JPH02500275A

JPH02500275A - 潰瘍の予防のための方法及び組成物

Info

Publication number: JPH02500275A
Application number: JP63504585A
Authority: JP
Inventors: ピックアート，ローレン，ラルフ
Original assignee: プロサイト　コーポレイション
Priority date: 1987-05-11
Filing date: 1988-05-11
Publication date: 1990-02-01
Also published as: DK10289A; AU607773B2; AU1794988A; KR960010833B1; KR890701116A; DK10289D0; CA1306683C; US4767753A; EP0313643B1; WO1988008714A1; EP0313643A1; MX165869B

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】潰瘍の予防のための方法及び組成物技術分野本発明は一般に潰瘍の予防に関し、そしてさらに詳しくは、温血動物での潰瘍の予防のための使用におけるグリシル−Ｌ−ヒスチジル−し−リジン、グリシル− Ｌ−ヒスチジル−しＩＪリジン銅（■）、及びこれらの誘導体の使用に関する。

背景技術胃潰瘍の発生及び治療は、多数の抗潰瘍療法の開発にもかかわらず大きな健康問題のままである。伝統的に、消化性潰瘍は過剰な胃酸の中和により、あるいは食事及び行動又は感情の変更により治療されてきた。よく知られた胃酸中和剤には炭酸水素ナトリウム、水酸化マグネシウム、炭酸カルシウム、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、三珪酸マグネシウム、及び三塩基性リン酸カルシウムがある。ある種のポリアミンメチレン樹脂もまた試みられている。胃酸の流れを抑制する試みも行われたが、これらの試みは深刻な副作用により特徴付けられる。さらに最近、シメチジン（ｃｉｍｅｔｉｄｉｎｅ）と称する化合物がヒスタミン部位のブロックによる胃酸の分泌の停止に効果的であった。しかしながら、酸の流れの停止には比較的有効であったが、シメチジンは腎機能の損傷及び精神錯乱を含む幾つかの不所望の特徴を有することが見出された。

幾つかの低分子組成物、例えばサリチル酸−銅又はジイソプロピルサリチル酸− 銅が胃潰瘍の発生を抑制することが報告されているが、これらの錯体は背中で遊離の銅と珪酸塩とに容易に解離する傾向があり、このことがそれらの実際的利用を制限している。さらに、これらの小さい銅錯体は水性条件下で溶解性に乏しく、そして組織刺激性可溶化剤と共に投与されなければならない。この様な他の薬剤であるペニシラミン−銅錯体はしばしば皮疹及び人格の変化（ペニシラミン精神病）を生じさせる。

従って、潰瘍の形成を予防するための改良された組成物の必要性が当業界において必要とされている。本発明はその様な組成物を提供し、そしてさらに他の関連する利点を提供する。

発明の開示要約すれば、本発明は後に記載する方法、すなわち（ａ）混血動物において胃潰瘍の形成を減少せしめる方法；　（ｂ）混血動物において胃酸の分泌を減少せしめる方法；及び（ｃ）温血動物の胃において細胞保護粘液の分泌を増加せしめる方法、において使用するために適当な種々の医薬組成物を開示する。

ここに記載する組成物はグリシル−し−ヒスチジル−し−リジン（ＧＨＬ）、グリシル−Ｌ−ヒスチジル−し−リジン：銅（ＩＩ　）　（ＧＨＬ−Ｃｕ）　、及びＧＨＬ−Ｃｕの種々の誘導体を包含する。

ＧＨＬ−Ｃｕの誘導体は次の一般式：（式中、Ｒは１〜１８個の炭素原子を含有するアルキル成分、６〜１２個の炭素原子を含有するアリール成分、１〜１２個の炭素原子を含有するアルコキシ成分、及び６〜１２個の炭素原子を含有するアリールオキシ成分から成る群から選択され、あるいはＲはＬ−プロリル−し−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリン又はＬ−バリル−し−フェニルアラニル−し−バリンである）を有する。

上記の誘導体に加えて、本発明の前記の誘導体の生物学的活性を変えるために他の化学的修飾を行うことができる。例えば、グリシンを種々の佃の小形のアミノ酸、例えばアラニン、セリン及びバリンにより置き換えることができる。さらに、分子の銅（ｎ）結合親和性を、グリシンのごときＮ−末端アミノ酸の付加によりグリシル−Ｌ−ヒスチジル−し−リジンをグリシル−Ｌ−グリシル−Ｌ−ヒスチジル−し−リジンに変えて、上昇せしめることができる。さらに、上記のように誘導体にグリシンを付加して対応するテトラペプチドを作ることができる。ヒスチジル残基中のイミダゾール基の銅（ＩＩ）に対する結合親和性を、ヒスチジンの代りに３−メチルヒスチジンを用いることにより、リジル側鎖に追加の炭素原子を付加して該鎖を延長することにより、変化せしめることができる。

上記の方法は一般に、所望の目的を達成するために上記の組成物のいずれかの療法的有効量を動物に投与することを含んで成る。本発明の他の観点は、次の詳細な記載及び添付された図面への言及により明らかになるであろう。

