EA001550B1 - Лекарственный комплекс - Google Patents

Лекарственный комплекс Download PDF

Info

Publication number
EA001550B1
EA001550B1 EA199900004A EA199900004A EA001550B1 EA 001550 B1 EA001550 B1 EA 001550B1 EA 199900004 A EA199900004 A EA 199900004A EA 199900004 A EA199900004 A EA 199900004A EA 001550 B1 EA001550 B1 EA 001550B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
drug
polyalcohol
carboxy
compound
drug complex
Prior art date
Application number
EA199900004A
Other languages
English (en)
Other versions
EA199900004A1 (ru
Inventor
Казухиро Иноуе
Хироси Сусаки
Масахиро Икеда
Хироси Куга
Эйдзи Кумазава
Акико Того
Original Assignee
Дайити Фармасьютикал Ко., Лтд.
Драг Деливери Систем Инститьют, Лтд.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Дайити Фармасьютикал Ко., Лтд., Драг Деливери Систем Инститьют, Лтд. filed Critical Дайити Фармасьютикал Ко., Лтд.
Publication of EA199900004A1 publication Critical patent/EA199900004A1/ru
Publication of EA001550B1 publication Critical patent/EA001550B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/61—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule the organic macromolecular compound being a polysaccharide or a derivative thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)

Abstract

Лекарственный комплекс, в котором остаток лекарственного соединения, такого как противоопухолевое средство, и карбокси (C)алкилдекстрановый полиспирт, полученный путем обработки декстрана в условиях, обеспечивающих практически полное превращение в полиспирт, связаны друг с другом спейсером, состоящим из одной аминокислоты, или спейсером, состоящим из 2-8 аминокислот, связанных пептидной связью. Указанный комплекс отличается великолепной избирательностью к местам локализации опухолей, благодаря чему он оказывает сильное противоопухолевое действие при низкой токсичности.

