KR20220034115A

KR20220034115A - 암 치료용 신규한 인터루킨-2 변이체

Info

Publication number: KR20220034115A
Application number: KR1020227001353A
Authority: KR
Inventors: 유-쉥 리; 링윈 루이; 징 쉬
Original assignee: 큐진 인크.
Priority date: 2019-06-14
Filing date: 2020-06-13
Publication date: 2022-03-17
Also published as: MX2021015834A; JP2022536345A; AU2020291942A1; CA3143034A1; WO2020252418A3; EP3983433A2; CN114651004A; US20220235109A1; EP3983433A4; WO2020252418A2

Abstract

본 발명은 돌연변이된 수 개의 아마노산을 제외하고, 인간 IL-2와 일차 서열을 공유하는 폴리펩타이드에 관한 것이다. IL-2 변이체의 패널은 이러한 폴리펩타이드의 능력을 실질적으로 감소시켜 Treg 세포를 자극하고 그들을 종양 요법에서 보다 효과적으로 만드는 돌연변이를 포함한다. 본 발명은 또한 Tregs의 활성이 바람직하지 않은 암 또는 감염과 같은 질환의 요법을 위해, 단독으로 또는 백신, 또는 TAA-표적 생물제제, 또는 면역 관문 블로커와 병용으로, 또는 이중기능성 분자 구조의 빌딩 블록으로서 사용되는, 이러한 돌연변이된 변이체의 치료적 용도를 포함한다. 또 다른 양태에서, 본 발명은 개시된 폴리펩타이드를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 최종적으로, 본 발명은 자가면역 및 염증 장애, 암, 및 다양한 감염 질환과 같은 질환에 대한 면역계의 그들의 선택적 조절 효과로 인한 개시된 폴리펩타이드 및 약제학적 조성물의 치료적 용도에 관한 것이다.

Description

암 치료용 신규한 인터루킨-2 변이체

관련 특허 출원

본 출원은 2019년 12월 13일자로 출원된 미국 가출원 번호 제62/947,806호, 및 2019년 6월 14일자로 출원된 미국 가출원 번호 제62/861,651호의 우선권을 주장하며, 각각은 그 전체가 본원에 참조로 포함된다.

인터루킨 2(IL-2)는 T-세포에 대해 기술된 첫 번째 성장 인자였다. 발견 이후 시험관내 T-세포의 증식 및 생존(Smith, K A.(1988) Science. 240, 1169-76) 및 T 바이러스성 감염의 맥락에서 면역 반응(Blattman, J N, 등(2003) Nat Med 9, 540-7) 또는 백신(Fishman, M., 등(2008) J Immunother. 31, 72-80, Kudo-Saito, C., 등(2007) Cancer Immunol Immunother. 56, 1897-910; Lin, C T., 등(2007) Immunol Lett. 114, 86-93)을 부스팅하는 능력을 촉진하는 것으로 밝혀졌다.

IL-2는 암 요법에 사용되어 왔다. 재조합 인간 IL-2는 전이성 흑색종 및 신장암에 효과적인 면역요법이며, 환자의 약 10%에서 지속적인 반응을 보인다. 그러나 짧은 반감기와 심각한 독성은 IL-2의 최적 투여를 제한한다. 또한, IL-2는 이종삼량체 수용체

에 더 큰 친화력으로 결합하며, 이는 높은 구성 수준의 IL-2Rα를 발현하는 면역억제 조절 T-세포(Treg)를 우선적으로 확장시킨다. Tregs의 확장은 암 면역요법에 대한 IL-2의 바람직하지 않은 효과를 나타낸다. 결론적으로, IL-2를 사용한 암의 성공적인 면역요법은 2개의 근본적으로 중요한 문제를 해결해야만 한다: 1) 부작용을 제한하지만 그것이 필요한 경우 활성적이도록 하는 방법; 및 2) Tregs의 자극을 제한하면서 효과기(effector) T 세포를 우선적으로 활성화하는 방법.

보다 최근에, IL-2는 세포독성 효과기 T 세포를 선택적으로 자극하도록 변형될 수 있다는 것이 발견되었다. 다양한 접근법은 개선되고 선택적인 면역 자극 능력을 갖는 IL-2 변이체의 생성을 초래하고 있다. 이러한 IL-2 변이체 중 일부는 중간 친화도 수용체(베타 및 감마 사슬)에 의해서가 아닌 높은 친화도 수용체(알파, 베타 및 감마 사슬)에 의해 주로 신호화하는 이러한 분자의 능력을 증가시키도록 설계되었다. 기본적인 아이디어는 NK 세포에서의 신호전달 대신에 T 세포에서 신호전달을 촉진하는 것이었으며, 이는 관찰된 독성 효과에 책임이 있는 것으로 생각되었다. 다음 발명은 이러한 작업 라인에 있다: 미국 특허 번호 7,186,804, 미국 특허 번호 7,105,653, 미국 특허 번호 6,955,807, 미국 특허 번호 5,229,109, 미국 특허 출원 20050142106. 이러한 발명 중 어느 것도 생체 내에서 천연(native) IL-2보다 더 큰 치료적 효능을 갖는 IL-2의 변이체에 관한 것이 아니라는 점을 주목하는 것이 중요하다.

요약하면, IL-2는 상이한 세포 집단의 생물학적 활성에 매우 관련 있는 고 다면발현성 사이토카인이다. 이러한 특성은 IL-2를 면역 반응의 조절에서 중요한 노드로 만들어서, 그것을 요법 및 복합 면역 조절에 대한 매력적인 표적으로 만든다. 또한, 수용체 서브유닛-편향된 IL-2 변이체는 Treg 세포 확장 및 활성을 감소시키는 동안 Teff 세포를 우선적으로 확장 및 활성화하여 암 세포를 공격하도록 IL-2 매개 선택적 면역 조절을 달성하기 위해 이루어질 수 있다.

일 양태에서, 본 발명은 IL-2의 돌연변이된 변이체의 생산에 관한 것이며, 이는 IL-2Rα에 대한 감소되거나 폐기된 결합 능력을 갖는 IL-2 활성의 선택적 효능제(agonist)인 것을 특징으로 한다. 구체적으로, 이러한 변이체는 생체내 자연 조절 T 세포를 확장시키는 그들의 증명된 능력으로부터 유래되는 천연 IL-2 요법에서 관찰되는 한계를 극복하기 위한 방법을 제공할 것이다. 본 발명은 돌연변이된 수 개의 아미노산을 제외하고, 인간 IL-2와 그들의 일차 서열을 공유하는 폴리펩타이드에 관한 것이다. 도입된 돌연변이는 Treg 세포를 자극하고 IL-2에 더 큰 효능을 부여하기 위해 이러한 폴리펩타이드의 능력을 실질적으로 감소시킨다. 게다가, 도입된 돌연변이는 CD25-매개 VLS 및 CD25-매개 싱크 효과(sink effect)를 감소시킬 것으로 예상된다. 본 발명은 돌연변이된 한 개 내지 수 개의 아미노산을 제외하고, 인간 IL-2와 그들의 일차 서열을 공유하는 폴리펩타이드에 관한 것이다. 본 발명은 또한 단독으로 또는 백신, 또는 면역 관문 억제제, 또는 종양 관련 항원 (tumor associated antigen; TAA)-표적 생물제제와 병용으로, 또는 조절 T 세포 (Tregs)의 활성이 바람직하지 않은 암 또는 감염과 같은 질환의 요법을 위한 이중기능성 융합 작제물의 일부로서, 이러한 돌연변이된 변이체의 치료적 용도를 포함한다.

일 양태에서, 본 발명은 IL-2의 돌연변이된 변이체의 생산에 관한 것이며, 이는 IL-2Rα에 대한 감소되거나 폐기된 결합 능력에 더하여

상호작용을 감소시킴으로써 최적으로 조절된 전체 효능(potency)을 갖는 IL-2 활성의 선택적 효능제인 것을 특징으로 한다. 도입된 돌연변이는 경로의 과도한 활성화를 방지하고, 바람직하지 않은 "온-타겟" 및 "오프-타겟" 독성을 감소시키고, 잠재적 싱크를 줄이고, 림프구 과자극과 연관되는 활성화 유도 세포 고갈을 낮추고, 수용체 매개 IL-2 내재화를 완화시키고, 따라서, 생체내 반감기를 연장시키고 느리고 지속적인 약력학을 야기하여 생체분포, 생체이용률, 기능, 및 항-종양 효능을 개선한다. 본 발명은 또한 IL-2Rα에 대한 감소/폐기된 결합 및 약화된

활성을 갖는 IL-2 변이체의 사용이 사이토카인과 극적으로 상이한 효능 및 분자량을 나타내는 항체 아암(arm) 사이의 화학양론적 균형의 확립을 용이하게 하여 최적의 투여(dosing)을 허용하고 각각의 아암의 기능을 유지시킨다는 것을 제안한다. 본 발명은 돌연변이된 한 개 내지 수 개의 아미노산을 제외하고, 인간 IL-2와 그들의 일차 서열을 공유하는 폴리펩타이드에 관한 것이다. 본 발명은 또한 단독으로 또는 백신, 또는 면역 관문 억제제, 또는 종양 관련 항원(TAA)-표적 생물제제와 병용으로, 또는 암 또는 감염과 같은 질환의 요법을 위한 이중기능성 융합 작제물의 일부로서, 이러한 돌연변이된 변이체의 치료적 용도를 포함한다.

일 양태에서, 본 발명은 IL-2의 돌연변이된 변이체의 생산에 관한 것이며, 이는 IL-2Rα에 대한 감소되거나 폐기된 결합 능력에 더하여 감소된

상호작용을 갖는 IL-2 활성의 선택적 효능제인 것을 특징으로 한다. 도입된 돌연변이는 연장되고 지속적인 약력학 및 잠재적 약동학을 제공한다. 게다가, 도입된 돌연변이는 세포 고갈 및 활성 유도 세포 사멸을 감소시키고 지속적인 림프구 반응성을 향상시킨다. 결과적으로, 도입된 돌연변이는 덜 빈번한 투여 레지멘(dosing regimen)을 허용하고 클리닉에서 투여 편의성을 제공한다. 제품 가격의 감소가 또한 예상된다. 본 발명은 돌연변이된 한 개 내지 수 개의 아미노산을 제외하고, 인간 IL-2와 그들의 일차 서열을 공유하는 폴리펩타이드에 관한 것이다. 본 발명은 또한 단독으로 또는 백신, 또는 면역 관문 억제제, 또는 종양 관련 항원(TAA)-표적 생물제제와 병용으로, 또는 암 또는 감염과 같은 질환의 요법을 위한 이중기능성 융합 작제물의 일부로서, 이러한 돌연변이된 변이체의 치료적 용도를 포함한다.

일 양태에서, 본 발명은 IL-2의 돌연변이된 변이체의 생산에 관한 것이며, 이는 IL-2Rα에 대한 폐기된 결합 및 야생형 대응물(counterpart)과 비교가 되지 않는 예기치 않은 높은 크기에서 강화된(bolstered) 효과기 T 및 NK 세포 반응을 갖는 IL-2 활성의 선택적 효능제인 것을 특징으로 한다. CD25-결합 폐기 돌연변이는 CD25 또는 CD25+ 세포에 대한 싱크를 감소시키고 결과적으로

에 대한 가용성을 증가시키는 것으로 예상된다. 풍부한 수용체 점유(occupancy)는 활발한 세포독성 세포 반응 및 강한 종양 살상 효능을 이끌어낸다. 본 발명은 돌연변이된 한 개 내지 수 개의 아미노산을 제외하고, 인간 IL-2와 그들의 일차 서열을 공유하는 폴리펩타이드에 관한 것이다. 본 발명은 또한 단독으로 또는 백신, 또는 면역 관문 억제제, 또는 종양 관련 항원(TAA)-표적 생물제제와 병용으로, 또는 암 또는 감염과 같은 질환의 요법을 위한 이중기능성 융합 작제물의 일부로서, 이러한 돌연변이된 변이체의 치료적 용도를 포함한다.

본 발명의 일 양태에서, 도입된 돌연변이는 IL-2Rα(CD25)에 대한 결합 능력을 감소시켰지만 낮은 수준의 Treg 반응을 유지하였다. 잔기 면역 조절 Treg는 면역 균형(counterbalance)을 제공하여 전신 내약성을 개선하고 세포독성 효과기 세포에 지나치게 기울어지지 않는 면역 균형을 보장한다. 미세-조정된 Treg 반응은 종양 살상 효능을 겪지 않지만 말초 내성을 유지하기에 충분히 강하도록 위치된다. 본 발명은 돌연변이된 한 개 내지 수 개의 아미노산을 제외하고, 인간 IL-2와 그들의 일차 서열을 공유하는 폴리펩타이드에 관한 것이다. 본 발명은 또한 단독으로 또는 백신, 또는 면역 관문 억제제, 또는 종양 관련 항원(TAA)-표적 생물제제와 병용으로, 또는 암 또는 감염과 같은 질환의 요법을 위한 이중기능성 융합 작제물의 일부로서, 이러한 돌연변이된 변이체의 치료적 용도를 포함한다.

일 양태에서, 본 발명은 IL-2의 돌연변이된 변이체의 생산에 관한 것이며, 이는 예를 들어, Treg 세포를 자극하는 실질적으로 감소된 능력, 감소된 수용체 과도-활성화(over-activation), 감소된 원하지 않는 "온-타겟" "오프-타겟" 독성, 및 생체분포, 생체이용률, 기능, 및 항종양 효능을 개선하는 연장된 약력학을 포함하는 속성의 조합과 함께 감소된 응집, 증가된 발현, 개선된 제조가능성 및 발달성을 소유한다. 본 발명은 돌연변이된 한 개 내지 수 개의 아미노산을 제외하고, 인간 IL-2와 그들의 일차 서열을 공유하는 폴리펩타이드에 관한 것이다. 본 발명은 또한 단독으로 또는 백신, 또는 면역 관문 억제제, 또는 종양 관련 항원(TAA)-표적 생물제제와 병용으로, 또는 암 또는 감염과 같은 질환의 요법을 위한 이중기능성 융합 작제물의 일부로서, 이러한 돌연변이된 변이체의 치료적 용도를 포함한다.

일 양태에서, 본 발명은 신장 암종 및 흑색종의 치료를 위한 임상에서 고용량 IL-2와 관련된, 혈관 누출 증후군(VLS)과 같은, 심각한 독성의 감소를 특징으로 하는 IL-2의 돌연변이된 변이체의 생산에 관한 것이다. 구체적으로, 도입된 돌연변이는 IL-2Rα(CD25)에 대한 결합 능력을 실질적으로 감소시키고; 결과적으로, CD25+ 폐 내피 세포에 대한 결합을 손상시키고, 내피 세포 손상을 방지하고 VLS를 상당히 감소시킬 것으로 예상된다. 본 발명은 돌연변이된 한 개 내지 수 개의 아미노산을 제외하고, 인간 IL-2와 일차 서열을 공유하는 폴리펩타이드에 관한 것이다. 본 발명은 또한 단독으로 또는 백신, 또는 면역 관문 억제제, 또는 종양 관련 항원(TAA)-표적 생물제제와 병용으로, 또는 안전성 프로파일을 개선하기 위한 암 또는 감염과 같은 질환의 요법을 위한 이중기능성 융합 작제물의 일부로서, 이러한 돌연변이된 변이체의 치료적 용도를 포함한다.

본 발명은 암의 요법에서 IL-2에 기초한 면역조절의 현재 전략의 실질적인 개선을 허용한다. 구체적으로, 본원에 설명되는 돌연변이된 변이체에 의한 천연 IL-2의 대체는 세포독성 효과기 세포에 비해 Treg 세포의 비 우선적 자극, 바람직하지 않은 "온-타겟" 및 "오프-타겟" 독성의 감소, 과자극 관련 세포 고갈의 최소화, 및 약력학 및 잠재적 약동학의 개선을 야기할 것이다. 돌연변이는 CD25+ 폐 내피 세포에 대한 결합을 손상시키고 결과적으로 VLS를 감소시킬 것으로 예상된다. 다양한 구현예에서, IL-2 변이체(또는 돌연변이)는 서열번호: 3에 제시되는 바와 같은 성숙한 인간 IL-2 폴리펩타이드의 서열로부터 유래되는 IL-2 변이체(또는 돌연변이)의 서열을 포함한다. 다양한 구현예에서, IL-2 변이체는 IL-2 효능제로서 기능한다. 다양한 구현예에서, IL-2 변이체는 IL-2 길항제로서 기능한다. 다양한 구현예에서, IL-2 변이체는 서열번호: 31-66, 또는 서열번호: 111-120 또는 서열번호: 47의 아미노산 9-133, 10-133, 및 11-113을 포함한다.

다른 양태에서, 본 발명의 IL-2 변이체는 적어도 하나의 이종 단백질에 부착된다. 다양한 구현예에서, IL-2 변이체는 융합 분자 상에 연장된 반감기를 부여하는 적어도 하나의 폴리펩타이드에 융합된다. 그러한 폴리펩타이드는 IgG Fc 또는 신생아 Fc 수용체, 인간 혈청 알부민에 결합하는 다른 폴리펩타이드, 또는 연장된 혈청 반감기를 갖는 단백질에 결합하는 폴리펩타이드를 포함한다. 다양한 구현예에서, IL-2 변이체는 IgG Fc 분자에 융합된다. 다양한 구현예에서, Fc 도메인은 인간 IgG Fc 도메인이다. 다양한 구현예에서, Fc 도메인은 서열번호: 6에 제시되는 인간 IgG1 중쇄 불변 도메인 서열로부터 유래된다. 다양한 구현예에서, Fc 도메인은 서열번호: 7에 제시되는 아미노산 서열을 갖는 Fc 도메인이다. 다양한 구현예에서, Fc 도메인은 서열번호: 8에 제시되는 아미노산 서열을 갖는 Fc 도메인이다. 다양한 구현예에서, Fc 도메인은 인간 IgG2 중쇄 불변 도메인 서열로부터 유래된다. 다양한 구현예에서, Fc 도메인은 인간 IgG4 중쇄 불변 도메인 서열로부터 유래된다.

다양한 구현예에서, IL-2 변이체는 IgG Fc 영역의 N-말단 또는 C-말단에 링크될 수 있다.

용어 "Fc"는 단량체 형태이든 다량체 형태이든 전체 항체의 비-항원-결합 단편의 서열을 포함하는 분자 또는 서열을 지칭한다. 천연 Fc의 원래 면역글로불린 공급원은 바람직하게는 인간 기원이고 당업계에 개시된 임의의 면역글로불린일 수 있다. 천연 Fc는 공유(즉, 이황화물 결합) 및 비공유 결합에 의해 이량체 또는 다량체 형태로 연결될 수 있는 단량체성 폴리펩타이드로 구성된다. 천연 Fc 분자의 단위체 서브유닛 사이의 분자간 이황화물 결합의 수는 클래스(예를 들어, IgG, IgA, IgE) 또는 서브클래스(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgA1, IgGA2)에 따라 1 내지 4의 범위이다. 천연 Fc의 한 예는 IgG의 파파인 소화로부터 생성된 이황화물 결합 이량체이다(Ellison 등의(1982), Nucleic Acids Res. 10: 4071-9 참조). 본원에 사용된 용어 "천연 Fc"는 단량체, 이량체 및 다량체 형태가 일반적이다. Fc 도메인은 단백질 A, 단백질 G, 다양한 Fc 수용체 및 보체 단백질에 대한 결합 부위를 함유한다.

다양한 구현예에서, 용어 "Fc 변이체"는 천연 Fc로부터 변형되지만 회수 수용체 FcRn에 대한 결합 부위를 여전히 포함하는 분자 또는 서열을 지칭한다. 국제출원 WO 97/34631(1997년 9월 25일 공개) 및 WO 96/32458은 예시적인 Fc 변이체뿐만 아니라 회수 수용체와의 상호작용을 기재하고 있으며, 이는 본원에 참고로 포함된다. 더욱이, 천연 Fc는 본 발명의 융합 분자에 필요하지 않은 구조적 특징 또는 생물학적 활성을 제공하기 때문에 제거될 수 있는 부위를 포함한다. 따라서, 다양한 구현예에서, 용어 "Fc 변이체"는 (1) 이황화물 결합 형성, (2) 선택된 숙주 세포와의 비호환성, (3) 선택된 숙주 세포에서 발현 시 N-말단 이질성, (4) 글리코실화, (5) 보체와의 상호작용, (6) 회수 수용체 이외의 Fc 수용체에 대한 결합, 또는 (7) 항체 의존성 세포 세포독성(ADCC)에 영향을 미치거나 이에 수반되는 하나 이상의 천연 Fc 부위 또는 잔기가 결여된 분자 또는 서열을 포함한다.

용어 "Fc 도메인"은 상기 정의된 천연 Fc 및 Fc 변이체 분자 및 서열을 포괄한다. Fc 변이체 및 천연 Fc의 경우와 같이, 용어 "Fc 도메인"은 전체 항체로부터 분해되거나 재조합 유전자 발현에 의해 또는 다른 수단에 의해 생성되든, 단량체 또는 다량체 형태의 분자를 포함한다. 다양한 구현예에서, "Fc 도메인"은 일반적으로 힌지 영역의 전체 또는 일부를 포함하는 2개의 Fc 도메인 단량체(서열번호: 6)의 이량체를 지칭한다. 다양한 구현예에서, Fc 도메인은 효과기 기능이 결여되도록 돌연변이될 수 있다. 다양한 구현예에서, Fc 도메인 내의 각각의 Fc 도메인 단량체는 Fc 도메인과

수용체 사이의 상호작용 또는 결합을 감소시키기 위해 CH2 항체 불변 도메인 내의 아미노산 치환을 포함한다. 다양한 구현예에서, Fc 도메인의 각각의 서브유닛은 활성 Fc 수용체 및/또는 효과기 기능에 대한 결합을 감소시키는 3개의 아미노산 치환을 포함하며 여기서 상기 아미노산 치환은 L234A, L235A 및 G237A이다(서열번호: 7). 다양한 구현예에서, Fc 도메인의 각각의 서브유닛은 활성화 Fc 수용체 및/또는 효과기 기능에 대한 결합을 감소시키는 3개의 아미노산 치환을 포함하며 여기서 상기 아미노산 치환은 L234A, L235A 및 P329G이다.

다양한 구현예에서, Fc 도메인은 생체내 반감기를 더 연장시키기 위해 돌연변이될 수 있다. 다양한 구현예에서, Fc 도메인의 각각의 서브유닛은 인간 FcRn에 대한 결합을 향상시키는 미국 특허 공개 번호 제7,658,921호에 개시되는 3개의 아미노산 치환 M252Y, S254T, 및 T256E를 포함한다. 다양한 구현예에서, Fc 도메인의 각각의 서브유닛은 미국 특허 공개 번호 제7,371,826호에 개시되는 아미노산 치환 N434A(서열번호: 8)을 포함한다. 다양한 구현예에서, Fc 도메인의 각각의 서브유닛은 인간 FcRn에 대한 결합을 향상시키는 미국 특허 공개 번호 제8,546,543호에 개시되는 아미노산 치환 M428L 또는 N434S를 포함한다. 다양한 구현예에서, 반감기 연장 돌연변이는 활성 Fc 수용체 및/또는 효과기 기능에 대한 결합을 감소시키는 아미노산 치환과 결합될 수 있다.

다양한 구현예에서, IL-2 변이체 Fc-융합 단백질은 단량체일 것이며, 즉, 단일 IL-2 뮤테인 분자만을 함유할 것이다. 그러한 구현예에서, 융합 단백질은 IL-2 변이체에 링크되는 이종이량체 Fc(예를 들어, 서열번호: 9에 제시되는 서열을 갖는 놉-Fc) 및 정합(matching) 이종이량체 Fc(예를 들어, 서열번호: 10에 제시되는 서열을 갖는 홀-Fc)와 공동 발현된다. 2개의 Fc-함유 폴리펩타이드의 이종이량체가 형성될 때, 결과 단백질은 1가(monovalent) IL-2 변이체만을 포함한다. 다양한 구현예에서, 1가 IL-2 Fc 융합 단백질을 만들기 위해 사용되는 이종이량체 Fc 도메인은 감소/폐기된 효과기 기능 및 연장된 반감기를 갖는 놉(Knob)-Fc 도메인(서열번호: 134) 및 감소/폐기된 효과기 기능 및 연장된 반감기를 갖는 홀(Hole)-Fc 도메인(서열번호: 135)이다.

다양한 구현예에서, 본 발명의 IL-2 변이체는 융합 분자에 연장된 반감기를 부여하는 항체, 예컨대 항-열쇠구멍 삿갓조개 헤모시아닌(KLH) 항체에 부착될 수 있다. 이러한 항체는 외래 항원을 인식하여 더 긴 반감기를 부여하지만 생물학적 기능이나 인체에 해를 끼치지 않는다. IgG 클래스는 IgG, IgA, IgE 또는 서브클래스(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgA1, IgA2)일 수 있다.

다양한 구현예에서, 본 발명의 L-2 변이체 작제물은 종양 관련 항원(tumor associated antigen; TAA)과 같은 암 조직에 풍부한 분자에 결합하는 항체, 항체 단편, 단백질 또는 펩타이드의 형태의 표적화 모이어티(moiety)를 포함한다.

TAA는 면역 반응이 요구되는 임의의 분자, 거대분자, 분자의 조합 등일 수 있다. TAA는 하나보다 많은 폴리펩타이드 서브유닛을 포함하는 단백질일 수 있다. 예를 들어, 단백질은 이량체, 삼량체, 또는 고차 다량체일 수 있다. 다양한 구현예에서, 단백질의 2개 이상의 서브유닛은 예를 들어, 이황화물 결합과 같은 공유 결합으로 연결될 수 있다. 다양한 구현예에서, 단백질의 서브유닛은 비-공유 상호작용으로 함께 유지될 수 있다. 따라서, TAA는 당업자가 면역 반응을 유도하기 원하는, 임의의 펩타이드, 폴리펩타이드, 단백질, 핵산, 지질, 탄수화물, 또는 작은 유기 분자, 또는 그 임의의 조합일 수 있다. 다양한 구현예에서, TAA는 약 5, 약 6, 약 7, 약 8, 약 9, 약 10, 약 11, 약 12, 약 13, 약 14, 약 15, 약 16, 약 17, 약 18, 약 19, 약 20, 약 25, 약 30, 약 35, 약 40, 약 45, 약 50, 약 55, 약 60, 약 65, 약 70, 약 75, 약 80, 약 85, 약 90, 약 95, 약 100, 약 150, 약 200, 약 250, 약 300, 약 400, 약 500, 약 600, 약 700, 약 800, 약 900 또는 약 1000개의 아미노산을 포함하는 펩타이드이다. 다양한 구현예에서, 펩타이드, 폴리펩타이드, 또는 단백질은 주사(injection)에 의해 대상체에 통상적으로 투여되는 분자이다.

다양한 구현예에서, 종양-특이적 항체 또는 결합 단백질은 IL-2 변이체를 병든 부위, 예컨대 종양 부위로 안내하는 표적화 모이어티의 역할을 하며, 여기서 그들은 자유 사이토카인 요법의 전신 독성을 회피하면서 보다 최적의 항-종양 면역 반응을 자극할 수 있다. IL-2 완전 효능제의 경우, IL-2-IL-2R 상호작용은, 항체-항원 표적화 이외에, 전형적인 항체 용량에서 종양 세포보다는 IL-2 수용체-발현 세포에 면역사이토카인 국소화를 지시할 수 있다. 다양한 구현예에서, IL-2Rα에 대한 감소/폐기된 결합 및 항체 융합 단백질에서의 약화된 효능을 갖는 IL-2 변이체의 사용은 IL-2 모이어티가 과도한 경로 활성화를 야기하지 않는 동안에 항체가 충분한 표적 점유를 달성할 수 있는 최적의 투여(dosing)를 달성하기 위해 IL-2와 표적화 항체 사이의 화학양론적 균형의 확립을 용이하게 한다. IL-2Rα에 대한 감소/폐기된 결합 및 IL-2 항체 융합 단백질에서의 약화된 효능을 갖는 IL-2 변이체의 사용은 항체를 통한 종양 표적화를 더 향상시키고, 말초 활성 및 AICD를 최소화하고, 항원-싱크를 완화하고, 항체 아암을 통한 종양 표적화를 촉진한다.

다양한 구현예에서, 본 발명의 IL-2 변이체는 항체, 항체 단편, 단백질, 또는 펩타이드 표적화 면역 관문 조절자인 표적화/이중 기능성 모이어티에 부착될 수 있다.

다수의 면역-관문(immune-checkpoint) 단백질 항원은 예를 들어, SIRP(대식세포, 단핵세포, 수지상 세포 상에서 발현됨), CD47(종양 세포 및 다른 세포 유형 상에 고도로 발현됨), VISTA(단핵세포, 수지상 세포, B 세포, T 세포 상에 발현됨), CD152(활성화된 CD8+ T 세포, CD4+ T 세포 및 조절 T 세포에 의해 발현됨), CD279(활성화된 T 세포(CD4 및 CD8 둘 다), 조절 T 세포, 활성화된 B 세포, 활성화된 NK 세포, 무력성 T 세포, 단핵세포, 수지상 세포에 의해 발현되는, 종양 침윤 림프구 상에 발현됨), CD274(T 세포, B 세포, 수지상 세포, 대식세포, 혈관 내피 세포, 췌도 세포 상에 발현됨), 및 CD223(활성화된 T 세포, 조절 T 세포, 무력성 T 세포, NK 세포, NKT 세포, 및 플라스마사이토이드 수지상 세포에 의해 발현됨)을 포함하는 다양한 면역 세포 상에서 발현되는 것으로 보고되고 있다(예를 들어, Pardoll, D., Nature Reviews Cancer, 12:252-264, 2012를 참조함). 면역-관문 단백질인 것으로 결정되는 항원에 결합하는 항체는 당업자에 공지되어 있다. 예를 들어, 다양한 항-CD276 항체는 기술 분야에서 설명되었고(예를 들어, 미국 특허 공개 번호 제20120294796호(Johnson 등) 및 그 속에 인용된 참고문헌을 참조); 다양한 항-CD272 항체는 기술 분야에서 설명되었고(예를 들어, 미국 특허 공개 번호 제20140017255호(Mataraza 등) 및 그 속에 인용된 참고문헌을 참조); 다양한 항-CD152/CTLA-4 항체는 기술 분야에서 설명되었고(예를 들어, 미국 특허 공개 번호 제20130136749호(Korman 등) 및 그 속에 인용된 참고문헌을 참조); 다양한 항-LAG-3/CD223 항체는 기술 분야에서 설명되었고(예를 들어, 미국 특허 공개 번호 제20110150892호(Thudium 등) 및 그 속에 인용된 참고문헌을 참조); 다양한 항-CD279(PD-1) 항체는 기술 분야에서 설명되었고(예를 들어, 미국 특허 번호 제7,488,802호(Collins 등) 및 그 속에 인용된 참고문헌을 참조); 다양한 항-CD274(PD-L1) 항체는 기술 분야에서 설명되었고(예를 들어, 미국 특허 공개 번호 제20130122014호(Korman 등) 및 그 속에 인용된 참고문헌을 참조); 다양한 항-TIM-3 항체는 기술 분야에서 설명되었고(예를 들어, 미국 특허 공개 번호 제20140044728호(Takayanagi 등) 및 그 속에 인용된 참고문헌을 참조); 다양한 항-B7-H4 항체는 기술 분야에서 설명되었고(예를 들어, 미국 특허 공개 번호 제20110085970호(Terrett 등) 및 그 속에 인용된 참고문헌을 참조); 다양한 항-TIGIT 항체는 기술 분야에 설명되었다(예를 들어, 미국 특허 공개 번호 제20180169239A1호(Grogan) 및 그 속에 인용된 참고문헌을 참조). 이러한 참고문헌 각각은 이로써 본원에 교시되는 특정 항체 및 서열에 대해 전체적으로 참조로 통합된다.

다양한 구현예에서, IL-2 변이체는 면역 세포의 표면 상에 존재하는 면역-관문 단백질 항원에 대한 결합을 나타내는 항체, 항체 단편, 또는 단백질 또는 펩타이드에 융합될 수 있다. 다양한 구현예에서, 면역-관문 단백질 항원은 CD279(PD-1), CD274(PDL-1), CD276, CD272, CD152, CD223(LAG-3), CD40, SIRPa, CD47, OX-40, GITR, ICOS, CD27, 4-1 BB, TIM-3, B7-H3, B7-H4, TIGIT, 및 VISTA를 포함하지만 이에 제한되지 않는 그룹으로부터 선택된다.

다양한 구현예에서, 항체는 길항적 FAP 항체 또는 항체 단편이다. 다양한 구현예에서, 항체는 서열번호: 136 및 137에 제시되는 가변 도메인 서열을 포함하는 인간화된 길항적 FAP 항체이다. 다양한 구현예에서, 이종 단백질은 면역 관문 조절자에 대한 항체 또는 항체 단편이다. 다양한 구현예에서, 항체는 길항적 PD-1 항체 또는 항체 단편이다. 다양한 구현예에서, 항체는 서열번호: 138 및 139, 서열번호: 140 및 141, 서열번호: 142 및 143, 서열번호: 144 및 145, 또는 서열번호: 146 및 147에 제시되는 가변 도메인 서열을 포함하는 길항적 PD-1 항체이다. 다양한 구현예에서, 항체는 서열번호: 148 및 149에 제시되는 가변 도메인 서열을 포함하는 길항적 인간 PD-L1 항체이다. 다양한 구현예에서, 항체는 서열번호: 150 및 151에 제시되는 가변 도메인 서열을 포함하는 길항적 CTLA-4 항체이다. 다양한 구현예에서, 이종 단백질은 링커 및/또는 힌지 링커 펩타이드에 의해 IL-2 변이체에 부착된다. 링커 또는 힌지 링커는 상대적으로 2차 구조가 없는 5, 10, 15, 20, 30, 40개 이상의 아미노산 사이의 인공 서열일 수 있다.

다양한 구현예에서, 이종 단백질은 α-나선 형태를 나타내고 단백질 도메인 사이의 강성(rigid) 스페이서로서 작용할 수 있는 10, 15, 20, 30, 40개 이상의 아미노산의 강성 링커 펩타이드에 의해 IL-2 변이체에 부착된다.

또 다른 양태에서, IL-2 변이체는 미국 특허 번호 4,640,835; 4,496,689; 4,301,144; 4,670,417; 4,791,192 또는 4,179,337에 기재된 방식으로 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로파일렌 글리콜 또는 폴리옥시알킬렌과 같은 다양한 폴리올을 포함하지만 이에 국한되지 않는 다양한 비단백질성 중합체에 연결될 수 있다. 다양한 구현예에서, 아미노산 치환은 PEG와 같은 중합체의 첨가를 용이하게 하기 위해 IL-2 변이체 내의 다양한 위치에서 이루어질 수 있다. 다양한 구현예에서, 이러한 페길화된 단백질은 페길화되지 않은 단백질에 비해 증가된 반감기 및/또는 감소된 면역원성을 가질 수 있다.

다양한 구현예에서, IL-2 변이체는 IgG Fc 또는 신생아

/수용체에 결합하는 다른 폴리펩타이드, 인간 혈청 알부민, 또는 연장된 혈청 반감기 또는 N-말단 또는 C-말단에서 다양한 비단백질성 중합체를 갖는 단백질에 결합하는 폴리펩타이드에 비공유적으로 또는 공유적으로 연결될 수 있다.

또 다른 양태에서, 본 개시는 약제학적으로 허용가능한 담체와 혼합된 단리된 IL-2 변이체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

또 다른 양태에서, 본 개시는 본 발명의 약제학적 조성물의 치료적 유효량을 그것을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암 또는 암 전이를 치료하기 위한 방법을 제공한다. 일 구현예에서, 대상체는 인간 대상체이다. 다양한 구현예에서, 암은 췌장암, 위암, 난소암, 결장암, 흑색종, 백혈병, 골수형성이상 증후군, 폐암, 전립선암, 뇌암, 방광암, 두경부암, 또는 횡문근육종으로부터 선택되지만 이에 제한되지 않는다.

또 다른 양태에서, 본 개시는 대상체에서 암 또는 암 전이를 치료하기 위한 방법을 제공하며, 다음: 즉, 세포독성 화학요법, 면역요법, 소분자 키나아제 억제제 표적 요법, 수술, 방사선 요법, 및 줄기 세포 이식으로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 제2 요법과 병용으로 본 발명의 약제학적 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함한다. 다양한 구현예에서, 병용 요법은 대상체에게 특정 종양 항원에 대한 고갈 항체를 사용하는 치료; 항체-약물 접합체를 사용하는 치료; CTLA-4, PD-1 , PD-L1 , OX-40, CD137, TIGIT, GITR, LAG3, TIM-3, CD47, SIRPa, ICOS, 및 VISTA와 같은 공자극 또는 공억제 분자(면역 관문)에 대한 효능적, 길항적, 또는 차단적 항체를 사용하는 치료; 블리나투모밥과 같은 이중특이적 T 세포 결합 항체(BiTE®)를 사용하는 치료: TNF 패밀리, IL-1 , IL-4, IL-7, IL-12, IL-15, IL-17, IL-21 , IL-22, GM-CSF, IFN-α, IFN-β 및 IFN-γ와 같은 생물학적 반응 조절제의 투여를 수반하는 치료; 시풀루셀-T(sipuleucel-T)와 같은 치료적 백신을 사용하는 치료; 수지상 세포 백신, 또는 종양 항원 펩타이드 백신을 사용하는 치료; 키메라 항원 수용체 (CAR)-T 세포를 사용하는 치료; CAR-NK 세포를 사용하는 치료; 종양 침윤 림프구(tumor infiltrating lymphocytes; TILs)를 사용하는 치료; 입양으로 전달된 항종양 T 세포(생체외 확장 및/또는 TCR 형질전환)를 사용하는 치료; TALL-104 세포를 사용하는 치료; 및 Toll-유사 수용체(TLR: TLR7, TLR8, 및 TLR 9) 효능제 CpG 및 이미퀴모드(imiquimod)와 같은 면역자극제를 사용하는 치료를 포함하지만, 이에 제한되지 않는, 면역요법의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함할 수 있으며; 여기서 병용 요법은 종양 세포의 증가된 효과기 세포 사멸을 제공하며, 즉, 동반상승효과는 공동 투여될 때 IL-2 변이체와 면역요법 사이에 존재한다.

또 다른 양태에서, 본 개시는 암의 치료를 위한 약제의 제조를 위한 IL-2 변이체의 용도를 제공한다.

또 다른 양태에서, 본 개시는 본 개시의 IL-2 변이체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 단리된 핵산 분자를 제공한다. 또 다른 양태에서, 본 개시는 본원에 설명되는 핵산을 포함하는 벡터를 제공한다. 다양한 구현예에서, 벡터는 발현 벡터이다. 또 다른 양태에서, 본 개시는 본 개시의 핵산을 포함하는 단리된 세포를 제공한다. 다양한 구현예에서, 세포는 본 개시의 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포이다. 또 다른 양태에서, IL-2 변이체의 제조 방법은 단백질 또는 폴리펩타이드의 발현을 촉진하는 조건 하에 숙주 세포를 배양함으로써 제공된다.

본 발명은 돌연변이된 한 개 내지 수 개의 아미노산을 제외하고, 인간 IL-2와 일차 서열을 공유하는 폴리펩타이드에 관한 것이다. IL-2 변이체는 Treg 세포를 자극하고 그들을 종양 요법에서 보다 효과적으로 만들기 위해 이러한 폴리펩타이드의 능력을 실질적으로 감소시키는 돌연변이를 포함한다. 또한, 조절 T 세포(Tregs)의 활성이 바람직하지 않은 암 또는 감염과 같은 질환의 요법을 위해, 단독으로 또는 백신, 또는 TAA-표적 생물제제, 또는 면역 관문 블로커와 병용으로, 또는 이중기능성 분자 구조의 빌딩 블록으로서 사용되는, 이러한 돌연변이된 변이체의 치료적 용도를 포함한다. 또 다른 양태에서, 본 발명은 개시된 폴리펩타이드를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 최종적으로, 본 발명은 암 및 다양한 감염 질환에 대한 면역계의 그들의 선택적 조절 효과로 인한 개시되는 폴리펩타이드 및 약제학적 조성물의 치료적 용도에 관한 것이다.

정의

용어 "폴리펩타이드", "펩타이드" 및 "단백질"은 아미노산 잔기의 중합체를 지칭하기 위해 본원에서 상호교환가능하게 사용된다. 다양한 구현예에서, "펩타이드", "폴리펩타이드", 및 "단백질"은 알파 탄소가 펩타이드 결합을 통해 연결된 아미노산의 사슬이다. 따라서 사슬의 한쪽 말단(아미노 말단)에 있는 말단 아미노산에는 유리 아미노기가 있고, 사슬의 다른 말단(카복시 말단)에 있는 말단 아미노산에는 유리 카복실기가 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "아미노 말단"(N-말단으로 약칭됨)은 펩타이드의 아미노 말단에서 아미노산 상의 유리 α-아미노기 또는 펩타이드 내의 다른 위치에 있는 아미노산의 α-아미노기(펩타이드 결합에 참여할 때 이미노 기)를 지칭한다. 유사하게, 용어 "카복시 말단"은 펩타이드의 카복시 말단 상의 유리 카복실기 또는 펩타이드 내의 임의의 다른 위치에 있는 아미노산의 카복실기를 지칭한다. 펩타이드는 또한 아미드 결합과는 반대로 에테르로 연결된 아미노산과 같은 펩타이드 모방체를 포함하지만 이에 제한되지 않는 본질적으로 모든 폴리아미노산을 포함한다.

본 개시의 폴리펩타이드는 임의의 방식 및 임의의 이유로 예를 들어 (1) 단백질 분해에 대한 감수성을 감소시키고, (2) 산화에 대한 감수성을 감소시키고, (3) 단백질 복합체를 형성하기 위한 결합 친화성을 변경하고, (4) 결합 친화도를 변경하고, 그리고 (5) 다른 물리화학적 또는 기능적 특성을 부여하거나 수정하도록 변형된 폴리펩타이드를 포함한다.

본원에 사용되는 바와 같은 아미노산 "치환"은 폴리펩타이드에서 모체 폴리펩타이드 서열의 특정 위치에 있는 한 아미노산이 상이한 아미노산으로 대체되는 것을 지칭한다. 아미노산 치환은 당업계에 잘 알려진 유전적 또는 화학적 방법을 사용하여 생성될 수 있다. 예를 들어, 단일 또는 다중 아미노산 치환(예를 들어, 보존적 아미노산 치환)은 자연 발생 서열(예를 들어, 분자간 접촉을 형성하는 도메인(들) 외부의 폴리펩타이드 부분)에서 이루어질 수 있다. "보존적 아미노산 치환"은 폴리펩타이드에서 아미노산이 기능적으로 유사한 아미노산으로 치환되는 것을 지칭한다. 다음 6개 그룹은 각각 서로에 대한 보존적 치환인 아미노산을 함유한다:

1) 알라닌(A), 세린(S), 트레오닌(T)

2) 아스파르트산(D) 및 글루탐산(E)

3) 아스파라긴(N)과 글루타민(Q)

4) 아르기닌(R) 및 라이신(K)

5) 이소류신(I), 류신(L), 메티오닌(M) 및 발린(V)

6) 페닐알라닌(F), 티로신(Y), 트립토판(W)

"비보존적 아미노산 치환"은 이러한 클래스 중 하나의 구성원이 다른 클래스의 구성원으로 치환되는 것을 지칭한다. 그러한 변경을 수행함에 있어서, 다양한 구현예에 따르면, 아미노산의 소수성 지수(hydropathic index)가 고려될 수 있다. 각 아미노산은 소수성과 전하 특성을 기반으로 소수성 지수를 배정하였다. 이소류신(+4.5); 발린(+4.2); 류신(+3.8); 페닐알라닌(+2.8); 시스테인/시스틴(+2.5); 메티오닌(+1.9); 알라닌(+1.8); 글리신(-0.4); 트레오닌(-0.7); 세린(-0.8); 트립토판(-0.9); 티로신(-1.3); 프롤린(-1.6); 히스티딘(-3.2); 글루타메이트(-3.5); 글루타민(-3.5); 아스파르테이트(-3.5); 아스파라긴(-3.5); 라이신(-3.9); 및 아르기닌(-4.5).

단백질에 상호작용적 생물학적 기능을 부여하는 데 있어서 소수성 아미노산 지수의 중요성은 당업계에 이해되어 있다(예를 들어, Kyte 등, 1982, J. Mol. Biol. 157:105-131 참조). 특정 아미노산은 유사한 수치료 지수(hydropathic index) 또는 점수를 갖는 다른 아미노산으로 대체될 수 있으며 여전히 유사한 생물학적 활성을 유지하는 것으로 알려져 있다. 다양한 구현예에서, 소수성 지수에 기초한 변화를 만들 때, 그의 소수성 지수가 ±2 이내인 아미노산의 치환이 포함된다. 다양한 구현예에서 ±1 이내의 것들이 포함되고, 다양한 구현예에서 ±0.5 이내의 것들이 포함된다.

또한, 유사 아미노산의 치환은 친수성(hydrophilicity)을 기반으로 효과적으로 이루어질 수 있으며, 특히 이에 의해 생성된 생물학적 기능성 단백질 또는 펩타이드는 본원에 개시된 바와 같은 면역학적 구현예에 사용하도록 의도되는 경우에 이해된다. 다양한 구현예에서, 인접 아미노산의 친수성에 의해 지배되는 단백질의 최대 국부 평균 친수성은 그의 면역원성 및 항원성, 즉 단백질의 생물학적 특성과 상관된다.

