PT817643E - Compostos e composições para distribuir agentes activos. - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO

"COMPOSTOS E COMPOSIÇÕES PARA DISTRIBUIR AGENTES ACTIVOS" ÁREA DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se a compostos para distribuir agentes activos e, particularmente, agentes biológica ou quimicamente activos, tais como, por exemplo, péptidos bioactivos e afins. Estes compostos são utilizados como transportadores para facilitar a distribuição de uma carga num alvo. Os transportadores são aminoácidos modificados e são adequados para formar misturas não covalentes com agentes biologicamente activos para administração oral a animais. Também são revelados métodos para a preparação e para a administração dessas composições.

CONTEXTO DA INVENÇÃO

Meios convencionais para distribuir agentes activos são muitas vezes seriamente limitados por barreiras biológicas, quimicas e fisicas. Tipicamente, estas barreiras são impostas pelo ambiente através do qual ocorre a distribuição, o ambiente do alvo para a distribuição ou o próprio alvo.

Agentes biológica ou quimicamente activos são particularmente vulneráveis a essas barreiras. Por exemplo, na distribuição de agentes farmacológicos e terapêuticos a animais, são impostas barreiras pelo corpo. Exemplos de barreiras fisicas são a pele e membranas de vários órgãos que devem ser atravessadas antes de atingir um alvo. Barreiras quimicas incluem, mas não se limitam a estas, 2 variações do pH, bicamadas lipídicas e enzimas de degradação.

Estas barreiras são particularmente importantes na concepção de sistemas de distribuição oral. A distribuição oral de muitos agentes biológica ou quimicamente activos seria a via de administração de eleição para administração a animais se não fossem as barreiras biológicas, químicas e físicas, como variação do pH no tracto gastrointestinal (GI), enzimas digestivas poderosas e membranas gastrointestinais impermeáveis a agentes activos. Entre os numerosos agentes que não são tipicamente propensos a serem administrados oralmente encontram-se péptidos biológica ou quimicamente activos, como calcitonina e insulina; polissacáridos e, em particular, mucopolissacáridos, incluindo, mas não se limitando a heparina; heparinóides; antibióticos, e outras substâncias orgânicas. Estes agentes tornam-se rapidamente ineficazes ou são destruídos no tracto gastrointestinal por hidrólise ácida, enzimas ou afins. Métodos anteriores para administrar oralmente agentes farmacológicos vulneráveis basearam-se na co-administração de adjuvantes (por exemplo, resorcinóis e surfactantes não iónicos, como éter de oleílo de polioxietileno e éter de n-hexadecilpolietileno) para aumentar artificialmente a permeabilidade das paredes intestinais, bem como na co-administração de inibidores enzimáticos (por exemplo, inibidores da tripsina pancreática, fluorofosfato de diisopropilo (DFF) e trasilol) para inibir a degradação enzimática. 3

Também foram descritos lipossomas como sistemas de distribuição de fármacos para insulina e heparina. Ver, por exemplo, Patente U.S. N° 4 239 754, Patel et al. (1976) FEBS Letters, Volume 62, página 60, e Hashimoto et al. (1979) Endocrinology Japan, Volume 26, página 337.

No entanto, a aplicação de largo espectro desses sistemas de distribuição de fármacos é excluída porque: (1) os sistemas requerem quantidades tóxicas de adjuvantes ou inibidores; (2) não estão disponíveis cargas, isto é, agentes activos, de baixo peso molecular adequadas; (3) os sistemas exibem fraca estabilidade e tempo de vida de armazenamento inadequado; (4) é difícil preparar os sistemas; (5) os sistemas não conseguem proteger o agente activo (carga); (6) os sistemas alteram adversamente o agente activo, ou (7) os sistemas não conseguem permitir ou promover a absorção do agente activo.

Mais recentemente, microesferas de polímeros artificiais de aminoácidos misturados (proteinóides) foram utilizadas para distribuir agentes farmacêuticos. Por exemplo, a Patente U.S. N° 4 925 673 descreve transportadores de microesferas proteinóides que contêm fármaco, bem como métodos para a sua preparação e utilização. Estas microesferas proteinóides são úteis para a distribuição de alguns agentes activos.

Ainda são necessários na área sistemas de distribuição simples e económicos que sejam preparados facilmente e que possam distribuir uma gama ampla de agentes activos.

RESUMO DA INVENÇÃO 4 São proporcionadas composições que são úteis para a distribuição de agentes activos. Estas composições incluem pelo menos um agente activo, preferivelmente um agente biológica ou quimicamente activo, e pelo menos um dos compostos seguintes: 4

O

V

OH em que:

Composto

IV XIX kJ 1 XXVII XXVIII 10 8 XXIX δ XXX 11 XXXI 2 em que:

Composto; n

Composto

UI

LIV 5

Composto CVI

Composto CIX ou respectivos sais. 6

Foi descoberto que compostos ácidos orgânicos, e seus sais, com um grupo amida aromática, com um grupo hidroxi substituído na posição orto do anel aromático e uma cadeia lipófila com desde cerca de 4 átomos de carbono até cerca de 20 átomos na cadeia são úteis como transportadores para a distribuição de agentes activos. Numa forma preferida, a cadeia lipófila pode ter desde 5 até 20 átomos de carbono.

Composições que compreendem os compostos transportadores discutidos acima e agentes activos demonstraram ser eficazes na distribuição de agentes activos em sistemas biológicos seleccionados. Estas composições incluem pelo menos um agente activo, que é preferivelmente um agente biológica ou quimicamente activo, e pelo menos um composto transportador.

Também são contempladas pela presente invenção formas galénicas unitárias que incluem estas composições.

Também é contemplado um método para preparar estas composições, que compreende misturar pelo menos um agente activo com pelo menos um composto como descrito acima e, opcionalmente, um veículo de dosagem.

Numa especificação alternativa, estes compostos não tóxicos são administrados oralmente a animais como parte de um sistema de distribuição por combinação ou mistura dos compostos com um agente activo antes da administração.

DESCRIÇÃO DAS FIGURAS A Figura 1 é uma ilustração gráfica dos resultados da injecção subcutânea de composição de rhGH em ratos. 7 A Figura 2 é uma ilustração gráfica dos resultados da dosagem sublingual (SL), intranasal (IN) e intra-colónica (IC) de rhGH em ratos. A Figura 3 é uma ilustração gráfica dos resultados da dosagem intra-colónica de distribuição de heparina com o transportador composto XXXI.

DESCRIÇÃO PORMENORIZADA DA INVENÇÃO

As composições especificas da presente invenção incluem um agente activo e um aminoácido modificado. Estas composições podem ser utilizadas para distribuir vários agentes activos através de várias barreiras biológicas, químicas e físicas e são particularmente adequadas para distribuir agentes activos que estão sujeitos a degradação ambiental. As composições da presente invenção são particularmente úteis para distribuir ou administrar agentes biológica ou quimicamente activos em quaisquer animais, como pássaros, mamíferos, como primatas e particularmente humanos, e insectos.

Outras vantagens da presente invenção incluem a utilização de matérias-primas fáceis de preparar e económicas. As composições e os métodos de formulação da presente invenção são económicos, fáceis de implementar e propensos a escalamento para a escala industrial para produção comercial. A co-administração subcutânea, sublingual e intranasal de um agente activo, como hormona de crescimento humano recombinante (rhGH), e dos agentes de distribuição, e particularmente proteínas, descrita aqui resulta numa biodisponibilidade acrescida do agente activo em comparação 8 com a administração do agente activo isoladamente. Obtém-se um resultado semelhante por co-administração de calcitonina de salmão com os agentes de distribuição em ratos. Os dados que corroboram estas descobertas estão apresentados nos exemplos.