Description

Настоящее изобретение относится к эффективному лекарственному комплексу. В частности, данное изобретение относится к лекарственному комплексу, в котором карбокси (С1-4) алкилдекстрановый полиспирт, являющийся производным полисахарида, и лекарственное соединение, например, противоопухолевое средство, связаны друг с другом при помощи спейсера.
Уровень техники
Противоопухолевые средства, применяемые для лечения твердых злокачественных опухолей, в частности, рака легкого или карциномы пищеварительных органов, и рака крови, например, лейкоза, вводят системно внутривенным или пероральным способом, затем вместе с кровотоком они переносятся в конкретные места локализации опухоли, где ингибируют или подавляют пролиферацию раковых клеток. Однако вводимые системно противоопухолевые средства часто поглощаются из крови печенью и ретикулоэндотелиальными органами или быстро выводятся с мочой, в результате чего их концентрация в крови снижается и воздействие на опухоль оказывается недостаточно эффективным. Кроме того, обычно применяемые противоопухолевые средства сами по себе характеризуются плохой избирательностью обнаружения мест локализации опухоли (избирательное воздействие на опухоль), поэтому указанные средства равномерно распределяются в разных тканях и клетках всего организма и воздействуют как цитотоксины на здоровые клетки и ткани, что ведет к возникновению вредных эффектов, например, рвоты, гипертермии или алопеции. Из вышесказанного следует, что существует насущная необходимость в способах эффективной и избирательной доставки противоопухолевых средств к местам локалВизсаоцоитивоетпсутхвоилиейс. одним из предложенных способов противоопухолевое средство связывают с полисахаридом, благодаря чему оно дольше сохраняется в крови и более избирательно воздействует на опухолевые ткани. Например, в публикации патента Японии (КОКОКи) № (Не1) 7-84481/1995 рассматривается лекарственный комплекс, в котором даунорубицин, доксорубицин, митомицин С, блеомицин или подобное средство вводят в производное карбокси-метилированного манноглюкана при помощи основания Шиффа или кислотноамидной связи. В качестве производного манноглюкана по этому изобретению используют также полиспирты карбоксиметилированного манноглюкана. Однако производные манноглюкана имеют слишком разветвленную и сложную структуру, поэтому из них трудно получить однородный продукт, пригодный для изготовления лекарственных средств.
Помимо этого, в публикации международного патента XVО 94/19376 описывается лекарственный комплекс, в котором пептидная цепь (количество аминокислотных остатков от 1 до 8) связывает между собой карбоксильную группу полисахарида, имеющего несколько подобных групп, и доксорубицин, даунорубицин, митомицин С, блеомицин и тому подобные. В качестве примеров полисахаридов с карбоксильными группами приведены полисахариды, изначально имеющие карбоксильные группы в своей структуре (например, гиалуроновая кислота), и полисахариды, не содержащие изначально карбоксильные группы (например, пуллулан, декстран, хитин и т. д.), у которых гидроксильные группы модифицированы карбонильными группами путем введения карбокси(С14)алкильных групп или связывания путем этерификации с многоосновной кислотой, такой как малоновая кислота или янтарная кислота. Эти лекарственные комплексы отличаются в структурном отношении тем, что лекарственное средство, такое как доксорубицин, и вышеуказанная полисахаридная часть связаны друг с другом при помощи спейсера, благодаря чему указанные комплексы оказывают более сильное противоопухолевое действие по сравнению с доксорубицином, являются менее токсичными и не вызывают вредных эффектов.
Методы получения лекарственных комплексов на основе производных полисахаридного полиспирта, используемых и качестве носителей лекарственного вещества, представлены и ряде отчетов, например, таких как Рекеагсйек оп ро1у8ассйаг1бе-рер1Ие-бохогиЫст сотр1ехе§ Соггс1а1юп5 ЬеВгееп ЧаЬПЮех оГ роРъассйапбе сатега ίη Ыооб апб Шей апй-пеор1аШс асйуйтек (Рефераты 10-й конференции Японского общества по системам доставки лекарственных веществ к участкам действия, 279, 1994); Рекеагсйек оп ро1у8ассйапбе-рер11бе-бохогиЫст сотр1ехе§ Рйагтасокшейск апб апй-пеор1аШс асйуйу (Рефераты 9-й ежегодной конференции Японского общества по изучению ксенобиотиков, 292, 1994); рефераты 19-го семинара по вопросам развития научно-исследовательной деятельности (Тйе Огдашхабоп Гог Эгид А Ό К. Рейе£ Р&Э Рготойоп апб Ргобис! Ре\'1е\\·). Ό-9, 1995; и Кекеагсйек оп бгид бейуегу 1о а (итог Й88ие Ьу роРъассйапбе сатега (Рефераты 12-го симпозиума по коллоидным и межповерхностным технологиям. Химическое общество Японии, 51, 1995).
Сущность изобретения
Целью настоящего изобретения является создание лекарственного комплекса, способного избирательно доставлять активный ингредиент, например, такой, как противоопухолевое, к местам локализации опухолей или подобным участкам. В частности, целью настоящего изобретения является создание лекарственного комплекса, который содержит в своей структуре лекарственное соединение, например, противоопухолевое средство, сохраняется в крови в течение длительного времени и может избирательно доставлять лекарственное соединение к местам локализаций опухоли. Кроме того, еще одной целью настоящего изобретения является создание метода получения лекарственных комплексов, обладающих вышеуказанными отличительными признаками.
Для достижения вышеуказанной цели авторы настоящего изобретения предприняли попытку улучшить лекарственный комплекс, описанный в публикации международного патента XVО 94/19376. В результате этого они обнаружили, что при использовании в качестве полисахаридной части производного декстрана, полученного путем карбокси(С1-4)алкилирования декстранового полиспирта, вместо полисахаридов с карбоксильными группами, в крови длительное время после введения сохраняется высокая концентрация лекарственного средства и значительно улучшается избирательность воздействия на места локализации опухолей или очаги воспаления. Кроме того, указанные соединения характеризуются более высокой эффективностью, в частности, противоопухолевым действием и меньшей токсичностью. Эти открытия легли в основу настоящего изобретения.
Таким образом, объектом настоящего изобретения является лекарственный комплекс, в котором карбокси(С1-4)алкилдекстрановый полиспирт и остаток лекарственного соединения связаны друг с другом спейсером, состоящим из одной аминокислоты, или спейсером, состоящим из 2-8 аминокислот, связанных с пептидной связью. Другим объектом настоящего изобретения является препарат, в состав которого входит вышеуказанный лекарственный комплекс; и фармацевтическая композиция, содержащая вышеуказанный лекарственный комплекс в качестве активного ингредиента, например, препараты для инъекций или капельных вливаний в виде лиофилизированных продуктов в ампулах. Кроме того, еще одним объектом настоящего изобретения является способ получения вышеуказанного лекарственного комплекса.
К предпочтительным вариантам осуществления данного изобретения относится вышеуказанный лекарственный комплекс, в котором декстрановый полиспирт является, в частности, карбокси(С1 -4)алкилдекстрановым полиспиртом, который получают путем обработки декстрана в условиях, обеспечивающих практически полное превращение в полиспирт; вышеуказанный лекарственный комплекс, в котором карбокси (С1-4)алкилдекстрановый полиспирт является карбоксиметилдекстрановым полиспиртом; вышеуказанный лекарственный комплекс, в котором лекарственное соединение является противоопухолевым или противовоспалительным средством; вышеуказанный лекарственный комплекс, в котором лекарственное соединение является противоопухолевым средством, оказывающим противоопухолевое действие в зависимости от концентрации (противоопухолевое средство, оказывающее более сильное противоопухолевое действие при более высокой концентрации; в настоящем описании изобретения далее иногда определяется как зависящее от концентрации противоопухолевое средство); вышеуказанный лекарственный комплекс, в котором лекарственное соединение является противоопухолевым средством, оказывающим противоопухолевое действие в зависимости от времени (противоопухолевое средство, оказывающее более сильное противоопухолевое действие при более продолжительном времени воздействия; в настоящем описании изобретения иногда определяется как зависящее от времени противоопухолевое средство); и вышеуказанный лекарственный комплекс, в котором противоопухолевое средство является доксорубицином или (18,98)-1-амино-9-этил-5фтор-2,3 -дигидро -9 -гидрокси-4 -метил- 1Н, 12Нбензо[де]-пирано-[3',4':6,7]индолизино[1,2Ь]хинолин-10,13 (9Н,15Н)дионом.
Кроме того, к предпочтительным вариантам осуществления данного изобретения относится вышеуказанный лекарственный комплекс, в котором спейсер является дипептидом формулы -Χ-Ζ-[символ -Χ-Ζ- означает остаток, который состоит из дипептида, полученного путем соединения пептидной связью гидрофобной аминокислоты (Χ) и гидрофильной аминокислоты (Ζ), расположенных соответственно у Νконцевого участка и С-концевого участка, и в котором удалены один атом водорода и одна гидроксильная группа соответственно из аминогруппы у Ν-конца и из карбоксильной группы у С-конца], либо спейсер содержит дипептид в виде частичной пептидной последовательности; вышеуказанный лекарственный комплекс, в котором гидрофобная аминокислота является фенилаланином и гидрофильная аминокислота является глицином; вышеуказанный лекарственный комплекс, в котором спейсер является (№конец)-С1у-С1у-Рйе-С1у-; и вышеуказанный лекарственный комплекс, в котором количество введенного остатка противоопухолевого средства составляет 1-15 мас.%, предпочтительно 3-10 мас.% и более предпочтительно 5-6 мас.%.
К наиболее предпочтительным вариантам осуществления настоящего изобретения относится вышеуказанный лекарственный комплекс, в котором Ν-конец пептида формулы Η2Ν-6ΚС1у-Рйс-С1у-СООН присоединен к карбоксильной группе карбоксиметилдекстранового полиспирта с помощью кислотно-амидной связи и Сконец указанного пептида присоединен к 1 аминогруппе (18.98)-1 -амино-9-этил-5-фтор2,3-дигидро-9-гидрокси-4-метил-1Н,12Нбензо[де] пирано[3',4':6,7]индолизино[1,2-Ь]5 хинолин-10,13(9Н,15Н)-диона с помощью кислотно-амидной связи; вышеуказанный лекарственный комплекс, в котором количество введенного остатка (18,98)-1-амино-9-этил-5-фтор2,3-дигидро -9 -гидрокси-4 -метил- 1Н, 12Нбензо [де] пирано [3',4':6,7]индолизино [ 1,2-Ь]хинолин-10,13(9Н,15Н)-диона составляет 2-10 мас.%; и вышеуказанный лекарственный комплекс, в котором карбокси (С1-4) алкилдекстрановый полиспирт является карбоксиметилдекстрановым полиспиртом с молекулярной массой 5000-500000, предпочтительно 50000-450000 и более предпочтительно 200000-400000, при этом степень карбоксиметилирования на один составной остаток сахарида равна 0,01-2,0, предпочтительно 0,1-1,0 и более предпочтительно 0,3-0,5.
Другим объектом настоящего изобретения является носитель лекарственного вещества, которым является карбокси(С1-4)алкилдекстрановый полиспирт. В соответствии с предпочтительными вариантами осуществления данного изобретения молекулярная масса карбокси(С14)алкилдекстранового полиспирта составляет 5000-500000, предпочтительно 50000-450000 и более предпочтительно 200000-400000, при этом степень карбоксиметилирования на один составной остаток сахарида равна 0,01-2,0, предпочтительно 0,1-1,0 и более предпочтительно 0,3-0,5. Наиболее предпочтительным носителем является карбоксиметилдекстрановый полиспирт. Другим объектом настоящего изобретения является использование карбокси (С1-4)алкилдекстранового полиспирта для получения лекарственного комплекса, в котором карбокси(С1-4)-алкилдекстрановый полиспирт связан с остатком лекарственного соединения.
К предпочтительным вариантам осуществления настоящего изобретения относится использование карбокси(С1-4)алкилдекстрано-вого полиспирта для получения лекарственного комплекса, в котором остаток лекарственного соединения и карбокси(С1-4)алкилдекстрановый полиспирт связаны друг с другом при помощи спейсера; и использование карбокси(С1-4) алкилдекстранового полиспирта для получения лекарственного комплекса, в котором карбокси (С1-4)алкилдекстрановый полиспирт и остаток лекарственного соединения связаны друг с другом спейсером, состоящим из одной аминокислоты, или спейсером, состоящим из 2-8 аминокислот с пептидной связью.
Краткое описание чертежей
На фиг. 1 изображен график гельпроникающей хроматографии лекарственного комплекса по настоящему изобретению (полученного в примере 8).
На фиг. 2 изображен ультрафиолетовый спектр поглощения лекарственного комплекса по настоящему изобретению (полученного в примере 8).
На фиг. 3 изображен график гельпроникающей хроматографии лекарственного комплекса по настоящему изобретению (полученного в примере 9).
На фиг. 4 изображен ультрафиолетовый спектр поглощения лекарственного комплекса по настоящему изобретению (полученного в примере 9).
На фиг. 5 изображен ультрафиолетовый спектр поглощения лекарственного комплекса по настоящему изобретению (полученного в примере 1 0).
На фиг. 6 изображен график гельпроникающей хроматографии лекарственного комплекса по настоящему изобретению (полученного в примере 15).
На фиг. 7 изображен ультрафиолетовый спектр поглощения лекарственного комплекса по настоящему изобретению (полученного в примере 15).
На фиг. 8 изображен график гельпроникающей хроматографии лекарственного комплекса по настоящему изобретению (полученного в примере 28).
На фиг. 9 изображен ультрафиолетовый спектр поглощения лекарственного комплекса по настоящему изобретению (полученного в примере 28).
На фиг. 1 0 изображен график гельпроникающей хроматографии лекарственного комплекса по настоящему изобретению (полученного в примере 29).
На фиг. 11 изображен ультрафиолетовый спектр поглощения лекарственного комплекса по настоящему изобретению (полученного в примере 29).
На фиг. 1 2 изображен график гельпроникающей хроматографии лекарственного комплекса по настоящему изобретению (полученного в примере 34).
На фиг. 1 3 изображен ультрафиолетовый спектр поглощения лекарственного комплекса по настоящему изобретению (полученного в примере 34).
На фиг. 1 4 изображен график гельпроникающей хроматографии лекарственного комплекса по настоящему изобретению (полученного в примере 39).
На фиг. 1 5 изображен ультрафиолетовый спектр поглощения лекарственного комплекса по настоящему изобретению (полученного в примере 39).
На фиг. 1 6 изображен график гельпроникающей хроматографии лекарственного комплекса по настоящему изобретению (полученного в примере 41 ).
На фиг. 1 7 изображен ультрафиолетовый спектр поглощения лекарственного комплекса по настоящему изобретению (полученного в примере 41 ).
На фиг. 1 8 изображен график гельпроникающей хроматографии лекарственного комплекса по настоящему изобретению (полученного в примере 44).
На фиг. 19 изображен ультрафиолетовый спектр поглощения лекарственного комплекса по настоящему изобретению (полученного в примере 44).
На фиг.20 изображен график гельпроникающей хроматографии лекарственного комплекса по настоящему изобретению (полученного в примере 47).
На фиг. 21 изображен ультрафиолетовый спектр поглощения лекарственного комплекса по настоящему изобретению (полученного в примере 47).
На фиг. 22 изображен график гельпроникающей хроматографии лекарственного комплекса по настоящему изобретению (полученного в примере 55).
На фиг. 23 изображен ультрафиолетовый спектр поглощения лекарственного комплекса по настоящему изобретению (полученного в примере 55).
На фиг. 24 показана фармакокинетика лекарственного комплекса по настоящему изобретению (полученного в примере 15). Каждая точка на этой фигуре представляет собой среднее значение для трех экспериментов.
Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения
Предпочтительный вариант осуществления изобретения
Лекарственный комплекс по настоящему изобретению отличается тем, что карбокси (С1-4) алкилдекстрановый полиспирт и остаток лекарственного соединения связаны друг с другом спейсером, состоящим из одной аминокислоты, или спейсером, состоящим из 2-8 аминокислот связанных с пептидной связью.
Остаток лекарственного, соединения, входящий в состав лекарственного комплекса по настоящему изобретению, получают из лекарственного соединения, используемого для лечения и/или профилактики болезней у млекопитающих, в том числе, у человека, например, в качестве противоопухолевого средства, антибактериального средства или тому подобного, при этом он имеет частичную структуру лекарственного соединения. Однако лекарственные соединения, из которых может быть получен данный остаток, не ограничиваются вышеуказанными соединениями. Кроме того, в качестве лекарственных соединений можно использовать любые соединения, которые имеют одну или несколько реакционноспособных функциональных групп, способных участвовать в образовании связи со спейсером (к таким группам, например, относятся аминогруппа, карбоксильная группа, гидроксильная группа, тиольная группа, сложноэфирная группа или тому подобные). Термин лекарственное соединение в настоящем описании изобретения означает также пролекарство, которое в качестве своей части со держит основную структуру лекарственного средства, обладающую фармакологической активностью, и может воссоздать указанное соединение ίη νίνο.
Термин остаток лекарственного соединения в настоящем описании изобретения, в частности, означает частичную структуру лекарственного соединения, остающуюся в соединении после образования связи, при условии, что связь между спейсером и остатком лекарственного соединения образуется в результате взаимодействия реакционноспособной функциональной группы данного лекарственного соединения с реакционноспособной функциональной группой данного спейсера (например, в результате дегидратации и конденсации и т.д.). Например, когда лекарственное соединение выражено формулой Ό-ΝΗ2, Ό-СООН, Ό-СООК, ΌОН, Ό-8Η, Ι)-(ΌΝΗ· или Ό-ΝΗ-СООК (К обозначает низшую алкильную группу или подобную группу), тогда остаток лекарственного соединения представляет собой соответственно ΌΝΙΙ-(Ι)-ΝΊΙ-(Ό-Ο и т.д.), 1)-СО-(1)-СС)А'Н-О. ΌСО-О-О. О-СО-8-Ц и т.д.), О-СО-Щ-СО^-Ц, Ό-СО-О-Ц, О-СО-8-Ц и т.д.), 1)-О-(1)-О-СС)-О. 11-О-О и т.д.), О-З-Щ-З-СО-Ц, Ό-8-Ц и т.д.), Ό(ΌΝΗ-(Ι)-(Ό-ΝΉ-(Ό-Ο и т.д.) и П-КН-СО-ЩΝΗ-СО-О-Ц, ^-NΗ-СО-NΗ-^ и т.д.) (в скобках указана связь между спейсером и остатком лекарственного средства, в котором О обозначает оставшуюся частичную структуру спейсера без реакционноспособной функциональной группы). Однако тип связи между спейсером и остатком лекарственного соединения не ограничивается указанными выше. Остаток лекарственного соединения может быть присоединен к Ν-концевой аминогруппе или С-концевой карбоксильной группе спейсера; альтернативно он может быть присоединен к реакционноспособной функциональной группе аминокислоты, образующей спейсер.
В качестве остатка лекарственного соединения можно использовать, например, остатки противоопухолевых средств, таких как доксорубицин, даунорубицин, митомицип С, блеомицин, циклоцитидин, винкристин, винбластин, метотрексат, противоопухолевые средства на основе платины, (цисплатин или его производные), таксол или его производные, камптотецин или его производные (противоопухолевые средства, описанные в нерассмотренной публикации патента Японии (КОКА1) № (Ηοί) 6-87746/1994, причем предпочтение отдается (18,98)-1-амино9-этил-5 -фтор-2,3 -дигидро -9 -гидрокси-4 -метил1Н,12Н-бензо[де]-пирано[3',4':6,7]индолизино[1,2-Ь]хинолин-10,13(9Η, 15И)-диону, представленному в п.2, или подобному соединению).
В качестве спейсера, связывающегося с остатком лекарственного соединения, можно использовать спейсер, состоящий из одной аминокислоты, или спейсер, состоящий из 2-8 аминокислот, связанных с пептидной связью. Такой спейсер, в частности, представляет собой остаток одной аминокислоты, который получают, удаляя один атом водорода и одну гидроксильную группу соответственно из аминогруппы и карбоксильной группы аминокислоты, или остаток олигопептида, состоящий из 2-8 аминокислот, связанных пептидной связью, который получают, удаляя один атом водорода и одну гидроксильную группу соответственно из Ν’концевой аминогруппы и С-концевой карбоксильной группы олигопептида.
Предпочтительными спейсерами являются остатки олигопептидов, состоящие из 2-6 аминокислот. Тип аминокислоты, образующей спейсер, не имеет каких-либо ограничений. Например, можно использовать Ь- или Ό-аминокислоты, предпочтительно Ь-аминокислоты, βаланин, ε-аминокапроновую кислоту, γаминомасляную кислоту или тому подобные, а также α-аминокислоты. Эти аминокислоты, кроме α-аминокислот, предпочтительно должны находиться рядом с производным полисахарида.
Направление связывания спейсера не имеет каких-либо ограничений. Ν-конец спейсера обычно присоединяют к карбоксильной группе карбокси (С1-4) алкилдекстранового полиспирта с помощью кислотно-амидной связи и С-конец спейсера присоединяют к аминогруппе лекарственного соединения. Когда составным звеном пептидного спенсера является остаток лизина, α-аминогруппа и ε-аминогруппа остатка лизина предпочтительно образуют соответствующие кислотно-амидные связи с карбоксильными группами других аминокислот с получением Νконцов с обеих сторон пептидного спейсера, что способствует образованию связи с карбоксильными группами лекарственных соединений. Кроме того, если в качестве составных звеньев ввести в спейсер один или несколько остатков соединений диамина или дикарбоновой кислоты (например, остатки таких соединений диамина, как этилендиамин, или таких соединений дикарбоновой кислоты, как янтарная кислота), можно использовать спейсер, имеющий с обеих сторон Ν-концы или С-концы.
Аминокислотная последовательность спейсера не имеет каких-либо ограничений. Предпочтение отдается спейсеру, представляющему собой остаток дипептида формулы -XΖ-, где X является остатком гидрофобной аминокислоты и Ζ является остатком гидрофильной аминокислоты; -Х-Ζ- обозначает остаток, который состоит из дипептида, полученного путем соединения пептидной связью гидрофобной аминокислоты (X) и гидрофильной аминокислоты (Ζ), расположенных соответственно у Νконцевого участка и С-концевого участка, и в котором удалены один атом водорода и одна гидроксильная группа соответственно из аминогруппы у Ν-конца и из карбоксильной группы у
С-конца, а также спейсеру, содержащему остаток дипептида в виде частичной пептидной последовательности. В качестве гидрофобной аминокислоты можно использовать фенилаланин, тирозин, лейцин или тому подобные и в качестве гидрофильной аминокислоты можно использовать глицин, аланин или тому подобные. Спейсер может иметь повторяющуюся последовательность дипептидного остатка (например, Χ-Ζ-Χ-Ζ-, -Χ-Ζ-Χ-Ζ-Χ-Ζ- и т.д.).
Спейсер, имеющий такую дипептидную структуру, гидролизуется в местах локализации опухолей или в очагах воспаления, где, как известно, имеется избыток пептидазы, и высвобождает в указанных местах большое количество лекарственного соединения. Частичная структура, образованная путем связывания спейсера, содержащего вышеуказанный дипептид, с лекарственным соединением является предпочтительной частичной структурой лекарственного комплекса по настоящему изобретению. Когда в качестве остатка лекарственного соединения используется противоопухолевое средство, действующее в зависимости от концентрации, (например, доксорубицин) или подобное, наиболее предпочтительным является спейсер, содержащий вышеуказанный дипептидный остаток формулы -Χ-Ζ-, или спейсер, содержащий вышеуказанный дипептидный остаток в виде частичной пептидной последовательности.
Кроме того, когда в качестве остатка лекарственного соединения используется противоопухолевое средство, действующее в зависимости от времени, которое требует сохранения высокой концентрации в течение длительного времени, вышеуказанный спейсер иногда способствует усилению противоопухолевого действия. В качестве примеров можно привести противоопухолевые средства, описанные в нерассмотренной публикации патента Японии (КОКА1) № (Не1) 6-87746/1994, в частности, противоопухолевое средство по п.2. Как правило, типы спейсеров не ограничиваются вышеуказанными, поэтому необходимо выбрать спейсер, приемлемый с учетом режима воздействия противоопухолевого средства, фармако-кинетики или токсичности, высвобождения противоопухолевого средства ίη νίνο и подобных факторов. Для лечения карцином с быстрой пролиферацией клеток желательно использовать вышеуказанный спейсер, способный за короткое время высвобождать большое количество лекарственного соединения.
В нижеследующей таблице приведены конкретные примеры спейсеров; однако спейсеры, используемые для получения лекарственных комплексов по настоящему изобретению не ограничиваются указанными спейсерами, и специалистам в этой области должно быть очевидно, что можно выбрать любой другой спейсер, обеспечивающий оптимальное высвобождение лекарственного соединения. В этой таблице ле вые части пептидных последовательностей являются Ν-концами, и остатки лекарственных соединений присоединены к С-концам. Ό-Рйе обозначает остаток Ό-фенилаланина, и другие аминокислоты являются Ь-аминокислотами. Степень высвобождения лекарственного соединения определяли исходя из эффективности воздействия лекарственных комплексов, связанных с доксорубицином, на крыс, пораженных опухолью \Уа1кег 256, или с учетом свободной концентрации доксорубицина в местах локализации опухоли у крыс, пораженных опухолью \Уа1кег 256. Из этих спейсеров с доксорубицином предпочтительно используют спейсер, который способен высвобождать большое количество лекарственного соединения в течение короткого времени, например, (№конец)-О1у01у-РЬе-01у-.
Таблица 1 (a) Спейсеры с высокой степенью высвобождения лекарственного соединения
-Ьеи-С1у-Туг-С1у-рЪе-С1у-С1у-РЬе-С1у-С1у-01у-РЬе-С1у-С1у-РЬе-С1у-С1у-Рйе-61у-С1у’С1у’ -РНе-РЬе-С1у-С1у-С1у-С1у-С1у-РЬе-С1у- (b) Спейсеры с относительно высокой степенью высвобождения лекарственного соединения
-01у-е1у-₽Ье-РЬе —51у“С1у-С1у-€1у-С1у-С1у- (c) Спейсеры с относительно низкой степенью высвобождения лекарственного соединения
-Рйе-₽Ье-А1а-С1у-Рго-61у-61у-61у-61у~РЬе(б) Спейсеры с низкой степенью высвобождения лекарственного соединения
-61у-Ц-РЬе-С1у-С1у-РЬе-5ег-01у-С1у-С1у-61у-61у-61у-С1у-е1у-С1у-01уХотя степень алкоголизации карбокси (С1-4) алкилдекстранового полиспирта, который является производным полисахарида, входящим в состав лекарственного комплекса по настоящему изобретению, не имеет каких-либо ограничений, желательно, чтобы условия обработки декстрана обеспечивали практически полное превращение в полиспирт. Например, декстрановый полиспирт, полученный путем последовательной обработки декстрана большим из бытком перйодата натрия и борогидрида натрия, в результате которой достигается практически полное превращение в полиспирт, можно успешно использовать в качестве исходного вещества для получения лекарственного комплекса по настоящему изобретению. Однако объем настоящего изобретения не ограничивается вышеуказанным методом превращения декстрана в полиспирт, и специалисты в этой области могут использовать для этой цели любые другие приемлемые методы.
Тип декстрана не имеет каких-либо ограничений, и используемый декстран может содержать любое число а-Э-1.6-связей. Например, можно использовать декстраны, в которых α-Ω1,6-связи составляют 85% или больше, 90% или больше и 95% или больше. Молекулярная масса декстрана не имеет каких-либо ограничений; например, можно использовать декстраны с молекулярной массой от около 1 0000 до около 2000000, предпочтительно от около 50000 до около 800000. В качестве С1-4алкильной группы, образующей карбокси(С1-4)алкильную группу, можно использовать С1-4алкильную группу с линейной или разветвленной цепью, в частности, метильную, этильную, н-пропильную, изопропильную, н-бутильную, втор-бутильную группу или тому подобные, при этом наиболее предпочтительной является метильная группа. Карбокси (С1-4)алкилирование можно осуществлять, например, путем взаимодействия галогенсодержащей (С1-4)алкилкарбоновой кислоты, такой как хлоруксусная кислота, бромуксусная кислота, α-хлорпропионовая кислота, α-метилα-хлорпропионовая кислота, β-хлорпропионовая кислота, α-метил-в-хлорпропионовая кислота, α-хлормасляная кислота, β-хлормасляная кислота или γ-хлормасляная кислота, предпочтительно хлоруксусной кислоты, с гидроксильньми группами декстранового полиспирта до достижения частичного или полного карбокси (С1-4) алкилирования гидроксильных групп.