図面の説明第１図は、治療された動物と比較しての対照動物における潰瘍形成を示すラットの胃の写真である。

第２図は、ＧＨＬ−Ｃｕにより治療した場合の可視胃潰瘍を有するラットの％と比較しての対照群における可視胃潰瘍を有するラットの％のグラフ表示である。

発明を実施するための最良の形態ここに記載するように、ＧＨＬ、　ＧＨＬ−Ｃｕ　、及びこれらの誘導体は、（ａ）温血動物において胃酸の分泌を減少せしめ、（ｂ）温血動物の胃において細胞保護粘液の分泌を増加せしめ、そして（Ｃ）温血動物において胃潰瘍の形成を減少せしめる、ための方法において使用することができる。本発明の誘導体は米国特許出願Ｎ（Ｌ　０４０．４６０及び米国特許Ｎα４．６６５．０５４に詳細に記載されており、これらは引用によりこの明細書に組み入れる。本発明の誘導体はエステル化により、水分子の除去により、又はＧＨＬのカルボキシ末端への基（オクタツール、メタノール、ベンジルアルコールのごときアルコール、又はＮ　Ｈｓ）により、より親脂性の誘導体を形成することにより製造することができる。

この転換の全体化学反応は：ＧＨＬ−ＤＨ＋　Ｒ−Ｈ−ＣＨＬ−Ｒ＋Ｈ２０により特徴付けることができる。

実際に、この反応は、ＧＨＬへのリジン及び他の２個のアミノ酸の結合に先立ってアミノ酸リジンにＲ基を付加することにより最も容易に行われる。Ｇ）ＩＬ− Ｒの形成及び単離の後、銅（ｎ）が前記分子にキレート化され生物活性錯体が形成さより親脂性のＧＨＬ−Ｃｕを形成するための全体反応は次のように特徴付けられる。

１）リジン−〇〇　＋　Ｒ−Ｈ−リジン−Ｒ＋８２０２）リジン−Ｒ＋フ゛ロックされたし一ヒスチジン　−ブロックされたし一ヒスチジンーし一リジンーＲ３）ブロックされたし一ヒスチジンーし一すジンーＲ＋ブロックされたグリシン　 −　ブロックされたグリシル−Ｌ−ヒスチジン−し−リジン−Ｒ４）ブロックされたグリシル−し−ヒスチジン−し−リジン−Ｒ−グリシル−Ｌ −ヒスチジン−しニリジンーＲ５）グリシル−し−ヒスチジン−し−リジン−Ｒ十銅（ＩＩ）−グリシル−Ｌ− ヒスチジン−し−リジン−Ｒ：銅（ＩＩ）好ましい態様において、ＧＨＬ又はＣＨＬの誘導体と銅とは１：１の比率で存在する。

前記の方法に加えて、ここに開示される結果が示唆するところによれば、Ｇｌ（Ｌ、　ＧＨＬ−Ｃｕ　、及びその誘導体はまた他の胃腸疾患に対する治癒作用、例えば吻合術、腸虚血の後の病変、壊死性腸炎、並びに口咽喉及び食道の傷の後の治癒をも行う。

本発明においては、この明細書に記載する組成物を経口的にそしてカプセルの形で投与するのが一般に好ましい。経口投与のために組成物をカプセル化する方法（例えば、ハードゼラチンのコーティング）は当業界においてよく知られている（Ｂａｋｅｒ、　Ｒｉｃｈａｒｄ、　Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ　Ｒｅ１ｅａｓｅ　ｏｆ　ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙＡｃｔｉｖｅ　Ａｇｅｎｔｓ、　Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　ａｎｄ　５ｏｎｓ、　１９８６）。投与量は患者の状態により影響されるが、宿主の体重当り約１０〜１００　ｍｇ／　ｋｇの量で投与するのが一般に好ましい。さらに、まずＧＨＬ−Ｃｕを用いて治療を開始し、そして次に少量の銅（Ｉｆ）を伴うか又は伴わない遊離ペプチド（ＧＨＬ）を用いて治療を続けるのが好ましいであろう。

この明細書に記載するＧｔｌＬ−Ｃｕ及び誘導体はまた、抗潰瘍性又は潰瘍治癒性を有することが報告されている他の因子と組み合わせて使用することができる。こうして、いずれかの単一因子により得られるより良い臨床効果を提供する相乗効果が得られるであろう。さらに、この明細書に記載する組成物は抗−潰瘍作用及び潰瘍治癒作用のスペクトルを刺激するが、臨床状態はしばしばかなり異り、この明細書に記載する組成物と他の因子との組み合わせを用いるのが幾分有利であろう。

本発明と組み合わせることができる薬物の例にはインドメタシン、シメチジン、及び多数のヒスタミンＨ２拮抗薬のいずれかが含まれる。本発明の組成物はまた、抗−潰瘍性及び胃酸分泌阻害性を有する他のペプチド及びペプチド類似体と組み合わせることもできよう。この様な因子の例は、上皮生長因子、繊維芽細胞生長因子、神経生長因子、形質転換生長因子α及びβ、血小板由来生長因子、並びに他の類似の因子である。この様な他の因子にはソマトスタチン及びその類似体（米国特許ＮＣ１４，６１１，０５４及びＮａ　４，３６０，５１６）　、カルシトニン及びその類似体（米国特許Ｎα３．８２６．８２４）　、並びに上皮生長因子のペプチド断片（米国特許Ｎａ　３．９１７．８２４）が含まれる。