Agentes Activos

Os agentes activos adequados para serem utilizados na presente invenção incluem agentes biológica ou quimicamente activos, agentes quimicamente activos, incluindo, mas não se limitando a fragrâncias, bem como outros agentes activos, tais como, por exemplo, cosméticos.

Agentes biológica ou quimicamente activos incluem, mas não se limitam a pesticidas, agentes farmacológicos e agentes terapêuticos. Por exemplo, agentes biológica ou quimicamente activos adequados para serem utilizados na presente invenção incluem, mas não se limitam a péptidos, e particularmente péptidos pequenos, hormonas, e particularmente hormonas que, por si próprias, não passam ou passa apenas uma fracção da dose administrada através da mucosa gastrointestinal e/ou que são susceptíveis a clivagem quimica por ácidos e enzimas no tracto gastrointestinal, polissacáridos, e particularmente misturas de mucopolissacáridos, hidratos de carbono, lipidos, ou qualquer combinação destes. Outros exemplos incluem, mas não se limitam a hormonas de crescimento humano, hormonas de crescimento bovino, hormonas de libertação de hormonas de crescimento, interferões, interleuquina-1, insulina, heparina, e particularmente heparina de baixo peso molecular, calcitonina, eritropoietina, factor natriurético atrial, antigenes, anticorpos monoclonais, somatostatina, 9 adrenocorticotropina, hormona de libertação da gonadotropina, oxitocina, vasopressina, cromolina sódica (cromoglicato sódico ou dissódico), vancomicina, desferrioxamina (DFO), hormona paratiróide, antimicrobianos, incluindo, mas não se limitando a agentes antifúngicos, ou qualquer combinação destes.

Aminoácidos Modificados

Emprega-se o termo aminoácido modificado para designar os compostos transportadores mencionados acima, que são aminoácidos que foram modificados por acilação de um grupo amina livre com um agente de acilação que reage com o grupo amina livre presente.

Aminoácidos em forma modificada podem ser utilizados para distribuir agentes activos que incluem, mas não se limitam a agentes biológica ou quimicamente activos, tais como, por exemplo, agentes farmacológicos e terapêuticos.

Aminoácidos modificados são tipicamente preparados por modificação do aminoácido ou respectivo éster. Muitos destes compostos são preparados por acilação com agentes de fórmula: X - Y - R4 em que R4 é o radical apropriado para dar origem à modificação indicada no produto final, Y é C=0 e X é um grupo abandonante. Grupos abandonantes típicos incluem, mas não se limitam a halogéneos, tais como, por exemplo, cloro, bromo e iodo. Adicionalmente, os anidridos correspondentes são agentes modificadores. 10

Muitos dos compostos da presente invenção podem ser facilmente preparados a partir de aminoácidos por métodos que pertencem ao âmbito dos experimentados na área com base na presente revelação. Por exemplo, os compostos I-VII derivam do ácido aminobutirico e os compostos XI-XXVI derivam do ácido aminocaprilico. Por exemplo, os compostos de aminoácidos modificados acima podem ser preparados fazendo reagir o aminoácido isolado com o agente modificador apropriado, que reage com a fracção amino livre presente nos aminoácidos para formar amidas. Podem utilizar-se grupos protectores para evitar reacções secundárias indesejadas, como é conhecido dos experimentados na área. O aminoácido pode ser dissolvido em solução alcalina aquosa de um hidróxido metálico, por exemplo, hidróxido de sódio ou potássio, e ser aquecido a uma temperatura que varia entre cerca de 5°C e cerca de 70°C, preferivelmente entre cerca de 10°C e cerca de 40°C, durante um período de tempo que varia entre cerca de 1 hora e cerca de 4 horas, preferivelmente cerca de 2,5 horas. A quantidade de alcali empregue por equivalente de grupos NH2 presentes no aminoácido varia geralmente entre cerca de 1,25 e cerca de 3 mmol, preferivelmente entre cerca de 1,5 e cerca de 2,25 mmol por equivalente de NH2. O pH da solução varia geralmente entre cerca de 8 e cerca de 13, variando preferivelmente entre cerca de 10 e cerca de 12.

Em seguida, o agente modificador de amino apropriado é

adicionado à solução do aminoácido com agitação. A temperatura da mistura é mantida num valor que varia geralmente entre cerca de 5°C e cerca de O O O preferivelmente entre cerca de 10°C e cerca de O o O 11 durante um período de tempo que varia entre cerca de 1 e cerca de 4 horas. A quantidade do agente modificador de amino empregue relativamente à quantidade do aminoácido baseia-se nas moles de NH2 livre total presente no aminoácido. Em geral, o agente modificador de amino é empregue numa quantidade que varia entre cerca de 0,5 e cerca de 2,5 equivalentes molares, preferivelmente entre cerca de 0,75 e cerca de 1,25 equivalentes, por equivalente molar do grupo NH2 total presente no aminoácido. A reacção é rapidamente arrefecida por ajustamento do pH da mistura com um ácido adequado, por exemplo, ácido clorídrico concentrado, até o pH atingir um valor entre cerca de 2 e cerca de 3. A mistura separa-se por repouso à temperatura ambiente, formando uma camada superior transparente e um precipitado branco ou quase branco. A camada superior é deitada fora e o aminoácido modificado é recolhido da camada inferior por filtração ou decantação. O aminoácido modificado em bruto é então dissolvido em água a um pH que varia entre cerca de 9 e cerca de 13, preferivelmente entre cerca de 11 e cerca de 13. Os materiais insolúveis são removidos por filtração e o filtrado é seco in vacuo. O rendimento do aminoácido modificado varia geralmente entre cerca de 30 e cerca de 60%, sendo habitualmente cerca de 45%.

Se desejado, podem utilizar-se ésteres de aminoácidos, tais como, por exemplo, ésteres de benzilo, metilo ou etilo de compostos aminoácidos, para preparar os aminoácidos modificados da invenção. O éster do aminoácido, dissolvido num solvente orgânico adequado, como dimetilformamida, piridina ou tetra-hidrofurano, reage com o agente modificador de amino apropriado a uma temperatura que varia 12 entre cerca de 5°C e cerca de 70°C, preferivelmente cerca de 25°C, durante um período de tempo que varia entre cerca de 7 e cerca de 24 horas. A quantidade do agente modificador de amino utilizada relativamente ao éster do aminoácido é a mesma descrita acima para aminoácidos. Esta reacção pode ser conduzida com ou sem uma base, tal como, por exemplo, trietilamina ou diisopropiletilamina.

Em seguida, o solvente reaccional é removido sob pressão negativa e a funcionalidade éster é removida por hidrólise do éster do aminoácido modificado com uma solução alcalina adequada, por exemplo, hidróxido de sódio 1 N, a uma temperatura que varia entre cerca de 50°C e cerca de 80°C, preferivelmente cerca de 70°C, durante um período de tempo suficiente para remover por hidrólise o grupo éster e formar o aminoácido modificado com um grupo carboxilo livre. A mistura da hidrólise é seguidamente arrefecida para a temperatura ambiente e é acidificada, por exemplo, com solução aquosa de ácido clorídrico a 25%, para um pH que varia entre cerca de 2 e cerca de 2,5. O aminoácido modificado precipita da solução e é recuperado por meios convencionais, como filtração ou decantação. Os ésteres de benzilo podem ser removidos por hidrogenação num solvente orgânico utilizando um catalisador de metal de transição. O aminoácido modificado pode ser purificado por recristalização ou por fraccionamento em suportes sólidos em coluna. Sistemas solventes adequados para recristalização incluem acetonitrilo, metanol e tetra-hidrofurano. O fraccionamento pode ser efectuado em suportes sólidos em coluna adequados, como alumina, utilizando como fase móvel misturas de metanol/n-propanol; suportes em coluna de fase reversa utilizando como fase 13 móvel misturas de ácido trifluoroacético/acetonitrilo, e cromatografia de permuta iónica utilizando como fase móvel água. Quando se realiza cromatografia de permuta aniónica, é preferivelmente empregue um gradiente subsequente de cloreto de sódio 0-500 mM.

