TW202248207A - 用於增生及感染性疾病治療之細胞激素結合物 - Google Patents

用於增生及感染性疾病治療之細胞激素結合物 Download PDF

Info

Publication number
TW202248207A
TW202248207A TW111104389A TW111104389A TW202248207A TW 202248207 A TW202248207 A TW 202248207A TW 111104389 A TW111104389 A TW 111104389A TW 111104389 A TW111104389 A TW 111104389A TW 202248207 A TW202248207 A TW 202248207A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
instances
hours
polypeptide
conjugate
amino acid
Prior art date
Application number
TW111104389A
Other languages
English (en)
Inventor
傑洛 普塔辛
卡洛琳娜 Ｅ 卡法洛
馬可斯 米菈
Original Assignee
美商欣爍克斯公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 美商欣爍克斯公司 filed Critical 美商欣爍克斯公司
Publication of TW202248207A publication Critical patent/TW202248207A/zh

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A61K38/2013—IL-2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • C07K14/55—IL-2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/542—Carboxylic acids, e.g. a fatty acid or an amino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/61—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule the organic macromolecular compound being a polysaccharide or a derivative thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/643—Albumins, e.g. HSA, BSA, ovalbumin or a Keyhole Limpet Hemocyanin [KHL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/644—Transferrin, e.g. a lactoferrin or ovotransferrin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/65—Peptidic linkers, binders or spacers, e.g. peptidic enzyme-labile linkers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6813—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin the drug being a peptidic cytokine, e.g. an interleukin or interferon
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/715—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
    • C07K14/7155—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons for interleukins [IL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Abstract

