RS58765B1 - Cd3-vezujući molekuli sposobni za vezivanje za humani i nehumani cd3 - Google Patents

Cd3-vezujući molekuli sposobni za vezivanje za humani i nehumani cd3

Info

Publication number
RS58765B1
RS58765B1 RS20190504A RSP20190504A RS58765B1 RS 58765 B1 RS58765 B1 RS 58765B1 RS 20190504 A RS20190504 A RS 20190504A RS P20190504 A RSP20190504 A RS P20190504A RS 58765 B1 RS58765 B1 RS 58765B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
binding
mab2
antibody
antigen
cancer
Prior art date
Application number
RS20190504A
Other languages
English (en)
Inventor
Ling Huang
Leslie S Johnson
Original Assignee
Macrogenics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Macrogenics Inc filed Critical Macrogenics Inc
Publication of RS58765B1 publication Critical patent/RS58765B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C03—GLASS; MINERAL OR SLAG WOOL
    • C03C—CHEMICAL COMPOSITION OF GLASSES, GLAZES OR VITREOUS ENAMELS; SURFACE TREATMENT OF GLASS; SURFACE TREATMENT OF FIBRES OR FILAMENTS MADE FROM GLASS, MINERALS OR SLAGS; JOINING GLASS TO GLASS OR OTHER MATERIALS
    • C03C17/00—Surface treatment of glass, not in the form of fibres or filaments, by coating
    • C03C17/34—Surface treatment of glass, not in the form of fibres or filaments, by coating with at least two coatings having different compositions
    • C03C17/36—Surface treatment of glass, not in the form of fibres or filaments, by coating with at least two coatings having different compositions at least one coating being a metal
    • C03C17/38—Surface treatment of glass, not in the form of fibres or filaments, by coating with at least two coatings having different compositions at least one coating being a metal at least one coating being a coating of an organic material
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/12—Antidiarrhoeals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/14—Prodigestives, e.g. acids, enzymes, appetite stimulants, antidyspeptics, tonics, antiflatulents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C03—GLASS; MINERAL OR SLAG WOOL
    • C03C—CHEMICAL COMPOSITION OF GLASSES, GLAZES OR VITREOUS ENAMELS; SURFACE TREATMENT OF GLASS; SURFACE TREATMENT OF FIBRES OR FILAMENTS MADE FROM GLASS, MINERALS OR SLAGS; JOINING GLASS TO GLASS OR OTHER MATERIALS
    • C03C17/00—Surface treatment of glass, not in the form of fibres or filaments, by coating
    • C03C17/34—Surface treatment of glass, not in the form of fibres or filaments, by coating with at least two coatings having different compositions
    • C03C17/42—Surface treatment of glass, not in the form of fibres or filaments, by coating with at least two coatings having different compositions at least one coating of an organic material and at least one non-metal coating
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2809—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2827—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against B7 molecules, e.g. CD80, CD86
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • G—PHYSICS
    • G02—OPTICS
    • G02B—OPTICAL ELEMENTS, SYSTEMS OR APPARATUS
    • G02B5/00—Optical elements other than lenses
    • G02B5/08—Mirrors
    • G02B5/0808—Mirrors having a single reflecting layer
    • H—ELECTRICITY
    • H10—SEMICONDUCTOR DEVICES; ELECTRIC SOLID-STATE DEVICES NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • H10F—INORGANIC SEMICONDUCTOR DEVICES SENSITIVE TO INFRARED RADIATION, LIGHT, ELECTROMAGNETIC RADIATION OF SHORTER WAVELENGTH OR CORPUSCULAR RADIATION
    • H10F77/00—Constructional details of devices covered by this subclass
    • H10F77/40—Optical elements or arrangements
    • H10F77/42—Optical elements or arrangements directly associated or integrated with photovoltaic cells, e.g. light-reflecting means or light-concentrating means
    • H10F77/488—Reflecting light-concentrating means, e.g. parabolic mirrors or concentrators using total internal reflection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C03—GLASS; MINERAL OR SLAG WOOL
    • C03C—CHEMICAL COMPOSITION OF GLASSES, GLAZES OR VITREOUS ENAMELS; SURFACE TREATMENT OF GLASS; SURFACE TREATMENT OF FIBRES OR FILAMENTS MADE FROM GLASS, MINERALS OR SLAGS; JOINING GLASS TO GLASS OR OTHER MATERIALS
    • C03C2217/00—Coatings on glass
    • C03C2217/40—Coatings comprising at least one inhomogeneous layer
    • C03C2217/43—Coatings comprising at least one inhomogeneous layer consisting of a dispersed phase in a continuous phase
    • C03C2217/44—Coatings comprising at least one inhomogeneous layer consisting of a dispersed phase in a continuous phase characterized by the composition of the continuous phase
    • C03C2217/445—Organic continuous phases
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C03—GLASS; MINERAL OR SLAG WOOL
    • C03C—CHEMICAL COMPOSITION OF GLASSES, GLAZES OR VITREOUS ENAMELS; SURFACE TREATMENT OF GLASS; SURFACE TREATMENT OF FIBRES OR FILAMENTS MADE FROM GLASS, MINERALS OR SLAGS; JOINING GLASS TO GLASS OR OTHER MATERIALS
    • C03C2217/00—Coatings on glass
    • C03C2217/40—Coatings comprising at least one inhomogeneous layer
    • C03C2217/43—Coatings comprising at least one inhomogeneous layer consisting of a dispersed phase in a continuous phase
    • C03C2217/46—Coatings comprising at least one inhomogeneous layer consisting of a dispersed phase in a continuous phase characterized by the dispersed phase
    • C03C2217/465—Coatings comprising at least one inhomogeneous layer consisting of a dispersed phase in a continuous phase characterized by the dispersed phase having a specific shape
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C03—GLASS; MINERAL OR SLAG WOOL
    • C03C—CHEMICAL COMPOSITION OF GLASSES, GLAZES OR VITREOUS ENAMELS; SURFACE TREATMENT OF GLASS; SURFACE TREATMENT OF FIBRES OR FILAMENTS MADE FROM GLASS, MINERALS OR SLAGS; JOINING GLASS TO GLASS OR OTHER MATERIALS
    • C03C2217/00—Coatings on glass
    • C03C2217/40—Coatings comprising at least one inhomogeneous layer
    • C03C2217/43—Coatings comprising at least one inhomogeneous layer consisting of a dispersed phase in a continuous phase
    • C03C2217/46—Coatings comprising at least one inhomogeneous layer consisting of a dispersed phase in a continuous phase characterized by the dispersed phase
    • C03C2217/47—Coatings comprising at least one inhomogeneous layer consisting of a dispersed phase in a continuous phase characterized by the dispersed phase consisting of a specific material
    • C03C2217/475—Inorganic materials
    • C03C2217/479—Metals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/71—Decreased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
    • Y02E10/00—Energy generation through renewable energy sources
    • Y02E10/50—Photovoltaic [PV] energy
    • Y02E10/52—PV systems with concentrators

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Geochemistry & Mineralogy (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Dermatology (AREA)

