JPH05268986A - モノクローナル抗体及びリンパ球の活性法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【目的】ヒトの主要組織適合性複合（ＭＨＣ）クラスＩ
分子に見出だされるＨＬＡ決定因子と反応性のＭａｂ４
−１０と名付けられたモノクローナル抗体を提供。 【構成】協同刺激剤を要することなくリンパ球を活性化
するハイブリドーマＡＴＣＣＮｏ．ＨＢ１０３５５によ
り生成したＭＨＣクラスＩ分子と反応性の４−１０と名
付けられたモノクローナル抗体に関する。又リンパ球を
固定化モノクローナル抗体（Ｍａｂ）４−１０と接触す
ることにより、又は少ない数の付着性細胞の存在下リン
パ球をＭａｂ４−１０と接触することにより、リンパ球
好ましくはＴ細胞を活性化する。 【効果】Ｍａｂ４−１０は、休止細胞に対して直接に細
胞分裂促進性であり、協同刺激の他のどんな形も必要と
しない。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、リンパ球を活性化する
方法に関し、さらに詳しくはＴ細胞を活性化するための
主要組織適合性複合（ＭＨＣ）クラスＩ分子と反応性の
モノクローナル抗体の用途に関する。

【０００２】

【従来の技術】「Ｔ細胞」としても知られているＴリン
パ球は、少なくとも二つのやり方で免疫応答を仲介す
る。細胞毒性Ｔ細胞は、特定の標的細胞の溶解に関係
し、一方ヘルパーＴ細胞は、Ｂ細胞の増殖及び分化を助
け、抗原特異性抗体の生成を導く（Ｋｉｍｂａｌｌ編、
Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ
ｙ、第２版、１１〜１３章、Ｍａｃｍｉｌｌａｎ Ｐｕ
ｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．（１９８６））。

【０００３】ＣＤ抗原は、その機能がこれらの抗原につ
いて統一した命名を与えることにあるＩｎｔｅｒｎａｔ
ｉｏｎａｌ Ｗｏｒｋｓｈｏｐにより命名されたよう
に、細胞の表面上のモノクローナル抗体（Ｍａｂ）の反
応性により規定される天然に生ずる細胞表面分化抗原で
ある（ＭｃＭｉｃｈａｅｌ編、Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｔ
ｙｐｉｎｇ ＩＩＩ、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉ
ｔｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘ−ｆｏｒｄ、英国（１９８７）
参照）。周知のＣＤ抗原は、汎Ｔ抗原、ＣＤ３、ＣＤ
２、ＣＤ５、ＣＤ６及びＣＤ７、ヘルパーＴ細胞サブセ
ットに特異性のＣＤ抗原、ＣＤ４及びサプレッサーＴ細
胞サブセットに特異性のＣＤ抗原、ＣＤ８を含む（Ｌｅ
ｄｂｅｔｔｅｒら、Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ ｉｎ
Ｉｍｍｕｎｏ−ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏ
ｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ、６巻、Ｈｅｉｓｅ編、Ｌ
ｙｍｐｈｏｃｙｔｅ Ｓｕｒｆａｃｅ Ａｎｔｉｇｅｎ
ｓ、３２５〜４０ページ、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉ
ｅｔｙ ｆｏｒ Ｈｉｓｔｏ−ｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉ
ｔｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ、Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ、（１９８４））。ＣＤ２８は、Ｔ細胞の多く
に存在する抗原である（Ｙａｍａｄａら、Ｅｕｒ．Ｊ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：１１６４〜１１６９（１９８
５））。これらのＣＤ抗原は、受容体として機能すると
考えられ、Ｔ細胞のシグナル形質導入に関係している
が、Ｔ細胞活性化（リンパ球のシグナル形質導入及び増
殖）におけるそれらの正確な機能は、知られていない。

【０００４】Ｔ細胞は、活性化されて、抗原をもたらす
細胞上の抗原と、Ｔ細胞の表面上のＴ細胞受容体（Ｔ
ｉ）及びその結合したＣＤ３複合体（ＣＤ３／Ｔｉ受容
体複合体とも呼ばれる）の相互反応を経てそれらの機能
を行なう（Ｒｅｉｎｈｅｒｚら、「Ｃｌｏｎｏｔｙｐｉ
ｃ Ｓｕｒｆａｃｅ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｎ Ｈｕ
ｍａｎ Ｔ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ：Ｆｕｎｃｔｉｏ
ｎａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｎａｌｙ
ｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ Ａｎｔｉｇｅｎ Ｒｅｃｅｐｔ
ｏｒ Ｃｏｍｐｌｅｘ」、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．８
１：９５〜１２９（１９８４））。一般に、Ｔ細胞は、
抗原が抗原をもたらす細胞上の特別な主要組織適合性複
合体（ＭＨＣ）をエンコードした抗原と結合するときの
み、抗原に応答することが観察された。ヒトの主要組織
適合性複合体（ＭＨＣ）は、二三の構造的に関連のある
遺伝子座よりなる。これらの遺伝子座の一つの遺伝子生
成物であるＭＨＣクラスＩは、β_２−ミクログロブリン
として知られている不変の１２０００ダルトンの蛋白と
非共有的に結合した４５０００ダルトンの高度に多形性
細胞表面糖蛋白よりなる。これらの２個の蛋白により形
成された複合体は、殆どすべての有核細胞で発現される
（Ｐｌｏｅｇｈら、「ＭａｊｏｒＨｉｓｔｏｃｏｍｐａ
ｔｉｂｉｌｉｔｙ Ａｎｔｉｇｅｎｓ、ｔｈｅ ｈｕｍ
−ａｎ （ＨＬＡ−Ａ、−Ｂ、−Ｃ） ａｎｄ ｍｕｒ
ｉｎｅ （Ｈ−２Ｋ、Ｈ−２Ｄ） Ｃｌａｓｓ Ｉ Ｍ
ｏｌｅｃｕｌｅｓ」、Ｃｅｌｌ２４：２８７（１９８
１））。免疫遺伝学及び血清学により始め移植抗原とし
て規定されたが（Ｍｅｓｃｈｅｒ、「Ｈｉｓｔｏｃｏｍ
ｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ Ａｎｔｉｇｅｎｓ：Ｓｔｒｕｃ
ｔｕｒｅ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ」、Ｐａｒｈａｍ
ら編、Ｃｈａｐｍａｎ ａｎｄ Ｈａｌｌ、Ｌｏｎｄｏ
ｎ、５３〜８３ページ（１９８２））、ＭＨＣクラスＩ
分子複合体は、インスリン、グルカゴン、ソマトスタチ
ン、表皮成長因子（ＥＧＦ）及びインターロイキン−２
（ＩＬ−２）に対する受容体を含む種々のホルモン受容
体と結合することが示された（Ｄｕｅら、「Ｔｈｅ Ｍ
ａｊｏｒ Ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ Ｃ
ｏｍｐｌ−ｅｘ Ｃｌａｓｓ Ｉ Ｈｅａｖｙ Ｃｈａ
ｉｎ ａｓ ａ ｓｔｒｕｃｔｕ−ｒａｌ Ｓｕｂｕｎ
ｉｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｈｕｍａｎ Ｃｅｌｌ Ｍｅｍｂ
ｒ−ａｎｅ Ｉｎｓｕｌｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ：Ｉｍ
ｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｆｏｒｔｈｅ Ｒａｎｇｅ ｏｆ
Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ
Ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ Ａｎｔｉｇｅ
ｎｓ」、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
（Ｕ．Ｓ．Ａ．）８３：６００７（１９８６）；Ｓｃｈ
ｒｅｉｂｅｒら、「Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ Ｂｅｔ
ｗｅｅｎ Ｍａ−ｊｏｒ Ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂ
ｉｌｉｔｙ Ｃｏｍｐｌｅｘ Ａｎｔｉ−ｇｅｎｓ ａ
ｎｄ Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏ
ｒ Ｒｅ−ｃｅｐｔｏｒｓ ｏｎ Ｈｕｍａｎ Ｃｅｌ
ｌｓ」、Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．９８：７２５（１９
８４）；Ｓｉｍｏｎｓｅｎら、「Ｃｏｍｐｏｕｎｄ Ｒ
ｅ−ｃｅｐｔｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｃｅｌｌ Ｍｅｍ
ｂｒａｎｅ：Ｒｕｍｉｎａ−ｔｉｏｎｓ ｆｒｏｍ ｔ
ｈｅ Ｂｏｒｄｅｒｌａｎｄ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏ−ｌ
ｏｇｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ」、Ｐｒｏｇ．
Ａｌｌｅｒｇｙ ３６：１５１（１９８５）；及びＳｈ
ａｒｏｎら、「Ｐｏｓｓｉｂｌｅ Ａｓｓｏ−ｃｉａｔ
ｉｏｎｓ Ｂｅｔｗｅｅｎ ＩＬ−２ Ｒｅｃｅｐｔｏ
ｒｓ ａｎｄＣｌａｓｓ Ｉ ＨＬＡ Ｍｏｌｅｃｕｌ
ｅｓ ｏｎ Ｔ ｃｅｌｌｓ」、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．
１４１：３５１２（１９８８））。

【０００５】抗原のＴ細胞認識は、抗原と結合したＭＨ
Ｃをエンコードした生成物の群により制限されると云わ
れる。このＭＨＣ制限の結果は、細胞毒性Ｔ細胞がクラ
スＩＭＨＣ抗原分子と結合した抗原により活性化され、
ヘルパーＴ細胞がクラスＩＩＭＨＣ分子と結合した抗原
により活性化されることになる（Ｋｉｍｂａｌｌ、前
述）。最近、クラスＩ抗原が活性化ヒトＴ細胞上のＣＤ
８と結合することが示された（Ｂｕｓｈｋｉｎら、「Ｐ
ｈｙｓｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｂｅ−ｔｗ
ｅｅｎ ｔｈｅ ＣＤ８ ａｎｄ ＨＬＡ Ｃｌａｓｓ
Ｉ Ｍｏｌｅｃ−ｕｌｅｓ ｏｎ ｔｈｅ Ｓｕｒｆ
ａｃｅ ｏｆ Ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｈｕ−ｍａｎ Ｔ
Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ」、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：３９８５（１９８
８））。他の研究は、ＣＤ８がｐ５６^ｌｃｋと名付けら
れた細胞内蛋白チロシンキナーゼと結合することを示し
ている（Ｖｉｅｌｌｅｔｔｅら、「Ｔｈｅ ＣＤ４ ａ
ｎｄ ＣＤ８ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｓｕｒｆａｃｅ Ａｎｔ
ｉｇｅｎｓ ａｒｅ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ
ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｔｙ
ｒｏｓｉｎｅ−Ｐｒｏｔ−ｅｉｎ Ｋｉｎａｓｅ ｐ５
６^ｌｃｋ」、Ｃｅｌｌ５６：３０１（１９８８））。Ｔ
細胞受容体の成分のチロシンのリン酸化は、Ｔ細胞の活
性化を調節するのに助けになると思われ、ｐ５６^ｌｃｋ
がこの工程に関与することを示唆する或る証拠がある
（Ｖｉｅｌｌｅｔｔｅら、「Ｓｉｇｎａｌ Ｔｒａｎｓ
ｄｕｃｔｉｏｎＴｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ＣＤ４ Ｒｅ
ｃｅｐｔｏｒ Ｉｎｖｏｌｖｅｓ ｔｈｅ Ａｃｔｉｖ
ａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｍ
ｂ−ｒａｎｅ Ｔｙｒｏｓｉｎｅ−Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｋ
ｉｎａｓｅ ｐ５６^ｌｃｋ」Ｎａｔｕｒｅ ３３８：２
５７（１９８９））。