류신(-1.8); 이소류신(-1.8); 티로신(-2.3); 페닐알라닌(-2.5) 및 트립토판(-3.4). 유사한 친수성 값에 기초하여 변경을 수행함에 있어서, 다양한 구현예에서, 친수성 값이 ±2 이내인 아미노산의 치환이 포함되고, 다양한 구현예에서, ±1 이내의 아미노산의 치환이 포함되고, 다양한 구현예에서, ±0.5 이내의 아미노산의 치환이 포함된다.

예시적인 아미노산 치환은 표 1에 제시되어 있다.

[표 1]

당업자는 잘 알려진 기술을 사용하여 본원에 설명되는 폴리펩타이드의 적합한 변이체를 결정할 수 있을 것이다. 다양한 구현예에서, 당업자는 활성에 중요하지 않은 것으로 여겨지는 영역을 표적화함으로써 활성을 파괴하지 않고 변화될 수 있는 분자의 적합한 영역을 확인할 수 있다. 다른 구현예에서, 당업자는 유사한 폴리펩타이드 사이에 보존된 분자의 잔기 및 부분을 확인할 수 있다. 추가 구현예에서, 생물학적 활성 또는 구조에 중요할 수 있는 영역조차도 생물학적 활성을 파괴하지 않거나 폴리펩타이드 구조에 악영향을 미치지 않으면서 보존적 아미노산 치환을 받을 수 있다.

추가적으로, 당업자는 활성 또는 구조에 중요한 유사한 폴리펩타이드의 잔기를 식별하는 구조-기능 연구를 검토할 수 있다. 이러한 비교의 관점에서, 당업자는 유사한 폴리펩타이드에서 활성 또는 구조에 중요한 아미노산 잔기에 상응하는 폴리펩타이드에서 아미노산 잔기의 중요성을 예측할 수 있다. 당업자는 이러한 예측된 중요한 아미노산 잔기에 대해 화학적으로 유사한 아미노산 치환을 선택할 수 있다.

당업자는 또한 유사한 폴리펩타이드의 구조와 관련하여 3차원 구조 및 아미노산 서열을 분석할 수 있다. 이러한 정보의 관점에서, 당업자는 3차원 구조에 대한 폴리펩타이드의 아미노산 잔기의 정렬을 예측할 수 있다. 다양한 구현예에서, 당업자는 폴리펩타이드의 표면 상에 있을 것으로 예상되는 아미노산 잔기에 라디칼 변화를 일으키지 않도록 선택할 수 있는데, 그 이유는 이러한 잔기가 다른 분자와의 중요한 상호작용에 관여될 수 있기 때문이다. 더욱이, 당업자는 각각의 원하는 아미노산 잔기에서 단일 아미노산 치환을 함유하는 시험 변이체를 생성할 수 있다. 그 다음, 변이체는 당업자에게 공지된 활성 검정을 사용하여 스크리닝될 수 있다. 이러한 변이체는 적합한 변이체에 대한 정보를 수집하는 데 사용할 수 있다. 예를 들어, 특정 아미노산 잔기에 대한 변화가 파괴되거나, 바람직하지 않게 감소되거나, 부적절한 활성을 초래한다는 것을 발견한 경우, 그러한 변화를 갖는 변이체는 회피될 수 있다. 다시 말해서, 이러한 일상적인 실험으로부터 수집된 정보에 기초하여, 당업자는 단독으로 또는 다른 돌연변이와 조합하여 추가 치환을 피해야 하는 아미노산을 쉽게 결정할 수 있다.

본원에 사용된 용어 "폴리펩타이드 단편" 및 "말단절단된 폴리펩타이드"는 상응하는 전장 단백질과 비교하여 아미노-말단 및/또는 카복시-말단 결실을 갖는 폴리펩타이드를 지칭한다. 다양한 구현예에서, 단편은 예를 들어, 적어도 5, 적어도 10, 적어도 25, 적어도 50, 적어도 100, 적어도 150, 적어도 200, 적어도 250, 적어도 300, 적어도 350, 적어도 400, 적어도 450, 적어도 500, 적어도 600, 적어도 700, 적어도 800, 적어도 900 또는 적어도 1000 개의 아미노산 길이일 수 있다. 다양한 구현예에서, 단편은 또한 예를 들어 최대 1000, 최대 900, 최대 800, 최대 700, 최대 600, 최대 500, 최대 450, 최대 400, 최대 350, 최대 300, 최대 250, 최대 200, 최대 150, 최대 100, 최대 50, 최대 25, 최대 10, 또는 최대 5 개의 아미노산 길이일 수 있다. 단편은 그의 단부 하나 또는 둘 모두에서 하나 이상의 추가 아미노산, 예를 들어, 상이한 자연 발생 단백질(예를 들어, Fc 또는 류신 지퍼 도메인) 또는 인공적 아미노산 서열(예를 들어, 인공 링커 서열)을 포함한다.

본원에 사용된 용어 "폴리펩타이드 변이체", "하이브리드 폴리펩타이드" 및 "폴리펩타이드 돌연변이체"는 하나 이상의 아미노산 잔기가 다른 폴리펩타이드 서열에 대한 아미노산 서열에 삽입, 결실 및/또는 치환된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 지칭한다. 다양한 구현예에서, 삽입, 결실 또는 치환될 아미노산 잔기의 수는 예를 들어, 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 적어도 10, 적어도 25, 적어도 50, 적어도 75, 적어도 100, 적어도 125, 적어도 150, 적어도 175, 적어도 200, 적어도 225, 적어도 250, 적어도 275, 적어도 300, 적어도 350, 적어도 400, 적어도 450 또는 적어도 500 개의 아미노산 길이일 수 있다. 본 개시의 하이브리드는 융합 단백질을 포함한다.

폴리펩타이드의 "유도체"는 화학적으로 변형된 폴리펩타이드, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜, 알부민(예를 들어, 인간 혈청 알부민), 인산화 및 글리코실화와 같은 또 다른 화학적 모이어티에 대한 접합이다.

용어 "% 서열 동일성"은 본원에서 "% 동일성"이라는 용어와 상호교환적으로 사용되며, 서열 정렬 프로그램을 사용하여 정렬될 때 2개 이상의 펩타이드 서열 사이의 아미노산 서열 동일성의 수준 또는 2개 이상의 뉴클레오티드 서열 사이의 뉴클레오티드 서열 동일성의 수준을 지칭한다. 예를 들어, 본원에서 사용된 80% 동일성은 정의된 알고리즘에 의해 결정된 80% 서열 동일성과 동일한 것을 의미하며, 주어진 서열이 다른 길이의 다른 서열과 적어도 80% 동일함을 의미한다. 다양한 구현예에서, % 동일성은 예를 들어, 주어진 서열에 대한 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 또는 그 초과의 서열 동일성으로부터 선택된다. 다양한 구현예에서, % 동일성은 예를 들어, 약 60% 내지 약 70%, 약 70% 내지 약 80%, 약 80% 내지 약 85%, 약 85% 내지 약 90%, 약 90% 내지 약 95%, 또는 약 95% 내지 약 99%의 범위이다.

용어 "% 서열 상동성"은 본원에서 "% 상동성"이라는 용어와 상호교환적으로 사용되며, 서열 정렬 프로그램을 사용하여 정렬될 때 2개 이상의 펩타이드 서열 사이의 아미노산 서열 상동성의 수준 또는 2개 이상의 뉴클레오티드 서열 사이의 뉴클레오티드 서열 상동성의 수준을 지칭한다. 예를 들어, 본원에서 사용된 바와 같이, 80% 상동성은 정의된 알고리즘에 의해 결정된 80% 서열 상동성과 동일한 것을 의미하며, 따라서 주어진 서열의 상동체는 주어진 서열의 길이에 걸쳐 80% 초과의 서열 상동성을 갖는다는 것을 의미한다. 다양한 구현예에서, % 상동성은 예를 들어, 주어진 서열에 대한 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 또는 그 초과의 서열 상동성으로부터 선택된다. 다양한 구현예에서, % 상동성은 예를 들어, 약 60% 내지 약 70%, 약 70% 내지 약 80%, 약 80% 내지 약 85%, 약 85% 내지 약 90%, 약 90% 내지 약 95%, 또는 약 95% 내지 약 99%의 범위이다.

2개의 서열 사이의 동일성을 결정하기 위해 사용될 수 있는 예시적인 컴퓨터 프로그램은 NCBI 웹사이트에서 인터넷에서 공개적으로 이용가능한 BLAST 프로그램의 세트, 예를 들어 BLASTN, BLASTX, 및 TBLASTX, BLASTP 및 TBLASTN을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 또한, Altschul 등의 J. Mol. Biol. 215:403-10, 1990(공개된 디폴트 설정, 즉 파라미터 w=4, t=17에 대한 특별 참조) 및 Altschul 등의 Nucleic Acids Res., 25:3389-3402, 1997을 참조한다. 서열 검색은 일반적으로 GenBank 단백질 서열 및 기타 공개 데이터베이스의 아미노산 서열과 비교하여 주어진 아미노산 서열을 평가할 때 BLASTP 프로그램을 사용하여 수행된다. BLASTX 프로그램은 GenBank 단백질 서열 및 기타 공개 데이터베이스의 아미노산 서열에 대해 모든 해독틀에서 번역된 핵산 서열을 검색하는 데 선호된다. BLASTP와 BLASTX는 모두 11.0의 개방 GAPS 패널티와 1.0의 확장된 GAPS 패널티의 기본 파라미터를 사용하여 실행되며 BLOSUM-62 매트릭스를 활용한다.

퍼센트 서열 동일성을 계산하는 것에 더하여, BLAST 알고리즘은 또한 두 서열 사이의 유사성에 대한 통계적 분석을 수행한다(예를 들어, Karlin 및 Altschul, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA, 90:5873-5787, 1993을 참조). BLAST 알고리즘에 의해 제공되는 유사성의 한 척도(measure)는 최소 합계 확률(P(N))이며, 이는 2개의 뉴클레오티드 또는 아미노산 서열 간의 일치가 우연히 발생할 확률의 표시를 제공한다. 예를 들어, 시험 핵산과 참조 핵산의 비교에서 최소 합계 확률이 예를 들어, 약 0.1 미만, 약 0.01 미만, 또는 약 0.001 미만인 경우 핵산은 참조 서열과 유사한 것으로 간주된다.

본원에 사용된 용어 "변형"은 펩타이드 골격(예를 들어, 아미노산 서열)의 임의의 조작 또는 폴리펩타이드의 번역후 변형(예를 들어, 글리코실화)을 지칭한다.

본원에 사용된 바와 같이 용어 "놉-인투-홀 변형(knob-into-hole modification)"은 CH3 도메인에서 2개의 면역글로불린 중쇄 사이의 계면 내의 변형을 지칭한다. 일 구현예에서, "놉-인-홀 변형"은 항체 중쇄 중 하나에서 아미노산 치환 T366W 및 선택적으로 아미노산 치환 S354C, 및 항체 중쇄의 다른 하나에서 아미노산 치환 T366S, L368A, Y407V 및 선택적으로 Y349C를 포함한다. 놉-인투-홀 기술은 예를 들어 미국 특허 제5,731,168호; 미국 특허 제7,695,936호; Ridgway 등의 Prot Eng 9, 617-621(1996) 및 Carter, J Immunol Meth 248, 7-15(2001)에 기재되어 있다.

본원에 사용된 용어 "융합 단백질"은 원래 별개의 단백질을 코딩하는 2개 이상의 유전자를 포함하는 융합 폴리펩타이드 분자를 지칭하며, 여기서 융합 단백질의 구성요소는 직접적으로 또는 펩타이드 링커를 통해 펩타이드 결합에 의해 서로 연결되어 있다. 본원에 사용된 용어 "융합된"은 직접적으로 또는 하나 이상의 펩타이드 링커를 통해 펩타이드 결합에 의해 연결된 구성요소를 지칭한다.

"링커"는 공유적으로 또는 이온성, 반데르발스 또는 수소 결합을 통해 두 개의 다른 분자를 연결하는 분자, 예를 들어 5' 말단에서 하나의 상보적 서열 및 3' 말단에서 다른 상보적 서열에 혼성화하여 두 개의 비-상보적 서열을 연결하는 핵산 분자를 지칭한다. "절단 가능한 링커"는 절단 가능한 링커에 의해 연결된 2개의 성분을 분리하기 위해 분해되거나 달리 절단될 수 있는 링커를 지칭한다. 절단 가능한 링커는 일반적으로 효소, 전형적으로 펩티다제, 프로테아제, 뉴클레아제, 리파제 등에 의해 절단된다. 절단 가능한 링커는 또한 예를 들어 온도, pH, 염 농도 등의 변화와 같은 환경 단서에 의해 절단될 수 있다.

본원에 사용된 용어 "펩타이드 링커"는 하나 이상의 아미노산, 일반적으로 약 2-20개의 아미노산을 포함하는 펩타이드를 지칭한다. 펩타이드 링커는 당업계에 공지되어 있거나 본원에 기재되어 있다. 적합한 비-면역원성 링커 펩타이드는 예를 들어(G₄S)_n, (SG₄)_n 또는 G₄(SG₄) 펩타이드 링커를 포함한다. "n"은 일반적으로 1에서 10 사이, 일반적으로 2에서 4 사이의 숫자이다.

"약제학적 조성물"은 동물에서 약제학적 용도에 적합한 조성물을 의미한다. 약제학적 조성물은 약리학적 유효량의 활성제 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함한다. "약리학적 유효량"은 의도된 약리학적 결과를 생성하는데 효과적인 제제의 양을 지칭한다. "약학적으로 허용가능한 담체"는 표준 약제학적 담체, 비히클, 완충액, 및 부형제, 예컨대 포스페이트 완충 식염수 용액, 덱스트로스의 5% 수용액, 및 에멀젼, 예컨대 오일/물 또는 물/오일 에멀젼, 및 다양한 유형의 습윤제 및/또는 아쥬반트 중 임의의 것을 지칭한다. 적합한 약제학적 담체 및 제형은 Remington's Pharmaceutical Sciences, 21st Ed. 2005, Mack Publishing Co, Easton에 기재되어 있다. "약제학적으로 허용가능한 염"은 예를 들어, 금속 염(나트륨, 칼륨, 마그네슘, 칼슘 등) 및 암모니아 또는 유기 아민의 염을 포함하는 약제학적 용도를 위한 화합물로 제형화될 수 있는 염이다.

본원에 사용된 바와 같이, "치료"(및 "치료하다" 또는 "치료하는"과 같은 이의 문법적 변형)는 치료를 받는 개체의 질환의 자연스러운 과정을 변경하려는 시도에서 임상적 개입을 의미하며 예방을 위해 또는 임상 병리학 과정에서 수행될 수 있다. 바람직한 치료 효과는 질환의 발생 또는 재발의 예방, 증상의 완화, 질환의 임의의 직접적 또는 간접적 병리학적 결과의 감소, 전이의 방지, 질환 진행 속도의 감소, 질환 상태의 개선 또는 완화, 및 차도 또는 개선된 예후를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 본원에 사용된 바와 같이, 질환, 장애 또는 병태를 "완화"시키는 것은 질환, 장애 또는 병태의 증상의 중증도 및/또는 발생 빈도를 감소시키는 것을 의미한다. 또한, 본원에서 "치료"에 대한 언급은 치유적, 완화적 및 예방적 치료에 대한 언급을 포함한다.

본원에 사용된 용어 "유효량" 또는 "치료 유효량"은 명시된 장애, 병태 또는 질환을 치료하는데, 예컨대 그의 증상 중 1종 이상을 개선하고, 완화시키고, 줄이고/거나 지연시키기에 충분한 화합물 또는 조성물의 양을 지칭한다. 암 또는 기타 원치 않는 세포 증식과 관련하여, 유효량은 (i) 암세포의 수를 감소시키고; (ii) 종양 크기 감소; (iii) 말초 기관으로의 암세포 침윤을 억제, 지연, 어느 정도 늦추고 바람직하게는 중지시키고; (iv) 종양 전이를 억제하고(즉, 어느 정도 느리게 하고 바람직하게는 중지시키고); (v) 종양 성장을 억제하고; (vi) 종양의 발생 및/또는 재발을 예방하거나 지연시키고/거나; (vii) 암과 연관된 하나 이상의 증상을 어느 정도 완화시키는 데 충분한 양을 포함한다. 유효량은 하나 이상의 투여로 투여될 수 있다.

어구 "투여하는" 또는 "투여되도록 하는"은 의료 전문가(예를 들어, 의사), 또는 환자의 의료 관리를 제어하는 사람에 의해 취해지는 행위를 지칭하며, 이는 환자에게 해당 효능제(들)/화합물(들)의 투여를 제어 및/또는 허용한다. 투여되도록 하는 것은 적절한 치료 레지멘의 진단 및/또는 결정, 및/또는 환자를 위한 특정 제제(들)/화합물을 처방하는 것을 수반할 수 있다. 그러한 처방은 예를 들어 처방 양식 작성, 의료 기록에 주석 달기 등을 포함할 수 있다. 투여가 본원에 설명되는 경우, "투여되도록 하는"이 또한 고려된다.

용어들 "환자", "개체" 및 "대상체"는 상호교환적으로 사용될 수 있으며 포유동물, 바람직하게는 인간 또는 비-인간 영장류, 그러나 또한 사육된 포유동물(예를 들어, 갯과 또는 고양이), 실험실 포유동물(예를 들어, 마우스, 랫트, 토끼, 햄스터, 기니아 피그), 및 농업 포유동물(예를 들어, 말과, 소, 돼지, 양)을 지칭한다. 다양한 구현예에서, 환자는 병원, 정신의학 관리 시설에서 의사 또는 다른 건강 작업자의 관리 하에, 외래환자로서, 또는 다른 임상 상황 하에 인간(예를 들어, 성인 남성, 성인 여성, 청소년 남성, 청년 여성, 남성 아동, 여성 아동)일 수 있다. 다양한 구현예에서, 환자는 일차 면역 결핍이 있는 환자, AIDS; 특정 면역억제 약물을 복용하는 암 및 이식 환자; 및 면역계에 영향을 미치는 선천적 질환(예를 들어, 선천성 무감마글로불린혈증, 선천성 IgA 결핍)을 가지고 있는 환자를 포함하지만 이에 제한되지 않는 면역저하된 환자 또는 면역계가 약화된 환자일 수 있다. 다양한 구현예에서, 환자는 방광암, 폐암, 흑색종 및 높은 비율의 돌연변이가 있는 보고된 다른 암을 포함하지만 이에 제한되지 않는 면역원성 암을 갖는다(Lawrence 등, Nature, 499(7457): 214-218, 2013).

용어 "면역요법"은, 특정 종양 항원에 대한 고갈 항체를 사용하는 치료; CTLA-4, PD-1 , OX-40, CD137, GITR, LAG3, TIM-3, SIRP, CD47 및 VISTA와 같은 공자극 또는 공억제 분자(면역 관문)에 대한 효능적, 길항적, 또는 차단적 항체를 사용하는 치료; 블리나투모밥과 같은 이중특이적 T 세포 결합 항체(BiTE®)를 사용하는 치료:IL-2, IL-12, IL-15, IL-21 , GM-CSF, IFN-α, IFN-β 및 IFN-γ와 같은 생물학적 반응 조절제의 투여를 수반하는 치료; 시풀루셀-T(sipuleucel-T)와 같은 치료적 백신을 사용하는 치료; 수지상 세포 백신, 또는 종양 항원 펩타이드 백신을 사용하는 치료; 키메라 항원 수용체 (CAR)-T 세포를 사용하는 치료; CAR-NK 세포를 사용하는 치료; 종양 침윤 림프구(tumor infiltrating lymphocyte; TIL)를 사용하는 치료; 입양으로 전달된 항종양 T 세포(생체외 확장 및/또는 TCR 형질전환)를 사용하는 치료; TALL-104 세포를 사용하는 치료; 및 톨(Toll)-유사 수용체(TLR) 효능제 CpG 및 이미퀴모드와 같은 면역자극제를 사용하는 치료를 포함하지만 이에 제한되지 않는, 암 치료에 관한 것이다.

"내성 또는 불응성 암"은 예를 들어, 화학요법, 수술, 방사선 요법, 줄기 세포 이식 및 면역 요법을 포함하는 이전의 항암 요법에 반응하지 않는 종양 세포 또는 암을 지칭한다. 종양 세포는 치료 시작 시 내성 또는 불응성일 수 있으며, 치료 중에 내성 또는 불응성이 될 수 있다. 불응성 종양 세포는 치료 시작 시 반응하지 않거나 초기에 짧은 기간 동안 반응하지만 치료에 반응하지 않는 종양을 포함한다. 불응성 종양 세포에는 항암 요법에 반응하지만 후속 라운드(round)에는 반응하지 않는 종양도 포함된다. 본 발명의 목적을 위해, 불응성 종양 세포는 또한 항암 요법에 의한 치료에 의해 억제되는 것으로 보이지만 치료가 중단된 후 최대 5년, 때로는 최대 10년 이상 재발하는 종양을 포괄한다. 항암 요법은 화학요법제 단독, 방사선 단독, 표적 요법 단독, 수술 단독, 또는 그 조합을 이용할 수 있다. 제한이 아닌 설명의 편의를 위해, 불응성 종양 세포는 내성 종양과 상호교환가능한 것으로 이해될 것이다.

본원에 사용된 용어 "Fc 도메인" 또는 "Fc 영역"은 불변 영역의 적어도 일부를 함유하는 면역글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 정의하는 데 사용된다. 상기 용어는 천연 서열 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 포함한다. IgG Fc 영역은 IgG CH2 및 IgG CH3 도메인을 포함한다. 본 명세서의 CH3 영역은 천연 서열 CH3 도메인 또는 변이체 CH3 도메인(예를 들어, 그의 한 사슬에 도입된 "돌기"("놉") 및 그의 다른 사슬에서 상응하는 도입된 "공동"("홀")을 갖는 CH3 도메인; 본원에 참조된 포함된 미국 특허 번호 5,821,333 참조)일 수 있다. 이러한 변이체 CH3 도메인은 본원에 설명되는 바와 같이 2개의 동일하지 않은 면역글로불린 중쇄의 이종이량체화를 촉진하기 위해 사용될 수 있다. 본원에서 달리 명시되지 않는 한, Fc 영역 또는 불변 영역에서 아미노산 잔기의 넘버링은 EU 넘버링 시스템에 따른다.

본원에 사용된 용어 "효과기 기능"은 면역글로불린 이소타입에 따라 변하는 면역글로불린의 Fc 영역에 기인하는 생물학적 활성을 지칭한다. 면역글로불린 효과기 기능의 예는 다음을 포함한다: Clq 결합 및 보체 의존적 세포독성(CDC), Fc 수용체 결합, 항체 의존 세포-매개된 세포독성(ADCC), 항체 의존 세포 포식작용 (ADCP), 사이토카인 분비, 항원 제시 세포에 의한 면역 복합체-매개된 항원 흡수, 세포 표면 수용체(예를 들어, B 세포 수용체)의 하향 조절, 및 B 세포 활성화. 효과기 기능은 또한 CD8 및 NK 세포와 같은 효과기 면역 세포에 의해 유래되는 유사한 면역 반응을 지칭할 수 있다.

본원에 사용된 용어 "조절 T-세포" 또는 "Treg 세포"는 다른 T-세포(효과기 T-세포)의 반응을 억제할 수 있는 특화된 유형의 CD4+ T-세포를 의미한다. Treg 세포는 IL-2 수용체(CD25)의 α-서브유닛인 CD4 및 전사 인자 포크헤드 박스 P3 (FOXP3)의 발현을 특징으로 하고(Sakaguchi, Annu Rev Immunol 22, 531-62(2004)) 종양에 의해 발현되는 항원을 포함하여 항원에 대한 말초 자가 내성(self-tolerance)의 유도 및 유지에 중요한 역할을 한다.

본원에 사용되는 바와 같은 용어 "종래의 CD4+ T 세포"는 조절 T 세포 이외의 CD4+ T 세포로 의미된다. CD3 및 CD4의 종래의 CD4+ T 세포 발현. 나이브(naive) 및 비자극 상태에서, 그들은 IL-2 수용체(CD25)의 α-서브유닛을 발현하지 않고 IL-2 수용체의

서브유닛을 발현한다.

용어 "CD8 T 세포"는 CD3 및 CD8의 발현을 특징으로 하는 세포독성 T 림프구의 유형이다. CD8 T 세포는 IL-2 수용체의

서브유닛을 주로 발현하고 암 세포, 바이러스에 감염된 세포, 또는 다른 방식으로 손상된 세포를 살상하는 데 중요한 역할을 한다.

용어 "NK 세포"는 선천성 면역계에 매우 중요한 세포독성 림프구의 유형이다. NK 세포는 IL-2 수용체의

서브유닛을 주로 발현하고 바이러스-감염된 세포 및 종양 형성에 대한 신속한 반응을 제공한다.

본원에 사용된 바와 같이, "특이적 결합"은 결합이 항원에 대해 선택적이고 원치 않는 또는 비특이적 상호작용과 구별될 수 있음을 의미한다. 특정 항원에 결합하는 면역글로불린의 능력은 효소 결합 면역흡착 분석법(ELISA) 또는 당업자에게 친숙한 기타 기술, 예를 들어 표면 플라즈몬 공명(SPR) 기술을 통해 측정될 수 있다.

본원에 사용된 용어 "친화도" 또는 "결합 친화도"는 분자(예를 들어, 항체)의 단일 결합 부위와 그의 결합 파트너(예를 들어, 항원) 사이의 비공유 상호작용의 총계의 강도를 지칭한다. 파트너 Y에 대한 분자 X의 친화도는 일반적으로 해리 상수(KD)로 나타낼 수 있으며, 이는 해리 및 연관 속도 상수(각각 koff 및 kon)의 비율이다. 친화도를 측정하는 특정 방법은 표면 플라스몬 공명(SPR)이다.

본원에 사용된 용어 "감소된 결합"은 예를 들어 SPR에 의해 측정된 바와 같은 각각의 상호작용에 대한 친화도의 감소를 지칭한다. 역으로, "증가된 결합"은 각각의 상호작용에 대한 결합 친화도의 증가를 의미한다.

본원에 사용된 용어 "중합체"는 일반적으로 단독중합체; 예를 들어 블록, 그래프트, 랜덤 및 교대 공중합체와 같은 공중합체; 및 삼원공중합체; 및 이들의 블렌드 및 변형을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 또한, 달리 특별히 제한되지 않는 한, 용어 "중합체"는 물질의 가능한 모든 기하학적 배열을 포함해야 한다. 이러한 배열은 아이소탁틱, 신디오탁틱, 및 랜덤 대칭을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

"폴리에틸렌 글리콜" 또는 "PEG"는, 커플링제 또는 커플링 또는 활성 모이어티를 갖는 (예를 들어, 알데히드, 히드록시숙신이미딜, 히드라지드, 티올, 트라이플레이트, 트레실레이트, 아지르딘, 옥시란, 오르토피리딜디설파이드, 비닐술폰, 요오드아세트아미드 또는 말레이미드 모이어티를 갖는) 유도체화를 갖거나 갖지 않는, 폴리알킬렌 글리콜 화합물 또는 그 유도체를 의미한다. 다양한 구현예에서, PEG는 실질적으로 선형, 직쇄 PEG, 분지형 PEG, 또는 수지상 PEG를 포함한다. PEG는 상업적으로 이용가능하거나 기술 분야에 잘 알려진 방법에 따른 에틸렌 글리콜의 개환 중합에 의해 제조될 수 있는 잘 알려진, 수용성 중합체이다(Sandler and Karo, Polymer Synthesis, Academic Press, New York, Vol. 3, pages 138-161).

"폴리뉴클레오티드"는 뉴클레오티드 단위로 구성된 중합체를 의미한다. 폴리뉴클레오티드는 자연 발생 핵산, 예컨대 데옥시리보핵산("DNA") 및 리보핵산 ("RNA")뿐만 아니라 핵산 유사체를 포함한다. 핵산 유사체는 비-자연 발생 염기, 천연 발생 포스포디에스테르 결합 이외의 다른 뉴클레오티드와의 연결에 참여하거나 포스포디에스테르 결합 이외의 연결을 통해 부착된 염기를 포함하는 뉴클레오티드를 포함하는 것을 포함한다. 따라서, 뉴클레오티드 유사체는 예를 들어 제한 없이 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트, 포스포로트리에스테르, 포스포르아미데이트, 유기산염, 메틸포스포네이트, 키랄-메틸 포스포네이트, 2-O-메틸 리보뉴클레오티드, 펩타이드-핵산(PNA), 등을 포함한다. 이러한 폴리뉴클레오티드는 예를 들어 자동화된 DNA 합성기를 사용하여 합성될 수 있다. 용어 "핵산"은 일반적으로 큰 폴리뉴클레오티드를 지칭한다. 용어 "올리고뉴클레오티드"는 일반적으로 약 50개 이하의 뉴클레오티드인 짧은 폴리뉴클레오티드를 전형적으로 지칭한다. 뉴클레오타이드 서열이 DNA 서열(즉, A, T, G, C)로 표시될 때, 이것은 "U"가 "T"를 대체하는 RNA 서열(즉, A, U, G, C)도 포함하는 것으로 이해될 것이다.

폴리뉴클레오타이드 서열을 기술하기 위해 본원에서 종래의 표기법이 사용된다: 단일 가닥 폴리뉴클레오타이드 서열의 좌측 말단은 5'-말단이고; 이중 가닥 폴리뉴클레오티드 서열의 왼쪽 방향을 5'-방향이라고 한다. 초기 RNA 전사체에 뉴클레오티드의 5'에서 3'으로의 추가 방향을 전사 방향이라고 한다. mRNA와 동일한 서열을 갖는 DNA 가닥은 "코딩 가닥"으로 지칭하고; 그 DNA로부터 전사된 mRNA와 동일한 서열을 갖고 RNA 전사체의 5'에서 5'-말단에 위치하는 DNA 가닥 상의 서열은 "업스트림 서열"로 지칭하고; RNA와 동일한 서열을 갖고 코딩 RNA 전사체의 3'에서 3' 말단에 있는 DNA 가닥 상의 서열은 "다운스크림 서열"로 지칭한다.

"상보적"은 2개의 폴리뉴클레오타이드의 상호작용 표면의 위상적 호환성 또는 함께 매칭을 지칭한다. 따라서 2개의 분자는 상보적이라고 설명할 수 있으며, 더 나아가 접촉 표면 특성은 서로 상보적이다. 제1 폴리뉴클레오타이드의 뉴클레오타이드 서열이 제2 폴리뉴클레오타이드의 폴리뉴클레오타이드 결합 파트너의 뉴클레오타이드 서열과 실질적으로 동일하거나 제1 폴리뉴클레오타이드는 엄격한 혼성화 조건 하에 제2 폴리뉴클레오타이드에 혼성화할 수 있는 경우, 제1 폴리뉴클레오타이드는 제2 폴리뉴클레오타이드에 상보적이다.

"~에 특이적으로 혼성화하는" 또는 "특이적 혼성화" 또는 "선택적으로 혼성화하는"은 서열이 복합 혼합물(예를 들어, 전체 세포) DNA 또는 RNA에 존재할 때 엄격한 조건 하에 특정 뉴클레오티드 서열에 우선적으로 핵산 분자를 결합, 이중화 또는 혼성화하는 것을 지칭한다.　용어 "엄격한 조건"은 프로브가 그의 표적 하위서열에 우선적으로 혼성화하고 다른 서열에는 덜한 정도로 혼성화하거나 전혀 혼성화하지 않는 조건을 지칭한다. 서던 및 노던 혼성화와 같은 핵산 혼성화 실험의 맥락에서 "엄격한 혼성화" 및 "엄격한 혼성화 세척 조건"은 서열 의존적이며 상이한 환경 파라미터에서 다르다. 핵산의 혼성화에 대한 광범위한 가이드는 Tijssen, 1993, Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology--Hybridization with Nucleic Acid Probes, part I, chapter 2, "Overview of principles of hybridization and the strategy of nucleic acid probe assays", Elsevier, N.Y.; Sambrook 등, 2001, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 3.sup.rd ed., NY; 및 Ausubel 등, eds., Current Edition, Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and Wiley Interscience, NY에서 찾을 수 있다.

일반적으로 매우 엄격한 혼성화 및 세척 조건은 정의된 이온 강도 및 pH에서 특정 서열에 대한 열 용융점(Tm)보다 약 5℃ 낮도록 선택된다. Tm은 표적 서열의 50%가 완벽하게 일치하는 프로브에 혼성화되는 온도(정의된 이온 강도 및 pH에서)이다. 특정 프로브의 Tm과 같도록 매우 엄격한 조건이 선택된다. 서던 또는 노던 블롯에서 필터 상의 약 100개 이상의 상보적 잔기가 있는 상보적 핵산의 혼성화를 위한 엄격한 혼성화 조건의 예는 42℃에서 1 mg의 헤파린을 갖는 50% 포르말린이며, 혼성화는 밤새 수행된다. 매우 엄격한 세척 조건의 예는 72℃에서 약 15분 동안 0.15 M의 NaCl이다. 엄격한 세척 조건의 예는 65℃에서 15분 동안 0.2 x SSC 세척이다. SSC 완충액에 대한 설명은 Sambrook 등을 참조한다. 높은 엄격도 세척은 배경 프로브 신호를 제거하기 위해 낮은 엄격도 세척이 선행될 수 있다. 예를 들어, 약 100개 초과의 뉴클레오티드의 이중체에 대한 예시적인 중간 엄격도 세척은 15분 동안 45℃에서 1 x SSC이다. 예를 들어, 약 100개 초과의 뉴클레오티드의 이중체에 대한 예시적인 낮은 엄격도 세척은 15분 동안 40℃에서 4-6 x SSC이다. 일반적으로, 특정 혼성화 검정에서 관련 없는 프로브에 대해 관찰된 것보다 2x(또는 더 높은)의 신호 대 잡음비는 특정 혼성화의 검출을 나타낸다.

"프라이머"는 지정된 폴리뉴클레오타이드 주형에 특이적으로 혼성화할 수 있고 상보적 폴리뉴클레오타이드의 합성을 위한 개시 시점을 제공할 수 있는 폴리뉴클레오타이드를 지칭한다. 이러한 합성은 폴리뉴클레오타이드 프라이머가 합성이 유래되는 조건, 즉 뉴클레오타이드, 상보적 폴리뉴클레오타이드 주형 및 DNA 중합효소와 같은 중합제의 존재 하에 놓이는 경우에 일어난다. 프라이머는 일반적으로 단일 가닥이지만 이중 가닥일 수도 있다. 프라이머는 일반적으로 데옥시리보핵산이지만 다양한 합성 및 자연 발생 프라이머가 많은 응용 분야에 유용하다. 프라이머는 합성 개시 부위의 역할을 하도록 혼성화되도록 설계된 주형에 대해 상보적이지만 주형의 정확한 서열을 반영할 필요는 없다. 이러한 경우 프라이머와 주형의 특이적 혼성화는 혼성화 조건의 엄격성에 따라 달라진다. 프라이머는 예를 들어 발색성, 방사성 또는 형광성 모이어티로 표지될 수 있고 검출 가능한 모이어티로 사용될 수 있다.

"프로브"는 폴리뉴클레오타이드와 관련하여 사용될 때 다른 폴리뉴클레오타이드의 지정된 서열에 특이적으로 혼성화할 수 있는 폴리뉴클레오타이드를 지칭한다. 프로브는 표적 상보적 폴리뉴클레오티드에 특이적으로 혼성화하지만 주형의 정확한 상보적 서열을 반영할 필요는 없다. 이러한 경우, 표적에 대한 프로브의 특이적 혼성화는 혼성화 조건의 엄격성에 달려 있다. 프로브는 예를 들어 발색성, 방사성 또는 형광성 모이어티로 표지될 수 있고 검출 가능한 모이어티로 사용될 수 있다. 프로브가 상보적 폴리뉴클레오타이드 합성을 위한 개시 시점을 제공하는 경우, 프로브는 프라이머가 될 수도 있다.

"벡터"는 이에 연결된 다른 핵산을 세포에 도입하는 데 사용할 수 있는 폴리뉴클레오티드이다. 벡터의 한 유형은 추가 핵산 세그먼트가 결찰될 수 있는 선형 또는 원형 이중 가닥 DNA 분자를 지칭하는 "플라스미드"이다. 또 다른 유형의 벡터는 바이러스 벡터(예를 들어, 복제 결함 레트로바이러스, 아데노바이러스 및 아데노 연관 바이러스)이며, 여기서 추가 DNA 세그먼트는 바이러스 게놈에 도입될 수 있다. 특정 벡터는 이들이 도입된 숙주 세포에서 자율 복제할 수 있다(예를 들어, 박테리아 복제 기점을 포함하는 박테리아 벡터 및 에피솜 포유동물 벡터). 다른 벡터(예를 들어, 비-에피솜 포유동물 벡터)는 숙주 세포에 도입되면 숙주 세포의 게놈에 통합되어 숙주 게놈과 함께 복제된다. "발현 벡터"는 선택된 폴리뉴클레오티드의 발현을 지시할 수 있는 벡터의 유형이다.

"조절 서열"은 작동가능하게 연결된 핵산의 발현(예를 들어, 발현 수준, 시기 또는 위치)에 영향을 미치는 핵산이다. 예를 들어, 조절 서열은 조절된 핵산에 직접적으로 또는 하나 이상의 다른 분자(예를 들어, 조절 서열 및/또는 핵산에 결합하는 폴리펩타이드)의 작용을 통해 효과를 발휘할 수 있다. 조절 서열의 예에는 프로모터, 인핸서 및 기타 발현 조절 요소(예를 들어, 폴리아데닐화 신호)가 포함된다. 조절 서열의 추가 예는 예를 들어 Goeddel, 1990, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, California. 및 Baron 등, 1995, Nucleic Acids Res. 23:3605-06에 기재되어 있다. 조절 서열이 뉴클레오티드 서열의 발현(예를 들어, 발현 수준, 시기 또는 위치)에 영향을 미치는 경우 뉴클레오티드 서열은 조절 서열에 "작동가능하게 연결"된다.

"숙주 세포"는 본 개시의 폴리뉴클레오티드를 발현하는데 사용될 수 있는 세포이다. 숙주 세포는 원핵생물, 예를 들어, E. 콜라이일 수 있거나, 진핵생물, 예를 들어 단세포 진핵생물(예를 들어, 효모 또는 다른 진균), 식물 세포(예를 들어, 담배 또는 토마토 식물 세포), 동물 세포(예를 들어, 인간 세포, 원숭이 세포, 햄스터 세포, 랫트 세포, 마우스 세포 또는 곤충 세포) 또는 하이브리도마 (hybridoma)이다. 전형적으로, 숙주 세포는 숙주 세포에서 발현될 수 있는 폴리펩타이드-인코딩 핵산으로 형질전환되거나 형질감염될 수 있는 배양된 세포이다. "재조합 숙주 세포"라는 어구는 발현될 핵산으로 형질전환되거나 형질감염된 숙주 세포를 나타내기 위해 사용될 수 있다. 숙주 세포는 또한 핵산을 포함하지만 조절 서열이 핵산과 작동가능하게 연결되도록 숙주 세포 내로 도입되지 않는 한 원하는 수준으로 이를 발현하지 않는 세포일 수 있다. 숙주 세포라는 용어는 특정 대상 세포뿐만 아니라 이러한 세포의 자손 또는 잠재적 자손을 지칭하는 것으로 이해된다. 예를 들어 돌연변이 또는 환경적 영향으로 인해 특정 변형이 후속 세대에서 일어날 수 있기 때문에 이러한 자손은 실제로 모 세포와 동일하지 않을 수 있지만 여전히 본원에 사용된 용어의 범위 내에 포함된다.

용어 "단리된 분자"(여기서 분자는 예를 들어 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드임)는 그의 기원 또는 유도 공급원에 의해 (1) 그의 천연 상태에서 동반되는 천연 연관 성분과 연관되지 않거나, (2) 동일한 종으로부터의 다른 분자가 실질적으로 없거나, (3) 상이한 종으로부터의 세포에 의해 발현되거나, 또는 (4) 자연에서 발생하지 않는 분자이다. 따라서, 화학적으로 합성되거나 자연적으로 유래된 세포와 다른 세포 시스템에서 발현되는 분자는 자연적으로 연관된 구성요소로부터 "단리"된다. 분자는 또한 당업계에 잘 알려진 정제 기술을 사용하여 단리함으로써 자연적으로 연관된 구성요소가 실질적으로 없게 될 수 있다. 분자 순도 또는 균질성은 당업계에 잘 알려진 다수의 수단에 의해 검정될 수 있다. 예를 들어, 폴리아크릴아미드 겔 전기영동 및 겔 염색을 사용하여 폴리펩타이드 샘플의 순도를 분석하여 당업계에 널리 공지된 기술을 사용하여 폴리펩타이드를 시각화할 수 있다. 특정 목적을 위해, HPLC 또는 정제를 위해 당업계에 잘 알려진 다른 수단을 사용하여 더 높은 분해능을 제공할 수 있다.

단백질 또는 폴리펩타이드는 샘플의 적어도 약 60% 내지 75%가 단일 종의 폴리펩타이드를 나타낼 때 "실질적으로 순수한", "실질적으로 균질한" 또는 "실질적으로 정제된" 것이다. 폴리펩타이드 또는 단백질은 단량체 또는 다량체일 수 있다. 실질적으로 순수한 폴리펩타이드 또는 단백질은 일반적으로 단백질 샘플의 약 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90% W/W, 보다 일반적으로 약 95%를 포함할 것이고, 바람직하게는 99% 초과로 순수할 것이다. 단백질 순도 또는 균질성은 단백질 샘플의 폴리아크릴아미드 겔 전기영동과 같은 당업계에 잘 알려진 많은 수단에 의해 표시될 수 있으며, 이어서 당업계에 잘 알려진 염색으로 겔을 염색할 때 단일 폴리펩타이드 밴드를 시각화할 수 있다. 특정 목적을 위해, HPLC 또는 정제를 위해 당업계에 잘 알려진 다른 수단을 사용하여 더 높은 분해능을 제공할 수 있다.

본원에 사용된 용어 "표지" 또는 "표지된"은 항체에 또 다른 분자의 혼입(incorporation)을 지칭한다. 일 구현예에서, 표지는 검출가능한 마커, 예를 들어 방사성 표지된 아미노산의 혼입 또는 마킹된 아비딘(예를 들어, 광학 또는 열량측정 방법에 의해 결정될 수 있는 형광 마커 또는 효소적 활성을 함유하는 스트렙타비딘)에 의해 검출될 수 있는 바이오티닐 모이어티의 폴리펩타이드에 대한 부착이다. 또 다른 구현예에서, 표지 또는 마커는 치료제, 예를 들어 약물 접합체 또는 독소일 수 있다. 폴리펩타이드 및 당단백질을 표지하는 다양한 방법이 당업계에 공지되어 있고 사용될 수 있다. 폴리펩타이드에 대한 표지의 예는 다음을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다: 방사성 동위원소 또는 방사선핵종(예를 들어, ³H, ¹⁴C, ¹⁵N, ³⁵S, ⁹⁰Y, ⁹⁹Tc, ¹¹¹In, ¹²⁵I, ¹³¹I), 형광 표지(예를 들어, FITC, 로다민, 란탄족 포스포르), 효소적 라벨(예를 들어, 서양고추냉이 과산화효소, β-갈락토시다제, 루시퍼라제, 알칼리성 포스파타제), 화학발광 마커, 바이오티닐 기, 이차 리포터에 의해 인식된 미리 결정된 폴리펩타이드 에피토프(예를 들어, 류신 지퍼 쌍 서열, 이차 항체를 위한 결합 부위, 금속 결합 도메인, 에피토프 태그), 자성제, 예컨대 가돌리늄 킬레이트, 독소 예컨대 백일해 독소, 탁솔, 사이코칼라신 B, 그라마이시딘 D, 에티듐 브로마이드, 에메틴, 미토마이신, 에토포시드, 테노포사이드, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 콜히친, 독소루비신, 다우노루비신, 디하이드록시 안트라신 디온, 미톡산트론, 미트라마이신, 악티노마이신 D, 1-데하이드로테스토스테론, 글루코코르티코이드, 프로카인, 테트라카인, 리도카인, 프로프라놀롤, 및 퓨로마이신 및 이들의 유사체 또는 상동체. 다양한 구현예에서, 표지는 잠재적인 입체 장애를 감소시키기 위해 다양한 길이의 스페이서 아암에 의해 부착된다.

본원에 사용된 용어 "이종(heterologous)"은 예를 들어, 기존의 천연 조성 또는 상태를 다른 공급원으로부터 유래된 것으로 대체함으로써 달성될 수 있는 천연하지 않거나 자연적으로 발견되는 조성 또는 상태를 지칭한다. 유사하게, 단백질은 자연적으로 발현되는 유기체 이외의 유기체에서 단백질의 발현은 이종 발현 시스템 및 이종 단백질을 구성한다.

본원에 설명되는 개시의 양태 및 구현예는 양태 및 구현예를 "구성하는" 및/또는 "본질적으로 구성되는"을 포함하는 것으로 이해된다.

본원에서 값 또는 파라미터 "약"에 대한 언급은 그 값 또는 파라미터 자체에 대한 변형을 포함(및 설명)한다. 예를 들어, "약 X"를 언급하는 설명은 "X"에 대한 설명을 포함한다.

본원에 사용된 바와 같이, 단수 형태는 문맥이 명백하게 달리 지시하지 않는 한 복수 지시 대상을 포함한다. 본원에 설명되는 개시의 양태 및 변형은 양태 및 변형을 "구성하는" 및/또는 "본질적으로 구성되는"을 포함하는 것으로 이해된다.

