CN113329771A - 治疗炎症性和自身免疫性疾病的组合物和方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及治疗病症如乳糜泻的方法，所述方法通过施用单独或与另外的剂组合的抗CD3抗体进行。

Description

治疗炎症性和自身免疫性疾病的组合物和方法

相关申请的交叉引用化合物及其

本申请要求2018年10月31日提交的美国临时申请No.62/753,445的优先权益，所述临时申请以引用的方式整体并入本文中。

技术领域

本发明涉及单独或与改善肠屏障功能的化合物和/或抗炎化合物组合的抗CD3抗体的口服制剂、剂量和给药方案，以治疗炎症性和自身免疫性疾病，包括乳糜泻(CeD)和克罗恩病(Crohn’s Disease，CD)。

以电子方式提交的文本文件的描述

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背景技术

乳糜泻(CeD)是一种自身免疫性疾病，与饮食中摄入的麸质有关。乳糜泻患者对饮食中摄入的麸质极为敏感，这些麸质会引起涉及腹痛、腹胀、腹泻等症状。尽管仅部分了解了乳糜泻的病因，但众所周知，摄入小麦和其它谷物中存在的麸质蛋白在基因上倾向于携带DQ2或DQ8人白细胞抗原单倍型的个体中是所述疾病的增强剂。蛋白质组学和分子研究还说明了组织转谷氨酰胺酶2(TG2)在CeD中的致病作用。这种酶催化麸质肽转变成其脱酰胺代谢物，这极其有效地激活致病性T细胞。在CeD患者中，TG2过表达。此外，CeD患者的肠屏障功能也由于微生物群的改变和其它炎性刺激而被破坏。潜在的粘膜炎症也干扰改善肠屏障功能的治疗。粘膜炎症的主要原因之一是T调节细胞(Tregs)的功能失调。因此，包含正常化或刺激Tregs功能的化合物与改善肠屏障功能的化合物的组合的治疗可能适用于胃肠道(GI)炎症性疾病，例如CeD和CD。

DQ2和DQ8分子充当麸质特异性CD4⁺T淋巴细胞的限制要素，但不足以引起慢性小肠炎。显然，摄入麸质蛋白是疾病发展的先决条件，导致绒毛变平或隐窝增生。传统上，麸质仅是小麦蛋白的名称，但现在麸质正日益用作表示由称为小麦族(triticeae)的一类草形成的富含脯氨酸和谷氨酰胺(Gln)的蛋白质的术语，这类草主要包括小麦、大麦和黑麦。无麸质饮食可逆转许多疾病表现，但对于少数难治性CeD患者而言，这是不够的。由于患有难治性CeD和异常克隆性T细胞群(II型难治性CeD)的患者有发生显著侵袭性形式的非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma)的风险。

因此，需要用于乳糜泻的治疗方式。

发明内容

本发明提供了用于治疗病症的方法，所述方法通过施用口服剂型的抗CD3抗体和改善肠屏障功能的化合物和/或抗炎化合物进行。改善肠屏障功能的化合物降低肠通透性。

病症是炎症性疾病、胃肠道病症、自身免疫性疾病或癌症。炎症性病症是胃肠道的炎症性病症。胃肠道病症是胃肠道癌症。可替代地，胃肠道病症是乳糜泻、克罗恩病、溃疡性结肠炎、肠易激综合征、炎症性肠病或结肠癌。自身免疫性疾病是例如糖尿病。病症是NASH、胆汁酸病症或肝病。

改善肠屏障功能的化合物降低肠通透性。

改善肠屏障功能的化合物是例如视黄酸、GC-C受体激动剂、肝素、鲁比前列酮(lubiprostone)、谷氨酰胺、GLP-2肽、连蛋白(zonulin)肽抑制剂、连蛋白(zonulin)拮抗剂、拉瑞唑来(larazotide)、益生菌或丁酸。

视黄酸是全反式-视黄酸、9-顺式-视黄酸或13-顺式-视黄酸。视黄酸以约15-45mg/m²的日剂量施用。优选地，视黄酸以约45mg/m²的日剂量施用。任选地，日剂量以两个等分剂量施用。例如，视黄酸以约22.5mg/m²的剂量每日施用两次。

GC-C受体激动剂是鸟苷素、尿鸟苷素、淋巴鸟苷素、大肠杆菌热稳定肠毒素(ST)、利那洛肽(linaclotide)(例如

)、普卡那肽(plecanatide)(例如

)或多卡那肽(dolcanatide)。GC-C受体激动剂以约1至约10mg的日剂量施用。优选地，GC-C受体激动剂以3mg或6mg的日剂量施用。GC-C激动剂每日施用一次。

抗炎化合物是对IL-17、TNF-a、α4-整合素、α4-β7整合素、IL-12或IL-23具有特异性的单克隆抗体。可替代地，抗炎化合物是

JNK抑制剂、PI3K通路抑制剂、AKT抑制剂、mTOR抑制剂、美沙拉嗪(mesalamine)、Uceris或鞘氨醇-1-磷酸激酶抑制剂。

抗CD3抗体是完全人类抗体、人源化抗体或鼠类抗体。抗CD3抗体以约0.1mg至约10mg的日剂量施用。抗CD3抗体被施用达30天的治疗周期。例如，抗CD3抗体被施用达一个治疗周期，所述治疗周期包含15天施药期和15天停药期。在一些方面，抗CD3抗体和增加肠屏障功能的化合物被施用达30天的治疗周期。在另一方面，抗CD3抗体和增加肠屏障功能的化合物被施用达一个治疗周期，所述治疗周期包含抗CD3抗体的15天施药期和15天停药期以及增加肠屏障功能的化合物的30天施药期。在另一个方面，抗CD3抗体、增加肠屏障功能的化合物和GC-C受体激动剂被施用达一个治疗周期或30天。在另一方面，抗CD3抗体、增加肠屏障功能的化合物和GC-C受体激动剂被施用达一个治疗周期，所述治疗周期包含抗CD3抗体或其抗原结合片段的15天施药期和15天停药期，GC-C激动剂的30天施药期，以及视黄酸的30天施药期。

任选地，每个治疗周期重复2次、3次、4次、5次、6次、7次、8次、9次或10次。

抗CD3抗体的口服剂型是肠溶聚合物包衣口服剂型，例如液体填充胶囊或粉末填充胶囊。肠溶聚合物包衣的液体填充口服胶囊含有液体制剂，所述液体制剂具有约0.1mg至10mg的单位剂量的抗CD3抗体、约10mM至约500mM三水合乙酸钠、约10mM至500mM氯化钠和约0.01％至1％聚山梨醇酯80(w/v)。肠溶聚合物包衣的粉末填充口服胶囊含有冻干粉末制剂，所述冻干粉末制剂具有约0.1mg至10mg的单位剂量的抗CD3抗体和一种或多种药学上可接受的赋形剂。

在一些方面，抗CD3抗体具有：重链，所述重链包括包含GYGMH(SEQ ID NO:1)的氨基酸序列的可变重链互补决定区1(VH CDR1)、包含VIWYDGSKKYYVDSVKG(SEQ ID NO:2)的氨基酸序列的可变重链互补决定区2(VH CDR2)、包含QMGYWHFDL(SEQ ID NO:3)的氨基酸序列的可变重链互补决定区3(VH CDR3)；和轻链，所述轻链包括包含RASQSVSSYLA(SEQ ID NO:4)的氨基酸序列的可变轻链互补决定区1(VL CDR1)、包含DASNRAT(SEQ ID NO:5)的氨基酸序列的可变轻链互补决定区2(VL CDR2)、包含QQRSNWPPLT(SEQ ID NO:6)的氨基酸序列可变轻链的互补决定区3(VL CDR3)；

在另一方面，抗CD3抗体具有：重链，所述重链包括包含氨基酸序列SYGMH(SEQ IDNO:7)的VH CDR1；包含IIWYDGSKKNYADSVKG(SEQ ID NO:8)的氨基酸序列的VH CDR2；包含GTGYNWFDP(SEQ ID NO:9)的氨基酸序列的VH CDR3；和轻链，所述轻链包括包含RASQSVSSSYLA(SEQ ID NO:10)、RASQGISSALA(SEQ ID NO:11)或WASQGISSYLA(SEQ ID NO:12)的氨基酸序列的VL CDR1；包含GASSRAT(SEQ ID NO:13)、YASSLQS(SEQ ID NO:14)或DASSLGS(SEQ ID NO:15)的氨基酸序列的VL CDR2；以及包含QQYGSSPIT(SEQ ID NO:16)或QQYYSTLT(SEQ ID NO:17)的氨基酸序列的VL CDR3；以及

在其它方面，抗CD3抗体具有：重链，所述重链包括包含氨基酸序列SYGMH(SEQ IDNO:7)的VH CDR1；包含AIWYNGRKQDYADSVKG(SEQ ID NO:18)的氨基酸序列的VH CDR2；包含GTGYNWFDP(SEQ ID NO:9)的氨基酸序列的VH CDR3；和轻链，所述轻链包括包含RASQSVSSYLA(SEQ ID NO:4)或RASQGISSALA(SEQ ID NO:11)的氨基酸序列的VL CDR1；包含DASNRAT(SEQ ID NO:5)或DASSLES(SEQ ID NO:19)的氨基酸序列的VL CDR2；以及包含QQRSNWPWT(SEQ ID NO:20)或QQFNSYPIT(SEQ ID NO:21)的氨基酸序列的VL CDR3。

抗CD3抗体包含具有SEQ ID NO:22(28F11 VH)、24(23F10VH)、26(27H5 VH)或32(15C3 VH)的氨基酸序列的重链可变区(VH)；和具有SEQ ID NO:23(28F11 VL)、25(23F10VL)、27(27H5 VL1)、28(27H5 VL2)、29(27H5 VL3)、30(27H5 VL4)、31(27H5 VL5)、33(15C3VL1)或34(15C3 VL2)的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。

在另一方面，抗CD3抗体包含具有SEQ ID NO:22(28F11 VH)的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有SEQ ID NO:23(28F11 VL)的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。

在另一方面，抗CD3抗体包含具有SEQ ID NO:24(23F10 VH)的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有SEQ ID NO:25(23F10 VL)的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。

在另一方面，抗CD3抗体包含具有SEQ ID NO:26(27H5 VH)的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有SEQ ID NO:27(27H5 VL1)、28(27H5 VL2)、29(27H5 VL3)、30(27H5 VL4)、31(27H5 VL5)的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。

在另一方面，抗CD3其包含具有SEQ ID NO:32(15C3 VH)的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有SEQ ID NO:33(15C3 VL1)或34(15C3 VL2)的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。

