JPH0232095A - 免疫機構の機能を仰制する新規ペプチド、それらを含む医薬組成物、並びに前記ペプチド及び医薬組成物の調製方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、次の式（１）〜（１６）の新規ペプチド： ０−＾ｒｇ−ＬＹＳ−Ｄ−Ａｓｐ Ａｒｇ−Ｄ−Ｌｙｓ−八ｓｐ Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｄ−八ｓｐ Ａｒｇ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ａｓｐ Ｄ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ Ｏ−Ａｒｇ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ａｓｐ Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｄ−八ｓｐ−ＶａＩ Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｖａｌ Ｄ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｖａｌ Ａｒｇ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｖａｌ Ｌｙｓ　（Ａｒｇ）　−Ａｓｐ ｌｙｓ　（Ａｒｇ）　−Ｄ−＾ｓｐ Ａｒｇ−Ｌｙｓ　（Ａｒｇ）　−ＡｓｐＡｒｇ−Ｌｙｓ
−Ａｓｐ　（Ｖａｌ） （１５）および Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ａｓｐ（Ｖａｌ）　　　　　　　
　（１６）　　：それらの酸付加塩；並びにそれらのペ
プチドを含む医薬組成物に関する。

本発明の別の観点によれば、式（１）　−（１６）の新
規ペプチドおよびそれらを含む医薬組成物の調製方法が
提供される。

上式（１）〜（１６）のペプチドは、免疫機構のある種
の部分的な過程を阻害することができる。

本発明は更に、前記ペプチドまたはそれらを含む医薬組
成物を使うことにより免疫機構の機能を抑制するために
、ヒト以外の哺乳動物を処置する方法に関する。

〔従来の技術およびその課題〕

本発明に係る化合物は、チモボイエチンの活性中心の誘
導体およびジアステレオマーである。しかしながら、チ
モポイエチンの活性中心であると考えられている既知の
ペプチドＡｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ、　ＡｒｇＬｙｓ−＾
５ｐ−Ｖａ　１　（ハンガリー国特許第１８５．２６３
号明細書）およびＡｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｔ
ｙｒ　（ハンガリー国特許第１８３．５７９号明細書）
は、有意な免疫刺激作用発明に係るペプチドは反対の作
用を示す。

幾つかの病気の原因またはそれに伴う症候群は、免疫機
構の動的機能の障害までさかのぼることができることが
知られている。免疫刺激薬は、遺伝的な免疫不全症、生
来の免疫不全症（出産後または分娩後、老齢）および後
天性の免疫不全症（例えば注射後および手術後、ＡＩＤ
Ｓ、等）の治癒に使われている。しかしながら、免疫機
構の増大した機能または一時的に望ましくない機能が生
体の防御機構の自発的変化に起因するであろう多数の病
気または状態が存在する。自己免疫疾患の場合は、防御
機構が“自身“と“異種”とを識別できず、従って、自
身の抗原に対しても抗体を生産することにより保護し、
それにより苛酷な結果が生じる。

アレルギー症は、外来物質により引き起こされる増大さ
れた抗体産生を伴う。器官移植後の拒絶反応もまた、生
体の正常な且つ健全な機能の結果であるけれども、移植
された外来器官をその生体に組み入れることを可能にす
るためには一次的に抑制されるべきである。

自己免疫疾患の治癒に使われるシクロホスファミド即ち
２−〔ビス（２−クロロエチル）アミノコ−テトラヒド
ロ−２Ｈ−１，３，２−オキサザホスホリン−２−オキ
シド、アザチオプリン即ち６−（１−メチル−４−ニト
ロ−５−イミダゾリルチオ）プリンおよびコルチコステ
ロイド、並びにアレルギーを治療するのに使われるＨ−
１１Ｊセブター遮断性抗ヒスタミン薬、並びに器官移植
に不可欠であるシクロスポリンは、免疫機構の増大され
た機能を抑制するかまたは正常の機能を弱める免疫抑制
薬に属する。

付随する副作用が多いことは、該免疫抑制薬の治療指数
が比較的低い（＜１０）ことにより説明される。従って
、それらは精密な医療制御下でのみ、そして一般に限定
された期間の間でのみ投与し得る。ペプチドタイプの活
性物質の特定の利点は、それらの比較的高い治療指数（
＞１００〜１０００　）にあり、即ち、有害な作用を導
く用量がそれらの有効量よりもずっと高いオーダーにあ
り；生理的条件下では、生体内で非常に速く分解されそ
して蓄積されないことである。それらの効果は、短い寿
命の間に高い効率で複雑な事柄を開始する能力に基づい
ている。

免疫刺激性ペプチドＡｒｇ−Ｌｙｓ−ＡｓｐおよびＡｒ
ｇ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｖａ　１のＤ−アミノ酸含有ジア
ステレオマーである式（１）〜（１６）の新規ペプチド
、更にリジンのα−またはα−およびε−アミノ基上に
アルギニンを担持しているイソペプチド並びにアスパラ
ギン酸のβ−カルボキシル基上にバリンを有するイソペ
プチドが、幾つかの免疫学的試験において抑制効果を示
すことを見出した。しかし、本発明者らの現在までに入
手可能な知見（例えば米国特許第４．５０５．８５３号
明細書を参照のこと）によれば、この２つのタイプの変
更は、普通むしろ酵素に対する耐性の増大、ペプチドの
安定性の増加およびもとの生物学的効果の持続期間の延
長を伴う。

