JP4420472B2

JP4420472B2 - 薬物複合体

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Publication number: JP4420472B2
Application number: JP53695197A
Authority: JP
Inventors: 州一菅原; 正洋加治木; 浩栗山; 暢哉北口
Original assignee: Asahi Kasei Corp
Current assignee: Asahi Kasei Corp
Priority date: 1996-04-15
Filing date: 1997-04-15
Publication date: 2010-02-24
Anticipated expiration: 2017-04-15
Also published as: DE69734709D1; US6458347B1; WO1997038727A1; ATE310538T1; EP0895784A4; CA2251742C; EP0895784A1; EP0895784B1; CA2251742A1; JP2009287036A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、生体内に投与した場合、生体内における水酸基を有する薬物の薬物複合体からの遊離速度が制御される薬物複合体に関するものである。更に本発明は、抗腫瘍剤として有用なタキサン類の、水溶性が非常に低いという欠点を改良し、同時にタキサン類の血中からの消失を遅延させ、且つ腫瘍組織への移行性を高めるための新規な多糖タキサン類複合体を提供する。
【０００２】
【従来の技術】
パクリタキセル（商品名：タキソール、米国、ブリストルマイヤーズ・スクイブ社製）は大平洋沿岸諸国のイチイ科樹木タキサスブレビホリア（Taxus brevifolia）の樹皮から抽出された天然物質であり、動物モデルを用いた抗腫瘍活性試験において優れた抗腫瘍活性をもつことが示されている。そして最近の研究によれば、パクリタキセルの抗腫瘍活性における作用機序はチューブリンの異常重合や有糸分裂の阻害を含む特異な作用機序であると説明されている。近年、卵巣ガン、乳ガン、大腸ガンおよび肺ガンを含む研究に関して、有望な成果が示されている。又、ドセタキセル（商品名：タキソテール、米国／仏国、ローヌプーランローラー社製）と呼ばれるパクリタキセルの半合成同族体も、良好な抗腫瘍活性をもつことが見い出されている。
【０００３】
パクリタキセルを代表とするタキサン類の一つの欠点は、その水溶性が非常に低いことである。特にパクリタキセルは投与時、その難溶性のために、非水系医薬溶解補助剤中で配合しなければならない。現在使用されている溶解補助剤の一つはクレモホールＥＬ（米国、シグマ社製）であり、これは過敏症など、それ自身が人に望ましくない副作用を示すことがある。それ故に、多数のパクリタキセルの水溶性誘導体に関する研究が実施され、例えば、タキサン類のホスホノオキシメチルエーテル誘導体に関する技術（日本国特開平７−１４９７７９号）、塩基性条件下に置くことにより除去されるカルボナート型およびエステル型プロドラッグの技術（Nature,365,464-466（1993））が知られている。しかし、プロドラッグとしては、未だ十分な展開がなされていないのが現状である。
【０００４】
薬物の有する種々の欠点をその分子構造を化学的に修飾することにより改善しようとする技術において、薬物と遊離基を結ぶ結合様式の選択は、プロドラッグの効果を左右する重要な因子となっている（ドラッグデリバリーシステム、瀬崎仁編、日本国、南江堂）。酵素反応を利用して、プロドラッグから薬物へ復元する場合、一般にはエステラーゼ、アミダーゼ、カルバミダーゼなど生体内に広く分布する酵素が結合様式選定のための判断材料とされることになる。従って、薬物が水酸基を持つ場合にはカルボン酸エステル、リン酸エステルやアシロキシメチルエーテル、カルボキシル基を持つ場合にはエステルやアミドの構造が結合様式として屡々選択される。
【０００５】
ところで、一般に高分子物質は多様な性状、機能を有し、生体との間に示される相互作用も低分子物質とは大きく異なっていることから、低分子量の薬物を高分子物質に結合させて、その生体内の挙動や細胞との相互作用を制御しようとする試みが数多くなされている。この場合も薬物と高分子物質の間の結合様式の選択がプロドラッグの効果を左右する重要な因子となっている。一般に、薬物と遊離基との結合は、それぞれの有する官能基どうしを直接結合するものが多く、薬物と遊離基の間にスペーサーを介在させる例は少ない。
【０００６】
そういった中で、多糖高分子であるカルボキシメチル化したデキストランを担体として用いる技術については、薬物としてその構造にアミノ基を有する薬物であるドキソルビシンを使用し、そのアミノ基にカルボキシメチル化したデキストラン等を導入し用いる例（国際出願公開第ＷＯ９４／１９３７６号）が知られている。なお、ドキソルビシンはその構造中にアミノ基を有しており、ペプチドをスペーサーとして用いることにより、担体のカルボキシメチルデキストランのカルボキシル基とスペーサー、および薬物の結合は全てアミド結合により成り立っている。従って、血中においてアミド結合は極めて安定であるために、血中で薬物複合体からの薬物遊離速度は極めて小さい。又、水酸基を有する薬物に関しての薬物遊離に関する記載は無い。
【０００７】
又合成高分子を担体として用いる技術については、薬物としてドキソルビシンを使用し、そのアミノ基にペプチドを介してヒドロキシプロピルメタクリルアミド誘導体の重合生成物と結合し、高分子体（ＨＰＭＡ）を調製し用いる例（J.Contr.Rel.,10,51-63（1989）,J.Contr.Rel.,19,331-346（1992）,Eur.J.Cancer,31A（suppl 5）,S193（1995））が知られている。この場合も、薬物とスペーサー、並びにスペーサーと担体の間の結合はいずれもアミド結合である。又、担体が合成高分子であるために、生体内において担体が全く分解されない（代謝されない）ことが予想される。その結果、このような合成高分子を担体として用いた薬物複合体を生体内に投与した場合、担体が異物として生体内に長期間滞留することにより、蓄積毒性や抗原性の問題が生じる危険性がある。そこで、生体内に蓄積せず、速やかに排泄されうる程度の担体分子量としなければならない等の配慮が必要となる。
【０００８】
又、同様の重合法により製造される合成高分子を担体として用いる例としては、ヒドロキシプロピルメタクリルアミド誘導体モノマーの共重合により高分子体（ＨＰＭＡ）を調製し、水酸基を有する薬物であるパクリタキセルを薬物としてその水酸基にペプチド等を介して結合し、用いる例（USP 5,362,831）が知られている。この場合においても、同様に担体が合成高分子であるために、生体内において担体が全く分解されないことが予想される。その結果、このような合成高分子を担体として用いた薬物複合体を生体内に投与した場合においても、担体が異物として生体内に長期間内滞留することにより、上記と同様、蓄積毒性や抗原性の問題が生じる危険性がある。そこで、生体内に蓄積せず、速やかに排泄されうる程度の担体分子量としなければならない等の配慮が必要となる。
【０００９】
更に、合成高分子としてカルボキシル基を導入したポリエチレングリコール（以降ＰＥＧ−ＣＯＯＨとする）を用いる例としては、薬物として水酸基を有する薬物であるパクリタキセルを用い、その水酸基に直接エステル結合を介してＰＥＧ−ＣＯＯＨを結合させる方法（Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters,Vol.4,No.20,2465-2470（1994））が知られている。この場合、このＰＥＧ−ＣＯＯＨと結合させることによるプロドラッグ化によりパクリタキセルの水溶性は向上したが、緩衝液中では安定なものの特に血中においてこのエステル結合が速やかに分解されるために、高分子化修飾による薬物送達の目的には適さない。
この様に、担体と薬物を化学結合させて薬物送達を行う技術については、特にエステル結合により薬物と担体を結合する場合、生体内に存在するエステラーゼ等によるエステル結合切断の速度が極めて早いため、薬物複合体からの薬物遊離速度の制御という問題に関しては、まだ十分に解決されていないのが現状である。
【００１０】
［発明の概要］
かかる状況下において、本発明者等は、薬物にスペーサーを導入し、薬物に導入されたスペーサーを担体に結合させることによって得られる薬物複合体からの薬物遊離速度が制御される薬物複合体を開発すべく鋭意研究を行った。
その結果、意外にも、本発明者等は、水酸基を有する薬物の水酸基に、アミノ基とカルボキシル基を有する化合物であるスペーサーをエステル結合を介して導入し、薬物に導入されたスペーサーをカルボキシル基を有する担体にアミド結合を介して結合させた薬物複合体が、薬物複合体からの薬物遊離速度が制御されることを見い出した。
又、上記の薬物複合体において、スペーサーとして、特定の範囲のＥｓ値を有する置換基Ｘをカルボキシル基に対するα位に有するスペーサーを選択することにより、薬物複合体からの薬物遊離速度が特に効果的に制御されることを見い出した。
【００１１】
更に、タキサン類などの水に難溶性で水酸基を有する薬物の水酸基に、分子中にアミノ基とカルボキシル基を有する化合物であるスペーサーをエステル結合により導入し、薬物に導入されたスペーサーを担体であるカルボキシアルキルデキストランと結合させることにより調製した薬物複合体が、特に特定の範囲のＥｓ値を有する置換基Ｘをカルボキシル基に対するα位に有するスペーサーを選択することにより、生体内における薬物複合体からの薬物遊離速度を制御しうるのみならず、薬物の水に対する溶解性を著しく高め、腫瘍組織などの標的組織への薬物の移行を高めることのできるのみならず、薬物遊離速度を制御して、薬物の効果発現の強さを制御しうることを見い出した。
更に又、薬物としてパクリタキセル等のタキサン類を使用した場合、タキサン類の２’位又は７位の水酸基にスペーサーをエステル結合により導入し、担体としてカルボキシアルキルデキストランを用いると、タキサン類の水に対する溶解性を著しく高め、更に血中消失速度を小さくし、腫瘍組織への薬物の移行を高め、薬効を増強することのできることを見い出した。
【００１２】
更に、１級水酸基を有するステロイド、例えば、ベタメタゾン、プレドニゾロン等の１級水酸基に対し、担体として文献Chem.Pharm.Bull.42（10）2090-2096（1994）に報告されている様なカルボキシアルキル単糖もしくは酢酸、プロピオン酸といった脂肪族カルボン酸を直接エステル結合により導入し調製した化合物においては、薬物であるステロイドが生体内において極めて速やかに遊離してしまうが、ステロイドの１級水酸基に、アミノ酸のようなスペーサーを、エステル結合により導入し、カルボキシアルキル単糖あるいは脂肪族カルボン酸のような担体に結合させることにより調製した薬物複合体は、特に特定の範囲のＥｓ値を有する置換基Ｘをカルボキシル基のα位に有するスペーサーを選択することにより、生体内における薬物複合体からの薬物遊離速度が制御されることを見い出した。
【００１３】
又、水酸基を有する薬物の水酸基に、担体としてＰＥＧ−ＣＯＯＨを結合させる場合、従来の手法では、緩衝液中では薬物遊離の半減期が３時間以上と安定なものの、ラットおよびヒト血漿中における半減期が十分ではなく（J.Med.Chem.,39,1938−1940（1996））、速やかな薬物遊離が見られるのに対し、水酸基を有する薬物の一例であるパクリタキセルの水酸基にアミノ酸のようなスペーサーをエステル結合により導入し、その後スペーサーのアミノ基とＰＥＧのカルボキシル基とアミド結合により結合させることにより調製した薬物複合体は、特に特定の範囲のＥｓ値を有する置換基Ｘをカルボキシル基に対するα位に有するスペーサーを選択することにより、生体内における薬物複合体からの薬物遊離速度が制御されることを見い出した。
【００１４】
本発明は、上記の諸知見に基づいて完成されたものである。
従って、本発明の一つの目的は、薬物複合体であって、該薬物複合体からの薬物遊離速度が確実に制御されて、薬物の標的組織への移行を高めたり、あるいは又薬物の薬効を増強することのできる薬物複合体を提供することにある。
本発明の他の一つの目的は、薬物としてタキサン類を用いる薬物複合体であって、水に難溶性のタキサン類の水溶性を著しく高めると共に、薬物複合体からのタキサン類の遊離速度が確実に制御されて、タキサン類の標的組織への移行を高めたり、あるいは又タキサン類の薬効を増強することのできる薬物複合体を提供することにある。
本発明の更に他の一つの目的は、上記の薬物複合体を含有してなる薬剤を提供することにある。
本発明の上記及び他の諸目的、諸特徴並びに諸利益は、添付の図面を参照しながら述べる次の詳細な説明及び請求の範囲の記載から明らかになる。
【００１５】
【発明が解決しようとする課題】
基本的には、本発明によれば、水酸基を有する薬物の薬物複合体であって、血中における薬物複合体からの薬物遊離速度が制御でき、
（Ａ）少なくとも１つのカルボキシル基を有する糖類、少なくとも１つのカルボキシル基を有するポリエチレングリコール、少なくとも１つのカルボキシル基を有する直鎖状または分岐状Ｃ₂〜Ｃ₈脂肪族カルボン酸、及びそれらの誘導体からなる群より選ばれる少なくとも１つの担体；
（Ｂ）少なくとも１つのアミノ基と少なくとも１つのカルボキシル基を有する化合物よりなる少なくとも１つのスペーサー；及び
（Ｃ）水酸基を有する少なくとも１つの薬物
を包含してなり、
該薬物（Ｃ）の水酸基と該スペーサー（Ｂ）のカルボキシル基との間に形成されたエステル結合を介して、該少なくとも１つの薬物（Ｃ）が、該少なくとも１つのスペーサー（Ｂ）と結合することにより少なくとも１つの薬物−スペーサーブロックを形成し、該少なくとも１つの薬物−スペーサーブロックの該スペーサー（Ｂ）のアミノ基と、該担体（Ａ）の少なくとも１つのカルボキシル基との間に形成されたアミド結合を介して、該少なくとも１つの薬物−スペーサーブロックが該少なくとも１つの担体（Ａ）の少なくとも１つのカルボキシル基と結合している、薬物複合体が提供される。
【００１６】
【課題を解決するための手段】
次に、本発明の理解を容易にするために、まず本発明の基本的諸特徴及び好ましい態様を列挙する。
１．下記（１）式で表わされるタキサン類の複合体であって、担体（Ａ）とスペーサー（Ｂ）とは（Ａ）のカルボキシル基と（Ｂ）のアミノ基との間に形成されたアミド結合を介して結合し、スペーサー（Ｂ）とタキサン類（Ｃ）は（Ｂ）のカルボキシル基と（Ｃ）の２’あるいは７位の水酸基との間に形成されたエステル結合を介して結合していることを特徴とする薬物複合体。
（Ａ）−（Ｂ）−（Ｃ）（１）
（式中、（Ａ）はカルボキシアルキルデキストラン、（Ｂ）はグリシン、アラニン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニンから選ばれるアミノ酸あるいはペプチドよりなるスペーサー、（Ｃ）はタキサン類を表わす。）
【００１７】
２．前記タキサン類（Ｃ）が下記（２）式で表されるタキサン類であり、前記担体（Ａ）が下記（３）式で表されるカルボキシアルキルデキストランであることを特徴とするタキサン類とカルボキシアルキルデキストランを含む前項１に記載の薬物複合体。
【化５】

（式中、Ｒ ¹ はＣ ₁ 〜Ｃ ₆ アルキル基、Ｃ ₁ 〜Ｃ ₆ アルケニル基、Ｃ ₂ 〜Ｃ ₆ アルキニル基、Ｃ ₁ -Ｃ ₆ 直鎖状又は分岐状アルコキシ基又は置換又は無置換フェニル基であり；Ｒ ² は水素、水酸基又はアセチルオキシ基であり；Ｒ ³ 又はＲ ⁴ の一方が水素で他方が水酸基；あるいはＲ ³ とＲ ⁴ が一緒になってオキソ基を形成し；Ｒ ⁵ 又はＲ ⁶ の一方が水素で他方が水酸基を表わす。）
【００１８】
【化６】

（式中、Ｒ ⁷ 、Ｒ ⁸ 及びＲ ⁹ は、同一又は異なっていてもよく、それぞれ独立して、水素原子、−（ＣＨ ₂ ） _m −ＣＯＯＨ基、−ＣＨ（ＣＨ ₃ ）−ＣＯＯＨ基、−ＣＨ ₂ ＣＨ（ＣＨ ₃ ）−ＣＯＯＨ基又は−ＣＨ（ＣＨ ₃ ）ＣＨ ₂ −ＣＯＯＨ基を表わし、ｍは１〜４の整数を表わし、ｎは５０＜ｎ＜１０００の整数を表わす。）
【００１９】
３．前記タキサン類（Ｃ）がパクリタキセルであることを特徴とする前項１または２に記載の薬物複合体。
４．前記タキサン類（Ｃ）がドセタキセルであることを特徴とする前項１または２に記載の薬物複合体。
５．前項１〜４のいずれかに記載の薬物複合体を含有してなることを特徴とする抗腫瘍剤。
【００２０】
６．薬物複合体として、
下記（１）式で表わされるタキサン類の複合体であって、担体（Ａ）とスペーサー（Ｂ）とは（Ａ）のカルボキシル基と（Ｂ）のアミノ基との間に形成されたアミド結合を介して結合し、スペーサー（Ｂ）とタキサン類（Ｃ）は（Ｂ）のカルボキシル基と（Ｃ）の２’あるいは７位の水酸基との間に形成されたエステル結合を介して結合していることを特徴とする薬物複合体
（Ａ）−（Ｂ）−（Ｃ）（１）
（式中、（Ａ）はカルボキシアルキルデキストラン、（Ｂ）はグリシン、アラニン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニンから選ばれるアミノ酸あるいはペプチドよりなるスペーサー、（Ｃ）はタキサン類を表わす。）を使用し、
スペーサー（Ｂ）のカルボキシル基に対するα位の置換基Ｘの、下記式（Ｉ）によって定義される酸加水分解における立体障害パラメータ（Ｅｓ）値が−０．０〜−２．５であり、該立体障害パラメータ（Ｅｓ）値に対応したアミノ酸またはペプチドを選択することにより薬物複合体からのタキサン類遊離速度を制御することを特徴とする薬物遊離速度調整方法。
Ｅｓ＝ｌｏｇ（ｋ _X ／ｋ _H ）（Ｉ）
［式中、ｋ _X は、次の反応式で表されるα位モノ置換酢酸エステルの酸加水分解反応における反応速度定数であり、
Ｘ−ＣＨ ₂ ＣＯＯＲ ^X ＋Ｈ ₂ Ｏ→Ｘ−ＣＨ ₂ ＣＯＯＨ＋Ｒ ^X ＯＨ
（Ｘは上に定義したとおりであり、Ｒ ^X は、Ｃ ₁ 〜Ｃ ₁₈ のアルキル基又はＣ ₁ 〜Ｃ ₁₈ のアリール基である）
ｋ _H は、次の反応式で表される、上記のα位モノ置換酢酸エステルに対応する酢酸エステルの酸加水分解反応における反応速度定数である。
ＣＨ ₃ ＣＯＯＲ ^y ＋Ｈ ₂ Ｏ→ＣＨ ₃ ＣＯＯＨ＋Ｒ ^y ＯＨ
（Ｒ ^y は、Ｒ ^X と同じである）］
【００２１】
７．前記タキサン類（Ｃ）が下記（２）式で表されるタキサン類であり、前記担体（Ａ）が下記（３）式で表されるカルボキシアルキルデキストランであることを特徴とするタキサン類とカルボキシアルキルデキストランを含む前項６に記載の薬物遊離速度調整方法。
【化７】