抗CD3抗体或其抗原结合片段包括包含氨基酸序列WVRQAPGKGLEWV(SEQ ID NO:35)的框架2区(FWR2)。

在一些方面，抗CD3抗体或其抗原结合片段包括包含氨基酸序列RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCA(SEQ ID NO:36)的框架3区(FRW3)。

优选地，抗CD3抗体是IgG1同型。

在一些方面，抗CD3抗体或其抗原结合片段包括重链中位置234、235、265或297或其组合处的氨基酸残基的突变，并减少了T细胞的细胞因子释放，其中氨基酸残基位置是根据Kabat进行编号。突变在所述位置处产生丙氨酸或谷氨酸残基。

在另一方面，抗CD3抗体或其抗原结合片段是IgG1同型，并且含有至少位置234处的第一突变和位置235处的第二突变，其中所述第一突变在位置234处产生丙氨酸残基并且所述第二突变在位置235处产生谷氨酸残基，其中氨基酸残基位置是根据Kabat进行编号。

除非另外定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语均具有与本发明所属领域的一般技术人员通常所了解的含义相同的含义。虽然与本文所述的方法和材料类似或同等的方法和材料可用于实践本发明，但下文描述合适的方法和材料。本文中提到的所有公布、专利申请、专利和其它参考文献均明确地以引用的方式整体并入本文中。万一发生矛盾，将以包括定义在内的本说明书为准。此外，本文所述的材料、方法和实施例只是例示性的，且并不意图限制。

本发明的其它特征和优点将从以下详细描述和权利要求书中显而易见并涵盖这些特征和优点。

附图说明

图1是展示乳糜泻3个阶段的图示。

图2示出用单独或与其它剂组合的抗CD3抗体治疗的给药方案。

具体实施方式

本发明提供了治疗病症的方法，所述方法通过口服单独或与改善肠屏障功能的化合物和/或抗炎化合物组合的对CD3ε链(CD3ε)具有特异性的抗体进行。有待治疗的病症包括炎症性疾病(例如胃肠道的炎症性病症)、胃肠道病症、自身免疫性疾病(例如糖尿病)、癌症(例如胃肠道癌症)、NASH、胆汁病症或肝病。胃肠道病症包括乳糜泻、克罗恩病、溃疡性结肠炎、肠易激综合征、炎症性肠病或结肠癌。

具体地说，本发明提供了一种治疗CeD或CD的方法，所述方法通过口服单独或如本文所述的组合的对CD3ε具有特异性的抗体。

乳糜泻

食物中存在的麸质的主要成分之一麦醇溶蛋白的片段穿过小肠的上皮屏障并进入固有层，在此它们被组织TG2脱氨，然后与特定的HLA II类(DQ2或DQ8)分子连接，这一点已被广泛接受。特异性识别HLA-麦醇溶蛋白复合物的T细胞受体(TCR)的存在导致IFNγ和白细胞介素21的产生，这促进了可引起肠粘膜损害的CD8+T细胞细胞毒活性。

最近，人们已将注意力集中在表征CeD中的T辅助1(TH1)CD4⁺T细胞群体的改变上。转录组下一代RNA测序(RNA-seq)分析证实了CeD中促炎细胞因子IFNγ、IL-17和IL-15的潜在重要性。传统上，已知IFN-γ会促进CD4+T细胞向TH1细胞因子类型分化，同时已知它会抑制TH2免疫应答和调节性T细胞生存。已知TH1细胞通过增强和维持CD8+(细胞毒性)T细胞的应答来发展细胞介导的免疫，并激活吞噬细胞依赖性炎症状态。此外，CD4+T细胞通过分泌含有颗粒酶B和穿孔素的细胞毒性颗粒，并通过直接接触以抗原(Ag)-HLA-II类方式直接杀死靶细胞而具有直接的细胞毒性功能。Ag呈递细胞(即树突状细胞或B细胞)呈递源自于在核内体中被吞噬和加工的外源Ag和通过细胞自噬进行的内源加工两方面的肽。还已知TH1细胞可促进B细胞Ig类别转换和HLA的呈递。

最近的研究表明上皮内淋巴细胞群在乳糜泻的发病机制中的作用。已知乳糜泻的特征性特征是上皮内淋巴细胞增加有许多年，但这些细胞在疾病发病机制中的作用仍不清楚。上皮内淋巴细胞似乎是激活后引起上皮损伤的关键细胞。激活的淋巴细胞还可以将其特征从抗原特异性T细胞典型的特征改变为能够介导上皮细胞损伤的NK样细胞表型。还已知细胞因子白细胞介素(IL)-15的表达似乎在这个过程中处于中心阶段，因为在乳糜泻中IL-15被上皮细胞和固有层中的细胞上调，可能是引起上皮内淋巴细胞群的特性改变的关键因素。还已知细胞因子IL-15干扰T调节细胞(Tregs)的抗炎功能。Tregs的耗竭和其功能的破坏可能是CeD患者最重要的改变。因此，Tregs的上调和肠屏障功能的改善对于开发CeD治疗剂来时可能很重要。

肠上皮的基本功能是充当屏障，调控肠腔内容物(例如肠微生物群)、基础免疫系统和身体其余部分之间的相互作用，同时支持营养素、水和废物的向量运输。肠屏障功能需要连续的上皮细胞层以及密封上皮细胞之间的细胞旁间隙的连接处。在CeD患者中，屏障功能被破坏，肠通透性增强，紧密连接蛋白(闭合蛋白(occludin)和ZO-1)的表达降低，从而导致肠道渗漏。肠屏障功能受损与肠道和全身的许多疾病病况相关。尽管这些关联中的绝大多数只是相关，但是在一些情况下存在屏障功能障碍与疾病发病机制相关的实验证据，包括炎症性肠病(IBD)、克罗恩病(CD)和乳糜泻(CeD)。还提出肠屏障功能减少在CeD中起致病作用，因为暴露于麸质肽的免疫系统对于CeD的临床表现必不可少。但是，麸质从内腔传递到固有层的途径是有争议的，可能涉及跨细胞或细胞旁途径。因此，必须保持肠通透性和肠屏障完整性以预防CeD。

CDl03+树突状细胞(DC)充当迁移性抗原呈递细胞，并且在激活后运输至次级淋巴组织(包括肠系膜淋巴结(MLN)和派伊尔结(Peyer'spatches))，携带抗原物质和活细菌以呈递给适应性免疫细胞。这些迁移的DC通过叉头盒P3(FOXP3⁺)Tregs细胞的分化来促进免疫耐受。在存在TGF-β的情况下，维生素A类似物视黄酸可促进这个Tregs子集的产生。此外，肠上皮细胞(IEC)调节的CD-103⁺DC产生视黄酸使得T细胞具有肠道归巢特性，允许再循环的成熟细胞靶向肠固有层中抗原遭遇的位点。因此，除了促进基于抗原特异性的幼稚T细胞成熟外，CD-103⁺DC还可以在肠上皮屏障处转播抗原遭遇的原始环境。已知通过口服抗CD3抗体可刺激Tregs的这个产生过程。因此，预期与人抗CD3(福雷芦单抗(Foralumab))一起口服可促进Tregs的产生，其可能产生抗炎活性以减少CeD患者的肠道炎症。

因此，图1示出CeD患者的治疗策略，涵盖阐明CeD发病机制的三个阶段。可以通过改善屏障功能来减少麸质的摄入，然后麸质肽在固有层中的运输和其随后的脱酰胺(第1阶段)。但是，CeD患者已经患有肠道炎症，并产生过多的促炎细胞因子(第2阶段)，这可能会干扰屏障功能的改善。因此，期望通过增加Tregs的产生来促进屏障功能的改善。可以通过单独或与改善肠屏障功能的剂和/或抗炎化合物组合用抗CD3抗体口服治疗来提高Tregs的产生。另外，还预期改善肠屏障功能的治疗方式可能与抗CD3抗体的作用是协同的。因此，将抗CD3与改善肠屏障功能的剂和/或抗炎化合物组合可延缓CeD的进一步进展。另外，抗CD3的抗炎作用也将减少肠道炎症，预计这不仅减少促炎细胞因子的产生，而且还增强Tregs的功能。

本文还提供了治疗克罗恩病、溃疡性结肠炎、肠易激综合征、炎症性肠病或结肠癌的方法，所述方法通过口服单独或与改善肠屏障功能的化合物和/或抗炎化合物组合的对CD3ε链(CD3ε)具有特异性的抗体进行。最近的研究表明，口服抗CD3抗体可在溃疡性结肠炎患者中产生免疫学改变(Boden等人,“Immunologic Alterations Associated with OralDelivery of Anti-CD3(OKT3)Monoclonal Antibodies in Patients with Moderate-to-Severe Ulcerative Colitis,”Crohn’s&Colitis 360,第1(2)卷,2019年7月，以引用的方式整体并入本文中)。

CD3抗体

对CD3ε链(CD3ε)具有特异性的抗体和其抗原结合片段在本文中称为抗CD3抗体。本领域中已知的任何抗CD3抗体都适用于本发明中。适用于本发明中的抗CD3抗体包括WO2005/118635、WO2005/099755和WO 2018/044948(每一个的内容以引用的方式整体并入)中公开的抗体。

一种示例性抗CD3抗体包含：包含氨基酸序列GYGMH(SEQ ID NO:1)的重链互补决定区1(CDRH1)、包含氨基酸序列VIWYDGSKKYYVDSVKG(SEQ ID NO:3)的重链互补决定区2(CDRH2)、包含氨基酸序列QMGYWHFDL(SEQ ID NO:4)的重链互补决定区3(CDRH3)、包含氨基酸序列RASQSVSSYLA(SEQ ID NO:5)的轻链互补决定区1(CDRL1)、包含氨基酸序列DASNRAT(SEQ ID NO:6)的轻链互补决定区2(CDRL2)和包含氨基酸序列QQRSNWPPLT(SEQ ID NO:7)的轻链互补决定区3(CDRL3)。

在一些实施方案中，抗CD3抗体包括包含QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFKFSGYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKKYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQMGYWHFDLWGRGTLVTVSS(SEQ ID NO:8)的可变重链氨基酸序列和包含EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPLTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:9)的可变轻链氨基酸序列。

优选地，抗CD3抗体包括包含QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFKFSGYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKKYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQMGYWHFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:10)的重链氨基酸序列和包含EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:11)的轻链氨基酸序列。这种抗CD3抗体在本文中称为NI-0401、福雷芦单抗或28F11-AE。(参见例如Dean Y,Dépis F,Kosco-Vilbois M.“Combination therapies in the context of anti-CD3antibodies for the treatment of autoimmune diseases.”Swiss Med Wkly.(2012)(内容以引用的方式整体并入本文中)。