本文揭示介白素(IL)結合物(例如IL-2結合物)及在治療一或多種適應症中之用途。本文亦描述包含一或多種介白素結合物(例如IL-2結合物)的醫藥組合物及套組。

Description

用於增生及感染性疾病治療之細胞激素結合物
不同T細胞群體調節免疫系統以維持免疫穩態及耐受性。舉例而言，調節性T(Treg)細胞藉由防止病理性自身反應性而防止免疫系統之不適當反應，而細胞毒性T細胞靶向且破壞感染細胞及/或癌細胞。在一些情況下，不同T細胞群體之調節為治療疾病或適應症提供一種選項。
在某些實施例中，本文揭示細胞激素結合物及在治療一或多種適應症中之用途。在一些實施例中，本文描述亦包括介白素2(IL-2)結合物及在治療一或多種適應症中之用途。在一些情況下，一或多種適應症包含癌症或病原性感染。在一些情況下，本文描述調節IL-2與IL-2受體之間的相互作用以刺激或擴增特異性T細胞、自然殺手(NK)細胞及/或自然殺手T(NKT)細胞群體之方法。在其他情況下，本文進一步描述包含一或多種本文所述之介白素結合物(例如IL-2結合物)之醫藥組合物及套組。
在某些實施例中，本文揭示一種介白素2(IL-2)結合物，其包含：分離及純化之IL-2多肽；及在選自以下之胺基酸位置結合至分離及純化之IL-2多肽的結合部分：K35、T37、R38、T41、F42、K43、 F44、Y45、E61、E62、E68、K64、P65、V69、L72及Y107，其中胺基酸殘基之編號與SEQ ID NO：1相對應。在一些實施例中，胺基酸位置選自T37、R38、T41、F42、F44、Y45、E61、E62、E68、K64、P65、V69、L72及Y107。在一些實施例中，胺基酸位置選自T37、R38、T41、F42、F44、Y45、E61、E62、E68、P65、V69、L72及Y107。在一些實施例中，胺基酸位置選自T37、T41、F42、F44、Y45、P65、V69、L72及Y107。在一些實施例中，胺基酸位置選自R38及K64。在一些實施例中，胺基酸位置選自E61、E62及E68。在一些實施例中，胺基酸位置在E62。在一些實施例中，選自K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E61、E62、E68、K64、P65、V69、L72及Y107之胺基酸殘基進一步突變成離胺酸、半胱胺酸或組胺酸。在一些實施例中，胺基酸殘基突變成半胱胺酸。在一些實施例中，胺基酸殘基突變成離胺酸。在一些實施例中，選自K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E61、E62、E68、K64、P65、V69、L72及Y107之胺基酸殘基進一步突變成非天然胺基酸。在一些實施例中，非天然胺基酸包含N6-疊氮基乙氧基-L-離胺酸(AzK)、N6-炔丙基乙氧基-L-離胺酸(PraK)、BCN-L-離胺酸、降冰片烯離胺酸、TCO-離胺酸、甲基四
Figure 111104389-A0202-12-0002-56
離胺酸、烯丙氧基羰基離胺酸、2-胺基-8-側氧基壬酸、2-胺基-8-側氧基辛酸、對乙醯基-L-苯丙胺酸、對疊氮基甲基-L-苯丙胺酸(pAMF)、對碘-L-苯丙胺酸、間乙醯基苯丙胺酸、2-胺基-8-側氧基壬酸、對炔丙基氧基苯丙胺酸、對炔丙基-苯丙胺酸、3-甲基-苯丙胺酸、L-多巴(L-Dopa)、氟化苯丙胺酸、異丙基-L-苯丙胺酸、對疊氮基-L-苯丙胺酸、對醯基-L-苯丙胺酸、對苯甲醯基-L-苯丙胺酸、對溴苯基丙胺酸、對胺基-L-苯丙胺酸、異丙基-L-苯丙胺酸、O-烯丙基酪胺 酸、O-甲基-L-酪胺酸、O-4-烯丙基-L-酪胺酸、4-丙基-L-酪胺酸、膦醯基酪胺酸、三-O-乙醯基-GlcNAcp-絲胺酸、L-磷絲胺酸、膦醯基絲胺酸、L-3-(2-萘基)丙胺酸、2-胺基-3-((2-((3-(苯甲氧基)-3-側氧基丙基)胺基)乙基)硒烷基)丙酸、2-胺基-3-(苯基硒烷基)丙酸或硒半胱胺酸。在一些實施例中，相對於野生型IL-2多肽，IL-2結合物具有降低之與IL-2受體α(IL-2Rα)次單元之親和力。在一些實施例中，相對於野生型IL-2多肽，降低之親和力係與IL-2Rα之結合親和力降低約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或大於99%。在一些實施例中，相對於野生型IL-2多肽，降低之親和力係約1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、30倍、50倍、100倍、200倍、300倍、500倍、1000倍或更大。在一些實施例中，結合部分減弱或阻斷IL-2與IL-2Rα之結合。在一些實施例中，結合部分包含水溶性聚合物。在一些實施例中，另外結合部分包含水溶性聚合物。在一些實施例中，水溶性聚合物各獨立地包含聚乙二醇(PEG)、聚(丙二醇)(PPG)、乙二醇及丙二醇之共聚物、聚(氧乙基化多元醇)、聚(烯醇)、聚(乙烯吡咯啶酮)、聚(羥烷基甲基丙烯醯胺)、聚(羥烷基甲基丙烯酸酯)、聚(醣)、聚(α-羥基酸)、聚(乙烯醇)、聚磷氮烯、聚噁唑啉(POZ)、聚(N-丙烯醯嗎啉)或其組合。在一些實施例中，水溶性聚合物各獨立地包含PEG。在一些實施例中，PEG係線性PEG或分支PEG。在一些實施例中，水溶性聚合物各獨立地包含多醣。在一些實施例中，多醣包含葡聚糖、聚唾液酸(PSA)、玻尿酸(HA)、直鏈澱粉、肝素、硫酸乙醯肝素(HS)、糊精或羥乙基澱粉(HES)。在一些實施例中，水溶性聚合物各獨立地包含聚醣。在一些實施例中，水溶性聚合物各獨立地包含多元胺。在一些實施例中，結合部分包含蛋白 質。在一些實施例中，另外結合部分包含蛋白質。在一些實施例中，蛋白質各獨立地包含白蛋白、轉鐵蛋白或甲狀腺素運載蛋白。在一些實施例中，蛋白質各獨立地包含Fc部分。在一些實施例中，蛋白質各獨立地包含IgG之Fc部分。在一些實施例中，結合部分包含多肽。在一些實施例中，另外結合部分包含多肽。在一些實施例中，多肽各獨立地包含XTEN肽、富甘胺酸高胺基酸聚合物(HAP)、PAS多肽、類彈性蛋白多肽(ELP)、CTP肽或類明膠蛋白質(GLK)聚合物。在一些實施例中，分離及純化之IL-2多肽藉由麩胺醯化修飾。在一些實施例中，結合部分直接結合至分離及純化之IL-2多肽。在一些實施例中，結合部分經由連接子間接結合至分離及純化之IL-2多肽。在一些實施例中，連接子包含同雙官能連接子。在一些實施例中，同雙官能連接子包含羅曼特氏試劑(Lomant's reagent)二硫代雙(丁二醯亞胺基丙酸酯)DSP、3'3'-二硫代雙(丙酸磺基丁二醯亞胺酯)(DTSSP)、辛二酸二丁二醯亞胺酯(DSS)、辛二酸雙(磺基丁二醯亞胺酯)(BS)、酒石酸二丁二醯亞胺酯(DST)、酒石酸二磺基丁二醯亞胺酯(磺基DST)、糖基雙(丁二醯亞胺基丁二酸)伸乙酯(EGS)、戊二酸二丁二醯亞胺酯(DSG)、碳酸N,N'-二丁二醯亞胺酯(DSC)、二亞胺代二酸二甲酯(DMA)、庚二亞胺酸二甲酯(DMP)、辛二亞胺酸二甲酯(DMS)、二甲基-3,3'-二硫代雙丙醯亞胺酸酯(DTBP)、1,4-二(3'-(2'-吡啶基二硫基)丙醯胺基)丁烷(DPDPB)、雙順丁烯二醯亞胺基己烷(BMH)、含有芳基鹵化物之化合物(DFDNB)(諸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯或1,3-二氟-4,6-二硝基苯)、4,4'-二氟-3,3'-二硝基苯基碸(DFDNPS)、雙[β-(4-疊氮柳基醯胺基)乙基]二硫化物(BASED)、甲醛、戊二醛、1,4-丁二醇二縮水甘油醚、己二酸二醯肼、碳醯肼、鄰甲苯胺、3,3'-二甲基聯苯胺、聯苯胺、α,α'-對二胺基聯 苯、二碘-對二甲苯磺酸、N,N'-伸乙基-雙(碘乙醯胺)或N,N'-六亞甲基-雙(碘乙醯胺)。在一些實施例中，連接子包含異雙官能連接子。在一些實施例中，異雙官能連接子包含3-(2-吡啶基二硫基)丙酸N-丁二醯亞胺酯(sPDP)、長鏈3-(2-吡啶基二硫基)丙酸N-丁二醯亞胺酯(LC-sPDP)、水溶性長鏈3-(2-吡啶基二硫基)丙酸N-丁二醯亞胺酯(磺基-LC-sPDP)、丁二醯亞胺基氧基羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基二硫基)甲苯(sMPT)、磺基丁二醯亞胺基-6-[α-甲基-α-(2-吡啶基二硫基)甲苯醯胺基]己酸酯(磺基-LC-sMPT)、丁二醯亞胺基-4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸酯(sMCC)、磺基丁二醯亞胺基-4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸酯(磺基-sMCC)、間順丁烯二醯亞胺基苯甲醯基-N-羥基丁二醯亞胺酯(MBs)、間順丁烯二醯亞胺基苯甲醯基-N-羥基磺基丁二醯亞胺酯(磺基-MBs)、(4-碘乙醯基)胺基苯甲酸N-丁二醯亞胺酯(sIAB)、(4-碘乙醯基)胺基苯甲酸磺基丁二醯亞胺酯(磺基-sIAB)、丁二醯亞胺基-4-(對順丁烯二醯亞胺基苯基)丁酸酯(sMPB)、磺基丁二醯亞胺基-4-(對馬來醯亞胺基苯基)丁酸酯(磺基-sMPB)、N-(γ-順丁烯二醯亞胺基丁醯氧基)丁二醯亞胺酯(GMBs)、N-(γ-順丁烯二醯亞胺基丁醯氧基)磺基丁二醯亞胺酯(磺基-GMBs)、6-((碘乙醯基)胺基)己酸丁二醯亞胺酯(sIAX)、6-[6-(((碘乙醯基)胺基)己醯基)胺基]己酸丁二醯亞胺酯(sIAXX)、4-(((碘乙醯基)胺基)甲基)環己烷-1-甲酸丁二醯亞胺酯(sIAC)、6-(((((4-碘乙醯基)胺基)甲基)環己烷-1-羰基)胺基)己酸丁二醯亞胺酯(sIACX)、碘乙酸對硝苯酯(NPIA)、羰基反應性及硫氫基反應性交聯劑，諸如4-(4-N-馬來醯亞胺基苯基)丁酸醯肼(MPBH)、4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-羧基-醯肼-8(M2C2H)、3-(2-吡啶基二硫基)丙醯基醯肼(PDPH)、N-羥基丁二醯亞胺基 -4-疊氮柳酸(NHs-AsA)、N-羥基磺基丁二醯亞胺基-4-疊氮柳酸(磺基-NHs-AsA)、磺基丁二醯亞胺基-(4-疊氮柳基醯胺基己酸酯(磺基-NHs-LC-AsA)、磺基丁二醯亞胺基-2-(ρ-疊氮柳基醯胺基)乙基-1,3'-二硫丙酸酯(sAsD)、N-羥基丁二醯亞胺基-4-疊氮苯甲酸酯(HsAB)、N-羥基磺基丁二醯亞胺基-4-疊氮苯甲酸酯(磺基-HsAB)、N-丁二醯亞胺基-6-(4'-疊氮基-2'-硝基苯基胺基)己酸酯(sANPAH)、磺基丁二醯亞胺基-6-(4'-疊氮基-2'-硝基苯基胺基)己酸酯(磺基-sANPAH)、N-5-疊氮基-2-硝基苯甲醯氧基丁二醯亞胺(ANB-NOs)、磺基丁二醯亞胺基-2-(間疊氮基-鄰硝基苯甲醯胺基)-乙基-1,3'-二硫丙酸酯(sAND)、N-丁二醯亞胺基-4(4-疊氮苯基)1,3'-二硫丙酸酯(sADP)、(4-疊氮苯基)-1,3'-二硫丙酸N-磺基丁二醯亞胺酯(磺基-sADP)、4-(ρ-疊氮苯基)丁酸磺基丁二醯亞胺酯(磺基-sAPB)、2-(7-疊氮基-4-甲基香豆素-3-乙醯胺)乙基-1,3'-二硫丙酸磺基丁二醯亞胺酯(sAED)、7-疊氮基-4-甲基香豆素-3-乙酸磺基丁二醯亞胺酯(磺基-sAMCA)、重氮丙酮酸ρ-硝苯酯(ρNPDP)、ρ-硝苯基-2-重氮-3,3,3-三氟丙酸酯(PNP-DTP)、1-(ρ-疊氮柳基醯胺基)-4-(碘乙醯胺基)丁烷(AsIB)、N-[4-(ρ-疊氮柳基醯胺基)丁基]-3'-(2'-吡啶基二硫基)丙醯胺(APDP)、二苯甲酮-4-碘乙醯胺、ρ-疊氮基苯甲醯基醯肼(ABH)、4-(ρ-疊氮柳基醯胺基)丁胺(AsBA)或ρ-疊氮苯基乙二醛(APG)。在一些實施例中，連接子包含可裂解連接子，視情況包含二肽連接子。在一些實施例中，二肽連接子包含Val-Cit、Phe-Lys、Val-Ala或Val-Lys。在一些實施例中，連接子包含不可裂解連接子。在一些實施例中，連接子包含順丁烯二醯亞胺基，視情況包含順丁烯二醯亞胺基己醯基(mc)、丁二醯亞胺基-4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸酯(SMCC)或磺基丁二醯亞胺基-4-(N-順丁烯二醯亞 胺基甲基)環己烷-1-甲酸酯(磺基-SMCC)。在一些實施例中，連接子進一步包含間隔子。在一些實施例中，間隔子包含對胺基苯甲基醇(PAB)、對胺基苯甲氧基羰基(PABC)、其衍生物或類似物。在一些實施例中，結合部分能夠延長IL-2結合物之血清半衰期。在一些實施例中，另外結合部分能夠延長IL-2結合物之血清半衰期。
在某些實施例中，本文揭示一種介白素2(IL-2)結合物，其包含：分離及純化之IL-2多肽；及結合部分；其中相對於野生型IL-2多肽，IL-2結合物具有降低之與IL-2受體α(IL-2Rα)次單元之親和力。在一些實施例中，結合部分結合至與IL-2Rα相互作用之胺基酸殘基。在一些實施例中，結合部分結合至選自以下之胺基酸殘基：K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E61、E62、E68、K64、P65、V69、L72及Y107，其中胺基酸殘基之編號與SEQ ID NO：1相對應。在一些實施例中，結合部分包含水溶性聚合物。在一些實施例中，另外結合部分包含水溶性聚合物。在一些實施例中，水溶性聚合物各獨立地包含聚乙二醇(PEG)、聚(丙二醇)(PPG)、乙二醇及丙二醇之共聚物、聚(氧乙基化多元醇)、聚(烯醇)、聚(乙烯吡咯啶酮)、聚(羥烷基甲基丙烯醯胺)、聚(羥烷基甲基丙烯酸酯)、聚(醣)、聚(α-羥基酸)、聚(乙烯醇)、聚磷氮烯、聚噁唑啉(POZ)、聚(N-丙烯醯嗎啉)或其組合。在一些實施例中，水溶性聚合物各獨立地包含PEG。在一些實施例中，PEG係線性PEG或分支PEG。在一些實施例中，水溶性聚合物各獨立地包含多醣。在一些實施例中，多醣包含葡聚糖、聚唾液酸(PSA)、玻尿酸(HA)、直鏈澱粉、肝素、硫酸乙醯肝素(HS)、糊精或羥乙基澱粉(HES)。在一些實施例中，水溶性聚合物各獨立地包含聚醣。在一些實施例中，水溶性聚合物各獨立地包含多元胺。在 一些實施例中，結合部分包含蛋白質。在一些實施例中，另外結合部分包含蛋白質。在一些實施例中，蛋白質各獨立地包含白蛋白、轉鐵蛋白或甲狀腺素運載蛋白。在一些實施例中，蛋白質各獨立地包含Fc部分。在一些實施例中，蛋白質各獨立地包含IgG之Fc部分。在一些實施例中，結合部分包含多肽。在一些實施例中，另外結合部分包含多肽。在一些實施例中，多肽各獨立地包含XTEN肽、富甘胺酸高胺基酸聚合物(HAP)、PAS多肽、類彈性蛋白多肽(ELP)、CTP肽或類明膠蛋白質(GLK)聚合物。在一些實施例中，分離及純化之IL-2多肽藉由麩胺醯化修飾。在一些實施例中，結合部分直接結合至分離及純化之IL-2多肽。在一些實施例中，結合部分經由連接子間接結合至分離及純化之IL-2多肽。在一些實施例中，連接子包含同雙官能連接子。在一些實施例中，同雙官能連接子包含羅曼特氏試劑二硫代雙(丁二醯亞胺基丙酸酯)DSP、3'3'-二硫代雙(丙酸磺基丁二醯亞胺酯)(DTSSP)、辛二酸二丁二醯亞胺酯(DSS)、辛二酸雙(磺基丁二醯亞胺酯)(BS)、酒石酸二丁二醯亞胺酯(DST)、酒石酸二磺基丁二醯亞胺酯(磺基DST)、糖基雙(丁二醯亞胺基丁二酸)伸乙酯(EGS)、戊二酸二丁二醯亞胺酯(DSG)、碳酸N,N'-二丁二醯亞胺酯(DSC)、二亞胺代二酸二甲酯(DMA)、庚二亞胺酸二甲酯(DMP)、辛二亞胺酸二甲酯(DMS)、二甲基-3,3'-二硫代雙丙醯亞胺酸酯(DTBP)、1,4-二(3'-(2'-吡啶基二硫基)丙醯胺基)丁烷(DPDPB)、雙順丁烯二醯亞胺基己烷(BMH)、含有芳基鹵化物之化合物(DFDNB)(諸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯或1,3-二氟-4,6-二硝基苯)、4,4'-二氟-3,3'-二硝基苯基碸(DFDNPS)、雙[β-(4-疊氮柳基醯胺基)乙基]二硫化物(BASED)、甲醛、戊二醛、1,4-丁二醇二縮水甘油醚、己二酸二醯肼、碳醯肼、鄰甲苯胺、3,3'-二甲基聯苯胺、聯苯胺、α,α'-對二 胺基聯苯、二碘-對二甲苯磺酸、N,N'-伸乙基-雙(碘乙醯胺)或N,N'-六亞甲基-雙(碘乙醯胺)。在一些實施例中，連接子包含異雙官能連接子。在一些實施例中，異雙官能連接子包含3-(2-吡啶基二硫基)丙酸N-丁二醯亞胺酯(sPDP)、長鏈3-(2-吡啶基二硫基)丙酸N-丁二醯亞胺酯(LC-sPDP)、水溶性長鏈3-(2-吡啶基二硫基)丙酸N-丁二醯亞胺酯(磺基-LC-sPDP)、丁二醯亞胺基氧基羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基二硫基)甲苯(sMPT)、磺基丁二醯亞胺基-6-[α-甲基-α-(2-吡啶基二硫基)甲苯醯胺基]己酸酯(磺基-LC-sMPT)、丁二醯亞胺基-4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸酯(sMCC)、磺基丁二醯亞胺基-4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸酯(磺基-sMCC)、間順丁烯二醯亞胺基苯甲醯基-N-羥基丁二醯亞胺酯(MBs)、間順丁烯二醯亞胺基苯甲醯基-N-羥基磺基丁二醯亞胺酯(磺基-MBs)、(4-碘乙醯基)胺基苯甲酸N-丁二醯亞胺酯(sIAB)、(4-碘乙醯基)胺基苯甲酸磺基丁二醯亞胺酯(磺基-sIAB)、丁二醯亞胺基-4-(對順丁烯二醯亞胺基苯基)丁酸酯(sMPB)、磺基丁二醯亞胺基-4-(對馬來醯亞胺基苯基)丁酸酯(磺基-sMPB)、N-(γ-順丁烯二醯亞胺基丁醯氧基)丁二醯亞胺酯(GMBs)、N-(γ-順丁烯二醯亞胺基丁醯氧基)磺基丁二醯亞胺酯(磺基-GMBs)、6-((碘乙醯基)胺基)己酸丁二醯亞胺酯(sIAX)、6-[6-(((碘乙醯基)胺基)己醯基)胺基]己酸丁二醯亞胺酯(sIAXX)、4-(((碘乙醯基)胺基)甲基)環己烷-1-甲酸丁二醯亞胺酯(sIAC)、6-(((((4-碘乙醯基)胺基)甲基)環己烷-1-羰基)胺基)己酸丁二醯亞胺酯(sIACX)、碘乙酸對硝苯酯(NPIA)、羰基反應性及硫氫基反應性交聯劑，諸如4-(4-N-馬來醯亞胺基苯基)丁酸醯肼(MPBH)、4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-羧基-醯肼-8(M2C2H)、3-(2-吡啶基二硫基)丙醯基醯肼(PDPH)、N-羥基丁二醯亞胺基 -4-疊氮柳酸(NHs-AsA)、N-羥基磺基丁二醯亞胺基-4-疊氮柳酸(磺基-NHs-AsA)、磺基丁二醯亞胺基-(4-疊氮柳基醯胺基己酸酯(磺基-NHs-LC-AsA)、磺基丁二醯亞胺基-2-(ρ-疊氮柳基醯胺基)乙基-1,3'-二硫丙酸酯(sAsD)、N-羥基丁二醯亞胺基-4-疊氮苯甲酸酯(HsAB)、N-羥基磺基丁二醯亞胺基-4-疊氮苯甲酸酯(磺基-HsAB)、N-丁二醯亞胺基-6-(4'-疊氮基-2'-硝基苯基胺基)己酸酯(sANPAH)、磺基丁二醯亞胺基-6-(4'-疊氮基-2'-硝基苯基胺基)己酸酯(磺基-sANPAH)、N-5-疊氮基-2-硝基苯甲醯氧基丁二醯亞胺(ANB-NOs)、磺基丁二醯亞胺基-2-(間疊氮基-鄰硝基苯甲醯胺基)-乙基-1,3'-二硫丙酸酯(sAND)、N-丁二醯亞胺基-4(4-疊氮苯基)1,3'-二硫丙酸酯(sADP)、(4-疊氮苯基)-1,3'-二硫丙酸N-磺基丁二醯亞胺酯(磺基-sADP)、4-(ρ-疊氮苯基)丁酸磺基丁二醯亞胺酯(磺基-sAPB)、2-(7-疊氮基-4-甲基香豆素-3-乙醯胺)乙基-1,3'-二硫丙酸磺基丁二醯亞胺酯(sAED)、7-疊氮基-4-甲基香豆素-3-乙酸磺基丁二醯亞胺酯(磺基-sAMCA)、重氮丙酮酸ρ-硝苯酯(ρNPDP)、ρ-硝苯基-2-重氮-3,3,3-三氟丙酸酯(PNP-DTP)、1-(ρ-疊氮柳基醯胺基)-4-(碘乙醯胺基)丁烷(AsIB)、N-[4-(ρ-疊氮柳基醯胺基)丁基]-3'-(2'-吡啶基二硫基)丙醯胺(APDP)、二苯甲酮-4-碘乙醯胺、ρ-疊氮基苯甲醯基醯肼(ABH)、4-(ρ-疊氮柳基醯胺基)丁胺(AsBA)或ρ-疊氮苯基乙二醛(APG)。在一些實施例中，連接子包含可裂解連接子，視情況包含二肽連接子。在一些實施例中，二肽連接子包含Val-Cit、Phe-Lys、Val-Ala或Val-Lys。在一些實施例中，連接子包含不可裂解連接子。在一些實施例中，連接子包含順丁烯二醯亞胺基，視情況包含順丁烯二醯亞胺基己醯基(mc)、丁二醯亞胺基-4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸酯(SMCC)或磺基丁二醯亞胺基-4-(N-順丁烯二醯亞 胺基甲基)環己烷-1-甲酸酯(磺基-SMCC)。在一些實施例中，連接子進一步包含間隔子。在一些實施例中，間隔子包含對胺基苯甲基醇(PAB)、對胺基苯甲氧基羰基(PABC)、其衍生物或類似物。在一些實施例中，結合部分能夠延長IL-2結合物之血清半衰期。在一些實施例中，另外結合部分能夠延長IL-2結合物之血清半衰期。
在某些實施例中，本文揭示一種分離及修飾之介白素2(IL-2)多肽，其在多肽上之一位置包含至少一個非天然胺基酸，該非天然胺基酸降低修飾之IL-2多肽與介白素2受體α(IL-2Rα)之間的結合，但並不明顯減弱與介白素2βγ受體(IL-2Rβγ)信號傳導複合物之結合以形成IL-2/IL-2Rβγ複合物，其中降低之與IL-2Rα之結合係與野生型IL-2多肽與IL-2Rα之間的結合相比而言。在一些實施例中，至少一個非天然胺基酸之位置選自K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E60、E61、E62、K64、P65、E68、V69、N71、L72、M104、C105及Y107，其中殘基位置與如SEQ ID NO：1中所闡述之位置35、37、38、41、42、43、44、45、61、62、64、65、68、69、71、72、104、105及107相對應。在一些實施例中，至少一個非天然胺基酸之位置選自T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E61、E62、P65、E68及L72，其中殘基位置與如SEQ ID NO：1中所闡述之位置37、38、41、42、43、44、45、61、62、65、68及72相對應。在一些實施例中，至少一個非天然胺基酸之位置選自K35、K64、V69、N71、M104、C105及Y107，其中殘基位置與如SEQ ID NO：1中所闡述之位置35、64、69、71、104、105及107相對應。在一些實施例中，至少一個非天然胺基酸之位置選自T37、R38、T41、Y45、E61、E68及L72，其中殘基位置與如SEQ ID NO：1中所闡述 之位置37、38、41、45、61、68及72相對應。在一些實施例中，至少一個非天然胺基酸之位置選自F42、K43、F44、E62及P65，其中殘基位置與如SEQ ID NO：1中所闡述之位置42、43、44、62及65相對應。在一些實施例中，至少一個非天然胺基酸：係離胺酸類似物；包含芳族側鏈；包含疊氮基；或包含醛或酮基團。在一些實施例中，至少一個非天然胺基酸不包含芳族側鏈。在一些實施例中，至少一個非天然胺基酸包含N6-疊氮基乙氧基-L-離胺酸(AzK)、N6-炔丙基乙氧基-L-離胺酸(PraK)、BCN-L-離胺酸、降冰片烯離胺酸、TCO-離胺酸、甲基四
Figure 111104389-A0202-12-0012-55
離胺酸、烯丙氧基羰基離胺酸、2-胺基-8-側氧基壬酸、2-胺基-8-側氧基辛酸、對乙醯基-L-苯丙胺酸、對疊氮基甲基-L-苯丙胺酸(pAMF)、對碘-L-苯丙胺酸、間乙醯基苯丙胺酸、2-胺基-8-側氧基壬酸、對炔丙基氧基苯丙胺酸、對炔丙基-苯丙胺酸、3-甲基-苯丙胺酸、L-多巴、氟化苯丙胺酸、異丙基-L-苯丙胺酸、對疊氮基-L-苯丙胺酸、對醯基-L-苯丙胺酸、對苯甲醯基-L-苯丙胺酸、對溴苯基丙胺酸、對胺基-L-苯丙胺酸、異丙基-L-苯丙胺酸、O-烯丙基酪胺酸、O-甲基-L-酪胺酸、O-4-烯丙基-L-酪胺酸、4-丙基-L-酪胺酸、膦醯基酪胺酸、三-O-乙醯基-GlcNAcp-絲胺酸、L-磷絲胺酸、膦醯基絲胺酸、L-3-(2-萘基)丙胺酸、2-胺基-3-((2-((3-(苯甲氧基)-3-側氧基丙基)胺基)乙基)硒烷基)丙酸、2-胺基-3-(苯基硒烷基)丙酸或硒半胱胺酸。在一些實施例中，至少一個非天然胺基酸藉由正交tRNA合成酶/tRNA對併入至修飾之IL-2多肽中。在一些實施例中，具有正交合成酶/tRNA對之正交tRNA包含至少一個非天然核鹼基。在一些實施例中，修飾之IL-2多肽經由至少一個非天然胺基酸共價連接至結合部分。在一些實施例中，結合部分包含水溶性聚合物、脂質、蛋白質或肽。在一些實施例 中，水溶性聚合物包含聚乙二醇(PEG)、聚(丙二醇)(PPG)、乙二醇及丙二醇之共聚物、聚(氧乙基化多元醇)、聚(烯醇)、聚(乙烯吡咯啶酮)、聚(羥烷基甲基丙烯醯胺)、聚(羥烷基甲基丙烯酸酯)、聚(醣)、聚(α-羥基酸)、聚(乙烯醇)、聚磷氮烯、聚噁唑啉(POZ)、聚(N-丙烯醯嗎啉)或其組合。在一些實施例中，水溶性聚合物包含PEG分子。在一些實施例中，PEG分子係線性PEG。在一些實施例中，PEG分子係分支PEG。在一些實施例中，水溶性聚合物包含多醣。在一些實施例中，多醣包含葡聚糖、聚唾液酸(PSA)、玻尿酸(HA)、直鏈澱粉、肝素、硫酸乙醯肝素(HS)、糊精或羥乙基澱粉(HES)。在一些實施例中，脂質包含脂肪酸。在一些實施例中，脂肪酸包含約6至約26個碳原子、約6至約24個碳原子、約6至約22個碳原子、約6至約20個碳原子、約6至約18個碳原子、約20至約26個碳原子、約12至約26個碳原子、約12至約24個碳原子、約12至約22個碳原子、約12至約20個碳原子或約12至約18個碳原子。在一些實施例中，脂肪酸係飽和脂肪酸。在一些實施例中，蛋白質包含白蛋白、轉鐵蛋白或甲狀腺素運載蛋白。在一些實施例中，蛋白質包含TLR促效劑。在一些實施例中，蛋白質包含抗體或其結合片段。在一些實施例中，抗體或其結合片段包含抗體之Fc部分。在一些實施例中，肽包含XTEN肽、富甘胺酸高胺基酸聚合物(HAP)、PAS多肽、類彈性蛋白多肽(ELP)、CTP肽或類明膠蛋白質(GLK)聚合物。在一些實施例中，結合部分經由連接子間接結合至修飾之IL-2之至少一個非天然胺基酸。在一些實施例中，連接子包含同雙官能連接子、異雙官能連接子、零長度連接子、可裂解或不可裂解二肽連接子、順丁烯二醯亞胺基、間隔子或其組合。在一些實施例中，相對於野生型IL-2多肽，結合親和力降低係與IL-2Rα之結合親和力降低約10%、 20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或99%。在一些實施例中，相對於野生型IL-2多肽，對於IL-2Rα之結合親和力降低約1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更大。在一些實施例中，修飾之IL-2多肽係：全長IL-2多肽之功能活性片段；重組IL-2多肽；或重組人類IL-2多肽。在一些實施例中，修飾之IL-2多肽包含N端缺失、C端缺失或其組合。在一些實施例中，N端缺失包含自N端缺失前1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25或30個殘基，其中殘基位置係參考SEQ ID NO：1中之位置。在一些實施例中，C端缺失包含自C端缺失最後1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20或更多個殘基，其中殘基位置係參考SEQ ID NO：1中之位置。在一些實施例中，功能活性片段包含IL-2區10-133、20-133、30-133、10-130、20-130、30-130、10-125、20-125、30-125、1-130或1-125，其中殘基位置係參考SEQ ID NO：1中之位置。在一些實施例中，修飾之IL-2多肽包含與SEQ ID NO：1約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%之序列一致性。在一些實施例中，與IL-2Rα之結合親和力降低之修飾之IL-2多肽能夠擴增CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶細胞、自然殺手(NK)細胞、自然殺手T(NKT)細胞群體或其組合。在一些實施例中，結合部分減弱或阻斷IL-2與IL-2Rα之結合。在一些實施例中，CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶細胞、自然殺手(NK)細胞或自然殺手T(NKT)細胞群體藉由修飾之IL-2多肽經由IL-2Rβγ複合物之活化與該細胞群體藉由野生型IL-2多肽之活化並無明顯不同，且其中修飾之IL-2多肽之效能高於野生型IL-2多肽之效能至少1倍。在一些實施例中，當該活化劑與該細胞群體接觸時，修飾之IL-2多肽使CD4+ T調節性 (Treg)細胞擴增小於20%、15%、10%、5%、1%或0.1%。在一些實施例中，修飾之IL-2多肽不使該細胞群體中之Treg細胞擴增。
在某些實施例中，本文揭示一種分離及修飾之介白素2(IL-2)多肽，其在多肽上之一位置包含至少一個非天然胺基酸，該非天然胺基酸降低修飾之IL-2多肽與介白素2受體α(IL-2Rα)之間的結合，但保持與介白素2βγ受體(IL-2Rβγ)信號傳導複合物明顯結合以形成IL-2/IL-2Rβγ複合物，其中降低之與IL-2Rα之結合係與野生型IL-2多肽與IL-2Rα之間的結合相比而言。在一些實施例中，受體信號傳導效能差異小於5倍、小於4倍、小於3倍、小於2倍或小於1倍。在一些實施例中，至少一個非天然胺基酸之位置選自K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E60、E61、E62、K64、P65、E68、V69、N71、L72、M104、C105及Y107，其中殘基位置與如SEQ ID NO：1中所闡述之位置35、37、38、41、42、43、44、45、61、62、64、65、68、69、71、72、104、105及107相對應。在一些實施例中，至少一個非天然胺基酸之位置選自T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E61、E62、P65、E68及L72，其中殘基位置與如SEQ ID NO：1中所闡述之位置37、38、41、42、43、44、45、61、62、65、68及72相對應。在一些實施例中，至少一個非天然胺基酸之位置選自K35、K64、V69、N71、M104、C105及Y107，其中殘基位置與如SEQ ID NO：1中所闡述之位置35、64、69、71、104、105及107相對應。在一些實施例中，至少一個非天然胺基酸之位置選自T37、R38、T41、Y45、E61、E68及L72，其中殘基位置與如SEQ ID NO：1中所闡述之位置37、38、41、45、61、68及72相對應。在一些實施例中，至少一個非天然胺基酸之位置選自F42、K43、F44、E62 及P65，其中殘基位置與如SEQ ID NO：1中所闡述之位置42、43、44、62及65相對應。在一些實施例中，至少一個非天然胺基酸：係離胺酸類似物；包含芳族側鏈；包含疊氮基；包含炔基；或包含醛或酮基團。在一些實施例中，至少一個非天然胺基酸不包含芳族側鏈。在一些實施例中，至少一個非天然胺基酸包含N6-疊氮基乙氧基-L-離胺酸(AzK)、N6-炔丙基乙氧基-L-離胺酸(PraK)、BCN-L-離胺酸、降冰片烯離胺酸、TCO-離胺酸、甲基四
Figure 111104389-A0202-12-0016-54
離胺酸、烯丙氧基羰基離胺酸、2-胺基-8-側氧基壬酸、2-胺基-8-側氧基辛酸、對乙醯基-L-苯丙胺酸、對疊氮基甲基-L-苯丙胺酸(pAMF)、對碘-L-苯丙胺酸、間乙醯基苯丙胺酸、2-胺基-8-側氧基壬酸、對炔丙基氧基苯丙胺酸、對炔丙基-苯丙胺酸、3-甲基-苯丙胺酸、L-多巴、氟化苯丙胺酸、異丙基-L-苯丙胺酸、對疊氮基-L-苯丙胺酸、對醯基-L-苯丙胺酸、對苯甲醯基-L-苯丙胺酸、對溴苯基丙胺酸、對胺基-L-苯丙胺酸、異丙基-L-苯丙胺酸、O-烯丙基酪胺酸、O-甲基-L-酪胺酸、O-4-烯丙基-L-酪胺酸、4-丙基-L-酪胺酸、膦醯基酪胺酸、三-O-乙醯基-GlcNAcp-絲胺酸、L-磷絲胺酸、膦醯基絲胺酸、L-3-(2-萘基)丙胺酸、2-胺基-3-((2-((3-(苯甲氧基)-3-側氧基丙基)胺基)乙基)硒烷基)丙酸、2-胺基-3-(苯基硒烷基)丙酸或硒半胱胺酸。在一些實施例中，至少一個非天然胺基酸藉由正交tRNA合成酶/tRNA對併入至修飾之IL-2多肽中。在一些實施例中，具有正交合成酶/tRNA對之正交tRNA包含至少一個非天然核鹼基。在一些實施例中，修飾之IL-2多肽經由至少一個非天然胺基酸共價連接至結合部分。在一些實施例中，結合部分包含水溶性聚合物、脂質、蛋白質或肽。在一些實施例中，水溶性聚合物包含聚乙二醇(PEG)、聚(丙二醇)(PPG)、乙二醇及丙二醇之共聚物、聚(氧乙基化多元醇)、聚(烯醇)、 聚(乙烯吡咯啶酮)、聚(羥烷基甲基丙烯醯胺)、聚(羥烷基甲基丙烯酸酯)、聚(醣)、聚(α-羥基酸)、聚(乙烯醇)、聚磷氮烯、聚噁唑啉(POZ)、聚(N-丙烯醯嗎啉)或其組合。在一些實施例中，水溶性聚合物包含PEG分子。在一些實施例中，PEG分子係線性PEG。在一些實施例中，PEG分子係分支PEG。在一些實施例中，水溶性聚合物包含多醣。在一些實施例中，多醣包含葡聚糖、聚唾液酸(PSA)、玻尿酸(HA)、直鏈澱粉、肝素、硫酸乙醯肝素(HS)、糊精或羥乙基澱粉(HES)。在一些實施例中，脂質包含脂肪酸。在一些實施例中，脂肪酸包含約6至約26個碳原子、約6至約24個碳原子、約6至約22個碳原子、約6至約20個碳原子、約6至約18個碳原子、約20至約26個碳原子、約12至約26個碳原子、約12至約24個碳原子、約12至約22個碳原子、約12至約20個碳原子或約12至約18個碳原子。在一些實施例中，脂肪酸係飽和脂肪酸。在一些實施例中，蛋白質包含白蛋白、轉鐵蛋白或甲狀腺素運載蛋白。在一些實施例中，結合部分包含TLR促效劑。在一些實施例中，蛋白質包含抗體或其結合片段。在一些實施例中，抗體或其結合片段包含抗體之Fc部分。在一些實施例中，肽包含XTEN肽、富甘胺酸高胺基酸聚合物(HAP)、PAS多肽、類彈性蛋白多肽(ELP)、CTP肽或類明膠蛋白質(GLK)聚合物。在一些實施例中，結合部分經由連接子間接結合至修飾之IL-2之至少一個非天然胺基酸。在一些實施例中，連接子包含同雙官能連接子、異雙官能連接子、零長度連接子、可裂解或不可裂解二肽連接子、順丁烯二醯亞胺基、間隔子或其組合。在一些實施例中，相對於野生型IL-2多肽，結合親和力降低係與IL-2Rα之結合親和力降低約30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或100%。在一些實施例中，相對於野生型IL-2多肽，對於IL- 2Rα之結合親和力降低約3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更大。在一些實施例中，修飾之IL-2多肽係：全長IL-2多肽之功能活性片段；重組IL-2多肽；或重組人類IL-2多肽。在一些實施例中，修飾之IL-2多肽包含N端缺失、C端缺失或其組合。在一些實施例中，N端缺失包含自N端缺失前1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25或30個殘基，其中殘基位置係參考SEQ ID NO：1中之位置。在一些實施例中，C端缺失包含自C端缺失最後1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20或更多個殘基，其中殘基位置係參考SEQ ID NO：1中之位置。在一些實施例中，功能活性片段包含IL-2區10-133、20-133、30-133、10-130、20-130、30-130、10-125、20-125、30-125、1-130或1-125，其中殘基位置係參考SEQ ID NO：1中之位置。在一些實施例中，修飾之IL-2多肽包含與SEQ ID NO：1約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%之序列一致性。在一些實施例中，與IL-2Rα之結合親和力降低之修飾之IL-2多肽能夠擴增CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶細胞、自然殺手(NK)細胞、自然殺手T(NKT)細胞群體或其組合。在一些實施例中，結合部分或非天然胺基酸減弱或阻斷IL-2與IL-2Rα之結合。在一些實施例中，相對於野生型IL-2多肽，CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶細胞、自然殺手(NK)細胞或自然殺手T(NKT)細胞群體藉由修飾之IL-2多肽經由IL-2Rβγ複合物之活化保持該細胞群體之明顯活化效能。在一些實施例中，修飾之IL-2多肽與IL-2Rβγ複合物之受體信號傳導效能高於野生型IL-2多肽與IL-2Rβγ複合物之受體信號傳導效能。在一些實施例中，修飾之IL-2多肽IL-2Rβγ複合物之受體信號傳導效能低於野生型IL-2多肽IL-2Rβγ複合物之受體信號傳導效能。在 一些實施例中，修飾之IL-2多肽展現與IL-2Rβγ之第一受體信號傳導效能及與IL-2Rαβγ之第二受體信號傳導效能，且其中與第二受體信號傳導效能相比，第一受體信號傳導效能係至少1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、50倍、100倍、500倍或更高。在一些實施例中，修飾之IL-2多肽之第一受體信號傳導效能高於野生型IL-2多肽與IL-2Rβγ之受體信號傳導效能，且修飾之IL-2多肽之第二受體信號傳導效能低於野生型IL-2多肽與IL-2Rαβγ之受體信號傳導效能。在一些實施例中，修飾之IL-2多肽之第一受體信號傳導效能比野生型IL-2多肽之受體信號傳導效能低至少1倍。
在某些實施例中，本文揭示一種分離及修飾之介白素2(IL-2)多肽，其包含至少一個非天然胺基酸，其中該分離及修飾之IL-2多肽展現與IL-2βγ信號傳導複合物之第一受體信號傳導效能及與IL-2αβγ信號傳導複合物之第二受體信號傳導效能，且其中第一受體信號傳導效能與第二受體信號傳導效能之間的差異小於10倍。在一些實施例中，受體信號傳導效能差異小於5倍、小於4倍、小於3倍、小於2倍或小於1倍。在一些實施例中，至少一個非天然胺基酸之位置選自K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E60、E61、E62、K64、P65、E68、V69、N71、L72、M104、C105及Y107，其中殘基位置與如SEQ ID NO：1中所闡述之位置35、37、38、41、42、43、44、45、61、62、64、65、68、69、71、72、104、105及107相對應。在一些實施例中，至少一個非天然胺基酸之位置選自T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E61、E62、P65、E68及L72，其中殘基位置與如SEQ ID NO：1中所闡述之位置37、38、41、42、43、44、45、61、62、65、68及72相對應。在一些實 施例中，至少一個非天然胺基酸之位置選自K35、K64、V69、N71、M104、C105及Y107，其中殘基位置與如SEQ ID NO：1中所闡述之位置35、64、69、71、104、105及107相對應。在一些實施例中，至少一個非天然胺基酸之位置選自T37、R38、T41、Y45、E61、E68及L72，其中殘基位置與如SEQ ID NO：1中所闡述之位置37、38、41、45、61、68及72相對應。在一些實施例中，至少一個非天然胺基酸之位置選自F42、K43、F44、E62及P65，其中殘基位置與如SEQ ID NO：1中所闡述之位置42、43、44、62及65相對應。在一些實施例中，至少一個非天然胺基酸：係離胺酸類似物；包含芳族側鏈；包含疊氮基；包含炔基；或包含醛或酮基團。在一些實施例中，至少一個非天然胺基酸不包含芳族側鏈。在一些實施例中，至少一個非天然胺基酸包含N6-疊氮基乙氧基-L-離胺酸(AzK)、N6-炔丙基乙氧基-L-離胺酸(PraK)、BCN-L-離胺酸、降冰片烯離胺酸、TCO-離胺酸、甲基四
Figure 111104389-A0202-12-0020-53
離胺酸、烯丙氧基羰基離胺酸、2-胺基-8-側氧基壬酸、2-胺基-8-側氧基辛酸、對乙醯基-L-苯丙胺酸、對疊氮基甲基-L-苯丙胺酸(pAMF)、對碘-L-苯丙胺酸、間乙醯基苯丙胺酸、2-胺基-8-側氧基壬酸、對炔丙基氧基苯丙胺酸、對炔丙基-苯丙胺酸、3-甲基-苯丙胺酸、L-多巴、氟化苯丙胺酸、異丙基-L-苯丙胺酸、對疊氮基-L-苯丙胺酸、對醯基-L-苯丙胺酸、對苯甲醯基-L-苯丙胺酸、對溴苯基丙胺酸、對胺基-L-苯丙胺酸、異丙基-L-苯丙胺酸、O-烯丙基酪胺酸、O-甲基-L-酪胺酸、O-4-烯丙基-L-酪胺酸、4-丙基-L-酪胺酸、膦醯基酪胺酸、三-O-乙醯基-GlcNAcp-絲胺酸、L-磷絲胺酸、膦醯基絲胺酸、L-3-(2-萘基)丙胺酸、2-胺基-3-((2-((3-(苯甲氧基)-3-側氧基丙基)胺基)乙基)硒烷基)丙酸、2-胺基-3-(苯基硒烷基)丙酸或硒半胱胺酸。在一些實施例中，至少一 個非天然胺基酸藉由正交tRNA合成酶/tRNA對併入至修飾之IL-2多肽中。在一些實施例中，具有正交合成酶/tRNA對之正交tRNA包含至少一個非天然核鹼基。在一些實施例中，修飾之IL-2多肽經由至少一個非天然胺基酸共價連接至結合部分。在一些實施例中，結合部分包含水溶性聚合物、脂質、蛋白質或肽。在一些實施例中，水溶性聚合物包含聚乙二醇(PEG)、聚(丙二醇)(PPG)、乙二醇及丙二醇之共聚物、聚(氧乙基化多元醇)、聚(烯醇)、聚(乙烯吡咯啶酮)、聚(羥烷基甲基丙烯醯胺)、聚(羥烷基甲基丙烯酸酯)、聚(醣)、聚(α-羥基酸)、聚(乙烯醇)、聚磷氮烯、聚噁唑啉(POZ)、聚(N-丙烯醯嗎啉)或其組合。在一些實施例中，水溶性聚合物包含PEG分子。在一些實施例中，PEG分子係線性PEG。在一些實施例中，PEG分子係分支PEG。在一些實施例中，水溶性聚合物包含多醣。在一些實施例中，多醣包含葡聚糖、聚唾液酸(PSA)、玻尿酸(HA)、直鏈澱粉、肝素、硫酸乙醯肝素(HS)、糊精或羥乙基澱粉(HES)。在一些實施例中，脂質包含脂肪酸。在一些實施例中，脂肪酸包含約6至約26個碳原子、約6至約24個碳原子、約6至約22個碳原子、約6至約20個碳原子、約6至約18個碳原子、約20至約26個碳原子、約12至約26個碳原子、約12至約24個碳原子、約12至約22個碳原子、約12至約20個碳原子或約12至約18個碳原子。在一些實施例中，脂肪酸係飽和脂肪酸。在一些實施例中，蛋白質包含白蛋白、轉鐵蛋白或甲狀腺素運載蛋白。在一些實施例中，結合部分包含TLR促效劑。在一些實施例中，蛋白質包含抗體或其結合片段。在一些實施例中，抗體或其結合片段包含抗體之Fc部分。在一些實施例中，肽包含XTEN肽、富甘胺酸高胺基酸聚合物(HAP)、PAS多肽、類彈性蛋白多肽(ELP)、CTP肽或類明膠蛋白質(GLK)聚合物。在一些實施 例中，結合部分經由連接子間接結合至修飾之IL-2之至少一個非天然胺基酸。在一些實施例中，連接子包含同雙官能連接子、異雙官能連接子、零長度連接子、可裂解或不可裂解二肽連接子、順丁烯二醯亞胺基、間隔子或其組合。在一些實施例中，相對於野生型IL-2多肽，結合親和力降低係與IL-2Rα之結合親和力降低約30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或100%。在一些實施例中，相對於野生型IL-2多肽，對於IL-2Rα之結合親和力降低約3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更大。在一些實施例中，修飾之IL-2多肽係：全長IL-2多肽之功能活性片段；重組IL-2多肽；或重組人類IL-2多肽。在一些實施例中，修飾之IL-2多肽包含N端缺失、C端缺失或其組合。在一些實施例中，N端缺失包含自N端缺失前1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25或30個殘基，其中殘基位置係參考SEQ ID NO：1中之位置。在一些實施例中，C端缺失包含自C端缺失最後1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20或更多個殘基，其中殘基位置係參考SEQ ID NO：1中之位置。在一些實施例中，功能活性片段包含IL-2區10-133、20-133、30-133、10-130、20-130、30-130、10-125、20-125、30-125、1-130或1-125，其中殘基位置係參考SEQ ID NO：1中之位置。在一些實施例中，修飾之IL-2多肽包含與SEQ ID NO：1約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%之序列一致性。在一些實施例中，與IL-2Rα之結合親和力降低之修飾之IL-2多肽能夠擴增CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶細胞、自然殺手(NK)細胞、自然殺手T(NKT)細胞群體或其組合。在一些實施例中，結合部分或非天然胺基酸減弱或阻斷IL-2與IL-2Rα之結合。在一些實施例中，相對於野生型IL-2多 肽，CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶細胞、自然殺手(NK)細胞或自然殺手T(NKT)細胞群體藉由修飾之IL-2多肽經由IL-2Rβγ複合物之活化保持該細胞群體之明顯活化效能。在一些實施例中，修飾之IL-2多肽與IL-2Rβγ複合物之受體信號傳導效能高於野生型IL-2多肽與IL-2Rβγ複合物之受體信號傳導效能。在一些實施例中，修飾之IL-2多肽IL-2Rβγ複合物之受體信號傳導效能低於野生型IL-2多肽IL-2Rβγ複合物之受體信號傳導效能。在一些實施例中，修飾之IL-2多肽展現與IL-2Rβγ之第一受體信號傳導效能及與IL-2Rαβγ之第二受體信號傳導效能，且其中與第二受體信號傳導效能相比，第一受體信號傳導效能係至少1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、50倍、100倍、500倍或更高。在一些實施例中，修飾之IL-2多肽之第一受體信號傳導效能高於野生型IL-2多肽與IL-2Rβγ之受體信號傳導效能，且修飾之IL-2多肽之第二受體信號傳導效能低於野生型IL-2多肽與IL-2Rαβγ之受體信號傳導效能。在一些實施例中，修飾之IL-2多肽之第一受體信號傳導效能比野生型IL-2多肽之受體信號傳導效能低至少1倍。
在某些實施例中，本文揭示一種分離及修飾之介白素2(IL-2)多肽，其包含至少一個非天然胺基酸，其中分離及修飾之IL-2多肽提供活化IL-2βγ信號傳導複合物之第一EC50值及活化IL-2αβγ信號傳導複合物之第二EC50值，且其中第一EC50與第二EC50值之間的差異小於10倍。在一些實施例中，差異小於5倍、小於4倍、小於3倍、小於2倍或小於1倍。在一些實施例中，受體信號傳導效能差異小於5倍、小於4倍、小於3倍、小於2倍或小於1倍。在一些實施例中，至少一個非天然胺基酸之位置選自K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E60、E61、 E62、K64、P65、E68、V69、N71、L72、M104、C105及Y107，其中殘基位置與如SEQ ID NO：1中所闡述之位置35、37、38、41、42、43、44、45、61、62、64、65、68、69、71、72、104、105及107相對應。在一些實施例中，至少一個非天然胺基酸之位置選自T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E61、E62、P65、E68及L72，其中殘基位置與如SEQ ID NO：1中所闡述之位置37、38、41、42、43、44、45、61、62、65、68及72相對應。在一些實施例中，至少一個非天然胺基酸之位置選自K35、K64、V69、N71、M104、C105及Y107，其中殘基位置與如SEQ ID NO：1中所闡述之位置35、64、69、71、104、105及107相對應。在一些實施例中，至少一個非天然胺基酸之位置選自T37、R38、T41、Y45、E61、E68及L72，其中殘基位置與如SEQ ID NO：1中所闡述之位置37、38、41、45、61、68及72相對應。在一些實施例中，至少一個非天然胺基酸之位置選自F42、K43、F44、E62及P65，其中殘基位置與如SEQ ID NO：1中所闡述之位置42、43、44、62及65相對應。在一些實施例中，至少一個非天然胺基酸：係離胺酸類似物；包含芳族側鏈；包含疊氮基；包含炔基；或包含醛或酮基團。在一些實施例中，至少一個非天然胺基酸不包含芳族側鏈。在一些實施例中，至少一個非天然胺基酸包含N6-疊氮基乙氧基-L-離胺酸(AzK)、N6-炔丙基乙氧基-L-離胺酸(PraK)、BCN-L-離胺酸、降冰片烯離胺酸、TCO-離胺酸、甲基四
Figure 111104389-A0202-12-0024-52
離胺酸、烯丙氧基羰基離胺酸、2-胺基-8-側氧基壬酸、2-胺基-8-側氧基辛酸、對乙醯基-L-苯丙胺酸、對疊氮基甲基-L-苯丙胺酸(pAMF)、對碘-L-苯丙胺酸、間乙醯基苯丙胺酸、2-胺基-8-側氧基壬酸、對炔丙基氧基苯丙胺酸、對炔丙基-苯丙胺酸、3-甲基-苯丙胺酸、L-多巴、氟化苯丙胺 酸、異丙基-L-苯丙胺酸、對疊氮基-L-苯丙胺酸、對醯基-L-苯丙胺酸、對苯甲醯基-L-苯丙胺酸、對溴苯基丙胺酸、對胺基-L-苯丙胺酸、異丙基-L-苯丙胺酸、O-烯丙基酪胺酸、O-甲基-L-酪胺酸、O-4-烯丙基-L-酪胺酸、4-丙基-L-酪胺酸、膦醯基酪胺酸、三-O-乙醯基-GlcNAcp-絲胺酸、L-磷絲胺酸、膦醯基絲胺酸、L-3-(2-萘基)丙胺酸、2-胺基-3-((2-((3-(苯甲氧基)-3-側氧基丙基)胺基)乙基)硒烷基)丙酸、2-胺基-3-(苯基硒烷基)丙酸或硒半胱胺酸。在一些實施例中，至少一個非天然胺基酸藉由正交tRNA合成酶/tRNA對併入至修飾之IL-2多肽中。在一些實施例中，具有正交合成酶/tRNA對之正交tRNA包含至少一個非天然核鹼基。在一些實施例中，修飾之IL-2多肽經由至少一個非天然胺基酸共價連接至結合部分。在一些實施例中，結合部分包含水溶性聚合物、脂質、蛋白質或肽。在一些實施例中，水溶性聚合物包含聚乙二醇(PEG)、聚(丙二醇)(PPG)、乙二醇及丙二醇之共聚物、聚(氧乙基化多元醇)、聚(烯醇)、聚(乙烯吡咯啶酮)、聚(羥烷基甲基丙烯醯胺)、聚(羥烷基甲基丙烯酸酯)、聚(醣)、聚(α-羥基酸)、聚(乙烯醇)、聚磷氮烯、聚噁唑啉(POZ)、聚(N-丙烯醯嗎啉)或其組合。在一些實施例中，水溶性聚合物包含PEG分子。在一些實施例中，PEG分子係線性PEG。在一些實施例中，PEG分子係分支PEG。在一些實施例中，水溶性聚合物包含多醣。在一些實施例中，多醣包含葡聚糖、聚唾液酸(PSA)、玻尿酸(HA)、直鏈澱粉、肝素、硫酸乙醯肝素(HS)、糊精或羥乙基澱粉(HES)。在一些實施例中，脂質包含脂肪酸。在一些實施例中，脂肪酸包含約6至約26個碳原子、約6至約24個碳原子、約6至約22個碳原子、約6至約20個碳原子、約6至約18個碳原子、約20至約26個碳原子、約12至約26個碳原子、約12至約24個碳原子、約 12至約22個碳原子、約12至約20個碳原子或約12至約18個碳原子。在一些實施例中，脂肪酸係飽和脂肪酸。在一些實施例中，蛋白質包含白蛋白、轉鐵蛋白或甲狀腺素運載蛋白。在一些實施例中，結合部分包含TLR促效劑。在一些實施例中，蛋白質包含抗體或其結合片段。在一些實施例中，抗體或其結合片段包含抗體之Fc部分。在一些實施例中，肽包含XTEN肽、富甘胺酸高胺基酸聚合物(HAP)、PAS多肽、類彈性蛋白多肽(ELP)、CTP肽或類明膠蛋白質(GLK)聚合物。在一些實施例中，結合部分經由連接子間接結合至修飾之IL-2之至少一個非天然胺基酸。在一些實施例中，連接子包含同雙官能連接子、異雙官能連接子、零長度連接子、可裂解或不可裂解二肽連接子、順丁烯二醯亞胺基、間隔子或其組合。在一些實施例中，相對於野生型IL-2多肽，結合親和力降低係與IL-2Rα之結合親和力降低約30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或100%。在一些實施例中，相對於野生型IL-2多肽，對於IL-2Rα之結合親和力降低約3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更大。在一些實施例中，修飾之IL-2多肽係：全長IL-2多肽之功能活性片段；重組IL-2多肽；或重組人類IL-2多肽。在一些實施例中，修飾之IL-2多肽包含N端缺失、C端缺失或其組合。在一些實施例中，N端缺失包含自N端缺失前1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25或30個殘基，其中殘基位置係參考SEQ ID NO：1中之位置。在一些實施例中，C端缺失包含自C端缺失最後1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20或更多個殘基，其中殘基位置係參考SEQ ID NO：1中之位置。在一些實施例中，功能活性片段包含IL-2區10-133、20-133、30-133、10-130、20-130、30-130、10-125、20-125、30-125、1- 130或1-125，其中殘基位置係參考SEQ ID NO：1中之位置。在一些實施例中，修飾之IL-2多肽包含與SEQ ID NO：1約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%之序列一致性。在一些實施例中，與IL-2Rα之結合親和力降低之修飾之IL-2多肽能夠擴增CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶細胞、自然殺手(NK)細胞、自然殺手T(NKT)細胞群體或其組合。在一些實施例中，結合部分或非天然胺基酸減弱或阻斷IL-2與IL-2Rα之結合。在一些實施例中，相對於野生型IL-2多肽，CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶細胞、自然殺手(NK)細胞或自然殺手T(NKT)細胞群體藉由修飾之IL-2多肽經由IL-2Rβγ複合物之活化保持該細胞群體之明顯活化效能。在一些實施例中，修飾之IL-2多肽與IL-2Rβγ複合物之受體信號傳導效能高於野生型IL-2多肽與IL-2Rβγ複合物之受體信號傳導效能。在一些實施例中，修飾之IL-2多肽IL-2Rβγ複合物之受體信號傳導效能低於野生型IL-2多肽IL-2Rβγ複合物之受體信號傳導效能。在一些實施例中，修飾之IL-2多肽展現與IL-2Rβγ之第一受體信號傳導效能及與IL-2Rαβγ之第二受體信號傳導效能，且其中與第二受體信號傳導效能相比，第一受體信號傳導效能係至少1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、50倍、100倍、500倍或更高。在一些實施例中，修飾之IL-2多肽之第一受體信號傳導效能高於野生型IL-2多肽與IL-2Rβγ之受體信號傳導效能，且修飾之IL-2多肽之第二受體信號傳導效能低於野生型IL-2多肽與IL-2Rαβγ之受體信號傳導效能。在一些實施例中，修飾之IL-2多肽之第一受體信號傳導效能比野生型IL-2多肽之受體信號傳導效能低至少1倍。
在某些實施例中，本文揭示一種醫藥組合物，其包含：上 文所述之IL-2結合物；及醫藥學上可接受之賦形劑。在一些實施例中，醫藥組合物針對非經腸投與進行調配。
在某些實施例中，本文揭示一種治療有需要受試者之增生性疾病或病狀之方法，其包含向受試者投與治療有效量之分離及修飾之上文所述之IL-2多肽、上文所述之IL-2結合物、上文所述之IL-2Rβγ結合蛋白、上文所述之CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶細胞、自然殺手(NK)細胞或自然殺手T(NKT)細胞之活化劑或上文所述之醫藥組合物。在一些實施例中，增生性疾病或病狀係癌症。在一些實施例中，癌症係實體腫瘤癌症。在一些實施例中，實體腫瘤癌症係膀胱癌、骨癌、腦癌、乳癌、結腸直腸癌、食道癌、眼癌、頭頸癌、腎癌、肺癌、黑素瘤、卵巢癌、胰臟癌或前列腺癌。在一些實施例中，癌症係惡性血液病。在一些實施例中，惡性血液病係慢性淋巴球性白血病(CLL)、小淋巴球性淋巴瘤(SLL)、濾泡性淋巴瘤(FL)、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、套細胞淋巴瘤(MCL)、瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血症(Waldenstrom's macroglobulinemia)、多發性骨髓瘤、結外邊緣區B細胞淋巴瘤、結邊緣區B細胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)、非伯基特氏高級B細胞淋巴瘤、原發性縱隔B細胞淋巴瘤(PMBL)、免疫母細胞大細胞淋巴瘤、前驅體B淋巴母細胞性淋巴瘤、B細胞前淋巴球性白血病、淋巴漿細胞淋巴瘤、脾邊緣區淋巴瘤、漿細胞骨髓瘤、漿細胞瘤、縱隔(胸腺)大B細胞淋巴瘤、血管內大B細胞淋巴瘤、原發性積液淋巴瘤或淋巴瘤樣肉芽腫。在一些實施例中，該方法進一步包含投與另外治療劑。在一些實施例中，同時投與分離及修飾之IL-2多肽、IL-2結合物、IL-2Rβγ結合蛋白、CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶細胞、自然殺手(NK)細胞或自然 殺手T(NKT)細胞之活化劑、或醫藥組合物及另外治療劑。在一些實施例中，依序投與分離及修飾之IL-2多肽、IL-2結合物、IL-2Rβγ結合蛋白、CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶細胞、自然殺手(NK)細胞或自然殺手T(NKT)細胞之活化劑、或醫藥組合物及另外治療劑。在一些實施例中，在另外治療劑之前投與分離及修飾之IL-2多肽、IL-2結合物、IL-2Rβγ結合蛋白、CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶細胞、自然殺手(NK)細胞或自然殺手T(NKT)細胞之活化劑或醫藥組合物。在一些實施例中，在投與另外治療劑之後投與分離及修飾之IL-2多肽、IL-2結合物、IL-2Rβγ結合蛋白、CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶細胞、自然殺手(NK)細胞或自然殺手T(NKT)細胞之活化劑或醫藥組合物。
在某些實施例中，本文揭示一種擴增CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶細胞、自然殺手(NK)細胞或自然殺手T(NKT)細胞群體之方法，其包含：使細胞群體與上文所述之分離及修飾之IL-2多肽、上文所述之IL-2結合物、上文所述之IL-2Rβγ結合蛋白、上文所述之CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶細胞、自然殺手(NK)細胞或自然殺手T(NKT)細胞之活化劑或上文所述之醫藥組合物接觸足以誘導與IL-2Rβγ形成複合物之時間，藉此刺激Teff及/或NK細胞群體之擴增。在一些實施例中，相比於與野生型IL-2多肽接觸之CD3+細胞群體中之CD4+ Treg細胞之擴增，上文所述之分離及修飾之IL-2多肽、上文所述之IL-2結合物、上文所述之IL-2Rβγ結合蛋白、上文所述之CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶細胞、自然殺手(NK)細胞或自然殺手T(NKT)細胞之活化劑或上文所述之醫藥組合物使CD3+細胞群體中之CD4+ T調節性(Treg)細胞擴增小於20%、15%、10%、5%或1%。在一些實施例中，上文所述之分離及修 飾之IL-2多肽、上文所述之IL-2結合物、上文所述之IL-2Rβγ結合蛋白、上文所述之CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶細胞、自然殺手(NK)細胞或自然殺手T(NKT)細胞之活化劑或上文所述之醫藥組合物不擴增細胞群體中之CD4+ Treg細胞。在一些實施例中，在與上文所述之分離及修飾之IL-2多肽、上文所述之IL-2結合物、上文所述之IL-2Rβγ結合蛋白、上文所述之CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶細胞、自然殺手(NK)細胞或自然殺手T(NKT)細胞之活化劑或上文所述之醫藥組合物一起培育之後細胞群體中Teff細胞與Treg細胞之比率係約或至少2：1、3：1、4：1、5：1、6：1、7：1、8：1、9：1、10：1、20：1、50：1或100：1。在一些實施例中，該方法係活體內方法。在一些實施例中，該方法係活體外方法。在一些實施例中，該方法係離體方法。
在某些實施例中，本文揭示一種擴增CD4+輔助細胞群體、CD8+效應初始及/或記憶細胞群體、自然殺手(NK)細胞群體或自然殺手T(NKT)細胞群體或其組合之方法，其包含：(a)使細胞與上文所述之IL-2結合物接觸；及(b)使IL-2與IL-2Rβ及IL-2Rγ次單元相互作用以形成IL-2/IL-2Rβγ複合物；其中IL-2結合物具有降低之與IL-2Rα次單元之親和力，且其中IL-2/IL-2Rβγ複合物刺激CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及/或記憶細胞、NK細胞、NKT細胞或其組合之擴增。
在一些實施例中，本文揭示一種套組，其包含上文所述之分離及修飾之IL-2多肽、上文所述之IL-2結合物、上文所述之IL-2Rβγ結合蛋白、上文所述之CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶細胞、自然殺手(NK)細胞或自然殺手T(NKT)細胞之活化劑或上文所述之包含IL-2結合物之醫藥組合物。在一些實施例中，本文亦描述一種套組，其包含編碼上 文所述之IL-2多肽之聚核酸分子。
本發明之新穎特徵在隨附申請專利範圍中細緻闡述。將參考闡述利用本發明原理之說明性實施例及其附圖的以下詳細描述來獲得對本發明之特徵及優勢的更佳理解：
圖1展示例示性非天然胺基酸。此圖式自Young等人，「Beyond the canonical 20 amino acids：expanding the genetic lexicon」,J.of Biological Chemistry 285(15)：11039-11044(2010)之圖2改編。
圖2A至圖2B說明例示性非天然胺基酸。圖2A說明例示性離胺酸衍生物。圖2B說明例示性苯丙胺酸衍生物。
圖3A至圖3D說明例示性非天然胺基酸。此等非天然胺基酸(UAA)已基因編碼於蛋白質中(圖3A-UAA 1-42號；圖3B-UAA 43-89號；圖3C- UAA 90-128號；圖3D-UAA 129-167號)。圖3A至5D自Dumas等人，Chemical Science 2015,6,50-69之表1改編。
圖4A至圖4B展示對P65_30kD、P65_5kD、E62_30kD及E62_5kD PEG結合物之表面電漿子共振(SPR)分析。圖4A展示對結合至固定IL-2 Rα之IL-2變異體之SPR分析。圖4B展示對結合至固定IL-2 Rβ之IL-2變異體之SPR分析。
圖5A至圖5C展示人類LRS初級細胞群體中之pSTAT5信號傳導之例示性IL-2變異體劑量反應曲線。圖5A：天然IL-2；圖5B：E62_30kD；及圖5C：P65_30kD。
圖6展示在向C57BL/6小鼠單次靜脈內快速給藥阿地介白 素(Aldesleukin)(IL-2)、E62_5、E62_30及P65_30之後相對於時間概況之平均(±SD)血漿濃度。
圖7展示在向C57BL/6小鼠單次靜脈內快速給藥P65_30或阿地介白素進行處理之後，周邊血液中相對於時間單元之pSTAT5+ CD8+ T細胞之百分比。
圖8A至圖8C展示在用單次靜脈內快速給藥P65_30或阿地介白素(IL-2)進行處理之後，PBMC群體中CD8+ T細胞(圖8A)、NK細胞(圖8B)及CD4+ Treg細胞(圖8C)之百分比。在所指示之時間點經由心臟穿刺抽取血液，且藉由流式細胞測量術評定免疫細胞群體。各數據點表示各時間點之來自3個複本之平均值±SEM。
圖9A至圖9B展示在用單次靜脈內快速給藥P65_30或阿地介白素(IL-2)處理之後，在刺激CD3+群體內之記憶CD8+CD44+ T細胞增殖上P65_30與IL-2(阿地介白素)之間的差異。在所指示之時間點經由心臟穿刺抽取血液，且藉由流式細胞測量術評定免疫細胞群體。數據使用不成對學生t測試進行分析。***指示P值<0.001。圖9A展示72、96及120小時之記憶CD8+CD44+ T細胞增殖。圖9B展示在120h時間點對彼等細胞之流式細胞測量術分析。
圖10展示在用單次靜脈內快速給藥P65_30進行處理之後，帶有同系B16F10腫瘤之C57B16小鼠中相對於時間之腫瘤浸潤性淋巴細胞(TIL)之增加。圖10A展示在治療第5天經P65_30處理相對於未處理(媒劑)動物中NK、CD8+ T及CD4+ T reg細胞之百分比。圖10B展示經P65_30處理及對照(媒劑)動物中CD8+/CD4+ Treg細胞之比率。數據使用不成對學生t測試進行分析。***指示P值<0.001。
圖11A至圖11B展示在用單次靜脈內快速給藥遞增含量(0.01至5mg/kg)之P65_30或阿地介白素(IL-2)進行處理之後，小鼠IL-2、TNF-α、IFNγ、IL-5及IL-6之血漿含量。細胞激素之血漿濃度經由ELISA測定(Abcam,Cambridge,UK)。對於各劑量組，N=3隻小鼠且在給藥後4、34及72h收集樣品。圖11A展示給藥阿地介白素之動物之細胞激素含量且圖11B展示給藥P65_30之動物之細胞激素含量。
圖12展示在向雄性食蟹獼猴單次靜脈內給藥P65_30kD之後，白血球、淋巴細胞及嗜酸性球計數(平均值±SD)。
交叉參考
本申請案主張2017年8月3日申請之美國臨時申請案第62/540,781號之優先權，該申請案以全文引用的方式併入本文中。
序列表
本申請案含有序列表，其已以ASCII格式以電子方式提交且其全部內容以引用的方式併入本文中。於2018年7月27日產生之該ASCII複本命名為46085-710_601_SL.txt且大小係3,703個位元組。
細胞激素包含細胞信號傳導蛋白質家族，諸如趨化介素、干擾素、介白素、淋巴介質、腫瘤壞死因子及在先天性及適應性免疫細胞恆定中起作用之其他生長因子。細胞激素藉由諸如巨噬細胞、B淋巴細胞、T淋巴細胞及肥大細胞、內皮細胞、成纖維細胞及不同基質細胞之免疫細胞產生。在一些情況下，細胞激素調節體液與基於細胞之免疫反應之間的平衡。
介白素係信號傳導蛋白質，調節T及B淋巴細胞、單核球性 譜系之細胞、嗜中性白血球、嗜鹼性球、嗜酸性球、巨核細胞及造血細胞之發育及分化。介白素藉由輔助CD4 T及B淋巴細胞、單核細胞、巨噬細胞、內皮細胞及其他組織常駐物產生。在一些情況下，存在約15種介白素，亦即介白素1至13、介白素15及介白素17。
介白素2(IL-2)係結構包含15.5kDa四α螺旋束之多效性第1型細胞激素。IL-2之前驅體形式長達153個胺基酸殘基，其中前20個胺基酸形成信號肽且殘基21至153形成成熟形式。IL-2主要在抗原刺激後由CD4+ T細胞，且較小程度藉由CD8+細胞、自然殺手(NK)細胞及自然殺手T(NKT)細胞、活化樹突狀細胞(DC)及肥大細胞產生。IL-2信號傳導經由與IL-2受體(IL-2R)次單元、IL-2Rα(亦稱為CD25)、IL-2Rβ(亦稱為CD122)及IL-2Rγ(亦稱為CD132)之特定組合相互作用發生。IL-2與IL-2Rα之相互作用形成具有約10-8M之Kd的「低親和力」IL-2受體複合物。IL-2與-2Rβ及IL-2Rγ之相互作用形成具有約10-9M之Kd的「中等親和力」IL-2受體複合物。IL-2與所有三個次單元IL-2Rα、IL-2Rβ及IL-2Rγ之相互作用形成具有約>10-11M之Kd的「高親和力」IL-2受體複合物。
在一些情況下，經由「高親和力」IL-2Rαβγ複合物之IL-2信號傳導調節調節性T細胞之活化及增殖。調節性T細胞或CD4+CD25+Foxp3+調節性T(Treg)細胞藉由抑制諸如CD4+ T細胞、CD8+ T細胞、B細胞、NK細胞及NKT細胞之效應細胞介導免疫穩態之維持。在一些情況下，Treg細胞由胸腺產生(tTreg細胞)或由周邊中之天然T細胞誘導(pTreg細胞)。在一些情況下，Treg細胞視為具有周邊耐受性之介體。實際上，在一個研究中，不含CD25之周邊CD4+ T細胞之轉移在裸小鼠中產生多種自體免疫性疾病，然而CD4+CD25+ T細胞之共轉移抑制自體免 疫顯現(Sakaguchi等人，「Immunologic self-tolerance maintained by activated T cells expressing IL-2 receptor alpha-chains(CD25)」,J.Immunol.155(3)：1151-1164(1995))。Treg細胞群體之擴增下調效應T細胞增殖且抑制自體免疫及T細胞抗腫瘤反應。
經由「中等親和力」IL-2Rβγ複合物之IL-2信號傳導調節CD8+效應T(Teff)細胞、NK細胞及NKT細胞之活化及增殖。CD8+ Teff細胞(亦稱為細胞毒性T細胞、Tc細胞、細胞毒性T淋巴球、CTL、T殺手細胞、溶胞T細胞、Tcon或殺手T細胞)係識別且殺死受損細胞、癌細胞及感染病原體之細胞的T淋巴球。NK及NKT細胞係與CD8+ Teff細胞、靶標癌細胞及感染病原體之細胞類似之淋巴球類型。
在一些情況下，利用IL-2信號傳導調節T細胞反應且隨後用於治療癌症。舉例而言，投與高劑量形式之IL-2以誘導Teff細胞群體擴增，從而用於治療癌症。然而，高劑量IL2進一步致使伴隨刺激減弱抗腫瘤免疫反應之Treg細胞。高劑量IL-2亦誘導由血管中之IL-2Rα鏈表現細胞(包括第2型先天性免疫細胞(ILC-2)、嗜酸性球及內皮細胞)之接合介導之有毒不良事件。由此導致嗜酸性球增多症、毛細管滲漏及血管滲漏症候群VLS)。
在某些實施例中，本文揭示一種經由細胞激素/細胞激素受體信號傳導選擇性上調不同群體之淋巴球(例如CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶細胞、NK細胞或NKT細胞)之方法。在一些情況下，細胞激素包含介白素、干擾素或腫瘤壞死因子。在一些情況下，細胞激素係細胞激素結合物，例如介白素結合物、干擾素結合物或腫瘤壞死因子結合物。在另外情況下，本文描述包含醫藥組合物及包含一或多種本文所述之細胞 激素結合物之套組。
在一些實施例中，本文亦描述一種經由IL-2/IL-2R信號傳導選擇性上調CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶細胞、NK細胞及/或NKT細胞群體之方法。在一些情況下，IL-2係一種IL-2結合物，其與「中等親和力」IL-2Rβγ複合物相互作用，視情況具有與IL-2Rαβγ複合物類似的效能，且相對於野生型IL-2具有減弱之IL-2Rα相互作用。在一些實施例中，本文進一步描述使用本文所述之IL-2結合物治療癌症之方法。在另外實施例中，本文描述醫藥組合物及包含一或多種本文所述之IL-2結合物之套組。
細胞激素結合物
在一些實施例中，本文描述細胞激素結合物。在一些情況下，細胞激素包含介白素、腫瘤壞死因子、干擾素、趨化介素、淋巴激素或生長因子。在一些情況下，細胞激素係介白素。在一些情況下，細胞激素係干擾素。在另外情況下，細胞激素係腫瘤壞死因子。在其他情況下，細胞激素係生長因子。
在一些實施例中，本文描述一種介白素結合物。例示性介白素包括(但不限於)介白素1β(IL-1β)、介白素2(IL-2)、介白素7(IL-7)、介白素10(IL-10)、介白素12(IL-12)、介白素15(IL-15)、介白素18(IL-18)及介白素21(IL-21)。在一些情況下，本文描述一種介白素結合物，其中介白素選自IL-1β、IL-2、IL-7、IL-10、IL-12、IL-15、IL-18及IL-21。
IL-2結合物
在一些實施例中，本文描述在胺基酸位置經修飾之IL-2結 合物。在一些情況下，修飾係關於天然胺基酸。在一些情況下，修飾係關於非天然胺基酸。在一些情況下，本文描述一種包含至少一個非天然胺基酸之分離及修飾之IL-2多肽。在一些情況下，IL-2多肽係分離及純化之哺乳動物IL-2，例如嚙齒動物IL-2蛋白質或人類IL-2蛋白質。在一些情況下，IL-2多肽係人類IL-2蛋白質。在一些情況下，IL-2多肽包含與SEQ ID NO：1約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%之序列一致性。在一些情況下，IL-2多肽包含SEQ ID NO：1之序列。在一些情況下，IL-2多肽由SEQ ID NO：1之序列組成。在另外情況下，IL-2多肽包含與SEQ ID NO：2約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%之序列一致性。在另外情況下，IL-2多肽包含SEQ ID NO：2之序列。在另外情況下，IL-2多肽由SEQ ID NO：2之序列組成。
在一些情況下，IL-2多肽係截短變異體。在一些情況下，截短係N端缺失。在一些情況下，截短係C端缺失。在另外情況下，截短包含N端與C端缺失。舉例而言，截短可為自N端或C端抑或兩個末端缺失至少或約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20或更多個殘基。在一些情況下，IL-2多肽包含N端缺失至少或約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20或更多個殘基。在一些情況下，IL-2多肽包含N端缺失至少或約1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個殘基。在一些情況下，IL-2多肽包含N端缺失至少或約2個殘基。在一些情況下，IL-2多肽包含N端缺失至少或約3個殘基。在一些情況下，IL-2多肽包含N端缺失至少或約4個殘基。在一些情況下，IL-2多肽包含N端缺失至少或約5個殘基。在一些情況下，IL-2多肽包含N端缺失至少或約6個殘基。在一些情況下，IL-2多肽包含N端缺失至少或約7個殘 基。在一些情況下，IL-2多肽包含N端缺失至少或約8個殘基。在一些情況下，IL-2多肽包含N端缺失至少或約9個殘基。在一些情況下，IL-2多肽包含N端缺失至少或約10個殘基。
在一些實施例中，IL-2多肽係功能活性片段。在一些情況下，功能活性片段包含IL-2區10-133、20-133、30-133、10-130、20-130、30-130、10-125、20-125、30-125、1-130或1-125，其中殘基位置係參考SEQ ID NO：1中之位置。在一些情況下，功能活性片段包含IL-2區10-133，其中殘基位置係參考SEQ ID NO：1中之位置。在一些情況下，功能活性片段包含IL-2區20-133，其中殘基位置係參考SEQ ID NO：1中之位置。在一些情況下，功能活性片段包含IL-2區30-133，其中殘基位置係參考SEQ ID NO：1中之位置。在一些情況下，功能活性片段包含IL-2區10-125，其中殘基位置係參考SEQ ID NO：1中之位置。在一些情況下，功能活性片段包含IL-2區20-125，其中殘基位置係參考SEQ ID NO：1中之位置。在一些情況下，功能活性片段包含IL-2區1-130，其中殘基位置係參考SEQ ID NO：1中之位置。在一些情況下，功能活性片段包含IL-2區1-125，其中殘基位置係參考SEQ ID NO：1中之位置。
在一些實施例中，本文描述一種IL-2結合物，其包含分離、純化及修飾之IL-2多肽及結合部分。在一些情況下，相對於野生型IL-2多肽，IL-2結合物具有降低之與IL-2受體α(IL-2Rα)次單元之親和力。在一些情況下，結合部分結合至與IL-2Rα(例如在IL-2/IL-2Rα界面)相互作用之胺基酸殘基。在一些情況下，結合部分結合至接近IL-2/IL-2Rα界面(例如遠離IL-2/IL-2Rα界面約5Å、約10Å、約15Å或約20Å)之胺基酸殘基。如本文所使用，與IL-2/IL-2Rα界面有關之殘基包含與來自IL- 2Rα次單元之殘基形成疏水相互作用、氫鍵或離子型相互作用之IL-2殘基。
在一些情況下，結合部分結合至選自以下之胺基酸殘基：胺基酸位置Y31、K32、N33、P34、K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、P47、K48、Q57、E60、E61、E62、L63、K64、P65、E68、V69、N71、L72、Q74、S75、K76、N77、M104、C105、E106、Y107、A108、D109、E110、T111或A112，其中胺基酸殘基之編號與SEQ ID NO：1相對應。在一些情況下，胺基酸位置選自Y31、K32、N33、P34、K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、P47、K48、E61、E62、E68、K64、P65、V69、L72、Q74、S75、K76、N77、M104、C105、E106、Y107、A108、D109、E110、T111及A112。在一些情況下，胺基酸位置選自N33、P34、K35、T37、R38、M39、T41、F42、K43、F44、Y45、Q57、E60、E61、E62、L63、K64、P65、E68、V69、N71、L72、M104、C105、E106、Y107、A108、D109、E110、T111及A112。在一些情況下，胺基酸位置選自K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E61、E62、E68、K64、P65、V69、L72及Y107。在一些情況下，胺基酸位置選自T37、R38、T41、F42、F44、Y45、E61、E62、E68、K64、P65、V69、L72及Y107。在一些情況下，胺基酸位置選自T37、R38、T41、F42、F44、Y45、E61、E62、E68、P65、V69、L72及Y107。在一些情況下，胺基酸位置選自T37、T41、F42、F44、Y45、P65、V69、L72及Y107。在一些情況下，胺基酸位置選自R38及K64。在一些情況下，胺基酸位置選自E61、E62及E68。在一些實施例中，胺基酸位置在K35。在一些實施例 中，胺基酸位置在T37。在一些情況下，胺基酸位置在R38。在一些情況下，胺基酸位置在T41。在一些情況下，胺基酸位置在F42。在一些情況下，胺基酸位置在K43。在一些情況下，胺基酸位置在F44。在一些情況下，胺基酸位置在Y45。在一些情況下，胺基酸位置在E61。在一些情況下，胺基酸位置在E62。在一些情況下，胺基酸位置在K64。在一些情況下，胺基酸位置在E68。在一些情況下，胺基酸位置在P65。在一些情況下，胺基酸位置在V69。在一些情況下，胺基酸位置在L72。在一些情況下，胺基酸位置在Y107。在一些情況下，胺基酸位置在L72。在一些情況下，胺基酸位置在D109。
在一些情況下，IL-2結合物進一步包含另外突變。在一些情況下，另外突變在選自以下之胺基酸位置：K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E61、E62、E68、K64、P65、V69、L72及Y107。在此類情況下，胺基酸與另外結合部分結合，以增加血清半衰期、穩定性或其組合。或者，胺基酸在結合至另外結合部分之前首先突變成諸如離胺酸、半胱胺酸、組胺酸、精胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、絲胺酸、蘇胺酸或酪胺酸之天然胺基酸；或突變成非天然胺基酸。
在一些實施例中，相對於無非天然胺基酸修飾之野生型IL-2多肽(例如野生型IL-2多肽)，降低之修飾IL-2多肽與IL-2受體α(IL-2Rα)次單元之親和力係約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或99%或大於99%。在一些情況下，降低之親和力係約10%。在一些情況下，降低之親和力係約20%。在一些情況下，降低之親和力係約40%。在一些情況下，降低之親和力係約50%。在一些情況下，降低之親和力係約60%。在一些情況下，降低之親和力係約80%。在一些 情況下，降低之親和力係約90%。在一些情況下，降低之親和力係約99%。在一些情況下，降低之親和力係大於99%。在一些情況下，降低之親和力係約80%。在一些情況下，降低之親和力係約100%。
在一些實施例中，相對於無非天然胺基酸修飾之等效IL-2多肽(例如野生型IL-2多肽)，降低之修飾之IL-2多肽與IL-2受體α(IL-2Rα)次單元之親和力係約1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、30倍、50倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、1,000倍或更大。在一些情況下，降低之親和力係約1倍。在一些情況下，降低之親和力係約2倍。在一些情況下，降低之親和力係約4倍。在一些情況下，降低之親和力係約5倍。在一些情況下，降低之親和力係約6倍。在一些情況下，降低之親和力係約8倍。在一些情況下，降低之親和力係約10倍。在一些情況下，降低之親和力係約30倍。在一些情況下，降低之親和力係約50倍。在一些情況下，降低之親和力係約100倍。在一些情況下，降低之親和力係約300倍。在一些情況下，降低之親和力係約500倍。在一些情況下，降低之親和力係約1000倍。在一些情況下，降低之親和力超過1,000倍。
在一些情況下，修飾之IL-2多肽不與IL-2Rα相互作用。在一些情況下，修飾之IL-2多肽進一步與結合部分結合。在一些情況下，IL-2結合物不與IL-2Rα相互作用。
在一些實施例中，修飾之IL-2多肽展現與IL-2βγ信號傳導複合物之第一受體信號傳導效能及與IL-2αβγ信號傳導複合物之第二受體信號傳導效能，且其中第一受體信號傳導效能與第二受體信號傳導效能之間的差異小於10倍。在一些實施例中，修飾之IL-2多肽展現與IL-2βγ信號 傳導複合物之第一受體信號傳導效能及與IL-2αβγ信號傳導複合物之第二受體信號傳導效能，且其中第一受體信號傳導效能與第二受體信號傳導效能之間的差異小於5倍。在一些情況下，差異係小於9倍、小於8倍、小於7倍、小於6倍、小於5倍、小於4倍、小於3倍、小於2倍或小於1倍。在一些情況下，修飾之IL-2多肽係部分促進劑，例如活化受體(例如IL-2βγ信號傳導複合物或IL-2αβγ信號傳導複合物)，但相對於完全促效劑對受體僅具有部分功效之促效劑。在一些情況下，修飾之IL-2多肽一種完全促效劑，例如以最大反應活化受體(例如IL-2βγ信號傳導複合物或IL-2αβγ信號傳導複合物)之促效劑。
在一些情況下，受體信號傳導效能藉由EC50值來量測。在一些情況下，修飾之IL-2多肽提供活化IL-2βγ信號傳導複合物之第一EC50值及活化IL-2αβγ信號傳導複合物之第二EC50值，且其中第一EC50與第二EC50值之間的差異小於10倍。在一些情況下，修飾之IL-2多肽提供活化IL-2βγ信號傳導複合物之第一EC50值及活化IL-2αβγ信號傳導複合物之第二EC50值，且其中第一EC50與第二EC50值之間的差異小於5倍。在一些情況下，差異係小於9倍、小於8倍、小於7倍、小於6倍、小於5倍、小於4倍、小於3倍、小於2倍或小於1倍。
在一些情況下，受體信號傳導效能藉由ED50值來量測。在一些情況下，修飾之IL-2多肽提供活化IL-2βγ信號傳導複合物之第一ED50值及活化IL-2αβγ信號傳導複合物之第二ED50值，且其中第一ED50與第二ED50值之間的差異小於10倍。在一些情況下，修飾之IL-2多肽提供活化IL-2βγ信號傳導複合物之第一ED50值及活化IL-2αβγ信號傳導複合物之第二ED50值，且其中第一ED50與第二ED50值之間的差異小於5倍。 在一些情況下，差異係小於9倍、小於8倍、小於7倍、小於6倍、小於5倍、小於4倍、小於3倍、小於2倍或小於1倍。
在一些實施例中，結合部分直接抑或經由連接肽間接連接至IL-2多肽之N端或C端。在一些情況下，結合部分(例如聚合物、蛋白質或肽)在IL-2之N端或C端及直接抑或經由連接肽間接地與IL-2基因融合。在一些情況下，結合部分連接至N端或C端胺基酸殘基。在一些情況下，結合部分連接至結合至N端或C端胺基酸殘基之反應性基團。