〔課題を解決するための手段〕

本発明の式（１）〜（１６）の新規ペプチドは、ペプチ
ド化学において知られている活性エステル法および／ま
たは混合無水物法の縮合段階、更にα−アミノ基および
／またはα−およびβ−アミノ基の脱保護段階をうまく
使って、 （ａ）　水素添加またはアシドリシスにより除去可能な
基によりエステル化されたカルボキシル基、所望により
保護された側鎖アミノ基および／または水素添加もしく
はアシドリシスにより除去可能な基によりエステル化さ
れた側鎖カルボキシル基、並びに遊離アミノ基を有する
カルボキシ端のアミノ酸誘導体を使って開始し、カルボ
キシル基がエステル化されておりそしてペプチド結合に
関与しないアミノ基に保護基Ｂｏｃおよび／またはＺを
含む式（１）〜（１６）の新規ペプチドの誘導体を調製
し； （ｂ）次いで、触媒的水素添加および／または酸処理に
より存在する保護基を除去し；そして（Ｃ）所望であれ
ば、酸との処理により式（１）〜（１６）の遊離ペプチ
ドをそれの酸付加塩１：″変換する： ことによって、溶液中での段階的な鎖−伸長法により調
製される。

保護基の組合せを使用するような合成においては、アミ
ノ保護基を選択的に除去し、次に合成の最後にできる限
り１回の単一段階において保護基を全て除去できるよう
にする。ペプチド結合を形成せしめるためには、Ｎ−ヒ
ドロキシスクシンイミドエステル［−０−Ｓ　ＩＪ　］
　（Ｂ、　Ｗ＋」ｎ５ｃｈ　；　５ｙｎｔｈｅｑｅｖｏ
ｎ　Ｐｅｐｔｉｄｅｎ、　第２巻、Ｇｅｏｒｇ　Ｔｈｉ
ｅｍｅ　Ｖｅｌａｇ。

Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ、　　１９７４．　　第１４９頁）
、ペンタフルオｏフェニルエステル（ハンガリー国特許
第１６８．４３１号明細書）、または混合無水物（ハン
ガリー国特許第１８３．５７９号明細書）を利用する方
法が使われる。

アミン部分を保護するためにはＢｏｃまたはＺ基、カル
ボキシル基を保護するためにはｔ、ｅ　ｒ　ｔ　、−ブ
チルアルコール、ベンジルアルコールまたはニトロベン
ジルアルコールによるエステル化が好ましく使われる。

合成の終了後、こうして得られた保護ペプチドから、所
望により存在する保護基が除去され、次に、所望であれ
ば、酸との処理により遊離ペプチドがそれの酸付加塩に
変換される。保護基を除去するためには、触媒的水素添
加またはアシドリシスが使われる。

得られた遊離ペプチドは普通、療法的使用に十分適する
程純粋であり、そして更なる精製を全く必要としない。

しかしながら、所望であれば、シリカゲル上でのクロマ
トグラフィーにより精製することができる。溶・液の形
で得られたペプチドは、溶液の蒸発または凍結乾燥によ
り単離できる。遊離のペプチドは適当な塩に変換できる
が、医薬上許容される酸、例えば塩酸、硫酸、リン酸、
酢酸およびクエン酸、を使って酸付加塩に変換すること
が好ましい。

調製された化合物の免疫抑制効果は、以下に記載の方法
を使って研究された。

１、抗体産生細胞における効果 この研究は、Ｃａｎｎ　ｉｎｇｈａｍの方法（ｌｌａｎ
ｄｂｏｏｋ　ｏｆ８ｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　　Ｉｍｍ
ｕｎｏｌｏｇｙ、　　Ｄ、ＭＪｅｉｒ　　ｍ、　　第２
巻、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ、　０ｘｆｏｒｄ−Ｌｏｎｄｏ
ｎ、　　第２８５頁、１９７８年）に従って、新生ラッ
トから得られた肺細胞を用いて行われた。同腹子の１２
匹のＷｉｓｔａｒラットを、生後１２時間以内に２５■
の試験物質で腹腔内（ｉ、ｐ、　）処置した。生後１４
日目に、５％ヒツジ赤血球を含む懸濁液０．５ｍｊ！に
よりこの動物を１８ｐ、免疫処置し、次いで７日後断頭
により出血させた。この動物から得られた肺細胞から、
前記ヒツジ赤血球懸濁液および補体と共に均一懸濁液を
調製し、次いでこれを単層細胞層を得るのに適したチャ
ンバーに入れた。抗体を産生じている肺細胞の周りに、
溶解領域、いわゆる溶血斑が形成された。第１表に要約
されているデータは、抑制性物質での処置の効果を示し
ている。処置の効果のもとての溶血斑形成細胞のカウン
トの変化は、表においては％で示されている。（未処置
の動物から得られた細胞カウントを対照として使った。

