MX2012006634A - Derivados de peptidos tipo glucagon 1 de doble acilato. - Google Patents

Derivados de peptidos tipo glucagon 1 de doble acilato.

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Patrick William Garibay
Jane Spetzler
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Abstract

La invención se refiere a un derivado de un análogo GLP-1, cuyo análogo comprende un primer residuo K en una posición que corresponde a la posición 37 de GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 1), un segundo residuo K en una posición que corresponde a la posición 26 de GLP-1(7-37), y un máximo de diez modificaciones de aminoácido en comparación con GLP-1(7- 37), en donde el primer residuo K se designa K37, y el segundo residuo K se designa K26, cuyo derivado comprende dos porciones enlazadas a albúmina unidas a K26 y K37, respectivamente, en donde la porción enlazada a albúmina comprende una porción prolongada seleccionada de: Química 1: HOOC-(CH2)X-CO-* Química 2: HOOC-C6H4-O-(CH2)Y-CO-* Química 3: R1-C6H4-(CH2)Z-CO-* Química 4: HOOC-C4SH2-(CH2)W-CO-* en la cual x es un entero en el intervalo de 6-18, y es un entero en el intervalo de 3-17, z es un entero en el intervalo de 1-5, R1 es un grupo que tiene una masa molar no mayor que 150 Da, y w es un entero en el intervalo de 6-18; con la condición de que cuando la porción prolongada es Química 1, la porción enlazada a albúmina comprende además un ligador de la fórmula Química 5: *-NH-(CH2)2-(O-(CH2)2)K-O-(CH2)N-CO-* en donde k es un entero en el intervalo de 1-5, y n es un entero en el intervalo de 1-5; o una sal, amida, o éster farmacéuticamente aceptable del mismo. La invención también se refiere al uso farmacéutico del mismo, por ejemplo en el tratamiento y/o prevención de todas las formas de diabetes y enfermedades relacionadas, así como a péptidos novedosos correspondientes e intermediarios de cadena lateral. Los derivados son adecuados para administración oral.

Description

DERIVADOS DE PEPTIDO TIPO GLUCAGON 1 DE DOBLE ACILADO Campo de la Invención La presente invención se refiere a derivados de Péptido Tipo Glucagón 1 (GLP-1, por sus siglas en inglés) y su uso farmacéutico, a saber, a derivados de GLP-1 de doble acilado acilados en la posición 26 y 37, y su uso farmacéutico.
Antecedentes de la Invención Journal of Medicinal Chemistry (2000), vol . 43, no. 9, p. 1664-669 describe de GLP-1 (7-37) que son de acilado doble en K26,34 - ver Tabla 1.
La WO 98/08871 describe un número de derivados de GLP-1 que incluyen algunos que son de acilado doble en K26,34, ver Ejemplos 3, 7, 17, 24, 32, 33, y 36. La liraglutida, un derivado de GLP-1 mono-acilado para administración una vez al día que se comercializa desde 2009 por Novo Nordisk A/S, también se describe en WO 98/08871 (Ejemplo 37) .
La WO 99/43706 describe un número de derivados de GLP-1 de doble y mono-acilado que incluyen alguinos derivados ?26 , 37 (ver p. 148-178) .
La WO 2005/027978 describe un número de derivados de GLP-1 que incluyen algunos que son de acilado doble en uno y el mismo residuo, K37, ver Ejemplos 8 y 9.
La WO 2009/030738 describe un número de derivados de GLP-1 que incluyen un acilado doble en K31,Dap34, ver Ejemplo Ref.:230472 Journal of Controlled Reléase (2010), vol . 144, p. 10-16 se refiere a análogos de exendina 4 acilados y describe, entre otros, una exendina 4 de acilado doble (K12,27-diLUA-Exendina 4) se describe (LUA es ácido laurico, por sus siglas en inglés , C12 ) .
La WO 06/097537 describe un número de derivados de GLP-1 que incluye semaglutida (Ejemplo 4) , uyn derivado de GLP-1 mono-acilado para administración una vez a la semana que está bajo desarrollo por Novo Nordisk A/S .
Angewandte Chemie International Edición 2008, vol. 47, p.' 3196-3201 reporta el descubrimiento y caracterización de una clase de derivados de ácido 4- (p-yodofenil) butírico que exhiben supuestamente una interacción de enlace no covalente estable con tanto albúmina de suero de ratón (MSA, por sus siglas en inglés) como albúmina de suero humana (HSA) , por sus siglas en inglés.
Campo de la Invención La invención se refiere a derivados de péptidos de GLP-1. Los derivados son acilados en la lisina nativa en la posición 26, así como en una lisina sustituida por la glicina nativa en la posición 37. Las cadenas laterales son porciones enlazadas a albúmina. Estos comprenden una porción protectora, seleccionada preferiblemente de diácidos grasos, y ácidos grasos con un grupo fenilo, fenoxi, o tiofeno distal, todos opcionalmente sustituidos. Un grupo carboxi del ácido graso o diácido graso se acila, opcionalmente por medio de un ligador, a un residuo de lisina del péptido GLP-1, preferiblemente en el grupo epsilon-amino del mismo. El péptido GLP-1 puede ser un análogo de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1) que tiene un total de hasta diez diferencias de aminoácidos en comparación con GLP-1 (7-37), por ejemplo una o más adiciones, una o más eliminaciones, y/o una o más sustituciones.
Más en particular, la invención se refiere a un derivado de un análogo GLP-1, cuyo análogo comprende un primer residuo K en una posición que corresponde a la posición 37 de GLP-l(7-37) (SEQ ID NO: 1), un segundo residuo K en una posición que corresponde a la posición 26 de GLP-1(7-37), y un máximo de diez modificaciones de aminoácido en comparación con GLP-1 (7-37), en donde el primer residuo K se designa K37, y el segundo residuo K se designa K26; cuyo derivado comprende dos porciones enlazadas a albúmina unidas a K26 y K37, respectivamente, en donde cada porción enlazada a albúmina comprende una porción protectora seleccionada de Química 1, Química 2, Química 3, y Química 4: Química 1: HOOC- (CH2) X-C0-* Química 2: HOOC-C6H4-0- (CH2) y-C0-* Química 3: R1-C6H4- (CH2) z-CO-* Química 4: HOOC-C4SH2- (CH2)„-C0- * , en el cual x es un entero en el intervalo de 6-18, y es un entero en el intervalo de 3-17, z es un entero en el intervalo de 1-5, R1 es un grupo que tiene una masa molar no mayor que 150 Da, y es un entero en el intervalo de 6-18; con la condición de que cuando la porción protectora es Química 1, la porción enlazada a albúmina comprende además un ligador de la fórmula Química 5: Química 5 : en donde k es un entero en el intervalo de 1-5, y n es un entero en el intervalo de 1-5; o una sal, amida, o éster farmacéuticamente aceptable del mismo.
La invención también se refiere a tal derivado para uso como un medicamento, en particular para uso en el tratamiento y/o prevención de todas las formas de diabetes y enfermedades relacionadas, tales como trastornos alimenticios, enfermedades cardiovasculares, enfermedades gastrointestinales, complicaciones diabéticas, enfermedad crítica, y/o síndrome de ovario policístico; y/o para mejorar parámetros de lípidos, función de célula ß mejorada, y/o para retardar o prevenir progreso de enfermedad diabética.
La invención adicionalmente se refiere a productos intermediarios en la forma de péptidos de GLP-1 y cadenas laterales, que son relevantes para la preparación de ciertos péptidos de GLP-1 y derivados de la invención.
Los derivados de la invención son biológicamente activos. También, o alternativamente, estos tienen un perfil farmacocinético prolongado. También, o alternativamente, son estables contra degradación por enzimas gastrointestinales. También, o alternativamente, tienen una alta biodisponibilidad oral. Estas propiedades son de importancia en el desarrollo de compuestos GLP-1 de siguiente generación para administración subcutánea, intravenosa, y/o en particular oral.
Descripción Detallada de la Invención La invención se refiere a derivados de péptidos de GLP-1. Los derivados son acilados en la lisina nativa en la posición 26, así como en una lisina sustituida por la glicina nativa en la posición 37. Las cadenas laterales son porciones enlazadas a albúmina. Comprenden una porción protectora, seleccionada preferiblemente de diácidos grasos, y ácidos grasos con un grupo fenilo, tiofeno, o fenoxi distal, o terminal, todos opcionalmente sustituidos. Un grupo carboxi del ácido graso o diácido graso se acila, opcionalmente por medio de un ligador, a un residuo de lisina del péptido GLP-1, preferiblemente en el grupo epsilon-amino del mismo. El péptido GLP-1 puede ser un análogo de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1) que tiene un total de hasta diez diferencias de aminoácidos en comparación con GLP-l(7-37), por ejemplo una o más adiciones, una o más eliminaciones, y/o una o más sustituciones .
Más en particular, en un primer aspecto, la invención se refiere a un derivado de un análogo GLP-1, cuyo análogo comprende un primer residuo K en una posición que corresponde a la posición 37 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1), un segundo residuo K en una posición que corresponde a la posición 26 de GLP-1 (7-37), y un máximo de diez modificaciones de aminoácido en comparación con GLP-1 (7-37), en donde el primer residuo K se designa K37, y. el segundo residuo K se designa K26, cuyo derivado comprende dos porciones enlazadas a albúmina unidas a K26 y K37, respectivamente, en donde la porción enlazada a albúmina comprende una porción protectora seleccionada de Química 1, Química 2, Química 3, y Química 4: Química 1: HOOC- (CH2) X-C0-* Química 2: HOOC-CeH4-0- (CH2) y-C0-* Química 3: R1-^-^- (CH2) Z-C0-* Química 4: HOOC-C4SH2- (CH2) W-C0-* en la cual x es un entero en el intervalo de 6-18, y es un entero en el intervalo de 3-17, z es un entero en el intervalo de 1-5, R1 es un grupo que tiene una masa molar no mayor que 150 Da, y w es un entero en el intervalo de 6-18; con la condición de que cuando la porción protectora es Química 1, la porción enlazada a albúmina comprende además un ligador de la fórmula Química 5: Química 5: en donde k es un entero en el intervalo de 1-5, y n es un entero en el intervalo de 1-5; o una sal, amida, o éster farmacéuticamente aceptable del mismo.
De esta manera, en un primer aspecto, la invención se refiere a un derivado de un análogo GLP-1, en donde el análogo GLP-1 comprende un primer residuo K en una posición que corresponde a la posición 37 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1) , un segundo residuo K en una posición que corresponde a la posición 26 de GLP-l(7-37), y un máximo de diez modificaciones de aminoácido en comparación con GLP-1 (7-37), en donde el primer residuo K se designa K37, y el segundo residuo K se designa K26, cuyo derivado comprende dos porciones enlazadas a albúmina unidas a KS y K37, respectivamente, en donde la porción enlazada a albúmina comprende una porción protectora seleccionada de Química 2, Química 3, y Química 4: Química 2: HOOC-C6H4-0- (CH2) y-C0-* Química 3: R1-C6H4- (CH2) 2-C0-* Química 4: HOOC-C4SH2- (CH2) W-C0-* en la cual y es un entero en el intervalo de 3-17, z es un entero en el intervalo de 1-5, R1 es un grupo que tiene una masa molar no mayor que 150 Da, y w es un entero en el intervalo de 6-18; o una sal, amida, o éster farmacéuticamente aceptable del mismo.
En un segundo aspecto, la invención se refiere a un derivado de un análogo GLP-1, en donde el análogo GLP-1 comprende un primer residuo K en una posición que corresponde a la posición 37 de GLP-l(7-37) (SEQ ID NO: 1), un segundo residuo K en una posición que corresponde a la posición 26 de GLP-1 (7-37) , y un máximo de diez modificaciones de aminoácido en comparación con GLP-1 (7-37), en donde el primer residuo K se designa K37, y el segundo residuo K se designa K26, cuyo derivado comprende dos porciones enlazadas a albúmina unidas a K26 y K37, respectivamente, en donde la porción enlazada a albúmina comprende i) una porción protectora de la fórmula Química 1 : Química 1: H00C- (CH2)x-C0-* en la cual x es un entero en el intervalo de 6-18; y ii) un ligador de la fórmula Química 5: Química 5 : en donde k es un entero en el intervalo de 1-5, y n es un entero en el intervalo de 1-5; o una sal, amida, o éster farmacéuticamente aceptable del mismo.
En un tercer aspecto, la invención se refiere a un derivado de un análogo GLP-1, en donde el análogo GLP-1 comprende un primer residuo K en una posición que corresponde a la posición 37 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1), un segundo residuo K en una posición que corresponde a la posición 26 de GLP-1 (7-37), y un máximo de diez modificaciones de aminoácido en comparación con GLP-1 (7-37), en donde el primer residuo K se designa K37, y el segundo residuo K se designa K2S; cuyo derivado comprende dos porciones prolongadas unidas a K26 y K37, respectivamente, por medio de un ligador, en donde la porción protectora es seleccionada de Química 1, Química 2, Química 3, y Química 4: Química 1: HOOC- (CH2) X-C0-* Química 2: HOOC-C6H4-0- (CH2) y-C0-* Química 3: R1-C6H4- (CH2) z-CO-* Química 4: HOOC-C4SH2- (CH2)„-CO-* en la cual x es un entero en el intervalo de 6-18, y es un entero en el intervalo de 3-17, z es un entero en el intervalo de 1-5, R1 es un grupo que tiene una masa molar no mayor que 150 Da, y w es un entero en el intervalo de 6-18; y el ligador comprende Química 5: Química 5 : en donde k es un entero en el intervalo de 1-5, y n es un entero en el intervalo de 1-5; o una sal, amida, o éster farmacéuticamente aceptable del mismo.
La invención también se refiere a un producto intermediario en la forma de un análogo GLP-1 que comprende las siguientes modificaciones en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1) : (i) (8Aib, 31H, 34Q, 37K) ; (ii) (des7-8, 34R, 37K, 38E) ; (iii) (des7-8, 34R, 37K) ; (iv) (8Aib( 9G, 34R, 37K) ; (v) (8Aib, 23R, 34R, 37K) ; (vi) (31H, 34Q, 37K) ; (vii) (9Q, 34R, 37K) ; (iix) (30E, 34R, 37K) ; (ix) (34R, 37K, 38G) ; (x) (34R, 36G, 37K) ; o (xi) (34R, 37K, 38E) ; o una sal, amida, o éster farmacéuticamente aceptable de cualquiera de los análogos de los mismos.
La invención también se refiere a un producto intermediario que comprende una porción protectora seleccionada de Química 2c, Química 3b, y Química 4b: Química 2c: HOOC-C6H4-0- (CH2) y-CO-PG Química 3b: R1-C6H4- (CH2) z-CO-PG Química 4b: HOOC-C4SH2- (CH2)„-CO-PG en la cual y es un entero en el intervalo de 3-17, z es un entero en el intervalo de 1-5, R1 es un grupo que tiene una masa molar no mayor que 150 Da, w es un entero en el intervalo de 6-18, y *-C0-PG es un éster activado; en donde, opcionalmente, el grupo *-C00H distal de la porción protectora, si se presenta, se funcionaliza como un éster no reactivo; o una sal, amida, o éster farmacéuticamente aceptable del mismo.
Y finalmente la invención también se refiere al uso farmacéutico de los análogos y derivados de la invención, en particular para uso en el tratamiento y/o prevención de todas las formas de diabetes y enfermedades relacionadas, tales como trastornos alimenticios, enfermedades cardiovasculares, enfermedades gastrointestinales, complicaciones diabéticas, enfermedad crítica, y/o síndrome de ovario policístico; y/o para mejorar parámetros de lípidos, función de célula ß mejorada, y/o para retardar o prevénir progreso de enfermedad diabética.
En lo que sigue, las letras Griegas pueden representarse por su símbolo o el nombre escrito correspondiente, por ejemplo: a = alfa; ß = beta; e = epsilon; ? = gamma; ? = omega; etc. También, la letra Griega de µ puede representarse por "u" , por ejemplo en µ1=?1, o en µ =^? .
Un asterisco (*) en una fórmula química designa i) un punto de enlace, ii) un radical, y/o iii) un electrón no compartido .
Análogos GLP-1 El término "análogo GLP-1" o "análogo de GLP-1" como se usa en la presente se refiere a un péptido, o un compuesto, que es una variante del Péptido Tipo Glucagón humano 1 (GLP-1(7-37)), la secuencia del cual se incluye en el listado de secuencias como SEQ ID NO: 1. El péptido que tiene la secuencia de de SEQ ID NO: 1 también puede designarse GLP-1 "nativo" .
En el listado de secuencias, el primer residuo de aminoácido de SEQ ID NO: 1 (histidina) se le asigna el no. 1. Sin embargo, en lo que sigue - de acuerdo con una práctica establecida en la técnica - este residuo de histidina se refiere como no. 7, y los residuos de aminoácido posteriores se numeran en consecuencia, finalizando con glicina no. 37. Por lo tanto, generalmente, cualquier referencia en la presente a un número de residuo de aminoácido o un número de posición de la secuencia GLP-1 (7-37) es a la secuencia que inicia con His en la posición 7 y finaliza con Gly en la posición 37.