在一些实施方案中，抗CD3抗体包括全长抗CD3抗体。在替代实施方案中，抗CD3抗体包括特异性结合CD3的抗体片段。在一些实施方案中，抗CD3抗体制剂包括全长抗CD3抗体与特异性结合CD3的抗原结合片段的组合。

在一些实施方案中，结合CD3的抗体或其抗原结合片段是单克隆抗体、结构抗体、单链、Fab片段、F(ab’)₂片段、scFv、scAb、dAb、单结构域重链抗体或单结构域轻链抗体。在一些实施方案中，结合CD3的这样的抗体或其抗原结合片段是小鼠、其它啮齿动物、嵌合、人源化或完全人类单克隆抗体。

任选地，本公开的制剂中所用的抗CD3抗体或其抗原结合片段包括至少一个氨基酸突变。典型地，突变在恒定区中。所述突变产生效应功能改变的抗体。抗体的效应功能通过改变，即增强或降低抗体对效应分子如Fc受体或补体组分的亲和力来改变。举例来说，突变产生能够减少T细胞的细胞因子释放的抗体。举例来说，突变在重链中氨基酸残基234、235、265或297或其组合处。优选地，突变在位置234、235、265或297处产生丙氨酸残基，或在位置235处产生谷氨酸残基，或其组合。

优选地，本文提供的抗CD3抗体含有一个或多个突变，所述突变预防重链恒定区介导的一种或多种细胞因子在体内释放。

在一些实施方案中，本公开的制剂中所用的抗CD3抗体或其抗原结合片段是完全人类抗体。本文中所用的完全人类CD3抗体包括例如Fc区中的L²³⁴ L²³⁵→A²³⁴ E²³⁵突变，使得在暴露于抗CD3抗体后显著减少或消除细胞因子释放。当抗CD3抗体暴露于人白细胞时，本文提供的抗CD3抗体的Fc区中的L²³⁴ L²³⁵→A²³⁴ E²³⁵突变减少或消除细胞因子释放，而以下描述的突变维持显著的细胞因子释放能力。举例来说，细胞因子释放的显著减少通过比较在暴露于具有Fc区中的L²³⁴ L²³⁵→A²³⁴ E²³⁵突变的抗CD3抗体后细胞因子的释放与在暴露于具有以下描述的一或多种突变的另一抗CD3抗体后的细胞因子释放水平来界定。Fc区中的其它突变包括例如L²³⁴ L²³⁵→A²³⁴A²³⁵、L²³⁵→E²³⁵、N²⁹⁷→A²⁹⁷和D²⁶⁵→A²⁶⁵。

术语“细胞因子”是指本领域内已知的结合在细胞表面上表达的细胞外受体，从而调节细胞功能的所有人细胞因子，包括但不限于IL-2、IFN-γ、TNF-a、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10和IL-13。

改善肠屏障功能的剂

改善肠屏障功能的剂包括至少改善肠屏障功能，例如减少肠通透性的任何剂。

改善肠屏障功能的示例性剂包括例如视黄酸、GC-C受体激动剂、肝素、鲁比前列酮、谷氨酰胺、GLP-2肽、连蛋白肽抑制剂、连蛋白拮抗剂、拉瑞唑来、益生菌或丁酸。

视黄酸包括例如全反式-视黄酸、9-顺式-视黄酸或13-顺式-视黄酸。

GC-C受体激动剂包括例如鸟苷素、尿鸟苷素、淋巴鸟苷素、大肠杆菌热稳定肠毒素(ST)、利那洛肽、普卡那肽或多卡那肽。优选地，GC-C受体激动剂是

或

改善肠屏障功能和或减少肠通透性的另外的剂包括例如不易消化的碳水化合物，例如低聚果糖(FOS)、低聚半乳糖(GOS)、菊粉、阿拉伯树胶、低聚木糖、抗性淀粉等；和LC-PUFA，例如花生四烯酸(AA)或二十碳六烯酸(DHA)；和任选地人乳寡糖，例如唾液乳糖；和/或神经节苷脂，例如来自水牛乳的脱糖乳清中含有的那些；和/或乳汁或初乳馏分，例如酸、凝乳酶或胶束酪蛋白、酸、甜或超乳清、脂肪球膜等；和/或广泛水解蛋白，例如从乳清蛋白水解获得的那些；和/或多胺，例如精胺或亚精胺和/或一种或多种多胺前体，尤其鸟氨酸和精氨酸。

优选地，不易消化的碳水化合物可以在低聚果糖、低聚半乳糖、唾液酸寡糖、低聚木糖、菊粉、阿拉伯树胶、瓜尔胶、抗性淀粉和/或源自乳汁的寡糖的组中选择并加入至微生物混合物中。这些中的一种或多种的总使用剂量可以为约0.01至5g/100ml，优选地1-2g/100ml。可以使用两种或更多种碳水化合物的混合物，每种碳水化合物在碳水化合物混合物的5％至95％范围内。

优选地，可以使用特定脂质。举例来说，有效量的至少一种n-6多不饱和脂肪酸与至少一种n-3多不饱和脂肪酸组合，例如C20或C22 n-6脂肪酸与一种C20或C22 n-3脂肪酸。C20或C22 n-6脂肪酸以占组合物中所有脂肪酸的约0.01至6.0重量％的总量，优选地以0.1至1％的总量存在。C20或C22 n-3脂肪酸以占组合物中所有脂肪酸的约0.01至6.0重量％的总量，优选地以0.1至1％的总量存在。优选地，本发明中所用的n-6多不饱和脂肪酸是花生四烯酸(AA，C20:4n-6)并且本发明中所用的n-3多不饱和脂肪酸是二十碳六烯酸(DHA，C22:6，n-3)。有效AA:DHA比率为约1:1至2.5:1，优选地1:1至2:1。LC-PUFA的来源可以是卵脂、真菌油、低EPA鱼油、藻油等。

神经节苷脂(第二类脂质)也可以加入至成分的组合，例如以约1-20microMol/L，优选地6-15microMol/L的量。神经节苷脂的来源可以是牛乳、牛初乳，但优选地水牛乳、乳清或初乳、羊乳、初乳或血清和/或每一者的衍生物。

组合还可含有多胺，尤其亚精胺、精胺或腐胺和/或一种或多种多胺前体，尤其鸟氨酸和精氨酸。其可以约10至2,000microg/100g固体制剂的量使用。多胺优选地是选自由精胺、亚精胺、腐胺和尸胺组成的组的至少两种或更多种。优选地，组合物包含约10-90％精胺、10-90％亚精胺、0-90％腐胺和0-20％尸胺。

优选地，乳汁馏分(富含生长因子)可以呈例如脂肪球膜蛋白、酸、凝乳酶或胶束酪蛋白、酸、甜或超乳清、乳清蛋白水解产物的形式。其可以约0.01至7g/100ml、优选地0.5-3g/100ml的量使用。

抗炎化合物

抗炎化合物是减少炎症或肿胀的任何物质。抗炎化合物是例如单克隆抗体，例如对IL-17、TNF-a、α4-整合素、α4-β7整合素、IL-12或IL-23具有特异性的单克隆抗体。优选的单克隆抗体包括

或

另外的抗炎化合物包括

JNK抑制剂、PI3K通路抑制剂、AKT抑制剂、mTOR抑制剂、美沙拉嗪、布地缩松(budesonide)

或鞘氨醇-1-磷酸激酶抑制剂。

抗体制剂

抗体制剂包含在以下范围内的单位剂量的抗体：约0.1mg至约50mg；约0.1mg至约25mg；或0.1mg至约10mg。例如，单位剂量为约0.1mg、0.2mg、0.3mg、0.4mg、0.5mg、0.6mg、0.7mg、0.8mg、0.9mg、1.0mg、1.5mg、2.0mg、2.5mg、3.0mg、3.5mg、4.0mg、5.0mg、5.5mg、6.0mg、6.5mg、7.0mg、7.5mg、8.0mg、8.5mg、9mg、9.5mg、10mg或更多。优选地，单位剂量为0.5mg、2.5mg或5.0mg。优选地，抗体被配制用于口服。优选的口服抗体制剂包括福雷芦单抗、阿达木单抗(Adalimumab)、英夫利昔单抗(Infliximab)、那他珠单抗(Nataslizumab)、维多珠单抗(Vedolizumab)和优特克单抗(Ustekinumab)。

抗体制剂可以是液体。例如，液体制剂是水溶液。可替代地，抗体制剂是冻干粉末。当抗体制剂是冻干粉末时，可以加入另外的增量剂，为冻干饼提供适当的结构。这种另外的增量剂可以增加冻干饼在储存时的稳定性。可替代地，这种另外的增量剂有助于产生剂型，例如口服胶囊。本文描述增量剂并包括多元醇，例如海藻糖、甘露醇、麦芽糖、乳糖、蔗糖、山梨醇或丙三醇、淀粉、微晶纤维素、低水分微晶纤维素，例如Avicel或聚乙二醇(PEG)。抗体制剂适合于口服。口服胶囊可以包有肠溶衣以最低程度地暴露于胃酸性。

抗CD3抗体制剂包括一种或多种盐(缓冲盐)、一种或多种多元醇和一种或多种赋形剂。本发明的制剂还可含有缓冲剂或防腐剂。抗CD3抗体制剂在溶液中被缓冲在约4至8的范围内、约4至7的范围内、约4至6的范围内、约5至6的范围内或约5.5至6.5的范围内的pH值下。优选地，pH值是5.5。

盐的实例包括由以下酸制备的盐：氢氯酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、顺丁烯二酸、乙酸、水杨酸、柠檬酸、硼酸、甲酸、丙二酸、丁二酸等。这类盐还以被制备成碱金属或碱土金属盐，例如钠、钾或钙盐。缓冲剂的实例包括磷酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐和2-(N-吗啉基)乙烷磺酸(MES)。

本发明的制剂可以包括缓冲系统。如本申请中所用，术语“缓冲液”或“缓冲系统”意指通常与至少一种其它化合物组合，在溶液中提供展现缓冲能力(即适当地中和酸或碱(碱)并且原始pH值几乎没有相对变化的能力)的缓冲系统的化合物。

缓冲液包括硼酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、钙缓冲液和它们的组合和混合物。硼酸盐缓冲液包括例如硼酸和其盐，例如硼酸钠或硼酸钾。硼酸盐缓冲液还包括例如四硼酸钾或偏硼酸钾的化合物，所述化合物在溶液中产生硼酸或其盐。

磷酸盐缓冲系统包括一种或多种一元磷酸盐、二元磷酸盐等。特别有用的磷酸盐缓冲液是选自碱金属和/或碱土金属的磷酸盐的缓冲液。合适的磷酸盐缓冲液的实例包括一种或多种磷酸氢二钠(Na2HPO4)、磷酸二氢钠(NaH2PO4)和磷酸二氢钾(KH2PO4)。磷酸盐缓冲液组分常常以0.01％或至0.5％(w/v)的量使用，以磷酸根离子计算。