Description

Opis
Osnova pronalaska:
Oblast pronalaska:
[0001] Predmetno otkriće se odnosi na CD3-vezujuće molekule sposobne da se vezuju za humani i nehumani CD3, i naročito na takve molekule koji su unakrsno reaktivni sa CD3 nehumanog sisara (npr., makaki majmuna). Otkriće se takođe odnosi na upotrebe takvih antitela i antigen-vezujućih fragmenata u lečenju kancera, autoimunih i/ili inflamatornih bolesti i drugih stanja.
Opis srodnog stanja tehnike:
[0002] Imuni sistem tela služi kao odbrana protiv različitih stanja, uključujući, npr., povredu, infekciju i neoplaziju, i posredovan je preko dva posebna, ali međusobno povezana sistema: ćelijski i humoralni imuni sistem. Generalno govoreći, humoralni sistem je posredovan preko rastvorljivih proizvoda (antitela ili imunoglobulinA) koji imaju sposobnost da se kombinuju sa i neutralizuju proizvode prepoznate od strane sistema kao strane za telo. Nasuprot tome, ćelijski imuni sistem obuhvata mobilizaciju određenih ćelija, označenih terminom T ćelije, koje služe za različite terapeutske uloge. T ćelije su limfociti koji su poreklom od timusa i cirkulišu između tkiva, limfatičkog sistema i cirkulatornog sistema. One deluju protiv, ili kao odgovor na, različitih stranih struktura (antigena). U mnogim slučajevima ovi strani antigeni su eksprimirani na ćelijama domaćinima kao rezultat neoplazije ili infekcije. Iako T ćelije same po sebi ne izlučuju antitela, one su obično potrebne za izlučivanje antitela od strane druge klase limfocita, B ćelija (koje su poreklom iz koštane srži). Kritično, T ćelije ispoljavaju izvanrednu imunološku specifičnost tako da su sposobne za razlikovanje jednog antigena od drugog).
[0003] Naivna T ćelija, npr., T ćelija koja još uvek se nije susrela sa svojim specifičnim antigenom, je aktivirana kada se prvi put susretne sa specifičnim kompleksom peptida:MHC na ćeliji koja prikazuje antigen. Ćelija koja prikazuje antigen može biti B ćelija, makrofag ili dendritska ćelija. Kada se naivna T ćelija susretne sa specifičnim kompleksom peptida:MHC na ćeliji koja prikazuje antigen, signal je isporučen preko T-ćelijskog receptora koji indukuje promenu u konformaciji molekula antigena povezanih sa funkcijom T ćelijskog limfocita (LFA), i povećava njihov afinitet za intercelularne adhezione molekule (ICAMs) prisutne na površini ćelije koja prikazuje antigen. Signal generisan interakcijom T ćelije sa ćelijom koja prikazuje antigen je neophodan, ali ne dovoljan, da aktivira naivnu T ćeliju. Potreban je drugi kostimulatorni signal. Naivna T ćelija može biti aktivirana samo antigen-prikazujućom ćelijom koja nosi specifićan kompleks peptida i MHC i ko-stimulatorni molekul na svojoj površini. Prepoznavanje antigena od strane naivne T ćelije u odsustvu ko-stimulacije rezultuje u tome da T ćelija postane anergična. Potreba za dva signala za aktivaciju T ćelija i B ćelija tako da oni postižu adaptivni imuni odgovor može da obezbedi mehanizam za izbegavanje odgovora na auto-antigene koji mogu biti prisutni na antigen-prikazujućoj ćeliji na lokacijama u sistemu gde on može biti prepoznat od strane T ćelije. Tamo gde kontakt T ćelije sa antigen-prikazujućom ćelijom rezultuje u generisanju samo jednog od dva potrebna signala, T ćelija ne postaje aktivirana i adaptivni imuni odgovor se ne javlja.
[0004] Efikasnost sa kojom ljudi i ostali sisari razvijaju imunološki odgovor na patogene i strane supstance zasniva se na dve karakteristike: izuzetnoj specifičnosti imunog odgovora za prepoznavanje antigena, i imunološkoj memoriji koja omogućava brže i snažnije odgovore posle reaktivacije sa istim antigenom (Portolés, P. et al. (2009) "The TCR/CD3 Complex: Opening the Gate to Successful Vaccination," Current Pharmaceutical Design 15:3290-3300; Guy, C.S. et al. (2009) "Organization of Proximal Signal Initiation at the TCR:CD3 Complex," Immunol Rev.
232(1):7-21). Specifičnost odgovora T-ćelija je posredovana preko prepoznavanja antigena (ispoljena na antigen-prikazujućim ćelijama (APCs) pomoću molekularnog kompleksa koji uključuje T ćelijski receptor ("TCR") i ligand receptora ćelijske površine, CD3. TCR je kovalentno vezan heterodimer α i β lanaca ("TCRαβ"). Ovi lanci su membranski polipeptidi klase I od 259 (α) i 296 (β) aminokiselina u dužinu. CD3 molekul je kompleks koji sadrži CD3 γ lanac, CD3 δ lanac, i dva CD3 ε lanca povezana kao tri dimera (εγ, εδ, ζζ) (Guy, C.S. et al. (2009) "Organization of Proximal Signal Initiation at the TCR:CD3 Complex," Immunol Rev.
232(1):7-21; Call, M.E. et al. (2007) "Common Themes In The Assembly And Architecture Of Activating Immune Receptors," Nat. Rev. Immunol. 7:841-850; Weiss, A. (1993) "T Cell Antigen Receptor Signal Transduction: A Tale Of Tails And Cytoplasmic Protein-Tyrosine Kinases," Cell 73:209-212). TCR i CD3 kompleks, zajedno sa CD3 ζ lancem zeta lancem (takođe poznat kao T-ćelijski receptor T3 zeta lanac ili CD247) sadrži TCR kompleks (van der Merwe, P.A. etc. (epub Dec.3, 2010) "Mechanisms For T Cell Receptor Triggering," Nat. Rev. Immunol. 11:47-55; Wucherpfennig, K.W. et al. (2010) "Structural Biology of the T-cell Receptor: Insights into Receptor Assembly, Ligand Recognition, and Initiation of Signaling," Cold Spring Harb. Perspect. Biol.2:a005140). Kompleks je naročito značajan s obzirom na to da sadrži veliki broj (deset) aktivacionih motiva na bazi imunoreceptor tirozina (ITAMs).
[0005] U zrelim T ćelijama, aktivacija TCR/CD3 stranim antigenim peptidima povezanim sa auto-MHC molekulima je prvi korak potreban za ekspanziju antigen-specifičnih T ćelija i njihovu diferencijaciju u efektorske i memorijske T limfocite. Ovi procesi obuhvataju fosforilaciju aktivacionih motiva na bazi imunoreceptor tirozina (ITAMs) TCR kompleksa. Kako TCR kompleks ima takav veliki broj ITAMS (10 sveukupno), i ovi ITAMS su analizirani u tandemu (zbog dimerizacije gradivnih lanaca), fosforilacija relevantnih tirozinskih ostataka posle TCR ligacije stvara sparena spajajuća mesta za proteine koji sadrže Src homologne 2 (SH2) domene kao što je protein vezan za ζ lanac od 70 kDa (ZAP-70), i na taj način započinju amplifikaciju signalne kaskade što dovodi do T-ćelijske aktivacije i diferencijacije (Guy, C.S. et al. (2009) "Organization of Proximal Signal Initiation at the TCR:CD3 Complex," Immunol Rev.
232(1):7-21).
[0006] Ishod ovih postupaka je moduliran intenzitetom i kvalitetom stimulusa antigena, kao i prirodom pratećih signala isporučenih od strane ko-receptora i ko-stimulatornih površinskih molekula, ili od strane citokinskih receptora (Portolés, P. et al. (2009) "The TCR/CD3 Complex: Opening the Gate to Successful Vaccination," Current Pharmaceutical Design 15:3290-3300; Riha, P. et al. (2010) "CD28 Co-Signaling In The Adaptive Immune Response," Self/Nonself 1(3):231-240). Iako je TCR stimulacija uslov za T-ćelijsku aktivaciju, dobro je poznato da je angažovanje ko-stimulatornih molekula, kao što je CD28, neophodno za punu T-ćelijsku aktivaciju i diferencijaciju (Guy, C.S. et al. (2009) "Organization of Proximal Signal Initiation at the TCR:CD3 Complex," Immunol Rev. 232(1):7-21).
[0007] Zbog fundamentalne prirode CD3 u započinjanju anti-antigenog odgovora, monoklonska antitela protiv ovog receptora su predložena kao sposobna za blokiranje ili najmanje modulaciju imunog procesa i na taj način kao agensi za lečenje inflamatorne i/ili autoimune bolesti. Zaista, anti-CD3 antitela su bili prvo antitelo odobreno za humanu terapiju (St. Clair E.W. (2009) "Novel Targeted Therapies for Autoimmunity," Curr. Opin. Immunol. 21(6):648-657). Anti-CD3 antitelo (koje se prodaje kao ORTHOCLONE™ OKT3™ od strane Janssen-Cilag) je primenjivano za redukcijom akutnog odbacivanja kod pacijenata sa transplantima organa i kao tretman za limfoblastičnu leukemiju (Cosimi, A.B. et al. (1981) "Use Of Monoclonal Antibodies To T-Cell Subsets For Immunologic Monitoring And Treatment In Recipients Of Renal Allografts," N. Engl. J. Med. 305:308-314; Kung, P. et al. (1979) Monoclonal antibodies defining distinctive human T cell surface antigens," Science 206:347-349; Vigeral, P. et al. (1986) "Prophylactic Use Of OKT3 Monoclonal Antibody In Cadaver Kidney Recipients. Utilization Of OKT3 As The Sole Immunosuppressive Agent," Transplantation 41:730-733; Midtvedt, K. et al. (2003) "Individualized T Cell Monitored Administration Of ATG Versus OKT3 In Steroid-Resistant Kidney Graft Rejection," Clin. Transplant. 17(1):69-74; Gramatzki, M. et al. (1995) "Therapy With OKT3 Monoclonal Antibody In Refractory T Cell Acute Lymphoblastic Leukemia Induces Interleukin-2 Responsiveness," Leukemia 9(3):382-390; Herold, K.C. et al. (2002) "Anti-CD3 Monoclonal Antibody In New-Onset Type 1 Diabetes Mellitus," N. Engl. J. Med. 346:1692-1698; Cole, M.S. et al. (1997) "Human IgG2 Variants Of Chimeric Anti-CD3 Are Nonmitogenic to T cells," J. Immunol. 159(7):3613-3621; Cole, M.S. et al. (1999) "Hum291, A Humanized Anti-CD3 Antibody, Is Immunosuppressive To T Cells While Exhibiting Reduced Mitogenicity in vitro," Transplantation 68:563-571; U.S. patenti br.
6,491,916; 5,585,097 i 6,706,265).
[0008] Međutim, takav anti-CD3 tretman nije dokazan kao dovoljno specifičan za izbegavanje sporednih efekata (Ludvigsson, J. (2009) "The Role of Immunomodulation Therapy in Autoimmune Diabetes," J. Diabetes Sci. Technol. 3(2):320-330). Ponovljena dnevna primena OKT3 rezultuje u izraženoj imunosupresiji i obezbeđuje efikasan tretman odbacivanja organa posle transplantacije bubrega. In vivo primena OKT3 rezultuje u T ćelijskoj aktivaciji i supresiji imunih odgovora. Međutim, upotreba OKT3 je ometena sindromom rekacije na prvu toksičnu dozu koji je povezan sa početnim događajima T-ćelijske aktivacije i sa posledičnim oslobađanjem citokina koje se javlja pre imunosupresije T ćelijskih odgovora. Objavljeni sporedni efekti koji se javljaju posle prve i nekada druge injekcije ovog mišjeg monoklonskog antitela obuhvataju sindrom "sličan gripu" koji se sastoji od visoke temperature, drhtavice, glavobolje i gastrointestinalnih simptoma (povraćanje i dijareja) i u teškim slučajevima zabeležen je plućni edem unutar nekoliklo časova tretmana (Thistlethwaite, J.R. Jr. et al. (1988) "Complications and Monitoring of OKT3 Therapy," Am. J. Kidney Dis. 11:112-119). Veruje se da ovaj sindrom reflektuje OKT3-posredovano unakrsno vezivanje TCR/CD3 kompleksa na T ćelijskoj površini i rezultujuće oslobađanje citokina (npr., faktor alfa nekroze tumora (TNFα), interferon-γ, interleukini IL-2, IL-3, IL-4, IL-6, IL-10 i faktor stimulacije kolonije granulocitamakrofaga (Masharani, U.B. et al. (2010) "Teplizumab Therapy For Type 1 Diabetes," Expert Opin. Biol. Ther. 10(3):459-465; Abramowicz, D. et al. (1989) "Release Of Tumor Necrosis Factor, Interleukin-2, And Gamma-Interferon In Serum After Injection Of OKT3 Monoclonal Antibody In Kidney Transplant Recipients," Transplantation 47:606-608; Ferran, C. et al. (1990) "Cytokine-Related Syndrome Following Injection Of Anti-CD 3 Monoclonal Antibody: Further Evidence For Transient In Vivo T Cell Activation," Eur. J. Immunol. 20:509-515; Hirsch, R. et al. (12989) "Effects Of In Vivo Administration Of Anti-CD3 Monoclonal Antibody On T Cell Function In Mice. II. In Vivo Activation Of T Cells," J. Immunol. 142:737-743). Upotreba anti-CD3 antitela je otkriven u SAD patentima br. 7,883,703; 7,728,114; 7,635,472; 7,575,923; i 7,381,903, i u SAD patentnim objavama br. 2010/0150918; 2010/0209437; 2010/0183554; 2010/0015142, 2008/0095766, 2007/0077246 i u PCT objavi WO2008/119567.
[0009] Naročito ograničenje prethodnih antitela je njihova specifičnost samo za humani CD3. Ovo ograničenje je značajna smetnja razvoju takvih antitela kao terapeutskih sredstava za lečenje humanih bolesti. U cilju dobijanja dozvole za stavljanje u promet svaki novi kandidat leka mora da prođe kroz rigorozno testiranje. Ovo testiranje može biti dalje podeljeno u prekliničke i kliničke faze. Dok poslednja navedena faza je –dalje podeljena u generalno poznate kliničke faze I, II i III - izvedena je kod humanih pacijenata, prva je izvedena kod životinja. Cilj prekliničkog testiranja je dokazati da lek kandidat ima željenu aktivnost i najvažnije je bezbedan. Samo kada je bezbednost kod životinja i moguća efikasnost leka kandidata ustanovljena u prekliničkom testiranju ovaj lek kandidat će biti odobren za kliničko testiranje kod ljudi od strane odgovarajućeg regulatornog organa. Lekovi kandidati mogu biti testirani za bezbednost kod životinja na sledeća tri načina, (i) u relevantnoj vrsti, tj., u vrsti gde lekovi kandidati mogu da prepoznaju ortolog antigene, (ii) u transgenoj životinji koja sadrži humane antigene i (iii) upotrebom surogata za lek kandidat koji može da veže ortolog antigene prisutne u životinji. Ograničenja transgenih životinja su ta da je ova tehnologija tipično ograničena na glodare. Međutim, glodari i ljudi imaju značajne razlike u fiziologiji koje mogu da komplikuju ekstrapolaciju podataka o bezbednosti dobijenih kod glodara za predviđanje bezbednosti kod ljudi. Ograničenja surogata za lek kandidat su različit sastav materije u poređenju sa stvarnim lekom kandidatom i često životinje koje su korišćene su glodari sa ograničenjem kao što je razmatrano u prethodnom tekstu. Prema tome, preklinički podaci generisani kod glodara su od ograničene prediktivne snage u dnosu na lek kandidat. Izabrani pristup za testiranje bezbedosti je upotreba relevantne vrste, poželjno nižeg primata. Ograničenje sada CD3-vezujučih molekula pogodnih za terapeutski pronalazak kod čoveka opisano u stanju tehnike je da su relevantne vrste viši primati, naročito makaki majmuni. Prema tome, anti-CD3 antitelo sposobno za vezivanje za humani i primatski CD3 je visoko poželjno. Takva antitela su opisana u SAD patentnoj objavi br.
20100150918 i u PCT objavi WO2008/119567.
[0010] Uprkos takvom napretku, ostaje potreba za anti-humanim CD3 antitelima i njihovim antigen-vezujućim fragmentima koji su sposobni za unakrsnu reakciju sa CD3 nehumanog sisara (npr., makaki majmuna). Predmetno otkriće se odnosi na ovu potrebu i potrebu za poboljšanim terapeuticima za kancer, autoimune i inflamatorne bolesti.
Kratak opis otkrića:
[0011] Predmetno orkriće se odnosi na CD3-vezujuće molekule sposobne za vezivanje za humani i nehumani CD3, i naročito na takve molekule koji su unakrsno reaktivni sa CD3 nehumanog sisara (npr., makaki majmuna). Otkriće se takođe odnosi na upotrebe takvih antitela i antigen-vezujuće fragmente u lečenju kancera, autoimunih i/ili inflamatornih bolesti i drugih stanja.
[0012] Detaljno, pronalazak daje CD3-vezujući molekul koji sadrži antigen-vezujući fragment antitela u skladu sa patentnim zahtevom 1 ovde.
[0013] Otkriće se naročito odnosi na primer izvođenja gore opisanog CD3-vezujućeg molekula gde CD3-specifičan VL domen je h-mab2 VL-6 (SEQ ID NO:26).
[0014] Otkriće se dalje odnosi na primer izvođenja gore opisanih CD3-vezujućih molekula u kojima CD3-specifičan VH domen je h-mab2 VH-8 (SEQ ID NO:50), h-mab2 VH-6 (SEQ ID NO:46).
[0015] Otkriće se naročito odnosi na primer izvođenja gore opisanog CD3-vezujućeg molekula gde je molekul antitelo, i naročito, pri čemu antitelu nedostaje Fc region ili sadrži Fc region koji: (A) nema efektorsku funkciju ili ima redukovanu efektorsku funkciju; ili
(B) smanjuje sposobnost Fc regiona antitela da se vezuje za Fc receptor;
pri čemu je redukcija u efektorskoj funkciji i smanjenje sposobnosti vezivanja u odnosu na ono kod Fc receptora divljeg tipa.
[0016] Otkriće se dalje odnosi na primer izvođenja gore opisanih CD3-vezujućih molekula, pri čemu je molekul CD3-vezujuće diatelo koje sadrži prvi polipeptidni lanac i drugi polipeptidni lanac, pri čemu su lanci kovalentno vezani međusobno, pri čemu:
I. prvi polipeptidni lanac sadrži amino terminus i karboksi terminus i od N-terminusa do C-terminusa:
(i) domen (A) koji sadrži CD3-specifičan VL domen;
(ii) domen (B) koji sadrži vezujući region varijabilnog domena teškog lanca drugog imunoglobulina (VH2); i
(iii) domen (C);
pri čemu se domeni (A) i (B) ne vezuju međusobno tako da formiraju mesto vezivanja epitopa; i
(II) drugi polipeptidni lanac sadrži amino terminus i karboksi terminus i od N-terminusa do C-terminusa:
(i) domen (D) koji sadrži vezujući region varijabilnog domena lakog lanca drugog imunoglobulina (VL2);
(ii) domen (E) koji sadrži CD3-specifičan VH domen; i
(iii) domen (F);
pri čemu se domeni (D) i (E) ne vezuju međusobno tako da formiraju mesto vezivanja epitopa; i pri čemu:
(1) domeni (A) i (E) se vezuju tako da formiraju antigen-vezujući domen koji je sposoban da se imunospecifično vezuje za humani CD3 i za CD3 nehumanog sisara;
(2) domeni (B) i (D) se vezuju tako da formiraju mesto vezivanja koje se specifično vezuje za drugi epitop, pri čemu je drugi epitop različit od CD3 epitopa vezanog antigen-vezujućim domenom formiranim vezivanjem domena (A) i (E); i
(3) domeni (C) i (F) su kovalentno vezani zajedno.
[0017] Otkriće se dalje odnosi na primer izvođenja gore opisanih CD3-vezujućih molekula, pri čemu, drugi epitop nije epitop CD3.
[0018] Otkriće se dalje odnosi na primer izvođenja gore opisanih CD3-vezujućih molekula, pri čemu, drugi epitop je epitop CD3 koji se razlikuje od CD3 epitopa vezanog antigen-vezujućim domenom formiranim vezivanjem domena (A) i (E).
[0019] Otkriće se dalje odnosi na primer izvođenja gore opisanih CD3-vezujućih molekula ili antitela ili diatela u kojima je takav molekul humanizovan.
[0020] Otkriće se dalje odnosi na primer izvođenja gore opisanih CD3-vezujućih molekula ili antitela ili diatela u kojima je takav molekul sposoban za imunospecifično vezivanje za CD3 i za fluorescein.
[0021] Otkriće se dalje odnosi na primer izvođenja gore opisanih CD3-vezujućih molekula ili diatela u kojima je takav molekul sposoban za imunospecifično vezivanje za oba: (i) CD3 i (ii)(a) tumorski antigen ili (ii)(b) antigen, receptor ili receptor ligand na ćelijskoj površini.
[0022] Otkriće se dalje odnosi na primer izvođenja gore opisanih CD3-vezujućih molekula ili diatela u kojima je molekul ili diatelo sposobno za imunospecifično vezivanje za CD3 i za tumorski antigen eksprimiran na tumorskoj ćeliji, pri čemu, tumorska ćelija je tumorska ćelija iz kancera izabranog iz grupe koja se sastoji od: kancera dojke, kancera prostate, kancera želudca, kancera pluća, kancera stomaka, kancera debelog creva, rektalnog kancera, kancera pankreasa, kancera jetre, kancera jajnika, kancera oralne šupljine, faringealnog kancera, kancera jednjaka, kancera grkljana, kancera kosti, kancera kože, melanoma, kancera materice, testikularnog kancera, kancera bešike, kancera bubrega, kancera mozga, glioblastoma, tiroiodnog kancera, limfoma, mijeloma i leukemije.
[0023] Otkriće se dalje odnosi na primer izvođenja gore opisanih CD3-vezujućih molekula ili diatela u kojima je molekul ili diatelo sposobno za imunospecifično vezivanje za CD3 i za antigen, receptor ili receptor ligand na ćelijskoj površini, pri čemu antigen, receptor ili receptor ligand na ćelijskoj površini je HER2/neu, B7-H3, CD20, PSMA, IGF-1R., Ep-CAM ili je molekul uključen u vezu T ćelije i B ćelije koja dovodi do aktivacije T ćelije ili B ćelije u adaptivnom imunom odgovoru.
[0024] Otkriće se dalje odnosi na primer izvođenja gore opisanih CD3-vezujućih molekula ili diatela u kojima je molekul ili diatelo sposobno za imunospecifično vezivanje za CD3 i za molekul uključen u vezu T ćelije i B ćelije i molekul uključen u vezu T ćelije i B ćelije je izabran iz grupe koja se sastoji od CD19, CD20, CD22, CD23, CD27, CD32B, CD38, CD40, CD79a, CD79b, CD80, CD86, LFA-I, LFA-3 i CFA-I.
[0025] Pronalazak se dalje odnosi na farmaceutsku kompoziciju u skladu sa patentnim zahtevom 19 ovde.
[0026] Pronalazak se dalje odnosi na CD-3-vezujući molekul ili farmaceutsku kompoziciju za upotrebu u skladu sa patentnim zahtevom 20 ovde.
[0027] Otkriće se dalje odnosi na gore opisanu farmaceutsku kompoziciju za upotrebu u lečenju autoimune ili inflamatorne bolesti izabrane iz grupe koja se sastoji od: insulin-zavisnog dijabetesa tipa I, reumatoidnog artritisa, sistemskog lupus eritematozisa, multiple skleroze, inflamatorne bolesti creva, mijastenije gravis, celijačne bolesti, Sjogren-ovog sindroma, Graveove bolesti, Crohn-ove bolesti, autoimunog hepatitisa, psorijaze, psorijatičkog artritisa, astme, alergijskog rinitisa, efekata transplantacije organa ili bolesti transplanta protiv domaćina (GVHD). Otkriće se naročito odnosi na gore opisanu farmaceutsku kompoziciju za upotrebu u lečenju insulin-zavisnog dijabetesa tipa I.
Kratak opis crteža:
[0028]
Slike 1A-1B prikazuje rezultat „capture ELISA“ u kojoj je sposobnost anti-CD3 antitela mAB1 (Slika 1A) ili himernog derivata antitela mAB1 (ch-mAb1) (Slika 1B) procenjivana upotrebom humanog rastvorljivog CD3 ("shCD3").
Slike 2A-2B prikazuju rezultate „capture ELISA“ u kojoj je sposobnost anti-CD3 antitela mAB2 (Slika 2A) ili himernog derivata antitela mAB2 (ch-mAb2) (Slika 2B) procenjivana upotrebom humanog rastvorljivog CD3 ("shCD3") ili rastvorljivog CD3 makaki majmuna ("scCD3").
Slika 3 prikazuje rezultate analiza za određivanje efekta varijacija u Kabat numerisanim okvirnim ostacima 41-46 lakog lanca mAb2.
Slika 4 prikazuje rezultate analiza za određivanje efekta varijacija u Kabat numerisanim okvirnim ostacima 36, 38, 44 i 46 lakog lanca mAb2.
Slika 5 prikazuje rezultate analiza za određivanje efekta varijacija u Kabat numerisanim okvirnim ostacima 36, 38 i 46 lakog lanca mAb2.
Slika 6 prikazuje rezultate analiza za određivanje efekta varijacija u Kabat numerisanim okvirnim ostacima 30, 49 i 93 teškog lanca mAb2.
Slika 7 prikazuje rezultate dodatnih analiza izvedenih za određivanje efekta varijacija u Kabat numerisanim okvirnim ostacima 30, 49 i 93 teškog lanca mAb2.
Slike 8A-8B prikazuju rezultate analiza izvedenih za procenu sposobnosti himernog i humanizovanog mAb2 za vezivanje za nehumani CD3.
Slike 9A-9D prikazuju nacrte senzorgrama BIACORE™ analiza izvedenih za određivanje kinetike vezivanja ch-mAB2 ili h-mAb2 i scCD3 ili scCD3.
Slike 10A-10D prikazuju rezultate „capture ELISA“ izvedenih na DART™ diatelima koja imaju anti-CD3 prvo mesto vezivanja epitopa i drugo mesto vezivanja epitopa koji se vezuju za Her2/neu, CD19, EGFR ili B7-H3.
Slike 11A-11B prikazuju sposobnost B7H3 x CD3 DART™ diatela da posreduju preusmereno ubijanje tumorskih ćelija koje eksprimiraju B7H3.
Slike 12A-12E pokazuju sposobnost A33 x CD3 DART™ diatela da posreduju preusmereno ubijanje tumorskih ćelija koje eksprimiraju A33.
Slike 13A i 13B prikazuju rezultate poređenja kapaciteta CD19-h-mAb2 DART™ i CD19 x CD3 DART diatela da uzrokuju preusmereno T-ćelijski-posredovano ubijanje. CD19-h-mAb2 DART™ diatelo i ispoljava specifičnost za humani kao nehumani CD3; CD19 x CD3 DART diatelo ispoljava specifičnost samo za humani CD3. Slika 13A: preusmereno ubijanje humanih B-ćelijskih ćelija limfoma Raji; Slika 13B: preusmereno ubijanje humanih mantle ćelija limfoma JeKo-1.
Slike 14A i 14B prikazuju da je CD19-h-mAb2 DART™ diatelo predmetnog otkrića bilo sposobno da posreduje citolizu u prisustvu humanih ili nehumanih T-ćelijskih efektorskih ćelija.
Slike 15A i 15B prikazuju sposobnost ERBITUX™-h-mAb2 DART™ diatela prema predmetnom otkriću ili ERBITUX™-T-Cell Receptor DART™ diatela da posreduju povećanje u CD69 MFI posle inkubacije sa CD4+ ili CD8+ T ćelijama; Kontrolno ERBITUX™-FN18 CD3 DART™ diatelo (sposobno za vezivanje za EGFR i za CD3 makaki majmuna) nije uspelo da indukuje povećanje u CD69 MFI.
Slike 16A-16D prikazuju rezultate ispitivanja vezivanja ERBITUX™-h-mAb2 DART™ diatela, ERBITUX™-m-mAb2 DART™ diatela ili 4420-h-mAb2 DART™ diatela (negativna kontrola) ili kontrolnog sekundarnog antitela za A498 ili A431 ćelije (Slika 16A i 16C, respektivno), i posredovanja preusmerenog ubijanja takvih ćelija (Slika 16B i 16D, respektivno).
Detaljan opis otkrića:
[0029] Predmetno otkriće se odnosi na anti-humana CD3 antitela i njihove antigen-vezujuće fragmente, i naročito na takva antitela koja su unakrsno reaktivna sa CD3 nehumanog sisara (npr., makaki majmuna). Oktriće se takođe odnosi na upotrebe takvih antitela i antigen-vezujuće fragmente u lečenju kancera, autoimunih i/ili inflamatornih bolesti i ostalih stanja.
I. Definicije
[0030] Kao što je ovde korišćen, termin "CD3-vezujući molekul" označava molekul koji je sposoban za imunospecifično vezivanje za oba, humani CD3 i za CD3 nehumanog sisara preko najmanje jednog mesta prepoznavanja antigena (npr., antigen-vezujući domen antitela) lociranog u varijabilnom regionu molekula. Kao što je ovde korišćena takva sposobnost za imunospecifično vezivanje za oba, za humani CD3 i za CD3 nehumanog sisara nije određen tako da označava kapacitet jednog antigen-vezujućeg domena da se istovremeno veže za oba takva CD3 molekula, već pre da takav antigen-vezujući domen ispoljava unakrsnu reaktivnost tako da će se on imunospecifično vezati za humani CD3 kada je inkubiran u prisustvu humanog CD3 i imunospecifično će se vezati za CD3 nehumanog sisara kada je inkubiran u prisustvu takvog nehumanog sisara CD3.
[0031] Kao što je ovde korišćen, termin "CD3-vezujući molekul" obuhvata ne samo intaktna poliklonska ili monoklonska antitela, već takođe njihove fragmente (kao što su Fab, Fab', F(ab')2Fv), pojedinačni lanci (ScFv), njihovi mutanti, prirodne varijante, fuzioni proteini koji sadrže deo antigena sa mestom prepoznavanja antigena tražene specifičnosti, humanizovana antitela, himerna antitela, "BiTEs®," molekule "DART™" diatela i drugu modifikovanu konfiguraciju molekula imunoglobulina koja sadrži mesto prepoznavanja antigena tražene specifičnosti. Termin "BiTEs" (bi-specifični T-ćelijski regruteri) označava pojedinačan polipeptidni lanac koji ima dva antigen-vezujuća domena, od kojih se jedan vezuje za T-ćelijski antigen i drugi koji se vezuje za antigen prisutan na površini ciljnog mesta (WO 05/061547; Baeuerle, P et al. (2008) "BiTE®: A New Class Of Antibodies That Recruit T Cells," Drugs of the Future 33: 137-147; Bargou, et al. 2008) "Tumor Regression in Cancer Patients by Very Low Doses of a T Cell-Engaging Antibody," Science 321: 974-977).
[0032] Termin "DART™" (Preusmeravajući reagens sa dvostrukim afinitetom) diatelo označava molekul imunoglobulina koji sadrži najmanje dva polipeptidna lanca koji se vezuju (naročito preko kovalentne interakcije) tako da formiraju najmanje dva mesta vezivanja epitopa, koji mogu da prepoznaju iste ili različite epitope. Svaki od polipeptidnih lanaca DART™ diatela sadrži varijabilni region lakog lanca imunoglobulina i varijabilni region teškog lanca imunoglobulina, ali ovi regioni ne interaguju tako da formiraju mesto vezivanja epitopa. Pre, varijabilni region teškog lanca imunoglobulina jednog (npr., prvog) od polipeptidnih lanaca DART™ diatela interaguje sa varijabilnim regionom lakog lanca imunoglobulina različitog (npr., drugog) DART™ polipeptidnog lanca tako da se formira mesto vezivanja epitopa. Slično, varijabilni region lakog lanca imunoglobulina jednog (npr., prvog) od polipeptidnih lanaca DART™ diatela interaguje sa varijabilnim regionom teškog lanca imunoglobulina različitog (npr., drugog) polipeptidnog lanca DART™ diatela tako da se formira mesto vezivanja epitopa. DART™ diatela mogu biti monospecifična, bispecifična, trispecifična, itd., na taj način su sposobna da istovremeno vezuju jedan, dva, tri ili više različitih epitopa (koji mogu biti od istih ili različitih antigena). DART™ diatela mogu dodatno biti monovalentna, bivalentna, trivalentna, tetravalentna, pentavalentna, heksavelentna, itd., na taj način su sposobna da istovremeno vezuju jedan, dva, tri, četiri, pet, šest ili više molekula. Ove dve osobine DART™ diatela (tj., stepen specifičnosti i valenca se mogu kombinovati, na primer tako da se proizvedu bispecifična antitela (tj., sposobna da vezuju dva epitopa) koja su tetravalentna (tj., sposobna da vezuju četiri grupe epitopa), itd. Molekuli DART™ diatela su otkriveni u PCT objavama WO 2006/113665, WO 2008/157379 i WO 2010/080538.
[0033] Bispecifični (ili trispecifični ili multispecifični) molekuli predmetnog otikrića će biti sposobni da se vezuju za oba, humani CD3 i CD3 nehumanog sisara (npr., makaki majmuna), i takođe za drugi (ili dodatni) i različit antigen(e) ili epitop(e). Drugi antigen ili epitop je poželjno tumorski antigen eksprimiran na tumorskoj ćeliji. Takve tumorske ćelije mogu biti iz kancera, na primer, kancera dojke, kancera prostate, kancera želudca, kancera pluća, kancera stomaka, kancera debelog creva, rektalnog kancera, kancera pankreasa, kancera jetre, kancera jajnika, kancera oralne šupljine, faringealnog kancera, kancera jednjaka, kancera grkljana, kancera kosti, kancera kože, melanoma, kancera materice, testikularnog kancera, kancera bešike, kancera bubrega, kancera mozga, glioblastoma, tiroiodnog kancera, limfoma, mijeloma i leukemije. Dodatni antigeni ili epitopi su poželjno tumorski antigeni ili epitopi na ćelijskoj površini (kao što su: 17-1A, A33, antigen primarnog endoderma I adultnog eritrocita, alfa fetoprotein, antigen omotača RNK tumorskog virusa, onkofetusni antigen tumora bešike, B7-H1, B7-H2, B7-H3, B7-H4, B7-H5, B7-H6, antigen-38.13 Burkitt-ovog limfoma, CA125, CD18, CD19, antigen-CD20 humanog B-limfoma, CD22, CD33, CD44, CD52, CEA, CO17-1A, CTA-1, CTLA-4, receptor epidermalnog faktora rasta, Ep-CAM, EphA2, antigen fetusnog eritrocita I, antigen fibrosarkoma, gangliozid GD2, gangliozid GD3, gangliozid GM2, gangliozid GM3, GICA 19-9, gp IIIb/IIIa, gp72, HER1, HER-2/neu, HER3, HER4, antigen melanoma visoke molekulske mase, HLA-DR antigen, antigen-Gp37 humane T ćelije leukemije, antigen L20 humanog karcinoma pluća, antigen L6 humanog karcinoma pluća, antigen masnih globula humanog mleka, IgE, KS 1/4 pan-karcinom antigen, LEA, F3 antigen adenokarcinoma pluća, antigen-APO-1 malignog humanog limfocita, antigen gp75 melanoma, antigen p97 povezan sa melanomom, neoglikoprotein, nuC242, antigen polimerfnog epitelijalnog mucina, antigen specifičan za prostatu, membranski antigen specifičan za prostatu, kiseli fosfat prostate, SK-1 antigen, TAG-72, T-antigen, tumorski antigen CA125, tumorski antigen MUC1, tumorspecifičan antigen ćelijske površine transplantacionog tipa, vaskularni endotelijalni faktor rasta, receptor vaskularnog endotelijalnog faktora rasta i αvβ3). Alternativno, takvi dodatni antigeni ili epitopi mogu biti povezani sa patogenom (kao što je: hepatitis tipa A, hepatitis tipa B, hepatitis tipa C, influenca, varičela, adenovirus, herpes simpleks tip I (HSV-I), herpes simpleks tip II (HSV-II), rinderpest, rinovirus, ehovirus, rotavirus, respiratorni sincicijalni virus, papiloma virus, papova virus, citomegalovirus, ehinovirus, arbovirus, huntavirus, koksaki virus, virus zauški, virus malih boginja, virus rubeole, polio virus, velike boginje, Epstein Barr virus, virus humane imunodeficijencije tipa I (HIV-I), virus humane imunodeficijencije tipa II (HIV-II), virusni miningitis, virusni encefalitis, denga groznice, velikih boginja; mycobacteria rickettsia, mycoplasma, neisseria, S. pneumonia, Borrelia burgdorferi, Bacillus anthracis, Streptococcus, Staphylococcus, Mycobacterium, tetanus, veliki kašalj, kolera, kuga, difterija, hlamidija i legionela; leišmanija, kokcidioza, tripanozoma ili malarija; hlamidija ili rikecija.
[0034] Termin "monoklonsko antitelo" označava homogenu populaciju antitela u kojoj je monoklonsko antitelo sadržano od aminokiselina (prirodnih i onih koje se ne javljaju u prirodi) koje su uključene u selektivno vezivanje antigena. Monoklonska antitela su visoko specifična, usmerena su protiv jednog antigenog mesta. Termin "monoklonsko antitelo" obuhvata ne samo intaktna monoklonska antitela i monoklonska antitela pune dužine, već takođe njihove fragmente (kao što su Fab, Fab', F(ab')2 Fv), pojedinačni lanci (ScFv), njihovi mutanti, fuzioni proteini koji sadrže deo antitela, humanizovana monoklonska antitela, himerna monoklonska antitela i bilo koja druga modifikovana konfiguracija molekula imunoglobulina koja sadrži mesto prepoznavanja antigena tražene specifičnosti i sposobnost da se veže za antigen. Nije bila namera da bude ograničeno u vezi sa izvorom antitela ili načinom na koji je pripremljeno (npr., pomoću hibridoma, selekcije faga, rekombinantne eskpresije, transgenih životinja, itd.). Ovaj termin obuhvata cele imunoglobuline kao i fragmente itd. opisane u prethodnom tekstu pod definicijom "antitela."
[0035] Termin "humanizovano antitelo" označava himerni molekul, generalo pripremljen upotrebom rekombinantnih tehnika, koje ima antigen-vezujuće mesto poreklom od imunoglobulina od nehumane vrste i preostalu strukturu imunoglobulina molekula na bazi strukture i/ili sekvence humanog imunoglobulina. Antigen-vezujuće mesto može da sadrži kompletne varijabilne domene fuzionisane na konstantne domene ili samo regione koji određuju komplementarnost (CDRs) nasađene na odgovarajuće okvirne regione u varijabilnim domenima. Antigen-vezujuća mesta mogu biti divljeg tipa ili modifikovana pomoću jedne ili više aminokiselinskih supstitucija. Ovo eliminiše konstantni region kao imunogen u humanim individuama, ali ostaje mogućnost imunog odgovora na strani varijabilni region (LoBuglio, A.F. et al. (1989) "Mouse/Human Chimeric Monoclonal Antibody In Man: Kinetics And Immune Response," Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 86:4220-4224). Sledeći pristup se fokusira ne samo na obezbeđivanje konstantnih regiona poreklom od čoveka, već modifikaciju varijabilnih regiona kao i na njihovo preoblikovanje što je moguće bliže humanom obliku. Poznato je da varijabilni regioni teških i lakih lanaca sadrže tri regiona koji određuju komplementarnost (CDRs) koji variraju u odgovoru na dotične antigene i određuju sposobnost vezivanja, flankiranih sa četiri okvirna regiona (FRs) koji su relativno konzervativni u datoj vrsti i koji navodno obezbeđuju osnovu za CDR regione. Kada su nehumana antitela pripremljena u odnosu na određeni antigen, varijabilni regioni mogu biti "preoblikovani" ili "humanizovani" nasađivanjem CDR regiona poreklom od nehumanog antitela na FR regione prisutne u humanom antitelu koje se modifikuje. Primena ovog pristupa na različita antitela je objavljena od strane Sato, K. et al. (1993) Cancer Res 53:851-856. Riechmann, L. et al. (1988) "Reshaping Human Antibodies for Therapy," Nature 332:323-327; Verhoeyen, M. et al. (1988) "Reshaping Human Antibodies: Grafting An Antilysozyme Activity," Science 239:1534-1536; Kettleborough, C. A. et al. (1991) "Humanization Of A Mouse Monoclonal Antibody By CDR-Grafting: The Importance Of Framework Residues On Loop Conformation," Protein Engineering 4:773-3783; Maeda, H. et al. (1991) "Construction Of Reshaped Human Antibodies With HIV-Neutralizing Activity," Human Antibodies Hybridoma 2:124-134; Gorman, S. D. et al. (1991) "Reshaping A Therapeutic CD4 Antibody," Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 88:4181-4185; Tempest, P.R. et al. (1991) "Reshaping A Human Monoclonal Antibody To Inhibit Human Respiratory Syncytial Virus Infection in vivo," Bio/Technology 9:266-271; Co, M. S. et al. (1991) "Humanized Antibodies For Antiviral Therapy," Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 88:2869-2873; Carter, P. et al. (1992) "Humanization Of An Anti-p185her2 Antibody For Human Cancer Therapy," Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 89:4285-4289; and Co, M.S. et al. (1992) "Chimeric And Humanized Antibodies With Specificity For The CD33 Antigen," J. Immunol. 148:1149-1154.
[0036] U nekim primerima izvođenja, humanizovana antitela čuvaju sve CDR sekvence (na primer, humanizovano mišje antitelo koje sadrži svih šest CDR regiona iz mišjih antitela). U drugim primerima izvođenja, humanizovana antitela imaju jedan ili više CDR regiona (jedan, dva, tri, četiri, pet, šest) koji su promenjeni u odnosu na originalno antitelo, koji su takođe označeni terminom jedan ili više CDR regiona "poreklom od" jednog ili više CDR regiona iz originalnog antitela. Kao što su otkrivena u daljem tekstu, poželjna antitela predmetnog otkrića imaju specifične identifikovane CDR regione. Predmetno otkriće, međutim, razmatra ekvivalentna antitela koja imaju promenjene CDR regione.
[0037] Kao što je ovde korišćeno, antitelo ili polipeptid koje je određeno tako da je "imunospecifično" ili ekvivalentno, "specifično" vezuje region drugog molekula (tj., epitop) ako reaguje ili se vezuje češće, brže, duže i/ili sa većim afinitetom sa tim epitom u odnosu na alternativne epitope. Na primer, antitelo koje se specifično vezuje za CD3 epitop je antitelo koje vezuje ovaj CD3 epitop sa većim afinitetom, aviditetom, lakše, i/ili duže nego što se vezuje za druge CD3 epitope ili ne-CD3 epitope. Čitanjem ove definicije se takođe razume da, na primer, antitelo (ili grupa ili epitop) koje se imunospecifično vezuje za prvo ciljno mesto može ili ne mora specifično ili preferencijalno da se veže za drugo ciljno mesto. Kao takvo, "imunospecifično vezivanje" ne zahteva neophodno (iako može da obuhvata) "isključivo" vezivanje. Generalno, ali ne neophodno, pozivanje na vezivanje označava "imunospecifično" vezivanje.
[0038] Kao što je ovde korišćen, termin "imunološki aktivan" u vezi sa epitopom koji je ili koji "ostaje imunološki aktivan" označava sposobnost antitela (npr., anti-CD3 antitela) da se veže za epitop pod različitim uslovima, na primer, pošto je epitop podvrgnut redukujućim i denaturacionim uslovima. Na primer, ako antitelo nije više sposobno da veže denaturisani epitop, taj epitop se označava kao napravljen imunološki neaktivan.
[0039] Različite biološke funkcije su povezane sa anti-CD3 antitelima prema predmetnom otkriću, i takva antitela mogu da ispoljavaju bilo koje ili sve od sledećih svojstava, ili mogu da im nedostaju, jedno, dva, tri ili više takvih svojstava: sposobnost da specifično vezuju humani CD3 kao endogeno eksprimiran na površini normalne humane T ćelije; sposobnost za specifično vezivanje humanog CD3 kao endogeno eksprimiranog na površini humane leukemijske T ćelije; sposobnost za specifično vezivanje za CD3 nehumanog sisara (npr., makaki majmuna) kao endogeno eksprimiranog na površini normalne nehumane sisarske T ćelije; sposobnost za specifično vezivanje nehumanog CD3 kao endogeno eksprimiranog na površini normalne nehumane T ćelije; sposobnost za specifično vezivanje nehumanog CD3 kao endogeno eksprimiranog na površini nehumane leukemijske T ćelije; sposobnost za neutralizaciju (tj., blokadu ili ometanje vezivanja) formiranja CD3 kompleksa; sposobnost za neutralizaciju formiranja TCR kompleksa; sposobnost za modulaciju (antagonistički ili agonistički) prenosa signala preko TCR kompleksa; sposobnost da vezuju Fc receptor; sposobnost za kompetitivnu inhibiciju preferencijalnog vezivanja poznatog anti-CD3 antitela za CD3, uključujući sposobnost za preferencijalno vezivanje za isti CD3 epitop za koji se originalno antitelo preferencijalno vezuje; sposobost za vezivanje za deo CD3 koji je izložen na površini žive ćelije in vitro ili in vivo; sposobnost da vezuje deo CD3 koji je izložen na površini žive ćelije kancera; sposobnost da isporuči hemoterapeutsko sredstvo u kanceroznu T ćeliju; i/ili sposobnost za isporuku terapeutskog sredstva, toksina ili detektabilnog markera u T ćeliju. Kao što je ovde razmatrano, polipeptidi (uključujući antitela) otkrića može imati bilo koju ili više ovih karakteristika.
[0040] Kao što je ovde korišćen, termin "sredstvo" označava biološko, farmaceutsko ili hemijsko jedinjenje. Neograničavajući primeri obuhvataju prost ili složen organski ili neorganski molekul, peptid, protein, oligonukleotid, antitelo, derivat antitela, fragment antitela, derivat vitamina, ugljeni hidrat, toksin, ili hemoterapeutsko sredstvo. Različita jedinjenja mogu biti sintetisana, na primer, mali molekuli i oligomeri (npr., oligopeptidi i oligonukleotidi), i sintetička organska jedinjenja na bazi različitih struktura jezgra. Pored toga, različiti nacionalni izvori mogu da obezbede jedinjenja za skrining, kao što su biljni ili životinjski ekstrakti i slično. Sredstva koja se koriste u postupcima ovde mogu biti izabrana po slučajnom izboru ili racionalno izabrana ili dizajnirana. Kao što je ovde korišćeno, sredstvo je određeno kao izabrano po slučajnom izboru kada je sredstvo izabrano bez prethodnog razmatranja ili znanja specifične aminokiseline ili drugih hemijskih grupa uključenih u vezu molekula sa njegovim nativnim vezujućim partnerom(ima) ili poznatim antitelima. Primer sredstva izabranog po slučajnom izboru je sredstvo koje je identifikovano preko upotrebe i skrininga hemijske biblioteke ili peptidne kombinatorne biblioteke. Kao što je ovde korišćeno, sredstvo je određeno kao racionalno izabrano ili dizajnirano kada je sredstvo izabrano na neslučajnoj bazi koja uzima u obzir sekvencu ciljnog mesta i/ili njenu konformaciju u vezi sa aktivnošću sredstva. Sredstva mogu biti racionalno izabrana ili racionalno dizajnirana upotrebom peptidnih sekvenci koje grade kontaktna mesta receptora /liganda i/ili complex CD3/anti-CD3 antitela. Na primer, racionalno izabrano peptidno sredstvo može biti peptid čija je aminokiselinska sekvenca identična epitopu koji se javlja na CD3 kako je on izložen na površini žive ćelije u njegovoj nativnoj sredini. Takvo sredstvo će redukovati ili blokirati vezu anti-CD3 antitela sa CD3, ili vezu CD3 sa njegovim nativnim ligandom, kako je poželjno, vezivanjem za anti-CD3 antitelo ili za nativni ligand.
[0041] Kao što je ovde korišćen, termin "obeležen," u vezi sa antitelom, je određen tako da obuhvata direktno obeležavanje antitela spajanjem (tj., fizičkim vezivanjem) detektabilne supstance, kao što je radioaktivno sredstvo ili fluorofora (npr. fikoeritrin (PE) ili fluorescein izotiocijanat (takođe poznat kao fluoroizotiocijanat ili FITC)) za antitelo, kao i indirektno obeležavanje probe ili antitela preko reaktivnosti sa detektabilnom supstancom.
[0042] Kao što je ovde korišćen, termin "veza," u vezi sa antitelom, obuhvata kovalentnu ili nekovalentnu vezu ili vezivanje sredstva (npr., hemoterapeutskog sredstva) za antitelo. Antitelo može biti vezano sa sredstvom (npr., hemoterapeutskim sredstvom) direktnim vezivanjem ili indirektnim vezivanjem preko vezivanja za zajedničku platformu, tako da antitelo usmerava lokalizaciju sredstva za kanceroznu ćeliju za koju se natitelo vezuje i pri čemu se antitelo i sredstvo nevezuju značajno pod fiziološkim uslovima tako da sredstvo nije usmereno na istu kanceroznu ćeliju za koju se antitelo vezuje ili tako da potencija sredstva nije smanjena.
[0043] Termin "biološki uzorak" obuhvata niz različitih tipova uzoraka dobijenih od individue i može se koristiti u dijagnostičkoj ili monitoring analizi. Definicija obuhvata pljuvačku, krv ili druge tečne uzorke biološkog porekla, uzorke čvrstog tkiva kao što je uzorak biopsije ili kulture tkiva ili ćelije poreklom od njih, i njihovo potomstvo, na primer, ćelije dobijene iz uzorka tkiva sakupljenog iz individue za koju se sumnja da ima kancer, u poželjnim primerima izvođenja iz tkiva jajnika, pluća, prostate, pankreasa, debelog creva i dojke. Definicija takođe obuhvata uzorke koji su manipulisani na bilo koji način posle njihove nabavke, kao što je tretmanom sa reagensima, solubilizacijom ili obogaćenjem za određene komponente, kao što su proteini ili polinukleotidi, ili kalupljenjem u polu-čvrst ili čvrst matriks za svrhe sečenja. Termin "biološki uzorak" obuhvata klinički uzorak, i takođe obuhvata ćelije u kulturi, ćelijske supernatante, ćelijske lizate, serum, plazmu, biološku tečnost i uzorke tkiva.
[0044] Termin "ćelija domaćin" obuhvata individualnu ćeliju ili ćelijsku kulturu koja može biti ili je primalac vektora (jednog ili više) za ugradnju polinukleotidnih inserata. Ćelije domaćini obuhvataju potomstvo jedne ćelije domaćina, i potomstvo ne mora biti potpuno identično (u morfologiji ili u komplementu genomske DNK) sa originalnom matičnom ćelijom kao posledica prirodne, slučajne ili namerne mutacije. Ćelija domaćin obuhvata ćelije transficirane in vivo sa polinukleotidom (polinukletidima) ovog otkrića.
[0045] Kao što je ovde korišćena, "efikasna količina" farmaceutske kompozicije, u jednom primeru izvođenja, je količina koja je dovoljna za postizanje korisnih ili željenih rezultata uključujući, bez ograničenja, kliničke rezultate kao što su skupljanje veličine ili stope rasta tumora, odlaganje ili slabljenje inflamatorne reakcije, povećanje kvaliteta života onih koji pate od bolesti, smanjenje doze drugih lekova potrebnih za lečenje takve bolesti, pojačanje efekta drugog leka klao što je preko ciljnog delovanja i/ili internalizacije, odlaganje napredovanja bolesti i/ ili produženje preživljavanja individua. Takva efikasna količina može biti primenjena u jednoj ili više primena. Za svrhe ovog pronalaska, efikasna količina leka, jedinjenja ili farmaceutske kompozicije je količina dovoljna za ublažavanje stanja koje se klinički može primetiti.
[0046] U nekim primerima izvođenja, efikasna količina leka, jedinjenja, ili farmaceutske kompozicije može ili ne mora biti postignuta u vezi sa drugim lekom, jedinjenjem ili farmaceutskom kompozicijom. Na taj način, "efikasna količina" može se razmatrati u kontekstu primene jednog ili više dodatnih sredstava, i jedno sredstvo može se razmatrati tako da se daje u efikasnoj količini ako, zajedno sa jednim ili više drugih sredstava, željeni rezultat može biti ili je postignut. Dok pojedinačne potrebe variraju, određivanje optimalnih opsega efikasnih količina svake komponente je unutar znanja stručnjaka iz date oblasti tehnike. Tipična doza primenjena na pacijenta je tipično 0.0001 mg/kg do 100 mg/kg telesne težine pacijenta. Poželjno, doza primenjena na pacijenta je između 0.0001 mg/kg i 20 mg/kg, 0.0001 mg/kg i 10 mg/kg, 0.0001 mg/kg i 5 mg/kg, 0.0001 i 2 mg/kg, 0.0001 i 1 mg/kg, 0.0001 mg/kg i 0.75 mg/kg, 0.0001 mg/kg i 0.5 mg/kg, 0.0001 mg/kg do 0.25 mg/kg, 0.0001 do 0.15 mg/kg, 0.0001 do 0.10 mg/kg, 0.001 do 0.5 mg/kg, 0.01 do 0.25 mg/kg ili 0.01 do 0.10 mg/kg telesne težine pacijenta. Doza i učestalost primene molekula otkrića mogu biti smanjene ili promenjene pojačanjem unosa i prodiranja u tkrivo molekula prema otkriću preko modifikacija kao što je, na primer, lipidacija.
[0047] Kao što je ovde korišćen, molekul nukleinske kiseline ili sredstvo, antitelo, kompozicija ili ćelija, itd., određen je kao "izolovan" kada je taj molekul nukleinske kiseline, sredstvo, antitelo, kompozicija ili ćelija, itd. značajno odvojen od kontaminirajućih molekula nukleinske kiseline, antitela, sredstava, kompozicija, ili ćelija, itd. koji su prirodno prisutni u svom originalnom izvoru.
[0048] Termin "individua/pojedinačan" označava životinju kičmenjaka, poželjno sisara. Sisari obuhvataju, ali bez ograničenja na, ljude, životinje sa farmi, sportske životinje, kućne ljubimce, primate, miševe i pacove. U najpoželjnijem primeru izvođenja, termin individua označava čoveka.
[0049] Termini "polipeptid," "oligopeptid," "peptid" i "protein" su korišćeni naizmenično ovde za označavanje polimera aminokiselina bilo koje dužine. Polimer može biti linearni ili granati, on može da sadrži modifikovane aminokiseline, i može biti tumačen preko neaminokiselina. Ovi termini takođe obuhvataju aminokiselinski polimer koji je modifikovan prirodno ili preko intervencije; na primer, formiranja disulfidne veze, glikozilacije, lipidacije, acetilacije, fosforilacije ili bilo koje druge manipulacije ili modifikacije, kao što je konjugacija sa obeležavajućom komponentom. Unutar definicije su takođe uključeni, na primer, polipeptidi koji sadrže jedan ili više analoga aminokiseline (uključujući, na primer, neprirodne aminokiseline, itd.), kao i druge modifikacije poznate u stanju tehnike. Razume se da, kako su polipeptidi ovog otkrića bazirani na antitelu, polpeptidi mogu da se jave kao pojedinačni lanci ili kao vezani lanci.
[0050] Kao što je ovde korišćen, termin "značajno čist" označava materijal koji je najmanje 50% čist (tj., bez zagađivača), poželjnije najmanje 90 % čist, poželjnije najmanje 95% čist, poželjnije najmanje 98% čist, poželjnije najmanje 99% čist i najpoželjnije više od 99% čist.
[0051] Kao što je ovde korišćen, termin "toksin" označava bilo koju supstancu koja postiže štetan odgovor unutar ćelije. Na primer, toksin usmeren na kanceroznu ćeliju bi imao štetan, nekada štetan efekat, na kanceroznu ćeliju. Primeri toksina obuhvataju, ali bez ograničenja na, taksan, majtanzinoid, auristatin (npr., monometil auristatin (MMAE), monometil auristatin F (MMAF), auristatin E (AE), itd.) (kao što su oni otkriveni u SAD patentima br. 5,208,020; 5,416,064; 6,333,410; 6,340,701; 6,372,738; 6,436,931; 6,441,163; 6,596,757; 7,276,497; 7,585,857; ili 7,851,432), kaliheamicin, antraciklin (npr., doksorubicin), CC-1065 analog, docetaksel; katepsin B ili E; ricin, gelonin, Pseudomonas egzotoksin, toksin difterije i RNaza; radioaktivno obeležena antitela (npr., tiuksetan-konjugovan ili obeležen toksičnim radioizotopom (na primer, 90Y; 131I, 177Lu, 186Re, 188Re, 211At, 212Bi, 213Bi, 225Ac, itd.).
[0052] Kao što su ovde korišćeni, termini "tretman" ili "lečenje" označavaju pristup za dobijanje korisnog ili željenog rezultata uključujući i poželjno korisnog ili željenog kliničkog rezultata. Takvi korisni ili željeni klinički rezultati obuhvataju, ali bez ograničenja na, jedan ili više od sledećih: redukciju inflamacije ili autoimunog odgovora, redukciju proliferacije (ili uništavanja) kanceroznih ćelija ili ostalih obolelih ćelija, redukciju kanceroznih ćelija nađenih u kancerima, sakupljanje veličine tumora, smanjenje simptoma koji su rezultat bolest, povećanje kvaliteta života onih koji pate od bolesti, smanjenje doze drugih lekova potrebih za lečenje bolesti, odlaganje napredovanja bolesti i/ili produženje preživljavanja individua.
II. Postupci za pripremu antitela i polipeptida predmetnog otkrića
[0053] Postupci za pripremu monoklonskih antitela su poznati u stanju tehnike. Jedan postupak koji može biti korišćen je postupak od Kohler, G. et al. (1975) "Continuous Cultures Of Fused Cells Secreting Antibody Of Predefined Specificity," Nature 256:495-497 ili njegova modifikacija. Tipično, monoklonska antitela su razvijena u nehumanih vrstama, kao što su miševi. Uopšteno, miš ili pacov je korišćen za imunizaciju, ali druge životinje takođe mogu biti korišćene. Antitela su proizvedena imunizacijom miševa imunogenom količinom ćelija, ćelijskih ekstrakata, ili proteinskih preparata koji sadrže humani CD3. Imunogen može biti, ali bez ograničenja na, primarne ćelije, kultivisane ćelijske linije, kancerozne ćelije, nukleinske kiseline ili tkivo.
[0054] U jednom primeru izvođenja, monoklonska antitela koaj se vezuju za CD3 su dobijena upotrebom ćelija domaćina koje prekomerno eksprimiraju CD3 kao imunogen. Takve ćelije obuhvataju, na primer i bez ograničenja, humane T ćelije.
[0055] Za praćenje odgovora antitela, mali biološki uzorak (npr., krv) mže biti dobijen iz životinje i testiran za titar antitela protiv imunogena. Slezina i/ili nekoliko velikih limfnih čvorova mogu biti uklonjeni i disocirani u pojedinačne ćelije. Ako je poželjno, može biti izvršen skrining ćelija slezine (posle uklanjanja nespecifično prijanjajućih ćelija) nanošenjem ćelijske suspenzije na ploču ili na zid obložen antigenom. B-ćelije, koje eksprimiraju imunoglobulin vezan za membranu specifičan za antigen, vezivaće se za ploču, i nisu isprane sa ostatkom suspenzije. Rezultujuće B-ćelije, ili sve disocirane ćelije slezine, mogu zatim biti fuzionisane sa ćelijama mijeloma (npr., X63- Ag8.653 i one iz Salk Institute, Cell Distribution Center, San Diego, CA). Polietilen glikol (PEG) se može koristiti za fuzionisanje ćelija slezine i limfocita sa ćelijama mijeloma tako da se formira hibridom. Hibridom je zatim kultivisan u selektivnom medijumu (npr., hipoksantin, aminopterin, timidinski medijum, inače poznat kao "HAT medijum"). Rezultujući hibridomi su zatim postavljeni na ploču pomoću ograničenog razblaženja, i analizirani su za proizvodnju antitela koja se specifično vezuju za imunogen, upotrebom, na primer, FACS (fluorescencijom aktivirano sortiranje ćelija) ili imunohistohemijski (IHC) skrining. Izabrani hibridomi koji izlučuju monoklonsko antitelo su zatim kultivisani in vitro (npr., u bocama kulture tkive ili reaktorima sa šupljim vlaknima), ili in vivo (npr., kao asciti kod miševa).
[0056] Kao sledeća alternativa tehnici fuzije ćelija, Epstein-Barr Virusom (EBV)-imortalizovane B ćelije mogu biti korišćene za proizvodnju monoklonskih antitela subjekta. Hibridomi su prošireni i subklonirani, ako je poželjno, i supernatanti su analizirani za anti-imunogenu aktivnost pomoću konvencionalnih postupaka analize (npr., FACS, IHC, radioimunološka analiza, enzimska imunološka analiza, fluorescentna imunološka analiza, itd.).
[0057] U sledećoj alternativi, anti-CD3 monoklonsko antitelo i bilo koja druga ekvivalentna antitela mogu biti sekvencirani i proizvedeni rekombinantno pomoću bilo kojih načina poznatih u stanju tehnike (npr., humanizacija, upotreba transgenih miševa za proizvodnju poptuno humanih antitela, tehnologija fagnog prikaza, itd.). U jednom primeru izvođenja, anti-CD3 monoklonsko antitelo je sekvencirano i polinukleotidna sekvenca je zatim klonirana u vektor za ekspresiju ili umnožavanje. Sekvenca koja kodira antitelo od interesa može biti održavana u vektoru u ćeliji domaćinu i ćelija domaćin zatim može biti proširena i zamrznuta za buduću upotrebu.
[0058] Polinukleotidna sekvenca anti-CD3 monoklonskog antitela i bilo kojih drugih ekvivalentnih antitela može se koristiti za genetičku manipulaciju za generisanje "humanizovanog" antitela, za poboljšanje afiniteta, ili ostalih karakteristika antitela. Opšti princip u humanizaciji antitela obuhvata zadržavanje bazne sekvence antigen-vezujućeg dela antitela, uz zamenu nehumanog ostatka antitela sa sekvencama humanog antitela. Postoje četiri opšta koraka za humanizaciju monoklonskog antitela. To su: (1) određivanje nukleotida i predviđene aminokiselinske sekvence početnih varijabilnih domena lakog i teškog lanca antitela (2) dizajniranje humanizovanog antitela, tj., odlučivanje koji okvirni region antitela bi rebalo koristiti za upotrebu u toku postupka humanizacije (3) stvarne metodologije /tehnike humanizacije i (4) transfekcija i ekspresija humanizovanog antitela. Videti, na primer, SAD patenti br.4,816,567; 5,807,715; 5,866,692; i 6,331,415.
