddina Í01á URI juntos =-cHcH Vormando piperazina)
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ANS 2 oo. poa Ao, ARO E do HATU, DIPEA DVWF a RIR RES Me cr b.RU=RU = Me o : 4d. RU RE juntos = -CH;CH, (formando piperazina) - KH ua & eh 1 o o o nos Aa A Aa A IA, õ LIC — LP1, RU = H, RU e Me ne Pa, RU=R =Me us. RUSRICE LPI4 su LP4, RU.RY? juntos =-CH,;CH;- (formando piperazina)
E É. — DISAC-suc-PEG,vcPAB-PNP (11b) A A AA, À OT? E a), RO E EN, DVAP, DNF "1 ê A Ç E
CC 1014 set
(18,28,AR,885,98,118,12R,138,198)-12,19-difluoro-11-hidróxi-8-(2- hidro-xiacetil)-9,13-dimetil-6-propil-5,7-dioxapentaciclo [10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17-dien-16-ona (100) o CERTA SS NO o Ho. o dy
[000601] A uma mistura de fluocinolona acetonida (10 g, 22 mmols) e sílica gel (100 g) em heptanos (900 mL) foi adicionado butiraldeído (3,0 mL; 33 mmols) abaixo de 10ºC e a suspensão foi agitada a 10-20ºC por minutos. À mistura foi adicionado ácido perclórico (70%; 7,6 mL; 91 mmols) em gotas a 0ºC. A mistura de reação foi então agitada em RT de um dia para o outro. A maior parte da fluocinolona acetonida foi consumida de acordo com TLC e LCMS. A mistura de reação foi diluída com éter de petróleo e temperada com de sódio sat. ag.. A suspensão foi filtrada e o sólido foi lavado com DCM/metano!l (v/v = 1:1). O filtrado combinado foi concentrado in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia rápida (0-1,5% de metanol em DCM) para dar o composto 100 (8,0 g; rendimento: 78%) como um sólido branco. ESI m/z: 467,1 (M + H)+. 1-[(2-[(18,28,4R,85,98,118,12R,135,198)-12,19-difluoro-11-hidróxi-9,13- dimetil-16-o0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]ico- sa-14,17-dien-8-il]-2-oxoetóxi)carbonil)óxilpirrolidina-2,5-diona (101-1a)
F H HH v AL o Oo o = OF . $ o o
[000602] Auma solução do composto 100 (0,47 g; 1,0 mmol) em DCM (20 mL) foram adicionados bis(2,5-dioxopirrolidin-1-il) carbonato (0,28 9; 1,4 mmol), trietilamina (0,40 g; 4,0 mmols) e DMAP (3,0 mg, cat.). À mistura de reação foi agitada em RT por 4 horas até que o composto 100 fosse consumido, a qual foi monitorada por LCMS. A mistura de reação foi então diluída com DCM e lavada com água. A solução orgânica foi seca sobre sulfato de sódio. Depois de filtrada, a solução foi concentrada in vacuo e o resíduo (bruto 101-1a) foi usado para a próxima etapa diretamente sem purificação. ESI m/z: 608,2 (M + H)+. (18,28,AR,88S,98,118,12R,138,198)-12,19-Difluoro-11-hidróxi-9,13- dimetil-8-(2-[(4-nitrofenoxicarbonil)óxilacetil)-6-propil-5,7-dioxa- pentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17-dien-16-ona (101-1b) A | 8 W ç O. O
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[000603] Uma mistura de composto 100 (0,80 g; 1,7 mmol), bis(4- nitrofenil) carbonato (1,6 9; 5,2 mmols) e DIPEA (1,1 g; 8,6 mmols) em THF (20 mL) foi agitada em RT por 4 horas, a qual foi monitorada por LCMS. A mistura foi concentrada in vacuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (50% de acetato de etila em éter de petróleo) para dar o composto 101-1b (0,75 g; 69% de rendimento) como óleo incolor. ES| m/z: 632 (M + H)+. Procedimento geral para composto 101
F EFA aa et o TA = 101.280 ROTA XÁ d=o rr oe ey 1) 101-2a-0, EUN, DIMAP, DOM RR AN. da AF 2/7 o 2)TFA ú 1 OH 101-1a,b 101-2a, RU = H, RV? = Me, RU = Boc 101a-d e 101-2h, RU = RU = Me, RU = H a vet) 101-2c, RU = R2 = Et, RU = Boc 101a, RU = H, RU? = Me A T 101-2d, piperazina 101b, RU = R'? = Me rã 1010, RU =RY=Et bt, vo 101d, RR? juntos — =-CH;CH; (formando piperazina)
[000604] A uma solução do composto 101-1a ou 101-1b (bruto,
calculado como 1,0 mmol) em DCM (20 mL) foram adicionados diamina 101-2 (a, b, c ou d) (1,1 mmol) e DMAP (0,1 mmol). A mistura de reação foi agitada em RT por 4 horas antes de TFA (1 mL) ser adicionado. À mistura foi agitada em RT por meia hora (para R13 = Boc, a reação foi agitada até que Boc fosse totalmente removido, que foi monitorada por LCMS). A mistura resultante foi concentrada in vacuo e o resíduo foi purificado por cromatografia rápida em fase reversa (50-80% de acetonitrila em TFA aq. (0,5%)) para dar o composto 101 (a, b, c ou d) como óleo incolor. 2-[(18,28,4R,88,98,1185,12R,138,1985)-12,19-difluoro-11-hidróxi-9,13- dimetil-16-o0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18] icosa-14,17-dien-8-i1]-2-0x0etil N-[2-(metilamino)etil|carbamato (101a)
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HO HHA AL j A A TFA mA "- º on
[000605] Seguindo o procedimento geral e usado composto 101-1a with Boc-diamina 101-2a, o composto 101a (0,38 g, 57% em duas etapas, sal de TFA) foi obtido como óleo incolor. ESI m/z: 567 (M + H)+. 2-[(18,28,AR,8S8,98,118,12R,138,198)-12,19-difluoro-11-hidróxi-9,13- dimetil-16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa- 14,17-dien-8-11]-2-0x0etil N-metil-N-[2-(metilamino)etil|carbamato (101b)
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H H H TA í ) ” º TFA mo o O
[000606] Seguindo o procedimento geral e usado composto 101-1a com diamina 101-2b, o composto 101b (0,45 g; 66% de rendimento em 2 etapas, sal de TFA) foi obtido como óleo incolor. ESI m/z: 581 (M + H)+.
2-[18,28,4R,85,95,1185,12R,138,198)-12,19-difluoro-11-hidróxi-9,13- dimetil-16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa- 14,17-dien-8-11]-2-0x0etil N-etil-N-[2-(etilamino)etil|carbamato (101c)
H F oNV MIA O ou
TFA
[000607] Seguindo o procedimento geral e usado composto 101-1b com diamina 101-2c, o composto 101c (24 mg, 18% de rendimento em duas etapas, sal de TFA) foi obtido como óleo incolor. ESI m/z: 609 (M + H)+. 1H RMN (500 MHz, DMSOd6) à 8,38 (s; 2H); 7,30 (d; J = 10,5 Hz; 1H); 6,24 (dd; J = 10,5 Hz; 2,0 Hz; 1H); 6,11 (s; 1H); 5,70-5,54 (m; 2H); 5,10-4,91 (m; 1H); 4,85-4,65 (m; 3H); 4,25-4,16 (m; 1H); 3,60-3,40 (m; 2H); 3,33-3,20 (m; 4H); 3,20-2,90 (m; 4H); 2,67-2,53 (m; 1H); 2,30- 2,20 (m; 1H); 2,10-2,00 (m; 2H); 1,80-1,70 (m; 1H); 1,64-1,51 (m; 4H); 1,49 (s; 3H); 1,40-1,30 (m; 2H); 1,20-1,10 (m; 4H); 1,10-1,00 (m; 1H); 0,90-0,80 (m; 6H) ppm. 2-[(18,28,AR,88,98,118,12R,138,198)-12,19-Difluoro-11-hidróxi-9,13- dimetil-16-o0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18] icosa-14,17-dien-8-i1]-2-0x0etil piperazina-1-carboxilato (101d)
ADO ty Yº o Va o
[000608] Seguindo o procedimento geral e usado composto 101-1b com piperazina (101-2d) sem tratamento com TFA e purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (0-10% de metanol em DCM), o composto 101d (0,21 g, 49% de rendimento em duas etapas, base livre) foi obtido como óleo incolor. ES| m/z: 579 (M + H)+.
Procedimento geral para composto 101-3 LR RÃS ** ' - Pres NOS vo ERA 1 bo A as WE nº o NA )=o Av eo Li Ífes/ 11d . o = : o Yu 1) 11d, HOBT, DIPEA, DMF, rt H o 2) piperidina, re 101a,b,d 101a, RU = H, RI? = Me 101b, R' = R1º = Me 101d, RU,R1? = -CHyCH,- (piperazina)
A F = PF CV o RA X/ XX o LRAÃST *ào á BeNTIE É. NR = o NS 101-3a,b,d L a, RU = H,R1 = Me NH b, R=R'?=Me oÊ NH) d, RILR2 juntos — = -CHCH7z- formando piperazina)
[000609] A uma solução do composto 101a, b ou d (0,20 mmol) em DMF (3 mL) foram adicionados Fmoc-VC-PAB-PNP 11d (0,17 g; 0,22 mmol), HOBT (41 mg; 0,80 mmol) e DIPEA (77 mg; 0,60 mmol). À mistura foi agitada em RT por 3 horas, a qual foi monitorada por LCMS. À mistura foi então adicionada piperidina (0,3 mL). A mistura de reação foi agitada em RT por uma hora até que Fmoc fosse totalmente removido de acordo com LCMS. A mistura resultante foi diretamente purificada por cromatografia rápida de fase reversa (50-80% acetonitrila em NH4HCOS3 aq. (10 mM)) para dar o composto 101-3a, b ou d como um sólido branco.
2-[(18,28,4R,88S,98,118,12R,138,198)-12,19-difluoro-11-hidróxi-9,13- dimetil-16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]ico- sa-14,17-dien-8-il]-2-0x0etil N-(2-([((4-[(28)-2-[(28)-2-amino-3-metilbuta- namido]-5-(carbamoilamino)pentanamido]fenil)>metóxi)carbonil] (metil)aminoJjetil)carbamato (101-3a)
F
H HA o ç RR" Ka ROTA AS H2oN Ss o
NH NH,
[000610] Seguindo o procedimento geral e usado composto 101a, o composto 101-3a (0,11 g; 57% de rendimento) foi obtido como um sólido branco. ES! m/z: 972 (M + H)+. 2-[(18,28,AR,8S8,98,118,12R,138,198)-12,19-difluoro-11-hidróxi-9,13-dime- til-16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]ico-sa-14,17- dien-8-11]-2-0x0etil N-metil-N-[2-(metilamino)etil|carbamato (101-3b)
F
HH HA o ç Xu o OO AA o Vu HoN Ss 9 o
NH ÂNt,
[000611] Seguindo o procedimento geral e usado composto 101b, o composto 101-3b (0.13 g, 65% de rendimento) foi obtido como um sólido branco. ESI m/z: 986 (M + H)+.
1-(4-[(28)-2-[(28)-2-amino-3-metilbutanamido]-5-(carbamoilamino) pentanamido]fenil)metil 4-(2-[(18,2S8,4R,8S,98,118,12R,138,19S)- 12,19-difluoro-11-hidróxi-9,13-dimetil-16-0x0-6-propil-5,7- dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17-dien-8-il]-2- oxoetil) piperazina-1,4-dicarboxilato (101-3d)
H É x o o o IDA. NO - o Q N AAA, o o
NH o nt,
[000612] Seguindo o procedimento geral e usado composto 101d (58 mg; 0,10 mmol), o composto 101-3d (52 mg, 53% de rendimento) foi obtido como um sólido branco. ESI| m/z: 984 (M + H)+. 1H RMN (500 MHz, DMSOd6) 5 10,0 (s; 1H); 8,14 (d; J=7,5 Hz; 1H);7,60 (d; J= 8,5 Hz; 2H); 7,31 (d; J= 8,5 Hz; 2H); 7,26 (d; J = 8,5 Hz; 1H); 6,30 (dd; J = 1,5 Hz; 10,5 Hz; 1H); 6,11 (s; 1H); 6,02-5,88 (m; 1H); 5,70-5,50 (m; 2H); 5,42 (s; 2H); 5,20-4,92 (m; 3H); 4,80-4,62 (m; 3H); 4,50-4,45 (m; 1H); 4,25-4,15 (m; 1H); 3,50-3,35 (m; 8H); 3,05-2,90 (m; 3H); 2,70-2,54 (m; 2H); 2,32-2,20 (m; 1H); 2,10-1,50 (m; 10H); 1,46 (s; 3H); 1,45-1,30 (m; 5H); 0,95 (d; J = 7,5 Hz; 1H); 0,90-0,80 (m; 9H); 0,77 (d; J= 7,0 Hz; 3H) ppm.
Procedimento geral para compostos LP1, LP2 e LP4 a, OQ sã sd A SRS At à KA AS TV . n. ES TT NO e ado L. aotsabo Fora! aa, RRTRAEANOO d, RU.RU = CH;CH;: (piperazina) - A o AEIHDY= A gostosas, Y . Nà o " EO L, LP4, RU Ri%juntos == -CH,;CH; ”. (formando piperazina) LPI2A4 NH:
[000613] A uma solução do composto 5c (34 mg, 60 umol) em DMF (1 mL) foram adicionados HATU (27 mg, 71 umol) e DIPEA (20 mg; 0,15 mmol). A mistura foi agitada em RT por 5 minutos antes do composto 101-3a, b ou d (50 umol) ser adicionado na mistura. A mistura foi agitada em RT por duas horas, a qual foi monitorada por LCMS. À mistura resultante foi diretamente purificada por prep-HPLC (método B) para dar o composto LP1, 2 ou 4 como um sólido branco. 2-[18,28,A4R,88,98,118,12R,138,198)-12,19-difluoro-11-hidróxi-9,13- dimetil-16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]ico- sa-14,17-dien-8-il]-2-0xoetil — N-(2-([((4-[(28)-2-[(28)-2-[1-(4-(2-azatriciclo [10.4.0.04,9]hexadeca-1(12),4(9),5,7,13,15-hexaen-10-in-2-11)-4-o0xobuta- namido)-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-amido]-3-metilbutanamido]-5- (carbamoilamino)pentanamido]fenil)metóxi)carbonil](metil)aminojetil)c arbamato (LP1) & 1 AR" CC go ara A ADA, SA AGE Aço YZ o o
[000614] Seguindo o procedimento geral e usado composto 101-3a, carga útil ligante LP1 (20 mg, 26% de rendimento) foi obtido como um sólido branco. ESI| m/z: 754 (M/2 + H)+.
2-[(18,28,A4R,88S,98,118,12R,138,198)-12,19-difluoro-11-hidróxi-9,13-di- metil-16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa- 14,17-dien-8-il]-2-o0xoetil N-(2A[((4-[(28)-2-[(28)-2-[1-(4-(2-azatriciclo [10.4.0.04,9]hexadeca-1(12),4(9),5,7,13,15-hexaen-10-in-2-il)-4-oxobuta- namido)-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-amido]-3-metilbutanamido]-5- (carbamoilamino)pentanamido]fenil)metóxi)carbonil](metil)aminojetil)- N-metilcarbamato (LP2) R Ro" SEA a dO nO Y o om
[000615] Seguindo o procedimento geral e usado composto 101-3b, carga útil ligante LP2 (20 mg, 26% de rendimento) foi obtido como um sólido branco. ESI m/z: 761 (M/2 + H)+. 1H RMN (500 MHz, DMSOd6) Ô 9,98 (s; 1H); 8,12 (d; J = 7,4 Hz; 1H); 7,87 (d; J = 8,6 Hz; 1H); 7,76 (t; J=5,4 Hz; 1H); 7,69-7,66 (m; 1H); 7,64-7,57 (m; 3H); 7,51-7,44 (m; 3H); 7,40-7,33 (m; 2H); 7,32-7,25 (m; 4H); 6,33-6,27 (m; 1H); 6,11 (s; 1H); 5,98 (t; J = 5,5 Hz; 1H); 5,70-5,55 (m; 2H); 5,41 (s; 2H); 5,08-4,91 (m; 4H); 4,79-4,66 (m; 2H); 4,41-4,35 m; 1H); 4,25-4,17 (m; 2H); 3,64-3,56 (m; 3H); 3,49-3,41 (m; 15H); 3,30-3,27 (m; 2H); 3,13-3,00 (m; 3H); 2,98- 2,75 (m; 8H); 2,65-2,54 (m; 2H); 2,48-2,43 (m; 1H); 2,41-2,34 (m; 1H); 2,28-2,19 (m; 2H); 2,07-1,94 (m; 4H); 1,81-1,67 (m; 3H); 1,63-1,53 (m; 5H); 1,48 (s; 3H); 1,45-1,31 (m; 5H); 0,88-0,82 (m; 13H) pom.