Num método alternativo, aminoácidos modificados com a fórmula:

O HO-Í-R1-N-Y— R3

I

CXXIV R2 em que Y é C=0 e R1, R2 e R3 são os radicais apropriados, podem ser preparados: (a) fazendo reagir, em água e na presença de uma base, um composto de fórmula:

O /\ . N-R1

CXXV i R2 com um composto de fórmula: R3 - Y - X, em que Y, R1, R2 e R3 são como acima e X é um grupo abandonante. O composto CXXV pode ser preparado, por exemplo, pelo método descrito em Olah et al., Synthesis, 537-538 (1979). 14 0 composto XXXI foi preparado como descrito no Esquema I a partir de 10-undeceno-l-ol, 1, por um procedimento em três passos com um rendimento global de 31%. A alquilação da ftalimida com o alcanol, 1, em condições de Mitsunobu, seguido de reacção com hidrazina, deu origem a l-amino-10-undeceno, 2, com um rendimento de 66%. A amina foi derivatizada com cloreto de O-acetilsaliciloilo e o alceno resultante, 3, foi oxidado para o ácido utilizando permanganato de potássio. A remoção do acetato, seguida de precipitação com ácido, deu origem ao composto XXXI, com um rendimento de 47% com base na amina 2.

Esquema I

HO

(I) PPhj, DEAÕ, Ftalimida, THF

(2) Ή:ΝΝΗ2, BQH HJÍ

AA

Cloreto de O-acetilsaliciloilo THF, NEtj

H I CGOH OH O

XXXI

OAe O 3 (1) ΚΜη04, Adogen 464 , CHjClj, h+ aquoso (2) NaOH 2 M Í3) H*

Sistemas de Distribuição

As composições da presente invenção podem incluir um ou mais agentes activos.

Numa especificação, os compostos transportadores mencionados acima podem ser utilizados directamente como transportador de distribuição simplesmente misturando um ou mais compostos com o agente activo antes da administração. 15

Numa especificação alternativa, os compostos podem ser utilizados para formar microesferas que contêm o agente activo. Estes compostos são particularmente úteis para a administração oral de certos agentes biologicamente activos, por exemplo, hormonas de péptidos pequenos, que, por si próprias, não passam ou passa apenas uma fracção da dose administrada através da mucosa gastrointestinal e/ou que são susceptiveis de sofrerem clivagem química por ácidos e enzimas no tracto gastrointestinal.

Se os aminoácidos modificados se destinarem a serem convertidos em microesferas, a mistura é opcionalmente aquecida para uma temperatura que varia entre cerca de 20 e cerca de 50°C, preferivelmente cerca de 40°C, até o(s) aminoácido (s) modificado (s) se dissolver(em). A solução final contém entre cerca de 1 mg e cerca de 2000 mg de composto por ml de solução, preferivelmente entre cerca de 1 e cerca de 500 mg por ml. A concentração de agente activo na solução final varia e depende da dosagem requerida para o tratamento. Quando for necessário, a concentração exacta pode ser determinada, por exemplo, por análise de HPLC de fase reversa.

Quando os compostos forem utilizados para preparar microesferas, outro procedimento útil é o seguinte. Dissolvem-se os compostos em água desionizada a uma concentração que varia entre cerca de 75 e cerca de 200 mg/ml, preferivelmente cerca de 100 mg/ml , a uma temperatura entre cerca de 25°C e cerca de 60°C, preferivelmente cerca de O o O A matéria em partículas remanescente na solução pode ser removida por meios convencionais, como filtração. 16

Em seguida, a solução do composto, mantida a uma temperatura de cerca de 40°C, é misturada 1:1 (V/V) com uma solução aquosa ácida (também a cerca de 40°C) com uma concentração de ácido que varia entre cerca de 0,05 N e cerca de 2 N, preferivelmente cerca de 1,7 N. A mistura resultante é suplementarmente incubada a 40°C durante um período de tempo eficaz para a formação de microesferas, observado por microscopia de luz. Ao implementar esta invenção, a ordem de adição preferida consiste em adicionar a solução do composto à solução aquosa ácida. Ácidos adequados para a formação de microesferas incluem qualquer ácido que não: (a) afecte adversamente os aminoácidos, poliaminoácidos ou péptidos modificados, por exemplo, iniciem ou propaguem a decomposição química; (b) interfira na formação de microesferas; (c) interfira na incorporação da carga de agente activo nas microesferas, e (d) interaja adversamente com a carga de agente activo. Ácidos preferidos para utilização neste aspecto incluem ácido acético, ácido cítrico, ácido clorídrico, ácido fosfórico, ácido málico e ácido maleico.

Um aditivo estabilizador de microesferas pode ser incorporado na solução aquosa ácida ou no composto ou solução da carga antes do processo de formação de microesferas. Com alguns agentes activos, a presença desses aditivos promove a estabilidade e/ou dispersibilidade das microesferas em solução. 17

Os aditivos estabilizadores podem ser empregues numa concentração que varia entre cerca de 0,1 e 5% (p/v), preferivelmente cerca de 0,5% (p/v). Exemplos adequados, mas não limitativos, de aditivos estabilizadores de microesferas incluem goma de acácia, gelatina, metilcelulose, polietilenoglicol, polipropilenoglicol, ácidos carboxilicos e respectivos sais, e polilisina. Os aditivos estabilizadores preferidos são goma de acácia, gelatina e metilcelulose.

Nas condições acima, as moléculas do composto formam microesferas do tipo matriz oca ou sólida, em que a carga está distribuída em microesferas do tipo matriz ou cápsula transportadora que encapsulam a carga líquida ou sólida. Se as microesferas de composto forem formadas na presença de um material solúvel, por exemplo, um agente farmacêutico na solução aquosa ácida acima mencionada, este material será encapsulado nas microesferas. Deste modo é possível encapsular materiais farmacologicamente activos, como péptidos, proteínas e polissacáridos, bem como moléculas orgânicas carregadas, por exemplo, agentes antimicrobianos, que normalmente têm baixa biodisponibilidade pela via oral. A quantidade de agente farmacêutico que pode ser incorporada pela microesfera depende de alguns factores, que incluem a concentração do agente na solução, bem como a afinidade da carga para o transportador. As microesferas de composto não alteram as propriedades fisiológicas e biológicas do agente activo. Suplementarmente, o processo de encapsulação não altera as propriedades farmacológicas do agente activo. Qualquer agente farmacológico pode ser incorporado nas microesferas. Este sistema é particularmente vantajoso para distribuir agentes químicos ou biológicos que, de outra forma, seriam destruídos ou se 18 tornariam menos eficazes por condições encontradas no corpo do animal ao qual são administrados antes da microesfera atingir a sua zona-alvo (isto é, a área onde deve ser libertado o conteúdo da microesfera) e para distribuir agentes farmacológicos que são fracamente absorvidos no tracto gastrointestinal. As zonas-alvo podem variar, dependendo do fármaco empregue. A dimensão das partículas da microesfera desempenha um papel importante na determinação da libertação do agente activo na área almejada do tracto gastrointestinal. As microesferas preferidas têm diâmetros entre cerca de < 0,1 mícrones e cerca de 10 mícrones, preferivelmente entre cerca de 0,5 mícrones e cerca de 5 mícrones. As microesferas são suficientemente pequenas para libertarem eficazmente o agente activo na área almejada do tracto gastrointestinal, tal como, por exemplo, entre o estômago e o jejuno. Microesferas pequenas também podem ser administradas parentericamente, sendo suspensas num fluido transportador apropriado (por exemplo, solução salina isotónica) e injectadas directamente no sistema circulatório, intramuscularmente ou subcutaneamente. O modo de administração seleccionado irá variar, obviamente, dependendo do requisito do agente activo a ser administrado. Microesferas de aminoácidos grandes (> 50 mícrones) tendem a ser menos eficazes como sistemas de distribuição oral. A dimensão das microesferas formadas por contacto dos compostos com água ou com uma solução aquosa que contenha agentes activos pode ser controlada manipulando uma variedade de parâmetros físicos ou químicos, como o pH, osmolaridade ou força iónica da solução de encapsulação, 19 dimensão dos iões em solução e escolhendo o ácido utilizado no processo de encapsulação.