）既知の免疫刺激性物質（第１表の化合物“Ａ”、“Ｂ
“および“Ｃ”を見よ）の場合は、この比率が有意に増
加している。

第１表 抗体産生の抑制 Ｄ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ａｓｐ Ａｒｇ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ａｓｐ Ａｒｇ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ａｓｐ Ｄ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ａｓｐ Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｖａｌ ＋７１ ＋６０ でこの動物を１００ｍｇ／ｋｇの用量の試験物質でｉ、
　ｐ。

処置した。この処置の３日後に、この動物から０．６０
〜０．７０ｍＪｌ！の血液を各々採取した。３０分放置
後、遠心により血清を分離し、そしてＴａｋａｔｓｙの
方法ＣＡｃｔａＭｉｃｒｏｂｉｏｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ
、Ｈｕｎｇ、、　　３．１９１（１９５５）　）に従っ
て血球凝集力価を測定した。データは第２表に要約され
ており、未処置の動物に比較した一次抗体産生における
抑制（阻害）効果の比率（％）を示す。免疫刺激性化合
物“Ｂ”および“Ｃ″は、同じテストにおいて逆の作用
を有する。

第２表 一次抗体産生における効果 この実験は、２３〜３０ｇの体重を有する雄のＣＦＬＰ
（１、ＡＴＩ）マウスにおいて行った。この動物を、３
回洗浄された１％のヒツジ赤血球を含有する懸濁液０．
５ｍ１．により腹腔内（ｉ、　ｐ、　）免疫処置し、次
いＡｒｇ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ａｓｐ Ｄ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ Ａｒｇ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｖａｌ Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｖａｌ Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｖａｎ−Ｔｙｒ＋３１ ＋２９ ３、　静止マクロファージの賞金能力における効果 この実験は、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ、、
　　４．２６５（１９８２−１９８３）に記載された方
法に従って、生後６力月の雄のＮ　Ｚ　Ｂ　（０１、Ａ
Ｃ−３ｚＫＢ）　マウスにおいて行った。この動物を４
日間の間毎日１■／　ｋｇの用量の試験物質で皮下（ｓ
、　ｃ、　）処置した。この動物を出血させた後、各々
１０Ｉ［１のヘパリンを含むＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７，２
）　８ｍｆｆで腹膜を洗浄した。

腹膜から洗い出された細胞懸濁液を蒸留水でショツキン
グすることにより赤血球を遊離させ、次いでＰＢＳ緩衝
液で３回洗浄した。２回の洗浄過程の間の沈降は、１１
０００ｒｐで５分間遠心することにより行われた。次に
、各細胞懸濁液の濃度を１０６細胞数／ｄに調整し、そ
してその懸濁液を、５％の二酸化炭素を含む大気中３７
℃のＢｏｙｄｅｎ−チャンバー中に３０分間固定した。

ガラス壁に付着したマクロファージの上に、オプソニン
処理された酵母を重層させた。賞金されなかった粒子を
除去した後、マクロファージにより取り込まれたものを
各セルにおいてカウントした。第３表において、賞金さ
れた酵母細胞のカウントの減少率は、対照としての未処
置の動物から単離されたマクロファージに比較して与え
られている。

第３表 静止マクロファージのλ全能力における効果Ｄ−Ａｒｇ
−Ｌｙｓ−Ｄ−Ａｓｐ Ａｒｌ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ Ｄ−＾ｒ１Ｈ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ａｓｐ Ａｒｇ−ＬｙＳ−Ｄ−、ＡＳｐ−Ｖａ　ｌＤ−Ａｒｇ−
Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｖａｌ Ａｒｇ−Ｄ−ＬＹｓ−Ａｓｐ−Ｖａｔ しｙｓ　（Ａｒｇ）−Ａｓｐ Ｌｙｓ　（Ａｒｇ）　−Ｄ−＾ｓｐ この研究は、Ｂｖａｎｓ　らの方法［：Ｂｒ、　Ｊ、　
Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、　。

４３、４０３（１９７１）　：］を使って、２０〜２２
ｇの体重を有する雄のＢＡＬＢ／ｅ（ＬＡＴＩ）マウス
に関して行った。

この動物の脇腹から毛を除去し、次いで各動物の裸の腹
部の皮膚をヒマワリ油中の２％オキサシロン溶液Ｏｏ１
ｍｌにより感作した。１週間後、このマウスを１．０ｍ
ｇ／ｋｇ用量の試験物質（生理食塩水中に溶解したもの
）でｉ、　ｐ、処置し、次いで２％オキサシロンを含む
アセトン溶液１ｏｐｉでこの動物の右耳を直接処置し、
一方アセトン１０ｄで左耳を処置した。２４時間後、こ
の両耳を切断し、そして計（した。動物の処置された耳
の重量と未処置の耳の重量との差を、試験物質で処置さ
れた動物と生理食塩水のみで処置された動物でそれぞれ
観察された差と比較した。耳の重量の差は接触皮膚炎の
程度に比例するとみなされ、一方試験物質で処置されな
い動物において測定された値を対照として取り、第４表
に示される比率で表わされるような試験物質の皮膚炎減
少効果を得た。

