CN113382985A - 用作lxr激动剂的双八氢菲羧酰胺类衍生物及其蛋白质偶联物 - Google Patents

用作lxr激动剂的双八氢菲羧酰胺类衍生物及其蛋白质偶联物 Download PDF

Info

Publication number
CN113382985A
CN113382985A CN201980089547.4A CN201980089547A CN113382985A CN 113382985 A CN113382985 A CN 113382985A CN 201980089547 A CN201980089547 A CN 201980089547A CN 113382985 A CN113382985 A CN 113382985A
Authority
CN
China
Prior art keywords
compound
group
amino acid
acid
antibody
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201980089547.4A
Other languages
English (en)
Inventor
J·格罗玛达
V·古萨罗娃
A·韩
S·哈西纳斯托
A·J·墨菲
W·奥尔松
M·思利曼
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Regeneron Pharmaceuticals Inc
Original Assignee
Regeneron Pharmaceuticals Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Regeneron Pharmaceuticals Inc filed Critical Regeneron Pharmaceuticals Inc
Publication of CN113382985A publication Critical patent/CN113382985A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L5/00—Compositions of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08L1/00 or C08L3/00
    • C08L5/16—Cyclodextrin; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C237/00—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups
    • C07C237/52—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups further acylated
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6883—Polymer-drug antibody conjugates, e.g. mitomycin-dextran-Ab; DNA-polylysine-antibody complex or conjugate used for therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D233/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings
    • C07D233/54—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D233/64—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms, e.g. histidine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D249/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D249/16—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H17/00—Compounds containing heterocyclic radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H17/02—Heterocyclic radicals containing only nitrogen as ring hetero atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
    • C08B37/0009—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid alpha-D-Glucans, e.g. polydextrose, alternan, glycogen; (alpha-1,4)(alpha-1,6)-D-Glucans; (alpha-1,3)(alpha-1,4)-D-Glucans, e.g. isolichenan or nigeran; (alpha-1,4)-D-Glucans; (alpha-1,3)-D-Glucans, e.g. pseudonigeran; Derivatives thereof
    • C08B37/0012—Cyclodextrin [CD], e.g. cycle with 6 units (alpha), with 7 units (beta) and with 8 units (gamma), large-ring cyclodextrin or cycloamylose with 9 units or more; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2603/00—Systems containing at least three condensed rings
    • C07C2603/02—Ortho- or ortho- and peri-condensed systems
    • C07C2603/04—Ortho- or ortho- and peri-condensed systems containing three rings
    • C07C2603/22—Ortho- or ortho- and peri-condensed systems containing three rings containing only six-membered rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2603/00—Systems containing at least three condensed rings
    • C07C2603/02—Ortho- or ortho- and peri-condensed systems
    • C07C2603/04—Ortho- or ortho- and peri-condensed systems containing three rings
    • C07C2603/22—Ortho- or ortho- and peri-condensed systems containing three rings containing only six-membered rings
    • C07C2603/26—Phenanthrenes; Hydrogenated phenanthrenes

Abstract

本发明提供了化合物或有效负载、连接体‑有效负载、抗体‑药物偶联物、和组合物，以及治疗与肝X受体相关的疾病和病症的方法，包括双八氢菲羧酰胺类化合物及其蛋白质(例如抗体)药物偶联物。