在一些實施例中，與IL-2Rα之結合親和力降低之IL-2結合物能夠擴增CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶T細胞、自然殺手(NK)細胞或自然殺手T(NKT)細胞群體。在一些情況下，結合部分減弱或阻斷IL-2與IL-2Rα之結合。
在一些情況下，相對於野生型IL-2多肽，CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶細胞、自然殺手(NK)細胞或自然殺手T(NKT)細胞群體藉由修飾之IL-2多肽經由IL-2Rβγ複合物之活化保持該細胞群體之明顯活化效能。在一些情況下，藉由修飾之IL-2多肽活化等效於藉由野生型IL-2多肽之活化。在其他情況下，藉由修飾之IL-2多肽活化高於藉由野生型IL-2多肽之活化。在一些情況下，修飾之IL-2多肽與IL-2Rβγ複合物之受體信號傳導效能高於野生型IL-2多肽與IL-2Rβγ複合物之受體信號傳導效能。在一些情況下，修飾之IL-2多肽之受體信號傳導效能高於野生型IL-2多肽之對應效能至少1倍。在一些情況下，與野生型IL-2多肽之對應效能相比，修飾之IL-2多肽之受體信號傳導效能係約或至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、25倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、100倍、150倍、200倍、300倍、 400倍、500倍、1,000倍或更高。在此類情況下，用於實現CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶細胞、自然殺手(NK)細胞或自然殺手T(NKT)細胞群體之活化水準與野生型IL-2多肽類似之修飾之IL-2多肽的劑量或濃度低於用於野生型IL-2多肽之劑量或濃度。
在一些實施例中，CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶細胞、自然殺手(NK)細胞或自然殺手T(NKT)細胞群體藉由修飾之IL-2多肽經由IL-2Rβγ複合物之活化保持該細胞群體藉由野生型IL-2多肽之明顯活化效能。在一些情況下，修飾之IL-2多肽IL-2Rβγ複合物之受體信號傳導效能低於野生型IL-2多肽IL-2Rβγ複合物之受體信號傳導效能。在一些情況下，修飾之IL-2多肽之受體信號傳導效能低於野生型IL-2多肽之對應效能約或至少1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、20倍或50倍。
在一些實施例中，修飾之IL-2多肽展現與IL-2Rβγ之第一受體信號傳導效能及與IL-2Rαβγ之第二受體信號傳導效能，且其中與IL-2Rβγ之第一受體信號傳導效能係相對於野生型IL-2多肽改良的效能且與IL-2Rαβγ之第二受體信號傳導效能係相對於野生型IL-2多肽減弱之效能。在一些實施例中，修飾之IL-2多肽展現與IL-2Rβγ之第一受體信號傳導效能及與IL-2Rαβγ之第二受體信號傳導效能，且其中與第二受體信號傳導效能相比，第一受體信號傳導效能係至少1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、50倍、100倍、500倍、1000倍或更高。在一些情況下，與第二受體信號傳導效能相比，第一受體信號傳導效能係至少1倍或更高。在一些情況下，與第二受體信號傳導效能相比，第一受體信號傳導效能係至少2倍或更高。在一些情況下，與第二受體信號傳導效能相比，第一受體信號傳導效能係至少5倍或更高。在一些 情況下，與第二受體信號傳導效能相比，第一受體信號傳導效能係至少10倍或更高。在一些情況下，與第二受體信號傳導效能相比，第一受體信號傳導效能係至少20倍或更高。在一些情況下，與第二受體信號傳導效能相比，第一受體信號傳導效能係至少50倍或更高。在一些情況下，與第二受體信號傳導效能相比，第一受體信號傳導效能係至少100倍或更高。在一些情況下，與第二受體信號傳導效能相比，第一受體信號傳導效能係至少500倍或更高。在一些情況下，與第二受體信號傳導效能相比，第一受體信號傳導效能係至少1000倍或更高。在一些情況下，修飾之IL-2多肽之第一受體信號傳導效能高於野生型IL-2多肽與IL-2Rβγ之受體信號傳導效能，且修飾之IL-2多肽之第二受體信號傳導效能低於野生型IL-2多肽與IL-2Rαβγ之受體信號傳導效能。在一些情況下，兩種受體信號傳導效力皆低於其在野生型IL-2多肽上之對應效力。在其他情況下，兩種受體信號傳導效力皆高於其在野生型IL-2多肽上之對應效力。
在一些實施例中，IL-2結合物減少投與IL-2結合物之受試者中之有毒不良事件。例示性有毒不良事件包括嗜酸性球增多症、毛細管滲漏及血管滲漏症候群(VLS)。在一些情況下，相對於投與野生型IL-2或阿地介白素之第二受試者，IL-2結合物減少受試者中有毒不良事件之發生約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或約100%。在一些情況下，相對於投與野生型IL-2或阿地介白素之第二受試者，IL-2結合物減輕受試者中有毒不良事件之嚴重程度約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或約100%。
在一些情況下，有毒不良事件係嗜酸性球增多症。在一些 情況下，相對於投與野生型IL-2或阿地介白素之第二受試者，IL-2結合物減少受試者中嗜酸性球增多症之發生約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或約100%。在一些情況下，相對於投與野生型IL-2或阿地介白素之第二受試者，IL-2結合物減輕受試者中嗜酸性球增多症之嚴重程度約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或約100%。
在一些情況下，有毒不良事件係毛細管滲漏。在一些情況下，相對於投與野生型IL-2或阿地介白素之第二受試者，IL-2結合物減少受試者中毛細管滲漏之發生約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或約100%。在一些情況下，相對於投與野生型IL-2或阿地介白素之第二受試者，IL-2結合物減輕受試者中毛細管滲漏之嚴重程度約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或約100%。
在一些情況下，有毒不良事件係VLS。在一些情況下，相對於投與野生型IL-2或阿地介白素之第二受試者，IL-2結合物減少受試者中VLS之發生約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或約100%。在一些情況下，相對於投與野生型IL-2或阿地介白素之第二受試者，IL-2結合物減輕受試者中VLS之嚴重程度約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或約100%。
在一些實施例中，IL-2結合物包含大於1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、18小時、24小時、2天、3天、4天、5天、6天、7天或更長之血漿半 衰期。在一些實施例中，IL-2結合物包含大於1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時或更長之血漿半衰期。在一些實施例中，IL-2結合物包含大於1小時之血漿半衰期。在一些實施例中，IL-2結合物包含大於2小時之血漿半衰期。在一些實施例中，IL-2結合物包含大於3小時之血漿半衰期。在一些實施例中，IL-2結合物包含大於4小時之血漿半衰期。在一些實施例中，IL-2結合物包含大於5小時之血漿半衰期。在一些實施例中，IL-2結合物包含大於6小時之血漿半衰期。在一些實施例中，IL-2結合物包含大於7小時之血漿半衰期。在一些實施例中，IL-2結合物包含大於8小時之血漿半衰期。在一些實施例中，IL-2結合物包含大於9小時之血漿半衰期。在一些實施例中，IL-2結合物包含大於10小時之血漿半衰期。在一些實施例中，IL-2結合物包含大於12小時之血漿半衰期。在一些實施例中，IL-2結合物包含大於18小時之血漿半衰期。在一些實施例中，IL-2結合物包含大於24小時之血漿半衰期。
在一些實施例中，IL-2結合物包含至少1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、15小時、18小時、24小時、2天、3天、4天、5天、6天、7天或更長之血漿半衰期。在一些實施例中，IL-2結合物包含至少1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、15小時、18小時、24小時或更長之血漿半衰期。在一些實施例中，IL-2結合物包含至少1小時之血漿半衰期。在一些實施例中，IL-2結合物包含至少2小時之血漿半衰期。在一些實施例中，IL-2結合物包含至少3小時之血漿半衰期。在一些實施例中，IL-2結合物包含至少4小時之血漿半 衰期。在一些實施例中，IL-2結合物包含至少5小時之血漿半衰期。在一些實施例中，IL-2結合物包含至少6小時之血漿半衰期。在一些實施例中，IL-2結合物包含至少7小時之血漿半衰期。在一些實施例中，IL-2結合物包含至少8小時之血漿半衰期。在一些實施例中，IL-2結合物包含至少9小時之血漿半衰期。在一些實施例中，IL-2結合物包含至少10小時之血漿半衰期。在一些實施例中，IL-2結合物包含至少12小時之血漿半衰期。在一些實施例中，IL-2結合物包含至少18小時之血漿半衰期。在一些實施例中，IL-2結合物包含至少24小時之血漿半衰期。
在一些實施例中，IL-2結合物包含約1小時至約7天、約12小時至約7天、約18小時至約7天、約24小時至約7天、約1小時至約5天、約12小時至約5天、約24小時至約5天、約2天至約5天或約2天至約3天之血漿半衰期。
在一些實施例中，IL-2結合物包含約1小時至約18小時、約1小時至約12小時、約2小時至約10小時、約2小時至約8小時、約4小時至約18小時、約4小時至約12小時、約4小時至約10小時、約4小時至約8小時、約6小時至約18小時、約6小時至約12小時、約6小時至約10小時、約6小時至約8小時、約8小時至約18小時、約8小時至約12小時或約8小時至約10小時之血漿半衰期。
在一些實施例中，IL-2結合物包含能夠增殖及/或擴增CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶T細胞、NK細胞、NKT細胞或其組合但不施加諸如細胞凋亡之不利影響之血漿半衰期。
在一些實施例中，相對於野生型IL-2，IL-2結合物包含延長之血漿半衰期，例如至少1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小 時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、15小時、18小時、24小時、2天、3天、4天、5天、6天、7天或更長。在一些實施例中，相對於野生型IL-2，IL-2結合物包含延長之血漿半衰期，例如至少1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、15小時、18小時、24小時或更長。
在一些實施例中，相對於野生型IL-2，IL-2結合物包含延長之血漿半衰期，例如約1小時至約18小時、約1小時至約12小時、約2小時至約10小時、約2小時至約8小時、約4小時至約18小時、約4小時至約12小時、約4小時至約10小時、約4小時至約8小時、約6小時至約18小時、約6小時至約12小時、約6小時至約10小時、約6小時至約8小時、約8小時至約18小時、約8小時至約12小時或約8小時至約10小時。
在一些實施例中，相對於阿地介白素，IL-2結合物包含延長之血漿半衰期，例如至少1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、15小時、18小時、24小時、2天、3天、4天、5天、6天、7天或更長。在一些實施例中，相對於阿地介白素，IL-2結合物包含延長之血漿半衰期，例如至少1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、15小時、18小時、24小時或更長。
在一些實施例中，相對於阿地介白素，IL-2結合物包含延長之血漿半衰期，例如約1小時至約18小時、約1小時至約12小時、約2小時至約10小時、約2小時至約8小時、約4小時至約18小時、約4小時至約12小時、約4小時至約10小時、約4小時至約8小時、約6小時至約18小時、約6小時至約12小時、約6小時至約10小時、約6小時至約8小時、約8 小時至約18小時、約8小時至約12小時或約8小時至約10小時。
在一些實施例中，IL-2結合物包含延長之血漿半衰期及降低之毒性。在一些情況下，IL-2結合物包含至少1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、15小時、18小時、24小時、2天、3天、4天、5天、6天、7天或更長之延長之血漿半衰期及降低之毒性。在一些情況下，IL-2結合物包含至少1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、15小時、18小時、24小時或更長之延長之血漿半衰期及降低之毒性。在一些情況下，IL-2結合物包含約1小時至約18小時、約1小時至約12小時、約2小時至約10小時、約2小時至約8小時、約4小時至約18小時、約4小時至約12小時、約4小時至約10小時、約4小時至約8小時、約6小時至約18小時、約6小時至約12小時、約6小時至約10小時、約6小時至約8小時、約8小時至約18小時、約8小時至約12小時或約8小時至約10小時之延長之血漿半衰期及降低之毒性。在一些情況下，降低之毒性係相對於野生型IL2降低至少1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、50倍、100倍或更大。在一些情況下，降低之毒性係相對於野生型IL-2降低至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、200%、300%、400%、500%或更多。
在一些實施例中，IL-2結合物包含延長之血漿半衰期及降低之毒性。在一些情況下，IL-2結合物包含至少1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、15小時、18小時、24小時、2天、3天、4天、5天、6天、7天或更長之延長之血漿半衰期及降低之毒性。在一些情況下，IL-2結合物包含至少1小時、2 小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、15小時、18小時、24小時或更長之延長之血漿半衰期及降低之毒性。在一些情況下，IL-2結合物包含約1小時至約18小時、約1小時至約12小時、約2小時至約10小時、約2小時至約8小時、約4小時至約18小時、約4小時至約12小時、約4小時至約10小時、約4小時至約8小時、約6小時至約18小時、約6小時至約12小時、約6小時至約10小時、約6小時至約8小時、約8小時至約18小時、約8小時至約12小時或約8小時至約10小時之延長之血漿半衰期及降低之毒性。在一些情況下，降低之毒性係相對於阿地介白素降低至少1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、50倍、100倍或更大。在一些情況下，降低之毒性係相對於阿地介白素降低至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、200%、300%、400%、500%或更多。
在一些實施例中，IL-2結合物包含結合部分之大小(例如體積或長度)增加血漿穩定性但不降低效能之結合部分。在一些情況下，結合部分之大小使血漿半衰期延長至少1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、15小時、18小時、24小時、2天、3天、4天、5天、6天、7天或更長。在一些情況下，結合部分之大小使血漿半衰期延長至少1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、15小時、18小時、24小時或更長。在一些情況下，結合部分之大小使血漿半衰期延長約1小時至約18小時、約1小時至約12小時、約2小時至約10小時、約2小時至約8小時、約4小時至約18小時、約4小時至約12小時、約4小時至約10小時、約4小時至約8小時、約6小時至約18小時、約6小時至約12小時、 約6小時至約10小時、約6小時至約8小時、約8小時至約18小時、約8小時至約12小時或約8小時至約10小時。在一些情況下，相對於阿地介白素，結合部分之大小使效能降低小於5%、4%、3%、2%、1%或更小。
在一些實施例中，IL-2結合物包含結合部分之大小(例如體積或長度)增加血漿穩定性及效能之結合部分。在一些情況下，結合部分之大小使血漿半衰期延長至少1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、15小時、18小時、24小時、2天、3天、4天、5天、6天、7天或更長。在一些情況下，結合部分之大小使血漿半衰期延長至少1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、15小時、18小時、24小時或更長。在一些情況下，結合部分之大小使血漿半衰期延長約1小時至約18小時、約1小時至約12小時、約2小時至約10小時、約2小時至約8小時、約4小時至約18小時、約4小時至約12小時、約4小時至約10小時、約4小時至約8小時、約6小時至約18小時、約6小時至約12小時、約6小時至約10小時、約6小時至約8小時、約8小時至約18小時、約8小時至約12小時或約8小時至約10小時。在一些情況下，相對於阿地介白素，結合部分之大小使效能進一步增加超過5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、200%或更多。
在一些實施例中，本文描述一種IL-2結合物，其包含共價連接至結合部分之非天然胺基酸，其中非天然胺基酸位於區35-107中，且其中區35-107與SEQ ID NO：1之殘基K35-Y107相對應。
在一些實施例中，本文描述一種介白素2 βγ受體(IL-2Rβγ)結合蛋白，其中該結合蛋白對介白素2α受體(IL-2Rα)之結合親和力小於野 生型人類IL-2(hIL-2)。在一些實施例中，本文描述一種介白素2 βγ受體(IL-2Rβγ)結合蛋白，其中該結合蛋白對介白素2α受體(IL-2Rα)之結合親和力小於野生型人類IL-2(hIL-2)，且其中該結合蛋白包含至少一個非天然胺基酸。在一些情況下，該結合蛋白係修飾之IL-2多肽或其功能活性片段，其中修飾之IL-2多肽包含至少一個非天然胺基酸。在一些情況下，至少一個非天然胺基酸位於區35-107中，且其中區35-107與SEQ ID NO：1之殘基K35-Y107相對應。
在一些實施例中，本文描述一種IL-2/IL-2Rβγ複合物，其包含有包含突變之修飾之IL-2多肽及IL-2Rβγ，其中修飾之IL-2多肽具有降低之對IL-2Rα之結合親和力，且其中降低之結合親和力係與野生型IL-2多肽與IL-2Rα之間的結合親和力相比而言。在一些情況下，修飾之IL-2多肽進一步包含共價連接至突變位點之結合部分。在一些情況下，突變位點包含突變成天然胺基酸之胺基酸。在一些情況下，突變位點包含突變成半胱胺酸殘基之胺基酸。在其他情況下，突變位點包含突變成離胺酸殘基之胺基酸。
在一些實施例中，本文描述一種IL-2/IL-2Rβγ複合物，其包含有包含非天然胺基酸之修飾之IL-2多肽及IL-2Rβγ，其中修飾之IL-2多肽具有降低之對IL-2Rα之結合親和力，且其中降低之結合親和力係與野生型IL-2多肽與IL-2Rα之間的結合親和力相比而言。在一些情況下，修飾之IL-2多肽進一步包含共價連接至非天然胺基酸之結合部分。
在一些實施例中，本文描述一種IL-2/IL-2Rβγ複合物，其包含有包含非天然胺基酸之修飾之IL-2多肽及IL-2Rβγ，其中修飾之IL-2多肽具有降低之對IL-2Rα之受體信號傳導效能，且其中降低之受體信號 傳導效能係與野生型IL-2多肽與IL-2Rα之間的受體信號傳導效能相比而言。在一些情況下，修飾之IL-2多肽進一步包含共價連接至非天然胺基酸之結合部分。
在一些實施例中，本文描述一種CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶T細胞、自然殺手(NK)細胞或自然殺手T(NKT)細胞之活化劑，其選擇性擴增細胞群體中之CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶T細胞、NK細胞、NKT細胞或其組合，其中該活化劑包含有包含至少一個突變之修飾之介白素2(IL-2)多肽。在一些情況下，突變係關於天然胺基酸。在其他情況下，突變係關於非天然胺基酸。在一些實施例中，本文描述一種CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶T細胞、自然殺手(NK)細胞或自然殺手T(NKT)細胞之活化劑，其選擇性擴增細胞群體中之CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶T細胞、NK細胞、NKT細胞或其組合，其中該活化劑包含有包含至少一個非天然胺基酸之修飾之介白素2(IL-2)多肽。在一些情況下，與接觸野生型IL-2多肽之CD3+細胞群體中之CD4+ Treg細胞的擴增相比，該當該活化劑與該CD3+細胞群體接觸時，活化劑使CD4+ T調節性(Treg)細胞擴增小於20%、15%、10%、5%、1%或小於0.1%。在一些情況下，該活化劑不使該細胞群體中之Treg細胞擴增。在一些情況下，該細胞群體係活體內細胞群體。在一些情況下，該細胞群體係活體外細胞群體。在一些情況下，該細胞群體係離體細胞群體。
在一些情況下，本文亦描述一種使CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶T細胞、自然殺手(NK)細胞或自然殺手T(NKT)細胞群體擴增之方法，其包含使該細胞群體與治療有效量之CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶T細胞、自然殺手(NK)細胞或自然殺手T(NKT)細胞活化 劑接觸，其中該活化劑包含有包含至少一個突變之修飾之介白素2(IL-2)多肽，藉此使CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶T細胞、自然殺手(NK)細胞或自然殺手T(NKT)細胞群體擴增。在一些情況下，突變係關於天然胺基酸。在其他情況下，突變係關於非天然胺基酸。在一些情況下，本文亦描述一種使CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶T細胞、自然殺手(NK)細胞或自然殺手T(NKT)細胞群體擴增之方法，其包含使該細胞群體與治療有效量之CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶T細胞、自然殺手(NK)細胞或自然殺手T(NKT)細胞活化劑接觸，其中該活化劑包含有包含至少一個非天然胺基酸之修飾之介白素2(IL-2)多肽，藉此使CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶T細胞、自然殺手(NK)細胞或自然殺手T(NKT)細胞群體擴增。
IL-15結合物
在一些實施例中，本文描述在一個胺基酸位置經修飾之IL-15結合物。IL-15調節T細胞及NK細胞之活化及增殖。在一些情況下，IL-15結合物包含分離及純化之IL-15多肽及結合部分。在一些情況下，相對於野生型IL-15多肽，IL-15結合物具有降低之與IL-15受體之親和力。在一些情況下，結合部分結合至與IL-15受體(例如在IL-15/IL-15Rα界面)或與IL-2Rβγ次單元相互作用之胺基酸殘基。在一些情況下，結合部分結合至接近IL-15/IL-15Rα界面(例如離IL-15/IL-15Rα界面約5Å、約10Å、約15Å或約20Å)或接近IL-2Rβγ次單元之胺基酸殘基。如本文所使用，與IL-15/IL-15Rα界面有關之殘基包含與IL-15R之殘基形成疏水相互作用、氫鍵或離子相互作用之IL-15殘基。類似地，與IL-15/IL-2Rβγ界面有關之殘基包含與IL-2Rβγ次單元之殘基形成疏水相互作用、氫鍵或離子相互作用 之IL-15殘基。在一些情況下，結合部分直接或經由連接肽間接連接至IL-15多肽之N端或C端(例如N端或C端胺基酸殘基或結合末端胺基酸殘基之反應性基團)。在另外情況下，結合部分調節IL-15與IL-15R之間的相互作用。在一些情況下，IL-15結合物經由IL-15/IL-15R信號傳導上調腫瘤浸潤性淋巴球之不同群體。在一些情況下，IL-15結合物促進降低腫瘤相關淋巴球之增殖及/或擴增。在一些情況下，IL-15結合物調節免疫活性。
另外細胞激素結合物
在一些實施例中，本文所述包括在一個胺基酸位置經修飾之一或多種另外細胞激素結合物。例示性細胞激素包括(但不限於)IL-1β、IL-7、IL-10、IL-12、IL-18、IL-21、INF(例如IFN-α、IFN-β、IFN-κ、IFN-δ、IFN-ε、IFN-τ、IFN-ω或IFN-ζ)及TNF(例如TNFα或CD40L)。在一些情況下，細胞激素結合物包含分離及純化之細胞激素多肽及結合部分。在一些情況下，相對於野生型細胞激素，細胞激素結合物具有降低之與其對應受體之親和力。在一些情況下，結合部分結合至接近受體界面(例如離受體界面約5Å、約10Å、約15Å或約20Å)之胺基酸殘基。在一些情況下，結合部分直接或經由連接肽間接連接至細胞激素之N端或C端。在另外情況下，結合部分調節細胞激素與其對應受體之間的相互作用。在一些情況下，細胞激素結合物上調腫瘤浸潤性淋巴球之不同群體。在一些情況下，細胞激素結合物促進降低腫瘤相關淋巴球之增殖及/或擴增。在一些情況下，細胞激素結合物調節免疫活性。
細胞激素結合物前驅體
本文描述細胞激素結合物前驅體，其包含突變型細胞激素(諸如IL-2)，其中一或多個胺基酸由野生型胺基酸突變成。本文所述用於 治療疾病或病況之方法通常使用此類前驅體。在一些實施例中，細胞激素前驅體不發生結合。此類突變各包含添加、缺失或取代。在一些實施例中，突變包含取代為不同天然胺基酸。在一些情況下，突變型細胞激素包含胺基酸位置Y31、K32、N33、P34、K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、P47、K48、Q57、E60、E61、E62、L63、K64、P65、E68、V69、N71、L72、Q74、S75、K76、N77、M104、C105、E106、Y107、A108、D109、E110、T111或A112處之突變，其中胺基酸殘基之編號與SEQ ID NO：1相對應。在一些情況下，胺基酸位置選自Y31、K32、N33、P34、K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、P47、K48、E61、E62、E68、K64、P65、V69、L72、Q74、S75、K76、N77、M104、C105、E106、Y107、A108、D109、E110、T111及A112。在一些情況下，胺基酸位置選自N33、P34、K35、T37、R38、M39、T41、F42、K43、F44、Y45、Q57、E60、E61、E62、L63、K64、P65、E68、V69、N71、L72、M104、C105、E106、Y107、A108、D109、E110、T111及A112。在一些情況下，胺基酸位置選自K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E61、E62、E68、K64、P65、V69、L72及Y107。在一些情況下，胺基酸位置選自T37、R38、T41、F42、F44、Y45、E61、E62、E68、K64、P65、V69、L72及Y107。在一些情況下，胺基酸位置選自T37、R38、T41、F42、F44、Y45、E61、E62、E68、P65、V69、L72及Y107。在一些情況下，胺基酸位置選自T37、T41、F42、F44、Y45、P65、V69、L72及Y107。在一些情況下，胺基酸位置選自R38及K64。在一些情況下，胺基酸位置選自E61、E62及E68。在一些情況下，胺基酸位置在K35。在一些情況下，胺 基酸位置在T37。在一些情況下，胺基酸位置在R38。在一些情況下，胺基酸位置在T41。在一些情況下，胺基酸位置在F42。在一些情況下，胺基酸位置在K43。在一些情況下，胺基酸位置在F44。在一些情況下，胺基酸位置在Y45。在一些情況下，胺基酸位置在E61。在一些情況下，胺基酸位置在E62。在一些情況下，胺基酸位置在K64。在一些情況下，胺基酸位置在E68。在一些情況下，胺基酸位置在P65。在一些情況下，胺基酸位置在V69。在一些情況下，胺基酸位置在L72。在一些情況下，胺基酸位置在Y107。在一些情況下，胺基酸位置在L72。在一些情況下，胺基酸位置在D109。在一些實施例中，細胞激素突變體包含結合部分，其中結合部分連接至突變型細胞激素中之突變之位點。
本文描述之細胞激素突變體通常包含一或多個向天然胺基酸之突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及至少一個突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及E62K突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及E62C突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及E62A突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及E62I突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及E62L突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及E62Y突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及E62W突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及E62N突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及E62R突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及E62D突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及E62Q突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包 含SEQ ID NO：1及E62G突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及E62H突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及E62M突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及E62F突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及E62P突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及E62S突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及E62T突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及E62V突變。
在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及至少一個突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及P65K突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及P65C突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及P65A突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及P65I突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及P65L突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及P65Y突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及P65W突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及P65N突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及P65R突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及P65D突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及P65Q突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及P65G突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及P65H突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及P65M突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及P65F突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及P65E突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及P65S突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及P65T突變。在一些實施例中，細胞激素突變體包含SEQ ID NO：1及P65V突變。
蛋白質或肽融合物
在一些實施例中，本文描述之細胞激素結合物包含與肽或蛋白質(融合物)融合之細胞激素(例如IL-2或其他細胞激素)。在一些實施例中，肽或蛋白質係抗體或抗體片段。在一些實施例中，本文描述之細胞激素結合物包含與抗體或其結合片段融合之細胞激素(例如IL-2或其他細胞激素)。在一些實施例中，使本文描述之細胞激素與多種蛋白質或肽融合。在一些實施例中，細胞激素結合物包含與蛋白質或肽之細胞激素融合物及至少一個結合部分。在一些情況下，抗體或其結合片段包含人類化抗體或其結合片段、鼠類抗體或其結合片段、嵌合抗體或其結合片段、單株抗體或其結合片段、單價Fab'、二價Fab2、F(ab)'3片段、單鏈可變片段(scFv)、雙scFv、(scFv)2、雙功能抗體、微型抗體、奈米抗體、三功能抗體、四功能抗體、人類抗體(humabody)、二硫鍵穩定之Fv蛋白質(dsFv)、單域抗體(sdAb)、Ig NAR、駱駝科抗體或其結合片段、雙特異性抗體或其結合片段或其化學修飾之衍生物。在一些情況下，此類融合蛋白直接經由轉譯產生。在一些實施例中，融合物使用化學或其他酶促連接方法產生。在一些實施例中，細胞激素結合物包含藉由連接子連接之融合之肽或蛋白質。在一些實施例中，連接子係肽。在一些實施例中，細胞激素結合物包含N端肽或蛋白質融合物。在一些實施例中，細胞激素結合物 包含C端肽或蛋白質融合物。在一些情況下，與肽或蛋白質融合之細胞激素進一步與一或多個下文所述之結合部分結合。
在一些情況下，細胞激素結合物包含與scFv、雙scFv、(scFv)2、dsFv之融合物或sdAb融合物。在一些情況下，融合物包含scFv。在一些情況下，細胞激素結合物包含與雙scFv之融合物。在一些情況下，細胞激素結合物包含與(scFv)2之融合物。在一些情況下，細胞激素結合物包含與dsFv之融合物。在一些情況下，細胞激素結合物包含與sdAb之融合物。在一些情況下，與scFv、雙scFv、(scFv)2、dsFv或sdAb融合之細胞激素進一步與一或多個下文所述之結合部分結合。
在一些情況下，細胞激素結合物包含與抗體(例如IgG、IgA、IgM、IgE或IgD)之Fc部分之融合物。在一些情況下，細胞激素結合物包含與IgG(例如IgG1、IgG3或IgG4)之Fc部分之融合物。在一些情況下，與Fc部分融合之細胞激素進一步與一或多個下文所述之結合部分結合。
在一些情況下，細胞激素(例如介白素、IFN或TNF)多肽與抗體或其結合片段融合。在一些情況下，細胞激素多肽與以下融合：人類化抗體或其結合片段、鼠類抗體或其結合片段、嵌合抗體或其結合片段、單株抗體或其結合片段、單價Fab'、二價Fab2、F(ab)'3片段、單鏈可變片段(scFv)、雙scFv、(scFv)2、雙功能抗體、微型抗體、奈米抗體、三功能抗體、四功能抗體、人類抗體、二硫鍵穩定之Fv蛋白質(dsFv)、單域抗體(sdAb)、Ig NAR、駱駝科抗體或其結合片段、雙特異性抗體或其結合片段或其化學修飾之衍生物。在另外情況下，細胞激素多肽與抗體之Fc部分融合。在另外情況下，細胞激素多肽與IgG(例如IgG1、IgG3或IgG4) 之Fc部分融合。在一些情況下，與抗體或其結合片段融合之細胞激素進一步與一或多個下文所述之結合部分結合。
在一些情況下，IL-2多肽與抗體或其結合片段融合。在一些情況下，IL-2多肽與以下融合：人類化抗體或其結合片段、鼠類抗體或其結合片段、嵌合抗體或其結合片段、單株抗體或其結合片段、單價Fab'、二價Fab2、F(ab)'3片段、單鏈可變片段(scFv)、雙scFv、(scFv)2、雙功能抗體、微型抗體、奈米抗體、三功能抗體、四功能抗體、人類抗體、二硫鍵穩定之Fv蛋白質(dsFv)、單域抗體(sdAb)、Ig NAR、駱駝科抗體或其結合片段、雙特異性抗體或其結合片段或其化學修飾之衍生物。在另外情況下，IL-2多肽與抗體之Fc部分融合。在另外情況下，IL-2多肽與IgG(例如IgG1、IgG3或IgG4)之Fc部分融合。在一些情況下，與抗體或其結合片段融合之IL-2多肽進一步與一或多個下文所述之結合部分結合。
天然及非天然胺基酸
在一些實施例中，本文所述(例如在諸如IL-2之細胞激素內)之胺基酸殘基在結合至結合部分(或與其反應)之前突變成離胺酸、半胱胺酸、組胺酸、精胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、絲胺酸、蘇胺酸或酪胺酸。舉例而言，離胺酸、半胱胺酸、組胺酸、精胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、絲胺酸、蘇胺酸或酪胺酸之側鏈可結合至本文所述之結合部分。在一些情況下，胺基酸殘基突變成半胱胺酸、離胺酸或組胺酸。在一些情況下，胺基酸殘基突變成半胱胺酸。在一些情況下，胺基酸殘基突變成離胺酸。在一些情況下，胺基酸殘基突變成組胺酸。在一些情況下，胺基酸殘基突變成酪胺酸。在一些情況下，胺基酸殘基突變成色胺酸。在一些實施例中，非天然胺基酸不與結合部分結合。在一些實施例中，本文所述之細 胞激素包含非天然胺基酸，其中該細胞激素與蛋白質結合，其中該連接點並非非天然胺基酸。
在一些實施例中，本文所述(例如在諸如IL-2之細胞激素內)之胺基酸殘基在結合至結合部分之前突變成非天然胺基酸。在一些情況下，向非天然胺基酸之突變防止免疫系統之自身抗原反應或使免疫系統之自身抗原反應減至最小。如本文所用，術語「非天然胺基酸」係指除20個天然存在於蛋白質中之胺基酸外之胺基酸。非天然胺基酸之非限制性實例包括：對乙醯基-L-苯丙胺酸、對碘-L-苯丙胺酸、對甲氧基苯丙胺酸、O-甲基-L-酪胺酸、對炔丙基氧基苯丙胺酸、對炔丙基-苯丙胺酸、L-3-(2-萘基)丙胺酸、3-甲基-苯丙胺酸、O-4-烯丙基-L-酪胺酸、4-丙基-L-酪胺酸、三-O-乙醯基-GlcNAcp-絲胺酸、L-多巴、氟化苯丙胺酸、異丙基-L-苯丙胺酸、對疊氮基-L-苯丙胺酸、對醯基-L-苯丙胺酸、對苯甲醯基-L-苯丙胺酸、對二羥硼基苯丙胺酸、O-炔丙基酪胺酸、L-磷絲胺酸、膦醯基絲胺酸、膦醯基酪胺酸、對溴苯基丙胺酸、硒半胱胺酸、對胺基-L-苯丙胺酸、異丙基-L-苯丙胺酸、疊氮基-離胺酸(AzK)、酪胺酸胺基酸之非天然類似物；麩醯胺酸胺基酸之非天然類似物；苯丙胺酸胺基酸之非天然類似物；絲胺酸胺基酸之非天然類似物；蘇胺酸胺基酸之非天然類似物；經烷基、芳基、醯基、疊氮基、氰基、鹵基、肼、醯肼、羥基、烯基、炔基、醚、硫醇、磺醯基、硒基、酯、硫代酸、硼酸酯、酸酯、磷酸基、膦醯基、膦、雜環、烯酮、亞胺、醛、羥胺、酮基或胺基取代之胺基酸或其組合；具有光活化交聯劑之胺基酸；自旋標記之胺基酸；螢光胺基酸；結合金屬之胺基酸；含金屬胺基酸；放射性胺基酸；光籠蔽及/或光可異構化胺基酸；含生物素或生物素類似物之胺基酸；含酮基之胺基酸；包含 聚乙二醇或聚醚之胺基酸；經重原子取代之胺基酸；可化學裂解或可光裂解胺基酸；具有長側鏈之胺基酸；含有有毒基團之胺基酸；經糖取代之胺基酸；含有連接碳之糖的胺基酸；氧化還原活性胺基酸；含有α-羥基之酸；胺基硫基酸；經α,α二取代之胺基酸；β-胺基酸；除脯胺酸或組胺酸外之環狀胺基酸，及除苯丙胺酸、酪胺酸或色胺酸外之芳族胺基酸。
在一些實施例中，非天然胺基酸包含用於靶標多肽之位點選擇性標記的選擇性反應性基團或反應性基團。在一些情況下，化學反應係雙正交反應(例如生物相容及選擇性反應)。在一些情況下，化學反應係Cu(I)催化或「無銅」炔烴-疊氮化物三唑形成反應、施陶丁格連接(Staudinger ligation)、反向需電子狄爾斯-阿德(inverse-electron-demand Diels-Alder，IEDDA)反應、「光點擊(photo-click)」化學反應或金屬介導之方法，諸如烯烴烯烴複分解及鈴木-宮浦或薗頭交叉偶合(Suzuki-Miyaura or Sonogashira cross-coupling)。
在一些實施例中，非天然胺基酸包含光反應性基團，其在用例如紫外線照射時交聯。
在一些實施例中，非天然胺基酸包含光籠蔽胺基酸。
在一些情況下，非天然胺基酸係經對位取代、經間位取代或經鄰位取代之胺基酸衍生物。
在一些情況下，非天然胺基酸包含對乙醯基-L-苯丙胺酸、對疊氮基甲基-L-苯丙胺酸(pAMF)、對碘-L-苯丙胺酸、O-甲基-L-酪胺酸、對甲氧基苯丙胺酸、對炔丙基氧基苯丙胺酸、對炔丙基-苯丙胺酸、L-3-(2-萘基)丙胺酸、3-甲基-苯丙胺酸、O-4-烯丙基-L-酪胺酸、4-丙基-L-酪胺酸、三-O-乙醯基-GlcNAcp-絲胺酸、L-多巴、氟化苯丙胺酸、異 丙基-L-苯丙胺酸、對疊氮基-L-苯丙胺酸、對醯基-L-苯丙胺酸、對苯甲醯基-L-苯丙胺酸、異丙基-L-苯丙胺酸、對疊氮基-L-苯丙胺酸、對醯基-L-苯丙胺酸、對苯甲醯基-L-苯丙胺酸、L-磷絲胺酸、膦醯基絲胺酸、膦醯基酪胺酸、對溴苯基丙胺酸、對胺基-L-苯丙胺酸或異丙基-L-苯丙胺酸。
在一些情況下，非天然胺基酸係3-胺基酪胺酸、3-硝基酪胺酸、3,4-二羥基-苯丙胺酸或3-碘酪胺酸。
在一些情況下，非天然胺基酸係苯基硒半胱胺酸。
在一些情況下，非天然胺基酸係含有二苯甲酮、酮、碘、甲氧基、乙醯基、苯甲醯基或疊氮基之苯丙胺酸衍生物。
在一些情況下，非天然胺基酸係含有二苯甲酮、酮、碘、甲氧基、乙醯基、苯甲醯基或疊氮基之離胺酸衍生物。
在一些情況下，非天然胺基酸包含芳族側鏈。
在一些情況下，非天然胺基酸不包含芳族側鏈。
在一些情況下，非天然胺基酸包含疊氮基。
在一些情況下，非天然胺基酸包含邁克爾受體基團。在一些情況下，邁克爾受體基團包含能夠經由1,2-加成反應形成共價鍵之不飽和部分。在一些情況下，邁克爾受體基團包含缺電子烯烴或炔烴。在一些情況下，邁克爾受體基團包括(但不限於)α,β不飽和的：酮、醛、亞碸、碸、腈、亞胺或芳族化合物。
在一些情況下，非天然胺基酸係去氫丙胺酸。
在一些情況下，非天然胺基酸包含醛或酮基團。
在一些情況下，非天然胺基酸係包含醛或酮基團之離胺酸 衍生物。
在一些情況下，非天然胺基酸係在β、γ或δ位置包含一或多個O、N、Se或S原子之離胺酸衍生物。在一些情況下，非天然胺基酸係在γ位置包含O、N、Se或S原子之離胺酸衍生物。
在一些情況下，非天然胺基酸係ε N原子經氧原子置換之離胺酸衍生物。
在一些情況下，非天然胺基酸係並非天然存在之轉譯後修飾離胺酸之離胺酸衍生物。
在一些情況下，非天然胺基酸係包含側鏈之胺基酸，其中來自α位置之第六原子包含羰基。在一些情況下，非天然胺基酸係包含側鏈之胺基酸，其中來自α位置之第六原子包含羰基，來自α位置之第五原子係氮。在一些情況下，非天然胺基酸係包含側鏈之胺基酸，其中來自α位置之第七原子係氧原子。
在一些情況下，非天然胺基酸係包含硒之絲胺酸衍生物。在一些情況下，非天然胺基酸係硒絲胺酸(2-胺基-3-氫硒丙酸)。在一些情況下，非天然胺基酸係2-胺基-3-((2-((3-(苯甲氧基)-3-側氧基丙基)胺基)乙基)硒烷基)丙酸。在一些情況下，非天然胺基酸係2-胺基-3-(苯基硒烷基)丙酸。在一些情況下，非天然胺基酸包含硒，其中硒之氧化致使形成包含烯烴之非天然胺基酸。
在一些情況下，非天然胺基酸包含環辛炔基。
在一些情況下，非天然胺基酸包含反環辛烯基。
在一些情況下，非天然胺基酸包含降冰片烯基。
在一些情況下，非天然胺基酸包含環丙烯基。
在一些情況下，非天然胺基酸包含二氮環丙烯基。
在一些情況下，非天然胺基酸包含四嗪基。
在一些情況下，非天然胺基酸係離胺酸衍生物，其中側鏈氮經胺甲醯基化。在一些情況下，非天然胺基酸係離胺酸衍生物，其中側鏈氮經醯化。在一些情況下，非天然胺基酸係2-胺基-6-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}己酸。在一些情況下，非天然胺基酸係2-胺基-6-{[(第三丁氧基)羰基]胺基}己酸。在一些情況下，非天然胺基酸係N6-Boc-N6-甲基離胺酸。在一些情況下，非天然胺基酸係N6-乙醯基離胺酸。在一些情況下，非天然胺基酸係吡咯離胺酸。在一些情況下，非天然胺基酸係N6-三氟乙醯基離胺酸。在一些情況下，非天然胺基酸係2-胺基-6-{[(苯甲氧基)羰基]胺基}己酸。在一些情況下，非天然胺基酸係2-胺基-6-{[(對碘苯甲氧基)羰基]胺基}己酸。在一些情況下，非天然胺基酸係2-胺基-6-{[(對硝基苯甲氧基)羰基]胺基}己酸。在一些情況下，非天然胺基酸係N6-脯胺醯基離胺酸。在一些情況下，非天然胺基酸係2-胺基-6-{[(環戊氧基)羰基]胺基}己酸。在一些情況下，非天然胺基酸係N6-(環戊烷羰基)離胺酸。在一些情況下，非天然胺基酸係N6-(四氫呋喃-2-羰基)離胺酸。在一些情況下，非天然胺基酸係N6-(3-乙炔基四氫呋喃-2-羰基)離胺酸。在一些情況下，非天然胺基酸係N6-((丙-2-炔-1-基氧基)羰基)離胺酸。在一些情況下，非天然胺基酸係2-胺基-6-{[(2-疊氮基環戊氧基)羰基]胺基}己酸。在一些情況下，非天然胺基酸係N6-((2-疊氮基乙氧基)羰基)離胺酸。在一些情況下，非天然胺基酸係2-胺基-6-{[(2-硝基苯甲氧基)羰基]胺基}己酸。在一些情況下，非天然胺基酸係2-胺基-6-{[(2-環辛炔氧基)羰基]胺基}己酸。在一些情況下，非天然胺基酸係N6-(2-胺基丁-3-炔醯基)離胺酸。在 一些情況下，非天然胺基酸係2-胺基-6-((2-胺基丁-3-炔醯基)氧基)己酸。在一些情況下，非天然胺基酸係N6-(烯丙氧基羰基)離胺酸。在一些情況下，非天然胺基酸係N6-(丁烯基-4-氧基羰基)離胺酸。在一些情況下，非天然胺基酸係N6-(戊烯基-5-氧基羰基)離胺酸。在一些情況下，非天然胺基酸係N6-((丁-3-炔-1-基氧基)羰基)-離胺酸。在一些情況下，非天然胺基酸係N6-((戊-4-炔-1-基氧基)羰基)-離胺酸。在一些情況下，非天然胺基酸係N6-(噻唑啶-4-羰基)離胺酸。在一些情況下，非天然胺基酸係2-胺基-8-側氧基壬酸。在一些情況下，非天然胺基酸係2-胺基-8-側氧基辛酸。在一些情況下，非天然胺基酸係N6-(2-側氧乙醯基)離胺酸。
在一些情況下，非天然胺基酸係N6-丙醯基離胺酸。在一些情況下，非天然胺基酸係N6-丁醯基離胺酸，在一些情況下，非天然胺基酸係N6-(丁-2-烯醯基)離胺酸，在一些情況下，非天然胺基酸係N6-((雙環[2.2.1]庚-5-烯-2-基氧基)羰基)離胺酸。在一些情況下，非天然胺基酸係N6-((螺[2.3]己-1-烯-5-基甲氧基)羰基)離胺酸。在一些情況下，非天然胺基酸係N6-(((4-(1-(三氟甲基)環丙-2-烯-1-基)芐基)氧基)羰基)離胺酸。在一些情況下，非天然胺基酸係N6-((雙環[2.2.1]庚-5-烯-2-基甲氧基)羰基)離胺酸。在一些情況下，非天然胺基酸係半胱胺醯基離胺酸。在一些情況下，非天然胺基酸係N6-((1-(6-硝基苯并[d][1,3]間二氧雜環戊烯-5-基)乙氧基)羰基)離胺酸。在一些情況下，非天然胺基酸係N6-((2-(3-甲基-3H-二氮雜環丙烯-3-基)乙氧基)羰基)離胺酸。在一些情況下，非天然胺基酸係N6-((3-(3-甲基-3H-二氮雜環丙烯-3-基)丙氧基)羰基)離胺酸。在一些情況下，非天然胺基酸係N6-((間硝基苄氧基)N6-甲基羰基)離胺酸。在一些情況下，非天然胺基酸係N6-((雙環[6.1.0]壬-4-炔-9-基甲氧基)羰基)-離 胺酸。在一些情況下，非天然胺基酸係N6-((環庚-3-烯-1-基氧基)羰基)-L-離胺酸。
在一些情況下，非天然胺基酸係2-胺基-3-(((((苯甲氧基)羰基)胺基)甲基)硒烷基)丙酸。
在一些實施例中，非天然胺基酸藉由重新設置之琥珀、蛋白石或赭石終止密碼子併入至細胞激素(例如IL多肽)中。
在一些實施例中，非天然胺基酸藉由4-鹼基密碼子併入至細胞激素(例如IL多肽)中。
在一些實施例中，非天然胺基酸藉由重新設置之罕見正義密碼子併入至細胞激素(例如IL多肽)中。
在一些實施例中，非天然胺基酸藉由包含非天然核酸之合成密碼子併入至細胞激素(例如IL多肽)中。
在一些情況下，非天然胺基酸藉由正交修飾之合成酶/tRNA對併入至細胞激素中。此類正交對包含能夠使非天然tRNA加載非天然胺基酸，同時使a)其他內源性胺基酸於非天然tRNA上及b)非天然胺基酸於其他內源性tRNA上之加載降至最低的非天然合成酶。此類正交對包含能夠藉由非天然合成酶加載，同時避免藉由內源性合成酶加載a)其他內源性胺基酸之tRNA。在一些實施例中，此類對自諸如細菌、酵母、古細菌或人類來源之各種生物體鑑別出。在一些實施例中，正交合成酶/tRNA對包含來自單個生物體之組分。在一些實施例中，正交合成酶/tRNA對包含來自兩個不同生物體之組分。在一些實施例中，正交合成酶/tRNA對包含在修飾之前促進兩個不同胺基酸之轉譯的組分。在一些實施例中，正交合成酶係修飾之丙胺酸合成酶。在一些實施例中，正交合成酶係修飾之精胺酸合成酶。 在一些實施例中，正交合成酶係修飾之天冬醯胺合成酶。在一些實施例中，正交合成酶係修飾之天冬胺酸合成酶。在一些實施例中，正交合成酶係修飾之半胱胺酸合成酶。在一些實施例中，正交合成酶係修飾之麩醯胺酸合成酶。在一些實施例中，正交合成酶係修飾之麩胺酸合成酶。在一些實施例中，正交合成酶係修飾之丙胺酸甘胺酸。在一些實施例中，正交合成酶係修飾之組胺酸合成酶。在一些實施例中，正交合成酶係修飾之白胺酸合成酶。在一些實施例中，正交合成酶係修飾之異白胺酸合成酶。在一些實施例中，正交合成酶係修飾之離胺酸合成酶。在一些實施例中，正交合成酶係修飾之甲硫胺酸合成酶。在一些實施例中，正交合成酶係修飾之苯丙胺酸合成酶。在一些實施例中，正交合成酶係修飾之脯胺酸合成酶。在一些實施例中，正交合成酶係修飾之絲胺酸合成酶。在一些實施例中，正交合成酶係修飾之蘇胺酸合成酶。在一些實施例中，正交合成酶係修飾之色胺酸合成酶。在一些實施例中，正交合成酶係修飾之酪胺酸合成酶。在一些實施例中，正交合成酶係修飾之纈胺酸合成酶。在一些實施例中，正交合成酶係修飾之磷絲胺酸合成酶。在一些實施例中，正交tRNA係修飾之丙胺酸tRNA。在一些實施例中，正交tRNA係修飾之精胺酸tRNA。在一些實施例中，正交tRNA係修飾之天冬醯胺tRNA。在一些實施例中，正交tRNA係修飾之天冬胺酸tRNA。在一些實施例中，正交tRNA係修飾之半胱胺酸tRNA。在一些實施例中，正交tRNA係修飾之麩醯胺酸tRNA。在一些實施例中，正交tRNA係修飾之麩胺酸tRNA。在一些實施例中，正交tRNA係修飾之丙胺酸甘胺酸。在一些實施例中，正交tRNA係修飾之組胺酸tRNA。在一些實施例中，正交tRNA係修飾之白胺酸tRNA。在一些實施例中，正交tRNA係修飾之異白胺酸tRNA。在一些實 施例中，正交tRNA係修飾之離胺酸tRNA。在一些實施例中，正交tRNA係修飾之甲硫胺酸tRNA。在一些實施例中，正交tRNA係修飾之苯丙胺酸tRNA。在一些實施例中，正交tRNA係修飾之脯胺酸tRNA。在一些實施例中，正交tRNA係修飾之絲胺酸tRNA。在一些實施例中，正交tRNA係修飾之蘇胺酸tRNA。在一些實施例中，正交tRNA係修飾之色胺酸tRNA。在一些實施例中，正交tRNA係修飾之酪胺酸tRNA。在一些實施例中，正交tRNA係修飾之纈胺酸tRNA。在一些實施例中，正交tRNA係修飾之磷絲胺酸tRNA。
在一些實施例中，非天然胺基酸藉由胺醯基(aaRS或)-tRNA合成酶-tRNA對併入至細胞激素(例如IL多肽)中。例示性aaRS-tRNA對包括(但不限於)詹氏甲烷球菌(Methanococcus jannaschii，Mj-Tyr)aaRS/tRNA對、大腸桿菌(E.coli)TyrRS(Ec-Tyr)/嗜熱脂肪芽孢桿菌(B.stearothermophilus)tRNACUA對、大腸桿菌LeuRS(Ec-Leu)/嗜熱脂肪芽孢桿菌tRNACUA對及吡咯離胺醯基-tRNA對。在一些情況下，非天然胺基酸藉由Mj-TyrRS/tRNA對併入至細胞激素(例如IL多肽)中。可藉由Mj-TyrRS/tRNA對併入之例示性UAA包括(但不限於)經對位取代之苯丙胺酸衍生物，諸如對胺基苯丙胺酸及對甲氧基苯丙胺酸；經間位取代之酪胺酸衍生物，諸如3-胺基酪胺酸、3-硝基酪胺酸、3,4-二羥基苯丙胺酸及3-碘酪胺酸；苯基硒半胱胺酸；對二羥硼基苯丙胺酸；及鄰硝基苯甲基酪胺酸。
在一些情況下，非天然胺基酸藉由Ec-Tyr/tRNACUA或Ec-Leu/tRNACUA對併入至細胞激素(例如IL多肽)中。可藉由Ec-Tyr/tRNACUA或Ec-Leu/tRNACUA對併入之例示性UAA包括(但不限於)含有二苯甲酮、 酮、碘或疊氮基物取代基之苯丙胺酸衍生物；O-炔丙基酪胺酸；α-胺基辛酸、O-甲基酪胺酸、O-硝苄基半胱胺酸；及3-(萘-2-基胺基)-2-胺基-丙酸。
在一些情況下，非天然胺基酸藉由吡咯離胺醯基-tRNA對併入至細胞激素(例如IL多肽)中。在一些情況下，PylRS獲自古細菌，例如獲自產甲烷古細菌。在一些情況下，PylRS獲自巴氏甲烷八疊球菌(Methanosarcina barkeri)、馬氏甲烷八疊球菌(Methanosarcina mazei)或嗜乙酸甲烷八疊球菌(Methanosarcina acetivorans)。可藉由吡咯離胺醯基-tRNA對併入之例示性UAA包括(但不限於)經醯胺及胺基甲酸酯取代之離胺酸，諸如2-胺基-6-((R)-四氫呋喃-2-甲醯胺基)己酸、N-ε-D-脯胺醯基-L-離胺酸及N-ε-環戊基氧基羰基-L-離胺酸；N-ε-丙烯醯基-L-離胺酸；N-ε-[(1-(6-硝基苯并[d][1,3]間二氧雜環戊烯-5-基)乙氧基)羰基]-L-離胺酸；及N-ε-(1-甲基環丙-2-烯甲醯胺基)離胺酸。
在一些情況下，非天然胺基酸藉由US 9,988,619及US 9,938,516中所揭示之合成酶併入至本文所述之細胞激素(例如IL多肽)中。可藉由此類合成酶併入之例示性UAA包括對甲基疊氮基-L-苯丙胺酸、芳烷基、雜環基、雜芳烷基非天然胺基酸及其他非天然胺基酸。在一些實施例中，此類UAA包含吡啶基、吡嗪基、吡唑基、三唑基、噁唑基、噻唑基、噻吩基或其他雜環。在一些實施例中，此類胺基酸包含疊氮基、四嗪或諸如水溶性部分之能夠結合至偶合搭配物之其他化學基團。在一些實施例中，此類合成酶得以表現且用以將UAA併入至活體內細胞激素中。在一些實施例中，此類合成酶用以使用轉譯系統將UAA併入至細胞激素中。
在一些情況下，非天然胺基酸藉由天然產生之合成酶併入至本文所述之細胞激素(例如IL多肽)中。在一些實施例中，非天然胺基酸藉由對於一或多個胺基酸具營養缺陷性之生物體併入至細胞激素中。在一些實施例中，對應於營養缺陷型胺基酸之合成酶能夠使對應tRNA加載非天然胺基酸。在一些實施例中，非天然胺基酸係硒半胱胺酸或其衍生物。在一些實施例中，非天然胺基酸係硒甲硫胺酸或其衍生物。在一些實施例中，非天然胺基酸係芳族胺基酸，其中芳族胺基酸包含芳基鹵化物，諸如碘化物。在實施例中，非天然胺基酸在結構上與營養缺陷型胺基酸類似。
在一些情況下，非天然胺基酸包含圖1中所示之非天然胺基酸。
在一些情況下，非天然胺基酸包含離胺酸或苯丙胺酸衍生物或類似物。在一些情況下，非天然胺基酸包含離胺酸衍生物或離胺酸類似物。在一些情況下，非天然胺基酸包含吡咯離胺酸(Pyl)。在一些情況下，非天然胺基酸包含苯丙胺酸衍生物或苯丙胺酸類似物。在一些情況下，非天然胺基酸係Wan等人，「Pyrrolysyl-tRNA synthetase：an ordinary enzyme but an outstanding genetic code expansion tool」,Biocheim Biophys Aceta 1844(6)：1059-4070(2014)中所述之非天然胺基酸。在一些情況下，非天然胺基酸包含圖2(例如圖2A及圖2B)中所示之非天然胺基酸。
在一些實施例中，非天然胺基酸包含圖3A-圖3D中所示之非天然胺基酸(改編自Dumas等人，Chemical Science 2015,6,50-69之表1)。
在一些實施例中，併入至本文所述之細胞激素(例如IL多 肽)中之非天然胺基酸揭示於US 9,840,493；US 9,682,934；US 2017/0260137；US 9,938,516；或US 2018/0086734中。可藉由此類合成酶併入之例示性UAA包括對甲基疊氮基-L-苯丙胺酸、芳烷基、雜環基及雜芳烷基及離胺酸衍生物非天然胺基酸。在一些實施例中，此類UAA包含吡啶基、吡嗪基、吡唑基、三唑基、噁唑基、噻唑基、噻吩基或其他雜環。在一些實施例中，此類胺基酸包含疊氮基、四嗪或諸如水溶性部分之能夠結合至偶合搭配物之其他化學基團。在一些實施例中，UAA包含經由烷基連接子連接至芳族部分之疊氮基。在一些實施例中，烷基連接子係C1-C10連接子。在一些實施例中，UAA包含經由烷基連接子連接至芳族部分之四嗪。在一些實施例中，UAA包含經由胺基連接至芳族部分之四嗪。在一些實施例中，UAA包含經由烷胺基連接至芳族部分之四嗪。在一些實施例中，UAA包含經由烷基鏈連接至胺基酸側鏈之末端氮(例如離胺酸衍生物之N6，或包含較短烷基側鏈之衍生物之N5、N4或N3)之疊氮基。在一些實施例中，UAA包含經由烷基鏈連接至胺基酸側鏈之末端氮之四嗪。在一些實施例中，UAA包含經由烷基連接子連接至醯胺之疊氮基或四嗪。在一些實施例中，UAA係3-胺基丙胺酸、絲胺酸、離胺酸或其衍生物之含有疊氮基或四嗪之胺基甲酸酯或醯胺。在一些實施例中，此類UAA併入至活體內細胞激素中。在一些實施例中，此類UAA併入至無細胞系統中之細胞激素中。
結合部分
在某些實施例中，本文揭示結合至一或多種上述細胞激素(例如介白素、IFN或TNF)之結合部分。在一些情況下，結合部分係干擾細胞激素與其受體之相互作用的分子。在一些情況下，結合部分係當鍵結 至細胞激素時使得細胞激素結合物能夠調節免疫反應之任何分子。在一些情況下，結合部分經由共價鍵結合至細胞激素。在一些情況下，本文所述之細胞激素由三唑基團連接至結合部分。在一些情況下，本文所述之細胞激素由二氫噠嗪或噠嗪基團連接至結合部分。在一些情況下，結合部分包含水溶性聚合物。在其他情況下，結合部分包含蛋白質或其結合片段。在另外情況下，結合部分包含肽。在另外情況下，結合部分包含核酸。在另外情況下，結合部分包含小分子。在另外情況下，結合部分包含生物結合物(例如TLR促效劑，諸如TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8或TLR9促效劑；或合成配位體，諸如Pam3Cys、CFA、MALP2、Pam2Cys、FSL-1、Hib-OMPC、聚I：C、聚A：U、AGP、MPL A、RC-529、MDF2β、CFA或鞭毛蛋白)。在一些情況下，結合部分增加血清半衰期及/或改良穩定性。在一些情況下，結合部分降低細胞激素與一或多個細胞激素受體域或次單元之相互作用。在另外情況下，結合部分阻斷細胞激素與一或多個細胞激素域或次單元及其同源受體之相互作用。在一些實施例中，本文所述之細胞激素結合物包含多個結合部分。在一些實施例中，結合部分連接至細胞激素肽中之非天然或天然胺基酸。在一些情況下，細胞激素結合物包含連接至天然胺基酸之結合部分。在一些實施例中，細胞激素結合物連接至細胞激素肽中之非天然胺基酸。在一些實施例中，結合部分連接至細胞激素肽之N或C端胺基酸。本文揭示各種組合位點，例如第一結合部分連接至細胞激素肽中之非天然或天然胺基酸，且第二結合部分連接至細胞激素肽之N或C端胺基酸。在一些實施例中，單個結合部分連接至細胞激素肽(例如短纖維)之多個殘基。在一些實施例中，結合部分連接至細胞激素肽之N與C端胺基酸。
水溶性聚合物
在一些實施例中，本文所述之結合部分係水溶性聚合物。在一些情況下，水溶性聚合物係非肽、無毒性及生物相容的。如本文所使用，若與物質單獨或與另一物質(例如活性劑，諸如細胞激素部分)一起結合活組織使用(例如向患者投與)相關之有利效果勝過如由例如醫師、毒理學家或臨床開發專家之臨床醫師所評估之任何不利效果，則該物質視為生物相容的。在一些情況下，水溶性聚合物進一步係非免疫原性的。在一些情況下，若物質之預期活體內使用不產生不合需要之免疫反應(例如形成抗體)或若產生免疫反應，但如藉由例如醫師、毒理學家或臨床臨床開發專家之臨床醫師所評估並不認為此類反應臨床上顯著或重要，則該物質視為非免疫原性的。
在一些情況下，水溶性聚合物之特徵為具有約2至約300個末端。例示性水溶性聚合物包括(但不限於)聚(伸烷基乙二醇)，諸如聚乙二醇(「PEG」)、聚(丙二醇)(「PPG」)、乙二醇及丙二醇之共聚物及其類似物、聚(氧乙基化多元醇)、聚(烯系醇)、聚(乙烯吡咯啶酮)、聚(羥烷基甲基丙烯醯胺)、聚(羥烷基甲基丙烯酸酯)、聚(醣)、聚(α-羥基酸)、聚(乙烯醇)(PVA)、聚丙烯醯胺(PAAm)、聚(N-(2-羥丙基)甲基丙烯醯胺)(PHPMA)、聚二甲基丙烯醯胺(PDAAm)、聚磷氮烯、聚噁唑啉(「POZ」)(其描述於中WO 2008/106186)、聚(N-丙烯醯嗎啉)及前述中之任一者之組合。
在一些情況下，水溶性聚合物不限於特定結構。在一些情況下，水溶性聚合物係線性(例如封端的，例如烷氧基PEG或雙官能PEG)、分支或多臂(例如分叉PEG或連接至多元醇核心之PEG)、樹突狀 (或星形)架構，其各有或無一或多個可分解鍵聯。此外，水溶性聚合物之內部結構可以許多不同重複模式組織，且可選自由以下組成之群：均聚物、交替共聚物、無規共聚物、嵌段共聚物、交替三聚物、無規三聚物及嵌段三聚物。
在一些實施例中，IL-2結合物中水溶性聚合物之重量平均分子量係約100道爾頓至約150,000道爾頓。例示性範圍包括例如在大於5,000道爾頓至約100,000道爾頓範圍內、在約6,000道爾頓至約90,000道爾頓範圍內、在約10,000道爾頓至約85,000道爾頓範圍內、在大於10,000道爾頓至約85,000道爾頓範圍內、在約20,000道爾頓至約85,000道爾頓範圍內、在約53,000道爾頓至約85,000道爾頓範圍內、在約25,000道爾頓至約120,000道爾頓範圍內、在約29,000道爾頓至約120,000道爾頓範圍內、在約35,000道爾頓至約120,000道爾頓範圍內及在約40,000道爾頓至約120,000道爾頓範圍內之重量平均分子量。
水溶性聚合物之例示性重量平均分子量包括約100道爾頓、約200道爾頓、約300道爾頓、約400道爾頓、約500道爾頓、約600道爾頓、約700道爾頓、約750道爾頓、約800道爾頓、約900道爾頓、約1,000道爾頓、約1,500道爾頓、約2,000道爾頓、約2,200道爾頓、約2,500道爾頓、約3,000道爾頓、約4,000道爾頓、約4,400道爾頓、約4,500道爾頓、約5,000道爾頓、約5,500道爾頓、約6,000道爾頓、約7,000道爾頓、約7,500道爾頓、約8,000道爾頓、約9,000道爾頓、約10,000道爾頓、約11,000道爾頓、約12,000道爾頓、約13,000道爾頓、約14,000道爾頓、約15,000道爾頓、約20,000道爾頓、約22,500道爾頓、約25,000道爾頓、約30,000道爾頓、約35,000道爾頓、約40,000道爾頓、約 45,000道爾頓、約50,000道爾頓、約55,000道爾頓、約60,000道爾頓、約65,000道爾頓、約70,000道爾頓及約75,000道爾頓。亦可使用具有前述中之任一者之總分子量的分支形式之水溶性聚合物(例如包含兩個20,000道爾頓聚合物之分支40,000道爾頓水溶性聚合物)。在一或多個實施例中，結合物不具有直接抑或間接連接具有低於約6,000道爾頓之重量平均分子量之PEG的任何PEG部分。
PEG通常包含許多(OCH2CH2)單體[或(CH2CH2O)單體，視PEG如何定義而定]。如本文所使用，重複單元之數量由「(OCH2CH2)n」中之下標「n」標識。因此，(n)值通常屬於以下範圍中之一或多者內：2至約3400、約100至約2300、約100至約2270、約136至約2050、約225至約1930、約450至約1930、約1200至約1930、約568至約2727、約660至約2730、約795至約2730、約795至約2730、約909至約2730及約1,200至約1,900。對於分子量已知之任何既定聚合物，可藉由聚合物之總重量平均分子量除以重複單體之分子量確定重複單元之數量(亦即「n」)。
在一些情況下，水溶性聚合物係封端聚合物，亦即，至少一個末端用諸如低碳C1-6烷氧基或羥基之相對惰性基團封端之聚合物。當聚合物係PEG時，例如可使用甲氧基-PEG(通常稱為mPEG)，其係線性形式之PEG，其中聚合物之一個末端係甲氧基(-OCH3)基團，而另一末端係羥基或可視情況化學修飾之其他官能基。
在一些實施例中，例示性水溶性聚合物包括(但不限於)來自Quanta Biodesign,Ltd之線性或分支個別PEG(dPEG)；來自Nektar Therapeutics之線性、分支或分叉PEG；及來自JenKem Technology之Y形 PEG衍生物。
在一些實施例中，本文所述之細胞激素(例如介白素、IFN或TNF)多肽與選自以下之水溶性聚合物結合：聚(伸烷基乙二醇)，諸如聚乙二醇(「PEG」)、聚(丙二醇)(「PPG」)、乙二醇及丙二醇之共聚物及其類似物、聚(氧乙基化多元醇)、聚(烯系醇)、聚(乙烯吡咯啶酮)、聚(羥烷基甲基丙烯醯胺)、聚(羥烷基甲基丙烯酸酯)、聚(醣)、聚(α-羥基酸)、聚(乙烯醇)(PVA)、聚丙烯醯胺(PAAm)、聚二甲基丙烯醯胺(PDAAm)、聚(N-(2-羥丙基)甲基丙烯醯胺)(PHPMA)、聚磷氮烯、聚噁唑啉(「POZ」)、聚(N-丙烯醯嗎啉)及其組合。在一些情況下，細胞激素多肽與PEG結合(例如聚乙二醇化)。在一些情況下，細胞激素多肽與PPG結合。在一些情況下，細胞激素多肽與POZ結合。在一些情況下，細胞激素多肽與PVP結合。
在一些實施例中，本文所述之IL-2多肽與選自以下之水溶性聚合物結合：聚(伸烷基乙二醇)，諸如聚乙二醇(「PEG」)、聚(丙二醇)(「PPG」)、乙二醇及丙二醇之共聚物及其類似物、聚(氧乙基化多元醇)、聚(烯系醇)、聚(乙烯吡咯啶酮)、聚(羥烷基甲基丙烯醯胺)、聚(羥烷基甲基丙烯酸酯)、聚(醣)、聚(α-羥基酸)、聚(乙烯醇)(PVA)、聚丙烯醯胺(PAAm)、聚二甲基丙烯醯胺(PDAAm)、聚(N-(2-羥丙基)甲基丙烯醯胺)(PHPMA)、聚磷氮烯、聚噁唑啉(「POZ」)、聚(N-丙烯醯嗎啉)及其組合。在一些情況下，IL-2多肽與PEG結合(例如聚乙二醇化)。在一些情況下，IL-2多肽與PPG結合。在一些情況下，IL-2多肽與POZ結合。在一些情況下，IL-2多肽與PVP結合。
在一些情況下，水溶性聚合物包含聚丙三醇(PG)。在一些 情況下，聚丙三醇一種超支化PG(HPG)(例如如Imran等人，「Influence of architecture of high molecular weight linear and branched polyglycerols on their biocompatibility and biodistribution」,Biomaterials 33：9135-9147(2012)所描述)。在其他情況下，聚丙三醇係線性PG(LPG)。在另外情況下，聚丙三醇係中等官能性PG、線性嵌段超支化PG(例如如Wurm等人，「Squaric acid mediated synthesis and biological activity of a library of linear and hyperbranched poly(glycerol)-protein conjugates」,Biomacromolecules 13：1161-1171(2012)所描述)或側鏈官能性PG(例如如Li等人，「Synthesis of linear polyether polyol derivatives as new materials for bioconjugation」,Bioconjugate Chem. 20：780-789(2009)所描述。
在一些情況下，本文所述之細胞激素(例如介白素、IFN或TNF)多肽與例如HPG、LPG、中等官能性PG、線性嵌段超支化PG或側鏈官能性PG之PG結合。在一些情況下，細胞激素係IL-2多肽。在一些情況下，IL-2多肽與PG、中等官能性PG、線性嵌段超支化PG結合。
在一些實施例中，水溶性聚合物係可分解合成PEG替代物。例示性可分解合成PEG替代物包括(但不限於)聚[寡甲基丙烯酸(乙二醇)甲酯](POEGMA)；由遠螯或二末端官能化基於PEG之大分子單體之聚合反應產生之主鏈修飾之PEG衍生物；包含含可分解鍵聯之共聚單體之PEG衍生物，諸如聚[(環氧乙烷)-共-(環氧甲乙烷)][P(EO-co-MEO)]、環狀乙烯酮縮醛，諸如共聚有OEGMA之5,6-苯并-2-亞甲基-1,3-二氧雜環庚烷(BMDO)、2-亞甲基-1,3-二氧雜環庚烷(MDO)及2-亞甲基-4-苯基-1,3-二氧雜環戊烷(MPDL)；或聚(ε-己內酯)-接枝-聚(環氧乙烷)(PCL-g- PEO)。
在一些情況下，本文所述之細胞激素(例如介白素、IFN或TNF)多肽與以下結合：可分解合成PEG替代物，諸如POEGM；由遠螯或二末端官能化基於PEG之大分子單體之聚合反應產生之主鏈修飾之PEG衍生物；P(EO-co-MEO)；環狀乙烯酮縮醛，諸如共聚有OEGMA之BMDO、MDO及MPDL；或PCL-g-PEO。在一些情況下，細胞激素係IL-2多肽。在一些情況下，IL-2多肽與以下結合：可分解合成PEG替代物，諸如POEGM；由遠螯或二末端官能化基於PEG之大分子單體之聚合反應產生之主鏈修飾之PEG衍生物；P(EO-co-MEO)；環狀乙烯酮縮醛，諸如共聚有OEGMA之BMDO、MDO及MPDL；或PCL-g-PEO。
在一些實施例中，水溶性聚合物包含聚(兩性離子)。例示性聚(兩性離子)包括(但不限於)聚(磺基甜菜鹼甲基丙烯酸酯)(PSBMA)、聚(羧基甜菜鹼甲基丙烯酸酯)(PCBMA)及聚(2-甲基丙烯醯基氧基乙基磷酸膽鹼)(PMPC)。在一些情況下，本文所述之細胞激素(例如介白素、IFN或TNF)多肽與諸如PSBMA、PCBMA PMPC之聚(兩性離子)結合。在一些情況下，細胞激素係IL-2多肽。在一些情況下，IL-2多肽諸如PSBMA、PCBMA或PMPC之聚(兩性離子)結合。
在一些實施例中，水溶性聚合物包含聚碳酸酯。例示性聚碳酸酯包括(但不限於)5-甲基-2-側氧基-1,3-二噁烷-5-甲酸五氟苯酯(MTC-OC6F5)。在一些情況下，本文所述之細胞激素(例如介白素、IFN或TNF)多肽與諸如MTC-OC6F5之聚碳酸酯結合。在一些情況下，細胞激素係IL-2多肽。在一些情況下，IL-2多肽與諸如MTC-OC6F5之聚碳酸酯結合。
在一些實施例中，水溶性聚合物包含聚合物雜交體，諸如聚碳酸酯/PEG聚合物雜交體、肽/蛋白質-聚合物結合物、或含羥基及/或兩性離子衍生化聚合物(例如含羥基及/或兩性離子衍生化PEG聚合物)。在一些情況下，本文所述之細胞激素(例如介白素、IFN或TNF)多肽與聚合物雜交體結合，該聚合物雜交體係諸如聚碳酸酯/PEG聚合物雜交體、肽/蛋白質-聚合物結合物、或含羥基及/或兩性離子衍生化聚合物(例如含羥基及/或兩性離子衍生化PEG聚合物)。在一些情況下，細胞激素係IL-2多肽。在一些情況下，IL-2多肽與聚合物雜交體結合，該聚合物雜交體係諸如聚碳酸酯/PEG聚合物雜交體、肽/蛋白質-聚合物結合物、或含羥基及/或兩性離子衍生化聚合物(例如含羥基及/或兩性離子衍生化PEG聚合物)。
在一些情況下，水溶性聚合物包含多醣。例示性多醣包括(但不限於)葡聚糖、聚唾液酸(PSA)、玻尿酸(HA)、直鏈澱粉、肝素、硫酸乙醯肝素(HS)、糊精或羥乙基澱粉(HES)。在一些情況下，細胞激素(例如介白素、IFN或TNF)多肽與多醣結合。在一些情況下，IL-2多肽與葡聚糖結合。在一些情況下，IL-2多肽與PSA結合。在一些情況下，IL-2多肽與HA結合。在一些情況下，IL-2多肽與直鏈澱粉結合。在一些情況下，IL-2多肽與肝素結合。在一些情況下，IL-2多肽與HS結合。在一些情況下，IL-2多肽與糊精結合。在一些情況下，IL-2多肽與HES結合。
在一些情況下，水溶性聚合物包含聚醣。聚糖之例示性類別包括N-連接聚醣、O-連接聚醣、醣脂、O-GlcNAc及葡糖胺聚醣。在一些情況下，細胞激素(例如介白素、IFN或TNF)多肽與聚醣結合。在一些情況下，IL-2多肽與N-連接聚醣結合。在一些情況下，IL-2多肽與O-連接聚醣結合。在一些情況下，IL-2多肽與醣脂結合。在一些情況下，IL-2多 肽與O-GlcNAc結合。在一些情況下，IL-2多肽與葡糖胺聚醣結合。
在一些實施例中，水溶性聚合物包含聚噁唑啉聚合物。聚噁唑啉聚合物係線性合成聚合物，且與PEG類似，包含低多分散性。在一些情況下，聚噁唑啉聚合物係多分散聚噁唑啉聚合物，其特徵在於平均分子量。在一些情況下，聚噁唑啉聚合物之平均分子量包括例如1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000、5500、6000、6500、7000、7500、8000、10,000、12,000、20,000、35,000、40,000、50,000、60,000、100,000、200,000、300,000、400,000或500,000Da。在一些情況下，聚噁唑啉聚合物包含聚(2-甲基2-噁唑啉)(PMOZ)、聚(2-乙基2-噁唑啉)(PEOZ)或聚(2-丙基2-噁唑啉)(PPOZ)。在一些情況下，細胞激素(例如介白素、IFN或TNF)多肽與聚噁唑啉聚合物結合。在一些情況下，IL-2多肽與聚噁唑啉聚合物結合。在一些情況下，IL-2多肽與PMOZ結合。在一些情況下，IL-2多肽與PEOZ結合。在一些情況下，IL-2多肽與PPOZ結合。
在一些情況下，水溶性聚合物包含聚丙烯酸聚合物。在一些情況下，細胞激素(例如介白素、IFN或TNF)多肽與聚丙烯酸聚合物結合。在一些情況下，IL-2多肽與聚丙烯酸聚合物結合。
在一些情況下，水溶性聚合物包含多元胺。多元胺係包含兩個或更多個一級胺基之有機聚合物。在一些實施例中，多元胺包括分支多元胺、線性多元胺或環狀多元胺。在一些情況下，多元胺係低分子量線性多元胺。例示性多元胺包括腐胺、屍胺、亞精胺、精胺、乙二胺、1,3-二胺基丙烷、己二胺、四乙基甲二胺及哌嗪。在一些情況下，細胞激素(例如介白素、IFN或TNF)多肽與多元胺結合。在一些情況下，IL-2多肽 與多元胺結合。在一些情況下，IL-2多肽與腐胺、屍胺、亞精胺、精胺、乙二胺、1,3-二胺基丙烷、己二胺、四乙基甲二胺或哌嗪結合。
在一些情況下，水溶性聚合物描述於美國專利第7,744,861號、第8,273,833號及第7,803,777號中。在一些情況下，細胞激素(例如介白素、IFN或TNF)多肽與美國專利第7,744,861號、第8,273,833號或第7,803,777號中所述之連接子結合。在一些情況下，IL-2多肽與美國專利第7,744,861號、第8,273,833號或第7,803,777號中所述之連接子結合。
脂質
在一些實施例中，本文所述之結合部分係脂質。在一些情況下，脂質係脂肪酸。在一些情況下，脂肪酸係飽和脂肪酸。在其他情況下，脂肪酸係飽和脂肪酸。例示性脂肪酸包括(但不限於)包含約6至約26個碳原子、約6至約24個碳原子、約6至約22個碳原子、約6至約20個碳原子、約6至約18個碳原子、約20至約26個碳原子、約12至約26個碳原子、約12至約24個碳原子、約12至約22個碳原子、約12至約20個碳原子或約12至約18個碳原子之脂肪酸。在一些情況下，脂質結合至一或多個血清蛋白質，藉此使血清穩定性及/或血清半衰期逐漸增加。
在一些實施例中，脂質與IL-2結合。在一些情況下，脂質係脂肪酸，例如飽和脂肪酸或不飽和脂肪酸。在一些情況下，脂肪酸係約6至約26個碳原子、約6至約24個碳原子、約6至約22個碳原子、約6至約20個碳原子、約6至約18個碳原子、約20至約26個碳原子、約12至約26個碳原子、約12至約24個碳原子、約12至約22個碳原子、約12至約20個碳原子或約12至約18個碳原子。在一些情況下，脂肪酸之長度包含約6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、 23、24、25或26個碳原子。在一些情況下，脂肪酸包含羊油酸(己酸)、葡萄花酸(庚酸)、羊羶酸(辛酸)、天竺葵酸(壬酸)、羊脂酸(癸酸)、十一酸(undecylic acid/undecanoic acid)、月桂酸(十二酸酸)、十三酸(tridecylic acid/tridecanoic acid)、肉豆蔻酸(十四酸)、十五酸(pentadecylic acid/pentadecanoic acid)、棕櫚酸(十六酸)、珠光子酸(十七酸)、硬脂酸(十八酸)、十九酸(nonadecylic acid/nonadecanoic acid)、花生酸酸(二十酸)、二十一酸(heneicosylic acid/heneicosanoic acid)、萮樹酸(二十二酸)、二十三酸(tricosylic acid/tricosanoic acid)、木答酸(二十四酸)、二十五酸(pentacosylic acid/pentacosanoic acid)或蠟酸(二十六酸)。
在一些實施例中，IL-2脂質結合物增加血清穩定性及/或血清半衰期。
蛋白質
在一些實施例中，本文所述之結合部分係蛋白質或其結合片段。例示性蛋白質包括白蛋白、轉鐵蛋白或甲狀腺素運載蛋白。在一些情況下，蛋白質或其結合片段包含抗體或其結合片段。在一些情況下，細胞激素結合物包含蛋白質或其結合片段。在一些情況下，包含蛋白質或其結合片段之IL-2結合物具有增加之血清半衰期及/或穩定性。在一些情況下，包含蛋白質或其結合片段之IL-2結合物具有降低之IL-2與一或多個IL-2R次單元之相互作用。在另外情況下，蛋白質或其結合片段阻斷IL-2與一或多個IL-2R次單元之相互作用。
在一些實施例中，結合部分係白蛋白。白蛋白係水溶性球形蛋白質家族。通常見於包含約55-60之所有血漿蛋白質的血漿中。人類血清白蛋白(HSA)係585胺基酸多肽，其中將三級結構分成三個域，域I (胺基酸殘基1-195)、域II(胺基酸殘基196-383)及域III(胺基酸殘基384-585)。各域進一步包含結合位點，其可與諸如長鏈及中長鏈脂肪酸、膽紅素或氯化血紅素之內源性配位體或諸如雜環或芳族化合物之外源性化合物可逆抑或不可逆相互作用。
在一些情況下，細胞激素(例如介白素、IFN或TNF)多肽與白蛋白結合。在一些情況下，細胞激素多肽與人類血清白蛋白(HSA)結合。在另外情況下，細胞激素多肽與白蛋白之功能片段結合。
在一些情況下，IL-2多肽與白蛋白結合。在一些情況下，IL-2多肽與人類血清白蛋白(HSA)結合。在另外情況下，IL-2多肽與白蛋白之功能片段結合。
在一些實施例中，結合部分係轉鐵蛋白。轉鐵蛋白係679胺基酸多肽，其係約80kDa大小且包含兩個Fe3+結合位點，一者位於N端域且另一者位於C端域。在一些情況下，人類轉鐵蛋白具有約7-12天之半衰期。
在一些情況下，細胞激素(例如介白素、IFN或TNF)多肽與轉鐵蛋白結合。在一些情況下，細胞激素多肽與人類轉鐵蛋白結合。在另外情況下，細胞激素多肽與轉鐵蛋白之功能片段結合。
在一些情況下，IL-2多肽與轉鐵蛋白結合。在一些情況下，IL-2多肽與人類轉鐵蛋白結合。在另外情況下，IL-2多肽與轉鐵蛋白之功能片段結合。
在一些實施例中，結合部分係甲狀腺素運載蛋白(TTR)。甲狀腺素運載蛋白係位於血清及腦脊髓液中運輸甲狀腺激素甲狀腺素(T4)及結合至視黃醇之視黃醇結合蛋白之運輸蛋白質。
在一些情況下，細胞激素(例如介白素、IFN或TNF)多肽與甲狀腺素運載蛋白(經由其末端中之一者或經由內部鉸鏈區)結合。在一些情況下，細胞激素多肽與甲狀腺素運載蛋白之功能片段結合。
在一些情況下，IL-2多肽與甲狀腺素運載蛋白(經由其末端中之一者或經由內部鉸鏈區)結合。在一些情況下，IL-2多肽與甲狀腺素運載蛋白之功能片段結合。
在一些實施例中，結合部分係抗體或其結合片段。在一些情況下，抗體或其結合片段包含人類化抗體或其結合片段、鼠類抗體或其結合片段、嵌合抗體或其結合片段、單株抗體或其結合片段、單價Fab'、二價Fab2、F(ab)'3片段、單鏈可變片段(scFv)、雙scFv、(scFv)2、雙功能抗體、微型抗體、奈米抗體、三功能抗體、四功能抗體、人類抗體、二硫鍵穩定之Fv蛋白質(dsFv)、單域抗體(sdAb)、Ig NAR、駱駝科抗體或其結合片段、雙特異性抗體或其結合片段或其化學修飾之衍生物。
在其他情況下，結合部分包含scFv、雙scFv、(scFv)2、dsFv或sdAb。在一些情況下，結合部分包含scFv。在一些情況下，結合部分包含雙scFv。在一些情況下，結合部分包含(scFv)2。在一些情況下，結合部分包含dsFv。在一些情況下，結合部分包含sdAb。
在一些情況下，結合部分包含抗體之Fc部分，例如IgG、IgA、IgM、IgE或IgD之Fc部分。在一些情況下，部分包含IgG(例如IgG1、IgG3或IgG4)之Fc部分。
在一些情況下，細胞激素(例如介白素、IFN或TNF)多肽與抗體或其結合片段結合。在一些情況下，細胞激素多肽與以下結合：人類化抗體或其結合片段、鼠類抗體或其結合片段、嵌合抗體或其結合片 段、單株抗體或其結合片段、單價Fab'、二價Fab2、F(ab)'3片段、單鏈可變片段(scFv)、雙scFv、(scFv)2、雙功能抗體、微型抗體、奈米抗體、三功能抗體、四功能抗體、人類抗體、二硫鍵穩定之Fv蛋白質(dsFv)、單域抗體(sdAb)、Ig NAR、駱駝科抗體或其結合片段、雙特異性抗體或其結合片段或其化學修飾之衍生物。在另外情況下，細胞激素多肽與抗體之Fc部分結合。在另外情況下，細胞激素多肽與IgG(例如IgG1、IgG3或IgG4)之Fc部分結合。
在一些情況下，IL-2多肽與抗體或其結合片段結合。在一些情況下，IL-2多肽與以下結合：人類化抗體或其結合片段、鼠類抗體或其結合片段、嵌合抗體或其結合片段、單株抗體或其結合片段、單價Fab'、二價Fab2、F(ab)'3片段、單鏈可變片段(scFv)、雙scFv、(scFv)2、雙功能抗體、微型抗體、奈米抗體、三功能抗體、四功能抗體、人類抗體、二硫鍵穩定之Fv蛋白質(dsFv)、單域抗體(sdAb)、Ig NAR、駱駝科抗體或其結合片段、雙特異性抗體或其結合片段或其化學修飾之衍生物。在另外情況下，IL-2多肽與抗體之Fc部分結合。在另外情況下，IL-2多肽與IgG(例如IgG1、IgG3或IgG4)之Fc部分結合。
在一些實施例中，IL-2多肽與水溶性聚合物(例如PEG)及抗體或其結合片段結合。在一些情況下，抗體或其結合片段包含人類化抗體或其結合片段、鼠類抗體或其結合片段、嵌合抗體或其結合片段、單株抗體或其結合片段、單價Fab'、二價Fab2、F(ab)'3片段、單鏈可變片段(scFv)、雙scFv、(scFv)2、雙功能抗體、微型抗體、奈米抗體、三功能抗體、四功能抗體、人類抗體、二硫鍵穩定之Fv蛋白質(dsFv)、單域抗體(sdAb)、Ig NAR、駱駝科抗體或其結合片段、雙特異性抗體或其結合片 段或其化學修飾之衍生物。在一些情況下，抗體或其結合片段包含scFv、雙scFv、(scFv)2、dsFv或sdAb。在一些情況下，抗體或其結合片段包含scFv。在一些情況下，抗體或其結合片段引導IL-2結合至所關注標靶細胞，且水溶性聚合物增加穩定性及/或血清半衰期。