第４表 接触皮膚炎の抑制 ２　　　　＾ｒｇ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ　　　　　　　
　　　−２２３０−＾ｒｇ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ａｓｐ　
　　　　　　−３１４Ａｒｇ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ａｓｐ
　　　　　　　　　−１９５０−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−＾Ｓ
ｐ　　　　　　　　　　　　　　　　−３５６０−Ａｒ
ｇ−０−Ｌｙｓ−Ａｓｐ　　　　　　　　　−１９７＾
ｒｇ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ａｓｐ　　　　　　　　　　−３４
９＾ｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｖａｌ　　　　　　　
　　　　　−１６本発明に係るペプチドおよびそれらの
酸付加塩を療法的使用のための普通の医薬組成物におい
て配合し、免疫機構の活性を減少させることができる。

この新規化合物を使用する利点は、使用する用量範囲に
おいて全く副作用がないのでほとんど完全な安全性を有
することにある。

式（１）〜（１６）のペプチドは、それらの遊離形また
は酸付加塩の形で単独に、しかし安全には医薬製剤の形
で使用される。それらの製剤は、固体、液体または半液
体であることができ、そして充填剤、希釈剤、安定剤、
ｐｌ（−および浸透圧−作用剤、並びにそのような製剤
において常用されている製剤を促進する添加剤を使うこ
とにより調製できる。

固体の医薬組成物は、注射液を調製するのに適当な、例
えば粉末アンプルであることができる。

注射可能な組成物および注入液は液体である。

本発明に係る医薬組成物は、所望の効果を達成するのに
必要な用量の活性成分を含む量で患者に投与される。こ
の用量は、病気の重さ、患者の体重、活性成分に対する
患者の感受性、投与の経路および毎日の処置の回数に依
存する。どの場合でも使用すべき用量は、処置すべき患
者を熟知している医者により定められ得る。

単純な投与については、該医薬組成物は１回投与すべき
活性成分を含有する用量単位、またはそれの半分、３分
の１もしくは４分の１または数倍量から成る。

本発明に係る組成物は、普通投薬準位当り１−１００ｍ
ｇの活性成分を含む。しかしながら、もちろん幾つかの
組成物においては、活性成分の壷が前に定義された限界
よりも多（でも少なくてもよい。

〔実施例〕

本発明を次の非−限定的な例により詳細に説明する。こ
の記載で使用する略号は、一般に文献［：Ｂｉｏｅｈｅ
ｍ、Ｊ、、　２１９．３４５（１９８４））のものと一
致する。通例によれば、指示されたアミノ酸についての
み“Ｄ”立体配置が記号で示されており：他のアミノ酸
は“Ｌ”の立体配置を有する。融点はＯｒ、　Ｔｏｔｔ
ｏｌｉ装置（Ｂｕ’ｃｈｉ、　５ｗ１ｔｚｅｒｌａｎｄ
により製造）で測定された。薄層クロマトグラフィー実
験は、すぐ使用できる吸着剤（ＤＣ−Ｆｅｒｔｉｇｐｌ
ａｔｔｅｎ、　Ｍｅｒｃｋ社、ＦＲＧにより製造）およ
び下記の溶媒混合物（ここで“原液”はピリジン／酢酸
／水の２０：６：１１混合物である）を使って実施した
。

１、酢酸エチル／原液　　　　　　　１９：１；２、酢
酸エチル／原液　　　　　　　９：１；酢酸エチル／原
液 酢酸エチル／原液 ｎ−ブタノール／原液 ｎ−ブタノール／原液 ｎ−ブタノール／酢酸 ／酢酸エチル／水 （比は体積比の値で示されている。） クロマトグラムは、ニンヒドリンにより、または塩素化
後、ヨウ化カリウム／トリジン試薬により検出した。

高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＩ、Ｃ）分析は、
可変波長の１．、ａｂｏｒ　ＭＩＭ　３０８型ＵＶ検出
器、Ｌａｂｏｒ−Ｍ　Ｉ　Ｍループインジェクター、Ｇ
１１ｓｏｎ　８０２Ｃおよび３０２ユニツトから成る供
給ポンプ、圧力測定器並びにＲａｄｅｌｋｉｓ　Ｏｉｌ
　８２７型レコーダーを装備した装置を使うことにより
行った。分離のためには、長さ１５０ｃｍおよび内径４
．６　ｍｍで、粒子サイズ６−のＣ１８−相Ｌａｂｏｒ
−ＭＩＭ型装填材を使った。濃度１０％のアンモニア溶
液の添加によりｐＨ８に調整された濃度０．２％のリン
酸水溶液をトリペプチドの溶離６：１　； ７：３； ３ニア； １：４　； １：１：１：１゜ 用に使用し、一方テトラペプチドの溶離用には、この溶
離液に１０重量％のアセトニトリルを補充した。測定は
、溶液の吸光度を２１２ｎｍで検出する場合、１−７分
の流速で行った。クロマトグラムは面積標準化法により
評価された。目的の化合物の純度は、ＨＰＬＣおよび薄
層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）分析に基づくと９５％
よりも高かった。