1-(4-[(28)-2-[(28)-2-[1-(4-(2-azatriciclo[10,4,0,04,9]hexadeca-1(12),4(9), 5,7,13,15-hexaen-10-in-2-11)-4-0xobutanamido)-3,6,9,12-tetraoxapentade- can-15-amido]-3-metilbutanamido]-5-(carbamoilamino)pentanamido]- fenil)metil 442-[(18,2S8,4AR,8S,98,118,12R,138,198)-12,19-difluoro-11-hidró- xi-9,13-dimetil-16-o0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18] icosa-14,17-dien-8-i1]-2-0x0etil) piperazina-1,4-dicarboxilato (LP4) GG o NA Gt NAO ASR GS! y 5
[000616] Seguindo o procedimento geral e usado composto 101-3d, carga útil ligante LP4 (35 mg, 44% de rendimento) foi obtido como um sólido branco. ESI m/z: 760 (M/2 + H)+. 1H RMN (500 MHz, DMSOd6) 3 10,0 (s; 1H); 8,14 (d; J=7,5 Hz; 1H); 7,88 (d; J = 8,5 Hz; 1H); 7,77 (t; J=5,0 Hz; 1H); 7,70-7,66 (m; 1H); 7,63-7,55 (m; 3H); 7,52-7,43 (m; 3H); 7,40-7,27 (m; 6H); 6,30 (d; J = 10,5 Hz; 1H); 6,11 (s; 1H); 6,02-5,88 (m; 1H); 5,70-5,50 (m; 2H); 5,42 (s; 2H); 5,20-4,92 (m; 4H); 4,80-4,62 (m; 3H); 4,40-4,35 (m; 1H); 4,26-4,20 (m; 2H); 3,64-3,55 (m; 3H); 3,50-3,35 (m; 17H); 3,30-3,25 (m; 3H); 3,15-2,90 (m; 4H); 2,64-2,54 (m; 2H); 2,50- 2,45 (m; 1H); 2,41-2,34 (m;1H); 2,32-2,20 (m; 2H); 2,10-1,92 (m; 4H); 1,80-1,68 (m; 3H); 1,62-1,50 (m; 5H); 1,46 (s; 3H); 1,45-1,40 (m; 2H); 1,40-1,30 (m; 3H); 1,22-1,20 (m; 1H); 0,90-0,80 (m; 13H) ppm.
(4-[(28)-2-[(28)-2-[1-(4-(2-azatriciclo[10.4.0.04,9]hexadeca-1(12),4(9), 5,7,13,15-hexaen-10-in-2-11)-4-o0xobutanamido)-3,6,9,12-tetraoxapentade- can-15-amido]-3-metilbutanamido]-5-(carbamoilamino)pentanamido] fenil)metil N-etil-N-[2-(etilamino)etil|carbamato (101-4) o O o o o pr? AA Cc K CC) NH A,
[000617] A uma solução de DIBAC-suc-PEG4-vcPAB-PNP 11b (0,11 9; 0,10 mmol) em DMF (5 mL) foram adicionados N,N'-dietiletilenodiamo (58 mg; 0,50 mmol) e DMAP (1 mg; 0,01 mmol). A mistura de reação foi agitada em RT por 4 horas, a qual foi monitorada por LCMS. A mistura resultante foi diretamente purificada por prep-HPLC (método B) para dar o composto 101-4 como óleo incolor. ESI m/z: 1056,6 (M + H)+, 529 (M/2 + H)+. 2-[(18,28,4R,88S,98,118,12R,138,198)-12,19-difluoro-11-hidróxi-9,13- dimetil-16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18] icosa-14,17-dien-8-il]-2-0xoetil — N-(2-([((4-[(28)-2-[(2S8)-2-[1-(4-(2-aza- triciclo[10.4.0.04,9]hexadeca-1(12),4(9),5,7,13,15-hexaen-10-in-2-11)-4- oxobutanamido)-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-amido]-3-metilbuta- namido]-5-(carbamoilamino)pentanamido]fenil)metóxi)carbonil](etil)- aminojetil)-N-etilcarbamato (LP3) FA GAR OO AEE 2
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[000618] Uma mistura do composto 101-4 (16 mg, 15 umol), 101-1b (11 mg, 17 umol) e DIPEA (4,0 mg; 31 umol) em DMF (5 mL) foi agitada em RT por 4 horas, a qual foi monitorada por LCMS. A mistura de reação foi diretamente purificada por prep-HPLC (método B) para dar carga útil ligante LP3 (3 mg, 13% de rendimento) como um sólido branco. ES| m/z: 775 (M/2 + H)+. 1H RMN (500 MHz, DMSOd6) 5 10,0 (s; 1H); 8,14 (d; J = 7,5 Hz; 1H); 7,88 (d; J = 8,5 Hz; 1H); 7,77 (t J = 5,0 Hz; 1H); 7,70-7,66 (m; 1H); 7,63-7,55 (m; 3H); 7,52-7,43 (m; 3H); 7,40-7,27 (m; 7H); 6,30 (d; J = 10,5 Hz; 1H); 6,11 (s; 1H); 6,02-5,88 (m; 1H); 5,70-5,50 (m; 2H); 5,42 (s; 2H); 5,20-4,92 (m; 4H); 4,80-4,62 (m; 3H); 4,40-4,35 (m; 1H); 4,26-4,20 (m; 2H); 3,64-3,55 (m; 4H); 3,50-3,35 (m; 18H); 3,12- 2,90 (m; 7H); 2,64-2,54 (m; 3H); 2,41-2,34 (m; 2H); 2,32-2,20 (m; 3H); 2,10-1,92 (m; 5H); 1,88-1,68 (m; 3H); 1,62-1,50 (m; 6H); 1,50-1,40 (m; 6H); 1,40-1,30 (m; 4H); 1,22-1,20 (m; 1H); 1,02-0,90 (m; 4H); 0,90-0,78 (m; 6H) ppm. Síntese dos profármacos de Cisteamina: Cargas úteis ligantes LP5, 6,7 eLP8 Rigo. selo, o RREO. no Soa ” ERRO Ç Ss E msn A o NY o A o NO Ga Vos PB, RM = Me A,
[000619] Cloridrato de 2-(piridin-2-ildissulfanil)etanamina (102-1e) estava comercialmente disponível com CAS 83578-21-6. terc-butil (2- mercaptoetil)(metil)carbamato (102-1f) foi sintetizado de acordo com Eur. J. Med. Chem., 2015, 95, 483-491.
[000620] endo-biciclo[6.1.0]non-4-in-9-ilmetil N-(2-(2-[2-(2- aminoetóxi) etóxiletóxiletil)carbamato (5f) foi sintetizado de acordo com WO2016168769.
[000621] 2-[(18,28,4R,8S,98,118,12R,138,198)-12,19-difluoro-11-hidróxi- 9,13-dimetil-16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]- icosa-14,17-dien-8-i1]-2-0x0etil N-[2-(piridin-2-ildisulfanil)etil|carbamato (102-3e) o Y H F ea RIO: CJ SO Y o Oo
[000622] A uma solução do composto 101-1b (0,54 g; 0,86 mmol) em acetonitrila (10 mL) foram adicionados DIPEA (0,22 g; 1,7 mmol), 102- 1e (0,19 9; 0,86 mmol) e DMAP (10 mg, 86 umol). A mistura de reação foi agitada em RT por 48 horas até que 101-1b fosse totalmente consumido de acordo com LCMS. A mistura foi então filtrada e o filtrado foi concentrado in vacuo. O óleo residual foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (20-50% acetato de etila em hexano) para dar o composto 102-3e (0,47 g; 80% de rendimento) como um sólido branco. ESI m/z: 679,2 (M + H)+. 2-[(18,28,4AR,885,98,118,12R,138,198)-12,19-difluoro-11-hidróxi-9,13-di- metil-16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa- 14,17-dien-8-i1]-2-0x0etil N-metil-N-[2-(piridin-2-ildisulfanil)etil]|carba- mato (102-3f) NA y" : es RO ( SOS Y O OH
[000623] Seguindo o procedimento similar como 102-3e exceto substituindo 102-1f por 102-1e, o composto 102-3f (0,45 g, 75% de rendimento) foi obtido como um sólido branco. ESI m/z: 693,2 (M + H)+.
2-[(18,28,4R,88,98,118,12R,138,198)-12,19-difluoro-11-hidróxi-9,13- dimetil-16-o0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18] icosa-14,17-dien-8-i1]-2-0x0etil N-(2-sulfaniletil)carbamato (102e) de H q o H "Ss Ão Hy ” o =
HO F o
[000624] A uma solução do composto 102-3e (1,4 g; 21 mmols) em clorofórmio (30 mL) foram adicionados trietilamina (0,82 mL; 5,9 mmolis) e 1,4-ditiotreitol (reagente Cleland, DTT) (1,2 g; 7,8 mmols). A mistura de reação foi agitada em RT sob nitrogênio por 4 horas, a qual foi monitorada por LCMS. A mistura resultante foi concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (50-70% de acetato de etila em hexano) para dar o composto 102e (0,95 g; 83% de rendimento) como um sólido branco. ESI m/z: 570,2 (M + H)+. 2-[(18,28,4R,88,98,118,12R,138,198)-12,19-difluoro-11-hidróxi-9,13- dimetil-16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18] icosa-14,17-dien-8-i1]-2-0x0etil N-metil-N-(2-sulfaniletil)carbamato (102f)
A H q o H "São SOH E o z
HO F Oo
[000625] Seguindo o procedimento similar como 102e exceto substituindo 102-3f por 102-3e, o composto 102f (0,97 g; 83% de rendimento) foi obtido como um sólido branco. ESI m/z: 584,3 (M + H)+.
Ácido 3-((2-[((2-[(18,28,4R,885,98,118,12R,138,195)-12,19-difluoro-11-hidró xi-9,13-dimetil-16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18] icosa-14,17-dien-8-il]-2-0xoetóxi)carbonil)amino]etil)disulfanil)-3-metilbuta noico (102-5e) o o H oH Ex o A À : DI no” o
[000626] A uma solução do composto 102-3e (0,68 g; 1,0 mmol) em metanol (5 mL) foram adicionados composto 102-4 (0,13 g; 1,0 mmol). A mistura de reação foi agitada em RT por 18 horas, a qual foi monitorada por LCMS. A mistura resultante foi então diretamente purificada por prep-HPLC (método B) para dar o composto 102-5e (0,39 9; 55% de rendimento) como um sólido branco. ESI m/z: 702,2 (M + H)+. Ácido 3-((2-[((2-[(18,28,4R,85,98,118,12R,138,198)-12,19-difluoro-11-hidró- xi-9,13-dimetil-16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18] icosa-14,17-dien-8-il]-2-0xoetóxi)carbonil)(metil)amino]etil)kdisulfanil)-3- metilbutanoico (102-5f) Nos q o H OH São NE E o A : 7a o
[000627] Seguindo o procedimento similar como 102-5e exceto substituindo 102-3f por 102-3e, o composto 102-5f (0,29 g; 40% de rendimento) foi obtido como um sólido branco. ESI m/z: 716,3 (M + H)+.
2,5-Dioxopirrolidin-1-il 3-((2-[([2-[(18,285,4R,85,98,118,12R,138,19S)- 12,19-difluoro-11-hidróxi-9,13-dimetil-16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaci- clo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17-dien-8-il]-2-0x0etóxi)carbonil)- amino]Jetil)disulfanil)-3-metilbutanoato (LP5) o de H o Ss tino S SE “FE o o au nor o
[000628] A uma solução do composto 102-5e (0,20 9; 0,29 mmol) em DCM (10 mL) foram adicionados HOSu (73 mg; 0,64 mmol) e EDCI (0,12 g; 0,64 mmol), e a mistura foi agitada em RT for 24 horas, a qual foi monitorada por LCMS. A mistura resultante foi diluída com DCM (50 mL) e a solução orgânica foi lavada com água e salmoura, seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado por prep-HPLC (método A) para dar LP5 (85 mg, 37% de rendimento) como óleo incolor. ESI m/z: 799,3 (M + H)+. 2,5-Dioxopirrolidin-1-il 3-([2-[[[2-[(18,28,4R,85,98,118,12R,138,19S)- 12,19-difluoro-11-hidróxi-9,13-dimetil-16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaci- clo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17-dien-8-il]-2-0x0etóxilcarbonil)- (metil)amino]Jetil)disulfanil)-3-metilbutanoato (LP6) Sao q o H o PC o : Wu noF o
[000629] Seguindo o procedimento similar como LP5 exceto substituindo 102-5f por 102-5e, o composto LP6 (86 mg, 36% de rendimento) foi obtido como óleo incolor. ESI| m/z: 813,3 (M + H)+.
[000630] endo-Biciclo[6.1.0]Jnon-4-in-9-ilmetil N-(2-[2-(2-(2-[3-((2-[((2- [18,28,A4R,88S,98,118,12R,138,198)-12,19-difluoro-11-hidróxi-9,13- dimetil-16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18] icosa-14,17-dien-8-il]-2-o0xo0etóxil)carbonil)amino]etil)disulfanil)-3- metilbutanamido]Jetoxi)etóxi)etóxiletil)carbamato (LP7) Nes Y Ar Aro, & o no” o
[000631] A uma solução do composto 102-5e (0,20 9; 0,29 mmol) em DMF (10 mL) foram adicionados HATU (0,11 g; 0,29 mmol) e DIPEA (75 mg; 0,58 mmol). A mistura de reação foi agitada em RT por 10 minutos antes do composto 5f (0,11 g; 0,29 mmol) ser adicionado. A mistura de reação foi agitada em RT por 18 horas, a qual foi monitorada por LCMS. A mistura resultante foi então diretamente purificada por prep-HPLC (método B) para dar o composto LP7 (0,16 g; 55% de rendimento) como um sólido branco. ESI m/z: 526,7 (M/2 + H)+. endo-Biciclo[6.1.0]non-4-in-9-ilmetil NA2-[2-(2-(2-[3-(12-[(62- [(18,28,AR,88S,98,118,12R,138,198)-12,19-difluoro-11-hidróxi-9,13- dimetil-16-o0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18] icosa-14,17-dien-8-i1]-2-o0x0etóxi)carbonil)(metil)amino]etil)disulfanil)-3- metilbutanamido]etoxi)etóxi)etóxiletil)carbamato (LP8)
A H H 9 É À noF o
[000632] Seguindo o procedimento similar como LP7 exceto substituindo 102-5f por 102-5e, o composto LP8 (0,13 g; 41% de rendimento) foi obtido como um sólido branco. ES! m/z: 533,8 (M/2 + H)+.
Síntese de AMO cargas úteis ligantes LP9-11 Esquema 103A. Síntese de cargas úteis 103a,b e cargas úteis ligantes LP9-10 " 9 RE ALTA, Mo ais ONO sa nan o AI St sersilinendç A gar ASA e Ee AÇÃO gago - O vo AAA o SR CO DA Aa AIEA “T * E Les Etil (2-(((9H-Fluoren-9-il) metóxi)carbonilamino)acetamido)macetato (103-1)
RARA mos ao
[000633] A uma mistura de Fmoc-Gly-Gly-OH (4,3 g; 12 mmols) em THF (0,12 L) e tolueno (40 mL) foram adicionados piridina (1,2 mL; 15 mmols) e tetraacetato de chumbo (6,8 g; 15 mmols). A mistura de reação foi refluxada por 5 horas, a qual foi monitorada por LCMS. Depois de resfriada até RT, a mistura de reação foi filtrada através de Celite para remover o material insolúvel, e o filtrado foi concentrado in vacuo. O resíduo foi dissolvido em acetato de etila, e a solução foi lavada com água e salmoura. A solução orgânica foi seca sobre sulfato de sódio e concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (10% acetato de etila em éter de petróleo) para prover o composto 103-1 (3,0 g; 67% de rendimento) como um sólido incolor. ESI m/z: 391 (M + Na)+.
9H-Fluoren-9-ilmetil ”— NA[((2-[(18,28,4R,88,98,118,128,13R)-11-hidróxi- 9,13-dimetil-16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18] icosa-14,17-dien-8-il]-2-0x0etóxi)metil)carbamoil]metil)kcarbamato (103- 2a)
NA NH
RO FEmocHN TN NO o on o
[000634] A uma solução do composto 103-1 (0,37 g; 1,0 mmol) e budesonida 1a (1,3 g; 3,0 mmoIls) em THF (4 mL) foi adicionado terc- butóxido de potássio (0,22 g; 2,0 mmols) a 0ºC. A mistura de reação foi agitada em RT por 15 minutos, a qual foi monitorada por TLC. A solução de reação foi carregada com acetato de etila e água a 0ºC, e extraída com acetato de etila e clorofórmio. A solução orgânica combinada foi seca sobre sulfato de sódio e concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (30-35% acetato de etila em éter de petróleo) para dar o composto 103-2a (0,19 g; 40% de rendimento) como um sólido branco. ES! m/z: 739 (M + H)+. 9H-Fluoren-9-ilmetil NÁ[((2-[(18,28,4R,88,98,118,12R,138,198)-12,19- difluoro-11-hidróxi-9,13-dimetil-16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo [10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17-dien-8-il]-2-0x0etóxi)metil)carba- moil]metil)carbamato (103-2b) NM NS d
O FmocHN Wo o OH o
[000635] A um tubo vedado foi adicionada uma solução de composto 103-1 (0,30 g; 0,81 mmol) e composto 100 (0,38 g; 0,81 mmol) em DCM (4 mL) e p-toluenossulfonato de piridínio (21 mg, 81 umol) em RT. O tubo de reação foi vedado e agitado a 500C por 24 horas, a qual foi monitorada por LCMS. Depois de resfriada, a mistura de reação foi concentrada in vacuo e o resíduo foi purificado por prep-HPLC (método A) para dar o composto 103-2b (0,23 g; 37% de rendimento) como um sólido branco. ES| m/z: 775 (M + H)+. 2-Amino-N-((2-[(18,28,4R,88,98,118,128,13R)-11-hidróxi-9,13-dimetil-16- oxo-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17- dien-8-i1]-2-oxoetóxi)metil)acetamida (103a) NL ms H
ÃO
HOW O OH o
[000636] A uma solução do composto 103-2a (0,10 g; 0,14 mmol) em DMF (2 mL) foi adicionada piperidina (35 mg; 0,41 mmol). A mistura de reação foi agitada em RT por duas horas até que Fmoc fosse totalmente removido, a qual foi monitorada por LCMS. A mistura resultante foi diretamente purificada por cromatografia rápida de fase reversa (0- 100% de acetonitrila em TFA aq. (0,05%)) para dar o composto 103a (50 mg, 70% de rendimento) como um sólido branco. ESI m/z: 517,6 (M + H)+. 2-Amino-N-((2-[(18,28,4R,8S,98,118,12R,138,198)-12,19-difluoro-11-hidró- xi-9,13-dimetil-16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]- icosa-14,17-dien-8-il]-2-0xo0etóxi)metil)acetamida (103b)
NA NH SF
RO Han e o OH Oo
[000637] Seguindo o procedimento similar como 103a exceto substituindo 103-2b por 103-2a, o composto 103b (0,26 g; 65% de rendimento) foi obtido como um sólido branco. ES! m/z: 553,2 (M/2 + H)+.