（式中、Ｒ ¹ はＣ ₁ 〜Ｃ ₆ アルキル基、Ｃ ₁ 〜Ｃ ₆ アルケニル基、Ｃ ₂ 〜Ｃ ₆ アルキニル基、Ｃ ₁ -Ｃ ₆ 直鎖状又は分岐状アルコキシ基又は置換又は無置換フェニル基であり；Ｒ ² は水素、水酸基又はアセチルオキシ基であり；Ｒ ³ 又はＲ ⁴ の一方が水素で他方が水酸基；あるいはＲ ³ とＲ ⁴ が一緒になってオキソ基を形成し；Ｒ ⁵ 又はＲ ⁶ の一方が水素で他方が水酸基を表わす。）
【００２２】
【化８】

（式中、Ｒ ⁷ 、Ｒ ⁸ 及びＲ ⁹ は、同一又は異なっていてもよく、それぞれ独立して、水素原子、−（ＣＨ ₂ ）ｍ−ＣＯＯＨ基、−ＣＨ（ＣＨ ₃ ）−ＣＯＯＨ基、−ＣＨ ₂ ＣＨ（ＣＨ ₃ ）−ＣＯＯＨ基又は−ＣＨ（ＣＨ ₃ ）ＣＨ ₂ −ＣＯＯＨ基を表わし、ｍは１〜４の整数を表わし、ｎは５０＜ｎ＜１０００の整数を表わす。）
【００２３】
８．前記タキサン類（Ｃ）がパクリタキセルであることを特徴とする前項６または７に記載の薬物遊離速度調整方法。
９．前記タキサン類（Ｃ）がドセタキセルであることを特徴とする前項６または７に記載の薬物遊離速度調整方法。
【００２４】
タキサン類の具体例としては、下記式（４）式で表わされるパクリタキセル（商品名：タキソール、米国、ブリストルマイヤーズ・スクイブ社製）、および下記式（５）式で表わされるドセタキセル（商品名：タキソテール、米国／仏国、ローヌプーラシローラー社製）を挙げることができる。更に、それらの誘導体も本発明によるタキサン類に含まれる。
【化９】

【化１０】

【００２５】
本発明におけるスペーサーは、分子中に少なくとも１つのアミノ基と少なくとも１つのカルボキシル基を有する化合物からなり、又、臓器内の酵素（例えばプロテアーゼ、ペプチダーゼ、エステラーゼ）による作用で、薬物又はその活性分子種が速やかに、場合によっては徐々に遊離するものでなければならない。そのようなスペーサーの例としては、蛋白質構成アミノ酸、蛋白質非構成アミノ酸、それらのアミノ酸がペプチド（アミド）結合により連結したペプチドが挙げられる。
本発明中において、蛋白質構成アミノ酸とは、グリシン、アラニン、フェニルアラニン、ロイシン、イソロイシン等の、蛋白質の通常の構成成分であるアミノ酸を意味する。又蛋白質非構成アミノ酸とは、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、ピログルタミン酸、β−シクロヘキシルアラニン、β−アラニン、ε−アミノカプロン酸、γ−アミノ酪酸など、通常蛋白質の構成成分でないアミノ酸を意味する。
【００２６】
本発明におけるスペーサーとして、そのカルボキシル基に対するα位に置換基Ｘを有する化合物が用いられる場合、本発明の薬物複合体からの薬物遊離速度は、置換基Ｘによる立体障害の大きさに大きな影響を受ける。従って、立体障害の大きさが特定の範囲にある置換基Ｘをカルボキシル基に対するα位に有するスペーサーを選択することにより、薬物複合体からの薬物遊離速度を制御することができる。
一般に、化学反応が起こる際、その反応中心に近接した置換基があると、その置換基が反応の進行にさまざまな影響を及ぼす。そのうちの一つが立体障害であり、反応中心に近接した嵩高い置換基Ｘの存在が、化学反応の進行が妨げる事を言う。立体障害は、反応中心に近接した嵩高い置換基Ｘが、試薬の反応中心への接近を妨げるために生じると考えられている。立体障害の大きさは、置換基Ｘの嵩高さに支配される。
【００２７】
置換基の立体障害の大きさを数値化したものに、タフト等が定義したＥｓ値が知られている［American Chemical Society Professional Reference Book,’Exploring QSAR’,C.Hansh A.Leoら著、S.R.Hell編集］。例えば、このＥｓ値が特定の範囲にある置換基Ｘをカルボキシル基に対するα位に有するスペーサーを選択することにより、薬物複合体からの薬物遊離速度が効果的に制御される。以下、Ｅｓ値について説明する。
様々な実験結果より、酸性条件下でのエステルの加水分解反応においては、置換基が反応の進行に対して及ぼす影響は立体障害だけと考えてよいことが知られており、この事を利用して置換基の立体障害を数値化したものがＥｓ値である。
置換基ＸのＥｓ値は、次の化学反応式
Ｘ−ＣＨ₂ＣＯＯＲ^X＋Ｈ₂Ｏ→Ｘ−ＣＨ₂ＣＯＯＨ＋Ｒ^XＯＨ
（Ｘは上に定義した通りであり、Ｒ^Xは、Ｃ₁〜Ｃ₁₈のアルキル基又はＣ₆〜Ｃ₁₈のアリール基である）
で表わされる、酢酸のメチル基の水素原子１つを置換基Ｘで置換したα位モノ置換酢酸から誘導されるα位モノ置換酢酸エステルを酸性条件下で加水分解する際の反応速度定数ｋ_Xと、次の化学反応式
ＣＨ₃ＣＯＯＲ^y＋Ｈ₂Ｏ→ＣＨ₃ＣＯＯＨ＋Ｒ^yＯＨ
（Ｒ^yはＲ^Xと同じである）
で表わされる、上記のα位モノ置換酢酸エステルに対応する酢酸エステルを酸性条件下で加水分解する際の反応速度定数ｋ_Hから、下記式（１）で求められる。
Ｅｓ＝ｌｏｇ（ｋ_X／ｋ_H）（１）
置換基Ｘの立体障害により、反応速度は低下し、その結果ｋ_X＜ｋ_Hとなるので、Ｅｓ値は通常負となる。
【００２８】
実際にＥｓ値を求める場合には、上記の二つの反応速度定数ｋ_Xがｋ_Hを求め、上記の式により算出する。実測に基づくＥｓ値の具体的な例が、上記の成書American Chemical Society Professional Reference Book,’Exploring QSAR’p.81 Table 3-3に記載されている。次にその一部を示す。
置換基Ｘの種類Ｅｓ値
Ｈ０（基準）
ＣＨ₃ −１．２４
ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₅ −１．６１
ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂ −２．１７
ＣＨ（ＣＨ₃）ＣＨ₂ＣＨ₃ −２．３７
【００２９】
本発明のスペーサーとして蛋白質構成アミノ酸を用いる場合、上記の置換基をカルボキシル基に対するα位に有するアミノ酸はそれぞれＧｌｙ、Ａｌａ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅである。このうち例えば、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅについて、カルボキシル基に対するα位の置換基のＥｓ値が大きい順に並べると、Ｉｌｅ＞Ｌｅｕ＞Ａｌａ＞Ｇｌｙであり、この順序で置換基の立体障害は小さくなってゆくことになる。そして、この置換基の立体障害の大きさと、本発明の薬物複合体からの薬物遊離速度には相関が見られる。
例えば、スペーサーが蛋白質構成アミノ酸であるＧｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ又はＩｌｅであり、薬物がパクリタキセルであり、担体がカルボキシメチルデキストランからなる薬物複合体の場合、スペーサーとして用いた蛋白質構成アミノ酸を生体内における薬物複合体からの薬物遊離速度の大きい順に並べると、Ｇｌｙ＞Ａｌａ＞Ｌｅｕ＞Ｉｌｅであり、スペーサーがＧｌｙ又はＰｈｅで、それ以外は前記と同じである薬物複合体の場合、ＧｌｙとＰｈｅを薬物複合体からの薬物遊離速度の大きい順に並べるとＧｌｙ＞Ｐｈｅであった。従って、スペーサーのカルボキシル基に対するα位の置換基のＥｓ値、すなわち、立体障害の大きさと薬物遊離速度の間に相関が見られた。
【００３０】
例えば、スペーサーが蛋白質構成アミノ酸であるＧｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ又はＩｌｅであり、薬物がデキサメタゾンであり、担体がプロピオン酸からなる薬物複合体の場合、スペーサーとして用いた蛋白質構成アミノ酸を生体内における薬物複合体からの薬物遊離速度の大きい順にＧｌｙ＞Ａｌａ＞Ｌｅｕ＞Ｉｌｅであった。従って、スペーサーのカルボキシル基に対するα位の置換基のＥｓ値、すなわち、立体障害の大きさと薬物遊離速度の間に相関が見られた。
更に、スペーサーがペプチドＧｌｙ−Ｐｈｅ又はＰｈｅ−Ｇｌｙであり薬物がパクリタキセルであり、担体がカルボキシメチルデキストランからなる薬物複合体の場合、スペーサーとして用いたペプチドを生体内における薬物複合体からの薬物遊離速度の大きい順に並べるとＰｈｅ−Ｇｌｙ＞Ｇｌｙ−Ｐｈｅであった。従って薬物遊離速度は薬物に直接結合するアミノ酸のカルボキシル基に対するα位の置換基のＥｓ値、すなわち、立体障害の大きさと薬物遊離速度の間に相関が見られた。
【００３１】
従って、スペーサーがペプチド等であっても、薬物遊離速度を制御するためには、薬物の水酸基に直接結合するスペーサーのカルボキシル基に対するα位の置換基の立体障害の大きさが重要である。
本発明における担体は、少なくとも１つのカルボキシル基を有する糖類、少なくとも１つのカルボキシル基を有するポリエチレングリコール、少なくとも１つのカルボキシル基を有する直鎖状又は分岐状Ｃ₂〜Ｃ₈脂肪族カルボン酸、及びそれらの誘導体よりなる群から選ばれる。
本発明における少なくとも１つのカルボキシル基を有する糖類又はその誘導体は、少なくとも１つのカルボキシル基を有する限り特に限定されないが、特にカルボキシアルキルデキストランが好ましい。
【００３２】
本発明におけるカルボキシアルキルデキストランは、デキストランの一部もしくは全部の水酸基の水素原子がカルボキシアルキル基で置換された構造を有し、下記式（３）を主構成単位として構成されるものであり、又、分枝を含んでいてもよい。
【化１１】