其它已知的缓冲化合物可以任选地加入至根据本发明的CD3制剂中，例如柠檬酸盐、碳酸氢钠、TRIS等。溶液中的同时具有其它功能的其它成分也会影响缓冲能力。举例来说，常常用作络合剂的EDTA会对溶液的缓冲能力具有显著的作用。

用于本发明制剂中的优选盐包括氯化钠、乙酸钠、三水合乙酸钠和柠檬酸钠。

根据本发明的制剂中的盐的浓度介于约10mM和500mM之间，约25m与250mM之间，约25nM与150mM之间。

三水合乙酸钠的浓度在约10mM至100mM范围内。举例来说，三水合乙酸钠在约10mM、15mM、20mM、25mM、30mM、35mM、40mM、45mM、50mM、55mM、60mM、65mM、70mM、75mM、80mM、85mM、90mM、95mM或100mM下。优选地，三水合乙酸钠在25mM下。

氯化钠的浓度在约50mM至500mM范围内。举例来说，氯化钠在约50mM、55mM、60mM、65mM、70mM、75mM、80mM、85mM、90mM、95mM、100mM、125mM、150mM、175mM、200mM、225mM、250mM、275mM、300mM、325mM、350mM、375mM、400mM、425mM、450mM、475mM或500mM下。优选地，氯化钠在约125mM的浓度下。

柠檬酸钠的浓度在约10mM至100mM范围内。举例来说，柠檬酸钠在约10mM、15mM、20mM、25mM、30mM、35mM、40mM、45mM、50mM、55mM、60mM、65mM、70mM、75mM、80mM、85mM、90mM、95mM或100mM下。优选地，柠檬酸钠在约25至50mM范围内。

在一些实施方案中，盐为浓度在约25mm至100mm范围内的三水合乙酸钠和浓度在约150mm至500mm范围内的氯化钠。

优选地，制剂包括约25mM三水合乙酸钠和约150mM氯化钠。

制剂包括一种或多种多元醇作为增量剂和/或稳定化赋形剂。多元醇包括例如海藻糖、甘露醇、麦芽糖、乳糖、蔗糖、山梨醇或丙三醇。多元醇的浓度在约0.1％至50％或5％至25％范围内。举例来说，多元醇在约1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％或50％下。

在一些实施方案中，多元醇为浓度在约1％至50％或5％至25％范围内的海藻糖。举例来说，海藻糖在约1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45或50％下。优选地，海藻糖在约10％或约20％的浓度下。更优选地，海藻糖在约20％的浓度下。

在一些实施方案中，多元醇为浓度在约1％至约10％范围内的山梨醇。在一些实施方案中，多元醇为浓度在约1％至约10％范围内的丙三醇。

在一些实施方案中，多元醇为浓度在约0.1％至约10％范围内的甘露醇。在一些实施方案中，多元醇为浓度在约1％至约10％范围内的麦芽糖。

制剂包括一种或多种抑制或以其它方式减少抗体聚集的赋形剂和/或表面活性剂。合适的减少抗体聚集的赋形剂包括(借助于非限制性实例)表面活性剂，例如(借助于非限制性实例)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。在一些实施方案中，聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80以在约0.01至1％或约0.01至0.05％范围内的浓度存在。举例来说，聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80在约0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％或1.0％的浓度下。

优选地，表面活性剂为浓度在约0.01至0.05％范围内的聚山梨醇酯80。更优选地，聚山梨醇酯80在0.02％下。

制剂包括一种或多种减少抗体氧化的赋形剂。合适的减少抗体氧化的赋形剂包括(借助于非限制性实例)抗氧化剂。抗氧化剂包括例如甲硫氨酸、D-精氨酸、BHT或抗坏血酸。抗氧化剂以在约0.01％至1％、0.1％至1％或0.1％至0.5％范围内的浓度存在。在一些实施方案中，抗氧化剂为甲硫氨酸。在一些实施方案中，甲硫氨酸以在约0.01％至1％、0.1％至1％或0.1％至0.5％范围内的浓度存在。举例来说，甲硫氨酸以约0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％或1.0％的浓度存在。优选地，甲硫氨酸在约0.1％下。

制剂包括一种或多种螯合剂，如例如乙二胺四乙酸(EDTA)。螯合剂的浓度在0.01％至1％、0.1％至1％或0.1％至0.5％范围内。举例来说，螯合剂以约0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％或1.0％的浓度存在。优选地，螯合剂为浓度为约0.1％的EDTA。

在一些实施方案中，制剂包括一种或多种增加稳定性的赋形剂。在一些实施方案中，增加稳定性的赋形剂为人血清白蛋白。在一些实施方案中，人血清白蛋白以在约1mg至约5mg范围内存在。

在一些实施方案中，制剂包括硬脂酸镁(硬脂酸镁)、氨基酸或硬脂酸镁与氨基酸两者。合适的氨基酸包括例如亮氨酸、精氨酸、组氨酸或它们的组合。

在一些实施方案中，一种或多种另外的赋形剂是低水分的微晶纤维素，例如Avicel、聚乙二醇(PEG)或淀粉。

可用于本发明制剂的药学上可接受的载体和赋形剂的其它实例包括(但不限于)粘合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂、抗微生物剂、抗氧化剂和包覆剂，例如：粘合剂：玉米淀粉、马铃薯淀粉、其它淀粉、明胶、天然和合成胶例如阿拉伯胶、黄原胶、海藻酸钠、海藻酸、其它海藻酸盐、粉末状黄蓍胶、瓜尔胶、纤维素和其衍生物(例如乙基纤维素、乙酸纤维素、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠)、聚乙烯吡咯烷酮(例如聚维酮、交联聚维酮、共聚维酮等)、甲基纤维素、Methocel、预糊化淀粉(例如STARCH

和STARCH 1500

由Colorcon有限公司出售)、羟丙基甲基纤维素、微晶纤维素(FMC公司,Marcus Hook,PA,USA)、Emdex、Plasdone或它们的混合物；填充剂：滑石、碳酸钙(例如颗粒或粉末)、磷酸氢钙、磷酸钙、硫酸钙(例如颗粒或粉末)、微晶纤维素、粉末状纤维素、葡萄糖结合剂(dextrate)、高岭土、甘露醇、硅酸、山梨醇、淀粉、预糊化淀粉、右旋糖、果糖、蜂蜜、乳糖脱水酶、乳糖单水合物、乳糖和阿斯巴甜(aspartame)、乳糖和纤维素、乳糖和微晶纤维素、麦芽糊精、麦芽糖、甘露醇、微晶纤维素与amp；瓜尔胶、糖蜜、蔗糖或它们的混合物；崩解剂：琼脂、海藻酸、碳酸钙、微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、聚克立林钾(polacrilin potassium)、羟基乙酸淀粉钠(例如Explotab)、马铃薯或木薯淀粉、其它淀粉、预糊化淀粉、粘土、其它海藻胶、其它纤维素、树胶(如结冷胶)、低取代羟基丙基纤维素、ployplasdone或它们的混合物；润滑剂：硬脂酸钙、硬脂酸镁、矿物油、轻质矿物油、甘油、山梨醇、甘露醇、聚乙二醇、其它二醇、compritol、硬脂酸、十二烷基硫酸钠、硬脂酰反丁烯二酸钠(例如Pruv)、基于植物的脂肪酸润滑剂、滑石、氢化植物油(例如花生油、棉籽油、葵花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油)、硬脂酸锌、油酸乙酯、十二烷酸乙酯、琼脂、syloid硅胶(AEROSIL 200,W.R.Grace公司,Baltimore,MD USA)、合成硅石的凝聚型气溶胶(Deaussa公司,Piano,TX USA)、热解二氧化硅(CAB-O-SIL,Cabot公司,Boston,MA USA)或它们的混合物；防结块剂：硅酸钙、硅酸镁、二氧化硅、胶体二氧化硅、滑石或它们的混合物；抗微生物剂：氯化苯甲烃铵(benzalkonium chloride)、氯化苄乙氧铵(benzethonium chloride)、苯甲酸、苯甲醇、对羟基苯甲酸丁酯、氯化十六烷吡啶鎓、甲酚、氯丁醇、脱氢乙酸、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸甲酯、苯酚、苯乙醇、苯氧乙醇、乙酸苯汞、硝酸苯汞、山梨酸钾、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲酸钠、脱氢乙酸钠、丙酸钠、山梨酸、硫柳汞(thimersol)、thymo或它们的混合物；抗氧化剂：抗坏血酸、BHA、BHT、EDTA或它们的混合物；以及包覆剂：羧甲基纤维素钠、邻苯二甲酸乙酸纤维素、乙基纤维素、明胶、药用釉料、羟基丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素(羟丙甲纤维素(hypromellose))、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、甲基纤维素、聚乙二醇、聚乙酸乙烯酯邻苯二甲酸酯、虫胶、蔗糖、二氧化钛、加洛巴蜡(carnauba wax)、微晶蜡、结冷胶、麦芽糊精、甲基丙烯酸酯、微晶纤维素和卡拉胶(carrageenan)或它们的混合物。

制剂还可以包括其它的赋形剂和其类别，包括但不限于

泊洛沙姆(Poloxamer)(例如

和Poloxamer 188)、抗坏血酸、谷胱甘肽、蛋白酶抑制剂(例如大豆胰蛋白酶抑制剂、有机酸)、pH值降低剂、乳膏和洗剂(如麦芽糊精和卡拉胶)；用于咀嚼药片的物质(如右旋糖、果糖、乳糖单水合物、乳糖和阿斯巴甜、乳糖和纤维素、麦芽糊精、麦芽糖、甘露醇、微晶纤维素和瓜尔胶、结晶山梨醇)；不经肠(如甘露醇和聚维酮)；增塑剂(如癸二酸二丁酯、用于包衣的增塑剂、聚乙酸乙烯酯邻苯二甲酸酯)；粉末润滑剂(如山嵛酸甘油酯)；软明胶胶囊(如山梨醇特殊溶液)；用于包衣的球(如糖球)；滚圆剂(如山嵛酸甘油酯和微晶纤维素)；悬浮/胶凝剂(如卡拉胶、结冷胶、甘露醇、微晶纤维素、聚维酮、羟基乙酸淀粉钠、黄原胶)；甜味剂(如阿斯巴甜、阿斯巴甜和乳糖、右旋糖、果糖、蜂蜜、麦芽糊精、麦芽糖、甘露醇、糖蜜、结晶山梨醇、山梨醇特殊溶液、蔗糖)；湿式造粒剂(如碳酸钙、无水乳糖、乳糖单水合物、麦芽糊精、甘露醇、微晶纤维素、聚维酮、淀粉)、焦糖、羧甲基纤维素钠、樱桃奶油味调味剂和樱桃味调味剂、无水柠檬酸、柠檬酸、糖粉、D&C红色No.33、D&C黄色#10铝色淀、依地酸二钠、乙醇15％、FD&C黄色No.6铝色淀、FD&C蓝色#1铝色淀、FD&C蓝色No.1、FD&C蓝色no.2铝色淀、FD&C绿色No.3、FD&C红色No.40、FD&C黄色No.6铝色淀、FD&C黄色No.6、FD&C黄色No.10、棕榈酰硬脂酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、靛蓝胭脂红、卵磷脂、甘露醇、对羟苯甲酸甲酯和对羟苯甲酸丙酯、甘草酸单铵、天然和人工橙味调味剂、药用釉料、泊洛沙姆188、聚糊精、聚山梨酸酯20、聚山梨醇酯80、聚维酮、预糊化玉米淀粉、预糊化淀粉、红色氧化铁、糖精钠、羧甲基醚钠、氯化钠、柠檬酸钠、磷酸钠、草莓味调味剂、合成黑色氧化铁、合成红色氧化铁、二氧化钛和白蜡。

