JPH1036391A - 新規なペプチドおよびアンジオテンシン変換酵素阻害剤 - Google Patents
新規なペプチドおよびアンジオテンシン変換酵素阻害剤Info
- Publication number
- JPH1036391A JPH1036391A JP8221634A JP22163496A JPH1036391A JP H1036391 A JPH1036391 A JP H1036391A JP 8221634 A JP8221634 A JP 8221634A JP 22163496 A JP22163496 A JP 22163496A JP H1036391 A JPH1036391 A JP H1036391A
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- JP
- Japan
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- peptide
- tyr
- amino acid
- acid sequence
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- Pending
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 海苔の蛋白質分解酵素分解液から、アンジ
オテンシン変換酵素阻害作用を有する新規なペンタペブ
チド、及び、ヒジキの蛋白質分解酵素分解液から、アン
ジオテンシン変換酵素阻害作用を有する新規なテトラペ
プチドを提供する。 【構成】 海苔を蛋白質分解酵素等で処理し、新規な
アンジオテンシン変換酵素阻害作用を有するペンタペプ
チドはＡｌａ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒであ
り、血圧降下作用を有し、毒性も極めて低い。又、ヒジ
キを蛋白質分解酵素等で処理し、新規なアンジオテンシ
ン変換酵素阻害作用を有するテトラペブチドはＣｙｓ−
Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒであり、血圧降下作用を有し、
毒性も極めて低い。
オテンシン変換酵素阻害作用を有する新規なペンタペブ
チド、及び、ヒジキの蛋白質分解酵素分解液から、アン
ジオテンシン変換酵素阻害作用を有する新規なテトラペ
プチドを提供する。 【構成】 海苔を蛋白質分解酵素等で処理し、新規な
アンジオテンシン変換酵素阻害作用を有するペンタペプ
チドはＡｌａ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒであ
り、血圧降下作用を有し、毒性も極めて低い。又、ヒジ
キを蛋白質分解酵素等で処理し、新規なアンジオテンシ
ン変換酵素阻害作用を有するテトラペブチドはＣｙｓ−
Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒであり、血圧降下作用を有し、
毒性も極めて低い。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、医薬品として有用性を
有する下記のアミノ酸配列のペプチド構造を有するペプ
チドならびにそのペプチドを有効成分とするアンジオテ
ンシン変換酵素阻害剤に関する。 Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ （式中、アミノ酸残基を表わす各記号は、アミノ酸化学
において慣用の表示法によるものである。）
有する下記のアミノ酸配列のペプチド構造を有するペプ
チドならびにそのペプチドを有効成分とするアンジオテ
ンシン変換酵素阻害剤に関する。 Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ （式中、アミノ酸残基を表わす各記号は、アミノ酸化学
において慣用の表示法によるものである。）
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】高血圧
は、病因的に血圧上昇の明らかなもの（病候性高血圧）
と不明なもの（本態性高血圧）とに大別されている。病
候性高血圧は原因となる疾患を治癒させることで高血圧
を治癒させることができるが、本態性高血圧では原因に
対する直接的な治療法は困難である。従来、レニンーア
ンジオテンシン系（以下、Ｒ・Ａ系と略す）は、本態性
高血圧の重要な要因の一つであると考えられており、こ
こ２０年来、Ｒ・Ａ系で中心的な役割を果たしているア
ンジオテンシン変換酵素（以下、ＡＣＥと略す）の活性
を阻害することによって、Ｒ・Ａ系を調節して本態性高
血圧を調節する試みが行われてきた。即ち、ＡＣＥの活
性を阻害することによって血圧を降下させることが可能
であり、又、このことは臨床的に高血圧の予防、治療に
有効であると考えられている。この目的のためプロリン
の誘導体であるカプトリルが合成され、その降圧作用が
確認されて以来、カプトリルの構造研究に基づく種々の
ＡＣＥ阻害物質の合成研究が盛んに行われ、最近ではマ
レイン酸エナラブリルやアラセブリル等の物質が、次々
と臨床の場に供されている。一方、ＡＣＥ阻害物質とし
ては、上記の合成品の他に天然物又は天然物由来のペプ
チドとして蛇毒由来のブラジキニン増強因子（Ｃ末端が
Ｐｒｏ）［Ｓ．Ｈ．Ｆｅｒｒｅｉａ ｅｔ ａｌ：Ｂｉ
ｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，９，３５８３（１９７０）］、
ゼラチンのコラゲナーゼ消化由来の６種類のペプチド
（いずれもＣ末端がＡｌａ−Ｈｙｐ）［Ｇ．Ｏｓｈｉｍ
ａ ｅｔ ａｌ：Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａ
ｃｔａ．，５５６，１２８（１９７９）］、牛カゼイン
のトリプシン消化物由来のペプチド（Ｃ末端がＧｌｙ−
Ｌｙｓ）［Ｓ．Ｍａｒｕｙａｍａ ｅｔ ａｌ：Ａｇｒ
ｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，４６，１３９３（１９８
２）］等に始まり本発明者等のイワシ筋肉由来の５種の
ヘクサペプチド（いずれもＣ末端から２番目または３番
目がＰｒｏ、Ｎ末端がＬｅｕ）［特公平７−０７４２３
６号］が挙げられ、いずれもＡＣＥ阻害剤となり得るこ
とが開示されている。更に、合成法により得た鎖長の短
いジ、トリペプチド［特開平６−８７８８６号、特開平
６−１６５６８号公報］についての提案は行なわれてい
