KR960010833B1 - 궤양 예방용 약제학적 조성물 - Google Patents

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Abstract

내용 없음.

Description

[발명의 명칭]
궤양 예방용 약제학적 조성물
[도면의 간단한 설명]
제1도는 치료 동물과 비교용 대조 동물에 있어서의 궤양 상태를 나타낸 래트의 위 사진이다. 위벽의 원형의 검은 점이 위궤양이다.
제2도는 대조 그룹에서 가시적 위궤양을 갖는 래트(%)와 GHL-Cu로 치료한 경우에 가시적 위궤양을 갖는 래트(%)를 비교하여 도시한 그래프이다.
[발명의 상세한 설명]
[기술분야]
본 발명은 일반적으로 궤양 예방, 보다 특별히는 온혈동물에 있어서 궤양 예방방법에서의 글리실-L-히스티딜-L-리신, 글리실-L-히스티딜-L-리신 ; 구리(Ⅱ) 및 이들의 유도체의 용도에 관한 것이다.
[배경기술]
위궤양의 진행과 치료는 수많은 항궤양제의 개발에도 불구하고 주요한 건강문제로 남아 있다. 전통적으로, 소화성 궤양은 과량의 위산을 중화시키거나 식이 요법 및 행위 또는 감정 변화를 통해 치료하였다. 잘 알려진 위산 중화제에는 중탄산나트륨, 수산화마그네슘, 탄산칼슘, 수산화알루미늄, 인산알루미늄, 삼규산마그네슘 및 삼염기성 인산칼슘이 포함된다. 특정 폴리아민 메틸렌 수지도 또한 시도된 바 있다. 다소 심한 부작용이 있지만, 위산의 유출을 억제하려는 시도도 또한 행하여졌다. 보다 최근에는, 시메티딘이라 명명된 화합물이 히스타민 부위를 차단함으로써 위산의 분비를 중단시키는데 유효함이 밝혀졌다. 그러나, 시메티딘은 산의 유출을 중단시키는데 비교적 효과가 있는 반면, 신장 기능 손상 및 정신 착란을 포함한 바람직하지 않는 특징이 있는 것으로 밝혀졌다.
디이소프로필살리실레이트-구리의 살리실레이트-구리와 같은 특정 저분자량 조성물이 위궤양 발생을 억제한다고 알려져 있지만, 이들 착물은 위속에서 쉽게 유리 구리와 살리실레이트로 분해되는 경향이 있어서 실제 사용하는데에는 한계가 있다. 또한, 이러한 소형 구리 착물은 수성 조건하에서 난용성이어서, 조직 자극성 가용화제와 함께 투여해야 한다. 기타 페니실라민-구리 착물 제제도 피부 발진 및 성격 변화(페니실라민 정신병)를 자주 일으킨다.
따라서, 궤양 형성을 예방하기 위한 개선된 조성물이 당해 분야에서 필요하게 되었다. 본 발명은 이러한 조성물과 더 나아가 다른 관련된 이점을 제공한다.
[발명의 설명]
간단히 설명하면, 본 발명은 (a) 온혈동물에 있어서 위궤양의 형성을 감소시키는 방법, (b) 온혈동물에 있어서 위산분비를 감소시키는 방법 및 (c) 온혈동물의 위장속의 세포보호성 점액 분비를 증가시키는 방법에 사용하기에 적합한 각종 약제학적 조성물에 대해 기술하고 있다.
언급한 조성물에는 글리실-L-히스티딜-L-리신(GHL), 글리실-L-히스티딜-L-리신 ; 구리(Ⅱ) (GHL-Cu) 및 GHL-Cu의 각종 유도체가 포함된다.
GHL-Cu의 유도체의 일반식은 다음과 같다 :
Figure kpo00001
: 구리(Ⅱ)
상기식에서, R은 탄소수 1 내지 18의 알킬 잔기, 탄소수 6 내지 12의 아릴 잔기, 탄소수 1 내지 12의 알콕시 잔기 및 탄소수 6 내지 12의 아릴옥시 잔기로 이루어진 그룹으로부터 선택되거나, L-프롤릴-L-발릴-L-페닐알라닐-L-발린 또는 L-발릴-L-페닐알라닐-L-발린이다.
