SE438507B - Nya cefalosporinantibiotika samt forfarande for framstellning derav - Google Patents

Description

7901676-1 av hög antibakteriell verkan mot en mångfald grampositiva och gramnegativa organismer med särskilt hög stabilitet mot P-laktamaser producerade av olika gramnegativa organismer.

Upptäckten av denna klass av föreningar har stimulerat ytter- ligare forskning inom samma område i försök att finna före- ningar, som har förbättrade egenskaper exempelvis mot sär- skilda klasser av organismer, speciellt gramnegativa organis- mer .

I vårt brittiska patent 1.496.757 beskrives cefalosporin- antibiotika innehållande en 7p-acylamidogrupp med formeln Roco y _ _' co NH RA (A) N i \o.(cH2)m c (cayncooa a RB i vari R är en tienyl- eller furylgrupp; RA och RB kan variera inom vida gränser och kan exempelvis beteckna Cl_4 alkylgrup- per eller tillsammans med kolatomen vid vilken de är bundna kan de bilda en C3_7 cykloalkylidengrupp och m och n är var och en 0 eller l så att summan av m och n är 0 eller l, var- vid föreningarna som är syn-isomerer eller blandningar av syn- och anti-isomerer innehåller minst 90 % av syn-isomeren. 3-ställningen i cefalosporinmolekylen kan vara osubstituerad eller kan innehålla en av ett stort antal möjliga substituen- ter. Dessa föreningar har visat sig ha särskilt god verkan mot gramnegativa organismer.

Vidare beskrives i vårt brittiska patent l.522.l4O cefalo- sporinantibiotika med formeln H H 7904576-'1 vari Rl betecknar en furyl-eller tienylgrupp; R2 betecknar en Cl-C4-grupp, C3-C7-šykloalkylgrupp, en furylmetyl eller tie- nylmetylgrupp och R betecknar en väteatom eller karbamoyl-, karboxi-, karboximetyl-, sulfo- eller metylgruPP* varvid föreningarna som utgöres avsyn-isomerer'eller förekommer som blandningar av syn- och anti-isomerer innehåller minst 90 % av syn-isomeren. Dessa föreningar utvecklar hög antibakteriell verkan mot ett stort område av grampositiva och gramnegativa organismer. Föreningarna har också hög stabilitet mot ß-lakta- maser producerade av olika gramnegativa organismer såväl som god stabilitet in vivo.

Andra föreningar med liknande struktur har utvecklats ur dessa föreningar vid ytterligare försök att finna antibiotika som har förbättrad bredspektrumantibiotikaaktivitet och/eller hög aktivitet mot gramnegativa organismer. En sådan utveckling innefattar variationer inte endast av 7p-acylamidogrupperna i ovanstående formler utan även införandet av särskilda grupper i 3-ställning i cefalosporinmolekylen. Således beskrives exem- pelvis i det belgiska patentet 852.427 cefalosporinantibio- tikaföreningar som faller inom den allmänna omfattningen av vårt svenska patent 7416195-l och vari gruppen R i formeln (A) ovan kan ersättas av ett antal olika organiska grupper innefattande 2-aminotiazol-4-yl och syreatomen i oxiimino- gruppen är bunden vid en alifatisk kolvätegrupp som själv kan vara substituerad av exempelvis karboxi. I sådana föreningar är substitutenten i 3-ställning av acyloximetyl-, hydroximetyl-, formyl- eller eventuellt substituerad heterocyklisk tiometyl- g ILIPP .

Vidare beskrives i det belgiska patentet 836.813 cefalosporin- föreningar vari gruppen R i formeln (A) ovan kan ersättas med exempelvis 2-aminotiazol-4-yl, och oxiiminogruppen är en hydroxiimino- eller blockerad hydroxiiminogrupp exempelvis en metoxiiminogrupp. I sådana föreningar är 3-ställningen i ce- falosporinmolekylen substituerad av en metylgrupp som själv kan vara eventuellt substituerad av vilken som helst av ett stort antal âterstoder av nukleofila föreningar som beskrives 7904576-1 däri, exempelvis pyridiniumgruppen som kan vara substituerad exempelvis av en karbamoylgrupp. I ovan nämnda beskrivning har ingen antibiotisk verkan tillskrivits sådana föreningar som endast anges såsom mellanprodukter för framställning av antibiotika angivna i beskrivningen.

Det svenska patentet 7704233-1 avser cefalosporinantibiotika vari 7ß-acylamidosidokedjan primärt är en 2-(2-aminotiazol-4- yl)-2-(syn)-metoxiiminoacetamidogrupp och substituenten i 3- ställning är i stort sett definierad på liknande sätt som det anges i ovan nämnda belgiska patent 836.813.

Föreningarna som speciellt exemplifieras i beskrivningen om- fattar föreningar i vilka 3~ställningen är substituerad av en pyridiniummetyl- eller 4-karbamoylpyridiniummetylgrupp.

Vi har nu upptäckt att genom ett lämpligt urval av en särskild grupp i 7ß~ställning i kombination med en pyridiniummetylgrupp i 3-ställning erhålles en cefalosporinförening med särskilt fördelaktig verkan (beskrivet mera detaljerat nedan) mot ett brett område vanligen använda patogena organismer.

Föreliggande uppfinning avser cefalosporinantibiotikumet (GR, 71:)-7-Uz)-z-(z-aminotiazola-yi)-z-(z-karboxi-prop-z- -oxiimino)acetamido]-3-(1-pyridiniummetyl)-cef-3-em-4fkar- boxylat med formeln: NH 2 Å. H H s N z : S (I) \---l-c,co.1~:u ---'( ï g H _ N CH3 Oas”-“~N. d//9CHi-N \o.c.coon C00 CH 3 7904576-1 och icke-toxiska salter och icke-toxiska estrar därav in vivo överförbara i motsvarande syror, vilka är kända under det god~ tagna namnet "ceftazidime".

Föreningarna enligt uppfinningen är syn-isomerer. Den syn-iso- mera formen defineras genom konfigurationen av gruppen CH3 l __.O.C.COOH I CH3 med hänsyn till karboxamidogruppen. I denna beskrivning är syn-utformningen strukturellt angiven såsom: 2 Å S N \__ M-l- c.co,NH --- ll N \ FHB o,c.coon I C113 Då föreningarna enligt uppfinningen är geometriska isomerer kan viss ytterligare blandning med motsvarande anti-isomerer förekomma.

Uppfinningen innefattar även solvaten (särskilt hydraten) av föreningen med formeln (I). Den innefattar även salter av estrar av föreningen med formeln (I).

Föreningarna enligt föreliggande uppfinning kan föreligga i tautomera former (exempelvis med hänsyn till 2-aminotiazolyl- gruppen) och det framgår att sådana tautomera former såsom exempelvis 2-iminotiazolinylformen innefattas inom ramen för 7904576-1 uppfinningen. Dessutom kan föreningarna med formeln (I) be- skrivna ovan även föreligga i alternativa zwitterjoniska for- mer exempelvis vari 4-karboxylgruppen är protonerad och kar- boxylgruppen i 7-sidokedjan är deprotonerad vilka alternativa former innefattas inom ramen för föreliggande uppfinning.

Föreningarna enligt föreliggande uppfinning uppvisar bredspek- trumantibiotisk verkan. Gentemot gramnegativa organismer är verkan ovanligt hög. Denna höga verkan omfattar många/%laktamas- producerade gramnegativa stammar. Föreningarna har även hög stabilitet mot ß-laktamaser producerade av ett antal gram- negativa organismer.

Föreningen enligt uppfinningen har visat sig utveckla ovan- ligt hög verkan mot stammar av Pseudomonas-organismer, exempelvis stammar av Pseudomonas aeruginosa såväl som hög verkan mot olika enheter av Enterobacteriacea (exempelvis stammar av Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Salmonella typhimurium, Shigella sonnei, Enterobacter cloacae, Serratia marcescens, Providence species, Proteus mirabilis och sär- skilda indolpositiva Proteusorganismer såsom Proteus vulgaris och Proteus morganii) och stammar av Haemophilus influenzae.

De antibiotiska egenskaperna av föreningarna enligt uppfinning- en utfaller mycket fördelaktigt vid en jämförelse med egen- skaperna hos aminoglykosider såsom amikacin eller gentamicin.