（式中、Ｒ⁷、Ｒ⁸およびＲ⁹は同一であっても異なっていてもよく、各々独立に水素原子、あるいは−（ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨ基、−ＣＨ（ＣＨ₃）−ＣＯＯＨ基、−ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）−ＣＯＯＨ基又は、−ＣＨ（ＣＨ₃）ＣＨ₂−ＣＯＯＨ基からなる群より選ばれるカルボキシアルキル基であり、ｍは１〜４の整数であり；ｎは５０〜１０００の整数であり、カルボキシアルキル基の数のｎに対する比は０．１〜２．０である。）
【００３３】
カルボキシアルキル基の好ましい例としては、カルボキシメチル基、カルボキシエチル基、カルボキシｎ−プロピル基、カルボキシイソプロピル基、カルボキシｎ−ブチル基などが挙げられる。
上記において、カルボキシアルキル基の導入の程度は、糖残基一つあたりのカルボキシアルキル基の数（ペプチドが更にこれらに導入されたカルボキシアルキル基の数も含む）として定義される「置換度」によって表わすことができる。すなわち、カルボキシアルキル化したデキストランにおける置換度＝（分子中のカルボキシアルキル基の総数）／（分子中の糖残基の総数）、と表わすことができる。なお、以下この置換度を、カルボキシアルキル基がカルボキシメチル基である場合には「カルボキシメチル化度」と、言うことがある。カルボキシアルキルデキストランの場合、全ての水酸基が置換された場合には置換度は３である。本発明によれば、その置換度は、０．１以上が好ましく、体内動態の面から、更に好ましくは、０．１〜２．０である。
【００３４】
本発明において担体として好ましく用いられるカルボキシアルキルデキストランは、デキストランの水酸基にカルボキシアルキル基を導入することによって得ることができる。例えば、デキストランをアルカリ（例えば溶媒として水を用いる場合には重炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、アンモニア水、水酸化ナトリウム等、溶媒としてＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド又はジメチルスルホキシド等を用いる場合にはピリジン又はトリエチルアミン等）の存在下で溶解し、モノクロロ酢酸を加え氷冷〜室温の温度下で、数分〜数日間かけて反応させた後、反応液のｐＨを酢酸などの酸を加えることにより８に調整し、エタノール中に滴下することにより、カルボキシメチルデキストランを析出沈殿として得ることができる。この場合、反応溶媒、反応時間、反応温度ならびにモノクロロ酢酸およびアルカリの添加量を変化させることにより「置換度」を調節することができる。
【００３５】
本発明におけるカルボキシル基を有するポリエチレングリコールおよびその誘導体は、分子量が１０００〜４００００の範囲にあるものが、好ましい。
本発明におけるスペーサーを薬物に導入する場合について以下に述べる。ここでスペーサーの薬物への導入は、スペーサーのカルボキシル基と、薬物の水酸基とをエステル結合を介することによって行う。なお、薬物とスペーサーとを反応させる場合、合成過程における薬物活性の低下や、担体が高分子の場合担体の架橋、凝集を防ぐために、反応条件はできるだけ穏和な条件であることが望ましく、こうした観点から、ペプチド合成に用いられている方法を採用することが望ましい。
【００３６】
薬物の水酸基にスペーサーを導入する場合、この反応は、通常の有機合成反応に用いられる塩化メチレン、Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン等の溶媒を、薬物その他の反応物を溶解させるに足る量を用い、場合によって適当な縮合剤、例えば、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド、塩酸１−エチル−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、１−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン等を薬物に対して等モル量用いることによって、さらに必要に応じて、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジンを薬物に対して等モル量あるいは触媒量を添加することにより、室温あるいは必要に応じて加熱下、必要に応じてアルゴン、ヘリウム等の乾燥不活性ガス雰囲気下、常圧にて、数時間から数日間反応させることにより、薬物の水酸基にスペーサーの導入を行うことが出来る。さらに、副反応を起こす恐れのあるスペーサーのアミノ基は、Ｆｍｏｃ（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基）、Ｔｒｔ（トリフェニルメチル基）（トリチル基））、Ｚ（ベンジルオキシカルボニル基）等のペプチド合成に用いられる保護基で、カルボキシル基は、ベンジルエステル、第三ブチルエステルあるいはフェナシルエステル等のペプチド合成に用いられる保護基で、さらに水酸基はベンジルエーテル、第三ブチルエーテル等のペプチド合成に用いられる保護基を用いて保護しておくことが望ましい。
【００３７】
次に、薬物に導入されたスペーサーを担体に導入する場合について以下に述べる。
スペーサーのアミノ基に導入された保護基をペプチド合成に用いられる手法、例えば、Ｚ基を用いた場合はパラジウム存在下、水素添加すること等により脱保護し、Ｆｍｏｃ基を用いた場合は、ピペリジン等で処理することにより、Ｔｒｔ基を用いた場合には、酢酸等で処理することにより、脱保護する。
その後薬物に導入されたスペーサーを、スペーサーのアミノ基を用いて、カルボキシル基を有する担体に結合させる場合、この反応は、一般的な有機合成反応に用いる塩化メチレン、Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン等の溶媒を用いても良いし、特に担体が水溶性である場合には、水とＮ，Ｎ’−ジメチルホルムアミドやジメチルスルホキシド等の親水性の有機溶媒との混合溶媒を必要量用い、場合によって適当な縮合剤、例えば、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド、塩酸１−エチル−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、１−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン等を必要量用いることによって、室温もしくは４℃、常圧下で数時間から数日間の反応時間により行うことができる。又、薬物の導入量は、担体に対する薬物に導入されたスペーサーの量を変えることにより、あるいは反応時間を変えることにより、又あるいは用いる縮合剤の量を変えることにより制御できる。
【００３８】
本発明において、カルボキシル基を有する担体と水酸基を有する薬物とを結合するためのスペーサーとしては、その末端にアミノ基を有し、他端にカルボキシル基を有している物であればよく、その一例である、ペプチドについて以下に示す。
本発明において用いられるスペーサーとしてのペプチドは、薬物放出特性を考慮して、又その合成工程の煩雑さを考慮するとアミノ酸の数が６以下であるペプチドがより好ましく、更に好ましくは４以下である。又、「アミノ酸を含んでなるペプチド」とは、このペプチドがアミノ酸のみからなる場合に加えて、ペプチドの一部にアミノ酸以外の化合物を含む場合も包含する。例えば、コハク酸のような二塩基カルボン酸がペプチドの中に又は末端に存在していてもよい。又、このペプチドを構成するアミノ酸は、蛋白質構成アミノ酸をはじめとするα−アミノ酸の他に、β−アラニン、ε−アミノカプロン酸、γ−アミノ酪酸などのα−アミノ酸以外のアミノ酸であってもよい。又、ペプチドの結合方法は、担体のカルボキシル基とペプチドのＮ末端におけるアミノ基とのアミド結合によって結合しているのが通常であるが、二つのアミノ基を有するアミノ酸のうちの一方のアミノ基（例えば、ペプチド中にリジンが存在する場合にはそのε−アミノ基）を担体のカルボキシル基と結合させ、他のアミノ基にペプチドのＣ末端を結合させることによってペプチドの結合方向を逆転させ、更にそのペプチドのＮ末端にカルボキシル基を二つ有するアミノ酸、例えばグルタミン酸の一方のカルボキシル基を結合させ、他の一方のカルボキシル基に薬物を結合させてもよい。
ペプチドを構成するアミノ酸の種類については特に限定されないが、臓器内での酵素（例えばプロテアーゼ、ペプチダーゼ、エステラーゼ）による作用で、薬物が速やかに、場合によっては徐々に遊離されるものでなくてはならない。ペプチドを構成するアミノ酸は中性アミノ酸、塩基性アミノ酸および酸性アミノ酸のいずれであってもよい。本発明の好ましい態様によれば、−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−および鎖中にこの配列を含むペプチド等が挙げられる。これらのペプチドのＮ末端側のアミノ基が、アミド結合によって、担体のカルボキシル基と結合する。
【００３９】
次に、ペプチドをタキサン類に導入する場合について以下に述べる。ここでペプチドへのタキサン類の導入は、ペプチドのＣ末端と、タキサン類の２’位又は７位の水酸基とをエステル結合を介して結合させることによって行う。
タキサン類の２’位の水酸基にペプチドを導入する場合には、適当な縮合剤、例えば、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド、塩酸１−エチル−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、１−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン等を用いることによって直接２’位にペプチドを導入することが出来る。なお、タキサン類とペプチドとを反応させる場合、ペプチドの副反応を起こす恐れのあるＮ末端および側鎖官能基をＦｍｏｃ（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基）、Ｔｒｔ（トリフェニルメチル基（トリチル基））、Ｚ（ベンジルオキシカルボニル基）等のペプチド合成に用いられる保護基で保護しておくことが望ましい。
タキサン類の７位の水酸基にペプチドを導入する場合には、まず２’位の水酸基を、例えばペプチド合成でよく用いられる、Ｚの様な適当な保護基を用いて保護し、次いで、７位の水酸基に目的とするペプチドを上述の方法と同様の方法で導入する。保護ペプチドを導入後、例えば、水素添加、弱酸、弱塩基といったタキサン類が分解しない様な反応条件で、保護基を除去することが望ましい。
【００４０】
つぎに、タキサン類の２’位又は７位の水酸基に導入されたペプチドをカルボキシアルキルデキストランに結合させる場合、この反応は、例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシドといった極性溶媒と水との混合溶媒を用い、場合によって適当な縮合剤、例えば、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド、塩酸１−エチル−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、１−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロフォスフェート（ＨＡＴＵ）等を用いることによって行うことができる。
本発明の、薬物が水酸基を有し、スペーサーがアミノ基とカルボキシル基を有し、担体がカルボキシル基を有する薬物複合体について、薬物導入率、投与方法を述べる。
担体への薬物導入率は、薬物の種類によって適宜選択されるが、担体の好ましい生体内動態を薬物複合体に反映させるために、一般的には、薬物複合体に対して、１〜３０重量％が好ましく、１〜１５重量％が特に好ましい。
この様にして得た複合体は、元の薬物と同様の方法で使用することが出来る。
【００４１】
本発明の薬物複合体の投与用量、形態、スケジュールは特に制約を受けるものではなく、又用いる特定の薬物複合体によって変動することがありうる。本発明の薬物複合体は、どの様な適宜な投与経路によって投与されてもよいが、好ましくは、非経口投与であり、その投与量は、製剤の組成、投与の経路及び部位、宿主及び治療する疾患の種類によって変化しうる。更に、年齢、体重、性別、食事及び患者の体調などを含む薬剤の作用を変化させる多くの要素が、投与量設定の場合には考慮されねばならない。
本発明の一例である、薬物がパクリタキセルであり、スペーサーがアミノ酸又はペプチドであり、担体がカルボキシアルキルデキストランである薬物複合体について、薬物導入率、溶解度、投与方法を述べる。
【００４２】
カルボキシアルキルデキストランへのパクリタキセルの導入率は、担体であるカルボキシアルキルデキストランの好ましい生体内動態を薬物複合体に反映させるために、一般的には、薬物複合体に対して、１〜３０重量％が好ましく、１〜１０重量％が特に好ましい。
この様にして得たカルボキシアルキルデキストラン、スペーサー、及びパクリタキセルとからなる複合体は、パクリタキセルに比べて極めて優れた水溶性を示した。すなわち、パクリタキセルの溶解度は＜０．００４ｍｇ／ｍｌであると報告されているが（Ｎａｔｕｒｅ，３６５，４６４−４６６（１９９３））、本複合体の溶解度をパクリタキセルの溶解度に換算すると１．６ｍｇ／ｍｌ以上である。従って、抗腫瘍効果の評価実験を実施する場合、本複合体を溶解する際に、溶解補助剤は不要であり、直接生理食塩水に溶解し、静脈内投与することが可能である。
【００４３】
本発明の薬物複合体は、元の薬物の場合と同様な方法で使用することが出来る。本発明の薬物複合体の投与用量、形態、スケジュールは特に制約を受けるものではなく、又用いる特定の薬物複合体によって変動することがありうる。本発明の薬物複合体は、どのような適宜な投与経路によって投与されてもよいが、好ましくは、非経口投与であり、その投与用量は、薬物がパクリタキセルの場合、一般には成人一日当り、パクリタキセルの量に換算して約２０〜約１０００ｍｇ／ｍ²体表面積程度である。使用する実際の用量は製剤の組成、投与の経路及び部位、宿主及び治療する腫瘍の種類によって変化しうる。更に、年齢、体重、性別、食事及び患者の体調などを含む薬剤の作用を変化させる多くの要素が、投与量設定の場合には考慮されねばならない。
【００４４】
【発明の実施の形態】
以下に実施例、参考例及び実験例により本発明を具体的に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。
又、実施例中の化合物番号は後述する合成過程を示すスキーム中に示された番号である。
更に以下の実験例において、多糖誘導体のカルボキシメチル化度は、アルカリ滴定によって求めた。又、薬物の導入量（重量％）は、薬物の吸光度分析（２５４ｎｍ）から求めた。更にゲル濾過法は以下の条件によって行った（カラム：日本国、東ソー株式会社製ＴＳＫＧｅｌＧ４０００ＰＷ_XL、溶離液：０．１ＭＮａＣｌ、流速：０．８ｍｌ／ｍｉｎ、カラム温度：４０℃、試料注入量：約５０μｇ）。高分解能質量スペクトル（以降単にＨＲＭＳとする）はマトリックスとしてグリセリン又はグリセリンと３−ニトロベンジルアルコールの混合物を用い、高速原子衝撃質量分析法（ＦＡＢ−ＭＳ）により、日本国、日本電子株式会社製ＪＭＳＨＸ−１１０型質量分析装置を用いて測定した。
以下の参考例および実施例では次の略号を使用する。ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｔｒｔ：トリフェニルメチル基（トリチル基）、Ｚ：ベンジルオキシカルボニル基、Ｆｍｏｃ：９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基、ＰＥＧ：ポリ（エチレングリコール）メチルエーテル分子量５，０００、ｔＢｕＯＫ：Potassium t-butoxide,ＤＭＳＯ−ｄ６：重水素化ジメチルスルホキシド
【００４５】
【実施例】
実施例１
（工程１）カルボキシメチル化デキストランナトリウム塩（１）の製造
精製水２００ｍｌに氷冷下、水酸化ナトリウム（４０ｇ）を加え、ついでデキストラン（仏国、エクストラシンテーゼ社製：Ｔ１１０、１０ｇ）を加え溶解した。この溶液に対し、室温下、モノクロロ酢酸（５０ｇ）を加え、２０時間反応させた。この反応液のｐＨを酢酸を用いて８に調整し、メタノール（１．５１）に注加し、生じた沈殿を集め、精製水（２００ｍｌ）に溶解した。透析膜（分子量カットオフ１２，０００−１４，０００、米国、スペクトラム社製）を用い、この水溶液を精製水に対して４℃で２日間透析した。この内液をメンブランフィルター（０．２２μｍ）にて濾過した後、凍結乾燥した。表記化合物（１）（１１．５ｇ）を得た。この物質の糖残基当たりのカルボキシメチル化度は０．６であった。又本化合物のゲル濾過溶出パターン（検出：２１４ｎｍにおける紫外吸光度および屈折率）は、それぞれ図１および図２に示されるとおりである。本化合物の、プルランを標準とするゲル濾過法による分子量は、約１５万であった。
【００４６】
（工程２）２’−Ｇｌｙ−パクリタキセル（２）の製造
Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ（１７８ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）および、ジメチルアミノピリジン（７３ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）およびパクリタキセル（インド国、ＤＡＢＵＲ社製、４２７ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（２０ｍｌ）に溶解した。次いで、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（７６ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）を加え室温で終夜撹拌した。反応溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No.9385,Silica gel 60,200-400 mesh,カラム：４．０×３０ｃｍ、溶離液：塩化メチレン／アセトニトリル＝７０／３０）で精製し、２’−Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−パクリタキセル（４９９ｍｇ）を得た。この化合物（４２０ｍｇ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍｌ）に溶解し、室温下ピペリジン（２ｍｌ）を加え、５分間撹拌し、溶媒を留去して、脱Ｆｍｏｃ化し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No.9385,Silica gel 60,200-400 mesh,カラム：４．０×５０ｃｍ、溶離液：アセトニトリル／塩化メチレン＝８０／２０）で精製し、標記化合物（２）（１４１ｍｇ）を得た。
【００４７】
¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１．０１（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１７）１．０５（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１６）１．５２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１４．６，９．２Ｈｚ，Ｈ−１４ｂ）１．５１（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１９）１．６５（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）１．８１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．５，９．６Ｈｚ，Ｈ−１４ａ）１．８６（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１８）２．１１（ｓ，３Ｈ，Ａｃ−１０）２．２３（ｓ，３Ｈ，Ａｃ−４）２．３２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６ａ）３．５８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｈ−３）３．９６〜４．０７（ｍ，３Ｈ，ＧｌｙＣＨ２，Ｈ−２０）４．１０(ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．７，１０．７，Ｈ−７）４．６３（ｓ，１Ｈ，ＯＨ−１）４．９０（ｂｒｓ，１Ｈ，ＯＨ−７）４．９１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，Ｈ−５）５．４３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０，Ｈ−２）５．４６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，Ｈ−２’）５．５８（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−３’）５．８７（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，Ｈ−１３）６．３０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１０）７．１９〜８．００（ａｒｏｍａｔｉｃ，１５Ｈ）８．４０（ｂｒｓ，２Ｈ，ＧｌｙＮＨ２）９．２５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，ＣＯＮＨ−３’）
ＨＲＭＳ：ｍ／ｚ９１１．３６０４（Ｍ＋Ｈ）⁺：Ｃ₄₉Ｈ₅₅Ｏ₁₅Ｎ₂としての計算値９１１．３６０２
【００４８】
（工程３）カルボキシメチル化デキストラン−２’−Ｇｌｙ−パクリタキセル（３）の製造
工程１で得た、カルボキシメチル化デキストランナトリウム塩（１）（１００ｍｇ）を水２ｍｌに溶解し、氷冷下、この溶液にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド２ｍｌを加えた。この溶液に工程２で得た、２’−Ｇｌｙ−パクリタキセル（２）（３０ｍｇ）を溶解した水：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１：１）混合液（０．５ｍｌ）および１−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン（１００ｍｇ）を溶解したＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍｌ）を加え、室温で２時間撹拌した。反応液をエタノール（１００ｍｌ）に注加し、生じた沈殿を集め、精製水（１０ｍｌ）に溶解した。この水溶液をエタノール（１００ｍｌ）に注加し、生じた沈殿をアセトンおよびエーテルで洗浄し、白色非晶質の標記化合物（３）（１０５ｍｇ）を得た。
本複合体の薬物の導入量は、２５４ｎｍにおける紫外吸光度および複合体の総重量から算出したところ、３．７％（重量％）であった。本複合体のゲル濾過溶出パターン（検出：２２７ｎｍにおける紫外吸光度）と紫外部吸光スペクトルはそれぞれ図３、図４に示されるとおりである。
【００４９】
（工程４）プロパノイル−２’−Ｇｌｙ−パクリタキセル（４）の製造
プロピオン酸（７．４ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド２ｍｌに溶解し、この溶液に工程２で得た、２’−Ｇｌｙ−パクリタキセル（２）（４５ｍｇ，０．０５ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（１２ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（１２．６ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を加え、室温下で終夜撹拌し、反応溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No.9365,Silica gel 60,200-400 mesh,溶離液：塩化メチレン／アセトニトリル＝７０／３０）で精製し、標記化合物（４）（３０ｍｇ）を得た。
【００５０】
¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１．０１（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１７）１．０５（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１６）１．０６（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，Ｍｅ−Ｐｒ）１．５２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１４．６，９．２Ｈｚ，Ｈ−１４ｂ）１．５１（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１９）１．６５（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）１．８１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．５，９．６Ｈｚ，Ｈ−１４ａ）１．８６（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１８）２．１１（ｓ，３Ｈ，Ａｃ−１０）２．２３（ｓ，３Ｈ，Ａｃ−４）２．３２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６ａ）２．４０（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，ＣＨ₂−Ｐｒ）３．５８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｈ−３）３．９６−４．０７（ｍ，３Ｈ，ＧｌｙＣＨ₂，Ｈ−２０）４．１０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．７，１０．７，Ｈ−７）４．６３（ｓ，１Ｈ，ＯＨ−１）４．９０（ｂｒｓ，１Ｈ，ＯＨ−７）４．９１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，Ｈ−５）５．４３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０，Ｈ−２）５．４６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，Ｈ−２’）５．５８（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−３’）５．８７（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，Ｈ−１３）６．３０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１０）７．１９−８．００（ａｒｏｍａｔｉｃ，１５Ｈ）８．４０（ｂｒｓ，２Ｈ，ＧｌｙＮＨ₂）９．２５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，ＣＯＮＨ−３’）
【００５１】
（工程５）ＰＥＧ−２’−Ｇｌｙ−パクリタキセル（５）の製造
ＰＥＧ（Poly（ethylene glycol）methyl ether,Ｍｗ＝５，０００，米国、Ａｌｄｒｉｃｈ社製）をもとに、モノブロモ酢酸エチルおよびｔＢｕＯＫを用い、文献Journal of Controlled Release,10,145-154（1989）およびPolymer Bulletin,18,487-493（1987）に従い、カルボキシメチル化ＰＥＧ（ＣＭ−ＰＥＧ）を調製した。ＣＭ−ＰＥＧ（５００ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド５ｍｌに溶解し、この溶液に工程２で得た、２’−Ｇｌｙ−パクリタキセル（２）（４５ｍｇ，０．０５ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（１２ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（１２．６ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を加え、室温下で終夜撹拌し、反応溶媒を留去した後、２−プロパノールに加熱溶解し、再結晶を行った。生成した析出物を冷却した２−プロパノール、及びエーテルにて洗浄した後、減圧下乾燥し、標記化合物（５）（１５０ｍｇ）を得た。本複合体の紫外部吸光スペクトルは図５に示されるとおりである。
【００５２】
実施例２
（工程１）２’−Ａｌａ−パクリタキセル（６）の製造
Ｚ−Ａｌａ（１４５ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）および、ジメチルアミノピリジン（７９ｍｇ，０．６５ｍｍｏｌ）およびパクリタキセル（インド国、ＤＡＢＵＲ社製、４２７ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（２０ｍｌ）に溶解した。次いで、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（８２ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）を加え室温で終夜撹拌した。反応溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No.9385,Silica gel 60,200-400 mesh,カラム：４．０×３０ｃｍ、溶離液：塩化メチレン／アセトニトリル＝７０／３０）で精製し、２’−Ｚ−Ａｌａ−パクリタキセル（４３１ｍｇ）を得た。この化合物（４００ｍｇ）をジオキサン（２０ｍｌ）に溶解しパラジウム−炭素触媒（２００ｍｇ）を加え、水素雰囲気下、４時間撹拌し、触媒を濾去した後、減圧下溶媒を留去し、残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No.9385,Silica gel 60,200-400 mesh,カラム：２．０×３０ｃｍ、溶離液：塩化メチレン／メタノール／アセトニトリル＝９５／５／５）で精製し、標記化合物（６）（２３１ｍｇ）を得た。
【００５３】
¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１．０１（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１７）１．０３（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１６）１．１４（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−Ａｌａ）１．５１（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１９）１．６１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．６，９．２Ｈｚ，Ｈ−１４ｂ）１．６４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）１．８１（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１８）１．８８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．３，９．５Ｈｚ，Ｈ−１４ａ）２．１１（ｓ，３Ｈ，Ａｃ−１０）２．２７（ｓ，３Ｈ，Ａｃ−４）２．３３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６ａ）３．５２（ｑ，１Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｈ−Ａｌａ）３．６０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，Ｈ−３）４．０２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ，Ｈ−２０）４．０３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ，Ｈ−２０）４．１２（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．６，６．６，１７．４Ｈｚ，Ｈ−７）４．６６（ｓ，１Ｈ，ＯＨ−１）４．９１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．６，ＯＨ−７）４．９２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，Ｈ−５）５．３５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．６，Ｈ−２’）５．４３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｈ−２）５．６４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，Ｈ−３’）５．８７（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，Ｈ−１３）６．３０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１０）７．２０〜８．００（ａｒｏｍａｔｉｃ，１５Ｈ）９．１７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ＣＯＮＨ−３’）
ＨＲＭＳ：ｍ／ｚ９２５．３７９７（Ｍ＋Ｈ）⁺：Ｃ₅₀Ｈ₅₇Ｏ₁₅Ｎ₂としての計算値９２５．３７５９
【００５４】
（工程２）カルボキシメチル化デキストラン−２’−Ａｌａ−パクリタキセル（７）の製造
実施例１で得た、カルボキシメチル化デキストランナトリウム塩（１）（１００ｍｇ）を水２ｍｌに溶解し、氷冷下、この溶液にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド２ｍｌを加えた。この溶液に工程１で得た、２’−Ａｌａ−パクリタキセル（６）（３０ｍｇ）を溶解した水：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１：１）混合液（０．５ｍｌ）および１−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン（１００ｍｇ）を溶解したＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍｌ）を加え、室温で２時間撹拌した。反応液をエタノール（１００ｍｌ）に注加し、生じた沈殿を集め、精製水（１０ｍｌ）に溶解した。この水溶液をエタノール（１００ｍｌ）に注加し、生じた沈殿をアセトンおよびエーテルで洗浄し、白色非晶質の標記化合物（７）（１０５ｍｇ）を得た。
本複合体の薬物の導入量は、２５４ｎｍにおける紫外吸光度および複合体の総重量から算出したところ、１．７％（重量％）であった。本複合体のゲル濾過溶出パターン（検出：２２７ｎｍにおける紫外吸光度）と紫外部吸光スペクトルはそれぞれ図６、図７に示されるとおりである。
【００５５】
（工程３）プロパノイル−２’−Ａｌａ−パクリタキセル（８）の製造
プロピオン酸（７．４ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド２ｍｌに溶解し、この溶液に工程１で得た、２’−Ａｌａ−パクリタキセル（６）（４５ｍｇ，０．０５ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（１２ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（１２．６ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を加え、室温下で終夜撹拌し、反応溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No.9385,Silica gel 60,200-400 mesh,溶離液：塩化メチレン／アセトニトリル＝７０／３０）で精製し、標記化合物（８）（３２ｍｇ）を得た。
【００５６】
¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１．０１（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１７）１．０３（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１６）１．０６（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，Ｍｅ−Ｐｒ）１．１４（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−Ａｌａ）１．５１（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１９）１．６１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．６，９．２Ｈｚ，Ｈ−１４ｂ）１．６４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）１．８１（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１８）１．８８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．３，９．５Ｈｚ，Ｈ−１４ａ）２．１１（ｓ，３Ｈ，Ａｃ−１０）２．２７（ｓ，３Ｈ，Ａｃ−４）２．３３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６ａ）２．４０（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，ＣＨ₂−Ｐｒ）３．５２（ｑ，１Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｈ−Ａｌａ）３．６０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，Ｈ−３）４．０２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ，Ｈ−２０）４．０３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ，Ｈ−２０）４．１２（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．６，６．６，１７．４Ｈｚ，Ｈ−７）４．６６（ｓ，１Ｈ，ＯＨ−１）４．９１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．６，ＯＨ−７）４．９２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，Ｈ−５）５．３５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．６，Ｈ−２’）５．４３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｈ−２）５．６４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，Ｈ−３’）５．８７（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，Ｈ−１３）６．３０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１０）７．２０−８．００（ａｒｏｍａｔｉｃ，１５Ｈ）９．１７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ＣＯＮＨ−３’）
【００５７】
（工程４）ＰＥＧ−２’−Ａｌａ−パクリタキセル（９）の製造
実施例１工程５で得た、ＣＭ−ＰＥＧ（５００ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド５ｍｌに溶解し、この溶液に工程１で得た、２’−Ａｌａ−パクリタキセル（６）（４５ｍｇ，０．０５ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（１２ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（１２．６ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を加え、室温下で終夜撹拌し、反応溶媒を留去した後、２−プロパノールに加熱溶解し、再結晶を行った。生成した析出物を冷却した２−プロパノール、及びエーテルにて洗浄した後、減圧下乾燥し、標記化合物（９）（１６０ｍｇ）を得た。本複合体の紫外部吸光スペクトルは図８に示されるとおりである。
【００５８】
実施例３
（工程１）２’−Ｌｅｕ−パクリタキセル（１０）の製造
Ｚ−Ｌｅｕ（１７２ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）および、ジメチルアミノピリジン（７９ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）およびパクリタキセル（インド国、ＤＡＢＵＲ社製、４２７ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（２０ｍｌ）に溶解した。次いで、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（８２ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）を加え室温で終夜撹拌した。反応溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No.9385,Sillca gel 60,200-400 mesh,カラム：４．０×３０ｃｍ、溶離液：塩化メチレン／アセトニトリル＝７０／３０）で精製し、２’−Ｚ−Ｌｅｕ−パクリタキセル（４５４ｍｇ）を得た。この化合物（４００ｍｇ）をジオキサン（２０ｍｌ）に溶解しパラジウム−炭素触媒（２００ｍｇ）を加え、水素雰囲気下、４時間撹拌し、触媒を濾去した後、減圧下溶媒を留去し、残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No.9385,Silica gel 60,200-400 mesh,カラム：４．０×３０ｃｍ、溶離液：塩化メチレン／メタノール／アセトニトリル＝９５／５／５）で精製し、標記化合物（１０）（２８９ｍｇ）を得た。
【００５９】
¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．６６（ｄ，３Ｈ，Ｍｅ−Ｌｅｕ）０．７０（ｄ，３Ｈ，Ｍｅ−Ｌｅｕ）１．０１（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１７）１．０３（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１６）１．２６（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．４，８．５，１３．４Ｈｚ，Ｈ−Ｌｅｕ）１．３６（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．８，７．６，１３．４Ｈｚ，Ｈ−Ｌｅｕ）１．５１（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１９）１．５６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．３，９．０Ｈｚ，Ｈ−１４ｂ）１．６４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６ｂ）１．６７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−Ｌｅｕ）１．７９（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１８）１．８４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．３，９．５Ｈｚ，Ｈ−１４ａ）２．１０（ｓ，３Ｈ，Ａｃ−１０）２．２５（ｓ，３Ｈ，Ａｃ−４）２．３３（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１４．７，９．５，６．４Ｈｚ，Ｈ−６ａ）３．３８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．６，５．８Ｈｚ，Ｈ−Ｌｅｕ）３．５９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｈ−３）４．０１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．８Ｈｚ，Ｈ−２０）４．０３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．８Ｈｚ，Ｈ−２０）４．１２（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．９，６．９，１１．０Ｈｚ，Ｈ−７）４．６４（ｓ，１Ｈ，ＯＨ−１）４．９０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０，ＯＨ−７）４．９２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ，Ｈ−５）５．３４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．２，Ｈ−２’）５．４２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｈ−２）５．６２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−３’）５．８６（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，Ｈ−１３）６．３０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１０）７．２０〜８．００（ａｒｏｍａｔｉｃ，１５Ｈ）９．１６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ＣＯＮＨ−３’）
ＨＲＭＳ：ｍ／ｚ９６７．４３２１（Ｍ＋Ｈ）⁺：Ｃ₅₃Ｈ₆₃Ｏ₁₅Ｎ₂としての計算値９６７．４２２８
【００６０】
（工程２）カルボキシメチル化デキストラン−２’−Ｌｅｕ−パクリタキセル（１１）の製造
実施例１で得た、カルボキシメチル化デキストランナトリウム塩（１）（１００ｍｇ）を水２ｍｌに溶解し、氷冷下、この溶液にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド２ｍｌを加えた。この溶液に工程２で得た、２’−Ｌｅｕ−パクリタキセル（１０）（３０ｍｇ）を溶解した水：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１：１）混合液（０．５ｍｌ）および１−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン（１００ｍｇ）を溶解したＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍｌ）を加え、室温で２時間撹拌した。反応液をエタノール（１００ｍｌ）に注加し、生じた沈殿を集め、精製水（１０ｍｌ）に溶解した。この水溶液をエタノール（１００ｍｌ）に注加し、生じた沈殿をアセトンおよびエーテルで洗浄し、白色非晶質の標記化合物（１１）（１０６ｍｇ）を得た。
本複合体の薬物の導入量は、２５４ｎｍにおける紫外吸光度および複合体の総重量から算出したところ、１．７％（重量％）であった。本複合体のゲル濾過溶出パターン（検出：２２７ｎｍにおける紫外吸光度）と紫外部吸光スペクトルはそれぞれ図９、図１０に示されるとおりである。
【００６１】
（工程３）プロパノイル−２’−Ｌｅｕ−パクリタキセル（１２）の製造
プロピオン酸（７．４ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド２ｍｌに溶解し、この溶液に工程１で得た、２’−Ｌｅｕ−パクリタキセル（１０）（４５ｍｇ，０．０５ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（１２ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（１２．６ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）を加え、室温下で終夜撹拌し、反応溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No.9385,Silica gel 60,200-400 mesh,溶離液：塩化メチレン／アセトニトリル＝７０／３０）で精製し、標記化合物（１２）（３４ｍｇ）を得た。
【００６２】
¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．６６（ｄ，３Ｈ，Ｍｅ−Ｌｅｕ）０．７０（ｄ，３Ｈ，Ｍｅ−Ｌｅｕ）１．０１（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１７）１．０３（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１６）１．０６（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，Ｍｅ−Ｐｒ）１．２６（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．４，８．５，１３．４Ｈｚ，Ｈ−Ｌｅｕ）１．３６（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．８，７．６，１３．４Ｈｚ，Ｈ−Ｌｅｕ）１．５１（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１９）１．５６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．３，９．０Ｈｚ，Ｈ−１４ｂ）１．６４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６ｂ）１．６７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−Ｌｅｕ）１．７９（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１８）１．８４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．３，９．５Ｈｚ，Ｈ−１４ａ）２．１０（ｓ，３Ｈ，Ａｃ−１０）２．２５（ｓ，３Ｈ，Ａｃ−４）２．３３（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１４．７，９．５，６．４Ｈｚ，Ｈ−６ａ）２．４０（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，ＣＨ₂−Ｐｒ）３．３８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．６，５．８Ｈｚ，Ｈ−Ｌｅｕ）３．５９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｈ−３）４．０１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．８Ｈｚ，Ｈ−２０）４．０３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．８Ｈｚ，Ｈ−２０）４．１２（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．９，６．９，１１．０Ｈｚ，Ｈ−７）４．６４（ｓ，１Ｈ，ＯＨ−１）４．９０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０，ＯＨ−７）４．９２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ，Ｈ−５）５．３４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．２，Ｈ−２’）５．４２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｈ−２）５．６２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−３’）５．８６（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，Ｈ−１３）６．３０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１０）７．２０−８．００（ａｒｏｍａｔｉｃ，１５Ｈ）９．１６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ＣＯＮＨ−３’）
【００６３】
（工程４）ＰＥＧ−２’−Ｌｅｕ−パクリタキセル（１３）の製造
実施例１工程５で得た、ＣＭ−ＰＥＧ（５００ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド５ｍｌに溶解し、この溶液に工程１で得た、２’−Ｌｅｕ−パクリタキセル（１０）（４５ｍｇ，０．０５ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（１２ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（１２．６ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）を加え、室温下で終夜撹拌し、反応溶媒を留去した後、２−プロパノールに加熱溶解し、再結晶を行った。生成した析出物を冷却した２−プロパノール、及びエーテルにて洗浄した後、減圧下乾燥し、標記化合物（１３）（１４５ｍｇ）を得た。本複合体の紫外部吸光スペクトルは図１１に示されるとおりである。
【００６４】
実施例４
（工程１）２’−Ｉｌｅ−パクリタキセル（１４）の製造
Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ（２１２ｍｇ，０．６ｍｍｏｌ）および、ジメチルアミノピリジン（７３ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）およびパクリタキセル（インド国、ＤＡＢＵＲ社製、４２７ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（２０ｍｌ）に溶解した。次いで、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（７６ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）を加え室温で終夜撹拌した。反応溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマト・グラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No.9385,Silica gel 60,200-400 mesh,カラム：２．０×３０ｃｍ、溶離液：塩化メチレン／アセトニトリル＝７０／３０）で精製し、２’−Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−パクリタキセル（５５２ｍｇ）を得た。この化合物（４７０ｍｇ）をＤＭＦ（１０ｍｌ）に溶解し、室温下ピペリジン（２ｍｌ）を加え、５分間撹拌した後、減圧下溶媒を留去し、残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No.9385,Silica gel 60,200-400 mesh,カラム：４．０×３０ｃｍ、溶離液：塩化メチレン／メタノール／アセトニトリル＝９５／５／５）で精製し、標記化合物（１４）（３５３ｍｇ）を得た。
【００６５】
¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．６２（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，Ｍｅ−Ｉｌｅ）０．８１（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，Ｍｅ−Ｉｌｅ）１．０１（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１７）１．０３（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１６）１．０７（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１４．４，７．３，４．９Ｈｚ，Ｈ−Ｉｌｅ）１．３２（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．４，７．６，４．６Ｈｚ，Ｈ−Ｉｌｅ）１．５１（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１９）１．５６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．３，９．２Ｈｚ，Ｈ−１４ｂ）１．５６−１．６１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−Ｉｌｅ）１．６４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．７，３．１Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）１．７９（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１８）１．８７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．３，９．８Ｈｚ，Ｈ−１４ａ）２．１０（ｓ，３Ｈ，Ａｃ−１０）２．２９（ｓ，３Ｈ，Ａｃ−４）２．３３（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１４．４，９．６，６．４Ｈｚ，Ｈ−６ａ）３．６０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，Ｈ−３）３．６０−３．６７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−Ｉｌｅ）４．０２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．６Ｈｚ，Ｈ−２０）４．０３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．６Ｈｚ，Ｈ−２０）４．１２（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．８，６．７，６．７Ｈｚ，Ｈ−７）４．６４（ｓ，１Ｈ，ＯＨ−１）４．９０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０，ＯＨ−７）４．９２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，Ｈ−５）５．３７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，Ｈ−２’）５．４３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，Ｈ−２）５．６４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，Ｈ−３’）５．８５（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝０．９，９．２Ｈｚ，Ｈ−１３）６．３０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１０７．２０〜８．００（ａｒｏｍａｔｉｃ，１５Ｈ）９．１５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，ＣＯＮＨ−３’）
ＨＲＭＳ：ｍ／ｚ９６７．４２３４（Ｍ＋Ｈ）⁺：Ｃ₅₃Ｈ₆₃Ｏ₁₅Ｎ₂としての計算値９６７．４２２８
【００６６】
（工程２）カルボキシメチル化デキストラン−２’−Ｉｌｅ−パクリタキセル（１５）の製造
実施例１で得た、カルボキシメチル化デキストランナトリウム塩（１）（１００ｍｇ）を水２ｍｌに溶解し、氷冷下、この溶液にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド２ｍｌを加えた。この溶液に工程２で得た、２’−Ｉｌｅ−パクリタキセル（１４）（３０ｍｇ）を溶解した水：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１：１）混合液（０．５ｍｌ）および１−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン（１００ｍｇ）を溶解したＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍｌ）を加え、室温で２時間撹拌した。反応液をエタノール（１００ｍｌ）に注加し、生じた沈殿を集め、精製水（１０ｍｌ）に溶解した。この水溶液をエタノール（１００ｍｌ）に注加し、生じた沈殿をアセトンおよびエーテルで洗浄し、白色非晶質の標記化合物（１５）（１０５ｍｇ）を得た。
本複合体の薬物の導入量は、２５４ｎｍにおける紫外吸光度および複合体の総重量から算出したところ、１．６％（重量％）であった。本複合体のゲル濾過溶出パターン（検出：２２７ｎｍにおける紫外吸光度）と紫外部吸光スペクトルはそれぞれ図１２、図１３に示されるとおりである。
【００６７】
（工程３）プロパノイル−２’−Ｉｌｅ−パクリタキセル（１６）の製造
プロピオン酸（７．４ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド２ｍｌに溶解し、この溶液に工程１で得た、２’−Ｉｌｅ−パクリタキセル（１４）（４５ｍｇ，０．０５ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（１２ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（１２．６ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）を加え、室温下で終夜撹拌し、反応溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No.9385,Silica gel 60,200-400 mesh,溶離液：塩化メチレン／アセトニトリル＝７０／３０）で精製し、標記化合物（１６）（２８ｍｇ）を得た。
【００６８】
¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．６２（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，Ｍｅ−Ｉｌｅ）０．８１（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，Ｍｅ−Ｉｌｅ）１．０１（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１７）１．０３（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１６）１．０６（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，Ｍｅ−Ｐｒ）１．０７（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１４．４，７．３，４．９Ｈｚ，Ｈ−Ｉｌｅ）１．３２（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．４，７．６，４．６Ｈｚ，Ｈ−Ｉｌｅ）１．５１（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１９）１．５６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．３，９．２Ｈｚ，Ｈ−１４ｂ）１．５６−１．６１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−Ｉｌｅ）１．６４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．７，３．１Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）１．７９（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１８）１．８７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．３，９．８Ｈｚ，Ｈ−１４ａ）２．１０（ｓ，３Ｈ，Ａｃ−１０）２．２９（ｓ，３Ｈ，Ａｃ−４）２．３３（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１４．４，９．６，６．４Ｈｚ，Ｈ−６ａ）２．４０（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，ＣＨ₂−Ｐｒ）３．６０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，Ｈ−３）３．６０−３．６７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−Ｉｌｅ）４．０２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．６Ｈｚ，Ｈ−２０）４．０３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．６Ｈｚ，Ｈ−２０）４．１２（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．８，６．７，６．７Ｈｚ，Ｈ−７）４．６４（ｓ，１Ｈ，ＯＨ−１）４．９０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０，ＯＨ−７）４．９２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，Ｈ−５）５．３７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，Ｈ−２’）５．４３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，Ｈ−２）５．６４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，Ｈ−３’）５．８５（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝０．９，９．２Ｈｚ，Ｈ−１３）６．３０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１０）７．２０−８．００（ａｒｏｍａｔｉｃ，１５Ｈ）９．１５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，ＣＯＮＨ−３’）
【００６９】
（工程４）ＰＥＧ−２’−Ｉｌｅ−パクリタキセル（１７）の製造
実施例１工程５で得た、ＣＭ−ＰＥＧ（５００ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド５ｍｌに溶解し、この溶液に工程１で得た、２’−Ｉｌｅ−パクリタキセル（１４）（４５ｍｇ，０．０５ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（１２ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（１２．６ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を加え、室温下で終夜撹拌し、反応溶媒を留去した後、２−プロパノールに加熱溶解し、再結晶を行った。生成した析出物を冷却した２−プロパノール、及びエーテルにて洗浄した後、減圧下乾燥し、標記化合物（１７）（１２５ｍｇ）を得た。本複合体の紫外部吸光スペクトルは図１４に示されるとおりである。
【００７０】
実施例５
（工程１）２’−Ｐｈｅ−パクリタキセル（１８）の製造
Ｚ−Ｐｈｅ（１９４ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）および、ジメチルアミノピリジン（７９ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）およびパクリタキセル（インド国、ＤＡＢＵＲ社製、４２７ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（２０ｍｌ）に溶解した。
次いで、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（８２ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）を加え室温で終夜撹拌した。反応溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No.9385,Silica gel 60,200-400 mesh,カラム：４．０×３０ｃｍ、溶離液：塩化メチレン／アセトニトリル＝７０／３０）で精製し、２’−Ｚ−Ｐｈｅ−パクリタキセル（４２８ｍｇ）を得た。この化合物（４００ｍｇ）をジオキサン（２０ｍｌ）に溶解しパラジウム−炭素触媒（２００ｍｇ）を加え、水素雰囲気下、４時間撹拌し、触媒を濾去した後、減圧下溶媒を留去し、残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No.9385,Silica gel 60,200-400 mesh,カラム：４．０×３０ｃｍ、溶離液：塩化メチレン／メタノール／アセトニトリル＝９５／５／５）で精製し、標記化合物（１８）（２６９ｍｇ）を得た。