在一些情況下，一或多種IL-2多肽-水溶性聚合物(例如PEG)結合物進一步結合至抗體或其結合片段。在一些情況下，IL-2結合物與抗體之比率係約1：1、2：1、3：1、4：1、5：1、6：1、7：1、8：1、9：1、10：1、11：1或12：1。在一些情況下，IL-2結合物與抗體之比率係約1：1。在其他情況下，IL-2結合物與抗體之比率係約2：1、3：1或4：1。在另外情況下，IL-2結合物與抗體之比率係約6：1或更高。
在一些實施例中，一或多種IL-2多肽-水溶性聚合物(例如PEG)結合物直接結合至抗體或其結合片段。在其他情況下，IL-2結合物由連接子間接結合至抗體或其結合片段。例示性連接子包括同雙官能連接子、異雙官能連接子、基於順丁烯二醯亞胺之連接子、零痕跡連接子、自我分解型連接子、間隔子及其類似物。
在一些實施例中，抗體或其結合片段直接抑或間接結合至IL-2多肽-水溶性聚合物(例如PEG)結合物之IL-2多肽部分。在此類情況下，抗體與IL-2多肽之結合位點位於不阻礙IL-2多肽與IL-2Rβγ結合之位點。在另外情況下，抗體與IL-2多肽之結合位點位於將阻礙或進一步阻礙IL-2多肽與IL-2Rα結合之位點。在其他實施例中，抗體或其結合片段直接抑或間接結合至IL-2多肽-水溶性聚合物(例如PEG)結合物之水溶性聚合物部分。
肽
在一些實施例中，本文所述之結合部分係肽。在一些情況下，肽係非結構化肽。在一些情況下，細胞激素(例如介白素、IFN或TNF)多肽與肽結合。在一些情況下，包含肽之IL-2結合物具有增加之血清半衰期及/或穩定性。在一些情況下，包含肽之IL-2結合物具有降低之IL-2與一或多個IL-2R次單元之相互作用。在另外情況下，肽阻斷IL-2與一或多個IL-2R次單元之相互作用。
在一些情況下，結合部分係XTENTM肽(Amunix Operating Inc.)且修飾稱為XTEN化。XTEN化係編碼所關注多肽之核酸與編碼XTENTM肽(Amunix Operating Inc.)之核酸的遺傳融合，該XTENTM肽係包含不同百分比之六種胺基酸之長非結構化親水性肽：Ala、Glu、Gly、Ser及Thr。在一些情況下，XTENTM肽根據諸如表現、遺傳穩定性、溶解度、聚集抗性、增加之半衰期、增加之效能及/或增加之活體外活性的特性結合所關注多肽進行選擇。在一些情況下，細胞激素(例如介白素、IFN或TNF)多肽與XTEN肽結合。在一些情況下，IL-2多肽與XTEN肽結合。
在一些情況下，結合部分係富甘胺酸高胺基酸聚合物(HAP)且修飾稱為HAP化。HAP化係編碼所關注多肽之核酸與編碼富甘胺酸之高胺基酸聚合物(HAP)之核酸的遺傳融合。在一些情況下，HAP聚合物包含(Gly4Ser)n重複基元(SEQ ID NO：3)，且有時長度係約50、100、150、200、250、300或更多個殘基。在一些情況下，細胞激素(例如介白素、IFN或TNF)多肽與HAP結合。在一些情況下，IL-2多肽與HAP結合。
在一些實施例中，結合部分係PAS多肽且修飾稱為PAS化。PAS化係編碼所關注多肽之核酸與編碼PAS多肽之核酸的遺傳融合。PAS多肽係由Pro、Ala及Ser殘基組成之親水性不帶電多肽。在一些情況 下，PAS多肽之長度係至少約100、200、300、400、500或600個胺基酸。在一些情況下，細胞激素(例如介白素、IFN或TNF)多肽與PAS多肽結合。在一些情況下，IL-2多肽與PAS多肽結合。
在一些實施例中，結合部係類彈性蛋白多肽(ELP)且修飾稱為ELP化。ELP化係編碼所關注多肽之核酸與編碼類彈性蛋白多肽(ELP)之核酸的遺傳融合。ELP包含VPGxG重複基元(SEQ ID NO：4)，其中x係除脯胺酸外之任何胺基酸。在一些情況下，細胞激素(例如介白素、IFN或TNF)多肽與ELP結合。在一些情況下，IL-2多肽與ELP結合。
在一些實施例中，結合部分係CTP肽。CTP肽包含31個胺基酸殘基肽FQSSSS*KAPPPS*LPSPS*RLPGPS*DTPILPQ(SEQ ID NO：5)，其中S*指示O-糖基化位點(OPKO)。在一些情況下，CTP肽與細胞激素多肽(例如IL-2多肽)基因融合。在一些情況下，細胞激素多肽(例如IL-2多肽)與CTP肽結合。
在一些實施例中，細胞激素(例如IL-2多肽)藉由麩胺醯化來修飾。麩胺醯化(或聚麩胺醯化)係麩胺酸之可逆轉譯後修飾，其中麩胺酸之γ-羧基與游離麩胺酸中之胺基形成類肽鍵，在該游離麩胺酸中α-羧基延伸成聚麩胺酸酯鏈。
在一些實施例中，細胞激素(例如IL-2多肽)藉由類明膠蛋白質(GLK)聚合物修飾。在一些情況下，GLK聚合物包含多個重複序列Gly-Xaa-Yaa，其中Xaa及Yaa分別主要包含脯胺酸及4-羥脯胺酸。在一些情況下，GLK聚合物進一步包含胺基酸殘基Pro、Gly、Glu、Qln、Asn、Ser及Lys。在一些情況下，GLK聚合物之長度係約20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、150個殘基或更長。
另外結合部分
在一些情況下，結合部分包含細胞外生物標記。在一些情況下，細胞外生物標記係腫瘤抗原。在一些情況下，例示性細胞外生物標記包含CD19、PSMA、B7-H3、B7-H6、CD70、CEA、CSPG4、EGFRvIII、EphA3、EpCAM、EGFR、ErbB2(HER2)、FAP、FRα、GD2、GD3、Lewis-Y、間皮素、Muc1、Muc 16、ROR1、TAG72、VEGFR2、CD11、Gr-1、CD204、CD16、CD49b、CD3、CD4、CD8及B220。在一些情況下，結合部分鍵結或結合至細胞激素(例如IL-2)。在一些情況下，結合部分例如在細胞激素(例如IL-2)之N端或C端發生基因融合。
在一些情況下，結合部分包含來自轉譯後修飾之分子。在一些情況下，轉譯後修飾之實例包括豆蔻醯化、棕櫚醯化、異戊烯化(或異戊烯化)(例如法呢基化或四異戊二烯化)、糖基磷脂醯肌醇化、醯化(例如O-醯化、N-醯化、S-醯化)、烷基化(例如加入諸如甲基或乙基之烷基)、醯胺化、糖基化、羥基化、碘化、核苷酸加入、氧化、磷酸化、琥珀醯化、硫酸化、糖化、胺甲醯化、麩胺醯化或去醯胺化。在一些情況下，細胞激素(例如IL-2)藉由轉譯後修飾來修飾，該轉譯後修飾係諸如豆蔻醯化、棕櫚醯化、異戊烯化(或異戊烯化)(例如法呢基化或四異戊二烯化)、糖基磷脂醯肌醇化、醯化(例如O-醯化、N-醯化、S-醯化)、烷基化(例如加入諸如甲基或乙基之烷基)、醯胺化、糖基化、羥基化、碘化、核苷酸加入、氧化、磷酸化、琥珀醯化、硫酸化、糖化、胺甲醯化、麩胺醯化或去醯胺化。
結合
連接子
在一些實施例中，適用於使結合部分結合(conjugating/binding)至本文所述之細胞激素多肽(例如IL-2多肽)之官能性反應性基團包括例如零或高級連接子。在一些情況下，併入至本文所述之介白素中之非天然胺基酸包含官能性反應性基團。在一些情況下，連接子包含與併入至本文所述之介白素中之非天然胺基酸反應的官能性反應性基團。在一些情況下，結合部分包含與併入至本文所述之介白素中之非天然胺基酸反應的官能性反應性基團。在一些情況下，結合部分包含與本文所述之連接子(視情況預先連接至細胞激素肽)反應的官能性反應性基團。在一些實施例中，連接子包含與本文所述之細胞激素肽中之天然胺基酸反應的反應性基團。在一些情況下，高級連接子包含雙官能連接子，諸如同雙官能連接子或異雙官能連接子。例示性同雙官能連接子包括(但不限於)羅曼特氏試劑二硫代雙(丁二醯亞胺基丙酸酯)DSP、3'3'-二硫代雙(丙酸磺基丁二醯亞胺酯)(DTSSP)、辛二酸二丁二醯亞胺酯(DSS)、辛二酸雙(磺基丁二醯亞胺酯)(BS)、酒石酸二丁二醯亞胺酯(DST)、酒石酸二磺基丁二醯亞胺酯(磺基DST)、糖基雙(丁二醯亞胺基丁二酸)伸乙酯(EGS)、戊二酸二丁二醯亞胺酯(DSG)、碳酸N,N'-二丁二醯亞胺酯(DSC)、二亞胺代二酸二甲酯(DMA)、庚二亞胺酸二甲酯(DMP)、辛二亞胺酸二甲酯(DMS)、二甲基-3,3'-二硫代雙丙醯亞胺酸酯(DTBP)、1,4-二(3'-(2'-吡啶基二硫基)丙醯胺基)丁烷(DPDPB)、雙順丁烯二醯亞胺基己烷(BMH)、含有芳基鹵化物之化合物(DFDNB)(諸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯或1,3-二氟-4,6-二硝基苯)、4,4'-二氟-3,3'-二硝基苯基碸(DFDNPS)、雙[β-(4-疊氮基柳基醯胺基)乙基]二硫化物(BASED)、甲醛、戊二醛、1,4-丁二醇二縮水甘油醚、 己二酸二醯肼、碳醯肼、鄰甲苯胺、3,3'-二甲基聯苯胺、聯苯胺、α,α'-對二胺基聯苯、二碘-對二甲苯磺酸、N,N'-伸乙基-雙(碘乙醯胺)或N,N'-六亞甲基-雙(碘乙醯胺)。
在一些實施例中，雙官能連接子包含異雙官能連接子。例示性異雙官能連接子包括(但不限於)胺反應性及硫氫基交聯劑，諸如3-(2-吡啶基二硫基)丙酸N-丁二醯亞胺酯(sPDP)、長鏈3-(2-吡啶基二硫基)丙酸N-丁二醯亞胺酯(LC-sPDP)、水溶性長鏈3-(2-吡啶基二硫基)丙酸N-丁二醯亞胺酯(磺基-LC-sPDP)、丁二醯亞胺基氧基羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基二硫基)甲苯(sMPT)、磺基丁二醯亞胺基-6-[α-甲基-α-(2-吡啶基二硫基)甲苯醯胺基]己酸酯(磺基-LC-sMPT)、丁二醯亞胺基-4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸酯(sMCC)、磺基丁二醯亞胺基-4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸酯(磺基-sMCC)、間順丁烯二醯亞胺基苯甲醯基-N-羥基丁二醯亞胺酯(MBs)、間順丁烯二醯亞胺基苯甲醯基-N-羥基磺基丁二醯亞胺酯(磺基-MBs)、(4-碘乙醯基)胺基苯甲酸N-丁二醯亞胺酯(sIAB)、(4-碘乙醯基)胺基苯甲酸磺基丁二醯亞胺酯(磺基-sIAB)、丁二醯亞胺基-4-(對順丁烯二醯亞胺基苯基)丁酸酯(sMPB)、磺基丁二醯亞胺基-4-(對馬來醯亞胺基苯基)丁酸酯(磺基-sMPB)、N-(γ-順丁烯二醯亞胺基丁醯氧基)丁二醯亞胺酯(GMBs)、N-(γ-順丁烯二醯亞胺基丁醯氧基)磺基丁二醯亞胺酯(磺基-GMBs)、6-((碘乙醯基)胺基)己酸丁二醯亞胺酯(sIAX)、6-[6-(((碘乙醯基)胺基)己醯基)胺基]己酸丁二醯亞胺酯(sIAXX)、4-(((碘乙醯基)胺基)甲基)環己烷-1-甲酸丁二醯亞胺酯(sIAC)、6-(((((4-碘乙醯基)胺基)甲基)環己烷-1-羰基)胺基)己酸丁二醯亞胺酯(sIACX)、碘乙酸對硝苯酯(NPIA)；羰基反應性及硫氫基反應性交聯 劑，諸如4-(4-N-馬來醯亞胺基苯基)丁酸醯肼(MPBH)、4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-羧基-醯肼-8(M2C2H)、3-(2-吡啶基二硫基)丙醯基醯肼(PDPH)；胺反應性及光反應性交聯劑，諸如N-羥基丁二醯亞胺基-4-疊氮柳酸(NHs-AsA)、N-羥基磺基丁二醯亞胺基-4-疊氮柳酸(磺基-NHs-AsA)、磺基丁二醯亞胺基-(4-疊氮柳基醯胺基己酸酯(磺基-NHs-LC-AsA)、磺基丁二醯亞胺基-2-(ρ-疊氮柳基醯胺基)乙基-1,3'-二硫丙酸酯(sAsD)、N-羥基丁二醯亞胺基-4-疊氮苯甲酸酯(HsAB)、N-羥基磺基丁二醯亞胺基-4-疊氮苯甲酸酯(磺基-HsAB)、N-丁二醯亞胺基-6-(4'-疊氮基-2'-硝基苯基胺基)己酸酯(sANPAH)、磺基丁二醯亞胺基-6-(4'-疊氮基-2'-硝基苯基胺基)己酸酯(磺基-sANPAH)、N-5-疊氮基-2-硝基苯甲醯氧基丁二醯亞胺(ANB-NOs)、磺基丁二醯亞胺基-2-(間疊氮基-鄰硝基苯甲醯胺基)-乙基-1,3'-二硫丙酸酯(sAND)、N-丁二醯亞胺基-4(4-疊氮苯基)1,3'-二硫丙酸酯(sADP)、(4-疊氮苯基)-1,3'-二硫丙酸N-磺基丁二醯亞胺酯(磺基-sADP)、4-(ρ-疊氮苯基)丁酸磺基丁二醯亞胺酯(磺基-sAPB)、2-(7-疊氮基-4-甲基香豆素-3-乙醯胺)乙基-1,3'-二硫丙酸磺基丁二醯亞胺酯(sAED)、7-疊氮基-4-甲基香豆素-3-乙酸磺基丁二醯亞胺酯(磺基-sAMCA)、重氮丙酮酸ρ-硝苯酯(ρNPDP)、ρ-硝苯基-2-重氮-3,3,3-三氟丙酸酯(PNP-DTP)：硫氫基反應性及光反應性交聯劑，諸如1-(ρ-疊氮柳基醯胺基)-4-(碘乙醯胺基)丁烷(AsIB)、N-[4-(ρ-疊氮柳基醯胺基)丁基]-3'-(2'-吡啶基二硫基)丙醯胺(APDP)、二苯甲酮-4-碘乙醯胺、二苯甲酮-4-順丁烯二醯亞胺；羰基反應性及光反應性交聯劑，諸如ρ-疊氮基苯甲醯基醯肼(ABH)；羧酸酯反應性及光反應性交聯劑，諸如4-(ρ-疊氮柳基醯胺基)丁胺(AsBA)；及精胺酸反應性及光反應性交聯劑，諸如ρ-疊氮苯基乙二 醛(APG)。
在一些情況下，反應性官能基包含對存在於結合部分上(例如結合部分或IL-2上)之親電子基團具有反應性之親核基團。例示性親電子基團包括羰基，諸如醛、酮、羧酸、酯、醯胺、烯酮、醯基鹵化物或酸酐。在一些實施例中，反應性官能基係醛。例示性親核性基團包括醯肼、肟、胺基、肼、硫半卡巴肼、甲酸肼及芳基醯肼。在一些實施例中，併入至本文所述之介白素中之非天然胺基酸包含親電子基團。
在一些實施例中，連接子係可裂解連接子。在一些實施例中，可裂解連接子係二肽連接子。在一些實施例中，二肽連接子係纈胺酸-瓜胺酸(Val-Cit)、苯丙胺酸-離胺酸(Phe-Lys)、纈胺酸-丙胺酸(Val-Ala)及纈胺酸-離胺酸(Val-Lys)。在一些實施例中，二肽連接子係纈胺酸-瓜胺酸。
在一些實施例中，連接子係包含例如至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、15、20、25、30、35、40、45、50或更多個胺基酸之肽連接子。在一些情況下，肽連接子包含至多2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、15、20、25、30、35、40、45、50或更少個胺基酸。在另外情況下，肽連接子包含約2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、15、20、25、30、35、40、45或50個胺基酸。
在一些實施例中，連接子包含自我分解型連接部分。在一些實施例中，自我分解型連接部分包含對胺基苯甲醇(PAB)、對胺基苯甲氧基羰基(PABC)或其衍生物或類似物。在一些實施例中，連接子包含二肽連接部分及自我分解型連接部分。在一些實施例中，自我分解型連接部分諸如描述於美國專利第9089614號及WIPO申請案第WO2015038426號 中。
在一些實施例中，可裂解連接子係葡萄糖苷酸。在一些實施例中，可裂解連接子係酸可裂解連接子。在一些實施例中，酸可裂解連接子係肼。在一些實施例中，可裂解連接子係可還原連接子。
在一些實施例中，連接子包含順丁烯二醯亞胺基。在一些情況下，順丁烯二醯亞胺基亦稱為順丁烯二醯亞胺間隔子。在一些情況下，順丁烯二醯亞胺基進一步包含羊油酸，從而形成順丁烯二醯亞胺基己醯基(mc)。在一些情況下，連接子包含順丁烯二醯亞胺基己醯基(mc)。在一些情況下，連接子係順丁烯二醯亞胺基己醯基(mc)。在其他情況下，順丁烯二醯亞胺基包含順丁烯二醯亞胺基甲基，諸如上文所述之丁二醯亞胺基-4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸酯(sMCC)或磺基丁二醯亞胺基-4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸酯(磺基-sMCC)。
在一些實施例中，順丁烯二醯亞胺基係自穩定順丁烯二醯亞胺。在一些情況下，自穩定順丁烯二醯亞胺利用二胺基丙酸(DPR)鄰近順丁烯二醯亞胺併入鹼性胺基以提供硫代丁二醯亞胺環水解之分子內催化，藉此使順丁烯二醯亞胺避免經由逆邁克爾(Michael)反應發生消除反應。在一些情況下，自穩定順丁烯二醯亞胺係Lyon等人，「Self-hydrolyzing maleimides improve the stability and pharmacological properties of antibody-drug conjugates」,Nat.Biotechnol. 32(10)：1059-1062(2014)中所描述之順丁烯二醯亞胺基。在一些情況下，連接子包含自穩定順丁烯二醯亞胺。在一些情況下，連接子係自穩定順丁烯二醯亞胺。
結合化學反應
使用各種結合反應來結合連接子、結合部分及併入至本文所述之細胞激素肽中之非天然胺基酸。此類結合反應通常與諸如「生物正交」反應之水性條件相容。在一些實施例中，結合反應藉由諸如催化劑之化學試劑、光或見於連接子、結合部分或非天然胺基酸上之反應性化學基團介導。在一些實施例中，結合反應藉由酶介導。在一些實施例中，本文所用之結合反應描述於Gong,Y.,Pan,L.Tett.Lett.2015,56,2123中。在一些實施例中，本文所用之結合反應描述於Chen,X.；Wu.Y-W.Org.Biomol.Chem.2016,14,5417中。
在一些本文所述之實施例中，結合反應包含酮或醛與親核體之反應。在一些實施例中，結合反應包含酮與胺氧基反應以形成肟。在一些實施例中，結合反應包含酮與芳基或雜芳基胺基反應以形成亞胺。在一些實施例中，結合反應包含醛與芳基或雜芳基胺基反應以形成亞胺。在一些實施例中，本文所述之結合反應產生包含經由肟連接之連接子或結合部分之細胞激素肽。在一些實施例中，結合反應包含醛或酮與色胺親核體之皮克特-施彭格勒反應(Pictet-Spengler reaction)。在一些實施例中，結合反應包含肼基-皮克特-施彭格勒反應。在一些實施例中，結合反應包含皮克特-施彭格勒連接。
在一些本文所述之實施例中，本文所述之結合反應包含疊氮基與膦之反應(施陶丁格連接(Staudinger ligation))。在一些實施例中，膦係芳基膦。在一些實施例中，芳基膦包含原酸酯基團。在一些實施例中，膦包含結構2-(二苯基磷烷基)苯甲酸甲酯。在一些實施例中，本文所述之結合反應產生包含經由芳基醯胺連接之連接子或結合部分之細胞激素肽。在一些實施例中，本文所述之結合反應產生包含經由醯胺連接之連接 子或結合部分之細胞激素肽。
在一些本文所述之實施例中，本文所述之結合反應包含1,3-偶極環加成反應。在一些實施例中，1,3-偶極環加成反應包含疊氮基與膦之反應(「單擊」反應)。在一些實施例中，結合反應藉由銅催化。在一些實施例中，本文所述之結合反應產生包含經由三唑連接之連接子或結合部分之細胞激素肽。在一些實施例中，本文所述之結合反應包含疊氮基與應變烯烴之反應。在一些實施例中，本文所述之結合反應包含疊氮基與應變炔烴之反應。在一些實施例中，本文所述之結合反應包含疊氮基與例如OCT、DIFO、DIFBO、DIBO、BARAC、TMTH或其他應變環炔之環炔之反應，其結構示於Gong,Y.,Pan,L.Tett.Lett.2015,56,2123中。在一些實施例中，1,3-偶極環加成反應藉由光催化(「光點擊」)。在一些實施例中，本文所述之結合反應包含末端烯丙基與四唑及光之反應。在一些實施例中，本文所述之結合反應包含末端炔基與四唑及光之反應。在一些實施例中，本文所述之結合反應包含O-烯丙基胺基酸與四嗪及光之反應。在一些實施例中，本文所述之結合反應包含O-烯丙基酪胺酸與四嗪及光之反應。
在一些本文所述之實施例中，本文所述之結合反應包含含二烯及親二烯物之反向需電子環加成反應。在一些實施例中，二烯包含四嗪。在一些實施例中，親二烯物包含烯烴。在一些實施例中，親二烯物包含炔烴。在一些實施例中，炔烴係應變炔烴。在一些實施例中，烯烴係應變二烯。在一些實施例中，炔烴係反-環辛炔。在一些實施例中，炔烴係環辛烯。在一些實施例中，烯烴係環丙烯。在一些實施例中，烯烴係氟環丙烯。在一些實施例中，本文所述之結合反應致使形成經由環中包含兩個 氮原子之6員環雜環連接至連接子或結合部分之細胞激素肽。
在一些本文所述之實施例中，本文所述之結合反應包含烯烴複分解反應。在一些實施例中，本文所述之結合反應包含烯烴及炔烴與釕催化劑之反應。在一些實施例中，本文所述之結合反應包含兩種烯烴與釕催化劑之反應。在一些實施例中，本文所述之結合反應包含兩種炔烴與釕催化劑之反應。在一些實施例中，本文所述之結合反應包含烯烴或炔烴與釕催化劑及包含烯丙基之胺基酸之反應。在一些實施例中，本文所述之結合反應包含烯烴或炔烴與釕催化劑及包含硫化丙烯或硒化丙烯之胺基酸之反應。在一些實施例中，釕催化劑係霍夫達-格拉布斯(Hoveda-Grubbs)第2代催化劑。在一些實施例中，烯烴複分解反應包含一或多種應變烯烴或炔烴之反應。
在一些本文所述之實施例中，本文所述之結合反應包含交叉偶合反應。在一些實施例中，交叉偶合反應包含過渡金屬催化劑，諸如銥、金、釕、銠、鈀、鎳、鉑或其他過渡金屬催化劑及一或多種配位體。在一些實施例中，過渡金屬催化劑係水溶性的。在一些本文所述之實施例中，本文所述之結合反應包含鈴木-宮浦交叉偶合反應(Suzuki-Miyaura cross-coupling reaction)。在一些本文所述之實施例中，本文所述之結合反應包含芳基鹵化物(或三氟甲磺酸酯或甲苯磺酸酯)、芳基或烯基酸及鈀催化劑之反應。在一些本文所述之實施例中，本文所述之結合反應包含薗頭交叉偶合反應。在一些本文所述之實施例中，本文所述之結合反應包含芳基鹵化物(或三氟甲磺酸酯、或甲苯磺酸酯)、炔烴及鈀催化劑之反應。在一些實施例中，交叉偶合反應致使連接子或結合部分經由碳-碳鍵連接至細胞激素肽。
在一些本文所述之實施例中，本文所述之結合反應包含在結合之前反應性基團之脫除保護基或「釋放」反應。在一些實施例中，本文所述之結合反應包含由光釋放反應性基團，之後進行結合反應。在一些實施例中，反應性基團經包含一或多個硝基之芳烷基部分保護。在一些實施例中，反應性基團之釋放產生游離胺、硫醚基或其他反應性基團。在一些實施例中，本文所述之結合反應包含由過渡金屬催化劑釋放反應性基團，之後進行結合反應。在一些實施例中，過渡金屬催化劑包含鈀及一或多種配位體。在一些實施例中，反應性基團經烯丙基部分保護。在一些實施例中，反應性基團經烯丙基胺基甲酸酯保護。在一些實施例中，反應性基團經丙炔部分保護。在一些實施例中，反應性基團經胺基甲酸炔丙酯保護。在一些實施例中，反應性基團經親二烯物保護，其中暴露於二烯(諸如四嗪)致使反應性基團脫除保護基。
在一些本文所述之實施例中，本文所述之結合反應包含配位體導向之反應，其中連接至反應性基團)之配位體(視情況)有助於反應性基團與細胞激素肽之間的結合位點。在一些實施例中，配位體在細胞激素肽與反應性基團反應期間或之後裂解。在一些實施例中，細胞激素肽之結合位點係天然胺基酸。在一些實施例中，細胞激素肽之結合位點係離胺酸、半胱胺酸或絲胺酸。在一些實施例中，細胞激素肽之結合位點係本文所述之非天然胺基酸。在一些實施例中，反應性基團包含離去基，諸如缺電子芳基或雜芳基。在一些實施例中，反應性基團包含離去基，諸如經細胞激素肽置換之缺電子烷基。在一些實施例中，本文所述之結合反應包含基團捕獲劑與基團物種之反應。在一些實施例中，本文所述之結合反應包含氧化基團加成反應。在一些實施例中，基團捕獲劑係芳胺。在一些實施 例中，基團物種係酪胺醯基。在一些實施例中，基團物種由釕催化劑(諸如[Ru(bpy)3])及光產生。
酶促反應視情況用於本文所述之結合反應。例示性酶促結合包括SortA介導之結合、TGs介導之結合或FGE介導之結合。在一些實施例中，本文所述之結合反應包含末端1-胺基-2-硫基與硫酯之天然蛋白質連接(NPL)以形成醯胺結合。
本文描述使連接子或結合部分與細胞激素肽反應之各種結合反應，其中反應與細胞激素肽中之天然(「典型」)胺基酸發生。在一些實施例中，天然胺基酸見於野生型序列中之結合位置，或者該位置已發生突變。在一些實施例中，結合反應包含在半胱胺酸殘基處形成二硫鍵。在一些實施例中，結合反應包含半胱胺酸或離胺酸之1,4邁克爾加成反應。在一些實施例中，結合反應包含半胱胺酸之氰基苯并噻唑連接。在一些實施例中，結合反應包含與丙酮部分交聯，諸如1,3-二氯-2-丙酮。在一些實施例中，結合反應包含1,4邁克爾加成得到去氫丙胺酸，其由半胱胺酸與O-均三甲苯磺醯基羥胺之反應形成。在一些實施例中，結合反應包含酪胺酸與三唑啉二酮(TAD)或TAD衍生物之反應。在一些實施例中，結合反應包含色胺酸與銠類碳烯之反應。
使用方法
增生性疾病或病狀
在一些實施例中，本文描述一種治療有需要受試者之增生性疾病或病狀之方法，其包含向受試者投與治療有效量之本文所述之細胞激素結合物(例如IL-2結合物)。在一些情況下，IL-2結合物包含分離及純化之IL-2多肽及結合部分，其中相對於野生型IL-2多肽，IL-2結合物具有 降低之與IL-2受體α(IL-2Rα)次單元之親和力。在一些情況下，IL-2結合物包含分離及純化之IL-2多肽；及在選自以下之胺基酸位置結合至分離及純化之IL-2多肽的結合部分：K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E60、E61、E62、K64、P65、E68、V69、N71、L72、M104、C105及Y107，其中胺基酸殘基之編號與SEQ ID NO：1相對應。在一些情況下，IL-2結合物較佳與IL-2Rβ及IL-2Rβγ次單元相互作用以形成IL-2/IL-2Rβγ複合物。在一些情況下，IL-2/IL-2Rβγ複合物刺激及/或增強CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶T細胞、NK細胞及/或NKT細胞之擴增。在另外情況下，Teff細胞之擴增使Teff：Treg比率偏向Teff群體。
在一些實施例中，增生性疾病或病狀係癌症。在一些情況下，癌症係實體腫瘤。例示性實體腫瘤包括(但不限於)膀胱癌、骨癌、腦癌、乳癌、結腸直腸癌、食道癌、眼癌、頭頸癌、腎癌、肺癌黑素瘤、卵巢癌、胰臟癌或前列腺癌。在一些情況下，實體腫瘤係轉移性癌症。在一些情況下，實體腫瘤係復發性或難治性癌症。
在一些情況下，向有需要之受試者投與本文所述之細胞激素(例如介白素、IFN或TNF)結合物以治療實體腫瘤。在此類情況下，受試者具有膀胱癌、骨癌、腦癌、乳癌、結腸直腸癌、食道癌、眼癌、頭頸癌、腎癌、肺癌、黑素瘤、卵巢癌、胰臟癌或前列腺癌。在一些情況下，實體腫瘤係轉移性癌症。在一些情況下，實體腫瘤係復發性或難治性癌症。
在一些情況下，向有需要之受試者投與本文所述之IL-2結合物以用於治療實體腫瘤。在此類情況下受試者具有膀胱癌、骨癌、腦癌、乳癌、結腸直腸癌、食道癌、眼癌、頭頸癌、腎癌、肺癌、黑素瘤、 卵巢癌、胰臟癌或前列腺癌。在一些情況下，向受試者投與IL-2結合物以用於治療膀胱癌。在一些情況下，向受試者投與IL-2結合物以用於治療乳癌。在一些情況下，向受試者投與IL-2結合物以用於治療結腸直腸癌。在一些情況下，向受試者投與IL-2結合物以用於治療食道癌。在一些情況下，向受試者投與IL-2結合物以用於治療頭頸癌。在一些情況下，向受試者投與IL-2結合物以用於治療腎癌。在一些情況下，向受試者投與IL-2結合物以用於治療肺癌。在一些情況下，向受試者投與IL-2結合物以用於治療黑素瘤。在一些情況下，向受試者投與IL-2結合物以用於治療卵巢癌。在一些情況下，向受試者投與IL-2結合物以用於治療胰臟癌。在一些情況下，向受試者投與IL-2結合物以用於治療前列腺癌。
在一些實施例中，向受試者投與IL-2結合物以用於治療轉移性癌症。在一些情況下，轉移性癌症包含轉移性膀胱癌、轉移性骨癌、轉移性腦癌、轉移性乳癌、轉移性結腸直腸癌、轉移性食道癌、轉移性眼癌、轉移性頭頸癌、轉移性腎癌、轉移性肺癌、轉移性黑素瘤、轉移性卵巢癌、轉移性胰臟癌或轉移性前列腺癌。在一些情況下，向受試者投與IL-2結合物以用於治療轉移性膀胱癌、轉移性骨癌、轉移性腦癌、轉移性乳癌、轉移性結腸直腸癌、轉移性食道癌、轉移性眼癌、轉移性頭頸癌、轉移性腎癌、轉移性肺癌、轉移性黑素瘤、轉移性卵巢癌、轉移性胰臟癌或轉移性前列腺癌。
在一些情況下，向受試者投與IL-2結合物以用於治療復發性或難治性癌症。在一些情況下，復發性或難治性癌症包含復發性或難治性膀胱癌、復發性或難治性骨癌、復發性或難治性腦癌、復發性或難治性乳癌、復發性或難治性結腸直腸癌、復發性或難治性食道癌、復發性或難 治性眼癌、復發性或難治性頭頸癌、復發性或難治性腎癌、復發性或難治性肺癌、復發性或難治性黑素瘤、復發性或難治性卵巢癌、復發性或難治性胰臟癌或復發性或難治性前列腺癌。在一些情況下，向受試者投與IL-2結合物以用於治療復發性或難治性膀胱癌、復發性或難治性骨癌、復發性或難治性腦癌、復發性或難治性乳癌、復發性或難治性結腸直腸癌、復發性或難治性食道癌、復發性或難治性眼癌、復發性或難治性頭頸癌、復發性或難治性腎癌、復發性或難治性肺癌、復發性或難治性黑素瘤、復發性或難治性卵巢癌、復發性或難治性胰臟癌或復發性或難治性前列腺癌。
在一些實施例中，癌症係未治療癌症。在此類情況下，未治療癌症係尚未經療法治療之癌症。在一些情況下，未經治療之癌症係實體腫瘤，諸如膀胱癌、骨癌、腦癌、乳癌、結腸直腸癌、食道癌、眼癌、頭頸癌、腎癌、肺癌、黑素瘤、卵巢癌、胰臟癌或前列腺癌。在一些實施例中，本文描述一種治療有需要受試者之未經治療之實體腫瘤之方法，其包含向受試者投與本文所述之細胞激素結合物(例如IL-2結合物)。
在一些實施例中，癌症係惡性血液病。在一些情況下，惡性血液病包含白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。在一些情況下，惡性血液病係T細胞惡性病。在其他情況下，血液科惡性病係B細胞惡性病。例示性血液科惡性疾病包括(但不限於)慢性淋巴球性白血病(CLL)、小淋巴球性淋巴瘤(SLL)、濾泡性淋巴瘤(FL)、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、套細胞淋巴瘤(MCL)、瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血症、多發性骨髓瘤、結外邊緣區B細胞淋巴瘤、結邊緣區B細胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、非伯基特氏高級B細胞淋巴瘤、原發性縱隔B細胞淋巴瘤(PMBL)、免疫母細胞大細胞淋巴瘤、前驅體B淋巴母細胞性淋巴瘤、B細胞前淋巴球性白血病、淋巴 漿細胞淋巴瘤、脾邊緣區淋巴瘤、漿細胞骨髓瘤、漿細胞瘤、縱隔(胸腺)大B細胞淋巴瘤、血管內大B細胞淋巴瘤、原發性積液淋巴瘤或淋巴瘤樣肉芽腫。
在一些情況下，惡性血液病係轉移性癌症。在一些情況下，轉移性癌症係轉移性T細胞惡性病或轉移性B細胞惡性病。
在一些情況下，惡性血液病係復發性或難治性癌症。在一些情況下，復發性或難治性癌症係復發性或難治性T細胞惡性病或復發性或難治性B細胞惡性病。
在一些情況下，向有需要之受試者投與本文所述之細胞激素(例如介白素、IFN或TNF)以用於治療惡性血液病。在一些情況下，受試者具有T細胞惡性病。在一些情況下，受試者具有B細胞惡性病。在一些情況下，受試者具有慢性淋巴球性白血病(CLL)、小淋巴球性淋巴瘤(SLL)、濾泡性淋巴瘤(FL)、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、套細胞淋巴瘤(MCL)、瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血症、多發性骨髓瘤、結外邊緣區B細胞淋巴瘤、結邊緣區B細胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、非伯基特氏高級B細胞淋巴瘤、原發性縱隔B細胞淋巴瘤(PMBL)、免疫母細胞大細胞淋巴瘤、前驅體B淋巴母細胞性淋巴瘤、B細胞前淋巴球性白血病、淋巴漿細胞淋巴瘤、脾邊緣區淋巴瘤、漿細胞骨髓瘤、漿細胞瘤、縱隔(胸腺)大B細胞淋巴瘤、血管內大B細胞淋巴瘤、原發性積液淋巴瘤或淋巴瘤樣肉芽腫。
在一些情況下，向有需要之受試者投與本文所述之IL-2結合物以用於治療惡性血液病。在一些情況下，受試者具有T細胞惡性病。在一些情況下，受試者具有B細胞惡性病。在一些情況下，受試者具有慢 性淋巴球性白血病(CLL)、小淋巴球性淋巴瘤(SLL)、濾泡性淋巴瘤(FL)、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、套細胞淋巴瘤(MCL)、瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血症、多發性骨髓瘤、結外邊緣區B細胞淋巴瘤、結邊緣區B細胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、非伯基特氏高級B細胞淋巴瘤、原發性縱隔B細胞淋巴瘤(PMBL)、免疫母細胞大細胞淋巴瘤、前驅體B淋巴母細胞性淋巴瘤、B細胞前淋巴球性白血病、淋巴漿細胞淋巴瘤、脾邊緣區淋巴瘤、漿細胞骨髓瘤、漿細胞瘤、縱隔(胸腺)大B細胞淋巴瘤、血管內大B細胞淋巴瘤、原發性積液淋巴瘤或淋巴瘤樣肉芽腫。在一些情況下，向受試者投與IL-2結合物以用於治療CLL。在一些情況下，向受試者投與IL-2結合物以用於治療SLL。在一些情況下，向受試者投與IL-2結合物以用於治療FL。在一些情況下，向受試者投與IL-2結合物以用於治療DLBCL。在一些情況下，向受試者投與IL-2結合物以用於治療MCL。在一些情況下，向受試者投與IL-2結合物以用於治療瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血症。在一些情況下，向受試者投與IL-2結合物以用於治療多發性骨髓瘤。在一些情況下，向受試者投與IL-2結合物以用於治療伯基特氏淋巴瘤。
在一些情況下，向受試者投與IL-2結合物以用於治療轉移性惡性血液病。在一些情況下，向受試者投與IL-2結合物以用於治療轉移性T細胞惡性病。在一些情況下，向受試者投與IL-2結合物以用於治療轉移性B細胞惡性病。在一些情況下，向受試者投與IL-2結合物以用於治療轉移性慢性淋巴球性白血病(CLL)、小淋巴球性淋巴瘤(SLL)、濾泡性淋巴瘤(FL)、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、套細胞淋巴瘤(MCL)、瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血症、多發性骨髓瘤、結外邊緣區B細胞淋巴瘤、結 邊緣區B細胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、非伯基特氏高級B細胞淋巴瘤、原發性縱隔B細胞淋巴瘤(PMBL)、免疫母細胞大細胞淋巴瘤、前驅體B淋巴母細胞性淋巴瘤、B細胞前淋巴球性白血病、淋巴漿細胞淋巴瘤、脾邊緣區淋巴瘤、漿細胞骨髓瘤、漿細胞瘤、縱隔(胸腺)大B細胞淋巴瘤、血管內大B細胞淋巴瘤、原發性積液淋巴瘤或淋巴瘤樣肉芽腫。
在一些情況下，向受試者投與IL-2結合物以用於治療復發性或難治性惡性血液病。在一些情況下，向受試者投與IL-2結合物以用於治療復發性或難治性T細胞惡性病。在一些情況下，向受試者投與IL-2結合物以用於治療復發性或難治性B細胞惡性病。在一些情況下，向受試者投與IL-2結合物以用於治療復發性或難治性慢性淋巴球性白血病(CLL)、小淋巴球性淋巴瘤(SLL)、濾泡性淋巴瘤(FL)、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、套細胞淋巴瘤(MCL)、瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血症、多發性骨髓瘤、結外邊緣區B細胞淋巴瘤、結邊緣區B細胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、非伯基特氏高級B細胞淋巴瘤、原發性縱隔B細胞淋巴瘤(PMBL)、免疫母細胞大細胞淋巴瘤、前驅體B淋巴母細胞性淋巴瘤、B細胞前淋巴球性白血病、淋巴漿細胞淋巴瘤、脾邊緣區淋巴瘤、漿細胞骨髓瘤、漿細胞瘤、縱隔(胸腺)大B細胞淋巴瘤、血管內大B細胞淋巴瘤、原發性積液淋巴瘤或淋巴瘤樣肉芽腫。
另外治療劑
在一些實施例中，向受試者進一步投與另外治療劑。在一些情況下，將另外治療劑與細胞激素結合物(例如IL-2結合物)同時投與。在其他情況下，依序投與另外治療劑及IL-2結合物，例如，將細胞激素結合物(例如IL-2結合物)在另外治療劑之前投與或將細胞激素結合物(例如 IL-2結合物)在投與另外治療劑之後投與。
在一些情況下，另外治療劑包含化學治療劑、免疫治療劑、靶向療法、輻射療法或其組合。說明性另外治療劑包括(但不限於)烷基化劑，諸如六甲蜜胺(altretamine)、白消安(busulfan)、卡鉑(carboplatin)、卡莫司汀(carmustine)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、順鉑(cisplatin)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、達卡巴嗪(dacarbazine)、洛莫司汀(lomustine)、美法侖(melphalan)、奧沙利鉑(oxalaplatin)、替莫唑胺(temozolomide)或噻替派(thiotepa)；抗代謝物，諸如5-氟尿嘧啶(5-FU)、6-巰基嘌呤(6-MP)、卡培他濱(capecitabine)、阿糖胞苷(cytarabine)、氟尿苷(floxuridine)、氟達拉賓(fludarabine)、吉西他濱(gemcitabine)、羥基脲(hydroxyurea)、甲胺喋呤(methotrexate)或培美曲塞(pemetrexed)；蒽環黴素(anthracycline)，諸如道諾黴素(daunorubicin)、小紅莓(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)或伊達比星(idarubicin)；拓樸異構酶I抑制劑，諸如拓朴替康(topotecan)或伊立替康(irinotecan)(CPT-11)；拓樸異構酶II抑制劑，諸如依託泊苷(etoposide)(VP-16)、替尼泊苷(teniposide)或米托蒽醌(mitoxantrone)；有絲分裂抑制劑，諸如多烯紫杉醇(docetaxel)、雌莫司汀(estramustine)、伊沙匹隆(ixabepilone)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、長春鹼(vinblastine)、長春新鹼(vincristine)或長春瑞賓(vinorelbine)；或皮質類固醇，諸如潑尼松(prednisone)、甲基潑尼龍(methylprednisolone)或地塞米松(dexamethasone)。
在一些情況下，另外治療劑包含一線療法。如本文所使用，「一線療法」包含用於具有癌症之受試者之初級治療。在一些態樣 中，癌症為原發癌。在其他情況下，癌症係轉移性或復發性癌症。在一些情況下，一線療法包含化學療法。在其他情況下，一線治療包含輻射療法。熟習此項技術者容易瞭解，不同一線治療可適用於不同類型之癌症。
在一些情況下，細胞激素結合物(例如IL-2結合物)與選自以下之另外治療劑一起投與：烷基化劑，諸如六甲蜜胺、白消安、卡鉑、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、順鉑、環磷醯胺、達卡巴嗪、洛莫司汀、美法侖、奧沙利鉑、替莫唑胺噻替派；抗代謝物，諸如5-氟尿嘧啶(5-FU)、6-巰基嘌呤(6-MP)、卡培他濱、阿糖胞苷、氟尿苷、氟達拉賓、吉西他濱、羥基脲、甲胺喋呤或培美曲塞；蒽環黴素，諸如道諾黴素、小紅莓、表柔比星或伊達比星；拓樸異構酶I抑制劑，諸如拓朴替康或伊立替康(CPT-11)；拓樸異構酶II抑制劑，諸如依託泊苷(VP-16)、替尼泊苷或米托蒽醌；有絲分裂抑制劑，諸如多烯紫杉醇、雌莫司汀、伊沙匹隆、太平洋紫杉醇、長春鹼、長春新鹼或長春瑞賓；或皮質類固醇，諸如潑尼松、甲基潑尼龍或地塞米松。
在一些情況下，本文所述之細胞激素結合物(例如IL-2結合物)與酶聚ADP核糖聚合酶(PARP)之抑制劑一起投與。例示性PARP抑制劑包括(但不限於)奧拉帕尼(olaparib)(AZD-2281，Lynparza®，來自Astra Zeneca)、如卡帕瑞(rucaparib)(PF-01367338，Rubraca®，來自Clovis Oncology)、尼拉帕尼(niraparib)(MK-4827，Zejula®，來自Tesaro)、他拉柔帕瑞(talazoparib)(BMN-673，來自BioMarin Pharmaceutical Inc.)、維利帕尼(veliparib)(ABT-888，來自AbbVie)、CK-102(先前CEP 9722，來自Teva Pharmaceutical Industries Ltd.)、E7016(來自Eisai)、依尼帕瑞(iniparib)(BSI 201，來自Sanofi)及帕米帕 里(pamiparib)(BGB-290，來自BeiGene)。在一些情況下，細胞激素結合物(例如IL-2結合物)與PARP抑制劑組合投與，該PARP抑制劑係諸如奧拉帕尼、如卡帕瑞、尼拉帕尼、他拉柔帕瑞、維利帕尼、CK-102、E7016、依尼帕瑞或帕米帕里。
在一些情況下，本文所述之細胞激素結合物(例如IL-2結合物)與免疫檢查點抑制劑一起投與。例示性檢查點抑制劑包括：
PD-L1抑制劑，諸如Genentech之MPDL3280A(RG 7446)、來自BioXcell之抗小鼠PD-L1抗體純系10F.9G2(目錄號BE0101)、來自Bristol-Meyer's Squibb之抗PD-L1單株抗體MDX-1105(BMS-936559)及BMS-935559、MSB0010718C、小鼠抗PD-L1純系29E.2A3、及AstraZeneca之MEDI4736；
PD-L2抑制劑，諸如GlaxoSmithKline之AMP-224(Amplimmune)及rHIgM12B7；
PD-1抑制劑，諸如來自BioXcell之抗小鼠PD-1抗體純系J43(目錄號BE0033-2)、來自BioXcell之抗小鼠PD-1抗體純系RMP1-14(目錄號BE0146)、小鼠抗PD-1抗體純系EH12、Merck之MK-3475抗小鼠PD-1抗體(克珠達(Keytruda)、派立珠單抗(pembrolizumab)、拉立珠單抗(lambrolizumab))、AnaptysBio之抗PD-1抗體(稱為ANB011)、抗體MDX-1 106(ONO-4538)、Bristol-Myers Squibb之人類IgG4單株抗體納武單抗(nivolumab)(Opdivo®、BMS-936558、MDX1106)、AstraZeneca之AMP-514及AMP-224，及來自CureTech Ltd之皮立珠單抗(Pidilizumab)(CT-011)；
CTLA -4抑制劑，諸如Bristol Meyers Squibb之抗CTLA-4 抗體伊派利單抗(ipilimumab)(亦稱為Yervoy®、MDX-010、BMS-734016及MDX-101)、來自Millipore之抗CTLA4抗體純系9H10、Pfizer之曲美單抗(tremelimumab)(CP-675,206、替西單抗(ticilimumab))及來自Abcam之抗CTLA4抗體純系BNI3；
LAG3抑制劑，諸如來自eBioscience之抗Lag-3抗體純系eBioC9B7W(C9B7W)、來自LifeSpan Biosciences之抗Lag3抗體LS-B2237、來自Immutep之IMP321(ImmuFact)、抗Lag3抗體BMS-986016，及LAG-3嵌合抗體A9H12；
B7-H3抑制劑，諸如MGA271；
KIR抑制劑，諸如利瑞路單抗(Lirilumab)(IPH2101)；
CD137抑制劑，諸如烏瑞魯單抗(urelumab)(BMS-663513，Bristol-Myers Squibb)、PF-05082566(抗4-1BB，PF-2566，Pfizer)或XmAb-5592(Xencor)；
PS抑制劑，諸如巴維昔單抗(Bavituximab)；
及抑制劑，諸如抗體或其片段(例如單株抗體、人類、人類化或嵌合抗體)、RNAi分子或TIM3、CD52、CD30、CD20、CD33、CD27、OX40、GITR、ICOS、BTLA(CD272)、CD160、2B4、LAIR1、TIGHT、LIGHT、DR3、CD226、CD2或SLAM之小分子。
在一些情況下，細胞激素結合物(例如IL-2結合物)與派立珠單抗、納武單抗、曲美單抗或伊派利單抗組合投與。
在一些情況下，本文所述之細胞激素結合物(例如IL-2結合物)與抗體，諸如阿侖單抗(alemtuzumab)、曲妥珠單抗(trastuzumab)、替伊莫單抗(ibritumomab tiuxetan)、本妥昔單抗維多汀(brentuximab vedotin)、曲妥珠單抗-美坦新偶聯物(ado-trastuzumab emtansine)或布林莫單抗(blinatumomab)一起投與。
在一些情況下，細胞激素結合物(例如IL-2結合物)與選自另外細胞激素之另外治療劑一起投與。在一些情況下，另外細胞激素增強及/或協同T效應細胞擴增及/或增殖。在一些情況下，另外細胞激素包含IL-1β、IL-6、IL-7、IL-10、IL-12、IL-15、IL-21或TNFα。在一些情況下，另外細胞激素係IL-7。在一些情況下，另外細胞激素係IL-15。在一些情況下，另外細胞激素係IL-21。在一些情況下，另外細胞激素係TNFα。
在一些情況下，細胞激素結合物(例如IL-2結合物)與選自受體促效劑之另外治療劑一起投與。在一些情況下，受體促效劑包含類鐸受體(TLR)配位體。在一些情況下，TLR配位體包含TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8或TLR9。在一些情況下，TLR配位體包含合成配位體，諸如Pam3Cys、CFA、MALP2、Pam2Cys、FSL-1、Hib-OMPC、聚I：C、聚A：U、AGP、MPL A、RC-529、MDF2β、CFA或鞭毛蛋白。在一些情況下，細胞激素結合物(例如IL-2結合物)與一或多種選自以下之TLR促效劑一起投與：TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8及TLR9。在一些情況下，細胞激素結合物(例如IL-2結合物)與一或多種選自以下之TLR促效劑一起投與：Pam3Cys、CFA、MALP2、Pam2Cys、FSL-1、Hib-OMPC、聚I：C、聚A：U、AGP、MPL A、RC-529、MDF2β、CFA及鞭毛蛋白。
在一些實施例中，細胞激素結合物(例如IL-2結合物)與授 受性T細胞轉移(ACT)療法結合使用。在一個實施例中，ACT涉及鑑別受試者中具有例如抗腫瘤活性之自體T淋巴球，活體外擴增該等自體T淋巴球及後續將擴增之T淋巴球再輸注至受試者中。在另一實施例中，ACT包含使用具有例如抗腫瘤活性之同種異體T淋巴球，活體外擴增該等T淋巴球及後續將擴增之同種異體T淋巴球輸注至有需要之受試者中。在一些情況下，本文所述之細胞激素結合物(例如IL-2結合物)與作為ACT療法之一部分的自體T淋巴球結合使用。在其他情況下，本文所述之細胞激素結合物(例如IL-2結合物)與作為ACT療法之一部分的同種異體T淋巴球結合使用。在一些情況下，細胞激素結合物(例如IL-2結合物)與ACT療法同時投與有需要之受試者。在其他情況下，細胞激素結合物(例如IL-2結合物)與ACT療法依序投與有需要之受試者。
在一些實施例中，細胞激素結合物(例如IL-2結合物)用於離體活化及/或擴增自體及/或同種異體T細胞轉移。在此類情況下，細胞激素結合物(例如IL-2結合物)用以活化及/或擴增包含自體及/或同種異體T細胞之樣品，且在將樣品投與至有需要之受試者之前視情況自樣品移除細胞激素結合物(例如IL-2結合物)。
在一些實施例中，細胞激素結合物(例如IL-2結合物)與疫苗一起投與。在一些情況下，細胞激素結合物(例如IL-2結合物)與溶瘤病毒組合利用。在此類情況下細胞激素結合物(例如IL-2結合物)充當刺激劑以調節免疫反應。在一些情況下，細胞激素結合物(例如IL-2結合物)與作為佐劑療法之一部分的溶瘤病毒使用。例示性溶瘤病毒包括T-Vec(Amgen)、G47△(Todo等人)、JX-594(Sillajen)、CG0070(Cold Genesys)及瑞賴森(Reolysin)(Oncolytics Biotech)。在一些情況下，細胞 激素結合物(例如IL-2結合物)與諸如T-Vec、G47△、JX-594、CG0070或瑞賴森之溶瘤病毒組合使用。
在一些實施例中，細胞激素結合物(例如IL-2結合物)與輻射療法組合投與。
在一些實施例中，細胞激素結合物(例如IL-2結合物)與手術組合投與。
病原性感染
在一些實施例中，本文描述一種治療有需要受試者之病原性感染之方法，其包含向受試者投與治療有效量之本文所述之細胞激素結合物(例如IL-2結合物)。在一些情況下，IL-2結合物包含分離及純化之IL-2多肽及結合部分，其中相對於野生型IL-2多肽，IL-2結合物具有降低之與IL-2受體α(IL-2Rα)次單元之親和力。在一些情況下，IL-2結合物包含分離及純化之IL-2多肽；及在選自以下之胺基酸位置結合至分離及純化之IL-2多肽的結合部分：K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E60、E61、E62、K64、P65、E68、V69、N71、L72、M104、C105及Y107，其中胺基酸殘基之編號與SEQ ID NO：1相對應。在一些情況下，IL-2結合物較佳與IL-2Rβ及IL-2Rβγ次單元相互作用以形成IL-2/IL-2Rβγ複合物，其刺激及/或增強CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶細胞、NK細胞及/或NKT細胞之擴增。在另外情況下，IL-2結合物有助於藉由CD8+ T細胞識別病原性儲庫。
在一些實施例中，病原性感染係病毒感染，其中用抗病毒療法治療時，病毒儲庫(例如靜息CD4+ T細胞)存在於經治療宿主中。在此等情況下，本文所述之細胞激素結合物(例如IL-2結合物)誘導藉由 CD8+ T細胞(或細胞毒性T細胞)識別病毒性儲庫。在一些情況下，細胞激素結合物(例如IL-2結合物)用作單一療法用以重新引導CD8+ T細胞至感染靜息細胞以消除該等感染靜息細胞。在一些情況下，細胞激素結合物(例如IL-2結合物)與另外療法組合使用以重新引導CD8+ T細胞至感染靜息細胞以消除該等感染靜息細胞。例示性另外療法包含抗病毒治療，諸如阿昔洛韋(acyclovir)、溴夫定(brivudine)、多可沙諾(docosanol)、泛昔洛韋(famciclovir)、膦甲酸(foscarnet)、碘苷(idoxuridine)、噴昔洛韋(penciclovir)、曲氟尿苷(trifluridine)、發昔洛韋(valacyclovir)及普瑞利偉(pritelivir)。
在一些實施例中，病毒係DNA病毒或RNA病毒。DNA病毒包括單股(ss)DNA病毒、雙股(ds)DNA病毒或含有ss與ds DNA區之DNA病毒。RNA病毒包括單股(ss)RNA病毒或雙股(ds)RNA病毒。在一些情況下，ssRNA病毒進一步分類成正義RNA病毒或反義RNA病毒。
例示性dsDNA病毒包括來自以下科之病毒：肌尾噬菌體科(Myoviridae)、短尾病毒科(Podoviridae)、長尾病毒科(Siphoviridae)、異疱疹病毒科(Alloherpesviridae)、疱疹病毒科(Herpesviridae)、軟體動物疱疹病毒科(Malacoherpesviridae)、脂毛噬菌體科(Lipothrixviridae)、小桿狀噬菌體科(Rudiviridae)、腺病毒科(Adenoviridae)、瓶狀病毒科(Ampullaviridae)、囊泡病毒科(Ascoviridae)、艾斯法病毒科(Asfaviridae)、桿狀病毒科(Baculoviridae)、雙尾病毒科(Bicaudaviridae)、克氏病毒科(Clavaviridae)、被脂病毒科(Corticoviridae)、微小紡錘形噬菌體科(Fuselloviridae)、格氏病毒科(Globuloviridae)、滴狀病毒科(Guttaviridae)、唾液腺肥大病毒科 (Hytrosaviridae)、虹彩病毒科(Iridoviridae)、馬賽病毒科(Marseilleviridae)、擬菌病毒科(Mimiviridae)、線極病毒科(Nimaviridae)、潘多拉病毒科(Pandoraviridae)、乳頭瘤病毒科(Papillomaviridae)、藻類DNA病毒科(Phycodnaviridae)、芽生噬菌體科(Plasmaviridae)、多分DNA病毒(Polydnaviruses)、多瘤病毒科(Polyomaviridae)、痘病毒科(Poxviridae)、弗氏病毒科(Sphaerolipoviridae)及複層噬菌體科(Tectiviridae)。
例示性ssDNA病毒包括來自以下科之病毒：指環病毒科(Anelloviridae)、巴氏病毒科(Bacillariodnaviridae)、雙DNA病毒科(Bidnaviridae)、環病毒科(Circoviridae)、雙生病毒科(Geminiviridae)、絲狀噬菌體科(Inoviridae)、微小噬菌體科(Microviridae)、矮化病毒科(Nanoviridae)、細小病毒科(Parvoviridae)及圈形病毒科(Spiraviridae)。
含有ss及ds DNA區之例示性DNA病毒包括來自普氏病毒(pleolipoviruses)群之病毒。在一些情況下，普氏病毒包括鹽盒菌屬西班牙多形性病毒1(Haloarcula hispanica pleomorphic virus 1)、鹽幾何菌屬多形性病毒1(Halogeometricum pleomorphic virus 1)、鹽紅菌屬多形性病毒1(Halorubrum pleomorphic virus 1)、鹽紅菌屬多形性病毒2、鹽紅菌屬多形性病毒3及鹽紅菌屬多形性病毒6。
例示性dsRNA病毒包括來自以下科之病毒：雙股核醣酸病毒科(Birnaviridae)、金色病毒科(Chrysoviridae)、囊狀噬菌體科(Cystoviridae)、內源病毒科(Endornaviridae)、低毒性病毒科(Hypoviridae)、麥氏病毒科(Megavirnaviridae)、分體病毒科(Partitiviridae)、小雙節RNA病毒科(Picobirnaviridae)、呼腸孤病毒科 (Reoviridae)、輪狀病毒(Rotavirus)及整體病毒科(Totiviridae)。
例示性正義ssRNA病毒包括來自以下科之病毒：甲型線形病毒科(Alphaflexiviridae)、甲型特氏病毒科(Alphatetraviridae)、阿氏病毒科(Alvernaviridae)、動脈炎病毒科(Arteriviridae)、星狀病毒科(Astroviridae)、桿菌狀核糖核酸病毒科(Barnaviridae)、乙型線形病毒科(Betaflexiviridae)、雀麥花葉病毒科(Bromoviridae)、杯狀病毒科(Caliciviridae)、卡氏病毒科(Carmotetraviridae)、長線形病毒科(Closteroviridae)、冠狀病毒科(Coronaviridae)、二順反子病毒科(Dicistroviridae)、黃病毒科(Flaviviridae)、丙型線形病毒科(Gammaflexiviridae)、傳染性軟化病毒科(Iflaviridae)、光滑病毒科(Leviviridae)、黃症病毒科(Luteoviridae)、海洋RNA病毒科(Marnaviridae)、梅氏病毒科(Mesoniviridae)、裸露RNA病毒科(Narnaviridae)、野田病毒科(Nodaviridae)、派氏病毒科(Permutotetraviridae)、小RNA病毒科(Picornaviridae)、馬鈴薯Y病毒科(Potyviridae)、桿狀套病毒科(Roniviridae)、反轉錄病毒屬(Retroviridae)、植物小RNA病毒科(Secoviridae)、披膜病毒科(Togaviridae)、番茄叢矮病毒科(Tombusviridae)、蕪菁發黃鑲嵌病毒科(Tymoviridae)及帚狀病毒科(Virgaviridae)。
例示性反義ssRNA病毒包括來自以下科之病毒：沙粒病毒科(Arenaviridae)、博爾納病毒科(Bornaviridae)、布尼亞病毒科(Bunyaviridae)、絲狀病毒科(Filoviridae)、尼式病毒科(Nyamiviridae)、蛇形病毒科(Ophioviridae)、正黏病毒科(Orthomyxoviridae)、副黏病毒科(Paramyxoviridae)及彈狀病毒科(Rhabdoviridae)。
在一些實施例中，病原性感染由以下所致：阿貝爾森白血病病毒(Abelson leukemia virus)、阿貝爾森鼠類白血病病毒、阿貝爾森氏病毒、急性喉氣管支氣管炎病毒、阿德萊德河病毒(Adelaide River virus)、腺相關病毒群、腺病毒、非洲馬瘟病毒(African horse sickness virus)、非洲豬瘟病毒(African swine fever virus)、AIDS病毒、阿留申貂病細小病毒(Aleutian mink disease parvovirus)、α逆轉錄病毒屬(Alpharetrovirus)、α病毒(Alphavirus)、ALV相關病毒、大卡里孛病毒(Amapari virus)、口蹄疫病毒(Aphthovirus)、水產呼腸孤病毒(Aquareovirus)、蟲媒病毒(Arbovirus)、蟲媒病毒C、蟲媒病毒群A、蟲媒病毒群B、沙粒狀病毒群(Arenavirus group)、阿根廷出血熱病毒(Argentine hemorrhagic fever virus)、阿根廷出血熱病毒、動脈炎病毒(Arterivirus)、星狀病毒(Astrovirus)、侏猴疱疹病毒群(Ateline herpesvirus group)、奧耶斯基氏病病毒群(Aujezky's disease virus)、奧拉病毒(Aura virus)、奧斯達克病病毒(Ausduk disease virus)、澳大利亞蝙蝠狂犬病毒(Australian bat lyssavirus)、禽腺病毒(Aviadenovirus)、禽骨髓成紅血細胞增多症病毒、禽感染性支氣管炎病毒、禽白血病病毒、禽白血病性病毒、禽淋巴瘤病病毒、禽骨髓胚細胞過多症病毒、禽副黏病毒、禽肺炎腦炎病毒、禽網狀內皮細胞增生病病毒、禽肉瘤病毒、禽C型反轉錄病毒群、禽肝病毒(Avihepadnavirus)、禽痘病毒(Avipoxvirus)、B病毒、B19病毒、巴巴克病毒(Babanki virus)、狒狒疱疹病毒、桿狀病毒、巴馬森林病毒(Barmah Forest virus)、比巴魯病毒(Bebaru virus)、貝里馬病毒(Berrimah virus)、β逆轉錄病毒(Betaretrovirus)、雙RNA病毒(Birnavirus)、貝特納病毒(Bittner virus)、BK病毒、黑港渠病毒(Black Creek Canal virus)、藍舌病病毒、玻利維亞出血熱病毒(Bolivian hemorrhagic fever virus)、博馬病病毒(Boma disease virus)、綿羊邊界病病毒、博納病毒(borna virus)、牛α疱疹病毒1、牛α疱疹病毒2、牛冠狀病毒、牛暫時發熱病毒、牛免疫缺陷病毒、牛白血病病毒、牛白血病性病毒、牛乳頭炎病毒、牛乳突狀瘤病毒、牛丘疹口腔炎病毒、牛細小病毒、牛融合病毒、牛C型腫瘤病毒、牛病毒性腹瀉病毒、病毒(Buggy Creek virus)、子彈形病毒群、布尼安維拉病毒超群(Bunyamwera virus supergroup)、布尼亞病毒(Bunyavirus)、伯基特氏淋巴瘤病毒、勃旺巴發熱(Bwamba Fever)、CA病毒、杯狀病毒(Calicivirus)、加州腦炎病毒(California encephalitis virus)、駱駝痘病毒(camelpox virus)、金絲雀痘病毒(canarypox virus)、犬科動物疱疹病毒(canid herpesvirus)、犬冠狀病毒(canine coronavirus)、犬瘟熱病毒(canine distemper virus)、犬疱疹病毒(canine herpesvirus)、犬微小病毒(canine minute virus)、犬細小病毒(canine parvovirus)、卡尼奧德爾加蒂圖病毒(Cano Delgadito virus)、山羊關節炎病毒、山羊腦炎病毒、山羊疱疹病毒、羊痘病毒(Capripox virus)、心病毒、豚鼠疱疹病毒1(caviid herpesvirus 1)、猴疱疹病毒1(Cercopithecid herpesvirus 1)、獼猴疱疹病毒1(cercopithecine herpesvirus 1)、獼猴疱疹病毒2、金迪普拉病毒(Chandipura virus)、張格羅拉病毒(Changuinola virus)、河鯰病毒(channel catfish virus)、沙勒維爾病毒(Charleville virus)、水痘病毒(chickenpox virus)、屈公病毒(Chikungunya virus)、黑猩猩疱疹病毒(chimpanzee herpesvirus)、鰱魚呼腸孤病毒(chub reovirus)、大麻哈魚病毒(chum salmon virus)、科卡爾病毒(Cocal virus)、銀鮭呼腸孤病毒(Coho salmon reovirus)、媾疹病毒 (coital exanthema virus)、科羅拉多壁虱熱病毒(Colorado tick fever virus)、科羅拉多蜱傳熱症病毒屬(Coltivirus)、哥倫比亞SK病毒(Columbia SK virus)、感冒病毒、觸染性膿皰病毒(contagious eethyma virus)、觸染性膿皰型皮膚炎病毒、冠狀病毒、科里帕塔病毒(Corriparta virus)、鼻黏膜炎病毒、牛痘病毒、科沙奇病毒(coxsackie virus)、CPV(細胞質多角體病毒)、板球運動麻痹病毒、克里米亞-岡果出血熱病毒(Crimean-Congo hemorrhagic fever virus)、喉炎相關病毒、隱病毒(Cryptovirus)、質型多角體病毒(Cypovirus)、巨細胞病毒、巨細胞病毒群、細胞質多角體病毒、鹿乳突狀瘤病毒、δ逆轉錄病毒屬、登革熱病毒、濃核病毒、依賴病毒、多理病毒(Dhori virus)、文憑病毒(diploma virus)、果蠅C病毒、鴨B型肝炎病毒、鴨肝炎病毒1、鴨肝炎病毒2、十二指腸病毒、杜文海格病毒病毒(Duvenhage virus)、變形翼形病毒DWV、東部馬腦炎、東部馬腦脊髓炎病毒、EB病毒、埃博拉病毒、類埃博拉病毒、回波病毒(echo virus)、埃可病毒、埃可病毒10、埃可病毒28、埃可病毒9、脫腳病病毒、EEE病毒、EIA病毒、EIA病毒、腦炎病毒、腦心肌炎群病毒、腦心肌炎病毒、腸病毒、酶升高病毒、酶升高病毒(LDH)、傳染性出血熱病毒、流行性出血性疾病病毒、埃-巴二氏病毒(Epstein-Barr virus)、馬α疱疹病毒1(equid alphaherpesvirus 1)、馬α疱疹病毒4、馬疱疹病毒2、馬流產病毒、馬動脈炎病毒、馬腦病病毒、馬感染性貧血病毒、馬麻疹病毒、馬鼻肺炎病毒、馬鼻病毒、艾本那戈病毒(Eubenangu virus)、歐洲麋鹿乳突狀瘤病毒、歐洲豬發熱病毒、沼澤地病毒、艾雅克病毒(Eyach virus)、貓疱疹病毒1、貓杯狀病毒、貓纖維肉瘤病毒、貓疱疹病毒、貓免疫缺陷病毒、貓感染性腹膜炎病毒、貓白血病/肉瘤病毒、 貓白血病病毒、貓泛白血球減少症病毒、貓細小病毒、貓肉瘤病毒、貓融合病毒、纖絲病毒、弗朗德病毒(Flanders virus)、黃病毒、口蹄病病毒、摩根堡病毒(Fort Morgan virus)、四角漢坦病毒(Four Corners hantavirus)、家禽腺病毒1、鳥痘病毒、弗蘭德病毒(Friend virus)、γ逆轉錄病毒、GB肝炎病毒、GB病毒、德國麻疹病毒、蓋塔病毒(Getah virus)、長臂猿白血病病毒、腺發熱病毒、山羊痘病毒(goatpox virus)、金幣病毒(golden shinner virus)、枯葉蛾病毒(Gonometa virus)、鵝細小病毒、顆粒體病毒、格羅斯氏病毒(Gross' virus)、地松鼠B型肝炎病毒、A群蟲媒病毒(group A arbovirus)、瓜納里托病毒(Guanarito virus)、天竺鼠巨細胞病毒(guinea pig cytomegalovirus)、天竺鼠C型病毒、漢坦病毒(Hantaan virus)、漢坦病毒(Hantavirus)、硬殼蛤呼腸孤病毒、野兔纖維瘤病毒、HCMV(人類巨細胞病毒)、血球吸附病毒2、日本之血球凝集病毒、出血熱病毒、亨德拉病毒、亨尼病毒、嗜肝DNA病毒、A型肝炎病毒、B型肝炎病毒群、C型肝炎病毒、D型肝炎病毒、δ型肝炎病毒、E型肝炎病毒、F型肝炎病毒、G型肝炎病毒、非A非B型肝炎病毒、肝炎病毒、肝炎病毒(非人類)、腦脊髓炎呼腸孤病毒3、肝病毒、蒼鷺B型肝炎病毒、B型疱疹病毒、單純疱疹病毒、單純疱疹病毒1、單純疱疹病毒2、疱疹病毒、疱疹病毒7、蛛猴疱疹病毒、人單疱疹病毒、疱疹病毒感染、松鼠猴疱疹病毒、豬疱疹病毒、水痘疱疹病毒、J型高地病毒(Highlands J virus)、牙鮃棒狀病毒(Hirame rhabdovirus)、豬瘟病毒、人類腺病毒2、人類α疱疹病毒1、人類α疱疹病毒2、人類α疱疹病毒3、人類B型嗜淋巴細胞的病毒、人類β疱疹病毒5、人類冠狀病毒、人類巨細胞病毒群、人類泡沫病毒、人類γ疱疹病毒4、人類γ疱疹病毒6、人類A型肝炎病毒、人類疱 疹病毒1群、人類疱疹病毒2群、人類疱疹病毒3群、人類疱疹病毒4群、人類疱疹病毒6、人類疱疹病毒8、人類免疫缺陷病毒、人類免疫缺陷病毒1、人類免疫缺陷病毒2、人類乳突狀瘤病毒、人類T細胞白血病病毒、人類T細胞白血病病毒I、人類T細胞白血病病毒II、人類T細胞白血病病毒III、人類T細胞淋巴瘤病毒I、人類T細胞淋巴瘤病毒II、第1型人類T細胞嗜淋巴細胞的病毒、第2型人類T細胞嗜淋巴細胞病毒、人類T嗜淋巴細胞病毒I、人類T嗜淋巴細胞病毒II、人類T嗜淋巴細胞的病毒III、姬蜂病毒(Ichnovirus)、嬰兒胃腸炎病毒、感染性牛鼻氣管炎病毒、感染姬蜂病毒(Ichnovirus)、嬰兒胃腸炎病毒、感染性牛鼻氣管炎病毒、感染性造血壞死病毒、感染性胰臟壞死病毒、流感病毒A、流感病毒B、流感病毒C、流感病毒D、流感病毒pr8、昆蟲虹彩病毒、昆蟲病毒、姬蜂病毒、日本B病毒、日本腦炎病毒、JC病毒、胡寧病毒、卡波西氏肉瘤相關之疱疹病毒、克麥羅沃病毒(Kemerovo virus)、克氏大鼠病毒(Kilham's rat virus)、克拉瑪斯病毒(Klamath virus)、科隆各病毒(Kolongo virus)、韓國出血熱病毒(Korean hemorrhagic fever virus)、庫姆巴病毒(kumba virus)、科薩努爾森林疾病病毒(Kysanur forest disease virus)、孜拉加奇病毒(Kyzylagach virus)、拉克羅斯病毒(La Crosse virus)、乳酸去氫酶升高症病毒(lactic dehydrogenase elevating virus)、乳酸去氫酶病毒、拉各斯蝙蝠病毒(Lagos bat virus)、葉猴病毒(Langur virus)、兔細小病毒(lapine parvovirus)、拉沙熱病毒(Lassa fever virus)、拉沙病毒(Lassa virus)、潛伏大鼠病毒(latent rat virus)、LCM病毒、漏症病毒(Leaky virus)、慢病毒(Lentivirus)、野兔痘病毒(Leporipoxvirus)、白血病病毒(leukemia virus)、白血病病毒(leukovirus)、疙瘩皮膚病病毒、淋巴結病相關病毒、 淋巴潛隱病毒(Lymphocryptovirus)、淋巴球性脈絡叢腦膜炎病毒(lymphocytic choriomeningitis virus)、淋巴增生病毒群、馬丘波病毒(Machupo virus)、瘋癢病病毒(mad itch virus)、哺乳動物B型腫瘤病毒群、哺乳動物B型反轉錄病毒、哺乳動物C型反轉錄病毒群、哺乳動物D型反轉錄病毒、乳房腫瘤病毒、馬普埃拉病毒(Mapuera virus)、馬堡病毒(Marburg virus)、類馬堡病毒(Marburg-like virus)、梅森輝瑞猴子病毒(Mason Pfizer monkey virus)、哺乳動物腺病毒屬、馬雅羅病毒(Mayaro virus)、ME病毒、麻疹病毒、曼拉角病毒(Menangle virus)、門戈病毒(Mengo virus)、門戈病毒(Mengovirus)、米德爾堡病毒(Middelburg virus)、擠奶員結節病毒(milkers nodule virus)、貂腸炎病毒、小鼠之微小病毒、MLV相關病毒、MM病毒、莫科拉病毒(Mokola virus)、軟疣痘病毒(Molluscipoxvirus)、傳染性軟疣病毒(Molluscum contagiosum virus)、猴子B病毒、猴痘病毒、單股負鏈病毒(Mononegavirale)、麻疹病毒、埃爾崗蝙蝠病毒(Mount Elgon bat virus)、小鼠巨細胞病毒、小鼠腦脊髓炎病毒、小鼠肝炎病毒、小鼠k病毒、小鼠白血病病毒、小鼠乳房腫瘤病毒、小鼠微小病毒、小鼠肺炎病毒、小鼠脊髓灰白質炎病毒、小鼠多瘤病毒、小鼠肉瘤病毒、鼠痘病毒、莫三比克病毒(Mozambique virus)、穆坎布病毒(Mucambo virus)、黏膜疾病病毒、腮腺炎病毒、鼠β疱疹病毒1(murid betaherpesvirus 1)、鼠巨細胞病毒2、鼠巨細胞病毒群、鼠腦脊髓炎病毒、鼠肝炎病毒、鼠白血病病毒、鼠節結誘導病毒、鼠多瘤病毒、鼠肉瘤病毒、鼠巨細胞病毒、莫雷山谷腦炎病毒、黏液瘤病毒、黏液病毒、多形黏液病毒、腮腺炎黏液病毒(Myxovirus parotitidis)、奈洛比綿羊疾病病毒(Nairobi sheep disease virus)、內羅畢病毒(Nairovirus)、內 羅必病毒(Nanirnavirus)、納里瓦病毒(Nariva virus)、恩度摩病毒(Ndumo virus)、利瑟林病毒(Neethling virus)、納爾遜月桂病毒(Nelson Bay virus)、親神經病毒、新世界沙粒狀病毒、新生兒肺炎病毒、新城雞瘟病毒、尼帕病毒、非致細胞病變病毒、諾沃克病毒(Norwalk virus)、細胞核多角體病毒(NPV)、乳頭頸病毒、奧-奈氏病毒(O'nyong'nyong virus)、奧克爾布病毒(Ockelbo virus)、致癌病毒、致癌類病毒粒子、RNA腫瘤病毒、環狀病毒、Orf病毒、奧羅普切病毒(Oropouche virus)、正肝炎DNA病毒、正黏病毒、正痘病毒、正呼腸孤病毒屬、奧輪穀(Orungo)、綿羊乳突狀瘤病毒、綿羊卡他性發熱病毒、梟猴疱疹病毒、巴尼亞姆病毒(virus)、乳突狀瘤病毒、棉尾兔乳突狀瘤病毒、乳多泡病毒、副流感病毒、第1型副流感病毒、第2型副流感病毒、第3型副流感病毒、第4型副流感病毒、副黏病毒、副痘病毒、副牛痘病毒、細小病毒、細小病毒B19、細小病毒群、瘟病毒、白蛉熱病毒屬、海豹犬瘟熱病毒、小脫氧糖核酸病毒、小RNA病毒、豬巨細胞病毒-鴿痘病毒、帛黎病毒(Piry virus)、皮春納病毒(Pixuna virus)、小鼠之肺炎病毒、肺病毒、脊髓灰白質炎病毒(poliomyelitis)、脊髓灰白質炎病毒(poliovirus)、多分DNA病毒(Polydnavirus)、多面形病毒、多瘤病毒(polyoma virus)、多瘤病毒(Polyomavirus)、牛多瘤病毒、獼猴多瘤病毒、人類多瘤病毒2、鼠多瘤病毒1(Polyomavirus maccacae1)、鼠多瘤病毒1(Polyomavirus muris 1)、鼠多瘤病毒2、狒狒多瘤病毒1(Polyomavirus papionis 1)、狒狒多瘤病毒2、棉尾兔多瘤病毒、猿疱疹病毒1、豬流行性下痢病毒(porcine epidemic diarrhea virus)、豬血球凝集腦脊髓炎病毒、豬細小病毒、豬傳染性胃腸炎病毒、豬C型病毒、痘病毒、痘病毒、天花痘病毒、可能性希 爾病毒(Prospect Hill virus)、原病毒、偽牛痘病毒、假性狂犬病病毒、鸚鵡痘病毒、鵪鶉痘病毒、兔纖維瘤病毒、兔腎臟空泡病毒、兔乳突狀瘤病毒、狂犬病病毒、洗熊細小病毒、洗熊痘病毒、蘭尼克特病毒(Ranikhet virus)、大鼠巨細胞病毒、大鼠細小病毒、大鼠病毒、勞舍爾氏病毒(Rauscher's virus)、重組痘瘡病毒、重組病毒、呼腸孤病毒、呼腸孤病毒1、呼腸孤病毒2、呼腸孤病毒3、爬行動物C型病毒、呼吸道感染病毒、呼吸道合胞病毒、呼吸病毒、網狀內皮細胞增生病病毒、棒狀病毒、卡碧雅棒狀病毒(Rhabdovirus carpia)、猴病毒(Rhadinovirus)、鼻病毒、菌病毒(Rhizidiovirus)、東非瑞夫特河谷羊熱病病毒、賴利氏病毒(Riley's virus)、牛瘟病毒、RNA腫瘤病毒、羅斯河病毒、輪狀病毒屬、麻疹病毒、勞斯肉瘤病毒、風疹病毒、風疹病毒、風疹病毒屬、俄羅斯秋季腦炎病毒、SA11猿猴病毒、SA2病毒、薩比亞病毒(Sabia virus)、鷺山病毒、松鼠猴疱疹病毒1、唾液腺病毒、沙蠅發熱病毒群、聖德吉姆巴病毒(Sandjimba virus)、SARS病毒、SDAV(唾液淚腺炎病毒)、海豹痘病毒、勝利基森林病毒(Semliki Forest Virus)、首爾病毒、綿羊痘病毒、休普氏纖維瘤病毒、肖普乳頭瘤病毒(Shope papilloma virus)、猿猴泡沫狀病毒、猿猴A型肝炎病毒、猿猴人類免疫缺乏病毒、猿猴免疫缺乏病毒、猿猴副流感病毒、猿猴T細胞淋巴病毒、猿猴病毒、猿猴病毒40、單純疱疹病(Simplexvirus)、辛諾柏病毒(Sin Nombre virus)、辛得比斯病毒(Sindbis virus)、天花病毒、南美出血熱病毒、麻雀痘病毒、泡沫病毒、松鼠纖維瘤病毒、松鼠猴子反轉錄病毒、SSV1病毒群、第I型STLV(猿猴T嗜淋巴細胞病毒)、第II型STLV(猿猴T嗜淋巴細胞病毒)、第III型STLV(猿猴T嗜淋巴細胞病毒)、口腔炎丘疹病毒、頜下病毒、豬α疱疹病毒1、 豬疱疹病毒2、豬痘病毒、沼澤發熱病毒、豬痘病毒、瑞士小鼠白血病病毒、TAC病毒、塔卡里伯複合病毒(Tacaribe complex virus)、塔卡里伯病毒(Tacaribe virus)、特納河痘病毒(Tanapox virus)、沙鼠痘病毒、丁鱥呼腸孤病毒、蒂勒氏腦脊髓炎病毒(Theiler's encephalomyelitis virus)、蒂勒氏病毒、托高土病毒(Thogoto virus)、索托帕拉雅病毒(Thottapalayam virus)、蟲媒腦炎病毒、刁曼病毒(Tioman virus)、披衣病毒、環曲病毒屬、腫瘤病毒、圖帕伊病毒(Tupaia virus)、火雞鼻氣管炎病毒、火雞痘病毒、C型反轉錄病毒、D型腫瘤病毒、D型反轉錄病毒群、潰瘍性疾病棒狀病毒、烏納病毒(Una virus)、尤尤庫尼米病毒群(Uukuniemi virus group)、痘瘡病毒、空泡病毒、水痘帶狀皰狀病毒、水痘病毒、天花病毒(Varicola virus)、痘瘡主要病毒、天花病毒(variola virus)、瓦辛伊修疾病病毒(Vasin Gishu disease virus)、VEE病毒、委內瑞拉馬腦炎病毒、委內瑞拉馬腦脊髓炎病毒、委內瑞拉出血熱病毒、水泡性口炎病毒、水泡性病毒(Vesiculovirus)、維琉斯克病毒、毒蛇反轉錄病毒、病毒性出血性敗血症病毒、維斯納-梅迪病毒(Visna Maedi virus)、維斯納病毒、田鼠痘病毒、VSV(水泡性口炎病毒)、沃勒爾病毒(Wallal virus)、沃里戈病毒(Warrego virus)、疣病毒、WEE病毒、西尼羅河病毒(West Nile virus)、西部馬腦炎病毒、西部馬腦脊髓炎病毒、瓦塔羅阿病毒(Whataroa virus)、冬季嘔吐病毒、土拔鼠B型肝炎病毒、毛猴肉瘤病毒、傷口腫瘤病毒、WRSV病毒、亞巴猴腫瘤病毒、亞巴病毒、亞塔痘病毒屬、黃熱病病毒或尤格波格丹諾夫奇病毒(Yug Bogdanovac virus)。
在一些實施例中，病原性感染由反轉錄病毒所致。例示性反轉錄病毒包括(但不限於)人類免疫缺陷病毒(HIV)、人類T細胞白血病病 毒(HTLV)、莫洛尼鼠白血病病毒(MuLV)、鼠乳房腫瘤病毒(MMTV)、禽白血病及肉瘤病毒或梅森-輝瑞猴病毒。
在一些實施例中，向具有反轉錄病毒感染或潛伏期期間之受試者投與本文所述之細胞激素結合物(例如IL-2結合物)以減輕及/或消除處於靜息期之感染細胞。在一些情況下，反轉錄病毒包含人類免疫缺陷病毒(HIV)、人類T細胞白血病病毒(HTLV)、莫洛尼鼠白血病病毒(MuLV)、鼠乳房腫瘤病毒(MMTV)、禽白血病及肉瘤病毒或梅森-輝瑞猴病毒。在一些情況下，細胞激素結合物重新引導CD8+ T細胞來識別及消除處於靜息期之感染細胞。
在一些情況下，細胞激素結合物係IL-2結合物。在一些情況下，向具有反轉錄病毒感染或潛伏期期間之受試者投與IL-2結合物以減輕及/或消除處於靜息期之感染細胞。在一些情況下，反轉錄病毒包含人類免疫缺陷病毒(HIV)、人類T細胞白血病病毒(HTLV)、莫洛尼鼠白血病病毒(MuLV)、鼠乳房腫瘤病毒(MMTV)、禽白血病及肉瘤病毒或梅森-輝瑞猴病毒。在一些情況下，IL-2結合物重新引導CD8+ T細胞以識別及消除處於靜息期之感染細胞。在另外情況下，向受試者投與IL-2結合物與抗反轉錄病毒療法之組合。
在一些實施例中，反轉錄病毒係HIV。在一些情況下，向具有後天性免疫缺乏症候群(AIDS)或在潛伏期期間之受試者投與本文所述之細胞激素結合物(例如IL-2結合物)以減輕及/或消除處於靜息期之HIV感染細胞(例如CD4+ T細胞)。在一些情況下，細胞激素結合物係IL-2結合物。在一些情況下，向受試者投與IL-2結合物與抗反轉錄病毒療法之組合。例示性HIV抗反轉錄病毒療法包括：
核苷逆轉錄酶抑制劑(NRTI)，諸如阿巴卡韋(abacavir)、安卓西他賓(emtricitabine)、拉米夫定(lamivudine)、反丁烯二田諾弗地索普西(tenofovir disoproxil fumarate)及齊多夫定(zidovudine)；
非核苷逆轉錄酶抑制劑(NNRTI)，諸如依法韋侖(efavirenz)、依曲韋林(etravirine)、奈韋拉平(nevirapine)或利匹韋林(rilpivirine)；
蛋白酶抑制劑(PI)，諸如阿紮那韋(atazanavir)、地瑞那韋(darunavir)、夫沙那韋(fosamprenavir)、利托那韋(ritonavir)、沙奎那韋(saquinavir)及替拉那韋(tipranavir)；
融合抑制劑，諸如恩夫韋地(enfuvirtide)；
CCR5拮抗劑，諸如馬拉維若(maraviroc)；
整合酶抑制劑，諸如都魯拉韋(dolutegravir)及雷特格韋(raltegravir)；
附著後抑制劑，諸如伊利祖單抗(ibalizumab)；
藥物動力學增強劑，諸如考比西他(cobicistat)；及
混合物，諸如阿巴卡韋及拉米夫定；阿巴卡韋、都魯拉韋及拉米夫定；阿巴卡韋、拉米夫定及齊多夫定；阿紮那韋及考比西他；比替拉韋(bictegravir)、安卓西他賓及田諾弗艾拉酚胺(tenofovir alafenamide)；地瑞那韋及考比西他；都魯拉韋及利匹韋林；依法韋侖、安卓西他賓及反丁烯二酸田諾弗地索普西；依法韋侖、拉米夫定及反丁烯二酸田諾弗地索普西；依法韋侖、拉米夫定及反丁烯二酸田諾弗地索普西；埃替格韋、考比西他、安卓西他賓及反丁烯二酸田諾弗艾拉酚胺；埃替格韋、考比西他、安卓西他賓及反丁烯二酸田諾弗地索普西；安卓西他 賓、利匹韋林及田諾弗艾拉酚胺；安卓西他賓、利匹韋林及反丁烯二酸田諾弗地索普西；安卓西他賓及田諾弗艾拉酚胺；安卓西他賓及反丁烯二酸田諾弗地索普西；拉米夫定及反丁烯二酸田諾弗地索普西；拉米夫定及齊多夫定；及咯匹那韋(lopinavir)及利托那韋。
在一些情況下，向受試者投與IL-2結合物與抗反轉錄病毒療法之組合，該抗反轉錄病毒療法係諸如核苷逆轉錄酶抑制劑(NRTI)，諸如阿巴卡韋、安卓西他賓、拉米夫定、反丁烯二酸田諾弗地索普西及齊多夫定；非核苷逆轉錄酶抑制劑(NNRTI)，諸如依法韋侖、依曲韋林、奈韋拉平或利匹韋林；蛋白酶抑制劑(PI)，諸如阿紮那韋、地瑞那韋、夫沙那韋、利托那韋、沙奎那韋及替拉那韋；融合抑制劑，諸如恩夫韋地；CCR5拮抗劑，諸如馬拉維若；整合酶抑制劑，諸如都魯拉韋及雷特格韋；附著後抑制劑，諸如伊利祖單抗；藥物動力學增強劑，諸如考比西他；或混合物，諸如阿巴卡韋及拉米夫定；阿巴卡韋、都魯拉韋及拉米夫定；阿巴卡韋、拉米夫定及齊多夫定；阿紮那韋及考比西他；比替拉韋、安卓西他賓及田諾弗艾拉酚胺；地瑞那韋及考比西他；都魯拉韋及利匹韋林；依法韋侖、安卓西他賓及反丁烯二酸田諾弗地索普西；依法韋侖、拉米夫定及反丁烯二酸田諾弗地索普西；依法韋侖、拉米夫定及反丁烯二酸田諾弗地索普西；埃替格韋、考比西他、安卓西他賓及反丁烯二酸田諾弗艾拉酚胺；埃替格韋、考比西他、安卓西他賓及反丁烯二酸田諾弗地索普西；安卓西他賓、利匹韋林及田諾弗艾拉酚胺；安卓西他賓、利匹韋林及反丁烯二酸田諾弗地索普西；安卓西他賓及田諾弗艾拉酚胺；安卓西他賓及反丁烯二酸田諾弗地索普西；拉米夫定及反丁烯二酸田諾弗地索普西；拉米夫定及齊多夫定；及咯匹那韋及利托那韋。
在一些實施例中，病毒係肝炎病毒，例如A型、B型、C型、D型或E型肝炎。在一些情況下，向具有肝炎感染或潛伏期期間之受試者投與本文所述之細胞激素結合物(例如IL-2結合物)以減輕及/或消除處於靜息期之感染細胞。在一些情況下，細胞激素結合物重新引導CD8+ T細胞來識別及消除處於靜息期之感染細胞。
在一些情況下，細胞激素結合物係IL-2結合物。在一些情況下，向具有肝炎感染或潛伏期期間之受試者投與IL-2結合物以減輕及/或消除處於靜息期之感染細胞。在一些情況下，IL-2結合物重新引導CD8+ T細胞以識別及消除處於靜息期之感染細胞。在一些情況下，向受試者投與IL-2結合物與抗病毒療法之組合。用於肝炎之例示性抗病毒療法包括利巴韋林(ribavirin)；NS3/4A蛋白酶抑制劑，諸如帕瑞普韋和(paritaprevir)、西咪匹韋(simeprevir)及革佐匹韋(grazoprevir)；NS5A蛋白酶抑制劑，諸如利帕斯韋(ledipasvir)、奧比他韋(ombitasvir)、艾巴司韋(elbasvir)及達拉他韋(daclatasvir)；NS5B核苷酸核苷及非核苷聚合酶抑制劑，諸如索非布韋(sofosbuvir)及達薩布韋(dasabuvir)；及組合，諸如利帕斯韋-索非布韋、達薩布韋-奧比他韋-帕瑞普韋和-利托那韋；艾巴司韋-革佐匹韋、奧比他韋-帕瑞普韋和-利托那韋、索非布韋-維帕他韋(velpatasvir)、索非布韋-維帕他韋-沃西拉韋(voxilaprevir)及格卡匹韋(glecaprevir)-匹布他韋(pibrentasvir)；及干擾素，諸如聚乙二醇化干擾素α-2a、聚乙二醇化干擾素α-2b及干擾素α-2b。在一些情況下，向受試者投與IL-2結合物與以下之組合：抗病毒療法，諸如利巴韋林；NS3/4A蛋白酶抑制劑，諸如帕瑞普韋和、西咪匹韋及革佐匹韋；NS5A蛋白酶抑制劑，諸如利帕斯韋、奧比他韋、艾巴司韋及達拉他韋；NS5B核苷酸/核苷 及非核苷聚合酶抑制劑，諸如索非布韋及達薩布韋；及組合，諸如利帕斯韋-索非布韋、達薩布韋-奧比他韋-帕瑞普韋和-利托那韋；艾巴司韋-革佐匹韋、奧比他韋-帕瑞普韋和-利托那韋、索非布韋-維帕他韋、索非布韋-維帕他韋-沃西拉韋、及格卡匹韋-匹布他韋；及干擾素，諸如聚乙二醇化干擾素α-2a、聚乙二醇化干擾素α-2b及干擾素α-2b。
細胞群體擴增之方法
在一些實施例中，本文另外描述擴增例如CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶細胞、NK細胞及/或NKT細胞群體之淋巴細胞群體之方法，或擴增Treg細胞群體之方法。在一些情況下，該方法包含使細胞與本文所述之細胞激素結合物接觸及使細胞激素與細胞激素受體相互作用以形成複合物，其中複合物刺激不同淋巴細胞群體之擴增。