るが、規則性を持ったアミノ酸配列を有する鎖長の長い
ペプチドのＡＣＥ阻害作用並びに経口投与による降圧効
果（薬理効果）は不明であり、発見されてから長期間経
過しているが、未だ医薬品としての開発が進んでいると
の報告はない。食品の場合には、鈴木等［農化，５７，
１１４３（１９８３）］が大豆、茶類、果実類などでＡ
ＣＥ阻害活性を認めているが、しかし、これまでに海藻
類（褐藻、緑藻類）にＡＣＥ阻害物質があることは知ら
れていない。
は、病因的に血圧上昇の明らかなもの（病候性高血圧）
と不明なもの（本態性高血圧）とに大別されている。病
候性高血圧は原因となる疾患を治癒させることで高血圧
を治癒させることができるが、本態性高血圧では原因に
対する直接的な治療法は困難である。従来、レニンーア
ンジオテンシン系（以下、Ｒ・Ａ系と略す）は、本態性
高血圧の重要な要因の一つであると考えられており、こ
こ２０年来、Ｒ・Ａ系で中心的な役割を果たしているア
ンジオテンシン変換酵素（以下、ＡＣＥと略す）の活性
を阻害することによって、Ｒ・Ａ系を調節して本態性高
血圧を調節する試みが行われてきた。即ち、ＡＣＥの活
性を阻害することによって血圧を降下させることが可能
であり、又、このことは臨床的に高血圧の予防、治療に
有効であると考えられている。この目的のためプロリン
の誘導体であるカプトリルが合成され、その降圧作用が
確認されて以来、カプトリルの構造研究に基づく種々の
ＡＣＥ阻害物質の合成研究が盛んに行われ、最近ではマ
レイン酸エナラブリルやアラセブリル等の物質が、次々
と臨床の場に供されている。一方、ＡＣＥ阻害物質とし
ては、上記の合成品の他に天然物又は天然物由来のペプ
チドとして蛇毒由来のブラジキニン増強因子（Ｃ末端が
Ｐｒｏ）［Ｓ．Ｈ．Ｆｅｒｒｅｉａ ｅｔ ａｌ：Ｂｉ
ｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，９，３５８３（１９７０）］、
ゼラチンのコラゲナーゼ消化由来の６種類のペプチド
（いずれもＣ末端がＡｌａ−Ｈｙｐ）［Ｇ．Ｏｓｈｉｍ
ａ ｅｔ ａｌ：Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａ
ｃｔａ．，５５６，１２８（１９７９）］、牛カゼイン
のトリプシン消化物由来のペプチド（Ｃ末端がＧｌｙ−
Ｌｙｓ）［Ｓ．Ｍａｒｕｙａｍａ ｅｔ ａｌ：Ａｇｒ
ｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，４６，１３９３（１９８
２）］等に始まり本発明者等のイワシ筋肉由来の５種の
ヘクサペプチド（いずれもＣ末端から２番目または３番
目がＰｒｏ、Ｎ末端がＬｅｕ）［特公平７−０７４２３
６号］が挙げられ、いずれもＡＣＥ阻害剤となり得るこ
とが開示されている。更に、合成法により得た鎖長の短
いジ、トリペプチド［特開平６−８７８８６号、特開平
６−１６５６８号公報］についての提案は行なわれてい
るが、規則性を持ったアミノ酸配列を有する鎖長の長い
ペプチドのＡＣＥ阻害作用並びに経口投与による降圧効
果（薬理効果）は不明であり、発見されてから長期間経
過しているが、未だ医薬品としての開発が進んでいると
の報告はない。食品の場合には、鈴木等［農化，５７，
１１４３（１９８３）］が大豆、茶類、果実類などでＡ
ＣＥ阻害活性を認めているが、しかし、これまでに海藻
類（褐藻、緑藻類）にＡＣＥ阻害物質があることは知ら
れていない。
【０００３】
【課題を解決するための手段】本発明者は、前記の課題
を解決するために鋭意研究した結果、海藻類（褐藻、緑
藻類）から得られた本発明の新規なペプチドが、血圧降
下作用を有することを見出し、本発明を完成するに至っ
た。即ち、海苔（褐藻）の蛋白質分解酵素の分解液から
及びヒジキ（緑藻）の蛋白質分解酵素の分解液から薬理
作用を有する物質を検索し、新規なペンタペプチドとテ
トラペプチドに強いアンジオテンシン変換酵素（ＡＣ
Ｅ）阻害作用を有することを見出した。そして、これら
ペプチドを医薬品として実用化するための研究を鋭意行
い、その結果、これらペプチドが血圧降下作用を有し、
天然物由来のＡＣＥ阻害剤としての有用性を見出した。
本発明は係る知見に基づくものである。本発明に係る新
規なペプチドは、次式、（１）及び（２） （１） Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ （２） Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ の式で示されるＬ体のアミノ酸の配列を有する新規なペ
ンタペプチド及びテトラペプチドであり、常温における
性状は白色の粉末である。
を解決するために鋭意研究した結果、海藻類（褐藻、緑
藻類）から得られた本発明の新規なペプチドが、血圧降
下作用を有することを見出し、本発明を完成するに至っ
た。即ち、海苔（褐藻）の蛋白質分解酵素の分解液から
及びヒジキ（緑藻）の蛋白質分解酵素の分解液から薬理
作用を有する物質を検索し、新規なペンタペプチドとテ
トラペプチドに強いアンジオテンシン変換酵素（ＡＣ
Ｅ）阻害作用を有することを見出した。そして、これら
ペプチドを医薬品として実用化するための研究を鋭意行
い、その結果、これらペプチドが血圧降下作用を有し、
天然物由来のＡＣＥ阻害剤としての有用性を見出した。
本発明は係る知見に基づくものである。本発明に係る新
規なペプチドは、次式、（１）及び（２） （１） Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ （２） Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ の式で示されるＬ体のアミノ酸の配列を有する新規なペ
ンタペプチド及びテトラペプチドであり、常温における
性状は白色の粉末である。
【０００４】前記の本発明に係る新規なペンタペプチド
及びテトラペプチドは、化学的に合成する方法又は海草
類（褐藻、緑藻類）の蛋白質分解酵素の分解液から分離
精製する方法を挙げることができる。これらペプチドを
化学的に合成する場合には、液相法又は固相法等の通常
のペプチド合成法によって行なうことができるが、好ま
しくは、固相法によってポリマー性の固相支持体へ前記
ペプチドのＣ末端（カルボキシル末端側）から、そのア
ミノ酸残基に対応したＬ体のアミノ酸を順次ペプチド結
合によって結合していくのが良い。そして、そのように
して得られた合成ペプチドは、トリフルオロメタンスル
ホン酸、フッ化水素等を用いてポリマー性の固相支持体