Description

用作LXR激动剂的双八氢菲羧酰胺类衍生物及其蛋白质偶 联物
发明领域
本发明提供了新颖的双八氢菲羧酰胺类化合物及其蛋白质偶联物，以及用于治疗多种疾病、病症和病况的方法，包括施用所述双八氢菲羧酰胺类化合物及其蛋白质偶联物。
发明背景
抗体-药物偶联物(ADC)是与生物活性小分子药物连接的抗体，因此可将抗体的靶向特异性与小分子药物的作用模式和效力相结合。ADC的治疗作用已在癌症治疗中得到验证，并且是研究的主要持续焦点。
Figure BDA0003169092350000011
(bentruximab vedotin)和
Figure BDA0003169092350000012
(ado-曲妥珠单抗emtansine偶联物(ado-trastuzumab emtansine))均是经批准用于治疗某些癌症类型的ADC，目前至少有40种ADC正在临床开发中。
肝X受体(LXR)包括LXRα和LXRβ，其均是依赖于配体的转录因子，控制与胆固醇、脂质和葡萄糖稳态、炎症以及先天免疫有关的基因的表达。LXRα在肝、肠、脂肪组织、以及经分化的巨噬细胞中高表达；而LXRβ的表达则无处不在。LXR具有多种生物学功能，其中包括：(i)刺激胆固醇转运蛋白(例如ABCA1和ABCG1)表达，所述ABCA1和ABCG1均介导细胞胆固醇外排；(ii)通过抑制NF-kB激活来负调控巨噬细胞炎性基因表达。LXR也与动脉粥样硬化、增殖性疾病、神经退行性疾病和炎症有关。增殖性疾病包括黑色素瘤、肺癌、口腔鳞状细胞癌、和前列腺癌(Pencheva et al.2004；Wu et al.2015；Kaneko et al.2015；Chuu etal.2006)。神经退行性疾病包括阿尔茨海默病和髓磷脂基因表达(Terwel et al.2011；Sandoval-Hernandez et al.2016；Meffre et al.2014)。炎症包括炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩病和关节炎(Anderson et al.2011；Huang et al.2015；Cui et al.2012)。已知巨噬细胞LXR具有抗动脉粥样硬化活性。LXR激动剂被认为能够(i)抑制动脉粥样硬化的发生并延缓其发展；(ii)减轻动脉粥样硬化并稳定已建立的动脉粥样硬化病变；和(iii)通过细胞凋亡减少病变巨噬细胞含量。
小分子LXR调节剂的治疗潜力受到例如非靶细胞对LXR的不希望的调节和/或低生物利用度的限制。非靶细胞对LXR的调节可导致不良副作用，并且由于多种原因，可能显示出低生物利用度，包括但不限于低溶解度，这进一步加剧了不良的治疗窗口。包含LXR调节剂的ADC的开发将使得对LXR进行靶向特异性调节，从而避免了由LXR的脱靶调节引起的副作用。此外，此类ADC将提供对生物靶标的改善调节、改善的生物利用度、和改善的治疗窗口。因此，持续需使用LXR调节剂的小分子ADC来有效治疗例如代谢性疾病。
发明摘要
本发明提供了化合物，其可用于例如治疗代谢性疾病，包括但不限于血脂异常。本发明还提供了用于例如治疗炎症或神经退行性疾病的化合物。
在一个实施方案，本发明提供了式I所示化合物：
Figure BDA0003169092350000021
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，其中，
Q1和Q2各自独立地为–CH2–、–C(O)–、–C(H)(OH)–、–C(OH)2–、–SO2–、–SO–、–PO(OR3)–、–PO(NR3NR4)–、–NR3–、或–N＝；
W是–CH2–、–N(H)–、或–O–；
R1是–N(H)R4或–N(R5)2；
R2是–N(H)R4；
各R4，在每种情况下，分别独立地为H、氨基酸残基、N-烷基氨基酸残基、肽残基、可生物降解的基团部分、烷基、取代的烷基、酰基、或取代的酰基；
R5是烷基、芳基、芳基烷基、杂环烷基、或取代的杂环烷基，其中各杂环烷基或取代的杂环烷基分别包含选自N和O的1、2或3个杂原子，并且当被取代时包含至少一个–OH和–CH2OH、或至少一个伯氮或仲氮；
各R6分别独立地为卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、–CN、O-葡萄糖、O-氨基酸残基、或O-PEGn1，其中各n分别为从0至14的整数，和各n1分别为从1至12的整数；和
各R3分别独立地为H、烷基、或芳基。
在一个实施方案，本发明提供了式I所示化合物：
Figure BDA0003169092350000022
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，其中，
Q1和Q2各自独立地为–CH2–、–C(O)–、–C(H)(OH)–、–C(OH)2–、–SO2–、–SO–、–PO(OR3)–、–PO(NR3NR4)–、–NR3–、或–N＝；
W是–CH2–、–N(H)–、或–O–；
R1是–N(H)R4或–N(R5)2；
R2是–N(H)R4；
各R4，在每种情况下，分别独立地为H、氨基酸残基、N-烷基氨基酸残基、肽残基、可生物降解的基团部分、或烷基；
R5是烷基、芳基、芳基烷基、杂环烷基、或取代的杂环烷基，其中各杂环烷基或取代的杂环烷基分别包含选自N和O的1、2或3个杂原子，并且当被取代时包含至少一个–OH和–CH2OH、或至少一个伯氮或仲氮；
各R6分别独立地为卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、–CN、O-葡萄糖、O-氨基酸残基、或O-PEGn1，其中各n分别为从0至14的整数，和各n1分别为从1至12的整数；和
各R3分别独立地为H、烷基、或芳基。
在另一实施方案，本发明提供了连接体-有效负载，其具有与连接体连接的上述式I所示化合物。
在另一实施方案，本发明提供了抗体-药物偶联物，其具有与抗体或其抗原结合片段连接的上述式I所示化合物或连接体-有效负载。
在一个实施方案，本发明提供了式A、B、C、或D所示化合物：
Figure BDA0003169092350000031
Figure BDA0003169092350000041
或其药学上可接受的盐、或立体异构体形式，其中，
L是连接体；
BA是结合剂；
k是从1至30的整数；
Q1和Q2各自独立地为–CH2–、–C(O)–、–C(H)(OH)–、–C(OH)2–、–SO2–、–SO–、–PO(OR3)–、–PO(NR3NR4)–、–NR3–、或–N＝；
W是–CH2–、–N(H)–、或–O–；
R1是–N(H)R4、–N(H)R4–、–N(H)–、–N(R5)2、或–N(R5)2–；
R2是–N(H)R4、–N(H)R4–、或–N(H)–；
各R4，在每种情况下，分别独立地为H、氨基酸残基、N-烷基氨基酸残基、肽残基、可生物降解的基团部分、烷基、取代的烷基、酰基、取代的酰基、或-亚烷基-；
R5是烷基、芳基、芳基烷基、杂环烷基、或取代的杂环烷基，其中各杂环烷基或取代的杂环烷基分别包含选自N和O的1、2或3个杂原子，并且当被取代时包含至少一个–OH和–CH2OH、或至少一个伯氮或仲氮；
各R6分别独立地为卤素、C1-6烷基、C1-6亚烷基、C1-6烷氧基、–CN、O-葡萄糖、O-氨基酸残基、或O-PEGn1，其中各n分别为从0至14的整数，和各n1分别为从1至12的整数；和
各R3分别独立地为H、烷基、或芳基。
在另一实施方案，本发明提供了式A、B、C、或D所示化合物：
Figure BDA0003169092350000051
或其药学上可接受的盐、或立体异构体形式，其中，
L是连接体；
BA是结合剂；
k是从1至30的整数；
Q1和Q2各自独立地为–CH2–、–C(O)–、–C(H)(OH)–、–C(OH)2–、–SO2–、–SO–、–PO(OR3)–、–PO(NR3NR4)–、–NR3–、或–N＝；
W是–CH2–、–N(H)–、或–O–；
R1是–N(H)R4、–N(H)R4–、–N(H)–、–N(R5)2、或–N(R5)2–；
R2是–N(H)R4、–N(H)R4–、或–N(H)–；
各R4，在每种情况下，分别独立地为H、氨基酸残基、N-烷基氨基酸残基、肽残基、可生物降解的基团部分、烷基、或-亚烷基-；
R5是烷基、芳基、芳基烷基、杂环烷基、或取代的杂环烷基，其中各杂环烷基或取代的杂环烷基分别包含选自N和O的1、2或3个杂原子，并且当被取代时包含至少一个–OH和–CH2OH、或至少一个伯氮或仲氮；
各R6分别独立地为卤素、C1-6烷基、C1-6亚烷基、C1-6烷氧基、–CN、O-葡萄糖、O-氨基酸残基、或O-PEGn1，其中各n分别为从0至14的整数，和各n1分别为从1至12的整数；和
各R3分别独立地为H、烷基、或芳基。
在另一实施方案，本发明提供了药物组合物，其包含本发明所述的化合物、连接体-有效负载或抗体-药物偶联物，以及药学上可接受的辅料、载体或稀释剂。
在另一实施方案，本发明提供了治疗受试者血脂异常、代谢性疾病、炎症、或神经退行性疾病的方法，其包含向所述受试者施用有效治疗量的本发明所述化合物、连接体-有效负载或抗体-药物偶联物、或药物组合物。
在另一实施方案，本发明提供了制备本发明所述化合物、连接体-有效负载或抗体-药物偶联物、以及组合物的方法。
附图简要说明
图1和图2示出了有效负载、化合物及双八氢菲羧酰胺类化合物的合成化学方案。
图3-9示出了连接体-有效负载、基于环糊精的连接体-有效负载、基于PEG4-牛磺酸的连接体-有效负载、和基于麦芽糖的连接体-有效负载的合成化学方案。
图10-12示出了环糊精-叠氮化物、叠氮基-PEG4-牛磺酸和麦芽糖-叠氮化物的合成化学方案。
图13示出了由含P2有效负载的抗MSR1 ADC激活胆固醇外排的EC50图。
具体实施方式
本发明提供了用于治疗例如受试者血脂异常、代谢性疾病、炎症或神经退行性疾病的化合物或有效负载、连接体-有效负载、抗体-药物偶联物、组合物及方法。
除非另有定义，本发明使用的所有技术术语和科学术语与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同。本发明使用的术语“约/大约”在用于参考特定列举的数值时，是指所述值可与所列举的值相差不超过1％。譬如，如本发明所用，表述“约100”包括99和101以及其间的所有值(例如，99.1、99.2、99.3、99.4等)。
尽管与本发明描述的那些方法或材料/物料相似或等同的任何方法和材料/物料均可用于本发明的实践或测试中，但现在描述优选的方法和材料/物料。本说明书中提及的所有专利、专利申请和非专利出版物均通过引用其全文并入本发明。
定义
当提及本发明提供的化合物或有效负载、连接体-有效负载(LP)、或抗体-药物偶联物时，除非另有说明，否则以下术语具有以下含义。除非另有定义，否则本发明使用的所有技术术语和科学术语均具有与本领域普通技术人员通常所理解的相同的含义。在本发明提供的术语存在多个定义的情况下，除非另有说明，否则以所述这些定义为准。
本发明使用的“烷基”是指一价且饱和的烃基基团部分。烷基是任选取代的，且可以是直链、支链或环状的，即环烷基。烷基包括但不限于具有1-20个碳原子，即C1-20烷基；1-12个碳原子，即C1-12烷基；1-8个碳原子，即C1-8烷基；1-6个碳原子，即C1-6烷基；和1-3个碳原子，即C1-3烷基的那些基团。烷基基团部分的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、异丁基、戊基基团部分、己基基团部分、及其构造异构体、环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
本发明使用的“构造异构体(constitutional isomer)”是指具有相同分子式但由于原子排列方式而产生不同化学结构的化合物。示例性构造异构体包括正丙基和异丙基；正丁基、仲丁基和叔丁基；以及正戊基、异戊基和新戊基等。
本发明使用的“亚烷基”是指二价烷基基团。除非另有说明，否则亚烷基包括但不限于1-20个碳原子。亚烷基基团任选地如本发明所述被烷基取代。在一些实施方案，亚烷基是未取代的。
本发明使用的术语“O-氨基酸”或“HO-氨基酸”表示氨基酸，其中氨基酸或氨基酸序列的N端的天然氨基基团已分别被氧或羟基基团替代。譬如，“O-AAAA”或“HO-AAAA”旨在表示氨基酸序列(AAAA)，其中N端的天然氨基基团分别被氧或羟基基团替代(例如
Figure BDA0003169092350000071
其中各R分别为氨基酸侧链)。同理，术语“O-氨基酸残基”或“HO-氨基酸残基”是指化合物内进行化学反应后保留的化学基团部分。例如，“O-氨基酸残基”或“HO-氨基酸残基”是指O-氨基酸或HO-氨基酸与合适的偶联配偶体进行酰胺偶联或肽偶联的产物；其中，例如，在O-氨基酸或HO-氨基酸的酰胺偶联或肽偶联之后将水分子排出，从而形成O-氨基酸残基或HO-氨基酸残基掺入其中的产物。
在未指定其立体化学的情况下，氨基酸或氨基酸残基的名称旨在涵盖氨基酸的L形式、氨基酸的D形式、或其外消旋混合物。
本发明使用的“卤代烷基”是指如上所定义的烷基，其中所述烷基包括至少一个选自卤素例如氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)或碘(I)的取代基。卤代烷基的实例包括但不限于，-CF3、-CH2CF3、–CCl2F和–CCl3。
本发明使用的“烯基”是指包含至少两个碳原子和一个或多个非芳族碳-碳双键的一价烃基基团部分。烯基是任选取代的，且可以是直链、支链或环状的。烯基包括但不限于具有2-20个碳原子，即C2-20烯基；2-12个碳原子，即C2-12烯基；2-8个碳原子，即C2-8烯基；2-6个碳原子，即C2-6烯基；和2-4个碳原子，即C2-4烯基的那些基团。烯基基团部分的实例包括但不限于乙烯基、丙烯基、丁烯基和环己烯基。
本发明使用的“炔基”是指包含至少两个碳原子和一个或多个碳-碳三键的一价烃基基团部分。炔基是任选取代的，且可以是直链、支链或环状的。炔基包括但不限于具有2-20个碳原子，即C2-20炔基；2-12个碳原子，即C2-12炔基；2-8个碳原子，即C2-8炔基；2-6个碳原子，即C2-6炔基；和2-4个碳原子，即C2-4炔基的那些基团。炔基基团部分的实例包括但不限于乙炔基、丙炔基和丁炔基。
本发明使用的“烷氧基”是指一价且饱和的烃基基团部分，其中所述烃包括与氧原子连接的单键，和其中所述自由基位于氧原子上，例如乙氧基CH3CH2–O·。烷氧基取代基与其通过所述烷氧基取代基的氧原子取代的化合物连接。烷氧基是任选取代的，且可以是直链、支链或环状的，即环烷氧基。烷氧基包括但不限于具有1-20个碳原子，即C1-20烷氧基；1-12个碳原子，即C1-12烷氧基；1-8个碳原子，即C1-8烷氧基；1-6个碳原子，即C1-6烷氧基；和1-3个碳原子，即C1-3烷氧基的那些。烷氧基基团部分的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、异丁氧基、戊氧基基团部分、和己氧基基团部分、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基和环己氧基(即分别为
Figure BDA0003169092350000081
Figure BDA0003169092350000082
)。
本发明使用的“卤代烷氧基”是指如上所定义的烷氧基，其中所述烷氧基包括至少一个选自卤素例如F、Cl、Br或I的取代基。
本发明使用的“芳基”是指一价基团部分，其是芳族化合物的原子团，其中所述环原子均是碳原子。芳基是任选取代的，且可以是单环或多环的，例如双环或三环。芳基基团部分的实例包括但不限于具有6至20个环碳原子，即C6-20芳基；6至15个环碳原子，即C6-15芳基；和6至10个环碳原子，即C6-10芳基的那些。芳基基团部分的实例包括但不限于苯基、萘基、芴基、薁基、蒽基、菲基和芘基。
本发明使用的“芳基烷基”是指烷基化合物原子团的一价基团部分，其中所述烷基化合物被芳香族取代基取代，即，所述芳香族化合物包括与烷基基团连接的单键，和其中所述自由基位于所述烷基基团上。芳基烷基基团通过所述烷基基团与所示的化学结构连接。芳基烷基可以由以下结构表示，例如，
Figure BDA0003169092350000091
其中B是芳族基团部分，例如苯基。芳基烷基是任选取代的，即所述芳基基团和/或所述烷基基团，可以如本发明所述的那样被取代。芳基烷基的实例包括但不限于苄基。
本发明使用的“烷基芳基”是指芳基化合物原子团的一价基团部分，其中所述芳基化合物被烷基取代基取代，即，所述芳基化合物包括与烷基基团连接的单键，其中所述自由基位于所述芳基基团上。烷基芳基基团通过所述芳基基团与所示的化学结构连接。烷基芳基可以由以下结构表示，例如，
Figure BDA0003169092350000092
其中B是芳族基团部分，例如苯基。烷基芳基是任选取代的，即所述芳基基团和/或所述烷基基团，可以如本发明所述的那样被取代。烷基芳基的实例包括但不限于甲苯甲酰基。
本发明使用的“芳氧基/芳基氧基”是指芳族化合物原子团的一价基团部分，其中所述环原子均是碳原子，和其中所述环被氧基取代，即所述芳族化合物包括与氧原子连接的单键，和其中所述自由基位于氧原子上，例如苯氧基
Figure BDA0003169092350000093
芳氧基取代基与它们通过此氧原子取代的化合物连接。芳氧基是任选取代的。芳氧基包括但不限于具有6至20个环碳原子，即C6-20芳氧基；6至15个环碳原子，即C6-15芳氧基，和6至10个环碳原子，即C6-10芳氧基的那些基团。芳氧基基团部分的实例包括但不限于苯氧基、萘氧基和蒽氧基。
本发明使用的“RaRbN-芳基氧基”是指芳族化合物原子团的一价基团部分，其中所述环原子均是碳原子，和其中所述环被至少一个RaRbN-取代基和至少一个氧基取代，即所述芳族化合物包括与RaRbN-取代基连接的单键和与氧原子连接的单键，其中所述自由基位于氧原子上，例如
Figure BDA0003169092350000094
RaRbN-芳基氧基取代基与它们通过此氧原子取代的化合物连接。RaRbN-芳基氧基是任选取代的。RaRbN-芳基氧基包括但不限于具有6至20个环碳原子，例如，C6-20(RaRbN)nn-芳基氧基，6至15个环碳原子，例如，C6-15(RaRbN)nn-芳基氧基，和6至10个环碳原子，例如，C6-10(RaRbN)nn-芳基氧基的那些，其中nn表示RaRbN–取代基的数目。RaRbN-芳基氧基基团部分的实例包括但不限于4–(二甲基氨基)–苯氧基，
Figure BDA0003169092350000101
本发明使用的“亚芳基”是指芳族化合物的二价基团部分，其中所述环原子仅为碳原子。亚芳基是任选取代的，且可以是单环或多环的，例如双环或三环。亚芳基基团部分的实例包括但不限于具有6至20个环碳原子，即C6-20亚芳基；6至15个环碳原子，即C6-15亚芳基；和6至10个环碳原子，即C6-10亚芳基的那些。
本发明使用的“杂烷基”是指其中一个或多个碳原子被杂原子替换的烷基。本发明使用的“杂烯基”是指其中一个或多个碳原子被杂原子替换的烯基。本发明使用的“杂炔基”是指其中一个或多个碳原子被杂原子替换的炔基。合适的杂原子包括但不限于氮、氧和硫原子。杂烷基是任选取代的。杂烷基基团部分的实例包括但不限于氨基烷基、磺酰基烷基、和亚磺酰基烷基。杂烷基基团部分的实例还包括但不限于甲氨基、甲磺酰基和甲基亚磺酰基。本发明使用的“亚杂烷基”、“亚杂烯基”和“亚杂炔基”分别为杂烷基、杂烯基和杂炔基的二价形式。
本发明使用的“杂芳基”是指芳族化合物原子团的一价基团部分，其中所述环原子包含碳原子和至少一个氧、硫、氮或磷原子。杂芳基基团部分的实例包括但不限于具有5至20个环原子，5至15个环原子，和5至10个环原子的那些。杂芳基是任选取代的。
本发明使用的“亚杂芳基”是指其中所述芳环的一个或多个环原子被氧、硫、氮或磷原子替换的亚芳基。亚杂芳基是任选取代的。
本发明使用的“杂环烷基”是指其中一个或多个碳原子被杂原子替换的环烷基。合适的杂原子包括但不限于氮、氧和硫原子。杂环烷基是任选取代的。杂环烷基基团部分的实例包括但不限于吗啉基、哌啶基、四氢吡喃基、吡咯烷基、咪唑烷基、噁唑烷基、噻唑烷基、二氧杂环戊烷基、二硫杂环戊烷基、四氢吡喃基(oxanyl)或四氢噻喃基(thianyl)。
本发明使用的“路易斯酸”是指接受孤对电子的分子或离子。本发明所述方法中使用的路易斯酸是质子以外的那些。路易斯酸包括但不限于非金属酸类，金属酸类，硬路易斯酸类和软路易斯酸类。路易斯酸包括但不限于铝、硼、铁、锡、钛、镁、铜、锑、磷、银、镱、钪、镍和锌的路易斯酸类。示例性路易斯酸包括但不限于：AlBr3，AlCl3，BCl3，三氯化硼甲基硫化物，BF3，三氟化硼甲基醚络合物，三氟化硼甲基硫化物，三氟化硼四氢呋喃，二环己基硼三氟甲烷磺酸盐，溴化铁(III)，氯化铁(III)，氯化锡(IV)，氯化钛(IV)，钛(IV)酸异丙酯，Cu(OTf)2，CuCl2，CuBr2，氯化锌，烷基铝卤化物类(RnAlX3-n，其中R是烃基)，Zn(OTf)2，ZnCl2，Yb(OTf)3，Sc(OTf)3，MgBr2，NiCl2，Sn(OTf)2，Ni(OTf)2，和Mg(OTf)2。
本发明使用的“含N的杂环烷基”是指其中一个或多个碳原子被杂原子替代，和其中至少一个杂原子是氮原子的环烷基。合适的杂原子除氮原子之外，还包括但不限于氧原子和硫原子。含N的杂环烷基是任选取代的。含N的杂环烷基基团部分的实例包括但不限于吗啉基、哌啶基、吡咯烷基、咪唑烷基、噁唑烷基、或噻唑烷基。
本发明使用的“O-葡萄糖”是指通过环外葡萄糖氧原子进行连接的一价基团部分。合适的O-葡萄糖基团部分包括但不限于，
Figure BDA0003169092350000111
等。
本发明使用的“O-PEGn1”是指通过末端氧原子进行连接的一价基团部分，其中nl是从1至100。例如，当nl是1时，则O-PEGn1是–O–CH2CH2OH；当n1是2时，则O-PEGn1是–O–CH2CH2O–CH2CH2OH；和当n1是3时，则O-PEGn1是–O–CH2CH2O–CH2CH2O–CH2CH2OH。
本发明使用的“任选取代的”，当用于描述基团部分，例如任选取代的烷基时，是指此基团部分任选地与一个或多个取代基连接。此类取代基的实例包括但不限于卤素，氰基，硝基，任选取代的卤代烷基，叠氮基，环氧基，任选取代的杂芳基，任选取代的杂环烷基，
Figure BDA0003169092350000112
Figure BDA0003169092350000113
Figure BDA0003169092350000114
氧代或
Figure BDA0003169092350000115
其中RA、RB和RC在每次出现时，分别独立地为氢原子、烷基、烯基、炔基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、杂烷基、杂芳基、或杂环烷基，或RA和RB同与它们连接的原子一起形成饱和或不饱和的碳环，其中所述环是任选取代的，和其中一个或多个环原子任选地被杂原子替代。在某些实施方案，当基团部分任选地被任选取代的杂芳基、任选取代的杂环烷基或任选取代的饱和或不饱和碳环取代时，所述任选取代的杂芳基、任选取代的杂环烷基或任选取代的饱和或不饱和碳环上的取代基，如果它们被取代，则不被进一步任选地被另外的取代基取代的取代基取代。在一些实施方案，当本发明所述的基团任选地被取代时，除非另有说明，与所述基团连接的取代基是未被取代的。
本发明使用的“酰基”是指
Figure BDA0003169092350000116
其中RA是烷基，或任选取代的烷基。并且，本发明使用的“任选取代的酰基”是指当RA是任选取代时。
本发明使用的“结合剂”是指能够与给定结合配偶体(例如抗原)特异性结合的任何分子，例如蛋白质。
本发明使用的“连接体”是指使所述结合剂与本发明所述的一个或多个化合物(例如，本发明所述的有效负载化合物和增强剂)共价连接的二价、三价、或多价基团部分。
本发明使用的“酰胺合成条件”是指适于促进形成酰胺，譬如，通过羧酸、活化的羧酸、或酰卤与胺进行反应的反应条件。在一些实施例，“酰胺合成条件”是指适于在羧酸和胺之间促进形成酰胺键的反应条件。在所述这些实施例的一些中，所述羧酸首先在活化羧酸与胺反应形成酰胺之前转化为活化羧酸。实现酰胺形成的适宜条件包括，但不限于，利用试剂来实现羧酸与胺之间反应的那些，包括但不限于，二环己基碳二亚胺(DCC)、二异丙基碳二亚胺(DIC)、(苯并三氮唑-1-基氧基)三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐(BOP)、(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(PyBOP)、(7-偶氮苯并三氮唑-1-基氧基)三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(PyAOP)、三吡咯烷基溴化鏻六氟磷酸盐(PyBrOP)、O-(苯并三氮唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)、O-(苯并三氮唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟硼酸盐(TBTU)、1-[双(二甲氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三氮唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化六氟磷酸盐(HATU)、N-乙氧羰基-2-乙氧基-1,2-二氢喹啉(EEDQ)、N-乙基-N’-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺(EDC)、2-氯-1,3-二甲基咪唑鎓六氟磷酸盐(CIP)、2-氯-4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪(CDMT)、和羰二咪唑(CDI)。在一些实施例，首先将羧酸转化为活化的羧酸酯，然后活化的羧酸酯用胺处理以形成酰胺键。在一些实施方案，羧酸用试剂处理。所述试剂通过使羧酸去质子来活化羧酸，然后由于去质子化的羧酸亲核进攻到质子化试剂上，从而与去质子化的羧酸形成产物复合物。对于某些羧酸，相较羧酸转化成活化酯之前，所述活化羧酸酯更容易受到胺的亲核进攻。此举导致酰胺键形成。因此，所述羧酸被描述为活化的。示例性试剂包括DCC和DIC。
本发明使用的“区域异构体”或“区域异构体的混合物”是指得自用合适的炔类化合物处理的合适的叠氮化物(例如，-N3或PEG-N3衍生抗体)的1,3-环加成产物或应变促进的炔烃-叠氮化物环加成(SPAAC)(也称为点击反应)产物。在某些实施方案，例如，所述区域异构体和区域异构体的混合物的特征在于如下所示的点击反应产物：
Figure BDA0003169092350000121
Figure BDA0003169092350000131
在某些实施方案，可在生成产物的合成方案中使用一种以上的合适的叠氮化物和一种以上的合适的炔烃，其中每对叠氮化物-炔烃可参与一个或多个独立的点击反应以生成区域异构的点击反应产物的混合物。例如，技术人员将认识到，第一合适的叠氮化物可独立地与第一合适的炔烃反应，第二合适的叠氮化物可在生成产物的途中独立地与第二合适的炔烃反应，从而生成本发明所述ADC样本中的四种可能的点击反应区域异构体或所述四种可能的点击反应区域异构体的混合物。通过进一步的实例，技术人员将认识到，第一合适的叠氮化物可独立地与第一合适的炔烃反应，和第二合适的叠氮化物可在生成产物的途中独立地与第二合适的炔烃反应，从而生成本发明所述LP样本中的四种可能的点击反应区域异构体或所述四种可能的点击反应区域异构体的混合物。
本发明使用的术语“残基”是指化合物内化学反应后保留的化学基团部分。例如，术语“氨基酸残基”或“N-烷基氨基酸残基”是指氨基酸或N-烷基氨基酸与合适的偶联配偶体进行酰胺偶联或肽偶联的产物；其中，例如，在氨基酸或N-烷基氨基酸的酰胺偶联或肽偶联之后将水分子排出，从而得到氨基酸残基或N-烷基氨基酸残基掺入其中的产物。
本发明使用的“治疗有效量”是指足以在患者治疗或控制疾病或病症，或延迟或最小化与疾病或病症相关的一种或多种症状时，提供治疗益处的(化合物或有效负载的)量。
某些基团、分子/基团部分、取代基、和原子被描述为具有与键相交的波浪线，以指示所述基团、分子/基团部分、取代基、原子通过其进行连接的原子。譬如，被丙基基团取代的苯基基团可表示为：
Figure BDA0003169092350000132
具有下述结构：
Figure BDA0003169092350000133
本发明使用的，通过环原子之间的键连接到环状基团(例如，芳环、杂芳环、稠环、和饱和或不饱和环烷基或杂环烷基)的取代基的例示说明意在表示，除非另有说明，环状基团可根据本发明所阐述的技术或即时公开的涉及本领域已知的技术，在环状基团的任何环位置或稠环基团的任何环上被取代基取代。譬如，所述基团
Figure BDA0003169092350000134
其中下标q是从0至4的整数，和其中取代基R1的位置一般性地描述，即不直接连接至键合线结构的任何顶点，即特定的环碳原子，包括以下，其中取代基R1与特定环碳原子连接的基团的非限制性实例：
Figure BDA0003169092350000141
Figure BDA0003169092350000142
本发明使用的短语“活性(反应性)连接体”或缩写“RL”是指包含活性(反应性)基团和间隔基团的一价基团，如
Figure BDA0003169092350000143
所示，其中RG是所述活性基团，和SP是所述间隔基团。如本发明所述，活性(反应性)连接体可包含一个以上活性(反应性)基团和一个以上间隔基团。所述间隔基团是将活性(反应性)基团桥接至另一个基团(例如有效负载)的任何二价基团部分。所述活性连接体(RL)与同它们连接的有效负载一起，组成可用作制备本发明所述抗体偶联物的合成前体的中间体(“连接体-有效负载”)。所述活性连接体包含活性基团(“RG”)，其是能够与另一基团(例如抗体、经修饰的抗体、或其抗原结合片段、或增强基团)的活性部分反应的官能团或基团部分。由所述活性基团与所述抗体、经修饰的抗体或其抗原结合片段反应产生的基团部分与所述连接基团一起，组成本发明所述的偶联物的“结合剂连接体”(“BL”)部分。在某些实施方案，所述“活性基团”是与抗体或其抗原结合片段的半胱氨酸或赖氨酸残基反应的官能团或基团部分(例如，马来酰亚胺或N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)酯)。在某些实施方案，所述“活性基团”是能够进行点击化学反应(参见，例如clickchemistry,Huisgen Proc.Chem.Soc.1961,Wang et al.J.Am.Chem.Soc.2003,和Agard etal.J.Am.Chem.Soc.2004)的官能团或基团部分。在所述点击化学反应的一些实施方案中，所述活性基团是能够与叠氮化物进行1,3-环加成反应的炔烃。此类合适的活性基团包括但不限于应变炔烃类，例如适用于应变促进的炔-叠氮化物环加成(SPAAC)的那些，环炔烃类，例如环辛炔类、苯并环化的炔烃类、和在没有铜催化剂的情况下能够与炔烃类化合物进行1,3-环加成反应的炔烃类。合适的炔烃类还包括但不限于二苯并氮杂环辛炔或
Figure BDA0003169092350000151
(DIBAC)，二苯并环辛炔或
Figure BDA0003169092350000152
(DIBO)，二芳基氮杂环辛炔酮或
Figure BDA0003169092350000153
(BARAC)，二氟化环辛炔或
Figure BDA0003169092350000154
(DIFO)，取代的例如氟化炔烃类，氮杂环炔烃类，二环[6.1.0]壬炔或
Figure BDA0003169092350000155
(BCN，其中R是烷基、烷氧基、或酰基)，和其衍生物类。特别有用的炔烃类包括
Figure BDA0003169092350000156
包含此类活性基团的连接体-有效负载可用于偶联已用叠氮基官能化的抗体。此类官能化抗体包括用叠氮基-聚乙二醇基团官能化的抗体。在某些实施方案，此类官能化抗体通过在转谷氨酰胺酶的存在下，用带有氨基基团和叠氮基的化合物处理具有至少一个谷氨酰胺残基(例如重链Gln295)的抗体，从而衍生得到。
在一些实施例，所述活性基团是炔烃，例如
Figure BDA0003169092350000157
其可通过点击化学与叠氮化物(例如
Figure BDA0003169092350000158
)反应，以形成点击化学产物，例如
Figure BDA0003169092350000159
在一些实施例，所述基团与经修饰的抗体或其抗原结合片段上的叠氮化物反应。在一些实施例，所述活性基团是炔烃，例如
Figure BDA00031690923500001510
其可通过点击化学与叠氮化物(例如
Figure BDA00031690923500001511
)反应，以形成点击化学产物，例如
Figure BDA0003169092350000161
在一些实施例，所述活性基团是炔烃，例如
Figure BDA0003169092350000162
其可通过点击化学与叠氮化物(例如
Figure BDA0003169092350000163
)反应，以形成点击化学产物，例如
Figure BDA0003169092350000164
在一些实施例，所述活性基团是官能团，例如
Figure BDA0003169092350000165
其与抗体或其抗原结合片段上的半胱氨酸残基反应，与其形成键，例如
Figure BDA0003169092350000166
其中Ab是指抗体或其抗原结合片段，S是指半胱氨酸残基上的S原子，所述官能团通过此半胱氨酸残基上的S原子与Ab结合。在一些实施例，所述活性基团是官能团，例如
Figure BDA0003169092350000167
其与抗体或其抗原结合片段上的赖氨酸残基反应，与其形成键，例如
Figure BDA0003169092350000168
其中Ab是指抗体或其抗原结合片段，NH是指赖氨酸侧链残基上的NH原子，所述官能团通过此赖氨酸侧链残基上的NH原子与Ab结合。
本发明使用的短语“可生物降解的基团部分”是指在体内降解为无毒的、可生物相容的组分的基团部分，所述组分可通过普通生物过程从体内清除。在一些实施方案，可生物降解的基团部分在约90天或更短，约60天或更短，或约30天或更短的时间内在体内完全或基本上降解，其中降解的程度基于所述可生物降解基团部分的质量损失百分比，其中完全降解对应于100％质量损失。示例性可生物降解的基团部分包括但不限于脂族聚酯类，例如聚(ε-己内酯)(PCL)，聚(3-羟基丁酸酯)(PHB)，聚(乙醇酸)(PGA)，聚(乳酸)(PLA)和其与乙醇酸的共聚物(即聚(D,L-丙交酯-共乙交酯)(PLGA)(Vert M,Schwach G,Engel R andCoudane J(1998)J Control Release 53(1-3):85-92；Jain R A(2000)Biomaterials 21(23):2475-2490；Uhrich KE,Cannizzaro S M,Langer R S and Shakesheff K M(1999)Chemical Reviews 99(11):3181-3198；和Park T G(1995)Biomaterials 16(15):1123-1130，各文献均通过引用其全部内容并入本发明)。
本发明使用的短语“有效量”、“生理学有效量”或“预防有效量”是指当向需要此种治疗的受试者施用时足以实现治疗效果的化合物的量。活性物质的“生理学有效量”表示有效量的所述活性物质对患者具有显著的、外部可观察的效果。因此，生理有效量影响患者中的一种或多种特征(例如表型)，而无需专用设备来确定所述效果。例如，通过减少待治疗病症的一种或多种症状，本发明公开的生理学有效量的化合物对患者的行为具有显著的、外部可观察的作用。因此，可通过观察患者并观察患者是否由于活性物质而发生了变化来确定是否已施用了有效量的活性物质。
本发明使用的短语“结合剂连接体”、或“BL”是指使结合剂(例如，抗体或其抗原结合片段)与本发明所述的有效负载化合物(例如，双八氢菲羧酰胺类化合物)、以及任选地与一个或多个侧链化合物连接、结合或键合的任何二价、三价、或多价基团或基团部分。通常，本发明所述的抗体偶联物的合适的结合剂连接体是足以稳定以利用抗体的循环半衰期，并且同时能够在抗原介导的偶联物内化后释放其有效负载的那些。连接体可以是可切割的或不可切割的。可切割的连接体是内化后由细胞内代谢切割的连接体，例如通过水解、还原或酶促反应进行切割。不可切割的连接体是通过内化后抗体的溶酶体降解来释放附接的有效负载的连接体。合适的连接体包括但不限于酸不稳定连接体，水解不稳定连接体，酶促可切割连接体，还原不稳定连接体，自降解(self-immolative)连接体和不可切割连接体。合适的连接体还包括但不限于，是或包含肽类，葡糖苷酸类，琥珀酰亚胺-硫醚类，聚乙二醇(PEG)单元类，腙类，马来酰亚胺(mal)-己酰单元类，二肽单元类，缬氨酸-瓜氨酸单元类，和对氨基苄基(PAB)单元类的那些。在一些实施方案，所述结合剂连接体(BL)包含通过活性连接体(RL)的活性基团(RG)与结合剂(例如，抗体、经修饰的抗体、或其抗原结合片段)的活性部分进行反应形成的基团部分。
在一些实施例，所述BL包含以下基团部分：
Figure BDA0003169092350000171
或所述三唑基区域异构体，其中
Figure BDA0003169092350000172
是与所述结合剂连接的键。在一些实施例，所述BL包含以下基团部分：
Figure BDA0003169092350000173
其中
Figure BDA0003169092350000174
是与所述结合剂连接的键。在一些实施例，所述BL包含以下基团部分：
Figure BDA0003169092350000175
或所述三唑基区域异构体，其中
Figure BDA0003169092350000176
是与所述结合剂连接的键。在一些实施例，所述BL包含以下基团部分：
Figure BDA0003169092350000177
其中
Figure BDA0003169092350000181
是与所述抗体或其抗原结合片段的所述半胱氨酸连接的键。在一些实施例，所述BL包含以下基团部分：
Figure BDA0003169092350000182
其中
Figure BDA0003169092350000183
是与所述抗体或其抗原结合片段的所述赖氨酸连接的键。
化合物或有效负载
在一些实施方案，本发明提供了具有式(I)所示结构的化合物：
Figure BDA0003169092350000184
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，其中，
Q1和Q2各自独立地为–CH2–、–C(O)–、–C(H)(OH)–、或–C(OH)2–；
W是–CH2–、–N(H)–、或–O–；
R1是–N(H)R4或–N(R5)2；
R2是–N(H)R4；
各R4，在每种情况下，分别独立地为H、氨基酸残基、N-烷基氨基酸残基、肽残基、可生物降解的基团部分、烷基、取代的烷基、酰基、或取代的酰基；
R5是烷基、芳基、芳基烷基、杂环烷基、或取代的杂环烷基，其中各杂环烷基或取代的杂环烷基分别包含选自N和O的1、2或3个杂原子，并且当被取代时包含至少一个–OH和–CH2OH、或至少一个伯氮或仲氮；和
各R6分别独立地为卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、–CN、O-葡萄糖、O-氨基酸残基、或O-PEGn1，其中各n分别为从0至14的整数，和各n1分别为从1至12的整数。
在式I的一个实施方案中，Q1是–CH2–，Q2是–C(O)–，和W是–CH2–。在式I的一个实施方案中，Q1是–CH2–，Q2是–C(O)–，和W是–O–。在式I的一个实施方案中，Q1是–CH2–，Q2是–C(O)–，和W是–NH–。在本段的任一实施方案中，R1是–N(H)R4或–N(R5)2，和R2是–N(H)R4。在本段的任一实施方案中，R1是–N(H)R4，和R2是–N(H)R4。在本段的任一实施方案中，R1是–N(R5)2，和R2是–N(H)R4。在本段的任一实施方案中，各R4在每种情况下，分别独立地为H、氨基酸残基、N-烷基氨基酸残基、肽残基、可生物降解的基团部分、烷基、取代的烷基、酰基、或取代的酰基。在本段的任一实施方案中，各R4在每种情况下，分别独立地为H、氨基酸残基、N-烷基氨基酸残基、肽残基、可生物降解的基团部分、或烷基。在本段的任一实施方案中，各R4分别为H。在本段的任一实施方案中，各R4在每种情况下，分别独立地为氨基酸残基。在本段的任一实施方案中，各R4在每种情况下，分别独立地为N-烷基氨基酸残基。在本段的任一实施方案中，各R4在每种情况下，分别独立地为肽残基。在本段的任一实施方案中，各R4在每种情况下，分别独立地为可生物降解的基团部分。在本段的任一实施方案中，各R4在每种情况下，分别独立地为烷基。在本段的任一实施方案中，各R4在每种情况下，分别独立地为取代的烷基。在本段的任一实施方案中，各R4在每种情况下，分别独立地为酰基。在本段的任一实施方案中，各R4在每种情况下，分别独立地为取代的酰基。在本段的任一实施方案中，一个R4是H，和另一个R4是氨基酸残基。在本段的任一实施方案中，一个R4是H，和另一个R4是肽残基。在本段的任一实施方案中，一个R4是H，和另一个R4是取代的烷基。在本段的任一实施方案中，一个R4是H，和另一个R4是酰基。在本段的任一实施方案中，一个R4是H，和另一个R4是取代的酰基。在本段的任一实施方案中，R5是烷基、芳基、芳基烷基、杂环烷基、或取代的杂环烷基，其中各杂环烷基或取代的杂环烷基分别包含选自N和O的1、2或3个杂原子，并且当被取代时包含至少一个–OH和–CH2OH、或至少一个伯氮或仲氮。在本段的任一实施方案中，R5是烷基。在本段的任一实施方案中，R5是芳基。在本段的任一实施方案中，R5是芳基烷基。在本段的任一实施方案中，R5是杂环烷基。在本段的任一实施方案中，R5是取代的杂环烷基。在本段的任一实施方案中，R5是杂环烷基，和杂环烷基包含选自N和O的1个杂原子。在本段的任一实施方案中，R5是杂环烷基，和杂环烷基包含1个N原子。在本段的任一实施方案中，R5是杂环烷基，和杂环烷基包含1个O原子。在本段的任一实施方案中，R5是杂环烷基，和杂环烷基包含选自N和O的2个杂原子。在本段的任一实施方案中，R5是杂环烷基，和杂环烷基包含2个N原子。在本段的任一实施方案中，R5是杂环烷基，和杂环烷基包含2个O原子。在本段的任一实施方案中，R5是杂环烷基，和杂环烷基包含1个N原子和1个O原子。在本段的任一实施方案中，R5是杂环烷基，和杂环烷基包含选自N和O的3个杂原子。在本段的任一实施方案中，R5是杂环烷基，和杂环烷基包含3个N原子。在本段的任一实施方案中，R5是杂环烷基，和杂环烷基包含2个N原子和1个O原子。在本段的任一实施方案中，R5是取代的杂环烷基并包含选自N和O的1个杂原子。在本段的任一实施方案中，R5是取代的杂环烷基并包含1个N原子。在本段的任一实施方案中，R5是取代的杂环烷基并包含1个O原子。在本段的任一实施方案中，R5是取代的杂环烷基并包含选自N和O的2个杂原子。在本段的任一实施方案中，R5是取代的杂环烷基并包含2个N原子。在本段的任一实施方案中，R5是取代的杂环烷基并包含2个O原子。在本段的任一实施方案中，R5是取代的杂环烷基并包含1个N原子和1个O原子。在本段的任一实施方案中，R5是取代的杂环烷基并包含选自N和O的3个杂原子。在本段的任一实施方案中，R5是取代的杂环烷基并包含3个N原子。在本段的任一实施方案中，R5是取代的杂环烷基并包含2个N原子和1个O原子。在本段的任一实施方案中，R5是取代的杂环烷基并包含选自N和O的1个杂原子，如上所述，并包含至少一个–OH和–CH2OH。在本段的任一实施方案中，R5是取代的杂环烷基并包含选自N和O的2个杂原子，如上所述，并包含至少一个–OH和–CH2OH。在本段的任一实施方案中，R5是取代的杂环烷基并包含选自N和O的3个杂原子，如上所述，并包含至少一个–OH和–CH2OH。在本段的任一实施方案中，R5是取代的杂环烷基并包含选自N和O的1个杂原子，如上所述，并包含至少一个伯氮。在本段的任一实施方案中，R5是取代的杂环烷基并包含选自N和O的2个杂原子，如上所述，并包含至少一个伯氮。在本段的任一实施方案中，R5是取代的杂环烷基并包含选自N和O的3个杂原子，如上所述，并包含至少一个伯氮。在本段的任一实施方案中，R5是取代的杂环烷基并包含选自N和O的1个杂原子，如上所述，并包含至少一个仲氮。在本段的任一实施方案中，R5是取代的杂环烷基并包含选自N和O的2个杂原子，如上所述，并包含至少一个仲氮。在本段的任一实施方案中，R5是取代的杂环烷基并包含选自N和O的3个杂原子，如上所述，并包含至少一个仲氮。在本段的任一实施方案中，各R6分别独立地为卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、–CN、O-葡萄糖、O-氨基酸残基、或O-PEGn1，其中各n分别为从0至14的整数，和各n1分别为从1至12的整数。在本段的任一实施方案中，各R6分别独立地为卤素。在本段的任一实施方案中，各R6分别独立地为C1-6烷基。在本段的任一实施方案中，各R6分别独立地为C1-6烷氧基。在本段的任一实施方案中，各R6分别为–CN。在本段的任一实施方案中，各R6分别独立地为O-葡萄糖。在本段的任一实施方案中，各R6分别独立地为O-氨基酸残基。在本段的任一实施方案中，各R6分别独立地为O-PEGn1，其中各n1分别为从1至12的整数。在本段的任一实施方案中，各R6分别独立地为O-PEGn1，其中各n1分别为1。在本段的任一实施方案中，各R6分别独立地为O-PEGn1，其中各n1分别为2。在本段的任一实施方案中，各R6分别独立地为O-PEGn1，其中各n1分别为3。在本段的任一实施方案中，各R6分别独立地为O-PEGn1，其中各n1分别为4。在本段的任一实施方案中，各R6分别独立地为O-PEGn1，其中各n1分别为5。在本段的任一实施方案中，各R6分别独立地为O-PEGn1，其中各n1分别为6。在本段的任一实施方案中，各R6分别独立地为O-PEGn1，其中各n1分别为7。在本段的任一实施方案中，各R6分别独立地为O-PEGn1，其中各n1分别为8。在本段的任一实施方案中，各R6分别独立地为O-PEGn1，其中各n1分别为9。在本段的任一实施方案中，各R6分别独立地为O-PEGn1，其中各n1分别为10。在本段的任一实施方案中，各R6分别独立地为O-PEGn1，其中各n1分别为11。在本段的任一实施方案中，各R6分别独立地为O-PEGn1，其中各n1分别为12。在本段的任一实施方案中，各R6分别独立地为卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、–CN、O-葡萄糖、O-氨基酸残基、或O-PEGn1，其中各n分别为从0至14的整数，和各n1分别为从1至12的整数，及其任何组合。譬如，在一个实施方案，一个R6是卤素，和另一个R6是C1-6烷基。如本领域技术人员将理解的，已考虑了其他示例性R6组合实施方案。在本段的任一实施方案中，如本领域技术人员所理解的，适合作为氨基酸残基或组合为肽残基的氨基酸包括丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、硒代半胱氨酸、甘氨酸、脯氨酸、精氨酸、组氨酸、赖氨酸、天冬氨酸和谷氨酸，以及其作为肽残基任何组合。本领域技术人员将认识到，氨基酸残基可以是非手性的或手性的，例如，L-氨基酸残基或D-氨基酸残基。本领域技术人员将认识到，肽残基可以是非手性的或手性的，例如，包括外消旋DL-氨基酸或非外消旋D-或L-氨基酸及其非对映异构体混合物。在本段的任一实施方案中，合适的芳基烷基基团部分包括苄基、苯乙基、苯丙基、α-甲基苄基及其每种立体异构体，以及2-苯丙基及其每种立体异构体。在本段的任一实施方案中，芳基烷基是苄基。在本段的任一实施方案中，芳基烷基是苯乙基。在本段的任一实施方案中，芳基烷基是苯丙基。在本段的任一实施方案中，芳基烷基是α-甲基苄基及其每种立体异构体。在本段的任一实施方案中，芳基烷基是(R)-α-甲基苄基。在本段的任一实施方案中，芳基烷基是(S)-α-甲基苄基。在本段的任一实施方案中，芳基烷基是2-苯丙基(即，CH3CH(Ph)CH2–)及其每种立体异构体。在本段的任一实施方案中，芳基烷基是(R)-2-苯丙基。在本段的任一实施方案中，芳基烷基是(S)-2-苯丙基。在本段的任一实施方案中，卤素是选自由F、Cl、Br和I组成的组。在本段的任一实施方案中，卤素是F。在本段的任一实施方案中，卤素是Cl。在本段的任一实施方案中，卤素是Br。在本段的任一实施方案中，卤素是I。在本段的任一实施方案中，C1-6烷基是选自由以下组成的组：甲基、乙基、丙基、丁基、戊基和己基，及其构造异构体。在本段的任一实施方案中，C1-6烷基是甲基或–CH3。在本段的任一实施方案中，C1-6烷基是乙基或–CH2CH3。在本段的任一实施方案中，C1-6烷基是丙基或其构造异构体。在本段的任一实施方案中，C1-6烷基是丁基或其构造异构体。在本段的任一实施方案中，C1-6烷基是戊基或其构造异构体。在本段的任一实施方案中，C1-6烷基是己基或其构造异构体。在本段的任一实施方案中，C1-6烷氧基是选自由以下组成的组：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基和己氧基，及其构造异构体。在本段的任一实施方案中，C1-6烷氧基是甲氧基或–OCH3。在本段的任一实施方案中，C1-6烷氧基是乙氧基或–OCH2CH3。在本段的任一实施方案中，C1-6烷氧基是丙氧基或其构造异构体。在本段的任一实施方案中，C1-6烷氧基是丁氧基或其构造异构体。在本段的任一实施方案中，C1-6烷氧基是戊氧基或其构造异构体。在本段的任一实施方案中，C1-6烷氧基是己氧基或其构造异构体。
在式I的一个实施方案中，Q1是–C(H)(OH)–，Q2是–C(O)–，和W是–CH2–。在式I的一个实施方案中，Q1是–C(H)(OH)–，Q2是–C(O)–，和W是–O–。在式I的一个实施方案中，Q1是–C(H)(OH)–，Q2是–C(O)–，和W是–NH–。在本段的任一实施方案中，R1、R2、R4、R5和R6均如上文在式I的上下文中所述。
在式I的一个实施方案中，Q1是–C(O)–，Q2是–C(O)–，和W是–CH2–。在式I的一个实施方案中，Q1是–C(O)–，Q2是–C(O)–，和W是–O–。在式I的一个实施方案中，Q1是–C(O)–，Q2是–C(O)–，和W是–NH–。在本段的任一实施方案中，R1、R2、R4、R5和R6均如上文在式I的上下文中所述。
在式I的一个实施方案中，Q1是–C(O)–，Q2是–CH2–，和W是–CH2–。在式I的一个实施方案中，Q1是–C(O)–，Q2是–CH2–，和W是–O–。在式I的一个实施方案中，Q1是–C(O)–，Q2是–CH2–，和W是–NH–。在本段的任一实施方案中，R1、R2、R4、R5和R6均如上文在式I的上下文中所述。
在式I的一个实施方案中，Q1是–C(O)–，Q2是–C(H)(OH)–，和W是–CH2–。在式I的一个实施方案中，Q1是–C(O)–，Q2是–C(H)(OH)–，和W是–O–。在式I的一个实施方案中，Q1是–C(O)–，Q2是–C(H)(OH)–，和W是–NH–。在本段的任一实施方案中，R1、R2、R4、R5和R6均如上文在式I的上下文中所述。
在一些实施方案，本发明提供了具有式(II)所示结构的化合物或有效负载：
Figure BDA0003169092350000221
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式。在本段的任一实施方案中，R1、R2、R4、R5和R6均如上文在式I的上下文中所述。
在一些实施方案，本发明提供了具有式(III)所示结构的化合物或有效负载：
Figure BDA0003169092350000222
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式。在本段的任一实施方案中，R1、R2、R4、R5和R6均如上文在式I的上下文中所述。
在一些实施方案，本发明提供了式I、II、或III所示化合物或有效负载，其中R1是–N(H)R4。在一些实施方案，本发明提供了式I、II、或III所示化合物或有效负载，其中R1是–N(R5)2。在本段的任一实施方案中，R2、R4、R5和R6均如上文在式I的上下文中所述。
在一些实施方案，本发明提供了式I、II、或III所示化合物或有效负载，其中R1是–NH2；和R4是氨基酸残基、N-烷基氨基酸残基、肽残基、可生物降解的基团部分、烷基、取代的烷基、酰基、或取代的酰基。在一个实施方案，本发明提供了式I、II、或III所示化合物或有效负载，其中R1是–NH2；和R4是氨基酸残基。在一个实施方案，本发明提供了式I、II、或III所示化合物或有效负载，其中R1是–NH2；和R4是N-烷基氨基酸残基。在一个实施方案，本发明提供了式I、II、或III所示化合物或有效负载，其中R1是–NH2；和R4是肽残基。在一个实施方案，本发明提供了式I、II、或III所示化合物或有效负载，其中R1是–NH2；和R4是可生物降解的基团部分。在一个实施方案，本发明提供了式I、II、或III所示化合物或有效负载，其中R1是–NH2；和R4是烷基。在一个实施方案，本发明提供了式I、II、或III所示化合物或有效负载，其中R1是–NH2；和R4是取代的烷基。在一个实施方案，本发明提供了式I、II、或III所示化合物或有效负载，其中R1是–NH2；和R4是酰基。在一个实施方案，本发明提供了式I、II、或III所示化合物或有效负载，其中R1是–NH2；和R4是取代的酰基。在本段的任一实施方案中，合适的氨基酸残基如上文在式I的上下文中所述。在本段的任一实施方案中，合适的肽残基均如上文在式I的上下文中所述。在一个实施方案，本发明提供了化合物或有效负载，其中R1是–NH2；和R4是氨基酸残基，和所述氨基酸残基是选自由以下组成的组：丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、硒代半胱氨酸、甘氨酸、脯氨酸、精氨酸、组氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、和谷氨酸。在一个实施方案，本发明提供了化合物或有效负载，其中R1是–NH2；和R4是肽残基，其中所述肽残基包含选自由以下组成的组的氨基酸残基：丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、硒代半胱氨酸、甘氨酸、脯氨酸、精氨酸、组氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、和谷氨酸。在本段的任一实施方案中，R6如上文在式I的上下文中所述。
在一些实施方案，本发明提供了化合物或有效负载，其中R1和R2均为–N(H)R4。在一个实施方案，本发明提供了化合物或有效负载，其中R1和R2均为–N(H)R4，和R4，在每种情况下，分别独立地为氨基酸残基；和所述氨基酸残基是选自由以下组成的组：丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、硒代半胱氨酸、甘氨酸、脯氨酸、精氨酸、组氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、和谷氨酸。
在某些实施方案，本发明提供了选自由下列组成的组的化合物或有效负载：
Figure BDA0003169092350000231
Figure BDA0003169092350000241
Figure BDA0003169092350000251
Figure BDA0003169092350000261
其药学上可接受的盐、或溶剂化物。
在一个实施方案，本发明提供了具有以下结构的化合物：
Figure BDA0003169092350000262
或其药学上可接受的盐、或溶剂化物。
本发明还提供了选自由下列组成的组的化合物或有效负载：
Figure BDA0003169092350000271
Figure BDA0003169092350000281
结合剂
用于本发明提供的任何偶联物的合适结合剂包括但不限于抗体类、淋巴因子类、激素类、生长因子类、病毒受体类、白介素类、或任何其他细胞结合分子类或物质类或肽结合分子类或物质类。
在一些实施方案，所述结合剂是抗体或其抗原结合片段。所述抗体可以是本领域技术人员已知的任何形式。本发明使用的术语“抗体”是指包含至少一个互补决定区(CDR)的任何抗原结合分子或分子复合物，所述互补决定区(CDR)与特定抗原特异性结合或相互作用。术语“抗体”包括免疫球蛋白分子，所述免疫球蛋白分子包含四条多肽链，通过二硫键相互连接的两条重(H)链和两条轻(L)链，以及其多聚体(例如IgM)。每条重链包含重链可变区(本发明缩写为HCVR或VH)和重链恒定区。所述重链恒定区包含三个结构域，CH1、CH2和CH3。每条轻链包含轻链可变区(本发明缩写为LCVR或VL)和轻链恒定区。所述轻链恒定区包含一个结构域(CL1)。所述VH区和VL区可进一步细分为高变区，称为互补决定区(CDR)，散布有更保守的区域，称为框架区(FR)。各VH和VL分别由三个CDR和四个FR组成，按照以下顺序从氨基端到羧基端排列：FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3，FR4。在本发明的不同实施方案中，适用于本发明化合物或有效负载的所述抗体(或其抗原结合部分)的FR可以与人种系序列相同，或者可以是天然、或人工修饰的。可基于两个或更多个CDR的并列分析来定义氨基酸共有序列。本发明使用的术语“抗体”还包括完整抗体分子的抗原结合片段。本发明使用的术语抗体的“抗原结合部分”，抗体的“抗原结合片段”等包括任何天然存在的、可酶促得到的、合成的、或基因工程化的多肽或糖蛋白，其特异性结合抗原以形成复合物。抗体的抗原结合片段可以例如使用任何合适的标准技术，例如涉及操纵和表达编码抗体可变结构域和任选恒定结构域的DNA的蛋白水解消化或重组基因工程技术，由完整抗体分子衍生得到。此种DNA是已知的和/或容易从例如商业来源，DNA文库(包括例如噬菌体-抗体文库)得到，或可以合成得到。可通过化学方法或通过使用分子生物学技术对DNA进行测序和操作，例如，将一个或多个可变结构域和/或恒定结构域排列成合适的构型，或引入密码子，产生半胱氨酸残基，修饰、添加或删除氨基酸等。抗原结合片段的非限制性实例包括：(i)Fab片段；(ii)F(ab')2片段；(iii)Fd片段；(iv)Fv片段；(v)单链Fv(scFv)分子；(vi)dAb片段；和(vii)由模拟抗体高变区(例如，分离的互补决定区(CDR)，例如CDR3肽)或受约束的FR3-CDR3-FR4肽的氨基酸残基组成的最小识别单元。其他工程化分子，如结构域特异性抗体类，单结构域抗体类，结构域缺失抗体类，嵌合抗体类，CDR嫁接抗体类，双抗体类，三抗体类，四抗体类，微抗体类，纳米抗体类(例如，一价纳米抗体类，二价纳米抗体类等)，小型模块化免疫药物(SMIP)和鲨鱼可变IgNAR结构域亦均包含在本发明所使用的表述“抗原结合片段”内。抗体的抗原结合片段通常包含至少一个可变结构域。所述可变结构域可具有任何尺寸或氨基酸组成，并且通常包含至少一个CDR，所述至少一个CDR与一个或多个框架序列相邻或在框内。在具有与VL结构域相关的VH结构域的抗原结合片段中，所述VH和VL结构域可以任何合适的排列相对于彼此进行定位。譬如，所述可变区可以是二聚的并含有VH-VH、VH-VL或VL-VL二聚体。或者，所述抗体的抗原结合片段可包含单体VH或VL结构域。在某些实施方案，抗体的抗原结合片段可包含至少一个可变结构域，所述可变结构域与至少一个恒定结构域共价连接。可在本发明公开的抗体的抗原结合片段内发现的可变结构域和恒定结构域的非限制性示例性构型包括：(i)VH-CH1；(ii)VH-CH2；(iii)VH-CH3；(iv)VH-CH1-CH2；(v)VH-CH1-CH2-CH3；(vi)VH-CH2-CH3；(vii)VH-CL；(viii)VL-CH1；(ix)VL-CH2；(x)VL-CH3；(xi)VL-CH1-CH2；(xii)VL-CH1-CH2-CH3；(xiii)VL-CH2-CH3；和(xiv)VL-CL。在可变结构域和恒定结构域的任何构型中，包括上文列出的任何示例性构型，所述可变结构域和恒定结构域可以彼此直接连接或可以通过完整或部分铰链或连接体区域进行连接。铰链区可由至少2个(例如，5、10、15、20、40、60个或更多个)氨基酸组成，所述氨基酸导致单个多肽分子中相邻可变结构域和/或恒定结构域之间的柔性或半柔性连接。与完整的抗体分子一样，抗原结合片段可以是单特异性或多特异性的(例如，双特异性的)。抗体的多特异性抗原结合片段通常包含至少两个不同的可变结构域，其中每个可变结构域均能够特异性结合单独的抗原或结合同一抗原上的不同表位。任何多特异性抗体形式，包括本发明公开的示例性双特异性抗体形式，均可使用本领域可用的常规技术，适于在本发明抗体的抗原结合片段上下文中使用。在本发明所述的某些实施方案中，本发明所述抗体是人抗体。本发明使用的术语“人抗体”旨在包括具有衍生自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。本发明的人抗体可包括不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变而引入的突变)，例如在CDR中，特别是在CDR3中。然而，本发明使用的术语“人抗体”不旨在包括其中衍生自另一种哺乳动物物种(例如小鼠)的种系的CDR序列已移植到人框架序列上的抗体。术语“人抗体”不包括在天然存在的、未经修饰的生物体中通常不经修饰或人为干预/操作而存在的天然存在的分子。在一些实施方案，本发明所述抗体可以是重组人抗体。本发明使用的术语“重组人抗体”旨在包括通过重组方式制备、表达、产生或分离的所有人抗体，例如使用转染到宿主细胞中的重组表达载体表达的抗体(下文进一步描述)；从重组、组合人抗体文库分离的抗体(下文进一步描述)；从动物(例如小鼠)分离的抗体，所述动物是人免疫球蛋白基因的转基因动物(参见例如，Taylor et al.(1992)Nucl.Acids Res.20:6287-6295)；或通过涉及将人免疫球蛋白基因序列剪接到其他DNA序列的任何其他方法制备、表达、产生或分离的抗体。此类重组人抗体具有衍生自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区。然而，在某些实施方案，对此种重组人抗体进行体外诱变(或者，当使用转基因人Ig序列的动物时，进行体内体细胞诱变)，并因此重组抗体的所述VH区和VL区的氨基酸序列是衍生自人种系VH和VL序列并与之相关、但在体内可不天然存在于人抗体种系库中的序列。人抗体可以与铰链异质性相关的两种形式存在。在一种形式中，免疫球蛋白分子包含约150-160kDa的稳定四链构建体，其中二聚体通过链间重链二硫键连接在一起。在第二种形式中，所述二聚体不通过链间二硫键连接，并且形成约75-80kDa的分子，其由共价偶联的轻链和重链(半抗体)组成。即使在亲和纯化后，这些形式也极难分离。在各种完整IgG同型中出现第二种形式的频率是由于但不限于，与抗体的铰链区同型相关的结构差异。人IgG4铰链的铰链区中的单个氨基酸置换可显著地将第二种形式(Angaletal.(1993)Molecular Immunology 30:105)的出现降低至通常使用人IgG1铰链观察到的水平。本发明公开内容包括在铰链区、CH2区或CH3区中具有一个或多个突变的抗体，所述突变可能是例如在生成中所需的，以提高所需抗体形式的产量。本发明所述抗体可以是分离的抗体。本发明使用的“分离的抗体”是指已经从其天然环境的至少一种组分中鉴定和分离和/或回收的抗体。例如，出于本发明目的，已从生物体的至少一种组分或从其中天然存在或天然产生的抗体的组织或细胞中分离或移去的抗体是“分离的抗体”。分离的抗体还包括重组细胞内的原位抗体。分离的抗体是已经过至少一个纯化或分离步骤的抗体。根据某些实施方案，分离的抗体可以基本上不含其他细胞材料和/或化学物质。与衍生抗体的相应种系序列相比，本发明使用的抗体可在所述重链和轻链可变结构域的框架和/或CDR区中包含一个或多个氨基酸置换、插入和/或缺失。通过将本发明公开的氨基酸序列与可从例如公共抗体序列数据库获得的种系序列进行比较，可容易地确定此类突变。本发明包括抗体及其抗原结合片段，其衍生自本发明公开的任何氨基酸序列，其中一个或多个框架和/或CDR区内的一个或多个氨基酸突变为衍生抗体的种系序列的相应残基，或突变为另一个人种系序列的相应残基，或突变为相应种系残基的保守氨基酸置换(此类序列变化在本发明中统称为“种系突变”)。本领域普通技术人员从本发明公开的重链和轻链可变区序列开始，可生成许多抗体和抗原结合片段，所述抗体和抗原结合片段包含一个或多个个体种系突变或其组合。在某些实施方案，VH和/或VL结构域内的所有框架和/或CDR残基均突变回在衍生抗体的原始种系序列中发现的残基。在其他实施方案，仅有某些残基突变回原始种系序列，例如，仅在FR1的前8个氨基酸内或在FR4的最后8个氨基酸内发现的突变残基，或仅在CDR1、CDR2或CDR3中发现的突变残基。在其他实施方案，将一个或多个框架和/或CDR残基突变为不同种系序列(即，种系序列不同于最初衍生抗体的种系序列)的相应残基。此外，本发明所述抗体可包含框架和/或CDR区内的两个或更多个种系突变的任何组合，例如，其中某些个体残基突变为特定种系序列的相应残基，而某些与原始种系序列不同的其他残基保持或突变为不同种系序列的相应残基。一旦得到，可容易地测试含有一个或多个种系突变的抗体和抗原结合片段的一种或多种所需特性，例如改善的结合特异性，增加的结合亲和力，改善或增强的拮抗或激动生物学特性(视情况而定)，降低的免疫原性等。以这种一般方式得到的抗体和抗原结合片段均包括在本发明中。可用于本发明化合物或有效负载的抗体还包括此类抗体，其包含具有一个或多个保守置换的本发明公开的HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列中任一个的变体。术语“表位”是指与抗体分子的可变区中被称为互补位的特定抗原结合位点相互作用的抗原决定簇。单个抗原可具有一个以上的表位。因此，不同的抗体可结合抗原上的不同区域并且可具有不同的生物学效应。表位可以是构象的或线性的。构象表位是由线性多肽链不同区段在空间上并列的氨基酸产生。线性表位是由多肽链中相邻氨基酸残基产生。在某些实施方案，表位可包括抗原上的糖类、磷酰基类或磺酰基类基团部分。
在某些实施方案，所述抗体包含轻链。在某些实施方案，所述轻链是κ轻链。在某些实施方案，所述轻链是λ轻链。在某些实施方案，所述抗体包含重链。在一些实施方案，所述重链是IgA。在一些实施方案，所述重链是IgD。在一些实施方案，所述重链是IgE。在一些实施方案，所述重链是IgG。在一些实施方案，所述重链是IgM。在一些实施方案，所述重链是IgG1。在一些实施方案，所述重链是IgG2。在一些实施方案，所述重链是IgG3。在一些实施方案，所述重链是IgG4。在一些实施方案，所述重链是IgA1。在一些实施方案，所述重链是IgA2。
在一些实施方案，所述抗体是抗体片段。在一些实施方案，所述抗体片段是Fv片段。在一些实施方案，所述抗体片段是Fab片段。在一些实施方案，所述抗体片段是F(ab')2片段。在一些实施方案，所述抗体片段是Fab'片段。在一些实施方案，所述抗体片段是scFv(sFv)片段。在一些实施方案，所述抗体片段是scFv-Fc片段。
在一些实施方案，所述抗体是单克隆抗体。在一些实施方案，所述抗体是多克隆抗体。
在一些实施方案，所述抗体是嵌合抗体。在一些实施方案，所述抗体是人源化抗体。在一些实施方案，所述抗体是人抗体。
所述抗体可对认为适合本领域技术人员的任何抗原具有结合特异性。在某些实施方案，所述抗原是跨膜分子(例如受体)或生长因子。示例性抗原包括但不限于，诸如A类清道夫受体(包括清道夫受体A(SR-A或MSR1))的分子，具有胶原结构的巨噬细胞受体(MARCO)的分子，具有C型凝集素的清道夫受体(SRCL)的分子，和清道夫受体A-5(SCARA5)，COLEC12，B类巨噬细胞清道夫受体(包括CD36、LIMPII、SRBI、SRBII)，D类清道夫受体CD68，和溶酶体膜糖蛋白(LAMP)的分子，E类清道夫受体(包括凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1LOX-1和Dectin-1)的分子，F类清道夫受体(包括内皮细胞-I(SREC-I)和SREC-II以及多种表皮生长因子(EGF)样结构域(MEGF)10表达的清道夫受体)的分子，G类清道夫受体CXC趋化因子配体16(CXCL16)的分子，H类清道夫受体(包括成束蛋白(Fasciclin)、EGF样、核纤层蛋白类型EGF样和含有连接结构域的清道夫受体1(FEEL-1)和受体2(FEEL-2))的分子，I类清道夫受体CD163的分子，和用于晚期糖基化终产物(RAGE)的J类清道夫受体的分子，其他C型凝集素超家族成员(包括DEC205、CD206、Dectin-2、Mincle、DC-SIGN和DNGR-1)的分子，以及其他膜蛋白类(例如B7家族相关成员，包括V-set和含Ig结构域4(VSIG4))的分子，集落刺激因子1受体(CSF1R)的分子，去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)的分子，和淀粉样β前体样蛋白2(APLP-2)的分子。在一些实施方案，所述抗原是PRLR或HER2。在一些实施方案，所述抗体是抗PRLR抗体或抗HER2抗体。在一些实施方案，所述抗体是抗MSR1抗体。示例性抗MSR1抗体如本发明所述。
所述结合剂连接体可通过抗体或抗原结合分子内特定氨基酸处的附接而与所述结合剂(例如，抗体或抗原结合分子)连接。可在本发明此方面的上下文中使用的示例性氨基酸附接包括，例如，赖氨酸(参见例如，US 5,208,020；US 2010/0129314；Hollander etal.,Bioconjugate Chem.,2008,19:358–361；WO 2005/089808；US 5,714,586；US 2013/0101546；和US 2012/0585592)；半胱氨酸(参见例如，US2007/0258987；WO 2013/055993；WO2013/055990；WO 2013/053873；WO 2013/053872；WO 2011/130598；US 2013/0101546；和US7,750,116)；硒代半胱氨酸(参见例如，WO 2008/122039；和Hofer et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,2008,105:12451–12456)；甲酰甘氨酸(参见例如，Carrico etal.,Nat.Chem.Biol.,2007,3:321–322；Agarwal et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,2013,110:46–51，和Rabuka et al.,Nat.Protocols,2012,10:1052–1067)；非天然氨基酸(参见例如，WO 2013/068874，和WO 2012/166559)，和酸性氨基酸(参见例如，WO 2012/05982)。连接体也可通过与碳水化合物的附接而与抗原结合蛋白质偶联(参见例如，US2008/0305497，WO 2014/065661，和Ryan et al.,Food&Agriculture Immunol.,2001,13:127–130)。
在一些实施例，所述结合剂是抗体或抗原结合分子，和所述抗体通过赖氨酸残基与所述连接体连接。在一些实施方案，所述抗体或抗原结合分子通过半胱氨酸残基与所述连接体连接。
连接体还可通过基于转谷氨酰胺酶的化学酶偶联而偶联至一个或多个谷氨酰胺残基上(参见例如，Dennler et al.,Bioconjugate Chem.2014,25,569–578，和WO 2017/147542)。例如，在转谷氨酰胺酶存在下，抗体的一个或多个谷氨酰胺残基可与伯胺化合物偶联。简言之，在一些实施方案，在转谷氨酰胺酶存在下，用伯胺化合物处理具有谷氨酰胺残基(例如，Gln295残基)的抗体，如下文更详细描述的。伯胺类化合物包括例如有效负载或连接体-有效负载，其通过转谷氨酰胺酶介导的偶联直接提供抗体药物偶联物。伯胺类化合物还包括被活性基团官能化的连接体和间隔基团，随后可用进一步的化合物对其进行处理以合成抗体药物偶联物。包含谷氨酰胺残基的抗体可从天然来源分离得到或经工程改造以包含一个或多个谷氨酰胺残基而得到。用于将谷氨酰胺残基工程化为抗体多肽链(经谷氨酰胺基修饰的抗体或抗原结合分子)的技术均在本领域技术人员的技术范围内。在某些实施方案，所述抗体是无糖基化的。
在某些实施方案，所述抗体在EU编号系统中编号为295的一个或多个重链位置处包含谷氨酰胺残基。在本发明中，此位置被称为谷氨酰胺295，或称为Gln295，或称为Q295。技术人员将认识到，其是许多抗体的野生型序列中的保守谷氨酰胺残基。在其他有用的实施方案中，可将抗体设计成包含谷氨酰胺残基。修饰抗体序列以包括谷氨酰胺残基的技术均属于本领域技术人员的技术范围内(参见，例如Ausubel et al.CurrentProtoc.Mol.Biol.)。
在某些实施方案，所述抗体或经谷氨酰胺基修饰的抗体或抗原结合分子在至少一个多肽链序列中包含至少一个谷氨酰胺残基。在某些实施方案，所述抗体或经谷氨酰胺基修饰的抗体或抗原结合分子包含两个重链多肽，其中每个具有一个Gln295残基。在进一步的实施方案中，所述抗体或经谷氨酰胺基修饰的抗体或抗原结合分子在除重链295以外的位点处包含一个或多个谷氨酰胺残基。本发明包括具有本发明所述的Asn297Gln(N297Q)突变的本章节的抗体。本发明包括具有Gln55(Q55)残基的本章节的抗体。如本发明所述，残基编号是根据EU编号系统进行。
伯胺类化合物
在某些实施方案，可用于由包含谷氨酰胺的抗体(或抗原结合化合物)的转谷氨酰胺酶介导的偶联的伯胺化合物可以是普通技术人员认为有用的任何伯胺化合物。通常，伯胺化合物具有式H2N-R所示结构，其中R可以是与抗体和反应条件相容的任何基团。在某些实施方案，R是烷基、取代的烷基、杂烷基、或取代的杂烷基。
在一些实施方案，所述伯胺化合物包含活性基团或保护的活性基团。有用的活性基团包括叠氮化物类、炔烃类、环炔烃类、硫醇类、醇类、酮类、醛类、酸类、酯类、酰肼类、苯胺类、和胺类。在某些实施方案，所述活性基团选自由叠氮化物、炔烃、巯基、环炔烃、醛、和羧基组成的组。
在某些实施方案，所述伯胺化合物具有式H2N-LL-X所示结构，其中LL是二价间隔基团，和X是活性基团或保护的活性基团。在特定实施方案，LL是二价聚乙二醇(PEG)基团。在某些实施方案，X是选自由-SH、–N3、炔烃、醛和四唑组成的组。在特定实施方案，X是–N3。
在某些实施方案，所述伯胺化合物具有以下通式之一的结构：
H2N-(CH2)n-X；
H2N-(CH2CH2O)n-(CH2)p-X；
H2N-(CH2)n-N(H)C(O)-(CH2)m-X；
H2N-(CH2CH2O)n-N(H)C(O)-(CH2CH2O)m-(CH2)p-X；
H2N-(CH2)n-C(O)N(H)-(CH2)m-X；
H2N-(CH2CH2O)n-C(O)N(H)-(CH2CH2O)m-(CH2)p-X；
H2N-(CH2)n-N(H)C(O)-(CH2CH2O)m-(CH2)p-X；
H2N-(CH2CH2O)n-N(H)C(O)-(CH2)m-X；
H2N-(CH2)n-C(O)N(H)-(CH2CH2O)m-(CH2)p-X；和
H2N-(CH2CH2O)n-C(O)N(H)-(CH2)m-X；
其中n是选自1至12的整数；
m是选自0至12的整数；
p是选自0至2的整数；
和X是选自由以下组成的组：–SH、–N3、–C≡CH、–C(O)H、四唑、和以下之一：
Figure BDA0003169092350000341
在上文中，任一所述烷基(即-CH2-)基团均可任选地被例如C1-8烷基、甲基甲酰基、或–SO3H取代。在某些实施方案，所述烷基基团均是未取代的。
在某些实施方案，所述伯胺化合物是选自由以下组成的组：
Figure BDA0003169092350000342
在特定实施方案，所述伯胺化合物是：
Figure BDA0003169092350000343
在以下实施例中提供了上述反应的示例性条件。
连接体
在某些实施方案，本发明所述偶联物的连接体L部分是一个基团部分，例如二价基团部分，其将结合剂共价连接至本发明所述的有效负载化合物。在其他实施例，连接体L是将结合剂共价连接至本发明所述的有效负载化合物的三价或多价基团部分。合适的连接体可在例如Antibody-Drug Conjugates and Immunotoxins；Phillips,G.L.,Ed.；SpringerVerlag:New York,2013；Antibody-Drug Conjugates；Ducry,L.,Ed.；Humana Press,2013；Antibody-Drug Conjugates；Wang,J.,Shen,W.-C.,and Zaro,J.L.,Eds.；SpringerInternational Publishing,2015中获悉，各文献的内容通过引用其全文并入本发明。有效负载化合物包括上述式I、II和III的化合物，以及其与连接体L连接或结合后的残基，其中化合物或有效负载与连接体L的组合是连接体-有效负载(LP)。本领域技术人员将认识到，所述化合物或有效负载基团部分的某些官能团便于连接至连接体和/或结合剂。所述这些基团包括胺类、羟基类、磷酸盐/酯类和糖类。
在某些实施方案，所述连接体在生理条件下是稳定的。在某些实施方案，所述连接体是可切割的，例如，能够在酶存在下或在特定pH范围或pH值下释放至少所述化合物或有效负载部分。在一些实施方案，连接体包含酶可切割的基团部分。示例性酶可切割的基团部分包括但不限于肽键类、酯键类、腙类、和二硫键类。在一些实施方案，所述连接体包含组织蛋白酶可切割的连接体。
在一些实施方案，所述连接体包含不可切割基团部分。在一些实施方案，所述不可切割的连接体衍生自
Figure BDA0003169092350000351
或其残基。在一些实施方案，所述不可切割的连接体-有效负载是
Figure BDA0003169092350000352
或其区域异构体。在一些实施方案，所述不可切割的连接体衍生自
Figure BDA0003169092350000353
或其残基。在一些实施方案，所述不可切割的连接体-有效负载是
Figure BDA0003169092350000354
或其区域异构体。在一个实施方案，所述连接体是马来酰亚胺环己烷羧酸酯或4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷羧酸(MCC)。在所述结构中，
Figure BDA0003169092350000355
表示与结合剂连接的键。在所述结构中，在一些实施例，
Figure BDA0003169092350000356
表示由例如结合剂和连接体有效负载的反应而产生的点击化学残基。
在一些实施方案，合适的连接体包括但不限于与单一结合剂(例如抗体)的两个半胱氨酸残基进行化学键合的那些。此类连接体可用于模拟由于偶联过程而被破坏的所述抗体的二硫键。