[0059] Opisan je određeni broj "humanizovanih" molekula antitela koji sadrže antigen-vezujuće mesto poreklom od nehumanog imunoglobulina, uključujući himerna antitela koja imaju glodarske ili modifikovane glodarske V regione i njihove povezane regione koji određuju komplementarnost (CDRs) fuzionisane za humane konstantne domene (videti, na primer, Winter et al. (1991) "Man-made Antibodies," Nature 349:293-299; Lobuglio et al. (1989) "Mouse/Human Chimeric Monoclonal Antibody In Man: Kinetics And Immune Response," Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 86:4220-4224 (1989), Shaw et al. (1987) "Characterization Of A Mouse/Human Chimeric Monoclonal Antibody (17-1A) To A Colon Cancer Tumor-Associated Antigen," J. Immunol. 138:4534-4538, and Brown et al. (1987) "Tumor-Specific Genetically Engineered Murine/Human Chimeric Monoclonal Antibody," Cancer Res. 47:3577-3583). Ostale reference opisuju glodarske CDR regione nasađene u humani potporni okvirni region (FR) pre fuzije sa odgovarajućim konstantnim domenom humanog antitela (videti, na primer, Riechmann, L. et al. (1988) "Reshaping Human Antibodies for Therapy," Nature 332:323-327; Verhoeyen, M. et al. (1988) "Reshaping Human Antibodies: Grafting An Antilysozyme Activity," Science 239:1534-1536; and Jones et al. (1986) "Replacing The Complementarity-Determining Regions In A Human Antibody With Those From A Mouse," Nature 321:522-525). Sledeća referenca opisuje glodarske CDR regione sa potporom od rekombinantno maskiranih glodarskih okvirnih regiona. Videti, na primer, evropsku patentnu objavu br. 519,596. Ovi "humanizovani" molekuli su dizajnirani tako da minimizuju neželjeni imunološki odgovor prema glodarskim anti-humanim molekulima antitela, koji ograničava trajanje i efikasnost terapeutskih primena tih grupa kod humanih primaoca. Ostali postupci humanizacije antitela koji mogu takođe biti korišćeni su otkriveni od strane Daugherty et al. (1991) "Polymerase Chain Reaction Facilitates The Cloning, CDR-Grafting, And Rapid Expression Of A Murine Monoclonal Antibody Directed Against The CD18 Component Of Leukocyte Integrins," Nucl. Acids Res.
19:2471-2476 i u SAD patentima br.6,180,377; 6,054,297; 5,997,867; i 5,866,692.
[0060] Otkriće takođe obuhvata jednolančane fragmente varijabilnog regiona ("scFv") antitela ovog otkrića, kao što je mu-anti-CD3. Jednolančani fragmenti varijabilnog regiona su pripremljeni vezivanjem varijabilnih regiona lakog i / ili teškog lanca upotrebom kratkog vezujućeg peptida. Bird et al. (1988) ("Single-Chain Antigen-Binding Proteins," Science 242:423-426) opisuju primer vezujućih peptida koji premošćuju približno 3.5 nm između karboksi terminusa jednog varijabilnog regiona i amino terminusa drugog varijabilnog regiona. Linkeri ostalih sekvenci su dizajnirani i korišćeni (Bird et al. (1988) "Single-Chain Antigen-Binding Proteins," Science 242:423-426). Linkeri mogu zatim biti modifikovani za dodatne funkcije, kao što je vezivanje lekova ili vezivanje za čvrste podloge. Jednolančane varijante mogu biti proizvedene rekombinantno ili sintetički. Za sintetičku proizvodnju scFv, može se koristiti automatski sintetizator. Za rekombinantnu proizvodnju scFv, pogodan plazmid koji sadrži polinukleotid koji kodira scFv može biti uveden u pogodnu ćeliju domaćina, eukariotsku, kao što su ćelije kvasca, biljne, insekata ili sisarske ćelije, ili prokariotsku, kao što je E. coli. Polinukleotidi koji kodiraju scFv od interesa mogu biti pripremljeni rutinskim manipulacijama kao što je ligacija polinukleotida. Rezultirajući scFv može biti izolovan upotrebom standardnih tehnika prečišćavanja proteina poznatih u stanju tehnike.
[0061] Otkriće obuhvata modifikacije anti-CD3 antitela i njihovih vezujućih fragmenata. Modifikacija polipeptida je rutinska praksa u stanju tehnike i ne treba je ovde detaljno opisivati. Primeri modifikovanih polipeptida obuhvataju polipeptide sa konzervativnim supstitucijama aminokiselinskih ostataka, jednu ili više delecija ili adicija aminokiselina koje značajno štetno ne menjaju funkcionalnu aktivnost ili upotrebu hemijskih analoga. Aminokiselinski ostaci koji mogu biti konzervativno supstituisani međusobno obuhvataju, ali bez ograničenja na: glicin/alanin; valin/izoleucin/leucin; asparagin/glutamin; asparaginsku kiselinu/glutaminsku kiselinu; serin/treonin; lizin/arginin; i fenilalanin/tirozin. Ovi polipeptidi takođe obuhvataju glikozilovane i neglikozilovane polipeptide, kao i polipeptide sa drugim post-translacionim modifikacijama, kao što su, na primer, glikozilacija sa različitim šećerima, acetilacija i fosforilacija. Poželjno, aminokiselinske supstitucije bi bile konzervativne, tj., supstituisana aminokiselina bi posedovala slične hemijske osobine kao one od originalne aminokiseline. Takve konzervativne supstitucije su poznate u stanju tehnike, i primeri su dati u prethodnom tekstu. Aminokiselinske modifikacije mogu biti u opsegu od promene ili modifikacije jedne ili više aminokiselina do potpunog redizajna regiona, kao što je varijabilni region. Promene u varijabilnom regionu mogu da promene afinitet i/ili specifičnost vezivanja. Ostali postupci modifikacije obuhvataju upotrebu kuplujućih tehnika poznatih u stanju tehnike, uključujući, ali bez ograničenja na, enzimatske načine, oksidativnu supstituciju i helaciju. Modifikacije mogu biti korišćene, na primer, za vezivanje obeleživača za imunološku analizu, kao što je vezivanje radioaktivnih grupa za radioimunološku analizu. Modifikovani polipeptidi su pripremljeni upotrebom ustanovljenih postupaka u stanju tehnike i može biti izvršen njihov skrining upotrebom standardnih analiza poznatih u stanju tehnike.
[0062] Činjenica da promena jedne aminokiseline CDR ostatka može da rezultuje u gibitku funkcionalnog vezivanja (Rudikoff, S. etc. (1982) "Single Amino Acid Substitution Altering Antigen-Binding Specificity," Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 79(6):1979-1983) daje način za sistematsku identifikaciju alternativnih funkcionalnih CDR sekvenci. U jednom poželjnom postupku za dobijanje takvih varijantnih CDR regiona, polinukleotid koji kodira CDR je mutagenizovan (na primer preko slučajne mutageneze ili pomoću postupka usmerenog na mesto (npr., amplifikacija posredovana preko lanca polimeraze sa prajmerima koji kodiraju mutirani lokus)) za proizvodnju CDR koji ima supstituisani aminokiselinski ostatak. Poređenjem identiteta relevantnog ostatka u originalnoj (funkcionalnoj) CDR sekvenci sa identitetom supstituisane (nefunkcionalne) varijante CDR sekvence, može biti identifikovana BLOSUM62.iij oscena supstitucije za tu supstituciju. BLOSUM sistem daje matricu aminokiselinskih supstitucija stvorenu analizom baze podataka sekvenci za odobrena poravnanja (Eddy, S.R. (2004) "Where Did The BLOSUM62 Alignment Score Matrix Come From?," Nature Biotech. 22(8):1035-1036; Henikoff, J.G. (1992) "Amino acid substitution matrices from protein blocks," Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 89:10915-10919; Karlin, S. et al. (1990) "Methods For Assessing The Statistical Significance Of Molecular Sequence Features By Using General Scoring Schemes," Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 87:2264-2268; Altschul, S.F. (1991) "Amino Acid Substitution Matrices From An Information Theoretic Perspective," J. Mol. Biol.219, 555565. Trenutno, najnaprednija BLOSUM baza podataka je BLOSUM62 baza podataka (BLOSUM62.iij). Tabela 1 predstavlja BLOSUM62.iij ocene supstitucije (što je viša ocena to je više konzervativnih supstitucija i na taj način veća je verovatnoća da supstitucija neće uticati na funkciju). Ako antigen-vezujući fragment koji sadrži rezultujući CDR ne uspeva da se veže za CD3, tada se BLOSUM62.iij ocena supstitucije smatra nedovoljno konzervativnom, i izabrana i proizvedena je nova kandidat supstitucija koja ima višu ocenu supstitucije. Na taj način, na primer, ako je originalni ostatak bio glutamat (E), i nefunkcionalni supstituišući ostatak je histidin (H), tada će BLOSUM62.iij ocena supstitucije biti 0, i poželjne su konzervativnije promene (kao što su u aspartat, asparagin, glutamin ili lizin).
[0063] Slučajna mutageneza može biti korišćena za identifikaciju poboljšanih CDR regiona. Tehnologija fagnog prikaza može alternativno biti korišćena za povećanje (ili smanjenje) CDR afiniteta. Ova tehnologija, označena kao afinitetno sazrevanje, koristi mutagenezu ili "postupak kretanja kroz CDR" i ponovna selekcija koristi ciljni antigen ili njegov antigeni fragment za identifikaciju antitela koja imaju CDR regione koji se vezuju sa višim (ili nižim) afinitetom za antigen u poređenju sa početnim ili matičnim antitelom (Videti, npr. Glaser et al. (1992) J. Immunology 149:3903). Mutageneza celih kodona pre nego pojedinačnih nukleotida rezultuje u polu-randomizovanom repertoaru aminokiselinskih supstitucija. Mogu biti konstruisane biblioteke pula varijanti klonova od kojih se svaki razlikuje u jednoj aminokiselinskoj promeni u jednom CDR i koje sadrže varijante koje predstavljaju svaku moguću aminokiselinsku supstituciju za svaki CDR ostatak. Mutanti sa povećanim (ili smanjenim) vezujućim afinitetom za antigen mogu biti ispitivani dovođenjem u dodir imobilizovanih mutanata sa obeleženim antigenom. Bilo koji postupak skrininga poznat u stanju tehnike može biti korišćen za identifikaciju mutantnih antitela sa povećanim ili smanjenim afinitetom za antigen (npr., ELISA) (See Wu et al. 1998, Proc Natl. Acad Sci. USA 95:6037; Yelton et al., 1995, J. Immunology 155:1994). Može biti korišćen postupak kretanja kroz CDR koji randomizuje laki lanac (videti Schier et al., 1996, J. Mol. Bio.263:551).
[0064] Postupci za postizanje takvog afinitetnog sazrevanja opisani su na primer u: Krause, J.C. et al. (2011) "An Insertion Mutation That Distorts Antibody Binding Site Architecture Enhances Function Of A Human Antibody," MBio. 2(1) pii: e00345-10. doi: 10.1128/mBio.00345-10; Kuan, C.T. et al. (2010) "Affinity-Matured Anti-Glycoprotein NMB Recombinant Immunotoxins Targeting Malignant Gliomas And Melanomas," Int. J. Cancer 10.1002/ijc.25645; Hackel, B.J. et al. (2010) "Stability And CDR Composition Biases Enrich Binder Functionality Landscapes," J. Mol. Biol. 401(1):84-96; Montgomery, D.L. et al. (2009) "Affinity Maturation And Characterization Of A Human Monoclonal Antibody Against HIV-1 gp41," MAbs 1(5):462-474; Gustchina, E. et al. (2009) "Affinity Maturation By Targeted Diversification Of The CDR-H2 Loop Of A Monoclonal Fab Derived From A Synthetic Naive Human Antibody Library And Directed Against The Internal Trimeric Coiled-Coil Of Gp41 Yields A Set Of Fabs With Improved HIV-1 Neutralization Potency And Breadth," Virology 393(1):112-119; Finlay, W.J. et al. (2009) "Affinity Maturation Of A Humanized Rat Antibody For Anti-RAGE Therapy: Comprehensive Mutagenesis Reveals A High Level Of Mutational Plasticity Both Inside And Outside The Complementarity-Determining Regions," J. Mol. Biol.388(3):541-558; Bostrom, J. et al. (2009) "Improving Antibody Binding Affinity And Specificity For Therapeutic Development," Methods Mol. Biol. 525:353-376; Steidl, S. et al. (2008) "In Vitro Affinity Maturation Of Human GM-CSF Antibodies By Targeted CDR-Diversification," Mol. Immunol.
46(1):135-144; i Barderas, R. et al. (2008) "Affinity maturation of antibodies assisted by in silico modeling," Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 105(26):9029-9034. U poželjnom primeru izvođenja, višekomorne ploče mogu biti obložene sa izabranim CD3 antitelom (npr., 100 ng/komorici u karbonatnom puferu na sobnoj temperaturi u trajanju od 2 časa) i kasnije inkubirane sa rastvorljivim CD3 dodatim u razblaženju od 1/10 i inkubirane na sobnoj temperaturi u trajanju od 16 časova ili razblažene do koncentracije od 50 ng/ml u PBS-T-BSA (0.05 ml dodato u svaku komoricu i inkubirano najmanje 2 časa na sobnoj temperaturi). Ploča je zatim isprana i razblaženja rekombinantnih antitela počevši na 0.5 µg/ml u PBS-T-BSA su zatim dodati i inkubirani u trajanju od 1 časa na sobnoj temp. Vezivanje rekombinantnih antitela za uhvaćeni antigen je zatim mereno upotrebom, na primer, anti-humanog IgG-HRP konjugata i TMB supstrata. Posle zaustavljanja razvijanja boje upotrebom razblažene sumporne kiseline, ploča je očitavana na 450 nM i identifikovana su antitela sa višim afinitetom (videti, npr., SAD patent br.
7,351,803).
[0065] Otkriće obuhvata polipeptide koji sadrže aminokiselinsku sekvencu antitela ovog otkrića. Polipeptidi ovog otkrića mogu biti pripremljeni pomoću postupaka poznatih u stanju tehnike. Polipeptidi mogu biti proizvedeni pomoću proteolotičkog ili drugog razlaganja antitela, pomoću rekombinantnih postupaka (tj., pojedinačnih ili fuzionih polipeptida) kao što su opisani u prethodnom tekstu ili pomoću hemijske sinteze. Polipeptidi antitela, naročito kraći polipeptidi do oko 50 aminokiselina, su povoljno pripremljeni pomoću hemijske sinteze. Postupci za hemijsku sintezu su poznati u stanju tehnike i komercijalno su dostupni. Na primer, anti-CD3 polipeptid bi mogao biti proizveden pomoću automatskog polipeptidnog sintetizera upotrebom postupka čvrste faze.
[0066] Otkriće takođe obuhvata fuzione proteine koji sadrže jedan ili više fragmenata ili regiona iz polipeptida i antitela ovog otkrića. U jednom primeru izvođenja, obezbeđen je fuzioni polipeptid koji sadrži najmanje 10 kontinuiranih aminokiselina varijabilnog regiona lakog lanca i najmanje 10 aminokiselina varijabilnog regiona teškog lanca. U sledećem primeru izvođenja, fuzioni polipeptid sadrži heterologni konstantni region imunoglobulina. U sledećem primeru izvođenja, fuzioni polipeptid sadrži varijabilni region lakog lanca i varijabilni region teškog lanca antitela proizvedenog od javno deponovanog hibridoma. Za svrhe ovog otkrića, fuzioni protein antitela sadrži jedan ili više polipeptidnih domena koji se specifično vezuju za CD3 i drugu aminokiselinsku sekvencu za koju nije vezan u nativnom molekulu, na primer, heterolognu sekvencu ili homologu sekvencu iz drugog regiona.
[0067] Anti-CD3 polipeptid i drugi agonisti, antagonisti i modulatori CD3 mogu biti stvoreni pomoću postupaka poznatih u stanju tehnike, na primer, sintetički ili rekombinantno. Jedan postupak za proizvodnju takvih molekula obuhvata hemijsku sintezu polipeptida, praćen tretmanom pod oksidacionim uslovima odgovarajućim za dobijanje nativne konfiguracije, to jest, ispravnih disulfidnih veza. Ovo se može postići upotrebom metodologija dobro poznatih stručnjacima iz date oblasti tehnike (videti, npr., Kelley, R. F. et al. (1990) In: GENETIC ENGINEERING PRINCIPLES AND METHODS, Setlow, J.K. Ed., Plenum Press, N.Y., vol.
12, pp 1-19; Stewart, J.M et al. (1984) SOLID PHASE PEPTIDE SYNTHESIS, Pierce Chemical Co., Rockford, IL; videti takođe SAD patente br. 4,105,603; 3,972,859; 3,842,067; i 3,862,925).
[0068] Polipeptidi otkrića mogu biti povoljno pripremljeni upotrebom peptidne sinteze čvrste faze (Merrifield, B. (1986) "Solid Phase Synthesis," Science 232(4748):341-347; Houghten, R.A. (1985) "General Method For The Rapid Solid-Phase Synthesis Of Large Numbers Of Peptides: Specificity Of Antigen-Antibody Interaction At The Level Of Individual Amino Acids," Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 82(15):5131-5135; Ganesan, A. (2006) "Solid-Phase Synthesis In The Twenty-First Century," Mini Rev. Med. Chem. 6(1):3-10).
[0069] U sledećoj alternativi, potpuno humana antitela se mogu dobiti preko upotrebe komercijalno dostupnih miševa koji su konstruisani tako da eksprimiraju specifične humane imunoglobulinske proteine. Transgene životinje su dizajnirane tako da proizvode poželjniji (npr., potpuno humana antitela) ili jači imuni odgovor takođe može biti korišćen za stvaranje humanizovanih ili humanih antitela. Primeri takve tehnologije su XENOMOUSE™ (Abgenix, Inc., Fremont, CA) i HUMAB-MOUSE® i TC MOUSE™ (oba iz Medarex, Inc., Princeton, NJ).
[0070] Alternativno, antitela mogu biti pripremljena rekombinantno i eksprimirano upotrebom bilo kog postupka poznatog u stanju tehnike. Antitela mogu biti pripremljena rekombinantno prvo izolacijom antitela napravljenih iz životinja domaćina, dobijajući gensku sekvencu, i upotrebom genske sekvence za ekspresiju antitela rekombinantno u ćelijama domaćinima (npr., CHO ćelija). Sledeći postupak koji može biti korišćen je ekspresija sekvence antitela u biljkama {npr., duvanu) ili transgenom mleku. Otkriveni su pogodni postupci za ekspresiju antitela rekombinantno u biljkama ili mleku (videti, na primer, Peeters et al. (2001) "Production Of Antibodies And Antibody Fragments In Plants," Vaccine 19:2756; Lonberg, N. et al. (1995) "Human Antibodies From Transgenic Mice," Int. Rev. Immunol 13:65-93; i Pollock et al. (1999) "Transgenic Milk As A Method For The Production Of Recombinant Antibodies," J. Immunol Methods 231:147-157). Pogodni postupci pripreme derivata antitela, npr., humanizovanog, jednog lanca, itd. poznati su u stanju tehnike. U sledećoj alternativi, antitela mogu biti pripremljena rekombinantno pomoću tehnologije fagnog prikaza (videti, na primer, SAD patenti br. 5,565,332; 5,580,717; 5,733,743; 6,265,150; i Winter, G. et al. (1994) "Making Antibodies By Phage Display Technology," Annu. Rev. Immunol. 12.433-455).
[0071] Antitela ili protein od interesa mogu biti podvrgnuti sekvenciranju pomoću Edman razlaganja, koji je dobro poznat stručnjacima iz date oblasti tehnike. Peptidna informacija generisana iz masene spektrometrije ili Edman razlaganja može biti korišćena za dizajniranje proba ili prajmera koji su korišćeni za kloniranje proteina od interesa.
[0072] Alternativan postupak za kloniranje proteina od interesa je putem "paninga" upotrebom prečišćenog CD3 ili njegovih delova za ćelije koje eksprimiraju antitelo ili protein od interesa. Postupak "paninga" može biti izveden dobijanjem cDNK biblioteke iz tkiva ili ćelija koji eksprimiraju CD3, prekomerno eksprimiraju cDNK u drugom ćelijskom tipu i skriningom transficiranih ćelija drugog ćelijskog tipa za specifično vezivanje za CD3. Detaljni opisi postupaka korišćenih u kloniranju sisarskih gena koji kodiraju za proteine na ćelijskoj površini putem "paninga" mogu se naći u stanju tehnike (videti, na primer, Aruffo, A. et al. (1987) "Molecular Cloning Of A CD28 cDNK By A High-Efficiency COS Cell Expression System," Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 84:8573-8577 i Stephan, J. et al. (1999) "Selective Cloning Of Cell Surface Proteins Involved In Organ Development: Epithelial Glycoprotein Is Involved In Normal Epithelial Differentiation," Endocrinol.140:5841-5854).
[0073] cDNK koje kodiraju anti-CD3 antitela, i ostali agonisti, antagonisti i modulatori CD3 peptida mogu se dobiti pomoću reverzne transkripcije iRNK iz određenog ćelijskog tipa prema standardnim postupcima u stanju tehnike. Specifično, iRNK se može izolovati upotrebom različitih litičkih enzima ili hemijskih rastvora prema postupcima navedenim u, na primer, MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, Third Edition (Sambrook et al. Eds., 2001) Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY) ili ekstrahovanjem upotrebom komercijalno dostupnih smola koje vezuju nukleinske kiseline prema pratećim uputstvima obezbeđenim od strane proizvođača (npr., Qiagen, Invitrogen, Promega). Sintetisane cDNK mogu zatim biti uvedene u ekspresioni vektor za proizvodnju antitela ili proteina od interesa u ćelijama drugog tipa. Podrazumeva se da ekspresioni vektor mora biti replikabilan u ćelijama domaćinima kao epizom ili kao integralni deo hromozomalne DNK. Pogodni ekspresioni vektori obuhvataju, ali nisu ograničeni na plazmide, virusne vektore, uključujući adenoviruse, adenovezane viruse, retroviruse i kozmide.
[0074] Vektori koji sadrže polinukleotide od interesa mogu biti uvedeni u ćeliju domaćina pomoću bilo kog od određenog broja odgovarajućih načina, uključujući elektroporaciju, transfekciju koja koristi kalcijum hlorid, rubidijum hlorid, kalcijum fosfat, DEAE- dekstran ili ostale supstance; bombardovanje mikroprojektilima; lipofekciju; i infekciju (npr., gde je vektor infektivni agens kao što je vakcinija virus). Izbor vektora ili polinukleotida za uvođenje često će zavisiti od karakteristika ćelije domaćina.
[0075] Bilo koje ćelije domaćini sposobne za prekomernu ekspresiju heterolognih DNK mogu se koristiti za svrhu izolacije gena koji kodiraju antitelo, polipeptid ili protein od interesa. Neograničavajući primeri pogodnih sisarskih ćelija domaćina obuhvataju, ali bez ograničenja na COS, HeLa i CHO ćelije. Poželjno, ćelije domaćini eksprimiraju cDNK na nivou od oko 5-puta više, poželjnije 10-puta više, čak poželjnije 20-puta više nego odgovarajućeg endogenog antitela ili proteina od interesa, ako je prisutan, u ćelijama domaćinima. Skrining ćelija domaćina za specifično vezivanje za CD3 je postignut imunološkom analizom ili FACS. Može se identifikovati ćelija koja prekomerno eksprimira antitelo ili protein od interesa.
III. Postupci za skrining polipeptida i monoklonskih antitela
[0076] Nekoliko postupaka može biti korišćeno za skrining polipetida i monoklonskih antitela koji se vezuju za CD3. Razume se da se "vezivanje" označava biološki ili imunološki relevantno specifično vezivanje, i ne označava nespecifično vezivanje koje može da se javi, na primer, kada je imunoglobulin korišćen na veoma visokoj koncentraciji protiv ne-specifičnog ciljnog mesta. U jednom primeru izvođenja, monoklonska antitela su ispitivana za vezivanje za CD3 upotrebom standardnih tehnika skrininga. Na ovaj način, dobijeno je anti-CD3 monoklonsko antitelo. Poželjni hibridomi su oni koji proizvode antitela mAb1 i mAb2, ili njihove himerne ili humanizovane derivate. Međutim, mogu biti identifikovana dodatna monoklonska antitela koja se vezuju za CD3. Za ovu svrhu, monoklonska antitela su ispitivana za njihovu diferencijalnu sposobnost da se vezuju za humani CD3 kao i CD3 primata.
[0077] Bilo koji od nekoliko različitih detekcionih sistema može se koristiti za detekciju vezivanja antitela za isečak tkiva. Tipično, imunohistohemija obuhvata vezivanje primarnog antitela za tkivo i zatim sekundarno antitelo reaktivno protiv vrste iz primarnog antitela je generisano i konjugovano za detektabilni marker (npr., renova peroksidaza (HRP), ili diaminobenzedin (DAB)). Jedan alternativni postupak koji se može koristiti su poliklonska komplementarna antitela koja predstavljaju odraz u ogledalu ili polyMICA™ (polyclonal Mirror Image Complementary Antibodies; The Binding Site Limited, Birmingham, UK; Mangham, D.C. et al. (1999) "A Novel Immunohistochemical Detection System Using Mirror Image Complementary Antibodies (MICA)," Histopathology 35(2):129-33). PolyMICA™ tehnika se može koristiti za testiranje vezivanja primarnih antitela (npr., anti-CD3 antitela) za normalno i kancerozno tkivo. Nekoliko vrsta polyMICA™ detekcionih kompleta su komercijalno dostupni: proizvod br. HK004.D je polyMICA™ detekcioni komplet koji koristiti DAB hromagen; proizvod br. HK004.A je polyMICA™ detekcioni komplet koji koristiti AEC hromagen. Alternativno, primarno antitelo može biti direktno obeleženo detektabilnim markerom.
IV. Postupci za karakterizaciju anti-CD3 antitela
[0078] Bilo koji od nekoliko postupaka se može koristiti za karakterizaciju anti-CD3 antitela. Jedan postupak je identifikacija epitopa za koji se vezuje. Mapiranje epitopa je komercijalno dostupno iz različitih izvora, na primer, Pepscan Systems (Lelystad, The Netherlands). Mapiranje epitopa se može koristiti za određivanje sekvence za koju se vezuje anti-CD3 antitelo. Epitop može biti linearni epitop, tj., sadržan u jednom nizu aminokiselina, ili konformacioni epitop formiran pomoću trodimenzionalne interakcije aminokiselina koje ne moraju neophodno biti sadržane u jednom nizu.
[0079] Peptidi različite dužine (npr., poželjno dužine najmanje 4-6 aminokiselina) mogu biti izolovani ili sintetisani {npr., rekombinantno) i korišćeni za analize vezivanja sa anti-CD3 antitelom. Epitop za koji se anti-CD3 antitelo vezuje može biti određen u sistematskom skriningu upotrebom preklapajućih peptida poreklom od ekstracelularne sekvence i određivanjem vezivanja pomoću anti-CD3 antitela.
[0080] Sledeći postupak koji se može koristiti za karakterizaciju anti-CD3 antitela je upotreba kompetitivnih analiza sa drugim antitelima za koje je poznato da se vezuju za isti antigen, tj., CD3 za određivanje da li se anti-CD3 antitela vezuju za isti epitop kao ostala antitela. Primeri komercijalno dostupnih antitela za CD3 mogu biti dostupni i mogu biti identifikovani upotrebom analiza vezivanja navedenih u njima. Kompetitivne analize su dobro poznate stručnjaku iz date oblasti tehnike, i takvi postupci i ilustrativni podaci su dodatno detaljno opisani u Primerima. Anti-CD3 antitela mogu biti dalje okarakterisana tkivima, tipom kancera ili tipom tumora za koji se vezuju.
V. Poželjne kompozicije predmetnog otkrića
[0081] Predmetno otkriće obuhvata kompozicije, uključujući farmaceutske kompozicije, koje sadrže anti-CD3 antitela, polipeptide poreklom od anti-CD3 antitela, polinukleotide koji sadrže sekvencu koja kodira anti-CD3 antitela i ostala sredstva kao što su ovde opisana. Otkriće dalje daje konjugate bilo kog agonista, antagonista ili modulatora CD3 peptida, i dodatne hemijske strukture koje podržavaju određenu funkciju ili funkcije određenog agonista, antagonista ili modulatora CD3 peptida. Ovi konjugati obuhvataju agonist, antagonist ili modulator CD3 peptida kovalentno vezan za makromolekul kao što je bilo koja nerastvorljiva, čvrsta potporna matrica korišćena u dijagnostičkim postupcima, postupcima skrininga ili prečšćavanja koji su razmatrani ovde. Pogodni matrijali matrice obuhvataju bilo koju supstancu koja je hemijski inertna, ima visoku poroznost i ima veliki broj funkcionalnih grupa sposobnih za formiranje kovalentnih veza sa peptidnim ligandima. Primeri materijala matrice i postupci za pripremu konjugata matrice-liganda opisani su u Dean et al. (Eds) AFFINITY CHROMATOGRAPHY: A PRACTICAL APPROACH, IRL Press (1985); Lowe, "An Introduction to Affinity Chromatography", in Work et al. (eds) LABORATORY TECHNIQUES IN BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY, Vol. 7, Part II, North-Holland (1979); Porath et al., "Biospecific Affinity Chromatography", in Neurath, H. et al. (eds), THE PROTEINS, 3rd ed., Vol. 1, pp.95-178 (1975); i Schott, H. AFFINITY CHROMATOGRAPHY, Macel Dekker, Inc. NY (1984).
[0082] Ove su takođe obezbeđeni konjugati agonista, antagonista ili modulatora CD3 peptida i bilo koja reporter grupa korišćena u dijagnostičkim postupcima razmatranim ovde. Agonistički, antagonistički ili modulatorni agensi, polipeptidi ili proteini CD3 peptida ovog otkrića, uključujući anti-CD3 antitela, su dalje identifikovani i okartakterisani bilo kojim (jednim ili više) od sledećih kriterijuma:
(1) sposobnost da specifično vežu humani CD3 kao endogeno eksprimiran na površini normalne humane T ćelije;
(2) sposobnost da specifično vežu humani CD3 kao endogeno eksprimiran na površini humane leukemijske T ćelije;
(3) sposobnost da specifično vežu nehumani CD3 (npr., CD3 makaki majmuna) kao endogeno eksprimiran na površini normalne nehumane T ćelije;
(4) sposobnost da specifično vežu nehumani CD3 kao endogeno eksprimiran na površini nehumane leukemijske T ćelije;
(5) sposobnost da neutralizuju (tj., blokiraju ili ometaju vezivanje) formiranje CD3 kompleksa; sposobnost da neutralizuju formiranje TCR kompleksa;
(6) sposobnost da moduliraju (bilo antagonistički ili agonistički) prenos signala preko TCR kompleksa;
(7) sposobnost da vezuju Fc receptor;
(8) sposobnost da kompetitivno inhibira preferencijalno vezivanje poznatog anti-CD3 antitela za CD3, uključujući sposobnost da se preferencijalno vezuje za isti CD3 epitop za koji se preferencijalno vezuje originalno antitelo;
(9) sposobnost da se vezuju za deo CD3 koji je izložen na površini žive ćelije in vitro ili in vivo; sposobnost da se vezuju za deo CD3 koji je izložen na površini žive ćelije kancera;
(10) sposobnost da isporuče hemoterapeutsko sredstvo u kanceroznu T ćeliju; i/ili
(11) sposobnost da isporuče terapeutsko sredstvo, toksin ili detektabilni marker u T ćeliju.
[0083] Poželjno antitelo otkrića će ispoljiti diferencijalno IHC bojenje tumorskog tkiva u odnosu na normalno, nekancerozno tkivo, i pored toga će biti sposobno za testiranje efikasnosti antitela u modelima primata (i naročito majmuna). Poželjna antitela predmetnog otkrića će dodatno ispoljiti poželjne nivoe afiniteta i specifičnost antigena. Poželjna antitela prema predmetnom otkriću će dodatno ispoljiti poželjne nivoe imunomodulatorne aktivnosti i ćelijske internalizacije.
[0084] U nekim primerima izvođenja, antitelo otkrića je antitelo koje je proizvedeno pomoću hibridoma mAb1 ili hibridoma mAb2, koji respektivno eksprimiraju mišje antitelo mAb1 i mišje antitelo mAb2, ili njegovo potomstvo. Predmetno otkriće takođe obuhvata različite formulacije antitela proizvedenih pomoću ovih hibridoma i ekvivalentnih antitela ili polipeptidnih fragmenata (npr., Fab, Fab', F(ab')2 Fv, Fc, itd.), himernih antitela, pojedinačnog lanca (scFv), njihovih mutanata, fuzionih proteina koji sadrže deo antitela, humanizovana antitela, i bilo koje druge modifikovane konfiguracije bilo kog od ovih ili ekvivalentnih antitela koja sadrže mesto prepoznavanja antigena (CD3) tražene specifičnosti. Otkriće takođe daje humana antitela koja ispoljavaju jednu ili više od bioloških karakteristika člana anti-CD3 familije. Ekvivalentna antitela anti-CD3 familije (uključujući humanizovana antitela i humana antitela), polipeptidni fragmenti i polipeptidi koji sadrže bilo koji od ovih fragmenata su identifikovani i okarakterisani pomoću bilo kog (jednog ili više) od kriterijuma opisanih u prethodnom tekstu.
[0085] Prema tome, otkriće daje bilo koji od sledećih (ili kompozicije, uključujući farmaceutske kompozicije, koje sadrže bilo koji od sledećih): (a) antitelo proizvedeno od strane ćelije domaćina ili njegovog potomstva; (b) humanizovani oblik takvog antitela; (c) antitelo koje sadrži jedan ili više varijabilnih regiona lakog lanca i /ili teškog lanca takvog antitela; (d) himerno antitelo koje sadrži varijabilne regione homologe ili poreklom od varijabilnih regiona teškog lanca i lakog lanca takvog antitela, i konstantne regione homologe ili poreklom od konstantnih regiona teškog lanca i lakog lanca humanog antitela; (e) antitelo koje sadrži jedan ili vše CDR regiona lakog lanca i/ili teškog lanca (najmanje jedan, dva, tri, četiri, pet ili šest) od takvog antitela; (f) antitelo koje sadrži težak i/ili lak lanac takvog antitela; (g) humano antitelo koje je ekvivalentno takvom antitelu. Humanizovani oblik antitela može ili ne mora da ima CDR regione identične originalnom antitelu ili antitelu proizvedenom od strane ćelije domaćina identifikovane u prethodnom tekstu. Određivanje CDR regiona je unutar znanja stručnjaka iz date oblasti tehnike. Ostali primeri izvođenja obuhvataju antitela koja imaju najmanje dva, tri, četiri, pet ili šest CDR regiona koji su značajno homologi sa najmanje dva, tri, četiri, pet ili šest CDR regiona antitela proizvedenih iz hibridoma deponovanog kao što je ovde identifikovano, ili poreklom od takvog antitela. Razume se da, za svrhe ovog otkrića, specifičnost vezivanja i/ili ukupna aktivnost je generalno zadržana, iako stepen aktivnosti može da varira u poređenju sa antitelom proizvedenim pomoću deponovanog hibridoma (može biti veći ili manji). Postupci za pripremu antitela su poznati u stanju tehnke i opisani su ovde.
[0086] Otkriće takođe daje polipeptide koji sadrže aminokiselinsku sekvencu antitela prema otkriću. U nekim primerima izvođenja, polipeptid sadrži jedan ili više varijabilnih regiona lakog lanca i/ili teškog lanca antitela. U nekim primerima izvođenja, polipeptid sadrži jedan ili više CDR regiona lakog lanca i/ili teškog lanca antitela. U nekim primerima izvođenja, polipeptid sadrži tri CDR regiona lakog lanca i/ili teškog lanca antitela. U nekim primerima izvođenja, polipeptid sadrži aminokiselinsku sekvencu antitela koja ima bilo šta od sledećeg: najmanje 5 kontinuiranih aminokiselina sekvence originalnog antitela, najmanje 8 kontinuiranih aminokiselina, najmanje oko 10 kontinuiranih aminokiselina, najmanje oko 15 kontinuiranih aminokiselina, najmanje oko 20 kontinuiranih aminokiselina, najmanje oko 25 kontinuiranih aminokiselina, najmanje oko 30 kontinuiranih aminokiselina, pri čemu najmanje 3 aminokiselina su iz varijabilnog regiona antitela. U jednom primeru izvođenja, varijabilni region je iz lakog lanca originalnog antitela. U sledećem primeru izvođenja, varijabilni region je iz teškog lanca antitela. U sledećem primeru izvođenja, 5 (ili više) kontinuiranih aminokiselina su iz regiona koji određuje komplementarnost (CDR) antitela.
[0087] Ćelije koje eksprimiraju CD3, deo CD3, anti-CD3 antitela ili drugi CD3-vezujući polipeptidi ovog otkrića mogu biti primenjivani direktno na individuu za modulaciju in vivo biološke aktivnosti CD3.
[0088] Poželjna anti-CD3 antitela predmetnog pronalaska su mAb1 i mAb2, i njihovi humanizovani ili himerni derivati i antigen-vezujući fragmenti koji su reaktivni prema humanom i makaki CD3 molekulu. Aminokiselinske i kodirajuće polinukleotidne sekvence varijabilnog lakog lanca i varijabilnog teškog lanca mišjih antitela mAb1 i mAb2 prikazane su u daljem tekstu. Sekvence CDR regiona ilustrativnih antitela (mAb1 i mAb2) prikazane su u boldu i podvučene.
A. Sekvence varijabilnih regiona mišjeg monoklonskog antitela mAb1
[0089] Aminokiselinska sekvenca varijabilnog lakog lanca mišjeg monoklonskog antitela mAb1 (SEQ ID NO:1):
[0090] Polinukleotidna sekvenca koja kodira varijabilni laki lanac mišjeg monoklonskog antitela mAb1 (SEQ ID NO:2):
[0091] Aminokiselinska sekvenca varijabilnog teškog lanca mišjeg monoklonskog antitela mAb1 (SEQ ID NO:3):
[0092] Polinukleotidna sekvenca koja kodira varijabilni težak lanac mišjeg monoklonskog antitela mAb1 (SEQ ID NO:4):
B. Sekvence varijabilnih regiona mišjeg monoklonskog antitela mAb2
[0093] Aminokiselinska sekvenca varijabilnog lakog lanca mišjeg monoklonskog antitela mAb2 (SEQ ID NO:5):
[0094] Polinukleotidna sekvenca koja kodira varijabilni laki lanac mišjeg monoklonskog antitela
[0095] Aminokiselinska sekvenca varijabilnog teškog lanca mišjeg monoklonskog antitela mAb2 (SEQ ID NO:7):
[0096] Polinukleotidna sekvenca koja kodira varijabilni težak lanac mišjeg monoklonskog antitela mAb2 (SEQ ID NO:8):
[0097] Položaj 40 teškog lanca je visoko afinitetni „sidro“ ostatak vezujućeg peptida MHC klase. Položaji 44, 48, 54, 94, 99 i 108 teškog lanca su umereno afinitetni „sidro“ ostaci vezujućeg peptida MHC klase II. Položaj 69 lakog lanca je visoko afinitetni „sidro“ ostatak vezujućeg peptida MHC klase II. Položaj 59 lakog lanca je umereno afinitetni „sidro“ ostatak vezujućeg peptida MHC klase II. Ovi ostaci mogu biti supstituisani, upotrebom standardnih tehnika molekularne biologije, u ostatak u cilju redukcije ili uklanjanja mesta prepoznavanja MHC klase II.
C. Fc-konstruisana CD3 antitela
[0098] U tradicionalnoj imunoj funkciji, interakcija kompleksa antitela-antigena sa ćelijama imunog sistema rezultuje u širokom nizu odgovora, u opsegu od efektornih funkcija kao što je citotoksičnost zavisna od antitela, degranulacija mastocita i fagocitoza do imunomodulatornih signala kao što je proliferacija regulatornih limfocita i izlučivanje antitela. Sve ove interakcije su započete preko vezivanja Fc domena antitela ili imunih kompleksa za specijalizovane receptore na ćelijskoj površini hematopoetskih ćelija. Diverzitet ćelijskih odgovora pokrenutih preko antitela i imunih kompleksa rezultuje iz strukturne heterogenosti tri Fc receptora: FcγRI (CD64), FcγRII (CD32) i FcγRIII (CD16). FcγRI (CD64), FcγRIIA (CD32A) i FcγRIII (CD16) su aktivirajući (tj., pojačavaju imuni sistem) receptori; FcγRIIB (CD32B) je inhibitorni (tj., suprimira imuni sistem) receptor. Aminokiselinska sekvenca Fc regiona IgG1 je prikazan u daljem tekstu (kao SEQ ID NO:9, numerisana prema Kabat et al., SEQUENCE OF PROTEINS OF IMMUNOLOGICAL INTEREST, 5th Ed. Public Health Service, NIH, MD (1991), u daljem tekstu označen kao "Kabat EU"). Ostaci 230-341 su Fc CH2 region. Ostaci 342-447 su Fc CH3 region:
SEQ ID NO:9
[0099] S obzirom na to da su Fc receptor (FcR)-ne-vezujuća CD3-specifična antitela minimalno depletirajuća, predloženo je da ona mogu da promene TCR signale na način koji bi mogao da indukuje imunu toleranciju (St. Clair E.W. (2009) "Novel Targeted Therapies for Autoimmunity," Curr. Opin. Immunol. 21(6):648-657). Na taj način, takva terapija ima potencijalnu primenu u lečenju autoimune bolesti i odbacivanja transplantiranog tkiva protiv domaćina. FcR ne-vezujuća CD3-specifična antitela su takođe postulirana za indukciju remisije u toleranciji dijabetes melitusa tipa 1 (St. Clair E.W. (2009) "Novel Targeted Therapies for Autoimmunity," Curr. Opin. Immunol. 21(6):648-657; Masharani, U.B. et al. (2010) "Teplizumab Therapy For Type 1 Diabetes," Expert Opin. Biol. Ther. 10(3):459-465).
[0100] Predmetno otkriće na taj način obuhvata antitela koja se specifično vezuju za CD3 koja sadrže varijantu Fc regiona koja ima Fc regione koji su modifikovani (npr., supstitucije, delecije, insercije u jednom ili više delova) tako da je nesposobno ili manje sposobno da se veže za Fc receptor (u odnosu na antitelo koje ima iste CDR regione, ali Fc region divljeg tipa).
[0101] U jednom primeru izvođenja, takva antitela će biti nesposobna za vezivanje za bilo koji Fc receptor. Alternativno, Fc region antitela će biti modifikovan tako da mu se dozoli da se veže za Fc receptore kao što je FcγRIIB koji su inhibitorni, ali ne za Fc receptore kao što je FcγRIIA, FcγRIIIA ili FcγRIIIB koji stimulišu aktivaciju imunog sistema.
[0102] Poželjno, vezujuće osobine molekula otkrića su okarakterisane pomoću in vitro funkcionalnih analiza za određivanje jedne ili više funkcija FcyR medijatorskih efektorskih ćelija. Afiniteti i vezujuće osobine molekula, npr., antitela, otkrića za FcγR mogu biti određeni upotrebom in vitro analiza (biohemijske i imunološke analize) poznatih u stanju tehnike za određivanje interakcija antitelo-antigen ili Fc-FcγR, tj., specifičnog vezivanja antigena za antitelo ili specifičnog vezivanja Fc regiona za FcγR, respektivno, uključujući, ali bez ograničenja na ELISA analizu, analizu površinske plazmon rezonance, imunoprecipitacione analize. U najpoželjnijim primerima izvođenja, molekuli otkrića imaju slične vezujuće osobine u in vivo modelima (kao što su oni opisani i otkriveni ovde) kao oni u in vitro analizama. Međutim, predmetno otkriće ne isključuje molekule otkrića koji ne ispoljavaju željeni fenotip u in vitro analizama, ali koji ispoljavaju željeni fenotip in vivo.
[0103] U nekim primerima izvođenja, molekuli otkrića koji sadrže varijantu Fc regiona sarže najmanje jednu aminokiselinsku modifikaciju (na primer, poseduju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili više aminokiselinskih modifikacija) u CH3 domenu Fc regiona, koja je definisana kao produženje od aminokiselina 342-447. U drugim primerima izvođenja, molekuli otkrića koji sadrže varijantu Fc regiona sadrže najmanje jednu aminokiselinsku modifikaciju (na primer, poseduju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ili više aminokiselinskih modifikacija) u CH2 domenu Fc regiona, koji je definisan kao da se produžava od aminokiselina 231-341. U nekim primerima izvođenja, molekuli otkrića sadrže najmanje dve aminokiselinske modifikacije (na primer, poseduju 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili više aminokiselinskih modifikacija), pri čemu je najmanje jedna takva modifikacija u CH3 regionu i najmanje jedna takva modifikacija je u CH2 regionu. Otkriće dalje obuhvata aminokiselinsku modifikaciju u zglobnom regionu. U naročitom primeru izvođenja, otkriće obuhvata aminokiselinsku modifikaciju u CH1 domenu Fc regiona, koja je definisana kao produženje od aminokiselina 216-230.
[0104] U naročito poželjnim primerima izvođenja, otkriće obuhvata molekule koji sadrže varijantu Fc regiona, pri čemu navedena varijanta pruža smanjenu ili je smanjila ADCC aktivnost i/ili smanjeno vezivanje za FcγRIIA (CD32A), kao što je mereno upotrebom postupaka poznatih stručnjaku iz date oblasti tehnike i ilustrovano ovde. ADCC analize korišćene u skladu sa postupcima koji su ovde dati mogu biti NK zavisni ili zavisni od makrofaga.
[0105] U naročito poželjnim primerima izvođenja, otkriće obuhvata molekule koji sadrže varijantu Fc regiona, pri čemu navedena varijanta pruža dmanjenu ili je smanjila ADCC aktivnost i/ili je smanjila vezivanje za FcγRIIIA (CD16A), kao što je mereno upotrebom postupaka poznatih stručnjaku iz date oblasti tehnike i ilustrovano ovde. ADCC analize korišćene u skladu sa postupcima ovde mogu biti zavisne od NK ili zavisne od makrofaga.
[0106] Fc varijante predmetnog otkrića mogu biti kombinovane sa drugim Fc modifikacijama, kao što su one otkrivene u SAD patentima br. 7,632,497; 7,521,542; 7,425,619; 7,416,727; 7,371,826; 7,355,008; 7,335,742; 7,332,581; 7,183,387; 7,122,637; i 6,737,056; u PCT objavama br. WO 2008/105886; WO 2008/002933; WO 2007/021841; WO 2007/106707; WO 06/088494; WO 05/115452; WO 05/110474; WO 04/1032269; i u WO 04/063351; i u Presta, L.G. et al. (2002) "Engineering therapeutic antibodies for improved function," Biochem. Soc. Trans.
30(4):487-490; Shields, R.L. et al. (2002) "Lack of fucose on human IgG1 N-linked oligosaccharide improves binding to human Fcgamma RIII and antibody-dependent cellular toxicity," J. Biol. Chem. 26;277(30):26733-26740 i Shields, R.L. et al. (2001) "High resolution mapping of the binding site on human IgG1 for Fc gamma RI, Fc gamma RII, Fc gamma RIII, and FcRn and design of IgG1 variants with improved binding to the Fc gamma R," J. Biol. Chem. 276(9):6591-6604). Otkriće obuhvata kombinovanje Fc varijante otkrića sa drugim Fc modifikacijama da bi se obezbedila aditivna, sinergistička ili nova svojstva modifikovanom antitelu.
[0107] U drugim primerima izvođenja, otkriće obuhvata upotrebu bilo koje Fc varijante poznate u stanju tehnike, kao što su one otkrivene u Jefferis, B.J. et al. (2002) "Interaction Sites On Human IgG-Fc For FcgammaR: Current Models," Immunol. Lett. 82:57-65; Presta, L.G. et al. (2002) "Engineering Therapeutic Antibodies For Improved Function," Biochem. Soc. Trans.
30:487-90; Idusogie, E.E. et al. (2001) "Engineered Antibodies With Increased Activity To Recruit Complement," J. Immunol. 166:2571-75; Shields, R.L. et al. (2001) "High Resolution Mapping Of The Binding Site On Human IgG1 For Fc Gamma RI, Fc Gamma RII, Fc Gamma RIII, And FcRn And Design Of IgG1 Variants With Improved Binding To The Fc gamma R," J. Biol. Chem. 276:6591-6604; Idusogie, E.E. et al. (2000) "Mapping Of The C1q Binding Site On Rituxan, A Chimeric Antibody With A Human IgG Fc," J. Immunol. 164:4178-84; Reddy, M.P. et al. (2000) "Elimination Of Fc Receptor-Dependent Effector Functions Of A Modified IgG4 Monoclonal Antibody To Human CD4," J. Immunol. 164:1925-1933; Xu, D. et al. (2000) "In Vitro Characterization of Five Humanized OKT3 Effector Function Variant Antibodies," Cell. Immunol. 200:16-26; Armour, K.L. et al. (1999) "Recombinant human IgG Molecules Lacking Fcgamma Receptor I Binding And Monocyte Triggering Activities," Eur. J. Immunol. 29:2613-24; Jefferis, R. et al. (1996) "Modulation Of Fc(Gamma)R And Human Complement Activation By IgG3-Core Oligosaccharide Interactions," Immunol. Lett. 54:101-04; Lund, J. et al. (1996) "Multiple Interactions Of IgG With Its Core Oligosaccharide Can Modulate Recognition By Complement And Human Fc Gamma Receptor I And Influence The Synthesis Of Its Oligosaccharide Chains," J. Immunol. 157:4963-4969; Hutchins et al. (1995) "Improved Biodistribution, Tumor Targeting, And Reduced Immunogenicity In Mice With A Gamma 4 Variant Of Campath-1H," Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 92:11980-84; Jefferis, R. et al. (1995) "Recognition Sites On Human IgG For Fc Gamma Receptors: The Role Of Glycosylation," Immunol. Lett. 44:111-17; Lund, J. et al. (1995) "Oligosaccharide-Protein Interactions In IgG Can Modulate Recognition By Fc Gamma Receptors," FASEB J. 9:115-19; Alegre, M.L. et al. (1994) "A Non-Activating "Humanized" Anti-CD3 Monoclonal Antibody Retains Immunosuppressive Properties In Vivo," Transplantation 57:1537-1543; Lund et al. (1992) "Multiple Binding Sites On The CH2 Domain Of IgG For Mouse Fc Gamma R11," Mol. Immunol. 29:53-59; Lund et al. (1991) "Human Fc Gamma RI And Fc Gamma RII Interact With Distinct But Overlapping Sites On Human IgG," J. Immunol. 147:2657-2662; Duncan, A.R. et al. (1988) "Localization Of The Binding Site For The Human High-Affinity Fc Receptor On IgG," Nature 332:563-564; US Patent Nos. 5,624,821; 5,885,573; 6,194,551; 7,276,586; i 7,317,091; i PCT objave WO 00/42072 i PCT WO 99/58572.
[0108] U određenim primerima izvođenja, antitelo prema otkriću sadrži varijantu Fc regiona (uključujući Fc poreklom od bilo kog tipa humanog imunoglobulina (npr., IgG, IgE, IgM, IgD, IgA i IgY), ili klase (npr., IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, i IgA2) ili podklase), pri čemu navedena varijanta Fc regiona sadrži najmanje jednu aminokiselinsku modifikaciju u odnosu na Fc region divljeg tipa, koja varijanta Fc regiona ispoljava redukovano ili ukinuto vezivanje za jedan ili više efektorskih liganada kao što je određeno pomoću standardnih analiza poznatih u stanju tehnike i otkrivenih ovde, u odnosu na sličan molekul koji sadrži Fc region divljeg tipa. U određenim primerima izvođenja, varijanta Fc domena antitela otkrića sadrži aminokiselinsku modifikaciju (tj., inserciju, supstituciju, deleciju) na jednom ili više ostataka 233, 234, 235, 236, 237, 238, 265, 270, 297, 298, 299. U specifičnom primeru izvođenja, jedna ili više aminokiselinskih modifikacija koje redukuju ili poništavaju vezivanje za jedan ili više efektorskih liganada je supstitucija sa fenilalaninom ili prolinom na položaju 233; supstitucija sa alaninom na položaju 234; supstitucija sa alaninom ili glutaminskom kiselinom na položaju 235; supstitucija sa alaninom na položaju 236, supstitucija sa alaninom na položaju 237, supstitucija sa argininom na položaju 238; supstitucija sa alaninom ili glutaminskom kiselinom na položaju 265; supstitucija sa alaninom ili asparaginom na položaju 270; supstitucija sa alaninom ili glutaminom na položaju 297; supstitucija sa fenilalaninom, asparaginom ili prolinom na položaju 298; supstitucija sa bilo kojom aminokiselinom na položaju 299 osim serina ili treonina; ili kombinacija dve ili više gore navedenih supstitucija. U određenim primerima izvođenja, antitelo otkrića sadrži Fc domen koji ima supstituciju sa alaninom na položaju 265 i na položaju 297; supstitucija sa alaninom na položaju 265 i sa glutaminom na položaju 297; supstitucija sa glutaminskom kiselinom na položaju 265 i sa alaninom na položaju 297; ili supstitucija sa glutaminskom kiselinom na položaju 265 i sa glutaminom na položaju 297. U poželjnim primerima izvođenja, antitelo otkrića sadrži Fc domen koji ima modifikaciju (npr., supstituciju, inserciju, deleciju) na položaju 234 i položaju 235 Fc regiona. U specifičnom primeru u skladu sa ovim primerom izvođenja, antitelo otkrića sadrži Fc domen koji ima supstituciju na položaju 234 sa alaninom i supstituciju na položaju 235 sa glutaminskom kiselinom. U poželjnijem primeru izvođenja, antitelo otkrića sadrži Fc koji ima supstituciju sa alaninom na položaju 234 i supstituciju sa alaninom na položaju 235.
[0109] U drugim primerima izvođenja, antitelo otkrića sadrži Fc region, koja varijanta Fc regiona ispoljava redukovano ili poništeno vezivanje za jedan ili više efektornih liganada kao što je određeno pomoću standardnih analiza poznatih u stanju tehnike i otkrivenih ovde, u odnosu na sličan kontrolni molekul. U određenim primerima izvođenja, antitelo prema otkriću ima Fc region koji ispoljava redukovano ili poništeno vezivanje za jedan ili više efektorskih liganada, koji Fc region sadrži fenilalanin ili prolin na položaju 233; alanin na položaju 234; alanin ili glutaminsku kiselinu na položaju 235; alanin na položaju 236, alanin na položaju 237, arginin na položaju 238; alanin ili glutaminsku kiselinu na položaju 265; alanin ili asparagin na položaju 270; alanin ili glutamin na položaju 297; fenilalanin, asparagin ili prolin na položaju 298; bilo koju aminokiselinu na položaju 299 osim serina ili treonina; ili kombinaciju dva ili više od gore navedenih supstitucija. U određenim primerima izvođenja, antitelo prema otkriću sadrži Fc domen koji ima alanin na položaju 265 i na položaju 297; alanin na položaju 265 i glutamin na položaju 297; glutaminsku kiselinu na položaju 265 i alanin na položaju 297; ili glutaminsku kiselinu na položaju 265 i glutamin na položaju 297. U određenim primerima izvođenja, antitelo prema otkriću sadrži Fc domen koji ima alanin na 234 i glutaminsku kiselinu na položaju 235. U poželjnim primerima izvođenja, antitelo prema otkriću sadrži Fc koji ima alanin na položaju 234 i alanin na položaju 235.
[0110] Antitela prema otkriću koja sadrže i Fc domen koji ima alanin na položajima koji odgovaraju 234 i 235 prema šemi numeracije prema Kabatu su poznata kao "ala-ala" antitela. U određenim primerima izvođenja, upotreba "ala-ala" Fc domena i/ili ostalih kombinacija aminokiselinskih kombinacija koje su ovde opisane (uključujući kombinacije koje sadrže "alaala" Fc domene) može da poništi vezivanje Fc domena za sve FcγRs. Vezivanje Fc domena za jedan il više FcγRs može biti određeno pomoću bilo kog postupka koji je ovde opisan i/ili poznat u stanju tehnike.
[0111] U određenim primerima izvođenja, jedna ili više aminokiselinskih modifikacija koja ponišatavaju vezivanje za sve FcγRs ili smanjuju ili poništavaju vezivanje za jedan ili više efektorskih liganada sadrže kombinacije modifikacija koje su ovde navedene ili kombinacije modifikacija navedenih ovde sa bilo kojom koja može da pruži nula vezivanje za bilo koji FcR (npr., FcγRIIIA, FcγRIIIB, FcγRIIA) kao što je određeno pomoću postupaka otkrivenih ovde ili poznatih stručnjaku iz date oblasti tehnike. Kao što stručnjak iz date oblasti tehnike jednostavno razume, takva antitela otkrića mogu naći naročitu upotrebu u lečenju autoimune bolesti po tome što anti-CD3 antitela i antigen-vezujući fragmenti služe za modulaciju imune funkcije bez povezanog odgovora na prvu dozu zajedničkog za antitela protiv imunih ćelija.
[0112] U određenim primerima izvođenja, anti-CD3 antitela i antigen-vezujući fragmenti otkrića, ili njihovi antigen-vezujući fragmenti, imaju smanjeno (kao što je, ali bez ograničenja na, manje od 50%, manje od 40%, manje od 30%, manje od 20%, manje od 10%, manje od 5% ili manje od 1% u poređenju sa vezivanjem od strane proteina koji sadrži kontrolni Fc domen) ili, poželjnije, nema detektabilno vezivanje za jedan ili više od bilo kog FcγR (npr., FcγRI, FcγRII ili FcγRIII) preko njegovog Fc domena kao što je određeno pomoću analiza rutinskih u stanju tehnike. Pored toga ili alternativno, anti-CD3 antitela i antigen-vezujući fragmenti otkrića, ili njihovi antigen-vezujući fragmenti, mogu imati smanjeno (kao što je, ali bez ograničenja na, manje od 50%, manje od 40%, manje od 30%, manje od 20%, manje od 10%, manje od 5% ili manje od 1% u poređenju sa vezivanjem od strane kontrolnog proteina koji sadrži kontrolni Fc domen) ili, poželjnije, nikakvo detektabilno vezivanje za bilo koje komplement receptore, kao što je, C1q, kao što je određeno u rutinski korišćenim analizama. U naročitim primerima izvođenja, antitelo je aglikozilovano. U drugim primerima izvođenja, antitelo nema Fc domen (npr., to je Fab fragment, F(ab')2ili jednolančano antitelo).
[0113] Antitela prema otkriću su na taj način naročito korisna zbog toga što ona imaju smanjenu ili nemaju in vivo toksičnost uzrokovanu proizvodnjom limfokina ili oslobađanjem citokina. Postupci za merenje proizvodnje limfokina i oslobađanje citokina su poznati i rutinski u stanju tehnike i obuhvaćeni ovde. Na primer, oslobađanje citokina može se meriti merenjem izlučivanja citokina uključujući, ali bez ograničenja na Interleukin -2 (IL-2). Interleukin-4 (IL-4), Interleukin-6 (IL-6), Interleukin-12 (IL-12), Interleukin-16 (IL-16), PDGF, TGF-α, TGF-β, TNF- α, TNF- β, GCSF, GM-CSF, MCSF, IFN- α, IFN- β, TFN-γ, IGF-I, IGF-II. Na primer, videti, Isaacs et al., 2001, Rheumatology, 40: 724-738; Soubrane et al., 1993, Blood, 81(1): 15-19.
D. CD3 DART™ diatela
[0114] Kao što je razmatrano u prethodnom tekstu, predmetno otkriće dodatno obuhvata bispecifična, trispecifična i multispecifična antitela. Naročito poželjan primer takvih antitela sadrži molekule "DART™" diatela koji sadrže najmanje dva polipeptidna lanca koji formiraju najmanje dva mesta vezivanja epitopa, od kojih se najmanje jedno specifično vezuje za CD3. Primeri molekula "DART™" diatela su otkriveni u US20100174053, US20090060910, US20070004909, EP2158221, EP1868650, WO2010080538, WO2008157379 i WO2006113665.
[0115] U poželjnim primerima izvođenja, prvi polipeptidni lanac DART™ diatela sadrži:
(i) domen (A) koji sadrži vezujući region varijabilnog domena lakog lanca prvog imunoglobulina (VL1) specifičan za epitop (1);
(ii) domen (B) koji sadrži vezujući region varijabilnog domena teškog lanca drugog imunoglobulina (VH2) specifičan za epitop (2); i
(iii) domen (C).
Drugi polipeptidni lanac takvog DART™ diatela sadrži:
(i) domen (D) koji sadrži vezujući region varijabilnog domena lakog lanca drugog imunoglobulina (VL2) specifičan za epitop (2);
(ii) domen (E) koji sadrži vezujući region varijabilnog domena teškog lanca prvog imunoglobulina (VH1) specifičan za epitop (1); i
(iii) domen (F).
Domeni DART™ diatela (A) i (B) ne vezuju se međusobno tako da se formira mesto vezivanja epitopa. Slično, domeni DART™ diatela (D) i (E) se ne vezuju međusobno tako da formiraju mesto vezivanja epitopa. Pre, domeni DART™ diatela (A) i (E) se vezuju tako da se formira vezujuće mesto koje vezuje epitop (1); navedeni domeni DART™ diatela (B) i (D) se vezuju tako da formiraju vezujuće mesto koje vezuje navedeni epitop (2). Domeni (C) i (F) su kovalentno vezani zajedno.