在一些情況下，擴增CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶細胞、自然殺手(NK)細胞或自然殺手T(NKT)細胞群體之方法包含使細胞群體與上文所述之分離及修飾之IL-2多肽接觸足以誘導與IL-2Rβ形成複合物之時間，藉此刺激Teff及/或NK細胞群體之擴增。在一些情況下，擴增CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶細胞、NK細胞及/或NKT細胞群體之方法包含(a)使細胞群體與本文所述之IL-2結合物接觸；及(b)使IL-2與IL-2Rβ及IL-2Rγ次單元相互作用以形成IL-2/IL-2Rβγ複合物；其中IL-2結合物具有降低之與IL-2Rα次單元之親和力，且其中IL-2/IL-2Rβγ複合物刺激CD4+輔助細胞、CD8+效應初始及記憶細胞、NK細胞及/或NKT細胞之擴增。如上文所述，IL-2結合物包含分離及純化之IL-2多肽；及在選自以下之胺基酸位置結合至分離及純化之IL-2多肽的結合部分：K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E60、E61、E62、K64、 P65、E68、V69、N71、L72、M104、C105及Y107，其中胺基酸殘基之編號與SEQ ID NO：1相對應。在一些情況下，胺基酸位置選自K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E61、E62、E68、K64、P65、V69、L72及Y107。在一些情況下，胺基酸位置選自T37、R38、T41、F42、F44、Y45、E61、E62、E68、K64、P65、V69、L72及Y107。在一些情況下，胺基酸位置選自T37、R38、T41、F42、F44、Y45、E61、E62、E68、P65、V69、L72及Y107。在一些情況下，胺基酸位置選自T37、T41、F42、F44、Y45、P65、V69、L72及Y107。在一些情況下，胺基酸位置選自R38及K64。在一些情況下，胺基酸位置選自E61、E62及E68。在一些情況下，胺基酸位置在E62。
在一些情況下，IL-2結合物使細胞群體中之CD4+ T調節性(Treg)細胞擴增小於20%、15%、10%、5%或1%。在一些情況下，IL-2結合物不使細胞群體中之CD4+ Treg細胞擴增。在一些情況下，在與分離及修飾之IL-2多肽一起培育之後細胞群體中Teff細胞與Treg細胞之比率係至少2：1、3：1、4：1、5：1、6：1、7：1、8：1、9：1、10：1、20：1、50：1或100：1。在一些情況下，在與分離及修飾之IL-2多肽一起培育之後細胞群體中Teff細胞與Treg細胞之比率係約2：1、3：1、4：1、5：1、6：1、7：1、8：1、9：1、10：1、20：1、50：1或100：1。
在一些情況下，足以誘導與IL-2Rβ形成複合物之時間係至少5分鐘、10分鐘、15分鐘、20分鐘、30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、8小時、10小時、12小時、18小時、24小時、2天、3天、4天、5天、6天或7天。在一些情況下，足以誘導與IL-2Rβ形成複合物之時間係約5分鐘、10分鐘、15分鐘、20分鐘、30分鐘、1小時、2小時、3小 時、4小時、5小時、8小時、10小時、12小時、18小時、24小時、2天、3天、4天、5天、6天或7天。
在一些情況下，該方法係活體內方法。
在一些情況下，該方法係活體外方法。
在一些情況下，該方法係離體方法。
細胞激素多肽產生
在一些情況下，含有天然胺基酸突變抑或非天然胺基酸突變之本文所述之細胞激素(例如介白素、IFN或TNF)多肽以重組方式產生或以化學方式合成。在一些情況下，本文所述之細胞激素(例如IL-2)多肽例如藉由宿主細胞系統抑或在中無細胞系統以重組方式產生。
在一些情況下，細胞激素(例如IL-2)多肽經由宿主細胞系統以重組方式產生。在一些情況下，宿主細胞係真核細胞(例如哺乳動物細胞、昆蟲細胞、酵母細胞或植物細胞)或原核細胞(例如革蘭氏陽性細菌或革蘭氏陰性細菌)。在一些情況下，真核宿主細胞係哺乳動物宿主細胞。在一些情況下，哺乳動物宿主細胞係穩定細胞株，或已將所關注遺傳物質併入至其自身基因組中且在許多代細胞分裂之後具有表現遺傳物質產物之能力的細胞株。在其他情況下，哺乳動物宿主細胞係短暫細胞株，或尚未將所關注遺傳物質併入至其自身基因組中且在許多代細胞分裂之後不具有表現遺傳物質產物之能力的細胞株。
例示性哺乳動物宿主細胞包括293T細胞株、293A細胞株、293FT細胞株、293F細胞、293 H細胞、A549細胞、MDCK細胞、CHO DG44細胞、CHO-S細胞、CHO-K1細胞、Expi293FTM細胞、Flp-InTM T-RExTM 293細胞株、Flp-InTM-293細胞株、Flp-InTM-3T3細胞株、 Flp-InTM-BHK細胞株、Flp-InTM-CHO細胞株、Flp-InTM-CV-1細胞株、Flp-InTM-Jurkat細胞株、FreeStyleTM 293-F細胞、FreeStyleTM CHO-S細胞、GripTiteTM 293 MSR細胞株、GS-CHO細胞株、HepaRGTM cells,T-RExTM Jurkat細胞株、Per.C6細胞、T-RExTM-293細胞株、T-RExTM-CHO細胞株及T-RExTM-HeLa細胞株。
在一些實施例中，真核宿主細胞係昆蟲宿主細胞。例示性昆蟲宿主細胞包括果蠅S2細胞、Sf9細胞、Sf21細胞、高FiveTM細胞及expresSF+®細胞。
在一些實施例中，真核宿主細胞係酵母宿主細胞。例示性酵母宿主細胞包括甲醇酵母(Pichia pastoris yeast)菌株，諸如GS115、KM71H、SMD1168、SMD1168H及X-33，及釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae yeast)菌株，諸如INVSc1。
在一些實施例中，真核宿主細胞係植物宿主細胞。在一些情況下，植物細胞包含來自海藻之細胞。例示性植物細胞株包括來自萊茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)137c或細長聚球藻(Synechococcus elongatus)PPC 7942之菌株。
在一些實施例中，宿主細胞係原核宿主細胞。例示性原核宿主細胞包括BL21、MachlTM、DH10BTM、TOP10、DH5α、DH10BacTM、OmniMaxTM、MegaXTM、DH12STM、INV110、TOP10F'、INVαF、TOP10/P3、ccdB Survival、PIR1、PIR2、Stbl2TM、Stbl3TM或Stbl4TM。
在一些情況下，適用於產生本文所述之IL-2多肽之聚核酸分子或載體包括源自真核抑或原核來源之任何適合的載體。例示性聚核酸 分子或載體包括來自細菌(例如大腸桿菌(E.coli))、昆蟲、酵母(例如甲醇酵母)、海藻或哺乳動物來源之載體。細菌性載體包括例如pACYC177、pASK75、pBAD載體系列、pBADM載體系列、pET載體系列、pETM載體系列、pGEX載體系列、pHAT、pHAT2、pMal-c2、pMal-p2、pQE載體系列、pRSET A、pRSET B、pRSET C、pTrcHis2系列、pZA31-Luc、pZE21-MCS-1、pFLAG ATS、pFLAG CTS、pFLAG MAC、pFLAG Shift-12c、pTAC-MAT-1、pFLAG CTC或pTAC-MAT-2。
昆蟲載體包括例如pFastBac1、pFastBac DUAL、pFastBac ET、pFastBac HTa、pFastBac HTb、pFastBac HTc、pFastBac M30a、pFastBact M30b、pFastBac、M30c、pVL1392、pVL1393、pVL1393 M10、pVL1393 M11、pVL1393 M12、FLAG載體(諸如pPolh-FLAG1或pPolh-MAT 2)或MAT載體(諸如pPolh-MAT1或pPolh-MAT2)。
酵母載體包括例如Gateway® pDESTTM 14載體、Gateway® pDESTTM 15載體、Gateway® pDESTTM 17載體、Gateway® pDESTTM 24載體、Gateway® pYES-DEST52載體、pBAD-DEST49 Gateway®目標載體、pAO815畢赤酵母載體、pFLD1甲醇酵母載體、pGAPZA、B及C甲醇酵母載體、pPIC3.5K畢赤酵母載體、pPIC6 A、B及C畢赤酵母載體、pPIC9K畢赤酵母載體、pTEF1/Zeo、pYES2酵母載體、pYES2/CT酵母載體、pYES2/NT A、B及C酵母載體或pYES3/CT酵母載體。
海藻載體包括例如pChlamy-4載體或MCS載體。
哺乳動物載體包括例如短暫表現載體或穩定表現載體。例示性哺乳動物短暫表現載體包括p3xFLAG-CMV 8、pFLAG-Myc-CMV 19、pFLAG-Myc-CMV 23、pFLAG-CMV 2、pFLAG-CMV 6a,b,c、 pFLAG-CMV 5.1、pFLAG-CMV 5a,b,c、p3xFLAG-CMV 7.1、pFLAG-CMV 20、p3xFLAG-Myc-CMV 24、pCMV-FLAG-MAT1、pCMV-FLAG-MAT2、pBICEP-CMV 3或pBICEP-CMV 4。例示性哺乳動物穩定表現載體包括pFLAG-CMV 3、p3xFLAG-CMV 9、p3xFLAG-CMV 13、pFLAG-Myc-CMV 21、p3xFLAG-Myc-CMV 25、pFLAG-CMV 4、p3xFLAG-CMV 10、p3xFLAG-CMV 14、pFLAG-Myc-CMV 22、p3xFLAG-Myc-CMV 26、pBICEP-CMV 1或pBICEP-CMV 2。
在一些情況下，無細胞系統用於產生本文所述之細胞激素(例如IL-2)多肽。在一些情況下，無細胞系統包含來自細胞之細胞質及/或細胞核組分之混合物，且適用於活體外核酸合成。在一些情況下，無細胞系統利用原核細胞組分。在其他情況下，無細胞系統利用真核細胞組分。在無細胞系統中根據例如果蠅細胞、爪蟾卵、古菌或HeLa細胞獲得核酸合成。例示性無細胞系統包括大腸桿菌S30提取物系統、大腸桿菌T7 S30系統或PURExpress®、XpressCF及XpressCF+。
無細胞轉譯系統各包含組分，諸如質體、mRNA、DNA、tRNA、合成酶、釋放因子、核糖體、伴隨蛋白、轉譯起始及延伸因子、天然及/或非天然胺基酸及/或用於蛋白質表現之其他組分。此類組分視情況經修飾以改良產率，增加合成速率，增加蛋白質產物保真度或併入非天然胺基酸。在一些實施例中，本文所述之細胞激素使用US 8,778,631；US 2017/0283469；US 2018/0051065；US 2014/0315245；或US 8,778,631中所述之無細胞轉譯系統合成。在一些實施例中，無細胞轉譯系統包含修飾之釋放因子，或甚至自系統移除一或多個釋放因子。在一些實施例中，無細胞轉譯系統包含降低之蛋白酶濃度。在一些實施例中，無 細胞轉譯系統包含具有用以編碼非天然胺基酸之再指定密碼子的修飾之tRNA。在一些實施例中，將用於併入非天然胺基酸之本文所述之合成酶用於無細胞轉譯系統中。在一些實施例中，tRNA在添加至無細胞轉譯系統之前使用酶促或化學方法預負載有非天然胺基酸。在一些實施例中，用於無細胞轉譯系統之組分獲自修飾之生物體，諸如修飾之細菌、酵母或其他生物體。
在一些實施例中，經由表現宿主系統抑或經由無細胞系統產生環狀排列形式之細胞激素(例如IL-2)多肽。
產生包含非天然胺基酸之細胞激素多肽
本發明可使用正交或擴增之基因密碼，其中分配存在於細胞激素(例如IL-2)多肽之核酸序列中之一或多個特異性密碼子以編碼非天然胺基酸，以使得其可藉由使用正交tRNA合成酶/tRNA對以基因方式併入至細胞激素中(例如IL-2)。正交tRNA合成酶/tRNA對能夠使tRNA加載非天然胺基酸且能夠響應於密碼子將該非天然胺基酸併入至多肽鏈中。
在一些情況下，密碼子係密碼子琥珀、赭石、蛋白石或四聯密碼子。在一些情況下，密碼子與將用以攜帶非天然胺基酸之正交tRNA相對應。在一些情況下，密碼子係琥珀。在其他情況下，密碼子係正交密碼子。
在一些情況下，密碼子係四聯密碼子，其可藉由正交核糖體核糖-Q1解碼。在一些情況下，四聯密碼子如Neumann等人，「Encoding multiple unnatural amino acids via evolution of a quadruplet-decoding ribosome」,Nature, 464(7287)：441-444(2010)中所示。
在一些情況下，用於本發明中之密碼子係重編碼密碼子，例如經替代密碼子置換之同義密碼子或罕見密碼子。在一些情況下，重編碼密碼子如Napolitano等人，「Emergent rules for codon choice elucidated by editing rare argine codons in Escherichia coli」,PNAS, 113(38)：E5588-5597(2016)中所述。在一些情況下，重編碼密碼子如Ostrov等人，「Design,synthesis,and testing toward a 57-codon genome」,Science 353(6301)：819-822(2016)中所述。
在一些情況下，利用非天然核酸使得將一或多個非天然胺基酸併入至細胞激素(例如IL-2)中。例示性非天然核酸包括(但不限於)尿嘧啶-5-基、次黃嘌呤-9-基(I)、2-胺基腺嘌呤-9-基、5-甲基胞嘧啶(5-me-C)、5-羥甲基胞嘧啶、黃嘌呤、次黃嘌呤、2-胺基腺嘌呤、腺嘌呤及鳥嘌呤之6-甲基及其他烷基衍生物、腺嘌呤及鳥嘌呤之2-丙基及其他烷基衍生物、2-硫尿嘧啶、2-硫胸腺嘧啶及2-硫胞嘧啶、5-鹵基尿嘧啶及胞嘧啶、5-丙炔基尿嘧啶及胞嘧啶、6-偶氮尿嘧啶、胞嘧啶及胸腺嘧啶、5-尿嘧啶(假尿嘧啶)、4-硫尿嘧啶、8-鹵基、8-胺基、8-巰基、8-硫烷基、8-羥基及其他8-取代腺嘌呤及鳥嘌呤、5-鹵基(尤其為5-溴)、5-三氟甲基及其他5-取代尿嘧啶及胞嘧啶、7-甲基鳥嘌呤及7-甲基腺嘌呤、8-氮鳥嘌呤及8-氮腺嘌呤、7-去氮鳥嘌呤及7-去氮腺嘌呤及3-去氮鳥嘌呤及3-去氮腺嘌呤。某些非天然核酸，諸如5-取代嘧啶、6-氮雜嘧啶及N-2取代嘌呤、N-6取代嘌呤、O-6取代嘌呤、2-胺基丙基腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶、5-丙炔基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、增加雙螺旋體形成之穩定性的彼等核酸、通用核酸、疏水性核酸、混雜核酸、大小擴增之核酸、氟化核酸、5-取代嘧啶、6-氮雜嘧啶及N-2、N-6及O-6取代嘌呤(包括2-胺基丙基腺嘌呤、5-丙 炔基尿嘧啶及5-丙炔基胞嘧啶)、5-甲基胞嘧啶(5-me-C)、5-羥甲基胞嘧啶、黃嘌呤、次黃嘌呤、2-胺基腺嘌呤、腺嘌呤及鳥嘌呤之6-甲基、其他烷基衍生物、腺嘌呤及鳥嘌呤之2-丙基及其他烷基衍生物、2-硫尿嘧啶、2-硫胸腺嘧啶及2-硫胞嘧啶、5-鹵基尿嘧啶、5-鹵基胞嘧啶、5-丙炔基(-C≡C-CH3)尿嘧啶、5-丙炔基胞嘧啶、嘧啶核酸之其他炔基衍生物、6-偶氮尿嘧啶、6-偶氮胞嘧啶、6-偶氮胸腺嘧啶、5-尿嘧啶(假尿嘧啶)、4-硫尿嘧啶、8-鹵基、8-胺基、8-硫醇基、8-硫烷基、8-羥基及其他8-取代腺嘌呤及鳥嘌呤、5-鹵基(尤其5-溴)、5-三氟甲基、其他5-取代尿嘧啶及胞嘧啶、7-甲基鳥嘌呤、7-甲基腺嘌呤、2-F-腺嘌呤、2-胺基-腺嘌呤、8-氮雜鳥嘌呤、8-氮雜腺嘌呤、7-去氮鳥嘌呤、7-去氮腺嘌呤、3-去氮鳥嘌呤、3-去氮腺嘌呤、三環嘧啶、啡噁嗪胞苷([5,4-b][1,4]苯并噁嗪-2(3H)-酮)、啡噻嗪胞苷(1H-嘧啶并[5,4-b][1,4]苯并噻嗪-2(3H)-酮)、G-鉗、啡噁嗪胞苷(例如9-(2-胺基乙氧基)-H-嘧啶并[5,4-b][1,4]苯并噁嗪-2(3H)-酮)、咔唑胞苷(2H-嘧啶并[4,5-b]吲哚-2-酮)、吡啶并吲哚胞苷(H-吡啶并[3',2'：4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-酮)、嘌呤或嘧啶鹼基經其他雜環置換之彼等物、7-去氮-腺嘌呤、7-去氮鳥苷、2-胺基吡啶、2-吡啶酮、氮雜胞嘧啶、5-溴胞嘧啶、溴尿嘧啶、5-氯胞嘧啶、氯化胞嘧啶、環胞嘧啶、胞嘧啶阿拉伯糖苷、5-氟胞嘧啶、氟嘧啶、氟尿嘧啶、5,6-二氫胞嘧啶、5-碘胞嘧啶、羥基脲、碘尿嘧啶、5-硝基胞嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-氟尿嘧啶及5-碘尿嘧啶、2-胺基腺嘌呤、6-硫-鳥嘌呤、2-硫-胸腺嘧啶、4-硫-胸腺嘧啶、5-丙炔基-尿嘧啶、4-硫-尿嘧啶、N4-乙基胞嘧啶、7-去氮鳥嘌呤、7-去氮-8-氮雜鳥嘌呤、5-羥基胞嘧啶、2'-脫氧尿苷、2-胺基-2'-去氧腺苷及美國專利第3,687,808號；第4,845,205號；第4,910,300號；第 4,948,882號；第5,093,232號；第5,130,302號；第5,134,066號；第5,175,273號；第5,367,066號；第5,432,272號；第5,457,187號；第5,459,255號；第5,484,908號；第5,502,177號；第5,525,711號；第5,552,540號；第5,587,469號；第5,594,121號；第5,596,091號；第5,614,617號；第5,645,985號；第5,681,941號；第5,750,692號；第5,763,588號；第5,830,653號及第6,005,096號；WO 99/62923；Kandimalla等人，(2001)Bioorg.Med.Chem.9：807-813；The Concise Encyclopedia of Polymer Science and Engineering,Kroschwitz,J.I.編，John Wiley & Sons,1990,858- 859；Englisch等人，Angewandte Chemie,International Edition,1991,30,613；及Sanghvi，第15章，Antisense Research and Applications,Crookeand Lebleu編，CRC Press,1993,273-288中所述之彼等核酸。另外鹼基修飾可見於例如美國專利第3,687,808號；Englisch等人，Angewandte Chemie，國際版，1991,30,613；及Sanghvi，第15章，Antisense Research and Applications，第289至302頁，Crooke及Lebleu編，CRC Press,1993中發現。
此項技術中可用包含各種雜環鹼基及各種糖部分(及糖類似物)之非天然核酸，且在一些情況下，核酸包括除天然產生之核酸之主要五種鹼基組分外之一種或若干種雜環鹼基。舉例而言，在一些情況下，雜環鹼基包括尿嘧啶-5-基、胞嘧啶-5-基、腺嘌呤-7-基、腺嘌呤-8-基、鳥嘌呤-7-基、鳥嘌呤-8-基、4-胺基吡咯并[2.3-d]嘧啶-5-基、2-胺基-4-側氧基吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基、2-胺基-4-側氧基吡咯并[2.3-d]嘧啶-3-基，其中嘌呤係經由9位置、嘧啶經由1位置、吡咯并嘧啶經由7位置且吡唑并嘧啶經由1位置附接至核酸之糖部分。
在一些實施例中，核苷酸類似物亦在磷酸酯部分經修飾。修飾之磷酸酯部分包括(但不限於)具有兩種核苷酸之間的鍵聯處之修飾且含有以下之磷酸酯部分：例如硫代磷酸酯；對掌性硫代磷酸酯；二硫代磷酸酯；磷酸三酯；胺基烷基磷酸三酯；甲基及其他烷基膦酸酯，包括3'-伸烷基膦酸酯及對掌性膦酸酯；亞膦酸酯；胺基磷酸酯，包括3'-胺基胺基磷酸酯及胺基烷基胺基磷酸酯；硫羰基胺基磷酸酯；硫羰基烷基膦酸酯；硫羰基烷基磷酸三酯及硼烷磷酸酯。應理解，在兩種核苷酸之間的此等磷酸酯或修飾之磷酸酯鍵聯可經由3'-5'鍵聯或2'-5'鍵聯，且該鍵聯含有反轉極性，諸如3'-5'至5'-3'或2'-5'至5'-2'。亦包括各種鹽、混合鹽及游離酸形式。大量美國專利教示製造及使用含有修飾之磷酸酯的核苷酸之方式且包括(但不限於)3,687,808；4,469,863；4,476,301；5,023,243；5,177,196；5,188,897；5,264,423；5,276,019；5,278,302；5,286,717；5,321,131；5,399,676；5,405,939；5,453,496；5,455,233；5,466,677；5,476,925；5,519,126；5,536,821；5,541,306；5,550,111；5,563,253；5,571,799；5,587,361；及5,625,050。
在一些實施例中，非天然核酸包括2',3'-二去氧基-2',3'-二去氫-核苷(PCT/US2002/006460)、5'-取代DNA及RNA衍生物(PCT/US2011/033961；Saha等人，J.Org Chem.,1995,60,788-789；Wang等人，Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters,1999,9,885-890；及Mikhailov等人，Nucleosides & Nucleotides,1991,10(1-3),339-343；Leonid等人，1995,14(3-5),901-905；及Eppacher等人，Helvetica Chimica Acta,2004,87,3004-3020；PCT/JP2000/004720；PCT/JP2003/002342；PCT/JP2004/013216；PCT/JP2005/020435； PCT/JP2006/315479；PCT/JP2006/324484；PCT/JP2009/056718；PCT/JP2010/067560)或製成具有修飾之鹼基的單磷酸酯之5'-取代單體(Wang等人，Nucleosides Nucleotides & Nucleic Acids,2004,23(1及2),317-337)。
在一些實施例中，非天然核酸包括在糖環之5'位置及2'位置之修飾(PCT/US94/02993)，諸如5'-CH2-取代2'-O-保護核苷(Wu等人，Helvetica Chimica Acta,2000,83,1127-1143及Wu等人，Bioconjugate Chem.1999,10,921-924)。在一些情況下，非天然核酸包括醯胺連接之核苷二聚體(已經製備用於併入至寡核苷酸中)，其中在該二聚體(5'至3')中之3'連接核苷包含2'-OCH3及5'-(S)-CH3(Mesmaeker等人，Synlett,1997,1287-1290)。非天然核酸可包括2'-取代5'-CH2(或O)修飾之核苷(PCT/US92/01020)。非天然核酸可包括5'-亞甲基膦酸酯DNA及RNA單體及二聚體(Bohringer等人，Tet.Lett.,1993,34,2723-2726；Collingwood等人，Synlett,1995,7,703-705；及Hutter等人，Helvetica Chimica Acta,2002,85,2777-2806)。非天然核酸可包括具有2'-取代之5'-膦酸酯單體(US2006/0074035)及其他修飾之5'-膦酸酯單體(WO1997/35869)。非天然核酸可包括5'-修飾之亞甲基膦酸酯單體(EP614907及EP629633)。非天然核酸可包括在5'及/或6'位置處包含羥基之5'或6'-膦酸酯核糖核苷之類似物(Chen等人，Phosphorus,Sulfur and Silicon,2002,777,1783-1786；Jung等人，Bioorg.Med.Chem.,2000,8,2501-2509；Gallier等人，Eur.J.Org.Chem.,2007,925-933；及Hampton等人，J.Med.Chem.,1976,19(8),1029-1033)。非天然核酸可包括具有5'-磷酸酯基之5'-膦酸酯去氧核苷單體及二聚體(Nawrot等人，Oligonucleotides,2006,16(1),68-82)。 非天然核酸可包括核苷，其具有6'-膦酸酯基，其中5'或/及6'位置未經取代或經硫基-第三丁基(SC(CH3)3)(及其類似物)取代；亞甲基胺基(CH2NH2)(及其類似物)或氰基(CN)(及其類似物)(Fairhurst等人，Synlett,2001,4,467-472；Kappler等人，J.Med.Chem.,1986,29,1030-1038；Kappler等人，J.Med.Chem.,1982,25,1179-1184；Vrudhula等人，J.Med.Chem.,1987,30,888-894；Hampton等人，J.Med.Chem.,1976,19,1371-1377；Geze等人，J.Am.Chem.Soc,1983,105(26),7638-7640；及Hampton等人，J.Am.Chem.Soc,1973,95(13),4404-4414)。
在一些實施例中，非天然核酸亦包括糖部分之修飾。在一些情況下，核酸含有一或多個核苷，其中糖基已得以修飾。此類糖修飾之核苷可賦予增強之核酸酶穩定性、增加之結合親和力或某些其他有益生物特性。在某些實施例中，核酸包含化學修飾之核呋喃糖環部分。化學修飾之核呋喃糖環之實例包括(但不限於)添加取代基(包括5'及/或2'取代基；將兩個環原子橋接以形成雙環核酸(BNA)；用S、N(R)或C(R1)(R2)(R=H、C1-C12烷基或保護基)置換核糖基環氧原子；及其組合。化學修飾糖之實例可在WO2008/101157、US2005/0130923及WO2007/134181中發現。
在一些情況下，修飾之核酸包含修飾之糖或糖類似物。因此，除核糖及去氧核糖之外，糖部分可為戊醣、去氧戊醣、己醣、去氧已醣、葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、來蘇糖或糖「類似物」環戊基。糖可呈哌喃糖基或呋喃糖基形式。糖部分可為核糖、去氧核糖、阿拉伯糖或2'-O-烷基核糖之呋喃糖苷，且該糖可以[α]或[β]變旋異構組態連接至對應雜環鹼基。糖修飾包括(但不限於)2'-烷氧基-RNA類似物、2'-胺基-RNA類似 物、2'-氟-DNA及2'-烷氧基-或胺基-RNA/DNA嵌合體。舉例而言，糖修飾可包括2'-O-甲基-尿苷或2'-O-甲基-胞嘧啶核苷。糖修飾包括2'-O-烷基-取代去氧核糖核苷及2'-O-乙二醇類核糖核苷。已知此等糖或糖類似物及對應「核苷」(其中此類糖或類似物連接至雜環鹼基(核酸鹼基))之製備。亦可進行糖修飾且與其他修飾組合。
對糖部分之修飾包括核糖及去氧核糖之天然修飾以及非天然修飾。糖修飾包括(但不限於)在2'位置處之以下修飾：OH；F；O-、S-或N-烷基；O-、S-或N-烯基；O-、S-或N-炔基；或O-烷基-O-烷基，其中烷基、烯基及炔基可為經取代或未經取代之C1至C10烷基或C2至C10烯基及炔基。2'糖修飾亦包括(但不限於)-O[(CH2)nO]m CH3、-O(CH2)nOCH3、-O(CH2)nNH2、-O(CH2)nCH3、-O(CH2)nONH2及-O(CH2)nON[(CH2)n CH3)]2，其中n及m係1至約10。
其他在2'位置處之修飾包括(但不限於)：C1至C10低碳烷基、經取代之低碳烷基、烷芳基、芳烷基、O-烷芳基、O-芳烷基、SH、SCH3、OCN、Cl、Br、CN、CF3、OCF3、SOCH3、SO2 CH3、ONO2、NO2、N3、NH2、雜環烷基、雜環烷芳基、胺基烷基胺基、聚烷基胺基、經取代之矽烷基、RNA裂解基團、報導基團、嵌入劑、用於改良寡核苷酸之藥物動力學特性之基團或用於改良寡核苷酸之藥效動力學特性之基團及具有類似特性之其他取代基。類似修飾亦可在糖上之其他位置處進行，尤其係3'末端核苷酸上之糖之3'位置或5'末端核苷酸之2'-5'連接寡核苷酸及5'位置。修飾之糖亦包括含有在橋接環氧處之修飾(諸如CH2及S)的修飾之糖。核苷酸糖類似物亦可具有糖模擬物，諸如環丁基部分，而非呋喃戊醣基糖。存在教示此類修飾之糖結構之製備且詳述且描述一系列鹼基修飾 之大量美國專利，諸如美國專利第4,981,957號；第5,118,800號；第5,319,080號；第5,359,044號；第5,393,878號；第5,446,137號；第5,466,786號；第5,514,785號；第5,519,134號；第5,567,811號；第5,576,427號；第5,591,722號；第5,597,909號；第5,610,300號；第5,627,053號；第5,639,873號；第5,646,265號；第5,658,873號；第5,670,633號；第4,845,205號；第5,130,302號；第5,134,066號；第5,175,273號；第5,367,066號；第5,432,272號；第5,457,187號；第5,459,255號；第5,484,908號；第5,502,177號；第5,525,711號；第5,552,540號；第5,587,469號；第5,594,121號、第5,596,091號；第5,614,617號；第5,681,941號；及第5,700,920號，各文獻以全文引用的方式併入本文中。
具有修飾之糖部分之核酸之實例包括(但不限於)包含5'-乙烯基、5'-甲基(R或S)、4'-S、2'-F、2'-OCH3及2'-O(CH2)2OCH3取代基之核酸。在2'位置處之取代基亦可選自烯丙基、胺基、疊氮基、硫基、O-烯丙基、O-(C1-C10烷基)、OCF3、O(CH2)2SCH3、O(CH2)2-O-N(Rm)(Rn)及O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn)，其中各Rm及Rn獨立地為H或經取代或未經取代之C1-C10烷基。
在某些實施例中，本文所述之核酸包括一或多種雙環核酸。在某些此類實施例中，雙環核酸包含在4'核糖基環原子與2'核糖基環原子之間的橋。在某些實施例中，本文中提供之核酸包括一或多種雙環核酸，其中橋包含4'至2'雙環核酸。此類4'至2'雙環核酸之實例包括(但不限於)以下式中之一者：4'-(CH2)-O-2'(LNA)；4'-(CH2)-S-2'；4'-(CH2)2-O-2'(ENA)；4'-CH(CH3)-O-2'及4'-CH(CH2OCH3)-O-2'及其類似物(參見美 國專利第7,399,845號)；4'-C(CH3)(CH3)-O-2'及其類似物(參見WO2009/006478；WO2008/150729；US2004/0171570；美國專利第7,427,672號；Chattopadhyaya等人，J.Org.Chem.,209,74,118-134及WO2008/154401)。亦參見例如：Singh等人，Chem.Commun.,1998,4,455-456；Koshkin等人，Tetrahedron,1998,54,3607-3630；Wahlestedt等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,2000,97,5633-5638；Kumar等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.,1998,8,2219-2222；Singh等人，J.Org.Chem.,1998,63,10035-10039；Srivastava等人，J.Am.Chem.Soc.,2007,129(26)8362-8379；Elayadi等人，Curr.Opinion Invens.Drugs,2001,2,558-561；Braasch等人，Chem.Biol,2001,8,1-7；Oram等人，Curr.Opinion Mol.Ther.,2001,3,239-243；美國專利第4,849,513號；第5,015,733號；第5,118,800號；第5,118,802號；第7,053,207號；第6,268,490號；第6,770,748號；第6,794,499號；第7,034,133號；第6,525,191號；第6,670,461號；及第7,399,845號；國際公開案第WO2004/106356號、第WO1994/14226號、第WO2005/021570號、第WO2007/090071號及第WO2007/134181號；美國公開案第US2004/0171570號、第US2007/0287831號及第US2008/0039618號；美國臨時申請案第60/989,574號、第61/026,995號、第61/026,998號、第61/056,564號、第61/086,231號、第61/097,787號及第61/099,844號；及國際申請案第PCT/US2008/064591號、第PCT US2008/066154號、第PCT US2008/068922號及第PCT/DK98/00393號。
在某些實施例中，核酸包含連接之核酸。核酸可使用任何間核酸鍵聯連接在一起。兩種主要類別之間核酸連接基團係藉由磷原子之 存在或不存在定義。代表性的含磷間核酸鍵包括(但不限於)磷酸二酯、磷酸三酯、甲基磷酸酯、胺基磷酸酯及硫代磷酸酯(P=S)。代表性不含磷間核酸連接基團包括(但不限於)亞甲基甲基亞胺基(-CH2-N(CH3)-O-CH2-)、硫基二酯(-O-C(O)-S-)、硫羰基胺基甲酸酯(-O-C(O)(NH)-S-)；矽氧烷(-O-Si(H)2-O-)；及N,N*-二甲基肼(-CH2-N(CH3)-N(CH3))。在某些實施例中，具有對掌性原子之間核酸鍵可製備為外消旋混合物、獨立的對映異構體(例如磷酸烷基酯及硫代磷酸酯)。非天然核酸可含有單一修飾。非天然核酸可含有多個在部分中之一者內或在不同部分之間的修飾。
對核酸之主鏈磷酸酯修飾包括(但不限於)膦酸甲酯、硫代磷酸酯、胺基磷酸酯(橋接或非橋接)、磷酸三酯、二硫代磷酸酯、二硫代磷醯酯(phosphodithioate)及硼烷磷酸酯，且可以任何組合形式使用。亦可使用其他非磷酸酯鍵聯。
在一些實施例中，主鏈修飾(例如甲基膦酸酯、硫代磷酸酯、磷醯胺酸及二硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯)可對修飾之核酸賦予免疫調節活性及/或增強其活體內穩定性。
在一些情況下，磷衍生物(或修飾之磷酸酯基)可連接至糖或糖類似物部分且可為單磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、膦酸烷基酯、硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、胺基磷酸酯或類似者。含有修飾之磷酸酯鍵聯或非磷酸酯鍵聯的例示性聚核苷酸可見於Peyrottes等人，1996,Nucleic Acids Res.24：1841-1848；Chaturvedi等人，1996,Nucleic Acids Res.24：2318-2323；及Schultz等人，(1996)Nucleic Acids Res.24：2966-2973；Matteucci,1997,「Oligonucleotide Analogs：an Overview」Oligonucleotides as Therapeutic Agents,(Chadwick及Cardew編)John Wiley and Sons,New York,NY；Zon,1993,「Oligonucleoside Phosphorothioates」Protocols for Oligonucleotides and Analogs,Synthesis and Properties,Humana Press，第165-190頁；Miller等人，1971,JACS 93：6657-6665；Jager等人，1988,Biochem.27：7247-7246；Nelson等人，1997,JOC 62：7278-7287；美國專利第5,453,496號；及Micklefield,2001,Curr.Med.Chem.8：1157-1179。
在一些情況下，主鏈修飾包含用替代部分(諸如陰離子、中性或陽離子基團)替代磷酸二酯鍵聯。此類修飾之實例包括：陰離子核苷間鍵；N3'至P5'胺基磷酸酯修飾；硼烷磷酸酯DNA；促寡核苷酸；中性核苷間鍵聯，諸如甲基磷酸酯；醯胺連接DNA；亞甲基(甲基亞胺基)鍵聯；甲縮醛及硫代甲縮醛鍵；含有磺醯基之主鏈；N-嗎啉基寡聚物；肽核酸(PNA)；及帶正電去氧核糖核酸胍(DNG)寡聚物(Micklefield,2001,Current Medicinal Chemistry 8：1157-1179)。修飾之核酸可包括包含一或多個修飾之嵌合或混合主鏈，例如磷酸酯鍵聯之組合，諸如磷酸二酯鍵聯與硫代磷酸酯鍵聯之組合。
用於磷酸酯之替代物包括例如短鏈烷基或環烷基核苷間鍵聯、混合雜原子及烷基或環烷基核苷間鍵聯或一或多個短鏈雜原子或雜環核苷間鍵聯。此等主鏈包括具有(N-嗎啉基)鍵聯(部分由核苷之糖部分形成)；矽氧烷主鏈；硫基、亞碸及碸主鏈；甲醯基及硫甲醯基主鏈；亞甲基甲醯基及硫甲醯基主鏈；含有烯烴之主鏈；胺基磺酸酯主鏈；亞甲基亞胺基及亞甲基肼基主鏈；磺酸酯及磺醯胺主鏈；醯胺主鏈；及具有混合N、O、S及CH2組成部分之其他主鏈。大量美國專利揭示製造及使用含有此等類型之磷酸酯替代物的方式且包括(但不限於)美國專利第5,034,506 號；第5,166,315號；第5,185,444號；第5,214,134號；第5,216,141號；第5,235,033號；第5,264,562號；第5,264,564號；第5,405,938號；第5,434,257號；第5,466,677號；第5,470,967號；第5,489,677號；第5,541,307號；第5,561,225號；第5,596,086號；第5,602,240號；第5,610,289號；第5,602,240號；第5,608,046號；第5,610,289號；第5,618,704號；第5,623,070號；第5,663,312號；第5,633,360號；第5,677,437號；及第5,677,439號。亦應理解，在核苷酸替代物中，核苷酸之糖與磷酸酯部分均可經例如醯胺類鍵聯(胺基乙基甘胺酸)(PNA)置換。美國專利第5,539,082號、第5,714,331號及第5,719,262號教示製造及使用PNA分子之方式，該等文獻各以引用的之方式併入本文中。亦參見Nielsen等人，Science,1991,254,1497-1500。亦有可能將其他類型之分子(結合物)連接至核苷酸或核苷酸類似物以增強例如細胞吸收。結合物可以化學方式連接至核苷酸或核苷酸類似物。此類結合物包括(但不限於)脂質部分，諸如膽固醇部分(Letsinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1989,86,6553-6556)、膽酸(Manoharan等人，Bioorg.Med.Chem.Let.,1994,4,1053-1060)、硫醚，例如己基-S-三苯硫醇(Manoharan等人，Ann.KY.Acad.Sci.,1992,660,306-309；Manoharan等人，Bioorg.Med.Chem.Let.,1993,3,2765-2770)、硫膽固醇(Oberhauser等人，Nucl.Acids Res.,1992,20,533-538)、脂族鏈，例如十二烷二醇或十一烷基殘基(Saison-Behmoaras等人，EM5OJ,1991,10,1111-1118；Kabanov等人，FEBS Lett.,1990,259,327-330；Svinarchuk等人，Biochimie,1993,75,49-54)、磷脂，例如二十六烷基-外消旋-丙三醇或l-二-O-十六烷基-外消旋-丙三氧基-S-H膦酸三乙銨(Manoharan等人，Tetrahedron Lett.,1995,36, 3651-3654；Shea等人，Nucl.Acids Res.,1990,18,3777-3783)、多元胺或聚乙二醇鏈(Manoharan等人，Nucleosides & Nucleotides,1995,14,969-973)或乙酸金剛烷(Manoharan等人，Tetrahedron Lett.,1995,36,3651-3654)，、軟脂基部分(Mishra等人，Biochem.Biophys.Acta,1995,1264,229-237)或十八基胺或己基胺基-羰基-氧基膽固醇部分(Crooke等人，J.Pharmacol.Exp.Ther.,1996,277,923-937)。大量美國專利教示此類結合物之製備且包括(但不限於)美國專利第4,828,979號；第4,948,882號；第5,218,105號；第5,525,465號；第5,541,313號；第5,545,730號；第5,552,538號；第5,578,717號、第5,580,731號；第5,580,731號；第5,591,584號；第5,109,124號；第5,118,802號；第5,138,045號；第5,414,077號；第5,486,603號；第5,512,439號；第5,578,718號；第5,608,046號；第4,587,044號；第4,605,735號；第4,667,025號；第4,762,779號；第4,789,737號；第4,824,941號；第4,835,263號；第4,876,335號；第4,904,582號；第4,958,013號；第5,082,830號；第5,112,963號；第5,214,136號；第5,082,830號；第5,112,963號；第5,214,136號；第5,245,022號；第5,254,469號；第5,258,506號；第5,262,536號；第5,272,250號；第5,292,873號；第5,317,098號；第5,371,241,5,391,723號；第5,416,203,5,451,463號；第5,510,475號；第5,512,667號；第5,514,785號；第5,565,552號；第5,567,810號；第5,574,142號；第5,585,481號；第5,587,371號；第5,595,726號；第5,597,696號；第5,599,923號；第5,599,928號及第5,688,941號。
在一些情況下，非天然核酸進一步形成非天然鹼基對。在活體內條件下能夠形成非天然DNA或RNA鹼基對(UBP)之例示性非天然 核苷酸包括(但不限於)5SICS、d5SICS、NAM、dNaM及其組合。在一些實施例中，非天然核苷酸包括：
Figure 111104389-A0202-12-0152-1
在一些實施例中，非天然鹼基對產生Dumas等人，「Designing logical codon reassignment-Expanding the chemistry in biology」,Chemical Science, 6：50-69(2015)中所述之非天然胺基酸。
將引入本文所揭示之構築體或載體之宿主細胞培養或保持於適合的培養基中以使得產生tRNA、tRNA合成酶及所關注蛋白質。培養基亦包含非天然胺基酸以使得所關注蛋白質併有非天然胺基酸。
正交tRNA合成酶/tRNA對使tRNA加載非天然胺基酸且響應於密碼子將非天然胺基酸併入至多肽鏈中。例示性aaRS-tRNA對包括(但不限於)詹氏甲烷球菌(Mj-Tyr)aaRS/tRNA對、大腸桿菌TyrRS(Ec-Tyr)/嗜熱脂肪芽孢桿菌tRNACUA對、大腸桿菌LeuRS(Ec-Leu)/嗜熱脂肪芽孢桿菌tRNACUA對及吡咯離胺醯基-tRNA對。
包含非天然胺基酸之細胞激素(例如IL-2)多肽藉由將包含tRNA及tRNA合成酶且包含具有一或多個框內正交(終止)密碼子之所關注核酸序列之本文所述之核酸構築體引入至宿主細胞中來製備。使宿主細胞暴露於包含非天然胺基酸之生理學溶液，且接著使宿主細胞保持於允許表現所關注蛋白質之編碼序列的條件下。響應於密碼子將非天然胺基酸併入至多肽鏈中。舉例而言，將一或多個非天然胺基酸併入至細胞激素(例如IL-2)多肽中。或者，在蛋白質中之兩個或更多個位點，可將兩個或更多個非天然胺基酸併入至細胞激素(例如IL-2)多肽中。
當將多個非天然胺基酸併入至細胞激素(例如IL-2)多肽中時，應瞭解，需要在所需位置將多個密碼子併入至編碼核酸序列中以使得tRNA合成酶/tRNA對可引導非天然胺基酸響應於密碼子之併入。可將至少1、2、3、4或更多個密碼子編碼核酸併入至所關注核酸序列中。
當需要將多於一個類型之非天然胺基酸併入至所關注蛋白質中單個蛋白質中時，可使用第二或其他正交tRNA-tRNA合成酶對併入第二或其他非天然胺基酸；該第二或其他正交tRNA-tRNA合成酶對適當識別編碼所關注蛋白質之核酸中之不同密碼子，以使得可在單個製造步驟中將兩個或更多個非天然胺基酸特定併入至蛋白質中之不同限定位點中。在某些實施例中，因此可使用兩個或更多個正交tRNA-tRNA合成酶對。
一旦在宿主細胞中已產生併入有非天然胺基酸之細胞激素(例如IL-2)多肽，即可藉由多種此項技術中已知之技術將其自其中萃取，該等技術包括酶促、化學及/或滲透性溶解及物理破壞。細胞激素(例如IL-2)多肽可藉由諸如製備型層析、親和純化或任何其他適合的技術之此項技術中已知之標準技術來純化。
適合的宿主細胞可包括細菌細胞(例如大腸桿菌)，但宿主細胞最適當係真核細胞，例如昆蟲細胞(例如果蠅，諸如黑腹果蠅(Drosophila melanogaster))、酵母細胞、線蟲(例如秀麗隱桿線蟲(Celegans))、小鼠(例如小家鼠)或哺乳動物細胞(諸如中國倉鼠卵巢細胞(Chinese hamster ovary cells，CHO)或COS細胞、人類293T細胞、HeLa細胞、NIH 3T3細胞及小鼠紅白血病(mouse erythroleukemia，MEL)細胞)或人類細胞或其他真核細胞。其他適合的宿主細胞為熟習此項技術者已知。宿主細胞適當地係哺乳動物細胞，諸如人類細胞或昆蟲細胞。
一般可用於本發明實施例中之其他適合的宿主細胞係實例部分中提及之彼等宿主細胞。載體DNA可經由習知轉型或轉染技術引入至宿主細胞中。如本文所用，術語「轉型」及「轉染」意指將外源核酸分子(例如DNA)引入至宿主細胞中之熟知技術，包括磷酸鈣或氯化鈣共沈澱、DEAE-右旋糖苷介導之轉染、脂質體轉染或電穿孔。適用於轉型或轉染宿主細胞之方法在此項技術中已熟知。
當產生細胞株時，一般較佳製備穩定細胞株。對於例如哺乳動物細胞之穩定轉染，已知視所用表現載體及轉染技術而定，僅小部分之細胞可將外來DNA整合至其基因組中。為鑑別及選擇此等整合體，一般將編碼可選標記(例如針對對抗生素之抗性)的基因與相關基因一起引入宿主細胞中。較佳可選標記包括彼等賦予對藥物(諸如G418、潮黴素及甲胺喋呤)之抗性的標記。可將編碼可選標記之核酸分子引入至宿主細胞中同一載體上，或可引入至各別載體上。可藉由藥物選擇來鑑別經引入之核酸分子穩定轉染之細胞(例如已併入有可選標記基因之細胞將存活，而其他細胞死亡)。
在一個實施例中，將本文所述之構築體整合至宿主細胞之基因組中。穩定整合之優勢係實現個別細胞或純系之間的均勻性。另一優勢係可選擇最佳生產者。因此，需要產生穩定細胞株。在另一實施例中，將本文所述之構築體轉染至宿主細胞中。將構築體轉染至宿主細胞中之優勢係可使蛋白質產率達最大。在一個態樣中，描述一種包含本文所述之核酸構築體或載體之細胞。
醫藥組合物及調配物
在一些實施例中，藉由多種投與途徑向受試者投與本文所述之醫藥組合物及調配物，該等途徑包括(但不限於)非經腸、口服、經頰、經直腸、舌下或經皮投與途徑。在一些情況下，非經腸投與包含靜脈內、皮下、肌肉內、腦內、鼻內、動脈內、關節內、皮內、玻璃體內、骨內輸注、腹膜內或鞘內投與。在一些情況下，醫藥組合物針對局部投與進行調配。在其他情況下，醫藥組合物針對全身投與進行調配。
在一些實施例中，醫藥調配物包括(但不限於)水性液體分散液、自乳化型分散液、固溶體、脂質分散液、氣霧劑、固體劑型、散劑、立即釋放調配物、控制釋放調配物、速熔調配物、錠劑、膠囊、丸劑、延時釋放調配物、緩釋調配物、脈衝釋放調配物、多微粒調配物(例如奈米粒子調配物)及混合立即與控制釋放調配物。
在一些實施例中，醫藥調配物包括基於與本文所揭示之組合物之相容性及所需劑型之釋放曲線特性選擇之載劑或載劑物質。例示性載劑物質包括例如黏合劑、懸浮劑、崩解劑、填充劑、界面活性劑、增溶劑、穩定劑、潤滑劑、濕潤劑、稀釋劑及其類似物。醫藥學上相容之載劑物質包括(但不限於)阿拉伯膠、明膠、膠態二氧化矽、甘油磷酸鈣、乳酸 鈣、麥芽糊精、丙三醇、矽酸鎂、聚乙烯吡咯啶酮(PVP)、膽固醇、膽固醇酯、酪蛋白鈉、大豆卵磷脂、牛膽酸、磷脂醯膽鹼、氯化鈉、磷酸三鈣、磷酸氫二鉀、纖維素及纖維素結合物、硬脂醯基乳酸糖鈉、角叉菜膠、單酸甘油酯、二酸甘油脂、預膠凝化澱粉及其類似物。參見例如Remington：The Science and Practice of Pharmacy，第19版(Easton,Pa.：Mack Publishing Company,1995),Hoover,John E.,Remington's Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co.,Easton,Pennsylvania 1975；Liberman,H.A.及Lachman,L.編，Pharmaceutical Dosage Forms,Marcel Decker,New York,N.Y.,1980；及Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems，第7版(Lippincott Williams & Wilkins 1999)。
在一些情況下，醫藥組合物調配為免疫微脂囊，其包含直接抑或間接結合至脂質體之脂質雙層的複數種IL-2結合物。例示性脂質包括(但不限於)脂肪酸；磷脂；固醇，諸如膽固醇；鞘脂，諸如鞘磷脂；醣神經鞘脂質，諸如神經節苷脂、紅細胞糖苷脂及腦苷脂；界面活性劑胺，諸如十八烷基、油基及亞油醇基胺。在一些情況下，脂質包含陽離子型脂質。在一些情況下，脂質包含磷脂。例示性磷脂包括(但不限於)磷脂酸(「PA」)、膽鹼磷脂(「PC」)、磷脂醯甘油(「PG」)、磷脂醯乙醇胺(「PE」)、磷脂醯肌醇(「PI」)及磷脂醯絲胺酸(「PS」)、鞘磷脂(包括大腦鞘磷脂)、卵磷脂、溶血卵磷脂、溶血磷脂醯乙醇胺、腦苷脂、二花生醯基膽鹼磷脂(「DAPC」)、二癸醯基-L-α-膽鹼磷脂(「DDPC」)、二反油醯基膽鹼磷脂(「DEPC」)、二月桂醯基膽鹼磷脂(「DLPC」)、二亞油醯基磷脂醯膽鹼、二肉豆蔻醯基磷脂醯膽鹼(「DMPC」)、二油醯基磷脂 醯膽鹼(「DOPC」)、二棕櫚醯基磷脂醯膽鹼(「DPPC」)、二硬脂醯基磷脂醯膽鹼(「DSPC」)、1-軟脂醯基-2-油醯基-膽鹼磷脂(「POPC」)、二花生醯基磷脂醯甘油(「DAPG」)、二癸醯基-L-α-磷脂醯甘油(「DDPG」)、二反油醯基磷脂醯甘油(「DEPG」)、二月桂醯基磷脂醯甘油(「DLPG」)、二亞油醯基磷脂醯甘油、二肉豆蔻醯基磷脂醯甘油(「DMPG」)、二油醯基磷脂醯甘油(「DOPG」)、二棕櫚醯基磷脂醯甘油(「DPPG」)、二硬脂醯基磷脂醯甘油(「DSPG」)、1-軟脂醯基-2-油醯基-磷脂醯甘油(「POPG」)、二花生醯基磷脂醯乙醇胺(「DAPE」)、二癸醯基-L-α-磷脂醯乙醇胺(「DDPE」)、二反油醯基磷脂醯乙醇胺(「DEPE」)、二月桂醯基磷脂醯乙醇胺(「DLPE」)、二亞油醯基磷脂醯乙醇胺、二肉豆蔻醯基磷脂醯乙醇胺(「DMPE」)、二油醯基磷脂醯乙醇胺(「DOPE」)、二棕櫚醯基磷脂醯乙醇胺(「DPPE」)、二硬脂醯基磷脂醯乙醇胺(「DSPE」)、1-軟脂醯基-2-油醯基-磷脂醯乙醇胺(「POPE」)、二花生醯基磷脂醯環己六醇(「DAPI」)、二癸醯基-L-α-磷脂醯環己六醇(「DDPI」)、二反油醯基磷脂醯環己六醇(「DEPI」)、二月桂醯基磷脂醯環己六醇(「DLPI」)、二亞油醯基磷脂醯環己六醇、二肉豆蔻醯基磷脂醯環己六醇(「DMPI」)、二油醯基磷脂醯環己六醇(「DOPI」)、二棕櫚醯基磷脂醯環己六醇(「DPPI」)、二硬脂醯基磷脂醯環己六醇(「DSPI」)、1-軟脂醯基-2-油醯基-磷脂醯環己六醇(「POPI」)、二花生醯基磷脂醯絲胺酸(「DAPS」)、二癸醯基-L-α-磷脂醯絲胺酸(「DDPS」)、二反油醯基磷脂醯絲胺酸(「DEPS」)、二月桂醯基磷脂醯絲胺酸(「DLPS」)、二亞油醯基磷脂醯絲胺酸、二肉豆蔻醯基磷脂醯絲胺酸(「DMPS」)、二油醯基磷脂醯絲胺酸(「DOPS」)、二棕櫚 醯基磷脂醯絲胺酸(「DPPS」)、二硬脂醯基磷脂醯絲胺酸(「DSPS」)、1-軟脂醯基-2-油醯基-磷脂醯絲胺酸(「POPS」)、二花生醯基鞘磷脂、二癸醯基鞘磷脂、二反油醯基鞘磷脂、二月桂醯基鞘磷脂、二亞油醯基鞘磷脂、二肉豆蔻醯基鞘磷脂、鞘磷脂、二油醯基鞘磷脂、二棕櫚醯基鞘磷脂、二硬脂醯基鞘磷脂及1-軟脂醯基-2-油醯基-鞘磷脂。
在一些情況下，醫藥調配物進一步包括pH調節劑或緩衝劑，其包括酸，諸如乙酸、硼酸、檸檬酸、乳酸、磷酸及鹽酸；鹼，諸如氫氧化鈉、磷酸鈉、硼酸鈉、檸檬酸鈉、乙酸鈉、乳酸鈉及參-羥基甲胺基甲烷；及緩衝劑，諸如檸檬酸鹽/右旋糖、碳酸氫鈉及氯化銨。包括保持組合物之pH在可接受範圍內所需之量的此類酸、鹼及緩衝劑。
在一些情況下，醫藥調配物包括使組合物之重量莫耳滲透濃度達可接受範圍所需之量的一或多種鹽。此類鹽包括具有鈉、鉀或銨陽離子及氯、檸檬酸根、抗壞血酸根、硼酸根、磷酸根、碳酸氫根、氫根、硫酸根、硫代硫酸根或亞硫酸氫根陰離子之鹽，適合的鹽包括氯化鈉、氯化鉀、硫代硫酸鈉、亞硫酸氫鈉及硫酸銨。
在一些實施例中，醫藥調配物包括(但不限於)類糖海藻糖、蔗糖、甘露糖醇、麥芽糖、葡萄糖或類鹽磷酸鉀、檸檬酸鈉、硫酸銨及/或增加多肽之溶解度及活體內穩定性的其他藥劑，諸如肝素。
在一些情況下，醫藥調配物進一步包括用以穩定化合物之稀釋劑，因為其可提供更穩定的環境。溶解於緩衝溶液(其亦可提供pH控制或維持)中之鹽在此項技術中用作稀釋劑，緩衝溶液包括(但不限於)磷酸鹽緩衝鹽水溶液。在某些情況下，稀釋劑增加組合物體積以促進壓縮或形成足夠體積以供針對膠囊填充均質摻合。此類化合物可包括例如乳糖、 澱粉、甘露糖醇、山梨糖醇、右旋糖、微晶纖維素(諸如Avicel®)、磷酸氫二鈣、二水合磷酸二鈣、磷酸三鈣、磷酸鈣、無水乳糖、噴霧乾燥乳糖、預膠凝化澱粉、可壓縮糖(諸如Di-Pac®(Amstar))、甘露糖醇、羥基丙基甲基纖維素、羥基丙基甲基纖維素乙酸硬脂酸酯、基於蔗糖之稀釋劑、糖粉、單水合硫酸單氫鈣、二水合硫酸鈣、三水合乳酸鈣、葡萄糖結合劑、水解穀類固體、直鏈澱粉；粉末狀纖維素、碳酸鈣、甘胺酸、高嶺土、甘露糖醇、氯化鈉、肌醇、膨潤土及其類似物。
在一些情況下，醫藥調配物包括有助於物質分裂或崩解之崩解劑(disintegration agent/disintegrant)。術語「崩解」包括當與腸胃液接觸時劑型溶解與分散。崩解劑之實例包括澱粉，例如天然澱粉，諸如玉米澱粉或馬鈴薯澱粉；預膠凝化澱粉，諸如National 1551或Amijel®；或羥基乙酸澱粉鈉，諸如Promogel®或Explotab®；纖維素，諸如木材產品；甲基結晶纖維素，例如Avicel®、Avicel® PH101、Avicel® PH102、Avicel® PH105、Elcema® P100、Emcocel®、Vivacel®、Ming Tia®及Solka-Floc®；甲基纖維素、交聯羧甲纖維素或交聯纖維素，諸如交聯羧基甲基纖維素鈉(Ac-Di-Sol®)、交聯羧基甲基纖維素或交聯之交聯羧甲纖維素；交聯澱粉，諸如羥基乙酸澱粉鈉；交聯聚合物，諸如交聯聚維酮；交聯聚乙烯吡咯啶酮；海藻酸鹽，諸如海藻酸或海藻酸之鹽，諸如海藻酸鈉；黏土，諸如Veegum® HV(矽酸鎂鋁)、膠，諸如瓊脂、瓜爾膠、槐豆膠、加拉亞膠(Karaya)、果膠或黃蓍膠；羥基乙酸澱粉鈉；膨潤土；天然海綿；界面活性劑；樹脂，諸如陽離子交換樹脂；柑桔渣；月桂基硫酸鈉；月桂基硫酸鈉與澱粉之組合；及其類似物。
在一些情況下，醫藥調配物包括諸如以下之填充劑：乳 糖、碳酸鈣、磷酸鈣、磷酸氫二鈣、硫酸鈣、微晶纖維素、纖維素粉末、右旋糖、葡聚糖結合劑、葡聚糖、澱粉、預膠凝化澱粉、蔗糖、木糖醇、乳糖醇、甘露糖醇、山梨糖醇、氯化鈉、聚乙二醇及其類似物。
潤滑劑及滑動劑亦視情況包含本文所述用於防止、減少或抑制物質之黏附或摩擦之醫藥調配物。例示性潤滑劑包括例如硬脂酸；氫氧化鈣；滑石；硬脂基反丁烯二酸鈉；烴，諸如礦物油；或氫化植物油，諸如氫化大豆油(Sterotex®)；高碳數脂肪酸及其鹼金屬鹽及鹼土金屬鹽，諸如鋁、鈣、鎂、鋅、硬脂酸、硬脂酸鈉、甘油、滑石、蠟、Stearowet®、硼酸、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉、白胺酸、聚乙二醇(例如PEG-4000)或甲氧基聚乙二醇，諸如CarbowaxTM；油酸鈉、苯甲酸鈉、二十二烷酸甘油酯、聚乙二醇、月桂基硫酸鎂或月桂基硫酸鈉；膠態二氧化矽，諸如SyloidTM、Cab-O-Sil®；澱粉，諸如玉米澱粉、聚矽氧油、界面活性劑及其類似物。
塑化劑包括用於使微膠囊材料或膜包衣軟化以使其脆性較低之化合物。適合的塑化劑包括例如聚乙二醇(諸如PEG 300、PEG 400、PEG 600、PEG 1450、PEG 3350及PEG 800)、硬脂酸、丙二醇、油酸、三乙基纖維素及三乙酸甘油酯(triacetin)。塑化劑亦可充當分散劑或潤濕劑。
增溶劑包括諸如以下之化合物：三乙酸甘油酯、檸檬酸三乙酯、油酸乙酯、辛酸乙酯、月桂基硫酸鈉、多庫酯鈉(sodium doccusate)、維生素E TPGS、二甲基乙醯胺、N-甲基吡咯啶酮、N-羥基乙基吡咯啶酮、聚乙烯吡咯啶酮、羥丙基甲基纖維素、羥丙基環糊精、乙醇、正丁醇、異丙醇、膽固醇、膽汁鹽、聚乙二醇200-600、四氫呋喃聚 乙二醇醚、二乙二醇單乙醚、丙二醇及二甲基異山梨糖醇及其類似物。
穩定劑包括諸如任何抗氧化劑、緩衝劑、酸、防腐劑及其類似物之化合物。例示性穩定劑包括L-精胺酸鹽酸鹽、緩血酸胺、白蛋白(人類)、檸檬酸、苯甲醇、苯酚、脫水磷酸二氫二鈉、丙二醇、間甲酚(metacresol/m-cresol)、乙酸鋅、聚山梨醇酯-20或Tween®20或胺丁三醇。
懸浮劑包括諸如以下之化合物：聚乙烯吡咯啶酮，例如聚乙烯吡咯啶酮K12、聚乙烯吡咯啶酮K17、聚乙烯吡咯啶酮K25或聚乙烯吡咯啶酮K30；乙烯基吡咯啶酮/乙酸乙烯酯共聚物(S630)；聚乙二醇，例如聚乙二醇可具有約300至約6000，或約3350至約4000，或約7000至約5400之分子量；羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥甲基纖維素乙酸酯硬脂酸酯；聚山梨醇酯-80；羥乙基纖維素；海藻酸鈉；膠，諸如黃蓍膠及阿拉伯膠、瓜爾膠、三仙膠(包括黃原膠)；糖；纖維素材料，諸如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、羥丙基甲基纖維素、羥乙基纖維素；聚山梨醇酯-80；海藻酸鈉；聚乙氧基化脫水山梨糖醇單月桂酸酯；聚乙氧基化脫水山梨糖醇單月桂酸酯；聚維酮及其類似物。
界面活性劑包括諸如以下之化合物：月桂基硫酸鈉、多庫酯鈉、Tween 60或80、三乙酸甘油酯、維生素E TPGS、脫水山梨糖醇單油酸酯、聚氧化乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯、聚山梨醇酯、泊洛沙姆、膽汁鹽、單硬脂酸甘油酯、環氧乙烷與環氧丙烷之共聚物(例如Pluronic®(BASF))及其類似物。另外界面活性劑包括聚氧化乙烯脂肪酸甘油酯及植物油，例如聚氧化乙烯(60)氫化之蓖麻油；及聚氧化乙烯烷基醚及烷基苯 基醚，例如辛苯聚醇10，辛苯聚醇40。有時，包括界面活性劑以增強物理穩定性或達到其他目的。
黏度增強劑包括例如甲基纖維素、黃原膠、羧甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素乙酸酯硬脂酸酯、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯、卡波姆(carbomer)、聚乙烯醇、海藻酸鹽、阿拉伯膠、殼聚糖及其組合。
濕潤劑包括諸如以下之化合物：油酸、單硬脂酸甘油酯、脫水山梨糖醇單油酸酯、脫水山梨糖醇單月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯、聚氧化乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯、聚氧化乙烯脫水山梨糖醇單月桂酸酯、多庫酯鈉、油酸鈉、月桂基硫酸鈉、多庫酯鈉、三乙酸甘油酯、Tween 80、維生素E TPGS、銨鹽及其類似物。
治療方案
在一些實施例中，投與本文所述之醫藥組合物以用於治療性應用。在一些實施例中，每天一次、每天兩次、每天三次或更多次投與醫藥組合物。每日、每天、每隔一天、一週五天、一週一次、每隔一週、每月兩週、每月三週、每月一次、每月兩次、每月三次或更多次投與醫藥組合物。投與醫藥組合物至少1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、11個月、12個月、18個月、2年、3年或更長。
在患者狀態改善之情況下，在醫生判斷後可持續投與化合物；或者，組合物投與劑量可暫時減少或暫時中止一段時間(亦即「藥物假期」)。在一些情況下，藥物假期之長度在2天與1年之間變化，包括僅例如2天、3天、4天、5天、6天、7天、10天、12天、15天、20天、28 天、35天、50天、70天、100天、120天、150天、180天、200天、250天、280天、300天、320天、350天或365天。藥物假期期間之劑量減少為10%至100%，包括僅例如10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
一旦患者之病狀出現改良，則在必要時投與維持劑量。隨後，根據症狀可將投與劑量或頻率或兩者降低至維持改善之疾病、病症或病狀的水準。
在一些實施例中，與此類量相對應之既定藥劑之量視諸如以下之因素而變化：特定化合物、疾病嚴重程度、需要治療之受試者或宿主之特性(例如重量)，然而通常以此項技術中已知之方式根據該病例之特定情形來確定，例如投與之特定藥劑、投與途徑及所治療之受試者或宿主。在一些情況下，所需劑量宜以單次劑量或分次劑量呈遞，該等分次劑量同時(或在較短時間段期間)投與或以適當的時間間隔投與，例如每天兩次、三次、四次或更多次子劑量。
前述範圍僅為建議範圍，因為關於個別治療方案之變數的數量較大，且與此等推薦值有相當大的偏移並不罕見。此類劑量視許多變數而改變，該等變數不限於所用化合物之活性、待治療之疾病或病狀、投與模式、個別受試者之需要、所治療之疾病或病狀之嚴重程度及從業者之判斷。
在一些實施例中，此類治療方案之毒性及治療功效在細胞培養物或實驗動物中藉由標準醫藥程序來確定，包括(但不限於)測定LD50(群體之50%致死的劑量)及ED50(群體之50%治療有效的劑量)。毒 性與治療效果之間的劑量比率係治療指數且其表示為LD50與ED50之間的比率。展示較高治療指數之組合物較佳。利用自細胞培養物分析及動物研究獲得之資料制定用於人類的劑量範圍。此類化合物之劑量較佳處於循環濃度之範圍內，其包括具有最小毒性之ED50。劑量視所採用劑型及所用投與途徑而在此範圍內變化。
套組/製品
在某些實施例中，本文揭示與一或多種本文所述之方法及組合物一起使用之套組及製品。此類套組包含載劑、封裝或經分隔以接收一或多個容器(諸如小瓶、管道及其類似物)之容器，各容器包含一種待用於本文所述方法之各別要素。合適的容器包括例如瓶子、小瓶、注射器及試管。在一個實施例中，容器由多種材料(諸如玻璃或塑膠)形成。
本文所提供之製品含有封裝材料。醫藥封裝材料之實例包括(但不限於)泡殼包裝、瓶子、管道、袋、容器、瓶子及適於所選調配物及預期投與及治療模式的任何封裝材料。
舉例而言，容器包括本文所揭示之細胞激素(例如IL-2)多肽或細胞激素(例如IL-2)結合物中之一或多者及視情況選用之一或多種本文所述之醫藥賦形劑，以有助於遞送細胞激素(例如IL-2)多肽或細胞激素(例如IL-2)結合物。此類套組進一步視情況包括識別描述或標籤或與其在本文所述方法中之用途相關之說明書。
套組通常包括列出含量之標籤及/或使用說明書，及具有使用說明之包裝插頁。典型地亦包括一組說明書。
在一個實施例中，標籤在容器上或與容器關聯。在一個實施例中，當形成標籤之字母、編號或其他特徵附著、成型或蝕刻於容器本 身中時，標籤可位於容器之上，當標籤存在於容器或亦固持容器之載體內時，標籤可與容器關聯，例如呈藥品說明書形式。在一個實施例中，標籤用於指示待用於特定治療應用之含量。標籤亦可指示該含量諸如在本文所述方法中之使用指南。
在某些實施例中，醫藥組合物呈現於含有一或多個含有本文所提供化合物之單位劑型之包裝或分配器裝置中。包裝例如含有金屬或塑膠箔，諸如泡殼包裝。在一個實施例中，包裝或分配器裝置附有投與說明書。在一個實施例中，包裝或分配器亦附有與容器關聯之注意事項，其呈管制醫藥品之製造、使用或銷售之政府機構指定的形式，該注意事項反映該機構批准該藥物形式用於人類或獸醫學投與。此類注意事項例如係經美國食品藥物管理局(U.S.Food and Drug Administration)核准用於藥物之標籤，或核准之藥品說明書。在一個實施例中，將含有本文所提供化合物之組合物調配於亦製備之相容醫藥載劑中，置於適當容器中，且針對指定病狀之治療作標記。
某些術語
除非另有定義，否則本文所用之所有技術及科學術語均具有與熟習所主張之主題所屬技術者通常所瞭解相同之含義。應瞭解，詳細描述僅為例示性的及解釋性的，且不受所主張之任何主題限制。在本申請案中，除非另外特定陳述，否則單數之使用包括複數。必須注意的是，除非上下文另外明確指示，否則如在本說明書中所使用，單數形式「一個(種)(a/an)」及「該(the)」包括複數個(種)指示物。在本申請案中，除非另外說明，否則使用「或」意謂「及/或」。此外，術語「包括(including)」以及其他形式(諸如「包括(include)」、「包括(includes)」及 「包括(included)」)之使用不具限制性。
儘管本發明之各種特徵可描述於單個實施例之上下文中，但該等特徵亦可分開或以任何適合組合形式提供。相反，儘管為了清楚起見，本發明在本文中可在獨立實施例之上下文中描述，但本發明亦可以單一實施例實施。
本說明書中提及「一些實施例」、「一實施例」、「一個實施例」或「其他實施例」意謂結合實施例所描述之特定特性、結構或特徵包括於至少一些實施例中但不一定包括於本發明之所有實施例中。
如本文所使用，範圍及量可表示為「約」特定值或範圍。約亦包括準確量。因此，「約5μL」意謂「約5μL」以及「5μL」。一般而言，術語「約」包括預期在實驗誤差內(諸如在15%、10%或5%內)之量。
本文所用之章節標題僅出於組織目的而不應被視為限制所述主題。
如本文所用，術語「個體(individual(s))」、「個體(subject(s))」及「患者」意謂任何哺乳動物。在一些實施例中，哺乳動物係人類。在一些實施例中，哺乳動物係非人類。該等術語均無需健康照護工作者(例如醫生、註冊護士、護士從業者、醫師助理、勤雜工或臨終關懷工作者)之監督(例如持續或間歇監督)或不限於特徵為該監督的情形。
如本文所使用，關於結合親和力之術語「明顯(significant/significantly)」意謂足以影響細胞激素(例如IL-2多肽與目標受體之結合的細胞激素(例如IL-2多肽)之結合親和力變化。在一些情況下，該術語係指至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、 80%、90%、95%或更大之變化。在一些情況下，該術語意謂至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、50倍、100倍、500倍、1000倍或更大之變化。
在一些情況下，關於一或多種細胞群體經由細胞激素信號傳導複合物活化之術語「顯著(significant/significantly)」意謂足以活化細胞群體之變化。在一些情況下，活化細胞群體之變化量測為受體信號傳導效能。在此類情況下，可提供EC50值。在其他情況下，可提供ED50值。在另外情況下，可提供細胞激素之濃度或劑量。
如本文所使用，術語「效能」係指產生目標效果所需之細胞激素(例如IL-2多肽)之量。在一些情況下，術語「效能」係指活化目標細胞激素受體(例如IL-2受體)所需之細胞激素(例如IL-2多肽)之量。在其他情況下，術語「效能」係指活化目標細胞群體所需之細胞激素(例如IL-2多肽)之量。在一些情況下，效能係量測為ED50(有效劑量50)，或產生50%最大效果所需之劑量。在其他情況下，效能量測為EC50(有效濃度50)，或50%群體產生目標效果所需之劑量。
實例
提供此等實例僅為達成說明之目的且不限制本文所提供之申請專利範圍之範疇。
實例1
激酶及細胞激素受體二聚分析
細胞處理
PathHunter細胞株自冷凍備料根據標準程序擴增。將細胞以總體積20μL接種於白壁384孔微量培養盤中且在測試之前培育適當時 間。
促效劑形式
對於促效劑測定，將細胞與樣品一起培育以誘導反應。用分析緩衝劑對樣品備料進行中間稀釋以產生5倍樣品。將約5μL 5倍樣品添加至細胞中且視分析而定在37℃下培育6至16小時。媒劑濃度係1%。
信號偵測
經由分別針對促效劑及拮抗劑分析單次添加12.5或15μL(50% v/v)PathHunter偵測試劑混合液，之後在室溫下培育一小時產生分析信號。對於一些分析，使用高敏感性偵測試劑(PathHunter閃爍套組)偵測活性以改良分析效能。在此等分析中，將等體積之偵測試劑(25或30μL)添加至孔中，之後在室溫下一小時培育。在信號產生之後用供化學發光信號偵測之PerkinElmer EnvisionTM儀器讀取微量培養盤。
數據分析
使用CBIS數據分析套件(ChemInnovation,CA)分析化合物活性。對於促效劑模式分析，使用下式計算活性百分比：
活性%=100%×(測試樣品之平均RLU-媒劑對照之平均RLU)/(對照配位體之平均最大RLU-媒劑對照之平均RLU)。
對於拮抗劑模式分析，使用下式計算抑制百分比：
抑制%=100%×(1-(測試樣品之平均RLU-媒劑對照之平均RLU)/(EC80對照之平均RLU-媒劑對照之平均RLU))。
實例2
用於鑑別不接合IL-2Rα之聚乙二醇化IL-2化合物之基於細胞之篩檢
使用IL-2/雜三聚受體信號傳導複合物(PDB：2ERJ)之結構性數據指導nAA-聚乙二醇化位點之設計以特定阻斷IL-2與IL-2受體α次單元(IL-2Rα)之相互作用。使例示性IL-2結合物經歷官能性分析：K35、F42、K43、E62及P65。IL-2結合物於大腸桿菌中以包涵體表現，使用標準程序純化及再摺疊，之後使用DBCO介導之無銅點擊化學使穩定的共價mPEG部分連接至AzK而使IL-2產物位點特異性PEG化。
在Discoverx(Fremont CA)使用PathHunter IL-2細胞激素受體分析篩檢具有功能活性之IL-2結合物。此分析使用重組人類U2OS細胞株，該細胞株表現各與一半分離報導酶β-半乳糖苷酶融合之IL-2受體β(IL-2Rβ)及γ(IL-2Rγ)次單元。第二細胞株經進一步工程改造以表現IL-2Rα次單元。用此兩種細胞株進行平行測試使得評定IL-2受體αβγ以及基礎βγ複合物之變異體活化。對IL-2 βγ受體複合物之IL-2促效活性刺激受體二聚及產生化學發光信號之報導β-半乳糖苷酶復原。在促效劑模式中運作分析以測定各測試物品之EC50，且比較IL2Rα陽性與陰性細胞類型之間的劑量-反應曲線概況使得確定IL2Rα對於觀察到之活性的貢獻。
表1展示30kD聚乙二醇化IL-2結合物之基於細胞之篩檢中IL-2受體促效作用之EC50數據。
Figure 111104389-A0202-12-0169-2
聚乙二醇化IL-2與人類IL-2受體次單元之生物化學相互作用
聚乙二醇化IL-2化合物與人類IL-2受體次單元之相互作用之動力學使用Biosensor Tools LLC(Salt Lake City,UT)之表面電漿子共振(SPR)來量測。對於此等研究，在Biacore蛋白質A塗佈之CM4感測器晶片之表面上捕捉人類IgG1 Fc融合IL-2Rα(Sino Biological編號10165-H02H)及β(Sino Biological編號10696-H02H)胞外域。使用Biacore 2000 SPR儀器用以2μM起始兩倍稀釋系列之天然IL-2(野生型IL-2；Thermo編號PHC0021)、P65_30kD、P65_5kD、E62_30kD抑或E62_5kD重複兩次探測此等表面。注入測試樣品60s以使得量測締合，之後僅注入緩衝劑(洗滌)30s以量測解離。相對於時間(s，X軸)繪製反應單位(RU，Y軸)。
為評估IL-2受體α次單元對IL-2與β結合之影響，捕捉相對於β約兩倍過量之α。對於此等表面，塗覆以2.5μM開始三倍稀釋系列之天然IL-2(野生型IL-2)、P65_30kD、P65_5kD、E62_30kD或E62_5kD。結合數據擬合包括體積變換之1：1相互作用模型，且提取之動力學參數概述於表2A及表2B中。
Figure 111104389-A0202-12-0170-3
Figure 111104389-A0202-12-0170-4
在含有固定IL-2Rα之感應器表面上，天然IL-2展示快速締合及緩慢解離動力學，表明高親和力結合(圖4A)。相反，甚至在2μM之最高測試濃度下，P65_30kD或E62_30kD均不與IL-2Rα表面相互作用(圖4A)。含有固定IL-2Rβ之表面展示與天然IL-2(野生型IL-2)及IL-2 P65_30kD類似的締合及解離反應(圖4B)。對於β次單元，化合物之間觀察到之適度KD差異係歸因於相對於天然IL-2而言IL-2 P65_30kD之締合速率降低，自此聚乙二醇化化合物之流體動力學半徑變化(較低擴散係數)以及大PEG部分對遠距離結合表面之非特異性屏蔽作用預計。此等結果表明P65_30kD及E62_30kD缺乏IL-2Rα相互作用，而主要保留與IL-2Rβ之結合。
初級人類白血球減少系統(LRS)來源PBMC樣品中IL-2 P65_30kD及E62_kD之離體免疫反應分佈概況
為確定IL-2 P65_30kD及E62_30kD之不同受體特異性對初級免疫細胞亞群之活化的影響方式，使用多色流式細胞測量術得到人類LRS來源周邊血單核細胞(PBMC)樣品中淋巴細胞活化之濃度-反應分佈概況。在PrimityBio LLC(Fremont,CA)執行此等研究。新鮮LRS來源樣品用以30μg/mL之最高濃度起始之5倍稀釋系列之天然IL-2、P65_30kD抑或E62_30kD處理。在45min培育之後，將樣品固定且用偵測磷酸化形式之轉錄因子STAT5(pSTAT5)抗體、IL-2受體信號複合物之上游接合及活化之標記及追蹤特異性T細胞及自然殺手(NK)細胞亞群中之pSTAT5形成之一組表面標記(表3)染色。
Figure 111104389-A0202-12-0171-5
在用天然IL-2(圖5A)、E62_30kD(圖5B)及P65_30kD(圖5C)處理之後，針對濃度-反應模式中不同T及NK細胞子組之活化分析流式細胞測量術數據，讀取pSTAT5積聚。在NK及效應T細胞(CD3+ CD8+)群體中，相對於天然IL-2，IL-2 P65_30kD及IL-2 E62_30kD保持了效能，其中pSTAT5產生之EC50值在天然IL-2之4-5倍內(圖5A)。相反，與天然IL-2相比，IL-2 P65_30kD在Treg子群體(CD3+ CD4+ IL-2Rα+ CD127-)中誘導pSTAT5之EC50值降低900倍，然而對於NK及Teff細胞群體，EC50仍保持類似(圖5C)。Treg群體中IL-2 P65_30kD之此EC50之顯著增加特定指示此等位置之IL-2之聚乙二醇化使得促效IL-2受體，但相對於效應T細胞，消除IL-2對Treg刺激之偏向。
Figure 111104389-A0202-12-0172-6
自由MFI曲線圖產生之劑量反應曲線計算EC50值(pg/mL)。
實例3
未處理(E3826-U1704)及帶有B16-F10腫瘤(E3826-U1803)之C57BL/6小鼠中之PK/PD研究
研究設計概述於表5及6中。經由心臟穿刺在指定點收集末 端血液樣品。研究E3826-U1704包括13個時間點(0.13、0.25、0.5、1、2、4、8、12、24、48、72、96及120h)，各時間點犧牲3隻小鼠，且研究E3826-U1803包括9個時間點(2、8、12、24、48、72、120、168及240h)，各時間點犧牲4-7隻小鼠。收集血漿及血球(在兩種研究中)及研究E3826-U1803中之腫瘤以用於PK及PD分析。
使用定性人類IL-2 ELISA分析(Abcam,Cambridge,UK)執行血漿樣本之生物分析。使用ELISA分析測定源自血漿之樣品中之阿地介白素、E62_30kD及P65_30kD及內標物之濃度。在NW Solutions(Seattle,WA)執行PK數據分析。將PK數據導入至Phoenix WinNonlin v6.4(Certara/Pharsight,Princeton,NJ)中以進行分析。用非室體方法使用靜脈內快速投與模型分析相對於時間數據之組平均血漿濃度。
Figure 111104389-A0202-12-0173-18
*劑量係指P65_30kD IL-2多肽量
Figure 111104389-A0202-12-0173-8
0.3mg/kg下之P65_30kD、E62_30kD、E62_5kD及阿地介白素之血漿濃度概況繪於圖6中。
在研究E3826-U1704中，相對於阿地介白素，P65_30kD與E62_30kD展現優良PK概況，如表3所概述。在單次靜脈內快速給藥阿地介白素之後，在給藥後0.03h(給藥後之第一量測時間點)觀察到Tmax，且可測量出達至給藥後4h之平均血漿濃度。在單次靜脈內快速給藥P65_30kD及E62_30kD之後，在給藥後0.03h觀察到Tmax，且可測量出達至給藥後120h(最後量測之時間點)之平均血漿濃度。在各別研究中，在靜脈內給藥E62_5kD之後，在給藥後0.133h觀察到Tmax，且可測量出達至給藥後12h之平均血漿濃度。
基於Cmax及AUC0-t之暴露如下：P65_30kD>>E62_30kD>>E62_5kD>阿地介白素。具有較小PEG之E62_5kD具有更接近rIL-2之PK概況。分別基於Cmax及AUC0-t，P65_30kD暴露高達阿地介白素之5.5及200倍。另外，與阿地介白素相比，P65_30kD表明t1/2延長至23倍(13.3h相對於0.57h)及CL降至約198倍(6.58相對於1300mL/h/Kg)。對於P65_30kD與E62_30kD，相對於阿地介白素，分佈體積(分別係82.4及92.3mL/kg)降至約4.2至4.7倍，且與小鼠中之血量類似(85mL/kg；[Boersen 2013])。由此表明P65_30kD及E62_30kD主要分佈於全身循環內。
Figure 111104389-A0202-12-0174-17
注意：R2係各濃度對時間概況之末期的適配度參數
所有參數示為3位有效數字。
實例4
周邊血液腔室中之藥效動力學觀察結果
使用STAT5磷酸化及細胞增生之誘導(早期分子標記Ki-67及細胞計數)作為藥效動力學讀數相對於其藥物動力學來評定P65_30kD之藥理學概況。在CD8+效應T細胞中，對於P65_30kD與阿地介白素，pSTAT5 PD標記展示與PK之良好相關性(表7)。在NK與CD8+ T細胞中直至72h，且在Treg中直至24h觀察到pSTAT5之持續升高。在給藥阿地介白素之小鼠中，在僅2h之後，pSTAT5誘導返回至基線(圖7)。STAT5磷酸化轉譯為CD8+效應T細胞及NK細胞之延遲之增生反應(72-120h)，但在Treg之情況並非如此(圖8A-8C)，對CD8+效應T細胞之表現型分析顯示CD44+記憶細胞在此群體內顯著擴增(圖9A至圖9B)。
帶有B16-F10腫瘤(E3826 U1803)之C57BL/6小鼠中腫瘤腔室中之藥效動力學觀察結果
表8展示帶有B16-F10腫瘤之小鼠中單次給藥3mg/kg之P65_30kD後之血漿及腫瘤藥物濃度。腫瘤半衰期係血漿半衰期兩倍(24.4相對於12.6)，指示P65_30kD穿透腫瘤且保留於腫瘤中。曲線之尾端交叉，展示血漿消除比腫瘤快。分別對於1及3mg/kg劑量，腫瘤：血漿AUC比率係9.7%至8.4%。
Figure 111104389-A0202-12-0175-12
Figure 111104389-A0202-12-0176-13
圖10A-圖10B展示在B16F10腫瘤中P65_30kD使NK及CD+T細胞擴增。圖10A展示在用單次靜脈內快速給藥3g/kg之P65_30kD處理之後腫瘤CD3+ T細胞群體中NK細胞、CD8+細胞及Treg之百分比。在處理之後5天藉由流式細胞測量術分析腫瘤樣品之免疫細胞群體。各數據點表示各時間點之來自3個複本之平均值±SEM。細胞群體數據自第5天腫瘤樣品表示且CD8/Treg比率自第7天樣品計算。圖10B展示在用單次靜脈內快速給藥3mg/kg之P65_30kD處理之後7天，CD8+效應T細胞相對於CD4+調節性T細胞之比率。各數據點表示各時間點之來自3個複本之平均值±SEM。
Balb/c小鼠E3826-U1802中之MTD研究
在Crown Biosciences,Inc.(San Diego,CA)之未處理雌性Balb/C小鼠中進行P65_30kD之劑量範圍研究。研究設計展示於表5中。在7個時間點(0.25、1、4、12、24、34、48及72h)經由下頜下靜脈抽取血液樣品。收集血漿與血球用於PK及PD分析。
採用市售ELISA套組，針對人類IL-2以及小鼠IL-2、TNF-α、IFNγ、IL-5及IL-6細胞激素分析所有血漿樣品。
Figure 111104389-A0202-12-0176-14
Figure 111104389-A0202-12-0177-16
*在除72h時間點外之所有時間點，血液收集係經由下頜下靜脈。72h時間點係末端血液收集。
# 僅使用0.3mg/kg劑量之P65_30kD進行PKPD評估
使用Balb/c小鼠之MTD研究中之毒理學觀察結果
與高劑量IL-2相關之主要毒性係血管滲漏症候群及相關細胞激素釋放症候群(CRS)。為在小鼠中評估此情況，執行單次給藥靜脈內投與0.01-5.0mg/kg劑量之劑量範圍內的P65_30kD(表9)。所進行之分析係血液病、病理組織學、器官重量及細胞激素分析。在P65_30kD或阿地介白素兩者之情況下，相對於媒劑對照小鼠，未觀測到關於血液病、病理組織學或體重之異常。關於細胞激素分析，觀察到阿地介白素在1mg/kg至5mg/kg開始時提高血漿IL-5含量(圖11A)。在P65_30kD之情況下，僅在5mg/kg劑量下見到IL-5適度增加，且此增加小於阿地介白素(圖11B)。在阿地介白素與P65_30kD之情況下，觀察到全身IFNγ含量之瞬時升高。
實例5
第20157276號食蟹獼猴研究中之PK/PD
在非未處理食蟹獼猴中在投與0.3mg/kg之單次靜脈內劑量之後評估P65_30kD之藥物動力學及藥效動力學概況。在Charles River Laboratories,Inc.(Reno,NV)進行該研究且在NW Solutions(Seattle, WA)執行PK數據分析。在給藥前及21個時間點(給藥後0.5、1、2、4、8、12、24、36、48、72、120、144、168、192及240h收集血液樣品。收集血漿與血球用於PK及PD分析。所選時間點用於PK、PD、細胞群體及血液病分析。
採用市售ELISA套組針對人類IL-2(PK讀取)分析所有血漿樣品。
表10展示食蟹獼猴中之P65_30kD PK參數。
Figure 111104389-A0202-12-0178-19
在單次靜脈內快速給藥之後，在給藥後0.5h觀察到Tmax(給藥後之第一量測時間點)，且可測量出達至給藥後168h(最後量測)之平均血漿濃度，P65_30kD之t1/2及AUC分別係13.6h及121000hr×ng/mL。
血液病參數-第20157276號食蟹獼猴研究
對於血液學參數，評估時間點與給藥前1天及給藥後1、3、6、8、10、12、14、17、19、21天相對應。
圖12展示絕對白血球及差分計數。數據表示平均值±SD(N=2隻動物/劑量組)。
對白血球(WBC)亞群之分析顯示WBC計數之主要增加係歸因於淋巴細胞細胞群體之擴增，其與P65_30kD之機制一致。不發生嗜酸性球增 多。
實例6
表11說明本文所述之IL-2序列。
Figure 111104389-A0202-12-0179-20
雖然本文已展示及描述本發明之較佳實施例，但熟習此項技術者將明白，此等實施例僅藉助於實例提供。在不背離本發明之情況下，熟習此項技術者現將想到許多變化、改變及取代。應瞭解，本文所述之本發明實施例之各種替代方案均可用於實踐本發明。以下申請專利範圍意欲限定本發明之範疇，且藉此涵蓋此等申請專利範圍及其等效物之範疇內的方法及結構。
<110> 美商欣爍克斯公司(Synthorx,Inc.)
<120> 用於增生及感染性疾病治療之細胞激素結合物
<130> 46085-710.601
<140> 111104389
<141> 2022-02-07
<150> 62/540,781
<151> 2017-08-03
<160> 5
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 133
<212> PRT
<213> 智人
<400> 1
Figure 111104389-A0202-12-0180-21
<210> 2
<211> 153
<212> PRT
<213> 智人
<400> 2
Figure 111104389-A0202-12-0180-22
Figure 111104389-A0202-12-0181-23
<210> 3
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<400> 3
Figure 111104389-A0202-12-0181-24
<210> 4
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> 除脯胺酸外之任何胺基酸
<400> 4
Figure 111104389-A0202-12-0182-26
<210> 5
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成多肽
<400> 5
Figure 111104389-A0202-12-0182-25