比旋光度はＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ　２４１型旋光計
におイテ測定された。全ての溶媒は、４０℃の湯浴中で
Ｂｊｅｈｉ　ロータリーエバポレーターにおいて除去ま
たは蒸発された。

中間体および目的化合物の’Ｈ−ＮＭＲおよび”Ｃ−Ｎ
ＭＲスペクトルは、Ｖａｒｉａｎ　ＸＬＡ　４００型装
置において測定された。目的化合物は、その場合でも０
２ａ中に溶解された。スペクトルは、予想される構造と
一致した。

目的化合物のアミノ酸分析は、Ｂｉｏｔｒｏｎｉｃ　Ｌ
Ｃ５００１型装置において行った。試料を６モル濃度の
塩酸中１１０℃で２４時間加水分解した。分析結果は、
どの場合でも、±５％の誤差範囲内にあった。

合成の出発物質は、一般に文献で知られている。

Ｄ一対掌体は、Ｌ一対掌体と同じ方法においてＤ−アミ
ノ酸を使って出発して合成した。

例Ｉ Ａｒｇ−しｙｓ−〇−Ａｓｐの調製（方法“Ａ”）４．
０６ｍｆ！（２９，０ミリモル）のトリエチルアミンを
、６０ｒｄの酢酸エチル中に６．６０ｇ　（１３，８ミ
リモル）のＺ−Ｌｙｓ　（Ｂｏａ）−０Ｓｕおよび４．
８６ｇ　（１４，５ミリモル）のＨ−Ｄ−Ａｓｐ（Ｏｔ
Ｂｕ）−０ｔＢｕ　シュウ酸塩を含む混合物に添加し、
次いでこの混合物を一晩放置しておく。次に、それを水
２０ｍｆ！で１回、１モルの塩酸各２０ｍｊ’で３回、
５％の炭酸水素カリウム水溶液各２０ｍｊ！で３回、お
よび最後に水２０ｍｆ！で１回、順次洗浄する。

有機相を無水硫酸す）　ＩＪウム上で乾燥し、そして減
圧下で蒸発させる。

油状生成物（重量６．５ｇ、Ｒｒ”　＝０．８）　、す
なわち保護ジペプチドである蒸発残渣を７０ｍｆのメタ
ノール中に溶解し、１．５ｇのパラジウム・カーボン（
Ｐｄ／Ｃ）を添加し、撹拌下で懸濁液に２時間水素ガス
をバブリングする。混合物を濾過し、そして１．４５ｇ
　（１１，５ミ！Ｊモル）のシュウ酸二水和物を濾液に
添加する。蒸発後、残渣をエーテルで粉砕し、そして得
られた懸濁液を濾過すると４．８０　ｇの遊離のＬｙｓ
−Ｄ−Ａｓｐ　シュウ酸塩を得る。ｍ、ｐ、：１１８−
１２１℃、〔α〕６°＝１１．Ｏ°　（ｃ＝１、メタノ
ール）・Ｒｒ’　＝０．２５゜ 一１０℃に冷却した２０ｍ１のジメチルホルムアミド（
ＤＭＦ）中に１．９８ｇ　　（６，０ミリ％）’ｖ）　
ノＢｏｃ−Ａｒｇ（・１（Ｃｆ　）−Ｏｆ（−１１２０
および０．６７ｍｆ　（６，０ミリモル）のＮ−メチル
モルホリンを含む溶液に、０．７８ｄ（６，０ミリモル
）のイソブチルクロロホルメートを温布する。こうして
得られた混合無水物を〜１０℃で１０分間撹拌し、次に
、−１０℃に冷却したＤＭＦ１５ｍｌｌ！中に前記のよ
うにして調製されたＬｙｓ−Ｄ−Ａｓｐシュウ酸塩３．
２７ｇ　（５，８ミリモル）およびＮ−メチルモルホリ
ン１．２８ｍ１（１１，６ミリモル）を含む溶液を添加
する。その後、反応混合物を室温まで加温し、そして−
晩装置する。溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣を５０ｍｊ
！のクロロホルム中に溶解し、そして１モルの塩酸各２
０ｍｊ！で３回および水２０ｍ１で順次洗浄し、次いで
無水硫酸すｌ・リウム上で乾燥する。懸濁液を濾過した
後、濾液を減圧下で蒸発させる。ジイソプロピルエーテ
ルの添加により、油状の残渣を固体にする。懸濁液を濾
過し、モして濾液を減圧蒸発すると、３．２０ｇ　（４
，１８ミ！Ｊモル）の非晶質のＢｏｃ−Ａｒｇ（−ＨＣ
ｊ！　）−Ｌｙｓ（Ｂｏａ）−Ｄ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）
ＤＩＢＩＪｌ−リベブチドエステル塩を得る。Ｒｔ３＝
０．１０゜Ｌ’　　＝０．４５・　Ｃｔｘ”３　３°＝
−６，４°　　（ｃ＝１．、Ａり）−Ｊ＃）。

