JP2003267994A - 新規なペプチドおよびアンジオテンシン変換酵素阻害剤 - Google Patents
新規なペプチドおよびアンジオテンシン変換酵素阻害剤Info
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Abstract
(57)【要約】
【目的】ワカメの蛋白質分解酵素分解液から、アンジオ
テンシン変換酵素阻害作用を有する新規な１３種類のワ
カメペプチドを提供する。 【構成】ワカメをペプシン等で酵素分解し、新規なアン
ジオテンシン変換酵素阻害作用を有する１３種類のワカ
メペプチドは（１）Ｖａｌ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−
Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、（２）Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｌ
ａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、（３）Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−
Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ、（４）Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｐｈ
ｅ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ、（５）Ａｌａ−Ｉｌｅ−
Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、（６）Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｖａ
ｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、（７）Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−
Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、（８）Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒ
ｏ−Ｐｒｏ、（９）Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−
Ｇｌｙ、（１０）Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｇ
ｌｙ、（１１）Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ａｌ
ａ、（１２）Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ａｌａ及び（１
３）Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏであり、
生体内での血圧降下作用を有し、毒性も極めて低い。
テンシン変換酵素阻害作用を有する新規な１３種類のワ
カメペプチドを提供する。 【構成】ワカメをペプシン等で酵素分解し、新規なアン
ジオテンシン変換酵素阻害作用を有する１３種類のワカ
メペプチドは（１）Ｖａｌ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−
Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、（２）Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｌ
ａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、（３）Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−
Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ、（４）Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｐｈ
ｅ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ、（５）Ａｌａ−Ｉｌｅ−
Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、（６）Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｖａ
ｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、（７）Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−
Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、（８）Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒ
ｏ−Ｐｒｏ、（９）Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−
Ｇｌｙ、（１０）Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｇ
ｌｙ、（１１）Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ａｌ
ａ、（１２）Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ａｌａ及び（１
３）Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏであり、
生体内での血圧降下作用を有し、毒性も極めて低い。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、医薬品として有用性を
有する下記アミノ酸の配列のペプチド構造を有するペプ
チド及びそれらペプチドを有効成分とするアンジオテン
シン変換酵素阻害剤に関する。 （１） Ｖａｌ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ−Ｐ
ｒｏ−Ｐｒｏ （２） Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐ
ｒｏ （３） Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ （４） Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐ
ｒｏ （５） Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ （６） Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ （７） Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ （８） Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ （９） Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ （１０）Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ （１１）Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ａｌａ （１２）Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ａｌａ （１３）Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ （式中、アミノ酸残基を表す各記号は、アミノ酸化学に
おいて慣用の表示法によるものである。）
有する下記アミノ酸の配列のペプチド構造を有するペプ
チド及びそれらペプチドを有効成分とするアンジオテン
シン変換酵素阻害剤に関する。 （１） Ｖａｌ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ−Ｐ
ｒｏ−Ｐｒｏ （２） Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐ
ｒｏ （３） Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ （４） Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐ
ｒｏ （５） Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ （６） Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ （７） Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ （８） Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ （９） Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ （１０）Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ （１１）Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ａｌａ （１２）Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ａｌａ （１３）Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ （式中、アミノ酸残基を表す各記号は、アミノ酸化学に
おいて慣用の表示法によるものである。）
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】レニン
−アンジオテンシン系が生体の水・電解質及び血液の調
節に重要な役割を果たしていることはよく知られてい
る。このレニン−アンジオテンシン系にはアンジオテン
シン変換酵素（以下ＡＣＥと略記する）が存在し、アン
ジオテンシンＩはＡＣＥによってアンジオテンシンＩＩ
に変換される。アンジオテンシンＩＩは強力な昇圧物質
で、血管、副腎皮質のみならず中枢神経系ならびに末梢
神経系に働いて血圧上昇を促す。又、ＡＣＥは生体内降
圧物質であるブラジキニンを分解し、不活性化する作用
を有し、昇圧系に関与している。従って、ＡＣＥの活性
を阻害することによって血圧を降下させることが可能で
あり、又、そのことは臨床的に高血圧の予防、治療に有
効であると考えられている。この目的のためプロリン誘
導体であるカプトリルが合成され、その降圧作用が確認
されて以来、カプトリルの構造研究に基づく種々のＡＣ
Ｅ阻害物質の合成研究が盛んに行われ、最近ではマレイ
ン酸エナラブリルやアラセブリル等の物質が、次々と臨
床の場に供されている。現在、ＡＣＥ阻害剤は本態性高
血圧症、病候性高血圧症を問わず、又、軽症、重症を問
わず、幅広く用いられ、高血圧症の第一次選択の治療薬
中に加えられ、多く優れた点を有することが見出されて
いる。一方、ＡＣＥ阻害物質の作用機序としては、アン
ジオテンシンＩＩの産生抑制によるアルドステロンやバ
ソプレッシンの分泌抑制、又、腎動脈収縮の解除による
ナトリウムや水の排泄促進が考えられている。更に、Ａ
ＣＥ阻害物質については、それがカリクレン−キニン系
の不活性化を抑制し、プロスタグランジン系を賦活させ
ることにより末梢血管拡張やナトリウム及び水の排泄を
更に促進させると考えられており、心不全の悪循環を断
つ上で合目的な治療薬として期待されている。ところ
で、ＡＣＥ阻害物質としては、上記の合成品の他に天然
物又は天然物由来の物質として蛇毒由来のブラジキニン
増強因子（Ｃ末端がＰｒｏ）［Ｓ．Ｈ．Ｆｅｒｒｅｉａ
ｅｔ ａｌ：Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，９，３５８
３（１９７０）］、ゼラチンのコラゲナーゼ消化物由来
の６種類のペプチド（いずれもＣ末端がＡｌａ−Ｈｙ
ｐ）［Ｇ．Ｏｓｈｉｍａ ｅｔａｌ： Ｂｉｏｃｈｉ
ｍ．Ｂｉｏｐｈｓ．Ａｃｔａ，５６６，１２８（１９７
９）］、牛カゼインのトリプシン消化物由来のペプチド
（Ｃ末端がＧｌｙ−Ｌｙｓ）［Ｓ．Ｍａｒｕｙａｍａ
ｅｔ ａｌ．： Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，
４６，１３９３（１９８３）］等に始まり本発明者等の
イワシ筋肉由来の５種のヘクサペウチド（いずれもＣ末
端から２番目又は３番目がＰｒｏ、Ｎ末端がＬｅｕ）
［特許第２０４６４８３号］、海苔由来のテトラペプチ
ド（Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｌａ）［特許第２６７
８１８０号］、朝鮮人参由来のペンタペプチド（Ｉｌｅ
−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｙ）［特許第２９２０
８２９号］、クロレラ由来のペンタペプチド（Ｖａｌ−
Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ａｌａ）及び３種のワカメ由
来のテトラペプチド（Ｔｙｒ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｌｅ
ｕ，Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ，Ａｌａ−Ｉｌｅ