在一些实施方案中，抗体制剂是液体并且乙酸钠的浓度为约10mM至500mM；氯化钠的浓度为约10mM至500mM；聚山梨醇酯80的浓度为约0.01％至1％(w/v)；海藻糖的浓度为约5％至50％(w/v)；并且甲硫氨酸的浓度为0.01％至1％(w/v)。任选地，制剂还包括约0.01％至1％(w/v)的浓度的EDTA。抗CD3抗体或其抗原结合片段的单位剂量在约0.1mg至10mg范围内。在一些实施方案中，液体制剂冻干，形成粉末。

在一些实施方案中，抗体制剂是液体并且含有25mM乙酸钠、125mM氯化钠、0.02％聚山梨醇酯80(w/v)、20％海藻糖(w/v)、0.1％甲硫氨酸(w/v)和在约0.1mg至10mg范围内的单位剂量的抗CD3抗体或其抗原结合片段。任选地，制剂还包括0.1％EDTA(w/v)。在一些实施方案中，液体制剂冻干，形成粉末。

在一特定实施方案中，液体抗体制剂包括25mM乙酸钠、125mM氯化钠、0.02％聚山梨醇酯80(w/v)、20％海藻糖(w/v)、0.1％甲硫氨酸(w/v)和0.5mg单位剂量的抗CD3抗体或抗原结合片段。本发明中还包括这种制剂的冻干粉末。

在一特定实施方案中，液体抗体制剂包括25mM乙酸钠、125mM氯化钠、0.02％聚山梨醇酯80(w/v)、20％海藻糖(w/v)、0.1％甲硫氨酸(w/v)和0.2.5mg单位剂量的抗CD3抗体或抗原结合片段。本发明中还包括这种制剂的冻干粉末。

在一特定实施方案中，液体抗体制剂包括25mM乙酸钠、125mM氯化钠、0.02％聚山梨醇酯80(w/v)、20％海藻糖(w/v)、0.1％甲硫氨酸(w/v)和5.0mg单位剂量的抗CD3抗体或抗原结合片段。本发明中还包括这种制剂的冻干粉末。

在一特定实施方案中，液体抗体制剂包括25mM乙酸钠、125mM氯化钠、0.02％聚山梨醇酯80(w/v)、20％海藻糖(w/v)、0.1％甲硫氨酸(w/v)、0.1％EDTA(w/v)和0.5mg单位剂量的抗CD3抗体或抗原结合片段。本发明中还包括这种制剂的冻干粉末。

在一特定实施方案中，液体抗体制剂包括25mM乙酸钠、125mM氯化钠、0.02％聚山梨醇酯80(w/v)、20％海藻糖(w/v)、0.1％甲硫氨酸(w/v)、0.1％EDTA(w/v)和0.2.5mg单位剂量的抗CD3抗体或抗原结合片段。本发明中还包括这种制剂的冻干粉末。

在一特定实施方案中，液体抗体制剂包括25mM乙酸钠、125mM氯化钠、0.02％聚山梨醇酯80(w/v)、20％海藻糖(w/v)、0.1％甲硫氨酸(w/v)、0.1％EDTA(w/v)和5.0mg单位剂量的抗CD3抗体或抗原结合片段。本发明中还包括这种制剂的冻干粉末。

在一些实施方案中，制剂是冻干粉末，其中抗CD3抗体或抗原结合片段与聚山梨醇酯80的比率为约1:0.01至0.1(w/w)；抗CD3抗体或抗原结合片段与海藻糖的比率为约1:10至50(w/w)；抗CD3抗体或抗原结合片段与甲硫氨酸的比率约1:0.1至0.5(w/w)；抗CD3抗体或抗原结合片段与乙酸钠的比率为约1:0.1至1.0(w/w)；并且抗CD3抗体或抗原结合片段与氯化钠的比率为约1:0.5至2.0(w/w)。任选地，制剂还包括EDTA，其中抗CD3抗体或抗原结合片段:EDTA的比率为约1:0.1至0.5(w/w)。抗CD3抗体或其抗原结合片段的单位剂量在约0.1mg至10mg范围内。

在一些实施方案中，抗体制剂是粉末，例如冻干粉末，其具有约0.1mg至10mg的单位剂量的抗CD3抗体或其抗原结合片段和每1mg抗CD3抗体或其抗原结合片段约0.58mg三水合乙酸钠、约1.25mg氯化钠、约0.034mg聚山梨醇酯80、约34mg海藻糖和约0.17mg甲硫氨酸。任选地，粉末制剂还包括每1mg抗CD3抗体或其抗原结合片段0.17mg EDTA。优选地，单位剂量为0.5mg、2.5mg或5.0mg。

在一特定实施方案中，抗体制剂是粉末，例如冻干粉末，其具有约0.5mg的单位剂量抗CD3抗体或其抗原结合片段和每1mg抗CD3抗体或其抗原结合片段约0.58mg三水合乙酸钠、约1.25mg氯化钠、约0.034mg聚山梨醇酯80、约34mg海藻糖和约0.17mg甲硫氨酸。

在一特定实施方案中，抗体制剂是粉末，例如冻干粉末，其具有约2.5mg的单位剂量抗CD3抗体或其抗原结合片段和每1mg抗CD3抗体或其抗原结合片段约0.58mg三水合乙酸钠、约1.25mg氯化钠、约0.034mg聚山梨醇酯80、约34mg海藻糖和约0.17mg甲硫氨酸。

在一特定实施方案中，抗体制剂是粉末，例如冻干粉末，其具有约5mg的单位剂量抗CD3抗体或其抗原结合片段和每1mg抗CD3抗体或其抗原结合片段约0.58mg三水合乙酸钠、约1.25mg氯化钠、约0.034mg聚山梨醇酯80、约34mg海藻糖和约0.17mg甲硫氨酸。

在一特定实施方案中，抗体制剂是粉末，例如冻干粉末，其具有的单位剂量约0.5mg抗CD3抗体或其抗原结合片段和每1mg抗CD3抗体或其抗原结合片段约0.58mg三水合乙酸钠、约1.25mg氯化钠、约0.034mg聚山梨醇酯80、约34mg海藻糖、约0.17mg EDTA和约0.17mg甲硫氨酸。

在一特定实施方案中，抗体制剂是粉末，例如冻干粉末，其具有约2.5mg的单位剂量抗CD3抗体或其抗原结合片段和每1mg抗CD3抗体或其抗原结合片段约0.58mg三水合乙酸钠、约1.25mg氯化钠、约0.034mg聚山梨醇酯80、约34mg海藻糖、约0.17mg EDTA和约0.17mg甲硫氨酸。

在一特定实施方案中，抗体制剂是粉末，例如冻干粉末，其具有约5mg的单位剂量抗CD3抗体或其抗原结合片段和每1mg抗CD3抗体或其抗原结合片段约0.58mg三水合乙酸钠、约1.25mg氯化钠、约0.034mg聚山梨醇酯80、约34mg海藻糖、约0.17mg EDTA和约0.17mg甲硫氨酸。

根据本发明的制剂(呈液体、冻干或最终剂型(例如胶囊)的水分(即水)含量少于约7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％。优选地，水分含量在2-5％范围内，更优选地，水分含量在1-2％范围内，最优选地，水分含量少于1％。测定水分含量的方法是本领域中已知的，例如通过费歇尔滴定(Karl Fischer titration)测定水分含量。

在一些实施方案中，制剂的渗透压度为约800-950(例如约825-925)mOsm/kg。

本发明的抗体制剂(呈液体、冻干或最终剂型(例如胶囊)适合于存储在约2℃至约4℃、15℃或周围温度下。在一些实施方案中，制剂与分子筛干燥剂包一起存储以在存储期间减少水分。在一些实施方案中，制剂与分子筛干燥剂包一起存储在容器中以在存储期间减少水分，所述容器例如瓶子或其它合适的容器。

本发明的制剂(呈液体、冻干或最终剂型(例如胶囊)提供所配制抗体和制剂其它任选的活性剂的化学稳定性。在这里“稳定性”和“稳定”是指抗体和其它任选的活性剂抵抗化学降解和物理变化，例如在给定制造和制备、输送和存储条件下沉降、沉淀、聚集。本发明的“稳定”制剂在给定制造、制备、输送和/或存储条件下还优选地保留起始或参考量的至少90％、95％、98％、99％或99.5％。可以使用任何领域公认的方法，如UV-Vis分光光度法和高压液相色谱法(HPLC)或SDS-PAGE，测定抗体和其它任选的活性剂的量。

本发明的抗体制剂(呈液体、冻干或最终剂型(例如胶囊)在4℃、15℃或周围温度下稳定至少3个月。制剂在4℃或15℃下稳定超过3个月，例如在4℃、15℃或周围温度下稳定至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月、至少12个月、至少18个月、至少24个月和/或超过24个月。

本发明的抗体制剂(呈液体、冻干或最终剂型(例如胶囊)具有至少90％、91％、92％、95％、95％、97％、985、99％或更多的呈重链和轻链的IgG的纯度。

本发明的抗体制剂(呈液体、冻干或最终剂型(例如胶囊)具有少于5％、4％、3％、2％、1％总杂质。

本发明的抗体制剂(呈液体、冻干或最终剂型(例如胶囊)具有至少90％、91％、92％、95％、95％、97％、985、99％或更多的IgG单体。

本发明的抗体制剂(呈液体、冻干或最终剂型(例如胶囊)具有少于5％、4％、3％、2％、1％、0.9％、0.8％、0.7％、0.6％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％、0.1％总IgG聚集体。