≠＝咽雨　　上記のようにしてｍ製された他の保護ペプ
チド　は第５表に示されている。

上記のようにして・得られた保護トリペプチドエステル
塩１．６０ｇ　（２，０８ミリモル）を２０ｍｊ！のト
リフルオロ酢酸で２時間処理し、次いで減圧下で蒸発さ
せる。エーテルの添加により残渣を固体にした後、懸濁
液を濾過し、そして沈澱物をエーテルで徹底的に洗浄す
る。得られたトリフルオロ酢酸塩を２０ｍ１の水に溶か
し、そして５ｍＮのアセテート型のＤｏｗｅｘ　２　Ｘ
　３イオン交換樹脂（ｎｏｗ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ
。

により製造）を添加する。３０分後、懸濁液を濾過し、
濾液を減圧下で蒸発せしめ、メタノールの添加により蒸
発残渣を固体にすると、１．０ｇの非晶質のＡｒｇ−Ｌ
ｙｓ−Ｄ−Ａｓｐ　−Ｃｆ１．１ＣＯＩＩ）ｌ　）リベ
ブチド酢酸塩を得る。〔α〕６°＝＋１．Ｏ°　（Ｃ＝
１．０．１０％酢酸）。アミノ酸分析：　Ｄ−Ａｓｐ　
＝１．０３　、Ｉ、ｙｓ　＝１．００八ｒｇ　　＝０．
９８゜ 上記のようにして調製した式（１）〜（１６）の目標化
合物の物理定数は第６表に要約されている。

例２ Ｌｙｓ　（Ａｒｇ）　−Ａｓｐの調製（方法“Ｂ″）６
０ｄの酢酸エチル中に４．７７ｇ　（１０，０ミリモル
）のＢｏｃ−Ｌｙｓ　（Ｚ）−０Ｓｕおよび３．６９ｇ
　（１１，０ミリモル）のＨ−Ａｓｐ　（ＯｔＢｕ）−
ＤｔＢｕシコウ酸塩を含む混合物に、３．０８−のトリ
エチルアミンを添加し、そして混合物を一晩反応させる
。次に、この混合物を水２０ｍ！！で１回、１モルの塩
酸各２０ｍ！！で３回、５％の炭酸水素カリウム水溶液
で３回、そして最後に水２０ｍ１で１回顧次洗浄し、無
水硫酸ナトリウム上で乾燥し、次いで減圧下で蒸発させ
る。

オイル正して得られた保護ジペプチド（Ｒｒ’＝０、８
５）　５．６　ｇを６０ｍ１のメタノールに溶解し、そ
してパラジウム・カーボン（Ｐｄ／Ｃ）触媒１．０ｇ；
ｔ−添加した後、撹拌下で２時間懸濁液に水素ガスをバ
ブリングする。次いで懸濁液を濾過し、濾液に１．１ｇ
のシコウ酸二水和物を添加し、そして溶媒を蒸発させる
。エーテル中に結晶残渣を懸濁し、濾過し、そして乾燥
して４．４ｇのＢｏｃ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ（０’Ｂｕ）−
０ｔＢｕシユウ酸塩を得る。ｍ、　ｐ、　：　１３５−
１３８℃。

Ｒｆ’　＝０．３５゜ 得られた前記シコウ酸塩を、例１に記載したような混合
無水物縮合法によ引、ｙｓのε−アミノ基の所でアシル
化し、次いで例１に記載したようにして、得られた保護
トリペプチドから保護基を除去する。

上記のようにして得られた保護ペプチドおよび遊離ペプ
チドの物理定数は第５表および第６表に要約されている
。

例３ Ａｒｇ−Ｌｙｓ　（Ａｒｇ）−Ａｓｐの調製（方法”Ｃ
”）１．８５ｇ　　（５，５ミリモル）のｔｌ−Ａｓｐ
（ＯｔＢｕ）−０ｔＢｕシユウ酸塩を振盪漏斗中の５０
ｍ１のエーテル中に懸濁し、そして５％炭酸水素カリウ
ム溶液２０ｍｆ！をこの懸濁液に添加する。完全に溶解
するまで混合物を振盪し、水相を分離し、エーテル相を
２０ｍｆ！の５％炭酸水素カリウム溶液および２０−の
水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして２
０ｍｊ！の容量まで減圧ａ縮する。保護リジンＺ−Ｌｙ
ｓ　（Ｚ）　−０Ｈ２，４９ｇ　（６，０ミリモル）を
添加しそして０℃に冷却した後、１．２０ｇ　（５，８
ミリモル）のジシクロへキシルカルボジイミドを添加す
る。この混合物を０℃で３０分間維持し、次いで室温で
一晩放習する。

ジシクロヘキシル尿素沈澱物を濾別し、濾液を各１０ｒ
ｎｉ！０１モル塩酸で３回、各１０１ｎｌの５％炭酸水
素す）　ＩＪウム溶液で３回、そして最後に２０＋７１
ｆ！の水で１回、順次洗浄し、そして無水硫酸ナトリウ
ム上で乾燥後、減圧下で蒸発させる。