Claims (42)

  1. 一種介白素2(IL-2)結合物，其包含共價連接至結合部分之非天然胺基酸，
    其中該非天然胺基酸位於區35-107中，且其中該區35-107對應於SEQ ID NO：1之殘基K35-Y107；且
    其中該非天然胺基酸係位於該IL-2結合物上之一位置，降低該IL-2結合物與介白素2受體α(IL-2Rα)之間的結合，但保持與介白素2βγ受體(IL-2Rβγ)信號傳導複合物顯著結合以形成IL-2/IL-2Rβγ複合物，其中該降低與IL-2Rα之結合係與野生型IL-2多肽與IL-2Rα之間的結合相比。
  2. 如請求項2之IL-2結合物，其中該非天然胺基酸的該位置係K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、P47、K48、Q57、E60、E61、E62、L63、K64、P65、E68、V69、N71、L72、Q74、S75、K76、N77、M104、C105、E106，或Y107，其中該等殘基位置對應於SEQ ID NO：1中的位置。
  3. 如請求項1或2之IL-2結合物，其中該非天然胺基酸為係離胺酸類似物或包含芳族側鏈。
  4. 如請求項3之IL-2結合物，其中該至少一個非天然胺基酸包含N6-疊氮基乙氧基-L-離胺酸(AzK)、N6-炔丙基乙氧基-L-離胺酸(PraK)、BCN-L-離胺酸、降冰片烯離胺酸、TCO-離胺酸、甲基四
    Figure 111104389-A0202-13-0001-51
    離胺酸、烯丙氧基羰基離胺酸、對-乙醯基-L-苯丙胺酸、對-疊氮基甲基-L-苯丙胺酸 (pAMF)、對-碘-L-苯丙胺酸、間-乙醯基苯丙胺酸、對-炔丙基氧基苯丙胺酸、對-炔丙基-苯丙胺酸、3-甲基-苯丙胺酸、L-多巴、氟化苯丙胺酸、異丙基-L-苯丙胺酸、對-疊氮基-L-苯丙胺酸、對-醯基-L-苯丙胺酸、對-苯甲醯基-L-苯丙胺酸、對-溴苯丙胺酸、對-胺基-L-苯丙胺酸、異丙基-L-苯丙胺酸、O-烯丙基酪胺酸、O-甲基-L-酪胺酸、O-4-烯丙基-L-酪胺酸、4-丙基-L-酪胺酸、膦醯基酪胺酸、L-3-(2-萘基)丙胺酸、2-胺基-3-((2-((3-(苯甲氧基)-3-側氧基丙基)胺基)乙基)硒烷基(selanyl))丙酸，或2-胺基-3-(苯基硒烷基)丙酸。
  5. 如請求項1或2之IL-2結合物，其中該結合部分係水溶性聚合物。
  6. 如請求項5之IL-2結合物，其中該水溶性聚合物包含聚乙二醇(PEG)、聚(丙二醇)(PPG)、乙二醇及丙二醇之共聚物、聚(氧乙基化多元醇)、聚(烯醇)、聚(乙烯吡咯啶酮)、聚(羥烷基甲基丙烯醯胺)、聚(羥烷基甲基丙烯酸酯)、聚(醣)、聚(α-羥基酸)、聚(乙烯醇)、聚磷氮烯、聚噁唑啉(POZ)、聚(N-丙烯醯嗎啉)，或其組合。
  7. 如請求項6之IL-2結合物，其中該水溶性聚合物包含PEG。
  8. 如請求項7之IL-2結合物，其中該PEG包含自約20kDa至約85kDa的重量平均分子量。
  9. 如請求項8之IL-2結合物，其中該PEG具有約20kDa、約25kDa、約30kDa、約35kDa、約40kDa、約45kDa，或約50kDa的重量平均分子量。
  10. 如請求項1或2之IL-2結合物，其中該結合部分經由連接子結合至該非天然胺基酸。
  11. 如請求項10之IL-2結合物，其中該連接子包含同雙官能(homobifunctional)連接子、異雙官能(heterobifunctional)連接子、可裂解或不可裂解二肽連接子、順丁烯二醯亞胺基、間隔子，或其組合。
  12. 如請求項1或2之IL-2結合物，其中該IL-2結合物包含N端缺失。
  13. 如請求項12之IL-2結合物，其中該N端缺失包含缺失該N端前1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25或30個殘基，其中殘基位置係參考SEQ ID NO：1中之位置。
  14. 如請求項1或2之IL-2結合物，其中該IL-2結合物包含與SEQ ID NO：1至少80%之序列一致性。
  15. 如請求項14之IL-2結合物，其中該IL-2結合物包含與SEQ ID NO：1約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%之序列一致 性。
  16. 如請求項1或2之IL-2結合物，其中該IL-2結合物能夠擴增CD4+輔助細胞、CD8+效應初始(naïve)細胞、CD8+效應記憶細胞、自然殺手(NK)細胞、自然殺手T(NKT)細胞群體，或其組合。
  17. 如請求項1或2之IL-2結合物，其中該結合部分或該非天然胺基酸減弱或阻斷IL-2與IL-2Rα之結合。
  18. 如請求項1或2之IL-2結合物，其中相對於野生型IL-2多肽，CD4+輔助細胞、CD8+效應初始細胞、CD8+效應記憶細胞、自然殺手(NK)細胞或自然殺手T(NKT)細胞群體藉由該IL-2結合物經由IL-2Rβγ複合物之活化保持該細胞群體之顯著活化效能。
  19. 如請求項18之IL-2結合物，其中該IL-2結合物對該IL-2Rβγ複合物之受體信號傳導效能高於該野生型IL-2多肽對該IL-2Rβγ複合物之受體信號傳導效能。
  20. 如請求項18之IL-2結合物，其中該IL-2結合物對該IL-2Rβγ複合物之受體信號傳導效能低於該野生型IL-2多肽對該IL-2Rβγ複合物之受體信號傳導效能。
  21. 如請求項1或2之IL-2結合物，其中該IL-2結合物展現對IL- 2Rβγ之第一受體信號傳導效能及對IL-2Rαβγ之第二受體信號傳導效能，且其中與該第二受體信號傳導效能相比，該第一受體信號傳導效能係至少1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、50倍、100倍、500倍或更高。
  22. 如請求項21之IL-2結合物，其中該IL-2結合物之該第一受體信號傳導效能高於該野生型IL-2多肽對該IL-2Rβγ之受體信號傳導效能，且該IL-2結合物之該第二受體信號傳導效能低於該野生型IL-2多肽對該IL-2Rαβγ之受體信號傳導效能。
  23. 如請求項21之IL-2結合物，其中該IL-2結合物之該第一受體信號傳導效能比該野生型IL-2多肽之受體信號傳導效能低至少1倍。
  24. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至23中任一項之IL-2結合物及醫藥學上可接受之賦形劑。
  25. 如請求項24之醫藥組合物，其中該醫藥組合物經調配以用於全身遞送。
  26. 如請求項24之醫藥組合物，其中該醫藥組合物經調配以用於非經腸投與。
  27. 一種如請求項1至23中任一項之IL-2結合物或如請求項24至26 中任一項之醫藥組合物之用途，其係用於製備治療有需要個體之增生性疾病或病狀之藥物。
  28. 如請求項27之用途，其中該增生性病症或病狀係癌症。
  29. 如請求項28之用途，其中該癌症係實體腫瘤癌症。
  30. 如請求項29之用途，其中該實體腫瘤癌症係膀胱癌、骨癌、腦癌、乳癌、結腸直腸癌、食道癌、眼癌、頭頸癌、腎癌、肺癌、黑素瘤、卵巢癌、胰臟癌或前列腺癌。
  31. 如請求項28之用途，其中該癌症係惡性血液病。
  32. 如請求項31之用途，其中該惡性血液病係慢性淋巴球性白血病(CLL)、小淋巴球性淋巴瘤(SLL)、濾泡性淋巴瘤(FL)、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、套細胞淋巴瘤(MCL)、瓦爾登斯特倫氏(Waldenstrom’s)巨球蛋白血症、多發性骨髓瘤、結外(extranodal)邊緣區B細胞淋巴瘤、結(nodal)邊緣區B細胞淋巴瘤、伯基特氏(Burkitt’s)淋巴瘤、非伯基特氏高級B細胞淋巴瘤、原發性縱隔(mediastinal)B細胞淋巴瘤(PMBL)、免疫母細胞大細胞淋巴瘤、前驅體B淋巴母細胞性淋巴瘤、B細胞前淋巴球性白血病、淋巴漿細胞淋巴瘤、脾邊緣區淋巴瘤、漿細胞骨髓瘤、漿細胞瘤、縱隔(胸腺)大B細胞淋巴瘤、血管內大B細胞淋巴瘤、原發性積液淋巴瘤(effusion lymphoma)或淋巴瘤樣肉芽腫。
  33. 如請求項27之用途，其進一步包含投與另外治療劑。
  34. 如請求項33之用途，其中該IL-2結合物或該醫藥組合物，及該另外治療劑係同時投與。
  35. 如請求項33之用途，其中該IL-2結合物或該醫藥組合物，及該另外治療劑係依序投與。
  36. 如請求項35之用途，其中該IL-2結合物或該醫藥組合物係在投與該另外治療劑之前投與。
  37. 如請求項35之用途，其中該IL-2結合物或該醫藥組合物係在投與該另外治療劑之後投與。
  38. 如請求項27至37中任一項之用途，其中該個體係人類。
  39. 一種活體外(in vitro)或離體(ex vivo)擴增CD4+輔助細胞、CD8+效應初始細胞、CD8+效應記憶細胞、自然殺手(NK)細胞或自然殺手T(NKT)細胞群體之方法，其包含：
    使細胞群體與如請求項1至23中任一項之IL-2結合物或如請求項24至26中任一項之醫藥組合物接觸足以誘導與IL-2Rβγ形成複合物之時間，藉此刺激Teff及/或NK細胞群體之擴增。
  40. 如請求項39之活體外或離體方法，其中該IL-2結合物或該醫藥組合物使該CD3+細胞群體中之CD4+ Treg細胞擴增少20%、15%、10%、5%或1%。
  41. 如請求項39之活體外或離體方法，其中該IL-2結合物或該醫藥組合物不使該細胞群體中之CD4+ Treg細胞擴增。
  42. 如請求項39之活體外或離體方法，其中在與該IL-2結合物或該醫藥組合物一起培育之後，該細胞群體中該等Teff細胞對Treg細胞之比率係約或至少2：1、3：1、4：1、5：1、6：1、7：1、8：1、9：1、10：1、20：1、50：1或100：1。
TW111104389A 2017-08-03 2018-08-03 用於增生及感染性疾病治療之細胞激素結合物 TW202248207A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762540781P 2017-08-03 2017-08-03
US62/540,781 2017-08-03