As misturas para administração são preparadas misturando uma solução aquosa do transportador com uma solução aquosa do inqrediente activo imediatamente antes da administração. Alternativamente, o transportador e o ingrediente biológica ou quimicamente activo podem ser misturados durante o processo de fabrico. Opcionalmente, as soluções podem conter aditivos, como sais de tampão de fosfato, ácido cítrico, ácido acético, gelatina e goma de acácia.

Aditivos estabilizadores podem ser incorporados na solução do transportador. Com alguns fármacos, a presença desses aditivos promove a estabilidade e dispersibilidade do agente em solução.

Os aditivos estabilizadores podem ser empregues numa concentração que varia entre cerca de 0,1 e 5% (P/V), preferivelmente cerca de 0,5% (P/V). Exemplos adequados, mas não limitativos, de aditivos estabilizadores incluem goma de acácia, gelatina, metilcelulose, polietilenoglicol, ácidos carboxílicos e respectivos sais, e polilisina. Os aditivos estabilizadores preferidos são goma de acácia, gelatina e metilcelulose. A quantidade do agente activo é uma quantidade eficaz para atingir o objectivo do agente activo particular. A quantidade presente na composição é, tipicamente, uma quantidade farmacológica ou biologicamente eficaz. No entanto, a quantidade pode ser inferior a uma quantidade farmacológica ou biologicamente eficaz quando a composição 20 for utilizada numa forma galénica unitária, como uma cápsula, uma pastilha ou um liquido, uma vez que a forma galénica unitária pode conter uma multiplicidade de composições de transportador/agente biológica ou quimicamente activo ou pode conter uma quantidade farmacológica ou biologicamente eficaz dividida. As quantidades eficazes totais podem então ser administradas em unidades cumulativas que contêm, no total, quantidades farmacológica ou biológica ou quimicamente activas do agente biológica ou farmacologicamente activo. A quantidade total de agente activo, e particularmente de agente biológica ou quimicamente activo, a ser utilizada pode ser determinada pelos experimentados na área. No entanto, foi surpreendentemente descoberto que, com alguns agentes biológica ou quimicamente activos, a utilização dos transportadores presentemente revelados proporciona uma distribuição extremamente eficiente, particularmente em sistemas orais, intranasais, sublinguais, intra-duodenais ou subcutâneos. Em consequência, podem administrar-se ao sujeito quantidades mais baixas do agente biológica ou quimicamente activo do que as utilizadas em formas galénicas unitárias ou sistemas de distribuição anteriores atingindo os mesmos níveis no sangue e efeitos terapêuticos. A quantidade do transportador na presente composição é uma quantidade eficaz no que se refere à distribuição e pode ser determinada, para qualquer transportador ou agente biológica ou quimicamente activo particular, por métodos conhecidos dos experimentados na área. 21

Formas galénicas unitárias também podem incluir qualquer componente de entre excipientes, diluentes, agentes desintegradores, lubrificantes, plastificantes, corantes e veículos de dosagem, incluindo, mas não se limitando a água, 1,2-propanodiol, etanol, azeite ou qualquer combinação destes. A administração das presentes composições ou formas galénicas unitárias é preferivelmente feita por via oral ou por injecção intra-duodenal.

As composições de distribuição da presente invenção também podem incluir um ou mais inibidores enzimáticos. Esses inibidores enzimáticos incluem, mas não se limitam a compostos tais como actinonina ou epiactinonina e respectivos derivados. Estes compostos têm as fórmulas apresentadas abaixo:

CXXV1

CXXVH

Derivados destes compostos são revelados na Patente U.S. N° 5 206 384. Derivados da actinonina têm a fórmula: 22

em que R5 é sulfoximetilo ou carboxilo ou um grupo carboxi substituído seleccionado de entre os grupos carboxamida, hidroxiaminocarbonilo e alcoxicarbonilo, e R6 é um grupo hidroxilo, alcoxi, hidroxiamino ou sulfoxiamino. Outros inibidores enzimáticos incluem, mas não se limitam a aprotinina (Trasilol) e inibidor de Bowman-Birk.

Os compostos e composições da presente invenção são úteis para administrar agentes biológica ou quimicamente activos a quaisquer animais, como pássaros, mamíferos, como primatas e particularmente humanos, e insectos. 0 sistema é particularmente vantajoso para distribuir agentes química ou biológica ou quimicamente activos, que, de outra forma, seriam destruídos ou se tornariam menos eficazes por condições encontradas antes dos agentes activos atingirem a sua zona-alvo (isto é, a área onde deve ser libertado o agente activo da composição de distribuição) no corpo do animal ao qual são administrados. Particularmente, os compostos e composições da presente invenção são úteis na administração oral de agentes activos, especialmente aqueles que, normalmente, não estão aptos a serem distribuídos oralmente.

DESCRIÇÃO DAS ESPECIFICAÇÕES PREFERIDAS 23

Os exemplos seguintes ilustram a invenção sem limitação. Todas as partes são apresentadas por peso, a menos que indicado em contrário.

Exemplo 1

Preparou-se o Composto XIX do modo seguinte.

Um balão de fundo redondo de três tubuladuras de 3 1 foi equipado com um agitador mecânico de pé e um termómetro e o balão foi arrefecido num banho de gelo. Introduziu-se no balão de fundo redondo uma solução de ácido 8-aminocaprílico (100,0 g, 0,65 moles) em hidróxido de sódio aquoso 2 M (1,4 1). Manteve-se a temperatura da solução a cerca de 5°C e adicionou-se cloreto de O-acetilsaliciloílo (198,6 g, 0,76 moles, 1,2 equivalentes) em porções durante 7 horas. Agitou-se a mistura a 5°C durante 12 horas para dar origem a uma solução homogénea amarela. A solução foi acidificada com ácido clorídrico 1 M para pH 6,8 e foi extraida com acetato de etilo (2 x 600 ml). O pH da camada aquosa foi novamente ajustado para 6,3 e esta foi suplementarmente extraida com acetato de etilo (2 x 600 ml). As camadas orgânicas foram combinadas, secas em sulfato de sódio anidro, filtradas e evaporadas sob pressão reduzida. Dissolveu-se novamente o resíduo num volume mínimo de hidróxido de sódio aquoso 2 Μ; o pH da solução situava-se entre 9,5 e 10. A mistura foi acidificada com agitação com ácido clorídrico 1 M para pH de cerca de 6,2 e formou-se um sólido. O sólido foi filtrado, lavado com água (3 x 300 ml) e recristalizado a partir de 55% metanol/água (v/v), dando origem ao Composto XVIII na forma de um sólido quase branco (99,7 g, 57%).