Декстрановый полиспирт, например, растворяют в инертном растворителе, который не участвует в указанных реакциях (таком как вода, Ν,Ν-диметилформамид или диметилсульфоксид), в присутствии основания (например, гидроксид натрия или гидроксид калия) добавляют к раствору галогенсодержащую (С1-4) алкилкарбоновую кислоту или ее соль и подвергают смесь взаимодействию в течение периода времени от нескольких минут до нескольких дней при температуре охлаждения льдом до примерно 100°С. Степень введения карбокси (С1-4)алкильной группы можно легко контролировать, например, путем выбора соответствующей температуры для карбокси(С1-4)алкилирования или необходимых количеств используемых в качестве реагентов галогенсодержащей(С1-4) алкилкарбоновой кислоты или оснований, что хорошо известно специалистам в этой области.
Степень карбокси(С1.4)алкилирования гидроксильных групп декстранового полиспирта не имеет каких-либо ограничений, при этом она может составлять от 0,01 до 2,0, предпочтительно от 0,1 до 1,0 и более предпочтительно от 0,3 до 0,5 на один составной остаток сахарида. Молекулярная масса карбокси(С1-4)алкилдекстранового полиспирта, определяемая методом гель-фильтрации, составляет от около 5000 до 500000, предпочтительно от около 50000 до 450000 и более предпочтительно от около 200000 до 400000.
Вышеуказанный карбокси(С1 -4)алкилдекстрановый полиспирт является эффективным носителем лекарственного вещества. Лекарственные комплексы, в которых лекарственное соединение и карбокси (С1-4)алкилдекстрановый полиспирт связаны друг с другом, отличаются, например, великолепной избирательностью, в частности, избирательным воздействием на опухоль, и способны сохранять высокие концентрации лекарственного соединения в крови в течение длительного времени. Для образования связи между лекарственным соединением и карбокси(С1 -4)алкилдекстрановым полиспиртом можно использовать метод связывания с помощью сложноэфирной связи или описанный выше альтернативный метод с использованием соответствующего спейсера.
В случае использования спейсера лекарственный комплекс по настоящему изобретению можно получить путем присоединения спейсера, связанного с остатком лекарственного соединения, к карбоксильной группе вышеуказанного карбоксиметилдекстранового полиспирта. Спейсер присоединяют к карбоксильной группе карбоксиметилдекстранового полиспирта путем связывания Ν-концевой аминогруппы спейсера с карбоксильной группой карбоксиметилдекстранового полиспирта с помощью кислотноамидной связи. Однако связь между спейсером и карбоксильной группой карбоксиметилдекстранового полиспирта не ограничивается указанной выше; для этой цели можно использовать другие химические связи и связи, образуемые с помощью одного или нескольких спейсеров. Например, С-концевую карбоксильную группу спейсера и карбоксильную группу карбоксиметилдекстранового полиспирта можно связать друг с другом ангидридом кислоты, или, используя в качестве спейсера соединение диамина, такое как этилендиамин, все карбоксильные группы можно связать с аминогруппами соединения диамина посредством кислотно-амидной связи.
Когда Ν-концевая аминогруппа спейсера связана с карбоксильной группой карбоксиметилдекстранового полиспирта с помощью кислотно-амидной связи, можно использовать осушающие и конденсирующие средства, обычно применяемые для синтеза пептидной цепи, например, Ν,Ν-дициклоалкилкарбодиимиды, такие как Ν,Ν'-дициклогексилкарбодиимид (ОСС), производные карбодиимида, такие как 1этил-3 -(3 -диметиламинопропил)карбодиимид (ΕΌΑΡΟ), производные бензотриазола, такие как 1-гидроксибензотриазол (НОВТ), 1этоксикарбонил-2-этокси-1,2-дигидроксихинолин (ΈΕΩΟ) и тому подобные. Кроме того, эту реакцию можно осуществлять с использованием активированного сложного эфира и галогенангидрида кислоты.
Хотя количество остатка лекарственного соединения, вводимого в карбоксиметилдекстрановый полиспирт, не имеет каких-либо ограничений, оно должно быть выбрано с учетом, например, физико-химических свойств остатка лекарственного соединения, фармакокинетики, эффективности и токсичности лекарственного комплекса по настоящему изобретению. Остаток лекарственного соединения обычно используют в количестве примерно 0,1-30 мас.%, предпочтительно примерно 1-15 мас.%, более предпочтительно примерно 3-10 мас.% и наиболее предпочтительно примерно 5-6 мас.%. Количество остатка лекарственного соединения, вводимого в карбоксиметилдекстрановый полиспирт можно легко определить, например, абсорбционным спектрометрическим анализом.
В качестве примера получения лекарственного комплекса по настоящему изобретению приведена нижеследующая схема, на которой показан процесс введения остатка лекарственного соединения, в частности, противоопухолевого средства, описанного в п.2 нерассмотренной публикации патента Японии (ΚΟΚΑΙ) № (Не1) 6-87746/1994; однако лекарственные комплексы по настоящему изобретению и методы их получения не ограничиваются показанными на этой схеме. На приведенной схеме вводимое количество остатка лекарственного соединения составляет, например, примерно 1 -1 5 мас.%, предпочтительно примерно 2-10 мас.%. Кроме того, из всех составных звеньев полиспиртов на этой схеме показано только одно составное звено, которое вводится с одной или двумя карбоксиметильными группами. Однако очевидно, что производное полисахарида, являющееся составной частью лекарственного комплекса по настоящему изобретению, состоит не только из повторов указанного составного звена.
шеуказанного лекарственного соединения достигается у соединений, имеющих замкнутое лактоновое кольцо (соединение с замкнутым кольцом) в кислой водной среде (например, примерно при рН 3), и у соединений, имеющих разомнутое кольцо (соединение с разомкнутым кольцом) в щелочной водной среде (например, примерно при рН 10). Лекарственный комплекс, в который введен остаток, соответствующий соединению с замкнутым или разомкнутым кольцом, обладает аналогичным противоопухолевым действием. Поэтому необходимо понять, что любые подобные соединения входят в объем настоящего изобретения. Когда в реакционной системе присутствует реагент с открытым лактоновым кольцом, реакция конденсации происходит между карбоксильной группой лактонового кольца и аминогруппой спейсера, что ведет к значительно меньшему выходу продукта, причем в некоторых случаях не удается получить однородный лекарственный комплекс. Такую побочную реакцию можно избежать, ис пользуя в качестве реагента соединение с замкнутым кольцом.
То есть указанную побочную реакцию можно свести до минимума, превращая натриевую соль карбоксиметилдекстранового полиспирта в соль триэтиламмония и конденсируя Ν-концевую аминогруппу спейсера, связанную с остатком описанного выше лекарственного соединения, с помощью карбоксильной группы карбоксиметилдекстранового полиспирта в неводной системе (в органическом растворителе, не содержащем воды), что обеспечивает эффективный выход требуемого продукта. В качестве соли карбоксиметилдекстранового полиспирта, растворяющейся в органических растворителях, можно использовать, например, соль триалкиламмония, такую как соль триэтиламмония или соль триметиламмония, либо соль органических оснований, такую как Ν-метилпирролидин, Νметил-морфолин или диметиламинопиридин (ΏΜΛΡ). В качестве органических растворителей можно использовать Ν,Ν-диметилформамид, диметилсульфоксид или тому подобные.
Лекарственный комплекс по настоящему изобретению отличается тем, что он оказывает требуемое фармакологическое действие на конкретном участке, например, в месте локализации опухоли или в очаге воспаления, в зависимости от типа остатка лекарственного соединения (например, остаток лекарственного соединения, являющегося противоопухолевым средством или противовоспалительным средством), и уменьшает токсичность, присущую лекарственному соединению. Не желая быть связанными какой-либо конкретной теорией, авторы настоящего изобретения считают нужным отметить, что производное полисахарида, являющееся составной частью лекарственного комплекса по настоящему изобретению (например, карбоксиметилдекстрановый полиспирт) хорошо сохраняется в крови и накапливается в большом количестве в местах локализации опухоли или в очагах воспаления, поэтому он является эффективным носителем лекарственного вещества и сообщает лекарственному комплексу по настоящему изобретению избирательность воздействия на места локализации опухоли и очаги воспаления. Кроме того, считается, что в местах локализации опухоли или очагах воспаления экспрессируется протеаза (пептидаза), вследствие чего спейсер лекарственного комплекса по настоящему изобретению легко гидролизуется, высвобождая лекарственное соединение, которое эффективно воздействует на очаг поражения.
Препарат, содержащий лекарственный комплекс по настоящему изобретению, обычно находится в ампулах в виде лиофилизированного продукта или тому подобного и используется в клинических условиях для парентерального введения, например, для инъекций или капельных вливаний. Однако фармацевтические препараты по настоящему изобретению не ограничиваются вышеуказанными формами. Для получения указанных фармацевтических препаратов можно использовать фармацевтические добавки, известные в этой области, например, солюбилизаторы, модификаторы рН, стабилизаторы и тому подобные. Доза лекарственного средства по настоящему изобретению конкретно не ограничена и должна быть определена с учетом типа и количества остатка лекарственного соединения, вводимого в лекарственный комплекс по настоящему изобретению, состояния нуждающегося субъекта, серьезности заболевания и подобных факторов. Например, лекарственный комплекс по настоящему изобретению, содержащий примерно 6 мас.% остатка противоопухолевого средства, описанного в пункте 2 нерассмотренной публикации патента Японии (ΚΟΚΑΙ) № (Не1) 6-87746/1994, можно вводить парентерально в количестве примерно 1-500 мг/м2, предпочтительно, 10-100 мг/м2 поверхности тела один раз в день, и курс лечения желательно повторять через каждые 3-4 недели.
Примеры
Настоящее изобретение более подробно иллюстрируется нижеследующими конкретными примерами; однако приводимые примеры не ограничивают объем изобретения. В примерах Α-ΝΗ- обозначает остаток лекарственного соединения с лактоновым кольцом, который аналогичен описанному в пункте 2 нерассмотренной публикации патента Японии (ΚΟΚΑΙ) № (Не1) 6-87746/1994 (в примерах он иногда определяется как ΌΧ-8951), и лекарственное соединение с замкнутым лактоновым кольцом выражено формулой Α-ΝΗ2. Пример включает группу формулы Α-ΝΗ-, указанную на приведенной выше схеме, в которой образовано лактоновое кольцо. Кроме того, Α'-ΝΗ- показывает, что лактоновое кольцо остатка лекарственного соединения формулы Α-ΝΗ- является замкнутым или разомкнутым кольцом либо их смесью, -ΌΧΚ. обозначает остаток, полученный из доксорубицина, и -Ό51-7059 обозначает остаток, полученный из производного таксиола, приведенного в примере 55.
В приведенных примерах за исключением особо оговоренных случаев степень карбоксиметилирования в карбоксиметилдекстрановом полиспирте (степень замещения карбоксиметильной группой на один составной остаток сахарида) определяют следующим образом: натриевую соль карбоксиметилдекстранового полиспирта превращают в свободную кислоту, полученную кислоту растворяют в 0,1н. водном растворе гидроксида натрия и титруют 0,1н. раствором хлористо-водородной кислоты. Водный раствор натриевой соли карбоксиметилдекстранового полиспирта вводят в колонку ΒίοРа4 Α6 50\У-х 2 (Н+ форма), вытекающую жидкость лиофилизируют и используют в качестве образца. Указанный образец растворяют в за данном избытке 0,1н. водного раствора гидроксида натрия и титруют 0,1н. раствором хлористо-водородной кислоты, используя в качестве индикатора фенолфталеин. Степень карбоксиметилирования высчитывают по следующему уравнению: степень карбоксиметилирования = 13,4(а-Ь)/[8-5,8(а-Ь)], где 8 означает массу используемого образца (мг), а означает заданный избыток 0,1н. водного раствора гидроксида натрия (мл) и Ь означает объем 0,1н. раствора хлористо-водородной кислоты, израсходованного на титрование (мл). Количество введенного лекарственного средства (мас.%) определяют посредством абсорбционного спектроскопического анализа при типичных значениях поглощения данного лекарственного соединения (примерно 362 нм). Гель-фильтрацию выполняют в следующих условиях: гель Τ8Κ С-4000 Ρ\νΧ|. элюент: 0,1 М раствор №1С1; скорость потока 0,8 мл/мин; и температура колонки: 40°С.
Условные обозначения 'Н ΝΜΚ. - спектр 'Н ЯМР; ΌΜ8Ο - диметилсульфоксид (ДМСО); (§) -синглет, (4) - дублет, (1) - триплет, (с.|) - квартет, (т) -мультиплет, (Ьг) - широкий, (44) - дублет дублетов; Ма88 (ΓΑΒ) - масс-спектрометрия с бомбардировкой ускоренными атомами.
Пример 1. 3'-Н-(Вос-С1у-С1у-Рйе-С1у)-ХНΑ (Α-ΝΗ2=ΌΧ-8951).
н
Вос-С1у-С1у-Рйе-С1у (600 мг) и Νгидроксисукцинимид (160 мг) растворяют в Ν, Ν-диметилформамиде (20 мл), охлаждают до 4°С и добавляют Ν, Ν'-дициклогексилкарбодиимид (280 мг). К полученному раствору добавляют раствор лекарственного соединения, описанного в п.2 нерассмотренной публикации патента Японии (ΚΟΚΑΙ) № (Не1) 6-87746/1994 (600 мг, соединение, описанное в примере 50 публикации вышеуказанного патента), в метансульфонате и раствор триэтиламина (0, 1 6 мл) в Ν,Ν-диметилформамиде (30 мл) и перемешиваемую смесь оставляют на 1 6 ч для взаимодействия при комнатной температуре в защищенном от света месте. Реакционную смесь упаривают до сухого состояния при пониженном давлении и остаток очищают хроматографией на колонках из силикагеля (элюент: раствор дихлорметана в метаноле (10:1), содержащий 0,5% уксусной кислоты), что дает целевое соединение (1 , 0 г).
Ή-ЯМР (Ι1Μ8Ο-4.) δ: 8. 40 (4, 1Н, 1 = 8. 3 Ηζ), 8. 10-8. 17 (т, 2Н), 7. 91-8. 01 (т, 1Н), 7. 78 (4, 1Н, 1 = 10. 75 Ш), 7. 32 (8, 1Н), 6. 94-6. 96 (т, 1Н), 6. 50 (8, 1Н), 5. 57 (1, 1Н, 1 = 4. 5 Ш), 5. 43 (8, 2Н), 5. 23 (8, 2Н), 3. 77 (44, 2Н, 1 = 5. 85 Ш, 1 = 8. 80 Ш), 3. 70 (4, 2Н, 1 = 4. 40 Ш), 3. 65 (4,
2Н, 1 = 5. 35 Ηζ), 3. 56 (б, 2Н, 1 = 5. 85 Ηζ), 3. 153. 25 (т, 2Н), 2. 40 (δ, 3Н), 2. 05-2. 25 (т, 1Н), 1. 86 (т, 2Н), 1. 35 (δ, 9Н), 0. 88 (1, 3Н, 1 = 7. 35 Н).
Μαδδ (ГАВ); т/е854(М+1).
Пример 2. Синтез 3'-К-(Вос-С1у-О1у-О1уРйе)-ИН-А (А-ΝΙЬ ОХ-8951).
Вос-С1у-С1у-С1у-Р11е (600 мг) и Ν-гидроксисукцинимид (160 мг) растворяют в Ν,Νдиметилформамиде (20 мл), охлаждают до 4°С и добавляют Ν,Ν'-дициклогексилкарбодиимид (280 мг). К полученному раствору добавляют раствор ΌΧ-8951 (600 мг) и триэтиламина (0,16 мл) в Ν,Ν-диметилформамиде (30 мл) и перемешиваемую смесь оставляют на 16 ч для взаимодействия при комнатной температуре в защищенном от света месте. Реакционную смесь упаривают до сухого состояния при пониженном давлении и остаток очищают хроматографией на колонках из силикагеля (элюент: раствор дихлорметана в метаноле (10:1), содержащий 0,5% уксусной кислоты), что дает целевое соединение (700 мг).
'Н-ЯМР (ΌΜ8Ο-66) δ: 8.57 (б, 1Н, 1 = 7.8 Н), 8.19 (б, 1Н), 8.05-8.07 (т, 2Н), 7.79 (б, 1Н, 1 = 11.2 Н), 7.32 (δ, 1Н), 7.10 (б, 2Н, 1 = 7.8 Ш),
6.93-7.03 (т, 4Н), 6.51 (δ, 1Н), 5.52-5.55 (т, 1Н),
5.44 (δ, 2Н), 5.18 (б, 1Н, 1 = 18.5 Ш), 4.84 (б, 1Н, 1 = 18.5 Н), 4.57-4.59 (т, 1Н), 3.57-3.71 (т, 6Н),
3.15-3.25 (т, 2Н), 3.00-3.02 (т, 1Н), 2.80-2.90 (т, 1Н), 2.40 (δ, 3Н), 2.05-2.25 (т, 1Н) , 1.86 (т, 2Н) , 1.35 (δ, 9Н), 0.88 (1, 3Н, 1 = 7.35 Ш).
Μαδδ (ГАВ); т/е 854 (М+1).
Пример 3. Синтез 3'-И-(Вос-О1у-О1у-О1уС1у)-ИН-А (А-ИН2=ОХ-8951).
Вос-С1у-С1у-О1у-О1у (120 мг) и Ν-гидроксисукцинимид (39 мг) растворяют в Ν,Νдиметилформамиде (20 мл), охлаждают до 4°С и добавляют Ν,Ν'-дициклогексилкарбодиимид (70 мг). К полученному раствору добавляют раствор ΌΧ-8951 (150 мг) и триэтиламина (0,039 мл) в Ν,Ν-диметилформамиде (10 мл) и перемешиваемую смесь оставляют на 1 6 ч для взаимодействия при комнатной температуре в защищенном от света месте. Реакционную смесь упаривают до сухого состояния при пониженном давлении и остаток очищают хроматографией на колонках из силикагеля (элюент: раствор дихлорметана в метаноле (10:1)), что дает целевое соединение (1 00 мг).
'Н-ЯМР (ΌΜ8Ο-66) δ: 8.40 (б, 1Н, 1 = 8.3 Н), 8.10-8.17 (т, 2Н), 7.91-8.01 (т, 1Н), 7.78 (б, 1Н, 1 = 10.75 Н), 7.32 (δ, 1Н), 6.94-6.96 (т, 1Н),
6.50 (δ, 1Н), 5.57 (1, 1Н, 1 = 4.5 Ш), 5.43 (δ, 2Н),
5.23 (δ, 2Н), 3.77 (бб, 2Н, 1 = 5.85 Ш, 1 = 8.80 Н), 3.70 (б, 2Н, 1 = 4.40 Н), 3.65 (б, 2Н, 1 = 5.35 Н), 3.56 (б, 2Н, 1 = 5.85 Н), 3.15-3.25 (т, 2Н),
2.40 (δ, 3Н), 2.05-2.25 (т, 1Н) , 1.86 (т, 2Н), 1.35 (δ, 9Н), 0.88 (1, 3Н, 1 = 7.35 Ш).
Μαδδ (ГАВ); т/е 764 (Μ+1).
Пример 4. Синтез трифторацетата 3'-Ν(О1у-О1у-О1у-О1у)-ИН-А (А-ИН2=ОХ-8951).
3'-Н-(Вос-О1у-О1у-О1у-О1у)-ИН-А (А-ИН2= ΌΧ-8951) (79 мг) растворяют в трифторуксусной кислоте (3 мл) и оставляют выстаиваться в течение одного часа. Растворитель выпаривают и остаток подвергают азеотропной перегонке дважды с метанолом (30 мл) и дважды с этанолом (30 мл), а затем промывают простым эфиром с получением целевого соединения (80 мг).
!Н-ЯМР (ΌΜ8Ο-66) δ: 8.59-8.61 (т, 1Н),
8.50 (б, 1Н, 1 = 8.3 Н), 8.21-8.27 (т, 2Н), 7.918.01 (Ьг, 3Н), 7.81 (б, 1Н, 1 = 11.2 Ш), 7.32 (δ, 1Н), 6.50-6.52 (Ьг, 1Н) , 5.57-5.59 (т, 1Н), 5.43 (δ, 2Н), 5.23 (δ, 2Н), 3.80-3.82 (т, 3Н), 3.70-3.75 (т, 3Н), 3.15-3.25 (т, 2Н), 2.41 (δ, 3Н), 2.05-2.25 (т, 1Н), 1.86-1.88 (т, 2Н), 0.88 (1, 3Н, 1 = 7.35 Ш).
Пример 5. Синтез триэтиламмониевой соли карбоксиметилдекстранового полиспирта.
Декстран Т2000 (10 г, Рйагташа, средняя молекулярная масса: 2000000) растворяют в 0,1 М растворе ацетатного буфера (рН 5,5, 1000 мл) и добавляют водный раствор (1 000 мл) перйодата натрия (33,0 г). Смесь перемешивают в течение 10 дней при температуре 4°С в защищенном от света месте, добавляют этиленгликоль (7,0 мл) и продолжают перемешивать в течение ночи. Охлаждаемую льдом реакционную смесь доводят до рН 7,5 с помощью 8 М водного раствора гидроксида натрия. Затем добавляют борогидрид натрия (14 г), растворяют его и перемешивают смесь при комнатной температуре в течение ночи. Охлаждаемую льдом реакционную смесь доводят до рН 5,5 уксусной кислотой, перемешивают при температуре 4°С в течение одного часа и, охлаждая льдом, доводят до рН 7,5 с помощью 8 М водного раствора гидроксида натрия. Полученный водный раствор фильтруют через мембранный ультрафильтр Вютах-30 (микропористый), удаляя таким образом низкомолекулярную фракцию. Полимерную фракцию лиофилизируют с получением декстранового полиспирта. Низкомолекулярную фракцию обрабатывают декстрановым полиспиртом при рН 3,0 в течение одного часа и отфильтровывают через мембранный фильтр Вютах-50, затем полимерную фракцию отфильтровывают через мембранный фильтр Вютах1 00 и полученный продукт лиофилизируют, что дает очищенный декстрановый полиспирт (2,0 г). Молекулярная масса указанного вещества равна 220000 (гель-фильтрация, декстрановый эталон).
Очищенный декстрановый полиспирт (1,8
г) добавляют к раствору гидроксида натрия (1 0,5 г) в воде (45 мл) и растворяют при комнатной температуре. К охлаждаемому льдом раствору добавляют монохлоруксусную кислоту (15 г), растворяют ее и оставляют смесь на 20 часов для взаимодействия при комнатной температуре. Реакционную смесь доводят до рН 8 уксусной кислотой и фильтруют через мембранный ультрафильтр Вютах-10, удаляя таким образом низкомолекулярную фракцию. Полимерную фракцию лиофилизуют с получением натриевой соли карбоксиметилдекстранового полиспирта (1,8 г). Молекулярная масса этого вещества равна 330000 (гель-фильтрация, декстрановый эталон), и степень карбоксиметилирования составляет 0,8.
Натриевую соль карбоксиметилдекстранового полиспирта (300 мг) растворяют в воде, вводят в колонку Βίο-Рай АС50\У-Х2 (200-400 меш, Н+ форма) (1,5 х 8,6 см) и элюируют водой. К вытекающей жидкости добавляют триэтиламин (0,5 мл) и лиофилизируют, что дает триэтиламмониевую соль карбоксиметилдекстранового полиспирта (380 мг) . Отдельные порции натриевой соли карбоксиметилдекстранового полиспирта (по 300 мг каждая) обрабатывают в вышеописанной колонке с получением триэтиламмониевой соли карбоксиметилдекстранового полиспирта (380 мг, 400 мг).
Пример 6. Синтез натриевой соли карбоксиметилдекстранового полиспирта.
Натриевую соль карбоксиметилдекстранового полиспирта (0,15 г), полученную в примере 5, добавляют к раствору гидроксида натрия (1,05 г) в воде (4,5 мл) и растворяют при комнатной температуре. К охлаждаемому льдом раствору добавляют монохлоруксусную кислоту (1,5 г), растворяют ее и полученную смесь оставляют на 1 8 ч для взаимодействия при комнатной температуре. Реакционную смесь доводят до рН 8 уксусной кислотой, вводят по каплям в 90 мл метанола и добавляют 3 М водный раствор хлорида натрия (0,15 мл). Полученный осадок собирают центрифугированием (3500 об/мин, 8 мин), промывают метанолом, растворяют в воде (5 мл) и добавляют 3 М водный раствор хлорида натрия (0,15 мл). Водный раствор фильтруют через микропористый фильтр (0,45 мкм), фильтрат добавляют по каплям к 35 мл этанола и выпавший осадок собирают центрифугированием (3500 об/мин, 8 мин). Осадок промывают этанолом, растворяют в воде и диализируют очищенной водой через мембрану для диализа (8рее1гароге 1, предельная молекулярная масса 6000-8000). Раствор внутреннего диализата фильтруют через микропористый фильтр (0,22 мкм) и лиофилизируют с получением натриевой соли карбоксиметилдекстранового полиспирта (0,18 г). Степень карбоксиметилирования этого вещества на один остаток сахарида составляет 1,2 (алкалиметрия) .
Пример 7. Синтез натриевой соли карбоксиметилдекстранового полиспирта.
Очищенный декстрановый полиспирт (0,2
г), полученный в примере 5, добавляют к раствору гидроксида натрия (0,84 г) в воде (6 мл) и растворяют при комнатной температуре. К охлаждаемому льдом раствору добавляют монохлоруксусную кислоту (1,2 г), растворяют ее и оставляют смесь на 1 8 ч для взаимодействия при комнатной температуре. Реакционную смесь доводят до рН 8 уксусной кислотой, вводят по каплям в 1 20 мл метанола и добавляют 3М водный раствор хлорида натрия (0,2 мл). Полученный осадок собирают центрифугированием (3500 об/мин, 8 мин), промывают метанолом, растворяют в воде (5 мл) и добавляют 3М водный раствор хлорида натрия (0,2 мл). Водный раствор фильтруют через микропористый фильтр (0,45 мкм), фильтрат по каплям добавляют к 35 мл этанола и выпавший осадок собирают центрифугированием (3500 об/мин, 8 мин). Осадок промывают этанолом, растворяют в воде и диализируют очищенной водой через мембрану для диализа (8рее1гароге 1, предельная молекулярная масса 6000-8000). Раствор внутреннего диализата фильтруют через микропористый фильтр (0,22 мкм) и лиофилизируют с получением натриевой соли карбоксиметилдекстранового полиспирта (0,20 г). Степень карбоксиметилирования этого вещества на один остаток сахарида составляет 0,4 (алкалиметрия).
Пример 8. Синтез карбоксиметилдекстранового полиспирта-С1у-С1у-С1у-Рйе-ХН-А' (АΝΗ2=ΌΧ-8951).
Триэтиламмониевую соль карбоксиметилдекстранового полиспирта, полученную в примере 5 (380 мг, степень карбоксиметилирования 0,8), растворяют в Ν,Ν-диметилформамиде (30 мл). К полученному раствору последовательно добавляют раствор соли трифторуксусной кислоты 3'-Ы-(61у-61у-С1у-Рйе)-МН-А (Α-ΝΗ2ΌΧ-8951) (49мг) в Ν,Ν-диметилформамиде (5 мл), триэтиламин (0,017 мл) и 1этоксикарбонил-2-этокси-1,2дигидроксихинолин (380 мг), после чего перемешиваемую смесь оставляют на ночь для взаимодействия при комнатной температуре. Реакционную смесь доводят до рН 1 0 с помощью 1М водного раствора гидроксида натрия и 5 мл порции смеси по каплям добавляют к 25 мл этанола. К полученной смеси добавляют 3М водный раствор хлорида натрия (1 мл) и диэтиловый эфир (5 мл) и выпавший осадок собирают центрифугированием (3500 об/мин, 8 мин).
Полученный осадок растворяют в воде и диализируют очищенной водой через мембрану для диализа (8рее1гароге 1, предельная молекулярная масса 6000-8000). Раствор внутреннего диализата фильтруют через микропористый фильтр (0,22 мкм) и лиофилизируют. Сырой продукт растворяют в воде (30 мл), доводят до рН 9 с помощью 0,1М водного раствора гидроксида натрия и в течение одного часа выдерживают при температуре 37°С. Обработанный раствор анализируют, как описано выше, после чего раствор внутреннего диализата фильтруют через микропористый фильтр (0,22 мкм) и лиофилизируют с получением целевого соединения (289 мг) . Полученное соединение растворяют в 0,1М водном растворе хлорида натрия и анализируют. Результаты гель-проникающей хроматографии (колонка: гель Т8К Р\У-4000ХБ. То5о11. растворитель: 0,1М раствор №1С1. скорость потока: 0,8 мл/мин) и ультрафиолетовый спектр поглощения (0,1 М раствор трис-буфера, рН 9,0, 0,25 мг/мл) приведены соответственно на фиг. 1 и фиг. 2. Содержание остатка лекарственного соединения в целевом соединении составляет 5,3% (в весовом отношении) по методу определения на основе поглощения при длине волны 362 нм в 0,1 М растворе трис-буфера (рН 9,0).
Пример 9. Синтез карбоксиметилдекстранового полиспирта-С1у-С1у-Рйе-С1у-ХН-А' (АΝΗ2=ΌΧ-8951).
Целевое соединение (300 мг) синтезируют аналогично способу, описанному в примере 8, для чего соль трифторуксусной кислоты 3'-Ν(Ο^-Ο^-Ρ^-Ο^)-ΝΗ-Α, полученную путем удаления группы Вос из 3'-№(Вос-С1у-С1у-Рйе61у)-NΗ-Α (Α-ΝΗ2=ΌΧ-8951) (50 мг), вводят так же, как в примере 4, в триэтиламмониевую соль карбоксиметилдекстранового полиспирта (380 мг), полученную в примере 5. Полученное соединение растворяют в 0,1 М водном растворе хлорида натрия и анализируют. Результаты гель-проникающей хроматографии (колонка: гель Т8К Р^-4000ХБ, ТоюР растворитель: 0,1М раствор №С1, скорость потока: 0,8 мл/мин) и ультрафиолетовый спектр поглощения (0,1М раствор трис-буфера, рН 9,0, 0,19 мг/мл) приведены соответственно на фиг. 3 и фиг. 4. Содержание остатка лекарственного соединения в целевом соединении составляет 5,3% (в весовом отношении) по методу определения на основе поглощения при длине волны 362 нм в 0,1 М растворе трис-буфера (рН 9,0).
Пример 1 0. Синтез карбоксиметилдекстранового полиспирта-С1у-С1у-С1у-С1у^Н-А' (АΝΗ2=ΌΧ-8951).
Целевое соединение (190 мг) синтезируют аналогично способу, описанному в примере 8, для чего соль трифторуксусной кислоты 3'-Ν(С1у-С1у-С1у-С1у)^Н-А, полученную путем удаления группы Вос из 3'-К-(Вос-61у-61у-61у6150-ΝΗ-Α (Α-ΝΗ2=ΌΧ-8951) (41 мг) , вводят так же, как в примере 4, в триэтиламмониевую соль карбоксиметилдекстранового полиспирта (380 мг), полученную в примере 5. Ультрафиолетовый спектр поглощения указанного соединения (0,1М раствор трис-буфера, рН 9,0, 0,34 мг/мл) показан на фиг. 5. Содержание остатка лекарственного соединения в целевом соединении составляет 5,3% (в весовом отношении) по методу определения на основе поглощения при длине волны 362 нм в 0,1М растворе трисбуфера (рН 9,0).
Пример 11. Противоопухолевое действие лекарственного комплекса по настоящему изобретению.
У мышей вызывали образование опухоли Ме111 А следующим образом: самцам мышей ВАЬВ/с (в возрасте 7 недель) (7 мышей в группе) подкожно трансплантировали в правую паховую область клетки фибросаркомы мышей Ме111 А в количестве 1 х 106 Начиная с 7-го дня в хвостовую вену мышей, пораженных опухолью Ме111 А, через каждые 4 дня четырежды делали инъекции лекарственного комплекса по примеру 9, растворенного в дистиллированной воде. На 21 -ый день после трансплантации опухолевых клеток образовавшиеся опухоли иссекали и взвешивали для определения степени ингибирования роста опухоли по следующему уравнению: степень ингибирования роста опухоли (%) = [1-(средняя масса опухоли в группе, получавшей испытуемое соединение/средняя масса опухоли в контрольной группе)] х100. Таким образом было установлено, что лекарственный комплекс по настоящему изобретению, полученный в примере 9, оказывает значительно более сильное противоопухолевое действие по сравнению с лекарственным соединением, используемым отдельно без спейсера и производного полисахарида, и не является токсичным (потеря массы тела). Производное полисахарида (пример 5), используемое отдельно, и лекарственное соединение, вводимое только с помощью спейсера (соль трифторкусусной кислоты 112Ν -61 у -61 у -Р11е-61 у-Ν11 - А (А-МР 1ХХ-8951), полученного путем удаления группы Вос из соединения по примеру 1 аналогично способу по примеру 4), оказались неэффективными.
Таблица 2
Испытуемое соединение Доза Степень
ингибирования
Лекарственное соединение, 7,5 х 4 76
используемое отдельно 1,875 х 4 46
0,9375 х 4 36
Соединение по примеру 9 1,41) х 4 94
0,71) х 4 59
0,3511 х 4 41
1) Высчитано на основе лекарственного соединения
Пример 1 2. Противоопухолевое действие лекарственного комплекса по настоящему изобретению.