下記の例を要約すると、例１はグリシル−し−ヒスチジル−Ｌ　−１，１ジンベンジルエステル：銅（ＩＩ）の合成を示す。例２はグリシジル−Ｌ−ヒスチジル −し−リジン・ｎ−オクチルエステル：銅（ＩＦ）の合成を示す。例３は、（Ａ）グリシル−Ｌ−ヒスチジル−し−リジン・ｎ−ステアリルエステル：銅（■）、及び（Ｂ）他の方法によるその合成を示す。いずれの方法においても、ｎ−ステアリルアルコール（炭素１８個）の代りにｎ−バルミチルアルコール（炭素１６個）を用いてグリシル−Ｌ−ヒスチジル−し−リジン・ｎ−ステアリルエステル：銅（ｎ）を得ることができよう。例４は、グリシル−し−ヒスチジル−し− リジル−し−プロリル−し−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリン：銅（ ■）及びグリシル−Ｌ−ヒスチジル−し−リジル−し−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリン：銅（ＩＩ＞の合成を示す。例５は、（ａ）胃酸蓄積の阻害、（ｂ）細胞保護粘液分泌の刺激、及び（ｃ）温血動物における胃潰瘍の形成の減少を示す。例６はＧ）ＩＬ−Ｃｕを用いての胃潰瘍形成の抑制を示す。例７はＧＨＬ−Ｃｕの代表的な誘導体を用いての胃潰瘍形成の抑制を示す。

次の例は例示的なものであり限定的なものではない。

匠動物において使用するためのＧＨＬ、　ＧＨＬ−Ｃｕの製造ＧＨＬを精製するためガラス蒸留水中に溶解しく５０ｍｇ／ｒＩＬ１）、そして２０．０００ｘｇにて１時間３℃で遠心した。これにより合成法から残留していた水に溶解しにくい物質が除去される。上清を凍結乾燥し、次に０．５％酢酸の溶剤中３℃にてセファデックスＧ−１０カラムを通した。溶剤フロントの後に溶出する主ピーク（２５４ナノメーターでの吸収によりモニターされる）を凍結乾燥する。精製されたＧＨＬを等モル量の酢酸第二銅及び水酸化ナトリウムと一緒にすることによりＧＨＬ−Ｃｕを調製し、次に公表されている方法（Ｐｅｒｋｉｎｓ等、Ｉｎｏｒｇ、　Ｃｈｉｍ。

Ａｃｔａ　６７　：　９３−９９．１９８４＞により、エタノールの添加及び低温を用いて沈澱せしめた。

化学物質の由来以下の例において使用する化学物質及びペプチド中間体は次の供給者から購入することができる。

シダ？−ケミカル社（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、）　（セントルイスＭｏ）　；ペニンスラ・ラボラドリース（Ｐｅｎｉｎｓｕｌａ　Ｌａｂｏｒａｔｏ−ｒｉｅｓ）　（サンカルロス、カリホルニア）　：アルドリッジ・ケミカルス（Ａｌｄｒｉｄｇｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、）　（ミルウオーキー、ライスコンシン）；ベガバイオケミカルス（Ｖｅｇａ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）（ツクソン、アリシナ）；ピース・ケミカルス社（ＰｉｅｒｃｅＣｈｅＩＩｌｉｃａｌ　Ｃｏ、）　（ロックホード、イリノイ）；リサーチ・バイオケミカルス（Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）　（クリーブランド・オヒオ）；パン・ウォーター・アンド・ロジャース（ＶａｎＷａｔｅｒｓ　ａｎｄ　Ｒｏｇｅｒｓ）　（サウス・サンフランシスコ、カリホルニア）；バッケム社（Ｂａｃｈｅｍ、　Ｉｎｃ、　）　（）ランス、カリポルＮ８−ベンジルオキシカルボニル−し−リジンベンジルエステルをヘキサン／酢酸エチル（１：１）に溶解し、そしてカップリング剤としてジシクロへキシルカルボジイミドを用いてＮ ”　−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｎ’−−ベンジルオキシカルボニル−し− ヒスチジンに連結した。炭酸水素ナトリウム（１０％）を添加し、そして生成物を有機層中に抽出した。生成物Ｎ　ａ−＋、−ブチロキシカルボニルーＮ”−ベンジルオキシカルボニル−し−ヒスチジル−Ｎ＠−ベンジルオキシカルボニル− し−リジン・ベンジルエステルを溶液から結晶化した。ブロックされたジペプチドのＮ−末端基を、ジクロロメタ７９５０％トリフルオロ酢酸中での３０分間の撹拌により除去し、そして真空蒸発せしめた。生成物Ｎ”−ベンジルオキシカルボニル−し−ヒスチジル−Ｎ＠−ベンジルオキシカルボニル−し−リジン・ベンジルエステルを、カップリング剤としてジシクロへキシルカルボジイミドを用いてベンジルオキシカルボニル−グリシンに連結した。氷酢酸中で炭素上１０％パラジウムを用いる触媒的水素化によりブロック基を除去した。凍結乾燥の後、生成物グリシル−し−ヒスチジル−し−リジン・ベンジルエステルを水中に溶解し、そしテダウエックス（Ｄｏｗｅｘ）　５０　Ｘ−４イオン交換樹脂上でのイオン交換クロマトグラフィー及び０．１Ｍ水酸化アンモニウムによる溶出によって精製し、溶出液を酢酸により直接中和した。

中性ＰＨにて陰イオン交換カラムビオレックス（ＢｉｏＲｅｘ）　６３をさらに通過せしめることにより遊離カルボン酸基を有する分解生成物をさらに除去した。

グリシル−し−ヒスチジル−し−リジン・ベンジルエステルを、等モル量の酢酸銅を添加した水中に溶解した。水酸化ナトリウムによりｐＨを中性に上昇せしめた。この溶液を２０．０００ｘｇにて１時間３℃にして遠心分離して水に難溶性の物質を除去した。上清を凍結乾燥してグリシル−Ｌ−ヒスチジル−し−リジン・ベンジルエステル：銅（ＩＩ）を得た。

例２グリシル−し−ヒスチジル−し−リジン・ｎ−オクチルエステル：銅（ｎ）の合成Ｎ”−ベンジルオキシカルボニル−し−リジン、ｎ−オクタツール、ベンゼン及びトルエンスルホン酸−水和物の混合物を、ディーンースターク（Ｄｅａｎ−３ｔａｒｋ）　）ラップを用いて還流することにより水を除去した。冷却の後乾燥エチルエーテルを添加した。次に、この溶液を０℃にて一夜沈澱せしめた。

沈澱した固体の一部を５０ｍｆの炭酸カリウム溶液及び５０ｍ１のジクロロメタンに加えた。抽出の後、層を分離し、そして有機相を水及び塩水で洗浄し、そして無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過、蒸発及びフラッシュクロマトグラフィーによる精製によってｎ−オクチル・Ｎ″−ベンジルオキシカルボニル−し− リジネートを得た。この生成物をテトラヒドロフラン中に溶解し、そしてＮ″− ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−Ｎ”−ベンジルオキシカルボニル−し−ヒスチジン、イソブチルクロロホルメート及びＮ−メチルモルホリンと混合した。蒸発の後、水及び酢酸エチルを添加した。生成物を有機相に抽出し、これを無水硫酸マグネシウムにより乾燥した。濾過、蒸発、及びフラッシュ・カラムクロエトゲラフィーによる精製により、ｎ−オクチル・Ｎ”　−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｎ　ｉ　ｌ″−ベンジルオキシカルボニル−し−ヒスチジル−ＮＩＩ−ベンジルオキシカルボニル−し−リジネートを得た。

生成物をツク００１２フ９５０３０分間にわたり溶解せしめ、次に蒸発せしめて、ｎ−オクチル・Ｎ１”−ベンジルオキシカルボニル−し−ヒスチジル−Ｎ″−ベンジルオキシカルボニル−し −リジネートを生成せしめた。これをテトラヒドロフランに溶解し、そしてイソブチルクロロホルメート、Ｎ−メチルモルホリン及びベンジルオキシカルボニルグリシンを添加してｎ−オクチル・ベンジルオキシカルボニルグリシル−Ｎ　１　ｍ−ベンジルオキシカルボニル−し−ヒスチジル−Ｎｅ−ベンジルオキシカルボニル−し−リジネートを生成せしめた。これを氷酢酸に溶解し、そして−夜水素添加した。

生ずるグリシル−Ｎ−ヒスチジル−し−リジンのｎ−オクチルエステルを、等モル量の二酢酸第二銅の添加により銅錯体に転換した。ｐｔ＋を水酸化ナトリウムにより中性に上昇せしめた。溶液を２０，　０００ｘｇにて１時間３℃で遠心して水に難溶性の物質を除去した。上滑を凍結乾燥してグリシル−Ｌ−ヒスチジル −し−リジン・ｎ−オクチルエステル：銅（ｎ）を得た。

Ｎ”−ベンジルオキシカルボニル−し−リジン、ｎ−ステアリルアルコール、ベンゼン及びｐ−トルエンスルホン酸−水和物の混合物をディーン・スターク・トラップを用いて一夜還流して水を除去した。冷却後、乾燥プロピルエーテルを添加して全量を６倍に増加した。生成物を０℃にて一夜沈澱せしめそして濾過した。この濾液の部分を５０ｍ１の炭酸カリウム及び５０ｒｎｌのジクロロメタンに添加した。抽出の後、層を分離し、そして有機相を水及び塩水で洗浄し、次に無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過、蒸発、及びフラッシュカラムクロマトグラフィーによる精製がｎ−ステアリル・Ｎ”−ベンジルオキシカルボニル−し− リジネートをもたらした。

この生成物をテトラヒドロフラン中に溶解し、そしてＮ′″−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｎ１″−ベンジルオキシカルボニル−し−ヒスチジン、イソブチルクロロホルメート及びＮ−メチルモルホリンと混合した。蒸発の後、水及び酢酸プロピルを添加し、そして生成物を有機相中に抽出し、そして無水硫酸マグネシウムにより乾燥した。濾過、蒸発、及びフラッシュカラムクロマトグラフィーによる精製がｎ−ステアリル・Ｎ”　−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｎ”−ベンジルオキシカルボニル−し−ヒスチジル−Ｎ１１−ベンジルオキシカルボニル− し−リジネートをもたらした。

生成物を、ツク００１２フ９５０３０分間にわたって溶解し、次に蒸発せしめてｎ−ステアリル・Ｎ　ｉ　＋ａミーベンジルオキシカルボニル−一ヒスチジルーＮ０ーベンジルオキシカルボニル −し−リジネートを生成せしめ、これをテトラヒドロフラン、イソブチルクロロホルメート、Ｎ−メチルモルホリン及びベンジルオキシカルボニルグリシンに溶解してｎ−ステアリル・ベンジルオキシカルボニルグリシル−Ｎ　１ｌｌ−ベンジルオキシカルボニル−し−ヒスチジル−Ｎ”−ベンジルオキシカルボニル−し −リジネートを生成せしめた。生成物を、ツク００１２フ９５０酢酸に３０分間にわたり溶解し、次に蒸発せしめることによりｎ−ステアリル・グリシル−Ｌ− ヒスチジル−し−リジンエステルを生成せしめた。

生ずる分子、グリシル−し−ヒスチジル−し−リジン・ｎ−ステアリルエステルを、等モル量の二酢酸銅の添加により銅錯体に転換せしめた。水酸化ナトリウムによりｐＨを中性に上昇せしめて、動物研究のために有用な生成物を得た。

ｎ−ステアリルアルコールをｎ−バルミチルアルコールで置き換えることにより、同様にしてグリシル−し−ヒスチジル−し−リジン・ｎ−パルミチルエステルを合成することができる。

Ｎ（ε）−ベンジルオキシカルボニル−し−リジン、ｎ−ステアリルアルコール、ｐ−トルエンスルホン酸−水和物及びベンゼンをディーン・ス夛−り・トラップを用いて還流することにより、生じた水を共沸除去した。室温に冷却しそして次に乾燥エチルエーテルを添加した後、ｎ−ステアリル・Ｎ（ε）−ベンジルオキシカルボニル−し−リジネート・ｐ−トルエンスルホン酸塩を濾過により集め、２Ｍ炭酸水素カリウム水溶液で処理し、そしてジクロロメタン中に抽出した。

蒸発により遊離アミンを得、これを乾燥テトラヒドロフラン（ＴＩＩＰ）に再溶解し、そして乾燥ＴＨＦ中Ｎ（α）−１−ブチルオキシカルボニル−Ｎ（ｉ、） −ベンジルオキシカルボニル−し−ヒスチジン、Ｎ−メチルモルホリン及びイソブチルクロロホルメートの撹拌中の溶液に一１５℃にて添加した。生ずる十分に保護されたジペプチドエステルをトリフルオロ酢酸／ジクロロメタン（１：１）により室温で処理し、炭酸水素す）　ＩＪウムの飽和水溶液により中和し、そして酢酸エチル中に抽出した。蒸発により部分的に脱ブロックされたジペプチドを得、これを乾燥ＴＨＦに溶解し、そして乾燥ＴＨＦ中ベンジルオキシカルボニルグリシン、Ｎ−メチルモルホリン及びイソブチルクロロホルメートの撹拌中の溶液に一１５℃にて添加した。生成した完全に保護されたトリペプチドエステルを、Ｐｄ−Ｃ触媒の存在下室温にて米酢酸中水素ガスにより室温にて処理することにより全体的に脱ブロックする。濾過、蒸発及びミクロクリスタリンセルロースカラム上での精製及びこれに続く凍結乾燥が、目的のトリペプチドエステルをその三酢酸塩として与える。

生ずる分子、グリシル−し−ヒスチジル−Ｌ−リジン・ｎ−ステアリルエステルを、等モル量の二酢酸銅の添加により銅錯体に乾燥した。ｐＨを水酸化ナトリウムの添加により中性に上昇せしめることにより動物研究のために有用な生成物を得た。

ｎ−ステアリルアルコールをｎ−パルミチルアルコールで置き換えることにより同様にしてグリシル−し−ヒスチジル−し−リジン・ｎ−パルミチルエステルを合成することかでグリシル−Ｌ−ヒスチジル−し−リジル−し−プロピル−し− バリルート−フェニルアラニル−Ｌ−バＩＪン：銅（Ｉ［）　及びグリシル−し −ヒスチジル−Ｌ−リジル−し−バリル−し−フェニルアラニル−Ｌ−バリン：銅（ｎ）の合成これらのペプチドは、ペプチドの分野において共通な標準的固相法（Ｊ、　Ｓｔｅｗａｒｔ及びＪ、Ｙｏｕｎｇ、　５ｏｌｉｄ　Ｐｈａｓｅ　ＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓ　ｉｓ、ピース・ケミカル社、１９８４）により合成される。

要約すれば、Ｂｏｃ−Ｖａ　］−０−樹脂を、反応試薬としてジシクロへキシルカルボジイミドを用いて、他のブロックされたアミノ酸と逐次連結した。保護されたアミノ酸、固相合成のための樹脂及びカップリング剤はペニンスラ・ラボラトリーズ、サンフランシスコ、カリホルニアから得た。ブロックされたアミノ酸を次々と付加して目的のペプチドを得る。最終ペプチドを弗化水素を用いて脱ブロックする。最終ペプチドを０．５％酢酸に溶解し、そしてセファデックスＧ− １５カラム（ファルマシア）を通すことにより精製する。等モル量の酢酸第二銅及びこれに続く凍結乾燥が活性分子を生じさせる。

例５シャイ（Ｓｈａｙ）法によりラットに胃癌を生じさせた。要約すれば、ラットの胃と腸との間の通路を結紮し、これによって胃酸の蓄積を生じさせて潰瘍形成を生じさせた。治療のため、０．２５−の塩溶液中１０■のＧＨＬもしくはＧＨＬ −Ｃｕ又はその誘導体をチューブによりラットの胃に投与した。対照ラットには塩溶液のみを投与した。２４時間後、胃を写真に写し、そして胃の酸度を決定した。

実験の結果を次の表（第１表）に示す。これはラットにおける胃酸蓄積の抑制及び細胞保護粘液の分泌の刺激を示す。

粘液の生産を０〜→什←　に視覚的に評価し、ここで０は粘液が実質的に観察されないことを示し、そして→什←　は非常に多くの粘液分泌を示す。

第１表対　照　２．０１±０．２７　観察できずＧＨＬ　３．２６±０．４７　＋Ｇｌ（Ｌ　＋　ＣＨＬ−Ｃｕ　６．５２±０．７０　→什←ＧＨＬ−Ｃｕ　６．９４±０．２５　→升←さらに、第１図に示すように、Ｇｔ（Ｌ−Ｃｕによる治療が胃潰瘍の形成を顕著に減少せしめた。

胃潰瘍をラットの群において例５に記載した様にして誘導した。ＧＨＬとＣｕのモル比が２：１又は１：１であるＧＨＬ−Ｃｕ。

及び銅を伴わないＧＨＬ、の増加する量を動物に投与した。

２４時間後、胃を摘出し、Ｊ）Ｈを測定し、そして可視潰瘍を有する胃の％を決定した。

実験の結果を次の表（第２表）に示す。これは胃酸分泌の抑制（対照と比較した場合の胃液の高いｐＨにより示される）、及び第２図に示すような可視潰瘍を有する胃の％を示す。

第２表塩溶液　２．０６　７２％ＧＨＬ　１０■　２．８４　４０％ＧＨＬ−Ｃｕ　（２：　１　）　３ｍｇ　２４２　５０％ＧＨＬ−Ｃｕ　（２：　１　）　１０ｍｇ　６．３８　１１％ＧＨＬ−Ｃｕ　（１：　１　）　Ｉｍｇ　３．８０　３３％ＧＨＬ−Ｃｕ　（１：　１　）　３ｍｇ　４．８５　０％ＧＨＬ−Ｃｕの誘導体による胃潰瘍形成の抑制胃潰瘍をラットの群において例５に記載したようにして誘導した。動物にＧｔｌＬ−Ｃｕの幾つかの誘導体を増加する量で投与した。この例は、２種類の誘導体グリシル−し−ヒスチジル−し−リジン・オクチルエステル及びグリシル−Ｌ−（メチル）ヒスチジル−し−リジンを用いて得られた結果を示す。

これらの化合物の両者を１モルの誘導体対１モルの銅のモル比（比率＝ｉ　：　ｉ＞で試薬した。２４時間後、胃を摘出し、ｐＨを測定し、そして可視潰瘍を有する胃の％を決定した。

実験の結果を次の表（第３表）に示す。これは胃液分泌の抑制（対照と比較した場合の胃液のｐＨの上昇により示される）、及び可視潰瘍を有する胃の％を示す。

第３表塩溶液　２．０６　７２％グリシル−し−ヒスチジル−し−リジン・オクチルエステル：ｃｕ１■　１．９９　５０％３ｍｇ　３．５０　２５％１０■　６．１８　０％グリシル−Ｌ−（メチル）ヒスチジル−し−リジン二Ｃｕしたが、本発明の本質及び範囲を逸脱することなく種々の変更を行うことができることが明らかであろう。従って、本発明は添付された請求の範囲によるほか制限されない。

浄書（内容に変更なし）対照潰瘍形成の予防補正書の翻訳文提出書（特許法第１８４条の７第１項）平成元年１月！θ日特許庁長官　吉　１）文　毅　殿１、特許出願の表示ＰＣＴ／ＵＳ　８８１０１５４８２、発明の名称潰瘍の予防のための方法及び組成物３、特許出願人名称　プロサイト　コーポレイション′４、代理人住所　東京都港区虎ノ門−丁目８番１０号静光虎ノ門ビル５、補正書の提出年月日１９８８年１１月７ＥＩ＜受理臼）６、添付書類の目録（１）補正書の翻訳文　１通請求の範囲１、温血動物において胃酸の分泌を減少せしめるために使用するための、グリシル−Ｌ−ヒスチジル−し−リジンヲ含んで成る組成物。

２、温血動物において胃酸の分泌を減少せしめるために使用するための、グリシル−Ｌ−ヒスチジル−し−リジン：銅（ＩＩ）を含んで成る組成物。

３、次の一般式：（式中、Ｒは、１〜１８個の炭素原子を含有するアルキル成分、６〜１２個の炭素原子を含有するアリール成分、１〜１８個の炭素原子を含有するアルコキシ成分、６〜１２個の炭素原子を含有するアリールオキシ成分から成る群から選択されたものであり、あるいはＲはＬ−プロリル−し−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリン又はＬ−バリル−し。

フェニルアラニル−Ｌ−バリンである）を有するＧＨＬ−Ｃｕの誘導体を含んで成る、温血動物において胃酸の分泌を減少せしめるために使用するための組成物。

４、次の一般式：（式中、Ｘはグリシル−し−アラニル、グリシル−し−セリル、又はグリシル− Ｌ−バリルであり゛、そしてＲは１〜１８個の炭素原子を含有するアルキル成分、６〜１２個の炭素原子を含有するアリール成分、１〜１８個の炭素原子を含有するアルコキシ成分、及び６〜１２個の炭素原子を含有するアリールオキシ成分から成る群から選択されたものであり、あるいはＲはＬ−プロリル−し−バリル −Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ　７ｓ、？リン又はＬ−バリル−し−フェニルアラニル−Ｌ−バリンである）で表わされるＧＨＬ−Ｃｕの誘導体を含んで成る、温血動物において胃酸の分泌を減少せしめるために使用するための組成物。

５、温血動物の胃において細胞保護粘液の分泌を増加せしめるために使用するための、グリシル−Ｌ−ヒスチジル−し−リジンを含んで成る組成物。

６、温血動物の胃において細胞保護粘液の分泌を増加せしめるために使用するための、グリシル−Ｌ−ヒスチジル−し−リジン：銅（ＩＩ）を含んで成る組成物。

７、次の一般式：（式中、Ｒは、１〜１８個の炭素原子を含有するアルキル成分、６〜１２個の炭素原子を含有するアリール成分、１〜１８個の炭素原子を含有するアルコキシ成分、６〜１２個の炭素原子を含有するアリールオキシ成分から成る群から選択されたものであり、あるいはＲはＬ−プロリル−し−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリン又はＬ−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリンである）を有するＧＨＬ−［：ｕの誘導体を含んで成る、温血動物の胃において細胞保護粘液の分泌を増加せしめるために使用するための組成物。

８、次の一般式：（式中、Ｘはグリシル−し−アラニル、グリシル−Ｌ−セリル、又はグリシル− Ｌ−バリルであり、モしてＲは１〜１８個の炭素原子を含有するアルキル成分、６〜１２個の炭素原子を含有するアリール成分、１〜１８個の°炭素原子を含有するアルコキシ成分、及び６〜１２個の炭素原子を含有するアリールオキシ成分から成る群から選択されたものであり、あるいはＲはＬ−プロリル−し−バリル −Ｌ−フェニルアラニ）Ｌｔ　−Ｌ−ハＩ）ン又はＬ−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリンである）で表わされるＧｔｌＬ−Ｃｕの誘導体を含んで成る、温血動物の胃において細胞保護粘液の分泌を増加せしめるために使用するための組成物。

９、温血動物において胃潰瘍の形成を減少せしめるために使用するための、グリシル−Ｌ−ヒスチジル−し−リジンを含んで成る組成物。

１０、温血動物において胃潰瘍の形成を減少せしめるために使用するための、グリシル−Ｌ−ヒスチジル−し−リジン：銅（ＩＩ）を含んで成る組成物。

１１、次の一般式：（式中、Ｒは、１〜１８個の炭素原子を含有するアルキル成分、６〜１２個の炭素原子を含有するアリール成分、１〜１８個の炭素原子を含有するアルコキシ成分、６〜１２個の炭素原子を含有するアリールオキシ成分から成る群から選択されたものであり、あるいはＲはＬ−プロリル−し−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリン又はＬ−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリンである）を有するＧＨＬ−Ｃｕの誘導体を含んで成る、温血動物において胃潰瘍の形成を減少せしめるために使用するための組成物。

１２、次の一般式：（式中、ｘはグリシル−し−アラニル、グリシル−Ｌ−セリル、又はグリシル− Ｌ−バリルであり、そしてＲは１〜１８個の炭素原子を含有するアルキル成分、６〜１２個の炭素原子を含有するアリール成分、１〜１８個の炭素原子を含有するアルコキシ成分、及び６〜１２個の炭素原子を含有する了り−ルオキシ成分から成る群から選択されたものであり、あるいはＲはＬ−プロリル−し−バリル− Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリン又はＬ−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ −バリンである）で表わされるＧＨＬ−Ｃｕの誘導体を含んで成る、温血動物において胃潰瘍の形成を減少せしめるために使用するための組成物。

１３、温血動物において胃潰瘍の形成を減少せしめるために使用するためのグリシル−Ｌ−（メチル）ヒスチジル−Ｌ−リジン：Ｃｕを含んで成る組成物。

手続補正書（方式）平成１年１０月お日特許庁長官　吉　１）文　毅　殿１、事件の表示ＰＣＴ／ＵＳ８　Ｂ１０１５４８２、発明の名称潰瘍の予防のための方法及び組成物３、補正をする者事件との関係　特許出願人住所　〒１０５東京都港区虎ノ門−丁目８番１０号静光虎ノ門ビル　電話５０４ −０７２１５、補正命令の日付平成１年１０月３日（発送日）６、補正の対象（１）　特許法第１８４条の５第１項の規定による書面の「特許出願人の代表者」の欄（２）図面の翻訳文（３）委任状７、補正の内容（１０３）　別紙の通り（２）図面の翻訳文の浄書（内容に変更なし）８、添付書類の目録（１）訂正した特許法第１８４条の５第１項の規定による書面　１通（２）図面の翻訳文　１通国際調査報告ｍ−一、＊ｍ＾ｓｅｍｍ−ｅ−ｗｅ、　ＰＣＴ／ＴＪＳ　８１ｉ１１０１５４Ｂ国際調査報告

Claims

【特許請求の範囲】

１．温血動物において胃酸の分泌を減少せしめるために使用するための、グリシルーＬ−ヒスチジルーＬ−リジンを含んで成る組成物。
２．温血動物において胃酸の分泌を減少せしめるために使用するための、グリシルーＬ−ヒスチジルーＬ−リジン：銅（ＩＩ）を含んで成る組成物。
３．次の−般式：〔グリシルーＬ−ヒスチジルーＬ−リジン−■Ｃ−Ｒ〕：銅（ＩＩ）（式中、Ｒは、１〜１８個の炭素原子を含有するアルキル成分、６〜１２個の炭素原子を含有するアリール成分、１〜１２個の炭素原子を含有するアルコキシ成分、６〜１２個の炭素原子を含有するアリールオキシ成分から成る群から選択されたものであり、あるいはＲはＬ−プロリルーＬ−バリルーＬ−フェニルアラニル−Ｌ−バリン又はＬ−バリルーＬ−フェニルアラニル−Ｌ−バリンである）を有するＧＨＬ−Ｃｕの誘導体を含んで成る、温血動物において胃酸の分泌を減少せしめるために使用するための組成物。
４．次の一般式：〔Ｘ−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−リジン−▲数式、化学式、表等があります▼−Ｒ〕：銅（ＩＩ）（式中、Ｘはグリシル−Ｌ−アラニル、グリシル−Ｌ−セリル、又はグリシル−Ｌ−バリルであり、そしてＲは１〜１８個の炭素原子を含有するアルキル成分、６〜１２個の炭素原子を含有するアリール成分、１〜１２個の炭素原子を含有するアルコキシ成分、及び６〜１２個の炭素原子を含有するアリールオキシ成分から成る群から選択されたものであり、あるいはＲはし−プロリル− Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリン又はＬ−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリンである）で表わされるＧＨＬ−Ｃｕの誘導体を含んで成る、温血動物において胃酸の分泌を減少せしめるために使用するための組成物。
５．温血動物の胃において細胞保護粘液の分泌を増加せしめるために使用するための、グリシル−Ｌ−ヒスチジルーＬ−リジンを含んで成る組成物。
６．温血動物の胃において細胞保護粘液の分泌を増加せしめるために使用するための、グリシル−Ｌ−ヒスチジルーＬ−リジン：銅（ＩＩ）を含んで成る組成物。
７．次の一般式：〔グリシルーＬ−ヒスチジル−Ｌ−リジン−▲数式、化学式、表等があります▼ Ｃ−Ｒ〕：銅（ＩＩ）（式中、Ｒは、１〜１８個の炭素原子を含有するアルキル成分、６〜１２個の炭素原子を含有するアリール成分、１〜１２個の炭素原子を含有するアルコキシ成分、６〜１２個の炭素原子を含有するアリールオキシ成分から成る群から選択されたものであり、あるいはＲはＬ−プロリル−Ｌ−バリル −Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリン又はＬ−バリル−Ｌ−フェニルアラニル− Ｌ−バリンである）を有するＧＨＬ−Ｃｕの誘導体を含んで成る、温血動物の胃において細胞保護粘液の分泌を増加せしめるために使用するための組成物。
８．次の一般式：〔Ｘ−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−リジン−▲数式、化学式、表等があります▼Ｃ−Ｒ〕：銅（ＩＩ）（式中、Ｘはグリシル−Ｌ−アラニル、グリシル−Ｌ−セリル、又はグリシル−Ｌ−バリルであり、そしてＲは１〜１８個の炭素原子を含有するアルキル成分、６〜１２個の炭素原子を含有するアリール成分、１〜１２個の炭素原子を含有するアルコキシ成分、及び６〜１２個の炭素原子を含有するアリールオキシ成分から成る群から選択されたものであり、あるいはＲはＬ−プロリル −Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリン又はＬ−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリンである）で表わされるＧＨＬ−Ｃｕの誘導体を含んで成る、温血動物の胃において細胞保護粘液の分泌を増加せしめるために使用するための組成物。
９．温血動物において胃潰瘍の形成を減少せしめるために使用するための、グリシル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−リジンを含んで成る組成物。
１０．温血動物において胃潰瘍の形成を減少せしめるために使用するための、グリシル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−リジン：銅（ＩＩ）を含んで成る組成物。
１１．次の一般式：〔グリシル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−リジン−▲数式、化学式、表等があります▼ Ｃ−Ｒ〕：銅（ＩＩ）（式中、Ｒは、１〜１８個の炭素原子を含有するアルキル成分、６〜１２個の炭素原子を含有するアリール成分、１〜１２個の炭素原子を含有するアルコキシ成分、６〜１２個の炭素原子を含有するアリールオキシ成分から成る群から選択されたものであり、あるいはＲはＬ−プロリル−Ｌ−バリル −Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリン又はＬ−バリル−Ｌ−フェニルアラニル− Ｌ−バリンである）を有するＧＨＬ−Ｃｕの誘導体を含んで成る、温血動物において胃潰瘍の形成を減少せしめるために使用するための組成物。
１２．次の一段式：〔Ｘ−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−リジン−▲数式、化学式、表等があります▼Ｃ−Ｒ〕：銅（ＩＩ）（式中、Ｘはグリシル−Ｌ−アラニル、グリシル−Ｌ−セリル、又はグリシル−Ｌ−バリルであり、そしてＲは１〜１８個の炭素原子を含有するアルキル成分、６〜１２個の炭素原子を含有するアリール成分、１〜１２個の炭素原子を含有するアルコキシ成分、及び６〜１２個の炭素原子を含有するアリールオキシ成分から成る群から選択されたものであり、あるいはＲはＬ−プロリル −Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリン又はＬ−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリンである）で表わされるＧＨＬ−Ｃｕの誘導体を含んで成る、温血動物において胃潰瘍の形成を減少せしめるために使用するための組成物。
１３．温血動物において胃潰瘍の形成を減少せしめるために使用するためのグリシル−Ｌ−（メチル）ヒスチジル−Ｌ−リジン：Ｃｕを含んで成る組成物。