As propriedades estão listadas abaixo. 24 p.f. 116-117 °C. NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 12,70 (1H, s largo), 11,95 (1H, s largo), 8,81 (1H, t) , 7,82 (1H, m) , 7,38 (1H, m) , 6,84 (2H, m) , 2,36 (2H, q) , 2,18 (2H, t) , 1,50 (4H, m largo), 1,28 (6H, m) , Análise Calculada para C15H21NO4: C, 64,50; H, 7,58; 1 N, 5,02. Experimental: C, 64,26; H, 7,81; N, 4,93

Utilizaram-se procedimentos semelhantes para preparar os Compostos IV, XXVII, XXVIII.

As propriedades estão listadas abaixo.

Composto IV: Análise Calculada para C11H13NO4: C, 59,9, H, 5,87, N, 6,27 Experimental: C, 58,89, H, 5,85, N, 6,07. NMR (300MHz, DMSO-d6) : δ 1,8 (2H, m) 2,3 (2H, t) 3,1 (2H,q) 6,9 (2 H, t) 7,4 (1H, t) 7,8 (1 H, d) 8,85 (1 H, t) 12,0 (1 H, s) 12,15 (1 H, s)

Composto XXVII: Análise Calculada para C18H27NO4: C, 67:25, H, 8,48, N, 4,36 Experimental: C, 67,23, H, 8,57, N, 4,20 . NMR (300MHz, DMSO- d6) : δ 1 ,22-1,26 (m, 12H) 1,45-1,51 (m, 4H) 2,16 (t, 2H) 3,25 (qt, 2H) , 6,85 (t, 2H) , 7,37 (t, 1 H), 7,81 (d, 1H), 8,79 (t, 1H) , 11,95 (s, 1 H), 12 ,72 (s, 1 H)

Composto XXVIII: NMR (300MHz, DMSO-d6) : δ 1,26 (8H, m largo), 1,49 (4H, m) , 2,17 (2H, t) , 3,26 (2H, m) , 6,86 (2H, m) , 7,37 (1H. m) , 7,83 (1H, m), 8,80 (1H, t), 11,95 (1H, s), 12,73 (1H, s). 25

Exemplo ΙΑ

Uma síntese alternativa do composto XIX foi a seguinte.

Um balão de fundo redondo de três tubuladuras de 5 1 foi equipado com uma camisa de aquecimento, um agitador mecânico de pé, um funil de adição e um termómetro. A reacção foi efectuada sob atmosfera de árgon. Introduziram-se no balão de fundo redondo ácido hidroxilamino-O-sulfónico (196,7 g, 1,74 moles, 1,10 equivalentes) e ácido fórmico (1 1) e agitou-se o sistema para formar uma pasta branca. Adicionou-se gota-a-gota à pasta branca, via o funil de adição, uma solução de ciclo-octanona (200,0 g, 1,58 moles, 1,0 equivalentes) em ácido fórmico (600 ml). Após a adição, o funil de adição foi substituído por um condensador de refluxo e a reacção foi aquecida para o refluxo (temperatura interna de cerca de 105°C) durante 1 hora, dando origem a uma solução castanha. Depois da solução ter sido arrefecida para a temperatura ambiente, foi derramada numa mistura de cloreto de amónio aquoso saturado (1,5 1) e água (1,5 1). Extraiu-se a mistura aquosa com clorofórmio (3 x 1200 ml) . Transferiram-se as camadas de clorofórmio combinadas para um copo e adicionou-se lentamente bicarbonato de sódio saturado (2 1) . Em seguida, a camada de clorofórmio foi separada, seca em sulfato de sódio anidro e evaporada sob pressão reduzida, dando origem a um óleo castanho. O óleo foi colocado num balão de fundo redondo de 500 ml com um agitador magnético. O balão de fundo redondo foi colocado num banho de óleo de silicone e foi equipado com uma cabeça de destilação a vácuo de passagem curta equipada com um termómetro. Um colector de tipo Cow foi ligado a três balões de 250 ml. Obteve-se 2-azaciclononanona (145 g, 65%, p.f. 64-69°C) por destilação a vácuo (fracção com gama da temperatura da cabeça desde 80 até 120°C a pressões entre 3,0 e 3,4 mmHg). 26

Um balão de fundo redondo de três tubuladuras de 5 1 foi equipado com uma camisa de aquecimento, um agitador mecânico de pé, um condensador de refluxo e um termómetro 29. Introduziu-se no balão de fundo redondo uma suspensão de 2-azaciclononanona (83 g, 0,59 moles, 1,0 equivalentes) em hidróxido de sódio aquoso 5 M (650 ml, 8,23 moles, 5,5 equivalentes). A mistura foi aquecida para o refluxo (temperatura interna de cerca de 110°C) durante 4 horas, dando origem a uma solução amarela clara. Removeram-se a camisa de aquecimento e o condensador de refluxo. Depois da solução ter arrefecido para a temperatura ambiente, foi diluída com água (650 ml) e suplementarmente arrefecida num banho de gelo. Adicionou-se à solução cloreto de 0-acetilsaliciloílo finamente triturado (114,7 g, 0,59 moles, 1,0 equivalentes) em porções com agitação e continuou-se o arrefecimento durante 1 hora. Após 30 minutos adicionais, removeu-se o banho de gelo e continuou-se a agitação à temperatura ambiente durante 21 horas, dando origem a uma solução amarela acastanhada. A mistura agitada foi acidificada com ácido sulfúrico 2 M (cerca de 850 ml) para um pH de cerca de 1, tendo-se formado um sólido amarelo. O sólido foi recolhido por filtração e foi dissolvido em metanol morno (1,7 1). Adicionou-se ao metanol carvão activado (cerca de 5 g) e agitou-se a solução durante 10 minutos. O carvão activado foi removido por filtração e o resíduo de carvão foi lavado com 300 ml adicionais de metanol. Adicionou-se água (2 1) aos filtrados combinados (isto é, os 2 1 de metanol) e um sólido quase branco precipitou por repouso a 4°C durante a noite. O produto em bruto foi filtrado e foi recristalizado a partir de 65% metanol/água (v/v), dando origem ao Composto XIX (69,1 g, 42%) na forma de um sólido quase branco. 27

As propriedades estão listadas abaixo. p.f. 116-117°C; HPLC, 1H NMR e Análise Calculada para C15H21NO2: C, 64,50; H, 7,58; N, 5,02. Experimental: C. 64,26; H, 7,81; N, 4,93.

Exemplo 2

Preparou-se o composto XXXI do modo seguinte. l-Amino-10-undeceno. Agitou-se vigorosamente, sob árgon, uma mistura de 10-undeceno-l-ol (5,00 g, 29,36 mmol, 1 equivalente), trifenilfosfina (7,70 g, 29,36 mmol, 1 equivalente) e ftalimida (4,32 g, 29,36 mmol, 1 equivalente) em tetra-hidrofurano seco (THF, 30 ml) . Azodicarboxilato de dietilo (DEAD, 5,11 g, 29,36 mmol, 1 equivalente) foi diluído com THF (12 ml) e adicionado gota-a-gota por seringa. Após a adição, a reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 4 horas. Evaporou-se o solvente sob vácuo e adicionou-se éter (30 ml) para precipitar o óxido de trifenilfosfina e dicarboxilato de hidrazina, que foram removidos por filtração. O precipitado foi enxaguado com éter (2 x 30 ml) e os filtrados combinados foram evaporados, dando origem a um sólido amarelo. O sólido amarelo foi triturado com hexanos mornos (3 x 50 ml) e foi filtrado. Os hexanos combinados foram evaporados, dando origem a l-ftalimidil-10-undeceno na forma de uma cera amarela.