【００７１】
¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１．０２（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１７）１．０５（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１６）１．５２（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１９）１．６４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．６，９．２Ｈｚ，Ｈ−１４ｂ）１．６６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１４．４，１１．３Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）１．８５（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１８）１．９３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．３，９．５Ｈｚ，Ｈ−１４ａ）２．１１（ｓ，３Ｈ，Ａｃ−１０）２．３０（ｓ，３Ｈ，Ａｃ−４）２．３２（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１４．７，９．６，６．６Ｈｚ，Ｈ−６ａ）２．９９（ｄｄ，１Ｈ，１４．５，６．９Ｈｚ，ＰｈｅＣＨ２）３．１３（ｄｄ，１Ｈ，１４．４，５．２Ｈｚ，ＰｈｅＣＨ２）３．６１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，Ｈ−３）４．１０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．０，６．７Ｈｚ，Ｈ−７）４．５２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，ＰｈｅＣＨ）４．６８（ｓ，１Ｈ，ＯＨ−１）４．８９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０，ＯＨ−７）４．９２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，Ｈ−５）５．４７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，Ｈ−２’）５．５０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，Ｈ−２）５．７８（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，Ｈ−３’）５．９４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，Ｈ−１３）６．３０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１０）７．００〜８．１０（ｍ，２０Ｈ，ａｒｏｍａｔｉｃ）８．４９（ｂｒｓ，２Ｈ，ＮＨ２）９．２６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ＣＯＮＨ−３’）
ＨＲＭＳ：ｍ／ｚ１００１．４０７６（Ｍ＋Ｈ）⁺：Ｃ₅₆Ｈ₆₁Ｏ₁₅Ｎ₂としての計算値１００１．４０７２
【００７２】
（工程２）カルボキシメチル化デキストラン−２’−Ｐｈｅ−パクリタキセル（１９）の製造
実施例１で得た、カルボキシメチル化デキストランナトリウム塩（１）（１００ｍｇ）を水２ｍｌに溶解し、氷冷下、この溶液にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド２ｍｌを加えた。この溶液に工程１で得た、２’−Ｐｈｅ−パクリタキセル（１８）（３０ｍｇ）を溶解した水：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１：１）混合液（０．５ｍｌ）および１−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン（１００ｍｇ）を溶解したＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍｌ）を加え、室温で２時間撹拌した。反応液をエタノール（１００ｍｌ）に注加し、生じた沈殿を集め、精製水（１０ｍｌ）に溶解した。この水溶液をエタノール（１００ｍｌ）に注加し、生じた沈殿をアセトンおよびエーテルで洗浄し、白色非晶質の標記化合物（１９）（１０６ｍｇ）を得た。
本複合体の薬物の導入量は、２５４ｎｍにおける紫外吸光度および複合体の総重量から算出したところ、４．７％（重量％）であった。本複合体のゲル濾過溶出パターン（検出：２２７ｎｍにおける紫外吸光度）と紫外部吸光スペクトルはそれぞれ図１５、図１６に示されるとおりである。
【００７３】
実施例６
（工程１）２’−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−パクリタキセル塩酸塩（２０）の製造
実施例６、（工程１）を参考に、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ（日本国、ペプチド研究所製、１．１ｇ、５ｍｍｏｌ）をＨ₂Ｏ（２ｍｌ）、２−プロパノール（２ｍｌ）およびジエチルアミン（１．５ｍｌ）の混合溶液に溶かし、この反応液にトリチルクロライド（１．８ｇ、６．５ｍｍｏｌ）を徐々に加え、１時間撹拌する。反応液にＨ₂Ｏを加え、生じた沈殿を水で洗浄した。次に、沈澱に酢酸５ｍｌを加えて酸性にした後、溶媒を減圧下留去することによりＴｒｔ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ１．５ｇを得た。
得られたＴｒｔ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ（６０４ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）および、ジメチルアミノピリジン（１５８ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）およびパクリタキセル（インド国、ＤＡＢＵＲ社製、８５３ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（２０ｍｌ）に溶解した。次いで、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（１６４ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）を加え室温下終夜撹拌した。反応溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No.9385,Silica gel 60,200-400 mesh,カラム：４．０×３０ｃｍ、溶離液：塩化メチレン／アセトニトリル＝８０／２０）で精製し、２’−Ｔｒｔ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−パクリタキセル（９８３ｍｇ）を得た。この化合物（８００ｍｇ）を９０％酢酸（１０ｍｌ）で処理して脱Ｎ−トリチル化し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No.9385,Silica gel 60,200-400 mesh,カラム：４．０×３０ｃｍ、溶離液：塩化メチレン／メタノール／アセトニトリル＝９５／５／５）で精製し、次に塩酸塩へ変換して標記化合物（２０）（４９０ｍｇ）を得た。
【００７４】
¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）；δ１．０１（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１７）１．０３（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１６）１．４２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．５，９．１Ｈｚ，Ｈ−１４ｂ）１．５０（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１９）１．６３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１２．２Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）１．７５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．３，９．５Ｈｚ，Ｈ−１４ａ）１．８１（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１８）２．１２（ｓ，３Ｈ，Ａｃ−１０）２．２３（ｓ，３Ｈ，Ａｃ−４）２．２９（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１４．４，９．２，７．０Ｈｚ，Ｈ−６ａ）２．９０（ｄｄ，１Ｈ，１４．２，７．８Ｈｚ，ＰｈｅＣＨ２）３．０８（ｄｄ，１Ｈ，１４．４，５．２Ｈｚ，ＰｈｅＣＨ２）３．５６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｈ−３）４．０５−４．１０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−７，ＰｈｅＣＨ）４．１５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１８．０，５．８Ｈｚ，Ｇｌｙ）４．６１（ｂｒｓ，１Ｈ，ＯＨ−１）４．９０（ｂｒｓ，１Ｈ，ＯＨ−７）４．９０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，Ｈ−５）５．３８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，Ｈ−２’）５．４１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｈ−２）５．５３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，Ｈ−３’）５．８３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，Ｈ−１３）６．２９（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１０）７．１６〜８．００（ｍ，２０Ｈ，ａｒｏｍａｔｉｃ）８．１５（ｂｒｓ，２Ｈ，ＮＨ２）９．０２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，Ｇｌｙ−ＮＨ）９．２９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ＣＯＮＨ−３’）
ＨＲＭＳ：ｍ／ｚ１０５８．４２４１（Ｍ＋Ｈ）⁺：Ｃ₅₈Ｈ₆₄Ｏ₁₆Ｎ₃としての計算値１０５８．４２８７
【００７５】
（工程２）カルボキシメチル化デキストラン−２’−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−パクリタキセル（２１）の製造
実施例１で得た、カルボキシメチル化デキストランナトリウム塩（１）（１００ｍｇ）を水２ｍｌに溶解し、氷冷下、この溶液にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド２ｍｌを加えた。この溶液に工程１で得た、２’−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−パクリタキセル（２０）（２２ｍｇ）を溶解した水：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１：１）混合液（０．５ｍｌ）および１−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン（１００ｍｇ）を溶解したＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍｌ）を加え、室温で２時間撹拌した。反応液をエタノール（１００ｍｌ）に注加し、生じた沈殿を集め、精製水（１０ｍｌ）に溶解した。この水溶液をエタノール（１００ｍｌ）に注加し、生じた沈殿をアセトンおよびエーテルで洗浄し、白色非晶質の標記化合物（２１）（１０８ｍｇ）を得た。本複合体の薬物の導入量は、２５４ｎｍにおける紫外吸光度および複合体の総重量から算出したところ、３．３％（重量％）であった。本複合体のゲル濾過溶出パターン（検出：２２７ｎｍにおける紫外吸光度）と紫外部吸光スペクトルはそれぞれ図１７、図１８に示されるとおりである。
【００７６】
実施例７
（工程１）２’−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−パクリタキセル塩酸塩（２２）の製造
実施例６、（工程1）を参考に、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ（日本国、ペプチド研究所製、１．１ｇ、５ｍｍｏｌ）をＨ₂Ｏ（２ｍｌ）、２−プロパノール（２ｍｌ）およびジエチルアミン（１．５ｍｌ）の混合溶液に溶かし、この反応液にトリチルクロライド（１．８ｇ、６．５ｍｍｏｌ）を徐々に加え、１時間撹拌する。反応液にＨ₂Ｏを加え、生じた沈殿を水で洗浄した。次に、沈澱に酢酸５ｍｌを加えて酸性にした後、溶媒を減圧下留去することによりＴｒｔ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ１．５ｇを得た。
得られたＴｒｔ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ（６０４ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）および、ジメチルアミノピリジン（１５８ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）およびパクリタキセル（インド国、ＤＡＢＵＲ社製、８５３ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（２０ｍｌ）に溶解した。次いで、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（１６４ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）を加え室温下終夜撹拌した。反応溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No.9385,Silica gel 60,200-400 mesh,カラム：４．０×３０ｃｍ、溶離液：塩化メチレン／アセトニトリル＝８０／２０）で精製し、２’−Ｔｒｔ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−パクリタキセル（９６８ｍｇ）を得た。この化合物（８００ｍｇ）を９０％酢酸（１０ｍｌ）で処理して脱Ｎ−トリチル化し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No.9385,Silica gel 60,200-400 mesh,カラム：４．０×３０ｃｍ、溶離液：塩化メチレン／メタノール／アセトニトリル＝９５／５／５）で精製し、次に塩酸塩へ変換して標記化合物（２２）（５２０ｍｇ）を得た。
【００７７】
¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１．０２（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１７）１．０５（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１６）１．５２（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１９）１．６６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．０，９．５Ｈｚ，Ｈ−１４ｂ）１．６６（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１０．７Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）１．８２（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１８）１．９４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．２，９．７Ｈｚ，Ｈ−１４ａ）２．１１（ｓ，３Ｈ，Ａｃ−１０）２．３０（ｂｒ，１Ｈ，Ｈ−６ａ）２．３３（ｓ，３Ｈ，Ａｃ−４）２．７６（ｄｄ，１Ｈ，１４．１，９．５Ｈｚ，ＰｈｅＣＨ２）２．９７（ｄｄ，１Ｈ，１４．０，３．６Ｈｚ，ＰｈｅＣＨ２）３．４６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．２，Ｇｌｙ）３．５１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．５，Ｇｌｙ）３．６１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，Ｈ−３）４．０３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，Ｈ−２０）４．０５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，Ｈ−２０）４．１０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．５，６．９Ｈｚ，Ｈ−７）４．７１（ｂｒｓ，１Ｈ，ＯＨ−１）４．７９（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．０，９．０，３．７Ｈｚ，ＰｈｅＣＨ）４．９２（ｂｒｓ，１Ｈ，ＯＨ−７）４．９３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，Ｈ−５）５．４０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，Ｈ−２’）５．４４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，Ｈ−２）５．７９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．６，７．９Ｈｚ，Ｈ−３’）５．９３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，Ｈ−１３）６．２９（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１０）６．９７〜８．０２（ｍ，２０Ｈ，ａｒｏｍａｔｉｃ）７．９７（ｂｒｓ，２Ｈ，ＧｌｙＮＨ２）８．８８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，Ｐｈｅ−ＮＨ）９．３０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，ＣＯＮＨ−３’）
ＨＲＭＳ：ｍ／ｚ１０５８．４３３３（Ｍ＋Ｈ）⁺：Ｃ₅₈Ｈ₆₄Ｏ₁₆Ｎ₃としての計算値１０５８．４２８７
【００７８】
（工程２）カルボキシメチル化デキストラン−２’−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−パクリタキセル（２３）の製造
実施例１で得た、カルボキシメチル化デキストランナトリウム塩（１）（１００ｍｇ）を水２ｍｌに溶解し、氷冷下、この溶液にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド２ｍｌを加えた。この溶液に工程１で得た、２’−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−パクリタキセル（２２）（１５ｍｇ）を溶解した水：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１：１）混合液（０．５ｍｌ）および１−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン（１００ｍｇ）を溶解したＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍｌ）を加え、室温で２時間撹拌した。反応液をエタノール（１００ｍｌ）に注加し、生じた沈殿を集め、精製水（１０ｍｌ）に溶解した。この水溶液をエタノール（１００ｍｌ）に注加し、生じた沈殿をアセトンおよびエーテルで洗浄し、白色非晶質の標記化合物（２３）（１０１ｍｇ）を得た。
本複合体の薬物の導入量は、２５４ｎｍにおける紫外吸光度および複合体の総重量から算出したところ、４．７％（重量％）であった。本複合体のゲル濾過溶出パターン（検出：２２７ｎｍにおける紫外吸光度）と紫外部吸光スペクトルはそれぞれ図１９、図２０に示されるとおりである。
【００７９】
実施例８
（１）２１−プロパノイルイソロイシル−デキサメタゾン（２４）の製造
Ｚ−Ｉｌｅ（１７２ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）および、ジメチルアミノピリジン（７９ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）およびデキサメタゾン（日本国、和光純薬社製、１９６ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２０ｍｌ）に溶解した。次いで、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（８２ｍｇ，０．６５ｍｍｏｌ）を加え室温で終夜撹拌した。反応溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No.9385,Silica gel 60,200-400 mesh,溶離液：クロロホルム／酢酸エチル＝５０／３０）で精製し、２１−Ｚ−Ｉｌｅ−デキサメタゾン（６２ｍｇ）を得た。この化合物（５０ｍｇ）をジオキサン（２０ｍｌ）に溶解しパラジウム−炭素触媒（５０ｍｇ）を加え、水素雰囲気下、４時間撹拌し、触媒を濾去した後、減圧下溶媒を留去し、残査をＤＭＦに溶解し、４−ジメチルアミノピリジン（６１ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（６３ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）およびプロピオン酸（３７ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）を加え室温下で終夜撹拌した。反応溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No.9385,Silica gel 60,200-400 mesh,クロロホルム／酢酸エチル＝５０／２５）で精製し、標記化合物（２４）（５０ｍｇ）を得た。
【００８０】
¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．６３（ｓ，３Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ）０．７６（ｄ，３Ｈ，７．５Ｈｚ）０．８２（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．７Ｈｚ）０．８７（ｓ，３Ｈ）１．０７（ｍ，２Ｈ）１．１０（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ）１．３０−１．５０（ｍ，３Ｈ）１．４９（ｓ，３Ｈ）１．５５−１．６２（ｍ，２Ｈ）１．７８（ｍ，１Ｈ）２．１１（ｍ，２Ｈ）２．３２（ｍ，２Ｈ）２．３５（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ）２．６０（ｍ，１Ｈ）２．９Ａ（ｍ，１Ｈ）３．６０−３．６８（ｍ，１Ｈ）４．１６（ｍ，１Ｈ）４．６８（ｍ，１Ｈ）４．６８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１７．２Ｈｚ）５．０１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１７．２Ｈｚ）５．１６（ｂｒｓ，１Ｈ）６．０１（ｓ，１Ｈ）６．２３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ）７．３０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ）９．００（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ）
【００８１】
（２）ＰＥＧ−イソロイシル−２１−デキサメタゾン（２５）の製造
Ｚ−Ｉｌｅ（１７２ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）および、ジメチルアミノピリジン（７９ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）およびデキサメタゾン（日本国、和光純薬社製、１９６ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２０ｍｌ）に溶解した。次いで、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（８２ｍｇ，０．６５ｍｍｏｌ）を加え室温で終夜撹拌した。反応溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No.9385,Silica gel 60,200-400 mesh,溶離液：クロロホルム／酢酸エチル＝５０／３０）で精製し、２１−Ｚ−Ｉｌｅ−エキサメタゾン（６５ｍｇ）を得た。この化合物（５０ｍｇ）をジオキサン（２０ｍｌ）に溶解しパラジウム−炭素触媒（５０ｍｇ）を加え、水素雰囲気下、４時間撹拌し、触媒を濾去した後、減圧下溶媒を留去し、残査をＤＭＦに溶解し、４−ジメチルアミノピリジン（６１ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（６３ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）および実施例１工程５で得た、ＣＭ−ＰＥＧ（２５００ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）を加え室温下で終夜撹拌した。反応溶媒を留去し、２−プロパノール、及びエーテルにて洗浄した後、減圧下乾燥し、標記化合物（２５）（１０００ｍｇ）を得た。本複合体の紫外部吸光スペクトルは図２１に示されるとおりである。
【００８２】
（３）２１−プロパノイルグリシル−デキサメタゾン（２６）の製造
Ｚ−Ｇｌｙ（１３５ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）および、ジメチルアミノピリジン（７９ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）およびデキサメタゾン（日本国、和光純薬社製、１９６ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２０ｍｌ）に溶解した。次いで、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（８２ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）を加え室温で終夜撹拌した。反応溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No.9385,Silica gel 60,200-400 mesh,溶離液：クロロホルム／メタノール＝１５／１）で精製し、２１−Ｚ−Ｇｌｙ−デキサメタゾン（６８ｍｇ）を得た。この化合物（５０ｍｇ）をジオキサン（２０ｍｌ）に溶解しパラジウム−炭素触媒（５０ｍｇ）を加え、水素雰囲気下、４時間撹拌し、触媒を濾去した後、減圧下溶媒を留去し、残査をＤＭＦに溶解し、４−ジメチルアミノピリジン（６１ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（６３ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）およびおよびプロピオン酸（３７ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）を加え室温下で終夜撹拌した。反応溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No.9385,Silica gel 60,200-400 mesh,溶離液：クロロホルム／メタノール＝１７／１）で精製し、表記化合物（２６）（３０ｍｇ）を得た。
【００８３】
¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．７４（ｄ，３Ｈ，７．５Ｈｚ）０．８８（ｄ，３Ｈ）１．０４（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ）１．０７（ｍ，２Ｈ）１．３０−１．５０（ｍ，３Ｈ）１．５２（ｓ，３Ｈ）１．６０（ｍ，２Ｈ）１．７８（ｍ，１Ｈ）２．１４（ｍ，２Ｈ）２．３２（ｍ，２Ｈ）２．３７（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ）２．６２（ｍ，１Ｈ）２．９４（ｍ，１Ｈ）３．９６−４．０６（ｍ，２Ｈ）４．１６（ｍ，１Ｈ）４．６８（ｍ，１Ｈ）４．８２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１７．４Ｈｚ）４．９８（ｂｒｓ，１Ｈ）５．０３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１７．４Ｈｚ）６．０２（ｓ，１Ｈ）６．２４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．３，１．７Ｈｚ）７．２９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ）９．０２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ）
【００８４】
（４）ＰＥＧ−グリシル−２１−デキサメタゾン（２７）の製造
Ｚ−Ｇｌｙ（１３５ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）および、ジメチルアミノピリジン（７９ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）およびデキサメタゾン（日本国、和光純薬社製、１９６ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２０ｍｌ）に溶解した。次いで、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（８２ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）を加え室温で終夜撹拌した。反応溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No.9385,Silica gel 60,200-400 mesh,溶離液：クロロホルム／メタノール＝１５／１）で精製し、２１−Ｚ−Ｇｌｙ−デキサメタゾン（６５ｍｇ）を得た。この化合物（５０ｍｇ）をジオキサン（２０ｍｌ）に溶解しパラジウム−炭素触媒（５０ｍｇ）を加え、水素雰囲気下、４時間撹拌し、触媒を濾去した後、減圧下溶媒を留去し、残査をＤＭＦに溶解し、４−ジメチルアミノピリジン（６１ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（６３ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）および実施例１工程５で得た、ＣＭ−ＰＥＧ（２５００ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）を加え室温下で終夜撹拌した。反応溶媒を留去し、２−プロパノール、及びエーテルにて洗浄した後、減圧下乾燥し、標記化合物（２７）（７００ｍｇ）を得た。本複合体の紫外部吸光スペクトルは図２２に示されるとおりである。
【００８５】
（５）２１−プロパノイルアラニル−デキサメタゾン（２８）の製造
Ｚ−Ａｌａ（１４５ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）および、ジメチルアミノピリジン（７９ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）およびデキサメタゾン（日本国、和光純薬社製、１９６ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２０ｍｌ）に溶解した。次いで、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（８２ｍｇ，０．６５ｍｍｏｌ）を加え室温で終夜撹拌した。反応溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No.9385,Silica gel 60,200-400 mesh,溶離液：クロロホルム／メタノール＝２０／１）で精製し、２１−Ｚ−Ａｌａ−デキサメタゾン（７０ｍｇ）を得た。この化合物（５０ｍｇ）をジオキサン（２０ｍｌ）に溶解しパラジウム−炭素触媒（５０ｍｇ）を加え、水素雰囲気下、４時間撹拌し、触媒を濾去した後、減圧下溶媒を留去し、残査をＤＭＦに溶解し、４−ジメチルアミノピリジン（６１ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（６３ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）およびプロピオン酸（３７ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）を加え室温下で終夜撹拌した。反応溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No.9385,Silica gel 60,200-400 mesh,溶離液：クロロホルム／メタノール＝４０／３）で精製し、標記化合物（２８）（５５ｍｇ）を得た。
【００８６】
¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．７６（ｄ，３Ｈ，７．５Ｈｚ）０．８９（ｄ，３Ｈ）１．０６（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ）１．０７（ｍ，２Ｈ）１．１４（ｓ，３Ｈ）１．３０−１．５０（ｍ，３Ｈ）１．５０（ｓ，３Ｈ）１．６０（ｍ，２Ｈ）１．７８（ｍ，１Ｈ）２．１４（ｍ，２Ｈ）２．３２（ｍ，２Ｈ）２．４０（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ）２．６０（ｍ，１Ｈ）２．９４（ｍ，１Ｈ）３．５０（ｑ，１Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ）４．１６（ｍ，１Ｈ）４．６８（ｍ，１Ｈ）４．７８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１７．０Ｈｚ）４．９８（ｂｒｓ，１Ｈ）５．０２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１７．０Ｈｚ）６．０２（ｓ，１Ｈ）６．２４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．３，１．７Ｈｚ）７．２９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ）８．８４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ）
【００８７】
（６）ＰＥＧ−アラニル−２１−デキサメタゾン（２９）の製造
Ｚ−Ａｌａ（１４５ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）および、ジメチルアミノピリジン（７９ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）およびデキサメタゾン（日本国、和光純薬社製、１９６ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２０ｍｌ）に溶解した。次いで、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（８２ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）を加え室温で終夜撹拌した。反応溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No.9385,Silica gel 60,200-400 mesh,溶離液：クロロホルム／メタノール＝２０／１）で精製し、２１−Ｚ−Ａｌａ−デキサメタゾン（６８ｍｇ）を得た。この化合物（５０ｍｇ）をジオキサン（２０ｍｌ）に溶解しパラジウム−炭素触媒（５０ｍｇ）を加え、水素雰囲気下、４時間撹拌し、触媒を濾去した後、減圧下溶媒を留去し、残査をＤＭＦに溶解し、４−ジメチルアミノピリジン（６１ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（６３ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）および実施例１工程５で得た、ＣＭ−ＰＥＧ（２５００ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）を加え室温下で終夜撹拌した。反応溶媒を留去し、２−プロパノール、及びエーテルにて洗浄した後、減圧下乾燥し、標記化合物（２９）（１４００ｍｇ）を得た。本複合体の紫外部吸光スペクトルは図２３に示されるとおりである。
【００８８】
（７）２１−プロパノイル−デキサメタゾン（３０）の製造
プロピオン酸（４８ｍｇ，０．６５ｍｍｏｌ）および、ジメチルアミノピリジン（７９ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）およびデキサメタゾン（日本国、和光純薬社製、１９６ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２０ｍｌ）に溶解した。次いで、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（８２ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）を加え室温で終夜撹拌した。反応溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No.9385,Silica gel 60,200-400 mesh,溶離液：クロロホルム／メタノール＝７／１）で精製し、表記化合物（３０）（５０ｍｇ）を得た。
¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．７９（ｄ，３Ｈ，７．２Ｈｚ）０．８９（ｄ，３Ｈ）１．０７（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ）１．０７（ｍ，１Ｈ）１．３０−１．５０（ｍ，３Ｈ）１．４９（ｓ，３Ｈ）１．６０（ｍ，２Ｈ）１．７８（ｍ，１Ｈ）２．１４（ｍ，２Ｈ）２．３２（ｍ，２Ｈ）２．３７（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ）２．６２（ｍ，１Ｈ）２．９４（ｍ，１Ｈ）４．１４（ｍ，１Ｈ）４．８０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１７．４Ｈｚ）５．０３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１７．４Ｈｚ）５．１６（ｂｒｓ，１Ｈ）５．４０（ｍ，１Ｈ）６．０１（ｓ，１Ｈ）６．２３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．９Ｈｚ）７．３０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ）
【００８９】
（８）ＰＥＧ−２１−デキサメタゾン（３１）の製造
実施例１工程５で得た、ＣＭ−ＰＥＧ（２，５００ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）および、ジメチルアミノピリジン（７９ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）およびデキサメタゾン（日本国、和光純薬社製、１９６ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２０ｍｌ）に溶解した。次いで、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（８２ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）を加え室温で終夜撹拌した。反応溶媒を留去し、２−プロパノール、及びエーテルにて洗浄した後、減圧下乾燥し、標記化合物（３１）（１，０００ｍｇ）を得た。本複合体の紫外部吸光スペクトルは図２４に示されるとおりである。
【００９０】
参考例１
Ｔｒｔ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙの製造
（１）Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−ＯＢｎの合成
Ｐｈｅ−Ｇｌｙ・Ｈ₂Ｏ（日本国、国産化学社製、２５ｇ、１０４ｍｍｏｌ）をパラトルニンスルホン酸１水和物（１９．８ｇ、１０４ｍｍｏｌ）、ベンジルアルコール（２５ｍｌ）およびトルエン（２００ｍｌ）混合液に溶かし、Dean-Stark装置により５時間加熱環流する。反応後、溶媒を留去し、ジエチルエーテルを加えると標記化合物であるＰｈｅ−Ｇｌｙ−ＯＢｎのパラトルエンスルホン酸塩（４０ｇ）が得られた。
【００９１】
（２）Ｔｒｔ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙの合成
実施例６、（工程１）を参考に、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ（日本国、ペプチド研究所製、６．６ｇ、５０ｍｍｏｌ）をＨ₂Ｏ（２０ｍｌ）、２−プロパノール（４０ｍｌ）およびジエチルアミン（１５ｍｌ）の混合溶液に溶かし、この反応液にトリチルクロライド（１８．１ｇ、６５ｍｍｏｌ）を徐々に加え、１時間撹拌する。反応液にＨ₂Ｏを加え、生じた沈殿を水で洗浄した。次に、沈澱に酢酸5mlを加えて酸性にした後、溶媒を減圧下留去することにより標記化合物１３．１ｇを得た。
【００９２】
（３）Ｔｒｔ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−ＯＢｎの合成
乾燥ＤＭＦ（１０ｍｌ）に、Ｔｒｔ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ（１．５４ｇ）、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド（０．５２ｇ）およびＤＣＣ（０．９３ｇ）を加え、４℃で３時間反応する。反応溶液に（１）で合成したＰｈｅ−Ｇｌｙ−ＯＢｎのパラトルエンスルホン酸塩（２．０ｇ）およびＮ−メチルモルホリン（０．４１ｇ）を溶かしたＤＭＦ溶液（ＤＭＦ１０ｍｌ）を加え、４℃で１５時間反応する。沈殿物を除き、溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No.9365,Silica gel 60,200-400 mesh,溶離液：クロロホルム／メタノール−２０／１）で精製することにより、標記生成物（１．５ｇ）を得た。
【００９３】
（４）Ｔｒｔ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙの合成
化合物（３）Ｔｒｔ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−ＯＢｎ（１．３ｇ）をＤＭＦ（２０ｍｌ）に溶かし、１０％パラジウム−炭素（０．５ｇ）および１，４−シクロヘキサジエン（０．４ｇ）を加え、室温下３０分反応する。反応液をろ過し、触媒を除き、溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No.9365,Silica gel 60,200-400 mesh,溶離液：クロロホルム／メタノール＝７／１）で精製することにより、標記化合物（１．０ｇ）を得た。
Anal.Calcd for:Ｃ₃₄Ｈ₃₄Ｎ₄Ｏ₅：
Ｃ，７０．５７；Ｈ，５．９２；Ｎ，９．６８
Found:Ｃ，７０．０３；Ｈ，６．０７；Ｎ，９．６７
アミノ酸分析：
Ｐｈｅ（１）１．００，Ｇｌｙ（３）２．９１
加水分解条件：６ＮＨＣｌ、１１０℃、２２ｈｒｓ
【００９４】
参考例２
Ｚ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅの製造
ＢＯＣ−Ｐｈｅ（日本国、ペプチド研究所製、１０．６ｇ）を酢酸エチル（１００ｍｌ）に溶かし、氷冷下、臭化フェナシル（Phenacyl bromide,１０．０ｇ）およびトリエチルアミン（５．１ｇ）を加え撹拌する、反応温度を室温に上げ、終夜撹拌の後に反応溶媒を留去した。残渣を酢酸エチル（５０ｍｌ）に溶かし、飽和重曹水ついで飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧濃縮して、ＢＯＣ−Ｐｈｅ−フェナシルエステル（１３．４ｇ）を得た。次に、ＢＯＣ−Ｐｈｅ−フェナシルエステル（１．９ｇ）にトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ、５ｍｌ）を加え、１０分間撹拌し、減圧下ＴＦＡを留去した。この残渣に対し、ＤＭＦ（２０ｍｌ）、Ｎ−メチルモルホリン（０．６１ｇ）、ＤＣＣ（１．２４ｇ）、ＨＯＢＴ（０．８１ｇ）およびＢＯＣ−Ｇｌｙ（日本国、ペプチド研究所製、１．０５ｇ）を加え、室温下、終夜撹拌する。反応液を減圧濃縮し、残渣を酢酸エチル（５０ｍｌ）に溶かし、氷冷した０．１Ｎ塩酸水溶液、飽和食塩水、飽和重曹水ついで飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧濃縮して、ＢＯＣ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−フェナシルエステル（１．５ｇ）を得た。次に、ＢＯＣ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−フェナシルエステル（１．６ｇ）にトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ、５ｍｌ）を加え、１０分間撹拌し、減圧下ＴＦＡを留去した。
【００９５】
この残渣に対し、ＤＭＦ（２０ｍｌ）、Ｎ−メチルモルホリン（０．４０ｇ）、ＤＣＣ（０．８３ｇ）、ＨＯＢＴ（０．５４ｇ）およびＺ−Ｇｌｙ（国産化学、０．８４ｇ）を加え、室温下、終夜撹拌した。反応液を減圧濃縮し、残渣を酢酸エチル（５０ｍｌ）に溶かし、氷冷した０．１Ｎ塩酸水溶液、飽和食塩水、飽和重曹水ついで飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧濃縮して、Ｚ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−フェナシルエステル（１．１ｇ）を得た。次に、Ｚ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−フェナシルエステル（１．１ｇ）を９０％酢酸水溶液（３０ｍｌ）に溶かし、亜鉛末４ｇを加え室温下、５時間撹拌した。ろ過後、溶媒を留去し、残渣を酢酸エチル（３０ｍｌ）に溶かし、１０％クエン酸で洗浄した後、飽和食塩水で洗浄し、さらに硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧濃縮して標記Ｚ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ（０．６２ｇ）を得た。
【００９６】
実施例９
（工程１）２’−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−パクリタキセル塩酸塩（３２）の製造
参考例１で得たＴｒｔ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ（７３９ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）および、ジメチルアミノピリジン（１５８ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）およびパクリタキセル（インド国、ＤＡＢＵＲ社製、８５３ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（２０ｍｌ）に溶解した。次いで、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（１６４ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）を加え室温下４時間撹拌した。反応溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No.9385,Silica gel 60,200-400 mesh,カラム：４．０×５０ｃｍ、溶離液：塩化メチレン／メタノール／アセトニトリル＝９５／５／３０）で精製し、２’−Ｎα−Ｔｒｔ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−パクリタキセル（１２４６ｍｇ）を得た。
ＨＲＭＳ：ｍ／ｚ１４１４．５７６３（Ｍ＋Ｈ）⁺：Ｃ₈₁Ｈ₈₄Ｏ₁₈Ｎ₅としての計算値１４１４．５８１１
この化合物（１１００ｍｇ）を７５％酢酸（１０ｍｌ）で処理して脱Ｎ−トリチル化し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No.9385,Silica gel 60,200-400 mesh,カラム：４．０×５０ｃｍ、溶離液：塩化メチレン／メタノール／アセトニトリル＝８５／１５／５）で精製し、次に塩酸塩へ変換して表記化合物（３２）（５３０ｍｇ）を得た。
【００９７】
¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１．００（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１７）１．０３（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１６）１．４２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．４，９．２Ｈｚ，Ｈ−１４ｂ）１．４９（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１９）１．６３（ｂｒｔ，１Ｈ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）１．７４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．４，９．２Ｈｚ，Ｈ−１４ａ）１．８０（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１８）２．１１（ｓ，３Ｈ，Ａｃ−１０）２．２３（ｓ，３Ｈ，Ａｃ−４）２．３０（ｍ，１Ｈ，Ｈ６ａ）２．７２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．９，１０．２Ｈｚ，ＰｈｅＣＨ２Ｈｂ）３．０２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．９，３．８Ｈｚ，ＰｈｅＣＨ２ＣＨａ）３．５２（ｂｒｓ，２Ｈ，ＧｌｙＣＨ２）３．５６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ−３）３．６６（ｄｄ，１Ｈ，１６．９，５．４Ｈｚ，ＧｌｙＣＨ２ｂ）３．８４（ｄｄ，１Ｈ，１６．９，５．４Ｈｚ，ＧｌｙＣＨ２ａ）４．０１（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１４．５，８．４Ｈｚ，Ｈ−２０ａ，Ｈ−２０ｂ）４．０１（２Ｈ，ＧｌｙＣＨ２）４．０９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−７）４．５５（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．２，８．５，３．８Ｈｚ，ＰｈｅＣＨ２ＣＨ）４．６１（ｓ，１Ｈ，ＯＨ−１）４．８９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９，１．３Ｈｚ，Ｈ−５）４．９２（ｂｒｓ，１Ｈ，ＯＨ−７）５．４１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．２，Ｈ−２）５．４３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，Ｈ−２’）５．５１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，Ｈ−３’）５．８３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，Ｈ−１３）６．２９（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１０）７．１０〜８．００（ａｒｏｍａｔｉｃ，２０Ｈ）８．３３（ｄ，１Ｈ，ＰｈｅＣＯＮＨ）８．５１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，ＧｌｙＣＯＮＨ）８．６９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，ＧｌｙＣＯＮＨ）９．３４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，ＣＯＮＨ−３’）
ＨＲＭＳ：ｍ／ｚ１１７２．４７１１（Ｍ＋Ｈ）⁺：Ｃ₆₂Ｈ₇₀Ｏ₁₈Ｎ₅としての計算値１１７２．４７１６
Anal.Calcd for:Ｃ₆₂Ｈ₆₉Ｏ₁₈Ｎ₅・ＨＣｌ・２．５Ｈ₂Ｏ：Ｃ，５９．４０；Ｈ，６．０３；Ｎ，５．５９．
Found:Ｃ，５９．５５；Ｈ，６．０４；Ｎ，５．６０
【００９８】
（工程２）カルボキシメチル化デキストラン−２’−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−パクリタキセル（３３）の製造
実施例１（工程１）で得た、カルボキシメチル化デキストランナトリウム塩（１）（１．０ｇ）を水２０ｍｌに溶解し、氷冷下、この溶液にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド２０ｍｌを加えた。この溶液に実施例９（工程１）で得た、２’−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−パクリタキセル（３２）（２００ｍｇ）を溶解した水：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１：１）混合液（８ｍｌ）および１−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン（１．０ｇ）を溶解したＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド５ｍｌを加え、室温で６時間撹拌した。反応液をエタノール（１１）に注加し、生じた沈殿を集め、精製水（１００ｍｌ）に溶解した。この水溶液をエタノール（１１）に注加し、生じた沈殿をアセトンおよびエーテルで洗浄し、白色非晶質の標記化合物（３３）（１０５０ｍｇ）を得た。
本複合体の薬物の導入量は、２５４ｎｍにおける可視吸光度および複合体の総重量から算出したところ、３．７％（重量％）であった。本複合体の紫外部吸光スペクトルとゲル濾過溶出パターン（検出：２２０ｎｍにおける紫外吸光度）はそれぞれ図２５、２６に示されるとおりである。
【００９９】
実施例１０
（工程１）７−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−パクリタキセル（３４）の製造
パクリタキセル（インド国、ＤＡＢＵＲ社製、４２７ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を塩化メチレンに溶解し、ジイソプロピルエチルアミン（１２９ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）および氷冷下ベンジルオキシカルボニルクロリド（１７０ｍｇ、１．０ｍｍｌ）を加え、室温下一晩撹拌した。反応溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No.9385,Silica gel 60,200-400 mesh,カラム：２．０×３０ｃｍ、溶離液：塩化メチレン／アセトニトリル＝８０／２０）で精製し、２’−Ｚ−パクリタキセル（４２３ｍｇ）を得た。
【０１００】
２’−Ｚ−パクリタキセル（２７０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を塩化メチレンに溶解し、Ｚ−グリシン（８５ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（８４ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）およびジメチルアミノピリジン（５０．１ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）を加え室温下３日間撹拌した。反応溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No.9385,Silica gel 60,200-400 mesh,カラム：４．０×５０ｃｍ、溶離液：塩化メチレン／アセトニトリル＝８０／２０）で精製し、２’−Ｚ−７−Ｚ−Ｇｌｙ−パクリタキセル（３００ｍｇ）を得た。
２’−Ｚ−７−Ｚ−Ｇｌｙ−パクリタキセル（２００ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）を酢酸エチル１００ｍｌに溶解し、パラジウム−炭素を加え、撹拌下に水素ガスを通した。反応終了後、触媒を濾去し、反応溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No.9385,Silica gel 60,200-400 mesh,カラム：４．０×５０ｃｍ、溶離液：塩化メチレン／アセトニトリル＝５０／５０）で精製し、７−Ｇｌｙ−パクリタキセル（８７ｍｇ）を得た。
【０１０１】
７−Ｇｌｙ−パクリタキセル（７０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（２０ｍｌ）に溶解し、参考例２で得たＺ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ（５８ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）、水溶性カルボジイミド（２６ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１８ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を加え、室温下３日間撹拌した。反応溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No.9385,Silica gel 60,200-400 mesh,カラム：４．０×５０ｃｍ）溶離液：塩化メチレン／メタノール／アセトニトリル＝８５／１５／５）で精製し、７−Ｚ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−パクリタキセル（９４ｍｇ）を得た。
７−Ｚ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−パクリタキセル（８０ｍｇ，０．０６ｍｍｏｌ）をメタノール２０ｍｌに溶解し、パラジウム−炭素を加え、撹拌下に水素ガスを通した。反応終了後、触媒を濾去し、反応溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No.9385,Silica gel 60,200-400 mesh,カラム：４．０×３０ｃｍ、溶離液：塩化メチレン／メタノール／アセトニトリル＝９５／５／３０）で精製し、表記化合物（３４）（５０ｍｇ）を得た。
【０１０２】
¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．９９(ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１７）１．０５（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１６）１．６７（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１９）１．６８（ｍ，１Ｈ，Ｈ６ｂ）１．７５（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１８）１．７９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．３，８．９Ｈｚ，Ｈ−１４ｂ）１．９０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．３，８．９Ｈｚ，Ｈ−１４ａ）２．１５（ｓ，３Ｈ，Ａｃ−１０）２．２６（ｓ，３Ｈ，Ａｃ−４）２．４２（ｍ，１Ｈ，Ｈ６ａ）２．７４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．９，１０．５Ｈｚ，ＰｈｅＣＨ２ＣＨｂ）３．０５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．９，３．８Ｈｚ，ＰｈｅＣＨ２ＣＨａ）３．５４（ｂｒｓ，２Ｈ，ＧｌｙＣＨ２）３．６６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．８，５．３Ｈｚ，ＧｌｙＣＨ２ｂ）３．６９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．８，５．３Ｈｚ，ＧｌｙＣＨ２ａ）３．７２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，Ｈ−３）３．８０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．８，５．８Ｈｚ，ＧｌｙＣＨ２ｂ）３．８５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．８，５．８Ｈｚ，ＧｌｙＣＨ２ａ）４．０６（ｓ，２Ｈ，Ｈ−２０）４．５７（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．５，８．９，３．８Ｈｚ，ＰｈｅＣＨ２ＣＨ）４．６２（ｂｒｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｈ−２’）４．８５（ｓ，１Ｈ，ＯＨ−１）４．９９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，Ｈ−５）５．４２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，Ｈ−３’）５．４３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，Ｈ−２）５．４７（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１０．４，７．６Ｈｚ，Ｈ−７）５．９１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，Ｈ−１３）６．２３（ｄ，１Ｈ，ＯＨ−２’）７．００〜８．００（ａｒｏｍａｔｉｃ，２０Ｈ）８．０５（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ２）８．３０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ＰｈｅＣＯＮＨ）８．４７（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，ＧｌｙＣＯＮＨ）８．５６（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，ＧｌｙＣＯＮＨ）９．００（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，ＣＯＮＨ−３’）
【０１０３】
（工程２）カルボキシメチル化デキストラン−７−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−パクリタキセル（３５）の製造
実施例１（工程１）で得たカルボキシメチル化デキストランナトリウム塩（１）（１．０ｇ）を水２０ｍｌに溶解し、氷冷下、この溶液にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド２０ｍｌを加えた。この溶液に実施例１０（工程１）で得た７−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−パクリタキセル（３４）（１８０ｍｇ）を溶解した水：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１：１）混合液（８ｍｌ）および１−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン（１．０ｇ）を溶解したＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド５ｍｌを加えた。室温で６時間撹拌した。反応液をエタノール（１１）に注加し、生じた沈殿を集め、精製水（１００ｍｌ）に溶解した。この水溶液をエタノール（１１）に注加し、生じた沈殿をアセトンおよびエーテルで洗浄し、白色非晶質の表記化合物（３５）（１，０５０ｍｇ）を得た。
本複合体の薬物の導入量率は、２５４ｎｍにおける可視吸光度および複合体の総重量から算出したところ、７．４％（重量％）であった。本複合体の紫外部吸光スペクトルとゲル濾過溶出パターン（検出：２２０ｎｍにおける紫外吸光度）はそれぞれ図２７、２８に示されるとおりである。
【０１０４】
実験例１
化合物（３）および（１５）の生理食塩水に対する溶解度実施例１で得た化合物（３）５０ｍｇを、０．５ｍｌの生理食塩水に溶解したところ、完全に溶解した。これは、パクリタキセル３７ｍｇが１０ｍｌの生理食塩水に溶解したことになる。パクリタキセル換算では、３．７ｍｇ／ｍｌ（生理食塩水）の溶解度となる。
実施例４で得た化合物（１５）５０ｍｇを、０．５ｍｌの生理食塩水に溶解したところ、完全に溶解した。これは、パクリタキセル１６ｍｇが１０ｍｌの生理食塩水に溶解したことになる。パクリタキセル換算では、１．６ｍｇ／ｍｌ（生理食塩水）の溶解度となる。
更に、パクリタキセル（インド国、ＤＡＢＵＲ社製）１ｍｇは、１０ｍｌの生理食塩水に溶解しなかった。
【０１０５】
実験例２
マウスおよびヒト血漿中における、化合物（３）、（７）、（１１）および（１５）からのパクリタキセル遊離評価実験実施例１で得た化合物（３）、実施例２で得た化合物（５）、実施例３で得た化合物（１１）および実施例４で得た化合物（１５）をそれぞれ生理食塩水に溶解し、パクリタキセルに換算した濃度が１２５μｇ／ｍｌとなるよう調製した。これらの溶液２０μｌをマウスおよびヒト血漿２００μｌにそれぞれ添加し、３７℃における薬物複合体からのパクリタキセル遊離量を測定した。
薬学雑誌，１１４，３５１−３５５（１９９４）記載の方法に従い、血漿中からのパクリタキセル回収を行い、ＨＰＬＣにより、化合物（３）、（７）、（１１）および（１５）から血漿中に遊離したパクリタキセル量を評価した。図２９および図３０には、パクリタキセル遊離の経時変化を示した。その結果、薬物複合体からのパクリタキセルの遊離速度はマウスおよびヒト血漿で同じ傾向が見られた。その順序は、遊離速度の大きい順に化合物（３）＞（７）＞（１１）＞（１５）であり、これはスペーサーであるアミノ酸の立体障害の大きさと相関が見られた。
【０１０６】
実験例３
抗腫瘍効果の評価実験（１）
Ｂ１６マウス黒色腫細胞５×１０⁶個を、Ｃ５７ＢＬ／６系の雌性マウス（６週齢）の鼠径部皮下に移植し、８日後に、被検化合物として実施例１で得た化合物（３）、実施例２で得た化合物（７）および実施例４で得た化合物（１５）を生理食塩水に溶解した被検液、およびパクリタキセルをエタノール−クレモホールＥＬ（米国、シグマ社製）−生理食塩水に溶解した被検液を、一群７匹として尾静脈内に投与した。投与量はパクリタキセル換算で５０ｍｇ／ｋｇとした。無処置群は、生理食塩水を一群１３匹として投与した。被検液投与後６日目に、マウスの腫瘍体積を測定することにより、抗腫瘍効果を判定した。無処置群の腫瘍体積を１００としたときの、被検化合物投与群の平均腫瘍体積を表わした。腫瘍体積Ｖは、腫瘍を外部から計測し、長径ａ（ｍｍ）および短径ｂ（ｍｍ）とするとき、下式により求めた。
【数１】