から切断した後、アミノ酸側鎖の保護基を除去し、逆相
系のカラムを用いた高速液体クロマトグラフィー（以
下、ＨＰＬＣと略す）等を用いた通常の方法で精製する
ことができる。
及びテトラペプチドは、化学的に合成する方法又は海草
類（褐藻、緑藻類）の蛋白質分解酵素の分解液から分離
精製する方法を挙げることができる。これらペプチドを
化学的に合成する場合には、液相法又は固相法等の通常
のペプチド合成法によって行なうことができるが、好ま
しくは、固相法によってポリマー性の固相支持体へ前記
ペプチドのＣ末端（カルボキシル末端側）から、そのア
ミノ酸残基に対応したＬ体のアミノ酸を順次ペプチド結
合によって結合していくのが良い。そして、そのように
して得られた合成ペプチドは、トリフルオロメタンスル
ホン酸、フッ化水素等を用いてポリマー性の固相支持体
から切断した後、アミノ酸側鎖の保護基を除去し、逆相
系のカラムを用いた高速液体クロマトグラフィー（以
下、ＨＰＬＣと略す）等を用いた通常の方法で精製する
ことができる。
【０００５】上記したように、本発明に係る新規なペン
タペプチド及びテトラペプチドは、海藻類（褐藻、緑藻
類）即ち、海苔及びヒジキの蛋白質分解酵素の分解液か
ら分離精製することができるが、その場合には、例え
ば、以下のようにして行なうことができる。上記の新規
なペンタペプチドを含有している海苔（褐藻）蛋白質部
分、及び新規なテトラペプチドを含有しているヒジキ
（緑藻）蛋白質部分を取り出し加水分解する。加水分解
は常法に従って行なう。例えば、ペプシン等の蛋白分解
酵素で加水分解する場合には、海苔蛋白質部分及びヒジ
キ蛋白質部分を必要とあれば更に加水分解した後、酵素
の至適値に調整し、酵素を加えてインキュベートする。
次いで必要に応じ中和した後、酵素を失活させて加水分
解液を得る。その加水分解液を濾紙及び／又はセライト
等を用いて濾過することによって不溶性成分を除去し、
得られた濾液をセロファン等の半透膜を用いて適当な溶
媒（例えば、トリスー塩酸緩衝液、リン酸緩衝液の中性
緩衝液）中で十分に透析し、その濾液中の成分で半透膜
を通過した成分を含む溶液を強酸性陽イオン交換樹脂
（例えば、ダウケミカル社製のＤｏｗｅｘ ５０Ｗ等）
にかけ、その吸着溶出成分からＡＣＥ（アンジオテンシ
ン変換酵素）阻害活性を含有する画分を得、得られたＡ
ＣＥ阻害活性画分をゲル濾過（例えば、ファルマシア社
製のＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５等）によって分画し、
得られたＡＣＥ阻害活性画分を陽イオン交換ゲル濾過
（例えば、ファルマシア社製のＳＰ−Ｓｅｐｈａｄｅｘ
Ｃ−２５等）によって分画し、得られたＡＣＥ阻害活
性画分を更に逆相ＨＰＬＣによって分画する。
タペプチド及びテトラペプチドは、海藻類（褐藻、緑藻
類）即ち、海苔及びヒジキの蛋白質分解酵素の分解液か
ら分離精製することができるが、その場合には、例え
ば、以下のようにして行なうことができる。上記の新規
なペンタペプチドを含有している海苔（褐藻）蛋白質部
分、及び新規なテトラペプチドを含有しているヒジキ
（緑藻）蛋白質部分を取り出し加水分解する。加水分解
は常法に従って行なう。例えば、ペプシン等の蛋白分解
酵素で加水分解する場合には、海苔蛋白質部分及びヒジ
キ蛋白質部分を必要とあれば更に加水分解した後、酵素
の至適値に調整し、酵素を加えてインキュベートする。
次いで必要に応じ中和した後、酵素を失活させて加水分
解液を得る。その加水分解液を濾紙及び／又はセライト
等を用いて濾過することによって不溶性成分を除去し、
得られた濾液をセロファン等の半透膜を用いて適当な溶
媒（例えば、トリスー塩酸緩衝液、リン酸緩衝液の中性
緩衝液）中で十分に透析し、その濾液中の成分で半透膜
を通過した成分を含む溶液を強酸性陽イオン交換樹脂
（例えば、ダウケミカル社製のＤｏｗｅｘ ５０Ｗ等）
にかけ、その吸着溶出成分からＡＣＥ（アンジオテンシ
ン変換酵素）阻害活性を含有する画分を得、得られたＡ
ＣＥ阻害活性画分をゲル濾過（例えば、ファルマシア社
製のＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５等）によって分画し、
得られたＡＣＥ阻害活性画分を陽イオン交換ゲル濾過
（例えば、ファルマシア社製のＳＰ−Ｓｅｐｈａｄｅｘ
Ｃ−２５等）によって分画し、得られたＡＣＥ阻害活
性画分を更に逆相ＨＰＬＣによって分画する。
【０００６】本発明に係る新規なペンタペプチド及びテ
トラペプチドは、静脈内への繰り返し投与を行った場
合、抗体産生を惹起せず、アナフィラキシーショックを
起こさない。又、これらペプチドはＬ−アミノ酸のみの
配列構造からなり、投与後、生体内のプロテアーゼによ
り徐々に分解される為、毒性は極めて低く安全性は極め
て高い（ＬＤ５０＞５０００ｍｇ／ｋｇ：ラット経口投
与）。これらペプチドは、通常用いられる賦形剤等の添
加物を用いて注射剤、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤
等に調製することができる。投与法としては、通常は、
アンジオテンシン変換酵素を有している咄乳類（例え
ば、ヒト、イヌ、ラット等）に注射すること、あるいは
経口投与することが挙げられる。投与量は、例えば、動
物体重１ｋｇ当たりこれらペプチドを０．０１〜１０ｍ
ｇの量である。投与回数は、通常１日１〜４回程度であ
るが、投与経路によって、適宜、調製することができ
る。上記の各種製剤において用いられる賦形剤、結合
剤、滑沢剤の種類は、特に限定されず、通常の注射剤、
散剤、顆粒剤、錠剤あるいはカプセル剤に用いられるも
のを使用することができる。
トラペプチドは、静脈内への繰り返し投与を行った場
合、抗体産生を惹起せず、アナフィラキシーショックを
起こさない。又、これらペプチドはＬ−アミノ酸のみの
配列構造からなり、投与後、生体内のプロテアーゼによ
り徐々に分解される為、毒性は極めて低く安全性は極め
て高い（ＬＤ５０＞５０００ｍｇ／ｋｇ：ラット経口投
与）。これらペプチドは、通常用いられる賦形剤等の添
加物を用いて注射剤、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤
等に調製することができる。投与法としては、通常は、
アンジオテンシン変換酵素を有している咄乳類（例え
ば、ヒト、イヌ、ラット等）に注射すること、あるいは
経口投与することが挙げられる。投与量は、例えば、動
物体重１ｋｇ当たりこれらペプチドを０．０１〜１０ｍ
ｇの量である。投与回数は、通常１日１〜４回程度であ