−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ）［特許第３１０８９２０号］等が挙
げられ、いずれもＡＣＥ阻害剤となり得ることが開示さ
れているが、いずれも規則性を持ったアミノ酸配列を有
するペプチドの、ＡＣＥ阻害作用（試験管内薬理効果）
並びに経口投与による降圧効果（生体内薬理効果）は不
明であり、発見されて以来未だ医薬品としての開発が進
んでいるとの報告はない。
−アンジオテンシン系が生体の水・電解質及び血液の調
節に重要な役割を果たしていることはよく知られてい
る。このレニン−アンジオテンシン系にはアンジオテン
シン変換酵素（以下ＡＣＥと略記する）が存在し、アン
ジオテンシンＩはＡＣＥによってアンジオテンシンＩＩ
に変換される。アンジオテンシンＩＩは強力な昇圧物質
で、血管、副腎皮質のみならず中枢神経系ならびに末梢
神経系に働いて血圧上昇を促す。又、ＡＣＥは生体内降
圧物質であるブラジキニンを分解し、不活性化する作用
を有し、昇圧系に関与している。従って、ＡＣＥの活性
を阻害することによって血圧を降下させることが可能で
あり、又、そのことは臨床的に高血圧の予防、治療に有
効であると考えられている。この目的のためプロリン誘
導体であるカプトリルが合成され、その降圧作用が確認
されて以来、カプトリルの構造研究に基づく種々のＡＣ
Ｅ阻害物質の合成研究が盛んに行われ、最近ではマレイ
ン酸エナラブリルやアラセブリル等の物質が、次々と臨
床の場に供されている。現在、ＡＣＥ阻害剤は本態性高
血圧症、病候性高血圧症を問わず、又、軽症、重症を問
わず、幅広く用いられ、高血圧症の第一次選択の治療薬
中に加えられ、多く優れた点を有することが見出されて
いる。一方、ＡＣＥ阻害物質の作用機序としては、アン
ジオテンシンＩＩの産生抑制によるアルドステロンやバ
ソプレッシンの分泌抑制、又、腎動脈収縮の解除による
ナトリウムや水の排泄促進が考えられている。更に、Ａ
ＣＥ阻害物質については、それがカリクレン−キニン系
の不活性化を抑制し、プロスタグランジン系を賦活させ
ることにより末梢血管拡張やナトリウム及び水の排泄を
更に促進させると考えられており、心不全の悪循環を断
つ上で合目的な治療薬として期待されている。ところ
で、ＡＣＥ阻害物質としては、上記の合成品の他に天然
物又は天然物由来の物質として蛇毒由来のブラジキニン
増強因子（Ｃ末端がＰｒｏ）［Ｓ．Ｈ．Ｆｅｒｒｅｉａ
ｅｔ ａｌ：Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，９，３５８
３（１９７０）］、ゼラチンのコラゲナーゼ消化物由来
の６種類のペプチド（いずれもＣ末端がＡｌａ−Ｈｙ
ｐ）［Ｇ．Ｏｓｈｉｍａ ｅｔａｌ： Ｂｉｏｃｈｉ
ｍ．Ｂｉｏｐｈｓ．Ａｃｔａ，５６６，１２８（１９７
９）］、牛カゼインのトリプシン消化物由来のペプチド
（Ｃ末端がＧｌｙ−Ｌｙｓ）［Ｓ．Ｍａｒｕｙａｍａ
ｅｔ ａｌ．： Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，
４６，１３９３（１９８３）］等に始まり本発明者等の
イワシ筋肉由来の５種のヘクサペウチド（いずれもＣ末
端から２番目又は３番目がＰｒｏ、Ｎ末端がＬｅｕ）
［特許第２０４６４８３号］、海苔由来のテトラペプチ
ド（Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｌａ）［特許第２６７
８１８０号］、朝鮮人参由来のペンタペプチド（Ｉｌｅ
−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｙ）［特許第２９２０
８２９号］、クロレラ由来のペンタペプチド（Ｖａｌ−
Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ａｌａ）及び３種のワカメ由
来のテトラペプチド（Ｔｙｒ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｌｅ
ｕ，Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ，Ａｌａ−Ｉｌｅ
−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ）［特許第３１０８９２０号］等が挙
げられ、いずれもＡＣＥ阻害剤となり得ることが開示さ
れているが、いずれも規則性を持ったアミノ酸配列を有
するペプチドの、ＡＣＥ阻害作用（試験管内薬理効果）
並びに経口投与による降圧効果（生体内薬理効果）は不
明であり、発見されて以来未だ医薬品としての開発が進
んでいるとの報告はない。
【０００３】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、褐藻コン
ブ目（Ｌａｍｉｎａｒｉａｌｅｓ）の海藻種に属するワ
カメの蛋白質分解酵素の分解液から薬理作用を有する物
質を検索し、新規な１３種類のワカメペプチドが強いア
ンジオテンシン変換酵素阻害作用を有することを見出し
た。そして、これら１３種類のワカメペプチドを医薬と
して実用化するための研究を鋭意行った。その結果、こ
れら１３種類のワカメペプチドが血圧降下作用を有し、
天然物由来のアンジオテンシン変換酵素阻害剤としての
有用性を見出した。本発明は係る知見に基づくものであ
る。本発明に係る新規なワカメペプチドは、次式
（１）、（２）、（３）、（４）、（５）、（６）、
（７）、（８）、（９）、（１０）、（１１）、（１
２）及び（１３） （１） Ｖａｌ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ−Ｐ
ｒｏ−Ｐｒｏ （２） Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐ
ｒｏ （３） Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ （４） Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐ
ｒｏ （５） Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ （６） Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ （７） Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ （８） Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ （９） Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ （１０）Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ （１１）Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ａｌａ （１２）Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ａｌａ （１３）Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ （式中、アミノ酸残基を表す各記号は、アミノ酸化学に
おいて慣用の表示法によるものである。）
ブ目（Ｌａｍｉｎａｒｉａｌｅｓ）の海藻種に属するワ
カメの蛋白質分解酵素の分解液から薬理作用を有する物
質を検索し、新規な１３種類のワカメペプチドが強いア
ンジオテンシン変換酵素阻害作用を有することを見出し
た。そして、これら１３種類のワカメペプチドを医薬と
して実用化するための研究を鋭意行った。その結果、こ
れら１３種類のワカメペプチドが血圧降下作用を有し、
天然物由来のアンジオテンシン変換酵素阻害剤としての
有用性を見出した。本発明は係る知見に基づくものであ
る。本発明に係る新規なワカメペプチドは、次式
（１）、（２）、（３）、（４）、（５）、（６）、
（７）、（８）、（９）、（１０）、（１１）、（１
２）及び（１３） （１） Ｖａｌ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ−Ｐ
ｒｏ−Ｐｒｏ （２） Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐ
ｒｏ （３） Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ （４） Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐ
ｒｏ （５） Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ （６） Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ （７） Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ （８） Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ （９） Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ （１０）Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ （１１）Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ａｌａ （１２）Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ａｌａ （１３）Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ （式中、アミノ酸残基を表す各記号は、アミノ酸化学に
おいて慣用の表示法によるものである。）
【０００４】前記の１３種類のワカメペプチドは、化学
的に合成する方法またはワカメの蛋白質分解酵素の分解
液から分離精製する方法を挙げることができる。本発明
に係る新規な１３種類のワカメペプチドを化学的に合成
する場合には、液相法または固相法等の通常のペプチド
合成方法によって行うことができるが、好ましくは、固
相法によってポリマー性の固相支持体へ前記ペプチドの
Ｃ末端（カルボキシル末端側）からそのアミノ酸残基に
対応したＬ体のアミノ酸を順次ペプチド結合によって結
合して行くのが良い。そして、そのようにして得られた
合成ペプチドは、トリフルオロメタンスルホン酸、フッ
化水素等を用いてポロマー性の固相支持体から切断した
後、アミノ酸側鎖の保護基を除去し、逆相系のカラムを
用いた高速液体クロマトグラフィー（以下、ＨＰＬＣと
略記する）などを用いた通常の方法で精製することがで
きる。
的に合成する方法またはワカメの蛋白質分解酵素の分解
液から分離精製する方法を挙げることができる。本発明
に係る新規な１３種類のワカメペプチドを化学的に合成
する場合には、液相法または固相法等の通常のペプチド
合成方法によって行うことができるが、好ましくは、固
相法によってポリマー性の固相支持体へ前記ペプチドの
Ｃ末端（カルボキシル末端側）からそのアミノ酸残基に
対応したＬ体のアミノ酸を順次ペプチド結合によって結
合して行くのが良い。そして、そのようにして得られた
合成ペプチドは、トリフルオロメタンスルホン酸、フッ
化水素等を用いてポロマー性の固相支持体から切断した
後、アミノ酸側鎖の保護基を除去し、逆相系のカラムを
用いた高速液体クロマトグラフィー（以下、ＨＰＬＣと
略記する）などを用いた通常の方法で精製することがで
きる。
【０００５】上記したように、本発明に係る新規な１３
種類のワカメペプチドは、ワカメの蛋白質分解酵素の分
解液から分離精製することができるが、その場合には、
例えば以下のようにして行うことができる。上記の新規
なワカメペプチドを含有しているワカメのタンパク質部
分を用いて加水分解する。加水分解は常法に従って行
う。例えば、ペプシン等のタンパク質分解酵素で加水分
解する場合は、ワカメを必要とあれば更に加水分解した
後、酵素の至適温度まで加温しｐＨを至適値に調整し酵
素を加えてインキュベートする。次いで必要に応じ中和
した後、酵素を失活させて加水分解液を得る。その加水
分解物を濾紙及び／又はセライト等を用いて濾過するこ
とによって不溶性成分を除去し、その得られた濾液をセ
ロファンなどの半透膜を用いて適当な溶媒（例えば、
水、トリス−塩酸緩衝液、リン酸緩衝液の中性の緩衝液
等）中で十分に透析し、その濾液中の成分で半透膜を通
過した成分を含む溶液を強酸性陽イオン交換樹脂（例え
ば、ダウケミカル社製のＤｏｗｅｘ ５０Ｗ等）にか
け、その吸着溶出分画からアンジオテンシン変換酵素
（以下、ＡＣＥと略記する）阻害活性を有する成分を含
有する分画を得、得られたＡＣＥ阻害活性分画をゲル濾
過（例えば、ファルマシア社製のＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ
−２５等）によって分画し、得られたＡＣＥ阻害活性分
画を陽イオン交換ゲル濾過（例えば、ファルマシア社製
のＳＰ−ＳｅｐｈａｄｅｘＣ−２５等）によって分画
し、その得られたＡＣＥ阻害活性画分を更に逆相ＨＰＬ
Ｃによって分画する。
種類のワカメペプチドは、ワカメの蛋白質分解酵素の分
解液から分離精製することができるが、その場合には、
例えば以下のようにして行うことができる。上記の新規
なワカメペプチドを含有しているワカメのタンパク質部
分を用いて加水分解する。加水分解は常法に従って行
う。例えば、ペプシン等のタンパク質分解酵素で加水分
解する場合は、ワカメを必要とあれば更に加水分解した
後、酵素の至適温度まで加温しｐＨを至適値に調整し酵
素を加えてインキュベートする。次いで必要に応じ中和
した後、酵素を失活させて加水分解液を得る。その加水
分解物を濾紙及び／又はセライト等を用いて濾過するこ
とによって不溶性成分を除去し、その得られた濾液をセ
ロファンなどの半透膜を用いて適当な溶媒（例えば、