Detta är särskilt tillämpligt på deras verkan mot stammar av olika Pseudomonasorganismer vilka inte är känsliga för ma- joriteten av existerande kommersiellt tillgängliga antibiotiska föreningar. I motsats till aminoglykosiderna utvecklar cefalo- sporinantibiotika vanligtvis låg toxicitet hos människan. An- vändningen av aminoglykosiderna vid behandling av människan tenderar att begränsas eller kompliceras av dessa antibiotikas höga toxicitct. Ccfalosporinantibiotika enligt föreliggande uppfinning uppvisar således potentiellt stora fördelar gente- mot aminoglykosiderna. 7994576-1 Icke-toxiska saltderivat som kan bildas genom reaktion av en eller båda av karboxylgrupperna närvarande i föreningen med formeln (I) innefattar oorganiska bassalter som alkalimetallsalter (exempelvis natrium- och kaliumsalter) och alkaliska jordartmetallsalter (exempelvis kalciumsalter) amino- syrasalter (exempelvis lysin och argininsalter), organiska bassalter (exempelvis prokain, fenyletylbensylamin, dibensyl- etylendiamin, etanolamin, dietanolamin och N-metylglykosamin- salter). Andra icke-toxiska saltderivat innefattar syraaddi- tionssalter, exempelvis bildade med saltsyra, bromvätesyra, svavelsyra, salpetersyra, fosforsyra, myrsyra och trifluor- ättiksyra. Salterna kan även föreligga i form av resinat bildade med exempelvis ett polystyrenharts eller tvärbundna polystyrendivinylbensensampolymerharts innehållande amino- eller kvarternära aminogrupper eller sulfonsyragrupper eller med ett harts innehållande karboxylgrupper exempelvis ett polyakrylsyraharts. Lösliga bassalter (exempelvis alkali- metallsalter såsom natriumsaltet) av föreningen med formeln (I) kan användas vid terapeutiska applikationer på grund av den snabba distributionen av sådana salter i kroppen efter tillförandet. När emellertid olösliga salter av föreningen med formeln (I) önskas för ett särskilt användningsområde exempelvis i depå-preparat kan sådana salter bildas på vanligt sätt exempelvis med lämpliga organiska aminer.

Dessa och andra saltderivat såsom salter med toluen-p-sulfon- syra och metansulfonsyra kan användas som mellanprodukter vid framställning och/eller rening av föreliggande förening med formeln (I), exempelvis vid förfarandet som beskrives nedan.

Icke-toxiska estcrdcrivat in vivo överförbara i motsvarande syror som kan bildas genom förestring av en eller båda kar- boxylgrupperna i föreliggande förening med formeln (I) inne- fattar acyloxialkylestrar, exempelvis lägre alkanoyloximetyl- eller -etylestrar såsom acetoximetyl- eller -etyl- eller pivaloyloximetylestrar. Dessutom innefattar föreliggande förening utöver ovanstående esterderivat föreningar med for- meln (I) i form av andra fysiologiskt acceptabla ekvivalenter . ....~.._.._..._..,_._._.__..__. 7904576-1 exempelvis fysiologiskt acceptabla föreningar vilka såsom estrarna omvandlas in vivo till föreliggande antibiotiska förening med formeln (I).

Föreningen med formeln (I), dvs. (6R,7R)-7-[(Z)-2-(2-amino- tiazol-4-yl)-2-(2-karboxiprop-2-oxiimino)acetamidd]-3-(l- -pyridiniummetyl)-cef-3-em-4-karboxylat, och dess icke-toxiska salter (exempelvis natriumsalt) och icke-toxiska estrar in vivo överförbara i motsvarande syror äger i en utomordentligt hög grad de allmänna antibiotiska egenskaperna som har an- givits ovan. Man kan emellertid särskilt understryka dess utmärkta verkan mot stammar av Pseudomonasorganismer.

Föreningen har utmärkta antibakteriella egenskaper som inte försämras av humanserum och dessutom är effekten ökad inympning mot föreningen låg- Föreningen är snabbt bakteriedödande vid koncentrationer som ligger nära den minimala inhiberingskoncentrationen. Den distribueras väl i kroppen på små gnagare och ger användbara terapeutiska nivåer efter subkutaninjektion. Hos primater ger föreningen höga och långverkande serumnivåer efter intramuskulärinjek- tion. Serumhalveringstiden i primater pekar på sannlikheten av förhållandevis lång halveringstid hos människan med möjlighet till att mindre frekventa doser erfordras vid mindre allvar- liga infektioner. Försöksinfektioner på möss med gramnegativa bakteria behandlades framgångsrikt med användning av före- ningen och särskilt utmärkt skydd erhölls mot stammar av Pseudomonas aeruginosa, en organism som vanligtvis inte är mottaglig för behandling med cefalosporinantibiotika. Detta skydd var jämförbart med behandlingen med en aminoglykosid såsom amikacin. Akuta toxicitetprover med föreningen på möss gav LD5 -värden över 1,0 gram/kg. Ingen nefrotoxicitet obser- O verades hos råttor med doser om 2,0 gram/kg.

Med hänsyn till den höga bredspektrumaktivitetsnivån som före- ningarna besitter kommer detta antibiotikum primärt att använ- das för behandling av allvarligt sjuka patienter. Det är där- för víktigt att antibiotikumet har hög aktivitet inte endast 790lr576-1 mot kliniska rutinisolat utan även mot organismer, som normalt är svåra att bekämpa, såsom de mera resistenta stammarna av Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas sp., Enterobacter cloacae, Enterobacter SPP. Klebsiella oxytoca, Proteus mirabilis och indolpositiva Proteus-organismer såsom Proteus vulgaris. Mot dessa organismer är föreningen signifikant mer aktiv än de kommersiellt tillgängliga föreningarna cefotaxime och cefmenoxime (vilka beskrives i det ovannämnda svenska patentet 7704233-l) eller testföreningarna (6R,7R)-7-[(Z)-2-(2-amino- tiazol-4-yl)-2-metoxiiminoacetamido]-3-(1-pyridiniummetyl)-cef- -3-em-4-karboxylat (testförening A, beskriven i det ovannämnda svenska patentet 7704233-1) och (en,vm-v-Uzy-z-(z--karboxi- prop~2-oxiimino)-2-(fur-2-yl)-acetamido]-3-(l-pyridiniummetyl)- -cef~3-em-4~karboxylat (testförening B, beskriven i det ovan- nämnda svenska patentet 74l6l95-1), såsom åskådliggöres av följande tabell: '7904576-1 Jämförelse av aktiviteten mot mera resistenta Pseudomonas~ TABELL -organismer Minimal inhiberande koncentration (pg/ml) vid 107 kolonibildande enheter Organism Stam nr Testföreningar Ceftazídime Cefmenoxime Cefotaxime A B Pseudomonas2823 4 62_ 125 2 250 aeruglfwsa 2826 a 62 125 2 2so 2827 4 62 62 2 250 2828 4 62 62 2 250 2829 4 62 62 2 125 2830 4 125 125 2 >25O 2831 2 62 62 >62 >250 2832 2 62 62 >62 >250 2833 4 >l25 62 >62 >25O 2834 4 31 62 2 125 2835 4 31 62 >62 >250 2836 2 31 62 2 125 2837 2 31 31 2 >250 2838 2 62 62 >62 >250 2839 4 31 62 2 >25O 2513 2 62 125 >62 >25O 2506 4 31 62 4 125 2500 2 31 125 16 >250 Pseudomonas 2458 8 31 62 >62 IQSO SPP ' 2452 4 31 62 >62 >2so 2451 2 31 62 >62 >250 2484 2 31 62 16 >250 2481 2 125 125 31 >2S0 4000 2 31 31 >62 250 Geometriskt medeltal 3 49 70 18 250 ......_._.._.q...____..._____..._.i__..__ ll TABELL (forts.) 790læ576-1 Jämförelse av aktiviteten mot mera resistenta gramnegativa organismer Minimal inhiberande koncentration (pg/ml) vid 107 kolonibildande enheter Organism Stam nr Tëstföreningaf Ceftazidime Cefmenoxime Cefotaxíme A B K. oxytoca 4156 0,5 62 125 31 62 Pr. vulgaris hl57A 2 >l25 >l25 62 >250 41573 >l25 >l25 62 > 250 4158 4 >l25 >l25 62 250 4161 125 125 125 >62 62 4166 0,25 >l25 125 >62 31 Proteus spp. 4162 2 >125 >l25 >62 >250 4163 4 >l25 >l25 >62 >250 4164 4 >l25 >l25 >62 >250 4165 4 >l25 >l25 >62 >250 Pr. mirabilis 4159 0,13 125 125 >62 16 4160 O, 5 >l25 125 >62 31 Enterobacter spp. 4167 62 >125 >l25 >62 >250 4168 62 125 >l25 62 >250 4170 62 125 >l25 >62 >250 4171 62 125 >l25 > 62 >250 4172 31 125 >l25 >62 >250 Ent. cloacae 4173 62 125 >l25 >62 >250 4169 31 125 >l25 >62 >250 4,1 >l25 ï>l25 >62 >250 Geometriskt medeltal 7904576-1 l2 Föreningen enligt uppfinningen kan användas för behandling av olika sjukdomar orsakade av patogena bakteria hos människor och djur såsom infektioner i andningsvägarna och urinvägs- infektioner.