IL-2

고전적인 Th1 사이토카인인 인터루킨-2(IL-2)는 T-세포 항원 수용체와 공동 자극 분자 CD28을 통해 활성화된 후 T-세포에 의해 생성된다. IL-2의 조절은 IL-2 프로모터에 작용하여 새로운 유전자 전사를 생성하는 신호전달 경로 및 전사 인자의 활성화를 통해 발생하지만, 또한 IL-2 mRNA의 안정성 조절을 수반한다. IL-2는 Jak-STAT 경로를 통해 신호 전달을 매개하는 고도로 조절된 α 사슬과 β 및 γ 사슬을 포함하는 다중 사슬 수용체에 결합한다. IL-2는 T-세포, B 세포 및 NK 세포에 활성화, 성장 및 분화 신호를 전달한다. IL-2는 또한 면역 반응을 종결시키기 위한 필수 메커니즘을 제공하는 기능인 T-세포의 활성화 유도 세포사를 매개하는 데 중요하다. 상업적으로 이용 가능한 글리코실화되지 않은 인간 재조합 IL-2 제품인 알데스류킨(데스-알라닐-1, 세린-125 인간 인터루킨-2의 PROLEUKIN® 브랜드로 제공됨, Prometheus Laboratories Inc., San Diego Calif.)은 전이성 신세포 암종 및 전이성 흑색종으로 고통받는 환자에게 투여용으로 승인되었다. IL-2는 또한 간염 C 바이러스(HCV), 인간 면역결핍 바이러스(HIV), 급성 골수성 백혈병, 비-호지킨 림프종, 피부 T-세포 림프종, 소아 류마티스성 관절염, 아토피 피부염, 유방암 및 방광암로 고통받거나 감염된 환자의 투여를 위해 제안되었다. 불행히도, 짧은 반감기와 심각한 독성은 IL-2의 최적 투여를 제한한다.

본원에 사용된 바와 같이, 단백질 또는 폴리펩타이드의 맥락에서 용어 "천연 IL-2" 및 "천연 인터루킨-2"는 미성숙 또는 전구체 및 성숙한 형태의를 포함하는 임의의 자연 발생 포유동물 인터루킨-2 아미노산 서열을 지칭한다. 다양한 종의 천연 포유동물 인터루킨-2의 아미노산 서열에 대한 GenBank 수탁 번호의 비제한적 예는 NP_032392.1(Mus 무스큘러스, 미성숙한 형태의), NP_001040595.1(붉은털원숭이, 미성숙한 형태의), NP_000577.2(인간, 전구체 형태), CAA01199,1(인간, 미성숙한 형태의), AAD48509.1(인간, 미성숙한 형태의), 및 AAB20900.1(인간)을 포함한다. 본 발명의 다양한 구현예에서, 천연 IL-2는 자연 발생 포유동물 IL-2의 미성숙 또는 전구체 형태이다. 다른 구현예에서, 천연 IL-2는 자연 발생 포유동물 IL-2의 성숙한 형태의이다. 다양한 구현예에서, 천연 IL-2는 자연 발생 인간 IL-2의 전구체 형태이다. 다양한 구현예에서, 천연 IL-2는 자연 발생 인간 IL-2의 성숙한 형태의이다. 다양한 구현예에서, IL-2 기반 도메인 D2는 서열번호: 1에 제시된 인간 IL-2 전구체 서열의 아미노산 서열로부터 유래된다:

다양한 구현예에서, IL-2 기반 도메인 D2는 서열번호: 3에 제시된 인간 IL-2 성숙한 형태의 야생형 서열의 아미노산 서열을 포함하며, 이는 125번 위치에서 세린으로의 시스테인의 치환을 포함하지만, 자연 발생 IL-2와 비교하여 IL-2 수용체 결합을 변경한다:

IL-2 변이체

본 발명은 돌연변이된 한 개 내지 수개의 아미노산을 제외하고, 인간 IL-2와 일차 서열을 공유하는 폴리펩타이드에 관한 것이다. IL-2 변이체의 하나의 패널은 Treg 세포를 자극하고 그들을 종양 요법에서 보다 효과적으로 만들기 위해 그러한 폴리펩타이드의 능력을 실질적으로 감소시키는 돌연변이를 포함한다. 또한, 조절 T 세포(Tregs)의 활성이 바람직하지 않은 암 또는 감염과 같은 질환의 요법을 위해, 단독으로 또는 백신, 또는 TAA-표적 생물제제, 또는 면역 관문 블로커와 병용으로, 또는 이중기능성 분자 구조의 빌딩 블록으로서 사용되는, 이러한 돌연변이된 변이체의 치료적 용도를 포함한다. 또 다른 양태에서 본 발명은 개시되는 폴리펩타이드를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 마지막으로, 본 발명은 자가면역 및 염증성 장애 또는 암과 같은 질환 및 다양한 감염성 질환에 대한 면역계의 그것의 선택적 조절 효과로 인해 개시되는 폴리펩타이드 및 약제학적 조성물의 치료 용도에 관한 것이다.

본 발명은 길이가 100개 내지 500개의 아미노산, 바람직하게는 겉보기 분자량이 적어도 15 kD인 140개 잔기 크기의 폴리펩타이드에 관한 것이다. 이러한 폴리펩타이드는 천연 IL-2와, 90% 초과의, 높은 서열 동일성을 유지한다. 그들의 서열의 위치에서, 이러한 폴리펩타이드는 돌연변이되어 천연 IL-2에서 동일한 위치의 그러한 것과 상이한 아미노산 잔기를 도입한다.

본 발명의 폴리펩타이드는 다른 명칭 중에서, 면역조절 폴리펩타이드, IL-2 유사체 또는 IL-2 변이체로서 지칭될 수 있다. 이러한 폴리펩타이드는 IL-2 수용체 서브유닛 α와 상호작용하는 아미노산에 대응하는 IL-2의 위치에 주로 돌연변이를 도입하는, (PDB 공공 데이터베이스에서 이용가능한) IL-2 수용체 복합체의 3D 구조에 기초하여 설계된다.

다양한 구현예에서, IL-2 변이체(또는 돌연변이)는 서열번호: 3에 제시되는 성숙한 인간 IL-2 폴리펩타이드의 서열로부터 유래되는 서열을 포함한다. 다양한 구현예에서, IL-2 변이체는 천연(또는 야생형) IL-2 단백질과 다른 상이한 아미노산 서열을 포함한다. 다양한 구현예에서, IL-2 변이체는 IL-2 수용체 폴리펩타이드와 상호작용하고 IL-2 효능제 또는 길항제로서 기능한다. 다양한 구현예에서, 효능제 활성을 갖는 IL-2 변이체는 슈퍼 효능제 활성을 갖는다. 다양한 구현예에서, IL-2 변이체는 IL-2Rα와의 연관과 독립적으로 IL-2 효능제 또는 길항제로서 기능할 수 있다. IL-2 효능제는 야생형 IL-2와 비교하여 비교할만한 또는 증가된 생물학적 활성에 의해 예시화된다. IL-2 길항제는 야생형 IL-2와 비교하여 줄어든 생물학적 활성에 의해 또는 IL-2-매개된 반응을 억제하는 능력에 의해 예시화된다. 다양한 구현예에서, IL-2 변이체의 서열은 IL-2 효능제 또는 길항제 활성을 야기하는 변화와 같은, 천연 IL-2 서열과 비교하여, 적어도 하나의 아미노산 변화, 예를 들어 치환 또는 결실을 갖는다. 다양한 구현예에서, IL-2 변이체는 효과기 T 세포 (Teff)를 선택적으로 활성 및 증식시키기 위해 IL-2Rα에 대한 감소/폐기된 결합을 갖는 서열번호: 31-66에 제시되는 아미노산 서열을 갖는다. 다양한 구현예에서, IL-2 변이체는 IL-2Rα에 대한 감소/폐기된 결합이 IL-2Rα 또는

관련 독성을 감소시키고, 세포 고갈을 약화시키고 지속적인 약력학을 개선하기 위해 약화된 효능을 갖는 효과기 T 세포를 효과적으로 활성 및 증식시키게 하는 돌연변이에 더하여 IL-2Rβ 또는

조절 돌연변이를 포함하는 서열번호: 111-120에 제시되는 아미노산 서열을 갖는다. 다양한 구현예에서, IL-2 변이체는 IL-2Rα에 대한 감소/폐기된 결합이 약화된 효능을 갖는 효과기 T 세포를 선택적으로 활성 및 증식시키게 하는 돌연변이에 더하여 N-말단 결실을 포함하는 서열번호: 189(아미노산 462-586), 190(아미노산 462-585), 및 191(아미노산 462-584)에서 아미노산 서열을 갖는다. 다양한 구현예에서, 서열번호: 31-66, 111-120에 제시되는 아미노산 서열, 및 서열번호: 47의 아미노산 9-133, 10-133, 및 11-133을 갖는 IL-2 변이체는 또한 IL-2 및 대응하는 융합 단백질의 발달성 프로파일을 개선하기 위해 S125I 아미노산 치환을 포함한다.

IL-2Rα와의 계면에 도입되는 아미노산 치환을 갖는 예시적 IL-2 변이체가 표 2에 제공된다:

[표 2]

수용체 서브유닛 α와 상호작용하는 아미노산에 대한 돌연변이(들)를 포함하는 IL-2 변이체 또는 융합 작제물. 모든 변이체는 발달성-개선 치환(S125I)을 포함한다.

본 발명의 주요 양태는 암 요법을 위해

를 발현하는 세포에 비해 (IL-2Rα가 아닌)

를 발현하는 세포에 대해 야생형 IL-2에 대한 IL-2 선택성을 개선하는 것이다. 본 발명자에 의해 사용되는 하나의 접근법은 사이토카인 성분으로 CD25-파괴 돌연변이의 도입을 통해 고도로 선택적인 IL-2-Fc-융합 단백질을 생성하는 것이다. CD25-파괴 돌연변이의 선택은 IL-2/IL-2R 공결정 구조(PDB 코드 2B51)의 검사에 기초하였다. R38, T41, F42, F44, E62, P65, E68, 및 Y107을 포함하는, IL-2 수용체 α 서브유닛과의 계면에서 한 개 또는 두 개의 관련 잔기에 대한 다중 아미노산 치환은 IL-2Rα에 대한 결합을 감소 또는 폐기시키는 것을 목표로 도입되었다. 이러한 작제물은 또한 상당히 개선된 발달성을 위해 S125I 돌연변이를 함유하였다. 게다가,

폐 내피 세포에 결합 시 IL-2 변이체의 손상은 내피 세포 손상을 방지하고 VLS를 상당히 감소시킬 것으로 예상된다. 더욱이, CD25 결합의 손상은 또한 CD25 항원 싱크를 감소시키고

발현 세포에 대한 사이토카인 점유를 풍부하게 하고 결과적으로 생체내 반응 및 종양 살상 효능을 향상시킬 것으로 예상된다.

모든 표적화된 IL-2 잔기인, R38, T41, F42, F44, E62, P65, E68, 및 Y107이 IL-2Rα와의 계면에 있고 다수의 IL-2Rα 잔기와의 수소 결합/염다리 또는 소수성 상호작용을 형성함에 따라(Mathias Rickert 등. (2005) Science 308, 1477-80), 표 2에 열거되고 유사한 IL-2 변이체는IL-2Rα와의 상호작용을 방해하고 IL-2Rα에 대한 감소되거나 폐기된 결합을 갖는 IL-2 변이체를 야기할 것으로 예상된다고 추론되었다. 그러나, 상이한 부위에서의 돌연변이 및 동일한 부위에서의 상이한 치환은 IL-2Rα 결합에 영향을 미칠 시에 급격한 차이를 야기할 수 있었다는 것이 발견되었으며, 이는 구조-기반 돌연변이유발 접근법에 기초하여 예측되지 않았고, 일부는 특히 예기치 않은 것이다(실시예 4 및 5 참조).

또한,

조절 치환은 최적의 활성을 위해 전체 효능을 약화시키도록 추가로 혼입될 수 있다고 추론되었다.

조절 효능의 효능제는 세포독성 림프구의 과도한 활성을 방지하고 "온-타겟" 및 "오프 조직" 독성을 최소화할 수 있다. 게다가, 과자극 유도 세포 고갈 및 세포자멸사는 최소화될 수 있다. 또한, 사이토카인 신호전달 분자의 결합 친화도의 약화는 수용체 매개 내재화를 감소시키고, 원하지 않은 표적 싱크를 줄이고 계속적인 수용체 활성화 및 지속적인 약력학 및 약동학을 초래할 수 있으며; 결과적으로,

조절 치환은 잠재적으로 독성을 감소시키고 약동학 및 약력학 뿐만 아니라 치료 지수를 개선할 수 있다.

IL-2Rα에 대한 감소/폐기된 결합을 갖는 IL-2 변이체에 대한 IL-2Rβ 또는

파괴 돌연변이를 포함하는 아미노산 치환을 갖는 예시적 IL-2 변이체가 표 3에 제공된다:

[표 3]

파괴 치환의 도입. 모든 변이체는 발달성-개선 치환(S125I)을 포함한다.

본 발명은 또한 다양한 수준의 약화된 효능을 갖는 효과기 T 세포를 선택적으로 활성 및 증식시키기 위해 위에 언급된 IL-2 변이체에 대한 8, 또는 9, 또는 10개의 N-말단 잔기의 결실을 포함하는, 위에 언급된 IL-2 변이체의 클래스 및 특히 표 2 및 표 3에 설명되는 것들에 대한 추가적인 변형(modification)을 포함한다. 임의의 추가적인 조합 돌연변이체는 그것이 IL-2 수용체의 특이적 구성요소에 대한 그것의 친화도를 변경하거나, 그것의 생체내 약력학을 개선하는 것인지 여부에 관계없이 본 발명의 사상 및 범위를 따른다: 반감기를 증가시키거나 T 세포에 의한 그것의 내재화를 감소시킨다. 이러한 추가적인 돌연변이는 생물정보학 도구를 사용한 합리적인 설계인에 의해, 또는 상이한 본성(nature)의 조합 분자 라이브러리(파아지 라이브러리, 효모 또는 박테리아에서 유전자 발현의 라이브러리)를 사용함으로써 수득될 수 있다. 또 다른 양태에서 본 발명은 운반 단백질에 커플링되는, 위에 설명된 임의의 면역조절 폴리펩타이드를 포함하는 융합 단백질에 관한 것이다. 운반 단백질은 인간 면역글로불린의 알부민 또는 Fc 영역일 수 있다.

다양한 구현예에서, 서열번호: 170에 제시되는 아미노산 서열을 갖는

는 다양한 길이 및 조성물의 링커를 사용하여 IL-2와 Fc 도메인 사이에 링크되었다. Fc 도메인은 N-말단 또는 C-말단에 있을 수 있다.

융합 단백질은 효과기 T 세포를 선택적으로 활성 및 증식시키기 위해 IL-2Rα에 대한 감소된 결합을 갖을 것으로 예상되는 서열번호: 171-172에 제시되는 아미노산 서열을 갖는다.

다양한 구현예에서, IL-2 및

는 비-공유 착물(complexation)을 형성한다. IL-2는 홀-Fc 사슬(서열번호: 10)의 N- 또는 C-말단에 융합되었고,

는 놉-Fc 사슬(서열번호: 9)의 N- 또는 C-말단에 융합되었다. 비-공유 C-말단

융합 단백질은 서열번호: 173-174에 제시되는 아미노산 서열을 갖는다.

[표 4]

Fc 융합 단백질로서 공유적으로 링크되거나 비공유적으로 착물화되는 IL-2 및

Fc 도메인

IgG 클래스의 면역글로불린은 인간 혈액에서 가장 풍부한 단백질 중 하나이다. 순환 반감기는 21일까지 도달할 수 있다. 융합 단백질은 다양한 사이토카인 및 수용체와 같은 다른 단백질의 도메인과 IgG의 Fc 영역을 조합하는 것으로 보고되었다(예를 들어, Capon 등, Nature, 337:525-531, 1989; Chamow 등, Trends Biotechnol., 14:52-60, 1996); 미국 특허 제5,116,964호 및 제5,541,087호 참조). 프로토타입 융합 단백질은 IgG Fc의 힌지 영역에서 시스테인 잔기를 통해 연결된 동종이량체 단백질로서, 중쇄 가변 및 CH1 도메인 및 경쇄가 없는 IgG 분자와 유사한 분자를 생성한다. Fc 도메인을 포함하는 융합 단백질의 이량체 성질은 다른 분자와의 고차 상호작용(즉, 2가 또는 이중특이적 결합)을 제공하는데 유리할 수 있다. 구조적 상동성으로 인해, Fc 융합 단백질은 유사한 이소타입을 갖는 인간 IgG의 것과 유사한 생체내 약동학적 프로파일을 나타낸다.

용어 "Fc"는 단량체 형태이든 다량체 형태이든 전체 항체의 비-항원-결합 단편의 서열을 포함하는 분자 또는 서열을 지칭한다. 천연 Fc의 원래 면역글로불린 공급원은 바람직하게는 인간 기원이고 임의의 면역글로불린일 수 있지만, IgG1 및 IgG2가 바람직하다. 천연 Fc는 공유(즉, 이황화물 결합) 및 비공유 결합에 의해 이량체 또는 다량체 형태로 연결될 수 있는 단량체성 폴리펩타이드로 구성된다. 천연 Fc 분자의 단위체 서브유닛 사이의 분자간 이황화물 결합의 수는 클래스(예를 들어, IgG, IgA, IgE) 또는 서브클래스(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgA1, IgGA2)에 따라 1 내지 4의 범위이다. 천연 Fc의 한 예는 IgG의 파파인 소화로부터 생성된 이황화물 결합 이량체이다(Ellison 등(1982), Nucleic Acids Res. 10: 4071-9 참조). 본원에 사용된 용어 "천연 Fc"는 단량체, 이량체 및 다량체 형태가 일반적이다. 단백질 A, 단백질 G, 다양한 Fc 수용체 및 보체 단백질에 대한 결합 부위를 함유하는 Fc 도메인.

다양한 구현예에서, 용어 "Fc 변이체"는 천연 Fc로부터 변형되지만 회수 수용체 FcRn에 대한 결합 부위를 여전히 포함하는 분자 또는 서열을 지칭한다. 국제출원 WO 97/34631(1997년 9월 25일 공개) 및 WO 96/32478은 예시적인 Fc 변이체뿐만 아니라 회수 수용체와의 상호작용을 기재하고 있으며, 이는 본원에 참고로 포함된다. 또한, 천연 Fc는 본 발명의 융합 분자에 필요하지 않은 구조적 특징 또는 생물학적 활성을 제공하기 때문에 제거될 수 있는 부위를 포함한다. 따라서, 다양한 구현예에서, 용어 "Fc 변이체"는 (1) 이황화물 결합 형성, (2) 선택된 숙주 세포와의 비호환성, (3) 선택된 숙주 세포에서 발현 시 N-말단 이질성, (4) 글리코실화, (5) 보체와의 상호작용, (6) 회수 수용체 이외의 Fc 수용체에 대한 결합, 또는 (7) 항체 의존성 세포 세포독성(ADCC)에 영향을 미치거나 이에 관여하는 하나 이상의 천연 Fc 부위 또는 잔기가 결여된 분자 또는 서열을 포함한다.

수용체 사이의 상호작용 또는 결합을 감소시키기 위해 CH2 항체 불변 도메인 내의 아미노산 치환을 포함한다. 다양한 구현예에서, Fc 도메인의 각각의 서브유닛은 활성화 Fc 수용체에 대한 결합 및/또는 효과기 기능을 감소시키는 3개의 아미노산 치환을 포함하며, 상기 아미노산 치환은 L234A, L235A 및 G237A (서열번호: 7)이다.

다양한 구현예에서, Fc 도메인의 2개의 Fc 도메인 단량체 각각은 2개의 단량체의 이종이량체화를 촉진하는 아미노산 치환을 포함한다. 다양한 다른 구현예에서, Fc 도메인 단량체의 이종이량체화는 "놉-인투-홀(knob-into-hole)" 잔기 쌍과 같은, 2개의 Fc 도메인 단량체에서 상이하지만, 양립가능한 치환을 도입함으로써 촉진될 수 있다. "놉-인투-홀" 기술은 또한 미국 특허 공개 번호 제 8,216,805호에 개시된다. 또 다른 구현예에서, 하나의 Fc 도메인 단량체는 놉(knob) 돌연변이 T366W를 포함하고 다른 Fc 도메인 단량체는 홀(hole) 돌연변이 T366S, L358A, 및 Y407V를 포함한다. 다양한 구현예에서, 안정화 이황화물 브릿지를 형성하는 2개의

잔기가 도입되었다("놉" 상의 S354C 및 "홀" 측면 상의 Y349C)(서열번호: 9 및 10). 이종이량체 Fc의 사용은 1가 IL-2 변이체를 야기할 수 있다.

다양한 구현예에서, 이량체 IL-2 변이체 Fc 융합을 만들기 위해 사용되는 Fc 도메인 서열은 서열번호: 7에 제시되는 인간 IgG1-Fc 도메인 서열이다:

여기서 서열번호: 7은

및

결합을 제거하는 아미노산 치환(언더라인됨)을 함유한다.

다양한 구현예에서, 이량체 IL-2 Fc 융합 단백질을 만들기 위해 사용되는 Fc 도메인 서열은 서열번호: 8에 제시되는 IgG1-Fc 도메인 서열이다:

여기서 서열번호: 8은

및

결합을 제거하는 아미노산 치환(언더라인됨) 및 반감기를 연장시키는 아미노산 치환(볼드체)을 함유한다.

다양한 구현예에서, 단량체 IL-2 변이체 융합을 만들기 위해 사용되는 이종이량체 Fc 도메인 서열은 서열번호: 9에 제시되는 놉-Fc 도메인 서열이다:

여기서 서열번호: 9는

및

결합을 제거하는 아미노산 치환(언더라인됨)을 함유한다.

다양한 구현예에서, IL-2 변이체를 만들기 위해 사용되는 이종이량체 Fc 도메인 서열은 서열번호: 10에 제시되는 홀-Fc 도메인 서열이다:

여기서 서열번호: 10은

및

결합을 제거하는 아미노산 치환(언더라인됨)을 함유한다.

다양한 구현예에서, 단량체 IL-2 Fc 융합 단백질을 만들기 위해 사용되는 이종이량체 Fc 도메인은 서열번호: 134에 제시되는 아미노산 서열을 갖는 감소/폐기된 효과기 기능 및 연장된 반감기의 놉-Fc 도메인이다:

여기서 서열번호: 134는

및

다양한 구현예에서, 단량체 IL-2 Fc 융합 단백질을 만들기 위해 사용되는 이종이량체 Fc 도메인은 서열번호: 135에 제시되는 아미노산 서열을 갖는 감소/폐기된 효과기 기능 및 연장된 반감기의 홀-Fc 도메인이다:

여기서 서열번호: 135는

및

표적화 모이어티로서의 항체

다양한 구현예에서, 본 발명의 IL-2 변이체 작제물은 종양 관련 항원(tumor associated antigen; TAA)과 같은, 암 조직에 풍부한 분자에 결합하는 항체, 항체 단편, 단백질 또는 펩타이드 형태의 표적화 모이어티를 포함한다.

TAA는 면역 반응이 요구되는 임의의 분자, 거대분자, 분자의 조합 등일 수 있다. TAA는 하나보다 많은 폴리펩타이드 서브유닛을 포함하는 단백질일 수 있다. 예를 들어, 단백질은 이량체, 삼량체, 또는 고차 다량체일 수 있다. 다양한 구현예에서, 단백질의 2개 이상의 서브유닛은 예를 들어, 이황화물 결합과 같은 공유 결합으로 연결될 수 있다. 다양한 구현예에서, 단백질의 서브유닛은 비-공유 상호작용으로 함께 유지될 수 있다. 따라서, TAA는 임의의 펩타이드, 폴리펩타이드, 단백질, 핵산, 지질, 탄수화물, 또는 작은 유기 분자, 또는 그 임의의 조합일 수 있으며, 이에 대해 당업자는 면역 반응을 유도하기 원한다. 다양한 구현예에서, TAA는 약 5, 약 6, 약 7, 약 8, 약 9, 약 10, 약 11 , 약 12, 약 13, 약 14, 약 15, 약 16, 약 17, 약 18, 약 19, 약 20, 약 25, 약 30, 약 35, 약 40, 약 45, 약 50, 약 55, 약 60, 약 65, 약 70, 약 75, 약 80, 약 85, 약 90, 약 95, 약 100, 약 150, 약 200, 약 250, 약 300, 약 400, 약 500, 약 600, 약 700, 약 800, 약 900 또는 약 1000개의 아미노산을 포함하는 펩타이드이다. 다양한 구현예에서, 펩타이드, 폴리펩타이드, 또는 단백질은 주사에 의해 대상체에 통상적으로 투여되는 분자이다. 다양한 구현예에서, 투여 후, 종양-특이적 항체 또는 결합 단백질은 IL-2 변이체를 병든 부위, 암 부위로 안내하기 위해 표적화 모이어티의 역할을 하며, 거기서 활성 도메인은 방출되고 질환에 걸린 세포 상의 그것의 인지체(cognate) 수용체와 상호작용할 수 있다.

전술한 마커 중 임의의 것은 본 발명의 IL-2 변이체에 대한 TAA 표적으로서 사용될 수 있다. 다양한 구현예에서, 본 개시의 IL-2 변이체 작제물 및 방법에 사용하기 위해 고려되는 하나 이상의 TAA, TAA 변이체, 또는 TAA 돌연변는 표 5에 제공되는 리스트로부터 선택되거나, 유래된다.

[표 5]

다양한 구현예에서, 본 발명의 IL-2 변이체는 항체, 항체 단편, 단백질 또는 펩타이드 표적화 면역 관문 조절자인 표적화/이중 기능성 모이어티에 부착될 수 있다.

다수의 면역-관문 단백질 항원은 예를 들어, SIRP(대식세포, 단핵세포, 수지상 세포 상에서 발현됨), CD47(종양 세포 및 다른 세포 유형 상에서 고도로 발현됨), VISTA(단핵세포, 수지상 세포, B 세포, T 세포 상에서 발현됨), CD152(활성화된 CD8+ T 세포, CD4+ T 세포 및 조절 T 세포에 의해 발현됨), CD279(활성화된 T 세포(CD4 및 CD8 둘 다), 조절 T 세포, 활성화된 B 세포, 활성화된 NK 세포, 무력성 T 세포, 단핵세포, 수지상 세포에 의해 발현되는, 종양 침윤 림프구 상에서 발현됨), CD274(T 세포, B 세포, 수지상 세포, 대식세포, 혈관 내피 세포, 췌도 세포 상에서 발현됨), 및 CD223(활성화된 T 세포, 조절 T 세포, 무력성 T 세포, NK 세포, NKT 세포, 및 플라스마사이토이드 수지상 세포에 의해 발현됨)을 포함하는, 다양한 면역 세포 상에서 발현되는 것으로 보고되어 왔다(예를 들어, Pardoll, D., Nature Reviews Cancer, 12:252-264, 2012를 참조). 면역-관문 단백질인 것으로 결정되는 항원에 결합하는 항체는 당업자에 공지되어 있다. 예를 들어, 다양한 항-CD276 항체는 기술 분야에서 설명되었고(예를 들어, 미국 특허 공개 번호 제20120294796호(Johnson 등) 및 그 속에 인용된 참고문헌을 참조); 다양한 항-CD272 항체는 기술 분야에서 설명되었고(예를 들어, 미국 특허 공개 번호 제20140017255호(Mataraza 등) 및 그 속에 인용된 참고문헌을 참조); 다양한 항-CD152/CTLA-4 항체는 기술 분야에서 설명되었고(예를 들어, 미국 특허 공개 번호 제20130136749호(Korman 등) 및 그 속에 인용된 참고문헌을 참조); 다양한 항-LAG-3/CD223 항체는 기술 분야에서 설명되었고(예를 들어, 미국 특허 공개 번호제20110150892호(Thudium 등) 및 그 속에 인용된 참고문헌을 참조); 다양한 항-CD279(PD-1) 항체는 기술 분야에서 설명되었고(예를 들어, 미국 특허 번호 제7,488,802 (Collins 등) 및 그 속에 인용된 참고문헌을 참조); 다양한 항-CD274 (PD-L1) 항체는 기술 분야에서 설명되었고(예를 들어, 미국 특허 공개 번호 제20130122014호(Korman 등) 및 그 속에 인용된 참고문헌을 참조); 다양한 항-TIM-3 항체는 기술 분야에서 설명되었고(예를 들어, 미국 특허 공개 번호 제20140044728호(Takayanagi 등) 및 그 속에 인용된 참고문헌을 참조); 및 다양한 항-B7-H4 항체는 기술 분야에서 설명되었다(예를 들어, 미국 특허 공개 번호 제20110085970호(Terrett 등) 및 그 속에 인용된 참고문헌을 참조). 이러한 참조문헌 각각은 이로써 본원에 교시되는 특정 항체 및 서열에 대해 전체적으로 참조에 의해 통합된다.

다양한 구현예에서, IL-2 융합 파트너는 면역 세포의 표면 상에 존재하는 면역-관문 단백질 항원에 대한 결합을 나타내는 항체, 항체 단편, 또는 단백질 또는 펩타이드일 수 있다. 다양한 구현예에서, 면역-관문 단백질 항원은 PD1(CD279), PDL-1(CD274), CD276, CD272, CD152(CTLA-4), CD223, CD279, CD274, CD40, SIRPa, CD47, OX-40, GITR, ICOS, CD27, 4-1BB, TIM-3, B7-H3, B7-H4, TIGIT 및 VISTA로 구성되지만, 이에 제한되지 않는, 그룹으로부터 선택된다.

다양한 구현예에서, 항체는 길항적 FAP 항체 또는 항체 단편이다. 다양한 구현예에서, 항체는 서열번호: 136 및 137에 제시되는 가변 도메인 서열을 포함하는 인간화된 길항적 FAP 항체이다. 다양한 구현예에서, 이종 단백질은 면역 관문 조절자에 대한 항체 또는 항체 단편이다. 다양한 구현예에서, 항체는 길항적 인간 TIGIT 항체이다. 다양한 구현예에서, 항체는 길항적 PD-1 항체 또는 항체 단편이다. 다양한 구현예에서, 항체는 서열번호: 138 및 139, 서열번호: 140 및 141, 서열번호: 142 및 143, 서열번호: 144 및 145, 또는 서열번호: 146 및 147에 제시되는 가변 도메인 서열을 포함하는 길항적 PD-1 항체이다. 다양한 구현예에서, 항체는 서열번호: 148 및 149에 제시되는 가변 도메인 서열을 포함하는 길항적 인간 PD-L1 항체이다. 다양한 구현예에서, 항체는 서열번호: 150 및 151에 제시되는 가변 도메인 서열을 포함하는 길항적 인간 CTLA-4 항체이다. 다양한 구현예에서, 예시적 이중기능성 IL-2 PD1 항체 융합 단백질은 표 12에 나열된다.

이중기능성 IL-2 변이체 PD-1 항체 융합 단백질

다양한 구현예에서, 기존 반응을 강화하기 위해 종양 미세환경 또는 면역-자극 항체에서 면역억제 효과를 우회하는 면역 관문 차단 항체는 IL-2 항체 융합 단백질을 작제하기 위해 사용된다. 음성 면역 관문의 발현 수준은 종양 미세환경에 침투된 고갈된 T 세포를 경험한 종양-항원 상에서 특히 증가된다. 다양한 구현예에서, IL-2 변이체를 면역 관문을 표적화하는 항체에 테더링하는 것은 IL-2를 고갈된 T 세포로 지향시키고 종양 미세환경을 면역학적으로 핫(hot)하게 만들 것으로 예상된다. 다양한 구현예에서, 이중기능성 IL-2 변이체 관문 억제제 항체 융합 단백질은 선택적 신호전달을 용이하게 하고 원하는 종양 부위에서 활성을 향상시키기 위해, 종양 미세환경에 침투된 고갈된 T 세포를 경험한 종양-항원과 같은, 관문 억제제-발현 세포로 IL-2를 우선적으로 인 시스(cis)로 전달할 수 있다. 다양한 구현예에서, 이중기능성 IL-2 변이체 관문 억제제 항체 융합 단백질은 음성 조절을 제거하고 기능에서 T 세포를 활성화하고 Teff 세포 수를 확장시킴으로써 동반상승효과를 제공하여 종양에 대한 면역계의 활성을 추가로 향상시킨다.

다양한 구현예에서, 이중기능성 IL-2 변이체 관문 억제제 항체 융합 단백질은 IL-2의 전신 노출 및 오프 표적 독성을 감소시킨다. 다양한 구현예에서, IL-2Rα에 대한 감소/폐기된 결합 및 약화된/조절된

활성을 갖는 IL-2 변이체의 사용은 사이토카인 IL-2 활성과 항체 활성 사이의 화학양론적 균형의 확립을 용이하게 한다. 고갈된 Teff 세포에서 적절한 항체 표적화 또는 시스(cis)-활성화를 갖는 약화된 IL-2 활성 변이체는 최적 투여을 허용하고 각각의 아암의 기능을 유지할 것이다. 또한, 항체와 융합되는 약화된 IL-2 활성 변이체는 말초 활성화를 최소화하고, T 세포 AICD를 감소시키고, 항원-싱크을 완화시키고, 종양 및/또는 면역 세포 부위에 대한 항체 표적화 모이어티를 통한 종양 살상을 촉진시킬 것으로 예상된다.

다양한 구현예에서, 본 발명의 IL-2 변이체는 항체, 항체 단편, 단백질, 또는 펩타이드 표적화 면역 관문 조절자인 관문 억제제에 부착될 수 있다. 다양한 구현예에서, 면역 관문 억제제는 길항제 PD-1 항체이다. 다양한 구현예에서, PD-1 항체는 서열번호: 138 및 139, 서열번호: 140 및 141, 서열번호: 142 및 143, 서열번호: 144 및 145, 또는 서열번호: 146 및 147에 제시되는 가변 도메인 서열을 포함한다. 다양한 구현예에서, 예시적 이중기능성 IL-2 PD1 항체 융합 단백질은 표 12에 나열된다.

링커

다양한 구현예에서, 이종 단백질은 링커 및/또는 힌지 링커 펩타이드에 의해 IL-2 변이체에 부착된다. 링커 또는 힌지 링커는 이차 구조가 상대적으로 없거나 α-나선 형태를 나타내는 5, 10, 15, 20, 30, 40개 이상의 아미노산 사이의 인공 서열일 수 있다.

펩타이드 링커는 단백질 도메인 사이에서 공유결합 및 추가적인 구조 및/또는 공간적 유연성을 제공한다. 당해 분야에 알려진 바와 같이, 펩타이드 링커는 유연한 아미노산 잔기, 예컨대 글리신 및 세린을 함유한다. 다양한 구현예에서, 펩타이드 링커는 1 내지 100개의 아미노산을 함유할 수 있다. 다양한 구현예에서, 스페이서는 GGGSGGGS(서열번호: 18)의 모티프를 함유할 수 있다. 다른 구현예에서, 링커는 (GGGGS)(서열번호: 21)n의 모티프를 함유할 수 있으며, 여기서 n은 정수 1 내지 10이다. 다른 구현예에서, 링커는 또한 글리신 및 세린 이외의 아미노산을 함유할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 링커는 AEAAAKEAAAKEAAAKA(서열번호: 16)와 같은 α-나선 형태의 서열을 포함하지만, 이에 제한되지 않는 다른 단백질 모티프를 함유할 수 있다. 다양한 구현예에서, 링커 길이 및 조성물은 발현 수준 및 응집 경향을 포함하지만 이에 제한되지 않는, 활성 또는 발달성을 최적화하도록 조정될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 펩타이드 링커는 단순한 화학 결합, 예를 들어, 아미드 결합(예를 들어, PEG의 화학적 접합(conjugation)에 의함)일 수 있다.

예시적 펩타이드 링커가 표 6에 제공된다:

[표 6]

폴리뉴클레오타이드

또 다른 양태에서, 본 개시는 본 개시의 IL-2, IL-2 변이체, IL-2 융합 단백질, 또는 IL-2 변이체 융합 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 단리된 핵산 분자를 제공한다. 대상 핵산은 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있다. 이러한 핵산은 DNA 또는 RNA 분자일 수 있다. DNA는 예를 들어 cDNA, 게놈 DNA, 합성 DNA, PCR에 의해 증폭된 DNA, 및 이들의 조합을 포함한다. IL-2 폴리펩타이드를 인코딩하는 게놈 DNA는 다수의 종에 대해 이용가능한 게놈 라이브러리로부터 수득된다. 합성 DNA는 중첩 올리고뉴클레오티드 단편의 화학적 합성 후, 단편을 조립하여 코딩 영역 및 측접(flanking) 서열의 일부 또는 전부를 재구성함으로써 이용가능하다. RNA는 T7 프로모터 및 RNA 중합효소를 사용하는 벡터와 같이 mRNA의 고수준 합성을 지시하는 원핵생물 발현 벡터로부터 얻을 수 있다. cDNA는 IL-2를 발현하는 다양한 조직에서 단리된 mRNA로부터 준비된 라이브러리에서 수득된다. 본 개시의 DNA 분자는 전장 유전자뿐만 아니라 폴리뉴클레오티드 및 그의 단편을 포함한다. 전장 유전자는 또한 N-말단 신호 서열을 인코딩하는 서열을 포함할 수 있다. 이러한 핵산은 예를 들어 새로운 IL-2 변이체를 제조하는 방법에 사용될 수 있다.

다양한 구현예에서, 단리된 핵산 분자는 본원에 설명되는 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 본원에 설명되는 적어도 하나의 이종 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 추가로 포함한다. 다양한 구현예에서, 핵산 분자는 본원에 설명되는 링커 또는 힌지 링커를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 추가로 포함한다.

다양한 구현예에서, 본 개시의 재조합 핵산은 발현 작제물에서 하나 이상의 조절 뉴클레오티드 서열에 작동가능하게 연결될 수 있다. 조절 서열은 당업계에 인식되고 IL-2 변이체의 발현을 지시하도록 선택된다. 따라서, 조절 서열이라는 용어는 프로모터, 인핸서 및 기타 발현 조절 요소를 포함한다. 예시적인 조절 서열은 Goeddel; Gene Expression Technology: Methods in Enzymology, Academic Press, San Diego, Calif.(1990)에 기재되어 있다. 전형적으로, 상기 하나 이상의 조절 뉴클레오티드 서열은 프로모터 서열, 리더 또는 신호 서열, 리보솜 결합 부위, 전사 시작 및 종결 서열, 번역 시작 및 종결 서열, 및 인핸서 또는 활성화제 서열을 포함할 수 있지만 이에 제한되지는 않는다. 당업계에 공지된 구성적 또는 유도성 프로모터가 본 개시 의해 고려된다. 프로모터는 자연 발생 프로모터이거나 하나보다 많은 프로모터의 요소를 조합하는 하이브리드 프로모터일 수 있다. 발현 작제물은 플라스미드와 같은 에피솜 상의 세포에 존재할 수 있거나, 발현 작제물이 염색체에 삽입될 수 있다. 다양한 구현예에서, 발현 벡터는 형질전환된 숙주 세포의 선택을 가능하게 하는 선택가능한 마커 유전자를 함유한다. 선택 가능한 마커 유전자는 당업계에 잘 알려져 있으며 사용되는 숙주 세포에 따라 달라질 것이다.

본 개시의 또 다른 양태에서, 대상 핵산은 IL-2 변이체를 인코딩하고 적어도 하나의 조절 서열에 작동가능하게 연결된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 발현 벡터에 제공된다. 용어 "발현 벡터"는 폴리뉴클레오티드 서열로부터 폴리펩타이드를 발현하기 위한 플라스미드, 파아지, 바이러스 또는 벡터를 지칭한다. 숙주 세포에서 발현하기에 적합한 벡터는 쉽게 이용 가능하며 핵산 분자는 표준 재조합 DNA 기술을 사용하여 벡터에 삽입된다. 이러한 벡터는 작동가능하게 연결된 경우 DNA 서열의 발현을 제어하는 매우 다양한 발현 조절 서열을 포함할 수 있으며, 이는 IL-2 변이체를 인코딩하는 DNA 서열을 발현하기 위해 이들 벡터에서 사용될 수 있다. 이러한 유용한 발현 조절 서열은 예를 들어, SV40의 초기 및 후기 프로모터 SV40, tet 프로모터, 아데노바이러스 또는 사이토메갈로바이러스 즉시 초기 프로모터, RSV 프로모터, lac 시스템, trp 시스템, TAC 또는 TRC 시스템, 발현이 T7 RNA 중합효소에 의해 지시되는 T7 프로모터, 파아지 람다의 주요 오퍼레이터 및 프로모터 영역, 코트 단백질에 대한 조절 영역, 3-포스포글리세레이트 키나제 또는 다른 당분해 효소에 대한 프로모터, 산 포스파타제의 프로모터, 예를 들어, PhoS, 효모 α-메이팅 인자의 프로모터, 배큘로바이러스 시스템의 다면체 프로모터 및 원핵 또는 진핵 세포 또는 그 바이러스의 유전자 발현을 조절하는 것으로 알려진 기타 서열, 및 이들의 다양한 조합을 포함한다. 발현 벡터의 설계는 형질전환될 숙주 세포의 선택 및/또는 발현하고자 하는 단백질의 유형과 같은 인자에 의존할 수 있음을 이해해야 한다. 또한, 벡터의 카피 수, 카피 수를 제어하는 능력 및 항생제 마커와 같이 벡터에 의해 인코딩된 다른 단백질의 발현도 고려해야 한다. vIL-2의 발현에 적합한 예시적인 발현 벡터는 vIL-2 폴리뉴클레오타이드뿐만 아니라 당업계에 공지되거나 아래에 기재된 임의의 추가의 적합한 벡터를 함유하는 pDSRa(WO 90/14363에 기재되고, 이는 본원에 참고로 포함됨) 및 이의 유도체이다.

본 개시의 재조합 핵산은 클로닝된 유전자 또는 이의 일부를 원핵 세포, 진핵 세포(효모, 조류, 곤충 또는 포유동물), 또는 둘 모두에서의 발현에 적합한 벡터 내로 결찰함으로써 생성될 수 있다. 재조합 IL-2 폴리펩타이드의 생산을 위한 발현 비히클은 플라스미드 및 기타 벡터를 포함한다. 예를 들어, 적합한 벡터는 다음 유형의 플라스미드: pBR322 유래 플라스미드, pEMBL 유래 플라스미드, pEX 유래 플라스미드, pBTac 유래 플라스미드 및 pUC 유래 플라스미드를 포함하고, 이는 E. 콜라이와 같은 원핵 세포에서의 발현을 위한 것이다.

일부 포유동물 발현 벡터는 박테리아에서 벡터의 전파를 촉진하는 원핵생물 서열 및 진핵 세포에서 발현되는 하나 이상의 진핵생물 전사 단위를 모두 함유한다. pcDNAI/amp, pcDNAI/neo, pRc/CMV, pSV2gpt, pSV2neo, pSV2-dhfr, pTk2, pRSVneo, pMSG, pSVT7, pko-neo 및 pHyg 유래 벡터는 진핵 세포의 형질감염에 적합한 포유동물 발현 벡터의 예이다. 이들 벡터 중 일부는 pBR322와 같은 박테리아 플라스미드의 서열로 변형되어 원핵 및 진핵 세포 모두에서 복제 및 약물 내성 선택을 용이하게 한다. 또는 소 유두종 바이러스(BPV-1) 또는 엡슈타인-바르 바이러스 (pHEBo, pREP 유래 및 p205)와 같은 바이러스의 유도체를 진핵 세포에서 단백질의 일시적인 발현에 사용할 수 있다. 다른 바이러스(레트로바이러스 포함) 발현 시스템의 예는 유전자 치료 전달 시스템의 설명에서 아래에서 찾을 수 있다. 플라스미드의 제조 및 숙주 유기체의 형질전환에 사용되는 다양한 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 원핵 및 진핵 세포 모두에 대한 다른 적합한 발현 시스템 및 일반적인 재조합 절차에 대해서는 Molecular Cloning A Laboratory Manual, 2nd Ed., ed. by Sambrook, Fritsch and Maniatis(Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989) 챕터 16 및 17을 참조한다. 일부 경우에, 배큘로바이러스 발현 시스템을 사용하여 재조합 폴리펩타이드를 발현시키는 것이 바람직할 수 있다. 이러한 배큘로바이러스 발현 시스템의 예는 pVL 유래 벡터(예컨대 pVL1392, pVL1393 및 pVL941), pAcUW 유래 벡터(예컨대 pAcUW1), 및 pBlueBac 유래 벡터(예컨대 B-gal 함유 pBlueBac III)를 포함한다.

다양한 구현예에서, 벡터는 CHO 세포에서 대상 IL-2 변이체의 생성을 위해 설계될 수 있고, 그 예는 Pcmv-스트립트 벡터(Stratagene, La Jolla, Calif.), pcDNA4 벡터(Invitrogen, Carlsbad, Calif.) 및 pCI-네오 벡터(Promega, Madison, Wis.)이다. 명백한 바와 같이, 대상 유전자 작제물은 예를 들어 정제를 위한 융합 단백질 또는 변이체 단백질을 포함하는 단백질을 생산하기 위해 배양물에서 전파된 세포에서 대상 IL-2 변이체의 발현을 유발하는 데 사용될 수 있다.