在一些实施方案，所述连接体包含一个或多个氨基酸。合适的氨基酸包括天然、非天然的、标准、非标准的、蛋白原、非蛋白原的、和L-型或D-型α-氨基酸。在一些实施方案，所述连接体包含丙氨酸、缬氨酸、甘氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、或瓜氨酸、或其衍生物、或其组合。在某些实施方案，所述氨基酸的一个或多个侧链连接至如下所述的侧链基团。在一些实施方案，所述连接体包含缬氨酸和瓜氨酸。在一些实施方案，所述连接体包含赖氨酸、缬氨酸和瓜氨酸。在一些实施方案，所述连接体包含赖氨酸、缬氨酸和丙氨酸。在一些实施方案，所述连接体包含缬氨酸和丙氨酸。
在一些实施方案，所述连接体包含自降解(self-immolative)基团。所述自降解基团可以是技术人员已知的任何此类基团。在特定实施方案，所述自降解基团是对氨基苄基(PAB)或其衍生物。有用的衍生物包括对氨基苄氧基羰基(PABC)。本领域技术人员将认识到，自降解基团能够进行化学反应，所述化学反应从有效负载中释放连接体的剩余原子。
在一些实施方案，所述连接体是：
Figure BDA0003169092350000361
其中：
SP1是间隔基团；
SP2是间隔基团；
Figure BDA0003169092350000362
是与所述结合剂连接的一个或多个键；
Figure BDA0003169092350000363
是与所述有效负载连接的一个或多个键；
各AA分别为氨基酸；和
p1是从0至10的整数。
SP1间隔基团是将(AA)p1部分连接至结合剂(BA)或连接至与BA连接的活性基团残基的基团部分。合适的SP1间隔基团包括但不限于，包含亚烷基或聚醚或亚烷基和聚醚两者的那些基团。间隔基团的末端，例如间隔基团连接至结合剂或AA的部分，可以是衍生自活性基团部分的基团部分，所述活性基团部分用于在偶联物的化学合成过程中将抗体或AA偶联至间隔基团的目的。在某些实施方案，p1是0、1、2、3、或4。在特定实施方案，p1是0。在特定实施方案，p1是2。在特定实施方案，p1是3。在特定实施方案，p1是4。
在一些实施方案，SP1间隔基团包含亚烷基。在一些实施方案，SP1间隔基团包含C5-7亚烷基。在一些实施方案，SP1间隔基团包含聚醚。在一些实施方案，SP1间隔基团包含环氧乙烷的聚合物，例如聚乙二醇。
在一些实施方案，SP1间隔基团是：
Figure BDA0003169092350000364
其中：
RG'是活性基团RG与结合剂反应后的活性基团残基；
Figure BDA0003169092350000371
是与所述结合剂连接的键；
Figure BDA0003169092350000377
是与(AA)p1连接的键；
b是从2至8的整数；和
p1是从0至4的整数。
活性基团RG可以是本领域技术人员已知的能够与结合剂连接形成一个或多个键的任何活性基团。活性基团RG是在其结构中包含能够与结合剂反应(例如，在抗体的半胱氨酸或赖氨酸残基或叠氮化物基团部分处与抗体反应，例如在一个或多个谷氨酰胺残基处与PEG-N3官能化的抗体反应)以形成式A、B、C、D、A′、B′、C′、D′、或A″所示化合物的部分的基团部分。与结合剂偶联后，活性基团成为活性基团(RG')残基。示例性活性基团包括但不限于，包含能够与结合剂反应的卤代乙酰基、异硫氰酸酯基、琥珀酰亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺、或马来酰亚胺部分的那些活性基团。
在某些实施方案，活性基团包括但不限于炔烃类。在某些实施方案，所述炔烃是在不存在铜催化剂的情况下能够与叠氮化物进行1,3-环加成反应的炔烃，如应变炔烃。应变炔烃是适于应变促进的炔-叠氮化物环加成(SPAAC)的那些，环炔烃类，例如环辛炔类，苯并环化的炔烃类。合适的炔烃类还包括但不限于，二苯并氮杂环辛炔或
Figure BDA0003169092350000372
(DIBAC)，二苯并环辛炔或
Figure BDA0003169092350000373
(DIBO)，二芳基氮杂环辛炔酮或
Figure BDA0003169092350000374
(BARAC)，二氟化环辛炔或
Figure BDA0003169092350000375
Figure BDA0003169092350000376
(DIFO)，取代的，例如氟化炔烃类，氮杂-环炔烃类，二环[6.1.0]壬炔或
Figure BDA0003169092350000381
(BCN)，及其衍生物。特别有用的炔烃包括
Figure BDA0003169092350000382
Figure BDA0003169092350000383
在某些实施方案，所述结合剂直接连接至RG'。在某些实施方案，所述结合剂通过下面的间隔基团例如SP4连接至RG'。在特定实施方案，所述结合剂通过PEG间隔基团连接至RG'。如以下详细讨论的，在某些实施方案，所述结合剂通过采用一个或多个叠氮基进行官能化来制得。每个叠氮基基团分别能够与RG反应形成RG'。在特定实施方案，所述结合剂采用与谷氨酰胺残基连接的–PEG-N3衍生得到。本发明提供了示例性–N3衍生的结合剂，其制备方法，以及其用于与RG反应的方法。在某些实施方案，RG是适于参与1,3-环加成的炔烃，和RG'是由RG与叠氮基官能化的结合剂反应形成的1,2,3-三唑基基团部分。作为进一步的实例，在某些实施方案，RG'连接至结合剂，如
Figure BDA0003169092350000384
所示，或各区域异构体的混合物。各R和R'分别具有本发明所述定义。
SP2间隔基团是将(AA)p1部分连接至有效负载的基团部分。合适的间隔基团包括但不限于以上描述为SP1间隔基团的那些。其他合适的SP2间隔基团包括但不限于包含亚烷基或聚醚或亚烷基和聚醚两者的那些。SP2间隔基团的末端(例如，直接连接至有效负载或AA的间隔基团的部分)可以是衍生自活性基团部分的基团部分，其用于在化学合成偶联物的过程中将有效负载或AA与SP2间隔基团偶联的目的。在一些实施例，SP2间隔基团的末端(例如，直接连接至有效负载或AA的SP2间隔基团的部分)可以是活性基团部分的残基，其用于在化学合成偶联物的过程中将有效负载或AA与间隔基团偶联的目的。
在一些实施方案，SP2间隔基团是选自由–O–、–N(R6')–、–R4'–、–R5'–、–OR5'–、和–OP(O)(OR6')O–组成的组，其中：
R4'是–Z'–Y–X–；
X是选自由–O–和–N(H)–组成的组；
Y是选自由亚烷基、取代的亚烷基(包括但不限于氧代取代，即＝O)、亚杂烷基、和取代的亚杂烷基组成的组；
Z'是选自由–O–和–N(H)–组成的组；
R5'是亚杂环烷基、或取代的亚杂环烷基，其中各亚杂环烷基或取代的亚杂环烷基分别包含选自N和O的1、2或3个杂原子，包括选自由–O–、–N(H)–、和
Figure BDA0003169092350000391
组成的组的至少两个基团部分，用于连接至分子的其余部分；和
各R6'分别为–H、氨基酸残基、肽、或烷基。
在某些实施方案，SP2间隔基团是选自由以下组成的组：–O-，–N(H)–，
Figure BDA0003169092350000392
Figure BDA0003169092350000393
Figure BDA0003169092350000394
在某些实施方案，各
Figure BDA0003169092350000395
分别为与所述有效负载连接的键，和各
Figure BDA0003169092350000396
分别为与(AA)p1连接的键。
在上述通式中，各AA分别为氨基酸，或任选地为对氨基苄氧基羰基残基(PABC)，或
Figure BDA0003169092350000397
其中c是1、2、3、4、5、或6。如果存在PABC，则优选仅存在一个PABC。优选地，若PABC残基存在，则连接至(AA)p1基团中的末端AA，位于有效负载的近端。如果
Figure BDA0003169092350000398
存在，则优选c是2。优选地，如果所述
Figure BDA0003169092350000399
残基存在且c是2，则连接至(AA)p1基团中的末端AA，位于有效负载的远端。每个AA的合适氨基酸包括天然、非天然的、标准、非标准的、蛋白原、非蛋白原的、和L-型或D-型α-氨基酸。在一些实施方案，所述连接体AA包含丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、或瓜氨酸、其衍生物、或其组合。在某些实施方案，所述氨基酸的一个或多个侧链连接至如下所述的侧链基团。在一些实施方案，p1是0。在一些实施方案，p1是2。在一些实施方案，所述(AA)p1是缬氨酸-瓜氨酸。在一些实施方案，(AA)p1是瓜氨酸-缬氨酸。在一些实施方案，(AA)p1是缬氨酸-丙氨酸。在一些实施方案，(AA)p1是丙氨酸-缬氨酸。在一些实施方案，(AA)p1是缬氨酸-甘氨酸。在一些实施方案，(AA)p1是甘氨酸-缬氨酸。在一些实施方案，p1是3。在一些实施方案，(AA)p1是缬氨酸-瓜氨酸-PABC。在一些实施方案，(AA)p1是瓜氨酸-缬氨酸-PABC。在一些实施方案，所述(AA)p1是赖氨酸-缬氨酸-瓜氨酸-PABC。在一些实施方案，(AA)p1是谷氨酸-缬氨酸-瓜氨酸。在一些实施方案，(AA)p1是谷氨酰胺-缬氨酸-瓜氨酸。在一些实施方案，(AA)p1是赖氨酸-缬氨酸-丙氨酸。在一些实施方案，(AA)p1是赖氨酸-缬氨酸-瓜氨酸。在一些实施方案，p1是4。在一些实施方案，(AA)p1是谷氨酸-缬氨酸-瓜氨酸-PAB。在一些实施方案，(AA)p1是谷氨酰胺-缬氨酸-瓜氨酸-PABC。技术人员将认识到PABC是具有以下示例性结构的对氨基苄氧基羰基的残基：
Figure BDA0003169092350000401
PABC残基已被证明有助于在体外和体内切割某些连接体。
在一些实施方案，所述连接体是：
Figure BDA0003169092350000402
Figure BDA0003169092350000411
Figure BDA0003169092350000421
其中：
各
Figure BDA0003169092350000422
分别为与所述结合剂连接的键；
各
Figure BDA0003169092350000423
分别为与所述有效负载连接的键；
各R9分别为–CH3或–(CH2)3N(H)C(O)NH2；和
各A分别为–O–、–N(H)–、
Figure BDA0003169092350000424
Figure BDA0003169092350000425
Figure BDA0003169092350000426
其中ZZ是H、或氨基酸的侧链，如本发明其他地方所讨论。譬如，在一个实施方案，ZZ是C1-6烷基。作为另一实例，在一个实施方案，ZZ是C1-6杂烷基。如上所讨论，与所述结合剂连接的键可以是直接连接，或经由间隔基团连接。在某些实施方案，与所述结合剂连接的键是经由PEG间隔基团连接至所述结合剂的谷氨酰胺残基。
在一些实施方案，所述连接体是：
Figure BDA0003169092350000427
Figure BDA0003169092350000431
其中：
各
Figure BDA0003169092350000432
分别为与所述结合剂连接的键；
各
Figure BDA0003169092350000433
分别为与所述有效负载连接的键；
各R9分别为–CH3、–CH(CH3)2、或–(CH2)3N(H)C(O)NH2；
q是从1至3的整数；和
各A分别为–O–、–N(H)–、
Figure BDA0003169092350000434
Figure BDA0003169092350000441
Figure BDA0003169092350000442
其中ZZ是H、或氨基酸的侧链，如本发明其他地方所讨论；q1是从1至5的整数；和H是–O–或–NH–。譬如，在一个实施方案，ZZ是C1-6烷基。作为另一实例，在一个实施方案，ZZ是C1-6杂烷基。在一个实施方案，H是–O–。在一个实施方案，H是–NH–。如上所讨论，与所述结合剂连接的键可以是直接连接，或经由间隔基团连接。在某些实施方案，与所述结合剂连接的键是经由PEG间隔基团连接至所述结合剂的谷氨酰胺残基。
在一些实施方案，所述连接体是：
Figure BDA0003169092350000443
Figure BDA0003169092350000451
其中：
各
Figure BDA0003169092350000452
分别为与所述结合剂连接的键；
各
Figure BDA0003169092350000453
分别为与所述有效负载连接的键；
各R9分别为–CH3或–(CH2)3N(H)C(O)NH2；和
各A分别为–O–、–N(H)–、
Figure BDA0003169092350000454
Figure BDA0003169092350000455
Figure BDA0003169092350000456
其中ZZ是H、或氨基酸的侧链，如本发明其他地方所讨论。譬如，在一个实施方案，ZZ是C1-6烷基。作为另一实例，在一个实施方案，ZZ是C1-6杂烷基。如上所讨论，与所述结合剂连接的键可以是直接连接，或经由间隔基团连接。在某些实施方案，与所述结合剂连接的键是经由PEG间隔基团连接至所述结合剂的谷氨酰胺残基。
在一些实施方案，所述连接体是：
Figure BDA0003169092350000457
Figure BDA0003169092350000461
其中：
各
Figure BDA0003169092350000462
分别为与所述结合剂连接的键；
各
Figure BDA0003169092350000463
分别为与所述有效负载连接的键；
各R9分别为–CH3、–CH(CH3)2、或–(CH2)3N(H)C(O)NH2；
q是从1至3的整数；和
各A分别为–O–、–N(H)–、
Figure BDA0003169092350000464
Figure BDA0003169092350000465
Figure BDA0003169092350000466
其中ZZ是H、或氨基酸的侧链，如本发明其他地方所讨论；q1是从1至5的整数；和H是–O–或–NH–。譬如，在一个实施方案，ZZ是C1-6烷基。作为另一实例，在一个实施方案，ZZ是C1-6杂烷基。在一个实施方案，H是–O–。在一个实施方案，H是–NH–。如上所讨论，与所述结合剂连接的键可以是直接连接，或经由间隔基团连接。在某些实施方案，与所述结合剂连接的键是经由PEG间隔基团连接至所述结合剂的谷氨酰胺残基。
在以上任一个实施方案中，(AA)p1基团可用一个或多个增强基团进行修饰。有利地，所述增强基团可连接至(AA)p1中任何氨基酸的侧链。用于连接增强基团的有用氨基酸包括赖氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、和瓜氨酸。与增强基团的连接可以是与氨基酸侧链的直接连接，或者所述连接可以是经由间隔基和/或活性基团的间接连接。有用的间隔基团和活性基团包括任何上述基团。所述增强基团可以是本领域技术人员认为有用的任何基团。例如，所述增强基团可以是赋予化合物、有效负载、连接体有效负载、或抗体偶联物有益作用的任何基团，包括但不限于生物学、生化、合成、增溶、成像、检测、和反应性/活性方面作用等。在某些实施方案，所述增强基团是亲水基团。在某些实施方案，所述增强基团是环糊精。在某些实施方案，所述增强基团是烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸。环糊精可以是技术人员已知的任何环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是α-环糊精、β-环糊精、或γ-环糊精、或其混合物。在某些实施方案，所述环糊精是α-环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是β-环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是γ-环糊精。在某些实施方案，所述增强基团能够改善偶联物其余部分的溶解度。在某些实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是取代的或未取代的。在某些实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)1-5SO3H，–(CH2)n2–NH-(CH2)1- 5SO3H，–(CH2)n2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，–(CH2CH2O)m2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，–(CH2)n2–N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，–(CH2)n2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，或–(CH2CH2O)m2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n2是1、2、3、4、或5，和m2是1、2、3、4、或5。在一个实施方案，所述烷基磺酸、或亚烷基磺酸是–(CH2)1-5SO3H。在另一实施方案，所述杂烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–NH-(CH2)1-5SO3H，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2CH2O)m2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，其中m2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–N((CH2)1- 5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2CH2O)m2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中m2是1、2、3、4、或5。在一些实施方案，所述连接体是：
Figure BDA0003169092350000471
其中：
SP1是间隔基团；
SP2是间隔基团；
SP3是间隔基团，连接至(AA)p1中的一个AA；
Figure BDA0003169092350000472
是与所述结合剂连接的一个或多个键；
Figure BDA0003169092350000473
是与所述有效负载连接的一个或多个键；
Figure BDA0003169092350000481
是与所述增强基团EG连接的一个或多个键；
各AA分别为氨基酸；和
p1是从1至10的整数。
如上所讨论，与所述结合剂连接的键可以是直接连接、也可以是经由间隔基团连接。在某些实施方案，与所述结合剂连接的键是经由PEG间隔基团连接至所述结合剂的谷氨酰胺残基。
SP1间隔基团具有如上所述定义。SP2间隔基团具有如上所述定义。各(AA)p1基团分别具有如上所述定义。
SP3间隔基团是将(AA)p1部分连接至增强基团(EG)的基团部分。合适的SP3间隔基团包括但不限于包含亚烷基或聚醚、或亚烷基和聚醚两者的那些。SP3间隔基团的末端(即，直接连接至增强基团或AA的SP3间隔基团的部分)可以是衍生自活性基团部分的基团部分，其用于在化学合成偶联物的过程中将增强基团或AA与SP3间隔基团偶联的目的。在一些实施例，SP3间隔基团的末端(即，直接连接至增强基团或AA的间隔基团的部分)可以是活性基团部分的残基，其用于在化学合成偶联物的过程中将增强基团或AA与间隔基团偶联的目的。在某些实施方案，SP3是间隔基团，连接至(AA)p1中的一个且仅一个AA。在某些实施方案，SP3间隔基团连接至(AA)p1的赖氨酸残基的侧链。
在一些实施方案，SP3间隔基团是：
Figure BDA0003169092350000482
其中：
RG'是活性基团RG与增强剂EG反应后的活性基团残基；
Figure BDA0003169092350000483
是与所述增强剂连接的键；
Figure BDA0003169092350000484
是与(AA)p1连接的键；
a是从2至8的整数；和
p1是从1至4的整数。
活性基团RG可以是本领域技术人员已知的能够与增强剂连接形成一个或多个键的任何活性基团。活性基团RG是在其结构中包含能够与增强剂反应以形成式LPa、LPb、LPc、LPd、LPa′、LPb′、LPc′、LPd′、A、B、C、D、A′、B′、C′、D′、或A″所示化合物的部分的基团部分。与增强基团偶联后，活性基团成为活性基团残基(RG')。活性基团RG可以是上述任何活性基团。示例性活性基团包括但不限于，包含能够与结合剂反应的卤代乙酰基、异硫氰酸酯基、琥珀酰亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺、或马来酰亚胺部分的那些活性基团。
在某些实施方案，活性基团包括但不限于炔烃类。在某些实施方案，所述炔烃是在不存在铜催化剂的情况下能够与叠氮化物进行1,3-环加成反应的炔烃，如应变炔烃。应变炔烃是适于应变促进的炔-叠氮化物环加成(SPAAC)的那些，环炔烃类，例如环辛炔类，苯并环化的炔烃类。合适的炔烃类包括但不限于，二苯并氮杂环辛炔或
Figure BDA0003169092350000491
(DIBAC)，二苯并环辛炔或
Figure BDA0003169092350000492
(DIBO)，二芳基氮杂环辛炔酮或
Figure BDA0003169092350000493
(BARAC)，二氟化环辛炔或
Figure BDA0003169092350000494
Figure BDA0003169092350000495
(DIFO)，取代的，例如氟化炔烃类，氮杂-环炔烃类，二环[6.1.0]壬炔或
Figure BDA0003169092350000496
(BCN)，及其衍生物。特别有用的炔烃包括
Figure BDA0003169092350000497
Figure BDA0003169092350000498
在一些实施方案，所述连接体是：
Figure BDA0003169092350000499
其中：
RG'是活性基团RG与结合剂反应后的活性基团残基；
PEG是–NH–PEG4–C(O)–；
SP2是间隔基团；
SP3是间隔基团，连接至(AA)p1中的一个AA；
Figure BDA00031690923500004910
是与所述结合剂连接的一个或多个键；
Figure BDA0003169092350000501
是与所述有效负载连接的一个或多个键；
Figure BDA0003169092350000502
是与所述增强基团EG连接的一个或多个键；
各AA分别为氨基酸残基；和
p1是从1至10的整数。
如上所讨论，与所述结合剂连接的键可以是直接连接、或经由间隔基团连接。在某些实施方案，与所述结合剂连接的键是经由PEG间隔基团连接至所述结合剂的谷氨酰胺残基。
在某些实施方案，所述连接体是：
Figure BDA0003169092350000503
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，或其区域异构体，或其区域异构体的混合物，其中：
各
Figure BDA0003169092350000504
分别为与所述结合剂连接的键；
各
Figure BDA0003169092350000505
分别为与所述有效负载连接的键；
各
Figure BDA0003169092350000506
分别为与所述增强剂连接的键；
各R9分别为–CH3或–(CH2)3N(H)C(O)NH2；和
各A分别为–O–、–N(H)–、
Figure BDA0003169092350000507
Figure BDA0003169092350000511
Figure BDA0003169092350000512
其中ZZ是氢，或如本发明其他地方所讨论的氨基酸的侧链。例如，在一个实施方案，ZZ是C1-6烷基。作为另一实例，在一个实施方案，ZZ是C1-6杂烷基。在某些实施方案，1,3-环加成或SPAAC区域异构体或区域异构体的混合物衍生自用合适炔烃处理的PEG-N3衍生的抗体。譬如，在一个实施方案，所述连接体是：
Figure BDA0003169092350000513
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，或其区域异构体，或其区域异构体的混合物。作为另一实例，在一个实施方案，所述连接体是：
Figure BDA0003169092350000521
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，或其区域异构体，或其区域异构体的混合物。作为另一实例，所述连接体是：
Figure BDA0003169092350000522
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，或其区域异构体，或其区域异构体的混合物。作为另一实例，在一个实施方案，所述连接体是：
Figure BDA0003169092350000531
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，或其区域异构体，或其区域异构体的混合物。如上所述，与所述结合剂连接的键可以是直接连接、也可以是经由间隔基团连接。在某些实施方案，与所述结合剂连接的键是经由PEG间隔基团连接至所述结合剂的谷氨酰胺残基。在某些实施方案，所述增强剂是亲水基团。在某些实施方案，所述增强剂是环糊精。在某些实施方案，所述增强剂是烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸。环糊精可以是技术人员已知的任何环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是α-环糊精、β-环糊精、或γ-环糊精、或其混合物。在某些实施方案，所述环糊精是α-环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是β-环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是γ-环糊精。在某些实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)1-5SO3H，–(CH2)n2–NH-(CH2)1-5SO3H，–(CH2)n2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，–(CH2CH2O)m2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，–(CH2)n2–N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，–(CH2)n2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，或–(CH2CH2O)m2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n2是1、2、3、4、或5，和m2是1、2、3、4、或5。在一个实施方案，所述烷基磺酸、或亚烷基磺酸是–(CH2)1-5SO3H。在另一实施方案，所述杂烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–NH-(CH2)1-5SO3H，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2CH2O)m2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，其中m2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2CH2O)m2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中m2是1、2、3、4、或5。
在一些实施方案，所述连接体是：
Figure BDA0003169092350000541
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，或其区域异构体，或其区域异构体的混合物，其中：
各
Figure BDA0003169092350000542
分别为与所述结合剂连接的键；
各
Figure BDA0003169092350000543
分别为与所述增强剂连接的键；
各
Figure BDA0003169092350000544
分别为与所述有效负载连接的键；
各R9分别为–CH3或–(CH2)3N(H)C(O)NH2；和
各A分别为–O–、–N(H)–、
Figure BDA0003169092350000545
Figure BDA0003169092350000546
Figure BDA0003169092350000547
其中ZZ是H、或如本发明其他地方所讨论的氨基酸的侧链。例如，在一个实施方案，ZZ是C1-6烷基。作为另一实例，在一个实施方案，ZZ是C1-6杂烷基。如上所讨论，与所述结合剂连接的键可以是直接连接、也可以是经由间隔基团连接。在某些实施方案，与所述结合剂连接的键是经由PEG间隔基团连接至所述结合剂的谷氨酰胺残基。在某些实施方案，所述增强剂是亲水基团。在某些实施方案，所述增强剂是环糊精。在某些实施方案，所述增强剂是烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸。环糊精可以是技术人员已知的任何环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是α-环糊精、β-环糊精、或γ-环糊精、或其混合物。在某些实施方案，所述环糊精是α-环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是β-环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是γ-环糊精。在某些实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)1-5SO3H，–(CH2)n2–NH-(CH2)1-5SO3H，–(CH2)n2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，–(CH2CH2O)m2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，–(CH2)n2–N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，–(CH2)n2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，或–(CH2CH2O)m2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n2是1、2、3、4、或5，和m2是1、2、3、4、或5。在一个实施方案，所述烷基磺酸、或亚烷基磺酸是–(CH2)1-5SO3H。在另一实施方案，所述杂烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–NH-(CH2)1-5SO3H，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2CH2O)m2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，其中m2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2CH2O)m2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中m2是1、2、3、4、或5。
在一些实施方案，所述连接体是：
Figure BDA0003169092350000561
Figure BDA0003169092350000571
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，或其区域异构体，或其区域异构体的混合物，其中：
各
Figure BDA0003169092350000572
分别为与所述结合剂连接的键；
各
Figure BDA0003169092350000573
分别为与所述有效负载连接的键；
R9是–CH3或–(CH2)3N(H)C(O)NH2；和
A是–O–、–N(H)–、
Figure BDA0003169092350000574
Figure BDA0003169092350000575
其中ZZ是H、或如本发明其他地方所讨论的氨基酸的侧链。例如，在一个实施方案，ZZ是C1-6烷基。作为另一实例，在一个实施方案，ZZ是C1-6杂烷基。如上所讨论，与所述结合剂连接的键可以是直接连接，也可以是经由间隔基团连接。在某些实施方案，与所述结合剂连接的键是经由PEG间隔基团连接至所述结合剂的谷氨酰胺残基。
在一些实施方案，所述连接体是：
Figure BDA0003169092350000581
Figure BDA0003169092350000591
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，或其区域异构体，或其区域异构体的混合物，其中：
各
Figure BDA0003169092350000592
分别为与所述结合剂连接的键；
各
Figure BDA0003169092350000593
分别为与所述有效负载连接的键；
R9是–CH3或–(CH2)3N(H)C(O)NH2；和
A是–O–、–N(H)–、
Figure BDA0003169092350000601
Figure BDA0003169092350000602
其中ZZ是H、或如本发明其他地方所讨论的氨基酸的侧链。例如，在一个实施方案，ZZ是C1-6烷基。作为另一实例，在一个实施方案，ZZ是C1-6杂烷基。如上所讨论，与所述结合剂连接的键可以是直接连接，也可以是经由间隔基团连接。在某些实施方案，与所述结合剂连接的键是经由PEG间隔基团连接至所述结合剂的谷氨酰胺残基。
在一些实施方案，所述连接体是：
Figure BDA0003169092350000603
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，或其区域异构体，或其区域异构体的混合物，其中：
各
Figure BDA0003169092350000604
分别为与所述结合剂连接的键；
各
Figure BDA0003169092350000605
分别为与所述有效负载连接的键；
各
Figure BDA0003169092350000606
分别为与所述增强基团连接的键；
各R9分别为–CH3或–(CH2)3N(H)C(O)NH2；和
各A分别为–O–、–N(H)–、
Figure BDA0003169092350000611
Figure BDA0003169092350000612
Figure BDA0003169092350000613
其中ZZ是H、或如本发明其他地方所讨论的氨基酸的侧链。例如，在一个实施方案，ZZ是C1-6烷基。作为另一实例，在一个实施方案，ZZ是C1-6杂烷基。如上所讨论，与所述结合剂连接的键可以是直接连接、也可以是经由间隔基团连接。在某些实施方案，与所述结合剂连接的键是经由PEG间隔基团连接至所述结合剂的谷氨酰胺残基。在某些实施方案，所述增强剂是亲水基团。在某些实施方案，所述增强剂是环糊精。在某些实施方案，所述增强基团是烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸。环糊精可以是技术人员已知的任何环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是α-环糊精、β-环糊精、或γ-环糊精、或其混合物。在某些实施方案，所述环糊精是α-环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是β-环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是γ-环糊精。在某些实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)1-5SO3H，–(CH2)n2–NH-(CH2)1-5SO3H，–(CH2)n2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，–(CH2CH2O)m2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，–(CH2)n2–N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，–(CH2)n2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，或–(CH2CH2O)m2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n2是1、2、3、4、或5，和m2是1、2、3、4、或5。在一个实施方案，所述烷基磺酸、或亚烷基磺酸是–(CH2)1-5SO3H。在另一实施方案，所述杂烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–NH-(CH2)1-5SO3H，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2CH2O)m2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，其中m2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2CH2O)m2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中m2是1、2、3、4、或5。
在一些实施方案，所述连接体是：
Figure BDA0003169092350000621
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，或其区域异构体，或其区域异构体的混合物，其中：
各
Figure BDA0003169092350000622
分别为与所述结合剂连接的键；
各
Figure BDA0003169092350000623
分别为与所述有效负载连接的键；
各R9分别为–CH3或–(CH2)3N(H)C(O)NH2；和
各A分别为–O–、–N(H)–、
Figure BDA0003169092350000624
Figure BDA0003169092350000625
Figure BDA0003169092350000626
其中ZZ是H、或如本发明其他地方所讨论的氨基酸的侧链。例如，在一个实施方案，ZZ是C1-6烷基。作为另一实例，在一个实施方案，ZZ是C1-6杂烷基。如上所讨论，与所述结合剂连接的键可以是直接连接、也可以是经由间隔基团连接。在某些实施方案，与所述结合剂连接的键是经由PEG间隔基团连接至所述结合剂的谷氨酰胺残基。在某些实施方案，所述增强剂是亲水基团。在某些实施方案，所述增强剂是环糊精。在某些实施方案，所述增强基团是烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸。环糊精可以是技术人员已知的任何环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是α-环糊精、β-环糊精、或γ-环糊精、或其混合物。在某些实施方案，所述环糊精是α-环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是β-环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是γ-环糊精。在某些实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)1-5SO3H，–(CH2)n2–NH-(CH2)1-5SO3H，–(CH2)n2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，–(CH2CH2O)m2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，–(CH2)n2–N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，–(CH2)n2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，或–(CH2CH2O)m2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n2是1、2、3、4、或5，和m2是1、2、3、4、或5。在一个实施方案，所述烷基磺酸、或亚烷基磺酸是–(CH2)1-5SO3H。在另一实施方案，所述杂烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–NH-(CH2)1-5SO3H，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2CH2O)m2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，其中m2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2CH2O)m2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中m2是1、2、3、4、或5。
在一些实施方案，所述连接体是：
Figure BDA0003169092350000631
Figure BDA0003169092350000641
Figure BDA0003169092350000651
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，或其区域异构体，或其区域异构体的混合物，其中：
各
Figure BDA0003169092350000652
分别为与所述结合剂连接的键；
各
Figure BDA0003169092350000653
分别为与所述有效负载连接的键；和H是–O–或–NH–。
在一些实施方案，所述连接体是：
Figure BDA0003169092350000654
Figure BDA0003169092350000661
其中：
各
Figure BDA0003169092350000662
分别为与所述结合剂连接的键；
各
Figure BDA0003169092350000663
分别为与所述有效负载连接的键；和H是–O–或–NH–。
在一些实施方案，所述连接体是：
Figure BDA0003169092350000664
Figure BDA0003169092350000671
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，或其区域异构体，或其区域异构体的混合物，其中：
各
Figure BDA0003169092350000672
分别为与所述结合剂连接的键；
各
Figure BDA0003169092350000673
分别为与所述有效负载连接的键；
R9是–CH3或–(CH2)3N(H)C(O)NH2；和
A是–O–、–N(H)–、
Figure BDA0003169092350000674
Figure BDA0003169092350000675
其中ZZ是H、或如本发明其他地方所讨论的氨基酸的侧链。例如，在一个实施方案，ZZ是C1-6烷基。作为另一实例，在一个实施方案，ZZ是C1-6杂烷基。如上所讨论，与所述结合剂连接的键可以是直接连接，也可以是经由间隔基团连接。在某些实施方案，与所述结合剂连接的键是经由PEG间隔基团连接至所述结合剂的谷氨酰胺残基。
在一些实施方案，所述连接体是：
Figure BDA0003169092350000681
Figure BDA0003169092350000691
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，或其区域异构体，或其区域异构体的混合物，其中：
各
Figure BDA0003169092350000692
分别为与所述结合剂连接的键；
各
Figure BDA0003169092350000693
分别为与所述有效负载连接的键；
R9是–CH3或–(CH2)3N(H)C(O)NH2；和
A是–O–、–N(H)–、
Figure BDA0003169092350000694
Figure BDA0003169092350000695
其中ZZ是H、或如本发明其他地方所讨论的氨基酸的侧链。例如，在一个实施方案，ZZ是C1-6烷基。作为另一实例，在一个实施方案，ZZ是C1-6杂烷基。如上所讨论，与所述结合剂连接的键可以是直接连接，也可以是经由间隔基团连接。在某些实施方案，与所述结合剂连接的键是经由PEG间隔基团连接至所述结合剂的谷氨酰胺残基。
连接体-有效负载或活性连接体-有效负载
本发明提供了衍生自任何本发明所述化合物或有效负载(例如，式I、II或III所示化合物或有效负载)及连接体的连接体-有效负载或活性连接体-有效负载。在下文描述的某些实施方案中，本发明提供的偶联物可由具有如上所述活性基团RG的连接体-有效负载或活性连接体-有效负载制得。所述连接体-有效负载或活性连接体-有效负载可根据以下描述的方法连接至增强基团和/或结合剂。
在某些实施方案，所述连接体-有效负载包括由上述式I、II或III中的任一个或多个所包含的与连接体连接的任何特定有效负载，其中本发明所述的连接体包括与本发明所述的结合剂、抗体或其抗原结合片段、和/或增强基团反应的基团部分。在特定实施方案，所述连接体与R1、R2或R6、或R1、R2或R6的二价形式连接，如上述有效负载式I、II或III中的任一个或多个所示。在一个实施方案，所述连接体-有效负载具有式LPa所示结构：
Figure BDA0003169092350000701
其中L是如上所述的连接体，和Q1、Q2、W、–R1–、R2、R4、R5和R6均如上文在式I的上下文中所述。在一个实施方案，所述连接体-有效负载具有式LPb所示结构：
Figure BDA0003169092350000702
其中L是如上所述的连接体，和Q1、Q2、W、R1、–R2–、R4、R5和R6均如上文在式I的上下文中所述。
在一个实施方案，所述连接体-有效负载具有式LPc所示结构：
Figure BDA0003169092350000703
其中L是如上所述的连接体，和Q1、Q2、W、R1、R2、R4、R5和–R6–均如上文在式I的上下文中所述。
在一个实施方案，所述连接体-有效负载具有式LPd所示结构：
Figure BDA0003169092350000711
其中L是如上所述的连接体，和Q1、Q2、W、R1、R2、R4、R5和–R6–均如上文在式I的上下文中所述。
在一个实施方案，所述连接体-有效负载具有式LPa′所示结构：
Figure BDA0003169092350000712
其中SP1和SP2均为如上所述的间隔基团，各AA分别为如上所述的氨基酸残基，Q1、Q2、W、–R1–、R2、R4、R5和R6均如上文在式I的上下文中所述，和p1是从1至10整数。在一个实施方案，所述连接体-有效负载具有式LPb′所示结构：
Figure BDA0003169092350000713
其中SP1和SP2均为如上所述的间隔基团，各AA分别为如上所述的氨基酸残基，Q1、Q2、W、R1、–R2–、R4、R5和R6均如式I的上下文中所述，和p1是从1至10整数。在一个实施方案，所述连接体-有效负载具有式LPc′所示结构：
Figure BDA0003169092350000721
其中SP1和SP2均为如上所述的间隔基团，各AA分别为如上所述的氨基酸残基，Q1、Q2、W、R1、R2、R4、R5和–R6–均如式I的上下文中所述，和p1是从1至10整数。在一个实施方案，所述连接体-有效负载具有式LPd′所示结构：
Figure BDA0003169092350000722
其中SP1和SP2均为如上所述的间隔基团，各AA分别为如上所述的氨基酸残基，Q1、Q2、W、R1、R2、R4、R5和–R6–均如式I的上下文中所述，和p1是从1至10整数。在本段的任一实施方案中，p1是1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10。在本段的任一实施方案中，所述连接体L或间隔基团SP2连接至芳基氮、或单独的氨基酸残基或肽内的氨基酸残基。在本段的任一实施方案中，各R4，在每种情况下，分别独立地为H、氨基酸残基、N-烷基氨基酸残基、肽残基、可生物降解的基团部分、烷基、取代的烷基、酰基、或取代的酰基。在本段的任一实施方案中，各R4，在每种情况下，分别独立地为H、氨基酸残基、N-烷基氨基酸残基、肽残基、可生物降解的基团部分、或烷基。
在一些实施方案，所述连接体-有效负载或活性连接体-有效负载是：
Figure BDA0003169092350000723
Figure BDA0003169092350000731
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，其中：
各RG分别为活性基团，如本发明所述；
Q1、Q2、W、R1、R2、R4、R5和R6均如式I的上下文中所述；
各R9分别为–CH3或–(CH2)3N(H)C(O)NH2；和
各A分别为–O–、–N(H)–、
Figure BDA0003169092350000732
Figure BDA0003169092350000733
Figure BDA0003169092350000734
其中ZZ是H、或如本发明其他地方所讨论的氨基酸的侧链。例如，在一个实施方案，ZZ是C1-6烷基。作为另一实例，在一个实施方案，ZZ是C1-6杂烷基。
在一些实施方案，所述连接体-有效负载或活性连接体-有效负载是：
Figure BDA0003169092350000735
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，其中：
各RG分别为活性基团，如本发明所述；
Q1、Q2、W、R1、R2、R4、R5和R6均如式I的上下文中所述；
各R9分别为–CH3或–(CH2)3N(H)C(O)NH2；和
各A分别为–O–、–N(H)–、
Figure BDA0003169092350000741
Figure BDA0003169092350000742
Figure BDA0003169092350000743
其中ZZ是H、或如本发明其他地方所讨论的氨基酸的侧链。例如，在一个实施方案，ZZ是C1-6烷基。作为另一实例，在一个实施方案，ZZ是C1-6杂烷基。
在一些实施方案，所述连接体-有效负载或活性连接体-有效负载是：
Figure BDA0003169092350000744
Figure BDA0003169092350000751
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，其中：
Q1、Q2、W、R1、R2、R4、R5和R6均如式I的上下文中所述；
各R9分别为–CH3或–(CH2)3N(H)C(O)NH2；和
各A分别为–O–、–N(H)–、
Figure BDA0003169092350000752
Figure BDA0003169092350000753
Figure BDA0003169092350000754
其中ZZ是H、或如本发明其他地方所讨论的氨基酸的侧链。例如，在一个实施方案，ZZ是C1-6烷基。作为另一实例，在一个实施方案，ZZ是C1-6杂烷基。
在一些实施方案，所述连接体-有效负载或活性连接体-有效负载是：
Figure BDA0003169092350000761
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，其中：
Q1、Q2、W、R1、R2、R4、R5和R6均如式I的上下文中所述；
各R9分别为–CH3或–(CH2)3N(H)C(O)NH2；和
各A分别为–O–、–N(H)–、
Figure BDA0003169092350000762
Figure BDA0003169092350000763
Figure BDA0003169092350000764
其中ZZ是H、或如本发明其他地方所讨论的氨基酸的侧链。例如，在一个实施方案，ZZ是C1-6烷基。作为另一实例，在一个实施方案，ZZ是C1-6杂烷基。
在一些实施方案，所述活性连接体-有效负载是：
Figure BDA0003169092350000771
Figure BDA0003169092350000781
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，或其区域异构体，其中：
Q1、Q2、W、R1、R2、R4、R5和R6均如式I的上下文中所述；
各R9分别为–CH3或–(CH2)3N(H)C(O)NH2；和
各A分别为–O–、–N(H)–、
Figure BDA0003169092350000782
Figure BDA0003169092350000783
Figure BDA0003169092350000784
其中ZZ是H、或如本发明其他地方所讨论的氨基酸的侧链。例如，在一个实施方案，ZZ是C1-6烷基。作为另一实例，在一个实施方案，ZZ是C1-6杂烷基。
在一些实施方案，所述活性连接体-有效负载是：
Figure BDA0003169092350000791
Figure BDA0003169092350000801
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，或其区域异构体，其中：
Q1、Q2、W、R1、R2、R4、R5和R6均如式I的上下文中所述；
各R9分别为–CH3或–(CH2)3N(H)C(O)NH2；和
各A分别为–O–、–N(H)–、
Figure BDA0003169092350000802
Figure BDA0003169092350000803
Figure BDA0003169092350000804
其中ZZ是H、或如本发明其他地方所讨论的氨基酸的侧链。例如，在一个实施方案，ZZ是C1-6烷基。作为另一实例，在一个实施方案，ZZ是C1-6杂烷基。
在一些实施方案，所述连接体-有效负载或活性连接体-有效负载是：
Figure BDA0003169092350000811
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，其中：
Q1、Q2、W、R1、R2、R4、R5和R6均如式I的上下文中所述；
各R9分别为–CH3或–(CH2)3N(H)C(O)NH2；和
各A分别为–O–、–N(H)–、
Figure BDA0003169092350000812
Figure BDA0003169092350000813
Figure BDA0003169092350000814
其中ZZ是H、或如本发明其他地方所讨论的氨基酸的侧链。例如，在一个实施方案，ZZ是C1-6烷基。作为另一实例，在一个实施方案，ZZ是C1-6杂烷基。
在一些实施方案，所述连接体-有效负载或活性连接体-有效负载是：
Figure BDA0003169092350000815
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，其中：
Q1、Q2、W、R1、R2、R4、R5和R6均如式I的上下文中所述；
各R9分别为–CH3或–(CH2)3N(H)C(O)NH2；和
各A分别为–O–、–N(H)–、
Figure BDA0003169092350000821
Figure BDA0003169092350000822
Figure BDA0003169092350000823
其中ZZ是H、或如本发明其他地方所讨论的氨基酸的侧链。例如，在一个实施方案，ZZ是C1-6烷基。作为另一实例，在一个实施方案，ZZ是C1-6杂烷基。
在一些实施方案，所述连接体-有效负载或活性连接体-有效负载是：
Figure BDA0003169092350000824
Figure BDA0003169092350000831
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，或其区域异构体，其中：
Q1、Q2、W、R1、R2、R4、R5和R6均如式I的上下文中所述；
各R9分别为–CH3或–(CH2)3N(H)C(O)NH2；和
各A分别为–O–、–N(H)–、
Figure BDA0003169092350000832
Figure BDA0003169092350000833
Figure BDA0003169092350000834
其中ZZ是H、或如本发明其他地方所讨论的氨基酸的侧链。例如，在一个实施方案，ZZ是C1-6烷基。作为另一实例，在一个实施方案，ZZ是C1-6杂烷基。
在一些实施方案，所述连接体-有效负载或活性连接体-有效负载是：
Figure BDA0003169092350000841
Figure BDA0003169092350000851
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，或其区域异构体，其中：
Q1、Q2、W、R1、R2、R4、R5和R6均如式I的上下文中所述；
各R9分别为–CH3或–(CH2)3N(H)C(O)NH2；和
各A分别为–O–、–N(H)–、
Figure BDA0003169092350000852
Figure BDA0003169092350000853
Figure BDA0003169092350000854
其中ZZ是H、或如本发明其他地方所讨论的氨基酸的侧链。例如，在一个实施方案，ZZ是C1-6烷基。作为另一实例，在一个实施方案，ZZ是C1-6杂烷基。
在一些实施方案，所述连接体-有效负载或活性连接体-有效负载选自：
Figure BDA0003169092350000861
Figure BDA0003169092350000871
Figure BDA0003169092350000881
Figure BDA0003169092350000891
Figure BDA0003169092350000901
Figure BDA0003169092350000911
其药学上可接受的盐、或溶剂化物。
本发明还提供了选自由下列组成的组的连接体-有效负载：
Figure BDA0003169092350000912
Figure BDA0003169092350000921
其药学上可接受的盐、或溶剂化物。
上述连接体、连接体-有效负载或活性连接体-有效负载可用于提供以下偶联物。
偶联物/抗体药物偶联物(ADC)
本发明提供了抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体与一种或多种本发明所述的式I、II或III的化合物偶联。
本发明提供了式A所示化合物或偶联物：
Figure BDA0003169092350000922
Figure BDA0003169092350000931
或其药学上可接受的盐、或立体异构体形式，其中，BA是结合剂，L是连接体，Q1、Q2、W、–R1–、R2、R4、R5和R6均如上文在式I的上下文中所述，和k是1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10。在某些实施方案，与式A中—L—BA偶联的化合物或有效负载包含一种或多种上述式I、II和/或III的化合物，其中BA是结合剂；L是连接体；和k是1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10。在本段的任一实施方案中，BA是抗体、或其抗原结合片段，其中所述抗体偶联至式I的化合物，如上所述。在本段的任一实施方案中，BA是抗体、或其抗原结合片段，其中所述抗体偶联至式II的化合物，如上所述。在本段的任一实施方案中，BA是抗体、或其抗原结合片段，其中所述抗体偶联至式III的化合物，如上所述。在本段的任一实施方案中，k是1-2、1-3、2-3、2-4、3-4或1-4的范围。在本段的任一实施方案中，k是1。在本段的任一实施方案中，k是2。在本段的任一实施方案中，k是3。在本段的任一实施方案中，k是4。在本段的任一实施方案中，各R4，在每种情况下，分别独立地为H、氨基酸残基、N-烷基氨基酸残基、肽残基、可生物降解的基团部分、烷基、取代的烷基、酰基、或取代的酰基。在本段的任一实施方案中，各R4，在每种情况下，分别独立地为H、氨基酸残基、N-烷基氨基酸残基、肽残基、可生物降解的基团部分、或烷基。
本发明提供了式B所示化合物或偶联物：
Figure BDA0003169092350000932
或其药学上可接受的盐、或立体异构体形式，其中，BA是结合剂，L是连接体，Q1、Q2、W、R1、–R2–、R4、R5和R6均如上文在式I的上下文中所述，和k是1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10。在某些实施方案，与式B中—L—BA偶联的化合物或有效负载包含一种或多种上述式I、II和/或III的化合物，其中BA是结合剂；L是连接体；和k是1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10。在本段的任一实施方案中，BA是抗体、或其抗原结合片段，其中所述抗体偶联至式I的化合物，如上所述。在本段的任一实施方案中，BA是抗体、或其抗原结合片段，其中所述抗体偶联至式II的化合物，如上所述。在本段的任一实施方案中，BA是抗体、或其抗原结合片段，其中所述抗体偶联至式III的化合物，如上所述。在本段的任一实施方案中，k是1-2、1-3、2-3、2-4、3-4或1-4的范围。在本段的任一实施方案中，k是1。在本段的任一实施方案中，k是2。在本段的任一实施方案中，k是3。在本段的任一实施方案中，k是4。在本段的任一实施方案中，各R4，在每种情况下，分别独立地为H、氨基酸残基、N-烷基氨基酸残基、肽残基、可生物降解的基团部分、烷基、取代的烷基、酰基、或取代的酰基。在本段的任一实施方案中，各R4，在每种情况下，分别独立地为H、氨基酸残基、N-烷基氨基酸残基、肽残基、可生物降解的基团部分、或烷基。
本发明提供了式C所示化合物或偶联物：
Figure BDA0003169092350000941
或其药学上可接受的盐、或立体异构体形式，其中，BA是结合剂，L是连接体，Q1、Q2、W、R1、R2、R4、R5和–R6–均如上文在式I的上下文中所述，和k是1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10。在某些实施方案，与式C中—L—BA偶联的化合物或有效负载包含一种或多种上述式I、II和/或III的化合物，其中BA是结合剂；L是连接体；和k是1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10。在本段的任一实施方案中，BA是抗体、或其抗原结合片段，其中所述抗体偶联至式I的化合物，如上所述。在本段的任一实施方案中，BA是抗体、或其抗原结合片段，其中所述抗体偶联至式II的化合物，如上所述。在本段的任一实施方案中，BA是抗体、或其抗原结合片段，其中所述抗体偶联至式III的化合物，如上所述。在本段的任一实施方案中，k是1-2、1-3、2-3、2-4、3-4或1-4的范围。在本段的任一实施方案中，k是1。在本段的任一实施方案中，k是2。在本段的任一实施方案中，k是3。在本段的任一实施方案中，k是4。在本段的任一实施方案中，各R4，在每种情况下，分别独立地为H、氨基酸残基、N-烷基氨基酸残基、肽残基、可生物降解的基团部分、烷基、取代的烷基、酰基、或取代的酰基。在本段的任一实施方案中，各R4，在每种情况下，分别独立地为H、氨基酸残基、N-烷基氨基酸残基、肽残基、可生物降解的基团部分、或烷基。
本发明提供了式D所示化合物或偶联物：
Figure BDA0003169092350000951
或其药学上可接受的盐、或立体异构体形式，其中，BA是结合剂，L是连接体，Q1、Q2、W、R1、R2、R4、R5和–R6–均如上文在式I的上下文中所述，和k是1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10。在某些实施方案，与式D中—L—BA偶联的化合物或有效负载包含一种或多种上述式I、II和/或III的化合物，其中BA是结合剂；L是连接体；和k是1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10。在本段的任一实施方案中，BA是抗体、或其抗原结合片段，其中所述抗体偶联至式I的化合物，如上所述。在本段的任一实施方案中，BA是抗体、或其抗原结合片段，其中所述抗体偶联至式II的化合物，如上所述。在本段的任一实施方案中，BA是抗体、或其抗原结合片段，其中所述抗体偶联至式III的化合物，如上所述。在本段的任一实施方案中，k是1-2、1-3、2-3、2-4、3-4或1-4的范围。在本段的任一实施方案中，k是1。在本段的任一实施方案中，k是2。在本段的任一实施方案中，k是3。在本段的任一实施方案中，k是4。在本段的任一实施方案中，各R4，在每种情况下，分别独立地为H、氨基酸残基、N-烷基氨基酸残基、肽残基、可生物降解的基团部分、烷基、取代的烷基、酰基、或取代的酰基。在本段的任一实施方案中，各R4，在每种情况下，分别独立地为H、氨基酸残基、N-烷基氨基酸残基、肽残基、可生物降解的基团部分、或烷基。
在前述四段的任一实施方案中，L是连接体或X-Y-Z，其中X是–NH–或–O–；Y是酶促可切割基团部分、自降解(self-immolative)基团、酸不稳定基团部分、PEGn1、糖基团部分、或增强基团；和Z是结合剂连接体(BL)，其中Z与BA共价连接。示例性酶促可切割基团部分包括但不限于任何二肽或三肽(例如，VC-PAB和VA，如本发明其他地方所述)。示例性自降解基团如本发明其他地方所述。示例性酸不稳定基团部分包括但不限于烷氧胺类、酮氧胺类、碳酸酯类、或膦酸酯类。示例性增强基团如本发明其他地方所述。示例性活性/反应性基团部分如本发明其他地方所述。在某些实施方案，Y不包括PEGn1，其中n1是1、2、3、4、或5。在某些实施方案，氨基酸可用于将有所述效负载、增强基团和抗体(各自如本发明其他地方所述)彼此连接，如本发明其他地方所述以及本发明其他地方显而易见的。本领域技术人员将理解，所述有效负载、增强基团和抗体经由氨基酸的连接可通过酰胺偶联反应、硫代-迈克尔加成、或苯胺-NH-烷基化来进行。譬如，连接所述有效负载、增强基团和抗体的氨基酸是赖氨酸。作为进一步的实例，在一个实施方案，连接所述有效负载、增强基团和抗体的氨基酸是D-赖氨酸。作为进一步的实例，在一个实施方案，连接所述有效负载、增强基团和抗体的氨基酸是天冬氨酸。作为进一步的实例，在一个实施方案，连接所述有效负载、增强基团和抗体的氨基酸是谷氨酸。作为进一步的实例，在一个实施方案，连接所述有效负载、增强基团和抗体的氨基酸是丝氨酸。作为进一步的实例，在一个实施方案，连接所述有效负载、增强基团和抗体的氨基酸是半胱氨酸。作为进一步的实例，在一个实施方案，连接所述有效负载、增强基团和抗体的氨基酸是酪氨酸。
本发明提供了具有式A′、B′、C′、或D′所示结构的化合物或偶联物：
Figure BDA0003169092350000961
Figure BDA0003169092350000971
或其药学上可接受的盐、或立体异构体形式，其中，BA是结合剂，Q1、Q2、W、R1、–R1–、R2、R2–、R4、R5和R6或–R6–均如上文在式I的上下文中所述，SP1和SP2，当存在时，均为间隔基团，各AA分别为氨基酸残基，和p1是从1至10的整数。在一个实施方案，所述化合物或偶联物是式A′、或其药学上可接受的盐、或立体异构体形式，其中BA是结合剂，Q1、Q2、W、–R1–、R2、R4、R5和R6均如上文在式I的上下文中所述，SP1和SP2，当存在时，均为间隔基团，各AA分别为氨基酸残基，和p1是从1至10的整数。在一个实施方案，所述化合物或偶联物是式B′、或其药学上可接受的盐、或立体异构体形式，其中BA是结合剂，Q1、Q2、W、R1、–R2–、R4、R5和R6均如上文在式I的上下文中所述，SP1和SP2，当存在时，均为间隔基团，各AA分别为氨基酸残基，和p1是从1至10的整数。在一个实施方案，所述化合物或偶联物是式C′、或其药学上可接受的盐、或立体异构体形式，其中BA是结合剂，Q1、Q2、W、R1、R2、R4、R5和–R6–均如上文在式I的上下文中所述，SP1和SP2，当存在时，均为间隔基团，各AA分别为氨基酸残基，和p1是从1至10的整数。在一个实施方案，所述化合物或偶联物是式D′、或其药学上可接受的盐、或立体异构体形式，其中BA是结合剂，Q1、Q2、W、R1、R2、R4、R5和–R6–均如上文在式I的上下文中所述，SP1和SP2，当存在时，均为间隔基团，各AA分别为氨基酸残基，和p1是从1至10的整数。在本段的任一实施方案中，BA是抗体、或其抗原结合片段，其中所述抗体偶联至式I的化合物，如上所述。在本段的任一实施方案中，BA是抗体、或其抗原结合片段，其中所述抗体偶联至式II的化合物，如上所述。在本段的任一实施方案中，BA是抗体、或其抗原结合片段，其中所述抗体偶联至式III的化合物，如上所述。在本段的任一实施方案中，p1是1、2、3、4、或5。在本段的任一实施方案中，k是1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10。在本段的任一实施方案中，k是1-2、1-3、2-3、2-4、3-4或1-4的范围。在本段的任一实施方案中，k是1。在本段的任一实施方案中，k是2。在本段的任一实施方案中，k是3。在本段的任一实施方案中，k是4。
在一些实施方案，所述化合物或偶联物是式A″：
Figure BDA0003169092350000981
或其药学上可接受的盐、或立体异构体形式，或其区域异构体，其中：
BA是结合剂；
各SP1、SP2和SP3分别为如上所述的间隔基团，其中SP3连接至(AA)p1的一个氨基酸残基AA；
p1是从1至10的整数；
EG是增强剂；
k是从1至30的整数；
Q1、Q2、W、–R1–、R2、R4、R5和R6均如式I的上下文中所述。
如上所述，与所述结合剂连接的键可以是直接连接、也可以是经由间隔基团连接。在某些实施方案，与所述结合剂连接的键是经由PEG间隔基团连接至所述结合剂的谷氨酰胺残基。在某些实施方案，所述增强剂是亲水基团。在某些实施方案，所述增强剂是环糊精。在某些实施方案，所述增强剂是烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸。环糊精可以是技术人员已知的任何环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是α-环糊精、β-环糊精、或γ-环糊精、或其混合物。在某些实施方案，所述环糊精是α-环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是β-环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是γ-环糊精。在某些实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)1-5SO3H，–(CH2)n2–NH-(CH2)1- 5SO3H，–(CH2)n2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，–(CH2CH2O)m2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，–(CH2)n2–N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，–(CH2)n2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，或–(CH2CH2O)m2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n2是1、2、3、4、或5，和m2是1、2、3、4、或5。在一个实施方案，所述烷基磺酸、或亚烷基磺酸是–(CH2)1-5SO3H。在另一实施方案，所述杂烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–NH-(CH2)1-5SO3H，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2CH2O)m2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，其中m2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–N((CH2)1- 5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2CH2O)m2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中m2是1、2、3、4、或5。在一个实施方案，所述SP1间隔基团是：
Figure BDA0003169092350000991
其中RG′是活性基团RG与结合剂反应后的活性基团残基；
Figure BDA0003169092350000992
是与所述结合剂直接或间接连接的键；和b是从1至4的整数；所述(AA)p1–SP2–是–NH-赖氨酸-缬氨酸-丙氨酸–、–NH-赖氨酸-缬氨酸-瓜氨酸–、或–NH-赖氨酸-缬氨酸-瓜氨酸-PABC–；所述SP3间隔基团是：
Figure BDA0003169092350000993
其中RG′是活性基团RG与增强剂EG反应后的活性基团残基；
Figure BDA0003169092350000994
是与所述增强剂连接的键；和
Figure BDA0003169092350000995
是与(AA)p1连接的键。在本段的任一实施方案中，BA是抗体、或其抗原结合片段，其中所述抗体偶联至式I的化合物，如上所述。在本段的任一实施方案中，BA是抗体、或其抗原结合片段，其中所述抗体偶联至式II的化合物，如上所述。在本段的任一实施方案中，BA是抗体、或其抗原结合片段，其中所述抗体偶联至式III的化合物，如上所述。在本段的任一实施方案中，p1是1、2、3、4、或5。在本段的任一实施方案中，k是1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10。在本段的任一实施方案中，k是1-2、1-3、2-3、2-4、3-4或1-4的范围。在本段的任一实施方案中，k是1。在本段的任一实施方案中，k是2。在本段的任一实施方案中，k是3。在本段的任一实施方案中，k是4。
在一些实施方案，所述化合物或偶联物是：
Figure BDA0003169092350001001
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，或其区域异构体，其中：
BA是结合剂；
各RG'分别为活性基团的残基，如本发明所述；
EG是增强剂；
k是从1至30的整数；
Q1、Q2、W、R1、R2、R4、R5和R6均如式I的上下文中所述。
各R9分别为–CH3或–(CH2)3N(H)C(O)NH2；和
各A分别为–O–、–N(H)–、
Figure BDA0003169092350001002
Figure BDA0003169092350001011
Figure BDA0003169092350001012
其中ZZ是H、或如本发明其他地方所讨论的氨基酸的侧链。例如，在一个实施方案，ZZ是C1-6烷基。作为另一实例，在一个实施方案，ZZ是C1-6杂烷基。如上所讨论，与所述结合剂连接的键可以是直接连接、也可以是经由间隔基团连接。在某些实施方案，与所述结合剂连接的键是经由PEG间隔基团连接至所述结合剂的谷氨酰胺残基。在某些实施方案，所述增强剂是亲水基团。在某些实施方案，所述增强剂是环糊精。在某些实施方案，所述增强基团是烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸。环糊精可以是技术人员已知的任何环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是α-环糊精、β-环糊精、或γ-环糊精、或其混合物。在某些实施方案，所述环糊精是α-环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是β-环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是γ-环糊精。在某些实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)1-5SO3H，–(CH2)n2–NH-(CH2)1-5SO3H，–(CH2)n2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，–(CH2CH2O)m2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，–(CH2)n2–N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，–(CH2)n2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，或–(CH2CH2O)m2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n2是1、2、3、4、或5，和m2是1、2、3、4、或5。在一个实施方案，所述烷基磺酸、或亚烷基磺酸是–(CH2)1-5SO3H。在另一实施方案，所述杂烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–NH-(CH2)1-5SO3H，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2CH2O)m2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，其中m2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–N((CH2)1- 5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2CH2O)m2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中m2是1、2、3、4、或5。
