JPH08511017A

JPH08511017A - 新規なペプチド誘導体

Info

Publication number: JPH08511017A
Application number: JP7501664A
Authority: JP
Inventors: アントンソン，カール・トーマス; ビユルンド，ルート
Original assignee: アストラ・アクチエボラーグ
Priority date: 1993-06-03
Filing date: 1994-06-02
Publication date: 1996-11-19
Also published as: AU6940894A; WO1994029335A1; SE9301911D0; EP0701567A1; AU685465B2

Abstract

(57)【要約】一般式（Ｉ）：A¹-A²-NH-(CH₂)_n-NH-C(NH)-NH₂-〔式中ｎは整数２、３、４、５または６であり、好ましくは３または４であり；A¹は式（IIａ）、（IIｂ）、（IIｃ）、（IIｄ）または（IIｅ）の構造フラグメントを示し、A²は構造フラグメント(a)を示す〕の化合物、その調製方法、使用および薬学的組成物。

Description

【発明の詳細な説明】新規なペプチド誘導体本発明は広い意味において、プロテアーゼ阻害および炎症性疾患の治療に関する。より詳細には、本発明は、キニノゲナーゼのようなトリプシン様セリンプロテアーゼの新しい競合的阻害剤、その合成、活性成分としてその化合物を含有する薬学的組成物、および、炎症性疾患、例えば喘息、鼻炎、ジン麻疹、炎症性腸疾患および関節炎の治療のための化合物の使用に関する。背景キニノゲナーゼはキニノゲンに作用しキニン（ブラディキニン、カリジンおよびMet-Lys-ブラディキニン）を生成するセリンプロテアーゼである。血漿カリクレイン、組織カリクレインおよび肥満細胞トリプターゼが重要なキニノゲナーゼである。キニン類（ブラディキニン、カリジン）は一般的に炎症に関与している。例えば、活性炎症過程は血管透過性の増大を伴い、血漿から組織への溢出過剰をもたらす。その後に生じる血漿の滲出液には循環血液の全ての蛋白系が含有されている。血漿由来キニノゲンは必然的に種々のカリクレインと相互作用を有し、活性血漿滲出過程が継続する限り、キニン類を形成し続ける。血漿滲出は、アレルギー、感染またはその他の要因のいずれであるかに関らず、炎症に関与する機序とは無関係に起こる（Persson等編集、Thorex 1992，47:993-1000）。即ち血漿滲出は喘息、鼻炎、風邪、および炎症性腸疾患を含む多くの疾患の特徴である。特にアレルギーでは肥満細胞トリプターゼが放出（Salomonsson等，Am．Rev．Resp ir．Dis.,1992,146: 1535-1542）され、喘息、鼻炎および腸疾患におけるキニン形成およびその他の病的状況の発生に寄与する。キニン類は平滑筋作用、分泌作用、神経原作用およびホスホリパーゼA²の活性化および血管透過性の増大を含む炎症過程を持続させる作用を有する生物学的に高い活性を有する物質である。後者の作用は潜在的にキニンの悪影響を誘発し、更にキニンを発生させる。組織カリクレインは主に低分子量のキニノゲンを切断してカリジンを生成し、そして、血漿カリクレインは高分子量のキニノゲンからブラディキニンを好ましく放出させる。従来技術切断部位周辺のアミノ酸配列（-Ser-Pro-Phe-Arg-Ser-Ser-Arg-）に基づくカリクレインの阻害剤は以前に報告されている。アルギニンクロロメチルケトンはKettnerおよびShawにより血漿カリクレイン阻害剤として報告されている（Biochemistry 1978,17: 4778-4784およびMeth．E nzym．1981，80: 826-842）。同様にエステルおよびアミドが血漿カリクレイン阻害剤としてFareed等により報告されている（Ann．N.Y. Acad．Sci．1981,370: 765-784）。欧州特許出願A2-0,195,212号には、カリクレインを含むペプチダーゼ基質の類縁体に基づくプロテアーゼ酵素阻害剤が記載されている。アルギニンのＣ末端ボロン酸誘導体およびそのイソチオウロニウム類縁体に基づくトロンビンおよびカリクレインのようなトリプシン様セリンプロテアーゼが欧州特許出願A2-0,293,881号に報告されている。 WO 92/04371号には、カルボニル活性化または結合基を有する一連のカリクレイン阻害剤が記載されている。発明の詳細な説明本発明の目的は、酵素に対して競合的な阻害作用を有する、即ち可逆阻害を示すような新しい強力なカリクレイン阻害剤を提供することである。本発明の別の目的は、経口、経皮、直腸または吸入経路で投与できる阻害剤を得ることである。本発明によれば、下記一般式Ｉ： A¹-A²-NH-(CH₂)_n-NH-C(NH)-NH₂ （Ｉ）〔式中ｎは整数２、３、４、５または６、好ましくは３または４であり； A¹は下記式IIａ、IIｂ、IIｃ、IIｄまたはIIｅ；の構造フラグメントを示し；ここでｐは整数０、１または２であり；ｍは整数１、２、３または４、好ましくは２であり；ｑは整数０〜２、好ましくは１であり； R¹はＨ、炭素原子１〜４個を有するアルキル基、炭素原子２〜３個を有するヒドロキシアルキル基、または、Ｒ¹¹OOC−アルキル−（ここでアルキル基は炭素原子１〜４個を有し、Ｒ¹¹はＨまたは炭素原子１〜４個を有するアルキル基である）を示すか、または、 R¹はR¹²-OOC-1,4-フェニル-CH₂−（ここでR¹²はＨまたは炭素原子１〜４個を有するアルキル基）を示すか、または、 R¹はR¹³-NH-CO-アルキル（ここでアルキル基は炭素原子１〜４個を有し、炭素原子１〜４個を有するアルキル基でカルボニルに対してアルファ位で置換されていることができ、R¹³はＨまたは炭素原子１〜４個を有するアルキル基であるか、または、-CH2COOR¹²〔ここでR¹²は前に定義したもの〕である）を示すか、または、 R¹はR¹⁴SO₂-、Ph(4-COOR¹²)-SO₂-、Ph(3-COOR¹²)-SO₂-またはPh(2-COOR¹²)-SO₂ -〔ここでR¹²は前に定義したものであり、R¹⁴は炭素原子１〜４個を有するアルキル基〕を示すか、または、 R¹はCO-R¹⁵〔ここでR¹⁵は炭素原子１〜４個を有するアルキル基〕を示すか、または、 R¹はCO-OR¹⁵〔ここでR¹⁵は前に定義したもの〕を示すか、または、 R¹はCO-(CH₂)_p-COOR¹²〔ここでR¹²は前に定義したもの〕を示すか、または、 R¹は-CH₂PO(OR¹⁶)₂〔ここでR¹⁶は各々、Ｈ、メチルまたはエチル〕を示し； R²はＨまたは炭素原子１〜４個を有するアルキル基またはR²¹OOC-アルキル〔ここでアルキル基は炭素原子１〜４個を有し、カルボニル基に対してアルファ位で置換されていることができ、そしてそのアルファ置換基は基R²²−(CH₂)_p-｛ここでｐは上記したものであり、R²²はメチル、フェニル、OH、COOR²¹である｝であり、R²¹はＨまたは炭素原子１〜４個を有するアルキル基である〕を示し； R³は炭素原子１〜４個を有するアルキル基を示すか、または、 R³はシクロヘキシル−またはシクロペンチル基を示すか、または、 R³は、炭素原子１〜４個を有するアルキル基または基OR²¹〔R²¹は上記のとおり定義される〕で置換されていてもよいフェニルを示すか、または、 R³は１−ナフチル、２−ナフチル、４−ピリジル、３−ピロリジル、または３ −インドリル基を示し、これは、OR²¹〔R²¹は上記のとおり定義される〕で置換されていてもよいものであり、そしてｐ＝１であるか、または、 R³はシス−またはトランス−デカリン基であり、そしてｐ＝１であるか、または R³はSi(Me)₃またはCH(R³¹)₂であり、ここで、R³¹はシクロヘキシル−またはフェニル基であり； A²は構造フラグメント：〔式中R³およびｐは前に定義した通りである〕の化合物、生理学的に許容されるその塩および立体異性体がセリンプロテアーゼ、特にカリクレインの強力な阻害剤であることが解った。アルキル基は特段の記載が無い限り、直鎖または分枝鎖のものであってよい。