水、トリス−塩酸緩衝液、リン酸緩衝液の中性の緩衝液
等）中で十分に透析し、その濾液中の成分で半透膜を通
過した成分を含む溶液を強酸性陽イオン交換樹脂（例え
ば、ダウケミカル社製のＤｏｗｅｘ ５０Ｗ等）にか
け、その吸着溶出分画からアンジオテンシン変換酵素
（以下、ＡＣＥと略記する）阻害活性を有する成分を含
有する分画を得、得られたＡＣＥ阻害活性分画をゲル濾
過（例えば、ファルマシア社製のＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ
−２５等）によって分画し、得られたＡＣＥ阻害活性分
画を陽イオン交換ゲル濾過（例えば、ファルマシア社製
のＳＰ−ＳｅｐｈａｄｅｘＣ−２５等）によって分画
し、その得られたＡＣＥ阻害活性画分を更に逆相ＨＰＬ
Ｃによって分画する。
【０００６】本発明に係る新規な１３種類のワカメペプ
チドの製法において用いる褐藻類としては、本発明の目
的を達成できる限りいかなる褐藻類を用いても良いが、
好ましくはワカメを用いるのが良い。以上のようにして
得られた本発明に係る新規な１３種類のワカメペプチド
は、静脈内へ繰り返し投与を行った場合、抗体産生を惹
起せず、アナフィラキシーショックを起こさせない。
又、本発明に係る新規な１３種類のワカメペプチドはＬ
−アミノ酸のみの配列構造からなり、投与後、生体内の
プロテアーゼにより徐々に分解される為、毒性は極めて
低く、安全性は極めて高い（ＬＤ５０＞５０００ｍｇ／
ｋｇ；ラット経口投与）。本発明に係る新規な１３種類
のワカメペプチドは、通常用いられる賦形剤等の添加物
を用いて注射剤、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤等に
調製することができる。投与方法としては、通常は、Ａ
ＣＥを有している哺乳類（例えば、ヒト、イヌ、ラット
等）に注射すること、あるいは経口投与することがあげ
られる。投与量は、例えば、動物体１ｋｇ当りこのワカ
メペプチドを０．０１〜１０ｍｇの量である。投与回数
は、通常１日１〜４回程度であるが、投与経路によっ
て、適宜、調製することができる。
チドの製法において用いる褐藻類としては、本発明の目
的を達成できる限りいかなる褐藻類を用いても良いが、
好ましくはワカメを用いるのが良い。以上のようにして
得られた本発明に係る新規な１３種類のワカメペプチド
は、静脈内へ繰り返し投与を行った場合、抗体産生を惹
起せず、アナフィラキシーショックを起こさせない。
又、本発明に係る新規な１３種類のワカメペプチドはＬ
−アミノ酸のみの配列構造からなり、投与後、生体内の
プロテアーゼにより徐々に分解される為、毒性は極めて
低く、安全性は極めて高い（ＬＤ５０＞５０００ｍｇ／
ｋｇ；ラット経口投与）。本発明に係る新規な１３種類
のワカメペプチドは、通常用いられる賦形剤等の添加物
を用いて注射剤、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤等に
調製することができる。投与方法としては、通常は、Ａ
ＣＥを有している哺乳類（例えば、ヒト、イヌ、ラット
等）に注射すること、あるいは経口投与することがあげ
られる。投与量は、例えば、動物体１ｋｇ当りこのワカ
メペプチドを０．０１〜１０ｍｇの量である。投与回数
は、通常１日１〜４回程度であるが、投与経路によっ
て、適宜、調製することができる。
【０００７】上記の各種製剤において用いられる賦形
剤、結合剤、潤沢剤の種類は、特に限定されず、通常の
注射剤、散剤、顆粒剤、錠剤あるいはカプセル剤に用い
られるものを使用することができる。錠剤、カプセル
剤、顆粒剤、散剤に用いる添加物としては、下記のもの
をあげることができる。賦形剤としては、結晶セルロー
ス等の糖類、マンニトール等の糖アルコール類、デンプ
ン類、無水リン酸カルシウム等；結合剤としては澱粉
類、ヒドロキシプロピルメチルセルローズ等；崩壊剤と
してはカルボキシメチルセルロース及びそのカリウム塩
類；潤滑剤としてはステアリン酸及びその塩類、タル
ク、ワックス類を挙げることができる。又、製剤の調整
にあたっては必要に応じメントール、クエン酸及びその
塩類、香料等の矯臭剤を用いることができる。注射用の
無菌組成物は、常法により、本発明に係る新規なワカメ
ペプチドを、注射用水、生理食塩水及びキシリトールや
マンニトール等の糖アルコール注射液、プロピレングリ
コールやポリエチレングリコール等のグリコールに溶解
または懸濁させて注射剤とすることができる。この際、
緩衝液、防腐剤、酸化防止剤等を必要に応じて添加する
ことができる。本発明に係る新規な１３種類のワカメペ
プチドを含有する製剤は凍結乾燥品又は乾燥粉末の形と
し、用時、通常の溶解剤、例えば水又は生理食塩液に溶
解して用いることもできる。
剤、結合剤、潤沢剤の種類は、特に限定されず、通常の
注射剤、散剤、顆粒剤、錠剤あるいはカプセル剤に用い
られるものを使用することができる。錠剤、カプセル
剤、顆粒剤、散剤に用いる添加物としては、下記のもの
をあげることができる。賦形剤としては、結晶セルロー
ス等の糖類、マンニトール等の糖アルコール類、デンプ
ン類、無水リン酸カルシウム等；結合剤としては澱粉
類、ヒドロキシプロピルメチルセルローズ等；崩壊剤と
してはカルボキシメチルセルロース及びそのカリウム塩
類；潤滑剤としてはステアリン酸及びその塩類、タル
ク、ワックス類を挙げることができる。又、製剤の調整
にあたっては必要に応じメントール、クエン酸及びその
塩類、香料等の矯臭剤を用いることができる。注射用の
無菌組成物は、常法により、本発明に係る新規なワカメ
ペプチドを、注射用水、生理食塩水及びキシリトールや
マンニトール等の糖アルコール注射液、プロピレングリ
コールやポリエチレングリコール等のグリコールに溶解
または懸濁させて注射剤とすることができる。この際、
緩衝液、防腐剤、酸化防止剤等を必要に応じて添加する
ことができる。本発明に係る新規な１３種類のワカメペ
プチドを含有する製剤は凍結乾燥品又は乾燥粉末の形と
し、用時、通常の溶解剤、例えば水又は生理食塩液に溶
解して用いることもできる。
【０００８】本発明に係る新規な１３種類のワカメペプ
チドは優れたアンジオテンシン変換酵素阻害作用を有
し、血圧降下作用、ブラジキニン不活化抑制作用を示
す。従って、本態性高血圧、腎性高血圧、副腎性高血圧
等の高血圧症の予防、治療剤、これらうっ血性心不全に
対する臓器循環の正常化と長期予後の改善（延命効果）
作用を有し、心不全の治療剤として有用である。
チドは優れたアンジオテンシン変換酵素阻害作用を有
し、血圧降下作用、ブラジキニン不活化抑制作用を示
す。従って、本態性高血圧、腎性高血圧、副腎性高血圧
等の高血圧症の予防、治療剤、これらうっ血性心不全に
対する臓器循環の正常化と長期予後の改善（延命効果）
作用を有し、心不全の治療剤として有用である。
【０００９】
【実施例】以下に実施例として、製造例および試験例を
記載し、本発明を更に詳細に説明する。 製造例１ ワカメ粉末２３．６ｇに脱イオン水７０８ｍＬを加えホ
モジナイズしたワカメホモジネイトを用いた。透析チュ
ーブ（内径３６インチ，和光純薬工業社製）に詰め、流
水に対して３日間透析を行い透析内液を得た。この内液
を１規定の塩酸にてｐＨを２．０に調整し、ペプシン
（メルク社製、酵素番号ＥＣ３．４．２３．１）７０８
ｍｇを添加し、４５℃で５時間撹拌しながら加水分解を
行った。分解反応液を直ちに限外濾過膜（アミコン社
製、ＹＭ１０型；分画分子量約１万）に通過させた通過
液を、Ｄｏｗｅｘ５０Ｗ×４［Ｈ＋］カラム（φ４．０
×５５ｃｍ）に加えた。そのカラムを脱イオン水で十分
洗滌した後、２規定の水酸化アンモニウム液２Ｌを用い
て溶出した。減圧濃縮によりアンモニアを除去し濃縮液
を予め脱イオン水で緩衝化したＳｅｐｈａｄｅｘＧ−２
５（φ１．６×１１３ｃｍ）に負荷し、流速１２ｍＬ／
ｈｒ、各分画量５．７ｍＬでゲル濾過を行った。その結
果は図１のとおりである。ゲル濾過を繰り返して大量分
取したＡＣＥ阻害活性の高い画分を集め凍結乾燥してペ
プチド粉末とした。このペプチド粉末１．５５ｇを２０
ｍＬの脱イオン水に溶解後、予め、脱イオン水で緩衝化
したＳＰ−ＳｅｐｈａｄｅｘＣ−２５［Ｈ＋］カラム
（φ１．８×４０ｃｍ）に負荷し、脱イオン水５００ｍ
Ｌから１．５％塩化ナトリウム５００ｍιの濃度勾配法
を行い、流速７０ｍＬ／ｈｒ、各分画量１０ｍＬでクロ
マトグラフィーを行った。上記クロマトグラフ中、ＡＣ
Ｅ阻害活性の高かった分画番号２３〜５１の画分を集め
て凍結乾燥して精製ペプチド粉末（ＳＰ−ＩＩ分画）を
得た。この精製ペプチド粉末２０ｍｇを６０μＬの脱イ
オン水に溶解した後、高速液体クロマトグラフィー（Ｈ
ＰＬＣ）を行った。カラムとしては野村化学社製Ｄｅｖ
ｅｌｏｓｉｌ ＯＤＳ−５（４．５ｍｍＩＤ×２５ｃｍ
Ｌ）を使用し、移動相としては０．０５％トリフルオロ
酢酸（以下、ＴＦＡと略記する。）から２５％アセトニ
トリル／０．０５％ＴＦＡの濃度勾配法を行い、流速
１．０ｍＬ／ｍｉｎ、検出波長２２０ｎｍでＨＰＬＣを
行い、ＡＣＥ阻害活性を有する１３個のペプチドフラグ
メントを得た。このようにして得られたＡＣＥ阻害作用
を有するペプチドフラグメントのアミノ酸配列は、アプ
ライドバイオシステム（ＡＢＩ）社製のプロテインシー
クエンサー４７７Ａ型を用いて決定された。その結果、
１３種類のペプチドは、次式（１）、（２）、（３）、
（４）、（５）、（６）、（７）、（８）、（９）、
（１０）、（１１）、（１２）及び（１３） （１） Ｖａｌ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ−Ｐ
ｒｏ−Ｐｒｏ （２） Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐ
ｒｏ （３） Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ （４） Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐ
ｒｏ （５） Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ （６） Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ （７） Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ （８） Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ （９） Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ （１０）Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ （１１）Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ａｌａ （１２）Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ａｌａ （１３）Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ で示されるＬ体のアミノ酸配列で表される新規なペプチ
ドであることが確認された。常温における性状は白色の
粉末である。尚、本発明に係る新規な１３種類のワカメ
ペプチドをＡＣＥ阻害剤として、例えば錠剤に製剤する
場合には、常法に従って、例えば次のように処理すれば
よい：ペプチド９ｇ、乳糖６３ｇ、コーンスター
チ３８ｇ、ステアリン酸マグネシウム１ｇを原料と
し、先ず、及び１９ｇのコーンスターチを混和し、
９ｇのコーンスターチから作ったペーストとともに顆粒
化し、この顆粒に１０ｇのコーンスターチととを加
え、得られた混合物を圧縮錠剤機で打錠し、錠剤１００
０個を製造する。
記載し、本発明を更に詳細に説明する。 製造例１ ワカメ粉末２３．６ｇに脱イオン水７０８ｍＬを加えホ
モジナイズしたワカメホモジネイトを用いた。透析チュ
ーブ（内径３６インチ，和光純薬工業社製）に詰め、流
水に対して３日間透析を行い透析内液を得た。この内液
を１規定の塩酸にてｐＨを２．０に調整し、ペプシン
（メルク社製、酵素番号ＥＣ３．４．２３．１）７０８
ｍｇを添加し、４５℃で５時間撹拌しながら加水分解を
行った。分解反応液を直ちに限外濾過膜（アミコン社
製、ＹＭ１０型；分画分子量約１万）に通過させた通過
液を、Ｄｏｗｅｘ５０Ｗ×４［Ｈ＋］カラム（φ４．０
×５５ｃｍ）に加えた。そのカラムを脱イオン水で十分
洗滌した後、２規定の水酸化アンモニウム液２Ｌを用い
て溶出した。減圧濃縮によりアンモニアを除去し濃縮液
を予め脱イオン水で緩衝化したＳｅｐｈａｄｅｘＧ−２
５（φ１．６×１１３ｃｍ）に負荷し、流速１２ｍＬ／
ｈｒ、各分画量５．７ｍＬでゲル濾過を行った。その結
果は図１のとおりである。ゲル濾過を繰り返して大量分
取したＡＣＥ阻害活性の高い画分を集め凍結乾燥してペ
プチド粉末とした。このペプチド粉末１．５５ｇを２０
ｍＬの脱イオン水に溶解後、予め、脱イオン水で緩衝化
したＳＰ−ＳｅｐｈａｄｅｘＣ−２５［Ｈ＋］カラム
（φ１．８×４０ｃｍ）に負荷し、脱イオン水５００ｍ
Ｌから１．５％塩化ナトリウム５００ｍιの濃度勾配法
を行い、流速７０ｍＬ／ｈｒ、各分画量１０ｍＬでクロ
マトグラフィーを行った。上記クロマトグラフ中、ＡＣ
Ｅ阻害活性の高かった分画番号２３〜５１の画分を集め
て凍結乾燥して精製ペプチド粉末（ＳＰ−ＩＩ分画）を
得た。この精製ペプチド粉末２０ｍｇを６０μＬの脱イ
オン水に溶解した後、高速液体クロマトグラフィー（Ｈ
ＰＬＣ）を行った。カラムとしては野村化学社製Ｄｅｖ
ｅｌｏｓｉｌ ＯＤＳ−５（４．５ｍｍＩＤ×２５ｃｍ
Ｌ）を使用し、移動相としては０．０５％トリフルオロ
酢酸（以下、ＴＦＡと略記する。）から２５％アセトニ
トリル／０．０５％ＴＦＡの濃度勾配法を行い、流速
１．０ｍＬ／ｍｉｎ、検出波長２２０ｎｍでＨＰＬＣを
行い、ＡＣＥ阻害活性を有する１３個のペプチドフラグ
メントを得た。このようにして得られたＡＣＥ阻害作用