본 개시는 또한 대상 IL-2 변이체 중 하나 이상에 대한 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 재조합 유전자로 형질감염된 숙주 세포에 관한 것이다. 숙주 세포는 임의의 원핵 또는 진핵 세포일 수 있다. 예를 들어, 본 개시의 IL-2 변이체는 E. 콜라이와 같은 박테리아 세포, 곤충 세포(예를 들어, 배큘로바이러스 발현 시스템 사용), 효모, 또는 포유동물 세포에서 발현될 수 있다. 다른 적합한 숙주 세포는 당업자에게 알려져 있다.

따라서, 본 개시는 추가로 대상 IL-2 변이체를 생성하는 방법에 관한 것이다. 예를 들어, IL-2 변이체를 인코딩하는 발현 벡터로 형질감염된 숙주 세포는 IL-2 변이체의 발현이 일어나도록 하는 적절한 조건 하에 배양될 수 있다. IL-2 변이체는 IL-2 변이체를 함유하는 세포 및 배지의 혼합물로부터 분비 및 단리될 수 있다. 대안적으로, IL-2 변이체는 세포질적으로 또는 멤브레인 분획에 보유될 수 있고 세포가 수확되고, 용해되고 단백질은 단리될 수 있다. 세포 배양은 숙주 세포, 배지 및 기타 부산물을 포함한다. 세포 배양에 적합한 배지는 당업계에 잘 알려져 있다.

본 개시의 폴리펩타이드 및 단백질은 당업자에게 잘 알려진 단백질 정제 기술에 따라 정제될 수 있다. 이러한 기술은 한 수준에서 단백질 및 비단백질 분획의 조 분획을 포함한다. 펩타이드 및 폴리펩타이드를 다른 단백질로부터 분리한 후, 관심 펩타이드 또는 폴리펩타이드는 크로마토그래피 및 전기영동 기술을 사용하여 추가로 정제하여 부분적 또는 완전한 정제(또는 균질성을 위한 정제)를 달성할 수 있다. 본원에 사용된 용어 "단리된 폴리펩타이드" 또는 "정제된 폴리펩타이드"는 다른 성분으로부터 단리 가능한 조성물을 지칭하는 것으로 의도되며, 여기서 폴리펩타이드는 자연적으로 얻을 수 있는 상태에 비해 어느 정도 정제된다. 따라서 정제된 폴리펩타이드는 또한 그것이 자연적으로 발생할 수 있는 환경이 없는 폴리펩타이드를 지칭한다. 일반적으로, "정제된"은 다양한 기타 성분을 제거하기 위해 분별화되고 발현된 생물학적 활성을 실질적으로 유지하는 폴리펩타이드 조성물을 지칭할 것이다. "실질적으로 정제된"이라는 용어가 사용되는 경우, 이 명칭은, 폴리펩타이드 또는 펩타이드가 조성물 내 단백질의 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 70%, 80%, 약 85%, 또는 약 90% 이상을 구성하는 것과 같이, 조성물의 주요 성분을 형성하는 펩타이드 또는 폴리펩타이드 조성물을 지칭할 것이다.

정제에 사용하기에 적합한 다양한 기술은 당업자에게 잘 알려져 있을 것이다. 이들은 예를 들어 황산암모늄, PEG, 항체(면역침강) 등을 사용한 침전 또는 열 변성 후, 원심분리; 크로마토그래피 예컨대 친화성 크로마토그래피(단백질-A 칼럼), 이온 교환, 겔 여과, 역상, 하이드록실인회석, 소수성 상호작용 크로마토그래피; 등전점 초점조절; 겔 전기영동; 및 이들 기술의 조합을 포함한다. 당업계에 일반적으로 공지된 바와 같이, 다양한 정제 단계를 수행하는 순서가 변경될 수 있거나 특정 단계가 생략될 수 있고 여전히 실질적으로 정제된 폴리펩타이드의 제조를 위한 적합한 방법이 생성되는 것으로 여겨진다.

약제학적 조성물

또 다른 양태에서, 본 개시는 약제학적으로 허용가능한 담체와 혼합된 IL-2 변이체, 또는 IL-2 변이체 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 이러한 약제학적으로 허용가능한 담체는 잘 알려져 있고 당업자에 의해 이해되고 광범위하게 기재되어 있다(예를 들어, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, A. R. Gennaro, ed., Mack Publishing Company, 1990 참조). 약제학적으로 허용가능한 담체는 예를 들어 조성물의 pH, 삼투질농도, 점도, 투명성, 색상, 등장성, 냄새, 멸균, 안정성, 용해 또는 방출 속도, 흡착 또는 침투를 변형, 유지 또는 보존할 목적으로 포함될 수 있다. 이러한 약제학적 조성물은 폴리펩타이드의 물리적 상태, 안정성, 생체내 방출 속도 및 생체내 제거 속도에 영향을 미칠 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용가능한 담체는 아미노산(예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌 또는 라이신); 항균제; 항산화제(예컨대 아스코르브산, 아황산나트륨 또는 나트륨 수소-설파이트); 완충액(예컨대 보레이트, 바이카보네이트, 트리스-HCl, 시트레이트, 포스페이트, 다른 유기 산); 증량제(예컨대 만니톨 또는 글리신), 킬레이트화제(예컨대 에틸렌디아민 테트라아세트산(EDTA)); 착화제(예컨대 카페인, 폴리비닐피롤리돈, 베타-사이클로덱스트린 또는 하이드록시프로파일-베타-사이클로덱스트린); 충전제; 단당류; 이당류 및 다른 탄수화물(예컨대 글루코스, 만노스, 또는 덱스트린); 단백질(예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린); 착색제; 풍미제 및 희석제; 유화제; 친수성 중합체(예컨대 폴리비닐피롤리돈); 저분자량 폴리펩타이드; 염 형성 반대 이온(예컨대 나트륨); 보존제(예컨대 벤즈알코늄 클로라이드, 벤조산, 살리실산, 티메로살, 펜에틸 알코올, 메틸파라벤, 프로파일파라벤, 클로르헥시딘, 소르브산 또는 과산화수소); 용매(예컨대 글리세린, 프로파일렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜); 당 알코올(예컨대 만니톨 또는 소르비톨); 현탁화제; 계면활성제 또는 습윤제(예컨대 플루로닉스, PEG, 소르비탄 에스테르, 폴리소르베이트 예컨대 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 트리톤, 트로메타민, 레시틴, 콜레스테롤, 틸록사팔); 안정성 증진제(수크로스 또는 소르비톨); 긴장성 증진제(예컨대 알칼리 할로겐화금속(바람직하게는 나트륨 또는 칼륨 클로라이드, 만니톨 소르비톨); 전달 비히클; 희석제; 부형제 및/또는 약제학적 보조제를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

약제학적 조성물 내의 일차 비히클 또는 담체는 사실상 수성 또는 비수성일 수 있다. 예를 들어, 적합한 비히클 또는 담체는 주사용수, 생리 식염수 또는 인공 뇌척수액일 수 있으며, 비경구 투여용 조성물에 일반적으로 사용되는 다른 물질로 보충될 수 있다. 중성 완충 식염수 또는 혈청 알부민과 혼합된 식염수가 추가의 예시적인 비히클이다. 다른 예시적인 약제학적 조성물은 약 pH 7.0-8.5의 Tris 완충액, 또는 약 pH 4.0-5.5의 아세테이트 완충액을 포함하며, 이는 소르비톨 또는 이의 적합한 대체물을 추가로 포함할 수 있다. 본 개시의 일 구현예에서, 조성물은 원하는 정도의 순도를 갖는 선택된 조성물을 동결건조된 케이크 또는 수용액의 형태로 임의의 제형화 제제(상기의 Remington's Pharmaceutical Sciences)와 혼합함으로써 저장을 위해 제조될 수 있다. 또한, 치료적 조성물은 수크로스와 같은 적절한 부형제를 사용하여 동결건조물로 제형화될 수 있다. 최적의 약제학적 조성물은 예를 들어 의도된 투여 경로, 전달 형식 및 원하는 복용량에 따라 당업자에 의해 결정될 것이다.

비경구 투여가 고려되는 경우, 치료적 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용가능한 비히클에 원하는 IL-2 폴리펩타이드 또는 IL-2 폴리펩타이드 융합 단백질을 포함하는 발열원이 없는 비경구적으로 허용가능한 수용액의 형태일 수 있다. 비경구 주사에 특히 적합한 비히클은 폴리펩타이드가 적절하게 보존된 멸균 등장 용액으로 제형화된 멸균 증류수이다. 다양한 구현예에서, 주사 가능한 투여에 적합한 약제학적 제형은 수용액에서, 바람직하게는 생리학적으로 양립 가능한 완충액, 예컨대 행크스(Hanks') 용액, 링거 용액, 또는 생리학적으로 완충된 식염수에서 제형화될 수 있다. 수성 주사 현탁액은 현탁액, 예컨대 나트륨 카복시메틸 셀룰로스, 소르비톨, 또는 덱스트란의 점도를 증가시키는 물질을 함유할 수 있다. 추가로, 활성 화합물의 현탁액은 적절한 유성 주사 현탁액으로 제조될 수 있다. 선택적으로, 현탁액은 또한 화합물의 용해도를 증가시키고 고농축 용액의 제조를 가능하게 하는 적합한 안정화제 또는 제제를 함유할 수 있다.

다양한 구현예에서, 치료적 약제학적 조성물은 콜로이드 분산 시스템을 사용하여 표적화된 전달을 위해 제형화될 수 있다. 콜로이드 분산 시스템은 거대분자 복합체, 나노캡슐, 마이크로구형체, 비드 및 수중유 에멀젼, 교질입자, 혼합된 교질입자를 포함하는 지질 기반 시스템을 포함한다. 리포솜 생성에 유용한 지질의 예는 포스파티딜 화합물, 예컨대 포스파티딜글리세롤, 포스파티딜콜린, 포스파티딜세린, 포스파티딜에탄올아민, 스핑고지질, 세레브로시드, 및 강글리오사이드를 포함한다. 예시적인 인지질은 난(egg) 포스파티딜콜린, 디팔미토일포스파티딜콜린, 및 디스테아로일포스파티딜콜린을 포함한다. 리포좀의 표적화는 또한 예를 들어 기관-특이성, 세포-특이성 및 세포소기관-특이성을 기반으로 하여 가능하며 당업 기술에 알려져 있다.

다양한 구현예에서, 약제학적 조성물의 경구 투여가 고려된다. 이러한 방식으로 투여되는 약제학적 조성물은 정제 및 캡슐과 같은 고체 복용 형태의 배합에 통상적으로 사용되는 담체와 함께 또는 담체 없이 제형화될 수 있다. 경구 투여를 위한 고체 복용 형태(캡슐, 정제, 환제, 당의정, 분말, 과립 등)에서, 본 개시의 하나 이상의 치료 화합물은 시트르산나트륨 또는 인산제이칼슘 및/또는 다음 중 임의의 것과 혼합될 수 있다: (1) 충전제 또는 증량제, 예컨대 전분, 락토스, 수크로스, 글루코스, 만니톨, 및/또는 규산; (2) 결합제, 예컨대, 예를 들어, 카복시메틸셀룰로스, 알기네이트, 젤라틴, 폴리비닐 피롤리돈, 수크로스, 및/또는 아카시아; (3) 보습제, 예컨대 글리세롤; (4) 붕해제, 예컨대 한천, 탄산칼슘, 감자 또는 타피오카 전분, 알긴산, 특정 실리케이트, 및 탄산나트륨; (5) 용액 지연제, 예컨대 파라핀; (6) 흡수 가속제, 예컨대 사차 암모늄 화합물; (7) 습윤제, 예컨대, 예를 들어, 아세틸 알코올 및 글리세롤 모노스테아레이트; (8) 흡수제, 예컨대 카올린 및 벤토나이트 점토; (9) 윤활제, 예컨대 탈크, 칼슘 스테아레이트, 스테아르산마그네슘, 고체 폴리에틸렌 글리콜, 나트륨 라우릴 설페이트, 및 그의 혼합물; 및 (10) 착색제. 캡슐, 정제 및 환제의 경우, 약제학적 조성물은 또한 완충제를 포함할 수 있다. 유사한 유형의 고체 조성물은 또한 락토스 또는 유당, 뿐만 아니라 고분자량 폴리에틸렌 글리콜 등과 같은 부형제를 사용하여 연질 및 경질 충전 젤라틴 캡슐의 충전제로 사용될 수 있다.　경구 투여에 유용한 액체 복용 형태는 약제학적으로 허용가능한 에멀젼, 마이크로에멀젼, 용액, 현탁액, 시럽, 및 엘릭시르를 포함한다. 활성 성분에 추가하여, 액체 복용 형태는 물 또는 다른 용매, 가용화제 및 유화제, 예컨대 에틸 알코올, 이소프로파일 알코올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로파일렌 글라이콜, 1,3-부틸렌 글라이콜, 오일(특히, 면종자, 땅콩, 옥수수, 세균, 올리브, 캐스터 및 참께 오일), 글리세롤, 테트라하이드로푸릴 알코올, 폴리에틸렌 글라이콜 및 소르비탄의 지방산 에스테르, 및 그의 혼합물과 같은 당업계에서 통상적으로 사용되는 불활성 희석제를 함유할 수 있다. 불활성 희석제 외에, 경구 조성물은 또한 습윤제, 유화제 및 현탁제, 감미제, 풍미제, 착색제, 방향제 및 보존제와 같은 보조제를 포함할 수 있다.

다양한 구현예에서, 피부 또는 점막에 대한 약제학적 조성물의 국소 투여가 고려된다. 국소 제형은 피부 또는 각질층 침투 증진제로서 효과적인 것으로 알려진 다양한 제제 중 하나 이상을 추가로 포함할 수 있다. 이들의 예는 2-피롤리돈, N-메틸-2-피롤리돈, 디메틸아세트아미드, 디메틸포름아미드, 프로파일렌 글리콜, 메틸 또는 이소프로파일 알코올, 디메틸 설폭사이드, 및 아존이다. 제형을 화장용으로 허용 가능하게 하기 위해 추가 제제가 추가로 포함될 수 있다. 이들의 예는 지방, 왁스, 오일, 염료, 항료, 보존제, 안정화제, 및 표면 활성제이다. 당해 분야에서 알려진 것들과 같은 각질용해제가 또한 포함될 수 있다. 예로는 살리실산과 황이 있다.　국소 또는 경피 투여를 위한 투여 형태에는 분말, 스프레이, 연고, 페이스트, 크림, 로션, 젤, 용액, 패치 및 흡입제가 포함된다. 활성 화합물은 멸균 조건 하에 약제학적으로 허용가능한 담체 및 필요할 수 있는 임의의 보존제, 완충제 또는 추진제와 혼합될 수 있다. 연고, 페이스트, 크림 및 젤은 본 개시의 당해 화합물(예를 들어, IL-2 변이체) 외에, 부형제, 예컨대 동물 및 식물성 지방, 오일, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸쓰, 셀룰로스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 규산, 탈크 및 산화아연, 또는 그의 혼합물을 함유할 수 있다.

본원에 사용하기 위해 고려되는 추가적인 약제학적 조성물은 지속- 또는 제어-전달 제형에서 폴리펩타이드를 수반하는 제형을 포함한다. 다양한 구현예에서, 약제학적 조성물은 느린 방출 하이드로겔로서, 나노입자로 제형화되거나, 종양용해 바이러스로 혼입될 수 있다. 그러한 나노입자 방법은, 예를 들어, 약물 담체로서 소수성 골격 및 친수성 가지를 갖는 중합체로 구성되는 나노입자의 캡슐화, 미세입자의 캡슐화, 에멀젼에서 리보좀으로 삽입, 및 다른 분자에 대한 접합을 포함한다. 나노입자의 예는 키토산 및 카르보폴로 코팅되는 점막접착제 나노입자(Takeuchi 등의, Adv. Drug Deliv. Rev. 47(1):39-54, 2001) 및 하전된 조합 폴리에스테르, 폴리 (2-2-술포부틸-비닐 알코올) 및 폴리 (D,L-라틱-코-글리콜산)을 함유하는 나노입자(Jung 등의, Eur. J. Pharm. Biopharm. 50(1):147-160, 2000)를 포함한다. 알부민-기반 나노입자 조성물은 탁산과 같은 소수성 약물을 전달하기 위한 약물 전달 시스템으로서 개발되었다. 예를 들어, 미국 특허 번호 제5,916,596호; 제6,506,405호; 제6,749,868호; 제6,537,579호; 제7,820,788호; 및 제7,923,536호를 참조한다. 파클릭탁셀의 알부민 안정화 나노입자 제형인 Abraxane®은 2005에 미국에서 승인되었고 이후 전이성 유방암을 치료하기 위해 다양한 다른 국가에서 승인되었다.

본원에서 사용하기 위해 고려되는 추가 약제학적 조성물은 지속 또는 제어 전달 제형에서 폴리펩타이드를 수반하는 제형을 포함한다. 리포솜 담체, 생체붕괴성 마이크로입자 또는 다공성 비드 및 데포 주사와 같은 다양한 다른 지속 또는 제어 전달 수단을 제형화하는 기술도 당업자에게 알려져 있다.

치료적으로 사용되는 약제학적 조성물의 유효량은 예를 들어 치료 맥락 및 목적에 따라 달라질 것이다. 따라서 당업자는, 치료를 위한 적절한 복용량 수준이 부분적으로, 전달된 분자, 폴리펩타이드가 사용되는 적응증(indication), 투여 경로 및 크기(체중, 체표면 또는 장기 크기) 및 환자의 상태(연령 및 일반적인 건강)에 따라 변할 수 있음을 인정할 것이다. 따라서 임상의는 최적의 치료 효과를 얻기 위해 복용량을 적정하고 투여 경로를 수정할 수 있다. 전형적인 투여량은 상기 언급된 인자에 따라 약 0.001 mg/kg 내지 최대 약 100 mg/kg 또는 그 초과의 범위일 수 있다. 폴리펩타이드 조성물은 바람직하게는 정맥내 주사 또는 투여될 수 있다. 지속성 약제학적 조성물은 특정 제형의 반감기 및 제거율에 따라 3 내지 4일마다, 매주, 또는 격주로 투여될 수 있다. 투여 빈도는 사용된 제형에서 폴리펩타이드의 약동학적 파라미터에 따라 달라질 것이다. 전형적으로, 조성물은 원하는 효과를 달성하는 복용량에 도달할 때까지 투여된다. 따라서, 조성물은 단일 용량으로서, 또는 시간 경과에 따른 다중 용량(동일하거나 상이한 농도/복용량으로)으로, 또는 연속적 주입으로서 투여될 수 있다. 적절한 복용량의 추가 개량이 일상적으로 이루어진다. 적절한 용량-반응 데이터를 사용하여 적절한 복용량을 확인할 수 있다.

약제학적 조성물의 투여 경로는 예를 들어 정맥내, 복강내, 대뇌내(실질내), 뇌심실내, 근육내, 안구내, 동맥내, 문내, 병소내 경로, 수질내, 척추강내, 뇌실내, 경피, 피하, 또는 복강내 또는 종양내로; 뿐만 아니라 비강내, 장관, 국소, 설하, 요도, 질, 또는 직장 수단에 의해, 서방성(sustained release) 시스템 또는 이식 장치에 의해 주사를 통해 경구로 알려진 방법에 따른다. 원하는 경우, 조성물은 볼러스 주사에 의해 또는 주입에 의해 연속적으로, 또는 이식 장치에 의해 투여될 수 있다. 대안적으로, 또는 추가적으로, 조성물은 원하는 분자가 흡수되거나 캡슐화된 막, 스펀지, 또는 다른 적절한 물질의 이식을 통해 국소적으로 투여될 수 있다. 이식 장치가 사용되는 경우, 장치는 임의의 적합한 조직 또는 기관에 이식될 수 있으며 원하는 분자의 전달은 확산, 적기-방출 볼러스, 또는 연속적 투여를 통해 이루어질 수 있다.

치료적 용도

일 양태에서, 본 개시는 대상체에서 암 세포를 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 약제학적으로 허용가능한 담체에서 본 개시의 IL-2 변이체 또는 IL-2 변이체 융합 단백질의 치료적 유효량(단일요법으로서 또는 병용 요법 레지멘으로)을 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 이러한 투여는 암 세포의 성장 및/또는 증식을 억제한다. 구체적으로, 본 개시의 IL-2 변이체, 또는 IL-2 변이체 융합 단백질은 암을 특징으로 하는 장애를 치료하는데 유용하다. 이러한 장애에는 고형 종양, 예컨대 유방, 기도, 뇌, 생식 기관, 소화관, 요로, 눈, 간, 피부, 두경부, 갑상선, 부갑상선 및 그것의 원격 전이의 암, 림프종, 육종, 다발성 골수종 및 백혈병을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 유방암의 예는 침습성 관상 암종, 침습성 소엽 암종, 관상피내 암종, 및 상피내 소엽 암종을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 기도암의 예는 소세포 및 비-소세포 폐 암종, 뿐만 아니라 기관지 선종 및 흉막폐 아세포종을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 뇌암의 예는 뇌간 및 시상하부 신경교종, 소뇌 및 대뇌 성상세포종, 수모세포종, 뇌실막세포종, 뿐만 아니라 신경외배엽 및 송과체 종양을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 남성 생식 기관의 종양은 전립선암과 고환암을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 여성 생식 기관의 종양은 자궁내막암, 자궁경부암, 난소암, 질암, 외음부암, 자궁 육종을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 소화관의 종양은 항문, 결장, 결장직장, 식도, 담낭, 위, 췌장, 직장, 작은-장, 및 타액샘 암을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 요로의 종양은 방광, 음경, 신장, 신우, 요관, 및 요도 암을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 안암은 안내 흑색종 및 망막모세포종을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 간암의 예는 간세포 암종(섬유층 변이가 있거나 없는 간 세포 암종), 담관암(간내 담관 암종) 및 혼합 간세포 담관암종을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 피부암은 편평 세포 암종, 카포시 육종, 악성 흑색종, 머켈 세포 피부암, 및 비-흑색종 피부암을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 두경부암은 비인두 암, 및 입술 및 구강 암을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 림프종은 AIDS 관련 림프종, 비-호지킨 림프종, 피부 T-세포 림프종, 호지킨 질환, 및 중추신경계의 림프종을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 육종은 연조직의 육종, 골육종, 악성 섬유상 조직구종, 림프육종, 및 횡문근육종을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 백혈병은 급성 골수성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병, 다양한 림프구성 백혈병, 다양한 골수형성 백혈병, 및 모발 세포 백혈병을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 다양한 구현예에서, 암은 액티빈 A, 마이오스타틴, TGF-β 및 GDF15와 같은 TGF-β 패밀리 구성원의 고발현을 갖는 암, 예를 들어, 췌장암, 위암, 난소암, 결장직장암, 흑색종 백혈병, 폐암, 전립선암, 뇌암, 방광암, 및 두경부 암일 것이다.

"치료적 유효량" 또는 "치료적 유효 용량"은 치료되는 장애의 하나 이상의 증상을 어느 정도 완화시킬 투여되는 치료제의 양을 지칭한다.

치료적 유효 용량은 EC₅₀을 결정함으로써 세포 배양물 검정으로부터 초기에 추정될 수 있다. 그 다음, 용량은 세포 배양물에서 결정되는 바와 같은 EC₅₀을 포함하는 순환 혈장 농도 범위를 달성하기 위해 동물 모델에서 제형화될 수 있다. 그러한 정보는 인간에서의 유용한 용량을 보다 정확하게 결정하기 위해 사용될 수 있다. 혈장의 수준은 예를 들어, HPLC에 의해 측정될 수 있다. 정확한 조성물, 투여 경로 및 투약량은 대상체의 상태를 고려하여 개별 의사에 의해 선택될 수 있다.

복용량 레지멘은 최적의 원하는 반응(예를 들어, 치료 또는 예방 반응)을 제공하기 위해 조정할 수 있다. 예를 들어, 단일 볼러스가 투여될 수 있고, 시간이 지남에 따라 여러 분할 용량(다중 또는 반복 또는 유지)이 투여될 수 있으며, 치료 상황의 긴급성에 따라 용량이 비례적으로 감소 또는 증가될 수 있다. 투여의 용이성과 복용량의 균일성을 위해 비경구 조성물을 복용량 단위 형태로 제형화하는 것이 특히 유리하다. 본원에 사용된 복용량 단위 형태는 치료될 포유동물 대상체에 대한 일체형 복용량으로 적합한 물리적으로 별개의 단위를 지칭하고; 각 단위는 필요한 약제학적 담체와 관련하여 원하는 치료 효과를 생성하도록 계산된 활성 화합물의 미리 결정된 양을 함유한다. 본 개시의 복용량 단위 형태에 대한 사양은 주로 항체의 독특한 특성 및 달성될 특정 치료 또는 예방 효과에 의해 지시될 것이다.

따라서, 당업자는 본원에 제공된 개시에 기초하여 용량 및 투여 레지멘이 치료 기술분야에 널리 공지된 방법에 따라 조정된다는 것을 인식할 것이다. 즉, 최대 허용 용량이 쉽게 설정될 수 있고, 대상체에게 검출 가능한 치료 이점을 제공하기 위해 각각의 제제를 투여하기 위한 시간적 요구사항과 같이, 대상체에게 검출 가능한 치료 이점을 제공하는 유효량도 결정될 수 있다. 따라서, 특정 용량 및 투여 레지멘이 본원에 예시되어 있지만, 이들 예는 본 개시를 실시함에 있어서 대상체에게 제공될 수 있는 용량 및 투여 레지멘을 결코 제한하지 않는다.

복용량 값은 완화될 조건의 유형 및 중증도에 따라 다를 수 있고 단일 또는 다중 용량을 포함할 수 있다는 점이 주목되어야 한다. 임의의 특정 대상체의 경우, 특이적 투약 요법은 개인적인 필요 및 조성물의 투여를 관리 또는 감독하는 사람의 전문 판단에 따라 경시적으로 조정되어야 하고, 본원에 제시되는 복용량 범위는 단지 예시적인 것이고 청구된 조성물의 범위 또는 실시를 제한하도록 의도되지 않는다는 것이 더 이해되어야 한다. 또한, 본 개시의 조성물을 갖는 복용량 레지멘은 질환의 유형, 대상체의 연령, 체중, 성별, 의료 병태, 상태의 중증도, 투여 경로, 및 이용되는 특정 항체를 포함하는, 다양한 인자에 기초할 수 있다. 따라서, 복용량 레지멘은 상당히 다를 수 있지만, 표준 방법을 사용하여 일상적으로 결정될 수 있다. 예를 들어, 용량은 약동학적 또는 약력학적 파라미터에 기초하여 조정될 수 있으며, 이는 임상 효과 예컨대 독성 효과 및/또는 실험실 값을 포함할 수 있다. 따라서, 본 개시는 당업자에 의해 결정된 바와 같은 대상체 내(intra-subject) 용량-단계적 확대 (dose-escalation)를 망라한다. 적절한 복용량 및 요법을 결정하는 것은 관련된 기술에 잘-알려져 있고 일단 본원에 개시되는 교시가 주어지는 경우 당업자에 의해 망라되는 것으로 이해될 것이다.

본 개시의 IL-2 변이체, 또는 IL-2 변이체 융합 단백질의 치료적 또는 예방적 유효량에 대한 예시적이고 비제한적인 매일 투여 범위는 0.001 내지 100 mg/kg, 0.001 내지 90 mg/kg, 0.001 내지 80 mg/kg, 0.001 내지 70 mg/kg, 0.001 내지 60 mg/kg, 0.001 내지 50 mg/kg, 0.001 내지 40 mg/kg, 0.001 내지 30 mg/kg, 0.001 내지 20 mg/kg, 0.001 내지 10 mg/kg, 0.001 내지 5 mg/kg, 0.001 내지 4 mg/kg, 0.001 내지 3 mg/kg, 0.001 내지 2 mg/kg, 0.001 내지 1 mg/kg, 0.010 내지 50 mg/kg, 0.010 내지 40 mg/kg, 0.010 내지 30 mg/kg, 0.010 내지 20 mg/kg, 0.010 내지 10 mg/kg, 0.010 내지 5 mg/kg, 0.010 내지 4 mg/kg, 0.010 내지 3 mg/kg, 0.010 내지 2 mg/kg, 0.010 내지 1 mg/kg, 0.1 내지 50 mg/kg, 0.1 내지 40 mg/kg, 0.1 내지 30 mg/kg, 0.1 내지 20 mg/kg, 0.1 내지 10 mg/kg, 0.1 내지 5 mg/kg, 0.1 내지 4 mg/kg, 0.1 내지 3 mg/kg, 0.1 내지 2 mg/kg, 0.1 내지 1 mg/kg, 1 내지 50 mg/kg, 1 내지 40 mg/kg, 1 내지 30 mg/kg, 1 내지 20 mg/kg, 1 내지 10 mg/kg, 1 내지 5 mg/kg, 1 내지 4 mg/kg, 1 내지 3 mg/kg, 1 내지 2 mg/kg, 또는 1 내지 1 mg/kg 체중일 수 있다. 복용량 값은 완화될 병태의 유형 및 중증도에 따라 변할 수 있다는 점에 유의해야 한다. 임의의 특정 대상체에 대해, 특정 복용량 레지멘은 개인적인 필요 및 조성물의 투여를 투여하거나 감독하는 사람의 전문적인 판단에 따라 시간이 지남에 따라 조정되어야 하며, 본원에 설명되는 복용량 범위는 예시적이며, 청구된 조성물의 범위 또는 실행을 제한하려는 것이 아님을 추가로 이해해야 한다.

본 개시의 약제학적 조성물의 독성 및 치료 지수는 예를 들어 LD₅₀(집단의 50%에 치명적인 용량) 및 ED₅₀(집단의 50%에서 치료 효과적인 용량)을 결정하기 위해 세포 배양 또는 실험 동물에서 표준 약제학적 절차에 의해 결정될 수 있다. 독성과 치료적 유효 용량 사이의 용량 비율은 치료 지수이며 LD₅₀/ED₅₀의 비율로 표시될 수 있다. 큰 치료 지수를 나타내는 조성물이 일반적으로 바람직하다.

IL-2 변이체, 또는 IL-2 변이체 융합 단백질 약제학적 조성물의 투여의 투여 빈도는 요법의 성질 및 치료되는 특정 질환에 의존한다. 대상체는 원하는 치료 결과가 달성될 때까지 매주, 매주 또는 매월 2회와 같은 규칙적인 간격으로 치료될 수 있다. 예시적인 투여 빈도는 다음을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다: 휴식 없이 매주 1회; 2주에 한 번; 3주에 한 번; 2주 동안 쉬지 않고 약하게, 그 다음에는 매달; 3주 동안 휴식 없이 약하게, 그 다음에는 매달; 매달; 격월에 1회; 3개월에 1회; 4개월에 1회; 5개월에 1회; 또는 6개월에 1회 또는 매년.

병용 요법

본원에 사용된 바와 같이, 본 개시의 IL-2 변이체 또는 IL-2 변이체 융합 단백질 및 하나 이상의 다른 치료제를 지칭하는 용어 "공동 투여", "공동 투여된" 및 "~와 병용으로"는 다음을 의미하고, 지칭하고, 포함한다: 실질적으로 동시에 상기 성분을 상기 대상체에게 방출하는 단일 복용 형태로 이러한 성분을 함께 제형화될 때, 치료가 필요한 대상체에 대한 본 개시의 IL-2 변이체, 또는 IL-2 변이체 융합 단백질과 치료제(들)의 이러한 병용의 동시 투여; 이러한 성분이 상기 대상체에 의해 실질적으로 동시에 복용되어, 상기 대상체에 실질적으로 동일한 시간에 방출하는 별개의 복용 형태로 상기 성분을 서로 별도로 제형화될 때, 실질적으로 치료가 필요한 대상체에 대한 본 개시의 IL-2 변이체, 또는 IL-2 변이체 융합 단백질과 치료제(들)의 이러한 병용의 동시 투여; 각 투여 사이의 상당한 시간 간격으로 상기 대상체에 의해 연속 시간에 복용되어, 상기 성분을 상기 대상체에 실질적으로 상이한 시건에 방출하는 별개 복용 형태로 상기 성분을 서로 별도로 제형화할 때, 치료가 필요한 대상체에 대한 본 개시의 IL-2 변이체, 또는 IL-2 변이체 융합 단백질과 치료제(들)의 이러한 병용의 순차적인 투여; 및, 제어된 방식으로 상기 성분을 방출하여 상기 대상체에게 동일하고/거나 상이한 시간에 동반하여, 연속적으로, 및/또는 중첩적으로 방출하는 단일 복용 형태로 이러한 성분을 함께 제형화할 때 치료가 필요한 대상체에 대한 본 개시의 IL-2 변이체, 또는 IL-2 변이체 융합 단백질과 치료제(들)의 이러한 병용의 순차적인 투여, 여기서 각 부분은 동일하거나 상이한 경로에 의해 투여될 수 있다.

또 다른 양태에서, 본 개시는 대상체에서 암 또는 암 전이를 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 본 발명의 약제학적 조성물의 치료적 유효량을 면역요법, 세포독성 화학요법, 소분자 키나제 억제제 표적 요법, 수술, 방사선 요법, 및 줄기 세포 이식을 포함하지만 이에 제한되지 않는 제2 요법과 병용으로 투여하는 것을 포함한다. 예를 들어, 이러한 방법은 예방적 암 예방, 수술 후 암 재발 및 전이의 예방 및 기타 종래의 암 요법의 보조제로 사용될 수 있다. 본 개시는 종래의 암 요법(예를 들어, 화학요법, 방사선 요법, 광선요법, 면역요법 및 수술)의 효과가 본원에 설명되는 병용 방법의 사용을 통해 향상될 수 있음을 인식한다.

광범위한 종래의 화합물이 항-신생물성 활성을 갖는 것으로 나타났다. 이러한 화합물은 고형 종양을 축소하고, 전이 및 추가 성장을 예방하거나, 백혈병 또는 골수 악성 종양에서 악성 T-세포의 수를 줄이기 위한 화학요법의 약제학적 제제로서 사용되어 왔다. 화학요법이 다양한 유형의 악성 종양을 치료하는 데 효과적이기는 하지만, 많은 항-신생물성 화합물은 바람직하지 않은 부작용을 유발한다. 2개 이상의 상이한 치료법이 조합될 때, 치료법이 상승적으로 작용할 수 있고 각각의 치료법의 복용량을 감소시킬 수 있어, 더 높은 복용량에서 각 화합물에 의해 가해지는 유해한 부작용을 감소시키는 것으로 나타났다. 다른 사례에서, 치료에 불응성인 악성종양은 2개 이상의 상이한 치료의 병용 요법에 반응할 수 있다.

다양한 구현예에서, 화학요법제와 같은 제2 항암제가 환자에게 투여될 것이다. 예시적인 화학요법제의 목록은 다우노루비신, 닥티노마이신, 독소루비신, 블레오마이신, 미토마이신, 질소 머스타드, 클로르암부실, 멜팔란, 사이클로포스파미드, 6-머캅토퓨린, 6-티오구아닌, 벤다무스틴, 사이타라빈(CA), 5-플루오로우라실 (5-FU), 플록수리딘(5-FUdR), 메토트렉세이트(MTX), 콜히친, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 에토포시드, 테니포시드, 시스플라틴, 카보플라틴, 옥살리플라틴, 펜토스타틴, 클라드리빈, 사이타라빈, 젬시타빈, 프랄라트렉세이트, 미톡산트론, 디에틸스틸베스트롤(DES), 플루다라빈, 이포스파미드, 하이드록시우레아탁산(예컨대 파클리탁셀 및 독세탁셀) 및/또는 안트라사이클린 항생제, 뿐만 아니라 DA-EPOCH, CHOP, CVP 또는 FOLFOX로 제한되지 않는 것과 같은 제제의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 다양한 구현예에서, 이러한 화학요법제의 복용량은 약 10 mg/m², 20 mg/m², 30 mg/m², 40 mg/m², 50 mg/m², 60 mg/m², 75 mg/m², 80 mg/m², 90 mg/m², 100 mg/m², 120 mg/m², 150 mg/m², 175 mg/m², 200 mg/m², 210 mg/m², 220 mg/m², 230 mg/m², 240 mg/m², 250 mg/m², 260 mg/m², 및 300 mg/m² 중 어느 하나를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.

다양한 구현예에서, 본 개시의 병용 요법 방법은 특정 종양 항원에 대한 고갈 항체를 사용하는 치료; 항체-약물 접합체를 사용하는 치료; CTLA-4, PD-1, OX-40, CD137, GITR, LAG 3, TIM-3, SIRP, CD47, CD40, TIGIT 및 VISTA와 같은 공자극 또는 공억제 분자(면역 관문)에 대한 효능적, 길항적, 또는 차단적 항체를 사용하는 치료; 블리나투모밥과 같은 이중특이적 T 세포 결합 항체(BiTE®)를 사용하는 치료; IL-12, IL-15, IL-21 , GM-CSF, IFN-α, IFN-β 및 IFN-γ와 같은 생물학적 반응 조절제의 투여를 수반하는 치료; 시풀루셀-T(sipuleucel-T)와 같은 치료적 백신을 사용하는 치료; 수지상 세포 백신, 또는 종양 항원 펩타이드 백신을 사용하는 치료; 키메라 항원 수용체 (CAR)-T 세포를 사용하는 치료; CAR-NK 세포를 사용하는 치료; 종양 침윤 림프구(tumor infiltrating lymphocytes; TILs)를 사용하는 치료; 입양으로 전달된 항종양 T 세포(생체외 확장 및/또는 TCR 형질전환)를 사용하는 치료; TALL-104 세포를 사용하는 치료; 및 톨(Toll)-유사 수용체(TLR) 효능제 CpG 및 이미퀴모드와 같은 면역자극제를 사용하는 치료; Toll-유사 수용체(TLR) 효능제 CpG 및 이미퀴모드(imiquimod)와 같은 면역자극제를 사용하는 치료를 포함하지만, 이에 제한되지 않는, 면역요법의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함할 수 있으며; 여기서 병용 요법은 종양 세포의 증가된 효과기 세포 사멸을 제공하며, 즉, 동반상승효과는 공동 투여될 때 IL-2 변이체와 면역요법 사이에 존재한다.

다양한 구현예에서, 병용 요법은 IL-2 변이체 및 제2 제제 조성물을 동일한 약제학적 조성물 또는 별도의 약제학적 조성물로 동시에 투여하는 것을 포함한다. 다양한 구현예에서, IL-2 변이체 조성물 및 제2 제제 조성물은 순차적으로 투여되며, 즉 IL-2 변이체 조성물은 제2 제제 조성물의 투여 전 또는 후에 투여된다. 다양한 구현예에서, IL-2 변이체 조성물 및 제2 제제 조성물의 투여는 동시적이며, 즉 IL-2 변이체 조성물 및 제2 제제 조성물의 투여 기간은 서로 중첩된다. 다양한 구현예에서, IL-2 변이체 조성물 및 제2 제제 조성물의 투여는 동시적이지 않다. 예를 들어, 다양한 구현예에서, IL-2 변이체 조성물의 투여는 제2 제제 조성물이 투여되기 전에 종료된다. 다양한 구현예에서, 제2 제제 조성물 투여는 IL-2 변이체 조성물이 투여되기 전에 종료된다.