るが、投与経路によって、適宜、調製することができ
る。上記の各種製剤において用いられる賦形剤、結合
剤、滑沢剤の種類は、特に限定されず、通常の注射剤、
散剤、顆粒剤、錠剤あるいはカプセル剤に用いられるも
のを使用することができる。
【０００７】錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤に用いる
添加剤としては、下記のものを挙げることができる。賦
形剤としては、結晶セルロース等の糖類、マンニトール
等の糖アルコール類、でんぷん類、無水リン酸カルシウ
ム等；結合剤としてはでんぷん類、ヒドロキシプロピル
メチルセルロース等；崩壊剤としてはカルボキシメチル
セルロース及びそのカリウム塩類；滑沢剤としてはステ
アリン酸及びその塩類、タルク、ワックス類を挙げるこ
とができる。又、製剤の調製にあたっては必要に応じメ
ントール、クエン酸及びその塩類、香料等の矯臭剤を用
いることができる。注射用の無菌組成物は、常法によ
り、これらペプチドを、注射用水、生理食塩水及びキシ
リトールやマンニトールなどの糖アルコール注射液、プ
ロピレングリコールやポリエチレングリコール等のグリ
コールに溶解又は懸濁させて注射剤とすることができ
る。この際、緩衝液、防腐剤、酸化防止剤等を必要に応
じて添加することができる。これらペプチドを含有する
製剤は凍結乾燥品又は凍結粉末の形とし、用時、通常の
溶解剤、例えば水又は生理食塩水にて溶解して用いるこ
ともできる。
添加剤としては、下記のものを挙げることができる。賦
形剤としては、結晶セルロース等の糖類、マンニトール
等の糖アルコール類、でんぷん類、無水リン酸カルシウ
ム等；結合剤としてはでんぷん類、ヒドロキシプロピル
メチルセルロース等；崩壊剤としてはカルボキシメチル
セルロース及びそのカリウム塩類；滑沢剤としてはステ
アリン酸及びその塩類、タルク、ワックス類を挙げるこ
とができる。又、製剤の調製にあたっては必要に応じメ
ントール、クエン酸及びその塩類、香料等の矯臭剤を用
いることができる。注射用の無菌組成物は、常法によ
り、これらペプチドを、注射用水、生理食塩水及びキシ
リトールやマンニトールなどの糖アルコール注射液、プ
ロピレングリコールやポリエチレングリコール等のグリ
コールに溶解又は懸濁させて注射剤とすることができ
る。この際、緩衝液、防腐剤、酸化防止剤等を必要に応
じて添加することができる。これらペプチドを含有する
製剤は凍結乾燥品又は凍結粉末の形とし、用時、通常の
溶解剤、例えば水又は生理食塩水にて溶解して用いるこ
ともできる。
【０００８】本発明に係る新規なペンタペプチドとテト
ラペプチドは、優れたアンジオテンシン変換酵素阻害作
用を有し、血圧降下作用、ブラジキニン不活性化抑制作
用を示す。従って、本態性高血圧、腎性高血圧、副腎性
高血圧等の高血圧症の予防、治療剤、これらの疾患の診
断剤や各種の病態において用いられる血圧降下剤として
有用であり、更にうっ血性心不全に対する臓器循環の正
常化と長期予後の改善（延命効果）作用を有し、心不全
の治療剤として有用である。
ラペプチドは、優れたアンジオテンシン変換酵素阻害作
用を有し、血圧降下作用、ブラジキニン不活性化抑制作
用を示す。従って、本態性高血圧、腎性高血圧、副腎性
高血圧等の高血圧症の予防、治療剤、これらの疾患の診
断剤や各種の病態において用いられる血圧降下剤として
有用であり、更にうっ血性心不全に対する臓器循環の正
常化と長期予後の改善（延命効果）作用を有し、心不全
の治療剤として有用である。
【０００９】
【実施例】以下に実施例として、製造例及び試験例を記
載し、本発明を更に詳細に説明する。 製造例１ （海苔由来ＡＣＥ阻害ペプチドの製造）風乾した新鮮海
苔を高速粉砕機にて３５メッシュに微粉化したもの５０
ｇに脱イオン水２ιを加えてホモジナイズした。得られ
た海苔ホモジネイトにペプシン１．５ｇを加え、ＨＣｌ
−ＫＣｌ緩衝液にてｐＨ２．０に調整した後、攪拌下３
７℃で２０時間、酵素分解反応した。得られた酵素分解
液をＤｉａｆｌｏｗ膜（アミコン社製、ＹＮ１０型膜、
分画分子量１万）を用いて限外濾過した。得られた濾過
液をＤｏｗｅｘ５０Ｗ×４（Ｈ＋）を充填したカラムを
用いてクロマトグラム処理した。脱イオン水で水洗し、
溶出は２Ｎ−ＮＨ４ＯＨで行い、溶出液を濃縮した。こ
の濃縮液をＳｅｐｈａｄｅｘＧ−２５を充填したカラム
を用いてクロマトグラム処理した。ゲル濾過操作（遊離
アミノ酸と未分解の蛋白質を除く操作）によりペプチド
画分を集め濃縮して海苔ペプチド液とした。更にこの海
苔ペプチド液をＳＰ−Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ−２５（Ｈ
＋）カラムによりクロマトグラム処理してＡＣＥ阻害活
性の強い精製ペプチド画分（分画番号１０〜２８）を分
離した。そのカラムクロマトグラフを図１に示した。こ
のようにして得た精製ペプチド画分を凍結乾燥して海苔
ペプチドパウダーとし、更に脱イオン水に溶解した後、
ＨＰＬＣを行なった。条件はカラムとして野村化学社製
のＤｅｖｅｌｏｓｉｌＯＤＳ−５（φ４．６ｍｍＩＤ×
２５ｃｍＬ）を使用し、移動相として０．０５％トリフ
ルオロ酢酸（以下、ＴＦＡと略す）から２５％アセトニ
トリル／０．０５％ＴＦＡの濃度勾配法により、流速
１．０ｍｌ／ｍｉｎ、検出波長２２０ｎｍでクロマトグ
ラム処理し、溶出時間５４．７３分に強いＡＣＥ阻害作
用を有するペプチドフラグメントを得た。その結果は図
２に示すとおりである。このようにして得られたＡＣＥ
阻害作用を有するペプチドのアミノ酸配列は、アプライ
ドバイオシステム（ＡＢＩ）社製のプロティンシーケン
サー４７７Ａ型を用いて決定された。その結果、次式 Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ で示されるＬ体のアミノ酸残基からなる配列を有する新
規なペンタペプチドであることが確認された。本発明に
係わる新規なペンタペプチドをＡＣＥ阻害剤として例え
ば錠剤に製剤する場合には、常法に従って例えば次のよ
うに処理すればよい：（１）ペンタペプチド１３ｇ、
（２）乳糖８７ｇ、（３）コーンスターチ２９ｇ、
（４）ステアリン酸マグネシウム１ｇを原料とし、先ず
（１）、（２）及び１７ｇのコーンスターチを混和し、
７ｇのコーンスターチから作ったペーストとともに顆粒
化し、この顆粒に５ｇのコーンスターチと（４）とを加
え、得られた混合物を圧縮錠剤機で打錠し、錠剤１００
０個を製造する。
載し、本発明を更に詳細に説明する。 製造例１ （海苔由来ＡＣＥ阻害ペプチドの製造）風乾した新鮮海