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW202248207A true TW202248207A (zh) 2022-12-16

Family

ID=65234189

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW111104389A TW202248207A (zh) 2017-08-03 2018-08-03 用於增生及感染性疾病治療之細胞激素結合物
TW107127148A TWI757528B (zh) 2017-08-03 2018-08-03 用於增生及感染性疾病治療之細胞激素結合物

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW107127148A TWI757528B (zh) 2017-08-03 2018-08-03 用於增生及感染性疾病治療之細胞激素結合物

Country Status (18)

Country Link
US (6) US20200181220A1 (zh)
EP (2) EP3661955A4 (zh)
JP (4) JP2020529976A (zh)
KR (2) KR20200035092A (zh)
CN (2) CN111183149A (zh)
AR (1) AR112969A1 (zh)
AU (4) AU2018309172B2 (zh)
BR (2) BR112020002271A2 (zh)
CA (2) CA3071013A1 (zh)
CO (2) CO2020001823A2 (zh)
IL (2) IL272410A (zh)
MA (2) MA49767A (zh)
MX (2) MX2020001332A (zh)
NZ (2) NZ761430A (zh)
PH (2) PH12020500241A1 (zh)
SG (2) SG11202000944SA (zh)
TW (2) TW202248207A (zh)
WO (2) WO2019028419A1 (zh)

Families Citing this family (108)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018170288A1 (en) 2017-03-15 2018-09-20 Pandion Therapeutics, Inc. Targeted immunotolerance
BR112019024127A2 (pt) 2017-05-24 2020-06-23 Pandion Therapeutics, Inc. Imunotolerância alvejada
JP7325341B2 (ja) 2017-07-11 2023-08-14 シンソークス，インク． 非天然ヌクレオチドの組み込み及びその方法
NZ761430A (en) 2017-08-03 2024-03-22 Synthorx Inc Cytokine conjugates for the treatment of proliferative and infectious diseases
US10946068B2 (en) 2017-12-06 2021-03-16 Pandion Operations, Inc. IL-2 muteins and uses thereof
US10174091B1 (en) 2017-12-06 2019-01-08 Pandion Therapeutics, Inc. IL-2 muteins
CN115710576A (zh) 2018-02-01 2023-02-24 Nkmax有限公司 产生天然杀伤细胞的方法和用于治疗癌症的组合物
JP2021514974A (ja) * 2018-02-26 2021-06-17 シンソークス， インコーポレイテッド Ｉｌ−１５コンジュゲートおよびその使用
AU2019297451A1 (en) 2018-07-03 2021-01-28 Marengo Therapeutics, Inc. Anti-TCR antibody molecules and uses thereof
FI3849614T3 (fi) 2018-09-11 2024-02-08 Ambrx Inc Interleukiini-2-polypeptidikonjugaatteja ja niiden käyttöjä
US20210221863A1 (en) * 2018-09-21 2021-07-22 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Novel interleukin-2 and use thereof
BR112021014415A2 (pt) 2019-02-06 2021-09-21 Synthorx, Inc. Conjugados de il-2 e métodos de uso dos mesmos
US20220193253A1 (en) * 2019-04-26 2022-06-23 Prolynx Llc Slow-release cytokine conjugates
KR20220035333A (ko) 2019-05-20 2022-03-22 팬디온 오퍼레이션스, 인코포레이티드 Madcam 표적 면역관용
KR20220012296A (ko) 2019-05-20 2022-02-03 싸이튠 파마 암 또는 감염성 질환 치료를 위한 IL-2/IL-15Rβγ 작용제 투여 요법
WO2020257525A1 (en) * 2019-06-20 2020-12-24 Cspc Dophen Corporation Modified il-2 proteins, peg conjugates, and uses thereof
US20220289806A1 (en) * 2019-08-15 2022-09-15 Cytimm Therapeutics, Inc. Modified Interleukin 2 (IL-2) Polypeptides, Conjugates and Uses Thereof
MX2022001776A (es) * 2019-08-15 2022-03-17 Synthorx Inc Terapias de combinacion de inmuno oncologia con conjugados de il-2.
MX2022002053A (es) 2019-08-23 2022-03-17 Synthorx Inc Conjugados de il-15 y sus usos.
CN114853874A (zh) * 2019-09-10 2022-08-05 中国医学科学院北京协和医院 靶向调节t细胞的长效白介素-2及其在治疗自身免疫病中的应用
US20210070827A1 (en) 2019-09-10 2021-03-11 Synthorx, Inc. Il-2 conjugates and methods of use to treat autoimmune diseases
TW202131952A (zh) 2019-11-04 2021-09-01 美商欣爍克斯公司 介白素10接合物及其用途
EP3819307A1 (en) 2019-11-07 2021-05-12 CytoKi Pharma ApS Therapeutic derivatives of interleukin-22
CN114524873A (zh) * 2019-12-17 2022-05-24 北京志道生物科技有限公司 白介素-2衍生物
CN115315436A (zh) * 2020-01-10 2022-11-08 明峰治疗股份公司 修饰的il-2多肽及其用途
JP2023511274A (ja) 2020-01-14 2023-03-17 シンセカイン インコーポレイテッド Ｉｌ２オルソログおよび使用法
CA3166509A1 (en) 2020-01-14 2021-07-22 Synthekine, Inc. Biased il2 muteins methods and compositions
AU2021233909A1 (en) * 2020-03-11 2022-09-29 Ambrx, Inc. Interleukin-2 polypeptide conjugates and methods of use thereof
CN115997008A (zh) 2020-04-22 2023-04-21 艾欧凡斯生物治疗公司 协调用于患者特异性免疫疗法的细胞的制造的系统和方法
KR20230004682A (ko) * 2020-04-22 2023-01-06 머크 샤프 앤드 돔 엘엘씨 인터류킨-2 수용체 베타 감마c 이량체에 대해 편향되고 비펩티드성 수용성 중합체에 접합된 인간 인터류킨-2 접합체
US20210340586A1 (en) 2020-04-30 2021-11-04 Sutro Biopharma, Inc. Methods of Producing Full-Length Antibodies Using E. coli
JP2023523855A (ja) 2020-05-04 2023-06-07 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド 腫瘍浸潤リンパ球の製造方法及び免疫療法におけるその使用
TW202208616A (zh) 2020-05-04 2022-03-01 美商艾歐凡斯生物治療公司 改良之腫瘤反應性ｔ細胞的選擇
JP2023526282A (ja) 2020-05-13 2023-06-21 ボナム セラピューティクス，インク． タンパク質複合体の組成物及びその使用方法
JP2023527919A (ja) 2020-06-03 2023-06-30 アセンディス ファーマ オンコロジー ディヴィジョン エー／エス Ｉｌ－２配列及びその使用
US20210393743A1 (en) * 2020-06-21 2021-12-23 Ketan Desai Use of IL13 for prevention and treatment of COVID19
KR20230027235A (ko) 2020-06-25 2023-02-27 신톡스, 인크. Il-2 콘쥬게이트 및 항-egfr 항체를 사용한 면역 종양학 병용 요법
WO2022031884A2 (en) 2020-08-05 2022-02-10 Synthekine, Inc. Il2rg binding molecules and methods of use
KR20230065259A (ko) 2020-08-05 2023-05-11 신테카인, 인크. Il10 수용체 결합 분자 및 사용 방법
EP4192490A1 (en) 2020-08-05 2023-06-14 Synthekine, Inc. IL27Ra BINDING MOLECULES AND METHODS OF USE
EP4192489A2 (en) 2020-08-05 2023-06-14 Synthekine, Inc. Il2rb binding molecules and methods of use
TW202227480A (zh) 2020-09-14 2022-07-16 美商蘇特羅生物製藥公司 使用無細胞蛋白質合成系統來大規模生產抗體之方法
WO2022076606A1 (en) 2020-10-06 2022-04-14 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of nsclc patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies
EP4225330A1 (en) 2020-10-06 2023-08-16 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of nsclc patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies
MX2023004029A (es) 2020-10-09 2023-04-27 Synthorx Inc Terapia de combinacion de inmunoncologia con conjugados de il-2 y pembrolizumab.
AU2021356610A1 (en) 2020-10-09 2023-06-15 Synthorx, Inc. Immuno oncology therapies with il-2 conjugates
CN116963755A (zh) 2020-10-14 2023-10-27 赛缇姆治疗公司 经修饰的白细胞介素2（il-2）多肽以及制备和使用其的方法
JP2023550880A (ja) 2020-10-26 2023-12-06 サイチューン ファーマ 非黒色腫皮膚癌を治療するためのＩＬ－２／ＩＬ－１５Ｒβγアゴニスト
AU2021367887A1 (en) 2020-10-26 2023-06-01 Cytune Pharma IL-2/IL-15Rβү AGONIST FOR TREATING SQUAMOUS CELL CARCINOMA
CN112279906B (zh) * 2020-10-30 2022-09-20 浙江新码生物医药有限公司 人白细胞介素2-聚乙二醇偶联物及其制备方法与应用
WO2022098954A1 (en) 2020-11-06 2022-05-12 Nektar Therapeutics Tlr agonist compounds and related cancer immunotherapy methods
WO2022125941A1 (en) 2020-12-11 2022-06-16 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of cancer patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies in combination with braf inhibitors and/or mek inhibitors
WO2022133149A1 (en) 2020-12-17 2022-06-23 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of cancers with tumor infiltrating lymphocytes
JP2023554395A (ja) 2020-12-17 2023-12-27 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド Ｃｔｌａ－４及びｐｄ－１阻害剤と併用した腫瘍浸潤リンパ球療法による治療
JP2024501845A (ja) 2020-12-31 2024-01-16 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド 腫瘍浸潤リンパ球の自動化された産生のためのデバイス及びプロセス
EP4274616A2 (en) 2021-01-11 2023-11-15 Synthekine, Inc. Compositions and methods related to receptor pairing
WO2022165260A1 (en) 2021-01-29 2022-08-04 Iovance Biotherapeutics, Inc. Methods of making modified tumor infiltrating lymphocytes and their use in adoptive cell therapy
WO2022170219A1 (en) 2021-02-05 2022-08-11 Iovance Biotherapeutics, Inc. Adjuvant therapy for cancer
WO2022174102A1 (en) 2021-02-12 2022-08-18 Synthorx, Inc. Lung cancer combination therapy with il-2 conjugates and an anti-pd-1 antibody or antigen-binding fragment thereof
WO2022174101A1 (en) 2021-02-12 2022-08-18 Synthorx, Inc. Skin cancer combination therapy with il-2 conjugates and cemiplimab
EP4301138A2 (en) 2021-03-05 2024-01-10 Iovance Biotherapeutics, Inc. Tumor storage and cell culture compositions
CA3212439A1 (en) 2021-03-19 2022-09-22 Michelle SIMPSON-ABELSON Methods for tumor infiltrating lymphocyte (til) expansion related to cd39/cd69 selection and gene knockout in tils
KR20240032711A (ko) 2021-03-25 2024-03-12 이오반스 바이오테라퓨틱스, 인크. T-세포 공배양 효능 검정 및 세포 치료제와 함께 사용하기 위한 방법 및 조성물
WO2022200525A1 (en) 2021-03-26 2022-09-29 Innate Pharma Multispecific proteins comprising an nkp46-binding site, a cancer antgienge binding site fused to a cytokine for nk cell engaging
CN113321722A (zh) * 2021-04-13 2021-08-31 苏州复融生物技术有限公司 白介素2突变体及其应用
KR20240037185A (ko) 2021-04-19 2024-03-21 이오반스 바이오테라퓨틱스, 인크. 키메라 공동자극 수용체, 케모카인 수용체, 및 세포 면역치료에서의 이의 용도
EP4340850A1 (en) 2021-05-17 2024-03-27 Iovance Biotherapeutics, Inc. Pd-1 gene-edited tumor infiltrating lymphocytes and uses of same in immunotherapy
WO2022256538A1 (en) 2021-06-03 2022-12-08 Synthorx, Inc. Head and neck cancer combination therapy comprising an il-2 conjugate and cetuximab
WO2022260916A1 (en) * 2021-06-08 2022-12-15 Merck Sharp & Dohme Llc Functional cell-based potency assay for measuring biological activity of interleukin 2 (il-2) analogs
WO2022258691A1 (en) 2021-06-09 2022-12-15 Innate Pharma Multispecific proteins binding to nkg2d, a cytokine receptor, a tumour antigen and cd16a
WO2022258678A1 (en) 2021-06-09 2022-12-15 Innate Pharma Multispecific proteins binding to nkp30, a cytokine receptor, a tumour antigen and cd16a
BR112023025476A2 (pt) 2021-06-09 2024-02-27 Innate Pharma Proteína de ligação multimérica e seu método de produção, composição farmacêutica, molécula de ácido nucleico isolada, vetor de expressão, célula isolada e proteína de ligação para uso
CN117616050A (zh) 2021-06-09 2024-02-27 先天制药公司 与nkp46、细胞因子受体、肿瘤抗原和cd16a结合的多特异性蛋白质
WO2023281485A1 (en) 2021-07-09 2023-01-12 Bright Peak Therapeutics Ag Modified il-2 polypeptides for treatment of inflammatory and autoimmune diseases
WO2023281482A1 (en) 2021-07-09 2023-01-12 Bright Peak Therapeutics Ag Cd20-targeted il-2 and its uses
US20230250181A1 (en) 2021-07-09 2023-08-10 Bright Peak Therapeutics Ag Modified checkpoint inhibitors and uses thereof
WO2023281480A1 (en) 2021-07-09 2023-01-12 Bright Peak Therapeutics Ag Conjugates of checkpoint inhibitors with il-2, and uses thereof
KR20240040134A (ko) 2021-07-09 2024-03-27 브라이트 피크 테라퓨틱스 아게 항체 접합체 및 이의 제조
CA3226111A1 (en) 2021-07-22 2023-01-26 Iovance Biotherapeutics, Inc. Method for cryopreservation of solid tumor fragments
WO2023009716A1 (en) 2021-07-28 2023-02-02 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of cancer patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies in combination with kras inhibitors
KR20240043797A (ko) 2021-08-13 2024-04-03 싸이튠 파마 암 치료용 IL-2/IL-15Rβγ 작용제와 항체-약물 접합체 조합
CN113788890B (zh) * 2021-09-01 2022-11-08 浙江新码生物医药有限公司 一种人白细胞介素2-聚乙二醇偶联物及其应用
CN113698468B (zh) * 2021-09-01 2022-10-11 浙江新码生物医药有限公司 人白细胞介素2-聚乙二醇偶联物及其应用
AU2022343729A1 (en) 2021-09-09 2024-03-21 Iovance Biotherapeutics, Inc. Processes for generating til products using pd-1 talen knockdown
WO2023049862A1 (en) 2021-09-24 2023-03-30 Iovance Biotherapeutics, Inc. Expansion processes and agents for tumor infiltrating lymphocytes
WO2023064802A1 (en) * 2021-10-13 2023-04-20 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods for controlling osteocalcin release
AR127482A1 (es) 2021-10-27 2024-01-31 Iovance Biotherapeutics Inc Sistemas y métodos para coordinar la fabricación de células para inmunoterapia específica de paciente
WO2023079524A2 (en) * 2021-11-08 2023-05-11 Life Technologies As Polymer-interaction molecule conjugates and methods of use
WO2023086803A1 (en) 2021-11-10 2023-05-19 Iovance Biotherapeutics, Inc. Methods of expansion treatment utilizing cd8 tumor infiltrating lymphocytes
WO2023122573A1 (en) 2021-12-20 2023-06-29 Synthorx, Inc. Head and neck cancer combination therapy comprising an il-2 conjugate and pembrolizumab
WO2023122750A1 (en) 2021-12-23 2023-06-29 Synthorx, Inc. Cancer combination therapy with il-2 conjugates and cetuximab
WO2023133595A2 (en) 2022-01-10 2023-07-13 Sana Biotechnology, Inc. Methods of ex vivo dosing and administration of lipid particles or viral vectors and related systems and uses
CN114349843A (zh) * 2022-01-18 2022-04-15 浙江博锐生物制药有限公司 白细胞介素-2衍生物及其制备方法和应用
WO2023147486A1 (en) 2022-01-28 2023-08-03 Iovance Biotherapeutics, Inc. Tumor infiltrating lymphocytes engineered to express payloads
WO2023147488A1 (en) 2022-01-28 2023-08-03 Iovance Biotherapeutics, Inc. Cytokine associated tumor infiltrating lymphocytes compositions and methods
CN114533730A (zh) * 2022-02-17 2022-05-27 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心） Triapine用于治疗非洲猪瘟病毒感染的应用
WO2023161857A1 (en) 2022-02-23 2023-08-31 Bright Peak Therapeutics Ag Bifunctional cytokine compositions
WO2023193015A1 (en) 2022-04-01 2023-10-05 Sana Biotechnology, Inc. Cytokine receptor agonist and viral vector combination therapies
WO2023196877A1 (en) 2022-04-06 2023-10-12 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of nsclc patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies
WO2023201369A1 (en) 2022-04-15 2023-10-19 Iovance Biotherapeutics, Inc. Til expansion processes using specific cytokine combinations and/or akti treatment
WO2023202035A1 (zh) * 2022-04-20 2023-10-26 北京大学宁波海洋药物研究院 受体偏向的peg化il-2变体组合及其应用
WO2023220608A1 (en) 2022-05-10 2023-11-16 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of cancer patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies in combination with an il-15r agonist
WO2023235790A1 (en) * 2022-06-01 2023-12-07 University Of Miami Bifunctional il-2 and il-10 fusion proteins and uses thereof
WO2023241653A1 (zh) * 2022-06-17 2023-12-21 舒泰神（北京）生物制药股份有限公司 白介素-2(il-2)突变体及其用途
WO2024011114A1 (en) 2022-07-06 2024-01-11 Iovance Biotherapeutics, Inc. Devices and processes for automated production of tumor infiltrating lymphocytes
WO2024030758A1 (en) 2022-08-01 2024-02-08 Iovance Biotherapeutics, Inc. Chimeric costimulatory receptors, chemokine receptors, and the use of same in cellular immunotherapies
WO2024055017A1 (en) 2022-09-09 2024-03-14 Iovance Biotherapeutics, Inc. Processes for generating til products using pd-1/tigit talen double knockdown
WO2024055018A1 (en) 2022-09-09 2024-03-14 Iovance Biotherapeutics, Inc. Processes for generating til products using pd-1/tigit talen double knockdown