도 1은 (비-환원성 조건(레인 1) 및 환원성 조건(레인 2) 하에서) SDS-PAGE에 의해 결정되는 순도 및 예시적 IL-2 변이체 Fc 융합 단백질 P-0635(1a) 및 P-0704(1b)의 SEC-HPLC에 의해 평가되는 단량체 백분율을 도시한다. P-0635 및 P-0704는 야생형 IL-2에서 동일한 아미노산 치환 P65R을 공유한다. P-0635는 동종이량체 Fc에 융합되는 2가 IL-2 변이체를 포함하는 반면, P-0704는 놉-인투-홀(knob-into-hole) 이종이량체 Fc에 융합되는 1가 IL-2 변이체를 포함한다.
도 2는 단백질 A 정제 후 예시적 IL-2 Fc 융합 단백질 P-0250(2a), P-0318(2b), P-0317(2c), 및 P-0531(2d)의 크기 배제 크로마토그램을 도시한다.
도 3은 ELISA에서 IL-2Rα에 대한 IL-2 Fc 융합 단백질의 결합 강도상의 IL-2 원자가의 영향을 도시한다. P-0531 및 P-0689는 야생형 IL-2에서 동일한 발달성-향상 아미노산 치환 S125I를 공유한다. P-0531은 동종이량체 Fc에 융합되는 2가 IL-2 변이체를 포함하는 반면, P-0689는 놉-인투-홀 이종이량체 Fc에 융합되는 1가 IL-2를 포함한다.
도 4는 ELISA에서 IL-2Rα에 대한 IL-2 변이체 Fc 융합의 결합 강도 상의 다양한 돌연변이의 영향을 도시한다. (4a) IL-2 변이체 Fc 융합은 T41에 대한 아미노산 치환을 함유하고; (4b) IL-2 변이체 Fc 융합은 Y107에 대한 아미노산 치환을 함유하고; (4c 및 4d) IL-2 변이체 Fc 융합은 R38에 대한 아미노산 치환을 함유한다.
도 5는 ELISA에서 IL-2Rα에 대한 IL-2 변이체 Fc 융합의 결합 강도 상의 IL-2 E68 치환의 영향을 도시한다.
도 6은 ELISA에서 IL-2Rα에 대한 IL-2 변이체 Fc 융합의 결합 강도 상의 IL-2 E62 치환의 영향을 도시한다.
도 7은 ELISA에서 IL-2Rα에 대한 IL-2 변이체 Fc 융합의 결합 강도 상의 다양한 IL-2 P65 치환의 영향을 도시한다. (7a-7b) IL-2 P65 치환은 IL-2Rα에 대한 향상된 결합을 야기하였고; (7c) IL-2 P65 치환은 IL-2Rα에 대한 감소된 결과를 야기하였고; (7d) IL-2 P65 치환은 IL-2Rα에 대한 결합의 완전 상실을 야기하였다.
도 8은 ELISA에서 IL-2Rα에 대한 결합 강도 상의 IL-2 아미노산 치환 조합의 영향을 도시한다. (8a) IL-2Rα에 대한 결합 강도 상의 IL-2 F42A 치환의 영향; (8b) IL-2Rα에 대한 결합의 완전 상실을 야기한 F42A 및 CD25-파괴 치환 E62F의 조합; (8c) IL-2Rα에 대한 결합의 완전 상실을 야기한 F42A 및 CD25-파괴 치환 P65H의 조합.
도 9는 인간 PBMC 검정에서 야생형 융합 단백질(P-0531) 및 벤치마크 단백질(P-0551)과 비교하여 CD4+ Treg 세포에서 STAT5 인산화의 용량-의존적 유도 상의 IL-2 변이체 Fc 융합 단백질의 차동 효과를 도시한다. IL-2 변이체의 패널은 IL-2Rα에 대한 향상된, 감소된, 또는 폐기된 결합을 야기한 CD25-간섭 돌연변이를 함유한다.
도 10은 야생형 IL-2 융합 단백질 P-0531, 및 벤치마크 단백질 P-0551과 비교하여 ELISA에서

에 대한 IL-2 변이체 Fc 융합 단백질의 패널의 결합의 완전 보존을 도시한다. IL-2 변이체의 패널은 IL-2Rα에 대한 향상된, 감소된, 또는 폐기된 결합을 야기한 CD25-간섭 돌연변이를 함유한다.
도 11은 IL-2 변이체 Fc 융합 단백질의 패널이 인간 PBMC에서 CD8+ T 세포(11a) 및 NK 세포(11b) 상에 Ki67 발현을 유도할 시에 비교가능한 활성을 나타낸 것을 도시한다. IL-2 변이체의 패널은 IL-2Rα에 대한 향상된, 감소된, 또는 폐기된 결합을 야기한 CD25-간섭 돌연변이를 포함한다. 야생형 IL-2 융합 단백질 P-0531 및 벤치마크 단백질 P-0511은 비교를 위해 포함된다.
도 12는 인간 PBMC에서 CD8+ T 세포 상에 Ki67 발현을 유도할 시에 활성 상의 IL-2 원자가의 영향을 도시한다. P-0531 및 P-0689는 야생형 IL-2 Fc 융합 단백질의 2가 및 1가 대응물이다. P-0635 및 P-0704는 IL-2 P65R Fc 융합의 2가 및 1가 등가물(equivalent)이다.
도 13은 그들의 야생형 대응물과 비교하여 CD4+ T 세포 상에 pSTAT5 발현을 유도하는 활성 상의 다양한

조절 아미노산 치환 또는 N-말단 결실의 영향을 도시한다. (13a) 위치 D20에서 아미노산 치환을 갖는 IL-2 돌연변이; (13b-13c) 위치 L19에서 아미노산 치환을 갖는 IL-2 돌연변이; (13d) IL-2 Q126E 돌연변이; 및 (13e) N-말단 산(acid) 결실을 갖는 IL-2 돌연변이.
도 14는 ELISA에서

에 대한 결합 강도(14a) 및 인간 PBMC에서 CD8+ T 세포 상에 Ki67 발현을 유도할 시의 활성(14b) 상의 IL-2Rβ 또는

파괴 아미노산 치환의 영향을 도시한다. P-0689는 1가 야생형 IL-2 Fc 융합 단백질이고 P-0704는 IL-2Rα에 더 이상 결합할 수 없지만 단량체

수용체에 대해 완전 친화도 및 기능적 활성을 유지하는 1가 IL-2 P65R Fc 융합이다.
도 15는 인간 PBMC에서 CD8+ T 세포(15a), NK 세포(15b), 및 CD4+ T 세포 (15c) 상에 Ki67 발현을 유도할 시에 IL-2 변이체 Fc 융합의 활성 상의 다양한 IL-2Rβ 파괴 아미노산 변화의 영향을 도시한다. P-0704 및 벤치마크 분자(P-0551의 단량체 버전)는 비교를 위해 포함되었다.
도 16은 Balb/C 마우스의 단일 주사 다음에 말초 혈액에서 Treg(16a), CD8+ T(16b), 및 NK 세포(16c)의 확장 상의 P-0704의 시간-의존적 효과를 도시한다. P-0704는 1가 IL-2 P65R Fc 융합이고; 1가 야생형 IL-2 Fc 융합 단백질인 P-0689은 비교를 위해 포함되었다. 혈액은 FACS 분석에 의한 림프구 표시형을 위해 3일 및 5일째에 수집되었다.
도 17은 인간 PBMC 검정에서 CD4+ Treg(17a), CD8+ T(17b), 및 NK 세포(17c)에 대한 STAT5 인산화의 용량-의존적 유도 상의 융합 형식의 영향을 도시한다. P-0704는 1가 IL-2 P65R Fc 융합이고, P-0803은 동일한 IL-2 모이어티를 보유하는 항체 융합이다.
도 18은 인간 PBMC 검정에서 야생형 융합 단백질(P-0837)과 비교하여 CD4+ Treg(18a), CD8+ T(18b), 및 NK 세포(18c)에 대한 STAT5 인산화의 용량-의존적 유도 상의 IL-2 변이체 항체 융합 단백질의 차동 효과를 도시한다. P-0838은 IL-2Rα에 대한 결합 능력을 상당히 감소시킨 IL-2 P65Q 돌연변이를 보유하고, P-0782는 IL-2Rα에 대한 폐기된 결합을 갖는 IL-2 P65R 모이어티를 갖는다.
도 19는 CD8+ T(19a) 및 NK(19b) 상에서 STAT5 인산화를 자극할 시에 그리고 인간 PBMC에서 D8+ T(19c) 및 NK(19d) 세포 상에서 Ki67 발현을 유도할 시에 IL-2 변이체 항체 융합의 활성에 대한 IL-2Rβ 조절 아미노산 변화의 영향을 도시한다. 모든 3개의 화합물은 IL-2 모이어티에서 P65R 돌연변이를 포함하고, P-0786 및 P-0783은 각각, 추가적인 IL-2Rβ 파괴 돌연변이 L19Q 및 L19H를 함유한다.
도 20은 CD4+ Treg(20a), CD8+ T(20b), 및 NK 세포(20c) 상에서 STAT5 인산화를 자극할 시에, 그리고 인간 PBMC 검정에서 D8+ T(20d) 및 NK 세포(20e) 상에서 Ki67 발현을 유도할 시에 IL-2 변이체 항체 융합의 활성에 대한 IL-2Rβ 조절 아미노산 변화의 영향을 도시한다. 모든 3개의 화합물인, P-0838, P-0790, 및 P-0787은 IL-2 모이어티에 P65Q 돌연변이를 포함하고, P-0790 및 P-0787 각각은, 추가적인 IL-2Rβ 조절 돌연변이 L19Q 및 L19H를 함유한다. P-0837은 야생형 IL-2 융합 대응물이다.
도 21은 CTLL-2 세포를 증식시킬 시에 IL-2 변이체 항체 융합의 활성에 대한 IL-2Rβ 조절 아미노산 변화의 영향을 도시한다. P-0782, P-0783, 및 P-0786 모두는 IL-2 모이어티에서 P65R 돌연변이를 포함하며; P-0786 및 P-0783은 각각, 추가적인 IL-2Rβ 조절 돌연변이 L19Q 및 L19H를 함유한다. P-0837은 야생형 IL-2 융합 대응물이다.
도 22는 ELISA에서 항체 아암에 대한 직접 결합(22a) 및 리간드 경쟁 억제 (22b) 상의 IL-2 변이체의 융합의 최소 영향을 도시하고, 유사하게, IL-2 변이체 인간 PD-1 항체 IL-2는 FACS 분석(도 22c)에 의해 분석되는 세포 표면 상에 발현되는 PD1에 대한 부모 항체와 유사한 결합을 도시하였다. P-0795는 인간 PD-1 길항제 항체이고, P-0803, P-0880, 및 P-0885는 P-0795의 중쇄의 C-말단에 공유적으로 링크되는 단량체 IL-2 P65R 변이체를 갖는다. P-0803 및 P-0885는 동일한 IL-2 P65R/S125I 치환을 공유하지만 상이한 링커((G₃S)₂ 및 (G₄S)₃각각)를 갖는다. P-0885는 하나의 추가적인 L19Q 돌연변이인 그러한 P-0880을 함유한다. P-0704 및 P-0859는 각각, P-0880 및 P-0885의 Fc 융합 대응물이다.
도 23은 인간 PBMC에서 CD4+ Treg(23a 및 23b), CD8+ T(23c 및 23d), 및 NK 세포(23e 및 23f) 상의 STAT5 인산화의 용량-의존적 유도에 대한 IL-2 변이체 항체 융합 단백질의 차동 효과를 도시한다. P-0803 및 P-0804는 각각, P65R 및 L19H/P65R 돌연변이를 보유하는 IL-2 변이체 인간 PD-1 항체 융합 단백질이다. P-0782는 IL-2 P65R 대리(surrogate) 마우스 PD-1 항체 융합이고, P-0783은 P-0782와 비교하여 추가적인 L19H 돌연변이를 함유한다.
도 24는 단백질 A 정제 후, IL-2 변이체 인간 PD-1 항체 융합 단백질인 P-0840(24a), P-0841(24b), P-0803(24c), 및 P-0880(24d)의 크기 배제 크로마토그램을 도시한다.
도 25는 인간 PBMC 검정에서 CD8+ T(25a 및 25b), 및 NK 세포(25c 및 25d) 상의 STAT5 인산화의 용량-의존적 유도에 대한 IL-2 변이체 항체 융합 단백질의 링커 길이의 영향을 도시한다. P-0840 및 P-0841 둘 다 IL-2 L19Q/P65Q 변이체 인간 PD-1 항체 융합 단백질이며; P-0840은 (G₃S)₂ 링커를 포함하는 반면 P-0841은 (G₄S)₃ 링커를 갖는다. 유사하게, P-0803 및 P-0880은 IL-2 P65R 변이체 인간 PD-1 항체 융합 단백질이며; P-0803은 (G₃S)₂ 링커를 포함하는 반면 P-0880은 (G₄S)3 링커를 갖는다.
도 26은 CD8+ T(26a) 및 NK 세포(26b) 상에서 STAT5 인산화를 자극할 시에, 그리고 인간 PBMC에서 CD8+ T(26c) 및 NK 세포(26d) 상에서 Ki67 발현을 유도할 시에 IL-2 변이체 인간 PD-1 항체 융합의 활성에 대한 IL-2Rβ 조절 아미노산 변화의 영향을 도시한다. 모든 3개의 화합물인, P-0880, P-0885, 및 P-0882는 IL-2 모이어티에 P65R 돌연변이를 포함하는 반면, P-0885 및 P-0882는 각각, 추가적인 IL-2Rβ 조절 돌연변이 L19Q 및 L19H를 함유한다. P-0849는 야생형 IL-2 융합 대응물이다. 모든 화합물은 PD-1 항체 중쇄 및 IL-2를 연결하는 (G₄S)₃ 링커를 갖는다.
도 27은 CD8+ T(27a), 및 NK 세포(27b) 상에서 Ki67 발현에 대한 IL-2 변이체 대리 마우스 PD-1 항체 융합 단백질 P-0782, P-0838, P-0781(벤치마크), 및 P-0837의 시간-의존적 효과, 및 C57BL6 마우스에서의 단일 주사 다음에 CD8(27c) 및 NK 세포(27d)의 세포 확장에 대한 효과를 도시한다. 세포 확장은 기준선에 걸쳐 세포 수 배수 변화로 표시되었다. P-0782는 IL-2 모이어티에 P65R 돌연변이를 포함하고, P-0838은 P65Q 돌연변이를 함유하고, P-0781은 IL-2Rα에 대한 결합을 폐기한 벤치마크 IL-2 변이체를 보유하고, P-0837은 야생형 IL-2 융합 대응물이다.
도 28은 CD8+ T(28a), 및 NK 세포(28b) 상에서 Ki67 발현에 대한 IL-2 변이체 대리 마우스 PD-1 항체 융합 단백질 P-0786의 시간- 및 용량-의존적 효과, 및 C57BL6 마우스에서의 단일 주사 다음에 CD8+ T(28c) 및 NK 세포(28d)의 세포 확장에 대한 효과를 도시한다. 세포 확장은 기준선에 걸쳐 세포수의 배수 변화로 표시되었다. P-0786은 IL-2Rα에 대한 폐기된 결합 및 감소된 전체 효능을 렌더링하는 L19Q/P65R 돌연변이를 포함한다. P-0837인, 야생형 IL-2 융합 대응물은 비교를 위해 포함되었다.
도 29는 CD8+ T(29a), 및 NK 세포(29b) 상에서 Ki67 발현에 대한 IL-2 변이체 대리 마우스 PD-1 항체 융합 단백질 P-0783의 시간- 및 용량-의존적 효과, 및 C57BL6 마우스에서의 단일 주사 다음에 CD8(29c) 및 NK 세포(29d)의 세포 확장에 대한 효과를 도시한다. 세포 확장은 기준선에 걸쳐 세포 수의 배수 변화로 표시되었다. P-0783은 IL-2Rα에 대한 폐기된 결합 및 감소된 전체 효능을 렌더링하는 L19H/P65R 돌연변이를 포함한다. P-0837인, 야생형 IL-2 융합 대응물은 비교를 위해 포함되었다.
도 30은 IL-2 변이체 대리 마우스 PD-1 항체 융합 단백질인, P-0782, P-0786, 및 P-0783로 치료된 C57BL/6 마우스의 체중 변화를 도시한다. 모든 화합물은 IL-2 모이어티에 P65R 돌연변이를 포함하고, P-0781은 IL-2Rα에 대한 결합을 폐기한 벤치마크 IL-2 변이체를 보유하고, P-0786 및 P-0783은 각각, 추가적인 IL-2Rβ 파괴 돌연변이 L19Q 및 L19H를 함유한다. 데이터는 평균±SEM으로서 표시된다.
도 31은 Q7D 반복 투여 일정에 따라 피하 B16F10 쥣과(murine) 흑색종 종양 모델에서 IL-2 변이체 대리 마우스 PD-1 항체 융합 단백질의 항종향 효능(31a) 및 체중 변화(31b)를 도시한다. 모든 3개의 항체 융합 단백질은 IL-2Rα에 대한 결합을 손상시키기 위해 IL-2 L65Q 돌연변이를 함유하고; P-0790 및 P-0787은 각각, 전체 효능을 추가로 조절하기 위해 추가적인 L19Q 및 L19H 돌연변이를 포함한다. 데이터는 평균±SEM으로서 표시된다.
도 32는 Q7D 반복 투여 일정에 따라 피하 B16F10 쥣과 흑색종 종양 모델에서 2개의 상이한 투약에서 P-0787의 항종향 효능(32a) 및 체중 변화(32b)를 도시한다. P-0787은 IL-2 변이체 대리 마우스 PD-1 항체 융합 단백질이고 L19H/P65Q 돌연변이를 포함한다. 데이터는 평균±SEM으로서 표시된다.
도 33은 Q7D 반복 투여 일정에 따라 피하 B16F10 쥣과 흑색종 종양 모델에서 IL-2 변이체 대리 마우스 PD-1 항체 융합 단백질인, P-0782 및 P-0786의 항종향 효능을 도시한다. 대리 마우스 PD-1 항체인 P-0722는 비교를 위해 포함되었다. P-0782 및 P-0786 둘 다는 IL-2Rα 결합-폐기된 돌연변이 P65R을 포함하는 반면, P-0786은 전체 효능을 조절하기 위해 추가적인 L19Q 돌연변이를 함유한다. 데이터는 평균±SEM으로서 표시된다.
도 34는 마우스 B16F10 폐 전이 모델에서 P-0790에 의한 폐 전이 결절의 용량-의존적 억제를 도시한다. (34a) 평균 폐 결절 카운트; (34b) 각각의 그룹으로부터의 대표 동물의 폐 사진. P-0790은 IL-2Rα에 대한 상당히 손상된 결합 및 조절된 전체 효능을 갖는 IL-2 L19Q/P65Q 대리 마우스 PD-1 항체 융합 단백질이다. 데이터는 평균±SEM으로서 표시된다. 통계적 분석은 Tukey 사후검증 다음에 이어지는 일원분산분석에 의해 수행되었다. *p<0.05.

다음 실시예는 본 개시를 보다 완전하게 예시하기 위해 제공되지만 그 범위를 제한하는 것으로서 해석되지 않는다.

실시예 1

IL-2 Fc 융합 작제물의 구조 및 생산

모든 유전자는 포유동물 세포에서의 발현을 위해 최적화된 코돈이었고, 합성되고 수령체 포유동물 발현 벡터(GenScript)로 서브클로닝되었다. 단백질 발현은 CMV 프로모터에 의해 유도되고 합성 SV40 polyA 신호 서열은 CDS의 3' 말단에 존재한다. 선도 서열은 작제물의 N-말단에서 조작되어 분비를 위한 적절한 신호 전달 및 처리를 보장한다.

작제물은 폴리에틸렌이민을 사용하여 포유동물 발현 벡터와 현탁액에서 성장하는 HEK293-F 세포를 공-형질감염시킴으로써 생산되었다(PEI, 25,000 MW linear, Polysciences). 2개 이상의 발현 벡터가 있는 경우, 벡터는 1:1 비로 형질감염되었다. 2개 이상의 발현 벡터가 있는 경우, 벡터를 1:1 비율로 형질감염시켰다. 형질감염을 위해, HEK293 세포를 무혈청 FreeStyleTM 293 발현 배지(ThermoFisher)에서 배양하였다. 1000 ml 진탕 플라스크(작업 부피 330ml)에서 생산을 위해, HEK293 세포를 형질감염 24시간 전에 0.8 Х10⁶개의 세포/ml의 밀도로 시딩하였다. 총 330 ㎍의 DNA 발현 벡터를 16.7 ml의 Opti-mem 배지(ThermoFisher)와 혼합하였다. 16.7 ml의 Opti-mem 배지에 희석된 0.33 mg의 PEI를 첨가한 후, 혼합물을 15초 동안 와동시킨 후 실온에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 그 다음 DNA/PEI 용액을 세포에 첨가하고 8% CO₂가 있는 인큐베이터에서 37℃에서 인큐베이션하였다. 나트륨 부티레이트(Millipore Sigma)를 4일째에 세포에 2 mg/L의 최종 농도로 첨가하여 단백질 발현을 지속시키는 데 도움을 주었다. 6일 배양 후, 2200 rpm에서 20분 동안 원심분리에 의한 정제를 위해 상청액을 수집하였다. 용액을 멸균 여과하였다(0.22 ㎛ 필터, Corning). 단백질 A 친화성 크로마토그래피를 사용하여 세포 배양 상청액으로부터 분비된 단백질을 정제하였다.

대안적으로, 제조업체의 지시에 따라 ExpiCHO 세포(ThermoFisher)에서 작제물을 생성하였다.

친화성 크로마토그래피를 위해, 25 ml의 인산염 완충 식염수(pH 7.2)(ThermoFisher)로 평형화된 HiTrap MabSelectSure 컬럼(CV = 5mL, GE Healthcare)에 각 상청액을 로딩하였다. 결합되지 않은 단백질은 5 컬럼 부피 PBS(pH 7.2)로 세척하여 제거하고 표적 단백질을 25 mM의 시트르산나트륨, 25 mM의 염화나트륨(pH 3.2)으로 용리시켰다. 3%의 1M Tris(pH 10.2)를 첨가하여 단백질 용액을 중화시켰다. CaptoMMC(GE Healthcare), 세라믹 수산화인회석, 또는 세라믹 플루오로인회석(Bio-Rad)를 포함하지만 이에 제한되지 않는 이온 교환 크로마토그래피 또는 혼합 모드 크로마토그래피도 필요에 따라 단백질 A 물질을 연마하는 데 사용되었다. Amicon^®Ultra-15 농축기 10KDa NMWC(Merck Millipore Ltd.)로 표적 단백질을 농축되었다.

정제된 작제물의 순도 및 분자량은 환원제가 있거나 없는 SDS-PAGE 및 Coomassie(ImperialR Stain)로 염색하여 분석하였다. NuPAGE^® Pre-Cast 젤 시스템 (4-12% 또는 8-16% Bis-Tris, ThermoFisher)을 제조업체의 지침에 따라 사용하였다. 아미노산 서열에 기초하여 계산된 몰 소광 계수로 나눈 280 nm에서의 UV 흡광도(Nanodrop Spectrophotometer, ThermoFisher)를 측정하여 정제된 단백질 샘플의 단백질 농도를 결정하였다. 작제물의 응집체 함량은 Agilent 1200 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 시스템에서 분석되었다. 샘플을 25℃에서 이동상으로 150 mM의 인산나트륨(pH 7.0)을 사용하여 AdvanceBio 크기 배제 컬럼(300Å, 4.6 x 150mm, 2.7 ㎛, LC 컬럼, Agilent)에 주입하였다.

단백질 A 정제된 예시적 IL-2 변이체 Fc 융합 작제물인 P-0635 및 P-0704의 SDS-PAGE 및 크기 배제 크로마토그램 분석이 도 1에 예시되었다. P-0635(서열번호: 85; 도 1a) 및 P-0704(서열번호: 96 및 10; 도 1b)는 IL-2에서 동일한 아미노산 치환 P65R을 공유한다. P-0635는 동종이량체 Fc에 융합되는 2가 IL-2 변이체를 포함하는 반면, P-0704는 놉-인투-홀 이종이량체 Fc에 융합되는 1가 IL-2 변이체를 포함한다. SDS-PAGE 분석은 두 분자가 높은 단백질 순도를 나타냈고, 감소된 조건(레인 2) 하에서 실행된 샘플이 P-0635에서의 동종이량체 Fc 사슬 및 P-0704의 이종이량체 Fc 사슬 둘 다에 대해 예상된 MW를 보였다는 것을 입증하였다. 크기 배제 크로마토그램 분석은 두 분자가 초기 단백질 A 포획 단계 후에 5% 미만의 응집을 갖는 낮은 응집 경향을 보였다는 것을 나타냈다.

실시예 2

IL-2의 단일 아미노산 치환은 융합 화합물의 발달성에서 보편적인 개선을 야기한다

원하는 생물학적 특성을 가진 변이체 단백질을 생성하는 돌연변이 조합을 찾기 위한 엔지니어링 접근 방식은 IL-2에 적용할 때 심각한 문제에 직면하였다. 자연 발생 IL-2 단백질은 매우 불안정한 경향이 있고 응집되기 쉬운 경향이 있다는 것은 기술 분야에 공지되어 있다. 이는 본 발명자들의 실험에서 야생형 IL-2 Fc 융합 단백질(P-0250)이 도 2a에 도시된 SEC 크로마토그램에 의해 예시된, 높은 응집 경향을 갖는 낮은 수준(HEK-293F 세포에서 일시적으로 약 3 mg/L)으로 발현되었음을 입증하였다. 원하는 생물학적 활성을 달성하는 것을 목적으로 하는 IL-2에서의 아미노산 치환으로서 간신히 마친 공학적 노력은 전형적으로 심지어 덜 안정적인 돌연변이 단백질을 야기하였다. 현재 작업의 초기 단계의 IL-2 변이체의 상당한 부분은 극도로 낮은 수준으로 발현되었고, 일부 변이체는, 도 2b에 도시된 P-0318(IL-2 D20I/N88I Fc 융합)의 SEC 크로마토그램에 의해 예시화되는, 상당히 더 응집-경향이 있었다. 이것은 치료제의 제조 및 저장에 대해 문제가 있다.

IL-2 변이체 Fc 융합체의 발현 프로파일 및 응집 경향은 상이한 돌연변이 부위를 갖는 작제물 또는 동일한 돌연변이 부위를 공유하지만 상이한 잔기 치환을 공유하는 돌연변이체 중에서 상당히 다르다는 것으로 관찰되었다. 이러한 관찰은 P-0317(IL-2 D20I/N88R Fc 융합) 및 P-0318(IL-2 D20I/N88I Fc 융합)에 의해 예시화된다. 두 변이체 융합은 잔기 20 및 88에서 동일한 돌연변이 부위를 공유하고 하나의 아미노산에 의해서만 다르고 유사한 낮은 수준에서 발현되었다. 도 2b에서 알 수 있는 바와 같이, P-0318은 매우 응집하는 경향이 있고 65%의 고분자량 종을 함유하며, 이는 크로마토그램에서 마이너 종(minor species)으로서 예상된 피크를 만들고 화살표로 마킹되었다. 대조적으로, P-0317은 7.5%의 응집체를 갖는 상대적으로 순수하다(도 2c). N88R 돌연변이가 생성된 융합 단백질의 응집 경향을 감소시킬 수 있다는 것이 추론될 것이다. 그러나, N88R 단일 돌연변이, 또는 D20T/N88R 이중 돌연변이를 갖는 IL-2인, 생성된 융합 단백질인, P-0254 및 P-0324 각각은, 30-40%의 응집체를 갖는 응집하는 경향이 있었다. 따라서, 단백질 안정성에 대한 개별 아미노산 치환의 기여는 맥락 의존적인 것으로 보인다.

IL-2로의 아미노산 치환이 일반적으로 덜 안정적인 단백질을 초래한다는 사실은 단백질 안정성에 대한 상이한 잔기 치환의 예측할 수 없는 기여에 의해 더욱 복잡해졌다. 따라서 개선된 안정성, 더 높은 발현 수준 및 더 낮은 응집 경향을 포함하여 단백질 발달성을 보편적으로 향상시킬 수 있는 잔기 치환(들)을 찾는 것이 매우 바람직하다.

위치 125에서의 아미노산 치환은 원래 잔기가

상호작용에 필수적인 Q126에 바로 인접해 있음에 따라 원래 조정된 IL-2 선택성을 목표로 하였다. 자연 발생 IL-2는 위치 125에서 쌍을 이루지 않은 시스테인을 함유하며, 이는 프로류킨(Proleukin)에서 세린에 의해 대체되었다. 위치 125에서 알라닌 치환을 함유하는 IL-2는 또한 널리 사용된다. 위치 125에서 시스테인에 대한 세린 또는 알라닌의 치환이 완전한 생물학적 활성을 유지함에 따라, Glu, Lys, Try, His, 및 Iso를 포함하는 부피가 큰 하전된 또는 소수성 잔기는 변경된 생물학적 활성을 달성하기 위해 Q126과

의 상호작용을 방해하는 것을 목표로 하도록 위치 125에 도입되었다. 융합 분자를 제외한 모든 생성된 융합 분자는 너무 낮은 수준으로 발현되어 특성화될 수 없는 Iso125(P-0531)를 함유한다. 그것의 S125 대응물(P-0250)과 비교할 때, P-0531은 크게 감소된 응집 경향(0.7% 대 25.7% 응집)으로 상당히 더 높은 수준(29.5 mg/L 대 3.1 mg/L 역가)에서 발현되었다. 현상성(developability), 특히 생성물 순도에 대한 인상적인 개선은 우리를 자극하여 위치 125에서 이소류신 치환에 의한 그러한 향상이 상이한 돌연변이 맥락에서 개괄될 수 있는지를 평가하게 하였다.

따라서, S25I 치환은 다수의 IL-2 변이체 Fc 융합 분자에 도입되었다. IL-2에서 아미노산 위치 125(125l)에 Ile 치환을 보유하는 작제물은 동일한 벡터를 사용하여 그리고 그들의 Ser-125 대응물과 동일한 배양 조건에서 발현되었고 MabSelectSure를 사용하여 정제되었다. 예시적 분자의 응집%에서 SEC 크로마토그래피에 의해 평가되는 mg/L의 발현 수준 및 순도가 표 7에 요약된다. 표 7의 동일한 행(row)의 2개의 분자는 동일한 다른 아미노산 치환(들)을 공유하고 세린 또는 이소류신을 갖는 잔기 125에서만 다르다. P-0531(서열번호: 68)인, 야생형 IL-2 Fc 융합의 125I 등가물의 SEC 프로파일은 도 2d에 더 예시되었다. 위치 125에서 이소류신 치환은 4 내지 11배 향상된 발현 수준 및 균일하게 낮은 응집 경향을 야기하였다는 점이 표 7로부터 명백하다.

[표 7]

S125I 치환은 다양한 IL-2 융합 단백질의 응집을 감소시키고 발현을 증가시켰다

위치 125에서의 이소류신은 IL-2 융합 작제물의 발달성에서 보편적인 개선을 야기했다는 것이 본 발명으로부터 명백하다. 이러한 발견은 미미하게 안정한 야생형 IL-2를 변경하는 것이 전형적으로 심지어 덜 무른 돌연변이 단백질을 초래한다는 사실로 인해 요망되는 생물학적 특성을 위한 IL-2의 조작으로서 특히 가치가 있다. IL-2 조작의 고유한 문제는 위치 125번에서 이소류신으로 단일 아미노산 치환에 의해 완화될 수 있다.

실시예 3

효과기 T 세포 및 NK 세포를 위한 개선된 선택성에 대한 IL-2 작제물의 설계

본 발명의 주요 양태는 암 요법을 위해

를 발현하는 세포에 비해 (IL-2Rα가 아닌)

를 발현하는 세포에 대해 야생형 IL-2에 대한 IL-2 선택성을 개선하는 것이다. 본 발명자에 의해 사용되는 하나의 접근법은 사이토카인 성분으로 CD25-파괴 돌연변이의 도입을 통해 고도로 선택적인 IL-2-Fc-융합 단백질을 생성하는 것이다. CD25-파괴 돌연변이의 선택은 IL-2/IL-2R 공결정 구조(PDB 코드 2B51)의 검사에 기초하였다. R38, T41, F42, F44, E62, P65, E68, 및 Y107을 포함하는, IL-2 수용체 α 서브유닛과의 계면에서 한 개 또는 두 개의 관련 잔기에 대한 다중 아미노산 치환은 IL-2Rα에 대한 결합을 감소 또는 폐기시키는 것을 목표로 도입되었다. 이러한 작제물은 또한 상당히 개선된 발달성을 위한 S125I 돌연변이를 함유하였다. 추가적으로,

폐 내피 세포에 대한 결합 시 IL-2 변이체의 손상은 내피 세포 손상을 방지하고 VLS를 상당히 감소시킬 것으로 예상된다. 더욱이, CD25 결합의 손상은 또한 CD25 항원 싱크를 감소시키고

-발현 세포에 대한 사이토카인 점유를 풍부하게 하고 결과적으로 생체내 반응 및 종양 살상 효능을 증가시킬 것으로 예상된다.

표 3은 Fc 동종이량체 또는 Fc 이종이량체에 대한 C-말단 융합으로서 발현되는 IL-2 뮤테인의 패널을 요약한다. IL-2 수용체 α 서브유닛과의 계면에서 잔기에 대한 한 개 또는 두 개의 아미노산 치환을 보유하는 IL-2 변이체(서열번호: 31-66)의 패널은 "GGGSGGGS" 링커(서열번호: 18)를 통해 2가 IL-2 융합(서열번호: 69-95)으로서 Fc 동종이량체 또는 1가 IL-2 융합(서열번호: 96-106)으로서 Fc 이종이량체의 C-말단에 융합되었다.

실시예 4

수용체 서브유닛 α에 대한 결합 시 IL-2Rα와의 계면에 도입되는 IL-2 돌연변이의 영향

IL-2 뮤테인의 패널은 Fc 이종이량체의 Fc 동종이량체에 C-말단 융합으로서 발현되었고 효소-링크 면역흡착 검정(ELISA)에서 IL-2Rα에 대한 결합에 대해 스크리닝되었다. 요약하면,

(서열번호: 5)는 0.1 ㎍/웰로 Nunc Maxisorp 96-웰 마이크로플레이트(microplate)의 웰 상으로 코팅되었다. 4℃에서 밤새 인큐베이션하고 슈퍼블록(ThermoFisher)으로 차단한 후, 100 nM에서 시작하는 IL-2 Fc 융합 단백질의 3배 연속 희석액이 100 ㎕/웰로 각각의 웰에 첨가되었다. 실온에서 1시간 인큐베이션한 후, 100 ㎕/웰의 염소 항-인간 IgG Fc-FIRP(희석액으로 1:5000 희석됨)는 각각의 웰에 첨가되었고 1 시간 동안 실온에서 인큐베이션되었다. 웰은 각각의 단계 다음에 PBS/0.05% Tween-20으로 3회 철저히 흡인 및 세척되었다. 웰은 완전히 흡인되었고 각각의 단계 후에 PBS/0.05% Tween-20으로 3회 세척되었다. 최종적으로, 100 ㎕ TMB 기질(substrate)이 각각의 웰에 첨가되었으며; 플레이트는 암실에서 10분 동안 실온에서 발달되었고, 100 ㎕/웰의 정지 용액(2N 황산, Ricca Chemical)이 첨가되었다. 흡광도는 450 nm에서 결정되었고 곡선은 Prism 소프트웨어(GraphPad)를 사용하여 피팅되었다.

먼저, 야생형 IL-2 Fc 융합 단백질의 S125I 등가물인 P-0531 및 P-0689가 CD25 결합에 대해 시험되었다. P-0531은 Fc 동종이량체(서열번호: 68)에 융합되는 2가 IL-2 모이어티를 포함하고, P-0689(서열번호: 107 + 10)는 P-0531의 1가 대응물이다. 도 3에 예시된 바와 같이, P-0531과 P-0689 사이의 결합 EC₅₀의 2배 변화(각각, 0.21 nM 및 0.51 nM)는 IL-2 원자가 차이와 일치하였다.

모든 표적화된 IL-2 잔기인, R38, T41, F42, F44, E62, P65, E68, 및 Y107이 IL-2Rα와의 계면에 있고 다수의 IL-2Rα 잔기와 수소 결합/염다리 또는 소수성 상호작용을 형성하므로(Mathias Rickert 등. (2005) Science 308, 1477-80), 이러한 부위에서의 아미노산 치환은 IL-2Rα와의 상호작용을 파괴하고 IL-2Rα에 대한 감소되거나 폐기된 결합을 갖는 IL-2 변이체를 야기할 것으로 예상된다고 추론되었다. 그러나, 결합 데이터는 IL-2Rα에 대한 상이한 IL-2 돌연변이의 영향이 극적으로 변하였다는 것을 드러냈다.

도 4에 예시된 바와 같이, (도 4a에서 P-0603, P-0604, 및 P-0605에 의해 예시화되는) T41 또는 (도 4b에서 P-0610, P-0611, 및 P-0612에 의해 예시화되는) Y107 위치에서 다양한 치환을 보유하는 IL-2 동종이량체 Fc 융합은 IL-2Rα에 대한 결합 강도를 완전히 유지하였다. 데이터는 잔기 T41 및 Y107이 IL-2Rα의 계면에 있고 다양한 IL-2Rα 잔기와 상호작용함에도 불구하고 기능적으로 중요하지 않을 가능성이 있다고 시사하였다.

잔기 R38은 중요한 수소 결합에 관여하는, IL-2/IL-2Rα 상호작용에 대한 활동적인 핫 스팟으로서 연루되었으며; 다수의 공학적 노력, 예를 들어, Keith M. Heaton 등의, (1993) Cancer Res. 53. 2597-2602, 및 Peisheng Hu 등의, (2003) Blood 101: 4853-4861은 R38에서의 다양한 치환이 IL-2Rα와의 파괴된 상호작용을 야기했다는 것을 보여주었다. 결과적으로, P-0602(R38A), P-0614(R38F), 및 P-0615 (R38G)에 의해 예시화되는 다양한 돌연변이가 IL-2Rα에 대한 결합 강도에서 전혀 또는 단지 최소 감소(최대 3배)를 야기했다는 것을 관찰하는 것은 다소 예상되지 못한 것이었다. 결합 데이터는 도 4c 내지 도 4d에 예시된다.

마찬가지로, 잔기 E68은 IL-2Rα 계면 잔기와의 다중 수소 결합에 관여하지만, E68A(P-0628), E68F(P-0629), E68H(P-0630), 및 E68L(P-0631)에 의해 예시화되는, 다양한 아미노산 특성 중 E68에서의 치환 중 어느 것도 IL-2Rα에 대한 결합에서 임의의 감소를 야기하지 않았다. 흥미롭게도, P-0629 및 P-0630은 각각, 3배 및 14배만큼 IL-2Rα에 대한 향상된 결합을 실제로 입증하였다(도 5).

요약하면, IL-2 잔기인, T41, R38, E68, 및 Y107의 대체는 일반적으로 IL-2Rα상호작용을 파괴하지 않았고 생성된 IL-2 동종이량체 Fc 융합은 IL-2Rα에 대한 완전한 또는 완전에 가까운 결합을 유지하였다. P-0531의 뮤테인에 정규화되는 다양한 IL-2 뮤테인의 ELISA 결합 EC₅₀은 표 8에 요약된다.

[표 8]

대체를 갖는 IL-2 잔기는 일반적으로 IL-2Rα 상호작용을 파괴하지 않았고 생성된 IL-2 변이체가 IL-2Rα에 대한 완전한 결합을 유지하였다.

대조적으로, P-0624(E62A), P-0625(E62F), P-0626(E62H), 및 P-0627(E62L)에 의해 예시화되는 잔기 E62에서의 아미노산 치환은 모두 IL-2Rα에 대한 감소된 결합을 야기하였으며, E62가 실제로 IL-2/IL-2Rα 상호작용에 대해 활동적인 핫 스팟이라는 것을 시사한다. 도 6에 입증된 바와 같이, E62H 및 E62L 치환이 IL-2Rα에 대한 결합에서 보통의 2-3배 감소만을 산출한 반면, E62A 및 E62F 돌연변이는 이러한 IL-2Rα 서브유닛과의 상호작용에서 급격한 파괴를 생성하여, IL-2Rα에 대한 결합에서 각각 60배 및 150배 감소를 야기한 것으로 보인다. 추가적으로, IL-2 F42A 돌연변이(P-0613)는 IL-2Rα에 대한 결합에서 15배 감소로, 도 8a에서 입증된, 수용체 α와의 상호작용을 파괴하는 것으로 문헌에 잘 기록되었다.

요약하면, F42 및 E62는 일반적으로 IL-2Rα 상호작용을 파괴하는 대체를 갖는 IL-2 잔기이고 생성된 IL-2 변이체는 IL-2Rα에 대한 감소된 결합을 나타냈다. 다양한 IL-2 뮤테인의 ELISA 결합 EC₅₀은 P-0531의 뮤테인에 정규화되었고 표 9에 도시되었다.

[표 9]

대체를 갖는 IL-2 잔기는 일반적으로 IL-2Rα 상호작용을 파괴하였고 생성된 IL-2 변이체는 IL-2Rα에 대한 결합을 감소시켰다

실시예 5

잔기 P65에서의 아미노산 치환은 수용체 서브유닛 α에 대한 결합에 대해 예상치 못한 다양한 영향을 산출하였다

IL-2 잔기 P65는 R36 및 L42를 포함하는, 한 쌍의 중요한 IL-2Rα 계면 잔기와 반데르발스 상호작용을 체결하지만, IL-2Rα와 염다리 또는 수소 결합을 형성하지 않는다. 따라서, P65 치환은 이러한 IL-2R 서브유닛과의 상호작용에서 보통의 파괴만을 야기하고 IL-2Rα에 대한 결합 상에 가벼운 영향을 야기할 가능성이 있다고 추측되었다. 그러나, IL-2Rα 상호작용에 대한 P65 치환의 영향은 추정에 대해 현저하게 대조적이었고 IL-2Rα에 대한 결합을 완전히 유지/향상, 감소, 또는 완전히 폐기시키는 것을 포함하여 예상치 못하게 다양하였다.

P65G, P65E, P65A, P65H, P65N, P65Q, P65R, P65K에 의해 예시화되는 P65에서의 다중 치환이 도입되었고, 생성된 IL-2 뮤테인은 Fc 동종이량체 또는 Fc 이종이량체에 C-말단 융합으로서 발현되었다. 이러한 IL-2 뮤테인 패널은 CD25에 대한 ELISA 결합으로 나중에 스크리닝되었다. 결합 데이터는 도 7에 예시되었고, 각각의 작제물의 원자가와 일치하는 P-0531 또는 P-0689의 뮤테인에 정규화되는 IL-2 뮤테인의 ELISA 결합 EC₅₀은 표 10에 요약되었다.

[표 10]

P65의 치환은 IL-2Rα 결합 상에 예상치 못한 다양한 영향을 야기하였다

도 7a 및 도 7b에 예시된 바와 같이, P65G(P-0608), P65E(P-0633), P65A(P-0706) 돌연변이는 IL-2Rα 서브유닛과의 상호작용에 어떠한 파괴도 생성하지 않을 것으로 보였으며; 오히려, IL-2Rα에 대한 결합 강도는 그들의 야생형 대응물과 비교하여 각각, 18, 10, 및, 10배만큼 향상되었다.

IL-2 뮤테인 Fc 융합체인, P-0634, P-0708, 및 P-0709의 다른 패널은 IL-2Rα 서브유닛과의 IL-2 상호작용에서 상당한 파괴를 야기한 P65 돌연변이를 보유한다. 도 7c에 예시되고 표 9에 요약된 바와 같이, P65N(P-0708)은 IL-2Rα에 대한 결합에서 보통의 8.6배 감소를 야기한 반면, P65H(P-0634) 및 P65H(P-0709) 치환은 보다 현저한 영향을 야기하였으며, 이는 각각, IL-2Rα결합에서 23배 및 43배수 감소에 의해 입증되었다.

IL-2 P65 치환의 더 다른 범주인, P65R 및 P65K는 IL-2 및 IL-2Rα 상호작용에서 급격한 파괴를 일으키고 IL-2Rα에 대한 P-0635, P-0704, 및 P-0707의 결합을 폐기하는 것으로 보였다(도 7d). P-0635 및 P-0704는 P65R 치환을 포함하는 IL-2 Fc 융합의 2가 및 1가 대응물이고, P-0707은 P65K 아미노산 대체를 보유한다. 도 7d는 모든 3개의 IL-2 뮤테인 Fc 융합이 결합을 폐기하도록 입증된 트리플 CD25-파괴 돌연변이 F42A/Y45A/L72G를 보유하는, 벤치마크 분자에 비교가능한, 100 nM만큼 높은 IL-2Rα 농도에서 최소 신호를 나타냈다는 것을 예시하였다(Christian Klein 등의, Oncolmmunology (2017), 6: 3, e1277306).

도 7a 내지 도7c 그리고 표 9 및 표 10에 요약된 바와 같이, 잔기 P65의 치환은 IL-2Rα결합 상에 예상치 못한 다양한 영향을 야기하였다. 중요하게는, 그것의 치환은 IL-2Rα에 대한 생성된 IL-2 변이체의 결합을 완전히 유지/향상, 감소, 또는 완전히 폐기시킬 수 있다. 당업자에 의해 이해되는 바와 같이, 단일 아미노산에 대한 변화로부터 기인하는 이러한 수준의 활성 변화는 구조-기반 돌연변이유발 접근법에 의해 예측될 수 없었다. IL-2Rα 결합의 완전한 폐기는, P65에 대한 돌연변이가 반데르발스(Van'der Waal) 상호작용 표면의 제한된 일부만을 변경하였음에 따라, 종래 기술에 의해 예상되거나 교시되지 않았다.

실시예 6

수용체 서브유닛 α에 대한 IL-2 결합을 조절하기 위한 아미노산 치환 조합

당업자에 의해 이해되는 바와 같이, 본 발명에 개시되는 돌연변이는 수용체 서브유닛 α에 대한 IL-2 결합을 최적으로 조절하기 위해 임의의 방식으로 선택적으로 및 독립적으로 결합될 수 있다. 여기서, 우리는 2개의 IL-2Rα파괴 아미노산 치환을 결합함으로써 IL-2Rα에 대한 결합을 불가능하게 하는 IL-2 화합물의 설계를 입증한다.

P-0613은 IL-2Rα에 대한 결합에서 15배 감소를 야기한 F42A 돌연변이를 함유하고(도 8a), P-0625 및 P-0634는 E62F를 보유하고 P65H 치환은 각각, IL-2Rα에 대한 150배 및 23배 감소된 결합을 가졌다. P-0702에서 F42A 및 E62F 이중 돌연변이 및 P-0703에서 F42A 및 P65H 이중 돌연변이의 조합은 둘 다 IL-2Rα에 대한 폐기된 결합을 야기하였다(도 8b 및 도 8c). 예상된 바와 같이, F42/E62A 이중 아미노산 변화를 포함하는 P-0766 및 F42A/E62H 이중 치환의 P-0767은 IL-2Rα에 결합할 수 없었다(데이터 미도시).

IL-2Rα에 대한 폐기된 결합을 갖는 IL-2 뮤테인을 설계하는 효과적인 방법의 역할을 하는 것에 더하여, 아미노산 조합은 또한 결합 활성의 수준을 조절하기 위해 사용될 수 있다. 여기에 예시되는 일 예는 P-0765이며, 이는 하나의 CD25-파괴 돌연변이 F42A 및 하나의 CD25-증대 치환인 P65A를 결합시키고, 그것의 야생형 대응물 P-0689와 비교하여 IL-2Rα에 대한 보통의 6.8배 감소 결합 강도가 있었으며(데이터 미도시), 이는 개별 돌연변이의 조합과 일치하였다. P-0689의 뮤테인 정규화되는 IL-2 뮤테인의 ELISA 결합 EC₅₀은 표 11에 요약되었다.

[표 11]

IL-2Rα에 대한 결합 상의 CD25 계면에서의 아미노산 치환 조합의 영향

요약하면, 아미노산 치환 조합은 수용체 서브유닛 α에 대한 IL-2 결합을 조절하는 다재다능한 접근법이다. 그것은 2개의 CD25-파괴 잔기를 조합함으로써 IL-2Rα 결합의 완전한 폐기를 달성할 수 있거나, 그것은 상이한 약화(attenuation) 수준으로 IL-2Rα 결합을 조절하는 역할을 할 수 있다.

실시예 7

IL-2Rα결합 강도의 조절은 생체외 기능 검정에서 자극 Treg 세포의 IL-2 효능과 상관된다

IL-2 변이체 Fc 융합 단백질의 패널은 야생형 융합 P-0531 및 벤치마크 분자 P-0551(서열번호: 95)와 비교하여 CD4+ Treg 세포에서 STAT5 인산화를 차등적으로 자극하는 그들의 능력에 대해 그 뒤에 조사되었다. STAT5는 막관통 IL-2 수용체에 대한 IL-2 결합 시에 다운스트림 신호전달 캐스케이드에 수반되는 것으로 알려져 있다. 림프구 하위집단에서의 STAT5의 인산화는 신선한 인간 말초 혈액 단핵 세포 (peripheral blood mononuclear cell; PBMC)를 사용하여 측정되었고 포크헤드 전사 인자 FOXP3은 FACS 분석에서 Treg 집단을 식별하기 위해 사용되었다.

정제된 PBMC는 1시간 동안 4℃의 무혈청 MACS 완충액에서 결핍되었다. 그 다음, 2×10⁵PBMC는 37℃에서 30분 동안 시험 화합물의 연속 희석액으로 처리되었다. 세포는 30분 동안 1X Foxp3 고정/침투 작업 용액과 함께 인큐베이션하고 1X 투과 완충액으로 세척함으로써 Foxp3/전사 인자 염색 완충액 세트(EBIO)로 고정 및투과되었다. 세포는 추가적으로 Cytofix 완충액으로 고정되었고 Perm Buffer III(BD Biosciences)로 투과되었고 그 다음 세척되었다. 인간 TruStain FcX(1:50 희석)를 첨가함으로써 Fc 수용체를 차단한 후, 세포는 실온에서 45분 동안 제조업체에 의해 권장되는 농도에서 항-CD25-PE, 항-FOXP3-APC, 항-pSTAT5-FITC, 및 항-CD4-PerCP-Cy5.5 항체의 혼합물로 염색되었다. 세포는 원심분리에 의해 수집되었고, 세척되었고, FACS 완충액에서 재현탁되었고, 유동 세포측정에 의해 분석되었다. 유동 세포측정 데이터는 Treg 세포 서브세트에 대해 CD4+/Foxp3+/CD25^high 그룹으로 게이팅되었다. 데이터는 게이팅된 집단에서 pStat5 양성 세포의 백분율로서 표현된다.

이러한 IL-2 변이체 Fc 융합 패널은 IL-2Rα에 대한 향상된 결합(P-0608), 감소된 결합(P-0626, P-0634, 및 P-0624), 또는 폐기된 결합(P-0635)을 렌더링하는 아미노산 치환을 함유한다. 또한, P-0626, P-0634, 및 P-0624는 IL-2Rα 결합 강도에서 상이한 수준의 약화를 표시하였으며; 결합의 감소는 각각, P-0626, P-0634, 및 P-0624에 대해 2.6, 23, 및 60배 이었다. IL-2Rα 결합에서 조절의 경향 및 수준은 CD4+ Treg 세포에서 STAT5 인산화를 자극할 시에 다양한 IL-2 변이체 Fc 융합의 차동 효능(differential potency)에 반영되었다(도 9). IL-2Rα에 대한 향상된 결합을 갖는 P-0608은 상대적으로 Treg STAT5 인산화를 자극할 시에 P-0531보다 더 높은 효능의 경향을 표시하였다. P-0626, P-0624, 및 P-0634 모두는 그들의 더 낮은 IL-2Rα 결합 강도와 일치하는 감소된 pSTAT5 효능을 보였다. 비록 더 낮을지라도 IL-2Rα에 대한 그들의 유지된 결합은 Treg가 여전히 IL-2Rα에 대한 결합이 폐기된 P-0635 및 벤치마크 P-0551보다 더 강력하게 활성화된다는 것을 야기하였다. P-0635 및 P-0551은 Treg 세포에서 pSTAT5를 유도할 시 비교가능한 5-로그 우측-시프트의 효능을 갖고, 이러한 낮은 수준의 Treg 신호전달은 Treg 세포 상에 발현되는

의 활성화에서 기인할 가능성이 있다. 결과적으로, 돌연변이는 CD8+ T 및 NK 세포가 또한 활성화된 때의 농도에서 Treg를 활성화시키는 원하는 특성을 달성할 것으로 예상된다. IL-2Rα 결합의 완전한 폐기가 Treg 효능에서 5 로그 이상의 감소를 야기했다는 것을 관할하는 것은 주목할 만한 것이다(도 9).