En annan utföringsform av uppfinningen avser ett förfarande för framställning av den antibiotiska föreningen med formeln (I) såsom beskrivas häri eller ett icke-toxiskt salt eller en icke-toxisk ester därav in vivo överförbar i motsvarande syra som omfattar (A) acylering av en förening med formeln: (II) [vari B är :> S eller > S -à O (Oá- eller ß-) , och den streckade linjen som sträcker sig över 2-, 3- och 4-ställningarna anger att före- ningen är en cef-2-em- eller cef-3-em-förening] eller ett salt, exempelvis ett syraadditionssalt (bildat med exempelvis en mineralsyra såsom saltsyra, bromvätesyra, svavelsyra, sal- petersyra eller fosforsyra eller en organisk syra såsom metan- sulfonsyra eller toluen-p-sulfonsyra) eller ett N-silylderivat därav eller en motsvarande förening med en grupp med formeln -COORS i 4-ställning [vari R5 betecknar en väteatom eller en karboxyl blockerande grupp exempelvis återstoden av en ester- bildande alifatisk eller aralifatisk alkohol eller en ester- bildande fenol, silanol eller stannanol (nämnda alkohol, fenol, silanol eller stannanol företrädesvis innehållande l-20 kol- atomerlz och med en associerad anjon Å) såsom en halogenid, exempelvis klorid eller bromid eller trifluoracetatanjon med en syra med formeln '1904576-1 13 R7 /k N \::;___ C_C0QH II N H 3 (III) \\\0.ï.C00R6 CH" J (I) à (vari R6 betecknar en karboxylblockerande grupp exempelvis såsom angivits för R5, R7 är en amino- eller skyddad aminogrupp) eller med ett acyler- ingsmedel motsvarande därtill, eller (B) en förening med for- meln: 7 R Å f; u S N 1 I B \.-==l_ C_g0_NH ------------1'/ : n _______ f' _ N Éa Q; N I :HZX \ o}(|\coo118a C003 R (IV) (vari R7, B och den streckade linjen har den tidigare angivna betydelsen, R8 och Rsa kan var och en beteckna väte eller en karboxylblockerande grupp och X är en ersättningsbar återstod av en nukleofil exempelvis en acetoxi eller diklor~ acetoxigrupp eller en halogenatom såsom klor, brom eller jod) eller ett salt därav bringas att reagera med pyridin, varefter om det är nödvändigt och/eller önskvärt vid varje tillfälle någon av följande reaktioner genomföras vid lämpliqt tillfälle l) omvandling avfßz-isomeren till den önskade A3-isomcron, ii) reduktion av föreningen vari B är “;>S-#0 för bildning av en förening vari B är j>$L iii) omvandling av en karboxylgrupp till ett icke-toxiskt 7904576-1 14 salt eller icke-toxisk esterfunktion in vivo överför- bar i motsvarande syra och iv) avlägsnande av eventuella karboxylblockerande och/eller N-skyddande grupper.

I det ovan beskrivna förfarandet (A) är utgängsmaterialet med formeln (II) företrädesvis en förening vari (B) är ;>S och den streckade linjen betecknar en cef-3-em förening. Ett sä- dant utgångsmaterial, som har visat sig vara särskilt lämpligt för användning i förfarandet (A) är N-(%aminocef-3-em-3-ylme- tyl)-pyridinium-4'-karboxylatdihydroklorid på grund av den höga renhet med vilken föreningen kan framställas.

Acyleringsmedel som kan användas vid framställningen av fö- reningen med formeln I innefattar syrahalogenider, särskilt syraklorider och -bromider. Sådana acyleringsmedel kan fram- ställas på så sätt att man bringar en syra (III) eller ett salt därav att reagera med ett halogeringsmedel, t.ex. fosfor- pentaklorid, tionylklorid eller oxalylklorid.

Acyleringar med användning av syrahalogenider kan utföras i vattenhaltiga och icke vattenhaltiga reaktionsmedia, lämpli- gen vid temperaturer från -50 till +5Ö°C, företrädesvis -20 till +30°C, om så önskas i närvaro av ett syrabindande medel.

Lämpliga reaktionsmedia innefattar vattenhaltiga ketoner såsom vattenhaltig aceton, estrar såsom etylacetat, halogenerade kolväten såsom metylenklorid, amider såsom dimetylacetamid, nitriler såsom acetonitril, eller blandningar av två eller flera sådana lösningsmedel. Lämpliga syrabindande medel inne- fattar tertiära aminer (t.ex. trietylamin eller dimetylanilin), oorganiska baser (t.ex. kalciumkarbonat eller natriumbikarbo- nat), och oxiraner såsom lägre 1,2-alkylenoxider (t.ex. ety- lenoxid eller propylenoxid), som binder vätehalogenid som frigöres vid acyleringsreaktionen.

Syror med formeln III kan i sig användas såsom acylerings- medel vid framställningen av föreningen med formeln I. Acy- 79045764 leringar med användning av syror (III) utföres lämpligen i närvaro av ett kondenseringsmedel, t.ex. karbodiimid såsom N,N'-dicyklohexyl-karbodiimid eller N-etyl-N'-7-dimetylamino- propyl-karbodiimid; en karbonylförening såsom karbonyldi- imidazol; eller ett isoxazoliumsalt såsom N-etyl-5-fenylisoxa- zoliumperklorat.

Acylering kan även ske med andra amidbildande derivat såsom syror med formeln (III) såsom exempelvis en aktiverad ester, en symmetrisk anhydrid eller en blandad anhydrid (exempelvis bildad med pivalinsyra eller med ett halogenformiat, såsom ett lägre alkylhalogenformiat).

Blandade anhydrider kan även bildas med fosforsyror (exempel- vis fosforsyra eller fosforsyrlighet, svavelsyra eller alifa- tiska eller aromatiska sulfonsyror (exempelvis toluen-p-sul- fonsyra). En aktiverad ester kan lämpligen bildas in situ med användning av exempelvis l-hydroxibensotriazol i närvaro av ett kondensationsmedel som angivits ovan. Alternativt kan den aktiverade estern bildas i förväg.

Acyleringsreaktioner innefattande de fria syrorna eller deras ovan angivna amidbildande derivat sker företrädesvis i ett vattenfritt reaktionsmedium exempelvis metylenklorid, tetra- hydrofuran, dimetylformamid eller acetonitril. Om så önskas kan ovanstående acyleringsreaktioner genomföras i närvaro av en katalysator såsom 4~dimetylaminopyridin.

Syrorna med formeln (III) och de därtill motsvarande acyle- ringsmedlen kan om så önskas framställas och användas i form av deras syraadditionssalter. Således kan exempelvis syra- klorider lämpligen användas i form av hydrokloridsalter och syrabromider i form av hydrobromidsalter.

Pyridinen kan verka såsom en nukleofil för ersättande av ett stort antal olika substituenter X i cefalosporinen med formeln (IV). I viss utsträckning är lätt- 79Û4576-1 l6 heten med vilken ersättandet sker beroende av pKa av syran HX från vilken substituenten kommer. Således tycks atomer eller grupper X erhållna från starka syror i allmänhet vara lättare ersättningsbara än atomer eller grupper erhållna från svagare syror.

Ersättningen av X med pyridin kan lämpligen genomföras genom att reaktanterna hålles i lösning eller suspension. Reaktionen genomföres företrädesvis under användning av l till 10 mol av pyridinen.

Nukleofila ersättningsreaktioner kan lämpligen genomföras på sådana föreningar med formeln (IV) vari substituenten X är en halogenatom eller en acyloxigrupp exempelvis såsom beskrives nedan.

Acyloxigrupper Föreningar med formeln (IV) vari X är en acetoxigrupp är lämp- liga utgångsmaterial för användning vid nukleofila ersättningsreaktioner med pyridin. Alternativa utgångsmaterial i denna klass innefattar föreningar med formeln (IV) vari X är återstoden av en substituerad ättikssyra exem- pelvis klorättiksyra, diklorättiksyra eller trifluorättiksyra.

Ersättningsreaktioner på föreningar (IV) med X-substituenter av denna klass särskilt i de fall där X är en acetoxigrupp kan underlättas genom närvaron i reaktionsmediet av jodid- eller tiocyanatjoner. Reaktioner av denna typ beskrives mer i detalj i de brittiska patenten l.l32.62l och l.l7l.603.

Substituenten X kan även erhållas från myrsyra, en halogen- myrsyra såsom klormyrsyra eller en karbamidsyra.

Vid användning av en förening med formeln (IV) vari X beteck- nar en acetoxi- eller substituerad acetoxigrupp är det i all- skall vara en mänhet önskvärt att gruppen R8 i formeln (IV) väteatom och att B skall representera É>S. I detta fall genom- 7904576-1 17 föres reaktionen företrädesvis i ett vattenhaltigt medium, företrädesvis vid ett pH av 5 till 8 särskilt 5,5 till 7.

Det ovan beskrivna förfarandet vari föreningar med formeln (IV) användes vari X är återstoden av en substituerad ättiksyra kan utföras såsom beskrives i det brittiska patentet 1.241.657.

Vid användning av föreningar med formeln (IV) vari X är en acetoxigrupp genomföres reaktionen lämpligen vid temperaturer ev so till 1io°c företrädesvis 50 tili so°c.

Halogener Föreningar med formeln (IV) vari X är en klor-, brom- eller jodatom kan även lämpligen användas såsom utgångsmaterial i den nukleofila ersättningsreaktionen med pyridin.