【０００６】二三の実験室は、ＭＨＣクラスＩ抗原への
モノクローナル抗体が末梢Ｔ細胞、Ｔ細胞系及びＩＬ−
２依存Ｔ細胞クローンにおける活性化シグナルを伝達す
ることを示した（Ｇｅｐｐｅｒｔら、「Ａｃｔｉｖａｔ
ｉｏｎ ｏｆ ＨｕｍａｎＴ４ Ｃｅｌｌｓ ｂｙ Ｃ
ｒｏｓｓｌｉｎｋｉｎｇ Ｃｌａｓｓ Ｉ ＭＨＣＭｏ
ｌｅｃｕｌｅｓ」、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：２１
５５（１９８８）；Ｇｅｐｐｅｒｔら、「Ａｃｔｉｖａ
ｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｔ ＣｅｌｌＣｌｏｎｅ
ｓ ａｎｄ Ｊｕｒｋａｔ Ｃｅｌｌｓ ｂｙ Ｃｒｏ
ｓｓｌｉｎ−ｋｉｎｇ Ｃｌａｓｓ Ｉ ＭＨＣ Ｍｏ
ｌｅｃｕｌｅｓ」、Ｊ．Ｉｍｍｕｎ−ｎｏｌ．１４２：
３７６３（１９８９）；Ｇｉｌｌｉｌａｎｄら、「Ｓｉ
ｇｎ−ａｌ Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ Ｌｙｍ
ｐｈｏｃｙｔｅ Ａｃｔｉ−ｖａｔｉｏｎ Ｔｈｒｏｕ
ｇｈ Ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｉｎｇ ｏｆ ＨＬＡＣｌａ
ｓｓ Ｉ Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ」、Ｈｕｍａｎ Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．２５：２６９（１９８９））。その上、ＭＨ
Ｃクラス１抗原の橋かけは、追加の刺激剤なしにＩＬ−
２依存クローンにおける、又はホルボールエステル或い
はクラスＩに対する抗ＣＤ３ Ｍａｂの何れかにより同
時に刺激された休止Ｔ細胞におけるＴ細胞の増殖を導く
（Ｇｅｐｐｅｒｔ、上述、１９８９）。これらの研究
は、ＭＨＣクラスＩ分子が、リンパ球の調節において以
前考えられていたのよりもより複雑な役割を演じ、そし
てＭＨＣクラスＩ抗原が、リンパ球の活性化を調節する
シグナル形質導入の経路に直接含まれるという必然的な
証拠をもたらす。しかし、全部の抗ＭＨＣクラスＩ抗体
がこの可能性を有するとは限らない。

【０００７】クラスＩ分子に対する機能的に独特な単形
態性決定因子に関する証拠が、最近発表された。これら
のデータは、けっ歯類Ｔ細胞で発現されたＱａ−２抗原
（ＭＨＣクラスＩ分子）と反応性の抗体が、もしそれら
がＱａ−２分子のアルファー３領域と反応するならば、
増殖のみを導入することが出来ることを示している（Ｈ
ａｈｎら、「Ａｎｔｉ−Ｑａ−２ Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｔ
Ｃｅｌｌ Ａｃ−ｔｉｖａｔｉｏｎ． Ｔｈｅ Ｐａ
ｒａｍｅｔｅｒｓ ｏｆ Ａｃｔｉｖａ−ｔｉｏｎ，ｔ
ｈｅ Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｔｏｇｅｎｉ
ｃ ａｎｄＮｏｎｍｉｔｏｇｅｎｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄ
ｉｅｓ，ａｎｄ ｔｈｅ Ｄｉ−ｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ
Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ＣＤ４^＋ ｖｓ ＣＤ８^＋
ＴＣｅｌｌｓ」、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４３：４０７
（１９８９））。

【０００８】腫瘍細胞を攻撃するように刺激された白血
球特にリンパ球を用いる免疫療法は、癌に対する療法の
期待出来る方法である。この方法の一つは、獲得免疫療
法であり、その場合、リンパ球はインターロイキン−２
（ＩＬ−２）により生体外で刺激されて成長し細胞毒性
となり、次に生物に再導入されて腫瘍細胞と闘うことに
なる（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら、「Ａ Ｎｅｗ Ａｐｐｒ
ｏａｃｈ ｔｏ ｔｈｅ Ａｄｏｐｔｉｖｅ Ｉｍｍｕ
ｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ ｗｉｔｈ
Ｔｕｍｏｒ−Ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ Ｌｙｍｐｈｏ
ｃｙｔｅｓ」、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２３：１３１８〜１
３２１（１９８６））。腫瘍細胞を攻撃するためにリン
パ球を刺激する方法は、周知である。例えば、活性化Ｔ
細胞は、天然キラー（ＮＫ）欠損Ｔ細胞のフィトーヘマ
グルチニン（ＰＨＡ）刺激又は精製したＴ細胞のＩＬ−
２刺激を用いて、腫瘍細胞に対して溶解性になることが
報告されている。Ｔｈｉｅｌｅら、「Ａｎｔｉ−ＣＤ３
ａｎｄ Ｔｈｏｒ−ｂｏｌ Ｍｙｒｉｓｔａｔｅ Ａ
ｃｅｔａｔｅ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＭＨＣ
ｕｎｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｃｙｔｏｔ
ｏｘｉｃｉ−ｔｙ」、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１４０：
３２５３（１９８８）；Ｃａｌａｍ−ｏｎｉｃｉら、
「ＩＬ−２−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ
ｏｆ ＣＤ３^＋ Ｌａｒｇｅ Ｇｒａｎｕｌａｒ Ｌ
ｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ Ｅｘｐｒ−ｅｓｓｉｎｇ Ｔ
Ｃｅｌｌ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ−δ△」、Ｊ．Ｉｍｍｕ−
ｎｏｌ．１４０：２５２７（１９８８）；及びＤａｍｌ
ｅら、「Ｉｎｔｅｒ−ｌｅｕｋｉｎ−２−Ａｃｔｉｖａ
ｔｅｄ Ｈｕｍａｎ Ｋｉｌｌｅｒ Ｃｅ−ｌｌｓ ａ
ｒｅ Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｆｒｏｍ Ｐｈｅｎｏｔｙｐｉ
ｃａｌｌｙ Ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓ Ｐｒｅｃｕ
ｒｓｏｒｓ」、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：２８１４
（１９８６））。

【０００９】リンパ球を活性化するためにＭＨＣクラス
Ｉ抗原と反応性の新しい抗体を得るのが有用である。
又、協同刺激剤を要することなく腫瘍細胞を攻撃するた
めにＴ細胞を活性化する方法を見付けることが望まし
い。

【００１０】

【発明の概要】従って、本発明は、協同刺激剤を要する
ことなくリンパ球を活性化するハイプリドーマＡＴＣＣ
Ｎｏ．ＨＢ１０３５５により生成したＭＨＣクラスＩ
分子と反応性の４−１０と名付けられたモノクローナル
抗体を提供する。本発明は、又好ましくはリンパ球を固
定化モノクローナル抗体（Ｍａｂ）４−１０と接触する
ことにより、又は少ない数の付着性細胞の存在下リンパ
球をＭａｂ４−１０と接触することにより、リンパ球好
ましくはＴ細胞を活性化する方法を提供する。Ｍａｂ４
−１０は、休止細胞に対して直接に細胞分裂促進性であ
り、協同刺激の他のどんな形も必要としない。Ｍａｂ４
−１０は、ＭＨＣクラスＩ抗原の新規なＨＬＡ決定因子
を認識するように思われる。

【００１１】図１は、下記の実施例に記載された、ＳＤ
Ｓ−ＰＡＧＥを還元することにより分離された種々のＭ
ａｂの免疫沈降物のオートラジオグラフである。（第１
の実験から：Ｍａｂ４−１０（レーン２）、Ｗ６／３２
（レーン４）、２ＴＥ．２０５（レーン７）及び１Ｔ．
Ｂ７２（レーン８）；そして第２の実験から：ＭａｂＷ
６／３２（レーン９）、Ｍａｂ４−１０（レーン１１）
及びＭａｂ４−１０によりプレクレアーされしかも免疫
沈降されたＷ６／３２（レーン１３））。

【００１２】図２は、下記の実施例に記載された、Ｍａ
ｂ抗ＣＤ３及びＲＡＭＩｇＧ（▲黒四角▼−▲黒四角
▼）；Ｍａｂ４−１０及びＲＡＭＩｇＧ（●−●）；Ｍ
ａｂ抗ＣＤ３及びＭａｂ４−１０及びＲＡＭＩｇＧ（◆
−◆）；及びＭａｂ４−１０のみ（▲−▲）による刺激
後の休止末梢Ｔ細胞におけるカルシウムの動員を示すグ
ラフである。

【００１３】図３は、下記の実施例に記載された、刺激
後７２時間の［^３Ｈ］−チミジン配合により測定された
Ｍａｂ４−１０誘導Ｔ細胞の増殖を示すグラフである。
（Ｍａｂ抗−ＣＤ３（▲黒四角▼−▲黒四角▼）、Ｍａ
ｂ４−１０（●−●）、Ｍａｂ Ｗ６／３２（◆−
◆）、Ｍａｂ抗−ＣＤ５（○−○）又はＭａｂ抗−ＣＤ
２８（▲− ▲）により刺激されたＴ細胞）。

【００１４】図４は、下記の実施例に記載された、Ｍａ
ｂ４−１０誘導増殖のカイネティクスのグラフである。
（細胞は、Ｍａｂ吸着Ｍａｂ抗ＣＤ３（▲黒四角▼−▲
黒四角▼）、Ｍａｂ抗ＣＤ２８（○−○）；又はＭａｂ
４−１０（●−●）とともに培養された））。

【００１５】図５は、下記の実施例に記載された、Ｍａ
ｂ４−１０のフラグメントのＴ細胞増殖に対する効果を
示すグラフである。（５Ａ：Ｔ細胞は、Ｍａｂ４−１０
の固定化（Ｆ（ａｂ’）_２フラグメント（●−●）；全
分子Ｍａｂ４−１０（○−○）又はＭａｂ Ｗ６／３２
（▲黒四角▼−▲黒四角▼）に加えられた；５Ｂ：Ｔ細
胞は、Ｍａｂ４−１０の吸着したＦ（ａｂ’）_２フラグ
メント（▲黒四角▼−▲黒四角▼）；吸着された一価Ｆ
ａｂ４−１０（○−○）；又は３００ｎｇ／穴で可溶性
Ｆａｂ４−１０を含む吸着したＦ（ａｂ’）_２（△−
△）に加えられた）。

【００１６】図６は、下記の実施例に記載された、マク
ロファージの存在下の［^３Ｈ］−チミジン配合により測
定されたＴ細胞増殖に対する可溶性Ｍａｂ４−１０の効
果のグラフである。（６Ａ：２％のマクロファージを含
むＴ細胞を、吸着したＭａｂ４−１０（□−□）；Ｍａ
ｂ１Ｔ．Ｂ７２（△−△）；Ｍａｂ９．３（●−●）又
は可溶性Ｍａｂ４−１０（▲黒四角▼−▲黒四角▼）に
加えた；６Ｂ：２％のマクロファージを含むＴ細胞を、
吸着したＭａｂ４−１０（▲黒四角▼−▲黒四角▼）；
可溶性Ｍａｂ４−１０（▲−▲）；吸着したＷ６／３２
（△−△）；又は可溶性Ｆ（ａｂ’）_２４−１０（●−
●）に加えた）。

【００１７】図７は、下記の実施例に記載された、［^３
Ｈ］−チミジン配合により測定されたＴ細胞増殖に対す
るＭＨＣクラスＩ抗原及びＣＤ８の同時橋かけの効果の
グラフである。（Ｔ細胞を、吸着したＭａｂ４−１０の
み（▲黒四角▼−▲黒四角▼）；Ｍａｂ ＯＫＴ６のみ
（▲−▲）；Ｍａｂ４−１０及びＭａｂ ＯＫＴ６（●
−●）；ＭａｂＯＫＴ４Ｄ（□−□）又はＭａｂ ＯＫ
Ｔ８Ａ（△−△）とともに培養した）。

【００１８】図８は、下記の実施例に記載された、［^３
Ｈ］−チミジン配合により測定されたＣＤ４^＋（▲黒四
角▼−▲黒四角▼）又はＣＤ８^＋（●−●）の精製した
集団に対する固定化Ｍａｂ４−１０の効果のグラフであ
る。