실시예 8

와의 상호작용에 대한 IL-2Rα계면에 도입되는 IL-2 돌연변이의 영향

IL-2Rα 계면에 도입되는 IL-2 돌연변이가

와의 상호작용에 영향을 미치는지 여부를 조사하기 위해,

에 대한 결합이 실시예 7의 IL-2 변이체 Fc 융합 단백질의 동일한 패널에 대해 ELISA에서 평가되었다.

간략하게, Fc 홀 사슬(서열번호: 10)의 N-말단에 융합되는 IL-2Rβ ECD(서열번호: 109) 및 Fc 노브 사슬(서열번호: 9)의 N-말단에 융합되는

ECD(서열번호: 110)를 포함하는 재조합

이종이량체는 Nunc Maxisorp 96-웰 마이크로플레이트의 웰 상에 2 ㎍/웰로 코팅되었다. 4℃에서 밤새 인큐베이션하고 1% BSA로 차단한 후에, 10 nM에서 시작하는 IL-2 Fc 융합 단백질의 3배 연속 희석액이 100 ㎕/웰에서 각각의 웰에 첨가되었다. 실온에서 1시간 인큐베이션 한 후, 0.5 ㎍/ml에서의 비오틴 마우스 항-인간 IL-2 클론 B33-2(BD Biosiences)의 100 ㎕/웰이 각각의 웰에 첨가되었고 1 시간 동안 실온에서 인큐베이션되었다. 그 후에, 100 ㎕/웰의 스트렙타비딘-HRP(희석액에서 1:5000 희석됨)가 각각의 웰에 첨가되었고 40분 동안 실온에서 인큐베이션되었다. 웰은 완전히 흡인되었고 각각의 단계 후에 PBS/0.05% Tween-20으로 3회 세척되었다. 마지막으로, 100 ㎕ TMB 기질이 각각의 셀에 첨가되었으며; 플레이트는 암실에서 10분 동안 실온에서 발달되었고, 100 ㎕/웰의 정지 용액(2N 황산, Ricca Chemical)이 첨가되었다. 흡광도는 450 nm에서 결정되었고 곡선은 Prism 소프트웨어 (GraphPad)를 사용하여 피팅되었다.

도 10에 도시된 바와 같이, 야생형 IL-2 융합 P-0531과 비교하여, IL-2Rα에 대한 향상된, 감소된, 또는 폐기된 결합을 렌더링하는 돌연변이를 포함하는, 예시적 IL-2 변이체 Fc 융합 모두는

에 대한 비-변경된 결합을 표시하였다. 데이터는 IL-2Rα 계면에 도입되는 시험된 IL-2 돌연변이가 실제로 CD25 결합만을 방해하고

와의 상호작용에 영향을 미치지 않는다는 것을 확인하였다.

예시적 IL-2 변이체 Fc 융합 단백질의 패널은 유동 세포측정에 의해 인간 CD8+ T 세포 및 NK 세포에 대한 Ki67 발현의 유도를 위해 추가로 특성화되었다. 갓 단리된 NK 세포 및 CD8+ T 세포는 없거나 매우 낮은 CD25 발현을 발현시키고 IL-2R 신호전달은 중간 친화도 수용체 서브유닛

를 통해 주로 매개된다. Ki67은 세포 증식을 위한 마커로서 역할을 하는 핵 단백질이다.

간략하게, 인간 PBMC는 건강한 공여체의 버피 코트로부터 Ficoll-Flypaque 원심분리에 의해 단리되었다. 정제된 인간 PBMC는 IL-2 변이체 Fc 융합 화합물의 연속 희석액으로 처리되었고 5일 동안 37℃에서 인큐베이션되었다. 5일째, 세포는 FACS 완충액(1% FBS/PBS)으로 한 번 세척되었고 Fc-블로커 및 표면 마커 항체, 항-인간 CD56-FITC, 항-인간 CD8-APC로 먼저 염색되었다. 30분 인큐베이션 및 세척 후에, 세포 펠렛은 200 ㎕/웰의 1X Foxp3 고정 및 투과 작업 용액에 의해 완전히 재현탁되었고 암실에서 30분 동안 실온에서 인큐베이션되었다. 원심분리 후, 200 ㎕의 1X 투과 완충액이 또 다른 세척을 위해 각각의 웰에 첨가되었다. 세포 펠렛은 항-인간 Ki67-PE(1:25 희석)으로 투과 완충액에서 재현탁된다. 실온에서 30분 배양 후, 세포는 수집 및 세척되었고, FACS 완충액에서 재현탁되었고, 유동 세포측정에 의해 분석되었다. 데이터는 게이팅된 집단에서 Ki-67 양성 세포의 %로서 표현되었다.

P-0531 및 P-0551과 비교하여 IL-2 변이체 Fc 융합 단백질에 반응하는 CD8+ T 세포 및 NK 세포에 대한 Ki-67 발현의 용량-의존적 증가는 도 11a 및 도 11b에 예시된다. CD25를 방해하는 돌연변이의 도입은 야생형 IL-2 2가 융합 단백질인 P-0531과 비교가능한 효능을 갖는 Fc 융합 작제물을 야기하였다.

또한, P-0531 및 P-0635의 1가 대응물인 P-0689 및 P-0704는 각각, 인간 CD8+ T 세포에 대한 Ki-67 발현의 유도를 위해 특성화되었다. 도 11c에 예시된 바와 같이, IL-2Rα에 대한 결합을 폐기한 P65R 돌연변이를 보유하는 P-0689(야생형 IL-2) 및 P-0704는 CD8+ T 세포에 대한 Ki-67 발현의 동일하게 강력한 용량-의존적 증가를 나타냈다. 결합된 생체외 기능 데이터는 IL-2Rα 계면에 도입되는 IL-2 돌연변이가

와의 상호작용에 최소의 영향을 미치거나 영향을 미치지 않는다는 것을 추가로 확인하였다. 더욱이, P-0531와 P-0689 사이 및 P-0635와 P-0704 사이의 효능 변화는 그들의 각각의 IL-2 원자가 차이와 일치하였다.

실시예 9

전체 효능 약화를 위해 IL-2Rα에 대한 감소된 결합을 갖는 IL-2 변이체에 대한 IL-2Rβ 또는

파괴 치환의 도입

완전 IL-2 효능제는 경로 및 바람직하지 않은 "온-타겟" 및 "오프-타겟" 독성의 과도한 활성화를 야기할 수 있었다. 그것은 특히

선택적 완전 효능제에 대해 사실일 수 있었으며; 향상된 선택성 및 감소된 CD25 싱크로 인해,

선택적 완전 효능제는 CD4+, CD8+ 효과기 T 및 NK 세포의 극적인 생체내 반응을 강화할 수 있다. 결과적으로, 급성 독성은 현저한 체중 감소로 관찰될 수 있다. 게다가, 과자극 유도 세포 고갈 또는 사멸은 반복 투여 다음에 이어지는 생체내 반응의 상실(loss)을 야기할 수 있다. 더 낮은 전반적인 효능은 경로 과도한 활성화를 방지하고 원하지 않은 표적 싱크를 감소시킬 수 있으며; 결과적으로, 잠재적으로 독성을 감소시키고 약동학 및 약력학을 개선할 수 있다는 것이 추론되었다. 따라서, 전반적인 효능을 약화시키는

-조절 치환은 최적의 활성을 위해 IL-2Rα에 대한 감소/폐기된 결합을 갖는 IL-2 변이체에 혼입된다.

에 대한 약화된 결합 친화도는 또한 야생형 IL-2보다 느리지만 계속적인 수용체 활성화 및 지속적인 약력학을 초래하는 수용체-매개 IL-2 내재화를 감소시킬 것이다.

또는

-파괴 돌연변이의 선택은 IL-2/IL-2R 공결정 구조 (PDB 코드 2B51)의 검사에 기초하였다. IL-2Rβ 또는

수용체 서브유닛과 직접 접촉하는 계면에서 또는 계면 근처에서 잔기의 대체는

에 대한 감소된 결합을 야기하고 따라서 경로를 활성화할 시에 전반적인 효능을 조절할 수 있다. 예를 들어, D20은 IL-2Rβ 계면에서 수용체 서브유닛 측쇄에 대한 수소 결합의 광범위한 네트워크에 관여된다. 유사하게, N88은 수용체 사슬과 임계(critical) 수소 결합에 관여하는, IL-2/IL-2Rβ 상호작용을 위한 활동적인 핫 스팟이다. Q126은

상호작용에 필수적이며, 그러나, 에너지 핫 스팟에서 아미노산 치환은 차선의(suboptimal) 효능을 렌더링하는 실질적으로 감소된 활성을 야기할 수 있었으며, 이는 도 13a의 D20 위치(D20E, D20T, D20N, D20Q, D20S)에서 다양한 돌연변이에 의해 예시화되었다. 모든 돌연변이는 P-0250(SEQ ID: 67)에서 IL-2에 도입되었고 IL-2 변이체 Fc 융합 단백질로서 발현되었다. 도 13a에 도시된 바와 같이, D20에서 돌연변이의 대부분은

서브유닛만을 발현하는, CD4+ Tconv 세포에서 pSTAT5 발현을 자극할 시에 주로 감소된 또는 폐기된 활성을 야기하였다. 유사하게, 위치 N88에서의 돌연변이는 또한 CD4+ Tconv 세포의 활성화에서 대부분 폐기된 활성을 야기하였다(데이터 미도시).

따라서, 아미노산 치환은

와 반데르발스 상호작용만을 일으키는 잔기인 위치 L19에 도입되었고, 생성된 돌연변이는 IL-2 기능적 활성을 폐기하지 않고, 단지 이를 조절한다. 도 13b 및 도 13c는 위치 19에서 다양한 돌연변이를 보유하는 IL-2 변이체가 CD4+ Tconv 세포 상에 STAT5 인산화를 유도할 시에 스펙트럼 수준의 효능을 입증하였다는 것을 도시한다. 야생형과 비교하여, L19Y, L19R, L19Q 돌연변이는 경미한 활성 감소를 야기한 반면, L19N 및 L19H는 중간 정도로 활성을 감소시켰다. L19D의 경우, 그러한 활성은 상당히 손상되었다. 위치 L19를 돌연변이시키는 것에 의한 상이한 수준의 효능 감소는 최적 효능을 위한 활성 미세 조정을 가능하게 하여 독성을 감소시키고 생체내의 약동학 및 약역학을 개선한다.

또한,

상호작용에 필수적인 잔기에 Q126에서 아미노산 변화를 보유하는 IL-2 변이체가 유사하게 만들어졌다. CD4+ Tconv 세포 상에 STAT5 인산화를 유도할 시에 IL-2 Q126E Fc 융합 단백질의 기능적 활성은 도 13d에서 입증된다. 그 야생형 대응물과 비교하여, Q126E는 보통의 활성 감소를 야기하였다.

추가적으로, IL-2 N-말단에서의 아미노산이 주로

와의 상호작용에 수반됨에 따라, N-말단 아미노산 결실은 전반적인 효능을 조절하는 상이한 접근법으로서 고려되었다. 결과적으로, L19H/S125I/Q126E를 보유하는 IL-2 변이체 상의 N-말단 결실 돌연변이(5, 7, 9, 또는 11-아미노산 N-말단 결실) 구조가 작제되었고 인간 PBMC 검정에서 분석되었다. 모체 분자인 IL-2 L19H/S125I/Q126E 변이체가 IL-2Rα에 대한 완전 결합을 유지하지만,

에 대한 감소된 결합을 유지함에 따라, 그것은 단지 Treg 세포에서 신뢰가능하게 분석될 수 있으며, 이는 여전히 전반적인 효능에 대한 돌연변이의 영향을 해부할 수 있다. 11-aa 결실을 포함하는 Fc IL-2 변이체는 특성화를 위한 충분한 물질을 산출하지 않았다. 도 13e에 도시된 바와 같이, 5- 및 7-aa 결실은 효능을 완전히 유지한 반면, 9-aa 결실은 25배 활성 손상을 야기하였다(18 pM 대 0.74 pM). 따라서, 상이한 효능의 다양한 IL-2 변이체는 N-말단에서 7, 8, 9, 또는 10개의 아미노산의 아미노산 결실로 원하는 활성 프로파일에 대해 추가로 조정될 수 있었을 것으로 예상된다.

IL-2Rβ 파괴 돌연변이 L19H, L19Q, L19Y 및

파괴 돌연변이 Q126E는 P-0704에 도입되어 P-0731, P-0759, P-0761 및 P-0732 각각을 산출하였다. P-0704는 IL-2Rα에 대한 결합의 완전 상실을 렌더링한 P65R 아미노산 치환을 포함한다. P-0731, P-0759, P-0761 및 P-0732는 ELISA에서

에 대한 결합에 대해 평가되었고 P-0704과 비교하여 유동 세포측정에 의해 인간 CD8+ T 세포, CD4+ T 세포 및 NK 세포에 대한 Ki-67 발현의 유도에 대해 평가되었다.

도 14a에 도시된 바와 같이, P-0689 및 P-0704와 비교하여, 예시적 IL-2 변이체 Fc 융합은 모두

에 대한 다양한 수준의 감소된 결합을 표시하였다. 수용체 서브유닛 β 또는 γ에 대한 IL-2의 결합이 약하고 높은 해리 속도를 가짐에 따라, 각각의 개별 서브유닛에 대한 결합 활성은 ELISA에 의해 신뢰가능하게 평가될 수 없었다(데이터 미도시). 그러나,

이종이량체에 대한 결합의 감소는 각각의 β 또는 γ 수용체 서브유닛과의 상호작용을 파괴하는 아미노산 변화에 의해 기여될 것으로 예상되었다.

P-0731의 IL-2Rβ 파괴 치환 L19H 및 P-0732의

파괴 돌연변이 Q126E에 의해 야기되는 효능 감소는 인간 PBMC에서 인간 CD8+ T 세포 상에 Ki67 발현을 유도할 시에 활성에 대해 평가되었다. 야생형 IL-2 단량체 Fc 융합의 S125I 등가물인 P-0689, 및 IL-2Rα에 대한 결합을 상실하였지만 단량체

수용체에 대한 친화도 및 기능적 활성을 완전히 유지한 P-0704는 비교를 위해 포함되었다. 도 14b에 입증된 바와 같이, 유도된 모든 단량체 IL-2 Fc 융합 단백질은 용량-의존적 방식에서 Ki-67 양성 CD8+ T 세포의 백분율을 증가시켰으며; P-0731은 P-0704와 비교하여 대략 30배의 효능 감소를 나타냈다. P-0732는 P-0704과 비교하여 100배보다 더 크게 약화된 EC₅₀로 가장 낮은 효능을 표시하였다.

P-0731, P-759, 및 P-0761에 의한 인간 CD8+ T 세포, NK 세포, 및 CD4+ T 세포의 증식에서의 용량-의존적 증가는 각각, 도 15a, 도 15b, 및 도 15c에 예시되었다. IL-2 변이체 Fc 융합 단백질 P-0731, P-0759, 및 P-0761 모두는 P-0704에서 IL-2Rα 결합-폐기 치환 P65R에 더하여 위치 L19에서 IL-2Rβ 파괴 돌연변이를 함유한다. P-0704와 비교하여, 모든 변이체는 인간 CD8+ T 세포, NK 세포, 및 CD4+ T 세포의 증식에서 예상된 효능 감소를 보였다. P-0759(L19Q) 및 P-0761(L19Y)은 보통의 3-5배 효능 감소를 보인 반면 P-0731의 L19H 돌연변이는 보다 엄청난 30배 효능 감소를 야기하였다. L19Q 및 L19H 치환에 의한 효능 약화 수준은 평가된 모든 세포 서브세트에 걸쳐 동일한 경향을 따랐고 CD4+ Tconv 세포 상에 pSTAT5를 유도할 시에 활성 감소의 수준(도 13b 및 도 13c) 및 재조합

단백질에 대한 약화된 결합의 수준(도 14a)과 일치하였다. 벤치마크 분자는 P-0704와 비교하여 세포 증식을 유도할 시에 비교가능하지만 약간 더 낮은 효능을 표시하였다.

요약하면, 면역억제 Tregs의 바람직하지 않은 확장을 억제하기 위해 IL-2에 CD25 파괴 치환을 도입하는 것에 더하여,

파괴 치환 또는 N-말단 결실은 최적의 활성을 위해 전반적인 효능을 약화시키기 위해 추가로 혼입될 수 있다. 더 낮은 효능은 경로의 과도한 활성화를 방지하고 원하지 않은 표적 싱크를 감소시킬 수 있으며; 결과적으로, 잠재적으로 독성을 감소시키고 약동학 및 약력학을 개선한다.

실시예 10

단일 주사 후 마우스에서 IL-2 변이체 Fc 융합 단백질의 약력학적 효과

IL-2Rα에 대한 폐기된 결합을 갖는 C-말단 1가 IL-2 변이체 Fc 융합 단백질인 P-0704(서열번호: 96 및 10)로의 치료 후 상이한 림프구 서브세트의 세포 확장의 시간 코스(time course)는 단일 주사 다음에 Balb/C 마우스에서 수행되었다. 말초 혈액 림프구 확장에 대한 효과는 시간 경과에 따라 모니터링되었다. 게다가, P-0704의 면역 약력학적 프로파일은 야생형 IL-2 대응물인 P-0689(서열번호: 107 및 10)의 그것과 비교되었다.

7주령 암컷 Balb/c 마우스는 Charles River Laboratory로부터 받았고 연구 전에 적어도 7일 동안 집에서 순응되었다. 비히클, 및 P-0704 및 P-0689의 0.6 mg/kg에서의 단일 용량은 0일째에 마우스에게 복강내 투여되었다. 혈액 샘플은 주사 후 3일 및 5일째에 회수되었다. 각각의 그룹은 4 마리의 마우스를 포함하였다.

헤파린-처리된 전혈은 면역 표시형을 위해 사용되었다. BD pharm 용해 완충액을 사용한 적혈구 용해 후, 총 생존가능한 단핵 혈구는 트리판 블루 죽은 세포 배제법에 의해 카운트되었고 Ki67 세포내 염색으로 진행되었다. 세포 펠렛은 200 ㎕/웰의 1x Foxp3 고정/침투 작업 용액에 의해 완전히 재현탁되었고 암실에서 30분 동안 실온에서 인큐베이션되었다. 원심분리 후, 200 ㎕의 1x 투과 완충액은 다른 세척을 위해 각각의 웰에 첨가되었다. Fc-수용체를 정제된 항-마우스 CD16/CD32(1:50 희석)로 차단한 후, 세포는 APC-cy7 CD3, BV510 CD4, FITC Foxp3, PE Ki67, APC CD335, 및 Percpcy5.5 CD8(1:50 희석)로 염색되었다. 30분 인큐베이션 후, 세포는 수집 및 세척되었고, FACS 완충액에서 재현탁되었고, 유동 세포측정에 의해 분석되었다.

도 16a에 도시된 바와 같이, P-0689의 야생형 IL-2는, 암의 치료에 대해 바람직하지 않은 것으로 간주되는, 3일째에 최고조에 이른 Treg 세포의 강한 확장(세포 수에서 6배 증가)을 야기한 반면, P-0704는 3일째에 Treg 확장을 갖지 않았고 5일째 단지 최소로 확장된 Treg 세포를 가졌다. 대조적으로, P-0704는 3일째에 총 CD3+ 림프구 집단에서 CD8+ T 세포의 백분율을 증가시켰고 5일째에 19%(기준선)에서 67%(도 16b)까지 향상된 CD8 집단을 지속시켰다. 대조적으로, P-0689에 의한 CD8+ T 세포 확장은 최소였다(도 16b). NK 세포의 경우, 5.4배의 세포 수 증가는 3일째에 관찰되었고, 세포 확장은 지속되었고 P-0704에 의해 5일째에 64배의 세포 증가를 야기하였다. P-0689는 3일째에 7.8배만큼 NK 세포 수를 증가시켰지만, 효과는 빠르게 감소되었고 5일째에 기준선으로 복귀하였다(도 16c).

요약하면, P-0704는 P-0689으로부터 거의 폐기된 Treg 확장 및 현저하게 향상된 CD8 및 NK 세포 확장, 첨예하게 상이한 세포 확장 프로파일을 입증하였다. 관찰은 IL-2Rα 서브유닛에 대한 결합 능력 및 결과적으로 Treg 세포 반응성에서의 급격한 차이와 일치환다. 추가적으로,

선택적 완전 효능제로서, P-0704는 향상된 선택성 및 감소된 CD25 싱크로 인해 CD8+ 효과기 T 및 NK 세포의 극적인 생체내 반응을 강화할 수 있다.

실시예 11

IL-2-항체 융합 단백질의 작제, 발현, 및 정제

이러한 실시예에서, 다양한 IL-2-항체 융합 단백질이 제조되고 평가된다. IL-2 변이체를 항체 표적화 면역 관문에 테더링하는 것은 IL-2를 고갈된 T 세포로 지향시키고 종양 미세환경을 면역학적으로 뜨겁게 만들 것으로 예상된다. 전략은 또한 IL-2의 전신 노출 및 오프 표적 독성을 감소시킨다. IL-2 변이체를 갖는 면역 관문 억제제의 이중기능성 융합 단백질은 또한 음성 조절을 제거하고 기능 및 수에서 T 세포를 활성화시킴으로써 동반상승효과를 제공할 것으로 예상된다. 면역 관문 차단 항체-사이토카인 융합 단백질은 종양에 대한 면역계의 활성을 더 향상시킬 것으로 예상된다. 본 발명자는 IL-2Rα에 대한 감소/폐기된 결합 및 약화된

활성을 갖는 IL-2 변이체의 사용이 드라마틱하게 상이한 효능 및 분자량을 나타내는 사이토카인과 항체 아암 사이의 화학양론적 균형의 확립을 용이하게 하여 최적 투여를 허용하고 각각의 아암의 기능을 유지시킨다고 제안한다. 또한, 사이토카인 활성 약화는 말초 활성화를 최소화하고, 항원-싱크를 완화하고, 항체 아암을 통해 종양 표적화를 촉진할 것으로 예상된다.

세포독성 T 세포 또는

, 예컨대 PD-1을 또한 발현하는 다른 림프구 서브세트 상의 관문 억제제 표적 발현의 경우, IL-2 PD-1 항체 융합 단백질은, 선택적 신호전달을 용이하게 하기 위해, 종양 미세환경에서 활성화되고 고갈된 CD8+ T와 같은, PD-1 + 세포에 시스(cis)에서 우선적으로 IL-2 변이체를 전달할 수 있을 것으로 예상된다.

이러한 개념을 따라, 다양한 IL-2-항체 융합 단백질이 작제되었다.

IL-2-항체 융합 단백질을 제조하기 위해, 위에 열거된 항체의 중쇄의 CH1-CH2-CH3(EU 넘버링에 기초한 항체 잔기 118-447) 도메인은

및

에 대한 결합을 폐기하지만

결합 또는 PK를 유지하는 L234A, L235A, G237A 돌연변이를 포함하는 서열번호: 162에 제시되는 IgG1 서열로 대체되었다. IL-2 변이체 펩타이드는 Fc 도메인의 C-말단에 표 6에 열거되는 서열을 갖는 펩타이드 링커를 통해 융합된다. 대안적으로, 1가 IL-2 변이체를 발현시키기 위해, 위에 열거된 항체의 중쇄의 CH1-CH2-CH3 도메인은 서열번호: 163-164에 제시되는 이종이량체 사슬로 대체되었다. IL-2 변이체 펩타이드는 놉-인투-홀 기술을 사용하여 조작되는 놉-함유 이종이량체 중쇄의 C-말단에 표 6에 열거되는 서열을 갖는 펩타이드 링커를 통해 융합된다. 반감기 연장 돌연변이, 예를 들어, N434A는 단독이량체(homodimeric) 또는 이종이량체 Fc 사슬로 추가로 혼입될 수 있다. 예시적 IL-2 PD-1 길항제 항체 융합 단백질은 표 12에 열거된다. 추가적으로, P-0844는 서열번호:182-184을 포함하는 벤치마크 IL-2 변이체 PD-1 길항제 항체 융합 단백질이다.

[표 12]

예시적 IL-2 변이체 길항제 PD-1 항체 융합 단백질

유전자 합성, 발현 벡터 작제, 및 단백질 생성, 정제, 및 특성화는 실시예 1에 상세화된 동일한 절차를 따라서 수행되었다.

쥣과 대리 PD-1 IL-2 변이체 융합 단백질은 면역적합성 마우스에서 생체내 종양 모델에 사용하기 위해 유사하게 생성되었다. 대리 항-마우스 PD-1 항체는 효과기 기능의 제거를 위해 그리고 이종이량체화를 위해 Fc 돌연변이를 함유하는 서열번호: 185-187을 포함하며; IL-2 변이체는 (G₄S)₃ 링커(서열번호: 15)를 통해 항-마우스 PD-1 HC 사슬 2(서열번호: 186)의 C-말단에 융합되었다. 표 13은 각각의 예시적 쥣과 대리 PD1-IL-2 변이체 융합 단백질에서 IL-2 변이체를 열거한다:

[표 13]

예시적 쥣과 대리 PD-1 IL-2 변이체 융합 단백질

실시예 12

IL-2 변이체 항체 융합 단백질은 생체외 기능적 분석에서 IL-2 효능 및 활성 프로파일을 완전히 유지한다.

현재 연구의 대리 마우스 PD-1 길항제 항체(서열번호: 185-187)는 인간 항원과 교차-반응하지 않으며; 결과적으로 그것은 림프구 서브세트를 자극 및 증식시킬 시에 IL-2 변이체의 효능 및 활성 프로파일에 대한 항체 융합 형식의 영향을 평가하기 위해 인간 세포에서 비 기능적 항체로서 사용되었다.

항체 융합 형식의 영향은 그 Fc 융합 대응물 P-0704와 비교하여 P-0782에 의해 예시화되었다. P-0782 및 P-0704 둘 다는 유연성 (G₃S)₂링커(서열번호: 18)를 통해 이종이량체 Fc 도메인의 C-말단에 링크되는 단량체 IL-2 P65R 변이체를 포함한다. IL-2에서의 P65R 치환은 IL-2Rα에 대한 결합을 폐기하였다(도 7d). 도 17a 내지 도 17c에 도시된 바와 같이, P-0782 및 P-0704은 CD4+ Treg 세포(도 17a), CD8+ T 세포(도 17b), 및 NK 세포(도 17c)에서 용량-의존적 STAT5 인산화를 유도할 시에 동등하다. 데이터는 항체에 융합되는 IL-2 모이어티가 그 대응하는 Fc 융합 단백질에서와 같이 그 활성을 완전히 유지하였다는 것을 확인하였다.

또한, 3개의 IL-2 변이체 마우스 PD1 항체 융합 단백질인 P-0837, P-0838, 및 P-0782는 인간 PBMC에서 pSTAT5를 자극할 시에 그들의 활성에 대해 비교되었다. IL-2 돌연변이 P-0838 및 P-0782는 각각, P65Q 및 P65R이다. P-0837은 야생형 IL-2 모이어티(서열번호: 4)를 포함한다. 야생형과 비교하여, P65Q는 43배만큼 IL-2Rα 결합 강도를 감소시켰고(표 10) P65R은 IL-2Rα에 대한 결합을 폐기하였다. 초기 실시예에서 IL-2 Fc 융합 분자의 결과(finding)를 확증하는, 도 18a 내지 도 18c는 IL-2Rα 계면에 도입되는 IL-2 돌연변이가 실제로 CD25만을 방해하고,

와의 상호작용에 영향을 미치지 않는다는 것을 입증한다. 인간 PBMC에서 나이브(naive) CD8+ T 및 NK 세포가 전혀 또는 매우 낮은 수준의 CD25를 발현함으로써, 모든 3개의 분자는 이러한 2개의 림프구 서브세트 상의 pSTAT5 발현의 용량-의존적 자극에서 동일한 효능을 나타낸다(도 18b 및 도 18c). 대조적으로, Treg 세포는 본질적으로 높은 수준의 CD25를 발현하고, 결과적으로 P-0838 및 P-0782는 야생형 대응물인 P-0837보다 Treg 세포에서 pSTAT5 발현을 자극할 시에 극적으로 감소된 반응을 보였고(도 18a); EC_50S는P-0837, P-0838, 및 P-0782 각각에 대해 0.45 pM, 0.36 pM(P-0837보다 800배 더 약함), 및 4.5 nM(P-0837보다 10,000배 더 약함)이다. CD25-결합 감소된 돌연변이 P-0838 및 CD25-결합 폐기된 돌연변이 P-0782 둘다는 야생형 대응물과 같이 유사하게 CD8 및 NK 세포를 자극할 시에 효능을 유지하였다. 추가적으로, P-0782에서 IL-2Rα결합의 폐기는 약 1의 Treg/CD8의 EC₅₀ 비율을 야기하였으며, 세포독성 효과기 세포에 비해 Treg 세포의 우선적 자극이 없다는 것을 나타낸다(Treg에 대한 EC₅₀4.5 nM 대 CD8+ T 세포에 대한 EC₅₀4.6 nM). P-0838에서 비록 상당히 감소될지라도 존재하는 IL-2Rα결합은 CD8+ T 세포보다 Treg에 대해 약 13배 향상된 pSTAT5 반응성을 렌더링한다(Treg에 대해 0.36 nM 대 CD8+ T 세포에 대해 4.6 nM).

IL-2α에 대한 감소된 결합에 더하여 IL-2Rβ 파괴 돌연변이 L19Q 또는 L19H를 갖는 효능-약화된 IL-2 변이체는 또한 IL-2 항체 융합 형식에 대해 생체외 기능 분석에서 평가되었다. P-0782와 비교하여, P-0786은 하나의 추가적인 L19Q 치환을 포함하고 P-0783은 L19H를 포함한다. P-0782, P-0786, 및 P-0783의 Fc 대응물은 각각, P-0704, P-0759, 및 P-0731이다.

인간 CD8+ T 세포, 및 NK 세포 상의 용량-의존적 방식에서의 P-0782, P-0786, 및 P-0783에 의한 STAT5 인산화의 유도는 각각, 도 19a 및 도 19b에 예시되었으며; 동일한 림프구 서브세트의 증식에서의 용량-의존적 증가는 각각, 도 19c 및 도 19d에 도시되었다. P-0782과 비교하여, P-0786은 CD8+ T 세포(도 19a) 및 NK 세포(도 19b) 상에 STAT5 인산화를 유도할 시에 보통의(modest) 2-3배 효능 감소를 나타낸 반면, P-0783의 L19H 돌연변이는 보다 엄청난 20-30배 효능 감소(도 19a 및 도 19b)를 야기했다. 유사한 수준의 효능 약화는 CD8+ T 세포(도 19c) 및 NK 세포(도 19d) 상의 Ki67에서의 용량-의존적 증가에 대해 관찰되었다. 항체 융합 단백질인 P-0782, P-0786, 및 P-0783의 효능 약화의 수준은 각각, 그들의 대응하는 Fc 융합 단백질 P-0704, P-0759 및 P-0731과 동일한 경향을 따랐다(도 15a 및 도 15b).

IL-2Rβ 파괴 돌연변이에 의한 효능-약화는 또한 IL-2 항체 융합 형식에서 P65Q 돌연변이의 맥락으로 평가되었다. L19Q 및 L19H는 각각, P-0838에 도입되어 P-0790 및 P-0787을 만들었다. 도 20a, 도 20b 및 도 20c는 Treg, CD8+ T, 및 NK 세포 상에서 STAT5 인산화를 자극할 시에 그들의 활성을 표시한다. 도 20d 및 도 20e는 CD8+ T 세포 및 NK 세포 상에서 증식 마커 Ki67의 용량-의존적 증가를 도시한다. 효능 약화의 수준은 IL-Rα 폐기 치환 P65R-기반 Ab 융합에 대해 관찰된 것과 동일한 경향을 따른다.

P-0782, P-0786, 및 P-0783은 S125I 등가 야생형 IL-2를 포함하는, P-0837과 함께 CTLL-2 증식 활성에 대해 추가로 평가되었다. CTLL-2 세포는 α, β, 및 γ 수용체 서브유닛을 발현하는 C57BL/6 마우스-유도 세포독성 T 세포이다. 간략하게, CTLL2 세포는 IL-2 없이 배지(RPMI1640, 10% FCS, 2 mM 글루타민)에서 채취, 세척, 및 재현탁되었고 2시간 동안 인큐베이션되었다(IL-2 결핍). 결핍 후, IL-2가 없는 신선한 배지의 50,000/ml로 재현탁되는 50 ㎕의 CTLL-2 세포는 96-웰 U-보텀 플레이트로 이동되었다. 50 ㎕의 연속 희석된 IL-2 항체 융합은 웰에 첨가되어 100 ㎕/웰의 최종 볼륨을 만들었다. 샘플은 2일 동안 인큐베이션되었고 증식은 제조업자의 치침에 따라 CellTiter-Glo를 사용하여 평가되었고 발광 신호가 측정되었다. 도 21에 도시된 바와 같이, L19Q 및 L19h에 의한 효능 약화 수준이 또한 마우스 세포에서 유지되었다. 야생형 IL-2를 포함하는 P-0837은 Treg 세포를 닮은, CTLL-2 세포 상의 IL-Rα서브유닛의 발현으로 인해 P-0782에 비해 상당한 성장 이점을 입증하였다.

요약하면, 대리 마우스 PD-1 항체 융합 단백질 형식의 IL-2 변이체는 생체외 기능 분석에서 그들의 Fc 융합 등가물에서 볼 수 있는 바와 같은 효능 및 활성 프로파일을 완전히 유지하였다.

실시예 13

IL-2 변이체 인간 PD-1 항체 융합 단백질의 시험관내 특성

P-0795는 중쇄로서 서열번호: 140 및 경쇄로서 서열번호: 141을 포함하는 인간 PD-1 길항제 항체이다. P-0803(서열번호: 166, 169 및 141 )은 놉-함유 이종이량체 중쇄의 C-말단에 융합되는 IL-2 변이체를 갖는 P-0795의 면역접합체 (immunoconjugate)이다. P-0803의 IL-2 변이체는 IL-2Rα결합-폐기 돌연변이 P65R 및 발달성-개선 치환 S125I를 포함한다. P-0803에 의해 예시화되는 항체 융합 단백질에서 항체 아암의 기능은 ELISA 형식에서 직접 결합 및 리간드 경쟁 억제 둘 다에 대해 분석되었다.

직접 결합의 경우, 실시예 4의 동일한 ELISA 프로토콜은 코팅 항원으로서 huPD-1-His를 사용하여 이어졌다. 리간드(PD-L1) 경쟁 억제 ELISA의 경우, 유사한 ELISA 프로토콜은 일부 변형과 함께 사용되었다. 간략하게, 플레이트는 밤새 4℃에서 0.2 ㎍/웰의 인간PD1-Fc 단백질로 코팅되었다. 2% BSA로 세척 및 차단 후, 0.5 ㎍/mL의 바이오티닐화된 인간PDL1-Fc는 1:1(v/v)에서 연속-희석된 P-0795 또는 P-0803과 혼합되었으며; 100 μL 혼합물이 각각의 웰에 첨가되었고 1시간 동안 37℃에서 인큐베이션되었다. 스트렙타비딘-HRP는 2차 항체로서 첨가되었다.

도 22a에 도시된 바와 같이, P-0803 및 P-0795는 PD-1에 대한 동일한 결합 강도를 가졌다(EC_5O = 0.6 nM). P-0803은 또한 표면 상에 고정화되는 PD-L1에 대한 인간 PD-1의 결합을 차단할 시에 P-0795와 동일하게 강하다(IC₅₀ = 2.1 nM; 도 22b). 데이터는 IL-2 항체 융합의 항체 아암이 완전히 기능한다는 것을 집합적으로 확인하였다.

유사하게, IL-2 변이체 인간 PD-1 항체 IL-2는 FACS 분석에 의해 분석되는 세포 표면 상에 발현되는 PD1에 부모 항체와 유사한 결합을 보였다(도 22c). P-0795는 길항제 인간 PD-1 항체이고, P-0880 및 P-0885 둘 다는 (G₄S)₃ 링커를 통해 P-0795의 C-말단에 부착되는 1가 IL-2를 포함한다. P-0880은 P65R/S125I 치환을 함유하는 반면 P-0885는 L19Q/P65R/S125I 돌연변이를 포함한다. P-0704 및 P-0759는 각각, P-0880 및 P-0885의 Fc 융합 대응물이다. PD-1-표적화 아암의 결핍으로 인해, P-0704 및 P-0759는 예상된 바와 같이 PD-1-발현 세포에 결합하지 않았다.

PD-1이 면역관문 억제제 PD-1에 결합함에 따라, 면역접합체는, 선택적 신호전달을 용이하게 하기 위해, 종양 미세환경에서 활성화된 및 고갈된 CD8+ T와 같은, PD-1 + 세포에 시스(cis)에서 우선적으로 IL-2 변이체를 전달할 수 있을 것으로 예상된다. 건강한 인간으로부터의 PBMC에서, 천연 CD8+ T 세포 및 NK 세포는 일반적으로 PD-1 음성인 반면 Treg는 낮은 구성 수준의 PD-1을 발현한다. 결과적으로, IL-2 huPD-1 Ab 융합 단백질인, P-0803 및 P-0804는 그들의 비-PD-1 표적화 등가물인 P-0782 및 P-0783 각각보다 PD-1 양성 T 세포에서 pSTAT5를 자극할 시에 15배 이상 더 강력한 것으로 관찰되었으며(도 23a 및 도 23b); 반면에, 효능 차이는 PD-1 음성 세포 상에서 최소였거나 미미하였다(도 23c 내지 도23f). huPD-1 Ab 융합 단백질은 또한 천연 비-활성화된 CD8 및 NK 세포에서 비-PD-1 표적화된 대응물과 비교하여 증가된 효능의 경향을 보였다(도 23c 내지 도 23f).

T 세포 상의 더 높은 PD-1 발현 수준은 선택적 신호전달을 달성하기 위해 항체 융합 단백질에 의해 표적화될 가능성이 더 있을 것으로 예상된다. 결과적으로, 종양 미세환경에서, IL-2 PD-1 항체 융합 단백질은 Teff 대 Tregs에 우선적으로 결합할 것이다.

또한, 단백질 발현 프로파일 및 활성에 대한 항체 놉 중쇄 및 IL-2 변이체를 연결하는 링커의 길이의 영향이 탐구되었다. P-0840(서열번호: 168, 169 및 141) 및 P-0841(서열번호:178, 175, 및 141)은 링커 길이에서만 다른 2개의 IL-2 P-0795 융합 단백질이다. P-0840는 (G₃S)₂ 링커(서열번호: 18)를 포함하는 반면 P-0841은 (G₄S)₃ 링커(서열번호: 15)를 갖는다. 도 24a 및 도 24b에 도시된 바와 같이, ExpiCHO 일시적 발현에서 기인하는 단백질 A 정제된 P-0841은 동일한 생성 및 정제 공정으로부터 산출된 P-0840보다 상당히 더 적은 낮은 분자량 불순물을 표시하였다 (16% 대 3%). 불순물 함량에서의 유사한 차이는 링커가 각각 다르게 동일한 서열을 갖는, (G₃S)₂및 (G₄S)₃인, P-0803 및 P-0880(서열번호: 177, 175, 및 141)에 대해 관찰되었다(11% 대 2.7%; 도 24c 및 도 24d).

P-0841 및 P-0880에서 약간 더 긴 링커가 그들의 각각의 더 짧은 링커-함유 대응물과 비교하여 개선된 순도를 야기하지만, IL-2 모이어티의 생물학적 활성에 대한 영향은 세포독성 림프구 상의 pSTAT5 자극 효능에 의해 예시된, 최소 또는 미미하게 증강되었다(도 25). 융합 단백질의 발달성 프로파일에 대한 유익한 영향으로, 다른 음성 영향을 야기하지 않는 더 긴-링커가 더 짧은 링커에 비해 선호된다.

(G₄S)₃ 링커를 통해 놉-함유 이종이량체 중쇄의 C-말단에 융합되는 IL-2 변이체를 갖는 소수의 P-0795 융합 단백질인 P-0880, P-0882(서열번호: 176, 175 및 141 ), 및 P-0885(서열번호: 179, 175 및 141)이 작제되었다. 세포 표면 발현된 PD-1에 대한 결합은 도 22c에 도시된 바와 같이 hPD1 항체 단독과 비교하여 더 긴 링커를 갖는 IL-2 변이체 huPD-1 항체 융합 단백질에서 변경되지 않았다. 그들은 CD8+ T 세포 및 NK 세포 둘 다에서 pSTAT5를 자극하고 Ki67 발현을 유도할 시에 IL-2 효능을 조사하기 위해 생체외 기능 분석에서 더 시험되었다(도 26). 3개의 작제물은 모두 IL-2Rα 폐기 돌연변이 P65R을 포함하는 반면, P-0882 및 P-0885은 각각, 전반적인 효능을 조절하기 위해 추가적인 L19H 및 L19Q 돌연변이를 함유한다. 야생형 IL-2 대응물인 P-0849는 비교를 위해 분석에 포함되었다. 생체외 기능적 활동은 표 14에 요약되었다. P-0880와 비교하여 P-0885 및 P-0882에 의한 효능 약화의 수준은 평가된 세포 서브세트에 걸쳐 동일한 경향을 따랐고, P-0759 및 P-0731 대 P-0704(각각의 Fc 융합 단백질; 도 15a 및 도 15b), 그리고 P-0786 및 P-0783 대 P-0782(각각의 마우스 PD1 항체 융합 단백질; 도 19)에 대해 관찰되는 감소의 수준과 일치하였다. 예상된 바와 같이, 야생형 IL-2 융합은 P-0880과 같이 CD8+ T 및 NK 세포 상에서 비교가능한 활성을 나타냈다.

[표 14]

IL-2 변이체 인간 PD-1 항체 융합 단백질의 활성

실시예 14

C57BL6 마우스에 서IL-2 변이체 대리 마우스 PD-1 항체 융합 단백질의 약력학적 효과

IL-2 변이체 마우스 PD-1 항체 융합 단백질의 약력학적 효과는 단일 주사 다음에 C57BL6 마우스에서 평가되었다. 7주령 암컷 C57BL6 마우스는 Charles River Laboratory로부터 수용되었고 연구 전에 적어도 7일 동안 집에서 순응되었다. 비히클, 및 각각의 IL-2 마우스 PD-1 항체 융합 단백질의 단일 투여는 0시에서 마우스에게 복강내로 투여되었다. 혈액 샘플은 주사 후 3, 5, 7, 및 10일째 회수되었다. 각각의 그룹은 5마리의 마우스를 포함하였다. 헤파린-처리된 전혈은 실시예 10에서 설명된 면역 표시형을 위해 사용되었다.

P-0782는 IL-2Rα 결합을 폐기한 IL-2 P65R 모이어티를 포함하고, P-0838은 IL-2Rα 결합을 감소시킨 IL-2 P65Q 모이어티를 포함하는 반면, P-0837은 야생형 IL-2를 함유한다. IL-2Rα에 대한 상실된 결합을 완료한 벤치마크 IL-2 변이체(서열번호: 188)를 함유하는 대응물 마우스 PD-1 항체 융합 단백질인 P-0781이 비교를 위해 포함되었다.

2 mg/kg의 단일 주사 다음에, Ki67 자극은 CD8 및 NK 세포 상에서 시험되는 모든 화합물에 대해 최대 수준을 달성하였다(도 27a 내지 도 27b). 각각의 화합물에 대한 피크 Ki67 발현 신호는 CD8+ T 세포 상에서 최대 수준에 도달하였고 3일째 최고조에 달했으며, P-0782, P-0838 및 벤치마크 P-0781의 경우, 신호는 7일째까지 지속되었고 10일째 감소되었다. 비교하면, Ki67 신호는 야생형 P-0837에 대해 가속화된 속도로 약화되었으며(도 27a), NK 세포 상의 유사한 Ki67 유도는 시험된 모든 화합물에 대해 관찰되었다(도 27b).

놀랍게도, CD8 및 NK 세포 확장은 시험된 화합물 중에서 급격한 차이를 나타냈다. IL-2Rα 결합을 폐기하는 돌연변이를 갖는 P-0782는 CD8+ T(도 27c) 및 NK 세포(도 27d)의 활발한 팽창을 보였다. 두 림프구 서브세트의 팽창은 3일째에 시작하였고, 계속되어 CD8+ T 세포의 68배 증가 및 182배 NK 세포 수 증가로 7일째에 최고조에 달했다. 감소된 IL-2Rα 결합 능력을 갖는 돌연변이를 함유하는 P-0838은 WT 항체 융합과 유사하거나 약간 더 강한 CD8 및 NK 세포 확장을 나타냈다. 벤치마크 P-0781의 경우, 두 림프구 서브세트의 확장은 P-0780 및 P-0838와 비교하여 중간이었다. 극명하게 대조적으로, 야생형 P-0837에 의한 두 림프구 서브세트의 세포 확장은 현저히 더 낮은 최대 신호(CD8+ T 세포에 대해 3.9배 증가 및 NK 세포에 대해 6.8배 증가; 도 27c 및 도 27d)로 5일째 최고조에 달했다.