Vid användning av föreningar med formeln (IV) i denna klass, kan B betecknaÉ>S-*O och R8 ande grupp. Reaktionen genomföras lämpligen i ett icke vatten- kan beteckna en karboxylblocker- haltigt medium, som företrädesvis omfattar en eller flera orga- niska lösningsmedel, företrädesvis avpolärnatur såsom etrar, exempelvis dioxan eller tetrahydrofuran, estrar exempelvis etylacetat, amider, exempelvis formamid och N,N-dimetylform- amid och ketoner exempelvis aceton. I vissa fall kan pyri- dinen själv vara lösningsmedlet. Andra lämpliga organiska lösningsmedel är beskrivna mer i detalj i det brittiska patentet l.326.53l. Reaktionsmediet skall varken vara extremt surt eller extremt basiskt. I de fall där reaktioner genomförs på föreningar med formeln (IV) vari R8 och Raa betecknar kar- boxylblockerande grupper bildas 3-pyridiniummetylprodukten såsom motsvarande halogenidsalt som om så önskas kan utsättas för en eller flera jonbytarreaktioner för erhållande av ett salt med den önskade anjonen.

När föreningar med formeln (IV) vari X är en enligt ovan be- skriven halogenatom genomföras reaktionen lämpligen vid en temperatur ev -1o° till +5o°c, företrädesvis +10 till +3o°c. 79Û4+576-1 18 Reaktionsprodukten kan separeras från reaktionsblandníngen, som kan innehålla exempelvis oförändrat cefalosporinutgångs- material och andra substanser genom olika förfaranden såsom omkristallisation, jonofores, kolonnkromatografi och använd- ning av jonbytare (exempelvis genom kromatografi på jonbytar- hartser) eller makroretikulära hartser. 462-cefalosporinesterderivaten erhållna enligt förfarandet enligt uppfinningen kan överföras till motsvarande A3-derivat . _ 2 _ , exempelvis genom behandling av A -estern meo en bas sasom py- ridin eller trietylamin.

En cef-2-em-reaktionsprodukt kan även oxideras till motsvaran- de cef-3-em-l-oxid, exempelvis genom reaktion med en persyra såsom exempelvis perättik- eller m-klorperbensoesyra, varvid den erhållna sulfoxiden om så önskas därefter kan reduceras såsom beskrives nedan till motsvarande cef-3-em-sulfid.

När en förening erhålles vari B är >S-+O kan denna överföras till motsvarande sulfid genom exempelvis reduktion av motsva- rande acyloxisulfonium- eller alkoxisulfoniumsalt framställt in situ genom reaktion med exempelvis acetylklorid i fallet av ett acetoxisulfoniumsalt, varvid reduktionen genomföres med exempelvis natriumditionit eller med jodidjon såsom i en lösning med kaliumjodid i ett med vatten blandbart lösnings- medel exempelvis ättiksyra, aceton, tetrahydrofuran, dioxan, dimetylformamid eller dimetylacetamid. Reaktionen kan genom- föras vid en temperatur från -20 till +50°C.

Esterderivat, in vivo överförbara i motsvarande syror, av föreningen med formeln (I) kan framställas genom att man bringar en förening med formeln (I) eller ett salt eller skyddat derivat därav att reagera med ett lämpligt förest- ringsmedel såsom en acyloxialkylhalogenid (exempelvis jodid) vanligtvis i ett inert organiskt lösningsmedel såsom dimetyl- formamid eller aceton varefter om så erfordras eventuella skyddande grupper avlägsnas. 7904576-'1 l9 Bassalter av föreningen med formeln (I) kan framställas genom att man bringar en syra med formeln (I) att reagera med en lämplig bas. Sålunda kan exempelvis natrium- eller kalium- salter framställas med användning av respektive 2-etylhexanoat eller vätekarbonatsalt. Syraadditionssalter kan framställas genom reaktion av en förening med formeln (I) eller ett esterderivat därav med en lämplig syra.

När föreningen med formeln (I) erhålles såsom en blandning av isomerer, kan syn-isomeren exempelvis erhållas genom konven- tionella metoder såsom kristallisation eller kromatografi.

Såsom utgångsmaterial för framställning av föreningen med formeln (I) enligt uppfinningen användes företrädesvis före- ningar med den allmänna formeln (III) eller motsvarande syra- halogenider och anhydrider i deras syn-isomera form eller i form av blandningar av syn-isomerer och motsvarande anti- isomerer innehållande åtminstone 90 % av syn-isomeren.

Syror med formeln (III) kan framställas genom företring av en förening med formeln Rv A S N \==l- C.C00R9 i || N \ (vi) 9 betecknar en (vari R7 har den ovan angivna betydelsen och R karboxylblockerande grupp) genom reaktion med en fdrening med den allmänna formeln (VII) 79014576-'1 (vari R6 har ovan angivna betydelse och T betecknar halogen såsom klor, brom eller jod, sulfat eller sulfonat såsom tosylat), varefter den karboxylblockerande gruppen R9 avlägsnas. Separation av isomerer kan genomföras antingen före eller efter sådan företring. Företringsreaktionen utföres vanligtvis i närvaro av en bas exempelvis kaliumkarbonat eller natriumhydrid och genomföres företrädesvis i ett'organiskt lösningsmedel exempelvis dimetylsulfoxid, en cyklisk eter, såsom tetrahydrofuran eller dioxan eller en N,N-disubstituerad amid såsom dimetylformamid. Under dessa betingelser är konfi- gurationen av oxiiminogruppen huvudsakligen oförändrad vid företringsreaktionen. Reaktionen skall genomföras i närvaro av en bas om ett syraadditionssalt av en förening med formeln (VI) användes. Basen skall användas i tillräcklig mängd för att snabbt neutralisera syran ifråga.

Syrorna med den allmänna formeln (III) kan även framställas genom reaktion mellan en förening med formeln If? //šsï â-'r-“í- C0.C00R9 (VIII) (vari R7 och R9 har ovan angivna betydelse) och en förening med formeln CH3 H N.0.C.C0OR6 2 r CH3 (IX) (vari R6 har ovan angivna betydelse) varefter den karboxylblockerande gruppen R9 avlägsnas, och där så erford- ras av separation av syn- och antiisomerer.

Syror med formeln (III) kan överföras till motsvarande syra- ----:--:_--- 7904576-1 21 halogenider och anhydrider och syraadditionssalter enligt van- liga metoder exempelvis såsom beskrivits ovan.

När X är en halogen- (exempelvis klor-, brom- eller jod-) atom i formeln (IV) kan cef-3-em utgångsföreningar framställas på konventionellt sätt, exempelvis genom halogenering av en lø- skyddad amino-3-metylcef-3-em-4-karboxylsyraester-lß-oxid, avlägsnande av den 7ß-skyddande gruppen, acylering av den er- hållna lß-aminoföreningen för bildning av den önskade ¶b-acy1- amidogruppen, exempelvis på analogt sätt till förfarandet (A) ovan, följt av reduktion av lß-oxidgruppen senare under fram- ställningen. Denna beskrives i det brittiska patentet l.3%L53l.

Motsvarande cef-2-em-föreningar kan framställas enligt den metod som beskrives i den publicerade holländska patentansökan 6.902.013 genom reaktion av en 3-metylcef-2-em-förening med N-bromsuccinimid till motsvarande 3-brommety1cef-2-em-före- ning.

När X i formeln (IV) betecknar en acetoxigrupp kan sådana ut- gângsmaterial framställas, exempelvis genom acylering av 7-ami- no-cefalosporansyra, exempelvis på analogt sätt med förfaran- det (A) ovan. Föreningarna med formeln (IV) vari X betecknar andra acyloxigrupper kan framställas genom acylering av mot- svarande 3-hydroximetylföreningar som kan framställas exempel- vis genom hydrolys av de lämpliga 3-acetoximetylföreningarna exempelvis såsom beskrivits i de brittiska patenten 1.474.519 och 1.531.212.

Utgångsmaterialen med formeln (II) kan även framställas på vanligt sätt exempelvis genom nukleofil ersättning av motsvaran- de 3-acetoximetylförening med pyridin exempelvis :dsom beskrives i det brittiska patentet 1.028.563.

En ytterligare metod för framställning av utgångsmatorial med formeln (II) omfattar att den skyddande gruppen avlägsnas från en motsvarande skyddad 7ß-aminoförening på vanligt sätt exem- pelvis med användning PC15. 7904576-1 22 Det skall framhållas att i vissa av de ovanstående överför- ingsreaktionerna kan det bli nödvändigt att skydda någon eller några känsliga grupper i molekylen på föreningen ifråga för att undvika icke önskvärda sidoreaktioner. Exempelvis kan det under någon av de reaktionssekvenser som angetts ovan vara nödvändigt att skydda NH2-gruppen i aminotiazolyldelen, exem- pelvis genom tritylering, acylering (exempelvis kloracetyler- ing) protonering eller andra konventionella metoder. Skydds- gruppen kan därefter avlägsnas på något konventionellt sätt som inte förorsakar nedbrytning av den önskade föreningen, exem- pelvis vid en tritylgrupp under användning av en eventuellt halogenerad karbonsyra, exempelvis ättiksyra, myrsyra, klor- ättiksyra eller trifluorättiksyra eller användning av en mine- ralsyra, exempelvis saltsyra eller blandningar av sådana sy- ror, företrädesvis i närvaro av ett protiskt lösningsmedel, såsom vatten eller vid en kloracetylgrupp genom behandling med tiokarbamid.