Family Cites Families (323)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3687808A (en) 1969-08-14 1972-08-29 Univ Leland Stanford Junior Synthetic polynucleotides
US4469863A (en) 1980-11-12 1984-09-04 Ts O Paul O P Nonionic nucleic acid alkyl and aryl phosphonates and processes for manufacture and use thereof
US5023243A (en) 1981-10-23 1991-06-11 Molecular Biosystems, Inc. Oligonucleotide therapeutic agent and method of making same
US4476301A (en) 1982-04-29 1984-10-09 Centre National De La Recherche Scientifique Oligonucleotides, a process for preparing the same and their application as mediators of the action of interferon
JPS5927900A (ja) 1982-08-09 1984-02-14 Wakunaga Seiyaku Kk 固定化オリゴヌクレオチド
FR2540122B1 (fr) 1983-01-27 1985-11-29 Centre Nat Rech Scient Nouveaux composes comportant une sequence d'oligonucleotide liee a un agent d'intercalation, leur procede de synthese et leur application
US4605735A (en) 1983-02-14 1986-08-12 Wakunaga Seiyaku Kabushiki Kaisha Oligonucleotide derivatives
US4948882A (en) 1983-02-22 1990-08-14 Syngene, Inc. Single-stranded labelled oligonucleotides, reactive monomers and methods of synthesis
US4824941A (en) 1983-03-10 1989-04-25 Julian Gordon Specific antibody to the native form of 2'5'-oligonucleotides, the method of preparation and the use as reagents in immunoassays or for binding 2'5'-oligonucleotides in biological systems
US4587044A (en) 1983-09-01 1986-05-06 The Johns Hopkins University Linkage of proteins to nucleic acids
US4849513A (en) 1983-12-20 1989-07-18 California Institute Of Technology Deoxyribonucleoside phosphoramidites in which an aliphatic amino group is attached to the sugar ring and their use for the preparation of oligonucleotides containing aliphatic amino groups
US5015733A (en) 1983-12-20 1991-05-14 California Institute Of Technology Nucleosides possessing blocked aliphatic amino groups
US5118802A (en) 1983-12-20 1992-06-02 California Institute Of Technology DNA-reporter conjugates linked via the 2' or 5'-primary amino group of the 5'-terminal nucleoside
US5118800A (en) 1983-12-20 1992-06-02 California Institute Of Technology Oligonucleotides possessing a primary amino group in the terminal nucleotide
EP0154316B1 (en) 1984-03-06 1989-09-13 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified lymphokine and production thereof
US4569790A (en) 1984-03-28 1986-02-11 Cetus Corporation Process for recovering microbially produced interleukin-2 and purified recombinant interleukin-2 compositions
US5550111A (en) 1984-07-11 1996-08-27 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education Dual action 2',5'-oligoadenylate antiviral derivatives and uses thereof
FR2567892B1 (fr) 1984-07-19 1989-02-17 Centre Nat Rech Scient Nouveaux oligonucleotides, leur procede de preparation et leurs applications comme mediateurs dans le developpement des effets des interferons
US5430136A (en) 1984-10-16 1995-07-04 Chiron Corporation Oligonucleotides having selectably cleavable and/or abasic sites
US5258506A (en) 1984-10-16 1993-11-02 Chiron Corporation Photolabile reagents for incorporation into oligonucleotide chains
US5367066A (en) 1984-10-16 1994-11-22 Chiron Corporation Oligonucleotides with selectably cleavable and/or abasic sites
US4828979A (en) 1984-11-08 1989-05-09 Life Technologies, Inc. Nucleotide analogs for nucleic acid labeling and detection
FR2575751B1 (fr) 1985-01-08 1987-04-03 Pasteur Institut Nouveaux nucleosides de derives de l'adenosine, leur preparation et leurs applications biologiques
US5034506A (en) 1985-03-15 1991-07-23 Anti-Gene Development Group Uncharged morpholino-based polymers having achiral intersubunit linkages
US5235033A (en) 1985-03-15 1993-08-10 Anti-Gene Development Group Alpha-morpholino ribonucleoside derivatives and polymers thereof
US5185444A (en) 1985-03-15 1993-02-09 Anti-Gene Deveopment Group Uncharged morpolino-based polymers having phosphorous containing chiral intersubunit linkages
US5405938A (en) 1989-12-20 1995-04-11 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US5166315A (en) 1989-12-20 1992-11-24 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US4683202A (en) 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US4965188A (en) 1986-08-22 1990-10-23 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences using a thermostable enzyme
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US5656493A (en) 1985-03-28 1997-08-12 The Perkin-Elmer Corporation System for automated performance of the polymerase chain reaction
JPS61225199A (ja) * 1985-03-29 1986-10-06 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd 新規ヒトインタ−ロイキン２ポリペチド誘導体
US4762779A (en) 1985-06-13 1988-08-09 Amgen Inc. Compositions and methods for functionalizing nucleic acids
US4766106A (en) 1985-06-26 1988-08-23 Cetus Corporation Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
US5206344A (en) 1985-06-26 1993-04-27 Cetus Oncology Corporation Interleukin-2 muteins and polymer conjugation thereof
US5576195A (en) 1985-11-01 1996-11-19 Xoma Corporation Vectors with pectate lyase signal sequence
US5093232A (en) 1985-12-11 1992-03-03 Chiron Corporation Nucleic acid probes
US4910300A (en) 1985-12-11 1990-03-20 Chiron Corporation Method for making nucleic acid probes
US5317098A (en) 1986-03-17 1994-05-31 Hiroaki Shizuya Non-radioisotope tagging of fragments
JPS638396A (ja) 1986-06-30 1988-01-14 Wakunaga Pharmaceut Co Ltd ポリ標識化オリゴヌクレオチド誘導体
US4931544A (en) 1986-09-04 1990-06-05 Cetus Corporation Succinylated interleukin-2 for pharmaceutical compositions
US5276019A (en) 1987-03-25 1994-01-04 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
US5264423A (en) 1987-03-25 1993-11-23 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
US4904582A (en) 1987-06-11 1990-02-27 Synthetic Genetics Novel amphiphilic nucleic acid conjugates
JP2828642B2 (ja) 1987-06-24 1998-11-25 ハワード フローレイ インスティテュト オブ イクスペリメンタル フィジオロジー アンド メディシン ヌクレオシド誘導体
US5585481A (en) 1987-09-21 1996-12-17 Gen-Probe Incorporated Linking reagents for nucleotide probes
US5188897A (en) 1987-10-22 1993-02-23 Temple University Of The Commonwealth System Of Higher Education Encapsulated 2',5'-phosphorothioate oligoadenylates
US4924624A (en) 1987-10-22 1990-05-15 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education 2,',5'-phosphorothioate oligoadenylates and plant antiviral uses thereof
US5525465A (en) 1987-10-28 1996-06-11 Howard Florey Institute Of Experimental Physiology And Medicine Oligonucleotide-polyamide conjugates and methods of production and applications of the same
DE3738460A1 (de) 1987-11-12 1989-05-24 Max Planck Gesellschaft Modifizierte oligonukleotide
US5082830A (en) 1988-02-26 1992-01-21 Enzo Biochem, Inc. End labeled nucleotide probe
JPH03503894A (ja) 1988-03-25 1991-08-29 ユニバーシィティ　オブ　バージニア　アランミ　パテンツ　ファウンデイション オリゴヌクレオチド　ｎ‐アルキルホスホラミデート
US5278302A (en) 1988-05-26 1994-01-11 University Patents, Inc. Polynucleotide phosphorodithioates
US5109124A (en) 1988-06-01 1992-04-28 Biogen, Inc. Nucleic acid probe linked to a label having a terminal cysteine
US5216141A (en) 1988-06-06 1993-06-01 Benner Steven A Oligonucleotide analogs containing sulfur linkages
US5175273A (en) 1988-07-01 1992-12-29 Genentech, Inc. Nucleic acid intercalating agents
US5262536A (en) 1988-09-15 1993-11-16 E. I. Du Pont De Nemours And Company Reagents for the preparation of 5'-tagged oligonucleotides
US5512439A (en) 1988-11-21 1996-04-30 Dynal As Oligonucleotide-linked magnetic particles and uses thereof
CA2008096A1 (en) 1989-01-19 1990-07-19 Samuel Rose Nucleic acid amplification using single primer
US4902502A (en) 1989-01-23 1990-02-20 Cetus Corporation Preparation of a polymer/interleukin-2 conjugate
US5089261A (en) 1989-01-23 1992-02-18 Cetus Corporation Preparation of a polymer/interleukin-2 conjugate
US5457183A (en) 1989-03-06 1995-10-10 Board Of Regents, The University Of Texas System Hydroxylated texaphyrins
US5599923A (en) 1989-03-06 1997-02-04 Board Of Regents, University Of Tx Texaphyrin metal complexes having improved functionalization
US5391723A (en) 1989-05-31 1995-02-21 Neorx Corporation Oligonucleotide conjugates
US4958013A (en) 1989-06-06 1990-09-18 Northwestern University Cholesteryl modified oligonucleotides
US5451463A (en) 1989-08-28 1995-09-19 Clontech Laboratories, Inc. Non-nucleoside 1,3-diol reagents for labeling synthetic oligonucleotides
US5134066A (en) 1989-08-29 1992-07-28 Monsanto Company Improved probes using nucleosides containing 3-dezauracil analogs
US5254469A (en) 1989-09-12 1993-10-19 Eastman Kodak Company Oligonucleotide-enzyme conjugate that can be used as a probe in hybridization assays and polymerase chain reaction procedures
US5591722A (en) 1989-09-15 1997-01-07 Southern Research Institute 2'-deoxy-4'-thioribonucleosides and their antiviral activity
US5399676A (en) 1989-10-23 1995-03-21 Gilead Sciences Oligonucleotides with inverted polarity
US5264564A (en) 1989-10-24 1993-11-23 Gilead Sciences Oligonucleotide analogs with novel linkages
EP0942000B1 (en) 1989-10-24 2004-06-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-Modified oligonucleotides
US5264562A (en) 1989-10-24 1993-11-23 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide analogs with novel linkages
US5292873A (en) 1989-11-29 1994-03-08 The Research Foundation Of State University Of New York Nucleic acids labeled with naphthoquinone probe
US5177198A (en) 1989-11-30 1993-01-05 University Of N.C. At Chapel Hill Process for preparing oligoribonucleoside and oligodeoxyribonucleoside boranophosphates
US5130302A (en) 1989-12-20 1992-07-14 Boron Bilogicals, Inc. Boronated nucleoside, nucleotide and oligonucleotide compounds, compositions and methods for using same
US5486603A (en) 1990-01-08 1996-01-23 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide having enhanced binding affinity
US5459255A (en) 1990-01-11 1995-10-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-2 substituted purines
US5681941A (en) 1990-01-11 1997-10-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted purines and oligonucleotide cross-linking
US5587361A (en) 1991-10-15 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having phosphorothioate linkages of high chiral purity
US5646265A (en) 1990-01-11 1997-07-08 Isis Pharmceuticals, Inc. Process for the preparation of 2'-O-alkyl purine phosphoramidites
US5587470A (en) 1990-01-11 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. 3-deazapurines
US5670633A (en) 1990-01-11 1997-09-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Sugar modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression
US5578718A (en) 1990-01-11 1996-11-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Thiol-derivatized nucleosides
AU7579991A (en) 1990-02-20 1991-09-18 Gilead Sciences, Inc. Pseudonucleosides and pseudonucleotides and their polymers
US5214136A (en) 1990-02-20 1993-05-25 Gilead Sciences, Inc. Anthraquinone-derivatives oligonucleotides
US5321131A (en) 1990-03-08 1994-06-14 Hybridon, Inc. Site-specific functionalization of oligodeoxynucleotides for non-radioactive labelling
WO1991014781A1 (en) 1990-03-19 1991-10-03 Henkel Research Corporation METHOD FOR INCREASING THE OMEGA-HYDROXYLASE ACTIVITY IN $i(CANDIDA TROPICALIS)
US5470967A (en) 1990-04-10 1995-11-28 The Dupont Merck Pharmaceutical Company Oligonucleotide analogs with sulfamate linkages
GB9009980D0 (en) 1990-05-03 1990-06-27 Amersham Int Plc Phosphoramidite derivatives,their preparation and the use thereof in the incorporation of reporter groups on synthetic oligonucleotides
ES2116977T3 (es) 1990-05-11 1998-08-01 Microprobe Corp Soportes solidos para ensayos de hibridacion de acidos nucleicos y metodos para inmovilizar oligonucleotidos de modo covalente.
JPH04126084A (ja) 1990-05-11 1992-04-27 Hoechst Japan Ltd 蛋白質の製造法
US5610289A (en) 1990-07-27 1997-03-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogues
BR9106702A (pt) 1990-07-27 1993-06-08 Isis Pharmaceuticals Inc Analogo de oligonucleotideos e processos para modular a producao de uma proteina por um organismo e para tratar um organismo
US5688941A (en) 1990-07-27 1997-11-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods of making conjugated 4' desmethyl nucleoside analog compounds
US5623070A (en) 1990-07-27 1997-04-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Heteroatomic oligonucleoside linkages
US5602240A (en) 1990-07-27 1997-02-11 Ciba Geigy Ag. Backbone modified oligonucleotide analogs
US5608046A (en) 1990-07-27 1997-03-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated 4'-desmethyl nucleoside analog compounds
US5489677A (en) 1990-07-27 1996-02-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleoside linkages containing adjacent oxygen and nitrogen atoms
US5618704A (en) 1990-07-27 1997-04-08 Isis Pharmacueticals, Inc. Backbone-modified oligonucleotide analogs and preparation thereof through radical coupling
US5138045A (en) 1990-07-27 1992-08-11 Isis Pharmaceuticals Polyamine conjugated oligonucleotides
US5218105A (en) 1990-07-27 1993-06-08 Isis Pharmaceuticals Polyamine conjugated oligonucleotides
US5677437A (en) 1990-07-27 1997-10-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. Heteroatomic oligonucleoside linkages
US5541307A (en) 1990-07-27 1996-07-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogs and solid phase synthesis thereof
US5245022A (en) 1990-08-03 1993-09-14 Sterling Drug, Inc. Exonuclease resistant terminally substituted oligonucleotides
IL113519A (en) 1990-08-03 1997-11-20 Sterling Winthrop Inc Oligonucleoside sequences of from about 6 to about 200 bases having a three atom internucleoside linkage, their preparation and pharmaceutical compositions for inhibiting gene expression containing said oligonucleosides
US5177196A (en) 1990-08-16 1993-01-05 Microprobe Corporation Oligo (α-arabinofuranosyl nucleotides) and α-arabinofuranosyl precursors thereof
US5512667A (en) 1990-08-28 1996-04-30 Reed; Michael W. Trifunctional intermediates for preparing 3'-tailed oligonucleotides
US5214134A (en) 1990-09-12 1993-05-25 Sterling Winthrop Inc. Process of linking nucleosides with a siloxane bridge
US5561225A (en) 1990-09-19 1996-10-01 Southern Research Institute Polynucleotide analogs containing sulfonate and sulfonamide internucleoside linkages
CA2092002A1 (en) 1990-09-20 1992-03-21 Mark Matteucci Modified internucleoside linkages
NZ239893A (en) 1990-09-25 1993-11-25 Hoechst Japan A method for introducing a foreign dna into a cell
US5432272A (en) 1990-10-09 1995-07-11 Benner; Steven A. Method for incorporating into a DNA or RNA oligonucleotide using nucleotides bearing heterocyclic bases
ATE198598T1 (de) 1990-11-08 2001-01-15 Hybridon Inc Verbindung von mehrfachreportergruppen auf synthetischen oligonukleotiden
US5268273A (en) 1990-12-14 1993-12-07 Phillips Petroleum Company Pichia pastoris acid phosphatase gene, gene regions, signal sequence and expression vectors comprising same
US5672697A (en) 1991-02-08 1997-09-30 Gilead Sciences, Inc. Nucleoside 5'-methylene phosphonates
US5595732A (en) 1991-03-25 1997-01-21 Hoffmann-La Roche Inc. Polyethylene-protein conjugates
US5719262A (en) 1993-11-22 1998-02-17 Buchardt, Deceased; Ole Peptide nucleic acids having amino acid side chains
US5539082A (en) 1993-04-26 1996-07-23 Nielsen; Peter E. Peptide nucleic acids
US5714331A (en) 1991-05-24 1998-02-03 Buchardt, Deceased; Ole Peptide nucleic acids having enhanced binding affinity, sequence specificity and solubility
US5389529A (en) 1991-06-12 1995-02-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Modified lamβ signal sequence and processes for producing recombinant neurotrophins
US5371241A (en) 1991-07-19 1994-12-06 Pharmacia P-L Biochemicals Inc. Fluorescein labelled phosphoramidites
US5571799A (en) 1991-08-12 1996-11-05 Basco, Ltd. (2'-5') oligoadenylate analogues useful as inhibitors of host-v5.-graft response
US5612199A (en) 1991-10-11 1997-03-18 Behringwerke Ag Method for producing a polynucleotide for use in single primer amplification
DE59208572D1 (de) 1991-10-17 1997-07-10 Ciba Geigy Ag Bicyclische Nukleoside, Oligonukleotide, Verfahren zu deren Herstellung und Zwischenprodukte
US5594121A (en) 1991-11-07 1997-01-14 Gilead Sciences, Inc. Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified purines
US5484908A (en) 1991-11-26 1996-01-16 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotides containing 5-propynyl pyrimidines
JP3739785B2 (ja) 1991-11-26 2006-01-25 アイシス ファーマシューティカルズ，インコーポレイティド 修飾されたピリミジンを含有するオリゴマーを使用する増強された三重らせんおよび二重らせんの成形
TW393513B (en) 1991-11-26 2000-06-11 Isis Pharmaceuticals Inc Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified pyrimidines
US5359044A (en) 1991-12-13 1994-10-25 Isis Pharmaceuticals Cyclobutyl oligonucleotide surrogates
DE9115660U1 (zh) 1991-12-18 1992-07-30 Hoechst Ag, 6230 Frankfurt, De
US5565552A (en) 1992-01-21 1996-10-15 Pharmacyclics, Inc. Method of expanded porphyrin-oligonucleotide conjugate synthesis
US5595726A (en) 1992-01-21 1997-01-21 Pharmacyclics, Inc. Chromophore probe for detection of nucleic acid
FR2687679B1 (fr) 1992-02-05 1994-10-28 Centre Nat Rech Scient Oligothionucleotides.
US5229109A (en) 1992-04-14 1993-07-20 Board Of Regents, The University Of Texas System Low toxicity interleukin-2 analogues for use in immunotherapy
US5633360A (en) 1992-04-14 1997-05-27 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide analogs capable of passive cell membrane permeation
US5434257A (en) 1992-06-01 1995-07-18 Gilead Sciences, Inc. Binding compentent oligomers containing unsaturated 3',5' and 2',5' linkages
EP0577558A2 (de) 1992-07-01 1994-01-05 Ciba-Geigy Ag Carbocyclische Nukleoside mit bicyclischen Ringen, Oligonukleotide daraus, Verfahren zu deren Herstellung, deren Verwendung und Zwischenproduckte
US5272250A (en) 1992-07-10 1993-12-21 Spielvogel Bernard F Boronated phosphoramidate compounds
TW263437B (zh) 1992-09-24 1995-11-21 Takeda Pharm Industry Co Ltd
US6288302B1 (en) 1992-11-04 2001-09-11 National Science Council Of R.O.C. Application of α-amylase gene promoter and signal sequence in the production of recombinant proteins in transgenic plants and transgenic plant seeds
EP0673559A1 (en) 1992-12-14 1995-09-27 Honeywell Inc. Motor system with individually controlled redundant windings
US5574142A (en) 1992-12-15 1996-11-12 Microprobe Corporation Peptide linkers for improved oligonucleotide delivery
US5476925A (en) 1993-02-01 1995-12-19 Northwestern University Oligodeoxyribonucleotides including 3'-aminonucleoside-phosphoramidate linkages and terminal 3'-amino groups
GB9304618D0 (en) 1993-03-06 1993-04-21 Ciba Geigy Ag Chemical compounds
CA2159631A1 (en) 1993-03-30 1994-10-13 Sanofi Acyclic nucleoside analogs and oligonucleotide sequences containing them
EP0691979A1 (en) 1993-03-31 1996-01-17 Sanofi Novel 5'-substituted nucleosides and oligomers produced therefrom
WO1994022891A1 (en) 1993-03-31 1994-10-13 Sterling Winthrop Inc. Oligonucleotides with amide linkages replacing phosphodiester linkages
DE4311944A1 (de) 1993-04-10 1994-10-13 Degussa Umhüllte Natriumpercarbonatpartikel, Verfahren zu deren Herstellung und sie enthaltende Wasch-, Reinigungs- und Bleichmittelzusammensetzungen
US6294323B1 (en) 1993-04-14 2001-09-25 Behringwerke Ag Self initiating single primer amplification of nucleic acids
GB9311682D0 (en) 1993-06-05 1993-07-21 Ciba Geigy Ag Chemical compounds
US5502177A (en) 1993-09-17 1996-03-26 Gilead Sciences, Inc. Pyrimidine derivatives for labeled binding partners
US5457187A (en) 1993-12-08 1995-10-10 Board Of Regents University Of Nebraska Oligonucleotides containing 5-fluorouracil
US5446137B1 (en) 1993-12-09 1998-10-06 Behringwerke Ag Oligonucleotides containing 4'-substituted nucleotides
US5519134A (en) 1994-01-11 1996-05-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Pyrrolidine-containing monomers and oligomers
US5470719A (en) 1994-03-18 1995-11-28 Meng; Shi-Yuan Modified OmpA signal sequence for enhanced secretion of polypeptides
US5596091A (en) 1994-03-18 1997-01-21 The Regents Of The University Of California Antisense oligonucleotides comprising 5-aminoalkyl pyrimidine nucleotides
US5627053A (en) 1994-03-29 1997-05-06 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. 2'deoxy-2'-alkylnucleotide containing nucleic acid
US5625050A (en) 1994-03-31 1997-04-29 Amgen Inc. Modified oligonucleotides and intermediates useful in nucleic acid therapeutics
US5525711A (en) 1994-05-18 1996-06-11 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Pteridine nucleotide analogs as fluorescent DNA probes
US5597696A (en) 1994-07-18 1997-01-28 Becton Dickinson And Company Covalent cyanine dye oligonucleotide conjugates
US5597909A (en) 1994-08-25 1997-01-28 Chiron Corporation Polynucleotide reagents containing modified deoxyribose moieties, and associated methods of synthesis and use
US5580731A (en) 1994-08-25 1996-12-03 Chiron Corporation N-4 modified pyrimidine deoxynucleotides and oligonucleotide probes synthesized therewith
US6010871A (en) 1994-09-29 2000-01-04 Ajinomoto Co., Inc. Modification of peptide and protein
JPH0889278A (ja) 1994-09-29 1996-04-09 Ajinomoto Co Inc 遺伝子導入用修飾蛋白質及びその製法
US5712114A (en) 1995-06-06 1998-01-27 Basf Aktiengesellschaft Compositions for expression of proteins in host cells using a preprocollagen signal sequence
US6720140B1 (en) 1995-06-07 2004-04-13 Invitrogen Corporation Recombinational cloning using engineered recombination sites
JP4020429B2 (ja) 1995-06-07 2007-12-12 インヴィトロジェン コーポレーション 操作された組換え部位を使用する組換えクローニング
US6143557A (en) 1995-06-07 2000-11-07 Life Technologies, Inc. Recombination cloning using engineered recombination sites
US6261797B1 (en) 1996-01-29 2001-07-17 Stratagene Primer-mediated polynucleotide synthesis and manipulation techniques
GB9606158D0 (en) 1996-03-23 1996-05-29 Ciba Geigy Ag Chemical compounds
JPH09324000A (ja) 1996-06-05 1997-12-16 Suntory Ltd インターロイキン−２受容体を特異的に認識する因子とリボヌクレアーゼとの接合体
US7875733B2 (en) 2003-09-18 2011-01-25 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising 4′-thionucleosides for use in gene modulation
JP3756313B2 (ja) 1997-03-07 2006-03-15 武 今西 新規ビシクロヌクレオシド及びオリゴヌクレオチド類縁体
US6770748B2 (en) 1997-03-07 2004-08-03 Takeshi Imanishi Bicyclonucleoside and oligonucleotide analogue
IL135000A0 (en) 1997-09-12 2001-05-20 Exiqon As Bi- and tri-cyclic nucleoside, nucleotide and oligonucleotide analogues
US6794499B2 (en) 1997-09-12 2004-09-21 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
US5932474A (en) 1997-10-21 1999-08-03 The Regents Of The University Of California Target sequences for synthetic molecules
US6054271A (en) 1997-10-21 2000-04-25 The Regents Of The University Of California Methods of using synthetic molecules and target sequences
US6008378A (en) 1997-10-21 1999-12-28 The Regents Of The University Of California Synthetic molecules that specifically react with target sequences
DE69834420T2 (de) 1997-10-21 2007-04-19 The Regents Of The University Of California, Oakland Zielsequenzen für synthetische moleküle und verfahren für deren verwendung
WO1999021977A1 (en) 1997-10-24 1999-05-06 Life Technologies, Inc. Recombinational cloning using nucleic acids having recombination sites
DE19813317A1 (de) 1998-03-26 1999-09-30 Roche Diagnostics Gmbh Verbessertes Verfahren zur Primer Extension Präamplifikations-PCR
US6391544B1 (en) 1998-05-15 2002-05-21 Abbott Laboratories Method for using unequal primer concentrations for generating nucleic acid amplification products
US6955807B1 (en) * 1998-05-15 2005-10-18 Bayer Pharmaceuticals Corporation IL-2 selective agonists and antagonists
DZ2788A1 (fr) * 1998-05-15 2003-12-01 Bayer Ag Agonistes et antagonistes selectifs à IL-2.
US6562798B1 (en) 1998-06-05 2003-05-13 Dynavax Technologies Corp. Immunostimulatory oligonucleotides with modified bases and methods of use thereof
WO2000011028A2 (en) 1998-08-21 2000-03-02 Yeda Research And Development Co. Ltd. Anti-inflammatory peptides derived from il-2 and analogues thereof
US6175001B1 (en) 1998-10-16 2001-01-16 The Scripps Research Institute Functionalized pyrimidine nucleosides and nucleotides and DNA's incorporating same
EP2119788A1 (en) 1999-03-02 2009-11-18 Life Technologies Corporation Compositions and methods for use in recombinational cloning of nucleic acids
KR100782896B1 (ko) 1999-05-04 2007-12-06 엑시콘 에이/에스 Ｌ-리보-ｌｎａ 유사체
US6525191B1 (en) 1999-05-11 2003-02-25 Kanda S. Ramasamy Conformationally constrained L-nucleosides
MXPA01012500A (es) 1999-06-03 2003-10-14 Bioinnovation Ltd Productos para terapia de gen.
DE60045238D1 (de) 1999-07-15 2010-12-30 Japan Science & Tech Agency Nukleinsäurebasenpaar
WO2001032887A1 (en) 1999-10-29 2001-05-10 Stratagene Compositions and methods utilizing dna polymerases
NZ530816A (en) 1999-12-10 2005-10-28 Invitrogen Corp Use of multiple recombination sites with unique specificity in recombinational cloning
WO2003070918A2 (en) 2002-02-20 2003-08-28 Ribozyme Pharmaceuticals, Incorporated Rna interference by modified short interfering nucleic acid
US20020001804A1 (en) 2000-02-25 2002-01-03 Wayne Mitchell Genomic analysis of tRNA gene sets
WO2002036626A1 (en) 2000-11-02 2002-05-10 Maxygen Aps Single-chain multimeric polypeptides
WO2002062816A1 (en) 2001-02-07 2002-08-15 Celltech R & D Limited Non-natural nucleotides and dinucleotides
US20020170681A1 (en) 2001-02-23 2002-11-21 Alain Saurer Letter moistener
EP1363927A2 (en) 2001-03-01 2003-11-26 Pharmasset Limited Method for the synthesis of 2',3'-dideoxy-2',3'-didehydronucleosides
JP2005502322A (ja) 2001-04-19 2005-01-27 ザ スクリップス リサーチ インスティテュート 非天然アミノ酸のインビボ組込み
NZ532027A (en) 2001-10-10 2008-09-26 Neose Technologies Inc Remodeling and glycoconjugation of peptides
US7026440B2 (en) 2001-11-07 2006-04-11 Nektar Therapeutics Al, Corporation Branched polymers and their conjugates
ES2381025T3 (es) * 2001-12-04 2012-05-22 Merck Patent Gmbh Inmunocitocinas con selectividad modulada
AUPR975201A0 (en) 2001-12-24 2002-01-24 Unisearch Limited Enzymatic redox labelling of nucleic acids
US20060074035A1 (en) 2002-04-17 2006-04-06 Zhi Hong Dinucleotide inhibitors of de novo RNA polymerases for treatment or prevention of viral infections
US7745417B2 (en) 2002-07-17 2010-06-29 Riken Nucleosides or nucleotides having novel unnatural bases and use thereof
US7977049B2 (en) 2002-08-09 2011-07-12 President And Fellows Of Harvard College Methods and compositions for extending the life span and increasing the stress resistance of cells and organisms
WO2004044139A2 (en) 2002-11-05 2004-05-27 Isis Parmaceuticals, Inc. Modified oligonucleotides for use in rna interference
AU2003291753B2 (en) 2002-11-05 2010-07-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. Polycyclic sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation
CA2507189C (en) 2002-11-27 2018-06-12 Sequenom, Inc. Fragmentation-based methods and systems for sequence variation detection and discovery
TWI364295B (en) 2002-12-26 2012-05-21 Mountain View Pharmaceuticals Polymer conjugates of cytokines, chemokines, growth factors, polypeptide hormones and antagonists thereof with preserved receptor-binding activity
KR20060003862A (ko) 2003-03-14 2006-01-11 네오스 테크놀로지스, 인크. 수용성분기폴리머 및 그 접합체
US20070026485A1 (en) 2003-04-09 2007-02-01 Neose Technologies, Inc. Glycopegylation methods and proteins/peptides produced by the methods
CN101223272B (zh) 2003-04-17 2013-04-03 斯克利普斯研究院 扩展真核生物遗传密码
WO2004106356A1 (en) 2003-05-27 2004-12-09 Syddansk Universitet Functionalized nucleotide derivatives
WO2005007121A2 (en) 2003-07-18 2005-01-27 Massachusetts Institute Of Technology Mutant interleukin-2(il-2) polypeptides
ES2382807T3 (es) 2003-08-28 2012-06-13 Takeshi Imanishi Nuevos ácidos nucleicos artificiales del tipo de enlace N-O con reticulación
US20050069521A1 (en) * 2003-08-28 2005-03-31 Emd Lexigen Research Center Corp. Enhancing the circulating half-life of interleukin-2 proteins
WO2005026187A1 (ja) 2003-09-10 2005-03-24 Riken 非天然型塩基を有するヌクレオシド又はヌクレオチド及びその利用
PL1675622T3 (pl) 2003-09-17 2017-11-30 Nektar Therapeutics Proleki na bazie wieloramiennego polimeru
US7348146B2 (en) 2003-10-02 2008-03-25 Epoch Biosciences, Inc. Single nucleotide polymorphism analysis of highly polymorphic target sequences
EP1685246A2 (en) 2003-11-03 2006-08-02 Medical Research Council Polymerase
AU2005211362B2 (en) * 2004-02-02 2008-03-13 Ambrx, Inc. Modified human interferon polypeptides and their uses
JP2007527242A (ja) 2004-03-05 2007-09-27 カイロン コーポレーション 治療剤の患者耐容性を予測するためのインビトロ試験システム
WO2005092928A1 (en) 2004-03-11 2005-10-06 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein, prepared by reductive amination
US20060084136A1 (en) 2004-07-14 2006-04-20 Invitrogen Corporation Production of fusion proteins by cell-free protein synthesis
WO2006093526A2 (en) 2004-07-21 2006-09-08 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides comprising a modified or non-natural nucleobase
WO2006049297A1 (ja) 2004-11-08 2006-05-11 Riken 新規なヌクレオシド若しくはヌクレオチド誘導体及びその利用
EP1846020B1 (en) 2005-01-27 2013-08-21 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Methods for treating renal cell carcinoma
TWI376234B (en) 2005-02-01 2012-11-11 Msd Oss Bv Conjugates of a polypeptide and an oligosaccharide
JP5649018B2 (ja) 2005-08-04 2015-01-07 タグシクス・バイオ株式会社 新規人工塩基対及びその利用
CA2642657A1 (en) 2005-12-09 2007-06-14 Riken Method for replicating nucleic acids and novel unnatural base pairs
KR20130042043A (ko) 2006-01-27 2013-04-25 아이시스 파마수티컬즈 인코포레이티드 6-변형된 바이시클릭 핵산 유사체
DK1984382T3 (da) 2006-01-27 2012-09-03 Santaris Pharma As LNA modificerede fosforthiolerede oligonukleotider
CA2641133A1 (en) 2006-02-14 2007-08-23 Basf Se Pyridin-4 -ylmethylamides for combating pests
JP5196378B2 (ja) 2006-02-22 2013-05-15 独立行政法人理化学研究所 サプレッサーｔＲＮＡの合成方法、ＤＮＡ構築物及びそれを用いた非天然型アミノ酸組み込みタンパク質の製造
US20140314864A1 (en) 2006-03-31 2014-10-23 Massachusetts Institute Of Technology System for Targeted Delivery of Therapeutic Agents
EP2395099A3 (en) 2006-05-02 2012-05-16 Allozyne, Inc. Amino acid substituted molecules
DK2066684T3 (da) 2006-05-11 2012-10-22 Isis Pharmaceuticals Inc 5´-Modificerede bicycliske nukleinsyreanaloge
JP2009542592A (ja) 2006-07-06 2009-12-03 メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング Ｉｌ−２媒介性免疫応答の有効性を高める組成物および方法
AU2007294124A1 (en) 2006-09-08 2008-03-13 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Compounds and methods for 18F labeled agents
MX2009002526A (es) 2006-09-08 2009-04-16 Ambrx Inc Transcripcion de tarn supresor en celulas de vertebrados.
JP2010510794A (ja) 2006-11-28 2010-04-08 ハナル ファーマシューティカル カンパニー リミテッド 修飾型エリスロポエチンポリペプチド及びこの治療用用途
EP2126083A1 (en) 2006-12-06 2009-12-02 Erik Bjerregaard Pedersen Hoogsteen-type triplex formation of pyrene labelled probes for nucleic acid detection in fluorescence assay
WO2008101157A1 (en) 2007-02-15 2008-08-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. 5'-substituted-2'-f modified nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom
WO2008106186A2 (en) 2007-02-28 2008-09-04 Serina Therapeutics, Inc. Activated polyoxazolines and compositions comprising the same
EP2130835B1 (en) 2007-03-09 2012-05-23 Riken Compound having structure derived from mononucleoside or mononucleotide, nucleic acid, labeling substance, and method and kit for detection of nucleic acid
WO2008150729A2 (en) 2007-05-30 2008-12-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-substituted-aminomethylene bridged bicyclic nucleic acid analogs
WO2008154401A2 (en) 2007-06-08 2008-12-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. Carbocyclic bicyclic nucleic acid analogs
WO2009006478A2 (en) 2007-07-05 2009-01-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. 6-disubstituted bicyclic nucleic acid analogs
CA2707840A1 (en) 2007-08-20 2009-02-26 Allozyne, Inc. Amino acid substituted molecules
US8546556B2 (en) 2007-11-21 2013-10-01 Isis Pharmaceuticals, Inc Carbocyclic alpha-L-bicyclic nucleic acid analogs
JP5679147B2 (ja) 2008-02-07 2015-03-04 独立行政法人理化学研究所 非天然塩基を含む改変ｔＲＮＡ及びその用途
US8426569B2 (en) 2008-03-31 2013-04-23 Riken DNA capable of being amplified by PCR with high selectivity and high efficiency
BRPI0911501A2 (pt) 2008-04-29 2015-07-28 Monsanto Technology Llc Genes e usos para melhoramento de plantas.
WO2009155102A2 (en) 2008-05-30 2009-12-23 Barofold, Inc. Method for derivatization of proteins using hydrostatic pressure
WO2010023670A2 (en) 2008-08-28 2010-03-04 Insight Biopharmaceuticals Ltd. Methods for covalently attaching a polymer to a methionine residue in proteins and peptides
WO2010036698A1 (en) 2008-09-24 2010-04-01 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted alpha-l-bicyclic nucleosides
WO2010068278A2 (en) 2008-12-10 2010-06-17 The Scripps Research Institute Production of carrier-peptide conjugates using chemically reactive unnatural amino acids
JP5766124B2 (ja) 2009-01-21 2015-08-19 アムジェン インコーポレイテッド 炎症性疾患および自己免疫疾患の処置の組成物および方法
WO2011043385A1 (ja) 2009-10-06 2011-04-14 独立行政法人理化学研究所 特異な塩基対を形成する人工塩基対
WO2011053065A2 (ko) 2009-10-29 2011-05-05 한국과학기술원 카테콜 폴리에틸렌글리콜 유도체와 단백질 또는 펩타이드의 접합체 및 이의 제조방법
EP3091027B1 (en) 2010-04-28 2018-01-17 Ionis Pharmaceuticals, Inc. 5' modified nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom
LT2637694T (lt) 2010-11-12 2021-05-25 Nektar Therapeutics Il-2 fragmento konjugatai ir polimeras
JP6093712B2 (ja) * 2010-12-22 2017-03-08 ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー インターロイキン２のスーパーアゴニストおよびアンタゴニスト
PE20140303A1 (es) * 2011-02-10 2014-03-22 Roche Glycart Ag Polipeptidos interleuquina-2 mutantes
EA201892619A1 (ru) 2011-04-29 2019-04-30 Роше Гликарт Аг Иммуноконъюгаты, содержащие мутантные полипептиды интерлейкина-2
US8343752B2 (en) 2011-05-03 2013-01-01 Verdezyne, Inc. Biological methods for preparing adipic acid
ES2907763T3 (es) 2012-08-31 2022-04-26 Sutro Biopharma Inc Aminoácidos modificados que comprenden un grupo azido
US9650621B2 (en) 2012-10-12 2017-05-16 Sutro Biopharma, Inc. Proteolytic inactivation of select proteins in bacterial extracts for improved expression
JP6482471B2 (ja) 2012-12-21 2019-03-13 バイオアライアンス コマンディテール フェンノートシャップ 親水性の自壊性リンカー及びそのコンジュゲート
SG11201508642WA (en) 2013-04-19 2015-11-27 Sutro Biopharma Inc Expression of biologically active proteins in a bacterial cell-free synthesis system using cell extracts with elevated levels of exogenous chaperones
AU2014306271A1 (en) 2013-08-08 2016-03-24 The Scripps Research Institute A method for the site-specific enzymatic labelling of nucleic acids in vitro by incorporation of unnatural nucleotides
WO2015038426A1 (en) 2013-09-13 2015-03-19 Asana Biosciences, Llc Self-immolative linkers containing mandelic acid derivatives, drug-ligand conjugates for targeted therapies and uses thereof
WO2015054590A2 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Sutro Biopharma, Inc. NON-NATURAL AMINO ACID tRNA SYNTHETASES FOR PYRIDYL TETRAZINE
WO2015054658A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use
DK3055321T3 (en) 2013-10-11 2018-12-17 Sutro Biopharma Inc Non-natural amino acid tRNA synthetases for para-methylazido-1-phenylalanine
DK3129493T3 (da) 2014-04-09 2021-09-27 Scripps Research Inst Import af unaturlige eller modificerede nukleosidtriphosphater ind i celler via nukleinsyre-triphosphat-transportører
US10150802B2 (en) 2014-04-24 2018-12-11 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Superagonists, partial agonists and antagonists of interleukin-2
HUE043038T2 (hu) 2014-08-11 2019-07-29 Delinia Inc Regulator T-sejteket szelektíven aktiváló, módosított IL-2-változatok autoimmun betegségek kezelésére
US10487133B2 (en) 2014-12-19 2019-11-26 Sutro Biopharma, Inc. Codon optimization for titer and fidelity improvement
WO2016115168A1 (en) 2015-01-12 2016-07-21 Synthorx, Inc. Incorporation of unnatural nucleotides and methods thereof
MX2017012966A (es) 2015-04-10 2018-06-06 Amgen Inc Muteinas de interleuquina 2 para la expansion de celulas t regulatorias.
US11761007B2 (en) 2015-12-18 2023-09-19 The Scripps Research Institute Production of unnatural nucleotides using a CRISPR/Cas9 system
US20190015520A1 (en) 2015-12-21 2019-01-17 Duke University Polymer conjugates having reduced antigenicity and methods of using the same
KR20180133198A (ko) 2016-05-04 2018-12-13 암젠 인크 T-조절 세포의 증식을 위한 인터류킨-2 뮤테인
ES2929047T3 (es) 2016-06-24 2022-11-24 Scripps Research Inst Transportador de nucleósido trifosfato novedoso y usos del mismo
JP7325341B2 (ja) 2017-07-11 2023-08-14 シンソークス，インク． 非天然ヌクレオチドの組み込み及びその方法
NZ761430A (en) 2017-08-03 2024-03-22 Synthorx Inc Cytokine conjugates for the treatment of proliferative and infectious diseases
CN111615396A (zh) 2017-11-21 2020-09-01 小利兰·斯坦福大学董事会 白介素-2的部分激动剂
AU2018394189B2 (en) 2017-12-27 2023-12-21 Kyowa Kirin Co., Ltd. IL-2 variant
JP2021514974A (ja) 2018-02-26 2021-06-17 シンソークス， インコーポレイテッド Ｉｌ−１５コンジュゲートおよびその使用
JP2021519336A (ja) 2018-03-28 2021-08-10 アセンディス ファーマ オンコロジー ディヴィジョン エー／エス Ｉｌ−２コンジュゲート
CA3106858A1 (en) 2018-07-24 2020-01-30 Biontech Rna Pharmaceuticals Gmbh Il2 agonists
FI3849614T3 (fi) 2018-09-11 2024-02-08 Ambrx Inc Interleukiini-2-polypeptidikonjugaatteja ja niiden käyttöjä
US20210221863A1 (en) 2018-09-21 2021-07-22 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Novel interleukin-2 and use thereof
CN113260374A (zh) 2018-11-08 2021-08-13 新索思股份有限公司 白介素10缀合物及其用途
CA3125529A1 (en) 2019-01-07 2020-07-16 Inhibrx, Inc. Polypeptides comprising modified il-2 polypeptides and uses thereof
BR112021014415A2 (pt) 2019-02-06 2021-09-21 Synthorx, Inc. Conjugados de il-2 e métodos de uso dos mesmos
WO2020201095A1 (en) 2019-03-29 2020-10-08 Institut Curie Interleukin-2 variants with modified biological activity
US20220193253A1 (en) 2019-04-26 2022-06-23 Prolynx Llc Slow-release cytokine conjugates
KR20220034115A (ko) 2019-06-14 2022-03-17 큐진 인크. 암 치료용 신규한 인터루킨-2 변이체
US20220306714A1 (en) 2019-08-12 2022-09-29 AskGene Pharma, Inc. Il-2 fusion proteins that preferentially bind il-2ralpha
MX2022001866A (es) 2019-08-13 2022-03-11 Amgen Inc Muteinas de interleucina-2 para la expansion de celulas t reguladoras.
MX2022001776A (es) 2019-08-15 2022-03-17 Synthorx Inc Terapias de combinacion de inmuno oncologia con conjugados de il-2.
US20220289806A1 (en) 2019-08-15 2022-09-15 Cytimm Therapeutics, Inc. Modified Interleukin 2 (IL-2) Polypeptides, Conjugates and Uses Thereof
MX2022002053A (es) 2019-08-23 2022-03-17 Synthorx Inc Conjugados de il-15 y sus usos.
US20210070827A1 (en) 2019-09-10 2021-03-11 Synthorx, Inc. Il-2 conjugates and methods of use to treat autoimmune diseases
CN114853874A (zh) 2019-09-10 2022-08-05 中国医学科学院北京协和医院 靶向调节t细胞的长效白介素-2及其在治疗自身免疫病中的应用
TW202131952A (zh) 2019-11-04 2021-09-01 美商欣爍克斯公司 介白素10接合物及其用途
JP2023506223A (ja) 2019-12-13 2023-02-15 シンセカイン インコーポレイテッド Ｉｌ－２オルソログおよび使用法
MX2022007605A (es) 2019-12-23 2022-07-19 Synthorx Inc Metodos de preparacion de n6-((2-azidoetoxi)carbonil)lisina.
CN115315436A (zh) 2020-01-10 2022-11-08 明峰治疗股份公司 修饰的il-2多肽及其用途
US20220016252A1 (en) 2020-06-25 2022-01-20 Synthorx, Inc. Immuno oncology combination therapy with il-2 conjugates and anti-egfr antibodies
KR20230027235A (ko) 2020-06-25 2023-02-27 신톡스, 인크. Il-2 콘쥬게이트 및 항-egfr 항체를 사용한 면역 종양학 병용 요법
AU2021356610A1 (en) 2020-10-09 2023-06-15 Synthorx, Inc. Immuno oncology therapies with il-2 conjugates
MX2023004029A (es) 2020-10-09 2023-04-27 Synthorx Inc Terapia de combinacion de inmunoncologia con conjugados de il-2 y pembrolizumab.
WO2022174101A1 (en) 2021-02-12 2022-08-18 Synthorx, Inc. Skin cancer combination therapy with il-2 conjugates and cemiplimab
WO2022256538A1 (en) 2021-06-03 2022-12-08 Synthorx, Inc. Head and neck cancer combination therapy comprising an il-2 conjugate and cetuximab

Also Published As

Publication number Publication date
JP2023082090A (ja) 2023-06-13
AU2023201482A1 (en) 2023-04-13
BR112020002272A2 (pt) 2020-07-28
NZ761430A (en) 2024-03-22
AU2018309172B2 (en) 2022-12-15
RU2020107926A3 (zh) 2021-12-27
MX2020001332A (es) 2020-09-09
RU2020107917A (ru) 2021-09-03
US20200181220A1 (en) 2020-06-11
KR20200035092A (ko) 2020-04-01
US11701407B2 (en) 2023-07-18
MA49767A (fr) 2021-05-26
CA3071013A1 (en) 2019-02-07
US20190314455A1 (en) 2019-10-17
WO2019028425A1 (en) 2019-02-07
US20240082359A1 (en) 2024-03-14
PH12020500238A1 (en) 2021-01-11
AU2018309172A1 (en) 2020-02-27
MX2020001336A (es) 2020-08-20
US11622993B2 (en) 2023-04-11
AR112969A1 (es) 2020-01-15
CO2020001823A2 (es) 2020-04-01
AU2018309166B2 (en) 2022-12-08
AU2023200972A1 (en) 2023-03-23
BR112020002271A2 (pt) 2020-07-28
EP3661955A1 (en) 2020-06-10
AU2018309166A1 (en) 2020-02-27
JP2020529977A (ja) 2020-10-15
SG11202000944SA (en) 2020-02-27
CN111183149A (zh) 2020-05-19
NZ761434A (en) 2024-03-22
CN111194322A (zh) 2020-05-22
JP2022169649A (ja) 2022-11-09
MA49770A (fr) 2021-05-26
US10610571B2 (en) 2020-04-07
PH12020500241A1 (en) 2021-01-04
IL272412A (en) 2020-03-31
JP7258844B2 (ja) 2023-04-17
EP3661955A4 (en) 2021-05-26
US20230302089A1 (en) 2023-09-28
JP2020529976A (ja) 2020-10-15
CA3071016A1 (en) 2019-02-07
KR20200035102A (ko) 2020-04-01
US20200231644A1 (en) 2020-07-23
IL272410A (en) 2020-03-31
CO2020001828A2 (es) 2020-04-01
EP3661956A1 (en) 2020-06-10
US20200188484A1 (en) 2020-06-18
WO2019028419A1 (en) 2019-02-07
TWI757528B (zh) 2022-03-11
SG11202000939PA (en) 2020-02-27
TW201920241A (zh) 2019-06-01
RU2020107917A3 (zh) 2021-12-24
RU2020107926A (ru) 2021-09-03
EP3661956A4 (en) 2021-04-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI757528B (zh) 用於增生及感染性疾病治療之細胞激素結合物
US11077195B2 (en) IL-2 conjugates and methods of use thereof
US11919934B2 (en) IL-15 conjugates and uses thereof
TW202031284A (zh) 介白素10結合物及其用途
JP2022554272A (ja) インターロイキン１０コンジュゲートおよびその使用
RU2786116C2 (ru) Конъюгаты цитокинов для лечения пролиферативных и инфекционных заболеваний
RU2793754C2 (ru) Конъюгаты IL-15 и пути их применения
TWI834636B (zh) Il-15結合物及其用途