剂型

本发明的制剂特别被配制用于经肠或不经肠施用。

对于经肠施用，即口服，制剂可以是胶囊或片剂。

胶囊包括软凝胶胶囊或硬壳胶囊。软凝胶胶囊是软凝胶或明胶或明胶样。硬壳或软凝胶胶囊是HPMC胶囊。软凝胶或硬壳胶囊可以用液体抗体制剂或粉末状、例如冻干抗CD3制剂填充。上文描述了示例性的液体和粉末状抗CD3制剂。

在一些实施方案中，每个胶囊包括充足的肠溶衣以绕过胃酸性。口服抗CD3抗体制剂中可以使用任何合适的肠溶衣，包括(借助于非限制性实例)肠溶衣，例如

例如

L 30D/L 100-55，其在超过4或5的pH值下释放抗CD3抗体。

在一些实施方案中，口服抗CD3抗体制剂的每个胶囊包含尺寸在0至2范围内，例如尺寸0、尺寸1和/或尺寸2的软凝胶或明胶或明胶样物质。

在一些实施方案中，口服抗CD3抗体制剂的胶囊是液体填充硬胶囊(LFHC)。本公开的口服抗CD3抗体制剂中可以使用任何合适的LFHC，包括(借助于非限制性实例)

和其它LFHC，如

在一些实施方案中，口服抗CD3抗体制剂中的每个液体填充胶囊含有少于约1000μL，例如少于约75μL，和/或少于约500μL的体积。在一些实施方案中，口服抗CD3抗体制剂中的每个液体填充胶囊含有在约50μL至约1000μL、约100μL至约1000μL、约200μL至约1000μL、约250μL至约1000μL、约50μL至约500μL、约100μL至约500μL、约200μL至约500μL和/或约250μL至约500μL范围内的体积。

一种优选制剂包括包覆肠衣的口服胶囊，其含有抗CD3抗体冻干制剂，所述冻干制剂具有约0.1mg至10mg的单位剂量的抗CD3抗体或其抗原结合片段和每1mg抗CD3抗体或其抗原结合片段约0.58mg三水合乙酸钠、约1.25mg氯化钠、约0.034mg聚山梨醇酯80、约34mg海藻糖和约0.17mg甲硫氨酸。任选地，包覆肠衣的口服胶囊还包括每1mg抗CD3抗体或其抗原结合片段0.17mg EDTA。单位剂量为0.5mg、2.5mg或5.0mg。

另一优选口服制剂包括包覆肠衣的口服胶囊，其含有抗CD3抗体液体制剂，所述液体制剂包含约0.1mg至10mg的单位剂量的抗CD3抗体或其抗原结合片段、25mM三水合乙酸钠、125mM氯化钠、0.02％聚山梨醇酯80(w/v)、20％海藻糖(w/v)和0.1％甲硫氨酸(w/v)。任选地，包覆肠衣的口服胶囊还包括0.1％EDTA。单位剂量0.5mg、2.5mg或5.0mg。

在一些实施方案中，抗CD3抗体制剂为皮下制剂。在一些实施方案中，皮下抗CD3抗体制剂装在密封小瓶或或其它容器中。

在一些实施方案中，皮下抗CD3抗体制剂包括抗CD3抗体、至少一种盐、至少一种表面活性剂和使制剂达到所需注射体积所需的体积的水。

在一些实施方案中，皮下抗CD3抗体制剂包括约2mg/mL抗CD3抗体、约7.31mg氯化钠、约3.40mg三水合乙酸钠、约0.20mg聚山梨醇酯80和使制剂体积达到1ml所需注射体积的量的水。皮下抗体制剂应该在约4至6范围内的pH下。

在一些实施方案中，皮下抗CD3抗体制剂冷藏存储在小瓶或其它合适的溶液中，例如在约2℃至约8℃范围内。在一些实施方案中，不对皮下抗CD3抗体制剂进行震荡。在一些实施方案中，不将皮下抗CD3抗体制剂冷冻。在一些实施方案中，在施用前稀释皮下抗CD3抗体制剂。

在一些实施方案中，皮下抗CD3抗体制剂以在约1mg/60kg体重至约10mg/60kg体重范围内的剂量施用。

应了解，根据本公开的治疗实体的施用将与合适的载体、赋形剂和被掺入制剂中以改善转移、递送耐受性等的其它剂一起施用。许多适当的制剂可见于所有药物化学师已知的配方书中：Remington'sPharmaceutical Sciences(第15版,Mack PublishingCompany,Easton,PA(1975))，尤其其中的第87章，Blaug,Seymour。这些制剂包括例如粉剂、糊剂、软膏、凝胶体、蜡、油、脂质、含有脂质(阳离子或阴离子)的泡囊(例如Lipofectin^TM)、DNA缀合物、无水吸附糊剂、水包油和油包水乳液、乳液卡包蜡(carbowax)(多种分子量的聚乙二醇)、半固体凝胶和含有卡包蜡的半固体混合物。在根据本发明的治疗和疗法中任何上述混合物都可以是适当的，条件是制剂中的活性成分不会因制剂而失活并且制剂与施用途径在生理学上相容和可耐受。又参见Baldrick P.“Pharmaceutical excipientdevelopment:the need for preclinical guidance.”Regul.Toxicol Pharmacol.32(2):210-8(2000)；Wang W.“Lyophilization and development of solid proteinpharmaceuticals.”Int.J.Pharm.203(1-2):1-60(2000)；Charman WN“Lipids,lipophilicdrugs,and oral drug delivery-some emerging concepts.”J Pharm Sci.89(8):967-78(2000)；Powell等人“Compendium of excipients for parenteral formulations”PDA JPharm Sci Technol.52:238-311(1998)和其中对与药物化学师众所周知的制剂、赋形剂和载体有关的附加信息的引用。

治疗剂施用

本文提供的包括单独或连同改善肠屏障功能的化合物和/或抗炎化合物一起的抗CD3抗体的治疗性制剂用于治疗或减轻与胃肠道病症，例如胃肠系统的自身免疫性疾病或炎症性病症相关的症状。S

具体地说，所公开的制剂还用于治疗或减轻与CeD和CD相关的症状。

向罹患胃肠道病症，例如自身免疫性疾病或炎症性病症的受试者施用治疗性制剂。通过本领域中已知的方法鉴定罹患自身免疫性疾病、炎症性病症、神经退化性病症或癌症的受试者。

如果实现多种实验室或临床结果中的任一种，那么认为向罹患胃肠道病症，例如自身免疫性疾病或炎症性病症的患者施用治疗性制剂是成功的。举例来说，如果与病症相关的一或多种症状减轻、减少、被抑制或未进展至进一步，即更坏的状态，那么认为治疗是成功的。

在另一个实施方案中，本文提供的治疗性制剂用于治疗、诊断和/或预防克罗恩病。克罗恩病是肠的慢性炎症和刺激。克罗恩病引起症状如腹痛、腹泻、重量减轻、食欲不振、发烧、盗汗、直肠疼痛和直肠出血。向罹患、经诊断患有或易患克罗恩病的受试者施用本文提供的治疗性制剂。本文提供的抗体制剂以足以在受试者中减轻克罗恩病的至少一种症状、治疗克罗恩病、预防克罗恩病和/或预防克罗恩病进展至进一步疾病病况的剂量施用。

使用治疗性制剂激活调控T细胞(Tregs)。

在本文中使用的另一个实施方案中，向人类受试者施用治疗性制剂组合物以预防、减少或降低免疫细胞募集至人组织中。向有需要的受试者施用本文中使用的治疗性制剂以预防和治疗与免疫细胞异常或失调地募集至人疾病组织部位中相关的疾患。

在本文中使用的另一个实施方案中，向人类受试者施用治疗性制剂组合物以预防、减少或降低免疫细胞溢出和血细胞渗出至人组织中。因此，施用本文中使用的治疗性制剂以预防和/或治疗与免疫细胞异常或失调地浸润至人疾病组织部位中相关的疾患。

在本文中使用的另一个实施方案中，向人类受试者施用治疗性制剂组合物以预防、减少或降低由人体内细胞因子的释放所介导的作用。术语“细胞因子”是指本领域内已知的结合细胞表面上的细胞外受体，从而调节细胞功能的所有人细胞因子，包括但不限于IL-2、IFN-g、TNF-α、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10和IL-13。

在本文中使用的另一个实施方案中，向人类受试者施用治疗性制剂以预防、减少或降低由人体内细胞因子受体的释放所介导的作用。术语“细胞因子受体”是指本领域内结合一种或多种如本文中定义的细胞因子的所有人细胞因子受体，包括但不限于上述细胞因子的受体。因此，施用本文中使用的治疗性制剂以治疗和/或预防由人体内一种或多种细胞因子受体的异常激活、结合或接合介导的疾患。进一步设想，治疗性制剂在体内的施用将耗竭由这类人类受试者内的细胞因子受体介导的细胞内信号传导。

在本文中使用的一方面，在人类个体中胰腺β-细胞功能降低后向其施用治疗性制剂组合物。在一个实施方案中，如本领域内已知的，测试个体的β-细胞功能、胰岛素分泌或c-肽水平。随后，在注意到每一指标充分降低后，向人类个体施用治疗性制剂的充足给药方案以预防其中β-细胞功能的自身免疫破坏的进一步进展。

优选地，经口、皮下或经鼻向受试者施用本文提供的治疗性抗体制剂。涵盖其它施用途径。举例来说，抗体制剂经静脉内、肌肉内或这些施用途径的任何组合施用。

组合疗法

在与一种或多种另外的剂，例如改善肠屏障功能和/或减少肠通透性的化合物和/或抗炎化合物组合进行治疗期间和/或之后，施用抗CD3抗体制剂。

在一些实施方案中，抗CD3抗体和另外的剂(3)被配制成单一治疗性组合物，并且抗CD3抗体和另外剂同时被施用。

可替代地，抗CD3抗体和另外的剂彼此分开，例如每个被配制成单独的治疗组合物，并且抗CD3抗体和另外的剂同时被施用，或抗CD3抗体和另外的剂在治疗方案期间的不同时间被施用。举例来说，在施用另外的剂之前施用抗CD3抗体，在施用另外的剂之后施用抗CD3抗体，或抗CD3抗体和另外的剂以交替的方式施用。如本文所述，抗CD3抗体和另外的剂以单一剂量或多剂量施用。

在一些实施方案中，抗CD3抗体和另外的剂同时被施用。举例来说，抗CD3抗体和另外的剂可以被配制成单一组合物或呈两种或更多种单独的组合物施用。在一些实施方案中，抗CD3抗体和另外的剂相继被施用，或抗CD3抗体和另外的剂在治疗方案期间的不同时间被施用。