[0116] Svaki polipeptidni lanac molekula DART™ diatela sadrži VL domen i VH domen, koji su kovalentno vezani tako da su domeni sprečeni da se sami sklapaju. Interakcija dva od polipeptidnih lanaca će proizvesti dva VL-VH para, formirajući dva mesta vezivanja epitopa, tj., bivalentni molekul. Ni VH niti VL domen nije ograničen na bilo koji položaj unutar polipeptidnog lanca, tj., ograničen na amino (N) ili karboksi (C) teminus, niti su domeni ograničeni u njihovim relativnim položajima jedan na drugi, tj., VL domen može biti N-terminalan za VH domen i obrnuto. Jedino ograničenje je to da je komplementaran polipeptidni lanac dostupan u cilju formiranja funkcionalnih DART™ diatela. Tamo gde su VL i VH domeni poreklom od istog antitela, dva komplementarna polipeptidna lanca mogu biti identična. Na primer, gde su vezujući domeni poreklom od antitela specifičnog za epitop A (tj., vezujući domen je formiran od VLA-VHAinterakcije), svaki polipeptid će sadržati VHAi VLA. Homodimerizacija dva polipeptidna lanca antitela će rezultirati u formiranju dva VLA-VHAvezujuća mesta, rezultujući u bivalentnom monospecifičnom antitelu. Tamo gde su VL i VH domeni poreklom od antitela specifičnih za različite antigene, formiranje funkcionalnog bispecifičog DART™ diatela zahteva interakciju dva različita polipeptidna lanca, tj., formiranje heterodimera. Na primer, za bispecifično DART™ diatelo, jedan polipeptidni lanac će sadržati VLAi VLB; homodimerizacija navedenog lanca će rezultovati u formiranju dva VLA-VHBvezujuća mesta, bilo bez vezivanja ili sa nepredviđenim vezivanjem. Nasuprot tome, tamo gde su dva različita polipeptidna lanca slobodna da interaguju, npr., u rekombinantnom ekspresionom sistemu, jedan sadrži VLAi VHBi drugi sadrži VLBi VHA, dva različita vezujuća mesta će formirati: VLA-VHAi VLB-VHB. Za sve parove polipeptidnih lanaca DART™ diatela, moguće je pogrešno poravnanje ili pogrešno vezivanje dva lanca, tj., interakcija VL-VL ili VH-VH domena; međutim, prečišćavanjem funkcionalnih diatela se lako upravlja na osnovu imunospecifičnosti ispravno dimerizujućeg vezujućeg mesta upotrebom bilo kog postupka na bazi afiniteta poznatog u stanju tehnike ili ilustrovanog ovde, npr., afinitetne hromatografije.
[0117] Jedan ili više polipeptidnih lanaca DART™ diatela može izborno da sadrži Fc domen ili njegov deo (npr. CH2 domen ili CH3 domen). Fc domen ili njegov deo može biti poreklom od bilo kog izotipa ili alotipa imunoglobulina uključujući, ali bez ograničenja na, IgA, IgD, IgG, IgE i IgM. U poželjnim primerima izvođenja, Fc domen (ili njegov deo) je poreklom od IgG. U specifičnim primerima izvođenja, izotip IgG je IgG1, IgG2, IgG3 ili IgG4 ili njegov alotip. U jednom primeru izvođenja, molekul diatela sadrži Fc domen, pri čemu taj Fc domen sadrži CH2 domen i CH3 domen nezavisno izabran od bilo kog izotipa imunoglobulina (tj. Fc domen koji sadrži CH2 domen poreklom od IgG i CH3 domen poreklom od IgE, ili CH2 domen poreklom od IgG1 i CH3 domen poreklom od IgG2, itd.). Fc domen može biti konstruisan u polipeptidni lanac koji sadrži molekul diatela prema otkriću u bilo kom položaju u odnosu na druge domene ili delove navedenog polipeptidnog lanca (npr., Fc domen, ili njegov deo, može biti c-terminalan za oba, VL i VH domene polipeptidnog lanca; može biti n-terminalan za oba, VL i VH domene; ili može biti N-terminalan za jedan domen i c-terminalan za drugi (tj., između dva domena polipeptidnog lanca)).
[0118] Fc domeni u polipeptidnim lancima molekula DART™ diatela preferencijalno se dimerizuju, rezultujući u formiranju molekula DART™ koji ispoljava osobine slične imunoglobulinu, npr., Fc-FcγR, interakcije. Diatela koja sadrže Fc mogu biti dimeri, npr., sastavljeni od dva polipeptidna lanca, od kojih svaki sadrži VH domen, VL domen i Fc domen. Dimerizacija navedenih polipeptidnih lanaca rezultuje u bivalentnom DART™ diatelu koje sadrži Fc domen, iako sa strukturom različitom od one od nemodifikovanog bivalentnog antitela. Takvi molekuli DART™ diatela će ispoljiti promenjene fenotipe u odnosu na imunoglobulin divljeg tipa, npr., promenjen polu-život u serumu, vezujuće osobine, itd. U drugim primerima izvođenja, molekuli DART™ diatela koji sadrže Fc domene mogu biti tetrameri. Takvi tetrameri sadrže dva 'teža' polipeptidna lanca, tj., polipetidni lanac koji sadrži VL, VH i Fc domen, i dva 'lakša' polipeptidna lanca, tj., polipeptidni lanac koji sadrži VL i VH. Lakši i teži lanci interaguju tako da formiraju monomer, i navedeni monomeri interaguju preko svojih nesparenih Fc domena tako da se formira molekul sličan Ig. Takvo DART™ diatelo slično Ig je tetravalentno i može biti monospecifično, bispecifično ili tetraspecifično.
VI. Terapeutski postupci za upotrebu anti-CD3 antitela prema predmetnom otkriću [0119] Anti-CD3 antiela prema predmetnom otkriću i njihovi antigen-vezujući fragmenti imaju naročitu korist u lečenju kancera povezanih sa ekspresijom CD3 i u lečenju autoimune bolesti i ostalih inflamatornih poremećaja.
[0120] Ove upotrebe mogu da obuhvataju formiranje kompleksa između CD3 i antitela koje se specifično vezuje za CD3. Primeri takvih antitela obuhvataju, ali bez ograničenja na anti-CD3 monoklonska antitela mAb1 i mAb2 ili, poželjnije, njihove humanizovane derivate. Formiranje takvog kompleksa može biti in vitro ili in vivo. Bez vezivanja za teoriju, anti-CD3 antitelo može da se veže za CD3 preko ekstracelularnog domena CD3 i može zatim biti internalizovano unutar žive normalne ćelije ili ćelije kancera.
A. Lečenje kancera
[0121] Antitela i antigen-vezujući fragmenti predmetnog otkrića vezuju se za CD3 prisutan na površini T ćelija. Antigen-vezujući fragmenti predmetnog otkrića mogu se koristiti u kontekstu bi-specifičnog (ili trispecifičnog ili multispecifičnog) molekula, kao što je DART ili BiTE molekul, za preusmeravanje T-ćelija do tumorske ćelije. T-ćelija može zatim da ubije tumosku ćeliju. Bispecifični (ili trispecifični ili multispecifični) molekuli predmetnog otkrića su sposobni da se vezuju za oba, humani CD3 i CD3 nehumanog sisara (npr., makaki majmuna), i takođe za drugi (ili dodatni) i različit antigen(e) ili epitop(e). Drugi antigen ili epitop je poželjno tumorski antigen eksprimiran na tumorskoj ćeliji. Takve tumorske ćelije mogu biti od kancera, na primer, kancera dojke, kancera prostate, kancera želudca, kancera pluća, kancera stomaka, kancera debelog creva, rektalnog kancera, kancera pankreasa, kancera jetre, kancera jajnika, kancera oralne šupljine, faringealnog kancera, kancera jednjaka, kancera grkljana, kancera kosti, kancera kože, melanoma, kancera materice, testikularnog kancera, kancera bešike, kancera bubrega, kancera mozga, glioblastoma, tiroiodnog kancera, limfoma, mijeloma i leukemije. Takvi dodatni tumorski antigeni ili epitopi su poželjno antigeni ili epitopi na ćelijskoj površini (kao što su: 17-1A, A33, antigen primarnog endoderma I adultnog eritrocita, alfa fetoprotein, antigen omotača RNK tumorskog virusa, onkofetusni antigen tumora bešike, B7-H1, B7-H2, B7-H3, B7-H4, B7-H5, B7-H6, antigen-38.13 Burkitt-ovog limfoma, CA125, CD18, CD19, antigen-CD20 humanog B-limfoma, CD22, CD33, CD44, CD52, CEA, CO17-1A, CTA-1, CTLA-4, receptor epidermalnog faktora rasta, Ep-CAM, EphA2, antigen I fetusnog eritrocita, antigen fibrosarkoma, gangliozid GD2, gangliozid GD3, gangliozid GM2, gangliozid GM3, GICA 19-9, gp IIIb/IIIa, gp72, HER1, HER-2/neu, HER3, HER4, antigen melanoma visoke molekulske mase, HLA-DR antigen, antigen-Gp37 humane leukemijske T ćelije, antigen L20 humanog karcinoma pluća, antigen L6 humanog karcinoma pluća, antigen globule masti humanog mleka, IgE, KS 1/4 pan-karcinom antigen, LEA, F3 antigen adenokarcinoma pluća, antigen-APO-1 malignog humanog limfocita, antigen gp75 melanoma, antigen p97 povezan za melanom, neoglikoprotein, nuC242, antigen polimorfnog eputelijalnog mucina, antigen specifičan za prostatu, membranski antigen specifičan za prostatu, fosfat prostatičke kiseline, SK-1 antigen, TAG-72, T-antigen, tumor antigen CA125, kiseli fosfat prostate, SK-1 antigen, TAG-72, T-antigen, tumorski antigen CA125, tumorski antigen MUC1, tumor-specifičan antigen ćelijske površine transplantacionog tipa, vaskularni endotelijalni faktor rasta, receptor vaskularnog endotelijalnog faktora rasta i αvβ3). Alternativno, takvi dodatni antigeni ili epitopi mogu biti povezani sa patogenom (kao što je: hepatitis tipa A, hepatitis tipa B, hepatitis tipa C, influenca, varičela, adenovirus, herpes simpleks tip I (HSV-I), herpes simpleks tip II (HSV-II), rinderpest, rinovirus, ehovirus, rotavirus, respiratorni sincicijalni virus, papiloma virus, papova virus, citomegalovirus, ehinovirus, arbovirus, huntavirus, koksaki virus, virus zauški, virus malih boginja, virus rubeole, polio virus, velike boginje, Epstein Barr virus, virus humane imunodeficijencije tipa I (HIV-I), virus humane imunodeficijencije tipa II (HIV-II), virusni miningitis, virusni encefalitis, denga groznice, velikih boginja; mycobacteria rickettsia, mycoplasma, Neisseria, S. pneumonia, Borrelia burgdorferi, Bacillus anthracis, Streptococcus, Staphylococcus, Mycobacterium, tetanus, veliki kašalj, kolera, kuga, difterija, hlamidija i legionela; leišmanija, kokcidioza, tripanozoma ili malarija; hlamidija ili rikecija.
[0122] Antitela i antigen-vezujući fragmenti predmetnog otkrića vezuju se za CD3 prisutan na površini T ćelija. Upotrebom konvencionalnih postupaka, takva antietla mogu biti obeležena fluoresceinom, kao što je opisano u prethodnom tekstu. Kada su takvi obeleženi molekuli inkubirani u prisustvu bispecifičnog molekula (kao što je na primer, UDART™ diatelo koje ima domen koji se vezuje za epitop koji se vezuje za T-ćelijski receptor i domen koji se vezuje za epitop koji se vezuje za fluorescein ("TCR-UDART™")), oni mogu da se vezuju za fluoresceinski obeleživač i na taj način lokalizuju sebe za površinu ćelija koje eksprimiraju CD3 i uzrokuju preusmereno ubijanje takvih ćelija.
[0123] U alternativnom primeru izvođenja, CD19 može biti korišćen kao "drugi" epitop, talo da je bispecifično antitelo, ili poželjnije, DART™ diatelo, koje prepoznaje CD3 i CD19 korišćeno za iskorenjivanje B-ćelijskog limfoma preko istovremenog angažovanja B-ćelijski specifičnog antigena (CD19) i kompleksa T-ćelijskog receptora/CD3 na efektorskim T-ćelijama. Kao što je otkriveno od strane Moore, P.A. et al. (2011) "Application Of Dual Affinity Retargeting Molecules To Achieve Optimal Redirected T-Cell Killing Of B-Cell Lymphoma," Blood 2011 blood-2010-09-306449, CD3/CD19 DART™ diatelo je korišćeno za iskorenjivanje B-ćelijskog limfoma preko istovremenog angažovanja B-ćelijskog specifičnog antigena CD19 i kompleksa T-ćelijskog receptora/CD3 na efektorskim T-ćelijama. Uporedno poređenje sa jednolančanim bispecifičnim antitelom koje nosi indetične Fv sekvence antitela CD19 i CD3 otkrilo je da je DART potentniji u usmeravanju B-ćelijske lize. Pojačana aktivnost sa CD19xCD3 DART je zabeležena na svim ciljnim B ćelijama koje eksprimiraju CD19 procenjena upotrebom mirujućih i prethodno stimulisanih humanih PBMC ili prečišćenih efektorskih T-ćelijskih populacija. Karakterizacija CD19xTCR bispecifičnog DART otkrila je ekvivalentnu potenciju za CD19xCD3 DART pokazujući fleksibilnost DART arhitekture za podržavanje veza T-ćelije/B-ćelije za primene preusmerenog T-ćelijskog ubijanja. Značajno, pojačani nivo ubijanja posredovan preko molekula DART nije praćen nikakvim povećanjem u aktivaciji nespecifičnih T-ćelija ili lizi CD19 negativnih ćelija. Studije ćelijskog vezivanja ukazuju na to da je arhitektura DART pogodna za održavanje kontakta ćelija:ćelija koji navodno doprinose visokom nivou ubijanja ciljne ćelije. Konačno, sposobnost CD19xTCR DART da inhibira B-ćelijski limfom kod NOD/SCID miševa kada je primenjeno istovremeno sa humanim PBMC dalje pokazuje vrednost molekula DART za lečenje B-ćelijskih maligniteta. Unakrsno reaktivna anti-CD3 antitela predmetnog pronalaska bi se mogla koristiti na isti način kao CD3 antitela od Moore, P.A. et al. Na taj način, otkriće daje terapiju za kancere (naročito limfome i leukemije) koji obuhvataju ćelije kancera koje eksprimiraju CD3.
[0124] Bispecifični (ili trispecifični ili multispecifični) molekuli predmetnog otkrića su požečjno primenjeni na pacijenta u jednoj ili više jediničnih doza od tipično 0.0001 mg/kg do 100 mg/kg telesne težine pacijenta. Poželjno, doza primenjena na pacijenta je između 0.0001 mg/kg i 20 mg/kg, 0.0001 mg/kg i 10 mg/kg, 0.0001 mg/kg i 5 mg/kg, 0.0001 i 2 mg/kg, 0.0001 i 1 mg/kg, 0.0001 mg/kg i 0.75 mg/kg, 0.0001 mg/kg i 0.5 mg/kg, 0.0001 mg/kg do 0.25 mg/kg, 0.0001 do 0.15 mg/kg, 0.0001 do 0.10 mg/kg, 0.001 do 0.5 mg/kg, 0.01 do 0.25 mg/kg ili 0.01 do 0.10 mg/kg telesne težine pacijenta.
B. Lečenje autoimune bolesti i inflamacije
[0125] Opisani su postupci za lečenje, prevenciju, usporavanje napredovanja i/ili ublažavanje simptoma T-ćelijski posredovanih bolesti ili poremećaja, uključujući odbacivanje transplanta, bolesti transplanta protiv domaćina, neželjene reakcije hipersenzitivnosti odloženog tipa (kao što su alergijske reakcije odloženog tipa), T-ćelijski posredovane bolesti pluća i autoimune bolesti.
T-ćelijski posredovane bolesti pluća obuhvataju sarkoidozu, hipersenzitivni pneumonitis, akutni intersticijalni pneumonitis, alveolitis, plućnu fibrozu, idiopatsku plućnu fibrozu i ostale bolesti okarakterisane inflamatornim oštećenjem pluća. T-ćelijske autoimune bolesti obuhvataju multiplu sklerozu, neuritis, polimiozitis, psorijazu, vitiligo, Sjogren-ov sindrom, reumatoidni artritis, dijabetes tipa 1, autoimuni pankreatitis, inflamatorne bolesti creva (npr., Crohn-ovu bolest i ulcerozni kolitis), celijačnu bolest, glomerulonefritis, sklerodermu, sarkoidozu, autoimune tiroidne bolesti (npr., Hashimoto-ov tiroidits i Graves-ova bolest), mijasteniju gravis, Addison-ovu bolest, autoimuni uveoretinitis, pemfigus vulgaris, primarnu bilijarnu cirozu, pernicioznu anemiju i sistemski lupus eritematozis, lupus (naročito, kutani), efekte transplantacije organa, bolest transplanta protiv domaćina (GVHD), itd. Naročito, postupci ovde su korisni kod subjekata sa ranim stadijumom bolesti za usporavanje ili redukciju oštećenja od autoimuniteta i održavanje visokog nivoa funkcije i/ili redukciju potrebe za drugom terapijom (npr., u lečenju ili profilaksi dijabetesa tipa I, postupci ovde mogu da smanje potrebu za primenom egzogenog insulina na subjekta). Pored toga, postupci ovde mogu povoljno da redukuju incidencu ili rezultuju u tome da nema incidence sindoma oslobađanja citokina prethodno povezanog sa primenom terapeutskih antitela, i, naročito, protiv T-ćelije (npr., anti-CD3 antitelo ili antigen-vezujući fragmenti).
[0126] U određenim primerima izvođenja, tok tretmana sa anti-CD3 antitelom ili antigenvezujućim fargmentima prema postupcima otkrića je ponovljen na intervalima od 2 meseca, 4 meseca, 6 meseci, 8 meseci, 9 meseci, 10 meseci, 12 meseci, 15 meseci, 18 meseci, 24 meseca, 30 meseci, ili 36 meseci. U specifičnim primerima izvođenja efikasnost lečenja sa anti-CD3 antitelom ili antigen-vezujućim fragmentima otkrića je određena kao što je ovde opisano ili kao što je poznato u stanju tehnike na 2 meseca, 4 meseca, 6 meseci, 9 meseci, 12 meseci, 15 meseci, 18 meseci, 24 meseca, 30 meseci ili 36 meseci posle prethodnog tretmana.
[0127] U sledećem primeru izvođenja, subjekat je primao jednu ili više jediničnih doza od približno 0.5-50 µg/kg, približno 0.5-40 µg/kg, približno 0.5-30 µg/kg, približno 0.5-20 µg/kg, približno 0.5-15 µg/kg, približno 0.5-10 µg/kg, približno 0.5-5 µg/kg, približno 1-5 µg/kg, približno 1-10 µg/kg, približno 20-40 µg/kg, približno 20-30 µg/kg, približno 22-28 µg/kg ili približno 25-26 µg/kg jednog ili više anti-CD3 antitela ili antigen-vezujućih fragmenata za prevenciju, lečenje ili ublažavanje jednog ili više simptoma autoimunog poremećaja ili T ćelijskog maligniteta. U sledećem primeru izvođenja, subjekat je primio jednu ili više jediničnih doza od 200 µg/kg, 178 µg/kg, 180 µg/kg, 128 µg/kg, 100 µg/kg, 95 µg/kg, 90 µg/kg, 85 µg/kg, 80 µg/kg, 75 µg/kg, 70 µg/kg, 65 µg/kg, 60 µg/kg, 55 µg/kg, 50 µg/kg, 45 µg/kg, 40 µg/kg, 35 µg/kg, 30 µg/kg, 26 µg/kg, 25 µg/kg, 20 µg/kg, 15 µg/kg, 13 µg/kg, 10 µg/kg, 6.5 µg/kg, 5 µg/kg, 3.2 µg/kg, 3 µg/kg,2.5 µg/kg, 2 µg/kg, 1.6 µg/kg, 1.5 µg/kg, 1 µg/kg, 0.5 µg/kg, 0.25 µg/kg, 0.1 µg/kg ili 0.05 µg/kg jednog ili više anti-CD3 antitela ili antigen-vezujućih fragmenata za prevenciju, lečenje ili ublažavanje jednog ili više simptoma autoimunog poremećaja ili T-ćelijskog maligniteta.
[0128] U jednom primeru izvođenja, subjekat je primao jednu ili više doza od 200 µg/kg ili manje, 175 µg/kg ili manje, 150 µg/kg ili manje, 128 µg/kg ili manje, 100 µg/kg ili manje, 95 µg/kg ili manje, 90 µg/kg ili manje, 85 µg/kg ili manje, 80 µg/kg ili manje, 75 µg/kg ili manje, 70 µg/kg ili manje, 65 µg/kg ili manje, 60 µg/kg ili manje, 55 µg/kg ili manje, 50 µg/kg ili manje, 45 µg/kg ili manje, 40 µg/kg ili manje, 35 µg/kg ili manje, 30 µg/kg ili manje, 25 µg/kg ili manje, 20 µg/kg ili manje, 15 µg/kg ili manje, 10 µg/kg ili manje, 5 µg/kg ili manje, 2.5 µg/kg ili manje, 2 µg/kg ili manje, 1.5 µg/kg ili manje, 1 µg/kg ili manje, 0.5 µg/kg ili manje, 0.25 µg/kg ili manje, 0.1 µg/kg ili manje, ili 0.05 µg/kg ili manje jednog ili više anti-CD3 antitela ili antigen-vezujućih fragmenata otkrića za prevenciju, lečenje ili ublažavanje jednog ili više simptoma autoimunog poremećaja ili T-ćelijskog maligniteta.
[0129] U naročitim primerima izvođenja, subjekat je primao jednu ili više doza od oko 5 - 1200 µg/m2 , poželjno, 51 - 826 µg/m<2>. U sledećem primeru izvođenja, subjekat je primao jednu ili više doza od 1200 µg/m<2>, 1150 µg/m<2>, 1100 µg/m<2>, 1050 µg/m<2>, 1000 µg/m<2>, 950 µg/m<2>, 900 µg/m2 , 850 µg/m2 , 800 µg/m2, 750 µg/m2 , 700 µg/m2 , 650 µg/m2 , 600 µg/m2 , 550 µg/m2 , 500 µg/m2 , 450 µg/m2 , 400 µg/m2 , 350 µg/m2 , 300 µg/m2 , 250 µg/m2, 200 µg/m2 , 150 µg/m2 , 100 µg/m2 , 50 µg/m2 , 40 µg/m2 , 30 µg/m2, 20 µg/m2 , 15 µg/m2 , 10 µg/m2 , ili 5 µg/m2 jednog ili više anti-CD3 antitela ili antigen-vezujućih fragmenata za prevenciju, lečenje, usporavanje napredovanja, odlaganja početka ili ublažavanja jednog ili više simptoma autoimunog poremećaja ili T-ćelijskog maligniteta.
[0130] U sledećem primeru izvođenja, subjekat je primao režim lečenja koji sadrži jednu ili više doza profilaktički ili terapeutski efikasne količine jednog ili više anti-CD3 antitela ili antigenvezujućih fragmenata, pri čemu je tok lečenja primenjivan tokom 2 dana, 3 dana, 4 dana, 5 dana, 6 dana, 7 dana, 8 dana, 9 dana, 10 dana, 11 dana, 12 dana, 13 dana ili 14 dana. U jednom primeru izvođenja, režim lečenja sadrži primenu doza profilaktički ili terapeutski efikasne količine jednog ili više anti-CD3 antitela ili antigen-vezujućih fragmenata svaki dan, svaki 2. dan, svaki 3. dan ili svaki 4. dan. U određenim primerima izvođenja, režim lečenja sadrži primenu doza profilaktički ili terapeutski efikasne količine jednog ili više anti-CD3 antitela ili antigenvezujućih fragmenata u ponedeljak, utorak, sredinu, četvrtak date nedelje i bez primene doza profilaktički ili terapeutski efikasne količine jednog ili više anti-CD3 antitela ili antigenvezujućih fragmenata u petak, subotu i nedelju iste nedelje sve dok nije primenjeno 14 doza, 13, doza, 13 doza, 12 doza, 11 doza, 10 doza, 9 doza ili 8 doza. U određenim primerima izvođenja primenjena doza je ista svakog dana režima. U određenim primerima izvođenja, subjekat je primio režim lečena koji sadrži jednu ili više doza profilaktički ili terapeutski efikasne količine jednog ili više anti-CD3 antitela ili antigen-vezujućih fragmenata, pri čemu, profilaktički ili terapeutski efikasna količina je 200 µg/kg/dan, 175 µg/kg/dan, 150 µg/kg/dan, 125 µg/kg/dan, 100 µg/kg/dan, 95 µg/kg/dan, 90 µg/kg/dan, 85 µg/kg/dan, 80 µg/kg/dan, 75 µg/kg/dan, 70 µg/kg/dan, 65 µg/kg/dan, 60 µg/kg/dan, 55 µg/kg/dan, 50 µg/kg/dan, 45 µg/kg/dan, 40 µg/kg/dan, 35 µg/kg/dan, 30 µg/kg/dan, 26 µg/kg/dan, 25 µg/kg/dan, 20 µg/kg/dan, 15 µg/kg/dan, 13 µg/kg/dan, 10 µg/kg/dan, 6.5 µg/kg/dan, 5 µg/kg/dan, 3.2 µg/kg/dan, 3 µg/kg/dan, 2.5 µg/kg/dan, 2 µg/kg/dan, 1.6 µg/kg/dan, 1.5 µg/kg/dan, 1 µg/kg/dan, 0.5 µg/kg/dan, 0.25 µg/kg/dan, 0.1 µg/kg/dan, ili 0.05 µg/kg/dan; i/ili pri čemu profilaktički ili terapeutski efikasna količina je 1200 µg/m<2>/dan, 1150 µg/m<2>/dan, 1100 µg/m<2>/dan, 1050 µg/m<2>/dan, 1000 µg/m<2>/dan, 950 µg/m2/dan, 900 µg/m2/dan, 850 µg/m2/dan, 800 µg/m2/dan, 750 µg/m2/dan, 700 µg/m2/dan, 650 µg/m2/dan, 600 µg/m2/dan, 550 µg/m2/dan, 500 µg/m2/dan, 450 µg/m2/dan, 400 µg/m2/dan, 350 µg/m2/dan, 300 µg/m2/dan, 250 µg/m2/dan, 200 µg/m2/dan, 150 µg/m2/dan, 100 µg/m2/dan, 50 µg/m2/dan, 40 µg/m2/dan, 30 µg/m2/dan, 20 µg/m2/dan, 15 µg/m2/dan, 10 µg/m2/dan, ili 5 µg/m2/dan. U sledećem primeru izvođenja, intravenska doza od 1200 µg/m<2>ili manje, 1150 µg/m2 ili manje, 1100 µg/m2 ili manje, 1050 µg/m2 ili manje, 1000 µg/m2 ili manje, 950 µg/m2 ili manje, 900 µg/m2 ili manje, 850 µg/m2 ili manje, 800 µg/m2 ili manje, 750 µg/m2 ili manje, 700 µg/m2 ili manje, 650 µg/m2 ili manje, 600 µg/m2 ili manje, 550 µg/m2 ili manje, 500 µg/m2 ili manje, 450 µg/m2 ili manje, 400 µg/m2 ili manje, 350 µg/m2 ili manje, 300 µg/m2 ili manje, 250 µg/m2 ili manje, 200 µg/m2 ili manje, 150 µg/m2 ili manje, 100 µg/m2 ili manje, 50 µg/m2 ili manje, 40 µg/m2 ili manje, 30 µg/m2 ili manje, 20 µg/m2 ili manje, 15 µg/m2 ili manje, 10 µg/m2 ili manje ili 5 µg/m2 ili manje jednog ili više anti-CD3 antitela ili antigen-vezujućih fragmenata je primenjeno tokom oko 24 časa, oko 22 časa, oko 20 časova, oko 18 časova, oko 16 časova, oko 14 časova, oko 12 časova, oko 10 časova, oko 8 časova, oko 6 časova, oko 4 časa, oko 2 časa, oko 1.5 časova, oko 1 čas, oko 50 minuta, oko 40 minuta, oko 30 minuta, oko 20 minuta, oko 10 minuta, oko 5 minuta, oko 2 minuta, oko 1 minute, oko 30 sekundi ili oko 10 sekundi za prevenciju, lečenje ili ublažavanje jednog ili više simptoma autoimune bolesti ili T-ćelijskog maligniteta. Ukupna doza tokom trajanja režima je poželjno ukupno manja od 9000 µg/m<2>, 8000 µg/m2 , 7000 µg/m2 , 6000 µg/m2 , i može biti manja od 5000 µg/m<2>, 4000 µg/m<2>, 3000 µg/m<2>, 2000 µg/m2 ili 1000 µg/m2. U specifičnim primerima izvođenja, ukupna doza primenjena u režimu je 100 µg/m<2>do 200 µg/m<2>, 100 µg/m<2>do 500 µg/m<2>, 100 µg/m<2>do 1000 µg/m<2>, ili 500 µg/m2 do 1000 µg/m2.
[0131] U poželjnim primerima izvođenja, doza se brzo povećava tokom prve četvrtine, prve polovine ili prvih 2/3 doza (npr., tokom prva 2, 3, 4, 5 ili 6 dana od 10, 12, 14, 16, 18 ili 20 – dnevnog režima jedne doze na dan) režima lečenja dok se ne postigne dnevna profilaktički ili terapeutski efikasna količina jednog ili više anti-CD3 antitela ili antigen-vezujućih fragmenata. U određenim primerima izvođenja, subjekat je primao režim lečenja koji sadrži jednu ili više doza profilaktički ili terapeutski efikasne količine jednog ili više anti-CD3 antitela ili antigenvezujućih fragmenata, pri čemu je profilaktički ili terapeutski efikasna količina povećana za, npr., 0.01 µg/kg, 0.02 µg/kg, 0.04 µg/kg, 0.05 µg/kg, 0.06 µg/kg, 0.08 µg/kg, 0.1 µg/kg, 0.2 µg/kg, 0.25 µg/kg, 0.5 µg/kg, 0.75 µg/kg, 1 µg/kg, 1.5 µg/kg, 2 µg/kg, 4 µg/kg, 5 µg/kg, 10 µg/kg, 15 µg/kg, 20 µg/kg, 25 µg/kg, 30 µg/kg, 35 µg/kg, 40 µg/kg, 45 µg/kg, 50 µg/kg, 55 µg/kg, 60 µg/kg, 65 µg/kg, 70 µg/kg, 75 µg/kg, 80 µg/kg, 85 µg/kg, 90 µg/kg, 95 µg/kg, 100 µg/kg, or 125 µg/kg each day; or increased by, e.g., 1 µg/m2 , 5 µg/m2 , 10 µg/m2 , 15 µg/m2 , 20 µg/m2 , 30 µg/m2 , 40 µg/m2 , 50 µg/m2 , 60 µg/m2 , 70 µg/m2 , 80 µg/m2 , 90 µg/m2 , 100 µg/m2 , 150 µg/m2 , 200 µg/m2 , 250 µg/m2 , 300 µg/m2 , 350 µg/m2 , 400 µg/m2 , 450 µg/m2 , 500 µg/m2 , 550 µg/m2 , 600 µg/m2 ili 650 µg/m2 , svaki dan kako tretman napreduje. U određenim primerima izvođenja, subjekat je primio režim lečenja koji sadrži jednu ili više doza profilaktički ili terapeutski efikasne količine jednog ili više anti-CD3 antitela ili antigen-vezujućih fragmenata, pri čemu je profilaktički ili terapeutski efikasna količina povećana za faktor od 1.25, faktor od 1.5, faktor od 2, faktor od 2.25, faktor od 2.5, ili faktor od 5 sve dok se ne postigne dnevna profilaktički ili terapeutski efikasna količina jednog ili više anti-CD3 antitela ili antigenvezujućih fragmenata.
[0132] U specifičnom primeru izvođenja, subjekat je intramuskularno primio jednu ili više doza od 200 µg/kg ili manje, poželjno 175 µg/kg ili manje, 150 µg/kg ili manje, 125 µg/kg ili manje, 100 µg/kg ili manje, 95 µg/kg ili manje, 90 µg/kg ili manje, 85 µg/kg ili manje, 80 µg/kg ili manje, 75 µg/kg ili manje, 70 µg/kg ili manje, 65 µg/kg ili manje, 60 µg/kg ili manje, 55 µg/kg ili manje, 50 µg/kg ili manje, 45 µg/kg ili manje, 40 µg/kg ili manje, 35 µg/kg ili manje, 30 µg/kg ili manje, 25 µg/kg ili manje, 20 µg/kg ili manje, 15 µg/kg ili manje, 10 µg/kg ili manje, 5 µg/kg ili manje, 2.5 µg/kg ili manje, 2 µg/kg ili manje, 1.5 µg/kg ili manje, 1 µg/kg ili manje, 0.5 µg/kg ili manje, ili 0.5 µg/kg ili manje jednog ili više anti-CD3 antitela ili antigen-vezujućih fragmenata za prevenciju, lečenje ili ublažavanje jednog ili više simptoma autoimunog poremećaja ili T-ćelijskog maligniteta.
[0133] U sledećem primeru izvođenja, subjekat je subkutano primio jednu ili više doza od 200 µg/kg ili manje, poželjno 175 µg/kg ili manje, 150 µg/kg ili manje, 125 µg/kg ili manje, 100 µg/kg ili manje, 95 µg/kg ili manje, 90 µg/kg ili manje, 85 µg/kg ili manje, 80 µg/kg ili manje, 75 µg/kg ili manje, 70 µg/kg ili manje, 65 µg/kg ili manje, 60 µg/kg ili manje, 55 µg/kg ili manje, 50 µg/kg ili manje, 45 µg/kg ili manje, 40 µg/kg ili manje, 35 µg/kg ili manje, 30 µg/kg ili manje, 25 µg/kg ili manje, 20 µg/kg ili manje, 15 µg/kg ili manje, 10 µg/kg ili manje, 5 µg/kg ili manje, 2.5 µg/kg ili manje, 2 µg/kg ili manje, 1.5 µg/kg ili manje, 1 µg/kg ili manje, 0.5 µg/kg ili manje, ili 0.5 µg/kg ili manje jednog ili više anti-CD3 antitela ili antigen-vezujućih fragmenata za prevenciju, lečenje ili ublažavanje jednog ili više simptoma autoimunog poremećaja.
[0134] U sledećem primeru izvođenja, subjekat je intravenski primao jednu ili više doza od 100 µg/kg ili manje, poželjno 95 µg/kg ili manje, 90 µg/kg ili manje, 85 µg/kg ili manje, 80 µg/kg ili manje, 75 µg/kg ili manje, 70 µg/kg ili manje, 65 µg/kg ili manje, 60 µg/kg ili manje, 55 µg/kg ili manje, 50 µg/kg ili manje, 45 µg/kg ili manje, 40 µg/kg ili manje, 35 µg/kg ili manje, 30 µg/kg ili manje, 25 µg/kg ili manje, 20 µg/kg ili manje, 15 µg/kg ili manje, 10 µg/kg ili manje, 5 µg/kg ili manje, 2.5 µg/kg ili manje, 2 µg/kg ili manje, 1.5 µg/kg ili manje, 1 µg/kg ili manje, 0.5 µg/kg ili manje, ili 0.5 µg/kg ili manje jednog ili više anti-CD3 antitela ili antigen-vezujućih fragmenata za prevenciju, lečenje ili ublažavanje jednog ili više simptoma autoimunog poremećaja ili T-ćelijskog maligniteta. U sledećem primeru izvođenja, intravenska doza od 100 µg/kg ili manje, 95 µg/kg ili manje, 90 µg/kg ili manje, 85 µg/kg ili manje, 80 µg/kg ili manje, 75 µg/kg ili manje, 70 µg/kg ili manje, 65 µg/kg ili manje, 60 µg/kg ili manje, 55 µg/kg ili manje, 50 µg/kg ili manje, 45 µg/kg ili manje, 40 µg/kg ili manje, 35 µg/kg ili manje, 30 µg/kg ili manje, 25 µg/kg ili manje, 20 µg/kg ili manje, 15 µg/kg ili manje, 10 µg/kg ili manje, 5 µg/kg ili manje, 2.5 µg/kg ili manje, 2 µg/kg ili manje, 1.5 µg/kg ili manje, 1 µg/kg ili manje, 0.5 µg/kg ili manje, ili 0.5 µg/kg ili manje jednog ili više anti-CD3 antitela ili antigen-vezujućih fragmenata je primenjivana tokom oko 6 časova, oko 4 časova, oko 2 časa, oko 1.5 časa, oko 1 časa, oko 50 minuta, oko 40 minuta, oko 30 minuta, oko 20 minuta, oko 10 minuta, oko 5 minuta, oko 2 minuta, oko 1 minute, oko 30 sekundi ili oko 10 sekundi za prevenciju, lečenje ili ublažavanje jednog ili više simptoma autoimunog poremećaja ili T-ćelijskog maligniteta.
[0135] U specifičnim primerima izvođenja u kojima su brzo rastuće doze primenjivane tokom prvih dana režima doziranja, doza na dan 1 režima je 5 - 100 µg/m<2>/dan, i brzo raste do dnevne doze kao što je navedena neposredno u prednom tekstu do dana 3, 4, 5, 6 ili 7. Na primer, na dan 1, subjekat je primao dozu od približno 51 µg/m<2>/dan, na dan 2 približno 103 µg/m<2>/dan, na dan 3 približno 207 µg/m<2>/dan, na dan 4 približno 413 µg/m<2>/dan i u narednim danima režima (npr., dani 5-14) 826 µg/m2/dan.
[0136] U drugim primerima izvođenja, početna doza je 1/4, do 1/2, do jednaka dnevnoj dozi na kraju režima, ali je primenjena u porcijama u intervalima od 6, 8, 10 ili 12 časova. Na primer, doza od 13 µg/kg/dan primenjivana je u četiri doze od 3-4 µg/kg u intervalima od 6 časova da bi se smanjio nivo oslobađanja citokina uzrokovan primenom antitela.
[0137] U specifičnim primerima izvođenja, da bi se smanjila mogućnost oslobađanja citokina i ostali štetni efekti, prvih 1, 2, 3 ili 4 doza ili sve doze u režimu su primenjivane sporije preko intravenske primene. Na primene, doza od 51 µg/m2/dan može biti primenjivana tokom oko 5 minuta, oko 15 minuta, oko 30 minuta, oko 45 minuta, oko 1 časa, oko 2 časova, oko 4 časova, oko 6 časova, oko 8 časova, oko 10 časova, oko 12 časova, oko 14 časova, oko 16 časova, oko 18 časova, oko 20 časova, i oko 22 časova. U određenim primerima izvođenja, doza je primenjivana sporom infuzijom tokom perioda od, npr., 20 do 24 časova. U specifičnim primerima izvođenja, doza je infuzirana u pumpi, poželjno povećavajući koncentraciju primenjivanog antitela kako infuzija napreduje.
[0138] U drugim primerima izvođenja, frakcija režima može biti primenjivana u brzo rastućim dozama. Na primer, za režim od 51 µg/m<2>/dan do 826 µg/m<2>/dan opisan u prethodnom tekstu, frakcija može biti 1/10, 1/4, 1/3, 1/2, 2/3 ili 3/4 dnevnih doza. Prema tome, kada je frakcija 1/10, dnevne doze će biti 5.1 µg/m<2>na dan 1, 10.3 µg/m<2>na dan 2, 20.7 µg/m<2>na dan 3, 41.3 µg/m<2>na dan 4 i 82.6 µg/m2 na dane 5 do 14. Kada je frakcija 1/4, doze će biti 12.75 µg/m<2>na dan 1, 25.5 µg/m2 na dan 2, 51 µg/m2 na dan 3, 103 µg/m2 na dan 4, and 207 µg/m2 na dane 5 do 14. Kada je frakcija 1/3, doze će biti 17 µg/m<2>na dan 1, 34.3 µg/m<2>na dan 2, 69 µg/m<2>na dan 3, 137.6 µg/m2 na dan 4 i 275.3 µg/m2 na dane 5 do 14. Kada je frakcija 1/2, doze će biti 25.5 µg/m<2>na dan 1, 51 µg/m2 na dan 2, 103 µg/m2 na dan 3, 207 µg/m2 na dan 4, i 413 µg/m2 na dane 5 do 14. Kada je frakcija 2/3, doze će biti 34 µg/m<2>na dan 1, 69 µg/m<2>na dan 2, 137.6 µg/m<2>na dan 3, 275.3 µg/m2 na dan 4, i 550.1 µg/m2 na dane 5 do 14. Kada je frakcija 3/4, doze će biti 38.3 µg/m2 na dan 1, 77.3µg/m2 na dan 2, 155.3 µg/m2 na dan 3, 309.8 µg/m2 na dan 4 i 620 µg/m2 na dane 5 do 14.
[0139] U specifičnim primerima izvođenja, anti-CD3 antitelo ili antigen-vezujući fragmenti nisu primenjivani u dnevnim dozama tokom određenog broja dana, već su pre primenjivani infuzijom na isprekidani način tokom 4 časa, 6 časova, 8 časova, 10 časova, 12 časova, 15 časova, 18 časova, 20 časova, 24 časa, 30 časova ili 36 časova. Infuzija može biti konstantna ili može da počne na nižoj dozi tokom, na primer, prvih 1, 2, 3, 5, 6 ili 8 časova infuzije i zatim raste do više doze. Tokom infuzije, pacijent prima dozu jednaku količini primenjenoj u ilustrativnim režimima navedenim u prethodnom tekstu. Na primer, doza od približno 150 µg/m<2>, 200 µg/m<2>, 250 µg/m2 , 500 µg/m2 , 750 µg/m2 , 1000 µg/m2 , 1500 µg/m2 , 2000 µg/m2 , 3000 µg/m2 , 4000 µg/m2 , 5000 µg/m2 , 6000 µg/m2 , 7000 µg/m2 , 8000 µg/m2 , ili 9000 µg/m2. Naročito, brzina i trajanje infuzije je dizajnirano tako da se minimizuje nivo slobodnog anti-CD3 antitela ili antigenvezujućih fragmenata su subjektu posle primene. U određenim primerima izvođenja, nivo slobodnog anti-CD3 antitela ili antigen-vezujućih fragmenata ne bi trebalo da pređe 200 ng/ml slobodnog antitela. Pored toga, infuzija je dizajnirana tako da se postigne kombinovano oblaganje i modulacija T ćelijskog receptora od najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% ili 100%.
[0140] U određenim primerima izvođenja, anti-CD3 antitelo ili antigen-vezujući fragmenti primenjuju se tako da se postigne određeni nivo kombinovanog oblaganja i modulacije kompleksa T ćelijskog receptora na T ćelijama, kao što je određeno pomoću postupaka koji su dobro poznati u stanju tehnike, videti, npr., Primer 11 SAD objave patentne prijave US 2003/0108548. U specifičnim primerima izvođenja, režim doziranja postiže kombinovano oblaganje i modulaciju T ćelijskog receptora od najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% ili 100% sa, u specifičnim primerima izvođenja, malo do bez detektovanog slobodnog anti-CD3 antitela ili antigen-vezujućih fragmenata (na primer, manje od 200 ng/mL leka je detektovano u krvi pacijenta).
[0141] U poželjnim primerima izvođenja, anti-CD3 antitelo ili antigen-vezujući fragmenti su primenjivani parenteralno, na primer, intravenski, intramuskularno ili subkutano, ili, alternativno, primenjivani su oralno. Anti-CD3 antitelo ili antigen-vezujući fragmenti takođe mogu biti primenjivani kao formulacija sa produženim oslobađanjem.
[0142] U specifičnom primeru izvođenja, primena jedne ili više doza ili režima doziranja profilaktički ili terapeutski efikasne količine jednog ili više anti-CD3 antitela ili antigenvezujućih fragmenata ne indukuje ili smanjuje u odnosu na druga imunosupresivna sredstva jedan ili više od sledećih neželjenih ili štetnih efekata: abnormalitete vitalnih znakova (groznica, tahikardija, bradikardija, hipertenzija, hipotenzija), hematološke događaje (anemija, limfopenija, leukopenija, trombocitopenija), glavobolju, groznicu, vrtoglavicu, mučninu, ateniju, bol u leđima, bol u grudima (pritisak u grudima), dijareju, mijalgiju, bol, pruritus, psorijazu, rinitis, znojenje, reakciju mesta injekcije, vazodilataciju, povećani rizik od oportunističke infekcije, aktivaciju Epstein Barr virusa, apoptozu T ćelija i povećani rizik od razvoja određenih tipova kancera. U drugom specifičnom primeru izvođenja, primena jedne ili više doza profilaktički ili terapeutski efikasne količine jednog ili više anti-CD3 antitela ili antigen-vezujućih fragmenata ne indukuje ili smanjuje u odnosu na druga imunosupresivna sredstva jednog ili više od sledećih neželjenih ili štetnih efekata: abnormalitete vitalnih znakova (groznica, tahikardija, bradikardija, hipertenzija, hipotenzija), hematološke događaje (anemija, limfopenija, leukopenija, trombocitopenija), glavobolju, groznicu, vrtoglavicu, mučninu, ateniju, bol u leđima, bol u grudima (pritisak u grudima), dijareju, mijalgiju, bol, pruritus, psorijazu, rinitis, znojenje, reakciju mesta injekcije, vazodilataciju, povećani rizik od oportunističke infekcije, aktivaciju Epstein Barr virusa, apoptozu T ćelija i povećani rizik od razvoja određenih tipova kancera.
[0143] U skladu sa otkrićem, doza ili režim doziranja koji sadrži profilaktički ili terapeutski efikasnu količinu jednog ili više anti-CD3 antitela ili antigen-vezujućih fragmenata za lečenje autoimunog poremećaja mogu biti ponovljeni na 1 mesec, 2 meseca, 4 meseca, 6 meseci, 8 meseci, 12 meseci, 15 meseci, 18 meseci ili 24 meseca ili duže posle početne ili prethodne doze ili režima doziranja koji sadrže profilaktički ili terapeutski efikasnu količinu jednog ili više anti-CD3 antitela ili antigen-vezujućih fragmenata. Ponovljena doza ili režium doziranja mogu biti primenjivani kao što se podrazumeva, kada se simptomi povezani sa navedenim autoimunim poremećajem vraćaju posle poboljšanja posle početne ili prethodne doze ili režima doziranja, ili kada se simptomi povezani sa navedenim autoimunim poremećajem ne poboljšavaju posle početne doze ili režima doziranja anti-CD3 antitela ili antigen-vezujućih fragmenata prema postupcima koji su ovde dati. Na primer, u vezi sa dijabetesom, ponovljena doza ili režim doziranja koji sadrži profilaktički ili terapeutski efikasnu količinu jednog ili više anti-CD3 antitela ili antigen-vezujućih fragmenata može biti primenjivana/primenjivan na subjekta kada se, na primer, prosečna dnevna upotreba insulina subjekta na 1 mesec, 2 meseca, 4 meseca, 6 meseci, 8 meseci, 12 meseci, 15 meseci, 18 meseci ili 24 meseca ili duže posle početnog ili prethodnog tretmana sa anti-CD3 antitelom ili antigen-vezujućim fragmentima ne smanjuje za najmanje 5%, najmanje 10%, najmanje 20%, najmanje 30%, najmanje 40%, najmanje 50%, najmanje 60%, najmanje 70%, najmanje 80% ili najmanje 90% u poređenju sa nivoima pre tretmana. Alternativno, u vezi sa dijabetesom, ponovljena doza ili režim doziranja koji sadrži profilaktički ili terapeutski efikasnu količinu jednog ili više anti-CD3 antitela ili antigenvezujućih fragmenata mogu se primenjivati na subjekta kada, na primer, nivoi HA 1 ili HA 1 C subjekta na 1 mesec, 2 meseca, 4 meseca, 6 meseci, 8 meseci, 12 meseci, 15 meseci, 18 meseci ili 24 meseca ili duže posle početnog ili prethodnog tretmana sa anti-CD3 antitelom ili antigenvezujućim fragmentima ne smanjuje se za najmanje 5%, najmanje 10%, najmanje 20%, najmanje 30%, najmanje 40%, najmanje 50%, najmanje 60%, najmanje 70%, najmanje 80% ili najmanje 90% u poređenju sa nivoima pre tretmana. U sledećem primeru izvođenja, u vezi sa dijabetesom, ponovljena doza ili režim doziranja koji sadrži profilaktički ili terapeutski efikasnu količinu jednog ili više anti-CD3 antitela ili antigen-vezujućih fragmenata može se primenjivati na subjekta kada, na primer, odgovor C-peptida subjekta na 1 mesec, 2 meseca, 4 meseca, 6 meseci, 8 meseci, 12 meseci, 15 meseci, 18 meseci ili 24 meseca ili duže posle početnog ili prethodnog tretmana sa anti-CD3 antitelom ili antigen-vezujućim fragmentima smanjuje se za više od 5%, više od 10%, više od 20%, više od 30%, više od 40%, više od 50%, više od 60%, više od 70%, više od 80% ili više od 90% u poređenju sa nivoima pre tretmana.
[0144] Autoimune bolesti su neinfektivne imunološke bolesti uzrokovane imunim odgovorima koji su usmereni na normalne komponente humanih ćelija, tkiva i organa. Autoimune bolesti su često hronične bolesti koje postepeno erodiraju ciljna tkiva i organe. Uobičajene bolesti sada klasifikovane kao autoimune bolesti koje su posledica prisustva neodgovarajućih autoimunih odgovora obuhvataju insulin-zavisni dijabetes tipa I, reumatoidni artritis (RA), sistemski lupus eritematozis (SLE), multiplu sklerozu (MS), inflamatornu bolest creva (IBD); mijasteniju gravis, celijačnu bolest, Sjogren-ov sindrom, Grave-ovu bolest, Crohn-ovu bolest, autoimuni hepatitis, psorijazu, psorijatički artritis, astmu, alergijski rinitis, efekte transplantacije organa ili bolest transplanta protiv domaćina (GVHD) i brojne druge bolesti koje uključuju inflamatorni imuni odgovor.
[0145] Kako su autoimune bolesti tipično hronične, one tipično zahtevaju lečenje ili praćenje tokom celog života. Konvencionalne terapije za autoimunu bolest su prema tome primarno usmerene na upravljanje posledicama inflamacije uzrokovane bolešću, i samo nekoliko autimunih bolesti mogu biti lečene ili može biti učinjeno da nestanu sa takvim tretmanom. Za neke autoimune bolesti, primena jednog od ograničenog broja imunosupresivnih lekova može rezultirati u periodima remisije ili nestajanja aktivne bolesti. Imunosupresivna sredstva korišćena za dodatnu terapiju obuhvataju supstance koje suprimiraju proizvodnju citokina, nishodno regulišu ili suprimiraju ekspresiju auto-antigena ili maskiraju antigene histokompatibilnosti (MHC). Imunosupresivni lekovi obuhvataju anti-inflamatorne lekove (npr., nesteroidni antiinflamatorni lek ("NSAID"), ciklofosfamid, bromokriptin ciklosporin A, metotreksat, steroide kao što su glukokortikosteroidi i citokini ili antagonisti receptora za citokin. Pacijenti su retko sposobni za prekid ovih imunosupresivnih lekova jer se njihova autoimuna bolest obično ponovo javlja kada je lek prekinut. Autoimuna bolest može da postane refraktivna za lečenje kada su imunosupresivni lekovi prekinuti dugotrajno i može da zahteva sve veće doze imunosupresivnih sredstava.
[0146] Veruje se da terapeutska antitela usmerena na CD3 proizvode manje dugotrajnih sporednih efekata od mnogih imunosupresivnih hemoterapija koje su trenutno dostupne za autoimune bolesti (WO 2007/117600). Međutim, nađeno je da su prethodne terapije na bazi antitela problematične, naročito gde je korišćena ponovljena primena. Anti-limfocitne terapije, kao što je antilimfocitni globulin (ALG), i monoklonska antitela usmerena na B ćelije, kao što je rituksimab (Rituxin®) i alemtuzumab (CAMPATH®) smanjuju cirkulaciju i poulacije B ćelija tkiva kod lečenih subjekata. Međutim, ove terapije takođe uzrokuju tešku imunosupresiju, koja je neželjena za dugotrajno lečenje hronične autoimune bolesti. Glavna komplikacija teške imunosupresivne terapije je infekcija. Sistemska imunosupresija takođe može biti praćena neželjenim toksičnim efektima i redukcijom u nivoima hematopoetskih matičnih ćelija. Pored toga, pacijenti koji primaju terapije antitelom često razvijaju značajne nivoe humanih anti-mišjih antitela (HAMA), humanih anti-himernih antitela (HACA) i anti-idiotipskih odgovora, koji mogu da ograniče ponovljene tretmane kada se remisija završi.
[0147] Kao što su razmatrana u prethodnom tekstu, antitela usmerena na antigene T ćelije, kao što je kompleks T-ćelijskog receptora (TCR), sugerisana su kao mogući terapeutici za imunosupresiju autoimune bolesti. Veruje se da anti-CD3 antitela indukuju takvu imunosupresiju redukcijom patogenih T ćelija i indukcijom regulatornih T ćelija (WO 2007/117600; St. Clair E.W. (2009) "Novel Targeted Therapies for Autoimmunity," Curr. Opin. Immunol. 21(6):648-657; Ludvigsson, J. (2009) "The Role of Immunomodulation Therapy in Autoimmune Diabetes," J. Diabetes Sci. Technol. 3(2):320-330). Antitela protiv T ćelija, uključujući anti-CD3, prema tome su korišćena za delovanje na imunološki status kod subjekta supresijom, pojačanjem ili preusmeravanjem T ćelijskih odgovora na antigen. Naročito, teplizumab, takođe poznat kao hOKT3γ1(Ala-Ala) (koji sadrži alanin na položajima 234 i 235) (MacroGenics, Inc.) je anti-CD3 antitelo koje je konstruisano za promenu funkcije T limfocita koji posreduju uništavanje beta ćelija koje proizvode insulin ostrvaca pankreasa. Teplizumab se vezuje za epitop CD3ε lanca eksprimiran na zrelim T ćelijama i činjeći to.
[0148] Kao posledica delimično njihove unakrsne reaktivnosti sa nehumanim CD3 (koja omogućava tačnije i responsivnije lečenje), anti-CD3 antitela prema predmetnom otkriću smatra se da imaju naročitu korist u lečenju autoimune bolesti bez obzira na očigledne neuspehe stanja tehnike.
[0149] Takva antitela i njihovi antigen-vezujući fragmenti mogu biti korišćeni pojedinačno ili zajedno sa drugim farmaceutskim sredstvima. Naročito, opisane su terapije koje uključuju primenu takvih antitela ili antigen-vezujućih fragmenata zajedno sa antitelima protiv B ćelija (ili njihovim antigen-vezujućim fragmentima). Antitela protiv B ćelija su poznata u stanju tehnike (videti, WO 2007/117600; WO 2005/000901; WO 2004/035607; SAD patenti br. 5,500,362 i 5,736,137; SAD patentne objave br. 2003/0219433; 2005/0271658; 2005/0271658; 2005/0281817; 2006/024295; 2006/024300 i 2006/034835; Clark, E.A. et al. (1985) "Role Of The Bp35 Cell Surface Polypeptide In Human B-Cell Activation," Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 82(6):1766-1770; Press, O.W. et al. (1987) "Monoclonal Antibody 1F5 (Anti-CD20) Serotherapy of Human B Cell Lymphomas," Blood 69:584-591). Takva vezana primena može se postići upotrebom zajedničke primene različitih antitela ili njihovih antigen-vezujućih fragmenata, ili formiranjem bispecifičnih antitela, ili poželjnije, formiranjem DART™ diatela, kao što je opisano u prethodnom tekstu, koja imaju sposobnost da se vežu za oba CD3 i B ćelijski antigen.
[0150] Poželjno, korišćeno antitelo protiv B ćelije ili antigen-vezujućeg fragmenta biće usmereno na B ćelijski površinski marker, kao što je marker izabran od CD19, CD20, CD22, CD23, CD32B, CD40, B7-1 (CD80), B7-2 (CD86), CD79a, CD79b, CD38, CD27, antigen vezan za funkciju limfocita (LFA), kao što je LFA-I ili LFA-3, CFA-I, ili drugi pomoćni molekul uključen u vezivanje T ćelije, B ćelije koje dovodi do aktivacije T ćelije i B ćelije u adaptivnom imunom odgovoru. U dodatnom poželjnom primeru izvođenja, antitelo protiv B ćelije može biti antitelo koje depletira B ćelije, kao što je antitelo usmereno na marker izabran od CD19, CD20, CD22, CD23, CD32B, CD40, B7-1 (CD80), B7-2 (CD86), antigena povezanog sa funkcijom lifocita (LFA), kao što je LFA-I ili LFA-3, CFA-I, ili pomoćni molekul uključen u vezu T ćelije, B ćelije.
[0151] Alternativno, takva kombinovana terapija može da sadrži primenu anti-CD3 antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta, u kombinaciji sa antitelom (ili njegovim antigenvezujućim fragmentom) koje prepoznaje antigen prisutan na antigen prikazujućoj ćeliji (npr., B7-H3). U dodatnom poželjnom primeru izvođenja, kombinovana terapija sadrži primenu anti-CD3 antitela (ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta) u kombinaciji sa antitelom (ili njegovim antigen-vezujućim fragmentom) koje prepoznaje polipeptid uključen u aktivaciju B ćelije (bilo direktno ili indirektno) ili imunomodulator kao što je član porodice TNF citokina, ili interferon (npr., α, β ili γ interferon). Kao što razumeju stručnjaci iz date oblasti tehnike, takvi interferoni su uključeni u regulaciju proteina koji funkcionišuzajedno u obradi i prikazu antigena. Ovi citokini stimulišu ćelije za povećanje njihove ekspresije teških lanaca HLA klase I. U jednom poželjnom primeru izvođenja, kombinovana terapija sadrži primenu na subjekta koji ima aktivnu autoimunu bolest antitela za T ćelijski antigen u kombinaciji sa antitelom za βinterferonom. U dodatnom poželjnom primeru izvođenja, kombinovana terapija sadrži primenu na subjekta antitela usmerenog na T ćelijski antigen u kombinaciji sa antitelom izabranim od βinterferon antitela AVONEX®, BETASERON® i REBIF®. U dodatnom primeru izvođenja, kombinovana terapija sadrži primenu na subjekta antitela usmerenog na T ćelijski antigen u kombinaciji sa antitelom usmerenim na β-interferon za lečenje subjekta koji ima multiplu sklerozu.
[0152] U dodatnom primeru izvođenja, anti-CD3 antitelo može biti nemitogeno antitelo ili redukovano-mitogeno antitelo koje inhibira ili sprečava T ćelijsku aktivaciju kada T ćelija dođe u kontakt sa svojim specifičnim antigenom na ćeliji koja prikazuje antigen, naročito antigen prikazujućoj B ćeliji. Kao što je ovde korišćen, termin "nemitogeno T ćelijsko antitelo" označava antitelo koje je konstruisano promenom Fc receptora antitela tako da ono ne pokreće početne aktivacione događaje i posledično oslobađanje citokina koji su zabeleženi kada je aktivirana T ćelija. "Redukovano mitogeno T ćelijsko antitelo" je antitelo specifično za T ćelijski antigen koji redukuje početne aktivacione događaje i oslobađanje citokina koji se javljaju kada je T ćelija aktivirana. Nemitogeno ili redukovano mitogeno antitelo može biti korisno za prevenciju početnih "sporednih efekata prve doze" zabeleženih kada je anti-limfocitno antitelo primenjeno na pacijenta. Nemitogeno ili redukovano mitogeno antitelo može biti konstruisano antitelo koje ima modifikovani Fc fragment koje sprečava ili inhibira vezivanje efektorskih ćelija.
C. Postupci primene
[0153] Ovde su opisani tretirani humani subjekti tako da se postignu i održavaju kliničke remisije tokom dužih perioda od remisija postignutih kod subjekata tretiranih konvencionalnom terapijom. Na primer, tamo gde konvencionalna terapija postiže remisiju simptoma autoimune bolesti tokom tri meseca, kompozicije prema predmetnom otkriću mogu da obezbede potpunu remisiju simptoma do šest meseci, do 12 meseci i u nekim slučajevima do jedne do dve godine ili duže. Razmatrano je da za određene autoimune bolesti može biti moguće obezbediti potpunu remisiju koja ne relapsira, naročito gde terapija počinje kratko pošto je postavljena dijagnoza autoimune bolesti.
[0154] Klinička remisija postignuta sa kombinovanom terapijom može biti potpuna remisija, ili može biti parcijalna remisija kod koje su značajne redukcije u simptomima bolesti održavane tokom dužeg perioda. Na primer, subjekat koji prima terapiju opisanu ovde može imati redukovane autoimune odgovore kao što je određeno pomoću redukovanih nivoa detektabilnih autoantitela u telesnim tečnostima i tkivima, na primer u cerebrospinalnoj tečnosti (CSF), serumu, urinu ili u telesnim tkivima. Subjekat koji prima kombinovanu terapiju takođe može imati redukovane T ćelijske odgovore na autoantigene kao što je detektovano pomoću in vitro analiza proliferacije ili proizvodnje citokina upotrebom mononuklearnih ćelija periferne krvi (PBMCs) ili prečišćenih T ćelija u poređenju sa subjektima tretiranim konvencionalnom terapijom.
[0155] Kompozicije predmetnog otkrića mogu biti primenjivane pomoću bilo kojih pogodnih načina, uključujući parenteralnu, topikalnu, subkutanu, intraperitonealnu, intrapulmonarnu, intranazalnu i/ili intralezionu primenu. Parenteralne infuzije obuhvataju intramuskularnu, intravensku, intraarterijsku, intraperitonealnu ili subkutanu primenu. Pored toga, antitelo može biti pogodno primenjeno pulsnom infuzijom, npr., sa rastućim dozama antitela. Poželjno, dozitanje je davano intravenski ili subkutano, i poželjnije preko intravenske infuzije(a). Svako izlaganje može biti obezbeđeno upotrebom istih ili različitih načina primene. U jednom primeru izvođenja, svako izlaganje je preko intravenske primene. U sledećem primeru izvođenja, svako izlaganje je davano preko subkutane primene. U sledećem primeru izvođenja, izlaganja su davana preko obe, intravenske i subkutane primene.
[0156] U jednom primeru izvođenja, terapeutska antitela su primenjivana kao spora intravenska infuzija koja može da počne po satu da bi se isporučili molekuli otkrića od približno 15 minuta do 4 časova. Međutim, ako subjekat ima reakciju povezanu sa infuzijom, stopa infuzije je poželjno smanjena, npr., do polovine trenutne stope. Tretirani subjekti mogu da primaju profilaktički tretman acetaminofena/paracetamola (npr., oko 1g) i difenhidramin HCl (npr., oko 50 mg ili ekvivalentnu dozu sličnog sredstva) preko usta oko 30 do 60 minuta pre početka infuzije.
[0157] Terapija obezbeđena preko kombinovanih kompozicija prema predmetnom otkriću (uključujući DART™ diatela) može biti primenjena na subjekta upotrebom početne doze prvog antitela koja je manja od količine takvog antitela potrebne da se postigne klinički odgovor u terapiji za autoimunu bolest kada je primenjena kao terapija pojedinačnog antitela. Doza terapeutskog anti-T ćelijskog antitela koja je manja od doze potrebne za postizanje deplecije T ćelija koje su sposobne da prepoznaju i odgovore na autoantigene u terapiji koja obezbeđuje pojedinačno antitelo može biti dovoljna da se obezbedi željeni klinički odgovor. Postupci za određivanje doze terapeutskog antitela potrebne da se postigne klinički odgovor su poznati stručnjacima iz date oblasti tehnike. Na primer, klinički odgovor kod subjekta može biti meren kao vreme do napredovanja bolesti, redukcije kliničkih simptoma, redukcije u nivoima laboratorijskih markera, redukcije u potrebi za ponovnim tretmanom, ili pomoću bilo kojih drugih kliničkih načina priznatih kao korisni indikator poboljšanja u statusu autoimune bolesti.
[0158] Drugo antitelo kombinovane terapije takođe može biti primenjivano na subjekta kod koga postoji potreba za tretmanom kao početna doza koja je manja od efikasne doze za postizanje kliničkog odgovora kada je antitelo primenjeno pojedinačno. Na primer, doze depletirajućeg antitela protiv B ćelija koje mogu da postignu manju od 100% deplecije B-ćelija, manju od 50% deplecije B ćelija, manju od 30% deplecije ili čak bez deplecije B ćelija mogu se primenjivati zajedno sa prvim antitelom protiv T ćelije da bi se postigao klinički odgovor koji obezbeđuje supresiju imunog odgovora na autoantigen isti ili bolji od kliničkog odgovora postignutog primenom količine antitela koje depletira B ćelije koja obezbeđuje 100% depleciju B ćelija u subjektu kada je primeno pojedinačno.
[0159] U nekim slučajevima, klinički odgovor može biti odgovor koji ni prvo ni drugo antitelo ne postiže kada se primenjuje pojedinačno. U drugim slučajevima, klinički odgovor može biti ekvivalentan onome postignutom primenom terapije pojedinačnog antitela, pri čemu kombinovana terapija obezbeđuje manju imunosupresiju imunog sistema tretiranog subjekta od terapije pojedinačnim antitelom. U jednom poželjnom primeru izvođenja, sinergistički odgovor obezbeđen kombinovanom terapijom redukuje ili eliminiše odgovor subjekta na autoantigen, uz obezbeđeivanje nižih nivoa imunosupresije. Opšta imunosupresija je značajan problem za prethodno dostupne terapije antitelom.
D. Farmaceutske formulacije
[0160] Terapeutske formulacije antitela korišćene u primerima izvođenja predmetnog otkrića su pripremljene za skladištenje, transport i primenu mešanjem kompozicije prema predmetnom otkriću koja ima željenu čistoću sa izbornim farmaceutski prihvatljivim nosačima, ekscipijensima ili stabilizatorima priznatim u farmaceutskom stanju tehnike u obliku liofilizovanih formulacija ili vodenih rastvora.
[0161] Termin "farmaceutski prihvatljiv" označava odobren od strane regulstorne agencije Federalne ili državne vlade ili naveden u U.S. Pharmacopeia ili drugoj opšte priznatoj farmakopeji za upotrebu kod životinja, i naročito kod ljudi. Termin "nosač" označava razblaživač, ađuvans (npr., Freund-ov ađuvans (kompletan i nekompletan), ekscipijens ili vehikulum sa kojim se terapeutik primenjuje. Takvi farmaceutski nosači mogu biti sterilne tečnosti, kao što su voda i ulja, uključujući ona od petroleuma, životinjskog, biljnog ili sintetičkog porekla, kao što je ulje od kikirikija, sojino ulje, mineralno ulje, susamovo ulje i slično. Voda je poželjan nosač kada je farmaceutska kompozicija primenjivana intravenski. Fiziološki rastvori i vodeni rastvor dekstroze i rastvori glicerola takođe mogu biti korišćeni kao tečni nosači, naročito za injektabilne rastvore. Pogodni farmaceutski ekscipijensi obuhvataju skrob, glukozu, laktozu, saharozu, želatin, skrob, pirinač, brašno, kredu, silika gel, natrijum stearat, glicerol monostearat, talk, natrijum hlorid, suvo obrano mleko, glicerol, propilen, glikol, vodu, etanol i slično. Kompozicija, ako je poželjna, takođe može da sadrži manje količine sredstva za vlaženje ili emulgatora, ili pH puferujućih sredstava. Ove kompozicije mogu imati oblik rastvora, suspenzija, emulzije, tableta, pilula, kapsula, praškova, formulacija sa produženim oslobađanjem i slično.