炭素原子１〜４個を有するアルキル基はメチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｓ−ブチルおよびｔ−ブチルである。不飽和という記載は、炭素−炭素二重結合を意味する。略号は明細書の終りに表にして示す。本発明によれば、一般式Ｉの化合物、生理学的に許容されるその塩および立体異性体はトリプシン様セリンプロテアーゼ、特に血漿および／または組織カリクレインの強力な阻害剤であることが解った。A²アミノ酸でＳ型であるような式Ｉの化合物が好ましい化合物であり、そのうち、A¹アミノ酸でＲ型であるような化合物が特に好ましい。本発明の好ましい化合物には以下のものが包含される。 H-(R)Cha-Phe-Agm HOOC-CH₂-(R)Cha-Phe-Agm H-(R)Cha-Phe-Nag HOOC-CH₂-(R)Cha-Phe-Nag CH₃-CO-(R)-Cha-Phe-Nag CH₃-CH₂-(R)-Cha-Phe-Nag HOOC-CO-(R)-Cha-Phe-Nag HOOC-CH₂-(R)Phe-Phe-Agm HOOC-CH₂-(R)Phe-Cha-Agm HOOC-CH₂-(R)Cha-Cha-Agm HOOC-CH₂-(R)Phe-Phe-Nag HOOC-CH₂-(R)Phe-Cha-Nag HOOC-CH₂-(R)Cha-Cha-Nag HOOC-CH₂-(R)Cha-αNal-Agm HOOC-CH₂-(R)Cha-βNal-Agm H-(R)Phe-Cha-Agm H-(R)Phe-Cha-Nag H-(R)Phe-Phe-Agm H-(R)Phe-Phe-Nag CH₃-(R)Phe-Phe-Agm CH₃-(R)Cha-Phe-Agm CH₃-(R)Phe-Cha-Agm HOOC-CH₂-(R)Pro-Phe-Agm HOOC-CH₂-(R)Pro-Phe-Nag H-(R)Pro-Phe-Agm H-(R)Pro-Phe-Nag CH₃-(R)Pro-Phe-Agm CH₃-(R)Pro-Phe-Nag 特に好ましい化合物を以下に示す。 H-(R)Cha-Phe-Agm HOOC-CH₂-(R)Cha-Phe-Agm H-(R)Cha-Phe-Nag HOOC-CH₂-(R)Cha-Phe-Nag CH₃-CO-(R)-Cha-Phe-Nag CH₃-CH₂-(R)-Cha-Phe-Nag HOOC-CO-(R)-Cha-Phe-Nag 現時点で知られている本発明のもっとも良い態様は以下に示す実施例４の化合物を使用することである。 HOOC-CH₂-(R)Cha-Phe-Nag 医療上および薬品としての使用本発明はまた、生理学的障害、および、喘息、鼻炎、膵炎、ジン麻疹、炎症性腸疾患および関節炎のような炎症性疾患を治療するための組成物および方法を提供する。式Ｉの化合物の有効量を、生理学的に許容される担体または希釈剤を用いるか用いることなく、単独で、または、別の治療薬と組み合わせて使用できる。治療する疾患および患者に応じて、組成物は、経口、経皮、経鼻、気管、気管支、非経腸、または直腸経路で種々の用量で投与してよい。化合物は既知の方法に従って発色性の基質を用いて評価することのできるカリクレイン活性の阻害を示す。本発明の化合物の抗炎症作用は、例えば、気道粘膜または消化管粘膜のアレルゲン誘発滲出性炎症過程の抑制により検討できる。血漿カリクレインの阻害定数K_iの測定 K_iの測定は、発色基質法で行い、Roche（Basel、スイス）製のCobas Bio遠心分離分析器で実施した。種々の濃度の被験化合物とともにヒト血漿カリクレインをインキュベートした後の残存酵素活性を３通りの基質濃度で測定し、37℃の40 5nmにおける吸光度の変化として求めた。ウシアルブミン（カタログ番号810033，ICI Biochemicals Ltd,Hih Wycombe， Bucks，GB）５ｇ／ｌを含有する緩衝液（0.05mol／ｌトリス塩酸，pH7.4，ｌ 0 .15，NaClで調節）中0.4nkat／mlの濃度のスエーデン）250μｌを、アルブミン10ｇ／ｌを含有する0.15モル／ｌの濃度の塩化ナトリウム中の被験化合物の溶液80μｌとともに、300秒間インキュベートした。この段階で水を更に10μｌ添加した。次にカリクレイン基質（S-2302，Chromogenix AB，水中1,25，2.0または4.0ミリモル／ｌ）40μｌを更に水20μｌとともに添加し、吸光度の変化をモニタリングした。 Dixonプロット、即ち、種々の基質濃度のデータが切片ｘ＝−K_iの直線を形成するような阻害剤濃度vsl／（△Ａ／分）のダイアグラムからK_iを評価した。薬学的組成物式Ｉの化合物は通常は、薬学的に許容される剤形で、活性成分を遊離の塩基または薬学的に許容される非毒性の有機または無機の酸付加塩、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、乳酸塩、酢酸塩、クエン酸塩およびトリフルオロ酢酸塩等の何れかとして活性成分を含有する薬学的組成物の形態で、経口、直腸、経皮、経鼻または非経腸経路で投与する。剤形は、それ自体知られた方法で調製される固体、半固体または液体製剤であってよい。通常は、活性物質は非経腸投与を意図した製剤では製剤の0.1〜99重量％、特に0.1〜50重量％、そして、経口投与に適する製剤の場合は、0.2〜75重量％を占める。ヒトの治療に用いる場合の本発明の化合物の適当な一日当たり用量は、経口投与の場合約0.001〜100mg/kg体重、非経腸投与の場合は0.001〜50mg／kg体重である。調製本発明の別の目的は化合物の調製方法である。式Ｉの化合物は、Ｎ−末保護ジペプチド（W₁-A¹-A²-OH）または（W₁-A¹-OH）（ここで、Ｎ−末端保護アミノ酸を用いる場合は、第２のアミノ酸は標準方法を用いて後に添加する）を、下記式： H₂N-(CH₂)_n-X （式中、A¹、A²およびｎは式Ｉにおいて定義した通りであり、そしてＸは未保護または保護されたグアニジノ基、または保護されたアミノ基、またはアミノ基に変換可能な基である）の化合物とカップリングさせ、次に、保護基を除去するか、または、Ｎ−末端窒素を脱保護し、その後、Ｎ−末端窒素をアルキル化し、知られた方法で脱保護することにより調製してよい。カップリングは以下に示す方法の１つを用いて行う。方法Ｉ：標準的なペプチドカップリング方法により調製されたＮ−末端保護ジペプチドと、保護された、または未保護のアミノグアニジンまたはアルキル鎖末端に保護されたまたはマスキングされたアミノ基を有する直鎖アルキルアミンとの、下記式：〔式中、A¹、A²およびｎは式Ｉで定義した通りであり、W₁はｔ−ブトキシカルボニルおよびベンジルオキシカルボニルのようなＮ−末端アミノ保護基であり、Ｘは-NH-C(NH)-NH₂、-NH-C(NH)-NH-W₂、-N(W₂)-C(N_H)-NH-W₂、-NH-C(NW₂)-NH-W₂または-NH-W₂（ここでW₂はｔ−ブトキシカルボニルまたはベンジルオキシカルボニルのようなアミン保護基）であるか、またはＸはアジドのようなマスキングされたアミノ基である〕に示す標準的なペプチドカップリングを用いて保護ペプチドを得る。最終化合物は使用するＸ基の性質に応じ低下の方法の何れかで調製できる。即ち、保護基の除去（Ｘ＝ -NH-C(NH)-NH₂、-N(W₂)-C(NH)-NH-W₂、-NH-C(NW₂)-NH-W₂または-NH-C(NH)-NH-W₂ の場合）またはW₁-基の選択的脱保護（例えばＸ＝-NH-C(NH)-NH-W₂、-N(W₂)-C(N H)-NH-W₂、-NH-C(NW₂)-NH-W₂の場合、この場合W₂はW₁に対しオルト）を行ない、ついで、Ｎ−末端窒素のアルキル化および脱保護または末端アルキルアミノ官能基の選択的脱保護／マスキング除去（Ｘ＝NH-W₂、この場合W₂はW₁に対しオルトであるか、またはＸ＝アジドのようなマスキングされたアミノ基である）を行ない、その後、標準的な方法を用いた遊離アミンのグアニド化反応およびW₁−基の脱保護を行う。