苔を高速粉砕機にて３５メッシュに微粉化したもの５０
ｇに脱イオン水２ιを加えてホモジナイズした。得られ
た海苔ホモジネイトにペプシン１．５ｇを加え、ＨＣｌ
−ＫＣｌ緩衝液にてｐＨ２．０に調整した後、攪拌下３
７℃で２０時間、酵素分解反応した。得られた酵素分解
液をＤｉａｆｌｏｗ膜（アミコン社製、ＹＮ１０型膜、
分画分子量１万）を用いて限外濾過した。得られた濾過
液をＤｏｗｅｘ５０Ｗ×４（Ｈ＋）を充填したカラムを
用いてクロマトグラム処理した。脱イオン水で水洗し、
溶出は２Ｎ−ＮＨ４ＯＨで行い、溶出液を濃縮した。こ
の濃縮液をＳｅｐｈａｄｅｘＧ−２５を充填したカラム
を用いてクロマトグラム処理した。ゲル濾過操作（遊離
アミノ酸と未分解の蛋白質を除く操作）によりペプチド
画分を集め濃縮して海苔ペプチド液とした。更にこの海
苔ペプチド液をＳＰ−Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ−２５（Ｈ
＋）カラムによりクロマトグラム処理してＡＣＥ阻害活
性の強い精製ペプチド画分（分画番号１０〜２８）を分
離した。そのカラムクロマトグラフを図１に示した。こ
のようにして得た精製ペプチド画分を凍結乾燥して海苔
ペプチドパウダーとし、更に脱イオン水に溶解した後、
ＨＰＬＣを行なった。条件はカラムとして野村化学社製
のＤｅｖｅｌｏｓｉｌＯＤＳ−５（φ４．６ｍｍＩＤ×
２５ｃｍＬ）を使用し、移動相として０．０５％トリフ
ルオロ酢酸（以下、ＴＦＡと略す）から２５％アセトニ
トリル／０．０５％ＴＦＡの濃度勾配法により、流速
１．０ｍｌ／ｍｉｎ、検出波長２２０ｎｍでクロマトグ
ラム処理し、溶出時間５４．７３分に強いＡＣＥ阻害作
用を有するペプチドフラグメントを得た。その結果は図
２に示すとおりである。このようにして得られたＡＣＥ
阻害作用を有するペプチドのアミノ酸配列は、アプライ
ドバイオシステム（ＡＢＩ）社製のプロティンシーケン
サー４７７Ａ型を用いて決定された。その結果、次式 Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ で示されるＬ体のアミノ酸残基からなる配列を有する新
規なペンタペプチドであることが確認された。本発明に
係わる新規なペンタペプチドをＡＣＥ阻害剤として例え
ば錠剤に製剤する場合には、常法に従って例えば次のよ
うに処理すればよい：（１）ペンタペプチド１３ｇ、
（２）乳糖８７ｇ、（３）コーンスターチ２９ｇ、
（４）ステアリン酸マグネシウム１ｇを原料とし、先ず
（１）、（２）及び１７ｇのコーンスターチを混和し、
７ｇのコーンスターチから作ったペーストとともに顆粒
化し、この顆粒に５ｇのコーンスターチと（４）とを加
え、得られた混合物を圧縮錠剤機で打錠し、錠剤１００
０個を製造する。
【００１０】製造例２ （ヒジキ由来ＡＣＥ阻害ペプチドの製造）風乾した新鮮
ヒジキを高速粉砕機にて３５メッシュに微粉化したもの
５０ｇに脱イオン水２ιを加えてホモジナイズした。得
られたヒジキホモジネイトにペプシン１．５ｇを加え、
ＨＣｌ−ＫＣｌ緩衝液にてｐＨ２．０に調整した後、攪
拌下３７℃で２０時間、酵素分解反応した。得られた酵
素分解液をＤｉａｆｌｏｗ膜（アミコン社製、ＹＮ１０
型膜、分画分子量１万）を用いて限外濾過した。得られ
た濾過液をＤｏｗｅｘ５０Ｗ×４（Ｈ＋）を充填したカ
ラムを用いてクロマトグラム処理した。脱イオン水で水
洗し、溶出は２Ｎ−ＮＨ４ＯＨで行い、溶出液を濃縮し
た。この濃縮液をＳｅｐｈａｄｅｘＧ−２５を充填した
カラムを用いてクロマトグラム処理した。ゲル濾過操作
（遊離アミノ酸と末分解の蛋白質を除く操作）によりペ
プチド画分を集め濃縮して海苔ペプチド液とした。更に
このヒジキペプチド液をＳＰ−Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ−
２５（Ｈ＋）カラムによりクロマトグラム処理してＡＣ
Ｅ阻害活性の強い精製ペプチド画分（分画番号１５〜２
５）を分離した。そのカラムクロマトグラフを図３に示
した。このようにして得た精製ペプチド画分を凍結乾燥
してヒジキペプチドパウダーとし、更に脱イオン水に溶
解した後、ＨＰＬＣを行なった。条件はカラムとして野
村化学社製のＤｅｖｅｌｏｓｉｌ ＯＤＳ−５（φ４．
６ｍｍＩＤ×２５ｃｍＬ）を使用し、移動相として０．
０５％ＴＦＡから２５％アセトニトリル／０．０５％Ｔ
ＦＡの濃度勾配法により、流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ）検
出波長２２０ｎｍでクロマトグラム処理し、溶出時間６
３．５５分に強いＡＣＥ阻害作用を有するペプチドフラ
グメントを得た。その結果は図４に示すとおりである。
このようにして得られたＡＣＥ阻害作用を有するペプチ
ドのアミノ酸配列は、ＡＢＩ社製のプロティンシーケン
サー４７７Ａ型を用いて決定された。その結果、次式 Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ で示されるＬ体のアミノ酸残基からなる配列を有する新
規なテトラペプチドであることが確認された。本発明に
係わる新規なテトラペプチドをＡＣＥ阻害剤として例え
ば錠剤に製剤する場合には、常法に従って例えば次のよ
うに処理すればよい：（１）テトラペプチド１３ｇ、
（２）乳糖８７ｇ、（３）コーンスターチ２９ｇ、
（４）ステアリン酸マグネシウム１ｇを原料とし、先ず
（１）、（２）及び１７ｇのコーンスターチを混和し、
７ｇのコーンスターチから作ったペーストとともに顆粒
化し、この顆粒に５ｇのコーンスターチと（４）とを加
え、得られた混合物を圧縮錠剤機で打錠し、錠剤１００
０個を製造する。
ヒジキを高速粉砕機にて３５メッシュに微粉化したもの
５０ｇに脱イオン水２ιを加えてホモジナイズした。得
られたヒジキホモジネイトにペプシン１．５ｇを加え、
ＨＣｌ−ＫＣｌ緩衝液にてｐＨ２．０に調整した後、攪
拌下３７℃で２０時間、酵素分解反応した。得られた酵
素分解液をＤｉａｆｌｏｗ膜（アミコン社製、ＹＮ１０
型膜、分画分子量１万）を用いて限外濾過した。得られ
た濾過液をＤｏｗｅｘ５０Ｗ×４（Ｈ＋）を充填したカ
ラムを用いてクロマトグラム処理した。脱イオン水で水
洗し、溶出は２Ｎ−ＮＨ４ＯＨで行い、溶出液を濃縮し
た。この濃縮液をＳｅｐｈａｄｅｘＧ−２５を充填した
カラムを用いてクロマトグラム処理した。ゲル濾過操作
（遊離アミノ酸と末分解の蛋白質を除く操作）によりペ
プチド画分を集め濃縮して海苔ペプチド液とした。更に