を有するペプチドフラグメントのアミノ酸配列は、アプ
ライドバイオシステム（ＡＢＩ）社製のプロテインシー
クエンサー４７７Ａ型を用いて決定された。その結果、
１３種類のペプチドは、次式（１）、（２）、（３）、
（４）、（５）、（６）、（７）、（８）、（９）、
（１０）、（１１）、（１２）及び（１３） （１） Ｖａｌ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ−Ｐ
ｒｏ−Ｐｒｏ （２） Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐ
ｒｏ （３） Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ （４） Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐ
ｒｏ （５） Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ （６） Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ （７） Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ （８） Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ （９） Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ （１０）Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ （１１）Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ａｌａ （１２）Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ａｌａ （１３）Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ で示されるＬ体のアミノ酸配列で表される新規なペプチ
ドであることが確認された。常温における性状は白色の
粉末である。尚、本発明に係る新規な１３種類のワカメ
ペプチドをＡＣＥ阻害剤として、例えば錠剤に製剤する
場合には、常法に従って、例えば次のように処理すれば
よい：ペプチド９ｇ、乳糖６３ｇ、コーンスター
チ３８ｇ、ステアリン酸マグネシウム１ｇを原料と
し、先ず、及び１９ｇのコーンスターチを混和し、
９ｇのコーンスターチから作ったペーストとともに顆粒
化し、この顆粒に１０ｇのコーンスターチととを加
え、得られた混合物を圧縮錠剤機で打錠し、錠剤１００
０個を製造する。
【００１０】製造例２
本例は、合成法による製造例である。
Ｖａｌ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｐ
ｒｏの合成法 アプライドバイオシステム社製のペプチド自動合成装置
４３０Ａ型を用いた固相法によって当該ジペプチドを合
成した。固相担体としては、スチレンジビニルベンゼン
共重合体（ポリスチレン樹脂）をクロロメチル化した樹
脂を使用した。まず、当該ジペプチドのアミノ酸配列に
従って、常法どおり、そのＣ末端側のプロリンからクロ
ロメチル樹脂に反応させペプチド結合樹脂を得た。この
時のアミノ酸は、ｔ−ブトキシカルボニル（以下、ｔ−
Ｂｏｃと略記する。）基で保護されたｔ−Ｂｏｃアミノ
酸を使用した。次にこのペプチド結合樹脂をエタンジチ
オールとチオアニソールからなる混合液に懸濁し、室温
で１０分間撹拌後、氷冷下でトリフルオロ酢酸を加え、
更に１０分間撹拌した。この混合液にトリフルオロメタ
ンスルホン酸を滴下し、室温で３０分間撹拌した後、無
水エーテルを加えてその生成物を沈澱させて分離し、そ
の沈澱物を無水エーテルで数回洗浄した後、減圧下で乾
燥した。このようにして得られた未精製の合成ペプチド
は蒸留水又はメタノールに溶解した後、逆相系のカラム
Ｃ１８（５μｍ）を用いたＨＰＬＣにより精製した。移
動相として（Ａ）０．１％ＴＦＡ含有蒸留水、（Ｂ）
０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリル溶液を使用し、
（Ａ）液が７３分間で７１％→５６％の濃度勾配法によ
り流速１．２ｍＬ／ｍｉｎでクロマトグラフィーを行っ
た。紫外部波長２１７ｎｍで検出し、最大の吸収を示し
た溶出画分を分取し、これを凍結乾燥することによって
目的とする合成ヘプタペプチドを得た。
ｒｏの合成法 アプライドバイオシステム社製のペプチド自動合成装置
４３０Ａ型を用いた固相法によって当該ジペプチドを合
成した。固相担体としては、スチレンジビニルベンゼン
共重合体（ポリスチレン樹脂）をクロロメチル化した樹
脂を使用した。まず、当該ジペプチドのアミノ酸配列に
従って、常法どおり、そのＣ末端側のプロリンからクロ
ロメチル樹脂に反応させペプチド結合樹脂を得た。この
時のアミノ酸は、ｔ−ブトキシカルボニル（以下、ｔ−
Ｂｏｃと略記する。）基で保護されたｔ−Ｂｏｃアミノ
酸を使用した。次にこのペプチド結合樹脂をエタンジチ
オールとチオアニソールからなる混合液に懸濁し、室温
で１０分間撹拌後、氷冷下でトリフルオロ酢酸を加え、
更に１０分間撹拌した。この混合液にトリフルオロメタ
ンスルホン酸を滴下し、室温で３０分間撹拌した後、無
水エーテルを加えてその生成物を沈澱させて分離し、そ
の沈澱物を無水エーテルで数回洗浄した後、減圧下で乾
燥した。このようにして得られた未精製の合成ペプチド
は蒸留水又はメタノールに溶解した後、逆相系のカラム
Ｃ１８（５μｍ）を用いたＨＰＬＣにより精製した。移
動相として（Ａ）０．１％ＴＦＡ含有蒸留水、（Ｂ）
０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリル溶液を使用し、
（Ａ）液が７３分間で７１％→５６％の濃度勾配法によ
り流速１．２ｍＬ／ｍｉｎでクロマトグラフィーを行っ
た。紫外部波長２１７ｎｍで検出し、最大の吸収を示し
た溶出画分を分取し、これを凍結乾燥することによって
目的とする合成ヘプタペプチドを得た。
【００１１】この合成ヘプタペプチドをマススペクトル
及びアミノ酸分析により分析した結果、アミノ酸配列及
びアミノ酸組成が前記で示したアミノ酸配列構造を有す
るヘプタペプチドであることが確認された。このマスス
ペクトルとアミノ酸分析の結果は表１に示す通りであ
る。 Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏの合
成法 アプライドバイオシステム社製のペプチド自動合成装置
４３０Ａ型を用いた固相法によって当該ペプチドを合成
した。固相担体としては、スチレンジビニルベンゼン共
重合体（ポリスチレン樹脂）をクロロメチル化した樹脂
を使用した。まず、当該ペプチドのアミノ酸配列に従っ
て、常法どおり、そのＣ末端側のプロリンからクロロメ
チル樹脂に反応させペプチド結合樹脂を得た。この時の
アミノ酸は、ｔ−ブトキシカルボニル（以下、ｔ−Ｂｏ
ｃと略記する）基で保護されたｔ−Ｂｏｃアミノ酸を使
用した。次にこのペプチド結合樹脂をエタンジチオール
とチオアニソールからなる混合液に懸濁し、室温で１０
分間撹拌後、氷冷下でトリフルオロ酢酸を加え、更に１
０分間撹拌した。この混合液にトリフルオロメタンスル
ホン酸を滴下し、室温で３０分間撹拌した後、無水エー
テルを加えてその生成物を沈澱させて分離し、その沈澱
物を無水エーテルで数回洗浄した後、減圧下で乾燥し
た。このようにして得られた未精製の合成ペプチドは蒸
留水又はメタノールに溶解した後、逆相系のカラムＣ
１８（５μｍ）を用いたＨＰＬＣにより精製した。移動
相として（Ａ）０．１％ＴＦＡ含有蒸留水、（Ｂ）０．
１％ＴＦＡ含有アセトニトリル溶液を使用し、（Ａ）液
が６９分間で７２％→５４％の濃度勾配法により流速
２．１ｍＬ／ｍｉｎでクロマトグラフィーを行った。紫
外部波長２２１ｎｍで検出し、最大の吸収を示した溶出
画分を分取し、これを凍結乾燥することによって目的と
する合成ヘクサペプチドを得た。
及びアミノ酸分析により分析した結果、アミノ酸配列及
びアミノ酸組成が前記で示したアミノ酸配列構造を有す
るヘプタペプチドであることが確認された。このマスス
ペクトルとアミノ酸分析の結果は表１に示す通りであ
る。 Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏの合
成法 アプライドバイオシステム社製のペプチド自動合成装置
４３０Ａ型を用いた固相法によって当該ペプチドを合成
した。固相担体としては、スチレンジビニルベンゼン共
重合体（ポリスチレン樹脂）をクロロメチル化した樹脂
を使用した。まず、当該ペプチドのアミノ酸配列に従っ
て、常法どおり、そのＣ末端側のプロリンからクロロメ
チル樹脂に反応させペプチド結合樹脂を得た。この時の
アミノ酸は、ｔ−ブトキシカルボニル（以下、ｔ−Ｂｏ
ｃと略記する）基で保護されたｔ−Ｂｏｃアミノ酸を使
用した。次にこのペプチド結合樹脂をエタンジチオール
とチオアニソールからなる混合液に懸濁し、室温で１０
分間撹拌後、氷冷下でトリフルオロ酢酸を加え、更に１
０分間撹拌した。この混合液にトリフルオロメタンスル
ホン酸を滴下し、室温で３０分間撹拌した後、無水エー
テルを加えてその生成物を沈澱させて分離し、その沈澱
物を無水エーテルで数回洗浄した後、減圧下で乾燥し
た。このようにして得られた未精製の合成ペプチドは蒸
留水又はメタノールに溶解した後、逆相系のカラムＣ
１８（５μｍ）を用いたＨＰＬＣにより精製した。移動
相として（Ａ）０．１％ＴＦＡ含有蒸留水、（Ｂ）０．
１％ＴＦＡ含有アセトニトリル溶液を使用し、（Ａ）液
が６９分間で７２％→５４％の濃度勾配法により流速
２．１ｍＬ／ｍｉｎでクロマトグラフィーを行った。紫
外部波長２２１ｎｍで検出し、最大の吸収を示した溶出
画分を分取し、これを凍結乾燥することによって目的と
する合成ヘクサペプチドを得た。
【００１２】この合成ヘクサペプチドをマススペクトル
及びアミノ酸分析により分析した結果、アミノ酸配列及
びアミノ酸組成が前記で示したアミノ酸配列構造を有す
るヘクサペプチドであることが確認された。このマスス
ペクトルとアミノ酸分析の結果は表１に示す通りであ
る。 Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ａｓｎの合成法 アプライドバイオシステム社製のペプチド自動合成装置
４３０Ａ型を用いた固相法によって当該ペプチドを合成
した。固相担体としては、スチレンジビニルベンゼン共
重合体（ポリスチレン樹脂）をクロロメチル化した樹脂
を使用した。まず、当該ペプチドのアミノ酸配列に従っ
て、常法どおり、そのＣ末端側のアスパラギンからクロ
ロメチル樹脂に反応させペプチド結合樹脂を得た。この
時のアミノ酸は、ｔ−ブトキシカルボニル（以下、ｔ−
Ｂｏｃと略記する）基で保護されたｔ−Ｂｏｃアミノ酸
を使用した。次にこのペプチド結合樹脂をエタンジチオ
ールとチオアニソールからなる混合液に懸濁し、室温で
１０分間撹拌後、氷冷下でトリフルオロ酢酸を加え、更
に１０分間撹拌した。この混合液にトリフルオロメタン
スルホン酸を滴下し、室温で３０分間撹拌した後、無水
エーテルを加えてその生成物を沈澱させて分離し、その
沈澱物を無水エーテルで数回洗浄した後、減圧下で乾燥
した。このようにして得られた未精製の合成ペプチドは
蒸留水又はメタノールに溶解した後、逆相系のカラムＣ
１８（５μｍ）を用いたＨＰＬＣにより精製した。移動
相として（Ａ）０．１％ＴＦＡ含有蒸留水、（Ｂ）０．
１％ＴＦＡ含有アセトニトリル溶液を使用し、（Ａ）液
が６８分間で６６％→２６％の濃度勾配法により流速２
ｍＬ／ｍｉｎでクロマトグラフィーを行った。紫外部波
長２２０ｎｍで検出し、最大の吸収を示した溶出画分を
分取し、これを凍結乾燥することによって目的とする合
成ペンタペプチドを得た。
及びアミノ酸分析により分析した結果、アミノ酸配列及
びアミノ酸組成が前記で示したアミノ酸配列構造を有す
るヘクサペプチドであることが確認された。このマスス
ペクトルとアミノ酸分析の結果は表１に示す通りであ
る。 Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ａｓｎの合成法 アプライドバイオシステム社製のペプチド自動合成装置
４３０Ａ型を用いた固相法によって当該ペプチドを合成
した。固相担体としては、スチレンジビニルベンゼン共
重合体（ポリスチレン樹脂）をクロロメチル化した樹脂
を使用した。まず、当該ペプチドのアミノ酸配列に従っ
て、常法どおり、そのＣ末端側のアスパラギンからクロ
ロメチル樹脂に反応させペプチド結合樹脂を得た。この
時のアミノ酸は、ｔ−ブトキシカルボニル（以下、ｔ−
Ｂｏｃと略記する）基で保護されたｔ−Ｂｏｃアミノ酸
を使用した。次にこのペプチド結合樹脂をエタンジチオ
ールとチオアニソールからなる混合液に懸濁し、室温で
１０分間撹拌後、氷冷下でトリフルオロ酢酸を加え、更
に１０分間撹拌した。この混合液にトリフルオロメタン
スルホン酸を滴下し、室温で３０分間撹拌した後、無水
エーテルを加えてその生成物を沈澱させて分離し、その
沈澱物を無水エーテルで数回洗浄した後、減圧下で乾燥
した。このようにして得られた未精製の合成ペプチドは
蒸留水又はメタノールに溶解した後、逆相系のカラムＣ
１８（５μｍ）を用いたＨＰＬＣにより精製した。移動
相として（Ａ）０．１％ＴＦＡ含有蒸留水、（Ｂ）０．
１％ＴＦＡ含有アセトニトリル溶液を使用し、（Ａ）液
が６８分間で６６％→２６％の濃度勾配法により流速２
ｍＬ／ｍｉｎでクロマトグラフィーを行った。紫外部波
長２２０ｎｍで検出し、最大の吸収を示した溶出画分を
分取し、これを凍結乾燥することによって目的とする合
成ペンタペプチドを得た。
【００１３】この合成ペンタペプチドをマススペクトル
及びアミノ酸分析により分析した結果、アミノ酸配列及
びアミノ酸組成が前記で示したアミノ酸配列構造を有す
るペンタペプチドであることが確認された。このマスス
ペクトルとアミノ酸分析の結果は表１に示す通りであ