Los análogos GLP-1 de los derivados de la invención pueden describirse con referencia a i) el número del residuo de aminoácido en GLP-1 (7-37) nativo que corresponde al residuo de aminoácido que está modificado (es decir, la posición correspondiente en GLP-1 nativo) , y a ii) la modificación actual. Los siguientes son ejemplos no limitantes de nomenclatura análoga apropiada.
Un ejemplo no limitante . de un análogo GLP-1 del derivado de la invención es un análogo que sólo se modifica de manera que comprende un primer residuo de lisina en una posición que corresponde a la posición 37 de GLP-1 (7-37) . La secuencia de aminoácido de este análogo es de otra manera idéntica a la de GLP-1 nativo, y este análogo puede designarse K37-GLP-1 (7-37) . Esta designación representa la secuencia de aminoácido de GLP-1 nativo donde la glicina en la posición 37 se ha sustituido con lisina.
Este GLP-1 análogo del derivado de la invención adicionalmente comprende un segundo residuo de lisina en una posición que corresponde a la posición 26 de GLP-1 (7-37) . Ya que la secuencia de aminoácido de este análogo es de otra manera idéntica a la de GLP-1 nativo, tal análogo es, todavía, designado K37-GLP-1 (7-37) , ya que K26 está implícito por la referencia a GLP-1 nativo (7-37) , SEQ ID NO: 1.
En consecuencia, K37-GLP-1 (7-37) designa un análogo GLP-1(7-37) en donde la glicina que se presenta naturalmente en la posición 37 se ha sustituido con lisina.
El término "análogo de K37-GLP-1. (7-37) " se refiere a un análogo de GLP-1 (7-37) que comprende la modificación K37 y al menos una modificación adicional, en comparación con GLP-1 (7-37) .
El análogo GLP-1 que forma parte del derivado de la invención comprende un primer residuo K en una posición que corresponde a. la posición 37 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1) , un segundo residuo K en una posición que corresponde a la posición 26 de GLP-1 (7-37) , y un máximo de diez modificaciones de aminoácido en comparación con GLP-1 (7-37), en donde el primer residuo K se designa K37, y el segundo residuo K se designa K26. En otras palabras, es un péptido GLP-l(7-37) modificado en el cual un número de residuo de aminoácidos se ha cambiado cuando se compara con GLP-1 nativo (7-37) (SEQ ID NO: 1) . Estos cambios, o modificaciones, pueden representar, independientemente, una o más sustituciones, adiciones, y/o eliminaciones de aminoácidos.
Otro ejemplo no limitante de un análogo de un derivado de la invención es [Aib8,Arg34, Lys37] GLP-1 (7-37) , que designa un análogo GLP-1 (7-37), en el cual la alanina en la posición 8 se ha sustituido con ácido a-aminoisobutírico (Aib) , la lisina en la posición 34 se ha sustituido con arginina, y la glicina en la posición 37 se ha sustituido con lisina. Este análogo también puede ser designado (8Aib, R34, K37) GLP-1 (7-37) .
Un ejemplo no limitante adicional de un análogo de un derivado de la invención es un análogo "que comprende 34E, 34Q, o 34R" que se refiere a un análogo GLP-1 que tiene ya sea un ácido glutámico (E) , una glutamina (Q) , o una arginina (R) en una posición que corresponde a la posición 34 de GLP-1 nativo (SEQ ID NO: 1) , y que puede comprender modificaciones adicionales en comparación con SEQ ID NO: 1.
Todavía un ejemplo no limitante de un análogo de un derivado de la invención es el análogo de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1) que es sencillamente designado " (8Aib, 31H, 34Q, 37K)". Esta designación se refiere a un análogo que es idéntico a SEQ ID NO: 1 excepto por estas cuatro sustituciones, es decir un análogo en el cual la alanina en la posición 8 se ha sustituido con ácido a-aminoisobutírico (Aib) , el triptofano en la posición 31 se ha sustituido con histidina, la lisina en la posición 34 se ha sustituido con glutamina, y la glicina en la posición 37 se ha sustituido con lisina. Ese análogo no comprende modificaciones adicionales en comparación con SEQ ID NO: 1.
Todavía un ejemplo no limitante de un análogo de un derivado de la invención es un análogo que comprende des7 (o Des7), que se refiere a un análogo de GLP-l(7-37) en el cual el aminoácido N terminal, histidina, se ha eliminado. Este análogo también puede ser designado GLP-l(8-37) .
Similarmente , (des7+des8) ; (des7, des8) ; (des7-8) ; o (Des7, Des8) en relación a un análogo de GLP-l(7-37), donde la referencia a GLP-1 (7-37) puede estar implicada, se refiere a un análogo en el cual los aminoácidos correspondientes a los dos aminoácidos N terminal de GLP-1 nativo, histidina y alanina, se han eliminado. Este análogo también puede ser designado GLP-1 (9-37) .
Todavía un ejemplo no limitante de un análogo de un derivado de la invención es un análogo que comprende Imp7, y/o (Aib8 o S8) , que se refiere a un análogo GLP-1 (7-37), que, cuando se compara con GLP-1 nativo, comprende una sustitución de histidina en la posición 7 con ácido imidazopropiónico (Imp) ; y/o una sustitución de alanina en la posición 8 con ácido a-aminoisobutírico (Aib), o con serina.
Los análogos "que comprenden" ciertas modificaciones especificadas pueden comprender modificaciones adicionales, cuando se compara con SEQ ID NO: 1. Dos ejemplos, no limitantes, de análogos que comprenden Imp7, y/o (Aib8 o S8) , y forman parte de derivados de la invención son las partes péptido de Química 47 y Química 58.
Los ejemplos no limitantes de un análogo de GLP-l(7-37) que comprende (des7+des8) , Arg34, Lys37, y Glu38 son los siguientes: péptido [Des7, Des8, Arg34, Lys37] GLP-1 (7-37) -Glu38; y N9-{2- [2- (lH-Imidazol-4-il) -etilcarbamoil] -2-metil-propionil} [Arg34, Lys37] GLP-1 (9-37) Glu38-péptido. En el último compuesto un imitador dipéptido de las N terminales de GLP-1 nativo (His-Ala) es unido a las nuevas N terminales, Glu 9, por medio de un enlace amida.
Los imitadores His- o His-Ala apropiados que pueden usarse como un tipo de un sustituto para los aminoácidos de N terminal eliminados, si lo hay, comprende una estructura de anillo aromático, que contiene nitrógeno, heterocíclico, por ejemplo piridina o imidazol . Los imitadores His- o His-Ala preferidos son derivados de un imidazol o una piridina, diferentes a His y His-Ala, en una modalidad tienen un sustituyente con un grupo ácido carboílico libre, que puede formar un enlace amida con un group amino del aminoácido N terminal del péptido. El término imidazol se refiere a imidazoles como una clase de heterociclos con estructura de anillo similar pero con sustituyentes variados, y al contrario para piridina.
Como es aparente de los ejemplos anteriores, pueden identificarse los residuos de aminoácidos por su nombre completo, su código de una letra, y/o su código de tres letras. Estas tres formas son completamente equivalentes.
Las expresiones "una posición equivalente a" o "posición correspondiente" puede usarse para caracterizar el sitio de modificación en una secuencia GLP-l(7-37) modificada por referencia a GLP-1 nativo(7-37) (SEQ ID NO: 1). Las posiciones equivalente o correspondientes, así como el número de modifications , se deducen fácilmente, por ejemplo por escritura sencilla y a simple vista; y/o una proteína estándar o programa de alineación de péptido puede usarse, tales como "align" que es una alineación Needleman-Wunsch. El algoritmo se describe en Needleman, S.B. and Wunsch, C.D., (1970), Journal of Molecular Biology, 48: 443-453, y el programa de alineación por Myers and W. Mi11er en "Optimal Alignments in Linear Space" CABIOS (computer applications in the biosciences) (1988) 4:11-17. Para la alineación, puede usarse la matriz de registro predeterminada BLOSUM50 y la matriz de identidad predeterminada, y la penalización para el primer residuo en un espacio puede establecerse en -12, o preferiblemente en -10, y las penalizaciones para residuos adicionales en un espacio en -2, o preferiblemente en -0.5.
Un ejemplo de tal alineación ser inserta enseguida, en el cual la secuencia no. 1 is SEQ ID NO: 1, y la secuencia no. 2 es el análogo (des7-8, 34R, 37K, 38E) de la misma: # 1: GLP-M7-37) # 2: GLP-1 (7-37)_Análogo # Matriz: EBLOSUM62 # Penalización_espacio : 10.0 # Penalización_Extención : 0.5 # Longitud: 32 # Identidad: 27/32 (84.4%) # Similitud: 28/32 (87.5%) # Espacios: 3/32 ( 9.4%) # Registro: 138.0 1 1 HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG- 31 2 1 --EGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVRGRKE 30 En el caso de aminoácidos no naturales tales como Imp y/o Aib a incluirse en la secuencia, o en el caso de imitadores His-Ala, estos pueden, para propósitos de alineación, reemplazarse con X. Si se desea, X puede corregirse manualmente más tarde.
El término "peptido" , por ejemplo como se usa en el contaxto de análogos GLP-1 de los derivados de la invención, se refiere a un compuesto que comprende una serie de aminoácidos interconectados por enlaces amida (o péptido) .
En una modalidad particular el péptido es para una extención grande, o predominantemente, compuesto de aminoácidos interconectados por enlaces amida (por ejemplo, al menos 50%, 60%, 70%, 80%, o al menos 90%, por masa molecular) . En otra modalidad particular el péptido consiste de aminoácidos interconectados por enlaces péptido.
Los péptidos de la invención comprenden al menos cinco aminoácidos constituyentes conectados por enlaces péptido. En modalidades particulares el péptido comprende al menos 10, preferiblemente al menos 15, más preferiblemente al menos 20, aún más preferiblemente al menos 25, o con mayor preferencia al menos 28 aminoácidos.
En modalidades particulares, el péptido está compuesto de al menos cinco aminoácidos constituyentes, compuestos preferiblemente de al menos 10, al menos 15, al menos 20, al menos 25, o más preferiblemente compuesto de al menos 28 aminoácidos.
En modalidades particulares adicionales, el péptido está a) compuesto de, o b) consiste de, i) 29, ii) 30, iii) 31, o iv) 32 aminoácidos.
Todavía en una modalidad particular adicional el péptido consiste de aminoácidos interconectados por enlaces péptido .
Los aminoácidos son moléculas que contienen un grupo amina y un grupo ácido carboxílico, y, opcionalmente, uno o más grupos adicionales, a menudo referido como una cadena lateral .
El término "aminoácido" incluye aminoácidos proteogénicos (codificado por el código genético, incluyendo aminoácidos naturales, y aminoácidos estándares), así como aminoácidos no proteogénicos (no encontrados en proteínas, y/o no codificados en el código genético estándar) , y sintéticos. De esta manera, los aminoácidos pueden seleccionarse del grupo de aminoácidos proteinogénicos , aminoácidos no proteinogénicos, y/o aminoácidos sintéticos.
Los ejemplos de aminoácidos no limitantes que no son codificados por el código genético son gamma-carboxiglutamato, ornitina, y fosfoserina. Los ejemplos de aminoácidos sintéticos no limitantes son los isómeros D de los aminoácidos tales como D-alanina (en lo que sigue algunas veces abreviado "a" como por ejemplo en "a8", que en consecuencia se refiere a D-Ala8) y D-leucina, Aib (ácido a-aminoisobutírico) , ß-alanina, y des-amino-histidina (desH, nombre alternativo ácido imidazopropiónico, abreviado Imp) .
En lo que sigue, todos los aminoácidos para los cuales el isómero óptico no se establece se entiende que significa el isómero L (a menos que se especifique de otra manera) .
Los derivados de GLP-1 y análogos de la invención tienen actividad GLP-1. Este término se refiere a la capacidad para enlazarse al receptor GLP-1 e inicia una trayectoria de transducción de señal que resulta en acción insulinotrópica u otros efectos fisiológicos como se conoce en la técnica. Por ejemplo, los análogos y derivados de la invención pueden propbarse para actividad GLP-1 usando el ensayo descrito en el Ejemplo 50 en la presente.
Derivados GLP-1 El término "derivado" como se usa en la presente en el contexto de un péptído GLP-1 o análogo significa un péptido GLP-1 químicamente modificado o análogo, en el cual uno o más sustituyentes se han unido covalentemente al péptido. El süstituyente también puede referirse como una cadena lateral.
En una modalidad particular, la cadena lateral es capaz de formar agregados no covalentes con albúmina, promoviendo por ello la circulación del derivado con el torrente sanguíneo, y también tiene el efecto de prolongar el tiempo de acción del derivado, debido al hecho de que el agregado del derivado GLP-1 y albúmina sólo se desintegra lentamente para liberar el ingrediente farmacéutico activo. De esta manera, el süstituyente, o cadena lateral, como un todo se refiere preferiblemente como una porción enlazada a albúmina.
En modalidades particulares, la cadena lateral tiene al menos 10 átomos de carbono, o al menos 15, 20, 25, 30, 35, o al menos 40 átomos de carbono. En modalidades particulares adicionales, la cadena lateral puede incluir además al menos 5 heteroátomos , en particular 0 y N, por ejemplo al menos 7, 9, 10, 12, 15, 17, o al menos 20 heteroátomos, tales como al menos 1, 2, o 3 átomos N, y/o al menos 3, 6, 9, 12, o 15 átomos 0.
En otra modalidad particular la porción enlazada a albúmina comprende una porción que es particularmente relevante para el enlace de albúmina y por ello la prolongación, cuya porción puede en consecuencia referirse como una porción protectora. La porción protectora puede estar en, o cerca del, extremo opuesto de la porción enlazada a albúmina, con relación a su punto de enlace al péptido.
Todavía en una modalidad particular adicional la porción enlazada a albúmina comprende una porción entre la porción protectora y él punto de enlace al péptido, cuya porción puede referirse como un ligador, porción ligadora, espaciador, o similares. El ligador puede ser opcional, y po lo tanto en tal caso la porción enlazada a albúmina puede ser idéntica a la porción protectora.
En modalidades particulares, la porción enlazada a albúmina y/o la porción protectora es lipofílica, y/o cargada negativamente a pH fisiológico (7.4) .
La porción enlazada a albúmina, la porción protectora, o el ligador puede unirse covalentemente a un residuo de lisina del péptido GLP-1 por acilación. La química de conjugación adicional o alternativa incluye alquilación, formación de éster, o formación de amida, o acoplar a un residuo de cisteína, tales como por acoplamiento de maleimida o haloacetamida (tales como bromo-/fluoro-/yodo- ) .
En una modalidad preferida, un éster activo de la porción enlazada a albúmina, que comprende preferiblemente una porción protectora y un ligador, se liga covalentemente a un grupo amino de un residuo de lisina, preferiblemente el grupo amino epsilon del mismo, bajo formación de un enlace amida (este proceso se refiere como acilación) .
A menos que se establezca de otra manera, cuando se hace referencia a una acilación de un residuo de lisina, se entiende que es para el grupo epsilon-amino del mismo.
Un derivado que comprende dos porciones prolongadas unidas a K26 y K37, opcionalmente por medio de un ligador, puede referirse como un derivado que se ha acilado dos veces, de doble acilado, o de acilación doble en los grupos amino epsilon de los residuos de lisina en las posiciones correspondientes a . la posición 26 y 37, respectivamente, de GLP-1 (7-37) .
Para los propósitos actuales, los términos "porción enlazada a albúmina", "porción protectora", y "ligador" puede incluir las formas sin reaccionar así como las formas que reaccionan de estas moléculas. Si o no está implicada uno o la otra forma es claro a partir del contexto en el cual se usa el término.
En un aspecto, cada porción protectora comprende, o consiste de, una porción protectora independientemente seleccionada de Química 1, Química 2, Química 3, y Química 4: Química 1: HOOC- (CH2) X-C0-* Química 2: HOOC-C6H4-0- (CH2) y-C0-* Química 3: R1-C6H4- (CH2) Z-C0-* Química 4: HOOC-C4SH2- (CH2) W-C0-* en la cual x es un entero en el intervalo de 6-18, y es un entero en el intervalo de 3-17, z es un entero en el intervalo de 1-5, R1 es un grupo que tiene una masa molar no mayor que 150 Da, y w es un entero en el intervalo de 6-18.
En una modalidad, *-(CH2)x-* se refiere a alquileno recto o ramificado, preferiblemente recto en la cual x es un entero en el intervalo de 6-18.
En otra modalidad, *- (CH2)y-* se refiere a alquileno recto o ramificado, preferiblemente recto en la cual y es un entero en el intervalo de 3-17.
En una tercera modalidad, *-(CH2)z-* se refiere a alquileno recto o ramificado, preferiblemente recto en la cual z es un entero en el intervalo de 1-5.
Todavía en una modalidad adicional, *-(CH2)w-* se refiere a alquileno recto o ramificado, preferiblemente recto en la cual w es un entero en el intervalo de 6-18.
En otro aspecto la porción enlazada a albúmina comprende, o consiste de, una porción protectora seleccionada de diácidos grasos, y ácidos grasos con un grupo fenilo o fenoxi distal (terminal), ambos opcionalmente sustituidos. Los sustituyentes opcionalmes al grupo fenilo, y/o fenoxi, tienen una masa molar no mayor que 150 Da, preferiblemente no mayor que 125 Da, más preferiblemente no mayor que 100 Da, aún más preferiblemente no mayor que 75 Da, o más preferiblemente no mayor que 50 Da. Ejemplos de sustituyentes incluyen, sin limitación, carboxi , hidroxilo, alquilo C1-C5 lineal o ramificado inferior tales como metilo y tert. butilo, y halógeno tales como yodo.