在一些实施方案，所述化合物或偶联物是：
Figure BDA0003169092350001021
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，或其区域异构体，其中：
BA是结合剂；
各RG'分别为活性基团的残基，如本发明所述；
EG是增强剂；
k是从1至30的整数；
Q1、Q2、W、R1、R2、R4、R5和R6均如式I的上下文中所述。
各R9分别为–CH3或–(CH2)3N(H)C(O)NH2；和
各A分别为–O–、–N(H)–、
Figure BDA0003169092350001022
Figure BDA0003169092350001023
Figure BDA0003169092350001024
其中ZZ是H、或如本发明其他地方所讨论的氨基酸的侧链。例如，在一个实施方案，ZZ是C1-6烷基。作为另一实例，在一个实施方案，ZZ是C1-6杂烷基。如上所讨论，与所述结合剂连接的键可以是直接连接、也可以是经由间隔基团连接。在某些实施方案，与所述结合剂连接的键是经由PEG间隔基团连接至所述结合剂的谷氨酰胺残基。在某些实施方案，所述增强剂是亲水基团。在某些实施方案，所述增强剂是环糊精。在某些实施方案，所述增强基团是烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸。环糊精可以是技术人员已知的任何环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是α-环糊精、β-环糊精、或γ-环糊精、或其混合物。在某些实施方案，所述环糊精是α-环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是β-环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是γ-环糊精。在某些实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)1-5SO3H，–(CH2)n2–NH-(CH2)1-5SO3H，–(CH2)n2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，–(CH2CH2O)m2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，–(CH2)n2–N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，–(CH2)n2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，或–(CH2CH2O)m2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n2是1、2、3、4、或5，和m2是1、2、3、4、或5。在一个实施方案，所述烷基磺酸、或亚烷基磺酸是–(CH2)1-5SO3H。在另一实施方案，所述杂烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–NH-(CH2)1-5SO3H，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2CH2O)m2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，其中m2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2CH2O)m2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中m2是1、2、3、4、或5。
在一些实施方案，所述化合物或偶联物是：
Figure BDA0003169092350001031
Figure BDA0003169092350001041
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，或其区域异构体，其中：
BA是结合剂；
k是从1至30的整数；
Q1、Q2、W、R1、R2、R4、R5和R6均如式I的上下文中所述；
各
Figure BDA0003169092350001042
分别为与所述增强基团连接的键；
各R9分别为–CH3或–(CH2)3N(H)C(O)NH2；和
各A分别为–O–、–N(H)–、
Figure BDA0003169092350001043
Figure BDA0003169092350001044
Figure BDA0003169092350001045
其中ZZ是H、或如本发明其他地方所讨论的氨基酸的侧链。例如，在一个实施方案，ZZ是C1-6烷基。作为另一实例，在一个实施方案，ZZ是C1-6杂烷基。在某些实施方案，所述增强剂是亲水基团。在某些实施方案，所述增强剂是环糊精。在某些实施方案，所述增强基团是烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸。环糊精可以是技术人员已知的任何环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是α-环糊精、β-环糊精、或γ-环糊精、或其混合物。在某些实施方案，所述环糊精是α-环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是β-环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是γ-环糊精。在某些实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)1-5SO3H，–(CH2)n2–NH-(CH2)1-5SO3H，–(CH2)n2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，–(CH2CH2O)m2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，–(CH2)n2–N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，–(CH2)n2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，或–(CH2CH2O)m2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n2是1、2、3、4、或5，和m2是1、2、3、4、或5。在一个实施方案，所述烷基磺酸、或亚烷基磺酸是–(CH2)1-5SO3H。在另一实施方案，所述杂烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–NH-(CH2)1-5SO3H，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2CH2O)m2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，其中m2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2CH2O)m2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中m2是1、2、3、4、或5。
在一些实施方案，所述偶联物是：
Figure BDA0003169092350001061
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，或其区域异构体，其中：
BA是结合剂；
k是从1至30的整数；
Q1、Q2、W、R1、R2、R4、R5和R6均如式I的上下文中所述；
各
Figure BDA0003169092350001071
分别为与所述增强基团连接的键；
各R9分别为–CH3或–(CH2)3N(H)C(O)NH2；和
各A分别为–O–、–N(H)–、
Figure BDA0003169092350001072
Figure BDA0003169092350001073
Figure BDA0003169092350001074
其中ZZ是H、或如本发明其他地方所讨论的氨基酸的侧链。例如，在一个实施方案，ZZ是C1-6烷基。作为另一实例，在一个实施方案，ZZ是C1-6杂烷基。
在某些实施方案，所述增强剂是亲水基团。在某些实施方案，所述增强剂是环糊精。在某些实施方案，所述增强基团是烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸。环糊精可以是技术人员已知的任何环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是α-环糊精、β-环糊精、或γ-环糊精、或其混合物。在某些实施方案，所述环糊精是α-环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是β-环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是γ-环糊精。在某些实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)1-5SO3H，–(CH2)n2–NH-(CH2)1-5SO3H，–(CH2)n2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，–(CH2CH2O)m2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，–(CH2)n2–N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，–(CH2)n2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，或–(CH2CH2O)m2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n2是1、2、3、4、或5，和m2是1、2、3、4、或5。在一个实施方案，所述烷基磺酸、或亚烷基磺酸是–(CH2)1-5SO3H。在另一实施方案，所述杂烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–NH-(CH2)1-5SO3H，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2CH2O)m2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，其中m2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–N((CH2)1- 5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2CH2O)m2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中m2是1、2、3、4、或5。
在一些实施方案，所述化合物或偶联物是：
Figure BDA0003169092350001081
Figure BDA0003169092350001091
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，或其区域异构体，其中：
BA是结合剂；
k是从1至30的整数；
Q1、Q2、W、R1、R2、R4、R5和R6均如式I的上下文中所述；
各R9分别为–CH3或–(CH2)3N(H)C(O)NH2；和
各A分别为–O–、–N(H)–、
Figure BDA0003169092350001092
Figure BDA0003169092350001101
Figure BDA0003169092350001102
其中ZZ是H、或如本发明其他地方所讨论的氨基酸的侧链。例如，在一个实施方案，ZZ是C1-6烷基。作为另一实例，在一个实施方案，ZZ是C1-6杂烷基。
在一些实施方案，所述化合物或偶联物是：
Figure BDA0003169092350001103
Figure BDA0003169092350001111
Figure BDA0003169092350001121
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，或其区域异构体，其中：
BA是结合剂；
k是从1至30的整数；
Q1、Q2、W、R1、R2、R4、R5和R6均如式I的上下文中所述；
各R9分别为–CH3或–(CH2)3N(H)C(O)NH2；和
各A分别为–O–、–N(H)–、
Figure BDA0003169092350001122
Figure BDA0003169092350001123
Figure BDA0003169092350001124
其中ZZ是H、或如本发明其他地方所讨论的氨基酸的侧链。例如，在一个实施方案，ZZ是C1-6烷基。作为另一实例，在一个实施方案，ZZ是C1-6杂烷基。
在一些实施方案，所述化合物或偶联物是：
Figure BDA0003169092350001131
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，或其区域异构体，其中：
BA是结合剂；
k是从1至30的整数；
Q1、Q2、W、R1、R2、R4、R5和R6均如式I的上下文中所述；
各
Figure BDA0003169092350001132
分别为与所述增强基团连接的键；
各R9分别为–CH3或–(CH2)3N(H)C(O)NH2；和
各A分别为–O–、–N(H)–、
Figure BDA0003169092350001133
Figure BDA0003169092350001134
Figure BDA0003169092350001135
其中ZZ是H、或如本发明其他地方所讨论的氨基酸的侧链。例如，在一个实施方案，ZZ是C1-6烷基。作为另一实例，在一个实施方案，ZZ是C1-6杂烷基。在某些实施方案，所述增强剂是亲水基团。在某些实施方案，所述增强剂是环糊精。在某些实施方案，所述增强基团是烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸。环糊精可以是技术人员已知的任何环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是α-环糊精、β-环糊精、或γ-环糊精、或其混合物。在某些实施方案，所述环糊精是α-环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是β-环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是γ-环糊精。在某些实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)1-5SO3H，–(CH2)n2–NH-(CH2)1-5SO3H，–(CH2)n2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，–(CH2CH2O)m2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，–(CH2)n2–N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，–(CH2)n2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，或–(CH2CH2O)m2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n2是1、2、3、4、或5，和m2是1、2、3、4、或5。在一个实施方案，所述烷基磺酸、或亚烷基磺酸是–(CH2)1-5SO3H。在另一实施方案，所述杂烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–NH-(CH2)1-5SO3H，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2CH2O)m2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，其中m2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2CH2O)m2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中m2是1、2、3、4、或5。
在一些实施方案，所述化合物或偶联物是：
Figure BDA0003169092350001141
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，或其区域异构体，其中：
BA是结合剂；
k是从1至30的整数；
Q1、Q2、W、R1、R2、R4、R5和R6均如式I的上下文中所述；
各
Figure BDA0003169092350001142
分别为与所述增强基团连接的键；
各R9分别为–CH3或–(CH2)3N(H)C(O)NH2；和
各A分别为–O–、–N(H)–、
Figure BDA0003169092350001151
Figure BDA0003169092350001152
Figure BDA0003169092350001153
其中ZZ是H、或如本发明其他地方所讨论的氨基酸的侧链。例如，在一个实施方案，ZZ是C1-6烷基。作为另一实例，在一个实施方案，ZZ是C1-6杂烷基。在某些实施方案，所述增强剂是亲水基团。在某些实施方案，所述增强剂是环糊精。在某些实施方案，所述增强基团是烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸。环糊精可以是技术人员已知的任何环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是α-环糊精、β-环糊精、或γ-环糊精、或其混合物。在某些实施方案，所述环糊精是α-环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是β-环糊精。在某些实施方案，所述环糊精是γ-环糊精。在某些实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)1-5SO3H，–(CH2)n2–NH-(CH2)1-5SO3H，–(CH2)n2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，–(CH2CH2O)m2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，–(CH2)n2–N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，–(CH2)n2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，或–(CH2CH2O)m2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n2是1、2、3、4、或5，和m2是1、2、3、4、或5。在一个实施方案，所述烷基磺酸、或亚烷基磺酸是–(CH2)1-5SO3H。在另一实施方案，所述杂烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–NH-(CH2)1-5SO3H，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2CH2O)m2–C(O)NH-(CH2)1-5SO3H，其中m2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2)n2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中n2是1、2、3、4、或5。在另一实施方案，所述烷基磺酸、杂烷基磺酸、亚烷基磺酸、或亚杂烷基磺酸是–(CH2CH2O)m2–C(O)N((CH2)1-5C(O)NH(CH2)1-5SO3H)2，其中m2是1、2、3、4、或5。
在一些实施方案，所述化合物或偶联物是：
Figure BDA0003169092350001161
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，或其区域异构体，其中：
BA是结合剂；
k是从1至30的整数；
Q1、Q2、W、R1、R2、R4、R5和R6均如式I的上下文中所述；
各R9分别为–CH3或–(CH2)3N(H)C(O)NH2；和
各A分别为–O–、–N(H)–、
Figure BDA0003169092350001171
Figure BDA0003169092350001172
Figure BDA0003169092350001173
其中ZZ是H、或如本发明其他地方所讨论的氨基酸的侧链。例如，在一个实施方案，ZZ是C1-6烷基。作为另一实例，在一个实施方案，ZZ是C1-6杂烷基。
在一些实施方案，所述化合物或偶联物是：
Figure BDA0003169092350001174
Figure BDA0003169092350001181
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，或其区域异构体，其中：
BA是结合剂；
k是从1至30的整数；
Q1、Q2、W、R1、R2、R4、R5和R6均如式I的上下文中所述；
各R9分别为–CH3或–(CH2)3N(H)C(O)NH2；和
各A分别为–O–、–N(H)–、
Figure BDA0003169092350001191
Figure BDA0003169092350001192
Figure BDA0003169092350001193
其中ZZ是H、或如本发明其他地方所讨论的氨基酸的侧链。例如，在一个实施方案，ZZ是C1-6烷基。作为另一实例，在一个实施方案，ZZ是C1-6杂烷基。
在上述每个实施方案中，所述偶联物可由用叠氮基团及其残基官能化的结合剂制得，如下文章节中所述。为方便起见，上述几种结构中的三唑残基描述于括号内。技术人员将认识到，三唑可由叠氮化物衍生的结合剂的叠氮化物基团与连接体-有效负载LP的炔来形成。
在一些实施方案，所述化合物或偶联物选自：
Figure BDA0003169092350001194
Figure BDA0003169092350001201
Figure BDA0003169092350001211
Figure BDA0003169092350001221
Figure BDA0003169092350001231
Figure BDA0003169092350001241
Figure BDA0003169092350001251
Figure BDA0003169092350001261
Figure BDA0003169092350001271
Figure BDA0003169092350001281
Figure BDA0003169092350001291
Figure BDA0003169092350001301
Figure BDA0003169092350001311
或其区域异构体、或立体异构体形式。在本段的任一实施方案中，BA是结合剂。在本段的任一实施方案中，BA是抗体、或其抗原结合片段。在本段的任一实施方案中，k是从1至30的整数。在本段的任一实施方案中，k是1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10。在本段的任一实施方案中，k是1-2、1-3、2-3、2-4、3-4或1-4的范围。在本段的任一实施方案中，k是1。在本段的任一实施方案中，k是2。在本段的任一实施方案中，k是3。在本段的任一实施方案中，k是4。
本发明还提供了选自由下列组成的组的ADC：
Figure BDA0003169092350001321
Figure BDA0003169092350001331
Figure BDA0003169092350001341
在提供的任一化合物或偶联物实施方案中，BA是结合HER2的抗体或其抗原结合片段。在提供的任一化合物或偶联物实施方案中，BA是结合PRLR的抗体或其抗原结合片段。在提供的任一化合物或偶联物实施方案中，BA是抗体或其抗原结合片段，并通过至少一个Q295残基进行偶联。在提供的任一化合物或偶联物实施方案中，BA是抗体或其抗原结合片段，并通过两个Q295残基进行偶联。在提供的任一化合物或偶联物实施方案中，BA是N297Q抗体或其抗原结合片段。在提供的任一化合物或偶联物实施方案中，BA是N297Q抗体或其抗原结合片段，并通过至少一个Q295残基和至少一个Q297残基进行偶联。在提供的任一化合物或偶联物实施方案中，BA是N297Q抗体或其抗原结合片段，并通过两个Q295残基和两个Q297残基进行偶联。在特定实施方案，编号是根据EU编号系统进行。
在上述任一实施方案中，BA是抗-MSR1抗体。在某些实施方案，BA是以下实施例中描述的抗MSR1抗体H1H21234N。在某些实施方案，BA是以下实施例中描述的抗MSR1抗体H1H21234NN297Q。
在某些实施方案，BA是包含根据SEQ ID NO：2的HCVR和根据SEQ ID NO：10的LCVR的抗MSR1抗体。在某些实施方案，BA是抗MSR1抗体，其包含分别根据SEQ ID NO：4、SEQ IDNO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14和SEQ ID NO：16的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3中的1、2、3、4、5或6个。在某些实施方案，所述HCVR是由SEQ IDNO：1编码。在某些实施方案，所述LCVR是由SEQ ID NO：9编码。在某些实施方案，HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3中的1、2、3、4、5或6个分别由所述多核苷酸序列SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：15编码。N297Q表示一个或多个残基297从天冬酰胺(N)突变为谷氨酰胺(Q)。优选地，每个残基297分别突变为Q。在优选实施方案，编号是根据EU编号系统进行。在本段的某些实施方案中，k是1至4。在某些实施方案，k是1、2、3或4。在某些实施方案，k是4。在某些实施方案，BA是抗MSR1抗体，其记载在于2019年5月8日提交的WO 2019/217591中，其内容通过引用其全文并入本发明。
制备化合物的方法
本发明提供的化合物可通过本领域技术人员显而易见的任何方法制备、分离或得到。在以下实施例中详细描述了示例性制备方法。在某些实施方案，本发明提供的化合物可根据合成方案A和B制备得到。
合成方案A.示例性制备方案
Figure BDA0003169092350001351
在示例性制备方案A中，Q1、Q2、W、R1、R2、R6和n均具有式(I)的上下文中所述定义。最初的酯化反应之后，要么保护R1和/或将R1胺化以生成R2P。在保护R1之后，对例如羧酸部分进行皂化和活化以提供具有Q1的第一偶联配偶体。在对例如羧酸部分进行胺化、皂化和酰胺化之后，提供具有Q2的第二偶联配偶体。分别将具有Q1和Q2的偶联配偶体进行连接，然后分别使R1和R2脱保护，以提供式I所示化合物。在下述实施例中详细描述了示例性制备方法。
在某些实施方案，一个或多个保护或脱保护步骤可包括在以上合成方案A的所述制备方法中。
本发明所述的连接体-有效负载可通过一系列偶联步骤合成得到。例如，右侧的有效负载可通过一种或多种标准偶联反应连接至SP2。在有利的实施方案中，本发明所述的有效负载化合物包括可用于本发明所述的酰胺合成条件下偶联的游离氨基基团。(AA)p1的氨基酸可通过酰胺合成条件，例如肽合成条件，来进行添加。间隔基团SP2可通过一种或多种标准偶联反应与(AA)p1连接。在有利的实施方案中，本发明所述的SP2和(AA)p1基团包括可用于本发明所述的酰胺合成条件下偶联的游离氨基或羧基基团。当存在时，间隔基团SP3可通过一种或多种标准偶联反应与(AA)p1连接。在有利的实施方案，本发明所述的SP3和(AA)p1基团包括可用于本发明所述的酰胺合成条件下偶联的游离氨基或羧基基团。
合成方案B1.示例性制备方案
Figure BDA0003169092350001361
在示例性制备方案B1中，B1被氧化脱羧以提供B2，然后B2被有效负载(HO-有效负载或H2N-有效负载)取代以得到B3或B4。或者，B5被酯化、或肽与有效负载(分别为HO-有效负载或H2N-有效负载)偶联以得到B6或B7。
合成方案B2.示例性制备方案
Figure BDA0003169092350001371
在示例性制备方案B2中，B3、B4、B6或B7是与BB偶联的肽，然后脱保护得到B8、B9、B10或B11。B8-B11各自独立地为肽，其与受保护的谷氨酸的任一对映体偶联得到B12-B19。B20或B21羧酸酯被活化以提供B22或B23，然后其各自独立地偶联至B12-B19之一以提供B24-B27。
当存在间隔基团SP3时，其以活性基团RG终止。所述活性基团可通过本领域技术人员认为合适的偶联条件与增强剂EG连接。在某些实施方案，间隔基团SP3通过酰胺合成条件连接至增强剂EG。在某些实施方案，间隔基团SP3通过点击化学连接至增强剂EG。在这些实施方案中，间隔基团SP3以适于点击反应的活性基团(例如叠氮化物或炔烃)终止，和增强剂EG包含适于点击反应的互补活性基团，例如炔烃或叠氮化物。在优选实施方案，SP3以应变炔终止，和EG包含叠氮化物；或SP3以羧酸终止，和EG包含胺。当EG为环糊精基团部分时，所述环糊精可包含叠氮化物。叠氮基环糊精可以合成制备得到或从商业来源得到。当EG为磺酸基团部分时，EG的一个末端以磺酸基团终止，而另一个末端以伯胺或仲胺终止。
本发明所述的偶联物可通过在标准偶联条件下将本发明所述的连接体-有效负载与结合剂(例如抗体)偶联来合成得到(参见例如，Doroninaetal.NatureBiotechnology2003,21,7,778，其通过引用其全部内容并入本发明)。当所述结合剂是抗体时，所述抗体可通过抗体的一个或多个半胱氨酸或赖氨酸残基偶联至连接体-有效负载。连接体-有效负载可以，例如通过使抗体经受还原剂(例如二硫苏糖醇)的作用以切割抗体的二硫键，例如通过凝胶过滤纯化所述还原的抗体，然后用含有合适的活性基团部分(例如马来酰亚胺基)的连接体-有效负载处理所述抗体，从而与半胱氨酸残基偶联。合适的溶剂包括但不限于水、DMA、DMF、和DMSO。含有活性基团例如活化的酯或酰基卤基团的连接体-有效负载可与抗体的赖氨酸残基偶联。合适的溶剂包括但不限于水、DMA、DMF、和DMSO。偶联物可使用已知的蛋白质技术进行纯化，包括例如体积排除色谱法、透析法和超滤/渗滤法。
结合剂，例如抗体，也可通过点击化学反应进行偶联。在所述点击化学反应的一些实施方案中，连接体-有效负载包括能够与叠氮化物进行1,3-环加成反应的活性基团，例如炔。此类合适的活性基团如上所述。所述抗体包括一个或多个叠氮基团。此类抗体包括用例如叠氮基-聚乙二醇基团官能化的抗体。在某些实施方案，此类官能化抗体通过在转谷氨酰胺酶存在下，用伯胺化合物处理具有至少一个谷氨酰胺残基(例如重链Gln295或Gln55)的抗体，进行衍生得到。在某些实施方案，此类官能化抗体通过在转谷氨酰胺酶存在下，用伯胺化合物处理具有至少一个谷氨酰胺残基(例如重链Gln297)的抗体，进行衍生得到。此类抗体包括Asn297Gln(N297Q)突变体。在某些实施方案，此类官能化抗体通过在转谷氨酰胺酶存在下，用伯胺化合物处理具有至少两个谷氨酰胺残基(例如重链Gln295和重链Gln297)的抗体，进行衍生得到。此类抗体包括Asn297Gln(N297Q)突变体。在某些实施方案，所述抗体具有如本段所述的两条重链，用于总共两个或总共四个谷氨酰胺残基。
在某些实施方案，所述抗体包含两个谷氨酰胺残基，每条重链中有一个。在特定实施方案，所述抗体在每条重链中包含Q295残基。在进一步的实施方案，所述抗体包含1、2、3、4、5、6、7、8个、或更多个谷氨酰胺残基。所述这些谷氨酰胺残基可位于重链中、轻链中、或位于重链和轻链两者中。示例性谷氨酰胺残基包括Q55。所述这些谷氨酰胺残基可以是野生型残基、或工程化残基。所述抗体可根据标准技术制备得到。
本领域技术人员将认识到，抗体通常在重链序列中的残基Q295附近的残基N297处进行糖基化。残基N297处的糖基化可干扰残基Q295处的转谷氨酰胺酶(Dennler et al.，同上)。因此，在有利的实施方案中，所述抗体未被糖基化。在某些实施方案，所述抗体是去糖基化的或无糖基化的。在特定实施方案，所述抗体重链具有N297突变。换言之，所述抗体突变为在位置297处不再具有天冬酰胺残基。在特定实施方案，抗体重链具有N297Q突变。此类抗体可通过定点诱变除去糖基化序列或使糖基化序列无效或通过定点诱变将谷氨酰胺残基插入位点而不会导致抗体功能或结合功能丧失，来制备得到。在一些实施方案，具有Q295残基和/或N297Q突变的抗体在其可变区中含有一个或多个另外的天然存在的谷氨酰胺残基，转谷氨酰胺酶可接近这些残基，因此所述这些残基能够与连接体或连接体-有效负载偶联。可在例如轻链的Q55处找到示例性天然存在的谷氨酰胺残基。在此种情况下，通过转谷氨酰胺酶偶联的抗体可具有高于预期的药物抗体比值(DAR)(例如，DAR高于4)。可从天然来源或人工来源分离得到任何此类抗体。
然后使不干扰糖基化的抗体与伯胺化合物反应。在某些实施方案，使无糖基化的抗体与伯胺化合物反应以生成经谷氨酰胺基修饰的抗体。在某些实施方案，使去糖基化的抗体与伯胺化合物反应以生成经谷氨酰胺基修饰的抗体。
抗体的氨基酸序列可使用任何已知的编号方案进行编号，包括由Kabat等人描述的方案(“卡巴(Kabat)”编号方案)；Al-Lazikani et al.,1997,J.Mol.Biol.,273:927-948中描述的方案(“柯西亚(Chothia)”编号方案)；MacCallum et al.,1996,J.Mol.Biol.262:732-745中描述的方案(“接触(Contact)”编号方案)；Lefranc et al.,Dev.Comp.Immunol.,2003,27:55-77中描述的方案(“IMGT”编号方案)；以及Honegge andPlückthun,J.Mol.Biol.,2001,309:657-70中描述的方案(“AHo”编号方案)。除非另有说明，否则本发明中使用的编号方案是卡巴(Kabat)编号方案。然而，编号方案的选择并不旨在暗示在序列不存在的情况下存在差异，并且本领域技术人员可通过检查一个或多个抗体的氨基酸序列来容易地确证序列位置。除非另有说明，否则当提及抗体重链恒定区中的残基时，通常使用“EU编号方案”(例如，如Kabat等人所报告，见上文)。
术语“非糖基化抗体”或“无糖基化抗体”是指不包含可能干扰转谷氨酰胺化反应的糖基化序列的抗体，例如在一个或多个重链的N297处不具有糖基团的抗体。在特定实施方案，抗体重链具有N297突变。换言之，根据Kabat等人公开的EU编号系统，所述抗体被突变为在位置297处不再具有天冬酰胺残基。在特定实施方案，抗体重链具有N297Q或N297D突变。可通过定点诱变来去除糖基化序列或使糖基化序列无效或通过定点诱变将谷氨酰胺残基插入除任何干扰糖基化位点或任何其他干扰结构之外的位点来制备此类抗体。此类抗体也可从天然来源或人工来源分离得到。
术语“去糖基化抗体”是指其中N297处的糖基团被去除，从而打开Q295以进行转谷氨酰胺化的抗体。在特定实施方案，本发明提供了包括将抗体(例如N297抗体)去糖基化的额外步骤的方法。
伯胺可以是在转谷氨酰胺酶存在下能够与谷氨酰胺残基形成共价键的任何伯胺。有用的伯胺如下所述。所述转谷氨酰胺酶可以是本领域技术人员认为合适的任何转谷氨酰胺酶。在某些实施方案，所述转谷氨酰胺酶是催化伯胺化合物上的游离胺基团与谷氨酰胺残基侧链上的酰基基团之间的异肽键形成的酶。转谷氨酰胺酶也称为蛋白质-谷氨酰胺-γ-谷氨酰转移酶。在特定实施方案，所述转谷氨酰胺酶被分类为EC2.3.2.13。所述转谷氨酰胺酶可以来自认为合适的任何来源。在某些实施方案，所述转谷氨酰胺酶是微生物。有用的转谷氨酰胺酶已从茂原链轮丝菌(Streptomyces mobaraense)、肉桂链霉菌(Streptomyces cinnamoneum)、灰肉链霉菌(Streptomyces griseo-carneum)、淡紫灰链霉菌(Streptomyces lavendulae)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)中分离得到。也可使用非微生物的转谷氨酰胺酶，包括哺乳动物的转谷氨酰胺酶。在某些实施方案，所述转谷氨酰胺酶可通过任何技术生成或从本领域技术人员认为合适的任何来源得到。在特定实施方案，所述转谷氨酰胺酶得自商业来源。
在特定实施方案，所述伯胺化合物包含能够在转谷氨酰胺化之后进一步反应的活性基团。在所述这些实施方案中，可将经谷氨酰胺基修饰的抗体与活性有效负载化合物、连接体-有效负载或活性连接体-有效负载化合物反应或用活性有效负载化合物、连接体-有效负载或活性连接体-有效负载化合物处理以形成抗体-有效负载偶联物。在某些实施方案，所述伯胺化合物包含叠氮化物。
在某些实施方案，将经谷氨酰胺基修饰的抗体与连接体-有效负载或活性连接体-有效负载反应或用连接体-有效负载或活性连接体-有效负载处理以形成抗体-有效负载偶联物。所述反应可在本领域技术人员认为合适的条件下进行。在某些实施方案，使经谷氨酰胺基修饰的抗体与连接体-有效负载或活性连接体-有效负载化合物在适于在经谷氨酰胺基修饰的抗体与连接体-有效负载化合物之间形成键的条件下接触。合适的反应条件是本领域技术人员周知的。
以下实施例中提供了示例性反应。
药物组合物和治疗方法
本发明提供了治疗和预防疾病、病况或病症的方法，其包含施用治疗或预防有效量的本发明公开的一种或多种化合物，例如本发明提供的通式的一种或多种化合物。疾病、病症和/或病况包括但不限于与本发明所列抗原相关的那些。
本发明所述的化合物可以单独施用或与一种或多种附加治疗剂一同施用。可在施用本发明所述化合物之前、同时或之后不久施用一种或多种附加治疗剂。本发明还包括药物组合物，其包含任何本发明所述化合物与一种或多种附加治疗剂组合，以及治疗方法，所述方法包含向有需要的受试者施用此类组合。
合适的附加治疗剂包括但不限于：第二糖皮质激素，自身免疫治疗剂，激素，生物药，或单克隆抗体。合适的治疗剂还包括但不限于本发明所述化合物的任何药学上可接受的盐类、酸类或衍生物类。
在本发明所述方法的一些实施方案中，可在限定的时间疗程中向受试者施用多剂量的本发明所述化合物(或包含本发明所述化合物和本发明提及的任何附加治疗剂的组合的药物组合物)。根据本发明内容的此方面的方法包括向受试者依次施用多剂量的本发明所述化合物。本发明使用的“依次施用”是指在不同的时间点，例如在以预定间隔(例如，小时、天、周、或月)隔开的不同天，将化合物的每个剂量施用于受试者。本发明包含以下方法，所述方法包含依次向患者施用单一初始剂量的本发明所述化合物，随后施用一个或多个二次剂量的所述化合物，以及任选地后续施用一个或多个三次剂量的所述化合物。
术语“初始剂量”，“二次剂量”，和“三次剂量”是指本发明所述化合物的给药时间顺序。因此，“初始剂量”是在治疗方案开始时给药的剂量(也称为“基线剂量”)；“二次剂量”是在所述初始剂量给药后施用的剂量；和“三次剂量”是在所述二次剂量给药后施用的剂量。所述初始、二次和三次剂量均可含有相同量的本发明化合物，但通常可在给药频率方面彼此不同。在一些实施方案，在治疗过程中，所述初始、二次和/或三次剂量中所含的化合物的量彼此变化(例如，酌情上调或下调)。在一些实施方案，在治疗方案开始时，将两种或更多种(例如，2、3、4或5种)剂量施用为“负荷剂量”，随后以较不频繁的方式施用后续剂量(例如“维持剂量”)。
在本发明所述的一些示例性实施方案中，每个二次和/或三次剂量在紧随前述剂量之后进行给药1至26周(例如，1、11/2、2、21/2、3、31/2、4、41/2、5、51/2、6、61/2、7、71/2、8、81/2、9、91/2、10、101/2、11、111/2、12、121/2、13、131/2、14、141/2、15、151/2、16、161/2、17、171/2、18、181/2、19、191/2、20、201/2、21、211/2、22、221/2、23、231/2、24、241/2、25、251/2、26、261/2、或更多)。本发明使用的短语“紧随前述剂量”是指在多次给药的序列中，在施用紧邻下一个剂量之前，对患者施用本发明化合物的剂量，在所述给药序列中不存在干预剂量。
本发明此方面的方法可包含向患者施用任何数量的二次和/或三次剂量的本发明化合物。譬如，在一些实施方案，仅向患者施用单次二次剂量。在其他实施方案，向患者施用两次或更多次(例如，2、3、4、5、6、7、8次或更多次)二次剂量。同理，在某些实施方案，仅向患者施用单次三次剂量。在其他实施方案，向患者施用两次或更多次(例如，2、3、4、5、6、7、8次或更多次)三次剂量。给药方案可在特定受试者的寿命期内无限期地进行，或者直至此种治疗不再是治疗需要或有利的。
在涉及多个二次剂量的实施方案中，每个二次剂量可以与其他二次剂量相同的频率施用/给药。譬如，每个二次剂量可在紧随前述剂量之后，对患者进行给药1至2周或1至2个月。同理，在涉及多个三次剂量的实施方案中，每个三次剂量可以与其他三次剂量相同的频率施用/给药。譬如，每个三次剂量可在紧随前述剂量之后，对患者进行给药2至12周。在本发明的一些实施方案中，向患者施用二次和/或三次剂量的频率可在治疗方案的过程中变化。也可根据临床检查后的个体患者的需要，由医师在治疗过程中调整给药频率。
本发明包括其中以第一频率(例如，每周一次，每两周一次，每三周一次，每月一次，每两个月一次等)向患者施用2至6次负荷剂量，然后以较不频繁的方式向患者施用两次或更多次维持剂量的给药方案。例如，根据本发明的此方面，如果以每月一次的频率施用负荷剂量，那么维持剂量可以每6周施用一次，每两个月施用一次，每三个月施用一次等。
本发明包括本发明所述化合物、有效负载、连接体-有效负载、和/或偶联物(例如式I、II、和/或III所示化合物)的药物组合物，譬如，组合物包含本发明所述化合物、其盐、立体异构体、多晶型物，和药学上可接受的载体、稀释剂、和/或辅料。合适的载体、稀释剂和辅料的实例包括，但不限于：用于维持适当组合物pH值的缓冲剂类(例如，柠檬酸盐缓冲液、琥珀酸盐缓冲液、乙酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、乳酸盐缓冲液、草酸盐缓冲液等)，载体蛋白质类(如人血清白蛋白)，盐水，多元醇类(例如，海藻糖、蔗糖、木糖醇、山梨糖醇等)，表面活性剂类(例如，聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、聚氧乙烯酸酯(polyoxolate)等)，抗微生物剂类，和抗氧化剂类。
在一些实施例，本发明提供了治疗疾病、病症或病况的方法，包括向患有所述病症的患者施用治疗有效量的式I、II、和/或III的化合物或其药物组合物。
在一些实施例，本发明提供了预防疾病、病症或病况的方法，包括向患有所述病症的患者施用预防有效量的式I、II、和/或III的化合物或其药物组合物。
在一些实施例，本发明提供了用于治疗或预防响应于LXR信号传导调节的任何疾病、病症或病况的方法。在一些实施例，所述疾病或病症与LXR功能、LXR多态性、LXR激动剂活性、或LXR拮抗剂活性有关。在一些实施例，本发明提供了治疗或预防选自由以下组成的组的疾病、病症或病况的方法：增殖性疾病，神经退行性疾病，免疫疾病，自身免疫性疾病，炎性疾病，皮肤病，代谢性疾病，心血管疾病和胃肠道疾病。
所述增殖性疾病可以是技术人员已知的任何增殖性疾病。在某些实施方案，所述增殖性疾病包括但不限于肿瘤学疾病，其中所述肿瘤学疾病可以是技术人员已知的任何癌症疾病。在某些实施方案，本发明提供了治疗或预防黑素瘤的方法。在某些实施方案，本发明提供了治疗或预防转移性黑素瘤的方法。在某些实施方案，本发明提供了治疗或预防肺癌的方法。在某些实施方案，本发明提供了治疗或预防EGFR-酪氨酸激酶抑制剂抗性肺癌的方法。在某些实施方案，本发明提供了治疗或预防口腔癌的方法。在某些实施方案，本发明提供了治疗或预防口腔鳞状细胞癌的方法。在某些实施方案，本发明提供了治疗或预防前列腺癌的方法。在某些实施方案，本发明提供了治疗或预防霍奇金淋巴瘤的方法。在某些实施方案，本发明提供了治疗或预防乳腺癌的方法。
所述神经退行性疾病可以是技术人员已知的任何神经退行性疾病。在某些实施方案，本发明提供了治疗或预防阿尔茨海默病的方法。在某些实施方案，本发明提供了治疗或预防帕金森病的方法。在某些实施方案，本发明提供了治疗或预防亨廷顿病的方法。在某些实施方案，本发明提供了治疗或预防肌萎缩性侧索硬化症的方法。在某些实施方案，本发明提供了治疗或预防髓磷脂基因表达的方法。在某些实施方案，本发明提供了治疗或预防髓鞘化和再髓鞘化病况、疾病或病症的方法。
所述免疫疾病可以是技术人员已知的任何免疫疾病。在某些实施方案，本发明提供了治疗或预防炎症性肠病的方法。在某些实施方案，本发明提供了治疗或预防溃疡性结肠炎的方法。在某些实施方案，本发明提供了治疗或预防克罗恩病的方法。
所述炎性疾病可以是技术人员已知的任何炎性疾病。在某些实施方案，本发明提供了治疗或预防关节炎的方法。在某些实施方案，本发明提供了治疗或预防类风湿性关节炎的方法。
所述代谢性疾病可以是技术人员已知的任何代谢性疾病。在某些实施方案，所述代谢性疾病是血脂异常。血脂异常可以是本领域技术人员已知的任何血脂异常。在某些实施方案，所述血脂异常选自由以下组成的组：高脂血症，高胆固醇血症，高甘油三酯血症，高脂蛋白血症，HDL缺乏症，ApoA-I缺乏症，和心血管疾病例如冠状动脉疾病(包括，例如，治疗和预防心绞痛、心肌梗塞、和心源性猝死)；动脉粥样硬化(包括，例如，治疗和预防动脉粥样硬化)；和再狭窄(包括，例如，预防或治疗由于诸如气囊血管成形术之类的医疗程序而形成的动脉粥样硬化斑块)。在某些实施方案，本发明提供了治疗或预防糖尿病的方法。
所述心血管疾病可以是技术人员已知的任何心血管疾病。在某些实施方案，本发明提供了治疗或预防动脉粥样硬化的方法。在某些实施方案，本发明提供了治疗或预防源自异常巨噬细胞加工的动脉粥样硬化的方法。在某些实施方案，本发明提供了治疗或预防源自氧化的低密度脂蛋白(oxLDL)形成的动脉粥样硬化的方法，其中巨噬细胞不能加工氧化的低密度脂蛋白(oxLDL)。在某些实施方案，本发明提供了治疗或预防缺血性心脏病的方法。在某些实施方案，本发明提供了治疗或预防中风的方法。在某些实施方案，本发明提供了治疗或预防高血压性心脏病的方法。在某些实施方案，本发明提供了治疗或预防主动脉瘤的方法。在某些实施方案，本发明提供了治疗或预防心内膜炎的方法。在某些实施方案，本发明提供了治疗或预防外周动脉疾病的方法。在某些实施方案，本发明提供了治疗或预防本段提供的任何疾病的组合的方法。
在一些实施例，本发明提供了调节核受体功能的方法。作为非限制性实例，所述功能可选自炎性介质(例如细胞因子、趋化因子)的表达/分泌，胆固醇调节，胆固醇摄入，胆固醇外排，胆固醇氧化、迁移、趋化性，细胞凋亡和坏死，炎性活性，脂质调节，细胞凋亡、迁移、趋化性，基因转录，和蛋白质表达。
实施例
本发明提供了新的双八氢菲羧酰胺类化合物，其蛋白质偶联物，以及用于治疗疾病、病症和病况的方法，包括施用所述双八氢菲羧酰胺类化合物和偶联物。
在一些实施例，式(I)所示化合物是表1中鉴定的化合物。
表1.有效负载列表
Figure BDA0003169092350001431
Figure BDA0003169092350001441
Figure BDA0003169092350001451
Figure BDA0003169092350001461
本发明的连接体-有效负载的实例包括但不限于下表2中所述的那些。
表2.连接体-有效负载列表
Figure BDA0003169092350001471
Figure BDA0003169092350001481
Figure BDA0003169092350001491
通过以下非限制性实施例来阐明本发明的某些实施方案。
除非另有明确说明，否则试剂和溶剂均得自商业来源，例如国药集团化学试剂有限公司(Sinopharm ChemicalReagentCo.(SCRC))、Sigma-Aldrich、Alfa或其他供应商。
在Bruker AVIII 400或Bruker AVIII 500上记录1H NMR和其他NMR光谱。用Nuts软件或MestReNova软件处理数据，测定内标四甲基硅烷(TMS)低磁场的质子位移百万分率(ppm)。
HPLC-MS测定在Agilent 1200HPLC/6100SQ系统上运行，使用以下条件：
用于HPLC-MS测定的方法A包括作为流动相：A：水(0.01％三氟乙酸TFA)和B：乙腈(0.01％TFA)；梯度相：在15分钟(min)的时间段内，以1.0mL/min的流速由5％的B增至95％的B；所用色谱柱为SunFire C18，4.6x50mm，3.5μm。柱温为50℃。检测器包括模数转换器蒸发光散射检测器(以下简称“ADC ELSD”)，二极管阵列检测器(DAD，214nm和254nm)，和电喷雾电离-大气压电离(ES-API)。
用于HPLC-MS测定的方法B包括作为流动相：A：水(10mMNH4HCO3)和B：乙腈；梯度相是在15分钟(min)内，以1.0mL/min的流速由5％增至95％的B；所用色谱柱为XBridgeC18，4.6x50mm，3.5μm。柱温为50℃。检测器包括ADCELSD，DAD(214nm和254nm)，和质量选择检测器(MSD ES-API)。
LC-MS测定在Agilent 1200HPLC/6100SQ系统上运行，使用以下条件：
用于LC-MS测定的方法A是在WATERS 2767仪器上进行。色谱柱为Shimadzu Shim-Pack，PRC-ODS，20x250mm，15μm，两个串联连接；流动相是A：水(0.01％TFA)和B：乙腈(0.01％TFA)。梯度相是在3分钟内，以1.8-2.3mL/min的流速由5％的B增至95％的B。色谱柱为SunFireC18，4.6x50mm，3.5μm。柱温为50℃。检测器包括ADC ELSD，DAD(214nm和254nm)，和MSD ES-API。
用于LC-MS测定的方法B是在Gilson GX-281仪器上进行。色谱柱为Xbridge PrepC1810 um OBD，19x250mm。流动相是A：水(10mMNH4HCO3)，B：乙腈。梯度相是在3分钟内，以1.8-2.3mL/min的流速由5％的B增至95％的B。色谱柱是XBridge C18，4.6x50mm，3.5μm。柱温为50℃。检测器包括ADC ELSD，DAD(214nm和254nm)，和MSD ES-API。
在Gilson GX-281仪器上进行制备型高压液相色谱(制备型HPLC)。采用两种溶剂体系，一种为酸性，另一种为碱性。所述酸性溶剂体系(方法A)包括Waters SunFire 10μmC18柱(
Figure BDA0003169092350001502
250x19mm)。用于制备型HPLC的溶剂A是0.05％TFA的水溶液，溶剂B是乙腈。洗脱条件是线性梯度，其在20分钟的时间段内以30mL/min的流速，从5％的溶剂B增至100％的溶剂B。碱性溶剂体系(方法B)包括Waters Xbridge 10μmC18柱(
Figure BDA0003169092350001503
250x19mm)。用于制备型HPLC的溶剂A是10mM碳酸氢铵(NH4HCO3)的水溶液，溶剂B是乙腈。洗脱条件是线性梯度，其在20分钟的时间段内以30mL/min的流速，从5％的溶剂B增至100％的溶剂B。
使用Agela闪烁柱(Flash Column)硅胶-CS(silica-CS)在Biotage仪器上进行快速色谱法。除非另有明确说明，否则在Biotage仪器上使用Boston ODS或Agela C18柱进行反相快速色谱法。
如本发明使用的，无论是否具体定义了特定的缩写，所述这些方法、方案和实施例中使用的符号和惯例均与当代科学文献(例如，《美国化学学会杂志》或《生物化学杂志》)中使用的那些一致。具体但不限于，以下缩写可用于实施例和整个说明书：
Figure BDA0003169092350001501
Figure BDA0003169092350001511
Figure BDA0003169092350001521
制备方法
实施例1
本实施例说明了合成上述表1中罗汉松酸衍生物P1、P15和P2的一般方法。本实施例涉及图1中编号为1至12a-b以及P1、P15和P2的化合物。
(1S,4aS,10aR)-6-羟基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羧酸甲酯(2)
Figure BDA0003169092350001522
向罗汉松酸(1，90g，0.33mol)的甲醇(200mL)和甲苯(600mL)溶液中加入(三甲基硅烷基)重氮甲烷(2M的己烷溶液，200mL)。反应混合物在室温下搅拌2小时。然后根据LCMS监测，罗汉松酸完全耗尽。真空浓缩除去挥发物，将残余物采用石油醚(2L)进行研磨，得到化合物2(91g，96％收率)为白色固体。ESI m/z:289(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSOd6)δ8.95(s,1H),6.79(d,J＝8.2Hz,1H),6.63(d,J＝2.4Hz,1H),6.48(dd,J＝8.2,2.4Hz,1H),3.58(s,3H),2.80-2.55(m,2H),2.20-2.02(m,3H),1.96-1.71(m,2H),1.56-1.45(m,2H),1.27(t,J＝13.5Hz,1H),1.21(s,3H),1.09(td,J＝13.5,4.1Hz,1H),0.91(s,3H)ppm。
(1S,4aS,10aR)-1,4a-二甲基-6-(三氟甲磺酰氧基)-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羧酸甲酯(3)
Figure BDA0003169092350001531
在氮气氛下，向化合物2(10g，35mmol)的二氯甲烷(200mL)溶液中加入吡啶(3.3g，42mmol)和DMAP(0.84g，6.9mmol)。将混合物冷却至-78℃，加入三氟甲酸酐(12g，42mmol)，然后使所得混合物升温至25℃，并在25℃下再搅拌4小时。反应混合物用DCM(500mL)稀释，然后用水(100mL)、盐酸水溶液(1N，150mL)和盐水(100mL)洗，经硫酸钠干燥，真空浓缩，得到粗品化合物3(14g，97％粗收率)为粘稠油状物，其纯度足以用于下一步骤。所述粗品化合物3可通过快速色谱法(0-10％乙酸乙酯的石油醚溶液)纯化，得到纯产物3为粘稠油状物。ESI m/z:421.2(M+1)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.12(d,J＝2.5Hz,1H),7.10(d,J＝8.5Hz,1H),6.97(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H),3.67(s,J＝3.4Hz,3H),2.93(dd,J＝17.2,4.4Hz,1H),2.85-2.71(m,1H),2.29(d,J＝13.5Hz,1H),2.25-2.14(m,2H),2.03-1.89(m,2H),1.71-1.61(m,1H),1.56-1.48(m,1H),1.40(td,J＝13.4,4.2Hz,1H),1.30-1.22(m,3H),1.09(td,J＝13.6,4.2Hz,1H),1.02(s,3H)ppm。
(1S,4aS,10aR)-6-((叔丁氧基羰基)氨基)-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羧酸甲酯(4)
Figure BDA0003169092350001532
在室温下，向化合物3(14g，34mmol)和氨基甲酸叔丁酯(BocNH2，7.9g，68mmol)的叔丁醇(100mL)溶液中依次加入碳酸铯(22g，68mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(Pd2(dba)3，1.8g，2.0mmol)和2-二环己基磷-2,4,6-三异丙基联苯(X-Phos，1.8g，4.0mmol)。将混合物脱气并用氩气排气3次，然后在80℃下、在氩气氛(气球)下搅拌过夜，直至通过TLC监测，化合物3已完全耗尽。冷却至室温后，反应混合物用乙酸乙酯稀释并通过硅藻土过滤。固体用乙酸乙酯洗3次。合并的滤液真空浓缩，所得残余物经硅胶柱色谱法(0-6.25％乙酸乙酯的石油醚溶液)纯化，得到化合物4(11g，82％收率)为白色固体。ESI m/z:410(M+23)+。1HNMR(500MHz,DMSOd6)δ9.07(s,1H),7.39(s,1H),7.13(d,J＝8.5Hz,1H),6.87(d,J＝8.3Hz,1H),3.59(s,3H),2.76(dd,J＝16.4,4.5Hz,1H),2.70-2.61(m,1H),2.16-2.05(m,3H),2.00-1.75(m,2H),1.65-1.50(m,2H),1.45(s,9H),1.31-1.25(m,1H),1.21(s,3H),1.10(td,J＝13.5,4.1Hz,1H),0.92(s,3H)ppm。
(1S,4aS,10aR)-6-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羧酸(5)
Figure BDA0003169092350001541
在室温下，向化合物4(4.9g，13mmol)的DMSO溶液中一次性加入叔丁醇钾(15g，0.13mol)。反应混合物在氩气氛下、于60℃下搅拌3小时，直至根据LCMS监测反应完成。冷却至室温后，将反应混合物倒入冰中，然后用盐酸水溶液(0.5M)缓慢酸化至pH值为5，在此期间温度不超过25℃。通过过滤收集沉淀物，然后用水洗几次。粗产物经硅胶柱色谱法进一步纯化(0-20％乙酸乙酯的石油醚溶液)，得到化合物5(4.5g，93％收率)为白色固体。ESI m/z:318(M-55)+。1H NMR(500MHz,DMSOd6)δ12.08(s,1H),9.08(s,1H),7.40(s,1H),7.11(s,1H),6.87(d,J＝8.3Hz,1H),2.79-2.68(m,1H),2.65(d,J＝12.6Hz,1H),2.17-2.03(m,4H),1.94-1.76(m,2H),1.53(d,J＝13.7Hz,1H),1.46(d,J＝7.4Hz,9H),1.29-1.14(m,5H),1.04(s,3H)ppm。
N-[(4bS,8S,8aR)-8-氨基甲酰基-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酸叔丁酯(6)
Figure BDA0003169092350001542
向5(4.5g，12mmol)和HATU(4.9g，13mmol)的DMF(50mL)溶液中加入二异丙基乙胺(20mL，0.12mol)，将混合物在25℃下搅拌1小时。然后向混合物中加入氯化铵(16g，0.30mol)，混合物在室温下搅拌过夜。所得混合物用乙酸乙酯稀释，然后用水和盐水洗，经硫酸钠干燥，真空浓缩。所得残余物经快速色谱法(0-20％乙酸乙酯的石油醚溶液)纯化，得到化合物6(4.2g，94％收率)为白色固体。ESI m/z:373.3(M+1)+。1H NMR(500MHz,MeOHd4)δ7.20(s,1H),6.97(d,J＝7.7Hz,1H),6.80(d,J＝8.3Hz,1H),2.77-2.68(m,2H),2.66-2.55(m,1H),2.20(d,J＝12.9Hz,1H),2.13(dd,J＝13.2,5.3Hz,1H),2.08(d,J＝14.0Hz,1H),2.03-1.86(m,2H),1.54(d,J＝11.1Hz,1H),1.40(s,9H),1.26(t,J＝26.7Hz,1H),1.18(s,3H),1.14-1.03(m,4H)ppm。
(1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羧酸甲酯三氟乙酸盐(7)
Figure BDA0003169092350001543
在室温下，向化合物4(6.0g，15mmol)的DCM(60mL)溶液中加入TFA(12mL)。所得混合物在室温下搅拌2小时，直至Boc完全脱去，通过TLC进行监测。真空浓缩反应混合物，得到粗化合物7为TFA盐，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。ESI m/z:288(M+1)+。
(1S,4aS,10aR)-6-(苄氧基)-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羧酸甲酯(8a)
Figure BDA0003169092350001551
将化合物2(12g，40mmol)和碳酸铯(14g，44mmol)的DMF(100mL)混合物在20-25℃下搅拌15分钟。室温下，向所述混合物中加入苄基溴(7.1mL，60mmol)。反应在室温下搅拌4小时后，将所得混合物倒入冷水中，用乙酸乙酯萃取。合并的有机溶液用水和盐水洗，经硫酸钠干燥，真空浓缩。粗产物经快速色谱法(0-10％乙酸乙酯的石油醚溶液)纯化，得到标题化合物8a(13g，89％收率)为白色固体。ESI m/z:379(M+H)+。1H NMR(500MHz,MeOHd4)δ7.60-7.20(m,5H),7.00-6.82(m,2H),6.73(d,J＝7.1Hz,1H),5.03(s,2H),3.66(s,3H),2.95-2.58(m,2H),2.36-2.10(m,3H),2.10-1.85(m,2H),1.70-1.48(m,2H),1.44-1.21(m,4H),1.15(t,J＝17.2Hz,1H),1.01(s,3H)ppm。
(1S,4aS,10aR)-6-(二苄氨基)-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羧酸甲酯(8b)
Figure BDA0003169092350001552
在室温下，向上述获得的粗化合物7(计算量，15mmol)的DMF(60mL)溶液中加入碳酸钾(6.4g，46mmol)和苄基溴(5.8g，34mmol)。将反应混合物于80℃下搅拌过夜，直至通过TLC监测反应完成。冷却至室温后，将混合物倒入冷水(300mL)中，用乙酸乙酯(x 3)萃取。合并的有机溶液用水和盐水洗，经硫酸钠干燥，真空浓缩，得到粗产物8b，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。ESI m/z:468(M+1)+。
(1S,4aS,10aR)-6-(苄氧基)-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羧酸(9a)
Figure BDA0003169092350001553
将化合物8a(11g，29mmol)和叔丁醇钾(33g，0.29mol)的DMSO(0.19L)混合物在100℃下搅拌1小时，直至通过LCMS和TLC监测所述酯完全耗尽。反应冷却至25℃后，混合物用盐酸水溶液(1N)淬灭，然后用乙酸乙酯萃取。合并的有机溶液用盐水洗，经硫酸钠干燥，真空浓缩。所得残余物经硅胶柱色谱法(0-24％乙酸乙酯的石油醚溶液)纯化，得到化合物9a(7.5g，71％收率)为白色固体。ESI m/z:365(M+H)+。1H NMR(500MHz,MeOHd4)δ7.42(d,J＝7.4Hz,2H),7.36(t,J＝7.5Hz,2H),7.30(t,J＝7.3Hz,1H),6.92(d,J＝8.4Hz,1H),6.87(d,J＝2.5Hz,1H),6.72(dd,J＝8.4,2.5Hz,1H),5.02(s,2H),2.82(dd,J＝16.3,4.4Hz,1H),2.77-2.65(m,1H),2.24(d,J＝13.2Hz,2H),2.19(dd,J＝13.8,6.0Hz,1H),2.11-1.96(m,2H),1.64-1.56(m,1H),1.53(d,J＝11.0Hz,1H),1.35(td,J＝13.3,3.7Hz,1H),1.30(s,3H),1.13(s,3H),1.11-1.05(m,1H)ppm。
(1S,4aS,10aR)-6-(二苄氨基)-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羧酸(9b)
Figure BDA0003169092350001561
在室温下，向上述获得的粗化合物8b(计算量，15mmol)的DMSO(100mL)溶液中一次性加入叔丁醇钾(17g，0.15mol)。将反应混合物在氩气氛下于100℃下搅拌2小时直至反应完成，根据LCMS进行监测。冷却至室温后，将反应混合物倒入冰中，然后用盐酸盐水溶液(4M)缓慢酸化至pH 5，在此期间温度不得高于25℃。混合物用乙酸乙酯萃取，合并的有机溶液用水和盐水洗，经硫酸钠干燥，真空浓缩。粗产物经硅胶柱色谱法(0-20％乙酸乙酯的石油醚溶液)纯化，得到化合物9b(6.8g，由化合物4得到的3步收率为99％)为白色固体。ESIm/z:454(M+1)+。
(1S,4aS,10aR)-6-(苄氧基)-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羧酸五氟苯酯(10a)
Figure BDA0003169092350001562
向9a(9.6g，26mmol)的DMF(100mL)溶液中加入DIPEA(14mL，79mmol)和2,2,2-三氟乙酸全氟苯酯(15g，53mmol)。所得混合物在室温下搅拌过夜，并通过LCMS进行监测。然后将反应混合物用乙醚(200mL)稀释，并用水(300mL)和盐水(200mL)洗。有机溶液经硫酸钠干燥，真空浓缩。所得残余物经快速色谱法(0-10％乙酸乙酯的石油醚溶液)纯化，得到化合物10a(12g，88％收率)为白色固体。ESI m/z:531(M+H)+。1H NMR(500MHz,DMSOd6)δ7.43(d,J＝7.1Hz,2H),7.38(t,J＝7.4Hz,2H),7.31(t,J＝7.2Hz,1H),6.93(dd,J＝10.2,5.5Hz,2H),6.76(dd,J＝8.4,2.5Hz,1H),5.05(s,2H),2.81(dd,J＝16.3,4.5Hz,1H),2.77-2.68(m,1H),2.28-2.19(m,2H),2.18(dd,J＝13.4,5.6Hz,1H),2.00-1.83(m,2H),1.74(d,J＝11.8Hz,1H),1.65(d,J＝14.1Hz,1H),1.47(s,3H),1.38-1.27(m,2H),1.08(s,3H)ppm。
(1S,4aS,10aR)-6-(二苄氨基)-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羧酸五氟苯酯(10b)
Figure BDA0003169092350001563
向9b(6.8g，15mmol)的DMF(100mL)溶液中加入DIPEA(10mL，0.61mol)和2,2,2-三氟乙酸全氟苯酯(10mL，58mmol)。将所得混合物在氮气氛下于25℃下搅拌过夜，然后用乙醚稀释。有机物用水和盐水洗，经硫酸钠干燥，真空浓缩。残余物经硅胶柱色谱法(0-10％乙酸乙酯的石油醚溶液)纯化，得到化合物10b(7.5g，81％收率)为白色固体。ESI m/z:620(M+1)+。H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.36-7.25(m,10H),6.92(d,J＝8.4Hz,1H),6.67(d,J＝2.8Hz,1H),6.63(dd,J＝8.4,2.6Hz,1H),4.63(m,4H),2.85-2.73(m,2H),2.41-2.37(m,1H),2.22-2.20(m,1H),2.15-1.91(m,3H),1.71-1.65(m,2H),1.51(s,3H),1.37-1.19(m,2H),1.10(s,3H)ppm。
N-[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-(苄氧基)-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-基]甲酰胺基}羰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酸叔丁酯(11a)
Figure BDA0003169092350001571
在-78℃下，向化合物6(2.3g，6.2mmol)的THF(20mL)溶液中滴加n-BuLi(2.5M的己烷溶液，5.5mL，14mmol)。反应混合物在-78℃下搅拌1小时。向混合物中加入10a(3.0g，5.6mmol)的THF(20mL)溶液，然后将所得混合物在10-20℃下搅拌过夜，直至通过LCMS监测化合物10a已耗尽。然后用饱和氯化铵水溶液淬灭反应，并用乙酸乙酯萃取。合并的有机溶液用水和盐水洗，经硫酸钠干燥，真空浓缩。所得残余物经快速色谱法(0-30％乙酸乙酯的石油醚溶液)纯化，得到化合物11a(1.59g，51％收率)为白色固体。ESI m/z:719(M+1)+。
(与下面11b的方法相比，此处使用n-BuLi代替LiHMDS。虽然6未被完全消耗，但此方法导致较少的副产物并且11a的收率从约40％增至51％。回收未反应的化合物6(回收率：10-20％)。
N-[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-(二苄氨基)-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-基]甲酰胺基}羰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酸叔丁酯(11b)
Figure BDA0003169092350001572
在0℃下，向化合物6(1g，2.7mmol)的THF(15mL)溶液中滴加双(三甲基硅烷基)氨基锂(1M的己烷溶液，8.0mL)。反应在0℃下搅拌1小时。向混合物中加入化合物10b(2.5g，4.0mmol)的THF(10mL)溶液，然后将所得混合物在室温下搅拌过夜。然后反应用饱和氯化铵水溶液淬灭，并用乙酸乙酯萃取。合并的有机溶液用水和盐水洗，经硫酸钠干燥，真空浓缩。残余物经快速色谱法(0-35％乙酸乙酯的石油醚溶液)纯化，得到化合物11b(0.95g，44％收率)为白色固体；并回收化合物6(回收率37％)。ESI m/z:808(M+1)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.16(s,1H),7.35-7.24(m,10H),7.12(d,J＝8Hz,1H),7.00(d,J＝8.4Hz,1H),6.91(d,J＝8.4Hz,1H),6.62-6.59(m,2H),6.42(s,1H),4.62(s,3H),2.98-2.75(m,4H),2.31-2.22(m,5H),2.10-1.97(m,5H),1.69-1.63(m,4H),1.56(s,9H),1.32-1.27(m,9H),1.43-1.27(m,5H),1.05(s,3H)ppm。
N-[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-羟基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-基]甲酰胺基}羰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酸叔丁酯(12a)(P15)
Figure BDA0003169092350001581
在氮气保护下，向11a(2.0g，2.78mmol)的乙酸乙酯(40mL)溶液中加入湿的钯/碳(10％Pd，0.9g)。将混合物脱气并用氢气排气，然后在室温下、在氢气球下搅拌过夜，直至通过LCMS监测11a完全耗尽。混合物通过硅藻土过滤，滤液真空浓缩。所得残余物经硅胶柱色谱法(0-55％乙酸乙酯的石油醚溶液)纯化，得到12a(P15；1.06g，61％收率)为白色固体。ESI m/z:629(M+H)+。1H NMR(500MHz,DMSOd6)δ9.10(s,1H),8.98(s,1H),8.11(s,1H),7.40(s,1H),7.15(d,J＝7.5Hz,1H),6.90(d,J＝8.4Hz,1H),6.81(d,J＝8.3Hz,1H),6.63(d,J＝2.3Hz,1H),6.50(dd,J＝8.2,2.4Hz,1H),2.84(td,J＝16.3,3.8Hz,2H),2.77-2.64(m,2H),2.30-2.22(m,2H),2.14(t,J＝10.9Hz,4H),2.00-1.80(m,4H),1.65-1.54(m,4H),1.45(s,9H),1.34-1.28(m,2H),1.27(d,J＝2.5Hz,6H),1.15-1.08(m,2H),0.99(s,6H)ppm。
N-[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-基]甲酰胺基}羰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酸叔丁酯(12b)
Figure BDA0003169092350001582
在氮气保护下，向11b(0.45g，0.56mmol)的乙酸乙酯(5mL)溶液中加入湿的钯/碳(10％Pd，50mg)。将混合物脱气并用氢气排气3次，然后在室温下、在氢气球下搅拌过夜。混合物通过硅藻土过滤，滤液真空浓缩，得到化合物12b(0.33g，94％收率)为白色固体。ESIm/z:628(M+1)+。
(1S,4aS,10aR)-N-[(1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基]-6-羟基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-甲酰胺(P1)
Figure BDA0003169092350001591
在室温下，向化合物12a(0.17g，0.27mmol)的DCM(10mL)溶液中滴加TFA(3mL)。反应混合物在室温下搅拌1小时，直至根据LCMS已脱去Boc。真空除去挥发物，残余物经制备型HPLC(方法B)纯化，得到P1(0.10g，70％收率)为白色固体。ESI m/z:529.3(M+1)+。旋光度(α):+2.53°(1.7g/100mL THF,25℃)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.14(s,1H),6.92(d,J＝8.3Hz,1H),6.86(d,J＝8.1Hz,1H),6.73(d,J＝2.5Hz,1H),6.65-6.57(m,2H),6.50(dd,J＝8.1,2.3Hz,1H),4.75(s,1H),3.49(s,1H),2.99-2.85(m,2H),2.79(tt,J＝11.6,5.8Hz,2H),2.34-2.14(m,6H),2.15-1.95(m,4H),1.74-1.51(m,5H),1.46-1.34(m,2H),1.30(s,6H),1.21-1.06(m,8H)ppm。
1H NMR(400MHz,DMSOd6)δ8.99(s,1H),8.09(s,1H),6.81(d,J＝8.0Hz,1H),6.68(d,J＝8.0Hz,1H),6.63(d,J＝2.5Hz,1H),6.50(dd,J＝8.0,2.5Hz,1H),6.48(d,J＝2.5Hz,1H),6.34(dd,J＝8.0,2.5Hz,1H),4.69(s,2H),2.86-2.60(m,4H),2.28-2.10(m,6H),1.94-1.75(m,4H),1.65-1.53(m,4H),1.35-1.20(m,8H),1.20-1.06(m,2H),0.98(s,6H)ppm。
13C NMR(100MHz,DMSOd6)δ174.03,173.92,155.34,148.39,147.63,146.43,129.56,129.09,124.60,121.65,113.23,112.58,111.81,110.77,52.32,52.09,45.56,45.52,39.20,39.36,38.23,38.17,37.18,37.12,31.08,31.00,27.65,27.64,23.08,23.03,21.43,21.27,19.64,19.61ppm。
HPLC(方法B):保留时间:8.92min,纯度:99.4％。手性HPLC:>99.9％(在色谱柱AD、AS、OD和OJ中)。
(1S,4aS,10aR)-6-氨基-N-((1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基)-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-甲酰胺(P2)
Figure BDA0003169092350001592
在室温下，向化合物12b(0.63g，1.0mmol)的DCM(10mL)溶液中滴加TFA(3mL)。反应混合物在室温下搅拌4小时，直至根据LCMS已脱去Boc。混合物经制备型HPLC(方法B)直接纯化，得到P2(0.42g，79％收率)为白色固体。ESI m/z:528.2(M+1)+。1H NMR(500MHz,DMSOd6)δ8.28(s,1H),6.67(d,J＝8.0Hz,2H),6.47(d,J＝2.0Hz,2H),6.33(dd,J＝8.0,2.0Hz,2H),4.69(s,4H),2.80-2.75(m,2H),2.70-2.60(m,2H),2.26-2.20(m,2H),2.19-2.05(m,4H),1.95-1.75(m,4H),1.62-1.50(m,4H),1.33-1.20(m,8H),1.12(t,J＝8.8Hz,2H),0.98(s,6H)ppm。
实施例2
本实施例说明了合成上表1中罗汉松酸衍生物P3的一般方法。本实施例涉及图2A中编号为11b和P3的化合物。
(3S,8R,9S,10R,13S,14S)-17-亚氨基-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氢-1H-环戊并[a]菲-3-醇,三氟乙酸盐(P3)