このヒジキペプチド液をＳＰ−Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ−
２５（Ｈ＋）カラムによりクロマトグラム処理してＡＣ
Ｅ阻害活性の強い精製ペプチド画分（分画番号１５〜２
５）を分離した。そのカラムクロマトグラフを図３に示
した。このようにして得た精製ペプチド画分を凍結乾燥
してヒジキペプチドパウダーとし、更に脱イオン水に溶
解した後、ＨＰＬＣを行なった。条件はカラムとして野
村化学社製のＤｅｖｅｌｏｓｉｌ ＯＤＳ−５（φ４．
６ｍｍＩＤ×２５ｃｍＬ）を使用し、移動相として０．
０５％ＴＦＡから２５％アセトニトリル／０．０５％Ｔ
ＦＡの濃度勾配法により、流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ）検
出波長２２０ｎｍでクロマトグラム処理し、溶出時間６
３．５５分に強いＡＣＥ阻害作用を有するペプチドフラ
グメントを得た。その結果は図４に示すとおりである。
このようにして得られたＡＣＥ阻害作用を有するペプチ
ドのアミノ酸配列は、ＡＢＩ社製のプロティンシーケン
サー４７７Ａ型を用いて決定された。その結果、次式 Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ で示されるＬ体のアミノ酸残基からなる配列を有する新
規なテトラペプチドであることが確認された。本発明に
係わる新規なテトラペプチドをＡＣＥ阻害剤として例え
ば錠剤に製剤する場合には、常法に従って例えば次のよ
うに処理すればよい：（１）テトラペプチド１３ｇ、
（２）乳糖８７ｇ、（３）コーンスターチ２９ｇ、
（４）ステアリン酸マグネシウム１ｇを原料とし、先ず
（１）、（２）及び１７ｇのコーンスターチを混和し、
７ｇのコーンスターチから作ったペーストとともに顆粒
化し、この顆粒に５ｇのコーンスターチと（４）とを加
え、得られた混合物を圧縮錠剤機で打錠し、錠剤１００
０個を製造する。
【００１１】製造例３ 本例は、合成法による製造例である。 Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒの合成法 ＡＢＩ社製のペプチド自動合成装置４３０Ａ型を用いた
固相法によって当該ペンタペプチドを合成した。固相担
体としては、スチレン−ジビニルベンゼン共重合体（ポ
リスチレン樹脂）をクロロメチル化した樹脂を使用し
た。先ず、当該ペンタペプチドのアミノ酸配列に従っ
て、常法どおり、そのＣ末端側のＴｙｒからクロロメチ
ル樹脂に反応させペプチド結合樹脂を得た。このときの
アミノ酸はｔ−ブトキシカルボニル基（以下、ｔ−Ｂｏ
ｃと略す）で保護されたｔ−Ｂｏｃアミノ酸を使用し
た。次にこのペプチド結合樹脂をエタンジチオールとチ
オアニソールからなる混合液に懸濁し、室温で１０分間
攪拌後、氷冷下でトリフルオロ酢酸を加え、更に１０分
間攪拌した。この混合液にトリフルオロメタンスルホン
酸を滴下し、室温で３０分間攪拌した後、無水エーテル
を加えてその生成物を沈澱させて分離し、その沈澱物を
無水エーテルで数回洗浄した後、減圧下で乾燥した。こ
のようにして得られた未精製の合成ペンタペプチドは蒸
留水に溶解した後、逆相系のカラムＣ１８（５μ）を用
いたＨＰＬＣにより精製した。移動相として（Ａ）０．
１％ＴＦＡ含有蒸留水、（Ｂ）０．１％ＴＦＡ含有アセ
トニトリル溶液を使用し、（Ａ）液が２０分間で９８％
から７５％の濃度勾配法により流速１．１ｍｌ／ｍｉｎ
でクロマトグラフィーを行った。紫外部波長２１２ｎｍ
で検出し、最大の波長を示した溶出画分を分取し、これ
を凍結乾燥することによって目的とする合成ペンタペプ
チドを得た。
固相法によって当該ペンタペプチドを合成した。固相担
体としては、スチレン−ジビニルベンゼン共重合体（ポ
リスチレン樹脂）をクロロメチル化した樹脂を使用し
た。先ず、当該ペンタペプチドのアミノ酸配列に従っ
て、常法どおり、そのＣ末端側のＴｙｒからクロロメチ
ル樹脂に反応させペプチド結合樹脂を得た。このときの
アミノ酸はｔ−ブトキシカルボニル基（以下、ｔ−Ｂｏ
ｃと略す）で保護されたｔ−Ｂｏｃアミノ酸を使用し
た。次にこのペプチド結合樹脂をエタンジチオールとチ
オアニソールからなる混合液に懸濁し、室温で１０分間
攪拌後、氷冷下でトリフルオロ酢酸を加え、更に１０分
間攪拌した。この混合液にトリフルオロメタンスルホン
酸を滴下し、室温で３０分間攪拌した後、無水エーテル
を加えてその生成物を沈澱させて分離し、その沈澱物を
無水エーテルで数回洗浄した後、減圧下で乾燥した。こ
のようにして得られた未精製の合成ペンタペプチドは蒸
留水に溶解した後、逆相系のカラムＣ１８（５μ）を用
いたＨＰＬＣにより精製した。移動相として（Ａ）０．
１％ＴＦＡ含有蒸留水、（Ｂ）０．１％ＴＦＡ含有アセ
トニトリル溶液を使用し、（Ａ）液が２０分間で９８％
から７５％の濃度勾配法により流速１．１ｍｌ／ｍｉｎ
でクロマトグラフィーを行った。紫外部波長２１２ｎｍ
で検出し、最大の波長を示した溶出画分を分取し、これ
を凍結乾燥することによって目的とする合成ペンタペプ
チドを得た。
【００１２】この合成ペンタペプチドをマススペクトル
により分析した結果、アミノ酸配列構造を有するペンタ
ペプチドであることが確認された。このマススペクトル
の結果は図５に示すとおりである。もう一つのテトラペ
プチドについても上記合成方法に準じ固相法によりそれ
ぞれ末端側から反応させ合成した。未精製の合成テトラ
ペプチドは以下に示すとおり精製した。 Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒの精製法 逆相系のカラムＣ１８（５μ）を用いたＨＰＬＣにより
精製した。移動相として（Ａ）０．１％ＴＦＡ含有蒸留
水、（Ｂ）０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリル溶液を使
用し、（Ａ）液が２０分間で９６％から７２％の濃度勾
配法により流速１．３ｍｌ／ｍｉｎでクロマトグラフィ
ーを行なった。紫外部波長２１４ｎｍで検出し、最大の
波長を示した溶出画分を分取し、これを凍結乾燥するこ
とによって目的とする合成テトラペプチドを得た。この
合成テトラペプチドをマススペクトルにより分析した結
果、アミノ酸配列構造を有するテトラペプチドであるこ
とが確認された。このマススペクトルの結果は図６に示
すとおりである。合成によって得られた本発明のペンタ
ペプチド及びテトラペプチドは、以下に示す試験によっ
て薬理効果が確認された。
により分析した結果、アミノ酸配列構造を有するペンタ
ペプチドであることが確認された。このマススペクトル