위에 언급한 유도체 외에도, 다른 화학적 변형을 가하여 본 발명의 유도체의 생물학적 활성을 변화시킬 수 있다. 예를 들면, 글리신을 알라닌, 세린 및 발린 등의 다른 작은 다양한 아미노산으로 대체할 수 있다. 또한, 분자의 구리(Ⅱ) 결합 친화성은 글리신과 같은 N말단 아미노산을 가하여 글리실-L-히스티딜-L-리신을 글리실-L-글리실-L-히스티딜-L-리신으로 전환시켜 증가시킬 수 있다. 또한, 글리신을 위에 언급한 유도체에 가하여 상응하는 테트라펩타이드로 만들 수 있다. 히스티딜 잔기에 있어서 이미다졸 그룹의 구리(Ⅱ)에 대한 결합 친화성은 히스티딘을 3-메틸히스티딘으로 치환하거나, 추가 탄소원자를 쇄에 가하여 리실 측쇄를 연쇄 연장시켜 변형시킬 수 있다.
위에 언급한 방법은 일반적으로 목적 달성을 위해 위에 언급한 조성물중의 하나의 치료학적 유효량을 동물에 투여함을 특징으로 한다. 본 발명의 다른 양태는 다음의 상세한 설명과 도면에 의해 증명될 것이다.
[발명을 수행하기 위한 최선의 실시형태]
본 명세서에서 언급한 바와 같이, GHL, GHL-Cu 및 이들의 각종 유도체는 (a) 온혈동물에 있어서 위산 분비를 감소시키는 방법, (b) 온혈동물의 위속의 세포보호성 점액 분비를 증가시키는 방법 및 (c) 온혈동물에 있어서 위궤양 형성을 감소시키는 방법에 사용할 수 있다. 본 발명의 유도체는 본 명세서에 참고로 인용된 미합중국 특허원 제040,460호 및 미합중국 특허 제4,665,054호에 상세히 기재되어 있다. 본 발명의 유도체는 에스테르화하거나, 물 분자를 제거하거나 GHL의 카복실산 말단에 옥탄올, 메탄올, 벤질알콜과 같은 알콜 또는 NH3을 가하여 보다 친지성인 유도체를 만들 수 있다.
전체 화학 반응은 다음과 같다 :
Figure kpo00002
실제로, 반응은 다른 두 아미노산과 함께 리신을 GHL에 혼합하기 전에 아미노산 리신에 R그룹을 가함으로써 가장 용이하게 수행된다. GHL-R의 형성 및 분리 후, 구리(Ⅱ)를 분자에 킬레이트화시켜 생활성 착물을 형성한다.
친지성이 보다 큰 GHL-Cu유도체를 형성하는 전체 반응은 다음과 같다 :
1) 리신-OH+R-H
Figure kpo00003
리신-R+H2O
2) 리신-R+차단된 L-히스티딘
Figure kpo00004
차단된 L-히스티딘-L-리신-R
3) 차단된 L-히스티딘-L-리신-R+차단된-글리신
Figure kpo00005
차단된 글리실-L-히스티딘-L-리신-R
4) 차단된 글리실 -L-히스티딘-L-리신-R
Figure kpo00006
글리실-L-히스티딘-L-리신-R
5) 글리실-L-히스티딘-L-리신-R+구리(Ⅱ)
Figure kpo00007
글리실-L-히스티딘- L-리신-R : 구리(Ⅱ).
바람직한 양태에 있어서, GHL 또는 GHL의 유도체와 구리의 존재비는 1 : 1이다.
위에 언급한 방법 외에도, 본 명세서에 기술된 결과는 GHL, GHL-Cu 및 이의 유도체가 또한 문합술 후의 결장 치료, 소장 및 대장 허혈에 잇따라 발생하는 병변, 괴사성 소장 결장염 및 입, 목 및 식도의 상처 등의 기타 위장관 질환에도 치료 활성이 있음을 제시하고 있다.