Figure BDA0003169092350001601
向化合物11b(10mg，12μmol)的DCM(2mL)溶液中加入TFA(1mL)。反应混合物在室温下搅拌2小时，直至根据LCMS已脱去Boc。真空除去挥发物，将残余物溶于5％乙腈水溶液中。将溶液冻干，得到化合物P3(7mg，80％收率)为浅黄色固体。ESI m/z:354.8(M/2+H)+。1H NMR(400MHz,DMSOd6)δ9.38(br s,2H),8.08(s,1H),7.35-7.06(m,12H),6.97(d,J＝8.8Hz,1H),6.73(d,J＝8.8Hz,1H),6.51(s,1H),6.46(d,J＝6.4Hz,1H),4.68-4.55(m,4H),3.00-2.50(m,4H),2.40-2.00(m,6H),1.94-1.73(m,5H),1.70-1.50(m,3H),1.50-1.00(m,11H),0.98(s,3H),0.83(s,3H)ppm。19F NMR(376MHz,DMSOd6)δ-74.08ppm。
实施例3
本实施例说明了合成上表1中罗汉松酸衍生物P4-P8的一般方法。本实施例涉及图2A中编号为12b以及P4-P9、P13、P14、和P17的化合物。
实施例3a
中间体13a-13e
Figure BDA0003169092350001602
向化合物12b(1.0当量)的DMF或DCM溶液中依次加入Fmoc-氨基酸(1.1-1.2当量)、HATU(1.2-1.5当量)和DIPEA(2.0-3.0当量)。反应混合物在室温下搅拌4小时，通过LCMS进行监测。真空浓缩混合物(当DCM为溶剂时)，残余物经硅胶柱色谱法(0-90％乙酸乙酯的石油醚溶液)纯化；或反应混合物(当DMF为溶剂时)经反相快速色谱法(50-90％乙腈的碳酸氢铵水溶液(10mM))直接纯化，得到化合物13为白色固体。
Figure BDA0003169092350001611
9H-芴-9-基甲基N-({[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-基]甲酰胺基}羰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酰基}甲基)氨基甲酸酯(13a)
Figure BDA0003169092350001612
按照中间体13a-13e的一般方法，得到化合物13a(0.14g，78％收率)为白色固体。ESI m/z:907(M+H)+。
9H-芴-9-基甲基N-[(1S)-1-{[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-基]甲酰胺基}羰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酰基}-2-羟乙基]氨基甲酸酯(13b)
Figure BDA0003169092350001621
按照中间体13a-13e的一般方法，得到化合物13b(0.39g，83％收率)为白色固体。ESIm/z:938(M+H)+。
9H-芴-9-基甲基N-[(5S)-5-{[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-基]甲酰胺基}羰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酰基}-5-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}戊基]氨基甲酸酯(13c)
Figure BDA0003169092350001622
按照中间体13a-13e的一般方法，得到化合物13c(0.30g，78％收率)为白色固体。ESIm/z:1201(M+H)+。
(S)-叔丁基3-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基氨基)-4-((4bS,8S,8aR)-8-((1S,4aS,10aR)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基氨基甲酰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基氨基)-4-氧代丁酸酯(13d)
Figure BDA0003169092350001623
按照中间体13a-13e的一般方法，得到化合物13d(0.43g，85％收率)为白色固体。ESIm/z:1021(M+H)+。
(S)-叔丁基4-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基氨基)-5-((4bS,8S,8aR)-8-((1S,4aS,10aR)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基氨基甲酰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基氨基)-5-氧代戊酸酯(13e)
Figure BDA0003169092350001631
按照中间体13a-13e的一般方法，得到化合物13e(0.42g，82％收率)为白色固体。ESIm/z:1036(M+H)+。
实施例3b
中间体14a-14e
Figure BDA0003169092350001632
在室温下，向化合物13(1.0当量)的DCM溶液中加入TFA。反应混合物在室温下搅拌1小时，真空浓缩，得到粗产物14为无色油状物，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。
Figure BDA0003169092350001633
9H-芴-9-基甲基N-({[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-基]甲酰胺基}羰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酰基}甲基)氨基甲酸酯,三氟乙酸盐(14a)
Figure BDA0003169092350001641
按照中间体14a-14e的一般方法，得到粗化合物14a(0.14g，99％收率，TFA盐)为无色油状物。ESI m/z:807(M+1)+。
9H-芴-9-基甲基(S)-1-((4bS,8S,8aR)-8-((1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基氨基甲酰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基氨基)-3-羟基-1-氧代丙烷-2-基氨基甲酸酯,三氟乙酸盐(14b)
Figure BDA0003169092350001642
按照中间体14a-14e的一般方法，得到粗化合物14b(0.14g，99％收率，TFA盐)为无色油状物。ESI m/z:837(M+1)+。
9H-芴-9-基甲基N-[(5S)-5-{[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-基]甲酰胺基}羰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酰基}-5-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}戊基]氨基甲酸酯,三氟乙酸盐(14c)
Figure BDA0003169092350001643
按照中间体14a-14e的一般方法，得到粗化合物14c(0.22g，92％收率，TFA盐)为无色油状物。ESI m/z:1101(M+1)+。
(S)-3-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基氨基)-4-((4bS,8S,8aR)-8-((1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基氨基甲酰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基氨基)-4-氧代丁酸,三氟乙酸盐(14d)
Figure BDA0003169092350001651
按照中间体14a-14e的一般方法，得到粗化合物14d(0.10g，87％收率，TFA盐)为无色油状物。ESI m/z:866(M+1)+。
(S)-4-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基氨基)-5-((4bS,8S,8aR)-8-((1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基氨基甲酰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基氨基)-5-氧代戊酸,三氟乙酸盐(14e)
Figure BDA0003169092350001652
按照中间体14a-14e的一般方法，得到化合物14e(84mg，86％收率，TFA盐)为无色油状物。ESI m/z:880(M+1)+。
实施例3c
有效负载P4-P9、P13、P14和P17
Figure BDA0003169092350001653
向上述获得的粗品14的DMF溶液中加入哌啶。将混合物在室温下搅拌半小时，通过LCMS进行监测。混合物经制备型HPLC(方法B)直接纯化，得到有效负载P4-P8为白色固体。
Figure BDA0003169092350001661
(1S,4aS,10aR)-N-[(1S,4aS,10aR)-6-(2-氨基乙酰胺基)-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基]-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-甲酰胺(P4)
Figure BDA0003169092350001662
按照有效负载P4-P8的一般方法，得到化合物P4(12mg，28％收率)为白色固体。ESIm/z:585(M+1)+。1H NMR(500MHz,DMSOd6)δ9.79(s,1H),8.12(s,1H),7.50(s,1H),7.41(dd,J＝8.5Hz,1.5Hz,1H),6.96(d,J＝8.5Hz,1H),6.68(d,J＝8.5Hz,1H),6.48(d,J＝1.5Hz,1H),6.34(dd,J＝7.5Hz,1.5Hz,1H),4.70(m,2H),3.20(s,3H),2.95-2.83(m,1H),2.80-2.70(m,2H),2.70-2.60(m,1H),2.30-2.20(m,2H),2.20-2.10(m,4H),2.05-1.70(m,4H),1.70-1.50(m,4H),1.31-1.25(m,8H),1.20-1.10(m,2H),1.05(d,J＝7.5Hz,6H)ppm。
(1S,4aS,10aR)-6-氨基-N-((1S,4aS,10aR)-6-((S)-2-氨基-3-羟基丙酰胺基)-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基)-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-甲酰胺(P5)
Figure BDA0003169092350001663
按照有效负载P4-P8的一般方法，得到化合物P5(41mg，67％收率)为白色固体。ESIm/z:615(M+1)+。1H NMR(500MHz,DMSOd6)δ8.09(s,1H),7.52(s,1H),7.41(dd,J＝8.5Hz,1.5Hz,1H),6.96(d,J＝8.5Hz,1H),6.68(d,J＝8.5Hz,1H),6.48(d,J＝1.5Hz,1H),6.34(dd,J＝7.5Hz,1.5Hz,1H),4.84-4.76(m,1H),4.67(s,2H),3.60-3.45(m,2H),2.95-2.83(m,1H),2.80-2.60(m,4H),2.30-2.20(m,3H),2.20-2.10(m,4H),1.95-1.75(m,5H),1.70-1.50(m,4H),1.40-1.30(m,2H),1.28(s,3H),1.26(s,3H),1.20-1.10(m,3H),1.01(s,3H),0.98(s,3H)ppm。
(1S,4aS,10aR)-6-氨基-N-((1S,4aS,10aR)-6-((S)-2,6-二氨基己酰胺基)-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基)-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-甲酰胺(P6)
Figure BDA0003169092350001671
按照有效负载P4-P8的一般方法，得到化合物P6(5mg，17％收率)为白色固体。ESIm/z:656(M+1)+。1H NMR(500MHz,DMSOd6)δ8.09(s,1H),7.52(s,1H),7.41(dd,J＝8.5Hz,1.5Hz,1H),6.96(d,J＝8.5Hz,1H),6.68(d,J＝8.5Hz,1H),6.48(d,J＝1.5Hz,1H),6.34(dd,J＝7.5Hz,1.5Hz,1H),4.70(m,2H),3.20(s,2H),2.95-2.83(m,2H),2.80-2.70(m,2H),2.70-2.60(m,2H),2.37-2.35(m,1H),2.30-2.20(m,3H),2.20-2.10(m,5H),2.05-1.95(m,2H),1.95-1.75(m,5H),1.70-1.50(m,6H),1.31-1.25(m,8H),1.20-1.10(m,3H),1.05(d,J＝7.5Hz,6H),0.85(t,J＝6.0Hz,1H)ppm。
(S)-3-氨基-4-((4bS,8S,8aR)-8-((1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基氨基甲酰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基氨基)-4-氧代丁酸(P7)
Figure BDA0003169092350001672
按照有效负载P4-P8的一般方法，得到化合物P7(39mg，51％收率)为白色固体。ESIm/z:643(M+1)+。1H NMR(500MHz,DMSOd6)δ10.5-10.0(br,1H),8.09(s,1H),7.52(s,1H),7.41(dd,J＝8.5Hz,1.5Hz,1H),6.96(d,J＝8.5Hz,1H),6.68(d,J＝8.5Hz,1H),6.48(d,J＝1.5Hz,1H),6.34(dd,J＝7.5Hz,1.5Hz,1H),4.84-4.50(m,2H),3.75-3.68(m,2H),2.95-2.83(m,1H),2.80-2.60(m,4H),2.40-2.20(m,4H),2.20-2.10(m,5H),1.95-1.70(m,5H),1.70-1.50(m,5H),1.27(d,J＝7.5Hz,6H),1.20-1.10(m,2H),1.01(s,3H),0.98(s,3H)ppm。
(S)-4-氨基-5-((4bS,8S,8aR)-8-((1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基氨基甲酰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基氨基)-5-氧代戊酸(P8)
Figure BDA0003169092350001681
按照有效负载P4-P8的一般方法，得到化合物P8(44mg，58％收率)为白色固体。ESIm/z:657(M+1)+。1H NMR(500MHz,DMSOd6)δ8.09(s,1H),7.52(s,1H),7.41(dd,J＝8.5Hz,1.5Hz,1H),6.96(d,J＝8.5Hz,1H),6.68(d,J＝8.5Hz,1H),6.48(d,J＝1.5Hz,1H),6.34(dd,J＝7.5Hz,1.5Hz,1H),4.70(m,2H),2.95-2.83(m,1H),2.80-2.60(m,5H),2.30-2.20(m,4H),2.20-2.10(m,5H),1.95-1.75(m,5H),1.70-1.50(m,5H),1.50-1.40(m,4H),1.27(d,J＝7.5Hz,6H),1.20-1.10(m,2H),1.01(s,3H),0.98(s,3H)ppm。
(1S,4aS,10aR)-6-氨基-N-((1S,4aS,10aR)-6-((S)-2-氨基-3-(1H-咪唑-4-基)丙酰胺基)-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基)-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-甲酰胺(P9)
Figure BDA0003169092350001682
向Fmoc-His-OH(0.38g，1.0mmol)的DCM(5mL)溶液中加入Fmoc-OSu(0.37g，1.1mmol)和DIPEA(0.26g，2.0mmol)。反应混合物在室温下搅拌过夜。真空除去挥发物，残余物经快速色谱法(5-10％甲醇的DCM溶液)纯化，得到Fmoc-His(Fmoc)-OH(0.50g，84％收率，ESIm/z:600(M+1)+)为白色固体。
向化合物12b(0.31g，0.50mmol)的DCM(20mL)溶液中依次加入上述获得的Fmoc-His(Fmoc)-OH(0.33g，0.55mmol)、HATU(0.23g，0.60mmol)和DIPEA(0.19g，1.5mmol)。所得混合物在室温下搅拌4小时，通过LCMS进行监测。向反应混合物中加入哌啶(0.5mL)，将混合物在室温下搅拌1小时直至完全脱去Fmoc，通过LCMS进行监测。真空浓缩混合物，残余物经反相快速色谱法(50-80％乙腈的水溶液)纯化，得到Boc-P9(0.15g)为白色固体，将其中一半溶于DCM(20mL)。向所得溶液中加入TFA(3mL)。混合物在室温下搅拌1小时，直至根据LCMS已脱去Boc。真空除去挥发物，残余物经制备型HPLC(方法B)纯化，得到化合物P9(17mg，12％收率)为白色固体。ESI m/z:665(M+1)+。1H NMR(500MHz,DMSOd6)δ11.82(s,1H),9.75(s,1H),8.09(s,1H),7.52-7.50(m,2H),7.41(dd,J＝8.5Hz,1.5Hz,1H),6.96(d,J＝8.5Hz,1H),6.90-6.80(m,1H),6.68(d,J＝8.5Hz,1H),6.48(d,J＝1.5Hz,1H),6.34(dd,J＝7.5Hz,1.5Hz,1H),4.84-4.50(m,2H),3.60-3.45(m,2H),2.95-2.83(m,2H),2.80-2.70(m,2H),2.70-2.60(m,2H),2.40-2.10(m,8H),1.95-1.70(m,5H),1.70-1.50(m,4H),1.27(d,J＝7.5Hz,6H),1.20-1.10(m,2H),1.01(s,3H),0.98(s,3H)ppm。
(1S,4aS,10aR)-N-[(1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基]-6-[(2S)-2-氨基丙酰胺基]-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-甲酰胺(P13)
Figure BDA0003169092350001691
按照与P9类似的方法，除了用Fmoc-Ala-OH代替Fmoc-His(Fmoc)-OH之外，得到有效负载P13(12mg，59％收率)为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSOd6)δ9.85(br s,1H),8.09(s,1H),7.54-7.51(m,1H),7.41-7.39(m,1H),6.95(d,J＝8.4Hz,1H),6.68(d,J＝8.0Hz,1H),6.48(d,J＝1.6Hz,1H),6.35-6.32(m,1H),4.69(s,2H),3.58-3.41(m,3H),2.91-2.61(m,4H),2.26-2.14(m,6H),1.91-1.78(m,4H),1.66-1.55(m,4H),1.33-1.08(m,13H),1.00(s,3H),0.98(s,3H)ppm。
(1S,4aS,10aR)-N-[(1S,4aS,10aR)-6-(2-羟基乙酰胺基)-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基]-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-甲酰胺(P14)
Figure BDA0003169092350001692
向乙醇酸(2.2mg，29μmol)和HATU(18.2mg，48μmol)的DMF(2.0mL)混合物中加入DIPEA(12μL，72μmol)和化合物12b(15mg，24μmol)。反应混合物在室温下搅拌2小时，通过LCMS进行监测。所得混合物经反相快速色谱法(0-100％乙腈的碳酸氢铵水溶液(10mM))直接纯化，得到Boc-P14，将其溶于DCM(2mL)。向所得溶液中加入TFA(0.5mL)，将混合物在室温下搅拌2小时直至Boc完全脱去，通过LCMS进行监测。将所得混合物真空浓缩，残余物经制备型HPLC(方法B)纯化，得到有效负载P14(4.3mg，31％收率)为白色固体。ESI m/z:686.5(M+1)+。1H NMR(400MHz,DMSOd6)δ9.46(s,1H),8.10(s,1H),7.59(d,J＝1.8Hz,1H),7.49(dd,J＝8.3,1.9Hz,1H),6.96(d,J＝8.3Hz,1H),6.68(d,J＝8.2Hz,1H),6.47(d,J＝2.1Hz,1H),6.33(dd,J＝8.1,2.1Hz,1H),5.65(t,J＝6.0Hz,1H),4.70(s,2H),3.94(d,J＝6.0Hz,2H),2.93-2.85(m,1H),2.80-2.72(m,2H),2.71-2.63(m,1H),2.34-2.08(m,6H),1.94-1.76(m,4H),1.68-1.52(m,4H),1.35-1.23(m,8H),1.19-1.10(m,2H),0.99(d,J＝8.1Hz,6H)ppm。
(1S,4aS,10aR)-N-[(1S,4aS,10aR)-6-(2-羟基乙酰胺基)-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基]-6-羟基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-甲酰胺(P17)
Figure BDA0003169092350001701
在室温下，向有效负载P1(10mg，0.019mmol)的DMF(2mL)溶液中加入HATU(14mg，0.038mmol)和DIPEA(9.8mg，0.076mmol)。混合物在室温下搅拌15分钟，然后加入乙醇酸(1.73mg，0.0228mmol)。反应混合物在室温下搅拌，通过LCMS进行监测。所得混合物经制备型HPLC(方法B)直接纯化，得到P17(5.7mg，51％收率)为白色固体。ESI m/z:587.4(M+1)+。1HNMR(400MHz,DMSOd6)δ9.46(s,1H),9.00(s,1H),8.11(s,1H),7.59(s,1H),7.53-7.45(m,1H),6.96(d,J＝8.3Hz,1H),6.82(d,J＝8.3Hz,1H),6.63(d,J＝2.3Hz,1H),6.50(dd,J＝8.2,2.4Hz,1H),5.64(t,J＝6.0Hz,1H),3.94(d,J＝5.9Hz,2H),2.93-2.66(m,4H),2.29-2.10(m,6H),2.00-1.80(m,4H),1.72-1.50(m,4H),1.30-0.90(m,16H)ppm。
实施例4
本实施例说明了合成上表1中罗汉松酸衍生物P10和P11的一般方法。本实施例涉及图2B中编号为14a、15a-15b以及P10和P11的化合物。
(S)-叔丁基4-氨基-5-((4bS,8S,8aR)-8-((1S,4aS,10aR)-6-(2-氨基乙酰胺基)-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基氨基甲酰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基氨基)-5-氧代戊酸酯,二三氟乙酸盐(15a)
Figure BDA0003169092350001702
向Fmoc-Glu(OtBu)-OH(74mg，0.17mmol)和DIPEA(55μL，0.32mmol)的DMF(5.0mL)溶液中加入HATU(91mg，0.24mmol)。混合物在室温下搅拌15分钟，然后加入化合物14a(0.14g，0.16mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，通过LCMS进行监测。然后向反应混合物中滴加哌啶(1mL)。反应混合物在室温下搅拌1小时直至根据LCMS已完全脱去Fmoc。所得混合物经反相快速色谱法(0-100％乙腈的TFA水溶液(0.01％))直接分离，得到化合物15a(0.13g，80％收率)为黄色固体。ESIm/z:770.5(M+1)+。
(4S,4'S)-叔丁基5,5'-(4bS,4b'S,8S,8aR,8'S,8a'R)-8,8'-(氨二基双(氧代亚甲基))双(4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-8,3-二基)双(氨二基)双(4-氨基-5-氧代戊酸酯)二三氟乙酸盐(15b)
Figure BDA0003169092350001711
向Fmoc-Glu(OtBu)-OH(0.15g，0.35mmol)和DIPEA(83μL，0.48mmol)的DMF(5.0mL)溶液中加入HATU(0.15g，0.40mmol)。混合物在室温下搅拌30分钟，然后加入化合物P2(0.10g，0.16mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，通过LCMS进行监测。然后向反应混合物中滴加哌啶(1mL)。反应混合物在室温下搅拌3小时，直至根据LCMS已完全脱去Fmoc。所得混合物经反相快速色谱法(0-100％乙腈的TFA水溶液(0.01％))直接分离，得到化合物15b(0.14g，78％收率)为黄色固体。ESIm/z:899(M+1)+。
(S)-4-氨基-5-((4bS,8S,8aR)-8-((1S,4aS,10aR)-6-(2-氨基乙酰胺基)-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基氨基甲酰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基氨基)-5-氧代戊酸(P10)
Figure BDA0003169092350001712
将化合物15a(0.13g，0.13mmol)的纯TFA(2.0mL)混合物在RT下搅拌1小时，通过LCMS监测。所得混合物用DCM(20mL)稀释，真空浓缩。残余物经反相快速色谱法(0-100％乙腈的碳酸氢钠水溶液(10mM))纯化，得到P10(20mg，22％收率)为白色固体。ESI m/z:358(M/2+1)+；714.5(M+1)+。1H NMR(400MHz,DMSOd6)δ9.85(br s,1H),8.12(s,1H),7.51(s,2H),7.42-7.36(m,2H),6.96(dd,J＝8.0Hz和3.0Hz,2H),3.67(br s,8H),3.36-3.33(m,1H),3.22(s,2H),2.91-2.87(m,2H),2.80-2.71(m,2H),2.31-2.28(m,4H),2.17-2.14(m,4H),1.91-1.82(m,5H),1.69-1.58(m,5H),1.34-1.23(m,6H),1.19-1.12(m,2H),1.01(s,6H)ppm。
(4S,4'S)-5,5'-(4bS,4b'S,8S,8aR,8'S,8a'R)-8,8'-(氨二基双(氧代亚甲基))双(4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-8,3-二基)双(氨二基)双(4-氨基-5-氧代戊酸)(P11)
Figure BDA0003169092350001721
将化合物15b(0.14g，0.14mmol)的纯TFA(3.0mL)混合物在RT下搅拌1小时，通过LCMS监测。所得混合物用DCM(30mL)稀释，真空浓缩。残余物经反相快速色谱法(0-100％乙腈的碳酸氢钠水溶液(10mM))纯化，得到P11(20mg，18％收率)为白色固体。ESI m/z:394(M/2+1)+。1H NMR(400MHz,DMSOd6)δ9.85(brs,2H),8.12(s,1H),7.51(s,2H),7.9(dd,J＝8.4Hz和1.6Hz,2H),6.97(d,J＝8.0Hz,2H),3.5(br s,6H),3.40-3.37(m,2H),3.16(s,1H),2.91-2.88(m,2H),2.79-2.66(m,2H),2.33-2.29(m,7H),2.18-2.15(m,4H),1.91-1.84(m,6H),1.71-1.59(m,6H),1.35-1.23(m,6H),1.18-1.12(m,2H),1.01(s,6H)ppm。
实施例4a
本实施例说明了合成上表1中罗汉松酸衍生物P19的一般方法。本实施例涉及图2C中的化合物。
(4bS,8S,8aR)-8-{[(1S,4aS,10aR)-6-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基]氨基甲酰基}-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基叔丁基碳酸酯(16)
Figure BDA0003169092350001722
在室温下，向有效负载P1(0.10g，0.19mmol)的叔丁醇(2mL)混合物中加入碳酸钾(78mg，0.57mmol)和Boc酸酐(0.12g，0.57mmol)，反应混合物在60℃下搅拌3小时，通过LCMS进行监测。然后将所得混合物冷却，真空浓缩。将残余物溶于DCM(100mL)，溶液用水和盐水洗，经无水硫酸钠干燥，真空浓缩，得到粗产物16(0.14g，粗品)为白色固体，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。ESIm/z:729.4(M+1)+。
(4bS,8S,8aR)-8-{[(1S,4aS,10aR)-7-溴-6-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基]氨基甲酰基}-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基叔丁基碳酸酯(17)
Figure BDA0003169092350001731
向粗化合物16(0.14g，如上所得到)的DMF(4mL)溶液中加入NBS(50mg，0.28mmol)，将反应混合物在RT下搅拌过夜，通过LCMS监测。所得混合物经反相快速色谱法(0-100％乙腈的TFA水溶液(0.01％))直接纯化，得到化合物17(40mg，2步收率为26％)为黄色固体。ESIm/z:807.3(M+1)+。(4bS,8S,8aR)-8-{[(1S,4aS,10aR)-6-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-7-羟基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基]氨基甲酰基}-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基叔丁基碳酸酯(19)
Figure BDA0003169092350001732
将化合物17(40mg，50μmol)、醋酸钾(12mg，0.12mmol)和双(频哪醇合)二硼18(50mg，0.20mmol)的无水二氧六环(5mL)混合物脱气，并用氮气排气3次。在氮气下，向混合物中加入Pd(dppf)Cl2(1.8mg，2.5μmol)。所得悬浮液在氮气下于90℃下搅拌半小时，通过LCMS进行监测。然后将混合物冷却至室温，通过硅藻土过滤。在0℃下，在10分钟内向滤液中滴加过氧化氢(30％水溶液，2.0mL)。反应混合物在0℃下再搅拌半小时，通过LCMS进行监测。然后所得混合物经反相快速色谱法(0-100％乙腈的TFA水溶液(0.01％))直接纯化，得到粗化合物19(35mg，50％纯度，95％粗收率)为黄色固体，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。ESI m/z:745.5(M+1)+。
(1S,4aS,10aR)-N-[(1S,4aS,10aR)-6-氨基-7-羟基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基]-6-羟基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-甲酰胺(P19)
Figure BDA0003169092350001733
在0℃下，在5分钟内向粗化合物19(35mg，如上所得到)的DCM(5mL)溶液中滴加TFA(2mL)。反应混合物在室温下搅拌半小时直至完全脱去Boc，通过LCMS进行监测。真空除去挥发物，残余物经制备型HPLC(方法A)纯化，得到有效负载P19(6.5mg，由化合物17得到的收率为24％)为类白色固体。ESI m/z:545.3(M+1)+。1H NMR(400MHz,DMSOd6)δ9.03(s,1H),8.76(s,1H),8.08(s,1H),6.81(d,J＝8.4Hz,1H),6.62(d,J＝2.4Hz,1H),6.49(dd,J＝8.4,2.8Hz,1H),6.47(s,1H),6.27(s,1H),4.21(s,2H),2.84-2.80(m,1H),2.73-2.57(m,3H),2.25-2.19(m,2H),2.15-2.08(m,4H),1.89-1.77(m,4H),1.62-1.54(m,4H),1.30(s,3H),1.28(s,3H),1.31-1.20(m,2H),1.14-1.10(m,2H),0.98(s,3H),0.94(s,3H)ppm。
实施例5
本实施例说明了合成上表2中连接体-有效负载LP1-LP5和LP20的方法。本实施例涉及图3中编号为12b和102a-102b至106a-106e的化合物、以及连接体-有效负载LP1-LP5。
实施例5a
中间体102a-102b
Figure BDA0003169092350001741
在室温下，向酸(Fmoc-Val-Ala-OH(101a，1.2当量)或Fmoc-Val-Cit-OH(101b，1.2当量))的DMF溶液中加入HATU(1.2当量)和DIPEA(2.0-3.0当量)。混合物在室温下搅拌5分钟后，加入化合物12b(1.0当量)。所得混合物在室温下搅拌4-20小时，直至根据LCMS监测胺耗尽。然后向混合物中加入哌啶(过量)，混合物在室温下搅拌1-6小时，直至Fmoc完全脱去，通过LCMS进行监测。反应混合物通过膜过滤，滤液直接经制备型HPLC(方法B)或反相快速色谱法纯化，得到化合物102(38-72％收率)为白色固体。
Figure BDA0003169092350001742
N-[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-[(2S)-2-[(2S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺基]丙酰胺基]-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-基]羰基}氨基甲酰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酸叔丁酯(102a)
Figure BDA0003169092350001751
按照中间体102a、102b的一般方法，得到化合物102a(0.29g，72％收率)为白色固体。ESI m/z:799(M+1)+。
N-[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-[(2S)-2-[(2S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺基]-5-(氨基甲酰基氨基)戊酰胺基]-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-基]羰基}氨基甲酰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酸叔丁酯(102b)
Figure BDA0003169092350001752
按照中间体102a、102b的一般方法，得到化合物102b(0.27g，38％收率)为白色固体。ESI m/z:885(M+1)+。
实施例5b
中间体104a-104b
N-[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-氨基-6-[2-(环辛-2-炔-1-基氧基)乙酰胺基]己酰胺基}-3-甲基丁酰胺基]丙酰胺基]-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-基]羰基}氨基甲酰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酸叔丁酯(104a)
Figure BDA0003169092350001753
在室温下，向化合物103(70mg，0.13mmol)的DMF(2mL)溶液中加入HATU(68mg，0.18mmol)和DIPEA(44μL，0.24mmol)。混合物在室温下搅拌5分钟，然后加入化合物102a(95mg，0.12mmol)。然后将反应混合物在室温下搅拌3小时直至化合物102a完全消耗，通过LCMS进行监测。然后向反应混合物中加入哌啶(0.5mL，过量)。混合物在室温下搅拌2小时。然后将混合物过滤，滤液浓缩。残余物经反相快速色谱法(0-100％乙腈的碳酸氢铵水溶液(10mM))纯化，得到化合物104a(0.13g，96％收率)为白色固体。ESI m/z:518.0((M-55)/2)+。
N-[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-氨基-6-[2-(环辛-2-炔-1-基氧基)乙酰胺基]己酰胺基}-3-甲基丁酰胺基]-5-(氨基甲酰基氨基)戊酰胺基]-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-基]羰基}氨基甲酰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酸叔丁酯(104b)
Figure BDA0003169092350001761
向化合物103(0.27g，0.31mmol)和DIPEA(0.11mL，0.61mmol)的DMF(6mL)溶液中加入化合物102b(0.18g，0.34mmol)，然后加入HATU(0.14g，0.37mmol)。反应混合物在室温下搅拌3小时，通过LCMS进行监测。所得溶液经反相快速色谱法直接纯化，得到化合物Fmoc-104b(0.30g，ESI m/z:711((M+Na)/2+1)+)为淡黄色固体，将其溶于DCM(6.0mL)。向溶液中加入哌啶(0.5mL)，将反应混合物在室温下搅拌2小时，直至根据LCMS已完全脱去Fmoc。真空除去挥发物，将残余物与石油醚一起研磨，得到化合物104b(0.26g，65％收率)为浅黄色固体。ESI m/z:1177.6((M+H)+。
实施例5c
中间体105a-105c
叠氮基中间体α-CD-N3(105a)是根据J.Am.Chem.Soc.,2012,134(46),19108-19117合成得到(图10)。
叠氮基-15-氧代-3,6,9,12-四氧杂-16-氮杂十八烷-18-磺酸(105b)(图11)
向2,5-二氧代吡咯烷-1-基1-叠氮基-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酸酯(N3-PEG4-OSu，0.10g，0.26mmol)和牛磺酸105b-A(39mg，0.31mmol)的无水DMF(4mL)溶液中加入DIPEA(15mg，0.52mmol)。混合物在室温下搅拌过夜。过滤反应混合物，所得溶液经制备型HPLC(方法A)纯化，得到中间体105b(0.80g，收率78％)为无色油状物。ESI m/z:399.1(M+H)+。1H NMR(500MHz,D2O)δ3.69(t,J＝6.0Hz,2H),3.64-3.59(m,14H),3.49(t,J＝6.5Hz,2H),3.41(t,J＝4.5Hz,2H),3.00(t,J＝7.0Hz,2H),2.45(t,J＝6.0Hz,2H)ppm。
[2-(1-叠氮基-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基)乙基]三甲基铵氮氯化物(105d)
按照上述105b的类似方法，除了用105d-A代替105b-A之外，得到三甲基氯化铵105d(0.13g，64％收率)为无色油状物。ESI m/z:376(M+H)+。1H NMR(500MHz,DMSOd6)δ3.65-3.58(m,4H),3.58-3.45(m,16H),3.45-3.30(m,12H),2.35(t,J＝6.5Hz,2H)ppm。
叠氮基中间体麦芽糖-N3(105c)是根据Tetrahedron Letters,2001,42(7),1325-1328合成得到(图12)。
实施例5d
中间体106a-106f
Figure BDA0003169092350001771
在室温下，向化合物104的DMF溶液中加入叠氮基中间体105。反应在室温下搅拌3-48小时，直至LCMS显示反应完全。反应混合物经制备型HPLC直接纯化，得到化合物Boc-106为白色固体，将其溶于TFA溶液(或纯TFA)。所得溶液在室温下搅拌0.5-20小时，直至根据LCMS已脱去Boc。将溶液浓缩得到106(为TFA盐)。
Figure BDA0003169092350001772
*并非所有Boc-106a均用于脱Boc。
(1S,4aS,10aR)-N-[(1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-2,3,4,9,10,10a-六氢菲-1-羰基]-6-[(2S)-2-[(2S)-2-[(2R)-2-氨基-6-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-十二羟基-10,15,20,25,30-五(羟甲基)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-十二氧杂七环[26.2.2.23,6.28,11.213,16.218,21.223,26]四十二烷-5-基]甲基}-4H,5H,6H,7H,8H,9H-环辛并[d][1,2,3]三唑-4-基)氧基]乙酰胺基}己酰胺基]-3-甲基丁酰胺基]丙酰胺基]-1,4a-二甲基-2,3,4,9,10,10a-六氢菲-1-甲酰胺三氟乙酸盐(106a)
Figure BDA0003169092350001781
按照中间体106a-106e的一般方法，得到化合物Boc-106a(72mg，76％收率，作为三唑区域异构体的混合物)为白色固体(ESIm/z:1045(M/2+1)+)。通过反相快速色谱法(0-60％乙腈的TFA水溶液(0.01％))进一步纯化后，可得到少量纯的主要异构体(7mg)，其通过1H NMR(500MHz,DMSOd6)((含区域异构体)进行确定δ9.92(s,0.5H),9.82(s,0.5H),9.10(s,1H),8.58-8.53(m,1H),8.50-8.35(m,1H),8.12(s,1H),8.04(s,3H),7.88-7.82(m,1H),7.55(s,0.5H),7.46(s,0.5H),7.41(s,1H),7.40-7.26(m,1H),7.14(d,J＝7.0Hz,1H),6.97(d,J＝8.0Hz,1H),6.90(d,J＝8.5Hz,1H),5.51(br,12H),4.83-4.70(m,8H),4.57-4.51(m,3H),4.44-4.36(m,4H),4.00-3.98(m,1H),3.88-3.55(m,27H),3.26-3.09(m,6H),2.91-2.85(m,4H),2.76-2.63(m,3H),2.29-2.25(m,2H),2.17-1.99(m,4H),1.96-1.93(m,6H),1.88-1.63(m,9H),1.56-1.54(m,15H),1.33-1.28(m,15H),1.18-1.13(m,3H),1.01-0.99(m,6H),0.89-0.83(m,7H)ppm)。向Boc-106a(作为区域异构体的混合物)(20mg，9.6μmol)的DCM(3mL)混合物中加入TFA(1mL)。所得混合物在RT下搅拌1小时直至脱去Boc，通过LCMS进行监测。真空除去挥发物，得到化合物106a(19mg，由104a得到的收率为69％)为浅黄色固体，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。ESI m/z:995(M/2+1)+。
(1S,4aS,10aR)-N-{[(1S,4aS,10aR)-6-[(2S)-2-[(2S)-2-[(2R)-2-氨基-6-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-十二羟基-10,15,20,25,30-五(羟甲基)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-十二氧杂七环[26.2.2.23,6.28,11.213,16.218,21.223,26]四十二烷-5-基]甲基}-1H,4H,5H,6H,7H,8H,9H-环辛并[d][1,2,3]三唑-4-基)氧基]乙酰胺基}己酰胺基]-3-甲基丁酰胺基]-5-(氨基甲酰基氨基)戊酰胺基]-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-基]羰基}-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-甲酰胺三氟乙酸盐(106b)
Figure BDA0003169092350001791
按照中间体106a-106e的一般方法，得到化合物106b(76mg，由104b得到的收率为87％)为黄色固体。ESI m/z:692(M/3+1)+。
1-(4-(2-(((R)-5-氨基-6-(((S)-1-(((S)-1-(((4bS,8S,8aR)-8-(((1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基)氨基甲酰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-6-氧代己基)氨基)-2-氧代乙氧基)-4,5,6,7,8,9-六氢-1H-环辛并[d][1,2,3]三唑-1-基)-15-氧代-3,6,9,12-四氧杂-16-氮杂十八烷-18-磺酸(106c)
Figure BDA0003169092350001792
按照中间体106a-106e的一般方法，得到化合物106c(90mg，由104c得到的收率为39％)为黄色固体。ESI m/z:463.8(M/3+1)+。
1-(4-(((6S,9S,12R)-1,12-二氨基-6-(((4bS,8S,8aR)-8-(((1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基)氨基甲酰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基)氨基甲酰基)-9-异丙基-1,8,11,18-四氧代-2,7,10,17-四氮杂十九烷-19-基)氧基)-4,5,6,7,8,9-六氢-1H-环辛并[d][1,2,3]三唑-1-基)-15-氧代-3,6,9,12-四氧杂-16-氮杂十八烷-18-磺酸(106d)
Figure BDA0003169092350001801
按照中间体106a-106e的一般方法，在通过反相快速色谱法(0-80％乙腈的水溶液，25分钟内)纯化后，得到作为其TFA盐的化合物106d(22mg，36％收率)为白色固体。ESIm/z:788(M/2+H)+。
(1S,4aS,10aR)-6-氨基-N-((1S,4aS,10aR)-6-((2S)-2-((2S)-2-((2R)-2-氨基-6-(2-((1-((2S,3R,4R,5S,6R)-3,4-二羟基-6-(羟甲基)-5-(((2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)四氢-2H-吡喃-2-基)-3a,4,5,6,7,8,9,9a-八氢-1H-环辛并[d][1,2,3]三唑-4-基)氧基)乙酰胺基)己酰胺基)-3-甲基丁酰胺基)丙酰胺基)-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基)-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-甲酰胺(106e)
Figure BDA0003169092350001802
按照中间体106a-106e的一般方法，得到作为其TFA盐的化合物106e(34mg，77％收率)为无色油状物。ESI m/z:1358(M+H)+。
(2-{1-[4-({[(5R)-5-氨基-5-{[(1S)-1-{[(1S)-1-{[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-基]甲酰胺基}羰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酰基}乙基]氨基甲酰基}-2-甲基丙基]氨基甲酰基}戊基]氨基甲酰基}甲氧基)-1H,4H,5H,6H,7H,8H,9H-环辛并[d][1,2,3]三唑-1-基]-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基}乙基)三甲基铵氮三氟乙酸盐(106f)
Figure BDA0003169092350001803
按照一般方法，得到化合物106f(20mg，由104a得到的收率为42％)为白色固体。ESIm/z:455.8(M/3)+。
实施例5e
连接体-有效负载LP1-LP5和LP20
Figure BDA0003169092350001811
在室温下，向化合物106的DMF溶液中加入化合物DIBAC-PEG4-NHS 107和DIPEA。反应混合物在室温下搅拌3小时。反应混合物经制备型HPLC(方法B)或反相快速色谱法(方法B)直接纯化，得到化合物LP1-LP5和LP20。
Figure BDA0003169092350001812
*再回收7mg游离碱形式的化合物106a。
1-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰胺基)-N-[(1R)-1-{[(1S)-1-{[(1S)-1-{[(4bS,8S,8aR)-8-{[(1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-2,3,4,9,10,10a-六氢菲-1-羰基]氨基甲酰基}-4b,8-二甲基-5,6,7,8a,9,10-六氢菲-3-基]氨基甲酰基}乙基]氨基甲酰基}-2-甲基丙基]氨基甲酰基}-5-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-十二羟基-10,15,20,25,30-五(羟甲基)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-十二氧杂七环[26.2.2.23,6.28,11.213,16.218,21.223,26]四十二烷-5-基]甲基}-4H,5H,6H,7H,8H,9H-环辛并[d][1,2,3]三唑-4-基)氧基]乙酰胺基}戊基]-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺(LP1)
Figure BDA0003169092350001821
按照连接体-有效负载LP1-LP5的一般方法，得到连接体-有效负载LP1(8mg，36％收率)为白色固体。ESIm/z:842(M/3+1)+；1262(M/2+1)+。1H NMR(400MHz,DMSOd6)δ9.69(s,0.5H),9.28(s,0.5H),8.20-8.00(m,5H),7.81-7.75(m,2H),7.66(d,J＝7.6Hz,1H),7.60(d,J＝7.6Hz,1H),7.53-7.27(m,9H),6.96-6.92(m,1H),6.67(d,J＝8.0Hz,1H),6.47(s,1H),6.32(d,J＝8.4Hz,1H),5.57-5.47(m,14H),5.13-4.99(m,2H),4.81-4.68(m,11H),4.59-4.52(m,5H),4.36-4.29(m,3H),4.16-4.08(m,1H),3.99-3.98(m,1H),3.84-3.53(m,30H),3.45-3.38(m,12H),3.13-3.03(m,4H),2.90-2.66(m,5H),2.36-2.32(m,1H),2.26-2.20(m,3H),2.15-2.12(m,4H),2.00-1.99(m,2H),1.88-1.72(m,6H),1.64-1.40(m,14H),1.33-1.24(m,17H),1.14-1.09(m,3H),1.00-0.97(m,7H),0.89-0.81(m,8H)ppm。
分析型HPLC:95％，保留时间:7.93min(方法B)。
1-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰胺基)-N-[(1R)-1-{[(1S)-1-{[(1S)-1-{[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-基]甲酰胺基}羰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酰基}-4-(氨基甲酰基氨基)丁基]氨基甲酰基}-2-甲基丙基]氨基甲酰基}-5-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-十二羟基-10,15,20,25,30-五(羟甲基)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-十二氧杂七环[26.2.2.23,6.28,11.213,16.218,21.223,26]四十二烷-5-基]甲基}-1H,4H,5H,6H,7H,8H,9H-环辛并[d][1,2,3]三唑-4-基)氧基]乙酰胺基}戊基]-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺(LP2)
Figure BDA0003169092350001831
按照连接体-有效负载LP1-LP5的一般方法，得到连接体-有效负载LP2(20mg，21％收率)为白色固体。ESI m/z:870(M/3+H)+。1H NMR(400MHz,DMSOd6)δ9.76(s,1H),9.31(s,1H),8.26-8.16(m,1H),8.11-8.07(m,1H),8.03-7.98(m,1H),7.78-7.75(m,1H),7.68-7.66(m,1H),7.62-7.60(d,J＝7.2Hz,1H),7.55-7.52(m,1H),7.48-7.44(m,4H),7.39-7.30(m,4H),6.96-6.93(m,1H),6.68-6.77(d,J＝8.4Hz,1H),6.47(m,1H),6.34-6.32(dd,J＝8.0Hz,1.6Hz,1H),5.96(brs,1H),5.59-5.56(m,5H),5.52-5.45(m,7H),5.38(s,2H),5.13(brs,1H),5.04-5.00(d,J＝14.0Hz,1H),4.81-4.69(m,10H),4.60-4.51(m,5H),4.36-4.11(m,5H),3.98(brs,2H),3.85-3.77(m,11H),3.70-3.58(m,10H),3.45-3.40(m,20H),3.30-3.27(m,4H),3.12-3.04(m,5H),2.98-2.86(m,4H),2.77-2.67(m,4H),2.27-2.19(m,4H),2.16-2.10(m,4H),2.02-1.96(m,2H),1.89-1.73(m,8H),1.64-1.57(m,11H),1.50-1.43(m,7H),1.26-1.20(m,12H),1.15-1.10(m,4H),1.01-0.97(m,6H),0.89-0.82(m,6H)ppm。分析型HPLC:100％，保留时间:7.35min(方法B)。溶解度:<0.1mg/mL水。
2-{1-[4-({[(5R)-5-[1-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰胺基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基]-5-{[(1S)-1-{[(1S)-1-{[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-基]羰基}氨基甲酰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酰基}乙基]氨基甲酰基}-2-甲基丙基]氨基甲酰基}戊基]氨基甲酰基}甲氧基)-1H,4H,5H,6H,7H,8H,9H-环辛并[d][1,2,3]三唑-1-基]-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基}乙烷-1-磺酸(LP3)
Figure BDA0003169092350001832
按照连接体-有效负载LP1-LP5的一般方法，得到连接体-有效负载LP3(60mg，52％收率)为白色固体。ESIm/z:642(M/3+H)+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.68(s,0.6H),9.25(s,0.4H),8.22-8.07(m,3H),8.02-7.86(m,2H),7.77-7.72(m,2H),7.68-7.60(m,2H),7.54-7.52(m,1H),7.50-7.42(m,4H),7.39-7.27(m,4H),7.22(s,1H),7.08(s,1H),6.97-6.94(m,2H),6.74(d,J＝10.5Hz,1H),6.58(s,1H),6.43(dd,J＝10.0Hz,2.0Hz,1H),5.62(br s,1H),5.04-5.00(m,1H),4.93-4.90(m,0.4H),4.76-4.72(m,0.6H),4.52-4.26(m,4H),4.16-4.08(m,1H),3.81-3.75(m,4H),3.61-3.55(m,4H),3.46-3.44(m,24H),3.30-3.27(m,5H),3.08-3.06(m,5H),2.97-2.89(m,2H),2.80-2.74(m,4H),2.54-2.52(m,2H),2.40-2.31(m,2H),2.27-2.22(m,4H),2.16-2.13(m,4H),2.02-1.71(m,8H),1.69-1.45(m,10H),1.40-1.21(m,14H),1.17-1.08(m,4H),1.01-0.98(m,6H),0.89-0.82(m,6H)ppm。
2-{1-[4-({[(5R)-5-[1-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰胺基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基]-5-{[(1S)-1-{[(1S)-1-{[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-基]羰基}氨基甲酰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酰基}-4-(氨基甲酰基氨基)丁基]氨基甲酰基}-2-甲基丙基]氨基甲酰基}戊基]氨基甲酰基}甲氧基)-1H,4H,5H,6H,7H,8H,9H-环辛并[d][1,2,3]三唑-1-基]-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基}乙烷-1-磺酸(LP4)
Figure BDA0003169092350001841
按照连接体-有效负载LP1-LP5的一般方法，得到化合物LP4(6.0mg，20％收率)为白色固体。ESIm/z:671(M/3+H)+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.37(s,1H),9.29(s,1H),8.24-8.22(m,1H),8.18-8.17(m,2H),8.09(s,2H),8.01-7.99(m,1H),7.97-7.94(m,2H),7.89-7.84(m,1H),7.76(m,5H),7.68(d,J＝7.5Hz,2H),7.62(d,J＝7.5Hz,2H),7.55(m,2H),7.51-7.43(m,7H),7.39-7.28(m,7H),7.08(m,4H),6.96-6.93(t,J＝7.0Hz,2H),6.68(d,J＝8.5Hz,2H),6.48(s,2H),6.35-6.33(m,2H),5.97-5.95(m,2H),5.37(s,4H),5.04-5.01(m,2H),4.74-4.69(m,5H),4.52(m,1H),4.42(t,J＝5.5Hz,2H),4.34-4.27(m,4H),4.18(m,1H),4.13-4.11(m,1H),3.82-3.77(m,5H),3.58-3.55(m,6H),3.49-3.44(m,14H),3.10-3.05(m,4H),2.98-2.93(m,4H),2.77-2.75(m,4H),2.28-2.25(m,4H),2.03-1.99(m,2H),1.64-1.51(m,6H),1.27-1.24(m,11H),1.01-0.98(m,11H),0.89-0.82(m,8H)ppm。
1-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰胺基)-N-[(1R)-1-{[(1S)-1-{[(1S)-1-{[(4bS,8S,8aR)-8-{[(1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基]氨基甲酰基}-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酰基}乙基]氨基甲酰基}-2-甲基丙基]氨基甲酰基}-5-[2-({1-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3,4-二羟基-6-(羟甲基)-5-{[(2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟甲基)四氢吡喃-2-基]氧基}四氢吡喃-2-基]-1H,4H,5H,6H,7H,8H,9H-环辛并[d][1,2,3]三唑-4-基}氧基)乙酰胺基]戊基]-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺(LP5)
Figure BDA0003169092350001851
按照连接体-有效负载LP1-LP5的一般方法，得到化合物LP5(15mg，27％收率)为白色固体。ESI m/z:947(M/2+H)+。1H NMR(400MHz,DMSOd6)δ9.69(s,0.55H),9.27(s,0.45H),8.25-8.15(m,2H),8.15-8.05(m,2H),8.05-7.90(m,1H),7.90-7.80(m,1H),7.76(t,J＝6.4Hz,1H),7.66(d,J＝8.0Hz,1H),7.60(d,J＝6.8Hz,1H),7.55-7.40(m,4H),7.40-7.25(m,3H),7.00-6.90(m,1H),6.67(d,J＝8.4Hz,1H),6.47(s,1H),6.32(d,J＝8.0Hz,1H),5.75-5.70(m,1H),5.56(d,J＝6.0Hz,1H),5.50-5.40(m,2H),5.20-4.92(m,4H),4.80-4.70(m,1H),4.70-4.65(m,2H),4.65-4.55(m,2H),4.40-4.25(m,2H),4.20-3.95(m,2H),3.80-3.75(m,2H),3.75-3.45(m,23H),3.30-3.20(m,3H),3.20-2.90(m,5H),2.90-2.65(m,3H),2.60-2.55(m,1H),2.40-1.95(m,12H),1.90-1.70(m,5H),1.70-1.35(m,14H),1.35-1.20(m,15H),1.15-1.05(m,3H),1.00-0.90(m,7H),0.90-0.80(m,7H)ppm。
(2-{1-[4-({[(5R)-5-[1-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰胺基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基]-5-{[(1S)-1-{[(1S)-1-{[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-基]甲酰胺基}羰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酰基}乙基]氨基甲酰基}-2-甲基丙基]氨基甲酰基}戊基]氨基甲酰基}甲氧基)-1H,4H,5H,6H,7H,8H,9H-环辛并[d][1,2,3]三唑-1-基]-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基}乙基)三甲基铵氮三氟乙酸盐(LP20)
Figure BDA0003169092350001852
按照连接体-有效负载LP1-LP5的一般方法，得到化合物LP20(7mg，24％收率)为白色固体。ESI m/z:950.8(M/2)+。
实施例6
连接体-有效负载LP6
本实施例说明了合成上表2中连接体-有效负载LP6的方法。本实施例涉及图4中编号为109至113的化合物、以及连接体-有效负载LP6。
1-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰胺基)-N-[(1S)-1-{[(1S)-4-(氨基甲酰基氨基)-1-{[4-(羟甲基)苯基]氨基甲酰基}丁基]氨基甲酰基}-2-甲基丙基]-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺(110)
Figure BDA0003169092350001861
在室温下，向化合物108(0.30g，0.54mmol)的DMF(10mL)溶液中依次加入HATU(0.31g，0.81mmol)和DIPEA(0.14g，1.1mmol)。混合物在室温下搅拌15分钟。然后在室温下，向反应溶液中加入VC-PAB-OH 109(CAS:159857-79-1，0.21g，0.54mmol)，将所得混合物在室温下搅拌3h直至108或109耗尽，通过LCMS进行监测。然后将反应混合物通过过滤膜过滤，滤液浓缩，残余物经反相快速色谱法(0-100％乙腈的水溶液(含10mmol/L碳酸氢铵))直接纯化，得到化合物110(0.30g，60％收率)为白色固体。ESI m/z:617(M+H)+。
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-[1-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰胺基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基]-3-甲基丁酰胺基]-5-(氨基甲酰基氨基)戊酰胺基]苯基}甲基4-硝基苯基碳酸酯(112)
Figure BDA0003169092350001862
在0℃下，向化合物110(0.15g，0.16mmol)的DMF(10mL)溶液中依次加入双(4-硝基苯基)碳酸酯111(0.15g，0.49mmol)和DIPEA(63mg，0.49mmol)。然后将混合物在室温下搅拌3小时直至110耗尽，通过LCMS进行监测。反应混合物经过滤膜过滤，滤液浓缩，残余物经反相快速色谱法(0-100％乙腈的水溶液(含10mmol/L碳酸氢铵))直接纯化，得到化合物112(50mg，28％收率)为白色固体。ESI m/z:1079(M+H)+。
9H-芴-9-基甲基N-({[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-{[({4-[(2S)-2-[(2S)-2-[1-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰胺基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基]-3-甲基丁酰胺基]-5-(氨基甲酰基氨基)戊酰胺基]苯基}甲氧基)羰基]氨基}-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-基]甲酰胺基}羰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酰基}甲基)氨基甲酸酯(113)
Figure BDA0003169092350001871
向化合物14a(0.10g，0.12mmol)和化合物112(0.15g，0.14mmol)的DMF(5mL)混合物中加入HOBt(20mg，0.15mmol)和DIPEA(48mg，0.37mmol)，将混合物在室温下搅拌4小时，通过LCMS进行监测。反应混合物经制备型HPLC(方法B)纯化，得到化合物113(0.16g，72％收率)为浅黄色固体。ESI m/z:874(M/2+1)+。
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-[1-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰胺基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基]-3-甲基丁酰胺基]-5-(氨基甲酰基氨基)戊酰胺基]苯基}甲基N-[(4bS,8S,8aR)-8-{[(1S,4aS,10aR)-6-(2-氨基乙酰胺基)-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基]氨基甲酰基}-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酸酯(LP6)
Figure BDA0003169092350001872
向化合物113(0.10g，0.057mmol)的DMF(5mL)溶液中加入哌啶(1mL)，将混合物在室温下搅拌半小时，直至根据LCMS已完全脱去Fmoc。反应混合物经制备型HPLC(方法B)直接纯化，得到化合物LP6(35mg，23％收率)为白色固体。ESI m/z:763(M/2+1)+。1H NMR(500MHz,DMSOd6)δ10.0(s,1H),9.51(s,1H),8.15-8.08(m,2H),7.87(d,J＝8.5Hz,1H),7.76(t,J＝5.0Hz,1H),7.70-7.65(m,1H),7.61(t,J＝8.5Hz,3H),7.51-7.42(m,4H),7.41-7.30(m,8H),7.20-7.10(m,1H),7.00-6.90(m,2H),6.00-5.95(m,1H),5.40(s,2H),5.35-5.30(m,1H),5.10-5.00(m,3H),4.40-4.35(m,1H),4.25-4.20(m,1H),3.65-3.55(m,3H),3.50-3.40(m,14H),3.25(s,3H),3.10-3.00(m,4H),3.00-2.85(m,4H),2.80-2.70(m,2H),2.63-2.61(m,1H),2.60-2.55(m,1H),2.45-2.35(m,3H),2.31-2.20(m,3H),2.20-2.10(m,4H),2.10-1.92(m,5H),1.90-1.82(m,4H),1.68-1.53(m,6H),1.50-1.40(m,2H),1.20-1.10(m,2H),1.02-0.96(m,6H),0.90-0.80(m,8H)ppm。
实施例7
连接体-有效负载LP7
本实施例说明了合成上表2中连接体-有效负载LP7的方法。本实施例涉及图5中编号为14a、107、114和115的化合物、以及连接体-有效负载LP7。
9H-芴-9-基甲基N-({[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-[(2S)-2-[(2S)-2-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-3-甲基丁酰胺基]丙酰胺基]-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-基]甲酰胺基}羰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酰基}甲基)氨基甲酸酯(114)
Figure BDA0003169092350001881
向化合物14a(66mg，0.082mmol)的DMF(10mL)溶液中加入Boc-Val-Ala-OH 101c(28mg，0.098mmol)、DIPEA(32mg，0.25mmol)和HATU(47mg，0.12mmol)。反应混合物在室温下搅拌4小时，通过LCMS进行监测。混合物经反相快速色谱法(50-90％乙腈的碳酸氢铵水溶液(10mM))直接纯化，得到化合物114(74mg，84％收率)为白色固体。ESI m/z:978(M–Boc+1)+。
9H-芴-9-基甲基N-({[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-[(2S)-2-[(2S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺基]丙酰胺基]-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-基]甲酰胺基}羰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酰基}甲基)氨基甲酸酯三氟乙酸盐(115)
Figure BDA0003169092350001882
向化合物114(74mg，0.069mmol)的DCM(3mL)溶液中加入TFA(1mL)。反应混合物在室温下搅拌1小时，直至根据LCMS已完全脱去Boc。真空除去挥发物，得到粗产物115(66mg，作为TFA盐的收率为97％)为无色油状物。ESI m/z:978(M+1)+。
1-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰胺基)-N-[(1S)-1-{[(1S)-1-{[(4bS,8S,8aR)-8-{[(1S,4aS,10aR)-6-(2-氨基乙酰胺基)-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基]氨基甲酰基}-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酰基}乙基]氨基甲酰基}-2-甲基丙基]-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺(LP7)
Figure BDA0003169092350001891
向化合物115(60mg，61μmol)的DMF(5mL)溶液中加入DIBAC-suc-PEG4-OSu 107(48mg，74μmol)和DIPEA(24mg，0.18mmol)。反应混合物在室温下搅拌4小时，通过LCMS进行监测。然后向反应中加入哌啶(0.2mL，过量)。将反应混合物在室温下搅拌30分钟，直至根据LCMS已完全脱去Fmoc。反应混合物经制备型HPLC(方法B)直接纯化，得到LP7(22mg，28％收率)为白色固体。ESIm/z:1292(M+H)+。1H NMR(500MHz,DMSOd6)(含区域异构体)δ9.66(s,0.5H),9.51(s,0.5H),8.43(d,J＝7.5Hz,0.5H),8.15-8.10(m,1.5H),8.05(d,J＝7.5Hz,0.5H),7.90(d,J＝7.5Hz,0.5H),7.77(t,J＝5.5Hz,1H),7.70-7.65(m,1H),7.65-7.60(m,1H),7.55-7.25(m,11H),6.97(d,J＝8.5Hz,2H),5.02(d,J＝14.5Hz,1H),4.40-4.35(m,1H),4.18(t,J＝7.5Hz,0.5H),4.04(t,J＝7.5Hz,0.5H),3.65-3.50(m,3H),3.50-3.40(m,14H),3.23(s,3H),3.15-3.05(m,3H),2.95-2.85(m,3H),2.80-2.70(m,3H),2.60-2.55(m,1H),2.40-2.10(m,12H),2.00-1.80(m,5H),1.80-1.70(m,1H),1.70-1.55(m,5H),1.24(s,1H),1.20-1.10(m,3H),1.10-0.90(m,8H),0.90-0.80(m,8H)ppm。
实施例8
连接体-有效负载LP8