NHFmoc
EX wo. o B = ENE o % O NeFmoc o É dry DCM, rt 7 " F xo FANHA 4
A AÍ J À NH; f o o a o DE í = as nl * 105b
[000638] O composto 105(b) foi preparado de acordo com o procedimento acima. (4-[(28)-2-[(28)-2-[1-(4-[2-azatriciclo[10.4.0.04,9]hexadeca-1(12),4(9),5,7, 13,15-hexaen-10-in-2-il)-4-oxobutanamido)-3,6,9,12-tetraoxapentadecan- 15-amido]-3-metilbutanamido]-5-(carbamoilamino)pentanamido]fenil) metil NA[((2-[(18,28,4R,88S,98,118,128,13R)-11-hidróxi-9,13-dimetil-16- oxo-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17- dien-8-il]-2-o0xo0etóxi)metil Jcarbamoil]Jmetil)kcarbamato (LP9)
ALT O ga NES o SE Aa ALON As N. o. o. 1». o AAA Ad
ÊÔ
[000639] A uma solução do composto 103a (15 mg, 29 umol) em DMF (1,0 mL) foram adicionados composto 11b (30 mg, 28 umol), HOBT (2,0 mg, 15 umol) e DIPEA (7,7 mg; 60 umol). A mistura de reação foi agitada em RT por duas horas, a qual foi monitorada por LCMS. A mistura foi diretamente purificada por prep-HPLC (método B) para dar carga útil ligante LP9 (5,0 mg, 11% de rendimento) como um sólido branco. ESI m/z: 729 (M/2 + H)+.
(4-[(28)-2-[(28)-2-[1-(4-(2-azatriciclo[10.4.0.04,9]hexadeca-1(12),4(9),5,7, 13,15-hexaen-10-in-2-il)-4-0xobutanamido)-3,6,9,12-tetraoxapentadecan- 15-amido]-3-metilbutanamido]-5-(carbamoilamino)pentanamido]fenil)metil NAI((2-(18,28,4R,88,98,118,12R,138,198)-12,19-difluoro-11-hidróxi-9,13- dimetil-16-o0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa- 14,17-dien-8-11]-2-0x0etóxi)metil)carbamoil]Jmetil)kcarbamato (LP10) 7 O À RES - AAA AO CDA o br
[000640] Seguindo o procedimento similar como LP9 exceto substituindo 103b por 103a, carga útil ligante LP10 (23 mg, 58% de rendimento) foi obtido como um sólido branco. ES| m/z: 747,0 (M/2 + H)+; 513,8 (fragmento clivado por LCMS, pedaço clivado em NHCH2- O) 1HNMR (400 MHz, DMSOd6) à 10,02 (s; 1H); 8,80-8,72 (m; 1H); 8,15 (d; J = 6,8 Hz; 1H); 7,89 (d; J = 8,8 Hz; 1H); 7,80-7,75 (m; 1H); 7,68 (d; J = 7,6 Hz; 1H); 7,64-7,58 (m; 3H); 7,54-7,22 (m; 9H); 6,29 (d; J= 10,0 Hz; 1H); 6,10 (s; 1H); 6,04-5,96 (m; 1H); 5,78-4,10 (m; 15H); 3,66- 3,54 (m; 5H); 3,54-3,42 (m; 13H); 3,32-3,26 (m; 2H); 3,20-2,50 (m; 7H); 2,42-2,20 (m; 4H); 2,05-1,90 (m; 4H); 1,85-1,25 (m; 15H); 0,90-0,80 (m; 13H) ppm.
Esquema 103B. Síntese de Carga útil ligante LP11
O A HW à 1) Hosu, EDCI DEM - ' o q ! E O. SEL Iraar CO) Eça Ss do, Tor, À PR La Ro, FATO, DIPER, DUF OO em PA Ds
Ácido (28)-2-(2-(2-[1-(4-(2-azatriciclo[10.4.0.04,9]hexadeca-1(12),4(9), 5,7,13,15-hexaen-10-in-2-i1)-4-o0xobutanamido)-3,6,9,12-tetraoxapentade- can-15-amido]acetamido)acetamido)-3-fenilpropanoico (103-3) o o o on on
O
[000641] Auma solução do composto 5c (0,16 g; 0,29 mmol) em DCM (20 mL) foram adicionados HOSu (73 mg; 0,64 mmol) e EDCI (0,12 g; 0,64 mmol). A mistura foi agitada em RT por 24 horas até que o composto 5c fosse totalmente consumido de acordo com LCMS. A mistura resultante foi diluída com DCM (50 mL) e a solução orgânica foi lavada com água (50 mL) e salmoura (50 mL), seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada in vacuo para dar o éster ativo OSu (0,16 9, 84% de rendimento) como óleo incolor, que foi usado para a próxima etapa diretamente.
[000642] A uma solução de H-GIy-GIy-Phe-OH (10 mg, 36 umol) em DMF (0,5 mL) foram adicionados o éster ativo OSu (23 mg, 36 umol) obtido acima e DIPEA (9,0 mg; 72 umol). A mistura de reação foi agitada em RT de um dia para o outro. A mistura foi diretamente purificada por prep-HPLC (método B) para dar o composto 103-3 (15 mg, 51% de rendimento) como um sólido branco. ESI m/z: 408,2 (M/2 + H)+.
1-(442-Azatriciclo[10.4.0.04,9]hexadeca-1(12),4(9),5,7,13,15-hexaen-10-in-2- il)-4-oxobutanamido)-NX[(([(1S)-1-((K[(2-[(198)-12,19-difluoro-11-hidróxi- 9,13-dimetil-16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18] icosa-14,17-dien-8-i1]-2-oxo0etóxi)metil)carbamoil]Jmetil)carbamoil)-2- feniletil|carbamoil)metil)carbamoil]Jmetil)-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15- amida (LP11) ÉO o & 2. DAI A TATA y PATA + o
[000643] Auma solução do composto 103-3 (15 mg, 18 umol) em DMF (0,5 mL) foram adicionados HATU (14 mg, 36 umol) e DIPEA (9,3 mg; 72 umol). A mistura de reação foi agitada em RT por 10 min antes do composto 103b (10 mg, 18 umol) ser adicionado na mistura. A mistura de reação foi então agitada em RT de um dia para o outro. A mistura resultante foi diretamente purificada por prep-HPLC (método B) para dar carga útil ligante LP11 (5,0 mg; 20% de rendimento) como um sólido branco. ESI m/z: 420,2 (M/3 + H)+. Síntese do profármaco dipeptídico: Carga útil ligante LP12 Esquema 104A. Síntese da carga útil 104a 100 104.22 104:3a IRÃO nam a RO
[000644] Ácido alfa-azidoisobutírico 104-1 foi sintetizado de acordo com Org. Lett., 2001, 3(5), 781-783.
2-[(18,28,4R,88S,98,118,12R,138,198)-12,19-difluoro-11-hidróxi-9,13- dimetil-16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18] icosa-14,17-dien-8-il1]-2-0x0etil 2-azido-2-metilpropanoato (104-2a) ol E ç E) a E ÃO o Oh Oo
[000645] A uma solução do composto 100 (0,10 g; 0,21 mmol) em DCM (30 mL) foram adicionados composto 104-1 (52 mg; 0,40 mmol), DCC (90 mg; 0,44 mmol) e DMAP (10 mg) e a mistura foi agitada em RT de um dia para o outro, a qual foi monitorada por LCMS. A mistura resultante foi concentrada in vacuo e o resíduo foi purificado por prep- HPLC (método A) para dar o composto 104-2a (80 mg, 70% de rendimento) como um sólido branco. ESI m/z: 578,3 (M + H)+. 2-1(18,28,AR,88,98,118,12R,138,198)-12,19-difluoro-11-hidróxi-9,13-dime- til-16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17- dien-8-il]-2-0x0etil 2-amino-2-metilpropanoato (104-3a) ot Eh : A< EO) o mao o uy o
[000646] A uma solução do composto 104-2a (75 mg; 0,15 mmol) em THF (5 mL) foram adicionados PPh3 (0,15 g; 0,57 mmol), água (5 mL) e HCl conc. (1 gota), e a mistura de reação foi agitada em RT de um dia para o outro. A mistura foi concentrada in vacuo e diluída com DMF. O precipitado foi removido através de filtração. O filtrado foi purificado por prep-HPLC (método A) para dar o composto 104-3a (45 mg, 54% de rendimento) como um sólido branco. ESI| m/z: 552,3 (M + H)+.
2-1(18,28,A4R,88,98,118,12R,138,198)-12,19-difluoro-11-hidróxi-9,13-dime- til-16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17- dien-8-11]-2-0x0etil 2-[(28)-2[(terc-butóxi)carbonilJamino)-4- metilpentanamido]-2-metilpropanoato (104-4a) oe : o O EO) o seen À X o o by vo
[000647] Auma mistura de Boc-Leu-OH (20 mg, 87 umol) e HATU (50 mg; 0,13 mmol) em DMF (3 mL) foram adicionados DIPEA (30 mg; 0,23 mmol), DMAP (2 mg) e composto 104-3a (30 mg, 54 umol). A mistura foi agitada em RT por uma hora, a qual foi monitorada por LCMS. A mistura foi diretamente purificada por prep-HPLC (método A) para dar o composto 104-4a (25 mg, 55% de rendimento) como um sólido branco. ESI m/z: 787,4 (M + Na)+. 2-[18,28,A4R,88,98,118,12R,138,198)-12,19-difluoro-11-hidróxi-9,13-dime- til-16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17- dien-8-i1]-2-0x0etil 2-[(28)-2-amino-4-metilpentanamido]-2-metilpropanoato (104a) o HH f o AX, EO) o ma xo o by Y o
[000648] A uma mistura do composto 104-4a (25 mg, 33 umol) em DCM (1,5 mL) foi adicionado TFA (0,15 mL), e a mistura foi agitada em RT por uma hora até que Boc fosse totalmente removido de acordo com LCMS. A mistura de reação foi concentrada in vacuo e o resíduo foi purificado por prep-HPLC (método A) para dar o composto 104a (13 mg, 61% de rendimento) como um sólido branco. ESI m/z: 665,4 (M + H)+.
1H RMN (400 MHz, DMSOd6) à 8,39 (s; 1H); 8,26 (s; 1H); 7,27 (d; J= 10,0 Hz; 1H); 6,31 (d; J= 10,1 Hz; 1H); 6,11 (s; 1H); 5,63 (t; J = 24,2 Hz; 2H); 5,30-5,05 (m; 1H); 4,96 (d; J = 17,7 Hz; 1H); 4,81-4,65 (m; 2H); 4,20 (s; 1H); 2,69-2,54 (m; 1H); 2,36-2,15 (m; 1H); 2,12-1,94 (m; 2H); 1,85- 1,63 (m; 2H); 1,63-1,53 (m; 3H); 1,52-1,41 (m; 11H); 1,41-1,10 (m; 6H); 0,97-0,76 (m; 12H) ppm. Esquema 104B. Síntese de Carga útil ligante LP12 | AI AA D FER, our Ps rn - e Su oi; a o oas mean, K.AÀ OA: . nes rms DO ” x” E + ia ares O" FI " HATU, DUAR DIPER A o A, A, , ARA LEA EÔ as oa ganda, sra a AO A NT + ET
N FX URSS SENTA 7 v AL ã o Ss O FED Ada A PAPA Gorro Fº
(28)-2[((4-[(28S)-5-(carbamoilamino)-2-[(28)-2-([(9H-fluoren-9-ilmetóxi) etóxi)carbonilJamino)-3-metilbutanamido]pentanamido]fenil)metóxi) etóxi)carbonillamino)-4-metilpentanoato de terc-butila (104-5)
À a FmocHN ” N
NH NH,
[000649] A uma solução do composto 11b (0,30 g; 0,39 mmol) e H- Leu-OTBU-OH (0,14 g; 0,638 mmol) em DMF (3 mL) foi adicionado DIPEA (0,26 g; 2,0 mmols), e a mistura de reação foi agitada em RT por duas horas. A mistura resultante foi diretamente purificada por prep- HPLC (método A) para dar o composto 104-5 (0,11 g; 35% de rendimento) como um sólido branco. ESI m/z: 815,4 (M + H)+. Ácido (28)-2([(14-[(2S)-5-(carbamoilamino)-2-[(28)-24[(9H-fluoren-9- ilmetóxi)carbonilJamino)-3-metilbutanamido]pentanamido]fenil)metóxi) carbonilJamino)-4-metilpentanoico (104-6) o ag FmocHN q
NH NH,
[000650] A uma solução do composto 104-5 (25 mg, 31 umol) em DCM (4 mL) foi adicionado TFA (0,8 mL) e a mistura foi agitada em RT por duas horas. A mistura resultante foi concentrada in vacuo e o resíduo foi purificado por prep-HPLC (método A) para dar o composto 104-6 (15 mg, 67% de rendimento) como um sólido branco. ES| m/z: 759,3 (M + H)+.
2-[18,28,4R,88,98,118,12R,138,198)-12,19-difluoro-11-hidróxi-9,13-dimetil- 16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17- dien-8-il]-2-0xoetil — 2-[(2S)-2-([((4-[(28)-5-(carbamoilamino)-2-[(28)-24[(9H- fluoren-9-ilmetóxi)carbonilJamino)-3-metilbutanamido]pentanamido]fenil) metóxi)carbonilJamino)-4-metilpentanamido]-2-metilpropanoato (104-7a)
À H
LA Ás DI x” siso, FmocHN “O o o 4 Fe Y NH 9
CAN
[000651] A uma solução do composto 104-5 (20 mg, 26 umol) e composto 104-3 (17 mg, 32 umol) em DMF (2 mL) foram adicionados HATU (20 mg, 52 umol), DIPEA (13 mg; 0,10 mmol) e DMAP (1 mg), e a mistura de reação foi agitada em RT por uma hora, a qual foi monitorada por LCMS. A mistura resultante foi diretamente purificada por prep-HPLC (método A) para dar o composto 104-7a (30 mg, 89% de rendimento) como um sólido branco. ESI m/z: 1293 (M + H)+.
2-1(18,28,AR,88,98,118,12R,138,198)-12,19-difluoro-11-hidróxi-9,13-dime- til-16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17- dien-8-11]-2-0x0etil 2-[(28)-2-([([4-(28)-2-[(28)-2-amino-3-metilbutanamido]- S5-(carbamoilamino)pentanamido]fenil)metóxi)carbonilJamino)-4- metilpentanamido]-2-metilpropanoato (104-8a) Nes Ka ALTA E HoN 7 N o o À re . NH o
AS
[000652] A uma solução do composto 104-7a (25 mg, 19 umol) em DMF (2 mL) foi adicionada piperidina (0,2 mL), e a mistura foi agitada em RT por meia hora até que Fmoc fosse totalmente removido de acordo com LCMS. A mistura de reação foi imediatamente purificada por cromatografia rápida de fase reversa (0-50% de acetonitrila em TFA aq. (0,03%)) para dar o composto 104-8a (20 mg, 95% de rendimento) como um sólido branco. ESI m/z: 1070,5 (M + H)+.
2-[18,285,4R,8S,98,118,12R,138,198)-12,19-difluoro-11-hidróxi-9,13- dimetil-16-o0x0-6-propil-5,7 -dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18] icosa-14,17-dien-8-il]-2-0xoetil 2-[(28)-2-([(14-[(28)-2-[(28)-2-[1- (fTendo-biciclo[6.1.0]non-4-in-9-ilmetóxilcarbonil<)amino)-3,6,9,12- tetraoxapentadecan-15-amido]-3-metilbutanamido]-5-(carbamoilami- no)pentanamido]fenil)metóxi)carbonilJamino)-4-metilpentanamido]- 2-metilpropanoato (LP12) o o de é Apdessass AG OPA RA, NA" Lu POA, na,
[000653] A uma solução do composto 104-8a (20 mg, 26 umol) e composto 5d (14 mg, 32 umol) em DMF (2 mL) foram adicionados HATU (22 mg, 58 umol), DIPEA (15 mg; 0,412 mmol) e DMAP (1 mg) e à mistura de reação foi agitada em RT por duas horas, a qual foi monitorada por LCMS. A mistura resultante foi diretamente purificada por prep-HPLC (método A) para dar carga útil ligante LP12 (10 mg, 21% de rendimento) como um sólido branco. ESI m/z: 747,6 (M/2 + H)+. 1H RMN (400 MHz, DMSOd6) à 9,97 (s; 1H); 8,35-8,25 (m; 1H); 8,11 (d; J = 7,4 Hz; 1H); 7,87 (d; J = 8,6 Hz; 1H); 7,58 (d; J = 8,2 Hz; 2H); 7,34- 7,18 (m; 4H); 7,17-7,04 (m; 1H); 6,30 (d; J = 10,1 Hz; 1H); 6,11 (s; 1H); 6,03-5,90 (s; 1H); 5,72-5,50 (m; 2H); 5,41 (s; 2H); 5,34-3,91 (m; 12H); 3,66-3,38 (m; 15H); 3,15-2,88 (m; 4H); 2,73-2,53 (m; 1H); 2,50-2,45 (m; 1H); 2,41-2,31 (m; 1H); 2,30-1,90 (m; 9H); 1,83-1,62 (m; 2H); 1,63-1,17 (m; 27H); 0,92-0,77 (m; 20H) ppm.
Esquema 104C. Síntese da carga útil 104b e a sua carga útil ligante LP13 A H mor & . à. H se o FÃ o e FARO Foi À, piperidina ENA, H MEDO OVAF, DOM " Â rum a. ê » “" b K O , EOC, Sair poM r dE e DCW, —r RE e 100 104-2b 104-3b nho o & AE & " Boc-Ser-OH ção SH, TFADOMS RN Lo SA FmocvePpAB-PNP (11d) HATU, id OMF - É E = : n.2h TFA Yf + VI ga DMAP, OMF e " 2) piperidina, rt, 1h 104-4b 104 A. Lo SA Ku LisoA, A AAA AAA, o Ns Y E x > o A dE ED CO ó ê NS FATU, DIPEA, DNF * ne 16h no cm 1044 À, Qdo E o o o Oy ú Wu NAAS DO dO + : F A YZ.