【００１９】図９は、Ｍａｂ４−１０によりＣＤ４^＋Ｔ
細胞の活性化に対するＭａｂ抗−ＣＤ４の効果のグラフ
である。（ＣＤ４^＋Ｔ細胞は、吸着したＭａｂ４−１０
（●−●）；吸着したＭａｂ４−１０及びＭａｂ抗ＣＤ
４（○−○）；又は吸着したＭａｂ及び吸着したＭａｂ
抗ＣＤ１（▲黒四角▼−▲黒四角▼）の存在下培養され
た）。

【００２０】図１０は、下記の実施例に記載された、Ｍ
ａｂ４−１０活性化Ｔ細胞のフロー・サイトメトリーの
分析のグラフである。

【００２１】図１１は、下記の実施例に記載された、抗
クラスＩＭａｂのパネルを用いるＭＨＣクラスＩ抗原の
クロスブロッキングの評価を示す棒グラフである。

【００２２】本明細書に記載された本発明をより詳しく
理解するために、下記の詳細な記述が示される。

【００２３】本発明は、ヒトの主要組織適合性複合（Ｍ
ＨＣ）クラスＩ分子に見出だされるＨＬＡ決定因子と反
応性の、Ｍａｂ４−１０と名付けられたモノクローナル
抗体に関する。Ｍａｂ４−１０は、協同刺激剤を必要と
することなく疾患を治療するのに、改良した細胞免疫応
答のためにリンパ球を活性化するのに用いることができ
る。

【００２４】Ｍａｂ４−１０は、交雑のパートナーの一
つとして、免疫化した宿主動物好ましくはマウスから、
抗体生成細胞例えば脾臓又はリンパ球様細胞を用いて、
Ｋｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎ、Ｎａｔｕｒｅ ２
６５：４９５（１９７５）の体細胞交雑の技術に従って
一般に作ることができる。Ｍａｂを生成する方法は、免
疫原としてヒト扁桃リンパ球を用いてＭｉｔｔｌｅｒ
ら、「Ｇｅｎｅ−ｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃ
ｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｏｎｏ−ｃｌｏｎａｌ
Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｒｅａｃｔｉｖｅ ｗｉｔｈ
Ｈｕ−ｍａｎ Ｂ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ」、Ｊ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３１：１７５４（１９８３）により
記載された方法に従って、下記の実施例１に記載されて
いる。融合は、免疫化したＣＡＦ_１マウスからの脾臓を
用いて行なわれる。免疫化マウスから得られた抗体生成
細胞は、融合剤例えば１０００〜６０００ダルトンの大
体のＭｒを有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を
用いて、適切な癌（骨髄腫）細胞系Ｐ３Ｕ１と交雑（融
合）される。選択的培地例えばＨＡＴ培地（Ｌｉｔｔｌ
ｅｆｉｌｄ、Ｓｃｉｅｎｃｅ １４５：７０９（１９６
９））に対して感作性の骨髄腫細胞系は、有効に融合
し、高度の安定なレベルの発現を支持し、その交雑パー
トナーによる抗体の分泌が用いられる。全ての種類から
の骨髄腫細胞が用いられるが、これらの特徴を有するけ
っ歯類及びラットの骨髄腫系が好ましい。これらの系の
例は、Ｓａｌｋ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ＣｅｌｌＤｉｓ
ｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ、Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ
１８０９、ＳａｎＤｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、
９２１１２から入手できるオリジナルＭＯＰＣ−２１及
びＭＰＣ−１１マウス腫瘍から由来するものである。約
１：１０〜約１０：１の範囲の骨髄腫細胞：抗体生成細
胞の比が、通常用いられる。個々の細胞の濃度は、概し
て約１０^６〜１０^８の範囲にあり、好ましくは１×１０
^７〜５×１０^７細胞／ｍｌ融合培地の範囲である。約３
０〜６０％（ｗ／ｖ）及び好ましくは３５％（ｗ／ｖ）
の融合剤を含むバランスした塩の溶液が融合培地として
用いられる。融合後、細胞は融合剤を除くために融合剤
のない培地により洗浄される。それらは、次に選択的培
地に接種され培養されて、非交雑原細胞を除き、選択的
培地に抵抗性のあるハイブリッドのみを残し、そして骨
髄腫原細胞の不死性を有する。培養は、通常約３〜５週
間を要する。

【００２５】生存ハイブリドーマは、間接免疫蛍光法及
びフロー・サイトメトリーにより又は酵素結合免疫吸着
アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によりＭＨＣクラスＩ抗原に対
する抗体の生成について検査される。ポジティブなハイ
ブリドーマ・クローンは、制限希釈法によりサブクロー
ンされる。サブクローンにより分泌されたモノクローナ
ル抗体４−１０は、周知の技術例えば硫酸アンモニウム
沈殿、ゲル濾過クロマトグラフ、ＤＥＡＥセルロースク
ロマトグラフィ、蛋白Ａ又はアフィニティクロマトグラ
フィにより、生体内で成長したとき、培地又は腹水から
分離できる。所望ならば、抗体をさらに精製すること
は、超遠心分離及びミクロ濾過により達成できる。

【００２６】Ｍａｂ４−１０は、生物学的物質の寄託に
関するブタペスト協定の規定に従ってｔｈｅ Ａｍｅｒ
ｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔ
ｉ−ｏｎ（ＡＴＣＣ）、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤに寄
託され、次の寄託番号を与えられた。ハイブリドーマ；
４−１０、ＡＴＣＣ番号；ＨＢ１０３５５、寄託日；１
９９０年２月１３日。

【００２７】予想されないことであるが、Ｍａｂ４−１
０は、抗ＣＤ３抗体、インターロイキン−２（ＩＬ−
２）又はホルボール−１２−ミリステート−１３−アセ
テート（ＰＭＡ）のような剤による協同刺激を要するこ
となくリンパ球例えばＴ細胞を活性化する。活性化は、
約０．５〜約２％の付着性細胞の存在下固定化Ｍａｂ４
−１０又はＭａｂ４−１０とＴ細胞を接触することによ
り達成できる。Ｍａｂ４−１０及びＴ細胞活性化のその
使用は、休止末梢血液Ｔ細胞が固定化Ｍａｂ４−１０と
のインキュベーションにより生体内で活性化できる好ま
しい態様により例示される。固定化Ｍａｂ４−１０によ
るＴ細胞の処理は、細胞内のカルシウム動員の顕著な増
大により示されるような、休止Ｔ細胞におけるシグナル
形質導入を生じた。さらに、Ｍａｂ４−１０によるＴ細
胞の活性化は、ＩＬ−２受容体の急速な発現、ＭＨＣク
ラスＩ抗原の上方調節及びＴｉ−ＣＤ３複合体の下方調
節を誘発した。Ｍａｂ４−１０は、又下記に示されるク
ロスブロッキング実験及び免疫蛍光滴定曲線により示さ
れるように、新規なＭＨＣクラスＩ決定因子を認識する
ように見える。

【００２８】他の好ましい態様において、付着性細胞
（マクロファージ）の存在下のＭａｂ４−１０及び可溶
性Ｍａｂ４−１０の固定化Ｆ（ａｂ’）_２フラグメント
は、休止Ｔ細胞に増殖を誘発することが示された。固定
化抗ＣＤ８Ｍａｂは、Ｍａｂ４−１０誘発Ｔ細胞増殖を
阻害した。さらに、Ｍａｂ４−１０は、ＣＤ４^＋Ｔ細胞
に比べて、ＣＤ８^＋Ｔ細胞を優先的に活性化することを
示した。又、他の抗クラスＩＭａｂが、投与量依存の関
係でＴ細胞の活性化にＭａｂ４−１０により補強され、
Ｍａｂ４−１０によるＴ細胞の活性化は抗ＣＤ３又は抗
ＣＤ２８Ｍａｂとの同時の橋かけにより増強できること
が立証された。

【００２９】Ｍａｂ４−１０及び本発明の組成物は、リ
ンパ球の活性化に有用であり、それ故疾患の症状例えば
感染、疾患、癌、ＡＩＤＳ及び自己免疫障害における細
胞免疫応答を調節するのに使用される。Ｍａｂ４−１０
は、Ｔ細胞の欠損又は調節不能がある疾患の症状におけ
る細胞免疫応答の調節に特に有用である。

【００３０】本発明は、又疾患の症状における細胞免疫
応答の調節のために生体内又は生体外の何れかでＭａｂ
４−１０によりリンパ球を処理する方法を包含する。

【００３１】本発明の一つの態様によれば、Ｍａｂ４−
１０又はＭａｂ４−１０のＦ（ａｂ’）_２フラグメント
は、Ｔ細胞の生体外活性化に用いられる。この活性化は
患者から採ったＴリンパ球を生体外でＭａｂ４−１０と
接触させ、それによりＴ細胞が活性化されるようにな
り、次にオートロガス・ドナーへ再注入されることによ
り行なわれる（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら、「Ｉｍｍｕｎｏ
ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆＣａｎｃｅｒ ｂｙ Ｓｙｓｔｅ
ｍｉｃ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆＬｙｍｐ
ｈｏｉｄ Ｃｅｌｌｓ Ｐｌｕｓ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋ
ｉｎ−２」、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｓｐ．Ｍｏｄｉｆ．
３：５５０１〜５５１１（１９８４））。この処理法
は、又他の免疫調節剤との生体外同時インキュベーショ
ン又は予備インキュベーションを含む。この治療法は、
治療のための腫瘍細胞と結合した抗原と反応性の標的ヘ
テロ複合体背後抗体のような比較的大きな剤の使用を避
ける有利さを有する。獲得治療において、リンパ球は生
体外で活性化され、これらのリンパ球のみが患者に導入
されて腫瘍細胞を殺すか又は免疫疾患を治療する。

【００３２】別の態様によれば、Ｍａｂ４−１０及びＭ
ａｂ４−１０のＦ（ａｂ’）_２フラグメントは、恐らく
他の剤例えばＩＬ−２、成長因子又は作用的抗体例えば
抗ＣＤ５と一緒に、患者にＭａｂ４−１０を注射するこ
とにより生体内でＴ細胞を活性化するのに使用できる
（例えばＣｌａｒｋら、「Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｏｆ ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｅ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｂｙ
ＡｇｏｎｉｓｔｉｃＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」、Ｉｍｍ
ｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ ７：２６７〜２７０（１
９８６）参照）。

【００３３】Ｍａｂ４−１０及びＭａｂ４−１０のＦ
（ａｂ’）_２フラグメントは、又従来の投与法を用いて
生体内に投与でき、それは、以下のものに制限されない
が、静脈内、経口、皮下、腹腔内又はリンパ腺内投与が
ある。静脈内投与が好ましい。

【００３４】Ｍａｂ４−１０及びＭａｂ４−１０のＦ
（ａｂ’）_２フラグメントを含む本発明の製薬組成物
は、種々の投与の形で用いられ、それらに限定されない
が、固体、半固体及び液体の投与の形例えば錠剤、ピ
ル、粉末、液体溶液又は懸濁液、座薬、重合体状マイク
ロカプセル又はマイクロベシクル、リポソーム及び注射
可能又は注入可能な溶液を含む。好ましい形は、投与の
態様及び治療の応用に依存する。組成物は、当業者に周
知の従来の製薬上許容可能な担体例えばヒト血清アルブ
ミン、緩衝物質例えばリン酸塩、水又は塩又は電解質を
含むことができる。

【００３５】本発明の組成物に関する投与の最も有効な
態様及び投与量の範囲は、疾患の程度及び経路、患者の
健康及び治療に対する応答及び治療する医師の判断に依
存する。従って、Ｍａｂ４−１０の投与量は、個々の患
者に応じなくてはならない。それにもかかわらず、Ｍａ
ｂ４−１０の有効な投与量は、約１〜約１００ｍｇ／ｍ
^３の範囲である。Ｔ細胞の生体外の治療には、１０^９細
胞当たり約１００μｇ〜２ｍｇのＭａｂ４−１０の投与
量が用いられる。