方法II 標準的なペプチドカップリング方法により調製されたＮ−末端保護ジペプチドと、保護された、または未保護のアミノグアニジンまたはアルキル鎖末端において保護されたまたはマスキングされたアミノ基を有する直鎖アルキルアミンとの、下記式：〔式中、A²、ｎ、W₁およびＸは上記定義した通りである〕に示す標準的なペプチドカップリングを用いてカップリングさせること、ついで、W₁−基の脱保護および保護された形態のＮ−末端アミノ酸とのカップリングを行ない、方法Ｉに記載の保護ペプチドを得る。その後、方法Ｉに従って最終化合物への合成を継続する。本発明の詳細な記述以下の記述は本発明の特徴を説明するものである。実験の部一般的実験方法 ¹HNMRおよび¹³C NMRの測定のBRUKER AC-P 300、BRUKER 200およびBRUKER AM 5 00スペクトル分析器を用いて行った。前者は500.14MHzの¹H周波数および125.76M Hzの¹³C周波数で測定し、そして後者はそれぞれ300.13MHzおよび75.46MHzの¹Hおよび¹³Cの周波数で測定した。試料は、CDCl₃（アイソトープ純度＞99.8％、Dr．Glaser AGBasel）、CD₃OD（アイソトープ純度＞99.95％、Dr．Glaser AGBasel）またはD₂O（アイソトープ純度＞99.98％、Dr．Glaser AGBasel）の何れかの溶媒0.6ml中に10〜50mgの量で溶解した。 CDCl₃およびCD₃OD中の¹Hおよび¹³Cの化学シフト値は外部標準物質としてのテトラメチルシランに対する相対値とした。D₂O中の¹Hの化学シフトは外部標準物質３−（トリメチルシリル）−d₄−プロパン酸のナトリウム塩に対する相対値とし、そして、D₂O中の¹³Cの化学シフトはやはり外部標準物質１，４−ジオキサン（67.3ppm）に対する相対値とした。外部標準物質を用いたカリブレーションは場合により、内部標準物質を用いた場合と比較して僅かなシフトの差をもたらすが、¹Hの化学シフトの差は0.02ppm未満であり、¹³Cの化学シフトの差は0.1ppm未満である。薄層クロマトグラフィーは市販のMerckシリカゲル60F₂₅₄をコーティングしたガラスまたはアルミニウムプレート上で行った。可視化はUV光の組み合わせを用い、その後エタノール(95％)372ml、濃硫酸13.8ml、濃酢酸4.2mlおよびｐ−メトキシベンズアルデヒドまたはホスホモリブデン酸試薬（エタノール(95％)中５〜 10重量％）を混合することにより調製した溶液を噴霧し、加熱することにより行った。フラッシュクロマトグラフィーは窒素圧下Merckシリカゲル60（40〜63mm、230 〜400メッシュ）上で行った。凍結乾燥はLeybold-Heraeus，Lyovac GT ２型装置を用いて行った。保護操作 Boc-(R)Cha-OH １Ｍ水酸化ナトリウム130mlおよびTHF 65ml中のH-(R)Cha-OH21.55ｇ（125.8ミリモル）の溶液に、(Boc)₂O 30ｇ（137.5ミリモル）を添加し、混合物を室温で4 .5時間撹拌した。THFを蒸発させ、更に水150mlを添加した。アルカリ性の水層を酢酸エチルで２回洗浄し、２Ｍ硫酸水素カリウムで酸性化し、酢酸エチル３×15 0mlで抽出した。合体した有機層を水、塩水で洗浄し、乾燥（硫酸ナトリウム）した。溶媒を蒸発させて白色固体として標題化合物30.9ｇ(90.5％)を得た。出発物質の調製 Boc-(R)Cha-Osu Boc-(R)Cha-OH（１当量）、HOSu（1.1当量）およびDCCまたはCME-CDI（1.1当量）をアセトニトリル（約2.5ml／ミリモル酸）に溶解し、一夜室温で撹拌した。反応の間に形成した沈殿を濾過し、溶媒を蒸発させ、生成物を真空下に乾燥した。（反応にCME-CDIを使用する場合は、シアン化エチルの蒸発後、残存物を酢酸エチルに溶解し、有機層を水で洗浄し、乾燥した。溶媒を蒸発させて標題化合物を得た。） ¹H-NMR（500 MHz，CDCl₃，２回転異性体約：１：１の比）δ0.85-1.1(m，2H) ，1.1-1.48(m，4H)，1.5-1.98(m，16H；うち1.55(bs,9H))，2.82(bs，4H)，4.72 (bs，1H，大量異性体)，4.85(bs，1H，少量異性体) Boc-(R)Cha-Phe-OH ５℃のDMF／水（１／１）60ml中のH-Phe-OH 6.61ｇ（40ミリモル）および水酸化ナトリウム1.4ｇ（35ミリモル）の撹拌混合物に、Boc-(R)Cha-OSu 3.68ｇ（10 ミリモル）を添加し、混合物を室温に戻した。３時間後、溶媒を蒸発させ、残存物を水150mlに溶解した。塩基性の水層を酢酸エチル２×50mlで洗浄し、１Ｍ硫酸水素カリウムで酸性化し、酢酸エチル２×100mlで抽出した。合体した有機層を水２×50mlで洗浄し、乾燥（硫酸マグネシウム）した。濾過し、溶媒を蒸発させ、標題化合物2.86ｇ（68％）を得た。 Boc-(R)Cha-Phe-Osu アセトニトリル30ml中のBoc-(R)Cha-Phe-OH 2.81ｇ（6.71ミリモル）およびHO Su 850mg（7.38ミリモル）の撹拌溶液に、CME-CDI3.13ｇ（7.38ミリモル）を添加し、反応混合物を15時間室温に放置した。反応の間に形成した沈殿を濾過し、溶媒を蒸発させ、残存物を酢酸エチル150mlに溶解した。有機層を水１×20ml、炭酸ナトリウム（水性）１×20ml、水２×20ml、塩水１×20mlで洗浄し、乾燥（硫酸マグネシウム）した。濾過し、溶媒を蒸発させ、得られた標題化合物2.44ｇ（70％）を更に精製することなく用いた。 Boc-Nag(Z) （ｉ）Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｏ−メチルイソ尿素濃水酸化ナトリウム水溶液（2.81，50％w/w，19.1Ｍ，53モル）および水（32ｌ）の18℃の撹拌溶液に、Ｏ−メチルイソ尿素ヘミサルフェート（ 1.7kg，94％，13.0モル）およびＯ−メチルイソ尿素ハイドロジエンサルフェート（1.57kg，99％，9.0モル）を２回に分けて添加した。反応混合物を３〜５℃ に冷却した。ベンジルクロロホルメート（3.99kg，92％，20.9モル）を冷却しながら、激しく撹拌して20分かけて添加した。Z-Clの添加の間に反応温度が３℃から８℃に上昇した。添加漏斗を水５ｌですすぎ洗いし、これも反応器に添加した。反応混合物を18時間０〜３℃で撹拌し、濾過し、結晶を冷水（３℃，10ｌ）で洗浄した。48時間真空下に乾燥（25℃，10〜20mbar）し、白色結晶性粉末として標題化合物3.87ｇ（89％）を得た。（ii）Boc-Nag(Z) 60〜70℃のイソプロパノール（24kg）中のBoc-NH-(CH₂)₃-NH₂×HCl（Mattingl y P.G.の方法に従って調製〔Synthesis，367(1990)〕，3.9kg，18.5モル）の撹拌溶液に、炭酸水素カリウム（4.2kg，42モル）を30分間かけて添加した。炭酸ガスがゆっくり発生した。混合物を更に30分間撹拌し、次いで、Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｏ−メチルイソ尿素（3.74kg，18.0モル）を30分間かけて少しずつ添加した。反応混合物を16時間65〜70℃で撹拌し、20℃に冷却し、濾過した。沈殿をイソプロパノール（10＋５ｌ）で洗浄した。合体した濾液を減圧下、加熱マントルを65〜70℃以下に維持しながら濃縮した。約45ｌが留去された時点で、酢酸エチル（90ｌ）を添加した。反応混合物を20〜25℃に冷却し、水（10および５ｌ）および塩水（５ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウム（２kg）で乾燥した。撹拌後、反応混合物を濾過し、フィルターケーキを酢酸エチル（11および７ｌ）で洗浄した。加熱マントルを40〜50℃以下に維持しながら、合わせた濾液を減圧下に濃縮した。酢酸エチル約90リットルが留去された時点で、トルエン（25 ｌ）を添加し、蒸発を継続した。更に18リットルの留出物が回収された後、トルエン（20ｌ）を激しく撹拌しながら添加し、得られた混合物を−１〜０℃に冷却し、一夜（17時間）穏やかに撹拌した。