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2-[(18,285,4R,88,98,1185,12R,135,198)-12,19-difluoro-11-hidróxi-9,13- dimetil-16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]ico- sa-14,17-dien-8-il]-2-0x0etil (28)-2-([(9H-fluoren-9-ilmetóxi)carbonil] amino)-4-metilpentanoato (104-2b) o f. n FmeciN À, (sn
[000654] A uma solução do composto 100 (0,47 g; 1,0 mmol) e Fmoc- Leu-OH (0,39 g; 1,1 mmol) em DCM (10 mL) foram adicionados EDCI (0,23 g; 1,2 mmol) e DMAP (12 mg; 0,10 mmol). A mistura foi agitada em RT por 16 horas, a qual foi monitorada por LCMS. A mistura resultante foi diluída com água (50 mL) e extraída com DCM (50 mL x 2). A solução orgânica combinada foi seca sobre sulfato de sódio e concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (10-50% de acetato de etila em éter de petróleo) para dar o composto 104-2b (0,52 g; 65% de rendimento) como um sólido branco. ES! m/z: 802,4 (M + H)+.
2-[(18,28,A4R,8S8,98,118,12R,138,198)-12,19-difluoro-11-hidróxi-9,13-dime- til-16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17- dien-8-11]-2-0x0etil (28)-2-amino-4-metilpentanoato (104-3b) o f. H BN, .H i NH
[000655] A uma solução do composto 104-2b (0,50 g; 0,62 mmol) em DCM (9 mL) foi adicionada piperidina (1 mL) e a mistura de reação foi agitada em RT por 30 minutos até que Fmoc fosse totalmente removido de acordo com LCMS. A mistura resultante foi concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (5-10% metanol em DCM) para dar o composto 104-3b (0,32 g; 90% de rendimento) como um sólido branco. ESI m/z: 580,3 (M + H)+. 2-1(18,28,A4R,88,98,118,12R,138,198)-12,19-difluoro-11-hidróxi-9,13-dime- til-16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17- dien-8-i1]-2-0x0etil (28)-2-[(2S)-2[(terc-butóxi)carbonilJamino)-3- hidroxipropanamido]-4-metilpentanoato (104-4b) o OH o & H cmo fe S “FE
VT
[000656] A uma mistura do composto 104-3b (0,32 g; 0,55 mmol) e Boc-Ser-OH (0,14 g; 0,66 mmol) em DMF (3 mL) foram adicionados
HATU (0,25 g; 0,66 mmol) e DIPEA (0,21 g; 1,6 mmol) em RT. A mistura foi agitada em RT por 6 horas, a qual foi monitorada por LCMS. A mistura resultante foi concentrada in vacuo, e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (10-50% de acetato de etila em éter de petróleo) para dar o composto 104-4b (0,34 mg; 80% de rendimento) como um sólido branco. ES| m/z: 767,4 (M + H)+. Sal de 2-[1S8,2S8,4R,8S,98,118,12R,138,198)-12,19-difluoro-11-hidróxi-9,13- dimetil-16-0x0-6-propil-5,7 -dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa- 14,17-dien-8-i1]-2-0x0etil (28)-2-[(28)-2-amino-3-hidroxipropanamido]-4- metilpentanoato de ácido trifluoroacético (104b) OH e H AS “Ho
TFA v HF
[000657] A uma solução do composto 104-4b (0,34 g; 0,44 mmol) em DCM (5 mL) foi adicionado TFA (1 mL). A mistura de reação foi agitada em RT por duas horas até que Boc fosse totalmente removido de acordo com LCMS. A mistura resultante foi concentrada e o resíduo (0,33 9; 95% de rendimento) era puro o suficiente para a próxima etapa. 100 mg de produto bruto foi adicionalmente purificado por prep-HPLC (método A) para dar o composto 104b (80 mg, 80% de rendimento) como um sólido amarelo. ES| m/z: 667,3 (M + H)+.
2-[(18,25,4R,85,98,1185,12R,138,198)-12,19-Difluoro-11-hidróxi-9,13-dimetil- 16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17- dien-8-il]-2-0xoetil /— (28)-2-[(28)-2-([((4-[(28)-2-[(28)-2-amino-3-metilbutana- mido]-5-(carbamoilamino)pentanamido]fenil)metóxi)carbonilJamino)-3- hidroxipropanamido]-4-metilpentanoato (104-8b) o SANS de à H s DAL são De NS TT XY NH º ÂNt
[000658] A uma solução do composto bruto 104b (0,10 g; 0,13 mmol) recém obtido acima em DMF (3 mL) foram adicionados Fmoc-vcPAB- PNP (11d) (0,12 g; 0,16 mmol), DMAP (16 mg; 0,13 mmol) e DIPEA (50 mg; 0,39 mmol) em RT. A mistura foi agitada em RT por 3 horas até que a maior parte dos materiais de partida fossem consumidos, a qual foi monitorada por LCMS. À mistura de reação foi então adicionada piperidina (1 mL). Depois de agitada em temperatura ambiente por uma hora até que o Fmoc fosse totalmente removido de acordo com LCMS. A mistura de reação foi diretamente purificada por prep-HPLC (método B) para dar o composto 104-8b (28 mg, 20% de rendimento) como um sólido branco. ES| m/z: 536,8 (M/2 + H)+.
2-1(18,28,A4R,88,98,118,12R,138,198)-12,19-difluoro-11-hidróxi-9,13-dime- til-16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17- dien-8-i1]-2-0x0etil (28)-2-[(285)-2-([(14-[(28)-21(28)-211-(([endo-biciclo [6.1.0]non-4-in-9-ilmetoxi]carbonil<)amino)-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15- amido]-3-metilbutanamido]-5-(carbamoilamino)pentanamido]fenil)metóxi) carbonilJamino)-3-hidroxipropanamido]-4-metilpentanoato (LP13)
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[000659] A uma solução do composto 5d (10 mg, 22 umol) em DMF (1 mL) foram adicionados HATU (9 mg, 22 umol) e DIPEA (8,0 mg; 62 upmol) sucessivamente em RT. A mistura foi agitada em RT por meia hora seguido pela adição de uma solução de composto 104-8b (20 mg, 19 umol) em DMF (1 mL). A mistura resultante foi agitada em RT por duas horas até que o composto 104-8b fosse consumido, a qual foi monitorada por LCMS. Depois de filtrada através de membrana, o filtrado foi diretamente purificado por prep-HPLC (método B) para dar carga útil ligante LP13 (10 mg, 35% de rendimento) como um sólido branco. ESI m/z: 748,4 (M/2 + H)+.
Esquema 105. Síntese de LP18-21 4 Â be. Z or . À, A, À, mto, mssmenema PS II TAAY! vim, sottise sw piperidina, 1, 1h Y 10386, 10086 * afrabona so remate ini E manada nao PA açao EA à. 28 Arona, E o nx. ve. LD” E: ads ESA O | i se = o EC & Enio e. msn ai us WA paca TOS PR % s A. > Vs fia a AA ÁLSTP" Y Fio ão : nado
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2,5-Dioxopirrolidin-1-il 1-(4-(2-azatriciclo[10.4.0.04,9]hexadeca- 1(12),4(9),5,7,13,15-hexaen-10-in-2-il)-4-o0xobutanamido)-3,6,9,12- tetraoxapentadecan-15-oato (5-1c) oO DS O 9 º
[000660] A uma solução do composto 5c (160 mg; 0,290 mmol) em DCM (20 mL) foram adicionados HOSu (73,3 mg; 0,637 mmol) e EDCI (122 mg; 0,637 mmol), e a mistura foi agitada em RT por 24 horas, a qual foi monitorada por LCMS. A mistura de reação foi diluída com DCM (50 mL) e a camada orgânica foi lavada com água (50mL) e salmoura, seca com Na2SO4 anidro e concentrada in vacuo para dar o composto 5-1c (159 mg, 84% de rendimento) como óleo incolor, o qual foi usado para a próxima etapa diretamente. ES| m/z: 650 (M + H)+. 2,5-Dioxopirrolidin-1-il 1-[(fendo-biciclo[6.1.0]non-4-in-9- ilmetoxi)carbonil)amino]-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-0ato (5-1d) x : í fia oa
E
[000661] Seguindo o procedimento similar como 5-1c exceto substituindo 5d por 5c, o composto 5-1d (150 mg, 54% de rendimento) foi obtido como óleo incolor, o qual foi usado para a próxima etapa diretamente sem purificação adicional. ESI| m/z: 539 (M + H)+.
14-[(28)-2-[(28)-2-amino-3-metilbutanamido]-5-(carbamoilamino)pen- tanamido]fenil)metil NA[(12-[(18,28,4R,88,98,118,12R,138,19S)- 12,19-difluoro-11-hidróxi-9,13-dimetil-16-0x0-6-propil-5,7 -dioxapenta- ciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17-dien-8-il]-2-o0x0etóxi)metil)- carbamoil]metil)carbamato (103-8b)
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[000662] Seguindo o procedimento similar como 104-8b (vide esquema 104C) exceto substituindo 103b por 104b, o composto 103-8b (28 mg, 20% de rendimento) foi obtido como um sólido branco. ES! m/z: 480 (M/2 + H)+.
Ácido — (45)-4-amino-4-([(18)-1[(1S)-4-(carbamoilamino)-1-[(4-[[(4[(2- [(18,28,4R,8S8,98,118,12R,138,198)-12,19-difluoro-11-hidróxi-9,13-dime- til-16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18] icosa- 14,17-dien-8-11]-2-0x0etóxi)metil)carbamoil]Jmetil)kcarbamoil)óxilmetilfenil) carbamoil]butil|carbamoil)-2-metilpropil]|carbamoil)butanoico (103-9a)
F SE AH
[000663] A uma solução do composto Boc-L-Glu(OTBU)-OH (0,15 g; 0,50 mmol) em DMF (5 mL) foram adicionados HATU (0,19 g; 0,50 mmol) e DIPEA (0,13 g; 1,0 mmol). A mistura de reação foi agitada em RT por 10 minutos, antes do composto 103-8b (0,48 g; 0,50 mmol) ser adicionado na mistura de reação. A mistura de reação foi então agitada em RT por 3 horas até que o 103-8b fosse totalmente consumido de acordo com LCMS. A mistura foi extraída com EtOAc, e a solução orgânica combinada foi lavada com água, seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada in vacuo. O resíduo foi dissolvido em DCM (10 mL). À solução foi adicionado TFA (2 mL) e a mistura de reação foi agitada em RT por 3 horas, a qual foi monitorada por LCMS. A mistura de reação foi concentrada, e o resíduo foi diretamente purificado por prep-HPLC (método B) para dar o composto 103-9a (0,41 g; 75% de rendimento) como um sólido branco. ESI m/z: 536,8 (M/2 + H)+. Ácido (4R)-4-amino-4-([(1S)-14[(1S)-4-(carbamoilamino)-1-[(4-f[[(f[(62- [18,28,4R,88,98,118,12R,138,198)-12,19-difluoro-11-hidróxi-9,13-dimetil- 16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17- dien-8-il]-2-o0xo0etóximetil)carbamoil]Jmetil)carbamoil)óxilmetilHfenil) carbamoil]butil|carbamoil)-2-metilpropilJ|carbamoil)butanoico (103-9b)
AH
AE O RH o H
[000664] Seguindo o procedimento similar como 103-9a exceto substituindo Boc-D-Glu(OTBU)-OH por Boc-L-Glu(OTBU)-OH, o composto 103-9b (0,40 g; 74% de rendimento) como um sólido branco. ESI m/z: 536,8 (M/2 + H)+.
Ácido (48)-4-amino-44[(1S)-14[(1S)-A-(carbamoilamino)-1-((4-[(([(1S)-1- (I(28)-142-[(18,28,A4R,88,98,118,12R,138,198)-12,19-difluoro-11-hidróxi- 9,13-dimetil-16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]ico- sa-14,17-dien-8-1]-2-0x0etóxi)à-4-metil-1-oxopentan-2-ilJ|carbamoil)-2-hidro- xietil|carbamoil>)óxi)mMetil]fenil)carbamoil )butillcarbamoil)-2-metilpropil]car- bamoil)butanoico (104-9a)
N o fo A o o ALA SF Hon, RA Ã TT) é Y TOSA Hi Ao Ho So NH Ên,
[000665] Seguindo o procedimento similar como 103-9a exceto substituindo 104-8b por 103-8b, o composto 104-9a (0,39 g; 65% de rendimento) como um sólido branco. ESI m/z: 601,3 (M/2 + H)+. Ácido — (4R)4-amino-44[(1S)-14[(15)-4-(carbamoilamino)-1-((4-[([(1S)-1- AI(2S5)-1-(2-[[18,28,AR,85,98,118,12R,138,1985)-12,19-difluoro-11-hidróxi- 9,13-dimetil-16-0x0-6-propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18] icosa-14,17-dien-8-il]-2-0x0etóxi)-4-metil-1-oxopentan-2-il]carbamoil)-2- hidroxietil|carbamoil)óxi)metilIfenil)carbamoil)butillcarbamoil)-2- metilpropil|carbamoil)butanoico (104-9b)
N ga A o o ALA F HaN RA Â Cl) da 'Y TT SO Hi Ao Hoí“So NH o ,
[000666] Seguindo o procedimento similar como 103-9a exceto substituindo 104-8b por 103-8b, Boc-D-Glu(OTBU)-OH por Boc-L- Glu(OTBU)-OH, o composto 104-9b (0,39 g; 65% de rendimento) como um sólido branco. ESI m/z: 601,3 (M/2 + H)+.
Ácido (45)-4-[1-(4-(2-azatriciclo[10.4.0.04,9]hexadeca-1(12),4(9),5,7,13,15- hexaen-10-in-2-il)-4-oxobutanamido)-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15- amido]-44[(1S)-14[(1S)-4-(carbamoilamino)-1-[(A4[(([((2-[(18,28,AR8S, 98,118,12R,138,198)-12,19-difluoro-11-hidróxi-9,13-dimetil-16-0x0-6- propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17-dien-8-il]- 2-0x0etóxi)metil)carbamoil]Jmetil)carbamoil)óxilmetil)Yfenil)carbamoil] butil|carbamoil)-2-metilpropil]|carbamoil)butanoico (LP18) = 4 ON, oo E. FAAO o mono
[000667] A uma solução do composto 103-9a (57 mg, 53 umol) em DMF (1 mL) foram adicionados composto 5-1c (36 mg, 56 umol) e DIPEA (27 mg; 0,21 mmol). A mistura de reação foi agitada em RT por 4 horas, a qual foi monitorada por LCMS. A mistura resultante foi então diretamente purificada por prep-HPLC (método B) para dar o composto LP18 (12 mg, 15% de rendimento) como um sólido branco. ESI m/z: 811,4 (M/2 + H)+.
Ácido — (4R)-4-[1-(4-(2-azatriciclo[10.4.0.04,9]hexadeca-1(12),4(9),5,7,13,15- hexaen-10-in-2-i1)-4-0xobutanamido)-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-ami- do]-4([(18)-14[(1S)-4-(carbamoilamino)-1-[(4-([([((2-[(18,28,4R,88,98,11S, 12R,138,198)-12,19-difluoro-11-hidróxi-9,13-dimetil-16-0x0-6-propil-5,7- dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17-dien-8-11]-2-0x0etóxi) metil)carbamoil]Jmetil)carbamoil )óxilmetil)fenilJcarbamoil]butilJ|carbamoil)- 2-metilpropil|carbamoil)butanoico (LP19) HA eo Qi nd À, QoANA
O E nano
[000668] Seguindo o procedimento similar como LP18 exceto substituindo 103-9b por 103-9a, o composto LP19 (14 mg, 17% de rendimento) como um sólido branco. ESI m/z: 811,4 (M/2 + H)+. Ácido (4S)-4-(1-[(fendo-biciclo[6.1.0]non-4-in-9-ilmetoxikcarbonil) amino]-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-amido)-4-f[(1S)-1-[[(1S)-4- (carbamoilamino)-1-((4-[(([(1S)-1[(28)-1-(2-[(18,28,4R,8S,98,11S, 12R,138,198)-12,19-difluoro-11-hidróxi-9,13-dimetil-16-0x0-6- propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17- dien-8-i1]-2-0x0etóxi)-4-metil-1-oxopentan-2-il]|carbamoil)-2- hidroxietil|carbamoil)óxi)metil]fenil)carbamoil)butil|carbamoil)-2- metilpropil]Jcarbamoil)butanoico (LP20) & Nas n 20H | Espa E & A CP Ho “o NH : o o,
[000669] A uma solução do composto 104-9a (64 mg, 53 umol) em DMF (1 mL) foram adicionados composto 5-1d (30 mg, 56 umol) e DIPEA (27 mg; 0,21 mmol). A mistura de reação foi agitada em RT por 4 horas, a qual foi monitorada por LCMS. A mistura resultante foi então diretamente purificada por prep-HPLC (método B) para dar o composto LP20 (17 mg, 20% de rendimento) como um sólido branco. ESI m/z: 813,0 (M/2 + H)+. Ácido (4R)-4-(1-[(fendo-Biciclo[6.1.0]non-4-yn-9-ilmetoxi)carbonil) amino]-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-amido)-4-f[(1S)-1-([(1S)-4- (carbamoilamino)-1-(f(4-[(([(1S)-1[(28)-1-(2-[(18,28,4R,8S,9S8,11S, 12R,138,198)-12,19-difluoro-11-hidróxi-9,13-dimetil-16-0x0-6- propil-5,7-dioxapentaciclo[10,8,0,02,9,04,8,013,18]icosa-14,17- dien-8-i1]-2-0x0etóxi)-4-metil-1-oxopentan-2-il]|carbamoil)-2- hidroxietil|carbamoil)9óxi)metil]fenil)carbamoi!l)butil|carbamoi!)-2- metilpropil]carbamoil)butanoico (LP21) .oH Ae H Ds f à o TH Fa dA é SAFE Hoí“o NH o
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[000670] Seguindo o procedimento similar como LP20 exceto substituindo 104-9b por 104-9a, o composto LP21 (14 mg, 17% de rendimento) como um sólido branco. ESI m/z: 813,0 (M/2 + H)+.