Para el enlace al péptido GLP-1, el grupo ácido del ácido graso, o uno de los grupos ácidos del diácido graso, forma un enlace amida con el grupo amino epsilon de un residuo de lisina en el péptido GLP-1, preferiblemente por medio de un ligador.
El término "ácido graso" se refiere a ácidos monocarboxílieos alifáticos que tienen desde 4 hasta 28 átomos de carbono, es preferiblemente no ramificado, y/o aún numerado, y puede ser saturado o no saturado.
El término "diácido graso" se refiere a ácidos grasos como se define antes pero con un grupo ácido carboxílico adicional en la posición omega . De esta manera, los diácidos grasos son ácidos dicarboxílieos .
En una modalidad preferida la porción protectora es seleccionada de HOOC- (CH2) n-C0-* , HOOC-C6H4-0- (CH2) m-C0-* , y R1-^!^- (CH2) p-CO-* , en la cual n es un entero en el intervalo de 8-16, m es un entero en el intervalo de 7-17, p es un entero en el intervalo de 1-5, y R1 es un grupo que tiene una masa molar no mayor que 150 Da.
La nomenclatura es como es usual en la técnica, por ejemplo en las fórmulas anteriores *-COOH así como HOOC-* se refiere a carboxi ; *-C6H4-* a fenileno; *-CO-*, así como *-OC- *, a carbonilo (0=C<*.) ; C6H5-0-* a fenoxi ; C4H4 S o C4SH4 tiofeno; y *-C4SH2-* a un di-radical del mismo (cualquier tiofenileno) . En modalidades particulares, los aromáticos, tales como el fenoxi , y los radicales fenileno, pueden ser, independientemente, orto, meta, o para. En otra modalidad, el di-radical tiofenileno puede ser 2,3-; 2,4-; o 2,5-.
La masa molar (M) de una sustancia química (tal como el grupo R1) es la masa de un mol de la sustancia. La masa molar se indica en dalton, símbolo Da, con la definición 1 Da = 1 g/mol .
La masa molar puede calcularse a partir de pesos atómicos estándar, y a menudo se enlista en catálogos químicos . La masa molar de un compuesto se da por la suma de los . pesos atómicos estándar de los átomos que forman el compuesto multiplicado por la constante de masa molar, Mu que es igual a 1 g/mol. Como un ejemplo, la masa molecular de tert.butilo (C4H9) es (C4H9) = ( [4 x 12.01] + [9 xl.008]) x 1 g/mol = 57 Da.
Se publican los pesos atómicos estándar por la Unión Internacional de Química Pura y Aplicada (IUPAC, por sus siglas en inglés) , y también se reimprime en una amplia variedad de libros de texto, catálogos comerciales, gráficos etc .
Como se explica antes, los derivados GLP-1 de la presente invención son de acilado doble, es decir dos porciones enlazadas a albúmina son unidas covalentemente al péptido GLP-1. Los puntos de unión son el residuo de lisina nativa en la posición que corresponde a la posición 26 de GLP-1 (7-37), y un residuo de lisina que se ha sustituido por el residuo de glicina nativa en la posición que corresponde a la posición 37 de GLP-1 (7-37).
En una modalidad particular, las dos porciones enlazadas a albúmina (es decir las cadenas laterales completas) son similares, preferiblemente sustancialmente idénticas, o, aún más preferiblemente, idénticas.
En otra modalidad particular, las dos porciones prolongadas son similares, preferiblemente sustancialmente idénticas, o, aún más preferiblemente, idénticas.
Todavía en una modalidad particular adicional,' los dos ligadores son similares, preferiblemente sustancialmente idénticos, o, aún más preferiblemente idénticos.
El término "sustancialmente idénticos" incluye diferencias desde la identidad que se deben a la formación de una o más sales, ésteres, y/o amidas; preferiblemente formación de una o más sales, ésteres de metilo, y amidas sencillas; más preferiblemente formación de no más de dos sales, ésteres de metilo, y/o amidas sencillas; aún más preferiblemente formación de no más de una sal, éster de metilo, y/o amida sencilla; o más preferiblemente formación de no más de una sal .
En el contexto de compuestos químicos tales como las porciones del enlace de albúmina, porciones prolongadas, y ligadores, puede determinarse la similitud y/o identidad usando cualquier programa y/o algoritmo de computadora apropiado conocido en la técnica.
Por ejemplo, la similitud de dos -porciones prolongadas, dos ligadores, y/o dos cadenas laterales completas puede determinarse apropiadamente usando huellas digitales moleculares. Las huellas digitales es un método matemático para representar una estructura química (ver por ejemplo Chemoinformatics : A textbook, Johann Gasteiger and Thomas Engel (Eds) , Wiley-VCH Verlag, 2003).
Ejemplos de huellas digitales apropiadas incluyen, sin limitación, huellas digitales UNITY, huellas digitales MDL, y/o huellas digitales ECFP, tales como huellas digitales ECFP_6 (ECFP se establece para huellas digitales de conectividad extendida) .
En modalidades particulares, las dos porciones prolongadas, los dos ligadores, y/o las dos cadenas laterales completas se representan como a) huellas digitales ECFP_6; b) huellas digitales UNITY; y/o c) huellas digitales MDL.
El coeficiente Tanimoto se usa preferiblemente para calcular la similitud de las dos huellas digitales, si se usa a) , b) o c) .
En modalidades particulares, si se usa a) , b) o c) , las dos porciones prolongadas, los dos ligadores, y/o las dos cadenas laterales enteras, respectivamente, tienen una similitud de al menos 0.5 (50%); preferiblemente al menos 0.6 (60%); más preferiblemente al menos 0.7 (70%), o al menos 0.8 (80%); aún más preferiblemente al menos 0.9 (90%); o con mayor preferencia al menos 0.99 (99%), tal como una similitud de 1.0 (100%) .
Las huellas digitales UNITY pueden calcularse usando el programa SYBYL (disponible de Tripos, 1699 South Hanley Road, St. Louis, MO 63144-2319 EUA) . Las huellas digitales ECFP_6 y MDL pueden calcularse usando el programa Pipeline Pilot (disponible de Accelrys Inc., 10188 Telesis Court, Suite 100, San Diego, CA 92121, EUA) .
Para más detalles, ver por ejemplo J. Chem. Inf . Model . 2008, 48, 542-549; J. Chem. Inf. Comput . Sci. 2004, 44, 170-178; J. Med. Chem. 2004, 47, 2743-2749; J. Chem. Inf. Model. 2010, 50, 742-754; así como SciTegic Pipeline Pilot Chetnistry Collection: Basic Chemistry User Guide, Marzo 2008, SciTegic Pipeline Pilot Data Modeling Collection, 2008 - ambos de Accelrys Software Inc., San Diego, EU, y las guías http : //www. tripos . com/tripos_resources/fileroot/pdfs/Unity_ll 1408.pdf, y http://www.tripos.com/data/SYBYL/SYBYL_072505.pdf .
Un ejemplo de un cálculo de similitud se inserta de aquí en adelante, en el cual la cadena lateral entera de Química 23 se comparó con un éster de metilo del mismo, viz. El éster de mono metilo de la porción de glutamina ligadora (Química 23a) : Química 23a: Usando a) huellas digitales ECFP_6 la similitud es 0.798, usando b) huellas digitales UNITY la similitud es 0.957; y usando huellas digitales MDL la similitud es 0.905.
En caso de dos cadenas laterales idénticas (porciones enlazadas a albúmina) el derivado puede designarse simétrico.
En modalidades particulares, el coeficiente de similitud es al menos 0.80, preferiblemente al menos 0.85, más preferiblemente al menos 0.90, aún más preferiblemente al menos 0.95, o con mayor preferencia al menos 0.99.
Cada uno de los dos ligadores del derivado de la invención puede comprender el siguiente primer elemento ligador: Química 5 : en donde k es un entero en el intervalo de 1-5, y n es un entero en el intervalo de 1-5.
En una modalidad particular, cuando k=l y n= 1, este elemento ligador puede designarse OEG, o un di-radical de ácido 8-amino-3 , 6-dioxaoctánico, y/o puede representarse por la siguiente fórmula: Química 5a: *-NH- (CH2)2-0- (CH2)2-0-CH2-CO-*.
En otra modalidad particular, cada ligador del derivado de la invención puede comprender además, independientemente, un segundo elemento ligador, preferiblemente un di-radical Glu, tales como Química 6 y/o Química 7: Química 6 : Químic en donde el di-radical Glu puede incluirse p veces, donde p es un entero en el intervalo de 1-3.
Química 6 también puede referirse como gamma-Glu, o brevemente gGlu, debido al hecho de que es el grupo gamma carboxi del aminoácido ácido glutámico que se usa aquí para conexión a otro elemento ligador, o al grupo amino epsilon de lisina. Como se explica antes, el otro elemento ligador puede, por ejemplo, ser otro residuo Glu, o una molécula OEG. El grupo amino de Glu de nuevo forma un enlace amida con el grupo carboxi de la porción protectora, o con el grupo carboxi de, por ejemplo, una molécula OEG, si se presenta, o con el grupo gamma-carboxi de, por ejemplo, otro Glu, si se presenta.
Química 7 también puede referirse como alfa-Glu, o brevemente aGlu, o simplemente Glu, debido al hecho de que es el grupo alfa carboxi del aminoácido ácido glutámico que se usa aquí para conexión a otro elemento ligador, o al grupo amino epsilon de lisina.
Las estructuras anteriores de Química 6 y Química 7 cubren la forma L, así como la forma D de Glu. En modalidades particulares, Química 6 y/o Química 7 están, independientemente, a) en la forma L, o b) en la forma D.
En otra modalidad particular, cada ligador del derivado de la invención puede comprender además, independientemente, el siguiente tercer elemento ligador: Química 8 : *-NH- (CH2)q-CHR2-CO-*, en el cual q es un entero en el intervalo de 2-12, y R2 es hidrógeno (H) o amino (NH2) .
En Química 8, el grupo *-(CH2)q-* puede representar alquileno recto o ramificado, preferiblemente recto, en donde q es un entero en el intervalo de 2-12.
Todavía en modalidades particulares adicionales el ligador tiene a) desde 5 hasta 41 átomos C; y/o b) desde 4 hasta 28 heteroatomos. Los ejemplos particulares y no limitantes de heteroátomos son átomos N, y O. Los átomos H no son heteroátomos .
Alternativamente, la porción ligadora, si se presenta, tiene desde 5 hasta 30 átomos C, preferiblemente desde 5 hasta 25 átomos C, más preferiblemente desde 5 hasta 20 átomos C, o más preferiblemente desde 5 hasta 17 átomos C. En modalidades adicionales preferidas, la porción ligadora, si se presenta, tiene desde 4 hasta 20 heteroátomos, preferiblemente desde 4 hasta 18 heteroátomos, más preferiblemente desde 4 hasta 14 heteroátomos, o más preferiblemente desde 4 hasta 12 heteroátomos.
Alternativamente, el ligador comprende al menos una molécula OEG, y/o al menos un residuo de ácido glutámico, o en vez de los radicales correspondientes .
En una modalidad particular, cada ligador consiste de una vez Química 6 y dos veces Química 5, interconectadas por medio de enlaces amida y en la secuencia indicada, el ligador se conecta como su extremo amino libre al grupo carbonilo libre de la porción protectora, y en su extremo carbonilo libre al grupo amino epsilon de K26 o K37 del análogo GLP-1.
En otra modalidad particular, cada ligador consiste de dos veces Química 5 y una vez Química 6, interconectadas por medio de enlaces amida y en la secuencia indicada, el ligador se conecta en su extremo amino libre al grupo carbonilo libre de la porción protectora, y en su extremo carbonilo libre al grupo amino epsilon de K26 o K37 del análogo GLP-1.
Los derivados de la invención pueden existir en formas estereoisoméricas diferentes que tienen la misma fórmula y secuencia molecular de átomos unidos, pero diferen sólo en la orientación tridimensional de sus átomso en el espacio. El estereoisomerismo de los derivados de la invención ejemplificados se indica en la sección experimental, en los nombres así como las estructuras, usando nomenclatura estándar. A menos que se establezca de otra manera la invención se refiere a todas las formas estereoisoméricas del derivado reivindicado.
La concentración en plasma de los derivados GLP-1 de la invención puede determinarse usando cualquier método apropiado. Por ejemplo, puede usarse LC-MS (siglas en inglés de Cromatografía Líquida Espectroscopia de ¦ Masa) , o inraunoensayos tales como RIA (siglas en inglés de Radio Inmuno Ensayos) , ELISA (siglas en inglés de Ensayo Inmuno Sorbente Ligado a la Enzima) , y LOCI ( Inmunoensayo de Canalización de Oxígeno Luminiscente) . Los protocolos generales para ensayos RIA y ELISA apropiados se encuentran en, por ejemplo, O09/030738 en p. 116-118. Un ensayo preferido es el ensayo LOCI descrito en el Ejemplo 52, 55, y 58 en la presente.
Sal, amida, o éster farmacéuticamente aceptable Los derivados, análogos, y productos intermediarios de la invención pueden estar en la forma de una sal, amida, o éster farmacéuticamente aceptable.
Las sales son por ejemplo formadas por una reacción química entre una base y un ácido, por ejemplo: NH3 + H2S04 ? (NH4)2S04.
La sal puede ser una sal básica, una sal ácida, o puede ser ninguna de las dos (es decir una sal neutra) . Las sales básicas producen iones de hidróxido y iones de hidronio de sales acidas en agua.
Las sales de los derivados de la invención pueden formarse con cationes o aniones agregados que reaccionan con grupos aniónicos o catiónicos, respectivamente. Estos grupos pueden ser apropiados en la porción péptido, y/o en la cadena lateral de los derivados de la invención.
Los ejemplos no limitantes de grupos aniónicos de los derivados de la invención incluyen grupos carboxílicos libres en la cadena lateral, si hay, así como en la porción péptido. La porción péptido a menudo incluye un grupo ácido carboxílico libre en la C-terminal, y también puede incluir grupos carboxílicos libres en los residuos de aminoácidos de ácido interno tales como Asp y Glu.
Los ejemplos no limitantes de grupos catiónicos en la porción péptido incluyen el grupo amino libre en la N-terminal, si se presenta, así como cualquier grupo amino libre de residuos de aminoácidos básicos internos tales como His,' Arg, y Lys .
El éster de los derivados de la invención puede, por ejemplo, formarse por la reacción de un grupo ácido carboxílico libre con un alcohol o un fenol, que lleva al reemplazo de al menos un grupo hidroxilo por un grupo alcoxi o ariloxi.
La formación éster puede involucrar el grupo carboxílico libre en la C-terminal del péptido, y/o cualquier grupo carboxílico libre en la cadena lateral.
La amida de los derivados de la invención puede, por ejemplo, formarse por la reacción de un grupo ácido carboxílico libre con una amina o una amina sustituida, o por reacción de un grupo amino o libre sustituido con un ácido carboxílico .
La formación amida puede involucrar el grupo 7 carboxílico libre en la C- terminal- del péptido, cualquier grupo carboxílico libre en la. cadena lateral, el grupo amino libre en la N-terminal del péptido, y/o cualquier grupo amino libre o sustituido del péptido en el péptido y/o la cadena lateral .
En una modalidad particular, el péptido o derivado está en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable. En otra modalidad particular, el derivado está en la forma de una amida farmacéuticamente aceptable, preferiblemente con un grupo amida en la C- terminal del péptido. Todavía en una modalidad particular adicional, el péptido o derivado está en la forma de un éster farmacéuticamente aceptable.
Productos intermediarios Un tipo de producto intermediario de la invención toma la forma de un análogo GLP-1 que comprende las siguientes modificaciones, en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1) : (i) (8Aib, 31H, 34Q, 37K) ; (ii) (des7-8, 34R, 37K, 38E) ; (iii) (des7-8, 34R, 37K) ; (iv) (8Aib, 9G, 34R, 37K) ; (v) (8Aib, 23R, 34R, 37K) ; (vi) (31H, 34Q, 37K) ; (vii) (9Q, 34R, 37K) ; (iix) (30E, 34R, 37K) ; (ix) (34R, 37K, 38G) ; (x) (34R, 36G, 37K) ; or (xi) (34R, 37K, 38E) ; o una sal, amida, o éster farmacéuticamente aceptable del mismo.
Otro tipo de producto intermediario de la invención toma la forma de una porción enlazada a albúmina, o un intermediarios de cadena lateral, que comprende una porción protectora seleccionada de Química 2c, Química 3b, y Química 4b: Química 2c: HOOC-C5H4-0- (CH2) y-CO-PG Química 3b: R1-^!^- (CH2) z-CO-PG Química 4b: HOOC-C4SH2- (CH2) w-CO-PG en la cual y es un entero en el intervalo de 3-17, z es un entero en el intervalo de 1-5, R1 es un grupo que tiene una masa molar no mayor que 150 Da, w es un entero en el intervalo de 6-18, donde PG es un grupo de protección, preferiblemente *-CO-PG es un éster activado; en donde, opcionalmente, el otro grupo *-COOH (distal) de la porción protectora, si se presenta, es preferiblemente también protegido como se conoce en la técnica, por ejemplo funcionalizado como un éster no reactivo; o una sal, amida, o éster farmacéuticamente aceptable del mismo.