被検液投与後６日目の、投与量と腫瘍体積との関係は、図３１に示される通りであった。本発明による化合物（３）の５０ｍｇ／ｋｇ投与群の抗腫瘍効果は、パクリタキセルの５０ｍｇ／ｋｇ投与群の抗腫瘍効果と比較して、有意に優れていた。化合物（７）は、パクリタキセルに比べて抗腫瘍効果が優れていた。又、化合物（１５）は、パクリタキセルに比べて抗腫瘍効果が弱かった。パクリタキセル複合体の抗腫瘍効果については、効果の優れる順に（３）＞（７）＞（１５）であり、実験例２における薬物遊離速度と相関が見られた。
【０１０７】
実験例４
マウスおよびヒト血漿中における、化合物（３）および（１９）、（２１）および（２３）からのパクリタキセル遊離評価実験
実施例１で得た化合物（３）、実施例５で得た化合物（１９）、実施例６で得た化合物（２１）および実施例７で得た化合物（２３）をそれぞれ生理食塩水に溶解し、パクリタキセルに換算した濃度が１２５μｇ／ｍｌとなるよう調製した。これらの溶液２０μｌをマウスおよびヒト血漿２００μｌにそれぞれ添加し、３７℃における薬物複合体からのパクリタキセル遊離量を測定した。
薬学雑誌，１１４，３５１−３５５（１９９４）記載の方法に従い、血漿中からのパクリタキセル回収を行い、ＨＰＬＣにより、化合物（３）および（１９）、（２１）および（２３）から血漿中に遊離したパクリタキセル量を評価した。図３２および図３３には、パクリタキセル遊離の経時変化を示した。
その結果、薬物複合体からのパクリタキセルの遊離速度はマウス血漿では、その順序は、遊離速度の大きい順に化合物（３）＞（１９）であり、これはスペーサーであるアミノ酸の立体障害の大きさと相関が見られた。更に、マウスおよびヒト血漿中における薬物複合体からの薬物遊離速度とスペーサーであるペプチドとの関係は、速度の大きい順に（２１）＞（２３）の関係であり、薬物遊離速度は薬物に直接結合するアミノ酸の立体障害の大きさと相関が見られた。
【０１０８】
実験例５
化合物（５）および（１７）の生理食塩水に対する溶解度実施例１で得た化合物（５）２５ｍｇを、１ｍｌの生理食塩水に溶解したところ、完全に溶解した。これは、パクリタキセル３６ｍｇが１０ｍｌの生理食塩水に溶解したことになる。パクリタキセル換算では、３．６ｍｇ／ｍｌ（生理食塩水）の溶解度となる。
実施例４で得た化合物（１７）２０ｍｇを、１ｍｌの生理食塩水に溶解したところ、完全に溶解した。これは、パクリタキセル２８ｍｇが１０ｍｌの生理食塩水に溶解したことになる。パクリタキセル換算では、２．８ｍｇ／ｍｌ（生理食塩水）の溶解度となる。更に、パクリタキセル（インド国、ＤＡＢＵＲ社製）１ｍｇは、１０ｍｌの生理食塩水に溶解しなかった。
【０１０９】
実験例６
マウスおよびヒト血漿中における、化合物（５）、（９）、（１３）および（１７）からのパクリタキセル遊離評価実験実施例１で得た化合物（５）、実施例２で得た化合物（９）、実施例３で得た化合物（１３）および実施例４で得た化合物（１７）を生理食塩水に溶解し、パクリタキセルに換算した濃度が２５０μｇ／ｍｌとなるよう調製した。これらの溶液２０μｌをマウスおよびヒト血漿２００μｌにそれぞれ添加し、３７℃における薬物複合体からのパクリタキセル遊離量を測定した。
薬学雑誌，１１４，３５１−３５５（１９９４）記載の方法に従い、血漿中からのパクリタキセル回収を行い、ＨＰＬＣにより、化合物（５）、（９）、（１３）および（１７）から血漿中に遊離したパクリタキセル量を評価した。図３４および図３５には、パクリタキセル遊離の経時変化を示した。その結果、薬物複合体からのパクリタキセルの遊離速度はマウスおよびヒト血漿で同じ傾向が見られた。その順序は、遊離速度の大きい順に化合物（５）＞（９）＞（１３）＞（１７）であり、これはスペーサーであるアミノ酸の立体障害の大きさと相関が見られた。
【０１１０】
実験例７
マウスおよびヒト血漿中における、化合物（２４）、（２６）、（２８）および（３０）からのデキサメタゾン遊離評価実験実施例８で得た化合物（２４）、（２６）、（２８）および（３０）を生理食塩水に溶解し、デキサメタゾン換算で８０μｇ／ｍｌとなるよう調製した。これらの溶液５０μｌをマウスおよびヒト血漿２５０μｌにそれぞれ添加し、３７℃、５分におけるそれぞれの薬物複合体からのデキサメタゾン遊離量をそれぞれ測定した。
血漿中のデキサメタゾン回収並びに定量は次のようにして行った。すなわち、血漿サンプル２５０μｌに対し、２５０μｌリン酸緩衝液（pH7.4）を加え、さらに内部標準として酢酸ヒドロコルチゾンを含むアセトニトリル−メタノール溶液（ＣＨ₃ＣＮ／ＭｅＯＨ＝４／１、酢酸ヒドロコルチゾン濃度＝１０ｎｇ／ｍl）を３ｍｌ加えた後遠心し、（３０００ｒｐｍ、１０分、４℃）得られた上清７００μｌに、蒸留水７００μｌを加え、メンブランフィルター（０．２μｍ）にてろ過した後、ＨＰＬＣにて定量した。
【０１１１】
ＨＰＬＣの条件
カラム：Asahipak HIKARISIL C18（4.6×150mm）
流速：1.0ml/min
カラム温度：室温
検出波長：254nm
移動相：Linear gradient
0min：20%アセトニトリル水溶液（20%CH₃CN/H₂O）
20min：50%アセトニトリル水溶液（50%CH₃CN/H₂O）
その結果、薬物複合体からのデキサメタゾンの遊離速度はマウスおよびヒト血漿で同じ傾向が見られた。その順序は、遊離速度の大きい順に化合物（３０）＞（２６）＞（２８）＞（２４）であり、これはスペーサーであるアミノ酸の立体障害の大きさと相関が見られた。即ち、（３０）では極めて速やかに９８％以上のデキサメタゾン遊離が見られたが、（２６）では約９５％のデキサメタゾン遊離が見られ、（２８）では約７０％のデキサメタゾン遊離が見られ、（２４）では１０％以下のデキサメタゾンの遊離が見られた。
【０１１２】
実験例８
化合物（３３）および（３５）の生理食塩水に対する溶解度実施例９で得た化合物（３３）１ｇを、１０ｍｌの生理食塩水に溶解したところ、完全に溶解した。これは、パクリタキセル３７ｍｇが１０ｍｌの生理食塩水に溶解したことになる。パクリタキセル換算では、３．７ｍｇ／ｍｌ（生理食塩水）の溶解度となる。
実施例１０で得た化合物（３５）１ｇを、１０ｍｌの生理食塩水に溶解したところ、完全に溶解した。これは、パクリタキセル７４ｍｇが１０ｍｌの生理食塩水に溶解したことになる。パクリタキセル換算では、７．４ｍｇ／ｍｌ（生理食塩水）の溶解度となる。
更に、パクリタキセル（インド国、ＤＡＢＵＲ社製）１ｍｇは、１０ｍｌの生理食塩水に溶解しなかった。
【０１１３】
実験例９
Ｂ１６担癌マウス血漿中における、化合物（３３）および（３５）からのパクリタキセル遊離評価実験実施例９で得た化合物（３３）又は実施例１０で得た化合物（３５）を生理食塩水に溶解し、パクリタキセルに換算した濃度が２５０μｇ／ｍｌとなるよう調製した。これらの溶液２０μｌをＢ１６担癌マウス血漿２００μｌにそれぞれ添加し、３７℃における薬物複合体からのパクリタキセル遊離量を測定した。
薬学雑誌，１１４，３５１−３５５（１９９４）記載の方法に従い、血漿中からのパクリタキセル回収を行い、ＨＰＬＣにより、化合物（３３）又は（３５）から血漿中に遊離したパクリタキセル量を評価した。図３６には、パクリタキセル遊離の経時変化を示した。
その結果化合物（３３）は、８〜２４時間の間に遊離パクリタキセル濃度が最大となった。又、化合物（３５）は、化合物（３３）に比べパクリタキセルを穏やかに遊離した。
【０１１４】
実験例１０
抗腫瘍効果の評価実験（２）
Ｂ１６マウス黒色腫細胞５×１０⁶個を、Ｃ５７ＢＬ／６系の雌性マウス（６週齢）の鼠径部皮下に移植し、８日後に、被検化合物として実施例９で得た化合物（３３）を生理食塩水に溶解した被検液、およびパクリタキセルをエタノール−クレモホールＥＬ（米国、シグマ社製）−生理食塩水に溶解した被検液を、一群７匹として尾静脈内に投与した。投与量はパクリタキセル換算で２０および５０ｍｇ／ｋｇとした。無処置群は、生理食塩水を一群１３匹として投与した。
被検液投与後６日目に、マウスの腫瘍体積を測定することにより、抗腫瘍効果を判定した。無処置群の腫瘍体積を１００としたときの、被検化合物投与群の平均腫瘍体積を表わした。腫瘍体積Ｖは、腫瘍を外部から計測し、長径ａ（ｍｍ）および短径ｂ（ｍｍ）とするとき、下式により求めた。
【数２】