[000671] A tabela 5a abaixo apresenta cargas úteis ligantes produzidas usando os métodos descritos no presente documento. Tabela 5a. Exemplos de ligante-cargas úteis ECO = ligante ER Bege A] LP1 PEG4-vcPAB- SA a a À TA AE q MEDA-100 º Í A Pu
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Tabela 6a.
Dados de caracterização para cargas úteis ligantes [e fe e Je eres [una Juaes bp fo fome fee o fes [or | e fo fome E a fo pr fe fm [a e fas [aros | bm fe mes uso ora fora (fragment) ie fr fama fu o oras [ovos |
EXEMPLO 2
[000672] Este Exemplo demonstra procedimentos específicos para conjugação sítio-específica de um alcino-carga útil ligante ao anticorpo.
[000673] Neste exemplo, os conjugados sítio-específicos são produzidos em duas etapas. A primeira etapa é a ligação enzimática baseada em MTG de uma molécula pequena, tal como azida-PEG3- amina (supra), ao anticorpo tendo um Q-tag (por exemplo, WO?2017/147542) (aqui abaixo conjugação "baseada em MTG"). O anticorpo tendo uma mutação N297Q ou mutação N297D tem 0295/0297 ou Q295 que são reconhecidos como ligados a MTG para as conjugações sítio-específicas de base enzimática, onde Q295 e/ou 0297 foram definidos como o Qtag. A segunda etapa emprega a ligação de uma carga útil ligante ao anticorpo azido-funcionalizado através de uma [2+3] cicloadição, por exemplo, a cicloadição 1,3—dipolar entre as azidas e os ciclooctinos (também conhecidos como química "click" livre de cobre). Vide, Baskin, J. M.; Prescher, J. A.; Laughlin, S. T.; Agard, N. J.; Chang, P. V.; Miller, 1. A.; Lo, A.; Codelli, J. A.; Bertozzi, C. R. PNAS 2007, 104 (43), 16793-7, cujo conteúdo total é incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade para todas as finalidades. Onde o grupo reativo (RG) é uma porção DIBAC, a conjugação é realizada com um anticorpo azido-funcionalizado através de uma [2+3] cicloadição. Este processo provê os conjugados sítio- específicos e estequiométricos.
[000674] Conjugação ADC através da reação "click" [2+3].
[000675] Etapa 1: Preparação de um anticorpo azido-funcionalizado.
[000676] 1g9G (IgG1, IgGA4, etc.) de anticorpo humano aglicolisado ou um isotipo de IgG1 humano com mutação N297Q (numeração EU), em PBS (pH 6.5-8.0) é misturada com >200 equivalentes molares de azido-dPEG3-amina (MW= 218,26 g/mol). A solução resultante é misturada com MTG (EC 2.3.2.13 da Zedira, Darmstadt, Germany, ou
Modernist Pantry [Ltt 210115A] - ACTIVA TI contém maltodextrina do Ajinomoto, Japan) (25 U/mL; 5U MTG por mg de anticorpo) resultando em uma concentração final do anticorpo em 0,5-5 mg/mL, e a solução foi então incubada a 37ºC por 4—24 h enquanato em suave agitação. À reação é monitorada por ESI-MS. Mediante a finalização da reação, a amina em excesso e MTG são removidos por SEC ou cromatografia em coluna de proteína A, para gerar o anticorpo azido-funcionalizado. Este produto é caracterizado por SDS-PAGE e ESI-MS. A azido-dPEG3- amina adicionada aos dois sítios do anticorpo resultando em um aumento de 204 Da para o conjugado de 2DAR anticorpo-PEG3-azida.
[000677] Etapa 2: Preparação de conjugados sítio-específicos de um fármaco a um anticorpo usando as reações da química "click".
[000678] Os conjugados de anticorpo fármaco sítio-específicos com uma IgG humana (I9G1, IgG4, etc.) na Tabela 7 são preparados por uma reação "click" [2+3] entre anticorpos azido—funcionalizados e um alcino contendo carga útil ligante. O procedimento de conjugação detalhado segue. Um conjugado de anticorpo sítio-específico com carga útil ligante (LP) é preparado por incubação de mAb—PEG3-N3 (1-3 mg/mL) em um meio aquoso (por exemplo, PBS, PBS contendo 5% de glicerol, HBS) com 26 equivalentes molares de um LP dissolvido em um solvente orgânico adequado, tal como DMSO, DMF ou DMA (isto é, a mistura de reação contém 5-20% de solvente orgânico, v/v) em 240C até 37ºC durante 6 h. O progresso da reação é monitorado por ESI-MS e a ausência de MAb-PEG3-—N3 indicou a finalização da conjugação. À quantidade em excesso do LP e o solvente orgânico removido por SEC através da eluição com PBS, ou através de uma cromatografia em coluna de proteína A através de eluição com tampão acídico seguido por neutralização com Tris (pH8.0).
[000679] O produto final é concentrado por ultracentrifugação e caracterizado por UV, SEC, SDS-PAGE e ESI-MS.
EXEMPLO 3
[000680] Este exemplo demonstra um método para produzir uma conjugação não sítio-específica de um fármaco a um anticorpo usando uma reação tiol-maleimida.
[000681] A conjugação através das cisteínas de anticorpo é realizada em duas etapas usando os métodos descritos de forma similar àqueles descritos em Mol Pharm. 2015 Jun 1;12(6):1863-71.
[000682] Um anticorpo monoclonal (mAb, 10 mg/ml em 50 mM HEPES, 150 mM NaCl) em pH 7,5 é reduzido com ditiotreitol 1 mM (0,006 mg por mg de anticorpo) ou TCEP (2,5 equivalentes molar ao anticorpo) em 37ºC por 30 minutos. A concentração do anticorpo foi calculada com base na absorvência em 280 nm em Nanodrop (ThermoFisher Scientific) e um coeficiente de extinção do anticorpo. Depois da filtração em gel (G—25, pH 4,5 acetato de sódio), o composto LP em DMSO (10 mg/mL) é adicionado ao anticorpo reduzido, e a mistura foi ajustada até pH 7,0 com 1 M HEPES (pH 7,4). A reação é deixada reagir por 3—14 horas. O conjugado resultante foi purificado por SEC. Os valores de DAR (UV) são determinados usando as absorvências medidas do ncADC e os coeficientes de extinção do anticorpo e composto LP. EXEMPLO 4 Conjugação de ADC
[000683] Em um exemplo, os conjugados sítio-específicos são produzidos através da transglutaminase microbiana (MTG EC 2.3.2.13, Zedira, Darmstadt, Germany) (no presente documento conjugação em duas etapas "baseada em MTG") de um anticorpo mutado N297Q ou N297D. Na primeira etapa, o anticorpo mutado N297Q é funcionalizado com azdio-PEG3-amina através da reação enzimática baseada em MTG. Vide, por exemplo, Pedido de Patente PCT Internacional Nº. PCT/US17/19537 depositado em 24 de fevereiro de 2017, incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade para todas as finalidades. Na segunda etapa, uma carga útil alcino- funcionalizada é ligada ao anticorpo azido-—funcionalizado através da reação de cicloadição [2+3] 1,3—dipolar conjugada com um anticorpo azido-funcionalizado derivado através da [2+3] ciclização). Este processo provê conjugados sítio-específicos e estequiométricos. EXEMPLO 5
[000684] O exemplo que segue demonstra um método para produzir um conjugado de anticorpo fármaco azido-funcionalizado listado na tabela 7. MDA tom MP a MS nro SESMT N267Q Ab murado: anticorpo azido-funcionalizado * SS a, ” LAO y “ê. o — MA AD-DIBACT-PEG,-VC-PAB-F2"5a útil
[000685] O anticorpo aglicosilado com um isotipo de IgG1 humano em BupHTM (pH 7,6-—7,8) foi misturado com 2200 equivalentes molares de azido-dPEG3-amina (MW. 218,26 gímol). A solução resultante foi misturada com transglutaminase (25 U/ml; 5U MTG por mg de anticorpo) resultando em uma concentração final do anticorpo a 0,5-3 mg/mL, e a solução foi então incubada a 37ºC por 4—24 horas com agitação suave. A reação foi monitorada por SDS-PAGE ou ESI-MS. Mediante a finalização, a amina em excesso e MTG foram removidos por cromatografia por exclusão de tamanho (SEC) para gerar o anticorpo azido-funcionalizado. Este produto foi analisado em SDS- PAGE e ESI-MS. O azido-dPEG3-amina adicionado a dois sítios —
0295 e 0297-— do anticorpo resultando em um aumento de 804 Da para o conjugado de anticorpo aglicosilado 4/DAR-PEG3-azida.
[000686] O exemplo que segue demonstra um método para produzir conjugações sítio-específicas de um fármaco a um anticorpo usando reações da química "click".
[000687] Os conjugados de anticorpo aglicosilado — fármaco sítio- específicos com uma IgG1 humana contendo uma mutação N297Q foram preparados por uma reação "click" [2+3] entre anticorpos azido- funcionalizados com um alcino contendo carga útil ligante. Especificamente, o anti PRLR Ab-PEG3—N3 foi conjugado a 2b, 2g, 21, 2r ou 2s; e anti HER2 Ab-PEG3-—N3 foi conjugado a 2b, 2g, 21, 2r ou 2s. Esses conjugados anti-HER2 foram sintetizados para servir como controles de isotipo nos ensaios descritos no presente documento. Aqui a seguir, por conveniência, os anticorpos anti-HER2 são referidos como anticorpos "isotipo".
[000688] O procedimento de conjugação detalhado segue. Um conjugado de anticorpo sítio-específico com carga ligante (LP ou 2) foi preparado através da incubação de mAb-PEG3—N3 (1-3 mg/mL) em um meio aquoso (por exemplo, PBS, PBS contendo 5% de glicerol, HBS) com 26 equivalentes molares de um LP dissolvido em um solvente orgânico, tal como DMSO, DMF ou DMA (isto é, a mistura de reação contém 5-20% de solvente orgânico, v/v) em 24ºC a 37ºC por mais de 6 horas. O progresso da reação foi monitorado por ESI-MS e a ausência de mAb-PEG3-—N3 indicou a finalização da conjugação. A quantidade em excesso do LP e o solvente orgânico foram removidos por SEC através de eluição com PBS, ou através da cromatografia em coluna da proteína A através de eluição com tampão acídico seguido por neutralização com Tris (pH8,0). Os conjugados purificados foram analisados por SEC, SDS-PAGE e ESI-MS. Está mostrada na Tabela 7 uma lista dos conjugados de anticorpo esteroide a partir das LPs correspondentes, seus pesos moleculares e valores de ESI-DAR.
[000689] Em um exemplo específico, o anticorpo azido-funcionalizado (1 mg) em 0,800 mL de PBSg (PBS, 5% glicerol, pH 7,4) foi tratado com seis equivalentes molares de 2b (conc. 10 mg/mL em DMSO) por 6 -12 horas em RT e a carga útil ligante em excesso (LP) foi removida por cromatografia por exclusão de tamanho (SEC, Superdex 200 HR, GE Healthcare). O produto final foi concentrado por ultra-centrifugação e caracterizado por UV, SEC, SDS-PAGE e ESI-MS. EXEMPLO 6 Caracterização de ADCs
[000690] SDS-PAGE é usado para analisar a integridade e pureza dos ADCs.
[000691] Em um método, as condições de execução de SDS-PAGE incluem amostras não reduzidas e reduzidas (244 ug) junto com BenchMark Pre—Stained Protein Ladder (Invitrogen, cattt 10748-010; LH
1671922.) são carregadas por linha em (poço 1,0 mm x 10) Novex 4 — 20% Tris—-Glicina Gel e é executado em 180 V, 300 mA, por 80 minutos. Uma amostra não reduzida é preparada usando tampão Novex Tris— Glicina SDS (2X) (Invitrogen, Cat% LC2676) e a amostra reduzida é preparada com tampão de amostra SDS (2X) contendo 10% de 2-mecaptoetanol.
[000692] Os pesos moleculares dos anticorpos e ncADCs em SDS- PAGE são determinados sob condições não redutoras e redutoras. As trocas de massa podem não ser óbvias sob condições não redutoras devido a porcentagens relativamente pequenas de mudanças de massa. No entanto, as massas das cadeias pesadas são aumentadas a partir de anticorpos puros aos anticorpos azido-funcionalizados, e ainda ao conjugado ncADC. O material reticulado por ou não ser detectado.
[000693] ADCs são analisados quanto à pureza por cromatografia por exclusão de tamanho (SEC)
[000694] Para determinar a pureza dos conjugados de anticorpo fármaco, a cromatografia por exclusão de tamanho é realizada. Os experimentos analíticos por SEC são executados usando um instrumento Waters 600, em uma coluna HR Superdex 200 (1,0 x30cm), em uma taxa de vazão de 0,80 mL/min usando PBS pH 74 e monitorados a 1280 nm usando um Waters 2998 PDA. Uma amostra analítica é composta de 200 ul de PBS (pH 7,4) com 30—100 uL da amostra de teste. As purificações preparativas de SEC são realizadas usando um instrumento AKTA da GE Healthcare, em coluna Superdex 200 PG (2,6x60 cm), em uma taxa de vazão de 2 mL/min eluindo com PBSg a pH 7,4 e monitorados a A280nm.
[000695] O anticorpo e ADC são analisados por análise de massa intacta através de LC-ESI-MS, conforme descrito adicionalmente abaixo.
[000696] A medição de massa intacta para as amostras de ADC através de LC-ESI-MS foi realizada para determinar o perfil de distribuição de fármaco-carga útil e para calcular a DAR média. Cada amostra de teste (20-50 ng, SuL) foi carregada em uma coluna C4 Acquity UPLC Protein BEH (10K psi, 300 À; 1,7 um, 75 um x 100 mm; Cat No. 186003810). Depois de 3 min de dessalinização, a proteína foi eluída e os espectros de massa foram adquiridos por um espectrômetro de massa Waters Synapt G2-Si.
[000697] Sumarizada na Tabela 7 está uma lista dos conjugados de budesonida com espaçador- anticorpo ligante a partir das LPs correspondentes (2b, 2g, 21, 2r e 2s), seus pesos moleculares dos anticorpos puros, os anticorpos azido-funcionalizados, as LPs, e os ADCs esteroides, assim como os valores de ESI-DAR. Na tabela, Ab se refere a um anticorpo, Ab-N3 se refere a um anticorpo azido-funcionalizado e conjugados de Ab-steroide se referem a conjugados de anticorpo esteroide não citotóxico com as LPs correspondentes. Conforme sumarizado na tabela 7, a maioria dos ADCs sítio-específicos têm - 4DAR.
Tabela 7 esteroide je jsme Nome 5 | mviDa) [DAR o | jeemess 5 Jor | | jar — iso jamerRimADAS usasse || 2a as7 amePRIRADAR isto da ao jato lamePRRADA [soa 4 es = fes amPRRADAs 1seas a | od [O aeserenane as ias | mo em7 ema rsss dos o 7 eos rs do 2 7 ema ss os ma emma re de ams meras [rn | | EXEMPLO 7
[000698] Um ensaio à base de célula repórter de luciferase coativadora do receptor de glicocorticoide (GR) foi usado para analisar a ativação de GR pela budesonida e os esteroides descritos no presente documento como uma função de tempo.
[000699] Para gerar a linhagem celular do ensaio, uma linhagem celular HEK293 foi engenheirada para expressar PRLR humano de comprimento total. Depois, a referida linhagem celular estável foi ainda transfectada com vetor pBIND-GR (Catf%t E1581, Promega) e vetor PGLA4.35 [Luc2P/9xGAL4UAS/Hygro] (Catt% E1370, Promega) de modo que o gene de luciferase fosse transcrito mediante a ligação de esteroide a GR. A linhagem celular estável resultante é referida no presente documento como HEK293/PRLR/GRE-Luc.
[000700] A atividade de esteroides nas células HEK293/PRLR/GRE- Luc foi estudada em 24, 48 e 72 horas de incubação depois da adição dos reagentes de teste. Para este ensaio, 20,000 células foram semeadas em placas com 96 poços em meio contendo DMEM suplementado com 10% de FBS e penicilina/estreptomicina (meio completo) e desenvolvidas de um dia para o outro a 37ºC em 5% de CO?2. Para gerar as curvas de dose resposta dos esteroides livres e/ou seus ncADCs, reagentes serialmente diluídos que variam de 100 nM a
5.1 pM foram adicionados às células e incubados por 24, 48 e 72 horas a 37ºC. A atividade de luciferase foi determinada pela adição de 100 ul de reagente One-GloTM (Promega, CatffE6130), incubando em temperatura ambiente por 5 minutos e unidades de luz relativa (RLUs) foram medidas em um luminômetro Victor (Perkin Elmer).
[000701] Em uma primeira rodada do ensaio, antic-PRLR Ab ncADCs (Anti-PRLR Ab-2r, Anti-PRLR Ab-2s e Anti-PRLR Ab-2b), Isotipo Ab nNcADCSs (Isotipo Ab-2r, Isotipo Ab—2s e Isotipo Ab—-2b) e carga útil livre de budesonida foram testados no ensaio à base de célula HEK293/PRLR/GRE-Luc usando o protocolo descrito acima seja com 24, 48 ou 72 horas de incubação em uma rodada de ensaio. Em uma segunda rodada de ensaio, anti:-PRLR Ab ncADCs (Anti-PRLR Ab-2b, Anti-PRLR Ab-21I e Anti-PRLR Ab—2g), Isotipo Ab ncADCs (Isotipo Ab- 2b, Isotipo Ab—21I e Isotipo Ab—2g), anticorpos sozinhos (Anti-PRLR Ab e Isotipo Ab), e carga útil livre de budesonida foram testados no ensaio à base de célula HEK293/PRLR/GRE-Luc usando o protocolo descrito acima com incubação de 72 horas. Os valores de EC50 foram determinados a partir de uma equação logística de quatro parâmetros sobre uma curva de resposta de 10 pontos usando GraphPad Prism. À liberação dos esteroides resultará em uma ativação do repórter Luc em células HEK293/PRLR/GRE-Luc.