【００３６】

【実施例】下記の実施例は、本発明を説明し、さらに本
発明を行いしかも用いるのに当業者を助けるのに提供さ
れる。実施例は、特許により与えられる保護又は開示の
範囲を制限することを決して目的とするものではない。

【００３７】実施例 モノクローナル抗体（Ｍａｂ）４−１０の製造及びＭａ
ｂ４−１０を用いるＴ細胞の活性化

【００３８】本実施例は、Ｍａｂ４−１０の製造及びＴ
細胞の活性化におけるその使用を記載している。

【００３９】モノクローナル抗体ハイブリドーマＡＴＣ
Ｃ Ｎｏ．ＨＢ１０３５５により生成されるＭａｂ４−
１０（クローン３ＴＥ⁻４−１０．２Ｃ１０Ｅ）（Ｉｇ
Ｇ_３：ｋ）は、Ｍｉ−ｔｔｌｅｒら、「Ｇｅｎｅｒａｔ
ｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａ−ｔｉｏｎ
ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａ１ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ
Ｒｅａｃｔ−ｉｖｅ ｗｉｔｈ Ｈｕｍａｎ Ｂ Ｌ
ｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ」、Ｊ．Ｉｍｍ−ｕｎｏｌ．１３
１：１７５４（１９８３）により記載されたように、ヒ
ト扁桃リンパ球により免疫化されたＣＡＦ_１マウスから
の脾臓により生じた融合から由来した。Ｍａｂ４−１０
は、制限希釈により５回サブクローンされたＭａｂ４−
１０のクローンである。ＭＨＣクラスＩ抗原で発現した
単形態性決定因子と反応性のＭａｂ ２ＴＥ．２０５
（ＩｇＧ_２ｂ：ｋ）（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓ
ｑｕｉｂｂ Ｃｏ．、Ｗａｌｌｉｎｇｆｏｒｄ、ＣＴ）
及び１Ｔ．Ｂ７２（ＩｇＧ_２ａ：ｋ）（Ｂｒｉｓｔｏｌ
−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏ．、Ｗａｌｌｉｎｇ
ｆｏｒｄ、ＣＴ）は、Ｍａｂ４−１０を生成するのに用
いられたやり方により由来した。これらのＭａｂは、下
記の実験におけるＭａｂ４−１０との比較のために用い
た。

【００４０】ＨＬＡ、Ｂ及びＣ分子の単形態性決定因子
と反応性のＭａｂ Ｗ６／３２（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＨＢ
９５）（ＩｇＧ_２ａ：ｋ）、ＢＢ７．７（ＡＴＣＣ Ｎ
ｏ．ＨＢ９４）（ＩｇＧ_２ｂ）並びにβ_２−ミクログロ
ブリンを認識するＢＢＭ．１Ｅ９（ＡＴＣＣ Ｎｏ．Ｈ
Ｂ２８）（ＩｇＧ_２ｂ：ｋ）は、ＡＴＣＣ、Ｒｏｃｋｖ
ｉ−ｌｌｅ、ＭＤから得られた。ＣＤ３イプシロン鎖と
反応性のＭａｂ ＯＫＴ３（ＩｇＧ_２ａ：ｋ）（ＡＴＣ
Ｃ Ｎｏ．ＣＲＬ ８００１）及びＣＤ５分子と反応性
のＭａｂ ＯＫＴ１（ＩｇＧ：ｋ）（ＡＴＣＣ Ｎｏ．
ＣＲＬ８０１３）は、Ｏｒｔｈｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕ
ｔｉｃａｌ Ｃｏｒｐ．（Ｒａｒｉｔａｎ、ＮＪ）によ
り提供された。ＣＤ２８と反応性のＭａｂ ９．３（Ｉ
ｇＧ_２ａ：ｋ）（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＨＢ１０２７１）
は、Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒ博士、Ｏｎｃｏ−ｇｅｎ、Ｓｅ
ａｔｌｅ、ＷＡにより供給された。Ｔ細胞受容体、ＣＤ
２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＩＬ−２受容体、トラン
スフェリン受容体、Ｍｏ−１又はＨＬＡ−ＤＲに特異的
なフルオロクロム複合抗体（フルオレセインイソチオシ
アナート（ＦＩＴＣ）又はフィコエリテリン複合体の何
れか）は、Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｉｍｍ
ｕｎｏｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｍｏ−ｕｎ
ｔａｉｎｖｉｅｗ、ＣＡ）から入手した。さらに、それ
ぞれＣＤ４及びＣＤ８抗原と反応性のＭａｂ ＯＫＴ４
０及びＯＫＴ８Ａは、Ｏｒｔｈｏ Ｐｈａｒ−ｍａｃｅ
ｕｔｉｃａｌ Ｃｏｒｐ．（Ｒａｒｉｔａｎ、ＮＪ）に
より提供された。

【００４１】モノクローナル抗体及びそれらの蛋白分解
フラグメントの精製

【００４２】腹水を滅菌的にマウスから集め、４℃で１
０分間２００００×ｇでの遠心分離により透明にした。
透明にした腹水を、１０分の１容量の１．０Ｍトリス−
ＨＣｌ、ｐＨ８．０を加えることにより、ＰＨ８．０に
調節した。腹水を、０．０２％のナトリウムアジドを含
み４℃に保たれた０．１Ｍトリス−ＨＣｌにより平衡し
たプロティンＡ−セファロース４Ｂカラム（Ｐｈａｒｍ
ａｃｉａ−ＬＫＢ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）に通
した。カラムの溶離液を２７８ｎｍでイン−ラインＵＶ
モニターによりモニターした。Ｏ．Ｄ．が基線に戻った
とき、緩衝液を０．１Ｍグリシン−ＨＣｌ、ｐＨ３．０
に変え、結合したＩｇＧを５滴の１．０Ｍトリス−ＨＣ
ｌを含むフラクション・コレクター管に集めて抗体溶液
を中性にした。増殖及び活性化の研究に用いた全ての抗
体を、又製造者（Ｐｈａｒ−ｍａｃｉａ−ＬＫＢ）の指
示に従ってプロティンＧクロマトグラフィにより別に精
製した。

【００４３】Ｆ（ａｂ’）_２及びＦａｂｌ価４−１０フ
ラグメントの製造は、Ｇｏｄｉｎｇ、「Ｍｏｎｏｃｌｏ
ｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ
ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ」、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐ
ｒｅｓｓ、Ｏｒｌａｎｄｏ、ＦＬ、１１８〜１２４ペー
ジ（１９８３）により記載されているように行なわれ
た。抗体フラグメントは、ＨＰＬＣサイズ排除クロマト
グラフィにより精製され、前述したように、ＳＤＳ−Ｐ
ＡＧＥゲル電気泳動及び銀染色により純度についてチェ
ックした（Ｍｉｔｔｌｅｒら、「Ｔ ｃｅｌｌ Ｒｅｃ
ｅｐｔｏｒ−ＣＤ４ Ｐｈｙｓｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉ
ａｔｉｏｎ ｉｎ ａ Ｍｕｒｉｎｅ ＴＣｅｌｌ Ｈ
ｙｂｒｉｄｏｍａ：Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ Ａｎｔ
ｉｇ＝ｅｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｌｉｇａｔｉｏｎ」、
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８
６：８５３１（１９８９））。最後に、全てのＭａｂを
使用前にＤｕｌｂｅｃｃｏのリン酸塩緩衝塩水（Ｄ−Ｐ
ＢＳ）について十分に透析し、０．２２μｍフィルター
を通すことによりミリポア・フィルター滅菌した。Ｍａ
ｂフラグメントを、間接免疫蛍光法によりＭＨＣクラス
Ｉ分子に結合するそれらの能力についてテストし、Ｔ細
胞系へのＦＩＴＣラベルＭａｂ４−１０の結合をブロッ
クするそれらの能力についてテストした。

【００４４】プラスチック培養プレートへの抗体の吸着

【００４５】全ての精製した抗体を、カルシウム及びマ
グネシウム（ＧＩＢＣＯ Ｌａｂｓ）とともにＤ−ＰＢ
Ｓについて透析し、１ｍｇ／ｍｌに濃縮した。１００μ
ｇ／ｍｌで抗体溶液２００マイクロｌをマイクロタイタ
ー・プレートの一列に並んだ初めの３穴に入れ、次にＤ
−ＰＢＳで連続して３倍に希釈した。抗体は、２００μ
ｌのＤ−ＰＢＳで３回プレートを洗う前に、室温で１〜
１．５時間吸着させた。吸着した抗体の量を、或る場合
には痕跡量の^１２５ＩラベルＭａｂを含むことにより求
めた。用いた条件下、約１０００、３００、１００及び
３０ｎｇ／穴の抗体が結合された。最後のミクロプレー
トの洗浄直後、完全ＲＰＭＩ １６４０中に１×１０^６
／ｍｌで懸濁したＴ細胞２００μｌを、１２チャンネル
ピペットを用いてプレートの個々の穴に入れ、次に３７
℃でインキュベートした。

【００４６】Ｔ細胞の調製

【００４７】ヒトＴ細胞を正常のボランテアの静脈穿刺
により得た末梢全血から調製した。薬剤を採っているヒ
ト又はアレルギーに罹っているヒトは、これらの研究か
ら除いた。Ｔ細胞は、上述のＭｉｔｔｌｅｒ（１９８
３）の方法に従って、フィコル・ハイパク密度勾配で単
核細胞を分離し、次にＳＢＲＣによりＴ細胞をローゼッ
トすることにより、新しく調製した。Ｔ細胞集団の純度
は、Ｔ細胞、Ｂ細胞及び単核細胞表面抗原に対するフル
オロクロム複合Ｍａｂ（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓ
ｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ｓｙｓｔｅ
ｍ）を用いて直接免疫蛍光分析により評価した。分析
は、Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓ−ｏｎ ＦＡＣＳｓ
ｔａｒ・フロー・サイトメトリー（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉ
ｃｋ−ｉｎｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｍｅｔｒｙ
Ｓｙｓｔｅｍ）を用いて行なった。精製したＴ細胞を、
１％Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ及びＬ−グルタミン並びに１０
％仔ウシ血清（ＦＢＳ；ＧＩＢＣＯ Ｌａｂｓ、Ｇｒａ
ｎｄ Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）を含むＲＰＭＩ １６４０
中で培養した。

【００４８】ＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞サブセット
は、ヒツジ抗マウスＩｇＧ被覆磁気ビードを用いてネガ
チブ選択により調製した（Ｇａｕｄｅｒｎａｃｋら、
「Ｉｓ−ｏｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｐｕｒｅ ｆｕｎｃ
ｔｉｏｎａｌｌｙ ＡｃｔｉｖｅＣＤ８^＋ Ｔ Ｃｅｌ
ｌｓ． Ｐｏｓｉｔｉｖｅ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｗｉ
ｔｈ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ
Ｄｉｒｅｃｔｌｙ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ｔｏ Ｍｏ
ｎｏｓｉｚｅｄ Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｍｉ−ｃｒｏｓｐ
ｈｅｒｅｓ」、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．９０：
１７９（１９８６））。簡単に云えば、未分離Ｔ細胞
を、抗ＣＤ４Ｍａｂ又は抗ＣＤ８Ｍａｂの何れかを５０
μｇ／ｍｌで含むＤ−ＰＢＳ中で１×１０^７／ｍｌの濃
度で氷上で３０分間予めインキュベートした。細胞を、
次に１×１０^７／ｍｌで再懸濁する前に１５ｍｌ量のＤ
−ＰＢＳで３回洗った。細胞を次に４０：１の比（ビー
ド：細胞）で抗マウスＩｇＧ被覆磁気ビードと混合し
た。混合物を、１５分間４℃で冷凍下ローテーターで攪
拌した。抗体被覆細胞へ結合した磁気粒子を、１５ｍｌ
のＤ−ＰＢＳ中に混合物を含む１５ｍｌ容三角試験管の
側面にマグネットを置くことにより除いた。磁気粒子に
より結合しない流体及び細胞は、次の試験管にデカンテ
ーションされ、この方法を３回繰り返した。磁気粒子に
より結合しないＴ細胞を、２回洗い、２×１０^６細胞／
ｍｌで１０％ＦＢＳ、１％Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ及び１％
Ｌ−グルタミンを含むＲＰＭＩ １６４０に再懸濁し、
使用するまで氷上に貯蔵した。ＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋細
胞サブセットの純度は、ＣＤ４又はＣＤ８の何れかと反
応性のフィコエリテリン複合モノクローナル抗体（Ｂｅ
ｃｔｏｎ−Ｄｉ−ｃｋｉｎｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔ
ｏｍｅｔｒｙ Ｓｙｓｔｅｍ）を用いてフロー・サイト
メトリー及び直接免疫蛍光法により求めた。全ての実験
において、サンセットの純度は、９５％より大きかっ
た。