被検液投与後６日目の、投与量と腫瘍体積との関係は、図３７に示される通りであった。本発明による薬物複合体（３３）の５０ｍｇ／ｋｇ投与群の抗腫瘍効果は、パクリタキセルの５０ｍｇ／ｋｇ投与群の抗腫瘍効果と比較して、有意に優れていた。
【０１１５】
実験例１１
抗腫瘍効果の評価実験（３）
Ｃｏｌｏｎ２６腫瘍細胞４％懸濁液を、Ｂａｌｂ／Ｃ系の雌性マウス（６週齢）の側腹部皮下に移植し、被検化合物として実施例９で得た化合物（３３）を生理食塩水に溶解した被検液、およびパクリタキセルをエタノール−クレモホールＥＬ（米国、シグマ社製）−生理食塩水に溶解した被検液を、一群３匹として尾静脈内に投与した。投与量はパクリタキセル換算で５０ｍｇ／ｋｇとした。無処置群は、一群５匹とした。
細胞移植後２日目に、第１回被検液を投与し、その後４日毎に、被検液を尾静脈内に投与した。マウスの腫瘍体積を測定することにより、抗腫瘍効果を判定した。無処置群および被検液投与群の平均腫瘍体積の経時変化を示した。腫瘍体積Ｖは、腫瘍を外部から計測し、長径ａ（ｍｍ）および短径ｂ（ｍｍ）とするとき、下式により求めた。
【数３】