如果实现多种实验室或临床目标中的任一个，那么认为向罹患炎症性疾病(例如胃肠道的炎症性病症)、胃肠道病症(例如CeD、CD、溃疡性结肠炎、肠易激综合征、炎症性肠病或结肠癌)、自身免疫性疾病(例如糖尿病)、癌症(例如胃肠道癌症)、NASH、胆汁病症或肝病的患者施用单独或与一种或多种另外的剂组合的抗CD3抗体是成功的。

举例来说，如果与疾病或病症相关的一或多种症状减轻、减少、被抑制或未进展至进一步，即更坏的状态，那么认为向罹患炎症性疾病(例如胃肠道的炎症性病症)、胃肠道病症(例如乳糜泻、克罗恩病、溃疡性结肠炎、肠易激综合征、炎症性肠病或结肠癌)、自身免疫性疾病(例如糖尿病)、癌症(例如胃肠道癌症)、NASH、胆汁病症或肝病的患者施用单独或与一种或多种另外的剂组合的抗CD3抗体是成功的。

如果疾病或病症进入症状缓解或未进展至进一步，即更坏的状态，那么认为向罹患炎症性疾病(例如胃肠道的炎症性病症)、胃肠道病症(例如乳糜泻、克罗恩病、溃疡性结肠炎、肠易激综合征、炎症性肠病或结肠癌)、自身免疫性疾病(例如糖尿病)、癌症(例如胃肠道癌症)、NASH、胆汁病症或肝病的患者施用单独或与一种或多种另外的剂组合的抗CD3抗体是成功的。

可用于本发明的组合物和方法的另外的剂包括例如视黄酸，例如全反式-视黄酸、9-顺式-视黄酸或13-顺式-视黄酸；GC-C受体激动剂，例如鸟苷素、尿鸟苷素、淋巴鸟苷素、大肠杆菌热稳定肠毒素(ST)、利那洛肽、普卡那肽或多卡那肽；肝素、鲁比前列酮、谷氨酰胺、GLP-2肽、连蛋白肽抑制剂、连蛋白拮抗剂、拉瑞唑来、益生菌或丁酸。优选地，GC-C受体激动剂是

或

可用于本发明的组合物和方法的另外的剂包括抗炎化合物。抗炎化合物包括例如单克隆抗体，例如对IL-17、TNF-a、α4-整合素、α4-β7整合素、IL-12或IL-23具有特异性的单克隆抗体、

JNK抑制剂、PI3K通路抑制剂、AKT抑制剂、mTOR抑制剂、美沙拉嗪、uceris或鞘氨醇-1-磷酸激酶抑制剂。优选的单克隆抗体包括

或

在一些实施方案中，包括抗CD3抗体和至少第二治疗剂的组合疗法以图2中所示的给药方案施用。在一些实施方案中，包括抗CD3抗体和至少第二治疗剂的组合疗法以图2中所示的给药方案施用，并且重复给药方案。在一些实施方案中，包括抗CD3抗体和至少第二治疗剂的组合疗法以图2中所示的给药方案施用，并且在休药期之后重复给药方案。在一些实施方案中，包括抗CD3抗体和至少第二治疗剂的组合疗法以图2中所示的给药方案施用，并且重复休药周期。在一些实施方案中，包括抗CD3抗体和至少第二治疗剂的组合疗法以图2中所示的给药方案施用，并且重复给药方案和休药周期。

定义

除非另外定义，否则结合本发明使用的科学和技术术语将具有本领域的一般技术人员通常理解的含义。此外，除非上下文另外需要，否则单数术语将包括复数并且复数术语将包括单数。一般地，结合本文所述的细胞和组织培养、分子生物学以及蛋白质和寡核苷酸或多核苷酸化学和杂交所用的命名法和技术是本领域中熟知和常用的那些。可以使用重组DNA、寡核苷酸合成以及组织培养和转化(例如电穿孔、脂质体转染)的标准技术。酶促反应和纯化技术可以根据制造商的说明书或如本领域中通常所实现或如本文所述来进行。上述技术和程序一般根据本领域中众所周知并且如本说明书中引用和论述的多种通用和更特定的参考文献中所述的常规方法进行。参见例如Sambrook等人.Molecular Cloning:ALaboratory Manual(第2版,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold SpringHarbor,N.Y.(1989))。结合本文所述的分析化学、合成有机化学以及医学和药物化学所用的命名法以及其实验程序和技术是本领域中众所周知和常用的那些。可以使用化学合成、化学分析、药物制备、配制和递送以及患者治疗的标准技术。

如根据本公开所利用，除非另外指示，否则应了解以下术语具有以下含义：

如本文所用，术语“抗体”是指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白(Ig)分子的免疫有效部分，即含有特异性结合抗原(与抗原发生免疫反应)的抗原结合位点的分子。这类抗体包括(但不限于)多克隆、单克隆、嵌合、单链、F_ab、F_ab'和F_(ab')2片段，以及F_ab表达文库。“特异性结合”或“发生免疫反应”意指抗体与所希望抗原的一个或多个抗原决定子反应并且不与其它多肽反应(亦即结合)或以低得多的亲和力(K_d>10^-6)与其它多肽结合。

已知基础抗体结构单元包含四聚体。每个四聚体由两对相同的多肽链构成，每对具有一条“轻”链(约25kDa)和一条“重”链(约50-70kDa)。每条链的氨基端部分包括主要负责抗原识别的具有约100至110个或更多个氨基酸的可变区。每条链的羧基端部分界定主要负责效应功能的恒定区。人轻链分类为κ和λ轻链。重链分类为μ、δ、γ、α或ε，并分别将抗体的同型定义为IgM、IgD、IgA和IgE。在轻链和重链内，可变区和恒定区由具有约12个或更多个氨基酸的“J”区接合，其中重链还包括具有约10个更多氨基酸的“D”区。一般参见Fundamental Immunology第7章(Paul,W.,ea.,第2版Raven Press,N.Y.(1989))。每对轻链/重链的可变区形成抗体结合位点。

如本文所用，术语“单克隆抗体”(MAb)或“单克隆抗体组合物”是指只含有由独特轻链基因产物和独特重链基因产物组成的抗体分子的一种分子种类的抗体分子群体。具体地说，单克隆抗体的互补决定区(CDR)在所述群体的所有分子中都相同。MAb含有能够与抗原的特定表位发生免疫反应的抗原结合位点，其特征在于对所述抗原的独特结合亲和力。

一般说来，从人获得的抗体分子涉及类别IgG、IgM、IgA、IgE和IgD中的任一种，彼此不同之处在于分子中存在的重链的性质。某些类别还具有子类，例如IgG₁、IgG₂等。此外，在人中，轻链可以是κ链或λ链。

如本文所用，术语“表位”包括能够特异性结合于免疫球蛋白、scFv或T细胞受体的任何蛋白质决定子。术语“表位”包括能够特异性结合于免疫球蛋白或T细胞受体的任何蛋白质决定子。表位决定子通常由分子的化学活性表面分组组成，例如氨基酸或糖侧链，并通常具有特定的三维结构特性以及特定的电荷特征。当解离常数≤1μM，优选地≤100nM，最优选地≤10nM时，称抗体特异性结合抗原。

如本文所用，术语“免疫结合”和“免疫结合特性”和“特异性结合”是指在免疫球蛋白分子与免疫球蛋白特异性针对的抗原之间的发生的非共价相互作用类型。免疫结合相互作用的强度或亲和力可以根据相互作用的解离常数(K_d)表达，其中K_d越小表示亲和力越大。所选多肽的免疫结合特性使用本领域中众所周知的方法来定量。一种这类方法需要测量抗原结合位点/抗原络合物形成和解离作的速率，其中那些速率取决于络合物搭配物的浓度、相互作用的亲和力和同等地影响两个方向上的速率的几何参数。因此，“缔合速率常数”(K_on)和“解离速率常数”(K_off)可通过计算浓度和缔合和解离的实际速率来确定。(参见Nature 361:186-87(1993))。比率K_off/K_on能够消除与亲和力无关的所有参数，并且等于解离常数K_d。(一般参见Davies等人(1990)Annual Rev Biochem 59:439-473)。当如通过测定法如放射性配体结合测定法或本领域的技术人员已知的类似测定法所测量，平衡结合常数(K_d)≤1μM，优选地≤100nM，更优选地≤10nM，最优选地≤100pM至约1pM时，称本发明的抗体特异性结合于CD3表位。

保守氨基酸取代是指具有类似侧链的残基的可互换性。举例来说，具有脂肪族侧链的一组氨基酸是甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；具有脂肪族-羟基侧链的一组氨基酸是丝氨酸和苏氨酸；具有含酰胺侧链的一组氨基酸是天冬酰胺和谷氨酰胺；具有芳香族侧链的一组氨基酸是苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；具有碱性侧链的一组氨基酸是赖氨酸、精氨酸和组氨酸；并且具有含硫侧链的一组氨基酸是半胱氨酸和甲硫氨酸。优选的保守氨基酸取代组是：缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、赖氨酸-精氨酸、丙氨酸-缬氨酸、谷氨酸-天冬氨酸和天冬酰胺-谷氨酰胺。

如本文中所论述，预期本发明涵盖抗体或免疫球蛋白分子的氨基酸序列的微小变化，只要氨基酸序列的变化维持至少75％、更优选至少80％、90％、95％并且最优选地99％。具体地说，预期保守氨基酸替换。保守替换是在侧链相关联的氨基酸家族内进行的替换。基因编码的氨基酸一般被分成以下家族：(1)酸性氨基酸是天冬氨酸、谷氨酸；(2)碱性氨基酸是赖氨酸、精氨酸、组氨酸；(3)非极性氨基酸是丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸；以及(4)不带电的极性氨基酸是甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸。亲水性氨基酸包括精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、组氨酸、赖氨酸、丝氨酸和苏氨酸。疏水性氨基酸包括丙氨酸、半胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸。氨基酸的其它家族包括(i)丝氨酸和苏氨酸，它们是脂肪族-羟基家族；(ii)天冬酰胺和谷氨酰胺，它们是含酰胺家族；(iii)丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸，它们是脂肪族家族；以及(iv)苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸，它们是芳香族家族。

术语“剂”在本文中用以表示化合物、化合物混合物、生物大分子或由生物材料制成的提取物。

术语患者包括人和兽医学受试者。

本公开还包括F_v、F_ab、F_ab’和F_(ab')2抗CD3抗体片段、单链抗CD3抗体、双特异性抗CD3抗体、异缀合物抗CD3抗体、三特异性抗体、免疫缀合物和它们的片段。

双特异性抗体是对至少两种不同抗原具有结合特异性的抗体。在本发明的情况下，结合特异性之一是针对CD3。第二结合靶是任何其它的抗原，宜为细胞表面蛋白或受体或受体亚基。