結晶スラリーを濾過し、生成物を冷トルエン（10および５ｌ）で洗浄した。24時間真空下に乾燥（10〜20mbar,40℃）し、Boc-Nag(Z)4.83kg（13.8モル，76％）を得た。 ¹H-NMR(300 MHz，CDCl₃): δ1.41(s，9H)，1.6-1.7(m，2H)，3.0-3.3(m，4H) ，4.8-5.0(bs，1H)，5.10(s，2H)，7.2-7.4(m，5H)Boc-Agm(Z) （ｉ）Boc-Agm 硫酸アグマチン（Aldrich）14.95ｇ（65.5ミリモル，１当量）、トリエチルアミン13.7ml（98.25ミリモル，1.5当量）、水165mlおよびTHF165mlのスラリーに、室温で５分間、(Boc)₂O 21.5ｇ（98.25ミリモル，1.5当量）を添加した。混合物を一夜激しく撹拌し、蒸発乾固させ、残存物をジエチルエーテル２×200mlで洗浄し、白色粉末として得られたBoc-Agmを、更に精製することなく次の段階で用いた。（ii）Boc-Agm(Z) ４Ｎ水酸化ナトリウム180mlおよびTHF165ml中の前の段階の粗製Boc-Agm（約65 .5ミリモル）の冷却（５℃）スラリーに、10分間ベンジルクロロホルメート24ml （169ミリモル）を添加した。４時間室温で撹拌した後、メタノール（150ml）を添加し、撹拌を更に20時間室温で継続した。有機層を蒸発させ、残存物に水200m lを添加した。塩基性の水層を酢酸エチル１×300mlおよび２×200mlで抽出した。合わせた有機層を水（２×100ml）、塩水（１×100ml）で洗浄し、乾燥（硫酸マグネシウム）した。溶媒を蒸発させ、フラッシュクロマトグラフィー（塩化メチレン／メタノール97／３，95／５次いで９／１の段階勾配）により白色粉末として純粋なBoc- Agm(Z)14.63ｇ（58％）を得た。 ¹H-NMR(CDCl₃，500 MHz)：δ1.35-1.40(m，2H)，1.45(s，9H)，1.5-1.6(m，2H )，3.0-3.2(m，4H)，4.65(bs，1H)，5.1(s，2H),7.25-7.40(m，5H) ¹³C-NMR(CDCl₃，75.5MHz)：δ25.44，27.36，28.21，65.83，79.15，127.47， 127.66，128.14，137.29，156.47，161.48，163.30 H-(R)Cha-Phe-Nag(Z) （ｉ）Boc-(R)Cha-Phe-OH Boc-(R)Cha-OHをアセトニトリル（200ml）に溶解し、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（9.9ｇ，81ミリモル）を添加した。次にジシクロヘキシルカルボジイミド（17.8ｇ，81ミリモル）をゆっくり添加し、反応混合物を室温で一夜撹拌した。沈殿を濾過し、Boc-(R)Cha-OSuを含有する溶液を蒸発させた。Phe-OH（48.7ｇ，195ミリモル）、水酸化ナトリウム（10.3ｇ，258ミリモル）、水（270ml）最後にジメチルホルムアミド（70ml）を撹拌しながら反応容器に添加した。Boc-(R )Cha-OSuをジメチルホルムアミド（200ml）に溶解し、反応温度を５℃未満に維持しながら反応容器にゆっくり添加した。３時間後、溶液を蒸発させ、残存物を水（1000ml）に溶解し、酢酸エチル（２×300ml）で抽出した。水層を硫酸水素カリウム（１Ｍ）でpH３まで酸性化し、酢酸エチル（２×700ml）で抽出した。合体した有機層を水（２ ×300ml）で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥した。濾過し蒸発させた後、標題化合物Boc-(R)Cha-Phe-OH（21ｇ，50ミリモル）を67％収率で単離した。（ii）Boc-(R)Cha-Phe-Nag(Z) Boc-(R)Cha-Phe-OH（20.8ｇ，49.7ミリモル）をアセトニトリル（350ml）に溶解した。容器を冷却し、反応温度を２℃に維持しながら４−ジメチルアミノピリジン（12.1ｇ，99.4ミリモル）を添加した。Nag(Z)（12.4ｇ，49.7ミリモル）を添加し、白色スラリーを形成した。最後に、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド（8.6ｇ，52ミリモル）を10分間かけてゆっくり添加した。溶液を室温に戻し、一夜撹拌した。溶液を蒸発させ、残存物を酢酸エチル（400ml）および水（150ml）に溶解した。有機層を硫酸水素カリウム（１Ｍ，250ml）、炭酸ナトリウム（１Ｍ，３×250ml）、水（200ml）および最後に塩水（200ml）で洗浄した。合わせた有機層を蒸発させ標題化合物Boc-(R)Cha-Phe- Nag(Z)（24.9ｇ，38ミリモル）を77％収率で単離した。（iii）H₂N-(R)Cha-Phe-Nag(Z) Boc-(R)Cha-Phe-Nag(Z)（10ｇ，15.4ミリモル）を酢酸エチル（50ml）に溶解した。反応容器を４℃に氷水バスで冷却し、次に塩酸（46ml，52ミリモル，酢酸エチル中3.3Ｍ）を添加した。氷容器を取り外し、溶液を室温に戻した。1.5時間後、すべての出発物質が消費された。溶媒をデカンテーションして脱保護ペプチドの塩酸塩から分離し、粗生成物を水（50ml）に溶解し、酢酸エチル（50ml）で抽出した。合体した水層を炭酸カリウム（4.3ｇ，30.8ミリモル）を添加することにより中和し、次にジクロロメタン（150ml）で抽出した。合体した有機層を蒸発させ、溶離剤として塩化メチレン：メタノール：水酸化アンモニウム（100：４：１〜100：15：１）を用いたシリカゲル（230〜400メッシュ）上のクロマトグラフィーにより精製し、H₂N-(R)Cha-Phe-Nag(Z)（３ｇ，5.5ミリモル）を36％収率で単離した。 ¹H-NMR(200 MHz，CDCl₃) δ(ppm) 7.82(d，1H)，7.4-7.1(m,10H)，5.09(s，2H )，4.42(q，1H)，3.4-2.9(m，7H)，1.8-0.7(m,15H) 実施例実施例１ H-(R)Cha-Phe-Agm×2TFA （ｉ）Boc-(R)Cha-Phe-Agm(Z) TFA／塩化メチレン（１：４）15ml中のBoc-Agm(Z)729mg（２ミリモル）の溶液を約２時間室温で撹拌した。溶媒を蒸発させ、生成物をBoc-(R)Cha-Phe-OSu 1.0 3ｇ（２ミリモル）とともにDMF 10mlに溶解し、NMMでpHを約９℃、混合物を５時間室温で撹拌した。溶媒を真空下に蒸発させ、残存物を酢酸エチル200mlに溶解した。有機層を２×10mlの水、１Ｍ硫酸水素カリウム、１Ｍ水酸化ナトリウム、水で洗浄し、乾燥（硫酸マグネシウム）した。溶媒を蒸発させ、塩化メチレン／メタノール（95／５）100ml、次いで塩化メチレン／メタノール（９／１）250ml の段階勾配を用いたフラッシュクロマトグラフィー（70ｇ SiO₂）により、標題化合物1.09ｇ（96％）を得た。 ¹H-NMR（500MHz，CDCl₃，２つの回転異性体の混合物）：主たる回転異性体： δ0.7-0.9(m，2H)，1.0-1.8(m，25H；うち1.39(s，9H))， 2.9-3.25(m，6H)，4.02(m，1H)，4.71(q，1H)，5.05(s，2H)，7.1-7.4(m，10H) ¹³C-NMR（125 MHz，D₂O）:カルボニルおよびグアニジン炭素：δ161.7，163.6 ，172.0，172.7および174.9 （ii）H-(R)Cha-Phe-Agm×2TFA 塩化メチレン／TFA（４／１）１０ml中のBoc-(R)Cha-Phe-Agm(Z)100mg（0.15 ミリモル）の溶液を２時間45分室温で撹拌し、その後、溶媒を蒸発させた。残存物をエタノール／水（８／１）９mlに溶解し、３時間大気圧で５％Pd/C 40mg上水素添加した。触媒を濾去し、溶媒を蒸発させ、残存物を水に溶解し、凍結乾燥して、白色粉末として標題化合物93mg（94％）を得た。 ¹H-NMR（500MHz，D₂O，２つの回転異性体の混合物）：主たる回転異性体：δ0 .65-1.75(m，17H)，2.86-3.23(m，6H)，3.96(t，1H)，4.59(dd，1H)，7.15-7.4( m，5H) ¹³C-NMR（125 MHz，D₂O）：グアニジンδ157.3：カルボニル炭素：δ171.0および173.１実施例２ HOOC-CH₂-(R)Cha-Phe-Agm×2TFA （ｉ）H-(R)Cha-Phe-Agm(Z) 塩化メチレン／TFA（４／１）30ml中のBoc-(R)Cha-Phe-Agm(Z)0.99ｇ（1.49ミリモル）の溶液を３時間室温で撹拌し、その後、溶媒を蒸発させ、残存物を塩化メチレン10mlに溶解した。有機層を５Ｍ水酸化ナトリウム１×30ml、水２×30ml で洗浄し、乾燥（硫酸マグネシウム）した。濾過し、溶媒を蒸発させ、白色粉末として標題化合物825mg（98％）を得た。 ¹H-NMR(300 MHz，CDCl₃)：δ0.75-1.0(m，2H)，1.05-1.75(m,15H)，2.93-3.34 (m，7H)，4.56(q，1H)，7.13-7.39(m，10H) ¹³C-NMR(75 MHz，CDCl₃)：カルボニルおよびグアニジン炭素：δ161.8，163.8 ，171.8および176.5 （ii）BnOOC-CH₂-(R)Cha-Phe-Agm(Z) アセトニトリル／DF（15／１）16ml中のH-(R)Cha-Phe-Agm(Z)282mg、炭酸カリウム173mg（1.25ミリモル）およびBnOOC-CH₂-Br 137.5mg（0.6ミリモル）の混合物を４時間15分50℃に加熱し、その後、溶媒を蒸発させ、残存物を酢酸エチル70 mlに溶解した。有機層を水４×10ml、塩水10mlで洗浄し、乾燥（硫酸マグネシウム）した。溶媒を蒸発させ、溶離剤として塩化メチレン／メタノール（アンモニア飽和）（95／５）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（37g SiO₂）により、所望の化合物230mg（64％）を得た。 ¹H-NMR(300 MHz，CDCl₃)：δ0.7-0.95(m，2H)，1.05-1.75(m,15H)，2.84-3.25 (m，8H)，4.56-4.68(m，1H)，4.95(s，2H)，5.12(s，2H)，7.1-7.45(m，15) ¹³C-NMR(75 MHz，CDCl₃)：カルボニルおよびグアニジン炭素：δ161.7，163.6 ，171.56，171.61および175.1 （iii）HOOC-CH₂-(R)Cha-Phe-Agm×2TFA エタノール／水（５／１）18ml中のBnOOC-CH₂-(R)Cha-Phe-agm(Z)230mg（0.32 3ミリモル）の溶液に、少量のTFA（数滴）を添加し、混合物を６時間大気圧下に５％Pd/C 70mg上で水素添加した。触媒を濾去し、溶媒を蒸発させ、残存物を水に溶解し、凍結乾燥させ、白色粉末として標題化合物223ｇ（96％）を得た。 ¹H-NMR(300 MHz，CD₃OD)：δ0.65-1.85(m，17H)，2.8-3.0(m, 1H)，3.0-3.3(m，5H)，3.78(bs，2H)，4.0(bs，1H)，4.62(m，1H),7.1-7.4(m，5 H) ¹³C-NMR(75 MHz，CD₃OD): グアニジン：δ158.6；カルボニル炭素：δ168.9 ，169.6および173.4 実施例３ H-(R)Cha-Phe-Nag×2TFA （ｉ）Boc-(R)Cha-Phe-Nag(Z) Boc-(R)Cha-Phe-Osu（２ミリモル）およびBoc-Nag(Z)（２ミリモル）から、実施例１（ｉ）のBoc-(R)Cha-Phe-Agm(Z)に関する記載と同様にして調製した。収量1.02ｇ（78％）（ii）H-(R)Cha-Phe-Nag×2TFA 塩化メチレン／TFA（４／１）10ml中のBoc-(R)Cha-Phe-Nag(Z)100mg（0.15ミリモル）の溶液を３時間35分室温で撹拌し、その後、溶媒を蒸発させた。残存物をエタノール／水（８／１）９mlに溶解し、３時間大気圧下に５％Pd/C 40mg上で水素添加した。触媒を濾去し、溶媒を蒸発させ、残存物を水に溶解し、凍結乾燥して、白色粉末として標題化合物97mg（98％）を得た。 ¹H-NMR(500 MHz，D₂O，２つの回転異性体の混合物)：主たる異性体：δ0.75-1 .85(m，15H)，2.9-3.45(m，6H)，4.05(t，1H)，4.6-4.8(m，1H；H-O-Dシグナルで部分的に不明瞭化)，7.3-7.6(m，5H) ¹³C-NMR(75 MHz，D₂o)：グアニジンδ157.6；カルボニル炭素：171.3および17 3.5 実施例４ HOOC-CH₂-(R)Cha-Phe-Nag×2TFA （ｉ）H-(R)Cha-Phe-Nag(Z) Boc-(R)Cha-Phe-Nag(Z)から実施例２（ｉ）のH-(R)Cha-Phe-Agm(Z)に関する記載と同様の方法で調製した。収率90％ ¹³C-NMR(75 MHz，CDCl₃)：δ26.0，26.2，26.4，29.5，32.2，34.0，34.2，36 .7，37.7，38.3，42.6，52.7，55.1，66.3，126.9，127.7，127.9，128.3，128. 6，129.1，136.7，137.5，161.8，163.7，171.5および176.6 （ii）BnOOC-CH₂-(R)Cha-Phe-Nag(Z) アセトニトリル15ml中のH-(R)Cha-Phe-Nag(Z)275mg（0.5ミリモル）、炭酸カリウム173mg（1.25ミリモル）およびBnOOC-CH₂-Br137.5mg（0.6ミリモル）の混合物を３時間50分50℃に加熱し、その後、溶媒を蒸発させ、残存物を酢酸エチル 70mlに溶解した。有機層を水４×10ml、塩水10mlで洗浄し、乾燥（硫酸マグネシウム）した。溶媒を蒸発させ、溶離剤として塩化メチレン／メタノール（アンモニア飽和）（95／５）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（37ｇSiO₂）により、所望の化合物209mg（60％）を得た。 ¹H-NMR(300 MHz，CDCl₃)：δ0.72-0.93(m，2H)，1.0-1.72(m,13H)，2.83-3.25 (m，9H)，4.54(q，1H)，5.09(s，2H)，5.11(s，2H)，7.05-7.4(m，15H)，7.59(d ，1H；NH) ¹³C-NMR(75 MHz，CDCl₃): カルボニルおよびグアニジン炭素：δ161.8，163. 6，171.3，171.6および175.2 （iii）HOOC-CH₂-(R)Cha-Phe-Nag×2TFA エタノール／水（５／１）18ml中のBnOOC-CH₂-(R)Cha-Phe-Nag(Z)209mg（0.3 ミリモル）の溶液に、少量（15滴）のTFAを添加し、混合物を４時間大気圧下に５％Pd/C 70mg上で水素添加した。触媒を濾去し、溶媒を蒸発させ、残存物を水に溶解し、凍結乾燥して、白色粉末として標題化合物190mg（90％）を得た。 ¹H-NMR(300 MHz，CD₃OD)：δ0.6-1.38(m，6H)，1.4-1.9(m，9H)，2.9-3.4(m， 6H)，3.9(bs，2H)，4.1(bs，1H)，4.7(m，1H；H-O-Dシグナルで部分的に不明瞭化)，7.1-7.45(m，5H) ¹³C-NMR(75 MHz，CD₃OD)：グアニジン：δ157.5;カルボニル炭素：δ169.3，1 69.5および173.2 実施例５ H-(R)Cha-Phe-Nag H₂N-(R)Cha-Phe-Nag(Z)（300mg，0.55ミリモル）をエタノール（50ml）に溶解し、トリフルオロ酢酸（56μｌ，0.73ミリモル）を添加した。混合物を超音波処理し、Pd/C（５％，50mg）を添加し、19時間Parr振とう装置中で45psi水素圧下に水素添加した。懸濁液をセライトで濾過し、溶媒を蒸発させた後、56％収率で標題化合物（0.13ｇ，0.31ミリモル）を得た。 ¹H-NMR(200 MHz，d-HCl+d₂-H₂O)δ(ppm)7.40-7.00(m，5H)，4.47(t，1H)，3.8 6(t，1H)，3.25-2.65(m，6H)，1.75-0.50(m，15H) TSP-MS測定値(m/z)=417（MH+(C₂₂H₃₇N₆O₂)の計算値417）実施例６ CH₃-CO-(R)Cha-Phe-Nag （ｉ）CH₃-CO-(R)Cha-Phe-Nag(Z) H₂N-(R)Cha-Phe-Nag(Z)（500mg，0.91ミリモル）をアセトニトリル（7.5ml）に溶解した。次にアセトニトリル（１ml）に溶解したアセチルクロリド（10.7mg ，1.36ミリモル）を反応容器に入れた。30分後、アシル化されたペプチドが塩酸塩として沈殿した。20分後ジエチルエーテル（５ml）を添加した。沈殿を濾過し、一夜35℃で真空下に乾燥し、乾燥した生成物CH₃-CO-(R)Cha-Phe-Nag(Z)×HCl（407mg，0.69ミリモル）を67 ％収率で単離した。 ¹H-NMR(200 MHz，CDCl₃)δ(ppm) 7.4-7.1(m，10H)，5.1(q，2H)，4.7(m，1H) ，4.0(m，1H)，3.5-2.9(m，6H)，2.0-0.6(m，18H) TSP-MS計算値(m/Z)=593（MH⁺(C₃₂H₄₅N₆O₅)の計算値593）（ii）CH₃-CO-(R)Cha-Phe-Nag CH₃-CO-(R)Cha-Phe-Nag(Z)（400mg，0.68ミリモル）をエタノール（60ml）に溶解し、Pd/C（５％，80mg）を添加した。混合物を20時間Parr振とう装置中で45 psi水素圧下に水素添加した。懸濁液をセライトで濾過し、溶媒を蒸発させた後、粗製の混合物（300mg）を回収した。粗生成物（150mg）を、溶離剤としてシアン化メチル：酢酸アンモニウム（0.1Ｍ）（40：60）を用いた逆相クロマトグラフィー（C8-ゲル）により精製し、64％収率で生成物（100mg，0.22ミリモル）を得た。 ¹H-NMR(200 MHz，d₄-CH₃OH)δ(ppm)7.25-6.85(m，5H)，4.44(dd,1H)，4-02(t ，1H)，3.30-2.90(m，5H)，2.72(dd，1H)，2.0-0.5(m,18H) TSP-MS測定値(m/z)459（MH⁺(C₂₄H₃₉N₆O₃)の計算値459）実施例７ CH₃CH₂-(R)Cha-Phe-Nag （ｉ）CH₃CH₂-(R)Cha-Phe-Nag(Z) H₂N-(R)Cha-Phe-Nag(Z)（500mg，0.91ミリモル）、ｐ−トルエンスルホン酸（ 173mg，0.91ミリモル）およびメタノール（7.5ml）を氷冷した反応容器に添加した。アセトアルデヒド（51μｌ，0.91ミリモル）を添加し、更に30分後、最後にナトリウムシアノボロハイドライド（86 mg，1.36ミリモル）を添加した。混合物を４日間室温で撹拌し、次に蒸発させた。粗生成物を溶離剤として塩化メチレン：メタノール：水酸化アンモニウム（90 ：10：１）を用いたシリカゲル（230〜400メッシュ）上のクロマトグラフィーにより精製し、CH₃CH₂-(R)Cha-Phe-Nag(Z)（150mg，0.26ミリモル）を29％収率で得た。 ¹H-NMR(200 MHz，d₄-MeOH)δ(ppm) 7.39-7.28(m，10H)，5.11(s,2H)，4.63(t ，1H)，3.2-2.9(m)，2.42(m，2H)，1.8-0.8(m，18H) （ii）CH₃CH₂-(R)Cha-Phe-Nag(Z)（150mg，0.26ミリモル）をエタノール（840ml ）および酢酸（１ml）に溶解した。Pd/C（５％，51mg）を添加し、２日間Parr振とう装置中で45psiの水素圧下に水素添加した。混合物を濾過し、フィルターケーキをメタノール／酢酸（２：１，40ml）で洗浄した。ヘプタン：酢酸エチル： TEA（30：70：１）を溶離剤としたシリカゲル（230〜400メッシュ）上のクロマトグラフィーにより28％収率で標題化合物（32mg，0.072ミリモル）を単離した。 ¹H-NMR(200 MHz，d₄-MeOH)δ(ppm)7.50-7.10(m，5H)，4.62(q,1H)，3.76-3.67 (m，1H)，3.65-3.56(m，1H)，3.51(t，1H)，3.35-2.95(m，6H)，2.70(q，2H)，2 .0-0.5(m，18H) 実施例８ HOOC-CO-(R)Cha-Phe-Nag （ｉ）HOOC-CO-(R)Cha-Phe-Nag(Z) H₂N-(R)Cha-Phe-Nag(Z)（500mg，0.91ミリモル）をアセトニトリル（５ml）中に分散させた。メチルオキサリルクロリド（104μｌ， 1.14ミリモル）をスラリーに添加した。60分後、出発物質が消費されたことがHP LCにより確認され、透明の溶液を蒸発させた。残存物をテトラヒドロフラン（４ml）に溶解し、水（２ml）に溶解した水酸化リチウム（115mg，2.73ミリモル）を添加することにより、粗製のメチルエステルを加水分解した。90分後、更に水酸化リチウム（70mg，1.7ミリモル）を添加し、30分後水（10ml）を添加し、不溶性の物質を溶解させた。蒸発後、乾燥した未着色の粉末を塩化アンモニウム（150mg）を含有する水（10ml）中のスラリーとした。混合物を30分間撹拌し、次に沈殿を濾過し、水で２回洗浄した。 ¹H-NMR(200 MHz，d₆-DMSO)δ(ppm) 8.7(d，1H)，8.2-7.6(m)，7.31-7.22(m，1 0H)，4.94(s，2H)，4.32(m，1H)，4.00(m，1H)，3.3-2.6(m，6H)，1.7-0.6(m，1 5H) TSP-MS測定値(m/z)623（MH⁺(C32H43N607)計算値623）（ii）HOOC-CO-(R)Cha-Phe-Nag HOOC-CO-(R)Cha-Phe-Nag(Z)（210mg，0.34ミリモル）をテトラヒドロフラン（ 25ml）に分散させ、酢酸（20ml）を添加した。Pd/C（５％，30mg）を添加し、25 時間Parr振とう装置中で45psiの水素圧下に水素添加した。懸濁液をセライトで濾過し、フィルターケーキをテトラヒドロフランで洗浄し、溶媒を蒸発させた後、粗生成物（257mg）を回収した。トルエンで３回（計50ml）共沸蒸発させ、真空下に一夜乾燥させた後、85％収率で生成物（140mg，0.29ミリモル）を単離した。 ¹H-NMR(200 MHz，D₄-MeOH)δ(ppm) 7.19(m，5H)，4.54(dd，1H)，4.00(t，1H) ，4.00(t，1H)，3.50-2.90(m，5H)，2.70(t，1H)，1.90-0.60(m，15H) TSP-MS測定値(m/z)489（MH⁺(C₂₄H₃₆N₆O₅)計算値489）薬学的処方物Ａ．本発明の化合物は経口投与または腸への局所投与のための固体剤形に製剤できる。実施例Ａ１平型錠剤キニノゲナーゼ阻害剤 10mg／錠無水乳糖 250mg／錠微結晶セルロース 60mg／錠ステアリン酸マグネシウム 6mg／錠活性成分を乳糖および微結晶セルロースと混合し、ステアリン酸マグネシウムを添加混合し、混合物から錠剤を圧縮成形した。実施例Ａ２コーティング錠剤キニノゲナーゼ阻害剤 100mg／錠乳糖 350mg／錠ポリビニルピロリドン 40mg／錠ステアリン酸マグネシウム 8mg／錠ヒドロキシプロピルメチルセルロース 8mg／錠ポリエチレングリコール 1mg／錠タルク 1mg／錠酸化チタン 1mg／錠活性成分を乳糖と混合し、水中ポリビニルピロリドンとともに顆粒化した。乾燥し、ミリングした後、ステアリン酸マグネシウムを添加混合し、錠剤を圧縮成形した。錠剤を、水中のヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリエチレングリコール、タルクおよび二酸化チタンの溶液でコーティングした。実施例Ａ３胃耐性錠剤キニノゲナーゼ阻害剤 10mg／錠乳糖 200mg／錠ポリビニルピロリドン 40mg／錠微結晶セルロース 50mg／錠ステアリン酸マグネシウム 8mg／錠 Eudragit L 10mg／錠ジブチルフタレート 1mg／錠タルク 2mg／錠活性成分を乳糖と混合し、水中ポリビニルピロリドンとともに顆粒化した。