У мышей (6 мышей в группе) вызывали образование опухоли Ме111 А аналогично примеру 11 и противоопухолевое действие используемого отдельно лекарственного соединения сравнивали с действием лекарственных комплексов по примерам 8 и 9 при однократном введении на 7-ой день после трансплантации опухолевых клеток. Таким образом были получены нижеследующие результаты противоопухолевого действия: (производное полисахарида)-61у-61у-Ρйе-61у-NΗ-Α' > (производное полисахарида)-61у-61у-61у-Ρйе-NΗ-Α' > используемое отдельно лекарственное соедине25 ние. Соединение, в котором остаток лекарственного соединения связан с карбоксильной группой карбоксиметилдекстранового полиспирта по примеру 5 без спейсера (количество введенного остатка лекарственного соединения равно 6,2 мас.%), оказалось неэффективным.
Таблица 3
Испытуемое соединение Доза (мг/кг) Степень ингибирования
Лекарственное соединение, 60 %
используемое отдельно 20 59
Соединение по примеру 8 101 85
51» 76
Соединение по примеру 9 51·1 98
2,51) 87
1) Высчитано на основе лекарственного соединения
Пример 13. Синтез триэтиламмониевой соли карбоксиметилдекстранового полиспирта.
Декстран Т500 (10 г, Рйагтас1а, молекулярная масса 500000) растворяют в 0,1М растворе ацетатного буфера (рН 5,5, 1000 мл) и добавляют водный раствор (1 000 мл) перйодата натрия (33 г). Смесь перемешивают при температуре 4°С в течение десяти дней в защищенном от света месте, добавляют этиленгликоль (7,0 мл) и продолжают перемешивать в течение ночи. Реакционную смесь доводят до рН 7,5 с помощью 8М водного раствора гидроксида натрия. Затем добавляют боргидрид натрия (14 г), растворяют его и перемешивают смесь в течение ночи. Охлаждаемую льдом реакционную смесь доводят до рН 5,5 уксусной кислотой, перемешивают при температуре 4°С в течение одного часа и доводят до рН 7,5 с помощью 8М водного раствора гидроксида натрия, что дает раствор 1 . Отдельно выполняют вторую серию вышеописанных процедур, используя в качестве исходного вещества декстран Т500 (10 г, Рйагтас1а, молекулярная масса 500000), что дает раствор 2. Далее выполняют еще две серии вышеописанных процедур, используя в качестве исходного вещества декстран Т250 (по 10 г в каждой серии, Рйагтааа, молекулярная масса 250000), что дает раствор 3 и раствор 4. Растворы 1-4 объединяют и фильтруют через мембранный ультрафильтр Вютах-50, удаляя таким образом низкомолекулярную фракцию. Полимерную фракцию лиофилизируют с получением декстранового полиспирта (25 г). Молекулярная масса этого вещества равна 163000 (гельфильтрация, пуллулановый эталон).
Декстрановый полиспирт (11 г) добавляют к раствору гидроксида натрия (46,2 г) в воде (330 мл) и растворяют при комнатной температуре. К охлаждаемому льдом раствору добавляют монохлоруксусную кислоту (66 г), растворяют ее и оставляют смесь на ночь для взаимодействия при комнатной температуре. Реакционную смесь доводят до рН 9 уксусной кислотой и обессоливают, фильтруя через мембранный ультрафильтр Вютах-30. Раствор, не прошедший через фильтр, лиофилизируют с полу чением натриевой соли карбоксиметилдекстранового полиспирта (13 г). Молекулярная масса этого вещества равна 228000 (гель-фильтрация, пуллулановый эталон) и степень карбоксиметилирования составляет 0,4.
Натриевую соль карбоксиметилдекстранового полиспирта (600 мг) растворяют в воде, вводят в колонку Вю-Ваб АО 50\У-Х2 (200-400 меш, Н+ форма) (диаметр 44 мм, длина 210 мм) и элюируют водой. К вытекающей жидкости добавляют триэтиламин (0,93 мл) и лиофилизируют с получением целевого соединения (690 мг).
Пример 1 4. Синтез соли трифторуксусной кислоты 3'-Ν-(01ν-01ν-Ρ1ιο-01ν)-ΝΗ-Α (АΝΗ2=ΌΧ-8951).
Соединение 3 '-№(Вос-61у-О1у-Рйе-О1у )ΝΗ-А (Α-ΝΗ2=ΌΧ-8951) (79 мг), полученное в примере 1 , растворяют в трифторуксусной кислоте (3 мл) и оставляют выстаиваться в течение одного часа. Растворитель выпаривают и остаток подвергают азеотропной перегонке дважды с метанолом (30 мл) и дважды с этанолом (30 мл), а затем промывают простым эфиром с получением целевого соединения (80 мг).
Ή-ЯМР (ΌΜδΟ-бД δ: 8.53 (б, 1Η, 1 = 8.3 Ηζ), 8.40-8.48 (т, 2Η), 8.28 (б, 1Η, 1 = 8.3 Ηζ), 7.95-8.07 (Ьг, 3Η), 7.81 (б, 1Η, 1 = 10.2 Ηζ), 7.30-
7.37 (т, 2Η), 7.15-7.30 (т, 5Η), 6.50-6.55 (Ьг, 1Η), 5.50-5.57 (т, 1Η) , 5.41 (б, 2Η, 1 = 7.82 Ηζ),
5.25 (8, 2Η), 4.55-4.62 (т, 1Η), 3.55-3.92 (т, 6Η),
3.15-3.25 (Ьг, 2Η), 2.98-3.03 (т, 1Η) , 2.73-2.82 (т, 1Η) , 2.40 (8, 3Η), 2.05-2.25 (т, 1Η) , 1.84-
1.92 (т, 2Η) , 0.88 (ΐ, 3Η, 1 = 7.35 Ηζ).
Пример 15. Синтез карбоксиметилдекстранового полиспирτа-61у-61у-Рйе-61у-NΗ-Α' (АΝΗ2=ΌΧ-8951).
Натриевую соль карбоксиметилдекстранового полиспирта, полученную в примере 13, (400 мг) превращают в соль триэтиламмония (470 мг) и растворяют в Ν,Ν-диметилформамиде (30 мл). К полученному раствору последовательно добавляют раствор соли трифторуксусной кислоты 3^-(0^-0^^^-0^)-^-А (АΝΗ2=ΌΧ-8951), полученной в примере 14, (62 мг) в Ν,Ν-диметилформамиде (5 мл), триэтиламин (0,02 мл) и 1-этоксикарбонил-2-этокси-1,2дигидро-ксихинолин (470 мг), после чего перемешиваемую смесь оставляют на ночь для взаимодействия при комнатной температуре в защищенном от света месте. Порции реакционной смеси (5 мл) по каплям добавляют к 1 0 мл порциям этанола. К полученной смеси добавляют 3М водный раствор хлорида натрия (2,5 мл) и диэтиловый эфир (20 мл) и выпавший осадок собирают центрифугированием. Осадок растворяют в 0,5М водном растворе хлорида натрия, охлаждая льдом, доводят до рН 9 с помощью 0,1М водного раствора гидроксида натрия и диализируют очищенной водой через мембрану для диализа (8рес1гароге 1, предельная молекулярная масса 6000-8000). Раствор внутреннего диализата фильтруют через микропористый фильтр (0,22 мкм) и лиофилизируют с получением целевого соединения (600 мг) . Полученное соединение растворяют в 0,1 М водном растворе хлорида натрия и анализируют. Результаты гель-проникающей хроматографии (колонка: гель Т8К Р^-4000ХЬ, То8о11, растворитель: 0,1М раствор ЫаС1, скорость потока: 0,8 мл/мин) и ультрафиолетовый спектр поглощения (0,1М раствор трис-буфера, рН 9,0, 0,1 мг/мл) приведены соответственно на фиг. 6 и фиг. 7. Содержание остатка лекарственного соединения в целевом соединении составляет 5,8% (в весовом отношении) по методу определения на основе поглощения при длине волны 362 нм в 0,1М растворе трис-буфера (рН 9,0).
Пример 1 6. Синтез соли трифторуксусной кислоты 3'-Ν-(Ο1ν-Ο1ν-Ο1ν-Ρ1κ)-ΝΗ-Α (ΑΝΗ2=ΌΧ-8951).
Соединение 3 '-Ν-(Βοο-ΟΙν-ΟΙν-ΟΙν-ΡΙιο)ΝΗ-Α (Α-ΝΗ2=ΌΧ-8951) (79 мг), полученное в примере 2, растворяют в трифторуксусной кислоте (3 мл) и оставляют выстаиваться в течение одного часа. Растворитель выпаривают и остаток подвергают азеотропной перегонке дважды с метанолом (30 мл) и дважды с этанолом (30 мл), а затем промывают простым эфиром с получением целевого соединения (80 мг).
1Η-ΉΜΡ(ΌΜ8Ο-ά6) δ: 8.62-8.66 (т, 2Η),
8.23 (б, 1Η, 1 = 8.3 Ηζ), 8.18-8.20 (т, 1Η), 7.98-
8.10 (Ьг, 2Η), 7.79 (б, 1Η, 1 = 10.7 Ηζ), 7.32 (8, 1Η), 7.09 (б, 2Η, 1 = 7.3 Ηζ), 6.93-7.03 (т, 4Η),
6.50-6.60 (Ьг, 1Η) , 5.52-5.55 (т, 1Η) , 5.44 (8, 2Η), 5.18 (б, 1Η, 1 = 18.5 Ηζ), 4.80 (б, 1Η, 1 = 18.5 Ηζ), 4.57-4.59 (т, 1Η), 3.57-3.71 (т, 6Η), 3.15-
3.25 (т, 2Η), 3.00-3.02 (т, 1Η), 2.80-2.90 (т, 1Η), 2.50 (8, 3Η), 2.05-2.25 (т, 1Η) , 1.86-2.00 (т, 2Η), 0.88 (1, 3Η, 1 = 7.35 Ηζ).
Пример 1 7. Синтез карбоксиметилдекстранового полиспирτа-С1у-С1у-С1у-Ρйе-NΗ-Α' (АΝΗ2=ΌΧ-8951).
Натриевую соль карбоксиметилдекстранового полиспирта, полученную в примере 13, (1,0 г) превращают в соль триэтиламмония (1,2 г) и растворяют в Ν,Ν-диметилформамиде (90 мл). К полученному раствору последовательно добавляют раствор соли трифторуксусной кислоты 3'Ν-(6^-6^-6^-Ρ^)-ΝΗ-Α (Α-ΝΗ2=ΌΧ-8951), полученной в примере 16, (158 мг) в Ν,Νдиметилформамиде (15 мл), триэтиламин (0,05 мл) и 1-этоксикарбонил-2-этокси-1,2-дигидроксихинолин (1,2 г), после чего перемешиваемую смесь оставляют на ночь для взаимодействия при комнатной температуре в защищенном от света месте. Порции реакционной смеси (5 мл) по каплям добавляют к 1 0 мл порциям этанола. К полученной смеси добавляют 3М водный раствор хлорида натрия (2,5 мл) и диэтиловый эфир (20 мл) и выпавший осадок собирают центрифугированием. Остаток растворяют в 0,5М водном растворе хлорида натрия, охлаждая льдом, доводят до рН 9 с помощью 0,1М водно го раствора гидроксида натрия и диализируют против очищенной воды через мембрану для диализа (8рес1гароге 1, предельная молекулярная масса 6000-8000). Раствор внутреннего диализата фильтруют через микропористый фильтр (0,22 мкм) и лиофилизируют с получением целевого соединения (1,4 г). Содержание остатка лекарственного соединения в целевом соединении составляет 5,2% (в весовом отношении) по методу определения на основе поглощения при длине волны 362 нм в 0,1М растворе трисбуфера (рН 9,0).
Пример 18. Синтез Βο^Ο1ν-Ρ1^-Ρ€ΐ.ι-ΟΗ.
Η-Ο1ν-Ρ1^-Ρ€ΐ.ι-ΟΗ (3,0 г) добавляют к 50% водному раствору диоксана (48 мл) и охлаждают льдом. К полученному раствору добавляют 1н. водный раствор гидроксида натрия (9,45 мл) и диоксана (24 мл), содержащий (Вос)И2О (2,27 г), и перемешивают смесь в течение ночи. К реакционной смеси добавляют 1н. раствор хлористоводородной кислоты (9,45 мл) и выпаривают растворитель.
Полученный остаток очищают хроматографией на колонках из силикагеля (элюент: раствор дихлорметана в метаноле (5:1)), что дает целевое соединение (2,5 г).
Пример 19. Синтез Вос-С1у-Рйе-Ьеи-С1уΟΒζ1.
Βο^Ο^-Ρ^^π-ΟΗ, полученный в примере 18, (2,4 г) и Ν-гидроксисукцинимид (656 мг) растворяют в Ν,Ν-диметилформамиде (50 мл), охлаждают до 4°С, добавляют Ν,Ν'дициклогексилкарбодиимид (1,17 г) и перемешивают смесь в течение 2 ч. К полученному раствору добавляют раствор тозилата И-С1уΟΒζ1 (1,9 г) и триэтиламина (0,79 мл) в Ν,Νдиметилформамиде (40 мл) и перемешиваемую смесь оставляют на 1 6 ч для взаимодействия при комнатной температуре. Реакционную смесь упаривают до сухого состояния при пониженном давлении и остаток очищают хроматографией на колонках из силикагеля (элюент: раствор дихлорметана в метаноле (50:1)), что дает целевое соединение (2,0 г).
’Η-ЯМР (ΌΜ8Ο-66) δ: 8.20-8.30 (т, 1Η),
8.12 (б, 1Η, 1= 8.3 Ηζ), 7.83 (б, 1Η, 1 = 8.3 Ηζ),
7.32-7.37 (т, 5Η), 6.89-6.95 (т, 1Η), 5.12 (8, 1Η), 4.52-4.59 (Ьг, 1Η), 4.34 (бб, 1Η, 1 = 7.3 Ηζ, 1 =
15.1 Ηζ), 3.93 (бб, 1Η, 1 = 5.5 Ηζ, 1 = 17.2 Ηζ),
3.84 (бб, 1Η, 1 = 5.5 Ηζ, 1 = 17.2 Ηζ), 3.54 (бб, 1Η, 1 = 5.9 Ηζ, 1 = 16.7 Ηζ), 3.42 (бб, 1 = 5.9 Ηζ, 1 = 16.7 Ηζ), 3.00 (бб, 1Η, 1 = 4.4 Ηζ, 13.7 Ηζ), 2.78 (бб, 1Η, 1 = 8.8 Ηζ, 1 = 13.2 Ηζ), 1.50-1.65 (т, 1Η) , 1.45 (1, 2Η, 1=7.3Ηζ), 1.36 (8, 9Η), 0.86 (б, 3Η, 1 = 6.4 Ηζ), 0.82 (б, 3Η, 1 = 6.4 Ηζ).
Пример 20. Синтез Вос-С1у-Рйе-Ьеи-С1уΟΗ.
Βο^6^-Ρ^^π-ΟΒζ1 (1,7 г), полученный в примере 19, растворяют в смешанном растворе этилацетата (30 мл) и метанола (30 мл), добавляют 5% Еб-С (1,5 г) и производят каталитическое восстановление. Реакционную смесь фильтруют и фильтрат упаривают до сухого состояния при пониженном давлении, что дает целевое соединение (1,15 г).
Пример 21. Синтез 3'-Ы-(Вос-С1у-Рйе-ЬеиΟ1γ)-ΝΗ-Α (Α-ΝΗ2ΌΧ-8955).
Вос-С1у-Рйе-Ьеи-С1у-ОН, полученный в примере 20, (200 мг) и Ν-гидроксисукцинимид (58 мг) растворяют в Ν,Ν-диметилформамиде (5 мл). Полученный раствор охлаждают при температуре 4°С, добавляют Ν,Ν-дициклогексилкарбодиимид (104 мг) и растворяют. Затем к этому раствору добавляют раствор метансульфоната ΌΧ-8951 (224 мг) и триэтиламина (0,059 мл) в Ν,Ν-диметилформамиде (5 мл) и перемешиваемую смесь оставляют на 16 ч для взаимодействия при комнатной температуре в защищенном от света месте. Реакционную смесь упаривают до сухого состояния при пониженном давлении и остаток очищают хроматографией на колонках из силикагеля (элюент: раствор дихлорметана в метаноле (10:1), содержащий 0,5% уксусной кислоты), что дает целевое соединение (200 мг).
’Н-ЯМР (ΌΜ8Ο-ά6) δ: 8.35 (ά, 1Н, 1 = 7.8 Ηζ), 8.08-8.18 (т, 2Н), 7.75-7.85 (т, 2Н) , 7.32 (8, 1Н), 7.10 (ά, 2Н, 1 = 6.8 Ηζ), 7.08-7.13 (т, 3Н), 6.85-6.95 (Ьг, 1Н), 6.40-6.65 (Ьг, 1Н), 5.52-5.55 (т, 1Н), 5.46 (ά, 1Н, 1 = 18.5 Ηζ), 5.37 (ά, 1Н, 1 =
18.5 Ηζ), 5.24 (8, 2Η), 4.44-4.52 (т, 1Η), 4.15-4.25 (т, 1Н), 3.68-3.72 (т, 2Н), 3.40-3.52 (т, 2Н),
3.15-3.25 (Ьг, 2Н), 2.85-2.95 (т, 1Н), 2.65-2.75 (т, 1Н) , 2.40 (8, 3Н), 2.05-2.25 (т, 1Н) , 1.80-
1.91 (т, 2Н) , 1.50-1.65 (т, 1Н) , 1.45 (1, 2Н, 1 =
7.3 Ηζ), 1.35 (8, 9Н), 0.88 (1, 3Н, 1 = 7,4 Ηζ), 0.86 (ά, 3Н, 1 = 6.4 Ηζ), 0.82 (ά, 3Η, 1 = 6.4 Ηζ).
Пример 22. Синтез соли трифторуксусной кислоты 3'-№(С1у-Рйе-Ьеи-С1у)-Ж-А (ΑΝΗ2=ΌΧ-8951).
Соединение 3 '-№(Вос-С1у-Рйе-Ьеи-С1у )ΝΗ-Α (Α-ΝΗ2=ΌΧ-8951) (97 мг), полученное в примере 21, растворяют в трифторуксусной кислоте (3 мл) и оставляют выстаиваться в течение одного часа. Растворитель выпаривают и остаток подвергают азеотропной перегонке дважды с метанолом (30 мл) и дважды с этанолом (30 мл), а затем промывают простым эфиром с получением целевого соединения (95 мг).
!Н-ЯМР (ΌΜ8Ο-ά6) δ: 8.57 (ά, 1Н, 1 = 8.3 Ηζ), 8.47 (ά, 1Η, 1 = 8.3 Ηζ), 8.32 (ά, 1Η, 1 = 7.8 Ηζ), 8.17 (1, 1Η, 1 = 5.5 Ηζ), 7.81-7.91 (Ьг, 3Η),
7.79 (ά, 1Η, 1 = 10.7 Ηζ), 7.32 (8, 1Η), 7.21-7.23 (т, 5Η), 7.12-7.17 (т, 1Η), 6.45-6.55 (Ьг, 1Η) ,
5.57 (ц, 1Η, 1 = 4.4 Ηζ), 5.43 (ά, 1Η, 1 = 16.1 Ηζ),
5.34 (ά, 1Η, 1 = 16.1 Ηζ), 5.23 (8, 2Η), 4.67 (ά1, 1Η, 1 = 4.0 Ηζ, 1 = 9.0 Ηζ), 4.31 (άά, 1Η, 1 - 8.5 Ηζ, 1 = 15.0 Ηζ), 4.0-4.4 (Ьг, 1Η), 3.74-3.76 (т, 2Η), 3.56 (άά, 1Η, 1 = 6.0 Ηζ, 1 = 16.0 Ηζ), 3.41 (άά, 1Η, 1 = 6.0 Ηζ, 1 = 16.0 Ηζ), 3.17-3.19 (Ьг, 2Η), 3.02 (άά, 1Η, 1 = 4.0 Ηζ, 1 = 14.0 Ηζ), 2.70 (άά, 1Η, 1 = 10.0 Ηζ, 1 = 14.0 Ηζ), 2.40 (8, 3Η) , 2.05-2.15 (т, 1Η) ,
1.85 (ά1, 2Η, 1 = 7.0 Ηζ, 1 = 14.0 Ηζ), 1.50-1.55 (т,
1Η), 1.45 (1, 2Η, 1 = 6.0 Ηζ), 1.35 (8, 9Η), 0.88 (1, 3Η, 1 = 7.4 Ηζ), 0.85 (ά, 3Η, 1 = 6.4 Ηζ), 0.80 (ά, 3Η, 1 = 6.4 Ηζ).
Пример 23. Синтез карбоксиметилдекстранового полиспирта-С1у-Рйе-^еи-С1у-NΗ-Α' (ΑΝΗ2=ΌΧ-8951).
Триэтиламмониевую соль карбоксиметилдекстранового полиспирта, полученную в примере 13, (690 мг) растворяют в Ν,Ν-диметилформамиде (50 мл). К полученному раствору последовательно добавляют раствор соли трифторуксусной кислоты 3'-Н-(С1у-Рйе-Ьеи-С1у)ΝΗ-Α (Α-ΝΗ2=ΌΧ-8951) (95 мг), полученной в примере 22, в Ν,Ν-диметилформамиде (10 мл), триэтиламин (0,03 мл) и 1-этоксикарбонил-2этокси-1,2-дигидроксихинолин (690 мг) и перемешиваемую смесь оставляют на ночь для взаимодействия при комнатной температуре. Порции реакционной смеси (5 мл) по каплям добавляют к 1 0 мл порциям этанола. К полученной смеси добавляют 3М водный раствор хлорида натрия (2,5 мл) и диэтиловый эфир (20 мл) и выпавший осадок собирают центрифугированием. Осадок растворяют в 0,5М водном растворе хлорида натрия, доводят до рН 9 с помощью 0,1М водного раствора гидроксида натрия и диализируют против очищенной воды через мембрану для диализа (8рес1гароге 1, предельная молекулярная масса 6000-8000). Раствор внутреннего диализата фильтруют через микропористый фильтр (0,22 мкм) и фильтрат лиофилизируют с получением целевого соединения (600 мг). Содержание остатка лекарственного соединения в целевом соединении составляет 4,8% (в весовом отношении) по методу определения на основе поглощения при длине волны 362 нм в 0,1М растворе трис-буфера (рН 9,0).
Пример 24. Синтез триэтиламмониевой соли карбоксиметилдекстранового полиспирта.
Декстран Т500 (50 г, Рйаипас1а, молекулярная масса 500000) растворяют в 0,1М растворе ацетатного буфера (рН 5,5, 5000 мл) и добавляют водный раствор (5000 мл) перйодата натрия (165,0 г). Смесь перемешивают при температуре 4°С в течение десяти дней в защищенном от света месте, добавляют этиленгликоль (35,0 мл) и продолжают перемешивать в течение ночи. Реакционную смесь доводят до рН 7,5 с помощью 8 М водного раствора гидроксида натрия. Затем добавляют боргидрид натрия (70 г), растворяют его и перемешивают смесь в течение ночи. Реакционную смесь охлаждают льдом, доводят до рН 5,5 уксусной кислотой, перемешивают при температуре 4°С в течение одного часа и доводят до рН 7,5 с помощью 8 М водного раствора гидроксида натрия. Полученный раствор фильтруют через мембранный ультрафильтр Вютах-50, удаляя таким образом низкомолекулярную фракцию. Полимерную фракцию лиофилизируют с получением декстранового полиспирта (27,1 г). Молекулярная масса этого вещества равна 140000 (гельфильтрация, пуллулановый эталон).
Декстрановый полиспирт (5 г) добавляют к раствору гидроксида натрия (21 г) в воде(150 мл) и растворяют при комнатной температуре. К охлаждаемому льдом раствору добавляют монохлоруксусную кислоту (30 г), растворяют ее и оставляют смесь на ночь для взаимодействия при комнатной температуре. Реакционную смесь доводят до рН 8 уксусной кислотой и обессоливают, фильтруя через мембранный ультрафильтр Вютах-50. Раствор, не прошедший через фильтр, лиофилизируют с получением натриевой соли карбоксиметилдекстранового полиспирта (5,6 г). Молекулярная масса этого вещества равна 263000 (гель-фильтрация, пуллулановый эталон) и степень карбоксиметилирования составляет 0,4.
Натриевую соль карбоксиметилдекстранового полиспирта (2,0 г) растворяют в воде, вводят в колонку Βίο-Раб АС 50\У-Х2 (200-400 меш, Н+ форма) (диаметр 44 мм, длина 210 мм) и элюируют водой. К вытекающей жидкости добавляют триэтиламин (4 мл) и лиофилизируют с получением целевого соединения (2,2 г).
Пример 25. Синтез триметиламмониевой соли карбоксиметилдекстранового полиспирта.
Натриевую соль карбоксиметилдекстранового полиспирта (1,0 г), полученную в примере 24, растворяют в воде, вводят в колонку Βίο-Раб АС 50\\'-Х2 (200-400 меш, Н+ форма Ме3К) и элюируют водой. Вытекающую жидкость лиофилизируют с получением целевого соединения (950 мг).
Пример 26. Синтез гидрохлорида 3'-Ν(С1у-С1у-РЬе-С1у)-ИН-А (А-ΧΙΡ 1ХХ-8951).
В соответствии со способом, описанным в примере 14, соль трифторуксусной кислоты 3'Х-(С1у-С1у-РНе-С1у)-ХН-А. полученную из 3'-Ν(Вос-С1у-С1у-РНе-С1у)-ΝΗ-Α (Α-ΝΗ2=ΌΧ-8951), (400 мг) растворяют в смеси воды и метанола (1:4), вводят в колонку Βίο-Раб АС 1-Х8 (200400 меш, С1-1 форма) (1,5 см х 8,6 см) и элюируют вышеуказанным растворителем. Вытекающую жидкость концентрируют и лиофилизируют с получением целевого соединения (310 мг).
!Н-ЯМР (ΌΜδΟ-бД δ: 8.53 (б, 1Н, I = 8.5 Ηζ), 8.46-8.48 (т, 1Н), 8.37-8.39 (т, 1Н), 7.95 (б, 1Н, I = 8.0 Ηζ), 7.80 (8, 3Н), 7.78 (б, 1Н, I = 11.1 Ηζ), 7.34 (8, 1Н), 7.14-7.24 (т, 5Н), 6.50(8, 1Н),
5.56-5.60 (т, 1Н), 5.35-5.40 (т, 2Н), 5.24 (8, 2Н),
4.51-4.56 (т, 1Н), 3.86 (бб, I = 4.8, 13.5 Ηζ, 1Н),
3.68-3.79 (т, 3Н), 3.54 (8, 2Н), 3.15-3.22 (т, 2Н), 3.01 (бб, I = 5.6, 13.5 Ηζ, 1Н), 2.78 (бб, I = 9.6, 3.5Ηζ, 1Н), 2.41 (8, 3Н), 2.12-2.23 (т, 2Н) , 1.81-
1.89 (т, 2Н), 0.88 (ΐ, 3Н, 1 = 7.2 Ηζ).
Ма88 (РАВ); т/е 753 (М+1).
Пример 27. Синтез карбоксиметилдекстранового полиспирта-С1у-С1у-РЬе-С1у-ИН-А' (АΝΗ2=ΌΧ-8951).
Триметиламмониевую соль карбоксиметилдекстранового полиспирта, полученную в примере 25, (0,1 г) растворяют в Ν,Νдиметилформамиде (6 мл). К полученному раствору последовательно добавляют раствор гидрохлорида 3'-Ы-(С1у-С1у-РЬе-С1у)-ХН-А (АΝΗ2=ΌΧ-8951) (24 мг), полученного в примере 26, в Ν,Ν-диметилформамиде (10 мл), триэтиламин (5 мкл) и 1 -этокси-карбонил-2-этокси1,2-дигидроксихинолин (0,1 г) и оставляют перемешиваемую смесь на ночь для взаимодействия при комнатной температуре. Порции реакционной смеси (5 мл) по каплям добавляют к 1 0 мл порциям этанола. К полученной смеси добавляют 3 М водный раствор хлорида натрия (2,5 мл) и диэтиловый эфир (20 мл) и выпавший осадок собирают центрифугированием (3500 об/мин, 8 минут). Осадок растворяют в 0,5 М водном растворе хлорида натрия и, охлаждая льдом, доводят до рН 9 с помощью 0,1М водного раствора гидроксида натрия. Полученный водный раствор обессоливают, фильтруя через мембранный ультрафильтр Вютах-30. Раствор, не прошедший через мембранный фильтр, фильтруют через микропористый фильтр (0,22 мкм) и лиофилизируют с получением целевого соединения (90 мг). Содержание остатка лекарственного соединения в целевом соединении составляет 11% (в весовом отношении) по методу определения на основе поглощения при длине волны 362 нм в 0,1 М растворе трис-буфера (рН 9,0).
Пример 28. Синтез карбоксиметилдекстранового полиспирта-С1у-С1у-РЬе-С1у-ИН-А' (АΝΗ2=ΌΧ-8951).
Триметиламмониевую соль карбоксиметилдекстранового полиспирта, полученную в примере 25, (0,1 г) растворяют в Ν,Ν-диметилформамиде (6 мл). К полученному раствору последовательно добавляют раствор гидрохлорида 3'-Ы-(С1у-С1у-РРе-С1у)-МН-А (А-ΧΙΡ 1ХХ-8951) (36 мг), полученного в примере 26, в Ν,Νдиметилформамиде (10 мл), триэтиламин (8 мкл) и 1-этоксикарбонил-2-этокси-1,2-дигидроксихинолин (0,1 г) и оставляют перемешиваемую смесь на ночь для взаимодействия при комнатной температуре. Порции реакционной смеси (5 мл) по каплям добавляют к 1 0 мл порциям этанола. К полученной смеси добавляют 3М водный раствор хлорида натрия (2,5 мл) и диэтиловый эфир (20 мл) и выпавший осадок собирают центрифугированием (3500 об/мин, 8 мин). Осадок растворяют в 0,5М водном растворе хлорида натрия и, охлаждая льдом, доводят до рН 12 с помощью 0,1М водного раствора гидроксида натрия. Полученный водный раствор обессоливают, фильтруя через мембранный ультрафильтр Вютах-30. Раствор, не прошедший через мембранный фильтр, фильтруют через микропористый фильтр (0,22 мкм) и лиофилизируют с получением целевого соединения (80 мг). Полученное соединение растворяют в
0,1М водном растворе хлорида натрия и анализируют. Результаты гель-проникающей хроматографии (колонка: гель Т8К Р^-4000ХЬ, То8оН. растворитель: 0,1 М раствор ЫаС1, скорость потока: 0,8 мл/мин) и ультрафиолетовый спектр поглощения (0,1М раствор трис-буфера, рН 9,0, 36 мкг/мл) приведены соответственно на фиг. 8 и 9. Содержание остатка лекарственного соединения в целевом соединении составляет 15% (в весовом отношении) по методу определения на основе поглощения при длине волны 362 нм в 0,1М растворе трис-буфера (рН 9,0).
Пример 29. Синтез карбоксиметилдекстранового полиспирта-О1у-О1у-О1у-Рйе-ПН-А' (АΝΗ2=ΌΧ-8951).
Декстран Т250 (20 г, ΕΧΤΚΑ8ΥΝΤΗΕ8Ε, средняя молекулярная масса 250000) растворяют в 0,1М растворе буфера с уксусной кислотой (рН 5,5, 2000 мл) и добавляют водный раствор (2000 мл) перйодата натрия (66,0 г). Смесь перемешивают при температуре 4°С в течение десяти дней в защищенном от света месте, добавляют этиленгликоль (14,0 мл) и продолжают перемешивать в течение ночи. Охлаждаемую льдом реакционную смесь доводят до рН 7,5 с помощью 8М водного раствора гидроксида натрия. Затем добавляют боргидрид натрия (28 г), растворяют его и перемешивают смесь в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь охлаждают льдом, доводят до рН
5,5 уксусной кислотой, перемешивают при температуре 4°С в течение одного часа и, охлаждая льдом, доводят до рН 7,5 с помощью 8 М водного раствора гидроксида натрия. Полученный водный раствор фильтруют через мембранный ультрафильтр В1отах-30, удаляя таким образом низкомолекулярную фракцию, что дает задержанный раствор 1 , не прошедший через фильтр. Отдельно декстран Т250 (50 г, ΕΧΤΚΑ8ΥΝΤΗΕ8Ε, средняя молекулярная масса 250000) растворяют в 0,1М растворе ацетатного буфера (рН 5,5, 5000 мл) и добавляют водный раствор (5000 мл) перйодата натрия (165 г) . Смесь перемешивают при температуре 4°С в течение десяти дней в защищенном от света месте, добавляют этиленгликоль (35,0 мл) и продолжают перемешивать в течение ночи. Охлаждаемую льдом реакционную смесь доводят до рН 7,5 с помощью 8М водного раствора гидроксида натрия. Затем добавляют боргидрид натрия (70 г), растворяют его и перемешивают смесь в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь охлаждают льдом, доводят до рН
5,5 уксусной кислотой, перемешивают при температуре 4°С в течение одного часа и, охлаждая льдом, доводят до рН 7,5 с помощью 8 М водного раствора гидроксида натрия. Водный раствор фильтруют через мембранный ультрафильтр В1отах-30, удаляя таким образом низкомолекулярную фракцию, что дает задержанный раствор 2, не прошедший через фильтр. Задержанные растворы 1 и 2 объединяют, фильтруют через мембранный ультрафильтр Вютах-30, удаляя таким образом низкомолекулярную фракцию из фракции, не прошедшей через мембранный фильтр Вютах-50, и лиофилизируют с получением декстранового полиспирта (25,7 г). Молекулярная масса этого вещества равна 47000 (гель-фильтрация, пуллулановый эталон).
Декстрановый полиспирт (5 г) добавляют к раствору гидроксида натрия (35 г), в воде (150 мл) и растворяют при комнатной температуре. К охлаждаемому льдом раствору добавляют монохлоруксусную кислоту (50 г), растворяют ее и оставляют смесь на 1 8 ч для взаимодействия при комнатной температуре. Реакционную смесь доводят до рН 8 уксусной кислотой и обессоливают, фильтруя через мембранный ультрафильтр Вютах-50. Раствор, не прошедший через фильтр, лиофилизируют с получением натриевой соли карбоксиметилдекстранового полиспирта (7,2 г). Молекулярная масса этого вещества равна 1 27000 (гель-фильтрация, пуллулановый эталон) и степень карбоксиметилирования составляет 0,8. Натриевую соль карбоксиметилдекстранового полиспирта (2,2 г) растворяют в воде, вводят в колонку Вю-Вай АО 50\У-Х2 (200-400 меш, Н+ форма) (диаметр 44 мм, длина 210 мм) и элюируют водой. К вытекающей жидкости добавляют триэтиламин (4 мл) и лиофилизируют с получением триэтиламмониевой соли карбоксиметилдекстранового полиспирта (2,69 г).
Триэтиламмониевую соль карбоксиметилдекстранового полиспирта (2,67 г) растворяют в Ν,Ν-диметилформамиде (200 мл). К этому раствору последовательно добавляют раствор соли трифторуксусной кислоты 3'-Ы-(О1у-О1у-О1уРЬе)-ПН-А полученной аналогично примеру 16 путем удаления группы Вос из 3'-Ы-(Вос-О1уО1у-О1у-РНе)-НН-А (Α-ΝΗ2=ΌΧ-8951) (350 мг) по примеру 2, и триэтиламина (0,116 мл) в Ν,Νдиметилформамиде (10 мл) и раствор 1-этоксикарбонил-2-этокси-1,2-дигидроксихинолина (2,67 г) в Ν,Ν-диметилформамиде (10 мл), после чего перемешиваемую смесь оставляют на ночь для взаимодействия при комнатной температуре. К реакционной смеси добавляют 3М водный раствор хлорида натрия (100 мл), затем 8 мл порции смеси по каплям добавляют к 30 мл порциям этанола. К каждой смеси добавляют 3М водный раствор хлорида натрия (1 мл) и диэтиловый эфир (5 мл) и выпавший осадок собирают центрифугированием (3500 об/мин, 8 мин). Осадок промывают ацетоном, растворяют в воде, добавляют 3М водный раствор хлорида натрия (10 мл), доводят до рН 9 с помощью 0,1М водного раствора гидроксида натрия и выдерживают при температуре 37°С в течение 1 ч. Обработанный раствор обессоливают, фильтруя через мембранный ультрафильтр Вютах-10. Раствор, не прошедший через мембранный фильтр, фильтруют через М1Шроте микропористый фильтр (0,22 мкм) и лиофилизируют с по лучением целевого соединения (2,30 г). Полученное соединение растворяют в 0,1М водном растворе хлорида натрия и анализируют. Результаты гель-проникающей хроматографии (колонка: гель Τ8Κ Р^-4000ХЬ, Тоюк растворитель: 0,1М раствор №С1, скорость потока: 0,8 мл/мин) и ультрафиолетовый спектр поглощения (0,1 М раствор трис-буфера, рН 9,0, 0,20 мг/мл) приведены соответственно на фиг. 1 0 и 11. Содержание остатка лекарственного соединения в целевом соединении составляет 5,8% (в весовом отношении) по методу определения на основе поглощения при длине волны 362 нм в 0,1М растворе трис-буфера (рН 9,0).
Пример 30. Синтез триэтиламмониевой соли карбоксиметилдекстранового полиспирта.
К раствору (2000 мл) декстрана Т10 (20 г, РНагтааа, средняя молекулярная масса 10000) в 0,1М растворе буфера с уксусной кислотой (рН 5,5) добавляют водный раствор (2000 мл) перйодата натрия (66,0 г). Смесь перемешивают при температуре 4°С в течение десяти дней в защищенном от света месте, добавляют этиленгликоль (14,0 мл) и продолжают перемешивать в течение ночи. Охлаждаемую льдом реакционную смесь доводят до рН 7,5, добавляя 8М водный раствор гидроксида натрия. Затем добавляют боргидрид натрия (28 г), растворяют его и перемешивают смесь в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь охлаждают льдом, доводят до рН 5,5 уксусной кислотой, перемешивают при температуре 4°С в течение одного часа и, охлаждая льдом, доводят до рН 7,5 с помощью 8М водного раствора гидроксида натрия. Полученный водный раствор фильтруют через мембранный ультрафильтр Вютах-5 (миллипоровый), удаляя таким образом низкомолекулярную фракцию, и раствор, не прошедший через указанный мембранный фильтр, фильтруют через мембранный фильтр Вютах-30. Фильтрат лиофилизируют с получением декстранового полиспирта (8,0 г). Молекулярная масса этого вещества равна 13000 (гель-фильтрация, пуллулановый эталон).