[0162] Kompozicije otkrića obuhvataju kompozicije leka in bulk korisne u proizvodnji farmaceutskih kompozicija (npr., nečiste ili nesterilne kompozicije) i farmaceutske kompozicije (tj., kompozicije koje su pogodne za primenu na subjekta ili pacijenta) koje mogu biti korišćene u pripremi oblika jedinične doze. Takve kompozicije sadrže profilaktički ili terapeutski efikasnu količinu profilaktičkog i/ili terapeutskog sredstva otkrivenu ovde ili kombinaciju tih sredstava i farmaceutski prihvatljiv nosač. Poželjno, kompozicije otkrića sadrže profilaktički ili terapeutski efikasnu količinu humanizovanih antitela otkrića i farmaceutski prihvatljiv nosač.
[0163] Generalno, sastojci kompozicija otkrića su isporučeni bilo posebno ili mešani zajedno u obliku jedinične doze, na primer, kao suvi liofilizovani prašak ili koncentrat bez vode u hermetički zatvorenom kontejneru kao što je ampula ili kesica sa naznačenom količinom aktivnog sredstva. Tamo gde se kompozicija primenjuje infuzijom, ona može biti dispenzirana sa infuzionom bocom koja sadrži sterilnu, farmaceutskog kvaliteta vodu ili fiziološki rastvor. Tamo gde se kompozicija primenjuje injekcijom, ampula sterilne vode za injekciju ili fiziološkog rastvora može biti obezbeđena tako da sastojci mogu biti mešani pre ili posle primene. Farmaceutske kompozicije pogodne za injekciju obuhvataju sterilne vodene rastvore gde su aktivna sredstva rastvorljiva u vodi, ili disperzije ili sterilni praškovi za ex tempore pripremu sterilnih injektabilnih rastvora. Kompozicije za upotrebu u kombinovanoj terapiji mogu biti pripremljene ugradnjom aktivnog antagonista ili antitela u traženoj količini sa odgovarajućim nosačima, na primer vodom, etanolom, poliolom (npr., glicerolom, prolpilen glikolom i tečnim polietilen glikolom) i njihovim pogodnim smešama. Izotonična sredstva kao što su šećeri, polialkoholi kao što je manitol, sorbitol ili natrijum hlorid mogu biti uključeni u kompoziciju.
[0164] Kompozicije otkrića mogu biti formulisane kao neutralni ili oblici soli. Farmaceutski prihvatljive soli obuhvataju, ali bez ograničenja na, one formirane sa anjonima kao što su oni poreklom od hlorovodonične, fosforne, sirćetne, oksalne, vinske kiseline, itd., i one formirane sa katjonima kao što su oni poreklom od natrijuma, kalijuma, amonijuma, kalcijuma, gvožđe hidroksida, izopropilamina, trietilamina, 2-etilamino etanola, histidina, prokaina, itd.
E. Kompleti
[0165] Takođe je opisano farmaceutsko pakovanje ili komplet koji sadrži jedan ili više spremnika napunjenih humanizovanim antitelima prema otkriću. Dodatno, jedan ili više drugih profilaktičkih ili terapeutskih sredstava korisnih za lečenje bolesti takođe mogu biti uključeni u farmaceutsko pakovanje ili komplet. Takođe je opisano farmaceutsko pakovanje ili komplet koji sadrži jedan ili više spremnika napunjenih sa jednim ili više sastojaka farmaceutskih kompozicija otkrića. Izborno povezana sa takvim spremnikom (spremnicima) može biti beleška u obliku propisanom od strane vladine agencije koja reguliše proizvodnju, upotrebu ili prodaju farnaceutskih sredstava ili bioloških proizvoda, pri čemu ta beleška reflektuje odobrenje od strane agencije za proizvodnju, upotrebu ili prodaju za humanu upotrebu.
[0166] Takođe su opisani kompleti koji mogu biti korišćeni ugore navedenim postupcima. U jednom primeru izvođenja, komplet sadrži jedan ili više humanizovanih antitela prema otkriću. U sledećem primeru izvođenja, komplet dalje sadrži jedno ili više drugih profilaktičkih ili terapeutskih sredstava korisnih za lečenje kancera, u jednom ili više spremnika. U sledećem primeru izvođenja, komplet dalje sadrži jedno ili više citotoksičnih antitela koja vezuju jedan ili više antigena kancera povezanih sa kancerom. U određenim primerima izvođenja, drugo profilaktičko ili terapeutsko sredstvo je hemoterapeutik. U drugim primerima izvođenja, profilaktičko ili terapeutsko sredstvo je biološki ili hormonski terapeutik.
[0167] Takođe je opisan proizvodni artikl koji sadrži antitela koja se koriste za kombinovanu terapiju za lečenje autoimune bolesti. Proizvodni artikl sadrži spremnik koji sadrži prvo antitelo koje vezuje antigen prisutan na T ćeliji i farmaceutski prihvatljiv nosač, ekscipijens ili razblaživač unutar spremnika. Proizvodni artikl dalje sadrži drugi spremnik koji sadrži drugo antitelo usmereno na B ćelijski površinski marker i farmaceutski prihvatljiv nosač, ekscipijens ili razblaživač i uputstva za primenu kompozicije na subjekta kod koga postoji potreba za lečenjem autoimune bolesti. Tamo gde su prvo i drugo antitelo određeni kao komplementarni i da ne utiču štetno jedan na drugog, prvo i drugo antitelo može biti obezbeđeno u jednom spremniku koji sadrži prvo i drugo antitelo u odgovarajućim koncentracijama za primenu zajedno sa umetkom u pakovanje i uputstvima za primenu.
[0168] Spremnici proizvodnog artikla mogu biti od bilo kog pogodnog materijala koji neće da reaguje sa ili na drugi način da utiče na pripremu. Proizvodni artikl može dalje da sadrži drugi ili treći spremnik koji sadrži farmaceutski prihvatljiv razblaživač pufer, kao što je bakteriostatička voda za injekciju, fosfatno-puferisani fiziološki rastvor, Ringer-ov rastvor i rastvor dekstroze. Proizvodni artikl takođe može da obuhvata drugi materijal koji može biti poželjan sa komercijalne i korisničke tačke gledišta uključujući druge pufere, razblaživače, filtere, igle i špriceve.
VII. Dijagnostički postupci koji koriste anti-CD3 antitela prema predmetnom otkriću [0169] Antitela za CD3 pripremljena pomoću postupaka otkrivenih ovde takođe mogu biti korišćena za identifikaciju prisustva i odsustva kanceroznih ćelija, ili njihovog nivoa, koji cirkulišu u krvi posle njihovog oslobađanja sa ćelijske površine (npr., rastvorljivi CD3). Takav cirkulišući antigen može biti intaktan CD3 antigen, ili njegov fragment koji zadržava sposobnost da bude detektovan prema postupcima koji su tu opisani. Takva detekcija može, na primer, biti postignuta pomoću FACS analize upotrebom standardnih postupaka koji se uobičajeno koriste u stanju tehnike.
[0170] U poželjnom primeru izvođenja dijagnostičkih postupaka opisanih ovde antitelo nosi detektabilno obeleživač. Primeri obeleživača koji mogu biti korišćeni obuhvataju radioaktivno sredstvo (npr., skandijum-47, tehnecijum-99m, indijum-111, jod-131, renijum-186, renijum-188, samarijum-153, holmijum-166, lutecijum-177, bakar-64, skandijum-47, itrijum-900), enzim ili ili fluorofor, kao što je fikoeritrin ili fluorescein izotiocijanat (takođe poznat kao fluoroizotiocijanat ili FITC).
[0171] Jedan postupak za upotrebu antitela za dijagnozu je in vivo imadžing tumora vezivanjem antitela za radioaktivno ili radio-neprozirno sredstvo, primenom antitela na individuu i upotrebom rentgenske ili druge imadžing mašine za vizuelizaciju obeleženog antitela na površini ćelija kancera koje eksprimiraju antigen. Antitelo je primenjeno u koncentraciji koja stimuliše vezivanje na fiziološkim uslovima.
[0172] In vitro tehnike za detekciju CD3 su rutinske u stanju tehnike i obuhvataju enzimski vezane imunosorbent analize (ELISAs), imunoprecipitacije, imunofluorescenciju, enzimsku imunološku analizu (EIA), radioimunološku analizu (RIA) i Western blot analizu.
[0173] Takođe su opisani postupci za pomoć u dijagnozi kancera okarakterisani pomoću ćelija kancera koje eksprimiraju CD3 u individui upotrebom bilo kog antitela koje se vezuje za CD3 i bilo koji drugi postupci koji mogu biti korišćeni za određivanje nivoa ekspresije CD3. Kao što su ovde korišćeni, postupci za "pomoć u dijagnozi" označava da ovi postupci pomažu u formiranju kliničkog određivanja u vezi sa klasifikacijom ili prirodom, kancera, i mogu i ne moraju biti konačni u vezi sa definitivnom dijagnozom. Prema tome, postupak za pomoć u dijagnozi kancera može da sadrži korak detekcije nivoa CD3 u biološkom uzorku iz individue i/ili određivanja nivoa ekspresije CD3 u uzorku. Antitela koja prepoznaju antigen ili njegov deo takođe mogu biti korišćena za stvaranje dijagnostičkih imunoloških analiza za detekciju antigena oslobođenog ili izlučenog iz živih ili umirućih ćelija kancera u telesnim tečnostima, uključujući, ali bez ograničenja na, krv, pljuvačku, urin, plućnu tečnost ili tečnost ascita. Anti-CD3 antitela pripremljena pomoću postupaka otkrivenih ovde mogu biti korišćena za određivanje da li se individua sa dijagnozom kancera može smatrati kandidatom za imunoterapiju upotrebom antitela usmerenih protiv CD3. U jednom primeru izvođenja, uzorak biopsije može biti testiran za ekspresiju CD3, upotrebom antitela usmerenih protiv CD3. Individue sa ćelijama kancera koje eksmprimiraju CD3 su pogodni kandidati za imunoterapiju upotrebom antitela usmerenih protiv CD3. Bojenje sa anti-CD3 antitelom takođe može biti korišćeno za razlikovanje kanceroznih tkiva od normalnih tkiva.
[0174] Postupci upotrebe anti-CD3 antitela za dijagnostičke svrhe su korisni kako pre tako i posle bilo kog oblika tretmana protiv kancera, npr., hemoterapije ili terapije zračenjem, za određivanje koji tumori će najverovatnije da imaju odgovor na dati tretman, prognoze za individuu sa kancerom, podtip tumora ili poreklom metastatičke bolesti i napredovanje bolesti ili odgovora na tretman.
[0175] Kompozicije ovog otkrića su naročito pogodne za dijagnozu stanja bolesti osim kancera, upotrebom postupaka koji su generalno opisani u prethodnom tekstu u prijavi sa drugim obolelim (nekanceroznim) ćelijama. Stanja bolesti pogodna za upotrebu u postupcima koji su ovde dati obuhvataju, ali bez ograničenja na, bolesti ili poremećaje povezane sa inflamatornim ili autoimunim odgovorima kod individua. Postupci opisani u prethodnom tekstu mogu biti korišćeni za modulaciju inflamatornih ili autoimunih bolesti kod individua. Bolesti i stanja koji su rezultat inflamacije i autoimunih poremećaja koji mogu biti podvrgnuti dijagnozi i/ili lečenju upotrebom kompozicija i postupaka koji su ovde opisani obuhvataju, radi ilustracije i bez ograničenja, multiplu sklerozu, meningitis, encefalitis, šlog, ostale cerebralne traume, inflamatornu bolest creva uključujući ulcerozni kolitis i Crohn-ovu bolest, mijasteniju gravis, lupus, reumatoidni artritis, astmu, akutni dijabetes sa juvenilnim početkom, demenciju kod SIDA-e, aterosklerozu, nefritis, retinitis, atopijski dermatitis, psorijazu, ishemiju miokarda i akutnu povredu pluća posredovanu preko leukocita.
[0176] Ostale indikacije za dijagnostičku i/ili terapeutsku upotrebu antitela i ostalih terapeutskih sredstava otkrića obuhvataju primenu na individue koje su u riziku od odbacivanja organa ili transplanta. Tokom poslednjih godina postojalo je značajno poboljšanje u efikasnosti hirurških tehnika za transplantaciju tkiva i organa kao što su koža, bubreg, jetra, srce, pluća, pankreas i koštana srž. Možda je glavni istaknut problem nedostatak zadovoljavajućih sredstava za indukciju imunotolerancije u recipijentu na transplantirani alotranspalntant ili organ. Kada su alogene ćelije ili organi transplantirani u domaćina (tj., donor i primalac su različite individue iz iste vrste), imuni sistem domaćina će verovatno formirati imuni odgovor na strane antigene u transplantu (bolest transplanta protiv domaćina) koji dovodi do uništenja transplantiranog tkiva.
[0177] Monoklonska antitela za CD3 pripremljena pomoću postupaka otkrivenih ovde mogu biti korišćena za identifikaciju prisustva ili odsustva humanih matičnih ćelija kancera u različitim tkivima. Postavljena je hipoteza da matične ćelije kancera (CSCs) imaju ulogu u rastu i metastazi tumora (Ghotra, V.P. et al. (2009) "The Cancer Stem Cell Microenvironment And Anti-Cancer Therapy," Int. J. Radiat. Biol. 85(11):955-962; Gupta, P.B. et al. (2009) "Cancer Stem Cells: Mirage Or Reality?" Nat. Med.15(9):1010-1012; Lawson, J.C. et al. (2009) "Cancer Stem Cells In Breast Cancer And Metastasis," Breast Cancer Res. Treat. 118(2):241-254; Hermann, P.C. et al. (2009) "Pancreatic Cancer Stem Cells--Insights And Perspectives," Expert Opin. Biol. Ther.
9(10):1271-1278; Schatton, T. et al. (2009) "Identification And Targeting Of Cancer Stem Cells," Bioessays 31(10):1038-1049; Mittal, S. et al. (2009) "Cancer Stem Cells: The Other Face Of Janus," Amer. J. Med. Sci.338(2):107-112; Alison, M.R. et al. (2009) "Stem Cells And Lung Cancer: Future Therapeutic Targets?" Expert Opin. Biol. Ther.9(9):1127-1141; Charafe-Jauffret, E. et al. (2009) "Breast Cancer Stem Cells: Tools And Models To Rely On," BMC Cancer 9:202; Scopelliti, A. et al. (2009) "Therapeutic Implications Of Cancer Initiating Cells," Expert Opin. Biol. Ther. 9(8):1005-1016; PCT objava WO 2008/091908). Pod ovom hipotezom, CSCs obezbeđuju malu, posebnu pogrupu ćelija unutar svakog tumora koje su sposobne za neograničenu auto-obnovu i razvijanje u još adultnih tumorskih ćelija koje su relativno ograničene u kapacitetu replikacije. Postavljena je hipoteza da bi ove matične ćelije kancera mogle biti otpornije na hemoterapeutska sredstva, zračenje ili druge toksične uslove, i na taj način, opstaju posle kliničkih terapija i kasnije rastu u sekundarne tumore, metastaziraju ili će biti odgovorne za relapse. Sugerisano je da CSCs mogu da se jave iz 'normalnih' matičnih ćelija tkiva ili iz diferenciranijih progenitorskih ćelija tkiva.
[0178] Upotrebe opisane u ovoj prijavi koje navode njihovu upotrebu za anti-CD3 antitela takođe obuhvataju upotrebu ostalih CD3 agonista, antagonista i modulatora kao što su opisani za upotrebu indetifikacije i lečenja matičnih ćelija kancera. U takvim primerima izvođenja, anti-CD3 antitela i ostali CD3 agonisti, antagonisti i modulatori su korišćeni za identifikaciju, dijagnozu ili terapeutski tretman matičnih ćelija kancera upotrebom sličnih opisanih postupaka, i promena unutar obima stručnjaka iz date oblasti su pripremljeni za prilagođavanje postupka za identifikaciju/dijagnozu ili lečenje matičnih ćelija kancera.
[0179] U skladu sa opšte opisanim otkrićem, isto će biti lakše shvaćeno u vezi sa sledećim primerima, koji su obezbeđeni radi ilustracije i nije bila namera da budu ograničavajući za predmetno otkriće osim ukoliko nije naznačeno.
Primer 1
mAb1 se vezuje za oba, humani CD3 i CD3 makaki majmuna
[0180] U cilju procene sposobnosti mAb1 da se veže za humani CD3, izvedena je „capture ELISA“. Ploče su obložene sa 1 µg/ml rastvorljivog CD3 makaki majmuna ("sCD3") i inkubirane u prisustvu različitih koncentracija himerne varijante mAb1 antitela (ch-mAb1) (koji sadrži varijabilne sekvence mAb1 i konstantne regione humanog antitela), humanizovane varijante (h-mAb1) i antitela sastavljenog od lakog lanca himernog mAb1 antitela i teškog lanca humanizovane varijante mAb1. Rezultati ovog eksperimenta su prikazani na Slici 1A.
Eksperiment pokazuje sposobnost mAb1 da se vezuje za CD3 nehumanih sisarskih vrsta. Dodatno, vezivanje himernog mAb1 antitela je upoređivano sa onim kod antitela sastavljenog od humanizovane varijante mAb1 LC-2 i teškog lanca mAb1. Rezultati ovog eksperimenta su prikazani na Slici 1B. Eksperiment prikazuje sposobnost mAb1 da se vezuje za humani CD3.
Slike 1A i 1B na taj način otkrivaju da je humanizovano mAb1 sposobno da se vezuje za oba, humani CD3 i CD3 nehumanog sisara. Humanizovano mAb pokazalo je vezivanje za sCD3 i hCD3 koje je bilo slično onome kod himernog mAb1.
Primer 2
Humanizacija mAb1
[0181] Pripremljeni su humanizovani derivati mAb1. Aminokiselinske sekvence i kodirajuće polinukleotidne sekvence ovih humanizovanih derivata su prikazane u daljem tekstu. CDR regioni su prikazani u boldu i podvučeni.
Aminokiselinska sekvenca varijante 1 varijabilnog lakog lanca humanizovanog mAb1 (SEQ ID NO:10):
Polinukleotidna sekvenca koja kodira varijantu 1 varijabilnog lakog lanca humanizovanog mAb1 (SEQ ID NO:11):
Aminokiselinska sekvenca varijante 2 varijabilnog lakog lanca humanizovanog mAb1 (mAb1 LC-2) (SEQ ID NO:12):
Polinukleotidna sekvenca koja kodira varijantu 2 varijabilnog lakog lanca humanizovanog mAb1
Aminokiselinska sekvenca varijabilnog teškog lanca humanizovanog mAb1 (SEQ ID NO:14):
Polinukleotidna sekvenca koja kodira varijabilni težak lanac humanizovanog mAb1 (SEQ ID
Primer 3
Humanizacija mAb2
[0182] Pripremljeni su humanizovani derivati mAb2. Aminokiselinske sekvence i kodirajuće polinukleotidne sekvence ovih humanizovanih derivata su prikazane u daljem tekstu. CDR regioni su prikazani u boldu i podvučeni.
Aminokiselinska sekvenca varijante 1 varijabilnog lakog lanca humanizovanog mAb1 (h-mAb2 VL-1) (SEQ ID NO:16):
Polinukleotidna sekvenca koja kodira varijantu 1 varijabilnog lakog lanca humanizovanog mAb2 (h-mAb2 VL-1) (SEQ ID NO:17):
Aminokiselinska sekvenca varijante 2 varijabilnog lakog lanca humanizovanog mAb2 (h-mAb2 VL-2) (SEQ ID NO:18):
Polinukleotidna sekvenca koja kodira varijantu 2 varijabilnog lakog lanca humanizovanog mAb2 (h-mAb2 VL-2) (SEQ ID NO:19):
Aminokiselinska sekvenca varijante 3 varijabilnog lakog lanca humanizovanog mAb2 (h-mAb2 VL-3) (SEQ ID NO:20):
Polinukleotidna sekvenca koja kodira varijantu 3 varijabilnog lakog lanca humanizovanog mAb2 (h-mAb2 VL-3) (SEQ ID NO:21):
Aminokiselinska sekvenca varijante 4 varijabilnog lakog lanca humanizovanog mAb2 (h-mAb2 VL-4) (SEQ ID NO:22):
Polinukleotidna sekvenca koja kodira varijantu 4 varijabilnog lakog lanca humanizovanog mAb2 (h-mAb2 VL-4) (SEQ ID NO:23):
Aminokiselinska sekvenca varijante 5 varijabilnog lakog lanca humanizovanog mAb2 (h-mAb2 VL-5) (SEQ ID NO:24):
Polinukleotidna sekvenca koja kodira varijantu 5 varijabilnog lakog lanca humanizovanog mAb2 (h-mAb2 VL-5) (SEQ ID NO:25):
Aminokiselinska sekvenca varijante 6 varijabilnog lakog lanca humanizovanog mAb2 (h-mAb2 VL-6) (SEQ ID NO:26):
Polinukleotidna sekvenca koja kodira varijantu 6 varijabilnog lakog lanca humanizovanog mAb2 (h-mAb2 VL-6) (SEQ ID NO:27):
Aminokiselinska sekvenca varijantu 7 varijabilnog lakog lanca humanizovanog mAb2 (h-mAb2 VL-7) (SEQ ID NO:28):
Polinukleotidna sekvenca koja kodira varijantu 7 varijabilnog lakog lanca humanizovanog mAb2 (h-mAb2 VL-7) (SEQ ID NO:29):
Aminokiselinska sekvenca varijante 8 varijabilnog lakog lanca humanizovanog mAb2 (h-mAb2 VL-8) (SEQ ID NO:30):
Polinukleotidna sekvenca koja kodira varijantu 8 varijabilnog lakog lanca humanizovanog mAb2 (h-mAb2 VL-8) (SEQ ID NO:31):
Aminokiselinska sekvenca varijante 9 varijabilnog lakog lanca humanizovanog mAb2 (h-mAb2 VL-9) (SEQ ID NO:32):
Polinukleotidna sekvenca koja kodira varijantu 9 varijabilnog lakog lanca humanizovanog mAb2 (h-mAb2 VL-9) (SEQ ID NO:33):
Aminokiselinska sekvenca varijante 10 varijabilnog lakog lanca humanizovanog mAb2 (h-mAb2 VL-10) (SEQ ID NO:34):
Polinukleotidna sekvenca koja kodira varijantu 10 varijabilnog lakog lanca humanizovanog mAb2 (h-mAb2 VL-10) (SEQ ID NO:35):
Aminokiselinska sekvenca varijante 1 teškog lanca humanizovanog mAb2 (h-mAb2 VH-1) (SEQ ID NO:36):
Polinukleotidna sekvenca koja kodira varijantu 1 varijabilnog teškog lanca humanizovanog mAb2 (h-mAb2 VH-1) (SEQ ID NO:37):
Aminokiselinska sekvenca varijante 2 varijabilnog teškog lanca humanizovanog mAb2 (h-mAb2 VH-2) (SEQ ID NO:38):
Polinukleotidna sekvenca koja kodira varijantu 2 varijabilnog teškog lanca humanizovanog mAb2 (h-mAb2 VH-2) (SEQ ID NO:39):
Aminokiselinska sekvenca varijante 3 teškog lanca humanizovanog mAb2 (h-mAb2 VH-3) (SEQ ID NO:40):
Polinukleotidna sekvenca koja kodira varijantu 3 varijabilnog teškog lanca humanizovanog
Aminokiselinska sekvenca varijante 4 teškog lanca humanizovanog mAb2 (h-mAb2 VH-4) (SEQ ID NO:42):
Polinukleotidna sekvenca koja kodira varijantu 4 varijabilnog teškog lanca humanizovanog mAb2 (h-mAb2 VH-4) (SEQ ID NO:43):
Aminokiselinska sekvenca varijante 5 teškog lanca humanizovanog mAb2 (h-mAb2 VH-5) (SEQ ID NO:44):
Polinukleotidna sekvenca koja kodira varijantu 5 varijabilnog teškog lanca humanizovanog mAb2 (h-mAb2 VH-5) (SEQ ID NO:45):
Aminokiselinska sekvenca varijante 6 teškog lanca humanizovanog mAb2 (h-mAb2 VH-6) (SEQ ID NO:46):
Polinukleotidna sekvenca koja kodira varijantu 6 varijabilnog teškog lanca humanizovanog mAb2 (h-mAb2 VH-6) (SEQ ID NO:47):
Aminokiselinska sekvenca varijante 7 teškog lanca humanizovanog mAb2 (h-mAb2 VH-7) (SEQ ID NO:48):
Polinukleotidna sekvenca koja kodira varijantu 7 varijabilnog teškog lanca humanizovanog mAb2 (h-mAb2 VH-7) (SEQ ID NO:49):
Aminokiselinska sekvenca varijante 8 teškog lanca humanizovanog mAb2 (h-mAb2 VH-8) (SEQ ID NO:50):
Polinukleotidna sekvenca koja kodira varijantu 8 varijabilnog teškog lanca humanizovanog mAb2 (h-mAb2 VH-8) (SEQ ID NO:51):
Aminokiselinska sekvenca varijante QV varijabilnog teškog lanca humanizovanog mAb2 (hmAb2 VL-QV) (SEQ ID NO:52):
Polinukleotidna sekvenca koja kodira varijantu QV varijabilnog teškog lanca humanizovanog
Primer 4
mAb2 se vezuje za humani CD3 i CD3 makaki majmuna
[0183] Kao što je razmatrano u prethodnom tekstu, mAb2 antitelo je originalno izolovano na bazi njegove sposobnosti da se veže humani CD3. U cilju procene sposobnosti mAb2 da se veže za nehumani CD3, izvedena je „capture ELISA“. Ploče su obložene sa 1 µg/ml CD3 (humani ili od makaki majmuna) i inkubirane u prisustvu različitih koncentracija himerne varijante mAb2 antitela (ch-mAb2) (koja sadrži varijabilne sekvence mAb2 i konstantne regione humanog antitela). Kao kontrola, ploče su takođe inkubirane sa antitelom sastavljenim od lakog lanca humanizovanog mAb2 antitela i teškog lanca himernog antitela. Rezultati ovog eksperimenta su prikazani na Slikama 2A i 2B, i otkrivaju da je himerna mAb2 varijanta ispoljila ekvivalentno vezivanje za humani CD3 i za CD3 makaki majmuna.
Primer 5
Analiza vezujućih karakteristika varijanti teških i lakih lanaca h-mAb2
[0184] Analiza je izvedena za određivanje efekta varijacija u okvirnim ostacima lakog lanca mAb2. Tabela 2 označava ispitivane supstitucije.
[0185] Formirana su antitela koja imaju lake lance mAb2 prema SEQ ID NO:11, ali koja sadrže (Kabat numerisanu) supstituciju D41G, H42Q, L43A, F44P, T45R ili G46T i teške lance himernog mAb2 (CDR regioni mAb2 sa hFR1-mFR2-hFR3-4) i njihovo vezivanje je procenjeno upotrebom „capture ELISA“. Ploče su obložene sa 1 µg/ml ekstracelularnog domena humanog CD3 (rastvorljivi hCD3 ili "shCD3") i inkubirane u prisustvu različitih koncentracija antitela. Rezultati (Slika 3) pokazuju da je supstitucija T na Kabat položaju 46 eliminisala sposobnost antitela da se veže za shCD3.
[0186] Dodatna ispitivanja su izvedena za procenu uticaja varijacija na Kabat položajima lakog lanca 36, 38, 44 i 46. Formatirana su antitela koja imaju h-mAb2 VL-8, h-mAb2 VL-9 ili hmAb2 VL-10 laki lanac i težak lanac mAb2 himernog antitela i procenjivana su upotrebom gore opisane „capture ELISA“. Rezultati ovog eksperimenta su prikazani na Slici 4, i otkrili su da je vezivanje za shCD3 od strane antitela koje ima hVL-8 laki lanac bilo slično onome antitela koje ima laki lanac himernog mAb2.
[0187] Takođe su formirana antitela koja imaju h-mAb2 VL-6, h-mAb2 VL-7 ili h-mAb2 VL-8 laki lanac i težak lanac mAb2 himernog antitela i procenjivana su upotrebom gore opisane „capture ELISA“ (osim što su ploče obložene sa 0.5 µg/ml shCD3 u fosfatno puferisanom fiziološkom rastvoru) za određivanje uticaja dodatnih supstitucija na položajima 36, 38 i 46. Rezultati ovog eksperimenta su prikazani na Slici 5, i otkrili su da su Kabat supstitucije F36V i T46G bile dovoljne za proizvodnju antitela čije vezivanje za shCD3 je bilo slično onome kod antitela koje ima laki lanac himernog mAb2.
[0188] Uticaj supstitucija u sekvenci teškog lanca mAb2 procenjivan je formiranjem antitela koja imaju laki lanac himernog mAb2 antitela i težak lanac h-mAb2 VH-5, h-mAb2 VH-6 ili hmAb2 VH-7 i procenom vezivanja upotrebom gore opisane „capture ELISA“ (upotrebom 1 µg/ml oblaganja shCD3). Rezultati ovih ispitivanja su prikazani na Slici 6. Dodatno su formirana antitela koja imaju laki lanac himernog mAb2 antitela i humanizovanu varijantu teškog lanca hmAb2 VH-4, h-mAb2 VH-7 ili h-mAb2 VH-9. Takva antitela su procenjivana za vezivanje upotrebom gore opisane „capture ELISA“. Rezultati ovih ispitivanja su prikazani na Slici 7.
[0189] Teški lanci hVH-6L (i njegova varijanta, hVH-6M), i hVH-8L (i njegova varijanta VH-8M) su naročito poželjni za proizvodnu antitela koja imaju niži afinitet za CD3 od antitela sastavljenih od hVH-1, hVH-2, hVH-3, hVH-4, hVH-5, hVH-6, hVH-7 ili hVH-8 iz Tabele 2.
Takva antitela redukovanog afiniteta će poželjno biti sastavljena od teškog lanca hVH-6L ili teškog lanca VH-8L u kombinaciji sa bilo kojim lakim lancem h-mAb2 VL-1, h-mAb2 VL-2, hmAb2 VL-3, h-mAb2 VL-4, h-mAb2 VL-5, h-mAb2 VL-6, h-mAb2 VL-7, h-mAb2 VL-8, hmAb2 VL-9 ili h-mAb2 VL-10. Naročito poželjno deimunizovano antitelo će biti sastavljeno od teškog lanca hVH-6L (ili njegove varijante, hVH-6M) i lakog lanca h-mAb2 VL-6, ili teškog lanca hVH-8L (ili njegove varijante, hVH-8M) i lakog lanca h-mAb2 VL-6. Sekvence takvih polipeptida su predstavljene u daljem tekstu:
Aminokiselinska sekvenca hVH-6L (SEQ ID NO:54):
Aminokiselinska sekvenca hVH-8L (SEQ ID NO:55):
[0190] Teški lanci hVH-6L i hVH-8L su dalje modifikovani tako da proizvode varijante koje poseduju modifikaciju asparagina na položaju 52a (S52aN). Aminokiselinske sekvence i odgovarajuće polinukleotidne-kodirajuće sekvence ovih modifikovanih teških lanaca su kao što sledi:
Aminokiselinska sekvenca hVH-6M (SEQ ID NO:72):
Polinukleotidna sekvenca koja kodira varijabilni težak lanac hVH-6M (SEQ ID NO:73):
Aminokiselinska sekvenca hVH-8M (SEQ ID NO:74):
Polinukleotidna sekvenca koja kodira varijabilni težak lanac hVH-8M (SEQ ID NO:75):
[0191] Teški lanci hVH-8 di-1 i hVH-8 di-2 su naročito poželjni za proizvodnju antitela koja su manje imunogena od antitela sastavljenih od hVH-1, hVH-2, hVH-3, hVH-4, hVH-5, hVH-6, hVH7 ili hVH-8 iz Tabele 2. Takva deimunizovana antitela će poželjno biti sastavljena od teškog lanca hVH-8 di-1 ili teškog lanca hVH-8 di-2 u kombinaciji sa bilo kojim lakim lancem h-mAb2 VL-1, h-mAb2 VL-2, h-mAb2 VL-3, h-mAb2 VL-4, h-mAb2 VL-5, h-mAb2 VL-6, hmAb2 VL-7, h-mAb2 VL-8, h-mAb2 VL-9 ili h-mAb2 VL-10. Naročito poželjno deimunizovano antitelo će biti sastavljeno od teškog lanca hVH-8 di-1 i lakog lanca h-mAb2 VL-6, ili teškog lanca hVH-8 di-2 i lakog lanca h-mAb2 VL-6.
Aminokiselinska sekvenca hXR32VH-8 di-1 (SEQ ID NO:56):
Aminokiselinska sekvenca hXR32VH-8 di-2 (SEQ ID NO:57):
[0192] Takva deimunizovana antitela će poželjno biti sastavljena od teškog lanca hVH-8L di-1 ili teškog lanca VH-8L di-2 u kombinaciji sa bilo kojim lakim lancem h-mAb2 VL-1, h-mAb2 VL-2, h-mAb2 VL-3, h-mAb2 VL-4, h-mAb2 VL-5, h-mAb2 VL-6, h-mAb2 VL-7, h-mAb2 VL-8, h-mAb2 VL-9 ili h-mAb2 VL-10. Naročito poželjno deimunizovano antitelo će biti sastavljeno od teškog lanca hVH-9M di-1 i lakog lanca h-mAb2 VL-6, ili teškog lanca hVH-8L di-2 i lakog lanca h-mAb2 VL-6.
[0193] Takođe su proizvedene dodatne humanizovane varijante varijabilnog teškog lanca mišjeg monoklonskog antitela mAb2 (SEQ ID NO:7). Aminokiselinske sekvence takvih varijanti su predstavljene u daljem tekstu, sa promenama od SEQ ID NO:7 označenim u bolu i podvučenim:
Aminokiselinska sekvenca varijante "a" (I51T Y52cA) varijabilnog teškog lanca humanizovanog mAb2 mišjeg monoklonskog antitela (SEQ ID NO:76):
Aminokiselinska sekvenca varijante "b" (I51T N54S) varijabilnog teškog lanca humanizovanog mAb2 mišjeg monoklonskog antitela (SEQ ID NO:77):
Aminokiselinska sekvenca varijante "c" (I51T A56T) varijabilnog teškog lanca humanizovanog mAb2 mišjeg monoklonskog antitela (SEQ ID NO:78):
Aminokiselinska sekvenca varijante "d" (I51T Y52cA N54S) varijabilnog teškog lanca humanizovanog mAb2 mišjeg monoklonskog antitela (SEQ ID NO:79):
Aminokiselinska sekvenca varijante "e" (I51T N54S A56T) varijabilnog teškog lanca humanizovanog mAb2 mišjeg monoklonskog antitela (SEQ ID NO:80):
Aminokiselinska sekvenca varijante "f" (I51T Y52cA N54S A56T) varijabilnog teškog lanca humanizovanog mAb2 mišjeg monoklonskog antitela (SEQ ID NO:81):
Aminokiselinska sekvenca varijante "g" (I51T D61A) varijabilnog teškog lanca humanizovanog mAb2 mišjeg monoklonskog antitela (SEQ ID NO:82):
Aminokiselinska sekvenca varijante "h" (I51T D65G) varijabilnog teškog lanca humanizovanog mAb2 mišjeg monoklonskog antitela (SEQ ID NO:83):
Aminokiselinska sekvenca varijante "i" (I51T Y52cA N54S D61A) varijabilnog teškog lanca humanizovanog mAb2 mišjeg monoklonskog antitela (SEQ ID NO:84):
Aminokiselinska sekvenca varijante "j*" (I51T Y52cA N54S D65G) varijabilnog teškog lanca humanizovanog mAb2 mišjeg monoklonskog antitela (SEQ ID NO:85):
Aminokiselinska sekvenca varijante "k" (I51T Y52cA N54S D61A D65G) varijabilnog teškog lanca humanizovanog mAb2 mišjeg monoklonskog antitela (SEQ ID NO:86):
Aminokiselinska sekvenca varijante "2k" (I51T Y52cA N54S D61A D65G (VH8-A49G V93A)) varijabilnog teškog lanca humanizovanog mAb2 mišjeg monoklonskog antitela (SEQ ID NO:87):
Aminokiselinska sekvenca varijante "5k" (I51T Y52cA N54S D61A D65G (VH8-V93A)) varijabilnog teškog lanca humanizovanog mAb2 mišjeg monoklonskog antitela (SEQ ID NO:88):
[0194] Sve takve dodatne humanizovane varijante varijabilnog teškog lanca mAb2 mišjeg monoklonskog antitela mogu biti korišćene tako da formiraju deimunizovana antitela prema predmetnom otkriću. Takva dodatna deimunizovana i humanizovana antitela će poželjno biti sastavljena od bilo kog od teških lanaca: a, b, c, d, e, f, g, h, i, j, k, 2k ili 5k, u kombinaciji sa bilo kojim lakim lancem: h-mAb2 VL-1, h-mAb2 VL-2, h-mAb2 VL-3, h-mAb2 VL-4, h-mAb2 VL-5, h-mAb2 VL-6, h-mAb2 VL-7, h-mAb2 VL-8, h-mAb2 VL-9 ili h-mAb2 VL-10. Naročito poželjno deimunizovano antitelo će biti sastavljeno od teškog lanca 2k ili 5k i lakog lanca hmAb2 VL-6, ili teškog lanca hVH-8M8L di-2 i lakog lanca h-mAb2 VL-6. Varijante 2k i 5k se vezuju za protein A u varijabilnom regionu, na taj način olakšavajući prečišćavanje molekula (kao što su diatela) kojima može da nedostaju Fc regioni ili ostali domeni koji mogu biti korišćeni za odvajanje takvih molekula od drugih molekula. Varijante hVH-8M, hVH-8L. hVH-6M i hVH-6L ispoljavaju redukovanu imunogenost u odnosu na njihove odgovarajuće matične polipeptide.
[0195] Otkriće se naročito bavi deimunizovanim i humanizovanim antitelima sastavljenim od teškog lanca hVH-8 i lakog lanca VL-6. Otkriće se dodatno naročito odnosi na deimunizovana i humanizovana antitela sastavljena od teškog lanca hVH-4 i lakog lanca VL-6. Otkriće dodatno naročito se odnosi na deimunizovana i humanizovana antitela sastavljena od teškog lanca hVH-2k i lakog lanca VL-6
Primer 6
Analiza karakteristika vezivanja varijanti lakih i teških lanaca himernog i humanizovanog mAb2
[0196] U cilju procene sposobnosti himernog i humanizovanog mAb2 da se vežu za nehumani CD3, izvedena je „capture ELISA“. Ploče su obložene sa 1 µg/ml ekstracelularnog domena CD3 (rastvorljivi CD3) (humani ili makaki majmuna) i inkubirane u prisustvu različitih koncentracija antitela. Rezultati ovog eksperimenta su prikazani na Slikama 8A i 8B, i otkrivaju da su mAb2 i njegova humanizovana varijanta ispoljili vezivanje ekvivalentno rastvorljivom humanom CD3 i rastvorljivom CD3 makaki majmuna.
Primer 7
Kvantitativno određivanje vezivanja mAb2 za humani CD3 i CD3 makaki majmuna [0197] U cilju kvantitativnog određivanja stepena vezivanja između mAb2 i humanog CD3 i CD3 makaki majmuna, izvedene su BIACORE™ analize. BIACORE™ analize mere konstantnu disocijacije, kd. Vezujući afinitet (KD) između antitela i njegovog ciljnog mesta je funkcija kinetičkih konstanti za asocijaciju (konstanta asocijacije, ka) i disocijaciju (konstanta disocijacije, kd) prema KD= kd/ka. BIACORE™ analiza koristi površinsku plazmon rezonancu za direktno merenje ovih kinetičkih parametara. Anti-CD3 antitelo mAb2 (6.3-100 nM) je imobilizovano na podlogu upotrebom anti-EK antitela i inkubirano u prisustvu rastvorljivog humanog CD3 (shCD3) ili rastvorljivog CD3 makaki majmuna (scCD3). Vremenski tok disocijacije je meren i izvedena je bivalentna aproksimacija podataka. Rezultati BIACORE™ analiza su prikazani na Slikama 9A-9D. Kinetički podaci su rezimirani u Tabeli 3.
Primer 8
Podaci o bispecifičnom vezivanju za DART™ diatela koja sadrže CDR regione h-mAb2 [0198] CDR regioni humanizovanog mAb2 (h-mAb2) su korišćeni za proizvodnju seriju DART™ diatela koja imaju anti-CD3 prvo mesto vezivanja epitopai drugo mesto vezivanja epitopa sposobno da se veže za Her2/neu (DART™ diatelo "Her2-h-mAb2"), ili za CD19 (DART™ diatelo "CD19-h-mAb2") ili za receptor epidermalnog faktora rasta (EGFR) (DART™ diatelo "ERBITUX™-h-mAb2").
Her2/neu-h-mAb2 DART™ diatelo
[0199] Aminokiselinska sekvenca hXR32VL-Her-2VH E coil od Her2-h-mAb2 DART™ diatela (linkeri izmeđi hXR32VL sekvence i Her2VH sekvence i između Her2VH sekvence i E coil sekvence su podvučeni) (SEQ ID NO:58):
[0200] Aminokiselinska sekvenca Her2VL-hXR32VH-K coil od Her2-h-mAb2 DART™ diatela (linkeri između Her2VL sekvence i hXR32VH sekvence i između hXR32VH sekvence i K coil sekvence su podvučeni) (SEQ ID NO:59):
CD19-h-mAb2 DART™ diatelo
[0201] Aminokiselinska sekvenca CD19VL-hXR32VH-E coil od CD19-h-mAb2 DART™ diatela (linkeri između CD19VL sekvence i hXR32VH sekvence i između hXR32VH sekvence i E coil sekvence su podvučeni) (SEQ ID NO:60):
[0202] Aminokiselinska sekvenca hXR32VL-CD19VH-K coil od CD19-h-mAb2 DART™ diatela (linkeri između hXR32VL sekvence i CD19VH sekvence i između CD19VH sekvence i K coil sekvence su podvučeni) (SEQ ID NO:61):
ERBITUX™-h-mAb2 DART™ diatelo
[0203] Aminokiselinska sekvenca hXR32VL-EGFRVH-E coil od ERBITUX™-h-mAb2 DART™ diatela (linkeri između hXR32VL sekvence i EGFRVH sekvence i između EGFRVH sekvence i E coil sekvence su podvučeni) (SEQ ID NO:62):
[0204] Aminokiselinska sekvenca EGFRVL-hXR32VH-K coil od ERBITUX™-h-mAb2 DART™ diatela (linkeri između EGFRVL sekvence i hXR32VH sekvence i između hXR32VH sekvence i K coil sekvence su podvučeni) (SEQ ID NO:63):
[0205] Nađeno je da su takva DART™ diatela sposobna za vezivanje za CD3 makaki majmuna (Slike 10A-10C).
[0206] CDR regioni humanizovanog mAb2 (h-mAb2) su korišćeni za proizvodnju dodatne serije DART™ diatela koja imaju anti-CD3 prvo mesto vezivanja za epitop i drugo mesto vezivanja za epitop sposobno da se veže za B7-H3 (DART™ diatelo "B7-H3-1-h-mAb2" i B7-H3-2-h-mAb2").
B7-H3-1-h-mAb2 DART™ diatelo
[0207] Aminokiselinska sekvenca hBRCA69DVL-hXR32VH-E coil od B7-H3-1-h-mAb2 DART™ diatela (linkeri između hBRCA69DVL sekvence i hXR32VH sekvence i između hXR32VH sekvence i E coil sekvence su podvučeni) (SEQ ID NO:64):
[0208] Aminokiselinska sekvenca hXR32VL-hBRCA69DVH-K coil od B7-H3-1-h-mAb2 DART™ diatela (linkeri između hXR32VL sekvence i hBRCA69DVH sekvence i između hBRCA69DVH sekvence i K coil sekvence su podvučeni) (SEQ ID NO:65):
B7-H3-2-h-mAb2 DART™ diatelo
[0209] Aminokiselinska sekvenca hBRCA84DVL-hXR32VH-E coil od B7-H3-2-h-mAb2 DART™ diatela (linkeri između hBRCA84DVL sekvence i hXR32VH sekvence i između hXR32VH sekvence i E coil sekvence su podvučeni) (SEQ ID NO:66):
[0210] Aminokiselinska sekvenca hXR32VL-hBRCA84DVH-K coil od B7-H3-2-h-mAb2 DART™ diatela (linkeri između hXR32VL sekvence i hBRCA84DVH sekvence i između hBRCA84DVH sekvence i K coil sekvence su podvučeni) (SEQ ID NO:67):
[0211] Nađeno je da su takva DART™ diatela sposobna da se vezuju za rastvorljivi CD3 makaki majmuna (Slika 10D).
Primer 9
Diatela – preusmeravajući reagensi sa dvostrukim (DART™s) specifična za HER2/neu i CD3 posreduju ubijanje potentnih preusmerenih T-ćelija
[0212] Pripremljena su diatela - preusmeravajući reagens sa dvostrukim afinitetom (DART™) specifična za HER2/neu i CD3. Takva DART™ diatela imaju sposobnost da lokalizuju T-ćeliju (vezivanjem takve T-ćelije za CD3-vezujući deo CD3-vezujućeg DART™ diatela) za lokaciju tumorske ćelije (vezivanjem zakve ćelije kancera za HER2/neu-vezujući deo DART™ diatela). Lokalizovana T-ćelija može tarim da posreduje ubijanje tumorske ćelije u postupku koji je ovde označen terminom "preusmereno" ubijanje.
[0213] Daitelo - preumseravajući reagens sa dvostrukim afinitetom (DART™) specifično za HER2/neu i CD3 je konstruisano tako da ima anti-HER2/neu varijabilne domene trastuzumaba i anti-CD3 varijabilne domene od h-mab2 VH-8 i h-mab2 VL-6 (SEQ ID NOs: 58-59).
[0214] U cilju pokazivanja sposobnosti DART™ diatela da posreduju takvo preusmereno ubijanje ćelija kancera, gore opisano HER2/neu x CD3 DART™ diatelo je inkubirano u različitim koncentracijama sa ciljnim tumorskim ćelijama (SKOV-3 tumorske ćelije, SKBR-3 tumorske ćelije, A549 tumorske ćelije i MCF-7 tumorske ćelije) i efektornim mirujućim PBMC (E:T odnos = 30:1) i određivana je citotoksičnost (LDH analiza). Rezultati ovih ispitivanja pokazuju sposobnost HER2/neu x CD3 DART™ diatela da posreduju preusmereno ubijanje ćelija tumora.
Primer 10
Terapija anti- TCR monoklonskim antitelom za pacijente sa autoimunim dijabatesom [0215] Pacijenti: Četrdeset pacijenata sa dijabetesom tipa 1 je regrutovano za učešće prema sledećim kriterijumima: starosti između 7 i 20 godina, unutar 6 nedelja od dijagnoze prema kriterijumima Američke asocijacije za dijabetes, i potvrdu prisustva anti-GAD65, anti-ICA512 i/ili anti-insulinskih autoantitela. Pacijenti ostaju pod negom njihovih ličnih lekara u toku studije.
[0216] Kvalifikovani pacijenti su po slučajnom izboru dodeljeni u kontrolnu grupu i grupu za tretman humanizovanim anti-CD3 antitelom (N297Q) (koje sadrži h-mab2 VH-8 i h-mab2 VL-6). Posle randomizacije, uzorci krvi su uzeti da bi se ustanovili početni nivoi HA1c, C-peptidni odgovor na MMTT pre tretmana je ustanovljen i izveden je FPIR na IGTT pre tretmana. Pacijenti u obe grupe su hospitalizovani da bi primili 6-dnevni tretman humanizovanim anti-CD3 monoklonskim antitelom (N297Q) ili placebom. Antitelo je primenjivano intravenski u sledećoj dozi: 17 µg/m2 na dan 1, 34.3 µg/m2 na dan 2, 69 µg/m2 na dan 3, 137.6 µg/m2 na dan 4, i 275.3 µg/m2 na dane 5 i 6. Alternativno, antitelo se može primenjivati intravenski u sledećoj dozi: 1.6 µg/kg/dan na dan 1; 3.2 µg/kg/dan na dan 2; 6.5 µg/kg/dan na dan 3; 13 µg/kg/dan na dan 4; i 26 µg/kg/dan na dane 5 do 14. U studijama povećanja doze, tretman može biti, npr., 1.42 µg/kg/dan na dan 1; 5.7 µg/kg/dan na dan 2; 11 µg/kg/dan na dan 3; 26 µg/kg/dan na dan 4; i 45.4 µg/kg/dan na dane 5 do 14. U kasnijim studijama, terapija je promenjena za povećanje doze i/ili smanjenje vremenskog toka tretmana. Na primer, u kasnijim studijama pacijenti mogu da primaju 4-dnevni tretman: 6.4 µg/kg/dan na dan 1; 13 µg/kg/dan na dan 2 i 26 µg/kg/dan na dane 3 i 4.; u toku dodatnih studija povećanja doze, tretman može biti 8 µg/kg/dan na dan 1; 16 µg/kg/dan na dan 2; i 32 µg/kg/dan na dane 3 i 4.
[0217] U toku početnih studija doza antitela prva tri dana tretmana je primenjena preko spore infuzije IV tokom 20 časova za praćenje štetnih reakcija. Kasnije studije će smanjivati vreme primene i/ili podeliti dozu u 2 do 4 jednaka dela za primenu kao bolus injekcije ravnomerno raspoređene tokom 12 časova. Pacijenti u kontrolnoj grupi se podvrgavaju metaboličkim i imunološkim testovima, ali ne primaju monoklonska antitela. Pacijenti su praćeni tokom studije za imunosupresivne efekte anti-CD3 monoklonskog antitela (N297Q).
[0218] Pacijenti su praćeni tokom 18 meseci posle tretmana. Funkcija β-ćelija je određivana svakih 6 meseci u slučaju smanjene tolerancije glukoze i svakih 12 meseci u slučaju normalne tolerancije glukoze. Pacijentima je dozvoljeno da imaju normalnu ishranu, i ostaju pod normalnom negom svog ličnog lekara tokom trajanja studije. Imunološke analize su ponavljane u intervalima od 6 meseci. Insulinska terapija će biti davana pacijentima kao što je preporučeno od strane njihovog ličnog lekara.
[0219] Funkcija β-ćelija će biti analizirana prema promenama nivoa C-peptida kao što je mereno pomoću radioimunološke analize. Posle uzimanja uzoraka za početni nivo C-peptida i glukoze, pacijenti su primali mešani obrok. Nivoi C-peptida su mereni u uzorcima uzetim posle 15, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 i 240 min. C-peptidni odgovor na test tolerancije mešanog obroka (MMTT) je izražen kao ukupna površina ispod krive odgovora (AUC). Smatra se da je promena u odgovoru javila ako se odgovor razlikuje za više od 7.5 procenata od odgovora pri ulasku u studiju. C-peptidni odgovori pacijenata na MMTT su kontinuirano praćeni 6 meseci, 9 meseci, 12 meseci, 15 meseci i 18 meseci posle tretmana. Alternativno, funkcija β-ćelija je procenjena pomoću FPIR na IGTT. Nivoi insulina u serumu su mereni modifikacijom postupka radioimunološke analize dvostrukog antitela upotrebom monojodiranim tirozinom A14-obeleženog insulina (Amersham Pharmacia). FPIR je izračunat kao zbir nivoa insulina 1 i 3 minuta posle opterećenja glukozom (0.5 g/kg). Nivoi glikozilovanog hemoglobina su mereni pomoću testa inhibicije lateks-aglutinacije.
[0220] Imunološko praćenje: Nivo autoantitela protiv GAD65, IA2/ICA512 i insulina je meren radiovezujućim analizama kao što su poznbate u stanju tehnike (npr., Woo et al., 2000, J. Immunol Methods 244:91-103). Genotipizacija HLA-DQA i HLA-DQB je izvedena direktnim sekvenciranjem polimorfizma egzona 2 posle PCR amplifikacije. Nivo citokina u seruma posle primene monoklonskog antitela je meren pomoću enzimski-vezane imunosorbent analize (ELISA). Proizvodnja anti-idotip antitela je praćena pomoću ELISA analize upotrebom anti-CD3 (N297Q) vezanog za ploču ili pomoću protočne citometrije za merenje blokade vezivanja anti-CD3-FITC za CD3 lanac TCR.
[0221] Statistička analiza: Analiza rezultata će biti izvedena na rezidualnoj funkciji beta-ćelija, nivou antitela, nivou citokina i nivou glikozilovanog hemoglobina. χ<2>analiza će biti izvedena za testiranje efekta tretmana lekom pre i posle primene leka. Poređenje između kontrolne grupe i grupe za tretman će biti izvedeno sa Mann-Whitney U testom.
Primer 11
Preusmeravajući reagensi (DART™s) diatela sa dvostrukim afinitetom specifični za B7H3 i CD3 posredovano potentno preusmereno ubijanje T-ćelija
[0222] Pripremljena su diatela – preusmeravajući reagensi sa dvostrukim afinitetom (DART™) specifična za B7H3 antigen i CD3. B7H3 je imunohistološki detektovan u tumorskim ćelijskim linijama (Chapoval, A. et al. (2001) "B7-H3: A Costimulatory Molecule For T Cell Activation and IFN-γ Production," Nature Immunol. 2:269-274; Saatian, B. et al. (2004) "Expression Of Genes For B7-H3 And Other T Cell Ligands By Nasal Epithelial Cells During Differentiation And Activation," Amer. J. Physiol. Lung Cell. Mol. Physiol. 287:L217-L225; Castriconi et al. (2004) "Identification Of 4Ig-B7-H3 As A Neuroblastoma-Associated Molecule That Exerts A Protective Role From An NK Cell-Mediated Lysis," Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 101(34):12640-12645); Sun, M. et al. (2002) "Characterization of Mouse and Human B7-H3 Genes," J. Immunol. 168:6294-6297). Nekoliko nezavisnih studija je pokazalo da humane maligne tumorske ćelije ispoljavaju izrazito povećanje u ekspresiji B7-H3 proteina i da je ova povećana ekspresija povezana sa povećanom težinom bolesti (Zang, X. et al. (2007) "The B7 Family And Cancer Therapy: Costimulation And Coinhibition," Clin. Cancer Res. 13:5271-5279), što sugeriše da je B7-H3 korišćen od strane tumora kao put imune invazije (Hofmeyer, K. et al. (2008) "The Contrasting Role Of B7-H3," Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 105(30):10277-10278).
[0223] CD3 vezujući deo takvih DART™ diatela je sastavljen od gore opisanih varijabilnih regiona lakog i teškog lanca humanizovanog anti-CD3 mAb2 (h-mAb2 VH-8 i h-mAb2 VL-6). B7H3 deo takvih DART™ diatela je sastavljen od hBRCA84D-2 lakog lanca i hBRCA84D-2 teškog lanca (SEQ ID NOs.66-67).
[0224] Takva DART™ diatela imaju sposobnost da lokalizuju T-ćeliju (vezivanjem takve T-ćelije za CD3-vezujući deo CD3-vezujućeg DART™ diatela) za lokaciju tumorske ćelije (vezivanjem takve ćelije kancera za B7H3 vezujući deo DART™ diatelo). Lokalizovana T-ćelija može zatim da posreduje ubijanje tumorske ćelije preko procesa "preusmerenog" ubijanja.
[0225] U cilju pokazivanja sposobnosti takvih DART™ diatela da posreduju takvo preusmereno ubijanje ćelija kancera, DART™ diatelo je inkubirano u različitim koncentracijama sa ciljnim tumorskim ćelijama (A498 tumorske ćelije, RECA905021E tumorske ćelije) i efektorskim mirujućim PBMC (E:T odnos = 30:1) i određivana je citotoksičnost (LDH analiza). DART™ diatelo (4420-h-mAb2) koje ima dvostruku specifičnost za CD3 (h-mAb2) i fluorescein (antitelo 4420) korišćeno je kao kontrola.
4420-h-mAb2 DART™ diatelo
[0226] Aminokiselinska sekvenca 4420VL-hXR32VH-E coil od 4420-h-mAb2 DART™ diatela (linkeri između 4420VL sekvence i hXR32VH sekvence i između hXR32VH sekvence i E coil sekvence su podvučeni) (SEQ ID NO:68):
[0227] Aminokiselinska sekvenca hXR32VL-4420VH-K coil od 4420-h-mAb2 DART™ diatela (linkeri između hXR32VL sekvence i 4420VH sekvence i između 4420VH sekvence i K coil sekvence su podvučeni) (SEQ ID NO:69):
[0228] Rezultati ovih ispitivanja (Slike 11A-11B) pokazuju sposobnost B7H3 x CD3 DART™ diatela da posreduju preusmereno ubijanje tumorskih ćelija koje eksprimiraju B7H3.
Primer 12
Diatela – preusmeravajući reagensi sa dvistrukim afinitetom (DART™s) specifična za A33 i CD3 posreduju potentno preusmereno ubijanje T-ćelija
[0229] Pripremljena su diatela – preusmeravajući reagensi sa dvostrukim afinitetom (DART™) specifična za A33 antigen i CD3 ("A33-h-mAb2" DART™ diatelo). A33 je membranski antigen koji je eksprimiran u normalnom humanom epitelu debelog creva i epitelu tankog creva i >95% humanih kancera debelog creva (Heath, J.K. et al. (1997) "The Human A33 Antigen Is A Transmembrane Glycoprotein And A Novel Member Of The Immunoglobulin Superfamily," Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 94:469-474).
[0230] Takva DART™ diatela imaju sposobnost da lokalizuju T-ćeliju (vezivanjem takve T-ćelije za CD3-vezujući deo CD3-vezujućeg DART™ diatela) za lokaciju tumorske ćelije (vezivanjem takve ćelije kancera za A33 vezujući deo DART™ diatelo). Lokalizovana T-ćelija može zatim da posreduje ubijanje tumorske ćelije preko procesa "preusmerenog" ubijanja.
[0231] CD3 vezujući deo takvih DART™ diatela je sastavljen od gore opisanih varijabilnih regiona lakog i teškog lanca humanizovanog mAb2 (h-mAb2 VH-8 i h-mAb2 VL-6). A33 deo takvih DART™ diatela je sastavljen od antitela RECA47.
A33-h-mAb2 DART™ diatelo
[0232] Aminokiselinska sekvenca RECA47VL-hXR32VH-K coil od A33-h-mAb2 DART™ diatela (linkeri između RECA47VL sekvence i hXR32VH sekvence i između hXR32VH sekvence i K coil sekvence su podvučeni) (SEQ ID NO:70):
[0233] Aminokiselinska sekvenca hXR32VL-RECA47VH-E coil od A33-h-mAb2 DART™ diatela (linkeri između hXR32VL sekvence i RECA47VH sekvence i između RECA47VH sekvence i E coil sekvence su podvučeni) (SEQ ID NO:71):
[0234] U cilju pokazivanja sposobnosti takvih DART™ diatela da posreduju takvo preusmereno ubijanje ćelija kancera, DART™ diatelo je inkubirano u različitim koncentracijama sa ciljnim tumorskim ćelijama (Colo205 tumorske ćelije, RECA905021E tumorske ćelije) i efektorskim mirujućim PBMC (E:T odnos = 30:1) i određivana je citotoksičnost (LDH analiza). Rezultati ovih ispitivanja (Slike 12A-12E) pokazuju sposobnost A33 x CD3 DART™ diatela da posreduju preusmereno ubijanje tumorskih ćelija koje eksprimiraju A33.
Primer 13
Diatela – preusmeravajući reagensi sa dvostrukim afinitetom (DART™s) specifična za CD3 uzrokuju preusmereno T-ćelijski-posredovano ubijanje ekvivalentno onome kod ostalih humanih-specifičnih CD3 diatela
[0235] U cilju dalje procene diatela - CD3-specifičnih preusmeravajućih reagenasa sa dvostrukim afinitetom (DART™) prema predmetnom opisu, kapacitet gore opisanog CD19-hmAb2 DART™ diatela da uzrokuje preusmereno T-ćelijski-posredovano ubijanje je upoređivano sa onim od CD19 x CD3 DART diatela od Moore, P.A. et al. (2011) ("Application Of Dual Affinity Retargeting Molecules To Achieve Optimal Redirected T-Cell Killing Of B-Cell Lymphoma," Blood 117(17):4542-4551). CD19-h-mAb2 DART™ diatelo ispoljava specifičnost za humani kao i za nehumani CD3; CD19 x CD3 DART diatelo od Moore, P.A. et al. (2011)) ispoljava specifičnost samo za humani CD3.
[0236] Prema tome, Raji ćelije humanog B-ćelijskog limfoma (videti, Drexler, H.G. et al. (1998) "History And Classification Of Human Leukemia-Lymphoma Cell Lines," Leuk. Lymphoma 31(3-4):305-316; Arndt, R. (1984) "Demonstration Of C3-Binding Circulating Immune Complexes Using Raji, Conglutinin And Anti-C3 Assays--A Critical Review," Immun. Infekt.
12(1):3-11) ili ćelije limfoma iz humanih mantle ćelija JeKo-1 (Salaverria, I. et al. (2006) "Mantle Cell Lymphoma: From Pathology And Molecular Pathogenesis To New Therapeutic Perspectives," Haematologica 91:11-16; Jeon, H.J. et al. (1998) "Establishment And Characterization Of A Mantle Cell Lymphoma Cell Line," Br. J. Haematol. 102(5):1323-1326) inkubirane su u prisustvu DART™ diatela i mirujućih mononuklearnih ćelija periferne krvi (PBMC) (E:T = 30:1). Rezultati ovog eksperimenta (Slike 13A i 13B) otkrili su da CD19-hmAb2 DART™ diatelo prema predmetnom pronalasku uzrokuje preusmereno T-ćelijskiposredovano ubijanje koje je bilo ekvivalentno onome zabeleženom upotrebom CD19 x CD3 DART diatela specifičnog za humani CD3. Na taj način proširenje specifičnosti na nehumane CD3 homologe ne smanjuje sposobnost DART™ diatela da posreduje preusmereno ubijanje.
Primer 14
Preusmerena citoliza pomoću diatela –preusmeravajućih reagenasa makaki majmuna sa unakrsno reaktivnim dvostrukim afinitetom (DART™s) specifičnih za CD3
[0237] Ispitivana je sposobnost gore opisanog CD19-h-mAb2 DART™ diatela može da izazove preusmereno T-ćelijski-posredovano ubijanje u prisustvu humanih T ćelija ili T ćelija makaki majmuna.
[0238] Ćelije kancera humanog debelog creva HT-29 (Marchis-Mouren, G. et al. (1988) "HT 29, A Model Cell Line: Stimulation By The Vasoactive Intestinal Peptide (VIP); VIP Receptor Structure And Metabolism," Biochimie 70(5):663-671); Fogh, J. et al. (1975) In: J. Fogh (ed.), HUMAN TUMOR CELLS IN VITRO, New York: Plenum Press. 1975) inkubirane su u prisustvu humanih T-ćelija ili T-ćelija makaki majmuna (E:T odnos = 30:1) i gore opisanog CD19-h-mAb2 DART™ diatela ili CD19 x CD3 DART diatela čije su CD3 sekvence poreklom od antitela FN-18. Antitelo FN-18 ispoljava specifičnost samo na CD3 makaki majmuna (Nooij, F.J. et al. (1986) "Differentiation Antigens On Rhesus Monkey Lymphocytes. I. Identification Of T Cells Bearing CD3 And CD8, And Of A Subset Of CD8-Bearing Cells," Eur. J. Immunol.
16(8):975-979; Meng, G. et al. (1998) "The Effect Of Anti-CD3-Immunotoxin On T Lymphocyte Function in vitro," Transpl. Immunol. 6(1):53-59). Meren je rezultujući procenat citotoksičnosti kao funkcija koncentracije diatela. Rezultati (Slike 14A i 14B) pokazuju da je CD19-h-mAb2 DART™ diatelo bilo sposobno da posreduje citolizu u prisustvu humanih T-ćelijskih efektorskih ćelija ili T-ćelijskih efektorskih ćelija makaki majmuna. Nasuprot tome, FN-18 diatelo je bilo sposobno da posreduje citolizu samo u prisustvu T-ćelija makaki majmuna.
Primer 15
Diatela – preusmeravajuća reagensi sa dvostrukim afinitetom (DART™s) zahtevaju angažovanje ciljne ćelije
[0239] U cilju pokazivanja da je zabeleženo preusmereno ubijanje posredovano preko CD3 DART™ diatela predmetnog otkrića specifično, određen je stepen ubijanja u prisustvu i odsustvu ciljnih ćelija.
[0240] Humane PMBC su inkubirane u prisustvu gore opisanog ERBITUX™-h-mAb2 DART™ diatela, ERBITUX™-T-ćelijski receptornog DART™ diatela (sposobno da se vezuje za EGFR (receptor epidermalnog faktora rasta) i T-ćelijski receptor), ili ERBITUX™-FN18 CD3 DART™ diatela (sposobno da se vezuje za EGFR i za CD3 makaki majmuna). Inkubacije su izvedene u prisustvu ili odsustvu ciljnih ćelija kancera bubrega A498 (Giard, D.J. et al. (1973) "in vitro Cultivation Of Human Tumors: Establishment Of Cell Lines Derived From A Series Of Solid Tumors," J. Natl. Cancer Inst.51:1417-1423; Fogh, J. (1978) "Cultivation, Characterization, And Identification Of Human Tumor Cells With Emphasis On Kidney, Testis And Bladder Tumors," Natl. Cancer Inst. Monogr. 49:5-9).
[0241] CD69 glikoprotein je rani aktivacioni antigen T i B limfocita koji je eksprimiran na ćelijama većine hematopoetskih linija, uključujući neutrofile posle stimulacije (Atzenia, F. et al. (2002) "Induction Of CD69 Activation Molecule On Human Neutrophils by GM-CSF, IFN-γ, and IFN-α," Cellular Immunol. 220(1): 20-29). Srednji intenzitet fluorescencije CD69 (MFI) je prema tome meren (kao funkcija koncentracije diatela) kao sredstva za procenu aktivacije imunog sistema (videti, npr., Ampel, N.M. et al. (2002) "In Vitro Whole-Blood Analysis of Cellular Immunity in Patients with Active Coccidioidomycosis by Using the Antigen Preparation T27K," Clinical Diagnostic Laboratory Immunology 9(5):1039-1043).
[0242] Rezultati (Slike 15A i 15B) pokazuju da aktivacija imunog sistema (kao što je merena pomoću MFI od CD69) povećala samo kada su CD4+ ili CD8+ T ćelije inkubirane sa ERBITUX™-h-mAb2 DART™ diatelom predmetnog otkrića ili ERBITUX™-T-ćelijskim receptornim DART™ diatelom (sposbnoda se vezuje za EGFR i T-ćelijski receptor).
ERBITUX™-FN18 CD3 DART™ diatelo (sposobno da se vezuje za EGFR i za CD3 makaki majmuna) nije uspela da indukuje povećanje u CD69 MFI.
Primer 16
Preusmereno ubijanje pomoću humanizovanih unakrsno reaktivnih sa CD3 makaki majmuna/humanih DART™ diatela
[0243] Da bi se dalje pokazala sposobnost DART™ diatela prema predmetnom otkriću da posreduju preusmereno ubijanje, ciljnih ćelija kancera bubrega A498 ili ćelije epidermoidnog karcinoma A431 (Lee, C.M. et al. (2010) "The Distribution Of The Therapeutic Monoclonal Antibodies Cetuximab And Trastuzumab Within Solid Tumors," BMC Cancer 10:255; pages 1-11; Bryant, J.A. et al. (2004) "EGF Activates Intracellular And Intercellular Calcium Signaling By Distinct Pathways In Tumor Cells," Cancer Biol. Ther. 3(12):1243-1249) i određivan je stepen preusmerenog ubijanja posredovanog preko različitih DART™ diatela u prisustvu PMBC efektorskih ćelija (E:T = 30:1).
[0244] Ćelije su inkubirane u prisustvu ERBITUX™-h-mAb2 DART™ diatela, ERBITUX™-m-mAb2 DART™ diatela ili 4420-h-mAb2 DART™ diatela (negativna kontrola) ili kontrolnog sekundarnog antitela. Vezivanje za ciljne ćelije je određeno merenjem MFI. Preusmereno ubijanje je procenjeno merenjem % citotoksičnosti.
[0245] Rezultati ovog ispitvanja su prikazani na Slikama 16A-16D. Nađeno je da su diatela koja imaju specifičnost za CD3 i EGFR sposobna da se vezuju za A498 ili A431 ćelije (Slika 16A i 16C, respektivno), i da posreduju preusmereno ubijanje ovih ćelija (Slika 16B i 16D, respektivno).