被検液投与後の、腫瘍体積の経時変化は、図３８に示される通りであった。本発明による薬物複合体（３３）の５０ｍｇ／ｋｇ投与群の抗腫瘍効果は、パクリタキセルの５０ｍｇ／ｋｇ投与群の抗腫瘍効果と比較して、有意に優れていた。
【０１１６】
【発明の効果】
本発明は、薬物複合体であって、該薬物複合体からの薬物遊離速度が確実に制御されて、薬物の標的組織への移行を高めたり、あるいは又薬物の薬効を増強することができるので、医薬の分野でその価値は極めて高い。
例えば、薬物がタキサン類であり、スペーサーがアミノ酸であり、薬物単体がカルボキシアルキルデキストランである薬物複合体は、優れた薬物遊離速度の制御が可能であり、しかも薬物のタキサン類に比べ生理食塩水に対する溶解性が極めて向上し、溶解補助剤無しでの静脈内投与を可能とするなど、種々の有利な効果を発揮する。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、実施例１で得たカルボキシメチル化デキストランナトリウム塩（１）のゲル濾過溶出パターン（検出：２１４ｎｍにおける紫外吸光度）を表わす。
【図２】図２は、実施例１で得たカルボキシメチル化デキストランナトリウム塩（１）のゲル濾過溶出パターン（検出：屈折率）を表わす。
【図３】図３は、実施例１で得たカルボキシメチル化デキストラン−２’−Ｇｌｙ−パクリタキセル（３）のゲル濾過溶出パターン（検出：２２７ｎｍにおける紫外吸光度）を表わす。
【図４】図４は、実施例１で得たカルボキシメチル化デキストラン−２’−Ｇｌｙ−パクリタキセル（３）の紫外部吸光スペクトルを表わす。（濃度：６７２μｇ／ｍｌ、溶媒：水）
【図５】図５は、実施例１で得たＰＥＧ−２’−Ｇｌｙ−パクリタキセル（５）の紫外部吸光スペクトルを表わす。（濃度：２０５μｇ／ｍｌ、溶媒：水）
【図６】図６は、実施例２で得たカルボキシメチル化デキストラン−２’−Ａｌａ−パクリタキセル（７）のゲル濾過溶出パターン（検出：２２７ｎｍにおける紫外吸光度）を表わす。
【図７】図７は、実施例２で得たカルボキシメチル化デキストラン−２’−Ａｌａ−パクリタキセル（７）の紫外部吸光スペクトルを表わす。（濃度：６９８μｇ／ｍｌ、溶媒:水）
【図８】図８は、実施例２で得たＰＥＧ−２’−Ａｌａ−パクリタキセル（９）の紫外部吸光スペクトルを表わす。（濃度：２０４μｇ／ｍｌ、溶媒：水）
【図９】図９は、実施例３で得たカルボキシメチル化デキストラン−２’−Ｌｅｕ−パクリタキセル（１１）のゲル濾過溶出パターン（検出：２２７ｎｍにおける紫外吸光度）を表わす。
【図１０】図１０は、実施例３で得たカルボキシメチル化デキストラン−２’−Ｌｅｕ−パクリタキセル（１１）の紫外部吸光スペクトルを表わす。（濃度：６４４μｇ／ｍｌ、溶媒：水）
【図１１】図１１は、実施例３で得たＰＥＧ−２’−Ｌｅｕ−パクリタキセル（１３）の紫外部吸光スペクトルを表わす。（濃度：２０９μｇ／ｍｌ、溶媒：水）
【図１２】図１２は、実施例４で得たカルボキシメチル化デキストラン−２’−Ｉｌｅ−パクリタキセル（１５）のゲル濾過溶出パターン（検出：２２７ｎｍにおける紫外吸光度）を表わす。
【図１３】図１３は、実施例４で得たカルボキシメチル化デキストラン−２’−Ｉｌｅ−パクリタキセル（１５）の紫外部吸光スペクトルを表わす。（濃度：６２８μｇ／ｍｌ、溶媒：水）
【図１４】図１４は、実施例４で得たＰＥＧ−２’−Ｉｌｅ−パクリタキセル（１７）の紫外・可視部吸光スペクトルを表わす。（濃度：２１４μｇ／ｍｌ、溶媒：水）
【図１５】図１５は、実施例５で得たカルボキシメチル化デキストラン−２’−Ｐｈｅ−パクリタキセル（１９）のゲル濾過溶出パターン（検出：２２７ｎｍにおける紫外吸光度）を表わす。
【図１６】図１６は、実施例５で得たカルボキシメチル化デキストラン−２’−Ｐｈｅ−パクリタキセル（１９）の紫外部吸光スペクトルを表わす。（濃度：８１４μｇ／ｍｌ、溶媒:水）
【図１７】図１７は、実施例６で得たカルボキシメチル化デキストラン−２’−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−パクリタキセル（２１）のゲル濾過溶出パターン（検出：２２７ｎｍにおける紫外吸光度）を表わす。
【図１８】図１８は、実施例６で得たカルボキシメチル化デキストラン−２’−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−パクリタキセル（２１）の紫外部吸光スペクトルを表わす。（濃度：９４０ｐｇ／ｍｌ、溶媒:水）
【図１９】図１９は、実施例７で得たカルボキシメチル化デキストラン−２’−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−パクリタキセル（２３）のゲル濾過溶出パターン（検出：２２７ｎｍにおける紫外吸光度）を表わす。
【図２０】図２０は、実施例７で得たカルボキシメチル化デキストラン−２’−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−パクリタキセル（２３）の紫外部吸光スペクトルを表わす。（濃度：８５４μｇ／ｍｌ、溶媒:水）
【図２１】図２１は、実施例８で得たＰＥＧ−イソロイシル−２１−デキサメタゾン（２５）の紫外部吸光スペクトルを表わす。（濃度：２４５μｇ／ｍｌ、溶媒：水）
【図２２】図２２は、実施例８で得たＰＥＧ−グリシル−２１−デキサメタゾン（２７）の紫外部吸光スペクトルを表わす。（濃度：２０１μｇ／ｍｌ、溶媒：水）
【図２３】図２３は、実施例８で得たＰＥＧ−アラニル−２１−デキサメタゾン（２９）の紫外部吸光スペクトルを表わす。（濃度：１６３μｇ／ｍｌ、溶媒：水）
【図２４】図２４は、実施例８で得たＰＥＧ−２１−デキサメタゾン（３１）の紫外部吸光スペクトルを表わす。（濃度：２２７μｇ／ｍｌ、溶媒：水）
【図２５】図２５は、実施例９で得たカルボキシメチル化デキストラン−２’−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−パクリタキセル（３３）の紫外部吸光スペクトルを表わす。（濃度：７００μｇ／ｍｌ、溶媒：水）
【図２６】図２６は、実施例９で得たカルボキシメチル化デキストラン−２’−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−パクリタキセル（３３）のゲル濾過溶出パターン（検出：２２０ｎｍにおける紫外吸光度）を表わす。
【図２７】図２７は、実施例１０で得たカルボキシメチル化デキストラン−７−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−パクリタキセル（３５）の紫外部吸光スペクトルを表わす。（濃度：４２８μｇ／ｍｌ、溶媒:水）
【図２８】図２８は、実施例１０で得たカルボキシメチル化デキストラン−７−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−パクリタキセル（３５）のゲル濾過溶出パターン（検出：２２０ｎｍにおける紫外吸光度）を表わす。
【図２９】図２９は、実験例２における、３７℃のマウス血漿中における化合物（３）、（７）、（１１）および（１５）からのパクリタキセル遊離の経時変化を示すグラフである。
【図３０】図３０は、実験例２における、３７℃のヒト血漿中における化合物（３）、（７）、（１１）および（１５）からのパクリタキセル遊離の経時変化を示すグラフである。
【図３１】図３１は、実験例３における、化合物（３）（７）および（１５）の担癌マウスにおける抗腫瘍効果を示すグラフである。
【図３２】図３２は、実験例４における、３７℃のマウス血漿中における化合物（３）および（１９）、（２１）および（２３）からのパクリタキセル遊離の経時変化を示すグラフである。
【図３３】図３３は、実験例４における、３７℃のヒト血漿中における化合物（２１）および（２３）からのパクリタキセル遊離の経時変化を示すグラフである。
【図３４】図３４は、実験例６における、３７℃のマウス血漿中における化合物（５）、（９）、（１３）および（１７）からの薬物遊離の経時変化を示すグラフである。
【図３５】図３５は、実験例６における、３７℃のヒト血漿中における化合物（５）、（９）、（１３）および（１７）からの薬物遊離の経時変化を示すグラフである。
【図３６】図３６は、実験例９における、３７℃のマウス血漿中における化合物（３３）および（３５）からの薬物遊離の経時変化を示すグラフである。
【図３７】図３７は、実験例１０における評価結果、被検化合物の静脈内投与後６日目の被検液投与量と平均腫瘍体積との関係を示すグラフである。
【図３８】図３８は、実験例１１における評価結果、無処置群および被検液投与群の平均腫瘍体積の経時変化を示すグラフである。