【００４９】ラジオラベリング、免疫沈降及びＳＤＳ−
ＰＡＧＥ

【００５０】Ｍａｂ４−１０により認識した細胞表面分
子（抗原）を同定するために、下記の予め形成した免疫
複合体を用いて、末梢血液Ｔ細胞をラジオヨード化し、
トリトンＸ１００に可溶化し、そしてＭａｂ４−１０又
は他の以前確認された抗クラスＩＭａｂの何れかにより
免疫沈降した。

【００５１】休止末梢Ｔ細胞を、ラクトペルオキシダー
ゼ法によってＮａ−^１２５Ｉによりラジオヨード化した
（Ｍｉｔｔｌｅｒら、「Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ Ｈｕｍ
ａｎＢ Ｃｅｌｌｓ Ｄｉｓｐｌａｙ Ａ Ｆｕｎｃｔ
ｉｏｎａｌ ＩＬ−２ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ」、Ｊ．Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ．１３４：２３９３（１９８５））。ラベル
した細胞を、次に１％トリトンＸ１００及び１ｍＭ Ｐ
ＭＳＦ、１ｍＭベンズアミジン、２０μｇ／ｍｌの下記
のそれぞれ（トリプシン阻害剤、アンチペイン、ペプス
タチンＡ、ロイペプチン）及び２ｍＭ ＥＤＴＡ及びＥ
ＧＴＡを含むＲＩＰＡ融解緩衝液中で融解した。１×１
０^７細胞／１００μｌのＲＩＰＡ融解緩衝液を６０分間
氷上でインキュベートし、核及び不溶性の屑を４５分間
１０００００×ｇで遠心分離することにより除いた。次
に融解物を用いるまで−７０℃で貯蔵するか、又は４℃
で１時聞加熱殺菌したＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａ
ｕｒｅｕｓ Ｃｏｗａｎ Ｓｔｒａｉｎ Ｉ（Ｉｇｓｏ
ｒｂ）の１０％ｖ／ｖ懸濁液５０μによりプレクリアー
した。Ｉｇｓｏｒｂを遠心分離により除き、第二のプレ
クリアリングは、ウサギ抗マウスＩｇＧ血清により予め
沈殿したマウス骨髄腫蛋白（ＩｇＧ_１）よりなる非反応
性の予め形成した複合体（ＰＦＣ）を用いて行なわれ
た。このやり方は、２回繰り返され、各インキュベーシ
ョンは、２時間続き、両者は４℃に保ったローターター
で攪拌しつつ行なった。１００μｌのプレクレアーした
融解物を、研究中のＭａｂの一つにより作られたＰＦＣ
２０μｌとともにインキュベートした。免疫沈降物を一
晩４℃で攪拌しつつインキュベートした。次の朝、沈降
物をそれぞれ１％でトリトンＸ１００及びデオキシコレ
ートを含む１０〜２０％ショ糖密度勾配により遠心分離
した。沈降物を、次に１ｍＭ ＰＭＳＦを含む融解緩衝
液で２回洗い、サンプル緩衝液に溶解した。各免疫沈降
物を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルにかける前に１００℃で５
分間加熱した。サンプルを、前述の方法（Ｍｉｔｔｌｅ
ｒ、前記、（１９８５））に従って還元条件で処理し
た。オートラジオグラフィを以前に記述したように行な
った（Ｓｗａｎｓｔｒｏｍら、「Ｘ−Ｒａｙ Ｉｎｔｅ
ｎｓｉｆｙｉｎｇ Ｓｃｒ−ｅｅｎｓ Ｇｒｅａｔｌｙ
Ｅｎｈａｎｃｅ ｔｈｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｂｙ
Ａｕｔｏｒａｄｉｏｇｒａｐｈｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｒ
ａｄｉｏａｃｔｉ−ｖｅ ｉｓｏｔｏｐｅｓ ^３２Ｐ
ａｎｄ ^１２５Ｉ」、 Ａｎａｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．
８６：１８４（１９７８））。

【００５２】図１は、還元条件下の４〜２０％Ｍａｂ４
−１０（レーン２）；Ｗ６／３２（レーン４）；２Ｔ
Ｅ．２０５（レーン７）；及び１Ｔ．Ｂ７２（レーン
８）の免疫沈降物のオートラジオグラフを示す。理解さ
れるように、全ての免疫沈降物は、ＭＨＣクラスＩ重鎖
及びβ_２−ミクログロブリンに相当する４５ｋｄ及び１
２ｋｄの２本のＭＷバンドを示した。別の実験におい
て、Ｍａｂ Ｗ６／３２及び４−１０は、さらに免疫沈
降させられ、還元条件下で１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル
で処理された（それぞれレーン９及び１１）。Ｔ細胞融
解物は、Ｍａｂ Ｗ６／３２によりプレクリアーされ、
次にＭａｂ４−１０により沈降された。レーン１３で、
Ｍａｂ Ｗ６／３２はＭａｂ４−１０反応性物質の多く
を除き、さらに２種の抗体が同じ抗原を認識することを
指示していることが、分かる。又、用いた条件下で、Ｍ
ａｂ４−１０は、２００ｋｄの見かけのＭＷａを有する
蛋白を同時に沈降した。このバンドは、活性化Ｔ細胞に
以前観察されたが、休止Ｔ細胞では観察されず、そして
プレクリアリング免疫沈降及び蛍光共鳴エネルギー転移
の検討により白血球の共通の抗原ＣＤ４５として同定さ
れた。

【００５３】これらの結果は、Ｍａｂ４−１０がＭＨＣ
クラスＩ抗原を免疫沈降することを立証する。

【００５４】カルシウム動員

【００５５】正常の休止末梢血液Ｔ細胞にカルシウム動
員を誘発するＭａｂ４−１０の能力をテストした。末梢
血液Ｔ細胞に、以前記述されているように（Ｒａｂｉｎ
ｏ−ｖｉｔｃｈら、「Ｈｅｔｒｏｇｅｎｅｉｔｙ Ａｍ
ｏｎｇ Ｔ Ｃｅｌｌｓ ｉｎ Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕ
ｌａｒ Ｆｒｅｅ Ｃａｌｃｉｕｍ Ｒｅｓｐｏ−ｎｓ
ｅｓ Ａｆｔｅｒ Ｍｉｔｏｇｅｎ Ｓｔｉｍｕｌａｔ
ｉｏｎ ｗｉｔｈ ＰＨＡ ｏｒ Ａｎｔｉ−ＣＤ３．
Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ ｕｓｅ ｏｆ−Ｉｎｄｏ
ｌ−１ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃ
ｅ ｗｉｔｈＦｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ」、Ｊ．Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ．１３７：９５２（１９８６））、蛍光カ
ルシウムキレート剤Ｉｎｄｏ−１（Ｒｅｓｅｒｃｈ Ｏ
ｒ−ｇａｎｉｃｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）を付加した。
Ｔ細胞を、使用するまで室温で２５ｍＭのＨＥＰＥＳを
含むＲＰＭＩ １６４０中に１×１０^７／ｍｌで懸濁し
た。刺激は、Ｍａｂ ＯＫＴ３又はＭａｂ４−１０の何
れかが５００ｎｇ／ｍｌの濃度で加えられた予め加温さ
れた（３７℃）ＲＰＭＩ １６４０（９００μｌ）に１
００μｌのＩｎｄｏ−１を付加した細胞を導入すること
により行なった。一方、Ｍａｂ４−１０及びＭａｂ Ｏ
ＫＴ３を、それぞれ５００ｎｇ／ｍｌ及び１００ｎｇ／
ｍｌでともに加えた。室温で１〜４分間インキュベーシ
ョンした後、１μｌの純粋なウサギ抗マウスＩｇＧ血清
を加えて細胞結合Ｍａｂを橋かけした。細胞内カルシウ
ムの動員は、次に１０分間にわたりモニターされた。カ
ルシウム動員の分析は、１５０ｍＷの出力で３５１〜３
６２ｎｍに同調した５ワットのアルゴン・レザーを備え
たＥＰＩＣＳモデル７５３フロー・サイトメーター（Ｃ
ｏｕｌｔｅｒ Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ Ｃｏｒｐ．、
Ｈｉａｌｅａｈ、ＦＬ）により細胞毎に行なわれた。フ
ィルターの組合せ及び分析方法は、Ｋｅｉ−ｎｅｒら、
「ＣＤ−４５ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｙｒｏｓｉｎｅ Ｐ
ｈｏｓｐｈ−ａｔａｓｅ Ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｉｎｇ
Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ Ｔ ＣｅｌｌＲｅｃｅｐｔｏｒ
ＣＤ３−Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏ
ｆＨｕｍａｎ Ｔ Ｃｅｌｌｓ」、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．１４３：２３（１９８９）及び Ｍｉｔｔｌｅｒ
ら、「Ｓｙｎｅｒｇｉｓｍ Ｂｅｔｗｅｅｎ ＨＩＶ−
ｇｐ１２０ ａｎｄ ｇｐ１２０ ｓｐｅｃｉｆｉｃ
Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｉｎＢｌｏｃｋｉｎｇ Ｈｕｍａｎ
Ｔ Ｃｅｌｌ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ」、Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ ２４５：１３８０（１９８９）に記載されている
ように行なわれた。

【００５６】図２において、可溶性Ｍａｂ４−１０によ
るＴ細胞の処理は、細胞内カルシウムの基本的レベルに
影響しないことが分かる。Ｍａｂ４−１０により２分間
Ｔ細胞を予備処理し次に１μｌのウサギ抗マウスＩｇＧ
血清（ＲＡＭＩＧ）を加えると、ＲＡＭＩＧの添加２分
後でピークとなる細胞内カルシウムのささやかであるが
検出可能なしかもやや抑制された上昇を導いた。可溶性
Ｍａｂ抗ＣＤ３により次に２分後ＲＡＭＩＧによるＴ細
胞の同様な処理は、ＲＡＭＩＧの添加３０秒以内に、遊
離のイオン化細胞内カルシウムのレベルを顕著に増大さ
せた。Ｍａｂ抗ＣＤ３及び４−１０の混合物次にＲＡＭ
ＩＧとともにＴ細胞をインキュベートすることは、Ｍａ
ｂ抗ＣＤ３誘発刺激により観察されるのよりも２倍の動
員した細胞内カルシウムのレベルを生じさせた。その
上、これらの条件下で観察された刺激のカイネテイクス
は、抗ＣＤ３のみで観察されたのと同じであった。従っ
て、Ｍａｂ４−１０は、Ｔ細胞における細胞内カルシウ
ムを動員するのに抗ＣＤ３と協同で働く。