[000702] As Figuras 1A-C e a tabela 8 ilustram os resultados da primeira rodada de ensaio. Conforme mostrado nas Figuras 1A-C, o conjugado anti-PRLR Ab-2b induziu a ativação nas células HEK293/PRLR/GRE-Luc em 24, 48 e 72 horas, com um valor de EC50 menor do que € 10 nM em todos os três momentos e mostrou cerca de >15 vezes de seletividade sobre o Isotipo-Ab-2b de controle. O conjugado anti-PRLR Ab-2s induziu a ativação nas células HEK293/PRLR/GRE-Luc em 24, 48 e 72 horas, no entanto, ele não demonstra seletividade sobre o isotipo-2s de controle. O conjugado anti- PRLR Ab-2r induziu a ativação nas células 293/PRLR/GRE-Luc com <5 vezes de seletividade em 24 e 48 horas, mas teve ativação aumentada apenas em 72 horas com um EC50 de 13,4 nM.
[000703] Na segunda rodada conforme mostrado na Figura 2 e Tabela 9, o conjugado anti-PRLR Ab-2b induziu a ativação nas células HEK293/PRLR/GRE-Luc, tendo um EC50 de 0,48 nM e mostrou cerca de 14 vezes de seletividade sobre o Isotipo-Ab-2b controle. O anticorpo anti-PRLR Ab-2g induziu a ativação nas células HEK293/PRLR/GRE- Luc tendo um EC50 de 1,9 nM com cerca de 3,7 vezes de seletividade sobre o Isotipo-Ab-2g controle. O conjugado anti-PRLR Ab-2! induziu a ativação nas células HEK293/PRLR/GRE-Luc com um EC50 de 8,98 nM, enquanto o Isotipo-Ab-21I não demonstrou ativação neste ensaio.
Tabela 8.
nasais | cmmaeneamereento — | e ese | am | re Tabela 9 onde NA significa não ativo EXEMPLO 8
[000705] Este exemplo descreve um modelo de camundongo de liberação de citocina induzida por LPS.
[000706] O objetivo deste estudo é avaliar os compostos de teste na inibição da liberação de citocina induzida por LPS em camundongos. Os compostos de teste são administrados 48 h, 24 h e duas horas antes do desafio de LPS, os níveis de citocina nas amostras de sangue incluindo TNF-a e IL6 foram medidos em períodos de duas horas e 4 h depois do desafio de LPS. Materiais e Reagentes
[000707] O |ipopolissacarídeo (LPS) derivado de E. Coli K12 pode ser adquirido da Invivogen (San Diego, California, USA, cattt Tlirl-eklps), a dexametasona pode ser adquirida da ADAMAS (Emeryville, CA, USA, Cattt50-02-2). O kit ELISA de TNF-a de camundongo pode ser adquirido da ebioscience (ThermoFisher Scientific, Catt88-7324). O kit ELISA de IL6 de camundongo pode ser adquirido da ebioscience (ThermoFisher Scientific, Cattt88-7064). Métodos Experimentais
[000708] Criação de animais:
[000709] Um total de 18 camundongos C57BL/6j puros são usados neste estudo. Os animais são machos, com peso corporal de 18-20g no início do estudo. Os animais são adquiridos do Shanghai Laboratory Animal Center, CAS (SLAC) e colocados no viveiro animal ChemPartner em um ambiente SPF. Depois da chegada, os animais são verificados quanto a condições de saúde incluindo pelagem, extremidades, orifícios e sinais anormais na postura ou movimentos, e aclimatados no ambiente por mais de 7 dias.
[000710] São colocados 3 camundongos por gaiola em gaiolas de caixa de sapato de IVC policarbonato em ambiente SPF; os controles do ambiente para a sala animal são ajustados para manter uma temperatura de 20-26ºC, umidade de 40-70% e um ciclo de claro/escuro de 12 em 12 horas.
[000711] Ração padrão (SLAC-MO1, do Shanghai Laboratories Animal
Center) e água purificada (filtrada, qualidade da água municipal) são providos ad libitum ao longo do período de estudo. Procedimentos Experimentais
[000712] Agrupamento: os animais são randomicamente alocados em 6 grupos (A-F) antes do início do estudo. Cada grupo incluiu 3 camundongos. O grupo A serve como controle puro; o grupo B recebe dexametasona e serviu como controle positivo; o grupo C é tratado com um composto de teste e os grupos D-F são tratados com um composto de teste. Procedimento Experimental
[000713] Todos os camundongos recebem LPS dissolvido em PBS em uma dose de 0,5mpk com injeção i.p. Os camundongos no grupo À receberam PBS, os camundongos no grupo B receberam Dex (5mpk) e os camundongos no grupo C receberam 4b (5mpk) com injeção ip, duas horas antes do desafio de LPS; os camundongos no grupo D, E e F receberam em uma dose de 5mpk com injeção ip, duas horas, 24 horas e 48 horas antes do desafio de LPS, respectivamente.
[000714] As amostras de sangue são coletadas em períodos de duas horas e 4 horas pós desafio de LPS, em tubos contendo heparina. As amostras de sangue são centrifugadas e amostras de plasma são coletadas e armazenadas a -80ºC antes da análise.
[000715] Os níveis de TNFo no plasma são medidos com kits ELISA seguindo os procedimentos padronizados recomendados pelo fabricante. Vários parâmetros de PK são medidos (por exemplo Tmax, Cmax, t1/2 terminal, AUCIast e AUCINF).
[000716] As amostras de sangue são coletadas em duas horas e aa pós desafio de LPS; os níveis de TNF-a no plasma são medidos. Os dados são expressados como +SEM médio, *p<0,05, **p<0,01 vs Grupo A, através da análise ANOVA de uma via.
EXEMPLO 9 Células Dendríticas de Camundongo
[000717] Para determinar o efeito de um composto de teste em respostas imunes inflamatórias induzidas por LPS ex-vivo, as células dendríticas CD11c+ (DC) são isoladas dos baços dos camundongos C57BI/6 do tipo selvagem (Jackon Labs, Protocol f426.0). DCs esplênicos são isolados usando uma digestão de colagenase D (400U/mL de colagenase D (Roche Cat f111088858001), 205 g/mL de DNase | (Roche Cat f%10104159001), 2% FCS em RPMI-1640 com tampão HEPES) e incubadas a 37ºC por 25 minutos. Depois da incubação, o tecido esplênico é lavado com RPMI-1640 e filtrado através de um filtro 70/Im, então a lise dos glóbulos vermelhos é realizada usando tampão de lise ACK (Gibco Cat %&A1049201) por 1 minuto. A suspensão celular é subsequentemente lavada duas vezes usando RPMI-1640. DCs clássicas são isoladas da suspensão de célula mononuclear usando microesferas magnéticas CD11c (Milteny Biotec Cat t1130108338). Em resumo, a suspensão celular é lavada duas vezes com tampão de execução autoMACS (Milteny Biotec Cattt130091221) antes de uma incubação de 30 minutos a 4ºC com microesferas CD11c+, conforme estabelecido pelos protocolos da Milteny Biotec. As células CD11c+ são isoladas por seleção positiva, lavadas, suspensas em RPMI completo [RPMIl-1640 (ThermoFisher Scientific, Cat 415140122) contendo 10% de FBS (ThermoFisher Scientific, Cat 10082147) e 1% de penicilina-estreptomicina (ThermoFisher Scientific, Cat f411875093)], e contadas antes da cultura em 2x105 células por poço. O RPMI completo de controle, o RPMI completo tratado com o composto de Fórmula (Ill) (em 10nM e 100nM) ou dexametasona (Sigma, CatttD4902-25MG) RMPI completo tratado (em 10nM e 100nM) é adicionado às células em uma placa de cultura com 96 poços. DC/Controle, as células tratadas com composto de teste ou dexametasona foram incubadas por 24 horas a 37ºC antes do estímulo com 10ng/mL de LPS por 24 horas. Células Dendríticas Humanas
[000718] Para determinar o efeito de um composto de teste em respostas imunes inflamatórias induzidas por LPS ex-vivo em células imunes inatas humanas, monócitos CD14+ (Lonza Cat tt2W-400C) são isolados e cultivados na presença de RPMI completo [RPM]-1640 (ThermoFisher Scientific, Cat 415140122) contendo 10% de FBS (ThermoFisher Scientific, Cat %10082147) e 1% de penicilina- estreptomicina (ThermoFisher — Scientific, Cat tH11875093)] suplementados com IL4 humana (50ng/mL) (Milteny Biotec, Cat 4130- 093-922 ) e GM-CSF humano (100 ng/mL) (Milteny Biotec, Cat 130093866) por 7 dias. O RPMI completo com IL4 e GM-CSF é modificado a cada três dias. Duas condições de cultura específicas são desenvolvidas : Condição 1: Incubação de monócitos CD14+ com RPMI completo de controle, um RPMI completo tratado com composto de teste (em 10nM e 100 nM) ou RMPI completo tratado com dexametasona (Sigma) (em 10nM e 100 nM) pela cultura total de 7 dias ou Condição 2: Incubação de monócitos CD14+ com RPMI completo de controle por 5 dias antes da incubação com RMPI completo de controle, um RPM! completo tratado com composto de teste (em 10nM e 100 nM) ou RMPI completo tratado com dexametasona (Sigma, CatttD4902- 25MG) (em 10nM e 100 nM) até o dia 7. No dia 7, os vários grupos experimentais são estimulados com 10 ng/mL de LPS por 24 horas. Medição de citocinas nos sobrenadantes 24 horas pós-desafio de LPS ex vivo
[000719] Os sobrenadantes são coletados em placas de cultura de tecido de fundo redondo com 96 poços 24 horas pós-desafio de LPS e armazenados a -20ºC até análise adicional. As concentrações de citocina nos sobrenadantes são medidas usando um Kkit de imunoensaio multiplex (camundongo) do painel 1 pró-inflamatório (MesoScale Discovery, Cat tK15048D) de acordo com as instruções do fabricante ou kit de imunoensaio multiplex (humano) do painel 1 pró-inflamatório (MesoScale Discovery, Cat &K15049D). Em resumo, 50ulL/poço de calibradores e amostras (diluídos em diluente 1:2) são adicionados às placas pré-revestidas com anticorpos de captura e incubados em temperatura ambiente enquanto em agitação a 700 rpm por duas horas. As placas são então lavadas 3 vezes com 1xPBS contendo 0,05% (p/v) de Tween-20, seguido pela adição de 25uL de solução de anticorpo de detecção diluída em diluente 45. Depois de duas horas de incubação em temperatura ambiente enquanto em agitação, as placas são lavadas 3 vezes, e 150uL de 2x do tampão de leitura foram adicionados a cada poço. A eletroquimioluminescência é imediatamente lida em um instrumento MSD Spectorº. A análise de dados é realizada usando software GraphPad Prism'“. A significação estatística dentro dos grupos é determinada por Anova de uma via com pós-teste de comparação múltiplo de Turkey e erro padrão da média (SEM+t) calculada. A produção de IL12p70, IL1b, IL6, KC-GRO e TNF-a por DCs CD11c+ esplênicas é medida. A expressão de IL12p70, IL1b, IL6 e TNF- a por DCs derivadas de monócitos humanos é medida. Exemplo 10 Estabilidade do Plasma de 103a
[000720] A estabilidade do plasma pode ser medida de acordo com o protocolo a seguir.
[000721] Fosfato de sódio 0,05 M pré-aquecido e tampão de NaCl 0,07 M, pH 7,4: 14,505 g/L de Na2HPO, 12H20, 1,483 g/L de NaH2POs = 2H2O e 4,095 g/L de NaCl foram dissolvidos em água desionizada. À solução básica foi então titulada com o ácido fosfórico até pH 7,40 e armazenada refrigerada por até 7 dias. pH foi verificado no dia do experimento e ajustado caso a especificação externa de 7,4+/-0,1.
[000722] Preparação do plasma: plasma congelado foi descongelado ao colocá-lo em 37ºC. O plasma foi centrifugado a 3,000 rpm por 8 minutos para remover coágulos, pipetado e o sobrenadante foi classificado como o plasma a ser usado no experimento. O pH do plasma foi verificado e registrado e apenas usado dentro da faixa de pH 7,4 a pH 8. Caso maior do que o pH 8, o plasma foi descartado. O pH inicial do plasma não foi ajustado até pH 7,4 com ácido ou através de borbulhamento com CO?». Ao se usar incubadora de CO> a 5% e tampão de PBS, um pH de 7 4 foi alcançado depois de um tempo de diálise de equilíbrio de 4 horas. O plasma foi colocado no gelo até ser usado.
[000723] Composto de testes e compostos de referência da solução de base. 0,5 mM compostos de teste da solução de base A: 10 uL da solução estoque do composto de teste 10 mM foram adicionados a 190 ul de DMSO. Solução de base B 0,02 mM: 40 uL da solução de base À foram adicionados a 960 ul do tampão de fosfato de sódio 0,05 mM com 0,5% de BSA.
[000724] O plasma e a solução de base B foram pré-aquecidos em 37ºC por 5 min. 10 ul da solução de base B pré-aquecida foram adicionados nos poços designados para todos os períodos (0; 0,25; 1; 8; 24 h). Para O min, 400 uL de ACN contendo IS foram adicionados aos poços da placa de O min e então 90 uL de plasma foram adicionados. 90 uL de plasma pré-aquecido foram adicionados nos poços designados para os períodos (0,25; 1; 8; 24 h) e inicia a contagem. Em 0,25; 1; 8; 24 h, 400 ul de ACN contendo IS foram adicionados aos poços das placas correspondentes, respectivamente, para parar a reação. Depois da têmpera, as placas foram agitadas em um vibrador (IKA, MTS 2/4) por 10 min (600 rpm/min) e então centrifugadas a 5594 g por 15 min (Thermo Multifuge x 3R). 50 uL do sobrenadante de cada poço foram transferidos em uma placa de amostra com 96 poços contendo 50 ul de água ultrapura (Millipore, ZMQSS50F01) para análise de LC/MS.
[000725] Os dados de estabilidade do plasma humano para o composto 103A são mostrados na tabela abaixo.
NAL H H o INTÉ O So ba Oo Percentual restante (%) Artigo de teste 1/2 (h) 103a 100,00 | 107,04 | 96,48 | 78,87 | 38,03 | 16,79 [O Reese Budesonida Ú 0,054 |0,052 |0,042 | 0,047 | 0,049 liberada de 103a
[000726] BQL: abaixo do limite de quantificação Exemplo 11 Estabilidade do pH da carga útil ligante
[000727] Como a solubilidade da carga útil 103a,b e suas cargas úteis ligantes LP9,10 são fracas (< 0,02 mg/ml de DMSO aq. (20%)), a estabilidade do pH desses compostos não foi testada. LP9 foi temperada com CD-N3 para dar o composto que segue QLP9, o qual era hidrossolúvel e usado para o teste de estabilidade do pH.
Z ne o dA RO é e já ç o o ns SIS OO o “o À POARA TATA b S
[000728] Síntese de composto QLP9: A uma solução de LP9 (5 mg; 3,4 umol) em DMF (1,0 mL) foi adicionado o composto CD-N3 (7,0 mg; 6,8 umol). A mistura de reação foi agitada em RT de um dia para o outro,
a qual foi monitorada por LCMS. A mistura de reação foi diretamente purificada por prep-HPLC para dar o composto QLP9 (5 mg, 60% de rendimento) como um sólido branco. ESI m/z: 819,0 (M/3 + H)+.
[000729] Estabilidade do pH em tampões: A estabilidade de QLP9 em DMSO, tampões de PBS com pH 5,0; 7,4 e 8,5 (contendo 20% de DMSO) foi testada, e o composto se manteve estável naquelas soluções depois de 7 dias. Exemplo 12 Ensaio do repórter de luciferase do receptor de glicocorticoide (GR) baseado em célula
[000730] Um ensaio do repórter de luciferase responsivo a GR baseado em célula foi usado para testar a atividade agonista de GR dos compostos descritos no presente documento. Neste ensaio, os materiais que seguem foram usados.
Informação do vendedor
A mesm Meio de crescimento: DME alta glicose, 10% de FBS, 100 unidades/mL de penicilina, 100 ug/mL de estreptomicina, 53 ug/mL de glutamina, 100 ug/mL Temas: Soro fetal bovino Solução de penicilina-estreptomicina L-glutamina | Gibco fé 10378-016 Vetor pGL4.35[luc2p/9XGAL 4UAS/Hygro] Vetor pBIND-GR, marcador de seleção é neomicina
Informação do vendedor o eso Placa de micropoços com 96 poços Nunclon delta, | Thermo Scientific 4% 13610 med tam o Tt Meio de ensaio: o mesmo que o meio de Smam tm Instrumento Envision — plate — reader, ms eo E Placas de diluição Axygen Scientific, Cattt P- mes Et Composto de teste 100 Po composta datese tt Do composta detee tt Do compesindetae ta To Composto de teste Dexametasona Sigma/D1756- mm E
[000731] Para gerar a linhagem celular do ensaio, as células HEK293 foram co-transfectadas com os vetores pBind-GR (Promega, Cati E158A) e pGL4.35 [Luc2P/9xGAL4UAS/Hygro] (Promega, Catit E137A). O vetor pBind-GR expressa uma proteína de fusão consistindo do domínio de ligação a Gal4DNA de levedura e o domínio de ligação ao ligante de GR, que podem se ligar à sequência de ativação a montante (UAS) Gal4 no vetor de expressão de luciferase e induzir a expressão de luciferase em seguida à ligação do agonista GR. As células foram selecionadas por pelo menos duas semanas em G418 + higromicina. A linhagem celular resultante é referida como HEK293/UASLuc/pBIND-GR.