본 발명에서는 일반적으로, 조성물을 캡슐 형태로 경구 투여하는 것이 바람직하다. 경구 투여용 조성물의 캡슐화(경질 젤라틴으로 피복) 방법은 당해 분야에서 공지되어 있다[참조 : Baker Richard, Controlled Release of Biologically Active agents, John Wiley and Sosn, 1986]. 용량은 환자의 중증도에 따라 영향을 받을 수 있지만, 일반적으로 체중 1kg당 약 10 내지 100mg의 용량으로 조성물을 투여하는 것이 바람직하다. 또한, 처음에는 GHL-Cu로 처리하고, 이어서 소량의 구리(Ⅱ)의 존재 또는 부재하에 유리 펩타이드(GHL)를 사용하여 처리하는 것이 바람직하다.
GHL-Cu 및 이의 유도체는 또한 항궤양 또는 궤양 치료 특성이 있다고 알려진 다른 요소들과 혼합하여 사용할 수도 있다. 이러한 경우, 단독 요소만을 사용한 것보다 더 우수한 임상 효능을 제공하는 상승 효과를 얻을 수 있다. 또한, 당해 조성물은 항궤양 및 궤양 치료 작용 범위를 자극하지만, 임상 상태는 상당히 자주 변화하므로, 당해 조성물과 기타 다른 요소들을 혼합하여 사용하는 것이 어느 정도 더 이롭다.
본 발명의 조성물과 함께 혼합할 수 있는 약물의 예에는 인도메타신, 시메티딘 및 다수의 히스타민 H2길항제가 포함된다. 본 발명의 조성물은 또한 항궤양 및 위산 분비 억제 특성이 있는 펩타이드 및 펩타이드 동족체와 혼합할 수도 있다. 이러한 인자들의 예로는 표피 성장인자, 섬유아세포 성장인자, 신경 성장인자, 전이 성장인자 α 및 β, 혈소판 유도된 성장인자 및 기타 유사인자가 있다. 다른 인자에는 소마토스타틴 및 이의 동족체(미합중국 특허 제4,611,054호 및 제4,360,516호), 칼시토닌 및 이의 동족체(미합중국 특허 제3,825,824호)와 표피 성장인자의 펩타이드 분획(미합중국 특허 제3,917,824호)이 포함되지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
하기 실시예를 요약해 보면, 실시예 1은 글리실-L-히스티딜-L-리신 벤질 에스테르 ; 구리(Ⅱ)의 합성을 설명한다. 실시예 2는 글리실-L-히스티딜-L-리신 n-옥틸 에스테르 : 구리(Ⅱ)의 합성을 설명한다. 실시예 3은 (A) 글리실-L-히스티딜-L-리신 n-스테아릴 에스테르 : 구리(Ⅱ)의 합성 및 (B) 또다른 방법에 의한 이의 합성을 설명한다. 두가지 방법중 어느 하나를 기본으로 하여, 당해 분야의 숙련자들은 n-스테아릴 알콜(탄소수 18)을 n-팔미틸 알콜(탄소수 16)로 치환하여 글리실-L-히스티딜-L-리신 n-팔미틸 에스테르 : 구리(Ⅱ)를 수득할 수 있다. 실시예 4는 글리실-L-히스티딜-L-리신-L-프롤릴-L-발릴-L-페닐알라닐-L-발린 : 구리(Ⅱ) 및 글리실-L-히스티딜-L-리실-L-발릴 -L-페닐알라닐-L-발린 : 구리(Ⅱ)의 합성을 설명한다. 실시예 5는 온혈동물에 있어서 (a) 위산 축적의 억제, (b) 세포보호성 점액 분비의 자극 및 (c) 위궤양 생성의 감소를 보여준다. 실시예 6은 GHL-Cu를 사용한 위궤양 형성의 억제를 보여준다. 실시예 7은 대표적인 GHL-Cu의 유도체를 사용한 위궤양 형성의 억제를 보여준다.
하기 실시예는 예시용으로 제공된 것이고 이로써 본 발명이 한정되는 것은 아니다.
실시예
GHL의 제조 : 동물에 사용하기 위한 GHL-Cu
GHL을 유리관 속에서 증류수에 용해시켜(50mg/ml) 정제하고, 이어서, 20,000xg으로 3℃에서 1시간 동안 원심 분리시킨다. 이렇게 하여 합성 공정중에 남아 있는 수난용성 물질을 제거한다. 상등액을 동결건조시키고, 3℃에서 0.5% 아세트산 용매속에서 세파덱스(Sephadex) C-10컬럼을 통과시킨다. 용매가 먼저 나온 다음 용출되는 주 피크(254nm에서 흡광도 측정)를 동결 건조시킨다. 정제한 GHL과 등몰량의 아세트산 제2구리 및 수산화나트륨을 혼합하여 GHL-Cu를 제조한 다음, 공지된 방법[참조 : Perkins et al., Inorg. Chim. Acta 67 : 93-99, 1984]에 따라 저온에서 에탄올을 첨가하여 침전시킨다.
화학물질의 공급처
하기 실시예에서 사용되는 화학 물질과 펩타이드 중간체는 다음 공급처로부터 구입할 수 있다 : 시그마 케미칼 캄파니(Sigma Chemical Co., St. Louis, Mo.) ; 페닌슐라 래보러토리즈(Peninsula Laboratories, San Carlos, Calif.) ; 알드리지 케미칼 캄파니(Aldridge Chemical Co., Milwaukee, Wis.) : 베가 바이오 케미칼즈(Vega Biochemicals, Tucson, Ariz) : 피어스 케미칼 캄파니(Pierce Chemical Co., Rockford, Ⅲ.) ; 리서치 바이오케미칼즈(Research Biochemicals, Cleveland, Ohio) ; 반 워터즈 앤드 로저스(Van Waters and Rogers, South San Francisco, Calif.) ; 바켐, 인코포레이티드(Bachem., Inc., Torrance, Calif.)
실시예 1
글리실-L-히스티딜-L-리신 벤질 에스테르 : 구리(Ⅱ)의 합성
Ne-벤질옥시카보닐-L-리신 벤질 에스테르를 헥산-에틸 아세테이트(1 : 1)에 용해시키고, 커플링제로서 디사이클로헥실카보디이미드를 사용하여 Na-t-부틸옥시카보닐-Nim-벤질옥시카보닐-L-히스티딘과 커플링시킨다. 중탄산나트륨(l0%)을 가하고, 생성물을 유기층으로 추출한다. 생성물 Na-t-부틸옥시카보닐-Nim-벤질옥시카보닐-L-히스티딜-Ne-벤질옥시카보닐-L-리신 벤질 에스테르를 용액으로부터 결정화시킨다. 차단된 디펩타이드의 N말단 그룹을 디클로로메탄 중의 50% 트리플루오로아세트산 속에서 30분 동안 교반하면서 제거하고, 진공 증발시킨다. 생성물 Nim-벤질옥시카보닐-L-히스티딜-Ne-벤질옥시카보닐-L-리신 벤질 에스테르를 커플링제로서 디사이클로헥실카보디이미드를 사용하여 벤질옥시카보닐글리신과 커플링시킨다. 차단 그룹을 빙초산속에서 10% 탄소상 팔라듐을 사용하여 촉매적 수소화반응시켜 제거한다. 동결건조 후, 생성물 글리실-L-히스티딜-L-리신 벤질 에스테르를 물에 용해시키고 0.1M 수산화암모늄으로 용출(용출액은 즉시 아세트산으로 중화시킨다)시키는 도웩스(Dowex) 50 X-4 양이온 교환 수지상의 이온 교환 크로마토그래피로 정제한다. 추가로, 중성 pH에서 음이온 교환 컬럼 바이오렉스(BioRex) 63을 통과시켜 유리 카복실산 그룹을 갖는 분해된 생성물을 제거한다.
글리실-L-히스티딜-L-리신 벤질 에스테르를 등몰량의 구리 아세테이트가 가해진 물에 용해시킨다. 수산화나트륨을 사용하여 pH를 중성화시킨다. 용액을 20,000xg으로 3℃에서 1시간 동안 원심분리시켜 수용성이 불량한 물질을 제거한다. 상등액을 동결건조시켜 글리실-L-히스티딜-L-리신 벤질 에스테르 : 구리(Ⅱ)를 수득한다.
실시예 2
글리실-L-히스티딜-L-리신 n-옥틸 에스테르 : 구리 (Ⅱ)의 합성
Ne-벤질옥시카보닐-L-리신, n-옥탄올, 벤젠 및 p-톨루엔설폰산 일수화물의 혼합물을 딘-스타크(Dean-Stark) 트랩을 사용하여 밤새 환류시켜 물을 제거한다. 냉각시킨 후, 무수 에틸 에테르를 가한다. 용액을 0℃에서 밤새 침전시킨다. 침전된 고체의 일부를 탄산칼륨 용액 50ml 및 디클로로메탄 50ml에 가한다. 추출한 후, 층을 분리하고 유기상을 물과 염수로 세척한 다음, 무수 황산마그네슘으로 건조시킨다. 여과, 증발 및 섬광 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 n-옥틸 Ne-벤질옥시카보닐-L-리시네이트를 수득한다. 생성물을 테트라하이드로푸란에 용해시키고, Na-t-부틸옥시카보닐- L-Nim-벤질옥시카보닐-L-히스티딘, 이소부틸 클로로포르메이트 및 N-메틸모르폴린과 혼합한다. 증발시킨 후, 물과 에틸 아세테이트를 가한다. 생성물을 유기상 속으로 추출하고, 무수 황산마그네슘으로 건조시킨다. 여과, 증발 및 섬광 크로마토그래피로 정제하여 n-옥틸 Na-t-부틸옥시카보닐- Nim-벤질옥시카보닐-L-히스티딜-Ne-벤질옥시카보닐-L-리시네이트를 수득한다.
생성물을 디클로로메탄 속의 50% 트리플루오로아세트산 속에서 30분 동안 용해시킨 다음, 증발시켜 n-옥틸 Nim-벤질옥시카보닐-L-히스티딜-Ne-벤질옥시카보닐-L-리시네이트를 형성한다. 이를 테트라하이드로푸란에 용해시키고, 이소부틸클로로포르메이트, N-메틸모르폴린 및 벤질옥시카보닐글리신을 가하여 n-옥틸 벤질옥시카보닐글리실-Nim-벤질옥시카보닐-L-히스티딜-Ne-벤질옥시카보닐-L-리시네이트를 형성시킨다. 이를 빙초산에 용해시키고, 밤새 수소화시킨다.
생성된 글리실-L-히스티딜-L-리신의 n-옥틸 에스테르를, 등몰량의 구리 디아세테이트를 가하여, 구리 착물로 전환시킨다. 수산화나트륨을 사용하여 pH를 중성화시킨다. 용액을 20,000xg으로 3℃으로 1시간 동안 원심분리시켜 수난용성 물질을 제거한다. 상등액을 동결 건조시켜 글리실-L-히스티딜-L-리신 n-옥틸 에스테르 : 구리(Ⅱ)를 수득한다.
실시예 3
A. 글리실-L-히스티딜-L-리신 n-스테아릴 에스테르 : 구리(Ⅱ)의 합성
Ne-벤질옥시카보닐-L-리신, n-스테아릴 알콜, 벤젠 및 p-톨루엔설폰산 일수화물의 혼합물을 딘-스타크 트랩을 사용하여 밤새 환류시켜 물을 제거한다. 냉각시킨 후, 무수 프로필 에테르를 가하여 총 용적을 6배로 증가시킨다. 생성물을 0℃에서 밤새 침전시킨 다음, 여과한다. 여액의 일부를 탄산칼륨 50m1 및 디클로로메탄 50m1에 가한다. 추출한 후, 층을 분리하고, 유기상을 물과 염수로 세척한 다음, 무수 황산마그네슘으로 건조시킨다. 여과, 증발 및 섬광 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 n-스테아릴 Ne-벤질옥시카보닐-L-리시네이트를 수득한다. 생성물을 테트라하이드로푸란에 용해시키고, Na-t-부틸옥시카보닐-Nim-벤질옥시카보닐-L-히스티딘 및 이소부틸 클로로포르메이트 및 N-메틸모르폴린과 혼합한다. 증발시킨 후, 물과 프로필 아세테이트를 가하고, 생성물을 유기상 속으로 추출한 다음, 무수 황산마그네슘으로 건조시킨다. 여과, 증발 및 섬광 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 n-스테아릴 Na-t-부틸옥시카보닐-Nim-벤질옥시카보닐-L-히스티딜-Ne-벤질옥시카보닐-L-리시네이트를 수득한다.
생성물을 디클로로메탄 중의 50% 트리플루오로아세트산 속에서 30분 동안 용해시키고 증발시킨 다음, n-스테아릴 Nim-벤질옥시카보닐-L-히스티딜-Ne-벤질옥시카보닐-L-리시네이트를 형성시키고, 이를 테트라하이드로푸란, 이소부틸클로로포르메이트, N-메틸모르폴린 및 벤질옥시카보닐글리신에 용해시켜 n-스테아릴 벤질옥시카보닐글리실-Nim-벤질옥시카보닐-L-히스티딜-Ne-벤질옥시카보닐-L-리시네이트를 형성시킨다. 생성물을 디클로로메탄 중의 50% 트리플루오로아세트산 속에서 30분 동안 용해시키고 증발시켜 n-스테아릴 에스테르 글리실-L-히스티딜-L-리신을 수득한다.
생성된 분자, 글리실-L-히스티딜-L-리신-n-스테아릴 에스테르를, 등몰량의 구리 디아세테이트를 가함으로써 구리착물로 전환시킨다. 수산화나트륨을 사용하여 pH를 중성화시키고 동물 연구용으로 유용한 생성물을 수득한다.
n-스테아릴 알콜을 n-팔미틸 알콜로 치환하여 글리실-L-히스티딜-L-리신 n-팔미틸 에스테르를 유사하게 합성할 수 있다.
B. 글리실-L-히스티딜-L-리신-n-스테아릴 에스테르 : 구리(Ⅱ)의 다른 합성방법
N(ε)-벤질옥시카보닐-L-리신, n-스테아릴 알콜, p-톨루엔설폰산 일수화물 및 벤젠을 딘-스타크 트랩을 사용하여 함께 환류시켜 함유된 물을 공비 제거한다. 실온으로 냉각시킨 후, 무수 에틸 에테르를 가한다음, n-스테아릴 N(ε)-벤질옥시카보닐-L-리시네이트 p-톨루엔설폰산염을 여과하여 모으고, 2M 중탄산칼륨 수용액으로 처리한 다음, 디클로로메탄으로 추출한다. 증발시켜 유리 아민을 수득하고, 이를 무수 테트라하이드로푸란(THF)에 용해시킨 다음, 무수 THF속의 N(α)-t-부틸옥시카보닐-N(im) -벤질옥시카보닐-L-히스티딘, N-메틸모르폴린 및 이소부틸 클로로포르메이트의 용액에 -15℃에서 교반하면서 가한다. 생성된 충분히 보호된 디렙타이드 에스테르를 실온에서 트리플루오로아세트산/디클로로메탄(1/1)으로 처리하고, 중탄산나트륨 포화 수용액으로 중화시킨 다음, 에틸 아세테이트로 추출한다. 증발시켜 부분적으로 탈차단된 디펩타이드를 수득하고, 이를 무수 THF에 재용해시킨 다음, -15℃에서 무수 THF속의 벤질옥시카보닐글리신, N-메틸모르폴린 및 이소부틸 클로로포르메이트의 교반 용액에 가한다. 형성된, 충분히 보호된 트리펩타이드 에스테르를 Pd-C촉매 존재하에 실온에서 빙초산 속에서 수소 개스로 처리하여 전체적으로 탈차단시킨다. 여과, 증발 및 미세결정성 셀룰로즈 컬럼상에서 정제한 다음 동결 건조시켜, 이의 트리아세테이트 염으로서 목적하는 트리펩타이드 에스테르를 수득한다.
생성된 분자 글리실-L-히스티딜-L-리신 n-스테아릴 에스테르를, 등몰량의 구리 디아세테이트를 가하여 구리 착물로 전환시킨다. 수산화나트륨을 사용하여 pH를 중성화시켜 동물 연구용으로 유용한 생성물을 수득한다.
n-스테아릴 알콜을 n-팔미틸 알콜로 치환하여, 글리실-L-히스티딜-L-리신 n-팔미틸 에스테르를 유사하게 합성할 수 있다.
실시예 4
글리실-L-히스티딜-L-리실-L-프롤릴-L-발릴-L-페닐알라닐-L-발린 : 구리(Ⅱ) 및 글리실-L-히스티딜-L-리실-L-발릴-L-페닐알라닐-L- 발린 : 구리(Ⅱ)의 합성
이들 펩타이드는 펩타이드 분야에서 통상적인 표준 고체상 방법에 의해 합성된다[참조 : J. Stewart and J. Young, Solid Phase Peptide Synthesis, Pierce Chemical Co., 1984]. 간략하게 설명하면, Boc-Val-O-수지는 반응제로서 디사이클로헥실카보디이미드를 사용하여 다른 차단된 아미노산과 함께 연속적으로 커플링될 수 있다. 보호된 아미노산, 고체상 합성용 수지 및 커플링제는 페닌슐라 래보러토리즈에서 구입한다. 차단된 아미노산을 차례로 가하여 목적하는 펩타이드를 수득한다. 최종 펩타이드는 불화수소로 탈차단시킨다. 최종 펩타이드를 0.5% 아세트산에 용해시키고, 세파덱스 G-15컬럼[파르마시아(Pharmacia)]을 통과시켜 정제한다. 등몰량의 아세트산 제2구리를 가한 다음, 동결건조시켜 활성 분자를 생산한다.
실시예 5
쉐이(Shay) 방법으로 래트에 위궤양을 유발시킨다. 간략하게 설명하면, 래트의 위장과 소장 사이의 통로를 끈으로 묶고 위산을 증대시켜 궤양을 초래한다. 치료를 위해, 0.25ml 생리 식염수 속의 GHL 또는 GHL-Cu 또는 이의 유도체 10mg을 삽관을 통해 위장속으로 투여한다. 대조용 래트는 생리 식염수만 투여한다. 24시간 후, 위장의 사진을 찍고 위의 산도를 측정한다.
실험 결과를 하기 표 1에 나타내었고, 이 표로부터, 래트에 있어서 위산 축적이 억제되고 세포보호성 점액분비가 촉진됨을 알 수 있다. 점액 생산은 0 내지 ++++로 가시적으로 표시하였다(여기서, 0은 거의 점액이 관찰되지 않았음을 나타내고, ++++는 점액분비가 매우 많은 것은 나타낸다).
Figure kpo00008
또한, 제1도에 나타낸 바와 같이, GHL-Cu로 치료한 래트는 위궤양 형성이 현저하게 감소되었다.
실시예 6
GHL-Cu에 의한 위궤양 형성 억제
위궤양을 실시예 5에서 기술한 바와 같이 래트의 그룹에 유발시킨다. Cu 1몰에 대한 GHL 2몰의 몰비(2 : 1)로 증가량의 GHL-Cu와 구리가 없는 GHL을 동물에 투여한다. 24시간 후, 위장을 제거하고, pH를 측정한 다음, 가시적 궤양이 있는 위장(%)을 측정한다.
실험 결과를 하기 표 2에 나타내었고, 이 표로부터, 위산 분비 억제(대조군과 비교할 경우 위액의 pH가 보다 높은 것으로 보아 알 수 있다) 및 제 2도에 나타낸 바와 같은 가시적 궤양을 가진 위장(%)을 알 수 있다.
Figure kpo00009
실시예 7
GHL-Cu의 유도체에 의한 위궤양 형성 억제
위궤양을 실시예 5에서 기술한 바와 같이 래트의 그룹에 유발시킨다. 몇가지 GHL-Cu의 유도체의 증가량을 동물에 투여한다. 본 실시예는 글리실-L-히스티딜-L-리신 옥틸 에스테르 및 글리실-L-(메틸)히스티딜-L-리신의 두가지 유도체에 의해 수득된 결과를 설명하고 있다. 이들 두 화합물은 구리 1몰에 대한 유도체 1몰의 몰비(1 : 1)로 시험한다. 24시간 후, 위장을 제거하고, pH를 측정한 다음, 가시적 궤양을 가진 위장(%)을 측정한다.
실험 결과는 하기 표 3에 나타내었고. 이 표로부터 위산 분비 억제(대조군과 비교할 경우, 위액의 pH의 증가로 알 수 있다)와 가시적 궤양이 있는 위장(%)을 알 수 있다.
Figure kpo00010
상기에서 살펴본 바와 같이, 본 발명의 특이적 양태를 본 발명을 설명하기 위해 기술하였지만, 본 발명의 목적과 범주로부터 벗어나지 않고 다양한 변형을 가할 수 있다. 따라서, 본 발명은 특허청구 범위에 의해서 제한되는 것은 아니다.

Claims (10)

  1. 온혈동물의 위산 분비를 감소시키는데 사용하기 위한, 글리실-L-히스티딜-L-리신을 포함하는 조성물.
  2. 온혈동물의 위산 분비를 감소시키는데 사용하기 위한, 글리실-L-히스티딜-L-리신 : 구리(Ⅱ)를 포함하는 조성물.
  3. 온혈동물의 위산 분비를 감소시키는데 사용하기 위한, 하기 일반식의 GHL-Cu유도체를 포함하는 조성물.
    Figure kpo00011
    : 구리(Ⅱ)
    상기식에서, R은 탄소수 1 내지 18의 알킬 잔기, 탄소수 6 내지 12의 아릴 잔기, 탄소수 1 내지 18의 알콕시 잔기 및 탄소수 6 내지 12의 아릴옥시 관기로 이루어진 그룹으로부터 선택되거나, L-프롤릴-L-발릴-L-페닐알라닐-L-발린 또는 L-발릴-L-페닐알라닐-L-발린이다.
  4. 온혈동물의 위 속의 세포보호성 점액 분비를 증가시키는데 사용하기 위한, 글리실-L-히스티딜-L-리신을 포함하는 조성물.
  5. 온혈동물의 위 속의 세포보호성 점액 분비를 증가시키는데 사용하기 위한, 글리실-L-히스티딜-L-리신 : 구리(Ⅱ)를 포함하는 조성물.
  6. 온혈동물의 위 속의 세포보호성 점액 분비를 증가시키는데 사용하기 위한, 하기 일반식의 GHL-Cu유도체를 포함하는 조성물.
    Figure kpo00012
    : 구리(Ⅱ)
    상기식에서, R은 탄소수 1 내지 18의 알킬 잔기, 탄소수 6 내지 12의 아릴 잔기, 탄소수 1 내지 18의 알콕시 잔기 및 탄소수 6 내지 12의 아릴옥시 잔기로 이루어진 그룹으로부터 선택되거나, L-프롤릴-L-발릴-L-페닐알라닐-L-발린 또는 L-발릴-L-페닐알라닐-L-발린이다.
  7. 온혈동물의 위궤양 생성을 감소시키는데 사용하기 위한, 글리실-L-히스티딜-L-리신을 포함하는 조성물.
  8. 온혈동물의 위궤양 생성을 감소시키는데 사용하기 위한, 글리실-L-히스티딜-L-리신 : 구리(Ⅱ)를 포함하는 조성물.
  9. 온혈동물의 위궤양 생성을 감소시키는데 사용하기 위한, 하기 일반식의 GHL-Cu유도체를 포함하는 조성물.
    Figure kpo00013
    : 구리(Ⅱ)
    상기식에서, R은 탄소수 1 내지 18의 알킬 잔기, 탄소수 6 내지 12의 아릴 잔기, 탄소수 1 내지 18의 알콕시 잔기 및 탄소수 6 내지 12의 아릴옥시 잔기로 이루어진 그룹으로부터 선택되거나, L-프롤릴-L-발릴-L-페닐알라닐-L-발린 또는 L-발릴-L-페닐알라닐-L-발린이다.
  10. 온혈동물의 위궤양 생성을 감소시키는데 사용하기 위한, 글리실-L-(메틸)히스티딜-L-리신 Cu를 포함하는 조성물.
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