Claims (19)

Patentni zahtevi
1. CD3-vezujući molekul koji sadrži antigen-vezujući fragment antitela, naznačen time što navedeni antigen-vezujući fragment sadrži CD3-specifičan VL domen antitela i CD3-specifičan VH domen antitela, pri čemu navedeni CD3-specifičan VL domen i navedeni CD3-specifičan VH domen formiraju antigen-vezujući domen sposoban za imunospecifično vezivanje za oba, epitop humanog CD3 i epitop CD3 nehumanog sisara, gde:
(I) navedeni CD3-specifičan VL domen je izabran iz grupe koja se sastoji od h-mab2 VL-4 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:22, h-mab2 VL-6 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:26, h-mab2 VL-7 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:28, hmab2 VL-8 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:30, h-mab2 VL-9 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:32 i h-mab2 VL-10 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:34, i
(II) navedeni CD3-specifičan VH domen je izabran iz grupe koja se sastoji od h-mab2 VH-1 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:36, h-mab2 VH-2 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:38, h-mab2 VH-3 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID N0:40, hmab2 VH-4 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:42, h-mab2 VH-5 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:44, h-mab2 VH-6 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:46, h-mab2 VH-7 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:48 i h-mab2 VH-8 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:50.
2. CD3-vezujući molekul prema patentnom zahtevu 1, naznačen time što navedeni CD3-specifičan VL domen je h-mab2 VL-6 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID No:26.
3. CD3-vezujući molekul prema bilo kom od patentnih zahteva 1-2, naznačen time što navedeni CD3-specifičan VH domen je h-mab2 VH-8 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID No:50, ili h-mab2 VH-4 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID No:42.
4. CD3-vezujući molekul prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, naznačen time što navedeni molekul je antitelo.
5. CD3-vezujuće antitelo prema patentnom zahtevu 4, naznačeno time što navedeno atitelo: (A) nema Fc region;
ili
(B) sadrži Fc region koji:
(i) nema efektornu funkciju; ili
(ii) ima redukovanu efektornu funkciju; ili
(iii) pogoršava sposobnost Fc regiona navedenog antitela da se vezuje za Fc receptor;
pri čemu, navedeni nedostatak efektorske funkcije, navedena redukcija u efektorskoj funkciji i navedeno pogoršanje vezujuće aktivnosti je u odnosu na ono kod Fc receptora divljeg tipa.
6. CD3-vezujući molekul prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, naznačen time što navedeni molekul je CD3-vezujuće diatelo koje sadrži prvi polipeptidni lanac i drugi polipeptidni lanac, pri čemu su navedeni lanci kovalentno međusobno vezani, pri čemu:
(I) navedeni prvi polipeptidni lanac sadrži amino terminus i karboksi terminus i od N-terminusa do C-terminusa:
(i) domen (A) koji sadrži navedeni CD3-specifičan VL domen;
(ii) domen (B) koji sadrži vezujući region varijabilnog domena teškog lanca drugog imunoglobulina (VH2); i
(iii) domen (C);
pri čemu se navedeni domeni (A) i (B) ne vezuju međusobno tako da formiraju mesto vezivanja epitopa;
i
(II) navedeni drugi polipeptidni lanac sadrži amino terminus i karboksi terminus i od N-terminusa do C-terminusa:
(i) domen (D) koji sadrži vezujući region varijabilnog domena lakog lanca navedenog drugog imunoglobulina (VL2);
(ii) domen (E) koji sadrži naveden CD3-specifičan VH domen;
i
(iii) domen (F);
pri čemu navedeni domeni (D) i (E) se ne vezuju međusobno tako da formiraju mesto vezivanja epitopa; i
pri čemu:
(1) navedeni domeni (A) i (E) se vezuju tako da formiraju navedeni antigen-vezujući domen koji je sposoban za imunospecifično vezivanje za oba, humani CD3 i za CD3 nehumanog sisara; (2) navedeni domeni (B) i (D) se vezuju tako da formiraju vezujuće mesto koje se imunospecifično vezuje za drugi epitop, pri čemu je navedeni drugi epitop različit od CD3 epitopa vezanog antigen-vezujućim domenom formiranim od navedene veze navedenih domena (A) i (E); i
(3) navedeni domeni (C) i (F) su kovalentno vezani međusobno.
7. CD3-vezujući molekul prema patentom zahtevu 6, naznačen time što navedeni drugi epitop nije epitop CD3.
8. CD3-vezujući molekul prema patentnom zahtevu 6, naznačen time što navedeni drugi epitop je epitop CD3 koji se razlikuje od CD3 epitopa vezanog antigen-vezujućim domenom formiranim od navedene veze navedenih domena (A) i (E).
9. CD3-vezujući molekul prema bilo kom od patentnih zahteva 1-8 koji je humanizovan.
10. CD3-vezujući molekul prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3 ili 6-9 koji je sposoban za imunospecifično vezivanje za CD3 i za fluorescein.
11. CD3-vezujući molekul prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3 ili 6-9, koji je sposoban za imunospecifično vezivanje za oba: (i) CD3 i (ii)(a) tumorski antigen, ili (ii)(b) antigen, receptor ili receptor ligand na ćelijskoj površini.
12. CD3-vezujući molekul prema patentnom zahtevu 11, naznačen time što navedeni molekul je sposoban za imunospecifično vezivanje za CD3 i za tumorski antigen eksprimiran na ćeliji tumora, pri čemu navedena ćelija tumora je ćelija tumora iz kancera izabranog iz grupe koja se sastoji od: kancera dojke, kancera prostate, kancera želudca, kancera pluća, kancera stomaka, kancera debelog creva, rektalnog kancera, kancera pankreasa, kancera jetre, kancera jajnika, kancera oralne šupljine, faringealnog kancera, kancera jednjaka, kancera grkljana, kancera kosti, kancera kože, melanoma, kancera materice, testikularnog kancera, kancera bešike, kancera bubrega, kancera mozga, glioblastoma, tiroiodnog kancera, limfoma, mijeloma i leukemije.
13. CD3-vezujući molekul prema patentnom zahtevu 11, naznačen time što navedeni molekul je sposoban za imunospecifično vezivanje za CD3 i za antigen, receptor ili receptor ligand na ćelijskoj površini, pri čemu navedeni antigen, receptor ili receptor ligand na ćelijskoj površini je HER2/neu, B7-H3, CD20, PSMA, IGF-1R ili Ep-CAM.
14. CD3-vezujući molekul prema patentnom zahtevu 11, naznačen time što navedeni molekul je sposoban za imunospecifično vezivanje za CD3 i za antigen, receptor ili receptor ligand na ćelijskoj površini, pri čemu navedeni antigen, receptor ili receptor ligand na ćelijskoj površini je molekul uključen u vezu T ćelije - B ćelije, pri čemu je navedeni molekul uključen u navedenu vezu T ćelije - B ćelije izabran iz grupe koja se sastoji od CD19, CD20, CD22, CD23, CD27, CD32B, CD38, CD40, CD79a, CD79b, CD80, CD86, LFA-I, LFA-3 i CFA-I.
15. CD3-vezujuće diatelo prema bilo kom od patentnih zahteva 6-14 naznačeno time što navedeno CD3-vezujuće diatelo sadrži Fc domen ili njegov domen.
16. Farmaceutska kompozicija koja sadrži CD3-vezujući molekul prema bilo kom od patentnih zahteva 1-15, i farmaceutski prihvatljiv nosač, ekscipijens ili razblaživač.
17. CD3-vezujući molekul prema bilo kom od patentnih zahteva 1-15 ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 16, za upotrebu u lečenju kancera ili autoimune ili inflamatorne bolesti.
18. CD3-vezujući molekul ili farmaceutska kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 17, naznačeni time što navedena autoimuna ili inflamatorna bolest je izabrana iz grupe koja se sastoji od: insulin-zavisnog dijabetesa tip I, reumatoidnog artritisa, sistemskog lupus eritematozisa, multiple skleroze, inflamatorne bolesti creva, mijastenije gravis, celijačne bolesti, Sjogren-ovog sindroma, Grave-ove bolesti, Crohn-ove bolesti, autoimunog hepatitisa, psorijaze, psorijatičkog artritisa, astme, alergijskog rinitisa, efekata transplantacije organa ili bolesti transplanta protiv domaćina (GVHD).
19. CD3-vezujući molekul ili farmaceutska kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 18, naznačeni time što navedena autoimuna ili inflamatorna bolest je insulin-zavisan dijabetes tipa I.
RS20190504A 2011-05-21 2012-05-16 Cd3-vezujući molekuli sposobni za vezivanje za humani i nehumani cd3 RS58765B1 (sr)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161488716P 2011-05-21 2011-05-21
US201161530353P 2011-09-01 2011-09-01
PCT/US2012/038219 WO2012162067A2 (en) 2011-05-21 2012-05-16 Cd3-binding molecules capable of binding to human and non-human cd3
EP12790075.1A EP2714733B1 (en) 2011-05-21 2012-05-16 Cd3-binding molecules capable of binding to human and non-human cd3