[000732] As células foram semeadas em placas com 96 poços em 20,000 células/poço no meio de ensaio (DME alta glicose suplementada com 10% de FBS, 100 uu unidades/mL de penicilina, 100 ug/mL de estreptomicina, 53 ug/ml de glutamina, 500 ug/ml de G418 e 100 ug/mL de Higromicina) um dia antes do ensaio. As diluições seriais em três vezes dos compostos de teste foram preparadas em 100% de DMSO, transferidas ao meio de ensaio fresco, e adicionadas às células. A concentração final de DMSO foi mantida constante a 0,2%, e as concentrações finais do composto de teste variaram de 100 nM a 0,015 nM. O último poço na placa serviu como controle puro contendo apenas o meio de ensaio e 0,2% de DMSO (poço não tratado) e foi classificado como uma continuação da diluição serial em 3 vezes.
[000733] Quarenta e oito horas mais tarde, a atividade de luciferase foi determinada depois da adição do reagente One-GloTM (Promega, Cat E6130). As unidades de luz relativa (RLUs) foram medidas em um luminômetro Envision (PerkinElmer) e os valores de EC50 foram determinados usando uma equação logística de quatro parâmetros por uma curva de dose resposta de 10 pontos (GraphPad Prism). O sinal para barulho (S/N) foi determinado ao se tomar a razão da RLU mais alta na curva de dose resposta à RLU nos poços não tratados.
[000734] Conforme mostrado na tabela abaixo, os valores de EC50 variaram de 51,8 pM a 3,24 nM e os valores S/N variaram de 124 a 17,3. O composto de teste 100 foi 5,6 vezes mais potente do que 1a (budesonida) e 5,9 vezes mais potente do que dexametasona. A ligação do espaçador a la para gerar 103a resultou em valores de EC50 comparáveis a 1a. Similarmente, a ligação do espaçador a 100 para gerar 103b resultou em valores de EC50 comparáveis a 100. A ligação do espaçador a 100 para gerar 105a resultou em valores de EC50 que foram 2,7 vezes menos potentes do que 100. Os valores S/N foram comparáveis ao longo de todos os compostos de testes.
[000735] Atividade do GR-Reporter pelos agonistas GR Composto de teste EC50 (M) Dexametasona 3,24E-09 17,3
[000736] As modalidades e exemplos descritos acima pretendem ser meramente ilustrativos e não limitantes. Aqueles versados na técnica reconhecerão ou serão capazes de verificar o uso de não mais de uma experimentação de rotina, numerosos equivalentes de compostos, materiais e procedimentos específicos. Todos os referidos equivalentes são considerados estarem dentro do escopo e estão abrangidos pelas reivindicações anexas.

Claims (101)

REIVINDICAÇÕES
1. Composto, caracterizado pelo fato de que possui a fórmula (II): o PL & RR: BA psp O or z (1); ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, estereoisômero ou derivado do mesmo, em que: Rº é alquila, arila, arilalquila ou heterocicloalquila contendo N; ambos R* são hidrogênio; e SP é -C(O)-C1-Ci0-alquileno- C(O)-, -C(O)-N(C1.salquil)-C1-Cio-alquileno-X*- onde X é ligado ao L em fórmula (III), -C(O)-N(H)-(C1-Cio-alquileno)-S- onde S é ligado ao L em fórmula (III), -C(O)-N(C1-salquil)-(C1-C10-alquileno)-S- onde S é ligado ao o
NO L em fórmula (III), Ns onde o ponto de ligação na lateral direita (isto é, em N) é ao L em fórmula (III), -CH2-NH- onde N é ligado ao L Ne
OO em fórmula (Ill), O onde N é ligado ao L em fórmula (II), -(C1-Cio-alquileno)-NR5ºC(O)-(C1-C10-alquileno)-NRº2- onde NRºº? é ligado ao L em fórmula (III), -C(O)-(C1-C1o-alquileno)-NR5$ºC(O0)-(C1- Cio-alquileno)-NRºº- onde NR é ligado ao L em fórmula (Ill) e onde cada C1-Cio-alquileno é independentemente opcionalmente substituído com um ou mais hidróxi, -C(O)-N(R5)-C1-C10-alquileno-C(O)NH-X?-
Re Rº E) m 2 A ; Ixelo É a onde X? é ligado ao L em fórmula (Ill), ou onde X' é ligado ao L em fórmula (Ill); ou ambos R* são fluoro; e SP é -C(O)-C1-C1o-alquileno-C(O)-, -C(O)-N(C1-6alquil)-C1-C10-alquileno-X*"”- onde X'*” é ligado ao L em fórmula (III), -C(O)-N(H)-(C1-C10-alquileno)-X*P- onde X*” é ligado ao L o
NO em fórmula (III), o onde o ponto de ligação na lateral direita (isto é, em N) é ao L em fórmula (III), -CH2-NH- onde N é ligado ao L Pr
N
A em fórmula (Ill), O onde N é ligado ao L em fórmula (II), -(C1-Ci0-alquileno)-NR5ºC(O)-(C1-C10-alquileno)-NR5º2- onde NR5º? é ligado ao L em fórmula (Ill), -C(O)-(C1-Ci10-alquileno)-NRººC(O)-(C1- Cio-alquileno)-NRºº2- onde NR? é ligado ao L em fórmula (Ill) e onde cada C1-Cio-alquileno é independentemente opcionalmente substituído com um ou mais hidróxi, -C(O)-N(Rº)-(C1-C1o-alquileno)-C(O)NH-X?- Re a 2 A s iXI-X8 O É a onde X? é ligado ao L em fórmula (Ill), ou onde X' é ligado ao L em fórmula (Ill); e Xº é -N(C1-salquila)-; XP é -S-, -NH-, ou -N(C1-6salquila)-; X? é -NH-; XxX? é -CH>, Xº é -CH-O-(C1-Cio-alquileno)-C(O)- onde o C(O) é ligado ao Xº, ou X? é -C(O)-; X é -O-;
Rº é H, -OH, -OCH;s, ou C1-6alquila; Rºº e R%º são independentemente hidrogênio ou C1-Ces- alquila; Rº, Rº e Rº são independentemente -H, -OH, hidroxialquila, alcoxicarbonila, -C(O)JOH, ou -CH2OR% onde cada Rº é independentemente -CH2C(0)OH ou -CH2C(0)O(alquila); e mébou!; z é um inteiro selecionado a partir de 1-30, inclusive; L é um ligante; e BA é um agente de ligação.
2. Composto, caracterizado pelo fato de que possui a fórmula (11): o H " R AAÚÓRO-o Re-L2fid sp O OH 0-1 (1); ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, estereoisômero ou derivado do mesmo, em que: Rº é alquila, arila, arilalquila, ou uma heterocicloalquila contendo N; ambos R* são hidrogênio; SP é -C(O)-C1-Ci10-alquileno-C(O)-, -C(O)-N(C1-6alquil)-C1-C19-alquileno-X*- onde X'* é ligado ao (L?)o: em fórmula (II), -C(O)-N(H)-(C1-Ci0-alquileno)-S- onde S é ligado ao (L?)o1 em fórmula (II), -C(O)-N(C1-salquil)-(C1-C10-alquileno)-S- onde S é ligado o
TN ao (L?)o.: em fórmula (II), Ny onde o ponto de ligação na lateral direita (isto é, em N) é ao (Lº)os em fórmula (II), -CH2-NH- onde
É N é ligado ao (L?)o: em fórmula (II), O onde N é ligado ao (L?o: em fórmula (IN), -(Ci-Cio-alquileno)-NR5ºC(O0)-(C1-Cro- alquileno)-NR5º- onde NR*º é ligado ao (L?)o.: em fórmula (II), -C(O)- (C1-Cio-alquileno)-NR5ºC(O)-(C1-C1o-alquileno)-NRº2- onde NR é ligado ao (L?)o: em fórmula (Il) e onde cada C1-Cioalquileno é independentemente opcionalmente substituído com um ou mais hidróxi, -C(O)-N(R5)-C1-C10-alquileno-C(O)NH-X?- onde X? é ligado ao (L?)o.: em Re Rº Rº) Lx fórmula (II), ou xt o * onde Xº é ligado ao L? em fórmula (II); ou ambos R* são fluoro; SP é -C(O)-C1-C10-alquileno-C(O)-, -C(O)-N(C1- salquil)-C1-C10-alquileno-X*>- onde X** é ligado ao (L?)o.s em fórmula (11), -C(O)-N(H)-(C1-C10-alquileno)-X*”- onde X*” é ligado ao (L?): em o
NO fórmula (Il), SN onde o ponto de ligação na lateral direita (isto o
NO
NON é, em N) é ao (Lº)os em fórmula (II), toL CHNH- onde N
É é ligado ao (Lº)os em fórmula (II), O onde N é ligado ao (L?)o1 em fórmula (II), -(C1-Cio-alquileno)-NR5ºC(O0)-(C1-Cio-alquileno)- NR5%- onde NRººº é ligado ao (Lº)o.: em fórmula (II), -C(O0)-(C1-Cio- alquileno)-NRSºC(O)-(C1-Cr10-alquileno)-NR5º2- onde NR é ligado ao (Lo: em fórmula (Il) e onde cada CirCialguileno é independentemente opcionalmente substituído com um ou mais hidróxi, -C(O)-N(Rº)-(C1-C10-alquileno)-C(O)NH-X?- onde X? é ligado ao (L*)o1 Re sor em fórmula (Il), ou Ext Oo É onde Xº é ligado ao (L?): em fórmula (11); e X é -N(C1-6alquil)-; XP é -S-, -NH-, ou -N(C1-6alquil)-; X? é -NH-; XxX? é -CH>, X? é -CH2-O-(C1-Ci0-alquileno)-C(O)- onde o C(O) é ligado ao Xº, ou X? é -C(O)-; Xº é -O-; Rº é H, -OH, -OCH;s, ou C1-6alquila; Rº e Rººº são independentemente hidrogênio ou C1-Ce- alquila; Rº, Rº e R são independentemente -H, -OH, hidroxialquila, alcoxicarbonila, “-C(O)JOH, ou -CH2OR% onde cada Rº é independentemente -CH2C(0)OH ou -CH2C(0)O(alquila); e méboul; RG é um grupo reativo; L? é um ligante de conexão; e L?, quando presente, é um ligante autoimolativo.
3. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que Rº é alquila linear ou ramificada.
4. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que Ré arila.
5. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que Rº é arilalquila.
6. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que R? é heterocicloalquila contendo N.
7. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que Rº está na configuração R.
8. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que ambos R* são hidrogênio; e SP é -C(O)-C1-Ci0-alquileno- C(O)-, -C(O)-N(C1-salquil)-C1-C10-alquileno-X*- onde X é ligado ao L em fórmula (II!) ou (L)o.: em fórmula (II), -C(O)-N(H)-(C1-Ci10-alquileno)-S- onde S é ligado ao L em fórmula (III) ou (L?))-: em fórmula (II), -C(O)- N(C1-6alquil)-(C1-C10-alquileno)-S- onde S é ligado ao L em fórmula (III) ou (L?b: em fórmula (II), -(Ci-Cio-alquileno)-NR5ºC(O0)-(C1-Crio- alquileno)-NR%º- onde NR*º é ligado ao L em fórmula (III) ou (L?)o.: em fórmula (IN), —-C(O)-(C1-Cio-alquileno)-NRººC(O)-(C1-Ci0-alquileno)- NR5%- onde NR” é ligado ao L em fórmula (III) ou (L?)o-': em fórmula (11) e onde cada C1-C1o-alquileno é independentemente opcionalmente substituído com um ou mais hidróxi, -C(O)-N(R5)-C1-Ci10-alquileno- C(O)NH-X?- onde X? é ligado ao L em fórmula (III) ou (L?)o-: em fórmula (11), Re o : ou Ext on A onde Xº é ligado ao L em fórmula (11) ou (L)o1 em fórmula (II); ou ambos R* são fluoro; e SP é -C(O)-N(C1-6alquil)-C1-C10- alquileno-X'*”- onde X*P é ligado ao L em fórmula (III) ou (L?)o,: em fórmula (II), -C(O)-N(H)-(C1-Cio-alquileno)-X*”- onde X** é ligado ao L o
NO em fórmula (III) ou (L?)o-: em fórmula (II), Ns onde o ponto de ligação na lateral direita (isto é, em N) é ao L em fórmula (III) ou (L?)o1 em fórmula (II), -(C1-Ci10-alquileno)-NRººC(O)-(C1-C10-alquileno)-NRº2-
onde NR é ligado ao L em fórmula (III) ou (L?)).: em fórmula (II), -C(O0)-(C1-C10-alquileno)-NRººC(O)-(C1-C10-alquileno)-NR$º2- onde NRº? é ligado ao L em fórmula (Ill) ou (L?)o-1 em fórmula (II) e onde cada C1-C10-alquileno é independentemente opcionalmente substituído com um ou mais hidróxi, ou -C(O)-N(R5)-(C1-C10-alquileno)-C(O)NH-X2?- onde X? é ligado ao L em fórmula (III) ou (L?)o1 em fórmula (II).
9. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que SP é -C(0)-C1-C10- alquileno-C(O)-.
10. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que SP é -C(0)-C2-Cs- alquileno-C(O)-.
11. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que SP é -C(O)- CH2CH2-C(O)-.
12. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que SP é -C(O)-N(R*)- C1-Cio-alquileno-C(O)NH-X?-.
13. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8 e 12, caracterizado pelo fato de que SP é -C(O)- N(R5)-C1-Cs-alquileno-C(O)NH-NH-.
14. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, 12 e 13, caracterizado pelo fato de que SP é -C(O)- N(R5)-CH2-C(O)NH-NH-.
15. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8 e 12 a 14, caracterizado pelo fato de que R$ é H ou C1-.6alquila.
16. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8 e 12 a 15, caracterizado pelo fato de que Rº é H ou -CHs.
17. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que SP é Re Rº / RO W /m ixtoxPÓO S
18. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que SP é Re Rº J/ RO “XY hm Ext o emé.
19. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que SP é Re Rº J/ RO “XY hm xx OS s " * ,. mé 1, e R' é -H ou -OH.
20. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que SP é Re Rº J/ RO “XY hm EXt0 Oo .mé1,eR'é-H.
21. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que SP é Re Rº J/ RO Y /m ; Ko" XI .mé1,eR'é-OH.
22. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que SP é
Re Rº (RI T T m Ext o eméo.
23. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8 e 17 a 22, caracterizado pelo fato de que SP é Re Rº (RI T m EXt07 o eXt é -CHr.
24. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8 e 17 a 22, caracterizado pelo fato de que SP é Re Rº (RI T m Xtar o e X? é -CH2-O-(C1-Cro-alquileno)-C(O)-.
25. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8 e 17 a 22, caracterizado pelo fato de que SP é e m xt" o eX? é -C(O)-.
26. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8 e 17 a 25, caracterizado pelo fato de que Rº e Rº são independentemente -H ou -OH.
27. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8 e 17 a 25, caracterizado pelo fato de que Rº e Rº são -H.
28. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8 e 17 a 25, caracterizado pelo fato de que Rº e Rº são -OH.
29. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que SP é -(C1-Cio- alquileno)-NRººC(O)-(C1-Ci10-alquileno)-NR?-,
30. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que SP é -(C1-C3 a alquileno linear)-NRººC(O)-(C1-C3 a alquileno linear)-NRº?-,
31. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que SP é -C(O)-(C1-C1o- alquileno)-NRºC(O)-(C1-Ci0-alquileno)-NR%º- e onde cada C1-Cio alquileno é independentemente opcionalmente substituído com um ou mais hidróxi.
32. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que SP é -(C1-Cs- alquileno ramificado)-NR5ºC(O)-(C1-Ce-hidróxi-alquileno)-NR%º?,
33. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8 e 29 a 32, caracterizado pelo fato de que R5º e R5ºº são independentemente hidrogênio ou metila.
34. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8 e 29 a 32, caracterizado pelo fato de que Rºº e R5ºº são cada hidrogênio.
35. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8 e 29 a 32, caracterizado pelo fato de que R5º e R5ºº são cada metila.
36. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 35, caracterizado pelo fato de que ambos R* são hidrogênio.
37. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que ambos R* são hidrogênio e SP é -C(O)-N(H)-(C1-Cio-alquileno)-S- ou -C(O)-N(C1- salquil)-(C1-C10-alquileno)-S-.
38. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que ambos R* são hidrogênio e SP é -C(O)-N(C1.3alquil)-C1-C19-alquileno-X*-.
39. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8 e 38, caracterizado pelo fato de que ambos R* são hidrogênio e SP é -C(O)-N(C1-3alquil)-C2-Cs-alquileno-X*-.
40. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, 38 e 39, caracterizado pelo fato de que ambos R* são hidrogênio e SP é -C(O)-N(C1-3alquil)- CH2CH2-X*-.
41. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, 38 e 39, caracterizado pelo fato de que ambos R* são hidrogênio e SP é -C(O)-N(CH3)-C2-Cs-alquileno-N(CH3)-.
42. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8 e 38-41, caracterizado pelo fato de que ambos R* são hidrogênio e SP é -C(O)-N(CH3)-CH2CH2-N(CHs3).
43. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 35, caracterizado pelo fato de que ambos R* são flúor.
44. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que ambos R* são flúor e SP é -C(O)-N(H)-(C1-Ci1o-alquileno)-X*P- ou -C(O)-N(C1-salquil)-(C1- Cio-alquileno)-X*”-,
45. Composto de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que SP é -C(O)-N(H)-(C1-Cs-alquileno)-X1»b- ou -C(O)-N(C1-salquil)-(C1-Ce-alquileno)-X>-.