En una modalidad particular, el intermediario de cadena lateral comprende a) una porción protectora seleccionada de Química 2, Química 3, y Química 4: Química 2: H00C-C6H4-0- (CH2) y-C0-* Química 3: R1-C6H4- (CH2) z-CO-* Química 4 : HOOC-C4SH2- (CH2)„-CO-* en el cual y es un entero en el intervalo de 3-17, z es un entero en el intervalo de 1-5, R1 es un grupo que tiene una masa molar no mayor que 150 Da, y w es un entero en el intervalo de 6-18; y b) uno o más ligadores seleccionada de Química Química 6, y Química 7: Química 5b: Química 6a: en donde k es un entero en el intervalo de 1-5, y n es un entero en el intervalo de 1-5; y PG is un grupo de protección; en donde, opcionalmente , el grupo *-C00H de la porción protectora es preferiblemente también protegido como se conoce en la técnica, preferiblemente funcionalizado como un éster no reactivo; o una sal, amida, o éster farmacéuticamente aceptable del mismo.
En una modalidad particular, PG es un grupo que convierte reversiblemente el compuesto tal como la porción protectora no reactiva, y que puede removerse selectivamente.
Los ejemplos no limitantes de grupos PG son -OH, o grupos Euncionalizados como un éster activado, por ejemplo, sin limitación, OPfp, OPnp, y OSuc .
Otros ásteres activados apropiados pueden seleccionarse, por ejemplo, de acuerdo con la enseñanza de M. Bodanszky, "Principies of Peptide Synthesis" , 2a ed. , Springer Verlag, 1993.
Propiedades Funcionales En un primer aspecto funcional, los derivados de la invención tienen buena potencia. También, o alternativamente, en un segundo aspecto funcional, tienen un perfil farmacocinético prolongado. También, o alternativamente, en un tercer aspecto funcional, son estables contra degradación por enzimas gastrointestinales. También, o alternativamente, en un cuarto aspecto funcional, tienen una alta biodisponibilidad oral.
Actividad biológica (potencia) De acuerdo con el primer aspecto funcional, los derivados de la invención, así como los péptidos de GLP-1 constituyentes tal como (tales como K37-GLP-1 (7-37) o análogos de los mismos), son biológicamente activos, o potentes.
En una modalidad particular, potencia y/o actividad se refiere a potencia in vitro, es decir desempeño en un ensayo de GLP-1 receptor funcional, más en particular a la capacidad de estimular la formación de cA P en una línea de célula que expresa el receptor GLP-1 humano clonado.
La estimulación de la formación de cAMP en un medio que contiene el receptor GLP-1 humano puede preferiblemente determinarse usando una línea de célula transfectada estable tal como BHK467-12A (tk-tsl3) , y/o usando para la determinación de cAMP un ensayo del receptor funcional, por ejemplo con base en la competencia entre cAMP formado endógenamente y cAMP etiquetado con biotina agregado exógenamente , en el cual el ensayo cAMP se captura más preferiblemente usando un anticuerpo específico, y/o en donde un ensayo aún más preferido es el ensayo AlphaScreen cAMP, aún más preferiblemente el descrito en el Ejemplo 50.
El término concentración efectiva máxima media (EC50) generalmente se refiere a la . concentración que induce una respuesta intermedia entre la línea base y máxima, por referencia a la curva de respuesta a la dosis. EC50 se usa como una medida de la potencia de un compuesto y representa la concentración donde se observa 50% de su efecto máximo.
La potencia in vitro de los derivados de la invención puede determinarse como se describe antes, y el EC50 del derivado en cuestión se determina. Entre más bajo sea el EC50, mejor la potencia.
En una modalidad particular, él medio tiene la siguiente composición (concentraciones en ensayo finales) : TRIS-HC1 50 mM; HEPES 5 mM; MgCl2 10 mM, 6H20; NaCl 150 mM; 0.01% Tween; 0.1% BSA; 0.5 mM IBMX; 1 mM ATP; 1 uM GTP; pH 7.4.
Un medio alternativo es: Tris-HCl 50 mM, EGTA 1 mM, MgS04 1.5 mM, ATP 1.7 mM, GTP 20 mM, 3-isobutil-l-metilxantina (IBMX) 2 mM, 0.01 % Tween-20, pH 7.4.
En una modalidad particular adicional, el derivado de la invención tiene un EG50 en o debajo de 3000pM, más preferiblemente debajo de 2000pM, aún más preferiblemente debajo de ??????, o más preferiblemente debajo de 500pM.
En otra modalidad particular los derivados de la invención son potentes in vivo, lo que puede determinarse como se conoce en la técnica en cualquier modelo de animal apropiado, así como en ensayos clínicos.
El ratón db/db diabético es un ejemplo de un modelo, animal apropiado, y puede determinarse el efecto de disminución de glucosa en la sangre en tales ratones in vivo, por ejemplo como se describe en el Ejemplo 53, o como se describe en el Ejemplo 43 de WO09/030738.
También, o alternativamente, el efecto en secreción de insulina mediada por glucosa in vivo puede determinarse en estudios farmacodinámicos en minicerdos (IVGTT) , por ejemplo como se describe en el Ejemplo 55.
También, o alternativamente, el efecto en ingesta alimenticia in vivo puede determinarse en estudios farmacodinámicos en cerdos, por ejemplo como se describe en el Ejemplo 56.
Prolongación - enlace del receptor / albúmina alta y baja De acuerdo con el segundo aspecto funcional, los derivados de la invención son prolongados.
La capacidad de los derivados de la invención para enlazarse al receptor GLP-1 en presencia de una concentración baja y alta de albúmina, respectivamente, puede determinarse como se describe en Ejemplo 51.
Generalmente, el enlace al receptor GLP-1 a concentración de albúmina baja pudiera ser tan buena como sea posible, que corresponde a un valor IC50 bajo.
El valor IC50 a concentración de albúmina alta es una medida de la influencia de la albúmina en el enlace del derivado al receptor GLP-1. Como se conoce, los derivados de GLP-1 también se enlazan a albúmina. Esto es un efecto generalmente deseable, que extiende su tiempo de vida en el plasma. Por lo tanto, el . valor IC50 a albúmina alta generalmente será mayor que el valor IC50 a albúmina baja, que corresponde a un enlace reducido al receptor GLP-1, causado por la competencia de enlace de albúmina con el enlace al receptor GLP-1.
Una relación alta (valor IC50 (albúmina alta) / valor ic50 (albúmina baja)) puede por lo tanto tomarse como una indicación de que el derivado en cuestión se enlaza bien a albúmina (puede tener una vida media larga) , y también per se se enlaza al receptor GLP-1 (el valor IC50 (albúmina alta) es alto, y el valor IC50 (albúmina baja) es bajo) . Por otro lado, el enlace de albúmina puede no siempre ser deseable, o el enlace a albúmina puede volverse muy fuerte. Por lo tanto, los intervalos deseables para IC50 (albúmina baja) , IC50 (albúmina alta) /, y la relación alta/baja puede variar de compeusto a compuesto, dependiendo del uso pretendido y las circunstancias que rodean tal uso, y en otras propiedades de compuesto de interés potencial.
En una modalidad particular, la afinidad de enlace del receptor GLP-1 (IC50) en presencia de 0.005% HSA (albúmina baja) está debajo de 1000.00 nM, preferiblemente debajo de 600.00 nM, más preferiblemente debajo de 100.00 nM, o más preferiblemente debajo de 50.00 nM.
Un ensayo apropiado para determinar el enlace del receptor a una concentración de albúmina alta y baja se describe en el Ejemplo 51 en la presente.
Prolongación - vida media in vivo en ratas De acuerdo con el segundo aspecto funcional, los derivados de la invención son prolongados. En una modalidad particular, la prolongación puede determinarse como vida media (TM) en vivo en ratas después deadministración i.v. En modalidades adicionales, la vida media es al menos 4 horas, preferiblemente al menos 6 horas, aún más preferiblemente al menos 8 horas, o con mayor preferencia al menos 10 horas.
Un ensayo apropiado para determinar la vida media in vivo en ratas después de administración i.v. se describe en el Ejemplo 58 en la presente.
Prolongación - vida media in vivo en minicerdos De acuerdo con el segundo aspecto funcional, los derivados de la invención son prolongados. En una modalidad particular la prolongación puede determinarse como vida media (T¾) in vivo en minicerdos después de la administración i.v. En modalidades adicionales, la vida media es al menos 12 horas, preferiblemente al menos 24 horas, más preferiblemente al menos 36 horas, aún más preferiblemente al menos 48 horas, o con mayor preferencia al menos 60 horas.
Un ensayo apropiado para determinar la vida media in vivo en minicerdos después de la administración i.v. se describe en el Ejemplo 54 en la presente.
Degradación por enzimas gastrointestinales De acuerdo con el tercer aspecto funcional, los derivados de la invención son estables, o se estabilizan, contra la degradación por una o más enzimas gastrointestinales .
Las enzimas gastrointestinales incluyen, sin limitación, exo y endo peptidasas, tales como pepsina, tripsina, cimotripsina, elastasas, y carboxipeptidasas . La estabilidad puede probarse contra estas enzimas gastrointestinales en la forma de enzimas purificadas, o en la forma de extractos del sistema gastrointestinal.
En una modalidad particular, el derivado de la invención tiene una vida media in vitro (T¾) , en un extracto de intestinos delgados de rata, dividida por la correspondiente vida media (T¾) de GLP-1 (7-37), de al menos 1, preferiblemente arriba de 1.0, más preferiblemente al menos 1.2, todavía más preferiblemente al menos 2.0, aún más preferiblemente al menos 3.0, o con mayor preferencia al menos 4.0. En otras palabras, uan relación (SI) puede definirse para cada derivado, viz. como la vida media in vitro (T¾) del derivado en cuestión, en un extracto de intestinos delgados de rata, dividida por la correspondiente vida media (T¾) de GLP-1 (7-37).
Un ensayo apropiado para determinar vida media in vitro en un extracto de intestinos delgados de rata se describe en el Ejemplo 57 en la presente.
Biodisponibilidad oral De acuerdo con el cuarto aspecto funcional, los derivados de la invención tienen una alta biodisponibilidad oral .
La biodisponibilidad oral de derivados de GLP-1 comerciales es muy baja. La biodisponibilidad oral de derivados de GLP-1 bajo desarrollo para adminsitración i.v. o s.c. también es baja.
En consecuencia, hay una necesidad en la técnica para derivados de GLP-1 de una biodisponibilidad oral mejorada. Tales derivados debieran ser candidatos apropiados para administración oral, en la medida en que su potencia sea generalmente satisfactoria, y/o en la medida en que su vida media también sea generalmente satisfactoria.
Los inventores actuales identifican una clase novedosa de derivados de GLP-1, que tienen una biodisponibilidad oral sorprendentemente alta, y al mismo tiempo una potencia satisfactoria, y/o vida media.
También, o alternativamente, estos derivados tienen una biodisponibilidad oral sorprendentemente alta, y al mismo tiempo una afinidad de enlace alta (es decir un valor IC50 bajo) al receptor GLP-1 a una concentración de albúmina baja.
Estas características son de importancia con vista a obtener una dosis oral diaria baja del ingrediente farmacéutico activo, que es deseable por varias razones, incluyendo, por ejemplo, economía de producción, posibilidad de cuestiones de seguridad potenciales, así como cuestiones de comodidad de administración, y asuntos ambientales.
Generalmente, el término biodisponibilidad se refiere a la fracción de una dosis administrada del ingrediente farmacéutico activo (API, por sus siglas en inglés), tal como un derivado de la invención que alcanza la circulación sistémica sin cambio. Por definición, cuando se administra un API intravenosamente, su biodisponibilidad es 100%. Sin embargo, cuando se administra por medio de otras rutas (tales como oralmente) , su biodisponibilidad se reduce (debido a la absorción incompleta y metabolismo de primer paso) . El conocimiento acerca de la biodisponibilidad es esencial cuando se calcula la dosificación para ruras de administración no intravenosa.
La biodisponibilidad oral absoluta compara la biodisponibilidad (estimado como el área bajo la curva, o AUC) del API en circulación sistémica después de administración oral, con la biodisponibilidad del mismo API después de administración intravenosa. Esta es la fracción del API que se absorve a través de administración no intravenosa comparada con la correspondiente administración intravenosa del mismo API. La comparación debe ser dosis normalizada si se usan dosis diferentes; en consecuencia, cada AUC se corrige al dividir la dosis correspondiente administrada .
Se hace una gráfica de concentración API en plasma vs tiempo después de administración tanto intravenosa como oral. La biodisponibilidad absoluta (F) es la dosis AUC-oral correcta dividida por AUC intravenosa.
Los derivados de la invención tienen una biodisponibilidad absoluta oral que es mayor que la de a) liraglutida, y/o b) semaglutida ; preferiblemente al menos 10% más alta, más preferiblemente al menos 20% más alta, aún más preferiblemente al menos 30% más alta, o con mayor preferencia al menos 40% más alta. Antes de probar la biodisponibilidad oral los derivados de la invención pueden formularse apropiadamente como se conoce en la técnica de formulaciones orales de compuestos insulinotrópicos , por ejemplo usando una o más de cualquiera de las formulaciones descritas en O 2008/145728.
Se ha desarrollado una prueba, descrita en el Ejemplo 52, que se encontró que es una muy buena predicción para biodisponibilidad oral. De acuerdo con esta prueba, después de la inyección directa del derivado GLP-1 en el lumen intestinal de ratas, se · determina la concentración (exposición) del mismo en el plasma, y la relación de concentración en plasma (pmol/1) dividida por la concentración de la solución de dosificación (umol/1) se calcula para t=30 min. Esta relación es una medida de la biodisponibilidad intestinal, y se ha mostrado que se correlaciona con precisión con los datos de biodisponibilidad oral actuales .
Las modalidades particulares adicionales de los derivados de la invención se describen en las secciones encabezadas como "modalidades particulares" y "modalidades particulares adicionales" ante la sección experimental.
PROCESOS DE PRODUCCIÓN La producción de péptidos tipo GLP-l(7-37) y análogos de GLP-1 es bien conocida en la técnica.
La porción GLP-1 de los derivados de la invención (o fragmentos de los mismos), tales como K37-GLP-1 (7-37) o un análogo o fragmento del mismo, por ejemplo puede ser producido por síntesis de péptido clásica, por ejemplo, síntesis de péptido de fase sólida usando t-Boc o química Fmoc u otras técnicas bien establecidas, véase, por ejemplo, Greene y Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley & Sons, 1999, Florencio Zaragoza Dórwald, "Organic Synthesis on solid Phase", Wiley-VCH Verlag GmbH, 2000, y "Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis", Editado por W.C. Chan y P.D. White, Oxford University Press, 2000.
También, o alternativamente, pueden producirse por métodos recombinantes, viz. Por medio del cultivo de una célula hospedera que contiene una secuencia de ADN que codifica el análogo y es capaz de expresar el péptido en un medio nutriente idóneo bajo condiciones que permitan la expresión del péptido. Los ejemplos no limitantes de células hospderas idóneas para al expresión de estos péptidos son: Escherichia coli, Saccharomyces cerevisiae, así como líneas celulares BHK de mamífero o CHO.
Aquellos derivados de la invención que incluyen aminoácidos no naturales y/o un imitador mono o dipéptido de N-terminal covalentemente enlazado puede, por ejemplo, producirse como se describe en la parte experimental . 0 véase por ejemplo, Hodgson et al: "The synthesis de peptides and proteins containing non-natural amino acids" , Chemical Society Reviews, vol . 33, no. 7 (2004), p. 422-430; y WO 2009/083549 Al titulada "Semi-recombinant preparation de GLP-1 analogues" .
Los ejemplos específicos de métodos de preparación de un número de los derivados de la invención están incluidos en la parte experimental.
COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS Las composiciones farmacéuticas que comprenden un derivado de la invención o una sal, amida, o éster farmacéuticamente aceptable del mismo, y un excipiente farmacéuticamente aceptable pueden prepararse como se conoce en la técnica.
El término "excipiente" se refiere ampliamente a cualquier sustancia diferente a los ingredientes terápéuticos activos. El excipiente puede ser una sustancia inherte, una sustancia activa, y/o una sustancia medicinalmente no activa.
El excipiente puede servir para varios propósitos, por ejemplo como un portador, vehículo, diluyente, auxiliar de comprimido, y/o para mejorar la administración, y/o absorción de la sustancia activa.
La formulación de ingredientes farmacéuticamente activos con varios excipientes se conoce en la técnica, véase por ejemplo Remington: The Science and Practice of Pharmacy (por ejemplo 19a edición (1995) , y cualquier edición posterior) .
Los ejemplos no limitantes de excipientes son: Solventes, diluyentes, amortiguadores, conservadores, agentes reguladores de tonicidad, agentes quelantes y estabilizantes.
Los ejemplos de formulaciones incluyen formulaciones líquidas, es decir formulaciones acuosas que comprenden agua. Una formulación líquida puede ser una solución, o una suspensión. Por lo general una formulación acuosa comprende al menos 50% p/p de agua, o al menos 60%, 70%, 80%, o incluso al menos 90% p/p de agua.