本实施例说明了合成上表2中连接体-有效负载LP8的方法。本实施例涉及图6中编号为P4、117-120的化合物、以及连接体-有效负载LP8。
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺基]-5-(氨基甲酰基氨基)戊酰胺基]苯基}甲基N-({[(4bS,8S,8aR)-8-{[(1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基]氨基甲酰基}-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酰基}甲基)氨基甲酸酯(117)
Figure BDA0003169092350001892
在室温下，通过注射器向Fmoc-vc-PAB-PNP 116(0.14g，0.18mmol)和有效负载P4(0.11g，0.18mmol)的DMF(2mL)溶液中加入HOBt(24mg，0.18mmol)和DIPEA(70mg，0.54mmol)。混合物在室温下搅拌2小时，根据LCMS监测化合物P4耗尽。向所得混合物中加入哌啶(42mg，0.50mmol)，将反应在室温下搅拌2小时，直至完全脱去Fmoc，通过LCMS进行监测。通过膜过滤后，滤液浓缩，残余物经制备型HPLC(方法B)直接纯化，得到化合物117(45mg，27％收率)为白色固体。ESI m/z:991(M+1)+。
1H NMR(400MHz,DMSOd6)δ10.11(s,1H),9.80(s,1H),8.20-8.04(m,2H),7.60(d,J＝8.4Hz,2H),7.52-7.44(m,2H),7.36-7.20(m,3H),6.96(d,J＝8.4Hz,1H),6.68(d,J＝8.2Hz,1H),6.48(d,J＝1.7Hz,1H),6.36-6.29(m,1H),5.98(t,J＝5.6Hz,1H),5.41(s,2H),4.97(s,2H),4.70(s,2H),4.52-4.42(m,1H),3.75(d,J＝6.0Hz,2H),3.07-2.85(m,4H),2.82-2.61(m,3H),2.31-2.06(m,6H),2.00-1.78(m,6H),1.72-1.52(m,6H),1.44-1.09(m,13H),0.99(d,J＝8.5Hz,6H),0.87(d,J＝8.1Hz,3H),0.78(d,J＝6.8Hz,3H)ppm。
2,5-二氧代吡咯烷-1-基(2R)-6-[2-(环辛-2-炔-1-基氧基)乙酰胺基]-2-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}己酸酯(118)
Figure BDA0003169092350001901
将化合物103(0.10g，0.19mmol)、EDCI(72mg，0.38mmol)和HOSu(43mg，0.38mmol)的DCM(3mL)混合物在室温下搅拌3h。浓缩反应混合物，残余物经硅胶柱色谱法(70％乙酸乙酯的石油醚溶液)纯化，得到中间体118(55mg，47％收率)为白色固体，其无需纯化即可用于下一步骤。ESI m/z:630(M+1)+。
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-[(2R)-2-氨基-6-[2-(环辛-2-炔-1-基氧基)乙酰胺基]己酰胺基]-3-甲基丁酰胺基]-5-(氨基甲酰基氨基)戊酰胺基]苯基}甲基N-({[(4bS,8S,8aR)-8-{[(1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基]氨基甲酰基}-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酰基}甲基)氨基甲酸酯(119)
Figure BDA0003169092350001902
向化合物117(55mg，56μmol)和DIPEA(24mg，0.19mmol)的DMF(1.5mL)溶液中加入粗中间体118(40mg，63μmol)。反应混合物在室温下搅拌2小时，直至根据LCMS监测118耗尽。反应混合物经反相快速色谱法(0-100％乙腈的水溶液)直接纯化，得到Fmoc-119(60mg，ESIm/z:753(M/2+1)+)为白色固体，将其溶于DMF(1.5mL)。向溶液中加入二乙胺(24mg，0.33mmol)，将溶液在室温下搅拌2小时，直至根据LCMS监测完全脱去Fmoc。反应混合物经反相快速色谱法(0-100％乙腈的碳酸氢铵水溶液)直接纯化，得到化合物119(35mg，由化合物117得到的收率为50％)为白色固体。ESIm/z:1282(M+H)+。
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-[(2R)-2-氨基-6-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-十二羟基-10,15,20,25,30-五(羟甲基)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-十二氧杂七环[26.2.2.23,6.28,11.213,16.218,21.223,26]四十二烷-5-基]甲基}-1H,4H,5H,6H,7H,8H,9H-环辛并[d][1,2,3]三唑-4-基)氧基]乙酰胺基}己酰胺基]-3-甲基丁酰胺基]-5-(氨基甲酰基氨基)戊酰胺基]苯基}甲基N-({[(4bS,8S,8aR)-8-{[(1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基]氨基甲酰基}-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酰基}甲基)氨基甲酸酯(120)
Figure BDA0003169092350001911
向化合物119(70mg，54μmol)的DMF(3mL)溶液中加入α-CD-N3105a(0.16g，0.16mmol)。反应混合物在50℃下搅拌3天，通过LCMS进行监测。然后所得混合物经反相快速色谱法(0-100％乙腈的碳酸氢铵水溶液(10mM))直接纯化，得到化合物120(20mg，16％收率)为白色固体。ESI m/z:1141(M/2+1)+。
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-[(2R)-2-[1-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰胺基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基]-6-{2-[(1-{[31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42-十二羟基-10,15,20,25,30-五(羟甲基)-2,4,7,9,12,14,17,19,22,24,27,29-十二氧杂七环[26.2.2.23,6.28,11.213,16.218,21.223,26]四十二烷-5-基]甲基}-1H,4H,5H,6H,7H,8H,9H-环辛并[d][1,2,3]三唑-4-基)氧基]乙酰胺基}己酰胺基]-3-甲基丁酰胺基]-5-(氨基甲酰基氨基)戊酰胺基]苯基}甲基N-({[(4bS,8S,8aR)-8-{[(1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基]氨基甲酰基}-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酰基}甲基)氨基甲酸酯(LP8)
Figure BDA0003169092350001912
向化合物120(10mg，4.4μmol)和中间体107(5mg，7.7μmol)的DMF(2mL)溶液中加入DIPEA(16mg，0.12mmol)，将混合物在室温下搅拌16h。反应混合物经制备型HPLC(方法B)直接纯化两次，得到LP8(1.5mg，12％收率)为白色固体。ESI m/z:939(M/3+H)+。1H NMR(500MHz,DMSOd6)δ9.87-9.66(m,1H),8.22-8.08(m,4H),7.91-7.76(m,2H),7.71-7.61(m,4H),7.56-7.45(m,4H),7.40-7.28(m,5H),6.96(d,J＝8.5Hz,1H),6.68(d,J＝8.1Hz,1H),6.48(s,1H),6.34(d,J＝8.2Hz,1H),6.03-5.96(m,1H),5.67-5.31(m,12H),5.06-4.95(m,3H),4.87-4.66(m,7H),4.63-4.50(m,3H),4.38-4.29(m,3H),4.22-4.13(m,1H),4.06-3.93(m,1H),3.86-3.40(m,54H),3.30-3.19(m,4H),3.17-2.85(m,4H),2.81-2.62(m,2H),2.60-2.54(m,3H),2.41-1.95(m,11H),1.92-1.71(m,5H),1.68-1.40(m,13H),1.33-1.09(m,22H),1.02-0.93(m,10H),0.89-0.78(m,9H)ppm。分析型HPLC(作为三唑区域异构体的混合物):63％，保留时间:6.03min；36％,保留时间:6.13min(方法B)。
实施例9
连接体-有效负载LP9
本实施例说明了合成上表2中连接体-有效负载LP9的方法。本实施例涉及图7中编号为12b、15、112、121和122的化合物、以及连接体-有效负载LP9。
9H-芴-9-基甲基N-[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-基]甲酰胺基}羰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酸酯,三氟乙酸盐(15)
Figure BDA0003169092350001921
向化合物12b(0.63g，1.0mmol)的DCM(50mL)溶液中加入Fmoc-OSu(0.40g，1.2mmol)和DIPEA(0.26g，2.0mmol)。混合物在室温下搅拌16小时，通过LCMS进行监测。真空浓缩混合物，残余物经硅胶柱色谱法(50-80％乙酸乙酯的石油醚溶液)纯化，得到Boc-15(0.71g)为白色固体，将其溶于DCM(10mL)。在室温下，向所得溶液中加入TFA(3mL)。反应混合物在室温下搅拌4小时，直至根据LCMS监测完全脱去Boc。真空除去挥发物，得到化合物15，为TFA盐(0.62g，74％收率)和无色油状物。ESI m/z:751(M+H)+。
9H-芴-9-基甲基N-[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-[(2S)-6-氨基-2-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}己酰胺基]-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-基]甲酰胺基}羰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酸酯,三氟乙酸盐(122)
Figure BDA0003169092350001922
在室温下，向化合物15(0.30g，0.40mmol)的DMF(20mL)溶液中依次加入Fmoc-Lys(Boc)-OH 121(0.23g，0.48mmol)、HATU(228mg，0.60mmol)和DIPEA(0.16g，1.2mmol)。反应混合物在室温下搅拌4小时，通过LCMS进行监测。所得混合物经反相快速色谱法(50-90％乙腈的碳酸氢铵水溶液(10mM))直接纯化，得到Boc-122(0.41g)为白色固体，将其中0.24g溶于DCM(20mL)。向所得溶液中加入TFA(3mL)，反应混合物在室温下搅拌1小时，直至根据LCMS监测已完全脱去Boc。真空除去挥发物，得到化合物122，为TFA盐(0.22g，79％收率)和无色油状物。ESI m/z:1101(M+H)+。
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-[1-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰胺基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基]-3-甲基丁酰胺基]-5-(氨基甲酰基氨基)戊酰胺基]苯基}甲基N-[(5S)-5-氨基-5-{[(4bS,8S,8aR)-8-{[(1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基]氨基甲酰基}-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酰基}戊基]氨基甲酸酯(LP9)
Figure BDA0003169092350001931
向化合物122(14mg，12μmol)和化合物112(15mg，14μmol)的DMF(5mL)混合物中加入HOBt(2mg，15μmol)和DIPEA(5mg，37μmol)，将混合物在室温下搅拌4小时，通过LCMS进行监测。然后向反应混合物中加入哌啶(0.5mL)，将混合物在室温下搅拌0.5小时，直至根据LCMS监测完全脱去Fmoc。然后反应混合物通过膜过滤，滤液浓缩，残余物经制备型HPLC(方法B)直接纯化，得到LP9(6mg，31％收率)为白色固体。ESI m/z:798(M/2+H)+。1H NMR(500MHz,DMSOd6)δ10.0(s,1H),8.15-8.08(m,2H),7.87(d,J＝8.5Hz,1H),7.76(t,J＝5.0Hz,1H),7.67(d,J＝7.0Hz,1H),7.61(d,J＝7.0Hz,1H),7.60-7.56(m,2H),7.51-7.42(m,4H),7.41-7.24(m,6H),7.20-7.16(m,1H),6.95(d,J＝8.5Hz,1H),6.68(d,J＝8.0Hz,1H),6.50-6.46(m,1H),6.36-6.32(m,1H),6.00-5.96(m,1H),5.40(s,2H),5.02(d,J＝9.0Hz,1H),4.91(s,2H),4.69(s,2H),4.40-4.35(m,1H),4.25-4.20(m,1H),3.65-3.55(m,3H),3.50-3.40(m,14H),3.24-3.20(m,2H),3.10-3.05(m,2H),3.00-2.92(m,3H),2.92-2.85(m,1H),2.80-2.70(m,2H),2.65-2.55(m,2H),2.45-2.35(m,2H),2.31-2.20(m,4H),2.20-2.10(m,4H),2.10-1.92(m,3H),1.90-1.70(m,6H),1.68-1.53(m,6H),1.50-1.30(m,8H),1.25-1.20(m,7H),1.20-1.10(m,3H),1.02-0.96(m,6H),0.90-0.80(m,6H)ppm。
实施例10
连接体-有效负载LP10和LP11
本实施例说明了合成上表2中连接体-有效负载LP10-LP11的方法。本实施例涉及图8中编号为P7、P8、116、123a-123b的化合物、以及连接体-有效负载LP10和LP11。
(S)-4-((4bS,8S,8aR)-8-((1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基氨基甲酰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基氨基)-3-((4-((S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酰胺基)苄氧基)羰基氨基)-4-氧代丁酸(123a)
Figure BDA0003169092350001941
在室温下，向有效负载P7(64mg，0.10mmol)的DMF(5mL)溶液中依次加入中间体116(92mg，0.12mmol)和DIPEA(26mg，0.20mmol)。反应混合物在室温下搅拌4小时，通过LCMS进行监测。然后向混合物中加入哌啶(0.5mL)，将反应混合物在室温下搅拌10分钟，直至根据LCMS监测已完全脱去Fmoc。混合物经反相快速色谱法(40-70％乙腈的碳酸氢铵水溶液(10mM))直接纯化，得到化合物123a(41mg，39％收率)为白色固体。ESI m/z:1049(M+H)+。
(S)-5-((4bS,8S,8aR)-8-((1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基氨基甲酰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基氨基)-4-((4-((S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酰胺基)苄氧基)羰基氨基)-5-氧代戊酸(123b)
Figure BDA0003169092350001942
按照123a的类似方法，除了用P8(0.53g，0.81mmol)代替P7之外，提供化合物123b(0.61g，71％收率)为白色固体。ESI m/z:1063(M+H)+。
(3S)-3-{[({4-[(2S)-2-[(2S)-2-[1-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰胺基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基]-3-甲基丁酰胺基]-5-(氨基甲酰基氨基)戊酰胺基]苯基}甲氧基)羰基]氨基}-3-{[(4bS,8S,8aR)-8-{[(1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基]氨基甲酰基}-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酰基}丙酸(LP10)
Figure BDA0003169092350001943
在室温下，向化合物123(21mg，20μmol)的DMF(2mL)溶液中依次加入中间体107(16mg，24μmol)和DIPEA(5mg，40μmol)。反应混合物在室温下搅拌4小时，通过LCMS进行监测。所得混合物经制备型HPLC(方法B)直接纯化，得到化合物LP10(12mg，38％收率)为白色固体。ESI m/z:792(M/2+H)+。1H NMR(400MHz,DMSOd6)δ10.0(s,1H),8.14(d,J＝7.2Hz,1H),8.09(s,1H),7.90(d,J＝8.8Hz,1H),7.85-7.75(m,1H),7.68(d,J＝8.0Hz,1H),7.65-7.55(m,3H),7.55-7.40(m,4H),7.40-7.25(m,5H),6.95(d,J＝8.8Hz,1H),6.67(d,J＝8.0Hz,1H),6.47(s,1H),6.32(d,J＝8.0Hz,1H),6.05-5.95(m,1H),5.43(s,2H),5.05-4.90(m,3H),4.80-4.60(m,1H),4.40-4.35(m,2H),4.25-4.20(m,1H),3.65-3.55(m,3H),3.50-3.40(m,25H),3.20-2.85(m,4H),2.80-2.55(m,3H),2.40-2.30(m,3H),2.30-2.20(m,3H),2.20-2.05(m,4H),2.0-1.50(m,12H),1.50-1.30(m,3H),1.30-1.20(m,6H),1.20-1.05(m,2H),1.05-0.90(m,5H),0.90-0.80(m,6H)ppm。
(4S)-4-{[({4-[(2S)-2-[(2S)-2-[1-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰胺基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基]-3-甲基丁酰胺基]-5-(氨基甲酰基氨基)戊酰胺基]苯基}甲氧基)羰基]氨基}-4-{[(4bS,8S,8aR)-8-{[(1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基]氨基甲酰基}-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酰基}丁酸(LP11)
Figure BDA0003169092350001951
按照LP10的类似方法，除了用123b(0.10g，94μmol)代替123a之外，提供化合物LP11(50mg，33％收率)为白色固体。ESI m/z:799(M/2+H)+。1H NMR(400MHz,DMSOd6)δ10.0(s,1H),9.91(s,1H),8.14(d,J＝7.2Hz,1H),8.09(s,1H),7.90(d,J＝8.8Hz,1H),7.85-7.75(m,1H),7.68(d,J＝8.0Hz,1H),7.65-7.55(m,3H),7.55-7.40(m,4H),7.40-7.25(m,6H),6.95(d,J＝8.8Hz,1H),6.67(d,J＝8.0Hz,1H),6.47(s,1H),6.32(d,J＝8.0Hz,1H),6.05-5.95(m,1H),5.43(s,2H),5.05-4.90(m,3H),4.40-4.35(m,2H),4.25-4.20(m,1H),3.65-3.55(m,4H),3.50-3.40(m,25H),3.20-2.85(m,4H),2.80-2.55(m,3H),2.40-2.30(m,3H),2.30-2.20(m,3H),2.20-2.05(m,4H),2.00-1.50(m,12H),1.50-1.30(m,3H),1.30-1.20(m,6H),1.20-1.05(m,2H),1.05-0.90(m,5H),0.90-0.80(m,6H)ppm。
实施例11
有效负载P12和P16；以及连接体-有效负载LP12和LP16
本实施例说明了合成上表1中有效负载P12和P16以及上表2中连接体-有效负载LP12和LP16的方法。本实施例涉及图9中编号为12b、107、124、125和126的化合物；和有效负载P12和P16；以及连接体-有效负载LP12和LP16。
((S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-5-(叔丁氧基)-5-氧代戊酰基)-L-丙氨酸(125)
Figure BDA0003169092350001961
向Fmoc-Glu(OtBu)-OH(6.0g，14mmol)的DCM(300mL)溶液中加入HOSu(3.2g，28mmol)和EDCI(5.4g，28mmol)。反应混合物在室温下搅拌过夜，通过LCMS进行监测。所得混合物用DCM(200mL)稀释，然后用水(100mL×2)和盐水(100mL)洗。有机溶液经无水硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩，得到粗化合物124(8.5g，ESI m/z:545(M+23)+)，将其溶于DMF(10mL)。向所得溶液中加入丙氨酸(4.2g，48mmol)和DIPEA(6.2g，48mmol)。反应混合物在室温下搅拌过夜，通过LCMS进行监测。将所得混合物倒入水(100mL)中，并用乙酸酸化至pH 5-6。混合物用乙酸乙酯萃取，合并的有机溶液真空浓缩。粗产物经反相快速色谱法(0-60％乙腈的TFA水溶液(0.01％))纯化，得到化合物125(1g，15％收率)为白色固体。ESI m/z:497(M+H)+。
(S)-叔丁基4-氨基-5-((S)-1-((4bS,8S,8aR)-8-((1S,4aS,10aR)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基氨基甲酰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基氨基)-1-氧代丙烷-2-基氨基)-5-氧代戊酸酯(126a)
Figure BDA0003169092350001962
向化合物125(42mg，84μmol)和DIPEA(28μl，0.16mmol)的DMF(3.0mL)溶液中加入HATU(36mg，95μmol)。反应混合物在室温下搅拌10分钟，然后加入化合物12b(50mg，80μmol)，将混合物在室温下搅拌过夜，通过LCMS进行监测。然后向反应混合物中加入哌啶(1.0mL)，将混合物在室温下搅拌3小时，直至根据LCMS监测已完全脱去Fmoc。所得混合物经反相快速色谱法(0-100％乙腈的TFA水溶液(0.01％))直接纯化，得到化合物126a(20mg，28％收率)为黄色固体。ESI m/z:885(M+H)+。
(4S)-4-氨基-4-{[(1S)-1-{[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-羟基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-基]甲酰胺基}羰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酰基}乙基]氨基甲酰基}丁酸叔丁酯(126b)
Figure BDA0003169092350001963
按照126a的类似方法，除了用P1代替12b之外，得到化合物126b(37mg，47％收率)为白色固体。ESI m/z:393.4(M/2+1)+。
(S)-4-氨基-5-((S)-1-((4bS,8S,8aR)-8-((1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基氨基甲酰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基氨基)-1-氧代丙烷-2-基氨基)-5-氧代戊酸(P12)
Figure BDA0003169092350001971
将化合物126a(57mg，64μmol)的纯TFA(2.0mL)混合物在RT下搅拌1小时，通过LCMS进行监测。所得混合物用DCM(20mL)稀释，真空浓缩。残余物经反相快速色谱法(0-100％乙腈的碳酸氢钠水溶液(10mM))纯化，得到P12(20mg，43％收率)为白色固体。ESI m/z:365(M/2+H)+。1H NMR(400MHz,DMSOd6)δ9.90(s,1H),8.30(br s,1H),8.09(s,1H),7.50(s,1H),7.33(d,J＝8.4Hz,1H),6.96(d,J＝8.4Hz,1H),6.67(d,J＝8.0Hz,1H),6.46(s,1H),6.33(dd,J＝7.6Hz和2.0Hz,1H),4.70(br s,1H),4.41-4.36(m,1H),3.42-3.30(m,6H),2.91-2.85(m,1H),2.78-2.75(m,2H),2.67-2.61(m,1H),2.32-2.27(m,4H),2.16-2.13(m,4H),1.88-1.77(m,4H),1.65-1.58(m,4H),1.29-1.23(m,12H),1.14-1.11(m,2H),1.01(d,J＝7.6Hz,6H)ppm。
(4S)-4-氨基-4-{[(1S)-1-{[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-羟基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-基]甲酰胺基}羰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酰基}乙基]氨基甲酰基}丁酸(P16)
Figure BDA0003169092350001972
按照P12的类似方法，除了用126b代替126a之外，得到有效负载P16(18mg，53％收率)为黄色固体。ESI m/z:729.5(M+1)+。1H NMR(400MHz,DMSOd6)δ9.95-9.90(d,J＝18.8Hz,1H),8.30(brs,1H),8.11(s,1H),7.52(s,1H),7.37-7.33(m,1H),6.96(d,J＝8.0Hz,1H),6.81(d,J＝8.0Hz,1H),6.63(d,J＝2.8Hz,1H),6.50(dd,J＝8.0,2.0Hz,1H),4.39(br s,1H),3.32-3.16(m,4H),2.90-2.66(m,5H),2.27-2.13(m,8H),1.88-1.80(m,4H),1.66-1.59(m,4H),1.47(br s,1H),1.31-1.23(m,11H),1.17-1.10(m,2H),1.00-0.98(m,6H)ppm。
(4S)-4-[1-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰胺基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基]-4-{[(1S)-1-{[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-基]甲酰胺基}羰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酰基}乙基]氨基甲酰基}丁酸(LP12)
Figure BDA0003169092350001981
向化合物P12(10mg，14μmol)的DMF(2.0ml)溶液中加入DIPEA(6μl，21μmol)和化合物107(11mg，16μmol)。反应混合物在室温下搅拌3小时，通过LCMS进行监测。所得混合物经制备型HPLC(方法B)直接纯化，得到化合物LP12(3.5mg，20％收率)为白色固体。ESI m/z:632(M/2+H)+。1H NMR(400MHz,DMSOd6)δ9.64(s,1H),9.49(s,1H),8.41-8.39(m,1H),8.12-8.09(m,1H),7.79(br s,1H),7.67(d,J＝7.2Hz,1H),7.61(d,J＝7.2Hz,1H),7.60(br s,1H),7.52-7.27(m,8H),6.95(d,J＝8.4Hz,1H),6.67(d,J＝8.4Hz,1H),6.47(s,1H),6.33(dd,J＝8.4Hz和1.6Hz,1H),5.02(d,J＝14.0Hz,1H),4.70-4.67(brs,1H),4.36-4.30(m,1H),4.21-4.14(m,1H),3.61-3.58(m,3H),3.46-3.45(m,15H),3.08-3.06(m,2H),2.90-2.55(m,5H),2.42-2.09(m,12H),1.98-1.73(m,7H),1.65-1.54(m,3H),1.29-1.25(m,12H),1.17-1.11(m,2H),0.99-0.97(m,6H)ppm。
(4S)-4-[1-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰胺基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基]-4-{[(1S)-1-{[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-羟基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-基]甲酰胺基}羰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酰基}乙基]氨基甲酰基}丁酸(LP16)
Figure BDA0003169092350001982
按照P12的类似方法，除了用P16代替P12，得到连接体-有效负载LP16(12mg，69％收率)为白色固体。ESI m/z:632.5(M/2+1)+。1H NMR(400MHz,DMSOd6)δ9.63(s,1H),9.49(s,1H),8.97(s,1H),8.38(d,J＝5.6Hz,1H),8.11(s,1H),7.78(brs,1H),7.67(d,J＝7.6Hz,1H),7.61(d,J＝6.4Hz,1H),7.56-7.27(m,8H),6.95(d,J＝8.0Hz,1H),6.81(d,J＝8.4Hz,1H),6.63(d,J＝8.4Hz,1H),6.51-6.48(m,1H),5.02(d,J＝13.6Hz,1H),4.36-4.30(m,1H),4.20-4.15(m,1H),3.61-3.54(m,3H),3.46-3.43(m,14H),3.10-3.06(m,2H),2.89-2.66(m,5H),2.44-2.11(m,12H),2.02-1.73(m,7H),1.65-1.56(m,3H),1.31-1.22(m,12H),1.17-1.09(m,2H),1.00-0.98(m,6H)ppm。
实施例12
连接体-有效负载LP13和LP14
本实施例说明了合成上表2中连接体-有效负载LP13和LP14的方法。本实施例涉及图9A中编号为102a、127a/b、128a/b、107的化合物，以及连接体-有效负载LP13和LP14。
(4S)-4-氨基-4-{[(1S)-1-{[(1S)-1-{[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-基]甲酰胺基}羰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酰基}乙基]氨基甲酰基}-2-甲基丙基]氨基甲酰基}丁酸(128a)
Figure BDA0003169092350001991
将化合物127a(6.4mg，21μmol)和HATU(8.0mg，21μmol)的DMF(2.0mL)溶液于RT下搅拌15min，然后加入化合物102a(14mg，17.5μmol)和DIPEA(6.8mg，52.5μmol)。反应混合物在室温下搅拌1小时，通过LCMS进行监测。混合物经反相快速色谱法(0-100％乙腈的水溶液)直接纯化，得到保护的128a(12mg)为白色固体，将其溶于DCM(4mL)。向搅拌的溶液中加入TFA(0.5mL)，将混合物在RT下搅拌1小时，通过LCMS进行监测。所得混合物经反相快速色谱法(0-100％乙腈的碳酸氢铵水溶液(10mM))直接纯化，得到化合物128a(7.1mg，49％收率)为白色固体。ESI m/z:827.5(M+1)+。
(4R)-4-氨基-4-{[(1S)-1-{[(1S)-1-{[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-基]甲酰胺基}羰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酰基}乙基]氨基甲酰基}-2-甲基丙基]氨基甲酰基}丁酸(128b)
Figure BDA0003169092350001992
按照128a的类似方法，除了用化合物127b代替127a之外，得到化合物128b(16mg，56％收率)为白色固体。ESI m/z:827.5(M+1)+。
(4S)-4-[1-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰胺基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基]-4-{[(1S)-1-{[(1S)-1-{[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-基]甲酰胺基}羰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酰基}乙基]氨基甲酰基}-2-甲基丙基]氨基甲酰基}丁酸(LP13)
Figure BDA0003169092350002001
向化合物128a(7.1mg，8.6μmol)的DMF(2.0mL)混合物中加入化合物107(5.6mg，8.6μmol)和DIPEA(3.3mg，26μmol)，反应混合物在室温下搅拌1小时，由LCMS进行监测。所得混合物经反相快速色谱法(0-100％乙腈的碳酸氢铵水溶液(10mM))直接纯化，得到连接体-有效负载LP13(5.5mg，47％收率)为白色固体。ESI m/z:681.6(M/2+1)+。1H NMR(400MHz,DMSOd6)δ9.75(dd,J＝12,0.6Hz,1H),8.31(dd,J＝12,3.5Hz,1H),8.19(dd,J＝7.5,2.1Hz,1H),8.16-8.08(m,2H),7.82-7.70(m,2H),7.68(dd,J＝7.5,1.1Hz,1H),7.64-7.59(m,1H),7.56-7.44(m,4H),7.41-7.27(m,4H),6.96(dd,J＝8.8,3.2Hz,1H),6.68(d,J＝8.2Hz,1H),6.47(d,J＝1.8Hz,1H),6.33(dd,J＝8.1,2.1Hz,1H),5.02(d,J＝14.0Hz,1H),4.43-4.26(m,3H),4.22-4.08(m,2H),3.62-3.55(m,3H),3.51-3.42(m,12H),3.30-3.20(m,2H),3.12-2.84(m,3H),2.80-2.55(m,4H),2.47-2.10(m,12H),2.04-1.52(m,13H),1.37-1.23(m,10H),1.17-1.08(m,2H),0.99(d,J＝7.7Hz,6H),0.88-0.78(m,6H)ppm。
(4R)-4-[1-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰胺基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基]-4-{[(1S)-1-{[(1S)-1-{[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-基]甲酰胺基}羰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酰基}乙基]氨基甲酰基}-2-甲基丙基]氨基甲酰基}丁酸(LP14)
Figure BDA0003169092350002002
按照LP13的类似方法，除了用128b代替128a之外，得到连接体-有效负载LP14(10mg，76％收率)为白色固体。ESI m/z:681.5(M/2+1)+。1H NMR(400MHz,DMSOd6)δ9.79(br,1H),9.35(s,1H),8.28-8.23(m,1H),8.21(d,J＝6.6Hz,1H),8.17-8.13(m,1H),8.12-8.03(m,2H),8.02-7.95(m,1H),7.76(t,J＝5.8Hz,1H),7.67(dd,J＝7.3,1.1Hz,1H),7.64-7.60(m,1H),7.51(dd,J＝5.0,1.9Hz,1H),7.49-7.42(m,3H),7.40-7.31(m,3H),7.29(dd,J＝7.4,1.5Hz,1H),6.95(dd,J＝8.2,4.7Hz,1H),6.68(d,J＝8.2Hz,1H),6.48(d,J＝2.1Hz,1H),6.33(dd,J＝7.9,2.1Hz,1H),5.02(d,J＝14.0Hz,1H),4.40-4.30(m,2H),4.20-4.12(m,1H),3.62-3.49(m,4H),3.45-3.33(m,12H),3.33-3.28(m,2H),3.12-3.05(m,2H),2.92-2.85(m,1H),2.81-2.73(m,2H),2.69-2.63(m,1H),2.61-2.54(m,1H),2.43-2.20(m,7H),2.20-1.95(m,6H),1.91-1.70(m,6H),1.68-1.50(m,5H),1.34-1.22(m,10H),1.18-1.08(m,2H),1.03-0.96(m,6H),0.90(d,J＝6.8Hz,2H),0.86-0.80(m,4H)ppm。
实施例12A
连接体-有效负载LP15
本实施例说明了合成上表2中连接体-有效负载LP15的方法。本实施例涉及图9B中编号为129、130、131、132、133、Ser-P1的化合物，以及连接体-有效负载LP15。化合物129是根据WO2015/095124A1合成得到。
1-N-(2-{2-[2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)-1-N'-[(1S)-4-(氨基甲酰基氨基)-1-{[4-(羟甲基)苯基]氨基甲酰基}丁基]环丁烷-1,1-二羧酰胺(130)
Figure BDA0003169092350002011
向化合物129(0.18g，0.44mmol)的干燥DMF(6mL)溶液中加入氨基-PEG3-叠氮化物(0.10g，0.46mmol)和EDCI(0.13g，0.65mmol)，混合物在RT下搅拌20小时。所得混合物经反相快速色谱法(0-100％乙腈的水溶液)直接纯化，得到化合物130(0.19g，70％收率)为类白色固体。ESI m/z:607.3(M+1)+。
1-N-(2-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)-1-N'-[(1S)-4-(氨基甲酰基氨基)-1-{[4-(羟甲基)苯基]氨基甲酰基}丁基]环丁烷-1,1-二羧酰胺(131)
Figure BDA0003169092350002012
在氮气氛下，向化合物130(0.18g，0.30mmol)的甲醇(10mL)溶液中加入10％Pd/C(20mg)。将混合物脱气，并用氢气排气3次，然后在室温下在氢气下搅拌20小时。所得混合物通过硅藻土过滤，滤液真空浓缩，得到粗化合物131(0.16g，92％收率)为白色固体。ESI m/z:581.4(M+1)+。
(2S)-2-[(1-{[2-(2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰胺基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)乙基]氨基甲酰基}环丁基)甲酰胺基]-5-(氨基甲酰基氨基)-N-[4-(羟甲基)苯基]戊酰胺(133)
Figure BDA0003169092350002013
向粗化合物131(0.16g，0.28mmol)的DMF(4mL)溶液中加入DIBAC-suc-OSu 132(0.12g，0.30mmol)和DIPEA(0.2mL，0.83mmol)，反应混合物在室温下搅拌2小时，通过LCMS进行监测。所得混合物经反相快速色谱法(0-100％乙腈的碳酸氢铵水溶液(10mM))直接纯化，得到化合物133(50mg，21％收率)为黄色固体。ESI m/z:434.8(M/2+1)+。
{4-[(2S)-2-[(1-{[2-(2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰胺基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)乙基]氨基甲酰基}环丁基)甲酰胺基]-5-(氨基甲酰基氨基)戊酰胺基]苯基}甲基N-[(1S)-1-{[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-羟基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-基]甲酰胺基}羰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酰基}-2-羟乙基]氨基甲酸酯(LP15)
Figure BDA0003169092350002021
向化合物133(50mg，58μmol)的无水DMF(3mL)溶液中依次加入双(4-硝基苯基)碳酸酯(PNPC)(35mg，0.12mmol)和DIPEA(45μL，0.17mmol)，反应混合物在室温下搅拌过夜。混合物经反相快速色谱法(0-100％乙腈的水溶液)纯化。冻干溶液，得到黄色固体，将其中16mg(16μmol)溶于DMF(5mL)。向所得溶液中加入Px2(Ser-P1，其报道在WO2018/213082A1中，通过引用并入本发明)(10mg，16μmol)和DIPEA(10μL，64μmol)。所得混合物在室温下搅拌过夜，通过LCMS进行监测。混合物经制备型HPLC(方法B)直接纯化，得到连接体-有效负载LP15(4.0mg，由Px2得到的收率为16％)为橙色固体。ESI m/z:755.5(M/2+1)+。1H NMR(400MHz,DMSOd6)δδ10.0(s,1H),9.84(s,1H),8.11(s,1H),7.89-7.84(m,2H),7.78-7.75(tm,1H),7.68-7.65(m,1H),7.62-7.60(m,3H),7.54(s,1H),7.50-7.44(m,3H),7.39-7.22(m,10H),6.96(d,J＝8.4Hz,1H),6.81(d,J＝8.4Hz,1H),6.67(br s,1H),6.63(d,J＝2.0Hz,1H),6.50(dd,J＝2.0Hz,8.0Hz,1H),6.04-6.02(m,1H),5.43(s,2H),5.32(t,J＝4.8Hz,2H),5.04-4.95(m,3H),4.44-4.37(m,1H),4.20-4.15(m,1H),3.71-3.62(m,2H),3.53-3.48(m,12H),3.34-3.25(m,2H),2.47-2.37(m,3H),2.16-2.13(m,4H),2.03-1.95(m,8H),1.79-1.71(m,4H),1.66-1.54(m,6H),1.49-1.42(m,4H),1.27-1.26(m,8H),1.00(s,3H),0.98(s,3H),0.87-0.83(m,6H)ppm。
实施例12B
有效负载P18；以及连接体-有效负载LP17和LP18
本实施例说明了合成上表1中有效负载P18、以及上表2中连接体-有效负载LP17和LP18的方法。本实施例涉及图9C中编号为134、P1、P18、112、135的化合物，以及连接体-有效负载LP17和LP18。化合物134是根据WO 2015/155998 A1合成得到。
(1S,4aS,10aR)-N-[(1S,4aS,10aR)-6-{2-[(2-氨基乙酰胺基)甲氧基]乙酰胺基}-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基]-6-羟基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-甲酰胺(P18)
Figure BDA0003169092350002031
向化合物134(42mg，0.11mmol)的DMF(5mL)溶液中加入HATU(79mg，0.21mmol)和DIPEA(54mg，0.44mmol)，混合物在室温下搅拌15分钟后，加入有效负载P1(63mg，0.12mmol)。反应混合物在室温下搅拌2小时，通过LCMS进行监测。所得混合物经制备型HPLC(方法B)直接纯化，得到Fmoc-P18(47mg，ESI m/z:895.4(M+1)+)，将其溶于DMF(5mL)。向所得溶液中加入哌啶(13mg，0.15mmol)，将混合物在室温下搅拌1小时，直至完全脱去Fmoc，通过LCMS进行监测。所得混合物经制备型HPLC(方法B)直接纯化，得到化合物P18(34mg，47％收率)为白色固体。ESI m/z:673.5(M+1)+。1H NMR(400MHz,DMSOd6)δ9.54(s,1H),8.99(s,1H),8.85(br s,1H),8.11(s,1H),7.59(d,J＝1.5Hz,1H),7.45(dd,J＝8.4,1.5Hz,1H),6.97(d,J＝8.4Hz,1H),6.82(d,J＝8.4Hz,1H),6.63(d,J＝2.2Hz,1H),6.50(dd,J＝8.4,2.2Hz,1H),4.66(d,J＝1.6Hz,2H),4.00(s,2H),3.14(s,2H),2.94-2.64(m,4H),2.35-2.32(m,1H),2.32-2.22(m,2H),2.22-2.09(m,4H),1.95-1.78(m,4H),1.68-1.52(m,4H),1.36-1.28(m,2H),1.28(s,3H),1.27(s,3H),1.20-1.09(m,2H),1.01(s,3H),0.99(s,3H)ppm。
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-[1-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰胺基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基]-3-甲基丁酰胺基]-5-(氨基甲酰基氨基)戊酰胺基]苯基}甲基N-({[({[(4bS,8S,8aR)-8-{[(1S,4aS,10aR)-6-羟基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基]氨基甲酰基}-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酰基}甲氧基)甲基]氨基甲酰基}甲基)氨基甲酸酯(LP17)
Figure BDA0003169092350002032
在25℃下，向化合物P18(16mg，24μmol)的DMF(5mL)溶液中加入化合物112(26mg，24μmol)和DIPEA(6.2mg，0.048mmol)。混合物在25℃下搅拌过夜，通过LCMS进行监测。所得混合物经制备型HPLC(方法B)直接纯化，得到连接体-有效负载LP17(20mg，53％收率)为白色固体。ESI m/z:807(M/2+1)+。1H NMR(400MHz,DMSOd6)δ10.00(s,1H),9.53(s,1H),8.99(s,1H),8.92-8.83(m,1H),8.19-8.07(m,2H),7.88(d,J＝8.1Hz,1H),7.77(t,J＝5.6Hz,1H),7.68(d,J＝6.0Hz,1H),7.64-7.56(m,4H),7.53-7.25(m,9H),6.96(d,J＝8.5Hz,1H),6.81(d,J＝8.3Hz,1H),6.63(s,1H),6.50(d,J＝7.9Hz,1H),6.02-5.94(m,1H),5.42(s,2H),5.02(d,J＝14Hz,1H),4.95(s,2H),4.65(d,J＝6.5Hz,2H),4.43-4.32(m,1H),4.26-4.19(m,1H),4.00(s,2H),3.70-3.54(m,5H),3.50-3.41(m,12H),3.31-3.26(m,1H),3.13-2.54(m,8H),2.41-2.08(m,11H),2.06-1.52(m,14H),1.47-1.08(m,12H),1.00(s,3H),0.98(s,3H),0.86(d,J＝6.8Hz,3H),0.82(d,J＝6.8Hz,3H)ppm。
(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰胺基)乙酰胺基]乙酰胺基}-3-苯基丙酸(135)
Figure BDA0003169092350002041
向肽Gly-Gly-Phe(65mg，0.16mmol)的DMF(5mL)溶液中加入化合物132(56mg，0.16mmol)和DIPEA(63mg，0.49mmol)，反应混合物在室温下搅拌2小时，通过LCMS进行监测。混合物经制备型HPLC(方法B)直接纯化，得到化合物135(58mg，64％收率)为白色固体。ESIm/z:567(M+1)+。
(1S,4aS,10aR)-N-[(1S,4aS,10aR)-6-[2-({2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰胺基)乙酰胺基]乙酰胺基}-3-苯基丙酰胺基]乙酰胺基}甲氧基)乙酰胺基]-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基]-6-羟基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-甲酰胺(LP18)
Figure BDA0003169092350002042
向化合物135(8.5mg，15μmol)的DMF(5mL)溶液中加入HATU(11mg，30μmol)和DIPEA(7.7mg，60μmol)，混合物在室温下搅拌15分钟，然后加入化合物P18(10mg，15μmol)。反应混合物在室温下搅拌2小时，通过LCMS进行监测。所得混合物经制备型HPLC(方法B)直接纯化，得到连接体-有效负载LP18(8.4mg，46％收率)为白色固体。ESI m/z:635(M–MP17)+。1H NMR(400MHz,DMSOd6)δ9.53(s,1H),8.99(s,1H),8.70(d,J＝5.2Hz,1H),8.36(d,J＝5.0Hz,1H),8.20-7.96(m,4H),7.69-7.62(m,1H),7.61-7.56(m,2H),7.51-7.39(m,4H),7.38-7.32(m,2H),7.31-7.20(m,5H),7.19-7.13(m,1H),6.95(d,J＝8.7Hz,1H),6.82(d,J＝8.2Hz,1H),6.63(d,J＝2.2Hz,1H),6.50(dd,J＝8.2和2.2Hz,1H),4.99(dd,J＝13.9和1.9Hz,1H),4.64(d,J＝6.6Hz,2H),4.51-4.43(m,1H),4.00(s,2H),3.80-3.66(m,3H),3.62-3.56(m,3H),3.08-2.99(m,1H),2.91-2.59(m,7H),2.34-2.23(m,3H),2.20-2.10(m,4H),2.08-2.00(m,1H),1.95-1.72(m,5H),1.67-1.51(m,4H),1.27(s,3H),1.27(s,3H),1.25-1.22(m,2H),1.17-1.08(m,2H),0.99(s,3H),0.98(s,3H)ppm。
实施例12C
连接体-有效负载LP19
本实施例说明了合成上表2中连接体-有效负载LP19的方法。本实施例涉及图9D中编号为136-138、140、P15、141-143、106、116的化合物，以及连接体-有效负载LP19。
2-羟乙基(甲基)氨基甲酸叔丁酯(137)
Figure BDA0003169092350002051
在0℃下，向化合物136(3.8g，50mmol)的DCM(90mL)混合物中滴加Boc2O(11g，52mmol)的DCM(10mL)溶液。混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用盐水洗两次，有机溶液真空浓缩，得到化合物137(8.5g，97％收率)为无色油状物。ESI m/z:198(M+Na)+。
甲基(2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(138)
Figure BDA0003169092350002052
在0℃下，向化合物137(4.4g，25mmol)的干燥DCM(50mL)溶液中分批加入戴斯-马丁(Dess-Martin)过氧化物(12g，25mmol)。反应混合物在室温下搅拌过夜，然后用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和硫代硫酸钠水溶液淬灭。淬灭的混合物在室温下搅拌0.5小时。收集有机溶液，用饱和碳酸氢钠水溶液洗，经硫酸镁干燥，真空浓缩，得到粗品138，其通过快速色谱法(12-18％乙酸酯的石油醚溶液，采用PMA通过TLC进行检测)纯化，得到化合物138(2.6g，60％收率)为淡黄色油状物。1H NMR(400MHz,DMSOd6)δ9.48(d,J＝8.4Hz,1H),4.03(br,2H),2.85(s,3H),1.41(s,9H)ppm。
2-(2-(2-羟基乙基氧)乙氨基)乙基(甲基)氨基甲酸叔丁酯(140)
Figure BDA0003169092350002053
将化合物138(2.6g，15mmol)和化合物139(1.7g，16mmol)的干燥甲醇(20mL)混合物在室温下搅拌4小时，然后在0℃下，向混合物中分批加入硼氢化钠(1.1g，30mmol)。混合物缓慢升温至室温，并在室温下搅拌过夜。混合物用冷水淬灭，真空浓缩。残余物经快速色谱法(0-100％甲醇的DCM溶液)纯化，得到化合物140(2.4g，61％收率)为黄色油状物。ESIm/z:263.1(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSOd6)δ3.50-3.43(m,4H),3.41-3.38(m,2H),3.21(t,J＝6.4Hz,2H),2.78(s,3H),2.69-2.63(m,4H),2.08(s,1H),1.39(s,9H)ppm。
N-[(4bS,8S,8aR)-8-({[(1S,4aS,10aR)-6-{[(2-{[(叔丁氧基)羰基](甲基)氨基}乙基)[2-(2-羟基乙氧基)乙基]氨基甲酰基]氧基}-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-基]甲酰胺基}羰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基]氨基甲酸叔丁酯(141)
Figure BDA0003169092350002061
向有效负载P15(0.44g，0.70mmol)的干燥DCM(15mL)溶液中加入三乙胺(0.21g，2.1mmol)和氯甲酸4-硝基苯酯(0.15g，0.74mmol)的干燥DCM(5mL)溶液。反应混合物在室温下搅拌1.5小时，通过LCMS进行监测。真空浓缩混合物，得到粗PNP酯(0.58g)，将其溶于DCM(15mL)。向所得溶液中加入HOBt(19mg，0.14mmol)和化合物140(0.32g，1.2mmol)的DCM(5mL)溶液。反应混合物在室温下搅拌18小时，直至根据LCMS监测反应完成。反应混合物用DCM稀释，用水和盐水洗，经硫酸钠干燥，真空浓缩。残余物经反相快速色谱法(0-100％乙腈的TFA水溶液(0.01％))纯化，得到化合物141(0.50g，78％收率)为白色固体。ESI m/z:940.5(M+Na)+。
(4bS,8S,8aR)-8-((1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基氨基甲酰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基2-(2-羟基乙氧基)乙基(2-(甲基氨基)乙基)氨基甲酸酯(142)
Figure BDA0003169092350002062
向化合物141(0.30g，0.33mmol)的乙腈(5mL)溶液中加入HCl的二氧六环溶液(4N，3mL)。反应混合物在室温下搅拌3小时，直至根据LCMS监测已完全脱去Boc。除去挥发物，残余物经反相快速色谱法(0-100％乙腈的水溶液)纯化，得到作为HCl盐的化合物142(0.19g，73％收率)为白色固体，其不稳定，即使在碱性缓冲液(pH>7)下。ESI m/z:717.2(M+H)+。
(4bS,8S,8aR)-8-(((1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基)氨基甲酰基)-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基(2-((((4-((S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酰胺基)苄基)氧基)羰基)(甲基)氨基)乙基)(2-(2-羟基乙氧基)乙基)氨基甲酸酯(143)
Figure BDA0003169092350002071
在室温下，向新合成的化合物142(35mg，49μmol)的干燥DMF混合物中依次加入三乙胺(15mg，0.15mmol)、HOBt(7.0mg，49μmol)和Fmoc-vcPAB-PNP(116，35mg，45μmol)的干燥DMF(5mL)溶液。混合物在室温下搅拌过夜。向反应混合物中加入哌啶(13mg，0.15mmol)。混合物在室温下搅拌3小时，直至根据LCMS监测完全脱去Fmoc。反应混合物经反相快速色谱法(5-95％乙腈的碳酸氢铵水溶液(10mM))直接纯化，得到化合物143(62mg，58％收率)为白色固体。ESI m/z:1145.6(M+Na)+。
(4bS,8S,8aR)-8-{[(1S,4aS,10aR)-6-氨基-1,4a-二甲基-1,2,3,4,4a,9,10,10a-八氢菲-1-羰基]氨基甲酰基}-4b,8-二甲基-4b,5,6,7,8,8a,9,10-八氢菲-3-基N-(2-{[({4-[(2S)-2-[(2S)-2-[1-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.04,9]十六碳-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰胺基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酰胺基]-3-甲基丁酰胺基]-5-(氨基甲酰基氨基)戊酰胺基]苯基}甲氧基)羰基](甲基)氨基}乙基)-N-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]氨基甲酸酯(LP19)
Figure BDA0003169092350002072
在室温下，向化合物143(30mg，27μmol)的干燥DMF(5mL)溶液中依次加入DIBAC-suc-PEG4-OSu(107，21mg，30μmol)和DIPEA(10mg，78μmol)。反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物经制备型HPLC(方法B)直接纯化，得到化合物LP19(15mg，34％收率)为白色固体。ESI m/z:829.0(M/2+H)+。1H NMR(400MHz,DMSOd6)δ10.00(br,1H),8.13-8.10(m,2H),7.88-7.86(m,1H),7.78-7.74(m,1H),7.69-7.66(m,1H),7.62-7.44(m,6H),7.39-7.28(m,4H),7.22-7.20(m,1H),6.99-6.97(m,2H),6.75-6.74(m,1H),6.69-6.66(m,1H),6.47(s,1H),6.35-6.32(m,1H),5.97-5.96(m,1H),5.41(s,2H),5.04-4.92(m,3H),4.69(s,2H),4.60-4.58(m,1H),4.39-4.35(m,1H),4.30-4.20(m,1H),3.62-2.53(m,39H),2.40-1.36(m,25H),1.27-1.25(m,8H),1.14-1.11(m,2H),0.99-0.97(m,6H),0.87-0.81(m,7H)ppm。
分析实施例
实施例13
上述有效负载化合物的结构式、计算的LogP值、MS和HPLC结果总结于表3中。
表3有效负载的化学物理性质
Figure BDA0003169092350002081
Figure BDA0003169092350002082
Figure BDA0003169092350002091
6<+++<12；4<++≤6；0<+<4
实施例14
上述连接体-有效负载化合物的分子式、分子量、计算的LogP值、MS和HPLC结果总结于表4中。
表4有效负载的化学物理性质
Figure BDA0003169092350002092
Figure BDA0003169092350002101
6<+++<12；4<++<6；-2<+≤4
实施例15
本发明所述的某些LXR激动剂有效负载的活性在基于细胞的LXR响应性荧光素酶报告基因测定试验中进行评估。为了生成测定试验细胞系，将LXR调节的荧光素酶报告基因(Cignal Lenti LXR Reporter(luc)试剂盒(Qiagen，目录号CLS-001L))转导至THP1细胞，并在嘌呤霉素中挑选细胞两周。慢病毒在LXR转录反应元件的最小CMV启动子和串联重复序列的控制下，表达萤火虫荧光素酶基因。所得细胞系称为THP1/LXR-Luc细胞。对于所述测定试验，将THP1/LXR-Luc细胞以40,000个细胞/孔的浓度接种到96孔板上的培养基中，所述培养基含有RPMI，补充有10％FBS和青霉素/链霉素，然后用200nM佛波醇肉豆蔻酸酯乙酸酯(PMA)分化3天。随后移除培养基，并用80uL不含PMA的新鲜培养基替换。在100％DMSO中制备游离有效负载的三倍连续稀释液，转移至新鲜培养基中，然后以0.2％的最终DMSO恒定浓度将20uL加至细胞中，游离有效负载的最终浓度范围为100nM至0.015nM。板中的最后一个孔用作空白对照，仅包含培养基和0.2％DMSO(未经处理的孔)，并绘制为连续3倍稀释液的曲线。48小时后，在向每个孔中添加One-GloTM试剂(Promega，目录号E6130)后，测定荧光素酶活性。在Victor光度计(PerkinElmer)上测定相对光单位(RLU)，并使用四参数逻辑斯蒂方程在10点剂量响应曲线(GraphPad Prism)上确定EC50值。表1示出了每种受试分子的EC50值。信噪比(S/N)通过剂量响应曲线上最高RLU与未处理孔中RLU的比值确定。如表5所示，所有受试有效负载化合物均能提高THP1/LXR-Luc细胞中LXR依赖性荧光素酶活性，EC50值为112pM至3.51nM，S/N值为10.4至13.8。
表5:有效负载化合物在经分化的THP-1/LXR-Luc细胞中的LXR-报告基因活性
有效负载化合物 EC<sub>50</sub>(M) S/N
P1 1.14E-09 11.4
P2 2.92E-10 11.3
P4 1.25E-10 10.4
P6 3.34E-09 10.9
P5 1.74E-10 13.8
P7 2.53E-10 12.5
P9 2.34E-10 12.8
P8 3.51E-09 10.8
P10 2.22E-10 11.1
P12 2.96E-10 11.4
P11 1.12E-10 10.7
实施例16
使用与Mol.Pharm.2015,12(6),1863-71中记载的类似的那些方法，通过抗体半胱氨酸的偶联分两步进行。在示例性方法中，采用二硫苏糖醇或TCEP来还原单克隆抗体(mAb)。凝胶过滤后，将合适连接体-有效负载的DMSO溶液加至经还原的抗体中，将混合物调节至适当的pH值。搅拌反应。所得偶联物通过SEC进行纯化。DAR(UV)值是使用测定的ADC的吸光度以及抗体连接体-有效负载的消光系数来确定。
位点特异性抗体偶联，例如，可分两步进行：(1)基于微生物转谷氨酰胺酶，例如(MTGEC 2.3.2.13，Zedira，达姆施塔特(Darmstadt)，德国)，将叠氮基-PEG-胺酶促附接至位点特异性突变的抗体上，以及(2)通过[2+3]环加成，例如官能化抗体的叠氮基基团部分与连接体-有效负载的适当环辛炔基团部分之间的1,3-偶极环加成(例如，无铜点击化学)，将适当的连接体-有效负载附接至叠氮基-PEG-胺官能化抗体上。参见，Baskin,J.M.；Prescher,J.A.；Laughlin,S.T.；Agard,N.J.；Chang,P.V.；Miller,I.A.；Lo,A.；Codelli,J.A.；Bertozzi,C.R.PNAS 2007,104(43),16793–7。譬如，在BupHTM(pH 6.5-8.0)中，将无糖基化的人抗体IgG(IgG1、IgG4等)或人IgG1同种型与≥200摩尔当量的叠氮基-dPEG3-胺(MW＝218.26g/mol)混合。将所得溶液与转谷氨酰胺酶(25U/mL；每毫克抗体5U MTG，来自德国达德施塔特(Darmstadt)的Zedira或日本味之素(Ajinomoto))混合，使得抗体最终浓度为0.5–5mg/mL，溶液保持在pH 6.5–8.0，然后在37℃下孵育4–24h，同时轻轻振荡。反应通过ESI-MS进行监测。反应完成后，通过SEC或蛋白A柱色谱法用酸性缓冲液洗脱，然后用Tris缓冲液(pH 8)中和，除去过量的胺和MTG，以生成叠氮基官能化抗体。通过SDS-PAGE和ESI分析此产物。将叠氮基-dPEG3-胺添加至抗体的两个位点-Q295和Q297-，使得所述4DAR无糖基化的抗体-PEG3-叠氮化物偶联物增加804Da。通过胰蛋白酶消化的重链的肽序列作图，在EEQ连接体YQ连接体STYR(EEQLinkerYQLinkerSTYR)处鉴定和确证所述4DAR叠氮基官能化抗体的偶联位点。
在另一实施例，通过叠氮基官能化抗体与包含连接体-有效负载的炔之间的[2+3]点击反应来制备具有含N297Q突变(EU编号)的人IgG(IgG1、IgG4等)的位点特异性无糖基化抗体-药物偶联物。特别地，通过将mAb–PEG3–N3(1–3mg/mL)在水性培养基(例如，PBS、含5％甘油的PBS、HBS)中与≥6摩尔当量的溶于合适有机溶剂(如DMSO、DMF或DMA)(即，反应混合物含有5-20％有机溶剂，v/v)中的连接体有效负载，在24℃至37℃下持续孵育6小时，从而将叠氮基官能化的无糖基化人IgG1抗体(mAb–PEG3–N3)偶联至合适的连接体有效负载。通过ESI-MS监测反应进程，并且不存在mAb–PEG3–N3表示偶联完成。通过SEC用PBS进行洗脱，或通过蛋白A柱色谱法用酸性缓冲液进行洗脱，然后用Tris(pH 8)中和，来除去过量的连接体有效负载和有机溶剂。通过SEC、SDS-PAGE和ESI-MS来分析经纯化的偶联物。
可通过SDS-PAGE、SEC和MS(ESI)来表征抗体和抗体-药物偶联物。在其中一种方法，SDS-PAGE条件包括非还原和还原的样品(2-4μg)以及BenchMark预染色蛋白质阶梯(BenchMark Pre–Stained Protein Ladder，Invitrogen，目录号10748-010；L#1671922.)，其每泳道载入(1.0mm x 10孔)Novex 4-20％Tris–甘氨酸凝胶，并在180V、300mA下运行80分钟。使用Novex Tris-甘氨酸SDS缓冲液(2倍)(Invitrogen，目录号LC2676)制备分析样品，所述还原样品采用含10％2-巯基乙醇的SDS样品缓冲液(2倍)制得。
实施例16a
基于细胞的LXR荧光素酶报告基因测定试验
在基于细胞的LXR响应性萤光素酶报告基因测定试验中评估了本发明所述的LXR激动剂。为了生成测定试验细胞系，将LXR调节的荧光素酶报告基因(Cignal Lenti LXRReporter(luc)试剂盒(Qiagen,目录号CLS-001L))转导至THP1细胞，并在嘌呤霉素中挑选细胞两周。慢病毒在LXR转录反应元件的基础启动子和串联重复序列的控制下，表达萤火虫荧光素酶基因。所得细胞系称为THP1/LXR-Luc细胞。对于所述测定试验，将THP1/LXR-Luc细胞以40,000个细胞/孔的浓度接种到96孔板上的培养基中，所述培养基含有RPMI，补充有10％FBS和青霉素/链霉素，然后用200nM佛波醇肉豆蔻酸酯乙酸酯(PMA)分化3天。随后移除培养基，并用80μL不含PMA的新鲜培养基替换。在100％DMSO中制备游离有效负载的三倍连续稀释液，转移至新鲜生长培养基中，然后以0.2％的最终DMSO恒定浓度将20μL加至细胞中，游离有效负载的最终浓度范围为100nM至0.015nM。板中的最后一个孔用作空白对照，仅包含培养基和0.2％DMSO(未经处理的孔)，并绘制为连续3倍稀释液的曲线。48小时后，在向每个孔中添加One-GloTM试剂(Promega，目录号E6130)后，测定荧光素酶活性。在Envision光度计(PerkinElmer)上测定相对光单位(RLU)，并使用四参数逻辑斯蒂方程在10点剂量响应曲线(GraphPad Prism)上确定EC50值。表5a示出了每种受试分子的EC50值。信噪比(S/N)通过剂量响应曲线上最高RLU与未处理孔中RLU的比值确定。如表5a所示，LXR激动剂均能提高THP1/LXR-Luc细胞中LXR依赖性荧光素酶活性，EC50值为78.8pM至72.9nM，S/N值为8.8至13.1。
表5a：LXR激动剂在经分化的THP-1/LXR-Luc细胞中的LXR报告基因活性
LXR激动剂有效负载 EC<sub>50</sub>(M) S/N
P14 1.52E-10 10.8
P18 2.78E-09 11.5
P1 1.91E-10 11.9
P2 4.50E-10 13.1
P15 7.29E-08 8.8
P13 7.88E-11 11.9
P16 5.08E-10 11.5
P17 1.03E-09 12.5
P19 5.64E-10 11.4
实施例17
多个连接体-有效负载(LP)衍生自表1中的有效负载化合物，并使用先前实施例中所述的技术与抗MSR1抗体(H1H21234N-N297Q)或非结合对照偶联。如上文针对有效负载化合物所述，在THP1/LXRLuc报告基因测定试验中测试了所得抗MSR1 LXR激动剂抗体-药物偶联物(ADC)的活性。如表6所示，所有受试抗MSR1 LXR激动剂ADC均表现出对THP1/LXR-Luc细胞的刺激，其EC50值为414pM至2.11nM，S/N值为9.4至13.7。未偶联的抗MSR1对LXR-Luc活性无影响，偶联至LP1的非结合对照抗体(对照ADC-LP1)的EC50值>100nM，最大S/N值<5.0。
抗MSR1抗体H1H21234N具有根据SEQ ID NO：2的HCVR和根据SEQ ID NO：10的LCVR。其包含分别根据SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14和SEQ ID NO：16的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。多肽序列可由多核苷酸序列SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQID NO：13和SEQ ID NO：15编码。N297Q指示残基297从天冬酰胺(N)突变为谷氨酰胺(Q)。所有编号均根据EU编号系统进行编号。
表6：抗MSR1-LXR激动剂偶联物在经分化的THP-1/LXR-Luc细胞中的活性
Figure BDA0003169092350002131
Figure BDA0003169092350002141
实施例18
通过LC–ESI–MS对ADC进行表征
通过LC-ESI-MS对ADC样品的完整质量进行测定，以确定药物-有效负载分布曲线并计算平均DAR。将各个测试样品(20-50ng，5uL)上样至Acquity UPLC Protein BEH C4色谱柱(10Kpsi，
Figure BDA0003169092350002143
1.7μm，75μm×100mm；目录号186003810)。脱盐3分钟后，洗脱蛋白质，并通过Waters Synapt G2-Si质谱仪得到质谱。如表7所示，大多数位点特异性ADC的位点特异性偶联物均具有3.9DAR。
表7.ADC性质
Figure BDA0003169092350002142
实施例19
LXR激动剂抗体-药物偶联物激活经分化的THP1巨噬细胞中的胆固醇外排
使用荧光胆固醇类似物评估了抗MSR1-LXR激动剂ADC激活人巨噬细胞系(THP-1；ATCC目录号TIB-202)中胆固醇外排的能力。对于所述测定试验，将THP-1细胞以100,000个细胞/孔的浓度接种到96孔聚赖氨酸包被的平板(Corning，目录号354640)上的RPMI 1640培养基(Irvine Scientific，目录号9160)中，所述培养基包含10％FBS(Gibco，目录号1043010)、10μg/mL青霉素-链霉素(Gibco，目录号15140122)，并在5％CO2中于37℃下孵育。通过将100nM佛波醇-12肉豆蔻酸酯13-乙酸酯(Sigma，目录号P8139)加至培养基(上述)中进行处理，从而将细胞分化为巨噬细胞，并进一步孵育96小时。然后将经分化的巨噬细胞在不含酚红的RPMI 1640培养基(Gibco，目录号32404-014)中孵育24小时，所述培养基包含25μM BODIPY-胆固醇(Avanti PolarLipids，目录号810255P)，0.2％牛血清白蛋白(BSA；Sigma目录号A7211)，以及10μg/mL青霉素-链霉素，然后用游离有效负载(P1或P2)、抗MSR1Ab-LXR激动剂ncADC(H1H21234N-N297Q-29d1和H1H21234N-N297Q-LP1)、或同型对照-LXR激动剂ncADC(同型对照-N297Q-LP1)的1x10-7M至5x10-17M的连续稀释液，在含有0.2％BSA而不含酚红的RPMI 1640培养基中处理24小时。用不含酚红的RPMI 1640培养基清洗细胞，并与含有50μg/mL高密度脂蛋白(Millipore，目录号437641)、10μg/mL载脂蛋白A1(Millipore，目录号ALP10)的100μL受体培养基，在不含酚红的RPMI 1640培养基中一起孵育5小时，此后，收集受体培养基，将细胞在100μL RIPA缓冲液(Millipore，目录号20-188)中于室温温和搅拌下裂解2小时。在SpectraMax i3酶标仪(读板器，Molecular Devices)中，在激发482nm、发射515nm处测定这些级分的荧光。使用以下公式计算BODIPY-胆固醇外排的百分比：[受体培养基中的荧光/(受体培养基中的荧光+细胞裂解液中的荧光)]×100。
如表8和图13所示，在24小时后，游离有效负载P1和P2显示出相似量的胆固醇外排，EC50值分别为20pM和14pM。H1H21234N-N297Q-29d1 ncADC表现出EC50值为12pM，而H1H21234N-N297Q-LP1 ncADC显示EC50值为98pM。同型对照-N297Q-LP1 ncADC表现出最小的胆固醇外排，EC50值为13nM。
表8：LXR激动剂和LXR激动剂抗体-药物偶联物激活胆固醇外排量
受试分子 胆固醇外排激活EC<sub>50</sub>(M)
P1 2.0E-11
P2 1.4E-11
H1H21234N-N297Q-29d1 1.2E-11
H1H21234N-N297Q-LP1 9.8E-11
同型对照-N297Q-LP1 1.3E-8
Figure IDA0003169092410000011
Figure IDA0003169092410000021
Figure IDA0003169092410000031
Figure IDA0003169092410000041
Figure IDA0003169092410000051