Claims

下記（１）式で表わされるタキサン類の複合体であって、担体（A）とスペーサー（B）とは（A）のカルボキシル基と（B）のアミノ基との間に形成されたアミド結合を介して結合し、スペーサー（B）とタキサン類（C）は（B）のカルボキシル基と（C）の２’位の水酸基との間に形成されたエステル結合を介して結合していることを特徴とする薬物複合体。
（Ａ）−（Ｂ）−（Ｃ）（１）
（式中、（Ａ）はカルボキシルアルキルデキストラン、（Ｂ）はグリシン、アラニン、ロイシン、イソロイシン、及びフェニルアラニンからなる群から選ばれるアミノ酸あるいはグリシン及びフェニルアラニンからなるペプチドよりなるスペーサー、（Ｃ）は下記式（２）で表されるタキサン類を表わす。）

（式中、Ｒ¹はＣ₁〜Ｃ₆アルキル基、Ｃ₁〜Ｃ₆アルケニル基、Ｃ₂〜Ｃ₆アルキニル基、Ｃ_1-Ｃ₆直鎖状又は分岐状アルコキシ基又はフェニル基であり；Ｒ²は水素、水酸基又はアセチルオキシ基であり；Ｒ³又はＲ⁴の一方が水素で他方が水酸基；あるいはＲ³とＲ⁴が一緒になってオキソ基を形成し；Ｒ⁵又はＲ⁶の一方が水素で他方が水酸基を表わす。）
前記担体（A）が下記（３）式で表わされ、糖残基一つあたりのカルボキシルアルキル基の数が０．１〜２．０であるカルボキシアルキルデキストランであることを特徴とするタキサン類とカルボキシアルキルデキストランを含む請求項１に記載の薬物複合体。

（式中、Ｒ⁷、Ｒ⁸及びＲ⁹は、同一又は異なっていてもよく、それぞれ独立して、水素原子、−（ＣＨ₂）_m−ＣＯＯＨ基、−ＣＨ（ＣＨ₃）−ＣＯＯＨ基、−ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）−ＣＯＯＨ基又は−ＣＨ（ＣＨ₃）ＣＨ₂−ＣＯＯＨ基を表わし、ｍは１〜４の整数を表わし、ｎは５０＜ｎ＜１０００の整数を表わす。）
前記タキサン類（C）が、パクリタキセルであることを特徴とする請求項１または２に記載の薬物複合体。
前記タキサン類（C）が、ドセタキセルであることを特徴とする請求項１または２に記載の薬物複合体。
請求項１〜４のいずれかに記載の薬物複合体を含有してなることを特徴とする抗腫瘍剤。