Karboxylblockerande grupper använda vid framställning av fö- reningen med formeln (I) eller vid framställning av nödvändiga utgångsmaterial är önskvärda grupper som lätt kan spjälkas av vid ett lämpligt tillfälle i reaktionssekvensen, lämpligen i det sista steget. Det kan emellertid vara lämpligt i vissa fall att använda icke-toxiska metaboliskt labila karboxyl- blockerande grupper såsom acyloxi-metyl eller -etylgrupper (exempelvis acetoximetyl eller -etyl eller pivaloyloximetyl) och ha dessa kvar i den slutliga produkten för erhållande av ett lämpligt esterderivat av föreningen med formeln (I).

Lämpliga karboxylblockerande grupper är väl kända i tekniken en lista av representativa blockerande karboxylgrupper åter- finns i det brittiska patentet 1.399.086. Föredragna blockeran- de karboxylgrupper omfattar aryl-1ägre-alkoxikarbonylgrupper såsom p-metoxibensyloxikarbonyl, p-nitrobensyloxikarbonyl och difenylmetoxikarbonyl, lägre alkoxikarbonylgrupper såsom t- butoxikarbonyl och lägre halogenalkoxikarbonylgrupper såsom 2,2,2-trikloretoxikarbonyl. Karboxylblockerande grupp(er) kan 7904576-1 23 senare avlägsnas enligt någon lämplig metod beskriven i litteraturen, exempelvis av syra- eller baskatalyserade hydro- lys i många fall användbara liksom enzymatisk katalyserade hydrolyser.

De antibiotiska föreningarna enligt uppfinningen kan beredas för administrering på vilket som helst lämpligt sätt i analo- gi med andra antibiotika och uppfinningen omfattar därför pharmaoeutiska kompositioner innehållande en antibiotisk före- ning i enlighet med uppfinningen avsedd för användning inom human eller veterinärmedicin. Sådana kompositioner kan till- handahållas för användning på konventionellt sätt med hjälp av eventuellt erforderligt farmaceutiska bärare eller excipi- enter.

De antibiotiska föreningarna enligt uppfinningen kan beredas för injicering och kan föreligga i form av enhetsdoser i am- puller eller i multidosbehållare om så erfordras med till- sats av konserveringsmedel. Kompositionerna kan även ta så- dana former som suspensioner, lösningar eller emulsioner i oljiga eller vattenhaltiga bärare och kan innehålla samman- sättningsmedel såsom suspenderingsmedel, stabiliseringsmedel och/eller dispergeringsmedel. Alternativt kan den aktiva kom- ponenten föreligga i form av pulver för ombildning med en lämp- lig bärare exempelvis sterilt, pyrogenfritt vatten före använd- ning.

Om så önskas kan sådana pulversammansättning innehålla en lämplig icke-toxisk bas för att förbättra vattenlösligheten hos den aktiva ingrediensen och/eller säkerställa att när pulvret ombildas med vatten, den erhållna vattenhaltiga lös- ningens pH är fysiologiskt acceptabel. Alternativt kan basen vara närvarande i vattnet med vilket pulvret ombildas. Basen kan exempelvis vara en oorganisk bas såsom natriumkarbonat, natriumvätekarbonat eller natriumacetat eller en organisk bas såsom lysin eller lysinacetat. ......................_._.-......-..._. _ "___" _ _... .. ..-___._.-.._ 79Üå576~1 24 De antibiotiska föreningarna kan även utformas såsom supposi- toria exempelvis innehållande vanliga suppositoriabaser såsom kakaosmör eller andra glycerider.

Kompositionerna för veterinärmedicin kan exempelvis utformas som intramammära-preparationer i antingen lång tidsverkande eller snabbverkande baser.

Kompositionerna kan innehålla från O,l% upp till exempelvis 0,1 till 99 % av den aktiva substansen beroende på den metod som användes vid administreringen. När kompositionerna inne- håller dosenheter, innehåller varje enhet företrädesvis 50 till 1500 mg av den aktiva komponenten. Dosen som användes för behandling av vuxna ligger företrädesvis inom området från 500 till 6000 mg per dag, beroende på administrationssätt och frekvens. Exempelvis vid behandling av en vuxen person är lOOO till 3000 mg per dag administrerat intravenöst eller intra- muskulärt vanligen tillräckligt. Vid behandling av Pseudomonas- infektioner kan högre dagliga doser erfordras.

De antibiotiska föreningarna enligt uppfinningen kan administre- ras i kombination med andra terapeutiska medel såsom antibio- tika exempelvis penicillin eller andra cefalosporiner.

Följande exempel illustrerar uppfinningen. Alla temperaturer är angivna i OC. “Petrol“ betyder petroleumeter (kokpunkt 40- 6o°).

Protonmagnetisk resonans (p.m.r.) spektra bestämdes vid lOO MHz. Integralerna är i överensstämmelse med anvisningarna, kopplingskonstanterna, J, är i Hz, tecknen har inte bestämts, s = singel, d = dubbel, dd = dubbeldublett, m = multiplett och ABq = AB-kvartett. “Nujol" är ett registrerat varumärke.

Prcparat l Etyl(Z)-2-(2-aminotiazol-4-yl)~2-(hydroxiimino)acetat Till en omrörd och iskyld lösning av 292 g etylacetoacetat i '7904576-1 296 ml isättika sättes en lösning av 180 gram natriumnitrit i 400 ml vatten med en sådan hastighet att temperaturen hålles kvar under 100. Omröringen och kylningen fortsätter under ungefär 30 min. när en lösning av 160 g kaliumklorid i 800 ml vatten tillsättes. Den erhållna blandningen omröres under l timme. Den lägre oljiga fasen separeras och den vattenhaltiga fasen extraheras med dietyleter. Extraktet kombineras med oljan, tvättas undan för undan med vatten och mättad saltlake, torkas och indunstas. Den återstående oljan som stelnar när den får stå tvättas med petroleumeteroch torkas i vakuum över kaliumhydroxid, varvid man erhåller 309 g ety1-(Z)-2-(hydroxi- imino)-3-oxobutyrat.

En omrörd och iskyld lösning av 150 g etyl (Z)-2-(hydroxiimi- no)-3-oxobutyrat i 400 ml diklormetan behandlas droppvis med 140 g svavelklorid. Den erhållna lösningen hålles vid rums- temperatur 3 dagar, indunstas sedan. Återstoden upplöses i dietyleter, tvättas med vatten tills tvättvattnen är i det närmaste neutrala, torkas, indunstas. 177 g av den återståen- de oljan upplöses i 500 ml etanol och 77 ml dimetylanilin och 42 g tiokarbamid tillsättes under omröring. Efter 2 timmar upp- samlas produkten genom filtrering, tvättas med etanol och torkas, varvid man erhåller 73 g av titelföreningen, smält- punkt 1ss° (sönderaelning) .

Preparat 2 Etyl-(Z)-2-hydroxiimino~2-(2-tritylaminotiazol-4-yl)acetat, hydroklorid 16,75 g tritylklcrid sättes portionsvis under 2 tim. till en omrörd och kyld (-300) lösning av 12,91 g av preparat l i 28 ml dimetylformamid innehållande 8,4 ml trietylamin. Bland- ningen får värmas till 150 under 1 tim. omröres under ytter- ligare 2 tim. och uppdelas mellan 500 ml vatten och 500 ml etylacetat. Den organiska fasen separeras, tvättas med 2 x 500 ml vatten och skakas sedan med 500 ml 1N HCl. Fällningen upp- samlas, tvättas successivt med 100 ml vatten, 200 ml etylace- tat och 200 ml eter och torkas i vakuum, varvid man erhåller WÜÄWQ-i 26 16,4 g av titelföreningen såsom en vit fast substans, smält- punkt 184 till ls6° (sönaerdelnlng).

Preparat 3 Etyl-(Z)-2-(2-t-butoxikarbonylprop-2-oxiimino)-2-(2-trityl- aminotiazol-4~acetat 34,6 g kaliumkarbonat och 24,5 g t-butyl-2~brom-2-metyl-propio- nat i 25 ml dimetylsulfoxid sättes till en omrörd lösning av 49,4 g av produkten från preparat 2 under kvävgas i 200 ml dimetylsulfoxid och blandningen omröres vid rumstemperatur i 6 timmar. Blandningen hälles ner i 2 l vatten, omröres i min och filtreras. Den fasta delen tvättas med vatten och upplöses i 600 ml etylacetat. Lösningen tvättas successivt med vatten, 2N saltsyra, vattenochnättad saltlake, torkas och indunstas. Återstoden omkristalliseras ur petroleumeter (kokpunkt 60-80°) varvid man erhåller 34 g av titelföreningen, smältpunkt 123,5 till l2s°.

Preparat 4 (Z)-2-(2-t-butoxikarbonylprop-2-oxiimino)-2-(2-tritylamino- tiazol-4-yl)ättiksyra 2 g av produkten från preparat 3 upplöses i 20 ml metanol och 3,3 ml 2N natriumhydroxid tillsättes.Blandningendestilleras under återflöde 1,5 tim och koncentreras sedan. Återstgden tas upp i en.blandning av 50 ml vatten, 7 ml ZN saltsyra och 50 ml etylacetat. Den organiska fasen avskiljes och den vat- tenhaltiga fasen extraheras med etylacetat. De organiska lös- ningarna kombineras, tvättas successivt med vatten, mättad saltlake, torkas och indunstas. Återstoden omkristalliseras ur en blandning av koltetraklorid och petroleumeter varvid man erhåller l g av titelföreningen, smältpunkt l52 till 1560 (sönderdelning).