乾燥しミリングした後、微結晶セルロースおよびステアリン酸を添加混合し、錠剤を圧縮成形した。錠剤をイソプロパノール／アセトン中のEudragit L,ジブチルフタレートおよびタルクの溶液でコーティングした。実施例Ａ４小腸用胃耐性持続放出顆粒キニノゲナーゼ阻害剤 100mg／錠乳糖 448mg／錠微結晶セルロース 200mg／錠ヒドロキシプロピルセルロース 50mg／錠エチルセルロース 20mg／錠アセチルトリブチルシトレート 2mg／錠 Eudragit L30D 50mg／錠トリエチルシトレート 5mg／錠タルク 25mg／錠活性成分を乳糖および微結晶セルロースと混合し、水中ヒドロキシプロピルセルロースとともに顆粒化した。顆粒を押出し成形し、球状化し、乾燥した。顆粒をまずアセチルトリブチルシトレートを含有するエチルセルロース分散液でコーティングし、次にトリエチルシトレートおよびタルクを含有するEu dragit L30Dでコーティングした。顆粒をゼラチンカプセルに充填し、各カプセルが活性成分10mgを含有するようにした。実施例Ａ５結腸用胃耐性持続放出顆粒キニノゲナーゼ阻害剤 200mg／錠乳糖 400mg／錠微結晶セルロース 200mg／錠ヒドロキシプロピルセルロース 50mg／錠 Eudragit NE30D 50mg／錠 Eudragit S100 50mg／錠タルク 50mg／錠活性成分を乳糖および微結晶セルロースと混合し、水中ヒドロキシプロピルセルロースとともに顆粒化した。顆粒を押出し成形し、球状化し、乾燥した。顆粒を水中のEudragit NE30D、EudragitS100およびタルクの分散液でコーティングした。顆粒をゼラチンカプセルに充填し、各カプセルが活性成分100mgを含有するようにした。Ｂ．本発明の化合物は経口または経鼻吸入のための加圧エアロゾルまたは乾燥粉末吸入剤に製剤できる。キニノゲナーゼ阻害剤を吸入投与に適する粒径（質量メジアン直径＜４μm）まで微細化した。加圧エアロゾル用には、微細化した物質を液体高圧ガス混合物中に懸濁し、容器に充填し、計量弁で密封した。あるいは、キニノゲナーゼ阻害剤をエタノールを用いて液体プロペラント混合物中に溶解した。使用する高圧ガスは種々のクロロフルオロカーボン（CFC）またはハイドロフルオロアルカン（HFA）であってよい。最も頻繁に使用されているCFCはトリクロロモノフルオロメタン（プロペラント１１）およびジクロロジフルオロメタン（プロペラント１２）およびジクロロテトラフルオロエタン（プロペラント114）である。最も頻繁に使用されているHFAはテトラフルオロメタン（プロペラント1 34a）およびヘプタフルオロプロパン（プロペラント227）である。ソルビタントリオレエート、レシチン、オレイン酸またはその他の適当な物質のような界面活性剤を低濃度で用いて物理的安定性を改善してよい。エタノールを界面活性剤または溶媒として用いることにより活性物質のプロペラント混合物中の溶解度を高めてもよい。実施例Ｂ１％(w/w) キニノゲナーゼ阻害剤 0.5 トリクロロモノフルオロメタン（プロペラント11） 15 ジクロロジフルオロメタン（プロペラント12） 84 ソルビタントリオレエート 0.5 実施例Ｂ２％(w/w) キニノゲナーゼ阻害剤 0.5 トリクロロモノフルオロメタン（プロペラント11） 25 ジクロロジフルオロメタン（プロペラント12） 74.48 オレイン酸 0.02 実施例Ｂ３％(w/w) キニノゲナーゼ阻害剤 0.2 トリクロロモノフルオロメタン（プロペラント11） 15 ジクロロジフルオロメタン 64.78 エタノール 20 オレイン酸 0.02 実施例Ｂ４％(w/w) キニノゲナーゼ阻害剤 0.4 テトラフルオロエタン（プロペラント134a） 59.58 ヘプタフルオロプロパン（プロペラント227） 20 エタノール 20 オレイン酸 0.02 実施例Ｂ５％(w/w) キニノゲナーゼ阻害剤 1.0 ヘプタフルオロプロパン（プロペラント227） 93.5 エタノール 5 ソルビタントリオレエート 0.5 乾燥粉末吸入器中、微細化したキニノゲナーゼ阻害剤を単独または乳糖、マンニトールまたはグルコースのような担体物質との混合物として用いてよい。あるいは、微細化した粉末を球状に加工し、投与操作中に破裂するようにしてもよい。このような粉末または球状化粉末を単一用量または多用量の吸入器（例えばTu rbuhaler）内の薬剤リザーバに充填する。投与装置は患者が吸入する所望の用量を計量する。実施例Ｂ６キニノゲナーゼ阻害剤をジェットミル内で微細化し、吸入に適する粒径（マス直径＜４μm）とした。微細化粉末100mgを粉末多用量吸入器（Turbuhaler）に充填した。吸入器には１mgの用量を供給する投与装置を装着した。実施例Ｂ７キニノゲナーゼ阻害剤をジェットミル内で微細化し、吸入に適する粒径（マス直径＜４μm）とした。微細化粉末150mgを粉末多用量吸入器（Turbuhaler）に充填した。吸入器には0.5mgの用量を供給する投与装置を装着した。略号 Ac＝アセチル Agm＝アグマチン Agm(Z)＝ω−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアグマチン Boc＝ｔ−ブトキシカルボニル Brine=飽和食塩水 Bn＝ベンジル Cha＝(S)−β−シクロヘキシルアラニン CME-CDI＝１−シクロヘキシル−３−（２−モルホリノ−エチル）カルボジイミドメト−ｐ−トルエンスルホネート DCC＝ジシクロヘキシルカルボジイミド DMF＝ジメチルホルムアミド Et＝エチル EtOAc＝酢酸エチル HOSu＝Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド HPLC＝高速液体クロマトグラフィー LiOH＝水酸化リチウム Me＝メチル Nag＝ノルアグマチン Nag(Z)＝ω−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルノルアグマチン Nal＝(S)−ナフチルアラニン NMM＝Ｎ−メチルモルホリン Ph＝フェニル Phe＝(S)−フェニルアラニン Pro＝(S)−プロリン Ser＝(S)−セリン TFA＝トリフルオロ酢酸 THF＝テトラヒドロフランＺ＝ベンジルオキシカルボニル添え字のｎ、ｓ、ｉおよびｔはその通常の意味、即ち、ノルマル、イソ、第２および第３を指す。アミノ酸の立体化学は、特段の記載が無い限り、基本的に(S )とする。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＣ０７Ｋ 5/078 9455−4ＣＡ６１Ｋ 37/64 ＡＢＥ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．下記式： A¹-A²-NH-(CH₂)_n-NH-C(NH)-NH₂ 式Ｉ〔式中ｎは整数２、３、４、５または６、好ましくは３または４であり； A¹は下記式IIａ、IIｂ、IIｃ、IIｄまたはIIｅ；の構造フラグメントを示し；ここでｐは整数０、１または２であり；ｍは整数１、２、３または４、好ましくは２であり；ｑは整数０〜２、好ましくは１であり； R¹はＨ、炭素原子１〜４個を有するアルキル基、炭素原子２〜３個を有するヒドロキシアルキル基、または、R¹¹OOC−アルキル（ここでアルキル基は炭素原子１〜４個を有し、Ｒ¹¹はＨまたは炭素原子１〜４個を有するアルキル基である）を示すか、または、 R¹はR¹²-OOC-1,4-フェニル-CH₂-（ここでR¹²はＨまたは炭素原子１〜４個を有するアルキル基）を示すか、または、 R¹はR¹³-NH-CO-アルキル（ここでアルキル基は炭素原子１〜４個を有し、炭素原子１〜４個を有するアルキル基でカルボニルに対してアルファ位で置換されていることができ、R¹³はＨまたは炭素原子１〜４個を有するアルキル基であるか、または、-CH₂COOR¹²〔ここでR¹²は前に定義したもの〕である）を示すか、または、 R¹はR¹⁴SO₂-、Ph(4-COOR¹²)-SO₂-、Ph(3-COOR¹²)-SO₂-またはPh(2-COOR^l2)- SO₂-〔ここでR¹²は前に定義したものであり、R¹⁴は炭素原子１〜４個を有するアルキル基〕を示すか、または、 