Alternativamente, una composición farmacéutica puede ser una formación sólida, por ejemplo una composición secada por rocío o secada por congelamiento, que puede usarse como es, o donde el médico o el paciente agregue solventes, y/o diluyentes previo a su uso.
El pH en una formulación acuosa puede ser cualquiera entre pH 3 y pH 10, por ejemplo de cerca de 7.0 a cerca de 9.5; o de cerca de 3.0 a cerca de 7.0.
Una composición farmacéutica puede comprender un amortiguador. El amortiguador puede seleccionarse por ejemplo del grupo que consiste de acetato de sodio, carbonato de sodio, citrato, glicilglicina, histidina, glicina, lisina, arginina, fosfato diácido de sodio, fosfato ácido disódico, fosfato de sodio, y tris (hidroximet il) -aminometano, bicina, tricina, ácido malico, succinato, ácido maleico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido aspártico, y mezclas de los mismos. Una composición farmacéutica puede comprender un conservador. El conservador puede seleccionarse por ejemplo del grupo que consiste de fenol, o-cresol, m-cresol, p-cresol, p-hidroxibenzoato de metilo, p-hidroxibenzoato de propilo, 2-fenoxietanol, p-hidroxibenzoato de butilo, 2-feniletanol, alcohol bencílico, clorobutanol , y tiomerosal, bronopol , ácido benzoico, imidurea, clorohexidina , deshidroacetato de sodio, clorocresol, p-hidroxibenzoato de etilo, cloruro de bencetonio, clorfenesina (3p-clorfenoxipropano-1 , 2 -diol ) , y mezclas de los mismos. El conservador puede presentarse en una concentración de 0.1 mg/ml a 20 mg/ml . Una composición farmacéutica puede comprender un agente isotónico. El agente isotónico puede seleccionarse por ejemplo del grupo que consiste de una sal .(por ejemplo cloruro de sodio) , un azúcar o alcohol de azúcar, un aminoácido (por ejemplo glicina, histidina, arginina, lisina, isoleucina, ácido aspártico, triptofano, treonina) , un alditol (por ejemplo glicerol (glicerina) , 1,2-propanediol (propilenglicol) , 1 , 3 -propandiol , 1 , 3 -butandiol ) polietilenglicol (por ejemplo PEG400) , y mezclas de los mismos. Puede usarse cualquier tipo de azúcar tal como mono-, di-, o polisacáridos , o glucanos solubles en agua, incluyendo por ejemplo fructosa, glucosa, mañosa, sorbosa, xilosa, maltosa, lactosa, sacarosa, trehalosa, dextrano, pululano, dextrina, ciclodextrina, alfa y beta HPCD, almidón soluble, almidón de hidroxietilo y carboximetilcelulosa-Na . El alcohol de azúcar se define como un hidrocarburo C4-C8 que tiene al menos un grupo -OH e incluye, por ejemplo, manitol, sorbitol, inositol, galactitol, dulcitol, xilitol, y arabitol. En una modalidad, el aditivo de alcohol de azúcar es manitol. Una composición farmacéutica puede comprender un agente quelante. El agente quelante puede seleccionarse por ejemplo de sales de ácido etilenediaminotetraacetico (EDTA) , ácido cítrico, y ácido aspártico, y mezclas de los mismos. Una composición farmacéutica puede comprender un estabilizador. El estabilizador puede ser por ejemplo uno o más inhibidores de oxidación, inhibidores de agregación, tensioactivos , y/o uno o más inhibidores de proteasa. Los ejemplos no limitantes de estos varios tipos de estabilizadores se describen a continuación .
El término "formación agregada" se refiere a la interacción física entre las moléculas de polipéptido que resultan en la formación de oligómeros, que pueden mantenerse solubles, o agregados visiblemente grandes que se precipitan de la solución. La formación de agregado por un polipéptido durante el almacenamiento de una composición farmacéutica líquida puede afectar adversamente la actividad biológica de ese polipéptido, resultando en la pérdida de eficiencia terapéutica de una composición farmacéutica. Adicionalmente , la formación de agregado puede causar otros problemas tales como bloqueo de tuberías, membranas, o bombas cuando la composición farmacéutica que contiene polipéptido se administra usando un sistema de infusión.
Una composición farmacéutica puede comprender una cantidad de una base de aminoácido suficiente para disminuir la formación de agregado del polipéptido durante el almacenamiento de la composición. El término "base de aminoácido" se refiere a uno o más aminoácidos (tales como metionina, histidina, imidazol, arginina, lisina, isoleucina, ácido aspártico, triptofano, treonina) , o análogos de los mismos. Cualquier aminoácido puede estar presente ya sea en su forma de base libre o en su forma de sal. Cualquier estereoisómero (es decir, L, D, o una mezcla de los mismos) de la base aminoácido puede estar presente.
La metionina (u otros aminoácidos sulfúricos o análogos de aminoácidos) pueden agregarse para inhibir la oxidación de residuos de metionina al sulfóxido de metionina cuando el polipéptido actúa como el agente terapéutico es un polipéptido que comprende al menos un residuo de metionina susceptible a dicha oxidación. Puede usarse cualquier estereoisómero de metionina (L o D) o combinación de los mismos .
Una composición farmacéutica puede comprender un estabilizador seleccionado del grupo de polímeros de alto peso molecular o compuestos moleculares bajos. El estabilizador por ejemplo puede ser seleccionado de polietilen glicol (por ejemplo PEG 3350) , alcohol polivinílico (PVA) , polivinilpirrolidona, carboxi- /hidroxicelulosa o derivados de los mismos (por ejemplo HPC, HPC-SL, HPC-L y HPMC) , ciclodextrinas , sustancias que contienen azufre como monotioglicerol, ácido tioglicólico y 2 -metiltioetanol , y sales diferentes (por ejemplo cloruro de sodio) . Una composición farmacéutica puede comprender agentes estabilizadores adicionales tales como, pero no limitados a, metionina y EDTA, que protegen al polipéptido contra la oxidación de metionina, y un tensioactivo no iónico, que protege al polipéptido contra la agregación asociada con congelado-descongelado o cizallamiento mecánico.
Una composición farmacéutica puede comprender uno o más tensio ctivos , preferiblemente un tensioactivo, al menos un tensioactivo, o dos tensioáctivos diferentes. El término "tensioactivo" se refiere a cualquier molécula o iones que comprenden una parte soluble en agua (hidrof ílica) , y una parte soluble en grasa (lipofílica) . El tensioactivo puede seleccionarse por ejemplo del grupo que consiste de tensioáctivos aniónicos, tensioáctivos catiónicos, tensioactivos no iónicos, y/o tensioactivos zwitteriónicos.
Una composición farmacéutica puede comprender uno o más inhibidores de proteasa, tales como, por ejemplo, EDTA (ácido tetraacético etilendiamina) , y/o benzamidinaHCl .
Los ingredientes adicionales, opcionales de una composición farmacéutica incluyen, por ejemplo, agentes humectantes, emulsificadores , antioxidantes, agentes de aumento de volumen, iones de metal, vehículos aceitosos, proteínas (por ejemplo, albúmina de suero humano, gelatina) , y/o a zwitterion (por ejemplo, un aminoácido tal como betaína, taurina, arginina, glicina, lisina e histidina) .
Aún además, una composición farmacéutica puede formularse como se conoce en la técnica de formulaciones orales de compuestos insulinotrópicos , por ejemplo usando cualquiera una o más de las formulaciones descritas en WO 2008/145728.
Una dosis administrada puede contener de 0.01 mg - 100 mg del derivado, o de 0.01-50 mg, o de 0.01-20 mg, o de 0. Olio mg del derivado.
El derivado puede administrarse en la forma de una composición farmacéutica. Puede administrarse a un paciente que necesita del mismo en varios sitios, por ejemplo, en sitios tópicos tales como la piel o sitios mucosales en sitios que desvían la absorción tal como en una arteria, en una vena, o en el corazón; y en sitios que implican la absorción, tales como en la piel, bajo la piel, en un músculo, o en el abdomen.
La ruta de administración puede ser, por ejemplo, lingual; sublingual; bucal; en la boca; oral; en el estómago; en el intestino; nasal; pulmonar, tales como a través de los bronquios, el alveolo, o una combinación de los mismos; parenteral, epidérmico; dérmico; transdérmico; conjunctival ; uretal; vaginal; rectal; y/o ocular. Una composición puede estar en una composición oral, y la ruta de administración es per oral .
Una composición puede administrarse en diversas formas de dosificación, por ejemplo como una solución; una suspensión; una emulsión; una microemulsión; emulsiones múltiples; una espuma; una salva; una pasta; un yeso; una pomada; un comprimido; un comprimido recubierto; una goma de mascar; un enjuague; una cápsula tales como cápsulas de gelatina suave o dura; un supositorio; una cápsula rectal; gotas; un gel; un rocío; un polvo; un aerosol; un inhalante; gotas para los ojos; una pomada oftálmica; un enjuague oftálmico; un pesario vaginal; un anillo vaginal; una pomada vaginal; una solución inyectable; una solución transformadora in situ tales como gelificante in situ, ajuste, precipitación, y cristalización in situ; una solución de infusión; o como un implante. Una composición puede ser un comprimido, opcionalmente recubierto, una cápsula, o una goma de mascar.
Una composición además puede estar compuesta en un portador de fármaco o sistema de suministro de fármaco, por ejemplo para mejorar la estabilidad, biodisponibilidad, y/o solubilidad. En una modalidad particular una composición puede estar unida a dicho sistema a través de interacciones covalentes, hidrofóbicas , y/o electroestáticas . El propósito de dicho componente puede ser, por ejemplo, disminuir los efectos adversos, alcanzar la cronoterapia, e/o incrementar el cumplimiento del paciente.
Una composición también puede usarse en la formulación de sistemas de suministro de fármaco controlado, sustentado, prolongado, retardado, y/o de liberación lenta.
La administración parenteral puede realizarse por inyección subcutánea, intramuscular, intraperitonal , o intravenosa por medio de jeringa, o por medio de bomba de infusión .
Una composición puede administrarse nasalmente en la forma de una solución, una suspensión, o un polvo; o puede administrarse pulmonarmente en la forma de líquido o rocío en polvo.
La administración transdérmica es todavía una opción complementaria, por ejemplo por inyección libre de aguja, de un parche tales como un parche iontoforático, o por una ruta transmucosal , por ejemplo bucalmente.
Una composición puede ser una formulación estabilizada. El término "formulación estabilizada" se refiere a una formulación con estabilidad física y/o química incrementada, preferiblemente ambas. En general, una formulación debe ser estable durante su uso y su almacenamiento (en cumplimiento con el uso y las condiciones de almacenamiento recomendados) hasta que se alcance la fecha de expiración.
El término "estabilidad física" se refiere a la tendencia del polipéptido para formar agregados biológicamente inactivos e/o insolubles como resultado de la exposición a tensión termo mecánica, y/o la interacción con interfaces y superficies desestabilizadoras (tales como superficies hidrofóbicas) . La estabilidad física de una formulación de polipéptido acuoso puede evaluarse por medio de inspección visual, y/o por medidas de turbiedad después de la exposición a tensión mecánica/física (por ejemplo la agitación) en diferentes temperaturas por varios periodos de tiempo. Alternativamente, la estabilidad física puede evaluarse usando un agente espectroscópico o sonda del estado conformacional del polipéptido como Tioflavin T o sondas de "parche hidrofóbico" .
El término "estabilidad química" ' se refiere a cambios químicos en particular (en particular covalente) en la estructura del polipéptido conduciendo a la formación de productos de degradación química que potencialmente tienen una potencia biológica reducida, y/o incrementaron su efecto inmunogénico en comparación con el polipéptido intacto. La estabilidad química puede evaluarse midiendo la cantidad de productos de degradación química en varios puntos de tiempo después de la exposición a diferentes condiciones ambientales, por ejemplo por SEC-HPLC, y/o RP-HPLC.
El tratamiento con un derivado de acuerdo con la presente invención puede también combinarse con una o más sustancias farmacológicamente activas adicionales, por ejemplo seleccionadas de agentes antidiabéticos, agentes antiobesidad, agentes de regulación del apetito, agentes antihipertensión, agentes para el tratamiento y/o prevención de complicaciones resultantes de o asociadas con la diabetes y agentes para el tratamiento y/o prevención de complicaciones y trastornos resultantes de o asociados con la obesidad. Los ejemplos de estas sustancias farmacológicamente activas son: Insulina, sulfonilureas , biguanidas, meglitinidas , inhibidores de glucosidasa, antagonistas de glucagon, inhibidores DPP-IV (dipeptidil peptidasa- IV) , inhibidores de enzimas hepáticas implicadas en la estimulación de gluconeogénesis y/o glicogenólisis , moduladores de consumo de glucosa, compuestos que modifican el metabolismo de lípidos tales como agentes antihiperlipidémicos tal como inhibidores HMG CoA (estatinas) , Polipéptidos Inhibidores Gástricos (análogos GIP, por sus siglas en inglés) , compuestos que reducen la ingesta de alimentos, antagonistas RXR y agentes que actúan sobre el canal de potasio dependiente de ATP de las células ß ; colestiramina , colestipol, clofibrato, gemfibrozilo, lovastatina, pravastatina, simvastatina, probucol, dextrotiroxina, neteglinida, repaglinida, bloqueadores ß tal como alprenolol, atenolol, timolol, pindolol, propranolol y metoprolol, inhibidores ACE (enzima que convierte angiotensina) tales como benazepril, captopril, fosinopril, enalapril, lisinopril, alatriopril, quinapril y ramipril, bloqueadores de canales de calcio tales como nifedipino, felodipino, nicardipino, isradipino, nimodipina, diltiazem y verapamilo, y bloqueadores a tales como doxazosina, urapidil, prazosina y terazosina; agonistas CART (transcripto que regula de anfetamina cocaína) , antagonistas NPY (neuropéptido Y), agonistas PYY, agonistas del receptor Y2 , agonistas del receptor Y4 , agonistas del receptor Y2/Y4 mezclados, antagonistas MC4 (melanocortina 4), antagonistas de orexina, agonistas del TNF (factor de necrosis de tumor) , agonistas del CRF (factor liberador de corticotropina) , antagonistas de CRF BP (proteina enlazada al factor de liberación de corticotropina), agonistas de urocortina, agonistas ß3 , oxintomodulina y análogos, agonistas de SH (hormona estimuladora de melanocita) , antagonistas de MCH (hormona concentradora de melanocita) , agonistas de CCK (colecistoquinina) , inhibidores de la re-absorción de serotonina, serotonina e inhibidores de reabsorción de noradrenalina, compuestos de serotonina y noradrenérgicos mezclados, agonistas de 5HT (serotonina) , agonistas de bombesina, antagonistas de galanina, hormona de crecimiento, compuestos que liberan la hormona de crecimiento, agonistas de TRH (hormona liberadora de tireotropina) , moduladores de UCP 2 o 3 (proteína de desácoplamiento 2 o 3) , agonistas de leptina, agonistas de DA (bromocriptina, doprexina) , inhibidores de lipasa/amilasa, moduladores RXR (receptor de retinoide X) , agonistas de TR ß; antagonistas de histamina H3 , agonistas o antagonistas de Polipéptidos Inhibidores Gástricos (análogos de GIP, por sus siglas en inglés) , gastrina y análogos de gastrina.
El tratamiento con un derivado de acuerdo con esta invención también puede combinarse con una cirugía que tiene influencia en los niveles de glucosa, y/u homeostasis de lípidos tales como la banda gástrica o la derivación gástrica .
INDICACIONES FARMACÉUTICAS La presente invención también se refiere a un derivado de la invención, para uso como un medicamento.