る。 Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏの合
成法 アプライドバイオシステム社製のペプチド自動合成装置
４３０Ａ型を用いた固相法によって当該ペプチドを合成
した。固相担体としては、スチレンジビニルベンゼン共
重合体（ポリスチレン樹脂）をクロロメチル化した樹脂
を使用した。まず、当該ペプチドのアミノ酸配列に従っ
て、常法どおり、そのＣ末端側のプロリンからクロロメ
チル樹脂に反応させペプチド結合樹脂を得た。この時の
アミノ酸は、ｔ−ブトキシカルボニル（以下、ｔ−Ｂｏ
ｃと略記する）基で保護されたｔ−Ｂｏｃアミノ酸を使
用した。次にこのペプチド結合樹脂をエタンジチオール
とチオアニソールからなる混合液に懸濁し、室温で１０
分間撹拌後、氷冷下でトリフルオロ酢酸を加え、更に１
０分間撹拌した。この混合液にトリフルオロメタンスル
ホン酸を滴下し、室温で３０分間撹拌した後、無水エー
テルを加えてその生成物を沈澱させて分離し、その沈澱
物を無水エーテルで数回洗浄した後、減圧下で乾燥し
た。このようにして得られた未精製の合成ペプチドは蒸
留水又はメタノールに溶解した後、逆相系のカラムＣ
１８（５μｍ）を用いたＨＰＬＣにより精製した。移動
相として（Ａ）０．１％ＴＦＡ含有蒸留水、（Ｂ）０．
１％ＴＦＡ含有アセトニトリル溶液を使用し、（Ａ）液
が６６分間で７５％→４１％の濃度勾配法により流速
２．２ｍＬ／ｍｉｎでクロマトグラフィーを行った。紫
外部波長２１９ｎｍで検出し、最大の吸収を示した溶出
画分を分取し、これを凍結乾燥することによって目的と
する合成ヘクサペプチドを得た。
及びアミノ酸分析により分析した結果、アミノ酸配列及
びアミノ酸組成が前記で示したアミノ酸配列構造を有す
るペンタペプチドであることが確認された。このマスス
ペクトルとアミノ酸分析の結果は表１に示す通りであ
る。 Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏの合
成法 アプライドバイオシステム社製のペプチド自動合成装置
４３０Ａ型を用いた固相法によって当該ペプチドを合成
した。固相担体としては、スチレンジビニルベンゼン共
重合体（ポリスチレン樹脂）をクロロメチル化した樹脂
を使用した。まず、当該ペプチドのアミノ酸配列に従っ
て、常法どおり、そのＣ末端側のプロリンからクロロメ
チル樹脂に反応させペプチド結合樹脂を得た。この時の
アミノ酸は、ｔ−ブトキシカルボニル（以下、ｔ−Ｂｏ
ｃと略記する）基で保護されたｔ−Ｂｏｃアミノ酸を使
用した。次にこのペプチド結合樹脂をエタンジチオール
とチオアニソールからなる混合液に懸濁し、室温で１０
分間撹拌後、氷冷下でトリフルオロ酢酸を加え、更に１
０分間撹拌した。この混合液にトリフルオロメタンスル
ホン酸を滴下し、室温で３０分間撹拌した後、無水エー
テルを加えてその生成物を沈澱させて分離し、その沈澱
物を無水エーテルで数回洗浄した後、減圧下で乾燥し
た。このようにして得られた未精製の合成ペプチドは蒸
留水又はメタノールに溶解した後、逆相系のカラムＣ
１８（５μｍ）を用いたＨＰＬＣにより精製した。移動
相として（Ａ）０．１％ＴＦＡ含有蒸留水、（Ｂ）０．
１％ＴＦＡ含有アセトニトリル溶液を使用し、（Ａ）液
が６６分間で７５％→４１％の濃度勾配法により流速
２．２ｍＬ／ｍｉｎでクロマトグラフィーを行った。紫
外部波長２１９ｎｍで検出し、最大の吸収を示した溶出
画分を分取し、これを凍結乾燥することによって目的と
する合成ヘクサペプチドを得た。
【００１４】この合成ヘクサペプチドをマススペクトル
及びアミノ酸分析により分析した結果、アミノ酸配列及
びアミノ酸組成が前記で示したアミノ酸配列構造を有す
るヘクサペプチドであることが確認された。このマスス
ペクトルとアミノ酸分析の結果は表１に示す通りであ
る。 Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏの合成法 アプライドバイオシステム社製のペプチド自動合成装置
４３０Ａ型を用いた固相法によって当該ペプチドを合成
した。固相担体としては、スチレンジビニルベンゼン共
重合体（ポリスチレン樹脂）をクロロメチル化した樹脂
を使用した。まず、当該ペプチドのアミノ酸配列に従っ
て、常法どおり、そのＣ末端側のプロリンからクロロメ
チル樹脂に反応させペプチド結合樹脂を得た。この時の
アミノ酸は、ｔ−ブトキシカルボニル（以下、ｔ−Ｂｏ
ｃと略記する）基で保護されたｔ−Ｂｏｃアミノ酸を使
用した。次にこのペプチド結合樹脂をエタンジチオール
とチオアニソールからなる混合液に懸濁し、室温で１０
分間撹拌後、氷冷下でトリフルオロ酢酸を加え、更に１
０分間撹拌した。この混合液にトリフルオロメタンスル
ホン酸を滴下し、室温で３０分間撹拌した後、無水エー
テルを加えてその生成物を沈澱させて分離し、その沈澱
物を無水エーテルで数回洗浄した後、減圧下で乾燥し
た。このようにして得られた未精製の合成ペプチドは蒸
留水又はメタノールに溶解した後、逆相系のカラムＣ
１８（５μｍ）を用いたＨＰＬＣにより精製した。移動
相として（Ａ）０．１％ＴＦＡ含有蒸留水、（Ｂ）０．
１％ＴＦＡ含有アセトニトリル溶液を使用し、（Ａ）液
が６１分間で６８％→３１％の濃度勾配法により流速
１．９ｍＬ／ｍｉｎでクロマトグラフィーを行った。紫
外部波長２１９ｎｍで検出し、最大の吸収を示した溶出
画分を分取し、これを凍結乾燥することによって目的と
する合成ペンタペプチドを得た。
及びアミノ酸分析により分析した結果、アミノ酸配列及
びアミノ酸組成が前記で示したアミノ酸配列構造を有す
るヘクサペプチドであることが確認された。このマスス
ペクトルとアミノ酸分析の結果は表１に示す通りであ
る。 Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏの合成法 アプライドバイオシステム社製のペプチド自動合成装置
４３０Ａ型を用いた固相法によって当該ペプチドを合成
した。固相担体としては、スチレンジビニルベンゼン共
重合体（ポリスチレン樹脂）をクロロメチル化した樹脂
を使用した。まず、当該ペプチドのアミノ酸配列に従っ
て、常法どおり、そのＣ末端側のプロリンからクロロメ
チル樹脂に反応させペプチド結合樹脂を得た。この時の
アミノ酸は、ｔ−ブトキシカルボニル（以下、ｔ−Ｂｏ
ｃと略記する）基で保護されたｔ−Ｂｏｃアミノ酸を使
用した。次にこのペプチド結合樹脂をエタンジチオール
とチオアニソールからなる混合液に懸濁し、室温で１０
分間撹拌後、氷冷下でトリフルオロ酢酸を加え、更に１
０分間撹拌した。この混合液にトリフルオロメタンスル
ホン酸を滴下し、室温で３０分間撹拌した後、無水エー
テルを加えてその生成物を沈澱させて分離し、その沈澱
物を無水エーテルで数回洗浄した後、減圧下で乾燥し
た。このようにして得られた未精製の合成ペプチドは蒸
留水又はメタノールに溶解した後、逆相系のカラムＣ
１８（５μｍ）を用いたＨＰＬＣにより精製した。移動
相として（Ａ）０．１％ＴＦＡ含有蒸留水、（Ｂ）０．
１％ＴＦＡ含有アセトニトリル溶液を使用し、（Ａ）液
が６１分間で６８％→３１％の濃度勾配法により流速
１．９ｍＬ／ｍｉｎでクロマトグラフィーを行った。紫
外部波長２１９ｎｍで検出し、最大の吸収を示した溶出
画分を分取し、これを凍結乾燥することによって目的と
する合成ペンタペプチドを得た。
【００１５】この合成ペンタペプチドをマススペクトル
及びアミノ酸分析により分析した結果、アミノ酸配列及
びアミノ酸組成が前記で示したアミノ酸配列構造を有す
るペンタペプチドであることが確認された。このマスス
ペクトルとアミノ酸分析の結果は表１に示す通りであ
る。 Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏの合成法 アプライドバイオシステム社製のペプチド自動合成装置
４３０Ａ型を用いた固相法によって当該ペプチドを合成
した。固相担体としては、スチレンジビニルベンゼン共
重合体（ポリスチレン樹脂）をクロロメチル化した樹脂
を使用した。まず、当該ペプチドのアミノ酸配列に従っ
て、常法どおり、そのＣ末端側のプロリンからクロロメ
チル樹脂に反応させペプチド結合樹脂を得た。この時の
アミノ酸は、ｔ−ブトキシカルボニル（以下、ｔ−Ｂｏ
ｃと略記する）基で保護されたｔ−Ｂｏｃアミノ酸を使
用した。次にこのペプチド結合樹脂をエタンジチオール
とチオアニソールからなる混合液に懸濁し、室温で１０
分間撹拌後、氷冷下でトリフルオロ酢酸を加え、更に１
０分間撹拌した。この混合液にトリフルオロメタンスル
ホン酸を滴下し、室温で３０分間撹拌した後、無水エー
テルを加えてその生成物を沈澱させて分離し、その沈澱
物を無水エーテルで数回洗浄した後、減圧下で乾燥し
た。このようにして得られた未精製の合成ペプチドは蒸
留水又はメタノールに溶解した後、逆相系のカラムＣ
１８（５μｍ）を用いたＨＰＬＣにより精製した。移動
相として（Ａ）０．１％ＴＦＡ含有蒸留水、（Ｂ）０．
１％ＴＦＡ含有アセトニトリル溶液を使用し、（Ａ）液
が６４分間で６８％→３８％の濃度勾配法により流速
１．８ｍＬ／ｍｉｎでクロマトグラフィーを行った。紫
外部波長２１８ｎｍで検出し、最大の吸収を示した溶出
画分を分取し、これを凍結乾燥することによって目的と
する合成ペンタペプチドを得た。
及びアミノ酸分析により分析した結果、アミノ酸配列及
びアミノ酸組成が前記で示したアミノ酸配列構造を有す
るペンタペプチドであることが確認された。このマスス
ペクトルとアミノ酸分析の結果は表１に示す通りであ
る。 Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏの合成法 アプライドバイオシステム社製のペプチド自動合成装置
４３０Ａ型を用いた固相法によって当該ペプチドを合成
した。固相担体としては、スチレンジビニルベンゼン共
重合体（ポリスチレン樹脂）をクロロメチル化した樹脂
を使用した。まず、当該ペプチドのアミノ酸配列に従っ
て、常法どおり、そのＣ末端側のプロリンからクロロメ
チル樹脂に反応させペプチド結合樹脂を得た。この時の
アミノ酸は、ｔ−ブトキシカルボニル（以下、ｔ−Ｂｏ
ｃと略記する）基で保護されたｔ−Ｂｏｃアミノ酸を使
用した。次にこのペプチド結合樹脂をエタンジチオール
とチオアニソールからなる混合液に懸濁し、室温で１０
分間撹拌後、氷冷下でトリフルオロ酢酸を加え、更に１
０分間撹拌した。この混合液にトリフルオロメタンスル
ホン酸を滴下し、室温で３０分間撹拌した後、無水エー
テルを加えてその生成物を沈澱させて分離し、その沈澱
物を無水エーテルで数回洗浄した後、減圧下で乾燥し
た。このようにして得られた未精製の合成ペプチドは蒸
留水又はメタノールに溶解した後、逆相系のカラムＣ
１８（５μｍ）を用いたＨＰＬＣにより精製した。移動
相として（Ａ）０．１％ＴＦＡ含有蒸留水、（Ｂ）０．
１％ＴＦＡ含有アセトニトリル溶液を使用し、（Ａ）液
が６４分間で６８％→３８％の濃度勾配法により流速
１．８ｍＬ／ｍｉｎでクロマトグラフィーを行った。紫
外部波長２１８ｎｍで検出し、最大の吸収を示した溶出
画分を分取し、これを凍結乾燥することによって目的と
する合成ペンタペプチドを得た。
【００１６】この合成ペンタペプチドをマススペクトル
及びアミノ酸分析により分析した結果、アミノ酸配列及
びアミノ酸組成が前記で示したアミノ酸配列構造を有す
るペンタペプチドであることが確認された。このマスス
ペクトルとアミノ酸分析の結果は表１に示す通りであ
る。 Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏの合成法 アプライドバイオシステム社製のペプチド自動合成装置
４３０Ａ型を用いた固相法によって当該ペプチドを合成
した。固相担体としては、スチレンジビニルベンゼン共
重合体（ポリスチレン樹脂）をクロロメチル化した樹脂
を使用した。まず、当該ペプチドのアミノ酸配列に従っ
て、常法どおり、そのＣ末端側のプロリンからクロロメ
チル樹脂に反応させペプチド結合樹脂を得た。この時の
アミノ酸は、ｔ−ブトキシカルボニル（以下、ｔ−Ｂｏ
ｃと略記する）基で保護されたｔ−Ｂｏｃアミノ酸を使
用した。次にこのペプチド結合樹脂をエタンジチオール
とチオアニソールからなる混合液に懸濁し、室温で１０
分間撹拌後、氷冷下でトリフルオロ酢酸を加え、更に１
０分間撹拌した。この混合液にトリフルオロメタンスル
ホン酸を滴下し、室温で３０分間撹拌した後、無水エー
テルを加えてその生成物を沈澱させて分離し、その沈澱
物を無水エーテルで数回洗浄した後、減圧下で乾燥し
た。このようにして得られた未精製の合成ペプチドは蒸
留水又はメタノールに溶解した後、逆相系のカラムＣ
１８（５μｍ）を用いたＨＰＬＣにより精製した。移動
相として（Ａ）０．１％ＴＦＡ含有蒸留水、（Ｂ）０．
１％ＴＦＡ含有アセトニトリル溶液を使用し、（Ａ）液
が７４分間で６８％→２８％の濃度勾配法により流速
１．７ｍＬ／ｍｉｎでクロマトグラフィーを行った。紫
外部波長２２２ｎｍで検出し、最大の吸収を示した溶出
画分を分取し、これを凍結乾燥することによって目的と
する合成ペンタペプチドを得た。
及びアミノ酸分析により分析した結果、アミノ酸配列及
びアミノ酸組成が前記で示したアミノ酸配列構造を有す
るペンタペプチドであることが確認された。このマスス
ペクトルとアミノ酸分析の結果は表１に示す通りであ
る。 Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏの合成法 アプライドバイオシステム社製のペプチド自動合成装置
４３０Ａ型を用いた固相法によって当該ペプチドを合成
した。固相担体としては、スチレンジビニルベンゼン共
重合体（ポリスチレン樹脂）をクロロメチル化した樹脂
を使用した。まず、当該ペプチドのアミノ酸配列に従っ
て、常法どおり、そのＣ末端側のプロリンからクロロメ
チル樹脂に反応させペプチド結合樹脂を得た。この時の
アミノ酸は、ｔ−ブトキシカルボニル（以下、ｔ−Ｂｏ
ｃと略記する）基で保護されたｔ−Ｂｏｃアミノ酸を使
用した。次にこのペプチド結合樹脂をエタンジチオール