本文中引用的所有公布和专利文献都以引用的方式并入本文中，引用程度如同特定且个别地指示每个这类公布或专利文献以引用的方式并入本文中一般。公布和专利文献的引用无意承认任一者是相关的现有技术，也不构成对其内容或日期的任何承认。现在已经通过书面描述的方式描述了本公开，本领域的技术人员将认识到，可以在各种实施方案中实践本公开，并且上述描述和以下实施例是出于说明的目的，而不是限制随后的权利要求书。

其它的实施方案

虽然本公开已经结合其详细描述进行了描述，但上述描述意图说明而非限制本公开的范围，本公开的范围是由随附权利要求书的范围界定的。其它的方面、优点和修改在以下权利要求书的范围内。

Claims (48)

1.一种用于治疗病症的方法，所述方法包括施用口服剂型的抗CD3抗体和改善肠屏障功能的化合物和/或抗炎化合物。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述病症是炎症性疾病、胃肠道病症、自身免疫性疾病或癌症。

3.如权利要求2所述的方法，其中所述炎症性病症是胃肠道的炎症性病症。

4.如权利要求2所述的方法，其中所述胃肠道病症是胃肠道癌症。

5.如权利要求2所述的方法，其中所述胃肠道病症是乳糜泻、克罗恩病、溃疡性结肠炎、肠易激综合征、炎症性肠病或结肠癌。

6.如权利要求2所述的方法，其中所述自身免疫性疾病是糖尿病。

7.如权利要求1所述的方法，其中所述病症是NASH、胆汁酸病症或肝病。

8.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述改善肠屏障功能的化合物降低肠通透性。

9.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述改善肠屏障功能的化合物是视黄酸、GC-C受体激动剂、肝素、鲁比前列酮、谷氨酰胺、GLP-2肽、连蛋白肽抑制剂、连蛋白拮抗剂、拉瑞唑来、益生菌或丁酸。

10.如权利要求9所述的方法，其中所述视黄酸是全反式-视黄酸、9-顺式-视黄酸或13-顺式-视黄酸。

11.如权利要求9所述的方法，其中GC-C受体激动剂是鸟苷素、尿鸟苷素、淋巴鸟苷素、大肠杆菌热稳定肠毒素(ST)、利那洛肽、普卡那肽或多卡那肽。

12.如权利要求11所述的方法，其中所述利那洛肽是

13.如权利要求11所述的方法，其中普卡那肽是

14.如权利要求1所述的方法，其中所述抗炎化合物是对IL-17、TNF-a、α4-整合素、α4-β7整合素、IL-12或IL-23具有特异性的单克隆抗体。

15.如权利要求1所述的方法，其中所述抗炎化合物是

JNK抑制剂、PI3K通路抑制剂、AKT抑制剂、mTOR抑制剂、美沙拉嗪、Uceris或鞘氨醇-1-磷酸激酶抑制剂。

16.如权利要求9中任一项所述的方法，其中所述视黄酸以约15-45mg/m²的日剂量施用。

17.如权利要求14所述的方法，其中所述视黄酸以约45mg/m²的日剂量施用。

18.如权利要求15所述的方法，其中所述日剂量以两个等分剂量施用。

19.如权利要求14所述的方法，其中所述视黄酸以约22.5mg/m²的剂量每日施用两次。

20.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述GC-C受体激动剂以约1至约10mg的日剂量施用。

21.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述GC-C受体激动剂以3mg或6mg的日剂量施用。

22.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述GC-C激动剂每日施用一次。

23.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述抗CD3抗体是完全人类抗体、人源化抗体或鼠类抗体。

24.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述抗CD3抗体以约0.1mg至约10mg的日剂量施用。

25.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述抗CD3抗体被施用达30天的治疗周期。

26.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述抗CD3抗体被施用达一个治疗周期，所述治疗周期包含15天施药期和15天停药期。

27.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述抗CD3抗体和所述增加肠屏障功能的化合物被施用达30天的治疗周期。

28.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述抗CD3抗体和所述增加肠屏障功能的化合物被施用达一个治疗周期，所述治疗周期包含所述抗CD3抗体的15天施药期和15天停药期以及所述增加肠屏障功能的化合物的30天施药期。

29.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述抗CD3抗体、所述增加肠屏障功能的化合物和所述GC-C受体激动剂被施用达一个治疗周期或30天。

30.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述抗CD3抗体、所述增加肠屏障功能的化合物和所述GC-C受体激动剂被施用达一个治疗周期，所述治疗周期包含所述抗CD3抗体或其抗原结合片段的15天施药期和15天停药期，所述GC-C激动剂的30天施药期，以及所述视黄酸的30天施药期。

31.如权利要求25-30中任一项所述的方法，其中所述每个治疗周期重复2次、3次、4次、5次、6次、7次、8次、9次或10次。

32.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述抗CD3抗体的所述口服剂型是肠溶聚合物包衣口服剂型。

33.如权利要求32所述的方法，其中所述肠溶聚合物包衣口服剂型是液体填充胶囊。

34.如权利要求33所述的方法，其中所述肠溶聚合物包衣的液体填充口服胶囊包含液体制剂，所述液体制剂包含约0.1mg至10mg的单位剂量的抗CD3抗体、约10mM至约500mM三水合乙酸钠、约10mM至500mM氯化钠和约0.01％至1％聚山梨醇酯80(w/v)

35.如权利要求34所述的方法，其中所述肠溶聚合物包衣口服剂型是粉末填充胶囊。

36.如权利要求35所述的方法，其中所述肠溶聚合物包衣的粉末填充口服胶囊包含冻干粉末制剂，所述冻干粉末制剂包含约0.1mg至10mg的单位剂量的抗CD3抗体和一种或多种药学上可接受的赋形剂。

37.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述抗CD3抗体包含：

(i)重链，所述重链包括包含GYGMH(SEQ ID NO:1)的氨基酸序列的可变重链互补决定区1(VH CDR1)、包含VIWYDGSKKYYVDSVKG(SEQ ID NO:2)的氨基酸序列的可变重链互补决定区2(VH CDR2)、包含QMGYWHFDL(SEQ ID NO:3)的氨基酸序列的可变重链互补决定区3(VHCDR3)；和轻链，所述轻链包括包含RASQSVSSYLA(SEQ ID NO:4)的氨基酸序列的可变轻链互补决定区1(VL CDR1)、包含DASNRAT(SEQ ID NO:5)的氨基酸序列的可变轻链互补决定区2(VL CDR2)、包含QQRSNWPPLT(SEQ ID NO:6)的氨基酸序列的可变轻链互补决定区3(VLCDR3)；

(ii)重链，所述重链包括包含氨基酸序列SYGMH(SEQ ID NO:7)的VH CDR1；包含IIWYDGSKKNYADSVKG(SEQ ID NO:8)的氨基酸序列的VH CDR2；包含GTGYNWFDP(SEQ ID NO:9)的氨基酸序列的VH CDR3；和轻链，所述轻链包括包含RASQSVSSSYLA(SEQ ID NO:10)、RASQGISSALA(SEQ ID NO:11)或WASQGISSYLA(SEQ ID NO:12)的氨基酸序列的VL CDR1；包含GASSRAT(SEQ ID NO:13)、YASSLQS(SEQ ID NO:14)或DASSLGS(SEQ ID NO:15)的氨基酸序列的VL CDR2；以及包含QQYGSSPIT(SEQ ID NO:16)或QQYYSTLT(SEQ ID NO:17)的氨基酸序列的VL CDR3；以及

(iii)重链，所述重链包括包含氨基酸序列SYGMH(SEQ ID NO:7)的VH CDR1；包含AIWYNGRKQDYADSVKG(SEQ ID NO:18)的氨基酸序列的VH CDR2；包含GTGYNWFDP(SEQ ID NO:9)的氨基酸序列的VH CDR3；和轻链，所述轻链包括包含RASQSVSSYLA(SEQ ID NO:4)或RASQGISSALA(SEQ ID NO:11)的氨基酸序列的VL CDR1；包含DASNRAT(SEQ ID NO:5)或DASSLES(SEQ ID NO:19)的氨基酸序列的VL CDR2；以及包含QQRSNWPWT(SEQ ID NO:20)或QQFNSYPIT(SEQ ID NO:21)的氨基酸序列的VL CDR3。

38.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述抗CD3抗体包含具有SEQ ID NO:22(28F11 VH)、24(23F10 VH)、26(27H5 VH)或32(15C3 VH)的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有SEQ ID NO:23(28F11 VL)、25(23F10 VL)、27(27H5 VL1)、28(27H5 VL2)、29(27H5VL3)、30(27H5 VL4)、31(27H5 VL5)、33(15C3 VL1)或34(15C3 VL2)的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。

39.如权利要求1-36中任一项所述的方法，其中所述抗CD3抗体包含具有SEQ ID NO:22(28F11 VH)的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有SEQ ID NO:23(28F11 VL)的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。

40.如权利要求1-36中任一项所述的方法，其中所述抗CD3抗体其包含具有SEQ ID NO:24(23F10 VH)的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有SEQ ID NO:25(23F10 VL)的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。

41.如权利要求1-36中任一项所述的方法，其中所述抗CD3抗体包含具有SEQ ID NO:26(27H5 VH)的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有SEQ ID NO:27(27H5 VL1)、28(27H5VL2)、29(27H5VL3)、30(27H5 VL4)、31(27H5 VL5)的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。

42.如权利要求1-36中任一项所述的方法，其中所述抗CD3其包含具有SEQ ID NO:32(15C3 VH)的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有SEQ ID NO:33(15C3 VL1)或34(15C3VL2)的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。

43.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述抗CD3抗体或其抗原结合片段包括包含氨基酸序列WVRQAPGKGLEWV(SEQ ID NO:35)的框架2区(FWR2)。

44.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述抗CD3抗体或其抗原结合片段包括包含氨基酸序列RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCA(SEQ ID NO:36)的框架3区(FRW3)。

45.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述抗CD3抗体是IgG1同型。

46.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述抗CD3抗体或其抗原结合片段包括所述重链中位置234、235、265或297或其组合处的氨基酸残基的突变，并减少T细胞的细胞因子释放，其中所述氨基酸残基位置是根据Kabat进行编号

47.如权利要求46所述的方法，其中所述突变在所述位置处产生丙氨酸或谷氨酸残基。

48.如权利要求1-47中任一项所述的方法，其中所述抗CD3抗体或其抗原结合片段是IgG1同型，并且含有至少位置234处的第一突变和位置235处的第二突变，其中所述第一突变在位置234处产生丙氨酸残基并且所述第二突变在位置235处产生谷氨酸残基，其中所述氨基酸残基位置是根据Kabat进行编号。

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