Декстрановый полиспирт (3,7 г) добавляют к раствору гидроксида натрия (25,9 г) в воде (111 мл) и растворяют при комнатной температуре. К охлаждаемому льдом раствору добавляют монохлоруксусную кислоту (37 г), растворяют ее и оставляют смесь на 20 ч для взаимодействия при комнатной температуре. Реакционную смесь доводят до рН 8 уксусной кислотой и обессоливают, фильтруя через мембранный ультрафильтр Вютах-5. Раствор, не прошедший через фильтр, лиофилизируют с получением натриевой соли карбоксиметилдекстранового полиспирта (6,2 г). Молекулярная масса этого вещества равна 37000 (гель-фильтрация, пуллулановый эталон, и степень карбоксиметилирования составляет 0,9.
Натриевую соль карбоксиметилдекстранового полиспирта (6,0 г) растворяют в воде, вво дят в колонку Вю-Ваб Α6 50\У-Х2 (200-400 меш, Н+ форма) и элюируют водой. К вытекающей жидкости добавляют триэтиламин (9,3 мл) и лиофилизируют с получением целевого соединения (7,2 г).
Пример 31. Синтез триэтиламмониевой соли карбоксиметилдекстранового полиспирта.
Декстрановый полиспирт (3,9 г), полученный в примере 30, добавляют к раствору гидроксида натрия (16,3 г) в воде (117 мл) и растворяют при комнатной температуре. К охлаждаемому льдом раствору добавляют монохлоруксусную кислоту (23,4 г), растворяют ее и оставляют смесь на 1 8 ч для взаимодействия при комнатной температуре. Реакционную смесь доводят до рН 8 уксусной кислотой и обессоливают, фильтруя через мембранный ультрафильтр Вютах-5. Раствор, не прошедший через фильтр, лиофилизируют с получением натриевой соли карбоксиметилдекстранового полиспирта (5,0 г). Молекулярная масса этого вещества равна 28000 (гель-фильтрация, пуллулановый эталон) и степень карбоксиметилирования составляет 0,5. Натриевую соль карбоксиметилдекстранового полиспирта (4,8 мг) превращают в соль триэтиламмония аналогично способу, описанному в примере 30, что дает целевое соединение (5,6 г).
Пример 32. Синтез триэтиламмониевой соли карбоксиметилдекстранового полиспирта.
Водный раствор (2000 мл) перйодата натрия (66,0 г) добавляют к раствору (2000 мл) декстрана 4 (20 г, РииакокЫ, средняя молекулярная масса 4000-6000) в 0,1 М водном растворе буфера с уксусной кислотой (рН 5,5). Смесь перемешивают при температуре 4°С в течение десяти дней в защищенном от света месте, добавляют этиленгликоль (14,0 мл) и продолжают перемешивать в течение ночи. Охлаждаемую льдом реакционную смесь доводят до рН 7,5 с помощью 8М водного раствора гидроксида натрия. Затем добавляют боргидрид натрия (28 г), растворяют его и перемешивают смесь при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь охлаждают льдом, доводят до рН
5,5 уксусной кислотой, перемешивают при температуре 4°С в течение одного часа и, охлаждая льдом, доводят до рН 7,5 с помощью 8М водного раствора гидроксида натрия. Полученный водный раствор фильтруют через мембранный ультрафильтр Вютах-3 (миллипоровый), удаляя таким образом низкомолекулярную фракцию. Фильтрат лиофилизируют с получением декстранового полиспирта (6,0 г). Молекулярная масса этого вещества равна 9000 (гель-фильтрация, пуллулановый эталон). Декстрановый полиспирт (2,7 г) добавляют к раствору гидроксида натрия (18,9г) в воде (81 мл) и растворяют при комнатной температуре. К охлаждаемому льдом раствору добавляют монохлоруксусную кислоту (27 г), растворяют ее и оставляют смесь на 20 часов для взаимодействия при комнатной тем пературе. Реакционную смесь доводят до рН 8 уксусной кислотой и обессоливают, фильтруя через мембранный ультрафильтр В1отах-5. Раствор, не прошедший через фильтр, лиофилизируют с получением натриевой соли карбоксиметилдекстранового полиспирта (4,2 г). Молекулярная масса этого вещества равна 20000 (гельфильтрация, пуллулановый эталон, и степень карбоксиметилирования составляет 0,9.
Натриевую соль карбоксиметилдекстранового полиспирта (4,0 г) превращают в соль триэтиламмония аналогично способу, описанному в примере 30, что дает целевое соединение (4,8 г).
Пример 33. Синтез триэтиламмониевой соли карбоксиметилдекстранового полиспирта.
Декстрановый полиспирт (2,7 г), полученный в примере 32, добавляют к раствору гидроксида натрия (11,3 г) в воде (81 мл) и растворяют при комнатной температуре. К охлаждаемому льдом раствору добавляют монохлоруксусную кислоту (16,2 г), растворяют ее и оставляют смесь на 1 8 ч для взаимодействия при комнатной температуре. Реакционную смесь доводят до рН 8 уксусной кислотой и обессоливают, фильтруя через мембранный ультрафильтр Βίοтах-5. Раствор, не прошедший через фильтр, лиофилизируют с получением натриевой соли карбоксиметилдекстранового полиспирта (2,7 г). Молекулярная масса этого вещества равна 1 6000 (гель-фильтрация, пуллулановый эталон) и степень карбоксиметилирования составляет 0,5. Натриевую соль карбоксиметилдекстранового полиспирта (2,7 г) превращают в соль триэтиламмония аналогично способу, описанному в примере 30, что дает целевое соединение (3,1 г).
Пример 34. Синтез карбоксиметилдекстранового полиспирта-С1у-С1у-Р11с-С1у^Н-А' (АΝΗ2=ΌΧ-8951).
Триэтиламмониевую соль карбоксиметилдекстранового полиспирта, полученную в примере 30, (1,5 г) растворяют в Ν,Ν-диметилформамиде (90 мл). К полученному раствору последовательно добавляют раствор триэтиламина (0,07 мл) и соль трифторуксусной кислоты 3'-Ν(61у-61у-РЬе-61у)^-А (Α-ΝΗ2=ΌΧ-8951) (210 мг) в Ν,Ν-диметилформамиде (40 мл) и 1этоксикарбонил-2-этокси-1,2-гидироксихинолин (1,5 г), после чего перемешиваемую смесь оставляют на ночь для взаимодействия при комнатной температуре. Порции реакционной смеси (5 мл) по каплям добавляют к 1 0 мл порциям этанола. К каждой смеси добавляют 3 М водный раствор хлорида натрия (2,5 мл) и диэтиловый эфир (20 мл) и выпавший осадок собирают центрифугированием (3500 об/мин, 8 мин). Осадок растворяют в 0,5М водном растворе хлорида натрия и, охлаждая льдом, доводят до рН 9 с помощью 0,1М водного раствора гидроксида натрия. Полученный водный раствор обессоливают, фильтруя через мембранный ультрафильтр В1отах-3. Раствор, не прошедший через мембранный фильтр, фильтруют через милли поровый фильтр (0,22 мкм) и лиофилизируют с получением целевого соединения (1,3 г). Полученное соединение растворяют в 0,1М водном растворе хлорида натрия и анализируют. Результаты гель-проникающей хроматографии (колонка: гель Т8К Ρ\ν-4000ΧΓ. Τοδοίι. растворитель: 0,1М раствор №С1, скорость потока: 0,8 мл/мин) и ультрафиолетовый спектр поглощения (0,1М раствор трис-буфера, рН 9,0, 65 мкг/мл) приведены соответственно на фиг. 1 2 и фиг. 13. Содержание остатка лекарственного соединения в целевом соединении составляет 6,4% (в весовом отношении) по методу определения на основе поглощения при длине волны 362 нм в 0,1 М растворе трис-буфера (рН 9,0).
Пример 35. Синтез карбоксиметилдекстранового полиспирта-С1у-С1у-Р11е-С1у-НН-А' (АΝΗ2=ΌΧ-8951).
Триэтиламмониевую соль карбоксиметилдекстранового полиспирта, полученную в примере 31, (1,2 г) растворяют в Ν,Ν-диметилформамиде (90 мл). К полученному раствору последовательно добавляют раствор триэтиламина (0,056 мл) и соли трифторуксусной кислоты 3'К-(О1у-О1у-РЬе-О1у)-ЦН-А (Λ-ΝΗ2==ΌΧ-8951) (168 мг) в Ν,Ν-диметилформамиде (30 мл) и 1этоксикарбонил-2-этокси-1,2-дигидроксихинолин (1,2 г), после чего перемешиваемую смесь оставляют на ночь для взаимодействия при комнатной температуре. Порции реакционной смеси (5 мл) по каплям добавляют к 1 0 мл порциям этанола. К каждой смеси добавляют 3М водный раствор хлорида натрия (2,5 мл) и диэтиловый эфир (20 мл) и выпавший осадок собирают центрифугированием (3500 об/мин, 8 мин). Осадок растворяют в 0,5М водном растворе хлорида натрия и, охлаждая льдом, доводят до рН 9 с помощью 0,1М водного раствора гидроксида натрия. Полученный водный раствор обессоливают, фильтруя через мембранный ультрафильтр Вюшах-3. Раствор, не прошедший через мембранный фильтр, фильтруют через миллипоровый фильтр (0,22 мкм) и лиофилизируют с получением целевого соединения (1,0 г). Содержание остатка лекарственного соединения в целевом соединении составляет 4,8% (в весовом отношении) по методу определения на основе поглощения при длине волны 362 нм в 0,1 М растворе трис-буфера (рН 9,0).
Пример 36. Синтез карбоксиметилдекстранового полиспирта-Ο1у-Ο1у-Ρйе-Ο1у-NΗ-Α' (АΝΗ2=ΌΧ-8951).
Триэтиламмониевую соль карбоксиметилдекстранового полиспирта, полученную в примере 32, (1,2 г) растворяют в Ν,Ν-диметилформамиде (90 мл). К полученному раствору последовательно добавляют раствор триэтиламина (0,056 мл) и соли трифторуксусной кислоты 3^-(615(-015^^-0159-^^ (А-ΧΙΡ 1).\8951) (168 мг) в Ν,Ν-диметилформамиде (30 мл) и 1-этоксикарбонил-2-этокси-1,2-дигидроксихинолин (1,2 г), после чего перемешиваемую смесь оставляют на ночь для взаимодействия при комнатной температуре. Порции реакционной смеси (5 мл) по каплям добавляют к 1 0 мл порциям этанола. К каждой смеси добавляют 3М водный раствор хлорида натрия (2,5 мл) и диэтиловый эфир (20 мл) и выпавший осадок собирают центрифугированием (3500 об/мин, 8 мин). Осадок растворяют в 0,5М водном растворе хлорида натрия и, охлаждая льдом, доводят до рН 9 с помощью 0,1М водного раствора гидроксида натрия. Полученный водный раствор обессоливают, фильтруя через мембранный ультрафильтр В1отах-3. Раствор, не прошедший через мембранный фильтр, фильтруют через миллипоровый фильтр (0,22 мкм) и лиофилизируют с получением целевого соединения (1,0 г). Содержание остатка лекарственного соединения в целевом соединении составляет 5,9% (в весовом отношении) по методу определения на основе поглощения при длине волны 362 нм в 0,1 М растворе трис-буфера (рН 9,0).
Пример 37. Синтез карбоксиметилдекстранового полиспирта-С1у-С1у-Р11с-С1у^Н-А' (АΝΗ2=ΌΧ-8951).
Триэтиламмониевую соль карбоксиметилдекстранового полиспирта, полученную в примере 33, (1,5 г) растворяют в Ν,Ν-диметилформамиде (90 мл). К полученному раствору последовательно добавляют раствор триэтиламина (0,07 мл) и соли трифторуксусной кислоты 3'-Ν(61у-61у-РЬе-61у)-МН-А (Α-ΝΗ2=ΌΧ-8951) (210 мг) в Ν,Ν-диметилформамиде (40 мл) и 1этоксикарбонил-2-этокси-1,2-дигидроксихинолин (1,5 г), после чего перемешиваемую смесь оставляют на ночь для взаимодействия при комнатной температуре. Порции реакционной смеси (5 мл) по каплям добавляют к 1 0 мл порциям этанола. К каждой смеси добавляют 3М водный раствор хлорида натрия (2,5 мл) и диэтиловый эфир (20 мл) и выпавший осадок собирают центрифугированием (3500 об/мин, 8 мин). Осадок растворяют в 0,5М водном растворе хлорида натрия и, охлаждая льдом, доводят до рН 9 с помощью 0,1М водного раствора гидроксида натрия. Полученный водный раствор обессоливают, фильтруя через мембранный ультрафильтр В1отах-3. Раствор, не прошедший через мембранный фильтр, фильтруют через миллипоровый фильтр (0,22 мкм) и лиофилизируют с получением целевого соединения (1,3 г). Содержание остатка лекарственного соединения в целевом соединении составляет 4,6% (в весовом отношении) по методу определения на основе поглощения при длине волны 362 нм в 0,1М растворе трис-буфера (рН 9,0).
Пример 38. Синтез Вос-С1у-С1у-РНе-С1уΝΗ-А (Α-ΝΗ2=Όν-8286).
Вос-С1у-С1у-РНе-С1у (42 мг) и Ν-гидроксисукцинимид (12 мг) растворяют в Ν,Νдиметилформамиде (2 мл), охлаждают до 4°С и добавляют Ν,Ν'-дициклогексилкарбодиимид (22 мг). К полученному раствору добавляют раствор (6 мл) гидрохлорида соединения формулы
[(1 8,9к)- 1 -амино-5-хлор-9-этил-2,3дигидро-9-гидрокси-1Н,12Η-бензо[де]пирано [3',4':6,7]индолизино[1,2-Ь]хинолин-10,13(9Н, 15Н)-дион: Όν-8286] (50 мг) и триэтиламина (0,01 мл) в Ν,Ν-диметилформамиде, после чего перемешиваемую смесь оставляют на 1 6 ч для взаимодействия при комнатной температуре в защищенном от света месте. Реакционную смесь упаривают до сухого состояния при пониженном давлении и остаток очищают хроматогра-фией на колонках из силикагеля (элюент: раствор дихлорметана в метаноле (10:1), содержащий 0,5% уксусной кислоты), что дает целевое соединение (27 мг).
Ή-ЯМР (СОС13) δ: 8.10-8.20 (Ьг, 1Η), 7.958.05 (Ьг, 1Η), 7.70-7.80 (Ьг, 2Η), 7.50-7.60 (Ьг, 1Η), 7.40-7.50 (Ьг, 1Η), 7.10-7.25 (т, 5Η), 7.05-
7.15 (Ьг, 1Η), 5.85-5.95 (Ьг, 1Η), 5.50-5.60 (Ьг, 1Η), 5.40-5.50 (т, 1Η), 5.25-5.35 (т, 1Η), 5.05-
5.15 (т, 1Η), 4.90-5.00 (т, 1Η), 4.70-4.80 (Ьг, 1Η), 4.10-4.25 (Ьг, 2Η), 3.60-3.90 (т, 4Η), 3.10-
3.40 (т, 3Η), 2.95-3.05 (Ьг, 1Η), 2.15-2.30 (Ьг, 1Η), 1.75-1.90 (Ьг, 2Η), 1.39 (8, 9Η), 0.80-1.00 (т, 3Η).
Пример 39. Синтез карбоксиметилдекстранового полиспирτа-61у-61у-РЬе-61у-NΗ-Α' (АΝΗ2=Όν-8286).
Триэтиламмониевую соль карбоксиметилдекстранового полиспирта (175 мг), полученную в примере 24, растворяют в Ν,Ν-диметилформамиде (20 мл). К полученному раствору последовательно добавляют раствор соли трифторуксусной кислоты 3'-Н-(С1у-С1у-РНе-С1у)ΝΗ-А (Α-ΝΗ2=Όν-8286) (29 мг), полученной из 3'-Л-(Вос-61у-61у-РЬе-61у·)-ΝΗ-Α (27 мг) по примеру 38 путем удаления группы Вос аналогично примеру 4, и триэтиламина (9 мкл) в Ν,Νдиметилформамиде (5 мл) и 1 -этоксикарбонил2-этокси-1,2-дигидроксихинолин (175 мг), после чего перемешиваемую смесь оставляют для взаимодействия при комнатной температуре. Порции реакционной смеси (5 мл) по каплям добавляют к 1 0 мл порциям этанола. К полученной смеси добавляют 3М водный раствор хлорида натрия (2,5 мл) и диэтиловый эфир (20 мл) и выпавший осадок собирают центрифугированием (3500 об/мин, 8 мин). Осадок растворяют в 0,5М водном растворе хлорида натрия и, охлаждая льдом, доводят до рН 9 с помощью 0,1 М водного раствора гидроксида натрия. Полученный водный раствор обессоливают, фильтруя через мембранный ультрафильтр Вютах-30. Раствор, не прошедший через мембранный фильтр, фильтруют через миллипоровый фильтр (0,22 мкм) и лиофилизируют с получением целевого соединения (135 мг). Полученное соединение растворяют в 0,1М водном растворе хлорида натрия и анализируют. Результаты гельпроникающей хроматографии (колонка: гель Т8К Ρν-4000ΧΕ, То8ой, растворитель: 0,1М раствор №1С1, скорость потока: 0,8 мл/мин) и ультрафиолетовый спектр поглощения (0,1М раствор трис-буфера, рН 9,0, 99 мкг/мл) приведены соответственно на фиг. 14 и 15. Содержание остатка лекарственного соединения в целевом соединении составляет 6,1% (в весовом отношении) по методу определения на основе поглощения при длине волны 362 нм в 0,1М растворе трис-буфера (рН 9,0).
Пример 40. Синтез 3'-Ы-(Вос-61у-61у-Рйе61у)-ИН-А (Α-ΝΗ2=Όν-8089).
Вос-61у-61у-Рйе-61у (163 мг) и Νгидроксисукцинимид (45 мг) растворяют в Ν,Νдиметилформамиде (10 мл), охлаждают до 4°С и добавляют Ν,Ν'-дициклогексилкарбодиимид (79 мг). К полученному раствору добавляют раствор (30 мл) тозилата соединения формулы
[(18,98)-1 -амино -9 -этил-2,3 -дигидро -9гидрокси- 1Н, 12Н-бензо [де] пирано [3',4':6,7] индолизино [ 1,2-Ь]хинолин-10,13(9Н, 15Н)-дион: Όν-8089] (170 мг) и триэтиламина (0,054 мл) в Ν,Ν-диметилформамиде, после чего перемешиваемую смесь оставляют на ночь для взаимодействия при комнатной температуре в защищенном от света месте. Реакционную смесь упаривают до сухого состояния при пониженном давлении и остаток очищают хроматографией на колонках из силикагеля (элюент: раствор дихлорметана в метаноле (94:6), содержащий 0,5% уксусной кислоты), что дает целевое соединение (1 00 мг).
’Η-ЯМР (1)\18О-сР) δ: 8.51 (ά, 1Н, 1 = 8.5 Ηζ), 8.41 (ΐ, 1Η, 1 = 5.6 Ηζ), 8.29 (8, 1Η), 8.17 (ά, 1Η, 1 = 8.0 Ηζ), 8.03 (ά, 1Η, 1 = 8.0 Ηζ), 7.90 (άά, 1Η, 1 = 4.8, 5.6 Ηζ), 7.79 (ΐ, 1Η, 1 = 5.6 Ηζ), 7.53 (ά, 1Η, 1 = 7.2 Ηζ), 7.36 (8, 1Η), 7.13-7.25 (т, 5Η),
6.94-6.95 (т, 1Η), 5.60-5.63 (т, 1Η), 5.36-5.47 (т, 2Η), 5.21-5.30 (т, 2Η), 4.42-4.47 (т, 1Η),
3.63-3.96 (т, 3Η), 3.51-3.59 (т, 3Η), 3.31-3.40 (т, 1Η), 3.09-3.21 (т, 1Η), 3.02 (άά, 1Η, 1=4.8, 13.5Ηζ), 2.76-2.81 (т, 1Η), 2.13-2.17 (т, 2Η), 1.85-1.90 (т, 2Η), 1.37 (8, 9Η), 0.89 (ΐ, 3Η, 1 = 8.0 Ηζ).
Ма88 (РАВ); т/е 822 (М+1).
Пример 41. Синтез карбоксиметилдекстранового полиспирта-61у-61у-Ρйе-61у-NΗ-Α' (АΝΗ2=Όν-8089).
Триэтиламмониевую соль карбоксиметилдекстранового полиспирта (1,6 г), полученную в примере 24, растворяют в Ν,Ν-диметилформамиде (60 мл). К полученному раствору последовательно добавляют раствор соли трифторуксусной кислоты 3^-(615--615^1^-6151^^ А (Α-NΗ2=^V-8089) , полученной из 3'-Ы-(Вос61у-61у-Ρйе-61у)-NΗ-Α (200 мг) по примеру 40 путем удаления группы Вос аналогично примеру 4, и триэтиламина (0,07 мл) в Ν,Νдиметилформамиде (20 мл) и 1 -этоксикарбонил2-этокси-1,2-дигидроксихинолин (1,6 г), после чего перемешиваемую смесь оставляют на ночь для взаимодействия при комнатной температуре. Порции реакционной смеси (5 мл) по каплям добавляют к 1 0 мл порциям этанола. К каждой смеси добавляют 3М водный раствор хлорида натрия (2,5 мл) и диэтиловый эфир (25 мл) и выпавший осадок собирают центрифугированием (2500 об/мин, 8 мин). Осадок промывают этанолом, растворяют в воде, добавляют 3М водный раствор хлорида натрия (20 мл) и доводят до рН 9 с помощью 0,1М водного раствора гидроксида натрия. Полученный раствор обессоливают, фильтруя через мембранный ультрафильтр Вютах-10. Раствор, не прошедший через мембранный фильтр, фильруют через микропористый фильтр (0,22 мкм) и лиофилизируют с получением целевого соединения (1,20 г). Полученное соединение растворяют в 0,1М водном растворе хлорида натрия и анализируют. Результаты гель-проникающей хроматографии (колонка: гель Т8К ΡV-4000X^, То8ой, растворитель: 0,1М раствор №С1, скорость потока: 0,8 мл/мин) и ультрафиолетовый спектр поглощения (0,1М раствор трис-буфера, рН 9,0 26 мг/мл) приведены соответственно на фиг. 1 6 и 1 7. Содержание остатка лекарственного соединения в целевом соединении составляет 5,0% (в весовом отношении) по методу определения на основе поглощения при длине волны 362 нм в 0,1 М растворе трис-буфера (рН 9,0).
Пример 42. Синтез Тг1-61у-61у-Рйе-61уОШ
Тп-61\-61у-Рйе-61\-ОВ/.1 (670 мг), 10% Ρά-С (100 мг) и формиат аммония (200 мг) добавляют к Ν,Ν-диметилформамиду (5 мл) и перемешивают в течение трех часов. Реакционную смесь фильтруют, фильтрат упаривают до сухого состояния при пониженном давлении и остаток очищают хроматографией на колонках из силикагеля (элюент: раствор дихлорметана в метаноле (8:1)), что дает целевое соединение (300 мг).
Ή-ЯМР (СО3ОЭ) δ: 7.16-7.45 (т, 20Η), 4.66 (άά, 1Η, 1 = 9.8, 5.4Ηζ), 3.93 (ά, 1Η, 1 = 16.6 Ηζ), 3.80 (ά, 1Η, 1 = 17.6 Ηζ), 3.78 (ά, 1Η, 1 = 16.6 Ηζ), 3.68 (ά, 1Η, 1 = 17.1 Ηζ), 3.23 (άά, 1Η, 1 =
14.2, 5.4 Ηζ), 2.90 (ά, 1Η, 1 = 13.7 Ηζ), 2.90 (8, 1Η).
Пример 43. Синтез гидрохлорида 3'-Ν(61у-61у-Рйе-61у)-ПХК.
Тг1-С1у-С1у-Р11е-С1у-ΟΙ I (100 мг) и Νгидроксисукцинимид (22 мг) растворяют в Ν,Νдиметилформамиде (4 мл) и к смеси, охлаждаемой льдом и перемешиваемой при температуре 4°С в течение 2 ч, добавляют Ν,Ν'-дициклогексилкарбодиимид (40 мг). К полученному раствору добавляют раствор Ν-метилморфолина (0,019 мл) и гидрохлорида доксорубицина (ΌΧΒ) (92 мг) в Ν,Ν-диметилформамиде (20 мл) и перемешивают смесь при температуре 4°С в течение 1 6 ч. Реакционную смесь упаривают до сухого состояния при пониженном давлении и остаток очищают хроматографией на колонках из силикагеля (элюент: раствор дихлорметана в метаноле (20:1 )). Полученное соединение растворяют в 75% уксусной кислоте (1 мл) и перемешивают в течение 1 ч. Затем добавляют воду (20 мл), выпавшую в осадок твердую массу отфильтровывают, фильтрат лиофилизируют и полученный порошок растворяют в воде (5 мл). Этот раствор пропускают через колонку ЛС1 Χ8 (С1- форма) и элюируют водой, после чего вытекающую жидкость промывают дихлорметаном и водный слой лиофилизируют, что дает целевое соединение (40 мг).
!Н-ЯМР (ί'Ό3ΟΟ) δ: 7.95 (4, 1Н, I = 7.3 Ш),
7.82 (1, 1Н, I = 7.8 Ш), 7.54 (4, 1Н, I = 8.3 Ш),
7.16-7.26 (т, 5Н), 5.43 (4, 1Н, I = 3.4 Ш), 5.14 (Ьг, 1Н), 4.72 (8, 2Н), 4.42 (44, 1Н, I = 8.3, 6.8 Ш), 4.30 (ц, 1Н, I = 6.8 Ш), 4.14-4.18 (т, 1Н), 4.03 (4, 1Н, I = 16.6 Ш), 4.02 (8, 3Н) , 3.86 (4, 1Н, I = 18.5 Ш), 3.83 (4, 1Н, I = 17.1 Ш), 3.75 (4, 1Н, I = 16.1 Ш), 3.73 (4, 1Н, I = 16.1 Ш), 3.62 (Ьг, 1Н), 3.58 (4, 1Н, I = 16.6 Ш), 3.10-3.15 (т, 2Н) 3.00 (4, 1Н, I = 18.6 Ш), 2.94 (44, 1Н, I = 14.2, 8.8Ш), 2.38 (4, 1Н, I = 14.2 Ш), 2.18 (44, 1Н, I =
14.2, 4.4Ш), 1.94-2.00 (т, 1Н) , 1.71 (44, 1Н, I =
12.7, 4.4Н), 1.28 (4, 3Н, I = 6.3 Ш).
Пример 44. Синтез карбоксиметилдекстранового полиспирта-С1у-С1у-Рйе-С1у-ЭХК
Натриевую соль карбоксиметилдекстранового полиспирта (1,5 г), полученную в примере 24, превращают в соль триметиламмония (1,2 г) аналогично способу, описанному в примере 25, и 400 мг указанной соли растворяют в Ν,Νдиметилформамиде (24 мл). К полученному раствору последовательно добавляют гидрохлорид 3'-Ы-(С1у-С1у-РЬе-С1у)-ВХК. (76 мг) в Ν,Νдиметилформамиде (24 мл), триэтиламин (24 мкл) и 1-этоксикарбонил-2-этокси-1,2-дигидроксихинолин (400 мг), после чего перемешиваемую смесь оставляют на ночь для взаимодействия при комнатной температуре. Порции реакционной смеси (5 мл) по каплям добавляют к 1 0 мл порциям этанола. К полученной смеси добавляют 3М водный раствор хлорида натрия (2,5 мл) и диэтиловый эфир (20 мл) и выпавший осадок собирают центрифугированием (3500 об/мин, 8 мин). Осадок растворяют в 0,5М водном растворе хлорида натрия и обессоливают, фильтруя через мембранный ультрафильтр Βίοтах-30. Раствор, не прошедший через мембран бранный фильтр, фильтруют через миллипоровый фильтр (0,22 мкм) и лиофилизируют с получением целевого соединения (40 мг). Полученное соединение растворяют в 0,1М водном растворе хлорида натрия и анализируют. Результаты гель-проникающей хроматографии (колонка: гель Τ8Κ Ρν-4000ΧΕ, То8о11. растворитель: 0,1 М раствор №С1, скорость потока: 0,8 мл/мин) и ультрафиолетовый спектр поглощения (0,1М раствор трис-буфера, рН 7,4, 36 мкл) приведены соответственно на фиг. 1 8 и 1 9. Содержание остатка лекарственного соединения в целевом соединении составляет 6,0% (в весовом отношении) по методу определения на основе поглощения при длине волны 480 нм в физиологическом растворе с фосфатным буфером (РВ8) (рН 7,4).
Пример 45. Синтез триэтиламмониевой соли карбоксиметилдекстранового полиспирта.
Декстран Т150 (20 г, Рйагтас1а, средняя молекулярная масса 150000) растворяют в 0,1М растворе ацетатного буфера (рН 5,5, 2000 мл) и добавляют водный раствор (2000 мл) перйодата натрия (66,0 г). Смесь перемешивают при температуре 4°С в течение десяти дней в защищенном от света месте, добавляют этиленгликоль (14,0 мл) и продолжают перемешивать в течение ночи. Охлаждаемую льдом смесь доводят до рН
7.5 с помощью 8М водного раствора гидроксида натрия. Затем добавляют боргидрид натрия (28 г), растворяют его и перемешивают смесь при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь охлаждают льдом, доводят до рН
5.5 уксусной кислотой и перемешивают при температуре 4°С в течение 1 ч. Охлаждаемую льдом смесь доводят до рН 7,5 с помощью 8М водного раствора гидроксида натрия. Полученный водный раствор концентрируют до 500 мл, фильтруя через мембранный ультрафильтр Вютах-5 (миллипоровый), что дает раствор 1. Отдельно выполняют вторую серию вышеописанных процедур, используя в качестве исходного вещества декстран Т110 (20 г), что дает раствор 2. Растворы 1 и 2 объединяют, доводят до рН 3,0 и инкубируют при температуре 40°С в течение 4 ч, затем доводят до рН 7 с получением раствора, содержащего декстрановый полиспирт с более низкой молекулярной массой. Этот раствор фильтруют через мембранный фильтр Вютах-30, обессоливают, фильтруя через мембранный ультрафильтр Вютах-5, и лиофилизируют с получением декстранового полиспирта (4,6 г). Молекулярная масса этого вещества равна 1 7000 (гель-фильтрация, пуллулановый эталон).
Декстрановый полиспирт (2,5 г) добавляют к раствору гидроксида натрия (17,5 г) в воде (75 мл) и растворяют при комнатной температуре. К охлаждаемому льдом раствору добавляют монохлоруксусную кислоту (25 г), растворяют ее и оставляют смесь на 20 ч для взаимодействия при комнатной температуре. Реакционную смесь доводят до рН 9 уксусной кислотой и обессоливают, фильтруя через мембранный ультрафильтр В1отах-5. Раствор, не прошедший через фильтр, лиофилизируют с получением натриевой соли карбоксиметилдекстранового полиспирта (4,0 г). Молекулярная масса этого вещества равна 45000 (гель-фильтрация, пуллулановый эталон) и степень карбоксиметилирования составляет 0,9.
Натриевую соль карбоксиметилдекстранового полиспирта (3,7 г) растворяют в воде, вводят в колонку В1о-КаН АС 50\Х-Х2 (200-400 меш, Н+ форма) и элюируют водой. К вытекающей жидкости добавляют триэтиламин (5,8 мл) и лиофилизируют с получением целевого соединения (4,4 г).
Пример 46. Синтез карбоксиметилдекстранового полиспирта-61у-61у-61у-РНе-Ж-А' (АΝΗ2=ΌΧ-8951).
Триэтиламмониевую соль карбоксиметилдекстранового полиспирта, полученную в примере 45, (4,4 г) растворяют в Ν,Ν-диметилформамиде (300 мл). К полученному раствору последовательно добавляют раствор триэтиламина (0,19 мл) и соли трифторуксусной кислоты 3'-Ν-(61γ-61γ-61γ-ΡΗ€)-ΝΗ-Α (АΝΗ2=ΌΧ-8951) (580 мг) в Ν,Ν-диметилформамиде (45 мл) и 1-этоксикарбонил-2-этокси-1,2дигидроксихинолин (4,4 г), после чего перемешиваемую смесь оставляют на ночь для взаимодействия при комнатной температуре в защищенном от света месте. Реакционную смесь доводят до рН 1 0 с помощью 1 М водного раствора гидроксида натрия и 5 мл порции смеси по каплям добавляют к 25 мл порциям этанола. К смеси добавляют 3 М водный раствор хлорида натрия (1 мл) и диэтиловый эфир (5 мл) и выпавший осадок собирают центрифугированием (3500 об/мин, 8 мин). Осадок растворяют в воде и диализируют против очищенной водой через мембрану для диализа (8 рее 1га роге 1, предельная молекулярная масса 6000-8000). Раствор внутреннего диализата фильтруют через миллипоровый фильтр (0,22 мкм) и лиофилизируют с получением целевого соединения (3,4 г). Содержание остатка лекарственного соединения в этом соединении составляет 4,6% (в весовом отношении) по методу определения на основе поглощения при длине волны 362 нм в 0,1М растворе трис-буфера (рН 9,0).
Пример 47. Синтез α-метилкарбоксиметилдекстранового полиспирта-61у-61у-61уРВе-ΝΙ 1-А' (А-Ν12 1ХХ-8951).
Декстрановый полиспирт (2 г), полученный в примере 45, добавляют к раствору гидроксида натрия (1 4 г) в воде (60 мл) и растворяют его при комнатной температуре. К охлаждаемому льдом раствору добавляют α-бромпропионовую кислоту (1 9 мл), растворяют ее и оставляют смесь на 1 8 ч для взаимодействия при комнатной температуре. Реакционную смесь доводят до рН 8 уксусной кислотой и обессоливают, фильтруя через мембранный ультрафильтр В1отах-50. Раствор, не прошедший через фильтр, лиофилизируют с получением натриевой соли α-метилкарбоксиметилдекстранового полиспирта (2,95 г). Молекулярная масса этого вещества равна 45000 (гельфильтрация, пуллулановый эталон). Степень αметилкарбоксиметилирования на один остаток сахарида определяют с помощью карбоксиметилдекстранового полиспирта следующим образом. Водный раствор натриевой соли αметилкарбоксиметилдекстранового полиспирта вводят в колонку Вю-КаН А6 50\Х-Х2 (Н+ форма), вытекающую жидкость лиофилизируют и используют в качестве образца. Этот образец растворяют в заданном избытке 0,1 н водного раствора гидроксида натрия и титруют 0,1 н раствором хлористо-водородной кислоты, используя фенолфталеин в качестве индикатора. Степень α-метилкарбоксиметилирования определяют по уравнению: степень α-метилкарбоксиметилирования = 13,4(а-Ь)/[8-7,2(а-Ь)], где § означает количество используемого образца (мг), а означает заданный избыток 0,1н. водного раствора гидроксида натрия (мл) и Ь означает количество 0,1н. раствора хлористоводородной кислоты, израсходованной на титрование (мл). Степень α-метилкарбоксиметилирования, высчитанная по этому методу, равна 0,8.
Натриевую соль α-метилкарбоксиметилдекстранового полиспирта (2,2 г) растворяют в воде, вводят в колонку Вю-КаН А6 50\Х-Х2 (200-400 меш, Н+ форма) (диаметр 44 мм, длина 21 0 мм) и элюируют водой. К вытекающей жидкости добавляют триэтиламин (4 мл) и лиофилизируют с получением триэтиламмониевой соли α-метилкарбоксиметилдекстранового полиспирта (2,69 г).
Триэтиламмониевую соль α-метилкарбоксиметилдекстранового полиспирта (2,68 г) растворяют в Ν,Ν-диметилформамиде (60 мл). К полученному раствору последовательно добавляют раствор соли трифторуксусной кислоты 3'Ν-( 61у -61у -61у -Р11е)-\11-А (А-ΧΙΡ=ΌΧ-8951), полученной аналогично примеру 1 6 путем удаления группы Вос из 3'-Ы-(Вос-61у-61у-61уРНе)-Ж-А (350 мг) по примеру 2, и триэтиламина (0,116 мл) в Ν,Ν-диметилформамиде (10 мл) и раствор 1-этоксикарбонил-2-этокси-1,2дигидроксихинолина (2,68 г) в Ν,Ν-диметилформамиде (10 мл), после чего перемешиваемую смесь оставляют на ночь для взаимодействия при комнатной температуре. К реакционной смеси добавляют 3М водный раствор хлорида натрия (40 мл) и 6 мл порции смеси по каплям добавляют к 30 мл порциям этанола. К каждой смеси добавляют 3М водный раствор хлорида натрия (1 мл) и диэтиловый эфир (5 мл) и выпавший осадок собирают центрифугированием (3500 об/мин, 8 мин). Осадок промывают ацетоном, растворяют в воде, добавляют 3М водный раствор хлорида натрия (1 0 мл), доводят до рН 9 с помощью 0,1М водного раствора гидроксида натрия и выдерживают при температуре 37°С в течение 1 ч. Обработанный раствор обессоливают, фильтруя через мембранный ультрафильтр В1отах-10. Раствор, не прошедший через мембранный фильтр, фильтруют через миллипоровый фильтр (0,22 мкм) и лиофилизируют с получением целевого соединения (2,15 г). Полученное соединение растворяют в 0,1М водном растворе хлорида натрия и анализируют. Результаты гель-проникающей хроматографии (колонка: гель Т8К Р^-4000ХЬ, То8оН, растворитель: 0,1 М раствор №С1, скорость потока: 0,8 мл/мин) и ультрафиолетовый спектр поглощения (0,1М раствор трис-буфера, рН 9,0, 0,21 мг/мл) приведены соответственно на фиг. 20 и 21. Содержание остатка лекарственного соединения в полученном продукте составляет 5,9% (в весовом отношении) по методу определения на основе поглощения при длине волны 362 нм в 0,1М растворе трис-буфера (рН 9,0). Пример 48 Синтез соли трифторуксусной кислоты 3'-Ν-(Ο1γ-ΡΗβ-Ο1γ)-ΝΗ-Α (Α-ΝΗ2=ΌΧ8951).
Смесь соли паратолуолсульфоновой кислоты РНе-С1у-С1у-0В/1 (3,06 г), Вос-61у-0Н (1,10 г), Ν-гидроксисукцинимида (941 мг), Νметилморфолина (0,725 мл) и Ν,Νдиметилформамида (40 мл) охлаждают до 4°С и добавляют Ν,Ν'-дициклогексилкарбодиимид (1,56 г). Перемешиваемую смесь оставляют на ночь для взаимодействия при комнатной температуре и упаривают до сухого состояния при пониженном давлении. Остаток очищают хроматографией на колонках из силикагеля (элюент: раствор дихлорметана и метанола (98:2)) с получением Вос-С1у-РНе-С1у-0В/1 (1,93 г).
’Η-ЯМР (ΌΜ80-ά6) δ: 8.52 (йй, 1Н, I = 5.6,
6.4 Ηζ), 7.97 (й, 1Н, I = 8.8 Ηζ), 7.30-7.39 (т, 5Η), 7.15-7.26 (т, 5Η), 6.83 (ΐ, 1Η, 1 = 5.6 Ηζ),
5.14 (8, 1Η), 4.52-4.57 (т, 1Η), 3.87-3.96 (т, 2Η),
3.57 (йй, 1Η, 1 = 5.6, 16.7 Ηζ), 3.43 (йй, 1Η, 1 =
5.6, 16.7 Ηζ), 3.01 (йй, 1Η, 1 = 4.8, 14.3 Ηζ), 2.77 (йй, 1Η, 1 = 5.6, 14.3 Ηζ), 1.37 (8, 9Η).
Вос-С1у-РНе-С1у-0В/1 (1,78 г) растворяют в этилацетате (60 мл) и в течение 24 ч подвергают каталитическому восстановлению в присутствии 5% Рй-С (1,8 г). Катализатор отфильтровывают и фильтрат концентрируют при пониженном давлении с получением Вос-С1у-РНеС1у-0И (1,41 г).
!Н-ЯМР (ЭМ80-й6) 5: 8.35 (ΐ, 1Н, 1 = 5.6 Ηζ), 7.94 (й, 1Η, 1 = 8.8 Ηζ), 7.15-7.26 (т, 5Η),
6.85 (йй, 1Η, 1 = 5.6, 6.4 Ηζ), 4.52-4.58 (т, 1Η) ,
3.76 (й, 2Η, 1 = 5.6 Ηζ), 3.56 (йй, 1Η, 1 = 6.4, 16.7 Ηζ), 3.43 (йй, 1Η, 1 = 5.6, 16.7 Ηζ), 3.03 (йй, 1Η, 1 = 5.0, 13.5 Ηζ), 2.79 (йй, 1Η, 1 = 9.5, 13.5 Ηζ),
1.37 (8, 9Η).
Вос-С1у-РНе-С1у-0И (500 мг) и Νгидроксисукцинимид (161 мг) растворяют в Ν,Ν-диметилформамиде (10 мл). К полученному раствору добавляют раствор метансульфоната ΌΧ-8951 (530 мг) и триэтиламина (0,146 мл) в Ν,Ν-диметилформамиде (50 мл). Смесь охлаждают до 4°С, добавляют Ν,Ν-дициклогексилкарбодиимид (268 мг) и, перемешивая, оставляют на ночь для взаимодействия при комнатной температуре в защищенном от света месте. Реакционную смесь упаривают до сухого состояния при пониженном давлении и остаток очищают хроматографией на колонках из силикагеля (элюент: раствор дихлорметана в метаноле (96:4)), что дает 3'-N-(Вос-С1у-ΡНе-С1у)-NΗ-Α (Α-ΝΗ2=ΌΧ-8951) (100мг).
Ή-ЯМР (ЭМ80-й6) δ: 8.39 (й, 1Η, 1 = 8.0 Ηζ), 8.34 (ΐ, 1Η, 1 = 5.6 Ηζ), 7.98 (й, 1Η, 1 = 7.2 Ηζ), 7.78 (й, 1Η, 1 = 10.3 Ηζ), 7.33 (8, 1Η), 7.13-
7.24 (т, 5Η), 6.80 (йй, 1Η, 1 = 5.6, 6.4 Ηζ), 5.55-
5.61 (т, 1Η), 5.44 (й, 1Η, 1 = 16.0 Ηζ), 5.41 (й, 1Η, 1 = 16.0 Ηζ), 5.25 (8, 2Η), 4.43-4.46 (т, 1Η),
3.69- 3.79 (т, 2Η), 3.50 (йй, 1Η, 1=5.6, 16.7Ηζ),
3.41 (йй, 1Η, 1 = 5.6, 16.7 Ηζ), 3.16-3.19 (т, 2Η),
2.98 (йй, 1Η, 1 = 4.8, 14.3 Ηζ), 2.79 (йй, 1Η, 1 -
9.5, 14.3 Ηζ), 2.41 (8, 3Η), 2.19-2.25 (т, 1Η), 2.10-
2.15 (т, 1Η), 1.82-1.90 (т, 2Η), 1.35 (8, 9Η), 0.88 (ΐ, 3Η, 1 = 8.0 Ηζ).
Ма88 (РАВ); т/е 797 (М+1).
(Α-ΝΗ2=ΌΧ8951) (100 мг) растворяют в трифторуксусной кислоте (3 мл) и оставляют выстаиваться в течение одного часа. Растворитель выпаривают и остаток подвергают азеотропной перегонке дважды с метанолом (30 мл) и дважды с этанолом (30 мл), а затем промывают простым эфиром с получением целевого соединения (80 мг).
Ή-ЯМР (ЭМ80-й6) δ: 8.52-8.62 (т, 1Η),
7.94 (8, 3Η), 7.79 (ΐ, 1Η, 1 = 11.1Ηζ), 7.34 (8, 1Η),
7.15-7.27 (т, 5Η), 6.52 (8, 1Η), 5.57-5.61 (т, 1Η), 5.36-5.46 (т, 2Η), 5.24 (8, 2Η), 4.66-4.70 (т, 1Η),
3.69- 3.81 (т, 2Η), 3.61-3.68 (т, 1Η), 3.40-3.47 (т, 1Η), 3.15-3.23 (т, 1Η), 3.01 (йй, 1Η, 1 = 4.0,
13.5 Ηζ), 2.77 (йй, 1Η, 1 = 9.5, 13.5 Ηζ), 2.12-2.23 (т, 2Η), 1.81-1.91 (т, 2Η), 0.89 (ΐ, 3Η, 1 = 7.2 Ηζ).
Ма88 (РΑВ); т/е 697 (М+1).
Пример 49. Синтез соли трифторкусусной кислоты 3'-Ν-(ΡΗβ-Ο1γ)-ΝΗ-Α (Α-ΝΗ2=ΌΧ8951).
Вос-РНе-С1у (771 мг) и Νгидроксисукцинимид (300 мг) растворяют в Ν,Ν-диметилформамиде (10 мл). К полученному раствору добавляют раствор метансульфоната ΌΧ-8951 (1058 мг) и триэтиламина (0,293 мл) в Ν,Ν-диметилформамиде (50 мл). Смесь охлаждают до 4°С, добавляют Ν,Ν'-дициклогексилкарбодиимид (494 мг) и, перемешивая, оставляют на ночь для взаимодействия при комнатной температуре в защищенном от света месте. Реакционную смесь упаривают до сухого состоя ния при пониженном давлении и остаток очищают хроматографией на колонках из силикагеля (элюент: раствор дихлорметана в метаноле (98:2)) с получением 3'-Ы-(Вос-РЬе-61у)-ХН-А (Α-ΝΗ2=ΌΧ-8951) (1,20 г).
!Н-ЯМР (ΌΜ8Ο-66) δ: 8.29 (б, 1Н, I = 8.0 Нг), 8.21 (ΐ, 1Н, I = 4.8 Нг), 1.16 (б, 1Н, I = 10.3 Нг), 7.32 (8, 1Н), 7.13-7.25 (т, 5Н), 6.92 (б, 1Н, I = 7.2 Нг), 6.49 (8, 1Н) , 5.56-5.61 (т, 1Н), 5.44 (б, 1Н, I = 15.9 Нг), 5.38 (б, 1Н, I = 15.9 Нг), 5.25 (8, 2Н), 4.08-4.12 (т, 1Н), 3.78 (б, 1Н, I = 4.8 Нг),
3.16-3.25 (т, 2Н), 2.99 (бб, 1Н, I = 4.0, 13.5 Нг),
2.72 (бб, 1Н, I = 10.3, 13.5 Нг), 2.40 (8, 3Н), 2.09-
2.35 (т, 2Н), 1.80-1.91 (т, 2Н), 1.16 (8, 9Н), 0.88 (ΐ, 3Н, I = 8.0 Нг).
Ма88 (РАВ); т/е 741 (Μ+1).
3'-Ы-(Вос-РЬе-61у)-ХН-А (170 мг) растворяют в трифторуксусной кислоте (4 мл) и оставляют выстаиваться в течение одного часа. Растворитель выпаривают и остаток подвергают азеотропной перегонке дважды с метанолом (1 0 мл) и дважды с этанолом (10 мл), а затем промывают простым эфиром с получением целевого соединения (1 00 мг).
!Н-ЯМР (ΌΜ8Ο-66) δ: 8.88 (ΐ, 1Н, I = 4.8 Нг), 8.68 (б, 1Н, I = 8.7 Нг), 8.05-8.15 (т, 3Н),
7.79 (б, 1Н, I = 11.1 Нг), 7.26-7.36 (т, 5Н), 6.52 (б, 1Н, I = 7.2Нг), 5.57-5.62 (т, 1Н), 5.43 (б, 1Н, I = 15.9 Нг), 5.38 (б, 1Н, I = 15.9 Нг), 5.19-5.28 (т, 1Н), 4.10-4.18 (т, 1Н), 3.93 (бб, 1Н, I = 4.8,
16.7 Нг), 3.82 (бб, 1Н, I = 4.8, 16.7 Нг), 3.17-3.24 (т, 2Н), 3.14 (бб, 1Н, I = 4.8, 13.5 Нг), 2.95 (бб, 1Н, I = 8.0, 13.5 Нг), 2.42 (8, 3Н), 2.14-2.25 (т, 2Н), 1.83-1.91 (т, 2Н), 0.89 (ΐ, 3Н, I = 8.0 Нг).
Ма88 (РАВ); т/е 640 (М+1).
Пример 50. Синтез соли трифторуксусной кислоты 3'-Ы-61у-ХН-А (А-Р1Н2=ПХ-8951).
Метансульфонат ΌΧ-8951 (530 мг) и триэтиламин (0,28 мл) растворяют в М,Мдиметилформамиде (10 мл), охлаждают до 4°С и добавляют Ν-гидроксисукцинимидоэфир ВосС1у (327 мг). Перемешиваемую смесь оставляют на ночь для взаимодействия при комнатной температуре в защищенном от света месте. Реакционную смесь упаривают до сухого состояния при пониженном давлении и остаток очищают хроматографией на колонках из силикагеля (элюент: раствор дихлорметана в метаноле (98:2)) с получением 3'-Ы-(Вос-61у) -ИН-А (АИН2=ПХ-8951) (500мг).
!Н-ЯМР (ΌΜ8Ο-66) δ: 8.38 (б, 1Н, I = 8.3 Нг), 7.77 (б, 1Н, I = 10.7 Нг), 7.31 (8, 1Н), 6.89-
6.91 (т, 1Н), 6.49 (8, 1Н), 5.55-5.59 (т, 1Н), 5.45 (б, 1Н, I = 16.1 Нг), 5.38 (б, 1Н, I = 16.1 Нг), 5.27 (б, 1Н, I = 19.0 Нг), 5.18 (б, 1Н, I = 19.0 Нг),
3.50-3.62 (т, 2Н), 3.15-3.19 (т, 2Н), 2.41 (8, 3Н),
2.18-2.24 (т, 1Н), 2.08-2.12 (т, 1Н), 1.81-1.91 (т, 2Н), 1.31 (8, 9Н), 0.87 (ΐ, 3Н, I = 8.0 Нг).
Μа88 (РАВ); т/е 593 (Μ+1).
3'-Ы-(Вос-61у)-ХН-А (100мг) растворяют в трифторуксусной кислоте (2 мл) и оставляют выстаиваться в течение одного часа. Растворитель выпаривают и остаток подвергают азеотропной перегонке дважды с метанолом (1 0 мл) и дважды с этанолом (1 0 мл), а затем промывают простым эфиром с получением целевого соединения (70 мг).
Ή-ЯМР (ΌΜ8Ο-66) δ: 8.88 (б, 1Н, I = 8.8. Нг), 8.08 (8, 3Н), 7.81 (б, 1Н, I = 11.2 Нг), 7.34 (8, 1Н), 6.52 (8, 1Н), 5.63-5.67 (т, 1Н), 5.45 (б, 1Н, 1= 16.7 Нг), 5.40 (б, 1Н, I = 16.7 Нг), 5.36 (б, 1Н, I = 19.1 Нг), 5,25 (б, 1Н, I = 19.1 Нг), 3.56 (8, 2Н), 3.11-3.19 (т, 2Н), 2.43 (8, 3Н), 2.23-2.28 (т, 1Н), 2.11-2.19 (т, 1Н), 1.81-1.91 (т, 2Н), 0.88 (ΐ, 3Н, I = 8.0 Нг).
Μа88 (РАВ); т/е 493 (Μ+1).
Пример 51. Синтез триметиламмониевой соли карбоксиметилдекстранового полиспирта.
Декстран Т500 (50 г, РЬагтааа, молекулярная масса 500000) растворяют в 0,1М растворе ацетатного буфера (рН 5,5, 5000 мл) и добавляют водный раствор (5000 мл) перйодата натрия (165,0 г). Смесь перемешивают при температуре 4°С в течение десяти дней в защищенном от света месте, добавляют этиленгликоль (35,0 мл) и продолжают перемешивать в течение ночи. Реакционную смесь доводят до рН 7 с помощью 8 М водного раствора гидроксида натрия. Затем добавляют боргидрид натрия (70 г), растворяют его и перемешивают смесь в течение ночи. Полученную смесь охлаждают льдом, доводят до рН 5,5 уксусной кислотой, перемешивают при температуре 4°С в течение одного часа и доводят до рН 7,5 с помощью 8 М водного раствора гидроксида натрия. Полученный водный раствор обессоливают, фильтруя через мембранный ультрафильтр Вютах-50. Раствор, не прошедший через фильтр, лиофилизируют с получением декстранового полиспирта (20,2 г). Молекулярная масса этого вещества равна 159000 (гель-фильтрация, пуллулановый эталон).
Декстрановый полиспирт (7,5 г) добавляют к раствору гидроксида натрия (31,5 г) в воде (225 мл) и растворяют при комнатной температуре. К охлаждаемому льдом раствору добавляют монохлоруксусную кислоту (45 г), растворяют ее и оставляют смесь на ночь для взаимодействия при комнатной температуре. Реакционную смесь доводят до рН 8 уксусной кислотой и обессоливают, фильтруя через мембранный ультрафильтр Вютах-50. Раствор, не прошедший через фильтр, лиофилизируют с получением натриевой соли карбоксиметилдекстранового полиспирта (8,5 г). Молекулярная масса этого вещества равна 274000 (гель-фильтрация, пуллулановый эталон) и степень карбоксиметилирования составляет 0,4. Натриевую соль карбоксиметилдекстранового полиспирта (2,0 г) растворяют в воде, вводят в колонку Вю-Ваб АС 50\У-Х2 (200-400 меш, Н+ форма) (диаметр 44 мм, длина 21 0 мм) и элюируют водой. К вытекающей жидкости добавляют триэтиламин (4 мл) и лиофилизируют с получением целевого соединения (2,2 г).
Пример 52. Синтез карбоксиметилдекстранового полиспирта-61у-Рйе-61у-ИН-А' (Ά-ΝΉ2= РХ-8951).
Триэтиламмониевую соль карбоксиметилдекстранового полиспирта, полученную в примере 51, (200 мг) растворяют в Ν,Νдиметилформамиде (7 мл). К полученному раствору последовательно добавляют раствор соли трифторуксусной кислоты 3'-Ы-(61у-РЬе-61у)ИН-А (А-ИН2=ОХ-8951), полученной в примере 48, (41 мг) в Ν,Ν-диметилформамиде (5 мл), триэтиламин (0,014 мл) и 1-этоксикарбонил-2этокси-1,2-дигидроксихинолин (100 мг), после чего перемешиваемую смесь оставляют на ночь для взаимодействия при комнатной температуре. Порции реакционной смеси (5 мл) по каплям добавляют к 10 мл порциям этанола. К смеси добавляют 3 М водный раствор хлорида натрия (2,0 мл) и диэтиловый эфир (25 мл) и выпавший осадок собирают центрифугированием (3500 об/мин, 8 минут). Осадок растворяют в 0,5 М водном растворе хлорида натрия и, охлаждая льдом, доводят до рН 9 с помощью 0,1 М водного раствора гидроксида натрия. Полученный водный раствор обессоливают, фильтруя через мембранный ультрафильтр Вютах-50. Раствор, не прошедший через мембранный фильтр, фильтруют через миллипоровый фильтр (0,22 мкм) и лиофилизируют с получением целевого соединения (190 мг). Содержание остатка лекарственного соединения в этом соединении составляет 4,5% (в весовом отношении) по методу определения на основе поглощения при длине волны 362 нм в 0,1М растворе трисбуфера (рН 9,0).
Пример 53. Синтез карбоксиметилдекстранового полиспирта-Рйе-61у-№Н-А' (А-№Н2=ПХ8951).
Натриевую соль карбоксиметилдекстранового полиспирта, полученную в примере 24, (2,5 г) растворяют в воде, вводят в колонку Вю-Каб АС 50\\'-.Х2 (200-400 меш, Н+ форма Ε13Ν) и элюируют водой. Вытекающую жидкость лиофилизируют с получением триэтиламмониевой соли карбоксиметилдекстранового полиспирта (2,5 г).
Триэтиламмониевую соль карбоксиметилдекстранового полиспирта (200 мг) растворяют в Ν,Ν-диметилформамиде (12 мл). К полученному раствору последовательно добавляют раствор соли трифторуксусной кислоты 3'-К-(РЬеО1у)-ПН-А (А-ХН; ОХ-8951) (42 мг), полученной в примере 49, и триэтиламина (0,016 мл) в Ν,Ν-диметилформамиде (5 мл) и 1-этоксикарбоксил-2-этокси-1,2-дигидроксихинолин (200 мг), после чего перемешиваемую смесь оставляют на ночь для взаимодействия при комнатной температуре в защищенном от света месте. К реакционной смеси добавляют воду (300 мл) и фильтруют через мембранный ультрафильтр
10000 (Е111гои). Раствор, не прошедший через указанный фильтр, доводят до рН 10 с помощью 0,1н. водного раствора гидроксида натрия, и фильтруют через фильтрующую мембрану (0,16 мкм, Е111гои). Фильтрат обессоливают, фильтруя через мембранный ультрафильтр Вютах-50, затем фильтруют через миллипоровый фильтр (0,22 мкм) и лиофилизируют с получением целевого соединения (180 мг). Содержание остатка лекарственного соединения в целевом соединении составляют 6,1% (в весовом отношении) по методу определения на основе поглощения при длине волны 362 нм в 0,1М растворе трисбуфера (рН 9,0).
Пример 54. Синтез карбоксиметилдекстранового полиспирта-61у-№Н-А' (А-№Н2ПХ-8951).
Триэтиламмониевую соль карбоксиметилдекстранового полиспирта, полученную в примере 51, (370 мг) растворяют в Ν,Ν-диметилформамиде (10 мл). К полученному раствору последовательно добавляют раствор соли трифторуксусной кислоты 3^-6^-^^ (АХН2=ПХ-8951), полученной в примере 50, (57 мг) в Ν,Ν-диметилформамиде (3 мл), триэтиламин (0,027 мл) и 1-этоксикарбонил-2-этокси-1,2дигидроксихинолин (185 мг), после чего перемешиваемую смесь оставляют на ночь для взаимодействия при комнатной температуре. Порции реакционной смеси (5 мл) по каплям добавляют к 10 мл порциям этанола. К смеси добавляют 3М водный раствор хлорида натрия (2,0 мл) и диэтиловый эфир (25 мл) и выпавший осадок собирают центрифугированием (3500 об/мин, 8 мин). Осадок растворяют в 0,5М водном растворе хлорида натрия и, охлаждая льдом, доводят до рН 9 с помощью 0,1М водного раствора гидроксида натрия. Полученный водный раствор обессоливают, фильтруя через мембранный ультрафильтр Вютах-50. Раствор, не прошедший через мембранный фильтр, фильтруют через миллипоровый фильтр (0,22 мкм) и лиофилизируют с получением целевого соединения (290 мг). Содержание остатка лекарственного соединения в этом соединении составляет 0,5% (в весовом отношении) по методу определения на основе поглощения при длине волны 362 нм в 0,1М растворе трисбуфера (рН 9,0).
Пример 55. Синтез карбоксиметилдекстранового полиспирта-С1у-С1у-РНе-С1у-О51-7059.
Вос-С1у-С1у-РНе-С1у-0Н (200 мг) растворяют в трифторуксусной кислоте (4 мл) и перемешивают в течение 1,5 ч. Растворитель выпаривают и остаток подвергают азеотропной перегонке дважды с метанолом (10 мл) и дважды с этанолом (10 мл), а затем промывают простым эфиром с получением соли трифторуксусной кислоты С1у-С1у-РНе-С1у-0Н (225 мг).
Ή-ЯМР (ΌΜδΟ-бб) δ: 8.48 (бб, 1Н, I = 5.6, 5.6Нг), 8.59 (бб, 1Н, I = 5.6, 6.4Нг), 8.29 (б, 1Н, I = 4.8 Нг), 7.23-7.26 (т, 4Н), 7.16-7.20 (т, 1Н),
4.58 (ббб, 1Н, I = 4.8, 4.8, 10.4 Нг), 3.89 (бб, 1Н, = 5.6, 16.7 Ηζ), 3.76-3.79 (т, 2Η) , 3.67 (бб, 1Η, 1 = 5.6, 16.7 Ηζ), 3.56 (8, 2Η).
Соль трифторуксусной кислоты 01у-01уРНе-01у-0И (200 мг) растворяют в воде (10 мл), доводят до рН 9,0 триэтиламином, добавляют раствор 9-флуоренилметил-№гидроксисукцинимидилкарбоната (200 мг) в ацетонитриле (5 мл) и перемешивают при комнатной температуре в течение четырех часов, поддерживая рН на уровне 8,0-8,5 с помощью триэтиламина. К реакционной смеси добавляют 1,5н. раствор хлористо-водородной кислоты (50 мл). Выпавший осадок собирают фильтрованием, промывают водой и очищают хроматографией на колонках из силикагеля (элюент: раствор дихлорметана в метаноле (4:1)), что дает Ртос-01у-01у-Р1е-01уΟΗ (151 мг).
!Н-ЯМР (ΌΜ8Ο-66) δ: 8.28-8.32 (т, 1Η), 8.08-8.12 (т, 1Η), 7.85-7.89 (т, 2Η), 7.68-7.72 (т, 2Η), 7.57-7.65 (т, 1Η), 7.38-7.43 (т, 2Η),
7.29-7.34 (т, 2Η), 7.20-7.25 (т, 4Η), 7.14-7.17 (т, 1Η), 4.45-4.52 (т, 1Η), 4.26-4.30 (т, 2Η),
4.19-4.24 (т, 1Η), 3.77 (бб, 1Η, 1 = 5.6, 16.7 Ηζ),
3.58-3.69 (т, 4Η), 3.42-3.52 (т, 1Η), 3.06 (бб, 1Η, 1 = 4.0, 13.5 Ηζ), 2.78 (бб, 1Η, 1 = 4.0, 13.5 Ηζ).
£1110^0^-015^1^-0^-04 (24 мг), производное таксола формулы
[Ό51-7059: 9,10-О-(2 -аминоэтилиден)-13О-[3-(трет-бутоксикарбониламино)-2-гидрокси3-фенил] пропаноил-10-деацетил-9-дигидробаккатин III] (20 мг) и Ν-гидроксисукцинимид (7 мг) растворяют в Ν,Ν-диметилформамиде (1мл). Полученный раствор охлаждают до 4°С и добавляют Ν,Ν'-дициклогексилкарбодиимид (9 мг), после чего перемешиваемую смесь оставляют на ночь для взаимодействия при комнатной температуре. Реакционную смесь упаривают до сухого состояния при пониженном давлении и остаток очищают хроматографией на колонках из силикагеля (элюент: раствор дихлорметана в метаноле (96:4)), что дает Ртос-01у01у-РЬе-01у-Э51-7059 (21 мг).
’Η-ЯМР (ΟΌΟ13) δ: 8.06 (б, 2Η, I = 8.1 Ηζ),
7.75 (б, 2Η, I = 8.1 Ηζ), 7.18-7.61 (т, 23Η) , 7.62 (бб, 1Η, I = 7.2, 8.0 Ηζ), 6.07 (бб, 1Η, I = 7.9,8.8
Ηζ), 5.98 (б, 1Η, I = 4.8 Ηζ), 5.63 (б, 1Η, I =8.8
Ηζ), 5.00-5.40 (т, 4Η), 4.92 (8, 1Η), 4.60-4.69 (т, 2Η), 4.41 (б, 2Η, I = 6.4 Ηζ), 4.35 (б, 1Η, I =8.0
Ηζ), 4.29 (б, 1Η, I = 8.0 Ηζ), 4.21 (ΐ, 1Η, I =7.5
Ηζ), 3.96-4.07 (т, 3Η), 3.73-3.86 (т, 4Η), 3.37-
3.41 (т, 1Н), 3.19-3.23 (т, 1Η), 3.00 (бб, 1Η, I = 8.0, 13.5 Ηζ), 2.85-2.89 (т, 3Η), 2.29 (8, 3Η), 2.05-
2.40 (т, 4Η), 1.57 (8, 3Η), 1.56 (8, 3Η), 1.53 (8, 3Η), 1.40 (8, 9Η), 1.22 (8, 3Η).
Ма88 (РАВ); т/е 1413 (М+Ыа).
Ртос-01у-01у-Р11е-01у-Э51-7059 (21 мг) растворяют в дихлорметане (1,8 мл), добавляют пиперазин (0,2 мл) и оставляют смесь на 1 ч для взаимодействия при комнатной температуре. Реакционную смесь очищают хроматографией на колонках из силикагеля (элюент: раствор дихлорметана в метаноле (94:6)) с получением 01у-01у-РНе-01у-Э51-7059 (16мг).
Ή-ЯМР (СОС13) δ: 8.10 (б, 2Η, I = 8.1 Ηζ),
7.89-7.94 (т, 1Η), 7.62 (бб, 1Η, I = 7.2, 8.0Ηζ), 7.45-7.50 (т, 2Η), 7.17-7.42 (т, 12Η), 7.10-7.16 (т, 1Η), 6.97 (бб, 1Η, I = 5.6, 6.4 Ηζ), 6.08 (бб, 1Η, I = 8.0, 8.7 Ηζ), 6.02 (б, 1Η, I = 4.8 Ηζ), 5.62 (б, 1Η, I = 11.1 Ηζ), 5.23-5.30 (т, 1Η), 5.23 (б, 1Η, I = 7.2 Ηζ), 5.10 (8, 1Η), 4.98-5.00 (т, 1Η),
4.60-4.63 (т, 1Η), 4.38 (б, 1Η, I = 8.8 Ηζ), 4.33 (б, 1Η, I = 8.8 Ηζ), 4.13 (8, 1Η), 4.04 (бб, 1Η, I = 5.6,
16.7 Ηζ), 3.93 (бб, 1Η, I = 5.6, 16.7 Ηζ), 3.82 (б, 1Η, I = 7.2 Ηζ), 3.73-3.82 (т, 2Η), 3.43-3.49 (т, 1Η), 3.30-3.38 (т, 2Η), 3.24 (бб, 1Η, I = 6.4, 14.3 Ηζ), 3.04 (бб, 1Η, I = 8.0, 14.3 Ηζ), 2.89-3.07 (т, 3Η), 2.30 (8, 3Η), 2.01-2.50 (т, 4Η), 1.70 (8, 3Η),
1.62 (8, 3Η), 1.61 (8,3Η), 1.40 (8, 9Η), 1.26 (8, 3Η).
Ма88 (РАВ); т/е 1169 (М+1).
01у-01у-РНе-01у-Э51-7059, полученный в соответствии с вышеописанным способом, (33 мг) растворяют в Ν,Ν-диметилформамиде (0,5 мл). К полученному раствору последовательно добавляют раствор триэтиламмониевой соли карбоксиметилдекстранового полиспирта, полученной в примере 24, (180 мг) в Ν,Ν-диметилформамиде (7 мл) и 1 -этоксикарбонил-2-этокси1,2-дигидроксихинолин(180 мг), после чего перемешиваемую смесь оставляют на ночь для взаимодействия при комнатной температуре. Порции реакционной смеси (4 мл) по каплям добавляют к 1 0 мл порциям этанола. К каждой смеси добавляют 3М водный раствор хлорида натрия (2,0 мл) и диэтиловый эфир (25 мл), затем выпавший осадок собирают центрифугированием (2500 об/мин, 8 мин). Осадок промывают этанолом, растворяют в воде, вводят в колонку Вю-Ваб А0 50№-Х2 (200-400 меш, Ха' форма) (диаметр 15 мм, длина 85 мм) и элюируют водой, что дает раствор 1. 01у-01у-Р1е01у-Э51-7059 (10 мг) отдельно растворяют в Ν,Ν-диметилформамиде (0,5 мл) и к полученному раствору последовательно добавляют раствор триэтиламмониевой соли карбоксиметилдекстранового полиспирта, полученной в примере 24, (60 мг) в Ν,Ν-диметилформамиде (5 мл) и раствор 1-этоксикарбонил-2-этокси-1,2дигидроксихинолина (60 мг) в Ν,Ν-диметилформамиде (0,25мл), после чего перемешиваемую смесь оставляют на ночь для взаимодействия при комнатной температуре. Реакционную смесь по каплям добавляют к 1 0 мл этанола и к полученной смеси добавляют 3М водный раствор хлорида натрия (2,0 мл) и диэтиловый эфир (25 мл). Выпавший осадок собирают центрифугированием (2500 об/мин, 8 мин), промывают этанолом, растворяют в воде, вводят в ко лонку Вю-Раб АС 50№-Х2 (200-400 меш, Ха' форма) (диаметр 15 мм, длина 85 мм) и элюируют водой, что дает раствор 2. Раствор 1 и раствор 2 объединяют и обессоливают, фильтруя через мембранный ультрафильтр Вютах-50. Раствор, не прошедший через мембранный фильтр, фильтруют через миллипоровый фильтр (0,22 мкм) и лиофилизируют с получением целевого соединения (208 мг). Полученное соединение растворяют в 0,1М водном растворе хлорида натрия и анализируют. Результаты гельпроникающей хроматографии (колонка: гель Т8К Р^-4000ХЬ, То8о11, растворитель: 0,1М раствор КаС1, скорость потока: 0,8 мл/мин) и ультрафиолетовый спектр поглощения (раствор метанола в воде (10:1), 1,69 мг/мл) приведены соответственно на фиг. 22 и 23. Содержание остатка лекарственного соединения в целевом соединении составляет 5,3% (в весовом отношении) по методу определения на основе поглощения при длине волны 240 нм в растворе метанола в воде (1 0:1 ).
Пример 56. Противоопухолевое действие лекарственного комплекса по настоящему изобретению.
У мышей (6 мышей в группе) вызывали образование опухоли Ме111 А аналогично примеру 11 и исследовали противоопухолевое действие лекарственного комплекса по примеру 15, который однократно вводили в соответствии со способом, описанным в примере 1 2. Таким образом было установлено, что лекарственный комплекс по примеру 1 5 оказывает гораздо более сильное противоопухолевое действие и отличается более широкими пределами зависимости доза-эффект по сравнению с лекарственным соединением по примеру 12.
Испытуемое соединение Доза (мг/кг)1·1 Степень ингибирования
Соединение по примеру 15 10 (%0)
5 99
2,5 95
1,25 83
1) Высчитано на основе лекарственного соединения
Пример 57. Противоопухолевое действие лекарственного комплекса по настоящему изобретению.
У голых мышей (бестимусные мыши с мутацией пибе) (5 мышей в группе) вызывали образование опухоли 8С-6 следующим образом: самцам голых мышей (ВАЬВ/с-пи-пи) подкожно трансплантировали в правую паховую область фрагмент опухоли 8С-6 желудка человека. На 27-ой день после трансплантации производили однократное внутривенное введение лекарственного комплекса по примеру 15, растворенного в дистиллированной воде для инъекций, и противоопухолевое действие указанного комплекса сравнивали с действием лекарственного соединения, используемого отдельно. Таким образом было установлено, что лекарственный комплекс по примеру 1 5 оказывает более сильное противоопухолевое действие по сравнению с лекарственным соединением, используемым отдельно, и не вызывает гибели животных вследствие токсичности.
Испытуемое соединение Доза (мг/кг) Степень ингибирования (%) Кол-во умерших мышей/ кол-во используемых мышей
Лекарственное со- 60 98 2/5
единение, используемое отдельно 15 61 0/5
Соединение по при- 81·1 100 0/5
меру 15 21) 71 0/5
1) Высчитано на основе лекарственного соединения
Пример 58. Противоопухолевое действие лекарственного комплекса по настоящему изобретению.
У голых мышей (бестимусные мыши с мутацией пибе) (5 мышей в группе) вызывали образование раковой опухоли ОС-90 легкого человека аналогично примеру 57. На 16-ый день после трансплантации производили однократное внутривенное введение лекарственного комплекса по примеру 15, растворенного в дистиллированной воде для инъекций, и противоопухолевое действие указанного комплекса сравнивали с действием лекарственного соединения, используемого отдельно. Таким образом было установлено, что лекарственный комплекс по примеру 1 5 оказывает гораздо более сильное противоопухолевое действие и отличается более широкими пределами зависимости доза-эффект по сравнению с лекарственным соединением, используемым отдельно.
Испытуемое соединение Доза (мг/кг) Степень ингибирования (%) Кол-во умерших мышей/ кол-во используемых мышей
Лекарственное со- 50 65 0/5
единение, используемое отдельно 1 2,5 51 0/5
Соединение по при- 71·1 98 0/5
меру 15 11) 97 0/5
1) Высчитано на основе лекарственного соединения
Пример 59. Противоопухолевое действие лекарственного комплекса по настоящему изобретению.
У мышей (6 мышей в группе) вызывали образование опухоли Ме111 А аналогично примеру 11 и исследовали противоопухолевое действие лекарственного комплекса по примеру 41 , который однократно вводили в соответствии со способом, описанным в примере 12. Затем противоопухолевое действие указанного комплекса сравнивали с действием лекарственного соединения, используемого отдельно. Таким образом было установлено, что лекарственный комплекс по примеру 41 оказывает гораздо более сильное противоопухолевое действие и отличается более широкими пределами зависимости доза-эффект по сравнению с лекарственным соединением, используемым отдельно.
Испытуемое соединение Доза (мг/кт) Степень ингибирования
Лекарственное соединение, 100 (64)
используемое отдельно 50 56
25 34
Соединение по примеру 41 251 99
12,51) 95
6,251) 81
3,12511 61
1) Высчитано на основе лекарственного соединения
Пример 60. Противоопухолевое действие лекарственного комплекса по настоящему изобретению.
У мышей (6 мышей в группе) вызывали образование опухоли Ме111 А аналогично примеру 11 и исследовали противоопухолевое действие лекарственных комплексов по примерам 29, 46 и 47, которые однократно вводили в соответствии со способом, описанным в примере 1 2. Таким образом было установлено, что все эти лекарственные комплексы оказывают сильное противоопухолевое действие и отличаются широкими пределами зависимости доза-эффект.
Испытуемое соединение Доза (мг/кг) υ Степень ингибирования
Соединение по примеру 29 30 9%)
20 99
10 89
5 79
Соединение по примеру 46 100 94
80 92
40 82
20 75
Соединение по примеру 47 100 96
80 94
40 97
20 75
1) Высчитано на основе лекарственного соединения
Пример 61. Противоопухолевое действие лекарственного комплекса по настоящему изобретению.
У мышей (6 мышей в группе) вызывали образование опухоли Ме111 А аналогично примеру 11 и исследовали противоопухолевое действие лекарственного комплекса по примеру 44, который однократно вводили в соответствии со способом, описанным в примере 12. Затем противоопухолевое действие указанного комплекса сравнивали с действием лекарственного соединения (доксорубицин), используемого отдельно. Таким образом было установлено, что лекарственный комплекс по примеру 44 оказывает гораздо более сильное противоопухолевое действие и отличается более широкими пределами зависимости доза-эффект по сравнению с лекарственным соединением, используемым отдельно.
Испытуемое соединение Доза (мг/кг) Степень ингибирования (%) Кол-во умерших мышей/ кол-во используемых мышей
Лекарственное со- 20 - 6/6
единение, исполь- 10 64 0/6
зуемое отдельно 5 39 0/6
Соединение по при- 4011 96 0/6
меру 4 20 1) 96 0/6
10 1) 87 0/6
511 76 0/6
1) Высчитано на основе лекарственного соединения
Пример 62. Фармакокинетика лекарственного комплекса по настоящему изобретению.
У мышей вызывали образование опухоли Ме111 А аналогично примеру 11, затем однократно вводили лекарственный комплекс по примеру 1 5 в соответствии со способом, описанным в примере 12 (10 мг/кг; высчитано на основе лекарственного соединения), и определяли изменение концентрации лекарственного комплекса в разных тканях. Таким образом было установлено, что лекарственный комплекс по примеру 1 5 длительное время сохраняется в крови на высоком уровне, эффективно распределяется в опухолевых тканях и избирательно воздействует на опухоль, не накапливаясь в печени и тонкой кишке. Результаты приведены на фиг. 24.
Практическое применение
Лекарственный комплекс по настоящему изобретению, вводимый вместе с остатком лекарственного соединения, в частности, противоопухолевого средства, отличается великолепной избирательностью к местам локализации опухоли, благодаря чему он оказывает сильное противоопухолевое действие при низкой токсичности.