CD25-결합 폐기 돌연변이는 CD25 싱크 효과를 감소시키고 결과적으로

에 대한 가용성을 증가시키는 이점을 제공할 수 있다는 것이 가능하다. 풍부한 수용체 점유는 활발한 세포독성 세포 확장을 이끌어낸다. 잔기 CD25 결합 활성을 갖는 돌연변이는 여전히 CD8 및 NK 세포 상에 야생형과 유사한 활성을 야기하는 싱크 효과를 가질 수 있을 것이다. 요약하면, P-0782는 P-0838 및 P-0837과 비교하여 첨예하게 상이한 세포 확장 프로파일을 보였다. P-0782는 시험되는 임의의 화합물과 비교하여 CD8+ T 및 NK 세포 둘 다의 현저한 증식 및 확장을 입증하였고 벤치마크 화합물인 P-0781보다 뛰어나다.

선택적 완전 효능제로서, P-0782 및 P-0781은 향상된 선택성 및 감소된 CD25 싱크로 인해 CD8+ 효과기 T 및 NK 세포의 극적인 생체내 반응을 강화시킬 수 있다. P-0838이 야생형과 비교하여 강한 CD8 및 NK 세포 확장을 나타내지 않았지만, IL-2Rα(CD25)에 대한 결합 능력을 감소시키기 위해 도입되는 돌연변이는 VLS를 감소시킬 시에 이점을 제공할 것으로 예상된다. 게다가, 잔류 면역 조절 Treg 반응은 전신 내약성을 개선하고 면역 균형이 세포독성 효과기 세포에 과도하게 기울지 않았다는 것을 보장하기 위해 면역 균형을 제공할 수 있다. Treg 반응은 종양 살상 효능을 겪지 않고 말초 내성을 유지하기에 충분히 강하도록 미세-조정될 수 있다.

IL-2Rα에 대한 결합 능력을 폐기하는 것에 더하여

상호작용을 감소시키는 돌연변이를 함유하는 IL-2 변이체를 갖는 이중기능성 PD1 항체 융합 단백질의 약력학이 또한 시험되었다. P-0786 및 P-0783 둘 다는 각각, 상이한

조절 돌연변이 L19Q 및 L19H를 혼입함으로써 P-0782의 IL-2 효능-약화된 대응물이다. 도 19c 및 도 19d는 Ki67 발현을 자극할 시에 이들 3개의 화합물 사이의 시험관내 효능 차이를 표시하였다. 2개의 상이한 용량 수준에서 CD8+ 및 NK 세포의 증식 및 확장에 대한 P-0786 및 P-0783의 효과는 도 28 및 도 29에 도시된다. 도 28a에 도시된 바와 같이, 더 낮은-효능 화합물인, P-0786은 야생형 P-0837에 대해 관찰된 3일째 대신에 5일째에 CD8+ T 세포 상에 피크 Ki67 신호를 유도하였다. NK 세포 상에서 Ki67의 증가는, NK 세포가 CD8+ T 세포보다 IL-2에 더 응답한다는 개념과 일치하는, 두 P-0783 및 P-0837(도 28b)에 의해 최대화되었다.

약화된 IL-2 변이체의 PD1 항체 융합의 약력학적 효과는 야생형 융합과 비교하여 극적으로 개선되었다. 도 28c 및 도 28d는 야생형과 비교하여 P-0786에 의한 세포 확장에 대한 현저하게 연장되고 향상된 용량-반응 효과를 입증하였다. CD8+ T 및 NK 세포 확장의 증가는 지연되었지만 계속적이고 지속적이었다. 2 mg/kg의 용량 그룹으로부터의 반응은 7일째에 최고조에 달했고 10일째에 기준선으로 복귀하지 않은 반면, 5 mg/kg의 용량 그룹으로부터의 반응은 투약 후 10일째에 피크에 도달하는 것 없이 첨예하고 지속적으로 증가하였다. 반대로, 야생형 융합 그룹의 CD8 및 NK 세포 확장은 미미하였고, 5일째에 피크가 되었고 7일째에 기준선으로 복귀하였다(도 28c 및 도 28d).

심지어 더 약한 IL-2 효능제를 포함하는, P-0783은 용량-의존적 방식에서 CD8+ 및 NK 세포를 유도할 시에 P-0786와 유사한 지연되지만 계속적이고 지속적인 효과를 나타냈다(도 29c 및 도 29d). 각각의 화합물에 세포 수가 최고조에 달했고 세포 수의 배수 변화가 증가한 날이 표 15에 요약된다.

[표 15]

치료 다음의 기준선에 대한 피크 말초 세포 수 및 배수 변화

또한, 도 30에서 입증된 바와 같이, 효능 수준 및 대응하는 세포독성 림프구 확장은 마우스 체중 손실에 의해 반영되는 독성과 상관되었다.

선택적 완전 효능제인, P-0782가 두 CD8+ T 및 NK 세포 수에서 극적인 증가를 야기하였고 가장 큰 체중 손실을 야기하였음에 따라; 약화된 효능제 P-0786 및 P-0783은 생체내에서 개선된 내약성을 보였다. P-0783은 P-0786보다 내약성에서 약간 우세하였으며, P-0783이 P-0786보다 더 약한 효능제라는 사실과 일치한다.

요약하면, P-0782는 CD8+ T 및 NK 세포를 증식 및 확장시킬 시에 강한 약력학적 효과를 입증하였다. P-0786 및 P-0783은 더 약하지만 보다 지속적인 신호를 표시하였다. 3개의 화합물의 효능 순위는 일반적으로 생체외와 생체내 사이에서 일치하였다. 또한, 효능 약화된 화합물 P-0786 및 P-0783은 완전 효능제 P-0782와 비교하여 생체내에서 개선된 약력학 및 내약성을 보였다.

실시예 15

동계(syngeneic) 마우스 종양 모델에서 PD1 항체 IL-2 변이체 융합 단백질의 생체내 효능

IL-2 변이체 마우스 PD-1 항체 융합 단백질의 항-종양 효능은 피하 B16F10 흑색종 마우스 종양 모델에서 시험되었다. 암컷 C57BL/6 마우스(7주령)는 4-7일 순응 후에 체중에 의해 치료 그룹(n = 10/그룹)으로 무작위화되었다. 계대(passage) 3 (5x10⁵ 세포/마우스)의 B16F10 세포는 -1일째에 마우스의 우측방에 피하로(s.c.) 접종되었다. 마우스는 0, 7 및 14일(Q7D)에 3회 시험된 화합물을 복강내 투여받았다. 모든 마우스는 면밀히 모니터링되었고, 체중은 주 당 3회 측정되었다. 종양은 표준 캘리퍼스를 사용하여 주 당 3회 측정되었으며, 종양 크기는 mm³의 표준 공식 길이 x (폭)w² x 0.5에 의해 산출되었다. 마우스는 한계치 1500 mm³를 초과함에 따라 안락사되었다.

3개의 항체 융합 단백질인, P-0838, P-0790, 및 P-0787은 2회의 Q7D 투여와 함께 3 mg/kg으로 투여되었다. 모든 3개의 융합 단백질은 IL-2Rα에 대한 결합을 손상시키는 IL-2 L65Q 돌연변이를 함유하고; P-0790 및 P-0787은 각각,

활성을 더 감소시켜 전체 효능을 조절하기 위해 추가적인 L19Q 및 L19H 돌연변이를 포함한다. 도 31a에 입증된 바와 같이, 모든 화합물은 각각, P-0787, P-0790, 및 P-0838에 대해 78%, 64%, 및 57%의 종양 성장 억제를 갖는 강력한 단일-제제 항종향 효능을 나타냈다. 종양 억제 효능의 수준은 P-0838에서 P-0790까지 그리고 P-0787까지 시험관내 효능 약화와 상관되었다.

도 30에서 관찰된 것과 유사하게, 도 31b는 전체 IL-2 효능제인, P-0838이 가장 큰 체중 손실에 의해 반영되는 바와 같은 최초 및 최고 독성을 가졌고; 약화된 효능제인, P-0790 및 P-0787은 생체내의 개선된 내약성을 나타냈다는 것을 도시하였다. P-0787은 P-0790보다 내약성에서 일부 우세하였으며, P-0783이 P-0786보다 더 약한 효능제라는 사실과 일치한다. 전반적으로, 데이터는

선택적 및 약화된 돌연변이가 양호한 종양 살상 효능 및 개선된 내약성을 입증한다는 것을 지지한다.

생체내의 종양 억제 및 내약성에 대한 용량 효과는 P-0787에 대해 추가로 조사되었다. 도 32a에서 볼 수 있는 바와 같이, P-0787은 3 mg/kg에서 5 mg/kg까지 증가된 용량과 유사하게 강한 항종양 효과를 보였다. 용량 증가(dose escalation)는 극적인 체중 손실을 불러 일으키지 않았으며(도 32b), 약한 효능제가 고용량을 촉진하고 내약성을 증가시켰다는 것을 시사한다.

강한 종양 성장 억제는 또한 2회의 Q7D 투여로 1.5 mg/kg로 투여되는 P-0782 및 P-0786에 대해 관찰되었다(도 33). 대리 마우스 PD-1 항체인 P-0722는 B16F10 동계 모델에서 항종양 효과를 보이지 않은 반면, P-0782 및 P-0786은 P-0786이 P-0782의 약화된 대응물임에도 불구하고, 종양 성장의 비교가능한 강한 억제를 보였다.

최종적으로, IL-2 변이체 항체 융합 단백질인, P-0790은 마우스 B16F10 폐 전이 모델에서 시험되었다. 간략하게, 3 x10⁵ 마우스 흑색종 세포는 암컷 B57BL6 마우스(10-12주령)에 정맥내로 주입되었다. 3회의 Q7D 치료는 복강내 주입을 통해 다음 날(1일)에 개시되었다. 치료 그룹(n = 5/그룹)은 0.3, 1, 및 3 mg/kg의 P-0790 및 3 mg/kg의 대응하는 항체 P-0722를 포함한다. 비히클(PBS)은 음성 대조군 (negative control)으로서 포함되었다. 24일째, 모든 마우스는 조직 채취를 위해 희생되었다. 폐 종양 결절이 발견되었고, 항전이성 효과는 치료 그룹과 비히클 대조군 사이의 상이한 수의 종양 결절에 의해 표시되었다.

P-0790은 IL-2Rα에 대한 현저하게 손상된 결합 및 조절된 전체 효능을 갖는 IL-2 L19Q/P65Q PD-1 항체 융합 단백질이다. 유사하게, 대리 마우스 PD-1 항체인 P-0722는 B16F10 종양 세포의 전이를 억제할 시에 비효과적인 반면, P-0790에 의한 폐 전이 결절의 용량-의존적 억제가 관찰되었다. 도 34a는 평균 폐 결절 카운트를 도시하였고 도 34b는 각각의 그룹으로부터의 대표 동물의 폐 사진을 표시하였다. 데이터는 평균±SEM으로서 표시된다.

요약하면, 다양한 IL-2 변이체 마우스 PD-1 항체 융합 단백질은 강력한 단일-제제 항종양 효과를 입증하였다. 약화된 IL-2 효능제는 효과적인 종양 성장 억제 및 개선된 내약성을 보여주었으며, 이는 개선된 효능을 위해 더 높은 용량을 허용하였다.

실시예 16

시노몰구스 원숭이에서 선택된 IL-2 변이체 PD-1 항체 융합 단백질의 약력학적/약동학적 및 안전성 평가

시노몰구스 원숭이에서 선택된 IL-2 변이체 PD-1 항체 융합 단백질의 PK/PD 특성 및 안전성이 평가될 것이다. 약물-실험을 받은 적이 없는 시노몰구스 원숭이는 순응되고 2-3주 동안 훈련되고 그룹 당 한마리의 원숭이로 무작위화 될 것이며, 이 다음에 투약 전 기준 주(week)가 이어질 것이다. +1일째에, 하나의 그룹은 비히클(PBS)의 정맥내 투여를 받을 것이고, 다른 그룹은 상이한 시험 화합물로 정맥내에 투약될 것이다.

혈액은 -3일, 2일, 4일, 6일, 8일, 10일, 12일, 15일째에 수집된다. 말초 혈액 단핵 세포(Peripheral blood mononuclear cells: PBMC)는 약력학을 결정하기 위해, 원숭이 전혈로부터 단리되고 말초 혈액 Treg, 비-조절 CD4+T 세포, CD8+T 세포, CD8+T 중심 메모리, CD8+ 효과기 메모리, CD8+T 천연 및 NK 세포의 FACS 면역표시형에 대해 사용된다. 세포 활성화 및 증식은 또한 CD25 및 Ki67을 측정함으로써 모니터링될 것이다. 전혈은 또한 5-부분의 차이를 갖는 완전 혈액 카운트 (complete blood count: CBC)를 위해 사용된다: 호중구, 림프구, 단핵세포, 호산구, 및 호염기구.

선택된 IL-2 변이체 PD-1 항체 융합 단백질의 PK 특성은 융합 단백질을 캡처하기 위해 96-웰 플레이트를 코팅하는 항인간 IL-2 Ab(BD Pharmingen)를 사용하여 전장 온전 분자를 측정함으로써 시노몰구스 혈장 샘플에서 평가될 것이다. (하우스 내의) 마우스 항-인간 IL-2-비오틴은 검출을 위해 사용될 것이고 시험 화합물의 혈장 농도는 이후에 정량화될 것이다. -3일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 8일, 10일, 15일째에 수집된 혈장 샘플에 더하여, 4개보다 많은 혈장 샘플이 선택된 IL-2 변이체 PD-1 항체 융합 단백질의 투여 후에 10분, 1시간, 4시간, 및 8시간에서 1일째에서 수집되었다.

-7일, 8일, 15일째로부터의 혈장 샘플은 또한 다음의 임상 화학 파라미터를 평가하기 위해 사용될 것이다: 아스파르테이트 아모노기전이효소, 알라닌 아모노기전이효소, 알칼리 포스파타아제, 감마 글루타밀 전달효소, 알부민, 총 빌리루빈, 크레아티닌, 혈액 요소성 질소, 및 C-반응성 단백질.

또한, 각각의 동물의 체중은 전체 연구 기간 동안 주일마다 모니터링 될 것이다. 체온 및 혈압은 -1일(사전-투약)에서 그리고 약물 투여 후 6 시간, 24 시간, 96 시간 및 168 시간에서 모니터링될 것이다.

본원에 개시 및 청구되는 모든 물품 및 방법은 본 개시를 고려하여 과도한 실험 없이 이루어지고 실행될 수 있다. 본 개시의 물품 및 방법은 바람직한 구현예의 관점에서 설명되었지만, 변형이 본 개시의 사상 및 범위로부터 벗어나는 것 없이 물품 및 방법에 적용될 수 있다는 것이 당업자에게 명백할 것이다. 당업자에게 명백한 모든 그러한 변형 및 등가물은, 현재 존재하든 또는 나중에 개발되든, 첨부된 청구항들에 의해 정의되는 바와 같은 본 개시의 사상 및 범위 내에 있는 것으로 간주된다. 명세서에 언급되는 모든 특허, 특허 출원, 및 간행물은 본 개시가 관련되는 당업자의 수준을 나타낸다. 모든 특허, 특허 출원, 및 간행물은 모든 목적을 위해 그리고 각각의 개별 공보가 임의의 및 모든 목적을 위해 전체적으로 참고로 편입되도록 지시되는 바와 같은 동일한 정도로 전체적으로 참고로 본원에 편입된다. 본원에 적합하게 실례로 설명되는 본 개시는 본원에 구체적으로 개시되지 않는 임의의 요소(들)의 부재에서 실시될 수 있다. 따라서, 본 개시는 바람직한 구현예 및 선택적인 특징에 의해 구체적으로 개시되었지만, 본원에 개시되는 개념의 변형 및 변동은 당업자에 의해 재분류될 수 있고, 그러한 수정 및 변형은 첨부된 청구항들에 의해 정의되는 바와 같은 본 개시의 범위 내에 있는 것으로 간주된다는 것이 이해되어야 한다.

서열 목록

첨부된 서열 목록에 열거되는 핵산 및 아미노산 서열은 37 C.F.R. 1.822에 정의된 바와 같이, 뉴클레오타이드 염기에 대한 표준 문자 약어 및 아미노산에 대한 1개의 문자 암호를 사용하여 표시된다.

서열번호: 1은 인간 IL-2 전구체 아미노산 서열이다.

서열번호: 2는 인간 IL-2 성숙형 자연 발생 아미노산 서열이다.

서열번호: 3은 인간 IL-2 성숙한 형태의 야생형 아미노산 서열이다.

서열번호: 4는 융합 단백질 발달성 프로파일을 개선하기 위한 S125I 치환을 포함하는 인간 IL-2 성숙한 형태의 아미노산 서열이다.

서열번호: 5는 인간 IL-2Rα 세포외 도메인 아미노산 서열이다.

서열번호: 6은 인간 IgG1-Fc 아미노산 서열이다.

서열번호: 7은 감소/폐기된 효과기 기능을 갖는 인간 IgG1-Fc 서열이다.

서열번호: 8은 감소/폐기된 효과기 기능 및 연장된 반감기를 갖는 인간 IgG1-Fc 서열이다.

서열번호: 9는 감소/폐기된 효과기 기능을 갖는 놉-Fc 아미노산 서열이다.

서열번호: 10은 감소/폐기된 효과기 기능을 갖는 홀-Fc 아미노산 서열이다.

서열번호: 11-30은 다양한 펩타이드 링커 서열의 아마노산 서열이다.

서열번호: 31-66은 IL-2 수용체 α 서브유닛과 계면에서 도입되는 아미노산 치환을 갖는 다양한 IL-2 변이체의 아미노산 서열이다.

서열번호: 67-107은 다양한 IL-2 변이체 Fc 융합 단백질의 아미노산 서열이다.

서열번호: 108은 벤치마크 IL-2 변이체 Fc 융합 단백질의 벤치마크의 아미노산 서열이다.

서열번호: 109는 인간 IL-2Rβ 세포외 도메인 아미노산 서열이다.

서열번호: 110은 인간

세포외 도메인 아미노산 서열이다.

서열번호: 111-120은 다양한 IL-2 변이체의 아미노산 서열이다.

서열번호: 121-133은 다양한 IL-2 변이체 Fc 융합 단백질의 아미노산 서열이다.

서열번호: 134는 감소/폐기된 효과기 기능 및 연장된 반감기를 갖는 놉-Fc 아미노산 서열이다.

서열번호: 135는 감소/폐기된 효과기 기능 및 연장된 반감기를 갖는 홀-Fc 아미노산 서열이다.

서열번호: 136-137은 인간화된 항FAP 항체의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열이다.

서열번호: 138-139는 인간 PD-1 길항제 항체의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열이다.

서열번호: 140-141은 PD-1 길항제 항체의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열이다.

서열번호: 142-143은 PD-1 길항제 항체의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열이다.

서열번호: 144-145는 PD-1 길항제 항체의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열이다.

서열번호: 146-147은 PD-1 길항제 항체의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열이다.

서열번호: 148-149는 PD-L1 길항제 항체의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열이다.

서열번호: 150-151은 CTLA-4 길항제 항체의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열이다.

서열번호: 152-153은 CD40 효능제 항체의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열이다.

서열번호: 154-155는 파이브로넥틴 길항제 항체의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열이다.

서열번호: 156-157은 CD20 길항제 항체의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열이다.

서열번호: 158-159는 Her-2/neu 길항제 항체의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열이다.

서열번호: 160-161은 EGFR 길항제 항체의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열이다.

서열번호: 162는 감소/폐기된 Fc 효과기 기능을 갖는 인간 IgG1 CH1CH2CH3 도메인 서열의 아마노산 서열이다.

서열번호: 163은 감소/폐기된 Fc 효과기 기능을 갖는 인간 IgG1 CH1CH2CH3 도메인 놉 사슬 서열의 아미노산 서열이다.

서열번호: 164는 감소/폐기된 Fc 효과기 기능을 갖는 인간 IgG1 CH1CH2CH3 도메인 홀 사슬 서열의 아미노산 서열이다.

서열번호: 165-169는 다양한 IL-2 변이체 항체 융합 단백질의 아미노산 서열이다.

서열번호: 170은 인간 IL-2 수용체 알파 Sushi 도메인 아미노산 서열이다.

서열번호: 171 -174는 IL-2 및 IL-2RSushi Fc 융합 단백질의 아미노산 서열이다.

서열번호: 175-181은 다양한 IL-2 변이체 인간 PD-1 길항제 항체 융합 단백질의 놉 사슬의 아미노산 서열이다.

서열번호: 182-184는 벤치마크 IL-2 변이체 항체 융합 단백질의 아미노산 서열이다.

서열번호: 185-187은 이종이량체 중쇄를 갖는 대리 항-마우스 PD-1 항체의 아미노산 서열이다.

서열번호: 188은 벤치마크 IL-2 변이체의 아미노산 서열이다.

서열번호: 189-191은 다양한 IL-2 변이체 인간 PD-1 길항제 항체 융합 단백질의 놉 사슬의 아미노산 서열이다.

서열 목록

인간 IL-2 전구체 서열

MYRMQLLSCIALSLALVTNSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT (서열번호: 1)

인간 IL-2 성숙형 자연 발생 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT (서열번호: 2)

인간 IL-2 성숙한 형태의 야생형 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT (서열번호: 3)

인간 IL-2 S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 4)

인간 IL-2Rα(CD25) 세포외 도메인 서열

ELCDDDPPEIPHATFKAMAYKEGTMLNCECKRGFRRIKSGSLYMLCTGNSSHSSWDNQCQCTSSATRNTTKQVTPQPEEQKERKTTEMQSPMQPVDQASLPGHCREPPPWENEATERIYHFVVGQMVYYQCVQGYRALHRGPAESVCKMTHGKTRWTQPQLICTGEMETSQFPGEEKPQASPEGRPESETSCLVTTTDFQIQTEMAATMETSIFTTEYQ (서열번호: 5)

인간 IgG1-Fc

DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열번호: 6)

감소/폐기된 효과기 기능을 갖는 인간 IgG1-Fc

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열번호: 7)

감소/폐기된 효과기 기능 및 연장된 반감기를 갖는 인간 IgG1-Fc

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHAHYTQKSLSLSPG (서열번호: 8)

감소/폐기된 효과기 기능을 갖는 인간 IgG 놉-Fc

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열번호: 9)

감소/폐기된 효과기 기능을 갖는 인간IgG 홀-Fc

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열번호: 10)

펩타이드 링커 서열 GGGSGGGSGGGS (서열번호: 11)

펩타이드 링커 서열 GGGS (서열번호: 12)

펩타이드 링커 서열 GSSGGSGGSGGSG (서열번호: 13)

펩타이드 링커 서열 GSSGT (서열번호: 14)

펩타이드 링커 서열 GGGGSGGGGSGGGGS (서열번호: 15)

펩타이드 링커 서열 AEAAAKEAAAKEAAAKA (서열번호: 16)

펩타이드 링커 서열 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (서열번호: 17)

펩타이드 링커 서열 GGGSGGGS (서열번호: 18)

펩타이드 링커 서열 GSGST (서열번호: 19)

펩타이드 링커 서열 GGSS (서열번호: 20)

펩타이드 링커 서열 GGGGS (서열번호: 21)

펩타이드 링커 서열 GGSG (서열번호: 22)

펩타이드 링커 서열 SGGG (서열번호: 23)

펩타이드 링커 서열 GSGS (서열번호: 24)

펩타이드 링커 서열 GSGSGS (서열번호: 25)

펩타이드 링커 서열 GSGSGSGS (서열번호: 26)

펩타이드 링커 서열 GSGSGSGSGS (서열번호: 27)

펩타이드 링커 서열 GSGSGSGSGSGS (서열번호: 28)

펩타이드 링커 서열 GGGGSGGGGS (서열번호: 29)

펩타이드 링커 서열 GSGSGSGSGSGSGGS (서열번호: 30)

IL-2 F42A/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTAKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 31)

IL-2 R38F/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 32)

IL-2 R38G/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTGMLTAKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 33)

IL-2 R38A/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTAMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 34)

IL-2 T41A/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLAFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 35)

IL-2 T41G/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLGFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 36)

IL-2 T41V/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLVFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 37)

IL-2 F44G/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKGYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 38)

IL-2 F44V/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKVYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 39)

IL-2 E62A/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEALKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 40)

IL-2 E62F/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEFLKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 41)

IL-2 E62H/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEHLKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 42)

IL-2 E62L/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEELLKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 43)

IL-2 P65G/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKGLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 44)

IL-2 P65E/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKELEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 45)

IL-2 P65H/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKHLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 46)

IL-2 P65R/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKRLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 47)

IL-2 P65A/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKALEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 48)

IL-2 P65K/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKKLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 49)

IL-2 P65N/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKNLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 50)

IL-2 P65Q/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKQLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 51)

IL-2 E68A/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEAVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 52)

IL-2 E68F/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEFVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 53)

IL-2 E68H/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEHVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 54)

IL-2 E68L/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLELVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 55)

IL-2 E68P/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEPVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 56)

IL-2 Y107G/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKVYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEGADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 57)

IL-2 Y107H/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKVYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEHADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 58)

IL-2 Y107L/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKVYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCELADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 59)

IL-2 Y107V/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKVYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEVADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 60)

IL-2 F42A/E62F/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTAKFYMPKKATELKHLQCLEEFLKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 61)

IL-2 F42A/E62A/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTAKFYMPKKATELKHLQCLEEALKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 62)

IL-2 F42A/E62H/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTAKFYMPKKATELKHLQCLEEHLKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 63)

IL-2 F42A/P65H/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTAKFYMPKKATELKHLQCLEEELKHLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 64)

IL-2 F42A/P65R/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTAKFYMPKKATELKHLQCLEEELKRLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 65)

IL-2 F42A/P65A/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTAKFYMPKKATELKHLQCLEEELKALEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 66)

P-0250

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT (서열번호: 67)

P-0531

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 68)

P-0613

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTAKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 69)

P-0614

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTFMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLR PRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 70)

P-0615

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTGMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLR PRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 71)

P-0602

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTAMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 72)

P-0603

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLAFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 73)

P-0604

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLGFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 74)

P-0605

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLVFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 75)

P-0606

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKGYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 76)

P-0607

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKVYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 77)

P-0624

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEALKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 78)

P-0625

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEFLKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 79)

P-0626

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEHLKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 80)

P-0627

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEELLKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 81)

P-0608

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKGLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 82)

P-0633

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKELEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 83)

P-0634

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKHLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 84)

P-0635

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKRLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 85)

P-0628

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEAVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 86)

P-0629

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEFVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 87)

P-0630

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEHVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 88)

P-0631

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLELVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 89)

P-0632

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEPVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 90)

P-0609

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKVYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEGADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 91)

P-0610

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKVYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEHADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 92)

P-0611

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKVYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCELADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 93)

P-0612

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKVYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEVADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 94)

P-0551

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTAKFAMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNGAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 95)

P-0704 놉 사슬

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKRLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 96)

P-0706 놉 사슬

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKALEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 97)

P-0707 놉 사슬

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKKLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 98)

P-0708 놉 사슬

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKNLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 99)

P-0709 놉 사슬

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKQLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 100)

P-0702 놉 사슬

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTAKFYMPKKATELKHLQCLEEFLKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 101)

P-0766 놉 사슬

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTAKFYMPKKATELKHLQCLEEALKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 102)

P-0767 놉 사슬

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTAKFYMPKKATELKHLQCLEEHLKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 103)

P-0703 놉 사슬

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTAKFYMPKKATELKHLQCLEEELKHLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 104)

P-0705 놉 사슬

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTAKFYMPKKATELKHLQCLEEELKRLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 105)

P-0765 놉 사슬

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTAKFYMPKKATELKHLQCLEEELKALEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 106)

P-0689 놉 사슬

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 107)

벤치마크 놉 사슬

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTAKFAMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNGAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 108)

인간 IL-2Rβ (CD122) 세포외 도메인 서열

AVNGTSQFTCFYNSRANISCVWSQDGALQDTSCQVHAWPDRRRWNQTCELLPVSQASWACNLILGAPDSQKLTTVDIVTLRVLCREGVRWRVMAIQDFKPFENLRLMAPISLQVVHVETHRCNISWEISQASHYFERHLEFEARTLSPGHTWEEAPLLTLKQKQEWICLETLTPDTQYEFQVRVKPLQGEFTTWSPWSQPLAFRTKPAALGKDT (서열번호: 109)

인간 공통 서브세트 감마 γ_c(CD132)세포외 도메인 서열

LNTTILTPNGNEDTTADFFLTTMPTDSLSVSTLPLPEVQCFVFNVEYMNCTWNSSSEPQPTNLTLHYWYKNSDNDKVQKCSHYLFSEEITSGCQLQKKEIHLYQTFVVQLQDPREPRRQATQMLKLQNLVIPWAPENLTLHKLSESQLELNWNNRFLNHCLEHLVQYRTDWDHSWTEQSVDYRHKFSLPSVDGQKRYTFRVRSRFNPLCGSAQHWSEWSHPIHWGSNTSKENPFLFALEA (서열번호: 110)

IL-2 L19H/P65R/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLHDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKRLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 111)

IL-2 L19Q/P65R/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLQDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKRLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 112)

IL-2 L19Y/P65R/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLYDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKRLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 113)

IL-2 L19H/P65Q/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLHDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKQLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 114)

IL-2 L19H/P65H/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLHDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKHLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 115)

IL-2 L19H/P65N/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLHDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKNLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 116)

IL-2 L19Q/P65Q/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLQDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKQLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 117)

IL-2 L19Q/P65H/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLQDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKHLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 118)

IL-2 L19Q/P65N/S125I 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLQDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKNLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 119)

IL-2 P65R/S125I/Q126E 변이체 서열

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKRLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIESIISTLT (서열번호: 120)

P-0731 놉 사슬

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLHDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKRLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 121)

P-0759 놉 사슬

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLQDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKRLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 122)

P-0761 놉 사슬

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLYDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKRLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 123)

P-0811 놉 사슬

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLHDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKQLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 124)

P-0812 놉 사슬

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLHDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKHLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 125)

P-0813 놉 사슬

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLHDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKNLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 126)

P-0814 놉 사슬

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLQDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKQLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 127)

P-0815 놉 사슬

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLQDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKHLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 128)

P-0816 놉 사슬

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLQDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKNLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 129)

P-0732 놉 사슬

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKRLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIESIISTLT (서열번호: 130)

P-0758

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLHDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKRLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 131)

P-0760

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLQDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKRLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 132)

P-0762

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLYDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKRLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 133)

연장된 생체내 반감기를 갖는 놉-Fc

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHAHYTQKSLSLSPG (서열번호: 134)

연장된 생체내 반감기를 갖는 홀-Fc

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHAHYTQKSLSLSPG (서열번호: 135)

인간화된 항-FAP 항체 중쇄

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTENIIHWVRQAPGQGLEWMGWFHPGSGSIKYAQKFQGRVTMTADKSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARHGGTGRGAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열번호: 136)

인간화된 항-FAP 항체 카파 경쇄

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASRSISTSAYSYMHWYQQKPGKAPKLLIYLASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHSRELPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 137)

인간 PD-1 길항제 항체 중쇄

EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYRFTSYGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTNTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDADYSSGSGYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열번호: 138)

인간 PD-1 길항제 항체 Lλ

SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDALPKQYAYWYQQKPGQAPVMVIYKDTERPSGIPERFSGSSSGTKVTLTISGVQAEDEADYYCQSADNSITYRVFGGGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS (서열번호: 139)

인간화된 PD-1 길항제 항체-HC

EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVATISGGGSYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCASPDSSGVAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열번호: 140)

인간화된 PD-1 길항제 항체-Lκ

DIVMTQSPLSLPVTPGEPASITCKASQDVETVVAWYLQKPGQSPRLLIYWASTRHTGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQYSRYPWTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 141)

인간화된 PD-1 길항제 항체-HC

QGQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYEMHWVRQAPGQGLEWMGVIESETGGTAYNQKFKGRAKITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCTREGITTVATTYYWYFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (서열번호: 142)

인간화된 PD-1 길항제 항체-Lκ

DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHVPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 143)

인간화된 PD-1 길항제 항체-HC

QVQLVQSGVEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYMYWVRQAPGQGLEWMGGINPSNGGTNFNEKFKNRVTLTTDSSTTTAYMELKSLQFDDTAVYYCARRDYRFDMGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (서열번호: 144)

인간화된 PD-1 길항제 항체-Lκ

EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 145)

인간 PD-1 길항제 항체-HC

QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (서열번호: 146)

인간 PD-1 길항제 항체-Lκ

EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 147)

인간화된 PD-L1 길항제 항체-HC

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호: 148)

인간화된 PD-L1 길항제 항체-Lκ

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 149)

인간 CTLA-4 길항제 항체-HC

QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYTMHWVRQAPGKGLEWVTFISYDGNNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호: 150)

인간 CTLA-4 길항제 항체-Lκ

EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVGSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 151)

인간 CD40 효능제 항체-HC

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPDSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELNRLRSDDTAVYYCARDQPLGYCTNGVCSYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDISVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호: 152)

인간 CD40 효능제 항체-Lκ

DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIYSWLAWYQQKPGKAPNLLIYTASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANIFPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 153)

인간화된 항-피브로넥틴 항체-HC

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFSMSWVRQAPGKGLEWVSSISGSSGTTYYADSVKGRFTISRDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKPFPYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호: 154)

인간화된 항-피브로넥틴 항체-Lκ

EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSFLAWYQQKPGQAPRLLIYYASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQTGRIPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 155)

키메라 항-CD20 항체-HC

QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGRGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSTYYGGDWYFNVWGAGTTVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKAEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호 156)

키메라 항-CD20 항체-Lκ

QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVSYIHWFQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWTSNPPTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호 157)

인간화된 항-Her2 항체-HC

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호: 158)

인간화된 항-Her2 항체-Lκ

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호: 159)

키메라 항-EGFR 항체-HC

QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호 160)

키메라 항-EGFR 항체-Lκ

DILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호 161)

감소/폐기된 효과기 기능을 갖는 인간 IgG1 CH1-CH2-CH3 도메인

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열번호: 162)

감소/폐기된 효과기 기능 놉 사슬을 갖는 인간 IgG1 CH1-CH2-CH3 도메인

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열번호: 163)

감소/폐기된 효과기 기능 홀 사슬을 갖는 인간 IgG1 CH1-CH2-CH3 도메인

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열번호: 164)

인간화된 PD-1 길항제 항체-HC-IL-2 변이체

EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVATISGGGSYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCASPDSSGVAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHAHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLHDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKRLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 165)

인간화된 PD-1 길항제 항체-HC-IL-2 변이체 놉 사슬

EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVATISGGGSYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCASPDSSGVAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKRLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 166)

인간화된 PD-1 길항제 항체-HC-IL-2 변이체 놉 사슬

EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVATISGGGSYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCASPDSSGVAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKQLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 167)

인간화된 PD-1 길항제 항체-HC-IL-2 변이체 놉 사슬

EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVATISGGGSYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCASPDSSGVAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLQDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKQLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 168)

인간화된 PD-1 길항제 항체-IgG1-HC 홀 사슬

EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVATISGGGSYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCASPDSSGVAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열번호: 169)

인간 IL-2Rα Sushi 도메인 서열

ELCDDDPPEIPHATFKAMAYKEGTMLNCECKRGFRRIKSGSLYMLCTGNSSHSSWDNQCQCTSSATRNTTKQVTPQPEEQKERKTTEMQSPMQPVDQASLPGHCREPPPWENEATERIYHFVVGQMVYYQCVQGYRALHRGPAESVCKMTHGKTRWTQPQLICTG (서열번호: 170)

P-0327

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSELCDDDPPEIPHATFKAMAYKEGTMLNCECKRGFRRIKSGSLYMLCTGNSSHSSWDNQCQCTSSATRNTTKQVTPQPEEQKERKTTEMQSPMQPVDQASLPGHCREPPPWENEATERIYHFVVGQMVYYQCVQGYRALHRGPAESVCKMTHGKTRWTQPQLICTGGGGGSGGGGSGGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT (서열번호: 171)

P-0422

APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLTGGGGSGGGGSGGGGSELCDDDPPEIPHATFKAMAYKEGTMLNCECKRGFRRIKSGSLYMLCTGNSSHSSWDNQCQCTSSATRNTTKQVTPQPEEQKERKTTEMQSPMQPVDQASLPGHCREPPPWENEATERIYHFVVGQMVYYQCVQGYRALHRGPAESVCKMTHGKTRWTQPQLICTGGGGSGGGGSGGGGSCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열번호: 172)

P-0482-홀 사슬

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT (서열번호: 173)

P-0482-놉 사슬

DKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSELCDDDPPEIPHATFKAMAYKEGTMLNCECKRGFRRIKSGSLYMLCTGNSSHSSWDNQCQCTSSATRNTTKQVTPQPEEQKERKTTEMQSPMQPVDQASLPGHCREPPPWENEATERIYHFVVGQMVYYQCVQGYRALHRGPAESVCKMTHGKTRWTQPQLICT (서열번호: 174)

인간화된 PD-1 길항제 항체-IgG1-HC 홀 사슬

EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVATISGGGSYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCASPDSSGVAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열번호: 175)

인간화된 PD-1 길항제 항체-HC-IL-2 변이체 놉 사슬

EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVATISGGGSYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCASPDSSGVAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLHDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKRLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 176)

인간화된 PD-1 길항제 항체-HC-IL-2 변이체 놉 사슬

EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVATISGGGSYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCASPDSSGVAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKRLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 177)

인간화된 PD-1 길항제 항체-HC-IL-2 변이체 놉 사슬

EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVATISGGGSYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCASPDSSGVAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLQDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKQLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 178)

인간화된 PD-1 길항제 항체-HC-IL-2 변이체 놉 사슬

EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVATISGGGSYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCASPDSSGVAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLQDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKRLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 179)

인간화된 PD-1 길항제 항체-HC-IL-2 변이체 놉 사슬

EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVATISGGGSYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCASPDSSGVAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLHDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKQLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 180)

인간화된 PD-1 길항제 항체-HC-IL-2 변이체 놉 사슬

EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVATISGGGSYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCASPDSSGVAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSAPTSSSTKKTQLQLEHLLQDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKNLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 181)

벤치마크 PD-1 길항제 항체-HC-홀 사슬

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSFSSYTMSWVRQAPGKGLEWVATISGGGRDIYYPDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVLLTGRVYFALDSWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열번호: 182)

벤치마크 PD-1 길항제 항체-HC-벤치마크 IL-2 변이체 놉 사슬

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSFSSYTMSWVRQAPGKGLEWVATISGGGRDIYYPDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVLLTGRVYFALDSWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSAPASSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTAKFAMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNGAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFAQSIISTLT (서열번호: 183)

벤치마크 PD-1 길항제 항체-Lλ

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSFSSYTMSWVRQAPGKGLEWVATISGGGRDIYYPDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVLLTGRVYFALDSWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (서열번호: 184)

대리 마우스 PD-1 길항제 항체 HC 사슬 1

EVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCSVTGYSITSSYRWNWIRKFPGNRLEWMGYINSAGISNYNPSLKRRISITRDTSKNQFFLQVNSVTTEDAATYYCARSDNMGTTPFTYWGQGTLVTVSSAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSQTVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVAISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTKPREEQINSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFGAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKKQMAKDKVSLTCMITNFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMKTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPG (서열번호: 185)

대리 마우스 PD-1 길항제 항체 HC 사슬 2

EVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCSVTGYSITSSYRWNWIRKFPGNRLEWMGYINSAGISNYNPSLKRRISITRDTSKNQFFLQVNSVTTEDAATYYCARSDNMGTTPFTYWGQGTLVTVSSAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSQTVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVAISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTKPREEQINSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFGAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITNFFPEDITVEWQWNGQPAENYDNTQPIMDTDGSYFVYSDLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPG (서열번호: 186)

대리 마우스 PD-1 길항제 항체 LC

DIVMTQGTLPNPVPSGESVSITCRSSKSLLYSDGKTYLNWYLQRPGQSPQLLIYWMSTRASGVSDRFSGSGSGTDFTLKISGVEAEDVGIYYCQQGLEFPTFGGGTKLELKRTDAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPRDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC (서열번호 187)

벤치마크 IL-2 변이체

APASSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTAKFAMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNGAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFAQSIISTLT (서열번호: 188)

인간화된 PD-1 길항제 항체-HC-IL-2 변이체 놉 사슬

EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVATISGGGSYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCASPDSSGVAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKRLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 189)

인간화된 PD-1 길항제 항체-HC-IL-2 변이체 놉 사슬

EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVATISGGGSYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCASPDSSGVAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKRLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 190)

인간화된 PD-1 길항제 항체-HC-IL-2 변이체 놉 사슬

EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVATISGGGSYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCASPDSSGVAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKRLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIISTLT (서열번호: 191)