とチオアニソールからなる混合液に懸濁し、室温で１０
分間撹拌後、氷冷下でトリフルオロ酢酸を加え、更に１
０分間撹拌した。この混合液にトリフルオロメタンスル
ホン酸を滴下し、室温で３０分間撹拌した後、無水エー
テルを加えてその生成物を沈澱させて分離し、その沈澱
物を無水エーテルで数回洗浄した後、減圧下で乾燥し
た。このようにして得られた未精製の合成ペプチドは蒸
留水又はメタノールに溶解した後、逆相系のカラムＣ
１８（５μｍ）を用いたＨＰＬＣにより精製した。移動
相として（Ａ）０．１％ＴＦＡ含有蒸留水、（Ｂ）０．
１％ＴＦＡ含有アセトニトリル溶液を使用し、（Ａ）液
が７４分間で６８％→２８％の濃度勾配法により流速
１．７ｍＬ／ｍｉｎでクロマトグラフィーを行った。紫
外部波長２２２ｎｍで検出し、最大の吸収を示した溶出
画分を分取し、これを凍結乾燥することによって目的と
する合成ペンタペプチドを得た。
【００１７】この合成ペンタペプチドをマススペクトル
及びアミノ酸分析により分析した結果、アミノ酸配列及
びアミノ酸組成が前記で示したアミノ酸配列構造を有す
るペンタペプチドであることが確認された。このマスス
ペクトルとアミノ酸分析の結果は表１に示す通りであ
る。 Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏの合成法 アプライドバイオシステム社製のペプチド自動合成装置
４３０Ａ型を用いた固相法によって当該ペプチドを合成
した。固相担体としては、スチレンジビニルベンゼン共
重合体（ポリスチレン樹脂）をクロロメチル化した樹脂
を使用した。まず、当該ペプチドのアミノ酸配列に従っ
て、常法どおり、そのＣ末端側のプロリンからクロロメ
チル樹脂に反応させペプチド結合樹脂を得た。この時の
アミノ酸は、ｔ−ブトキシカルボニル（以下、ｔ−Ｂｏ
ｃと略記する）基で保護されたｔ−Ｂｏｃアミノ酸を使
用した。次にこのペプチド結合樹脂をエタンジチオール
とチオアニソールからなる混合液に懸濁し、室温で１０
分間撹拌後、氷冷下でトリフルオロ酢酸を加え、更に１
０分間撹拌した。この混合液にトリフルオロメタンスル
ホン酸を滴下し、室温で３０分間撹拌した後、無水エー
テルを加えてその生成物を沈澱させて分離し、その沈澱
物を無水エーテルで数回洗浄した後、減圧下で乾燥し
た。このようにして得られた未精製の合成ペプチドは蒸
留水又はメタノールに溶解した後、逆相系のカラムＣ
１８（５μｍ）を用いたＨＰＬＣにより精製した。移動
相として（Ａ）０．１％ＴＦＡ含有蒸留水、（Ｂ）０．
１％ＴＦＡ含有アセトニトリル溶液を使用し、（Ａ）液
が６３分間で６７％→３３％の濃度勾配法により流速
１．８ｍＬ／ｍｉｎでクロマトグラフィーを行った。紫
外部波長２１７ｎｍで検出し、最大の吸収を示した溶出
画分を分取し、これを凍結乾燥することによって目的と
する合成ペンタペプチドを得た。
及びアミノ酸分析により分析した結果、アミノ酸配列及
びアミノ酸組成が前記で示したアミノ酸配列構造を有す
るペンタペプチドであることが確認された。このマスス
ペクトルとアミノ酸分析の結果は表１に示す通りであ
る。 Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏの合成法 アプライドバイオシステム社製のペプチド自動合成装置
４３０Ａ型を用いた固相法によって当該ペプチドを合成
した。固相担体としては、スチレンジビニルベンゼン共
重合体（ポリスチレン樹脂）をクロロメチル化した樹脂
を使用した。まず、当該ペプチドのアミノ酸配列に従っ
て、常法どおり、そのＣ末端側のプロリンからクロロメ
チル樹脂に反応させペプチド結合樹脂を得た。この時の
アミノ酸は、ｔ−ブトキシカルボニル（以下、ｔ−Ｂｏ
ｃと略記する）基で保護されたｔ−Ｂｏｃアミノ酸を使
用した。次にこのペプチド結合樹脂をエタンジチオール
とチオアニソールからなる混合液に懸濁し、室温で１０
分間撹拌後、氷冷下でトリフルオロ酢酸を加え、更に１
０分間撹拌した。この混合液にトリフルオロメタンスル
ホン酸を滴下し、室温で３０分間撹拌した後、無水エー
テルを加えてその生成物を沈澱させて分離し、その沈澱
物を無水エーテルで数回洗浄した後、減圧下で乾燥し
た。このようにして得られた未精製の合成ペプチドは蒸
留水又はメタノールに溶解した後、逆相系のカラムＣ
１８（５μｍ）を用いたＨＰＬＣにより精製した。移動
相として（Ａ）０．１％ＴＦＡ含有蒸留水、（Ｂ）０．
１％ＴＦＡ含有アセトニトリル溶液を使用し、（Ａ）液
が６３分間で６７％→３３％の濃度勾配法により流速
１．８ｍＬ／ｍｉｎでクロマトグラフィーを行った。紫
外部波長２１７ｎｍで検出し、最大の吸収を示した溶出
画分を分取し、これを凍結乾燥することによって目的と
する合成ペンタペプチドを得た。
【００１８】この合成ペンタペプチドをマススペクトル
及びアミノ酸分析により分析した結果、アミノ酸配列及
びアミノ酸組成が前記で示したアミノ酸配列構造を有す
るペンタペプチドであることが確認された。このマスス
ペクトルとアミノ酸分析の結果は表１に示す通りであ
る。 Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙの合成法 アプライドバイオシステム社製のペプチド自動合成装置
４３０Ａ型を用いた固相法によって当該ペプチドを合成
した。固相担体としては、スチレンジビニルベンゼン共
重合体（ポリスチレン樹脂）をクロロメチル化した樹脂
を使用した。まず、当該ペプチドのアミノ酸配列に従っ
て、常法どおり、そのＣ末端側のグリシンからクロロメ
チル樹脂に反応させペプチド結合樹脂を得た。この時の
アミノ酸は、ｔ−ブトキシカルボニル（以下、ｔ−Ｂｏ
ｃと略記する）基で保護されたｔ−Ｂｏｃアミノ酸を使
用した。次にこのペプチド結合樹脂をエタンジチオール
とチオアニソールからなる混合液に懸濁し、室温で１０
分間撹拌後、氷冷下でトリフルオロ酢酸を加え、更に１
０分間撹拌した。この混合液にトリフルオロメタンスル
ホン酸を滴下し、室温で３０分間撹拌した後、無水エー
テルを加えてその生成物を沈澱させて分離し、その沈澱
物を無水エーテルで数回洗浄した後、減圧下で乾燥し
た。このようにして得られた未精製の合成ペプチドは蒸
留水又はメタノールに溶解した後、逆相系のカラムＣ
１８（５μｍ）を用いたＨＰＬＣにより精製した。移動
相として（Ａ）０．１％ＴＦＡ含有蒸留水、（Ｂ）０．
１％ＴＦＡ含有アセトニトリル溶液を使用し、（Ａ）液
が４４分間で６１％→２７％の濃度勾配法により流速
２．３ｍＬ／ｍｉｎでクロマトグラフィーを行った。紫
外部波長２２０ｎｍで検出し、最大の吸収を示した溶出
画分を分取し、これを凍結乾燥することによって目的と
する合成ペンタペプチドを得た。
及びアミノ酸分析により分析した結果、アミノ酸配列及
びアミノ酸組成が前記で示したアミノ酸配列構造を有す
るペンタペプチドであることが確認された。このマスス
ペクトルとアミノ酸分析の結果は表１に示す通りであ
る。 Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙの合成法 アプライドバイオシステム社製のペプチド自動合成装置
４３０Ａ型を用いた固相法によって当該ペプチドを合成
した。固相担体としては、スチレンジビニルベンゼン共
重合体（ポリスチレン樹脂）をクロロメチル化した樹脂
を使用した。まず、当該ペプチドのアミノ酸配列に従っ
て、常法どおり、そのＣ末端側のグリシンからクロロメ
チル樹脂に反応させペプチド結合樹脂を得た。この時の
アミノ酸は、ｔ−ブトキシカルボニル（以下、ｔ−Ｂｏ
ｃと略記する）基で保護されたｔ−Ｂｏｃアミノ酸を使
用した。次にこのペプチド結合樹脂をエタンジチオール
とチオアニソールからなる混合液に懸濁し、室温で１０
分間撹拌後、氷冷下でトリフルオロ酢酸を加え、更に１
０分間撹拌した。この混合液にトリフルオロメタンスル
ホン酸を滴下し、室温で３０分間撹拌した後、無水エー
テルを加えてその生成物を沈澱させて分離し、その沈澱
物を無水エーテルで数回洗浄した後、減圧下で乾燥し
た。このようにして得られた未精製の合成ペプチドは蒸
留水又はメタノールに溶解した後、逆相系のカラムＣ
１８（５μｍ）を用いたＨＰＬＣにより精製した。移動
相として（Ａ）０．１％ＴＦＡ含有蒸留水、（Ｂ）０．
１％ＴＦＡ含有アセトニトリル溶液を使用し、（Ａ）液
が４４分間で６１％→２７％の濃度勾配法により流速
２．３ｍＬ／ｍｉｎでクロマトグラフィーを行った。紫
外部波長２２０ｎｍで検出し、最大の吸収を示した溶出
画分を分取し、これを凍結乾燥することによって目的と
する合成ペンタペプチドを得た。
【００１９】この合成ペンタペプチドをマススペクトル
及びアミノ酸分析により分析した結果、アミノ酸配列及
びアミノ酸組成が前記で示したアミノ酸配列構造を有す
るペンタペプチドであることが確認された。このマスス
ペクトルとアミノ酸分析の結果は表１に示す通りであ
る。 Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙの合成法 アプライドバイオシステム社製のペプチド自動合成装置
４３０Ａ型を用いた固相法によって当該ペプチドを合成
した。固相担体としては、スチレンジビニルベンゼン共
重合体（ポリスチレン樹脂）をクロロメチル化した樹脂
を使用した。まず、当該ペプチドのアミノ酸配列に従っ
て、常法どおり、そのＣ末端側のグリシンからクロロメ
チル樹脂に反応させペプチド結合樹脂を得た。この時の
アミノ酸は、ｔ−ブトキシカルボニル（以下、ｔ−Ｂｏ
ｃと略記する）基で保護されたｔ−Ｂｏｃアミノ酸を使
用した。次にこのペプチド結合樹脂をエタンジチオール
とチオアニソールからなる混合液に懸濁し、室温で１０
分間撹拌後、氷冷下でトリフルオロ酢酸を加え、更に１
０分間撹拌した。この混合液にトリフルオロメタンスル
ホン酸を滴下し、室温で３０分間撹拌した後、無水エー
テルを加えてその生成物を沈澱させて分離し、その沈澱
物を無水エーテルで数回洗浄した後、減圧下で乾燥し
た。このようにして得られた未精製の合成ペプチドは蒸
留水又はメタノールに溶解した後、逆相系のカラムＣ
１８（５μｍ）を用いたＨＰＬＣにより精製した。移動
相として（Ａ）０．１％ＴＦＡ含有蒸留水、（Ｂ）０．
１％ＴＦＡ含有アセトニトリル溶液を使用し、（Ａ）液
が５８分間で６８％→３１％の濃度勾配法により流速
２．１ｍＬ／ｍｉｎでクロマトグラフィーを行った。紫
外部波長２１７ｎｍで検出し、最大の吸収を示した溶出
画分を分取し、これを凍結乾燥することによって目的と
する合成ペンタペプチドを得た。
及びアミノ酸分析により分析した結果、アミノ酸配列及
びアミノ酸組成が前記で示したアミノ酸配列構造を有す
るペンタペプチドであることが確認された。このマスス
ペクトルとアミノ酸分析の結果は表１に示す通りであ
る。 Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙの合成法 アプライドバイオシステム社製のペプチド自動合成装置
４３０Ａ型を用いた固相法によって当該ペプチドを合成
した。固相担体としては、スチレンジビニルベンゼン共
重合体（ポリスチレン樹脂）をクロロメチル化した樹脂
を使用した。まず、当該ペプチドのアミノ酸配列に従っ
て、常法どおり、そのＣ末端側のグリシンからクロロメ
チル樹脂に反応させペプチド結合樹脂を得た。この時の
アミノ酸は、ｔ−ブトキシカルボニル（以下、ｔ−Ｂｏ
ｃと略記する）基で保護されたｔ−Ｂｏｃアミノ酸を使
用した。次にこのペプチド結合樹脂をエタンジチオール
とチオアニソールからなる混合液に懸濁し、室温で１０
分間撹拌後、氷冷下でトリフルオロ酢酸を加え、更に１
０分間撹拌した。この混合液にトリフルオロメタンスル
ホン酸を滴下し、室温で３０分間撹拌した後、無水エー
テルを加えてその生成物を沈澱させて分離し、その沈澱
物を無水エーテルで数回洗浄した後、減圧下で乾燥し
た。このようにして得られた未精製の合成ペプチドは蒸
留水又はメタノールに溶解した後、逆相系のカラムＣ
１８（５μｍ）を用いたＨＰＬＣにより精製した。移動
相として（Ａ）０．１％ＴＦＡ含有蒸留水、（Ｂ）０．
１％ＴＦＡ含有アセトニトリル溶液を使用し、（Ａ）液
が５８分間で６８％→３１％の濃度勾配法により流速
２．１ｍＬ／ｍｉｎでクロマトグラフィーを行った。紫
外部波長２１７ｎｍで検出し、最大の吸収を示した溶出
画分を分取し、これを凍結乾燥することによって目的と
する合成ペンタペプチドを得た。
【００２０】この合成ペンタペプチドをマススペクトル
及びアミノ酸分析により分析した結果、アミノ酸配列及
びアミノ酸組成が前記で示したアミノ酸配列構造を有す
るペンタペプチドであることが確認された。このマスス
ペクトルとアミノ酸分析の結果は表１に示す通りであ
る。 Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ａｌａの合成法 アプライドバイオシステム社製のペプチド自動合成装置
４３０Ａ型を用いた固相法によって当該ペプチドを合成
した。固相担体としては、スチレンジビニルベンゼン共
重合体（ポリスチレン樹脂）をクロロメチル化した樹脂
を使用した。まず、当該ペプチドのアミノ酸配列に従っ
て、常法どおり、そのＣ末端側のアラニンからクロロメ
チル樹脂に反応させペプチド結合樹脂を得た。この時の
アミノ酸は、ｔ−ブトキシカルボニル（以下、ｔ−Ｂｏ
ｃと略記する）基で保護されたｔ−Ｂｏｃアミノ酸を使
用した。次にこのペプチド結合樹脂をエタンジチオール
とチオアニソールからなる混合液に懸濁し、室温で１０
分間撹拌後、氷冷下でトリフルオロ酢酸を加え、更に１
０分間撹拌した。この混合液にトリフルオロメタンスル
ホン酸を滴下し、室温で３０分間撹拌した後、無水エー
テルを加えてその生成物を沈澱させて分離し、その沈澱
物を無水エーテルで数回洗浄した後、減圧下で乾燥し
た。このようにして得られた未精製の合成ペプチドは蒸
留水又はメタノールに溶解した後、逆相系のカラムＣ
１８（５μｍ）を用いたＨＰＬＣにより精製した。移動
相として（Ａ）０．１％ＴＦＡ含有蒸留水、（Ｂ）０．
１％ＴＦＡ含有アセトニトリル溶液を使用し、（Ａ）液
が６７分間で８１％→４４％の濃度勾配法により流速