Claims (25)

1 . Лекарственный комплекс, где карбокси(С1 -С4)алкилдекстрановый полиспирт и остаток лекарственного соединения связаны друг с другом спейсером, состоящим из одной аминокислоты, или спейсером, состоящим из 2-8 аминокислот, связанных пептидной связью, где остаток лекарственного средства означает структуру лекарственного соединения, остающуюся в этом соединении после образования связи между спейсером и лекарственным соединением.
2. Лекарственный комплекс по п. 1 , где декстрановый полиспирт, который является карбокси(С1 -С4)алкилдекстрановым полиспиртом, получают путем обработки декстрана в условиях, обеспечивающих в основном полное превращение в полиспирт.
3. Лекарственный комплекс по п.1 или 2, в котором карбокси(С1 -С4)алкилдекстрановый полиспирт является карбоксиметилдекстрановым полиспиртом.
4. Лекарственный комплекс по любому из пп. 1-3, в котором лекарственное соединение является противоопухолевым средством.
5. Лекарственный комплекс по п.4, в котором лекарственное соединение является противоопухолевым средством, оказывающим зави симое от концентрации противоопухолевое действие.
6. Лекарственный комплекс по п.4, в котором лекарственное соединение является противоопухолевым средством, оказывающим зависимое от времени противоопухолевое действие.
7. Лекарственный комплекс по п.4, в котором противоопухолевым средством является доксорубицин или (18,98)-1-амино-9-этил-5фтор-2,3-дигидро-9-гидрокси-4-метил-1Н,12Нбензо [де] пирано [3',4':6,7] индолизино-[ 1,2-Ь] хинолин- 10,13(9Н, 15Н)дион.
8. Лекарственный комплекс по любому из пп.5-7, в котором спейсер является дипептидом формулы -Χ-Ζ-, где -Χ-Ζ- обозначает остаток, который состоит из дипептида, полученного путем соединения пептидной связью гидрофобной аминокислоты (Χ) и гидрофильной кислоты (Ζ), расположенных соответственно у Νконцевого участка и С-концевого участка, и в котором удалены один атом водорода и одна гидроксильная группа соответственно из аминогруппы у Ν-конца из карбоксильной группы у С-конца, либо спейсер содержит дипептид в виде частичной пептидной последовательности.
9. Лекарственный комплекс по п.8, в котором гидрофобная аминокислота является фенилаланином и гидрофильная аминокислота является глицином.
10. Лекарственный комплекс по п.9, в котором спейсер является ^-^^^-0^-0^^^01у.
11. Лекарственный комплекс по любому из пунктов 5-10, в котором введенное количество остатка противоопухолевого средства составляет 1 -1 5 мас.%.
1 2. Лекарственный комплекс по любому из пп.5-10, в котором введенное количество остатка противоопухолевого средства составляет 315 мас.%.
1 3. Лекарственный комплекс по любому из пп.5-10, в котором введенное количество остатка противоопухолевого средства составляет 5-6 мас.%.
14. Лекарственный комплекс по п.1, в котором Ν-конец пептида формулы Η2Ν-01ν-01νΡ1κ-Ο1ν-ί.ΌΟΗ связан с карбоксильной группой карбоксиметилдекстранового полиспирта посредством кислотно-амидной связи и С-конец пептида связан с 1-аминогруппой (18,98)-1амино-9-этил-5-фтор-2,3-дигидро-9-гидрокси-4метил-1Н,12Н-бензо-[де]пирано[3',4':6,7]индолизино [ 1,2-Ь] хинолин-10,13(9Н, 15Н)диона посредством кислотно-амидной связи.
15. Лекарственный комплекс по п.14, в котором введенное количество остатка (18,98)-1амино-9-этил-5-фтор-2,3-дигидро-9-гидрокси-4метил- 1Η, 12Н-бензо [де] пирано [3',4':6,7] индолизино [ 1,2-Ь] хинолин-10,13-(9Н, 15Н)диона составляет 2-1 0 мас.%.
16. Лекарственный комплекс по п.14 или 15, в котором карбокси-(С1-С4)алкилдекстрановый полиспирт является карбоксиметилдекстрановым полиспиртом, имеющим молекулярную массу 5000-500000 и степень карбоксиметилирования от 0,01 до 2,0.
17. Лекарственный комплекс по п.14 или 15, в котором карбокси-(С1-С4)алкилдекстрановый полиспирт является карбоксиметилдекстрановым полиспиртом, имеющим молекулярную массу 50000-450000 и степень карбоксиметилирования от 0,1 до 1,0.
18. Лекарственный комплекс по п.14 или 15, в котором карбокси-(С1-С4)алкилдекстрановый полиспирт является карбоксиметилдекстрановым полиспиртом, имеющим молекулярную массу 200000-400000 и степень карбоксиметилирования от 0,3 до 0,5.
19. Лекарственный комплекс по п. 14, в котором введенное количество остатка (18,98)-1амино-9-этил-5-фтор-2,3-дигидро-9-гидрокси-4метил-1Н,12Н- бензо [де] пирано [3',4':6,7]индолизино [1,2Ь]хинолин-10,13-(9Н,15Н)диона составляет 5-6 мас.%, молекулярная масса карбокси-(С1С4)алкилдекстранового полиспирта равна примерно 228000 и степень карбоксилирования равна примерно 0,4.
20. Носитель лекарственного вещества, предназначенный для связывания лекарственного соединения, который содержит карбокси-(С1 С4)алкилдекстрановый полиспирт.
21 . Носитель лекарственного вещества по п.20, в котором карбокси-(С1-С4)алкилдекстрановый полиспирт имеет молекулярную массу 5000-500000 и степень карбоксиметилирования от 0,01 до 2,0.
22. Носитель лекарственного вещества по п.20, в котором карбокси-(С1-С4)алкилдекстрановый полиспирт имеет молекулярную массу 50000-450000 и степень карбоксиметилирования от 0,1 до 1,0.
23. Носитель лекарственного вещества по п.20, в котором карбокси-(С1-С4)алкилдекстрановый полиспирт имеет молекулярную массу 200000-400000 и степень карбоксиметилирования от 0,3 до 0,5.
24. Носитель лекарственного вещества по любому из пп.20-23, в котором карбокси-(С1-С4) алкилдекстрановый полиспирт является карбоксиметилдекстрановым полиспиртом.
25. Применение карбокси-(С1-С4)алкилдекстранового полиспирта для получения лекарственного комплекса, в котором остаток лекарственного соединения и карбокси-(С1 -С4) алкилдекстрановый полиспирт связаны друг с другом при помощи спейсера, где остаток лекарственного средства означает структуру лекарственного соединения, остающуюся в этом соединении после образования связи между спейсером и лекарственным соединением.
EA199900004A 1996-06-06 1997-06-05 Лекарственный комплекс EA001550B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP14442196 1996-06-06
PCT/JP1997/001914 WO1997046260A1 (en) 1996-06-06 1997-06-05 Drug complexes