【００５７】Ｔ細胞のＭａｂ４−１０活性化

【００５８】他の刺激剤の不存在下休止末梢血液Ｔ細胞
に増殖性応答を誘発するＭａｂ４−１０の能力を検討し
た。末梢血液Ｔ細胞は、抗体なしに、又はそれにＭａｂ
Ｗ６／３２、４−１０、９．３、ＯＫＴ１又はＯＫＴ
３の種々の組合せが個々に吸着された９６穴平底ミクロ
タイター・プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｐｌａｓｔ−ｉ
ｃｓ、Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ）でそれらをインキュベー
トすることにより生体外で活性化された。１穴当たりの
吸着された抗体の量は、ラジオラベルされた^１２５Ｉト
レーサーＭａｂの添加により計算された。或る場合に
は、方法は、表現型及び細胞サイクル分析用に十分な数
の細胞（２×１０^６）を活性化するために２４穴２ｍｌ
クラスター・プレートで繰り返された。増殖に対するＭ
ａｂの効果は、７２時間プラスチック穴底に吸着される
種々の濃度のＭａｂとともに高度に精製されたＴ細胞
（２×１０^５／穴）をインキュベートすることを伴っ
た。細胞は、採取１８時間前に０．５μＣｉ［^３Ｈ］−
チミジン／穴によりパルスされた。サンプルを次にシン
チレーション・バイアルに入れ、液体シンチレーション
分光法によりカウントした。全アッセイは、３検体につ
いて行なわれた。これらの実験の結果を図３〜９に示
す。データの点は、１分当たりの平均カウントとしてプ
ロットされ、標準偏差は、常に指示された平均値の１０
％以内であった。

【００５９】休止Ｔ細胞を０．３〜３０ｎｇ／穴のＭａ
ｂ４−１０又はＭａｂ ＯＫＴ３により刺激したとき、
^３Ｈ−チミジンの配合に対する投与量依存性が観察され
た（図３）。対照的に、Ｍａｂ Ｗ６／３２、９．３
（抗ＣＤ２８）又はＯＫＴ１（抗ＣＤ５）は、増殖を誘
発出来なかった。これらの抗体に対する細胞の応答のな
さは、細胞が生体内で予め活性化されなかったことを示
した。それは、これらの条件下抗ＣＤ５又は抗ＣＤ２８
の何れかが増殖性応答を誘発したと考えられるからであ
る（Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒら、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ
ｔｏ Ｔｐ６７ａｎｄ Ｔｐ４４ Ａｕｇｍｅｎｔ ａ
ｎｄ Ｓｕｓｔａｉｎ ｐｒｏｌｉｆ−ｅｒａｔｉｖｅ
Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｏｆ Ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｔ
Ｃｅ−ｌｌｓ」、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３５：２３
３１（１９８５））。

【００６０】Ｍａｂ４−１０誘発増殖のカイネティクス

【００６１】Ｍａｂ４−１０誘発Ｔ細胞増殖のカイネテ
ィクスを検討した。末梢血液Ｔ細胞を、前記のように、
それにＭａｂ抗ＣＤ３、Ｍａｂ抗ＣＤ２８又はＭａｂ４
−１０の何れかを吸着させた９６穴平底ミクロタイター
・プレートで、１０日間培養した。コントロール培養物
は、ＩＬ−２生産を研究するために、ＰＭＡとともに固
定化Ｍａｂ抗ＣＤ２８、抗ＣＤ３又は抗ＣＤ３を含ん
だ。ＣＤ２８を用いて、Ｔ細胞が予め活性化されないこ
とを立証した。アッセイ中毎日、１００μｌの培養上澄
み液を採ってＩＬ−２の生成を測定した。培養物を次に
６時間［^３Ｈ］−チミジンによりパルスし、採集し、カ
ウントした。

【００６２】Ｍａｂ４−１０の存在下、Ｔ細胞は、１０
日間の間連続して増殖し、一方抗ＣＤ３は、７２時間で
ピークとなる増殖を誘発した（図４）。さらに、Ｍａｂ
４−１０刺激細胞は、培養上澄み液に検出可能な量のＩ
Ｌ−２を分泌しなかったが、抗ＣＤ３刺激培養物は分泌
した。

【００６３】Ｍａｂ４−１０誘発Ｔ細胞増殖のＦ（ａ
ｂ′）_２フラグメントによるＴ細胞増殖の誘発

【００６４】休止Ｔ細胞に増殖を誘発する４−１０のＦ
（ａｂ′）_２フラグメントの能力を立証した。Ｆ（ａ
ｂ′）_２４−１０、全分子Ｍａｂ４−１０及びＭａｂ
Ｗ６／３２を、種々の濃度で９６穴ミクロタイター・プ
レートの表面に固定化した。２×１０^５Ｔ細胞／穴を加
えた。培養７２時間後、穴を０．５μＣ８ ^３Ｈ−チミ
ジンによりパルスし、採集しそして６時間後カウントし
た。未処理４−１０抗体分子と同じく、Ｆ（ａｂ′）^２
フラグメントは、休止Ｔ細胞を増殖させるようにした
が、他の抗クラスＩＭａｂ、Ｗ６／３２は出来なかっ
た。Ｆ（ａｂ′）_２４−１０を用いる増殖に対する投与
量依存性は全抗体分子を用いるのと殆ど同じであった
（図５Ａ）。未処理抗体分子と同じく、Ｆ（ａｂ′）_２
フラグメントは、プラスチック培養プレートに固定化さ
れるとき細胞分裂促進性であった。

【００６５】Ｔ細胞増殖に対するＦａｂ一価４−１０の
効果

【００６６】Ｆ（ａｂ′）_２４−１０が未処理抗体と同
じくＴ細胞を増殖させるのに有効であったので、Ｔ細胞
の増殖を誘発する４−１０の一価フラグメントの能力を
テストした。ＰＢＬ Ｔ細胞を、３００ｎｇ／穴で、種
々の濃度の吸着したＦ（ａｂ′）_２４−１０Ｍａｂ、吸
着した一価Ｆａｂ４−１０又は可溶性Ｍａｂ４−１０を
含む吸着したＦ（ａｂ′）_２を含有する穴に加えた。培
養物を０．５μＣｉ^３Ｈ−チミジンによりパルスし、７
２時間培養し、採集し、液体シンチレーション分光法に
よりカウントした。

【００６７】Ｆ（ａｂ′）_２フラグメントとは異なり、
一価４−１０はたとえプラスチック培養プレートに吸着
されたときでもＴ細胞の増殖を刺激しなかった（図５
Ｂ）。Ｆａｂ４−１０がＴ細胞を活性化出来なかった理
由は、間接免疫蛍光分析により判断されるように、クラ
スＩ分子を結合するその無能力によるものではない。そ
の上、可溶性の形の一価４−１０は、固定化４−１０に
より誘発されるＴ細胞の活性化を阻害し（図５Ｂ）、そ
れがクラスＩ分子に結合することを立証した。

【００６８】マクロファージの存在下のＴ細胞増殖に対
する可溶性Ｍａｂ４−１０の効果

【００６９】時には、可溶性の形のＭａｂ４−１０が休
止細胞を活性化することが認められた。これは培養物中
の付着性単細胞の存在によるものであると、次に確かめ
られた。２％マクロファージを含む精製したＰＢＬ Ｔ
細胞は、２×１０^５細胞／穴でミクロタイター・プレー
トに加えられ、プレートには下記のＭａｂが種々の濃度
で吸着していた。Ｍａｂ４−１０（□−□）、Ｍａｂ１
Ｔ．Ｂ７２（△−△）、Ｍａｂ９．３（●−●）又は可
溶性の形のＭａｂ４−１０（▲黒四角▼−▲黒四角
▼）。細胞は、７２時間培養され、前述のように^３Ｈ−
チミジンによりパルスした。図６Ａに示されるように、
２％Ｅ−ローゼット・ネガティブ末梢血液白血球を、増
殖させるために精製したＴ細胞、可溶性Ｍａｂ４−１０
誘発Ｔ細胞に加えた。同じ培養条件下で、固定化４−１
０は、又細胞分裂促進性であったが、他の抗クラスＩＭ
ａｂ、１Ｔ．Ｂ７２及び抗ＣＤ２８Ｍａｂ（９．３）
は、固定化するとき細胞分裂促進性ではなかった。抗Ｃ
Ｄ２８ＭａｂがＴ細胞増殖を誘発できないこのことは、
細胞が予め活性化されず、この条件下でＭａｂ９．３が
Ｔ細胞に対して細胞分裂促進性であることから、ＩＬ−
２が培養物中に存在しないことを立証した。

【００７０】マクロファージの存在下のＴ細胞増殖に対
する可溶性Ｆ（ａｂ′）_２４−１０の効果 図６Ｂは、マクロファージが、それらのＦｃ受容体とＭ
ａｂ４−１０との相互反応により可溶性Ｍａｂ４−１０
誘発Ｔ細胞増殖に対してそれらの協同作用を及ぼすこと
を示す。２％マクロファージを含むＰＢＬ Ｔ細胞は、
前記のように、種々の濃度の吸着したＭａｂ４−１０
（▲黒四角▼−▲黒四角▼）、可溶性Ｍａｂ４−１０
（▲−▲）、吸着したＭａｂ Ｗ６／３２（△−△）又
は可溶性Ｆ（ａｂ′）_２４−１０（●−●）の存在下培
養した。培養物を^３Ｈ−チミジンによりパルスし、採集
し、カウントした。付着性細胞の存在下の可溶性４−１
０は、吸着したＭａｂ４−１０より有効ではないが、Ｔ
細胞を増殖させる。Ｍａｂ Ｗ６／３２は、増殖を誘発
することが出来なかった。図６Ｂに示すように、未処理
Ｍａｂとは対照的に、可溶性Ｆ（ａｂ′）_２４−１０
は、たとえそれが固定化されたときＴ細胞の有効な活性
剤として働いたとしても、マクロファージの存在下Ｔ細
胞を増殖させることが出来なかった。

【００７１】Ｔ細胞の増殖に対する他の抗クラスＩＭａ
ｂの効果

【００７２】追加の刺激剤の不存在下休止Ｔ細胞に増殖
を誘発させる二三の抗クラスＩＭａｂの能力を表１に示
す。この実験において、Ｔ細胞は、吸着されたＭａｂの
存在下、又は２％の付着性細胞を補給された可溶性Ｍａ
ｂとともに培養された。テストされた抗体の中で、Ｍａ
ｂ４−１０のみがＴ細胞について直接に細胞分裂促進性
であった。

【００７３】

【表１】

【００７４】Ｔ細胞増殖に対するＭＨＣクラスＩ抗原及
びＣＤ８の同時橋かけの効果

【００７５】これらの実験は、抗ＣＤ４Ｍａｂ（又はｐ
５６^ｌｃｋと結合した）又は抗ＣＤ８Ｍａｂが、Ｔ細胞
を活性化するＭａｂ４−１０の能力に影響するかどうか
を調べた。これらの抗体は、前述のように、９６穴の培
養プレートに種々の濃度の抗ＣＤ４又は抗ＣＤ８の何れ
かを吸着させることにより、本アッセイ系におけるそれ
らの作用についてテストされた。抗ＣＤ４及び抗ＣＤ８
抗体を、又両者の抗体を培養プレートに吸着させた条件
下、固定した濃度のＭａｂ４−１０に対して滴定した。
吸着した抗体の定量を前述のように行なった。実験の同
様なセットで、固定化Ｍａｂ４−１０誘発Ｔ細胞増殖を
ブロックする可溶性抗ＣＤ４又は可溶性ＣＤ８の何れか
の能力を評価した。９００ｎｇ／穴で種々の濃度の吸着
したＭａｂ４−１０のみ、Ｍａｂ ＯＫＴ６のみ、又は
３０ｎｇ／穴のＭａｂ ＯＫＴ６、ＯＫＴ４Ｄ又はＯＫ
Ｔ８Ａの何れかを有するＭａｂ４−１０を含有する９６
穴ミクロタイター・プレートで、ＰＢＬ Ｔ細胞を培養
した。Ｔ細胞を、６時間０．５μＣｉ^３Ｈ−チミジンに
よりパルスする前に、７２時間２×１０^５／穴で培養し
た。