Preparat 5 (6R,7R)-7-amino-3-(l-pyridiniummetyl)cef-3~em-4-karboxylsyra- dihydroklorid (a) En omrörd suspension av 4,15 g av (6R,7R)-7-(2-thienyl- 7904576-1 27 acetamido)3-(l-pyridiniummetyl)cef-3-em-4-karboxylat i 30 ml diklormetan behandlas med 5,09 ml N,N-dimetylanilin och 2,52 ml klortrimetylsilan. Blandningen omröres vid 30-350 i l tim och kyles sedan till -280 och behandlas med 4,16 g fosforpenta- klorid, omröres vid -25 till -300 i ytterligare l timme och hälles sedan ner i en omrörd kyld (-200) lösning av 8,1 ml bu- tan-l,3-diol och 20 ml diklormetan. Lösningen fick uppvärmas till 00 under 30 minuter, den utfällda fasta substansen (A) filtreras, tvättas med diklormetan och torkas i vakuum. Den omkristalliseras i 17,5 ml metanol, omröres och utspädes med 87,5 ml diklormetan och den utfällda fasta substansen av- filtreras, tvättas med diklormetan och torkas i vakuum varvid man erhåller 3,2 g av föreningen såsom en vit fast substans, )(max (pH 6 buffert) 258 nm (Eíâm 3l8),'T(D20) värdena inne- fattar 0,95, 1,32 och l,84 (pyridiniumprotoner), 4,10 till 4,46 (ABq, J 16 Hz, 3-CH2-), 4,56 (d, J 5 Hz 7-H), 4,70 (d, J 5 Hz, 6-H), 6,14 till 6,50 (ABq, J 17 Hz, C2-H). (b) 8 g av den fasta substansen (A) framställd såsom i steg (a) ovan upplöses i 25 ml lN saltsyra. Vid tillsats av 95 ml isopropanol utfälldes 4,95 g av den kristallina titelförening- en såsom ett dihydrat.'F(D20) värdena inkluderar l,O2, l,36 och l,87 (pyridiniumprotoner), 4,2 + 4,55 (ABq, J = 14 Hz, 3-CH2-), 4,62 (d, J = 5Hz, C7-H), 47,4 (d, J = 5Hz, C6-H), 6,19 + 6,38 (ABq, J = l8Hz, C -H). Vattenhalten enligt Karl Fischer- metoden: 9,4 %. 2 Exempel 1 a) t-butyl (6R,7R)-3-acetoximetyl-7-\(Z)-2-(2-t-butoxi- »_ karbonylprop-2-oxiimino)-2-(2-tritylaminotiazol-4-yl) acetami- dolcef-3-em-4-karboxylat En omrörd lösning av 572 mg av produkten från preparat 4 och 328 mg t-butyl (6R,7R)-3-acetoximetyl-7-aminocef-3-em-4-kar- bøxyiat i 1o m1 aimetyiformamid kyles till o° 0011150 mg i-mfa- roxibensotriazol tillsättes, följt av 225 mg dicyklohexylkar- bodiimid. Blandningen värmes till rumstemperatur, omröres i timmar och får stå över natten. Blandningen filtreras och '79Uë576-1 28 den vita fasta substansen tvättas med en liten mängd eter.

Filtratet och tvättvätskorna utspädes med 50 ml vatten och extraheras med etylacetat. De organiska extrakten kombineras, tvättas successivt med vatten, 2N saltsyra, vatten, natrium- vätekarbonatlösning och mättad saltlake, torkas och indunstas. Återstoden elueras genom en kiselkolonn med eter. Eluatet som innehåller produkten uppsamlas och koncentreras varvid man er- håller 533 mg av titelföreningcn. En portion omkristalliscras ur diisopropyleter, smältpunkt lO3 till ll3o, sönderdelning [cqšo + 8,50 (5, 1,0 nMso). b)(6R,7R)-3-acetoximetyl-7-í(Z)-2-(2-aminotiazol-4-yl)-2-(2- karboxiprop-2-oxiimino)acetamidd]cef-3-em-4-karboxylsyra. l8 ml trifluorättiksyra sättes till en lösning av 2,4 g av produkten från steg a) i 18 ml anisol vid OO. Blandningen om- röres vid rumstemperatur i 2 tim och koncentreras. Återstoden upplöses i etylacetat och extraheras med mättad natriumväte- karbonatlösning. De vattenhaltiga extraktens pH justeras till 6 och lösningen tvättas med etylacetat. Den vattenhal- tiga fasen surgöres till pH 1,5 under etylacetat, mättas med natriumklorit och extraheras med etylacetat. De kombinerade organiska extrakten tvättas med mättad saltlake, torkas och indunstas. Återstoden upplöses i 20 ml varm 50 %-ig vatten- haltig myrsyra och får stå i 2 timmar. Blandningen utspädes med 50 ml vatten och filtreras. Filtratet koncentreras. Åter- stoden upptas i 50 ml vatten, omfiltreras och lyofiliseras varvid man erhåller 920 mg av titelföreningen,ÅnmX(?H6 buffer) 236 mn (Eââm 250), Amf 255 nm (nämns), 296 nm (Eâfimiom, C C [Oqšo +2o,o° (g 1,0, Dmso).

C) (6R,7R)-7-[(Z)-2-(2-aminotiazol-4-yl)-2-(2-karb0XiPr0P" 2-oxiimino)acetamido]~3-(l“PYriÖiniUmmetYl)“Cef"3“em“4' karboxylat, mononatriumsalt 2 ml pyridin och 1,8 g av produkten från steg b) sättes till en omrörd lösning av 7,12 g natriumjodid i 2,2 ml vatten vid 800. Lösningen omröres vid 800 i l timme, kyles och utspädes till l00 ml med vatten. Lösningens pH justeras till 6,0 med 790115764 29 2N natriumhydroxidlösning och denna lösning koncentreras för avlägsnande av pyridin. Den vattenhaltiga återstoden utspä- des till 100 ml med vatten, 2 droppar metylísobutylketon till- sättes och lösningen surgöres till pH l med ZN saltsyra.

Blandningen filtreras och den fasta substansen tvättas med lite vatten. Filtratet och tvättvätskorna uppsamlas och tvättas med etylacetat och pH justeras till 6,0 med 2N matri- umhydroxidlösning. Lösningen koncentreras till 50 ml och till- föres en kolonn av 500 g Amberlit XAD-2-harts under användning av först vatten och sedan 20 %-ig vattenhaltig etanol såsom elueringslösningsmedel. Fraktionerna som innehåller produk- ten koncentreras och lyofiliseras varvid man erhåller 0,56 g av titeiföreníggen, Åmax(pn 6 buíšert) 253,52? (Eââmson, Äinfzsz nm (Elåm 159), 260 nm (Blom 295),[0L]D +24,5° (g 1,0 DMSO).

Exempel 2 (6R,7R)-7-[(Z)~2~(2-aminotiazol-4-yl)-2-(2-karboxiprop-2- oxiimino)acetamidq¶-3-(l-pyridiniummetyl)-cef-3-em-4-kar- boxylatnatriumsalt 2,5 g (6R,7R)-7-[kZ)-2-(2-aminotiazol-4-yl)-2-(2-karboxiprop- -2-oxiimino)acetamidd]-3-(l-pyridiniummetyl)-cef-3-em-4-kar- boxylat upplöses i vatten och lösningen behandlas med 1,52 g natrium-2-etylhexanoat i 8 ml metanol. Blandningen sättes till omrörd aceton under 15 min och den erhållna suspensionen filtreras, tvättas och torkas för erhållande av 2,5 g av titel- N . 23 foreningen ÉÜD OO (g 1,0, H2O),.ÄmaX(pH 6 fosfat) 255 1% 1% (Elm 327, 618630) med Ainfl vid 240 (Elm 305, 617.370; och 1% . _ 280 (Elm 172, ístsoopvmax 010301), 1780 cm l (paactafn), natrium, funnet: 4,5%, beräknat för C22H2l07N6S2 Na: 4,04%.

Exempel 3 a) Difenylmetyl (lS, 6R, 7R)-7- BZ)-2-(2-t-butoxikarbonylprop- 2~oxiimino)-2-(2-tritylaminotiazol-4-yl)-acetamido]-3-bromo- metylcef-3-em-l-oxid-4-karboxylat 0,75 g fosforpentaklorid suspenderas under omröring i 20 ml metylendiklorid. Blandningen kyles till -100 och 2,0 av pro- °?9Ûf+5?6'='ä dukten av preparat 4 tillsättes. Omröringen fortsätter vid -50 till -100 i 10 min. 0,88 ml trietylamin i 5 ml metylendiklorid tillsättes vid -100 följt efter 5 min med en suspension av 1,67 g difenylmetyl-(lS,6R,7R)-7-amino-3-bromometylcef-3-em- l-oxid-4-karboxylathydrobromid i 30 ml metylendiklorid inne- hållande 0,42 ml trietylamin tvättad med 5 ml metylendiklorid.

Blandningen omröres i 20 min vid -5 till -100, hälles sedan ner i 50 ml halvmättad vattenhaltig natriumvätekarbonatlösning.