１．６ｍＬ／ｍｉｎでクロマトグラフィーを行った。紫
外部波長２１７ｎｍで検出し、最大の吸収を示した溶出
画分を分取し、これを凍結乾燥することによって目的と
する合成ペンタペプチドを得た。
及びアミノ酸分析により分析した結果、アミノ酸配列及
びアミノ酸組成が前記で示したアミノ酸配列構造を有す
るペンタペプチドであることが確認された。このマスス
ペクトルとアミノ酸分析の結果は表１に示す通りであ
る。 Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ａｌａの合成法 アプライドバイオシステム社製のペプチド自動合成装置
４３０Ａ型を用いた固相法によって当該ペプチドを合成
した。固相担体としては、スチレンジビニルベンゼン共
重合体（ポリスチレン樹脂）をクロロメチル化した樹脂
を使用した。まず、当該ペプチドのアミノ酸配列に従っ
て、常法どおり、そのＣ末端側のアラニンからクロロメ
チル樹脂に反応させペプチド結合樹脂を得た。この時の
アミノ酸は、ｔ−ブトキシカルボニル（以下、ｔ−Ｂｏ
ｃと略記する）基で保護されたｔ−Ｂｏｃアミノ酸を使
用した。次にこのペプチド結合樹脂をエタンジチオール
とチオアニソールからなる混合液に懸濁し、室温で１０
分間撹拌後、氷冷下でトリフルオロ酢酸を加え、更に１
０分間撹拌した。この混合液にトリフルオロメタンスル
ホン酸を滴下し、室温で３０分間撹拌した後、無水エー
テルを加えてその生成物を沈澱させて分離し、その沈澱
物を無水エーテルで数回洗浄した後、減圧下で乾燥し
た。このようにして得られた未精製の合成ペプチドは蒸
留水又はメタノールに溶解した後、逆相系のカラムＣ
１８（５μｍ）を用いたＨＰＬＣにより精製した。移動
相として（Ａ）０．１％ＴＦＡ含有蒸留水、（Ｂ）０．
１％ＴＦＡ含有アセトニトリル溶液を使用し、（Ａ）液
が６７分間で８１％→４４％の濃度勾配法により流速
１．６ｍＬ／ｍｉｎでクロマトグラフィーを行った。紫
外部波長２１７ｎｍで検出し、最大の吸収を示した溶出
画分を分取し、これを凍結乾燥することによって目的と
する合成ペンタペプチドを得た。
【００２１】この合成ペンタペプチドをマススペクトル
及びアミノ酸分析により分析した結果、アミノ酸配列及
びアミノ酸組成が前記で示したアミノ酸配列構造を有す
るペンタペプチドであることが確認された。このマスス
ペクトルとアミノ酸分析の結果は表１に示す通りであ
る。 Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ａｌａの合成法 アプライドバイオシステム社製のペプチド自動合成装置
４３０Ａ型を用いた固相法によって当該ペプチドを合成
した。固相担体としては、スチレンジビニルベンゼン共
重合体（ポリスチレン樹脂）をクロロメチル化した樹脂
を使用した。まず、当該ペプチドのアミノ酸配列に従っ
て、常法どおり、そのＣ末端側のアラニンからクロロメ
チル樹脂に反応させペプチド結合樹脂を得た。この時の
アミノ酸は、ｔ−ブトキシカルボニル（以下、ｔ−Ｂｏ
ｃと略記する）基で保護されたｔ−Ｂｏｃアミノ酸を使
用した。次にこのペプチド結合樹脂をエタンジチオール
とチオアニソールからなる混合液に懸濁し、室温で１０
分間撹拌後、氷冷下でトリフルオロ酢酸を加え、更に１
０分間撹拌した。この混合液にトリフルオロメタンスル
ホン酸を滴下し、室温で３０分間撹拌した後、無水エー
テルを加えてその生成物を沈澱させて分離し、その沈澱
物を無水エーテルで数回洗浄した後、減圧下で乾燥し
た。このようにして得られた未精製の合成ペプチドは蒸
留水又はメタノールに溶解した後、逆相系のカラムＣ
１８（５μｍ）を用いたＨＰＬＣにより精製した。移動
相として（Ａ）０．１％ＴＦＡ含有蒸留水、（Ｂ）０．
１％ＴＦＡ含有アセトニトリル溶液を使用し、（Ａ）液
が５８分間で８１％→４３％の濃度勾配法により流速
１．８ｍＬ／ｍｉｎでクロマトグラフィーを行った。紫
外部波長２２０ｎｍで検出し、最大の吸収を示した溶出
画分を分取し、これを凍結乾燥することによって目的と
する合成テトラペプチドを得た。
及びアミノ酸分析により分析した結果、アミノ酸配列及
びアミノ酸組成が前記で示したアミノ酸配列構造を有す
るペンタペプチドであることが確認された。このマスス
ペクトルとアミノ酸分析の結果は表１に示す通りであ
る。 Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ａｌａの合成法 アプライドバイオシステム社製のペプチド自動合成装置
４３０Ａ型を用いた固相法によって当該ペプチドを合成
した。固相担体としては、スチレンジビニルベンゼン共
重合体（ポリスチレン樹脂）をクロロメチル化した樹脂
を使用した。まず、当該ペプチドのアミノ酸配列に従っ
て、常法どおり、そのＣ末端側のアラニンからクロロメ
チル樹脂に反応させペプチド結合樹脂を得た。この時の
アミノ酸は、ｔ−ブトキシカルボニル（以下、ｔ−Ｂｏ
ｃと略記する）基で保護されたｔ−Ｂｏｃアミノ酸を使
用した。次にこのペプチド結合樹脂をエタンジチオール
とチオアニソールからなる混合液に懸濁し、室温で１０
分間撹拌後、氷冷下でトリフルオロ酢酸を加え、更に１
０分間撹拌した。この混合液にトリフルオロメタンスル
ホン酸を滴下し、室温で３０分間撹拌した後、無水エー
テルを加えてその生成物を沈澱させて分離し、その沈澱
物を無水エーテルで数回洗浄した後、減圧下で乾燥し
た。このようにして得られた未精製の合成ペプチドは蒸
留水又はメタノールに溶解した後、逆相系のカラムＣ
１８（５μｍ）を用いたＨＰＬＣにより精製した。移動
相として（Ａ）０．１％ＴＦＡ含有蒸留水、（Ｂ）０．
１％ＴＦＡ含有アセトニトリル溶液を使用し、（Ａ）液
が５８分間で８１％→４３％の濃度勾配法により流速
１．８ｍＬ／ｍｉｎでクロマトグラフィーを行った。紫
外部波長２２０ｎｍで検出し、最大の吸収を示した溶出
画分を分取し、これを凍結乾燥することによって目的と
する合成テトラペプチドを得た。
【００２２】この合成テトラペプチドをマススペクトル
及びアミノ酸分析により分析した結果、アミノ酸配列及
びアミノ酸組成が前記で示したアミノ酸配列構造を有す
るテトラペプチドであることが確認された。このマスス
ペクトルとアミノ酸分析の結果は表１に示す通りであ
る。 Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏの合成法 アプライドバイオシステム社製のペプチド自動合成装置
４３０Ａ型を用いた固相法によって当該ペプチドを合成
した。固相担体としては、スチレンジビニルベンゼン共
重合体（ポリスチレン樹脂）をクロロメチル化した樹脂
を使用した。まず、当該ペプチドのアミノ酸配列に従っ
て、常法どおり、そのＣ末端側のプロリンからクロロメ
チル樹脂に反応させペプチド結合樹脂を得た。この時の
アミノ酸は、ｔ−ブトキシカルボニル（以下、ｔ−Ｂｏ
ｃと略記する）基で保護されたｔ−Ｂｏｃアミノ酸を使
用した。次にこのペプチド結合樹脂をエタンジチオール
とチオアニソールからなる混合液に懸濁し、室温で１０
分間撹拌後、氷冷下でトリフルオロ酢酸を加え、更に１
０分間撹拌した。この混合液にトリフルオロメタンスル
ホン酸を滴下し、室温で３０分間撹拌した後、無水エー
テルを加えてその生成物を沈澱させて分離し、その沈澱
物を無水エーテルで数回洗浄した後、減圧下で乾燥し
た。このようにして得られた未精製の合成ペプチドは蒸
留水又はメタノールに溶解した後、逆相系のカラムＣ
１８（５μｍ）を用いたＨＰＬＣにより精製した。移動
相として（Ａ）０．１％ＴＦＡ含有蒸留水、（Ｂ）０．
１％ＴＦＡ含有アセトニトリル溶液を使用し、（Ａ）液
が５６分間で６５％→２５％の濃度勾配法により流速
１．５ｍＬ／ｍｉｎでクロマトグラフィーを行った。紫
外部波長２１９ｎｍで検出し、最大の吸収を示した溶出
画分を分取し、これを凍結乾燥することによって目的と
する合成ペンタペプチドを得た。この合成ペンタペプチ
ドをマススペクトル及びアミノ酸分析により分析した結
果、アミノ酸配列及びアミノ酸組成が前記で示したアミ
ノ酸配列構造を有するペンタペプチドであることが確認
された。このマススペクトルとアミノ酸分析の結果は表
１に示す通りである。合成によって得られた本発明に係
る新規の１３種類のワカメペプチドは、以下に示す試験
によって薬理効果が確認された。
及びアミノ酸分析により分析した結果、アミノ酸配列及
びアミノ酸組成が前記で示したアミノ酸配列構造を有す
るテトラペプチドであることが確認された。このマスス
ペクトルとアミノ酸分析の結果は表１に示す通りであ
る。 Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏの合成法 アプライドバイオシステム社製のペプチド自動合成装置
４３０Ａ型を用いた固相法によって当該ペプチドを合成
した。固相担体としては、スチレンジビニルベンゼン共
重合体（ポリスチレン樹脂）をクロロメチル化した樹脂
を使用した。まず、当該ペプチドのアミノ酸配列に従っ
て、常法どおり、そのＣ末端側のプロリンからクロロメ
チル樹脂に反応させペプチド結合樹脂を得た。この時の
アミノ酸は、ｔ−ブトキシカルボニル（以下、ｔ−Ｂｏ
ｃと略記する）基で保護されたｔ−Ｂｏｃアミノ酸を使
用した。次にこのペプチド結合樹脂をエタンジチオール
とチオアニソールからなる混合液に懸濁し、室温で１０
分間撹拌後、氷冷下でトリフルオロ酢酸を加え、更に１
０分間撹拌した。この混合液にトリフルオロメタンスル
ホン酸を滴下し、室温で３０分間撹拌した後、無水エー
テルを加えてその生成物を沈澱させて分離し、その沈澱
物を無水エーテルで数回洗浄した後、減圧下で乾燥し
た。このようにして得られた未精製の合成ペプチドは蒸
留水又はメタノールに溶解した後、逆相系のカラムＣ
１８（５μｍ）を用いたＨＰＬＣにより精製した。移動
相として（Ａ）０．１％ＴＦＡ含有蒸留水、（Ｂ）０．
１％ＴＦＡ含有アセトニトリル溶液を使用し、（Ａ）液
が５６分間で６５％→２５％の濃度勾配法により流速
１．５ｍＬ／ｍｉｎでクロマトグラフィーを行った。紫
外部波長２１９ｎｍで検出し、最大の吸収を示した溶出
画分を分取し、これを凍結乾燥することによって目的と
する合成ペンタペプチドを得た。この合成ペンタペプチ
ドをマススペクトル及びアミノ酸分析により分析した結
果、アミノ酸配列及びアミノ酸組成が前記で示したアミ
ノ酸配列構造を有するペンタペプチドであることが確認
された。このマススペクトルとアミノ酸分析の結果は表
１に示す通りである。合成によって得られた本発明に係
る新規の１３種類のワカメペプチドは、以下に示す試験
によって薬理効果が確認された。
【００２３】試験例１
（アンジオテンシン変換酵素阻害活性測定法）ＡＣＥ
（シグマ社製、酵素番号ＥＣ３．４．１５．１）２．５
ｍＵ、合成基質Ｈｉｐｐｕｒｙｌ−Ｌ−ｈｉｓｔｉｄｙ
ｌ−Ｌ−ｌｅｕｃｉｎｅ（ペプチド研究所製）１２．５
ｍＭを用いＬｉｅｂｅｒｍａｎの測定法を改良した山本
等の方法［日胸疾会誌，１８巻，２９７−３０２頁（１
９８９年）］に準じて測定した。すなわち、生成した馬
尿酸を酢酸エチルにて抽出し２２５ｎｍの吸光度で測定
した。被検液での吸光度をＥｓ、被検液の代わりに緩衝
液を加えた時の値をＥｃ、予め反応停止液を加えて反応
させた時の値をＥｂとして次式から阻害率を求めた。 阻害率（％）＝（Ｅｃ−Ｅｓ）／（Ｅｃ−Ｅｂ）×１０
０ ＡＣＥ阻害剤の阻害活性ＩＣ５０値は、ＡＣＥの酵素活
性を５０％（阻害率）阻害するために必要な試料の濃度
（Ｍ）で示した。本発明に係る新規な１３種類のワカメ
ペプチドの牛肺血清アンジオテンシン変換酵素（ＡＣ
Ｅ）に対する阻害活性（ＩＣ５０値）は表１に示す通り
である。
（シグマ社製、酵素番号ＥＣ３．４．１５．１）２．５
ｍＵ、合成基質Ｈｉｐｐｕｒｙｌ−Ｌ−ｈｉｓｔｉｄｙ
ｌ−Ｌ−ｌｅｕｃｉｎｅ（ペプチド研究所製）１２．５
ｍＭを用いＬｉｅｂｅｒｍａｎの測定法を改良した山本
等の方法［日胸疾会誌，１８巻，２９７−３０２頁（１
９８９年）］に準じて測定した。すなわち、生成した馬
尿酸を酢酸エチルにて抽出し２２５ｎｍの吸光度で測定
した。被検液での吸光度をＥｓ、被検液の代わりに緩衝
液を加えた時の値をＥｃ、予め反応停止液を加えて反応
させた時の値をＥｂとして次式から阻害率を求めた。 阻害率（％）＝（Ｅｃ−Ｅｓ）／（Ｅｃ−Ｅｂ）×１０
０ ＡＣＥ阻害剤の阻害活性ＩＣ５０値は、ＡＣＥの酵素活
性を５０％（阻害率）阻害するために必要な試料の濃度
（Ｍ）で示した。本発明に係る新規な１３種類のワカメ
ペプチドの牛肺血清アンジオテンシン変換酵素（ＡＣ
Ｅ）に対する阻害活性（ＩＣ５０値）は表１に示す通り
である。
【００２４】試験例２
（高血圧自然発症ラットへ投与時の降圧効果）実験動物
は日本チャールズ・リバー社より１５週齢雄性高血圧自
然発症ラット（以下、ＳＨＲと略記する。）を購入し、
１週間の予備飼育後、収縮期血圧が１６０ｍｍＨｇ以上
（体重２８０〜３３０ｇ）の動物６匹１群として用い
た。ラットは、室温２３±２℃、湿度５５±１０％およ
び１２時間明暗（午前６時〜午後６時点灯）に調整され
た飼育室でステンレスワイヤー製ラット用個別ケージに
１匹ずつ収容し飼育した。飼料はオリエンタル酵母社製
ＭＦ粉末飼料を、飲水は自家揚水（水道水質基準適合）
をそれぞれ自由に摂取させた。血圧は非観血的尾動脈血
圧測定装置（理研開発社製、ＰＳ−１００型）を用いｔ
ａｉｌ−ｃｕｆｆ法により、投与前、投与後６時間後の
ＳＨＲ尾動脈の収縮期血圧（ｍｍＨｇ）の測定を各５回
づつ行い、得られた測定値の最高値と最低値を棄却し、
３回の平均値をもって各時間の測定値とした。本発明に
係る新規な合成ペプチド各々２０ｍｇ／ｋｇを、ＳＨＲ
に経口投与した時の各血圧値（ｍｍＨｇ）への作用につ
いての結果は、表２に示す通りである。 以上の試験の結果、本発明に係る新規な１３種類のワカ
メペプチドは、アンジオテンシン変換酵素阻害活性を有
し、ｉｎｖｉｖｏ（生体内）においても有意な血圧降下
作用を示すことが確認された。従って、本発明に係る新
規な１３種類のワカメペプチドは高血圧症の治療又は予
防薬として有用である。尚、本発明に係る新規な１３種