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS58765B1 true RS58765B1 (sr) 2019-06-28

Family

ID=47217980

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20190504A RS58765B1 (sr) 2011-05-21 2012-05-16 Cd3-vezujući molekuli sposobni za vezivanje za humani i nehumani cd3

Country Status (33)

Country Link
US (5) US9587021B2 (sr)
EP (2) EP3492494A1 (sr)
JP (4) JP6141831B2 (sr)
KR (2) KR20190105112A (sr)
CN (3) CN107827985A (sr)
AU (3) AU2012259161B2 (sr)
BR (2) BR112013029893A2 (sr)
CA (1) CA2836857C (sr)
CL (3) CL2013003329A1 (sr)
CO (1) CO6970560A2 (sr)
CY (1) CY1122020T1 (sr)
DK (1) DK2714733T3 (sr)
EA (1) EA033677B1 (sr)
EC (1) ECSP13013101A (sr)
ES (1) ES2732213T3 (sr)
HR (1) HRP20190756T1 (sr)
HU (1) HUE044209T2 (sr)
IL (3) IL229575B (sr)
LT (1) LT2714733T (sr)
MA (1) MA35174B1 (sr)
ME (1) ME03440B (sr)
MX (2) MX391107B (sr)
MY (1) MY173899A (sr)
NZ (1) NZ703939A (sr)
PL (1) PL2714733T3 (sr)
PT (1) PT2714733T (sr)
RS (1) RS58765B1 (sr)
SG (3) SG195072A1 (sr)
SI (1) SI2714733T1 (sr)
SM (1) SMT201900239T1 (sr)
UA (3) UA115402C2 (sr)
WO (1) WO2012162067A2 (sr)
ZA (1) ZA201308602B (sr)