Detorganiska skiktet avskiljes, tvättas med utspädd saltsyra- lösning (lN 3x3O ml) och 2x30 ml saltlake och indunstas i vakuum till ett skum. Skummet tas upp i ungefär 10 ml etyl- acetat och behandlas med 100 ml diisopropyleter. Den utfällda fasta substansen uppsamlas genom filtrering, tvättas med di- isopropyleter och torkas vid 400 i vakuum under natten för erhållande av 2,1 g av titelföreningen,'[(CDCl3) värdena inne- fattar 3,11 (s, -Cg Ph2), 3,37 (s, tiazol-5-yl proton) 3,88 (dd, J 9Hz och 5Hz, 7-H), 5,22 + 6,02 (ABq -3CH2), 5,49 (d, 5Hz 6-H), 8,46 (s, CMe2). b) (6R,7R)-7- &Z)-2-aminotiazol-4-yl)-2-(2-karboxiprop-2-oxi- imino)acetamidg)-3-(1-pyridiniummetyl)-cef-3-em-4-karboxylat 1 g av produkten från steg a) upplöses i 22 ml aceton och om- röres vid rumstemperatur. 0,08 ml pyridin tillsättes och bland- ningen omröres vid rumstemperatur 3 timmar. Ytterligare 0,72 ml pyridin tillsättes och blandningen får stå vid rumstemperatur över natten. Blandningen hälles ner i 75 ml omrörd dietyleter och den utfällda fasta substansen uppsamlas genom filtrering, tvättas med eter och torkas vid 400 i vakuum. 0,8 g av den fasta substansen omkristalliseras i 22 ml aceton vid -100. 0,7 g kaliumjodid tillsättes följt av 0,17 ml acetylklorid.

Blandningen omröres vid -100 i 20 min och därefter tillsättes ytterligare 0,7 g kaliumjodid och 0,17 ml acetylklorid. Efter omröring i ytterligare 20 min vid -100 sättes blandningen till en lösning av 0,6 g natriummetabisulfit i 60 ml vatten och ml mättad saltlake. Produkten extraheras med 2 x 50 ml me- tylendiklorid och extrakten tvättas med saltlake, torkas över magnesiumsulfat och indunstas under reducerat tryck till ett 7904576-1 31 skum. Detta upplöses i 6,5 ml myrsyra och får stå vid rums- temperatur i 15 min. 0,25 ml koncentrerad saltsyra tillsättes och blandningen får stå ytterligare 1,25 tim. Den fasta fäll- ningen filtreras och tvättas med en liten mängd myrsyra, Det kombinerade filtratet och tvättvätskan hälldes ner i 5 ml etylacetat och 5 ml dietyleter med 10 ml vatten och 5 ml aceto- nitril. Ytterligare vatten tillsättes tills 2 distinkta skikt erhålles. Detlägre skiktet dras av och extraheras med 14 ml dietyleter innehållande 7 ml Amberlite LA2 och 0,7 ml ättik- syra. Det vattenhaltiga skiktet separerades igen och till- fördes en kolonn av “Zerolit" 225 SRC 15 (H+ bildar 15 ml).

Kolonnen tvättas med vatten till neutral reaktion. Produkten elueras med en 10 procentig lösning av pyridin i vatten. Elu- atet indunstas i vakuum till en liten mängd och behandlas med aceton. Blandningen kyles till O-400 över natt och filtreras.

Den fasta substansen tvättas med aceton och torkas vid 400 i vakuum för erhållande av 0,25 g av titelföreningen. nmr-spekt- rum liknade det som erhölls vid föreningen framställd i exem- pel 7. _ l% . 1% Älnax (pH6 foïšat) 255,5nm (Elcm 374), Åïnf vid 238 (Elcm 340) och 290 nm (Elåm l60).

Exempel 4 a) (6R,7R)-7 EZ)-2-(2~trifenylmetylaminotiazol-4-yl)-2-(2-t- butoxikarbonylprop-2-oxiimino)acetamidqy-3-(l-pyridiniummetyl)- cef-3-em-4-karboxylat 3,44 g av produkten från preparat 4 sättes till en omrörd lös- ning av l,38 g fosforpentaklorid i 60 ml metylenklorid, kyld till -100. Den erhållna lösningen omröres vid -SO i 30 min och kyles sedan till -100. 1,33 g trietylamin tillsättes följt av 20 ml vatten. Blandningen omröres 3 min vid Oo, när den läg- re fasen under lO min sättes till en omrörd suspension av 2,19 g av produkten från preparat 5 a) i en blandning av 30 ml N,N-dimetylacetamid/30 ml acetonitril innehållande 3,03 g tri- etylamin, kylt till -100. Blandningen omröres i 45 min vid -10 till -50, därefter 1 timme utan kylning. l ml metanol till- sättes. Metylenklorid avlägsnas genom avdunstning under reduce- 79ülvš7öfl1 32 rat tryck. Den återstående lösningen sättes till 300 ml vatten under omröring för utfällning av 4,89 g av titelföreningen.

T(CDCl3) värdena inkluderar 2,78 (s, -{ç6Hš]3); 3,37 (s - tiazo1proton); 0,35, 1,80 2,12 (pyridiniumprotoner); 4,18 (m, -7~H); 4,95 (6-H); 8,66 (s -t-butyl); 8,50 (s, - C(CH3)2). b)(6R,7R)-7-[(Z)-2-(2-aminotiazol-4-yl)-2-(2-karboxiprop~2~ oxiimino)acetamidqJ-3-(1-pyridiniummetyl)cef~3~em~4-karboxy1- syradihydroklorid 3,38 g av produkten från steg a) upplöses i 20 ml 98 procentig myrsyra under omröring. 1,2 ml koncentrerad saltsyra tillsättes och blandningen omröres under 1 timme. Den utfällda fasta sub- stansen avlägsnas genom vakuumfiltrering. Lösningsmedlet av- lägsnas från filtratet genom avdunstning under reducerat tryck och efterlämnar en olja som sönderdelas med 30 ml aceton för erhållande av 2,20 g av titelföreningen.'f(D2O/NaHCO3)värdena inkluderar 3,08 (s, -tiazolproton); 1,06, 1,44, 1,93 (pyri- diniumprotoner); 4,16 (d, H 5Hz, 7-H); 4,74 (d, J5Hz, 6-H), 8,55 (s,-C(CH3) ).

Aceton med n.m.r. 1 mol.

Vattenhalt 5 % (Karl Fischer-metod).

Klor funnet l0,l% ( N S C12 + aceton (1 mol) + vatten (5%) Cz2H24 6 erfordrar Cl, l0.0%). 2 Exempel 5 a) (6R,7R)-7-[(Z)-2-(2-trifenylmetylaminotiazol-4-yl)-2-(2-t- butoxikarbonylprop-2-oxiimino)acetamido -3-(l-pyridinium- metyl)-cef-3-em-4-karboxylat 2,18 g av produkten från preparat 5 b) fick reagera såsom beskrivits i exempel 4 a) för erhållande av 4,03 g av titel- föreningen vars spektroskopiegenskaperliknade de som erhölls vid produkten enligt exempel 4 a). b) (6R,7R)-7-Ä(Z)~2-(2-aminotiaZ0l-4-yl)-2-(2-karboxiprop-2- oxiimino)acetamidQ]-3-Urpyridiniummetyl)cef~3~em-4-karboxy1- syradihydroklorid 3,8 g av produkten från steg a) behandlades såsom angivits i 79045764 33 exempel 4 b) för erhållande av 2,l7 g av titelföreningen vars spektroskopiegenskaper liknade de som erhållits vid produkten enligt exempel 4 b).

Exempel 6 a) (6R,7R)-3-acetoximetyl-7-ÅlZ)-2-(2-aminotiazol-4-¿l)-2- (2-karboxiprop-2-oxiimino)acetamidq]-cef~3-em-4-karboxylsyra- hydroklorid 200 g av produkten från exempel l a) upplöses i 800 ml myr- syra för-kyld till +lOO och 60 ml koncentrerad saltsyra sättes under 5 min till den omrörda blandningen. Omröringen fort- sätter vid 20-220 en och en kvarts timme innan kylning till +l0O och filtrering. Bädden tvättas med 30 ml myrsyra. Det kombinerade filtratet och tvättvätskan koncentreras genom in- dunstning vid 200 till ett gult skum som sönderdelas med 800 ml etylacetat. Den fasta substansen som avsatt sig uppsamlas genom filtrering, tvättas med 200 ml etylacetat och tornas i vakuum vid rumstemperatur över natten för erhållande av 124,6 g av 1% 311. titelföreningen Ämax (etanol)234,5 nm, Elcm b) (6R,7R)-7-llZ)-2-(2-aminotiazol-4-yl)-2-(2-karboxyprop-2- oxiimino)acetamidá -3-(pyridinium-l-ylmetyl)cef-3-em-4-kar- boxylathydrat 40 g av produkten från steg a) sättes till en omrörd bland- ning av 40 ml vatten och 25,6 ml pyridin. Därefter tillsättes 160 g natriumjodid och blandningen upphettas vid 600 3 l/2 tim.