SEQUENCE LISTING <110> Cugene Inc <120> NOVEL INTERLEUKIN-2 VARIANTS FOR THE TREATMENT OF CANCER <130> CACCG1.0004WO <160> 191 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 153 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu 1 5 10 15 Val Thr Asn Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu 20 25 30 Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile 35 40 45 Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe 50 55 60 Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu 65 70 75 80 Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys 85 90 95 Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile 100 105 110 Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala 115 120 125 Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe 130 135 140 Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 145 150 <210> 2 <211> 133 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 3 <211> 133 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 4 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Human IL-2 S125I variant sequence <400> 4 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 5 <211> 219 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Glu Leu Cys Asp Asp Asp Pro Pro Glu Ile Pro His Ala Thr Phe Lys 1 5 10 15 Ala Met Ala Tyr Lys Glu Gly Thr Met Leu Asn Cys Glu Cys Lys Arg 20 25 30 Gly Phe Arg Arg Ile Lys Ser Gly Ser Leu Tyr Met Leu Cys Thr Gly 35 40 45 Asn Ser Ser His Ser Ser Trp Asp Asn Gln Cys Gln Cys Thr Ser Ser 50 55 60 Ala Thr Arg Asn Thr Thr Lys Gln Val Thr Pro Gln Pro Glu Glu Gln 65 70 75 80 Lys Glu Arg Lys Thr Thr Glu Met Gln Ser Pro Met Gln Pro Val Asp 85 90 95 Gln Ala Ser Leu Pro Gly His Cys Arg Glu Pro Pro Pro Trp Glu Asn 100 105 110 Glu Ala Thr Glu Arg Ile Tyr His Phe Val Val Gly Gln Met Val Tyr 115 120 125 Tyr Gln Cys Val Gln Gly Tyr Arg Ala Leu His Arg Gly Pro Ala Glu 130 135 140 Ser Val Cys Lys Met Thr His Gly Lys Thr Arg Trp Thr Gln Pro Gln 145 150 155 160 Leu Ile Cys Thr Gly Glu Met Glu Thr Ser Gln Phe Pro Gly Glu Glu 165 170 175 Lys Pro Gln Ala Ser Pro Glu Gly Arg Pro Glu Ser Glu Thr Ser Cys 180 185 190 Leu Val Thr Thr Thr Asp Phe Gln Ile Gln Thr Glu Met Ala Ala Thr 195 200 205 Met Glu Thr Ser Ile Phe Thr Thr Glu Tyr Gln 210 215 <210> 6 <211> 226 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 1 5 10 15 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly 225 <210> 7 <211> 226 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Human IgG1-Fc with reduced/abolished effector function <400> 7 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly 225 <210> 8 <211> 226 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Human IgG1-Fc with reduced/abolished effector function and extended half-life <400> 8 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Ala His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly 225 <210> 9 <211> 226 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Human IgG Knob-Fc with reduced/abolished effector function <400> 9 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly 225 <210> 10 <211> 226 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Human IgG Hole-Fc with reduced/abolished effector function <400> 10 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly 225 <210> 11 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Peptide linker <400> 11 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser 1 5 10 <210> 12 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Peptide linker <400> 12 Gly Gly Gly Ser 1 <210> 13 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Peptide linker <400> 13 Gly Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly 1 5 10 <210> 14 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Peptide linker <400> 14 Gly Ser Ser Gly Thr 1 5 <210> 15 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Peptide linker <400> 15 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 16 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Peptide linker <400> 16 Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys 1 5 10 15 Ala <210> 17 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Peptide linker <400> 17 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 1 5 10 15 Gly Gly Gly Ser 20 <210> 18 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Peptide linker <400> 18 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser 1 5 <210> 19 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Peptide linker <400> 19 Gly Ser Gly Ser Thr 1 5 <210> 20 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Peptide linker <400> 20 Gly Gly Ser Ser 1 <210> 21 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Peptide linker <400> 21 Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 <210> 22 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Peptide linker <400> 22 Gly Gly Ser Gly 1 <210> 23 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Peptide linker <400> 23 Ser Gly Gly Gly 1 <210> 24 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Peptide linker <400> 24 Gly Ser Gly Ser 1 <210> 25 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Peptide linker <400> 25 Gly Ser Gly Ser Gly Ser 1 5 <210> 26 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Peptide linker <400> 26 Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser 1 5 <210> 27 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Peptide linker <400> 27 Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser 1 5 10 <210> 28 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Peptide linker <400> 28 Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser 1 5 10 <210> 29 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Peptide linker <400> 29 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 <210> 30 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Peptide linker <400> 30 Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 31 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 F42A/S125I variant sequence <400> 31 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Ala Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 32 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 R38F/S125I variant sequence <400> 32 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 33 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 R38G/S125I variant sequence <400> 33 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Gly Met Leu Thr Ala Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 34 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 R38A/S125I variant sequence <400> 34 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Ala Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 35 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 T41A/S125I variant sequence <400> 35 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Ala Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 36 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLGFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKP LEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFIQSIIS TLT <400> 36 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Gly Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 37 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 T41V/S125I variant sequence <400> 37 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Val Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 38 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 F44G/S125I variant sequence <400> 38 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Gly Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 39 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 F44V/S125I variant sequence <400> 39 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Val Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 40 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 E62A/S125I variant sequence <400> 40 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Ala Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 41 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 E62F/S125I variant sequence <400> 41 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Phe Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 42 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 E62H/S125I variant sequence <400> 42 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu His Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 43 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 E62L/S125I variant sequence <400> 43 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Leu Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 44 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 P65G/S125I variant sequence <400> 44 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Gly Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 45 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 P65E/S125I variant sequence <400> 45 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Glu Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 46 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 P65H/S125I variant sequence <400> 46 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 His Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 47 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 P65R/S125I variant sequence <400> 47 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Arg Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 48 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 P65A/S125I variant sequence <400> 48 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Ala Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 49 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 P65K/S125I variant sequence <400> 49 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Lys Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 50 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 P65N/S125I variant sequence <400> 50 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Asn Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 51 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 P65Q/S125I variant sequence <400> 51 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Gln Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 52 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 E68A/S125I variant sequence <400> 52 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Ala Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 53 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 E68F/S125I variant sequence <400> 53 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Phe Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 54 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 E68H/S125I variant sequence <400> 54 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu His Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 55 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 E68L/S125I variant sequence <400> 55 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Leu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 56 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 E68P/S125I variant sequence <400> 56 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Pro Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 57 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 Y107G/S125I variant sequence <400> 57 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Val Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Gly Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 58 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 Y107H/S125I variant sequence <400> 58 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Val Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu His Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 59 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 Y107L/S125I variant sequence <400> 59 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Val Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Leu Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 60 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 Y107V/S125I variant sequence <400> 60 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Val Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Val Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 61 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 F42A/E62F/S125I variant sequence <400> 61 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Ala Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Phe Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 62 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 F42A/E62A/S125I variant sequence <400> 62 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Ala Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Ala Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 63 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 F42A/E62H/S125I variant sequence <400> 63 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Ala Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu His Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 64 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 F42A/P65H/S125I variant sequence <400> 64 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Ala Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 His Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 65 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 F42A/P65R/S125I variant sequence <400> 65 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Ala Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Arg Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 66 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 F42A/P65A/S125I variant sequence <400> 66 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Ala Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Ala Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 67 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0250 <400> 67 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 68 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0531 <400> 68 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 69 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0613 <400> 69 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Ala Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 70 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0614 <400> 70 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Phe 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 71 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0615 <400> 71 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Gly 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 72 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0602 <400> 72 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Ala 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 73 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0603 <400> 73 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Ala Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 74 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0604 <400> 74 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Gly Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 75 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0605 <400> 75 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Val Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 76 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0606 <400> 76 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Gly Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 77 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0607 <400> 77 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Val Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 78 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0624 <400> 78 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Ala Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 79 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0625 <400> 79 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Phe Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 80 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0626 <400> 80 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu His Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 81 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0627 <400> 81 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Leu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 82 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0608 <400> 82 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Gly Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 83 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0633 <400> 83 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Glu Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 84 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0634 <400> 84 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys His Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 85 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0635 <400> 85 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Arg Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 86 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0628 <400> 86 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Ala Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 87 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0629 <400> 87 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Phe Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 88 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0630 <400> 88 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu His Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 89 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0631 <400> 89 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Leu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 90 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0632 <400> 90 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Pro Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 91 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0609 <400> 91 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Val Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Gly Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 92 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0610 <400> 92 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Val Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu His Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 93 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0611 <400> 93 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Val Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Leu Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 94 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0612 <400> 94 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Val Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Val Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 95 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0551 <400> 95 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Ala Lys Phe Ala Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Gly Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 96 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0704 knob chain <400> 96 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Arg Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 97 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0706 knob chain <400> 97 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Ala Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 98 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0707 knob chain <400> 98 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Lys Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 99 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0708 knob chain <400> 99 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Asn Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 100 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0709 knob chain <400> 100 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Gln Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 101 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0702 knob chain <400> 101 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Ala Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Phe Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 102 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0766 knob chain <400> 102 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Ala Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Ala Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 103 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0767 knob chain <400> 103 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Ala Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu His Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 104 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0703 knob chain <400> 104 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Ala Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys His Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 105 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0705 knob chain <400> 105 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Ala Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Arg Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 106 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0765 knob chain <400> 106 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Ala Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Ala Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 107 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0689 knob chain <400> 107 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 108 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Benchmark knob chain <400> 108 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Ala Lys Phe Ala Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Gly Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 109 <211> 214 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 109 Ala Val Asn Gly Thr Ser Gln Phe Thr Cys Phe Tyr Asn Ser Arg Ala 1 5 10 15 Asn Ile Ser Cys Val Trp Ser Gln Asp Gly Ala Leu Gln Asp Thr Ser 20 25 30 Cys Gln Val His Ala Trp Pro Asp Arg Arg Arg Trp Asn Gln Thr Cys 35 40 45 Glu Leu Leu Pro Val Ser Gln Ala Ser Trp Ala Cys Asn Leu Ile Leu 50 55 60 Gly Ala Pro Asp Ser Gln Lys Leu Thr Thr Val Asp Ile Val Thr Leu 65 70 75 80 Arg Val Leu Cys Arg Glu Gly Val Arg Trp Arg Val Met Ala Ile Gln 85 90 95 Asp Phe Lys Pro Phe Glu Asn Leu Arg Leu Met Ala Pro Ile Ser Leu 100 105 110 Gln Val Val His Val Glu Thr His Arg Cys Asn Ile Ser Trp Glu Ile 115 120 125 Ser Gln Ala Ser His Tyr Phe Glu Arg His Leu Glu Phe Glu Ala Arg 130 135 140 Thr Leu Ser Pro Gly His Thr Trp Glu Glu Ala Pro Leu Leu Thr Leu 145 150 155 160 Lys Gln Lys Gln Glu Trp Ile Cys Leu Glu Thr Leu Thr Pro Asp Thr 165 170 175 Gln Tyr Glu Phe Gln Val Arg Val Lys Pro Leu Gln Gly Glu Phe Thr 180 185 190 Thr Trp Ser Pro Trp Ser Gln Pro Leu Ala Phe Arg Thr Lys Pro Ala 195 200 205 Ala Leu Gly Lys Asp Thr 210 <210> 110 <211> 240 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 110 Leu Asn Thr Thr Ile Leu Thr Pro Asn Gly Asn Glu Asp Thr Thr Ala 1 5 10 15 Asp Phe Phe Leu Thr Thr Met Pro Thr Asp Ser Leu Ser Val Ser Thr 20 25 30 Leu Pro Leu Pro Glu Val Gln Cys Phe Val Phe Asn Val Glu Tyr Met 35 40 45 Asn Cys Thr Trp Asn Ser Ser Ser Glu Pro Gln Pro Thr Asn Leu Thr 50 55 60 Leu His Tyr Trp Tyr Lys Asn Ser Asp Asn Asp Lys Val Gln Lys Cys 65 70 75 80 Ser His Tyr Leu Phe Ser Glu Glu Ile Thr Ser Gly Cys Gln Leu Gln 85 90 95 Lys Lys Glu Ile His Leu Tyr Gln Thr Phe Val Val Gln Leu Gln Asp 100 105 110 Pro Arg Glu Pro Arg Arg Gln Ala Thr Gln Met Leu Lys Leu Gln Asn 115 120 125 Leu Val Ile Pro Trp Ala Pro Glu Asn Leu Thr Leu His Lys Leu Ser 130 135 140 Glu Ser Gln Leu Glu Leu Asn Trp Asn Asn Arg Phe Leu Asn His Cys 145 150 155 160 Leu Glu His Leu Val Gln Tyr Arg Thr Asp Trp Asp His Ser Trp Thr 165 170 175 Glu Gln Ser Val Asp Tyr Arg His Lys Phe Ser Leu Pro Ser Val Asp 180 185 190 Gly Gln Lys Arg Tyr Thr Phe Arg Val Arg Ser Arg Phe Asn Pro Leu 195 200 205 Cys Gly Ser Ala Gln His Trp Ser Glu Trp Ser His Pro Ile His Trp 210 215 220 Gly Ser Asn Thr Ser Lys Glu Asn Pro Phe Leu Phe Ala Leu Glu Ala 225 230 235 240 <210> 111 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 L19H/P65R/S125I variant sequence <400> 111 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu His Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Arg Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 112 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 L19Q/P65R/S125I variant sequence <400> 112 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Gln Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Arg Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 113 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 L19Y/P65R/S125I variant sequence <400> 113 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Tyr Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Arg Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 114 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 L19H/P65Q/S125I variant sequence <400> 114 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu His Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Gln Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 115 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 L19H/P65H/S125I variant sequence <400> 115 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu His Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 His Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 116 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 L19H/P65N/S125I variant sequence <400> 116 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu His Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Asn Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 117 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 L19Q/P65Q/S125I variant sequence <400> 117 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Gln Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Gln Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 118 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 L19Q/P65H/S125I variant sequence <400> 118 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Gln Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 His Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 119 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 L19Q/P65N/S125I variant sequence <400> 119 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Gln Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Asn Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 120 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IL-2 P65R/S125I/Q126E variant sequence <400> 120 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Arg Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Glu Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 121 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0731 knob chain <400> 121 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu His Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Arg Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 122 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0759 knob chain <400> 122 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Gln Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Arg Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 123 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0761 knob chain <400> 123 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Tyr Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Arg Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 124 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0811 knob chain <400> 124 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu His Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Gln Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 125 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0812 knob chain <400> 125 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu His Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys His Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 126 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0813 knob chain <400> 126 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu His Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Asn Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 127 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0814 knob chain <400> 127 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Gln Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Gln Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 128 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0815 knob chain <400> 128 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Gln Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys His Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 129 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0816 knob chain <400> 129 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Gln Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Asn Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 130 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0732 knob chain <400> 130 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Arg Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Glu Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 131 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0758 <400> 131 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu His Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Arg Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 132 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0760 <400> 132 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Gln Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Arg Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 133 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0762 <400> 133 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Tyr Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Arg Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 134 <211> 226 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Knob-Fc with extended in vivo half-life <400> 134 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Ala His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly 225 <210> 135 <211> 226 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Hole-Fc with extended in vivo half-life <400> 135 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Ala His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly 225 <210> 136 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Humanized anti-FAP antibody heavy chain <400> 136 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Asn 20 25 30 Ile Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Phe His Pro Gly Ser Gly Ser Ile Lys Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Gly Gly Thr Gly Arg Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly <210> 137 <211> 218 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Humanized anti-FAP antibody kappa light chain <400> 137 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Arg Ser Ile Ser Thr Ser 20 25 30 Ala Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 85 90 95 Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 110 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 115 120 125 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 130 135 140 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 145 150 155 160 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 165 170 175 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 180 185 190 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 138 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Human PD-1 antagonist antibody heavy chain <400> 138 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Arg Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Ala Asp Tyr Ser Ser Gly Ser Gly Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 <210> 139 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Human PD-1 antagonist antibody L? <400> 139 Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Arg Ile Thr Cys Ser Gly Asp Ala Leu Pro Lys Gln Tyr Ala 20 25 30 Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Met Val Ile Tyr 35 40 45 Lys Asp Thr Glu Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Ser Ser Gly Thr Lys Val Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Ala Glu 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Ala Asp Asn Ser Ile Thr Tyr 85 90 95 Arg Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys 100 105 110 Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln 115 120 125 Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly 130 135 140 Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly 145 150 155 160 Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala 165 170 175 Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser 180 185 190 Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val 195 200 205 Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 <210> 140 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Humanized PD-1 antagonist antibody-HC <400> 140 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Pro Asp Ser Ser Gly Val Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 210 215 220 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 <210> 141 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Humanized PD-1 antagonist antibody-L <400> 141 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Glu Thr Val 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala 65 70 75 80 Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Arg Tyr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 142 <211> 452 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Humanized PD-1 antagonist antibody-HC <400> 142 Gln Gly Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Glu Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Glu Ser Glu Thr Gly Gly Thr Ala Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Lys Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Glu Gly Ile Thr Thr Val Ala Thr Thr Tyr Tyr Trp Tyr Phe 100 105 110 Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 115 120 125 Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser 130 135 140 Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 145 150 155 160 Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 165 170 175 Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 180 185 190 Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys 195 200 205 Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu 210 215 220 Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu 225 230 235 240 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 245 250 255 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 260 265 270 Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 275 280 285 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr 290 295 300 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 305 310 315 320 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser 325 330 335 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 340 345 350 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 355 360 365 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 370 375 380 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 385 390 395 400 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr 405 410 415 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 420 425 430 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 435 440 445 Ser Leu Gly Lys 450 <210> 143 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Humanized PD-1 antagonist antibody-L <400> 143 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 85 90 95 Ser His Val Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 144 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Humanized PD-1 antagonist antibody-HC <400> 144 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro 210 215 220 Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 445 <210> 145 <211> 218 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Humanized PD-1 antagonist antibody-L <400> 145 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 35 40 45 Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 85 90 95 Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 110 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 115 120 125 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 130 135 140 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 145 150 155 160 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 165 170 175 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 180 185 190 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 146 <211> 440 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Human PD-1 antagonist antibody-HC <400> 146 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Asn Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 110 Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser 115 120 125 Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 130 135 140 Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr 145 150 155 160 Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr 165 170 175 Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys 180 185 190 Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp 195 200 205 Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala 210 215 220 Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 225 230 235 240 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 245 250 255 Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val 260 265 270 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 275 280 285 Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 290 295 300 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly 305 310 315 320 Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 325 330 335 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr 340 345 350 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 355 360 365 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 370 375 380 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 385 390 395 400 Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe 405 410 415 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 420 425 430 Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 <210> 147 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Human PD-1 antagonist antibody-L <400> 147 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 148 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Humanized PD-L1 antagonist antibody-HC <400> 148 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser 20 25 30 Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 149 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Humanized PD-L1 antagonist antibody-L <400> 149 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 150 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Human CTLA-4 antagonist antibody-HC <400> 150 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Thr Phe Ile Ser Tyr Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Thr Gly Trp Leu Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 151 <211> 215 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Human CTLA-4 antagonist antibody-L <400> 151 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Phe Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro 85 90 95 Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110 Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 115 120 125 Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 130 135 140 Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 145 150 155 160 Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 175 Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 180 185 190 Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 200 205 Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 152 <211> 452 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Human CD40 agonist antibody-HC <400> 152 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Pro Asp Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Asn Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Gln Pro Leu Gly Tyr Cys Thr Asn Gly Val Cys Ser Tyr 100 105 110 Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 115 120 125 Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr 130 135 140 Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 145 150 155 160 Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 165 170 175 His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 180 185 190 Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr 195 200 205 Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val 210 215 220 Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 225 230 235 240 Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 245 250 255 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 260 265 270 His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 275 280 285 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr 290 295 300 Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn 305 310 315 320 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro 325 330 335 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 340 345 350 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 355 360 365 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ser Val 370 375 380 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 385 390 395 400 Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 405 410 415 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 420 425 430 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 435 440 445 Ser Pro Gly Lys 450 <210> 153 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Human CD40 agonist antibody-L <400> 153 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Tyr Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Thr Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ile Phe Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 154 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Humanized anti-fibronectin antibody-HC <400> 154 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe 20 25 30 Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Gly Ser Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Lys Pro Phe Pro Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 165 170 175 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190 Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205 Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 245 250 255 Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 260 265 270 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 325 330 335 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350 Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 355 360 365 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 370 375 380 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 405 410 415 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 155 <211> 215 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Humanized anti-fibronectin antibody-L <400> 155 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Tyr Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Gly Arg Ile Pro 85 90 95 Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110 Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 115 120 125 Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 130 135 140 Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 145 150 155 160 Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 175 Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 180 185 190 Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 200 205 Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 156 <211> 451 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Chimeric anti-CD20 antibody-HC <400> 156 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Asn Met His Trp Val Lys Gln Thr Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Thr Tyr Tyr Gly Gly Asp Trp Tyr Phe Asn Val Trp Gly 100 105 110 Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Ala Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 225 230 235 240 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 305 310 315 320 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 325 330 335 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 340 345 350 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 355 360 365 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 370 375 380 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 385 390 395 400 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 405 410 415 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 420 425 430 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 435 440 445 Pro Gly Lys 450 <210> 157 <211> 213 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Chimeric anti-CD20 antibody-L <400> 157 Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ile 20 25 30 His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr 35 40 45 Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu 65 70 75 80 Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Thr Ser Asn Pro Pro Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110 Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125 Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140 Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 145 150 155 160 Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175 Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190 Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205 Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 158 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Humanized anti-Her2 antibody-HC <400> 158 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly Lys 450 <210> 159 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Humanized anti-Her2 antibody-L <400> 159 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 160 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Chimeric anti-EGFR antibody-HC <400> 160 Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Ser Gly Gly Asn Thr Asp Tyr Asn Thr Pro Phe Thr 50 55 60 Ser Arg Leu Ser Ile Asn Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Phe 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Asn Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Ala Leu Thr Tyr Tyr Asp Tyr Glu Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 Lys <210> 161 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Chimeric anti-EGFR antibody-L <400> 161 Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Val Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Asn 20 25 30 Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Ser 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn Asn Trp Pro Thr 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 162 <211> 329 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Human IgG1 CH1-CH2-CH3 domain with reduced/abolished effector function <400> 162 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 325 <210> 163 <211> 329 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Human IgG1 CH1-CH2-CH3 domain with reduced/abolished effector function knob chain <400> 163 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 325 <210> 164 <211> 329 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Human IgG1 CH1-CH2-CH3 domain with reduced/abolished effector function Hole chain <400> 164 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 325 <210> 165 <211> 587 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Humanized PD-1 antagonist antibody -HC-IL-2 variant <400> 165 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Pro Asp Ser Ser Gly Val Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 210 215 220 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Ala His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly 435 440 445 Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr 450 455 460 Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu His Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn 465 470 475 480 Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe 485 490 495 Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys 500 505 510 Leu Glu Glu Glu Leu Lys Arg Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln 515 520 525 Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn 530 535 540 Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu 545 550 555 560 Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile 565 570 575 Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 580 585 <210> 166 <211> 587 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Humanized PD-1 antagonist antibody -HC-IL-2 variant knob chain <400> 166 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Pro Asp Ser Ser Gly Val Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 210 215 220 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly 435 440 445 Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr 450 455 460 Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn 465 470 475 480 Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe 485 490 495 Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys 500 505 510 Leu Glu Glu Glu Leu Lys Arg Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln 515 520 525 Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn 530 535 540 Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu 545 550 555 560 Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile 565 570 575 Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 580 585 <210> 167 <211> 587 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Humanized PD-1 antagonist antibody-HC-IL-2 variant knob chain <400> 167 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Pro Asp Ser Ser Gly Val Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 210 215 220 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly 435 440 445 Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr 450 455 460 Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn 465 470 475 480 Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe 485 490 495 Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys 500 505 510 Leu Glu Glu Glu Leu Lys Gln Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln 515 520 525 Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn 530 535 540 Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu 545 550 555 560 Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile 565 570 575 Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 580 585 <210> 168 <211> 587 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Humanized PD-1 antagonist antibody-HC-IL-2 variant knob chain <400> 168 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Pro Asp Ser Ser Gly Val Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 210 215 220 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly 435 440 445 Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr 450 455 460 Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Gln Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn 465 470 475 480 Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe 485 490 495 Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys 500 505 510 Leu Glu Glu Glu Leu Lys Gln Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln 515 520 525 Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn 530 535 540 Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu 545 550 555 560 Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile 565 570 575 Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 580 585 <210> 169 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Humanized PD-1 antagonist antibody-IgG1-HC hole chain <400> 169 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Pro Asp Ser Ser Gly Val Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 210 215 220 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Cys Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 <210> 170 <211> 165 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Human IL-2R? Sushi domains sequence <400> 170 Glu Leu Cys Asp Asp Asp Pro Pro Glu Ile Pro His Ala Thr Phe Lys 1 5 10 15 Ala Met Ala Tyr Lys Glu Gly Thr Met Leu Asn Cys Glu Cys Lys Arg 20 25 30 Gly Phe Arg Arg Ile Lys Ser Gly Ser Leu Tyr Met Leu Cys Thr Gly 35 40 45 Asn Ser Ser His Ser Ser Trp Asp Asn Gln Cys Gln Cys Thr Ser Ser 50 55 60 Ala Thr Arg Asn Thr Thr Lys Gln Val Thr Pro Gln Pro Glu Glu Gln 65 70 75 80 Lys Glu Arg Lys Thr Thr Glu Met Gln Ser Pro Met Gln Pro Val Asp 85 90 95 Gln Ala Ser Leu Pro Gly His Cys Arg Glu Pro Pro Pro Trp Glu Asn 100 105 110 Glu Ala Thr Glu Arg Ile Tyr His Phe Val Val Gly Gln Met Val Tyr 115 120 125 Tyr Gln Cys Val Gln Gly Tyr Arg Ala Leu His Arg Gly Pro Ala Glu 130 135 140 Ser Val Cys Lys Met Thr His Gly Lys Thr Arg Trp Thr Gln Pro Gln 145 150 155 160 Leu Ile Cys Thr Gly 165 <210> 171 <211> 554 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0327 <400> 171 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 225 230 235 240 Ser Glu Leu Cys Asp Asp Asp Pro Pro Glu Ile Pro His Ala Thr Phe 245 250 255 Lys Ala Met Ala Tyr Lys Glu Gly Thr Met Leu Asn Cys Glu Cys Lys 260 265 270 Arg Gly Phe Arg Arg Ile Lys Ser Gly Ser Leu Tyr Met Leu Cys Thr 275 280 285 Gly Asn Ser Ser His Ser Ser Trp Asp Asn Gln Cys Gln Cys Thr Ser 290 295 300 Ser Ala Thr Arg Asn Thr Thr Lys Gln Val Thr Pro Gln Pro Glu Glu 305 310 315 320 Gln Lys Glu Arg Lys Thr Thr Glu Met Gln Ser Pro Met Gln Pro Val 325 330 335 Asp Gln Ala Ser Leu Pro Gly His Cys Arg Glu Pro Pro Pro Trp Glu 340 345 350 Asn Glu Ala Thr Glu Arg Ile Tyr His Phe Val Val Gly Gln Met Val 355 360 365 Tyr Tyr Gln Cys Val Gln Gly Tyr Arg Ala Leu His Arg Gly Pro Ala 370 375 380 Glu Ser Val Cys Lys Met Thr His Gly Lys Thr Arg Trp Thr Gln Pro 385 390 395 400 Gln Leu Ile Cys Thr Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 405 410 415 Gly Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln 420 425 430 Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly 435 440 445 Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys 450 455 460 Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu 465 470 475 480 Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser 485 490 495 Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val 500 505 510 Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr 515 520 525 Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr 530 535 540 Phe Ser Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 545 550 <210> 172 <211> 548 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0422 <400> 172 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 130 135 140 Gly Gly Gly Ser Glu Leu Cys Asp Asp Asp Pro Pro Glu Ile Pro His 145 150 155 160 Ala Thr Phe Lys Ala Met Ala Tyr Lys Glu Gly Thr Met Leu Asn Cys 165 170 175 Glu Cys Lys Arg Gly Phe Arg Arg Ile Lys Ser Gly Ser Leu Tyr Met 180 185 190 Leu Cys Thr Gly Asn Ser Ser His Ser Ser Trp Asp Asn Gln Cys Gln 195 200 205 Cys Thr Ser Ser Ala Thr Arg Asn Thr Thr Lys Gln Val Thr Pro Gln 210 215 220 Pro Glu Glu Gln Lys Glu Arg Lys Thr Thr Glu Met Gln Ser Pro Met 225 230 235 240 Gln Pro Val Asp Gln Ala Ser Leu Pro Gly His Cys Arg Glu Pro Pro 245 250 255 Pro Trp Glu Asn Glu Ala Thr Glu Arg Ile Tyr His Phe Val Val Gly 260 265 270 Gln Met Val Tyr Tyr Gln Cys Val Gln Gly Tyr Arg Ala Leu His Arg 275 280 285 Gly Pro Ala Glu Ser Val Cys Lys Met Thr His Gly Lys Thr Arg Trp 290 295 300 Thr Gln Pro Gln Leu Ile Cys Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 305 310 315 320 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala 325 330 335 Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 340 345 350 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 355 360 365 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 370 375 380 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 385 390 395 400 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 405 410 415 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 420 425 430 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 435 440 445 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln 450 455 460 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 465 470 475 480 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 485 490 495 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 500 505 510 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 515 520 525 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 530 535 540 Leu Ser Pro Gly 545 <210> 173 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0482-Hole chain <400> 173 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser 225 230 235 240 Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln 245 250 255 Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg 260 265 270 Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys 275 280 285 His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu 290 295 300 Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile 305 310 315 320 Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr 325 330 335 Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu 340 345 350 Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 355 360 365 <210> 174 <211> 405 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P-0482-Knob chain <400> 174 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 1 5 10 15 Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 225 230 235 240 Ser Glu Leu Cys Asp Asp Asp Pro Pro Glu Ile Pro His Ala Thr Phe 245 250 255 Lys Ala Met Ala Tyr Lys Glu Gly Thr Met Leu Asn Cys Glu Cys Lys 260 265 270 Arg Gly Phe Arg Arg Ile Lys Ser Gly Ser Leu Tyr Met Leu Cys Thr 275 280 285 Gly Asn Ser Ser His Ser Ser Trp Asp Asn Gln Cys Gln Cys Thr Ser 290 295 300 Ser Ala Thr Arg Asn Thr Thr Lys Gln Val Thr Pro Gln Pro Glu Glu 305 310 315 320 Gln Lys Glu Arg Lys Thr Thr Glu Met Gln Ser Pro Met Gln Pro Val 325 330 335 Asp Gln Ala Ser Leu Pro Gly His Cys Arg Glu Pro Pro Pro Trp Glu 340 345 350 Asn Glu Ala Thr Glu Arg Ile Tyr His Phe Val Val Gly Gln Met Val 355 360 365 Tyr Tyr Gln Cys Val Gln Gly Tyr Arg Ala Leu His Arg Gly Pro Ala 370 375 380 Glu Ser Val Cys Lys Met Thr His Gly Lys Thr Arg Trp Thr Gln Pro 385 390 395 400 Gln Leu Ile Cys Thr 405 <210> 175 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Humanized PD-1 antagonist antibody-IgG1-HC hole chain <400> 175 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Pro Asp Ser Ser Gly Val Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 210 215 220 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 <210> 176 <211> 594 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Humanized PD-1 antagonist antibody-HC-IL-2 variant knob chain <400> 176 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Pro Asp Ser Ser Gly Val Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 210 215 220 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Cys Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly 435 440 445 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr 450 455 460 Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu His 465 470 475 480 Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys 485 490 495 Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr 500 505 510 Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Arg Leu Glu 515 520 525 Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg 530 535 540 Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser 545 550 555 560 Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val 565 570 575 Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr 580 585 590 Leu Thr <210> 177 <211> 594 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Humanized PD-1 antagonist antibody-HC-IL-2 variant knob chain <400> 177 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Pro Asp Ser Ser Gly Val Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 210 215 220 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Cys Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly 435 440 445 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr 450 455 460 Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu 465 470 475 480 Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys 485 490 495 Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr 500 505 510 Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Arg Leu Glu 515 520 525 Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg 530 535 540 Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser 545 550 555 560 Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val 565 570 575 Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr 580 585 590 Leu Thr <210> 178 <211> 594 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Humanized PD-1 antagonist antibody-HC-IL-2 variant knob chain <400> 178 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Pro Asp Ser Ser Gly Val Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 210 215 220 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Cys Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly 435 440 445 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr 450 455 460 Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Gln 465 470 475 480 Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys 485 490 495 Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr 500 505 510 Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Gln Leu Glu 515 520 525 Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg 530 535 540 Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser 545 550 555 560 Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val 565 570 575 Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr 580 585 590 Leu Thr <210> 179 <211> 594 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Humanized PD-1 antagonist antibody-HC-IL-2 variant knob chain <400> 179 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Pro Asp Ser Ser Gly Val Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 210 215 220 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Cys Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly 435 440 445 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr 450 455 460 Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Gln 465 470 475 480 Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys 485 490 495 Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr 500 505 510 Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Arg Leu Glu 515 520 525 Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg 530 535 540 Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser 545 550 555 560 Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val 565 570 575 Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr 580 585 590 Leu Thr <210> 180 <211> 594 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Humanized PD-1 antagonist antibody-HC-IL-2 variant knob chain <400> 180 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Pro Asp Ser Ser Gly Val Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 210 215 220 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Cys Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly 435 440 445 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr 450 455 460 Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu His 465 470 475 480 Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys 485 490 495 Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr 500 505 510 Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Gln Leu Glu 515 520 525 Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg 530 535 540 Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser 545 550 555 560 Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val 565 570 575 Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr 580 585 590 Leu Thr <210> 181 <211> 594 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Humanized PD-1 antagonist antibody-HC-IL-2 variant knob chain <400> 181 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Pro Asp Ser Ser Gly Val Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 210 215 220 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Cys Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly 435 440 445 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr 450 455 460 Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Gln 465 470 475 480 Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys 485 490 495 Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr 500 505 510 Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Asn Leu Glu 515 520 525 Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg 530 535 540 Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser 545 550 555 560 Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val 565 570 575 Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr 580 585 590 Leu Thr <210> 182 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Benchmark PD-1 antagonist antibody-HC-hole chain <400> 182 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Arg Asp Ile Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Leu Leu Thr Gly Arg Val Tyr Phe Ala Leu Asp Ser Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly <210> 183 <211> 597 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Benchmark PD-1 antagonist antibody-HC-Benchmark IL-2 variant knob chain <400> 183 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Arg Asp Ile Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Leu Leu Thr Gly Arg Val Tyr Phe Ala Leu Asp Ser Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 450 455 460 Ala Pro Ala Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 465 470 475 480 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 485 490 495 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Ala Lys Phe Ala Met Pro Lys 500 505 510 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 515 520 525 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Gly Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 530 535 540 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 545 550 555 560 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 565 570 575 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ala Gln Ser Ile 580 585 590 Ile Ser Thr Leu Thr 595 <210> 184 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Benchmark PD-1 antagonist antibody-L? <400> 184 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Arg Asp Ile Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Leu Leu Thr Gly Arg Val Tyr Phe Ala Leu Asp Ser Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly <210> 185 <211> 443 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Surrogate mouse PD-1 antagonist antibody HC chain 1 <400> 185 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Ser 20 25 30 Tyr Arg Trp Asn Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Arg Leu Glu Trp 35 40 45 Met Gly Tyr Ile Asn Ser Ala Gly Ile Ser Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Arg Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe 65 70 75 80 Leu Gln Val Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Asp Asn Met Gly Thr Thr Pro Phe Thr Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val 115 120 125 Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Thr Trp Pro Ser Gln Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala 195 200 205 Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys 210 215 220 Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe 225 230 235 240 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val 245 250 255 Thr Cys Val Val Val Ala Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe 260 265 270 Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Lys Pro 275 280 285 Arg Glu Glu Gln Ile Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro 290 295 300 Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val 305 310 315 320 Asn Ser Ala Ala Phe Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr 325 330 335 Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys 340 345 350 Lys Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asn 355 360 365 Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro 370 375 380 Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Lys Thr Asp Gly Ser 385 390 395 400 Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala 405 410 415 Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His 420 425 430 His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly 435 440 <210> 186 <211> 443 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Surrogate mouse PD-1 antagonist antibody HC chain 2 <400> 186 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Ser 20 25 30 Tyr Arg Trp Asn Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Arg Leu Glu Trp 35 40 45 Met Gly Tyr Ile Asn Ser Ala Gly Ile Ser Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Arg Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe 65 70 75 80 Leu Gln Val Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Asp Asn Met Gly Thr Thr Pro Phe Thr Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val 115 120 125 Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Thr Trp Pro Ser Gln Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala 195 200 205 Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys 210 215 220 Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe 225 230 235 240 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val 245 250 255 Thr Cys Val Val Val Ala Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe 260 265 270 Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Lys Pro 275 280 285 Arg Glu Glu Gln Ile Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro 290 295 300 Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val 305 310 315 320 Asn Ser Ala Ala Phe Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr 325 330 335 Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys 340 345 350 Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asn 355 360 365 Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro 370 375 380 Ala Glu Asn Tyr Asp Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser 385 390 395 400 Tyr Phe Val Tyr Ser Asp Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala 405 410 415 Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His 420 425 430 His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly 435 440 <210> 187 <211> 218 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Surrogate mouse PD-1 antagonist antibody LC <400> 187 Asp Ile Val Met Thr Gln Gly Thr Leu Pro Asn Pro Val Pro Ser Gly 1 5 10 15 Glu Ser Val Ser Ile Thr Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu Tyr Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Trp Met Ser Thr Arg Ala Ser Gly Val Ser 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Gly Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly 85 90 95 Leu Glu Phe Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg 100 105 110 Thr Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln 115 120 125 Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr 130 135 140 Pro Arg Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln 145 150 155 160 Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 165 170 175 Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg 180 185 190 His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro 195 200 205 Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys 210 215 <210> 188 <211> 133 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Benchmark IL-2 variant <400> 188 Ala Pro Ala Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Ala Lys Phe Ala Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Gly Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ala Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 189 <211> 586 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Humanized PD-1 antagonist antibody-HC-IL-2 variant knob chain <400> 189 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Pro Asp Ser Ser Gly Val Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 210 215 220 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Cys Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly 435 440 445 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Lys Thr Gln 450 455 460 Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly 465 470 475 480 Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys 485 490 495 Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu 500 505 510 Glu Glu Glu Leu Lys Arg Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser 515 520 525 Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val 530 535 540 Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr 545 550 555 560 Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr 565 570 575 Phe Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 580 585 <210> 190 <211> 585 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Humanized PD-1 antagonist antibody-HC-IL-2 variant knob chain <400> 190 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Pro Asp Ser Ser Gly Val Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 210 215 220 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Cys Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly 435 440 445 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Thr Gln Leu 450 455 460 Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile 465 470 475 480 Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe 485 490 495 Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu 500 505 510 Glu Glu Leu Lys Arg Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys 515 520 525 Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile 530 535 540 Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala 545 550 555 560 Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe 565 570 575 Ile Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 580 585 <210> 191 <211> 584 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Humanized PD-1 antagonist antibody-HC-IL-2 variant knob chain <400> 191 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Pro Asp Ser Ser Gly Val Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 210 215 220 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Cys Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly 435 440 445 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Leu Gln 450 455 460 Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn 465 470 475 480 Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr 485 490 495 Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu 500 505 510 Glu Leu Lys Arg Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn 515 520 525 Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val 530 535 540 Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp 545 550 555 560 Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ile 565 570 575 Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr 580

Claims

단리된 인터루킨-2(IL-2) 변이체 폴리펩타이드로서,
상기 IL-2 변이체 폴리펩타이드는 다른 아미노산으로 치환되는 아미노산 잔기 위치 R38, T41, F42, F44, E62, P65, E68, Y107, 또는 S125 중 하나 이상을 갖는 서열번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 IL-2 변이체 폴리펩타이드는 IL-2Rα에 결합할 수 없고 서열번호: 3에 의해 표시되는 폴리펩타이드와 비교하여 Treg 세포를 더 이상 우선적으로 활성화하지 않지만,
복합체에 결합하고 활성화하는 능력을 유지하는, 단리된 인터루킨-2(IL-2) 변이체 폴리펩타이드.
단리된 IL-2 변이체 폴리펩타이드로서,
상기 IL-2 변이체 폴리펩타이드는 다른 아미노산으로 치환되는 아미노산 잔기 위치 R38, T41, F42, F44, E62, P65, E68, Y107, 또는 S125 중 하나 이상을 갖는 서열번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 IL-2 변이체 폴리펩타이드는 서열번호: 3에 의해 표시되는 폴리펩타이드와 비교하여 더 낮은 Treg 활성으로 IL-2Rα에 대한 감소된 결합을 입증하지만,
복합체에 결합하고 활성화하는 능력을 유지하는, 단리된 IL-2 변이체 폴리펩타이드.
단리된 IL-2 변이체 폴리펩타이드로서,
상기 IL-2 변이체 폴리펩타이드는 다른 아미노산으로 치환되는 아미노산 잔기 위치 R38, T41, F42, F44, E62, P65, E68, Y107, 또는 S125 중 하나 이상을 갖는 서열번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 IL-2 변이체 폴리펩타이드는 서열번호: 3에 의해 표시되는 폴리펩타이드와 비교하여 증가된 Treg 활성으로 IL-2Rα에 대한 향상된 결합을 입증하는, 단리된 IL-2 변이체 폴리펩타이드
단리된 IL-2 변이체 폴리펩타이드로서,
상기 IL-2 변이체 폴리펩타이드는 다른 아미노산으로 치환되는 아미노산 잔기 위치 L19, D20, S125 또는 Q126 중 하나 이상을 갖는 서열번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 IL-2 변이체 폴리펩타이드는 서열번호: 3에 의해 표시되는 폴리펩타이드와 비교하여
복합체를 활성화하는 감소된 능력을 입증하는, 단리된 IL-2 변이체 폴리펩타이드.
단리된 IL-2 변이체 폴리펩타이드로서,
상기 IL-2 변이체 폴리펩타이드는 다른 아미노산으로 치환되는 아미노산 잔기 위치 S125 중 하나를 포함하는 서열번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 IL-2 변이체 폴리펩타이드는 서열번호: 3에 의해 표시되는 폴리펩타이드와 비교하여 개선된 단백질 발현 및 순도를 입증하는, 단리된 IL-2 변이체 폴리펩타이드.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 아미노산 치환은: 위치 19에서 L19D, L19H, L19N, L19P, L19Q, L19R, L19S, L19Y의 상기 치환, 위치 38에서 R38A, R38F, R38G의 상기 치환, 위치 41에서 T41A, T41G, and T41V의 상기 치환, 위치 42에서 F42A의 상기 치환, 위치 44에서 F44G 및 F44V의 상기 치환, 위치 62에서 E62A, E62F, E62H, 및 E62L의 상기 치환, 위치 65에서 P65A, P65E, P65G, P65H, P65K, P65N, P65Q, P65R의 상기 치환, 위치 68에서 E68E, E68F, E68H, E68L, 및 E68P의 상기 치환, 위치 107에서 Y107G, Y107H, Y107L 및 Y107V의 상기 치환, 위치 125에서 S125I 상기 치환, 및 위치 126에서 Q126E의 상기 치환, 및 서열번호: 3의 N-말단에서의 5, 6, 7, 8, 9, 10 또는 11개 아미노산의 결실 돌연변이, 또는 이러한 치환 또는 결실 돌연변이의 임의의 조합으로 구성되는 군으로부터 선택되는, 단리된 IL-2 변이체 폴리펩타이드.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 IL-2 변이체 폴리펩타이드는 서열번호: 3의 아미노산 잔기 위치 P65 및 S125에서 2개의 아미노산 치환을 포함하는, 단리된 IL-2 변이체 폴리펩타이드.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 IL-2 변이체 폴리펩타이드는 서열번호: 3의 아미노산 잔기 위치 L19, P65 및 S125에서 3개의 아미노산 치환을 포함하는, 단리된 IL-2 변이체 폴리펩타이드.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 IL-2 변이체 폴리펩타이드는 서열번호: 31-66 및 서열번호: 111-120에 제시되는 아미노산 서열로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 IL-2 변이체 폴리펩타이드.
단리된 IL-2 변이체 폴리펩타이드로서,
서열번호: 3과 적어도 약 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고 상기 IL-2 변이체 폴리펩타이드는 서열번호: 3에 의해 표시되는 폴리펩타이드와 비교하여 Tregs를 더 이상 우선적으로 활성화하지 않지만, 상기 IL-2 수용체 복합체를 활성화하는 능력을 유지하는, 단리된 IL-2 변이체 폴리펩타이드.
단리된 융합 단백질로서,
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 1) IL-2 변이체 폴리펩타이드 및 2) 이종 단백질을 포함하는, 단리된 융합 단백질.
제11항에 있어서,
상기 IL-2 변이체 폴리펩타이드는, 단량체 또는 이량체 형태 중 어느 하나에서, 선택적으로 펩타이드 링커를 통해, 그 N-말단 아미노산에서 상기 이종 단백질의 C-말단 아미노산에 융합되는, 단리된 융합 단백질.
제11항에 있어서,
상기 IL-2 변이체 폴리펩타이드는, 단량체 또는 이량체 형태 중 어느 하나에서, 선택적으로 펩타이드 링커를 통해, 그 C-말단 아미노산에서 상기 이종 단백질의 상기 N-말단 아미노산에 융합되는, 단리된 융합 단백질.
제11항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 이종 단백질은 상기 IL-2 변이체의 순환 반감기를 증가시키는, 단리된 융합 단백질.
제11항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 이종 단백질은 상기 IL-2 변이체 폴리펩타이드의 발현 수준 및 전체 순도를 향상시키는, 단리된 융합 단백질.
제11항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 이종 단백질은 마커 또는 태그 또는 표적화 모이어티의 역할을 하는, 단리된 융합 단백질.
제11항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 이종 단백질은 인간 IgG1 Fc 도메인, 인간 IgG2 Fc 도메인, 인간 IgG3 Fc 도메인, 인간 IgG4 Fc 도메인, IgA Fc 도메인, IgD Fc 도메인, IgE Fc 도메인, IgG Fc 도메인, 및 IgM Fc 도메인으로 구성되는 군으로부터 선택되는, 단리된 융합 단백질.
제17항에 있어서,
상기 Fc 도메인은 침묵(silenced) 효과기 기능을 갖고/갖거나 반감기 연장 기능을 갖는 Fc 도메인인, 단리된 융합 단백질.
제17항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 Fc 도메인은 서열번호: 7-10 및 서열번호: 134-135에 제시되는 아미노산 서열로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 Fc 도메인인, 단리된 융합 단백질.
제11항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 융합 단백질은 서열번호: 67-107에 제시되는 아미노산 서열로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 융합 단백질.
제11항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 이종 단백질은 종양 관련 항원(TAA)을 표적화하는 항체, 항체 중쇄 또는 경쇄, 항체 단편, 단백질 및 펩타이드 항체의 표적화 모이어티인, 단리된 융합 단백질.
제21항에 있어서,
상기 항체, 또는 항체 단편은: PD-1 길항적 항체; PD-L1 길항적 항체; TIGIT 길항적 항체; CTLA-4 길항적 항체; CD20 길항적 항체; Her-2/neu 길항적 항체; EGFR 길항적 항체; FAP 길항적 항체; 인테그린 α₄β₇에 대한 항염증 항체; TNFα 길항적 항체; 및 작용적 CD40 항체로 구성되는 군으로부터 선택되는, 단리된 융합 단백질.
제22항에 있어서,
상기 항체는 길항적 섬유아세포 활성화 단백질(FAP) 항체 또는 항체 단편인, 단리된 융합 단백질.
제23항에 있어서,
상기 항체는 서열번호: 136 및 137에 제시되는 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 인간화된 길항적 FAP 항체인, 단리된 융합 단백질.
제21항에 있어서,
상기 이종 단백질은 면역 관문 조절자에 대한 항체 또는 항체 단편인, 단리된 융합 단백질.
제25항에 있어서,
상기 항체는 길항적으로 프로그래밍된 사멸-1(PD-1) 항체 또는 항체 단편인, 단리된 융합 단백질.
제26항에 있어서,
상기 항체는 서열번호: 138 및 139에 제시되는 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열; 서열번호: 140 및 141에 제시되는 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열; 서열번호: 142 및 143에 제시되는 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열; 서열번호: 144 및 145에 제시되는 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열; 및 서열번호: 146 및 147에 제시되는 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 항체로부터 선택되는 길항적 인간화된 PD-1 항체인, 단리된 융합 단백질.
제11항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 IL-2 변이체 폴리펩타이드는, 이량체 또는 단량체 형태 중 어느 하나에서, 선택적으로 펩타이드 링커를 통해, 그 N-말단 아미노산에서 상기 이종 단백질의 상기 C-말단 아미노산에 융합되는, 단리된 융합 단백질.
제28항에 있어서,
상기 IL-2 변이체 폴리펩타이드는, 이량체 또는 단량체 형태 중 어느 하나에서, 펩타이드 링커를 통해 상기 이종 단백질에 융합되는, 단리된 융합 단백질.
제29항에 있어서,
상기 펩타이드 링커는 1개 내지 40개 사이의 아미노산을 포함하는, 단리된 융합 단백질.
약제학적으로 허용가능한 담체(carrier)를 갖는 혼합물에 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 따른 IL-2 변이체 폴리펩타이드 또는 단리된 융합 단백질을 포함하는, 약제학적 조성물.
대상체에서 질환 또는 감염을 치료하는 방법에 있어서, 상기 대상체에게 제31항에 따른 상기 약제학적 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
제32항에 있어서,
상기 질환은 암인, 방법.
제33항에 있어서,
상기 방법은 대상체에서 암을 치료할 수 있는 제2 치료제 또는 모덜리티 (modality)를 투여하는 단계를 더 포함하는, 방법.
제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 따른 IL-2 변이체 폴리펩타이드 또는 융합 단백질을 인코딩하는, 단리된 핵산 분자.
제35항의 핵산 분자를 포함하는, 발현 벡터.
제36항의 핵산 분자를 포함하는, 숙주 세포.
제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 따른 IL-2 변이체 폴리펩타이드 또는 융합 단백질을 생성하는 방법으로서,
상기 IL-2 변이체 폴리펩타이드 또는 융합 단백질의 발현을 촉진시키는 조건 하에서 제37항의 상기 숙주 세포를 배양하는 단계 및 상기 IL-2 변이체 폴리펩타이드 또는 융합 단백질을 회수하는 단계를 포함하는, 방법.
제38항의 방법에 의해 생성되는 단리된 IL-2 변이체 폴리펩타이드 또는 융합 단백질.