46. Composto de acordo com a reivindicação 44 ou 45, caracterizado pelo fato de que XP é S.
47. Composto de acordo com a reivindicação 44 ou 45, caracterizado pelo fato de que X** é NH ou N(C1salquila).
48. Composto de acordo com a reivindicação 44 ou 45, caracterizado pelo fato de que X*” é NH ou N(CH;).
49. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que ambos R* são flúor o e Ao ON | LN, eSPé aoL.
50. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que SP é -CH2-NH.
51. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que SP é Ne
O o .
52. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que ambos R* são E | %
DOSE A hidrogênio ou ambos R* são flúor e SP é ! [0 o, & o É NO H H É O & N , N. NA NO NA > Oo Y AJ 7 Y LL Y o, ; ; o, o o H nn 9
N É N Es DONS VY > +! x * o x ? Os é OS N o à YT , -CH-NH-, ou O ;
H
ANA ou ambos R* são flúor e SP é ! o ou | & AN "
NÉ e onde o ponto de ligação da lateral esquerda nas estruturas acima é ligado ao L ou (L)o-1.
53. Composto de fórmula (III) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 3 a 52, caracterizado pelo fato de que z é selecionado a partir de 1-10, inclusive.
54. Composto de fórmula (Ill) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 3 a 53, caracterizado pelo fato de que z é selecionado a partir de 2-4, inclusive.
55. Composto de fórmula (III) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 3 a 54, caracterizado pelo fato de que z é 4.
56. Composto de fórmula (Ill) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 3 a 54, caracterizado pelo fato de que z é 2.
57. Composto de fórmula (III) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 3 a 56, caracterizado pelo fato de que BA compreende um anticorpo ou um fragmento de anticorpo.
58. Composto de fórmula (Ill) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 3 a 57, caracterizado pelo fato de que BA compreende um anticorpo que tem a seguinte estrutura w)h top ? onde Ab é um anticorpo monoclional, anticorpo policlonal, fragmento de anticorpo, ou anticorpo biespecífico; R é C2.4- alquileno, n é um inteiro selecionado a partir de 1 a 10, inclusive, e z é um inteiro selecionado a partir de 1-10, inclusive.
59. Composto de fórmula (III) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 3 a 59, caracterizado pelo fato de que BA compreende um anticorpo que tem a seguinte estrutura wh top ? onde Ab é um anticorpo monoclonal, anticorpo policlonal, fragmento de anticorpo, ou anticorpo biespecífico; R é C2.4-
alquileno; e n é um inteiro selecionado a partir de 2 a 4, inclusive.
60. Composto de fórmula (Ill) de acordo com qualquer uma das reivindicações | e 3 a 59, caracterizado pelo fato de que BA compreende MSR1.
61. Composto de fórmula (III) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 3 a 60, caracterizado pelo fato de que L é -L'-L?- (L?)o-1-, onde L' é ligado ao BA e L? é ligado ao SP; e onde L' é um resíduo de grupo reativo; L? é ligante de conexão; e L?, quando presente, é um ligante autoimolativo.
62. Composto de fórmula (Ill) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 3 a 61, caracterizado pelo fato de que L é -L!-L?- L?-.
63. Composto de fórmula (III) de acordo com a reivindicação 61 ou 62, caracterizado pelo fato de que L' é selecionado a partir de AO ou um regioiss i isô ; gioisômero ou mistura de isômeros dos mesmos; Ss ? ST + TC ss ; SS ; O ouumesteroisômero ou mistura de estereoisômeros dos mesmos, onde S se refere ao átomo S em um resíduo de cisteína através do qual o resíduo do grupo reativo é ligado o Mk ao BA;e * * onde N se refere ao átomo de N em um resíduo de lisina através do qual o resíduo do grupo reativo é ligado ao BA.
64. Composto de fórmula (II) de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 52, caracterizado pelo fato de que RG é
(? Vê > O O o DO selecionado a partir de , NAN=N ; ; o o “EE NY Ns No Ne LEY,
65. Composto de fórmula (II) de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 52, caracterizado pelo fato de que RG é Qx
O
66. Composto de fórmula (II) de acordo com qualquer uma o
Á o das reivindicações 2 a 52, caracterizado pelo fato de que RG é O .
67. Composto de fórmula (II) de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 52, caracterizado pelo fato de que RG é Pr O.
68. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 67, caracterizado pelo fato de que para o composto de fórmula (II!) L é -L!-L2-L3).-1+-; e onde Ss mo a L? no composto de fórmula (II) ou (II!) é H onde o grupo NH é ligado ao L?, quando SP é -C(O)-C1-Cr10-alquileno- C(O)-; ou o q. Al L? no composto de fórmula (Il) ou (II) é H onde o grupo NH é ligado ao L?, quando SP é -C(O)-N(C1-3alquil)-C1- Cio-alquileno-X*-, -C(O)-N(C1-3alquil)-C1-C19-alquileno-X??- onde X*? é -NH- ou -N(C1-salquila)-, -C(O)-N(H)-(C1-Ci0-alquileno)-X**- onde X*? é o
NO -NH- ou -N(C1-salquila)-, DANA -(C1-Ci10-alquileno)-NRººC(O)- (C1-C10-alquileno)-NR5%-, — -C(O)-(C1-C10-alquileno)-NRººC(O0)-(C1-C10- alquileno)-NR%ºº- onde cada C1-Cio-alquileno é independentemente opcionalmente substituído com um ou mais hidróxi: ou -C(O)-N(R5)-C1- Cio-alquileno-C(O)NH-X2-; ou L? no composto de fórmula (II) ou (II!) não está presente.
69. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 68, caracterizado pelo fato de que para o composto de fórmula (III) L é -L!-L2-L?)o-1-; e onde L? no composto de fórmula (Il) ou (Ill) compreende PEG, um resíduo de dipeptídeo, um tripeptídeo, um tetrapeptídeo, um pentapeptídeo, -C(O)CH2CH2C0(O0)-, CD, ou -CH2CH2CH2CH2CH20(O)-, ou qualquer combinação dos mesmos.
70. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 68, caracterizado pelo fato de que para o composto de fórmula (IM) L é -L!-L2-L3)1-1-; e onde L? no composto de fórmula (II) o É ? EI alo CA ou (Ill) compreende ; se... o, o o rodo o AAA AÊ AX A
E “ (S) É E (R) É o e e
AMA %“ So o, Ho So , HoOo ; Ha A 2) Y o 9 HN A; *q Ps Anko
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N ON JF
EA OA NAS O ; o ou resíduo de ciclodextrina (CD); ou qualquer combinação dos mesmos.
71. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 68, caracterizado pelo fato de que para o composto de fórmula (IM) L é -L!-L2-L3)1-1-; e onde L? no composto de fórmula (II)
H Pa
O o Ss ton As ão A. ou (Ill) compreende ; se... [RN E 6) SA (R) S o É & AJA ANA: "NA “ o, o , HOT To , HOT TOo ; o, RN N do, N N —N No NE o N
A TO o H o AA Ad O ou CD, ou qualquer combinação dos mesmos.
72. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 69 a 71, caracterizado pelo fato de que CD é selecionado a partir do grupo que consiste em
FT Ho o O o AS ” o Q Ho O o. Gm o GS o O! o o o Ho OH OH 6H Ho OH o o. o! o V A ob o OH oH OH o o O!
H Ho , Srenelã>r HO , ” 7
N Ho O o. o o io Co o dHO Ho oH Ho O Ro O, [or Oo o o o Ho oh Ho oH
OH OH or x o o OH no oh
HO OH OH o OH HO O oH o O! Pp o o H o Ho o ouHorooHZd Or Ho ; o > Ho ” Ho ,
C HO o o o 2 HOR ” o o voos Ho OH No SA o felal oH O o! oH o 0) HO x x oh Nf Ho ) oH HO Kon or oh Pp O. OH, o OH Ho OH7/) OH x. or?
OH º “E oH
H OH HO 9 HoHO O é q HO o HO .
73. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 67, caracterizado pelo fato de que para o composto de fórmula (III) L é -LI-L2-L?)..1-; e onde -L2-(L?)o-1- no composto de fórmula (11) ou (Ill) compreende O. NH,
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74. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto é:
HO HANNA o ENSTONOA ó N Fr! D| Se on, ou um estereoisômero ou mistura de estereoisômeros dos mesmos;
deal e AR SA A dE Y OS Led aa AA LO 5 Ar ou uma mistura dos mesmos; o o Ss
AS À A KO o o ONO NO! CIRO BEER o 9 “o v no Çn) " CO nt, o ou um estereoisômero ou mistura de estereoisômeros dos mesmos; Os NH Dá
NH o no Hu COTITLI Qt AS, as x | o nd. o ou um estereoisômero ou mistura de estereoisômeros dos mesmos; too o Ad oo edge ado IA LEA LI TO eva TOO o OA ÇAO ES j
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LÃ ou uma mistura dos mesmos r HR eo Ns PO OX — nd ad, e ox, Amd so, Se ata | AA 7 A No NÃo IN Ao O om NA NO 2 UA TAF SE 1 end DEI ”. ESTA o, Y Da À VT ” vs Lda, ou uma mistura dos mesmos onde BA compreende um anticorpo tendo a seguinte ao] H n Zz estrutura onde Ab é um anticorpo monocional, anticorpo policlonal, fragmento de anticorpo, ou anticorpo biespeciífico; R é Ca,4-alquileno; e n é um inteiro selecionado a partir de 2a 4, inclusive.
75. Composto de acordo com a reivindicação 74, caracterizado pelo fato de que Ab é MSR1.
76. Composto, caracterizado pelo fato de que é selecionado a partir de: 2b vv 7 ar & or CT Led ave A EA, N o FA O JOR EC ud OQ nt H HH o o IX ; a N o oH 2of 2 AAA O o fo] DE
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77. Composto, caracterizado pelo fato de que possui a fórmula (1):
o 1 Y :
ANA:
Ro o dy
();
ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, estereoisômero ou derivado do mesmo,
em que:
Rº é alquila, arila, arilalquila, ou uma heterocicloalquila contendo N;
a) ambos R*“são hidrogênio; e
Rº é -C(ORE — -(Cri-Cioalquileno)-NR$ºC(O0)-(C1-Cro-
Re RAL Rd alquileno)-NR5º9R%>: -CHANHa; ou RO AS
R? é -Ca-10-alquileno-C(O0)OH; -(C1-Crio-alquileno)-NR5ºC(O)- (C1-Cio-alquileno)-NR5º9R5º? onde cada CiCiralguileno é independentemente opcionalmente substituído com um ou mais hidróxi;
LI"
% ; ou NR!SR**;
R'** é H ou C1-Csalquila e R'º é -(C1-Cio-alquileno)-SH ou -(C1.6-alquileno)- C(O)NHNH;>;
b) ambos R* são fluoro; e
Rº é -C(ORE -(Cr-Cioalquileno)-NR$ºC(O0)-(C1-Cro-
Re RAL Rd alquileno)-NR5º9R5%>: -CHANHa; ou ROX
R? é -C4-10-alquileno-C(O0)OH; -(C1-Cr1o-alquileno)-NRººC(O)- (C1-Ci10-alquileno)-NR5º9R5º? onde cada CiCiwalgquileno é independentemente opcionalmente substituído com um ou mais hidróxi;
Es ; ou NRI6R6a; R'º é H ou C1-Csalquila e R'6? é -(C1-C10-alquileno)-SH, -(C1- io Cio-alquileno)-NHa, -(C1-Ci10-alquileno)-NH(C1.salquila), LON ou -(C1.6-alquileno)-C(O)NHNH;>; e cada R5º, R5ºº e R5º são independentemente hidrogênio ou C1-Cs-alquila; um de Rº, R$, Rº e Rí é -CHOORº e os outros são independentemente -H, -OH, hidroxialquila, -C(O)OH, ou -CH2ORSº, onde cada Rº é independentemente -(C1-s-alquileno)-C(O)OH ou -(C1-6- alquileno)-C(O)O(alquila); ou um de Rº, R$, Rº e R* é hidroxialquila e os outros são -H; e mébou1.
78. Composto de acordo com a reivindicação 77, caracterizado pelo fato de que R? é alquila.
79. Composto de acordo com a reivindicação 77 ou 78, caracterizado pelo fato de que Rº está na configuração R.
80. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 77 a 79, caracterizado pelo fato de que a) ambos R*“são hidrogênio; e Rº é -C(ORE -(CrCioalquileno)-NR$ºC(O0)-(C1-Cro- Re “ alquileno)-NR5ºaR5%>: qu Rº o ; R? é -Ca-10-alquileno-C(O0)OH; -(C1-Cr1o-alquileno)-NR”ºC(O)- (C1-C1o-alquileno)-NR5º9R5?— onde cada CiCialguileno é independentemente opcionalmente substituído com um ou mais hidróxi; ou NRISR'5a;
R** é H ou Cri-Csalquila e R'*º é -(C1-Cio-alquileno)-SH ou -(C1-.6-alquileno)- C(O)NHNH>; b) ambos R* são fluoro; e Rº é -C(ORZE -(Cr-Cioalquileno)-NR$ºC(O0)-(C1-Cro- Re o m alquileno)-NR5ºaR5%6; qu Rº O * ; R? é -C4-10-alquileno-C(O0)OH; -(C1-Cr10-alquileno)-NRººC(O)- (C1-Cio-alquileno)-NRºº9GRººº “onde cada CiCialguileno é independentemente opcionalmente substituído com um ou mais hidróxi; ou NR'6R'6a; R'º é H ou C1-Cealquila e R'6º é -(C1-Ci10-alquileno)-SH, -(C1-
A Cio-alquileno)-NH2, -(C1-Cio-alquileno)-NH(C1-6alquila), LONH ou -(C1.6-alquileno)-C(O)NHNH;>; e
81. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 77 a 79, caracterizado pelo fato de que Rº é -C(O)Rº e
LO Re6 * ou -CH2NH>.
82. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 77 a 80, caracterizado pelo fato de que Rº é -C(O)RºZ.
83. Composto de acordo com a reivindicação 82, caracterizado pelo fato de que R? é -C410-alquileno-C(O)OH.
84. Composto de acordo com a reivindicação 82, caracterizado pelo fato de que RZ é -(C1-Cio-alquileno)-NRººC(O)-(C'1- Cio-alquileno)-NR$º9R5%» onde cada C1-Cio-alquileno é independentemente opcionalmente substituído com um ou mais hidróxi.
85. Composto de acordo com qualquer uma das
Rº x AR) A. reivindicações 77 a 80, caracterizado pelo fato de que Rº é ROO É onde m é 1.
86. Composto de acordo com qualquer uma das É À nº m reivindicações 77 a 80, caracterizado pelo fato de que R&é 9” m é 1, e um de Rº, Rº, Rº e Rº é -CHCORº e os outros são independentemente -H, -OH, ou hidroxialquila.
87. Composto de acordo com qualquer uma das É À nº m reivindicações 77 a 80, caracterizado pelo fato de que R&é 9” m é 1, e um de Rº, Rº, Rº e R* é hidroxialquila e os outros são -H.
88. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 77 a 80, caracterizado pelo fato de que Rº é -(C1-Cio- alquileno)-NR5ºC(O)-(C1-Cr1o-alquileno)-NR5ºaR5.,
89. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 77 a 88, caracterizado pelo fato de que ambos R* são hidrogênio.
90. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 77 a 88, caracterizado pelo fato de que ambos R* são flúor.
91. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 77 a 80, caracterizado pelo fato de que ambos R* são hidrogênio, R? é -C(O)R? e R? é NRISR'*,
92. Composto de acordo com a reivindicação 91, caracterizado pelo fato de que R'* é H.
93. Composto de acordo com as reivindicações 77 a 80, caracterizado pelo fato de que ambos R* são fluoro, Rº é -C(O)R? e R? é NR'SR/6a
94. Composto de acordo com a reivindicação 93, caracterizado pelo fato de que R'*º é H.
95. Composto, caracterizado pelo fato de que é selecionado a partir de:
HH Han. N Neo o OH o 4 H
OSNI º LSRRO o o Ho. o o o OH
BA
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HA DAE)?
ARO HANO o OH
H Y o H 107a MAC DAS o O HANÇO: o OH ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou estereoisômero do mesmo.
96. Composto, caracterizado pelo fato de que é selecionado a partir de 8 pb. ss AT O pá e GS SA e Fo O nO mo PAR a Aa O A NS A. WONG N No A ol)
CT SS FA :ou uma mistura dos mesmos; onde Ab é um anticorpo monoclional, anticorpo policlonal, fragmento de anticorpo ou anticorpo biespecífico; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou estereoisômero do mesmo.
97. Composto, caracterizado pelo fato de que é de acordo com uma das fórmulas que seguem: Aos o q O. H Abd S o H o SÊ CH WA NA o À ã H 1 o o Di o no! NO NH, o
H ?;
à sa. ao o No E he Ns o o o Ê oo FT & A) n j A, fd a AA O PA A ORA, o no G Aar ne a ora, NT) o 2 no AA NÃ o. o.
AAA, N.. o > o GS AA AA NAN . y FA 7 PURA, no CA 7 ou uma mistura dos mesmos; Ab: o 4 Ss o o no no DO 0 o o, e! of N Ne (sH o 3 o no So o H NO NH, HH “CO o o 2 dx. os TOoH Ss “oH no om z.
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98. Composto de acordo com a reivindicação 94 ou 95, caracterizado pelo fato de que Ab é MSR1.
99. Método para tratar uma doença, distúrbio ou condição associada com a sinalização do receptor de glicocorticoide caracterizado pelo fato de que compreende administrar a um paciente que tem a referida doença, distúrbio ou condição uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (Ill) como definido em qualquer uma das reivindicações 1, 63 e 68 a 75, ou composto como definido em qualquer uma das reivindicações 96 a 98.
100. Método de acordo com a reivindicação 99, caracterizado pelo fato de que a doença, distúrbio ou condição é uma doença, distúrbio ou condição inflamatória.
101. Método de acordo com a reivindicação 99 ou 100, caracterizado pelo fato de que os efeitos colaterais associados com a administração da carga útil de esteroide não conjugado do referido composto são reduzidos.
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