Claims (56)

1.式I所示化合物：
Figure FDA0003169092340000011
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，其中，
Q1和Q2各自独立地为–CH2–、–C(O)–、–C(H)(OH)–、–C(OH)2–、–SO2–、–SO–、–PO(OR3)–、–PO(NR3NR4)–、–NR3–、或–N＝；
W是–CH2–、–N(H)–、或–O–；
R1是–N(H)R4或–N(R5)2；
R2是–N(H)R4；
各R4，在每种情况下，分别独立地为H、氨基酸残基、N-烷基氨基酸残基、肽残基、可生物降解的基团部分、烷基、取代的烷基、酰基、或取代的酰基；
R5是烷基、芳基、芳基烷基、杂环烷基、或取代的杂环烷基，其中各杂环烷基或取代的杂环烷基分别包含选自N和O的1、2或3个杂原子，并且当被取代时包含至少一个–OH和–CH2OH、或至少一个伯氮或仲氮；
各R6分别独立地为卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、–CN、O-葡萄糖、O-氨基酸残基、或O-PEGn1，其中各n分别为从0至14的整数，和各n1分别为从1至12的整数；和
各R3分别独立地为H、烷基、或芳基。
2.根据权利要求1所述的化合物，其具有式I所示结构：
Figure FDA0003169092340000012
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，其中，
Q1和Q2各自独立地为–CH2–、–C(O)–、–C(H)(OH)–、–C(OH)2–、–SO2–、–SO–、–PO(OR3)–、–PO(NR3NR4)–、–NR3–、或–N＝；
W是–CH2–、–N(H)–、或–O–；
R1是–N(H)R4或–N(R5)2；
R2是–N(H)R4；
各R4，在每种情况下，分别独立地为H、氨基酸残基、N-烷基氨基酸残基、肽残基、可生物降解的基团部分、或烷基；
R5是烷基、芳基、芳基烷基、杂环烷基、或取代的杂环烷基，其中各杂环烷基或取代的杂环烷基分别包含选自N和O的1、2或3个杂原子，并且当被取代时包含至少一个–OH和–CH2OH、或至少一个伯氮或仲氮；
各R6分别独立地为卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、–CN、O-葡萄糖、O-氨基酸残基、或O-PEGn1，其中各n分别为从0至14的整数，和各n1分别为从1至12的整数；和
各R3分别独立地为H、烷基、或芳基。
3.根据权利要求1所述的化合物，其具有式I所示结构：
Figure FDA0003169092340000021
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，其中，
Q1和Q2各自独立地为–CH2–、–C(O)–、–C(H)(OH)–、或–C(OH)2–；
W是–CH2–、–N(H)–、或–O–；
R1是–N(H)R4或–N(R5)2；
R2是–N(H)R4；
各R4，在每种情况下，分别独立地为H、氨基酸残基、N-烷基氨基酸残基、肽残基、可生物降解的基团部分、或烷基；
R5是烷基、芳基、芳基烷基、杂环烷基、或取代的杂环烷基，其中各杂环烷基或取代的杂环烷基分别包含选自N和O的1、2或3个杂原子，并且当被取代时包含至少一个–OH和–CH2OH、或至少一个伯氮或仲氮；和
各R6分别独立地为卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、–CN、O-葡萄糖、O-氨基酸残基、或O-PEGn1，其中各n分别为从0至14的整数，和各n1分别为从1至12的整数。
4.根据权利要求3所述的化合物，其具有式II所示结构：
Figure FDA0003169092340000031
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式。
5.根据前述权利要求任一项所述的化合物，其中Q1是–CH2–，和Q2是–C(O)–。
6.根据前述权利要求任一项所述的化合物，其中Q1是–C(H)(OH)–，和Q2是–C(O)–。
7.根据前述权利要求任一项所述的化合物，其中Q1是–C(O)–，和Q2是–C(O)–。
8.根据前述权利要求任一项所述的化合物，其中Q1是–C(O)–，和Q2是–CH2–。
9.根据前述权利要求任一项所述的化合物，其中Q1是–C(O)–，和Q2是–C(H)(OH)–。
10.根据前述权利要求任一项所述的化合物，其中W是–CH2–。
11.根据前述权利要求任一项所述的化合物，其中W是–O–。
12.根据前述权利要求任一项所述的化合物，其中W是–NH–。
13.根据前述权利要求任一项所述的化合物，其具有式III所示结构：
Figure FDA0003169092340000032
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式。
14.根据权利要求1-13任一项所述的化合物，其中R1是–N(H)R4。
15.根据权利要求1-13任一项所述的化合物，其中R1是–N(R5)2。
16.根据权利要求14所述的化合物，其中R1是–NH2；和
各R4，在每种情况下，分别独立地为氨基酸残基、N-烷基氨基酸残基、肽残基、可生物降解的基团部分、或烷基。
17.根据权利要求16所述的化合物，其中各R4，在每种情况下，分别独立地为氨基酸残基；和
所述氨基酸残基选自由以下组成的组：丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、硒代半胱氨酸、甘氨酸、脯氨酸、精氨酸、组氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、和谷氨酸。
18.根据权利要求17所述的化合物，其选自由以下组成的组：
Figure FDA0003169092340000041
Figure FDA0003169092340000051
Figure FDA0003169092340000052
和
Figure FDA0003169092340000053
Figure FDA0003169092340000054
或
其药学上可接受的盐、或溶剂化物。
19.根据权利要求16所述的化合物，其中各R4，在每种情况下，分别独立地为肽残基，其中所述肽残基包含选自由以下组成的组的氨基酸：丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、硒代半胱氨酸、甘氨酸、脯氨酸、精氨酸、组氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、和谷氨酸、及其所述残基。
20.根据权利要求19所述的化合物，其中所述化合物是
Figure FDA0003169092340000061
或
其药学上可接受的盐、或溶剂化物。
21.根据权利要求14所述的化合物，其中所述化合物是
Figure FDA0003169092340000062
或
其药学上可接受的盐、或溶剂化物。
22.根据权利要求1-13任一项所述的化合物，其中R1和R2均为–N(H)R4。
23.根据权利要求22所述的化合物，其中各R4，在每种情况下，分别独立地为氨基酸残基；其中，
所述氨基酸选自由以下组成的组：丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、硒代半胱氨酸、甘氨酸、脯氨酸、精氨酸、组氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、和谷氨酸、及其所述残基。
24.根据权利要求23所述的化合物，其中所述化合物选自由下列组成的组：
Figure FDA0003169092340000071
和
Figure FDA0003169092340000072
或其药学上可接受的盐、或溶剂化物。
25.根据权利要求15所述的化合物，其中所述化合物是
Figure FDA0003169092340000073
或其药学上可接受的盐、或溶剂化物。
26.根据权利要求22所述的化合物，其中所述化合物是
Figure FDA0003169092340000081
或
其药学上可接受的盐、或溶剂化物。
27.连接体-有效负载，其包含与连接体连接的前述权利要求任一项所述的化合物。
28.根据前述权利要求任一项所述的连接体-有效负载，其具有式LPa、LPb、LPc、或LPd所示结构：
Figure FDA0003169092340000082
Figure FDA0003169092340000091
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或立体异构体形式，其中，
L是连接体；
Q1和Q2各自独立地为–CH2–、–C(O)–、–C(H)(OH)–、–C(OH)2–、–SO2–、–SO–、–PO(OR3)–、–PO(NR3NR4)–、–NR3–、或–N＝；
W是–CH2–、–N(H)–、或–O–；
R1是–N(H)R4、–N(H)R4–、–N(H)–、–N(R5)2、或–N(R5)2–；
R2是–N(H)R4、–N(H)R4–、或–N(H)–；
各R4，在每种情况下，分别独立地为H、氨基酸残基、N-烷基氨基酸残基、肽残基、可生物降解的基团部分、烷基、取代的烷基、酰基、取代的酰基、或-亚烷基-；
R5是烷基、芳基、芳基烷基、杂环烷基、或取代的杂环烷基，其中各杂环烷基或取代的杂环烷基分别包含选自N和O的1、2或3个杂原子，并且当被取代时包含至少一个–OH和–CH2OH、或至少一个伯氮或仲氮；
各R6分别独立地为卤素、C1-6烷基、C1-6亚烷基、C1-6烷氧基、–CN、O-葡萄糖、O-氨基酸残基、或O-PEGn1，其中各n分别为从0至14的整数，和各n1分别为从1至12的整数；和
各R3分别独立地为H、烷基、或芳基。
29.根据权利要求28所述的连接体-有效负载，其中各R4，在每种情况下，分别独立地为H、氨基酸残基、N-烷基氨基酸残基、肽残基、可生物降解的基团部分、烷基、或-亚烷基-。
30.根据权利要求28所述的连接体-有效负载，其具有式LPa′、LPb′、LPc′、或LPd′所示结构：
Figure FDA0003169092340000092
Figure FDA0003169092340000101
其中SP1和SP2，当存在时，均为间隔基团；
各AA分别为氨基酸残基；和
p1是从1至10的整数。
31.根据前述权利要求任一项所述的连接体-有效负载，其中所述连接体L或间隔基团SP2是与芳基氮、或单独的氨基酸残基或肽内的氨基酸残基连接。
32.根据权利要求27-31任一项所述的连接体-有效负载，其选自由下列组成的组：
Figure FDA0003169092340000111
Figure FDA0003169092340000121
Figure FDA0003169092340000131
或其药学上可接受的盐、或溶剂化物。
33.抗体-药物偶联物，其包含与抗体或其抗原结合片段连接的前述权利要求任一项所述的化合物或连接体-有效负载。
34.式A、B、C、或D所示化合物：
Figure FDA0003169092340000141
或其药学上可接受的盐、或立体异构体形式，其中，
L是连接体；
BA是结合剂；
k是从1至30的整数；
Q1和Q2各自独立地为–CH2–、–C(O)–、–C(H)(OH)–、–C(OH)2–、–SO2–、–SO–、–PO(OR3)–、–PO(NR3NR4)–、–NR3–、或–N＝；
W是–CH2–、–N(H)–、或–O–；
R1是–N(H)R4、–N(H)R4–、–N(H)–、–N(R5)2、或–N(R5)2–；
R2是–N(H)R4、–N(H)R4–、或–N(H)–；
各R4，在每种情况下，分别独立地为H、氨基酸残基、N-烷基氨基酸残基、肽残基、可生物降解的基团部分、烷基、取代的烷基、酰基、取代的酰基、或-亚烷基-；
R5是烷基、芳基、芳基烷基、杂环烷基、或取代的杂环烷基，其中各杂环烷基或取代的杂环烷基分别包含选自N和O的1、2或3个杂原子，并且当被取代时包含至少一个–OH和–CH2OH、或至少一个伯氮或仲氮；
各R6分别独立地为卤素、C1-6烷基、C1-6亚烷基、C1-6烷氧基、–CN、O-葡萄糖、O-氨基酸残基、或O-PEGn1，其中各n分别为从0至14的整数，和各n1分别为从1至12的整数；和
各R3分别独立地为H、烷基、或芳基。
35.根据权利要求34所述的化合物，其中各R4，在每种情况下，分别独立地为H、氨基酸残基、N-烷基氨基酸残基、肽残基、可生物降解的基团部分、烷基、或-亚烷基-。
36.根据权利要求34所述的化合物，其具有式A′、B′、C′、或D′所示结构：
Figure FDA0003169092340000151
Figure FDA0003169092340000161
其中SP1和SP2，当存在时，均为间隔基团；
各AA分别为氨基酸残基；和
p1是从1至10的整数。
37.根据权利要求36所述的化合物，其中所述化合物选自由下列组成的组：
Figure FDA0003169092340000162
Figure FDA0003169092340000171
Figure FDA0003169092340000181
Figure FDA0003169092340000191
38.根据权利要求34所述的化合物，其具有式(A″)所示结构：
Figure FDA0003169092340000201
或其药学上可接受的盐、或立体异构体形式，或其区域异构体，其中，
各SP1、SP2和SP3分别为间隔基团，其中SP3连接至(AA)p1中的一个AA；
各AA分别为氨基酸残基；
p1是从1至10的整数；和
EG是增强剂。
39.根据权利要求38所述的化合物，其中，
所述SP1间隔基团是：
Figure FDA0003169092340000202
其中RG'是活性基团RG与结合剂反应后的活性基团残基；
Figure FDA0003169092340000203
是直接或间接与所述结合剂连接的键；和
b是从1至4的整数；
所述(AA)p1–SP2–是–NH-赖氨酸-缬氨酸-丙氨酸–、–NH-赖氨酸-缬氨酸-瓜氨酸–、或–NH-赖氨酸-缬氨酸-瓜氨酸-PABC–；
所述SP3间隔基团是：
Figure FDA0003169092340000204
其中RG′是活性基团RG与增强剂EG反应后的活性基团残基；
Figure FDA0003169092340000205
是与所述增强剂连接的键；和
Figure FDA0003169092340000206
是与(AA)p1连接的键。
40.根据权利要求38和39任一项所述的化合物，其中所述化合物选自由下列组成的组：
Figure FDA0003169092340000211
Figure FDA0003169092340000221
Figure FDA0003169092340000231
Figure FDA0003169092340000241
Figure FDA0003169092340000251
Figure FDA0003169092340000261
41.根据权利要求34-40任一项所述的化合物，其中BA是抗体或其抗原结合片段。
42.根据权利要求34-41任一项所述的化合物，其中k是从1至4的整数。
43.根据权利要求34-42任一项所述的化合物，其中BA是结合HER2的抗体或其抗原结合片段。
44.根据权利要求34-42任一项所述的化合物，其中BA是结合PRLR的抗体或其抗原结合片段。
45.根据权利要求34-42任一项所述的化合物，其中BA是结合MSR1的抗体或其抗原结合片段。
46.根据权利要求34-45任一项所述的化合物，其中BA是抗体或其抗原结合片段，并通过至少一个Q295残基进行偶联。
47.根据权利要求34-45任一项所述的化合物，其中BA是抗体或其抗原结合片段，并通过两个Q295残基进行偶联。
48.根据权利要求34-47任一项所述的化合物，其中BA是N297Q抗体或其抗原结合片段。
49.根据权利要求34-48任一项所述的化合物，其中BA是N297Q抗体或其抗原结合片段，并通过至少一个Q295残基和至少一个Q297残基进行偶联。
50.根据权利要求34-49任一项所述的化合物，其中BA是N297Q抗体或其抗原结合片段，并通过两个Q295残基和两个Q297残基进行偶联。
51.药物组合物，其包含前述权利要求任一项所述的化合物、连接体-有效负载或抗体-药物偶联物，以及药学上可接受的辅料、载体或稀释剂。
52.治疗受试者血脂异常、代谢性疾病、炎症、或神经退行性疾病的方法，其包含向所述受试者施用有效治疗量的前述权利要求任一项所述的化合物或药物组合物。
53.治疗受试者血脂异常的方法，其包含向所述受试者施用有效治疗量的前述权利要求任一项所述的化合物或药物组合物。
54.治疗受试者代谢性疾病的方法，其包含向所述受试者施用有效治疗量的前述权利要求任一项所述的化合物或药物组合物。
55.治疗受试者炎症的方法，其包含向所述受试者施用有效治疗量的前述权利要求任一项所述的化合物或药物组合物。
56.治疗受试者神经退行性疾病的方法，其包含向所述受试者施用有效治疗量的前述权利要求任一项所述的化合物或药物组合物。
CN201980089547.4A 2018-11-20 2019-11-19 用作lxr激动剂的双八氢菲羧酰胺类衍生物及其蛋白质偶联物 Pending CN113382985A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862769946P 2018-11-20 2018-11-20
US62/769946 2018-11-20
PCT/US2019/062302 WO2020106780A1 (en) 2018-11-20 2019-11-19 Bis-octahydrophenanthrene carboxamide derivatives and protein conjugates thereof for use as lxr agonists