Den heta lösningen hälles ner i 2 1 omrörd aceton och utspädes med 1,2 l dietyleter. Suspensionen kyles till 20 och 50,65 g av den råa produkten uppsamlas genom filtrering. Denna upp- löses i 480 ml vatten och omröres med 19,3 ml myrsyra, 280 ml "Amberlit LA2" i 560 ml eter. Blandningen separeras och det organiska skiktet tvättas 2 ggr med 240 ml vatten varje gång.

Det vattenhaltiga skiktet tvättas med 280 ml eter och till- föres en kolonn av "Zerolit 225, SRC 15" 200 ml H+, därefter tillsättes destillerat vatten tills eluatet är neutralt. Ko- lonnen elueras med 10 % pyridin i vatten och cLuatet passerar genom en kolonn av 40 g neutral aluminiumoxid. Lluatet indun- WÜ4576~1 34 stas till en sirap under reducerat tryck och sirapen sättes droppvis till 500 ml omrörd aceton. 13,09 g av titelförening- en erhålles genom filtrering och ekvilibrering i luft.

H20, 7.0 f, (Karl neehernÅ 255 mn (nlcm 364) Äinflzm och 285 nm (Eå max :m338 och l7l),ÜÅ šo -30 (pH 8 fosfatbuffert).

Exempel 7 al (6R,7R)-7-fiZ)-2-(2-tritylaminotiazol-4-yl)-2-(2-t~ butoxikarbonylprop-2-oxiimino)acetamido]-3-(l-pyridinium- metyl)cef~3-em~4-karboxylat, N.N-dimetylformamid, solvat Finpulvriserad produkt av exempel 9 a) sättes till 15 ml omrörd N,N-dimetylformamid vid 230. Den fasta substansen upplöses och kort därefter inträder kristallisation. Den om- rörda blandningen utspädes med droppvis tillsats av 20 ml diisopropyleter. Den fasta substansen uppsamlas gneom filt- rering för erhållande av 3,06 g av titelföreningen såsom färglösa nålar.

N,N-dimetylformamid nmr = 2 l/2 mol.

T(DMSO-d6): 2,4-3,0 (m, trityl); 3,32 (s, aminotiazol ring- proton); 0,47, 1,38, l,82 (pyridiniumprotoner); 4,34 (m, C-7 proton); 4,92 (d, J-5, C-6 proton); 8,64 (s, t-butylprotoner); 8,62 (e (cH3)2-c<),[0fi]š°= -27,s° (c = 1,1 i metanol). b) (6R,7R)-7 üZ)-2-(2-aminotiazol-4-yl)~2-(karboxyprop-2- -Oxiimino)acetamidQ]-3-(l-pyridniummetyl)cef-3-em-4-kar- boxylsyradihydroklorid. 2,l g av produkten från steg a) upplöses i lO ml myrsyra vid 220. 0,8 ml koncentrerad saltsyra tillsättes och efter 75 min avfiltreras den utfällda fasta substansen. Filtratet indunstas och 10 ml industriell denaturerad sprit tillsättes.

Lösningen återindunstas. Återstoden upplöses i metanol och lösningen sättes till diisopropyleter under erhållande av 1,35 g av titelföreningen, 200 o [OLD -14,7 (e = 0,95 med pH 6 buffert) 790l+576~1 H 'IUJMSO-dö) 0,28 (d, J 9, -c-Ng), 0,77 (d, J 6), 1,25 (t, J 6), 1,70 (t, J 6, pyridiniumprotoner); 3,0 (s aminotiazolprotonerj; 3,99 (d d, J 9,5, 7-H); 4,67 (d, J 5, 6-H); 8,42 (S, -(CH3)2).

Pharmaceutiska exempel Exempel A - Torrt pulver för injektion Sammansättning per liten medicinflaska (6R,7R)~7- BZ)-2-(2-aminotiazol~4-yl)-2-(2-karboxiprop-2- oxiimino)acetamido -3-(1-pyridniummetyl)cef-3-em-4-karboxy- lat- 500 mg Lysinacetat l89 mg Metod Cefalosporinantibiotika blandas med lysinacetat och fylles på glasflaskor. Flaskans halsutrymme renades med kvävgas och en kombinationsförslutning påföres genom "crimpning". Produkten upplöses för administrering genom tillsats av 2 ml vatten för injektion.

Exempel B ~ Torrt pulver för injektion Sterilt (6R,7R)-7-BZ)-2-(aminotiazol-4-yl)-2-(2-karboxiprop- 2-oxiimino)acetamido1-3-(l-pyridiniummetyl)-cef-3~em-4-kar- boxylat, mononatriumsalt fylles på glasflaskor så att varje flaska innehåller en mängd ekvivalent till l,O g av antibi- otikasyran. Fyllningen göres aseptisk under en ridå av steril kvävgas. Förslutningen av flaskorna sker under användning av gummiskivor eller proppar som hålls på plats med aluminium- ytterförslutningar, vilka därigenom förhindrar gasutbyte eller inträngande av mikroorganismer. Ombildande av produkten genom upplösning i vatten för injektioner eller andra lämpliga sterila bärare kort innan administreringen.

Exempel C - Injektion dubbelpack a) 500 mg mängder av steril (6R,7R)-7-BZ)-2~(2-aminotia- zol-4-yl)-2-(2~karboxiprop-2-oxiimino)acetamido]-3- b) c) 7904576-1 36 (l-pyridiniummetyl)cef-3-em-4-karboxylat fylles asep- tiskt på glasflaskor under en ridå av steril kvävgas.

Glasflaskorna förslutes under användning av gummiskivor eller pluggar som hålles på plats av aluminiumytter- förslutningenvarigenom man förhindrar gasutbyte eller inträngande av mikroorganismer.

En 3,84 % V/v~lösning av natriumvätekarbonat framställes, göres till en klar lösning genom filtrering och 2,15 ml fylles på rena ampuller. Koldioxid får passera genom innehållet av varje ampull under l min innan förslut~ ningen. Ampullerna steriliseras i en autoklav och kon- trolleras beträffande klarheten.

Cefalosporinantibiotika omvandlas kort före administre- ringen genom upplösning i 2,0 ml av natriumvätekarbonat- lösningen.

Claims (3)

1. 7904576-1 37 PATENTKRAV l. (6R,7R)-7-I(Z)-2-(2-aminotiazol-4-yl)~2-(2-karboxi- prop-2-oxiimino)acetamidol-3-(l-pyridiniummetyl)-cef-3-em-4- karboxylat med formeln NH /gz n u s-N c,co.Nn *É/S C- š cn3 0'-”""' N' /QCIÜÜ \o.!:.c'oon C00 ß èH3 (1) och icke-toxiska salter och icke-toxiska estrar därav in vivo överförbara till motsvarande syror.

2. Förfarande för framställning av (6R,7R)-7-[(Z)-2-(2- aminotiazol-4~yl)-2~(2-karboxiprop-2~oxiimino)acetamidol-3- (l-pyridiniummetyl)-cef-3-em-4-karboxylat och icke-toxiska salter och icke-toxiska estrar därav in vivo överförbara till motsvarande syror, k ä n n e t e c k n a t därav, att man (A) acylerar en förening med formeln (vari B är >S eller >S-+O, och den streckade linjen som sammanbinder 2~, 3- och 4-ställningarna anger att föreningen 7904576-1 38 är en oef-2-em- eller cef-3-em-förening) eller ett salt eller N-silylderivat därav eller en motsvarande förening med en grupp med formeln -COOR5 i 4-ställning (vari RS betecknar en väteatom eller en karboxylblockerande grupp) och som har en . . CD associerad anjon A , med en syra med formeln 7 R Å s N a \===Å- c.cooH U N ?H3 \*~o.c.cooR6 I (III) CH3 (vari R6 betecknar en karboxylblockerande grupp och R7 beteck- nar en amíno- eller skyddad aminogrupp) eller med ett motsva- rande acyleringsmedel, eller (B) omsätter en förening med formeln R7 ' «¿>N H E 5 1 ' B __J/ \===L- c.co.Nn | g n (ve-_- N _,f' cnzx N\0 :HÉOORM (30038 I I kr (vari R7, B och den streckade linjen har den ovan angivna betydelsen, R8 och Rsa oberoende av varandra kan beteckna väte eller en karboxylblockerande grupp, och X betecknar en ersätt- ningsbar återstod av en nukleofil eller ett salt därav, med en pyridinförening med formeln 7904576-1 39 f) \_-.-.-... varefter, om så erfordras och/eller önskas i varje enskilt (V) fall, någon av följande reaktioner genomföres i vilken som helst lämplig följd: i) överföring av en A2-isomer i den önskade A§~isomeren, ii) reduktion av en förening vari B är )S-+O till en före-“ ning vari B är >S, iii) överföring av en karboxylgrupp i ett icke-toxiskt salt eller en icke-toxisk esterfunktion, in vivo överförbar till motsvarande syra, och iv) avlägsnande av eventuella karboxylblockerande och/eller N-skyddande grupper.

3. Förening med formeln (I) enligt patentkravet 1 NH 2 1 Å E! t: () S N _ - , 1 l S. _* c.co.Nu --1/ 9* ll 'i N Ra o¿”"'N / cflztf e - al* 0.C.CO0H C00 . åh till användning som antibiotikum inom human- eller veterinär- medicinen.