の結果は図５に示すとおりである。もう一つのテトラペ
プチドについても上記合成方法に準じ固相法によりそれ
ぞれ末端側から反応させ合成した。未精製の合成テトラ
ペプチドは以下に示すとおり精製した。 Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒの精製法 逆相系のカラムＣ１８（５μ）を用いたＨＰＬＣにより
精製した。移動相として（Ａ）０．１％ＴＦＡ含有蒸留
水、（Ｂ）０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリル溶液を使
用し、（Ａ）液が２０分間で９６％から７２％の濃度勾
配法により流速１．３ｍｌ／ｍｉｎでクロマトグラフィ
ーを行なった。紫外部波長２１４ｎｍで検出し、最大の
波長を示した溶出画分を分取し、これを凍結乾燥するこ
とによって目的とする合成テトラペプチドを得た。この
合成テトラペプチドをマススペクトルにより分析した結
果、アミノ酸配列構造を有するテトラペプチドであるこ
とが確認された。このマススペクトルの結果は図６に示
すとおりである。合成によって得られた本発明のペンタ
ペプチド及びテトラペプチドは、以下に示す試験によっ
て薬理効果が確認された。
【００１３】試験例１ （アンジオテンシン変換酵素阻害活性）ＡＣＥ（シグマ
社製、酵素番号ＥＣ３．４．１５．１）２．５ｍＵ、合
成基質Ｈｉｐｐｕｒｙｌ−Ｌ−ｈｉｓｔｉｄｙｌ−Ｌ−
ｌｅｕｃｉｎｅ（ペプチド研究所製）１２．５ｍＭを用
いＬｉｅｂｅｒｍａｎの測定方法を改良した山本等の方
法［日胸疾会誌，１８，２９７（１９８９）］に準じて
測定した。即ち、生成した馬尿酸を酢酸エチルにて抽出
し２２５ｎｍの吸光度で測定した。被検液での吸光度を
Ｅｓ、被検液の代わりに緩衝液を加えた時の値をＥｃ、
予め反応停止液を加えて反応させた時の値をＥｂとして
次式から阻害率を求めた。阻害率（％）＝（Ｅｃ−Ｅ
ｓ）／（Ｅｃ−Ｅｂ）×１００ＡＣＥ阻害剤の阻害活性
ＩＣ５０値は、ＡＣＥの酵素活性を５０％（阻害率）阻
害するために必要な試料の濃度（Ｍ）で示した。本発明
に係る新規なペンタペプチドのＡＣＥに対する阻害活性
（ＩＣ５０値）は２．３２μＭであり、テトラペプチド
のＩＣ５０値は４．７８μＭである。
社製、酵素番号ＥＣ３．４．１５．１）２．５ｍＵ、合
成基質Ｈｉｐｐｕｒｙｌ−Ｌ−ｈｉｓｔｉｄｙｌ−Ｌ−
ｌｅｕｃｉｎｅ（ペプチド研究所製）１２．５ｍＭを用
いＬｉｅｂｅｒｍａｎの測定方法を改良した山本等の方
法［日胸疾会誌，１８，２９７（１９８９）］に準じて
測定した。即ち、生成した馬尿酸を酢酸エチルにて抽出
し２２５ｎｍの吸光度で測定した。被検液での吸光度を
Ｅｓ、被検液の代わりに緩衝液を加えた時の値をＥｃ、
予め反応停止液を加えて反応させた時の値をＥｂとして
次式から阻害率を求めた。阻害率（％）＝（Ｅｃ−Ｅ
ｓ）／（Ｅｃ−Ｅｂ）×１００ＡＣＥ阻害剤の阻害活性
ＩＣ５０値は、ＡＣＥの酵素活性を５０％（阻害率）阻
害するために必要な試料の濃度（Ｍ）で示した。本発明
に係る新規なペンタペプチドのＡＣＥに対する阻害活性
（ＩＣ５０値）は２．３２μＭであり、テトラペプチド
のＩＣ５０値は４．７８μＭである。
【００１４】試験例２ （ラットへ投与時の降圧効果）実験動物は日本チャール
ズ・リバー（株）より１５週齢雄性の高血圧自然発症ラ
ット（ＳＨＲ）を購入し、１週間の予備飼育後、収縮期
血圧が１６０ｍｍＨｇ以上（体重２８０〜３３０ｇ）の
動物３匹１群として用いた。血圧は非観血的尾動脈血圧
測定装置（（株）理研開発製、ＰＳ−１００型）を用
い、Ｔａｉｌ−ｃｕｆｆ法により、投与前、投与後１時
間、２時間、３時間、４時間、５時間のＳＨＲの尾動脈
の収縮期血圧（ＳＢＰ）、平均血圧（ＭＢＰ）及び拡張
期血圧（ＤＢＰ）の測定を測定時間毎に５回行い、得ら
れた測定値の最高値と最低値を棄却し、３回の平均値を
もって各時間の測定値とした。本発明に係るぺンタペプ
チド及びテトラペプチドの合成品各々５０ｍｇ／ｋｇを
蒸留水１０ｍｌに溶解し、ＳＨＲに経口投与した時の血
圧値（ＳＢＰ，ＭＢＰ，ＤＢＰ）への作用についての結
果は、図７及び図８に示すとおりである。以上の試験の
結果、本発明に係る新規なぺンタペプチド及びテトラペ
プチドはアンジオテンシン変換酵素阻害活性を有し、動
物実験においても有意な血圧降下作用を示すことが確認
された。従って、本発明に係る新規なペンタペプチド及
びテトラペプチドは、高血圧症の治療又は予防薬として
有用である。尚、本発明に係る新規なペンタペプチド及
びテトラペプチドは、構造的にそのアミノ酸配列を部分
構造とするペプチドにおいて、構造中に採用することも
できる。
ズ・リバー（株）より１５週齢雄性の高血圧自然発症ラ
ット（ＳＨＲ）を購入し、１週間の予備飼育後、収縮期
血圧が１６０ｍｍＨｇ以上（体重２８０〜３３０ｇ）の
動物３匹１群として用いた。血圧は非観血的尾動脈血圧
測定装置（（株）理研開発製、ＰＳ−１００型）を用
い、Ｔａｉｌ−ｃｕｆｆ法により、投与前、投与後１時
間、２時間、３時間、４時間、５時間のＳＨＲの尾動脈
の収縮期血圧（ＳＢＰ）、平均血圧（ＭＢＰ）及び拡張
期血圧（ＤＢＰ）の測定を測定時間毎に５回行い、得ら
れた測定値の最高値と最低値を棄却し、３回の平均値を
もって各時間の測定値とした。本発明に係るぺンタペプ
チド及びテトラペプチドの合成品各々５０ｍｇ／ｋｇを
蒸留水１０ｍｌに溶解し、ＳＨＲに経口投与した時の血
圧値（ＳＢＰ，ＭＢＰ，ＤＢＰ）への作用についての結
果は、図７及び図８に示すとおりである。以上の試験の
結果、本発明に係る新規なぺンタペプチド及びテトラペ
プチドはアンジオテンシン変換酵素阻害活性を有し、動
物実験においても有意な血圧降下作用を示すことが確認
された。従って、本発明に係る新規なペンタペプチド及
びテトラペプチドは、高血圧症の治療又は予防薬として
有用である。尚、本発明に係る新規なペンタペプチド及
びテトラペプチドは、構造的にそのアミノ酸配列を部分
構造とするペプチドにおいて、構造中に採用することも
できる。
【図１】製造例１における海苔ぺプシン分解液の、ＳＰ
−Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ−２５（Ｈ＋）カラムクロマト
グラフィーによるＡＣＥ阻害ペプチドの分離精製の結果
を示す図である。
−Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ−２５（Ｈ＋）カラムクロマト
グラフィーによるＡＣＥ阻害ペプチドの分離精製の結果
を示す図である。