類のワカメペプチドは、構造的にそのアミノ酸配列を部
分構造とするペプチドにおいて、構造中に採用すること
もできる。
は日本チャールズ・リバー社より１５週齢雄性高血圧自
然発症ラット（以下、ＳＨＲと略記する。）を購入し、
１週間の予備飼育後、収縮期血圧が１６０ｍｍＨｇ以上
（体重２８０〜３３０ｇ）の動物６匹１群として用い
た。ラットは、室温２３±２℃、湿度５５±１０％およ
び１２時間明暗（午前６時〜午後６時点灯）に調整され
た飼育室でステンレスワイヤー製ラット用個別ケージに
１匹ずつ収容し飼育した。飼料はオリエンタル酵母社製
ＭＦ粉末飼料を、飲水は自家揚水（水道水質基準適合）
をそれぞれ自由に摂取させた。血圧は非観血的尾動脈血
圧測定装置（理研開発社製、ＰＳ−１００型）を用いｔ
ａｉｌ−ｃｕｆｆ法により、投与前、投与後６時間後の
ＳＨＲ尾動脈の収縮期血圧（ｍｍＨｇ）の測定を各５回
づつ行い、得られた測定値の最高値と最低値を棄却し、
３回の平均値をもって各時間の測定値とした。本発明に
係る新規な合成ペプチド各々２０ｍｇ／ｋｇを、ＳＨＲ
に経口投与した時の各血圧値（ｍｍＨｇ）への作用につ
いての結果は、表２に示す通りである。 以上の試験の結果、本発明に係る新規な１３種類のワカ
メペプチドは、アンジオテンシン変換酵素阻害活性を有
し、ｉｎｖｉｖｏ（生体内）においても有意な血圧降下
作用を示すことが確認された。従って、本発明に係る新
規な１３種類のワカメペプチドは高血圧症の治療又は予
防薬として有用である。尚、本発明に係る新規な１３種
類のワカメペプチドは、構造的にそのアミノ酸配列を部
分構造とするペプチドにおいて、構造中に採用すること
もできる。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ｃ０７Ｋ 5/103 Ａ６１Ｋ 37/64
Claims (26)
- 【請求項１】 次式；Ｖａｌ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｐ
ｒｏ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏで示されるＬ体のアミノ
酸の配列によるペプチド構造を有する新規なペプチド。 - 【請求項２】 次式；Ｖａｌ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｐ
ｒｏ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏで示されるＬ体のアミノ
酸の配列によるペプチド構造を有する新規なペプチドを
有効成分として含有することを特徴とするアンジオテン
シン変換酵素阻害剤。 - 【請求項３】 次式；Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐ
ｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏで示されるＬ体のアミノ酸の配列
によるペプチド構造を有する新規なペプチド。 - 【請求項４】 次式；Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐ
ｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏで示されるＬ体のアミノ酸の配列
によるペプチド構造を有する新規なペプチドを有効成分
として含有することを特徴とするアンジオテンシン変換
酵素阻害剤。 - 【請求項５】 次式；Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐ
ｒｏ−Ａｓｎで示されるＬ体のアミノ酸の配列によるペ
プチド構造を有する新規なペプチド。 - 【請求項６】 次式；Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐ
ｒｏ−Ａｓｎで示されるＬ体のアミノ酸の配列によるペ
プチド構造を有する新規なペプチドを有効成分として含
有することを特徴とするアンジオテンシン変換酵素阻害
剤。 - 【請求項７】 次式；Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｐ
ｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏで示されるＬ体のアミノ酸の配列
によるペプチド構造を有する新規なペプチド。 - 【請求項８】 次式；Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｐ
ｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏで示されるＬ体のアミノ酸の配列
によるペプチド構造を有する新規なペプチドを有効成分
として含有することを特徴とするアンジオテンシン変換
酵素阻害剤。 - 【請求項９】 次式；Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐ
ｒｏ−Ｐｒｏで示されるＬ体のアミノ酸の配列によるペ
プチド構造を有する新規なペプチド。 - 【請求項１０】 次式；Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐ
ｒｏ−Ｐｒｏで示されるＬ体のアミノ酸の配列によるペ
プチド構造を有する新規なペプチドを有効成分として含
有することを特徴とするアンジオテンシン変換酵素阻害
剤。 - 【請求項１１】 次式；Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐ
ｒｏ−Ｐｒｏで示されるＬ体のアミノ酸の配列によるペ
プチド構造を有する新規なペプチド。 - 【請求項１２】 次式；Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐ
ｒｏ−Ｐｒｏで示されるＬ体のアミノ酸の配列によるペ
プチド構造を有する新規なペプチドを有効成分として含
有することを特徴とするアンジオテンシン変換酵素阻害
剤。 - 【請求項１３】 次式；Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｐ
ｒｏ−Ｐｒｏで示されるＬ体のアミノ酸の配列によるペ
プチド構造を有する新規なペプチド。 - 【請求項１４】 次式；Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｐ
ｒｏ−Ｐｒｏで示されるＬ体のアミノ酸の配列によるペ
プチド構造を有する新規なペプチドを有効成分として含
有することを特徴とするアンジオテンシン変換酵素阻害
剤。 - 【請求項１５】 次式；Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐ
ｒｏ−Ｐｒｏで示されるＬ体のアミノ酸の配列によるペ
プチド構造を有する新規なペプチド。 - 【請求項１６】 次式；Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐ
ｒｏ−Ｐｒｏで示されるＬ体のアミノ酸の配列によるペ
プチド構造を有する新規なペプチドを有効成分として含
有することを特徴とするアンジオテンシン変換酵素阻害
剤。 - 【請求項１７】 次式；Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐ
ｒｏ−Ｔｈｒで示されるＬ体のアミノ酸の配列によるペ
プチド構造を有する新規なペプチド。 - 【請求項１８】 次式；Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐ
ｒｏ−Ｔｈｒで示されるＬ体のアミノ酸の配列によるペ
プチド構造を有する新規なペプチドを有効成分として含
有することを特徴とするアンジオテンシン変換酵素阻害
剤。 - 【請求項１９】 次式；Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐ
ｒｏ−Ｇｌｙで示されるＬ体のアミノ酸の配列によるペ
プチド構造を有する新規なペプチド。 - 【請求項２０】 次式；Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐ
ｒｏ−Ｇｌｙで示されるＬ体のアミノ酸の配列によるペ
プチド構造を有する新規なペプチドを有効成分として含
有することを特徴とするアンジオテンシン変換酵素阻害
剤。 - 【請求項２１】 次式；Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｉ
ｌｅ−Ａｌａで示されるＬ体のアミノ酸の配列によるペ
プチド構造を有する新規なペプチド。 - 【請求項２２】 次式；Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｉ
ｌｅ−Ａｌａで示されるＬ体のアミノ酸の配列によるペ
プチド構造を有する新規なペプチドを有効成分として含
有することを特徴とするアンジオテンシン変換酵素阻害
剤。 - 【請求項２３】 次式；Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ａ
ｌａで示されるＬ体のアミノ酸の配列によるペプチド構
造を有する新規なペプチド。 - 【請求項２４】 次式；Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ａ
ｌａで示されるＬ体のアミノ酸の配列によるペプチド構
造を有する新規なペプチドを有効成分として含有するこ
とを特徴とするアンジオテンシン変換酵素阻害剤。 - 【請求項２５】 次式；Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｐ
ｒｏ−Ｐｒｏで示されるＬ体のアミノ酸の配列によるペ
プチド構造を有する新規なペプチド。 - 【請求項２６】 次式；Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｐ
ｒｏ−Ｐｒｏで示されるＬ体のアミノ酸の配列によるペ
プチド構造を有する新規なペプチドを有効成分として含
有することを特徴とするアンジオテンシン変換酵素阻害
剤。
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002112701A JP2003267994A (ja) | 2002-03-11 | 2002-03-11 | 新規なペプチドおよびアンジオテンシン変換酵素阻害剤 |
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002112701A JP2003267994A (ja) | 2002-03-11 | 2002-03-11 | 新規なペプチドおよびアンジオテンシン変換酵素阻害剤 |
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|---|---|
| JP2003267994A true JP2003267994A (ja) | 2003-09-25 |
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Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2002112701A Pending JP2003267994A (ja) | 2002-03-11 | 2002-03-11 | 新規なペプチドおよびアンジオテンシン変換酵素阻害剤 |
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| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2003267994A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004244359A (ja) * | 2003-02-13 | 2004-09-02 | Shirako:Kk | 血管拡張性医薬及び健康食品組成物 |
| WO2005058070A1 (en) * | 2003-12-15 | 2005-06-30 | Unilever N.V. | Peptides having an ace inhibiting effect |
| WO2006114192A1 (en) * | 2005-04-28 | 2006-11-02 | Unilever N.V. | Peptides having an ace inhibiting effect |
| WO2008020778A1 (fr) * | 2006-07-31 | 2008-02-21 | Institut Molekulyarnoi Genetiki Rossiiskoi Akademii Nauk (Img Ran) | Famille de peptides dotés d'une activité analgésique |
| JP2019094271A (ja) * | 2017-11-20 | 2019-06-20 | 株式会社ニッピ | アンジオテンシン変換酵素阻害剤、食品、飲料、およびサプリメント |
-
2002
- 2002-03-11 JP JP2002112701A patent/JP2003267994A/ja active Pending
Cited By (6)
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| JP2019094271A (ja) * | 2017-11-20 | 2019-06-20 | 株式会社ニッピ | アンジオテンシン変換酵素阻害剤、食品、飲料、およびサプリメント |
| JP7048270B2 (ja) | 2017-11-20 | 2022-04-05 | 株式会社ニッピ | アンジオテンシン変換酵素阻害剤、食品、飲料、およびサプリメント |
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