Dissolveu-se a cera amarela numa solução etanólica (38 ml) de hidrato de hidrazina (1,47 g, 1 equivalente, 29,36 mmol). Aqueceu-se a mistura no refluxo durante 2 horas. Depois da mistura ter arrefecido para a temperatura ambiente, adicionou-se ácido clorídrico concentrado (30 ml) 28 e filtrou-se o sólido num filtro de vidro sinterizado. 0 residuo foi lavado com água (50 ml) e os filtrados combinados foram evaporados, dando origem a um sólido amarelo. O sólido amarelo foi novamente dissolvido em NaOH 1 M (100 ml) e foi extraído com éter (2 x 50 ml) . O éter foi seco e evaporado, dando origem a um óleo amarelo. O óleo foi purificado por destilação de Kugelrohr (cerca de 0,1 mmHg, 100°C), dando origem a l-amino-10-undeceno (2) na forma de um óleo amarelo claro (3,29 g, 66%).

As propriedades estão listadas abaixo. NMR (300 mHz, DMSO-d6) ; δ 1,23 (14H, m largo), 1,99 (2H, m) , 2,48 (2H, m) , 4,94 (2H, m) , 5,77 (1H, m). 1-(O-Acetilsaliciloilamino)-lO-undeceno. Arrefeceu-se num banho de gelo cloreto de O-acetilsaliciloílo (3,82 g, 19,25 mmol, 1 equivalente) em THF (30 ml). Adicionou-se com uma seringa trietilamina (1,95 g, 19,25 mmol, 1 equivalente), seguido de l-amino-10-undeceno (3,26 g, 19,25 mmol, 1 equivalente) em THF (10 ml) . Removeu-se o banho de gelo e agitou-se a reacção à temperatura ambiente durante 3,5 horas. Após a remoção do solvente, o resíduo foi dissolvido em EtOAc (50 ml) e lavado com água (2 x 30 ml) . A camada orgânica foi seca e evaporada, dando origem a 1-(O-acetilsaliciloilamino)-10-undeceno na forma de um óleo incolor com um rendimento quantitativo, 6,59 g.

As propriedades estão listadas abaixo. XH NMR (300 mHz, DMSO-d6: δ1,26 (12H, s largo), 1,47 (2H,m), 1,99 (2H, m) , 2,19 (3H, s) , 3,15 (2H, q) , 4,95 (2H, m) , 5,78 (1H, m) , 7,15 (1H, m) , 7,30 (1H, m) , 7,50 (2H, m) 8,24 (1H. t) . 29

COMPOSTO XXXI

Adicionou-se 1- (O-acetilsaliciloilamino)-10-undeceno (6,59 g, 19,25 mmol, 1 equivalente) em diclorometano (108 ml) a uma mistura de água (108 ml), ácido sulfúrico (9 M, 13 ml), ácido acético glacial (2,16 ml) e cloreto de metiltrialquil (C8-Cio) amónio (0,32 g) (Adogen® 464, disponibilizado pela Aldrich Chemical Co.). Agitou-se vigorosamente a mistura num banho de gelo e adicionou-se permanganato de potássio (9,13 g, 57,75 mmol, 3 equivalentes) em porções durante 1,5 horas. Após a adição, removeu-se o banho de gelo e agitou-se a solução púrpura resultante à temperatura ambiente durante 20 horas. Arrefeceu-se a solução num banho de gelo e adicionou-se bissulfito de sódio (6,8 g) para dissipar o permanganato em excesso. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x 50 ml) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução salina (50 ml), foram secas e evaporadas. Adicionou-se ao resíduo hidróxido de sódio (2 M, 50 ml) e agitou-se o sistema durante 30 minutos. A solução foi diluída com água (50 ml), foi lavada com éter (50 ml) e acidificada para pH 1 com ácido clorídrico 2 M. Formou-se um sólido, que foi recolhido por filtração. A recristalização do sólido a partir de 65% MeOH/thO deu origem a XXXI na forma de um sólido castanho amarelado (2,78 g, 47% com base na amina).

As propriedades estão listadas abaixo. NMR (300 mHz, DMSO-d6) : δ 1,24 (10H, m largo), 1,51 (4H, m) , 2,17 (2H, t) , 3,27 (2H, m) , 6,86 (2H, m) , 7,37 (1H m) , 7,82 (1H, m) , 8,80 (1H. t), 11,95 (1H, s), 12,72 (1H, s) . 30

Os outros compostos da invenção podem ser facilmente preparados seguindo os procedimentos descritos nos Exemplos 1-2.

Exemplos 5-15 - Avaliação In Vivo da Hormona de Crescimento Recombinante em Ratos

Prepararam-se composições de dosagem misturando os aminoácidos modificados e hormona de crescimento humano recombinante (rhGH), como listado na Tabela 1 abaixo, numa solução tampão de fosfato a um pH de cerca de 7-8.

Administrou-se aos ratos a composição de dosagem por administração sublingual, gavagem oral, administração intra-duodenal ou administração colónica. Avaliou-se a distribuição utilizando um ensaio ELISA para a rhGH da Medix Biotech, Inc. Para a administração intra-colónica, preparou-se uma amostra que foi doseada em ratos em jejum a 25 mg/kg de transportador numa solução tamponada que continha propilenoglicol (0-50%) e 1 mg/kg de rhGH.

Os resultados estão ilustrados na Tabela 1 abaixo. Exemplo Comparativo 5A

Administrou-se a um rato rhGH (6 mg/ml) por gavagem oral e avaliou-se a distribuição de acordo com o procedimento do Exemplo 5.

Os resultados estão ilustrados na Tabela 1 abaixo. 31

Tabela 1 Distribuição In Vivo de rhGH Exemplo Trans portador Dose do Tiaiis-portador (mg/kg) Dose do Fármaeo <mg/kg) kíet.odo de Admin i str aç ào Média dos Uiveis Máximos no soro de rhOH (ng/ml) 5A nenhum 0 5 gral <10+/-t0 11 xtx 200 3 oral 60,02 + /-26,3 X!X 25 1 colónica •Ml-52+/-18.4 XIX 100 3 sublingual 119,14+/-650 14 XiX 25 1 intranasal 92(7+/-73,2 15 XXVti 25 1 colónica 73,72+M.Ô

Exemplos 16-27 - Avaliação In Vivo da Hormona de

Crescimento Recombinante em Ratos

Preparação de Soluções de Dosagem

Os agentes de distribuição foram reconstituídos com água destilada e ajustados para pH 7,2-8,0 com ácido clorídrico aquoso ou hidróxido de sódio aquoso. Preparou-se uma solução-mãe de rhGH misturando rhGH, D-manitol e glicina e dissolvendo esta mistura em 2% glicerol/água. Em seguida, a solução-mãe foi adicionada à solução do agente de distribuição. Estudaram-se várias razões entre agente de distribuição e agente activo.

Experiências in vivo

Ratos Sprague-Dawley machos com peso de 200-250 g jejuaram durante 24 horas e receberam cetamina (44 mg/kg) e clorpromazina (1,5 mg/kg) 15 minutos antes da dosagem. Administrou-se aos ratos uma das soluções de dosagem descritas acima por injecção subcutânea, instilação intranasal ou instilação sublingual. Recolheram-se amostras de sangue em série da artéria da cauda para determinar a concentração de cálcio no soro ou concentrações de rhGH no 32 soro. A dose de rhGH administrada nestas experiências foi 0,1 mg/kg.