【図２】製造例１における海苔由来ペンタペプチドの、
逆相ＨＰＬＣによるＡＣＥ阻害ペプチドフラグメントの
分離精製の結果を示す図である。
逆相ＨＰＬＣによるＡＣＥ阻害ペプチドフラグメントの
分離精製の結果を示す図である。
【図３】製造例２におけるヒジキペプシン分解液の、Ｓ
Ｐ−ＳｅｐｈａｄｅｘＣ−２５（Ｈ＋）カラムクロマト
グラフィーによるＡＣＥ阻害ペプチドの分離精製の結果
を示す図である。
Ｐ−ＳｅｐｈａｄｅｘＣ−２５（Ｈ＋）カラムクロマト
グラフィーによるＡＣＥ阻害ペプチドの分離精製の結果
を示す図である。
【図４】製造例２におけるヒジキ由来テトラペプチド
の、逆相ＨＰＬＣによるＡＣＥ阻害ペプチドフラグメン
トの分離精製の結果を示す図である。
の、逆相ＨＰＬＣによるＡＣＥ阻害ペプチドフラグメン
トの分離精製の結果を示す図である。
【図５】本発明に係る海苔由来ペンタペプチドの、製造
例３で得られた合成ペンタペプチドのマススペクトルを
示す図である。
例３で得られた合成ペンタペプチドのマススペクトルを
示す図である。
【図６】本発明に係るヒジキ由来テトラペプチドの、製
造例３で得られた合成テトラペプチドのマススペクトル
を示す図である。
造例３で得られた合成テトラペプチドのマススペクトル
を示す図である。
【図７】製造例３で得られた合成ぺンタペプチド５０ｍ
ｇ／ｋｇを、ＳＨＲに経口投与した場合の血圧値（収縮
期血圧、平均血圧及び拡張期血圧）の経時的変化を示す
図である。
ｇ／ｋｇを、ＳＨＲに経口投与した場合の血圧値（収縮
期血圧、平均血圧及び拡張期血圧）の経時的変化を示す
図である。
【図８】製造例３で得られた合成テトラペプチド５０ｍ
ｇ／ｋｇを、ＳＨＲに経口投与した場合の血圧値（収縮
期血圧、平均血圧及び拡張期血圧）の経時的変化を示す
図である。
ｇ／ｋｇを、ＳＨＲに経口投与した場合の血圧値（収縮
期血圧、平均血圧及び拡張期血圧）の経時的変化を示す
図である。
フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ｃ０７Ｋ 123:00
Claims (4)
- 【請求項１】 次式；Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ
−Ｔｙｒで示されるＬ体のアミノ酸の配列によるペプチ
ド構造を有する新規なペンタペプチド。 - 【請求項２】 次式；Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ
−Ｔｙｒで示されるＬ体のアミノ酸の配列によるペプチ
ド構造を有する新規なペンタペプチドを有効成分として
含有することを特徴とするアンジオテンシン変換酵素阻
害剤。 - 【請求項３】 次式；Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ
で示されるＬ体のアミノ酸の配列によるペプチド構造を
有する新規なテトラペプチド。 - 【請求項４】 次式；Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ
で示されるＬ体のアミノ酸の配列によるペプチド構造を
有する新規なテトラペプチドを有効成分として含有する
ことを特徴とするアンジオテンシン変換酵素阻害剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8221634A JPH1036391A (ja) | 1996-07-18 | 1996-07-18 | 新規なペプチドおよびアンジオテンシン変換酵素阻害剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8221634A JPH1036391A (ja) | 1996-07-18 | 1996-07-18 | 新規なペプチドおよびアンジオテンシン変換酵素阻害剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1036391A true JPH1036391A (ja) | 1998-02-10 |
Family
ID=16769852
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8221634A Pending JPH1036391A (ja) | 1996-07-18 | 1996-07-18 | 新規なペプチドおよびアンジオテンシン変換酵素阻害剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH1036391A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004244359A (ja) * | 2003-02-13 | 2004-09-02 | Shirako:Kk | 血管拡張性医薬及び健康食品組成物 |
| CN102495169A (zh) * | 2011-11-16 | 2012-06-13 | 江南大学 | 一种紫菜可控酶解后的抗氧化活性肽的纯化及分析鉴定方法 |
| CN110655553A (zh) * | 2019-10-10 | 2020-01-07 | 河南省农业科学院 | 一种芝麻来源的ace抑制肽、制备方法及其在制备降血压药物方面的应用 |
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1996
- 1996-07-18 JP JP8221634A patent/JPH1036391A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004244359A (ja) * | 2003-02-13 | 2004-09-02 | Shirako:Kk | 血管拡張性医薬及び健康食品組成物 |
| CN102495169A (zh) * | 2011-11-16 | 2012-06-13 | 江南大学 | 一种紫菜可控酶解后的抗氧化活性肽的纯化及分析鉴定方法 |
| CN110655553A (zh) * | 2019-10-10 | 2020-01-07 | 河南省农业科学院 | 一种芝麻来源的ace抑制肽、制备方法及其在制备降血压药物方面的应用 |
| CN110655553B (zh) * | 2019-10-10 | 2023-02-21 | 河南省农业科学院 | 一种芝麻来源的ace抑制肽、制备方法及其在制备降血压药物方面的应用 |
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