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA199900004A1 EA199900004A1 (ru) 1999-06-24
EA001550B1 true EA001550B1 (ru) 2001-04-23

Family

ID=15361795

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA199900004A EA001550B1 (ru) 1996-06-06 1997-06-05 Лекарственный комплекс

Country Status (17)

Country Link
US (2) US6436912B1 (ru)
EP (1) EP0916348B1 (ru)
JP (1) JP4137183B2 (ru)
KR (1) KR20000016558A (ru)
CN (1) CN1227499A (ru)
AT (1) ATE273715T1 (ru)
AU (1) AU723392B2 (ru)
CA (1) CA2257245A1 (ru)
DE (1) DE69730332T2 (ru)
DK (1) DK0916348T3 (ru)
EA (1) EA001550B1 (ru)
ES (1) ES2229354T3 (ru)
ID (1) ID18298A (ru)
NO (1) NO985666L (ru)
PT (1) PT916348E (ru)
TW (1) TW527183B (ru)
WO (1) WO1997046260A1 (ru)

Families Citing this family (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH071238U (ja) * 1993-06-11 1995-01-10 株式会社大井製作所 ドアロック操作用のロッド連結装置
TW527183B (en) * 1996-06-06 2003-04-11 Daiichi Seiyaku Co Drug complex
TW409058B (en) 1996-06-06 2000-10-21 Daiichi Seiyaku Co Method for preparation of a drug complex
AU3733399A (en) * 1998-05-22 1999-12-13 Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. Drug composites
AU765409B2 (en) * 1998-10-30 2003-09-18 Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. DDS compounds and method for assaying the same
US6677456B2 (en) 1999-10-15 2004-01-13 Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. Pentacyclic taxan compound
DK1221445T3 (da) * 1999-10-15 2008-11-24 Daiichi Sankyo Co Ltd Pentacykliske taxanforbindelser
AU2001267831A1 (en) * 2000-06-29 2002-01-08 Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. DDS compound and process for the preparation thereof
BR0112417A (pt) * 2000-07-13 2003-07-01 Daiichi Seiyaku Co Composições farmacêuticas contendo composto dds
US20030092608A1 (en) * 2001-08-21 2003-05-15 Takayuki Kawaguchi Pharmaceutical composition for inhibiting the metastasis or preventing the recurrence of malignant tumor
TWI313609B (en) * 2001-08-21 2009-08-21 Mitsubishi Tanabe Pharma Corp Pharmaceutical composition for inhibiting the metastasis or preventing the recurrence of malignant tumor
TW200306314A (en) * 2002-04-16 2003-11-16 Tanabe Seiyaku Co Liquid preparation comprising camptothecin derivative and pharmaceutical composition producible by lyophilizing the preparation
AU2003288467A1 (en) * 2002-12-13 2004-07-09 Immunomedics, Inc. Immunoconjugates with an intracellularly-cleavable linkage
BR122018071968B8 (pt) 2003-11-06 2021-07-27 Seattle Genetics Inc conjugado de anticorpo-droga, composição farmacêutica, artigo de manufatura e uso de um conjugado de anticorpo-droga
CN101238142B (zh) * 2005-02-18 2012-11-14 国立大学法人德岛大学 含聚氧化烯链的脂质衍生物及含有该衍生物的脂质膜结构体
CN100516067C (zh) 2006-01-10 2009-07-22 上海恒瑞医药有限公司 具有抗肿瘤活性的紫杉酚衍生物
US9895449B2 (en) 2010-05-25 2018-02-20 Syndevrx, Inc. Polymer-conjugated MetAP2 inhibitors, and therapeutic methods of use thereof
WO2011150022A2 (en) 2010-05-25 2011-12-01 Syndevrx, Inc. Polymer-conjugated metap2 inhibitors, and therapeutic methods of use thereof
EP3632471A1 (en) 2012-10-11 2020-04-08 Daiichi Sankyo Company, Limited Antibody-drug conjugate
EP2910573B1 (en) 2012-10-19 2020-02-19 Daiichi Sankyo Company, Limited Antibody-drug conjugate produced by binding through linker having hydrophilic structure
DK2984085T3 (da) 2013-04-10 2019-10-21 Syndevrx Inc Modificerede eller polymerkonjugerede fumagillol metap2-hæmmere til anvendelse i behandling af fedme
WO2015071841A1 (en) 2013-11-12 2015-05-21 Druggability Technologies Holdings Limited Complexes of dabigatran and its derivatives, process for the preparation thereof and pharmaceutical compositions containing them
KR102535900B1 (ko) 2013-12-25 2023-05-26 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 항 trop2 항체-약물 컨쥬게이트
SG10201800210TA (en) * 2014-01-31 2018-02-27 Daiichi Sankyo Co Ltd Anti-her2 antibody-drug conjugate
KR102127623B1 (ko) 2014-04-10 2020-06-29 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 항her3 항체-약물 콘주게이트
ES2754348T3 (es) * 2014-04-10 2020-04-17 Daiichi Sankyo Co Ltd Conjugado de (anticuerpo anti-HER2)-fármaco
EP4180455A1 (en) 2015-06-29 2023-05-17 Daiichi Sankyo Company, Limited Method for selectively manufacturing antibody-drug conjugate
KR20180093995A (ko) 2015-12-10 2018-08-22 신데브알엑스, 인크. 푸마길롤 유도체 및 그의 다형체
US10646463B2 (en) 2016-01-11 2020-05-12 Syndevrx, Inc. Treatment for tumors driven by metabolic dysfunction
AU2017341000A1 (en) 2016-10-07 2019-04-11 Daiichi Sankyo Company, Limited Therapy for drug-resistant cancer by administration of anti-HER2 antibody/drug conjugate
AU2017377233A1 (en) 2016-12-12 2019-06-13 Daiichi Sankyo Company, Limited Combination of antibody-drug conjugate and immune checkpoint inhibitor
AU2018210081A1 (en) 2017-01-17 2019-08-08 Daiichi Sankyo Company, Limited Anti-GPR20 antibody and anti-GPR20 antibody-drug conjugate
TW202330036A (zh) 2017-05-15 2023-08-01 日商第一三共股份有限公司 抗體-藥物結合物之製造方法
CN117838880A (zh) 2017-08-31 2024-04-09 第一三共株式会社 制备抗体-药物缀合物的新方法
SG11202000997YA (en) 2017-08-31 2020-03-30 Daiichi Sankyo Co Ltd Improved method for producing antibody-drug conjugate
DK3794042T3 (da) 2018-05-18 2024-04-15 Daiichi Sankyo Co Ltd Anti-muc1-exatecet-antistof-lægemiddelkonjugat
CN113453721A (zh) 2018-10-26 2021-09-28 辛德弗雷克斯公司 Metap2抑制剂的生物标志物及其应用
BR112022000297A2 (pt) 2019-07-10 2022-03-15 Cybrexa 3 Inc Conjugados de peptídeos de agentes de alvo de microtúbulos como terapêuticos
CN114341162A (zh) 2019-07-10 2022-04-12 赛博克萨2公司 作为治疗剂的细胞毒素的肽缀合物
US11806405B1 (en) 2021-07-19 2023-11-07 Zeno Management, Inc. Immunoconjugates and methods

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS59220197A (ja) * 1983-05-30 1984-12-11 Snow Brand Milk Prod Co Ltd 新規な含窒素多糖体およびその製造方法
JPH0539306A (ja) * 1990-12-14 1993-02-19 D D S Kenkyusho:Kk ヒアルロン酸およびコンドロイチン誘導体

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2081025A1 (en) 1991-02-21 1992-08-22 Kazuhiro Inoue Carboxymethylmannoglucans and derivatives thereof
JP3359955B2 (ja) 1992-07-16 2002-12-24 第一製薬株式会社 抗腫瘍剤
DE69425464T2 (de) 1993-02-26 2001-05-23 Drug Delivery System Inst Ltd Polysaccharidderivat und wirkstoffträger
JPH0784481A (ja) 1993-06-26 1995-03-31 Ricoh Co Ltd 画像形成装置
US5811510A (en) * 1995-04-14 1998-09-22 General Hospital Corporation Biodegradable polyacetal polymers and methods for their formation and use
SG50747A1 (en) 1995-08-02 1998-07-20 Tanabe Seiyaku Co Comptothecin derivatives
TW527183B (en) * 1996-06-06 2003-04-11 Daiichi Seiyaku Co Drug complex
TW409058B (en) 1996-06-06 2000-10-21 Daiichi Seiyaku Co Method for preparation of a drug complex
AU3733399A (en) 1998-05-22 1999-12-13 Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. Drug composites
AU765409B2 (en) 1998-10-30 2003-09-18 Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. DDS compounds and method for assaying the same

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS59220197A (ja) * 1983-05-30 1984-12-11 Snow Brand Milk Prod Co Ltd 新規な含窒素多糖体およびその製造方法
JPH0539306A (ja) * 1990-12-14 1993-02-19 D D S Kenkyusho:Kk ヒアルロン酸およびコンドロイチン誘導体

Also Published As

Publication number Publication date
AU2978797A (en) 1998-01-05
NO985666L (no) 1999-02-04
DE69730332T2 (de) 2005-09-22
ID18298A (id) 1998-03-26
JP4137183B2 (ja) 2008-08-20
ES2229354T3 (es) 2005-04-16
US6436912B1 (en) 2002-08-20
CA2257245A1 (en) 1997-12-11
KR20000016558A (ko) 2000-03-25
TW527183B (en) 2003-04-11
CN1227499A (zh) 1999-09-01
US20030171262A1 (en) 2003-09-11
EP0916348A1 (en) 1999-05-19
DK0916348T3 (da) 2004-12-06
DE69730332D1 (de) 2004-09-23
ATE273715T1 (de) 2004-09-15
WO1997046260A1 (en) 1997-12-11
EA199900004A1 (ru) 1999-06-24
AU723392B2 (en) 2000-08-24
EP0916348B1 (en) 2004-08-18
US6838450B2 (en) 2005-01-04
PT916348E (pt) 2004-10-29
NO985666D0 (no) 1998-12-04
EP0916348A4 (en) 2000-11-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA001550B1 (ru) Лекарственный комплекс
EP0955064B1 (en) Process for producing drug complexes
US6835807B1 (en) Drug complex and drug delivery system
JP4420472B2 (ja) 薬物複合体
US20040192644A1 (en) DDS compound and method for measurement thereof
JP6957629B2 (ja) 非線状自壊性リンカーおよびそのコンジュゲート
AU2002328093B2 (en) Pharmaceutical compositions comprising polysaccharide conjugates for inhibiting the metastsis or preventing the recurrence of maligant tumor
HU210147B (en) Process for producing antibody-drug conjugates and pharmaceutical compositions containing them
JPH1192405A (ja) 薬物複合体
US20030166513A1 (en) Dds compound and process for the preparation thereof
US20060052288A1 (en) Pharmaceutical composition for inhibiting the metastasis or preventing the recurrence of malignant tumor
AU2010223565B2 (en) Prodrugs
JP2003137818A (ja) 悪性腫瘍の転移抑制または再発予防用組成物
KR100481434B1 (ko) 약물복합체의제조방법

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM

MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): RU