As concentrações de rhGH no soro foram quantificadas com um estojo de teste de imunoensaio enzimático para a rhGH. Os resultados estão apresentados na Tabela 2 e Figuras 1 e 2.

Na Figura 2, os círculos representam a resposta após dosagem SL de uma solução aquosa de composto XIX e rhGH. Os quadrados representam a resposta após dosagem IN de uma solução aquosa do composto XIX e rhGH. Os triângulos representam a resposta após dosagem IC de uma solução aquosa do composto XIX e rhGH. A dose do composto XIX foi 25 mg/kg e a dose de rhGH foi 1 mg/kg.

Exemplo Comparativo 16A

Administrou-se a um rato rhGH (1 mg/kg) por gavagem oral e avaliou-se a distribuição de acordo com o procedimento do Exemplo 16.

Os resultados estão ilustrados na Tabela 2 abaixo.

Tabela 2 Aumento pelo Agente Humano Becombinante de Distribuição da Biodisponibilidade da Hormona de Crescimento (rhGH) Administrada por Administração Subcutânea Exemplo Agente de Distribuição Dose do Agente de Distribuição (mg/kg) [rhGH] Máxima no Soro (ng/ml) Ί ti XIX 1 i 0 22 ·*' 3 16A Nenhum 0,0 /. ·:·· ·τ» 17 XIX 2,5 25 .v 5 18 XIX £-'J 30 ,t 6 27 CÍX 1,0 18 r 3

Exemplos 28-33 - Avaliação In Vivo de Interferão em Ratos 33

Prepararam-se composições de dosagem misturando os compostos de aminoácidos modificados e interferão a2b, como listado na Tabela 3 abaixo, numa solução tampão de cloridrato Trizma® (Tris-HCl) a um pH de cerca de 7-8. Adicionou-se propilenoglicol (0-25%) como agente de solubilização, se necessário.

Administrou-se aos ratos a composição de dosagem por gavagem oral, administração intra-duodenal ou administração intra-colónica. Avaliou-se a distribuição utilizando um ensaio ELISA para o interferão α humano da Biosource, Inc.

Os resultados da administração intra-colónica estão ilustrados na Tabela 3 abaixo.

Exemplo Comparativo 28A

Administrou-se a ratos interferão a2b (250 μς/]ςς) de forma intra-colónica e avaliou-se a distribuição de acordo com o procedimento do Exemplo 14.

Os resultados estão ilustrados na Tabela 3 abaixo. TABELA 3 Distribuição In Vivo de Interferão por Administraçãointra-Colónica Exemplo Trans-port Ador Dose do Transportador (mg/kg) Dose de interferão 0¾)¾¾} Média dos Hiveis Máximos no Soro de Interferão (pg/ml) 28A nenhum 0 250 0 31 XiX 100 250 11193+ /-8553

Exemplos 34-37 - Avaliação In Vivo da Calcitonina de Salmão em Ratos

Prepararam-se composições de dosagem misturando os aminoácidos modificados e calcitonina de salmão como listado na Tabela 4 abaixo. Adicionaram-se 400 mg de transportador a 2,9 ml de propilenoglicol aquoso 25%. 34

Agitou-se a solução resultante e ajustou-se o pH para 7,2 com hidróxido de sódio (1,0 N) . Adicionou-se água para ajustar o volume total para 2,0 ml. A amostra tinha uma concentração final de transportador de 200 mg/ml. Adicionou-se calcitonina (10 μg) à solução. A concentração total de calcitonina foi 2,5 μg/ml.

Para cada amostra anestesiou-se um grupo de ratos em jejum. Administrou-se aos ratos a composição de dosagem por gavagem oral, instilação intra-colónica ou administração intra-duodenal. Recolheram-se amostras de sangue em série da artéria da cauda. Determinou-se o cálcio no soro por realização de testes com um Estojo de Cálcio (Sigma Chemical Company, St. Louis, Missouri, E.U.A.).

Os resultados estão ilustrados na Tabela 4 abaixo. TABELA 4 Distribuição In Vivo de Calcitonina Exemplo Trans portador Dose do Transportador (mg/kg) Dose do Fármaco (#9¾) Método de Administração Decréscimo Máximo do Cálcio no Soro (% inferior ao nivel de referência) 3 '6 XÍX 10 3 intra-colónica 28,49+/-12,3 37 XIX .200 7,5 oral 25,48+/-4 ,7

Exemplos 38-43 - Avaliação In Vivo da Calcitonina de Salmão em Ratos

Preparação da solução de dosagem

Os agentes de distribuição foram reconstituídos com água destilada e foram ajustados para pH 7,2-8,0 com ácido clorídrico aquoso ou hidróxido de sódio aquoso. Preparou-se uma solução-mãe de sCT dissolvendo sCT em ácido cítrico (0, 085 N) . Em seguida, a solução-mãe foi adicionada à solução do agente de distribuição. Estudaram-se várias 35 razões diferentes entre o agente de distribuição e o agente activo.

Experiências in vivo

Ratos Sprague-Dawley machos com peso de 200-250 g jejuaram durante 24 horas e receberam cetamina (44 mg/kg) e clorpromazina (1,5 mg/kg) 15 minutos antes da dosagem. Administrou-se aos ratos uma das soluções de dosagem descritas acima por injecção subcutânea. Recolheram-se amostras de sangue em série da artéria da cauda para determinar a concentração de cálcio no soro.

As concentrações de cálcio no soro foram quantificadas pelo método de complexona de o-cresolftaleína (Sigma) utilizando um espectrofotómetro de UV/VIS (Perkin Elmer). Os resultados estão apresentados na Tabela 5.

Exemplo 38A

Administrou-se a ratos calcitonina de salmão por gavagem oral e avaliou-se a distribuição de acordo com o procedimento do Exemplo 38. Os resultados estão apresentados na Tabela 5 abaixo.

Tabela 5 Aumento pelo Agente de Distribuição da Biodisponibilidade da Calcitonina de Salmão (sCT, doseada a 0,2 pg/kg) Administrada por Administração Subcutânea Exemplo Agente de Distribuição Dose do Agente de Distribuição (i*.g/kg) Decréscimo Percentual do Cálcio no Soro 38 XIX Ti 17 r 3 38A Nenhum 0 17·.!·. 2 39 XIX 20 25 £ 4 40 XÍX 200 25 v. 5 41 xtx 2000 265

Exemplos 44-50 - Avaliação In vivo de Heparina em Ratos 36

Prepararam-se composições de dosagem misturando os aminoácidos modificados e heparina como listado na Tabela 4. Num tubo de teste dissolveram-se 900 mg de transportador em 3 ml de propilenoglicol e dissolveram-se 0,299 g de heparina de sódio em 3 ml de água. Misturaram-se as soluções por vórtice. Adicionou-se hidróxido de sódio (10 M) à mistura resultante até se obter uma solução. Em seguida ajustou-se o pH para 7,4 +/- 0,5 com ácido clorídrico concentrado e submeteu-se a solução final a sonicação a 40°C durante 30 minutos. A um grupo de ratos em jejum e conscientes administraram-se as composições de dosagem por gavagem oral. Recolheram-se amostras de sangue por punção cardíaca após a administração de cetamina (44 mg/kg). Determinou-se a actividade da heparina utilizando o tempo de tromboplastina parcial activada (APTT) de acordo com o método de Henry, J. B., "Clinicai Diagnosis and Management by Laboratory Methods", Filadélfia, PA; WB Saunders (1979).