油状の蒸発残渣として得られた３、　０　ｇの保護ジペ
プチド（Ｒｆ２＝０．８０）を５０−のメタノールに溶
解し、そして１．０ｇのパラジウム・カーボン（Ｐｄ／
Ｃ”）触媒を添加した後、懸濁液に水素ガスを２時間バ
ブリングする。触媒の濾別の後、濾液に１、１８　ｇ　
（９，３４ｆｉ　ＩＪモル）のシュウ酸三水和物を添加
し、そして混合物をｌＯ−まで減圧濃縮ずろ。こうｉ、
て得られた懸濁液をエーテルの添加により１００ｍ１に
希釈し、沈殿物を濾過しそしてエーテルで洗浄する。こ
うして、Ｌ　４９　ｇ　Ｌｙ）Ｈ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ　（
ｆｌｔＢｕ）［］ｔＢｕシュウ酸塩（Ｒｆ’　＝０．２
５）が得られ、例１に記載の混合無水物縮合法を使うこ
とにより、これのリジン部分の２つのアミノ基どもアシ
ル化する。

こうして得られた保護テトラペプチドから例１に記載の
ようにして保護基を除去する。

保護テトラペプチドおよび遊離テトラペプチドの物理定
数は、第５表および第６表に要約されている。

例４ Ｄ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｖａｌの調製（方法″Ｄ
″）ＩＬＯｍｐのジメチルホルムアミド中の６．３ｇ（
３０ミリモル）のＨ−Ｖａｌ−ＯｔＢｕ−ＨＣ７！およ
び１１゜２ｇ（２６，８ミリモル）のＺ−Ａｓｐ　（Ｏ
ｔＢｕ）−［］Ｓｕの懸濁液に、４．２ｍｊ’２（３０
ミＩＪモル）のトリエチルアミンを添加した後、この混
合物を一晩放置し、次いで減圧下で蒸発させる。油状の
蒸発残渣を２００ｍ７！の酢酸エチルに溶解し、そして
各４０ｍｊ！の１モル塩酸で２回、４０ｒｎ１．の水、
４０−の５％炭酸水素ナトリウム溶液、そして再び４０
Ｔｎｌの水で順次洗浄する。無水硫酸ナトリウム上での
乾燥の後、溶液を濾過し、そｊ、２て濾液を減圧下で蒸
発させる。

蒸発残渣として得られた］、３．０ｇの保護ジペプチド
（Ｒ，’＝Ｏ７８０）を１００１ｎ１．のメタノールに
溶解し、１．５ｇのパラジウム・カーボン触媒を添加ｊ
−７だ後、撹拌下で懸濁液に２時間水素ガスをバブリン
グする。触媒を濾別した後、濾液を減圧下で蒸発さぜる
。油状の蒸発残渣を１００ｍｊ！のエーテル中に溶解し
、そしてｐＨが５になるまでメタノール性塩化水素溶液
（ＨＣ＃　／Ｍｅ０１１）を添加する。得られた懸濁液
を５時間冷却し、次いで濾過し、沈殿物をエーテルで洗
浄し、そして乾燥すると９．０ｇ（８８，０ミリモル）
のＨ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｖａｌ−ＯｔＢｕ　−ＨＣ
ｌ２　　、　ｍ、ｐ、　：１８７−１８９℃、　Ｒｆ’
　＝０．４０を得る。

その先は、例１に記載の方法に従う。

こうして得られた保護および遊離のテトラベブヂドの物
理定数は第５表および第６表に要約されている。

例５ Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ　（Ｖａ　１）の調製（方法“
Ｅ”）２５ｍ１．ＯＤＭＦ中に２．５８ｇ　　（１２，
０ミリモル）のＨＶａｌ−０″Ｂｕ　−ＨＣｊ！および
４．６２ｇ　（１１，０ミリモル）のＺ−Ａｓｐ　（Ｏ
３ｕ）−０ｔＢｕを含む懸濁液に、１．６８献（１２，
０ミＩＪモ）０のトリエチルアミンを添加した後、混合
物を一晩反応させ、次いで減圧下で蒸発させる。

５０ｍ１の酢酸エチル中の蒸発残渣の溶液を、２０ｍｊ
！の水で１回、各２０−の１モル塩酸で３回、各２０ｍ
ｆの５％炭酸水素ナトリウム溶液で３回、そして最後に
２０−の水で洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウム上で
乾燥し、そして減圧下で蒸発させると、４、３　ｇ　（
８１，７％）の保護ジペプチドを得る。ｍ、　ｐ。

：　８６．５−８７．０℃、Ｒｆ’　＝０．８５゜４０
ｍｊ！のメタノール中に上記のようにして得られた保護
ジペプチド４．０７ｇ　（８，５ミＩＪモル）を含む溶
液に１．Ｏｇのパラジウム・カーボン触媒を添加した後
、２時間の間撹拌しながら懸濁液に水素ガスをバブリン
グすることより水素添加する。触媒を濾別した後、濾液
を減圧下で蒸発させる。蒸発残渣を５０ｍ１のエーテル
中に溶解し、そして３−のメタノール中に溶解された０
、７６ｇ　（８，５ミＩＪモル）のシュウ酸三水和物を
添加すると、３．３７ｇ　（９１，６−％）の遊離ジペ
プチド・シュウ酸塩（［ｎ、　Ｉ’）、　：　１４２−
１４３℃、Ｒｒ’　”’０．１５）を得、次いで例１に
記載のようにしてこれをアシル化する。