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN113382985A true CN113382985A (zh) 2021-09-10

Family

ID=69005818

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201980089547.4A Pending CN113382985A (zh) 2018-11-20 2019-11-19 用作lxr激动剂的双八氢菲羧酰胺类衍生物及其蛋白质偶联物

Country Status (17)

Country Link
US (1) US20220080052A1 (zh)
EP (1) EP3883926A1 (zh)
JP (1) JP2022507781A (zh)
KR (1) KR20210094568A (zh)
CN (1) CN113382985A (zh)
AU (1) AU2019384136A1 (zh)
BR (1) BR112021009673A2 (zh)
CA (1) CA3120528A1 (zh)
CL (1) CL2021001308A1 (zh)
CO (1) CO2021007581A2 (zh)
EA (1) EA202191430A1 (zh)
IL (1) IL283313A (zh)
MA (1) MA53455B1 (zh)
MX (1) MX2021005822A (zh)
PH (1) PH12021551153A1 (zh)
SG (1) SG11202105175WA (zh)
WO (1) WO2020106780A1 (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023124537A1 (zh) * 2021-12-30 2023-07-06 辽宁键凯科技有限公司 一种缀合物及用其制备的抗体偶联药物
WO2024055886A1 (zh) * 2022-09-16 2024-03-21 辽宁键凯科技有限公司 一种分支型聚乙二醇连接子及其用途

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL309173A (en) * 2020-07-13 2024-02-01 Regeneron Pharma Camptothecin analogs conjugated to a glutamine residue in protein, and their uses
AU2021377185A1 (en) 2020-11-10 2023-06-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Selenium antibody conjugates
US11806405B1 (en) 2021-07-19 2023-11-07 Zeno Management, Inc. Immunoconjugates and methods

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001041704A2 (en) * 1999-12-13 2001-06-14 Merck & Co., Inc. Method for the prevention and/or treatment of atherosclerosis
US20030125357A1 (en) * 2001-06-11 2003-07-03 Adams Alan D. Therapeutic compounds for treating dyslipidemic conditions
EP1398032A1 (en) * 2002-09-10 2004-03-17 PheneX Pharmaceuticals AG 4-Oxo-quinazolines as LXR nuclear receptor binding compounds
US20090030082A1 (en) * 2007-02-23 2009-01-29 Barry Forman SYNTHETIC LIGANDS SELECTIVE FOR LXRbeta OVER LXRalpha, IDENTIFICATION AND METHODS OF USE THEREOF
CN101679297A (zh) * 2006-12-08 2010-03-24 埃克塞利希斯股份有限公司 Lxr和fxr调节剂
US20160324981A1 (en) * 2015-05-08 2016-11-10 The California Institute For Biomedical Research Liver x receptor agonists and uses thereof

Family Cites Families (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5714586A (en) 1995-06-07 1998-02-03 American Cyanamid Company Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US20070258987A1 (en) 2000-11-28 2007-11-08 Seattle Genetics, Inc. Recombinant Anti-Cd30 Antibodies and Uses Thereof
AR048098A1 (es) 2004-03-15 2006-03-29 Wyeth Corp Conjugados de caliqueamicina
US7750116B1 (en) 2006-02-18 2010-07-06 Seattle Genetics, Inc. Antibody drug conjugate metabolites
WO2008122039A2 (en) 2007-04-02 2008-10-09 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Selenocysteine mediated hybrid antibody molecules
WO2008153744A2 (en) 2007-05-23 2008-12-18 Ventana Medical Systems, Inc. Polymeric carriers for immunohistochemistry and in situ hybridization
EP2276506A4 (en) 2008-04-30 2014-05-07 Immunogen Inc EFFICIENT CONJUGATES AND HYDROPHILIC BINDER
KR101000067B1 (ko) 2008-12-30 2010-12-10 엘지전자 주식회사 고효율 태양전지용 레이저 소성장치 및 고효율 태양전지 제조방법
PE20130342A1 (es) 2010-04-15 2013-04-20 Spirogen Sarl Pirrolobenzodiacepinas y conjugados de las mismas
US20130244905A1 (en) 2010-07-06 2013-09-19 Ed Grabczyk Reporter for RNA Polymerase II Termination
EP3170821B1 (en) 2011-05-27 2021-09-15 Ambrx, Inc. Compositions containing, methods involving, and uses of non-natural amino acid linked dolastatin derivatives
US8815226B2 (en) 2011-06-10 2014-08-26 Mersana Therapeutics, Inc. Protein-polymer-drug conjugates
JP6393617B2 (ja) 2011-10-14 2018-09-19 シアトル ジェネティクス，インコーポレーテッド ピロロベンゾジアゼピンおよび標的コンジュゲート
EA029046B1 (ru) 2011-10-14 2018-02-28 Медимьюн Лимитед Пирролобензодиазепины и промежуточные соединения для их получения, способы их синтеза
EP2753178B1 (en) 2011-10-14 2017-12-06 Seattle Genetics, Inc. Pyrrolobenzodiazepines and targeted conjugates
MX341523B (es) 2011-10-14 2016-08-24 Medimmune Ltd Pirrolobenzodiazepinas.
WO2013068874A1 (en) 2011-11-11 2013-05-16 Pfizer Inc. Antibody-drug conjugates
CN110201186A (zh) 2012-10-23 2019-09-06 西纳福克斯股份有限公司 经修饰的抗体、抗体-缀合物及其制备方法
BR112016014126B1 (pt) 2013-12-16 2023-02-14 Medimmune Limited Composto não-peptídico, conjugados de anticorpo-fármaco do mesmo, uso dos ditos conjugados para o tratamento de câncer e composição farmacêutica que compreende os mesmos
KR102127623B1 (ko) 2014-04-10 2020-06-29 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 항her3 항체-약물 콘주게이트
WO2017076628A1 (en) * 2015-11-04 2017-05-11 Borealis Ag A process for producing a multilayer laminate
WO2017147542A2 (en) 2016-02-26 2017-08-31 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Optimized transglutaminase site-specific antibody conjugation
EP3625209A1 (en) 2017-05-18 2020-03-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Bis-octahydrophenanthrene carboxamides and protein conjugates thereof
CA3098453A1 (en) 2018-05-09 2019-11-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-msr1 antibodies and methods of use thereof

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001041704A2 (en) * 1999-12-13 2001-06-14 Merck & Co., Inc. Method for the prevention and/or treatment of atherosclerosis
US20030125357A1 (en) * 2001-06-11 2003-07-03 Adams Alan D. Therapeutic compounds for treating dyslipidemic conditions
EP1398032A1 (en) * 2002-09-10 2004-03-17 PheneX Pharmaceuticals AG 4-Oxo-quinazolines as LXR nuclear receptor binding compounds
CN101679297A (zh) * 2006-12-08 2010-03-24 埃克塞利希斯股份有限公司 Lxr和fxr调节剂
US20090030082A1 (en) * 2007-02-23 2009-01-29 Barry Forman SYNTHETIC LIGANDS SELECTIVE FOR LXRbeta OVER LXRalpha, IDENTIFICATION AND METHODS OF USE THEREOF
US20160324981A1 (en) * 2015-05-08 2016-11-10 The California Institute For Biomedical Research Liver x receptor agonists and uses thereof

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JAYNE CHIN ET AL.: "Miniaturization of Cell-Based b-Lactamase-Dependent FRET Assays to Ultra-High Throughput Formats to Identify Agonists of Human Liver X Receptors", 《ASSAY AND DRUG DEVELOPMENT TECHNOLOGIES》, vol. 1, no. 6, pages 777 - 787, XP001206567, DOI: 10.1089/154065803772613417 *
SHEO B. SINGH ET AL.: "Discovery and development of dimeric podocarpic acid leads as potent agonists of liver X receptor with HDL cholesterol raising activity in mice and hamsters", 《BIOORG. MED. CHEM. LETT. 》, vol. 15, pages 2824 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023124537A1 (zh) * 2021-12-30 2023-07-06 辽宁键凯科技有限公司 一种缀合物及用其制备的抗体偶联药物
WO2024055886A1 (zh) * 2022-09-16 2024-03-21 辽宁键凯科技有限公司 一种分支型聚乙二醇连接子及其用途

Also Published As

Publication number Publication date
MX2021005822A (es) 2021-07-15
AU2019384136A1 (en) 2021-06-10
EA202191430A1 (ru) 2021-11-29
MA53455B1 (fr) 2022-11-30
BR112021009673A2 (pt) 2021-12-14
IL283313A (en) 2021-07-29
CO2021007581A2 (es) 2021-06-21
EP3883926A1 (en) 2021-09-29
SG11202105175WA (en) 2021-06-29
US20220080052A1 (en) 2022-03-17
KR20210094568A (ko) 2021-07-29
PH12021551153A1 (en) 2021-11-03
WO2020106780A1 (en) 2020-05-28
CA3120528A1 (en) 2020-05-28
JP2022507781A (ja) 2022-01-18
CL2021001308A1 (es) 2022-03-11
MA53455A1 (fr) 2021-12-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2018269568B2 (en) Bis-octahydrophenanthrene carboxamides and protein conjugates thereof
US20210332080A1 (en) Hydrophilic linkers for antibody drug conjugates
US11491237B2 (en) Cyclodextrin protein drug conjugates
CN113382985A (zh) 用作lxr激动剂的双八氢菲羧酰胺类衍生物及其蛋白质偶联物
JP7426931B2 (ja) 抗体薬物コンジュゲートのための親水性リンカー
CN112533951A (zh) 抗msr1抗体及其使用方法
CN113905767A (zh) 无痕连接体及其蛋白质偶联物
WO2020132658A2 (en) Tubulysins and protein-tubulysin conjugates
CN115867563A (zh) 微管溶素及蛋白质-微管溶素偶联物
CN118027137A (zh) 微管溶素及蛋白质-微管溶素偶联物

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination