TW201707711A - 寡核苷酸組合物及其方法 - Google Patents

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Abstract

本發明尤其關於選擇設計之對掌性受控寡核苷酸、對掌性受控寡核苷酸組合物，及其製造及使用方法。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物提供核酸聚合物之裂解模式不同於參考寡核苷酸組合物。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物提供在核酸聚合物之互補序列內的單一位點裂解。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物具有本文所述之任何鹼基序列，及/或模式或鹼基修飾、糖修飾、主鏈修飾及/或立體化學，或此等要素之組合。

Description

寡核苷酸組合物及其方法 相關申請案之交叉參考
本申請案主張2015年7月22日申請之美國臨時申請案第62/195,779號、2015年10月2日申請之美國臨時申請案第62/236,847號及2016年5月4日申請之美國臨時申請案第62/331,960號的優先權，該等申請案中之每一者的全部內容以引用的方式併入本文中。
寡核苷酸適用於治療、診斷、研究及奈米材料應用。天然產生之核酸(例如，未經修飾之DNA或RNA)在療法上之用途可能有限，例如歸因於其對細胞外及細胞內核酸酶之不穩定性及/或其不良的細胞透性及分佈。需要新穎且改良之寡核苷酸及寡核苷酸組合物，諸如新穎反義及siRNA寡核苷酸及寡核苷酸組合物。
本發明尤其認識到，寡核苷酸之結構要素(諸如鹼基序列)、化學修飾(例如，糖、鹼基及/或核苷酸間鍵聯之修飾、及其模式)及/或立體化學(例如，主鏈對掌性中心(對掌性核苷酸間鍵聯)之立體化學及/或其模式)會對寡核苷酸之特性(例如活性)造成巨大影響。在一些實施例中，本發明證明，包含具有受控結構要素(例如受控化學修飾及/或受控主鏈立體化學模式)之寡核苷酸的寡核苷酸組合物提供出人意料的特性，包括(但不限於)本文所述之彼等特性。在一些實施例中，本 發明證明，化學修飾與立體化學之組合可提供出人意料的、大大改良的特性(例如，生物活性、選擇性等)。在一些實施例中，本發明提供一種寡核苷酸組合物，其具有特定的鹼基序列及/或糖修飾模式(例如，2'-OMe、2'-F、2'-MOE等)及/或模式或鹼基修飾(例如，5-甲基胞嘧啶)及/或主鏈修飾模式(磷酸酯或硫代磷酸酯)及/或主鏈修飾之立體化學之模式(例如，各硫代磷酸酯為Sp或Rp)。
在一些實施例中，核苷酸間鍵聯之修飾可將經修飾之鍵聯中之磷原子轉換成對掌性中心。舉例而言，在硫代磷酸酯(PS)修飾中，用硫(S)原子置換一個鍵結至磷(P)原子之非橋接氧(O)原子。在寡核苷酸合成中使用PS修飾之結果為，在磷處形成對掌性中心，其可具有「Sp」或「Rp」組態。舉例而言，具有19個PS鍵聯[例如長度為具有20個核苷酸、19個PS修飾，在各PS修飾處各自具有兩種可能的立體化學(Sp或Rp)]之習知立體無規PS修飾寡核苷酸組合物為超過500,000(219)種立體異構體之無規混合物，該等立體異構體各自具有相同的核苷酸序列(例如，鹼基序列)，但沿其主鏈之立體化學不同；此類組合物為「立體無規」寡核苷酸組合物。在一些實施例中，與立體無規組合物形成對照，對掌性受控寡核苷酸組合物為基本上純的單一寡核苷酸製劑，因為該組合物中預定含量之寡核苷酸具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式。在一些實施例中，一些寡核苷酸組合物為立體純的(亦即，對掌性受控寡核苷酸組合物)，其中各PS處之立體化學已限定(Sp或Rp)。在一些實施例中，在寡核苷酸之立體無規組合物中，各種寡核苷酸可具有相同鹼基序列、相同糖修飾模式(例如，2'-OMe、2'-F、2'-OME等)、相同鹼基修飾模式(例如，5-甲基胞嘧啶)及相同主鏈修飾模式(磷酸酯或PS)，但具有不同主鏈對掌性中心模式，且由於非立體控制性合成，所以其含量為無規的(未像本文所例示之某些使用對掌性輔助劑之方法一樣經 由立體控制性合成而預先確定)。對掌性受控寡核苷酸組合物可經過挑選，使得相比於相同鹼基序列之寡核苷酸之立體無規製劑，所要生物活性變大(例如，在RNA干擾或核糖核酸酶H介導之路徑中之活性、效率變大等)，且不當活性(例如，不當免疫原性、毒性等)降低。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物能夠較佳地區分突變型(mu)與野生型(wt)HTT序列(具有單一nt差異)。
本發明尤其認識到，立體無規寡核苷酸製劑含有複數個彼此不同的獨特化學實體，例如在寡核苷酸鏈內之個別主鏈對掌性中心之立體化學結構方面不同。在不控制主鏈對掌性中心之立體化學的情況下，立體無規寡核苷酸製劑提供不受控組合物，其包含不確定含量之寡核苷酸立體異構體。即使此等立體異構體可具有相同鹼基序列，但至少歸因於其不同的主鏈立體化學，所以其仍為不同的化學實體，且如本文所展現，其可具有不同特性，例如生物活性。本發明尤其提供新穎組合物，其為或含有感興趣寡核苷酸之特定立體異構體。在一些實施例中，特定立體異構體可例如由其鹼基序列、其長度、其主鏈鍵聯模式及其主鏈對掌性中心模式限定。如此項技術中所瞭解，在一些實施例中，鹼基序列可指寡核苷酸中之核苷殘基(例如，糖及/或鹼基組分，相對於標準天然產生之核苷酸而言，諸如腺嘌呤、胞嘧啶、鳥苷、胸腺嘧啶及尿嘧啶)之一致性及/或修飾狀態及/或可指該等殘基之雜交特徵(亦即，與特定互補殘基雜交之能力)。
本發明尤其證明，特定寡核苷酸之個別立體異構體可顯示彼此不同的穩定性及/或活性(例如，功能及/或毒性特性)。此外，本發明證明，經由包括特定對掌性結構及/或特定對掌性結構在寡核苷酸內之定位達成之穩定性及/或活性改良可能類似於，或甚至優於經由以下達成之彼等改良：使用特定主鏈鍵聯、殘基修飾等(例如，經由使用某些類型之經修飾之磷酸酯[例如硫代磷酸酯、經取代之硫代磷酸 酯等]、糖修飾[例如2'修飾等]及/或鹼基修飾[例如甲基化等])。
本發明尤其認識到，在一些實施例中，寡核苷酸之特性(例如，穩定性及/或活性)可藉由最佳化其主鏈對掌性中心模式來調整，視情況與寡核苷酸之一或多種其他特徵(例如，鍵聯模式、核苷修飾模式等)之調整/最佳化組合。
在一些實施例中，本發明提供寡核苷酸之組合物，其中該等寡核苷酸具有共同主鏈對掌性中心模式，其出乎意料地大大增強寡核苷酸之穩定性及/或生物活性。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式提供增加的穩定性。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式提供出人意料地增加的活性。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式提供增加的穩定性及活性。在一些實施例中，當寡核苷酸用於裂解核酸聚合物時，主鏈對掌性中心模式本身出人意料地改變了目標核酸聚合物之裂解模式。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式可有效防止在二級位點裂解。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式形成新裂解位點。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式使裂解位點之數目降到最低。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式使裂解位點之數目降到最低，使得目標核酸聚合物僅在與寡核苷酸互補之目標核酸聚合物序列內的一個位點處裂解。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式可增強在裂解位點之裂解效率。在一些實施例中，寡核苷酸之主鏈對掌性中心模式可改良目標核酸聚合物之裂解。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式增加選擇性。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式使脫靶效應降到最低。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式增加選擇性，例如僅因單核苷酸多形現象(SNP)而不同之兩個目標序列之間的裂解選擇性。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式包含以下、包含以下之一或多個重複或為以下：(Sp)m(Rp)n、(Rp)n(Sp)m、(Np)t(Rp)n(Sp)m或(Sp)t(Rp)n(Sp)m。在本文所述之一些實施例中，m為1-50；且n為1- 10；且t為1-50。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式包含或為(Sp)m(Rp)n、(Rp)n(Sp)m、(Np)t(Rp)n(Sp)m或(Sp)t(Rp)n(Sp)m。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式包含或為(Rp)n(Sp)m、(Np)t(Rp)n(Sp)m或(Sp)t(Rp)n(Sp)m，其中m>2。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式為包含至少5、6、7、8、9或10個或更多個連續(Sp)位置的序列。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式為包含至少5個連續(Sp)位置的序列。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式為包含至少8個連續(Sp)位置的序列。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式為包含至少10個連續(Sp)位置的序列。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式為除單一(Rp)之外全由(Sp)組成的序列。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式為除在SNP之位置處或與該位置相鄰處的單一(Rp)之外全由(Sp)組成的序列。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式為除單一(Rp)之外全由(Sp)組成的序列，其中該分子具有翼-核心-翼形式。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式為除單一(Rp)之外全由(Sp)組成的序列，其中該分子具有翼-核心-翼形式，其中在5'端之翼為1-9nt長，核心為1-15nt長，且在3'端之翼為1-9nt長。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式為除單一(Rp)之外全由(Sp)組成的序列，其中該分子具有翼-核心-翼形式，其中在5'端之翼為5nt長，核心為1-15nt長，且在3'端之翼為5nt長。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式為除單一(Rp)之外全由(Sp)組成的序列，其中該分子具有翼-核心-翼形式，其中在5'端之翼為1-9nt長，核心為10nt長，且在3'端之翼為1-9nt長。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式為除單一(Rp)之外全由(Sp)組成的序列，其中該分子具有翼-核心-翼形式，其中在5'端之翼為5nt長，核心為10nt長，且在3'端之翼為5nt長。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式為除單一(Rp)之外全由(Sp)組成的序列，其中該分子具有翼-核心-翼形式，其中在5'端之翼為5nt長，核 心為10nt長，且在3'端之翼為5nt長，且至少一個翼包含具有2'-OMe修飾之核苷酸。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式為除單一(Rp)之外全由(Sp)組成的序列，其中該分子具有翼-核心-翼形式，其中各翼包含至少一個具有2'-OMe修飾之核苷酸。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式為除單一(Rp)之外全由(Sp)組成的序列，其中該分子具有翼-核心-翼形式，其中兩翼中之各核苷酸均具有2'-OMe修飾。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式為除單一(Rp)之外全由(Sp)組成的序列，其中該分子具有翼-核心-翼形式，其中在5'端之翼為5nt長，核心為10nt長，且在3'端之翼為5nt長，且各翼中之各核苷酸均具有2'-OMe修飾。在一些實施例中，寡核苷酸為單股且具有翼-核心-翼形式，其中在分子5'端之翼包含4至8nt，其中之每一者具有2'-OMe修飾且其中在分子5'端之nt具有呈Sp構形之硫代磷酸酯；核心包含8至12nt，其中之每一者為DNA(2'-H)，其中除一個nt具有在Rp位置之硫代磷酸酯之外，各自具有在Sp位置之硫代磷酸酯；且其中在分子3'端之翼包含4至8nt，其中之每一者具有2'-OMe修飾，且其中在分子3'端之nt包含呈Sp構形之硫代磷酸酯。在一些實施例中，寡核苷酸為單股且具有翼-核心-翼形式，其中在分子5'端之翼包含6nt，其中之每一者具有2'-OMe修飾且其中在分子5'端之nt具有呈Sp構形之硫代磷酸酯；核心包含10nt，其中之每一者為DNA(2'-H)，其中除一個nt具有在Rp位置之硫代磷酸酯之外，各自具有在Sp位置之硫代磷酸酯；且其中在分子3'端之翼包含6nt，其中之每一者具有2'-OMe修飾，且其中在分子3'端之nt包含呈Sp構形之硫代磷酸酯。
在一些實施例中，本發明認識到，諸如核苷及核苷酸間鍵聯之修飾的化學修飾可提供增強的特性。在一些實施例中，本發明證明，化學修飾與立體化學之組合可提供出人意料的、大大改良的特性(例如，生物活性、選擇性等)。在一些實施例中，化學組合(諸如糖、鹼 基及/或核苷酸間鍵聯之修飾)與立體化學模式(例如(Rp)n(Sp)m、(Np)t(Rp)n(Sp)m或(Sp)t(Rp)n(Sp)m)組合，得到具有出人意料地增強的特性的寡核苷酸及其組合物。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸組合物為對掌性受控的，且包含一或多個糖部分、一或多個天然磷酸酯鍵聯、一或多個硫代磷酸酯鍵聯之2'修飾與立體化學模式(Rp)n(Sp)m、(Np)t(Rp)n(Sp)m或(Sp)t(Rp)n(Sp)m的組合，其中m>2。
在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸組合物，其包含由具有以下定義之寡核苷酸：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈對掌性中心模式，該組合物為基本上純的單一寡核苷酸製劑，因為該組合物中預定含量之寡核苷酸具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式。
在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸組合物，其包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸，其特徵在於：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有相同鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃。
在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸組合物，其包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸，其特徵在於：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈對掌性中心模式，該組合物為基本上純的單一寡核 苷酸製劑，因為該組合物中至少約10%之寡核苷酸具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式。
本發明尤其認識到，寡核苷酸結構要素(例如，化學修飾、主鏈鍵聯、主鏈對掌性中心及/或主鏈磷修飾之模式)之組合可提供出人意料地改良的特性，諸如生物活性。在一些實施例中，本發明提供一種寡核苷酸組合物，其包含預定含量之寡核苷酸，該等寡核苷酸包含一或多個翼區及一共同核心區，其中：各翼區獨立地具有兩個或更多個鹼基之長度，且獨立地且視情況包含一或多個對掌性核苷酸間鍵聯；核心區獨立地具有兩個或更多個鹼基之長度，且獨立地包含一或多個對掌性核苷酸間鍵聯，且共同核心區具有：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈對掌性中心模式。
在一些實施例中，在包含翼-核心-翼形式之寡核苷酸中，「翼」為寡核苷酸中在核心之5'或3'端之部分，其中「核心」(或者命名為「空隙」)介於兩個翼之間。在一些實施例中，寡核苷酸可具有單翼及單核心；在該等情況下，翼在寡核苷酸之5'或3'端上。翼及核心可由若干結構要素(例如，糖、鹼基、主鏈或主鏈立體化學等之修飾或修飾模式)中之任一者定義。在一些實施例中，翼及核心由核苷修飾定義，其中翼包含核心區沒有的核苷修飾。在一些實施例中，所提供組合物中之寡核苷酸具有核苷修飾之翼-核心結構。在一些實施例中，所提供組合物中之寡核苷酸具有核苷修飾之核心-翼結構。在一些實施例中，所提供組合物中之寡核苷酸具有核苷修飾之翼-核心-翼結構。在一些實施例中，翼及核心由糖部分之修飾定義。在一些實施例中，翼及核心由鹼基部分之修飾定義。在一些實施例中，翼區中之 各糖部分具有相同2'修飾，該2'修飾不存在於核心區中。在一些實施例中，翼區中之各糖部分具有相同2'修飾，該2'修飾不同於核心區中之任何糖修飾。在一些實施例中，翼區中之各糖部分具有相同2'修飾，且核心區無2'修飾。在一些實施例中，當存在兩個或更多個翼時，翼區中之各糖部分具有相同2'修飾，但第一翼區中之共同2'修飾可與第二翼區中之共同2'修飾相同或不同。
在一些實施例中，各翼包含至少一個對掌性核苷酸間鍵聯及至少一個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼包含至少一個經修飾之糖部分。在一些實施例中，各翼糖部分經修飾。在一些實施例中，翼糖部分經不存在於核心區之修飾修飾。在一些實施例中，翼區僅具有在其末端中之一者或兩者處經修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，翼區僅具有在其5'端處經修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，翼區僅具有在其3'端處經修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，翼區僅具有在其5'及3'端處經修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，翼在核心之5'端，且翼僅具有在其5'端處經修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，翼在核心之5'端，且翼僅具有在其3'端處經修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，翼在核心之5'端，且翼僅具有在其5'及3'端處經修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，翼在核心之3'端，且翼僅具有在其5'端處經修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，翼在核心之3'端，且翼僅具有在其3'端處經修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，翼在核心之3'端，且翼僅具有在其5'及3'端處經修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，一個翼中對糖部分或核苷酸間鍵聯之修飾或其他修飾可不同於另一翼中之彼等修飾。
在一些實施例中，核心區內之各核苷酸間鍵聯經修飾。在一些實施例中，核心區內之各核苷酸間鍵聯為對掌性的。在一些實施例中，核心區之主鏈對掌性中心模式為(Sp)m(Rp)n、(Rp)n(Sp)m、 (Np)t(Rp)n(Sp)m或(Sp)t(Rp)n(Sp)m。在一些實施例中，核心區之主鏈對掌性中心模式為(Rp)n(Sp)m、(Np)t(Rp)n(Sp)m或(Sp)t(Rp)n(Sp)m，其中m>2。本發明尤其證明，在一些實施例中，該等模式可提供或增強目標序列(例如RNA序列)之控制裂解。
在一些實施例中，所提供組合物中之寡核苷酸具有共同主鏈磷修飾模式。在一些實施例中，所提供組合物為對掌性受控寡核苷酸組合物，因為該組合物含有預定含量之個別寡核苷酸類型之寡核苷酸，其中寡核苷酸類型由以下定義：1)鹼基序列；2)主鏈鍵聯模式；3)主鏈對掌性中心模式；及4)主鏈磷修飾模式。
如上文所指出且如此項技術中所瞭解，在一些實施例中，寡核苷酸之鹼基序列可指寡核苷酸中之核苷殘基(例如，糖及/或鹼基組分，相對於標準天然產生之核苷酸而言，諸如腺嘌呤、胞嘧啶、鳥苷、胸腺嘧啶及尿嘧啶)之一致性及/或修飾狀態及/或可指該等殘基之雜交特徵(亦即，與特定互補殘基雜交之能力)。
在一些實施例中，特定寡核苷酸類型可由以下定義：1A)鹼基一致性；1B)鹼基修飾模式；1C)糖修飾模式；2)主鏈鍵聯模式；3)主鏈對掌性中心模式；及4)主鏈磷修飾模式。
因此，在一些實施例中，特定類型之寡核苷酸可共用相同鹼基，但其鹼基修飾及/或糖修飾之模式不同。在一些實施例中，特定 類型之寡核苷酸可共用相同鹼基及鹼基修飾模式(包括例如缺乏鹼基修飾)，但糖修飾模式不同。
在一些實施例中，特定類型之寡核苷酸的化學上相同之處在於：其具有相同鹼基序列(包括長度)、對糖及鹼基部分具有相同化學修飾模式、相同主鏈鍵聯模式(例如，天然磷酸酯鍵聯模式、硫代磷酸酯鍵聯模式、硫代磷酸三酯鍵聯模式及其組合)、相同主鏈對掌性中心模式(例如，對掌性核苷酸間鍵聯之立體化學(Rp/Sp)之模式)及相同的主鏈磷修飾模式(例如，對核苷酸間磷原子之修飾模式，諸如-S-及式I之-L-R1)。
在一些實施例中，寡核苷酸之序列包含以下或由以下組成：本文中所揭示之任何寡核苷酸之序列。在一些實施例中，寡核苷酸之序列包含以下或由以下組成：選自表N1、表N2、表N3、表N4及表8之任何寡核苷酸的序列。在一些實施例中，寡核苷酸之序列包含以下或由以下組成：選自表N1A、表N2A、表N3A、表N4A及表8之任何寡核苷酸的序列。在一些實施例中，立體純(對掌性受控)寡核苷酸組合物中之寡核苷酸之序列包含以下或由以下組成：WV-1092、WVE120101、WV-2603或WV-2595之序列。在一些實施例中，寡核苷酸之序列包括以下中之任何一或多者：鹼基序列(包括長度)；糖及鹼基部分之化學修飾模式；主鏈鍵聯模式；天然磷酸酯鍵聯模式、硫代磷酸酯鍵聯模式、硫代磷酸三酯鍵聯模式及其組合；主鏈對掌性中心模式；對掌性核苷酸間鍵聯之立體化學(Rp/Sp)之模式；主鏈磷修飾模式；對核苷酸間磷原子之修飾模式，諸如-S-及式I之-L-R1。
本發明尤其認識到寡核苷酸之立體選擇性(而非立體無規或外消旋)製備之挑戰。本發明尤其提供用於立體選擇性製備包含多個(例如，超過5、6、7、8、9或10個)核苷酸間鍵聯之寡核苷酸、且尤其包含多個(例如，超過5、6、7、8、9或10個)對掌性核苷酸間鍵聯之寡 核苷酸的方法及試劑。在一些實施例中，在立體無規或外消旋製備寡核苷酸時，以小於90：10、95：5、96：4、97：3或98：2之非對映立體選擇性形成至少一個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，關於寡核苷酸之立體選擇性或對掌性受控製備，以大於90：10、95：5、96：4、97：3或98：2之非對映立體選擇性形成各對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，關於寡核苷酸之立體選擇性或對掌性受控製備，以大於95：5之非對映立體選擇性形成各對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，關於寡核苷酸之立體選擇性或對掌性受控製備，以大於96：4之非對映立體選擇性形成各對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，關於寡核苷酸之立體選擇性或對掌性受控製備，以大於97：3之非對映立體選擇性形成各對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，關於寡核苷酸之立體選擇性或對掌性受控製備，以大於98：2之非對映立體選擇性形成各對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，關於寡核苷酸之立體選擇性或對掌性受控製備，以大於99：1之非對映立體選擇性形成各對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，寡核苷酸中之對掌性核苷酸間鍵聯之非對映立體選擇性可經由模型反應量測，例如在基本上相同或類似的條件下形成二聚體，其中二聚體具有與對掌性核苷酸間鍵聯相同的核苷酸間鍵聯，二聚體之5'-核苷與對掌性核苷酸間鍵聯5'端之核苷相同，且二聚體之3'-核苷與對掌性核苷酸間鍵聯3'端之核苷相同。
尤其出人意料地發現，某些所提供之寡核苷酸組合物達成了目標序列之裂解的前所未有的控制，例如藉由核糖核酸酶H裂解目標RNA。在一些實施例中，本發明證明，精確控制寡核苷酸之化學及立體化學屬性相比於不控制立體化學屬性但在其他方面類似之製劑而言，可達成寡核苷酸製劑之改良的活性。本發明尤其特定證明，所提供之寡核苷酸所雜交之核酸目標之裂解的速率、程度及或特異性改良。
在一些實施例中，本發明提供寡核苷酸組合物之各種用途。本發明尤其證明，藉由控制寡核苷酸之結構要素，諸如鹼基序列、化學修飾、立體化學等，寡核苷酸之特性可大大改良。舉例而言，在一些實施例中，本發明提供用於高度選擇性抑制目標核酸序列之轉錄物的方法。在一些實施例中，本發明提供藉由抑制來自致病複本(例如，致病對偶基因)之轉錄物來治療個體的方法。在一些實施例中，本發明提供用於設計及製備寡核苷酸組合物之方法，其中當抑制目標序列之轉錄物時，活性及/或選擇性出人意料地增強。在一些實施例中，本發明提供用於設計及/或製備寡核苷酸組合物之方法，該等寡核苷酸組合物提供對來自目標核酸序列之轉錄物的對偶基因特異性抑制。
在一些實施例中，本發明提供一種用於控制裂解核酸聚合物之方法，該方法包含以下步驟：使核苷酸序列包含目標序列之核酸聚合物與包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物接觸，該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的特徵在於：1)共同鹼基序列及長度，其中共同鹼基序列為或包含與核酸聚合物中所存在之目標序列互補的序列；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有特定鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃。
在一些實施例中，本發明提供一種用於更改裂解模式的方法，該裂解模式為當核苷酸序列包括目標序列之核酸聚合物與包含具有特定鹼基序列及長度之寡核苷酸的參考寡核苷酸組合物接觸時所觀察到之裂解模式，該特定鹼基序列為或包含與目標序列互補之序列，該方 法包含：使核酸聚合物與具有特定鹼基序列及長度之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物接觸，該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有特定鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中單一寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃，該類寡核苷酸之特徵在於：1)特定鹼基序列及長度；2)特定主鏈鍵聯模式；及3)特定主鏈對掌性中心模式。
在一些實施例中，本發明提供一種用於抑制來自目標核酸序列之轉錄物的方法，針對該目標核酸序列，在群體內存在一或多個類似核酸序列，目標序列及類似序列各自含有特異性核苷酸特徵序列元件，該元件相對於類似序列定義目標序列，該方法包含以下步驟：使包含目標核酸序列之轉錄物的樣品與包含具有以下之寡核苷酸的寡核苷酸組合物接觸：1)共同鹼基序列及長度；及2)共同主鏈鍵聯模式；其中共同鹼基序列為或包含與定義目標核酸序列之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特徵在於，當其與包含目標核酸序列及類似核酸序列之轉錄物的系統接觸時，目標核酸序列之轉錄物遭到抑制的程度大於類似核酸序列所觀察到之抑制程度。
在一些實施例中，本發明提供一種用於抑制來自目標核酸序列之轉錄物的方法，針對該目標核酸序列，在群體內存在一或多個類似核酸序列，目標序列及類似序列各自含有特異性核苷酸特徵序列元件，該元件相對於類似序列定義目標序列，該方法包含以下步驟：使包含目標核酸序列之轉錄物的樣品與包含具有以下之寡核苷酸的寡核苷酸組合物接觸： 1)共同鹼基序列及長度；及2)共同主鏈鍵聯模式；3)共同主鏈對掌性中心模式；其中共同鹼基序列為或包含與定義目標核酸序列之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特徵在於，當其與包含目標核酸序列及類似核酸序列之轉錄物的系統接觸時，目標核酸序列之轉錄物遭到抑制的程度大於類似核酸序列所觀察到之抑制程度。
在一些實施例中，目標核酸序列之轉錄物遭到抑制之程度大於類似核酸序列中之任一者所觀察到之抑制程度。
在一些實施例中，本發明提供一種用於對偶基因特異性抑制來自目標核酸序列之轉錄物的方法，針對該目標核酸序列，在群體內存在複數個對偶基因，其各自含有特異性核苷酸特徵序列元件，該元件相對於相同目標核酸序列之其他對偶基因定義對偶基因，該方法包含以下步驟：使包含目標核酸序列之轉錄物的樣品與包含具有以下之寡核苷酸的寡核苷酸組合物接觸：1)共同鹼基序列及長度；及2)共同主鏈鍵聯模式；其中共同鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特徵在於，當其與包含目標對偶基因及相同核酸序列之另一對偶基因之轉錄物的系統接觸時，特定對偶基因之轉錄物遭到抑制之程度大於相同核酸序列之另一對偶基因所觀察到之抑制程度。
在一些實施例中，本發明提供一種用於對偶基因特異性抑制來自目標核酸序列之轉錄物的方法，針對該目標核酸序列，在群體內存在複數個對偶基因，其各自含有特異性核苷酸特徵序列元件，該元件 相對於相同目標核酸序列之其他對偶基因定義對偶基因，該方法包含以下步驟：使包含目標核酸序列之轉錄物的樣品與包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物接觸，該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的特徵在於：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有相同鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃；其中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的共同鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特徵在於，當其與包含目標對偶基因及相同核酸序列之另一對偶基因之轉錄物的系統接觸時，特定對偶基因之轉錄物遭到抑制之程度大於相同核酸序列之另一對偶基因所觀察到之抑制程度。
在一些實施例中，本發明提供一種用於對偶基因特異性抑制來自目標基因之轉錄物的方法，針對該目標基因，在群體內存在複數個對偶基因，其各自含有特異性核苷酸特徵序列元件，該元件相對於相同目標基因之其他對偶基因定義對偶基因，該方法包含以下步驟：使包含目標基因之轉錄物的樣品與包含具有以下之寡核苷酸的寡核苷酸組合物接觸：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；其中共同鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特徵在於，當其與包含目標對偶基因及相 同基因之另一對偶基因之轉錄物的系統接觸時，特定對偶基因之轉錄物遭到抑制之程度比相同基因之另一對偶基因所觀察到之抑制程度大至少2倍。
在一些實施例中，本發明提供一種用於對偶基因特異性抑制來自目標基因之轉錄物的方法，針對該目標基因，在群體內存在複數個對偶基因，其各自含有特異性核苷酸特徵序列元件，該元件相對於相同目標基因之其他對偶基因定義對偶基因，該方法包含以下步驟：使包含目標基因之轉錄物的樣品與包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物接觸，該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸之特徵在於：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有相同鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃；其中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的共同鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特徵在於，當其與包含目標對偶基因及相同基因之另一對偶基因之轉錄物的系統接觸時，特定對偶基因之轉錄物遭到抑制之程度比相同基因之另一對偶基因所觀察到之抑制程度大至少2倍。
在一些實施例中，本發明提供一種用於對偶基因特異性抑制來自目標基因之轉錄物的方法，針對該目標基因，在群體內存在複數個對偶基因，其各自含有特異性核苷酸特徵序列元件，該元件相對於相同目標基因之其他對偶基因定義對偶基因，該方法包含以下步驟：使包含目標基因之轉錄物的樣品與包含特定寡核苷酸類型之寡 核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物接觸，該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸之特徵在於：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有相同鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃；其中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的共同鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特徵在於，當其與表現目標對偶基因及相同基因之另一對偶基因之轉錄物的系統接觸時，特定對偶基因之轉錄物遭到抑制之程度比相同基因之另一對偶基因所觀察到之抑制程度大至少2倍。
在一些實施例中，本發明提供一種用於對偶基因特異性抑制來自目標核酸序列之轉錄物的方法，針對該目標核酸序列，在群體內存在複數個對偶基因，其各自含有特異性核苷酸特徵序列元件，該元件相對於相同目標核酸序列之其他對偶基因定義對偶基因，該方法包含以下步驟：使包含目標核酸序列之轉錄物的樣品與包含具有以下之寡核苷酸的寡核苷酸組合物接觸：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；其中共同鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特徵在於，當其與包含相同目標核酸序列之轉錄物的系統接觸時，其顯示按以下程度抑制特定對偶基因之轉錄物： a)大於該組合物不存在時；b)大於相同核酸序列之另一對偶基因所觀察到之抑制程度；或c)大於組合物不存在時，且大於相同核酸序列之另一對偶基因所觀察到之抑制程度。
在一些實施例中，本發明提供一種用於對偶基因特異性抑制來自目標核酸序列之轉錄物的方法，針對該目標核酸序列，在群體內存在複數個對偶基因，其各自含有特異性核苷酸特徵序列元件，該元件相對於相同目標核酸序列之其他對偶基因定義對偶基因，該方法包含以下步驟：使包含目標核酸序列之轉錄物的樣品與包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物接觸，該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的特徵在於：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有相同鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃；其中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸之共同鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特徵在於，當其與包含相同目標核酸序列之轉錄物的系統接觸時，其顯示按以下程度抑制特定對偶基因之轉錄物：a)大於該組合物不存在時；b)大於相同核酸序列之另一對偶基因所觀察到之抑制程度；或c)大於組合物不存在時，且大於相同核酸序列之另一對偶基因所觀察到之抑制程度。
在一些實施例中，本發明提供一種用於對偶基因特異性抑制來自目標基因之轉錄物的方法，針對該目標基因，在群體內存在複數個對偶基因，其各自含有特異性核苷酸特徵序列元件，該元件相對於相同目標基因之其他對偶基因定義對偶基因，該方法包含以下步驟：使包含目標基因之轉錄物的樣品與包含具有以下之寡核苷酸的寡核苷酸組合物接觸：1)共同鹼基序列及長度；及2)共同主鏈鍵聯模式；其中共同鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特徵在於，當其與表現目標基因之轉錄物的系統接觸時，其顯示按以下程度抑制特定對偶基因之轉錄物的表現：a)所偵測到之來自特定對偶基因之轉錄物的量相差至少2倍，存在組合物時相對於不存在組合物時減少2倍；b)比相同基因之另一對偶基因所觀察到之抑制程度大至少2倍；或c)所偵測到之來自特定對偶基因之轉錄物的量相差至少2倍，存在組合物時相對於不存在組合物時減少2倍，且比相同基因之另一對偶基因所觀察到之抑制程度大至少2倍。
在一些實施例中，本發明提供一種用於對偶基因特異性抑制來自目標基因之轉錄物的方法，針對該目標基因，在群體內存在複數個對偶基因，其各自含有特異性核苷酸特徵序列元件，該元件相對於相同目標基因之其他對偶基因定義對偶基因，該方法包含以下步驟：使包含目標基因之轉錄物的樣品與包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物接觸，該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸之特徵在於： 1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有相同鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃；其中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸之共同鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特徵在於，當其與表現目標基因之轉錄物的系統接觸時，其顯示按以下程度抑制特定對偶基因之轉錄物的表現：a)所偵測到之來自特定對偶基因之轉錄物的量相差至少2倍，存在組合物時相對於不存在組合物時減少2倍；b)比相同基因之另一對偶基因所觀察到之抑制程度大至少2倍；或c)所偵測到之來自特定對偶基因之轉錄物的量相差至少2倍，存在組合物時相對於不存在組合物時減少2倍，且比相同基因之另一對偶基因所觀察到之抑制程度大至少2倍。
在一些實施例中，本發明提供一種用於對偶基因特異性抑制來自目標基因之轉錄物的方法，針對該目標基因，在群體內存在複數個對偶基因，其各自含有特異性核苷酸特徵序列元件，該元件相對於相同目標基因之其他對偶基因定義對偶基因，該方法包含以下步驟：使包含目標基因之轉錄物的樣品與包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的寡核苷酸組合物接觸，該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸之特徵在於：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式； 其中共同鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特徵在於，當其與表現目標基因之轉錄物的系統接觸時，其顯示按以下程度抑制特定對偶基因之轉錄物的表現：a)所偵測到之來自特定對偶基因之轉錄物的量相差至少2倍，存在組合物時相對於不存在組合物時減少2倍；b)比相同基因之另一對偶基因所觀察到之抑制程度大至少2倍；或c)所偵測到之來自特定對偶基因之轉錄物的量相差至少2倍，存在組合物時相對於不存在組合物時減少2倍，且比相同基因之另一對偶基因所觀察到之抑制程度大至少2倍。
在一些實施例中，本發明提供一種用於對偶基因特異性抑制來自目標基因之轉錄物的方法，針對該目標基因，在群體內存在複數個對偶基因，其各自含有特異性核苷酸特徵序列元件，該元件相對於相同目標基因之其他對偶基因定義對偶基因，該方法包含以下步驟：使包含目標基因之轉錄物的樣品與包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物接觸，該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸之特徵在於：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有相同鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃；其中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸之共同鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特徵在 於，當其與表現目標基因之轉錄物的系統接觸時，其顯示按以下程度抑制特定對偶基因之轉錄物的表現：a)所偵測到之來自特定對偶基因之轉錄物的量相差至少2倍，存在組合物時相對於不存在組合物時減少2倍；b)比相同基因之另一對偶基因所觀察到之抑制程度大至少2倍；或c)所偵測到之來自特定對偶基因之轉錄物的量相差至少2倍，存在組合物時相對於不存在組合物時減少2倍，且比相同基因之另一對偶基因所觀察到之抑制程度大至少2倍。
在一些實施例中，核苷酸特徵序列包含相對於其他類似序列定義目標序列的突變。在一些實施例中，核苷酸特徵序列包含相對於其他類似序列定義目標序列的點突變。在一些實施例中，核苷酸特徵序列包含相對於其他類似序列定義目標序列的SNP。
在一些實施例中，本發明提供一種用於製備包含特定序列之寡核苷酸的寡核苷酸組合物的方法，該組合物提供目標序列之轉錄物的選擇性抑制，包含提供包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物，其特徵在於：1)與特定序列相同之共同鹼基序列；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈對掌性中心模式，該模式包含(Sp)m(Rp)n、(Rp)n(Sp)m、(Np)t(Rp)n(Sp)m或(Sp)t(Rp)n(Sp)m，其中：m為1-50；n為1-10；t為1-50；且各Np獨立地為Rp或Sp。
一般而言，如本文所述之寡核苷酸組合物之活性可使用任何適 當分析評定。不同組合物(例如，立體控制對比非立體控制，及/或不同立體控制組合物)之相對活性通常宜在相同分析中測定；在一些實施例中，基本上同時測定；且在一些實施例中，參考歷史結果測定。
熟習此項技術者將清楚及/或將能夠容易地開發出用於特定寡核苷酸組合物之適當分析。本發明提供某些特定分析之說明，例如可適用於關於目標序列之核糖核酸酶H裂解，評定寡核苷酸組合物特性之一或多個特徵的分析。
舉例而言，可適用於評定核糖核酸酶H裂解之一或多個特徵(例如，裂解之速率、程度及/或選擇性)的一些分析可包括如本文(例如，在實例4、9-10、12、14、17-20等中之一或多者中)所述及/或所例示之任何分析中所述的分析。
在一些實施例中，本發明認識到，鹼基序列會影響寡核苷酸之特性。本發明證明，化學及立體化學修飾與所設計之鹼基序列組合可提供具有出乎意料地改良特性(例如，出人意料地更高的活性及/或選擇性等)的寡核苷酸組合物。在一些實施例中，具有與目標核酸序列之特徵序列元件互補之共同鹼基序列的寡核苷酸的活性優於與目標核酸序列之特徵序列元件互補的另一共同鹼基序列。在一些實施例中，具有與目標核酸序列之特徵序列元件互補之共同鹼基序列的寡核苷酸的選擇性優於與目標核酸序列之特徵序列元件互補的另一共同鹼基序列。
在一些實施例中，具有與目標核酸序列之特徵序列元件互補之共同鹼基序列的寡核苷酸的組合物當相比於具有與目標核酸序列之特徵序列元件互補之另一共同鹼基序列的寡核苷酸的另一組合物時，來自目標核酸序列之轉錄物的裂解速率更高，及/或提供如下裂解模式，其僅具有一個主要裂解位點，且該主要裂解位點在核苷酸特徵序列內或接近核苷酸特徵序列。在一些實施例中，具有互補共同鹼基序 列之寡核苷酸的組合物當相比於具有另一互補共同鹼基序列之寡核苷酸的另一組合物時，來自目標核酸序列之轉錄物之裂解速率更高，且提供如下裂解模式，其僅具有一個主要裂解位點，且該主要裂解位點在核苷酸特徵序列內或接近核苷酸特徵序列。在一些實施例中，例如當藉由適合方法(例如核糖核酸酶H分析)量測時，在這一個主要裂解位點發生超過50%、60%、70%、80%或90%之裂解。在一些實施例中，具有互補共同鹼基序列之寡核苷酸的組合物當相比於具有另一互補共同鹼基序列之寡核苷酸的另一組合物時，來自目標核酸序列之轉錄物的裂解速率更高，且提供如下裂解模式，其僅具有一個主要裂解位點，且該主要裂解位點在突變或SNP內或接近突變或SNP，該突變或SNP相對於其他類似序列定義目標序列。在一些實施例中，突變為點突變。在一些實施例中，主要裂解位點緊挨著相對於其他類似序列定義目標序列之突變或SNP。在一些實施例中，各共同鹼基序列與目標核酸序列之特徵序列元件100%互補。在一些實施例中，主要裂解位點在距離相對於其他類似序列定義目標序列之突變或SNP不到5、4、3或1個核苷酸間鍵聯內。在一些實施例中，當使用具有相同共同序列之寡核苷酸的立體無規組合物及/或具有相同共同序列之DNA寡核苷酸之組合物時，主要裂解位點在距離相對於其他類似序列定義目標序列之突變或SNP不到5、4、3或1個核苷酸間鍵聯內，且在距離裂解位點不到5、4、3或1個核苷酸間鍵聯內。在一些實施例中，主要裂解位點為在使用具有相同共同序列之寡核苷酸的立體無規組合物時的裂解位點。在一些實施例中，主要裂解位點為在使用具有相同共同序列之寡核苷酸的立體無規組合物時的主要裂解位點。在一些實施例中，主要裂解位點為在使用具有相同共同序列之DNA寡核苷酸的組合物時的裂解位點。在一些實施例中，主要裂解位點為在使用具有相同共同序列之DNA寡核苷酸的組合物時的主要裂解位點。
在一些實施例中，當比較第一及第二共同鹼基序列之作用時，可比較具有第一共同鹼基序列之寡核苷酸的立體無規組合物與具有第二共同鹼基序列之寡核苷酸的立體無規組合物。在一些實施例中，立體無規組合物為具有共同鹼基序列、共同核苷修飾模式及共同主鏈鍵聯模式之寡核苷酸的組合物。在一些實施例中，立體無規組合物為具有共同鹼基序列、共同核苷修飾模式之寡核苷酸的組合物，其中各核苷酸間鍵聯為硫代磷酸酯。在一些實施例中，當比較第一及第二共同鹼基序列之作用時，可比較具有第一共同鹼基序列之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物與具有第二共同鹼基序列之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物中之寡核苷酸具有共同鹼基序列、共同核苷修飾模式、共同主鏈鍵聯模式、共同主鏈對掌性中心模式及共同主鏈磷修飾模式。在一些實施例中，各核苷酸間鍵聯為硫代磷酸酯。
在一些實施例中，本文所述之寡核苷酸組合物及技術特別適用於治療亨廷頓氏病(Huntington's disease)。舉例而言，在一些實施例中，本發明定義立體化學受控寡核苷酸組合物，其指導與亨廷頓氏病相關之核酸的裂解(例如，核糖核酸酶H介導之裂解)。在一些實施例中，該等組合物指導特定目標序列之亨廷頓氏病相關之對偶基因相對於該序列之一或多個(例如，所有非亨廷頓氏病相關)其他對偶基因優先裂解。
亨廷頓氏病為遺傳性疾病，可導致腦神經細胞進行性退化且影響個體之運動及認知能力。在一些實施例中，亨廷頓氏病為常染色體顯性病症。在一些實施例中，其由亨廷頓基因突變引起。正常HTT基因含有10至35個CAG三核苷酸重複序列。具有40個或更多個重複序列之人常會患上該病症。在一些實施例中，HTT基因之第一外顯子上之經擴展的CAG區段導致產生異常長的亨廷頓蛋白形式(經擴展的聚麩 醯胺酸鏈(polyglutamine tract))，其被切成較小的毒性片段，該等片段鍵結在一起且在神經元中累積，破壞此等細胞之正常功能。Warby等人(Am J Hum Genet.2009,84(3),351-366)報導了多種SNP，該等SNP與疾病染色體相關且與CAG擴展之鍵聯相關性比之前報導之彼等SNP強。與CAG擴展高度相關的多種SNP不獨立地分離且彼此呈連鎖不平衡(Linkage Disequilibrium)。本發明尤其認識到，特異性SNP與CAG經擴展染色體之間的強相關性為治療亨廷頓氏病(例如經由反向療法)提供了具有吸引力的治療機會。另外，HD患者中特異性SNP之相關性與高比率異型接合性組合為對偶基因特異性阻斷突變基因產物之基因表現提供適合目標。例如參考文獻，參見Liu等人Journal of Huntington's Disease 2,2013,491-500；Aronin,Neil及Pfister,Edith WO 2010/118263 A1；Pfister等人Current Biology 2009,19,774-778。
在一些實施例中，本發明之目標SNP在HD中具有高頻率之異型接合性且具有與突變型HTT對偶基因相關之特定變異體。在一些實施例中，SNP為rs362307。在一些實施例中，SNP為rs7685686。在一些實施例中，SNP可不連鎖，但可具有高異型接合頻率。在一些實施例中，SNP為rs362268(3'-UTR區域)。在一些實施例中，SNP為rs362306(3'-UTR區域)。在一些實施例中，SNP為rs2530595。在一些實施例中，SNP為rs362331。
在一些實施例中，提供一種用於治療或預防個體之亨廷頓氏病的方法，其包含向個體投與所提供之寡核苷酸組合物。在一些實施例中，提供一種治療或預防個體之亨廷頓氏病的方法，其包含向個體投與包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物，該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸之特徵在於：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；及 3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有相同鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃。
在一些實施例中，所提供之方法改善亨廷頓氏病之症狀。在一些實施例中，所提供之方法減緩亨廷頓氏病之發作。在一些實施例中，所提供之方法減緩亨廷頓氏病之進程。
在一些實施例中，本發明提供針對指定寡核苷酸組合物鑑別患者的方法。在一些實施例中，本發明提供用於給患者分層之方法。在一些實施例中，所提供之方法包含鑑別與致病對偶基因相關之突變及/或SNP。舉例而言，在一些實施例中，所提供之方法包含鑑別個體中與經擴展之CAG重複序列相關的SNP，該等經擴展之CAG重複序列與亨廷頓氏病相關或導致亨廷頓氏病。
在一些實施例中，個體之亨廷頓基因中具有SNP。在一些實施例中，個體具有SNP，其中一個對偶基因為與經擴展之CAG重複序列相關的突變型亨廷頓蛋白。在一些實施例中，個體具有選自rs362307、rs7685686、rs362268、rs2530595、rs362331或rs362306之SNP。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸具有與包含來自致病對偶基因(突變體)之SNP的序列互補的序列，且該組合物選擇性抑制致病對偶基因表現。
在一些實施例中，所提供技術(化合物、組合物、方法等)中之寡核苷酸之序列包含以下、由以下組成或為以下：本文所述之任何寡核苷酸的序列。在一些實施例中，序列係選自表N1A、N2A、N3A、N4A或8；或WV-1092、WVE120101、WV-2603或WV-2595。在一些實施例中，序列係選自WV-1092、WVE120101、WV-2603或WV-2595之序列。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為由WV-1092、 WVE120101、WV-2603或WV-2595定義之類型。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為由WV-1092定義之類型。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為由WVE120101定義之類型。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為由WV-2603定義之類型。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為由WV-2595定義之類型。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸組合物包含脂質及寡核苷酸。在一些實施例中，脂質結合至寡核苷酸。
在一些實施例中，組合物包含寡核苷酸及脂質，該脂質選自以下清單：月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞麻油酸、α-次亞麻油酸、γ-次亞麻油酸、二十二碳六烯酸(順-DHA)、喇叭藻酸(turbinaric acid)、花生四烯酸及二亞油基(dilinoleyl)。在一些實施例中，組合物包含寡核苷酸及脂質，該脂質選自以下清單：月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞麻油酸、α-次亞麻油酸、γ-次亞麻油酸、二十二碳六烯酸(順-DHA)、喇叭藻酸及二亞油基。
在一些實施例中，組合物包含寡核苷酸及脂質，該脂質選自：
在一些實施例中，組合物包含寡核苷酸及脂質，其中脂質包含C10-C40直鏈飽和或部分不飽和脂鏈，視情況經一或多個C1-4脂族基取代。
在一些實施例中，寡核苷酸組合物包含複數個寡核苷酸，其共用：1)共同鹼基序列；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈磷修飾模式；其中該複數個中之一或多個寡核苷酸個別地結合至脂質。
在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物包含複數個寡核苷酸，其共用：1)共同鹼基序列；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈磷修飾模式；其中：該組合物為對掌性受控的，因為複數個寡核苷酸在一或多個對掌性核苷酸間鍵聯處共用同一立體化學；該複數個中之一或多個寡核苷酸個別地結合至脂質；及該複數個中之一或多個寡核苷酸視情況且個別地結合至目標化合物或部分。
在一些實施例中，一種將寡核苷酸傳遞至人類個體之細胞或組 織中之方法，其包含：(a)提供本文所述實施例中之任一者之組合物；及(b)向人類個體投與組合物，使得寡核苷酸傳遞至個體之細胞或組織中。
在一些實施例中，用於將寡核苷酸傳遞至細胞或組織之方法包含製備根據本文所述實施例中之任一者的組合物且使細胞或組織與組合物接觸。
在一些實施例中，一種調整細胞中之基因之轉錄物或基因產物之含量的方法，該方法包含使細胞與根據本文所述實施例中之任一者的組合物接觸的步驟，其中寡核苷酸能夠調整轉錄物或基因產物之含量。
在一些實施例中，用於抑制細胞或組織中之基因之表現的方法包含製備根據本文所述實施例中之任一者的組合物且用組合物處理細胞或組織。
在一些實施例中，用於抑制哺乳動物中之細胞或組織中之基因之表現的方法包含製備根據本文所述實施例中之任一者的組合物且向哺乳動物投與組合物。
在一些實施例中，一種治療個體之由細胞或組織中之一種或若干種蛋白質之過度表現引起的疾病的方法，該方法包含向該個體投與根據本文所述實施例中之任一者的組合物。
在一些實施例中，一種治療個體之由一種或若干種蛋白質之表現減少、受到抑制或缺失引起的疾病的方法，該方法包含向該個體投與根據本文所述實施例中之任一者的組合物。
在一些實施例中，一種用於在個體中產生免疫反應的方法，該方法包含向該個體投與根據本文所述實施例中之任一者的組合物，其中該生物學上活性化合物為免疫調節核酸。
在一些實施例中，一種用於治療亨廷頓氏病之體征及/或症狀的方法，其係藉由提供本文所述實施例中之任一者的組合物且向個體投與該組合物。
在一些實施例中，一種調整細胞中之核糖核酸酶H介導之裂解之量的方法，該方法包含使細胞與根據本文所述實施例中之任一者的組合物接觸的步驟，其中該寡核苷酸能夠調整核糖核酸酶H介導之裂解的量。
在一些實施例中，一種向有需要之個體投與寡核苷酸的方法，其包含以下步驟：提供包含藥劑脂質之組合物及向個體投與組合物，其中該藥劑為本文中所揭示之任何藥劑，且其中該脂質為本文中所揭示之任何脂質。
在一些實施例中，一種治療個體疾病的方法，該方法包含以下步驟：提供包含藥劑脂質之組合物及向個體投與治療有效量之組合物，其中該藥劑為本文中所揭示之任何藥劑，且其中該脂質為本文中所揭示之任何脂質，且其中該疾病為本文中所揭示之任何疾病。
在一些實施例中，脂質包含視情況經取代之C10-C40飽和或部分不飽和脂鏈。
在一些實施例中，脂質包含視情況經取代之C10-C40直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。
在一些實施例中，脂質包含C10-C40直鏈飽和或部分不飽和脂鏈，視情況經一或多個C1-4脂族基取代。
在一些實施例中，脂質包含未經取代之C10-C40直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。
在一些實施例中，脂質包含不超過一個視情況經取代之C10-C40直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。
在一些實施例中，脂質包含兩個或更多個視情況經取代之C10- C40直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。
在一些實施例中，脂質不含三環或多環部分。
在一些實施例中，脂質具有R1-COOH之結構，其中R1為視情況經取代之C10-C40飽和或部分不飽和脂鏈。
如請求項16中任一項之組合物或方法，其中該脂質經由其羧基結合。
根據本文所述實施例中之任一者的組合物或方法，其中該脂質係選自：
在一些實施例中，脂質結合至寡核苷酸。
在一些實施例中，脂質直接結合至寡核苷酸。
在一些實施例中，脂質經由連接基團結合至寡核苷酸。
在一些實施例中，連接基團係選自：不帶電連接基團；帶電連接基團；包含烷基之連接基團；包含磷酸酯之連接基團；分支鏈連接基團；未分支連接基團；包含至少一個裂解基團之連接基團；包含至少一個氧化還原裂解基團之連接基團；包含至少一個基於磷酸酯之裂解基團之連接基團；包含至少一個酸裂解基團之連接基團；包含至少一個基於酯之裂解基團之連接基團；及包含至少一個基於肽之裂解基團之連接基團。
在一些實施例中，複數個寡核苷酸各自在相同位置個別地結合至同一脂質。
在一些實施例中，脂質經由連接基團結合至寡核苷酸。
在一些實施例中，複數個寡核苷酸中之一或多者獨立地結合至目標化合物或部分。
在一些實施例中，複數個寡核苷酸中之一或多者獨立地結合至脂質及目標化合物或部分。
在一些實施例中，複數個寡核苷酸中之一或多者獨立地在一個末端結合至脂質且在另一末端結合至目標化合物或部分。
在一些實施例中，複數個寡核苷酸共用相同化學修飾模式。
在一些實施例中，複數個寡核苷酸共用包含一或多個鹼基修飾之相同化學修飾模式。
在一些實施例中，複數個寡核苷酸共用包含一或多個糖修飾之相同化學修飾模式。
在一些實施例中，共同鹼基序列能夠與細胞中之轉錄物雜交，該轉錄物含有與亨廷頓氏病相關之突變，或其含量、活性及/或分佈與亨廷頓氏病相關。
在一些實施例中，寡核苷酸為核酸。
在一些實施例中，寡核苷酸為寡核苷酸。
在一些實施例中，寡核苷酸為參與突變型亨廷頓基因mRNA之核糖核酸酶H介導之裂解的寡核苷酸。
在一些實施例中，疾病或病症為亨廷頓氏病。
在一些實施例中，脂質包含視情況經取代之C10-C80飽和或部分不飽和脂族基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經視情況經取代之基團置換，該基團選自C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡c-、C1-C6雜脂族部分、-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)-、-N(R')C(O)O-、-OC(O)N(R')-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-N(R')S(O)2-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(O)-及-C(O)O-，其中各變數獨立地如本文所定義及描述。
在一些實施例中，脂質包含視情況經取代之C10-C80飽和或部分不飽和脂鏈。
在一些實施例中，脂質包含視情況經取代之C10-C80直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。
在一些實施例中，脂質包含視情況經取代之C10-C60飽和或部分不飽和脂鏈。
在一些實施例中，脂質包含視情況經取代之C10-C60直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。
在一些實施例中，脂質包含視情況經取代之C10-C40飽和或部分不飽和脂鏈。
在一些實施例中，脂質包含視情況經取代之C10-C40直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。
在一些實施例中，脂質包含視情況經取代之C10-C60飽和或部分不飽和脂族基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經視情況經取代之基團置換，該基團選自C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、 C1-C6雜脂族部分、-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)-、-N(R')C(O)O-、-OC(O)N(R')-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-N(R')S(O)2-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(O)-及-C(O)O-，其中各變數獨立地如本文所定義及描述。
在一些實施例中，脂質包含視情況經取代之C10-C80飽和或部分不飽和脂鏈。
在一些實施例中，脂質包含視情況經取代之C10-C60直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。
在一些實施例中，脂質包含視情況經取代之C10-C40直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。
在一些實施例中，脂質包含視情況經取代之C10-C40飽和或部分不飽和脂族基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經視情況經取代之基團置換，該基團選自C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、C1-C6雜脂族部分、-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)-、-N(R')C(O)O-、-OC(O)N(R')-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-N(R')S(O)2-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(O)-及-C(O)O-，其中各變數獨立地如本文所定義及描述。
在一些實施例中，脂質包含視情況經取代之C10-C40飽和或部分不飽和脂鏈。
在一些實施例中，脂質包含視情況經取代之C10-C40直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。
在一些實施例中，組合物進一步包含一或多種其他組分，其選自：聚核苷酸、碳酸酐酶抑制劑、染料、嵌入劑、吖啶、交聯劑、補骨脂素、絲裂黴素C、卟啉、TPPC4、德卟啉(texaphyrin)、賽卟啉 (Sapphyrin)、多環芳族烴吩嗪、二氫吩嗪、人工核酸內切酶、螯合劑、EDTA、烷基化劑、磷酸酯、胺基、巰基、PEG、PEG-40K、MPEG、[MPEG]2、聚胺基、烷基、經取代烷基、放射性標記之標誌物、酶、半抗原生物素、輸送/吸收促進劑、阿司匹靈(aspirin)、維生素E、葉酸、合成核糖核酸酶、蛋白質、醣蛋白、肽、對協同配位體具有特異性親和力之分子、抗體、激素、激素受體、非肽物質、脂質、凝集素、碳水化合物、維生素、輔因子、選擇性試劑或藥物。在一些實施例中，組合物進一步包含一或多種其他組分，其選自：聚核苷酸、碳酸酐酶抑制劑、染料、嵌入劑、吖啶、交聯劑、補骨脂素、絲裂黴素C、卟啉、TPPC4、德卟啉、賽卟啉、多環芳族烴吩嗪、二氫吩嗪、人工核酸內切酶、螯合劑、EDTA、烷基化劑、磷酸酯、胺基、巰基、PEG、PEG-40K、MPEG、[MPEG]2、聚胺基、烷基、經取代烷基、放射性標記之標誌物、酶、半抗原生物素、輸送/吸收促進劑、阿司匹靈、維生素E、葉酸、合成核糖核酸酶、蛋白質、醣蛋白、肽、對協同配位體具有特異性親和力之分子、抗體、激素、激素受體、非肽物質、脂質、凝集素、碳水化合物、維生素、輔因子或藥物。
在一些實施例中，本發明提供一種結合至選擇性試劑之寡核苷酸。在一些實施例中，本發明提供一種組合物，其包含一種寡核苷酸或一類寡核苷酸，包含選擇性試劑。在一些實施例中，選擇性試劑特異性結合至一或多種神經傳遞素轉運體，其選自由多巴胺轉運體(DAT)、血清素轉運體(SERT)及去甲腎上腺素轉運體(NET)組成之群。在一些實施例中，選擇性試劑選自由以下組成之群：多巴胺再吸收抑制劑(DRI)、選擇性血清素再吸收抑制劑(SSRI)、去甲腎上腺素再吸收抑制劑(NRI)、去甲腎上腺素-多巴胺再吸收抑制劑(NDRI)及血清素-去甲腎上腺素-多巴胺再吸收抑制劑(SNDRI)。在一些實施例 中，選擇性試劑選自由以下組成之群：三重再吸收抑制劑、去甲腎上腺素多巴胺雙重再吸收抑制劑、血清素單一再吸收抑制劑、去甲腎上腺素單一再吸收抑制劑及多巴胺單一再吸收抑制劑。在一些實施例中，選擇性試劑選自由以下組成之群：多巴胺再吸收抑制劑(DRI)、去甲腎上腺素-多巴胺再吸收抑制劑(NDRI)及血清素-去甲腎上腺素-多巴胺再吸收抑制劑(SNDRI)。在一些實施例中，選擇性試劑係選自美國專利第9,084,825號及第9,193,969號及WO2011131693、WO2014064258中所述之選擇性試劑。
在一些實施例中，脂質包含C10-C80直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。
在一些實施例中，組合物進一步包含連接寡核苷酸與脂質之連接基團，其中該連接基團係選自：不帶電連接基團；帶電連接基團；包含烷基之連接基團；包含磷酸酯之連接基團；分支鏈連接基團；未分支連接基團；包含至少一個裂解基團之連接基團；包含至少一個氧化還原裂解基團之連接基團；包含至少一個基於磷酸酯之裂解基團之連接基團；包含至少一個酸裂解基團之連接基團；包含至少一個基於酯之裂解基團之連接基團；包含至少一個基於肽之裂解基團之連接基團。
在一些實施例中，寡核苷酸包含以下或由以下組成或為以下：寡核苷酸或寡核苷酸組合物或對掌性受控寡核苷酸組合物。
在一些實施例中，寡核苷酸包含以下或由以下組成或為以下：寡核苷酸組合物或對掌性受控寡核苷酸組合物，其中寡核苷酸之序列包含本文所述任何寡核苷酸之序列或由該序列組成。
在一些實施例中，寡核苷酸包含以下或由以下組成或為以下：寡核苷酸組合物或對掌性受控寡核苷酸組合物，其中寡核苷酸之序列包含表4中所列任何寡核苷酸之序列或由該序列組成。
在一些實施例中，寡核苷酸包含以下或由以下組成或為以下：寡核苷酸組合物或對掌性受控寡核苷酸組合物，其中寡核苷酸之序列包含剪接-切換寡核苷酸之序列或由該序列組成。
如本文所述實施例中之任一者的組合物或方法，其中該寡核苷酸為對掌性受控寡核苷酸組合物。
如本文所述實施例中之任一者的組合物或方法，其中該疾病或病症為亨廷頓氏病。
如本文所述實施例中之任一者的組合物或方法，其中該寡核苷酸能夠參與突變型亨廷頓基因mRNA之核糖核酸酶H介導的裂解。
如本文所述實施例中之任一者的組合物或方法，其中該寡核苷酸包含以下、由以下組成或為以下：本文中所揭示之任何寡核苷酸之序列。
如本文所述實施例中之任一者的組合物或方法，其中該寡核苷酸能夠區分野生型與突變型亨廷頓對偶基因。
如本文所述實施例中之任一者的組合物或方法，其中該寡核苷酸能夠參與突變型亨廷頓基因mRNA之核糖核酸酶H介導的裂解。
如本文所述實施例中之任一者的組合物或方法，其中該寡核苷酸包含以下、由以下組成或為以下：表4中所揭示之任何寡核苷酸之序列。
在一些實施例中，寡核苷酸包含以下或由以下組成或為以下：寡核苷酸或寡核苷酸組合物或對掌性受控寡核苷酸組合物，其中寡核苷酸之序列包含以下中之任一者的序列或由該序列組成：WV-1092、WV-2595或WV-2603。
在一些實施例中，寡核苷酸之序列包括以下中之任何一或多者：鹼基序列(包括長度)；糖及鹼基部分之化學修飾模式；主鏈鍵聯模式；天然磷酸酯鍵聯模式、硫代磷酸酯鍵聯模式、硫代磷酸三酯鍵 聯模式及其組合；主鏈對掌性中心模式；對掌性核苷酸間鍵聯之立體化學(Rp/Sp)之模式；主鏈磷修飾模式；對核苷酸間磷原子之修飾模式，諸如-S-及式I之-L-R1。
在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸組合物，其包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸，其特徵在於：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有相同鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃，其中該寡核苷酸靶向突變型亨廷頓基因，且長度為約10至約50個核苷酸，其中主鏈鍵聯包含至少一個硫代磷酸酯，且其中主鏈對掌性中心模式包含至少一個呈Rp構形之對掌性中心及至少一個呈Sp構形之對掌性中心。
在一些實施例中，本發明提供一種用於裂解具有包含目標序列之鹼基序列的核酸的方法，該方法包含以下步驟：(a)使具有包含目標序列之鹼基序列的核酸與包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物接觸，該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的特徵在於：1)共同鹼基序列及長度，其中該共同鹼基序列為或包含與核酸中之目標序列互補的序列；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有特定鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃，其中該寡核苷酸靶向突變型亨廷頓基因，且長度 為約10至約50個核苷酸，其中主鏈鍵聯包含至少一個硫代磷酸酯，且其中主鏈對掌性中心模式包含至少一個呈Rp構形之對掌性中心及至少一個呈Sp構形之對掌性中心。
在一些實施例中，本發明提供一種用於裂解具有包含目標序列之鹼基序列的核酸的方法，該方法包含以下步驟：(a)使具有包含目標序列之鹼基序列的核酸與包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物接觸，該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的特徵在於：1)共同鹼基序列及長度，其中該共同鹼基序列為或包含與核酸中之目標序列互補的序列；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有該特定鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃，其中該寡核苷酸靶向突變型亨廷頓基因，且該長度為約10至約50個核苷酸，其中主鏈鍵聯包含至少一個硫代磷酸酯，且其中主鏈對掌性中心模式包含至少一個呈Rp構形之對掌性中心及至少一個呈Sp構形之對掌性中心；及(b)藉由核糖核酸酶H或RNA干擾機制介導，裂解核酸。
在一些實施例中，所提供組合物進一步包含選擇性試劑，該選擇性試劑係選自：特異性結合至一或多種選自由多巴胺轉運體(DAT)、血清素轉運體(SERT)及去甲腎上腺素轉運體(NET)組成之群的神經傳遞素轉運體之化合物之群；由多巴胺再吸收抑制劑(DRI)、選擇性血清素再吸收抑制劑(SSRI)、去甲腎上腺素再吸收抑制劑(NRI)、去甲腎上腺素-多巴胺再吸收抑制劑(NDRI)及血清素-去甲腎上腺素-多巴胺再吸收抑制劑(SNDRI)組成之群；由三重再吸收抑制 劑、去甲腎上腺素多巴胺雙重再吸收抑制劑、血清素單一再吸收抑制劑、去甲腎上腺素單一再吸收抑制劑及多巴胺單一再吸收抑制劑組成之群；及由多巴胺再吸收抑制劑(DRI)、去甲腎上腺素-多巴胺再吸收抑制劑(NDRI)及血清素-去甲腎上腺素-多巴胺再吸收抑制劑(SNDRI)組成之群。
定義
脂族：如本文所用之術語「脂族」或「脂族基」意謂完全飽和或含有一或多個不飽和單元之直鏈(亦即未分支)或分支鏈、經取代或未經取代之烴鏈，或完全飽和或含有一或多個不飽和單元、但不為芳族基之單環烴或雙環或多環烴(在本文中亦稱作「碳環」、「環脂族」或「環烷基」)，其與分子其餘部分具有單一連接點。在一些實施例中，脂族基含有1-50個脂族碳原子。除非另外規定，否則脂族基含有1-10個脂族碳原子。在一些實施例中，脂族基含有1-6個脂族碳原子。在一些實施例中，脂族基含有1-5個脂族碳原子。在其他實施例中，脂族基含有1-4個脂族碳原子。在其他實施例中，脂族基含有1-3個脂族碳原子，且在其他實施例中，脂族基含有1-2個脂族碳原子。在一些實施例中，「環脂族」(或「碳環」或「環烷基」)係指完全飽和或含有一或多個不飽和單元，但不為芳族基之單環或雙環C3-C10烴，其與分子其餘部分具有單一連接點。在一些實施例中，「環脂族」(或「碳環」或「環烷基」)係指完全飽和或含有一或多個不飽和單元，但不為芳族基之單環C3-C6烴，其與分子其餘部分具有單一連接點。適合脂族基包括(但不限於)直鏈或分支鏈、經取代或未經取代之烷基、烯基、炔基及其混合體，諸如(環烷基)烷基、(環烯基)烷基或(環烷基)烯基。
伸烷基：術語「伸烷基」係指二價烷基。「伸烷基鏈」為聚亞甲基，亦即-(CH2)n-，其中n為正整數，較佳為1至6、1至4、1至3、1至2 或2至3。經取代之伸烷基鏈為一或多個亞甲基氫原子經取代基置換之聚亞甲基。適合取代基包括下文針對經取代之脂族基所描述之彼等取代基。
伸烯基：術語「伸烯基」係指二價烯基。經取代之伸烯基鏈為含有至少一個雙鍵且一或多個氫原子經取代基置換之聚亞甲基。適合取代基包括下文針對經取代之脂族基所描述之彼等取代基。
動物：如本文所用之術語「動物」係指動物界之任何成員。在一些實施例中，「動物」係指任何發育階段之人類。在一些實施例中，「動物」係指任何發育階段之非人類動物。在某些實施例中，非人類動物為哺乳動物(例如，嚙齒類動物、小鼠、大鼠、兔、猴、狗、貓、羊、牛、靈長類動物及/或豬)。在一些實施例中，動物包括(但不限於)哺乳動物、鳥類、爬行動物、兩棲動物、魚類及/或蠕蟲。在一些實施例中，動物可為轉殖基因動物、經基因工程改造之動物及/或純系。
大約：除非另外說明或從上下文明顯看出不同，否則如本文關於數字所用之術語「大約」或「約」一般用於包括沿任一方向(大於或小於)落在該數字之5%、10%、15%或20%範圍內之數字(該數字將小於可能值之0%或超過可能值之100%的情況除外)。在一些實施例中，關於劑量使用之術語「約」意謂±5毫克/公斤/天。
芳基：單獨使用或如在「芳烷基」、「芳烷氧基」或「芳氧基烷基」中作為較大部分的一部分使用之術語「芳基」係指具有總共五至十四個環成員之單環及雙環系統，其中系統中之至少一個環為芳族且其中系統中之各環含有三個至七個環成員。術語「芳基」可與術語「芳基環」互換使用。在本發明之某些實施例中，「芳基」係指芳族環系統，其包括(但不限於)苯基、聯苯、萘基、蒽基及其類似者，其可含有一或多個取代基。在如本文所用之術語「芳基」之範圍內亦包 括芳族環稠合至一或多個非芳族環之基團，諸如茚滿基、鄰苯二甲醯亞胺基、萘醯亞胺基、啡啶基或四氫萘基及其類似者。
特徵部分：如本文所用之片語蛋白質或多肽之「特徵部分」為含有共同成為蛋白質或多肽之特徵的胺基酸連續延伸部或胺基酸連續延伸部之集合的部分。此類連續延伸部一般將各自含有至少兩個胺基酸。另外，一般技術者應瞭解，通常需要至少5、10、15、20個或更多個胺基酸成為蛋白質之特徵。一般而言，特徵部分為除以上所指出之序列一致性之外，亦與相關完整蛋白質共享至少一個功能特徵的部分。
特徵序列：「特徵序列」為存在於多肽或核酸家族之所有成員中，且因此可由一般技術者用於限定家族成員的序列。
特徵結構元件：術語「特徵結構元件」係指存在於多肽、小分子或核酸家族之所有成員中，且因此可由一般技術者用於限定家族成員的獨特結構元件(例如，核心結構、側接部分集合、序列元件等)。
可比較的：術語「可比較的」在本文中用以描述兩組(或更多組)狀況或情況彼此足夠類似，從而允許比較所獲得之結果或所觀察到之現象。在一些實施例中，數組類似狀況或情況之特徵在於，複數個基本上相同的特徵及一個或少量不同特徵。一般技術者應瞭解，當數組狀況的特徵在於基本上相同特徵之數目及類型足以保證以下合理結論時，該等狀況彼此類似，該合理結論為：在數組不同狀況或情況下獲得之結果或觀察到之現象的差異係由彼等特徵中不同特徵之變化引起的或指示該等不同特徵之變化。
給藥方案：如本文所用之「給藥方案」或「治療方案」係指個別地向個體投與，通常相隔一定時間段的一組單位劑量(通常超過一個)。在一些實施例中，指定治療劑具有推薦的給藥方案，其可涉及一或多個劑量。在一些實施例中，給藥方案包含複數個劑量，其各自 彼此相隔相同長度的時間段；在一些實施例中，給藥方案包含複數個劑量及至少兩個用於隔開個別劑量之不同時間段。在一些實施例中，給藥方案內之所有劑量具有相同單位劑量的量。在一些實施例中，給藥方案內之不同劑量具有不同的量。在一些實施例中，給藥方案包含以第一給藥量第一次給藥，繼之以再一或多次以不同於第一給藥量之第二給藥量給藥。在一些實施例中，給藥方案包含以第一給藥量第一次給藥，繼之以再一或多次以與第一給藥量相同的第二給藥量給藥。
等效藥劑：一般技術者在閱讀本發明之後應瞭解，在本發明情況下，適用藥劑之範疇不限於本文具體提及或例示之彼等藥劑。特定言之，熟習此項技術者將認識到，活性劑通常具有由核心及所連接之側接部分組成的結構，且另外應瞭解，此類核心及/或側接部分之簡單變化不會顯著更改該藥劑之活性。舉例而言，在一些實施例中，用數組類似三維結構及/或化學反應性特徵取代一或多個側接部分可產生等效於母體參考化合物或部分的經取代化合物或部分。在一些實施例中，添加或移除一或多個側接部分可產生等效於母體參考化合物之經取代化合物。在一些實施例中，核心結構之更改(例如藉由添加或移除少量鍵(通常不超過5、4、3、2或1個鍵，且常常僅單個鍵))可產生等效於母體參考化合物之經取代化合物。在多個實施例中，等效化合物可藉由如例如下文所述之一般反應流程中所示之方法，或藉由其修改版本，使用可容易獲得之起始物質、試劑及習知或所提供之合成程序來製備。在此等反應中，亦有可能利用本身已知但此處未提及之變體。
等效劑量：術語「等效劑量」在本文中用以比較產生相同生物結果的不同醫藥活性劑之劑量。根據本發明，若兩種不同藥劑達成類似水準或類似程度之生物結果，則其劑量視為彼此「等效」。在一些實施例中，根據本發明使用之不同藥學製劑之等效劑量係使用如本文 所述之活體外及/或活體內分析測定。在一些實施例中，一或多種根據本發明使用之溶酶體活化劑係以等效於參考溶酶體活化劑之劑量的劑量使用；在一些此類實施例中，用於該目的之參考溶酶體活化劑係選自由以下組成之群：小分子異位活化劑(例如吡唑嘧啶)、亞胺糖(例如異桑葉生物鹼(isofagomine))、抗氧化劑(例如N-乙醯基-半胱胺酸)及細胞運輸調節劑(例如Rab1a多肽)。
雜脂族：術語「雜脂族」係指一或多個選自C、CH、CH2或CH3之單元獨立地經雜原子置換的脂族基。在一些實施例中，雜脂族基為雜烷基。在一些實施例中，脂族基為雜烯基。
雜芳基：單獨使用或作為例如「雜芳烷基」或「雜芳烷氧基」之較大部分的一部分使用的術語「雜芳基」及「雜芳-」係指具有5至10個環原子，較佳5、6或9個環原子；具有6、10或14個在環陣列中共用之π電子；且除碳原子之外，亦具有1至5個雜原子的基團。術語「雜原子」係指氮、氧或硫，且包括氮或硫之任何氧化形式；及鹼性氮之任何四級銨化形式。雜芳基包括(但不限於)噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、異噁唑基、噁二唑基、噻唑基、異噻唑基、噻二唑基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吲哚嗪基、嘌呤基、啶基及喋啶基。如本文所用之術語「雜芳基」及「雜芳-」亦包括雜芳環稠合至一或多個芳基、環脂族或雜環基環的基團，其中連接基團或連接點係在雜芳環上。非限制性實例包括吲哚基、異吲哚基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、二苯并呋喃基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、喹啉基、異喹啉基、啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喏啉基、4H-喹嗪基、咔唑基、吖啶基、啡嗪基、啡噻嗪基、啡噁嗪基、四氫喹啉基、四氫異喹啉基及吡啶并[2，3-b]-1,4-噁嗪-3(4H)-酮。雜芳基可為單環或雙環。術語「雜芳基(heteroaryl)」可與術語「雜芳基環(heteroaryl ring)」、「雜芳基 (heteroaryl group)」或「雜芳族基(heteroaromatic)」互換使用，該等術語中之任一者包括視情況經取代之環。術語「雜芳烷基」係指經雜芳基取代之烷基，其中烷基及雜芳基部分獨立地視情況經取代。
雜原子：術語「雜原子」意謂以下中之一或多者：氧、硫、氮、磷、硼、硒或矽(包括氮、硼、硒、硫、磷或矽之任何氧化形式；任何鹼性氮之四級銨化形式；或雜環之可取代氮，例如N(如在3,4-二氫-2H-吡咯基中)、NH(如在吡咯啶基中)或NR+(如在N上經取代之吡咯啶基中))。
雜環：如本文所用之術語「雜環(heterocycle)」、「雜環基(heterocyclyl)」、「雜環基(heterocyclic radical)」及「雜環(heterocyclic ring)」可互換使用且係指穩定的3員至7員單環或7員至10員雙環雜環部分，其為飽和或部分不飽和的，且除碳原子以外具有一或多個，較佳一至四個如上文所定義之雜原子。當關於雜環之環原子使用時，術語「氮」包括經取代之氮。舉例而言，在具有0-3個選自氧、硫或氮之雜原子之飽和或部分不飽和環中，氮可為N(如在3,4-二氫-2H-吡咯基中)、NH(如在吡咯啶基中)或+NR(如在N上經取代之吡咯啶基中)。
雜環可在任何雜原子或碳原子處連接至其側基，從而產生穩定結構，且任何環原子皆可視情況經取代。該等飽和或部分不飽和雜環基之實例包括(但不限於)四氫呋喃基、四氫噻吩基、吡咯啶基、哌啶基、吡咯啉基、四氫喹啉基、四氫異喹啉基、十氫喹啉基、噁唑啶基、哌嗪基、二氧雜環己烷基、二氧戊環基、二氮呯基、噁氮呯基、噻環氮己三烯基、嗎啉基及啶基。術語「雜環(heterocycle)」、「雜環基(heterocyclyl)」、「雜環基環(heterocyclyl ring)」、「雜環基(heterocyclic group)」、「雜環部分(heterocyclic moiety)」及「雜環基(heterocyclic radical)」在本文中可互換地使用，且包括雜環基環稠合至一或多個芳基、雜芳基或環脂族環之基團，諸如吲哚啉基、3H-吲 哚基、烷基、啡啶基或四氫喹啉基，其中連接基團或連接點係在雜環基環上。雜環基可為單環或雙環的。術語「雜環基烷基」係指經雜環基取代之烷基，其中烷基及雜環基部分獨立地視情況經取代。
腹膜內：如本文所用之片語「腹膜內投藥」及「腹膜內投與」具有其在此項技術中所瞭解之含義，係指將化合物或組合物投與至個體腹膜中。
活體外：如本文所用之術語「活體外」係指發生在人造環境中，例如試管或反應容器中、細胞培養液中等，而非發生在生物體(例如，動物、植物及/或微生物)內的事件。
活體內：如本文所用之術語「活體內」係指發生在生物體(例如，動物、植物及/或微生物)內之事件。
低碳烷基：術語「低碳烷基」係指C1-4直鏈或分支鏈烷基。例示性低碳烷基為甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基及第三丁基。
低碳鹵烷基：術語「低碳鹵烷基」係指經一或多個鹵素原子取代之C1-4直鏈或分支鏈烷基。
視情況經取代：如本文所述，本發明化合物可含有「視情況經取代」之部分。通常，術語「經取代」無論前面是否有術語「視情況」均意謂指定部分之一或多個氫經適合取代基置換。除非另外指示，否則「視情況經取代」之基團可在該基團之各可取代位置具有適合取代基，且當任何給定結構中超過一個位置可經超過一個選自指定組之取代基取代時，每一個位置之取代基可相同或不同。本發明所設想之取代基之組合較佳為將形成穩定的或化學上可行的化合物的彼等取代基。如本文所用之術語「穩定」係指化合物在經受允許其產生、偵測及(在某些實施例中)其回收、純化及出於本文中所揭示之一或多種目的使用之條件時基本上無變化。
「視情況經取代」之基團之可取代碳原子上的適合單價取代基獨立地為鹵素；-(CH2)0-4Ro；-(CH2)0-4ORo；-O(CH2)0-4Ro；-O-(CH2)0-4C(O)ORo；-(CH2)0-4CH(ORo)2；-(CH2)0-4SRo；可經Ro取代之-(CH2)0-4Ph；可經Ro取代之-(CH2)0-4O(CH2)0-1Ph；可經Ro取代之-CH=CHPh；可經Ro取代之-(CH2)0-4O(CH2)0-1-吡啶基；-NO2；-CN；-N3；-(CH2)0-4N(Ro)2；-(CH2)0-4N(Ro)C(O)Ro；-N(Ro)C(S)Ro；-(CH2)0-4N(Ro)C(O)NRo 2；-N(Ro)C(S)NRo 2；-(CH2)0-4N(Ro)C(O)ORo；-N(Ro)N(Ro)C(O)Ro；-N(Ro)N(Ro)C(O)NRo 2；-N(Ro)N(Ro)C(O)ORo；-(CH2)0-4C(O)Ro；-C(S)Ro；-(CH2)0-4C(O)ORo；-(CH2)0-4C(O)SRo；-(CH2)0-4C(O)OSiRo 3；-(CH2)0-4OC(O)Ro；-OC(O)(CH2)0-4SR；-SC(S)SRo；-(CH2)0-4SC(O)Ro；-(CH2)0-4C(O)NRo 2；-C(S)NRo 2；-C(S)SRo；-SC(S)SRo；-(CH2)0-4OC(O)NRo 2；-C(O)N(ORo)Ro；-C(O)C(O)Ro；-C(O)CH2C(O)Ro；-C(NORo)Ro；-(CH2)0-4SSRo；-(CH2)0-4S(O)2Ro；-(CH2)0-4S(O)2ORo；-(CH2)0-4OS(O)2Ro；-S(O)2NRo 2；-(CH2)0-4S(O)Ro；-N(Ro)S(O)2NRo 2；-N(Ro)S(O)2Ro；-N(ORo)Ro；-C(NH)NRo 2；-P(O)2Ro；-P(O)Ro 2；-OP(O)Ro 2；-OP(O)(ORo)2；-SiRo 3；-(C1-4直鏈或分支鏈伸烷基)O-N(Ro)2；或-(C1-4直鏈或分支鏈伸烷基)C(O)O-N(Ro)2，其中各Ro可如下文所定義經取代且獨立地為氫、C1-6脂族基、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph、-CH2-(5-6員雜芳基環)或具有0-4個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的5-6員飽和、部分不飽和或芳基環，或不管上文如何定義，兩個獨立出現之Ro與其插入原子一起形成具有0-4個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的3-12員飽和、部分不飽和或芳基單環或雙環，其可如下文所定義經取代。
Ro(或兩個獨立出現之Ro與其插入原子一起形成之環)上之適合單價取代基獨立地為鹵素、-(CH2)0-2R●、-(鹵基R●)、-(CH2)0-2OH、-(CH2)0-2OR●、-(CH2)0-2CH(OR●)2、-O(鹵基R●)、-CN、-N3、-(CH2)0-2C(O)R●、- (CH2)0-2C(O)OH、-(CH2)0-2C(O)OR●、-(CH2)0-2SR●、-(CH2)0-2SH、-(CH2)0-2NH2、-(CH2)0-2NHR●、-(CH2)0-2NR● 2、-NO2、-SiR● 3、-OSiR● 3、-C(O)SR●、-(C1-4直鏈或分支鏈伸烷基)C(O)OR●或-SSR●，其中各R●未經取代或在前面有「鹵基」之情況下僅經一或多個鹵素取代，且獨立地選自C1-4脂族基、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph或具有0至4個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子之5-6員飽和、部分不飽和或芳基環。Ro之飽和碳原子之適合二價取代基包括=O及=S。
「視情況經取代」之基團之飽和碳原子上之適合二價取代基包括以下：=O、=S、=NNR* 2、=NNHC(O)R*、=NNHC(O)OR*、=NNHS(O)2R*、=NR*、=NOR*、-O(C(R* 2))2-3O-或-S(C(R* 2))2-3S-，其中R*在每次出現時各自獨立地選自氫、可如下文所定義經取代之C1-6脂族基或具有0-4個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的未經取代之5-6員飽和、部分不飽和或芳基環。結合至「視情況經取代」之基團之鄰接可取代碳之適合二價取代基包括：-O(CR* 2)2-3O-，其中R*在每次出現時各自獨立地選自氫、可如下所定義經取代之C1-6脂族基或具有0-4個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子之未經取代之5-6員飽和、部分不飽和或芳基環。
R*之脂族基上之適合取代基包括鹵素、-R●、-(鹵基R●)、-OH、-OR●、-O(鹵基R●)、-CN、-C(O)OH、-C(O)OR●、-NH2、-NHR●、-NR● 2或-NO2，其中各R●未經取代或在前面有「鹵基」之情況下僅經一或多個鹵素取代，且獨立地為C1-4脂族基、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph或具有0-4個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子之5-6員飽和、部分不飽和或芳基環。
「視情況經取代」之基團之可取代氮上之適合取代基包括-R†、-NR† 2、-C(O)R†、-C(O)OR†、-C(O)C(O)R†、-C(O)CH2C(O)R†、-S(O)2R†、-S(O)2NR† 2、-C(S)NR† 2、-C(NH)NR† 2或-N(R†)S(O)2R†；其 中各R†獨立地為氫、可如下文所定義經取代之C1-6脂族基、未經取代之-OPh或具有0-4個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的未經取代之5-6員飽和、部分不飽和或芳基環，或不管上文如何定義，兩個獨立出現之R†與其插入原子一起形成具有0-4個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的未經取代之3-12員飽和、部分不飽和或芳基單環或雙環。
R†之脂族基上之適合取代基獨立地為鹵素、-R●、-(鹵基R●)、-OH、-OR●、-O(鹵基R●)、-CN、-C(O)OH、-C(O)OR●、-NH2、-NHR●、-NR● 2或-NO2，其中各R●未經取代或在前面有「鹵基」之情況下僅經一或多個鹵素取代，且獨立地為C1-4脂族基、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph或具有0-4個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子之5-6員飽和、部分不飽和或芳基環。
經口：如本文所用之片語「經口投藥」及「經口投與」具有其在此項技術中所瞭解之含義，係指經口投與化合物或組合物。
非經腸：如本文所用之片語「非經腸投藥」及「非經腸投與」具有其在此項技術中所瞭解之含義，係指除經腸及局部投藥以外之投藥模式，通常藉由注射，且包括(但不限於)靜脈內、肌肉內、動脈內、鞘內、囊內、眶內、心內、皮內、腹膜內、經氣管、皮下、表皮下、關節內、囊下、蛛膜下、脊椎內及胸骨內注射及輸注。
部分不飽和：如本文所用之術語「部分不飽和」係指環部分包括至少一個雙鍵或參鍵。術語「部分不飽和」意欲涵蓋具有多個不飽和位點之環，但並不意欲包括如本文所定義之芳基或雜芳基部分。
醫藥組合物：如本文所用之術語「醫藥組合物」係指與一或多種醫藥學上可接受之載劑一起調配之活性劑。在一些實施例中，活性劑以適合投與之單位劑量的量存在於治療方案中，其在向相關群體投與時展示出統計學上顯著之實現預定治療作用的概率。在一些實施例中，醫藥組合物可專門調配成用於以固體或液體形式投與，包括用於 以下之彼等醫藥組合物：經口投與，例如用於施加至舌部之灌藥(水性或非水性溶液或懸浮液)、錠劑(例如以經頰、舌下及全身性吸收為目標之彼等錠劑)、大丸劑、散劑、顆粒、糊劑；非經腸投與，例如藉由皮下、肌肉內、靜脈內或硬膜外注射投與之例如無菌溶液或懸浮液或持續釋放調配物；局部施用，例如施用至皮膚、肺或口腔之乳膏、軟膏或控制釋放貼片或噴霧；陰道內或直腸內投與，例如呈子宮托、乳膏或發泡體形式；舌下；經眼；經皮；或經鼻、經肺及至其他黏膜表面。
醫藥學上可接受：如本文所用之片語「醫藥學上可接受」係指彼等化合物、物質、組合物及/或劑型在合理醫學判斷之範疇內，適用於與人類及動物之組織接觸而無過度毒性、刺激、過敏反應或其他問題或併發症，與合理的益處/風險比相匹配。
醫藥學上可接受之載劑：如本文所用之術語「醫藥學上可接受之載劑」意謂在將本發明化合物自身體之一個器官或部分攜帶或輸送至身體之另一器官或部分時所涉及的醫藥學上可接受之物質、組合物或媒劑，諸如液體或固體填充劑、稀釋劑、賦形劑或溶劑囊封材料。各載劑在與調配物之其他成分相容且對患者無害的意義上必須為「可接受的」。可充當醫藥學上可接受之載劑的材料之一些實例包括：糖，諸如乳糖、葡萄糖及蔗糖；澱粉，諸如玉米澱粉及馬鈴薯澱粉；纖維素及其衍生物，諸如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素及乙酸纖維素；粉末狀黃蓍；麥芽；明膠；滑石；賦形劑，諸如可可脂及栓劑蠟；油，諸如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油及大豆油；二醇，諸如丙二醇；多元醇，諸如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇及聚乙二醇；酯，諸如油酸乙酯及月桂酸乙酯；瓊脂；緩衝劑，諸如氫氧化鎂及氫氧化鋁；海藻酸；無熱原質水；等張生理食鹽水；林格氏溶液(Ringer's solution)；乙醇；pH緩衝溶液；聚酯、聚碳酸酯及 /或聚酸酐；及醫藥調配物中採用之其他無毒相容物質。
醫藥學上可接受之鹽：如本文所用之術語「醫藥學上可接受之鹽」係指此類化合物之適合在醫藥背景下使用之鹽，亦即，在合理醫學判斷之範疇內，適用於與人類及低等動物之組織接觸而無異常毒性、刺激、過敏反應及其類似者，且與合理的益處/風險比相匹配的鹽。醫藥學上可接受之鹽為此項技術中熟知的。舉例而言，S.M.Berge等人在J.Pharmaceutical Sciences,66：1-19(1977)中詳細描述了醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，醫藥學上可接受之鹽包括(但不限於)無毒酸加成鹽，其為胺基與無機酸或與有機酸形成之鹽或藉由使用此項技術中所用之其他方法(諸如離子交換)形成之鹽，無機酸諸如鹽酸、氫溴酸、磷酸、硫酸及過氯酸，有機酸諸如乙酸、順丁烯二酸、酒石酸、檸檬酸、丁二酸或丙二酸。在一些實施例中，醫藥學上可接受之鹽包括(但不限於)己二酸鹽、海藻酸鹽、抗壞血酸鹽、天冬胺酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、環戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、甲酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、葡糖酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、氫碘化物、2-羥基-乙磺酸鹽、乳糖酸鹽、乳酸鹽、月桂酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、順丁烯二酸鹽、丙二酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、菸鹼酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酸鹽、過氧硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、磷酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、丁二酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、對甲苯磺酸鹽、十一烷酸鹽、戊酸鹽及其類似者。代表性鹼金屬或鹼土金屬鹽包括鈉鹽、鋰鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽及其類似者。在一些實施例中，適當時，醫藥學上可接受之鹽包括無毒銨、四級銨及使用抗衡離子形成之胺陽離子，該等抗衡離子諸如鹵離子、氫氧根、羧酸根、硫酸根、磷 酸根、硝酸根、具有1至6個碳原子之烷基、磺酸根及芳基磺酸根。
前藥：一般而言，如本文所用且如此項技術中所瞭解之術語「前藥」為當投與給生物體時，在體內代謝以傳遞感興趣之活性(例如，治療性或診斷性)劑的實體。通常，此類代謝涉及移除至少一個「前藥部分」，從而形成活性劑。此項技術中已知各種形式之「前藥」。關於此類前藥部分之實例，參見：a)Design of Prodrugs，由H.Bundgaard編，(Elsevier,1985)及Methods in Enzymology,42：309-396，由K.Widder等人編(Academic Press,1985)；b)Prodrugs and Targeted Delivery，由J.Rautio編(Wiley,2011)；c)Prodrugs and Targeted Delivery，由J.Rautio編(Wiley,2011)；d)A Textbook of Drug Design and Development，由Krogsgaard-Larsen編；e)Bundgaard，第5章「Design and Application of Prodrugs」,H.Bundgaard，第113-191頁(1991)；f)Bundgaard,Advanced Drug Delivery Reviews,8：1-38(1992)；g)Bundgaard等人，Journal of Pharmaceutical Sciences,77：285(1988)；及h)Kakeya等人，Chem.Pharm.Bull.,32：692(1984)。
如同本文所述之其他化合物一樣，前藥可按各種形式中之任一者提供，例如晶體形式、鹽形式等。在一些實施例中，前藥以其醫藥學上可接受之鹽形式提供。
保護基：如本文所用之術語「保護基」為此項技術中熟知的且包括在Protecting Groups in Organic Synthesis,T.W.Greene及P.G.M.Wuts，第3版，John Wiley & Sons,1999中詳細描述之彼等保護基，該參考文獻之全部內容以引用的方式併入本文中。亦包括在Current Protocols in Nucleic Acid Chemistry，由Serge L.Beaucage等人編06/2012中所述之專門用於核苷及核苷酸化學之彼等保護基，第2章之全部內容以引用的方式併入本文中。適合的胺基保護基包括胺基甲酸甲酯、胺基甲酸乙酯、胺基甲酸9-茀基甲酯(Fmoc)、胺基甲酸9-(2-磺酸基)茀基甲酯、胺基甲酸9-(2,7-二溴)茀基甲酯、胺基甲酸2,7-二第三丁基-[9-(10,10-二側氧基-10,10,10,10-四氫噻噸基)]甲酯(DBD-Tmoc)、胺基甲酸4-甲氧基苯甲醯甲酯(Phenoc)、胺基甲酸2,2,2-三氯乙酯(Troc)、胺基甲酸2-三甲基矽烷基乙酯(Teoc)、胺基甲酸2-苯乙酯(hZ)、胺基甲酸1-(1-金剛烷基)-1-甲基乙酯(Adpoc)、胺基甲酸1,1-二甲基-2-鹵基乙酯、胺基甲酸1,1-二甲基-2,2-二溴乙酯(DB-t-BOC)、胺基甲酸1,1-二甲基-2,2,2-三氯乙酯(TCBOC)、胺基甲酸1-甲基-1-(4-聯苯基)乙酯(Bpoc)、胺基甲酸1-(3,5-二第三丁基苯基)-1-甲基乙酯(t-Bumeoc)、胺基甲酸2-(2'-及4'-吡啶基)乙酯(Pyoc)、胺基甲酸2-(N,N-二環己基甲醯胺基)乙酯、胺基甲酸第三丁酯(BOC)、胺基甲酸1-金剛烷酯(Adoc)、胺基甲酸乙烯酯(Voc)、胺基甲酸烯丙酯(Alloc)、胺基甲酸1-異丙基烯丙酯(Ipaoc)、胺基甲酸桂皮酯(Coc)、胺基甲酸4-硝基桂皮酯(Noc)、胺基甲酸8-喹啉酯、胺基甲酸N-羥基哌啶酯、胺基甲酸烷基二硫酯、胺基甲酸苯甲酯(Cbz)、胺基甲酸對甲氧基苯甲酯(Moz)、胺基甲酸對硝基苯甲酯、胺基甲酸對溴苯甲酯、胺基甲酸對氯苯甲酯、胺基甲酸2,4-二氯苯甲酯、胺基甲酸4-甲基亞磺醯基苯甲酯(Msz)、胺基甲酸9-蒽基甲酯、胺基甲酸二苯甲酯、胺基甲酸2-甲基硫乙酯、胺基甲酸2-甲基磺醯基乙酯、胺基甲酸2-(對甲苯磺醯基)乙酯、胺基甲酸[2-(1,3-二噻烷基)]甲酯(Dmoc)、胺基甲酸4-甲基苯硫酯(Mtpc)、胺基甲酸2,4-二甲基苯硫酯(Bmpc)、胺基甲酸2-磷鎓基乙酯(Peoc)、胺基甲酸2-三苯基磷鎓基異丙酯(Ppoc)、胺基甲酸1,1-二甲基-2-氰基乙酯、胺基甲酸間氯-對醯氧基苯甲酯、胺基甲酸對(二羥基氧 硼基)苯甲酯、胺基甲酸5-苯并異噁唑基甲酯、胺基甲酸2-(三氟甲基)-6-色酮基甲酯(Tcroc)、胺基甲酸間硝基苯酯、胺基甲酸3,5-二甲氧基苯甲酯、胺基甲酸鄰硝基苯甲酯、胺基甲酸3,4-二甲氧基-6-硝基苯甲酯、胺基甲酸苯基(鄰硝基苯基)甲酯、啡噻嗪基-(10)-羰基衍生物、N'-對甲苯磺醯基胺基羰基衍生物、N'-苯基胺基硫羰基衍生物、胺基甲酸第三戊酯、硫胺基甲酸S-苯甲酯、胺基甲酸對氰基苯甲酯、胺基甲酸環丁酯、胺基甲酸環己酯、胺基甲酸環戊酯、胺基甲酸環丙基甲酯、胺基甲酸對癸氧基苯甲酯、胺基甲酸2,2-二甲氧基羰基乙烯酯、胺基甲酸鄰(N,N-二甲基甲醯胺基)苯甲酯、胺基甲酸1,1-二甲基-3-(N,N-二甲基甲醯胺基)丙酯、胺基甲酸1,1-二甲基丙炔酯、胺基甲酸二(2-吡啶基)甲酯、胺基甲酸2-呋喃基甲酯、胺基甲酸2-碘乙酯、胺基甲酸異冰片酯、胺基甲酸異丁酯、胺基甲酸異菸鹼酯、胺基甲酸對(對'-甲氧基苯基偶氮基)苯甲酯、胺基甲酸1-甲基環丁酯、胺基甲酸1-甲基環己酯、胺基甲酸1-甲基-1-環丙基甲酯、胺基甲酸1-甲基-1-(3,5-二甲氧基苯基)乙酯、胺基甲酸1-甲基-1-(對苯基偶氮基苯基)乙酯、胺基甲酸1-甲基-1-苯乙酯、胺基甲酸1-甲基-1-(4-吡啶基)乙酯、胺基甲酸苯酯、胺基甲酸對(苯偶氮基)苯甲酯、胺基甲酸2,4,6-三第三丁基苯酯、胺基甲酸4-(三甲銨)苯甲酯、胺基甲酸2,4,6-三甲基苯甲酯、甲醯胺、乙醯胺、氯乙醯胺、三氯乙醯胺、三氟乙醯胺、苯基乙醯胺、3-苯基丙醯胺、吡啶醯胺、3-吡啶基甲醯胺、N-苯甲醯基苯基丙胺醯基衍生物、苯甲醯胺、對苯基苯甲醯胺、鄰硝基苯基乙醯胺、鄰硝基苯氧基乙醯胺、乙醯乙醯胺、(N'-二硫苯甲氧羰基胺基)乙醯胺、3-(對羥基苯基)丙醯胺、3-(鄰硝基苯基)丙醯胺、2-甲基-2-(鄰硝基苯氧基)丙醯胺、2-甲基-2-(鄰苯基偶氮基苯氧基)丙醯胺、4-氯丁醯胺、3-甲基-3-硝基丁醯胺、鄰硝基桂皮醯胺、N-乙醯基甲硫胺酸衍生物、鄰硝基苯甲醯胺、鄰(苯甲醯氧基甲基)苯甲醯胺、4,5-二苯基-3- 噁唑啉-2-酮、N-鄰苯二甲醯亞胺、N-二硫雜丁二醯亞胺(Dts)、N-2,3-二苯基順丁烯二醯亞胺、N-2,5-二甲基吡咯、N-1,1,4,4-四甲基二矽烷基氮雜環戊烷加合物(STABASE)、5-經取代之1,3-二甲基-1,3,5-三氮雜環己-2-酮、5-經取代之1,3-二苯甲基-1,3,5-三氮雜環己-2-酮、1-經取代之3,5-二硝基-4-吡啶酮、N-甲胺、N-烯丙胺、N-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲胺(SEM)、N-3-乙醯氧基丙胺、N-(1-異丙基-4-硝基-2-側氧基-3-吡咯啉-3-基)胺、四級銨鹽、N-苯甲胺、N-二(4-甲氧基苯基)甲胺、N-5-二苯并環庚胺、N-三苯基甲胺(Tr)、N-[(4-甲氧基苯基)二苯甲基]胺(MMTr)、N-9-苯基茀基胺(PhF)、N-2,7-二氯-9-茀基亞甲基胺、N-二茂鐵基甲胺基(Fcm)、N-2-吡啶甲基胺基N'-氧化物、N-1,1-二甲基硫基亞甲基胺、N-苯亞甲基胺、N-對甲氧基苯亞甲基胺、N-二苯基亞甲基胺、N-[(2-吡啶基)基]亞甲基胺、N-(N',N'-二甲胺基亞甲基)胺、N,N'-亞異丙基二胺、N-對硝基苯亞甲基胺、N-亞柳基胺、N-5-氯亞柳基胺、N-(5-氯-2-羥基苯基)苯基亞甲基胺、N-亞環己基胺、N-(5,5-二甲基-3-側氧基-1-環己烯基)胺、N-硼烷衍生物、N-二苯基硼酸衍生物、N-[苯基(五羰基鉻-或鎢)羰基]胺、N-銅螯合物、N-鋅螯合物、N-硝基胺、N-亞硝基胺、胺N-氧化物、二苯基膦醯胺(Dpp)、二甲基硫基膦醯胺(Mpt)、二苯基硫基膦醯胺(Ppt)、胺基磷酸二烷基酯、胺基磷酸二苯甲酯、胺基磷酸二苯酯、苯亞磺醯胺、鄰硝基苯亞磺醯胺(Nps)、2,4-二硝基苯亞磺醯胺、五氯苯亞磺醯胺、2-硝基-4-甲氧基苯亞磺醯胺、三苯基甲基亞磺醯胺、3-硝基吡啶亞磺醯胺(Npys)、對甲苯磺醯胺(Ts)、苯磺醯胺、2,3,6-三甲基-4-甲氧基苯磺醯胺(Mtr)、2,4,6-三甲氧基苯磺醯胺(Mtb)、2,6-二甲基-4-甲氧基苯磺醯胺(Pme)、2,3,5,6-四甲基-4-甲氧基苯磺醯胺(Mte)、4-甲氧基苯磺醯胺(Mbs)、2,4,6-三甲基苯磺醯胺(Mts)、2,6-二甲氧基-4-甲基苯磺醯胺(iMds)、2,2,5,7,8-五甲基烷-6-磺醯胺(Pmc)、甲磺醯胺(Ms)、β-三 甲基矽烷基乙磺醯胺(SES)、9-蒽磺醯胺、4-(4',8'-二甲氧基萘基甲基)苯磺醯胺(DNMBS)、苯甲基磺醯胺、三氟甲基磺醯胺及苯甲醯甲基磺醯胺。
經適當保護之羧酸進一步包括(但不限於)經矽烷基、烷基、烯基、芳基及芳烷基保護之羧酸。適合矽烷基之實例包括三甲基矽烷基、三乙基矽烷基、第三丁基二甲基矽烷基、第三丁基二苯基矽烷基、三異丙基矽烷基及其類似者。適合烷基之實例包括甲基、苯甲基、對甲氧基苯甲基、3,4-二甲氧基苯甲基、三苯甲基、第三丁基、四氫哌喃-2-基。適合烯基之實例包括烯丙基。適合芳基之實例包括視情況經取代之苯基、聯苯或萘基。適合芳基烷基之實例包括視情況經取代之苯甲基(例如，對甲氧基苯甲基(MPM)、3,4-二甲氧基苯甲基、鄰硝基苯甲基、對硝基苯甲基、對鹵基苯甲基、2,6-二氯苯甲基、對氰基苯甲基)以及2-及4-吡啶甲基。
適合的羥基保護基包括甲基、甲氧基甲基(MOM)、甲硫基甲基(MTM)、第三丁基硫甲基、(苯基二甲基矽烷基)甲氧基甲基(SMOM)、苯甲氧基甲基(BOM)、對甲氧基苯甲氧基甲基(PMBM)、(4-甲氧基苯氧基)甲基(p-AOM)、愈創木酚甲基(guaiacolmethyl；GUM)、第三丁氧基甲基、4-戊烯氧基甲基(POM)、矽烷氧基甲基、2-甲氧基乙氧基甲基(MEM)、2,2,2-三氯乙氧基甲基、雙(2-氯乙氧基)甲基、2-(三甲基矽烷基)乙氧基甲基(SEMOR)、四氫哌喃基(THP)、3-溴四氫哌喃基、四氫硫哌喃基、1-甲氧基環己基、4-甲氧基四氫哌喃基(MTHP)、4-甲氧基四氫硫哌喃基、4-甲氧基四氫硫哌喃基S,S-二氧化物、1-[(2-氯-4-甲基)苯基]-4-甲氧基哌啶-4-基(CTMP)、1,4-二噁烷-2-基、四氫呋喃基、四氫硫呋喃基、2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氫-7,8,8-三甲基-4,7-甲醇苯并呋喃-2-基、1-乙氧基乙基、1-(2-氯乙氧基)乙基、1-甲基-1-甲氧基乙基、1-甲基-1-苯甲氧基乙基、1-甲基-1-苯甲氧基-2-氟 乙基、2,2,2-三氯乙基、2-三甲基矽烷基乙基、2-(苯基氫硒基)乙基、第三丁基、烯丙基、對氯苯基、對甲氧基苯基、2,4-二硝基苯基、苯甲基、對甲氧基苯甲基、3,4-二甲氧基苯甲基、鄰硝基苯甲基、對硝基苯甲基、對鹵基苯甲基、2,6-二氯苯甲基、對氰基苯甲基、對苯基苯甲基、2-吡啶甲基、4-吡啶甲基、3-甲基-2-吡啶甲基N-氧離子基、二苯甲基、對,對'-二硝基二苯甲基、5-二苯并環庚基、三苯甲基、α-萘基二苯基甲基、對甲氧基苯基二苯基甲基、二(對甲氧苯基)苯甲基、三(對甲氧苯基)甲基、4-(4'-溴苯甲醯甲基氧基苯基)二苯甲基、4,4',4"-參(4,5-二氯鄰苯二甲醯亞胺基苯基)甲基、4,4',4"-參(乙醯丙醯氧基苯基)甲基、4,4',4"-參(苯甲醯氧基苯基)甲基、3-(咪唑-1-基)雙(4',4"-二甲氧基苯基)甲基、1,1-雙(4-甲氧基苯基)-1'-芘基甲基、9-蒽基、9-(9-苯基)基、9-(9-苯基-10-側氧基)蒽基、1,3-苯并二硫雜環戊-2-基、苯并異噻唑基S,S-二氧離子基、三甲基矽烷基(TMS)、三乙基矽烷基(TES)、三異丙基矽烷基(TIPS)、二甲基異丙基矽烷基(IPDMS)、二乙基異丙基矽烷基(DEIPS)、二甲基第三己基矽烷基、第三丁基二甲基矽烷基(TBDMS)、第三丁基二苯基矽烷基(TBDPS)、三苯甲基矽烷基、三對二甲苯基矽烷基、三苯基矽烷基、二苯基甲基矽烷基(DPMS)、第三丁基甲氧苯基矽烷基(TBMPS)、甲酸酯、苯甲醯基甲酸酯、乙酸酯、氯乙酸酯、二氯乙酸酯、三氯乙酸酯、三氟乙酸酯、甲氧基乙酸酯、三苯基甲氧基乙酸酯、苯氧基乙酸酯、對氯苯氧基乙酸酯、3-苯基丙酸酯、4-側氧基戊酸酯(乙醯丙酸酯)、4,4-(伸乙基二硫基)戊酸酯(乙醯丙醯基二硫縮醛)、特戊酸酯、金剛酸酯、巴豆酸酯、4-甲氧基巴豆酸酯、苯甲酸酯、對苯基苯甲酸酯、2,4,6-三甲基苯甲酸酯(均三甲苯酸酯(mesitoate))、碳酸烷基酯甲酯、碳酸9-茀基甲酯(Fmoc)、碳酸烷基酯乙酯、碳酸烷基酯2,2,2-三氯乙酯(Troc)、碳酸2-(三甲基矽烷基)乙酯(TMSEC)、碳酸2-(苯磺醯基)乙酯 (Psec)、碳酸2-(三苯基磷鎓基)乙酯(Peoc)、碳酸烷基酯異丁酯、碳酸烷基酯乙烯酯、碳酸烷基酯烯丙酯、碳酸烷基酯對硝基苯基酯、碳酸烷基酯苯甲酯、碳酸烷基酯對甲氧基苯甲酯、碳酸烷基酯3,4-二甲氧基苯甲酯、碳酸烷基酯鄰硝基苯甲酯、碳酸烷基酯對硝基苯甲酯、硫代碳酸烷基酯S-苯甲酯、碳酸4-乙氧基-1-萘基酯、二硫代碳酸甲酯、2-碘苯甲酸酯、4-疊氮基丁酸酯、4-硝基-4-甲基戊酸酯、鄰(二溴甲基)苯甲酸酯、2-甲醯基苯磺酸酯、2-(甲基硫甲氧基)乙基、4-(甲基硫甲氧基)丁酸酯、2-(甲基硫甲氧基甲基)苯甲酸酯、2,6-二氯-4-甲基苯氧基乙酸酯、2,6-二氯-4-(1,1,3,3-四甲基丁基)苯氧基乙酸酯、2,4-雙(1,1-二甲基丙基)苯氧基乙酸酯、氯二苯基乙酸酯、異丁酸酯、單丁二酸酯、(E)-2-甲基-2-丁烯酸酯、鄰(甲氧羰基)苯甲酸酯、α-萘甲酸酯、硝酸酯、N,N,N',N'-四甲基二胺基磷酸烷基酯、N-苯基胺基甲酸烷基酯、硼酸酯、二甲基膦基硫基、2,4-二硝基苯基亞磺酸烷基酯、硫酸酯、甲烷磺酸酯(甲磺酸酯)、苯甲基磺酸酯及甲苯磺酸酯(Ts)。為保護1,2-或1,3-二醇，保護基包括亞甲基縮醛、亞乙基縮醛、1-第三丁基亞乙基縮酮、1-苯基亞乙基縮酮、(4-甲氧基苯基)亞乙基縮醛、2,2,2-三氯亞乙基縮醛、縮丙酮化物、亞環戊基縮酮、亞環己基縮酮、亞環庚基縮酮、苯亞甲基縮醛、對甲氧基苯亞甲基縮醛、2,4-二甲氧基苯亞甲基縮酮、3,4-二甲氧基苯亞甲基縮醛、2-硝基苯亞甲基縮醛、甲氧基亞甲基縮醛、乙氧基亞甲基縮醛、二甲氧基亞甲基原酸酯、1-甲氧基亞乙基原酸酯、1-乙氧基亞乙基原酸酯、1,2-二甲氧基亞乙基原酸酯、α-甲氧基苯亞甲基原酸酯、1-(N,N-二甲胺基)亞乙基衍生物、α-(N,N'-二甲胺基)苯亞甲基衍生物、2-氧雜亞環戊基原酸酯、二第三丁基亞矽烷基(DTBS)、1,3-(1,1,3,3-四異丙基二亞矽氧烷基)衍生物(TIPDS)、四第三丁氧基二矽氧烷-1,3-二亞基衍生物(TBDS)、環碳酸酯、環酸酯、酸乙酯及酸苯酯。
在一些實施例中，羥基保護基為乙醯基、第三丁基、第三丁氧基甲基、甲氧基甲基、四氫哌喃基、1-乙氧基乙基、1-(2-氯乙氧基)乙基、2-三甲基矽烷基乙基、對氯苯基、2,4-二硝基苯基、苯甲基、苯甲醯基、對苯基苯甲醯基、2,6-二氯苯甲基、二苯甲基、對硝基苯甲基、三苯甲基(triphenylmethyl/trityl)、4,4'-二甲氧基三苯甲基、三甲基矽烷基、三乙基矽烷基、第三丁基二甲基矽烷基、第三丁基二苯基矽烷基、三苯基矽烷基、三異丙基矽烷基、苯甲醯基甲酸酯、氯乙醯基、三氯乙醯基、三氟乙醯基、特戊醯基、碳酸9-茀基甲酯、甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、三氟甲磺酸酯、三苯甲基、單甲氧基三苯甲基(MMTr)、4,4'-二甲氧基三苯甲基(DMTr)及4,4',4"-三甲氧基三苯甲基(TMTr)、2-氰基乙基(CE或Cne)、2-(三甲基矽烷基)乙基(TSE)、2-(2-硝基苯基)乙基、2-(4-氰基苯基)乙基、2-(4-硝基苯基)乙基(NPE)、2-(4-硝基苯磺醯基)乙基、3,5-二氯苯基、2,4-二甲基苯基、2-硝基苯基、4-硝基苯基、2,4,6-三甲基苯基、2-(2-硝基苯基)乙基、丁基硫羰基、4,4',4"-參(苯甲醯氧基)三苯甲基、二苯基胺甲醯基、乙醯丙醯基、2-(二溴甲基)苯甲醯基(Dbmb)、2-(異丙硫基甲氧基甲基)苯甲醯基(Ptmt)、9-苯基二苯并哌喃-9-基(pixyl)或9-(對甲氧基苯基)黃嘌呤-9-基(MOX)。在一些實施例中，羥基保護基各自獨立地選自乙醯基、苯甲基、第三丁基二甲基矽烷基、第三丁基二苯基矽烷基及4,4'-二甲氧基三苯甲基。在一些實施例中，羥基保護基選自由三苯甲基、單甲氧基三苯甲基及4,4'-二甲氧基三苯甲基組成之群。
在一些實施例中，磷保護基為在整個寡核苷酸合成中連接至核苷酸間磷鍵聯之基團。在一些實施例中，磷保護基連接至核苷酸間硫代磷酸酯鍵聯之硫原子。在一些實施例中，磷保護基連接至核苷酸間硫代磷酸酯鍵聯之氧原子。在一些實施例中，磷保護基連接至核苷酸間磷酸酯鍵聯之氧原子。在一些實施例中，磷保護基為2-氰基乙基 (CE或Cne)、2-三甲基矽烷基乙基、2-硝基乙基、2-磺醯基乙基、甲基、苯甲基、鄰硝基苯甲基、2-(對硝基苯基)乙基(NPE或Npe)、2-苯乙基、3-(N-第三丁基甲醯胺基)-1-丙基、4-側氧基戊基、4-甲硫基-1-丁基、2-氰基-1,1-二甲基乙基、4-N-甲胺基丁基、3-(2-吡啶基)-1-丙基、2-[N-甲基-N-(2-吡啶基)]胺乙基、2-(N-甲醯基,N-甲基)胺乙基、4-[N-甲基-N-(2,2,2-三氟乙醯基)胺基]丁基。
蛋白質：如本文所用之術語「蛋白質」係指多肽(亦即，一串至少兩個藉由肽鍵彼此連接之胺基酸)。在一些實施例中，蛋白質僅包括天然產生之胺基酸。在一些實施例中，蛋白質包括一或多個非天然產生之胺基酸(例如，與相鄰胺基酸形成一或多個肽鍵之部分)。在一些實施例中，蛋白質鏈中之一或多個殘基含有非胺基酸部分(例如，聚糖等)。在一些實施例中，蛋白質包括超過一個多肽鏈，例如藉由一或多個二硫鍵連接或藉由其他方式相連。在一些實施例中，蛋白質含有L-胺基酸、D-胺基酸或兩者；在一些實施例中，蛋白質含有此項技術中已知之一或多種胺基酸修飾或類似物。適用修飾包括例如末端乙醯化、醯胺化、甲基化等。術語「肽」一般用於指長度小於約100個胺基酸、小於約50個胺基酸、小於20個胺基酸或小於10個胺基酸之多肽。在一些實施例中，蛋白質為抗體、抗體片段、其生物學活性部分及/或其特徵部分。
樣品：如本文所用之「樣品」為特定生物體或自其獲得之物質。在一些實施例中，樣品為獲自或源自感興趣來源之生物樣品，如本文所述。在一些實施例中，感興趣來源包含生物體，諸如動物或人類。在一些實施例中，生物樣品包含生物組織或體液。在一些實施例中，生物樣品為或包含以下中之任何一或多者：骨髓；血液；血細胞；腹水；組織或細針生檢樣品；含細胞之體液；自由浮動之核酸；痰；唾液；尿液；腦脊髓液；腹膜液；胸膜液；糞便；淋巴；婦科體 液(gynecological fluid)；皮膚拭子；陰道拭子；口腔拭子；鼻拭子；洗滌液或灌洗液，諸如導管灌洗液或支氣管肺泡灌洗液；抽出物；刮片；骨髓樣本；組織生檢樣本；手術樣本；糞便、其他體液、分泌物及/或排泄物；及/或來自其之細胞等。在一些實施例中，生物樣品為或包含自個體獲得之細胞。在一些實施例中，樣品為藉由任何適當手段直接自感興趣來源獲得之「初級樣品」。舉例而言，在一些實施例中，初級生物樣品係藉由選自由以下組成之群的方法獲得：活體檢查(例如，細針穿刺或組織活體檢查)、外科手術、收集體液(例如，血液、淋巴、糞便等)等。在一些實施例中，如將自上下文清楚得知，術語「樣品」係指藉由處理(例如，藉由自其移除一或多種組分及/或藉由向其中添加一或多種試劑)初級樣品獲得之製劑。舉例而言，使用半透膜過濾。此類「經處理樣品」可包含例如自樣品提取或藉由向初級樣品施加諸如mRNA擴增或反轉錄、分離及/或純化某些組分等技術獲得的核酸或蛋白質。在一些實施例中，樣品為生物體。在一些實施例中，樣品為植物。在一些實施例中，樣品為動物。在一些實施例中，樣品為人類。在一些實施例中，樣品為除人類以外之生物體。
立體化學異構形式：如本文所用之片語「立體化學異構形式」係指由藉由相同的鍵序列鍵結之相同原子組成，但具有不可互換的不同三維結構的不同化合物。在本發明之一些實施例中，所提供之化學組合物可為或包括化合物之個別立體化學異構形式之純製劑；在一些實施例中，所提供之化學組合物可為或包括該化合物之兩種或更多種立體化學異構形式之混合物。在某些實施例中，該等混合物含有等量之不同立體化學異構形式；在某些實施例中，該等混合物含有不同量之至少兩種不同立體化學異構形式。在一些實施例中，化學組合物可含有化合物之所有非對映異構體及/或對映異構體。在一些實施例中，化學組合物並非含有化合物之所有非對映異構體及/或對映異構 體。在一些實施例中，若需要本發明化合物之特定對映異構體，則其可例如藉由不對稱合成或藉由用對掌性助劑衍生來製備，其中分離所得非對映異構混合物且裂解輔助基團，得到純的所要對映異構體。或者，在分子含有諸如胺基之鹼性官能基的情況下，用具有適當光學活性之酸形成非對映異構鹽，且例如藉由分步結晶解析。
個體：如本文所用之術語「個體」或「測試個體」係指根據本發明，例如出於實驗、診斷、預防及/或治療目的，向其投與所提供化合物或組合物之任何生物體。典型個體包括動物(例如，哺乳動物，諸如小鼠、大鼠、兔、非人類靈長類動物及人類；昆蟲；蠕蟲等)及植物。在一些實施例中，個體可患有及/或易患上疾病、病症及/或病狀。
基本上：如本文所用之術語「基本上」係指展現感興趣特徵或性質之總的或近總的程度或等級之定性狀況。生物技術中之一般技術者所瞭解，生物及化學現象很少(若曾有)進行完全及/或繼續進行完整或很少達成或避免絕對結果。因而本文中使用術語「基本上」以針對諸多生物及/或化學現象中固有的完整性之可能缺乏。
患有：「患有」疾病、病症及/或病狀之個體已經診斷具有該疾病、病症及/或病狀及/或呈現其一或多種症狀。
易患上：「易患上」疾病、病症及/或病狀之個別為患上該疾病、病症及/或病狀之風險高於公眾成員之個體。在一些實施例中，易患上疾病、病症及/或病狀之個體可能尚未診斷出該疾病、病症及/或病狀。在一些實施例中，易患上疾病、病症及/或病狀之個體可呈現該疾病、病症及/或病狀之症狀。在一些實施例中，易患上疾病、病症及/或病狀之個體可不呈現該疾病、病症及/或病狀之症狀。在一些實施例中，易患上疾病、病症及/或病狀之個體將患上該疾病、病症及/或病狀。在一些實施例中，易患上疾病、病症及/或病狀之個體將不 患上該疾病、病症及/或病狀。
全身性：如本文所用之片語「全身性投藥」、「全身性投與」、「周邊投藥」及「周邊投與」具有其在此項技術中所瞭解之含義，係指投與化合物或組合物，使得其進入接受者之系統。
互變異構形式：如本文所用之片語「互變異構形式」用於描述有機化合物之能夠容易相互轉化之不同異構形式。互變異構體之特徵在於氫原子或質子之形式遷移，伴隨著單鍵與相鄰雙鍵之切換。在一些實施例中，互變異構體可由質子轉移互變異構(亦即，質子之重定位)產生。在一些實施例中，互變異構體可由價互變異構(亦即，成鍵電子之快速重組)產生。所有該等互變異構形式皆意欲包括在本發明之範疇內。在一些實施例中，化合物之互變異構形式彼此以動態平衡存在，使得試圖製備單獨物質，結果卻形成混合物。在一些實施例中，化合物之互變異構形式為可拆分及可分離的化合物。在本發明之一些實施例中，可提供化學組合物，其為或包括化合物之單一互變異構形式之純製劑。在本發明之一些實施例中，可以化合物之兩種或更多種互變異構形式之混合物形式提供化學組合物。在某些實施例中，該等混合物含有等量之不同互變異構形式；在某些實施例中，該等混合物含有化合物之不同量之至少兩種不同互變異構形式。在本發明之一些實施例中，化學組合物可含有化合物之所有互變異構形式。在本發明之一些實施例中，化學組合物並非含有化合物之所有互變異構形式。在本發明之一些實施例中，化學組合物可含有化合物之一或多種互變異構形式，其量隨時間推移因為相互轉化而發生變化。在本發明之一些實施例中，互變異構為酮-烯醇互變異構。化學技術中具通常知識者將認識到，酮-烯醇互變異構體可使用化學技術中已知的任何適合試劑「捕捉」(亦即，化學改質成使得其保持呈「烯醇」形式)，從而得到隨後可使用一或多種此項技術中已知之適合技術分離的烯醇 衍生物。除非另外指示，否則本發明涵蓋相關化合物之所有互變異構形式，無論呈純形式或彼此混合。
治療劑：如本文所用之片語「治療劑」係指當向個體投與時，具有治療作用及/或產生所要生物及/或藥理學作用之任何藥劑。在一些實施例中，治療劑為任何可用以緩解、改善、減輕、抑制、預防疾病、病症及/或病狀、延遲其發作、降低其嚴重程度及/或減小其一或多種症狀或特徵之發生率的物質。
治療有效量：如本文所用之術語「治療有效量」意謂當作為治療方案之一部分投與時可引發所要生物反應的物質(例如，治療劑、組合物及/或調配物)之量。在一些實施例中，物質之治療有效量為當向患有或易患上疾病、病症及/或病狀之個體投與時，足以治療、診斷、預防該疾病、病症及/或病狀及/或延遲其發作的量。如此項技術中之一般技術者將瞭解，物質之有效量可視諸如所要生物終點、待傳遞之物質、目標細胞或組織等因素而變化。舉例而言，在用於治療疾病、病症及/或病狀之調配物中，化合物之有效量為緩解、改善、減輕、抑制、預防疾病、病症及/或病狀、延遲其發作、降低其嚴重度及/或減小其一或多種症狀或特徵之發生率的量。在一些實施例中，治療有效量以單一劑量投與；在一些實施例中，需要多個單位劑量來傳遞治療有效量。
治療：如本文所用之術語「治療(treat/treatment/treating)」係指用於部分或完全緩解、改善、減輕、抑制、預防疾病、病症及/或病狀、延遲其發作、降低其嚴重程度及/或減小其一或多種症狀或特徵之發生率的任何方法。可向未呈現疾病、病症及/或病狀之病徵的個體投與治療。在一些實施例中，舉例而言，出於降低產生與疾病、病症及/或病狀有關之病變的風險之目的，可向僅呈現疾病、病症及/或病狀之早期病徵的個體投與治療。
不飽和：如本文所用之術語「不飽和」意謂部分(moiety)具有一或多個不飽和單元。
單位劑量：如本文所用之表述「單位劑量」係指以單一劑量及/或以醫藥組合物之物理離散單位投與之量。在多個實施例中，單位劑量含有預定數量之活性劑。在一些實施例中，單位劑量含有整個單一劑量之藥劑。在一些實施例中，投與超過一個單位劑量以達成總單一劑量。在一些實施例中，需要或者認為需要投與多個單位劑量，以便達成既定作用。單位劑量可為例如一定體積之含有預定數量之一或多種治療劑的液體(例如，可接受之載劑)、預定量之一或多種呈固體形式之治療劑、含有預定量之一或多種治療劑之持續釋放調配物或藥物傳遞裝置等。應瞭解，單位劑量可以除治療劑之外亦包括各種組分中之任一者的調配物形式存在。舉例而言，可包括可接受之載劑(例如，醫藥學上可接受之載劑)、稀釋劑、穩定劑、緩衝劑、防腐劑等，如下文所述。熟習此項技術者應瞭解，在多個實施例中，特定治療劑之總適當日劑量可包含單位劑量之一部分或複數個單位劑量，且可例如由主治醫師根據合理的醫學判斷來決定。在一些實施例中，任何特定個體或生物體之特定有效劑量可視多種因素而定，該等因素包括經治療之病症及該病症之嚴重程度；所採用之特定活性化合物之活性；所採用之特定組合物；個體之年齡、體重、總體健康狀況、性別及飲食；投藥時間及所採用之特定活性化合物之排泄速率；治療持續時間；與所採用之特定化合物組合或同時使用之藥物及/或其他療法；及醫療技術中熟知之類似因素。
野生型：如本文所用之術語「野生型」具有其在此項技術中所瞭解之含義，係指具有如自然界中在「正常」(相對於突變、患病、更改等而言)狀態或情況下所存在的結構及/或活性的實體。一般技術者應瞭解，野生型基因及多肽常常以多種不同形式(例如，對偶基因) 存在。
核酸：術語「核酸」包括任何核苷酸、其經修飾之變異體、其類似物及其聚合物。如本文所用之術語「聚核苷酸」係指任何長度之核苷酸之聚合物形式(核糖核苷酸(RNA)或去氧核糖核苷酸(DNA))或其經修飾之變異體或類似物。此等術語係指分子之一級結構，且因此包括雙股及單股DNA以及雙股及單股RNA。此等術語包括由核苷酸類似物及經修飾之聚核苷酸製成之RNA或DNA類似物作為等效物，諸如(但不限於)經甲基化、經保護及/或經封端之核苷酸或聚核苷酸。該等術語涵蓋聚或寡聚核糖核苷酸(RNA)及聚或寡聚去氧核糖核苷酸(DNA)；源自核鹼基及/或經修飾之核鹼基的N-糖苷或C-糖苷之RNA或DNA；源自糖及/或經修飾之糖之核酸；及源自磷酸酯橋及/或經修飾之磷原子橋(在本文中亦稱作「核苷酸間鍵聯」)之核酸。該術語涵蓋含有核鹼基、經修飾之核鹼基、糖、經修飾之糖、磷酸酯橋或經修飾之磷原子橋之任意組合的核酸。實例包括且不限於含有核糖部分之核酸、含有去氧核糖部分之核酸、含有核糖部分及去氧核糖部分之核酸、含有核糖部分及經修飾之核糖部分之核酸。前綴聚-係指核酸含有2至約10,000個核苷酸單體單元且其中前綴寡聚-係指核酸含有2至約200個核苷酸單體單元。
核苷酸：如本文所用之術語「核苷酸」係指由雜環鹼基、糖及一或多個磷酸酯基或含磷核苷酸間鍵聯組成的聚核苷酸單體單元。天然產生之鹼基(鳥嘌呤(G)、腺嘌呤(A)、胞嘧啶(C)、胸腺嘧啶(T)及尿嘧啶(U))為嘌呤或嘧啶之衍生物，但應瞭解，亦包括天然及非天然產生之鹼基類似物。天然產生之糖為戊糖(五碳糖)去氧核糖(其形成DNA)或核糖(其形成RNA)，但應瞭解，亦包括天然及非天然產生之糖類似物。核苷酸經由核苷酸間鍵聯連接，形成核酸或聚核苷酸。此項技術中已知多種核苷酸間鍵聯(諸如(但不限於)磷酸酯、硫代磷酸 酯、硼烷磷酸酯及其類似者)。人造核酸包括PNA(肽核酸)、磷酸三酯、硫代磷酸酯、H-膦酸酯、胺基磷酸酯、硼烷磷酸酯、甲基磷酸酯、膦醯乙酸酯、硫代膦醯乙酸酯及天然核酸之磷酸酯主鏈之其他變體，諸如本文所述之彼等者。其他類似物(例如，人造核酸或可併入核酸或人造核酸中之組分)包括：硼烷磷酸酯RNA、FANA、鎖核酸(LNA)、嗎啉基(Morpholinos)、肽核酸(PNA)、蘇糖核酸(TNA)及二醇核酸(GNA)。在各種實施例中，經修飾之核苷酸或核苷酸類似物為以下中之任一者中所述之任何經修飾之核苷酸或核苷酸類似物：Gryaznov,S；Chen,J.-K.J.Am.Chem.Soc.1994,116,3143；Hendrix等人1997 Chem.Eur.J.3：110；Hyrup等人1996 Bioorg.Med.Chem.4：5；Jepsen等人2004 Oligo.14：130-146；Jones等人J.Org.Chem.1993,58,2983；Koizumi等人2003 Nuc.Acids Res.12：3267-3273；Koshkin等人1998 Tetrahedron 54：3607-3630；Kumar等人1998 Bioo.Med.Chem.Let.8：2219-2222；Lauritsen等人2002 Chem.Comm.5：530-531；Lauritsen等人2003 Bioo.Med.Chem.Lett.13：253-256；Mesmaeker等人Angew.Chem.,Int.Ed.Engl.1994,33,226；Morita等人2001 Nucl.Acids Res.增刊1：241-242；Morita等人2002 Bioo.Med.Chem.Lett.12：73-76；Morita等人2003 Bioo.Med.Chem.Lett.2211-2226；Nielsen等人1997 Chem.Soc.Rev.73；Nielsen等人1997 J.Chem.Soc.Perkins Transl.1：3423-3433；Obika等人1997 Tetrahedron Lett.38(50)：8735-8；Obika等人1998 Tetrahedron Lett.39：5401-5404；Pallan等人2012 Chem.Comm.48：8195-8197,Petersen等人2003 TRENDS Biotech.21：74-81；Rajwanshi等人1999 Chem.Commun.1395-1396；Schultz等人1996 Nucleic Acids Res.24：2966；Seth等人2009 J.Med.Chem.52：10-13；Seth等人2010 J.Med.Chem.53：8309-8318； Seth等人2010 J.Org.Chem.75：1569-1581；Seth等人2012 Bioo.Med.Chem.Lett.22：296-299；Seth等人2012 Mol.Ther-Nuc.Acids.1,e47；Seth,Punit P；Siwkowski,Andrew；Allerson,Charles R；Vasquez,Guillermo；Lee,Sam；Prakash,Thazha P；Kinberger,Garth；Migawa,Michael T；Gaus,Hans；Bhat,Balkrishen等人Nucleic Acids Symposium Series(2008),52(1),553-554；Singh等人1998 Chem.Comm.1247-1248；Singh等人1998 J.Org.Chem.63：10035-39；Singh等人1998 J.Org.Chem.63：6078-6079；Sorensen 2003 Chem.Comm.2130-2131；Ts'o等人Ann.N.Y.Acad.Sci.1988,507,220；Van Aerschot等人1995 Angew.Chem Int.Ed.Engl.34：1338；Vasseur等人J.Am.Chem.Soc.1992,114,4006；WO 20070900071；WO 20070900071或WO 2016/079181。
核苷：術語「核苷」係指核鹼基或經修飾之核鹼基共價鍵結至糖或經修飾之糖的部分。
糖：術語「糖」係指呈封閉及/或開放形式之單醣。糖包括(但不限於)核糖、去氧核糖、戊呋喃糖、戊哌喃糖及己哌喃糖部分。如本文所用之術語亦涵蓋用於代替習知糖分子之結構類似物，諸如二醇，其聚合物形成核酸類似物之主鏈，二醇核酸(「GNA」)。
經修飾之糖：術語「經修飾之糖」係指可替換糖之部分。經修飾之糖模擬糖之空間排列、電子特性或一些其他物理化學特性。
核鹼基：術語「核鹼基」係指核酸中參與氫鍵結之部分，氫鍵結以序列特異性方式將一股核酸結合至另一互補股。最常見的天然產生之核鹼基為腺嘌呤(A)、鳥嘌呤(G)、尿嘧啶(U)、胞嘧啶(C)及胸腺嘧啶(T)。在一些實施例中，天然產生之核鹼基為經修飾之腺嘌呤、鳥嘌呤、尿嘧啶、胞嘧啶或胸腺嘧啶。在一些實施例中，天然產生之核鹼基為甲基化腺嘌呤、鳥嘌呤、尿嘧啶、胞嘧啶或胸腺嘧啶。在一 些實施例中，核鹼基為「經修飾之核鹼基」，例如除腺嘌呤(A)、鳥嘌呤(G)、尿嘧啶(U)、胞嘧啶(C)及胸腺嘧啶(T)以外的核鹼基。在一些實施例中，經修飾之核鹼基為甲基化腺嘌呤、鳥嘌呤、尿嘧啶、胞嘧啶或胸腺嘧啶。在一些實施例中，經修飾之核鹼基模擬核鹼基之空間排列、電子特性或一些其他物理化學特性，且保留以序列特異性方式將一股核酸結合至另一股核酸的氫鍵結特性。在一些實施例中，經修飾之核鹼基可與所有五種天然產生之鹼基(尿嘧啶、胸腺嘧啶、腺嘌呤、胞嘧啶或鳥嘌呤)配對，且基本上不影響熔融特性、由細胞內酶識別或寡核苷酸雙螺旋體之活性。
對掌性配位體：術語「對掌性配位體」或「對掌性助劑」係指具有對掌性且可併入反應中，使得反應可以某一立體選擇性進行的部分。
縮合試劑：在縮合反應中，術語「縮合試劑」係指活化反應性較低之位點且使其較易受到另一試劑攻擊的試劑。在一些實施例中，該另一試劑為親核試劑。
阻隔基：術語「阻隔基」係指掩蔽官能基之反應性的基團。官能基隨後可藉由移除阻隔基來解除掩蔽。在一些實施例中，阻隔基為保護基。
部分：術語「部分」係指分子之特定區段或官能基。化學部分為嵌入分子中或附接至分子之通常公認之化學實體。
固體載體：術語「固體載體」係指使得能夠合成核酸之任何載體。在一些實施例中，該術語係指玻璃或聚合物，其不可溶於用於合成核酸所執行之反應步驟中所採用的介質中，且經衍生化以包含反應基。在一些實施例中，固體載體為高度交聯聚苯乙烯(HCP)或受控微孔玻璃(CPG)。在一些實施例中，固體載體為受控微孔玻璃(CPG)。在一些實施例中，固體載體為受控微孔玻璃(CPG)與高度交聯聚苯乙 烯(HCP)之混合載體。
鍵聯部分：術語「鍵聯部分」係指視情況位於末端核苷與固體載體之間或位於末端核苷與另一核苷、核苷酸或核酸之間的任何部分。
DNA分子：「DNA分子」係指呈單股形式或雙股螺旋體的去氧核糖核苷酸(腺嘌呤、鳥嘌呤、胸腺嘧啶或胞嘧啶)之聚合物形式。此術語僅指分子之一級及二級結構，且不會使其限於任何特定三級形式。因此，此術語包括尤其存在於線性DNA分子(例如，限制性片段)、病毒、質體及染色體中之雙股DNA。在論述特定雙股DNA分子之結構時，本文中可根據沿著DNA之非轉錄股(亦即，具有與mRNA同源之序列的股)，僅沿5'至3'方向提供序列之一般慣例來描述序列。
編碼序列：DNA「編碼序列」或「編碼區」為當置於適當表現控制序列之控制下時，活體內轉錄及轉譯成多肽的雙股DNA序列。編碼序列之邊界(「開放閱讀框架」或「ORF」)由5'(胺基)端之起始密碼子及3'(羧基)端之轉譯終止密碼子決定。編碼序列可包括(但不限於)原核序列、來自真核mRNA之cDNA、來自真核(例如，哺乳動物)DNA之基因組DNA序列及合成DNA序列。聚腺苷酸化信號及轉錄終止序列通常位於編碼序列之3'。術語「非編碼序列」或「非編碼區」係指聚核苷酸序列中不轉譯成胺基酸之區域(例如，5'及3'非轉譯區)。
閱讀框架：術語「閱讀框架」係指雙股DNA分子之六種可能閱讀框架(各方向三種)中之一種。閱讀框架用於確定使用哪些密碼子來編碼DNA分子之編碼序列內之胺基酸。
反義：如本文所用之「反義」核酸分子包含與編碼蛋白質之「有義」核酸互補，例如與雙股cDNA分子之編碼股互補、與mRNA序列互補或與基因之編碼股互補的核苷酸序列。因此，反義核酸分子 可經由氫鍵結合至有義核酸分子。在一些實施例中，反義寡核苷酸為參與核糖核酸酶H介導之裂解的寡核苷酸；舉例而言，反義寡核苷酸以序列特異性方式與目標mRNA之一部分雜交，從而靶向mRNA以由核糖核酸酶H裂解。在一些實施例中，反義寡核苷酸能夠區分目標之野生型與突變型對偶基因。在一些實施例中，反義寡核苷酸大量參與突變型對偶基因的核糖核酸酶H介導之裂解，但參與野生型對偶基因之核糖核酸酶H介導之裂解的程度低得多(例如，沒有大量參與目標之野生型對偶基因的核糖核酸酶H介導之裂解)。
搖擺位置(Wobble position)：如本文所用之「搖擺位置」係指密碼子之第三位置。在一些實施例中，DNA分子中密碼子之搖擺位置內之突變導致胺基酸水準之靜止或保守突變。舉例而言，存在四個編碼甘胺酸之密碼子，亦即GGU、GGC、GGA及GGG，因此任何搖擺位置核苷酸相對於選自A、U、C及G之任何其他核苷酸的突變皆不會引起所編碼蛋白質之胺基酸含量的改變，且因此為靜止取代(silent substitution)。
靜止取代：「靜止取代」或「靜止突變(silent mutation)」為密碼子內之核苷酸經過修飾，但沒有引起由該密碼子編碼之胺基酸殘基發生變化的情況。實例包括密碼子第三位置突變，亦包括某些密碼子之第一位置突變，諸如密碼子「CGG」，當其突變為AGG時，仍編碼Arg。
基因：如本文所用之術語「基因」、「重組性基因」及「基因構築體」係指編碼蛋白質或其一部分之DNA分子或DNA分子之一部分。DNA分子可含有編碼蛋白質之開放閱讀框架(如外顯子序列)且可進一步包括內含子序列。如本文所用之術語「內含子」係指存在於指定基因中，不轉譯成蛋白質，且在一些但並非所有情況下，介於外顯子之間的DNA序列。期望該基因可操作地連接於(或其可包含)一或多 個啟動子、強化子、抑制子及/或其他調控序列以調節基因之活性或表現，如此項技術中所熟知。
互補DNA：如本文所用之「互補DNA」或「cDNA」包括藉由mRNA反轉錄合成且已移除插入序列(內含子)之重組性聚核苷酸。
同源性：「同源性」或「一致性」或「類似性」係指兩個核酸分子之間的序列類似性。同源性及一致性可各自藉由比較各序列中之位置來測定，可出於比較的目的比對各序列。當所比較序列中之等效位置係由相同鹼基佔據時，則該等分子在彼位置相同；當該等效位點係由相同或類似核酸殘基(例如，立體及/或電子性質類似)佔據時，則該等分子可稱作在彼位置同源(類似)。如同源性/類似性或一致性之百分比之表述係指在由所比較序列共用之位置處，相同或類似核酸之數目的函數。「不相關」或「非同源」序列與本文所述序列共享小於40%一致性、小於35%一致性、小於30%一致性或小於25%一致性。在比較兩個序列時，缺乏殘基(胺基酸或核酸)或存在其他殘基亦會減小一致性及同源性/類似性。
在一些實施例中，術語「同源性」描述基於數學之序列類似性比較結果，其用於鑑別具有類似功能或基元之基因。本文所述之核酸序列可用作「查詢序列(query sequence)」搜尋公共資料庫，例如用於鑑別其他家族成員、相關序列或同源物。在一些實施例中，該等搜尋可使用Altschul等人(1990)J.Mol.Biol.215：403-10之NBLAST及XBLAST程式(2.0版)執行。在一些實施例中，BLAST核苷酸檢索可用NBLAST程式，評分=100，字長=12執行，從而獲得與本發明核酸分子同源之核苷酸序列。在一些實施例中，出於比較目的，為獲得間隙比對，可如Altschul等人，(1997)Nucleic Acids Res.25(17)：3389-3402中所述採用間隙BLAST。當採用BLAST及間隙BLAST程式時，可使用各別程式(例如，XBLAST及BLAST)之預設參數(參見 www.ncbi.nlm.nih.gov)。
一致性：如本文所用之「一致性」意謂當比對兩個或更多個序列以達到最大序列匹配時，亦即考慮間隙及插入，該等序列中相應位置處相同核苷酸殘基的百分比。一致性容易藉由已知方法計算，該等方法包括(但不限於)以下各者中所述之方法：Computational Molecular Biology,Lesk,A.M.編，Oxford University Press,New York,1988；Biocomputing：Informatics and Genome Projects,Smith,D.W.編，Academic Press,New York,1993；Computer Analysis of Sequence Data，第I部分，Griffin,A.M.及Griffin,H.G.編，Humana Press,New Jersey,1994；Sequence Analysis in Molecular Biology,von Heinje,G.,Academic Press,1987；及Sequence Analysis Primer,Gribskov,M.及Devereux,J.編，M Stockton Press,New York,1991；以及Carillo,H.及Lipman,D.,SIAM J.Applied Math.,48：1073(1988)。設計用於測定一致性之方法，以在所測試序列之間得到最大匹配。此外，用公開可獲得之電腦程式編碼用於測定一致性之方法。用於測定兩個序列之間的一致性的電腦程式方法包括(但不限於)GCG程式包(Devereux,J.等人，Nucleic Acids Research 12(1)：387(1984))、BLASTP、BLASTN及FASTA(Altschul,S.F.等人，J.Molec.Biol.215：403-410(1990)及Altschul等人Nuc.Acids Res.25：3389-3402(1997))。BLAST X程式可公開獲自NCBI及其他來源(BLAST Manual,Altschul,S.等人，NCBI NLM NIH Bethesda,Md.20894；Altschul,S.等人，J.Mol.Biol.215：403-410(1990))。亦可使用熟知之史密斯沃特曼演算法(Smith Waterman algorithm)以確定一致性。
異源：DNA序列之「異源」區為較大DNA序列內之在自然界中未發現與該較大序列相關的可鑑別的DNA區段。因此，當異源區編碼哺乳動物基因時，該基因通常可藉由不側接源生物體基因組中之哺乳 動物基因組DNA之DNA進行側接。異源編碼序列之另一實例為編碼序列本身不存在於自然界中的序列(例如cDNA，其中基因組編碼序列含有內含子或具有不同於未經修飾基因之密碼子或基元的合成序列)。對偶基因變異或天然產生之突變事件不會產生如本文所定義之DNA異源區。
轉位突變(Transition mutation)：術語「轉位突變」係指DNA序列中之鹼基變化，其中嘧啶(胞苷(C)或胸苷(T))經另一嘧啶置換，或嘌呤(腺苷(A)或鳥苷(G))經另一嘌呤置換。
顛換突變(Transversion mutation)：術語「顛換突變」係指DNA序列中之鹼基變化，其中嘧啶(胞苷(C)或胸苷(T))經嘌呤(腺苷(A)或鳥苷(G))置換，或嘌呤經嘧啶置換。
寡核苷酸：術語「寡核苷酸」係指核苷酸單體之聚合物或寡聚物，其含有核鹼基、經修飾之核鹼基、糖、經修飾之糖、磷酸酯橋或經修飾之磷原子橋(在本文中亦稱作「核苷酸間鍵聯」，本文另外定義)之任意組合。
寡核苷酸可為單股或雙股。如本文所用之術語「寡核苷酸股」涵蓋單股寡核苷酸。單股寡核苷酸可具有雙股區且雙股寡核苷酸可具有單股區。例示性寡核苷酸包括(但不限於)結構基因、包括控制及終止區之基因、自行複製系統(諸如病毒或質體DNA)、單股及雙股siRNA及其他RNA干擾試劑(RNAi劑或iRNA劑)、shRNA、反義寡核苷酸、核酶、微小RNA、微小RNA模擬物、超級miR(supermir)、適體、抗miR(antimir)、拮抗miR(antagomir)、Ul接附蛋白、形成三螺旋體之寡核苷酸、G四重寡核苷酸、RNA活化劑、免疫刺激寡核苷酸及誘騙性寡核苷酸(decoy oligonucleotide)。
可有效誘導RNA干擾之雙股及單股寡核苷酸在本文中亦稱為siRNA、RNAi劑或iRNA劑。在一些實施例中，此等RNA干擾誘導型 寡核苷酸與稱為RNA誘導型緘默化複合體(RNAi-induced silencing complex；RISC)的細胞質多蛋白質複合體結合。在多個實施例中，單股及雙股RNAi劑足夠長，其可由內源性分子裂解，例如藉由Dicer裂解，產生較小寡核苷酸，該等較小寡核苷酸可進入RISC體系且參與RISC介導裂解目標序列，例如目標mRNA。
本發明寡核苷酸可具有各種長度。在特定實施例中，寡核苷酸之長度可在約2至約200個核苷酸範圍內。在各種相關實施例中，單股、雙股及三股寡核苷酸之長度可在以下範圍內：約4至約10個核苷酸、約10至約50個核苷酸、約20至約50個核苷酸、約15至約30個核苷酸、約20至約30個核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸之長度為約9至約39個核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸之長度為至少4個核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸之長度為至少5個核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸之長度為至少6個核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸之長度為至少7個核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸之長度為至少8個核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸之長度為至少9個核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸之長度為至少10個核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸之長度為至少11個核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸之長度為至少12個核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸之長度為至少15個核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸之長度為至少20個核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸之長度為至少25個核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸之長度為至少30個核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸為長度為至少18個核苷酸之互補股的雙螺旋體。在一些實施例中，寡核苷酸為長度為至少21個核苷酸之互補股的雙螺旋體。
核苷酸間鍵聯：如本文所用之片語「核苷酸間鍵聯」一般指寡核苷酸之核苷酸單元之間的含磷鍵聯，且可與如上文及此處所用之「糖間鍵聯」及「磷原子橋」互換。在一些實施例中，核苷酸間鍵聯 為磷酸二酯鍵聯，如天然產生之DNA及RNA分子中所存在。在一些實施例中，核苷酸間鍵聯為「經修飾之核苷酸間鍵聯」，其中磷酸二酯鍵聯之各氧原子視情況且獨立地經有機或無機部分置換。在一些實施例中，此類有機或無機部分係選自(但不限於)=S、=Se、=NR'、-SR'、-SeR'、-N(R')2、B(R')3、-S-、-Se-及-N(R')-，其中各R'獨立地如下文所定義及描述。在一些實施例中，核苷酸間鍵聯為磷酸三酯鍵 聯、硫代磷酸二酯鍵聯()或經修飾之硫代磷酸三酯鍵聯。一 般技術者應理解，因為核苷酸間鍵聯中存在酸或鹼部分，所以該鍵聯在指定pH下可以陰離子或陽離子形式存在。
除非另外規定，否則當與寡核苷酸序列一起用於時，s、s1、s2、s3、s4、s5、s6及s7各自獨立地表示以下經修飾之核苷酸間鍵聯，如下表1中所示。
舉例而言，(Rp,Sp)-ATsCs1GA具有1)介於T與C之間的硫代磷酸 酯核苷酸間鍵聯()；及2)介於C與G之間具有之 結構的硫代磷酸三酯核苷酸間鍵聯。除非另外規定，否則寡核苷酸序列前面的Rp/Sp名稱自寡核苷酸序列之5'至3'依次描述核苷酸間鍵聯中對掌性鍵聯磷原子之組態。舉例而言，在(Rp,Sp)-ATsCs1GA中，介於T與C之間的「s」鍵聯中之磷具有Rp組態且介於C與G之間的「s1」鍵聯中之磷具有Sp組態。在一些實施例中，「全(Rp)」或「全(Sp)」分別用於表示寡核苷酸中之所有對掌性鍵聯磷原子皆具有相同Rp或Sp組態。舉例而言，全(Rp)-GsCsCsTsCsAsGsTsCsTsGsCsTsTsCsGsCsAsCsC表示寡核苷酸中之所有對掌性鍵聯磷原子皆具有Rp組態；全(Sp)-GsCsCsTsCsAsGsTsCsTsGsCsTsTsCsGsCsAsCsC表示寡核苷酸中之所有對掌性鍵聯磷原子皆具有Sp組態。
寡核苷酸類型：如本文所用之片語「寡核苷酸類型」用於定義具有特定鹼基序列、主鏈鍵聯模式(亦即，核苷酸間鍵聯類型之模式，例如磷酸酯、硫代磷酸酯等)、主鏈對掌性中心模式(亦即，鍵聯磷立體化學模式(Rp/Sp))及主鏈磷修飾模式(例如，式I中之「-XLR1」基團之模式)的寡核苷酸。具有共同命名「類型」之寡核苷酸在結構上彼此相同。
熟習此項技術者應瞭解，本發明之合成方法在寡核苷酸股之合成期間提供一定程度之控制，使得寡核苷酸股之各核苷酸單元可提前設計及/或選擇以在鍵聯磷處具有特定立體化學及/或在鍵聯磷及/或特定鹼基及/或特定糖處具有特定修飾。在一些實施例中，提前設計及/ 或選擇寡核苷酸股以在鍵聯磷處具有特定立體中心組合。在一些實施例中，寡核苷酸股經設計及/或確定以在鍵聯磷處具有特定修飾組合。在一些實施例中，寡核苷酸股經設計及/或選擇以具有特定鹼基組合。在一些實施例中，寡核苷酸股經設計及/或選擇以具有以上結構特徵中之一或多者的特定組合。本發明提供包含複數個寡核苷酸分子或由其組成的組合物(例如，對掌性受控寡核苷酸組合物)。在一些實施例中，所有該等分子為相同類型的(亦即，在結構上彼此相同)。然而，在多個實施例中，所提供組合物包含複數個不同類型之寡核苷酸，通常在預先確定的相對量方面不同。
對掌性控制：如本文所用之「對掌性控制」係指控制寡核苷酸股內之每一個對掌性鍵聯磷之立體化學名稱的能力。片語「對掌性受控寡核苷酸」係指關於對掌性鍵聯磷以單一非對映異構形式存在的寡核苷酸。對掌性受控寡核苷酸由對掌性受控寡核苷酸合成製備。
對掌性受控寡核苷酸組合物：如本文所用之片語「對掌性受控寡核苷酸組合物」係指含有預定含量之個別寡核苷酸類型的寡核苷酸組合物。舉例而言，在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物包含一種寡核苷酸類型。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物包含超過一種寡核苷酸類型。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物包含複數種寡核苷酸類型之混合物。例示性對掌性受控寡核苷酸組合物在文本中另有描述。
對掌性純：如本文所用之片語「對掌性純」用於描述關於鍵聯磷，所有寡核苷酸皆以單一非對映異構形式存在的對掌性受控寡核苷酸組合物。
對掌性均一：如本文所用之片語「對掌性均一」用於描述所有核苷酸單元在鍵聯磷處皆具有相同立體化學的寡核苷酸分子或類型。舉例而言，核苷酸單元在鍵聯磷處皆具有Rp立體化學的寡核苷酸為對 掌性均一的。同樣，核苷酸單元在鍵聯磷處皆具有Sp立體化學的寡核苷酸為對掌性均一的。
預定：預定意謂經過慎重的選擇，例如與隨機發生或達成相反。一般技術者在閱讀本說明書之後應瞭解，本發明提供新穎且出人意料的技術，其允許選擇特定寡核苷酸類型來製備所提供組合物及/或將其包括在所提供組合物中，且進一步允許控制製備經過準確選擇的特定類型，視情況按所選特定相對量製備，從而製備出所提供組合物。該等所提供組合物如本文所述「預定」。因為某個無法控制只刻意產生特定寡核苷酸類型之過程而導致偶然產生某些個別寡核苷酸類型，可能含有該等寡核苷酸類型之組合物則不為「預定」組合物。在一些實施例中，預定組合物為可有意地再製造(例如，經由重複控制製程)的組合物。
鍵聯磷：如本文所定義之片語「鍵聯磷」用於指示，所提及之特定磷原子為存在於核苷酸間鍵聯中之磷原子，該磷原子對應於核苷酸間鍵聯之磷酸二酯之磷原子，如天然產生之DNA及RNA中所發生。在一些實施例中，鍵聯磷原子係在經修飾之核苷酸間鍵聯中，其中磷酸二酯鍵聯之各氧原子視情況且獨立地經有機或無機部分置換。在一些實施例中，鍵聯磷原子為式I之P*。在一些實施例中，鍵聯磷原子具有對掌性。在一些實施例中，對掌性鍵聯磷原子為式I之P*。
P修飾：如本文所用之術語「P修飾」係指在鍵聯磷處除立體化學修飾以外的任何修飾。在一些實施例中，P修飾包含添加、取代或移除共價連接至鍵聯磷之側接部分。在一些實施例中，「P修飾」為-X-L-R1，其中X、L及R1各自獨立地如此處及下文所定義及描述。
嵌段體(blockmer)：如本文所用之術語「嵌段體」係指某種寡核苷酸股，其表徵各個別核苷酸單元之結構特徵模式的特徵在於，存在至少兩個在核苷酸間磷鍵聯處共用共同結構特徵的連續核苷酸單元。 共同結構特徵意謂在鍵聯磷處之共同立體化學或在鍵聯磷處之共同修飾。在一些實施例中，至少兩個在核苷酸間磷鍵聯處共用共同結構特徵之連續核苷酸單元稱為「嵌段(block)」。
在一些實施例中，嵌段體為「立體嵌段體(stereoblockmer)」，例如至少兩個在鍵聯磷處具有相同立體化學的連續核苷酸單元。該至少兩個連續核苷酸單元形成「立體嵌段(stereoblock)」。舉例而言，(Sp,Sp)-ATsCs1GA為立體嵌段體，因為至少兩個連續核苷酸單元Ts及Cs1在鍵聯磷處具有相同立體化學(均為Sp)。在同一寡核苷酸(Sp,Sp)-ATsCs1GA中，TsCs1形成嵌段，且其為立體嵌段。
在一些實施例中，嵌段體為「P修飾嵌段體」，例如至少兩個在鍵聯磷處具有相同修飾的連續核苷酸單元。該至少兩個連續核苷酸單元形成「P修飾嵌段」。舉例而言，(Rp,Sp)-ATsCsGA為P修飾嵌段體，因為至少兩個連續核苷酸單元Ts及Cs具有相同P修飾(亦即，均為硫代磷酸二酯)。在同一寡核苷酸(Rp,Sp)-ATsCsGA中，TsCs形成嵌段，且其為P修飾嵌段。
在一些實施例中，嵌段體為「鍵聯嵌段體」，例如至少兩個在鍵聯磷處具有相同立體化學及相同修飾的連續核苷酸單元。至少兩個連續核苷酸單元形成「鍵聯嵌段(linkage block)」。舉例而言，(Rp,Rp)-ATsCsGA為鍵聯嵌段體，因為至少兩個連續核苷酸單元Ts及Cs具有相同立體化學(均為Rp)及P修飾(均為硫代磷酸酯)。在同一寡核苷酸(Rp,Rp)-ATsCsGA中，TsCs形成嵌段，且其為鍵聯嵌段。
在一些實施例中，嵌段體包含一或多個獨立地選自立體嵌段、P修飾嵌段及鍵聯嵌段的嵌段。在一些實施例中，嵌段體就一個嵌段而言為立體嵌段體，及/或就另一嵌段而言為P修飾嵌段體，及/或就又一嵌段而言為鍵聯嵌段體。舉例而言，(Rp,Rp,Rp,Rp,Rp,Sp,Sp,Sp)-AAsTsCsGsAs1Ts1Cs1Gs1ATCG就立體嵌段AsTsCsGsAs1(在鍵聯 磷處皆為Rp)或Ts1Cs1Gs1(在鍵聯磷處皆為Sp)而言為立體嵌段體，就P修飾嵌段AsTsCsGs(皆為s鍵聯)或As1Ts1Cs1Gs1(皆為s1鍵聯)而言為P修飾嵌段體，或者就鍵聯嵌段AsTsCsGs(在鍵聯磷處皆為Rp且皆為s鍵聯)或Ts1Cs1Gs1(在鍵聯磷處皆為Sp且皆為s1鍵聯)而言為鍵聯嵌段體。
文替體(altmer)：如本文所用之術語「交替體」係指某種寡核苷酸股，其表徵各個別核苷酸單元之結構特徵模式的特徵在於，該寡核苷酸股中沒有兩個連續核苷酸單元在核苷酸間磷鍵聯處共用特定結構特徵。在一些實施例中，將交替體設計成使得其包含重複模式。在一些實施例中，將交替體設計成使得其不包含重複模式。
在一些實施例中，交替體為「立體交替體(stereoaltmer)」，例如沒有兩個連續核苷酸單元在鍵聯磷處具有相同立體化學。例如(Rp,Sp,Rp,Sp,Rp,Sp,Rp,Sp,Rp,Sp Rp,Sp,Rp,Sp,Rp,Sp,Rp,Sp,Rp)-GsCsCsTsCsAsGsTsCsTsGsCsTsTsCsGsCsAsCsC。
在一些實施例中，交替體為「P修飾交替體」，例如沒有兩個連續核苷酸單元在鍵聯磷處具有相同修飾。舉例而言，全(Sp)-CAs1GsT，其中各鍵聯磷之P修飾彼此不同。
在一些實施例中，交替體為「鍵聯交替體」，例如沒有兩個連續核苷酸單元在鍵聯磷處具有相同立體化學或相同修飾。例如(Rp,Sp,Rp,Sp,Rp,Sp,Rp,Sp,Rp,Sp Rp,Sp,Rp,Sp,Rp,Sp,Rp,Sp,Rp)-GsCs1CsTs1CsAs1GsTs1CsTs1GsCs1TsTs2CsGs3CsAs4CsC。
單聚體(unimer)：如本文所用之術語「單聚體」係指某種寡核苷酸股，其表徵各個別核苷酸單元之結構特徵模式為使得該股內之所有核苷酸單元在核苷酸間磷鍵聯處共用至少一個共同結構特徵。共同結構特徵意謂在鍵聯磷處之共同立體化學或在鍵聯磷處之共同修飾。
在一些實施例中，單聚體為「立體單聚體(stereounimer)」，例如 所有核苷酸單元在鍵聯磷處皆具有相同立體化學。例如全(Sp)-CsAs1GsT，其中所有鍵聯皆具有Sp磷。
在一些實施例中，單聚體為「P修飾單聚體」，例如所有核苷酸單元在鍵聯磷處皆具有相同修飾。例如(Rp,Sp,Rp,Sp,Rp,Sp,Rp,Sp,Rp,Sp Rp,Sp,Rp,Sp,Rp,Sp,Rp,Sp,Rp)-GsCsCsTsCsAsGsTsCsTsGsCsTsTsCsGsCsAsCsC，其中所有核苷酸間鍵聯皆為硫代磷酸二酯。
在一些實施例中，單聚體為「鍵聯單聚體」，例如所有核苷酸單元在鍵聯磷處皆具有相同立體化學及相同修飾。例如全(Sp)-GsCsCsTsCsAsGsTsCsTsGsCsTsTsCsGsCsAsCsC，其中所有核苷酸間鍵聯皆為具有Sp鍵聯磷之硫代磷酸二酯。
間隔體(gapmer)：如本文所用之術語「間隔體」係指某種寡核苷酸股，其特徵在於該寡核苷酸股之至少一個核苷酸間磷鍵聯為磷酸二酯鍵聯，諸如天然產生之DNA或RNA中所存在之彼等磷酸二酯鍵聯。在一些實施例中，寡核苷酸股中超過一個核苷酸間磷鍵聯為磷酸二酯鍵聯，諸如天然產生之DNA或RNA中所存在之彼等磷酸二酯鍵聯。例如全(Sp)-CAs1GsT，其中C與A之間的核苷酸間鍵聯為磷酸二酯鍵聯。
跳過體(skipmer)：如本文所用之術語「跳過體」係指一種類型的間隔體，其中寡核苷酸股中每隔一個核苷酸間磷鍵聯為磷酸二酯鍵聯，諸如天然產生之DNA或RNA中所存在之彼等磷酸二酯鍵聯，且寡核苷酸股中每隔一個核苷酸間磷鍵聯為經修飾之核苷酸間鍵聯。例如全(Sp)-AsTCs1GAs2TCs3G。
出於本發明之目的，根據元素週期表，CAS版，Handbook of Chemistry and Physics，第67版，1986-87，內封面鑑別化學元素。
本文關於本發明化合物及組合物所述的方法及結構亦適用於醫 藥學上可接受之酸或鹼加成鹽以及此等化合物及組合物之所有立體異構形式。
圖1. 在與大鼠肝組織勻漿一起培育後之逆相HPLC。量測當與大鼠全肝組織勻漿一起在37℃下培育時在不同天數剩餘的寡核苷酸之總量。發現ONT-154之活體外代謝穩定性類似於ONT-87，其具有2'-MOE翼，同時ONT-154及ONT-87之穩定性均比立體無規的2'-MOE間隔體(ONT-41，米泊美生(Mipomersen))好得多。藉由逆相HPLC量測剩餘的全長寡聚物之量，其中感興趣峰之峰面積用內標標準化。
圖2. 米泊美生(ONT-41)之各種對掌性純類似物在大鼠全肝組織勻漿中之降解。量測當與大鼠全肝組織勻漿一起在37℃下培育時在不同天數剩餘的寡核苷酸之總量。發現人類ApoB序列ONT-41(米泊美生)之對掌性純非對映異構體的活體外代謝穩定性隨著Sp核苷酸間鍵聯增加而增加。藉由逆相HPLC量測剩餘的全長寡聚物之量，其中感興趣峰之峰面積用內標標準化。所用組合物包括：ONT-41、ONT-75、ONT-77、ONT-80、ONT-81、ONT-87、ONT-88及ONT-89。
圖3. 小鼠ApoB序列(ISIS 147764，ONT-83)之各種對掌性純類似物在大鼠全肝組織勻漿中之降解。量測當與大鼠全肝組織勻漿一起在37℃下培育時在不同天數剩餘的寡核苷酸之總量。發現鼠類ApoB序列(ONT-83，2'-MOE間隔體，立體無規硫代磷酸酯)之對掌性純非對映異構體之活體外代謝穩定性隨著Sp核苷酸間鍵聯增加而增加。藉由逆相HPLC量測剩餘的全長寡聚物之量，其中感興趣峰之峰面積用內標標準化。所用組合物包括：ONT-82至ONT-86。
圖4. 米泊美生類似物ONT-75在大鼠全肝組織勻漿中在24小時之時間段內的降解。此圖展示ONT-75在大鼠全肝組織勻漿中之穩定性。
圖5 米泊美生類似物ONT-81在大鼠全肝組織勻漿中在24小時之時間段內的降解。此圖展示ONT-81在大鼠全肝組織勻漿中之穩定性。
圖6 ONT-87、ONT-88及ONT-89之阻斷基因表現的持續時間。立體異構體可展現基本上不同的阻斷基因表現之持續時間。ONT-87所引起的抑制基本上比其他立體異構體持久。在多個活體內研究中觀察到ONT-87之作用的持續時間增加。在某些活體內研究中，ONT-88顯示出與ONT-41(米泊美生)類似的功效及恢復概況。給予Hu ApoB轉殖基因小鼠(n=4)10mpk IP藥團，2×/週，持續三週。將小鼠隨機分入研究組中，且基於在各給藥日給藥之前量測的個別小鼠體重，在第1天、第4天、第8天、第11天、第15天、第18天及第22天以10mg/kg腹膜內(IP)給藥。在第0天、第17天、第24天、第31天、第38天、第45天及第52天藉由頜下(頰部)放血收集血液且在第52天藉由心臟穿刺處死，且隨後處理成血清。藉由ELISA量測ApoB。突出強調：在給藥後3週維持72%對比35%之阻斷基因表現。
圖7 展現在人類血清中測定的具有若干Rp、Sp或立體無規硫代磷酸酯鍵聯之siRNA雙螺旋體之代謝穩定性差異的HPLC曲線。所用組合物包括：ONT-114、ONT-116、ONT-109、ONT-107、ONT-108及ONT-106。
圖8. 立體化學對核糖核酸酶H活性之影響。使寡核苷酸與RNA雜交，且隨後與核糖核酸酶H一起在37℃下在1×核糖核酸酶H緩衝液存在下培育。自上而下，在120min時：ONT-89、ONT-77、ONT-81、ONT-80、ONT-75、ONT-41、ONT-88、ONT-154、ONT-87，其中ONT-77/154彼此非常靠近。
圖9. 在與靶向人類ApoB mRNA之同一區域之硫代磷酸酯寡核苷酸的立體異構體之不同製劑雜交時，20-mer RNA之人類核糖核酸酶 H1裂解之分析。特定裂解位點受到不同立體化學的強烈影響。箭頭表示裂解位置(裂解位點)。藉由UPLC/MS分析產物。箭頭之長度表示反應混合物中所存在產物之量，其係由彼片段之UV峰面積與理論消光係數之比率確定(箭頭愈大，所偵測到之裂解產物愈多)。(A)：裂解圖譜之圖例。(B)及(C)：寡核苷酸之裂解圖譜。在該等圖中：(┬)表示在反應混合物中鑑別到兩個核糖核酸酶H1裂解片段(5'-磷酸酯物質以及5'-OH 3'-OH物質)。(┌)表示僅偵測到5'-磷酸酯物質且(┐)表示在質譜分析中偵測到5'-OH 3'-OH組分。所用組合物包括：ONT-41、ONT-75、ONT-77、ONT-80、ONT-81、ONT-87、ONT-88、ONT-88及ONT-154。
圖10. 不同寡核苷酸組合物((A)-(C))之裂解圖譜。該三個序列靶向FOXO1 mRNA中之不同區域。用五種不同化學方法研究各序列。裂解圖譜係源自在各別雙螺旋體與核糖核酸酶H1C一起在1×PBS緩衝液存在下在37℃下培育30分鐘後獲得的反應混合物。箭頭表示裂解位點。箭頭之長度表示反應混合物中所存在產物之量，其係由彼片段之UV峰面積與理論消光係數之比率確定(箭頭愈大，可偵測之裂解產物愈多)。僅在反應混合物中未偵測到5'-OH 3'-OH的情況下，使用5'-磷酸酯物質峰值進行定量。裂解速率藉由逆相HPLC量測反應混合物中剩餘的全長RNA之量來確定。在固定時間點藉由30mM Na2EDTA淬滅反應。所用組合物包括：ONT-316、ONT-355、ONT-361、ONT-367、ONT-373、ONT-302、ONT-352、ONT-358、ONT-364、ONT-370、ONT-315、ONT-354、ONT-360、ONT-366及ONT-372。
圖11. 具有不同共同鹼基序列及長度之寡核苷酸組合物的裂解圖譜((A)-(B))。該等圖譜顯示立體無規DNA組合物(上圖)與三種不同的立體化學純寡核苷酸組合物的對比。對掌性受控寡核苷酸組合物與兩種靶向FOXO1 mRNA中之不同區域的立體無規硫代磷酸酯寡核苷酸 組合物(ONT-366及ONT-367)的資料對比結果。各圖顯示立體無規DNA(上圖)與三種不同的立體化學純寡核苷酸製劑的對比。裂解圖譜係源自在各別雙螺旋體與核糖核酸酶H1C一起在1×PBS緩衝液存在下在37℃下培育30分鐘後獲得的反應混合物。箭頭表示裂解位點。箭頭之長度表示反應混合物中所存在代謝物之量，其係由彼片段之UV峰面積與理論消光係數之比率確定(箭頭愈大，可偵測之裂解產物愈多)。僅在反應混合物中未偵測到5'-OH 3'-OH的情況下，使用5'-磷酸酯物質峰值進行定量。所用組合物包括：ONT-366、ONT-389、ONT-390、ONT-391、ONT-367、ONT-392、ONT-393及ONT-394。
圖12. 立體化學對核糖核酸酶H活性之影響。在兩個獨立實驗中，使靶向FOXO1 mRNA之同一區域的反義寡核苷酸與RNA雜交，且隨後與核糖核酸酶H一起在37℃下在1×核糖核酸酶H緩衝液存在下培育。使用RP-HPLC，在254nm下，根據全長RNA之峰面積量測其消失。(A)：自上而下，在60min時：ONT-355、ONT-316、ONT-367、ONT-392、ONT-393及ONT-394(ONT-393及ONT-394在60min時大致相同；在5min時，ONT-393剩餘的RNA受質%較高)。(B)：自上而下，在60min時：ONT-315、ONT-354、ONT-366、ONT-391、ONT-389及ONT-390。裂解速率藉由逆相HPLC量測反應混合物中剩餘的全長RNA之量來確定。在固定時間點藉由30mM Na2EDTA淬滅反應。
圖13. 反義寡核苷酸之轉換。製得雙螺旋體，其中各DNA股濃度等於6μM且RNA為100μM。將此等雙螺旋體與0.02μM核糖核酸酶H酶一起培育且使用RP-HPLC，在254nm下，根據全長RNA之峰面積量測其消失。裂解速率藉由逆相HPLC量測反應混合物中剩餘的全長RNA之量來確定。在固定時間點藉由30mM Na2EDTA淬滅反應。自上而下，在40min時：ONT-316、ONT-367及ONT-392。
圖14 比較立體無規硫代磷酸酯寡核苷酸與六種靶向同一FOXO1 mRNA區域的不同的立體化學純寡核苷酸製劑的裂解圖譜。所用組合物包括：ONT-367、ONT-392、ONT-393、ONT-394、ONT-400、ONT-401及ONT-406。
圖15. 立體化學對核糖核酸酶H活性之影響。使反義寡核苷酸與RNA雜交，且隨後與核糖核酸酶H一起在37℃下在1×核糖核酸酶H緩衝液存在下培育。觀察到立體化學對核糖核酸酶H活性之相依性。在比較ONT-367(立體無規DNA)與ONT-316(5-10-5 2'-MOE間隔體)時亦顯而易見組合物化學性質對核糖核酸酶H活性之強相依性。自上而下，在40min時：ONT-316、ONT-421、ONT-367、ONT-392、ONT-394、ONT-415及ONT-422(ONT-394/415/422在40min時具有類似含量；在5min時，在DNA/RNA雙螺旋體中剩餘的RNA%方面，ONT-422>ONT-394>ONT-415)。
圖16. 立體化學對核糖核酸酶H活性之影響。使靶向FOXO1 mRNA之同一區域的反義寡核苷酸與RNA雜交，且隨後與核糖核酸酶H一起在37℃下在1×核糖核酸酶H緩衝液存在下培育。觀察到立體化學對核糖核酸酶H活性之相依性。自上而下，在40min時：ONT-396、ONT-409、ONT-414、ONT-408(ONT-396/409/414/408在40min時具有類似含量)、ONT-404、ONT-410、ONT-402(ONT-404/410/408在40min時具有類似含量)、ONT-403、ONT-407、ONT-405、ONT-401、ONT-406及ONT-400(ONT-401/405/406/400在40min時具有類似含量)。
圖17. 立體化學對核糖核酸酶H活性之影響。使靶向FOXO1 mRNA之同一區域的反義寡核苷酸與RNA雜交，且隨後與核糖核酸酶H一起在37℃下在1×核糖核酸酶H緩衝液存在下培育。觀察到立體化學對核糖核酸酶H活性之相依性。觀察到ONT-406引起雙螺旋RNA裂解之速率略超過磷酸二酯寡核苷酸ONT-415。自上而下，在40min 時：ONT-396、ONT-421、ONT-392、ONT-394、ONT-415、ONT-406及ONT-422(ONT-394/415/406在40min時具有類似含量；在5min時，在DNA/RNA雙螺旋體中剩餘的RNA%方面，ONT-394>ONT-415>ONT-406)。
圖18. 當RNA(ONT-388)與立體無規DNA(ONT-367)雙螺旋時(上圖)及當立體純DNA與重複三元組基元-3'-SSR-5'(ONT-394)雙螺旋時(下圖)獲得的RNA裂解產物之例示性UV層析圖。2.35min：7mer；3.16min：8mer及p-6mer；4.48min：P-7mer；5.83min：P-8mer；6.88min：12mer；9.32min：13mer；10.13min：P-11mer；11.0min：P-12mer及14mer；11.93min：P-13mer；13.13min：P-14mer。ONT-394(下圖)峰值分配：4.55min：p-7mer；4.97min：10mer；9.53min：13mer。
圖19. RNA裂解產物之電噴霧電離光譜。當雙螺旋體ONT-387(RNA)/ONT-354(7-6-7，DNA-2'-OMe-DNA)(上圖)及ONT-387(RNA)/ONT-315(5-10-5，2'-MOE間隔體)(下圖)與核糖核酸酶H一起在1×RNse H緩衝液存在下培育30分鐘時，自此等雙螺旋體獲得的RNA片段。
圖20. ONT-406及ONT-388雙螺旋體與核糖核酸酶H一起培育30分鐘後之UV層析圖及TIC。
圖21. 例示性提出之裂解。所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物能夠如所描述般裂解目標。
圖22. 靶向突變型亨廷頓mRNA之例示性對偶基因特異性裂解。(A)及(B)：例示性寡核苷酸。(C)-(E)：裂解圖譜。(F)-(H)：RNA裂解。製備立體無規及對掌性受控寡核苷酸組合物以靶向單核苷酸多形現象，用於對偶基因選擇性抑制突變型亨廷頓。ONT-450(立體無規)靶向ONT-453(muHTT)及ONT-454(wtHTT)，在RNA裂解及其裂解圖 譜方面顯示出極小差異。3'-SSR-5'基元選擇性置於核糖核酸酶H識別位點中之對掌性受控ONT-451靶向ONT-453(muHTT)及ONT-454(wtHTT)，在RNA裂解速率方面顯示出較大差異。根據裂解圖譜，值得注意的是，置放3'-SSR-5'基元係用於指導位置8與9之間的裂解，若自RNA之5'端開始讀，則其在錯配之後。3'-SSR-5'基元選擇性置於核糖核酸酶H識別位點中之ONT-452靶向ONT-453(muHTT)及ONT-454(wtHTT)，在RNA裂解速率方面顯示出中等差異。置放3'-SSR-5'基元係用於指導在位置7及8處之裂解，若自RNA之5'端開始讀，則其在錯配在前。例示性資料說明3'-SSR-5'基元之置放位置對達成對偶基因特異性裂解的增強型區分的重要性。所有裂解圖譜皆源自在各別雙螺旋體與核糖核酸酶H1C一起在1×PBS緩衝液存在下在37℃下培育5分鐘後獲得的反應混合物。箭頭表示裂解位點。箭頭之長度表示反應混合物中所存在代謝物之量，其係由彼片段之UV峰面積與理論消光係數之比率確定。僅在反應混合物中未偵測到5'-OH 3'-OH的情況下，使用5'-磷酸酯物質峰值進行定量。所用組合物包括：ONT-450至ONT-454。
圖23. (A)-(C)：靶向FOXO1 mRNA之例示性對偶基因特異性裂解。
圖24. ApoB mRNA在用ApoB寡核苷酸處理後之活體外劑量反應沉默。含及不含2'-MOE翼之立體化學純非對映異構體顯示與ONT-41(米泊美生)類似的功效。所用組合物包括：ONT-87、ONT-41及ONT-154。
圖25. 立體無規組合物(ONT-367)與對掌性受控寡核苷酸組合物(ONT-421，全Sp及ONT-455，全Rp)及DNA(ONT-415)之核糖核酸酶H裂解圖譜(A)及RNA裂解速率(B)的對比。此等序列靶向FOXO1 mRNA中之同一區域。裂解圖譜係源自在各別雙螺旋體與核糖核酸酶H1C一 起在1×PBS緩衝液存在下在37℃下培育5分鐘後獲得的反應混合物。箭頭表示裂解位點。箭頭之長度表示反應混合物中所存在代謝物之量，其係由彼片段之UV峰面積與理論消光係數之比率確定。僅在反應混合物中未偵測到5'-OH 3'-OH的情況下，使用5'-磷酸酯物質峰值進行定量。裂解速率藉由逆相HPLC量測反應混合物中剩餘的全長RNA之量來確定。在固定時間點藉由30mM Na2EDTA淬滅反應。
圖26. 含有一個Rp且位置自DNA之3'端開始改變的序列之裂解圖譜的對比。所用組合物包括：ONT-396至ONT-414。此等序列靶向FOXO1 mRNA中之同一區域。裂解圖譜係源自在各別雙螺旋體與核糖核酸酶H1C一起在1×核糖核酸酶H緩衝液存在下在37℃下培育5分鐘後獲得的反應混合物。箭頭表示裂解位點。箭頭之長度表示反應混合物中所存在代謝物之量，其係由彼片段之UV峰面積與理論消光係數之比率確定。僅在反應混合物中未偵測到5'-OH 3'-OH的情況下，使用5'-磷酸酯物質峰值進行定量。
圖27. (A)立體純寡核苷酸(ONT-406)、(ONT-401)、(ONT-404)及(ONT-408)之核糖核酸酶H裂解速率的對比。所有四個序列皆為含一個Rp鍵聯之立體純硫代磷酸酯。此等序列靶向FOXO1 mRNA中之同一區域。使所有雙螺旋體與核糖核酸酶H1C一起在1×核糖核酸酶H緩衝液存在下在37℃下培育。在固定時間點藉由30mM Na2EDTA淬滅反應。裂解速率藉由逆相HPLC量測反應混合物中剩餘的全長RNA之量來確定。發現ONT-406及ONT-401具有較高裂解速率。(B)核糖核酸酶H分析(10μM寡核苷酸)中裂解之RNA%與活體外分析(20nM寡核苷酸)中阻斷基因表現之mRNA%之間的相關性。所有序列皆靶向FOXO1目標中之mRNA之同一區域。當針對同一反應混合物中之DNA標準化時，藉由RNA之UV峰面積確定剩餘RNA之數量。以上圖譜皆源自在各別雙螺旋體與核糖核酸酶H1C一起在1×PBS緩衝液存在下在 37℃下培育5分鐘後獲得的反應混合物。自ONT-396至ONT-414之所有序列皆具有一個Rp硫代磷酸酯且其Rp位置不同。ONT-421(全Sp)硫代磷酸酯在活體外分析中失活。其與核糖核酸酶H分析中當ONT-421與互補RNA雙螺旋時RNA之裂解速率不良有關。
圖28. 單一Rp步移PS DNA(ONT-396-ONT-414)、立體無規PS DNA(ONT-367)、全Sp PS DNA(ONT-421)及全Rp PS DNA(ONT-455)在大鼠血清中持續2天之血清穩定性分析。應注意，ONT-396及ONT-455在所測試之時間點分解。所用組合物包括：ONT-396至ONT-414、ONT-367、ONT-421及ONT-455。
圖29. 例示性寡核苷酸包括半聚體(hemimer)。(A)：裂解圖譜。(B)：RNA裂解分析。(C)：FOXO1 mRNA阻斷基因表現。使用ONT-440、ONT-441及ONT-367。在一些實施例中，在序列之5'端上引入2'修飾可增加結合至目標RNA之穩定性同時保持核糖核酸酶H活性。ONT-367(立體無規硫代磷酸酯DNA)及ONT-440(5-15，2'-F-DNA)在核糖核酸酶H分析(10μM寡核苷酸)中具有類似裂解圖譜及類似RNA裂解速率。在一些實施例中，ONT-440(5-11，2'-F-DNA)序列具有較佳的細胞透性。在一些實施例中，不對稱2'修飾提供Tm優勢同時保持核糖核酸酶H活性。RSS基元之引入可進一步增強在半聚體中之核糖核酸酶H效率。裂解圖譜係源自在各別雙螺旋體與核糖核酸酶H1C一起在1×核糖核酸酶H緩衝液存在下在37℃下培育5分鐘後獲得的反應混合物。箭頭表示裂解位點。(┬)表示，在反應混合物中鑑別到兩種片段：5'-磷酸酯物質以及5'-OH 3'-OH物質。(┌)表示僅偵測到5'-磷酸酯物質且(┐)表示在質譜分析中偵測到5'-OH 3'-OH組分。箭頭之長度表示反應混合物中所存在代謝物之量，其係由彼片段之UV峰面積與理論消光係數之比率確定。僅在反應混合物中未偵測到5'-OH 3'-OH的情況下，使用5'-磷酸酯物質峰值進行定量。
圖30 裂解分析之例示性質譜資料。上圖：ONT-367之資料：2.35min：7 mer；3.16min：8 mer及P-6 mer；4.58min：P-7 mer；5.91min：P-8 mer；7.19min：12 mer；9.55min：13 mer；10.13min：P-11 mer；11.14min：P-12 mer及14 mer；12.11min：P-13 mer；13.29min：P-14 mer；14.80min：全長RNA(ONT-388)；且18.33min：立體無規DNA(ONT-367)。下圖：ONT-406之資料：4.72min：p-rArUrGrGrCrUrA，5'-磷酸化7 mer RNA；9.46min：5'-rGrUrGrArGrCrArGrCrUrGrCrA，5'-OH 3'-OH 13 mer RNA；16.45min：全長RNA(ONT-388)；19.48及19.49min：立體純DNA(ONT-406)。
圖31. 例示性RNA裂解速率。使雙螺旋體與核糖核酸酶H1C一起在1×核糖核酸酶H緩衝液存在下在37℃下培育。在固定時間點藉由添加30mM Na2EDTA淬滅反應。藉由量測反應混合物中剩餘的全長RNA之量確定裂解速率。所用組合物包括：WV-944、WV-945、WV-936、WV-904、WV-937、WV-905、WV-938、WV-906、WV-939、WV-907、WV-940、WV-908、WV-941及WV-909。
圖32. A-N：在核糖核酸酶H分析中，某些靶向rs362307之組合物的RNA裂解速率。此等組合物中之一些為立體無規的且一些為對掌性受控的。所用組合物包括：WV-1085、WV-1086、WV-1087、WV-1088、WV-1089、WV-1090、WV-1091、WV-1092、WV-905、WV-944、WV-945、WV-911、WV-917、WV-931、WV-937及WV-1497。
圖33. A：例示性裂解圖譜。裂解圖譜係源自在各別雙螺旋體與核糖核酸酶H1C一起在1×核糖核酸酶H緩衝液存在下在37℃下培育5分鐘後獲得的反應混合物。B：圖例。箭頭表示裂解位點。(┬)表示鑑別到兩種片段：5'-磷酸酯物質以及3'-OH物質。(┌)表示僅偵測到5'-OH 3'-OH物質且(┐)表示偵測到5'-磷酸酯組分。箭頭之長度表示反應混合 物中所存在片段之量，其係由彼片段之UV峰面積與理論消光係數之比率確定。僅在反應混合物中未偵測到5'-OH 3'-OH片段之情況下，使用5'-磷酸酯物質峰值進行定量。所用組合物包括：WV-944、WV-945、WV-904、WV-905、WV-906、WV-907、WV-908及WV-909。
圖34. 例示性裂解圖譜。例示性裂解圖譜。裂解圖譜係源自在各別雙螺旋體與核糖核酸酶H1C一起在1×核糖核酸酶H緩衝液存在下在37℃下培育30分鐘後獲得的反應混合物。關於圖例，參見圖33。所用組合物包括：WV-944、WV-945、WV-936、WV-937、WV-938、WV-939、WV-940、WV-941、WV-1085、WV-1086、WV-1087、WV-1088、WV-1089、WV-1090、WV-1091及WV-1092。
圖35. 例示性裂解圖譜。關於圖例，參見圖33。所用組合物包括：WV-944、WV-945、WV-905、WV-911、WV-917、WV-931及WV-937。
圖36. 當與WT HTT RNA(WV-944，上圖)或mu HTT RNA(WV-945，下圖)雙螺旋時，WV-937之核糖核酸酶H裂解反應的總離子層析圖。在用EDTA二鈉淬滅酶促反應30分鐘之後，使用Agilent 1290UPLC以及Agilent 6230 MS-TOF質譜儀對核糖核酸酶H裂解產物進行層析解析及分析。對所鑑別之各峰之高質量準確度高解析度MS光譜進行提取及解迴旋。藉由比較解迴旋平均質量與所預測之RNA代謝物的質量來鑑別代謝物，從而確定裂解位置。
圖37. 基於螢光素酶報導基因之篩選的圖示。
圖38. 圖38及圖39顯示各種HTT寡核苷酸之活性。在靶向rs362331_T或rs2530595_T SNP之ASO的轉染之後，在基於報導基因之分析中沉默之HTT在COS7細胞中的劑量反應曲線。藉由添加立體純設計(指定計算之IC50)，ASO特異性增加，且效能無重大損失。資料代表2個獨立實驗。線表示擬合曲線，誤差槓表示標準差。在該等 圖中，SNP之位置用淡綠色或淡藍色指出。圖38中所測試之組合物包括：WV-2067、WV-2416、WV-2069、WV-2417、WV-2072、WV-2418、WV-2076、WV-2419、WV-2605、WV-2589、WV-2606、WV-2590、WV-2607、WV-2591、WV-2608、WV-2592、WV-2609、WV-2593、WV-2610、WV-2594、WV-2611、WV-2595、WV-2612、WV-2596、WV-2611、WV-2595、WV-2671、WV-2672、WV-2673、WV-2675、WV-2674、WV-2613、WV-2597、WV-2614、WV-2598、WV-2615、WV-2599、WV-2616、WV-2600、WV-2617、WV-2601、WV-2618、WV-2602、WV-2619、WV-2603、WV-2620及WV-2604。
圖39. 在ASO之轉染之後，在基於報導基因之分析中沉默之HTT在COS7細胞中的劑量反應曲線。所測試之組合物包括：WVE120101、WV-1092、WV-1497、WV-2619、WV-2603、WV-2611及WV-2595。亦顯示IC50資料。
圖40. 圖40顯示以下寡核苷酸之液相層析及質譜資料：WV1092.22(WV-1092)、WV2595.01(WV-2595)及WV2603.01(WV-2603)。如本文所用之後綴(01)、(02)、.01、.02、.22等表示批號。
圖41. 圖41顯示以下寡核苷酸之液相層析及質譜資料：WV-1510、WV-2378及WV-2380。
合成寡核苷酸提供適用於各種應用之分子工具。舉例而言，寡核苷酸適用於治療、診斷、研究及新穎奈米材料應用。天然產生之核酸(例如，未經修飾之DNA或RNA)之使用受到限制，例如由於其對核酸內切酶及核酸外切酶之易感性而受到限制。因此，已研發出各種合成對應物來避開此等缺點。此等合成對應物包括含有主鏈修飾之合成寡核苷酸，其使此等分子不容易降解。自結構觀點來看，對核苷酸間磷酸酯鍵聯之該等修飾引入對掌性。現已清楚，寡核苷酸之某些特性 會受到形成寡核苷酸主鏈之磷原子之組態的影響。舉例而言，活體外研究已顯示，反義核苷酸之諸如結合親和力、與互補RNA之序列特異性結合、對核酸酶之穩定性等特性尤其受到主鏈對掌性(例如，磷原子之組態)的影響。
本發明尤其認識到，寡核苷酸之結構要素(諸如鹼基序列)、化學修飾(例如，糖、鹼基及/或核苷酸間鍵聯之修飾、及其模式)及/或立體化學(例如，主鏈對掌性中心(對掌性核苷酸間鍵聯)之立體化學及/或其模式)會對寡核苷酸之特性(例如活性)造成巨大影響。在一些實施例中，本發明證明，包含具有受控結構要素(例如受控化學修飾及/或受控主鏈立體化學模式)之寡核苷酸的寡核苷酸組合物提供出人意料的特性，包括(但不限於)本文所述之彼等特性。在一些實施例中，本發明提供一種寡核苷酸組合物，其包含預定含量之個別寡核苷酸類型之寡核苷酸，該等寡核苷酸在化學上相同，例如其具有相同鹼基序列、相同核苷修飾模式(若存在，則為針對糖及鹼基部分之修飾)、相同主鏈對掌性中心模式及相同主鏈磷修飾模式。
本發明尤其認識到，立體無規寡核苷酸製劑含有複數個彼此不同的獨特化學實體，例如在寡核苷酸鏈內之個別主鏈對掌性中心之立體化學結構方面不同。在不控制主鏈對掌性中心之立體化學的情況下，立體無規寡核苷酸製劑提供不受控組合物，其包含不確定含量之寡核苷酸立體異構體。即使此等立體異構體可具有相同鹼基序列，但至少歸因於其不同的主鏈立體化學，所以其仍為不同的化學實體，且如本文所展現，其可具有不同特性，例如生物活性。立體純(或「對掌性受控」)寡核苷酸組合物或製劑相比於在其他方面相同(例如，立體純及立體無規版本均具有相同鹼基序列、鹼基及糖修飾模式等)的立體無規寡核苷酸製劑而言，可具有改良生物活性。舉例而言，立體無規寡核苷酸WV-1497組合物及立體純寡核苷酸WV-1092組合物均具 有相同鹼基序列及相同糖修飾模式與主鏈鍵聯模式，僅立體化學不同。然而，在較高濃度下，立體純WV-1092組合物與立體無規WV-1497組合物在區分wt HTT與突變型HTT(兩者僅相差一個nt)的能力方面存在顯著差異。在高濃度下，兩者均大程度阻斷突變型HTT之基因表現，這一點為合乎需要的；但立體純WV-1092顯示僅少量阻斷野生型HTT之基因表現，而WV-1497則顯示較顯著地阻斷wt HTT之基因表現，這在一些情況下為不太適宜的。
對掌性受控寡核苷酸組合物WVE120101及WV-1092均能夠區分SNP rs362307之wt版本與突變版本，這兩個版本相差一個nt；WVE120101及WV-1092均顯著阻斷突變型對偶基因之基因表現，但不阻斷wt之基因表現，而立體無規版本WV-1497不能夠顯著區分wt對偶基因與突變型對偶基因(參見圖39D)。WVE120101及WV-1092之經修飾序列相同。
對掌性受控寡核苷酸組合物WV-2595能夠區分SNP rs2530595中之C對偶基因與T對偶基因，兩者亦僅相差一個nt。立體純WV-2595顯著阻斷T對偶基因之基因表現，但不阻斷C對偶基因之基因表現，與不能夠顯著區分對偶基因之立體無規寡核苷酸組合物WV-2611不同(參見圖39F)。WV-2595之序列為5'-mG*mGmGmUmC*C*T*C*C*C*C*A*C*A*G*mAmGmGmG*mA-3'或5'-mG*SmGmGmUmC*SC*ST*SC*SC*SC*SC*SA*SC*RA*SG*SmAmGmGmG*SmA-3'，含有某些立體化學資訊。
立體純寡核苷酸組合物WV-2603能夠區分SNP rs362331之C對偶基因與T對偶基因，兩者亦僅相差一個nt。立體純WV-2603顯著阻斷T對偶基因之基因表現，但不阻斷C對偶基因之基因表現，與不能夠顯著區分對偶基因之立體無規寡核苷酸組合物WV-2619不同(參見圖39A、圖39B、圖39C及圖39E)。WV-2603之序列為5'- mG*mUmGmCmA*C*A*C*A*G*T*A*G*A*T*mGmAmGmG*mG-3'或5'-mG*SmUmGmCmA*SC*SA*SC*SA*SG*ST*SA*SG*RA*ST*SmGmAmGmG*SmG-3'，含有某些立體化學資訊。
在一些實施例中，立體純(對掌性受控)寡核苷酸組合物中之寡核苷酸之序列包含以下或由以下組成：本文中所揭示之任何寡核苷酸之序列。在一些實施例中，立體純(對掌性受控)寡核苷酸組合物中之寡核苷酸之序列包含以下或由以下組成：選自表N1、表N2、表N3、表N4及表8之任何寡核苷酸之序列。在一些實施例中，立體純(對掌性受控)寡核苷酸組合物中之寡核苷酸之序列包含以下或由以下組成：選自表N1A、表N2A、表N3A、表N4A及表8之任何寡核苷酸之序列。在一些實施例中，立體純(對掌性受控)寡核苷酸組合物中之寡核苷酸之序列包含以下或由以下組成：WV-1092、WVE120101、WV-2603或WV-2595之序列。
本文所述包含HTT序列之各寡核苷酸表示經設計、構築且在各種分析中，在一些實施例中，在一或多個活體外分析中測試的HTT寡核苷酸。表N1A、表N2A、表N3A、表N4A及表8中之任一者中所列或本文其他地方所述的各HTT寡核苷酸經設計、構築且在各種分析中，在一些實施例中，在一或多個活體外分析中測試。舉例而言，在雙重螢光素酶報導基因分析中測試本文所述之HTT寡核苷酸。在一些實施例中，在一或多個在本發明中及/或在此項技術中所述的其他分析中根據本發明測試HTT寡核苷酸。在一些實施例中，根據本發明，在活體外及活體內分析中進一步測試經發現在雙重螢光素酶分析中尤其有效的HTT寡核苷酸。
在一些實施例中，立體純(對掌性受控)寡核苷酸組合物中之寡核苷酸之序列包括以下中之任何一或多者：鹼基序列(包括長度)；針對糖及鹼基部分之化學修飾模式；主鏈鍵聯模式；天然磷酸酯鍵聯模 式、硫代磷酸酯鍵聯模式、硫代磷酸三酯鍵聯模式及其組合；主鏈對掌性中心模式；對掌性核苷酸間鍵聯之立體化學(Rp/Sp)模式；主鏈磷修飾模式；對核苷酸間磷原子之修飾模式，諸如-S-及式I之-L-R1。
本發明尤其提供新穎組合物，其為或含有感興趣寡核苷酸之特定立體異構體。在一些實施例中，特定立體異構體可例如由其鹼基序列、其長度、其主鏈鍵聯模式及其主鏈對掌性中心模式限定。如此項技術中所瞭解，在一些實施例中，鹼基序列可指寡核苷酸中之核苷殘基(例如，糖及/或鹼基組分，相對於諸如腺嘌呤、胞嘧啶、鳥苷、胸腺嘧啶及尿嘧啶之標準天然產生之核苷酸而言)之一致性及/或修飾狀態及/或可指該等殘基之雜交特徵(亦即，與特定互補殘基雜交之能力)。在一些實施例中，所提供組合物中之寡核苷酸包含在例如翼區之糖修飾，例如2'修飾。在一些實施例中，所提供組合物中之寡核苷酸包含無糖修飾之中間區域，例如核心區。
本發明尤其證明，特定寡核苷酸之個別立體異構體可顯示彼此不同的穩定性及/或活性(例如，功能及/或毒性特性)。此外，本發明證明，經由包括特定對掌性結構及/或將其定位於寡核苷酸內達成之穩定性及/或活性改良可類似於或甚至優於經由使用特定主鏈鍵聯、殘基修飾等(例如，經由使用某些類型之經修飾之磷酸酯[例如硫代磷酸酯、經取代之硫代磷酸酯等]、糖修飾[例如2'修飾等]及/或鹼基修飾[例如甲基化等])達成的彼等改良。
本發明尤其認識到，在一些實施例中，寡核苷酸之特性(例如，穩定性及/或活性)可藉由最佳化其主鏈對掌性中心模式來調整，視情況與寡核苷酸之一或多種其他特徵(例如，鍵聯模式、核苷修飾模式等)之調整/最佳化組合。在一些實施例中，本發明提供寡核苷酸組合物，其中寡核苷酸包含核苷修飾、對掌性核苷酸間鍵聯及天然磷酸酯鍵聯。舉例而言，WV-1092包含2'-OMe修飾、在其5'及3'翼區中之磷 酸酯鍵聯及在其核心區中之硫代磷酸酯鍵聯。
在一些實施例中，本發明證明，經由包括特定對掌性結構及/或將其定位於寡核苷酸內達成之穩定性改良可類似於或甚至優於經由使用經修飾之主鏈鍵聯、鹼基及/或糖(例如，經由使用某些類型之經修飾之磷酸酯、2'修飾、鹼基修飾等)達成的彼等改良。在一些實施例中，本發明亦證明，經由包括特定對掌性結構及/或將其定位於寡核苷酸內達成之活性改良可類似於或甚至優於經由使用經修飾之主鏈鍵聯、鹼基及/或糖(例如，經由使用某些類型之經修飾之磷酸酯、2'修飾、鹼基修飾等)達成的彼等改良。
在一些實施例中，包括特定對掌性鍵聯及/或將其定位於寡核苷酸內可出人意料地在採用此類寡核苷酸裂解核酸聚合物時改變該核酸聚合物之裂解模式。舉例而言，在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式提供目標核酸聚合物意外地高的裂解效率。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式提供新裂解位點。在一些實施例中，舉例而言，主鏈對掌性中心模式藉由阻斷某些現有裂解位點提供較少裂解位點。甚至更出乎意料地，在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式提供僅在與用於裂解之寡核苷酸互補的序列內之目標核酸聚合物之一個位點處裂解。在一些實施例中，藉由選擇使裂解位點之數目降到最低的主鏈對掌性中心模式來達成較高裂解效率。
在一些實施例中，本發明提供寡核苷酸之組合物，其中該等寡核苷酸具有共同主鏈對掌性中心模式，其出乎意料地大大增強寡核苷酸之穩定性及/或生物活性。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式提供增加的穩定性。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式提供出人意料地增加的活性。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式提供增加的穩定性及活性。在一些實施例中，當寡核苷酸用於裂解核酸聚合物時，主鏈對掌性中心模式本身出人意料地改變了目標核酸聚合物之裂 解模式。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式可有效防止在二級位點裂解。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式形成新裂解位點。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式使裂解位點之數目降到最低。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式使裂解位點之數目降到最低，使得目標核酸聚合物僅在與寡核苷酸互補之目標核酸聚合物之序列內的一個位點處裂解(例如，在其他位點之裂解無法藉由某種方法容易地偵測到；在一些實施例中，在此類位點發生大於85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%裂解)。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式增強在裂解位點之裂解效率。在一些實施例中，寡核苷酸之主鏈對掌性中心模式改良目標核酸聚合物之裂解。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式增加選擇性。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式使脫靶效應降到最低。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式增加選擇性，例如僅相差單核苷酸多形現象(SNP)之兩個目標序列之間的裂解選擇性。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式增加在立體無規或DNA寡核苷酸組合物之裂解位點處之裂解。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式增加在立體無規或DNA寡核苷酸組合物之主要裂解位點處之裂解。在一些實施例中，此類位點為具有該主鏈對掌性中心模式之寡核苷酸的主要裂解位點。在一些實施例中，若位點為具有最多、或第二、第三、第四或第五多裂解之位點或發生大於5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%裂解之位點，則該位點視為主要位點。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式包含或為(Sp)m(Rp)n、(Rp)n(Sp)m、(Np)t(Rp)n(Sp)m或(Sp)t(Rp)n(Sp)m。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式包含或為(Rp)n(Sp)m、(Np)t(Rp)n(Sp)m或(Sp)t(Rp)n(Sp)m，其中m>2。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式包含或為(Rp)n(Sp)m、 (Np)t(Rp)n(Sp)m或(Sp)t(Rp)n(Sp)m，其中n為1，t>1，且m>2。在一些實施例中，m>3。在一些實施例中，m>4。
在一些實施例中，本發明認識到，諸如核苷及核苷酸間鍵聯之修飾的化學修飾可提供增強的特性。在一些實施例中，本發明證明，化學修飾與立體化學之組合可提供出人意料的、大大改良的特性(例如，生物活性、選擇性等)。在一些實施例中，化學組合(諸如糖、鹼基及/或核苷酸間鍵聯之修飾)與立體化學模式(例如(Rp)n(Sp)m、(Np)t(Rp)n(Sp)m或(Sp)t(Rp)n(Sp)m)組合，得到具有出人意料地增強的特性的寡核苷酸及其組合物。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸組合物為對掌性受控的，且包含一或多個糖部分、一或多個天然磷酸酯鍵聯、一或多個硫代磷酸酯鍵聯之2'修飾與立體化學模式(Rp)n(Sp)m、(Np)t(Rp)n(Sp)m或(Sp)t(Rp)n(Sp)m的組合，其中m>2。在一些實施例中，n為1，t>1，且m>2。在一些實施例中，m>3。在一些實施例中，m>4。
在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸組合物，其包含由具有以下定義之寡核苷酸：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈對掌性中心模式，該組合物為基本上純的單一寡核苷酸製劑，因為該組合物中預定含量之寡核苷酸具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式。
在一些實施例中，共同鹼基序列及長度可稱為共同鹼基序列。在一些實施例中，具有共同鹼基序列之寡核苷酸可具有相同核苷修飾模式，例如糖修飾、鹼基修飾等。在一些實施例中，核苷修飾模式可由位置與修飾之組合表示。舉例而言，關於WV-1092，自5'端至3'端之核苷修飾模式為5×2'-OMe(糖部分上之2'-OMe修飾)-DNA(在糖部 分上無2'修飾)-5×2'-OMe。在一些實施例中，主鏈鍵聯模式包含各核苷酸間鍵聯之位置及類型(例如磷酸酯、硫代磷酸酯、經取代之硫代磷酸酯等)。在一些實施例中，寡核苷酸可具有指定主鏈鍵聯模式。在一些實施例中，寡核苷酸之主鏈鍵聯模式為nPS-nPO-nPS-nPO-nPS，其中PO為磷酸酯(磷酸二酯)，PS為硫代磷酸酯，且n為1-15，且n在每次出現時可相同或不同。在一些實施例中，至少一個n大於2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。在一些實施例中，PS之至少一個n大於2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。在一些實施例中，介於兩個PO之間的PS之n大於2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。在一些實施例中，n大於5。在一些實施例中，n大於6。在一些實施例中，n大於7。在一些實施例中，n大於8。在一些實施例中，n大於9。在一些實施例中，n大於10。在一些實施例中，n大於11。在一些實施例中，n大於12。在一些實施例中，n大於13。在一些實施例中，n大於14。在一些實施例中，n大於15。在一些實施例中，寡核苷酸之主鏈鍵聯模式為1-5PS - 1-7PO - 5-15PS- 1-7PO- 1-5PS(意謂1至5個硫代磷酸酯、1至7個磷酸酯、5至15個硫代磷酸酯、1至7個磷酸酯及1至5個硫代磷酸酯)。在一些實施例中，寡核苷酸之主鏈鍵聯模式自5'至3'為1PS-3PO-11PS-3PO-1PS(意謂1個硫代磷酸酯、3個磷酸酯、11個硫代磷酸酯、3個磷酸酯及1個硫代磷酸酯，且其或者可表示為PS1 PO3 PS11 PO3 PS1)。舉例而言，關於WV-1092，主鏈鍵聯模式自5'端至3'端為1PS-3PO-11PS-3PO-1PS。在一些實施例中，寡核苷酸之主鏈鍵聯模式為1-5PS - 1-7PO - 5-15PS - 1-7PO - 1-5PS，其中各PS除一個為Rp之外皆為Sp。在一些實施例中，寡核苷酸之主鏈鍵聯模式為1-5PS - 1-7PO - 5-15PS - 1-7PO - 1-5PS，其中除自第5個至第15個PS之任一位置處之一個PS為Rp之 外，各PS皆為Sp。在一些實施例中，寡核苷酸之主鏈鍵聯模式為1-5PS - 1-7PO - 5-15PS - 1-7PO - 1-5PS，其中除自5'端開始計數之第10個PS為Rp之外，各PS皆為Sp。在一些實施例中，寡核苷酸之主鏈鍵聯模式為1-5PS - 1-7PO - 5-15PS - 1-7PO - 1-5PS，其中除自5'端開始計數之第9個PS為Rp之外，各PS皆為Sp。在一些實施例中，寡核苷酸之主鏈鍵聯模式為1-5PS - 1-7PO - 5-15PS - 1-7PO - 1-5PS，其中除自5'端開始計數之第11個PS為Rp之外，各PS皆為Sp。寡核苷酸之主鏈對掌性中心模式可藉由自5'至3'之鍵聯磷立體化學(Rp/Sp)之組合命名。舉例而言，WV-1092之模式為1S-3PO(磷酸酯)-8S-1R-2S-3PO-1S，且WV-937之模式為12S-1R-6S。在一些實施例中，當描述主鏈對掌性中心模式時，可省略所有非對掌性鍵聯(例如，PO)。如上文所例示，非對掌性鍵聯之位置可例如自主鏈鍵聯模式獲得。本文中所揭示之任何序列可與本文中所揭示之任何主鏈鍵聯模式及/或任何主鏈對掌性中心模式組合。除非另外指出，否則鹼基序列、主鏈鍵聯模式、立體化學(例如，Rp或Sp)模式、鹼基修飾模式、主鏈對掌性中心模式等按5'至3'方向呈現。
在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸組合物，其包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸，其特徵在於：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有相同鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃。
寡核苷酸之例示性基本上外消旋製劑係經由此項技術中之熟知製程，根據常用胺基磷酸酯寡核苷酸合成，用二硫化四乙基雙甲硫羰 醯胺或(TETD)或3H-1,2-苯并二硫醇-3-酮1,1-二氧化物(BDTD)硫化亞磷酸三酯來製備硫代磷酸酯寡核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸之基本上外消旋製劑提供基本上外消旋寡核苷酸組合物(或不控制對掌性之寡核苷酸組合物)。
如一般熟習此項技術者應理解，寡核苷酸之立體無規或外消旋製劑係藉由非立體選擇性及/或低立體選擇性偶合核苷酸單體，通常不使用任何對掌性助劑、對掌性修飾試劑及/或對掌性催化劑來製備。在一些實施例中，在基本上外消旋(或不控制對掌性)製備寡核苷酸時，所有或大部分偶合步驟並不控制對掌性，因為並未特異性地執行偶合步驟以提供增強的立體選擇性。寡核苷酸之例示性基本上外消旋製劑係經由此項技術中之熟知製程，根據常用胺基磷酸酯寡核苷酸合成，用二硫化四乙基雙甲硫羰醯胺或(TETD)或3H-1,2-苯并二硫醇-3-酮1,1-二氧化物(BDTD)硫化亞磷酸三酯來製備硫代磷酸酯寡核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸之基本上外消旋製劑提供基本上外消旋寡核苷酸組合物(或不控制對掌性之寡核苷酸組合物)。在一些實施例中，核苷酸單體之至少一個偶合具有小於約60：40、70：30、80：20、85：15、90：10、91：9、92：8、97：3、98：2或99：1之非對映立體選擇性。在一些實施例中，核苷酸單體之至少兩個偶合具有小於約60：40、70：30、80：20、85：15、90：10、91：9、92：8、97：3、98：2或99：1之非對映立體選擇性。在一些實施例中，核苷酸單體之至少三個偶合具有小於約60：40、70：30、80：20、85：15、90：10、91：9、92：8、97：3、98：2或99：1之非對映立體選擇性。在一些實施例中，核苷酸單體之至少四個偶合具有小於約60：40、70：30、80：20、85：15、90：10、91：9、92：8、97：3、98：2或99：1之非對映立體選擇性。在一些實施例中，核苷酸單體之至少五個偶合具有小於約60：40、70：30、80：20、85：15、90：10、91：9、92：8、97：3、98：2或99：1之非對映立體選擇性。在一些實施例 中，在立體無規或外消旋製劑中，至少一個核苷酸間鍵聯具有小於約60：40、70：30、80：20、85：15、90：10、91：9、92：8、97：3、98：2或99：1之非對映立體選擇性。在一些實施例中，至少兩個核苷酸間鍵聯具有小於約60：40、70：30、80：20、85：15、90：10、91：9、92：8、97：3、98：2或99：1之非對映立體選擇性。在一些實施例中，至少三個核苷酸間鍵聯具有小於約60：40、70：30、80：20、85：15、90：10、91：9、92：8、97：3、98：2或99：1之非對映立體選擇性。在一些實施例中，至少四個核苷酸間鍵聯具有小於約60：40、70：30、80：20、85：15、90：10、91：9、92：8、97：3、98：2或99：1之非對映立體選擇性。在一些實施例中，至少五個核苷酸間鍵聯具有小於約60：40、70：30、80：20、85：15、90：10、91：9、92：8、97：3、98：2或99：1之非對映立體選擇性。在一些實施例中，非對映立體選擇性小於約60：40。在一些實施例中，非對映立體選擇性小於約70：30。在一些實施例中，非對映立體選擇性小於約80：20。在一些實施例中，非對映立體選擇性小於約90：10。在一些實施例中，非對映立體選擇性小於約91：9。在一些實施例中，非對映立體選擇性小於約92：8。在一些實施例中，非對映立體選擇性小於約93：7。在一些實施例中，非對映立體選擇性小於約94：6。在一些實施例中，非對映立體選擇性小於約95：5。在一些實施例中，非對映立體選擇性小於約96：4。在一些實施例中，非對映立體選擇性小於約97：3。在一些實施例中，非對映立體選擇性小於約98：2。在一些實施例中，非對映立體選擇性小於約99：1。在一些實施例中，至少一個偶合具有小於約90：10之非對映立體選擇性。在一些實施例中，至少兩個偶合具有小於約90：10之非對映立體選擇性。在一些實施例中，至少三個偶合具有小於約90：10之非對映立體選擇性。在一些實施例中，至少四個偶合具有小於約90：10之非對映立體選擇性。在一些實施例中，至少五個偶合具有小於約90：10之非對映 立體選擇性。在一些實施例中，至少一個核苷酸間鍵聯具有小於約90：10之非對映立體選擇性。在一些實施例中，至少兩個核苷酸間鍵聯具有小於約90：10之非對映立體選擇性。在一些實施例中，至少三個核苷酸間鍵聯具有小於約90：10之非對映立體選擇性。在一些實施例中，至少四個核苷酸間鍵聯具有小於約90：10之非對映立體選擇性。在一些實施例中，至少五個核苷酸間鍵聯具有小於約90：10之非對映立體選擇性。
如一般熟習此項技術者所瞭解，在一些實施例中，偶合或鍵聯之非對映立體選擇性可經由在相同或類似條件下形成之二聚體的非對映立體選擇性來評定，其中該二聚體具有相同的5'及3'核苷及核苷酸間鍵聯。舉例而言，WV-1092 mG*SmGmCmAmC*SA*SA*S G*SG *SG*SC*SA*SC*RA*SG*SmAmCmUmU*SmC中加底線之偶合或鍵聯之非對映立體選擇性可根據在相同或類似條件下偶合兩個G部分來評定，該等條件例如單體、對掌性助劑、溶劑、活化劑、溫度等。
在一些實施例中，本發明提供對掌性受控(及/或立體化學純)寡核苷酸組合物，其包含由具有以下定義之寡核苷酸：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈對掌性中心模式，該組合物為基本上純的單一寡核苷酸製劑，因為該組合物中至少約10%之寡核苷酸具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式。
在一些實施例中，本發明提供寡核苷酸之對掌性受控寡核苷酸組合物，其中相對於相同寡核苷酸之基本上外消旋製劑而言，該組合物中單一寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃。在一些實施例中，本發明提供寡核苷酸之對掌性受控寡核苷酸組合物，其中相對於相同寡核苷酸之基本上外消旋製劑而言，該組合物中單一寡核苷酸類型之寡核苷酸 增濃，該單一寡核苷酸類型之寡核苷酸共用：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈對掌性中心模式。
在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸組合物，其包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸，其特徵在於：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有相同鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃。
在一些實施例中，具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式之寡核苷酸具有共同主鏈磷修飾模式及共同鹼基修飾模式。在一些實施例中，具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式之寡核苷酸具有共同主鏈磷修飾模式及共同核苷修飾模式。在一些實施例中，具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式之寡核苷酸具有相同結構。
在一些實施例中，某一寡核苷酸類型之寡核苷酸具有共同主鏈磷修飾模式及共同糖修飾模式。在一些實施例中，某一寡核苷酸類型之寡核苷酸具有共同主鏈磷修飾模式及共同鹼基修飾模式。在一些實施例中，某一寡核苷酸類型之寡核苷酸具有共同主鏈磷修飾模式及共同核苷修飾模式。在一些實施例中，一寡核苷酸類型之寡核苷酸為相同的。
在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物為某一寡核苷酸 類型之基本上純製劑，因為該組合物中不為該寡核苷酸類型之寡核苷酸為來自該寡核苷酸類型之製備製程，在一些情況下，在某些純化程序之後的雜質。
在一些實施例中，組合物中至少約20%之寡核苷酸具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式。在一些實施例中，組合物中至少約25%之寡核苷酸具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式。在一些實施例中，組合物中至少約30%之寡核苷酸具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式。在一些實施例中，組合物中至少約35%之寡核苷酸具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式。在一些實施例中，組合物中至少約40%之寡核苷酸具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式。在一些實施例中，組合物中至少45%之寡核苷酸具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式。在一些實施例中，組合物中至少約50%之寡核苷酸具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式。在一些實施例中，組合物中至少約55%之寡核苷酸具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式。在一些實施例中，組合物中至少約60%之寡核苷酸具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式。在一些實施例中，組合物中至少約65%之寡核苷酸具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式。在一些實施例中，組合物中至少約70%之寡核苷酸具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式。在一些實施例中，組合物中至少約75%之寡核苷酸具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式。在一些實施例中，組合物中至少約80%之寡核苷酸具有共 同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式。在一些實施例中，組合物中至少約85%之寡核苷酸具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式。在一些實施例中，組合物中至少約90%之寡核苷酸具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式。在一些實施例中，組合物中至少約92%之寡核苷酸具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式。在一些實施例中，組合物中至少約94%之寡核苷酸具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式。在一些實施例中，組合物中至少約95%之寡核苷酸具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式。在一些實施例中，組合物中至少約91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%之寡核苷酸具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式。在一些實施例中，組合物中大於約99%之寡核苷酸具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式。在一些實施例中，寡核苷酸之對掌性受控寡核苷酸組合物之純度可用組合物中具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式之寡核苷酸的百分比表示。
在一些實施例中，具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式之寡核苷酸具有共同主鏈磷修飾模式。在一些實施例中，具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式之寡核苷酸具有共同主鏈磷修飾模式及共同核苷修飾模式。在一些實施例中，具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式之寡核苷酸具有共同主鏈磷修飾模式及共同糖修飾模式。在一些實施例中，具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式之寡核苷酸具有共 同主鏈磷修飾模式及共同鹼基修飾模式。在一些實施例中，具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式之寡核苷酸具有共同主鏈磷修飾模式及共同核苷修飾模式。在一些實施例中，具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式之寡核苷酸為相同的。
在一些實施例中，所提供組合物中之寡核苷酸具有共同主鏈磷修飾模式。在一些實施例中，共同鹼基序列為某一寡核苷酸類型之鹼基序列。在一些實施例中，所提供之組合物為對掌性受控寡核苷酸組合物，因為該組合物含有預定含量之個別寡核苷酸類型之寡核苷酸，其中寡核苷酸類型由以下定義：1)鹼基序列；2)主鏈鍵聯模式；3)主鏈對掌性中心模式；及4)主鏈磷修飾模式。
如上文所指出及此項技術中所瞭解，在一些實施例中，寡核苷酸之鹼基序列可指寡核苷酸中之核苷殘基(例如，糖及/或鹼基組分，相對於諸如腺嘌呤、胞嘧啶、鳥苷、胸腺嘧啶及尿嘧啶之標準天然產生之核苷酸而言)之一致性及/或修飾狀態及/或可指該等殘基之雜交特徵(亦即，與特定互補殘基雜交之能力)。
在一些實施例中，特定寡核苷酸類型可由以下定義：1A)鹼基一致性；1B)鹼基修飾模式；1C)糖修飾模式；2)主鏈鍵聯模式；3)主鏈對掌性中心模式；及4)主鏈磷修飾模式。
因此，在一些實施例中，特定類型之寡核苷酸可共用相同鹼基，但其鹼基修飾及/或糖修飾之模式不同。在一些實施例中，特定類型之寡核苷酸可共用相同鹼基及鹼基修飾模式(包括例如缺乏鹼基修飾)，但糖修飾模式不同。
在一些實施例中，特定類型之寡核苷酸之相同之處在於，其具有相同鹼基序列(包括長度)、對糖及鹼基部分具有相同的化學修飾模式、相同主鏈鍵聯模式(例如，天然磷酸酯鍵聯模式、硫代磷酸酯鍵聯模式、硫代磷酸三酯鍵聯模式及其組合)、相同主鏈對掌性中心模式(例如，對掌性核苷酸間鍵聯之立體化學(Rp/Sp)模式)及相同主鏈磷修飾模式(例如，對核苷酸間磷原子之修飾模式，諸如-S-及式I之-L-R1)。
在一些實施例中，某一寡核苷酸類型之對掌性受控寡核苷酸組合物之純度用組合物中該寡核苷酸類型之寡核苷酸的百分比表示。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物中至少約10%之寡核苷酸為相同寡核苷酸類型。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物中至少約20%之寡核苷酸為相同寡核苷酸類型。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物中至少約30%之寡核苷酸為相同寡核苷酸類型。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物中至少約40%之寡核苷酸為相同寡核苷酸類型。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物中至少約50%之寡核苷酸為相同寡核苷酸類型。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物中至少約60%之寡核苷酸為相同寡核苷酸類型。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物中至少約70%之寡核苷酸為相同寡核苷酸類型。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物中至少約80%之寡核苷酸為相同寡核苷酸類型。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物中至少約90%之寡核苷酸為相同寡核苷酸類型。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物中 至少約92%之寡核苷酸為相同寡核苷酸類型。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物中至少約94%之寡核苷酸為相同寡核苷酸類型。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物中至少約95%之寡核苷酸為相同寡核苷酸類型。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物中至少約96%之寡核苷酸為相同寡核苷酸類型。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物中至少約97%之寡核苷酸為相同寡核苷酸類型。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物中至少約98%之寡核苷酸為相同寡核苷酸類型。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物中至少約99%之寡核苷酸為相同寡核苷酸類型。
在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物之純度可藉由其製備製程中之各偶合步驟之立體選擇性來控制。在一些實施例中，偶合步驟具有60%(由偶合步驟形成之新核苷酸間鍵聯中60%具有既定立體化學)之立體選擇性(例如，非對映立體選擇性)。在此類偶合步驟之後，所形成之新核苷酸間鍵聯可稱為具有60%純度。在一些實施例中，各偶合步驟具有至少60%之立體選擇性。在一些實施例中，各偶合步驟具有至少70%之立體選擇性。在一些實施例中，各偶合步驟具有至少80%之立體選擇性。在一些實施例中，各偶合步驟具有至少85%之立體選擇性。在一些實施例中，各偶合步驟具有至少90%之立體選擇性。在一些實施例中，各偶合步驟具有至少91%之立體選擇性。在一些實施例中，各偶合步驟具有至少92%之立體選擇性。在一些實施例中，各偶合步驟具有至少93%之立體選擇性。在一些實施例中，各偶合步驟具有至少94%之立體選擇性。在一些實施例中，各偶合步驟具有至少95%之立體選擇性。在一些實施例中，各偶合步驟具有至少96%之立體選擇性。在一些實施例中，各偶合步驟具有至少97%之立體選擇性。在一些實施例中，各偶合步驟具有至少98%之立體選擇性。在一些實施例中，各偶合步驟具有至少99%之立體選擇 性。在一些實施例中，各偶合步驟具有至少99.5%之立體選擇性。在一些實施例中，各偶合步驟具有幾乎100%之立體選擇性。在一些實施例中，偶合步驟具有幾乎100%之立體選擇性，因為根據分析方法(例如，NMR、HPLC等)，偶合步驟之所有可偵測產物皆具有既定立體選擇性。
本發明尤其認識到，寡核苷酸結構要素(例如，化學修飾、主鏈鍵聯、主鏈對掌性中心及/或主鏈磷修飾之模式)之組合可提供出人意料地改良的特性，諸如生物活性。
在一些實施例中，本發明提供一種寡核苷酸組合物，其包含預定含量之寡核苷酸，該等寡核苷酸包含一或多個翼區及一共同核心區，其中：各翼區獨立地具有兩個或更多個鹼基之長度，且獨立地且視情況包含一或多個對掌性核苷酸間鍵聯；核心區獨立地具有兩個或更多個鹼基之長度，且獨立地包含一或多個對掌性核苷酸間鍵聯，且共同核心區具有：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈對掌性中心模式。
在一些實施例中，翼區包含核心區中沒有之結構特徵。在一些實施例中，翼及核心可由任何結構要素定義，例如鹼基修飾(例如，甲基化/非甲基化、在位置1處之甲基化/在位置2處之甲基化等)、糖修飾(例如，經修飾/非修飾、2'修飾/另一類型之修飾、一種類型之2'修飾/另一類型之2'修飾等)、主鏈鍵聯類型(例如，磷酸酯/硫代磷酸酯、硫代磷酸酯/經取代之硫代磷酸酯等)、主鏈對掌性中心立體化學(例如，全Sp/全Rp、(SpRp)重複/全Rp等)、主鏈磷修飾類型(例如，s1/s2、s1/s3等)等。
在一些實施例中，翼及核心由核苷修飾定義，其中翼包含核心區沒有的核苷修飾。在一些實施例中，翼及核心由糖修飾定義，其中翼包含核心區沒有的糖修飾。在一些實施例中，糖修飾為2'修飾。在一些實施例中，糖修飾為2'-OR1。在一些實施例中，糖修飾為2'-MOE。在一些實施例中，糖修飾為2'-OMe。其他例示性糖修飾描述於本文中。
在一些實施例中，所提供組合物中之寡核苷酸具有翼-核心結構(半聚體)。在一些實施例中，所提供組合物中之寡核苷酸具有核苷修飾之翼-核心結構。在一些實施例中，所提供組合物中之寡核苷酸具有核心-翼結構(另一類型之半聚體)。在一些實施例中，所提供組合物中之寡核苷酸具有核苷修飾之核心-翼結構。在一些實施例中，所提供組合物中之寡核苷酸具有翼-核心-翼結構(間隔體)。在一些實施例中，所提供組合物中之寡核苷酸具有核苷修飾之翼-核心-翼結構。在一些實施例中，翼及核心由糖部分之修飾定義。在一些實施例中，翼及核心由鹼基部分之修飾定義。在一些實施例中，翼區中之各糖部分具有相同2'修飾，該2'修飾不存在於核心區中。在一些實施例中，翼區中之各糖部分具有相同2'修飾，該2'修飾不同於核心區中之任何糖修飾。在一些實施例中，核心區無糖修飾。在一些實施例中，翼區中之各糖部分具有相同2'修飾，且核心區無2'修飾。在一些實施例中，當存在兩個或更多個翼時，各翼由其自身修飾定義。在一些實施例中，各翼具有其自身特徵性糖修飾。在一些實施例中，各翼具有相同特徵性糖修飾，該特徵性糖修飾將其與核心區分開來。在一些實施例中，各翼糖部分具有相同修飾。在一些實施例中，各翼糖部分具有相同2'修飾。在一些實施例中，翼區中之各糖部分具有相同2'修飾，然而第一翼區中之共同2'修飾可與第二翼區中之共同2'修飾相同或不同。在一些實施例中，翼區中之各糖部分具有相同2'修飾，且第一翼 區中之共同2'修飾與第二翼區中之共同2'修飾相同。在一些實施例中，翼區中之各糖部分具有相同2'修飾，且第一翼區中之共同2'修飾與第二翼區中之共同2'修飾不同。
在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑為反義寡核苷酸(例如，基羅美爾森(chiromersen))。在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑為siRNA寡核苷酸。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物中之寡核苷酸可為反義寡核苷酸、拮抗miR、微小RNA、微小RNA前體(pre-microRNs)、抗miR、超級miR、核糖核酸酶、Ul接附蛋白、RNA活化劑、RNAi劑、誘騙性寡核苷酸、形成三螺旋體之寡核苷酸、適體或佐劑。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物具有反義寡核苷酸。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物具有拮抗miR寡核苷酸。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物具有微小RNA寡核苷酸。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物具有微小RNA前體寡核苷酸。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物具有抗miR寡核苷酸。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物具有超級miR寡核苷酸。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物具有核糖核酸酶寡核苷酸。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物具有Ul接附蛋白寡核苷酸。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物具有RNA活化劑寡核苷酸。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物具有RNAi劑寡核苷酸。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物具有誘騙性寡核苷酸。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物具有形成三螺旋體之寡核苷酸。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物具有適體寡核苷酸。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物具有佐劑寡核苷酸。
在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑 所含寡核苷酸包括一或多個經修飾之主鏈鍵聯、鹼基及/或糖。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含一或多個經修飾之對掌性磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含兩個或更多個經修飾之對掌性磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含三個或更多個經修飾之對掌性磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含四個或更多個經修飾之對掌性磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含五個或更多個經修飾之對掌性磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25個經修飾之對掌性磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸類型包含5個或更多個經修飾之對掌性磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸類型包含6個或更多個經修飾之對掌性磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸類型包含7個或更多個經修飾之對掌性磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸類型包含8個或更多個經修飾之對掌性磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸類型包含9個或更多個經修飾之對掌性磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸類型包含10個或更多個經修飾之對掌性磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸類型包含11個或更多個經修飾之對掌性磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸類型包含12個或更多個經修飾之對掌性磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸類型包含13個或更多個經修飾之對掌性磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸類型包含14個或更多個經修飾之對掌性磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸類型包含15個或更多個經修飾之對掌性磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸類型包含16個或更多個經修飾之對掌性磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸類型 包含17個或更多個經修飾之對掌性磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸類型包含18個或更多個經修飾之對掌性磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸類型包含19個或更多個經修飾之對掌性磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸類型包含20個或更多個經修飾之對掌性磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸類型包含21個或更多個經修飾之對掌性磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸類型包含22個或更多個經修飾之對掌性磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸類型包含23個或更多個經修飾之對掌性磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸類型包含24個或更多個經修飾之對掌性磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸類型包含25個或更多個經修飾之對掌性磷酸酯鍵聯。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含至少5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%經修飾之對掌性磷酸酯鍵聯。該等經修飾之對掌性磷酸酯鍵聯之實例在上文及此處均有描述。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含至少5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%呈Sp組態之經修飾之對掌性磷酸酯鍵聯。
在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑的立體化學純度大於約80%。在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑的立體化學純度大於約85%。在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑的立體化學純度大於約90%。在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑的立體化學純度大於約91%。在一些實施例中，所提供之對掌性受 控(及/或立體化學純)製劑的立體化學純度大於約92%。在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑的立體化學純度大於約93%。在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑的立體化學純度大於約94%。在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑的立體化學純度大於約95%。在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑的立體化學純度大於約96%。在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑的立體化學純度大於約97%。在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑的立體化學純度大於約98%。在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑的立體化學純度大於約99%。
在一些實施例中，經修飾之對掌性磷酸酯鍵聯為對掌性硫代磷酸酯鍵聯，亦即硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含至少5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，所有經修飾之對掌性磷酸酯鍵聯皆為對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸中至少約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯具有Sp構形。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸中至少約10%對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯具有Sp構形。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸中至少約20%對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯具有Sp構形。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸中至少約30%對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯具有Sp構形。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸中至少約40%對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯具有Sp構形。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸中至少約50%對掌性硫代磷酸酯核苷 酸間鍵聯具有Sp構形。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸中至少約60%對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯具有Sp構形。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸中至少約70%對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯具有Sp構形。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸中至少約80%對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯具有Sp構形。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸中至少約90%對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯具有Sp構形。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸中至少約95%對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯具有Sp構形。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸中至少約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯具有Rp構形。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸中至少約10%對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯具有Rp構形。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸中至少約20%對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯具有Rp構形。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸中至少約30%對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯具有Rp構形。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸中至少約40%對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯具有Rp構形。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸中至少約50%對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯具有Rp構形。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸中至少約60%對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯具有Rp構形。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸中至少約70%對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯具有Rp構形。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸中至少約80%對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯具有Rp構形。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸中至少約90%對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯具有Rp構形。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸中至少約95%對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯具有Rp構形。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸中小於約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯具有Rp構形。在一些實施例中， 所提供之寡核苷酸中小於約10%對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯具有Rp構形。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸中小於約20%對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯具有Rp構形。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸中小於約30%對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯具有Rp構形。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸中小於約40%對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯具有Rp構形。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸中小於約50%對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯具有Rp構形。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸中小於約60%對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯具有Rp構形。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸中小於約70%對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯具有Rp構形。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸中小於約80%對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯具有Rp構形。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸中小於約90%對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯具有Rp構形。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸中小於約95%對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯具有Rp構形。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸僅具有一個Rp對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸僅具有一個Rp對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯，其中所有核苷酸間鍵聯皆為對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯為對掌性硫代磷酸二酯鍵聯。在一些實施例中，各對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯獨立地為對掌性硫代磷酸二酯鍵聯。在一些實施例中，各核苷酸間鍵聯獨立地為對掌性硫代磷酸二酯鍵聯。在一些實施例中，各核苷酸間鍵聯獨立地為對掌性硫代磷酸二酯鍵聯，且僅一個為Rp。
在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑具有含有一或多個經修飾之鹼基的寡核苷酸。在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑具有不含經修飾之鹼基的寡核苷酸。該等經修飾之鹼基的實例在上文及此處均有描述。
在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含至少2、3、4、5、6、7、8、9或10個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含至少一個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含至少兩個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含至少三個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含至少四個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含至少五個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含至少六個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含至少七個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含至少八個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含至少九個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含至少十個天然磷酸酯鍵聯。
在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含2、3、4、5、6、7、8、9或10個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含一個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含兩個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含三個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含四個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含五個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含六個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含七個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含八個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含九個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含十個天然磷酸酯鍵聯。
在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含至少2、3、4、 5、6、7、8、9或10個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含至少兩個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含至少三個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含至少四個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含至少五個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含至少六個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含至少七個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含至少八個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含至少九個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含至少十個連續天然磷酸酯鍵聯。
在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含2、3、4、5、6、7、8、9或10個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含兩個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含三個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含四個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含五個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含六個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含七個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含八個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含九個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含十個連續天然磷酸酯鍵聯。
在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑含有具有至少8個鹼基之共同鹼基序列的寡核苷酸。在一些實施例 中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑含有具有至少9個鹼基之共同鹼基序列的寡核苷酸。在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑含有具有至少10個鹼基之共同鹼基序列的寡核苷酸。在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑含有具有至少11個鹼基之共同鹼基序列的寡核苷酸。在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑含有具有至少12個鹼基之共同鹼基序列的寡核苷酸。在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑含有具有至少13個鹼基之共同鹼基序列的寡核苷酸。在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑含有具有至少14個鹼基之共同鹼基序列的寡核苷酸。在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑含有具有至少15個鹼基之共同鹼基序列的寡核苷酸。在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑含有具有至少16個鹼基之共同鹼基序列的寡核苷酸。在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑含有具有至少17個鹼基之共同鹼基序列的寡核苷酸。在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑含有具有至少18個鹼基之共同鹼基序列的寡核苷酸。在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑含有具有至少19個鹼基之共同鹼基序列的寡核苷酸。在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑含有具有至少20個鹼基之共同鹼基序列的寡核苷酸。在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑含有具有至少21個鹼基之共同鹼基序列的寡核苷酸。在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑含有具有至少22個鹼基之共同鹼基序列的寡核苷酸。在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑含有具有至少23個鹼基之共同鹼基序列的寡核苷酸。在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑含有具有至少24個鹼 基之共同鹼基序列的寡核苷酸。在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑含有具有至少25個鹼基之共同鹼基序列的寡核苷酸。在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑含有具有至少30、35、40、45、50、55、60、65、70或75個鹼基之共同鹼基序列的寡核苷酸。
在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑包含含有一或多個在糖部分經修飾之殘基的寡核苷酸。在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑包含含有一或多個在糖部分之2'位置經修飾(本文中稱為「2'修飾」)之殘基的寡核苷酸。該等修飾之實例在上文及此處均有描述且包括(但不限於)2'-OMe、2'-MOE、2'-LNA、2'-F、FRNA、FANA、S-cEt等。在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑包含含有一或多個經2'修飾之殘基的寡核苷酸。舉例而言，在一些實施例中，所提供之寡核苷酸含有一或多個殘基，該一或多個殘基為經2'-O-甲氧基乙基(2'-MOE)修飾之殘基。在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑包含不含任何2'修飾之寡核苷酸。在一些實施例中，所提供之對掌性受控(及/或立體化學純)製劑為不含任何2'-MOE殘基之寡核苷酸。亦即，在一些實施例中，所提供之寡核苷酸未經MOE修飾。其他例示性糖修飾描述於本文中。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸具有翼-核心或核心-翼(半聚體，在本文中通常亦分別表示為X-Y或Y-X)之一般基元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸具有翼-核心-翼(間隔體，在本文中通常亦表示為X-Y-X)之一般基元。在一些實施例中，各翼獨立地含有一或多個具有特定修飾之殘基，該修飾不存在於核心「Y」部分。在一些實施例中，各翼獨立地含有一或多個具有特定核苷修飾之殘基，該修飾不存在於核心「Y」部分。在一些實施例中，各翼獨立地含有一或多 個具有特定鹼基修飾之殘基，該修飾不存在於核心「Y」部分。在一些實施例中，各翼獨立地含有一或多個具有特定糖修飾之殘基，該修飾不存在於核心「Y」部分。例示性糖修飾為此項技術中廣泛知曉的。在一些實施例中，糖修飾為選自US9006198中所述之彼等修飾的修飾，該等糖修飾以引用的方式併入本文中。其他例示性糖修飾描述於本文中。在一些實施例中，各翼含有一或多個具有2'修飾之殘基，該2'修飾不存在於核心部分中。在一些實施例中，2'修飾為2'-OR1，其中R1如本發明中所定義及描述。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸具有表示為X-Y之翼-核心基元或表示為Y-X之核心-翼基元，其中在「X」部分處之殘基為特定類型之經糖修飾之殘基且在核心「Y」部分中之殘基為相同特定類型之未經糖修飾之殘基。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸具有表示為X-Y-X之翼-核心-翼基元，其中在各「X」部分處之殘基為特定類型之經糖修飾之殘基且在核心「Y」部分中之殘基為相同特定類型之未經糖修飾之殘基。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸具有表示為X-Y之翼-核心基元或表示為Y-X之核心-翼基元，其中在「X」部分處之殘基為特定類型之經2'修飾之殘基且在核心「Y」部分中之殘基為相同特定類型之未經2'修飾之殘基。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸具有表示為X-Y之翼-核心基元，其中在「X」部分處之殘基為特定類型之經2'修飾之殘基且在核心「Y」部分中之殘基為相同特定類型之未經2'修飾之殘基。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸具有表示為Y-X之核心-翼基元，其中在「X」部分處之殘基為特定類型之經2'修飾之殘基且在核心「Y」部分中之殘基為相同特定類型之未經2'修飾之殘基。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸具有表示為X-Y-X之翼-核心-翼基元，其中在各「X」部分處之殘基為特定類型之經2'修飾之殘基且在核心「Y」部分中之殘基為相同特定類型之未經2'修飾 之殘基。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸具有表示為X-Y之翼-核心基元，其中在「X」部分處之殘基為特定類型之經2'修飾之殘基且在核心「Y」部分中之殘基為2'-去氧核苷。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸具有表示為Y-X之核心-翼基元，其中在「X」部分處之殘基為特定類型之經2'修飾之殘基且在核心「Y」部分中之殘基為2'-去氧核苷。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸具有表示為X-Y-X之翼-核心-翼基元，其中在各「X」部分處之殘基為特定類型之經2'修飾之殘基且在核心「Y」部分中之殘基為2'-去氧核苷。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸具有表示為X-Y-X之翼-核心-翼基元，其中在各「X」部分處之殘基為特定類型之經2'修飾之殘基且在核心「Y」部分中之殘基為2'-去氧核苷。舉例而言，在一些實施例中，所提供之寡核苷酸具有表示為X-Y-X之翼-核心-翼基元，其中在各「X」部分處之殘基為特定類型之經2'-MOE修飾之殘基且在核心「Y」部分中之殘基為未經2'-MOE修飾之殘基。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸具有表示為X-Y-X之翼-核心-翼基元，其中在各「X」部分處之殘基為經2'-MOE修飾之殘基且在核心「Y」部分中之殘基為2'-去氧核苷。相關技術之技術人員將認識到，在該等X-Y、Y-X及/或X-Y-X基元之情況下，涵蓋上文及此處所述之所有該等2'修飾。
在一些實施例中，翼具有一或多個鹼基之長度。在一些實施例中，翼具有兩個或更多個鹼基之長度。在一些實施例中，翼具有三個或更多個鹼基之長度。在一些實施例中，翼具有四個或更多個鹼基之長度。在一些實施例中，翼具有五個或更多個鹼基之長度。在一些實施例中，翼具有六個或更多個鹼基之長度。在一些實施例中，翼具有七個或更多個鹼基之長度。在一些實施例中，翼具有八個或更多個鹼基之長度。在一些實施例中，翼具有九個或更多個鹼基之長度。在一些實施例中，翼具有十個或更多個鹼基之長度。在一些實施例中，翼 具有11個或更多個鹼基之長度。在一些實施例中，翼具有12個或更多個鹼基之長度。在一些實施例中，翼具有13個或更多個鹼基之長度。在一些實施例中，翼具有14個或更多個鹼基之長度。在一些實施例中，翼具有15個或更多個鹼基之長度。在一些實施例中，翼具有16個或更多個鹼基之長度。在一些實施例中，翼具有17個或更多個鹼基之長度。在一些實施例中，翼具有18個或更多個鹼基之長度。在一些實施例中，翼具有19個或更多個鹼基之長度。在一些實施例中，翼具有十個或更多個鹼基之長度。
在一些實施例中，翼具有一個鹼基之長度。在一些實施例中，翼具有兩個鹼基之長度。在一些實施例中，翼具有三個鹼基之長度。在一些實施例中，翼具有四個鹼基之長度。在一些實施例中，翼具有五個鹼基之長度。在一些實施例中，翼具有六個鹼基之長度。在一些實施例中，翼具有七個鹼基之長度。在一些實施例中，翼具有八個鹼基之長度。在一些實施例中，翼具有九個鹼基之長度。在一些實施例中，翼具有十個鹼基之長度。在一些實施例中，翼具有11個鹼基之長度。在一些實施例中，翼具有12個鹼基之長度。在一些實施例中，翼具有13個鹼基之長度。在一些實施例中，翼具有14個鹼基之長度。在一些實施例中，翼具有15個鹼基之長度。在一些實施例中，翼具有16個鹼基之長度。在一些實施例中，翼具有17個鹼基之長度。在一些實施例中，翼具有18個鹼基之長度。在一些實施例中，翼具有19個鹼基之長度。在一些實施例中，翼具有十個鹼基之長度。
在一些實施例中，翼包含一或多個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，翼包含一或多個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，翼包含一或多個對掌性核苷酸間鍵聯及一或多個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，翼包含一或多個對掌性核苷酸間鍵聯及兩個或更多個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，翼包含一或多個對掌性核苷酸間鍵 聯及兩個或更多個天然磷酸酯鍵聯，其中兩個或更多個天然磷酸酯鍵聯為連續的。在一些實施例中，翼不含對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼鍵聯為天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，翼不含磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地為對掌性核苷酸間鍵聯。
在一些實施例中，各翼獨立地包含一或多個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含一或多個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含一或多個對掌性核苷酸間鍵聯及一或多個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含一或多個對掌性核苷酸間鍵聯及兩個或更多個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含一或多個對掌性核苷酸間鍵聯及兩個或更多個天然磷酸酯鍵聯，其中兩個或更多個天然磷酸酯鍵聯為連續的。
在一些實施例中，各翼獨立地包含至少一個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少兩個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少三個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少四個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少五個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少六個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少七個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少八個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少九個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少十個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少11個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少12個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少13個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少14個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少15個對掌性核苷酸間鍵 聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少16個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少17個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少18個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少19個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少20個對掌性核苷酸間鍵聯。
在一些實施例中，各翼獨立地包含一個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含兩個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含三個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含四個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含五個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含六個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含七個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含八個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含九個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含十個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含11個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含12個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含13個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含14個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含15個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含16個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含17個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含18個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含19個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含20個對掌性核苷酸間鍵聯。
在一些實施例中，各翼獨立地包含至少一個連續天然磷酸酯鍵 聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少兩個連續對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少三個連續對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少四個連續對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少五個連續對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少六個連續對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少七個連續對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少八個連續對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少九個連續對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少十個連續對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少11個連續對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少12個連續對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少13個連續對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少14個連續對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少15個連續對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少16個連續對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少17個連續對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少18個連續對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少19個連續對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少20個連續對掌性核苷酸間鍵聯。
在一些實施例中，各翼獨立地包含一個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含兩個連續對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含三個連續對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含四個連續對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含五個連續對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含六個連續對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施 例中，各翼獨立地包含七個連續對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含八個連續對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含九個連續對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含十個連續對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含11個連續對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含12個連續對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含13個連續對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含14個連續對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含15個連續對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含16個連續對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含17個連續對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含18個連續對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含19個連續對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含20個連續對掌性核苷酸間鍵聯。
在一些實施例中，各翼獨立地包含至少一個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少兩個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少三個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少四個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少五個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少六個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少七個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少八個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少九個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少十個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少11個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少12個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少13個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例 中，各翼獨立地包含至少14個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少15個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少16個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少17個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少18個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少19個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少20個天然磷酸酯鍵聯。
在一些實施例中，各翼獨立地包含一個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含兩個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含三個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含四個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含五個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含六個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含七個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含八個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含九個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含十個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含11個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含12個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含13個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含14個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含15個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含16個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含17個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含18個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含19個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含20個天然磷酸酯鍵聯。
在一些實施例中，各翼獨立地包含至少一個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少兩個連續天然磷酸酯鍵 聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少三個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少四個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少五個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少六個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少七個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少八個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少九個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少十個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少11個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少12個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少13個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少14個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少15個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少16個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少17個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少18個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少19個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含至少20個連續天然磷酸酯鍵聯。
在一些實施例中，各翼獨立地包含一個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含兩個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含三個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含四個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含五個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含六個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含七個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含八個連 續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含九個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含十個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含11個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含12個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含13個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含14個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含15個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含16個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含17個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含18個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含19個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各翼獨立地包含20個連續天然磷酸酯鍵聯。
在一些實施例中，翼包含僅一個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，5'端翼包含僅一個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，5'端翼包含僅一個在翼5'端之對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，5'端翼包含僅一個在翼5'端之對掌性核苷酸間鍵聯，且對掌性核苷酸間鍵聯為Rp。在一些實施例中，5'端翼包含僅一個在翼5'端之對掌性核苷酸間鍵聯，且對掌性核苷酸間鍵聯為Sp。在一些實施例中，3'端翼包含僅一個在翼3'端之對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，3'端翼包含僅一個在翼3'端之對掌性核苷酸間鍵聯，且對掌性核苷酸間鍵聯為Rp。在一些實施例中，3'端翼包含僅一個在翼3'端之對掌性核苷酸間鍵聯，且對掌性核苷酸間鍵聯為Sp。
在一些實施例中，翼包含兩個或更多個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，翼內所有磷酸酯鍵聯皆連續，且在翼內任意兩個磷酸酯鍵聯之間不存在非磷酸酯鍵聯。
在一些實施例中，當描述鍵聯(例如鍵聯化學、鍵聯立體化學等) 時，連接翼與核心之鍵聯視為核心之一部分。舉例而言，在WV-1092(mG*SmGmCmAmC *SA*SA*SG*SG*SG*SC*SA*SC*RA*SG*S mAmCmUmU*SmC)中，加底線鍵聯可視為核心(粗體)之一部分，其5'翼(在糖部分上具有2'-OMe)具有一個在其5'端之單一Sp硫代磷酸酯鍵聯，其3'翼(在糖部分上具有2'-OMe)具有一個在其3'端之Sp硫代磷酸酯鍵聯，且其核心中糖上無2'修飾。
在一些實施例中，連接至無2'修飾之糖部分的5'-核苷酸間鍵聯為經修飾之鍵聯。在一些實施例中，連接至無2'修飾之糖部分的5'-核苷酸間鍵聯為具有式I結構之鍵聯。在一些實施例中，連接至無2'修飾之糖部分的5'-核苷酸間鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，連接至無2'修飾之糖部分的5'-核苷酸間鍵聯為經取代之硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，連接至無2'修飾之糖部分的5'-核苷酸間鍵聯為硫代磷酸三酯鍵聯。在一些實施例中，連接至無2'修飾之糖部分的各5'-核苷酸間鍵聯為經修飾之鍵聯。在一些實施例中，連接至無2'修飾之糖部分的各5'-核苷酸間鍵聯為具有式I結構之鍵聯。在一些實施例中，連接至無2'修飾之糖部分的各5'-核苷酸間鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，連接至無2'修飾之糖部分的各5'-核苷酸間鍵聯為經取代之硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，連接至無2'修飾之糖部分的各5'-核苷酸間鍵聯為硫代磷酸三酯鍵聯。
在一些實施例中，連接至無2'修飾之糖部分的3'-核苷酸間鍵聯為經修飾之鍵聯。在一些實施例中，連接至無2'修飾之糖部分的3'-核苷酸間鍵聯為具有式I結構之鍵聯。在一些實施例中，連接至無2'修飾之糖部分的3'-核苷酸間鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，連接至無2'修飾之糖部分的3'-核苷酸間鍵聯為經取代之硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，連接至無2'修飾之糖部分的3'-核苷酸間鍵聯為硫代磷酸三酯鍵聯。在一些實施例中，連接至無2'修飾之糖部分的各 3'-核苷酸間鍵聯為經修飾之鍵聯。在一些實施例中，連接至無2'修飾之糖部分的各3'-核苷酸間鍵聯為具有式I結構之鍵聯。在一些實施例中，連接至無2'修飾之糖部分的各3'-核苷酸間鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，連接至無2'修飾之糖部分的各3'-核苷酸間鍵聯為經取代之硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，連接至無2'修飾之糖部分的各3'-核苷酸間鍵聯為硫代磷酸三酯鍵聯。
在一些實施例中，連接至無2'修飾之糖部分的兩個核苷酸間鍵聯均為經修飾之鍵聯。在一些實施例中，連接至無2'修飾之糖部分的兩個核苷酸間鍵聯均為具有式I結構之鍵聯。在一些實施例中，連接至無2'修飾之糖部分的兩個核苷酸間鍵聯均為硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，連接至無2'修飾之糖部分的兩個核苷酸間鍵聯均為經取代之硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，連接至無2'修飾之糖部分的兩個核苷酸間鍵聯均為硫代磷酸三酯鍵聯。在一些實施例中，連接至無2'修飾之糖部分的各核苷酸間鍵聯為經修飾之鍵聯。在一些實施例中，連接至無2'修飾之糖部分的各核苷酸間鍵聯為具有式I結構之鍵聯。在一些實施例中，連接至無2'修飾之糖部分的各核苷酸間鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，連接至無2'修飾之糖部分的各核苷酸間鍵聯為經取代之硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，連接至無2'修飾之糖部分的各核苷酸間鍵聯為硫代磷酸三酯鍵聯。
在一些實施例中，無2'修飾之糖部分為天然DNA核苷中所存在之糖部分。
在一些實施例中，關於翼-核心-翼結構，5'端翼包含僅一個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，關於翼-核心-翼結構，5'端翼包含僅一個在翼5'端之對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，關於翼-核心-翼結構，3'端翼包含僅一個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，關於翼-核心-翼結構，3'端翼包含僅一個在翼3'端之對掌性核苷 酸間鍵聯。在一些實施例中，關於翼-核心-翼結構，各翼包含僅一個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，關於翼-核心-翼結構，各翼包含僅一個對掌性核苷酸間鍵聯，其中5'端翼包含僅一個在其5'端之對掌性核苷酸間鍵聯；且3'端翼包含僅一個在其3'端之對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，5'翼中之唯一對掌性核苷酸間鍵聯為Rp。在一些實施例中，5'翼中之唯一對掌性核苷酸間鍵聯為Sp。在一些實施例中，3'翼中之唯一對掌性核苷酸間鍵聯為Rp。在一些實施例中，3'翼中之唯一對掌性核苷酸間鍵聯為Sp。在一些實施例中，5'翼及3'翼中之唯一對掌性核苷酸間鍵聯均為Sp。在一些實施例中，5'翼及3'翼中之唯一對掌性核苷酸間鍵聯均為Rp。在一些實施例中，5'翼中之唯一對掌性核苷酸間鍵聯為Sp，且3'翼中之唯一對掌性核苷酸間鍵聯為Rp。在一些實施例中，5'翼中之唯一對掌性核苷酸間鍵聯為Rp，且3'翼中之唯一對掌性核苷酸間鍵聯為Sp。
在一些實施例中，翼包含兩個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，翼包含僅兩個對掌性核苷酸間鍵聯及一或多個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，翼包含僅兩個對掌性核苷酸間鍵聯及兩個或更多個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，翼包含僅兩個對掌性核苷酸間鍵聯及兩個或更多個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，翼包含僅兩個對掌性核苷酸間鍵聯及兩個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，翼包含僅兩個對掌性核苷酸間鍵聯及三個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，5'翼(至核心)包含僅兩個對掌性核苷酸間鍵聯，一個在其5'端且另一個在其3'端，兩者之間含一或多個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，5'翼(至核心)包含僅兩個對掌性核苷酸間鍵聯，一個在其5'端且另一個在其3'端，兩者之間含兩個或更多個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，3'翼(至核心)包含僅兩個對掌性核苷酸間鍵聯，一個在其3'端且另一個在其3'端，兩者之間含一或多個 天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，3'翼(至核心)包含僅兩個對掌性核苷酸間鍵聯，一個在其3'端且另一個在其3'端，兩者之間含兩個或更多個天然磷酸酯鍵聯。
在一些實施例中，5'翼包含僅兩個對掌性核苷酸間鍵聯，一個在其5'端且另一個在其3'端，兩者之間含一或多個天然磷酸酯鍵聯；且3'翼包含僅一個核苷酸間鍵聯，在其3'端。在一些實施例中，5'翼(至核心)包含僅兩個對掌性核苷酸間鍵聯，一個在其5'端且另一個在其3'端，兩者之間含兩個或更多個天然磷酸酯鍵聯；且3'翼包含僅一個核苷酸間鍵聯，在其3'端。在一些實施例中，各對掌性核苷酸間鍵聯獨立地具有其自身的立體化學。在一些實施例中，5'翼中之兩個對掌性核苷酸間鍵聯具有相同立體化學。在一些實施例中，5'翼中之兩個對掌性核苷酸間鍵聯具有不同立體化學。在一些實施例中，5'翼中之兩個對掌性核苷酸間鍵聯均為Rp。在一些實施例中，5'翼中之兩個對掌性核苷酸間鍵聯均為Sp。在一些實施例中，5'翼及3'翼中之對掌性核苷酸間鍵聯具有相同立體化學。在一些實施例中，5'翼及3'翼中之對掌性核苷酸間鍵聯為Rp。在一些實施例中，5'翼及3'翼中之對掌性核苷酸間鍵聯為Sp。在一些實施例中，5'翼及3'翼中之對掌性核苷酸間鍵聯具有不同立體化學。
在一些實施例中，核心區具有一或多個鹼基之長度。在一些實施例中，核心區具有兩個或更多個鹼基之長度。在一些實施例中，核心區具有三個或更多個鹼基之長度。在一些實施例中，核心區具有四個或更多個鹼基之長度。在一些實施例中，核心區具有五個或更多個鹼基之長度。在一些實施例中，核心區具有六個或更多個鹼基之長度。在一些實施例中，核心區具有七個或更多個鹼基之長度。在一些實施例中，核心區具有八個或更多個鹼基之長度。在一些實施例中，核心區具有九個或更多個鹼基之長度。在一些實施例中，核心區具有 十個或更多個鹼基之長度。在一些實施例中，核心區具有11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25個或更多個鹼基之長度。在某些實施例中，核心區具有11個或更多個鹼基之長度。在某些實施例中，核心區具有12個或更多個鹼基之長度。在某些實施例中，核心區具有13個或更多個鹼基之長度。在某些實施例中，核心區具有14個或更多個鹼基之長度。在某些實施例中，核心區具有15個或更多個鹼基之長度。在某些實施例中，核心區具有16個或更多個鹼基之長度。在某些實施例中，核心區具有17個或更多個鹼基之長度。在某些實施例中，核心區具有18個或更多個鹼基之長度。在某些實施例中，核心區具有19個或更多個鹼基之長度。在某些實施例中，核心區具有20個或更多個鹼基之長度。在某些實施例中，核心區具有超過20個鹼基之長度。在某些實施例中，核心區具有2個鹼基之長度。在某些實施例中，核心區具有3個鹼基之長度。在某些實施例中，核心區具有4個鹼基之長度。在某些實施例中，核心區具有5個鹼基之長度。在某些實施例中，核心區具有6個鹼基之長度。在某些實施例中，核心區具有7個鹼基之長度。在某些實施例中，核心區具有8個鹼基之長度。在某些實施例中，核心區具有9個鹼基之長度。在某些實施例中，核心區具有10個鹼基之長度。在某些實施例中，核心區具有11個鹼基之長度。在某些實施例中，核心區具有12個鹼基之長度。在某些實施例中，核心區具有13個鹼基之長度。在某些實施例中，核心區具有14個鹼基之長度。在某些實施例中，核心區具有15個鹼基之長度。在某些實施例中，核心區具有16個鹼基之長度。在某些實施例中，核心區具有17個鹼基之長度。在某些實施例中，核心區具有18個鹼基之長度。在某些實施例中，核心區具有19個鹼基之長度。在某些實施例中，核心區具有20個鹼基之長度。
在一些實施例中，核心包含一或多個對掌性核苷酸間鍵聯。在 一些實施例中，核心包含一或多個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，核心獨立地包含一或多個對掌性核苷酸間鍵聯及一或多個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，核心不含磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各核心鍵聯為對掌性核苷酸間鍵聯。
在一些實施例中，核心包含至少一個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，核心包含至少兩個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心包含至少三個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心包含至少四個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心包含至少五個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心包含至少六個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心包含至少七個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心包含至少八個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心包含至少九個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心包含至少十個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心包含至少11個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心包含至少12個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心包含至少13個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心包含至少14個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心包含至少15個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心包含至少16個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心包含至少17個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心包含至少18個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心包含至少19個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心包含至少20個對掌性核苷酸間鍵聯。
在一些實施例中，核心包含一個天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，核心包含兩個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心包含三個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心包含四個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心包含五個對掌性核苷酸間鍵 聯。在一些實施例中，核心包含六個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心包含七個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心包含八個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心包含九個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心包含十個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心包含11個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心包含12個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心包含13個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心包含14個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心包含15個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心包含16個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心包含17個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心包含18個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心包含19個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心包含20個對掌性核苷酸間鍵聯。
在一些實施例中，核心區之主鏈對掌性中心模式包含(Sp)m(Rp)n、(Rp)n(Sp)m、(Np)t(Rp)n(Sp)m或(Sp)t(Rp)n(Sp)m，其中m、n、t及Np各自獨立地如本發明中所定義及描述。在一些實施例中，核心區之主鏈對掌性中心模式包含(Sp)m(Rp)n、(Rp)n(Sp)m、(Np)t(Rp)n(Sp)m或(Sp)t(Rp)n(Sp)m。在一些實施例中，核心區之主鏈對掌性中心模式包含(Sp)m(Rp)n。在一些實施例中，核心區之主鏈對掌性中心模式包含(Sp)m(Rp)n，其中m>2且n為1。在一些實施例中，核心區之主鏈對掌性中心模式包含(Rp)n(Sp)m。在一些實施例中，核心區之主鏈對掌性中心模式包含(Rp)n(Sp)m，其中m>2且n為1。在一些實施例中，核心區之主鏈對掌性中心模式包含(Np)t(Rp)n(Sp)m。在一些實施例中，核心區之主鏈對掌性中心模式包含(Np)t(Rp)n(Sp)m，其中m>2且n為1。在一些實施例中，核心區之主鏈對掌性中心模式包含(Np)t(Rp)n(Sp)m，其中t>2，m>2且n為1。在一些實施例中，核心區 之主鏈對掌性中心模式包含(Sp)t(Rp)n(Sp)m。在一些實施例中，核心區之主鏈對掌性中心模式包含(Sp)t(Rp)n(Sp)m，其中m>2且n為1。在一些實施例中，核心區之主鏈對掌性中心模式包含(Sp)t(Rp)n(Sp)m，其中t>2，m>2且n為1。本發明尤其證明，在一些實施例中，該等模式可提供及/或增強目標序列(例如RNA序列)之受控裂解、改良裂解速率、選擇性等。例示性主鏈對掌性中心模式描述於本發明中。
在一些實施例中，核心區中至少60%之對掌性核苷酸間鍵聯為Sp。在一些實施例中，核心區中至少65%之對掌性核苷酸間鍵聯為Sp。在一些實施例中，核心區中至少66%之對掌性核苷酸間鍵聯為Sp。在一些實施例中，核心區中至少67%之對掌性核苷酸間鍵聯為Sp。在一些實施例中，核心區中至少70%之對掌性核苷酸間鍵聯為Sp。在一些實施例中，核心區中至少75%之對掌性核苷酸間鍵聯為Sp。在一些實施例中，核心區中至少80%之對掌性核苷酸間鍵聯為Sp。在一些實施例中，核心區中至少85%之對掌性核苷酸間鍵聯為Sp。在一些實施例中，核心區中至少90%之對掌性核苷酸間鍵聯為Sp。在一些實施例中，核心區中至少95%之對掌性核苷酸間鍵聯為Sp。
在一些實施例中，翼-核心-翼(亦即，X-Y-X)基元用數字表示為例如5-10-4，意謂連接至核心之5'端的翼之長度為5個鹼基，核心區之長度為10個鹼基，且連接至核心之3'端的翼區之長度為4個鹼基。在一些實施例中，翼-核心-翼基元為以下中之任一者：例如2-16-2、3-14-3、4-12-4、5-10-5、2-9-6、3-9-3、3-9-4、3-9-5、4-7-4、4-9-3、4-9-4、4-9-5、4-10-5、4-11-4、4-11-5、5-7-5、5-8-6、8-7-5、7-7-6、5-9-3、5-9-5、5-10-4、5-10-5、6-7-6、6-8-5及6-9-2等。在某些實施例中，翼-核心-翼基元為5-10-5。在某些實施例中，翼-核心-翼基元為7-7-6。在某些實施例中，翼-核心-翼基元為8-7-5。
在一些實施例中，翼-核心基元為5-15、6-14、7-13、8-12、9-12等。在一些實施例中，核心-翼基元為5-15、6-14、7-13、8-12、9-12等。
在一些實施例中，該等翼-核心-翼(亦即，X-Y-X)基元之所提供寡核苷酸之核苷間鍵聯皆為經修飾之對掌性磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，該等翼-核心-翼(亦即，X-Y-X)基元之所提供寡核苷酸之核苷間鍵聯皆為對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，該等翼-核心-翼基元之所提供寡核苷酸之對掌性核苷酸間鍵聯為至少約10%、20%、30%、40%、50%、50%、70%、80%或90%經修飾之對掌性磷酸酯核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，該等翼-核心-翼基元之所提供寡核苷酸之對掌性核苷酸間鍵聯為至少約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，該等翼-核心-翼基元之所提供寡核苷酸之對掌性核苷酸間鍵聯為至少約10%、20%、30%、40%、50%、50%、70%、80%或90%呈Sp構形之對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯。
在一些實施例中，翼-核心-翼基元之各翼區視情況含有經修飾之對掌性磷酸酯核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，翼-核心-翼基元之各翼區視情況含有對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，翼-核心-翼基元之各翼區含有對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，翼-核心-翼基元之兩個翼區具有相同核苷酸間鍵聯立體化學。在一些實施例中，兩個翼區具有不同核苷酸間鍵聯立體化學。在一些實施例中，翼中之各核苷酸間鍵聯獨立地為對掌性核苷酸間鍵聯。
在一些實施例中，翼-核心-翼基元之核心區視情況含有經修飾之對掌性磷酸酯核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，翼-核心-翼基元之核心區視情況含有對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯。在一些實施例中， 翼-核心-翼基元之核心區包含核苷酸間鍵聯立體化學之重複模式。在一些實施例中，翼-核心-翼基元之核心區具有核苷酸間鍵聯立體化學之重複模式。在一些實施例中，翼-核心-翼基元之核心區包含核苷酸間鍵聯立體化學之重複模式，其中該重複模式為(Sp)m Rp或Rp(Sp)m，其中m為1-50。在一些實施例中，翼-核心-翼基元之核心區包含核苷酸間鍵聯立體化學之重複模式，其中該重複模式為(Sp)m Rp或Rp(Sp)m，其中m為1-50。在一些實施例中，翼-核心-翼基元之核心區包含核苷酸間鍵聯立體化學之重複模式，其中該重複模式為(Sp)m Rp，其中m為1-50。在一些實施例中，翼-核心-翼基元之核心區包含核苷酸間鍵聯立體化學之重複模式，其中該重複模式為Rp(Sp)m，其中m為1-50。在一些實施例中，翼-核心-翼基元之核心區具有核苷酸間鍵聯立體化學之重複模式，其中該重複模式為(Sp)m Rp或Rp(Sp)m，其中m為1-50。在一些實施例中，翼-核心-翼基元之核心區具有核苷酸間鍵聯立體化學之重複模式，其中該重複模式為(Sp)m Rp，其中m為1-50。在一些實施例中，翼-核心-翼基元之核心區具有核苷酸間鍵聯立體化學之重複模式，其中該重複模式為Rp(Sp)m，其中m為1-50。在一些實施例中，翼-核心-翼基元之核心區具有核苷酸間鍵聯立體化學之重複模式，其中該重複模式為包含至少33%呈S構形之核苷酸間鍵聯的基元。在一些實施例中，翼-核心-翼基元之核心區具有核苷酸間鍵聯立體化學之重複模式，其中該重複模式為包含至少50%呈S構形之核苷酸間鍵聯的基元。在一些實施例中，翼-核心-翼基元之核心區具有核苷酸間鍵聯立體化學之重複模式，其中該重複模式為包含至少66%呈S構形之核苷酸間鍵聯的基元。在一些實施例中，翼-核心-翼基元之核心區具有核苷酸間鍵聯立體化學之重複模式，其中該重複模式為選自RpRpSp及SpSpRp之重複三元組基元。在一些實施例中，翼-核心-翼基元之核心區具有核苷酸間鍵聯立 體化學之重複模式，其中該重複模式為重複的RpRpSp。在一些實施例中，翼-核心-翼基元之核心區具有核苷酸間鍵聯立體化學之重複模式，其中該重複模式為重複的SpSpRp。
在一些實施例中，本發明提供一種寡核苷酸類型之對掌性受控寡核苷酸組合物，其核心區中之主鏈對掌性中心模式包含(Sp)m Rp或Rp(Sp)m。在一些實施例中，本發明提供一種寡核苷酸類型之對掌性受控寡核苷酸組合物，其核心區中之主鏈對掌性中心模式包含Rp(Sp)m。在一些實施例中，本發明提供一種寡核苷酸類型之對掌性受控寡核苷酸組合物，其核心區中之主鏈對掌性中心模式包含(Sp)m Rp。在一些實施例中，m為2。在一些實施例中，本發明提供一種寡核苷酸類型之對掌性受控寡核苷酸組合物，其核心區中之主鏈對掌性中心模式包含Rp(Sp)2。在一些實施例中，本發明提供一種寡核苷酸類型之對掌性受控寡核苷酸組合物，其核心區中之主鏈對掌性中心模式包含(Sp)2 Rp(Sp)2。在一些實施例中，本發明提供一種寡核苷酸類型之對掌性受控寡核苷酸組合物，其核心區中之主鏈對掌性中心模式包含(Rp)2 Rp(Sp)2。在一些實施例中，本發明提供一種寡核苷酸類型之對掌性受控寡核苷酸組合物，其核心區中之主鏈對掌性中心模式包含RpSpRp(Sp)2。在一些實施例中，本發明提供一種寡核苷酸類型之對掌性受控寡核苷酸組合物，其核心區中之主鏈對掌性中心模式包含SpRpRp(Sp)2。在一些實施例中，本發明提供一種寡核苷酸類型之對掌性受控寡核苷酸組合物，其核心區中之主鏈對掌性中心模式包含(Sp)2 Rp。
在一些實施例中，本發明提供一種寡核苷酸類型之對掌性受控寡核苷酸組合物，其主鏈對掌性中心模式包含(Sp)m Rp或Rp(Sp)m。在一些實施例中，本發明提供一種寡核苷酸類型之對掌性受控寡核苷酸組合物，其主鏈對掌性中心模式包含Rp(Sp)m。在一些實施例中，本 發明提供一種寡核苷酸類型之對掌性受控寡核苷酸組合物，其主鏈對掌性中心模式包含(Sp)m Rp。在一些實施例中，m為2。在一些實施例中，本發明提供一種寡核苷酸類型之對掌性受控寡核苷酸組合物，其主鏈對掌性中心模式包含Rp(Sp)2。在一些實施例中，本發明提供一種寡核苷酸類型之對掌性受控寡核苷酸組合物，其主鏈對掌性中心模式包含(Sp)2 Rp(Sp)2。在一些實施例中，本發明提供一種寡核苷酸類型之對掌性受控寡核苷酸組合物，其主鏈對掌性中心模式包含(Rp)2 Rp(Sp)2。在一些實施例中，本發明提供一種寡核苷酸類型之對掌性受控寡核苷酸組合物，其主鏈對掌性中心模式包含RpSpRp(Sp)2。在一些實施例中，本發明提供一種寡核苷酸類型之對掌性受控寡核苷酸組合物，其主鏈對掌性中心模式包含SpRpRp(Sp)2。在一些實施例中，本發明提供一種寡核苷酸類型之對掌性受控寡核苷酸組合物，其主鏈對掌性中心模式包含(Sp)2 Rp。
如本文所定義，m為1-50。在一些實施例中，m為1。在一些實施例中，m為2-50。在一些實施例中，m為2、3、4、5、6、7或8。在一些實施例中，m為3、4、5、6、7或8。在一些實施例中，m為4、5、6、7或8。在一些實施例中，m為5、6、7或8。在一些實施例中，m為6、7或8。在一些實施例中，m為7或8。在一些實施例中，m為2。在一些實施例中，m為3。在一些實施例中，m為4。在一些實施例中，m為5。在一些實施例中，m為6。在一些實施例中，m為7。在一些實施例中，m為8。在一些實施例中，m為9。在一些實施例中，m為10。在一些實施例中，m為11。在一些實施例中，m為12。在一些實施例中，m為13。在一些實施例中，m為14。在一些實施例中，m為15。在一些實施例中，m為16。在一些實施例中，m為17。在一些實施例中，m為18。在一些實施例中，m為19。在一些實施例中，m為20。在一些實施例中，m為21。在一些實施例中，m為22。在一些實 施例中，m為23。在一些實施例中，m為24。在一些實施例中，m為25。在一些實施例中，m大於25。
在一些實施例中，重複模式為(Sp)m(Rp)n，其中n為1-10，且m獨立地如上文所定義且如本文所述。在一些實施例中，本發明提供一種寡核苷酸類型之對掌性受控寡核苷酸組合物，其主鏈對掌性中心模式包含(Sp)m(Rp)n。在一些實施例中，本發明提供一種寡核苷酸類型之對掌性受控寡核苷酸組合物，其核心區中之主鏈對掌性中心模式包含(Sp)m(Rp)n。在一些實施例中，重複模式為(Rp)n(Sp)m，其中n為1-10，且m獨立地如上文所定義且如本文所述。在一些實施例中，本發明提供一種寡核苷酸類型之對掌性受控寡核苷酸組合物，其主鏈對掌性中心模式包含(Rp)n(Sp)m。在一些實施例中，本發明提供一種寡核苷酸類型之對掌性受控寡核苷酸組合物，其核心區中之主鏈對掌性中心模式包含(Rp)n(Sp)m。在一些實施例中，(Rp)n(Sp)m為(Rp)(Sp)2。在一些實施例中，(Sp)n(Rp)m為(Sp)2(Rp)。
在一些實施例中，本發明提供一種寡核苷酸類型之對掌性受控寡核苷酸組合物，其主鏈對掌性中心模式包含(Sp)m(Rp)n(Sp)t。在一些實施例中，重複模式為(Sp)m(Rp)n(Sp)t，其中n為1-10，t為1-50，且m如上文所定義且如本文所述。在一些實施例中，本發明提供一種寡核苷酸類型之對掌性受控寡核苷酸組合物，其核心區中之主鏈對掌性中心模式包含(Sp)m(Rp)n(Sp)t。在一些實施例中，重複模式為(Sp)t(Rp)n(Sp)m，其中n為1-10，t為1-50，且m如上文所定義且如本文所述。在一些實施例中，本發明提供一種寡核苷酸類型之對掌性受控寡核苷酸組合物，其主鏈對掌性中心模式包含(Sp)t(Rp)n(Sp)m。在一些實施例中，本發明提供一種寡核苷酸類型之對掌性受控寡核苷酸組合物，其核心區中之主鏈對掌性中心模式包含(Sp)t(Rp)n(Sp)m。
在一些實施例中，重複模式為(Np)t(Rp)n(Sp)m，其中n為1-10，t 為1-50，Np獨立地為Rp或Sp，且m如上文所定義且如本文所述。在一些實施例中，本發明提供一種寡核苷酸類型之對掌性受控寡核苷酸組合物，其主鏈對掌性中心模式包含(Np)t(Rp)n(Sp)m。在一些實施例中，本發明提供一種寡核苷酸類型之對掌性受控寡核苷酸組合物，其核心區中之主鏈對掌性中心模式包含(Np)t(Rp)n(Sp)m。在一些實施例中，重複模式為(Np)m(Rp)n(Sp)t，其中n為1-10，t為1-50，Np獨立地為Rp或Sp，且m如上文所定義且如本文所述。在一些實施例中，本發明提供一種寡核苷酸類型之對掌性受控寡核苷酸組合物，其主鏈對掌性中心模式包含(Np)m(Rp)n(Sp)t。在一些實施例中，本發明提供一種寡核苷酸類型之對掌性受控寡核苷酸組合物，其核心區中之主鏈對掌性中心模式包含(Np)m(Rp)n(Sp)t。在一些實施例中，Np為Rp。在一些實施例中，Np為Sp。在一些實施例中，所有Np皆相同。在一些實施例中，所有Np皆為Sp。在一些實施例中，至少一個Np不同於另一個Np。在一些實施例中，t為2。
如本文所定義，n為1-10。在一些實施例中，n為1、2、3、4、5、6、7或8。在一些實施例中，n為1。在一些實施例中，n為2、3、4、5、6、7或8。在一些實施例中，n為3、4、5、6、7或8。在一些實施例中，n為4、5、6、7或8。在一些實施例中，n為5、6、7或8。在一些實施例中，n為6、7或8。在一些實施例中，n為7或8。在一些實施例中，n為1。在一些實施例中，n為2。在一些實施例中，n為3。在一些實施例中，n為4。在一些實施例中，n為5。在一些實施例中，n為6。在一些實施例中，n為7。在一些實施例中，n為8。在一些實施例中，n為9。在一些實施例中，n為10。
如本文所定義，t為1-50。在一些實施例中，t為1。在一些實施例中，t為2-50。在一些實施例中，t為2、3、4、5、6、7或8。在一些實施例中，t為3、4、5、6、7或8。在一些實施例中，t為4、5、6、7或 8。在一些實施例中，t為5、6、7或8。在一些實施例中，t為6、7或8。在一些實施例中，t為7或8。在一些實施例中，t為2。在一些實施例中，t為3。在一些實施例中，t為4。在一些實施例中，t為5。在一些實施例中，t為6。在一些實施例中，t為7。在一些實施例中，t為8。在一些實施例中，t為9。在一些實施例中，t為10。在一些實施例中，t為11。在一些實施例中，t為12。在一些實施例中，t為13。在一些實施例中，t為14。在一些實施例中，t為15。在一些實施例中，t為16。在一些實施例中，t為17。在一些實施例中，t為18。在一些實施例中，t為19。在一些實施例中，t為20。在一些實施例中，t為21。在一些實施例中，t為22。在一些實施例中，t為23。在一些實施例中，t為24。在一些實施例中，t為25。在一些實施例中，t大於25。
在一些實施例中，m及t中之至少一者大於2。在一些實施例中，m及t中之至少一者大於3。在一些實施例中，m及t中之至少一者大於4。在一些實施例中，m及t中之至少一者大於5。在一些實施例中，m及t中之至少一者大於6。在一些實施例中，m及t中之至少一者大於7。在一些實施例中，m及t中之至少一者大於8。在一些實施例中，m及t中之至少一者大於9。在一些實施例中，m及t中之至少一者大於10。在一些實施例中，m及t中之至少一者大於11。在一些實施例中，m及t中之至少一者大於12。在一些實施例中，m及t中之至少一者大於13。在一些實施例中，m及t中之至少一者大於14。在一些實施例中，m及t中之至少一者大於15。在一些實施例中，m及t中之至少一者大於16。在一些實施例中，m及t中之至少一者大於17。在一些實施例中，m及t中之至少一者大於18。在一些實施例中，m及t中之至少一者大於19。在一些實施例中，m及t中之至少一者大於20。在一些實施例中，m及t中之至少一者大於21。在一些實施例中，m及t中之至少一者大於22。在一些實施例中，m及t中之至少一者大於23。在一些實施例中， m及t中之至少一者大於24。在一些實施例中，m及t中之至少一者大於25。
在一些實施例中，m及t中之每一者大於2。在一些實施例中，m及t中之每一者大於3。在一些實施例中，m及t中之每一者大於4。在一些實施例中，m及t中之每一者大於5。在一些實施例中，m及t中之每一者大於6。在一些實施例中，m及t中之每一者大於7。在一些實施例中，m及t中之每一者大於8。在一些實施例中，m及t中之每一者大於9。在一些實施例中，m及t中之每一者大於10。在一些實施例中，m及t中之每一者大於11。在一些實施例中，m及t中之每一者大於12。在一些實施例中，m及t中之每一者大於13。在一些實施例中，m及t中之每一者大於14。在一些實施例中，m及t中之每一者大於15。在一些實施例中，m及t中之每一者大於16。在一些實施例中，m及t中之每一者大於17。在一些實施例中，m及t中之每一者大於18。在一些實施例中，m及t中之每一者大於19。在一些實施例中，m及t中之每一者大於20。
在一些實施例中，m及t之總和大於3。在一些實施例中，m及t之總和大於4。在一些實施例中，m及t之總和大於5。在一些實施例中，m及t之總和大於6。在一些實施例中，m及t之總和大於7。在一些實施例中，m及t之總和大於8。在一些實施例中，m及t之總和大於9。在一些實施例中，m及t之總和大於10。在一些實施例中，m及t之總和大於11。在一些實施例中，m及t之總和大於12。在一些實施例中，m及t之總和大於13。在一些實施例中，m及t之總和大於14。在一些實施例中，m及t之總和大於15。在一些實施例中，m及t之總和大於16。在一些實施例中，m及t之總和大於17。在一些實施例中，m及t之總和大於18。在一些實施例中，m及t之總和大於19。在一些實施例中，m及t之總和大於20。在一些實施例中，m及t之總和大於21。在一些實施例 中，m及t之總和大於22。在一些實施例中，m及t之總和大於23。在一些實施例中，m及t之總和大於24。在一些實施例中，m及t之總和大於25。
在一些實施例中，n為1，且m及t中之至少一者大於1。在一些實施例中，n為1且m及t各自獨立地大於1。在一些實施例中，m>n且t>n。在一些實施例中，(Sp)m(Rp)n(Sp)t為(Sp)2 Rp(Sp)2。在一些實施例中，(Sp)t(Rp)n(Sp)m為(Sp)2 Rp(Sp)2。在一些實施例中，(Sp)t(Rp)n(Sp)m為SpRp(Sp)2。在一些實施例中，(Np)t(Rp)n(Sp)m為(Np)t Rp(Sp)m。在一些實施例中，(Np)t(Rp)n(Sp)m為(Np)2 Rp(Sp)m。在一些實施例中，(Np)t(Rp)n(Sp)m為(Rp)2 Rp(Sp)m。在一些實施例中，(Np)t(Rp)n(Sp)m為(Sp)2 Rp(Sp)m。在一些實施例中，(Np)t(Rp)n(Sp)m為RpSpRp(Sp)m。在一些實施例中，(Np)t(Rp)n(Sp)m為SpRpRp(Sp)m。
在一些實施例中，(Sp)t(Rp)n(Sp)m為SpRpSpSp。在一些實施例中，(Sp)t(Rp)n(Sp)m為(Sp)2 Rp(Sp)2。在一些實施例中，(Sp)t(Rp)n(Sp)m為(Sp)3 Rp(Sp)3。在一些實施例中，(Sp)t(Rp)n(Sp)m為(Sp)4 Rp(Sp)4。在一些實施例中，(Sp)t(Rp)n(Sp)m為(Sp)t Rp(Sp)5。在一些實施例中，(Sp)t(Rp)n(Sp)m為SpRp(Sp)5。在一些實施例中，(Sp)t(Rp)n(Sp)m為(Sp)2 Rp(Sp)5。在一些實施例中，(Sp)t(Rp)n(Sp)m為(Sp)3 Rp(Sp)5。在一些實施例中，(Sp)t(Rp)n(Sp)m為(Sp)4 Rp(Sp)5。在一些實施例中，(Sp)t(Rp)n(Sp)m為(Sp)5 Rp(Sp)5。
在一些實施例中，(Sp)m(Rp)n(Sp)t為(Sp)2 Rp(Sp)2。在一些實施例中，(Sp)m(Rp)n(Sp)t為(Sp)3 Rp(Sp)3。在一些實施例中，(Sp)m(Rp)n(Sp)t為(Sp)4 Rp(Sp)4。在一些實施例中，(Sp)m(Rp)n(Sp)t為(Sp)m Rp(Sp)5。在一些實施例中，(Sp)m(Rp)n(Sp)t為(Sp)2 Rp(Sp)5。在一些實施例中，(Sp)m(Rp)n(Sp)t為(Sp)3 Rp(Sp)5。在一些實施例中，(Sp)m(Rp)n(Sp)t為(Sp)4 Rp(Sp)5。在一些實施例中，(Sp)m(Rp)n(Sp)t為(Sp)5 Rp(Sp)5。
在一些實施例中，核心區包含至少一個Rp核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，翼-核心-翼基元之核心區包含至少一個Rp核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心區包含至少一個Rp硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，翼-核心-翼基元之核心區包含至少一個Rp硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，翼-核心-翼基元之核心區包含僅一個Rp硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心區基元包含至少兩個Rp核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，翼-核心-翼基元之核心區包含至少兩個Rp核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，翼-核心-翼基元之核心區包含至少兩個Rp硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心區包含至少三個Rp核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，翼-核心-翼基元之核心區包含至少三個Rp核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心區包含至少三個Rp硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，翼-核心-翼基元之核心區包含至少三個Rp硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心區包含至少4、5、6、7、8、9或10個Rp核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，翼-核心-翼基元之核心區包含至少4、5、6、7、8、9或10個Rp核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，核心區包含至少4、5、6、7、8、9或10個Rp硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，翼-核心-翼基元之核心區包含至少4、5、6、7、8、9或10個Rp硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯。
在某些實施例中，翼-核心-翼基元為5-10-5基元，其中各翼區之殘基為經2'修飾之殘基。在某些實施例中，翼-核心-翼基元為5-10-5基元，其中各翼區之殘基為經2'-OR1修飾之殘基。在某些實施例中，翼-核心-翼基元為5-10-5基元，其中各翼區之殘基為經2'-MOE修飾之殘基。在某些實施例中，翼-核心-翼基元為5-10-5基元，其中各翼區之殘基為經2'-OMe修飾之殘基。在某些實施例中，翼-核心-翼基元為5-10-5基元，其中核心區中之殘基為2'-去氧核苷殘基。在某些實施例 中，翼-核心-翼基元為5-10-5基元，其中所有核苷酸間鍵聯皆為硫代磷酸酯鍵聯。在某些實施例中，翼-核心-翼基元為5-10-5基元，其中所有核苷酸間鍵聯皆為對掌性硫代磷酸酯鍵聯。在某些實施例中，翼-核心-翼基元為5-10-5基元，其中各翼區之殘基為經2'修飾之殘基，核心區中之殘基為2'-去氧核苷殘基，且核心區中之所有核苷酸間鍵聯皆為對掌性硫代磷酸酯鍵聯。在某些實施例中，翼-核心-翼基元為5-10-5基元，其中各翼區之殘基為經2'-OR1修飾之殘基，核心區中之殘基為2'-去氧核苷殘基，且核心區中之所有核苷酸間鍵聯皆為對掌性硫代磷酸酯鍵聯。在某些實施例中，翼-核心-翼基元為5-10-5基元，其中各翼區之殘基為經2'-MOE修飾之殘基，核心區中之殘基為2'-去氧核苷殘基，且核心區中之所有核苷酸間鍵聯皆為對掌性硫代磷酸酯鍵聯。在某些實施例中，翼-核心-翼基元為5-10-5基元，其中各翼區之殘基為經2'-OMe修飾之殘基，核心區中之殘基為2'-去氧核苷殘基，且核心區中之所有核苷酸間鍵聯皆為對掌性硫代磷酸酯鍵聯。
在一些實施例中，在「X」翼區之殘基不為經2'-MOE修飾之殘基。在某些實施例中，翼-核心基元為在「X」翼區之殘基不為經2'-MOE修飾之殘基的基元。在某些實施例中，核心-翼基元為在「X」翼區之殘基不為經2'-MOE修飾之殘基的基元。在某些實施例中，翼-核心-翼基元為在各「X」翼區之殘基不為經2'-MOE修飾之殘基的基元。在某些實施例中，翼-核心-翼基元為5-10-5基元，其中在各「X」翼區之殘基不為經2'-MOE修飾之殘基。在某些實施例中，翼-核心-翼基元為5-10-5基元，其中核心「Y」區中之殘基為2'-去氧核苷殘基。在某些實施例中，翼-核心-翼基元為5-10-5基元，其中所有核苷酸間鍵聯皆為硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯。在某些實施例中，翼-核心-翼基元為5-10-5基元，其中所有核苷酸間鍵聯皆為對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯。在某些實施例中，翼-核心-翼基元為5-10-5基元，其中在 各「X」翼區之殘基不為經2'-MOE修飾之殘基，核心「Y」區中之殘基為2'-去氧核苷，且所有核苷酸間鍵聯皆為對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯。
如一般熟習此項技術者所理解，所提供之寡核苷酸及組合物尤其可靶向大量核酸聚合物。舉例而言，在一些實施例中，所提供之寡核苷酸及組合物可靶向核酸序列之轉錄物，其中寡核苷酸之共同鹼基序列(例如，某一寡核苷酸類型之鹼基序列)包含或為與轉錄物之序列互補的序列。在一些實施例中，共同鹼基序列包含與目標序列互補之序列。在一些實施例中，共同鹼基序列為與目標序列互補之序列。在一些實施例中，共同鹼基序列包含或為與目標序列100%互補之序列。在一些實施例中，共同鹼基序列包含與目標序列100%互補之序列。在一些實施例中，共同鹼基序列為與目標序列100%互補之序列。在一些實施例中，核心中之共同鹼基序列包含或為與目標序列互補之序列。在一些實施例中，核心中之共同鹼基序列包含與目標序列互補之序列。在一些實施例中，核心中之共同鹼基序列為與目標序列%互補之序列。在一些實施例中，核心中之共同鹼基序列包含或為與目標序列100%互補之序列。在一些實施例中，核心中之共同鹼基序列包含與目標序列100%互補之序列。在一些實施例中，核心中之共同鹼基序列為與目標序列100%互補之序列。
在一些實施例中，如本發明中所描述，所提供之寡核苷酸及組合物可提供新裂解模式、較高裂解速率、較高裂解程度、較高裂解選擇性等。在一些實施例中，所提供組合物可選擇性抑制(例如，裂解)來自目標核酸序列之轉錄物，針對該目標核酸序列，在個體或群體內存在一或多個類似序列，目標序列及其類似序列各自含有特異性核苷酸特徵序列元件，該元件相對於類似序列定義目標序列。在一些實施例中，舉例而言，目標序列為野生型對偶基因或基因之複本，且類似 序列為具有非常類似鹼基序列之序列，例如具有SNP、突變等之序列；在一些實施例中，特徵序列元件相對於類似序列定義目標序列：舉例而言，當目標序列為亨廷頓氏病相關之在rs362307處含T(在相應RNA中為U；非疾病相關之對偶基因為C)的對偶基因時，特徵序列包含此SNP。
在一些實施例中，類似序列與目標序列具有大於60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%之序列同源性。在一些實施例中，目標序列為包含一或多個突變及/或SNP之核酸序列之致病複本，且類似序列為不致病之複本(野生型)。在一些實施例中，目標序列包含突變，其中類似序列為相應野生型序列。在一些實施例中，目標序列為突變型對偶基因，而類似序列為野生型對偶基因。在一些實施例中，目標序列包含與致病對偶基因相關之SNP，而類似序列包含與致病對偶基因不相關之相同SNP。在一些實施例中，目標序列中與所提供之寡核苷酸組合物之共同鹼基序列互補的區域與類似序列之對應區具有大於60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%之序列同源性。在一些實施例中，目標序列中與所提供之寡核苷酸組合物之共同鹼基序列互補的區域與類似序列之對應區相差小於5個、小於4個、小於3個、小於2個或僅1個鹼基對。在一些實施例中，目標序列中與所提供之寡核苷酸組合物之共同鹼基序列互補的區域與類似序列之對應區僅突變位點或SNP位點不同。在一些實施例中，目標序列中與所提供之寡核苷酸組合物之共同鹼基序列互補的區域與類似序列之對應區僅突變位點不同。在一些實施例中，目標序列中與所提供之寡核苷酸組合物之共同鹼基序列互補的區域與類似序列之對應區僅SNP位點不同。
在一些實施例中，共同鹼基序列包含或為與特徵序列元件互補 之序列。在一些實施例中，共同鹼基序列包含與特徵序列元件互補之序列。在一些實施例中，共同鹼基序列為與特徵序列元件互補之序列。在一些實施例中，共同鹼基序列包含或為與特徵序列元件100%互補之序列。在一些實施例中，共同鹼基序列包含與特徵序列元件100%互補之序列。在一些實施例中，共同鹼基序列為與特徵序列元件100%互補之序列。在一些實施例中，核心中之共同鹼基序列包含或為與特徵序列元件互補之序列。在一些實施例中，核心中之共同鹼基序列包含與特徵序列元件互補之序列。在一些實施例中，核心中之共同鹼基序列包含與特徵序列元件互補之序列。在一些實施例中，核心中之共同鹼基序列包含或為與特徵序列元件100%互補之序列。在一些實施例中，核心中之共同鹼基序列包含與特徵序列元件100%互補之序列。在一些實施例中，核心中之共同鹼基序列為與特徵序列元件100%互補之序列。
在一些實施例中，特徵序列元件包含或為突變。在一些實施例中，特徵序列元件包含突變。在一些實施例中，特徵序列元件為突變。在一些實施例中，特徵序列元件包含或為點突變。在一些實施例中，特徵序列元件包含點突變。在一些實施例中，特徵序列元件為點突變。在一些實施例中，特徵序列元件包含或為SNP。在一些實施例中，特徵序列元件包含SNP。在一些實施例中，特徵序列元件為SNP。
在一些實施例中，共同鹼基序列100%匹配目標序列，但其不100%匹配目標序列之類似序列。舉例而言，在一些實施例中，共同鹼基序列匹配目標核酸序列之致病複本或對偶基因中之突變，但不匹配突變位點之非致病複本或對偶基因；在一些其他實施例中，共同鹼基序列匹配目標核酸序列之致病對偶基因中之SNP，但不匹配相應位點之非致病對偶基因。在一些實施例中，核心中之共同鹼基序列 100%匹配目標序列，但其不100%匹配目標序列之類似序列。舉例而言，在WV-1092中，其共同鹼基序列(及其核心中之共同鹼基序列)匹配在rs362307之疾病相關之U，但不匹配非疾病相關(野生型)之C。
本發明尤其認識到，鹼基序列會對寡核苷酸特性造成影響。在一些實施例中，當採用具有某一鹼基序列之寡核苷酸抑制目標時，例如經由涉及核糖核酸酶H之路徑，該鹼基序列會對目標之裂解模式造成影響：舉例而言，圖33證明，在結構上類似(全硫代磷酸酯鍵聯，全立體無規)之寡核苷酸具有不同序列，可具有不同裂解模式。在一些實施例中，非立體無規寡核苷酸組合物(例如，在本發明中所提供之某些寡核苷酸組合物)之共同鹼基序列為以下鹼基序列，當應用於DNA寡核苷酸組合物(例如，ONT-415)或立體無規全硫代磷酸酯寡核苷酸組合物(例如，WV-905)時，DNA之裂解模式(DNA裂解模式)及/或立體無規全硫代磷酸酯組合物之裂解模式(立體無規裂解模式)具有在特徵序列元件內或在特徵序列元件附近之裂解位點。在一些實施例中，在內部或在附近之裂解位點係在與共同序列之核心區互補之序列內。在一些實施例中，在內部或在附近之裂解位點係在與共同序列之核心區100%互補之序列內。
在一些實施例中，共同鹼基序列為在其DNA裂解模式中在特徵序列元件內或在特徵序列元件附近具有裂解位點的鹼基序列。在一些實施例中，共同鹼基序列為在其DNA裂解模式中在特徵序列元件內具有裂解位點的鹼基序列。在一些實施例中，共同鹼基序列為在其DNA裂解模式中在特徵序列元件附近具有裂解位點的鹼基序列。在一些實施例中，共同鹼基序列為在其DNA裂解模式中在特徵序列元件之突變或SNP附近具有裂解位點的鹼基序列。在一些實施例中，共同鹼基序列為在其DNA裂解模式中在突變附近具有裂解位點的鹼基序列。在一些實施例中，共同鹼基序列為在其DNA裂解模式中在SNP附近具有裂 解位點的鹼基序列。
在一些實施例中，共同鹼基序列為在其立體無規裂解模式中在特徵序列元件內或在特徵序列元件附近具有裂解位點的鹼基序列。在一些實施例中，共同鹼基序列為在其立體無規裂解模式中在特徵序列元件內具有裂解位點的鹼基序列。在一些實施例中，共同鹼基序列為在其立體無規裂解模式中在特徵序列元件附近具有裂解位點的鹼基序列。在一些實施例中，共同鹼基序列為在其立體無規裂解模式中在特徵序列元件之突變或SNP附近具有裂解位點的鹼基序列。在一些實施例中，共同鹼基序列為在其立體無規裂解模式中在突變附近具有裂解位點的鹼基序列。在一些實施例中，共同鹼基序列為在其立體無規裂解模式中在SNP附近具有裂解位點的鹼基序列。
在一些實施例中，共同鹼基序列為在其DNA及/或立體無規裂解模式中在特徵序列元件之突變附近具有裂解位點的鹼基序列。在一些實施例中，共同鹼基序列為在其DNA及/或立體無規裂解模式中在突變附近具有裂解位點的鹼基序列。在一些實施例中，共同鹼基序列為在其DNA裂解模式中在突變附近具有裂解位點的鹼基序列。在一些實施例中，在突變附近之裂解位點係在突變處，亦即，裂解位點係在突變核苷酸之核苷酸間鍵聯處(例如，若突變係在目標序列GGG A CGTCTT中之A處，則裂解係在A與C之間)。在一些實施例中，在附近之裂解位點為遠離突變0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個核苷酸間鍵聯之裂解位點，其中0意謂在突變位點處裂解(例如，若突變係在目標序列GGG A CGTCTT之A處，則遠離0個核苷酸間鍵聯之裂解係在A與C之間；遠離突變1個核苷酸間鍵聯之裂解位點在朝向5'遠離突變為在G與A之間或在朝向3'遠離突變為在C與G之間)。在一些實施例中，在附近之裂解位點為遠離突變0、1、2、3、4或5個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向5'遠離 突變0、1、2、3、4或5個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向3'遠離突變0、1、2、3、4或5個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為遠離突變0、1、2、3、4或5個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向5'遠離突變0、1、2、3、4或5個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向3'遠離突變0、1、2、3、4或5個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為遠離突變0、1、2、3或4個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向5'遠離突變0、1、2、3或4個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向3'遠離突變0、1、2、3或4個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為遠離突變0、1、2或3個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向5'遠離突變0、1、2或3個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向3'遠離突變0、1、2或3個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為遠離突變0、1或2個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向5'遠離突變0、1或2個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向3'遠離突變0、1或2個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為遠離突變0或1個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向5'遠離突變0或1個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向3'遠離突變0或1個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為遠離突變0個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為遠離突變一個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向5' 遠離突變一個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向3'遠離突變一個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為遠離突變兩個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向5'遠離突變兩個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向3'遠離突變兩個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為遠離突變三個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向5'遠離突變三個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向3'遠離突變三個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為遠離突變四個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向5'遠離突變四個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向3'遠離突變四個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為遠離突變五個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向5'遠離突變五個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向3'遠離突變五個核苷酸間鍵聯之裂解位點。
在一些實施例中，共同鹼基序列為在其DNA及/或立體無規裂解模式中在特徵序列元件之SNP附近具有裂解位點的鹼基序列。在一些實施例中，共同鹼基序列為在其DNA及/或立體無規裂解模式中在SNP附近具有裂解位點的鹼基序列。在一些實施例中，共同鹼基序列為在其DNA裂解模式中在SNP附近具有裂解位點的鹼基序列。在一些實施例中，在SNP附近之裂解位點係在SNP處，亦即，裂解位點係在SNP處之核苷酸之核苷酸間鍵聯處(例如，關於WV-905之目標，G*G*C*A*C*A*A*G*G*G*C*A*C*A*G*A*C*T*T*C，其包含rUrUrUrGrGrArArGrUrCrUrGrU rGrCrCrCrUrUrGrUrGrCrCrC(rs362307 加粗)，裂解係在加粗rU與緊跟其後之加底線rG之間)。在一些實施例中，在附近之裂解位點為遠離SNP 0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個核苷酸間鍵聯之裂解位點，其中0意謂在SNP處裂解(例如，關於WV-905之目標，G*G*C*A*C*A*A*G*G*G*C*A*C*A*G*A*C*T*T*C，其包含rUrUrUrGrGrArArGrUrCrUrGrU rGrCrCrCrUrUrGrUrGrCrCrC(rs362307加粗)，關於遠離0個核苷酸間鍵聯，裂解係在加粗rU與緊跟其後之加底線rG之間；遠離SNP(加底線：rUrUrUrGrGrArArGrUrCrUrGrU rGrCrCrCrUrUrGrUrGrCrCrC)1個核苷酸間鍵聯之裂解位點係在朝向5'遠離SNP之rG與rU之間；或在朝向SNP(加底線：rUrUrUrGrGrArArGrUrCrUrGrU rGrCrCrCrUrUrGrUrGrCrCrC)、之3'端之rG與rC之間)。在一些實施例中，在附近之裂解位點為遠離SNP 0、1、2、3、4或5個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向5'遠離SNP 0、1、2、3、4或5個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向3'遠離SNP 0、1、2、3、4或5個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為遠離SNP 0、1、2、3、4或5個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向5'遠離SNP 0、1、2、3、4或5個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向3'遠離SNP 0、1、2、3、4或5個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為遠離SNP 0、1、2、3或4個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向5'遠離SNP 0、1、2、3或4個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向3'遠離SNP 0、1、2、3或4個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為遠離SNP 0、1、2或3個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向5'遠離SNP 0、1、2或3個核苷酸間 鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向3'遠離SNP 0、1、2或3個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為遠離SNP 0、1或2個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向5'遠離SNP 0、1或2個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向3'遠離SNP 0、1或2個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為遠離SNP 0或1個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向5'遠離SNP 0或1個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向3'遠離SNP 0或1個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為遠離SNP 0個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為遠離SNP一個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向5'遠離SNP一個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向3'遠離SNP一個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為遠離SNP兩個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向5'遠離SNP兩個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向3'遠離SNP兩個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為遠離SNP三個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向5'遠離SNP三個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向3'遠離SNP三個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為遠離SNP四個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向5'遠離SNP四個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向3'遠離SNP四個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解 位點為遠離SNP五個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向5'遠離SNP五個核苷酸間鍵聯之裂解位點。在一些實施例中，在附近之裂解位點為朝向3'遠離SNP五個核苷酸間鍵聯之裂解位點。舉例而言，圖33證明，WV-905序列之立體無規裂解模式在SNP處(在CUGU與GCCC之間)、遠離兩個核苷酸間鍵聯處(在GUCU與GUGC之間及在GUGC與CCUU之間)、遠離三個核苷酸間鍵聯處(在UGCC與CUUG之間)、遠離四個核苷酸間鍵聯處(在GCCC與UUGU之間及在AAGU與CUGU之間)及遠離五個核苷酸間鍵聯處(在CCCU與UGUG之間)具有裂解位點。
在一些實施例中，在特徵序列元件內或在特徵序列元件附近(例如在突變、SNP等附近)之裂解位點為DNA及/或立體無規裂解模式之主要裂解位點。在一些實施例中，在特徵序列元件內或在特徵序列元件附近之裂解位點為DNA裂解模式之主要裂解位點。在一些實施例中，在特徵序列元件內或在特徵序列元件附近之裂解位點為立體無規裂解模式之主要裂解位點。在一些實施例中，在突變附近之裂解位點為DNA裂解模式之主要裂解位點。在一些實施例中，在突變附近之裂解位點為立體無規裂解模式之主要裂解位點。在一些實施例中，在SNP附近之裂解位點為DNA裂解模式之主要裂解位點。在一些實施例中，在SNP附近之裂解位點為立體無規裂解模式之主要裂解位點。在一些實施例中，主要裂解位點係在與共同序列之核心區互補之序列內。在一些實施例中，主要裂解位點係在與共同序列之核心區100%互補之序列內。
在一些實施例中，主要裂解位點為具有最多或第二多、第三多、第四多或第五多裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為具有最多或第二多、第三多或第四多裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為具有最多或第二多或第三多裂解之位點。在一些實施 例中，主要裂解位點為具有最多或第二多裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為具有最多裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為具有第二多裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為具有第三多裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為具有第四多裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為具有第五多裂解之位點。
在一些實施例中，主要裂解位點為發生大於5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為發生大於5%裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為發生大於10%裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為發生大於15%裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為發生大於20%裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為發生大於25%裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為發生大於30%裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為發生大於35%裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為發生大於40%裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為發生大於45%裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為發生大於50%裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為發生大於55%裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為發生大於60%裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為發生大於65%裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為發生大於70%裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為發生大於75%裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為發生大於80%裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為發生大於85%裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為發生大於90%裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為發生大於91% 裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為發生大於92%裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為發生大於93%裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為發生大於94%裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為發生大於95%裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為發生大於96%裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為發生大於97%裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為發生大於98%裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為發生大於99%裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為發生100%裂解之位點。
在一些實施例中，主要裂解位點為大於5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%之目標裂解的位點。在一些實施例中，主要裂解位點為大於5%之目標裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為大於10%之目標裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為大於15%之目標裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為大於20%之目標裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為大於25%之目標裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為大於30%之目標裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為大於35%之目標裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為大於40%之目標裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為大於45%之目標裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為大於50%之目標裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為大於55%之目標裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為大於60%之目標裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為大於65%之目標裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為大於70%之目標裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為大於75%之目標裂 解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為大於80%之目標裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為大於85%之目標裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為大於90%之目標裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為大於91%之目標裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為大於92%之目標裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為大於93%之目標裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為大於94%之目標裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為大於95%之目標裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為大於96%之目標裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為大於97%之目標裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為大於98%之目標裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為大於99%之目標裂解之位點。在一些實施例中，主要裂解位點為100%之目標裂解之位點。在一些實施例中，裂解模式可不具有主要裂解位點，因為沒有位點達到絕對裂解臨限值位準。
如一般熟習此項技術者所瞭解，各種方法皆可適用於產生裂解模式及/或鑑別裂解位點，包括主要裂解位點。在一些實施例中，此類分析之實例為如本文所述之RNase裂解分析；舉例而言，結果參見圖33、圖34等。
在一些實施例中，本發明識別與特徵序列元件互補之序列基元的位置效應。在一些實施例中，本發明識別與突變互補之序列基元的位置效應。在一些實施例中，本發明識別與SNP互補之序列基元的位置效應。
在一些實施例中，序列中如自其5'端計數之位置11、12或13與特徵序列元件對準。在一些實施例中，序列中如自其5'端計數之位置11與特徵序列元件對準。在一些實施例中，序列中如自其5'端計數之位置12與特徵序列元件對準。在一些實施例中，序列中如自其5'端計數 之位置13與特徵序列元件對準。在一些實施例中，序列中如自其3'端計數之位置8、9或10與特徵序列元件對準。在一些實施例中，序列中如自其3'端計數之位置8與特徵序列元件對準。在一些實施例中，序列中如自其3'端計數之位置9與特徵序列元件對準。在一些實施例中，序列中如自其3'端計數之位置10與特徵序列元件對準。在一些實施例中，核心區中如自核心區之5'端計數之位置6、7或8與特徵序列元件對準。在一些實施例中，核心區中如自核心區之5'端計數之位置6與特徵序列元件對準。在一些實施例中，核心區中如自核心區之5'端計數之位置7與特徵序列元件對準。在一些實施例中，核心區中如自核心區之5'端計數之位置8與特徵序列元件對準。在一些實施例中，核心區中如自核心區之3'端計數之位置3、4或5與特徵序列元件對準。在一些實施例中，核心區中如自核心區之3'端計數之位置3與特徵序列元件對準。在一些實施例中，核心區中如自核心區之3'端計數之位置4與特徵序列元件對準。在一些實施例中，核心區中如自核心區之3'端計數之位置5與特徵序列元件對準。
在一些實施例中，序列中如自其5'端計數之位置11、12或13與突變對準。在一些實施例中，序列中如自其5'端計數之位置11與突變對準。在一些實施例中，序列中如自其5'端計數之位置12與突變對準。在一些實施例中，序列中如自其5'端計數之位置13與突變對準。在一些實施例中，序列中如自其3'端計數之位置8、9或10與突變對準。在一些實施例中，序列中如自其3'端計數之位置8與突變對準。在一些實施例中，序列中如自其3'端計數之位置9與突變對準。在一些實施例中，序列中如自其3'端計數之位置10與突變對準。在一些實施例中，核心區中如自核心區之5'端計數之位置6、7或8與突變對準。在一些實施例中，核心區中如自核心區之5'端計數之位置6與突變對準。在一些實施例中，核心區中如自核心區之5'端計數之位置7與突 變對準。在一些實施例中，核心區中如自核心區之5'端計數之位置8與突變對準。在一些實施例中，核心區中如自核心區之3'端計數之位置3、4或5與突變對準。在一些實施例中，核心區中如自核心區之3'端計數之位置3與突變對準。在一些實施例中，核心區中如自核心區之3'端計數之位置4與突變對準。在一些實施例中，核心區中如自核心區之3'端計數之位置5與突變對準。
在一些實施例中，序列中如自其5'端計數之位置11、12或13與SNP對準。在一些實施例中，序列中如自其5'端計數之位置11與SNP對準。在一些實施例中，序列中如自其5'端計數之位置12與SNP對準。在一些實施例中，序列中如自其5'端計數之位置13與SNP對準。在一些實施例中，序列中如自其3'端計數之位置8、9或10與SNP對準。在一些實施例中，序列中如自其3'端計數之位置8與SNP對準。在一些實施例中，序列中如自其3'端計數之位置9與SNP對準。在一些實施例中，序列中如自其3'端計數之位置10與SNP對準。在一些實施例中，核心區中如自核心區之5'端計數之位置6、7或8與SNP對準。在一些實施例中，核心區中如自核心區之5'端計數之位置6與SNP對準。在一些實施例中，核心區中如自核心區之5'端計數之位置7與SNP對準。在一些實施例中，核心區中如自核心區之5'端計數之位置8與SNP對準。在一些實施例中，核心區中如自核心區之3'端計數之位置3、4或5與SNP對準。在一些實施例中，核心區中如自核心區之3'端計數之位置3與SNP對準。在一些實施例中，核心區中如自核心區之3'端計數之位置4與SNP對準。在一些實施例中，核心區中如自核心區之3'端計數之位置5與SNP對準。
在一些實施例中，共同鹼基序列包含或為與核酸序列互補之序列。在一些實施例中，共同鹼基序列包含或為與核酸序列100%互補之序列。在一些實施例中，共同鹼基序列包含或為與致病核酸序列互 補之序列。在一些實施例中，共同鹼基序列包含或為與致病核酸序列100%互補之序列。在一些實施例中，共同鹼基序列包含或為與致病核酸序列之特徵序列元件互補的序列，該等特徵序列可區分致病核酸序列與非致病核酸序列。在一些實施例中，共同鹼基序列包含或為與致病核酸序列之特徵序列元件100%互補的序列，該等特徵序列可區分致病核酸序列與非致病核酸序列。在一些實施例中，共同鹼基序列包含或為與疾病相關之核酸序列互補的序列。在一些實施例中，共同鹼基序列包含或為與疾病相關之核酸序列100%互補的序列。在一些實施例中，共同鹼基序列包含或為與疾病相關之核酸序列之特徵序列元件互補的序列，該等特徵序列可區分疾病相關之核酸序列與非疾病相關之核酸序列。在一些實施例中，共同鹼基序列包含或為與疾病相關之核酸序列之特徵序列元件100%互補的序列，該等特徵序列可區分疾病相關之核酸序列與非疾病相關之核酸序列。
在一些實施例中，共同鹼基序列包含或為與基因互補之序列。在一些實施例中，共同鹼基序列包含或為與基因100%互補之序列。在一些實施例中，共同鹼基序列包含或為與基因之特徵序列元件互補的序列，該等特徵序列可區分來自與該基因共用同源性之類似序列的基因。在一些實施例中，共同鹼基序列包含或為與基因之特徵序列元件100%互補的序列，該等特徵序列可區分來自與該基因共用同源性之類似序列的基因。在一些實施例中，共同鹼基序列包含或為與目標基因之特徵序列元件互補的序列，該等特徵序列包含不存在於該基因之其他複本中之突變，例如基因之野生型複本、基因之另一突變型複本等。在一些實施例中，共同鹼基序列包含或為與目標基因之特徵序列元件100%互補的序列，該等特徵序列包含不存在於基因之其他複本中之突變，例如基因之野生型複本、基因之另一突變型複本等。
在一些實施例中，共同鹼基序列包含或為與包含SNP之序列互補 的序列。在一些實施例中，共同鹼基序列包含或為與包含SNP之序列互補的序列，且共同鹼基序列與疾病相關之SNP 100%互補。舉例而言，在一些實施例中，共同鹼基序列與亨廷頓氏病相關(或導致該疾病)之對偶基因相關的SNP 100%互補。在一些實施例中，共同鹼基序列為WV-1092之共同鹼基序列，其與多位亨廷頓氏病患者中之疾病相關對偶基因在rs362307處100%互補。在一些實施例中，SNP為rs362307。在一些實施例中，SNP為rs7685686。在一些實施例中，SNP為rs362268。在一些實施例中，SNP為rs362306。在一些實施例中，SNP為rs362331。在一些實施例中，SNP為rs2530595。在一些實施例中，其他例示性SNP位點可為本發明中所揭示之任何亨廷頓位點。
在一些實施例中，共同鹼基序列包含GCCTCAGTCTGCTTCGCACC中所存在之序列。在一些實施例中，共同鹼基序列包含GCCTCAGTCTGCTTCGCACC中所存在之序列，其中GCCTCAGTCTGCTTCGCACC中所存在之序列包含至少15個核苷酸。在一些實施例中，共同鹼基序列為GCCTCAGTCTGCTTCGCACC。
在一些實施例中，共同鹼基序列包含GAGCAGCTGCAACCTGGCAA中所存在之序列。在一些實施例中，共同鹼基序列包含GAGCAGCTGCAACCTGGCAA中所存在之序列，其中GAGCAGCTGCAACCTGGCAA中所存在之序列包含至少15個核苷酸。在一些實施例中，共同鹼基序列為GAGCAGCTGCAACCTGGCAA。在一些實施例中，共同鹼基序列為GGGCACAAGGGCACAGACTT。在一些實施例中，共同鹼基序列為GAGCAGCTGCAACCTGGCAA。在一些實施例中，共同鹼基序列為GCACAAGGGCACAGACTTCC。在一些實施例中，共同鹼基序列為CACAAGGGCACAGACTTCCA。在一些實施例中，共同鹼基序列為 ACAAGGGCACAGACTTCCAA。在一些實施例中，共同鹼基序列為CAAGGGCACAGACTTCCAAA。在一些實施例中，共同鹼基序列包含GAGCAGCTGCAACCTGGCAA中所存在之序列。在一些實施例中，共同鹼基序列包含GAGCAGCTGCAACCTGGCAA中所存在之序列，其中GAGCAGCTGCAACCTGGCAA中所存在之序列包含至少15個核苷酸。在一些實施例中，共同鹼基序列為GAGCAGCTGCAACCTGGCAA。在一些實施例中，共同鹼基序列為GAGCAGCTGCAACCTGGCAA。在一些實施例中，共同鹼基序列為AGCAGCTGCAACCTGGCAAC。在一些實施例中，共同鹼基序列為GCAGCTGCAACCTGGCAACA。在一些實施例中，共同鹼基序列為CAGCTGCAACCTGGCAACAA。在一些實施例中，共同鹼基序列為AGCTGCAACCTGGCAACAAC。在一些實施例中，共同鹼基序列為GCTGCAACCTGGCAACAACC。在一些實施例中，共同鹼基序列包含GGGCCAACAGCCAGCCTGCA中所存在之序列。在一些實施例中，共同鹼基序列包含GGGCCAACAGCCAGCCTGCA中所存在之序列，其中GGGCCAACAGCCAGCCTGCA中所存在之序列包含至少15個核苷酸。在一些實施例中，共同鹼基序列為GGGCCAACAGCCAGCCTGCA。在一些實施例中，共同鹼基序列為GGGCCAACAGCCAGCCTGCA。在一些實施例中，共同鹼基序列為GGCCAACAGCCAGCCTGCAG。在一些實施例中，共同鹼基序列為GCCAACAGCCAGCCTGCAGG。在一些實施例中，共同鹼基序列為CCAACAGCCAGCCTGCAGGA。在一些實施例中，共同鹼基序列為CAACAGCCAGCCTGCAGGAG。在一些實施例中，共同鹼基序列為AACAGCCAGCCTGCAGGAGG。在一些實施例中，共同鹼基序列包含ATTAATAAATTGTCATCACC中所存在之序列。在一些實施例中，共同鹼基序列包含ATTAATAAATTGTCATCACC中所存在之序列，其 中ATTAATAAATTGTCATCACC中所存在之序列包含至少15個核苷酸。在一些實施例中，共同鹼基序列為ATTAATAAATTGTCATCACC。在一些實施例中，共同鹼基序列為ATTAATAAATTGTCATCACC。
在一些實施例中，本發明提供針對寡核苷酸之立體化學設計參數。亦即，本發明尤其證明在沿著寡核苷酸鏈之不同位置的立體化學結構例如對寡核苷酸之穩定性及/或活性的影響，包括對寡核苷酸與同源配位體及/或與加工酶之相互作用的影響。本發明特別提供結構中併入該等設計參數或結構反映該等設計參數的寡核苷酸。相對於具有相同鹼基序列及長度之立體無規製劑而言，該等寡核苷酸為新穎的化學實體。
在一些實施例中，本發明提供針對反義寡核苷酸之立體化學設計參數。在一些實施例中，本發明特別提供針對可由核糖核酸酶H結合及/或裂解之寡核苷酸的設計參數。在一些實施例中，本發明提供針對siRNA寡核苷酸之立體化學設計參數。在一些實施例中，本發明特別提供針對可由例如DICER、阿爾古(Argonaute)蛋白(例如，阿爾古-1及阿爾古-2)等結合及/或裂解之寡核苷酸的設計參數。
在一些實施例中，所提供組合物之單一寡核苷酸包含以下區域，其中第一、第二、第三、第五、第七、第八、第九、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之至少一者為對掌性的。在一些實施例中，第一、第二、第三、第五、第七、第八、第九、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之至少兩者為對掌性的。在一些實施例中，第一、第二、第三、第五、第七、第八、第九、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之至少三者為對掌性的。在一些實施例中，第一、第二、第三、第五、第七、第八、第九、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之至少四者為對掌性的。在一些實施例 中，第一、第二、第三、第五、第七、第八、第九、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之至少五者為對掌性的。在一些實施例中，第一、第二、第三、第五、第七、第八、第九、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之至少六者為對掌性的。在一些實施例中，第一、第二、第三、第五、第七、第八、第九、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之至少七者為對掌性的。在一些實施例中，第一、第二、第三、第五、第七、第八、第九、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之至少八者為對掌性的。在一些實施例中，第一、第二、第三、第五、第七、第八、第九、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之至少九者為對掌性的。在一些實施例中，第一、第二、第三、第五、第七、第八、第九、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之一者為對掌性的。在一些實施例中，第一、第二、第三、第五、第七、第八、第九、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之兩者為對掌性的。在一些實施例中，第一、第二、第三、第五、第七、第八、第九、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之三者為對掌性的。在一些實施例中，第一、第二、第三、第五、第七、第八、第九、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之四者為對掌性的。在一些實施例中，第一、第二、第三、第五、第七、第八、第九、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之五者為對掌性的。在一些實施例中，第一、第二、第三、第五、第七、第八、第九、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之六者為對掌性的。在一些實施例中，第一、第二、第三、第五、第七、第八、第九、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之七者為對掌性的。在一些實施例中，第一、第二、第三、第五、第七、第八、第九、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之八者為對掌性的。在一些實施例中，第一、第二、第三、第五、第七、第八、第九、第 十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之九者為對掌性的。在一些實施例中，第一、第二、第三、第五、第七、第八、第九、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之十者為對掌性的。
在一些實施例中，所提供組合物之單一寡核苷酸包含以下區域，其中第一、第二、第三、第五、第七、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之至少一者為對掌性的。在一些實施例中，第一、第二、第三、第五、第七、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之至少兩者為對掌性的。在一些實施例中，第一、第二、第三、第五、第七、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之至少三者為對掌性的。在一些實施例中，第一、第二、第三、第五、第七、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之至少四者為對掌性的。在一些實施例中，第一、第二、第三、第五、第七、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之至少五者為對掌性的。在一些實施例中，第一、第二、第三、第五、第七、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之至少六者為對掌性的。在一些實施例中，第一、第二、第三、第五、第七、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之至少七者為對掌性的。在一些實施例中，第一、第二、第三、第五、第七、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之一者為對掌性的。在一些實施例中，第一、第二、第三、第五、第七、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之兩者為對掌性的。在一些實施例中，第一、第二、第三、第五、第七、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之三者為對掌性的。在一些實施例中，第一、第二、第三、第五、第七、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之四者為對掌性的。在一些實施例中，第一、第二、第三、第五、第七、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之五者為對掌性的。在一些實施例中，第一、第二、第三、第五、第七、第十八、第十九及第二十個核 苷酸間鍵聯中之六者為對掌性的。在一些實施例中，第一、第二、第三、第五、第七、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之七者為對掌性的。在一些實施例中，第一、第二、第三、第五、第七、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之八者為對掌性的。
在一些實施例中，所提供組合物之單一寡核苷酸包含以下區域，其中第一、第二、第三、第五、第七、第八、第九、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之至少一者為對掌性的，且至少一個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，所提供組合物之單一寡核苷酸包含以下區域，其中第一、第二、第三、第五、第七、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之至少一者為對掌性的，且至少一個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，至少兩個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，至少三個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，至少四個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，至少五個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，至少六個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，至少七個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，至少八個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，至少九個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，至少10個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，至少11個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，至少12個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，至少13個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，至少14個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，至少15個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，至少16個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，至少17個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，至少18個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，至少19個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，至少20個核 苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，一個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，兩個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，三個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，四個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，五個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，六個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，七個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，八個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，九個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，10個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，11個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，12個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，13個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，14個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，15個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，16個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，17個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，18個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，19個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，20個核苷酸間鍵聯為非對掌性的。在一些實施例中，所提供組合物之單一寡核苷酸包含以下區域，其中除第一、第二、第三、第五、第七、第八、第九、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之至少一者為對掌性之外，其餘所有核苷酸間鍵聯皆為非對掌性的。
在一些實施例中，所提供組合物之單一寡核苷酸包含以下區域，其中第一、第二、第三、第五、第七、第八、第九、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之至少一者為對掌性的，且至少一個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，所提供組合物之單一寡核苷酸包含以下區域，其中第一、第二、第三、第五、第七、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之至少一者為對掌性的，且至少一 個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，至少兩個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，至少三個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，至少四個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，至少五個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，至少六個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，至少七個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，至少八個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，至少九個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，至少10個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，至少11個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，至少12個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，至少13個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，至少14個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，至少15個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，至少16個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，至少17個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，至少18個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，至少19個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，至少20個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，一個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，兩個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，三個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，四個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，五個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，六個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，七個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，八個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，九個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，10個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，11個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，12個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，13個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，14個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，15個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，16個核苷酸間鍵 聯為磷酸酯。在一些實施例中，17個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，18個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，19個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，20個核苷酸間鍵聯為磷酸酯。在一些實施例中，所提供組合物之單一寡核苷酸包含以下區域，其中除第一、第二、第三、第五、第七、第八、第九、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之至少一者為對掌性之外，其餘所有核苷酸間鍵聯皆為磷酸酯。
在一些實施例中，所提供組合物之單一寡核苷酸包含以下區域，其中第一、第二、第三、第五、第七、第八、第九、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之至少一者為對掌性的，且該區域中所有核苷酸間鍵聯之至少10%為非對掌性的。在一些實施例中，所提供組合物之單一寡核苷酸包含以下區域，其中第一、第二、第三、第五、第七、第十八、第十九及第二十個核苷酸間鍵聯中之至少一者為對掌性的，且該區域中所有核苷酸間鍵聯之至少10%為非對掌性的。在一些實施例中，該區域中所有核苷酸間鍵聯之至少20%為非對掌性的。在一些實施例中，該區域中所有核苷酸間鍵聯之至少30%為非對掌性的。在一些實施例中，該區域中所有核苷酸間鍵聯之至少40%為非對掌性的。在一些實施例中，該區域中所有核苷酸間鍵聯之至少50%為非對掌性的。在一些實施例中，該區域中所有核苷酸間鍵聯之至少60%為非對掌性的。在一些實施例中，該區域中所有核苷酸間鍵聯之至少70%為非對掌性的。在一些實施例中，該區域中所有核苷酸間鍵聯之至少80%為非對掌性的。在一些實施例中，該區域中所有核苷酸間鍵聯之至少90%為非對掌性的。在一些實施例中，該區域中所有核苷酸間鍵聯之至少50%為非對掌性的。在一些實施例中，非對掌性核苷酸間鍵聯為磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，各非對掌性核苷酸間鍵聯為磷酸酯鍵聯。
在一些實施例中，該區域之第一核苷酸間鍵聯為經Sp修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，該區域之第一核苷酸間鍵聯為經Rp修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，該區域之第二核苷酸間鍵聯為經Sp修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，該區域之第二核苷酸間鍵聯為經Rp修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，該區域之第三核苷酸間鍵聯為經Sp修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，該區域之第三核苷酸間鍵聯為經Rp修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，該區域之第五核苷酸間鍵聯為經Sp修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，該區域之第五核苷酸間鍵聯為經Rp修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，該區域之第七核苷酸間鍵聯為經Sp修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，該區域之第七核苷酸間鍵聯為經Rp修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，該區域之第八核苷酸間鍵聯為經Sp修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，該區域之第八核苷酸間鍵聯為經Rp修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，該區域之第九核苷酸間鍵聯為經Sp修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，該區域之第九核苷酸間鍵聯為經Rp修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，該區域之第十八核苷酸間鍵聯為經Sp修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，該區域之第十八核苷酸間鍵聯為經Rp修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，該區域之第十九核苷酸間鍵聯為經Sp修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，該區域之第十九核苷酸間鍵聯為經Rp修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，該區域之第二十核苷酸間鍵聯為經Sp修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，該區域之第二十核苷酸間鍵聯為經Rp修飾之核苷酸間鍵聯。
在一些實施例中，該區域具有至少21個鹼基之長度。在一些實施例中，該區域具有21個鹼基之長度。在一些實施例中，所提供組合物中之單一寡核苷酸具有至少21個鹼基之長度。在一些實施例中，所 提供組合物中之單一寡核苷酸具有21個鹼基之長度。
在一些實施例中，對掌性核苷酸間鍵聯具有式I結構。在一些實施例中，對掌性核苷酸間鍵聯為硫代磷酸酯。在一些實施例中，所提供組合物之單一寡核苷酸中之各對掌性核苷酸間鍵聯獨立地具有式I結構。在一些實施例中，所提供組合物之單一寡核苷酸中之各對掌性核苷酸間鍵聯為硫代磷酸酯。
在一些實施例中，本發明寡核苷酸包含一或多個經修飾之糖部分。在一些實施例中，本發明寡核苷酸包含一或多個經修飾之鹼基部分。如一般技術者所知及在本發明中所述，可向糖及/或部分中引入各種修飾。舉例而言，在一些實施例中，修飾為US9006198及WO2014/012081中所述之修飾，其中之每一者的糖及鹼基修飾以引用的方式併入本文中。
在一些實施例中，糖修飾為2'修飾。常用2'修飾包括(但不限於)2'-OR1，其中R1不為氫。在一些實施例中，修飾為2'-OR，其中R為視情況經取代之脂族基。在一些實施例中，修飾為2'-OMe。在一些實施例中，修飾為2'-MOE。在一些實施例中，本發明證明，特定對掌性純核苷酸間鍵聯之包含及/或定位可提供類似於或優於經由使用經修飾之主鏈鍵聯、鹼基及/或糖達成之穩定性改良的穩定性改良。在一些實施例中，所提供組合物之所提供單一寡核苷酸在糖上無修飾。在一些實施例中，所提供組合物之所提供單一寡核苷酸在糖之2'位置上無修飾(亦即，在2'位置處之兩個基團為-H/-H或-H/-OH)。在一些實施例中，所提供組合物之所提供單一寡核苷酸不具有任何2'-MOE修飾。
在一些實施例中，2'修飾為-O-L-或-L-，其將糖部分之2'-碳連接至糖部分之另一個碳。在一些實施例中，2'修飾為-O-L-或-L-，其將糖部分之2'-碳連接至糖部分之4'-碳。在一些實施例中，2'修飾為S- cEt。在一些實施例中，經修飾之糖部分為LNA部分。
在一些實施例中，2'修飾為-F。在一些實施例中，2'修飾為FANA。在一些實施例中，2'修飾為FRNA。
在一些實施例中，糖修飾為5'修飾，例如R-5'-Me、S-5'-Me等。
在一些實施例中，糖修飾改變糖環之大小。在一些實施例中，糖修飾為FHNA中之糖部分。
在一些實施例中，相比於立體無規寡核苷酸組合物，所提供組合物中之單一寡核苷酸為阿爾古蛋白(例如，hAgo-1及hAgo-2)之較佳受質。如本發明中所述之對掌性純鍵聯之選擇及/或位置為與該等蛋白質相互作用的寡核苷酸(諸如siRNA)的有用設計參數。
在一些實施例中，所提供組合物中之單一寡核苷酸具有至少約25%呈Sp組態之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物中之單一寡核苷酸具有至少約30%呈Sp組態之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物中之單一寡核苷酸具有至少約35%呈Sp組態之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物中之單一寡核苷酸具有至少約40%呈Sp組態之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物中之單一寡核苷酸具有至少約45%呈Sp組態之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物中之單一寡核苷酸具有至少約50%呈Sp組態之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物中之單一寡核苷酸具有至少約55%呈Sp組態之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物中之單一寡核苷酸具有至少約60%呈Sp組態之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物中之單一寡核苷酸具有至少約65%呈Sp組態之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物中之單一寡核苷酸具有至少約70%呈Sp組態之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物中之單一寡核苷酸具有至少約75%呈Sp組態之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物中之單一寡核苷酸具有 至少約80%呈Sp組態之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物中之單一寡核苷酸具有至少約85%呈Sp組態之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，所提供組合物中之單一寡核苷酸具有至少約90%呈Sp組態之核苷酸間鍵聯。
在一些實施例中，所提供組合物中之寡核苷酸不為選自TkTk mCkAGTmCATGAmCTkTmCk mCk之寡核苷酸，其中後置有下標『k』之各核苷表示(S)-cEt修飾，R為Rp硫代磷酸酯鍵聯，S為Sp硫代磷酸酯鍵聯，各mC為經5-甲基胞嘧啶修飾之核苷，且所有核苷間鍵聯皆為硫代磷酸酯(PS)，其立體化學模式選自RSSSRSRRRS、RSSSSSSSSS、SRRSRSSSSR、SRSRSSRSSR、RRRSSSRSSS、RRRSRSSRSR、RRSSSRSRSR、SRSSSRSSSS、SSRRSSRSRS、SSSSSSRRSS、RRRSSRRRSR、RRRRSSSSRS、SRRSRRRRRR、RSSRSSRRRR、RSRRSRRSRR、RRSRSSRSRS、SSRRRRRSRR、RSRRSRSSSR、RRSSRSRRRR、RRSRSRRSSS、RRSRSSSRRR、RSRRRRSRSR、SSRSSSRRRS、RSSRSRSRSR、RSRSRSSRSS、RRRSSRRSRS、SRRSSRRSRS、RRRRSRSRRR、SSSSRRRRSR、RRRRRRRRRR及SSSSSSSSSS。
在一些實施例中，所提供組合物中之單一寡核苷酸不為選自TkTk mCkAGTmCATGAmCTTk mCk mCk之寡核苷酸，其中後置有下標『k』之各核苷表示(S)-cEt修飾，R為Rp硫代磷酸酯鍵聯，S為Sp硫代磷酸酯鍵聯，各mC為經5-甲基胞嘧啶修飾之核苷，且所有核心核苷間鍵聯皆為硫代磷酸酯(PS)，其立體化學模式選自：RSSSRSRRRS、RSSSSSSSSS、SRRSRSSSSR、SRSRSSRSSR、RRRSSSRSSS、RRRSRSSRSR、RRSSSRSRSR、SRSSSRSSSS、SSRRSSRSRS、SSSSSSRRSS、RRRSSRRRSR、RRRRSSSSRS、SRRSRRRRRR、RSSRSSRRRR、RSRRSRRSRR、RRSRSSRSRS、SSRRRRRSRR、 RSRRSRSSSR、RRSSRSRRRR、RRSRSRRSSS、RRSRSSSRRR、RSRRRRSRSR、SSRSSSRRRS、RSSRSRSRSR、RSRSRSSRSS、RRRSSRRSRS、SRRSSRRSRS、RRRRSRSRRR、SSSSRRRRSR、RRRRRRRRRR及SSSSSSSSSS。
對掌性受控寡核苷酸及對掌性受控寡核苷酸組合物
本發明提供對掌性受控寡核苷酸，及具有高粗產物純度及高非對映異構純度之對掌性受控寡核苷酸組合物。在一些實施例中，本發明提供對掌性受控寡核苷酸，及具有高粗產物純度之對掌性受控寡核苷酸組合物。在一些實施例中，本發明提供對掌性受控寡核苷酸，及具有高非對映異構純度之對掌性受控寡核苷酸組合物。
在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物為某一寡核苷酸類型之基本上純製劑，因為該組合物中不為該寡核苷酸類型之寡核苷酸為來自該寡核苷酸類型之製備製程，在一些情況下，在某些純化程序之後的雜質。
在一些實施例中，本發明提供寡核苷酸，其包含一或多個就對掌性鍵聯磷而言之非對映異構性純核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，本發明提供寡核苷酸，其包含一或多個具有式I結構之非對映異構性純核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，本發明提供寡核苷酸，其包含一或多個就對掌性鍵聯磷而言之非對映異構性純核苷酸間鍵聯及一或多個磷酸二酯鍵聯。在一些實施例中，本發明提供寡核苷酸，其包含一或多個具有式I結構之非對映異構性純核苷酸間鍵聯及一或多個磷酸二酯鍵聯。在一些實施例中，本發明提供寡核苷酸，其包含一或多個具有式I-c結構之非對映異構性純核苷酸間鍵聯及一或多個磷酸二酯鍵聯。在一些實施例中，該等寡核苷酸係藉由使用如本申請案中所述之立體選擇性寡核苷酸合成來製備，其用於就對掌性鍵聯磷而言形成經預設計之非對映異構性純核苷酸間鍵聯。舉例而言，在(Rp/Sp, Rp/Sp,Rp/Sp,Rp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp,Sp Sp,Sp,Sp,Sp,Rp,Rp,Rp,Rp,Rp)-d[GsCsCsTsCsAsGsTsCsTsGsCsTsTsCsGs1Cs1As1CsC]之一個例示性寡核苷酸中，前三個核苷酸間鍵聯係使用傳統的寡核苷酸合成方法構築，且非對映異構性純核苷酸間鍵聯係如本申請案中所述在立體化學控制下構築。例示性核苷酸間鍵聯包括具有式I結構之彼等核苷酸間鍵聯，在下文中進行進一步描述。
在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其中寡核苷酸內之個別核苷酸間鍵聯中之至少兩者相對於彼此而言具有不同的立體化學及/或不同的P修飾。在某些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其中寡核苷酸內之至少兩個個別核苷酸間鍵聯具有相對於彼此不同的P修飾。在某些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其中寡核苷酸內之個別核苷酸間鍵聯中之至少兩者具有相對於彼此不同的P修飾，且其中對掌性受控寡核苷酸包含至少一個磷酸二酯核苷酸間鍵聯。在某些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其中寡核苷酸內之個別核苷酸間鍵聯中之至少兩者具有相對於彼此不同的P修飾，且其中對掌性受控寡核苷酸包含至少一個磷酸二酯核苷酸間鍵聯及至少一個硫代磷酸二酯核苷酸間鍵聯。在某些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其中寡核苷酸內之個別核苷酸間鍵聯中之至少兩者具有相對於彼此不同的P修飾，且其中對掌性受控寡核苷酸包含至少一個硫代磷酸三酯核苷酸間鍵聯。在某些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其中寡核苷酸內之個別核苷酸間鍵聯中之至少兩者具有相對於彼此不同的P修飾，且其中對掌性受控寡核苷酸包含至少一個磷酸二酯核苷酸間鍵聯及至少一個硫代磷酸三酯核苷酸間鍵聯。
在某些實施例中，經修飾之核苷酸間鍵聯具有式I結構：
其中各變數如下文所定義及描述。在一些實施例中，式I之鍵聯為對掌性的。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含一或多個式I之經修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含一或多個式I之經修飾之核苷酸間鍵聯，且其中寡核苷酸內之個別式I之核苷酸間鍵聯具有相對於彼此不同的P修飾。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含一或多個式I之經修飾之核苷酸間鍵聯，且其中寡核苷酸內之個別式I之核苷酸間鍵聯具有相對於彼此不同的-X-L-R1。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含一或多個式I之經修飾之核苷酸間鍵聯，且其中寡核苷酸內之個別式I之核苷酸間鍵聯具有相對於彼此不同的X。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含一或多個式I之經修飾之核苷酸間鍵聯，且其中寡核苷酸內之個別式I之核苷酸間鍵聯具有相對於彼此不同的-L-R1。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸為所提供組合物中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸為所提供組合物中具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式之寡核苷酸。
在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其中寡核苷酸內之個別核苷酸間鍵聯中之至少兩者相對於彼此而言具有不同的立體化學及/或不同的P修飾。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其中寡核苷酸內之個別核苷酸間鍵聯中之至少兩者具有相對於彼此不同的立體化學，且其中對掌性受控寡核苷酸之結構的至少一部分的特徵在於交替立體化學之重複模式。
在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其中寡核苷酸內之個別核苷酸間鍵聯中之至少兩者具有相對於彼此不同的P修飾，不同之處在於在其-XLR1部分中其具有不同X原子，及/或在其-XLR1部分中其具有不同L基團，及/或在其-XLR1部分中其具有不同R1原子。
在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其中寡核苷酸內之個別核苷酸間鍵聯中之至少兩者具有相對於彼此不同的立體化學及/或不同P修飾且寡核苷酸具有由下式表示之結構：[SBn1RBn2SBn3RBn4...SBnxRBny]
其中：各RB獨立地表示在鍵聯磷處具有R組態之核苷酸單元嵌段；各SB獨立地表示在鍵聯磷處具有S組態之核苷酸單元嵌段；n1至ny中之每一者為零或整數，其要求為至少一個奇數n及至少一個偶數n必須不為零，使得寡核苷酸包括至少兩個相對於彼此具有不同立體化學的個別核苷酸間鍵聯；且其中n1至ny之總和介於2與200之間，且在一些實施例中，介於選自由2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或大於25組成之群的下限與選自由5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190及200組成之群的上限之間，且上限大於下限。
在一些此類實施例中，各n具有相同值；在一些實施例中，各偶數n與各另一偶數n具有相同值；在一些實施例中，各奇數n與各另一奇數n具有相同值；在一些實施例中，至少兩個偶數n具有不同彼此的值；在一些實施例中，至少兩個奇數n具有不同彼此的值。
在一些實施例中，至少兩個相鄰n彼此相等，使得所提供之寡核 苷酸包括相等長度之S立體化學鍵聯及R立體化學鍵聯之相鄰嵌段。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包括相等長度之S及R立體化學鍵聯之重複嵌段。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包括S及R立體化學鍵聯之重複嵌段，其中至少兩個此類嵌段具有彼此不同之長度；在一些此類實施例中，各S立體化學嵌段具有相同長度，且具有與各R立體化學長度不同的長度，各R立體化學長度可視情況為彼此相同的長度。
在一些實施例中，至少兩個隔一個相鄰(skip-adjacent)之n彼此相等，使得所提供之寡核苷酸包括至少兩個長度彼此相等且由另一立體化學鍵聯嵌段隔開的第一立體化學鍵聯嵌段，該間隔嵌段可具有與第一立體化學嵌段相同的長度或不同的長度。
在一些實施例中，與所提供之寡核苷酸末端之鍵聯嵌段相關的n具有相同長度。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸具有相同鍵聯立體化學之末端嵌段。在一些此類實施例中，末端嵌段由另一鍵聯立體化學之中間嵌段彼此隔開。
在一些實施例中，所提供之式[SBn1RBn2SBn3RBn4...SBnxRBny]之寡核苷酸為立體嵌段體。在一些實施例中，所提供之式[SBn1RBn2SBn3RBn4...SBnxRBny]之寡核苷酸為立體跳過體。在一些實施例中，所提供之式[SBn1RBn2SBn3RBn4...SBnxRBny]之寡核苷酸為立體交替體。在一些實施例中，所提供之式[SBn1RBn2SBn3RBn4...SBnxRBny]之寡核苷酸為間隔體。
在一些實施例中，所提供之式[SBn1RBn2SBn3RBn4...SBnxRBny]之寡核苷酸具有以上所述模式中之任一者且進一步包含P修飾模式。舉例而言，在一些實施例中，所提供之式[SBn1RBn2SBn3RBn4...SBnxRBny]之寡核苷酸為立體跳過體及P修飾跳過體。在一些實施例中，所提供之式[SBn1RBn2SBn3RBn4...SBnxRBny]之寡核苷酸為立體嵌 段體及P修飾交替體。在一些實施例中，所提供之式[SBn1RBn2SBn3RBn4...SBnxRBny]之寡核苷酸為立體交替體及P修飾嵌段體。
在一些實施例中，所提供之式[SBn1RBn2SBn3RBn4...SBnxRBny]之寡核苷酸為對掌性受控寡核苷酸，其包含一或多個獨立地具有式I結構之經修飾之核苷酸間鍵聯：
其中：P*為不對稱磷原子且為Rp或Sp；W為O、S或Se；X、Y及Z各自獨立地為-O-、-S-、-N(-L-R1)-或L；L為共價鍵或視情況經取代之直鏈或分支鏈C1-C10伸烷基，其中L之一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經選自以下之視情況經取代之基團置換：C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、C1-C6雜脂族部分、-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)-、-N(R')C(O)O-、-OC(O)N(R')-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-N(R')S(O)2-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(O)-及-C(O)O-；R1為鹵素、R或視情況經取代之C1-C50脂族基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經選自以下之視情況經取代之基團置換：C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、C1-C6雜脂族部分、-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)-、-N(R')C(O)O-、-OC(O)N(R')-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-N(R')S(O)2-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(O)-及-C(O)O-； 各R'獨立地為-R、-C(O)R、-CO2R或-SO2R，或：兩個R'與其插入原子一起形成視情況經取代之芳基、碳環、雜環或雜芳基環；-Cy-為選自伸苯基、伸碳環基、伸芳基、伸雜芳基及伸雜環基之視情況經取代之二價環；各R獨立地為氫或選自C1-C6脂族基、碳環基、芳基、雜芳基及雜環基之視情況經取代之基團；且各獨立地表示與核苷之連接。
在一些實施例中，L為共價鍵或視情況經取代之直鏈或分支鏈C1-C10伸烷基，其中L之一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經以下置換：視情況經取代之C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)-、-N(R')C(O)O-、-OC(O)N(R')-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-N(R')S(O)2-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(O)-或-C(O)O-；R1為鹵素、R或視情況經取代之C1-C50脂族基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經以下置換：視情況經取代之C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)-、-N(R')C(O)O-、-OC(O)N(R')-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-N(R')S(O)2-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(O)-或-C(O)O-；各R'獨立地為-R、-C(O)R、-CO2R或-SO2R，或：同一氮上之兩個R'與其插入原子一起形成視情況經取代之雜環或雜芳基環，或同一碳上之兩個R'與其插入原子一起形成視情況經取代之芳基、碳環、雜環或雜芳基環； -Cy-為選自伸苯基、伸碳環基、伸芳基、伸雜芳基或伸雜環基之視情況經取代之二價環；各R獨立地為氫或選自C1-C6脂族基、苯基、碳環基、芳基、雜芳基或雜環基之視情況經取代之基團；且各獨立地表示與核苷之連接。
在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸包含一或多個經修飾之核苷酸間磷鍵聯。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸包含例如硫代磷酸酯或硫代磷酸三酯鍵聯。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸包含硫代磷酸三酯鍵聯。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸包含至少兩個硫代磷酸三酯鍵聯。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸包含至少三個硫代磷酸三酯鍵聯。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸包含至少四個硫代磷酸三酯鍵聯。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸包含至少五個硫代磷酸三酯鍵聯。該等經修飾之核苷酸間磷鍵聯之實例進一步描述於本文中。
在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸包含不同的核苷酸間磷鍵聯。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸包含至少一個磷酸二酯核苷酸間鍵聯及至少一個經修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸包含至少一個磷酸二酯核苷酸間鍵聯及至少一個硫代磷酸三酯鍵聯。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸包含至少一個磷酸二酯核苷酸間鍵聯及至少兩個硫代磷酸三酯鍵聯。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸包含至少一個磷酸二酯核苷酸間鍵聯及至少三個硫代磷酸三酯鍵聯。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸包含至少一個磷酸二酯核苷酸間鍵聯及至少四個硫代磷酸三酯鍵聯。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸包含至少一個磷酸二酯核苷酸間鍵聯及至少五個硫代磷酸三酯鍵聯。該等經修飾之核苷酸間磷鍵聯之實例進一步描述於本文中。
在一些實施例中，硫代磷酸三酯鍵聯包含對掌性助劑，其例如用於控制反應之立體選擇性。在一些實施例中，硫代磷酸三酯鍵聯不包含對掌性助劑。在一些實施例中，有目的地維持硫代磷酸三酯鍵聯直至投與給個體及/或在投與給個體期間有目的地維持硫代磷酸三酯鍵聯。
在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸連結至固體載體。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸自固體載體裂解。
在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸包含至少一個磷酸二酯核苷酸間鍵聯及至少兩個連續的經修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸包含至少一個磷酸二酯核苷酸間鍵聯及至少兩個連續硫代磷酸三酯核苷酸間鍵聯。
在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸為嵌段體。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸為立體嵌段體。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸為P修飾嵌段體。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸為鍵聯嵌段體。
在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸為交替體。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸為立體交替體。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸為P修飾交替體。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸為鍵聯交替體。
在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸為單聚體。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸為立體單聚體。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸為P修飾單聚體。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸為鍵聯單聚體。
在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸為間隔體。
在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸為跳過體。
在一些實施例中，本發明提供寡核苷酸，其包含一或多個獨立 地具有式I結構之經修飾之核苷酸間鍵聯：
其中：P*為不對稱磷原子且為Rp或Sp；W為O、S或Se；X、Y及Z各自獨立地為-O-、-S-、-N(-L-R1)-或L；L為共價鍵或視情況經取代之直鏈或分支鏈C1-C10伸烷基，其中L之一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經選自以下之視情況經取代之基團置換：C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、C1-C6雜脂族部分、-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)-、-N(R')C(O)O-、-OC(O)N(R')-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-N(R')S(O)2-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(O)-及-C(O)O-；R1為鹵素、R或視情況經取代之C1-C50脂族基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經選自以下之視情況經取代之基團置換：C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、C1-C6雜脂族部分、-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)-、-N(R')C(O)O-、-OC(O)N(R')-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-N(R')S(O)2-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(O)-及-C(O)O-；各R'獨立地為-R、-C(O)R、-CO2R或-SO2R，或：兩個R'與其插入原子一起形成視情況經取代之芳基、碳環、雜環或雜芳基環；-Cy-為選自伸苯基、伸碳環基、伸芳基、伸雜芳基及伸雜環基之 視情況經取代之二價環；各R獨立地為氫或選自C1-C6脂族基、碳環基、芳基、雜芳基及雜環基之視情況經取代之基團；且各獨立地表示與核苷之連接。
在一些實施例中，L為共價鍵或視情況經取代之直鏈或分支鏈C1-C10伸烷基，其中L之一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經以下置換：視情況經取代之C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)-、-N(R')C(O)O-、-OC(O)N(R')-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-N(R')S(O)2-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(O)-或-C(O)O-；R1為鹵素、R或視情況經取代之C1-C50脂族基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經以下置換：視情況經取代之C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)-、-N(R')C(O)O-、-OC(O)N(R')-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-N(R')S(O)2-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(O)-或-C(O)O-；各R'獨立地為-R、-C(O)R、-CO2R或-SO2R，或：同一氮上之兩個R'與其插入原子一起形成視情況經取代之雜環或雜芳基環，或同一碳上之兩個R'與其插入原子一起形成視情況經取代之芳基、碳環、雜環或雜芳基環；-Cy-為選自伸苯基、伸碳環基、伸芳基、伸雜芳基或伸雜環基之視情況經取代之二價環；各R獨立地為氫或選自C1-C6脂族基、苯基、碳環基、芳基、雜芳基或雜環基之視情況經取代之基團；且 各獨立地表示與核苷之連接。
在一些實施例中，P*為不對稱磷原子且為Rp或Sp。在一些實施例中，P*為Rp。在其他實施例中，P*為Sp。在一些實施例中，寡核苷酸包含一或多個式I之核苷酸間鍵聯，其中各P*獨立地為Rp或Sp。在一些實施例中，寡核苷酸包含一或多個式I之核苷酸間鍵聯，其中各P*為Rp。在一些實施例中，寡核苷酸包含一或多個式I之核苷酸間鍵聯，其中各P*為Sp。在一些實施例中，寡核苷酸包含至少一個式I之核苷酸間鍵聯，其中P*為Rp。在一些實施例中，寡核苷酸包含至少一個式I之核苷酸間鍵聯，其中P*為Sp。在一些實施例中，寡核苷酸包含至少一個式I之核苷酸間鍵聯，其中P*為Rp；及至少一個式I之核苷酸間鍵聯，其中P*為Sp。
在一些實施例中，W為O、S或Se。在一些實施例中，W為O。在一些實施例中，W為S。在一些實施例中，W為Se。在一些實施例中，寡核苷酸包含至少一個式I之核苷酸間鍵聯，其中W為O。在一些實施例中，寡核苷酸包含至少一個式I之核苷酸間鍵聯，其中W為S。在一些實施例中，寡核苷酸包含至少一個式I之核苷酸間鍵聯，其中W為Se。
在一些實施例中，各R獨立地為氫或選自C1-C6脂族基、苯基、碳環基、芳基、雜芳基或雜環基之視情況經取代之基團。
在一些實施例中，R為氫。在一些實施例中，R為選自C1-C6脂族基、苯基、碳環基、芳基、雜芳基或雜環基之視情況經取代之基團。
在一些實施例中，R為視情況經取代之C1-C6脂族基。在一些實施例中，R為視情況經取代之C1-C6烷基。在一些實施例中，R為視情況經取代之直鏈或分支鏈己基。在一些實施例中，R為視情況經取代之直鏈或分支鏈戊基。在一些實施例中，R為視情況經取代之直鏈或分支鏈丁基。在一些實施例中，R為視情況經取代之直鏈或分支鏈丙 基。在一些實施例中，R為視情況經取代之乙基。在一些實施例中，R為視情況經取代之甲基。
在一些實施例中，R為視情況經取代之苯基。在一些實施例中，R為經取代之苯基。在一些實施例中，R為苯基。
在一些實施例中，R為視情況經取代之碳環基。在一些實施例中，R為視情況經取代之C3-C10碳環基。在一些實施例中，R為視情況經取代之單環碳環基。在一些實施例中，R為視情況經取代之環庚基。在一些實施例中，R為視情況經取代之環己基。在一些實施例中，R為視情況經取代之環戊基。在一些實施例中，R為視情況經取代之環丁基。在一些實施例中，R為視情況經取代之環丙基。在一些實施例中，R為視情況經取代之雙環碳環基。
在一些實施例中，R為視情況經取代之芳基。在一些實施例中，R為視情況經取代之雙環芳基環。
在一些實施例中，R為視情況經取代之雜芳基。在一些實施例中，R為具有1-3個獨立地選自氮、硫或氧之雜原子的視情況經取代之5-6員單環雜芳基環。在一些實施例中，R為具有1-3個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的經取代之5-6員單環雜芳基環。在一些實施例中，R為具有1-3個獨立地選自氮、硫或氧之雜原子的未經取代之5-6員單環雜芳基環。
在一些實施例中，R為具有1-3個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的視情況經取代之5員單環雜芳基環。在一些實施例中，R為具有1-3個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的視情況經取代之6員單環雜芳基環。
在一些實施例中，R為具有1個選自氮、氧或硫之雜原子的視情況經取代之5員單環雜芳基環。在一些實施例中，R係選自吡咯基、呋喃基或噻吩基。
在一些實施例中，R為具有2個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的視情況經取代之5員雜芳基環。在某些實施例中，R為具有1個氮原子及另一個選自硫或氧之雜原子的視情況經取代之5員雜芳基環。例示性R基包括視情況經取代之吡唑基、咪唑基、噻唑基、異噻唑基、噁唑基或異噁唑基。
在一些實施例中，R為具有1-3個氮原子之6員雜芳基環。在其他實施例中，R為具有1-2個氮原子之視情況經取代之6員雜芳基環。在一些實施例中，R為具有2個氮原子之視情況經取代之6員雜芳基環。在某些實施例中，R為具有1個氮之視情況經取代之6員雜芳基環。例示性R基包括視情況經取代之吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、噠嗪基、三嗪基或四嗪基。
在某些實施例中，R為具有1-4個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的視情況經取代之8-10員雙環雜芳基環。在一些實施例中，R為具有1-4個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的視情況經取代之5,6-稠合雜芳基環。在其他實施例中，R為具有1-2個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的視情況經取代之5,6-稠合雜芳基環。在某些實施例中，R為具有1個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的視情況經取代之5,6-稠合雜芳基環。在一些實施例中，R為視情況經取代之吲哚基。在一些實施例中，R為視情況經取代之氮雜雙環[3.2.1]辛基。在某些實施例中，R為具有2個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的視情況經取代之5,6-稠合雜芳基環。在一些實施例中，R為視情況經取代之氮雜吲哚基。在一些實施例中，R為視情況經取代之苯并咪唑基。在一些實施例中，R為視情況經取代之苯并噻唑基。在一些實施例中，R為視情況經取代之苯并噁唑基。在一些實施例中，R為視情況經取代之吲唑基。在某些實施例中，R為具有3個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的視情況經取代之5,6-稠合雜芳基環。
在某些實施例中，R為具有1-4個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的視情況經取代之6,6-稠合雜芳基環。在一些實施例中，R為具有1-2個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的視情況經取代之6,6-稠合雜芳基環。在其他實施例中，R為具有1個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的視情況經取代之6,6-稠合雜芳基環。在一些實施例中，R為視情況經取代之喹啉基。在一些實施例中，R為視情況經取代之異喹啉基。根據一個態樣，R為具有2個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的視情況經取代之6,6-稠合雜芳基環。在一些實施例中，R為喹唑啉或喹喏啉。
在一些實施例中，R為視情況經取代之雜環基。在一些實施例中，R為具有1-2個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子之視情況經取代之3-7員飽和或部分不飽和雜環。在一些實施例中，R為具有1-2個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的經取代之3-7員飽和或部分不飽和雜環。在一些實施例中，R為具有1-2個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的未經取代之3-7員飽和或部分不飽和雜環。
在一些實施例中，R為視情況經取代之雜環基。在一些實施例中，R為具有1-2個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的視情況經取代之6員飽和或部分不飽和雜環。在一些實施例中，R為具有2個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的視情況經取代之6員部分不飽和雜環。在一些實施例中，R為具有2個氧原子的視情況經取代之6員部分不飽和雜環。
在某些實施例中，R為具有1-2個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的3-7員飽和或部分不飽和雜環。在某些實施例中，R為環氧乙烷基、氧雜環丁烷基、四氫呋喃基、四氫哌喃基、氧雜環庚烷基、氮丙啶基、氮雜環丁烷基、吡咯啶基、哌啶基、氮雜環庚烷基、硫雜環丙烷基、硫雜環丁烷基、四氫噻吩基、四氫硫哌喃基、硫雜環庚烷基、 二氧戊環基、氧硫雜環戊烷基、噁唑啶基、咪唑啶基、噻唑啶基、二硫雜環戊烷基、二氧雜環己烷基、嗎啉基、氧硫雜環己烷基、哌嗪基、硫嗎啉基、二噻烷基、二氧雜環庚烷基、氧氮雜環庚烷基、氧硫雜環庚基、二硫雜環庚基、二氮雜環庚烷基、二氫呋喃酮基、四氫哌喃酮基、氧雜環庚酮基、吡咯啶酮基、哌啶酮基、氮雜環庚酮基、二氫噻吩酮基、四氫硫哌喃酮基、硫雜環庚酮基、噁唑啶酮基、氧氮雜環己酮基、氧氮雜環庚酮基、二氧雜環戊酮基、二氧雜環己酮基、二氧雜環庚酮基、氧硫雜環戊酮基、氧雜噻喃酮基、氧硫雜環庚酮基、噻唑啶酮基、噻嗪酮基、硫氮雜環庚酮基、咪唑啶酮基、四氫嘧啶酮基、二氮雜環庚酮基、咪唑啶二酮基、噁唑啶二酮基、噻唑啶二酮基、二氧雜環戊烷二酮基、氧硫雜環戊烷二酮基、哌嗪二酮基、嗎啉二酮基、硫嗎啉二酮基、四氫哌喃基、四氫呋喃基、嗎啉基、硫嗎啉基、哌啶基、哌嗪基、吡咯啶基、四氫噻吩基或四氫硫哌喃基。在一些實施例中，R為具有1-2個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的視情況經取代之5員飽和或部分不飽和雜環。
在某些實施例中，R為具有1-2個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的視情況經取代之5-6員部分不飽和單環。在某些實施例中，R為視情況經取代之四氫吡啶基、二氫噻唑基、二氫噁唑基或噁唑啉基。
在一些實施例中，R為具有1-4個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的視情況經取代之8-10員雙環飽和或部分不飽和雜環。在一些實施例中，R為視情況經取代之吲哚啉基。在一些實施例中，R為視情況經取代之異吲哚啉基。在一些實施例中，R為視情況經取代之1,2,3,4-四氫喹啉。在一些實施例中，R為視情況經取代之1,2,3,4-四氫異喹啉。
在一些實施例中，各R'獨立地為-R、-C(O)R、-CO2R或-SO2R，或： 同一氮上之兩個R'與其插入原子一起形成視情況經取代之雜環或雜芳基環，或同一碳上之兩個R'與其插入原子一起形成視情況經取代之芳基、碳環、雜環或雜芳基環。
在一些實施例中，R'為-R、-C(O)R、-CO2R或-SO2R，其中R如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，R'為-R，其中R如上文及此處所定義及描述。在一些實施例中，R'為氫。
在一些實施例中，R'為-C(O)R，其中R如上文所定義及此處所描述。在一些實施例中，R'為-CO2R，其中R如上文所定義及此處所描述。在一些實施例中，R'為-SO2R，其中R如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，同一氮上之兩個R'與其插入原子一起形成視情況經取代之雜環或雜芳基環。在一些實施例中，同一碳上之兩個R'與其插入原子一起形成視情況經取代之芳基、碳環、雜環或雜芳基環。
在一些實施例中，-Cy-為選自伸苯基、伸碳環基、伸芳基、伸雜芳基或伸雜環基的視情況經取代之二價環。
在一些實施例中，-Cy-為視情況經取代之伸苯基。在一些實施例中，-Cy-為視情況經取代之伸碳環基。在一些實施例中，-Cy-為視情況經取代之伸芳基。在一些實施例中，-Cy-為視情況經取代之伸雜芳基。在一些實施例中，-Cy-為視情況經取代之伸雜環基。
在一些實施例中，X、Y及Z各自獨立地為-O-、-S-、-N(-L-R1)-或L，其中L及R1各自獨立地如上文所定義及下文所述。
在一些實施例中，X為-O-。在一些實施例中，X為-S-。在一些實施例中，X為-O-或-S-。在一些實施例中，寡核苷酸包含至少一個式I之核苷酸間鍵聯，其中X為-O-。在一些實施例中，寡核苷酸包含 至少一個式I之核苷酸間鍵聯，其中X為-S-。在一些實施例中，寡核苷酸包含至少一個式I之核苷酸間鍵聯，其中X為-O-；及至少一個式I之核苷酸間鍵聯，其中X為-S-。在一些實施例中，寡核苷酸包含至少一個式I之核苷酸間鍵聯，其中X為-O-；及至少一個式I之核苷酸間鍵聯，其中X為-S-；及至少一個式I之核苷酸間鍵聯，其中L為視情況經取代之直鏈或分支鏈C1-C10伸烷基，其中L之一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經以下置換：視情況經取代之C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)-、-N(R')C(O)O-、-OC(O)N(R')-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-N(R')S(O)2-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(O)-或-C(O)O-。
在一些實施例中，X為-N(-L-R1)-。在一些實施例中，X為-N(R1)-。在一些實施例中，X為-N(R')-。在一些實施例中，X為-N(R)-。在一些實施例中，X為-NH-。
在一些實施例中，X為L。在一些實施例中，X為共價鍵。在一些實施例中，X為或視情況經取代之直鏈或分支鏈C1-C10伸烷基，其中L之一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經以下置換：視情況經取代之C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)-、-N(R')C(O)O-、-OC(O)N(R')-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-N(R')S(O)2-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(O)-或-C(O)O-。在一些實施例中，X為視情況經取代之C1-C10伸烷基或C1-C10伸烯基。在一些實施例中，X為亞甲基。
在一些實施例中，Y為-O-。在一些實施例中，Y為-S-。
在一些實施例中，Y為-N(-L-R1)-。在一些實施例中，Y為-N(R1)-。在一些實施例中，Y為-N(R')-。在一些實施例中，Y為-N(R)-。在一 些實施例中，Y為-NH-。
在一些實施例中，Y為L。在一些實施例中，L為共價鍵。在一些實施例中，Y為或視情況經取代之直鏈或分支鏈C1-C10伸烷基，其中L之一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經以下置換：視情況經取代之C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)-、-N(R')C(O)O-、-OC(O)N(R')-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-N(R')S(O)2-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(O)-或-C(O)O-。在一些實施例中，Y為視情況經取代之C1-C10伸烷基或C1-C10伸烯基。在一些實施例中，Y為亞甲基。
在一些實施例中，Z為-O-。在一些實施例中，Z為-S-。
在一些實施例中，Z為-N(-L-R1)-。在一些實施例中，Z為-N(R1)-。在一些實施例中，Z為-N(R')-。在一些實施例中，Z為-N(R)-。在一些實施例中，Z為-NH-。
在一些實施例中，Z為L。在一些實施例中，Z為共價鍵。在一些實施例中，Z為或視情況經取代之直鏈或分支鏈C1-C10伸烷基，其中L之一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經以下置換：視情況經取代之C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)-、-N(R')C(O)O-、-OC(O)N(R')-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-N(R')S(O)2-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(O)-或-C(O)O-。在一些實施例中，Z為視情況經取代之C1-C10伸烷基或C1-C10伸烯基。在一些實施例中，Z為亞甲基。
在一些實施例中，L為共價鍵或視情況經取代之直鏈或分支鏈C1-C10伸烷基，其中L之一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經以下置換：視情況經取代之C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、-C(R')2-、 -Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)-、-N(R')C(O)O-、-OC(O)N(R')-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-N(R')S(O)2-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(O)-或-C(O)O-。
在一些實施例中，L為共價鍵。在一些實施例中，L為視情況經取代之直鏈或分支鏈C1-C10伸烷基，其中L之一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經以下置換：視情況經取代之C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)-、-N(R')C(O)O-、-OC(O)N(R')-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-N(R')S(O)2-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(O)-或-C(O)O-。
在一些實施例中，L具有-L1-V-之結構，其中： L1為選自以下之視情況經取代之基團：、 、、、C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、伸碳 環基、伸芳基、C1-C6伸雜烷基、伸雜環基及伸雜芳基；V係選自-O-、-S-、-NR'-、C(R')2、-S-S-、-B-S-S-C-、 ，或選自C1-C6伸烷基、伸芳基、C1-C6伸雜烷基、伸雜環基 及伸雜芳基之視情況經取代之基團；A為=O、=S、=NR'或=C(R')2；B及C各自獨立地為-O-、-S-、-NR'-、-C(R')2-，或選自C1-C6伸烷基、伸碳環基、伸芳基、伸雜環基或伸雜芳基之視情況經取代之基 團；且各R'獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，L1為、、、、
在一些實施例中，L1為，其中環Cy'為視情況經取代之伸 芳基、伸碳環基、伸雜芳基或伸雜環基。在一些實施例中，L1為視情 況經取代之。在一些實施例中，L1為。
在一些實施例中，L1連接至X。在一些實施例中，L1為選自以下 之視情況經取代之基團：、、、 ，且硫原子連接至V。在一些實施例中，L1為選自以下之視 情況經取代之基團：、、、 ，且碳原子連接至X。
在一些實施例中，L具有以下結構： 其中：E為-O-、-S-、-NR'-或-C(R')2-；為單鍵或雙鍵；兩個RL1與其所鍵結之兩個碳原子一起形成視情況經取代之芳基、碳環、雜芳基或雜環；且各R'獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，L具有以下結構： 其中：G為-O-、-S-或-NR'；為單鍵或雙鍵；且兩個RL1與其所鍵結之兩個碳原子一起形成視情況經取代之芳基、C3-C10碳環、雜芳基或雜環。
在一些實施例中，L具有以下結構： 其中：E為-O-、-S-、-NR'-或-C(R')2-；D為=N-、=C(F)-、=C(Cl)-、=C(Br)-、=C(I)-、=C(CN)-、=C(NO2)-、=C(CO2-(C1-C6脂族基))-或=C(CF3)-；且各R'獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，L具有以下結構： 其中：G為-O-、-S-或-NR'；D為=N-、=C(F)-、=C(Cl)-、=C(Br)-、=C(I)-、=C(CN)-、=C(NO2)-、=C(CO2-(C1-C6脂族基))-或=C(CF3)-。
在一些實施例中，L具有以下結構： 其中：E為-O-、-S-、-NR'-或-C(R')2-；D為=N-、=C(F)-、=C(Cl)-、=C(Br)-、=C(I)-、=C(CN)-、=C(NO2)-、=C(CO2-(C1-C6脂族基))-或=C(CF3)-；且各R'獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，L具有以下結構： 其中：G為-O-、-S-或-NR'；D為=N-、=C(F)-、=C(Cl)-、=C(Br)-、=C(I)-、=C(CN)-、=C(NO2)-、=C(CO2-(C1-C6脂族基))-或=C(CF3)-。
在一些實施例中，L具有以下結構： 其中：E為-O-、-S-、-NR'-或-C(R')2-；為單鍵或雙鍵；兩個RL1與其所鍵結之兩個碳原子一起形成視情況經取代之芳基、C3-C10碳環、雜芳基或雜環；且各R'獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，L具有以下結構： 其中：G為-O-、-S-或-NR'；為單鍵或雙鍵；兩個RL1與其所鍵結之兩個碳原子一起形成視情況經取代之芳基、C3-C10碳環、雜芳基或雜環；且各R'獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，L具有以下結構： 其中：E為-O-、-S-、-NR'-或-C(R')2-；D為=N-、=C(F)-、=C(Cl)-、=C(Br)-、=C(I)-、=C(CN)-、=C(NO2)-、=C(CO2-(C1-C6脂族基))-或=C(CF3)-；且各R'獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，L具有以下結構： 其中：G為-O-、-S-或-NR'；D為=N-、=C(F)-、=C(Cl)-、=C(Br)-、=C(I)-、=C(CN)-、=C(NO2)-、=C(CO2-(C1-C6脂族基))-或=C(CF3)-；且各R'獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，L具有以下結構： 其中：E為-O-、-S-、-NR'-或-C(R')2-；D為=N-、=C(F)-、=C(Cl)-、=C(Br)-、=C(I)-、=C(CN)-、=C(NO2)-、=C(CO2-(C1-C6脂族基))-或=C(CF3)-；且各R'獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，L具有以下結構： 其中：G為-O-、-S-或-NR'；D為=N-、=C(F)-、=C(Cl)-、=C(Br)-、=C(I)-、=C(CN)-、=C(NO2)-、=C(CO2-(C1-C6脂族基))-或=C(CF3)-；且各R'獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，L具有以下結構： 其中：E為-O-、-S-、-NR'-或-C(R')2-；為單鍵或雙鍵；兩個RL1與其所鍵結之兩個碳原子一起形成視情況經取代之芳基、C3-C10碳環、雜芳基或雜環；且各R'獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，L具有以下結構： 其中：G為-O-、-S-或-NR'；為單鍵或雙鍵；兩個RL1與其所鍵結之兩個碳原子一起形成視情況經取代之芳基、C3-C10碳環、雜芳基或雜環；且各R'獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，L具有以下結構： 其中：E為-O-、-S-、-NR'-或-C(R')2-；D為=N-、=C(F)-、=C(Cl)-、=C(Br)-、=C(I)-、=C(CN)-、=C(NO2)-、=C(CO2-(C1-C6脂族基))-或=C(CF3)-；且各R'獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，L具有以下結構： 其中：G為-O-、-S-或-NR'；D為=N-、=C(F)-、=C(Cl)-、=C(Br)-、=C(I)-、=C(CN)-、=C(NO2)-、=C(CO2-(C1-C6脂族基))-或=C(CF3)-；且R'如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，L具有以下結構： 其中：E為-O-、-S-、-NR'-或-C(R')2-；D為=N-、=C(F)-、=C(Cl)-、=C(Br)-、=C(I)-、=C(CN)-、=C(NO2)-、=C(CO2-(C1-C6脂族基))-或=C(CF3)-；且各R'獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，L具有以下結構： 其中：G為-O-、-S-或-NR'；D為=N-、=C(F)-、=C(Cl)-、=C(Br)-、=C(I)-、=C(CN)-、=C(NO2)-、=C(CO2-(C1-C6脂族基))-或=C(CF3)-；且R'如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，L具有以下結構： 其中苯基環視情況經取代。在一些實施例中，苯基環未經取代。在一些實施例中，苯基環經取代。
在一些實施例中，L具有以下結構： 其中苯基環視情況經取代。在一些實施例中，苯基環未經取代。在一些實施例中，苯基環經取代。
在一些實施例中，L具有以下結構： 其中：為單鍵或雙鍵；且兩個RL1與其所鍵結之兩個碳原子一起形成視情況經取代之芳基、C3-C10碳環、雜芳基或雜環。
在一些實施例中，L具有以下結構： 其中：G為-O-、-S-或-NR'；為單鍵或雙鍵；且兩個RL1與其所鍵結之兩個碳原子一起形成視情況經取代之芳 基、C3-C10碳環、雜芳基或雜環。
在一些實施例中，E為-O-、-S-、-NR'-或-C(R')2-，其中各R'獨立地如上文所定義及此處所描述。在一些實施例中，E為-O-、-S-或-NR'-。在一些實施例中，E為-O-、-S-或-NH-。在一些實施例中，E為-O-。在一些實施例中，E為-S-。在一些實施例中，E為-NH-。
在一些實施例中，G為-O-、-S-或-NR'，其中各R'獨立地如上文所定義及此處所描述。在一些實施例中，G為-O-、-S-或-NH-。在一些實施例中，G為-O-。在一些實施例中，G為-S-。在一些實施例中，G為-NH-。
在一些實施例中，L為-L3-G-，其中：L3為視情況經取代之C1-C5伸烷基或伸烯基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經-O-、-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、- C(NR')-、-S(O)-、-S(O)2-或置換；且 其中G、R'及環Cy'各自獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，L為-L3-S-，其中L3如上文所定義及此處所描述。在一些實施例中，L為-L3-O-，其中L3如上文所定義及此處所描述。在一些實施例中，L為-L3-N(R')-，其中L3及R'各自獨立地如上文所定義及此處所描述。在一些實施例中，L為-L3-NH-，其中L3及R'各自獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，L3為視情況經取代之C5伸烷基或伸烯基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經-O-、-S-、-N(R')-、-C(O)-、- C(S)-、-C(NR')-、-S(O)-、-S(O)2-或置換，且R'及環Cy'各自獨 立地如上文所定義及此處所描述。在一些實施例中，L3為視情況經取 代之C5伸烷基。在一些實施例中，-L3-G-為。
在一些實施例中，L3為視情況經取代之C4伸烷基或伸烯基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經-O-、-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-S(O)-、-S(O)2-或置換，且R'及Cy'各自獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，-L3-G-為、、
在一些實施例中，L3為視情況經取代之C3伸烷基或伸烯基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經-O-、-S-、-N(R')-、-C(O)-、- C(S)-、-C(NR')-、-S(O)-、-S(O)2-或置換，且R'及Cy'各自獨立 地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，-L3-G-為、、、
在一些實施例中，L為。在一些實施例中，L為 或。在一些實施例中，L為或。
在一些實施例中，L3為視情況經取代之C2伸烷基或伸烯基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經-O-、-S-、-N(R')-、-C(O)-、- C(S)-、-C(NR')-、-S(O)-、-S(O)2-或置換，且R'及Cy'各自獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，-L3-G-為，其中G及Cy'各自獨立地如 上文所定義及此處所描述。在一些實施例中，L為。
在一些實施例中，L為-L4-G-，其中L4為視情況經取代之C1-C2伸烷基；且G如上文所定義及此處所描述。在一些實施例中，L為-L4-G-，其中L4為視情況經取代之C1-C2伸烷基；G如上文所定義及此處所描述；且G連接至R1。在一些實施例中，L為-L4-G-，其中L4為視情況經取代之亞甲基；G如上文所定義及此處所描述；且G連接至R1。在一些實施例中，L為-L4-G-，其中L4為亞甲基；G如上文所定義及此處所描述；且G連接至R1。在一些實施例中，L為-L4-G-，其中L4為視情況經取代之-(CH2)2-；G如上文所定義及此處所描述；且G連接至R1。在一些實施例中，L為-L4-G-，其中L4為-(CH2)2-；G如上文所定義及此處所描述；且G連接至R1。
在一些實施例中，L為或，其中G如上文所定義及 此處所描述，且G連接至R1。在一些實施例中，L為，其中G如 上文所定義及此處所描述，且G連接至R1。在一些實施例中，L為 ，其中G如上文所定義及此處所描述，且G連接至R1。在一些 實施例中，L為或，其中硫原子連接至R1。在一些實施 例中，L為或，其中氧原子連接至R1。
在一些實施例中，L為、或，其中 G如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，L為-S-RL3-或-S-C(O)-RL3-，其中RL3為視情況經取代之直鏈或分支鏈C1-C9伸烷基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經以下置換：視情況經取代之C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)-、-N(R')C(O)O-、-OC(O)N(R')-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-N(R')S(O)2-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(O)-或-C(O)O-，其中R'及-Cy-各自獨立地如上文所定義及此處所描述。在一些實施例中，L為-S-RL3-或-S-C(O)-RL3-，其中RL3為視情況經取代之C1-C6伸烷基。在一些實施例中，L為-S-RL3-或-S-C(O)-RL3-，其中RL3為視情況經取代之C1-C6伸烯基。在一些實施例中，L為-S-RL3-或-S-C(O)-RL3-，其中RL3為視情況經取代之C1-C6伸烷基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經視情況經取代之C1-C6伸烯基、伸芳基或伸雜芳基置換。在一些實施例中，在一些實施例中，RL3為視情況經取代之-S-(C1-C6伸烯基)-、-S-(C1-C6伸烷基)-、-S-(C1-C6伸烷基)-伸芳基-(C1-C6伸烷基)-、-S-CO-伸芳基-(C1-C6伸烷基)-或-S-CO-(C1-C6伸烷基)-伸芳基-(C1-C6伸烷基)-。
在一些實施例中，L為、、、
在一些實施例中，L為。在一些 實施例中，L為。在一些實施例中，
在一些實施例中，上文及此處所述之L實施例中之硫原子連接至X。在一些實施例中，上文及此處所述之L實施例中之硫原子連接至Rl。
在一些實施例中，R1為鹵素、R或視情況經取代之C1-C50脂族基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經以下置換：視情況經取代之C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)-、-N(R')C(O)O-、-OC(O)N(R')-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-N(R')S(O)2-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(O)-或-C(O)O-，其中各變數獨立地如上文所定義及此處所描述。在一些實施例中，R1為鹵素、R或視情況經取代之C1-C10脂族基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經以下置換：視情況經取代之C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)-、-N(R')C(O)O-、-OC(O)N(R')-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-N(R')S(O)2-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(O)-或-C(O)O-，其中各變數獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，R1為氫。在一些實施例中，R1為鹵素。在一些實施例中，R1為-F。在一些實施例中，R1為-Cl。在一些實施例中，R1為-Br。在一些實施例中，R1為-I。
R1為R，其中R如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，R1為氫。在一些實施例中，R1為選自C1-C50脂族基、苯基、碳環基、芳基、雜芳基或雜環基之視情況經取代之基團。
在一些實施例中，R1為視情況經取代之C1-C50脂族基。在一些實施例中，R1為視情況經取代之C1-C10脂族基。在一些實施例中，R1為視情況經取代之C1-C6脂族基。在一些實施例中，R1為視情況經取代之C1-C6烷基。在一些實施例中，R1為視情況經取代之直鏈或分支鏈己基。在一些實施例中，R1為視情況經取代之直鏈或分支鏈戊基。在一些實施例中，R1為視情況經取代之直鏈或分支鏈丁基。在一些實施例中，R1為視情況經取代之直鏈或分支鏈丙基。在一些實施例中，R1為視情況經取代之乙基。在一些實施例中，R1為視情況經取代之甲基。
在一些實施例中，R1為視情況經取代之苯基。在一些實施例中，R1為經取代之苯基。在一些實施例中，R1為苯基。
在一些實施例中，R1為視情況經取代之碳環基。在一些實施例中，R1為視情況經取代之C3-C10碳環基。在一些實施例中，R1為視情況經取代之單環碳環基。在一些實施例中，R1為視情況經取代之環庚基。在一些實施例中，R1為視情況經取代之環己基。在一些實施例中，R1為視情況經取代之環戊基。在一些實施例中，R1為視情況經取代之環丁基。在一些實施例中，R1為視情況經取代之環丙基。在一些實施例中，R1為視情況經取代之雙環碳環基。
在一些實施例中，R1為視情況經取代之C1-C50多環烴。在一些實施例中，R1為視情況經取代之C1-C50多環烴，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經以下置換：視情況經取代之C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)-、-N(R')C(O)O-、-OC(O)N(R')-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-N(R')S(O)2-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(O)-或-C(O)O-，其中各變數獨立地如上文所定義及此處所描述。在一些實施例中，R1為視情況經取 代之。在一些實施例中，R1為 。在一些實施例中，R1為視情況經取代之
在一些實施例中，R1為視情況經取代之C1-C50脂族基，其包含一或多個視情況經取代之多環烴部分。在一些實施例中，R1為視情況經取代之C1-C50脂族基，其包含一或多個視情況經取代之多環烴部分，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經以下置換：視情況經取代之C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)-、-N(R')C(O)O-、-OC(O)N(R')-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-N(R')S(O)2-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(O)-或-C(O)O-，其中各變數獨立地如上文所定義及此處所描述。在一些實施例中，R1為視情況經取代之C1-C50脂族基，其包含一或多個視情況經 取代之、、或 。在一些實施例中，R1為。 在一些實施例中，R1為。在一些實施例中， R1為。在一些 實施例中，R1為。在一些實 施例中，R1為。
在一些實施例中，R1為視情況經取代之芳基。在一些實施例中，R1為視情況經取代之雙環芳基環。
在一些實施例中，R1為視情況經取代之雜芳基。在一些實施例中，R1為具有1-3個獨立地選自氮、硫或氧之雜原子的視情況經取代之5-6員單環雜芳基環。在一些實施例中，R1為具有1-3個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的經取代之5-6員單環雜芳基環。在一些實施例中，R1為具有1-3個獨立地選自氮、硫或氧之雜原子的未經取代之5-6員單環雜芳基環。
在一些實施例中，R1為具有1-3個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的視情況經取代之5員單環雜芳基環。在一些實施例中，R1為具有1-3個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的視情況經取代之6員單環雜芳基環。
在一些實施例中，R1為具有1個選自氮、氧或硫之雜原子的視情況經取代之5員單環雜芳基環。在一些實施例中，R1係選自吡咯基、呋喃基或噻吩基。
在一些實施例中，R1為具有2個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的視情況經取代之5員雜芳基環。在某些實施例中，R1為具有1個氮原子及另一個選自硫或氧之雜原子的視情況經取代之5員雜芳基環。例示性R1基團包括視情況經取代之吡唑基、咪唑基、噻唑基、異噻唑基、噁唑基或異噁唑基。
在一些實施例中，R1為具有1-3個氮原子之6員雜芳基環。在其他實施例中，R1為具有1-2個氮原子之視情況經取代之6員雜芳基環。在一些實施例中，R1為具有2個氮原子之視情況經取代之6員雜芳基環。在某些實施例中，R1為具有1個氮之視情況經取代之6員雜芳基環。例示性R1基團包括視情況經取代之吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、噠嗪基、三嗪基或四嗪基。
在某些實施例中，R1為具有1-4個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的視情況經取代之8-10員雙環雜芳基環。在一些實施例中，R1為具有1-4個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的視情況經取代之5,6-稠合雜芳基環。在其他實施例中，R1為具有1-2個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的視情況經取代之5,6-稠合雜芳基環。在某些實施例中，R1為具有1個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的視情況經取代之5,6-稠合雜芳基環。在一些實施例中，R1為視情況經取代之吲哚基。在一些實施例中，R1為視情況經取代之氮雜雙環[3.2.1]辛基。在某些實施例中，R1為具有2個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的視情況經取代之5,6-稠合雜芳基環。在一些實施例中，R1為視情況經取代之氮雜吲哚基。在一些實施例中，R1為視情況經取代之苯并咪唑基。在一些實施例中，R1為視情況經取代之苯并噻唑基。在一些實施例中，R1為視情況經取代之苯并噁唑基。在一些實施例中，R1為視情況經取代之吲唑基。在某些實施例中，R1為具有3個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的視情況經取代之5,6-稠合雜芳基環。
在某些實施例中，R1為具有1-4個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的視情況經取代之6,6-稠合雜芳基環。在一些實施例中，R1為具有1-2個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的視情況經取代之6,6-稠合雜芳基環。在其他實施例中，R1為具有1個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的視情況經取代之6,6-稠合雜芳基環。在一些實施例中，R1為視情 況經取代之喹啉基。在一些實施例中，R1為視情況經取代之異喹啉基。根據一個態樣，R1為具有2個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的視情況經取代之6,6-稠合雜芳基環。在一些實施例中，R1為喹唑啉或喹喏啉。
在一些實施例中，R1為視情況經取代之雜環基。在一些實施例中，R1為具有1-2個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子之視情況經取代之3-7員飽和或部分不飽和雜環。在一些實施例中，R1為具有1-2個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的經取代之3-7員飽和或部分不飽和雜環。在一些實施例中，R1為具有1-2個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的未經取代之3-7員飽和或部分不飽和雜環。
在一些實施例中，R1為視情況經取代之雜環基。在一些實施例中，R1為具有1-2個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的視情況經取代之6員飽和或部分不飽和雜環。在一些實施例中，R1為具有2個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的視情況經取代之6員部分不飽和雜環。在一些實施例中，R1為具有2個氧原子的視情況經取代之6員部分不飽和雜環。
在某些實施例中，R1為具有1-2個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的3-7員飽和或部分不飽和雜環。在某些實施例中，R1為環氧乙烷基、氧雜環丁烷基、四氫呋喃基、四氫哌喃基、氧雜環庚烷基、氮丙啶基、氮雜環丁烷基、吡咯啶基、哌啶基、氮雜環庚烷基、硫雜環丙烷基、硫雜環丁烷基、四氫噻吩基、四氫硫哌喃基、硫雜環庚烷基、二氧戊環基、氧硫雜環戊烷基、噁唑啶基、咪唑啶基、噻唑啶基、二硫雜環戊烷基、二氧雜環己烷基、嗎啉基、氧硫雜環己烷基、哌嗪基、硫嗎啉基、二噻烷基、二氧雜環庚烷基、氧氮雜環庚烷基、氧硫雜環庚基、二硫雜環庚基、二氮雜環庚烷基、二氫呋喃酮基、四氫哌喃酮基、氧雜環庚酮基、吡咯啶酮基、哌啶酮基、氮雜環庚酮基、二 氫噻吩酮基、四氫硫哌喃酮基、硫雜環庚酮基、噁唑啶酮基、氧氮雜環己酮基、氧氮雜環庚酮基、二氧雜環戊酮基、二氧雜環己酮基、二氧雜環庚酮基、氧硫雜環戊酮基、氧雜噻喃酮基、氧硫雜環庚酮基、噻唑啶酮基、噻嗪酮基、硫氮雜環庚酮基、咪唑啶酮基、四氫嘧啶酮基、二氮雜環庚酮基、咪唑啶二酮基、噁唑啶二酮基、噻唑啶二酮基、二氧雜環戊烷二酮基、氧硫雜環戊烷二酮基、哌嗪二酮基、嗎啉二酮基、硫嗎啉二酮基、四氫哌喃基、四氫呋喃基、嗎啉基、硫嗎啉基、哌啶基、哌嗪基、吡咯啶基、四氫噻吩基或四氫硫哌喃基。在一些實施例中，R1為具有1-2個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的視情況經取代之5員飽和或部分不飽和雜環。
在某些實施例中，R1為具有1-2個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的視情況經取代之5-6員部分不飽和單環。在某些實施例中，R1為視情況經取代之四氫吡啶基、二氫噻唑基、二氫噁唑基或噁唑啉基。
在一些實施例中，R1為具有1-4個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的視情況經取代之8-10員雙環飽和或部分不飽和雜環。在一些實施例中，R1為視情況經取代之吲哚啉基。在一些實施例中，R1為視情況經取代之異吲哚啉基。在一些實施例中，R1為視情況經取代之1,2,3,4-四氫喹啉。在一些實施例中，R1為視情況經取代之1,2,3,4-四氫異喹啉。
在一些實施例中，R1為視情況經取代之C1-C10脂族基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經以下置換：視情況經取代之C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)-、-N(R')C(O)O-、-OC(O)N(R')-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-N(R')S(O)2-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(O)-或-C(O)O-，其中各變數獨立地如上文所定義及此處所描述。在一些實施例中，R1 為視情況經取代之C1-C10脂族基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經以下置換：視情況選用之-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)-、-N(R')C(O)O-、-OC(O)N(R')-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-N(R')S(O)2-、-OC(O)-或-C(O)O-，其中各R'獨立地如上文所定義及此處所描述。在一些實施例中，R1為視情況經取代之C1-C10脂族基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經以下置換：視情況選用之-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-OC(O)-或-C(O)O-，其中各R'獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，R1為、 、、、(Ga1NAc)、 、CH3-、、、、
在一些實施例中，R1為CH3-、、、
在一些實施例中，R1包含末端視情況經取代之-(CH2)2-部分，其連接至L。此類R1基團之實例描述如下：
在一些實施例中，R1包含末端視情況經取代之-(CH2)-部分，其連接至L。例示性此類R1基團描述如下：
在一些實施例中，R1為-S-RL2，其中RL2為視情況經取代之C1-C9脂族基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經以下置換：視情況經取代之C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)-、-N(R')C(O)O-、-OC(O)N(R')-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-N(R')S(O)2-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(O)-或-C(O)O-，其中R'及-Cy-各自獨立地如上文所定義及此處所描述。在一些實施例中，R1為-S-RL2，其中硫原子與L基團中之硫原子連接。
在一些實施例中，R1為-C(O)-RL2，其中RL2為視情況經取代之C1-C9脂族基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經以下置換：視情況經取代之C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)-、-N(R')C(O)O-、-OC(O)N(R')-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-N(R')S(O)2-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(O)-或-C(O)O-，其中R'及-Cy-各自獨立地如上文所定義及此處所描述。在一些實施例中，R1為-C(O)-RL2，其中羰基與L基團中之G連接。在一些實施例中，R1為-C(O)-RL2，其中羰基與L基團中之硫原子連接。
在一些實施例中，RL2為視情況經取代之C1-C9脂族基。在一些實施例中，RL2為視情況經取代之C1-C9烷基。在一些實施例中，RL2為 視情況經取代之C1-C9烯基。在一些實施例中，RL2為視情況經取代之C1-C9炔基。在一些實施例中，RL2為視情況經取代之C1-C9脂族基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經-Cy-或-C(O)-置換。在一些實施例中，RL2為視情況經取代之C1-C9脂族基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經-Cy-置換。在一些實施例中，RL2為視情況經取代之C1-C9脂族基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經視情況經取代之伸雜環基置換。在一些實施例中，RL2為視情況經取代之C1-C9脂族基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經視情況經取代之伸芳基置換。在一些實施例中，RL2為視情況經取代之C1-C9脂族基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經視情況經取代之伸雜芳基置換。在一些實施例中，RL2為視情況經取代之C1-C9脂族基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經視情況經取代之C3-C10伸碳環基置換。在一些實施例中，RL2為視情況經取代之C1-C9脂族基，其中兩個亞甲基單元視情況且獨立地經-Cy-或-C(O)-置換。在一些實施例中，RL2為視情況經取代之C1-C9脂族基，其中兩個亞甲基單元視情況且獨立地經-Cy-或-C(O)-置換。例示性RL2基團描述如下：
在一些實施例中，R1為氫，或選自以下之視情況經取代之基團： 、、-S-(C1-C10脂族基)、C1-C10脂族基、芳基、C1- C6雜烷基、雜芳基及雜環基。在一些實施例中，R1為、 或-S-(C1-C10脂族基)。在一些實施例中，R1為、
在一些實施例中，R1為選自-S-(C1-C6脂族基)、C1-C10脂族基、C1-C6雜脂族基、芳基、雜環基及雜芳基的視情況經取代之基團。
在一些實施例中，R1為、、、
在一些實施例中，上文及此處所述之R1實施例中之硫原子與上文及此處所述之L實施例中之硫原子、G、E或-C(O)-部分連接。在一些實施例中，上文及此處所述之R1實施例中之-C(O)-部分與上文及此處所述之L實施例中之硫原子、G、E或-C(O)-部分連接。
在一些實施例中，-L-R1為上文及此處所述之L實施例及R1實施例之任何組合。
在一些實施例中，-L-R1為-L3-G-R1，其中各變數獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，-L-R1為-L4-G-R1，其中各變數獨立地如上文所 定義及此處所描述。
在一些實施例中，-L-R1為-L3-G-S-RL2，其中各變數獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，-L-R1為-L3-G-C(O)-RL2，其中各變數獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，-L-R1為、、 或，其中RL2為視情況經取代之C1-C9脂族基，其中一或多 個亞甲基單元視情況且獨立地經以下置換：視情況經取代之C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)-、-N(R')C(O)O-、-OC(O)N(R')-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-N(R')S(O)2-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(O)-或-C(O)O-，且各G獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，-L-R1為-RL3-S-S-RL2，其中各變數獨立地如上文所定義及此處所描述。在一些實施例中，-L-R1為-RL3-C(O)-S-S-RL2，其中各變數獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，-L-R1具有以下結構： 其中各變數獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，-L-R1具有以下結構： 其中各變數獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，-L-R1具有以下結構： 其中各變數獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，-L-R1具有以下結構： 其中各變數獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，-L-R1具有以下結構： 其中各變數獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，-L-R1具有以下結構： 其中各變數獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，-L-R1具有以下結構： 其中各變數獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，-L-R1具有以下結構： 其中各變數獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，-L-R1具有以下結構： 其中各變數獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，-L-R1具有以下結構： 其中各變數獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，-L-R1具有以下結構： 其中各變數獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，-L-R1具有以下結構： 其中各變數獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，-L-R1具有以下結構： 其中各變數獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，-L-R1具有以下結構： 其中各變數獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，-L-R1具有以下結構： 其中各變數獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，-L-R1具有以下結構： 其中各變數獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，-L-R1具有以下結構： 其中各變數獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，-L-R1具有以下結構： 其中各變數獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，-L-R1具有以下結構： 其中各變數獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，-L-R1具有以下結構： 其中各變數獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，-L-R1具有以下結構： 其中各變數獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，L具有以下結構： 其中各變數獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，-X-L-R1具有以下結構：
其中：苯基環視情況經取代，且R1及X各自獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，-L-R1為、 、、、(GalNAc)、 、CH3-、、、、
在一些實施例中，-L-R1為：
在一些實施例中，-L-R1為CH3-、、 。在一些實施例中，-L-R1為、
在一些實施例中，-L-R1包含末端視情況經取代之-(CH2)2-部分，其連接至X。在一些實施例中，-L-R1包含末端-(CH2)2-部分，其連接至X。此類-L-R1部分之實例描述如下：
在一些實施例中，-L-R1包含末端視情況經取代之-(CH2)-部分，其連接至X。在一些實施例中，-L-R1包含末端-(CH2)-部分，其連接至X。此類-L-R1部分之實例描述如下：
在一些實施例中，-L-R1為
在一些實施例中，-L-R1為CH3-、、 ；且X為-S-。
在一些實施例中，-L-R1為CH3-、、 ，X為-S-，W為O，Y為-O-，且Z為-O-。
在一些實施例中，R1為、、、 、、、或-S-(C1-C10脂族基)。
在一些實施例中，R1為、、、
在一些實施例中，X為-O-或-S-，且R1為、 或-S-(C1-C10脂族基)。
在一些實施例中，X為-O-或-S-，且R1為、 、-S-(C1-C10脂族基)或-S- (C1-C50脂族基)。
在一些實施例中，L為共價鍵且-L-R1為R1。
在一些實施例中，-L-R1不為氫。
在一些實施例中，-X-L-R1為R1，為、、 、-S-(C1-C10脂族基)或-S-(C1- C50脂族基)。
在一些實施例中，-X-L-R1具有之結構，其中 部分視情況經取代。在一些實施例中，-X-L-R1為。在 一些實施例中，-X-L-R1為。在一些實施例中，-X-L-R1 為。在一些實施例中，-X-L-R1具有之結 構，其中X'為O或S，Y'為-O-、-S-或-NR'-，且部分視情況經 取代。在一些實施例中，Y'為-O-、-S-或-NH-。在一些實施例中， 為。在一些實施例中，為 。在一些實施例中，為。在 一些實施例中，-X-L-R1具有之結構，其中X'為O或S， 且部分視情況經取代。在一些實施例中，為 。在一些實施例中，-X-L-R1為，其中 視情況經取代。在一些實施例中，-X-L-R1為 ，其中經取代。在一些實施例中，-X-L-R1為 ，其中未經取代。
在一些實施例中，-X-L-R1為R1-C(O)-S-Lx-S-，其中Lx為選自 、、、及的視情況經取代之基 團。在一些實施例中，Lx為、、、及 。在一些實施例中，-X-L-R1為(CH3)3C-S-S-Lx-S-。在一些 實施例中，-X-L-R1為R1-C(=X')-Y'-C(R)2-S-Lx-S-。在一些實施例中，-X-L-R1為R-C(=X')-Y'-CH2-S-Lx-S-。在一些實施例中，-X-L-R1為
如熟習此項技術者將瞭解，此處所述之-X-L-R1基團中之多者可裂解且可在投與給個體之後轉化為-X-。在一些實施例中，-X-L-R1為可裂解的。在一些實施例中，-X-L-R1為-S-L-R1，且在投與給個體之後轉化為-S-。在一些實施例中，個體之酶推動該轉化。如熟習此項技術者所瞭解，在投藥後-S-L-R1基團是否轉化為-S-之判定方法在此項技術中廣泛已知且實踐，包括用於研究藥物代謝及藥物動力學之彼等方法。
在一些實施例中，具有式I結構之核苷酸間鍵聯為、
在一些實施例中，式I之核苷酸間鍵聯具有式I-a結構：
其中各變數獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，式I之核苷酸間鍵聯具有式I-b結構：
其中各變數獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，式I之核苷酸間鍵聯為具有式I-c結構之硫代磷酸三酯鍵聯：
其中：P*為不對稱磷原子且為Rp或Sp；L為共價鍵或視情況經取代之直鏈或分支鏈C1-C10伸烷基，其中L 之一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經以下置換：視情況經取代之C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)-、-N(R')C(O)O-、-OC(O)N(R')-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-N(R')S(O)2-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(O)-或-C(O)O-；R1為鹵素、R或視情況經取代之C1-C50脂族基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經以下置換：視情況經取代之C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)-、-N(R')C(O)O-、-OC(O)N(R')-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-N(R')S(O)2-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(O)-或-C(O)O-；各R'獨立地為-R、-C(O)R、-CO2R或-SO2R，或：同一氮上之兩個R'與其插入原子一起形成視情況經取代之雜環或雜芳基環，或同一碳上之兩個R'與其插入原子一起形成視情況經取代之芳基、碳環、雜環或雜芳基環；-Cy-為選自伸苯基、伸碳環基、伸芳基、伸雜芳基或伸雜環基之視情況經取代之二價環；各R獨立地為氫或選自C1-C6脂族基、苯基、碳環基、芳基、雜芳基或雜環基之視情況經取代之基團； 各獨立地表示與核苷之連接；且 當L為共價鍵時，R1不為-H。
在一些實施例中，具有式I結構之核苷酸間鍵聯為、
在一些實施例中，具有式I-c結構之核苷酸間鍵聯為
在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含一或多個磷酸二酯鍵聯，及一或多個具有式I-a、I-b或I-c之經修飾之核苷酸間鍵聯。
在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含至少一個磷酸二酯核苷酸間鍵聯及至少一個具有式I-c結構之硫代磷酸三酯鍵聯。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含至少一個磷酸二酯核苷酸間鍵聯及至少兩個具有式I-c結 構之硫代磷酸三酯鍵聯。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含至少一個磷酸二酯核苷酸間鍵聯及至少三個具有式I-c結構之硫代磷酸三酯鍵聯。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含至少一個磷酸二酯核苷酸間鍵聯及至少四個具有式I-c結構之硫代磷酸三酯鍵聯。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含至少一個磷酸二酯核苷酸間鍵聯及至少五個具有式I-c結構之硫代磷酸三酯鍵聯。
在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含GGCACAAGGGCACAGACTTC中所存在之序列。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含GGCACAAGGGCACAGACTTC中所存在之序列，其中該序列與GGCACAAGGGCACAGACTTC具有超過50%之一致性。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含GGCACAAGGGCACAGACTTC中所存在之序列，其中該序列與GGCACAAGGGCACAGACTTC具有超過60%之一致性。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含GGCACAAGGGCACAGACTTC中所存在之序列，其中該序列與GGCACAAGGGCACAGACTTC具有超過70%之一致性。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含GGCACAAGGGCACAGACTTC中所存在之序列，其中該序列與GGCACAAGGGCACAGACTTC具有超過80%之一致性。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含GGCACAAGGGCACAGACTTC中所存在之序列，其中該序列與GGCACAAGGGCACAGACTTC具有超過90%之一致性。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含GGCACAAGGGCACAGACTTC中所存在之序列，其中該序列與 GGCACAAGGGCACAGACTTC具有超過95%之一致性。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列。
在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含GGCACAAGGGCACAGACTTC中所存在之序列，其中至少一個核苷酸間鍵聯具有對掌性鍵聯磷。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含GGCACAAGGGCACAGACTTC中所存在之序列，其中至少一個核苷酸間鍵聯具有式I結構。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含GGCACAAGGGCACAGACTTC中所存在之序列，其中各核苷酸間鍵聯具有式I結構。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含GGCACAAGGGCACAGACTTC中所存在之序列，其中至少一個核苷酸間鍵聯具有式I-c結構。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含GGCACAAGGGCACAGACTTC中所存在之序列，其中各核苷酸間鍵聯具有式I-c結構。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含GGCACAAGGGCACAGACTTC中所存在之序列，其中至少一個核苷 酸間鍵聯為。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受 控寡核苷酸，其包含GGCACAAGGGCACAGACTTC中所存在之序 列，其中各核苷酸間鍵聯為。在一些實施例中，本發明提 供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含GGCACAAGGGCACAGACTTC 中所存在之序列，其中至少一個核苷酸間鍵聯為。在 一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含GGCACAAGGGCACAGACTTC中所存在之序列，其中各核苷酸間鍵 聯為。
在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列，其中至少一個核苷酸間鍵聯具有對掌性鍵聯磷。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列，其中至少一個核苷酸間鍵聯具有式I結構。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列，其中各核苷酸間鍵聯具有式I結構。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列，其中至少一個核苷酸間鍵聯具有式I-c結構。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列，其中各核苷酸間鍵聯具有式I-c結構。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列，其中至少一個核苷酸 間鍵聯為。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡 核苷酸，其包含GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列，其中各核苷 酸間鍵聯為。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控 寡核苷酸，其包含GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列，其中至少 一個核苷酸間鍵聯為。在一些實施例中，本發明提供 一種對掌性受控寡核苷酸，其包含GGCACAAGGGCACAGACTTC之 序列，其中各核苷酸間鍵聯為。
在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列，其中至少一個核苷酸間鍵聯具有對掌性鍵聯磷。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列，其中至少一個核苷酸間鍵聯具有式I結構。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列，其中各核苷酸間鍵聯具有式I結構。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列，其中至少一個核苷酸間鍵聯具有式I-c結構。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列，其中各核苷酸間鍵聯具有式I-c結構。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列，其中至少一個核苷酸 間鍵聯為。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡 核苷酸，其具有GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列，其中各核苷 酸間鍵聯為。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控 寡核苷酸，其具有GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列，其中至少 一個核苷酸間鍵聯為。在一些實施例中，本發明提供 一種對掌性受控寡核苷酸，其具有GGCACAAGGGCACAGACTTC之 序列，其中各核苷酸間鍵聯為。
在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列，其中至少一個鍵聯磷為Rp。一般技術者應理解，在對掌性受控寡核苷酸包含RNA序列之某些實施例中，各T獨立地且視情況經U置換。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列，其中各鍵聯磷為Rp。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列，其中至少一個鍵聯磷為Sp。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列，其中各鍵聯磷為Sp。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列，其中寡核苷酸為嵌段體。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列，其中寡核苷酸為立體嵌段體。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列，其中寡核苷酸為P修飾嵌段體。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列，其中寡核苷酸為鍵聯嵌段體。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列，其中寡核苷酸為交替體。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列，其中寡核苷酸為立體交替 體。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列，其中寡核苷酸為P修飾交替體。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列，其中寡核苷酸為鍵聯交替體。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列，其中寡核苷酸為單聚體。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列，其中寡核苷酸為立體單聚體。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列，其中寡核苷酸為P修飾單聚體。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列，其中寡核苷酸為鍵聯單聚體。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列，其中寡核苷酸為間隔體。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列，其中寡核苷酸為跳過體。
在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列，其中各胞嘧啶視情況且獨立地經5-甲基胞嘧啶置換。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列，其中至少一個胞嘧啶視情況且獨立地經5-甲基胞嘧啶置換。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有GGCACAAGGGCACAGACTTC之序列，其中各胞嘧啶視情況且獨立地經5-甲基胞嘧啶置換。
在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸設計成使得一或多個核苷酸包含易於在某些條件下「自行釋放(autorelease)」的磷修飾。亦 即，在某些條件下，特定磷修飾設計成使得其自寡核苷酸自行裂解，得到例如磷酸二酯，諸如天然產生之DNA及RNA中所存在之彼等磷酸二酯。在一些實施例中，此類磷修飾具有-O-L-R1之結構，其中L及R1各自獨立地如上文所定義及此處所描述。在一些實施例中，自行釋放基團包含N-嗎啉基。在一些實施例中，自行釋放基團之特徵在於將試劑傳遞至核苷酸間磷連接基團之能力，該試劑有助於進一步修飾磷原子，諸如脫硫。在一些實施例中，該試劑為水且進一步修飾為水解形成如天然產生之DNA及RNA中所存在之磷酸二酯。
在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含本文中所揭示之任何序列(非限制性實例包括任何表格中所揭示之任何序列)。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含與本文中所揭示之任何序列具有超過50%之一致性的序列。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含與本文中所揭示之任何序列具有超過60%之一致性的序列。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含與本文中所揭示之任何序列具有超過70%之一致性的序列。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含與本文中所揭示之任何序列具有超過80%之一致性的序列。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含與本文中所揭示之任何序列具有超過90%之一致性的序列。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含與本文中所揭示之任何序列具有超過95%之一致性的序列。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含本文中所揭示之任何序列。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有本文中所揭示之任何序列。
在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含本文中所揭示之任何序列，其中至少一個核苷酸間鍵聯具有對掌性 鍵聯磷。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含本文中所揭示之任何序列，其中至少一個核苷酸間鍵聯具有式I結構。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含本文中所揭示之任何序列，其中各核苷酸間鍵聯具有式I結構。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含本文中所揭示之任何序列，其中至少一個核苷酸間鍵聯具有式I-c結構。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含本文中所揭示之任何序列，其中各核苷酸間鍵聯具有式I-c結構。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含本文中所揭示 之任何序列，其中至少一個核苷酸間鍵聯為。在一些實施例 中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含本文中所揭示之任 何序列，其中各核苷酸間鍵聯為。在一些實施例中，本發明 提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含本文中所揭示之任何序列，其 中至少一個核苷酸間鍵聯為。在一些實施例中，本發 明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含本文中所揭示之任何序列， 其中各核苷酸間鍵聯為。
在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含本文中所揭示之任何序列，其中至少一個核苷酸間鍵聯具有對掌性鍵聯磷。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含本文中所揭示之任何序列，其中至少一個核苷酸間鍵聯具有式I結構。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含本文中所揭示之任何序列，其中各核苷酸間鍵聯具有式I結構。在 一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含本文中所揭示之任何序列，其中至少一個核苷酸間鍵聯具有式I-c結構。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含本文中所揭示之任何序列，其中各核苷酸間鍵聯具有式I-c結構。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含本文中所揭示 之任何序列，其中至少一個核苷酸間鍵聯為。在一些實施例 中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含本文中所揭示之任 何序列，其中各核苷酸間鍵聯為。在一些實施例中，本發明 提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含本文中所揭示之任何序列，其 中至少一個核苷酸間鍵聯為。在一些實施例中，本發 明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其包含本文中所揭示之任何序列， 其中各核苷酸間鍵聯為。
在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有本文中所揭示之任何序列，其中至少一個核苷酸間鍵聯具有對掌性鍵聯磷。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有本文中所揭示之任何序列，其中至少一個核苷酸間鍵聯具有式I結構。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有本文中所揭示之任何序列，其中各核苷酸間鍵聯具有式I結構。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有本文中所揭示之任何序列，其中至少一個核苷酸間鍵聯具有式I-c結構。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有本文中所揭示之任何序列，其中各核苷酸間鍵聯具有式I-c結構。在一些實 施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有本文中所揭示 之任何序列，其中至少一個核苷酸間鍵聯為。在一些實施例 中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有本文中所揭示之任 何序列，其中各核苷酸間鍵聯為。在一些實施例中，本發明 提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有本文中所揭示之任何序列，其 中至少一個核苷酸間鍵聯為。在一些實施例中，本發 明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有本文中所揭示之任何序列， 其中各核苷酸間鍵聯為。
在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有本文中所揭示之任何序列，其中至少一個鍵聯磷為Rp。一般技術者應理解，在對掌性受控寡核苷酸包含RNA序列之某些實施例中，各T獨立地且視情況經U置換。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有本文中所揭示之任何序列，其中各鍵聯磷為Rp。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有本文中所揭示之任何序列，其中至少一個鍵聯磷為Sp。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有本文中所揭示之任何序列，其中各鍵聯磷為Sp。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有本文中所揭示之任何序列，其中寡核苷酸為嵌段體。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有本文中所揭示之任何序列，其中寡核苷酸為立體嵌段體。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有本文中所揭示之任何序列，其中寡核苷酸為P修飾嵌段體。在一些實施例中，本 發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有本文中所揭示之任何序列，其中寡核苷酸為鍵聯嵌段體。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有本文中所揭示之任何序列，其中寡核苷酸為交替體。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有本文中所揭示之任何序列，其中寡核苷酸為立體交替體。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有本文中所揭示之任何序列，其中寡核苷酸為P修飾交替體。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有本文中所揭示之任何序列，其中寡核苷酸為鍵聯交替體。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有本文中所揭示之任何序列，其中寡核苷酸為單聚體。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有本文中所揭示之任何序列，其中寡核苷酸為立體單聚體。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有本文中所揭示之任何序列，其中寡核苷酸為P修飾單聚體。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有本文中所揭示之任何序列，其中寡核苷酸為鍵聯單聚體。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有本文中所揭示之任何序列，其中寡核苷酸為間隔體。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有本文中所揭示之任何序列，其中寡核苷酸為跳過體。
在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有本文中所揭示之任何序列，其中各胞嘧啶視情況且獨立地經5-甲基胞嘧啶置換。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有本文中所揭示之任何序列，其中至少一個胞嘧啶視情況且獨立地經5-甲基胞嘧啶置換。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其具有本文中所揭示之任何序列，其中各胞嘧啶視 情況且獨立地經5-甲基胞嘧啶置換。
在各種實施例中，本文中所揭示之任何序列可與如本文中所揭示或此項技術中已知之以下中之一或多者組合：主鏈鍵聯模式；主鏈對掌性中心模式；及主鏈P修飾模式；鹼基修飾模式；糖修飾模式；主鏈鍵聯模式；主鏈對掌性中心模式；及主鏈P修飾模式。
在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸設計成使得所得醫藥特性經由在磷處之一或多個特定修飾而得以改良。此項技術中充分證明，某些寡核苷酸藉由核酸酶迅速地降解且展現出經由細胞質細胞膜之不良細胞吸收[Poijarvi-Virta等人，Curr.Med.Chem.(2006),13(28)；3441-65；Wagner等人，Med.Res.Rev.(2000),20(6)：417-51；Peyrottes等人，Mini Rev.Med.Chem.(2004),4(4)：395-408；Gosselin等人，(1996),43(1)：196-208；Bologna等人，(2002),Antisense & Nucleic Acid Drug Development 12：33-41]。舉例而言，Vives等人，Nucleic Acids Research(1999),27(20)：4071-76發現，第三丁基SATE原寡核苷酸(pro-oligonucleotide)呈現相比於母體寡核苷酸而言顯著增加的細胞透性。
在一些實施例中，在鍵聯磷處之修飾的特徵在於其藉由一或多個酯酶、核酸酶及/或細胞色素P450酶轉化為磷酸二酯之能力，諸如天然產生之DNA及RNA中所存在之彼等磷酸二酯，該等酶包括(但不限於)下表1A中所列之彼等酶。
在一些實施例中，在磷處之修飾產生P修飾部分，其特徵在於其充當前藥，例如P修飾部分有助於寡核苷酸在移除之前傳遞至所要位置。舉例而言，在一些實施例中，P修飾部分係由在鍵聯磷處聚乙二醇化產生。相關技術之技術人員應瞭解，各種PEG鏈長皆為適用的且鏈長之選擇將部分地由試圖藉由聚乙二醇化達成之結果而定。舉例而言，在一些實施例中，為減少RES吸收及延長寡核苷酸之活體內循環壽命，進行聚乙二醇化。
在一些實施例中，根據本發明使用之聚乙二醇化試劑之分子量為約300g/mol至約100,000g/mol。在一些實施例中，聚乙二醇化試劑之分子量為約300g/mol至約10,000g/mol。在一些實施例中，聚乙二醇化試劑之分子量為約300g/mol至約5,000g/mol。在一些實施例中，聚乙二醇化試劑之分子量為約500g/mol。在一些實施例中，聚乙二醇化試劑之分子量為約1000g/mol。在一些實施例中，聚乙二醇化試劑之分子量為約3000g/mol。在一些實施例中，聚乙二醇化試劑之分子量為約5000g/mol。
在某些實施例中，聚乙二醇化試劑為PEG500。在某些實施例中，聚乙二醇化試劑為PEG1000。在某些實施例中，聚乙二醇化試劑為PEG3000。在某些實施例中，聚乙二醇化試劑為PEG5000。
在一些實施例中，P修飾部分之特徵在於其充當PK強化子，例如脂質、聚乙二醇化脂質等。
在一些實施例中，P修飾部分之特徵在於其充當促進細胞進入及/或內體逸出之試劑，諸如膜分裂性脂質或肽。
在一些實施例中，P修飾部分之特徵在於其充當靶向劑。在一些實施例中，P修飾部分為或包含靶向劑。如本文所用之片語「靶向劑」為與感興趣酬載(例如，寡核苷酸或寡核苷酸組合物)結合且亦與感興趣目標位點相互作用，使得感興趣酬載在與靶向劑結合時以遠大於在感興趣酬載不與靶向劑結合時在其他方面類似的條件下觀察到之程度的程度靶向於感興趣目標位點的實體。靶向劑可為或包含各種化學部分中之任一者，包括(例如)小分子部分、核酸、多肽、碳水化合物等。靶向劑由Adarsh等人，「Organelle Specific Targeted Drug Delivery-A Review」,International Journal of Research in Pharmaceutical and Biomedical Sciences,2011，第895頁進一步描述。
該等靶向劑之實例包括(但不限於)蛋白質(例如，運鐵蛋白)、寡 肽(例如，含環及非環RGD之寡肽)、抗體(單株及多株抗體，例如IgG、IgA、IgM、IgD、IgE抗體)、糖/碳水化合物(例如，單醣及/或寡醣(甘露糖、甘露糖-6-磷酸、半乳糖及其類似者))、維生素(例如，葉酸鹽)或其他小生物分子。在一些實施例中，靶向部分為類固醇分子(例如，膽汁酸，包括膽酸、去氧膽酸、去氫膽酸；皮質酮；地高辛(digoxigenin)；睾固酮；膽固醇；陽離子類固醇，諸如在皮質酮環之3位經由雙鍵連有三甲胺基甲基醯肼基之皮質酮，等)。在一些實施例中，靶向部分為親脂性分子(例如，脂環烴、飽和及不飽和脂肪酸、蠟、萜類及聚脂環烴，諸如金剛石般化合物(adamantine)及巴克敏斯特富勒烯(buckminsterfullerene))。在一些實施例中，親脂性分子為萜類，諸如維生素A、視黃酸、視黃醛或脫氫視黃醛。在一些實施例中，靶向部分為肽。
在一些實施例中，P修飾部分為式--X-L-R1之靶向劑，其中X、L及R1各自如上文式I中所定義。
在一些實施例中，P修飾部分之特徵在於其有助於細胞特異性傳遞。
在一些實施例中，P修飾部分之特徵在於其屬於上述類別中之一或多者。舉例而言，在一些實施例中，P修飾部分充當PK強化子及靶向配位體。在一些實施例中，P修飾部分充當前藥及內體逸出劑。相關技術中之技術人員將認識到，諸多其他此類組合為可能的且由本發明所涵蓋。
核鹼基
在一些實施例中，所提供寡核苷酸中存在之核鹼基為天然核鹼基或源自天然核鹼基之經修飾核鹼基。實例包括(但不限於)其各別胺基經醯基保護基保護的尿嘧啶、胸腺嘧啶、腺嘌呤、胞嘧啶及鳥嘌呤、2-氟尿嘧啶、2-氟胞嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、2,6-二胺基 嘌呤、氮雜胞嘧啶、嘧啶類似物(諸如假異胞嘧啶及假尿嘧啶)及其他經修飾核鹼基，諸如8位經取代之嘌呤、黃嘌呤或次黃嘌呤(後兩者為天然降解產物)。例示性經修飾核鹼基揭示於Chiu及Rana,RNA,2003,9,1034-1048；Limbach等人Nucleic Acids Research,1994,22,2183-2196；及Revankar及Rao,Comprehensive Natural Products Chemistry,第7卷，313中。
亦涵蓋由以下通式表示之化合物作為經修飾核鹼基：
其中R8為選自具有1至15個碳原子之脂族基、芳基、芳烷基、芳氧基烷基、碳環基、雜環基或雜芳基的視情況經取代之直鏈或分支鏈基團，僅舉例而言包括甲基、異丙基、苯基、苯甲基或苯氧基甲基；且R9及R10各自獨立地為選自直鏈或分支鏈脂族基、碳環基、芳基、雜環基及雜芳基的視情況經取代之基團。
經修飾核鹼基亦包括大小經擴展之核鹼基，其中已添加一或多個芳基環，諸如苯基環。涵蓋Glen研究目錄(www.glenresearch.com)；Krueger AT等人，Acc.Chem.Res.,2007,40,141-150；Kool,ET,Acc.Chem.Res.,2002,35,936-943；Benner S.A.等人，Nat.Rev.Genet., 2005,6,553-543；Romesberg,F.E.等人，Curr.Opin.Chem.Biol,2003,7,723-733；Hirao,I.,Curr.Opin.Chem.Biol.,2006,10,622-627中所述之核鹼基置換，如適用於合成本文中所述之核酸。此等大小經擴展之核鹼基的一些實例顯示如下：
本文中，經修飾核鹼基亦涵蓋不視為核鹼基而為其他部分之結構，諸如(但不限於)咕啉(corrin)或卟啉(porphyrin)衍生之環。卟啉衍生之鹼基置換已描述於Morales-Rojas,H及Kool,ET,Org.Lett.,2002,4,4377-4380中。下面示出卟啉衍生之環的實例，其可用作鹼基置換：
在一些實施例中，經修飾核鹼基具有以下視情況經取代之結構中之任一者：
在一些實施例中，經修飾之核鹼基發螢光。該等經螢光修飾之核鹼基之實例包括菲、芘、茋(stilbene)、異黃嘌呤、異黃喋呤(isoxanthopterin)、聯三苯、三噻吩(terthiophene)、苯并三噻吩、香豆素、二氧四氫蝶啶(lumazine)、繫鏈茋(tethered stilbene)、苯并尿嘧啶及萘并尿嘧啶，如下文所示：
在一些實施例中，經修飾核鹼基未經取代。在一些實施例中，經修飾核鹼基經取代。在一些實施例中，經修飾核鹼基經取代，使得 其含有例如連接至螢光部分、生物素或抗生物素蛋白部分或其他蛋白質或肽的雜原子、烷基或連接部分。在一些實施例中，經修飾核鹼基為並非最經典意義上的核鹼基，但功能類似於核鹼基的「通用鹼基(universal base)」。此類通用鹼基之一個代表性實例為3-硝基吡咯。
在一些實施例中，其他核苷亦可用於本文中所揭示之方法中且包括併有經修飾核鹼基或核鹼基共價鍵結至經修飾糖之核苷。併有經修飾核鹼基之核苷的一些實例包括4-乙醯基胞嘧啶核苷；5-(羧基羥甲基)尿苷；2'-O-甲基胞嘧啶核苷；5-羧甲基胺甲基-2-硫代尿苷；5-羧甲基胺甲基尿苷；二氫尿苷；2'-O-甲基假尿苷；β,D-半乳糖苷基Q核苷；2'-O-甲基鳥苷；N 6-異戊烯基腺苷；1-甲基腺苷；1-甲基假尿苷；1-甲基鳥苷；1-甲基肌苷；2,2-二甲基鳥苷；2-甲基腺苷；2-甲基鳥苷；N 7-甲基鳥苷；3-甲基-胞嘧啶核苷；5-甲基胞嘧啶核苷；5-羥甲基胞嘧啶核苷；5-甲醯基胞嘧啶；5-羧基胞嘧啶；N 6-甲基腺苷；7-甲基鳥苷；5-甲基胺乙基尿苷；5-甲氧基胺甲基-2-硫代尿苷；β,D-甘露糖苷基Q核苷；5-甲氧基羧甲基尿苷；5-甲氧基尿苷；2-甲硫基-N 6-異戊烯基腺苷；N-((9-β,D-呋喃核糖基-2-甲基硫代嘌呤-6-基)胺甲醯基)蘇胺酸；N-((9-β,D-呋喃核糖基嘌呤-6-基)-N-甲基胺甲醯基)蘇胺酸；尿苷-5-氧基乙酸甲酯；尿苷-5-氧基乙酸(v)；假尿苷；Q核苷；2-硫代胞嘧啶核苷；5-甲基-2-硫代尿苷；2-硫代尿苷；4-硫代尿苷；5-甲基尿苷；2'-O-甲基-5-甲基尿苷；及2'-O-甲基尿苷。
在一些實施例中，核苷包括在6'位具有(R)或(S)對掌性之6'-經修飾之雙環核苷類似物且包括美國專利第7,399,845號中所述之類似物。在其他實施例中，核苷包括在5'位具有(R)或(S)對掌性之5'經修飾之雙環核苷類似物且包括美國專利申請公開案第20070287831號中所述之類似物。
在一些實施例中，核鹼基或經修飾核鹼基包含一或多個生物分 子結合部分，諸如抗體、抗體片段、生物素、抗生物素蛋白、抗生蛋白鏈菌素、受體配位體或螯合部分。在其他實施例中，核鹼基或經修飾核鹼基為5-溴尿嘧啶、5-碘尿嘧啶或2,6-二胺基嘌呤。在一些實施例中，核鹼基或經修飾核鹼基藉由用螢光或生物分子結合部分取代來加以修飾。在一些實施例中，核鹼基或經修飾核鹼基上之取代基為螢光部分。在一些實施例中，核鹼基或經修飾核鹼基上之取代基為生物素或抗生物素蛋白。
教示以上所提及之經修飾核鹼基以及其他經修飾核鹼基中之某些核鹼基之製備的代表性美國專利包括(但不限於)以上提及之美國專利第3,687,808號，以及美國專利第4,845,205號、第5,130,30號、第5,134,066號、第5,175,273號、第5,367,066號、第5,432,272號、第5,457,187號、第5,457,191號、第5,459,255號、第5,484,908號、第5,502,177號、第5,525,711號、第5,552,540號、第5,587,469號、第5,594,121號、第5,596,091號、第5,614,617號、第5,681,941號、第5,750,692號、第6,015,886號、第6,147,200號、第6,166,197號、第6,222,025號、第6,235,887號、第6,380,368號、第6,528,640號、第6,639,062號、第6,617,438號、第7,045,610號、第7,427,672號及第7,495,088號，其各自以全文引用的方式併入本文中。
在一些實施例中，鹼基為視情況經取代之A、T、C、G或U，其中一或多個-NH2獨立地且視情況經-C(-L-R1)3置換，一或多個-NH-獨立地且視情況經-C(-L-R1)2-置換，一或多個=N-獨立地且視情況經-C(-L-R1)-置換，一或多個=CH-獨立地且視情況經=N-置換，且一或多個=O獨立地且視情況經=S、=N(-L-R1)或=C(-L-R1)2置換，其中兩個或更多個-L-R1視情況與其插入原子一起形成具有0-10個雜原子環原子之3-30員雙環或多環。在一些實施例中，經修飾鹼基為視情況經取代之A、T、C、G或U，其中一或多個-NH2獨立地且視情況經-C(-L-R1)3 置換，一或多個-NH-獨立地且視情況經-C(-L-R1)2-置換，一或多個=N-獨立地且視情況經-C(-L-R1)-置換，一或多個=CH-獨立地且視情況經=N-置換，且一或多個=O獨立地且視情況經=S、=N(-L-R1)或=C(-L-R1)2置換，其中兩個或更多個-L-R1視情況與其插入原子一起形成具有0-10個雜原子環原子之3-30員雙環或多環，其中經修飾鹼基不同於天然A、T、C、G及U。在一些實施例中，鹼基為視情況經取代之A、T、C、G或U。在一些實施例中，經修飾鹼基為經取代之A、T、C、G或U，其中經修飾鹼基不同於天然A、T、C、G及U。
在一些實施例中，經修飾之核苷酸或核苷酸類似物為以下中之任一者中所述之任何經修飾之核苷酸或核苷酸類似物：Gryaznov,S；Chen,J.-K.J.Am.Chem.Soc.1994,116,3143；Hendrix等人1997 Chem.Eur.J.3：110；Hyrup等人1996 Bioorg.Med.Chem.4：5；Jepsen等人2004 Oligo.14：130-146；Jones等人J.Org.Chem.1993,58,2983；Koizumi等人2003 Nuc.Acids Res.12：3267-3273；Koshkin等人1998 Tetrahedron 54：3607-3630；Kumar等人1998Bioo.Med.Chem.Let.8：2219-2222；Lauritsen等人2002 Chem.Comm.5：530-531；Lauritsen等人2003 Bioo.Med.Chem.Lett.13：253-256；Mesmaeker等人Angew.Chem.,Int.Ed.Engl.1994,33,226；Morita等人2001 Nucl.Acids Res.增刊1：241-242；Morita等人2002 Bioo Med.Chem.Lett.12：73-76；Morita等人2003 Bioo.Med.Chem.Lett.2211-2226；Nielsen等人1997 Chem.Soc.Rev.73；Nielsen等人1997 J.Chem.Soc.Perkins Transl.1：3423-3433；Obika等人1997 Tetrahedron Lett.38(50)：8735-8；Obika等人1998 Tetrahedron Lett.39：5401-5404；Pallan等人2012 Chem.Comm.48：8195-8197；Petersen等人2003 TRENDS Biotech.21：74-81；Rajwanshi等人1999 Chem.Commun.1395-1396；Schultz等人1996 Nucleic Acids Res.24：2966；Seth等人2009 J.Med.Chem.52：10-13；Seth等人2010 J.Med.Chem.53：8309-8318；Seth等人2010 J.Org.Chem.75：1569-1581；Seth等人2012 Bioo.Med.Chem.Lett.22：296-299；Seth等人2012 Mol.Ther-Nuc.Acids.1,e47；Seth,Punit P；Siwkowski,Andrew；Allerson,Charles R；Vasquez,Guillermo；Lee,Sam；Prakash,Thazha P；Kinberger,Garth；Migawa,Michael T；Gaus,Hans；Bhat,Balkrrshen等人Nucleic Acids Symposium Series(2008),52(1),553-554；Singh等人1998 Chem.Comm.1247-1248；Singh等人1998 J.Org.Chem.63：10035-39；Singh等人1998 J.Org.Chem.63：6078-6079；Sorensen 2003 Chem.Comm.2130-2131；Ts'o等人Ann.N.Y.Acad.Sci.1988,507,220；Van Aerschot等人1995 Angew.Chem.Int.Ed.Engl.34：1338；Vasseur等人J.Am.Chem.Soc.1992,114,4006；WO 20070900071；WO 20070900071；或WO 2016/079181。
糖
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含一或多個除天然糖部分之外的經修飾糖部分。
最常見的天然產生之核苷酸包含核糖糖連結至核鹼基腺苷(A)、胞嘧啶(C)、鳥嘌呤(G)及胸腺嘧啶(T)或尿嘧啶(U)。亦涵蓋經修飾之核苷酸，其中核苷酸中之磷酸酯基或鍵聯磷可連結至糖或經修飾糖之各個位置。作為非限制性實例，磷酸酯基或鍵聯磷可連結至糖或經修飾糖之2'、3'、4'或5'羥基部分。在此情況下亦涵蓋如本文所述併有經修飾核鹼基之核苷酸。在一些實施例中，根據本發明方法使用包含未受保護之-OH部分的核苷酸或經修飾之核苷酸。
其他經修飾之糖亦可併入所提供之寡核苷酸內。在一些實施例中，經修飾之糖在2'位置含有一或多個取代基，包括以下中之一者：- F；-CF3、-CN、-N3、-NO、-NO2、-OR'、-SR'或-N(R')2，其中各R'獨立地如上文所定義及此處所描述；-O-(C1-C10烷基)、-S-(C1-C10烷基)、-NH-(C1-C10烷基)或-N(C1-C10烷基)2；-O-(C2-C10烯基)、-S-(C2-C10烯基)、-NH-(C2-C10烯基)或-N(C2-C10烯基)2；-O-(C2-C10炔基)、-S-(C2-C10炔基)、-NH-(C2-C10炔基)或-N(C2-C10炔基)2；或-O-(C1-C10伸烷基)-O-(C1-C10烷基)、-O-(C1-C10伸烷基)-NH-(C1-C10烷基)或-O-(C1-C10伸烷基)-NH(C1-C10烷基)2、-NH-(C1-C10伸烷基)-O-(C1-C10烷基)或-N(C1-C10烷基)-(C1-C10伸烷基)-O-(C1-C10烷基)，其中烷基、伸烷基、烯基及炔基可經取代或未經取代。取代基之實例包括且不限於-O(CH2)nOCH3及-O(CH2)nNH2(其中n為1至約10)、MOE、DMAOE、DMAEOE。本文中亦涵蓋WO 2001/088198及Martin等人，Helv.Chim.Acta,1995,78,486-504中所述之經修飾之糖。在一些實施例中，經修飾之糖包含一或多個選自以下之基團：經取代之矽烷基、RNA裂解基團、報導基因、螢光標記、嵌入劑、用於改良核酸之藥物動力學特性之基團、用於改良核酸之藥效學特性之基團或其他具有類似特性之取代基。在一些實施例中，在糖或經修飾糖之2'、3'、4'、5'或6'位置中之一或多者進行修飾，包括在3'-末端核苷酸上或在5'-末端核苷酸之5'位置中之糖的3'位置。
在一些實施例中，核糖之2'-OH經取代基置換，該取代基包括以下中之一者：-H、-F；-CF3、-CN、-N3、-NO、-NO2、-OR'、-SR'或-N(R')2，其中各R'獨立地如上文所定義及此處所描述；-O-(C1-C10烷基)、-S-(C1-C10烷基)、-NH-(C1-C10烷基)或-N(C1-C10烷基)2；-O-(C2-C10烯基)、-S-(C2-C10烯基)、-NH-(C2-C10烯基)或-N(C2-C10烯基)2；-O-(C2-C10炔基)、-S-(C2-C10炔基)、-NH-(C2-C10炔基)或-N(C2-C10炔基)2；或-O-(C1-C10伸烷基)-O-(C1-C10烷基)、-O-(C1-C10伸烷基)-NH-(C1-C10烷基)或-O-(C1-C10伸烷基)-NH(C1-C10烷基)2、-NH-(C1-C10伸烷 基)-O-(C1-C10烷基)或-N(C1-C10烷基)-(C1-C10伸烷基)-O-(C1-C10烷基)，其中烷基、伸烷基、烯基及炔基可經取代或未經取代。在一些實施例中，2'-OH經-H置換(去氧核糖)。在一些實施例中，2'-OH經-F置換。在一些實施例中，2'-OH經-OR'置換。在一些實施例中，2'-OH經-OMe置換。在一些實施例中，2'-OH經-OCH2CH2OMe置換。
經修飾之糖亦包括鎖核酸(LNA)。在一些實施例中，糖碳原子上之兩個取代基一起形成二價部分。在一些實施例中，兩個取代基係在兩個不同的糖碳原子上。在一些實施例中，所形成之二價部分具有如本文中所定義之結構-L-。在一些實施例中，-L-為-O-CH2-，其中-CH2-視情況經取代。在一些實施例中，-L-為-O-CH2-。在一些實施例中，-L-為-O-CH(Et)-。在一些實施例中，-L-介於糖部分之C2與C4之間。在一些實施例中，鎖核酸具有如下所示之結構。以下指出該結構之鎖核酸，其中Ba表示如本文所述之核鹼基或經修飾之核鹼基，且其中R2s為-OCH2C4'-。
在一些實施例中，經修飾之糖為ENA，諸如在例如Seth等人，J Am Chem Soc.2010年10月27日；132(42)：14942-14950中所述之彼等ENA。在一些實施例中，經修飾之糖為異種核酸(xenonucleic acid；XNA)中所存在之彼等糖中之任一者，例如阿拉伯糖、無水己糖醇、蘇糖、2'-氟阿拉伯糖，或環己烯。
經修飾之糖包括諸如環丁基或環戊基部分之糖模擬物代替呋喃戊糖(pentofuranosyl sugar)。教示該等經修飾之糖結構之製備的代表性美國專利包括(但不限於)美國專利第4,981,957號：第5,118,800號： 第5,319,080號及第5,359,044號。所涵蓋之一些經修飾之糖包括核糖環內之氧原子經氮、硫、硒或碳置換之糖。在一些實施例中，經修飾之糖為經修飾之核糖，其中核糖環內之氧原子經氮置換，且其中氮視情況經烷基(例如，甲基、乙基、異丙基等)取代。
經修飾之糖之非限制性實例包括甘油，其形成甘油核酸(GNA)類似物。GNA類似物之一個實例顯示如下且描述於Zhang,R等人，J.Am.Chem Soc.,2008,130,5846-5847；Zhang L等人，J Am.Chem.Soc,2005,127,4174-4175及Tsai CH等人，PNAS,2007,14598-14603(X=O-)中：
GNA衍生之類似物基於甲醯基甘油之混合縮醛縮醛胺之可撓性核酸(FNA)的另一實例描述於Joyce GF等人，PNAS,1987,84,4398-4402；及Heuberger BD及Switzer C,J.Am Chem Soc.,2008,130,412-413中，且顯示如下：
經修飾糖之其他非限制性實例包括己哌喃糖基(6'至4')、戊哌喃糖基(4'至2')、戊哌喃糖基(4'至3')或四呋喃糖基(3'至2')糖。在一些實施例中，己哌喃糖基(6'至4')糖具有以下式中之任一者： 其中Xs對應於本文中所述之P修飾基團「-XLR1」且Ba如本文所定義。
在一些實施例中，戊哌喃糖基(4'至2')糖具有以下式中之任一者： 其中Xs對應於本文中所述之P修飾基團「-XLR1」且Ba如本文所定義。
在一些實施例中，戊哌喃糖基(4'至3')糖具有以下式中之任一者： 其中Xs對應於本文中所述之P修飾基團「-XLR1」且Ba如本文所定義。
在一些實施例中，四哌喃糖基(3'至2')糖具有以下式中之任一者： 其中Xs對應於本文中所述之P修飾基團「-XLR1」且Ba如本文所定義。
在一些實施例中，經修飾之糖具有以下式中之任一者： 其中Xs對應於本文中所述之P修飾基團「-XLR1」且Ba如本文所定義。
在一些實施例中，糖部分中之一或多個羥基視情況且獨立地經鹵素、R'-N(R')2、-OR'或-SR'置換，其中各R'獨立地如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，糖模擬物如下文所示，其中Xs對應於本文中所述之P修飾基團「-XLR1」，Ba如本文所定義，且X1選自-S-、-Se-、-CH2-、-NMe-、-NEt-或-NiPr-。
在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物中之糖中至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%或更多(例如，55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或更多)(包括該等百分比)經修飾。在一些實施例中，僅嘌呤殘基經修飾(例如，約1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、 33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%或更多[例如，55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或更多]嘌呤殘基經修飾)。在一些實施例中，僅嘧啶殘基經修飾(例如，約1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%或更多[例如，55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或更多]嘧啶殘基經修飾)。在一些實施例中，嘌呤及嘧啶殘基均經修飾。
經修飾之糖及糖模擬物可藉由此項技術中已知之方法製備，包括(但不限於)：A.Eschenmoser,Science(1999),284：2118；M.Bohringer等人，Helv.Chim.Acta(1992),75：1416-1477；M.Egli等人，J.Am.Chem.Soc.(2006),128(33)：10847-56；A.Eschenmoser Chemical Synthesis：Gnosis to Prognosis,C.Chatgilialoglu及V.Sniekus編，(Kluwer Academic,Netherlands,1996)，第293頁；K.-U.Schoning等人，Science(2000),290：1347-1351；A.Eschenmoser等人，Helv.Chim.Acta(1992),75：218；J.Hunziker等人，Helv.Chim.Acta(1993),76：259；G.Otting等人，Helv.Chim.Acta(1993),76：2701；K.Groebke等人，Helv.Chim.Acta(1998),81：375；及A.Eschenmoser,Science(1999),284：2118。針對2'修飾之修飾可見於Verma,S等人Annu.Rev Biochem. 1998,67,99-134及其中之所有參考文獻中。針對核糖之特異性修飾可見於以下參考文獻中：2'-氟基(Kawasaki等人，J.Med.Chem., 1993,36,831-841)、2'-MOE(Martin,P.Helv.Chim.Acta 1996,79,1930-1938)、「LNA」(Wengel,J.Acc.Chem.Res. 1999, 32, 301-310)。在一些實施例中，經修飾之糖為以引用的方式併入本文中之PCT公開案第WO2012/030683號中所述的彼等糖中之任一者，且描繪於本申請案之圖26至圖30中。在一些實施例中，經修飾之糖為以下中之任一者中所述的任何經修飾之糖：Gryaznov,S；Chen,J.-K.J.Am.Chem.Soc.1994,116,3143；Hendrix等人1997 Chem.Eur.J.3：110；Hyrup等人1996 Bioorg.Med.Chem.4：5；Jepsen等人2004 Oligo.14：130-146；Jones等人J.Org.Chem.1993,58,2983；Koizumi等人2003 Nuc.Acids Res.12：3267-3273；Koshkin等人1998 Tetrahedron 54：3607-3630；Kumar等人1998 Bioo.Med.Chem.Let.8：2219-2222；Lauritsen等人2002 Chem.Comm.5：530-531；Lauritsen等人2003 Bioo.Med.Chem.Lett.13：253-256；Mesmaeker等人Angew.Chem.,Int Ed.Engl.1994,33,226；Morita等人2001 Nucl.Acids Res.增刊1：241-242；Morita等人2002 Bioo.Med.Chem.Lett.12：73-76；Morita等人2003 Bioo.Med.Chem.Lett.2211-2226；Nielsen等人1997 Chem.Soc.Rev.73；Nielsen等人1997 J.Chem.Soc.Perkins Transl.1：3423-3433；Obika等人1997 Tetrahedron Lett.38(50)：8735-8；Obika等人1998 Tetrahedron Lett.39：5401-5404；Pallan等人2012 Chem.Comm.48：8195-8197；Petersen等人2003 TRENDS Biotech.21：74-81；Rajwanshi等人1999 Chem.Commun.1395-1396；Schultz等人1996 Nucleic Acids Res.24：2966；Seth等人2009 J.Med.Chem.52：10-13；Seth等人2010 J.Med.Chem.53：8309-8318；Seth等人2010 J.Org.Chem.75：1569-1581；Seth等人2012 Bioo.Med.Chem.Lett.22：296-299；Seth等人2012 Mol.Ther-Nuc.Acids.1,e47；Seth,Punit P；Siwkowski,Andrew；Allerson,Charles R；Vasquez,Guillermo；Lee,Sam；Prakash,Thazha P；Kinberger,Garth；Migawa,Michael T； Gaus,Hans；Bhat,Balkrishen等人Nucleic Acids Symposium Series(2008),52(1),553-554；Singh等人1998 Chem.Comm.1247-1248；Singh等人1998 J.Org.Chem.63：10035-39；Singh等人1998 J.Org.Chem.63：6078-6079；Sorensen 2003 Chem.Comm.2130-2131；Ts'o等人Ann.N.Y.Acad.Sci.1988,507,220；Van Aerschot等人1995Angew.Chem.Int.Ed.Engl.34：1338；Vasseur等人J.Am.Chem.Soc.1992,114,4006；WO 20070900071；WO 20070900071；或WO 2016/079181。
在一些實施例中，經修飾之糖部分為視情況經取代之戊糖或己糖部分。在一些實施例中，經修飾之糖部分為視情況經取代之戊糖部分。在一些實施例中，經修飾之糖部分為視情況經取代之己糖部分。在一些實施例中，經修飾之糖部分為視情況經取代之核糖或己糖醇部分。在一些實施例中，經修飾之糖部分為視情況經取代之核糖部分。在一些實施例中，經修飾之糖部分為視情況經取代之己糖醇部分。在一些實施例中，例示性經修飾之核苷酸間鍵聯及/或糖係選自： HNAPNA2'-氟N3'-P5'-胺基磷酸鹽 LNAβ-D-氧-LNA 2'-O,3'-C-連鎖雙環 PS-LNAβ-D- 硫基-LNAβ-D-胺基-LNA xylo-LNA[c]α-L-LNA ENAβ-D-ENA醯胺連鎖LNA 膦酸甲酯-LNA(R,S)-cEt (R,S)-cMOE(R,S)-5'-Me-LNA S-Me cLNA亞甲基-cLNA 3'-Me-α-L-LNAR-6'-Me-α-L-LNA S-5'-Me-α-L-LNA R-5'-Me-α-L-LNA
在一些實施例中，R1為如所定義及所描述之R。在一些實施例中，R2為R。在一些實施例中，Re為R。在一些實施例中，Re為H、CH3、Bn、COCF3、苯甲醯基、苯甲基、芘-1-基羰基、芘-1-基甲基、2-胺乙基。在一些實施例中，例示性經修飾之核苷酸間鍵聯及/ 或糖係選自以下各者中所述之彼等者：Ts'o等人Ann.N.Y.Acad.Sci.1988,507,220；Gryaznov,S.；Chen,J.-K.J.Am.Chem.Soc.1994,116,3143；Mesmaeker等人Angew.Chem.,Int.Ed.Engl.1994,33,226；Jones等人J.Org.Chem.1993,58,2983；Vasseur等人J.Am.Chem.Soc.1992,114,4006；Van Aerschot等人1995 Angew.Chem.Int.Ed.Engl.34：1338；Hendrix等人1997 Chem.Eur.J.3：110；Koshkin等人1998 Tetrahedron 54：3607-3630；Hyrup等人1996 Bioorg.Med.Chem.4：5；Nielsen等人1997 Chem.Soc.Rev.73；Schultz等人1996 Nucleic Acids Res.24：2966；Obika等人1997 Tetrahedron Lett.38(50)：8735-8；Obika等人1998 Tetrahedron Lett.39：5401-5404；Singh等人1998 Chem.Comm.1247-1248；Kumar等人1998 Bioo.Med.Chem.Let.8：2219-2222；Nielsen等人1997 J.Chem.Soc.Perkins Transl.1：3423-3433；Singh等人1998 J.Org.Chem.63：6078-6079；Seth等人2010 J.Org.Chem.75：1569-1581；Singh等人1998 J.Org.Chem.63：10035-39；Sorensen 2003Chem.Comm.2130-2131；Petersen等人2003 TRENDS Biotech.21：74-81；Rajwanshi等人1999 Chem.Commun.1395-1396；Jepsen等人2004 Oligo.14：130-146；Morita等人2001 Nucl.Acids Res.增刊1：241-242；Morita等人2002 Bioo.Med.Chem.Lett.12：73-76；Morita等人2003 Bioo.Med.Chem.Lett.2211-2226；Koizumi等人2003Nuc.Acids Res.12：3267-3273；Lauritsen等人2002 Chem.Comm.5：530-531；Lauritsen等人2003 Bioo.Med.Chem.Lett.13：253-256；WO 20070900071；Seth等人，Nucleic Acids Symposium Series(2008),52(1),553-554；Seth等人2009 J.Med.Chem.52：10-13；Seth等人2012 Mol.Ther-Nuc.Acids.1,e47；Pallan等人2012 Chem.Comm.48：8195-8197；Seth等人2010 J.Med.Chem.53：8309- 8318；Seth等人2012 Bioo.Med.Chem.Lett.22：296-299；WO 2016/079181；US 6,326,199；US 6,066,500；及US 6,440,739，其中之每一者的鹼基及糖修飾以引用的方式併入本文中。
寡核苷酸
在一些實施例中，本發明提供對掌性受控的寡核苷酸及寡核苷酸組合物。舉例而言，在一些實施例中，所提供組合物含有預定含量之一或多個個別寡核苷酸類型，其中寡核苷酸類型由以下定義：1)鹼基序列；2)主鏈鍵聯模式；3)主鏈對掌性中心模式；及4)主鏈P修飾模式。在一些實施例中，特定寡核苷酸類型可由以下定義：1A)鹼基一致性；1B)鹼基修飾模式；1C)糖修飾模式；2)主鏈鍵聯模式；3)主鏈對掌性中心模式；及4)主鏈P修飾模式。在一些實施例中，相同寡核苷酸類型之寡核苷酸為相同的。
如本文所述，本發明提供各種寡核苷酸。在一些實施例中，本發明提供寡核苷酸，其包含與所提供之例示性寡核苷酸中所存在之序列(諸如各表中所列之彼等序列)共享大於約50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%一致性的序列。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為WV-1092。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為WV-2595。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為WV-2603。在一些實施例中，本發明提供寡核苷酸，其包含所提供之例示性寡核苷酸中所存在之序列或由該序列組成。在一些實施例中，本發明提供寡核苷酸，其包含WV-1092中所存在之序列或由該序列組成。在一些實施例中，本發明提供寡核苷酸，其包含WV-2595中所存在之序列或由該序列組成。在一些實施例中，本發明提供寡核苷酸，其包含WV-2603中所存在之序列或由該序列組成。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸進一步包含一或多個天然磷酸酯鍵聯及一或多個經修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含兩個或更多個天然磷酸酯鍵 聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含兩個或更多個連續天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含兩個或更多個經修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含兩個或更多個連續的經修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20個或更多個連續的經修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含5個或更多個連續的經修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含5個或更多個連續的經修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含6個或更多個連續的經修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含7個或更多個連續的經修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含8個或更多個連續的經修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含9個或更多個連續的經修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含10個或更多個連續的經修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，經修飾之核苷酸間鍵聯中之至少一者為對掌性受控核苷酸間鍵聯，因為組合物內具有相同序列及化學修飾之寡核苷酸在經修飾之核苷酸間鍵聯之對掌性磷原子處共用相同組態Rp或Sp。在一些實施例中，至少兩個經修飾之核苷酸間鍵聯為對掌性受控的。在一些實施例中，連續的經修飾之核苷酸間鍵聯區域內至少一個經修飾之核苷酸間鍵聯為對掌性受控的。在一些實施例中，連續的經修飾之核苷酸間鍵聯區域內至少兩個經修飾之核苷酸間鍵聯為對掌性受控的。在一些實施例中，連續的經修飾之核苷酸間鍵聯區域內各經修飾之核苷酸間鍵聯為對掌性受控的。在一些實施例中，各經修飾之核苷酸間鍵聯為對掌性受控的。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含(Sp)xRp(Sp)y模式，其中x及y各自獨立地為1-20，且x及y之總和為1-50。在一些實 施例中，x及y各自獨立地為2-20。在一些實施例中，x及y中之至少一者大於5、6、7、8、9或10。在一些實施例中，x及y之總和大於5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含一或多個化學修飾，如所提供之例示性寡核苷酸中所呈現。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含一或多個鹼基修飾，如所提供之例示性寡核苷酸中所呈現。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含一或多個糖修飾，如所提供之例示性寡核苷酸中所呈現。在一些實施例中，糖修飾為2'修飾。在一些實施例中，糖修飾為LNA。在一些實施例中，糖修飾為ENA。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為對掌性受控寡核苷酸。在一些實施例中，本發明提供包含所提供之寡核苷酸的寡核苷酸組合物。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸組合物為對掌性受控寡核苷酸組合物。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為單聚體。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為P修飾單聚體。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為立體單聚體。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為組態Rp之立體單聚體。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為組態Sp之立體單聚體。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為交替體。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為P修飾交替體。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為立體交替體。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為嵌段體。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為P修飾嵌段體。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為立體嵌段體。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為間隔體。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為跳過體。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為半聚體。在一些實施例 中，半聚體為5'端或3'端之序列具有寡核苷酸其餘部分不具有之結構特徵的寡核苷酸。在一些實施例中，5'端或3'端具有或包含2至20個核苷酸。在一些實施例中，結構特徵為鹼基修飾。在一些實施例中，結構特徵為糖修飾。在一些實施例中，結構特徵為P修飾。在一些實施例中，結構特徵為對掌性核苷酸間鍵聯之立體化學。在一些實施例中，結構特徵為或包含對掌性核苷酸間鍵聯之鹼基修飾、糖修飾、P修飾或立體化學或其組合。在一些實施例中，半聚體為5'端序列之各糖部分共用共同修飾的寡核苷酸。在一些實施例中，半聚體為3'端序列之各糖部分共用共同修飾之寡核苷酸。在一些實施例中，5'或3'端序列之共同糖修飾不為寡核苷酸中之任何其他糖部分所共用。在一些實施例中，例示性半聚體為一種寡核苷酸，其一端包含經取代或未經取代之2'-O-烷基糖修飾之核苷、經雙環糖修飾之核苷、β-D-核糖核苷或β-D-去氧核糖核苷(例如經2'-MOE修飾之核苷及經LNATM或ENATM雙環糖修飾之核苷)的序列且另一端包含具有不同糖部分之核苷(諸如經取代或未經取代之2'-O-烷基糖修飾之核苷、經雙環糖修飾之核苷或天然核苷)的序列。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為單聚體、交替體、嵌段體、間隔體、半聚體及跳過體中之一或多者之組合。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為單聚體、交替體、嵌段體、間隔體及跳過體中之一或多者之組合。舉例而言，在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為交替體及間隔體。在一些實施例中，所提供之核苷酸為間隔體及跳過體。化學及合成技術中之技術人員將認識到，諸多其他模式組合為可用的且僅受用於根據本發明方法合成所提供寡核苷酸所需之組成部分的商業可獲得性及/或合成可行性限制。在一些實施例中，半聚體結構提供有利益處，如由圖29所例示。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為在5'端序列中包含經修飾之糖部分的5'-半聚體。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為在5'端序列中包 含經修飾之2'-糖部分的5'-半聚體。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含一或多個視情況經取代之核苷酸。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含一或多個經修飾之核苷酸。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含一或多個視情況經取代之核苷。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含一或多個經修飾之核苷。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含一或多個視情況經取代之LNA。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含一或多個視情況經取代之核鹼基。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含一或多個視情況經取代之天然核鹼基。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含一或多個視情況經取代之經修飾之核鹼基。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含一或多個5-甲基胞嘧啶核苷、5-羥甲基胞嘧啶核苷、5-甲醯基胞嘧啶或5-羧基胞嘧啶。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含一或多個5-甲基胞嘧啶核苷。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含一或多個視情況經取代之糖。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含一或多個視情況經取代的天然產生之DNA及RNA中所存在之糖。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含一或多個視情況經取代之核糖或去氧核糖。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含一或多個視情況經取代之核糖或去氧核糖，其中核糖或去氧核糖部分之一或多個羥基視情況且獨立地經鹵素、R'、-N(R')2、-OR'或-SR'置換，其中各R'獨立地如上文所定義及此處所描述。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含一或多個視情況經取代之去氧核糖，其中去氧核糖之2'位置視情況且獨立地經鹵素、R'、-N(R')2、-OR'或-SR'取代，其中各R'獨立地如上文所定義及此處所描述。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含一或多個視情況經取代之去氧核糖，其中去氧核糖之2'位置視情況且獨立地經鹵素 取代。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含一或多個視情況經取代之去氧核糖，其中去氧核糖之2'位置視情況且獨立地經一或多個-F取代。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含一或多個視情況經取代之去氧核糖，其中去氧核糖之2'位置視情況且獨立地經-OR'取代，其中各R'獨立地如上文所定義及此處所描述。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含一或多個視情況經取代之去氧核糖，其中去氧核糖之2'位置視情況且獨立地經-OR'取代，其中各R'獨立地為視情況經取代之C1-C6脂族基。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含一或多個視情況經取代之去氧核糖，其中去氧核糖之2'位置視情況且獨立地經-OR'取代，其中各R'獨立地為視情況經取代之C1-C6烷基。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含一或多個視情況經取代之去氧核糖，其中去氧核糖之2'位置視情況且獨立地經-OMe取代。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含一或多個視情況經取代之去氧核糖，其中去氧核糖之2'位置視情況且獨立地經-O-甲氧基乙基取代。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為單股寡核苷酸。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為混合寡核苷酸股。在某些實施例中，所提供之寡核苷酸為部分混合之寡核苷酸股。在某些實施例中，所提供之寡核苷酸為完全混合之寡核苷酸股。在某些實施例中，所提供之寡核苷酸為雙股寡核苷酸。在某些實施例中，所提供之寡核苷酸為三股寡核苷酸(例如，三螺旋體)。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為嵌合寡核苷酸。舉例而言，在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為DNA-RNA嵌合體、DNA-LNA嵌合體等。
在一些實施例中，包含WO2012/030683中所描繪之寡核苷酸的結構中之任一者可根據本發明方法修飾，得到其對掌性受控變異體。舉例而言，在一些實施例中，對掌性受控變異體包含在鍵聯磷中之任何 一或多者處之立體化學修飾及/或在鍵聯磷中之任何一或多者處之P修飾。舉例而言，在一些實施例中，預先選擇WO2012/030683之寡核苷酸之特定核苷酸單元在彼核苷酸單元之鍵聯磷處進行立體化學修飾及/或在彼核苷酸單元之鍵聯磷處進行P修飾。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸具有圖26至圖30中所描繪之結構中之任一者。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸為圖26至圖30中所描繪之結構中之任一者的變異體(例如，修飾版本)。WO2012/030683之揭示內容以全文引用的方式併入本文中。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為治療劑。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為反義寡核苷酸。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為反基因寡核苷酸。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為誘騙性寡核苷酸。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為DNA疫苗之一部分。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為免疫調節性寡核苷酸，例如免疫刺激性寡核苷酸及免疫抑制性寡核苷酸。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為佐劑。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為適體。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為核糖核酸酶。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為去氧核糖核酸酶(DNA酶(DNAzyme/DNA enzyme))。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為siRNA。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為微小RNA(microRNA/miRNA)。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為ncRNA(非編碼RNA)，包括長非編碼RNA(lncRNA)及小非編碼RNA，諸如piwi相互作用RNA(piwi-interacting RNA；piRNA)。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸與結構RNA(例如tRNA)互補。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為核酸類似物，例如GNA、LNA、PNA、TNA、GNA、ANA、FANA、CeNA、HNA、UNA、ZNA或N-嗎啉基。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為P經修飾之前藥。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為引子。在一些實施例中，引子係用於基於聚合酶之鏈反應(亦即，PCR)中擴增核酸。在一些實施例中，引子係用於PCR之任何已知變體中，諸如反轉錄PCR(RT-PCR)及即時PCR。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸經表徵具有調節核糖核酸酶H活化之能力。舉例而言，在一些實施例中，藉由立體控制之硫代磷酸酯核酸類似物之存在來調節核糖核酸酶H活化，其中天然DNA/RNA比Rp立體異構體易受影響或與Rp立體異構體易受影響之程度相同，Rp立體異構體又比相應Sp立體異構體易受影響。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸經表徵具有間接或直接增加或降低蛋白質活性或者抑制或促進蛋白質表現的能力。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸的特徵在於，其適用於控制細胞增殖、病毒複製及/或任何其他細胞信號傳導過程。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約2至約200個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約2至約180個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約2至約160個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約2至約140個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約2至約120個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約2至約100個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核 苷酸之長度為約2至約90個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約2至約80個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約2至約70個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約2至約60個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約2至約50個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約2至約40個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約2至約30個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約2至約29個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約2至約28個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約2至約27個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約2至約26個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約2至約25個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約2至約24個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約2至約23個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約2至約22個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約2至約21個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約2至約20個核苷酸單元。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約4至約200個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約4至約180個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約4至約160個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約4至約140個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約4至約120個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約4至約100個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約4至約90個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之 寡核苷酸之長度為約4至約80個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約4至約70個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約4至約60個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約4至約50個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約4至約40個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約4至約30個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約4至約29個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約4至約28個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約4至約27個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約4至約26個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約4至約25個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約4至約24個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約4至約23個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約4至約22個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約4至約21個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約4至約20個核苷酸單元。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約5至約10個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約10至約30個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約15至約25個核苷酸單元。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之長度為約5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25個核苷酸單元。
在一些實施例中，寡核苷酸之長度為至少2個核苷酸單元。在一些實施例中，寡核苷酸之長度為至少3個核苷酸單元。在一些實施例中，寡核苷酸之長度為至少4個核苷酸單元。在一些實施例中，寡核 苷酸之長度為至少5個核苷酸單元。在一些實施例中，寡核苷酸之長度為至少6個核苷酸單元。在一些實施例中，寡核苷酸之長度為至少7個核苷酸單元。在一些實施例中，寡核苷酸之長度為至少8個核苷酸單元。在一些實施例中，寡核苷酸之長度為至少9個核苷酸單元。在一些實施例中，寡核苷酸之長度為至少10個核苷酸單元。在一些實施例中，寡核苷酸之長度為至少11個核苷酸單元。在一些實施例中，寡核苷酸之長度為至少12個核苷酸單元。在一些實施例中，寡核苷酸之長度為至少13個核苷酸單元。在一些實施例中，寡核苷酸之長度為至少14個核苷酸單元。在一些實施例中，寡核苷酸之長度為至少15個核苷酸單元。在一些實施例中，寡核苷酸之長度為至少16個核苷酸單元。在一些實施例中，寡核苷酸之長度為至少17個核苷酸單元。在一些實施例中，寡核苷酸之長度為至少18個核苷酸單元。在一些實施例中，寡核苷酸之長度為至少19個核苷酸單元。在一些實施例中，寡核苷酸之長度為至少20個核苷酸單元。在一些實施例中，寡核苷酸之長度為至少21個核苷酸單元。在一些實施例中，寡核苷酸之長度為至少22個核苷酸單元。在一些實施例中，寡核苷酸之長度為至少23個核苷酸單元。在一些實施例中，寡核苷酸之長度為至少24個核苷酸單元。在一些實施例中，寡核苷酸之長度為至少25個核苷酸單元。在一些其他實施例中，寡核苷酸之長度為至少30個核苷酸單元。在一些其他實施例中，寡核苷酸為長度為至少18個核苷酸單元之互補股的雙螺旋體。在一些其他實施例中，寡核苷酸為長度為至少21個核苷酸單元之互補股的雙螺旋體。
在一些實施例中，所提供寡核苷酸之5'端及/或3'端經修飾。在一些實施例中，所提供寡核苷酸之5'端及/或3'端經末端封端部分修飾。此類包括末端封端部分之修飾的實例在本文及此項技術中廣泛描述，例如(但不限於)美國專利申請公開案US 2009/0023675A1中所述之彼 等修飾。
在一些實施例中，特徵為1)共同鹼基序列及長度、2)共同主鏈鍵聯模式及3)共同主鏈對掌性中心模式之寡核苷酸類型的寡核苷酸具有相同化學結構。舉例而言，其具有相同鹼基序列、相同核苷修飾模式、相同主鏈鍵聯模式(亦即，核苷酸間鍵聯類型模式，例如磷酸酯、硫代磷酸酯等)、相同主鏈對掌性中心模式(亦即鍵聯磷立體化學(Rp/Sp)模式)及相同主鏈磷修飾模式(例如，式I中之「-XLR1」基團之模式)。
例示性寡核苷酸及組合物
在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸包含米泊美生之序列或該序列之一部分。米泊美生係基於以下鹼基序列GCCT/UCAGT/UCT/UGCT/UT/UCGCACC。在一些實施例中，核苷酸或鍵聯中之任何一或多者可根據本發明修飾。在一些實施例中，本發明提供一種對掌性受控寡核苷酸，其按3'→5'硫代磷酸酯鍵聯具有G*-C*-C*-U*-C*-dA-dG-dT-dC-dT-dG-dmC-dT-dT-dmC-G*-C*-A*-C*-C*之序列[d=2'-去氧，*=2'-O-(2-甲氧基乙基)]。例示性經修飾之米泊美生序列描述於整個申請案中，包括(但不限於)表2中之彼等序列。
在某些實施例中，所提供之寡核苷酸為米泊美生單聚體。在某些實施例中，所提供之寡核苷酸為組態Rp之米泊美生單聚體。在某些實施例中，所提供之寡核苷酸為組態Sp之米泊美生單聚體。
包含米泊美生序列或該序列之一部分的例示性對掌性受控寡核苷酸描繪於下表2中。
在一些實施例中，本發明提供適用於治療亨廷頓氏病之寡核苷酸及/或寡核苷酸組合物，例如選自以下：
在表N1至表N4中，*僅表示立體無規硫代磷酸酯鍵聯；*S表示Sp硫代磷酸酯鍵聯，*R表示Rp硫代磷酸酯鍵聯，所有未加標記之鍵聯為天然磷酸酯鍵聯，鹼基前面之m表示2'-OMe，d2AP表示2-胺基嘌呤，且dDAP表示2,6-二胺基嘌呤。
在一些實施例中，本發明提供適用於治療亨廷頓氏病之寡核苷酸及/或寡核苷酸組合物，例如選自以下：
在表N1A至表N4A中，*僅表示立體無規硫代磷酸酯鍵聯；*S表示Sp硫代磷酸酯鍵聯，*R表示Rp硫代磷酸酯鍵聯，所有未加標記之鍵聯為天然磷酸酯鍵聯，鹼基前面之m表示2'-OMe，d2AP表示2-胺基嘌呤，且dDAP表示2,6-二胺基嘌呤。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸組合物為表N1A、表N2A、表N3A及表N4A中所列寡核苷酸類型之對掌性受控寡核苷酸組合物。本文中所描述之包含HTT序列之各寡核苷酸表示HTT寡核苷酸，其根據本發明設計、構築且在各種分析(例如活體外分析)中測試。舉例而言，表N1A、表N2A、表N3A、表N4A及表8中之任一者中所列或本文中其他地方所描述之各HTT寡核苷酸係根據本發明設計、構築且活體外測試。本文中所描述之每一HTT寡核苷酸尤其在雙重螢光素酶報導基因分析中進行測試。在一些實施例中，對發現在雙重螢光素酶分析中特別有效的HTT寡核苷酸進行進一步活體外及活體內測試。在一些實施例中，所提供之組合物係選自WVE120101、WV-2603、WV-2595、WV-1510、WV-2378及WV-2380；發現其各自非常有效，舉例 而言，如在根據本發明之活體外雙重螢光素酶報導基因分析中所展現。在一些實施例中，所提供之組合物係選自WV-1092、WV-1497、WV-1085、WV-1086、ONT-905及WV-2623；發現其各自非常有效，舉例而言，如在根據本發明之活體外雙重螢光素酶報導基因分析中所展現。各種其他HTT寡核苷酸亦顯示特別有效。在一些實施例中，所提供之組合物具有WV-1092。在一些實施例中，所提供之組合物具有WV-1497。在一些實施例中，所提供之組合物具有WV-1085。在一些實施例中，所提供之組合物具有WV-1086。在一些實施例中，所提供之組合物具有ONT-905。在一些實施例中，所提供之組合物具有WV-2623。
本發明提供包含複數個所提供之寡核苷酸或由其組成的組合物(例如，對掌性受控寡核苷酸組合物)。在一些實施例中，所有該等所提供之寡核苷酸皆為相同類型，亦即，全部具有相同的鹼基序列、主鏈鍵聯模式(亦即，核苷酸間鍵聯類型模式，例如磷酸酯、硫代磷酸酯等)、主鏈對掌性中心模式(亦即鍵聯磷立體化學(Rp/Sp)模式)及主鏈磷修飾模式(例如，式I中之「-XLR1」基團之模式)。在一些實施例中，同一類型之所有寡核苷酸皆相同。然而，在多個實施例中，通常就預定相對量而言，所提供之組合物包含複數個寡核苷酸類型。
在一些實施例中，所提供之組合物包含預定含量之選自某表之寡核苷酸。在一些實施例中，所提供之組合物包含預定含量之選自表N1至表N4之寡核苷酸。在一些實施例中，所提供之組合物包含預定含量之WV-1092。在一些實施例中，所提供之組合物包含預定含量之WV-2595。在一些實施例中，所提供之組合物包含預定含量之WV-2603。在一些實施例中，所提供之組合物包含預定含量之mG*SmGmCmAmC*SA*SA*SG*SG*SG*SC*SA*SC*RA*SG*SmAmCmUmU*SmC，其中寡核苷酸具有游離的5'-OH及3'-OH，鹼基前面之m 表示含有該鹼基之核苷中之2'-OMe修飾，*S表示Sp硫代磷酸酯鍵聯，*R表示Rp硫代磷酸酯鍵聯，且所有未加標記之鍵聯為天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供之組合物包含預定含量之mG*SmGmGmUmC*SC*ST*SC*SC*SC*SC*SA*SC*RA*SG*SmAmGmGmG*S mA，其中寡核苷酸具有游離的5'-OH及3'-OH，鹼基前面之m表示含有該鹼基之核苷中之2'-OMe修飾，*S表示Sp硫代磷酸酯鍵聯，*R表示Rp硫代磷酸酯鍵聯，且所有未加標記之鍵聯為天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供之組合物包含預定含量之mG*SmUmGmCmA*SC*SA*SC*SA*SG*ST*SA*SG*RA*ST*SmGmAmGmG*S mG，其中寡核苷酸具有游離的5'-OH及3'-OH，鹼基前面之m表示含有該鹼基之核苷中之2'-OMe修飾，*S表示Sp硫代磷酸酯鍵聯，*R表示Rp硫代磷酸酯鍵聯，且所有未加標記之鍵聯為天然磷酸酯鍵聯。
在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物為對掌性純米泊美生組合物。換言之，在一些實施例中，就鍵聯磷之組態而言，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物提供米泊美生作為單一非對映異構體。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物為對掌性均一的米泊美生組合物。換言之，在一些實施例中，米泊美生之每一個鍵聯磷皆呈Rp組態或米泊美生之每一個鍵聯磷皆呈Sp組態。
在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物包含一或多個所提供之寡核苷酸類型之組合。化學及醫藥技術中之技術人員將認識到，所提供組合物中之一或多個類型之所提供寡核苷酸中之每一者的選擇及量將視彼組合物之既定用途而定。換言之，相關技術之技術人員將設計所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物，使得其中所含之所提供寡核苷酸之量及類型使得該組合物總體上具有某些合乎需要之特徵(例如，生物學上合乎需要、治療上合乎需要等)。
在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物包含兩個或更多個所提供之寡核苷酸類型之組合。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物包含三個或更多個所提供之寡核苷酸類型之組合。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物包含四個或更多個所提供之寡核苷酸類型之組合。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物包含五個或更多個所提供之寡核苷酸類型之組合。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物包含六個或更多個所提供之寡核苷酸類型之組合。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物包含七個或更多個所提供之寡核苷酸類型之組合。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物包含八個或更多個所提供之寡核苷酸類型之組合。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物包含九個或更多個所提供之寡核苷酸類型之組合。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物包含十個或更多個所提供之寡核苷酸類型之組合。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物包含十五個或更多個所提供之寡核苷酸類型之組合。
在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物為一定量Rp組態對掌性均一米泊美生與一定量Sp組態對掌性均一米泊美生的組合。
在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物為一定量Rp組態對掌性均一米泊美生、一定量Sp組態對掌性均一米泊美生及一定量一或多種所要非對映異構形式之對掌性純米泊美生的組合。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸類型係選自PCT/US2013/050407中所述之彼等類型，該專利以引用的方式併入本文中。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物包含選自PCT/US2013/050407中所述類型之寡核苷酸類型的寡核苷酸。
用於製備寡核苷酸及組合物之例示性方法
本發明提供用於製造對掌性受控寡核苷酸及包含一或多個特定核苷酸類型之對掌性受控組合物的方法。在一些實施例中，如本文所用之片語「寡核苷酸類型」定義具有特定鹼基序列、主鏈鍵聯模式、主鏈對掌性中心模式及主鏈磷修飾模式(例如，「-XLR1」基團)之寡核苷酸。具有共同命名「類型」之寡核苷酸就鹼基序列、主鏈鍵聯模式、主鏈對掌性中心模式及主鏈磷修飾模式而言，在結構上彼此相同。在一些實施例中，一寡核苷酸類型之寡核苷酸為相同的。
在一些實施例中，本發明中所提供之對掌性受控寡核苷酸的特性不同於相應立體無規寡核苷酸混合物之特性。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸之親脂性不同於立體無規寡核苷酸混合物之親脂性。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸在HPLC上具有不同滯留時間。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸之峰值滯留時間可與相應立體無規寡核苷酸混合物之峰值滯留時間顯著不同。在使用HPLC純化寡核苷酸(如此項技術中通常所實施)期間，某些對掌性受控寡核苷酸將在很大程度上(若並非完全)丟失。在使用HPLC純化寡核苷酸(如此項技術中通常所實施)期間，某些對掌性受控寡核苷酸將在很大程度上(若並非完全)丟失。結果之一為，分析中測試不到立體無規寡核苷酸混合物之某些非對映異構體(某些對掌性受控寡核苷酸)。另一結果為，批次與批次之間因為不可避免的儀器及人為誤差，所以假設「純」的立體無規寡核苷酸將具有不一致的組合物，其中組合物中之非對映異構體及其相對量及絕對量因批次而不同。本發明中所提供之對掌性受控寡核苷酸及對掌性受控寡核苷酸組合物解決可該等問題，如以對掌性受控方式以單一非對映異構體形式合成對掌性受控寡核苷酸，且對掌性受控寡核苷酸組合物包含預定含量之一或多個個別寡核苷酸類型。
化學及合成技術中之技術人員應瞭解，本發明之合成方法在所提供之寡核苷酸之各合成步驟期間提供一定程度之控制，使得寡核苷酸之各核苷酸單元可提前設計及/或選擇，從而在鍵聯磷處具有特定立體化學及/或在鍵聯磷處具有特定修飾、及/或特定鹼基、及/或特定糖。在一些實施例中，提前設計及/或選擇所提供之寡核苷酸，從而在核苷酸間鍵聯之鍵聯磷處具有特定立體中心組合。
在一些實施例中，所提供的使用本發明方法製造之寡核苷酸經設計及/或確定具有特定的鍵聯磷修飾組合。在一些實施例中，所提供的使用本發明方法製造之寡核苷酸經設計及/或確定具有特定的鹼基組合。在一些實施例中，所提供的使用本發明方法製造之寡核苷酸經設計及/或確定具有特定的糖組合。在一些實施例中，所提供的使用本發明方法製造之寡核苷酸經設計及/或確定具有以上結構特徵中之一或多者的特定組合。
本發明方法展現高度對掌性控制。舉例而言，本發明方法有助於控制所提供寡核苷酸內之每一單一鍵聯磷之立體化學組態。在一些實施例中，本發明方法提供一種寡核苷酸，其包含一或多個獨立地具有式I結構之經修飾之核苷酸間鍵聯。
在一些實施例中，本發明方法提供一種寡核苷酸，其為米泊美生單聚體。在一些實施例中，本發明方法提供一種寡核苷酸，其為組態Rp之米泊美生單聚體。在一些實施例中，本發明方法提供一種寡核苷酸，其為組態Sp之米泊美生單聚體。
在一些實施例中，本發明方法提供一種對掌性受控寡核苷酸組合物，亦即，含有預定含量之個別寡核苷酸類型的寡核苷酸組合物。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物包含一種寡核苷酸類型。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物包含超過一種寡核苷酸類型。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物包含複數種 寡核苷酸類型。本文中描述根據本發明製造之例示性對掌性受控寡核苷酸組合物。
在一些實施例中，就鍵聯磷之組態而言，本發明方法提供對掌性純的米泊美生組合物。換言之，在一些實施例中，本發明方法提供米泊美生之組合物，其中就鍵聯磷之組態而言，米泊美生以單一非對映異構體形式存在於組合物中。
在一些實施例中，就鍵聯磷之組態而言，本發明方法提供對掌性均一的米泊美生組合物。換言之，在一些實施例中，本發明方法提供米泊美生之組合物，其中就鍵聯磷之組態而言，其中的所有核苷酸單元皆具有相同立體化學，例如所有核苷酸單元在鍵聯磷處皆為Rp組態或所有核苷酸單元在鍵聯磷處皆為Sp組態。
在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸超過50%純。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸超過約55%純。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸超過約60%純。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸超過約65%純。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸超過約70%純。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸超過約75%純。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸超過約80%純。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸超過約85%純。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸超過約90%純。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸超過約91%純。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸超過約92%純。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸超過約93%純。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸超過約94%純。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸超過約95%純。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸超過約96%純。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸超過約97%純。 在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸超過約98%純。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸超過約99%純。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸超過約99.5%純。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸超過約99.6%純。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸超過約99.7%純。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸超過約99.8%純。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸超過約99.9%純。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸超過至少約99%純。
在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物為經設計以包含單一寡核苷酸類型之組合物。在某些實施例中，該等組合物為約50%非對映異構性純。在一些實施例中，該等組合物為約50%非對映異構性純。在一些實施例中，該等組合物為約50%非對映異構性純。在一些實施例中，該等組合物為約55%非對映異構性純。在一些實施例中，該等組合物為約60%非對映異構性純。在一些實施例中，該等組合物為約65%非對映異構性純。在一些實施例中，該等組合物為約70%非對映異構性純。在一些實施例中，該等組合物為約75%非對映異構性純。在一些實施例中，該等組合物為約80%非對映異構性純。在一些實施例中，該等組合物為約85%非對映異構性純。在一些實施例中，該等組合物為約90%非對映異構性純。在一些實施例中，該等組合物為約91%非對映異構性純。在一些實施例中，該等組合物為約92%非對映異構性純。在一些實施例中，該等組合物為約93%非對映異構性純。在一些實施例中，該等組合物為約94%非對映異構性純。在一些實施例中，該等組合物為約95%非對映異構性純。在一些實施例中，該等組合物為約96%非對映異構性純。在一些實施例中，該等組合物為約97%非對映異構性純。在一些實施例中，該等組合物為約98%非對映異構性純。在一些實施例中，該等組合物為約99%非對映 異構性純。在一些實施例中，該等組合物為約99.5%非對映異構性純。在一些實施例中，該等組合物為約99.6%非對映異構性純。在一些實施例中，該等組合物為約99.7%非對映異構性純。在一些實施例中，該等組合物為約99.8%非對映異構性純。在一些實施例中，該等組合物為約99.9%非對映異構性純。在一些實施例中，該等組合物為至少約99%非對映異構性純。
本發明尤其認識到寡核苷酸之立體選擇性(而非立體無規或外消旋)製備之挑戰。本發明尤其提供用於立體選擇性製備包含多個(例如，超過5、6、7、8、9或10個)核苷酸間鍵聯之寡核苷酸、且尤其包含多個(例如，超過5、6、7、8、9或10個)對掌性核苷酸間鍵聯之寡核苷酸的方法及試劑。在一些實施例中，在立體無規或外消旋製備寡核苷酸時，以小於90：10、95：5、96：4、97：3或98：2之非對映立體選擇性形成至少一個對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，關於寡核苷酸之立體選擇性或對掌性受控製備，以大於90：10、95：5、96：4、97：3或98：2之非對映立體選擇性形成各對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，關於寡核苷酸之立體選擇性或對掌性受控製備，以大於95：5之非對映立體選擇性形成各對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，關於寡核苷酸之立體選擇性或對掌性受控製備，以大於96：4之非對映立體選擇性形成各對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，關於寡核苷酸之立體選擇性或對掌性受控製備，以大於97：3之非對映立體選擇性形成各對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，關於寡核苷酸之立體選擇性或對掌性受控製備，以大於98：2之非對映立體選擇性形成各對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，關於寡核苷酸之立體選擇性或對掌性受控製備，以大於99：1之非對映立體選擇性形成各對掌性核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，寡核苷酸中之對掌性核苷酸間鍵聯之非對映立體選擇性可經由模型反應量測，例如在基本上相同或類似的條 件下形成二聚體，其中二聚體具有與對掌性核苷酸間鍵聯相同的核苷酸間鍵聯，二聚體之5'-核苷與對掌性核苷酸間鍵聯5'端之核苷相同，且二聚體之3'-核苷與對掌性核苷酸間鍵聯3'端之核苷相同。
在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物為經設計以包含多個寡核苷酸類型之組合物。在一些實施例中，本發明方法允許產生對掌性受控寡核苷酸文庫，使得預先選好的量之任一或多種對掌性受控寡核苷酸類型可與任一或多種其他對掌性受控寡核苷酸類型混合，產生對掌性受控寡核苷酸組合物。在一些實施例中，預先選好的量之寡核苷酸類型為具有上述非對映異構純度中之任一者的組合物。
在一些實施例中，本發明提供用於製造對掌性受控寡核苷酸之方法，其包含以下步驟：(1)偶合；(2)封端；(3)修飾；(4)脫除阻隔基；及(5)重複步驟(1)至(4)，直至達成所要長度。
在描述所提供之方法時，「循環」一詞具有如一般技術者所理解之普通含義。在一些實施例中，步驟(1)至(4)一輪稱為一循環。
在一些實施例中，本發明提供用於製造對掌性受控寡核苷酸組合物之方法，其包含以下步驟：(a)提供一定量之第一對掌性受控寡核苷酸；(b)視情況提供一定量之一或多種其他對掌性受控寡核苷酸。
在一些實施例中，第一對掌性受控寡核苷酸為如本文所述之寡核苷酸類型。在一些實施例中，一或多種其他對掌性受控寡核苷酸為如本文所述之一或多個寡核苷酸類型。
相關化學及合成技術中之技術人員將辨認出當使用本發明方法 合成時，所提供之寡核苷酸之結構差異及立體化學組態之通用性及控制之程度。舉例而言，在第一循環完成之後，後一循環可使用針對彼後一循環個別地選擇的核苷酸單元執行，在一些實施例中，其包含不同於第一循環核鹼基及/或糖的核鹼基及/或糖。類似地，後一循環之偶合步驟中所用之對掌性助劑可不同於第一循環中所用之對掌性助劑，使得第二循環產生不同立體化學組態之磷鍵聯。在一些實施例中，新形成之核苷酸間鍵聯中之鍵聯磷的立體化學係藉由使用立體化學純胺基磷酸酯來控制。另外，後一循環之修飾步驟中所用之修飾試劑可不同於第一或前一循環中所用之修飾試劑。此迭代組裝方法之累積效應使得所提供之寡核苷酸之各組分可在結構上及組態上進行高度調整。此方法之另一優勢為，封端步驟使「n-1」種雜質之形成降到最低，該等雜質原本將使得所提供之寡核苷酸之分離極具挑戰，且尤其是長度較長之寡核苷酸。
在一些實施例中，用於製造對掌性受控寡核苷酸之方法的例示性循環示出於本發明中所描述之例示性流程中。在一些實施例中，用於製造對掌性受控寡核苷酸之方法的例示性循環示出於流程I中。在一些實施例中，表示固體載體，且視情況表示連接至固體載體之增長對掌性受控寡核苷酸的一部分。所例示之對掌性助劑具有式3-I之結構： 其進一步描述於下文中。「端部(cap)」為藉由封端步驟引入氮原子之任何化學部分，且在一些實施例中，為胺基保護基。一般技術者瞭解，在第一循環中，開始時可以僅存在一個連接至固體載體之核 苷，且可視情況在脫除阻隔基之前執行循環退出。如熟習此項技術者所瞭解，BPRO為寡核苷酸合成中所用之經保護之鹼基。流程I之以上所描繪之循環的各步驟進一步描述於下文中。
在固體載體上合成
在一些實施例中，在固相上執行所提供之寡核苷酸之合成。在一些實施例中，固體載體上所存在之反應基受保護。在一些實施例中，固體載體上所存在之反應基未受保護。在寡核苷酸合成期間，在若干合成循環中用各種試劑處理固體載體，以達成用個別核苷酸單元逐步延長增長寡核苷酸鏈。如本文所用，在鏈末端直接連結至固體載體之核苷單元稱為「第一核苷」。第一核苷經由連接基團部分結合至固體載體，該連接基團部分亦即二價基團，在CPG、聚合物或其他固體載體中之任一者與核苷之間具有共價鍵。連接基團在用於組裝寡核苷酸鏈所執行之合成循環期間保持完整，且在鏈組裝之後裂解，自載體釋放出寡核苷酸。
用於固相核酸合成之固體載體包括以下各者中所述之載體：例 如美國專利4,659,774、5,141,813、4,458,066；Caruthers之美國專利第4,415,732號、第4,458,066號、第4,500,707號、第4,668,777號、第4,973,679號及第第5,132,418號；Andrus等人之美國專利第5,047,524號、第5,262,530號；及Koster之美國專利第4,725,677號(再頒佈為RE34,069)。在一些實施例中，固相為有機聚合物載體。在一些實施例中，固相為無機聚合物載體。在一些實施例中，有機聚合物載體為聚苯乙烯、胺甲基聚苯乙烯、聚乙二醇-聚苯乙烯接枝共聚物、聚丙烯醯胺、聚甲基丙烯酸酯、聚乙烯醇、高度交聯聚合物(HCP)或其他合成聚合物、碳水化合物(諸如纖維素及澱粉)或其他聚合碳水化合物、或其他有機聚合物及任何共聚物、複合材料或以上無機或有機材料之組合。在一些實施例中，無機聚合物載體為二氧化矽、氧化鋁、受控聚玻璃(controlled polyglass；CPG，其為矽膠載體)，或胺丙基CPG。其他適用之固體載體包括含氟固體載體(參見例如WO/2005/070859)、長鏈烷基胺(LCAA)受控微孔玻璃(CPG)固體載體(參見例如S.P.Adams,K.S.Kavka,E.J.Wykes,S.B.Holder及G.R.Galluppi,J Am.Chem.Soc.,1983,105,661-663；G.R.Gough,M.J.Bruden及P.T.Gilham,Tetrahedron Lett.,1981,22,4177-4180)。膜載體及聚合物膜(參見例如Innovation and Perspectives in Solid Phase Synthesis,Peptides,Proteins and Nucleic Acids，第21章第157-162頁，1994,Roger Epton編及美國專利第4,923,901號)亦適用於合成核酸。形成之後，膜可以化學方式官能化以用於核酸合成。除使官能基連接至膜之外，在一些實施例中，亦使用連接至膜之連接基團或間隔基團以使膜與合成鏈之間的位阻降到最低。
其他適合之固體載體包括此項技術中通常已知適用於固相方法中之彼等固體載體，包括(例如)以PrimerTM 200載體、受控微孔玻璃(CPG)、草醯基受控微孔玻璃出售之玻璃(參見例如Alul等人，Nucleic Acids Research,1991,19,1527)、胺基聚乙二醇衍生化載體TentaGel載體(參見例如Wright等人，Tetrahedron Lett.,1993,34,3373)及聚苯乙烯/二乙烯基苯之Poros-a共聚物。
表面活化聚合物已證明可用於在若干固體載體培養基上合成天然及經修飾之核酸及蛋白質。固體載體材料可為孔隙率適當均一、具有足夠的胺含量及足夠的可撓性以在不丟失完整性的情況下經受住任何附帶操控的任何聚合物。所選擇的適合材料之實例包括耐綸(nylon)、聚丙烯、聚酯、聚四氟乙烯、聚苯乙烯、聚碳酸酯及硝化纖維。視研究者之設計而定，其他材料可充當固體載體。考慮到一些設計，舉例而言，可選擇包覆金屬，尤其是金或鉑(參見例如美國公開案第20010055761號)。在寡核苷酸合成之一個實施例中，舉例而言，將核苷錨定至經羥基或胺基殘基官能化之固體載體。或者，使固體載體衍生化，得到酸不穩定的三烷氧基三苯甲基，諸如三甲氧基三苯甲基(TMT)。不受理論束縛，吾人預期，三烷氧基三苯甲基保護基之存在將允許在DNA合成器上常用之條件下發生初始去三苯甲基化。針對寡核苷酸物質於含氨水之溶液中之較快釋放，視情況將二羥乙酸酯連接基團引入載體上。
在一些實施例中，可替代地自5'至3'方向合成所提供之寡核苷酸。在一些實施例中，將核酸經由增長核酸之5'端連接至固體載體，從而呈遞其3'基團進行反應，亦即使用5'-核苷胺基磷酸酯或在酶促反應中(例如，使用核苷5'-三磷酸酯連接及聚合)。當考慮5'至3'合成時，本發明之迭代步驟保持不變(亦即關於對掌性磷之封端及修飾)。
鍵聯部分
視情況使用鍵聯部分或連接基團將固體載體連接至包含游離親核部分之化合物。適合連接基團為已知的，諸如用以在固相合成技術中將固體載體連接至初始核苷分子之官能基(例如，羥基)的短分子。 在一些實施例中，鍵聯部分為丁二醯胺酸連接基團或丁二酸酯連接基團(-CO-CH2-CH2-CO-)或草醯基連接基團(-CO-CO-)。在一些實施例中，鍵聯部分及核苷經由酯鍵鍵結在一起。在一些實施例中，鍵聯部分及核苷經由醯胺鍵鍵結在一起。在一些實施例中，鍵聯部分將核苷連接至另一核苷酸或核酸。適合連接基團揭示於例如Oligonucleotides And Analogues A Practical Approach,Ekstein,F.編，IRL Press,N.Y.,1991，第1章；及Solid-Phase Supports for Oligonucleotide Synthesis,Pon,R.T.,Curr.Prot.Nucleic Acid Chem.,2000,3.1.1-3.1.28中。
使用連接基團部分將包含游離親核部分之化合物連接至另一核苷、核苷酸或核酸。在一些實施例中，鍵聯部分為磷酸二酯鍵聯。在一些實施例中，鍵聯部分為H-膦酸酯部分。在一些實施例中，鍵聯部分為如本文所述之經修飾之磷鍵聯。在一些實施例中，使用通用連接基團(UnyLinker)將寡核苷酸連接至固體載體(Ravikumar等人，Org.Process Res Dev,2008,12(3),399-410)。在一些實施例中，使用其他通用連接基團(Pon,R.T.,Curr.Prot Nucleic Acid Chem.,2000,3.1.1-3.1.28)。在一些實施例中，使用各種正交連接基團(諸如二硫化物連接基團)(Pon,R.T.,Curr.Prot.Nucleic Acid Chem.,2000,3.1.1-3.1.28)。
本發明尤其認識到，可選擇或設計與寡核苷酸合成中所採用的一組反應條件相容的連接基團。在一些實施例中，為避免寡核苷酸降解及避免脫硫，在脫除保護基之前選擇性移除輔助基團。在一些實施例中，可藉由F-離子選擇性移除DPSE基團。在一些實施例中，本發明提供在DPSE脫除保護基條件下穩定的連接基團，該條件例如0.1M TBAF於MeCN中、0.5M HF-Et3N於THF或MeCN中等。在一些實施例中，所提供之連接基團為SP連接基團。在一些實施例中，本發明證明，SP連接基團在DPSE脫除保護基條件下穩定，該條件例如0.1M TBAF於MeCN中、0.5M HF-Et3N於THF或MeCN中等；其在例如無水鹼性條件下亦穩定，該等條件諸如om1M DBU於MeCN中。
在一些實施例中，例示性連接基團為：
在一些實施例中，丁二醯基連接基團、Q連接基團或草醯基連接基團在使用F-之一或多個DPSE脫除保護基條件下不穩定。
一般條件-用於合成之溶劑
所提供之寡核苷酸之合成一般係在非質子有機溶劑中執行。在一些實施例中，溶劑為腈溶劑，諸如乙腈。在一些實施例中，溶劑為鹼性胺溶劑，諸如吡啶。在一些實施例中，溶劑為醚溶劑，諸如四氫呋喃。在一些實施例中，溶劑為鹵化烴，諸如二氯甲烷。在一些實施例中，使用溶劑混合物。在某些實施例中，溶劑為上述各類溶劑中之任何一或多者的混合物。
在一些實施例中，當非質子有機溶劑不為鹼性時，在反應步驟中存在鹼。在存在鹼之一些實施例中，鹼為胺鹼，諸如吡啶、喹啉或N,N-二甲基苯胺。其他胺鹼之實例包括吡咯啶、哌啶、N-甲基吡咯啶、吡啶、喹啉、N,N-二甲胺基吡啶(DMAP)或N,N-二甲基苯胺。
在一些實施例中，鹼不為胺鹼。
在一些實施例中，非質子有機溶劑無水。在一些實施例中，無水非質子有機溶劑為新蒸餾的。在一些實施例中，新蒸餾的無水非質子有機溶劑為鹼性胺溶劑，諸如吡啶。在一些實施例中，新蒸餾的無水非質子有機溶劑為醚溶劑，諸如四氫呋喃。在一些實施例中，新蒸餾的無水非質子有機溶劑為腈溶劑，諸如乙腈。
對掌性試劑/對掌性助劑
在一些實施例中，在製造對掌性受控寡核苷酸時使用對掌性試劑賦予立體選擇性。根據本發明方法，可使用熟習此項技術者及本文中亦稱為對掌性助劑的多種不同對掌性試劑。該等對掌性試劑之實例描述於本文及以上提及之Wada I、II及III中。在某些實施例中，對掌性試劑如由Wada I所述。在一些實施例中，根據本發明方法使用之對掌性試劑具有下式3-I： 其中W1及W2為-O-、-S-或-NG5-中之任一者，U1及U3為經由單鍵、雙鍵或參鍵鍵結至U2(若存在)或彼此鍵結(若r為0)之碳原子。U2為-C-、-CG8-、-CG8G8-、-NG8-、-N-、-O-或-S-，其中r為0至5之整數且不超過兩個雜原子相鄰。當U2中之任一者為C時，必須在U2之第二實例(其為C)之間或與U1或U3中之一者形成參鍵。類似地，當U2中之任一者為CG8時，在U2之第二實例(其為-CG8-或-N-)之間或與U1或U3中之一者形成雙鍵。
在一些實施例中，-U1(G3G4)-(U2)r-U3(G1G2)-為-CG3G4-CG1G2-。在一些實施例中，-U1-(U2)r-U3-為-CG3=CG1-。在一些實施例中，-U1-(U2)r-U3-為-C≡C-。在一些實施例中，-U1-(U2)r-U3-為-CG3=CG8- CG1G2-。在一些實施例中，-U1-(U2)r-U3-為-CG3G4-O-CG1G2-。在一些實施例中，-U1-(U2)r-U3-為-CG3G4-NG8-CG1G2-。在一些實施例中，-U1-(U2)r-U3-為-CG3G4-N-CG2-。在一些實施例中，-U1-(U2)r-U3-為-GG3G4-N=CG8-GG1G2-。
如本文所定義，G1、G2、G3、G4、G5及G8獨立地為氫或選自烷基、芳烷基、環烷基、環烷基烷基、雜環基、雜芳基及芳基之視情況經取代之基團；或G1、G2、G3、G4及G5中之兩者為G6(一起形成至多約20個環原子之視情況經取代之飽和、部分不飽和或不飽和碳環或含雜原子環，其為單環或多環，且稠合或未稠合)。在一些實施例中，如此形成之環經側氧基、硫酮基、烷基、烯基、炔基、雜芳基或芳基部分取代。在一些實施例中，當藉由兩個G6一起形成之環經取代時，其係經龐大的足以在反應期間賦予立體選擇性的部分取代。
在一些實施例中，藉由兩個G6一起形成之環為視情況經取代之環戊基、吡咯基、環丙基、環己烯基、環戊烯基、四氫哌喃基或哌嗪基。在一些實施例中，藉由兩個G6一起形成之環為視情況經取代之環戊基、吡咯基、環丙基、環己烯基、環戊烯基、四氫哌喃基、吡咯啶基或哌嗪基。
在一些實施例中，G1為視情況經取代之苯基。在一些實施例中，G1為苯基。在一些實施例中，G2為甲基或氫。在一些實施例中，G1為視情況經取代之苯基且G2為甲基。在一些實施例中，G1為苯基且G2為甲基。
在一些實施例中，r為0。
在一些實施例中，W1為-NG5-。在一些實施例中，G3及G4中之一者與G5一起形成視情況經取代之吡咯啶基環。在一些實施例中，G3及G4中之一者與G5一起形成吡咯啶基環。
在一些實施例中，W2為-O-。
在一些實施例中，對掌性試劑為式3-AA化合物：
其中各變數獨立地如上文所定義及此處所描述。
在式3AA之一些實施例中，W1及W2獨立地為-NG5-、-O-或-S-；G1、G2、G3、G4及G5獨立地為氫，或選自烷基、芳烷基、環烷基、環烷基烷基、雜環基、雜芳基或芳基之視情況經取代之基團；或G1、G2、G3、G4及G5中之兩者為G6(一起形成至多約20個環原子之視情況經取代之飽和、部分不飽和或不飽和碳環或含雜原子環，其為單環或多環、稠合或未稠合)，且G1、G2、G3、G4及G5中不超過四者為G6。類似於式3-I之化合物，G1、G2、G3、G4或G5中之任一者視情況經側氧基、硫酮基、烷基、烯基、炔基、雜芳基或芳基部分取代。在一些實施例中，此類取代在製造對掌性受控寡核苷酸時誘導立體選擇性。
在一些實施例中，所提供之對掌性試劑具有之結構。在 一些實施例中，所提供之對掌性試劑具有之結構。在一些實 施例中，所提供之對掌性試劑具有之結構。在一些實施例 中，所提供之對掌性試劑具有之結構。在一些實施例中，所 提供之對掌性試劑具有之結構。在一些實施例中，所提供之 對掌性試劑具有之結構。在一些實施例中，所提供之對掌性 試劑具有之結構。在一些實施例中，所提供之對掌性試劑具 有之結構。
在一些實施例中，W1為-NG5，W2為O，G1及G3各自獨立地為氫或選自C1-10脂族基、雜環基、雜芳基及芳基之視情況經取代之基團，G2為-C(R)2Si(R)3，且G4及G5一起形成至多約20個環原子之視情況經取代之飽和、部分不飽和或不飽和的含雜原子環，其為單環或多環、稠合或未稠合。在一些實施例中，各R獨立地為氫或選自C1-C6脂族基、碳環基、芳基、雜芳基及雜環基之視情況經取代之基團。在一些實施例中，G2為-C(R)2Si(R)3，其中-C(R)2-為視情況經取代之-CH2-，且-Si(R)3之各R獨立地為選自C1-10脂族基、雜環基、雜芳基及芳基之視情況經取代之基團。在一些實施例中，-Si(R)3之至少一個R獨立地為視情況經取代之C1-10烷基。在一些實施例中，-Si(R)3之至少一個R獨立地為視情況經取代之苯基。在一些實施例中，-Si(R)3之一個R獨立地為視情況經取代之苯基，且另兩個R各自獨立地為視情況經取代之C1-10烷基。在一些實施例中，-Si(R)3之一個R獨立地為視情況經取代之C1-10烷基，且另兩個R各自獨立地為視情況經取代之苯基。在一些實施例中，G2為視情況經取代之-CH2Si(Ph)(Me)2。在一些實施例中，G2為視情況經取代之-CH2Si(Me)(Ph)2。在一些實施例中，G2為-CH2Si(Me)(Ph)2。在一些實施例中，G4及G5一起形成含有一個氮原子(其與G5連接)的視情況經取代之飽和5-6員環。在一些實施例中，G4及G5一起形成含有一個氮原子的視情況經取代之飽和5員環。在一些實施例中，G1為氫。在一些實施例中，G3為氫。在一些實施例中，G1及G3均為氫。
在一些實施例中，對掌性試劑具有下式中之一者：
在一些實施例中，對掌性試劑為胺基醇。在一些實施例中，對掌性試劑為胺基硫醇。在一些實施例中，對掌性試劑為胺基苯酚。在一些實施例中，對掌性試劑為(S)-及(R)-2-甲胺基-1-苯乙醇、(1R,2S)-麻黃素或(1R,2S)-2-甲胺基-1,2-二苯基乙醇。
在本發明之一些實施例中，對掌性試劑為下式之一的化合物：
如本文中所說明，當用於製備對掌性核苷酸間鍵聯時，為獲得立體選擇性，一般採用立體化學純對掌性試劑。本發明尤其提供立體化學純對掌性試劑，包括具有所述結構之彼等試劑。
對掌性試劑(例如由式Q表示之異構體或其立體異構體式R)之選擇允許特異性控制鍵聯磷處之對掌性。因此，可在各合成循環中選擇Rp或Sp組態，從而控制對掌性受控寡核苷酸之整體三維結構。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸皆具有Rp立體中心。在本發明之一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸皆具有Sp立體中心。在本發明之一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸中之各鍵聯磷獨立地為Rp或Sp。在本發明之一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸中之各鍵聯磷獨立地為Rp或Sp，且至少一者為Rp且至少一者為Sp。在一些實施例中，選擇Rp及Sp中心以賦予對掌性受控寡核苷酸特定的三維上部構造。該等選擇之實例進一步詳細描述於本文中。
在一些實施例中，根據本發明使用之對掌性試劑係針對其在以上所描繪之循環中之特定步驟得以移除的能力來加以選擇。舉例而言，在一些實施例中，需要在鍵聯磷之修飾步驟期間移除對掌性試 劑。在一些實施例中，需要在鍵聯磷之修飾步驟之前移除對掌性試劑。在一些實施例中，需要在鍵聯磷之修飾步驟之後移除對掌性試劑。在一些實施例中，需要在第一偶合步驟發生之後但在第二偶合步驟發生之前移除對掌性試劑，使得在第二偶合(且其他後續偶合步驟同樣如此)期間，對掌性試劑不存在於增長寡核苷酸上。在一些實施例中，在「脫除阻隔基」反應期間移除對掌性試劑，該反應發生在鍵聯磷修飾之後，但在後續循環開始之前。例示性移除方法及試劑描述於本文中。
在一些實施例中，在執行修飾及/或脫除阻隔基步驟時達成對掌性助劑之移除，如流程I中所示。將對掌性助劑移除與諸如修飾及脫除阻隔基之其他轉換組合在一起可為有利的。一般技術者將瞭解，所保存之步驟/轉換可提高整體合成效率，例如就產率及產物純度而言，尤其針對較長寡核苷酸。在流程I中說明在修飾及/或脫除阻隔基期間移除對掌性助劑的一個實例。
在一些實施例中，根據本發明方法使用之對掌性試劑的特徵在於其可在某些條件下移除。舉例而言，在一些實施例中，對掌性試劑係針對其在酸性條件下得以移除的能力來加以選擇。在某些實施例中，對掌性試劑係針對其在弱酸性條件下得以移除的能力來加以選擇。在某些實施例中，對掌性試劑係針對其藉助於E1消除反應得以移除(例如，因為在酸性條件下在對掌性試劑上形成陽離子中間體，導致對掌性試劑自寡核苷酸裂解而發生移除)的能力來加以選擇。在一些實施例中，對掌性試劑之特徵在於，其具有公認能夠適應或促成E1消除反應的結構。相關技術中之技術人員應瞭解，哪些結構將設想為易於進行該等消除反應。
在一些實施例中，對掌性試劑係針對其用親核試劑移除之能力來加以選擇。在一些實施例中，對掌性試劑係針對其用胺親核試劑移 除之能力來加以選擇。在一些實施例中，對掌性試劑係針對其用除胺以外之親核試劑移除的能力來加以選擇。
在一些實施例中，對掌性試劑係針對其用鹼移除之能力來加以選擇。在一些實施例中，對掌性試劑係針對其用胺移除之能力來加以選擇。在一些實施例中，對掌性試劑係針對其用除胺以外之鹼移除的能力來加以選擇。
其他的對掌性助劑及其用途可見於例如Wada I(JP4348077；WO2005/014609；WO2005/092909)、Wada II(WO2010/064146)、Wada III(WO2012/039448)、對掌性控制(WO2010/064146)等中。
活化
用第一活化試劑處理非對掌性H-膦酸酯部分，形成第一中間體。在一個實施例中，在縮合步驟期間，向反應混合物中添加第一活化試劑。第一活化試劑之使用視反應條件而定，諸如反應所用之溶劑。第一活化試劑之實例為光氣、氯甲酸三氯甲酯、雙(三氯甲基)碳酸酯(BTC)、乙二醯氯、Ph3PCl2、(PhO)3PCl2、N,N'-雙(2-側氧基-3-噁唑啶基)次膦醯氯(BopCl)、六氟磷酸1,3-二甲基-2-(3-硝基-1,2,4-三唑-1-基)-2-吡咯啶-1-基-1,3,2-二氮雜鏻(MNTP)或六氟磷酸3-硝基-1,2,4-三唑-1-基-參(吡咯啶-1-基)鏻(PyNTP)。
非對掌性H-膦酸酯部分之實例為以上流程中所示之化合物。DBU表示1,8-二氮雜雙環[5.4.0]十一-7-烯。H+DBU可為例如銨離子、烷基銨離子、雜芳香族亞銨離子或雜環亞銨離子，其中任一者為一級、二級、三級或四級銨離子；或單價金屬離子。
與對掌性試劑反應
在第一活化步驟之後，經活化之非對掌性H-膦酸酯部分與對掌性試劑反應，對掌性試劑由式(Z-I)或(Z-I')表示，形成式(Z-Va)、(Z-Vb)、(Z-Va')或(Z-Vb')之對掌性中間體。
立體特異性縮合步驟
用第二活化試劑及核苷處理式Z-Va((Z-Vb)、(Z-Va')或(Z-Vb'))之對掌性中間體，形成縮合中間體。核苷可在固體載體上。第二活化試劑之實例為4,5-二氰基咪唑(DCI)、4,5-二氯咪唑、三氟甲磺酸1-苯基咪唑鎓(PhIMT)、三氟甲磺酸苯并咪唑鎓(BIT)、苯并三唑、3-硝基-1,2,4-三唑(NT)、四唑、5-乙硫基四唑(ETT)、5-苯硫基四唑(BTT)、5-(4-硝基苯基)四唑、三氟甲磺酸N-氰基甲基吡咯啶鎓(CMPT)、三氟甲磺酸N-氰基甲基哌啶鎓、三氟甲磺酸N-氰基甲基二甲基銨。式Z-Va((Z-Vb)、(Z-Va')或(Z-Vb'))之對掌性中間體可分離為單體。通常，Z-Va((Z-Vb)、(Z-Va')或(Z-Vb'))之對掌性中間體不分離且在同一個鍋中與核苷或經修飾之核苷反應，得到縮合中間體對掌性亞磷酸酯化合物。在其他實施例中，當經由固相合成執行該方法時，自副產物、雜質及/或試劑中過濾出包含該化合物之固體載體。
封端步驟
若最終核酸大於二聚體，則未反應的-OH部分用阻隔基封端且化合物中之對掌性助劑亦可用阻隔基封端，形成封端縮合中間體。若最終核酸為二聚體，則封端步驟為不必要的。
修飾步驟
藉由與親電試劑反應來修飾化合物。可對封端縮合中間體執行修飾步驟。在一些實施例中，使用硫親電試劑、硒親電試劑或硼酸化劑執行修飾步驟。修飾步驟之實例為氧化及硫化步驟。
在該方法之一些實施例中，硫親電試劑為具有下式中之一者的化合物：S8(式Z-B)、Zz1-S-S-Zz2或Zz1-S-Vz-Zz2；其中Zz1及Zz2獨立地為烷基、胺基烷基、環烷基、雜環、環烷基烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、烷氧基、芳氧基、雜芳氧基、醯 基、醯胺、醯亞胺或硫羰基，或Zz1及Zz2一起形成可經取代或未經取代之3至8員脂環族或雜環；Vz為SO2、O或NRf；且Rf為氫、烷基、烯基、炔基或芳基。
在該方法之一些實施例中，硫親電試劑為下式Z-A、Z-B、Z-C、Z-D、Z-E或Z-F之化合物：
在一些實施例中，硫化試劑為3-苯基-1,2,4-二噻唑啉-5-酮。
在一些實施例中，硒親電試劑為具有下式中之一者的化合物：Se(式Z-G)、Zz3-Se-Se-Zz4或Zz3-Se-Vz-Zz4；其中Zz3及Zz4獨立地為烷基、胺基烷基、環烷基、雜環、環烷基烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、烷氧基、芳氧基、雜芳氧基、醯基、醯胺、醯亞胺或硫羰基，或Zz3及Zz4一起形成可經取代或未經取代之3至8員脂環族或雜環；Vz為SO2、S、O或NRf；且Rf為氫、烷基、烯基、炔基或芳基。
在一些實施例中，硒親電試劑為式Z-G、Z-H、Z-I、Z-J、Z-K或Z-L之化合物。
在一些實施例中，硼化劑為硼烷-N,N-二異丙基乙胺(BH3DIPEA)、硼烷-吡啶(BH3 Py)、硼烷-2-氯吡啶(BH3 CPy)、硼烷-苯胺(BH3 An)、硼烷-四氫呋喃(BH3 THF)或硼烷-二甲基硫醚(BH3 Me2S)。
在一些實施例中，在修飾步驟之後，對掌性助劑基團離開增長寡核苷酸鏈。在一些實施例中，在修飾步驟之後，對掌性助劑基團保持連接至核苷酸間磷原子。
在該方法之一些實施例中，修飾步驟為氧化步驟。在該方法之一些實施例中，修飾步驟為使用如本申請案中上文所述之類似條件的氧化步驟。在一些實施例中，氧化步驟如例如JP 2010-265304 A及WO2010/064146中所揭示。
鏈延長循環及脫除保護基步驟
使封端縮合中間體脫除阻隔基以移除增長核酸鏈5'端的阻隔基，得到一化合物。視情況使化合物再進入鏈延長循環，形成縮合中間體、封端縮合中間體、經修飾之封端縮合中間體及5'脫除保護基之經修飾之封端中間體。在至少一輪鏈延長循環之後，藉由移除對掌性助劑配位體及其他保護基(例如核鹼基、經修飾之核鹼基、糖及經修飾之糖保護基)，使5'脫除保護基之經修飾之封端中間體進一步脫除阻隔基，得到核酸。在其他實施例中，包含5'-OH部分之核苷為來自如本文所述之前述鏈延長循環的中間體。在其他實施例中，包含5'-OH部分之核苷為自另一已知核酸合成方法獲得之中間體。在使用固體載體之實施例中，磷原子經修飾之核酸隨後自固體載體裂解。在某些實施例中，出於純化目的，核酸保持連接在固體載體上，且隨後在純化之後自固體載體裂解。
在其他實施例中，包含5'-OH部分之核苷為自另一已知核酸合成方法獲得之中間體。在其他實施例中，包含5'-OH部分之核苷為自如本申請案中所述之另一已知核酸合成方法獲得之中間體。在其他實施例中，包含5'-OH部分之核苷為自另一已知核酸合成方法獲得之中間體，該方法包含一或多個在流程I中所示之循環。在其他實施例中，包含5'-OH部分之核苷為自另一已知核酸合成方法獲得之中間體，該方法包含一或多個在流程I-b、I-c或I-d中所示之循環。
在一些實施例中，本發明提供寡核苷酸合成方法，其使用穩定且可在市面上購得的物質作為起始物質。在一些實施例中，本發明提 供寡核苷酸合成方法，其使用非對掌性起始物質來製造立體受控、磷原子經修飾之寡核苷酸衍生物。
在一些實施例中，本發明方法不會引起在脫除保護基步驟下降解。此外，該方法不需要特定封端劑來產生磷原子經修飾之寡核苷酸衍生物。
縮合試劑
根據本發明方法適用之縮合試劑(CR)具有以下通式中之任一者：
其中Z1、Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8及Z9獨立地為選自烷基、胺基烷基、環烷基、雜環、環烷基烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、烷氧基、芳氧基或雜芳氧基的視情況經取代之基團，或其中Z2及Z3、Z5及Z6、Z7及Z8、Z8及Z9、Z9及Z7、或Z7及Z8及Z9中之任一者一起形成3至20員脂環族或雜環；Q-為抗衡陰離子；且LG為離去基。
在一些實施例中，縮合試劑CR之抗衡離子為Cl-、Br-、BF4 -、PF6 -、TfO-、Tf2N-、AsF6 -、ClO4 -或SbF6 -，其中Tf為CF3SO2。在一些實施例中，縮合試劑CR之離去基為F、Cl、Br、I、3-硝基-1,2,4-三唑、咪唑、烷基三唑、四唑、五氟苯或1-羥基苯并三唑。
根據本發明方法使用之縮合試劑之實例包括(但不限於)：五氟苯甲醯氯、羰基二咪唑(CDI)、1-均三甲苯磺醯基-3-硝基三唑(MSNT)、1-乙基-3-(3'-二甲胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(EDCI-HCl)、六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基參(二甲胺基)鏻(PyBOP)、N,N'-雙(2-側氧基-3-噁唑啶基)次膦醯氯(BopCl)、六氟磷酸2-(1H-7-氮雜苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲(HATU)及六氟磷酸O-苯并三唑-N,N,N',N'-四甲(HBTU)、DIPCDI；N,N'-雙(2-側氧基-3-噁唑啶基)次膦醯溴(BopBr)、 六氟磷酸1,3-二甲基-2-(3-硝基-1,2,4-三唑-1-基)-2-吡咯啶-1-基-1,3,2-二氮雜鏻(MNTP)、六氟磷酸3-硝基-1,2,4-三唑-1-基-參(吡咯啶-1-基)鏻(PyNTP)、六氟磷酸溴三吡咯啶鏻(PyBrOP)；四氟硼酸O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲(TBTU)；及六氟磷酸四甲基氟甲脒鎓(TFFH)。在某些實施例中，縮合試劑CR之抗衡離子為Cl-、Br-、BF4 -、PF6 -、TfO-、Tf2N-、AsF6 -、ClO4 -或SbF6 -，其中Tf為CF3SO2。
在一些實施例中，縮合試劑為1-(2,4,6-三異丙基苯磺醯基)-5-(吡啶-2-基)四唑化物、特戊醯氯、六氟磷酸溴參吡咯啶鏻、N,N'-雙(2-側氧基-3-噁唑啶基)次膦醯氯(BopCl)或2-氯-5,5-二甲基-2-側氧基-1,3,2-二氧雜磷雜環己烷。在一些實施例中，縮合試劑為N,N'-雙(2-側氧基-3-噁唑啶基)次膦醯氯(BopCl)。在一些實施例中，縮合試劑係選自WO/2006/066260中所述之彼等縮合試劑。
在一些實施例中，縮合試劑為六氟磷酸1,3-二甲基-2-(3-硝基-1,2,4-三唑-1-基)-2-吡咯啶-1-基-1,3,2-二氮雜鏻(MNTP)或六氟磷酸3-硝基-1,2,4-三唑-1-基-參(吡咯啶-1-基)鏻(PyNTP)：
核苷偶合搭配物之鹼基及糖之選擇
如本文所述，根據本發明方法使用之核苷偶合搭配物可彼此相同或可彼此不同。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸之合成中所用的核苷偶合搭配物具有彼此相同的結構及/或立體化學組態。在一些實施例中，適用於合成所提供之寡核苷酸的各核苷偶合搭配物與寡核苷酸之某些其他核苷偶合搭配物並不具有相同結構及/或立體化學組態。根據本發明方法使用之例示性核鹼基及糖描述於本文中。相關化學及合成技術中之技術人員將認識到，涵蓋本文中所述之核鹼基及糖 之任何組合用於根據本發明方法使用。
偶合步驟
根據本發明使用之例示性偶合程序及對掌性試劑及縮合試劑尤其概述於Wada I(JP4348077；WO2005/014609；WO2005/092909)、Wada II(WO2010/064146)、Wada III(WO2012/039448)及對掌性控制(WO2010/064146)中。根據本發明使用之對掌性核苷偶合搭配物在本文中亦稱作「Wada胺基酸酯」。在一些實施例中，偶合搭配物具有 之結構，其中BPRO為經保護之核鹼基。在一些實施例 中，偶合搭配物具有之結構，其中BPRO為經保護之核鹼 基。在一些實施例中，偶合搭配物具有之結構，其 中BPRO為經保護之核鹼基，且R1如本文所定義及描述。在一些實施例 中，偶合搭配物具有之結構，其中BPRO為經保護之 核鹼基，且R1如本文所定義及描述。在一些實施例中，R1為視情況經取代之C1-6烷基。在一些實施例中，R1為Me。
作為偶合搭配物之例示性對掌性胺基磷酸酯描繪如下：
其他實例描述於對掌性控制(WO2010/064146)中。
用於合成偶合搭配物之方法之一描繪於以下流程II中。
流程II. 偶合搭配物之例示性合成.
在一些實施例中，偶合步驟包含寡核苷酸之核苷酸單元之游離羥基與核苷偶合搭配物在適合實現偶合之條件下反應。在一些實施例中，偶合步驟係在脫除阻隔基步驟之前。舉例而言，在一些實施例中，阻隔(亦即，保護)增長寡核苷酸之5'羥基且為了隨後與核苷偶合搭配物反應，必須脫除阻隔基。
在增長寡核苷酸之適當羥基已脫除阻隔基之後，對載體進行洗滌及乾燥，準備好用於傳遞包含對掌性試劑之溶液及包含活化劑之溶液。在一些實施例中，對掌性試劑及活化劑同時傳遞。在一些實施例中，共同傳遞包含於諸如腈溶劑(例如，乙腈)之極性非質子溶劑中傳遞含一定量對掌性試劑之溶液(例如，胺基磷酸酯溶液)及含一定量活化劑之溶液(例如，CMPT溶液)。
在一些實施例中，偶合步驟提供粗產物組合物，其中對掌性亞磷酸酯產物以>95%之非對映異構過量存在。在一些實施例中，對掌性亞磷酸酯產物以>96%之非對映異構過量存在。在一些實施例中，對掌性亞磷酸酯產物以>97%之非對映異構過量存在。在一些實施例中，對掌性亞磷酸酯產物以>98%之非對映異構過量存在。在一些實施例中，對掌性亞磷酸酯產物以>99%之非對映異構過量存在。
封端步驟：
所提供之用於製造對掌性受控寡核苷酸之方法包含封端步驟。在一些實施例中，封端步驟為單一步驟。在一些實施例中，封端步驟為兩個步驟。在一些實施例中，封端步驟為超過兩個步驟。
在一些實施例中，封端步驟包含使對掌性助劑之游離胺封端及使任何殘餘未反應的5'羥基封端的步驟。在一些實施例中，對掌性助劑之游離胺及未反應的5'羥基用相同封端基團封端。在一些實施例中，對掌性助劑之游離胺及未反應的5'羥基用不同封端基團封端。在某些實施例中，用不同封端基團封端允許在寡核苷酸合成期間選擇性移除一個封端基團，優先於另一個。在一些實施例中，兩個基團之封端同時發生。在一些實施例中，兩個基團之封端反覆發生。
在某些實施例中，封端反覆發生且包含第一步使游離胺封端，繼之以第二步使游離的5'羥基封端，其中游離胺及5'羥基均用相同封端基團封端。舉例而言，在一些實施例中，使用酸酐(例如，苯氧基乙酸酐，亦即Pac2O)使對掌性助劑之游離胺封端，隨後用相同酸酐使5'羥基封端。在某些實施例中，用相同酸酐使5'羥基封端發生在不同條件下(例如，在一或多種其他試劑存在下)。在一些實施例中，5'羥基之封端發生在含胺鹼之醚類溶劑(例如，含NMI(N-甲基咪唑)之THF)存在下。片語「封端基團」在本文中可與片語「保護基」及「阻隔基」互換地使用。
在一些實施例中，胺封端基團之特徵在於，其有效地使胺封端，因此其防止中間體亞磷酸酯物質重組及/或分解。在一些實施例中，封端基團係針對其保護對掌性助劑之胺從而防止核苷酸間鍵聯磷分子內裂解的能力來加以選擇。
在一些實施例中，5'羥基封端基團之特徵在於，其可有效地使羥基封端，因此其防止「短體)」(例如「n-m」，m及n為整數且m<n；n 為所靶向之寡核苷酸中之鹼基的數目)雜質之出現，該等雜質係由未能在第一循環中反應但隨後在一或多個後續循環中反應的寡核苷酸鏈之反應產生。該等短體、尤其「n-1」之存在對粗寡核苷酸之純度具有不利影響且使得寡核苷酸之最終純化繁瑣且通常低產。
在一些實施例中，基於在特定條件下促進特定類型之反應的趨勢選擇特定端基。舉例而言，在一些實施例中，封端基團係針對其促進E1消除反應之能力來加以選擇，該反應自增長寡核苷酸裂解端基及/或助劑。在一些實施例中，封端基團係針對其促進E2消除反應之能力來加以選擇，該反應自增長寡核苷酸裂解端基及/或助劑。在一些實施例中，封端基團係針對其促進β-消除反應之能力來加以選擇，該反應自增長寡核苷酸裂解端基及/或助劑。
修飾步驟：
如本文所用之片語「修飾步驟(modifying step)」、「修飾步驟(modification step)」及「P修飾步驟(P-modification step)」可互換使用且一般指任何一或多個用於安裝經修飾之核苷酸間鍵聯的步驟。在一些實施例中，經修飾之核苷酸間鍵聯具有式I結構。本發明之P修飾步驟發生在所提供之寡核苷酸之組裝期間而非在所提供之寡核苷酸之組裝完成之後。因此，所提供寡核苷酸之各核苷酸單元可個別地在安裝核苷酸單元之循環期間在鍵聯磷處加以修飾。
在一些實施例中，適合P修飾試劑為硫親電試劑、硒親電試劑、氧親電試劑、硼化試劑或疊氮試劑。
舉例而言，在一些實施例中，硒試劑為元素硒、硒鹽或經取代之二硒化物。在一些實施例中，氧親電試劑為元素氧、過氧化物或經取代之過氧化物。在一些實施例中，硼化試劑為硼烷-胺(例如，N,N-二異丙基乙胺(BH3．DIPEA)、硼烷-吡啶(BH3．Py)、硼烷-2-氯吡啶(BH3CPy)、硼烷-苯胺(BH3．An))、硼烷-醚試劑(例如，硼烷-四氫呋喃(BH3． THF))、硼烷-二烷基硫化物試劑(例如，BH3．Me2S)、苯胺-氰基硼烷或三苯基膦-烷氧羰基硼烷。在一些實施例中，疊氮試劑包含能夠進行後續還原以提供胺基的疊氮基。
在一些實施例中，P修飾試劑為如本文所述之硫化試劑。在一些實施例中，修飾步驟包含使磷硫化以得到硫代磷酸酯鍵聯或硫代磷酸三酯鍵聯。在一些實施例中，修飾步驟提供具有式I之核苷酸間鍵聯的寡核苷酸。
在一些實施例中，本發明提供硫化試劑，及其製造方法及用途。
在一些實施例中，該等硫化試劑為硫代磺酸酯試劑。在一些實施例中，硫代磺酸酯試劑具有式S-I之結構：
其中：Rs1為R；且R、L及R1各自獨立地如上文及此處所定義及所描述。
在一些實施例中，硫化試劑為雙(硫代磺酸酯)試劑。在一些實施例中，雙(硫代磺酸酯)試劑具有式S-II之結構：
其中Rs1及L各自獨立地如上文及此處所定義及所描述。
如上文一般所定義，Rs1為R，其中R如上文及此處所定義及所描述。在一些實施例中，Rs1為視情況經取代之脂族基、芳基、雜環基或雜芳基。在一些實施例中，Rs1為視情況經取代之烷基。在一些實 施例中，Rs1為視情況經取代之烷基。在一些實施例中，Rs1為甲基。在一些實施例中，Rs1為氰基甲基。在一些實施例中，Rs1為硝基甲基。在一些實施例中，Rs1為視情況經取代之芳基。在一些實施例中，Rs1為視情況經取代之苯基。在一些實施例中，Rs1為苯基。在一些實施例中，Rs1為對硝基苯基。在一些實施例中，Rs1為對甲基苯基。在一些實施例中，Rs1為對氯苯基。在一些實施例中，Rs1為鄰氯苯基。在一些實施例中，Rs1為2,4,6-三氯苯基。在一些實施例中，Rs1為五氟苯基。在一些實施例中，Rs1為視情況經取代之雜環基。在一些實施例中，Rs1為視情況經取代之雜芳某。
在一些實施例中，Rs1-S(O)2S-為(MTS)。在一些實施 例中，Rs1-S(O)2S-為(TTS)。在一些實施例中，Rs1- S(O)2S-為(NO2PheTS)。在一些實施例中，Rs1-S(O)2S- 為(p-ClPheTS)。在一些實施例中，Rs1-S(O)2S-為 (o-ClPheTS)。在一些實施例中，Rs1-S(O)2S-為 (2,4,6-TriClPheTS)。在一些實施例中，Rs1-S(O)2S-為 (PheTS)。在一些實施例中，Rs1-S(O)2S-為(PFPheTS)。在 一些實施例中，Rs1-S(O)2S-為(a-CNMTS)。在一些實施例 中，Rs1-S(O)2S-為(a-NO2MTS)。在一些實施例中，Rs1- S(O)2S-為(a-CF3MTS)。在一些實施例中，Rs1-S(O)2S-為 (a-CF3TS)。在一些實施例中，Rs1-S(O)2S-為(a- CHF2TS)。在一些實施例中，Rs1-S(O)2S-為(a-CH2FTS)。
在一些實施例中，硫化試劑具有S-I或S-II之結構，其中L為-S-RL3-或-S-C(O)-RL3-。在一些實施例中，L為-S-RL3-或-S-C(O)-RL3-，其中RL3為視情況經取代之C1-C6伸烷基。在一些實施例中，L為-S-RL3-或-S-C(O)-RL3-，其中RL3為視情況經取代之C1-C6伸烯基。在一些實施例中，L為-S-RL3-或-S-C(O)-RL3-，其中RL3為視情況經取代之C1-C6伸烷基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經視情況經取代之C1-C6伸烯基、伸芳基或伸雜芳基置換。在一些實施例中，在一些實施例中，RL3為視情況經取代之-S-(C1-C6伸烯基)-、-S-(C1-C6伸烷基)-、-S-(C1-C6伸烷基)-伸芳基-(C1-C6伸烷基)-、-S-CO-伸芳基-(C1-C6伸烷基)-或-S-CO-(C1-C6伸烷基)-伸芳基-(C1-C6伸烷基)-。在一些實施例中，硫化試劑具有S-I或S-II之結構，其中L為-S-RL3-或-S-C(O)-RL3-，且硫原子連接至R1。
在一些實施例中，硫化試劑具有S-I或S-II之結構，其中L為伸烷基、伸烯基、伸芳基或伸雜芳基。
在一些實施例中，硫化試劑具有S-I或S-II之結構，其中L為 、、或。在一些實施例中，L 、、或，其中硫原子連接至R1。
在一些實施例中，硫化試劑具有S-I或S-II之結構，其中R1為 、、、或。在 一些實施例中，R1為、、、 或，其中硫原子連接至L。
在一些實施例中，硫化試劑具有S-I或S-II之結構，其中L為 、、或，其中硫原子連接至 R1；且R1為、、、或 ，其中硫原子連接至L。
在一些實施例中，硫化試劑具有S-I或S-II之結構，其中R1為-S-RL2，其中RL2如上文及此處所定義及所描述。在一些實施例中，RL2為選自-S-(C1-C6伸烷基)-雜環基、-S-(C1-C6伸烯基)-雜環基、-S-(C1-C6伸烷基)-N(R')2、-S-(C1-C6伸烷基)-N(R')3的視情況經取代之基團，其中各R'如上文所定義及此處所描述。
在一些實施例中，-L-R1為-RL3-S-S-RL2，其中各變數獨立地如上 文所定義及此處所描述。在一些實施例中，-L-R1為-RL3-C(O)-S-S-RL2，其中各變數獨立地如上文所定義及此處所描述。
例示性式S-II之雙(硫代磺酸酯)試劑描繪如下：
在一些實施例中，硫化試劑為具有下式中之一者的化合物：S8、Rs2-S-S-Rs3或Rs2-S-Xs-Rs3，其中：Rs2及Rs3各自獨立地為選自脂族基、胺基烷基、碳環基、雜環基、雜環烷基、芳基、雜芳基、烷氧基、芳氧基、雜芳氧基、醯基、醯胺、醯亞胺或硫羰基的視情況經取代之基團；或Rs2及Rs3與其所鍵結之原子一起形成視情況經取代之雜環或雜芳基環；Xs為-S(O)2-、-O-或-N(R')-；且R'如上文及此處所定義及所描流。
在一些實施例中，硫化試劑為S8、、、、 、或。在一些實施例中，硫化試劑為S8、 或。在一些實施例中，硫化試劑為。
例示性硫化試劑描繪於下表5中。
在一些實施例中，所提供之硫化試劑用於修飾H-膦酸酯。舉例而言，在一些實施例中，使用例如Wada I或Wada II之方法合成H-膦酸酯寡核苷酸，且使用式S-I或S-II之硫化試劑修飾： 其中RS1、L及R1各自如上文及此處所描述及所定義。
在一些實施例中，本發明提供一種用於合成硫代磷酸三酯之方法，其包含以下步驟：i)使以下結構之H膦酸酯：
其中W、Y及Z各自如上文及此處所描述及所定義，與矽烷化試劑反應，得到矽烷氧基膦酸酯；及ii)使矽烷氧基膦酸酯與結構S-I或S-II之硫化試劑反應： 得到硫代磷酸三酯。
在一些實施例中，使用硒親電試劑代替硫化試劑向核苷酸間鍵聯引入修飾。在一些實施例中，硒親電試劑為具有下式中之一者的化合物：Se、Rs2-Se-Se-Rs3或Rs2-Se-Xs-Rs3，其中：Rs2及Rs3各自獨立地為選自脂族基、胺基烷基、碳環基、雜環基、雜環烷基、芳基、雜芳基、烷氧基、芳氧基、雜芳氧基、醯基、醯胺、醯亞胺或硫羰基的視情況經取代之基團；或Rs2及Rs3與其所鍵結之原子一起形成視情況經取代之雜環或雜芳基環；Xs為-S(O)2-、-O-或-N(R')-；且R'如上文及此處所定義及所描述。
在其他實施例中，硒親電試劑為Se化合物、KSeCN、、 、或。在一些實施例中，硒親電試劑 為Se或。
在一些實施例中，根據本發明使用之硫化試劑的特徵在於，在硫化期間轉移至磷之部分為經取代之硫(例如，-SR)，與單一硫原子(例如，-S-或=S)相反。
在一些實施例中，根據本發明使用之硫化試劑的特徵在於，該試劑之活性可藉由用某些拉電子或供電子基團修飾該試劑來調整。
在一些實施例中，根據本發明使用之硫化試劑的特徵在於其為結晶。在一些實施例中，根據本發明使用之硫化試劑的特徵在於其具有高結晶度。在某些實施例中，根據本發明使用之硫化試劑的特徵在 於經由例如再結晶純化試劑之簡易性。在某些實施例中，根據本發明使用之硫化試劑的特徵在於其基本上不含含硫雜質。在一些實施例中，基本上不含含硫雜質之硫化試劑顯示增加的效率。
在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸包含一或多個磷酸二酯鍵聯。為合成該等對掌性受控寡核苷酸，一或多個修飾步驟視情況用氧化步驟替換以安裝相應磷酸二酯鍵聯。在一些實施例中，氧化步驟以類似於普通寡核苷酸合成的方式執行。在一些實施例中，氧化步驟包含使用I2。在一些實施例中，氧化步驟包含使用I2及吡啶。在一些實施例中，氧化步驟包含使用含0.02M I2之THF/吡啶/水(70：20：10-v/v/v)共溶劑系統。例示性循環描繪於流程I-c中。
在一些實施例中，藉由硫化試劑(例如3-苯基-1,2,4-二噻唑啉-5-酮)硫化，直接形成硫代磷酸酯。在一些實施例中，在直接安裝硫代磷酸酯之後，對掌性助劑基團保持連接至核苷酸間磷原子。在一些實施例中，需要其他的脫除保護基步驟來移除對掌性助劑(例如，針對DPSE型對掌性助劑，使用TBAF、HF-Et3N等)。
在一些實施例中，使用硫代磷酸酯前驅體合成包含硫代磷酸酯鍵聯的對掌性受控寡核苷酸。在一些實施例中，此類硫代磷酸酯前驅 體為。在一些實施例中，在標準脫除保護基/ 釋放程序期間在循環退出之後轉化成硫代磷酸二酯鍵聯。實例進一步描述於下文中。
在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸包含一或多個磷酸二酯鍵聯及一或多個硫代磷酸二酯鍵聯。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸包含一或多個磷酸二酯鍵聯及一或多個硫代磷酸二酯鍵聯，其中至少一個磷酸二酯鍵聯係在自3'至5'合成時在所 有硫代磷酸二酯鍵聯之後安裝。為合成該等對掌性受控寡核苷酸，在一些實施例中，一或多個修飾步驟視情況用氧化步驟替換以安裝相應磷酸二酯鍵聯，且為硫代磷酸二酯鍵聯中之每一者安裝硫代磷酸酯前驅體。在一些實施例中，硫代磷酸酯前驅體在達成所要寡核苷酸長度之後轉化為硫代磷酸二酯鍵聯。在一些實施例中，在循環退出期間或在此之後的脫除保護基/釋放步驟將硫代磷酸酯前驅體轉化為硫代磷酸二酯鍵聯。在一些實施例中，硫代磷酸酯前驅體之特徵在於其具有藉由β消除路徑移除的能力。在一些實施例中，硫代磷酸酯前驅體為 。如一般技術者所理解，在合成期間使用硫代磷酸酯前 驅體(例如)的益處之一為，在某些條件中比 硫代磷酸酯穩定。
在一些實施例中，硫代磷酸酯前驅體為如本文所述之磷保護基，例如2-氰基乙基(CE或Cne)、2-三甲基矽烷基乙基、2-硝基乙基、2-磺醯基乙基、甲基、苯甲基、鄰硝基苯甲基、2-(對硝基苯基)乙基(NPE或Npe)、2-苯乙基、3-(N-第三丁基甲醯胺基)-1-丙基、4-側氧基戊基、4-甲硫基-1-丁基、2-氰基-1,1-二甲基乙基、4-N-甲胺基丁基、3-(2-吡啶基)-1-丙基、2-[N-甲基-N-(2-吡啶基)]胺乙基、2-(N-甲醯基,N-甲基)胺乙基、4-[N-甲基-N-(2,2,2-三氟乙醯基)胺基]丁基。實例進一步描述於下文中。
所要硫化試劑之合成方法描述於此處及實例部分中。
如上文所指出，在一些實施例中，硫化發生在使對掌性試劑自增長寡核苷酸裂解的條件下。在一些實施例中，硫化發生在不使對掌性試劑自增長寡核苷酸裂解的條件下。
在一些實施例中，將硫化試劑溶解於適合溶劑中且傳遞至管柱。在某些實施例中，溶劑為極性非質子溶劑，諸如腈溶劑。在一些實施例中，溶劑為乙腈。在一些實施例中，藉由將硫化試劑(例如，如本文所述之硫代磺酸酯衍生物)與BSTFA(N,O-雙-三甲基矽烷基-三氟乙醯胺)混合於腈溶劑(例如，乙腈)中來製備硫化試劑溶液。在一些實施例中，不包括BSTFA。舉例而言，本發明人已發現，通式Rs2-S-S(O)2-Rs3之反應性相對較強的硫化試劑常常可成功地在不存在BSTFA的情況下參與硫化反應。僅舉一例，本發明人已證明，若Rs2為對硝基苯基且Rs3為甲基，則不需要BSTFA。根據此揭示內容，熟習此項技術者將能夠容易地確定不需要BSTFA的其他情況及/或硫化試劑。
在一些實施例中，在室溫下執行硫化步驟。在一些實施例中，在諸如約0℃、約5℃、約10℃或約15℃之低溫下執行硫化步驟。在一些實施例中，在大於約20℃之高溫下執行硫化步驟。
在一些實施例中，硫化反應進行約1分鐘至約120分鐘。在一些實施例中，硫化反應進行約1分鐘至約90分鐘。在一些實施例中，硫化反應進行約1分鐘至約60分鐘。在一些實施例中，硫化反應進行約1分鐘至約30分鐘。在一些實施例中，硫化反應進行約1分鐘至約25分鐘。在一些實施例中，硫化反應進行約1分鐘至約20分鐘。在一些實施例中，硫化反應進行約1分鐘至約15分鐘。在一些實施例中，硫化反應進行約1分鐘至約10分鐘。在一些實施例中，硫化反應進行約5分鐘至約60分鐘。
在一些實施例中，硫化反應進行約5分鐘。在一些實施例中，硫化反應進行約10分鐘。在一些實施例中，硫化反應進行約15分鐘。在一些實施例中，硫化反應進行約20分鐘。在一些實施例中，硫化反應進行約25分鐘。在一些實施例中，硫化反應進行約30分鐘。在一些實施例中，硫化反應進行約35分鐘。在一些實施例中，硫化反應進行約 40分鐘。在一些實施例中，硫化反應進行約45分鐘。在一些實施例中，硫化反應進行約50分鐘。在一些實施例中，硫化反應進行約55分鐘。在一些實施例中，硫化反應進行約60分鐘。
意外發現，根據本發明方法製造的硫化修飾產物中之某些出乎意料地穩定。在一些實施例中，出乎意料地穩定的產物為硫代磷酸三酯。在一些實施例中，出乎意料地穩定的產物為對掌性受控寡核苷酸，其包含一或多個具有式I-c結構的核苷酸間鍵聯。
相關技術中之技術人員將認識到，本文所述之硫化方法及本文所述之硫化試劑亦適用於修飾H-膦酸酯寡核苷酸的情況，諸如Wada II(WO2010/064146)中所述之彼等。
在一些實施例中，硫化反應具有至少約80%、85%、90%、95%、96%、97%或98%之逐步硫化效率。在一些實施例中，硫化反應提供至少98%純的粗製二核苷酸產物組合物。在一些實施例中，硫化反應提供至少90%純的粗製四核苷酸產物組合物。在一些實施例中，硫化反應提供至少70%純的粗製十二核苷酸產物組合物。在一些實施例中，硫化反應提供至少50%純的粗製二十核苷酸產物組合物。
在鍵聯磷之修飾步驟完成之後，寡核苷酸經歷另一脫除阻隔基步驟以準備再進入循環。在一些實施例中，對掌性助劑在硫化之後保持完好且在後續脫除阻隔基步驟期間脫除阻隔基，該脫除阻隔基步驟必須發生在再進入循環之前。重複脫除阻隔基、偶合、封端及修飾之製程，直至增長寡核苷酸達至所要長度，此時寡核苷酸可立即自固體載體裂解或出於純化目的保持連接至載體且稍後裂解。在一些實施例中，在核苷酸鹼基中之一或多者上存在一或多個保護基，且寡核苷酸自載體之裂解及鹼基之脫除保護基發生在單一步驟中。在一些實施例中，在核苷酸鹼基中之一或多者上存在一或多個保護基，且寡核苷酸自載體之裂解及鹼基之脫除保護基發生在超過一個步驟中。在一些實 施例中，脫除保護基及自載體裂解發生在鹼性條件下，使用例如一或多種胺鹼。在某些實施例中，一或多種胺鹼包含丙胺。在某些實施例中，一或多種胺鹼包含吡啶。
在一些實施例中，自載體裂解及/或脫除保護基發生在約30℃至約90℃之高溫下。在一些實施例中，自載體裂解及/或脫除保護基發生在約40℃至約80℃之高溫下。在一些實施例中，自載體裂解及/或脫除保護基發生在約50℃至約70℃之高溫下。在一些實施例中，自載體裂解及/或脫除保護基發生在約60℃之高溫下。在一些實施例中，自載體裂解及/或脫除保護基發生在環境溫度下。
例示性純化程序描述於本文中及/或為相關技術中通常所知。
值得注意的是，在各循環期間自增長寡核苷酸移除對掌性助劑至少出於以下原因為有利的：(1)將不必在寡核苷酸合成結束時當可能敏感的官能基安裝在磷上時在單獨步驟中移除助劑；及(2)易於進行副反應及/或干擾後續化學反應的不穩定磷輔助中間體得以避免。因此，在各循環期間移除對掌性助劑使得整體合成更有效。
雖然上文已描述了在循環情況下脫除阻隔基之步驟，但下文包括其他的一般方法。
脫除阻隔基步驟
在一些實施例中，偶合步驟係在脫除阻隔基步驟之前。舉例而言，在一些實施例中，阻隔(亦即，保護)增長寡核苷酸之5'羥基且為了隨後與核苷偶合搭配物反應，必須脫除阻隔基。
在一些實施例中，使用酸化移除阻隔基。在一些實施例中，酸為布朗斯特酸(Brønsted acid)或路易斯酸(Lewis acid)。適用之布朗斯特酸為羧酸、烷基磺酸、芳基磺酸、磷酸及其衍生物、膦酸及其衍生物、烷基磷酸及其衍生物、芳基磷酸及其衍生物、次膦酸、二烷基次膦酸及二芳基次膦酸，其在有機溶劑或水(在80%乙酸之情況下)中之 pKa(25℃，於水中)值為-0.6(三氟乙酸)至4.76(乙酸)。酸化步驟中所用之酸的濃度(1至80%)視酸之酸性而定。考慮酸強度時必須考慮到強酸條件將引起去嘌呤/去嘧啶，其中嘌呤基或嘧啶基鹼基自核糖環及或其他糖環裂解。在一些實施例中，酸係選自Ra1COOH、Ra1SO3H、 Ra3SO3H、、或，其中Ra1及Ra2各自獨立地為 氫或視情況經取代之烷基或芳基，且Ra3為視情況經取代之烷基或芳基。
在一些實施例中，藉由含路易斯酸之有機溶劑實現酸化。該等適用路易斯酸之實例為Zn(Xa)2，其中Xa為Cl、Br、I或CF3SO3。
在一些實施例中，酸化步驟包含添加一定量之可有效自縮合中間體移除阻隔基且不移除嘌呤部分的布朗斯特酸或路易斯酸。
適用於酸化步驟中之酸亦包括(但不限於)含10%磷酸之有機溶劑、含10%鹽酸之有機溶劑、含1%三氟乙酸之有機溶劑、含3%二氯乙酸或三氯乙酸之有機溶劑或含80%乙酸之水。對此步驟中所用之任何布朗斯特酸或路易斯酸的濃度加以選擇，使得酸之濃度不超過會引起核鹼基自糖部分裂解之濃度。
在一些實施例中，酸化包含添加含1%三氟乙酸之有機溶劑。在一些實施例中，酸化包含添加含約0.1%至約8%三氟乙酸之有機溶劑。在一些實施例中，酸化包含添加含3%二氯乙酸或三氯乙酸之有機溶劑。在一些實施例中，酸化包含添加含約0.1%至約10%二氯乙酸或三氯乙酸之有機溶劑。在一些實施例中，酸化包含添加含3%三氯乙酸之有機溶劑。在一些實施例中，酸化包含添加含約0.1%至約10%三氯乙酸之有機溶劑。在一些實施例中，酸化包含添加含80%乙酸之水。在一些實施例中，酸化包含添加含約50%至約90%、或約50%至約80%、約50%至約70%、約50%至約60%、約70%至約90%乙酸之 水。在一些實施例中，酸化包含向酸性溶劑中進一步添加陽離子清除劑。在某些實施例中，陽離子清除劑可為三乙基矽烷或三異丙基矽烷。在一些實施例中，藉由酸化脫除阻隔基，酸化包含添加含1%三氟乙酸之有機溶劑。在一些實施例中，藉由酸化脫除阻隔基，酸化包含添加含3%二氯乙酸之有機溶劑。在一些實施例中，藉由酸化脫除阻隔基，酸化包含添加含3%三氯乙酸之有機溶劑。在一些實施例中，藉由酸化脫除阻隔基，酸化包含添加含3%三氯乙酸之二氯甲烷。
在某些實施例中，在合成器上完成本發明方法且脫除增長寡核苷酸之羥基的阻隔基之步驟包含向合成器管柱傳遞一定量的溶劑，該管柱含有連接著寡核苷酸的固體載體。在一些實施例中，溶劑為鹵化溶劑(例如，二氯甲烷)。在某些實施例中，溶劑包含一定量之酸。在一些實施例中，溶劑包含一定量之有機酸，諸如三氯乙酸。在某些實施例中，酸以約1%至約20% w/v之量存在。在某些實施例中，酸以約1%至約10% w/v之量存在。在某些實施例中，酸以約1%至約5% w/v之量存在。在某些實施例中，酸以約1至約3% w/v之量存在。在某些實施例中，酸以約3% w/v之量存在。脫除羥基之阻隔基的方法進一步描述於本文中。在一些實施例中，酸以3% w/v存在於二氯甲烷中。
在一些實施例中，在脫除阻隔基步驟之前移除對掌性助劑。在一些實施例中，在脫除阻隔基步驟期間移除對掌性助劑。
在一些實施例中，在脫除阻隔基步驟之前執行循環退出。在一些實施例中，在脫除阻隔基步驟之後執行循環退出。
用於阻隔基/保護基移除之一般條件
位於核鹼基或糖部分上之諸如羥基或胺基部分的官能基常規地在合成期間經阻隔(保護)基(部分)阻隔且隨後脫除阻隔基。一般而言，阻隔基使得分子之化學官能基對特定反應條件呈惰性且稍後可在 基本上不破壞分子其餘部分的情況下自分子中之該官能基移除(參見例如Green及Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis，第2版，John Wiley & Sons,New York,1991)。舉例而言，胺基可用氮阻隔基團阻隔，諸如鄰苯二醯亞胺基、9-茀甲氧羰基(FMOC)、三苯甲基次磺醯基、t-BOC、4,4'-二甲氧基三苯甲基(DMTr)、4-甲氧基三苯甲基(MMTr)、9-苯基黃嘌呤-9-基(Pixyl)、三苯甲基(Tr)或9-(對甲氧基苯基)黃嘌呤-9-基(MOX)。羧基可保護為乙醯基。羥基可經保護，諸如四氫哌喃基(THP)、第三丁基二甲基矽烷基(TBDMS)、1-[(2-氯-4-甲基)苯基]-4-甲氧基哌啶-4-基(Ctmp)、1-(2-氟苯基)-4-甲氧基哌啶-4-基(Fpmp)、1-(2-氯乙氧基)乙基、3-甲氧基-1,5-二甲氧羰基戊-3-基(MDP)、雙(2-乙醯氧基乙氧基)甲基(ACE)、三異丙基矽烷基氧基甲基(TOM)、1-(2-氰基乙氧基)乙基(CEE)、2-氰基乙氧基甲基(CEM)、[4-(N-二氯乙醯基-N-甲胺基)苯甲氧基]甲基、2-氰基乙基(CN)、特戊醯氧基甲基(PivOM)、乙醯丙基氧基甲基(ALE)。其他代表性羥基阻隔基已有描述(參見例如Beaucage等人，Tetrahedron,1992,46,2223)。在一些實施例中，經基阻隔基為酸不穩定基團，諸如三苯甲基、單甲氧基三苯甲基、二甲氧基三苯甲基、三甲氧基三苯甲基、9-苯基黃嘌呤-9-基(Pixyl)及9-(對甲氧基苯基)黃嘌呤-9-基(MOX)。化學官能基亦可藉由以前驅體形式包括來進行阻隔。因此，疊氮基可視為胺之阻隔形式，因為疊氮基容易轉化為胺。核酸合成中所採用之其他代表性保護基為已知的(參見例如Agrawal等人，Protocols for Oligonucleotide Conjugates,Humana Press編，New Jersey,1994，第26卷，第1-72頁)。
已知各種用於自核酸移除阻隔基的方法。在一些實施例中，移除所有阻隔基。在一些實施例中，移除一部分阻隔基。在一些實施例中，可調整反應條件以選擇性移除某些阻隔基。
在一些實施例中，核鹼基阻隔基(若存在)可在所提供寡核苷酸之 組裝之後羥酸性試劑裂解。在一些實施例中，核鹼基阻隔基(若存在)可在既非酸性亦非鹼性條件下裂解，例如可經氟化物鹽或氫氟酸複合物裂解。在一些實施例中，核鹼基阻隔基(若存在)可在所提供寡核苷酸之組裝之後在鹼或鹼性溶劑存在下裂解。在某些實施例中，核鹼基阻隔基中之一或多者的特徵在於，其可在所提供寡核苷酸之組裝之後在鹼或鹼性溶劑存在下裂解，但對所提供寡核苷酸之組裝期間發生的一或多個早期脫除保護基步驟之特定條件穩定。
在一些實施例中，核鹼基不需要阻隔基。在一些實施例中，核鹼基需要阻隔基。在一些實施例中，某些核鹼基需要一或多個阻隔基，而其他核鹼基不需要一或多個阻隔基。
在一些實施例中，在合成之後，寡核苷酸自固體載體裂解。在一些實施例中，自固體載體裂解包含使用丙胺。在一些實施例中，自固體載體裂解包含使用含丙胺之吡啶。在一些實施例中，自固體載體裂解包含使用含20%丙胺之吡啶。在一些實施例中，自固體載體裂解包含使用含丙胺之無水吡啶。在一些實施例中，自固體載體裂解包含使用含20%丙胺之無水吡啶。在一些實施例中，自固體載體裂解包含使用極性非質子溶劑，諸如乙腈、NMP、DMSO、碸及/或二甲基吡啶。在一些實施例中，自固體載體裂解包含使用溶劑，例如極性非質子溶劑；及一或多種一級胺(例如，C1-10胺)；及/或甲氧胺、肼及純無水氨中之一或多者。
在一些實施例中，脫除寡核苷酸之保護基包含使用丙胺。在一些實施例中，脫除寡核苷酸之保護基包含使用含丙胺之吡啶。在一些實施例中，脫除寡核苷酸之保護基包含使用含20%丙胺之吡啶。在一些實施例中，脫除寡核苷酸之保護基包含使用含丙胺之無水吡啶。在一些實施例中，脫除寡核苷酸之保護基包含使用含20%丙胺之無水吡啶。
在一些實施例中，在裂解期間脫除寡核苷酸之保護基。
在一些實施例中，自固體載體裂解寡核苷酸或脫除寡核苷酸之保護基係在約室溫下執行。在一些實施例中，自固體載體裂解寡核苷酸或脫除寡核苷酸之保護基係在高溫下執行。在一些實施例中，自固體載體裂解寡核苷酸或脫除寡核苷酸之保護基係在高於約30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃、90℃或100℃下執行。在一些實施例中，自固體載體裂解寡核苷酸或脫除寡核苷酸之保護基係在約30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃、90℃或100℃下執行。在一些實施例中，自固體載體裂解寡核苷酸或脫除寡核苷酸之保護基係在約40-80℃下執行。在一些實施例中，自固體載體裂解寡核苷酸或脫除寡核苷酸之保護基係在約50-70℃下執行。在一些實施例中，自固體載體裂解寡核苷酸或脫除寡核苷酸之保護基係在約60℃下執行。
在一些實施例中，自固體載體裂解寡核苷酸或脫除寡核苷酸之保護基執行超過0.1hr、1hr、2hr、5hr、10hr、15hr、20hr、24hr、30hr或40hr。在一些實施例中，自固體載體裂解寡核苷酸或脫除寡核苷酸之保護基執行約0.1-5hr。在一些實施例中，自固體載體裂解寡核苷酸或脫除寡核苷酸之保護基執行約3-10hr。在一些實施例中，自固體載體裂解寡核苷酸或脫除寡核苷酸之保護基執行約5-15hr。在一些實施例中，自固體載體裂解寡核苷酸或脫除寡核苷酸之保護基執行約10-20hr。在一些實施例中，自固體載體裂解寡核苷酸或脫除寡核苷酸之保護基執行約15-25hr。在一些實施例中，自固體載體裂解寡核苷酸或脫除寡核苷酸之保護基執行約20-40hr。在一些實施例中，自固體載體裂解寡核苷酸或脫除寡核苷酸之保護基執行約2hr。在一些實施例中，自固體載體裂解寡核苷酸或脫除寡核苷酸之保護基執行約5hr。在一些實施例中，自固體載體裂解寡核苷酸或脫除寡核苷酸之保護基執行約10hr。在一些實施例中，自固體載體裂解 寡核苷酸或脫除寡核苷酸之保護基執行約15hr。在一些實施例中，自固體載體裂解寡核苷酸或脫除寡核苷酸之保護基執行約18hr。在一些實施例中，自固體載體裂解寡核苷酸或脫除寡核苷酸之保護基執行約24hr。
在一些實施例中，自固體載體裂解寡核苷酸或脫除寡核苷酸之保護基係在室溫下執行超過0.1hr、1hr、2hr、5hr、10hr、15hr、20hr、24hr、30hr或40hr。在一些實施例中，自固體載體裂解寡核苷酸或脫除寡核苷酸之保護基係在室溫下執行約5-48hr。在一些實施例中，自固體載體裂解寡核苷酸或脫除寡核苷酸之保護基係在室溫下執行約10-24hr。在一些實施例中，自固體載體裂解寡核苷酸或脫除寡核苷酸之保護基係在室溫下執行約18hr。在一些實施例中，自固體載體裂解寡核苷酸或脫除寡核苷酸之保護基係在高溫下執行超過0.1hr、1hr、2hr、5hr、10hr、15hr、20hr、24hr、30hr或40hr。在一些實施例中，自固體載體裂解寡核苷酸或脫除寡核苷酸之保護基係在高溫下執行約0.5-5hr。在一些實施例中，自固體載體裂解寡核苷酸或脫除寡核苷酸之保護基係在60℃下執行約0.5-5hr。在一些實施例中，自固體載體裂解寡核苷酸或脫除寡核苷酸之保護基係在約60℃下執行約2hr。
在一些實施例中，自固體載體裂解寡核苷酸或脫除寡核苷酸之保護基包含使用丙胺且在室溫或高溫下執行超過0.1hr、1hr、2hr、5hr、10hr、15hr、20hr、24hr、30hr或40hr。例示性條件為含20%丙胺之吡啶，在室溫下持續約18hr；及含20%丙胺之吡啶，在60℃下持續約18hr。
在一些實施例中，在自固體載體裂解之前，若對掌性助劑基團仍連接至核苷酸間磷原子，則執行用於移除對掌性助劑基團之步驟。在一些實施例中，舉例而言，在寡核苷酸合成循環期間，一或多個 DPSE型對掌性助劑基團仍然連接至核苷酸間磷原子。適合移除剩餘對掌性助劑基團之條件為此項技術中廣泛已知的，例如Wada I、Wada II、Wada III、對掌性控制等中所述之彼等條件。在一些實施例中，用於移除DPSE型對掌性助劑之條件為TBAF或HF-Et3N，例如含0.1MTBAF之MeCN、含05M HF-Et3N之THF或MeCN等。在一些實施例中，本發明認識到，連接基團可在移除對掌性助劑基團之製程期間裂解。在一些實施例中，本發明提供連接基團，諸如SP連接基團，其在對掌性助劑基團移除期間提供較佳穩定性。本發明所提供之某些連接基團尤其提供改良的產率及/或純度。
在一些實施例中，活化劑為「Wada」活化劑，亦即活化劑係來自上文所引用之Wada I、II或III文獻中之任一者。
例示性活化基團描述如下：
在一些實施例中，活化試劑係選自
在一些實施例中，例示性循環描繪於流程I-b中。
在一些實施例中，例示性循環示出在流程I-c中。
流程I-c. 磷酸二酯及經修飾之核苷酸間鍵聯兩者在對掌性受控寡核苷酸中之安裝.
在流程I-c中，固體載體上之寡核苷酸(或核苷酸，或含經修飾之核苷酸間鍵聯的寡核苷酸)(C-1)與胺基磷酸酯C-2偶合。在偶合及封端之後，執行氧化步驟。在脫除阻隔基之後，形成磷酸二酯鍵聯。循環產物C-3可再進入循環C以安裝更多磷酸二酯鍵聯，或進入其他循環以安裝其他類型的核苷酸間鍵聯，或轉至循環退出。
在一些實施例中，在流程I-c中，可使用非對掌性純胺基磷酸酯代替C-2。在一些實施例中，使用經DMTr保護之β-氰基乙基胺基磷酸 酯。在一些實施例中，所使用之胺基磷酸酯具有以下結構：
在一些實施例中，使用硫代磷酸二酯前驅體增加寡核苷酸在合成期間之穩定性。在一些實施例中，使用硫代磷酸二酯前驅體改良對掌性受控寡核苷酸之合成效率。在一些實施例中，使用硫代磷酸二酯前驅體改良對掌性受控寡核苷酸之合成產率。在一些實施例中，使用硫代磷酸二酯前驅體改良對掌性受控寡核苷酸合成之產物純度。
在一些實施例中，上文所提及之方法中之硫代磷酸二酯前驅體 為。在一些實施例中，在脫除保護基/釋放期 間轉化為硫代磷酸二酯鍵聯。在一些實施例中，例示性循環描繪於流程I-d中。更多實例描繪於下文中。
流程I-d. 對掌性受控寡核苷酸合成中之硫代磷酸二酯前驅體.
如流程I-d中所示，硫代磷酸酯及磷酸二酯鍵聯均可併入同一對掌性受控寡核苷酸中。如一般技術者所理解，所提供之方法不需要硫代磷酸二酯及磷酸二酯連續，可使用如上所述之循環在兩者之間形成其他核苷酸間鍵聯。在流程I-d中，安裝硫代磷酸二酯前驅體 代替硫代磷酸二酯鍵聯。在一些實施例中，該等置換使 某些步驟(例如氧化步驟)期間的合成效率增加。在一些實施例中，使 用硫代磷酸二酯前驅體通常改良對掌性受控寡核苷酸在合成及/或儲存期間的穩定性。在循環退出之後，在脫除保護基/釋放期間，硫代磷酸二酯前驅體轉化為硫代磷酸二酯鍵聯。在一些實施例中，即使在對掌性受控寡核苷酸中不存在磷酸二酯鍵聯時，或在合成期間不需要氧化步驟時，使用硫代磷酸二酯前驅體仍為有利的。
如在流程I-c中，在一些實施例中，針對包含氧化步驟之循環，可使用非對掌性純胺基磷酸酯。在一些實施例中，使用經DMTr保護之β-氰基乙基胺基磷酸酯。在一些實施例中，所使用之胺基磷酸酯具 有之結構。
在一些實施例中，本發明方法提供特定寡核苷酸類型增濃之對掌性受控寡核苷酸組合物。
在一些實施例中，至少約10%之所提供粗組合物具有特定寡核苷酸類型。在一些實施例中，至少約20%之所提供粗組合物具有特定寡核苷酸類型。在一些實施例中，至少約30%之所提供粗組合物具有特定寡核苷酸類型。在一些實施例中，至少約40%之所提供粗組合物具有特定寡核苷酸類型。在一些實施例中，至少約50%之所提供粗組合物具有特定寡核苷酸類型。在一些實施例中，至少約60%之所提供粗組合物具有特定寡核苷酸類型。在一些實施例中，至少約70%之所提供粗組合物具有特定寡核苷酸類型。在一些實施例中，至少約80%之所提供粗組合物具有特定寡核苷酸類型。在一些實施例中，至少約90%之所提供粗組合物具有特定寡核苷酸類型。在一些實施例中，至少約95%之所提供粗組合物具有特定寡核苷酸類型。
在一些實施例中，至少約1%之所提供組合物具有特定寡核苷酸 類型。在一些實施例中，至少約2%之所提供組合物具有特定寡核苷酸類型。在一些實施例中，至少約3%之所提供組合物具有特定寡核苷酸類型。在一些實施例中，至少約4%之所提供組合物具有特定寡核苷酸類型。在一些實施例中，至少約5%之所提供組合物具有特定寡核苷酸類型。在一些實施例中，至少約10%之所提供組合物具有特定寡核苷酸類型。在一些實施例中，至少約20%之所提供組合物具有特定寡核苷酸類型。在一些實施例中，至少約30%之所提供組合物具有特定寡核苷酸類型。在一些實施例中，至少約40%之所提供組合物具有特定寡核苷酸類型。在一些實施例中，至少約50%之所提供組合物具有特定寡核苷酸類型。在一些實施例中，至少約60%之所提供組合物具有特定寡核苷酸類型。在一些實施例中，至少約70%之所提供組合物具有特定寡核苷酸類型。在一些實施例中，至少約80%之所提供組合物具有特定寡核苷酸類型。在一些實施例中，至少約90%之所提供組合物具有特定寡核苷酸類型。在一些實施例中，至少約95%之所提供組合物具有特定寡核苷酸類型。
在一些實施例中，例示性循環描繪於以下流程I-e中。
在一些實施例中，X為H或2'修飾。在一些實施例中，X為H或-OR1，其中R1不為氫。在一些實施例中，X為H或-OR1，其中R1為視情況經取代之C1-6烷基。在一些實施例中，X為H。在一些實施例中，X為-OMe。在一些實施例中，X為-OCH2CH2OCH3。在一些實施例中，X為-F。
在一些實施例中，例示性循環描繪於流程I-f中。
在一些實施例中，X為H或2'修飾。在一些實施例中，X為H或-0R1，其中R1不為氫。在一些實施例中，X為H或-OR1，其中R1為視情況經取代之C1-6烷基。在一些實施例中，X為H。在一些實施例中，X為-OMe。在一些實施例中，X為-OCH2CH2OCH3。在一些實施例中，X為-F。
一般熟習此項技術者應理解，可組合不同類型的循環以提供對寡核苷酸之化學修飾及立體化學的完全控制。在一些實施例中，舉例而言，寡核苷酸合成製程可含有一或多個循環A-F。在一些實施例中，所提供之方法包含至少一個使用DPSE型對掌性助劑之循環。
在一些實施例中，本發明提供用於製備所提供之寡核苷酸及寡核苷酸組合物之方法。在一些實施例中，所提供之方法包含提供具有 之結構的所提供對掌性試劑，其中W1為-NG5，W2為O， G1及G3各自獨立地為氫或選自C1-10脂族基、雜環基、雜芳基及芳基的視情況經取代之基團，G2為-C(R)2Si(R)3，且G4及G5一起形成至多約20個環原子的視情況經取代之飽和、部分不飽和或不飽和的含雜原子 環，其為單環或多環、稠合或未稠合，其中各R獨立地為氫或選自C1-C6脂族基、碳環基、芳基、雜芳基及雜環基的視情況經取代之基團。 在一些實施例中，所提供之對掌性試劑具有、、 或之結構。在一些實施例中，所提供之方法包含提 供包含來自對掌性試劑之部分的胺基磷酸酯，該對掌性試劑具有 、、、或之結構，其 中-W1H及-W2H或羥基及胺基與胺基磷酸酯之磷原子成鍵。在一些實施例中，-W1H及-W2H或羥基及胺基與胺基磷酸酯之磷原子成鍵，例 如在或中。在一些實施例中，胺基磷酸酯具有 以下之結構：、、、 。在一些實施例中，R為保護基。在一些實施例中， R為DMTr。在一些實施例中，G2為-C(R)2Si(R)3，其中-C(R)2-為視情況經取代之-CH2-，且-Si(R)3之各R獨立地為選自C1-10脂族基、雜環基、雜芳基及芳基之視情況經取代之基團。在一些實施例中，-Si(R)3之至少一個R獨立地為視情況經取代之C1-10烷基。在一些實施例中，-Si(R)3之至少一個R獨立地為視情況經取代之苯基。在一些實施例中，-Si(R)3之一個R獨立地為視情況經取代之苯基，且另兩個R各自獨立地為視情況經取代之C1-10烷基。在一些實施例中，-Si(R)3之一個R獨立地為視情況經取代之C1-10烷基，且另兩個R各自獨立地為視情 況經取代之苯基。在一些實施例中，G2為視情況經取代之-CH2Si(Ph)(Me)2。在一些實施例中，G2為視情況經取代之-CH2Si(Me)(Ph)2。在一些實施例中，G2為-CH2Si(Me)(Ph)2。在一些實施例中，G4及G5一起形成含有一個氮原子(其與G5連接)的視情況經取代之飽和5-6員環。在一些實施例中，G4及G5一起形成含有一個氮原子的視情況經取代之飽和5員環。在一些實施例中，G1為氫。在一些實施例中，G3為氫。在一些實施例中，G1及G3均為氫。在一些實施例中，G1及G3均為氫，G2為-C(R)2Si(R)3，其中-C(R)2-為視情況經取代之-CH2-，且-Si(R)3之各R獨立地為選自C1-10脂族基、雜環基、雜芳基及芳基的視情況經取代之基團，且G4及G5一起形成含有一個氮原子的視情況經取代之飽和5員環。在一些實施例中，所提供之方法進一步包含提供含氟試劑。在一些實施例中，所提供之含氟試劑在合成之後自寡核苷酸移除對掌性試劑或由對掌性試劑形成之產物。可根據本發明採用各種已知的含氟試劑，包括用於移除-SiR3基團之彼等F-來源，例如TBAF、HF3-Et3N等。在一些實施例中，含氟試劑提供較佳結果，例如相比於諸如濃氨之傳統方法而言，處理時間縮短，溫度降低，脫硫減少等。在一些實施例中，關於某些含氟試劑，本發明提供用於改良結果之連接基團，例如在對掌性試劑(或在寡核苷酸合成期間自其形成之產物)之移除期間，寡核苷酸自載體之裂解減少。在一些實施例中，所提供之連接基團為SP連接基團。在一些實施例中，本發明證明，可採用HF-鹼複合物，諸如HF-NR3，以控制在對掌性試劑(或在寡核苷酸合成期間自其形成之產物)之移除期間的裂解。在一些實施例中，HF-NR3為HF-NEt3。在一些實施例中，HF-NR3允許使用傳統連接基團，例如丁二醯基連接基團。
生物應用及用途實例
本發明尤其認識到，寡核苷酸之特性及活性可藉由經由使用所 提供之對掌性受控寡核苷酸組合物使其主鏈對掌性中心模式最佳化來調整。在一些實施例中，本發明提供對掌性受控寡核苷酸組合物，其中寡核苷酸具有增強其穩定性及/或生物活性之共同主鏈對掌性中心模式。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式提供出乎意料地增加的穩定性。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式出人意料地提供大大增加的活性。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式提供增加的穩定性及活性。在一些實施例中，當採用寡核苷酸裂解核酸聚合物時，寡核苷酸之主鏈對掌性中心模式本身出人意料地改變目標核酸聚合物之裂解模式。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式可有效防止在二級位點裂解。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式形成新裂解位點。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式使裂解位點之數目降到最低。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式使裂解位點之數目降到最低，使得目標核酸聚合物僅在與寡核苷酸互補之目標核酸聚合物序列內的一個位點處裂解。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式可增強在裂解位點之裂解效率。在一些實施例中，寡核苷酸之主鏈對掌性中心模式改良目標核酸聚合物之裂解。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式增加選擇性。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式使脫靶效應降到最低。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式增加選擇性，例如因點突變或單核苷酸多形現象(SNP)而不同之目標序列之間的裂解選擇性。在一些實施例中，主鏈對掌性中心模式增加選擇性，例如僅因一個點突變或單核苷酸多形現象(SNP)而不同之目標序列之間的裂解選擇性。
尤其出人意料地發現，某些所提供之寡核苷酸組合物達成了目標序列之裂解的前所未有的控制，例如藉由核糖核酸酶H裂解目標RNA。在一些實施例中，本發明證明，精確控制寡核苷酸之化學及立體化學屬性相比於不控制立體化學屬性但在其他方面類似之製劑而 言，可達成寡核苷酸製劑之改良的活性。本發明尤其特定證明，所提供之寡核苷酸所雜交之核酸目標之裂解的速率、程度及或特異性改良。
在一些實施例中，本發明提供寡核苷酸組合物之各種用途。本發明尤其證明，藉由控制寡核苷酸之結構要素，諸如鹼基序列、化學修飾、立體化學等，寡核苷酸之特性可大大改良。舉例而言，在一些實施例中，本發明提供用於高度選擇性抑制目標核酸序列之轉錄物的方法。在一些實施例中，本發明提供藉由抑制來自致病複本(例如，致病對偶基因)之轉錄物來治療個體的方法。在一些實施例中，本發明提供用於設計及製備寡核苷酸組合物之方法，其中當抑制目標序列之轉錄物時，活性及/或選擇性出人意料地增強。在一些實施例中，本發明提供用於設計及/或製備寡核苷酸組合物之方法，該等寡核苷酸組合物提供對來自目標核酸序列之轉錄物的對偶基因特異性抑制。
在一些實施例中，本發明提供一種用於控制裂解核酸聚合物之方法，該方法包含以下步驟：使核苷酸序列包含目標序列之核酸聚合物與包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物接觸，該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的特徵在於：1)共同鹼基序列及長度，其中共同鹼基序列為或包含與核酸聚合物中所存在之目標序列互補的序列；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有特定鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃。
在一些實施例中，本發明提供一種用於更改裂解模式的方法， 該裂解模式為當核苷酸序列包括目標序列之核酸聚合物與包含具有特定鹼基序列及長度之寡核苷酸的參考寡核苷酸組合物接觸時所觀察到之裂解模式，該特定鹼基序列為或包含與目標序列互補之序列，該方法包含：使核酸聚合物與具有特定鹼基序列及長度之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物接觸，該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有特定鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中單一寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃，該類寡核苷酸之特徵在於：1)特定鹼基序列及長度；2)特定主鏈鍵聯模式；及3)特定主鏈對掌性中心模式。
在一些實施例中，本發明提供一種用於控制裂解核酸聚合物之方法，其包含提供一種對掌性受控寡核苷酸組合物，該組合物包含由具有以下定義之寡核苷酸：1)共同鹼基序列及長度，其中共同鹼基序列為或包含與核酸聚合物中所存在之序列互補的序列；2)共同主鏈鍵聯模式；3)共同主鏈對掌性中心模式，該組合物為基本上純的單一寡核苷酸製劑，因為該組合物中至少約10%之寡核苷酸具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式；及其中核酸聚合物以不同於當提供不控制對掌性之寡核苷酸組合物時之裂解模式的裂解模式裂解。
如本文所用，核酸聚合物之裂解模式由裂解位點之數目、裂解位點之位置及各位點之裂解百分比定義。在一些實施例中，裂解模式具有多個裂解位點，且各位點之裂解百分比不同。在一些實施例中，裂解模式具有多個裂解位點，且各位點之裂解百分比相同。在一些實 施例中，裂解模式具有僅一個裂解位點。在一些實施例中，裂解模式彼此之不同之處在於，其具有不同數目之裂解位點。在一些實施例中，裂解模式彼此之不同之處在於，至少一個裂解位置不同。在一些實施例中，裂解模式彼此之不同之處在於，在至少一個共同裂解位點之裂解百分比不同。在一些實施例中，裂解模式彼此之不同之處在於，其具有不同數目之裂解位點，及/或至少一個裂解位置不同，及/或在至少一個共同裂解位點之裂解百分比不同。
在一些實施例中，本發明提供一種用於控制裂解核酸聚合物之方法，該方法包含以下步驟：使核苷酸序列包含目標序列之核酸聚合物與包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物接觸，該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的特徵在於：1)共同鹼基序列及長度，其中共同鹼基序列為或包含與核酸聚合物中所存在之目標序列互補的序列；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有特定鹼基序列及長度之寡核苷酸之基本上外消旋製劑而言，該組合物中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃，該接觸係在核酸聚合物發生裂解之條件下執行。
在一些實施例中，本發明提供一種用於改變自使用第一寡核苷酸組合物所得之核酸聚合物的第一裂解模式的方法，其包含提供第二對掌性受控寡核苷酸組合物，該第二對掌性受控寡核苷酸組合物包含由具有以下定義之寡核苷酸：1)共同鹼基序列及長度，其中共同鹼基序列為或包含與核酸聚合物中所存在之序列互補的序列；2)共同主鏈鍵聯模式； 3)共同主鏈對掌性中心模式，該組合物為基本上純的單一寡核苷酸製劑，因為該組合物中至少約10%之寡核苷酸具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式；及其中核酸聚合物以不同於第一裂解模式之裂解模式裂解。
在一些實施例中，本發明提供一種用於更改裂解模式的方法，該裂解模式為當核苷酸序列包括目標序列之核酸聚合物與包含具有特定鹼基序列及長度之寡核苷酸的參考寡核苷酸組合物接觸時所觀察到之裂解模式，該特定鹼基序列為或包含與目標序列互補之序列，該方法包含：使核酸聚合物與具有特定鹼基序列及長度之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物接觸，該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有特定鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中單一寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃，該類寡核苷酸之特徵在於：1)特定鹼基序列及長度；2)特定主鏈鍵聯模式；及3)特定主鏈對掌性中心模式。
該接觸係在核酸聚合物發生裂解之條件下執行。
在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物減少目標序列內裂解位點之數目。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物在目標序列內提供單一位點裂解。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物在目標序列內之裂解位點提供增強的裂解速率。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物在目標序列內之裂解位點提供增強的效率。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物在裂解目標核酸聚合物方面提供增加的轉換。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物增加在特徵序列元件內或在其附近之位點處的裂解百分比。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物增加在 突變附近之位點處的裂解百分比。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物增加在SNP附近之位點處的裂解百分比。在特徵序列元件內或在其附近、在突變附近、在SNP附近之位點的例示性實施例描述於本發明中。舉例而言，在一些實施例中，附近之裂解位點為遠離突變0、1、2、3、4或5個核苷酸間鍵聯的裂解位點；在一些其他實施例中，附近之裂解位點為遠離SNP 0、1、2、3、4或5個核苷酸間鍵聯的裂解位點。
在一些實施例中，裂解以不同於參考裂解模式之裂解模式發生。在一些實施例中，參考裂解模式為當核酸聚合物在類似條件下與參考寡核苷酸組合物接觸時觀察到之裂解模式。在一些實施例中，參考寡核苷酸組合物為共用對掌性受控寡核苷酸組合物之共同鹼基序列及長度的寡核苷酸之不控制對掌性(例如，立體無規)之寡核苷酸組合物。在一些實施例中，參考寡核苷酸組合物為共用共同序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑。
在一些實施例中，核酸聚合物為RNA。在一些實施例中，核酸聚合物為寡核苷酸。在一些實施例中，核酸聚合物為RNA寡核苷酸。在一些實施例中，核酸聚合物為轉錄物。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物之寡核苷酸與待裂解之核酸聚合物形成雙螺旋體。
在一些實施例中，核酸聚合物藉由酶裂解。在一些實施例中，酶裂解由核酸聚合物形成之雙螺旋體。在一些實施例中，酶為核糖核酸酶H。在一些實施例中，酶為Dicer。在一些實施例中，酶為阿爾古蛋白。在一些實施例中，酶為Ago2。在一些實施例中，酶在蛋白質複合物內。例示性蛋白質複合物為RNA誘導沉默複合物(RISC)。
在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物包含具有共同主鏈對掌性中心模式之寡核苷酸，提供出乎意料地高的選擇 性，使得可選擇性靶向僅在目標區域內具有小序列變化之核酸聚合物。在一些實施例中，核酸聚合物為來自對偶基因之轉錄物。在一些實施例中，可用所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物選擇性靶向來自不同對偶基因之轉錄物。
在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物及其方法能夠精確控制目標序列內之裂解位點。在一些實施例中，裂解位點係在RpSpSp主鏈對掌性中心之序列周圍。在一些實施例中，裂解位點在RpSpSp主鏈對掌性中心之序列的上游及附近。在一些實施例中，裂解位點在RpSpSp主鏈對掌性中心之序列上游5個鹼基對內。在一些實施例中，裂解位點在RpSpSp主鏈對掌性中心之序列上游4個鹼基對內。在一些實施例中，裂解位點在RpSpSp主鏈對掌性中心之序列上游3個鹼基對內。在一些實施例中，裂解位點在RpSpSp主鏈對掌性中心之序列上游2個鹼基對內。在一些實施例中，裂解位點在RpSpSp主鏈對掌性中心之序列上游1個鹼基對內。在一些實施例中，裂解位點在RpSpSp主鏈對掌性中心之序列的下游及附近。在一些實施例中，裂解位點在RpSpSp主鏈對掌性中心之序列下游5個鹼基對內。在一些實施例中，裂解位點在RpSpSp主鏈對掌性中心之序列下游4個鹼基對內。在一些實施例中，裂解位點在RpSpSp主鏈對掌性中心之序列下游3個鹼基對內。在一些實施例中，裂解位點在RpSpSp主鏈對掌性中心之序列下游2個鹼基對內。在一些實施例中，裂解位點在RpSpSp主鏈對掌性中心之序列下游1個鹼基對內。本發明因此尤其提供對目標序列內之裂解位點的控制。在一些實施例中，例示性裂解描繪於圖21中。在一些實施例中，圖21中描繪之裂解稱為在RpSpSp主鏈對掌性中心之序列下游兩個鹼基對之位點處的裂解。如本發明中廣泛所述，RpSpSp主鏈對掌性中心之序列可存在於(Np)m(Rp)n(Sp)t、(Np)t(Rp)n(Sp)m、(Sp)m(Rp)n(Sp)t、(Sp)t(Rp)n(Sp)m、(Rp)n(Sp)m、(Rp)m(Sp)n、(Sp)m Rp及/ 或Rp(Sp)m之單一或重複單元中，其各自獨立地如上文所定義及此處所描述。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物在目標分子(例如，參見圖21)中之RpSpSp主鏈對掌性中心下游2個鹼基對處形成新裂解位點，其中若使用參考(例如，不控制對掌性)寡核苷酸組合物，則該新裂解位點不存在(偵測不到)。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物增強目標分子(例如，參見圖21)中之RpSpSp主鏈對掌性中心下游2個鹼基對之裂解位點處之裂解，其中在此類位點發生之裂解百分比高於使用參考(例如，不控制對掌性)寡核苷酸組合物時。在一些實施例中，在此類位點藉由所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物達成之裂解為藉由參考寡核苷酸組合物達成之裂解的至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、500或1000倍(例如，當藉由位點處之裂解百分比量測時)。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物提供的在目標分子(例如，參見圖21)中之RpSpSp主鏈對掌性中心下游2個鹼基對之裂解位點處的裂解相比於當使用參考(例如，不控制對掌性)寡核苷酸組合物時加速。在一些實施例中，藉由所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物達成之裂解比藉由參考寡核苷酸組合物達成之裂解快至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、500或1000倍。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物在目標分子(例如，參見圖21)中之RpSpSp主鏈對掌性中心下游2個鹼基對之裂解位點為當使用參考(例如，不控制對掌性)寡核苷酸組合物時之裂解位點。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物在目標分子(例如，參見圖21)中之RpSpSp主鏈對掌性中心下游2個鹼基對之裂解位點在當使用參考(例如，不控制對掌性)寡核苷酸組合物時之裂解位點之一個鹼基對內。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物在目標分子(例如，參見 圖21)中之RpSpSp主鏈對掌性中心下游2個鹼基對之裂解位點在當使用參考(例如，不控制對掌性)寡核苷酸組合物時之裂解位點之2個鹼基對內。在一些實施例中，其在3個鹼基對內。在一些實施例中，其在4個鹼基對內。在一些實施例中，其在5個鹼基對內。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物在目標分子中之RpSpSp主鏈對掌性中心下游2個鹼基對之裂解位點為當使用參考(例如，不控制對掌性)寡核苷酸組合物時之主要裂解位點之一。在一些實施例中，此類位點為當使用參考(例如，不控制對掌性)寡核苷酸組合物時具有最高裂解百分比之裂解位點。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物在目標分子中之RpSpSp主鏈對掌性中心下游2個鹼基對之裂解位點為當使用參考(例如，不控制對掌性)寡核苷酸組合物時具有較高裂解速率之裂解位點之一。在一些實施例中，此類位點為當使用參考(例如，不控制對掌性)寡核苷酸組合物時具有最高裂解速率之裂解位點。
在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物增強在一或多個位點處之裂解，例如相對於參考(例如，不控制對掌性/立體無規)寡核苷酸組合物而言。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物相對於參考(例如，不控制對掌性/立體無規)組合物選擇性增強在單一位點之裂解。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物藉由提供較高裂解速率增強在位點處之裂解。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物藉由在位點處提供較高裂解百分比增強該位點處之裂解。位點處之裂解百分比可藉由此項技術中各種廣泛已知且實踐之方法測定。在一些實施例中，位點處之裂解百分比藉由對裂解產物之分析來確定，例如藉由HPLC-MS，如圖18、圖19及圖30中所示；亦參見例示性裂解圖譜，諸如圖9、圖10、圖11、圖14、圖22、圖25及圖26。在一些實施例中，增強係相對於參考寡核苷酸組 合物而言。在一些實施例中，增強係相對於另一裂解位點而言。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物增強位點處之裂解，該位點為參考寡核苷酸組合物之較佳裂解位點。在一些實施例中，一較佳裂解位點或一組較佳裂解位點為相比於一或多個其他裂解位點而言具有相對較高之裂解百分比的位點。在一些實施例中，較佳裂解位點可指示酶之偏好。舉例而言，關於核糖核酸酶H，當使用DNA寡核苷酸時，所得裂解位點可指示核糖核酸酶H之偏好。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物增強位點處之裂解，該位點為酶之較佳裂解位點。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物增強位點處之裂解，該位點不為參考寡核苷酸組合物之較佳裂解位點。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物增強位點處之裂解，該位點不為參考寡核苷酸組合物之裂解位點；有效地創建新裂解位點，該新裂解位點在使用參考寡核苷酸組合物時不存在。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物增強距離所靶向之突變或SNP 5個鹼基對內之位點處的裂解，從而增加不合需要之目標寡核苷酸之選擇性裂解。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物增強距離所靶向之突變或SNP 4個鹼基對內之位點處的裂解，從而增加不合需要之目標寡核苷酸之選擇性裂解。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物增強距離所靶向之突變或SNP 3個鹼基對內之位點處的裂解，從而增加不合需要之目標寡核苷酸之選擇性裂解。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物增強距離所靶向之突變或SNP 2個鹼基對內之位點處的裂解，從而增加不合需要之目標寡核苷酸之選擇性裂解。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物增強恰好在所靶向之突變或SNP上游或下游之位點處的裂解，從而增加不合需要之目標寡核苷酸之選擇性裂解(例如，圖22，圖D，muRNA)。
在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物抑制一或多個位點處之裂解，例如相對於參考(例如，不控制對掌性/立體無規)寡核苷酸組合物而言。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物相對於參考(例如，不控制對掌性/立體無規)組合物而言，選擇性抑制單一位點處之裂解。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物藉由提供較低裂解速率抑制在位點處之裂解。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物藉由在位點處提供較低裂解百分比抑制該位點處之裂解。在一些實施例中，抑制係相對於參考寡核苷酸組合物而言。在一些實施例中，抑制係相對於另一裂解位點而言。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物抑制位點處之裂解，該位點為參考寡核苷酸組合物之較佳裂解位點。在一些實施例中，一較佳裂解位點或一組較佳裂解位點為相比於一或多個其他裂解位點而言具有相對較高之裂解百分比的位點。在一些實施例中，較佳裂解位點可指示酶之偏好。舉例而言，關於核糖核酸酶H，當使用DNA寡核苷酸時，所得裂解位點可指示核糖核酸酶H之偏好。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物抑制位點處之裂解，該位點為酶之較佳裂解位點。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物抑制位點處之裂解，該位點不為參考寡核苷酸組合物之較佳裂解位點。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物抑制參考寡核苷酸組合物之所有裂解位點。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物一般增強目標寡核苷酸之裂解。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物一般抑制非目標寡核苷酸之裂解。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物增強目標寡核苷酸之裂解且抑制非目標寡核苷酸之裂解。使用圖22，圖D，舉例而言，用於裂解之目標寡核苷酸為muRNA，而非目標寡核苷酸為wtRNA。在包含有包含突變或SNP之患病組織的個體中， 用於裂解之目標寡核苷酸可為含突變或SNP之轉錄物，而非目標寡核苷酸可為不含突變或SNP之普通轉錄物，諸如在健康組織中表現之彼等轉錄物。
在一些實施例中，參考寡核苷酸組合物為立體無規寡核苷酸組合物。在一些實施例中，參考寡核苷酸組合物為所有核苷酸間鍵聯皆為硫代磷酸酯之寡核苷酸的立體無規組合物。在一些實施例中，參考寡核苷酸組合物為具有所有磷酸酯鍵聯之DNA寡核苷酸組合物。
在一些實施例中，除本文中所述之主鏈對掌性中心模式之外，所提供之寡核苷酸視情況包含經修飾之鹼基、經修飾之糖、經修飾之主鏈鍵聯及其任何組合。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為單聚體、交替體、嵌段體、間隔體、半聚體及跳過體。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含一或多個單聚體、交替體、嵌段體、間隔體、半聚體或跳過體部分或其任何組合。在一些實施例中，除本文中之主鏈對掌性中心模式之外，所提供之寡核苷酸為半聚體。在一些實施例中，除本文中之主鏈對掌性中心模式之外，所提供之寡核苷酸為含經修飾之糖部分的5'-半聚體。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸為含2'-修飾之糖部分的5'-半聚體。適合修飾為此項技術中廣泛已知的，例如本申請案中所述之彼等修飾。在一些實施例中，修飾為2'-F。在一些實施例中，修飾為2'-MOE。在一些實施例中，修飾為s-cEt。
在一些實施例中，本發明提供一種用於抑制來自目標核酸序列之轉錄物的方法，針對該目標核酸序列，在群體內存在一或多個類似核酸序列，目標序列及類似序列各自含有特異性核苷酸特徵序列元件，該元件相對於類似序列定義目標序列，該方法包含以下步驟：使包含目標核酸序列之轉錄物的樣品與包含具有以下之寡核苷酸的寡核苷酸組合物接觸：1)共同鹼基序列及長度；及 2)共同主鏈鍵聯模式；其中共同鹼基序列為或包含與定義目標核酸序列之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特性在於，當其與包含目標核酸序列及類似核酸序列之轉錄物的系統接觸時，目標核酸序列之轉錄物遭到抑制的程度大於類似核酸序列所觀察到之抑制程度。
在一些實施例中，本發明提供一種用於抑制來自目標核酸序列之轉錄物的方法，針對該目標核酸序列，在群體內存在一或多個類似核酸序列，目標序列及類似序列各自含有特異性核苷酸特徵序列元件，該元件相對於類似序列定義目標序列，該方法包含以下步驟：使包含目標核酸序列之轉錄物的樣品與包含具有以下之寡核苷酸的寡核苷酸組合物接觸：1)共同鹼基序列及長度；及2)共同主鏈鍵聯模式；3)共同主鏈對掌性中心模式；其中共同鹼基序列為或包含與定義目標核酸序列之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特性在於，當其與包含目標核酸序列及類似核酸序列之轉錄物的系統接觸時，目標核酸序列之轉錄物遭到抑制的程度大於類似核酸序列所觀察到之抑制程度。
在一些實施例中，共同鹼基序列為或包含與特徵序列元件100%互補的序列。在一些實施例中，抑制可經由一般熟習此項技術者已知的各種適合分析評定。在一些實施例中，分析為如本發明中所述之核糖核酸酶H分析，其可藉由評估包含特徵序列元件之目標核酸序列之轉錄物中所存在的序列之裂解及類似序列之轉錄物中所存在的序列之裂解來評定抑制情況。在一些實施例中，目標核酸序列之轉錄物遭到抑制之程度大於類似核酸序列中之任一者所觀察到之抑制程度。在一些實施例中，例示性目標序列及類似序列描述於本發明中。
在一些實施例中，本發明提供一種用於對偶基因特異性抑制來自目標核酸序列之轉錄物的方法，針對該目標核酸序列，在群體內存在複數個對偶基因，其各自含有特異性核苷酸特徵序列元件，該元件相對於相同目標核酸序列之其他對偶基因定義對偶基因，該方法包含以下步驟：使包含目標核酸序列之轉錄物的樣品與包含具有以下之寡核苷酸的寡核苷酸組合物接觸：1)共同鹼基序列及長度；及2)共同主鏈鍵聯模式；其中共同鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特性在於，當其與包含目標對偶基因及相同核酸序列之另一對偶基因之轉錄物的系統接觸時，特定對偶基因之轉錄物遭到抑制之程度大於相同核酸序列之另一對偶基因所觀察到之抑制程度。
在一些實施例中，本發明提供一種用於對偶基因特異性抑制來自目標核酸序列之轉錄物的方法，針對該目標核酸序列，在群體內存在複數個對偶基因，其各自含有特異性核苷酸特徵序列元件，該元件相對於相同目標核酸序列之其他對偶基因定義對偶基因，該方法包含以下步驟：使包含目標核酸序列之轉錄物的樣品與包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物接觸，該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的特徵在於：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有相同鹼基序列及長 度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃；其中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的共同鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特性在於，當其與包含目標對偶基因及相同核酸序列之另一對偶基因之轉錄物的系統接觸時，特定對偶基因之轉錄物遭到抑制之程度大於相同核酸序列之另一對偶基因所觀察到之抑制程度。
在一些實施例中，本發明提供一種用於對偶基因特異性抑制來自目標核酸序列之轉錄物的方法，針對該目標核酸序列，在群體內存在複數個對偶基因，其各自含有特異性核苷酸特徵序列元件，該元件相對於相同目標核酸序列之其他對偶基因定義對偶基因，該方法包含以下步驟：使包含目標核酸序列之轉錄物的樣品與包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物接觸，該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的特徵在於：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有相同鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃；其中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的共同鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特性在於，當其與包含目標對偶基因及相同核酸序列之另一對偶基因之轉錄物的系統接觸時，特定對偶基因之轉錄物遭到抑制之程度大於相同核酸序列之另一對偶基因所觀察到之抑制程度， 該接觸係在確定允許組合物抑制特定對偶基因之轉錄物的條件下執行。
在一些實施例中，本發明提供一種用於對偶基因特異性抑制來自目標核酸序列之轉錄物的方法，針對該目標核酸序列，在群體內存在複數個對偶基因，其各自含有特異性核苷酸特徵序列元件，該元件相對於相同目標核酸序列之其他對偶基因定義對偶基因，該方法包含以下步驟：使包含目標核酸序列之轉錄物的樣品與包含具有以下之寡核苷酸的寡核苷酸組合物接觸：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；其中共同鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特徵在於，當其與包含相同目標核酸序列之轉錄物的系統接觸時，其顯示按以下程度抑制特定對偶基因之轉錄物：a)大於該組合物不存在時；b)大於相同核酸序列之另一對偶基因所觀察到之抑制程度；或c)大於組合物不存在時，且大於相同核酸序列之另一對偶基因所觀察到之抑制程度。
在一些實施例中，本發明提供一種用於對偶基因特異性抑制來自目標核酸序列之轉錄物的方法，針對該目標核酸序列，在群體內存在複數個對偶基因，其各自含有特異性核苷酸特徵序列元件，該元件相對於相同目標核酸序列之其他對偶基因定義對偶基因，該方法包含以下步驟：使包含目標核酸序列之轉錄物的樣品與包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物接觸，該特定寡核苷酸類型 之寡核苷酸的特徵在於：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有相同鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃；其中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸之共同鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特徵在於，當其與包含相同目標核酸序列之轉錄物的系統接觸時，其顯示按以下程度抑制特定對偶基因之轉錄物：a)大於該組合物不存在時；b)大於相同核酸序列之另一對偶基因所觀察到之抑制程度；或c)大於組合物不存在時，且大於相同核酸序列之另一對偶基因所觀察到之抑制程度。
在一些實施例中，本發明提供一種用於對偶基因特異性抑制來自目標核酸序列之轉錄物的方法，針對該目標核酸序列，在群體內存在複數個對偶基因，其各自含有特異性核苷酸特徵序列元件，該元件相對於相同目標核酸序列之其他對偶基因定義對偶基因，該方法包含以下步驟：使包含目標核酸序列之轉錄物的樣品與包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物接觸，該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的特徵在於：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；3)共同主鏈對掌性中心模式； 該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有相同鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃；其中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸之共同鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特徵在於，當其與包含相同目標核酸序列之轉錄物的系統接觸時，其顯示按以下程度抑制特定對偶基因之轉錄物：a)大於該組合物不存在時；b)大於相同核酸序列之另一對偶基因所觀察到之抑制程度；或c)大於組合物不存在時，且大於相同核酸序列之另一對偶基因所觀察到之抑制程度，該接觸係在確定允許組合物抑制特定對偶基因之轉錄物的條件下執行。
在一些實施例中，轉錄物係藉由該轉錄物之裂解遭到抑制。在一些實施例中，特異性核苷酸特徵序列元件係在內含子中。在一些實施例中，特異性核苷酸特徵序列元件係在外顯子中。在一些實施例中，特異性核苷酸特徵序列元件部分在外顯子中且部分在內含子中。在一些實施例中，特異性核苷酸特徵序列元件包含可區分一對偶基因與其他對偶基因的突變。在一些實施例中，突變為缺失。在一些實施例中，突變為插入。在一些實施例中，突變為點突變。在一些實施例中，特異性核苷酸特徵序列元件包含至少一個單核苷酸多形現象(SNP)，其可區分一對偶基因與其他對偶基因。
在一些實施例中，目標核酸序列為目標基因。
在一些實施例中，本發明提供一種用於對偶基因特異性抑制序列中包含至少一個單核苷酸多形現象(SNP)之基因的方法，該方法包含提供一種對掌性受控寡核苷酸組合物，其包含由具有以下定義之寡 核苷酸：1)共同鹼基序列及長度，其中共同鹼基序列為或包含與來自第一對偶基因之轉錄物中所存在之序列完全互補，但與來自第二對偶基因之轉錄物中所存在之相應序列不互補的序列，其中該等轉錄物中所存在之序列包含SNP位點；2)共同主鏈鍵聯模式；3)共同主鏈對掌性中心模式，該組合物為基本上純的單一寡核苷酸製劑，因為該組合物中至少約10%之寡核苷酸具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式；其中來自第一對偶基因之轉錄物遭到之抑制超過來自第二對偶基因之轉錄物遭到之抑制至少五倍。
在一些實施例中，本發明提供一種用於對偶基因特異性抑制來自目標基因之轉錄物的方法，針對該目標基因，在群體內存在複數個對偶基因，其各自含有特異性核苷酸特徵序列元件，該元件相對於相同目標基因之其他對偶基因定義對偶基因，該方法包含以下步驟：使包含目標基因之轉錄物的樣品與包含具有以下之寡核苷酸的寡核苷酸組合物接觸：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；其中共同鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特徵在於，當其與包含目標對偶基因及相同基因之另一對偶基因之轉錄物的系統接觸時，特定對偶基因之轉錄物遭到抑制之程度為相同基因之另一對偶基因所觀察到之抑制程度的至少2倍。
在一些實施例中，本發明提供一種用於對偶基因特異性抑制目標基因之轉錄物的方法，針對該目標基因，在群體內存在複數個對偶 基因，其各自含有特異性核苷酸特徵序列元件，該元件相對於相同目標基因之其他對偶基因定義該對偶基因，該方法包含以下步驟：使包含該目標基因之轉錄物的樣品與包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物接觸，該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸之特徵在於：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有相同鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物富含該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸；其中該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的共同鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特徵在於，當其與包含目標對偶基因及相同基因之另一對偶基因之轉錄物的系統接觸時，該特定對偶基因之轉錄物受抑制之程度至少2倍大於相同基因之另一對偶基因所觀察到之抑制程度。
在一些實施例中，本發明提供一種用於對偶基因特異性抑制目標基因之轉錄物的方法，針對該目標基因，在群體內存在複數個對偶基因，其各自含有特異性核苷酸特徵序列元件，該元件相對於相同目標基因之其他對偶基因定義該對偶基因，該方法包含以下步驟：使包含該目標基因之轉錄物的樣品與包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物接觸，該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸之特徵在於：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；3)共同主鏈對掌性中心模式； 該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有相同鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物富含該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸；其中該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的共同鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特徵在於，當其與包含目標對偶基因及相同基因之另一對偶基因之轉錄物的系統接觸時，該特定對偶基因之轉錄物受抑制之程度至少2倍大於相同基因之另一對偶基因所觀察到之抑制程度，該接觸係在確定允許該組合物抑制該特定對偶基因之轉錄物的條件下執行。
在一些實施例中，本發明提供一種用於對偶基因特異性抑制來自目標基因之轉錄物的方法，針對該目標基因，在群體內存在複數個對偶基因，其各自含有特異性核苷酸特徵序列元件，該元件相對於相同目標基因之其他對偶基因定義對偶基因，該方法包含以下步驟：使包含目標基因之轉錄物的樣品與包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物接觸，該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸之特徵在於：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有相同鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃；其中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的共同鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特徵在於，當其與表現目標對偶基因及相同基因之另一對偶基因之轉錄物的 系統接觸時，特定對偶基因之轉錄物遭到抑制之程度為相同基因之另一對偶基因所觀察到之抑制程度的至少2倍，該接觸係在確定允許組合物抑制特定對偶基因之表現的條件下執行。
在一些實施例中，本發明提供一種用於對偶基因特異性抑制來自目標基因之轉錄物的方法，針對該目標基因，在群體內存在複數個對偶基因，其各自含有特異性核苷酸特徵序列元件，該元件相對於相同目標基因之其他對偶基因定義對偶基因，該方法包含以下步驟：使包含目標基因之轉錄物的樣品與包含具有以下之寡核苷酸的寡核苷酸組合物接觸：1)共同鹼基序列及長度；及2)共同主鏈鍵聯模式；其中共同鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特徵在於，當其與表現目標基因之轉錄物的系統接觸時，其顯示按以下程度抑制特定對偶基因之轉錄物的表現：a)所偵測到之來自特定對偶基因之轉錄物的量相差至少2倍，存在組合物時相對於不存在組合物時減少2倍；b)比相同基因之另一對偶基因所觀察到之抑制程度大至少2倍；或c)所偵測到之來自特定對偶基因之轉錄物的量相差至少2倍，存在組合物時相對於不存在組合物時減少2倍，且比相同基因之另一對偶基因所觀察到之抑制程度大至少2倍。
在一些實施例中，本發明提供一種用於對偶基因特異性抑制來自目標基因之轉錄物的方法，針對該目標基因，在群體內存在複數個對偶基因，其各自含有特異性核苷酸特徵序列元件，該元件相對於相同目標基因之其他對偶基因定義對偶基因，該方法包含以下步驟： 使包含目標基因之轉錄物的樣品與包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物接觸，該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸之特徵在於：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有相同鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃；其中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸之共同鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特徵在於，當其與表現目標基因之轉錄物的系統接觸時，其顯示按以下程度抑制特定對偶基因之轉錄物的表現：a)所偵測到之來自特定對偶基因之轉錄物的量相差至少2倍，存在組合物時相對於不存在組合物時減少2倍；b)比相同基因之另一對偶基因所觀察到之抑制程度大至少2倍；或c)所偵測到之來自特定對偶基因之轉錄物的量相差至少2倍，存在組合物時相對於不存在組合物時減少2倍，且比相同基因之另一對偶基因所觀察到之抑制程度大至少2倍。
在一些實施例中，本發明提供一種用於對偶基因特異性抑制來自目標基因之轉錄物的方法，針對該目標基因，在群體內存在複數個對偶基因，其各自含有特異性核苷酸特徵序列元件，該元件相對於相同目標基因之其他對偶基因定義對偶基因，該方法包含以下步驟：使包含目標基因之轉錄物的樣品與包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物接觸，該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸之特徵在於： 1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有相同鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃；其中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸之共同鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特徵在於，當其與表現目標基因之轉錄物的系統接觸時，其顯示按以下程度抑制特定對偶基因之轉錄物的表現：a)所偵測到之來自特定對偶基因之轉錄物的量相差至少2倍，存在組合物時相對於不存在組合物時減少2倍；b)比相同基因之另一對偶基因所觀察到之抑制程度大至少2倍；或c)所偵測到之來自特定對偶基因之轉錄物的量相差至少2倍，存在組合物時相對於不存在組合物時減少2倍，且比相同基因之另一對偶基因所觀察到之抑制程度大至少2倍，該接觸係在確定允許組合物抑制特定對偶基因之轉錄物的條件下執行。
在一些實施例中，本發明提供一種用於對偶基因特異性抑制來自目標基因之轉錄物的方法，針對該目標基因，在群體內存在複數個對偶基因，其各自含有特異性核苷酸特徵序列元件，該元件相對於相同目標基因之其他對偶基因定義對偶基因，該方法包含以下步驟：使包含目標基因之轉錄物的樣品與包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物接觸，該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸之特徵在於：1)共同鹼基序列及長度； 2)共同主鏈鍵聯模式；3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有相同鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃；其中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸之共同鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特徵在於，當其與表現目標基因之轉錄物的系統接觸時，其顯示按以下程度抑制特定對偶基因之轉錄物的表現：a)所偵測到之來自特定對偶基因之轉錄物的量相差至少2倍，存在組合物時相對於不存在組合物時減少2倍；b)比相同基因之另一對偶基因所觀察到之抑制程度大至少2倍；或c)所偵測到之來自特定對偶基因之轉錄物的量相差至少2倍，存在組合物時相對於不存在組合物時減少2倍，且比相同基因之另一對偶基因所觀察到之抑制程度大至少2倍，該接觸係在確定允許組合物抑制特定對偶基因之表現的條件下執行。
如本文所述，在一些實施例中，在所提供之方法中，接觸係在確定允許組合物抑制特定對偶基因之轉錄物的條件下執行。在一些實施例中，接觸係在確定允許組合物抑制特定對偶基因之表現的條件下執行。
在一些實施例中，特定對偶基因之轉錄物之抑制程度大於不存在組合物時。在一些實施例中，特定對偶基因之轉錄物之抑制程度為不存在組合物時的至少1.1倍，因為所偵測到的來自特定對偶基因之轉錄物之量在存在組合物時相對於不存在組合物時，低至少1.1倍。在一些實施例中，程度為至少1.2倍。在一些實施例中，程度為至少1.3倍。在一些實施例中，程度為至少1.4倍。在一些實施例中，程度 為至少1.5倍。在一些實施例中，程度為至少1.6倍。在一些實施例中，程度為至少1.7倍。在一些實施例中，程度為至少1.8倍。在一些實施例中，程度為至少1.9倍。在一些實施例中，程度為至少2倍。在一些實施例中，程度為至少3倍。在一些實施例中，程度為至少4倍。在一些實施例中，程度為至少5倍。在一些實施例中，程度為至少6倍。在一些實施例中，程度為至少7倍。在一些實施例中，程度為至少8倍。在一些實施例中，程度為至少9倍。在一些實施例中，程度為至少10倍。在一些實施例中，程度為至少11倍。在一些實施例中，程度為至少12倍。在一些實施例中，程度為至少13倍。在一些實施例中，程度為至少14倍。在一些實施例中，程度為至少15倍。在一些實施例中，程度為至少20倍。在一些實施例中，程度為至少30倍。在一些實施例中，程度為至少40倍。在一些實施例中，程度為至少50倍。在一些實施例中，程度為至少75倍。在一些實施例中，程度為至少100倍。在一些實施例中，程度為至少150倍。在一些實施例中，程度為至少200倍。在一些實施例中，程度為至少300倍。在一些實施例中，程度為至少400倍。在一些實施例中，程度為至少500倍。在一些實施例中，程度為至少750倍。在一些實施例中，程度為至少1000倍。在一些實施例中，程度為至少5000倍。
在一些實施例中，特定對偶基因之轉錄物之抑制程度大於相同核酸序列之另一對偶基因所觀察到之抑制程度。在一些實施例中，特定對偶基因之轉錄物之抑制程度比相同核酸序列之另一對偶基因所觀察到之抑制程度大至少1.1倍。在一些實施例中，程度為至少1.2倍。在一些實施例中，程度為至少1.3倍。在一些實施例中，程度為至少1.4倍。在一些實施例中，程度為至少1.5倍。在一些實施例中，程度為至少1.6倍。在一些實施例中，程度為至少1.7倍。在一些實施例中，程度為至少1.8倍。在一些實施例中，程度為至少1.9倍。在一些 實施例中，程度為至少2倍。在一些實施例中，程度為至少3倍。在一些實施例中，程度為至少4倍。在一些實施例中，程度為至少5倍。在一些實施例中，程度為至少6倍。在一些實施例中，程度為至少7倍。在一些實施例中，程度為至少8倍。在一些實施例中，程度為至少9倍。在一些實施例中，程度為至少10倍。在一些實施例中，程度為至少11倍。在一些實施例中，程度為至少12倍。在一些實施例中，程度為至少13倍。在一些實施例中，程度為至少14倍。在一些實施例中，程度為至少15倍。在一些實施例中，程度為至少20倍。在一些實施例中，程度為至少30倍。在一些實施例中，程度為至少40倍。在一些實施例中，程度為至少50倍。在一些實施例中，程度為至少75倍。在一些實施例中，程度為至少100倍。在一些實施例中，程度為至少150倍。在一些實施例中，程度為至少200倍。在一些實施例中，程度為至少300倍。在一些實施例中，程度為至少400倍。在一些實施例中，程度為至少500倍。在一些實施例中，程度為至少750倍。在一些實施例中，程度為至少1000倍。在一些實施例中，程度為至少5000倍。
在一些實施例中，特定對偶基因之轉錄物之抑制程度大於不存在組合物時，且其程度大於相同核酸序列之另一對偶基因所觀察到之抑制程度。在一些實施例中，特定對偶基因之轉錄物之抑制程度為不存在組合物時之至少1.1倍，且比相同核酸序列之另一對偶基因所觀察到之抑制程度大至少1.1倍。在一些實施例中，各倍數獨立地如上文所述。
在一些實施例中，系統為包含轉錄物之組合物。在一些實施例中，系統為包含來自不同對偶基因之轉錄物的組合物。在一些實施例中，系統可為活體內或活體外的，且任一方式均可包含一或多個細胞、組織、器官或生物體。在一些實施例中，系統包含一或多個細胞。在一些實施例中，系統包含一或多個組織。在一些實施例中，系統包含一或多個器官。在一些實施例中，系統包含一或多個生物體。 在一些實施例中，系統為個體。
在一些實施例中，轉錄物之抑制或轉錄出轉錄物之對偶基因之表現的抑制可在活體外分析中量測。在一些實施例中，在分析中使用來自轉錄物且包含特異性核苷酸特徵序列元件之序列代替全長轉錄物。在一些實施例中，分析為生物化學分析。在一些實施例中，分析為生物化學分析，其中測試核酸聚合物(例如轉錄物或來自轉錄物且包含特異性核苷酸特徵序列元件之序列)在對掌性受控寡核苷酸組合物存在下藉由酶達成之裂解。
在一些實施例中，向個體投與所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物。在一些實施例中，個體為動物。在一些實施例中，個體為植物。在一些實施例中，個體為人類。
在一些實施例中，關於來自特定對偶基因之轉錄物的對偶基因特異性抑制，在特異性核苷酸特徵序列元件內之序列差異(例如突變)附近之位點處裂解轉錄物，該序列差異可區分來自特定對偶基因之轉錄物與來自其他對偶基因之轉錄物。在一些實施例中，轉錄物在此類序列差異附近之位點處選擇性裂解。在一些實施例中，轉錄物在此類序列差異附近之位點處的裂解百分比高於使用不控制對掌性之寡核苷酸組合物時。在一些實施例中，轉錄物在具有序列差異之位點處裂解。在一些實施例中，轉錄物僅在特異性核苷酸特徵序列元件內具有序列差異之位點處裂解。在一些實施例中，轉錄物在序列差異下游或上游5個鹼基對內之位點處裂解。在一些實施例中，轉錄物在序列差異下游或上游4個鹼基對內之位點處裂解。在一些實施例中，轉錄物在序列差異下游或上游3個鹼基對內之位點處裂解。在一些實施例中，轉錄物在序列差異下游或上游2個鹼基對內之位點處裂解。在一些實施例中，轉錄物在序列差異下游或上游1個鹼基對內之位點處裂解。在一些實施例中，轉錄物在序列差異下游5個鹼基對內之位點處 裂解。在一些實施例中，轉錄物在序列差異下游4個鹼基對內之位點處裂解。在一些實施例中，轉錄物在序列差異下游3個鹼基對內之位點處裂解。在一些實施例中，轉錄物在序列差異下游2個鹼基對內之位點處裂解。在一些實施例中，轉錄物在序列差異下游1個鹼基對內之位點處裂解。在一些實施例中，轉錄物在序列差異上游5個鹼基對內之位點處裂解。在一些實施例中，轉錄物在序列差異上游4個鹼基對內之位點處裂解。在一些實施例中，轉錄物在序列差異上游3個鹼基對內之位點處裂解。在一些實施例中，轉錄物在序列差異上游2個鹼基對內之位點處裂解。在一些實施例中，轉錄物在序列差異上游1個鹼基對內之位點處裂解。在不存在本發明中由申請人所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物及其方法的情況下，裂解模式之此類精確控制及來自特定對偶基因之轉錄物的所得高度選擇性抑制將為不可能的。
在一些實施例中，本發明提供用於治療個體或預防個體疾病的方法，該等方法係藉由特異性抑制來自特定對偶基因之轉錄物，例如導致或可導致疾病之對偶基因。在一些實施例中，本發明提供用於治療患有疾病之個體的方法，其包含向個體投與包含對掌性受控寡核苷酸組合物之醫藥組合物，其中來自造成或促成疾病之對偶基因的轉錄物得到選擇性抑制。在一些實施例中，本發明提供用於治療患有疾病之個體的方法，其包含向個體投與包含對掌性受控寡核苷酸組合物之醫藥組合物，其中來自造成疾病之對偶基因的轉錄物得到選擇性抑制。在一些實施例中，本發明提供用於治療患有疾病之個體的方法，其包含向個體投與包含對掌性受控寡核苷酸組合物之醫藥組合物，其中來自促成疾病之對偶基因的轉錄物得到選擇性抑制。在一些實施例中，本發明提供用於治療患有疾病之個體的方法，其包含向個體投與包含對掌性受控寡核苷酸組合物之醫藥組合物，其中來自與疾病相關之對偶基因的轉錄物得到選擇性抑制。在一些實施例中，本發明提供 用於預防個體疾病之方法，其係藉由特異性抑制來自可導致疾病之特定對偶基因的轉錄物。在一些實施例中，本發明提供用於預防個體疾病之方法，其係藉由特異性抑制來自增加疾病在個體中之風險的特定對偶基因的轉錄物。在一些實施例中，所提供之方法包含向個體投與包含對掌性受控寡核苷酸組合物之醫藥組合物。在一些實施例中，醫藥組合物進一步包含醫藥載劑。
在一些實施例中，核苷酸特徵序列包含相對於其他類似序列定義目標序列的突變。在一些實施例中，核苷酸特徵序列包含相對於其他類似序列定義目標序列的點突變。在一些實施例中，核苷酸特徵序列包含相對於其他類似序列定義目標序列的SNP。
在一些實施例中，本發明提供一種用於製備用於選擇性抑制目標核酸序列之轉錄物的寡核苷酸組合物的方法，該方法包含提供一種寡核苷酸組合物，其包含預定含量之特定寡核苷酸類型之寡核苷酸，其特徵在於：1)共同鹼基序列；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈對掌性中心模式，該模式包含(Sp)m(Rp)n、(Rp)n(Sp)m、(Np)t(Rp)n(Sp)m或(Sp)t(Rp)n(Sp)m，其中m、n、t、Np各自獨立地如本文所定義及描述；其中目標核酸序列包含相對於類似核酸序列定義目標核酸序列的特徵序列元件；其中共同鹼基序列為DNA裂解模式及/或立體無規裂解模式具有在特徵序列元件內或其附近之裂解位點的序列。
在一些實施例中，本發明提供一種用於製備用於選擇性抑制目標核酸序列之轉錄物的寡核苷酸組合物的方法，該方法包含提供一種寡核苷酸組合物，其包含預定含量之特定寡核苷酸類型之寡核苷酸， 其特徵在於：1)共同鹼基序列；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈對掌性中心模式，該模式包含(Sp)m(Rp)n、(Rp)n(Sp)m、(Np)t(Rp)n(Sp)m或(Sp)t(Rp)n(Sp)m，其中m、n、t、Np各自獨立地如本文所定義及描述；其中目標核酸序列包含相對於類似核酸序列定義目標核酸序列的特徵序列元件；其中共同鹼基序列為DNA裂解模式及/或立體無規裂解模式具有在特徵序列元件內或其附近之主要裂解位點的序列。
在一些實施例中，共同主鏈對掌性中心模式包含如上所述之(Sp)m(Rp)n、(Rp)n(Sp)m、(Np)t(Rp)n(Sp)m或(Sp)t(Rp)n(Sp)m。在一些實施例中，共同主鏈對掌性中心模式包含如上所述之(Sp)m(Rp)n。在一些實施例中，共同主鏈對掌性中心模式包含如上所述之(Rp)n(Sp)m。在一些實施例中，共同主鏈對掌性中心模式包含如上所述之(Np)t(Rp)n(Sp)m。在一些實施例中，共同主鏈對掌性中心模式包含如上所述之(Sp)t(Rp)n(Sp)m。在一些實施例中，n為1。在一些實施例中，m>2。在一些實施例中，n為1且m>2。在一些實施例中，t>2。在一些實施例中，n為1，m>2，且t>2。
在一些實施例中，特定寡核苷酸類型之寡核苷酸具有翼-核心結構。在一些實施例中，特定寡核苷酸類型之寡核苷酸具有核心-翼結構。在一些實施例中，特定寡核苷酸類型之寡核苷酸具有翼-核心-翼結構。在一些實施例中，翼區中之各糖部分具有糖修飾。在一些實施例中，翼區中之各糖部分具有2'修飾。在一些實施例中，翼區中之各糖部分具有2'修飾，其中2'修飾為2'-OR1，其中R1為視情況經取代之C1-6烷基。在一些實施例中，翼區中之各糖部分具有2'-OMe。在一些 實施例中，各翼獨立地包含對掌性核苷酸間鍵聯及天然磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，對掌性核苷酸間鍵聯為硫代磷酸酯。在一些實施例中，關於翼-核心-翼結構，如在WV-1092中，5'翼具有在其5'端及3'端中之每一者的Sp核苷酸間鍵聯及兩者之間的磷酸酯鍵聯，且3'翼具有在其3'端之Sp核苷酸間鍵聯，且其核苷酸間鍵聯之其餘部分為磷酸酯。翼及/或核心之其他實施例(例如糖修飾、立體化學等)描述於本發明中。
作為DNA裂解模式及/或立體無規裂解模式具有在目標核酸序列內或其附近之裂解位點的序列之共同鹼基序列廣泛描述於本發明中。在一些實施例中，在目標核酸序列內或其附近之裂解位點為在相對於類似序列定義目標序列之突變附近的裂解位點。在一些實施例中，在目標核酸序列內或其附近之裂解位點為在相對於類似序列定義目標序列之SNP附近的裂解位點。在一些實施例中，如上所述，在突變或SNP附近為遠離突變或SNP 0、1、2、3、4、5個核苷酸間鍵聯。其他實施例在本發明上文有所描述。
在一些實施例中，共同鹼基序列為DNA裂解模式及/或立體無規裂解模式具有在目標核酸序列內或其附近之主要裂解位點的序列。在一些實施例中，主要裂解位點由彼位點處之絕對裂解定義(在彼位點相比於總目標序列之裂解%)。主要裂解位點之其他例示性實施例描述於本發明中。在一些實施例中，如由圖33所例示，共同鹼基序列(P12)可藉由比較與特徵序列元件互補之不同序列之裂解圖譜來鑑別。
在一些實施例中，本發明提供一種用於製備包含特定序列之寡核苷酸的寡核苷酸組合物的方法，該組合物提供目標序列之轉錄物的選擇性抑制，包含提供包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物，其特徵在於：1)與特定序列相同之共同鹼基序列；2)共同主鏈鍵聯模式；及 3)共同主鏈對掌性中心模式，該模式包含(Sp)m(Rp)n、(Rp)n(Sp)m、(Np)t(Rp)n(Sp)m或(Sp)t(Rp)n(Sp)m，其中：各n及t獨立地為1、2、3、4、5、6、7或8；m為2、3、4、5、6、7或8，且各Np獨立地為Rp或Sp。
涉及致病對偶基因之疾病為此項技術中廣泛已知的，包括(但不限於)以下各者中所述之彼等疾病：Hohjoh,Pharmaceuticals 2013, 6,522-535；美國專利申請公開案US 2013/0197061；Østergaard等人，Nucleic Acids Research 2013, 41(21),9634-9650；及Jiang等人，Science 2013, 342,111-114。在一些實施例中，疾病為亨廷頓氏病。在一些實施例中，疾病為人類肥厚性心肌症(HCM)。在一些實施例中，疾病為擴張型心肌症。在一些實施例中，致病對偶基因為肌凝蛋白重鏈(MHC)之對偶基因。在一些實施例中，例示性疾病係選自：
在一些實施例中，可藉由所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物及方法治療之例示性目標及疾病包含：
在一些實施例中，本文所述之寡核苷酸組合物及技術特別適用於治療亨廷頓氏病。舉例而言，在一些實施例中，本發明定義立體化學受控寡核苷酸組合物，其指導與亨廷頓氏病相關之核酸的裂解(例如，核糖核酸酶H介導之裂解)。在一些實施例中，該等組合物指導特定目標序列之亨廷頓氏病相關之對偶基因相對於該序列之一或多個(例如，所有非亨廷頓氏病相關)其他對偶基因優先裂解。
在一些實施例中，提供一種治療或預防個體之亨廷頓氏病的方法，其包含向個體投與包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物，該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸之特徵在於：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有相同鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃。在一些實施例中，特定寡核苷酸類型之寡核苷酸為相同的。在一些實施例中，所提供之組合物為對掌性受控寡核苷酸組合物。
與亨廷頓氏病相關之SNP為此項技術中廣泛已知的。在一些實施例中，共同鹼基序列與包含與亨廷頓氏病相關之SNP的核酸序列互補。在一些實施例中，所提供之組合物選擇性抑制來自致病對偶基因之轉錄物。在一些實施例中，所提供之組合物選擇性裂解來自致病對偶基因之轉錄物。可由所提供之組合物靶向之例示性SNP(目標亨廷頓位點)描述於本文中。
在一些實施例中，目標亨廷頓位點係選自rs9993542_C、rs362310_C、rs362303_C、rs10488840_G、rs363125_C、rs363072_A、rs7694687_C、rs363064_C、rs363099_C、rs363088_A、rs34315806_C、rs2298967_T、rs362272_G、rs362275_C、rs362306_G、rs3775061_A、rs1006798_A、rs16843804_C、rs3121419_C、rs362271_G、rs362273_A、rs7659144_C、rs3129322_T、rs3121417_G、rs3095074_G、rs362296_C、rs108850_C、rs2024115_A、rs916171_C、rs7685686_A、rs6844859_T、rs4690073_G、rs2285086_A、rs362331_T、rs363092_C、rs3856973_G、rs4690072_T、rs7691627_G、rs2298969_A、rs2857936_C、rs6446723_T、rs762855_A、rs1263309_T、rs2798296_G、rs363096_T、rs10015979_G、rs11731237_T、rs363080_C、rs2798235_G及rs362307_T。在一些實施例中，目標亨廷頓位點係選自rs34315806_C、rs362273_A、rs362331_T、rs363099_C、rs7685686_A、rs362306_G、rs363064_C、rs363075_G、rs2276881_G、rs362271_G、rs362303_C、rs362322_A、rs363088_A、rs6844859_T、rs3025838_C、rs363081_G、rs3025849_A、rs3121419_C、rs2298967_T、rs2298969_A、rs16843804_C、rs4690072_T、rs362310_C、rs3856973_G、rs2530595_C、rs2530595_T及rs2285086_A。在一些實施例中，目標亨廷頓位點係選自rs34315806_C、rs362273_A、rs362331_T、rs363099_C、rs7685686_A、rs362306_G、rs363064_C、rs363075_G、rs2276881_G、rs362271_G、rs362303_C、rs362322_A、rs363088_A、rs6844859_T、rs3025838_C、rs363081_G、rs3025849_A、rs3121419_C、rs2298967_T、rs2298969_A、rs16843804_C、rs4690072_T、rs362310_C、rs3856973_G及rs2285086_A。在一些實施例中，目標亨廷頓位點係選自rs362331_T、rs7685686_A、rs6844859_T、rs2298969_A、rs4690072_T、rs2024115_A、rs3856973_G、rs2285086_A、rs363092_C、rs7691627_G、rs10015979_G、rs916171_C、rs6446723_T、rs11731237_T、 rs362272_G、rs4690073_G及rs363096_T。在一些實施例中，目標亨廷頓位點係選自rs362267、rs6844859、rs1065746、rs7685686、rs362331、rs362336、rs2024115、rs362275、rs362273、rs362272、rs3025805、rs3025806、rs35892913、rs363125、rs17781557、rs4690072、rs4690074、rs1557210、rs363088、rs362268、rs362308、rs362307、rs362306、rs362305、rs362304、rs362303、rs362302、rs363075、rs2530595及rs2298969。在一些實施例中，目標亨廷頓位點係選自rs362267、rs6844859、rs1065746、rs7685686、rs362331、rs362336、rs2024115、rs362275、rs362273、rs362272、rs3025805、rs3025806、rs35892913、rs363l25、rs17781557、rs4690072、rs4690074、rs1557210、rs363088、rs362268、rs362308、rs362307、rs362306、rs362305、rs362304、rs362303、rs362302、rs363075及rs2298969。在一些實施例中，目標亨廷頓位點係選自：
在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物靶向兩個或更多個位點。在一些實施例中，所靶向之兩個或更多個位點選自本文中所列位點。在一些實施例中，所靶向之SNP為rs362307、rs7685686、rs362268、rs2530595、rs362331或rs362306。在一些實施例中，所靶向之SNP為rs362307、rs7685686、rs362268或rs362306。在一些實施例中，所靶向之SNP為rs362307。在一些實施例中，所靶向之SNP為rs7685686。在一些實施例中，所靶向之SNP不為rs7685686。在一些實施例中，所靶向之SNP為rs362268。在一些實施例中，所靶向之SNP為rs362306。
在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物能夠區分特定SNP之兩個對偶基因。
WVE120101及WV-1092之對掌性受控寡核苷酸組合物均能夠區分SNP rs362307之wt版本與突變版本，兩者相差一個nt；WVE120101及WV-1092對掌性受控寡核苷酸組合物顯著阻斷突變型對偶基因之基因表現，但不阻斷wt對偶基因之基因表現，而立體無規寡核苷酸組合物WV-1497不能夠顯著區分wt對偶基因與突變型對偶基因(參見圖39D)。
對掌性受控寡核苷酸組合物WV-2595亦能夠區分SNP rs2530595中之C對偶基因與T對偶基因，兩者亦僅相差一個nt。對掌性受控WV-2595寡核苷酸組合物顯著阻斷T對偶基因之基因表現，但不顯著阻斷C對偶基因之基因表現，與不能夠顯著區分對偶基因之立體無規寡核苷酸組合物WV-2611不同(參見圖39F)。
對掌性受控寡核苷酸組合物WV-2603能夠區分SNP rs362331之C對偶基因與T對偶基因，兩者亦僅相差一個nt。對掌性受控WV-2603寡核苷酸組合物顯著阻斷T對偶基因之基因表現，但不阻斷C對偶基因之基因表現，與不能夠顯著區分對偶基因之立體無規寡核苷酸組合物WV-2619不同(參見圖39A、圖39B、圖39C及圖39E)。
在一些實施例中，所提供之用於治療亨廷頓氏病之組合物係選自表N1、表N2、表N3或表N4。在一些實施例中，所提供之用於治療亨廷頓氏病之組合物係選自表N1。在一些實施例中，所提供之用於治療亨廷頓氏病之組合物係選自表N2。在一些實施例中，所提供之用於治療亨廷頓氏病之組合物係選自表N3。在一些實施例中，所提供之用於治療亨廷頓氏病之組合物係選自表N4。在一些實施例中，所提供之用於治療亨廷頓氏病之組合物係選自表N1A、表N2A、表N3A或表N4A。在一些實施例中，所提供之用於治療亨廷頓氏病之組 合物係選自表N1A。在一些實施例中，所提供之用於治療亨廷頓氏病之組合物係選自表N2A。在一些實施例中，所提供之用於治療亨廷頓氏病之組合物係選自表N3A。在一些實施例中，所提供之用於治療亨廷頓氏病之組合物係選自表N4A。在一些實施例中，所提供之組合物係選自具有WVE120101、WV-2603、WV-2595、WV-1510、WV-2378及WV-2380之序列的寡核苷酸；此等中之每一者經構築且發現非常有效，舉例而言，如在活體外雙重螢光素酶報導基因分析中所展現。在一些實施例中，所提供之組合物為WVE120101、WV-2603、WV-2595、WV-1510、WV-2378或WV-2380之對掌性受控寡核苷酸組合物。在一些實施例中，所提供之組合物為WV-1092之對掌性受控寡核苷酸組合物。在一些實施例中，所提供之組合物為WV-1510之對掌性受控寡核苷酸組合物。在一些實施例中，所提供之組合物為WV-2378之對掌性受控寡核苷酸組合物。在一些實施例中，所提供之組合物為WV-2380之對掌性受控寡核苷酸組合物。在一些實施例中，所提供之組合物為WV-2595之對掌性受控寡核苷酸組合物。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含本文中所揭示之任何寡核苷酸之鹼基序列、主鏈鍵聯模式、主鏈對掌性中心模式及/或化學修飾(例如，鹼基修飾、糖修飾等)之模式。
在一些實施例中，所提供之組合物不為ONT-451、ONT-452或ONT-450之組合物。在一些實施例中，所提供之組合物不為ONT-451之組合物。在一些實施例中，所提供之組合物不為ONT-452之組合物。在一些實施例中，所提供之組合物不為ONT-450之組合物。在一些實施例中，組合物不含預定含量之ONT-451或ONT-452。在一些實施例中，組合物不含預定含量之ONT-451。在一些實施例中，組合物不含預定含量之ONT-452。在一些實施例中，寡核苷酸類型不為ONT-451或ONT-452。在一些實施例中，寡核苷酸類型不為ONT-451。在一 些實施例中，寡核苷酸類型不為ONT-452。在一些實施例中，組合物不為ONT-451或ONT-452之對掌性受控寡核苷酸組合物。在一些實施例中，組合物不為ONT-451之對掌性受控寡核苷酸組合物。在一些實施例中，組合物不為ONT-452之對掌性受控寡核苷酸組合物。
在一些實施例中，所提供之方法改善亨廷頓氏病之症狀。在一些實施例中，所提供之方法減緩亨廷頓氏病之發作。在一些實施例中，所提供之方法減緩亨廷頓氏病之進程。在一些實施例中，所提供之方法停止亨廷頓氏病之進程。在一些實施例中，根據臨床標準，所提供之方法治癒亨廷頓氏病。
在一些實施例中，本發明提供針對指定寡核苷酸組合物鑑別患者的方法。在一些實施例中，本發明提供用於給患者分層之方法。在一些實施例中，所提供之方法包含鑑別與致病對偶基因相關之突變及/或SNP。舉例而言，在一些實施例中，所提供之方法包含鑑別個體中與經擴展之CAG重複序列相關的SNP，該等經擴展之CAG重複序列與亨廷頓氏病相關或導致亨廷頓氏病。在一些實施例中，所提供之方法包含鑑別個體中與亨延頓蛋白中超過35個CAG重複序列相關的SNP。在一些實施例中，所提供之方法包含鑑別個體中與亨廷頓蛋白中超過36個CAG重複序列相關的SNP。在一些實施例中，所提供之方法包含鑑別個體中與亨廷頓蛋白中超過37個CAG重複序列相關的SNP。在一些實施例中，所提供之方法包含鑑別個體中與亨廷頓蛋白中超過38個CAG重複序列相關的SNP。在一些實施例中，所提供之方法包含鑑別個體中與亨廷頓蛋白中超過39個CAG重複序列相關的SNP。在一些實施例中，所提供之方法包含鑑別個體中與亨廷頓蛋白中超過40個CAG重複序列相關的SNP。
在一些實施例中，個體之亨廷頓基因中具有SNP。在一些實施例中，個體具有SNP，其中一個對偶基因為與經擴展之CAG重複序列相 關的突變型亨廷頓蛋白。在一些實施例中，個體具有如本文所述之SNP。在一些實施例中，個體具有選自rs362307、rs7685686、rs362268、rs2530595、rs362331或rs362306之SNP。在一些實施例中，個體具有選自rs362307、rs7685686、rs362268或rs362306之SNP。在一些實施例中，個體具有選自rs362307之SNP。在一些實施例中，個體具有選自rs7685686之SNP。在一些實施例中，個體具有選自rs362268之SNP。在一些實施例中，個體具有選自rs362306之SNP。
在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸具有與包含來自致病對偶基因(突變體)之SNP的序列互補的序列，且該組合物選擇性抑制致病對偶基因表現。在一些實施例中，SNP為rs362307、rs7685686、rs362268、rs2530595、rs362331或rs362306。在一些實施例中，SNP為rs362307、rs7685686、rs362268或rs362306。在一些實施例中，SNP為rs362307。在一些實施例中，SNP為rs7685686。在一些實施例中，SNP為rs362268。在一些實施例中，SNP為rs362306。在一些實施例中，SNP為rs2530595。在一些實施例中，SNP為rs362331。
如一般熟習此項技術者所理解，可使用各種方法監測治療過程。在一些實施例中，突變型HTT(mHTT)可自腦脊髓液評定(Wild等人，Quantification of mutant Huntingtin protein in cerebrospinal fluid from Huntington's disease patients,J Clin Invest.2015；125(5)：1979-86)，且可用於監測治療。在一些實施例中，此方法可用於確定及/或最佳化方案、監測藥效學端點及/或確定投藥劑量及頻率等。
一般熟習此項技術者應理解，所提供之方法適用於含有錯配之任何類似目標。在一些實施例中，錯配介於母本基因與父本基因之間。用於抑制及/或阻斷基因表現(包括對偶基因特異性抑制及/或阻斷基因表現)之其他例示性目標可為與任何疾病相關的任何基因異常， 例如突變。在一些實施例中，一目標或一組目標係選自疾病之遺傳決定子，例如如Xiong等人，The human splicing code reveals new insights into the genetic determinants of disease.Science第347卷第6218期DOI：10.1126/science.1254806中所揭示。在一些實施例中，錯配介於突變體與野生型之間。
在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物及方法用於在疾病中選擇性抑制含突變之寡核苷酸。在一些實施例中，疾病為癌症。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物及方法用於在癌症中選擇性抑制含突變之轉錄物。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物及方法用於抑制KRAS之轉錄物。例示性目標KRAS位點包含G12V=GGU->GUU位置227G->U、G12D=GGU->GAU位置227G->A及G13D=GGC->GAC位置230G->A。
在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物及方法提供對生物體中之轉錄物之對偶基因特異性抑制。在一些實施例中，生物體包含存在兩個或更多個對偶基因之目標基因。舉例而言，個體之正常組織中具有野生型基因，而諸如腫瘤之患病組織中，該相同基因突變。在一些實施例中，本發明提供選擇性抑制一個對偶基因(例如，含突變或SNP之對偶基因)的對掌性受控寡核苷酸組合物及方法。在一些實施例中，本發明提供具有較高功效及/或低毒性及/或如本申請案中所述之其他益處的治療。
在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物包含一種寡核苷酸類型之寡核苷酸。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物包含僅一種寡核苷酸類型之寡核苷酸。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物具有僅一種寡核苷酸類型之寡核苷酸。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物包含兩種或更多種寡核苷酸類型之寡核苷酸。在一些實施例中，使用該 等組合物，所提供之方法可靶向超過一個目標。在一些實施例中，包含兩種或更多種寡核苷酸類型之對掌性受控寡核苷酸組合物靶向兩個或更多個目標。在一些實施例中，包含兩種或更多種寡核苷酸類型之對掌性受控寡核苷酸組合物靶向兩個或更多個錯配。在一些實施例中，單一寡核苷酸類型靶向兩個或更多個目標，例如突變。在一些實施例中，一種寡核苷酸類型之寡核苷酸之目標區域包含兩個或更多個「目標位點」，諸如兩個突變或SNP。
在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物中之寡核苷酸視情況包含經修飾之鹼基或糖。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物不具有任何經修飾之鹼基或糖。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物不具有任何經修飾之鹼基。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物中之寡核苷酸包含經修飾之鹼基及糖。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物中之寡核苷酸包含經修飾之鹼基。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物中之寡核苷酸包含經修飾之糖。用於寡核苷酸之經修飾之鹼基及糖為此項技術中廣泛已知的，包括(但不限於)本發明中所述之彼等經修飾之鹼基及糖。在一些實施例中，經修飾之鹼基為5-mC。在一些實施例中，經修飾之糖為經2'修飾之糖。寡核苷酸糖之適合2'修飾為一般熟習此項技術者廣泛已知的。在一些實施例中，2'修飾包括(但不限於)2'-OR1，其中R1不為氫。在一些實施例中，2'修飾為2'-OR1，其中R1為視情況經取代之C1-6脂族基。在一些實施例中，2'修飾為2'-MOE。在一些實施例中，修飾為2'-鹵素。在一些實施例中，修飾為2'-F。在一些實施例中，經修飾之鹼基或糖可進一步增強對掌性受控寡核苷酸組合物之活性、穩定性及/或選擇性，該對掌性受控寡核苷酸組合物之共同主鏈對掌性中心模式提供出人意料的活性、穩定性及/或選擇性。
在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物不具有任何經修飾之糖。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物不具有任何經2'修飾之糖。在一些實施例中，本發明意外發現，藉由使用對掌性受控寡核苷酸組合物，經修飾之糖將不再為穩定性、活性及/或裂解模式之控制所需。另外，在一些實施例中，本發明意外發現，不含經修飾之糖的寡核苷酸之對掌性受控寡核苷酸組合物就穩定性、活性、裂解模式之轉換及/或控制而言傳遞較佳特性。舉例而言，在一些實施例中，意外發現，不具有經修飾之糖的寡核苷酸之對掌性受控寡核苷酸組合物相比於含經修飾之糖的寡核苷酸之組合物而言，自裂解產物解離快得多且提供顯著增加的轉換。
在一些實施例中，適用於所提供方法的所提供對掌性受控寡核苷酸組合物之寡核苷酸具有如本發明中廣泛所述的結構。在一些實施例中，寡核苷酸具有如所述之翼-核心-翼結構。在一些實施例中，所提供對掌性受控寡核苷酸組合物之共同主鏈對掌性中心模式包含如所述之(Sp)m Rp。在一些實施例中，所提供對掌性受控寡核苷酸組合物之共同主鏈對掌性中心模式包含(Sp)2 Rp。在一些實施例中，所提供對掌性受控寡核苷酸組合物之共同主鏈對掌性中心模式包含如所述之(Sp)m(Rp)n。在一些實施例中，所提供對掌性受控寡核苷酸組合物之共同主鏈對掌性中心模式包含如所述之(Rp)n(Sp)m。在一些實施例中，所提供對掌性受控寡核苷酸組合物之共同主鏈對掌性中心模式包含如所述之Rp(Sp)m。在一些實施例中，所提供對掌性受控寡核苷酸組合物之共同主鏈對掌性中心模式包含Rp(Sp)2。在一些實施例中，所提供對掌性受控寡核苷酸組合物之共同主鏈對掌性中心模式包含如所述之(Sp)m(Rp)n(Sp)t。在一些實施例中，所提供對掌性受控寡核苷酸組合物之共同主鏈對掌性中心模式包含如所述之(Sp)m Rp(Sp)t。在一些實施例中，所提供對掌性受控寡核苷酸組合物之共同主鏈對掌性 中心模式包含如所述之(Sp)t(Rp)n(Sp)m。在一些實施例中，所提供對掌性受控寡核苷酸組合物之共同主鏈對掌性中心模式包含如所述之(Sp)t Rp(Sp)m。在一些實施例中，所提供對掌性受控寡核苷酸組合物之共同主鏈對掌性中心模式包含SpRpSpSp。在一些實施例中，所提供對掌性受控寡核苷酸組合物之共同主鏈對掌性中心模式包含(Sp)2 Rp(Sp)2。在一些實施例中，所提供對掌性受控寡核苷酸組合物之共同主鏈對掌性中心模式包含(Sp)3 Rp(Sp)3。在一些實施例中，所提供對掌性受控寡核苷酸組合物之共同主鏈對掌性中心模式包含(Sp)4 Rp(Sp)4。在一些實施例中，所提供對掌性受控寡核苷酸組合物之共同主鏈對掌性中心模式包含(Sp)t Rp(Sp)5。在一些實施例中，所提供對掌性受控寡核苷酸組合物之共同主鏈對掌性中心模式包含SpRp(Sp)5。在一些實施例中，所提供對掌性受控寡核苷酸組合物之共同主鏈對掌性中心模式包含(Sp)2 Rp(Sp)5。在一些實施例中，所提供對掌性受控寡核苷酸組合物之共同主鏈對掌性中心模式包含(Sp)3 Rp(Sp)5。在一些實施例中，所提供對掌性受控寡核苷酸組合物之共同主鏈對掌性中心模式包含(Sp)4 Rp(Sp)5。在一些實施例中，所提供對掌性受控寡核苷酸組合物之共同主鏈對掌性中心模式包含(Sp)5 Rp(Sp)5。在一些實施例中，共同主鏈對掌性中心模式具有僅一個Rp，且其他核苷酸間鍵聯各自為Sp。在一些實施例中，共同鹼基長度大於10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、32、35、40、45或50，如本發明中所述。在一些實施例中，共同鹼基長度大於10。在一些實施例中，共同鹼基長度大於11。在一些實施例中，共同鹼基長度大於12。在一些實施例中，共同鹼基長度大於13。在一些實施例中，共同鹼基長度大於14。在一些實施例中，共同鹼基長度大於15。在一些實施例中，共同鹼基長度大於16。在一些實施例中，共同鹼基長度大於17。在一 些實施例中，共同鹼基長度大於18。在一些實施例中，共同鹼基長度大於19。在一些實施例中，共同鹼基長度大於20。在一些實施例中，共同鹼基長度大於21。在一些實施例中，共同鹼基長度大於22。在一些實施例中，共同鹼基長度大於23。在一些實施例中，共同鹼基長度大於24。在一些實施例中，共同鹼基長度大於25。在一些實施例中，共同鹼基長度大於26。在一些實施例中，共同鹼基長度大於27。在一些實施例中，共同鹼基長度大於28。在一些實施例中，共同鹼基長度大於29。在一些實施例中，共同鹼基長度大於30。在一些實施例中，共同鹼基長度大於31。在一些實施例中，共同鹼基長度大於32。在一些實施例中，共同鹼基長度大於33。在一些實施例中，共同鹼基長度大於34。在一些實施例中，共同鹼基長度大於35。
在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物提供較高的轉換。在一些實施例中，來自核酸聚合物之裂解產物自所提供對掌性受控寡核苷酸組合物之寡核苷酸的解離速率快於自參考寡核苷酸組合物之寡核苷酸，例如不控制對掌性之寡核苷酸組合物。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物可以較低單位劑量、及/或總劑量、及/或比不控制對掌性之寡核苷酸組合物少之劑量投與。
在一些實施例中，當相比於參考寡核苷酸組合物時，對掌性受控寡核苷酸組合物在核酸聚合物之與其共同鹼基序列或其共同鹼基序列內之序列互補的序列中提供較少裂解位點。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物在核酸聚合物之與其共同鹼基序列互補的序列中提供較少裂解位點。在一些實施例中，在與對掌性受控寡核苷酸組合物之共同鹼基序列或共同鹼基序列內之序列互補的序列內的單一位點選擇性裂解核酸聚合物。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物在與對掌性受控寡核苷酸組合物之共同鹼基序列或共同鹼基序列內之序列互補的序列內的裂解位點提供較高的裂解百分比。在一些實 施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物在與對掌性受控寡核苷酸組合物之共同鹼基序列互補的序列內之裂解位點提供較高裂解百分比。在一些實施例中，具有較高裂解百分比之位點為當使用參考寡核苷酸組合物時之裂解位點。在一些實施例中，具有較高裂解百分比之位點為當使用參考寡核苷酸組合物時不存在的裂解位點。
意外發現，隨著互補序列中之裂解位點數目減少，裂解速率可出乎意料地增加及/或可達成較高裂解百分比。如本發明之實例中所說明，所提供之在目標核酸聚合物之互補序列內產生較少裂解位點的對掌性受控寡核苷酸組合物、尤其提供單一位點裂解的對掌性受控寡核苷酸組合物提供極高的裂解速率及極低含量之剩餘未裂解核酸聚合物。該等結果與此項技術中之一般教示內容形成鮮明對比，在此項技術中之一般教示內容中，為增加裂解速率，一直在追求更多裂解位點。
在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物相比於參考寡核苷酸組合物而言，裂解速率增加1.5倍。在一些實施例中，裂解速率增加至少2倍。在一些實施例中，裂解速率增加至少3倍。在一些實施例中，裂解速率增加至少4倍。在一些實施例中，裂解速率增加至少5倍。在一些實施例中，裂解速率增加至少6倍。在一些實施例中，裂解速率增加至少7倍。在一些實施例中，裂解速率增加至少8倍。在一些實施例中，裂解速率增加至少9倍。在一些實施例中，裂解速率增加至少10倍。在一些實施例中，裂解速率增加至少11倍。在一些實施例中，裂解速率增加至少12倍。在一些實施例中，裂解速率增加至少13倍。在一些實施例中，裂解速率增加至少14倍。在一些實施例中，裂解速率增加至少15倍。在一些實施例中，裂解速率增加至少20倍。在一些實施例中，裂解速率增加至少30倍。在一些實施例中，裂解速率增加至少40倍。在一些實施例中，裂解速率增加至少50倍。在一些 實施例中，裂解速率增加至少60倍。在一些實施例中，裂解速率增加至少70倍。在一些實施例中，裂解速率增加至少80倍。在一些實施例中，裂解速率增加至少90倍。在一些實施例中，裂解速率增加至少100倍。在一些實施例中，裂解速率增加至少200倍。在一些實施例中，裂解速率增加至少300倍。在一些實施例中，裂解速率增加至少400倍。在一些實施例中，裂解速率增加至少500倍。在一些實施例中，裂解速率增加至少超過500倍。
在一些實施例中，相比於參考寡核苷酸組合物而言，對掌性受控寡核苷酸組合物提供較低含量之剩餘未裂解的目標核酸聚合物。在一些實施例中，少1.5倍。在一些實施例中，少至少2倍。在一些實施例中，少至少3倍。在一些實施例中，少至少4倍。在一些實施例中，少至少5倍。在一些實施例中，少至少6倍。在一些實施例中，少至少7倍。在一些實施例中，少至少8倍。在一些實施例中，少至少9倍。在一些實施例中，少至少10倍。在一些實施例中，少至少11倍。在一些實施例中，少至少12倍。在一些實施例中，少至少13倍。在一些實施例中，少至少14倍。在一些實施例中，少至少15倍。在一些實施例中，少至少20倍。在一些實施例中，少至少30倍。在一些實施例中，少至少40倍。在一些實施例中，少至少50倍。在一些實施例中，少至少60倍。在一些實施例中，少至少70倍。在一些實施例中，少至少80倍。在一些實施例中，少至少90倍。在一些實施例中，少至少100倍。在一些實施例中，少至少200倍。在一些實施例中，少至少300倍。在一些實施例中，少至少400倍。在一些實施例中，少至少500倍。在一些實施例中，少至少1000倍。
如本文中詳細論述，本發明尤其提供一種對掌性受控寡核苷酸組合物，意謂該組合物含有複數個至少一種類型之寡核苷酸。各特定「類型」之寡核苷酸分子包含在以下方面經過預先選擇(例如，預定) 之結構要素：(1)鹼基序列；(2)主鏈鍵聯模式；(3)主鏈對掌性中心模式；及(4)主鏈P修飾部分之模式。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸組合物含有在單一合成製程中製備的寡核苷酸。在一些實施例中，所提供組合物含有在單一寡核苷酸分子內具有超過一種對掌性組態的寡核苷酸(例如，其中沿著寡核苷酸之不同殘基具有不同立體化學)；在一些此類實施例中，該等寡核苷酸可在單一合成製程中獲得，不需要二級結合步驟來產生含超過一種對掌性組態之個別寡核苷酸分子。
如本文所提供之寡核苷酸組合物可用作用於調整多種細胞過程及機器之試劑，該等細胞過程及機器包括(但不限於)轉錄、轉譯、免疫反應、後生學等。此外，如本文所提供之寡核苷酸組合物可用作用於研究及/或診斷目的之試劑。一般技術者將容易想到，本文中之本發明揭示內容不限於特定用途，而是適用於需要使用合成寡核苷酸之任何情況。所提供組合物尤其適用於各種治療、診斷、農業及/或研究應用。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸組合物包含包括一或多個如本文中詳細描述之結構修飾的寡核苷酸及/或其殘基。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸組合物包含含有一或多個核酸類似物之寡核苷酸。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸組合物包含含有一或多個人工核酸或殘基(例如，核苷酸類似物)之寡核苷酸，包括(但不限於)：肽核酸(PNA)、鎖核酸(LNA)、N-嗎啉基、蘇糖核酸(TNA)、二醇核酸(GNA)、阿拉伯糖核酸(ANA)、2'-氟阿拉伯糖核酸(FANA)、環己烯核酸(CeNA)、無水己糖醇核酸(HNA)及/或解鎖核酸(UNA)、蘇糖核酸(TNA)及/或異種核酸(ZNA)及其任何組合。
在任一實施例中，本發明適用於基因表現、免疫反應等之基於寡核苷酸的調節。因此，含有預定類型寡核苷酸(亦即，其為對掌性受控的，且視情況為對掌性純)的本發明立體限定的寡核苷酸組合物 可代替習知立體無規或對掌性不純的對應物使用。在一些實施例中，所提供組合物顯示所要作用增強及/或不當副作用減少。本發明之生物及臨床/治療應用之某些實施例明確論述於下文中。
可採用各種給藥方案來投與所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物。在一些實施例中，間隔一定時間段投與多個單位劑量。在一些實施例中，指定組合物具有推薦的給藥方案，其可涉及一或多個劑量。在一些實施例中，給藥方案包含複數個劑量，其各自彼此相隔相同長度的時間段；在一些實施例中，給藥方案包含複數個劑量及至少兩個用於隔開個別劑量之不同時間段。在一些實施例中，給藥方案內之所有劑量具有相同單位劑量的量。在一些實施例中，給藥方案內之不同劑量具有不同的量。在一些實施例中，給藥方案包含以第一給藥量第一次給藥，繼之以再一或多次以不同於第一給藥量之第二給藥量給藥。在一些實施例中，給藥方案包含以第一給藥量第一次給藥，繼之以再一或多次與第一次給藥(或另一先前給藥)量相同或不同的第二(或後續)給藥量給藥。在一些實施例中，給藥方案包含投與至少一個單位劑量持續至少一天。在一些實施例中，給藥方案包含在至少一天且有時超過一天之時間段內投與超過一個劑量。在一些實施例中，給藥方案包含在至少一週之時間段內投與多個劑量。在一些實施例中，時間段為至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、2324、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40或更多(例如，約45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100或更多)週。在一些實施例中，給藥方案包含每週投與一個劑量，持續超過一週。在一些實施例中，給藥方案包含每週投與一個劑量，持續2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23 24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、 37、38、39、40或更多(例如，約45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100或更多)週。在一些實施例中，給藥方案包含每兩週投與一個劑量，持續超過兩週時間。在一些實施例中，給藥方案包含每兩週投與一個劑量，持續2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23 24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40或更多(例如，約45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100或更多)週之時間段。在一些實施例中，給藥方案包含每個月投與一個劑量，持續一個月。在一些實施例中，給藥方案包含每個月投與一個劑量，持續超過一個月。在一些實施例中，給藥方案包含每個月投與一個劑量，持續2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或更多個月。在一些實施例中，給藥方案包含每週投與一個劑量，持續約10週。在一些實施例中，給藥方案包含每週投與一個劑量，持續約20週。在一些實施例中，給藥方案包含每週投與一個劑量，持續約30週。在一些實施例中，給藥方案包含每週投與一個劑量，持續26週。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物根據給藥方案投與，該給藥方案不同於相同序列之不控制對掌性(例如，立體無規)的寡核苷酸組合物及/或相同序列之不同對掌性受控寡核苷酸組合物所採用的給藥方案。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物根據給藥方案投與，該給藥方案如與相同序列之不控制對掌性(例如，立體無規)的寡核苷酸組合物進行比較時在以下方面有所降低：其在指定的單位時間內達成較低程度之總暴露，涉及一或多個較低單位劑量，及/或在指定單位時間內包括較少量之劑量。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物根據給藥方案投與，該給藥方案持續之時間段比相同序列之不控制對掌性(例如，立體無規)的寡核苷酸組合物長。不希望受理論限制，申請人指出，在一些實施例中，較短的給藥方案及/或各劑量之間較長 的時間段可歸因於對掌性受控寡核苷酸組合物之改良的穩定性、生物可用率及/或功效。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物之給藥方案比相應不控制對掌性的寡核苷酸組合物長。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物在至少兩個劑量之間的時間段比相應不控制對掌性的寡核苷酸組合物短。不希望受理論限制，申請人指出，在一些實施例中，較長給藥方案及/或各劑量之間的較短時間段可歸因於對掌性受控寡核苷酸組合物之改良的安全性。
依照應用所適合的要求，單一劑量可含有各種量之一種類型的對掌性受控寡核苷酸。在一些實施例中，單一劑量含有約1、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300或更多(例如，約350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000或更多)mg之一種類型的對掌性受控寡核苷酸。在一些實施例中，單一劑量含有約1mg一種類型的對掌性受控寡核苷酸。在一些實施例中，單一劑量含有約5mg一種類型的對掌性受控寡核苷酸。在一些實施例中，單一劑量含有約10mg一種類型的對掌性受控寡核苷酸。在一些實施例中，單一劑量含有約15mg一種類型的對掌性受控寡核苷酸。在一些實施例中，單一劑量含有約20mg一種類型的對掌性受控寡核苷酸。在一些實施例中，單一劑量含有約50mg一種類型的對掌性受控寡核苷酸。在一些實施例中，單一劑量含有約100mg一種類型的對掌性受控寡核苷酸。在一些實施例中，單一劑量含有約150mg一種類型的對掌性受控寡核苷酸。在一些實施例中，單一劑量含有約200mg一種類型的對掌性受控寡核苷酸。在一些實施例中，單一劑量含有約250mg一種類型的對掌性受控寡核苷酸。在一些實施例中，單一劑量含有約300mg一種類型的對掌性受控寡核苷酸。在一些實施例中，對掌性受控寡核 苷酸在單一劑量及/或總劑量中按比不控制對掌性之寡核苷酸低的量投與。在一些實施例中，歸因於改良的功效，對掌性受控寡核苷酸在單一劑量及/或總劑量中按比不控制對掌性之寡核苷酸低的量投與。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸在單一劑量及/或總劑量中按比不控制對掌性之寡核苷酸高的量投與。在一些實施例中，歸因於改良的安全性，對掌性受控寡核苷酸在單一劑量及/或總劑量中按比不控制對掌性之寡核苷酸高的量投與。
生物學活性寡核苷酸
如本文所用之所提供寡核苷酸組合物可包含單股及/或多股寡核苷酸。在一些實施例中，單股寡核苷酸含有自身互補部分，其可在相關條件下雜交，使得如所用之即使單股寡核苷酸亦可至少部分地具有雙股特徵。在一些實施例中，所提供組合物中所包括之寡核苷酸為單股、雙股或三股。在一些實施例中，所提供組合物中所包括之寡核苷酸在寡核苷酸內包含單股部分及多股部分。在一些實施例中，如上文所指出，個別單股寡核苷酸可具有雙股區及單股區。
在一些實施例中，所提供組合物包括一或多個與以下之股完全或部分互補的寡核苷酸：結構基因、基因控制及/或終止區及/或諸如病毒或質體DNA之自我複製系統。在一些實施例中，所提供組合物包括一或多個寡核苷酸，其為或充當siRNA或其他RNA干擾試劑(RNAi劑或iRNA劑)、shRNA、反義寡核苷酸、自行裂解RNA、核糖核酸酶、其片段及/或其變異體(諸如肽基轉移酶23S rRNA、核糖核酸酶P、I類及II類內含子、GIR1分枝核糖核酸酶、先導酶(Leadzyme)、髮夾核糖核酸酶、錘頭狀核糖核酸酶、HDV核糖核酸酶、哺乳動物CPEB3核糖核酸酶、VS核糖核酸酶、glmS核糖核酸酶、CoTC核糖核酸酶等)、微小RNA、微小RNA模擬物、超級miR、適體、抗miR、拮抗miR、Ul接附蛋白、形成三螺旋體之寡核苷酸、RNA活化劑、長非 編碼RNA、短非編碼RNA(例如，piRNA)、免疫調節性寡核苷酸(諸如免疫刺激性寡核苷酸、免疫抑制性寡核苷酸)、GNA、LNA、ENA、PNA、TNA、HNA、TNA、XNA、HeNA、CeNA、嗎啉核酸、G-四螺旋體(RNA及DNA)、抗病毒寡核苷酸及誘騙性寡核苷酸。
在一些實施例中，所提供組合物包括一或多個混合(例如，嵌合)寡核苷酸。在本發明之情況下，術語「混合」廣泛地指寡核苷酸之混合結構組分。混合寡核苷酸可指例如(1)具有混合種類之核苷酸的寡核苷酸分子，例如在單一分子內含部分DNA及部分RNA(例如，DNA-RNA)；(2)數對互補的不同種類之核酸，使得發生分子內或分子間或分子內及分子間DNA：RNA鹼基配對；(3)含兩種或更多種主鏈或核苷酸間鍵聯的寡核苷酸。
在一些實施例中，所提供組合物包括一或多個在單一分子內包含超過一類核酸殘基的寡核苷酸。舉例而言，在本文中描述之任一實施例中，寡核苷酸可包含DNA部分及RNA部分。在一些實施例中，寡核苷酸可包含未經修飾之部分及經修飾之部分。
所提供之寡核苷酸組合物可包括含有各種修飾中之任一者的寡核苷酸，例如如本文所述。在一些實施例中，舉例而言，根據既定使用選擇特定修飾。在一些實施例中，需要修飾雙股寡核苷酸(或單股寡核苷酸之雙股部分)之一股或兩股。在一些實施例中，兩股(或部分)包括不同修飾。在一些實施例中，兩股包括相同修飾。熟習此項技術者應瞭解，藉由本發明方法實現之修飾程度及類型允許發生多次修飾置換。該等修飾之實例描述於本文中且不意欲為限制性的。
如本文所用之片語「反義股」係指與感興趣目標序列基本上或100%互補的寡核苷酸。片語「反義股」包括兩個寡核苷酸中由兩個單獨股形成的反義區以及能夠形成髮夾或啞鈴型結構的單分子寡核苷酸。術語「反義股」及「引導股(guide strand)」在本文中可互換地使 用。
片語「有義股」係指與諸如信使RNA或DNA序列之目標序列具有完全或部分相同的核苷序列的寡核苷酸。術語「有義股」及「隨從股(passenger strand)」在本文中可互換地使用。
「目標序列」意指任何有待調節表現或活性之核酸序列。目標核酸可為DNA或RNA，諸如內源性DNA或RNA、病毒DNA或病毒RNA、或由基因、病毒、細菌、真菌、哺乳動物或植物編碼的其他RNA。在一些實施例中，目標序列與疾病或病症相關。在一些實施例中，目標序列為或包含亨廷頓基因之一部分。在一些實施例中，目標序列為或包含含有SNP之亨廷頓基因之一部分。
「可特異性雜交」及「互補」意指，核酸可藉由傳統的瓦生-克立克(Watson-Crick)或其他非傳統類型與另一核酸序列形成氫鍵。關於本發明之核分子，核酸分子與其互補序列之結合自由能足以允許核酸之相關功能繼續下去，例如RNAi活性。核酸分子之結合自由能之測定為此項技術中熟知的(參見例如Turner等人，1987,CSH Symp.Quant.Biol.LIT第123-133頁；Frier等人，1986,Proc.Nat.Acad.Sci USA83：9373-9377；Turner等人，1987,/.Ain.Chem.Soc.109：3783-3785)。
互補百分比表示核酸分子中可與第二核酸序列形成氫鍵(例如，瓦生-克立克鹼基配對)之相鄰殘基的百分比(例如，10中有5、6、7、8、9、10為50%、60%、70%、80%、90%及100%互補)。「完美互補」或100%互補意謂核酸序列之所有相鄰殘基皆將與第二核酸序列中相同數目之相鄰殘基形成氫鍵。次完美互補係指兩股之一些但並非所有核苷單元可彼此形成氫鍵的情況。「基本上互補」係指聚核苷酸股展現90%或更高的互補性，不包括聚核苷酸股中針對非互補所選擇之區域(諸如懸垂物)。特異性結合要求足夠程度之互補性以避免寡聚化合 物與非目標序列在適宜特異性結合的條件下非特異性結合，例如在活體內分析或治療性治療之情況下為在生理條件下，或在活體外分析之情況下為在執行該等分析之條件下。在一些實施例中，非目標序列與相應目標序列相差至少5個核苷酸。
當用作療法時，以醫藥組合物形式投與所提供之寡核苷酸。在一些實施例中，醫藥組合物包含治療有效量之所提供之寡核苷酸或其藥學上可接受之鹽，及至少一種醫藥學上可接受之非活性成分，選自醫藥學上可接受之稀釋劑、醫藥學上可接受之賦形劑及醫藥學上可接受之載劑。在另一實施例中，醫藥組合物經調配用於靜脈內注射、經口投與、經頰投與、吸入、經鼻投與、局部投與、經眼投與、鞘內投與或經耳投與。在另一實施例中，醫藥組合物經調配用於靜脈內注射、經口投與、經頰投與、吸入、經鼻投與、局部投與、經眼投與或經耳投與。在其他實施例中，醫藥組合物為錠劑、丸劑、膠囊、液體、吸入劑、鼻用噴霧溶液、栓劑、懸浮液、凝膠、膠質、分散液、懸浮液、溶液、乳液、軟膏、洗劑、滴眼劑、滴耳劑、或包含人工腦脊髓液之製劑。在其他實施例中，醫藥組合物為錠劑、丸劑、膠囊、液體、吸入劑、鼻用噴霧溶液、栓劑、懸浮液、凝膠、膠質、分散液、懸浮液、溶液、乳液、軟膏、洗劑、滴眼劑或滴耳劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含腦脊髓液。在一些實施例中，醫藥組合物包含人工腦脊髓液。在一些實施例中，醫藥組合物包含寡核苷酸，其中寡核苷酸之序列包含靶向亨廷頓基因之一部分的序列。在一些實施例中，該序列靶向包含SNP之亨廷頓基因之一部分。在一些實施例中，寡核苷酸之鹼基序列、主鏈鍵聯模式、主鏈對掌性中心模式及/或糖修飾模式為或包含本文中所揭示之任何寡核苷酸之鹼基序列、主鏈鍵聯模式、主鏈對掌性中心模式及/或糖修飾模式，且寡核苷酸包含於包含本文中所揭示之醫藥組合物之任何組分的醫藥組合物中。在一些 實施例中，寡核苷酸靶向亨廷頓基因(舉一非限制性實例，亨廷頓基因中之SNP)，且寡核苷酸之鹼基序列、主鏈鍵聯模式、主鏈對掌性中心模式及/或糖修飾模式為或包含本文中所揭示之任何寡核苷酸之鹼基序列、主鏈鍵聯模式、主鏈對掌性中心模式及/或糖修飾模式，且寡核苷酸包含於包含入工腦脊髓液之醫藥組合物中，且醫藥組合物經由鞘內投藥投與。
藥物組合物
當用作療法時，本文中所述之所提供之寡核苷酸或寡核苷酸組合物以醫藥組合物形式投與。在一些實施例中，醫藥組合物包含治療有效量之所提供之寡核苷酸或其藥學上可接受之鹽，及至少一種醫藥學上可接受之非活性成分，其選自醫藥學上可接受之稀釋劑、醫藥學上可接受之賦形劑及醫藥學上可接受之載劑。在一些實施例中，醫藥組合物經調配用於靜脈內注射、經口投與、經頰投與、吸入、經鼻投與、局部投與、經眼投與、鞘內投與或經耳投與。在一些實施例中，醫藥組合物經調配用於靜脈內注射、經口投與、經頰投與、吸入、經鼻投與、局部投與、經眼投與或經耳投與。在一些實施例中，醫藥組合物為錠劑、丸劑、膠囊、液體、吸入劑、鼻用噴霧溶液、栓劑、懸浮液、凝膠、膠質、分散液、懸浮液、溶液、乳液、軟膏、洗劑、滴眼劑、滴耳劑、或包含人工腦脊髓液之製劑。在一些實施例中，醫藥組合物為錠劑、丸劑、膠囊、液體、吸入劑、鼻用噴霧溶液、栓劑、懸浮液、凝膠、膠質、分散液、懸浮液、溶液、乳液、軟膏、洗劑、滴眼劑或滴耳劑。在一些實施例中，所提供之組合物包含腦脊髓液。在一些實施例中，所提供之組合物包含人工腦脊髓液。
在一些實施例中，本發明提供一種醫藥組合物，其包含對掌性受控寡核苷酸或其組合物，與醫藥學上可接受之賦形劑混合。熟習此項技術者將認識到，醫藥組合物包括對掌性受控寡核苷酸之醫藥學上 可接受之鹽或其組合物，如上所述。
可使用各種超分子奈米載劑來傳遞核酸。例示性奈米載劑包括(但不限於)脂質體、陽離子聚合物複合物及各種聚合物。核酸與各種聚陽離子複合為細胞內傳遞之另一方法；此方法包括使用聚乙二醇化聚陽離子、聚乙烯胺(PEI)複合物、陽離子嵌段共聚物及樹狀體。包括PEI及聚醯胺基胺樹狀體之若干陽離子奈米載劑有助於自內體釋放內容物。其他方法包括使用聚合物奈米粒子、聚合物微胞、量子點及脂複合體。
除本文中所述之例示性傳遞策略之外，亦已知其他核酸傳遞策略。
在治療及/或診斷應用中，本發明化合物可經調配用於各種投藥模式，包括全身性及局部或區域化投藥。技術及調配物一般可見於Remington,The Science and Practice of Pharmacy,(第20版2000)中。
所提供之寡核苷酸及其組合物在寬劑量範圍內有效。舉例而言，在治療成年人時，每天約0.01至約1000mg、約0.5至約100mg、約1至約50mg及每天約5至約100mg之劑量為可用劑量之實例。精確劑量將視投藥途徑、化合物之投藥形式、待治療之個體、待治療個體之體重及主治醫師之偏好及經歷而定。
醫藥學上可接受之鹽通常為一般技術者熟知的，且可包括例如(但不限於)乙酸鹽、苯磺酸鹽(benzenesulfonate/besylate)、苯甲酸鹽、碳酸氫鹽、酒石酸氫鹽、溴化物、乙二胺四乙酸鈣、樟腦磺酸鹽(carnsylate)、碳酸鹽、檸檬酸鹽、乙二胺四乙酸鹽、乙二磺酸鹽(edisylate)、衣托酸鹽(estolate)、乙磺酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡庚糖酸鹽(gluceptate)、葡糖酸鹽、麩胺酸鹽、乙內醯胺苯胂酸鹽、己基間苯二酚酸鹽(hexylresorcinate)、海卓胺(hydrabamine)、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、羥基萘甲酸鹽、碘化物、羥乙基磺酸鹽(isethionate)、乳酸 鹽、乳糖酸鹽、蘋果酸鹽、順丁烯二酸鹽、杏仁酸鹽、甲磺酸鹽、黏液酸鹽(mucate)、萘磺酸鹽、硝酸鹽、雙羥萘酸鹽(恩波酸鹽(embonate))、泛酸鹽、磷酸鹽/二磷酸鹽、聚半乳糖醛酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、鹼式乙酸鹽、丁二酸鹽、硫酸鹽、丹寧酸鹽(tannate)、酒石酸鹽或茶氯酸鹽(teoclate)。其他醫藥學上可接受之鹽可見於例如Remington,The Science and Practice of Pharmacy(第20版2000)中。較佳醫藥學上可接受之鹽包括例如乙酸鹽、苯甲酸鹽、溴化物、碳酸鹽、檸檬酸鹽、葡糖酸鹽、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、順丁烯二酸鹽、甲磺酸鹽、萘磺酸鹽、雙羥萘酸鹽(恩波酸鹽)、磷酸鹽、水楊酸鹽、丁二酸鹽、硫酸鹽或酒石酸鹽。
視待治療之具體病狀而定，該等試劑可調配成液體或固體劑型且全身性地或局部投與。該等試劑可例如以如熟習此項技術者已知的定時釋放或持續低釋放形式傳遞。調配及投藥技術可見於Remington,The Science and Practice of Pharmacy(第20版2000)中。適合途徑可包括經口、經頰、藉由吸入噴霧、舌下、經直腸、經皮、經陰道、經黏膜、經鼻或經腸投與；非經腸傳遞，包括肌肉內、皮下、髓內注射以及鞘內、直接室內、靜脈內、關節內、胸骨內、滑膜內、肝臟內、病灶內、顱內、腹膜內、鼻內或眼內注射或其他傳遞模式。
在本發明方法或組合物之一些實施例中，包含寡核苷酸之組合物經由鞘內投藥投與。在本發明方法或組合物之一些實施例中，包含寡核苷酸之組合物包含人工腦脊髓液且經由鞘內投藥投與。在本發明方法或組合物之一些實施例中，包含寡核苷酸之組合物包含人工腦脊髓液之一或多種組分(例如NaCl、NaHCO3、KCl、NaH2PO4、MgCl2及葡萄糖)且經由鞘內投藥投與。在本發明方法或組合物之一些實施例中，包含寡核苷酸之組合物包含人工腦脊髓液之一或多種組分(例如NaCl、NaHCO3、KCl、NaH2PO4、MgCl2及葡萄糖)且經由鞘內投藥投 與，其中寡核苷酸之序列包含靶向亨廷頓基因之一部分的序列。在本發明方法或組合物之一些實施例中，包含寡核苷酸之組合物包含人工腦脊髓液之兩種或更多種組分(例如NaCl、NaHCO3、KCl、NaH2PO4、MgCl2及葡萄糖)且經由鞘內投藥投與，其中寡核苷酸之序列包含靶向亨廷頓基因之一部分的序列。在本發明方法或組合物之一些實施例中，包含寡核苷酸之組合物包含人工腦脊髓液之三種或更多種組分(例如NaCl、NaHCO3、KCl、NaH2PO4、MgCl2及葡萄糖)且經由鞘內投藥投與，其中寡核苷酸之序列包含靶向亨廷頓基因之一部分的序列。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含本文中所揭示之任何寡核苷酸之鹼基序列、主鏈鍵聯模式、主鏈對掌性中心模式及/或化學修飾(例如，鹼基修飾、糖修飾等)之模式。在一些實施例中，該序列靶向包含SNP之亨廷頓基因的一部分。
為進行注射，本發明之藥劑可於水溶液，諸如於生理學上相容之緩衝液(諸如漢克氏溶液(Hank's solution)、林格氏溶液(Ringer's solution)或生理食鹽水緩衝液)中調配及稀釋。對於此類經黏膜投與，在調配物中使用適於待滲透之屏障的滲透劑。此類滲透劑一般為此項技術中已知。
關於將本發明實踐為適合於全身性投藥之劑量，使用醫藥學上可接受之惰性載劑調配本文中所揭示之化合物在本發明之範疇內。藉由恰當選擇載劑及適合製造規範，本發明組合物、尤其是以溶液形式調配之彼等組合物可非經腸投與，諸如藉由靜脈內注射投與。
化合物可使用此項技術中熟知的醫藥學上可接受之載劑容易調配成適合經口投與的劑量。此類載劑可使得本發明化合物能調配成用於由待治療之個體(例如，患者)口服攝取之錠劑、丸劑、膠囊、液體、凝膠、糖漿、漿液、懸浮液及其類似者。
關於經鼻或吸入傳遞，本發明藥劑亦可藉由熟習此項技術者已 知之方法調配，且可包括例如(但不限於)溶解、稀釋或分散諸如生理食鹽水、防腐劑(諸如苯甲醇)、吸收促進劑及氟碳化物之物質的實例。
在某些實施例中，寡核苷酸及組合物傳遞至CNS。在某些實施例中，寡核苷酸及組合物傳遞至腦脊髓液。在某些實施例中，寡核苷酸及組合物投與至腦實質。在某些實施例中，寡核苷酸及組合物藉由鞘內投與或腦室內投與傳遞至動物/個體。本文所述之寡核苷酸及組合物在中樞神經系統內之廣泛分佈可藉由腦實質內投與、鞘內投與或腦室內投與達成。
在某些實施例中，非經腸投與係藉由注射，例如藉由注射器、泵等。在某些實施例中，注射為快速注射。在某些實施例中，注射係直接投與至組織，諸如紋狀體、尾狀體、皮質、海馬區及小腦。
在某些實施例中，特異性定位醫藥劑之方法(諸如藉由快速注射)使中值有效濃度(EC50)降低20、25、30、35、40、45或50倍。在某些實施例中，醫藥劑為如本文中進一步描述之反義化合物。在某些實施例中，目標組織為腦組織。在某些實施例中，目標組織為紋狀體組織。在某些實施例中，減小EC50為合乎需要的，因為其降低了在有需要之患者中達成藥理學結果所需的劑量。
在某些實施例中，反義寡核苷酸藉由注射或輸注傳遞，每個月、每兩個月、每90天、每3個月、每6個月一次；一年兩次或年一次。
適用於本發明之醫藥組合物包括如下組合物，其中含有有效量之活性成分以達成其預期目的。有效量的確定完全在熟習此項技術者的能力範圍內(尤其根據本文提供的詳細揭示內容)。
除活性成分之外，此等醫藥組合物可含有適合的醫藥學上可接受之載劑，包含賦形劑及助劑，其有助於將活性化合物處理成可在藥 學上使用之製劑。經調配用於經口投與之製劑可呈錠劑、糖衣藥丸、膠囊或溶液形式。
經口使用之醫藥製劑可藉由組合活性化合物與固體賦形劑，視情況研磨所得混合物且必要時在添加適合助劑之後加工顆粒之混合物以得到錠劑或糖衣藥丸核心來獲得。適合賦形劑尤其為填充劑，諸如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇或山梨糖醇；纖維素製劑，例如玉米澱粉、小麥澱粉、大米澱粉、馬鈴薯澱粉、明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉(CMC)及/或聚乙烯吡咯啶酮(PVP：普維酮(povidone))。若需要，則可添加崩解劑，諸如交聯聚乙烯吡咯啶酮、瓊脂或海藻酸或其鹽，諸如海藻酸鈉。
糖衣藥丸核心具有適合包衣。出於此目的，可使用濃縮糖溶液，其可視情況含有阿拉伯膠、滑石、聚乙烯吡咯啶酮、卡波普凝膠(carbopol gel)、聚乙二醇(PEG)及/或二氧化鈦、漆液及適合有機溶劑或溶劑混合物。可向錠劑或糖衣藥丸包衣中添加染料或顏料以鑑別或表徵活性化合物劑量之不同組合。
可經口使用之醫藥製劑包括由明膠製成之配合插入膠囊以及由明膠及塑化劑(諸如甘油或山梨糖醇)製成之密封軟膠囊。配合插入膠囊可含有活性成分，與諸如乳糖之填充劑、諸如澱粉之黏合劑及/或諸如滑石或硬脂酸鎂之潤滑劑、及視情況選用之穩定劑混合。在軟膠囊中，活性化合物可溶解或懸浮於諸如脂肪油、液體石蠟或液體聚乙二醇(PEG)之適合液體中。此外，可添加穩定劑。
視待治療或預防之特定病狀或疾病病況而定，可與本發明寡核苷酸一起投與其他治療劑，其通常為治療或預防彼病狀而投與。舉例而言，化學治療劑或其他抗增生劑可與本發明寡核苷酸組合以治療增生性疾病及癌症。已知化學治療劑之實例包括(但不限於)阿德力黴素(adriamycin)、地塞米松(dexamethasone)、長春新鹼(vincristine)、環 磷醯胺(cyclophosphamide)、氟尿嘧啶、拓朴替康(topotecan)、紫杉醇、干擾素及鉑衍生物。
本發明之此等及其他實施例之功能及優勢將自下文所述之實例得到更充分的瞭解。以下實例意欲說明本發明之益處，但不例示本發明之完整範疇。
脂質
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸組合物進一步包含一或多種脂質。在一些實施例中，脂質結合至組合物中之所提供之寡核苷酸。在一些實施例中，兩種或更多種相同或不同脂質可經由相同或不同化學方式及/或位置結合至一個寡核苷酸。在一些實施例中，組合物可包含本文中所揭示之寡核苷酸(舉非限制性實例而言，對掌性受控寡核苷酸組合物、或寡核苷酸序列包含本文中所揭示之任何寡核苷酸之序列、由該序列組成或為該序列之對掌性受控寡核苷酸組合物、或寡核苷酸序列包含表8或本文中任何其他表中所揭示之任何寡核苷酸之序列、由該序列組成或為該序列之對掌性受控寡核苷酸組合物等)及脂質。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含本文中所揭示之任何寡核苷酸之鹼基序列、主鏈鍵聯模式、主鏈對掌性中心模式及/或化學修飾(例如，鹼基修飾、糖修飾等)之模式，且結合至脂質。在一些實施例中，所提供之組合物包含本文中所揭示之寡核苷酸及脂質，其中脂質結合至寡核苷酸。
在一些實施例中，本發明提供一種組合物，其包含寡核苷酸及脂質。根據本發明，在所提供之技術中可採用多種脂質。
在一些實施例中，脂質包含RLD基團，其中RLD為視情況經取代之C10-C80飽和或部分不飽和脂族基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經選自以下的視情況經取代之基團置換：C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、C1-C6雜脂族部分、-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、- S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)-、-N(R')C(O)O-、-OC(O)N(R')-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-N(R')S(O)2-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(O)-及-C(O)O-，其中：各R'獨立地為-R、-C(O)R、-CO2R或-SO2R，或：兩個R'與其插入原子一起形成視情況經取代之芳基、碳環、雜環或雜芳基環；-Cy-為選自伸碳環基、伸芳基、伸雜芳基及伸雜環基之視情況經取代之二價環；且各R獨立地為氫或選自C1-C6脂族基、苯基、碳環基、芳基、雜芳基或雜環基之視情況經取代之基團。
在一些實施例中，脂質包含RLD基團，其中RLD為視情況經取代之C10-C60飽和或部分不飽和脂族基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經選自以下的視情況經取代之基團置換：C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、C1-C6雜脂族部分、-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)-、-N(R')C(O)O-、-OC(O)N(R')-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-N(R')S(O)2-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(O)-及-C(O)O-，其中：各R'獨立地為-R、-C(O)R、-CO2R或-SO2R，或：兩個R'與其插入原子一起形成視情況經取代之芳基、碳環、雜環或雜芳基環；-Cy-為選自伸碳環基、伸芳基、伸雜芳基及伸雜環基之視情況經取代之二價環；且各R獨立地為氫或選自C1-C6脂族基、苯基、碳環基、芳基、雜芳基或雜環基之視情況經取代之基團。
在一些實施例中，脂質包含RLD基團，其中RLD為視情況經取代之C10-C40飽和或部分不飽和脂族基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經選自以下的視情況經取代之基團置換：C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、C1-C6雜脂族部分、-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)-、-N(R')C(O)O-、-OC(O)N(R')-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-N(R')S(O)2-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(O)-及-C(O)O-，其中：各R'獨立地為-R、-C(O)R、-CO2R或-SO2R，或：兩個R'與其插入原子一起形成視情況經取代之芳基、碳環、雜環或雜芳基環；-Cy-為選自伸碳環基、伸芳基、伸雜芳基及伸雜環基之視情況經取代之二價環；且各R獨立地為氫或選自C1-C6脂族基、苯基、碳環基、芳基、雜芳基或雜環基之視情況經取代之基團。
在一些實施例中，RLD為視情況經取代之C10-C80飽和或部分不飽和脂族基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經選自以下的視情況經取代之基團置換：C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、C1-C6雜脂族部分、-C(R')2-及-Cy-。在一些實施例中，RLD為視情況經取代之C10-C60飽和或部分不飽和脂族基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經選自以下的視情況經取代之基團置換：C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、C1-C6雜脂族部分、-C(R')2-及-Cy-。在一些實施例中，RLD為由碳及氫原子組成之烴基。.在一些實施例中，RLD為視情況經取代之C10-C60飽和或部分不飽和脂族基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經選自以下的視情況經取代之基團置換：C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、C1-C6 雜脂族部分、-C(R')2-及-Cy-。在一些實施例中，RLD為視情況經取代之C10-C60飽和或部分不飽和脂族基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經選自以下的視情況經取代之基團置換：C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、C1-C6雜脂族部分、-C(R')2-及-Cy-。在一些實施例中，RLD為由碳及氫原子組成之烴基。
在一些實施例中，RLD為視情況經取代之C16-C40飽和或部分不飽和脂族基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經選自以下的視情況經取代之基團置換：C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、C1-C6雜脂族部分、-C(R')2-及-Cy-。在一些實施例中，RLD為視情況經取代之C10-C60飽和或部分不飽和脂族基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經選自以下的視情況經取代之基團置換：C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、C1-C6雜脂族部分、-C(R')2-及-Cy-。在一些實施例中，RLD為由碳及氫原子組成之烴基。
RLD之脂族基可為各種適合長度。在一些實施例中，其為C10-C80。在一些實施例中，其為C10-C75。在一些實施例中，其為C10-C70。在一些實施例中，其為C10-C65。在一些實施例中，其為C10-C60。在一些實施例中，其為C10-C50。在一些實施例中，其為C10-C40。在一些實施例中，其為C10-C35。在一些實施例中，其為C10-C30。在一些實施例中，其為C10-C25。在一些實施例中，其為C10-C24。在一些實施例中，其為C10-C23。在一些實施例中，其為C10-C22。在一些實施例中，其為C10-C21。在一些實施例中，其為C12-C22。在一些實施例中，其為C13-C22。在一些實施例中，其為C14-C22。在一些實施例中，其為C15-C22。在一些實施例中，其為C16-C22。在一些實施例中，其為C17-C22。在一些實施例中，其為C18-C22。在一些實施例中，其為C10-C20。在一些實施例中，範圍之下端為C10、C11、C12、C13、C14、C15、C16、C17或C18。在一些實施例中， 範圍之上端為C18、C19、C20、C21、C22、C23、C24、C25、C26、C27、C28、C29、C30、C35、C40、C45、C50、C55或C60。在一些實施例中，其為C10。在一些實施例中，其為C11。在一些實施例中，其為C12。在一些實施例中，其為C13。在一些實施例中，其為C14。在一些實施例中，其為C15。在一些實施例中，其為C16。在一些實施例中，其為C17。在一些實施例中，其為C18。在一些實施例中，其為C19。在一些實施例中，其為C20。在一些實施例中，其為C21。在一些實施例中，其為C22。在一些實施例中，其為C23。在一些實施例中，其為C24。在一些實施例中，其為C25。在一些實施例中，其為C30。在一些實施例中，其為C35。在一些實施例中，其為C40。在一些實施例中，其為C45。在一些實施例中，其為C50。在一些實施例中，其為C55。在一些實施例中，其為C60。
在一些實施例中，脂質包含不超過一個RLD基團。在一些實施例中，脂質包含兩個或更多個RLD基團。
在一些實施例中，脂質結合至生物學上活性劑，視情況經由連接基團，如包含RLD基團之部分。在一些實施例中，脂質結合至生物學上活性劑，視情況經由連接基團，如包含不超過一個RLD基團之部分。在一些實施例中，脂質結合至生物學上活性劑，視情況經由連接基團，如RLD基團。在一些實施例中，脂質結合至生物學上活性劑，視情況經由連接基團，如包含兩個或更多個RLD基團之部分。
在一些實施例中，RLD為視情況經取代之C10-C40飽和或部分不飽和脂鏈。在一些實施例中，脂質包含視情況經取代之C10-C40飽和或部分不飽和脂鏈。
在一些實施例中，RLD為視情況經取代之C10-C40直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。在一些實施例中，脂質包含視情況經取代之C10-C40直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。
在一些實施例中，RLD為C10-C40直鏈飽和或部分不飽和脂鏈，視情況經一或多個C1-4脂族基取代。在一些實施例中，脂質包含C10-C40直鏈飽和或部分不飽和脂鏈，視情況經一或多個C1-4脂族基取代。在一些實施例中，RLD為C10-C40直鏈飽和或部分不飽和脂鏈，視情況經一或多個C1-2脂族基取代。在一些實施例中，脂質包含C10-C40直鏈飽和或部分不飽和脂鏈，視情況經一或多個C1-2脂族基取代。在一些實施例中，RLD為C10-C40直鏈飽和或部分不飽和脂鏈，視情況經一或多個甲基取代。在一些實施例中，脂質包含C10-C40直鏈飽和或部分不飽和脂鏈，視情況經一或多個甲基取代。
在一些實施例中，RLD為未經取代之C10-C40直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。在一些實施例中，脂質包含未經取代之C10-C40直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。
在一些實施例中，脂質包含不超過一個視情況經取代之C10-C40直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。在一些實施例中，脂質包含兩個或更多個視情況經取代之C10-C40直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。
在一些實施例中，RLD為視情況經取代之C10-C60飽和或部分不飽和脂鏈。在一些實施例中，脂質包含視情況經取代之C10-C60飽和或部分不飽和脂鏈。
在一些實施例中，RLD為視情況經取代之C10-C60直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。在一些實施例中，脂質包含視情況經取代之C10-C60直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。
在一些實施例中，RLD為C10-C60直鏈飽和或部分不飽和脂鏈，視情況經一或多個C1-4脂族基取代。在一些實施例中，脂質包含C10-C60直鏈飽和或部分不飽和脂鏈，視情況經一或多個C1-4脂族基取代。在一些實施例中，RLD為C10-C60直鏈飽和或部分不飽和脂鏈，視情況經一或多個C1-2脂族基取代。在一些實施例中，脂質包含C10-C60直鏈飽 和或部分不飽和脂鏈，視情況經一或多個C1-2脂族基取代。在一些實施例中，RLD為C10-C60直鏈飽和或部分不飽和脂鏈，視情況經一或多個甲基取代。在一些實施例中，脂質包含C10-C60直鏈飽和或部分不飽和脂鏈，視情況經一或多個甲基取代。
在一些實施例中，RLD為未經取代之C10-C60直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。在一些實施例中，脂質包含未經取代之C10-C60直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。
在一些實施例中，脂質包含不超過一個視情況經取代之C10-C60直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。在一些實施例中，脂質包含兩個或更多個視情況經取代之C10-C60直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。
在一些實施例中，RLD為視情況經取代之C10-C80飽和或部分不飽和脂鏈。在一些實施例中，脂質包含視情況經取代之C10-C80飽和或部分不飽和脂鏈。
在一些實施例中，RLD為視情況經取代之C10-C80直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。在一些實施例中，脂質包含視情況經取代之C10-C80直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。
在一些實施例中，RLD為C10-C80直鏈飽和或部分不飽和脂鏈，視情況經一或多個C1-4脂族基取代。在一些實施例中，脂質包含C10-C80直鏈飽和或部分不飽和脂鏈，視情況經一或多個C1-4脂族基取代。在一些實施例中，RLD為C10-C80直鏈飽和或部分不飽和脂鏈，視情況經一或多個C1-2脂族基取代。在一些實施例中，脂質包含C10-C80直鏈飽和或部分不飽和脂鏈，視情況經一或多個C1-2脂族基取代。在一些實施例中，RLD為C10-C80直鏈飽和或部分不飽和脂鏈，視情況經一或多個甲基取代。在一些實施例中，脂質包含C10-C80直鏈飽和或部分不飽和脂鏈，視情況經一或多個甲基取代。
在一些實施例中，RLD為未經取代之C10-C80直鏈飽和或部分不飽 和脂鏈。在一些實施例中，脂質包含未經取代之C10-C80直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。
在一些實施例中，脂質包含不超過一個視情況經取代之C10-C80直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。在一些實施例中，脂質包含兩個或更多個視情況經取代之C10-C80直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。
在一些實施例中，RLD為或包含C10飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C10部分不飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C11飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C11部分不飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C12飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C12部分不飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C13飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C13部分不飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C14飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C14部分不飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C15飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C15部分不飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C16飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C16部分不飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C17飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C17部分不飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C18飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C18部分不飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C19飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C19部分不飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C20飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C20部分不飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C21飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C21部分不飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C22飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C22部分不飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為 或包含C23飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C23部分不飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C24飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C24部分不飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C25飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C25部分不飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C26飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C26部分不飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C27飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C27部分不飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C28飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C28部分不飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C29飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C29部分不飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C30飽和直鏈脂鏈。在一些實施例中，RLD為或包含C30部分不飽和直鏈脂鏈。
在一些實施例中，脂質具有RLD-OH之結構。在一些實施例中，脂質具有RLD-C(O)OH之結構。在一些實施例中，RLD為
在一些實施例中，脂質為月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂 酸、油酸、亞麻油酸、α-次亞麻油酸、γ-次亞麻油酸、二十二碳六烯酸(DHA或順-DHA)、喇叭藻酸、花生四烯酸及二亞油基。在一些實施例中，脂質為月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞麻油酸、α-次亞麻油酸、γ-次亞麻油酸、二十二碳六烯酸(DHA或順-DHA)、喇叭藻酸及二亞油基。在一些實施例中，脂質具有以下結構：
在一些實施例中，脂質為以下中之任一者、包含以下中之任一者或由以下中之任一者組成．至少部分地疏水性或兩親媒性分子、磷脂、三酸甘油酯、雙酸甘油脂、單酸甘油酯、脂溶性維生素、固醇、脂肪及蠟。在一些實施例中，脂質為以下中之任一者：脂肪酸、甘油 脂、甘油磷脂、鞘脂、固醇脂質、異戊烯醇脂質、醣脂、聚酮及其他分子。
根據本發明，脂質可經由多種方法併入所提供之技術中。在一些實施例中，脂質與所提供之寡核苷酸物理混合，形成所提供之組合物。在一些實施例中，脂質與寡核苷酸化學結合。
在一些實施例中，所提供組合物包含兩種或更多種脂質。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含兩種或更多種結合脂質。在一些實施例中，兩種或更多種結合脂質相同。在一些實施例中，兩種或更多種結合脂質不同。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含不超過一種脂質。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含不同類型的結合脂質。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含相同類型之脂質。
脂質可視情況經由連接基團結合至寡核苷酸。根據本發明，可採用此項技術中各種類型之連接基團。在一些實施例中，連接基團包含磷酸酯基，其可例如用於經由類似於寡核苷酸合成中所採用之化學方式的化學方式結合脂質。在一些實施例中，連接基團包含醯胺、酯或醚基。在一些實施例中，連接基團具有-L-之結構。在一些實施例中，在結合至寡核苷酸之後，脂質形成具有-L-RLD之結構的部分，其中L及RLD各自獨立地如本文所定義及描述。
在一些實施例中，-L-包含二價脂鏈。在一些實施例中，-L-包含磷酸酯基。在一些實施例中，-L-包含硫代磷酸酯基。在一些實施例中，-L-具有-C(O)NH-(CH2)6-OP(=O)(S-)-之結構。
視情況經由連接基團，脂質可在各種適合位置結合至寡核苷酸。在一些實施例中，脂質經由5'-OH基團結合。在一些實施例中，脂質經由3'-OH基團結合。在一些實施例中，脂質經由一或多個糖部分結合。在一些實施例中，脂質經由一或多個鹼基結合。在一些實施 例中，脂質經由一或多個核苷酸間鍵聯併入。在一些實施例中，寡核苷酸可含有多個結合脂質，其獨立地經由其5'-OH、3'-OH、糖部分、鹼基部分及/或核苷酸間鍵聯結合。
在一些實施例中，脂質視情況經由連接基團部分結合至寡核苷酸。一般熟習此項技術者瞭解，可採用各種技術將脂質結合至根據本發明之寡核苷酸。舉例而言，關於包含羧基之脂質，該等脂質可經由羧基結合。在一些實施例中，脂質經由具有-L-之結構的連接基團結合，其中L如式I中所定義及描述。在一些實施例中，L包含磷酸二酯或經修飾之磷酸二酯部分。在一些實施例中，藉由脂質結合形成之化合物具有(RLD-L-)x-(寡核苷酸)之結構，其中x為1或大於1之整數，且RLD及L各自獨立地如本文所定義及描述。在一些實施例中，x為1。在一些實施例中，x大於1。在一些實施例中，寡核苷酸為寡核苷酸。舉例而言，在一些實施例中，結合物具有以下結構：
在一些實施例中，連接基團係選自：不帶電連接基團；帶電連接基團；包含烷基之連接基團；包含磷酸酯之連接基團；分支鏈連接基團；未分支連接基團；包含至少一個裂解基團之連接基團；包含至少一個氧化還原裂解基團之連接基團；包含至少一個基於磷酸酯之裂解基團之連接基團；包含至少一個酸裂解基團之連接基團；包含至少一個基於酯之裂解基團之連接基團；及包含至少一個基於肽之裂解基團之連接基團。
在一些實施例中，脂質不結合至寡核苷酸。
在一些實施例中，本發明係關於與包含寡核苷酸及脂質之組合 物相關的組合物及方法，該脂質包含C10-C40直鏈飽和或部分不飽和脂鏈，其中脂質結合至生物學上活性劑。在一些實施例中，本發明係關於與包含寡核苷酸及脂質之組合物相關的組合物及方法，該脂質包含C10-C40直鏈飽和或部分不飽和脂鏈，視情況經一或多個C1-4脂族基取代，其中脂質結合至生物學上活性劑。
在一些實施例中，本發明係關於與包含寡核苷酸及脂質之組合物相關的組合物及方法，該脂質包含C10-C40直鏈飽和或部分不飽和脂鏈，其中脂質不結合至生物學上活性劑。在一些實施例中，本發明係關於與包含寡核苷酸及脂質之組合物相關的組合物及方法，該脂質包含C10-C40直鏈飽和或部分不飽和脂鏈，視情況經一或多個C1-4脂族基取代，其中脂質不結合至生物學上活性劑。
在一些實施例中，組合物包含寡核苷酸及脂質，該脂質選自：月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞麻油酸、α-次亞麻油酸、γ-次亞麻油酸、二十二碳六烯酸(順-DHA)、喇叭藻酸、花生四烯酸及二亞油基，其中脂質不結合至生物學上活性劑。在一些實施例中，組合物包含寡核苷酸及脂質，該脂質選自：月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞麻油酸、α-次亞麻油酸、γ-次亞麻油酸、二十二碳六烯酸(順-DHA)、喇叭藻酸及二亞油基，其中脂質不結合至生物學上活性劑。
在一些實施例中，組合物包含寡核苷酸及脂質，該脂質選自：月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞麻油酸、α-次亞麻油酸、γ-次亞麻油酸、二十二碳六烯酸(順-DHA)、喇叭藻酸、花生四烯酸及二亞油基，其中脂質結合至生物學上活性劑。在一些實施例中，組合物包含寡核苷酸及脂質，該脂質選自：月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞麻油酸、α-次亞麻油酸、γ-次亞麻油酸、二十二碳六烯酸(順-DHA)、喇叭藻酸及二亞油基，其中脂質結合至生物 學上活性劑。
在一些實施例中，組合物包含寡核苷酸及脂質，該脂質選自：月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞麻油酸、α-次亞麻油酸、γ-次亞麻油酸、二十二碳六烯酸(順-DHA)、喇叭藻酸、花生四烯酸及二亞油基，其中脂質直接結合至生物學上活性劑(並無連接基團插入於脂質與生物學上活性劑之間)。在一些實施例中，組合物包含寡核苷酸及脂質，該脂質選自：月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞麻油酸、α-次亞麻油酸、γ-次亞麻油酸、二十二碳六烯酸(順-DHA)、喇叭藻酸及二亞油基，其中脂質直接結合至生物學上活性劑(並無連接基團插入於脂質與生物學上活性劑之間)。
在一些實施例中，組合物包含寡核苷酸及脂質，該脂質選自：月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞麻油酸、α-次亞麻油酸、γ-次亞麻油酸、二十二碳六烯酸(順-DHA)、喇叭藻酸、花生四烯酸及二亞油基，其中脂質間接結合至生物學上活性劑(連接基團插入於脂質與生物學上活性劑之間)。在一些實施例中，組合物包含寡核苷酸及脂質，該脂質選自：月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞麻油酸、α-次亞麻油酸、γ-次亞麻油酸、二十二碳六烯酸(順-DHA)、喇叭藻酸及二亞油基，其中脂質間接結合至生物學上活性劑(連接基團插入於脂質與生物學上活性劑之間)。
連接基團為連接組合物之兩個部分的部分；舉一非限制性實例，以物理方式連接寡核苷酸與脂質的連接基團。
適合連接基團之非限制性實例包括：不帶電連接基團；帶電連接基團，包含烷基之連接基團；包含磷酸酯之連接基團；分支鏈連接基團；未分支連接基團；包含至少一個裂解基團之連接基團；包含至少一個氧化還原裂解基團之連接基團；包含至少一個基於磷酸酯之裂解基團之連接基團；包含至少一個酸裂解基團之連接基團；包含至少 一個基於酯之裂解基團之連接基團；包含至少一個基於肽之裂解基團之連接基團。
在一些實施例中，連接基團包含不帶電連接基團或帶電連接基團。
在一些實施例中，連接基團包含烷基。
在一些實施例中，連接基團包含磷酸酯。在各種實施例中，磷酸酯亦可藉由用氮(橋連胺基磷酸酯)、硫(橋連硫代磷酸酯)及碳(橋連亞甲基膦酸酯)置換橋接氧(亦即連接磷酸酯與核苷之氧)來加以修飾。置換可發生在任一連接氧或兩個連接氧處。當橋接氧為核苷之3'-氧時，可用碳置換。當橋接氧為核苷之5'-氧時，可用氮置換。在各種實施例中，包含磷酸酯之連接基團包含以下中之任何一或多者：二硫代 磷酸酯、胺基磷酸酯、硼烷膦酸酯或式(I)化合物：(I)，其 中R3選自OH、SH、NH2、BH3、CH3、C1-6烷基、C6-10芳基、C1-6烷氧基及C6-io芳氧基，其中C1-6烷基及C6-io芳基未經取代或視情況獨立地經1至3個獨立地選自鹵基、羥基及NH2之基團取代；且R4選自O、S、NH或CH2。
在一些實施例中，連接基團包含直接鍵或諸如氧或硫之原子、諸如NR1、C(O)、C(O)NH、SO、SO2、SO2NH之單元或諸如以下之原子鏈：經取代或未經取代之烷基、經取代或未經取代之烯基、經取代或未經取代之炔基、芳基烷基、芳基烯基、芳基炔基、雜芳基烷基、雜芳基烯基、雜芳基炔基、雜環基烷基、雜環基烯基、雜環基炔基、芳基、雜芳基、雜環基、環烷基、環烯基、烷芳基烷基、烷芳基烯基、烷芳基炔基、烯基芳基烷基、烯基芳基烯基、烯基芳基炔基、炔 基芳基烷基、炔基芳基烯基、炔基芳基炔基、烷基雜芳基烷基、烷基雜芳基烯基、烷基雜芳基炔基、烯基雜芳基烷基、烯基雜芳基烯基、烯基雜芳基炔基、炔基雜芳基烷基、炔基雜芳基烯基、炔基雜芳基炔基、烷基雜環基烷基、烷基雜環基烯基、烷基雜環基炔基、烯基雜環基烷基、烯基雜環基烯基、烯基雜環基炔基、炔基雜環基烷基、炔基雜環基烯基、炔基雜環基炔基、烷基芳基、烯基芳基、炔基芳基、烷基雜芳基、烯基雜芳基、炔基雜芳基，其中一或多個亞甲基可由O、S、S(O)、SO2、N(R1)2、C(O)、可裂解連接基團、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之雜芳基、經取代或未經取代之雜環間雜或封端；其中R1為氫、醯基、脂族基或經取代之脂族基。
在一些實施例中，連接基團為分支鏈連接基團。在一些實施例中，分支鏈連接基團之分支點可為至少三價，但可為四價、五價或六價原子，或呈現此類多價之基團。在一些實施例中，分支點為--N、--N(Q)-C、--O--C、--S--C、--SS--C、--C(O)N(Q)-C、--OC(O)N(Q)-C、--N(Q)C(O)--C或--N(Q)C(O)O--C；其中Q在每次出現時獨立地為H或視情況經取代之烷基。在其他實施例中，分支點為甘油或甘油衍生物。
在一個實施例中，連接基團包含至少一個可裂解連接基團。
舉一非限制性實例，可裂解鍵聯基團在細胞外部可足夠穩定，但其在進入目標細胞後裂解，釋放出連接基團固持在一起之兩個部分。舉一非限制性實例，可裂解鍵聯基團在目標細胞中或在第一參考條件(其可例如選擇用於模擬或代表細胞內條件)下之裂解比在個體血液中或在第二參考條件(其可例如選擇用於模擬或代表血液或血清中所存在之條件)下快至少10倍或更多倍、至少100倍。可裂解鍵聯基團對裂解劑敏感，例如pH、氧化還原電位或降解分子之存在。一般而言，裂解劑在細胞內部比在血清或血液中更普遍或以更高含量或活性 存在。此類降解劑之實例包括：選擇用於特定受質或不具有受質特異性之氧化還原劑，包括例如細胞中存在之氧化或還原酶或還原劑，諸如硫醇，其可藉由還原降解氧化還原可裂解之鍵聯基團；酯酶；可建立酸性環境之內體或試劑，例如產生5或小於5之pH者；可藉由用作通用酸、肽酶(其可為受質特異性的)及磷酸酶來水解或降解酸可裂解鍵聯基團之酶。
舉一非限制性實例，諸如二硫鍵之可裂解鍵聯基團可對pH敏感。人類血清之pH為7.4，而平均細胞內pH略低，在約7.1-7.3範圍內。內體具有酸性更強之pH，在5.5-6.0範圍內，且溶酶體具有酸性甚至更強之pH，為約5.0。一些連接基團將具有在適宜pH下裂解，藉此自細胞內部之配位體釋放出陽離子脂質或將其釋放至細胞之所要區室中的可裂解鍵聯基團。
舉一非限制性實例，連接基團可包括可藉由特定酶裂解之可裂解鍵聯基團。併入連接基團中之可裂解鍵聯基團之類型可視待靶向細胞而定。舉例而言，靶向肝臟之配位體可經由包括酯基之連接基團鍵聯至陽離子脂質。肝臟細胞富含酯酶，且因此連接基團在肝臟細胞中將比在不富含酯酶之細胞類型中更有效裂解。富含酯酶之其他細胞類型包括肺、腎皮質及睾丸之細胞。
舉一非限制性實例，連接基團可含有肽鍵，其可在靶向富含肽酶之細胞類型(諸如肝臟細胞及滑膜細胞)時使用。
舉一非限制性實例，可藉由測試降解劑(或條件)裂解候選鍵聯基團之能力來評估候選可裂解鍵聯基團之適用性。亦需要測試候選可裂解鍵聯基團在血液中或與其他非目標組織接觸時的抗裂解能力。因此，可判斷第一與第二條件之間的相對裂解敏感性，其中選擇第一條件以指示目標細胞中之裂解且選擇第二條件以指示其他組織或生物流體(例如血液或血清)中之裂解。評估可在無細胞系統、細胞、細胞培 養物、器官或組織培養物或整個動物中進行。其可適用於在無細胞或培養條件中進行初始評估且藉由在整個動物中進一步評估進行確認。舉一非限制性實例，適用候選化合物在細胞中(或在選擇用於模擬細胞內條件之活體外條件下)之裂解比血液或血清(或在選擇用於模擬細胞外條件之活體外條件下)中快至少2、4、10或100倍。
在一些實施例中，連接基團包含氧化還原可裂解鍵聯基團。舉一非限制性實例，一類可裂解鍵聯基團為在還原或氧化後裂解之氧化還原可裂解鍵聯基團。還原可裂解鍵聯基團之非限制性實例為二硫化物鍵聯基團(--S--S--)。為判斷候選可裂解鍵聯基團是否為適合「還原可裂解鍵聯基團」或例如是否適於與特定iRNA部分及特定靶向劑一起使用，可關注本文所述之方法。舉一非限制性實例，使用此項技術中已知模擬細胞(例如目標細胞)中將觀測到的裂解速率之試劑，藉由與二硫蘇糖醇(DTT)或其他還原劑一起培育來評估候選物。候選物亦可在選擇用於模擬血液或血清條件之條件下評估。舉一非限制性實例，候選化合物在血液中裂解至多10%。舉一非限制性實例，適用候選化合物在細胞中(或在選擇用於模擬細胞內條件之活體外條件下)之降解比在血液中(或在選擇用於模擬細胞外條件之活體外條件下)快至少2、4、10或100倍。候選化合物之裂解速率可使用標準酶動力學分析法在選擇用於模擬細胞內介質之條件下測定且與選擇用於模擬胞外介質之條件比較。
在一些實施例中，連接基團包含基於磷酸酯之可裂解鍵聯基團，其藉由降解或水解磷酸酯基之試劑裂解。細胞中裂解磷酸酯基之試劑的實例為細胞中之酶，諸如磷酸酶。基於磷酸酯之鍵聯基團之實例為--O--P(O)(ORk)-O--、--O--P(S)(ORk)-O--、--O--P(S)(SRk)-O--、--S--P(O)(ORk)-O--、--O--P(O)(ORk)-S--、--S--P(O)(ORk)-S--、--O--P(S)(ORk)-S--、--S--P(S)(ORk)-O--、--O--P(O)(Rk)-O--、--O-- P(S)(Rk)-O--、--S--P(O)(Rk)-O--、--S--P(S)(Rk)-O--、--S--P(O)(Rk)-S--、--O--P(S)(Rk)-S--。其他非限制性實例為--O--P(O)(OH)--O--、--O--P(S)(OH)--O--、--O--P(S)(SH)--O--、--S--P(O)(OH)--O--、--O--P(O)(OH)--S--、--S--P(O)(OH)--S--、--O--P(S)(OH)--S--、--S--P(S)(OH)--O--、--O--P(O)(H)--O--、--O--P(S)(H)--O--、--S--P(O)(H)--O--、--S--P(S)(H)--O--、--S--P(O)(H)--S--、--O--P(S)(H)--S--。另一非限制性實例為--O--P(O)(OH)--O--。
在一些實施例中，連接基團包含酸可裂解鍵聯基團，其為在酸性條件下裂解之鍵聯基團。舉一非限制性實例，酸可裂解鍵聯基團在pH為約6.5或更低(例如約6.0、5.5、5.0或更低)之酸性環境中裂解或藉由諸如可用作通用酸之酶的試劑裂解。在細胞中，特定低pH細胞器(諸如內體及溶酶體)可為酸可裂解鍵聯基團提供裂解環境。酸可裂解鍵聯基團之實例包括(但不限於)腙、酯及胺基酸之酯。酸可裂解基團可具有通式--C=NN--、C(O)O或--OC(O)。在另一非限制性實例中，當連接至酯之氧的碳(烷氧基)為芳基時，為經取代之烷基或三級烷基，諸如二甲基戊基或第三丁基。
在一些實施例中，連接基團包含基於酯之鍵聯基團。舉一非限制性實例，基於酯之可裂解鍵聯基團藉由細胞中之諸如酯酶及醯胺酶的酶裂解。基於酯之可裂解鍵聯基團的實例包括(但不限於)伸烷基、伸烯基及伸炔基之酯。酯可裂解鍵聯基團具有通式--C(O)O--或--OC(O)--。此等候選物可使用與上文所述類似之方法評估。
在一些實施例中，連接基團包含基於肽之裂解基團。基於肽之可裂解鍵聯基團藉由細胞中之諸如肽酶及蛋白酶的酶裂解。基於肽之可裂解鍵聯基團為胺基酸之間形成以獲得寡肽(例如二肽、三肽等)及多肽的肽鍵。舉一非限制性實例，基於肽之可裂解基團不包括醯胺基(--C(O)NH--)。醯胺基可在任何伸烷基、伸烯基或伸炔基之間形成。 肽鍵為胺基酸之間形成以獲得肽及蛋白質的特定類型之醯胺鍵。舉一非限制性實例，基於肽之裂解基團可限於胺基酸之間形成以產生肽及蛋白質的肽鍵(亦即醯胺鍵)且不包括整個醯胺官能基。舉一非限制性實例，基於肽之可裂解鍵聯基團可具有通式--NHCHRAC(O)NHCHRBC(O)--，其中RA及RB為兩個相鄰胺基酸之R基。此等候選物可使用與上文所述類似之方法評估。
此項技術中報導之任何連接基團皆可使用，如非限制性實例包括美國專利申請案第20150265708號中所述之彼等連接基團。
脂質與寡核苷酸之結合方法之非限制性實例呈現在實例1中。
連接基團之非限制性實例為C6胺基連接基團。
靶向組分
在一些實施例中，所提供之組合物進一步包含靶向組分(靶向化合物或部分)。靶向組分可結合或不結合至脂質或生物學上活性劑。在一些實施例中，靶向組分結合至生物學上活性劑。在一些實施例中，生物學上活性劑結合至脂質及靶向組分。如本文所述，在一些實施例中，生物學上活性劑為所提供之寡核苷酸。因此，在一些實施例中，所提供之寡核苷酸組合物除脂質及寡核苷酸之外，進一步包含靶向要素。可根據本發明使用各種靶向組分，例如脂質、抗體、肽、碳水化合物等。
根據本發明，靶向組分可經由多種方法併入所提供之技術中。在一些實施例中，靶向組分與所提供之寡核苷酸物理混合，形成所提供之組合物。在一些實施例中，靶向組分與寡核苷酸化學結合。
在一些實施例中，所提供組合物包含兩種或更多種靶向組分。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含兩種或更多種結合靶向組分。在一些實施例中，兩種或更多種結合靶向組分相同。在一些實施例中，兩種或更多種結合靶向組分不同。在一些實施例中，所提供之 寡核苷酸包含不超過一種靶向組分。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含不同類型的結合靶向組分。在一些實施例中，所提供組合物之寡核苷酸包含相同類型之靶向組分。
靶向組分可視情況經由連接基團結合至寡核苷酸。根據本發明，可採用此項技術中各種類型之連接基團。在一些實施例中，連接基團包含磷酸酯基，其可例如用於經由類似於寡核苷酸合成中所採用之化學方式的化學方式結合靶向組分。在一些實施例中，連接基團包含醯胺、酯或醚基。在一些實施例中，連接基團具有-L-之結構。靶向組分可經由與脂質相同或不同之連接基團結合。
視情況經由連接基團，靶向組分可在各種適合位置結合至寡核苷酸。在一些實施例中，靶向組分經由5'-OH基團結合。在一些實施例中，靶向組分經由3'-OH基團結合。在一些實施例中，靶向組分經由一或多個糖部分結合。在一些實施例中，靶向組分經由一或多個鹼基結合。在一些實施例中，靶向組分經由一或多個核苷酸間鍵聯併入。在一些實施例中，寡核苷酸可含有多個結合靶向組分，其獨立地經由其5'-OH、3'-OH、糖部分、鹼基部分及/或核苷酸間鍵聯結合。靶向組分及脂質可在相同、相鄰及/或間隔開的位置結合。在一些實施例中，靶向組分在寡核苷酸之一端結合，且脂質在另一端結合。
在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物中之寡核苷酸為反義寡核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸之序列包含以下或由以下組成：本文中所揭示之任何寡核苷酸之序列。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含本文中所揭示之任何寡核苷酸之鹼基序列、主鏈鍵聯模式、主鏈對掌性中心模式及/或化學修飾(例如，鹼基修飾、糖修飾等)之模式。在一些實施例中，寡核苷酸之序列包含以下或由以下組成：表8中所揭示之任何寡核苷酸之序列。
在一些實施例中，反義寡核苷酸為參與核糖核酸酶H介導之裂解 的寡核苷酸；舉例而言，反義寡核苷酸以序列特異性方式與目標mRNA之一部分雜交，從而靶向mRNA以由核糖核酸酶H裂解。在一些實施例中，反義寡核苷酸能夠區分相同基因或目標之不同對偶基因。在一些實施例中，反義寡核苷酸能夠區分目標之野生型與突變型對偶基因。在一些實施例中，反義寡核苷酸大量參與突變型對偶基因的核糖核酸酶H介導之裂解，但參與野生型對偶基因之核糖核酸酶H介導之裂解的程度低得多(例如，沒有大量參與目標之野生型對偶基因的核糖核酸酶H介導之裂解)。在一些實施例中，反義寡核苷酸能夠參與包含突變之核酸的核糖核酸酶H介導之裂解。在一些實施例中，反義寡核苷酸靶向突變型對偶基因。在一些實施例中，反義寡核苷酸靶向亨廷頓基因之突變型對偶基因。
在一些實施例中，反義寡核苷酸能夠區分亨廷頓基因中之目標之野生型與突變型對偶基因。
在一些實施例中，本發明係關於：一種用於抑制哺乳動物中之突變型亨廷頓基因表現的方法，其包含製備包含脂質及寡核苷酸(舉一非限制性實例，靶向亨廷頓基因之突變型對偶基因的反義寡核苷酸)的組合物及向哺乳動物投與組合物。
一種治療個體之由突變型亨廷頓基因過度表現引起之疾病的方法，該方法包含投與包含脂質及寡核苷酸(舉一非限制性實例，靶向亨廷頓基因之突變型對偶基因的反義寡核苷酸)的組合物。
一種治療亨廷頓氏病之方法，該方法包含投與包含脂質及寡核苷酸(舉一非限制性實例，靶向亨廷頓基因之突變型對偶基因的反義寡核苷酸)的組合物。
一種用於治療個體之亨廷頓氏病之體征及/或症狀的方法，其係藉由提供包含脂質及寡核苷酸(舉一非限制性實例，靶向亨廷頓基因 之突變型對偶基因的反義寡核苷酸)的組合物及向個體投與治療有效量之組合物。
一種向有需要之個體投與寡核苷酸的方法，其包含提供包含寡核苷酸及脂質的組合物及向個體投與組合物的步驟，其中生物學上活性化合物為寡核苷酸(舉一非限制性實例，靶向亨廷頓基因之突變型對偶基因的反義寡核苷酸)，且其中脂質為本文中所揭示之任何脂質。
一種治療個體疾病之方法，該方法包含提供包含寡核苷酸及脂質之組合物及向個體投與治療有效量之組合物的步驟，其中生物學上活性化合物為寡核苷酸(舉一非限制性實例，靶向亨廷頓基因之突變型對偶基因的反義寡核苷酸)，且其中脂質為本文中所揭示之任何脂質，且其中疾病為本文中所揭示之任何疾病。
一種抑制哺乳動物中之突變型亨廷頓基因表現的方法，該方法包含製備包含脂質及寡核苷酸(舉一非限制性實例，靶向亨廷頓基因之突變型對偶基因的反義寡核苷酸)的組合物及向哺乳動物投與組合物的步驟。
一種向有需要之個體投與生物學上活性劑的方法，其包含提供包含生物學上活性劑及脂質的組合物及向個體投與組合物的步驟，其中生物學上活性化合物為寡核苷酸(舉一非限制性實例，靶向亨廷頓基因之突變型對偶基因的反義寡核苷酸)，且其中脂質為本文中所揭示之任何脂質。
一種治療個體之亨廷頓氏病的方法，該方法包含提供包含生物學上活性劑及脂質的組合物及向個體投與治療有效量之組合物的步驟，其中生物學上活性化合物為寡核苷酸(舉一非限制性實例，靶向亨廷頓基因之突變型對偶基因的反義寡核苷酸)，且其中脂質為本文中所揭示之任何脂質。
一種用於介導哺乳動物中之包含突變型亨廷頓基因之核酸的核糖核酸酶H介導之裂解的方法，該方法包含製備包含脂質及反義寡核苷酸之組合物及向哺乳動物投與組合物的步驟。
一種治療由亨廷頓基因突變引起之疾病的方法，該方法包含投與包含脂質及反義寡核苷酸之組合物，其中寡核苷酸能夠參與包含突變之核酸的核糖核酸酶H介導之裂解。
一種用於治療個體之亨廷頓氏病之體征及/或症狀的方法，其係藉由提供包含脂質及寡核苷酸(舉一非限制性實例，靶向亨廷頓基因之突變型對偶基因的反義寡核苷酸)的組合物及向個體投與治療有效量之組合物。
一種向有需要之個體投與寡核苷酸的方法，其包含提供包含寡核苷酸及脂質之組合物及向個體投與組合物的步驟，其中寡核苷酸能夠參與包含突變之核酸的核糖核酸酶H介導之裂解，且其中脂質為本文中所揭示之任何脂質。
一種治療個體之亨廷頓氏病的方法，其中該疾病或病症係關於基因突變，該方法包含提供包含寡核苷酸及脂質之組合物及向個體投與治療有效量之組合物的步驟，其中寡核苷酸能夠參與包含突變之核酸的核糖核酸酶H介導之裂解，且其中脂質為本文中所揭示之任何脂質。
一種用於介導哺乳動物中之包含突變型亨廷頓基因之核酸的核糖核酸酶H介導之裂解的方法，該方法包含製備包含脂質及反義寡核苷酸之組合物及向哺乳動物投與組合物的步驟。
一種治療與亨廷頓基因突變相關之疾病的方法，該方法包含投與包含脂質及反義寡核苷酸之組合物，其中反義寡核苷酸能夠參與包含突變之核酸的核糖核酸酶H介導之裂解。
一種治療由亨廷頓基因突變引起之疾病的方法，該方法包含投 與包含脂質及寡核苷酸之組合物，其中寡核苷酸能夠參與包含突變之核酸的核糖核酸酶H介導之裂解。
一種用於治療個體之亨廷頓氏病之體征及/或症狀的方法，其係藉由提供包含脂質及寡核苷酸(舉一非限制性實例，靶向亨廷頓基因之突變型對偶基因的反義寡核苷酸)的組合物及向個體投與治療有效量之組合物。
一種向有需要之個體投與寡核苷酸的方法，其包含提供包含寡核苷酸及脂質之組合物及向個體投與組合物的步驟，其中寡核苷酸能夠參與包含突變之核酸的核糖核酸酶H介導之裂解，且其中脂質為本文中所揭示之任何脂質。
一種治療個體之亨廷頓氏病的方法，其中亨廷頓氏病係關於亨廷頓基因突變，該方法包含提供包含寡核苷酸及脂質之組合物及向個體投與治療有效量之組合物的步驟，其中寡核苷酸能夠參與包含突變之核酸的核糖核酸酶H介導之裂解，且其中脂質為本文中所揭示之任何脂質。
一種用於介導哺乳動物中之包含突變型亨廷頓基因之核酸的核糖核酸酶H介導之裂解的方法，該方法包含製備包含脂質及反義寡核苷酸之組合物及向哺乳動物投與組合物的步驟，其中脂質為本文中所揭示之任何脂質，且其中反義寡核苷酸之序列包含以下或由以下組成：本文中(例如，表8中)所揭示之任何反義寡核苷酸之序列。在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含本文中(例如，表8中)所揭示之任何寡核苷酸之鹼基序列、主鏈鍵聯模式、主鏈對掌性中心模式及/或化學修飾(例如，鹼基修飾、糖修飾等)之模式。
一種治療與亨廷頓基因突變相關之疾病的方法，該方法包含投與包含脂質及反義寡核苷酸之組合物，其中反義寡核苷酸能夠參與包含突變之核酸的核糖核酸酶H介導之裂解，其中脂質為本文中所揭示 之任何脂質，且其中反義寡核苷酸之序列包含以下或由以下組成：本文中(例如，表8中)所揭示之任何反義寡核苷酸之序列。
一種治療由亨廷頓基因突變引起之疾病的方法，該方法包含投與包含脂質及寡核苷酸之組合物，其中寡核苷酸能夠參與包含突變之核酸的核糖核酸酶H介導之裂解，其中脂質為本文中所揭示之任何脂質，且其中寡核苷酸包含以下或由以下組成：本文中(例如，表8中)所揭示之任何反義寡核苷酸之序列。
一種用於治療個體之亨廷頓氏病之體征及/或症狀的方法，其係藉由提供包含脂質及寡核苷酸(舉一非限制性實例，靶向亨廷頓基因之突變型對偶基因的反義寡核苷酸)的組合物及向個體投與治療有效量之組合物，其中脂質為本文中所揭示之任何脂質，且其中寡核苷酸之序列包含以下或由以下組成：本文中(例如，表8中)所揭示之任何反義寡核苷酸之序列。
一種向有需要之個體投與寡核苷酸的方法，其包含提供包含寡核苷酸及脂質之組合物及向個體投與組合物的步驟，其中寡核苷酸能夠參與包含突變之核酸的核糖核酸酶H介導之裂解，且其中脂質為本文中所揭示之任何脂質，其中脂質為本文中所揭示之任何脂質，且其中寡核苷酸之序列包含以下或由以下組成：本文中(例如，表8中)所揭示之任何反義寡核苷酸之序列。
一種治療個體之亨廷頓氏病的方法，其中亨廷頓氏病係關於亨廷頓基因突變，該方法包含提供包含寡核苷酸及脂質之組合物及向個體投與治療有效量之組合物的步驟，其中寡核苷酸能夠參與包含突變之核酸的核糖核酸酶H介導之裂解，且其中脂質為本文中所揭示之任何脂質，且其中寡核苷酸包含以下或由以下組成：本文中(例如，表8中)所揭示之任何反義寡核苷酸之序列。
在一些實施例中，所提供之寡核苷酸包含本文中所揭示之任何 寡核苷酸之鹼基序列、主鏈鍵聯模式、主鏈對掌性中心模式及/或化學修飾(例如，鹼基修飾、糖修飾等)之模式。
在一些實施例中，寡核苷酸組合物包含複數個寡核苷酸，其共用：1)共同鹼基序列；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈磷修飾模式；其中該複數個中之一或多個寡核苷酸個別地結合至脂質。
在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物包含複數個寡核苷酸，其共用：1)共同鹼基序列；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈磷修飾模式；其中：該組合物為對掌性受控的，因為複數個寡核苷酸在一或多個對掌性核苷酸間鍵聯處共用同一立體化學；該複數個中之一或多個寡核苷酸個別地結合至脂質；及該複數個中之一或多個寡核苷酸視情況且個別地結合至靶向化合物或部分。
在一些實施例中，反義寡核苷酸係在對掌性受控寡核苷酸組合物中。在一些實施例中，寡核苷酸係在對掌性受控寡核苷酸組合物中。
各種寡核苷酸列於表8中。此等寡核苷酸中之多者能夠參與人類亨廷頓基因之核糖核酸酶H介導之裂解，如7/22/15申請之美國專利申請案第62/195,779號及5/4/16申請之美國專利申請案第62/331,960號中所呈現之資料中所示，該等專利申請案以全文引用的方式併入本文 中；及本文所示之資料中所示。
各種寡核苷酸尤其能夠參與人類亨廷頓基因目標或其突變型變異體(包括WV-1092、WVE120101、WV-2603或WV-2595)或本文中所揭示之任何其他核酸(包括(但不限於)表8中所列之彼等)的核糖核酸酶H介導之裂解。
任何寡核苷酸或對掌性受控寡核苷酸組合物皆可與本文中所揭示之任何方法或組合物(例如，任何醫藥組合物、修飾及/或使用及/或製造方法)組合使用。
在一些實施例中，本發明提供以下實施例：
1.一種對掌性受控寡核苷酸組合物，其包含由具有以下定義之寡核苷酸：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈對掌性中心模式，該組合物為基本上純的單一寡核苷酸製劑，因為該組合物中預定含量之寡核苷酸具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式。
2.一種對掌性受控寡核苷酸組合物，其包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸，其特徵在於：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有相同鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃。
2a.一種對掌性受控寡核苷酸組合物，其包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸，其特徵在於： 1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有相同鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃，其中該寡核苷酸靶向突變型亨廷頓基因，且長度為約10至約50個核苷酸，其中主鏈鍵聯包含至少一個硫代磷酸酯，且其中主鏈對掌性中心模式包含至少一個呈Rp構形之對掌性中心及至少一個呈Sp構形之對掌性中心。
3.一種對掌性受控寡核苷酸組合物，其包含由具有以下定義之寡核苷酸：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈對掌性中心模式，該組合物為基本上純的單一寡核苷酸製劑，因為該組合物中至少約10%之寡核苷酸具有共同鹼基序列及長度、共同主鏈鍵聯模式及共同主鏈對掌性中心模式。
4.如前述實施例中之任一者的組合物，其中寡核苷酸包含一或多個翼區及一共同核心區，其中：各翼區獨立地具有兩個或更多個鹼基之長度，且獨立地且視情況包含一或多個對掌性核苷酸間鍵聯；及該核心區獨立地具有兩個或更多個鹼基之長度且獨立地包含一或多個對掌性核苷酸間鍵聯。
5.一種寡核苷酸組合物，其包含預定含量之寡核苷酸，該等寡核苷酸包含一或多個翼區及一共同核心區，其中：各翼區獨立地具有兩個或更多個鹼基之長度，且獨立地且視情況包含一或多個對掌性核苷酸間鍵聯； 核心區獨立地具有兩個或更多個鹼基之長度，且獨立地包含一或多個對掌性核苷酸間鍵聯，且共同核心區具有：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈對掌性中心模式。
6.一種寡核苷酸組合物，其包含預定含量之寡核苷酸，該等寡核苷酸包含一或多個翼區及一共同核心區，其中：各翼區獨立地具有兩個或更多個鹼基之長度，且獨立地且視情況包含一或多個對掌性核苷酸間鍵聯；核心區獨立地具有兩個或更多個鹼基之長度，且獨立地包含一或多個對掌性核苷酸間鍵聯，且核心區具有：1)共同鹼基序列；2)共同主鏈鍵聯模式；3)共同主鏈對掌性中心模式；及4)共同主鏈磷修飾模式。
6a.如前述實施例中之任一者的組合物，其中該寡核苷酸類型之寡核苷酸包含至少一個翼區及一核心區，其中：各翼區獨立地具有兩個或更多個鹼基之長度，且獨立地且視情況包含一或多個對掌性核苷酸間鍵聯；該核心區獨立地具有兩個或更多個鹼基之長度，且獨立地包含一或多個對掌性核苷酸間鍵聯；及其中翼區中之至少一個核苷酸與該核心區之至少一個核苷酸不同，其中該差異係在以下一或多者：1)主鏈鍵聯；2)主鏈對掌性中心之模式；3)糖修飾。
7.如前述實施例中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸由具有共同主鏈磷修飾模式定義。
8.如前述實施例中之任一者的組合物，其中該組合物含有預定含量之個別寡核苷酸類型之寡核苷酸，其中寡核苷酸類型由以下定義：1)鹼基序列；2)主鏈鍵聯模式；3)主鏈對掌性中心之模式；及4)主鏈磷修飾模式。
9.如前述實施例中之任一者的組合物，其中具有共同鹼基序列之寡核苷酸為相同寡核苷酸類型，其特徵在於鹼基序列、主鏈鍵聯模式、主鏈對掌性中心模式及主鏈磷修飾模式。
10.如前述實施例中之任一者的組合物，其中該組合物含有預定含量之兩種或更多種個別寡核苷酸類型之寡核苷酸，其中寡核苷酸類型由以下定義：1)鹼基序列；2)主鏈鍵聯模式；3)主鏈對掌性中心之模式；及4)主鏈磷修飾模式。
11一種寡核苷酸組合物，其為對掌性受控的，因為該組合物含有預定含量之個別寡核苷酸類型之寡核苷酸，其中寡核苷酸類型由以下定義：1)鹼基序列；2)主鏈鍵聯模式；3)主鏈對掌性中心之模式；及4)主鏈磷修飾模式。
12.如前述實施例中之任一者的組合物，其中該組合物包含兩種或更多種個別寡核苷酸類型。
13.如前述實施例中之任一者的組合物，其中寡核苷酸類型由鹼基一致性、鹼基修飾模式、糖修飾模式、主鏈鍵聯模式、主鏈對掌性中心模式及主鏈磷修飾模式定義。
14.如前述實施例中之任一者的組合物，其中具有共同序列之寡核苷酸具有相同結構。
15.如前述實施例中之任一者的組合物，其中相同寡核苷酸類型之寡核苷酸具有相同結構。
16.如前述實施例中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸具有一個翼。
17.如前述實施例中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸為具有翼-核心結構之半聚體。
18.如前述實施例中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸為具有核心-翼結構之半聚體。
19.如實施例1至15中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸具有兩個翼。
20.如實施例1至15中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸為具有翼-核心-翼結構之間隔體。
21.如前述實施例中之任一者的組合物，其中翼包含對掌性核苷酸間鍵聯。
22.如前述實施例中之任一者的組合物，其中各翼獨立地包含對掌性核苷酸間鍵聯。
23.如實施例1至17及19至22中之任一者的組合物，其中核心5'端之翼在翼5'端包含對掌性核苷酸間鍵聯。
24.如實施例1至16及18至22中之任一者的組合物，其中核心3' 端之翼在翼3'端包含對掌性核苷酸間鍵聯。
25.如前述實施例中之任一者的組合物，其中翼具有僅一個對掌性核苷酸間鍵聯，且翼之其他核苷酸間鍵聯各自為天然磷酸酯鍵聯 ()。
26.如前述實施例中之任一者的組合物，其中對掌性核苷酸間鍵聯具有式I結構。
27.如前述實施例中之任一者的組合物，其中對掌性核苷酸間鍵聯具有式I結構，且其中X為S，且Y及Z為O。
28.如前述實施例中之任一者的組合物，其中對掌性核苷酸間鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯。
29.如前述實施例中之任一者的組合物，其中對掌性核苷酸間鍵聯為Sp。
30.如前述實施例中之任一者的組合物，其中各對掌性核苷酸間鍵聯為Sp。
31.如實施例1至29中之任一者的組合物，其中對掌性核苷酸間鍵聯為Rp。
32.如實施例1至28中之任一者的組合物，其中各對掌性核苷酸間鍵聯為Rp。
33.如實施例1至31中之任一者的組合物，其中翼包含Sp硫代磷酸酯鍵聯。
34.如實施例1至31中之任一者的組合物，其中各翼獨立地包含Sp硫代磷酸酯鍵聯。
35.如實施例1至17、19至31及33至34中之任一者的組合物，其中翼在核心5'端，且翼具有Sp硫代磷酸酯鍵聯。
36.如實施例1至17、19至31及33至35中之任一者的組合物，其 中翼在核心5'端，且翼在翼5'端具有Sp硫代磷酸酯鍵聯。
37.如實施例1至17、19至31及33至36中之任一者的組合物，其中翼在核心5'端，翼在翼5'端具有Sp硫代磷酸酯鍵聯，且翼之其他核 苷酸間鍵聯各自為天然磷酸酯鍵聯()。
38.如實施例1至16、18至31及33至34中之任一者的組合物，其中翼在核心3'端，且翼在翼3'端具有Sp硫代磷酸酯鍵聯。
39.如實施例1至16、18至31、33至34及38中之任一者的組合物，其中翼在核心3'端，且翼在翼3'端具有Sp硫代磷酸酯鍵聯。
40.如實施例1至16、18至31、33至34及38至39中之任一者的組合物，其中一個翼在共同核心之3'端，翼在翼3'端具有Sp硫代磷酸酯鍵聯，且翼之其他核苷酸間鍵聯各自為天然磷酸酯鍵聯()。
41.如實施例1至29及31至40中之任一者的組合物，其中翼包含Rp硫代磷酸酯鍵聯。
42.如實施例1至29及31至40中之任一者的組合物，其中各翼獨立地包含Rp硫代磷酸酯鍵聯。
43.如實施例1至17、19至29及31至42中之任一者的組合物，其中翼在核心5'端，且翼具有Rp硫代磷酸酯鍵聯。
44.如實施例1至17、19至29及31至43中之任一者的組合物，其中翼在核心5'端，且翼在翼5'端具有Rp硫代磷酸酯鍵聯。
45.如實施例1至17、19至29及31至44中之任一者的組合物，其中翼在核心5'端，翼在翼5'端具有Rp硫代磷酸酯鍵聯，且翼之其他核苷酸間鍵聯各自為天然磷酸酯鍵聯()。
46.如實施例1至16、18至29及31至42中之任一者的組合物，其中翼在核心3'端，且翼具有Rp硫代磷酸酯。
47.如實施例1至16、18至29及31至42中之任一者的組合物，其中翼在核心3'端，且翼在翼3'端具有Rp硫代磷酸酯鍵聯。
48.如實施例1至16、18至29及31至42中之任一者的組合物，其中一個翼在共同核心3'端，翼在翼3'端具有Rp硫代磷酸酯鍵聯，且翼之其他核苷酸間鍵聯各自為天然磷酸酯鍵聯()。
49.如實施例1至28中之任一者的組合物，其中翼在核心5'端，且其5'端核苷酸間鍵聯為對掌性核苷酸間鍵聯。
50.如實施例1至28中之任一者的組合物，其中翼在核心5'端，且其5'端核苷酸間鍵聯為Sp對掌性核苷酸間鍵聯。
51.如實施例1至28中之任一者的組合物，其中翼在核心5'端，且其5'端核苷酸間鍵聯為Rp對掌性核苷酸間鍵聯。
52.如實施例1至28及49至51中之任一者的組合物，其中翼在核心3'端，且其3'端核苷酸間鍵聯為對掌性核苷酸間鍵聯。
53.如實施例1至28及49至51中之任一者的組合物，其中翼在核心3'端，且其3'端核苷酸間鍵聯為Sp對掌性核苷酸間鍵聯。
54.如實施例1至28及49至51中之任一者的組合物，其中翼在核心3'端，且其3'端核苷酸間鍵聯為Rp對掌性核苷酸間鍵聯。
55.如前述實施例中之任一者的組合物，其中各翼獨立地包含天然磷酸酯鍵聯()。
56.如前述實施例中之任一者的組合物，其中各翼獨立地包含兩個或更多個天然磷酸酯鍵聯()。
57.如前述實施例中之任一者的組合物，其中各翼獨立地包含兩個或更多個天然磷酸酯鍵聯，且所有天然磷酸酯鍵聯皆為連續的。
58.如前述實施例中之任一者的組合物，其中翼具有三個或更 多個鹼基之長度。
59.如前述實施例中之任一者的組合物，其中一個翼具有四個或更多個鹼基之長度。
60.如前述實施例中之任一者的組合物，其中一個翼具有五個或更多個鹼基之長度。
61.如前述實施例中之任一者的組合物，其中一個翼具有六個或更多個鹼基之長度。
62.如前述實施例中之任一者的組合物，其中一個翼具有七個或更多個鹼基之長度。
63.如前述實施例中之任一者的組合物，其中一個翼具有八個或更多個鹼基之長度。
64.如前述實施例中之任一者的組合物，其中一個翼具有九個或更多個鹼基之長度。
65.如前述實施例中之任一者的組合物，其中一個翼具有十個或更多個鹼基之長度。
66.如前述實施例中之任一者的組合物，其中各翼獨立地具有三個或更多個鹼基之長度。
67.如前述實施例中之任一者的組合物，其中各翼獨立地具有四個或更多個鹼基之長度。
68.如前述實施例中之任一者的組合物，其中各翼獨立地具有五個或更多個鹼基之長度。
69.如前述實施例中之任一者的組合物，其中各翼獨立地具有六個或更多個鹼基之長度。
70.如前述實施例中之任一者的組合物，其中各翼獨立地具有七個或更多個鹼基之長度。
71.如前述實施例中之任一者的組合物，其中各翼獨立地具有 八個或更多個鹼基之長度。
72.如前述實施例中之任一者的組合物，其中各翼獨立地具有九個或更多個鹼基之長度。
73.如前述實施例中之任一者的組合物，其中各翼獨立地具有十個或更多個鹼基之長度。
74.如實施例1至57中之任一者的組合物，其中翼具有兩個鹼基之長度。
75.如實施例1至57中之任一者的組合物，其中翼具有三個鹼基之長度。
76.如實施例1至57中之任一者的組合物，其中翼具有四個鹼基之長度。
77.如實施例1至57中之任一者的組合物，其中翼具有五個鹼基之長度。
78.如實施例1至57中之任一者的組合物，其中翼具有六個鹼基之長度。
79.如實施例1至57中之任一者的組合物，其中翼具有七個鹼基之長度。
80.如實施例1至57中之任一者的組合物，其中翼具有八個鹼基之長度。
81.如實施例1至57中之任一者的組合物，其中翼具有九個鹼基之長度。
82.如實施例1至57中之任一者的組合物，其中翼具有十個鹼基之長度。
83.如實施例1至57中之任一者的組合物，其中翼具有11個鹼基之長度。
84.如實施例1至57中之任一者的組合物，其中翼具有12個鹼基 之長度。
85.如實施例1至57中之任一者的組合物，其中翼具有13個鹼基之長度。
86.如實施例1至57中之任一者的組合物，其中翼具有14個鹼基之長度。
87.如實施例1至57中之任一者的組合物，其中翼具有15個鹼基之長度。
88.如實施例1至11及15至76中之任一者的組合物，其中各翼具有相同長度。
89.如前述實施例中之任一者的組合物，其中翼由相對於核心之糖修飾定義。
90.如前述實施例中之任一者的組合物，其中各翼獨立地包含經修飾之糖部分。
91.如前述實施例中之任一者的組合物，其中各翼糖部分獨立地為經修飾之糖部分。
92.如前述實施例中之任一者的組合物，其中經修飾之糖部分包含高親和力糖修飾。
93.如前述實施例中之任一者的組合物，其中經修飾之糖部分具有2'修飾。
94.如前述實施例中之任一者的組合物，其中經修飾之糖部分包含雙環糖修飾。
95.如前述實施例中之任一者的組合物，其中經修飾之糖部分包含具有連接兩個環碳原子之-L-或-O-L-橋的雙環糖修飾。
96.如前述實施例中之任一者的組合物，其中經修飾之糖部分包含具有4'-CH(CH3)-O-2'橋之雙環糖修飾。
97.如實施例1至93中之任一者的組合物，其中經修飾之糖部分 包含2'修飾，其中2'修飾為2'-OR1。
98.如實施例1至93中之任一者的組合物，其中經修飾之糖部分包含2'修飾，其中2'修飾為2'-OR1，其中R1為視情況經取代之C1-6烷基。
99.如實施例1至93中之任一者的組合物，其中經修飾之糖部分包含2'修飾，其中2'修飾為2'-MOE。
100.如實施例1至93中之任一者的組合物，其中經修飾之糖部分包含2'修飾，其中2'修飾為2'-OMe。
101.如實施例1至96中之任一者的組合物，其中經修飾之糖部分包含2'修飾，其中2'修飾為S-cEt。
102.如實施例1至93中之任一者的組合物，其中經修飾之糖部分包含2'修飾，其中2'修飾為FANA。
103.如實施例1至93中之任一者的組合物，其中經修飾之糖部分包含2'修飾，其中2'修飾為FRNA。
104.如實施例1至92中之任一者的組合物，其中經修飾之糖部分具有5'修飾。
105.如實施例1至92中之任一者的組合物，其中經修飾之糖部分為R-5'-Me-DNA。
106.如實施例1至92中之任一者的組合物，其中經修飾之糖部分為S-5'-Me-DNA。
107.如實施例1至92中之任一者的組合物，其中經修飾之糖部分為FHNA。
108.如前述實施例中之任一者的組合物，其中各翼糖部分經修飾。
109.如前述實施例中之任一者的組合物，其中翼內所有經修飾之翼糖部分具有相同修飾。
110.如前述實施例中之任一者的組合物，其中所有經修飾之翼糖部分具有相同修飾。
111.如實施例1至108中之任一者的組合物，其中至少一個經修飾之翼糖部分不同於另一經修飾之翼糖部分。
112.如前述實施例中之任一者的組合物，其中翼包含經修飾之鹼基。
113.如前述實施例中之任一者的組合物，其中翼包含2S-dT。
114.如前述實施例中之任一者的組合物，其中核心區具有五個或更多個鹼基之長度。
115.如前述實施例中之任一者的組合物，其中核心區具有六個或更多個鹼基之長度。
116.如前述實施例中之任一者的組合物，其中核心區具有七個或更多個鹼基之長度。
117.如前述實施例中之任一者的組合物，其中核心區具有八個或更多個鹼基之長度。
118.如前述實施例中之任一者的組合物，其中核心區具有九個或更多個鹼基之長度。
119.如前述實施例中之任一者的組合物，其中核心區具有十個或更多個鹼基之長度。
120.如前述實施例中之任一者的組合物，其中核心區具有11個或更多個鹼基之長度。
121.如前述實施例中之任一者的組合物，其中核心區具有12個或更多個鹼基之長度。
122.如前述實施例中之任一者的組合物，其中核心區具有13個或更多個鹼基之長度。
123.如前述實施例中之任一者的組合物，其中核心區具有14個 或更多個鹼基之長度。
124.如前述實施例中之任一者的組合物，其中核心區具有15個或更多個鹼基之長度。
125.如1至113中之任一者的組合物，其中核心區具有五個鹼基之長度。
126.如1至113中之任一者的組合物，其中核心區具有六個鹼基之長度。
127.如1至113中之任一者的組合物，其中核心區具有七個鹼基之長度。
128.如1至113中之任一者的組合物，其中核心區具有八個鹼基之長度。
129.如1至113中之任一者的組合物，其中核心區具有九個鹼基之長度。
130.如1至113中之任一者的組合物，其中核心區具有十個鹼基之長度。
131.如1至113中之任一者的組合物，其中核心區具有11個鹼基之長度。
132.如1至113中之任一者的組合物，其中核心區具有12個鹼基之長度。
133.如1至113中之任一者的組合物，其中核心區具有13個鹼基之長度。
134.如1至113中之任一者的組合物，其中核心區具有14個鹼基之長度。
135.如1至113中之任一者的組合物，其中核心區具有15個鹼基之長度。
136.如前述實施例中之任一者的組合物，其中核心區不具有任 何2'修飾。
153.如前述實施例中之任一者的組合物，其中各核心糖部分不修飾。
138.如前述實施例中之任一者的組合物，其中核心區之各糖部分為天然DNA糖部分。
139.如前述實施例中之任一者的組合物，其中核心區包含對掌性核苷酸間鍵聯。
140.如前述實施例中之任一者的組合物，其中核心區之各核苷酸間鍵聯為對掌性核苷酸間鍵聯。
141.如前述實施例中之任一者的組合物，其中核心區之各核苷酸間鍵聯為具有式I結構之對掌性核苷酸間鍵聯。
142.如前述實施例中之任一者的組合物，其中核心區之各核苷酸間鍵聯為具有式I結構之對掌性核苷酸間鍵聯，且其中X為S，且Y及Z為O。
143.如前述實施例中之任一者的組合物，其中核心區之各核苷酸間鍵聯為具有式I結構之對掌性核苷酸間鍵聯，且其中一個-L-R1不為-H。
144.如實施例1至142中之任一者的組合物，其中核心區之各核苷酸間鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯。
145.如前述實施例中之任一者的組合物，其中核心區之主鏈對掌性中心模式包含(Sp)m(Rp)n，其中m為1-50，且n為1-10。
146.如前述實施例中之任一者的組合物，其中核心區之主鏈對掌性中心模式包含(Sp)m(Rp)n，其中m為1-50，n為1-10，且m>n。
147.如前述實施例中之任一者的組合物，其中核心區之主鏈對掌性中心模式包含(Sp)m(Rp)n，其中m為2、3、4、5、6、7或8，且n為1。
148.如實施例1至144中之任一者的組合物，其中核心區之主鏈對掌性中心模式包含(Rp)n(Sp)m，其中m為1-50且n為1-10。
149.如實施例1至144及148中之任一者的組合物，其中核心區之主鏈對掌性中心模式包含Rp(Sp)m，其中m為2、3、4、5、6、7或8。
150.如實施例1至144及148至149中之任一者的組合物，其中核心區之主鏈對掌性中心模式包含Rp(Sp)2。
151.如實施例1至144中之任一者的組合物，其中核心區之主鏈對掌性中心模式包含(Np)t(Rp)n(Sp)m，其中t為1-10，n為1-10，m為1-50，且各Np獨立地為Rp或Sp。
152.如實施例1至144及151中之任一者的組合物，其中核心區之主鏈對掌性中心模式包含(Sp)t(Rp)n(Sp)m，其中t為1-10，n為1-10，m為1-50。
153.如實施例1至144及151至152中之任一者的組合物，其中n為1。
154.如實施例1至144及151至153中之任一者的組合物，其中t為2、3、4、5、6、7或8。
155.如實施例1至144及151至154中之任一者的組合物，其中m為2、3、4、5、6、7或8。
156.如實施例1至144及151至155中之任一者的組合物，其中t及m中之至少一者大於5。
157.如前述實施例中之任一者的組合物，其中核心區之主鏈對掌性中心模式包含SpSpRpSpSp。
158.如前述實施例中之任一者的組合物，其中核心區中50%或更多之對掌性核苷酸間鍵聯具有Sp組態。
159.如前述實施例中之任一者的組合物，其中核心區中60%或更多之對掌性核苷酸間鍵聯具有Sp組態。
160.如前述實施例中之任一者的組合物，其中核心區中70%或更多之對掌性核苷酸間鍵聯具有Sp組態。
161.如前述實施例中之任一者的組合物，其中核心區中80%或更多之對掌性核苷酸間鍵聯具有Sp組態。
162.如前述實施例中之任一者的組合物，其中核心區中90%或更多之對掌性核苷酸間鍵聯具有Sp組態。
163.如前述實施例中之任一者的組合物，其中核心區中之各核苷酸間鍵聯為對掌性的，核心區具有僅一個Rp，且核心區中之其他核苷酸間鍵聯各自為Sp。
164.如前述實施例中之任一者的組合物，其中核心中之各鹼基部分不修飾。
165.如實施例1至163中之任一者的組合物，其中核心區包含經修飾之鹼基。
166.如實施例1至163中之任一者的組合物，其中核心區包含經修飾之鹼基，其中經修飾之鹼基經A、T、C或G取代。
167.如實施例1至164中之任一者的組合物，其中核心區中之各鹼基部分獨立地選自A、T、C及G。
168.如實施例1至163中之任一者的組合物，其中核心區為DNA序列，其磷酸酯鍵聯獨立地經硫代磷酸酯鍵聯置換。
169.如前述實施例中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸為單股。
170.如前述實施例中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸為反義寡核苷酸、拮抗miR、微小RNA、微小RNA前體、抗miR、超級miR、核糖核酸酶、Ul接附蛋白、RNA活化劑、RNAi劑、誘騙性寡核苷酸、形成三螺旋體之寡核苷酸、適體或佐劑。
171.如前述實施例中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸為 反義寡核苷酸。
172.如實施例1至171中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸具有大於10個鹼基之長度。
173.如實施例1至171中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸具有大於11個鹼基之長度。
174.如實施例1至171中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸具有大於12個鹼基之長度。
175.如實施例1至171中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸具有大於13個鹼基之長度。
176.如實施例1至171中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸具有大於14個鹼基之長度。
177.如實施例1至171中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸具有大於15個鹼基之長度。
178.如實施例1至171中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸具有大於16個鹼基之長度。
179.如實施例1至171中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸具有大於17個鹼基之長度。
180.如實施例1至171中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸具有大於18個鹼基之長度。
181.如實施例1至171中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸具有大於19個鹼基之長度。
182.如實施例1至171中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸具有大於20個鹼基之長度。
183.如實施例1至171中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸具有大於21個鹼基之長度。
184.如實施例1至171中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸 具有大於22個鹼基之長度。
185.如實施例1至171中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸具有大於23個鹼基之長度。
186.如實施例1至171中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸具有大於24個鹼基之長度。
187.如實施例1至171中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸具有大於25個鹼基之長度。
188.如前述實施例中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸具有小於約200個鹼基之長度。
189.如前述實施例中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸具有小於約150個鹼基之長度。
190.如前述實施例中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸具有小於約100個鹼基之長度。
191.如前述實施例中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸具有小於約50個鹼基之長度。
192.如前述實施例中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸具有小於約40個鹼基之長度。
193.如前述實施例中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸具有小於約30個鹼基之長度。
194.如實施例1至171中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸具有10個鹼基之長度。
195.如實施例1至171中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸具有11個鹼基之長度。
196.如實施例1至171中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸具有12個鹼基之長度。
197.如實施例1至171中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸 具有13個鹼基之長度。
198.如實施例1至171中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸具有14個鹼基之長度。
199.如實施例1至171中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸具有15個鹼基之長度。
200.如實施例1至171中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸具有16個鹼基之長度。
201.如實施例1至171中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸具有17個鹼基之長度。
202.如實施例1至171中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸具有18個鹼基之長度。
203.如實施例1至171中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸具有19個鹼基之長度。
204.如實施例1至171中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸具有20個鹼基之長度。
205.如實施例1至171中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸具有21個鹼基之長度。
206.如實施例1至171中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸具有22個鹼基之長度。
207.如實施例1至171中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸具有23個鹼基之長度。
208.如實施例1至171中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸具有24個鹼基之長度。
209.如實施例1至171中之任一者的組合物，其中該等寡核苷酸具有25個鹼基之長度。
210.如前述實施例中之任一者的組合物，其中寡核苷酸類型不 為(Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp)-d[5mCs1As1Gs1Ts15mCs1Ts1Gs15mCs1Ts1Ts15mCs1G]或(Rp,Rp,Rp,Rp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Rp,Rp,Rp,Rp,Rp)-Gs5mCs5mCsTs5mCsAsGsTs5mCsTsGs5mCsTsTs5mCsGs5mCsAs5mCs5mC(5R-(SSR)3-5R)，其中加底線核苷酸經2'-MOE修飾。
211.如前述實施例中之任一者的組合物，其中寡核苷酸不為選自以下之寡核苷酸：(Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp)-d[5mCs1As1Gs1Ts15mCs1Ts1Gs15mCs1Ts1Ts15mCs1G]或(Rp,Rp,Rp,Rp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Rp,Rp,Rp,Rp,Rp)-Gs5mCs5mCsTs5mCsAsGsTs5mCsTsGs5mCsTsTs5mCsGs5mCsAs5mCs5mC(5R-(SSR)3-5R)，其中加底線核苷酸經2'-MOE修飾。
212.如前述實施例中之任一者的組合物，其中寡核苷酸不為選自以下之寡核苷酸：
其中小寫字母表示2'OMe RNA殘基；大寫字母表示2'OH RNA殘基；且加粗及「s」表示硫代磷酸酯部分；且
其中小寫字母表示2'-OMe RNA殘基；大寫字母表示RNA殘基； d=2'-去氧殘基；且「s」表示硫代磷酸酯部分；且
其中小寫字母表示2'-OMe RNA殘基；大寫字母表示RNA殘基；d=2'-去氧殘基；「s」表示硫代磷酸酯部分；且
其中小寫字母表示2'-OMe RNA殘基；大寫字母表示2'-F RNA殘基；d=2'-去氧殘基；且「s」表示硫代磷酸酯部分；且
213.如前述實施例中之任一者的組合物，其中寡核苷酸不為選 自以下之寡核苷酸：d[ARCSARCSARCSARCSARC]、d[CSCSCSCRCRCSCSCSCSC]、d[CSCSCSCSCSCSCRCRCSC]及d[CSCSCSCSCSCRCRCSCSC]，其中R為Rp硫代磷酸酯鍵聯，且S為Sp硫代磷酸酯鍵聯。
214.如前述實施例中之任一者的組合物，其中寡核苷酸不為選自以下之寡核苷酸：GGARTSGRTSTR mCSTCGA、GGARTRGSTSTR mCRTCGA、GGASTSGRTRTS mCSTCGA，其中R為Rp硫代磷酸酯鍵聯，S為Sp硫代磷酸酯鍵聯，所有其他鍵聯為PO，且各mC為經5-甲基胞嘧啶修飾之核苷。
215.如前述實施例中之任一者的組合物，其中寡核苷酸不為選自TkTk mCkAGTmCATGAmCTkTmCk mCk之寡核苷酸，其中後面伴以下標『k』之各核苷表示(S)-cEt修飾，R為Rp硫代磷酸酯鍵聯，S為Sp硫代磷酸酯鍵聯，各mC為經5-甲基胞嘧啶修飾之核苷，且所有核苷間鍵為硫代磷酸酯(PS)，其立體化學模式選自RSSSRSRRRS、RSSSSSSSSS、SRRSRSSSSR、SRSRSSRSSR、RRRSSSRSSS、RRRSRSSRSR、RRSSSRSRSR、SRSSSRSSSS、SSRRSSRSRS、SSSSSSRRSS、RRRSSRRRSR、RRRRSSSSRS、SRRSRRRRRR、RSSRSSRRRR、RSRRSRRSRR、RRSRSSRSRS、SSRRRRRSRR、RSRRSRSSSR、RRSSRSRRRR、RRSRSRRSSS、RRSRSSSRRR、RSRRRRSRSR、SSRSSSRRRS、RSSRSRSRSR、RSRSRSSRSS、RRRSSRRSRS、SRRSSRRSRS、RRRRSRSRRR、SSSSRRRRSR、RRRRRRRRRR及SSSSSSSSSS。
215a.如前述實施例中之任一者的組合物，其中共同主鏈對掌性中心模式包含SSR、RSS、SSRSS、SSRSSR、RSSSRSRRRS、RSSSSSSSSS、SRRSRSSSSR、SRSRSSRSSR、RRRSSSRSSS、RRRSRSSRSR、RRSSSRSRSR、SRSSSRSSSS、SSRRSSRSRS、 SSSSSSRRSS、RRRSSRRRSR、RRRRSSSSRS、SRRSRRRRRR、RSSRSSRRRR、RSRRSRRSRR、RRSRSSRSRS、SSRRRRRSRR、RSRRSRSSSR、RRSSRSRRRR、RRSRSRRSSS、RRSRSSSRRR、RSRRRRSRSR、SSRSSSRRRS、RSSRSRSRSR、RSRSRSSRSS、RRRSSRRSRS、SRRSSRRSRS、RRRRSRSRRR或SSSSRRRRSR。
215b.如前述實施例中之任一者的組合物，其中共同主鏈對掌性中心模式包含SSRSS、SSRSSR、RSSSRSRRRS、RSSSSSSSSS、SRRSRSSSSR、SRSRSSRSSR、RRRSSSRSSS、RRRSRSSRSR、RRSSSRSRSR、SRSSSRSSSS、SSRRSSRSRS、SSSSSSRRSS、RRRSSRRRSR、RRRRSSSSRS、SRRSRRRRRR、RSSRSSRRRR、RSRRSRRSRR、RRSRSSRSRS、SSRRRRRSRR、RSRRSRSSSR、RRSSRSRRRR、RRSRSRRSSS、RRSRSSSRRR、RSRRRRSRSR、SSRSSSRRRS、RSSRSRSRSR、RSRSRSSRSS、RRRSSRRSRS、SRRSSRRSRS、RRRRSRSRRR或SSSSRRRRSR。
215c.如前述實施例中之任一者的組合物，其中共同主鏈對掌性中心模式包含RSSSRSRRRS、RSSSSSSSSS、SRRSRSSSSR、SRSRSSRSSR、RRRSSSRSSS、RRRSRSSRSR、RRSSSRSRSR、SRSSSRSSSS、SSRRSSRSRS、SSSSSSRRSS、RRRSSRRRSR、RRRRSSSSRS、SRRSRRRRRR、RSSRSSRRRR、RSRRSRRSRR、RRSRSSRSRS、SSRRRRRSRR、RSRRSRSSSR、RRSSRSRRRR、RRSRSRRSSS、RRSRSSSRRR、RSRRRRSRSR、SSRSSSRRRS、RSSRSRSRSR、RSRSRSSRSS、RRRSSRRSRS、SRRSSRRSRS、RRRRSRSRRR或SSSSRRRRSR。
216.如前述實施例中之任一者的組合物，其中寡核苷酸不為選自TkTk mCk AGT m CATGA m CTTk mCk mCk之寡核苷酸，其中後面伴以下標『k』之各核苷表示(S)-cEt修飾，R為Rp硫代磷酸酯鍵聯，S為Sp硫代 磷酸酯鍵聯，各mC為經5-甲基胞嘧啶修飾之核苷，且加底線核心中之所有核苷間鍵為硫代磷酸酯(PS)，其立體化學模式選自RSSSRSRRRS、RSSSSSSSSS、SRRSRSSSSR、SRSRSSRSSR、RRRSSSRSSS、RRRSRSSRSR、RRSSSRSRSR、SRSSSRSSSS、SSRRSSRSRS、SSSSSSRRSS、RRRSSRRRSR、RRRRSSSSRS、SRRSRRRRRR、RSSRSSRRRR、RSRRSRRSRR、RRSRSSRSRS、SSRRRRRSRR、RSRRSRSSSR、RRSSRSRRRR、RRSRSRRSSS、RRSRSSSRRR、RSRRRRSRSR、SSRSSSRRRS、RSSRSRSRSR、RSRSRSSRSS、RRRSSRRSRS、SRRSSRRSRS、RRRRSRSRRR、SSSSRRRRSR、RRRRRRRRRR及SSSSSSSSSS。
217.如實施例215或216之組合物，其中包含(S)-cEt修飾之各核苷酸之各硫代磷酸酯部分為立體無規的。
218.如前述實施例中之任一者的組合物，其中鹼基序列為或包含與目標序列互補的序列，其中當與包含目標序列之核酸聚合物接觸時，該組合物所提供之裂解模式相比於來自參考寡核苷酸組合物之參考裂解模式有所更改。
219.如前述實施例中之任一者的組合物，其中核酸聚合物為RNA，且參考寡核苷酸組合物為共用共同序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑。
220.如前述實施例中之任一者的組合物，其中核酸聚合物為RNA，且參考寡核苷酸組合物為共用共同序列及長度之寡核苷酸的不控制對掌性的寡核苷酸組合物。
221.如前述實施例中之任一者的組合物，其中更改的裂解模式所具有的裂解位點比參考裂解模式少。
222.如前述實施例中之任一者的組合物，其中更改的裂解模式在目標序列內具有僅一個裂解位點，且參考裂解模式在目標序列內具 有兩個或更多個裂解位點。
223.如前述實施例中之任一者的組合物，其中寡核苷酸之鹼基序列為或包含與特徵序列元件互補的序列，該特徵序列元件相對於群體中所存在之相同目標基因之其他對偶基因定義目標基因之特定對偶基因，該組合物之特徵在於，當其與表現相同基因之目標對偶基因及另一對偶基因之轉錄物的系統接觸時，特定對偶基因之轉錄物遭到抑制之程度比相同基因之另一對偶基因所觀察到的抑制程度大至少2倍。
224.如前述實施例中之任一者的組合物，其中寡核苷酸之鹼基序列為或包含與特徵序列元件互補的序列，該特徵序列元件相對於群體中所存在之相同目標基因之其他對偶基因定義目標基因之特定對偶基因，該組合物之特徵在於，當其與表現目標基因之轉錄物的系統接觸時，其顯示按以下程度抑制特定對偶基因之轉錄物之表現：a)所偵測到之來自特定對偶基因之轉錄物的量相差至少2倍，存在組合物時相對於不存在組合物時減少2倍；b)比相同基因之另一對偶基因所觀察到之抑制程度大至少2倍；或c)所偵測到之來自特定對偶基因之轉錄物的量相差至少2倍，存在組合物時相對於不存在組合物時減少2倍，且比相同基因之另一對偶基因所觀察到之抑制程度大至少2倍。
225.如前述實施例中之任一者的組合物，其中鹼基序列包含與目標之特徵序列元件互補的序列，其中特徵序列元件相對於類似序列定義目標序列。
226.如前述實施例中之任一者的組合物，其中核心區之鹼基序列包含與目標之特徵序列元件互補的序列，其中特徵序列元件相對於類似序列定義目標序列。
227.如前述實施例中之任一者的組合物，其中目標序列為包含突變之序列，且類似序列為野生型序列。
228.如前述實施例中之任一者的組合物，其中特徵序列元件相對於相同目標序列之其他對偶基因定義目標序列之特定對偶基因。
229.如前述實施例中之任一者的組合物，其中特徵序列元件相對於相同目標基因之其他對偶基因定義目標基因之特定對偶基因。
230.如前述實施例中之任一者的組合物，其中該序列與特徵序列元件100%互補。
231.如前述實施例中之任一者的組合物，其中寡核苷酸中如自寡核苷酸之5'端起計數之位置11、12或13與特徵序列元件對準。
232.如實施例1至230中之任一者的組合物，其中寡核苷酸中如自寡核苷酸5'端起計數之位置11與特徵序列元件對準。
233.如實施例1至230中之任一者的組合物，其中寡核苷酸中如自寡核苷酸之5'端起計數之位置12與特徵序列元件對準。
234.如實施例1至230中之任一者的組合物，其中寡核苷酸中如自寡核苷酸之5'端起計數之位置13與特徵序列元件對準。
235.如實施例1至230中之任一者的組合物，其中寡核苷酸中如自寡核苷酸之3'端起計數之位置8、9或10與特徵序列元件對準。
236.如實施例1至230中之任一者的組合物，其中寡核苷酸中如自寡核苷酸之3'端起計數之位置8與特徵序列元件對準。
237.如實施例1至230中之任一者的組合物，其中寡核苷酸中如自寡核苷酸之3'端起計數之位置9與特徵序列元件對準。
238.如實施例1至230中之任一者的組合物，其中寡核苷酸中如自寡核苷酸之3'端起計數之位置10與特徵序列元件對準。
239.如實施例1至230中之任一者的組合物，其中核心區中如自核心區之5'端起計數之位置6、7或8與特徵序列元件對準。
240.如實施例1至230中之任一者的組合物，其中核心區中如自核心區之5'端起計數之位置6與特徵序列元件對準。
241.如實施例1至230中之任一者的組合物，其中核心區中如自核心區之5'端起計數之位置7與特徵序列元件對準。
242.如實施例1至230中之任一者的組合物，其中核心區中如自核心區之5'端起計數之位置8與特徵序列元件對準。
243.如實施例1至230中之任一者的組合物，其中核心區中如自核心區之3'端起計數之位置3、4或5與特徵序列元件對準。
244.如實施例1至230中之任一者的組合物，其中核心區中如自核心區之3'端起計數之位置3與特徵序列元件對準。
245.如實施例1至230中之任一者的組合物，其中核心區中如自核心區之3'端起計數之位置4與特徵序列元件對準。
246.如實施例1至230中之任一者的組合物，其中核心區中如自核心區之3'端起計數之位置5與特徵序列元件對準。
247.如前述實施例中之任一者的組合物，其中寡核苷酸類型之共同鹼基序列或鹼基序列為DNA裂解模式具有在目標核酸序列之特徵序列元件內或其附近之裂解位點的序列。
248.如前述實施例中之任一者的組合物，其中DNA裂解模式為具有該序列之DNA寡核苷酸之寡核苷酸組合物的裂解模式，其中組合物中之各寡核苷酸具有相同結構。
249.如前述實施例中之任一者的組合物，其中寡核苷酸類型之共同鹼基序列或鹼基序列為立體無規裂解模式具有在目標核酸序列之特徵序列元件內或其附近之裂解位點的序列。
250.如前述實施例中之任一者的組合物，其中立體無規裂解模式為具有該序列之寡核苷酸之立體無規組合物的裂解模式，其中各核苷酸間鍵聯為硫代磷酸酯。
251.如前述實施例中之任一者的組合物，其中在目標核酸序列之特徵序列元件內或其附近之裂解位點係在核心區中。
252.如前述實施例中之任一者的組合物，其中裂解位點係在目標核酸序列之特徵序列元件附近。
253.如前述實施例中之任一者的組合物，其中在附近之裂解位點為遠離特徵序列元件0、1、2、3、4或5個核苷酸間鍵聯的裂解位點。
254.如前述實施例中之任一者的組合物，其中在附近之裂解位點為遠離特徵序列元件0個核苷酸間鍵聯的裂解位點。
255.如前述實施例中之任一者的組合物，其中在附近之裂解位點為遠離特徵序列元件1個核苷酸間鍵聯的裂解位點。
256.如前述實施例中之任一者的組合物，其中在附近之裂解位點為遠離特徵序列元件2個核苷酸間鍵聯的裂解位點。
257.如前述實施例中之任一者的組合物，其中在附近之裂解位點為遠離特徵序列元件3個核苷酸間鍵聯的裂解位點。
258.如前述實施例中之任一者的組合物，其中在附近之裂解位點為遠離特徵序列元件4個核苷酸間鍵聯的裂解位點。
259.如前述實施例中之任一者的組合物，其中在附近之裂解位點為遠離特徵序列元件5個核苷酸間鍵聯的裂解位點。
260.如前述實施例中之任一者的組合物，其中在附近之裂解位點為裂解位點5'之裂解位點。
261.如前述實施例中之任一者的組合物，其中在附近之裂解位點為裂解位點3'之裂解位點。
261.如前述實施例中之任一者的組合物，其中在特徵序列元件內或其附近之裂解位點為主要裂解位點。
262.如前述實施例中之任一者的組合物，其中在特徵序列元件 內或其附近之裂解位點為相對主要裂解位點。
263.如前述實施例中之任一者的組合物，其中在特徵序列元件內或其附近之裂解位點為相對主要裂解位點，其中大於40%之總裂解發生在該位點。
264.如前述實施例中之任一者的組合物，其中在特徵序列元件內或其附近之裂解位點為相對主要裂解位點，其中大於50%之總裂解發生在該位點。
265.如前述實施例中之任一者的組合物，其中在特徵序列元件內或其附近之裂解位點為相對主要裂解位點，其中大於60%之總裂解發生在該位點。
266.如前述實施例中之任一者的組合物，其中在特徵序列元件內或其附近之裂解位點為相對主要裂解位點，其中大於70%之總裂解發生在該位點。
267.如前述實施例中之任一者的組合物，其中在特徵序列元件內或其附近之裂解位點為相對主要裂解位點，其中大於80%之總裂解發生在該位點。
268.如前述實施例中之任一者的組合物，其中在特徵序列元件內或其附近之裂解位點為相對主要裂解位點，其中大於90%之總裂解發生在該位點。
269.如前述實施例中之任一者的組合物，其中在特徵序列元件內或其附近之裂解位點為相對主要裂解位點，其中大於95%之總裂解發生在該位點。
270.如前述實施例中之任一者的組合物，其中在特徵序列元件內或其附近之裂解位點為相對主要裂解位點，其中大於100%之總裂解發生在該位點。
271.如前述實施例中之任一者的組合物，其中在特徵序列元件 內或其附近之裂解位點為絕對主要裂解位點，其中大於5%之總目標在該位點裂解。
272.如前述實施例中之任一者的組合物，其中在特徵序列元件內或其附近之裂解位點為絕對主要裂解位點，其中大於10%之總目標在該位點裂解。
273.如前述實施例中之任一者的組合物，其中在特徵序列元件內或其附近之裂解位點為絕對主要裂解位點，其中大於15%之總目標在該位點裂解。
274.如前述實施例中之任一者的組合物，其中在特徵序列元件內或其附近之裂解位點為絕對主要裂解位點，其中大於20%之總目標在該位點裂解。
275.如前述實施例中之任一者的組合物，其中在特徵序列元件內或其附近之裂解位點為絕對主要裂解位點，其中大於25%之總目標在該位點裂解。
276.如前述實施例中之任一者的組合物，其中在特徵序列元件內或其附近之裂解位點為絕對主要裂解位點，其中大於30%之總目標在該位點裂解。
277.如前述實施例中之任一者的組合物，其中在特徵序列元件內或其附近之裂解位點為絕對主要裂解位點，其中大於35%之總目標在該位點裂解。
278.如前述實施例中之任一者的組合物，其中在特徵序列元件內或其附近之裂解位點為絕對主要裂解位點，其中大於40%之總目標在該位點裂解。
279.如前述實施例中之任一者的組合物，其中在特徵序列元件內或其附近之裂解位點為絕對主要裂解位點，其中大於45%之總目標在該位點裂解。
280.如前述實施例中之任一者的組合物，其中在特徵序列元件內或其附近之裂解位點為絕對主要裂解位點，其中大於50%之總目標在該位點裂解。
281.如前述實施例中之任一者的組合物，其中在特徵序列元件內或其附近之裂解位點為絕對主要裂解位點，其中大於60%之總目標在該位點裂解。
282.如前述實施例中之任一者的組合物，其中在特徵序列元件內或其附近之裂解位點為絕對主要裂解位點，其中大於70%之總目標在該位點裂解。
283.如前述實施例中之任一者的組合物，其中在特徵序列元件內或其附近之裂解位點為絕對主要裂解位點，其中大於80%之總目標在該位點裂解。
284.如前述實施例中之任一者的組合物，其中在特徵序列元件內或其附近之裂解位點為絕對主要裂解位點，其中大於90%之總目標在該位點裂解。
285.如前述實施例中之任一者的組合物，其中相對或絕對主要裂解位點係由核糖核酸酶H分析判定。
286.如前述實施例中之任一者的組合物，其中特徵序列元件包含單核苷酸多形現象(SNP)或突變。
287.如前述實施例中之任一者的組合物，其中特徵序列元件包含單核苷酸多形現象。
288.如前述實施例中之任一者的組合物，其中特徵序列元件為單核苷酸多形現象。
289.如前述實施例中之任一者的組合物，其中單核苷酸多形現象為與亨廷頓氏病相關的單核苷酸多形現象。
290.如前述實施例中之任一者的組合物，其中單核苷酸多形現 象為亨廷頓基因中所存在之單核苷酸多形現象。
291.如前述實施例中之任一者的組合物，其中單核苷酸多形現象係選自rs362307、rs7685686、rs362268、rs2530595、rs362331或rs362306。
291a.如前述實施例中之任一者的組合物，其中單核苷酸多形現象係選自rs362307、rs7685686、rs362268或rs362306。
292.如前述實施例中之任一者的組合物，其中單核苷酸多形現象為rs362307。
293.如前述實施例中之任一者的組合物，其中單核苷酸多形現象為rs7685686。
294.如前述實施例中之任一者的組合物，其中單核苷酸多形現象為rs362268。
295.如前述實施例中之任一者的組合物，其中單核苷酸多形現象為rs362306。
295a.如前述實施例中之任一者的組合物，其中單核苷酸多形現象為rs2530595。
295b.如前述實施例中之任一者的組合物，其中單核苷酸多形現象為rs362331。
296.如實施例1至290中之任一者的組合物，其中單核苷酸多形現象係在外顯子中。
297.如實施例1至290中之任一者的組合物，其中單核苷酸多形現象係在內含子中。
298.如實施例1至290中之任一者的組合物，其中組合物係選自表N1、表N2、表N3、表N4及表8。
298a.如實施例1至290中之任一者的組合物，其中組合物係選自表N1、表N2、表N3及表N4。
299.如實施例1至290中之任一者的組合物，其中組合物係選自表N1A、表N2A、表N3A、表N4A及表8；及WV-1092、WVE120101、WV-2603及WV-2595。
299a.如實施例1至290中之任一者的組合物，其中組合物係選自表N1A、表N2A、表N3A及表N4A。
300.如實施例1至290中之任一者的組合物，其中組合物為WV-1092。
300a.如實施例1至290中之任一者的組合物，其中組合物為WVE120101。
300b.如實施例1至290中之任一者的組合物，其中組合物為WV-2603。
300c.如實施例1至290中之任一者的組合物，其中組合物為WV-2595。
301.如實施例1至290中之任一者的組合物，其中組合物不為ONT-450、ONT-451或ONT-452。
302.如前述實施例中之任一者的組合物，其中特徵序列元件包含突變。
303.如前述實施例中之任一者的組合物，其中特徵序列元件為突變。
304.如前述實施例中之任一者的組合物，其中寡核苷酸與突變型對偶基因至少95%互補。
305.如前述實施例中之任一者的組合物，其中寡核苷酸與突變型對偶基因100%互補。
306.如前述實施例中之任一者的組合物，其中寡核苷酸與包含SNP之目標序列至少95%互補，其中SNP與疾病相關。
307.如前述實施例中之任一者的組合物，其中寡核苷酸與包含 SNP之目標序列100%互補，其中SNP與疾病相關。
307a.如前述實施例中之任一者的組合物，其中寡核苷酸選擇性降低突變型對偶基因之RNA含量。
308.一種醫藥組合物，其包含如前述實施例中之任一者的組合物及醫藥載劑。
308a.如前述請求項中任一項之組合物，其進一步包含腦脊髓液。
309.如前述請求項中任一項之組合物，其進一步包含人工腦脊髓液。
310.一種用於控制裂解核酸聚合物之方法，該方法包含以下步驟：使核苷酸序列包含目標序列之核酸聚合物與包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物接觸，其特徵在於：1)共同鹼基序列及長度，其中共同鹼基序列為或包含與核酸聚合物中所存在之目標序列互補的序列；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有特定鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃。
310a.一種用於裂解具有包含目標序列之鹼基序列的核酸的方法，該方法包含以下步驟：(a)使具有包含目標序列之鹼基序列的核酸與包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物接觸，其特徵在於：1)共同鹼基序列及長度，其中該共同鹼基序列為或包含與核酸中之目標序列互補的序列； 2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有特定鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃，其中該寡核苷酸靶向突變型亨廷頓基因，且長度為約10至約50個核苷酸，其中主鏈鍵聯包含至少一個硫代磷酸酯，且其中主鏈對掌性中心模式包含至少一個呈Rp構形之對掌性中心及至少一個呈Sp構形之對掌性中心。
310b.一種用於裂解具有包含目標序列之鹼基序列的核酸的方法，該方法包含以下步驟：(a)使具有包含目標序列之鹼基序列的核酸與包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物接觸，其特徵在於：1)共同鹼基序列及長度，其中該共同鹼基序列為或包含與核酸中之目標序列互補的序列；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有該特定鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃，其中該寡核苷酸靶向突變型亨廷頓基因，且該長度為約10至約50個核苷酸，其中主鏈鍵聯包含至少一個硫代磷酸酯，且其中主鏈對掌性中心模式包含至少一個呈Rp構形之對掌性中心及至少一個呈Sp構形之對掌性中心；及(b)藉由核糖核酸酶H或RNA干擾機制介導，裂解核酸。
311.如實施例310之方法，其中該接觸係在發生核酸聚合物裂解之條件下執行。
312.如實施例310至311中之任一者的方法，其中該裂解係以不 同於當核酸聚合物與參考寡核苷酸組合物在類似條件下接觸時觀察到的參考裂解模式的裂解模式發生。
313.一種用於更改裂解模式之方法，該裂解模式係在核苷酸序列包括目標序列之核酸聚合物與包含具有特定鹼基序列及長度之寡核苷酸的參考寡核苷酸組合物接觸時所觀察到的，該特定鹼基序列為或包含與目標序列互補的序列，該方法包含：使核酸聚合物與具有特定鹼基序列及長度之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物接觸，該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有特定鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中單一寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃，該類寡核苷酸之特徵在於：1)特定鹼基序列及長度；2)特定主鏈鍵聯模式；及3)特定主鏈對掌性中心模式。
314.如實施例313之方法，其中該接觸係在發生核酸聚合物裂解之條件下執行。
315.如實施例312至314中之任一者的方法，其中參考寡核苷酸組合物為共用共同序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑。
316.如實施例312至314中之任一者的方法，其中參考寡核苷酸組合物為共用共同序列及長度之寡核苷酸的不控制對掌性之寡核苷酸組合物。
317.如實施例312至316中之任一者的方法，其中由對掌性受控寡核苷酸組合物所提供之裂解模式不同於參考裂解模式，不同之處在於其在核酸聚合物中所存在之目標序列內所具有的裂解位點比參考裂解模式少。
318.如實施例317之方法，其中相比於參考裂解模式而言，由對掌性受控寡核苷酸組合物所提供之裂解模式在核酸聚合物中所存在之 目標序列內具有單一裂解位點。
319.如實施例318之方法，其中單一裂解位點為參考裂解模式中之裂解位點。
320.如實施例318之方法，其中單一裂解位點為不在參考裂解模式中之裂解位點。
321.如實施例312至316中之任一者的方法，其中由對掌性受控寡核苷酸組合物所提供之裂解模式不同於參考裂解模式，不同之處在於其增加裂解位點處之裂解百分比。
322.如實施例321之方法，其中裂解百分比增加之裂解位點為參考裂解模式中之裂解位點。
323.如實施例321之方法，其中裂解百分比增加之裂解位點為不在參考裂解模式中之裂解位點。
324.如實施例310至323中之任一者的方法，其中對掌性受控寡核苷酸組合物所提供之目標核酸聚合物之裂解速率比參考寡核苷酸組合物高。
325.如實施例310至324中之任一者的方法，其中裂解速率高至少5倍。
326.如實施例310至325中之任一者的方法，其中對掌性受控寡核苷酸組合物所提供之剩餘未裂解之目標核酸聚合物的含量低於參考寡核苷酸組合物。
327.如實施例310至326中之任一者的方法，其中剩餘未裂解之目標核酸聚合物低至少5倍。
328.如實施例310至327中之任一者的方法，其中來自核酸聚合物之裂解產物自對掌性受控寡核苷酸組合物中之特定寡核苷酸類型之寡核苷酸解離的速率比自參考寡核苷酸組合物之寡核苷酸快。
329.一種用於抑制來自目標核酸序列之轉錄物的方法，關於目 標核酸序列，在群體內存在一或多個類似核酸序列，目標序列及類似序列各自含有特異性核苷酸特徵序列元件，其相對於類似序列定義目標序列，該方法包含以下步驟：使包含目標核酸序列之轉錄物的樣品與包含具有以下之寡核苷酸的寡核苷酸組合物接觸：1)共同鹼基序列及長度；及2)共同主鏈鍵聯模式；其中共同鹼基序列為或包含與定義目標核酸序列之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特性在於，當其與包含目標核酸序列及類似核酸序列之轉錄物的系統接觸時，目標核酸序列之轉錄物遭到抑制的程度大於類似核酸序列所觀察到之抑制程度。
330.一種用於抑制來自目標核酸序列之轉錄物的方法，關於該目標核酸序列，在群體內存在一或多個類似核酸序列，目標序列及類似序列各自含有特異性核苷酸特徵序列元件，其相對於類似序列定義目標序列，該方法包含以下步驟：使包含目標核酸序列之轉錄物的樣品與包含具有以下之寡核苷酸的寡核苷酸組合物接觸：1)共同鹼基序列及長度；及2)共同主鏈鍵聯模式；3)共同主鏈對掌性中心模式；其中共同鹼基序列為或包含與定義目標核酸序列之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特性在於，當其與包含目標核酸序列及類似核酸序列之轉錄物的系統接觸時，目標核酸序列之轉錄物遭到抑制的程度大於類似核酸序列所觀察到之抑制程度。
331.一種用於抑制來自目標核酸序列之轉錄物的方法，關於該目標核酸序列，在群體內存在一或多個類似核酸序列，目標序列及類 似序列各自含有特異性核苷酸特徵序列元件，其相對於類似序列定義目標序列，該方法包含以下步驟：使包含目標核酸序列之轉錄物的樣品與包含具有以下之寡核苷酸的寡核苷酸組合物接觸：1)共同鹼基序列及長度；及2)共同主鏈鍵聯模式；其中共同鹼基序列為或包含與相對於類似序列定義特定目標序列之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特徵在於，當其與包含目標對偶基因及相同基因之另一對偶基因的轉錄物之系統接觸時，特定對偶基因之轉錄物遭到抑制之程度比相同基因之另一對偶基因所觀察到之抑制程度大至少2倍。
332.一種用於抑制來自目標核酸序列之轉錄物的方法，關於該目標核酸序列，在群體內存在一或多個類似核酸序列，目標序列及類似序列各自含有特異性核苷酸特徵序列元件，其相對於類似序列定義目標序列，該方法包含以下步驟：使包含目標核酸序列之轉錄物的樣品與包含具有以下之寡核苷酸的寡核苷酸組合物接觸：1)共同鹼基序列及長度；及2)共同主鏈鍵聯模式；3)共同主鏈對掌性中心模式；其中共同鹼基序列為或包含與相對於類似序列定義特定目標序列之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特徵在於，當其與包含目標對偶基因及相同基因之另一對偶基因之轉錄物的系統接觸時，特定對偶基因之轉錄物遭到抑制之程度比相同基因之另一對偶基因所觀察到之抑制程度大至少2倍。
333.一種用於抑制來自目標核酸序列之轉錄物的方法，關於該 目標核酸序列，在群體內存在一或多個類似核酸序列，目標序列及類似序列各自含有特異性核苷酸特徵序列元件，其相對於類似序列定義目標序列，該方法包含以下步驟：使包含目標核酸序列之轉錄物的樣品與包含具有以下之寡核苷酸的寡核苷酸組合物接觸：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；其中共同鹼基序列為或包含與相對於類似序列定義特定目標序列之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特徵在於，當其與包含相同目標核酸序列之轉錄物的系統接觸時，其顯示按以下程度抑制特定目標序列之轉錄物：a)大於該組合物不存在時；b)大於類似序列所觀察到之抑制程度；或c)大於不存在組合物時，且大於類似序列所觀察到之抑制程度。
334.一種用於抑制來自目標核酸序列之轉錄物的方法，關於該目標核酸序列，在群體內存在一或多個類似核酸序列，目標序列及類似序列各自含有特異性核苷酸特徵序列元件，其相對於類似序列定義目標序列，該方法包含以下步驟：使包含目標核酸序列之轉錄物的樣品與包含具有以下之寡核苷酸的寡核苷酸組合物接觸：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；3)共同主鏈對掌性中心模式；其中共同鹼基序列為或包含與相對於類似序列定義特定目標序列之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特徵在於，當其與包含相 同目標核酸序列之轉錄物的系統接觸時，其顯示按以下程度抑制特定目標序列之轉錄物：a)大於該組合物不存在時；b)大於類似序列所觀察到之抑制程度；或c)大於不存在組合物時，且大於類似序列所觀察到之抑制程度。
335.一種用於抑制來自目標核酸序列之轉錄物的方法，關於該目標核酸序列，在群體內存在一或多個類似核酸序列，目標序列及類似序列各自含有特異性核苷酸特徵序列元件，其相對於類似序列定義目標序列，該方法包含以下步驟：使包含目標基因之轉錄物的樣品與包含具有以下之寡核苷酸的寡核苷酸組合物接觸：1)共同鹼基序列及長度；及2)共同主鏈鍵聯模式；其中共同鹼基序列為或包含與定義特定目標核酸序列之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特徵在於，當其與表現目標核酸序列之轉錄物的系統接觸時，其顯示按以下程度抑制特定目標核酸序列之轉錄物的表現：a)所偵測到之來自特定目標核酸序列之轉錄物的量相差至少2倍，存在組合物時比不存在組合物時低2倍；b)比類似序列所觀察到之抑制程度大至少2倍；或c)所偵測到之來自特定目標核酸序列之轉錄物的量相差至少2倍，存在組合物時比不存在組合物時低2倍，且比類似序列所觀察到之抑制程度大至少2倍。
336.一種用於抑制來自目標核酸序列之轉錄物的方法，關於該目標核酸序列，在群體內存在一或多個類似核酸序列，目標序列及類 似序列各自含有特異性核苷酸特徵序列元件，其相對於類似序列定義目標序列，該方法包含以下步驟：使包含目標基因之轉錄物的樣品與包含具有以下之寡核苷酸的寡核苷酸組合物接觸：1)共同鹼基序列及長度；及2)共同主鏈鍵聯模式；3)共同主鏈對掌性中心模式；其中共同鹼基序列為或包含與定義特定目標核酸序列之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特徵在於，當其與表現目標核酸序列之轉錄物的系統接觸時，其顯示按以下程度抑制特定目標核酸序列之轉錄物的表現：a)所偵測到之來自特定目標核酸序列之轉錄物的量相差至少2倍，存在組合物時比不存在組合物時低2倍；b)比類似序列所觀察到之抑制程度大至少2倍；或c)所偵測到之來自特定目標核酸序列之轉錄物的量相差至少2倍，存在組合物時比不存在組合物時低2倍，且比類似序列所觀察到之抑制程度大至少2倍。
337.如前述實施例中之任一者的方法，其中目標序列為包含突變之序列，且類似序列為野生型序列。
338.如前述實施例中之任一者的方法，其中特徵序列元件相對於相同目標序列之其他對偶基因定義目標序列之特定對偶基因。
339.如前述實施例中之任一者的方法，其中特徵序列元件相對於相同目標基因之其他對偶基因定義目標基因之特定對偶基因。
340.一種用於對偶基因特異性抑制來自目標核酸序列之轉錄物的方法，關於該目標核酸序列，在群體內存在複數個對偶基因，其各自含有相對於相同目標核酸序列之其他對偶基因定義對偶基因的特異 性核苷酸特徵序列元件，該方法包含以下步驟：使包含目標核酸序列之轉錄物的樣品與包含具有以下之寡核苷酸的寡核苷酸組合物接觸：1)共同鹼基序列及長度；及2)共同主鏈鍵聯模式；其中共同鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特性在於，當其與包含目標對偶基因及相同核酸序列之另一對偶基因之轉錄物的系統接觸時，特定對偶基因之轉錄物遭到抑制之程度大於相同核酸序列之另一對偶基因所觀察到之抑制程度。
341.一種用於對偶基因特異性抑制來自目標核酸序列之轉錄物的方法，關於該目標核酸序列，在群體內存在複數個對偶基因，其各自含有相對於相同目標核酸序列之其他對偶基因定義對偶基因的特異性核苷酸特徵序列元件，該方法包含以下步驟：使包含目標核酸序列之轉錄物的樣品與包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物接觸，該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的特徵在於：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有相同鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃；其中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的共同鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特性在於，當其與包含目標對偶基因及相同核酸序列之另一對偶基因之轉錄 物的系統接觸時，特定對偶基因之轉錄物遭到抑制之程度大於相同核酸序列之另一對偶基因所觀察到之抑制程度。
342.一種用於對偶基因特異性抑制來自目標基因之轉錄物的方法，關於該目標基因，在群體內存在複數個對偶基因，其各自含有相對於相同目標基因之其他對偶基因定義對偶基因的特異性核苷酸特徵序列元件，該方法包含以下步驟：使包含目標基因之轉錄物的樣品與包含具有以下之寡核苷酸的寡核苷酸組合物接觸：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；其中共同鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特徵在於，當其與包含目標對偶基因及相同基因之另一對偶基因之轉錄物的系統接觸時，特定對偶基因之轉錄物遭到抑制之程度為相同基因之另一對偶基因所觀察到之抑制程度的至少2倍。
343.一種用於對偶基因特異性抑制來自目標基因之轉錄物的方法，關於該目標基因，在群體內存在複數個對偶基因，其各自含有相對於相同目標基因之其他對偶基因定義對偶基因的特異性核苷酸特徵序列元件，該方法包含以下步驟：使包含目標基因之轉錄物的樣品與包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物接觸，該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸之特徵在於：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有相同鹼基序列及長 度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃；其中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的共同鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特徵在於，當其與包含目標對偶基因及相同基因之另一對偶基因之轉錄物的系統接觸時，特定對偶基因之轉錄物遭到抑制之程度為相同基因之另一對偶基因所觀察到之抑制程度的至少2倍。
344.如實施例340或342之方法，該接觸係在確定允許組合物抑制特定對偶基因之轉錄物的條件下執行。
345.一種用於對偶基因特異性抑制來自目標基因之轉錄物的方法，關於該目標基因，在群體內存在複數個對偶基因，其各自含有相對於相同目標基因之其他對偶基因定義對偶基因的特異性核苷酸特徵序列元件，該方法包含以下步驟：使包含目標基因之轉錄物的樣品與包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物接觸，該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸之特徵在於：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有相同鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃；其中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的共同鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特徵在於，當其與表現目標對偶基因及相同基因之另一對偶基因之轉錄物的系統接觸時，特定對偶基因之轉錄物遭到抑制之程度為相同基因之另 一對偶基因所觀察到之抑制程度的至少2倍。
346.如實施例345之方法，其中該接觸係在確定允許組合物抑制特定對偶基因之表現的條件下執行。
347.如實施例340至346中之任一者的方法，其中特定對偶基因之轉錄物遭到抑制之程度比相同基因之另一對偶基因所觀察到之抑制程度大至少5、10、20、50、100、200或500倍。
348.一種用於對偶基因特異性抑制來自目標核酸序列之轉錄物的方法，關於該目標核酸序列，在群體內存在複數個對偶基因，其各自含有相對於相同目標核酸序列之其他對偶基因定義對偶基因的特異性核苷酸特徵序列元件，該方法包含以下步驟：使包含目標核酸序列之轉錄物的樣品與包含具有以下之寡核苷酸的寡核苷酸組合物接觸：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；其中共同鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特徵在於，當其與包含相同目標核酸序列之轉錄物的系統接觸時，其顯示按以下程度抑制特定對偶基因之轉錄物：a)大於該組合物不存在時；b)大於相同核酸序列之另一對偶基因所觀察到之抑制程度；或c)大於組合物不存在時，且大於相同核酸序列之另一對偶基因所觀察到之抑制程度。
349.一種用於對偶基因特異性抑制來自目標核酸序列之轉錄物的方法，關於該目標核酸序列，在群體內存在複數個對偶基因，其各自含有相對於相同目標核酸序列之其他對偶基因定義對偶基因的特異性核苷酸特徵序列元件，該方法包含以下步驟： 使包含目標核酸序列之轉錄物的樣品與包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物接觸，該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的特徵在於：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有相同鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃；其中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸之共同鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特徵在於，當其與包含相同目標核酸序列之轉錄物的系統接觸時，其顯示按以下程度抑制特定對偶基因之轉錄物：a)大於該組合物不存在時；b)大於相同核酸序列之另一對偶基因所觀察到之抑制程度；或c)大於組合物不存在時，且大於相同核酸序列之另一對偶基因所觀察到之抑制程度。
350.一種用於控制裂解核酸聚合物之方法，該方法包含使核苷酸序列包含目標序列之核酸聚合物與如實施例540至574中之任一者的寡核苷酸或寡核苷酸組合物接觸。
351.一種用於抑制來自目標核酸序列之轉錄物的方法，關於該目標核酸序列，在群體內存在一或多個類似核酸序列，目標序列及類似序列各自含有相對於類似序列定義目標序列的特異性核苷酸特徵序列元件，該方法包含使包含目標核酸序列之轉錄物的樣品與如實施例540至574中之任一者的寡核苷酸或寡核苷酸組合物接觸，其中寡核苷酸之鹼基序列為或包含與定義目標核酸序列之特徵序列元件互補的序列。
352.一種用於對偶基因特異性抑制來自目標核酸序列之轉錄物的方法，關於該目標核酸序列，在群體內存在複數個對偶基因，其各自含有相對於相同目標核酸序列之其他對偶基因定義對偶基因的特異性核苷酸特徵序列元件，該方法包含使包含目標核酸序列之轉錄物的樣品與如實施例540至574中之任一者的寡核苷酸或寡核苷酸組合物接觸，其中寡核苷酸之鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因的特徵序列元件互補的序列。
353.一種用於對偶基因特異性抑制來自目標核酸序列之轉錄物的方法，關於該目標核酸序列，在群體內存在複數個對偶基因，其各自含有相對於相同目標核酸序列之其他對偶基因定義對偶基因的特異性核苷酸特徵序列元件，該方法包含使包含目標核酸序列之轉錄物的樣品與如實施例540至574中之任一者的寡核苷酸或寡核苷酸組合物接觸，其中寡核苷酸之鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因之特徵序列元件互補的序列，寡核苷酸或寡核苷酸組合物之特徵在於，當其與包含目標對偶基因及相同基因之另一對偶基因的轉錄物之系統接觸時，特定對偶基因之轉錄物遭到抑制之程度比相同基因之另一對偶基因所觀察到之抑制程度大至少2倍。
354.一種用於對偶基因特異性抑制來自目標核酸序列之轉錄物的方法，關於該目標核酸序列，在群體內存在複數個對偶基因，其各自含有相對於相同目標核酸序列之其他對偶基因定義對偶基因的特異性核苷酸特徵序列元件，該方法包含使包含目標核酸序列之轉錄物的樣品與如實施例540至574中之任一者的寡核苷酸或寡核苷酸組合物接觸，其中寡核苷酸之鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因的特徵序列元件互補的序列，寡核苷酸或寡核苷酸組合物之特徵在於，當其與表現目標對偶基因及相同基因之另一對偶基因之轉錄物的系統接觸時，特定對偶基因之轉錄物遭到抑制之程度比相同基因之另一對偶基 因所觀察到之抑制程度大至少2倍。
355.一種用於對偶基因特異性抑制來自目標核酸序列之轉錄物的方法，關於該目標核酸序列，在群體內存在複數個對偶基因，其各自含有相對於相同目標核酸序列之其他對偶基因定義對偶基因的特異性核苷酸特徵序列元件，該方法包含使包含目標核酸序列之轉錄物的樣品與如實施例540至574中之任一者的寡核苷酸或寡核苷酸組合物接觸，其中寡核苷酸之鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因之特徵序列元件互補的序列，寡核苷酸或寡核苷酸組合物之特徵在於，當其與包含相同目標核酸序列之轉錄物的系統接觸時，其顯示按以下程度抑制特定對偶基因之轉錄物：a)大於該組合物不存在時；b)大於相同核酸序列之另一對偶基因所觀察到之抑制程度；或c)大於組合物不存在時，且大於相同核酸序列之另一對偶基因所觀察到之抑制程度。
356.一種用於對偶基因特異性抑制來自目標核酸序列之轉錄物的方法，關於該目標核酸序列，在群體內存在複數個對偶基因，其各自含有相對於相同目標核酸序列之其他對偶基因定義對偶基因的特異性核苷酸特徵序列元件，該方法包含使包含目標核酸序列之轉錄物的樣品與如實施例540至574中之任一者的寡核苷酸或寡核苷酸組合物接觸，其中寡核苷酸之鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因之特徵序列元件互補的序列，寡核苷酸或寡核苷酸組合物之特徵在於，當其與表現相同目標核酸序列之轉錄物的系統接觸時，其顯示按以下程度抑制特定對偶基因之轉錄物：a)大於該組合物不存在時；b)大於相同核酸序列之另一對偶基因所觀察到之抑制程度；或c)大於組合物不存在時，且大於相同核酸序列之另一對偶基因 所觀察到之抑制程度。
357.一種用於對偶基因特異性抑制來自目標基因之轉錄物的方法，關於該目標基因，在群體內存在複數個對偶基因，其各自含有相對於相同目標基因之其他對偶基因定義對偶基因的特異性核苷酸特徵序列元件，該方法包含以下步驟：使包含目標基因之轉錄物的樣品與包含具有以下之寡核苷酸的寡核苷酸組合物接觸：1)共同鹼基序列及長度；及2)共同主鏈鍵聯模式；其中共同鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特徵在於，當其與表現目標基因之轉錄物的系統接觸時，其顯示按以下程度抑制特定對偶基因之轉錄物的表現：a)所偵測到之來自特定對偶基因之轉錄物的量相差至少2倍，存在組合物時相對於不存在組合物時減少2倍；b)比相同基因之另一對偶基因所觀察到之抑制程度大至少2倍；或c)所偵測到之來自特定對偶基因之轉錄物的量相差至少2倍，存在組合物時相對於不存在組合物時減少2倍，且比相同基因之另一對偶基因所觀察到之抑制程度大至少2倍。
358.一種用於對偶基因特異性抑制來自目標基因之轉錄物的方法，關於該目標基因，在群體內存在複數個對偶基因，其各自含有相對於相同目標基因之其他對偶基因定義對偶基因的特異性核苷酸特徵序列元件，該方法包含以下步驟：使包含目標基因之轉錄物的樣品與包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物接觸，該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸之特徵在於： 1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有相同鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃；其中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸之共同鹼基序列為或包含與定義特定對偶基因之特徵序列元件互補的序列，該組合物之特徵在於，當其與表現目標基因之轉錄物的系統接觸時，其顯示按以下程度抑制特定對偶基因之轉錄物的表現：a)所偵測到之來自特定對偶基因之轉錄物的量相差至少2倍，存在組合物時相對於不存在組合物時減少2倍；b)比相同基因之另一對偶基因所觀察到之抑制程度大至少2倍；或c)所偵測到之來自特定對偶基因之轉錄物的量相差至少2倍，存在組合物時相對於不存在組合物時減少2倍，且比相同基因之另一對偶基因所觀察到之抑制程度大至少2倍。
359.如前述實施例中之任一者的方法，其中所偵測到之來自特定對偶基因之轉錄物的量在不存在組合物時為存在組合物時的2倍或更多。
360.如前述實施例中之任一者的方法，其中相同基因之另一對偶基因之轉錄物的含量比特定對偶基因之轉錄物之含量大至少2倍。
361.如前述實施例中之任一者的方法，其中所偵測到之來自特定對偶基因之轉錄物的量在不存在組合物時為存在組合物時的2倍或更多，且相同基因之另一對偶基因之轉錄物的含量比特定對偶基因之轉錄物的含量大至少2倍。
362.如前述實施例中之任一者的方法，該接觸係在確定允許組 合物抑制特定對偶基因之轉錄物的條件下執行。
363.如前述實施例中之任一者的方法，其中該接觸係在確定允許組合物抑制特定對偶基因之表現的條件下執行。
364.如前述實施例中之任一者的方法，其中特定對偶基因之轉錄物遭到抑制之程度按所偵測到之來自特定對偶基因之彼轉錄物的量計為至少5、10、20、50、100、200或500倍，存在組合物時比不存在組合物時低2倍。
365.如前述實施例中之任一者的方法，其中特定對偶基因之轉錄物遭到抑制之程度比相同基因之另一對偶基因所觀察到之抑制程度大至少5、10、20、50、100、200或500倍。
366.如前述實施例中之任一者的方法，其中該系統為活體外或活體內系統。
366a如前述實施例中之任一者的方法，其中該方法係在活體外或活體內執行。
367.如前述實施例中之任一者的方法，其中該系統包含一或多個細胞、組織或器官。
368.如前述實施例中之任一者的方法，其中該系統包含一或多個生物體。
369.如前述實施例中之任一者的方法，其中該系統包含一或多個個體。
370.如前述實施例中之任一者的方法，其中特定對偶基因之轉錄物裂解。
371.如前述實施例中之任一者的方法，其中特異性核苷酸特徵序列元件存在於目標核酸序列或基因之內含子內。
372.如前述實施例中之任一者的方法，其中特異性核苷酸特徵序列元件存在於目標核酸序列或基因之外顯子內。
373.如前述實施例中之任一者的方法，其中特異性核苷酸特徵序列元件跨越目標核酸序列或基因之外顯子及內含子。
374.如前述實施例中之任一者的方法，其中特異性核苷酸特徵序列元件包含突變。
375.如前述實施例中之任一者的方法，其中特異性核苷酸特徵序列元件為突變。
376.如前述實施例中之任一者的方法，其中特異性核苷酸特徵序列元件包含SNP。
377.如前述實施例中之任一者的方法，其中特異性核苷酸特徵序列元件為SNP。
378.如前述實施例中之任一者的方法，其中向個體投與寡核苷酸組合物。
379.如前述實施例中之任一者的方法，其中目標核酸聚合物或轉錄物為寡核苷酸。
380.如前述實施例中之任一者的方法，其中目標核酸聚合物或轉錄物為RNA。
381.如前述實施例中之任一者的方法，其中目標核酸聚合物或轉錄物為新轉錄RNA。
382.如前述實施例中之任一者的方法，其中對掌性受控寡核苷酸組合物中之特定寡核苷酸類型之寡核苷酸與核酸聚合物或轉錄物形成雙螺旋體。
383.如前述實施例中之任一者的方法，其中核酸聚合物或轉錄物藉由酶裂解。
384.如前述實施例中之任一者的方法，其中酶為核糖核酸酶H。
385.如前述實施例中之任一者的方法，其中SNP為與亨廷頓氏 病相關之SNP。
386.如前述實施例中之任一者的方法，其中SNP為亨廷頓基因中所存在之SNP。
387.如前述實施例中之任一者的方法，其中SNP係選自rs362307、rs7685686、rs362268或rs362306。
388.如實施例310至387之方法，其中SNP為rs362307。
389.如實施例310至387之方法，其中單核苷酸多形現象為rs7685686。
390.如實施例310至387之方法，其中單核苷酸多形現象為rs362268。
391.如實施例310至387之方法，其中單核苷酸多形現象為rs362306。
392.如實施例310至391之方法，其中寡核苷酸中如自寡核苷酸之5'端起計數之位置11與單核苷酸多形現象對準。
393.如實施例310至391之方法，其中寡核苷酸中如自寡核苷酸之5'端起計數之位置12與單核苷酸多形現象對準。
394.如實施例310至391之方法，其中寡核苷酸中如自寡核苷酸之5'端起計數之位置13與單核苷酸多形現象對準。
395.如實施例310至391之方法，其中寡核苷酸中如自寡核苷酸之3'端起計數之位置8與單核苷酸多形現象對準。
396.如實施例310至391之方法，其中寡核苷酸中如自寡核苷酸之3'端起計數之位置9與單核苷酸多形現象對準。
397.如實施例310至391之方法，其中寡核苷酸中如自寡核苷酸之3'端起計數之位置10與單核苷酸多形現象對準。
398.如前述實施例中之任一者的方法，其中寡核苷酸包含一或多個翼區及一共同核心區，其中： 各翼區獨立地具有兩個或更多個鹼基之長度，且獨立地且視情況包含一或多個對掌性核苷酸間鍵聯；及該核心區獨立地具有兩個或更多個鹼基之長度且獨立地包含一或多個對掌性核苷酸間鍵聯。
399.如實施例310至398中之任一者的方法，其中核心區中如自核心區之5'端起計數之位置6與單核苷酸多形現象對準。
400.如實施例310至398中之任一者的方法，其中核心區中如自核心區之5'端起計數之位置7與單核苷酸多形現象對準。
401.如實施例310至398中之任一者的方法，其中核心區中如自核心區之5'端起計數之位置8與單核苷酸多形現象對準。
402.如實施例310至398中之任一者的方法，其中核心區中如自核心區之3'端起計數之位置3與單核苷酸多形現象對準。
403.如實施例310至398中之任一者的方法，其中核心區中如自核心區之3'端起計數之位置4與單核苷酸多形現象對準。
404.如實施例310至398中之任一者的方法，其中核心區中如自核心區之3'端起計數之位置5與單核苷酸多形現象對準。
405.如前述實施例中之任一者的方法，其中：各翼區獨立地具有兩個或更多個鹼基之長度，且獨立地包含一或多個對掌性核苷酸間鍵聯及一或多個天然磷酸酯鍵聯；且核心區獨立地具有兩個或更多個鹼基之長度，其中核心區中之各核苷酸間鍵聯為對掌性的，核心區中僅一個核苷酸間鍵聯為Rp，且核心區中之其他核苷酸間鍵聯各自為Sp。
406.如前述實施例中之任一者的方法，其中該等寡核苷酸為具有翼-核心結構之半聚體。
407.如實施例310至405中之任一者的方法，其中該等寡核苷酸為具有核心-翼結構之半聚體。
408.如實施例310至405中之任一者的方法，其中該等寡核苷酸為具有翼-核心-翼結構之間隔體。
409.如前述實施例中之任一者的方法，其中來自致病對偶基因之轉錄物的含量遭到選擇性抑制。
410.如前述實施例中之任一者的方法，其中自致病對偶基因之轉錄物轉譯的蛋白質之含量遭到抑制。
411.一種用於治療或預防個體之亨廷頓氏病的方法，該方法包含向個體投與寡核苷酸組合物，其包含具有以下之寡核苷酸：1)共同鹼基序列及長度；及2)共同主鏈鍵聯模式。
412.一種用於治療或預防個體之亨廷頓氏病的方法，其包含向個體投與包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物，其特徵在於：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有相同鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物中特定寡核苷酸類型之寡核苷酸增濃。
413.如實施例411或412之方法，其中該等寡核苷酸包含一或多個翼區及一共同核心區，其中：各翼區獨立地具有兩個或更多個鹼基之長度，且獨立地且視情況包含一或多個對掌性核苷酸間鍵聯；及該核心區獨立地具有兩個或更多個鹼基之長度且獨立地包含一或多個對掌性核苷酸間鍵聯。
414.如實施例411至4113中之任一者的方法，其中： 各翼區獨立地具有兩個或更多個鹼基之長度，且獨立地包含一或多個對掌性核苷酸間鍵聯及一或多個天然磷酸酯鍵聯；且核心區獨立地具有兩個或更多個鹼基之長度，其中核心區中之各核苷酸間鍵聯為對掌性的，核心區中僅一個核苷酸間鍵聯為Rp，且核心區中之其他核苷酸間鍵聯各自為Sp。
415.如實施例411至414中之任一者的方法，其中該等寡核苷酸為具有翼-核心結構之半聚體。
416.如實施例411至414中之任一者的方法，其中該等寡核苷酸為具有核心-翼結構之半聚體。
417.如實施例411至414中之任一者的方法，其中該等寡核苷酸為具有翼-核心-翼結構之間隔體。
418.如實施例411至417中之任一者的方法，其中寡核苷酸中如自寡核苷酸之5'端起計數之位置11與單核苷酸多形現象對準。
419.如實施例411至417中之任一者的方法，其中寡核苷酸中如自寡核苷酸之5'端起計數之位置12與單核苷酸多形現象對準。
420.如實施例411至417中之任一者的方法，其中寡核苷酸中如自寡核苷酸之5'端起計數之位置13與單核苷酸多形現象對準。
421.如實施例411至417中之任一者的方法，其中寡核苷酸中如自寡核苷酸之3'端起計數之位置8與單核苷酸多形現象對準。
422.如實施例411至417中之任一者的方法，其中寡核苷酸中如自寡核苷酸之3'端起計數之位置9與單核苷酸多形現象對準。
423.如實施例411至417中之任一者的方法，其中寡核苷酸中如自寡核苷酸之3'端起計數之位置10與單核苷酸多形現象對準。
424.如實施例411至417中之任一者的方法，其中核心區中如自核心區之5'端起計數之位置6與單核苷酸多形現象對準。
425.如實施例411至417中之任一者的方法，其中核心區中如自 核心區之5'端起計數之位置7與單核苷酸多形現象對準。
426.如實施例411至417中之任一者的方法，其中核心區中如自核心區之5'端起計數之位置8與單核苷酸多形現象對準。
427.如實施例411至417中之任一者的方法，其中核心區中如自核心區之3'端起計數之位置3與單核苷酸多形現象對準。
428.如實施例411至417中之任一者的方法，其中核心區中如自核心區之3'端起計數之位置4與單核苷酸多形現象對準。
429.如實施例411至417中之任一者的方法，其中核心區中如自核心區之3'端起計數之位置5與單核苷酸多形現象對準。
430.如實施例411至429中之任一者的方法，其中該方法改善亨廷頓氏病之症狀。
431.如實施例411至429中之任一者的方法，其中該方法減緩亨廷頓氏病之發作。
432.如實施例411至429中之任一者的方法，其中該方法減緩亨廷頓氏病之進程。
433.如實施例411至432中之任一者的方法，其中該個體具有與亨廷頓氏病相關之SNP。
434.如實施例411至433中之任一者的方法，其中該個體具有在個體之亨廷頓基因中之SNP。
435.如實施例411至434中之任一者的方法，其中該個體具有SNP，其中一個對偶基因為與經擴展之CAG重複序列相關之突變型亨廷頓。
436.如實施例411至435中之任一者的方法，其中該個體具有選自rs362307、rs7685686、rs362268、rs2530595、rs362331或rs362306之SNP。
436a.如實施例411至435中之任一者的方法，其中該個體具有選 自rs362307、rs7685686、rs362268或rs362306之SNP。
437.如實施例411至436中之任一者的方法，其中該個體具有SNP rs362307。
438.如實施例411至436中之任一者的方法，其中該個體具有SNP rs7685686。
439.如實施例411至436中之任一者的方法，其中該個體具有SNP rs362268。
440.如實施例411至436中之任一者的方法，其中該個體具有SNP rs362306。
440a.如實施例411至436中之任一者的方法，其中該個體具有SNP rs2530595。
440b.如實施例411至436中之任一者的方法，其中該個體具有SNP rs362331。
441.如實施例1至309中之任一者的組合物，其中寡核苷酸之基本上外消旋製劑係藉由非立體選擇性製備來製備。
442.如實施例1至309及441中之任一者的組合物，其中寡核苷酸之基本上外消旋製劑係藉由非立體選擇性製備來製備，其中不使用對掌性助劑形成對掌性核苷酸間鍵聯。
443.如實施例1至309及441至442中之任一者的組合物，其中寡核苷酸之基本上外消旋製劑係藉由非立體選擇性製備來製備，其中以小於80：20非對映異構選擇性形成至少一個對掌性核苷酸間鍵聯。
444.如實施例1至309及441至443中之任一者的組合物，其中寡核苷酸之基本上外消旋製劑係藉由非立體選擇性製備來製備，其中以小於90：10非對映異構選擇性形成至少一個對掌性核苷酸間鍵聯。
445.如實施例1至309及441至444中之任一者的組合物，其中寡核苷酸之基本上外消旋製劑係藉由非立體選擇性製備來製備，其中以 小於95：5非對映異構選擇性形成至少一個對掌性核苷酸間鍵聯。
446.如實施例1至309及441至445中之任一者的組合物，其中寡核苷酸之基本上外消旋製劑係藉由非立體選擇性製備來製備，其中以小於97：3非對映異構選擇性形成至少一個對掌性核苷酸間鍵聯。
447.如實施例1至309中之任一者的組合物，其中以大於90：10非對映異構選擇性形成各對掌性核苷酸間鍵聯。
448.如實施例1至309中之任一者的組合物，其中以大於95：5非對映異構選擇性形成各對掌性核苷酸間鍵聯。
449.如實施例1至309中之任一者的組合物，其中以大於96：4非對映異構選擇性形成各對掌性核苷酸間鍵聯。
450.如實施例1至309中之任一者的組合物，其中以大於97：3非對映異構選擇性形成各對掌性核苷酸間鍵聯。
451.如實施例1至309中之任一者的組合物，其中以大於98：2非對映異構選擇性形成各對掌性核苷酸間鍵聯。
452.如實施例1至309中之任一者的組合物，其中以大於98：2非對映異構選擇性形成各對掌性核苷酸間鍵聯。
453.如實施例443至452中之任一者的組合物，其中用於形成對掌性核苷酸間鍵聯之非對映異構選擇性係藉由在相同或類似反應條件下形成包含對掌性核苷酸間鍵聯及在對掌性核苷酸間鍵聯兩側之核苷的二聚寡核苷酸來量測。
454.一種用於製備用於選擇性抑制目標核酸序列之轉錄物的寡核苷酸組合物的方法，其包含提供包含預定含量之特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的寡核苷酸組合物，其特徵在於：1)共同鹼基序列；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈對掌性中心模式，該模式包含(Sp)m(Rp)n、 (Rp)n(Sp)m、(Np)t(Rp)n(Sp)m或(Sp)t(Rp)n(Sp)m，其中：m為1-50；n為1-10；t為1-50；各Np獨立地為Rp或Sp；其中目標核酸序列包含自類似核酸序列定義目標核酸序列的特徵序列元件；其中共同鹼基序列為DNA裂解模式及/或立體無規裂解模式具有在目標核酸序列內或其附近之裂解位點的序列。
455.如實施例454之方法，其中該模式包含(Sp)m(Rp)n。
456.如實施例454之方法，其中該模式包含(Rp)n(Sp)m。
457.如實施例454之方法，其中該模式包含(Np)t(Rp)n(Sp)m。
458.如實施例454之方法，其中該模式包含(Sp)t(Rp)n(Sp)m。
459.如實施例454之方法，其中該模式為如實施例145至157中之任一者中的模式。
460.如實施例454至458中之任一者的方法，其中裂解位點係在實施例247至285中之任一者中。
461.如前述實施例中之任一者的方法，其中寡核苷酸組合物為如實施例1至309及441至453中之任一者的組合物。
462.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中對掌性受控寡核苷酸組合物中之寡核苷酸之序列包含本文中所述任何寡核苷酸之序列、由該序列組成或為該序列，或選自表N1A、表N2A、表N3A、表N4A或表8；或WV-1092、WVE120101、WV-2603或WV-2595。
463.一種組合物，其包含脂質及寡核苷酸。
463a.如前述實施例中之任一者的組合物，其中該組合物包含一 或多個與組合物中之一或多個寡核苷酸結合的脂質。
464.一種組合物，其包含寡核苷酸及脂質，該脂質選自以下清單：月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞麻油酸、α-次亞麻油酸、γ-次亞麻油酸、二十二碳六烯酸(順-DHA)、喇叭藻酸、花生四烯酸及二亞油基。
464a.一種組合物，其包含寡核苷酸及脂質，該脂質選自以下清單：月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞麻油酸、α-次亞麻油酸、γ-次亞麻油酸、二十二碳六烯酸(順-DHA)、喇叭藻酸及二亞油基。
465.一種組合物，其包含寡核苷酸及脂質，該脂質選自：
466.一種組合物，其包含寡核苷酸及脂質，其中脂質包含C10-C40直鏈飽和或部分不飽和脂鏈，視情況經一或多個C1-4脂族基取代。
467.一種寡核苷酸組合物，其包含複數個寡核苷酸，其共用： 1)共同鹼基序列；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈磷修飾模式；其中該複數個中之一或多個寡核苷酸個別地結合至脂質。
468.一種對掌性受控寡核苷酸組合物，其包含複數個寡核苷酸，其共用：1)共同鹼基序列；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈磷修飾模式；其中：該組合物為對掌性受控的，因為複數個寡核苷酸在一或多個對掌性核苷酸間鍵聯處共用同一立體化學；該複數個中之一或多個寡核苷酸個別地結合至脂質；及該複數個中之一或多個寡核苷酸視情況且個別地結合至靶向化合物或部分。
469.一種將寡核苷酸傳遞至人類個體之細胞或組織的方法，其包含：(a)提供如前述實施例中之任一者的組合物；及(b)向人類個體投與組合物，使得寡核苷酸傳遞至個體之細胞或組織中。
470.一種用於將寡核苷酸傳遞至細胞或組織之方法，其包含製備根據前述實施例中之任一者的組合物及用組合物處理[接觸]細胞或組織。
471.一種調整細胞中之基因之轉錄物或基因產物之含量的方法，該方法包含使細胞與根據前述實施例中之任一者的組合物接觸的步驟，其中寡核苷酸能夠調整轉錄物或基因產物之含量。
472.一種用於抑制細胞或組織中之基因表現的方法，其包含製備根據前述實施例中之任一者的組合物及用組合物處理細胞或組織。
473.一種用於抑制哺乳動物之細胞或組織中之基因表現的方法，其包含製備根據前述實施例中之任一者的組合物及向哺乳動物投與組合物。
474.一種治療由個體之細胞或組織中之一種或若干種蛋白質之過度表現引起的疾病的方法，該方法包含向個體投與根據前述實施例中之任一者的組合物。
475.一種治療由個體中之一種或若干種蛋白質之表現降低、抑制或缺失引起的疾病的方法，該方法包含向個體投與根據前述實施例中之任一者的組合物。
476.一種用於在個體中產生免疫反應的方法，該方法包含向個體投與根據前述實施例中之任一者的組合物，其中生物學上活性化合物為免疫調節核酸。
477.一種用於治療亨廷頓氏病之體征及/或症狀的方法，其係藉由提供如前述實施例中之任一者之組合物及向個體投與該組合物。
478.一種調整細胞中之核糖核酸酶H介導之裂解之量的方法，該方法包含使細胞與根據前述實施例中之任一者的組合物接觸的步驟，其中寡核苷酸能夠調整核糖核酸酶H介導之裂解的量。
479.一種向有需要之個體投與寡核苷酸的方法，其包含提供包含該藥劑及脂質之組合物及向個體投與該組合物的步驟，其中該藥劑為本文中所揭示之任何藥劑，且其中該脂質為本文中所揭示之任何脂質。
480.一種治療個體之疾病的方法，該方法包含提供包含藥劑及脂質之組合物及向個體投與治療有效量之組合物的步驟，其中該藥劑為本文中所揭示之任何藥劑，且其中該脂質為本文中所揭示之任何脂 質，且其中該疾病為本文中所揭示之任何疾病。
481.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中脂質包含視情況經取代之C10-C40飽和或部分不飽和脂鏈。
482.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中脂質包含視情況經取代之C10-C40直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。
483.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中脂質包含C10-C40直鏈飽和或部分不飽和脂鏈，視情況經一或多個C1-4脂族基取代。
484.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中脂質包含未經取代之C10-C40直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。
485.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中脂質包含不超過一個視情況經取代之C10-C40直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。
486.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中脂質包含兩個或更多個視情況經取代之C10-C40直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。
487.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中脂質不包含三環或多環部分。
488.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中脂質具有R1-COOH之結構，其中R1為視情況經取代之C10-C40飽和或部分不飽和脂鏈。
489.如實施例16中之任一者的組合物或方法，其中該脂質經由其羧基結合。
490.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中該脂質係選自：
491.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中該脂質結合至寡核苷酸。
492.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中該脂質直接結合至寡核苷酸。
493.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中該脂質經由連接基團結合至寡核苷酸。
494.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中該連接基團係選自：不帶電連接基團；帶電連接基團；包含烷基之連接基團；包含磷酸酯之連接基團；分支鏈連接基團；未分支連接基團；包含至少一個裂解基團之連接基團；包含至少一個氧化還原裂解基團之連接基團；包含至少一個基於磷酸酯之裂解基團之連接基團；包含至少一個酸裂解基團之連接基團；包含至少一個基於酯之裂解基團之連接基團；及包含至少一個基於肽之裂解基團之連接基團。
495.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中複數個寡 核苷酸各自在相同位置個別地結合至同一脂質。
496.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中脂質經由連接基團結合至寡核苷酸。
497.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中該複數個中之一或多個寡核苷酸獨立地結合至靶向化合物或部分。
498.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中該複數個中之一或多個寡核苷酸獨立地結合至脂質及靶向化合物或部分。
499.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中該複數個中之一或多個寡核苷酸獨立地在一端結合至脂質且在另一端結合至靶向化合物或部分。
500.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中該複數個寡核苷酸共用相同化學修飾模式。
501.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中該複數個寡核苷酸共用包含一或多個鹼基修飾之相同化學修飾模式。
502.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中該複數個寡核苷酸共用包含一或多個糖修飾之相同化學修飾模式。
503.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中共同鹼基序列能夠與細胞中之轉錄物雜交，該轉錄物含有與肌肉疾病相關的突變，或其含量、活性及/或分佈與肌肉疾病相關。
504.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中該寡核苷酸為核酸。
505.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中該寡核苷酸為寡核苷酸。
506.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中該寡核苷酸為介導外顯子跳過之寡核苷酸。
507.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中該寡核苷 酸為介導外顯子跳過的立體限定的寡核苷酸。
508.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中該疾病或病症為肌肉相關疾病或病症。
509.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中該脂質包含視情況經取代之C10-C80飽和或部分不飽和脂族基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經選自以下的視情況經取代之基團置換：C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、C1-C6雜脂族部分、-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)-、-N(R')C(O)O-、-OC(O)N(R')-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-N(R')S(O)2-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(O)-及-C(O)O-，其中各變數獨立地如本文所定義及描述。
510.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中脂質包含視情況經取代之C10-C80飽和或部分不飽和脂鏈。
511.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中脂質包含視情況經取代之C10-C80直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。
512.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中脂質包含視情況經取代之C10-C60飽和或部分不飽和脂鏈。
513.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中脂質包含視情況經取代之C10-C60直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。
514.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中脂質包含視情況經取代之C10-C40飽和或部分不飽和脂鏈。
515.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中脂質包含視情況經取代之C10-C40直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。
516.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中該脂質包含視情況經取代之C10-C60飽和或部分不飽和脂族基，其中一或多個亞 甲基單元視情況且獨立地經選自以下的視情況經取代之基團置換：C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、C1-C6雜脂族部分、-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)-、-N(R')C(O)O-、-OC(O)N(R')-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-N(R')S(O)2-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(O)-及-C(O)O-，其中各變數獨立地如本文所定義及描述。
517.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中脂質包含視情況經取代之C10-C80飽和或部分不飽和脂鏈。
518.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中脂質包含視情況經取代之C10-C60直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。
519.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中脂質包含視情況經取代之C10-C40直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。
520.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中該脂質包含視情況經取代之C10-C40飽和或部分不飽和脂族基，其中一或多個亞甲基單元視情況且獨立地經選自以下的視情況經取代之基團置換：C1-C6伸烷基、C1-C6伸烯基、-C≡C-、C1-C6雜脂族部分、-C(R')2-、-Cy-、-O-、-S-、-S-S-、-N(R')-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NR')-、-C(O)N(R')-、-N(R')C(O)N(R')-、-N(R')C(O)-、-N(R')C(O)O-、-OC(O)N(R')-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2N(R')-、-N(R')S(O)2-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(O)-及-C(O)O-，其中各變數獨立地如本文所定義及描述。
521.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中脂質包含視情況經取代之C10-C40飽和或部分不飽和脂鏈。
522.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中脂質包含視情況經取代之C10-C40直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。
523.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中該組合物進一步包含一或多種選自以下之其他組分：聚核苷酸、碳酸酐酶抑制劑、染料、嵌入劑、吖啶、交聯劑、補骨脂素、絲裂黴素C、卟啉、TPPC4、德卟啉、賽卟啉、多環芳族烴吩嗪、二氫吩嗪、人工核酸內切酶、螯合劑、EDTA、烷基化劑、磷酸酯、胺基、巰基、PEG、PEG-40K、MPEG、[MPEG]2、聚胺基、烷基、經取代烷基、放射性標記之標誌物、酶、半抗原生物素、輸送/吸收促進劑、阿司匹靈、維生素E、葉酸、合成核糖核酸酶、蛋白質、醣蛋白、肽、對協同配位體具有特異性親和力之分子、抗體、激素、激素受體、非肽物質、脂質、凝集素、碳水化合物、維生素、輔因子或藥物。
524.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中脂質包含C10-C80直鏈飽和或部分不飽和脂鏈。
525.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中組合物進一步包含連接寡核苷酸與脂質之連接基團，其中連接基團係選自：不帶電連接基團；帶電連接基團；包含烷基之連接基團；包含磷酸酯之連接基團；分支鏈連接基團；未分支連接基團；包含至少一個裂解基團之連接基團；包含至少一個氧化還原裂解基團之連接基團；包含至少一個基於磷酸酯之裂解基團之連接基團；包含至少一個酸裂解基團之連接基團；包含至少一個基於酯之裂解基團之連接基團；包含至少一個基於肽之裂解基團之連接基團。
526.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中寡核苷酸包含以下或由以下組成或為以下：寡核苷酸或寡核苷酸組合物或對掌性受控寡核苷酸組合物。
527.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中寡核苷酸包含以下或由以下組成或為以下：寡核苷酸或寡核苷酸組合物或對掌性受控寡核苷酸組合物，其中寡核苷酸之序列包含本文中所述之任何 寡核苷酸的序列或由該序列組成。
528.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中寡核苷酸包含以下或由以下組成或為以下：寡核苷酸或寡核苷酸組合物或對掌性受控寡核苷酸組合物，其中寡核苷酸之序列包含表4中所列任何寡核苷酸之序列或由該序列組成。
529.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中寡核苷酸包含以下或由以下組成或為以下：寡核苷酸或寡核苷酸組合物或對掌性受控寡核苷酸組合物，其中寡核苷酸之序列包含剪接切換寡核苷酸之序列或由該序列組成。
530.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中寡核苷酸包含以下或由以下組成或為以下：寡核苷酸或寡核苷酸組合物或對掌性受控寡核苷酸組合物，其中寡核苷酸之序列包含能夠跳過或介導跳過肌縮蛋白基因中之外顯子的寡核苷酸之序列或由該序列組成。
531.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中該寡核苷酸為對掌性受控寡核苷酸組合物。
532.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中該疾病或病症為亨廷頓氏病。
533.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中該寡核苷酸能夠參與突變型亨廷頓基因mRNA之核糖核酸酶H介導之裂解。
534.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中該寡核苷酸包含以下、由以下組成或為以下：本文中所揭示之任何寡核苷酸之序列。
535.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中該寡核苷酸能夠區分野生型與突變型亨廷頓對偶基因。
536.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中該寡核苷酸能夠參與突變型亨廷頓基因mRNA之核糖核酸酶H介導之裂解。
537.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中該寡核苷酸包含以下、由以下組成或為以下：表4中所揭示之任何寡核苷酸之序列。
538.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中寡核苷酸包含以下或由以下組成或為以下：寡核苷酸或寡核苷酸組合物或對掌性受控寡核苷酸組合物，其中寡核苷酸之序列包含以下或由以下組成：WV-1092、WV-2595或WV-2603中之任一者的序列。
539.如前述實施例中之任一者的組合物或方法，其中寡核苷酸之序列包括以下中之任何一或多者：鹼基序列(包括長度)；對糖及鹼基部分之化學修飾模式；主鏈鍵聯模式；天然磷酸酯鍵聯、硫代磷酸酯鍵聯、硫代磷酸三酯鍵聯之模式及其組合；主鏈對掌性中心模式；對掌性核苷酸間鍵聯之立體化學(Rp/Sp)之模式；主鏈磷修飾模式；對核苷酸間磷原子之修飾模式，諸如-S-及式I之-L-R1。
540.一種寡核苷酸，其包含與所提供之例示性寡核苷酸中所存在之序列共用大於約50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%一致性的序列。
541.如實施例540之寡核苷酸，其中所提供之例示性寡核苷酸為WV-1092。
542.如實施例540之寡核苷酸，其中所提供之例示性寡核苷酸為WV-2595。
543.如實施例540之寡核苷酸，其中所提供之例示性寡核苷酸為WV-2603。
544.如前述實施例中之任一者的寡核苷酸，其中該寡核苷酸包含所提供之例示性寡核苷酸中所存在之序列。
545.如前述實施例中之任一者的寡核苷酸，其中該寡核苷酸由所提供之例示性寡核苷酸中所存在之序列組成。
546.如前述實施例中之任一者的寡核苷酸，其中寡核苷酸包含一或多個天然磷酸酯鍵聯及一或多個經修飾之核苷酸間鍵聯。
547.如實施例546之寡核苷酸，其中該寡核苷酸為實施例540至545中之任一者的寡核苷酸。
548.如前述實施例中之任一者的寡核苷酸，其中該寡核苷酸包含2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多個天然磷酸酯鍵聯。
549.如前述實施例中之任一者的寡核苷酸，其中該寡核苷酸包含一或多個經修飾之核苷酸間鍵聯。
550.如前述實施例中之任一者的寡核苷酸，其中該寡核苷酸包含兩個或更多個經修飾之核苷酸間鍵聯。
551.如前述實施例中之任一者的寡核苷酸，其中該寡核苷酸包含3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多個經修飾之核苷酸間鍵聯。
552.如前述實施例中之任一者的寡核苷酸，其中該寡核苷酸包含5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多個經修飾之核苷酸間鍵聯。
553.如前述實施例中之任一者的寡核苷酸，其中該寡核苷酸包含10個或更多個經修飾之核苷酸間鍵聯。
554.如前述實施例中之任一者的寡核苷酸，其中經修飾之核苷酸間鍵聯中之至少一者為對掌性受控核苷酸間鍵聯，因為組合物內具有相同序列及化學修飾之寡核苷酸在經修飾之核苷酸間鍵聯之對掌性磷原子處共用相同組態Rp或Sp。
555.如前述實施例中之任一者的寡核苷酸，其中至少兩個經修飾之核苷酸間鍵聯為對掌性受控的。
556.如前述實施例中之任一者的寡核苷酸，其中至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20個經修 飾之核苷酸間鍵聯為對掌性受控的。
557.如前述實施例中之任一者的寡核苷酸，其中連續的經修飾之核苷酸間鍵聯區域內至少一個經修飾之核苷酸間鍵聯為對掌性受控的。
558.如前述實施例中之任一者的寡核苷酸，其中連續的經修飾之核苷酸間鍵聯區域內至少兩個經修飾之核苷酸間鍵聯為對掌性受控的。
559.如前述實施例中之任一者的寡核苷酸，其中連續的經修飾之核苷酸間鍵聯區域內至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20個經修飾之核苷酸間鍵聯為對掌性受控的。
560.如前述實施例中之任一者的寡核苷酸，其中連續的經修飾之核苷酸間鍵聯區域內各經修飾之核苷酸間鍵聯為對掌性受控的。
561.如前述實施例中之任一者的寡核苷酸，其中各經修飾之核苷酸間鍵聯為對掌性受控的。
562.如前述實施例中之任一者的寡核苷酸，其中所提供之寡核苷酸包含(Sp)xRp(Sp)y模式，其中x及y各自獨立地為1-20，且x及y之總和為1-50。
563.如前述實施例中之任一者的寡核苷酸，其中x及y各自獨立地為2-20。
564.如前述實施例中之任一者的寡核苷酸，其中x及y中之至少一者大於5、6、7、8、9或10。
565.如前述實施例中之任一者的寡核苷酸，其中x及y之總和大於5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。
566.如前述實施例中之任一者的寡核苷酸，其中所提供之寡核 苷酸包含一或多個化學修飾。
567.如前述實施例中之任一者的寡核苷酸，其中所提供之寡核苷酸包含一或多個鹼基修飾。
568.如前述實施例中之任一者的寡核苷酸，其中所提供之寡核苷酸包含一或多個糖修飾。
569.如前述實施例中之任一者的寡核苷酸，其中糖修飾為2'修飾。
570.如前述實施例中之任一者的寡核苷酸，其中糖修飾為LNA。
571.如前述實施例中之任一者的寡核苷酸，其中所提供之寡核苷酸為對掌性受控寡核苷酸。
572.如前述實施例中之任一者的寡核苷酸，其中該寡核苷酸結合至靶向組分。
573.一種寡核苷酸組合物，其包含如前述實施例中之任一者的寡核苷酸。
573a.如實施例573之組合物，其中該組合物為包含預定含量之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物。
574.如前述實施例中之任一者的組合物或如前述實施例中之任一者的方法中之組合物，其進一步包含選擇性試劑，該選擇性試劑係選自：特異性結合至一或多種選自由多巴胺轉運體(DAT)、血清素轉運體(SERT)及去甲腎上腺素轉運體(NET)組成之群的神經傳遞素轉運體之化合物之群；由多巴胺再吸收抑制劑(DRI)、選擇性血清素再吸收抑制劑(SSRI)、去甲腎上腺素再吸收抑制劑(NRI)、去甲腎上腺素-多巴胺再吸收抑制劑(NDRI)及血清素-去甲腎上腺素-多巴胺再吸收抑制劑(SNDRI)組成之群；由三重再吸收抑制劑、去甲腎上腺素多巴胺雙重再吸收抑制劑、血清素單一再吸收抑制劑、去甲腎上腺素單一再 吸收抑制劑及多巴胺單一再吸收抑制劑組成之群；及由多巴胺再吸收抑制劑(DRI)、去甲腎上腺素-多巴胺再吸收抑制劑(NDRI)及血清素-去甲腎上腺素-多巴胺再吸收抑制劑(SNDRI)組成之群。
575.一種用於治療或預防個體之亨廷頓氏病的方法，其包含向個體投與如前述實施例中之任一者的寡核苷酸或組合物。
575a.如前述實施例中之任一者的方法，其中該寡核苷酸或組合物係經由鞘內投藥投與。
576.一種用於製備寡核苷酸之方法，其包含提供具有式3-AA之結構的對掌性試劑。
577.一種用於製備寡核苷酸之方法，其包含提供具有以下結構之對掌性試劑：、、、、
578.如前述實施例中之任一者的方法，其中該對掌性試劑為對掌性純的。
579.一種用於製備寡核苷酸之方法，其包含提供一種化合物，該化合物包含來自具有如前述實施例中之任一者的結構之對掌性試劑的部分，其中-W1H及-W2H或羥基及胺基與胺基磷酸酯之磷原子成鍵。
580.如實施例579之方法，其中該化合物具有以下結構：
581.如實施例580之方法，其中連接至5'-O之R為羥基保護基。
582.如實施例581之方法，其中該羥基保護基為DMTr。
583.如實施例582之方法，其中BPRO為經保護之核鹼基。
584.如實施例583之方法，其中該核鹼基為選自A、T、C及G之 視情況經取代之核鹼基。
585.如前述實施例中之任一者的方法，其中W1為-NG5，W2為O。
586.如前述實施例中之任一者的方法，其中G1及G3各自獨立地為氫或選自C1-10脂族基、雜環基、雜芳基及芳基的視情況經取代之基團，G2為-C(R)2Si(R)3，且G4及G5一起形成至多約20個環原子的視情況經取代之飽和、部分不飽和或不飽和含雜原子環，其為單環或多環、稠合或未稠合。
587.如前述實施例中之任一者的方法，其中各R獨立地為氫或選自C1-C6脂族基、碳環基、芳基、雜芳基及雜環基的視情況經取代之基團。
588.在一些實施例中，G1為氫。
589.如前述實施例中之任一者的方法，其中G2為-C(R)2Si(R)3，其中-C(R)2-為視情況經取代之-CH2-，且-Si(R)3之各R獨立地為選自C1-10脂族基、雜環基、雜芳基及芳基的視情況經取代之基團。
590.如前述實施例中之任一者的方法，其中-Si(R)3之至少一個R獨立地為視情況經取代之C1-10烷基。
591.如前述實施例中之任一者的方法，其中-Si(R)3之至少一個R獨立地為視情況經取代之苯基。
592.如前述實施例中之任一者的方法，其中-Si(R)3之一個R獨立地為視情況經取代之C1-10烷基，且另兩個R各自獨立地為視情況經取代之苯基。
593.如前述實施例中之任一者的方法，其中G2為視情況經取代之-CH2Si(Me)(Ph)2。
594.如前述實施例中之任一者的方法，其中G2為-CH2Si(Me)(Ph)2。
595.如前述實施例中之任一者的方法，其中G3為氫。
596.如前述實施例中之任一者的方法，其中G4及G5一起形成含有一個氮原子的視情況經取代之飽和5-6員環。
597.如前述實施例中之任一者的方法，其中G4及G5一起形成含有一個氮原子的視情況經取代之飽和5員環。
598.如前述實施例中之任一者的方法，其中該對掌性試劑為
599.如前述實施例中之任一者的方法，其包含提供含氟試劑。
600.如前述實施例中之任一者的方法，其中該含氟試劑為TBAF。
601.如前述實施例中之任一者的方法，其包含使用對用於移除對掌性試劑之TBAF條件穩定的連接基團。
602.如前述實施例中之任一者的方法，其中該連接基團為SP連接基團。
603.如實施例576至599中之任一者的方法，其中該含氟試劑為HF-NR3。
604.如實施例603之方法，其中該含氟試劑為HF-NEt3。
605.如實施例603或604之方法，其包含使用對用於移除對掌性試劑之HF-NR3條件穩定的連接基團。
606.如實施例603至605中之任一者的方法，其中該連接基團為丁二醯基連接基團。
實例
以上內容為本發明之某些非限制性實施例之說明。因此，應理解，本文中所述之本發明實施例僅為本發明原理應用之說明。本文中對所展示之實施例之詳情的提及不意欲限制申請專利範圍之範疇。
實例1. 人類對掌性美生(Chiromersen)在預培育之大鼠全肝組織勻漿中之活體外代謝穩定性
本實例描述米泊美生(立體化學混合物)與米泊美生之對掌性受控寡核苷酸組合物(「對掌性美生」)之活體外全大鼠肝組織勻漿穩定性的對比。該方法尤其適用於篩選用於預測活體內半衰期之化合物。
如此項技術中已知，米泊美生(前稱ISIS 301012，以商標名Kynamro出售)為20mer寡核苷酸，其鹼基序列與脂蛋白元B基因之一部分反義。米泊美生抑制脂蛋白元B基因表現，可能係藉由靶向mRNA。米泊美生具有以下結構：G*-C*-C*-U*-C*-dA-dG-dT-dC-dT-dG-dmC-dT-dT-dmC-G*-C*-A*-C*-C*
[d=2'-去氧，*=2'-O-(2-甲氧基乙基)]
含3'→5'硫代磷酸酯鍵聯。因此，米泊美生在兩端具有經2'-O-甲氧基乙基修飾之核糖殘基，且在中間具有去氧核糖殘基。
在此實例中所述測試之對掌性純米泊美生類似物包括3'→5'硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所測試之類似物包括一或多個經2'-O-(2-甲氧基乙基)修飾之殘基；在一些實施例中，所測試之類似物僅包括2'-去氧殘基。特定測試類似物具有下表3及表4中所闡述之結構。
方案：吾人使用由Geary等人(Oligonucleotides，第20卷，第6期，2010)報導之方案，且加一些修改。
測試系統：由Charles River Laboratories,Inc.,(Hollister,CA)供應六隻雄性史泊格多利大鼠(Sprague-Dawley rat)(褐家鼠)，且在SNBL USA接收。
組織收集：在組織收集之前，使動物適應研究室兩天。在組織收集時，藉由腹膜內(IP)注射戊巴比妥鈉(sodium pentobarbital)溶液麻醉動物。使用500mL冷藏生理食鹽水/動物，經由肝門靜脈投與，執行肝臟灌注。在灌注之後，剝離肝臟且將其維持在冰上。將肝臟絞碎 成小碎片，隨後稱量。
肝組織勻漿製備：將肝組織之絞碎碎片轉移至去皮重之50mL離心管中且稱量。向各管中添加冷藏均質化緩衝液(100mM Tris pH 8.0、1mM乙酸鎂，含抗生素-抗黴菌劑)，使得管中每公克組織含有5mL緩衝液。使用QIAGEN TissueRuptor組織均質機，使肝臟/緩衝液混合物均質化，同時維持管子在冰上。使用Pierce BCA蛋白質分析測定肝組織勻漿池之蛋白質濃度。將肝組織勻漿分成5mL等分試樣，轉移至恰當大小之經標記之冷凍小瓶且儲存在-60℃下。
培育條件：給冷凍肝組織勻漿(蛋白濃度=22.48mg/ml)之5ml等分試樣解凍且在37℃下培育24小時。取六根艾本德管(eppendorf tube)(2ml)用於表1中之各寡聚物且在各管中添加450μl勻漿。向各管中添加50μl ASO(200μM)。緊接在混合之後，在0小時時間點，向一根管中添加125μl之(5×)停止緩衝液(2.5% IGEPAL、0.5M NaCl、5mM EDTA、50mM Tris，pH=8.0)及12.5μl之20mg/ml蛋白酶K(Ambion,# AM2546)。剩餘反應混合物在37℃下在以400rpm震盪下在VWR培育微量培養板震盪器上培育。在培育指定時間段(1、2、3、4及5天)之後，用125μl之(5×)停止緩衝液(2.5% IGEPAL、0.5M NaCl、5mM EDTA、50mM Tris，pH=8.0)及12.5μl之20mg/ml蛋白酶K(Ambion,# AM2546)處理各混合物。
處理及生物分析：使用27-mer寡核苷酸ISIS 355868(5'-GCGTTTGCTCTTCTTCTTGCGTTTTTT-3')(加底線鹼基經MOE修飾)作為對掌性美生之定量內標。向各管中添加50μl內標(200μM)，隨後添加250μl之30%氫氧化銨、800μl之苯酚：氯仿：異戊醇(25：24：1)。在600rpg下混合及離心之後，將水層速度真空蒸發至100μl且加載於Sep Pak柱(C18，1g，WAT 036905)上。在Sep pak柱上用快速離子交換法測試所有水性洗滌液(2×20ml)，確保不存在產物。使用50% ACN(3.5ml)溶離寡核苷酸及代謝物且進一步用70% CAN(3.5)洗滌管柱，確保管柱上無殘留。各序列收集五個溶離份。水洗液1、2、3、ACN1及2使用Visiprep系統(Sigma，零件編號：57031-U)。
離子交換法
緩衝液A=10mM Tris HCl、50% ACN，pH=8.0
緩衝液B=A+800mM NaClO4
管柱=DNA pac 100
管柱溫度60℃
在各輪(M9-Exp21中所述)之後使用洗滌方法，使用與上文相同的緩衝液且在緩衝線C中使用50：50(甲醇：水)。
將乙腈洗脫液濃縮至乾燥且溶解於100μl水中，使用RPHPIPC分析。
溶離劑A=10mM乙酸三丁銨，pH=7.0
溶離劑B=ACN(HPLC級，B& J)
管柱：XTerra MS C18，3.5μm，4.6×50mm，零件編號：186000432
保護管柱來自Phenomenex，零件編號：KJ0-4282
管柱溫度=60℃
HPLC梯度：
關於分析型RP HPLC，向40μl水中添加10μl此儲備溶液且注射40μl。
論述：預測反義及siRNA中之2'修飾可穩定此等分子且相比於野生型DNA及siRNA，增加其在血漿及組織中之存留。
米泊美生中之2'-MOE翼-核心-翼設計. 第一反義臨床試驗中所採用之第一代反義寡核苷酸具有2'-去氧核糖核苷酸殘基及硫代磷酸酯核苷間鍵聯。隨後產生第二代反義寡核苷酸，其通常在本文中稱為「5-10-5 2'-MOE翼-核心-翼設計」，因為各端五(5)個殘基為經2'-O-甲氧基乙基(2'-MOE)修飾之殘基且中間十(10)個殘基為2'-去氧核糖核苷酸；該等寡核苷酸之核苷酸間鍵聯為硫代磷酸酯。該等「5-10-5 2'-MOE翼-核心-翼」寡核苷酸展現優於第一代之顯著效能改良(PCT/US2005/033837)。設計如2-16-2、3-14-3、4-12-4或5-10-5之類 似翼-核心-翼基元改良寡核苷酸對核酸酶之穩定性，且同時為核糖核酸酶活性維持足夠的DNA結構。
對掌性純寡核苷酸. 本發明提供對掌性純寡核苷酸且尤其證明，立體化學之選擇本身即可改良寡核苷酸穩定性(亦即，與諸如2'MOE修飾之殘基修飾無關)。實際上，本發明證明，對掌性純硫代磷酸酯寡核苷酸可提供與相應的經2'修飾之立體無規硫代磷酸酯化合物相同或優於其之穩定性。
在一些實施例中，所測試之對掌性純寡核苷酸就立體化學而言具有通式結構X-Y-X，其中其含有翼「X」區(通常約1-10個殘基長)，其中所有殘基具有相同立體化學，該區側接於核心「Y」區，其中立體化學不同。在多個實施例中，在所測試之該等寡核苷酸中約20-50%之核苷酸類似物並非核糖核酸酶H之受質。控制DNA中之硫代磷酸酯之立體化學的能力能夠保護寡聚物免遭核酸酶降解，同時維持核糖核酸酶活性位點。此等設計之一為ONT-154，其中寡核苷酸之翼已藉由Sp硫代磷酸酯化學穩定，且幾乎不保留核糖核酸酶H之較佳受質Rp硫代磷酸酯(Molecular Cell,2007)。人類核糖核酸酶H與DNA/RNA雙螺旋體複合之晶體結構顯示，酶之磷酸酯結合袋可產生與DNA之四個相鄰磷酸酯之接觸。前三個接觸似乎強於第四個且其偏好該三個磷酸酯中之每一者的Pro-R/Pro-R/Pro-S氧原子。將來自Sp立體化學之穩定性優勢與核糖核酸酶H活性位點組合，可設計若干序列競爭/或改良2'修飾。根據大鼠全肝組織勻漿穩定性實驗，比較米泊美生(ONT-41)與吾人之含或不含2'修飾的合理(對掌性控制)設計(ONT-87及ONT-154)(表1及圖1)，顯而易見，經由移除2'修飾及用Rp及Sp硫代磷酸酯進行謹慎對掌性控制，可改良此等寡核苷酸之穩定性，其稍後影響活體內功效。
實例2. 例示性對掌性受控siRNA分子
儘管與此項技術中之教示內容相反，但本發明認識到，可採用核苷酸間鍵聯之立體化學，經由對掌性受控寡核苷酸組合物來增大寡核苷酸之穩定性及活性。該等對掌性受控寡核苷酸組合物可提供遠優於不控制對掌性之寡核苷酸組合物的結果，如本發明中所證明。
RNA與人類阿爾古-2蛋白(hAgo2)複合之晶體結構報導有兩種：The Crystal Structure of Human Argonaute-2,Science,2012(PDB-4ei3)；及The Structure of Human Argonaute-2 in Complex With miR-20a Cell,2012 PDB-4f3t)。此外，Let-7 RNA與人類阿爾古-1蛋白(hAgo-1)複合之晶體結構報導有一種：The Making of a Slicer：Activation of Human Argonaute-1,Cell Rep.2013(PDB-4krf)。
基於此等出版物中所含之資訊，預期可得出關於用硫代磷酸二酯鍵置換磷酸二酯鍵時，核苷酸間磷酸酯鍵聯之立體化學的有利偏好的一些判斷。此等優點可關於顯著改良之效能、穩定性及其他藥理學特性。基於這一點，使用電腦程式Pymol在所有三種結構之結晶RNA的蛋白質與核苷酸間磷酸二酯鍵聯之間定位所有極性相互作用。忽略距離超過3.5Å之極性相互作用。
此分析之結果概述於表1中。RNA上之磷酸二酯主鏈之特定磷原子基於以下假定分配Pro(R)或Pro(S)組態：在硫代磷酸二酯類似物中，將在胺基酸殘基上之極性基團與相應磷酸酯氧原子之間形成極類似的鍵。因此，硫取代將代替非橋接氧賦予彼基元內之磷原子獨特的立體化學((Sp)或(Rp)絕對組態)。
應注意，hAgo-2與RNA複合的兩種結構之間存在極佳一致性。此外，在hAgo-1及hAgo-2與RNA複合之結構之間存在極佳一致性，表明RNA分子所採用之構形在這兩種蛋白質之間高度保守。基於此分析之結果形成的任何結論或規則皆為可能的，因此，對兩種蛋白質分子均有效。
可以看出，除磷酸酯位置9及10處之磷酸二酯之間的彼等極性相互作用及經由分別與Arg351及Arg710鍵結專門採用Pro(Rp)偏好之hAgo-2(Cell 2012)之外，在任一個磷酸二酯基處通常存在超過一個極性相互作用。
然而，更短的距離(對應於更強的相互作用)以及每個氧之鍵數可表明Pro(Rp)或Pro(Sp)氧之主要相互作用，從而產生若干相互作用，其為一種立體化學類型或其他類型之主要相互作用。在以下磷酸酯位置處之磷酸二酯之間的相互作用在此組內：2(Sp)、3(Rp)、4(Rp)、6(Rp)、8(Sp)、19(Rp)、20(Sp)及21(Sp)。
在其餘相互作用中，似乎不存在一種特定立體化學優於另一種而加以採用的偏好，因此較佳立體化學可為(Sp)或(Rp)。
在磷酸酯位置5(Rp或Sp)及7(Rp或Sp)處之磷酸二酯之間形成的相互作用在此類別內。
關於其他磷酸酯主鏈之相互作用，不存在晶體結構資訊，因此在此等位置之立體化學可類似地為(Rp)或(Sp)，直至經驗資料顯示不同為止。
為此目的，表6含有若干非限制性例示性siRNA一般構築體，其可構想利用在個別硫代磷酸二酯基元處之此立體化學偏好。
*數字表示自siRNA之反義股之5'端起的磷酸酯位置(例如，#2係位於核苷酸1與2之間，且#21係位於核苷酸20與21之間)。(Sp)及(Rp)表示在所指出之位置處在硫代磷酸(PS)二酯核苷酸間鍵聯上之磷原子的立體化學。PO表示在所指出之位置處的磷酸二酯核苷酸間鍵聯。
例示性siRNA包括(但不限於)關於siRNA雙螺旋體之反義股的3'端及5'端之對掌性硫代磷酸酯具有Sp組態的siRNA，其賦予在人類血清或生物流體中之空前增加的穩定性。在siRNA雙螺旋體之反義股的3'端及5'端之對掌性硫代磷酸酯的相同Sp組態賦予空前增加的生物效能這一點係由對Ago2蛋白之親和力增加引起的，其導致在RISC RNAi沉默複合物內之活性增加。
在一個實施例中，將單一對掌性硫代磷酸酯基元沿著siRNA分子之反義或有義股獨立地引入各位置。關於21mer，此提供80種獨特序列，含(Sp)或(Rp)對掌性受控硫代磷酸酯基。當獨立地雙螺旋時，製得siRNA之1600種獨特組合。
對掌性siRNA分子之siRNA轉染
Hep3B或HeLa細胞以2.0×104個細胞/孔之密度在96孔盤中反向轉染。使用製造商之方案，但改用降低量之脂染胺RNAiMax，0.2μl/孔，用脂染胺RNAiMax(Life Technologies，目錄號13778-150)轉染siRNA。創建十二份1：3 siRNA雙螺旋體稀釋液，以1μM起始。隨後使10μl之10×siRNA雙螺旋體與9.8μl之無血清培養基及0.2μl之脂染 胺RNAiMax/孔的所製備混合物進行脂質複合。培育10-15分鐘後，添加含2.0×104個細胞之80μl EMEM細胞增長培養基(ATCC,30-2003)，使最終體積變為100μl/孔。針對各劑量執行兩個單獨轉染事件。
在轉染之後24小時，Hep3B或HeLa細胞裂解且siRNA所靶向之mRNA使用MagMAXTM-96總RNA分離套組(Life Technologies,AM1830)純化；用高容量cDNA反轉錄套組，用核糖核酸酶抑制劑(Life Technologies,4374967)合成15μl cDNA。藉由即時PCR，在Lightcycler 480(Roche)上使用探針主混合物(Roche,04 707 494 001)，根據製造商之方案評估基因表現。
IC50及資料分析
使用△△Ct法計算各值。針對hGAPDH使樣品標準化且經校準以模擬經轉染且未經處理之樣品。使用立體無規分子作為對照。資料按使用Graphpad Prism獲得之2份生物複製之平均值表示。用四參數線性回歸曲線擬合資料且使底部及頂部分別限於常數0及100以便計算相對IC50。
本實例證明，使用由如本文所述之對掌性受控寡核苷酸構成的siRNA劑，目標基因表現得以成功抑制。特定言之，此實例描述經由如本文所述之對掌性受控合成製備的個別寡核苷酸股雜交，從而得到雙股對掌性受控之siRNA寡核苷酸組合物。此實例進一步證明，細胞經該等試劑成功轉染，且此外，目標基因表現得以成功抑制。
具有立體控制的硫代磷酸二酯鍵聯之人類PCSK9 siRNA雙螺旋體在人類血清中的活體外代謝穩定性
將10μM siRNA雙螺旋體在90%人類血清(50μL，Sigma，H4522)中在37℃下培育24小時。製備0min時間點(50μL)以及PBS對照培育時間點(50μL)，其中10μM siRNA雙螺旋體在90% 1×PBS(50μL)中在37℃下培育24小時。培育完成後，至各時間點，添加10μL停止溶液 (0.5M NaCl、50mM TRIS、5mM EDTA、2.5% IGEPAL)，隨後添加3.2μL蛋白酶K(20mg/mL,Ambion)。將樣品在60℃下培育20分鐘，且隨後在2000rpm下離心15min。直接在變性IEX HPLC(注射體積50μL)中分析最終反應混合物。使用24h及0min時的積分區之比率確定各siRNA之降解%。
據觀察，在siRNA之反義股及有義股之位置21(3'端)處的單一硫代磷酸酯之立體化學組態對雙螺旋體在人類血清中培育時的穩定性具有關鍵影響(圖1)。如圖1中所示且如根據降解模式之積分比率所確定，(Rp,Rp)siRNA雙螺旋體在24h後展現相當大的55.0%降解。立體無規siRNA中之硫代磷酸酯之立體無規混合物在24h後顯示25.2%降解。(Sp/Sp)siRNA在24h後僅顯示微小的7.3%降解。這說明硫代磷酸酯立體化學賦予治療性siRNA強大的影響。其他實例資料呈現在圖2、圖3、圖4及圖5中。
據觀察，立體純構築體各自顯示視硫代磷酸酯基元沿主鏈之位置而不同的效能(IC50值)。亦觀察到，視任何單一位置處之硫代磷酸酯基元為(Sp)抑或(Rp)而定，獲得不同IC50值。立體化學對穩定性之影響同樣清楚且使用上文所述之人類血清或人類肝臟胞溶質提取物或蛇毒(Snake Venom)磷酸二酯酶或經分離核酸內切酶或經分離核酸外切酶進行區分。
某些設計規則可基於以上實例中獲得之資料調配。此等設計資訊可應用於在siRNA之反義及/或有義股內引入多個對掌性硫代磷酸酯鍵聯，如下文所說明。本發明認識到，在siRNA之反義及/或有義股內增加對掌性硫代磷酸酯之量、在恰當位置引入及具有恰當立體化學組態將促使siRNA構築體之效能及活體外代謝穩定性大大改良，轉譯成藥理學大大增強的治療性siRNA。
靶向PCSK9之例示性對掌性受控siRNA寡核苷酸
第9型前蛋白轉換酶枯草桿菌蛋白酶/kexin(PCSK9)為參與膽固醇代謝之酶。PCSK9結合至低密度脂蛋白(LDL)之受體，觸發其破壞。雖然當受體遭到破壞時，與受體結合之LDL亦得到消除，但PCSK9結合之淨效應實際上使LDL含量增加，因為受體將按其他方式循環回到細胞表面且移除更多膽固醇。
若干公司正在研發靶向PCSK9之治療劑。與本發明特別相關的是，Isis Pharmaceuticals、Santaris Pharma及Alnylam Pharmaceuticals各自正在研發一種抑制PCSK9之核酸劑。Isis Pharmaceuticals產品反義寡核苷酸已顯示可在小鼠中增加LDLR之表現且減小循環總膽固醇含量(Graham等人「Antisense inhibition of proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 reduces serum LDL in hyperlipidemic mice」.J. Lipid Res. 48(4)：763-7,2007年4月)。Alnylam Pharmaceuticals產品ALN-PCS之初始臨床試驗揭示，RNA干擾提供一種有效的PCSK9抑制機制(Frank-Kamenetsky等人「Therapeutic RNAi targeting PCSK9 acutely lowers plasma cholesterol in rodents and LDL cholesterol in nonhuman primates」.Proc.Natl Acad Sci.U.S.A. 105(33)：11915-20,2008年8月)。
在一些實施例中，儘管已知結果相反，但本發明認識到，可合理地設計一種立體化學構形或另一立體化學構形之硫代磷酸酯基元，經由對掌性受控寡核苷酸組合物利用增加的效能、穩定性及其他藥理學品質。為強化此概念，表3含有基於靶向PCSK9信使RNA之siRNA序列的例示性立體化學純構築體。
在此例示性實施例中，將單一對掌性硫代磷酸酯基元沿著siRNA分子之反義或有義股獨立地引入各位置。關於21mer，此提供80種獨特序列，含(Sp)或(Rp)對掌性受控硫代磷酸酯基。當獨立地雙螺旋時，製得siRNA之1600種獨特組合。
在其他例示性實施例中，將單一對掌性硫代磷酸酯基元沿著 siRNA分子之反義或有義股獨立地引入各位置，同時保留3'-(Sp)硫代磷酸酯鍵聯。關於21mer，此提供另外80種獨特序列，含(Sp)或(Rp)對掌性受控硫代磷酸酯基。當獨立地雙螺旋時，製得siRNA之1600種獨特組合。
在其他例示性實施例中，根據表7中所述之代碼，將多個對掌性硫代磷酸酯基元沿著siRNA分子之反義或有義股獨立地引入若干位置，同時保留3'-(Sp)硫代磷酸酯鍵聯。
注意：小寫字母表示2'-OMe RNA殘基；大寫字母表示RNA殘基；d=2'-去氧殘基；且「s」表示硫代磷酸酯部分。
具有若干對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯及全部對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯的人類PCSK9 siRNA反義股之合成實例。
注意：小寫字母表示2'-OMe RNA殘基；大寫字母表示RNA殘基；d=2'-去氧殘基；且「s」表示硫代磷酸酯部分。
實例3. 立體純FOXO-1反義類似物. 合理設計-對掌性受控反義寡核苷酸組合物
將活體內及Sp對掌性硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯之全大鼠肝組織勻漿模型中測定之空前核酸酶穩定性應用於新穎設計之新類型核糖核酸酶H受質間隔體中，藉此外部側接序列由未經修飾之DNA構成且內部空隙核心經2'化學修飾(2'OMe、2'MOE、2'LNA、2'F等)修飾。最後此設計延伸至完全未經修飾之DNA治療性寡核苷酸，其中硫代磷酸酯主鏈之謹慎對掌性控制賦予核糖核酸酶H治療性寡核苷酸適宜的藥理學特性。
亦已採用在研究人類核糖核酸酶H之晶體結構之後設計的三元組磷酸酯重複基元之應用。核糖核酸酶H之晶體結構先前已公開(Structure of Human RNase H1 Complexed with an RNA/DNA Hybrid：Insight into HIV Reverse Transcription,Nowotny等人，Molecular Cell,第28卷，第2期，264-276,2007,pdb檔案：2qkb)。本發明尤其認識到，寡核苷酸之核苷酸間鍵聯立體化學在例如本文中之情景中的重要性。在使用程式Pymol對此結構執行計算機模擬分析時，申請人發現，人類核糖核酸酶H1之磷酸酯結合袋產生與複合DNA之三個相鄰磷酸酯的極性接觸，且較佳與該三個磷酸酯中之每一者的Pro-R/Pro-R/Pro-S(或與Pro-S/Pro-S/Pro-R)各別氧原子相互作用。基於此觀察，吾人設計出兩個含重複(RRS)及(SSR)三元組硫代磷酸酯基元作為所設計之核糖核酸酶H受質的對掌性架構。申請人亦設計了其他核苷酸間鍵聯立體化學模式。如本文中提供之實例結果所說明，所提供之包含某些主鏈核苷酸間鍵聯模式(主鏈對掌性中心模式)的寡核苷酸類型之對掌性受控寡核苷酸組合物提供顯著增加的活性及/或動力學。5'- RSS-3'主鏈對掌性中心之序列尤其特別適用且得到出人意料的結果，如本發明中所述。
在新穎設計中亦採用增加的Sp對掌性主鏈(針對酶穩定性及其他藥理學上有利的特性)與(RRS)或(SSR)重複三元組對掌性主鏈基元(為增強作為核糖核酸酶H受質之特性)的組合；「S」表示Sp硫代磷酸酯鍵聯且「R」表示Rp硫代磷酸酯鍵聯。
另一替代設計係基於Sp對掌性硫代磷酸酯主鏈在延伸的重複基元中之增加的量，諸如：(SSSR)n、SR(SSSR)n、SSR(SSSR)n、SSR(SSSR)n、(SSSSR)n、SR(SSSSR)n、SSR(SSSSR)n、SSR(SSSSR)n、SSSR(SSSSR)n、(SSSSSR)n、SR(SSSSSR)n、SSR(SSSSSR)n、SSR(SSSSSR)n、SSSR(SSSSSR)n、SSSSR(SSSSSR)n等，其中n=0-50，視各別核苷酸間鍵聯之數目而定；「S」表示Sp硫代磷酸酯鍵聯且「R」表示Rp硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，n為0。在一些實施例中，R為1-50。在一些實施例中，R為1。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物之共同主鏈對掌性中心模式包含本文中所述之基元。在一些實施例中，基元係在核心區中。在一些實施例中，n為0。在一些實施例中，R為1-50。在一些實施例中，R為1。在一些實施例中，n為2。在一些實施例中，n為3。在一些實施例中，n為4。在一些實施例中，n為5。
另一替代設計係基於立體主鏈之「反轉」架構設計(「立體反轉體(stereo invert-mer)」)。此等設計係由將對掌性硫代磷酸酯之立體化學按反轉方式定位，使一些富Sp基元暴露於寡核苷酸之5'及3'端末端以及寡核苷酸之中部且具有以反轉影像方式定位於兩側的重複立體化學基元而產生，諸如：SS(SSR)n(SSS)(RSS)nSS； SS(SSR)n(SRS)(RSS)nSS；SS(SSR)n(SSR)(RSS)nSS；SS(SSR)n(RSS)(RSS)nSS；SS(RSS)n(SSS)(SSR)nSS；SS(RSS)n(SRS)(SSR)nSS；SS(RSS)n(SSR)(SSR)nSS；SS(RSS)n(RSS)(SSR)nSS等，其中n=0-50，視各別核苷酸間鍵聯之數目而定。「S」表示Sp硫代磷酸酯鍵聯且「R」表示Rp硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，所提供對掌性受控寡核苷酸組合物之共同主鏈對掌性中心模式包含本文中所述之基元。在一些實施例中，基元係在核心區中。在一些實施例中，n為0。在一些實施例中，n為1。在一些實施例中，n為1-50。在一些實施例中，n為2。在一些實施例中，n為3。在一些實施例中，n為4。在一些實施例中，n為5。
初始篩選 合成：DNA/RNA合成器MerMade-12上之寡核苷酸合成的概述(2'-去氧及2'-OMe循環)
具有DNA-2'-OMe-DNA(7-6-7)設計之立體無規PS寡核苷酸：
ONT-141 d(CsCsCsTsCsTsGs)gsaststsgsasd(GsCsAsTsCsCsA)
ONT-142 d(AsAsGsCsTsTsTs)gsgststsgsgsd(GsCsAsAsCsAsC)
ONT-143 d(AsGsTsCsAsCsTs)tsgsgsgsasgsd(CsTsTsCsTsCsC)
ONT-144 d(CsAsCsTsTsGsGs)gsasgscststsd(CsTsCsCsTsGsG)
ONT-145 d(AsTsAsGsCsCsAs)tstsgscsasgsd(CsTsGsCsTsCsA)
ONT-146 d(TsGsGsAsTsTsGs)asgscsastscsd(CsAsCsCsAsAsG)
ONT-147 d(CsCsAsTsAsGsCs)csaststsgscsd(AsGsCsTsGsCsT)
ONT-148 d(GsTsCsAsCsTsTs)gsgsgsasgscsd(TsTsCsTsCsCsT)
ONT-149 d(CsCsAsGsGsGsCs)ascstscsastsd(CsTsGsCsAsTsG)
ONT-150 d(GsCsCsAsTsCsCs)asasgstscsasd(CsTsTsGsGsGsA)
ONT-151 d(GsAsAsGsCsTsTs)tsgsgststsgsd(GsGsCsAsAsCsA)
ONT-152 d(CsTsGsGsAsTsTs)gsasgscsastsd(CsCsAsCsCsAsA)
ONT-183 d(CsAsAsGsTsCsAs)cststsgsgsgsd(AsGsCsTsTsCsT)
ONT-184 d(AsTsGsCsCsAsTs)cscsasasgstsd(CsAsCsTsTsGsG)
ONT-185 d(AsTsGsAsGsAsTs)gscscstsgsgsd(CsTsGsCsCsAsT)
ONT-186 d(TsTsGsGsGsAsGs)cststscstscsd(CsTsGsGsTsGsG)
ONT-187 d(TsGsGsGsAsGsCs)tstscstscscsd(TsGsGsTsGsGsA)
ONT-188 d(TsTsAsTsGsAsGs)astsgscscstsd(GsGsCsTsGsCsC)
ONT-189 d(GsTsTsAsTsGsAs)gsastsgscscsd(TsGsGsCsTsGsC)
ONT-190 d(CsCsAsAsGsTsCs)ascststsgsgsd(GsAsGsCsTsTsC)
ONT-191 d(AsGsCsTsTsTsGs)gststsgsgsgsd(CsAsAsCsAsCsA)
ONT-192 d(TsAsTsGsAsGsAs)tsgscscstsgsd(GsCsTsGsCsCsA)
ONT-193 d(TsGsTsTsAsTsGs)asgsastsgscsd(CsTsGsGsCsTsG)
ONT-194 d(AsTsCsCsAsAsGs)tscsascststsd(GsGsGsAsGsCsT)
ONT-195 d(GsGsGsAsAsGsCs)tststsgsgstsd(TsGsGsGsCsAsA)
ONT-196 d(CsTsCsCsAsTsCs)csastsgsasgsd(GsTsCsAsTsTsC)
ONT-197 d(AsAsGsTsCsAsCs)tstsgsgsgsasd(GsCsTsTsCsTsC)
ONT-198 d(CsCsAsTsCsCsAs)asgstscsascsd(TsTsGsGsGsAsG)
ONT-199 d(TsCsCsAsAsGsTs)csascststsgsd(GsGsAsGsCsTsT)
ONT-200 d(CsCsTsCsTsGsGs)aststsgsasgsd(CsAsTsCsCsAsC)
ONT-201 d(AsCsTsTsGsGsGs)asgscststscsd(TsCsCsTsGsGsT)
ONT-202 d(CsTsTsGsGsGsAs)gscststscstsd(CsCsTsGsGsTsG)
ONT-203 d(CsAsTsGsCsCsAs)tscscsasasgsd(TsCsAsCsTsTsG)
ONT-204 d(TsGsCsCsAsTsCs)csasasgstscsd(AsCsTsTsGsGsG)
ONT-205 d(TsCsCsAsTsCsCs)astsgsasgsgsd(TsCsAsTsTsCsC)
ONT-206 d(AsGsGsGsCsAsCs)tscsastscstsd(GsCsAsTsGsGsG)
ONT-207 d(CsCsAsGsTsTsCs)cststscsastsd(TsCsTsGsCsAsC)
ONT-208 d(CsAsTsAsGsCsCs)aststsgscsasd(GsCsTsGsCsTsC)
ONT-209 d(TsCsTsGsGsAsTs)tsgsasgscsasd(TsCsCsAsCsCsA)
ONT-210 d(GsGsAsTsTsGsAs)gscsastscscsd(AsCsCsAsAsGsA)
初始DNA-2'-OMe-DNA(7-6-7)設計在HepG2細胞中之生物學活體外資料：(d大寫字母)=DNA；小寫字母=2'-OMe；s=硫代磷酸酯。
具有2'-OMe-DNA-2'OMe(3-14-3)設計之立體無規PS寡核苷酸：(d大寫字母)=DNA；小寫字母=2'-OMe；s=硫代磷酸酯。
ONT-129 cscscsd(TsCsTsGsGsAsTsTsGsAsGsCsAsTs)cscsa
ONT-130 asasgsd(CsTsTsTsGsGsTsTsGsGsGsCsAsAs)csasc
ONT-131 asgstsd(CsAsCsTsTsGsGsGsAsGsCsTsTsCs)tscsc
ONT-132 csascsd(TsTsGsGsGsAsGsCsTsTsCsTsCsCs)tsgsg
ONT-133 astsasd(GsCsCsAsTsTsGsCsAsGsCsTsGsCs)tscsa
ONT-134 tsgsgsd(AsTsTsGsAsGsCsAsTsCsCsAsCsCs)asasg
ONT-135 cscsasd(TsAsGsCsCsAsTsTsGsCsAsGsCsTs)gscst
ONT-136 gstscsd(AsCsTsTsGsGsGsAsGsCsTsTsCsTs)cscst
ONT-137 cscsasd(GsGsGsCsAsCsTsCsAsTsCsTsGsCs)astsg
ONT-138 gscscsd(AsTsCsCsAsAsGsTsCsAsCsTsTsGs)gsgsa
ONT-139 gsasasd(GsCsTsTsTsGsGsTsTsGsGsGsCsAs)ascsa
ONT-140 cstsgsd(GsAsTsTsGsAsGsCsAsTsCsCsAsCs)csasa
ONT-155 csasasd(GsTsCsAsCsTsTsGsGsGsAsGsCsTs)tscst
ONT-156 astsgsd(CsCsAsTsCsCsAsAsGsTsCsAsCsTs)tsgsg
ONT-157 astsgsd(AsGsAsTsGsCsCsTsGsGsCsTsGsCs)csast
ONT-158 tstsgsd(GsGsAsGsCsTsTsCsTsCsCsTsGsGs)tsgsg
ONT-159 tsgsgsd(GsAsGsCsTsTsCsTsCsCsTsGsGsTs)gsgsa
ONT-160 tstsasd(TsGsAsGsAsTsGsCsCsTsGsGsCsTs)gscsc
ONT-161 gststsd(AsTsGsAsGsAsTsGsCsCsTsGsGsCs)tsgsc
ONT-162 cscsasd(AsGsTsCsAsCsTsTsGsGsGsAsGsCs)tstsc
ONT-163 asgscsd(TsTsTsGsGsTsTsGsGsGsCsAsAsCs)ascsa
ONT-164 tsastsd(GsAsGsAsTsGsCsCsTsGsGsCsTsGs)cscsa
ONT-165 tsgstsd(TsAsTsGsAsGsAsTsGsCsCsTsGsGs)cstsg
ONT-166 astscsd(CsAsAsGsTsCsAsCsTsTsGsGsGsAs)gscst
ONT-167 gsgsgsd(AsAsGsCsTsTsTsGsGsTsTsGsGsGs)csasa
ONT-168 cstscsd(CsAsTsCsCsAsTsGsAsGsGsTsCsAs)tstsc
ONT-169 asasgsd(TsCsAsCsTsTsGsGsGsAsGsCsTsTs)cstsc
ONT-170 cscsasd(TsCsCsAsAsGsTsCsAsCsTsTsGsGs)gsasg
ONT-171 tscscsd(AsAsGsTsCsAsCsTsTsGsGsGsAsGs)cstst
ONT-172 cscstsd(CsTsGsGsAsTsTsGsAsGsCsAsTsCs)csasc
ONT-173 ascstsd(TsGsGsGsAsGsCsTsTsCsTsCsCsTs)gsgst
ONT-174 cststsd(GsGsGsAsGsCsTsTsCsTsCsCsTsGs)gstsg
ONT-175 csastsd(GsCsCsAsTsCsCsAsAsGsTsCsAsCs)tstsg
ONT-176 tsgscsd(CsAsTsCsCsAsAsGsTsCsAsCsTsTs)gsgsg
ONT-177 tscscsd(AsTsCsCsAsTsGsAsGsGsTsCsAsTs)tscsc
ONT-178 asgsgsd(GsCsAsCsTsCsAsTsCsTsGsCsAsTs)gsgsg
ONT-179 cscsasd(GsTsTsCsCsTsTsCsAsTsTsCsTsGs)csasc
ONT-180 csastsd(AsGsCsCsAsTsTsGsCsAsGsCsTsGs)cstsc
ONT-181 tscstsd(GsGsAsTsTsGsAsGsCsAsTsCsCsAs)cscsa
ONT-182 gsgsasd(TsTsGsAsGsCsAsTsCsCsAsCsCsAs)asgsa
2'-OMe-DNA-2'-OMe(3-14-3)設計在HepG2細胞中之生物學活體外資料：
命中選擇：
ONT-151 d(GsAsAsGsCsTsTs)tsgsgststsgsd(GsGsCsAsAsCsA)
ONT-198 d(CsCsAsTsCsCsAs)asgstscsascsd(TsTsGsGsGsAsG)
ONT-185 d(AsTsGsAsGsAsTs)gscscstsgsgsd(CsTsGsCsCsAsT)
ONT-142 d(AsAsGsCsTsTsTs)gsgststsgsgsd(GsCsAsAsCsAsC)
ONT-145 d(AsTsAsGsCsCsAs)tstsgscsasgsd(CsTsGsCsTsCsA)
ONT-192 d(TsAsTsGsAsGsAs)tsgscscstsgsd(GsCsTsGsCsCsA)
ONT-188 d(TsTsAsTsGsAsGs)astsgscscstsd(GsGsCsTsGsCsC)
二級篩選. 化學及立體化學篩選 DNA/RNA合成器MerMade-12上之寡核苷酸合成的概述(立體限定的 硫代磷酸酯2'-去氧及2'-OMe循環)
適用於FOXO1命中序列之實例：
實例包括(但不限於)： (Sp,Sp,Sp,Sp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp,Sp)d[CsCsAsTsCsCsAsAsGsTsCsAsCsTsTsGsGsGsAsG]
(Sp,Sp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp)d[CsCsAsTsCsCsAsAsGsTsCsAsCsTsTsGsGsGsAsG]
(Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp)d[GsAsAsGsCsTsTsTsGsGsTsTsGsGsGsCsAsAsCsA]
(Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp)d[CsCsAsTsCsCsAsAsGsTsCsAsCsTsTsGsGsGsAsG]
(Sp,Sp,Sp,Sp,Sp,Rp,Rp,Sp,Rp,Rp,Sp,Rp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp,Sp,Sp)d[CsCsAsTsCsCsAsAsGsTsCsAsCsTsTsGsGsGsAsG]
(Sp,Sp,Sp,Sp,Rp,Rp,Sp,Rp,Rp,Sp,Rp,Rp,Sp,Rp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp)d[GsAsAsGsCsTsTsTsGsGsTsTsGsGsGsCsAsAsCsA]
(Sp,Sp,Sp,Sp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp,Sp)d[AsTsGsAsGsAsTsGsCsCsTsGsGsCsTsGsCsCsAsT]
(Sp,Sp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp)d[AsTsGsAsGsAsTsGsCsCsTsGsGsCsTsGsCsCsAsT]
(Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp)d[AsTsGsAsGsAsTsGsCsCsTsGsGsCsTsGsCsCsAsT]
(Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp)d[AsTsGsAsGsAsTsGsCsCsTsGsGsCsTsGsCsCsAsT]
(Sp,Sp,Sp,Sp,Sp,Rp,Rp,Sp,Rp,Rp,Sp,Rp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp,Sp,Sp)d[GsAsAsGsCsTsTsTsGsGsTsTsGsGsGsCsAsAsCsA]
(Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp)d[CsCsAsTsCsCsAs](AsGsTsCsAsCs) OMed[TsTsGsGsGsAsG]
(Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp)d[AsTsGsAsGsAsTs](GsCsCsTsGsGs) OMe d[CsTsGsCsCsAsT]
(Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp)d[CsCsAsTsCsCsAs](AsGsTsCsAsCs) LNAd[TsTsGsGsGsAsG]
(Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp)d[AsTsGsAsGsAsTs](GsCsCsTsGsGs) LNA d[CsTsGsCsCsAsT]
(Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp, Sp)d[CsCsAsTsCsCsAs](AsGsTsCsAsCs) MOEd[TsTsGsGsGsAsG]
(Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp)d[AsTsGsAsGsAsTs](GsCsCsTsGsGs) MOE d[CsTsGsCsCsAsT]
(Sp,Sp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Rp,Sp,Sp)(CsCsAs)OMed[TsCsCsAsAsGsTsCsAsCsTsTsGsGs](GsAsG)OMe
(Sp,Sp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Rp,Sp,Sp)(AsTsGs)MOEd[AsGsAsTsGsCsCsTsGsGsCsTsGsCs](CsAsT)MOE
(Sp,Sp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp)(CsCsAs)LNAd[TsCsCsAsAsGsTsCsAsCsTsTsGsGs](GsAsG)LNA
(Sp,Sp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp)(AsTsGs)OMed[AsGsAsTsGsCsCsTsGsGsCsTsGsCs](CsAsT)OMe
(Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp)d[CsCsAsTsCsCsAsAsGsTsCsAsCsTsTsGsGsGsAsG]
(Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp)d[AsTsGsAsGsAsTsGsCsCsTsGsGsCsTsGsCsCsAsT]
(Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp)d[GsAsAsGsCsTsTsTsGsGsTsTsGsGsGsCsAsAsCsA]
(Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp)d[AsTsGsAsGsAsTsGsCsCsTsGsGsCsTsGsCsCsAsT]
(Sp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp)d[CsCsAsTsCsCsAsAsGsTsCsAsCsTsTsGsGsGsAsG]
(Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp,Sp)d[AsTsGsAsGsAsTsGsCsCsTsGsGsCsTsGsCsCsAsT]
(Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp)d[GsAsAsGsCsTsTsTsGsGsTsTsGsGsGsCsAsAsCsA]
(Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp)d[AsTsGsAsGsAsTsGsCsCsTsGsGsCsTsGsCsCsAsT]
(Sp,Sp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp)d[CsCsAsTsCsCsAsAsGsTsCsAsCsTsTsGsGsGsAsG]
(Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp)d[CsCsAsTsCsCsAsAsGsTsCsAsCsTsTsGsGsGsAsG]
(Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp,Sp)d[AsTsGsAsGsAsTsGsCsCsTsGsGsCsTsGsCsCsAsT]
(Sp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp)d[CsCsAsTsCsCsAsAsGsTsCsAsCsTsTsGsGsGsAsG]
(Sp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Rp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp)d[CsCsAsTsCsCsAsAsGsTsCsAsCsTsTsGsGsGsAsG]
(Sp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Rp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp)d[CsCsAsTsCsCsAsAsGsTsCsAsCsTsTsGsGsGsAsG]
(Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp)d[CsCsAsTsCsCsAsAsGsTsCsAsCsTsTsGsGsGsAsG]
(Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp)d[CsCsAsTsCsCsAsAsGsTsCsAsCsTsTsGsGsGsAsG]
(Sp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp)d[CsCsAsTsCsCsAsAsGsTsCsAsCsTsTsGsGsGsAsG]
(Sp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Rp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp)(CsCs)OMed[AsTsCsCsAsAs](GsTsCs)OMed[AsCsTsTsGsGsGs](AsG)OMe
(Sp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Rp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp)(CsCs)LNAd[AsTsCsCsAsAsGsTsCsAsCsTsTsGsGsGs](AsG)LNA
(Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp)(CsCs)MOEd[AsTsCsCsAsAsGsTsCsAsCsTsTsGsGsGs](AsG)MOE
(Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Sp,Sp,Sp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp,Rp,Sp,Sp)(CsCs)OMed[AsTsCsCsAsAsGsTsCsAsCsTsTsGsGsGs](AsG)OMe
實例4. 核酸聚合物之抑制
本發明尤其提供對掌性受控寡核苷酸組合物及其方法，當例如用於在一些情況下經由裂解核酸聚合物抑制該等核酸聚合物時，其得到出人意料的結果。實例包括(但不限於)本文中所呈現之彼等實例。
核糖核酸酶H分析
藉由核酸酶達成之核酸聚合物之裂解速率(例如藉由核糖核酸酶H裂解RNA)對寡核苷酸在諸如反義技術之治療技術中之使用至關重要。使用吾人之分析，吾人研究當特定寡核苷酸類型之寡核苷酸結合至互補RNA時，特定寡核苷酸類型(P-非對映異構體)之對掌性受控寡核苷酸組合物的裂解速率，且分析其代謝物。以下結果亦說明本發明 所公認的裂解模式之重要性。
本文所用之核糖核酸酶H為水解RNA/DNA混合物之RNA股的泛表現核酸內切酶。其在反義寡核苷酸之作用模式中起重要作用。在一些實施例中，當構造RNA受質時，核糖核酸酶H裂解速率顯著降低(Lima,W.F.,Venkatraman,M.,Crooke,S.T.The Influence of Antisense Oligonucleotide-induced RNA Structure on Escherichia coli RNase H1 Activity The Journal Of Biological Chemistry 272，第29期，18191-18199,(1997))。另外，2'-MOE間隔體設計(5-10-5)對RNA目標提供較高親和力，造成反義股之轉換極少。在翼中存在2'-MOE修飾亦可減少核糖核酸酶H裂解位點之數目。
為研究RNA裂解速率，本發明提供一種用於定量在與核糖核酸酶H一起培育之後剩餘的RNA之長度的簡單分析。所提供之方法尤其提供各種寡聚物之經2'修飾之立體無規間隔體、立體無規DNA寡核苷酸組合物及對掌性純P-非對映異構體(相應寡核苷酸類型之對掌性受控寡核苷酸組合物)對不同目標的相對核糖核酸酶H裂解速率。改變經2'修飾之區域及DNA核心中之立體化學提供關於此等區域中之立體化學如何影響核糖核酸酶H與其受質之相互作用的資訊。在不同時間點，藉由LCMS分析核糖核酸酶H反應混合物，以確定裂解模式。本發明尤其提供對針對最佳活性(例如反義活性)設計立體化學核酸架構至關重要的核酸聚合物(例如RNA)裂解速率及裂解模式(圖譜)。
設備：
Alliance HPLC，2489-TUV，2695E-配備有自動進樣器
Cary100(Agilent Technologies)
方法：
DNA/RNA雙螺旋體製備：藉由量測在水中在260nm下之吸光度測定寡核苷酸濃度。藉由混合等莫耳寡核苷酸溶液製備DNA/RNA雙 螺旋體，其中各股濃度為10μM。在90℃下在水浴中加熱混合物2分鐘且歷時數小時使其緩慢冷卻下來。
人類核糖核酸酶H蛋白質表現及純化：自Wei Yang教授在NIH Bethesda之實驗室獲得人類核糖核酸酶HC純系。獲得此人類核糖核酸酶HC(殘基136-286)之方案已有描述(Nowotny,M.等人Structure of Human RNase H1 Complexed with an RNA/DNA Hybrid：Insight into HIV Reverse Transcription.Molecular Cell 28,264-276,(2007))。藉由遵循所報導之方案，但所得蛋白質改具有N端His6標籤，進行蛋白質表現。關於蛋白質表現，在LB培養基中使用BL21(DE3)大腸桿菌(E.coli)細胞。使細胞在37℃下生長，直至OD600達到約0.7。隨後冷卻培養物且添加0.4mM IPTG以在16℃下誘導蛋白質表現隔夜。藉由在添加蛋白酶抑制劑(Sigma-Aldrich)之緩衝液A(40mM NaH2PO4(pH 7.0)、1M NaCl、5%甘油、2.8mM β-巰基乙醇及10mM咪唑)中音波處理製備大腸桿菌提取物。藉由Ni親和柱，使用緩衝液A加60mM咪唑純化提取物。用60至300mM咪唑之線性梯度溶離蛋白質。收集蛋白質峰且在Mono S柱(GE Healthcare)上用含梯度100mM-500mM之NaCl的緩衝液B進一步純化。將含有核糖核酸酶HC之溶離份於儲存緩衝液(20mM HEPES(pH 7.0)、100mM NaCl、5%甘油、0.5mM EDTA、2mM DTT)中濃縮至0.3mg/ml且儲存在-20℃下。0.3mg/ml酶濃度基於其所報導之消光係數(32095cm-1M-1)及MW(18963.3Da單位)對應於17.4μM。
核糖核酸酶H分析：在96孔盤中，向25μL DNA/RNA雙螺旋體(10μM)中添加5μL之10×核糖核酸酶H緩衝液，隨後添加15μL水。在37℃下培育混合物數分鐘，且隨後添加5μL之0.1μM酶儲備溶液，得到50μL總體積，且最終受質/酶濃度為5μM/0.01μM(500：1)，且在37℃下進一步培育。使用此等條件研究各種比率之DNA/RNA雙螺旋體：核 糖核酸酶H蛋白質，尋找研究動力學之最佳比率。在不同時間點，使用10μL之500mM EDTA二鈉水溶液淬滅反應。在0min時間點，向反應混合物中添加EDTA，隨後添加酶。執行對照以確保EDTA能夠成功地完全抑制酶活性。在淬滅所有反應之後，在分析型HPLC柱(XBridge C18，3.5μm，4.6×150mm，Waters零件編號186003034)上注射10μL各反應混合物。Kcat/Km可藉由多種方法量測，諸如FRET(螢光共振能量轉移)依賴性核糖核酸酶H分析，使用經雙重標記之RNA且藉由SpectraMax監測。
用於LCMS之樣品製劑的固相萃取方案：使用96孔盤(Waters零件編號186002321)清潔核糖核酸酶H反應混合物，然後運作LCMS。藉助於歧管(Millipore零件編號MSV MHTS00)，在輕度真空下，相繼使用500μL乙腈、水平衡培養盤。採取預防措施以不使培養盤乾燥。在輕度真空下，將約50-100μL核糖核酸酶H反應混合物加載於各孔中，隨後加載水洗滌液(2mL)。使用2×500μL之70% ACN/水回收樣品。將所回收之樣品轉移至2mL離心管且速度真空濃縮至乾燥。各幹樣品在100μL水中復原且將10μL注射於Acquity UPLC OST C18 1.7μm，2.1×50mm(零件編號186003949)上進行LCMS分析。
關於質譜分析，使用C18 96孔盤(Waters)清潔淬滅後之反應混合物。將寡聚物溶離於70%乙腈/水中。使用速度真空蒸發乙腈且在注射用水中復原所得殘餘物。
溶離劑A=50mM乙酸三乙銨
溶離劑B=乙腈
管柱溫度=60℃
記錄254nm及280nm下之UV
RP-HPLC梯度法
在HPLC層析圖上，將對應於全長RNA寡聚物(ONT-28)之峰面積進行積分，使用DNA峰標準化且繪製與時間之曲線(圖8)。ONT-87展現優於其他候選產品及米泊美生之雙螺旋體形式的互補RNA裂解。因為此圖中之所有非對映異構體皆具有不活化核糖核酸酶H酶的經2'-MOE修飾之翼，所以不打算受理論限制，申請人提出，可能藉由DNA核心中之立體化學指示活性。反義股中含ONT-77至ONT-81(包括米泊美生)之異雙螺旋體顯示非常相似的RNA裂解速率。含交替的Sp/Rp立體化學之ONT-89在所測試之時間範圍內在所測試之條件下顯示最小活性。在所測試之含MOE修飾的寡核苷酸中，反義股中之ONT-87及ONT-88單元相比於異雙螺旋體之其餘部分，展現活性增加。ONT-87尤其提供出人意料地高的裂解速率及出人意料地低的剩餘目標RNA含量。其他實例資料示於圖6及圖24中。
活體外寡核苷酸轉染分析：轉染分析為廣泛已知的且由一般熟習此項技術者實踐。例示性方案描述於本文中。用脂染胺2000(Life Technologies，目錄號11668-019)以18×103個細胞/孔之密度在96孔盤中使用製造商之方案反向轉染Hep3B細胞。關於劑量反應曲線，使用八份1/3連續稀釋液，自60nM開始至100nM。將25μL之6×寡核苷酸濃度與每孔0.4μL脂染胺2000與25μL無血清培養基Opti-MEM培養基(Gibco，目錄號31985-062)之所製備混合物混合。培育20min後，在 DMEM細胞培養基(Gibco，目錄號11965-092)中添加100μL懸浮於10% FBS中之180×103個細胞/毫升，使最終體積變為150μL/孔。轉染後24-48小時，藉由添加含0.5mg/ml蛋白酶K之75μL溶解混合物裂解Hep3B細胞，使用QuantiGene樣品處理套組用於經培養細胞(Affymetrix，目錄號QS0103)。使用Affymetrix QuantiGene 2.0分析套組(目錄號QS0011)根據製造商之方案量測細胞溶解產物中之目標mRNA及GAPDH mRNA表現量。T將目標mRNA表現針對相同樣品之GAPDH mRNA表現標準化；且比較相對目標/GAPDH含量與僅使用脂染胺2000(無寡核苷酸)對照之轉染。由GraphPad Prism 6使用非線性回歸log(抑制劑)產生劑量反應曲線，對比用可變斜率(4參數)擬合之反應曲線。關於實例結果，參見圖24、圖27及圖29。
實例5. 所提供組合物及方法提供對裂解模式之控制
本發明意外發現，核苷酸間鍵聯立體化學模式對核酸聚合物之裂解模式具有出人意料的影響。藉由改變對掌性受控寡核苷酸組合物之共同主鏈對掌性中心模式，裂解位點數目、裂解位點之裂解百分比及/或裂解位點之位置皆可出人意料地獨立地及組合地更改。如本文實例中所述，所提供組合物及方法可提供對核酸聚合物之裂解模式的控制。
使用類似分析條件，測試不同寡核苷酸類型之各種對掌性受控寡核苷酸組合物。目標RNA序列之例示性裂解模式呈現於圖9中。某些主鏈對掌性中心模式(諸如ONT-87及ONT-154中者)出人意料地在目標序列中僅產生一個裂解位點。此外，意外發現，提供單一裂解位點之寡核苷酸(諸如ONT-87及ONT-154)提供出乎意料地高的裂解速率及出乎意料地低的剩餘目標核酸聚合物之含量。亦參見圖8、圖10及圖11。
實例6. FOXO1 mRNA之例示性裂解
在如上所述之裂解分析中測試靶向FOXO1 mRNA之不同區域的寡核苷酸組合物。在各情況下，對掌性受控寡核苷酸組合物顯示能夠提供相對於來自共用相同共同鹼基序列及長度但不控制對掌性之寡核苷酸組合物的參考裂解模式而言有所更改的裂解模式。關於實例結果，參見圖10及圖11。如圖12中所示，當相比於不控制對掌性之參考寡核苷酸組合物時，例示性對掌性受控寡核苷酸組合物提供顯著較快的裂解速率及出乎意料地低的剩餘受質含量。在一些實施例中，如圖11中所示，裂解位點與RpSpSp主鏈對掌性中心序列相關。在一些實施例中，裂解位點為RpSpSp上游之兩個鹼基對。
如下列出例示性寡核苷酸組合物。
實例7. 例示性對掌性受控寡核苷酸組合物提供較高轉換
在裂解核酸聚合物片段(例如RNA片段)於寡核苷酸之Tm大於生理溫度的情況下，產物解離會遭到抑制且寡核苷酸無法解離且尋找其他目標股形成雙螺旋體及導致目標股裂解。ONT-316(5-10-5 2'-MOE間隔體)於互補RNA之Tm為76℃。在與寡核苷酸互補之RNA序列中之 一切割或若干切割之後，2'-MOE片段可仍然結合至RNA且因此不能引起其他目標分子裂解。當與RNA雙螺旋時，DNA股之熱熔融溫度一般非常低，例如ONT-367(63℃)及ONT-392(60℃)。另外，相比於經2'-MOE修飾之寡核苷酸而言，熱穩定性常常相對均一地分佈於DNA序列中。在一些實施例中，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物中之寡核苷酸不含2'修飾，諸如2'-MOE。在一些實施例中，所提供之不含2'修飾(諸如2'-MOE)的對掌性受控寡核苷酸組合物中之寡核苷酸比具有2'修飾(諸如2'-MOE)之寡核苷酸容易自核酸聚合物裂解片段解離，且具有更高轉換。在一些實施例中，本發明提供一種全DNA設計，其中寡核苷酸不具有2'修飾。在一些實施例中，寡核苷酸不具有2'修飾的對掌性受控寡核苷酸組合物提供更高的核酸酶(諸如核糖核酸酶H)轉換。在一些實施例中，在裂解之後，核糖核酸酶H更容易自藉由RNA及所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物之寡核苷酸形成的雙螺旋體解離。使用如上所述之類似方案，寡核苷酸類型ONT-367及ONT-392之兩種例示性對掌性受控寡核苷酸組合物的轉換實際上顯示比不控制對掌性之參考寡核苷酸組合物高的轉換比率(參見圖13)。
實例8. FOXO1 mRNA之例示性裂解
如圖14中所例示，本發明中之對掌性受控寡核苷酸組合物及其方法可提供核酸聚合物之控制裂解。在一些實施例中，本發明之對掌性受控寡核苷酸組合物就裂解位點數目、裂解位點之位置及/或裂解位點之相對裂解百分比而言產生更改的裂解模式。在一些實施例中，如藉由ONT-401及ONT-406所例示，對掌性受控寡核苷酸組合物提供單一位點裂解。
在一些實施例中，僅偵測到一種RNA裂解組分。不打算受理論限制，申請人提出，此觀察結果可歸因於核糖核酸酶H酶之進行性本質，其可在同一雙螺旋體上造成多個切口，產生極短的5'-OH 3'-OH 片段。
進一步測試其他對掌性受控寡核苷酸組合物。如上所述，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物提供出人意料的結果，例如就裂解速率及DNA/RNA雙螺旋體中剩餘的RNA%而言。參見圖15至圖17。實例分析資料呈現於圖18至圖20中。不打算受理論限制，申請人提出，在一些實施例中，可發生裂解，如圖21中所描繪。在圖17中，觀察到所提及之ONT-406引起雙螺旋RNA以略超過具有相同鹼基序列及長度之天然DNA寡核苷酸ONT-415之速率的速率裂解。申請人提出，ONT-406之對掌性受控寡核苷酸組合物及本發明中所提供之其他對掌性受控寡核苷酸組合物具有ONT-415組合物不具有的其他較佳特性，例如較佳的活體外及/或活體內穩定性概況。其他實例資料呈現於圖25中。此外，如熟習此項技術者將瞭解，圖26及圖27中所示的實例資料證實，所提供之例示性對掌性受控寡核苷酸組合物，尤其在如此設計以經由主鏈對掌性中心模式控制裂解模式時，產生遠優於參考寡核苷酸組合物(例如立體無規寡核苷酸組合物)的結果。如圖26中所例示，控制主鏈對掌性中心模式尤其可在使用DNA寡核苷酸時選擇性增加及/或減少現有裂解位點之裂解，或在使用DNA寡核苷酸時形成不存在的全新裂解位點(參見圖25，ONT-415)。在一些實施例中，DNA寡核苷酸之裂解位點指示核糖核酸酶H之內源性裂解偏好。如圖27所證明，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物能夠調整目標裂解速率。在一些實施例中，大約75%之細胞活性差異導致裂解速率差異，其可經由主鏈對掌性中心模式控制。如本申請案中所提供，諸如鹼基修飾及其模式、糖修飾及其模式、核苷酸間鍵聯修飾及其模式及/或其任何組合的其他結構特徵可與主鏈對掌性中心模式組合提供適當寡核苷酸特性。
實例9. mHTT之例示性對偶基因特異性抑制
在一些實施例中，本發明提供用於以優於其他對偶基因之選擇性，對偶基因特異性抑制一個特定對偶基因之轉錄物的對掌性受控寡核苷酸組合物及其方法。在一些實施例中，本發明提供mHTT之對偶基因特異性抑制。
圖22展示特異性抑制一個對偶基因之轉錄物但不抑制其他對偶基因之轉錄物的例示性對掌性受控寡核苷酸組合物。使用以上所述之生物化學分析，針對來自所例示之兩種對偶基因之轉錄物測試寡核苷酸451及452。亦在細胞及動物模型中使用類似程序測試對偶基因特異性抑制，如Hohjoh,Pharmaceuticals 2013, 6,522-535；美國專利申請公開案US 2013/0197061；及Østergaard等人，Nucleic Acids Research, 2013, 41(21),9634-9650中所述。在所有情況下，優先於來自其他對偶基因之轉錄物，選擇性抑制來自目標對偶基因之轉錄物。如熟習此項技術者將瞭解，圖22中所示之實例資料證實，所提供之例示性對掌性受控寡核苷酸組合物，尤其在如此設計以經由立體化學控制裂解模式時，產生遠優於參考寡核苷酸組合物(在此情況下，立體無規寡核苷酸組合物)之結果。如圖22所證實，主鏈對掌性中心模式可顯著改變裂解模式(圖22C-E)，且可採用立體化學模式在錯配位點定位裂解位點(圖22C-E)，及/或可顯著改良突變型與野生型之間的選擇性(圖22G-H)。在一些實施例中，對掌性受控寡核苷酸組合物與目標之wtRNA及muRNA一起培育，且兩種雙螺旋體均與核糖核酸酶H一起培育。
亨廷頓對偶基因Tm
實例10. FOXO1之例示性對偶基因特異性抑制
在一些實施例中，本發明提供FOXO1之對偶基因特異性抑制。
圖23展示特異性抑制一個對偶基因之轉錄物但不抑制其他對偶基因之轉錄物的例示性對掌性受控寡核苷酸組合物。使用以上所述之生物化學分析，針對來自所例示之兩種對偶基因之轉錄物測試寡核苷酸ONT-400、ONT-402及ONT-406。亦使用類似程序，在細胞及動物模型中測試對偶基因特異性抑制，如Hohjoh,Pharmaceuticals 2013, 6,522-535；美國專利申請公開案US 2013/0197061；Østergaard等人，Nucleic Acids Research 2013, 41(21),9634-9650；及Jiang等人，Science 2013, 342,111-114中所述。優先於來自其他對偶基因之彼等轉錄物，選擇性抑制來自目標對偶基因之轉錄物。在一些情況下，自ONT-388合成含錯配的兩個RNA：ONT-442(A/G，位置第7)及ONT-443(A/G，位置第13)且使其與ONT-396雙螺旋為ONT-414。執行核糖核酸酶H分析以獲得裂解速率及裂解圖譜。
實例11. 某些例示性寡核苷酸及寡核苷酸組合物
靶向FOXO1 mRNA之三個不同區域的具有不同2'取代化學性質的立體無規寡核苷酸在與互補RNA雙螺旋時的熱熔融溫度。各股之濃度為1μM，於1×PBS緩衝液中。
如下列出其他例示性立體無規寡核苷酸組合物。
如下列出例示性RNA及DNA寡核苷酸。
以下呈現例示性對掌性純寡核苷酸。在一些實施例中，本發明提供以下例示性寡核苷酸中之每一者的相應對掌性受控寡核苷酸組合物。
以下伴隨Tm呈現靶向FOXO1的其他例示性寡核苷酸。在一些實施例中，本發明提供以下例示性寡核苷酸中之每一者的相應對掌性受控寡核苷酸組合物。
實例12. 藉由所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物達成之例示性其他控制裂解
如熟習此項技術者將瞭解，圖26中所示之實例資料證實，所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物及其方法相比於諸如立體無規寡核苷酸組合物之參考組合物而言，提供出人意料的結果。對掌性受控寡核苷酸組合物尤其可產生控制裂解模式，包括(但不限於)控制裂解位點之位置、裂解位點之數目及裂解位點之相對裂解百分比。亦參見圖27中所呈現之實例資料。
實例13. 對掌性受控寡核苷酸組合物之穩定性
如熟習此項技術者將瞭解，圖26中所示之實例資料證實，可藉由改變主鏈對掌性中心模式來調整所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物的穩定性。關於實例資料，參見圖7及圖28。下文描述用於執行血清穩定性實驗的例示性方案。
方案：將P立體化學純PS DNA(ONT-396-ONT-414(自3'端至5'端，單一Rp))、立體無規PS DNA(ONT-367)、全Sp PS DNA(ONT-421)及全Rp PS DNA(ONT-455)在大鼠血清(Sigma,R9759)(0h及48h)中培育且藉由IEX-HPLC分析。
培育方法：將5μL之250μM各DNA溶液及45μL之大鼠血清混合 且在37℃下培育，持續各時間點(0h及48h)。在各時間點，藉由添加25μL之150mM EDTA溶液、30μL裂解緩衝液(erpicentre，MTC096H)及3μL蛋白酶K溶液(20mg/mL)終止反應。將混合物在60℃下培育20分鐘，隨後注射20μL混合物至IEX-HPLC且分析。
培育對照樣品：製備5μL之250μM各DNA溶液及103μL之1×PBS緩衝液的混合物且藉由IEX-HPLC分析20μL混合物作為對照以便檢查絕對定量。
例示性分析方法：
IEx-HPLC
A：10mM TrisHCl、50% ACN(pH 8.0)
B：10mM TrisHCl、800mM NaCl、50% ACN(pH 8.0)
C：Water-ACN(1：1，v/v)
溫度：60℃
管柱：DIONEX DNAPac PA-100，250×4mm
梯度：
洗滌：
管柱溫度：60℃。
每次在操作樣品之後進行洗滌。
藉由使用HPLC層析圖之積分面積，分析自0h至48h之比率，計算剩餘PS DNA之百分比。
實例14. 實例分析結果(圖19)
圖19之峰值分配(上圖，M12-Exp11 B10，ONT-354，30min)
圖19之峰值分配(下圖，M12-Exp11 A10，ONT-315，30min)
實例15. 實例分析結果(圖30)
圖30之峰值分配(上圖，M12-Exp11 D2，ONT-367，30min)
圖30之峰值分配(下圖，M12-Exp21 NM Plate1(池)F11 ONT-406 30min)
實例16. 連接基團之例示性製備
在一些實施例中，根據以下流程製備SP連接基團：
實例17. 鹼基序列之例示性設計
如本發明中所述，本發明認識到鹼基序列對例如所提供之對掌性受控寡核苷酸組合物的重要性。在一些實施例中，如本文中所例示，本發明提供為諸如反義寡核苷酸之寡核苷酸設計鹼基序列的方法。
在一些實施例中，尤其使用生物信息學來為目標設計序列，該目標例如亨廷頓氏病之疾病相關突變型對偶基因。本實例描述可用於為例如rs362268、rs362306、rs2530595、rs362331、rs362307等設計反義寡核苷酸的例示性步驟。在一些實施例中，所提供之方法包含針對脫靶、與目標之結合親和力、相鄰Gs及回文部分(paliandromic moiety)檢查序列特徵的步驟。在一些實施例中，所提供之方法包含在錯配存在下檢查脫靶效應之步驟。在一些實施例中，在例如核糖核酸酶H分析、報導基因分析等分析中使用目標中所存在的包含特徵序列元件(例如突變、SNP等)且具有以下長度之序列：約10-1000個核苷酸，例如約10、約20、約30、約40、約50、約60、約70、約80、約90、約100、約110、約120、約130、約140、約150、約200、約250、約300、約400、約500、約600、約700、約800、約900、約1000、約2000、約3000、約4000、約5000等。在一些實施例中，如本實例中，針對例如rs362268、rs362306、rs2530595、rs362331、rs362307等SNP，使用40bp側接序列。可藉由所提供之方法容易地評定多個此類序列，例如6至12個。如下列出例示性測試序列：
如本發明中所述且一般熟習此項技術者所瞭解，在一些實施例中，例如本文中所述之核糖核酸酶裂解分析的分析適用於評定一或多個特徵(例如，裂解之速率、程度及/或選擇性)。在一些實施例中，核糖核酸酶裂解分析提供寡核苷酸組合物之裂解模式。在一些實施例中，使用具有相同序列之DNA寡核苷酸的組合物，核糖核酸酶H分析可提供該序列之DNA裂解模式。在一些實施例中，為產生DNA裂解模式，組合物中之所有DNA寡核苷酸皆相同。在一些實施例中，當使用具有相同序列之全硫代磷酸酯寡核苷酸的立體無規組合物時，核糖核酸酶H分析可提供該序列之立體無規裂解模式。在一些實施例中，為產生立體無規裂解模式，立體無規組合物中之所有寡核苷酸皆相同。在一些實施例中，當使用對掌性受控寡核苷酸組合物時，核糖核酸酶H分析可提供對掌性受控寡核苷酸組合物之立體無規裂解模式。在一些實施例中，為產生對掌性受控寡核苷酸組合物之裂解模式，對掌性受控寡核苷酸組合物中之所有寡核苷酸皆相同。在一些實施例中，核糖核酸酶H分析提供裂解速率資訊。在一些實施例中，核糖核酸酶H分析提供相對裂解程度，例如(在某一位點裂解)/(全部裂解)。在一些實施例中，核糖核酸酶H分析提供絕對裂解程度：(在某一位點之裂解目標)/(所有裂解及未裂解目標)。在一些實施例中，核糖核酸酶H分析提供選擇性。在一些實施例中，核糖核酸酶H分析提供抑制程度資訊。
在一些實施例中，如本文中所例示，核糖核酸酶H分析提供裂解速率。關於實例結果，參見圖31。P表示寡核苷酸中自5'端起之錯配位置。
分析25-mer RNA在與靶向rs362307 SNP之不同硫代磷酸酯寡核苷酸雜交時的人類核糖核酸酶H1裂解。WV-944及WV-945為分別包括rs362307之WT及突變型變異體的25mer RNA。WV-936至WV-941為立 體純DNA，而WV-904至WV-909皆為立體無規DNA。使所有雙螺旋體與核糖核酸酶H1C一起在1×核糖核酸酶H緩衝液存在下在37℃下培育。在固定時間點藉由30mM Na2EDTA淬滅反應。將1/10此反應混合物注射於逆相HPLC上且在不同時間點量測反應混合物中剩餘的全長RNA的峰面積。藉由繪製此等峰面積與各別時間點之圖確定裂解速率。在一些實施例中，在WT RNA與mu RNA之間觀察到裂解速率差異。
在一些實施例中，如圖31中所示，當序列中如自其5'端起計數之位置11、12或13與SNP對準，或序列中如自其3'端起計數之位置8、9或10與SNP對準時，觀察到較佳裂解選擇性。
實例18. 例示性翼、核心、翼-核心、核心-翼及翼-核心-翼設計
本發明尤其提供翼、核心、翼-核心、核心-翼及翼-核心-翼結構之各種實施例。在一些實施例中，意外發現，翼包含磷酸酯鍵聯且核心包含硫代磷酸酯鍵聯之寡核苷酸提供出乎意料地增加的裂解效率及選擇性。舉例而言，參見圖32C、F、G、H等。
分析25-mer RNA在與靶向rs362307 SNP之不同對掌性受控寡核苷酸組合物雜交時的人類核糖核酸酶H1裂解。WV-944及WV-945為分別包括rs362307之WT及突變型變異體的25mer RNA。WV-1085至WV-1092皆為含PO/PS混合主鏈的立體純2'-OMe/DNA。使所有雙螺旋體與核糖核酸酶H1C一起在1×核糖核酸酶H緩衝液存在下在37℃下培育。在固定時間點藉由30mM Na2EDTA淬滅反應。將1/10此反應混合物注射於逆相HPLC上且在不同時間點量測反應混合物中剩餘的全長RNA的峰面積。藉由繪製此等峰面積與各別時間點之圖確定裂解速率。
在一些實施例中，2'-OMe磷酸酯翼改變裂解速率及/或選擇性。在一些實施例中，2'-OMe磷酸酯翼改變裂解速率及選擇性。在一些實施例中，2'-OMe磷酸酯翼改變裂解速率或選擇性。在一些實施例中， 2'-OMe磷酸酯翼改變裂解速率。在一些實施例中，2'-OMe磷酸酯翼改變突變型及野生型對偶基因之裂解速率。在一些實施例中，2'-OMe磷酸酯翼改變裂解選擇性。在一些實施例中，2'-OMe磷酸酯翼改變裂解模式。
在一些實施例中，磷酸酯核苷酸間鍵聯之併入意外改良裂解速率及/或選擇性。在一些實施例中，磷酸酯核苷酸間鍵聯之併入意外改良裂解速率及選擇性。在一些實施例中，磷酸酯核苷酸間鍵聯之併入意外改良裂解速率或選擇性。在一些實施例中，磷酸酯核苷酸間鍵聯之併入意外改良裂解速率。在一些實施例中，磷酸酯核苷酸間鍵聯改良突變型及野生型對偶基因之裂解速率，但改良程度突變型對偶基因大於野生型對偶基因。在一些實施例中，磷酸酯核苷酸間鍵聯之併入意外改良裂解選擇性。
在一些實施例中，如藉由本文中所例示之資料所證明，相比於相應立體無規組合物，立體純寡核苷酸組合物提供出人意料地高的裂解速率及/或選擇性；例如參見立體純WV-1497/立體無規WV-1092、905/937、931/1087等。
實例19. 例示性裂解圖譜
如本文所述，在一些實施例中，諸如核糖核酸酶H分析之分析提供立體無規或對掌性受控寡核苷酸組合物的裂解圖譜。例示性裂解圖譜示於圖33中，其例示多鹼基序列之立體無規裂解模式。其他裂解圖譜呈現於圖35中，其尤其例示不具有核苷修飾之鹼基序列(WV-905)以及具有核苷修飾之鹼基序列的立體無規裂解模式。
對掌性受控立體純寡核苷酸組合物之例示性裂解模式呈現於圖34中。如本發明中所述，主要裂解位點可經由諸如核糖核酸酶H分析之分析自裂解模式鑑別。舉例而言，關於WV-937，如藉由(該位點之裂解/總裂解)評定且由箭頭長度反映之相對主要裂解位點，野生型係 在GCGC與CCUU之間(遠離SNP 2個核苷酸間鍵聯)，且突變型係在CUGU與GCCC之間(在SNP位點，遠離SNP 0個核苷酸間鍵聯)。在一些實施例中，相對主要裂解位點不一定為絕對主要裂解位點，其要求在該位點裂解一定百分比之總目標(在此情況下，RNA)。舉例而言，在一些實施例中，若需要在某一位點裂解超過20%之總目標以使該位點合格成為主要裂解位點，則WV-937/野生型中在GCGC與CCUU之間的位點並非主要裂解位點(參見圖32，M)；若主要位點之臨限值為在彼位點裂解20%之總目標，則WV-937/突變體中在CUGU與GCCC之間的位點仍為主要裂解位點。
在一些實施例中，不同寡核苷酸組合物具有不同裂解速率。在一些實施例中，在不同時間點產生裂解圖譜。舉例而言，關於具有較快裂解速率之寡核苷酸組合物，可在比具有較慢裂解速率之寡核苷酸組合物(例如，30分鐘、45分鐘、60分鐘等)早的時間點(例如，5分鐘、10分鐘、15分鐘等)產生其裂解圖譜。
在一些實施例中，當可藉由例如HPLC、HPLC-MS等分析方法鑑別僅一個位點之裂解產物時，相應裂解模式視為具有單一裂解位點。在一些實施例中，當在一位點發生大於約90%、大於約91%、大於約92%、大於約93%、大於約94%、大於約95%、大於約96%、大於約97%、大於約98%、大於約99%或大於約99.5%之總裂解時，相應裂解模式可視為具有單一裂解位點。在一些實施例中，如一般熟習此項技術者所理解，在例如細胞、組織、器官、個體等中之選擇性可高於在核糖核酸酶H分析中所觀察到之選擇性。在一些實施例中，在核糖核酸酶H分析中具有大於約90%、大於約91%、大於約92%、大於約93%、大於約94%、大於約95%、大於約96%、大於約97%、大於約98%、大於約99%或大於約99.5%之總裂解的位點在細胞、組織、器官或個體中可具有更高選擇性。在一些實施例中，在核糖核酸酶H分 析中具有大於約90%之總裂解的位點在細胞、組織、器官或個體中可為唯一裂解位點(例如，大於約99%、大於約99.5%、100%等)。
在一些實施例中，可藉由比較目標序列及類似序列(例如RNA)或作為目標之突變型對偶基因及作為類似序列之野生型對偶基因的代表性合成序列的剩餘轉錄物的絕對值(或其代表性序列，諸如本文中所述實例中用於的RNA序列)來評定選擇性。在一些實施例中，當起始量相同時，可藉由比較目標序列及類似序列之剩餘轉錄物(或其代表性序列，諸如本文中所述實例中所用的RNA序列)之絕對量來評定選擇性。在一些實施例中，可藉由目標序列及類似序列之轉錄物(或其代表性序列，諸如本文中所述實例中所用的RNA序列)的裂解百分比來評定選擇性。在一些實施例中，可藉由比較裂解的與未裂解的轉錄物(或其代表性序列，諸如本文中所述實例中所用的RNA序列)之比率來評定選擇性。
在一些實施例中，可藉由一或多種本文中所例示之分析評定選擇性。在一些實施例中，可藉由核糖核酸酶H裂解分析量測選擇性。舉例而言，目標(例如，來自突變型對偶基因之RNA)之選擇性裂解可藉由生物化學核糖核酸酶H裂解分析量測，其中比較突變型目標序列之裂解與野生型RNA序列之裂解，且選擇性可由裂解比率、某一時間點裂解的突變型RNA與野生型RNA之比率或某一時間點剩餘的突變型RNA與野生型RNA之比率或其組合表示。在一些實施例中，時間點為5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60分鐘或超過60分鐘。在一些實施例中，時間點為10分鐘。在一些實施例中，時間點為15分鐘。在一些實施例中，時間點為20分鐘。在一些實施例中，時間點為25分鐘。在一些實施例中，時間點為30分鐘。在一些實施例中，時間點為35分鐘。在一些實施例中，時間點為40分鐘。在一些實施例中，時間點為45分鐘。在一些實施例中，時間點為50分鐘。在一些實 施例中，時間點為55分鐘。在一些實施例中，時間點為60分鐘。在一些實施例中，時間點為60分鐘。一般熟習此項技術者瞭解如何選擇時間點，例如針對圖32中所示的裂解，可選擇5、10、15、20、20、45及60分鐘中之一或多個時間點評定選擇性。在一些實施例中，可藉由目標(例如，突變型)及非目標(例如野生型)序列之IC50比率量測選擇性，例如根據基於細胞之分析或動物模型。
例示性HPLC-MS軌跡呈現於圖36中。在一些實施例中，例示性核糖核酸酶H分析條件描述如下。
DNA/RNA雙螺旋體製備：藉由量測在水中在260nm下之吸光度測定寡核苷酸濃度。藉由混合等莫耳寡核苷酸溶液製備DNA/RNA雙螺旋體，其中各股濃度為20μM。在90℃下在水浴中加熱混合物2分鐘且歷時數小時使其緩慢冷卻下來。
人類核糖核酸酶H蛋白質表現及純化：自Wei Yang教授在NIH Bethesda之實驗室獲得人類核糖核酸酶HC純系。獲得此人類核糖核酸酶HC(殘基136-286)之方案已有描述(Nowotny,M.等人Structure of Human RNase H1 Complexed with an RNA/DNA Hybrid：Insight into HIV Reverse Transcription.Molecular Cell 28,264-276,(2007))。藉由遵循所報導之方案，但所得蛋白質改具有N端His6標籤，進行蛋白質表現。關於蛋白質表現，在LB培養基中使用BL21(DE3)大腸桿菌細胞。使細胞在37℃下生長，直至OD600nm達到約0.7。隨後冷卻培養物且添加0.4mM IPTG以在16℃下誘導蛋白質表現隔夜。藉由在添加蛋白酶抑制劑(Sigma-Aldrich)之緩衝液A(40mM NaH2PO4(pH 7.0)、1M NaCl、5%甘油、2.8mM β-巰基乙醇及10mM咪唑)中音波處理製備大腸桿菌提取物。藉由Ni親和柱，使用緩衝液A加60mM咪唑純化提取物。用60至300mM咪唑之線性梯度溶離蛋白質。收集蛋白質峰且在Mono S柱(GE Healthcare)上用含梯度100mM-500mM之NaCl的緩衝 液B進一步純化。將含有核糖核酸酶HC之溶離份於儲存緩衝液(20mM HEPES(pH 7.0)、100mM NaCl、5%甘油、0.5mM EDTA、2mM DTT)中濃縮至0.3mg/mL且儲存在-20℃下。0.3mg/mL酶濃度基於其所報導之消光係數(32095cm-1M-1)及MW(18963.3Da單位)對應於17.4μM。
在96孔盤中，向25μL DNA/RNA雙螺旋體(20μM)中添加10μL之10×核糖核酸酶H緩衝液，隨後添加30μL水。在37℃下培育混合物數分鐘，且隨後添加10μL之0.2μM酶儲備溶液，得到100μL總體積，且最終受質/酶濃度為10μM/0.02μM(500：1)，且在37℃下進一步培育。使用此等條件預先研究各種比率之DNA/RNA雙螺旋體與核糖核酸酶H蛋白質，從而找到用於研究動力學之此最佳比率(500：1)。在不同時間點，使用7μL之500mM EDTA二鈉水溶液淬滅反應。在0min時間點，向反應混合物中添加EDTA，隨後添加酶。執行對照以確保EDTA能夠完全抑制酶活性。在淬滅所有反應之後，使用分析型管柱(Agilent Poroshell 120 EC-C18 2.7微米，2.1×150mm，零件編號699775-902)，注射10μL或20μL各反應混合物於LCMS-TOF上。各反應混合物中之剩餘全長RNA與DNA之峰面積之比針對零點反應時之比率標準化，從而獲得剩餘的全長RNA%。
在一些實施例中，例示性HPLC條件為：溶離劑A=含8mM TEA、200mM HFIP之水
溶離劑B=50：50(溶離劑A：甲醇)
管柱溫度=50℃
自動進樣溫度=4℃
記錄254nm及280nm下之UV
LC梯度法
實例20. 用於評定寡核苷酸之例示性分析
在一些實施例中，本發明提供用於評定所提供之寡核苷酸及組合物之特性的報導基因分析。在一些實施例中，所提供之報導基因分析為雙重螢光素酶分析，例如如下所述。
使用雙重Glo螢光素酶系統測定藉由寡核苷酸達成之mRNA抑制：來自Promega之psiCheck2載體系統為可在市面上購得的載體，其編碼單一質體上之螢火蟲(Photinus pyralis)及海腎(Renilla Reniformis)螢光素酶基因，在海腎螢光素酶之3' UTR中含多個用於插入編碼微小RNA目標位點之寡核苷酸的選殖位點(或其他選殖調控序列，諸如目標3'UTR)。將含有感興趣之靶向區及其反向補體且具有對應於用於消化psiCheck載體之限制酶的適當懸垂鹼基的250個鹼基對片段選殖至psiCHECK-2載體(Promega，C8021)中NotI與XhoI限制酶位點之間。對含有插入物之載體進行定序以確認插入物之取向正確，擴展且純化。使用上文針對感興趣SNP之設計產生多個載體。在典型的共轉染實驗中，在細胞達到恰當密度(30%至40%融合度)之後，使用脂染胺2000(Life Technologies)反向轉染寡核苷酸及載體。可早在轉染後24h見到寡核苷酸對目標mRNA之影響，且該等影響在48h後仍然存在。psiCheck載體轉染後24小時或48小時，分析細胞之螢光素酶活性。簡言之，將細胞用PBS洗滌，在被動裂解緩衝液中裂解，添加螢光素試 劑，且在Spectramax M5儀器(Molecular Devices)上讀取樣品。在96孔盤中每孔20ng之載體濃度下進行量測。在各種寡核苷酸濃度(30、10及3.3nM)下及在兩個時間點(24及48小時)執行實驗。量測未經處理之細胞及經靶向海腎之寡核苷酸(WV-975)處理之細胞的海腎螢光素酶對比螢火蟲螢光素酶之相對含量，從而量測最大海腎阻斷基因表現。選擇對照寡核苷酸(例如，WV-437、WV-993等)標準化R/F含量。在一些實施例中，使用雙重螢光素酶報導基因分析在Cos7細胞系中評定寡核苷酸。在一些實施例中，該細胞株與寡核苷酸及任一psiCHECK2質體(包括rs362307(T)或rs362307(C)SNP)一起共轉染24小時。在一些實施例中，rs362307(T)及rs362307(C)稱作mu及wt。
使用雙重螢光素酶分析，以30nM測試各種對掌性受控及立體無規寡核苷酸組合物。關於在相同位置(例如，相對於5'端而言之位置8、9、10、11、12及13)含錯配之寡核苷酸，對掌性受控組合物維持高含量之寬型量測。
在一些實施例中，當在30nM下測試時，在24及/或48小時，WV-1092選擇性抑制突變體序列之表現，如藉由雙重螢光素酶報導基因分析所示。在一些實施例中，WV-1092在30nM下在24小時及/或48小時時觀察到之選擇性超過其他寡核苷酸組合物(例如WV-917、WV-1497、某些P12立體純寡核苷酸等)若干倍。在一些實施例中，在30nM下，在48小時時，WV-1092維持超過90%之野生型，且使突變體降低至約30%，而WV-917使野生型降低至約60%，且使突變體降低至約30%。在多種條件(例如，濃度、時間點等)下測試寡核苷酸，且顯示改良特性，例如活性、選擇性等。
如一般熟習此項技術者所理解，例如活性、選擇性等寡核苷酸特性可藉由多種其他分析評定，諸如基於細胞之分析、動物模型等。在一些實施例中，可使用類似程序，在細胞及動物模型中測試對偶基 因特異性抑制，如Hohjoh,Pharmaceuticals 2013,6,522-535；美國專利申請公開案US 2013/0197061；Østergaard等人，Nucleic Acids Research 2013,41(21),9634-9650；Jiang等人，Science 2013,342,111-114；及US9006198中所述。在一些實施例中，可藉由野生型及突變型對偶基因之IC50值評定選擇性。所提供組合物，包括靶向與亨廷頓氏病相關之SNP的彼等組合物，可優先於野生型對偶基因，選擇性抑制疾病相關對偶基因。
實例21. 用於製備寡核苷酸及組合物之例示性方法 縮寫
AMA：含濃NH3-40% MeNH2之H2O(1：1，v/v)
CMIMT：N-氰基甲基咪唑鎓三氟甲磺酸鹽
DBU：1,8-二氮雜雙環[5.4.0]十一-7-烯
DCA：二氯乙酸
DCM：二氯甲烷，CH2Cl2
DMTr：4,4'-二甲氧基三苯甲基
DVB：二乙烯基苯
HCP：高度交聯聚苯乙烯(含有50% DVB，非溶脹聚苯乙烯)
MeIm：N-甲基咪唑
MQ：自「Milli-Q Reference」獲得之水
PhIMT：N-苯基咪唑鎓三氟甲磺酸鹽
POS：3-苯基-1,2,4-二噻唑啉-5-酮
PS200：引子載體200，可購自GE Healthcare
PS5G：引子載體5G，可購自GE Healthcare
TBAF：氟化四丁銨
TBHP：氫過氧化第三丁基
TEAA：乙酸三乙銨
固體載體：測試各種類型之固體載體(核苷負載量不同)。在一些實施例中，HCP>PS5GPS200CPG。在一些實施例中，固體載體為HCP。在一些實施例中，固體載體為PS5G。在一些實施例中，固體載體為PS200。在一些實施例中，固體載體為CPG。關於核苷負載量，測試各種範圍(30-300μmol/g)。在一些實施例中，70-80μmol/g負載量優於其他。在一些實施例中，核苷負載量為70-80μmol/g。CPG購自各個供應器(GlenReseach、LinkTechnologies、ChemGenes、PrimeSynthesis及3-Prime)。
測試且可使用各種連接基團。在一些實施例中，在藉由使用DPSE型化學製備對掌性受控寡核苷酸組合物期間，使用SP連接基團。
製備及/或購買各種活化劑，且評估。在一些實施例中，關於DPSE型化學，使用CMIMT。
例示性分析條件：
1)RP-UPLC-MS
系統：Waters,Aquity UPLC I-Class,Xevo G2-Tof
管柱：Waters,BEH C18,1.7μm,2.1×150mm
溫度與流動速率：55℃，0.3mL/min
緩衝液：A：0.1M TEAA；B：MeCN
梯度：B%：1-30%/30min
2)AEX-HPLC
系統：Waters,Alliance e2695
管柱：Thermo,DNAPac PA-200,4×250mm
溫度與流動速率：50℃，1mL/min
緩衝液：A：20mM NaOH；B：A+1M NaClO4
梯度：B%：10-50%/30min
對掌性寡核苷酸之例示性合成程序(1μmol規模)：
根據本文中所示之例示性循環執行對掌性寡核苷酸之自動化固相合成。在合成循環之後，將樹脂用含0.1M TBAF之MeCN(1mL)在室溫下處理2h(通常30分鐘足夠)，用MeCN洗滌，乾燥，且添加AMA(1mL)，在45℃下持續30分鐘。將混合物冷卻至室溫且藉由膜過濾移除樹脂。在減壓下濃縮濾液至約1mL。用1mL H2O稀釋殘餘物且藉由AEX-HPLC及RP-UPLC-MS分析(例示性條件：參考分析條件)。
如所述，TBAF處理可提供較佳結果，例如脫硫較少。在一些實施例中，不打算受理論限制，SP連接基團經由如所述之對掌性助劑移除期間的較佳穩定性提供較佳產量及/或純度。在一些實施例中，不打算受理論限制，當使用丁二醯基連接基團時，諸如HF-NR3(例如，HF-TEA(三乙胺))之含氟試劑藉由在對掌性助劑移除期間裂解較少而提供較佳產量及/或純度。在一些實施例中，在合成之後，在50℃下，用含1M TEA-HF之DMF-H2O(3：1，v/v；1mL)處理樹脂2h。用MeCN、H2O洗滌PS5G載體，且添加AMA(濃NH3-40% MeNH2(1：1，v/v))(1mL)，在50℃下持續45min。將混合物冷卻至室溫且藉由膜過濾移除樹脂(用2mL H2O洗滌)。在減壓下濃縮濾液直至其變成約1mL。用1mL H2O稀釋殘餘物且藉由AEX-HPLC及RP-UPLC-MS分析(條件：參考分析條件部分)。
對掌性寡核苷酸之例示性純化程序(1μmol規模)：在一些實施例 中，藉由AEX-MPLC根據以下例示性條件純化粗製寡核苷酸：
系統：AKTA Purifier-10
管柱：TOHSOH,DNA STAT,4.6×100mm
溫度與流動速率：60℃，0.5mL/min
緩衝液：A：20mM Tris-HCl(pH 9.0)+20% MeCN，B：A+1.5M NaCl
梯度：B%：20-70%/25CV(2%/CV)
藉由分析型AEX-HPLC分析所有溶離份，且將含有對掌性寡核苷酸超過80%純度之溶離份校正且藉由Sep-Pak Plus tC18(WAT036800)使用如下例示性條件脫鹽：
1.用15mL MeCN調節Sep-Pak Plus。
2.用15mL之50% MeCN/MQ沖洗料筒。
3.用30mL MQ平衡料筒。
4.加載樣品，且用40mL MQ洗滌。
5.用10mL之50% MeCN/MQ溶離對掌性寡核苷酸。
在減壓下蒸發經溶離樣品以移除MeCN，且凍乾。將產物溶解於MQ(1mL)中，藉由0.2μm篩網針筒過濾器過濾，且分析。在藉由UV吸光度計算產率之後，再次凍乾製劑。
例示性方法、條件及試劑描述於例如JP 2002-33436、WO2005/092909、WO2010/064146、WO2012/039448、WO2011/108682、WO2014/010250、WO2014/010780、WO2014/012081等中，且可適用於製備所提供之寡核苷酸及/或組合物。
如下列出其他例示性寡核苷酸。在一些實施例中，使用以下寡核苷酸中之一或多者作為對照。在一些實施例中，以下寡核苷酸中之一或多者為在一或多個分析中作為裂解目標之RNA序列。
實例22. 例示性寡核苷酸.
其他例示性寡核苷酸列於下表8中。
縮寫：
2\'：2'
3\'：3'
5\'：5'
307：SNP rs362307
C6：C6胺基連接基團
F、f：2'-F
Htt、HTT：亨廷頓基因或亨廷頓氏病
Lauric、Myristic、Palmitic、Stearic、Oleic、Linoleic、alpha-Linoleic、gamma-Linoleic、DHA、Turbinaric、Dilinoleic：分別為月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞麻油酸、α-亞麻油酸、γ-亞麻油酸、二十二碳六烯酸、喇叭藻酸、二亞麻油酸。
muHtt或muHTT：突變型亨廷頓基因或基因產物
OMe：2'-OMe
O,PO：磷酸二酯(磷酸酯)
*,PS：硫代磷酸酯
R,Rp：呈Rp構形之硫代磷酸酯
S,Sp：呈Sp構形之硫代磷酸酯
WV：WV-
WV-：WV
X：硫代磷酸酯，立體無規
等效物
在已描述了本發明之一些說明性實施例之後，熟習此項技術者應清楚，以上內容僅為說明性的且非限制性的，僅為舉例而呈現。多個修改及其他說明性實施例在一般技術者之範疇內且皆涵蓋落入本發明之範疇內。特定言之，雖然本文中所呈現之實例中之多者涉及方法動作或系統要素之特定組合，但應瞭解，彼等動作及彼等要素可以其他方式組合來完成相同目標。不打算自其他實施例中之類似角色中排除所論述之僅與一個實施例相關的動作、要素及特徵。此外，關於在以下申請專利範圍中所述之一或多個手段加功能限制，手段不打算限於本文中針對執行所述功能所揭示之手段，而是意欲涵蓋在現在已知或以後產生的用於執行所述功能的任何手段之範疇中。
在申請專利範圍中使用諸如「第一」、「第二」、「第三」等序數術語修飾請求項要素本身不意味著一個請求項要素相對於另一請求項要素的任何優先權、優先性或次序或執行方法動作之時間次序，而是僅用作標籤以區分具有某一名稱之一個請求項要素與具有相同名稱(但使用序數術語)之另一要素以區分該等請求項要素。類似地，使用a)、b)等或i)、ii)等本身不意味著申請專利範圍中之步驟的任何優先權、優先性或次序。類似地，在說明書中使用此等術語本身不意味著任何所要求之優先權、優先性或次序。
前述書面說明書視為足以使熟習此項技術者實踐本發明。本發明的範疇不限於所提供之實例，因為該等實例打算作為本發明一個態樣之單一說明，且在功能上等效之其他實施例在本發明之範疇內。熟習此項技術者將根據前文描述顯而易知除本文所展示及描述之修改之外的各種本發明修改，且該等修改在隨附申請專利範圍之範疇內。本發明之各實施例未必涵蓋本發明之優點及目的。
<110> 新加坡商波濤生命科學有限公司
<120> 寡核苷酸組合物及其方法
<130> 2010581-0257
<140>
<141>
<150> 62/331,960
<151> 2016-05-04
<150> 62/236,847
<151> 2015-10-02
<150> 62/195,779
<151> 2015-07-22
<160> 1553
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 105
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(105)
<223> 此序列可涵蓋10-35個「cag」重複單元，其中一些位置可不存在
<400> 1
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成寡核苷酸
<400> 2
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成寡核苷酸
<400> 3
<210> 4
<211> 13
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成寡核苷酸
<400> 4
<210> 5
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<212> DNA
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<220>
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<220>
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<220>
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成寡核苷酸
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<223> 組合的DNA/RNA分子之說明：合成寡核苷酸
<400> 1533
<210> 1534
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> 組合的DNA/RNA分子之說明：合成寡核苷酸
<400> 1534
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成寡核苷酸
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<223> 組合的DNA/RNA分子之說明：合成寡核苷酸
<400> 1535
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成寡核苷酸
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<223> 組合的DNA/RNA分子之說明：合成寡核苷酸
<400> 1536
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<213> 人工序列
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<400> 1542
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> 組合的DNA/RNA分子之說明：合成寡核苷酸
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<212> DNA
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<223> 組合的DNA/RNA分子之說明：合成寡核苷酸
<400> 1544
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> 組合的DNA/RNA分子之說明：合成寡核苷酸
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成寡核苷酸
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<223> 組合的DNA/RNA分子之說明：合成寡核苷酸
<400> 1546
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<211> 12
<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成寡核苷酸
<400> 1547
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<212> DNA
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<223> 人工序列之說明：合成寡核苷酸
<400> 1548
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<212> DNA
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<223> 人工序列之說明：合成寡核苷酸
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<210> 1550
<211> 16
<212> DNA
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<223> 人工序列之說明：合成寡核苷酸
<400> 1550
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<211> 16
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成寡核苷酸
<400> 1551
<210> 1552
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成6×His標籤
<400> 1552
<210> 1553
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列之說明：合成寡核苷酸
<400> 1553

Claims (39)

  1. 一種對掌性受控寡核苷酸組合物，其包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸，其特徵在於：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有相同鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物富含該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸，其中該等寡核苷酸靶向突變型亨廷頓基因(mutant Huntingtin gene)，且該長度為約10至約50個核苷酸，其中該等主鏈鍵聯包含至少一個硫代磷酸酯，且其中該主鏈對掌性中心模式包含至少一個Rp對掌性中心及至少一個Sp對掌性中心。
  2. 一種對掌性受控寡核苷酸組合物，其包含具有以下定義之寡核苷酸：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈對掌性中心模式，該組合物為基本上純的單一寡核苷酸製劑，因為該組合物中預定含量之寡核苷酸具有該共同鹼基序列及長度、該共同主鏈鍵聯模式及該共同主鏈對掌性中心模式；或一種對掌性受控寡核苷酸組合物，其包含具有以下定義之寡核苷酸：1)共同鹼基序列及長度；2)共同主鏈鍵聯模式；及 3)共同主鏈對掌性中心模式，該組合物為基本上純的單一寡核苷酸製劑，因為該組合物中至少約10%之寡核苷酸具有該共同鹼基序列及長度、該共同主鏈鍵聯模式及該共同主鏈對掌性中心模式。
  3. 如請求項1之組合物，其中該等寡核苷酸包含一或多個翼區及一個共同核心區，其中：各翼區獨立地具有兩個或更多個鹼基之長度，且獨立地且視情況包含一或多個對掌性核苷酸間鍵聯；及該核心區獨立地具有兩個或更多個鹼基之長度且獨立地包含一或多個對掌性核苷酸間鍵聯。
  4. 如請求項1之組合物，其中該寡核苷酸類型之寡核苷酸包含至少一個翼區及一個核心區，其中：各翼區獨立地具有兩個或更多個鹼基之長度，且獨立地且視情況包含一或多個對掌性核苷酸間鍵聯；該核心區獨立地具有兩個或更多個鹼基之長度，且獨立地包含一或多個對掌性核苷酸間鍵聯；及其中翼區中之至少一個核苷酸與該核心區之至少一個核苷酸不同，其中該差異係在以下一或多者：1)主鏈鍵聯；2)主鏈對掌性中心模式；3)糖修飾。
  5. 如請求項1之組合物，其中相同寡核苷酸類型之寡核苷酸具有相同結構。
  6. 如請求項1之組合物，其中該等寡核苷酸包含一或多個天然磷酸 酯鍵聯()及一或多個硫代磷酸酯鍵聯。
  7. 如請求項1之組合物，其中該等寡核苷酸包含翼-核心-翼結構。
  8. 如請求項7之組合物，其中翼包含對掌性核苷酸間鍵聯及天然磷 酸酯鍵聯()。
  9. 如請求項8之組合物，其中該核心包含一或多個硫代磷酸酯鍵聯。
  10. 如請求項6之組合物，其中該等寡核苷酸中之每一者包含經修飾之糖部分。
  11. 如請求項10之組合物，其中該經修飾之糖部分包含高親和力糖修飾。
  12. 如請求項10之組合物，其中該經修飾之糖部分具有2'修飾。
  13. 如請求項10之組合物，其中該經修飾之糖部分包含雙環糖修飾。
  14. 如請求項10之組合物，其中該經修飾之糖部分包含2'修飾，其中2'修飾為2'-OR1，其中R1為視情況經取代之C1-6烷基。
  15. 如請求項10之組合物，其中該經修飾之糖部分包含2'修飾，其中2'修飾為2'-MOE。
  16. 如請求項10之組合物，其中該經修飾之糖部分包含2'修飾，其中2'修飾為2'-OMe。
  17. 如請求項10之組合物，其中該經修飾之糖部分包含2'修飾，其中該2'修飾為S-cEt。
  18. 如請求項10之組合物，其中該經修飾之糖部分包含2'修飾，其中該2'修飾為FANA。
  19. 如請求項10之組合物，其中該經修飾之糖部分包含2'修飾，其中該2'修飾為FRNA。
  20. 如請求項10之組合物，其中該經修飾之糖部分具有5'修飾。
  21. 如請求項1或2之組合物，其中該等寡核苷酸包含一或多個天然磷酸酯鍵聯，且主鏈對掌性中心模式包含(Sp)t(Rp)n(Sp)m，其中t為2-10，n為1，且m為2-10，且t及m中之至少一者大於5。
  22. 如請求項6之組合物，其中該等寡核苷酸包含主鏈對掌性中心模式，其包含：SSR、RSS、SSRSS、SSRSSR、RSSSRSRRRS、RSSSSSSSSS、SRRSRSSSSR、SRSRSSRSSR、RRRSSSRSSS、RRRSRSSRSR、RRSSSRSRSR、SRSSSRSSSS、SSRRSSRSRS、SSSSSSRRSS、RRRSSRRRSR、RRRRSSSSRS、SRRSRRRRRR、RSSRSSRRRR、RSRRSRRSRR、RRSRSSRSRS、SSRRRRRSRR、RSRRSRSSSR、RRSSRSRRRR、RRSRSRRSSS、RRSRSSSRRR、RSRRRRSRSR、SSRSSSRRRS、RSSRSRSRSR、RSRSRSSRSS、RRRSSRRSRS、SRRSSRRSRS、RRRRSRSRRR或SSSSRRRRSR。
  23. 如請求項22之組合物，其中該等寡核苷酸靶向包含單核苷酸多形現象(SNP)之突變型亨廷頓基因。
  24. 如請求項23之組合物，其中該單核苷酸多形現象係選自rs362307、rs7685686、rs362268、rs2530595、rs362331及rs362306。
  25. 如請求項1之組合物，其中該等寡核苷酸具有選自表N1A、表N2A、表N3A、表N4A及表8；及WV-1092、WV-2595及WV-2603之結構。
  26. 如請求項1之組合物，其中該等寡核苷酸為WV-1092。
  27. 如請求項1之組合物，其中該等寡核苷酸為WV-2595。
  28. 如請求項1之組合物，其中該等寡核苷酸為WV-2603。
  29. 一種用於控制裂解核酸聚合物之方法，該方法包含：使核苷酸序列包含目標序列之核酸聚合物與包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物接觸，該特定 寡核苷酸類型之寡核苷酸的特徵在於：1)共同鹼基序列及長度，其中該共同鹼基序列為或包含與該核酸聚合物中所存在之目標序列互補的序列；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有該特定鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物富含該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸。
  30. 一種用於裂解具有鹼基序列包含目標序列之核酸的方法，該方法包含以下步驟：(a)使具有鹼基序列包含目標序列之核酸與包含特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的對掌性受控寡核苷酸組合物接觸，該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸的特徵在於：1)共同鹼基序列及長度，其中該共同鹼基序列為或包含與該核酸中之該目標序列互補的序列；2)共同主鏈鍵聯模式；及3)共同主鏈對掌性中心模式；該組合物為對掌性受控的，因為相對於具有該特定鹼基序列及長度之寡核苷酸的基本上外消旋製劑而言，該組合物富含該特定寡核苷酸類型之寡核苷酸，其中該寡核苷酸靶向突變型亨廷頓基因，且該長度為約10至約50個核苷酸，其中該等主鏈鍵聯包含至少一個硫代磷酸酯，且其中該主鏈對掌性中心模式包含至少一個呈Rp構形之對掌性中心及至少一個呈Sp構形之對掌性中心；及(b)藉由核糖核酸酶H或RNA干擾機制介導裂解該核酸。
  31. 如請求項30之方法，其中該方法係在活體外或活體內執行。
  32. 如請求項1之組合物或如請求項30之方法，其中該組合物進一步包含一或多種選自以下之其他組分：聚核苷酸、碳酸酐酶抑制劑、染料、嵌入劑、吖啶、交聯劑、補骨脂素(psoralene)、絲裂黴素C、卟啉、TPPC4、德卟啉(texaphyrin)、賽卟啉(Sapphyrin)、多環芳族烴吩嗪(phenazine)、二氫吩嗪、人工核酸內切酶、螯合劑、EDTA、烷基化劑、磷酸酯、胺基、巰基、PEG、PEG-40K、MPEG、[MPEG]2、聚胺基、烷基、經取代之烷基、放射性標記之標誌物、酶、半抗原生物素、輸送/吸收促進劑、阿司匹靈(aspirin)、維生素E、葉酸、合成核糖核酸酶、蛋白質、醣蛋白、肽、對協同配位體(co-ligand)具有特異性親和力之分子、抗體、激素、激素受體、非肽物質、脂質、凝集素、碳水化合物、維生素、輔因子或藥物。
  33. 如請求項1之組合物或如請求項20之方法，其中該等寡核苷酸能夠參與突變型亨廷頓基因mRNA之核糖核酸酶H介導之裂解。
  34. 如請求項1之組合物或如請求項20之方法，其中該等寡核苷酸之鹼基序列、主鏈鍵聯模式及/或主鏈對掌性中心模式包含以下或由以下組成：WV-1092、WV-2595或WV-2603中任一者之鹼基序列、主鏈鍵聯模式及/或主鏈對掌性中心模式。
  35. 如請求項1之組合物或如請求項20之方法，其中該等寡核苷酸之鹼基序列、主鏈鍵聯模式及主鏈對掌性中心模式包含以下或由以下組成：WV-1092、WV-2595或WV-2603中任一者之鹼基序列、主鏈鍵聯模式及/或主鏈對掌性中心模式。
  36. 一種組合物，其包含如請求項1之組合物及選擇性劑，該選擇性劑係選自：特異性結合至一或多種選自由多巴胺轉運體(DAT)、血清素轉運體(SERT)及去甲腎上腺素轉運體(NET)組成之群的神經傳遞素轉運體之化合物之群；由多巴胺再吸收抑制劑(DRI)、 選擇性血清素再吸收抑制劑(SSRI)、去甲腎上腺素再吸收抑制劑(NRI)、去甲腎上腺素-多巴胺再吸收抑制劑(NDRI)及血清素-去甲腎上腺素-多巴胺再吸收抑制劑(SNDRI)組成之群；由三重(triple)再吸收抑制劑、去甲腎上腺素多巴胺雙重再吸收抑制劑、血清素單一再吸收抑制劑、去甲腎上腺素單一再吸收抑制劑及多巴胺單一再吸收抑制劑組成之群；及由多巴胺再吸收抑制劑(DRI)、去甲腎上腺素-多巴胺再吸收抑制劑(NDRI)及血清素-去甲腎上腺素-多巴胺再吸收抑制劑(SNDRI)組成之群。
  37. 一種用於預防及/或治療個體之亨廷頓氏病(Huntington's disease)的方法，其包含向該個體投與如請求項1之組合物。
  38. 如前述請求項中任一項之組合物，其進一步包含人工腦脊髓液。
  39. 一種寡核苷酸、一種寡核苷酸組合物或一種方法，其係選自實施例1至607。
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Families Citing this family (98)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8158768B2 (en) * 2002-12-23 2012-04-17 Dynavax Technologies Corporation Immunostimulatory sequence oligonucleotides and methods of using the same
ES2616051T3 (es) 2008-12-02 2017-06-09 Wave Life Sciences Japan, Inc. Método para la síntesis de ácidos nucleicos modificados en el átomo de fósforo
US9744183B2 (en) 2009-07-06 2017-08-29 Wave Life Sciences Ltd. Nucleic acid prodrugs and methods of use thereof
JP5868324B2 (ja) 2010-09-24 2016-02-24 株式会社Ｗａｖｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｊａｐａｎ 不斉補助基
SG10201700554VA (en) 2011-07-19 2017-03-30 Wave Life Sciences Pte Ltd Methods for the synthesis of functionalized nucleic acids
AU2013203395A1 (en) 2012-03-30 2013-10-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulating TAU expression for reducing seizure and modifying a neurodegenerative syndrome
CA2878945A1 (en) 2012-07-13 2014-01-16 Wave Life Sciences Pte. Ltd. Chiral control
AU2013288048A1 (en) 2012-07-13 2015-01-22 Wave Life Sciences Ltd. Asymmetric auxiliary group
TWI772856B (zh) 2013-07-19 2022-08-01 美商百健Ｍａ公司 用於調節τ蛋白表現之組合物
WO2015108047A1 (ja) 2014-01-15 2015-07-23 株式会社新日本科学 免疫誘導活性を有するキラル核酸アジュバンド及び免疫誘導活性剤
JPWO2015108048A1 (ja) 2014-01-15 2017-03-23 株式会社新日本科学 抗腫瘍作用を有するキラル核酸アジュバンド及び抗腫瘍剤
KR20220106232A (ko) 2014-01-16 2022-07-28 웨이브 라이프 사이언시스 리미티드 키랄 디자인
DK3234131T3 (da) * 2014-12-16 2020-06-29 Roche Innovation Ct Copenhagen As Fremgangsmåde til screening af kiral toksicitet
WO2016097212A1 (en) 2014-12-17 2016-06-23 Proqr Therapeutics Ii B.V. Targeted rna editing
ES2808750T3 (es) 2015-04-03 2021-03-01 Univ Massachusetts Compuestos oligonucleotídicos dirigidos a ARNm de huntingtina
MA43072A (fr) 2015-07-22 2018-05-30 Wave Life Sciences Ltd Compositions d'oligonucléotides et procédés associés
CA2995110A1 (en) * 2015-08-14 2017-02-23 University Of Massachusetts Bioactive conjugates for oligonucleotide delivery
WO2017062862A2 (en) 2015-10-09 2017-04-13 Wave Life Sciences Ltd. Oligonucleotide compositions and methods thereof
LT3386511T (lt) 2015-12-10 2021-08-25 Ptc Therapeutics, Inc. Hantingtono ligos gydymo būdai
CA3011894A1 (en) 2016-01-31 2017-08-03 University Of Massachusetts Branched oligonucleotides
EP3430019A4 (en) 2016-03-13 2019-10-30 Wave Life Sciences Ltd. COMPOSITIONS AND METHODS FOR PHOSPHORAMIDITE AND OLIGONUCLEOTIDE SYNTHESIS
MA45270A (fr) * 2016-05-04 2017-11-09 Wave Life Sciences Ltd Compositions d'oligonucléotides et procédés associés
WO2017210647A1 (en) 2016-06-03 2017-12-07 Wave Life Sciences Ltd. Oligonucleotides, compositions and methods thereof
JP7074345B2 (ja) 2016-06-22 2022-05-24 プロキューアール セラピューティクス ツー ベスローテン フェンノートシャップ 一本鎖ｒｎａ編集オリゴヌクレオチド
EP3496758A4 (en) 2016-08-12 2020-11-11 University of Massachusetts CONJUGATE OLIGONUCLEOTIDES
EP3507366B1 (en) 2016-09-01 2020-10-07 ProQR Therapeutics II B.V. Chemically modified single-stranded rna-editing oligonucleotides
JOP20190065A1 (ar) 2016-09-29 2019-03-28 Ionis Pharmaceuticals Inc مركبات وطرق لتقليل التعبير عن tau
JOP20190104A1 (ar) 2016-11-10 2019-05-07 Ionis Pharmaceuticals Inc مركبات وطرق لتقليل التعبير عن atxn3
MA46905A (fr) 2016-11-23 2019-10-02 Wave Life Sciences Ltd Compositions et procédés de synthèse de phosphoramidites et d'oligonucléotides
EP4122497B1 (en) 2016-12-19 2024-04-10 Sarepta Therapeutics, Inc. Exon skipping oligomer conjugates for muscular dystrophy
CA3047010A1 (en) 2016-12-19 2018-06-28 Sarepta Therapeutics, Inc. Exon skipping oligomer conjugates for muscular dystrophy
LT3554553T (lt) 2016-12-19 2022-08-25 Sarepta Therapeutics, Inc. Egzoną šalinantys oligomero konjugatai nuo raumenų distrofojos
US11274300B2 (en) 2017-01-19 2022-03-15 Proqr Therapeutics Ii B.V. Oligonucleotide complexes for use in RNA editing
WO2018145009A1 (en) * 2017-02-06 2018-08-09 University Of Tennessee Research Foundation Dna-zyme based methods & compositions for treating huntington's disease
EP3589751A4 (en) 2017-03-03 2021-11-17 The Regents of The University of California RNA TARGETING OF MUTATIONS VIA SUPPRESSOR RNA AND DEAMINASES
JP2020522510A (ja) 2017-06-02 2020-07-30 ウェイブ ライフ サイエンシズ リミテッドＷａｖｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｌｔｄ． オリゴヌクレオチド組成物及びその使用方法
EP3630789A4 (en) 2017-06-02 2021-06-16 Wave Life Sciences Ltd. COMPOSITIONS OF OLIGONUCLEOTIDES AND THEIR METHODS OF USE
MX2019014514A (es) 2017-06-05 2020-07-20 Ptc Therapeutics Inc Compuestos para tratar la enfermedad de huntington.
EP3642182A4 (en) 2017-06-21 2020-12-09 Wave Life Sciences Ltd. COMPOUNDS, COMPOSITIONS AND SYNTHESIS METHODS
EP3645121A4 (en) 2017-06-28 2021-03-17 PTC Therapeutics, Inc. HUNTINGTON'S DISEASE TREATMENT METHODS
CA3067591A1 (en) 2017-06-28 2019-01-03 Ptc Therapeutics, Inc. Methods for treating huntington's disease
TW201920672A (zh) * 2017-08-08 2019-06-01 新加坡商波濤生命科學有限公司 寡核苷酸組合物及其使用方法
US11608355B2 (en) 2017-09-18 2023-03-21 Wave Life Sciences Ltd. Technologies for oligonucleotide preparation
EA201991450A1 (ru) 2017-09-22 2019-12-30 Сарепта Терапьютикс, Инк. Конъюгаты олигомеров для пропуска экзона при мышечной дистрофии
EP3687519A1 (en) 2017-09-28 2020-08-05 Sarepta Therapeutics, Inc. Combination therapies for treating muscular dystrophy
EP3687577A1 (en) 2017-09-28 2020-08-05 Sarepta Therapeutics, Inc. Combination therapies for treating muscular dystrophy
EP3687547A1 (en) 2017-09-28 2020-08-05 Sarepta Therapeutics, Inc. Combination therapies for treating muscular dystrophy
US11596646B2 (en) 2017-10-12 2023-03-07 Wave Life Sciences Ltd. Oligonucleotide compositions and methods thereof
SG11202006526YA (en) 2018-01-12 2020-08-28 Bristol Myers Squibb Co Antisense oligonucleotides targeting alpha-synuclein and uses thereof
MA51645A (fr) 2018-01-15 2020-11-25 Ionis Pharmaceuticals Inc Modulateurs de l'expression de dnm2
US11332733B2 (en) 2018-02-12 2022-05-17 lonis Pharmaceuticals, Inc. Modified compounds and uses thereof
WO2019183440A1 (en) * 2018-03-22 2019-09-26 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Methods for modulating fmr1 expression
EA202092001A1 (ru) 2018-03-27 2021-01-29 ПиТиСи ТЕРАПЬЮТИКС, ИНК. Соединения для лечения болезни гентингтона
WO2019200185A1 (en) * 2018-04-12 2019-10-17 Wave Life Sciences Ltd. Oligonucleotide compositions and methods of use thereof
BR112020020957B1 (pt) 2018-05-09 2022-05-10 Ionis Pharmaceuticals, Inc Compostos oligoméricos, população e composição farmacêutica dos mesmos e seus usos
JP7427608B2 (ja) * 2018-05-11 2024-02-05 ウェイブ ライフ サイエンシズ リミテッド オリゴヌクレオチド組成物及びその使用方法
GB201808146D0 (en) * 2018-05-18 2018-07-11 Proqr Therapeutics Ii Bv Stereospecific Linkages in RNA Editing Oligonucleotides
US10765760B2 (en) 2018-05-29 2020-09-08 Sarepta Therapeutics, Inc. Exon skipping oligomer conjugates for muscular dystrophy
EP3806868A4 (en) 2018-06-13 2022-06-22 Sarepta Therapeutics, Inc. EXON-SKIPPING OLIGOMERS FOR MUSCULAR DYSTROPHY
US11858941B2 (en) 2018-06-27 2024-01-02 Ptc Therapeutics, Inc. Heterocyclic and heteroaryl compounds for treating Huntington's disease
CN109030440B (zh) * 2018-07-18 2020-12-04 西北农林科技大学 一种基于三氧化钼量子点检测单宁酸含量的方法
US11078486B2 (en) 2018-07-25 2021-08-03 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for reducing ATXN2 expression
TW202020153A (zh) 2018-07-27 2020-06-01 美商薩羅塔治療公司 用於肌肉萎縮症之外顯子跳躍寡聚物
KR20210093227A (ko) 2018-08-10 2021-07-27 유니버시티 오브 매사추세츠 Snp를 표적화하는 변형된 올리고뉴클레오티드
TW202023573A (zh) 2018-09-19 2020-07-01 美商Ionis製藥公司 Pnpla3表現之調節劑
WO2020072883A1 (en) * 2018-10-05 2020-04-09 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Chirally enriched oligomeric compounds
MX2021005758A (es) 2018-11-15 2021-09-21 Ionis Pharmaceuticals Inc Moduladores de la expresión de irf5.
JP7455831B2 (ja) 2018-11-21 2024-03-26 アイオーニス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッド プリオン発現を低減するための化合物及び方法
SG11202104960PA (en) 2018-12-13 2021-06-29 Sarepta Therapeutics Inc Exon skipping oligomer conjugates for muscular dystrophy
BR112021014940A2 (pt) * 2019-02-01 2021-09-28 Wave Life Sciences Ltd. Oligonucleotídeo, composição de oligonucleotídeo quiralmente controlada, composição farmacêutica, e método de tratamento, prevenção, atraso de início e/ou diminuição da gravidade de pelo menos um sintoma de doença de huntington
EP3941924A4 (en) * 2019-03-20 2022-12-28 Wave Life Sciences Ltd. USEFUL TECHNOLOGIES FOR THE PREPARATION OF OLIGONUCLEOTIDES
CN113728104B (zh) 2019-03-29 2023-10-27 Ionis制药公司 用于调节ube3a-ats的化合物和方法
JP2022528725A (ja) 2019-04-18 2022-06-15 サレプタ セラピューティクス， インコーポレイテッド 筋ジストロフィーを治療するための組成物
SG11202111387YA (en) * 2019-04-25 2021-11-29 Wave Life Sciences Ltd Oligonucleotide compositions and methods of use thereof
US20220243203A1 (en) 2019-05-28 2022-08-04 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for reducing fus expression
WO2021021673A1 (en) 2019-07-26 2021-02-04 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for modulating gfap
JP2022552249A (ja) 2019-10-14 2022-12-15 アストラゼネカ・アクチエボラーグ Ｐｎｐｌａ３発現のモジュレーター
CA3156848A1 (en) 2019-11-01 2021-05-06 Novartis Ag The use of a splicing modulator for a treatment slowing progression of huntington's disease
JP2023504314A (ja) 2019-12-02 2023-02-02 シェイプ セラピューティクス インコーポレイテッド 治療的編集
US20230203484A1 (en) 2020-05-22 2023-06-29 Wave Life Sciences Ltd. Double stranded oligonucleotide compositions and methods relating thereto
US11408000B2 (en) 2020-06-03 2022-08-09 Triplet Therapeutics, Inc. Oligonucleotides for the treatment of nucleotide repeat expansion disorders associated with MSH3 activity
TW202227102A (zh) 2020-09-22 2022-07-16 瑞典商阿斯特捷利康公司 治療脂肪肝病之方法
JP2023549563A (ja) 2020-11-18 2023-11-27 アイオーニス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッド アンジオテンシノーゲン発現を調節するための化合物及び方法
GB2603454A (en) 2020-12-09 2022-08-10 Ucl Business Ltd Novel therapeutics for the treatment of neurodegenerative disorders
EP4305168A1 (en) 2021-03-08 2024-01-17 Les Laboratoires Servier Antisense oligonucleotides for inhibiting alpha-synuclein expression
TW202304446A (zh) 2021-03-29 2023-02-01 瑞士商諾華公司 剪接調節子用於減慢杭丁頓氏舞蹈症進展的治療之用途
CN113122615A (zh) * 2021-05-24 2021-07-16 广州赛哲生物科技股份有限公司 一种应用于绝对定量高通量测序的多重pcr扩增的单分子标签引物及其应用
WO2022271836A2 (en) 2021-06-22 2022-12-29 AcuraStem, Inc. Pikfyve antisense oligonucleotides
TW202315943A (zh) 2021-06-23 2023-04-16 麻薩諸塞大學 用於治療子癇前症及其它血管新生病症的最佳化抗flt1寡核苷酸化合物
US20230125137A1 (en) 2021-07-21 2023-04-27 AcuraStem, Inc. Unc13a antisense oligonucleotides
CA3233242A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 Sarepta Therapeutics, Inc. Antisense oligonucleotides having one or more abasic units
GB202117758D0 (en) 2021-12-09 2022-01-26 Ucl Business Ltd Therapeutics for the treatment of neurodegenerative disorders
WO2023152371A1 (en) 2022-02-14 2023-08-17 Proqr Therapeutics Ii B.V. Guide oligonucleotides for nucleic acid editing in the treatment of hypercholesterolemia
WO2023212625A1 (en) 2022-04-28 2023-11-02 AcuraStem Incorporated Syf2 antisense oligonucleotides
WO2024013361A1 (en) 2022-07-15 2024-01-18 Proqr Therapeutics Ii B.V. Oligonucleotides for adar-mediated rna editing and use thereof
WO2024013360A1 (en) 2022-07-15 2024-01-18 Proqr Therapeutics Ii B.V. Chemically modified oligonucleotides for adar-mediated rna editing
WO2024035946A1 (en) * 2022-08-11 2024-02-15 Wave Life Sciences Ltd. Oligonucleotide compositions and methods thereof
WO2024064237A2 (en) 2022-09-21 2024-03-28 Sarepta Therapeutics, Inc. Dmd antisense oligonucleotide-mediated exon skipping efficiency

Family Cites Families (193)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US513030A (en) 1894-01-16 Machine for waxing or coating paper
US3687808A (en) 1969-08-14 1972-08-29 Univ Leland Stanford Junior Synthetic polynucleotides
US4500707A (en) 1980-02-29 1985-02-19 University Patents, Inc. Nucleosides useful in the preparation of polynucleotides
US5132418A (en) 1980-02-29 1992-07-21 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
US4458066A (en) 1980-02-29 1984-07-03 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
US4415732A (en) 1981-03-27 1983-11-15 University Patents, Inc. Phosphoramidite compounds and processes
US4668777A (en) 1981-03-27 1987-05-26 University Patents, Inc. Phosphoramidite nucleoside compounds
US4973679A (en) 1981-03-27 1990-11-27 University Patents, Inc. Process for oligonucleo tide synthesis using phosphormidite intermediates
DE3329892A1 (de) 1983-08-18 1985-03-07 Köster, Hubert, Prof. Dr., 2000 Hamburg Verfahren zur herstellung von oligonucleotiden
US5118800A (en) 1983-12-20 1992-06-02 California Institute Of Technology Oligonucleotides possessing a primary amino group in the terminal nucleotide
FR2567892B1 (fr) 1984-07-19 1989-02-17 Centre Nat Rech Scient Nouveaux oligonucleotides, leur procede de preparation et leurs applications comme mediateurs dans le developpement des effets des interferons
US5367066A (en) 1984-10-16 1994-11-22 Chiron Corporation Oligonucleotides with selectably cleavable and/or abasic sites
FR2575751B1 (fr) 1985-01-08 1987-04-03 Pasteur Institut Nouveaux nucleosides de derives de l'adenosine, leur preparation et leurs applications biologiques
US4659774A (en) 1985-11-01 1987-04-21 American Hoechst Corporation Support for solid-phase oligonucleotide synthesis
US5130300A (en) 1986-03-07 1992-07-14 Monsanto Company Method for enhancing growth of mammary parenchyma
ATE113059T1 (de) 1987-06-24 1994-11-15 Florey Howard Inst Nukleosid-derivate.
US4923901A (en) 1987-09-04 1990-05-08 Millipore Corporation Membranes with bound oligonucleotides and peptides
US5175273A (en) 1988-07-01 1992-12-29 Genentech, Inc. Nucleic acid intercalating agents
US5047524A (en) 1988-12-21 1991-09-10 Applied Biosystems, Inc. Automated system for polynucleotide synthesis and purification
US5262530A (en) 1988-12-21 1993-11-16 Applied Biosystems, Inc. Automated system for polynucleotide synthesis and purification
US5141813A (en) 1989-08-28 1992-08-25 Clontech Laboratories, Inc. Multifunctional controlled pore glass reagent for solid phase oligonucleotide synthesis
US5134066A (en) 1989-08-29 1992-07-28 Monsanto Company Improved probes using nucleosides containing 3-dezauracil analogs
CA2029273A1 (en) 1989-12-04 1991-06-05 Christine L. Brakel Modified nucleotide compounds
US5457191A (en) 1990-01-11 1995-10-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. 3-deazapurines
US5459255A (en) 1990-01-11 1995-10-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-2 substituted purines
US5681941A (en) 1990-01-11 1997-10-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted purines and oligonucleotide cross-linking
US5587470A (en) 1990-01-11 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. 3-deazapurines
EP0544824B1 (en) 1990-07-27 1997-06-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. Nuclease resistant, pyrimidine modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression
US5432272A (en) 1990-10-09 1995-07-11 Benner; Steven A. Method for incorporating into a DNA or RNA oligonucleotide using nucleotides bearing heterocyclic bases
US5512668A (en) * 1991-03-06 1996-04-30 Polish Academy Of Sciences Solid phase oligonucleotide synthesis using phospholane intermediates
US7015315B1 (en) 1991-12-24 2006-03-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Gapped oligonucleotides
US20020183502A1 (en) 1991-05-21 2002-12-05 Mesmaeker Alain De Backbone-modified oligonucleotide analogs and methods for using same
AU2874892A (en) 1991-10-15 1993-05-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having chiral phosphorus linkages
DE59208572D1 (de) 1991-10-17 1997-07-10 Ciba Geigy Ag Bicyclische Nukleoside, Oligonukleotide, Verfahren zu deren Herstellung und Zwischenprodukte
US5594121A (en) 1991-11-07 1997-01-14 Gilead Sciences, Inc. Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified purines
US6235887B1 (en) 1991-11-26 2001-05-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Enhanced triple-helix and double-helix formation directed by oligonucleotides containing modified pyrimidines
US5484908A (en) 1991-11-26 1996-01-16 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotides containing 5-propynyl pyrimidines
US5359044A (en) 1991-12-13 1994-10-25 Isis Pharmaceuticals Cyclobutyl oligonucleotide surrogates
EP0618925B2 (en) 1991-12-24 2012-04-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotides
US6015886A (en) 1993-05-24 2000-01-18 Chemgenes Corporation Oligonucleotide phosphate esters
US5502177A (en) 1993-09-17 1996-03-26 Gilead Sciences, Inc. Pyrimidine derivatives for labeled binding partners
KR960705837A (ko) * 1993-11-16 1996-11-08 라이오넬 엔. 사이몬 비포스포네이트 뉴클레오시드간 연결기와 혼합된 비대칭적으로 순수한 포스포네이트 뉴클레오시드간 연결기를 갖는 합성 올리고머(Synthetic Oligomers Having Chirally Pure Phosphonate Internucleosidyl Linkages Mixed with Non-Phosphonate Internucleosidyl Linkages)
US5457187A (en) 1993-12-08 1995-10-10 Board Of Regents University Of Nebraska Oligonucleotides containing 5-fluorouracil
US5596091A (en) 1994-03-18 1997-01-21 The Regents Of The University Of California Antisense oligonucleotides comprising 5-aminoalkyl pyrimidine nucleotides
US5525711A (en) 1994-05-18 1996-06-11 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Pteridine nucleotide analogs as fluorescent DNA probes
JPH10512894A (ja) 1995-03-06 1998-12-08 アイシス・ファーマシューティカルス・インコーポレーテッド ２’−ｏ−置換ピリミジンおよびそのオリゴマー化合物の合成の改良法
US6166197A (en) 1995-03-06 2000-12-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds having pyrimidine nucleotide (S) with 2'and 5 substitutions
US6639062B2 (en) 1997-02-14 2003-10-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Aminooxy-modified nucleosidic compounds and oligomeric compounds prepared therefrom
US6172209B1 (en) 1997-02-14 2001-01-09 Isis Pharmaceuticals Inc. Aminooxy-modified oligonucleotides and methods for making same
AU8512598A (en) 1997-07-25 1999-02-16 Hybridon, Inc. Oligonuclotides having 3' terminal stereospecific phosphorothioates
US6528640B1 (en) 1997-11-05 2003-03-04 Ribozyme Pharmaceuticals, Incorporated Synthetic ribonucleic acids with RNAse activity
US6617438B1 (en) 1997-11-05 2003-09-09 Sirna Therapeutics, Inc. Oligoribonucleotides with enzymatic activity
CA2321140C (en) * 1998-02-20 2015-04-07 Tanox, Inc. Inhibitors of complement activation
US7045610B2 (en) 1998-04-03 2006-05-16 Epoch Biosciences, Inc. Modified oligonucleotides for mismatch discrimination
US6242589B1 (en) * 1998-07-14 2001-06-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Phosphorothioate oligonucleotides having modified internucleoside linkages
US6867294B1 (en) 1998-07-14 2005-03-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Gapped oligomers having site specific chiral phosphorothioate internucleoside linkages
US6066500A (en) 1999-06-25 2000-05-23 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense modulation of Beta catenin expression
US6147200A (en) 1999-08-19 2000-11-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-O-acetamido modified monomers and oligomers
US6949520B1 (en) 1999-09-27 2005-09-27 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Methods related to immunostimulatory nucleic acid-induced interferon
US20020082227A1 (en) 1999-09-30 2002-06-27 Scott Henry Use of oligonucleotides for inhibition of complement activation
US20010055761A1 (en) 1999-10-29 2001-12-27 Agilent Technologies Small scale dna synthesis using polymeric solid support with functionalized regions
DE10019756A1 (de) 2000-04-20 2001-10-25 Bayer Ag Verfahren zur Herstellung von superabsorbierenden Polymeren aus Polyacrylnitrilen
US6492171B2 (en) 2000-05-16 2002-12-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of TERT expression
GB0024752D0 (en) 2000-10-10 2000-11-22 Univ Belfast Oxidative halogenation of aromatic compounds
US20050277133A1 (en) 2001-05-18 2005-12-15 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated treatment of polyglutamine (polyQ) repeat expansion diseases using short interfering nucleic acid (siNA)
US6440739B1 (en) 2001-07-17 2002-08-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of glioma-associated oncogene-2 expression
JP4348044B2 (ja) 2002-02-12 2009-10-21 株式会社キラルジェン 立体規則性の高いジヌクレオシドホスホロチオエートの製造法
US20050096284A1 (en) 2002-02-20 2005-05-05 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated treatment of polyglutamine (polyQ) repeat expansion diseases using short interfering nucleic acid (siNA)
US8232383B2 (en) 2002-02-20 2012-07-31 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
HUE037352T2 (hu) 2002-04-05 2018-08-28 Roche Innovation Ct Copenhagen As A HIF-1alfa expresszálódását módosító oligomer vegyületek
EP2314690A1 (en) 2002-07-10 2011-04-27 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. RNA-interference by single-stranded RNA molecules
US20050042646A1 (en) 2002-08-05 2005-02-24 Davidson Beverly L. RNA interference suppresion of neurodegenerative diseases and methods of use thereof
US20080274989A1 (en) 2002-08-05 2008-11-06 University Of Iowa Research Foundation Rna Interference Suppression of Neurodegenerative Diseases and Methods of Use Thereof
US7045306B2 (en) 2003-04-28 2006-05-16 The General Hospital Corporation Method for identifying compounds in vitro that modulate the dysregulation of transcription of transcription mediated by mutant huntingtin protein
AU2004239114B2 (en) 2003-05-14 2008-03-13 Japan Science And Technology Agency Inhibition of the expression of huntingtin gene
JP2005089441A (ja) 2003-08-08 2005-04-07 Toudai Tlo Ltd 立体規則性の高いリン原子修飾ヌクレオチド類縁体の製造法
JP4731324B2 (ja) 2003-08-28 2011-07-20 武 今西 Ｎ−ｏ結合性架橋構造型新規人工核酸
WO2005023828A1 (ja) 2003-09-02 2005-03-17 Takeshi Wada リボヌクレオチド又はリボヌクレオチド誘導体の製造方法
WO2005028494A1 (ja) 2003-09-02 2005-03-31 Takeshi Wada ５'-ホスフィチル化モノマーおよびh-ホスホネートオリゴヌクレオチド誘導体の製造方法
US8680063B2 (en) 2003-09-12 2014-03-25 University Of Massachusetts RNA interference for the treatment of gain-of-function disorders
WO2008005562A2 (en) 2006-07-07 2008-01-10 University Of Massachusetts Rna silencing compositions and methods for the treatment of huntington's disease
EP3760234B1 (en) 2003-09-12 2023-11-01 University of Massachusetts Rna interference for the treatment of gain-of-function disorders
JP4945129B2 (ja) 2004-01-27 2012-06-06 株式会社キラルジェン フルオラス担体およびそれを用いたオリゴヌクレオチド誘導体の製造方法
WO2005085272A1 (ja) 2004-03-05 2005-09-15 Takeshi Wada ボラノホスフェートモノマーおよびそれを用いたオリゴヌクレオチド誘導体の製造方法
WO2005092909A1 (ja) 2004-03-25 2005-10-06 Toudai Tlo, Ltd. 立体規則性の高いリボヌクレオチド類縁体及びデオキシリボヌクレオチド類縁体の製造法
US20060019916A1 (en) 2004-04-02 2006-01-26 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Immunostimulatory nucleic acids for inducing IL-10 responses
WO2006034348A2 (en) 2004-09-17 2006-03-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Enhanced antisense oligonucleotides
WO2006066260A2 (en) 2004-12-17 2006-06-22 Thiosense, Inc. Compositions of and methods for producing phosphorus-chiral monomers and oligomers
US7902352B2 (en) 2005-05-06 2011-03-08 Medtronic, Inc. Isolated nucleic acid duplex for reducing huntington gene expression
EP1885854B1 (en) 2005-05-06 2012-10-17 Medtronic, Inc. Methods and sequences to suppress primate huntington gene expression
ATE522626T1 (de) 2005-06-28 2011-09-15 Medtronic Inc Verfahren und nukleotid-sequenzen, die bevorzugt die expression eines mutierten huntingtin-genes unterdrücken
US9133517B2 (en) 2005-06-28 2015-09-15 Medtronics, Inc. Methods and sequences to preferentially suppress expression of mutated huntingtin
EP1937312B1 (en) 2005-08-30 2016-06-29 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Chimeric oligomeric compounds for modulation of splicing
EP1941059A4 (en) 2005-10-28 2010-11-03 Alnylam Pharmaceuticals Inc COMPOSITIONS AND METHODS FOR INHIBITING THE EXPRESSION OF THE HUNTINGTIN GENE
EP3210633B1 (en) 2006-01-26 2019-06-19 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and their uses directed to huntingtin
DK2314594T3 (da) 2006-01-27 2014-10-27 Isis Pharmaceuticals Inc 6-modificerede bicykliske nukleinsyreanaloger
CA3044969A1 (en) 2006-05-05 2007-12-21 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for modulating gene expression
CA2651453C (en) 2006-05-11 2014-10-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. 5'-modified bicyclic nucleic acid analogs
CA2653939C (en) 2006-05-31 2013-01-22 Toray Industries, Inc. Immunostimulatory oligonucleotides and use thereof in pharmaceuticals
CA2667055C (en) 2006-10-18 2017-05-09 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense compounds
WO2008151833A2 (en) 2007-06-13 2008-12-18 Hochschule Mannheim Compounds for the modulation of huntingtin aggregation, methods and means for identifying such compounds
DE602007005629D1 (de) 2007-06-18 2010-05-12 Commissariat Energie Atomique Reversibles siRNA-Silencing eines mutierten und endogenen Huntington-Wildtypgens und dessen Anwendung zur Behandlung von Morbus Huntington
AU2008279509B2 (en) 2007-07-09 2011-07-21 Idera Pharmaceuticals, Inc. Stabilized immune modulatory RNA (SIMRA) compounds
EP3100718B1 (en) * 2008-01-02 2019-11-27 Arbutus Biopharma Corporation Improved compositions and methods for the delivery of nucleic acids
US20110105587A1 (en) 2008-02-04 2011-05-05 David Frederik Fishcher Target sequences and methods to identify the same, useful in treatment of neurodegenerative diseases
AU2009244013B2 (en) 2008-05-09 2015-06-25 The University Of British Columbia Methods and compositions for the treatment of Huntington's disease
US8679750B2 (en) 2008-05-09 2014-03-25 The University Of British Columbia Methods and compositions for the treatment of Huntington'S disease
WO2009143391A2 (en) 2008-05-22 2009-11-26 Isis Pharmaceuticals, Inc Methods for modulation expression of creb
WO2009148605A2 (en) 2008-06-04 2009-12-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating hypercholesterolemia
HUE027169T2 (en) 2008-07-10 2016-10-28 Regenesance B V Complement antagonists and their use
ES2616051T3 (es) 2008-12-02 2017-06-09 Wave Life Sciences Japan, Inc. Método para la síntesis de ácidos nucleicos modificados en el átomo de fósforo
WO2010091301A1 (en) 2009-02-06 2010-08-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds and excipients
US8987222B2 (en) * 2009-04-08 2015-03-24 University Of Massachusetts Single nucleotide polymorphism (SNP) targeting therapies for the treatment of huntington'S disease
US9744183B2 (en) 2009-07-06 2017-08-29 Wave Life Sciences Ltd. Nucleic acid prodrugs and methods of use thereof
WO2011015573A1 (en) 2009-08-03 2011-02-10 Galapagos Nv Molecular targets and compounds, and methods to identify the same, useful in the treatment of neurodegenerative diseases
WO2011015572A1 (en) 2009-08-03 2011-02-10 Galapagos Nv Molecular targets and compounds, and methods to identify the same, useful in the treatment of neurodegenerative diseases
US8927553B2 (en) * 2009-08-10 2015-01-06 Daljit Singh Dhanoa Deuterium-enriched alkyl sulfonamides and uses thereof
KR102279458B1 (ko) 2009-09-11 2021-07-21 아이오니스 파마수티컬즈, 인코포레이티드 헌팅틴 발현의 조절
US8470987B2 (en) 2009-09-16 2013-06-25 Chiralgen, Ltd. Protective group for synthesis of RNA and derivative
JP6083735B2 (ja) 2009-12-31 2017-02-22 カッパーアールエヌエー，インコーポレイテッド インスリン受容体基質２（ｉｒｓ２）および転写因子３（ｔｆｅ３）に対する天然アンチセンス転写物の阻害によるインスリン受容体基質２（ｉｒｓ２）関連疾患の治療
ES2733708T3 (es) 2010-02-08 2019-12-02 Ionis Pharmaceuticals Inc Reducción selectiva de variantes alélicas
EP2534262B1 (en) 2010-02-08 2016-12-14 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Selective reduction of allelic variants
JP2011184318A (ja) 2010-03-05 2011-09-22 Univ Of Tokyo リボヌクレシドｈ−ボラノホスホネート
WO2011108682A1 (ja) 2010-03-05 2011-09-09 国立大学法人 東京大学 リボヌクレオシドホスホロチオエートの製造方法
EP2560687B1 (en) 2010-04-19 2017-05-24 Nlife Therapeutics S.L. Compositions and methods for selective delivery of oligonucleotide molecules to specific neuron types
JP5756858B2 (ja) * 2010-08-20 2015-07-29 セルリアン・ファーマ・インコーポレイテッド 複合体、粒子、組成物および関連の方法
ES2908978T3 (es) 2010-08-31 2022-05-04 Sirna Therapeutics Inc Nuevas entidades químicas simples y métodos para la administración de oligonucleótidos
JP5868324B2 (ja) 2010-09-24 2016-02-24 株式会社Ｗａｖｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｊａｐａｎ 不斉補助基
EP2638163B1 (en) 2010-11-12 2017-05-17 The General Hospital Corporation Polycomb-associated non-coding rnas
JP6093924B2 (ja) 2010-11-30 2017-03-15 株式会社Ｗａｖｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｊａｐａｎ ２’−ｏ−修飾ｒｎａ
EP3467109A1 (en) 2011-02-08 2019-04-10 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof
ES2739804T3 (es) 2011-02-12 2020-02-04 Univ Iowa Res Found Compuestos terapéuticos
RU2013151301A (ru) * 2011-04-20 2015-05-27 Ларри Дж. СМИТ Способы и композиции для модулирования экспрессии генов с использованием компонентов, которые обладают способностью к самосборке в клетках и обусловливают рнкi-активность
SG10201700554VA (en) 2011-07-19 2017-03-30 Wave Life Sciences Pte Ltd Methods for the synthesis of functionalized nucleic acids
US20150051389A1 (en) 2011-08-11 2015-02-19 Isis Pharmaceuticals, Inc. Selective antisense compounds and uses thereof
ES2832531T3 (es) 2011-11-30 2021-06-10 Sarepta Therapeutics Inc Oligonucleótidos para el tratamiento de enfermedades por expansión de repeticiones
WO2013112053A1 (en) 2012-01-27 2013-08-01 Prosensa Technologies B.V. Rna modulating oligonucleotides with improved characteristics for the treatment of duchenne and becker muscular dystrophy
AU2013288048A1 (en) 2012-07-13 2015-01-22 Wave Life Sciences Ltd. Asymmetric auxiliary group
CA2878945A1 (en) * 2012-07-13 2014-01-16 Wave Life Sciences Pte. Ltd. Chiral control
WO2014010718A1 (ja) 2012-07-13 2014-01-16 株式会社新日本科学 キラル核酸アジュバント
EP2906256B1 (en) 2012-10-12 2018-08-22 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Selective antisense compounds and uses thereof
JP2016503394A (ja) 2012-10-26 2016-02-04 エヌライフ、セラピューティックス、ソシエダッド、リミターダＮｌｉｆｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ｓ．Ｌ． 細胞型へのオリゴヌクレオチド分子の選択的送達のための組成物および方法
WO2014064257A1 (en) 2012-10-26 2014-05-01 Nlife Therapeutics, S.L. Compositions and methods for the treatment of parkinson disease by the selective delivery of oligonucleotide molecules to specific neuron types
JP6580993B2 (ja) 2013-01-30 2019-09-25 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ Ｌｎａオリゴヌクレオチド糖質コンジュゲート
CA2899924A1 (en) 2013-02-04 2014-08-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Selective antisense compounds and uses thereof
EP3633039A1 (en) 2013-05-01 2020-04-08 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods
SG11201602503TA (en) 2013-10-03 2016-04-28 Moderna Therapeutics Inc Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
RU2693891C1 (ru) 2013-11-11 2019-07-05 Сангамо Байосайенсиз, Инк. Способы и композиции для лечения болезни хантингтона
JPWO2015108048A1 (ja) 2014-01-15 2017-03-23 株式会社新日本科学 抗腫瘍作用を有するキラル核酸アジュバンド及び抗腫瘍剤
US10322173B2 (en) 2014-01-15 2019-06-18 Shin Nippon Biomedical Laboratories, Ltd. Chiral nucleic acid adjuvant having anti-allergic activity, and anti-allergic agent
WO2015108047A1 (ja) 2014-01-15 2015-07-23 株式会社新日本科学 免疫誘導活性を有するキラル核酸アジュバンド及び免疫誘導活性剤
KR20220106232A (ko) * 2014-01-16 2022-07-28 웨이브 라이프 사이언시스 리미티드 키랄 디자인
US9926556B2 (en) 2014-04-28 2018-03-27 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Linkage modified oligomeric compounds
MX2016014565A (es) 2014-05-08 2017-05-23 Sangamo Biosciences Inc Metodos y composiciones para tratar la enfermedad de huntington.
ES2759317T3 (es) 2014-05-20 2020-05-08 Univ Iowa Res Found Compuestos terapéuticos para la enfermedad de Huntington
US20160017327A1 (en) 2014-07-11 2016-01-21 The Johns Hopkins University Phosphorodiamidate morpholino oligomers (pmos) and their use in suppression of mutant huntingtin expression and attenuation of neurotoxicity
US20170204152A1 (en) 2014-07-16 2017-07-20 Moderna Therapeutics, Inc. Chimeric polynucleotides
US20180112217A1 (en) 2014-11-19 2018-04-26 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Stereospecific Phosphorothioate LNA
DK3234131T3 (da) 2014-12-16 2020-06-29 Roche Innovation Ct Copenhagen As Fremgangsmåde til screening af kiral toksicitet
SI3237618T1 (sl) 2014-12-24 2019-09-30 Uniqure Ip B.V. RNA inducirana supresija huntingtin gena
CN107636159B (zh) 2015-02-04 2022-06-14 百时美施贵宝公司 选择治疗性分子的方法
WO2016127002A1 (en) 2015-02-04 2016-08-11 Bristol-Myers Squibb Company Lna oligonucleotides with alternating flanks
JP2018506304A (ja) 2015-02-10 2018-03-08 ジェンザイム・コーポレーション バリアントＲＮＡｉ
ES2808750T3 (es) 2015-04-03 2021-03-01 Univ Massachusetts Compuestos oligonucleotídicos dirigidos a ARNm de huntingtina
MA43072A (fr) 2015-07-22 2018-05-30 Wave Life Sciences Ltd Compositions d'oligonucléotides et procédés associés
WO2017062862A2 (en) 2015-10-09 2017-04-13 Wave Life Sciences Ltd. Oligonucleotide compositions and methods thereof
US10955407B2 (en) 2015-10-22 2021-03-23 Roche Innovation Center Copenhagen A/S In vitro toxicity screening assay
EP3430019A4 (en) 2016-03-13 2019-10-30 Wave Life Sciences Ltd. COMPOSITIONS AND METHODS FOR PHOSPHORAMIDITE AND OLIGONUCLEOTIDE SYNTHESIS
MA45290A (fr) 2016-05-04 2019-03-13 Wave Life Sciences Ltd Procédés et compositions d'agents biologiquement actifs
MA45270A (fr) 2016-05-04 2017-11-09 Wave Life Sciences Ltd Compositions d'oligonucléotides et procédés associés
WO2017210647A1 (en) 2016-06-03 2017-12-07 Wave Life Sciences Ltd. Oligonucleotides, compositions and methods thereof
WO2018022473A1 (en) 2016-07-25 2018-02-01 Wave Life Sciences Ltd. Phasing
MA46905A (fr) 2016-11-23 2019-10-02 Wave Life Sciences Ltd Compositions et procédés de synthèse de phosphoramidites et d'oligonucléotides
JP2020522510A (ja) 2017-06-02 2020-07-30 ウェイブ ライフ サイエンシズ リミテッドＷａｖｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｌｔｄ． オリゴヌクレオチド組成物及びその使用方法
CN111164091A (zh) 2017-06-02 2020-05-15 波涛生命科学有限公司 寡核苷酸组合物及其使用方法
EP3630789A4 (en) 2017-06-02 2021-06-16 Wave Life Sciences Ltd. COMPOSITIONS OF OLIGONUCLEOTIDES AND THEIR METHODS OF USE
EP3642182A4 (en) 2017-06-21 2020-12-09 Wave Life Sciences Ltd. COMPOUNDS, COMPOSITIONS AND SYNTHESIS METHODS
TW201920672A (zh) 2017-08-08 2019-06-01 新加坡商波濤生命科學有限公司 寡核苷酸組合物及其使用方法
US11608355B2 (en) 2017-09-18 2023-03-21 Wave Life Sciences Ltd. Technologies for oligonucleotide preparation
US11596646B2 (en) 2017-10-12 2023-03-07 Wave Life Sciences Ltd. Oligonucleotide compositions and methods thereof
WO2019200185A1 (en) 2018-04-12 2019-10-17 Wave Life Sciences Ltd. Oligonucleotide compositions and methods of use thereof
JP7427608B2 (ja) 2018-05-11 2024-02-05 ウェイブ ライフ サイエンシズ リミテッド オリゴヌクレオチド組成物及びその使用方法
US20220186217A1 (en) 2018-12-06 2022-06-16 Wave Life Sciences Ltd. Oligonucleotide compositions and methods thereof
BR112021014940A2 (pt) 2019-02-01 2021-09-28 Wave Life Sciences Ltd. Oligonucleotídeo, composição de oligonucleotídeo quiralmente controlada, composição farmacêutica, e método de tratamento, prevenção, atraso de início e/ou diminuição da gravidade de pelo menos um sintoma de doença de huntington
EP3941924A4 (en) 2019-03-20 2022-12-28 Wave Life Sciences Ltd. USEFUL TECHNOLOGIES FOR THE PREPARATION OF OLIGONUCLEOTIDES
JPWO2020196662A1 (zh) 2019-03-25 2020-10-01
BR112021021203A2 (pt) 2019-04-25 2022-01-04 Wave Life Sciences Ltd Oligonucleotídeo; composição de oligonucleotídeo quiralmente controlada; composição farmacêutica; método para prevenir, tratar ou melhorar uma afecção, distúrbio ou doença relacionada a ush2a e/ou prevenir, atrasar o início, desenvolvimento e/ou progresso, e/ou tratar uma afecção, distúrbio ou doença relacionada a ush2a em um indivíduo suscetível à mesma ou que sofre da mesma; método para aumentar o nível de salto de um éxon prejudicial em uma transcrição de gene ush2a ou seu produto de gene em uma célula; método para prevenir, atrasar o início ou progressão de, tratar ou melhorar uma afecção, distúrbio ou doença relacionada a ush2a em um indivíduo suscetível à mesma ou que sofre da mesma; método para saltar um éxon prejudicial 13 em um alelo de ush2a em um indivíduo; método para produzir ou aumentar o nível de um éxon de proteína ush2a com salto 13 em um sistema; e composto, oligonucleotídeo, composição ou método
SG11202111387YA (en) 2019-04-25 2021-11-29 Wave Life Sciences Ltd Oligonucleotide compositions and methods of use thereof
WO2020227691A2 (en) 2019-05-09 2020-11-12 Wave Life Sciences Ltd. Oligonucleotide compositions and methods of use thereof
CA3154768A1 (en) 2019-10-06 2021-04-15 Wave Life Sciences Ltd. Oligonucleotide compositions and methods of use thereof
IL291974A (en) 2019-10-06 2022-06-01 Wave Life Sciences Ltd Compositions of oligonucleotides and methods of using them
TW202146650A (zh) 2020-03-01 2021-12-16 新加坡商波濤生命科學有限公司 寡核苷酸組成物及其方法
WO2021237223A1 (en) 2020-05-22 2021-11-25 Wave Life Sciences Ltd. Oligonucleotide compositions and methods thereof

Also Published As

Publication number Publication date
PE20181174A1 (es) 2018-07-20
US20180216107A1 (en) 2018-08-02
JP7296724B2 (ja) 2023-06-23
CN108025089A (zh) 2018-05-11
KR20180028516A (ko) 2018-03-16
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ECSP18010463A (es) 2018-04-30
US20200080083A1 (en) 2020-03-12
JP2018524013A (ja) 2018-08-30
BR112017028636A2 (pt) 2019-09-17
AU2016297155A1 (en) 2018-01-18
US11634710B2 (en) 2023-04-25
WO2017015575A1 (en) 2017-01-26
US20220195429A1 (en) 2022-06-23
AU2016297155B2 (en) 2022-11-17
HK1255369A1 (zh) 2019-08-16
CA2989682A1 (en) 2017-01-26
EP3324978A4 (en) 2019-01-30
US10479995B2 (en) 2019-11-19
CL2018000145A1 (es) 2018-08-10
MA43072A (fr) 2018-05-30
US20180216108A1 (en) 2018-08-02
EP3325017A4 (en) 2019-06-19
CR20180107A (es) 2018-04-03
IL256603A (en) 2018-02-28
MX2018000796A (es) 2018-03-23
JP2018525357A (ja) 2018-09-06
AU2023200807A1 (en) 2023-05-11
EP3325017A1 (en) 2018-05-30
JP2022000023A (ja) 2022-01-04
US20200299692A1 (en) 2020-09-24
EP3324978A1 (en) 2018-05-30
JP2024028927A (ja) 2024-03-05
CN108135921A (zh) 2018-06-08
EP4344744A2 (en) 2024-04-03
CN108135921B (zh) 2023-10-17
JP7441816B2 (ja) 2024-03-01
SG10201912900XA (en) 2020-02-27
HK1255370A1 (zh) 2019-08-16
SV2018005619A (es) 2018-07-20
RU2017146349A3 (zh) 2020-01-14
CO2018001484A2 (es) 2018-07-19
NI201800009A (es) 2018-06-12
PH12018500145A1 (en) 2018-07-23
RU2017146349A (ru) 2019-08-22
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