こうして得られた保護および遊離のテトラペプチドの物
理定数は、第５表および第６表に要約されている。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、免疫機構の機能を抑制する式（１）〜（１６）のペ
   プチド： 【遺伝子配列があります】（１）、 【遺伝子配列があります】（２）、 【遺伝子配列があります】（３）、 【遺伝子配列があります】（４）、 【遺伝子配列があります】（５）、 【遺伝子配列があります】（６）、 【遺伝子配列があります】（７）、 【遺伝子配列があります】（８）、 【遺伝子配列があります】（９）、 【遺伝子配列があります】（１０）、 【遺伝子配列があります】（１１）、 【遺伝子配列があります】（１２）、 【遺伝子配列があります】（１３）、 【遺伝子配列があります】（１４）、 【遺伝子配列があります】（１５）および 【遺伝子配列があります】（１６） 並びにそれらの酸付加塩。 ２、免疫機構の機能を抑制する医薬組成物であって、希
   釈剤、充填剤、安定剤、ｐＨ−および浸透圧−作用剤並
   びに医薬産業において常用されている製剤を促進する添
   加剤および補助物質との混合物において、活性成分とし
   て療法的に有効な量において遊離形または酸付加塩の形
   で１または複数の請求項１に記載の式（１）〜（１６）
   のペプチドを含んで成る医薬組成物。 ３、次の式（１）〜（１６）の新規ペプチド：【遺伝子
   配列があります】（１）、 【遺伝子配列があります】（２）、 【遺伝子配列があります】（３）、 【遺伝子配列があります】（４）、 【遺伝子配列があります】（５）、 【遺伝子配列があります】（６）、 【遺伝子配列があります】（７）、 【遺伝子配列があります】（８）、 【遺伝子配列があります】（９）、 【遺伝子配列があります】（１０）、 【遺伝子配列があります】（１１）、 【遺伝子配列があります】（１２）、 【遺伝子配列があります】（１３）、 【遺伝子配列があります】（１４）、 【遺伝子配列があります】（１５）および 【遺伝子配列があります】（１６） 並びにそれらの酸付加塩の調製方法であって、活性エス
   テル法および／または混合無水物法の縮合段階並びにア
   ミノ基の脱保護段階をうまく使って、（ａ）水素添加ま
   たはアシドリシスにより除去可能な基によりエステル化
   されたカルボキシル基、所望により保護された側鎖アミ
   ノ基および／または水素添加もしくはアシドリシスによ
   り除去可能な基によりエステル化された側鎖カルボキシ
   ル基、並びに遊離アミノ基を有するカルボキシ端のアミ
   ノ酸誘導体を使って開始し、カルボキシル基がエステル
   化されておりそしてペプチド結合に関与しないアミノ基
   に保護基Ｂｏｃおよび／またはＺを含む式（１）〜（１
   ６）の新規ペプチドの誘導体を調製し； （ｂ）次いで、触媒的水素添加および／または酸処理に
   より存在する保護基を除去し；そして（ｃ）所望であれ
   ば、酸との処理により式（１）〜（１６）の遊離ペプチ
   ドをそれの酸付加塩に変換する ことを含んで成る方法。 ４、前記活性エステル縮合法においてＮ−ヒドロキシス
   クシンイミドにより保護されたエステルを使用する、請
   求項３に記載の方法。 ５、前記混合無水物縮合法においてイソブチルクロロホ
   ルメートを用いて形成された混合無水物を使用する、請
   求項３に記載の方法。 ６、ペプチド結合に関与しないアミノ基上に保護基Ｚお
   よびカルボキシ基上にベンジルエステル基またはニトロ
   ベンジルエステル基を有する保護誘導体を調製し、そし
   て触媒的水素添加によりそれから保護基を除去すること
   を含んで成る、請求項３〜５のいずれか一項に記載の方
   法。 ７、ペプチド結合に関与しないアミノ基上に保護基Ｂｏ
   ｃおよびカルボキシ上に第三ブチルエステル基を有する
   保護誘導体を調製し、そしてアシドリシスによりそれか
   ら保護基を除去することを含んで成る、請求項３〜５の
   いずれか一項に記載の方法。 ８、免疫機構の機能を抑制する医薬組成物の調製方法で
   あって、活性成分として療法的に有効な量において請求
   項３に記載の式（１）〜（１６）の１つもしくは複数の
   ペプチドまたは医薬上許容されるその塩を、希釈剤、充
   填剤、安定剤、ｐＨ−および浸透圧−作用剤、並びに医
   薬産業において常用される製剤を促進する添加剤および
   補助物質と混合することを含んで成る方法。 ９、ヒトを除く哺乳動物の生体において免疫機構の機能
   を抑制する方法であって、１つもしくは複数の請求項１
   に記載のペプチドまたはそれらの酸付加塩の療法的に有
   効な量を投与することを含んで成る方法。