Families Citing this family (224)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9963510B2 (en) 2005-04-15 2018-05-08 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
IN2014DN10515A (sr) 2006-03-31 2015-08-21 Chugai Pharmaceutical Co Ltd
MX336725B (es) 2007-09-26 2016-01-28 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Metodo de modificacion del punto isoelectrico de anticuerpos medinate la sustitucion de aminoacidos en region de determinacion de complementariedad (cdr).
TWI700293B (zh) 2008-04-11 2020-08-01 日商中外製藥股份有限公司 重複結合複數個抗原的抗體
US9493578B2 (en) 2009-09-02 2016-11-15 Xencor, Inc. Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens
EP3029066B1 (en) 2010-07-29 2019-02-20 Xencor, Inc. Antibodies with modified isoelectric points
KR102568454B1 (ko) 2010-11-30 2023-08-18 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 복수 분자의 항원에 반복해서 결합하는 항원 결합 분자
RU2632647C2 (ru) 2011-04-22 2017-10-06 Аптево Рисерч Энд Девелопмент Ллс Белки, связывающие специфический мембранный антиген простаты, и соответствующие композиции и способы
CN107827985A (zh) * 2011-05-21 2018-03-23 宏观基因有限公司 能够与人和非人cd3结合的cd3结合分子
CN107586340B (zh) 2011-08-23 2022-01-21 罗切格利卡特公司 对t细胞活化性抗原和肿瘤抗原特异性的双特异性抗体及使用方法
US10851178B2 (en) 2011-10-10 2020-12-01 Xencor, Inc. Heterodimeric human IgG1 polypeptides with isoelectric point modifications
US12466897B2 (en) 2011-10-10 2025-11-11 Xencor, Inc. Heterodimeric human IgG1 polypeptides with isoelectric point modifications
JP6389166B2 (ja) 2012-05-07 2018-09-12 トラスティーズ・オブ・ダートマス・カレッジ 抗ｂ７−ｈ６抗体、融合タンパク質、及びこれらを使用する方法
JP6628966B2 (ja) 2012-06-14 2020-01-15 中外製薬株式会社 改変されたＦｃ領域を含む抗原結合分子
AU2013285355A1 (en) * 2012-07-06 2015-01-29 Genmab B.V. Dimeric protein with triple mutations
BR112015007120A2 (pt) 2012-10-08 2017-12-12 Roche Glycart Ag anticorpo biespecífico, composição farmacêutica, uso, célula hospedeira e método de produção de um anticorpo
US9605084B2 (en) 2013-03-15 2017-03-28 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US11053316B2 (en) 2013-01-14 2021-07-06 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
US10968276B2 (en) 2013-03-12 2021-04-06 Xencor, Inc. Optimized anti-CD3 variable regions
US9701759B2 (en) 2013-01-14 2017-07-11 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10487155B2 (en) 2013-01-14 2019-11-26 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10131710B2 (en) 2013-01-14 2018-11-20 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
CN105051069B (zh) 2013-01-14 2019-12-10 Xencor股份有限公司 新型异二聚体蛋白
US9738722B2 (en) 2013-01-15 2017-08-22 Xencor, Inc. Rapid clearance of antigen complexes using novel antibodies
ES2667420T3 (es) 2013-02-05 2018-05-10 Engmab Sàrl Anticuerpos biespecíficos contra cd3epsilon y bcma
GB201302447D0 (en) 2013-02-12 2013-03-27 Oxford Biotherapeutics Ltd Therapeutic and diagnostic target
UA119320C2 (uk) 2013-02-26 2019-06-10 Рош Глікарт Аг Активуюча т-клітини біспецифічна антигензв'язувальна молекула
CN110845618A (zh) 2013-02-26 2020-02-28 罗切格利卡特公司 双特异性t细胞活化抗原结合分子
US9487587B2 (en) * 2013-03-05 2016-11-08 Macrogenics, Inc. Bispecific molecules that are immunoreactive with immune effector cells of a companion animal that express an activating receptor and cells that express B7-H3 and uses thereof
US10351626B2 (en) 2013-03-14 2019-07-16 The Scripps Research Institute Targeting agent antibody conjugates and uses thereof
EP2968520B1 (en) * 2013-03-14 2021-05-12 MacroGenics, Inc. Bispecific molecules that are immunoreactive with immune effector cells that express an activating receptor
EP3421495A3 (en) 2013-03-15 2019-05-15 Xencor, Inc. Modulation of t cells with bispecific antibodies and fc fusions
US10858417B2 (en) 2013-03-15 2020-12-08 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10519242B2 (en) 2013-03-15 2019-12-31 Xencor, Inc. Targeting regulatory T cells with heterodimeric proteins
US10106624B2 (en) 2013-03-15 2018-10-23 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
HUE048722T2 (hu) 2013-07-05 2020-08-28 Genmab As Humanizált vagy kiméra CD3 ellenanyagok
DK3406633T3 (da) 2013-07-25 2022-03-28 Cytomx Therapeutics Inc Multispecifikke antistoffer, multispecifikke aktiverbare antistoffer og fremgangsmåder til anvendelse heraf
US11384149B2 (en) 2013-08-09 2022-07-12 Macrogenics, Inc. Bi-specific monovalent Fc diabodies that are capable of binding CD32B and CD79b and uses thereof
UA116479C2 (uk) 2013-08-09 2018-03-26 Макродженікс, Інк. БІСПЕЦИФІЧНЕ МОНОВАЛЕНТНЕ Fc-ДІАТІЛО, ЯКЕ ОДНОЧАСНО ЗВ'ЯЗУЄ CD32B I CD79b, ТА ЙОГО ЗАСТОСУВАННЯ
EP2840091A1 (en) * 2013-08-23 2015-02-25 MacroGenics, Inc. Bi-specific diabodies that are capable of binding gpA33 and CD3 and uses thereof
EP2839842A1 (en) 2013-08-23 2015-02-25 MacroGenics, Inc. Bi-specific monovalent diabodies that are capable of binding CD123 and CD3 and uses thereof
CN105940107B (zh) * 2013-11-11 2021-06-15 中外制药株式会社 含有改变了抗体可变区的抗原结合分子
KR102225489B1 (ko) * 2013-12-17 2021-03-10 제넨테크, 인크. 항-cd3 항체 및 이의 사용 방법
KR102497443B1 (ko) 2014-03-28 2023-02-08 젠코어 인코포레이티드 Cd38 및 cd3에 결합하는 이중특이적 항체
JP6738285B2 (ja) * 2014-05-28 2020-08-12 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト ヒト及びカニクイザルｃｄ３イプシロンに結合する抗体
TWI742423B (zh) * 2014-05-29 2021-10-11 美商宏觀基因股份有限公司 特異性結合多種癌症抗原的三特異性結合分子和其使用方法
MX2016017393A (es) 2014-07-01 2017-09-05 Pfizer Diacuerpos heterodimericos biespecificos y sus usos.
US9212225B1 (en) 2014-07-01 2015-12-15 Amphivena Therapeutics, Inc. Bispecific CD33 and CD3 binding proteins
AU2015292406B2 (en) 2014-07-25 2021-03-11 Cytomx Therapeutics, Inc Anti-CD3 antibodies, activatable anti-CD3 antibodies, multispecific anti-CD3 antibodies, multispecific activatable anti-CD3 antibodies, and methods of using the same
SMT202400235T1 (it) 2014-08-04 2024-07-09 Hoffmann La Roche Molecole bispecifiche leganti l’antigene di attivazione delle cellule t
EP2982693A1 (en) 2014-08-07 2016-02-10 Affimed Therapeutics AG CD3 binding domain
WO2016019969A1 (en) 2014-08-08 2016-02-11 Ludwig-Maximilians-Universität München Subcutaneously administered bispecific antibodies for use in the treatment of cancer
SG11201701627PA (en) 2014-09-12 2017-03-30 Genentech Inc Anti-cll-1 antibodies and immunoconjugates
EA201790719A1 (ru) * 2014-09-26 2017-07-31 Макродженикс, Инк. Биспецифические моновалентные диатела, которые способны связывать cd19 и cd3, а также их применения
US10717778B2 (en) * 2014-09-29 2020-07-21 Duke University Bispecific molecules comprising an HIV-1 envelope targeting arm
TWI740809B (zh) 2014-11-11 2021-10-01 日商中外製藥股份有限公司 包含經改變之抗體可變區之抗原結合分子的資料庫
BR112017010513A2 (pt) 2014-11-20 2018-04-03 F. Hoffmann-La Roche Ag ?cadeias leves comuns e métodos de uso?
RS61010B1 (sr) 2014-11-20 2020-11-30 Hoffmann La Roche Bispecifični antigen vezujući molekuli koji aktiviraju t ćelije protiv folr1 i cd3
RU2753902C2 (ru) 2014-11-20 2021-08-24 Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг Комбинированная терапия на основе активирующих т-клетки биспецифических антигенсвязывающих молекул против cd3 и фолатного рецептора 1 (folr1) и антагонистов, связывающихся с осью pd-1
BR112017011166A2 (pt) 2014-11-26 2018-02-27 Xencor, Inc. anticorpos heterodiméricos que se ligam a cd3 e cd38
CA2967426A1 (en) 2014-11-26 2016-06-02 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and tumor antigens
US10259887B2 (en) 2014-11-26 2019-04-16 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and tumor antigens
AU2015358325A1 (en) 2014-12-05 2017-05-25 Genentech, Inc. Anti-CD79b antibodies and methods of use
US20170058043A1 (en) 2014-12-06 2017-03-02 H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. Bispecific antibody for cancer immunotherapy
KR101838645B1 (ko) 2014-12-19 2018-03-14 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 항-c5 항체 및 그의 사용 방법
EP3237449A2 (en) 2014-12-22 2017-11-01 Xencor, Inc. Trispecific antibodies
UA120286C2 (uk) * 2015-01-08 2019-11-11 Ґенмаб А/С Біспецифічне антитіло проти cd3 і cd20
MY191964A (en) 2015-01-23 2022-07-21 Sanofi Sa Anti-cd3 antibodies, anti-cd123 antibodies and bispecific antibodies specifically binding to cd3 and/or cd123
WO2016141387A1 (en) 2015-03-05 2016-09-09 Xencor, Inc. Modulation of t cells with bispecific antibodies and fc fusions
US11071783B2 (en) 2015-03-19 2021-07-27 Duke University HIV-1 neutralizing antibodies and uses thereof
CA2979708A1 (en) 2015-03-19 2016-09-22 Duke University Hiv-1 neutralizing antibodies and uses thereof
WO2016149695A1 (en) 2015-03-19 2016-09-22 Duke University HIV-1 NEUTRALIZING ANTIBODIES AND USES THEREOF (CD4bs ANTIBODIES)
WO2016149698A2 (en) 2015-03-19 2016-09-22 Duke University Hiv-1 neutralizing antibodies and uses thereof (v3 antibodies)
HK1250997A1 (zh) * 2015-05-01 2019-01-18 基因泰克公司 掩蔽抗cd3抗体和使用方法
CA2985125A1 (en) * 2015-05-06 2016-11-10 Janssen Biotech, Inc. Prostate specific membrane antigen (psma) bispecific binding agents and uses thereof
EA201792581A1 (ru) 2015-05-29 2018-07-31 Амфивена Терапьютикс, Инк. Способы применения биспецифических cd33- и cd3- связывающих белков
TWI773646B (zh) 2015-06-08 2022-08-11 美商宏觀基因股份有限公司 結合lag-3的分子和其使用方法
EP3916018A1 (en) 2015-06-16 2021-12-01 Genentech, Inc. Anti-cd3 antibodies and methods of use
ES2957567T3 (es) 2015-06-16 2024-01-22 Hoffmann La Roche Anticuerpos humanizados y de afinidad madurada contra FcRH5 y procedimientos de uso
TW201718647A (zh) 2015-06-16 2017-06-01 建南德克公司 抗-cll-1抗體及使用方法
AU2016293073B2 (en) 2015-07-15 2022-12-22 Genmab A/S Humanized or chimeric CD3 antibodies
HUE055207T2 (hu) 2015-07-30 2021-11-29 Macrogenics Inc PD-1 és LAG-3 kötõ molekulák és eljárások azok alkalmazására
EP3337507A4 (en) * 2015-08-17 2019-04-24 MacroGenics, Inc. BIS-SPECIFIC MONOVALENTS DIABODIES WITH ABILITY TO BIND B7-H3 AND CD3 AND USES THEREOF
MX2018003292A (es) * 2015-09-21 2018-08-01 Aptevo Res & Development Llc Polipéptidos de unión a cd3.
AR106188A1 (es) 2015-10-01 2017-12-20 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-cd19 humano humanizados y métodos de utilización
KR20180073561A (ko) 2015-10-02 2018-07-02 에프. 호프만-라 로슈 아게 이중특이적 항-ceaxcd3 t 세포 활성화 항원 결합 분자
WO2017079272A2 (en) * 2015-11-03 2017-05-11 Ambrx, Inc. Anti-cd3-folate conjugates and their uses
TW201720458A (zh) * 2015-12-04 2017-06-16 宏觀基因股份有限公司 能夠結合cd19 和cd3 的雙特異性單價雙抗體以及其用途
CN108699136B (zh) 2015-12-07 2022-03-18 Xencor股份有限公司 结合cd3和psma的异二聚抗体
ES2901794T3 (es) 2015-12-09 2022-03-23 Hoffmann La Roche Anticuerpo anti-CD20 de tipo II para reducir la formación de anticuerpos antifármaco
EA201891178A1 (ru) 2015-12-14 2019-01-31 Макродженикс, Инк. Биспецифичные молекулы, обладающие иммунореактивностью в отношении pd-1 и ctla-4, и способы их применения
AR107303A1 (es) 2016-01-08 2018-04-18 Hoffmann La Roche Métodos de tratamiento de cánceres positivos para ace utilizando antagonistas de unión a eje pd-1 y anticuerpos biespecíficos anti-ace / anti-cd3, uso, composición, kit
TW201734049A (zh) 2016-01-22 2017-10-01 健生生物科技公司 抗－ｒｏｒ１抗體、ｒｏｒ１ ｘ ｃｄ３雙特異性抗體及使用其之方法
JP6951826B2 (ja) * 2016-02-04 2021-10-20 ザ スクリプス リサーチ インスティテュート ヒト化抗ｃｄ３抗体、その複合体、およびその使用
UY37127A (es) 2016-02-17 2017-08-31 Macrogenics Inc Moléculas de unión a ror1, y métodos de uso de las mismas
US12128102B2 (en) 2016-03-08 2024-10-29 Takeda Pharmaceutical Company Limited Constrained conditionally activated binding proteins
AU2017229687A1 (en) * 2016-03-08 2018-09-20 Takeda Pharmaceutical Company Limited Inducible binding proteins and methods of use
PL3433280T3 (pl) 2016-03-22 2023-07-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Dwuswoiste cząsteczki limfocytów T aktywowane przez proteazy
TWI781098B (zh) 2016-04-15 2022-10-21 美商宏觀基因股份有限公司 新穎的ｂ７-ｈ３-結合分子、其抗體藥物綴合物及其使用方法
WO2017210443A1 (en) * 2016-06-01 2017-12-07 Xencor, Inc. Bispecific antibodies that bind cd123 and cd3
CA3059010A1 (en) 2016-06-02 2018-12-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Type ii anti-cd20 antibody and anti-cd20/cd3 bispecific antibody for treatment of cancer
EP3252078A1 (en) 2016-06-02 2017-12-06 F. Hoffmann-La Roche AG Type ii anti-cd20 antibody and anti-cd20/cd3 bispecific antibody for treatment of cancer
US20200255524A1 (en) * 2016-06-07 2020-08-13 Macrogenics, Inc. Combination therapy
CA3026151A1 (en) 2016-06-14 2017-12-21 Xencor, Inc. Bispecific checkpoint inhibitor antibodies
TWI640536B (zh) 2016-06-20 2018-11-11 克馬伯有限公司 抗體
WO2017223111A1 (en) * 2016-06-21 2017-12-28 Teneobio, Inc. Cd3 binding antibodies
MX2018016265A (es) 2016-06-28 2019-07-04 Xencor Inc Anticuerpos heterodimericos que se unen al receptor 2 de somatostatina.
US10793632B2 (en) 2016-08-30 2020-10-06 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
JP7022123B2 (ja) 2016-09-30 2022-02-17 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Ｃｄ３に対する二重特異性抗体
PE20240950A1 (es) 2016-10-14 2024-05-06 Xencor Inc PROTEINAS DE FUSION FC HETERODIMERICAS IL 15/IL 15R(alfa)
US11466094B2 (en) 2016-11-15 2022-10-11 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-CD20/anti-CD3 bispecific antibodies
CA3046489A1 (en) 2016-12-07 2018-06-14 Progenity Inc. Gastrointestinal tract detection methods, devices and systems
BR112019012354A2 (pt) 2016-12-21 2019-11-26 Teneobio, Inc. anticorpos apenas de cadeia pesada anti-bcma
FI3561057T3 (fi) * 2016-12-22 2025-10-07 Daiichi Sankyo Co Ltd Anti-cd3-vasta-aine ja vasta-ainetta sisältäviä molekyylejä
US11242402B2 (en) 2016-12-23 2022-02-08 Macrogenics, Inc. ADAM9-binding molecules, and methods of use thereof
SG11201907753TA (en) 2017-02-24 2019-09-27 Macrogenics Inc Bispecific binding molecules that are capable of binding cd137 and tumor antigens, and uses thereof
US20210138213A1 (en) 2017-03-30 2021-05-13 Progenity, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with an immune modulatory agent released using an ingestible device
SG11201909160WA (en) 2017-04-11 2019-10-30 Inhibrx Inc Multispecific polypeptide constructs having constrained cd3 binding and methods of using the same
KR102629972B1 (ko) 2017-04-13 2024-01-29 아게누스 인코포레이티드 항-cd137 항체 및 이의 사용 방법
US11021537B2 (en) 2017-05-01 2021-06-01 Agenus Inc. Anti-TIGIT antibodies and methods of use thereof
WO2018213467A1 (en) 2017-05-16 2018-11-22 The Johns Hopkins University Manabodies and methods of using
EP3409322A1 (en) 2017-06-01 2018-12-05 F. Hoffmann-La Roche AG Treatment method
AU2018291497A1 (en) 2017-06-30 2020-01-16 Xencor, Inc. Targeted heterodimeric Fc fusion proteins containing IL-15/IL-15Ra and antigen binding domains
EP3668898B1 (en) 2017-08-14 2023-07-05 MorphoSys AG Humanized antibodies for cd3
EP3676294A4 (en) * 2017-08-28 2021-12-22 Systimmune, Inc. ANTI-CD3 ANTIBODIES AND METHOD OF MANUFACTURING AND USING THEREOF
IL273119B2 (en) 2017-09-08 2023-10-01 Maverick Therapeutics Inc Binding proteins are activated under limited conditions
AU2018347607B2 (en) * 2017-10-14 2025-08-21 Cytomx Therapeutics, Inc. Antibodies, activatable antibodies, bispecific antibodies, and bispecific activatable antibodies and methods of use thereof
KR101973060B1 (ko) * 2017-10-20 2019-04-26 주식회사 녹십자 항-cd3 항체 및 이를 포함하는 암 치료용 약학적 조성물
US10981992B2 (en) 2017-11-08 2021-04-20 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
KR20200085828A (ko) 2017-11-08 2020-07-15 젠코어 인코포레이티드 신규의 항-pd-1 서열을 사용한 이중특이적 및 단일특이적 항체
EP3720963A4 (en) 2017-12-05 2021-12-08 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha ANTIGEN-BINDING MOLECULE WITH CHANGED BINDING OF THE VARIABLE ANTIBODY REGIONS CD3 AND CD137
WO2019118266A1 (en) 2017-12-12 2019-06-20 Macrogenics Inc. Bispecific cd 16-binding molecules and their use in the treatment of disease
EP3728302A1 (en) 2017-12-19 2020-10-28 Xencor, Inc. Engineered il-2 fc fusion proteins
CN109939232A (zh) * 2017-12-21 2019-06-28 张曼 关于cd3×b7h3双特异性抗体定向杀伤膀胱癌细胞pumc-91的应用
CN118772287A (zh) 2018-02-08 2024-10-15 豪夫迈·罗氏有限公司 双特异性抗原结合分子和使用方法
WO2019160904A1 (en) 2018-02-15 2019-08-22 Macrogenics, Inc. Variant cd3-binding domains and their use in combination therapies for the treatment of disease
CN110305217B (zh) * 2018-03-27 2022-03-29 广州爱思迈生物医药科技有限公司 双特异性抗体及其应用
EP3773911A2 (en) 2018-04-04 2021-02-17 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind fibroblast activation protein
WO2019200022A1 (en) 2018-04-11 2019-10-17 Inhibrx, Inc. Multispecific polypeptide constructs having constrained cd3 binding and related methods and uses
KR20210003814A (ko) 2018-04-18 2021-01-12 젠코어 인코포레이티드 IL-15/IL-15Rα Fc-융합 단백질 및 TIM-3 항원 결합 도메인을 함유하는 TIM-3 표적화 이종이량체 융합 단백질
MX2020010910A (es) 2018-04-18 2021-02-09 Xencor Inc Proteinas de fusion heterodimericas dirigidas a pd-1 que contienen proteinas de fusion il-15 / il-15ra fc y dominios de union al antigeno pd-1 y usos de los mismos.
MX420253B (es) 2018-05-24 2025-02-10 Janssen Biotech Inc Anticuerpos anti-cd3 y usos de estos.
KR20210009421A (ko) * 2018-06-14 2021-01-26 바이오아트라, 엘엘씨 다중 특이적 항체 구조체
WO2019246312A1 (en) 2018-06-20 2019-12-26 Progenity, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with an immunomodulator
WO2019246317A1 (en) 2018-06-20 2019-12-26 Progenity, Inc. Treatment of a disease or condition in a tissue originating from the endoderm
TW202035451A (zh) 2018-07-24 2020-10-01 美商英伊布里克斯公司 含有受限cd3結合域及受體結合區之多重特異性多肽構築體及其使用方法
CN113286824A (zh) 2018-08-03 2021-08-20 中外制药株式会社 包含两个彼此连接的抗原结合结构域的抗原结合分子
IL280875B2 (en) 2018-08-31 2024-12-01 Regeneron Pharma Dosing strategy that mitigates cytokine release syndrome for cd3/c20 bispecific antibodies
EP3856789A4 (en) 2018-09-28 2022-08-17 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha ANTIGEN-BINDING MOLECULE WITH VARIABLE REGION OF AN ALTERED ANTIBODY
MX2021003765A (es) 2018-10-03 2021-07-15 Xencor Inc Proteínas il-12 de fusión a fc heterodimérico.
CA3115082A1 (en) * 2018-10-11 2020-04-16 Inhibrx, Inc. B7h3 single domain antibodies and therapeutic compositions thereof
JP2022512709A (ja) * 2018-10-31 2022-02-07 ティジアーナ ライフ サイエンシズ パブリック リミティド カンパニー 炎症性疾患及び自己免疫疾患を処置する組成物及び方法
CN116726361A (zh) 2018-11-19 2023-09-12 比奥拉治疗股份有限公司 用生物治疗剂治疗疾病的方法和装置
CA3121168A1 (en) * 2018-11-30 2020-06-04 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Heterodimeric tetravalency and specificity antibody compositions and uses thereof
AU2019339582A1 (en) * 2018-12-04 2021-06-17 Novartis Ag Binding molecules against CD3 and uses thereof
WO2020168555A1 (zh) * 2019-02-22 2020-08-27 武汉友芝友生物制药有限公司 Cd3抗原结合片段及其应用
AU2020232605A1 (en) 2019-03-01 2021-10-21 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind ENPP3 and CD3
EP4592313A3 (en) 2019-03-05 2025-11-19 Takeda Pharmaceutical Company Limited Constrained conditionally activated binding proteins
KR102239781B1 (ko) 2019-04-08 2021-04-13 주식회사 녹십자 Gpnmb 및 cd3에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체 및 이의 용도
IL288024B2 (en) 2019-05-14 2025-12-01 Provention Bio Inc Methods and compositions for preventing type
TWI905099B (zh) 2019-05-21 2025-11-21 瑞士商諾華公司 Cd19 結合分子及其用途
JP7774447B2 (ja) * 2019-06-07 2025-11-21 アディマブ・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー 高アフィニティ抗ｃｄ３抗体、ならびにその作製方法及び使用方法
CN111454357B (zh) * 2019-08-14 2022-03-15 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 一种含有抗体的肿瘤治疗剂的开发和应用
AU2020335928A1 (en) 2019-08-30 2022-02-17 Agenus Inc. Anti-CD96 antibodies and methods of use thereof
TWI878355B (zh) * 2019-10-02 2025-04-01 德商百靈佳殷格翰國際股份有限公司 用於癌症治療之多重專一性結合蛋白
PE20221511A1 (es) 2019-12-13 2022-10-04 Genentech Inc Anticuerpos anti-ly6g6d y metodos de uso
WO2021119482A1 (en) 2019-12-13 2021-06-17 Progenity, Inc. Ingestible device for delivery of therapeutic agent to the gastrointestinal tract
WO2021146328A1 (en) 2020-01-13 2021-07-22 Aptevo Research And Development Llc Formulations for protein therapeutics
JP2023512446A (ja) 2020-01-13 2023-03-27 アプティーボ リサーチ アンド デベロップメント エルエルシー 治療的タンパク質の薬物送達システム構成要素への吸着を防ぐ方法および組成物
KR20220148175A (ko) 2020-01-29 2022-11-04 인히브릭스, 인크. Ｃｄ28 단일 도메인 항체 및 이의 다가 및 다중특이적 구조체
CA3170330A1 (en) 2020-02-21 2021-08-26 Macrogenics, Inc. Cd137 binding molecules and uses thereof
TWI799824B (zh) 2020-03-31 2023-04-21 日商中外製藥股份有限公司 Ｄｌｌ３靶向之多特異性抗原結合分子及其用途
CN116096754A (zh) 2020-05-04 2023-05-09 免疫里森公司 前体三特异性抗体构建体及其使用方法
CA3176436A1 (en) 2020-05-08 2021-11-11 Tahamtan Ahmadi Bispecific antibodies against cd3 and cd20
US11919956B2 (en) 2020-05-14 2024-03-05 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind prostate specific membrane antigen (PSMA) and CD3
IL298444A (en) 2020-05-27 2023-01-01 Janssen Biotech Inc Proteins containing cd3 antigen binding sites and uses thereof
US12006366B2 (en) 2020-06-11 2024-06-11 Provention Bio, Inc. Methods and compositions for preventing type 1 diabetes
TWI852680B (zh) 2020-06-19 2024-08-11 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 與 cd3 及 cd19 結合之抗體
JP7773528B2 (ja) 2020-08-19 2025-11-19 ゼンコア インコーポレイテッド 抗ｃｄ２８組成物
MX2023002194A (es) 2020-08-25 2023-03-03 Gilead Sciences Inc Moleculas multiespecificas de union a antigenos dirigidas al vih y metodos de uso.
JP2023542291A (ja) 2020-09-10 2023-10-06 ジェンマブ エー／エス びまん性大細胞型ｂ細胞リンパ腫を治療するための併用療法におけるｃｄ３及びｃｄ２０に対する二重特異性抗体
JP2023542289A (ja) 2020-09-10 2023-10-06 ジェンマブ エー／エス 濾胞性リンパ腫を治療するための併用療法におけるｃｄ３及びｃｄ２０に対する二重特異性抗体
JP2023541858A (ja) 2020-09-10 2023-10-04 ジェンマブ エー／エス 慢性リンパ球性白血病を治療するためのｃｄ３及びｃｄ２０に対する二重特異性抗体
US20240034812A1 (en) 2020-09-10 2024-02-01 Genmab A/S Bispecific antibody against cd3 and cd20 in combination therapy for treating diffuse large b-cell lymphoma
CN116406293A (zh) 2020-09-10 2023-07-07 健玛保 用于治疗滤泡性淋巴瘤的联合疗法中的针对cd3和cd20的双特异性抗体
CR20230204A (es) 2020-10-14 2023-10-11 Viridian Therapeutics Inc Composiciones y métodos para el tratamiento de la enfermedad ocular tiroidea
CA3196191A1 (en) 2020-11-04 2022-05-12 Chi-Chung Li Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies and anti-cd79b antibody drug conjugates
CA3196539A1 (en) 2020-11-04 2022-05-12 Chi-Chung Li Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies
IL302400A (en) 2020-11-04 2023-06-01 Genentech Inc Subcutaneous dosing of bispecific anti-CD20/anti-CD3 antibodies
CN114573703A (zh) * 2020-12-02 2022-06-03 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 一种t细胞衔接器治疗剂的开发和应用
CN114656562B (zh) * 2020-12-23 2023-11-03 北京天广实生物技术股份有限公司 结合人和猴cd3的抗体及其应用
CA3212665A1 (en) 2021-03-09 2022-09-15 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and cldn6
KR20230154311A (ko) 2021-03-10 2023-11-07 젠코어 인코포레이티드 Cd3 및 gpc3에 결합하는 이종이량체 항체
BR112023019484A2 (pt) * 2021-03-24 2023-12-05 Janssen Biotech Inc Anticorpo triespecífico que tem como alvo cd79b, cd20 e cd3
EP4329800A1 (en) 2021-04-30 2024-03-06 F. Hoffmann-La Roche AG Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibody
AU2021443318A1 (en) 2021-04-30 2023-09-07 F. Hoffmann-La Roche Ag Dosing for combination treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibody and anti-cd79b antibody drug conjugate
WO2022241235A1 (en) 2021-05-14 2022-11-17 Genentech, Inc. Methods for treatment of cd20-positive proliferative disorder with mosunetuzumab and polatuzumab vedotin
JP2024519964A (ja) 2021-05-21 2024-05-21 アプティーボ リサーチ アンド デベロップメント エルエルシー タンパク質治療薬のための投薬レジメン
MX2023013851A (es) 2021-05-24 2023-12-08 Provention Bio Inc Metodos para el tratamiento de diabetes tipo 1.
TW202320850A (zh) 2021-08-10 2023-06-01 美商維里迪恩醫療股份有限公司 用於治療甲狀腺眼病之組合物、劑量及方法
JPWO2023132325A1 (sr) 2022-01-07 2023-07-13
EP4463135A2 (en) 2022-01-10 2024-11-20 Sana Biotechnology, Inc. Methods of ex vivo dosing and administration of lipid particles or viral vectors and related systems and uses
WO2023150518A1 (en) 2022-02-01 2023-08-10 Sana Biotechnology, Inc. Cd3-targeted lentiviral vectors and uses thereof
MX2024011468A (es) 2022-03-23 2024-09-25 Hoffmann La Roche Tratamiento conjunto de un anticuerpo biespecifico anti-cd20/anti-cd3 y quimioterapia.
WO2023193015A1 (en) 2022-04-01 2023-10-05 Sana Biotechnology, Inc. Cytokine receptor agonist and viral vector combination therapies
AU2023251832A1 (en) 2022-04-13 2024-10-17 F. Hoffmann-La Roche Ag Pharmaceutical compositions of anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies and methods of use
WO2023201291A1 (en) 2022-04-13 2023-10-19 Genentech, Inc. Pharmaceutical compositions of mosunetuzumab and methods of use
AU2023268258A1 (en) 2022-05-12 2024-11-28 Astellas Pharma Inc. Anti-taa/anti-cd3 multispecific antibody
IL314694A (en) * 2022-05-24 2024-10-01 Provention Bio Inc Methods and compositions for preventing or delaying type 1 diabetes
CN117603351A (zh) 2022-08-22 2024-02-27 英脉德医疗科技(广东)有限公司 肿瘤微环境特异激活的Her2-CD3双特异性抗体
US20260055146A1 (en) 2022-08-24 2026-02-26 Sana Biotechnology, Inc. Delivery of heterologous proteins
US20260061078A1 (en) 2022-08-31 2026-03-05 Universität Zürich Adenoviral-Based In Situ Delivery of Bispecific T Cell Engagers
WO2024088987A1 (en) 2022-10-26 2024-05-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy for the treatment of cancer
WO2024102948A1 (en) 2022-11-11 2024-05-16 Celgene Corporation Fc receptor-homolog 5 (fcrh5) specific binding molecules and bispecific t-cell engaging antibodies including same and related methods
WO2024119157A1 (en) 2022-12-02 2024-06-06 Sana Biotechnology, Inc. Lipid particles with cofusogens and methods of producing and using the same
CN116239700B (zh) * 2022-12-20 2024-06-21 浙江大学 一种肿瘤双靶向的三特异性t细胞衔接器及其应用
CN116063526B (zh) * 2022-12-31 2025-03-25 合肥天港免疫药物有限公司 抗pdl1的抗体及其用途
CN116284448B (zh) * 2023-02-14 2024-06-21 浙江大学 一种超抗原参与的三功能t细胞衔接器及其应用
WO2024220597A2 (en) 2023-04-18 2024-10-24 Sana Biotechnology, Inc. Digital droplet based assay for detecting replication competent lentiviral vector
WO2024228568A1 (ko) * 2023-05-03 2024-11-07 아주대학교산학협력단 Il-5rα×cd3ε t 세포 관여 이중 특이 항체 및 이의 용도
WO2024243340A1 (en) 2023-05-23 2024-11-28 Sana Biotechnology, Inc. Tandem fusogens and related lipid particles
WO2025184529A1 (en) 2024-03-01 2025-09-04 Sana Biotechnology, Inc. Viral particles with fusogen display and related compositions and methods
WO2026006492A2 (en) 2024-06-25 2026-01-02 Ypsilon Therapeutics, Inc. Anti-prame/hla-a2 antibodies and uses thereof
WO2026006495A1 (en) 2024-06-25 2026-01-02 Alloy Therapeutics, Inc. Anti-wt1/hla-a2 antibody and uses thereof

Family Cites Families (90)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3862925A (en) 1973-07-05 1975-01-28 American Home Prod Preparation of somatotropin release inhibiting factor and intermediates therefor
US3842067A (en) 1973-07-27 1974-10-15 American Home Prod Synthesis of(des-asn5)-srif and intermediates
JPS5726506B2 (sr) 1974-03-08 1982-06-04
US4105603A (en) 1977-03-28 1978-08-08 The Salk Institute For Biological Studies Peptides which effect release of hormones
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
AU600575B2 (en) 1987-03-18 1990-08-16 Sb2, Inc. Altered antibodies
AU612370B2 (en) 1987-05-21 1991-07-11 Micromet Ag Targeted multifunctional proteins
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
DE69233482T2 (de) 1991-05-17 2006-01-12 Merck & Co., Inc. Verfahren zur Verminderung der Immunogenität der variablen Antikörperdomänen
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
GB9115364D0 (en) 1991-07-16 1991-08-28 Wellcome Found Antibody
CA2078539C (en) 1991-09-18 2005-08-02 Kenya Shitara Process for producing humanized chimera antibody
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
GB9206422D0 (en) 1992-03-24 1992-05-06 Bolt Sarah L Antibody preparation
US5733743A (en) 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
US6129914A (en) * 1992-03-27 2000-10-10 Protein Design Labs, Inc. Bispecific antibody effective to treat B-cell lymphoma and cell line
US7381803B1 (en) 1992-03-27 2008-06-03 Pdl Biopharma, Inc. Humanized antibodies against CD3
DK0656789T3 (da) 1992-08-21 1998-08-24 Genentech Inc Fremgangsmåde til behandling af en LFA-1-medieretforstyrrelse.
US5736137A (en) 1992-11-13 1998-04-07 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
US20030108548A1 (en) 1993-06-01 2003-06-12 Bluestone Jeffrey A. Methods and materials for modulation of the immunosuppressive activity and toxicity of monoclonal antibodies
US5885573A (en) 1993-06-01 1999-03-23 Arch Development Corporation Methods and materials for modulation of the immunosuppressive activity and toxicity of monoclonal antibodies
US6491916B1 (en) 1994-06-01 2002-12-10 Tolerance Therapeutics, Inc. Methods and materials for modulation of the immunosuppresive activity and toxicity of monoclonal antibodies
US6180377B1 (en) 1993-06-16 2001-01-30 Celltech Therapeutics Limited Humanized antibodies
US20020106370A1 (en) 1994-05-13 2002-08-08 Donald Leonard Nicholas Cardy Improvements in or relating to peptide delivery
US6265150B1 (en) 1995-06-07 2001-07-24 Becton Dickinson & Company Phage antibodies
US5834597A (en) * 1996-05-20 1998-11-10 Protein Design Labs, Inc. Mutated nonactivating IgG2 domains and anti CD3 antibodies incorporating the same
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
DK1071752T3 (da) 1998-04-21 2003-10-20 Micromet Ag CD19xCD3-specifikke polypeptider og anvendelsen deraf
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
US20030009013A1 (en) 1998-12-30 2003-01-09 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
KR101077001B1 (ko) 1999-01-15 2011-10-26 제넨테크, 인크. 효과기 기능이 변화된 폴리펩티드 변이체
US7183387B1 (en) 1999-01-15 2007-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
NZ517772A (en) 1999-11-24 2004-03-26 Immunogen Inc Cytotoxic agents comprising taxanes and their therapeutic use
US6333410B1 (en) 2000-08-18 2001-12-25 Immunogen, Inc. Process for the preparation and purification of thiol-containing maytansinoids
US6441163B1 (en) 2001-05-31 2002-08-27 Immunogen, Inc. Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents
DE60237704D1 (de) 2001-10-16 2010-10-28 Government Of The Us Secretary Neutralisierende antikörper gegen hiv mit breiter kreuzreaktion, die mit hilfe von env-cd4-co-rezeptorkomplexen selektiert werden
CA2476166C (en) 2002-02-14 2011-11-15 Immunomedics, Inc. Anti-cd20 antibodies and fusion proteins thereof and methods of use
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
US6596757B1 (en) 2002-05-14 2003-07-22 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising polyethylene glycol-containing taxanes and their therapeutic use
EP1513554B9 (en) 2002-05-30 2011-11-09 Macrogenics, Inc. Cd16a binding proteins and use for the treatment of immune disorders
US7425620B2 (en) 2002-08-14 2008-09-16 Scott Koenig FcγRIIB-specific antibodies and methods of use thereof
PL216630B1 (pl) 2002-10-17 2014-04-30 Genmab As Izolowane ludzkie przeciwciało monoklonalne wiążące ludzki CD20, związane z tym przeciwciałem transfektoma, komórka gospodarza, transgeniczne zwierzę lub roślina, kompozycja, immunokoniugat, cząsteczka bispecyficzna, wektor ekspresyjny, kompozycja farmaceutyczna, zastosowanie medyczne, zestaw oraz przeciwciało antyidiotypowe i jego zastosowanie
WO2004103269A2 (en) 2002-10-18 2004-12-02 Macrogenics, Inc. Methods and compositions for vaccination comprising nucleic acid and/or polypeptide sequences of the genus borrelia
ES2347241T3 (es) 2002-12-16 2010-10-27 Genentech, Inc. Variantes de inmunoglobulina y sus utilizaciones.
EP2368578A1 (en) 2003-01-09 2011-09-28 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
US7960512B2 (en) 2003-01-09 2011-06-14 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
WO2005000901A2 (en) 2003-05-09 2005-01-06 Duke University Cd20-specific antibodies and methods of employing same
US7276497B2 (en) 2003-05-20 2007-10-02 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising new maytansinoids
WO2004106383A1 (en) 2003-05-31 2004-12-09 Micromet Ag Pharmaceutical composition comprising a bispecific antibody for epcam
JP2008501621A (ja) 2003-05-31 2008-01-24 マイクロメット アクツィエン ゲゼルシャフト Ｂ細胞関連疾患を処置するための二重特異性抗ｃｄ３、抗ｃｄ１９抗体構築物を含む薬学的組成物
US20050176028A1 (en) * 2003-10-16 2005-08-11 Robert Hofmeister Deimmunized binding molecules to CD3
WO2005048935A2 (en) 2003-11-14 2005-06-02 Brigham And Women's Hospital, Inc. Methods of modulating immunity
US7235641B2 (en) 2003-12-22 2007-06-26 Micromet Ag Bispecific antibodies
MXPA06011796A (es) 2004-04-16 2007-05-07 Macrogenics Inc Anticuerpos especificos de fc(riib y metodos para el uso de los mismos.
ZA200608982B (en) 2004-05-05 2008-06-25 Genentech Inc Preventing autoimmune disease by using an anti-CD20 antibody
MXPA06012601A (es) 2004-05-10 2007-05-10 Macrogenics Inc Anticuerpos especificos de fcy riib humanizados y metodos de uso de los mismos.
CA2569509C (en) 2004-06-03 2014-08-12 Novimmune S.A. Anti-cd3 antibodies and methods of use thereof
PA8635501A1 (es) 2004-06-04 2006-06-02 Genentech Inc Uso de un anticuerpo para el tratamiento del lupus
JP4463645B2 (ja) 2004-08-27 2010-05-19 日本メクトロン株式会社 プリント基板およびその検査方法
US7632497B2 (en) 2004-11-10 2009-12-15 Macrogenics, Inc. Engineering Fc Antibody regions to confer effector function
EP3479844B1 (en) 2005-04-15 2023-11-22 MacroGenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
US9963510B2 (en) 2005-04-15 2018-05-08 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
US9284375B2 (en) 2005-04-15 2016-03-15 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
CA2614640A1 (en) 2005-07-11 2007-01-18 Macrogenics, Inc. Methods for the treatment of autoimmune disorders using immunosuppressive monoclonal antibodies with reduced toxicity
CA2618681C (en) 2005-08-10 2015-10-27 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant fc regions and methods of using same
EA014025B1 (ru) 2005-09-12 2010-08-30 Новиммун С.А. Композиции антитела против cd3
EP1940881B1 (en) * 2005-10-11 2016-11-30 Amgen Research (Munich) GmbH Compositions comprising cross-species-specific antibodies and uses thereof
JP2009529331A (ja) 2006-03-10 2009-08-20 マクロジェニクス，インコーポレーテッド 変異型重鎖を有する抗体の同定および工学的改変ならびにその使用方法
WO2007117600A2 (en) 2006-04-07 2007-10-18 Macrogenics, Inc. Combination therapy for treating autoimmune diseases
US7786270B2 (en) 2006-05-26 2010-08-31 Macrogenics, Inc. Humanized FcγRIIB-specific antibodies and methods of use thereof
SG10201504662WA (en) 2006-06-14 2015-07-30 Macrogenics Inc Methods For The Treatment Of Autoimmune Disorders Using Immunosuppressive Monoclonal Antibodies With Reduced Toxicity
EP2032159B1 (en) 2006-06-26 2015-01-07 MacroGenics, Inc. Combination of fcgammariib antibodies and cd20-specific antibodies and methods of use thereof
WO2008079713A2 (en) 2006-12-21 2008-07-03 Macrogenics Inc. Methods for the treatment of lada and other adult-onset autoimmune diabetes using immunosuppressive monoclonal antibodies with reduced toxicity
US8309354B2 (en) 2007-01-22 2012-11-13 Macrogenics West, Inc. Human cancer stem cells
DK2155788T3 (da) * 2007-04-03 2012-10-08 Amgen Res Munich Gmbh Krydsartsspecifikke bispecifikke bindemidler
AU2008234019B2 (en) 2007-04-03 2014-05-29 Amgen Research (Munich) Gmbh Cross-species-specific bispecific binders
WO2008119567A2 (en) * 2007-04-03 2008-10-09 Micromet Ag Cross-species-specific cd3-epsilon binding domain
RU2769948C2 (ru) * 2007-04-03 2022-04-11 Эмджен Рисерч (Мьюник) Гмбх CD3-Эпсилон-связывающий домен с межвидовой специфичностью
ES2702087T3 (es) 2007-06-21 2019-02-27 Macrogenics Inc Diacuerpos covalentes y sus usos
US20100260668A1 (en) 2008-04-29 2010-10-14 Abbott Laboratories Dual Variable Domain Immunoglobulins and Uses Thereof
WO2010027797A1 (en) 2008-08-26 2010-03-11 Macrogenics Inc. T-cell receptor antibodies and methods of use thereof
EA032828B1 (ru) 2008-10-10 2019-07-31 Аптево Рисёрч Энд Девелопмент Ллс Иммунотерапевтические средства против комплекса tcr
SG172254A1 (en) 2008-12-19 2011-07-28 Macrogenics Inc Covalent diabodies and uses thereof
TWI653333B (zh) * 2010-04-01 2019-03-11 安進研究（慕尼黑）有限責任公司 跨物種專一性之ＰＳＭＡｘＣＤ３雙專一性單鏈抗體
CN107827985A (zh) * 2011-05-21 2018-03-23 宏观基因有限公司 能够与人和非人cd3结合的cd3结合分子
JP6926834B2 (ja) * 2017-08-30 2021-08-25 いすゞ自動車株式会社 ステアリング装置

Also Published As

Publication number Publication date
EP2714733A2 (en) 2014-04-09
JP2014517844A (ja) 2014-07-24
IL264293B (en) 2020-09-30
CA2836857A1 (en) 2012-11-29
MY173899A (en) 2020-02-26
JP2017206505A (ja) 2017-11-24
KR20190105112A (ko) 2019-09-11
MX369220B (es) 2019-10-31
MX2013013584A (es) 2014-09-22
CN107827985A (zh) 2018-03-23
UA115402C2 (uk) 2017-10-25
JP6141831B2 (ja) 2017-06-07
EA033677B1 (ru) 2019-11-15
PL2714733T4 (pl) 2019-08-30
ECSP13013101A (es) 2014-01-31
IL229575B (en) 2018-05-31
US12049501B2 (en) 2024-07-30
US11111299B2 (en) 2021-09-07
US20250122284A1 (en) 2025-04-17
UA117072C2 (uk) 2018-06-11
AU2017204545B2 (en) 2018-11-15
PL2714733T3 (pl) 2019-08-30
CL2013003329A1 (es) 2014-07-04
MX391107B (es) 2025-03-21
BR122016016837A2 (pt) 2019-08-27
CY1122020T1 (el) 2020-10-14
EP2714733B1 (en) 2019-01-23
AU2019200159B2 (en) 2020-03-12
US20140099318A1 (en) 2014-04-10
JP7302990B2 (ja) 2023-07-04
CO6970560A2 (es) 2014-06-13
AU2012259161B2 (en) 2017-04-06
SMT201900239T1 (it) 2019-05-10
PT2714733T (pt) 2019-05-23
KR20140033107A (ko) 2014-03-17
IL259187A (en) 2018-07-31
ME03440B (me) 2020-01-20
HUE044209T2 (hu) 2019-10-28
CA2836857C (en) 2019-12-03
UA115122C2 (uk) 2017-09-25
AU2012259161A1 (en) 2013-12-12
EA201391735A1 (ru) 2014-03-31
JP6496349B2 (ja) 2019-04-03
NZ618021A (en) 2015-02-27
LT2714733T (lt) 2019-06-10
CN103703024B (zh) 2017-11-14
SI2714733T1 (sl) 2019-06-28
CN103703024A (zh) 2014-04-02
MA35174B1 (fr) 2014-06-02
US10150812B2 (en) 2018-12-11
IL229575A0 (en) 2014-01-30
SG195072A1 (en) 2013-12-30
US20170137519A1 (en) 2017-05-18
CL2016001254A1 (es) 2016-12-02
IL259187B (en) 2019-02-28
WO2012162067A3 (en) 2013-01-31
IL264293A (en) 2019-02-28
AU2017204545A1 (en) 2017-07-20
SG10201703425RA (en) 2017-05-30
EP2714733A4 (en) 2015-10-14
ES2732213T3 (es) 2019-11-21
JP2019142866A (ja) 2019-08-29
ZA201308602B (en) 2014-07-30
US20220056131A1 (en) 2022-02-24
HRP20190756T1 (hr) 2019-06-14
NZ703939A (en) 2016-01-29
KR102060389B1 (ko) 2019-12-31
EP3492494A1 (en) 2019-06-05
US9587021B2 (en) 2017-03-07
DK2714733T3 (da) 2019-05-06
AU2019200159A1 (en) 2019-01-31
WO2012162067A2 (en) 2012-11-29
CN107722124A (zh) 2018-02-23
JP2022001580A (ja) 2022-01-06
SG10201509588TA (en) 2015-12-30
CL2020000830A1 (es) 2020-08-07
BR112013029893A2 (pt) 2017-05-30
US20190040135A1 (en) 2019-02-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12049501B2 (en) CD3-binding molecules capable of binding to human and non-human CD3
DK2699590T3 (en) ENDOGLIN POLYPEPTIDES AND APPLICATIONS THEREOF
KR20190086477A (ko) 다발성 골수종 치료를 위한 bcma 및 cd3에 대응하는 이중 특이적 항체 및 면역학적 약물의 복합용도
KR20170128234A (ko) Ror1에 특이적인 항체 및 키메라 항원 수용체
HK40009624A (en) Cd3-binding molecules capable of binding to human and non-human cd3
HK1190725B (en) Cd3-binding molecules capable of binding to human and non-human cd3
HK1190725A (en) Cd3-binding molecules capable of binding to human and non-human cd3
NZ618021B2 (en) Cd3-binding molecules capable of binding to human and non-human cd3
EA045070B1 (ru) Cd3-связывающие молекулы, способные связаться с cd3 человека и cd3, не являющимся человеческим