Os resultados estão ilustrados na Tabela 6 abaixo.

Exemplo Comparativo 44A

Administrou-se heparina (100 mg/kg) por gavagem oral a ratos e determinou-se a actividade da heparina de acordo com o procedimento do Exemplo 44.

Os resultados estão ilustrados na Tabela 6 abaixo. 37 TABELA δ Distribuição In Vivo de Heparina por Administração oral Exemplo Transpor tador Dose do Transportador (mg/kg) Dose do Fármaco (mg/kg) Média de APTT Mânimo (segundos) 44A nenhuma nenhuma 100 20,7 + /-0,17 48 K.:X 300 ; oo 119,99 + /-563 49 XXX! 50 25 127,56 + /- 22,97 50 XXX! 50 10 50,85 +/-9,1

Exemplo 51

Seguiu-se o método do Exemplo 4 4 substituindo a heparina por heparina de baixo peso molecular e variando as quantidades de propilenoglicol e água para a solubilização consoante o necessário.

Exemplos 50-58 - Avaliação In Vivo da Hormona Paratiróide em Ratos

Preparação de soluções de dosagem

Os agentes de distribuição foram reconstituídos com água destilada e/ou propilenoglicol e foram ajustados para um pH aparente de 7,2-8,0 com ácido clorídrico aquoso ou hidróxido de sódio aquoso. Preparou-se uma solução-mãe de hormona paratiróide dissolvendo hormona paratiróide em água. Em seguida, a solução de hormona paratiróide foi adicionada à solução do agente de distribuição. Estudaram-se várias razões diferentes entre o agente de distribuição e o agente activo.

Experiências in vivo

Ratos Sprague-Dawley machos com peso de 200-250 g jejuaram durante 24 horas e receberam cetamina (44 mg/kg) e clorpromazina (1,5 mg/kg) 15 minutos antes da dosagem. Administrou-se aos ratos uma das soluções de dosagem descritas acima por gavagem oral ou instilação intra- 38 colónica. Recolheram-se amostras de sangue em série da artéria da cauda para a determinação da concentração de hormona paratiróide no soro. As concentrações de hormona paratiróide no soro foram quantificadas com um estojo de teste de radioimunoensaio para a hormona paratiróide.

Administração Oral In Vivo A administração oral de soluções que continham hormona paratiróide (PTH) e os agentes de distribuição não a-aminoácidos foi testada in vivo em ratos. 0 resultado mostra um aumento significativo da biodisponibilidade oral de hormona paratiróide em comparação com a administração semelhante do agente activo isoladamente. Os dados estão apresentados na Tabela 7. TABELA 7 Aumento pelo Agente de Distribuição da Biodisponibilidade Oral da Hormona Paratiróide (PTH) Exemplo Trans portador Dose do Transportador mg/kg Método de Administração Dose do Agente Activo (μφ'Κφ) [PTH] Máxima no Soro (p-j/iiil) 51 XIX 100 lntra-eolóulca 25 130 ó 20 52 XIX 250 oral 100 75 v: 25 53 XIX 250 oral 25 20 6

Lisboa, 24 de Abril de 2007

Claims (22)

1. REIVINDICAÇÕES 1. Composto seleccionado do grupo que consiste em OH 0

   em que: IV 3 XIX 7 XXVII 10 XXVII i 8 XXÍX 6 XXX 11 XXXi 9

   em que: Composto Π LIV 2

   2 em que: Composto n Lííi 3 LVI 2:

   Composto CVI

   ou respectivos sais.
2. 2. Composição que compreende: a) um agente activo; b) um composto seleccionado do grupo que consiste em:

   3 em que: n IV XIX XXVÍi XXVIII XXIX XXX. XXX! ‘6 7 10 8 6 11 9

   V 0 OH em que: Composto n UI LliV em que:

   O Composto π Li LVI 4

   Composto CVI
3. 3. Composição de acordo com a Reivindicação 2, em que o referido agente activo é seleccionado do grupo que consiste num agente biologicamente activo e um agente quimicamente activo.
4. 4. Composição de acordo com a Reivindicação 3, em que o referido agente biologicamente activo é seleccionado do grupo que consiste num péptido, um mucopolissacárido, um hidrato de carbono, um lipido, um pesticida ou qualquer combinação destes.
5. 5. Composição de acordo com a Reivindicação 4, em que o referido agente biologicamente activo é seleccionado do grupo que consiste em hormona de crescimento humano, hormona de crescimento bovino, hormona de libertação da 5 hormona de crescimento, um interferão, interleuquina-II, insulina, heparina, calcitonina, eritropoietina, factor natriurético atrial, um antigene, um anticorpo monoclonal, somatostatina, adrenocorticotropina, hormona de libertação da gonadotropina, oxitocina, vasopressina, cromolina sódica, vancomicina, hormona paratiróide, desferrioxamina (DFO) ou qualquer combinação destes.
6. 6. Composição de acordo com a Reivindicação 2, em que a referida composição é adequada para ser administrada oralmente, intranasalmente, sublingualmente, intra-duodenalmente, intramuscularmente ou subcutaneamente a um animal necessitado de um agente activo.
7. 7. Composição de acordo com a Reivindicação 6, em que o agente activo é um agente biologicamente activo e a composição é adequada para ser administrada oralmente a um animal.
8. 8. Forma galénica unitária que compreende: (A) uma composição como definida na Reivindicação 2 e (B) (a) um excipiente, (b) um diluente, (c) um desintegrador, (d) um lubrificante, (e) um plastificante, (f) um corante, (g) um veiculo de dosagem ou (h) qualquer combinação destes.
9. 9. Forma galénica unitária de acordo com a Reivindicação 8, que compreende uma pastilha, uma cápsula ou um liquido. 6
10. 10. Método para preparar uma composição, cujo método compreende misturar: (A) pelo menos um agente biologicamente activo; (B) pelo menos um composto como definido na Reivindicação 1, e (C) opcionalmente, um veiculo de dosagem.
11. 11. Composto de acordo com a Reivindicação 1 com a fórmula seguinte:

    Composto XXXI ou respectivo sal.
12. 12. Composição de acordo com a Reivindicação 3, que compreende: (a) composto com a fórmula seguinte:

    ou respectivo sal, e (b) um agente biologicamente activo.
13. 13. Composição da Reivindicação 12, em que o agente biologicamente activo é heparina.
14. 14. Composto de acordo com a Reivindicação 1 com a fórmula seguinte: 7 7

    Composto XIX ou respectivo sal. que
15. 15. Composição de acordo com a Reivindicação 3, compreende: (a) um composto com a fórmula seguinte:

    ou respectivo sal, e (b) um agente biologicamente activo.
16. 16. Composição da Reivindicação 15, em que o agente biologicamente activo é hormona de crescimento humano.
17. 17. Composição da Reivindicação 15, em que o agente biologicamente activo é interferão.
18. 18. Composição da Reivindicação 15, em que o agente biologicamente activo é calcitonina.
19. 19. Composição da Reivindicação 18, em que o agente biologicamente activo é calcitonina de salmão.
20. 20. Composição da Reivindicação 15, em que o agente biologicamente activo é heparina. 8
21. 21. Composição de acordo com qualquer uma das Reivindicações 12, 13, 15 até 20, cuja composição é adequada para ser administrada oralmente.
22. 22. Composição de acordo com a Reivindicação 3, que compreende um composto com a fórmula seguinte: OH O

    Composto XIX ou respectivo sal, e hormona paratiróide. Lisboa, 24 de Abril de 2007