【００７６】図７において、吸着したＦ（ａｂ′）_２４
−１０が、投与量依存の形でＴ細胞の増殖を誘発するこ
とがわかる。同様に、３０ｎｇ／穴で種々の濃度の固定
化Ｆ（ａｂ′）_２４−１０及び抗ＣＤ１を含む培養物
は、投与量依存の形でＴ細胞を活性化した。ＣＤ１は、
胸腺細胞及びランゲルハンス細胞においてのみ見出だせ
るクラスＩ抗原のホモログと反応性である（ＭｃＭｉｃ
ｈａｅｌら、「Ａ Ｈｕｍａｎ Ｔｈｙｍｏｃｙｔｅ
Ａｎｔｉｇｅｎ Ｄｅｆｉｎｅｄ ｂｙ ＡＨｙｂｒｉ
ｄ Ｍｙｅｌｏｍａ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉ
ｂｏｄｙ」、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：２０５
（１９７９）；Ｆｉｔｈｉａｎら、「Ｒｅａｃｔｉｖｉ
ｔｙ ｏｆ Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ Ｃｅｌｌｓ ｗｉ
ｔｈ ａＨｙｂｒｉｄｏｍａ Ａｎｔｉｂｏｄｙ」、Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：
２５４１（１９８１））。抗ＣＤ１Ｍａｂは含まれて、
第二の抗体の吸着が用いた条件下でＴ細胞のＭａｂ４−
１０媒介活性化の結合を阻害しなかったことを示した。
抗ＣＤ４が抗ＣＤ１の代わりに３０ｎｇ／穴で用いられ
たとき、Ｔ細胞の増殖は約２５％阻害された。しかし、
抗ＣＤ８がＦ（ａｂ′）_２４−１０と３０ｎｇ／穴で固
定化したとき、Ｍａｂ４−１０誘発増殖は、９０％以上
阻害された。Ｍａｂ４−１０媒介増殖に対してＭａｂ抗
ＣＤ４により観察される弱い阻害作用は、抗ＣＤ４が下
記に示すようにＣＤ４^＋サブセットのＭａｂ４−１０媒
介増殖を阻害出来なかったので、抗ＣＤ４と抗ＣＤ８と
の間の親和性の差によるものではない。

【００７７】ＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞に対する固定
化Ｍａｂ４−１０の効果

【００７８】固定化抗ＣＤ８Ｍａｂが未分離末梢血液Ｔ
細胞のＭａｂ４−１０媒介増殖を驚くほど阻害し、一方
Ｍａｂ抗ＣＤ４が極めて僅かな効果しか有しなかったと
いう発見から考えて、固定化Ｍａｂ４−１０に応答する
高度に精製されたＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞の能力を
調べた。ＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞の精製した集団
を、種々の濃度の吸着したＭａｂ４−１０を含む９６穴
ミクロタイター・プレートで７２時間培養した。培養の
終わりに、前述のように、細胞を^３Ｈ−チミジンにより
パルスし、採集しそしてカウントした。

【００７９】図８は、Ｔ細胞の両方のサブセットが、Ｍ
ａｂ４−１０刺激に応じて増殖したことを示す。ＣＤ８
^＋サブセットは、ＣＤ４^＋サブセットに見出だされる匹
敵し得るレベルの^３Ｈ−チミジン配合に達するのに、約
５分の１の固定化Ｍａｂ４−１０を要した。図９は、Ｃ
Ｄ４^＋Ｔ細胞のＭａｂ４−１０媒介活性化は、Ｍａｂ抗
ＣＤ４により阻害されることを示す。

【００８０】末梢血液Ｔ細胞は、全てではないが殆どの
Ｔ細胞に対してＴ細胞受容体ＣＤ３複合体の下方調節を
導くことが観察された。Ｔｉ−ＣＤ３が選択的にＣＤ４
^＋又はＣＤ８^＋サブセツトに対して下方調節するかどう
かを確かめるために、Ｍａｂ４−１０活性化Ｔ細胞をＦ
ＩＴＣラベル抗ＣＤ３Ｍａｂ及びフィコエリテリン複合
抗ＣＤ４又は抗ＣＤ８Ｍａｂによりダブル染色した。Ｃ
Ｄ４^＋又はＣＤ８^＋Ｔ細胞を、前方角度光散乱器及び赤
色蛍光（即ちＣＤ４又はＣＤ８染色細胞）で電子的にゲ
イトし、緑色蛍光（ＣＤ３発現）の濃度を休止及び活性
化状態で各サブセットをモニターした。染色した細胞
を、ＦＡＣＳｔａｒフロー・サイトメーターで二色免疫
蛍光分析を用いてそれらの表面でＣＤ３の発現について
分析した。ゲイティングは、フィコエリテリン複合抗Ｃ
Ｄ４又は抗ＣＤ８Ｍａｂの何れかによりダブル染色され
た１×１０^６Ｔ細胞について行なわれた。各サブセット
のＴｉ−ＣＤ３の濃度を、ＦＩＴＣラベルＭａｂ抗ＣＤ
３を用いて分析した。結果を図１０に示す。

【００８１】ＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞の両者におい
て、Ｔｉ−ＣＤ３複合体が、下方調節された。しかし、
ＣＤ８^＋サブセットに対するＴｉ−ＣＤ３の濃度は、Ｃ
Ｄ４^＋サブセットに見出だされるのよりも顕著に低かっ
た（６分の１）。従って、二つの別々の基準より示され
るように、Ｍａｂ４−１０は、選択的にＣＤ８^＋Ｔ細胞
を活性化した。

【００８２】Ｍａｂ４−１０誘発Ｔ細胞活性化に対する
抗ＭＨＣクラスＩモノクローナル抗体の効果

【００８３】二三の抗クラスＩＭａｂの活性を、Ｔ細胞
のＭａｂ４−１０誘発活性化を増強又は阻害するそれら
の能力についてテストした。前記の同じプロトコールに
従い、Ｍａｂ４−１０を、種々の投与量の他のクラスＩ
決定因子に対する固定化抗体の存在下又は追加の抗体の
不存在下３０ｎｇ／穴という最適下の濃度で固定化し
た。成熟Ｔ細胞と非反応性の抗ＣＤ１Ｍａｂを、結合し
た第二のＭａｂの存在下のＭａｂ４−１０活性化のため
のコントロールとして用いた。表２で、３−１００ｎｇ
／穴の投与量の範囲の抗ＣＤ１はＭａｂ４−１０媒介Ｔ
細胞増殖に効果を有しないことが分かる。Ｍａｂ４−１
０とともにＭａｂ Ｗ６／３２又はＢＢ７．７を添加す
ることは、顕著にＭａｂ４−１０媒介増殖を増大させる
が、Ｍａｂ１Ｔ．Ｂ７２、２ＴＥ．２０５又はＢＢＭ
１．Ｅ９による同様な処理は、Ｔ細胞増殖を増大しなか
った。その上、これらの他の抗クラスＩＭａｂの何れ
も、組合せて加えたとき、Ｔ細胞の増殖を誘発した。

【００８４】

【表２】

【００８５】Ｍａｂ４−１０とのエピトープ反応を特徴
付けるクロスブロッキング及び免疫蛍光の検討

【００８６】Ｍａｂ４−１０はＴ細胞の活性化及び増殖
を直接誘発したが、他の抗クラスＩＭａｂはそうでなか
ったので、Ｍａｂ４−１０は、ＭＨＣクラスＩ分子の独
特な決定因子を認識するように見えた。これをテストす
るために、フロー・サイトメトリーを用いて、ＦＩＴＣ
ラベルＭａｂ４−１０の結合をブロックする種々の抗ク
ラスＩＭａｂの能力を測定した。

【００８７】抗クラスＩ抗原又はβ_２−ミクログロブリ
ンと反応性のＭａｂを、そのエピトープへのＭａｂ４−
１０の結合をブロックするそれらの能力について評価し
た。抗ＣＤ３をネガティブ・コントロールとして用い
た。飽和結合は、５μｇのＦＩＴＣ４−１０／１０^６細
胞により達成された。１０倍過剰の未ラベル４−１０と
ともに５μｇのＦＩＴＣ複合体とＴ細胞との同時インキ
ュベーションは、平均蛍光濃度を９０％低下させた（蛍
光チャンネル１５２対チャンネル１６）。クラスＩ重鎖
又はβ_２−ミクログロブリンの何れかと反応性であるこ
とが先に示された５種のＭａｂのうち、唯一つ、Ｍａｂ
１Ｔ．Ｂ７２のみが、部分的にＦＩＴＣラベルＭａｂ４
−１０の結合をクロスブロックしたが（図１１）、テス
トされた他の抗体の何れもＭａｂ４−１０の結合を干渉
しなかった。事実、２種の抗体、ＢＢ７．７及びＷ６／
３２は、顕著にＦＩＴＣラベルＭａｂ４−１０複合体の
結合を増大した。

【００８８】上記の結果は、Ｍａｂ４−１０は、他の既
述の抗クラスＩＭａｂとは異なり、休止末梢血液Ｔ細胞
に対して直接に細胞分裂促進性であり、追加の刺激剤例
えばＩＬ−２又は抗Ｔｉ−ＣＤ３の不存在下Ｔ細胞の活
性化及び増殖を誘発することを示す。クロスブロッキン
グの実験及び免疫蛍光敵定曲線に基づいて、Ｍａｂ４−
１０は、ＨＬＡクラスＩ分子の新規な決定因子を認識す
るように考えられる。

【００８９】この実施例でさらに立証されるように、Ｍ
ａｂ４−１０媒介活性化の要件は最少であり、即ち抗体
が固定化した形で又は動員の不存在下でＴ細胞に提供さ
れ、少ない数の付着性細胞が存在するというものであ
る。橋かけは、必須のように考えられ、４−１０の固定
化Ｆ（ａｂ′）_２フラグメントはＴ細胞を増殖させるの
に未処理抗体分子と同様に有効であるが、一価４−１０
はそうではない。Ｍａｂ４−１０とは異なり、付着性細
胞の存在下の可溶性Ｆ（ａｂ′）_２フラグメントは、Ｔ
細胞について細胞分裂促進性ではない。これは、付着性
細胞は、抗体分子のＦｃ部分に結合することにより可溶
性４−１０抗体と互いに反応出来ることを示唆する。４
−１０のＦａｂフラグメントは、たとえ培養プレートに
固定化されても、Ｔ細胞を刺激出来なかった。吸着され
た一価の形がＴ細胞を活性化出来なかったことは、抗原
に対するその低い親和性、必要な抗体の配向における培
養プレートへのその無効な結合又はこの二つの組合せを
示している。Ｆａｂ４−１０がＴ細胞を活性化できない
ことは、抗原を結合するその無能力の反映ではなかっ
た。それは、一価の形が、間接免疫蛍光法により検出出
来、さらに重要なことであるが、未処理Ｍａｂ４−１０
によるＴ細胞活性化を、ブロック出来たからである。

【００９０】本明細書に記載された抗クラスＩＭａｂ及
びＭａｂ４−１０のパネルを用いる競合結合実験の結果
は、Ｍａｂ４−１０がクラスＩ分子の新規な決定因子を
認識することを示唆している。１種のＭａｂ、１Ｔ．Ｂ
７２のみが、部分的にＭａｂ４−１０結合をブロックし
たが、Ｔ細胞の増殖を誘発出来ない。Ｍａｂ４−１０の
刺激効果は、テストされた全製品は非常に精製されたＦ
（ａｂ′）フラグメントを含んで細胞分裂促進性であっ
たため、刺激因子による製品の汚染によらないことにな
る。さらに、緩衝液からのＭａｂ４−１０の免疫減退
は、緩衝液の細胞分裂効果を廃棄した。

【００９１】Ｍａｂ４−１０はＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ
細胞の両者を活性化したが、ＣＤ８^＋サブセットに属す
るＴ細胞は、ＣＤ４^＋細胞よりもＭａｂ４−１０の刺激
に激しく応答する。これは投与量依存の検討で明らかで
あり、その場合ＣＤ４^＋は、ＣＤ８^＋Ｔ細胞で観察され
た［^３Ｈ］チミジン配合の同じレベルを達成するため
に、Ｍａｂ４−１０濃度の約６倍の増大を必要とした。
その上、各サブセットから得たＭａｂ４−１０活性化細
胞のフロー・サイトメトリー分析は、Ｔ細胞の両方のサ
ブセットがそれらのＴｉ−ＣＤ３複合体を下方調節した
一方、ＣＤ８^＋Ｔ細胞がＣＤ４^＋サブセットで観察され
たのより約６倍のファクターで、それらのＴ細胞受容体
を下方調節したことを明らかにした。これらの結果は、
ＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞のクローンの両者が、抗ク
ラスＩ刺激に応答するが、ＣＤ８^＋サブセットがより大
きい有効性で応答することを示す以前の検討と一致する
（Ｇｅ−ｐｐｅｒｔ、上記、１９８９）。