R¹はCO-R¹⁵〔ここでR¹⁵は炭素原子１〜４個を有するアルキル基〕を示すか、または、 R¹はCO-OR¹⁵〔ここでR¹⁵は前に定義したもの〕を示すか、または、 R¹はCO-(CH₂)_p-COOR¹²〔ここでR¹²は前に定義したもの〕を示すか、または、 R¹は-CH₂PO(OR¹⁶)₂〔ここでR¹⁶は各々、Ｈ、メチルまたはエチル〕を示し； R²はＨまたは炭素原子１〜４個を有するアルキル基またはR²¹COO-アルキル〔ここでアルキル基は炭素原子１〜４個を有し、カルボニル基に対してアルファ位で置換されていることができ、そしてそのアルファ置換基は基R²²-(CH₂)_p-｛ここでｐは上記したものであり、R²²はメチル、フェニル、OH、COOR²¹である｝であり、R²¹はＨまたは炭素原子１〜４個を有するアルキル基である〕を示し； R³は炭素原子１〜４個を有するアルキル基を示すか、または、 R³はシクロヘキシル−またはシクロペンチル基を示すか、または、 R³は、炭素原子１〜４個を有するアルキル基または基OR²¹で置換されていてもよいフェニルを示すか、または、 R³は１−ナフチル、２−ナフチル、４−ピリジル、３−ピロリジル、または３−インドリル基を示し、これは、OR²¹で置換されていてもよいものであり、そしてｐ＝１であるか、または、 R³はシス−またはトランス−デカリン基であり、そしてｐ＝１であるか、または R³はSi(Me)₃またはCH(R³¹)₂であり、ここで、R³¹はシクロヘキシル−またはフェニル基であり； A2は構造フラグメント：〔式中R³およびｐは前に定義した通りである〕の化合物。２．A¹がIIａまたはIIｂを示す請求項１記載の化合物。３．A¹がIIａを示す請求項１記載の化合物。４．R³がシクロヘキシル、シクロペンチル、フェニル、置換フェニルまたはその他のアリール系であり、そしてｐが１である請求項１記載の化合物。５．R³がシクロヘキシル、シクロペンチル、フェニル、置換フェニルまたはその他のアリール系であり、そしてｐが１である請求項２記載の化合物。６．R³がシクロヘキシル、シクロペンチル、フエニル、置換フェニルまたはその他のアリール系であり、そしてｐが１である請求項３記載の化合物。７．R¹がR¹¹OOC−アルキルを示し、ここでアルキル基は炭素原子１〜４個を有し、そしてR¹¹はＨである前記請求項の１つ以上に記載の化合物。８．R³がシクロヘキシルまたは置換フェニルである前記請求項の１つ以上に記載の化合物。９．ｎが３または４である前記請求項の１つ以上に記載の化合物。 10．ｎが４である前記請求項の１つ以上に記載の化合物。 11．ｐが１である前記請求項の１つ以上に記載の化合物。 12．ｑが１である前記請求項の１つ以上に記載の化合物。 13．A¹位のアミノ酸フラグメントでＲ型を有する前記請求項の１つ以上に記載の化合物。 14．A²位のアミノ酸フラグメントでＳ型を有する前記請求項の１つ以上に記載の化合物。 15．下記： H-(R)Cha-Phe-Agm HOOC-CH₂-(R)Cha-Phe-Agm H-(R)Cha-Phe-Nag HOOC-CH₂-(R)Cha-Phe-Nag CH₃-CO-(R)Cha-Phe-Nag CH3-CH₂-(R)Cha-Phe-Nag HOOC-CO-(R)Cha-Phe-Nag の化合物、生理学的に許容されるこれらの塩、および、立体異性体よりなる群から選択される化合物。 16．化合物HOOC-CH₂-(R)Cha-Phe-Nag、生理学的に許容されるその塩および立体異性体。 17．Ｎ−末端保護ジペプチド（W₁-A¹-A²-OH）または（W₁-A₁-OH）（ここで、Ｎ −末端保護アミノ酸を用いる場合は、第２のアミノ酸は定法を用いて後に添加する）を、下記式： H₂N-(CH₂)_n-X （式中、A¹、A²およびｎは式Ｉにおいて定義した通りであり、W¹はアミノ保護基であり、そしてＸは未保護または保護されたグアニジノ基、または保護されたアミノ基、またはアミノ基に変換可能な基である）の化合物とカップリングさせ、次に、保護基を除去するか、または、Ｎ−末端窒素を脱保護し、その後、Ｎ− 末端窒素をアルキル化し、知られた方法で脱保護し、そして、所望により、生理学的に許容される塩を形成し、反応により立体異性体の混合物が形成される場合には、これらを場合により、標準的なクロマトグラフィーまたは再結晶法により分離し、そして所望により単一の立体異性体を単離することを包含する、請求項１記載の化合物の調製方法。 18．下記工程：ａ）方法Ｉ：標準的なペプチドカップリング方法により調製されたＮ−末端保護ジペプチドと、保護された、または未保護のアミノグアニジンまたはアルキル鎖末端に保護されたまたはマスキングされたアミノ基を有する直鎖アルキルアミンとの、下記式：〔式中、A¹、A²およびｎは式Ｉで定義した通りであり、W¹はｔ−ブトキシカルボニルおよびベンジルオキシカルボニルのようなＮ−末端アミノ保護基であり、Ｘは-NH-C(NH)-NH₂、-NH-C(NH)-NH-W₂、-N(W₂)-C(NH)-NH-W₂、-NH-C(NW₂)-NH-W₂ または-NH-W₂（ここでW₂はｔ−ブトキシカルボニルまたはベンジルオキシカルボニルのようなアミン保護基）であるか、またはＸはアジドのようなマスキングされたアミノ基である〕に示す標準的なペプチドカップリング法を用いてカップリングを行って保護ペプチドを得ること、そして、更に使用するＸ基の性質に応じて、保護基の除去（Ｘ＝-NH-C(NH)-NH₂、-N(W₂)-C(NH)-NH-W₂、-NH-C(NW₂)-NH-W₂ または-NH-C(NH)-NH-W₂の場合）またはW₁-基の選択的脱保護（例えばＸ＝-NH-C (NH)-NH-W₂、-N(W₂)-C(NH)-NH-W₂、-NH-C(NW₂)-NH-W₂の場合、この場合W₂はW₁に対しオルト）を行ない、その後、Ｎ−末端窒素のアルキル化および脱保護または末端アルキルアミノ官能基の選択的脱保護／マスキング除去（Ｘ＝NH-W₂、この場合W₂はW₁に対しオルトであるか、またはＸ＝アジドのようなマスキングされたアミノ基である）を行ない、その後、標準的な方法を用いた遊離アミンのグアニド化反応およびW₁-基の脱保護を行うこと、または、ｂ）方法II 標準的なペプチドカップリング方法により調製されたＮ−末端保護ジペプチドと、保護された、または未保護のアミノグアニジンまたはアルキル鎖末端に保護されたまたはマスキングされたアミノ基を有する直鎖アルキルアミンとの、下記式：〔式中、A²、ｎ、W₁およびＸは上記定義した通りである〕に示す標準的なペプチドカップリングを用いてカップリングさせること、その後、W₁−基の脱保護および保護された形態のＮ−末端アミノ酸とのカップリングを行ない、方法Ｉに記載の保護ペプチドを得ること、その後、方法Ｉに従って最終化合物への合成を継続することを包含する請求項17記載の方法。 19．請求項１記載の下記式： A¹-A²-NH-(CH₂)_n-NH-C(NH)-NH₂ の化合物の、そのまま、またはその塩の形態、またはδ−窒素でモノ保護されているか、またはδ−窒素またはγ、δ−窒素でジ保護されているグアニジノ基を有する形態での、セリンプロテアーゼ阻害剤の合成における、そして特に、キニノゲナーゼ阻害剤の合成における出発物質としての使用。 20．セリンプロテアーゼ阻害剤がペプチド化合物である請求項19記載の使用。 21．治療に用いるための請求項１記載の化合物。 22．抗炎症剤として使用するための請求項21記載の化合物。 23．薬学的担体１つ以上と組み合わせて請求項１記載の化合物有効量を含有する薬学的組成物。 24．抗炎症剤として使用するための請求項23記載の薬学的組成物。 25．ヒトまたは動物の臓器におけるセリンプロテアーゼ、特にキニノゲナーゼの阻害のための薬学的組成物の製造のための活性成分としての請求項１記載の化合物の使用。 26．請求項１記載の化合物のセリンプロテアーゼ阻害有効量、特にキニノゲナーゼ阻害有効量をヒトまたは動物の臓器に投与することを包含する、上記阻害が必用な臓器における、上記阻害を得るための方法。 27．請求項１〜26の何れかに記載の、そして、実質的に本明細書に記載の、化合物、方法、薬学的組成物、使用および方法。