【００９２】以前の検討は、Ｔ細胞のＴｉ−ＣＤ３複合
体を橋かけすることにより誘発される活性化シグナル
は、ＣＤ４又はＣＤ８と反応性のＭａｂと同時に橋かけ
することにより増大出来ることを示している（Ａｎｄｅ
ｒｓｏｎ、上記、１９８７；Ｅｍｍｅｒｉｃｈら、「Ｓ
ｙｎｅｒｇｉｓｍ ｉｎ ｔｈｅ Ａｃｔｉｖａ−ｔｉ
ｏｎ ｏｆ Ｈｕｍａｎ ＣＤ８ Ｔ Ｃｅｌｌｓ ｂ
ｙ Ｃｒｏｓｓ−Ｌｉｎｋｉｎｇ ｔｈｅ Ｔ−Ｃｅｌ
ｌ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｃｏｍｐｌｅｘ ｗｉｔｈ ｔ
ｈｅ ＣＤ８ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ Ａｎ
ｔｉｇｅｎ」、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ ８３：８２９８（１９８６））。対照的
に、Ｍａｂ４−１０及び抗ＣＤ８Ｍａｂを用いるクラス
Ｉ抗原及びＣＤ８分子の同時橋かけは、劇的にＴ細胞増
殖を阻害した。ＣＤ４分子及びクラスＩ分子の同時橋か
けは、Ｔ細胞の４−１０媒介活性化に対して僅かな阻害
効果を有したに過ぎなかった。抗ＣＤ８ＭａｂがＴ細胞
増殖をブロックするために、それは又固定化されねばな
らなかった。

【００９３】上記の例は、ＭＨＣクラスＩ分子の新規な
決定因子を認識するＭａｂ４−１０によるＴ細胞活性化
の要件をもたらす。既述の抗クラスＩＭａｂとは異な
り、４−１０は直接敵にＴ細胞に対して細胞分裂促進性
である。Ｍａｂ４−１０がその細胞分裂促進性作用を精
製したＴ細胞の集団に働かせるために、それは好ましく
はプラスチック培養プレートに固定化される。Ｍａｂ４
−１０の固定化は、もし少量例えば少なくとも０．５〜
２％の付着性細胞がＴ細胞培養物に加えられるならば、
回避される。

【００９４】本発明に関係する当業者には明らかであろ
うが、本発明は、本発明の趣旨又は必須の特徴から離れ
ることなく、特に上述されたもの以外の形に具現でき
る。上述の本発明の特別な態様は、それ故、例示として
考え、制限するものと考えてはならない。本発明の範囲
は、上述に含まれた実施例に制限されるよりむしろ請求
の範囲に示された通りである。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、上記の実施例に記載された、ＳＤＳ−
ＰＡＧＥを還元することにより分離された種々のＭａｂ
の免疫沈降物のオートラジオグラフである。（第１の実
験から：Ｍａｂ４−１０（レーン２）、Ｗ６／３２（レ
ーン４）、２ＴＥ．２０５（レーン７）及び１Ｔ．Ｂ７
２（レーン８）；そして第２の実験から：ＭａｂＷ６／
３２（レーン９）、Ｍａｂ４−１０（レーン１１）及び
Ｍａｂ４−１０によりプレクレアーされしかも免疫沈降
されたＷ６／３２（レーン１３））。

【図２】図２は、上記の実施例に記載された、Ｍａｂ抗
ＣＤ３及びＲＡＭＩｇＧ（▲黒四角▼−▲黒四角▼）；
Ｍａｂ４−１０及びＲＡＭＩｇＧ（●−●）；Ｍａｂ抗
ＣＤ３及びＭａｂ４−１０及びＲＡＭＩｇＧ（◆−
◆）；及びＭａｂ４−１０のみ（▲−▲）による刺激後
の休止末梢Ｔ細胞におけるカルシウムの動員を示すグラ
フである。

【図３】図３は、上記の実施例に記載された、刺激後７
２時間の［^３Ｈ］−チミジン配合により測定されたＭａ
ｂ４−１０誘導Ｔ細胞の増殖を示すグラフである。（Ｍ
ａｂ抗−ＣＤ３（▲黒四角▼−▲黒四角▼）、Ｍａｂ４
−１０（●−●）、Ｍａｂ Ｗ６／３２（◆−◆）、Ｍ
ａｂ抗−ＣＤ５（○−○）又はＭａｂ抗−ＣＤ２８（▲
−▲）により刺激されたＴ細胞）。

【図４】図４は、上記の実施例に記載された、Ｍａｂ４
−１０誘導増殖のカイネティクスのグラフである。（細
胞は、Ｍａｂ吸着Ｍａｂ抗ＣＤ３（▲黒四角▼−▲黒四
角▼）、Ｍａｂ抗ＣＤ２８（○−○）；又はＭａｂ４−
１０（●−●）とともに培養された））。

【図５】図５は、上記の実施例に記載された、Ｍａｂ４
−１０のフラグメントのＴ細胞増殖に対する効果を示す
グラフである。（５Ａ：Ｔ細胞は、Ｍａｂ４−１０の固
定化（Ｆ（ａｂ′）_２フラグメント（●−●）；全分子
Ｍａｂ４−１０（○−○）又はＭａｂ Ｗ６／３２（▲
黒四角▼−▲黒四角▼）に加えられた；５Ｂ：Ｔ細胞
は、Ｍａｂ４−１０の吸着したＦ（ａｂ′）_２フラグメ
ント（▲黒四角▼−▲黒四角▼）；吸着された一価Ｆａ
ｂ４−１０（○−○）；又は３００ｎｇ／穴で可溶性Ｆ
ａｂ４−１０を含む吸着したＦ（ａｂ′）_２（△−△）
に加えられた）。

【図６】図６は、上記の実施例に記載された、マクロフ
ァージの存在下の［^３Ｈ］−チミジン配合により測定さ
れたＴ細胞増殖に対する可溶性Ｍａｂ４−１０の効果の
グラフである。（６Ａ：２％のマクロファージを含むＴ
細胞を、吸着したＭａｂ４−１０（□−□）；Ｍａｂ１
Ｔ．Ｂ７２（△−△）；Ｍａｂ９．３（●−●）又は可
溶性Ｍａｂ４−１０（▲黒四角▼−▲黒四角▼）に加え
た；６Ｂ：２％のマクロファージを含むＴ細胞を、吸着
したＭａｂ４−１０（▲黒四角▼−▲黒四角▼）；可溶
性Ｍａｂ４−１０（▲−▲）；吸着したＷ６／３２（△
−△）；又は可溶性Ｆ（ａｂ′）_２４−１０（●−●）
に加えた）。

【図７】図７は、上記の実施例に記截された、［^３Ｈ］
−チミジン配合により測定されたＴ細胞増殖に対するＭ
ＨＣクラスＩ抗原及びＣＤ８の同時橋かけの効果のグラ
フである。（Ｔ細胞を、吸着したＭａｂ４−１０のみ
（▲黒四角▼−▲黒四角▼）；Ｍａｂ ＯＫＴ６のみ
（▲−▲）；Ｍａｂ４−１０及びＭａｂ ＯＫＴ６（●
−●）；ＭａｂＯＫＴ４Ｄ（□−□）又はＭａｂ ＯＫ
Ｔ８Ａ（△−△）とともに培養した）。

【図８】図８は、上記の実施例に記載された、［^３Ｈ］
−チミジン配合により測定されたＣＤ４^＋（▲黒四角▼
−▲黒四角▼）又はＣＤ８^＋（●−●）の精製した集団
に対する固定化Ｍａｂ４−１０の効果のグラフである。

【図９】図９は、Ｍａｂ４−１０によりＣＤ４^＋Ｔ細胞
の活性化に対するＭａｂ抗−ＣＤ４の効果のグラフであ
る。（ＣＤ４^＋Ｔ細胞は、吸着したＭａｂ４−１０（●
−●）；吸着したＭａｂ４−１０及びＭａｂ抗ＣＤ４
（○−○）；又は吸着したＭａｂ及び吸着したＭａｂ抗
ＣＤ１（▲黒四角▼−▲黒四角▼）の存在下培養され
た）。

【図１０】図１０は、上記の実施例に記載された、Ｍａ
ｂ４−１０活性化Ｔ細胞のフロー・サイトメトリーの分
析のグラフである。

【図１１】図１１は、上記の実施例に記載された、抗ク
ラスＩＭａｂのパネルを用いるＭＨＣクラスＩ抗原のク
ロスブロッキングの評価を示す棒グラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｎ 15/06 //(Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91）

Claims (17)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 主要組織適合性クラスＩ分子と反応性の
   ハイプリドーマＡＴＣＣＮｏ．ＨＢ１０３５５生成モノ
   クローナル抗体４−１０。
2. 【請求項２】 ハイプリドーマＡＴＣＣ Ｎｏ．ＨＢ１
   ０３５５により生成したモノクローナル抗体。
3. 【請求項３】 リンパ球をハイプリドーマＡＴＣＣ Ｎ
   ｏ．ＨＢ１０３５５により生成したモノクローナル抗体
   ４−１０と接触させることよりなるリンパ球を活性化す
   る方法。
4. 【請求項４】 該リンパ球がＴ細胞である請求項３の方
   法。
5. 【請求項５】 該モノクローナル抗体４−１０が固定化
   されている請求項３の方法。
6. 【請求項６】 付着性細胞がリンパ球に加えられる請求
   項３の方法。
7. 【請求項７】 約０．５％〜約２％の付着性細胞が加え
   られる請求項６の方法。
8. 【請求項８】 主要組織適合性クラスＩ分子と反応性の
   他のモノクローナル抗体の添加をさらに含む請求項３の
   方法。
9. 【請求項９】 主要組織適合性クラスＩ分子と反応性の
   前記の他のモノクローナル抗体が、モノクローナル抗体
   Ｗ６／３２及びモノクローナル抗体ＢＢ７．７よりなる
   群から選ばれる請求頂８の方法。
10. 【請求項１０】 該モノクローナル抗体４−１０がＦ
    （ａｂ’）_２フラグメントの形である請求項３の方法。
11. 【請求項１１】 モノクローナル抗体４−１０による前
    記の活性化が、抗ＣＤ３モノクローナル抗体との同時の
    橋かけにより増強される請求項３の方法。
12. 【請求項１２】 該抗ＣＤ３モノクローナル抗体がモノ
    クローナル抗体ＯＫＴ３である請求項１１の方法。
13. 【請求項１３】 モノクローナル抗体４−１０による前
    記の活性化が、抗ＣＤ２８モノクローナル抗体との同時
    の橋かけにより増強される請求項３の方法。
14. 【請求項１４】 該抗ＣＤ２８モノクローナル抗体がモ
    ノクローナル抗体９．３である請求項１３の方法。
15. 【請求項１５】 製薬上許容しうる担体中の有効量のモ
    ノクローナル抗体１０又はＭａｂ４−１０のＦ（ａ
    ｂ’）フラグメントを含む生体内でリンパ球を活性化す
    る組成物。
16. 【請求項１６】 製薬上有効な量の請求項１５の組成物
    を患者に投与する段階を含む免疫疾患を治療する方法。
17. 【請求項１７】 ａ）生体外でリンパ球をモノクローナ
    ル抗体４−１０と接触させて該リンパ球を活性化して活
    性化リンパ球を生成する段階；及び ｂ）該活性化リンパ球を患者に導入して免疫疾患を治療
    する段階よりなる患者の免疫疾患を治療する方法。