En modalidades particulares, el derivado de la invención puede usarse para los siguientes tratamientos médicos, todos preferiblemente relacionados de una forma u otra con la diabetes: (i) prevención y/o tratamiento de todas las formas de diabetes, tales como hiperglicemia, diabetes tipo 2, tolerancia de glucosa dañada, diabetes tipo 1, diabetes no dependiente de insulina, MODY (diabetes de inicio en la edad adulta del joven) , diabetes gestacional, y/o para reducción de HbAlC; (ii) retrasar o prevenir el progreso de enfermedad diabética, tales como progreso en diabetes tipo 2, retrasar el progreso de tolerancia de glucosa dañada (IGT, por sus siglas en inglés) para diabetes tipo 2 que requiere insulina, y/o retrasar el progreso de diabetes tipo 2 que no requiere insulina a diabetes tipo 2 que requiere insulina; (iii) función de célula ß mejorada, tales como apoptosis de célula ß disminuida, función de célula ß incrementada -y/o masa de célula ß, y/o para restablecer la sensibilidad de glucosa a células ß ; (iv) prevención y/o tratamiento de trastornos cognitivos ; (v) prevención y/o tratamiento de trastornos alimenticios, tales como obesidad, por ejemplo al disminuir la ingesta alimenticia, reducir el peso corporal, suprimir el apetito, inducir saciedad; tratar o prevenir trastorno de comer en exceso, bulimia nerviosa, y/u obesidad inducida por administración de un antipsicótico o un esteroide; reducción de motilidad gástrica; y/o retraso de vaciado gástrico; (vi) prevención y/o tratamiento de complicaciones diabéticas, tales como neuropatía, incluyendo neuropatía periférica; nefropatía; o retinopatía; (vii) parámetros de lípidos mejorados, tales como prevención y/o tratamiento de dislipidetnia, lípidos de suero totales disminuidos; HDL disminuido; LDL denso, pequeño disminuido; VLDL disminuido: triglicéridos disminuidos; colesterol disminuido; HDL incrementado; niveles de plasma disminuidos de lipoproteína a (Lp(a)) en un humano; inhibir la generación de apolipoporteína a (apo(a)) in vitro y/o in vivo; (iix) prevención y/o tratamiento de enfermedades cardiovasculares, tales como síndrome X; ateroesclerosis; infarto al miocardio; enfermedad cardiaca coronaria; apoplejía, isquemia cerebral; una enfermedad cardiaca temprana o cardiovascular temprana, tales como hipertrofia ventricular izquierda; enfermedad arterial coronaria; hipertensión esencial; emergencia hipertensiva aguda; cardiomiopatía ; insuficiencia cardiaca; tolerancia al ejercicio; falla cardiaca crónica; arritmia; disritmia cardiaca; síncope; ateroesclerosis; insuficiencia cardiaca crónica moderada; angina de pecho; reoclusión de derivación cardiaca; claudicación intermitente (ateroesclerosis obliterante) ; disfunción diastólica; y/o disfunción sistólica; (ix) prevención y/o tratamiento de enfermedades gastrointestinales, tales como síndrome inflamatorio del intestino; síndrome del intestino delgado, o enfermedad de Crohn; dispepsia; y/o úlceras gástricas; (x) prevención y/o tratamiento de enfermedad crítica, tales como tratamiento de un paciente críticamente enfermo, un paciente con poli-nefropatía enfermo crítico (CIPNP, por sus siglas en inglés), y/o un paciente CIPNP potencial; prevención de enfermedad crítica o desarrollo de CIPNP; prevención, tratamiento y/o cura de síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SIRS, por sus siglas en inglés) en un paciente; y/o para la prevención o reducción de la probabilidad de que un paciente padezca de bacteriemia, septicemia, y/o choque séptico durante la hospitalización; y/o (xi) prevención y/o tratamiento de síndrome de ovario poliquístico (PCOS, por sus siglas en inglés) En una modalidad particular, la indicación es seleccionada del grupo que consiste de (i)-(iii) y (v)-(iix), tales como indicaciones (i) , (ii) , y/o (iii) ; o indicación (v) , indicación (vi) , indicación (vii) , y/o indicación' (iix) .
En otra modalidad particular, la indicación es (i) . En una modalidad particular adicional la indicación es (v) . Todavía en una modalidad particular adicional la indicación es ( iix) .
Las siguientes indicaciones son particularmente preferidas: diabetes tipo 2, y/u obesidad.
MODALIDADES PARTICULARES Las siguientes son modalidades particulares de la invención : 1. Un derivado de un análogo GLP-1, cuyo análogo comprende un primer residuo K en una posición que corresponde a la posición 37 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1) , un segundo residuo K en una posición que corresponde a la posición 26 de GLP-1 (7-37), y un máximo de diez modificaciones de aminoácido como se compara con GLP- 1(7-37), en donde el primer residuo K se designa K37, y el segundo residuo K se designa K26, cuyo derivado comprende dos porciones enlazadas a albúmina unidas a K26 y K37, respectivamente, en donde la porción enlazada a albúmina comprende una porción prolongada seleccionada de Química 1, Química 2, Química 3, y Química 4 : Química 1: H00C- (CH2) X-C0-* Química 2: HOOC-C6H4-0- (C¾) y-CO-* Química 3: R1-C6H4- (CH2) z-CO-* Química 4: HOOC-C4SH2- (CH2)„-CO-* en la cual x es un entero en el intervalo de 6-18, y es un entero en el intervalo de 3-17, z es un entero en el intervalo de 1-5, R1 es un grupo que tiene una masa molar no superior que 150 Da, y w es un entero en el intervalo de 6-18; con la condición de que cuando la porción prolongada es Química 1, la porción enlazada a albúmina comprende además un ligador de la fórmula Química 5: Química 5 : en donde k es un entero en el intervalo de 1-5, y n es un entero en el intervalo de 1-5; o una sal, amida, o éster farmacéuticamente aceptable del .mismo 2. El derivado de la modalidad 1, en donde el análogo GLP-1 comprende un primer residuo K en una posición que corresponde a la posición 37 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1) , un segundo residuo K en una posición que corresponde a la posición 26 de GLP-1 (7-37), y un máximo de diez modificaciones de aminoácido como se compara con GLP-1 (7-37), en donde el primer residuo K se designa K37, y el segundo residuo K se designa K26, cuyo derivado comprende dos porciones enlazadas a albúmina unidas a K26 y K37, respectivamente, en donde la porción enlazada a albúmina comprende una porción prolongada seleccionada de Química 2, Química 3, y Química 4: Química 2: HOOC-C6H4-0- (CH2) y-CO-* Química 3: R1-C6H4- (CH2) Z-C0-* Química 4: HOOC-C4SH2- (C¾)„-8-* en la cual y es un entero en el intervalo de 3-17,' z es un entero en el intervalo de 1-5, R1 es un grupo que tiene una masa molar no superior que 150 Da, y w es un entero en el intervalo de 6-18; o una sal, amida, o éster farmacéuticamente aceptable del mismo 3. El derivado de la modalidad 2, en donde la porción enlazada a albúmina comprende además un ligador. 4. El derivado de la modalidad 3, en donde el ligador comprende i) un di-radical Glu; y/o ii) un ligador de la fórmula Química 5 : Química 5 : en donde k es un entero en el intervalo de 1-5, y n es un entero en el intervalo de 1-5. 5. El derivado de la modalidad 4, en donde el diradical Glu se selecciona de Química 6, y/o Química 7: Química 6 : Química 7 : preferiblemente Química 6. 6. El derivado de la modalidad 1, en donde el análogo GLP-1 comprende un primer residuo K en una posición que corresponde a la posición 37 de GLP-1 (7- 37) (SEQ ID NO: 1) , un segundo residuo K en una posición que corresponde a la posición 26 de GLP-1 (7-37), y un máximo de diez modificaciones de aminoácido como se compara con GLP-1(7-37) , en donde el primer residuo K se designa K37, y el segundo residuo K se designa K ¦'26 cuyo derivado comprende dos porciones enlazadas a albúmina unidas a K26 y K37, respectivamente, en donde la porción enlazada a albúmina comprende i) una porción prolongada de la fórmula Química 1: Química 1: HOOC- (CH2) X-C0- * en la cual x es un entero en el intervalo de 6-18; y ii) un ligador de la fórmula Química 5: Química 5 : en donde k es un entero en el intervalo de 1-5, y n es un entero en el intervalo de 1-5; o una sal, amida, o éster farmacéuticamente aceptable del mismo 7. El derivado de la modalidad 1, en donde el análogo GLP-1 comprende un primer residuo K en una posición que corresponde a la posición 37 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1), un segundo residuo K en una posición que corresponde a la posición 26 de GLP-1 (7-37), y un máximo de diez modificaciones de aminoácido como se compara con GLP-1(7-37), en donde el primer residuo K se designa K37, y el segundo residuo se designa K26; cuyo derivado comprende dos porciones prolongadas unidas a K26 y K37, respectivamente, por medio de un ligador, en donde la porción prolongada se selecciona de Química 1, Química 2, Química 3, y Química 4: Química 1: H00C- (CH2) X-C0-* Química 2: HOOC-C6H4-0- (CH2) y-CO-* Química 3: I^-CeH*- (CH2) z-CO-* Química 4: HOOC-C4SH2- (CH2)„-CO- * en la cual x es un entero en el intervalo de 6-18, y es un entero en el intervalo de 3-17, z es un entero en el intervalo de 1-5, R1 es un grupo que tiene una masa molar no superior que 150 Da, y w es un entero en el intervalo de 6-18; y el ligador comprende Química 5: Química 5 : en donde k es un entero en el intervalo de 1-5, y n es un entero en el intervalo de 1-5; o una sal, amida, o éster farmacéuticamente aceptable del mismo 8. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-7, en donde Química 5 es un primer elemento de ligador. 9. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-8, en donde k es 1. 10. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-9, en donde n es 1. 11. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-10, en donde Química 5 se incluye m veces, en donde m es un entero en el intervalo de 1-10. 12. El derivado de la modalidad 11, en donde m es un entero en el intervalo de 1-6; preferiblemente en el intervalo de 1-4; más preferiblemente m es 1 o 2 ; o lo más preferiblemente m es 2. 13. El derivado de cualquiera de las modalidades 11-12, en donde, cuando m es diferente de 1, los elementos de Química 5 se interconectan por medio de enlaces de amida. 7 14. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-13, en donde el ligador consiste de uno o más elementos de Química 5. 15. El derivado de cualquiera de .las modalidades 1-13, en donde el ligador comprende además un segundo elemento de ligador; preferiblemente un di-radical Glu; más preferiblemente seleccionada de Química 6, y/o Química 7: Química 6 : Químic lo más preferiblemente Química 6. 16. El derivado de la modalidad 15, en donde el di-radical Glu se incluye p veces, en donde p es un entero en el intervalo de 1-3. 17. El derivado de la modalidad 16, en donde p es 1 , 2, o 3 ; preferiblemente 1 o 2 ; o lo más preferiblemente 1. 18. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-17, en donde el di-radical Glu es un radical de L-Glu o D-Glu, preferiblemente de L-Glu. 19. El derivado de cualquiera de las modalidades 16-18, en donde uno o más di-radicales Glu y uno o más elementos de Química 5 se interconectan por medio de enlaces de amida. 20. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-19, en donde el ligador comprende un elemento de ligador adicional, tal como un tercer elemento de ligador. 21. El derivado de la modalidad 20, en donde el tercer elemento de ligador es Química 8: *-NH- (CH2) q-CHR2-CO-* , en el cual q es un entero en el intervalo de 2-12, y R2 es hidrógeno (H) , amino (NH2) , o un alcohol inferior C1-C5. 22. El derivado de la modalidad 21, en donde q es 4, 6, o 10. 23. El derivado de cualquiera de las modalidades 21- 22, en donde Química 8 es un radical de ácido amino hexanoico, ácido amino octanoico, ácido amino dodecanoico, o lisina . 24. El derivado de la modalidad 23, en donde el grupo amino radicalizado está en la posición epsilon. 25. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-24, en donde el ligador consiste de m veces Química 5 y p veces el di-radical Glu. 26. El derivado de la modalidad 25, en donde (m,p) es (2,2), (2,1), (2,3), (4,1), (6,1), (1,0) , (1,1) , (1,2) , (0,1), o (0,2) ; preferiblemente (2,1), (2,0), (1,0), (1,1), (0,1), o (0,2) ; más preferiblemente (2,1), (2,2), o (1,2) ; aún más preferiblemente (1,1) o (2,1) ; o lo más preferiblemente (2,1) . 27. El derivado de cualquiera de las modalidades 25- 26, en donde los m elementos de la Química 5 y los p di-radicales Glu se interconectan por medio de enlaces de amida. 28. El derivado de cualquiera de las modalidades 21-24, en donde el ligador consiste de m veces Química 5, p veces el di-radical Glu, y Química 8. 29. El derivado de la modalidad 28, en donde (m,p) es (2,1), o (1,1) ; preferiblemente (2,1) . 30. El derivado de cualquiera de las modalidades 28- 29, en donde los m elementos de la Química 5, los p di-radicales Glu, y el elemento de Química 8 se interconectan por medio de enlaces de amida. 31. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 30, en donde el ligador y la porción prolongada se interconectan por medio de un enlace amida. 32. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 31, en donde el ligador y el análogo GLP-1 se interconectan por medio de un enlace amida. 33. El derivado de la modalidad 32, en donde el ligador es unida al grupo epsilon-amino de K26 o K37. 34. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-33, en donde el ligador tiene (i) desde 5 hasta 41 átomos C; preferiblemente desde 5-17 átomos C; tal como 5, 6, 11, 12, o 17 átomos C; por ejemplo 5, 6 o 12 átomos C, u 11 o 17 átomos C; o lo más preferiblemente 17 átomos C; o (ii) desde 5-30 átomos C, preferiblemente desde 5-25 átomos C, más preferiblemente desde 5-20 átomos C, o lo más preferiblemente desde 5-17 átomos C. 35. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-34, en donde el ligador tiene (i) desde 4 hasta 28 heteroátomos; preferiblemente desde 4 hasta 12 heteroátomos; tales como 4, 8, o 12 heteroátomos; más preferiblemente 8 o 12 heteroátomos; o lo más preferiblemente 12 heteroátomos; o (ii) desde 4-20 heteroátomos, preferiblemente desde 4- 18 heteroátomos, más preferiblemente desde 4-14 heteroátomos, o lo más preferiblemente desde 4-12 heteroátomos. 36. El derivado de la modalidad 35, en donde los heteroátomos son átomos N, y/u O. 37. El derivado de cualquiera de las modalidades 34- 36, en donde el ligador tiene desde 1 hasta 7 átomos N; preferiblemente desde 1 hasta 3 átomos N; tales como 1, 2, o 3 átomos N; por ejemplo 1, o 2 átomos N; o lo más preferiblemente 3 átomos N. 38. El derivado de cualquiera de las modalidades 34-37, en donde el ligador tiene desde 3 hasta 21 átomos 0; preferiblemente desde 3 hasta 9 átomos 0; tales como 3, 6, o 9 átomos 0; por ejemplo 3, o 6 átomos 0; o lo más preferiblemente 9 átomos 0. 39. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 38, en donde el ligador consiste de dos veces Química 5, interconectado por medio de un enlace amida, y se conecta a su extremo *-NH para el extremo *-C0 de la porción prolongada, y en su extremo *-C0 para el grupo amino epsilon de K26 o K37 del análogo GLP-1. 40. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-38, en donde el ligador consiste de cuatro veces Química 5, interconectado por medio de enlaces de amida, y conectado a su extremo *-NH para el extremo *-C0 de la porción prolongada, y en su extremo *-C0 para el grupo amino epsilon de K26 o K37 del análogo GLP-1. 41. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-38, en donde el ligador consiste de dos veces Química 6 y dos veces Química 5, interconectados por medio de enlaces de amida y en la secuencia indicada, el ligador se conecta a su extremo *-NH para el extremo *-C0 de la porción prolongada, y en su extremo *-C0 para el grupo amino epsilon de K26 o K37 del análogo GLP-1. 42. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-38, en donde el ligador consiste de dos veces Química 5 y una vez Química 6, interconectados por medio de enlaces de amida y en la secuencia indicada, el ligador se conecta a su extremo *-NH para el extremo *-C0 de la porción prolongada, y en su extremo *-C0 libre para el grupo amino epsilon de K26 o K3 del análogo GLP-1. 43. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-38, en donde el ligador consiste de tres veces Química 6 y dos veces Química 5, interconectado por medio de enlaces de amida y en la secuencia indicada, el ligador se conecta a su extremo *-NH para el extremo *-C0 de la porción prolongada, y en su extremo *-C0 libre para el grupo amino epsilon de K26 o K37 del análogo GLP-1. 44. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-38, en donde el ligador consiste de una vez Química 6 y dos veces Química 5, interconectados por medio de enlaces de amida y en la secuencia indicada, el ligador se conecta a su extremo *-NH para el extremo *-C0 de la porción prolongada, y en su extremo *-CO para el grupo amino epsilon de K26 o K37 del análogo GLP-1. 45. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 38, en donde el ligador consiste de una vez Química 6, una vez Química 5, y una vez Química 6, interconectados por medio de enlaces de amida y en la secuencia indicada, el ligador se conecta a su extremo *-NH para el extremo *-C0 de la porción prolongada, y en su extremo *-CO para el grupo amino epsilon de K26 o K37 del análogo GLP-1. 46. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-38, en donde el ligador consiste de una vez Química 6 y cuatro veces Química 5, interconectado por medio de enlaces de amida y en la secuencia indicada, el ligador se conecta a su extremo *-NH para el extremo *-C0 de la porción prolongada, y en su extremo *-C0 para el grupo amino epsilon de K26 o K37 del análogo GLP-1. 47. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-38, en donde el ligador consiste de una vez Química 6 y seis veces Química 5, interconectado por medio de enlaces de amida y en la secuencia indicada, el ligador se conecta a su extremo *-NH para el extremo *-C0 de la porción prolongada y en su extremo *-CO para el grupo amino epsilon de K26 o K37 del análogo GLP-1. 48. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-38, en donde el ligador consiste de una vez Química 6 y una vez Química 5, interconectados por medio de enlaces de amida y en la secuencia indicada, el ligador se conecta a su extremo *-NH para el extremo *-C0 de la porción prolongada, y en su extremo *-C0 para el grupo amino epsilon de K26 o K37 del análogo GLP-1. 49. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-38, en donde el ligador consiste de una vez Química 5, una vez Química 6, y una vez Química 5, interconectados por medio de enlaces de amida y en la secuencia indicada, el ligador se conecta a su extremo *-NH para el extremo *-C0 de la porción prolongada, y en su extremo *-C0 para el grupo amino epsilon de K26 o K37 del análogo GLP-1. 50. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 38, en donde el ligador consiste de una vez Química 7, y dos veces Química 5, interconectado por medio de enlaces de amida y en la secuencia indicada, el ligador se conecta a su extremo *-NH para el extremo *-CO de la porción prolongada, y en su extremo *-CO para el grupo amino epsilon de 26 o K37 del análogo GLP-1. 51. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-38, en donde el ligador consiste de una vez Química 5, el ligador se conecta a su extremo *-NH para el extremo *-CO de la porción prolongada, y en su extremo *-C0 para el grupo amino epsilon de K26 o K37 del análogo GLP-1. 52. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-38, en donde el ligador consiste de una vez Química 6, el ligador se conecta a su extremo *-NH para el extremo *-CO de la porción prolongada, y en su extremo *-C0 para el grupo amino epsilon de K26 o K37 del análogo GLP-1. 53. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-38, en donde el ligador consiste de dos veces Química 6, interconectado por medio de enlaces de amida, el ligador se conecta a su extremo *-NH para el extremo *-C0 de la porción prolongada, y en su extremo *-C0 para el grupo amino epsilon de K26 o K37 del análogo GLP-1. 54. ¦ El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 53, en donde el ligador consiste de una vez Química 6, una vez Química 8, en el cual preferiblemente q es 10 y R2 es H, una vez Química 6, y dos veces Química 5, interconectados por medio de enlaces de amida y en la secuencia indicada, el ligador se conecta a su extremo *-NH para el extremo *-C0 de la porción prolongada, y en su extremo *-C0 para el grupo amino epsilon de K26 o K37 del análogo GLP-1. 55. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 54, en donde el ligador consiste de una vez Química 6, una vez Química 8, en el cual preferiblemente q es 4 y R2 es H, una vez Química 6, y dos veces Química 5, interconectados por medio de enlaces de amida y en la secuencia indicada, el ligador se conecta a su extremo *-NH para el extremo *-CO de la porción prolongada, y en su extremo *-C0 para el grupo amino epsilon de K26 o K37 del análogo GLP-1. 56. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 55, en donde el ligador consiste de una vez Química 6, una vez Química 8, en el cual preferiblemente q es 6 y R2 es H, una vez Química 6, y dos veces Química 5, interconectados por medio de enlaces de amida y en la secuencia indicada, el ligador se conecta a su extremo *-NH para el extremo *-CO de la porción prolongada, y en su extremo *-C0 para el grupo amino epsilon de K26 o K37 del análogo GLP-1. 57. El derivado de cualquiera de las modalidades 15-18, en donde el ligador consiste de una vez Química 6, una vez Química 8, en el cual preferiblemente q es 4 y R2 es NH2, una vez Química 6, y dos veces Química 5, interconectados por medio de enlaces de amida y en la secuencia indicada, el ligador se conecta a su extremo *-NH para el extremo *-CO de la porción prolongada, y en su extremo *-C0 para el grupo amino epsilon de K26 o K37 del análogo GLP-1. 58. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 57, en donde la porción prolongada es Química 1. 59. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 58, en donde x es un es un número par. 60. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 59, en donde x es un entero en el intervalo de 8-16, tales como 8, 10, 12, 14, o 16; o preferiblemente en el intervalo de 10-14. 61. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 60, en donde x es 10, 12, o 14; preferiblemente 14; más preferiblemente 10; o lo más preferiblemente 12. 62. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 61, en donde Química 1 se representa por Química la: Química la: donde x es como se define en cualquiera de las modalidades 1-61. 63. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-57, en donde la porción prolongada es Química 2. 64. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 63, en donde y es un número impar. 65. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 64, en donde y es un entero en el intervalo de 7-17, tales como 7, 9, 11, 13, 15, o 17; preferiblemente 7-15, tales como, por ejemplo, 9, 11 o 15. 66. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 65, en donde y es 7, 8, 9, 11, o 15. 67. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 66, en donde y es 7, 9, 11, o 15. 68. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 67, en donde y es 7. 69. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 68, en donde y es 9. 70. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-69, en donde y es 11. 71. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 70, en donde y es 15. 72. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 71, en donde Química 2 se representa por Química 2a, o Química 2b: Química 2a: Químic preferiblemente por Química 2a; en donde y es como se define en cualquiera de las modalidades 1-71. 73. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-57, en donde la porción prolongada es Química 3. 74. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 73, en donde z es un número impar; preferiblemente 3. 75. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 74, en donde R1 es un grupo que tiene una masa molar no superior que 127 Da. 76. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 75, en donde R1 es un grupo que tiene una masa molar en el intervalo de 1-127 Da; preferiblemente 1-125 Da, más preferiblemente 1-100 Da, aún más preferiblemente 1-75 Da, o lo más preferiblemente 1-50 Da. 77. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 76, en donde R1 es un grupo que tiene (ii) una masa molar debajo de 130 Da, preferiblemente debajo de 100 Da, más preferiblemente debajo de 75 Da, aún más preferiblemente debajo de 60 Da, o lo más preferiblemente debajo de 50 Da; o (iü) una masa molar debajo de 40 Da, preferiblemente debajo de 30 Da, más preferiblemente debajo de 20 Da, o lo más preferiblemente debajo de 15 Da. 78. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 77, en donde R1 es -H. 79. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 78, en donde R1 es un radical de halógeno. 80. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 79, en donde R1 es -I. 81. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-80, en donde R1 es alquilo C1-C5 lineal o ramificado; preferiblemente alquilo C1-C4; más preferiblemente metilo; o lo más preferiblemente tert. butilo. 82. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-81, en donde Química 3 se representa por Química 3a: Química 3a: en donde R1 y z son como se definen en cualquiera de las modalidades 1-81. 83. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-57, en donde la porción prolongada es Química 4. 84. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 83, en donde w es un número par. 85. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 84, en donde w es un entero en el intervalo de 8-16; o preferiblemente en el intervalo de 10-14. 86. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 85, en donde w es 10, 12, o 14; preferiblemente 14; más preferiblemente 10; o lo más preferiblemente 12. 87. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 86, en donde Química 4 se representa por Química 4a: Química 4a: en donde w es como se define en cualquiera de las modalidades 1-86. 88. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 87, en donde las dos porciones prolongadas son sustancialmente idénticas; tal como al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, o al menos 99% idéntica. 89. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 88, en donde las dos porciones prolongadas tienen una similitud de al menos 0.5; preferiblemente al menos 0.6; más preferiblemente al menos 0.7, o al menos 0.8; aún más preferiblemente al menos 0.9; o lo más preferiblemente al menos 0.99, tal como una similitud de 1.0. 90. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 89, en donde las dos ligadores son sustancialmente idénticas; tal como al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, o al menos 99% idéntica. 91. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 90, en donde las dos ligadores tienen una similitud de al menos 0.5; preferiblemente al menos 0.6; más preferiblemente al menos 0.7, o al menos 0.8; aún más preferiblemente al menos 0.9; o lo más preferiblemente al menos 0.99, tal como una similitud de 1.0. 92. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 91, en donde los dos enlaces de albúmina, tales como las dos cadenas laterales consisten de ligador y porción prolongada, son sustancialmente idénticos; tal como al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al -menos 95%, o al menos 99% idéntica . 93. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 92, en donde los dos enlaces de albúmina, tales como las dos cadenas laterales consisten de ligador y porción prolongada, tienen una similitud de al menos 0.5; preferiblemente al menos 0.6; más preferiblemente al menos 0.7, o al menos 0.8; aún más preferiblemente al menos 0.9; o lo más preferiblemente al menos 0.99, tal como una similitud de 1.0. 94. El derivado de cualquiera de las modalidades 88-93, en donde las dos estructuras químicas a compararse se representan como huellas digitales, tales como a) huellas digitales ECFP_6 ; b) huellas digitales U ITY; y/o c) huellas digitales MDL; y en donde para cada uno de a) , b) y c) el coeficiente Tanimoto preferiblemente se usa para calcular la similitud, o identidad, de las dos huellas digitales. 95. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-94, en donde a) las posiciones corresponden a la posición 37 y 26 de GLP-K7-37) (SEQ ID NO: 1), y/o b) el número de modificaciones de aminoácido como se compara con GLP-l(7-37) (SEQ ID NO: 1) se identifican por escritura e inspección visual. 96. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-95, en donde a) las posiciones corresponden a la posición 37 y 26 de GLP-l(7-37) (SEQ ID NO: 1), y/o b) el número de modificaciones de aminoácido como se compara con GLP-K7-37) (SEQ ID NO: 1) se identifican por el uso de un programa de alineación de péptido o proteína estándar. 97. El derivado de la modalidad 96, en donde el programa de alineación es una alineación Needleman-Wunsch . 98. El derivado de cualquiera de las modalidades 96-97, en donde se usa la matriz de registro por omisión y la matriz de identidad por omisión. 99. El derivado de cualquiera de las modalidades 96-98, en donde la matriz de registro es BLOSUM62. 100. El derivado de cualquiera de las modalidades 96-99, en donde la penalización para el primer residuo en un espacio es -10 (menos diez) . 101. El derivado de cualquiera de las modalidades 96-100, en donde las penalizaciones |para residuos adicionales en un espacio es -0.5 (menos punto cinco) . 102. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 101, en donde el análogo no comprende residuos K diferentes del primer y el segundo residuo K. 103. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 102, en donde las modificaciones de aminoácido están en una o más posiciones correspondientes a las siguientes posiciones en GLP-l(7-37) (SEQ ID NO: 1): 7, 8, 9, 23, 30, 31, 34, 36, 37, y 38. 104. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 103, en donde el análogo comprende, preferiblemente tiene, un mínimo de dos modificaciones de aminoácido, como se compara con GLP-M7-37) (SEQ ID NO: 1); el mínimo de dos modificaciones de aminoácido están preferiblemente en cada una de las posiciones que corresponden a la posición 34 y 37 de GLP-K7-37) (SEQ ID NO: 1), y más preferiblemente de manera que el aminoácido en la posición que corresponde a la posición 37 es K, y el aminoácido en la posición que corresponde a la posición 34 no es K. 105. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 104, en donde el análogo GLP-1 tiene una amida de C-terminal. 106. El derivado de la modalidad 105, en donde el aminoácido en la posición que corresponde a la posición 34 es o Q. 107. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 106, en donde las modificaciones de aminoácido se seleccionan de lo siguiente: (R34 o Q34) , K37, (Des7 o Imp7) , (D-Ala8 , Des8, Aib8, G8, o S8), (Q9 o G9) , R23, E30, H31, G3S , y/o (E38 o G38) . 108. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-107, en donde las modificaciones de aminoácido se seleccionan de lo siguiente: (R34 o Q34) , K37, (Des7 o Imp7), (Des8 o Aib8), (Q9 o G9) , R23, E30, H31, G36, y/o (E38 o G38) . 109. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 108, en donde el análogo comprende (R34 o Q34) , y K37. 110. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 109, en donde el análogo comprende Imp7, y/o (Aib8 o S8) ; preferiblemente Imp7, y/o Aib8; más preferiblemente Imp7; o lo más preferiblemente Aib8. 111. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-lio, en donde el análogo comprende G38 o E38, preferiblemente E38. 112. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-111, en donde el análogo comprende Q9 o G9. 113. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-112, en donde el análogo comprende G36. 114. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 113, en donde el análogo comprende H31. 115. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 114, en donde el análogo comprende R23. 116. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 115, en donde el análogo comprende des7 y/o des8, preferiblemente ambos. 117. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 116, en donde un aminoácido se ha eliminado en una posición que corresponde a la posición 7 de GLP-l(7-37) (SEQ ID NO: 1) . 118. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 117, en donde un aminoácido se ha eliminado en una posición que corresponde a la posición 8 de GLP-l(7-37) (SEQ ID NO: 1) . 119. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 118, en donde dos aminoácidos se han eliminado en las posiciones que corresponden a la posición 7 y 8 de GLP-K7- 37) (SEQ ID NO: 1) . 120. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-119, el cual es un análogo de GLP-l(8-37) (aminoácidos 2-31 de SEQ ID NO: 1) , que tiene hasta diez, nueve, ocho, o seis modificaciones de aminoácido como se compara con GLP-l(7-37) (SEQ ID NO: 1) . 121. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 120, el cual es un análogo de GLP-l(9-37) (aminoácidos 3-31 respectivamente, de SEQ ID NO: 1), que tiene hasta diez,» nueve, ocho, o seis modificaciones de aminoácido como se compara con GLP-l(7-37) (SEQ ID NO: 1) . 122. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 121, en donde el análogo GLP-1 corresponde a (a) K37-GLP-1(7-37), (b) K37-GLP-1 (8-37) , (c) K37-GLP-1 (9-37) , O (d) un análogo de cualquiera de uno de (a) - (c) que tiene hasta diez, nueve, ocho, o seis modificaciones de aminoácido como se compara con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1) . 123. El derivado d cualquiera de las modalidades 1- 122, en donde un imitador His diferente de His está en una posición que corresponde a la posición 2 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1) . 124. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 123, en donde un imitador His-Ala diferente de His-Ala está en las posiciones que corresponden a la posición 7 y 8 de GLP-K7-37) (SEQ ID NO: 1) . 125. El derivado de cualquiera de las modalidades 123-124, en donde el imitador His, o el imitador His-Ala, comprende a) imidazol; o b) piridina. 126. El derivado de la modalidad 125, en donde el imidazol es un derivado de un imidazol que comprende un extremo *-C0, para acoplamiento covalente a *-NH del aminoácido de N-terminal del análogo, por medio de formación de un enlace de amida. 127. El derivado de la modalidad 125, en donde la piridina es un derivado de piridina que comprende un extremo *-C0, para acoplamiento covalente a *-NH del aminoácido de N-terminal del análogo, por medio de formación de un enlace de amida. 128. El derivado de cualquiera de las modalidades 125-127, en donde el derivado de imidazol es mono sustituido. 129. El derivado de cualquiera de las modalidades 125-127, en donde el derivado de piridina es mono sustituido. 130. El derivado de cualquiera de las modalidades 125-129, en donde el derivado de imidazol es sustituido con un grupo que comprende un radical de ácido carboxílico de un alquilo inferior que tiene desde uno hasta seis átomos de carbono. 131. El derivado de cualquiera de las modalidades 125-129, en donde el derivado de piridina es sustituido con un grupo que comprende un radical de ácido carboxílico de un alquilo inferior que tiene desde uno hasta seis átomos de carbono. 132. El derivado de cualquiera de las modalidades 130- 131, en donde el radical de ácido carboxílico se selecciona de acetilo; , y propionilo, butirilo, pentanoilo recto o ramificado; preferiblemente acetilo. 133. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 132, en donde el residuo de aminoácido en la posición que corresponde a la posición 8 de GLP-l(7-37) (SEQ ID NO: 1) tiene 3H-Imidazol-4-il-acetil unido a su átomo N. 134. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-133, en donde el residuo de aminoácido en la posición que corresponde a la posición 8 de SEQ ID NO: 1 es alanina. 135. El derivado de cualquiera de las modalidades 125-134, en donde el imidazol está sustituido con (metilcarbamoil) -2-metil-propionilo, (etilcarbamoil ) -2-metil-propionilo, (propilcarbamoil ) -2-metil-propionilo, o (butilcarbamoil) -2-metil-propionilo; preferiblemente con (etilcarbamoil) -2-metil-propionilo . 136. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-135, en donde el residuo de aminoácido en la posición que corresponde a la posición 9 de GLP-l(7-37) (SEQ ID NO: 1) tiene {2- [2- (lH-Imidazol-4-il) -etilcarbamoil] -2-metil-propionilo} unido a su átomo N. 137. El derivado de cualquiera de las modalidades 125-136, en donde la piridina está sustituida con (metilcarbamoil) -2-metil-propionilo, (etilcarbamoil) -2-metil-propionilo, (propilcarbamoil) -2-metil-propionilo, o (butilcarbamoil) -2-metil-propionilo; preferiblemente con (metilcarbamoil) -2 -metil-propionilo . 138. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-137, en donde el residuo de aminoácido en la posición que corresponde a la posición 9 de GLP-l(7-37) (SEQ ID NO: 1) tiene [2 , 2-dimetil-3-oxo-3- (piridin-2-ilmetilamino) propanoilo] unido a su átomo N. 139. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-138, en donde el residuo de aminoácido en la posición que corresponde a la posición 9 del análogo GLP-1 es ácido glutámico . 140. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 139, en donde el análogo no comprende (H31 y Q34) . 141. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 140, en donde el análogo no comprende (des7 y des8); y/o no comprende un imitador His, o un imitador His-Ala como se define en cualquiera de las modalidades 116-140. 142. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-141, en donde el análogo es un análogo de GLP-1 (7-37), o GLP- 1 (9-37) . 143. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 142, en donde el análogo comprende, preferiblemente tiene, los siguientes cambios de aminoácido, o modificaciones, como se compara con GLP-l(7-37) (SEQ ID NO: 1): i) (34R, 37K) ; ii) (8Aib, 34R, 37K) ; iii) (31H, 34Q, 37K) ; iv) (des7, des8, 34R, 37 ) , y opcionalmente 38E; o v) (34R, 36G, 37K) . 144. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 143, en donde el análogo tiene un máximo de nueve modificaciones de aminoácido. 145. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 144, en donde el análogo tiene un máximo de ocho modificaciones de aminoácido. 146. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-145, en donde el análogo tiene un máximo de siete modificaciones de aminoácido. 147. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 146, en donde el -análogo tiene un máximo de seis modificaciones de aminoácido. 148. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 147, en donde el análogo tiene un máximo de cinco modificaciones de aminoácido. 149. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-148, en donde el análogo tiene un máximo de cuatro modificaciones de aminoácido. 150. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-149, en donde el análogo tiene un máximo de tres modificaciones de aminoácido. 151. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-150, en donde el análogo tiene un máximo de dos modificaciones de aminoácido. 152. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-. 151, en donde el análogo tiene un mínimo de dos modificaciones de aminoácido. 153. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 152, en donde el análogo tiene un mínimo de tres modificaciones de aminoácido. 154. El derivado de cualquiera.de las modalidades 1- 153, en donde el análogo tiene un mínimo de cuatro modificaciones de aminoácido. 155. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 154, en donde el análogo tiene un mínimo de cinco modificaciones de aminoácido. 156. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-155, en donde el análogo tiene un mínimo de seis modificaciones de aminoácido. 157. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 156, en donde el análogo tiene un mínimo de siete modificaciones de aminoácido. 158. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 157, en donde el análogo tiene un mínimo de ocho modificaciones de aminoácido. 159. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 158, en donde el análogo tiene un mínimo de nueve modificaciones de aminoácido. 160. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-159, en donde el análogo tiene un mínimo de diez modificaciones de aminoácido. 161. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-160, en donde el análogo tiene una modificación de aminoácido. 162. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 161, en donde el análogo tiene dos modificaciones de aminoácido . 163. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 162, en donde el análogo tiene tres modificaciones de aminoácido. 164. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 163, en donde el análogo tiene cuatro modificaciones de aminoácido. 165. El derivado de -cualquiera de las modalidades 1- 164, en donde el análogo tiene cinco modificaciones de aminoácido . 166. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-165, en donde el análogo tiene seis modificaciones de aminoácido. 67. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 166, en donde el análogo tiene siete modificaciones de aminoácido . 168. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-167, en donde el análogo tiene ocho modificaciones de aminoácido . 169. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 169, en donde el análogo tiene nueve modificaciones de aminoácido. 170. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 170, en donde el análogo tiene diez modificaciones de aminoácido. 171. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-171, en donde las modificaciones son, independientemente, sustituciones, adiciones, y/o eliminaciones. 172. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-172, en donde las modificaciones son sustituciones. 173. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-173, en donde las modificaciones son eliminaciones. 174. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-174, en donde las modificaciones son adiciones. 175. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-174, en donde a) la posición que corresponde a cualquiera de las posiciones indicadas de GLP-l(7-37) (SEQ ID NO: 1), y/o b) el número de modificaciones de aminoácido como se compara con GLP-l(7-37) (SEQ ID NO: 1) se identifica por escritura e inspección visual. 176. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-175, en donde a) la posición que corresponde a cualquiera de las posiciones indicadas de GLP-l(7-37) (SEQ ID NO: 1) , y/o b) el número de modificaciones de aminoácido como se compara con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1) se identifica como se describe en cualquiera de las modalidades 96-101. 177. Un compuesto seleccionado de lo siguiente: Química 20, Química 21, Química 22, Química 23, Química 24, Química 25, Química 26, Química 27, Química 28, Química 29, Química 30, Química 31, Química 32, Química 33, Química 34, Química 35, Química 36, Química 37, Química 38, Química 39, Química 40, Química 41, Química 42, Química 43, Química 44, Química 45, Química 46, Química 47, Química 48, Química 49, Química 50, Química 51, Química 52, Química 53, Química 54, Química 55, Química 56, Química 57, Química 58, Química 59, Química 60, . Química 61, Química 62, Química 63, Química 64, Química 65, Química 66, Química 67, y Química 68; o una sal , amida, o éster farmacéuticamente aceptable del mismo 178. Un compuesto caracterizado por su nombre, y seleccionado de una lista de cada uno de los nombres de los compuestos de los Ejemplos 1-49 en la presente, o una sal, amida, o éster farmacéuticamente aceptable del mismo 179. El compuesto de la modalidad 178, que es un compuesto de la modalidad 177. 180. El compuesto de cualquiera de las modalidades 178 y 179, que es un derivado de acuerdo a cualquiera de las modalidades 1-176. 181. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 180 que se selecciona de lo siguiente: (i) • Ne2e- [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [ [ (4S) - -carboxi-4 - [10- (4- carboxifenoxi) decanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetilo] , N£37- [2 - [2 - [2 - [ [2 - [2 - [2- [ [ (4S) -4-carboxi-4- [10- (4- carboxifenoxi ) decanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetil] - [Arg34,Gly36, Lys37] -GLP-1- (7- 37 ) -péptido, Química 62 : t 26- [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [ [ (4S) -4 -carboxi-4 - [8- (4- carboxifenoxi) octanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetilo] , Nf37- [2- [2- [2- [ [2- [ [ (4S) -4 -carboxi-4- [8- (4- carboxifenoxi) octanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetil] - [Aib8, Arg34, Lys37] -GLP-1- (7- 37) -péptido, Química 58: N26- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -Carboxi -4 - (11- carboxiundecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi) acetilamino] etoxi } etoxi ) acetilo] , ISf37- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -Carboxi-4 - (ll- carboxiundecanoilamino)butirilamino] etoxi } etoxi) acetilamino] etoxi} etoxi) acetil] [Aib8, His31, Gln34, Lys37] GLP-1 (7-37) -péptido, Química 40: N£26- [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [ [ (4S) -4 -carboxi-4- [10- (4- carboxi.fenoxi) decanoi lamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetilo] , "7- [2- [2 - [2- [ [2- [2 - [2- [ [ (4S) -4-carboxi-4- [10- (4- carboxifenoxi) decanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetil] - [Gln9, Arg34, Lys37] -GLP-1- (7- 37) -péptido, Química 56 : lf26{2- [2-(2-{2-[2-(2-{(S) -4 -Carboxi -4 - [10- (4 - carboxifenoxi) decanoilamino] butirilaminojetoxi ) etoxi] acet ilamino} etoxi) etoxi] acetilo} , W637- {2 - [2 - (2 - {2- [2 - (2 - { (S) - -carboxi -4- [10- (4- carboxifenoxi ) decanoilamino] butirilamino}etoxi ) etoxi] acetilamino}etoxi) etoxi] acetil} - [Aib8 , Arg34 , Lys37] GLP-1 (7-37) - péptido, Química 21: if26- [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [ [ (4S) -4 -carboxi-4 - [9- (4- carboxifenoxi) nonanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetil] , N*37- [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [ [ (4S) -4- carboxi-4- [9- (4- carboxifenoxi) nonanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetil] - [Arg34,Lys37] -GLP-1- (7-37) -péptido, Química 63 : üf26- [2- (2- [2- (2- [2- (2- [4- (10- (4-Carboxifenoxi) decanoilamino) - 4 (S) -carboxibutirilamino] etoxi) etoxi] acetilamino) etoxi] etoxi) acetilo] - If37- [2- (2- [2- (2- [2- (2- [4- (10- (4- Carboxifenoxi) decanoilamino) -4 (S) - carboxibutirilamino] etoxi) etoxi] acetilamino) etoxi] etoxi) acetil ] [Aib8 , His31 , Gln3 , Lys37] GLP-1 (7-37) -péptido , Ne2 - [ (4S) -4-carboxi-4- [ [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [10- ( -carboxifenoxi) decanoilamino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] butanoilo] , N£37- [ (4S) -4-carboxi-4- [ [2- [2-[2- [ [2- [2- [2- [10- (4-carboxifenoxi) decanoilamino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acet il] amino] butanoil] - [His31 , Gln34 , Lys37] -GLP-1- (7-37) -péptido, Química 55: ?e26- [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [ [ (4S) -4 -carboxi-4- (13-carboxitridecanoilamino) butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetilo] , Ne3?- [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [ [ (4S) -4-carboxi-4- (13-carboxitridecanoilamino) butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetil] - [Arg34 , Lys37] -GLP-1- (7-37) -péptido, Química 51: f26- [ (S) - 4-Carboxi-4 - {2 - [2-(2- [2-(2-{2- [(13- carboxi ridecanoi lamino) ] etoxi }etoxi) acetilamino] etoxi) et oxi] acetilamino }butiril] , l 37- [ (S) -4-Carboxi-4- {2 - [2- (2- [2- (2-{2- [ (13- carboxitridecanoi lamino) ] etoxi } etoxi ) acetilamino] etoxi ) et oxi] acetilamino}butiril] [ Aib8 , Arg34 , Lys37 ] GLP - 1 (7-37) - pépt ido, Química 44 : N - [2-[2- [2- [[2- [2- [2- [[(4S) - 4 - carboxi - 4 - [10- (4- carboxifenoxi ) decanoi lamino] butanoi 1 ] amino] etoxi ] etoxi ] acetil] amino] etoxi] etoxi] acet i lo] , Nf37- [2 - [2 - [2 - [ [2 - [2- [[ (4S) -4 -carboxi -4- [10- (4- carboxifenoxi ) decanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetil] - [Arg34, Lys37] -GLP-1- (7- 37) -peptidil-Glu, y Química 64 : (ii) N9- { 2 - [2- (lH-Imidazol-4-il) -etilcarbamoil] -2 -metilpropionil } -lf26-{2- [2-(2-{2-[2-(2-{(S)-4-[4- (4-tert-Butilfenil) butirilamino] -4 -carboxibutirilamino} etoxi ) etoxi] acetilamino} etoxi ) etoxi] acetilo} , ?e37-{2 - [2 - (2- {2 - [2 - (2- { (S) -4 - [4 - (4-tert- Butilfenil) butirilamino] -4-carboxibutirilamino} etoxi ) etoxi] acetilamino} etoxi ) etoxi] acetilo} [ Arg34, Lys37] GLP-1 (9-37) -péptido, Química 46: N - [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [ [ (4S) -4 -carboxi-4- [10- (4-carboxifenoxi ) decanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetilo] , N - [2- [2- [2- [ [2 [ [ (4S) -4-carboxi-4- [10- (4- carboxifenoxi) decanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetil] - [Aib8, Arg23, Arg34, Lys37] 1- (7-37) -péptido, Química 50: lf26- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4-Carboxi-4 - (11- carboxiundecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi) acetilamino] etoxi} etoxi) acetilo] , lf37- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -Carboxi-4 (11- carboxiundecanoilamino) butirilamino] etoxi }etoxi ) acetilamino] etoxi}etoxi) acetil] [Aib8, Arg34, Lys37] GLP-1 (7-37) -péptido, Química 24 : . lf26-{2- [2- (2-{2- [2- (2-{ (S) -4 -Carboxi -4 - [4- (4-yodo-fenil) - butirilamino] -butirilamino} -etoxi) -etoxi] -acetilamino} - etoxi) -etoxi] -acetilo} , lf37-{2 - [2-(2-{2-[2-(2-{ (S) -4 -Carboxi - 4- [4- (4-yodo-fenil) -butirilamino] -butirilamino} -etoxi) - etoxi] -acetilamino} - etoxi) -etoxi] -acetil } [Aib8, Arg34 , Lys37] GLP- 1 (7-37) -péptido, y Química 31: (iü) i 26-{2 - [2 - (2-{2 - [2- (2-{ (S) -4-Carboxi-4- [12- (3- carboxifenoxi) dodecanoilamino] butirilamino}etoxi) etoxi] acetilamino} etoxi) etoxi] acetilo} , lf37-{2- [2-(2-{2-[2-(2-{(S) 4-Carboxi-4- [12- (3- carboxifenoxi) dodecanoilamino] butirilaminojetoxi) etoxi] acetilamino}etoxi) etoxi] acetil} [Aib8, Arg34, Lys37] GLP-1 (7-37) - péptido, Química 35: ISf26- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -Carboxi -4 - (13- carboxitridecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi) acetilamino] etoxi } etoxi ) aceti lo] , if37- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -Carboxi -4 - (13- carboxitridecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi) acetilamino] etoxi}etoxi) acetil] [ Aib8, Arg34, Lys37] GLP-1 (7-37) -péptido, Química 23 : l 26- [ (S) -4 -Carboxi -4- {2 - [2-(2-[2-(2-{2-[(13- carboxitridecanoilamino) ] etoxi} etoxi) acetilamino] etoxi) etoxi] acetilamino} butiril] , N837- [ (S) -4 -Carboxi-4 - { 2 - [2-(2-[2-(2-{2- [(13- carboxitridecanoilamino) ] etoxi}etoxi) acetilamino] etoxi) etoxi] acetilamino}butiril] [Aib8, Arg34, Lys37] GLP-1 (7-37) -péptido, Química 44: lf26{2 - [2 - (2-{2 - [2- (2-{ (S) -4 -Carboxi -4 - [10- (4-carboxifenoxi) decanoilamino] butirilaminojetoxi) etoxi] acetilamino} etoxi) etoxi] acetilo} , tf37- {2- [2-(2-{2-[2-(2-{(S)-4 -carboxi -4- [10- (4-carboxifenoxi) decanoilamino] butirilaminojetoxi) etoxi] acetilaminojetoxi) etoxi] acetil} - [Aib8, Arg34, Lys37] GLP-1 (7-37) -péptido, Química 21: NfcZ5- [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [ [ (4S) - 4 - carboxi - 4 - [10- (4-carboxifenoxi ) decanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetil] , N - [2 - [2 - [2 - [[2 - [2 - [2 [ [ (4S) -4-carboxi-4- [10- (4 -carboxif enoxi ) decanoi lamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetil] - [Arg34, Lys37] -GLP-1- (7-37) -péptido, y Química 48: (iv) lf2S-{2- [2- (2-{2- [2- (2-{ (S) -4-Carboxi-4- [12- (3-carboxifenoxi) dodecanoilamino] butirilaminojetoxi) etoxi] acetilaminojetoxi) etoxi] acetil} , tf37-{2- [2- (2-{2- [2-(2-{ (S) 4-Carboxi-4- [12- (3-carboxifenoxi) dodecanoilamino] utirilaminojetoxi) etoxi] acetilaminojetoxi) etoxi] acetil} [Aib8 , Arg34 , Lys37] GLP-1 (7-37) -péptido, Química 35: l 26{2 - [2 - (2-{2 - [2- (2-{ (S) -4-Carboxi-4- [10- (4 - carboxifenoxi) decanoilamino] butirilamino}etoxi) etoxi] acetilamino} etoxi) etoxi] acetil} , 27e37-{2-[2-(2-{2-[2-(2-{(S)- 4-carboxi-4- [10- (4- carboxifenoxi) decanoilamino] butirilaminojetoxi) etoxi] acetilamino} etoxi) etoxi] acetil } - [Aib8, Arg34, Lys3 ]GLP-l (7-37) - péptido, Química 21: l 26- [2-{2- [ (S) -4-Carboxi-4- (13- carboxitridecanoilamino) butirilamino] ] , amida de i\^37-[2-{2- [ (S) -4-Carboxi-4- (13- carboxitridecanoilamino) butirilamino] ] [Aib8, Arg34, Lys37] GLP-1(7-37) -péptido, Química 29: lf26-{2- [2- (2-{2- [2- (2-{ (S) -4-Carboxi-4- [4- (4 -yodo-feni.l) -butirilamino] -butirilamino} -etoxi) -etoxi] -acetilamino} -etoxi) -etoxi] -acetilo} , lf37- {2- [2- (2- {2- [2- (2- { (S) -4-Carboxi-4 - [4 - (4 -yodo- fenil ) -butirilamino] -butirilamino} -etoxi ) -etoxi] -acetilamino} - etoxi ) -etoxi] -acetil } [Aib8, Arg34 , Lys37] GLP-1 (7-37) -péptido, y Química 31: o una sal farmacéuticamente aceptable, amida, o éster de cualquiera de estos compuestos. 182. El derivado de la modalidad 181, que es Química 62, o una sal, amida, o éster farmacéuticamente aceptable del mismo 183. El derivado de la modalidad 181, que es Química 40, o una sal, amida, o éster farmacéuticamente aceptable del mismo 184. El derivado de la modalidad 181, que es Química 21, o una sal, amida, o éster farmacéuticamente aceptable del mismo 185. El derivado de la modalidad 181, que es Química 55, o una sal, amida, o éster farmacéuticamente aceptable del mismo 186. El derivado de la modalidad 181, que es Química 51, o una sal, amida, o éster farmacéuticamente aceptable del mismo 187. El derivado de la modalidad 181, que es Química 44, o una sal, amida, o éster farmacéuticamente aceptable del mismo 188. El derivado de la modalidad 181, que es Química 46, o una sal, amida, o éster farmacéuticamente aceptable del mismo 189. El derivado de la modalidad 181, que es Química 31, o una sal, amida, o éster farmacéuticamente aceptable del mismo 190. El derivado de la modalidad 181, que es Química 35, o una sal, amida, o éster farmacéuticamente aceptable del mismo 191. El derivado de la modalidad 181, que es Química 23, o una sal, amida, o éster farmacéuticamente aceptable del mismo 192. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-191, que tiene actividad GLP-l. 193. El derivado de la modalidad 192, en donde la actividad GLP-l se refiere a la capacidad de activar el receptor GLP-l humano. 194. El derivado de la modalidad 193, en donde la activación del receptor GLP-l humano se mide en un ensayo in vitro, como la potencia de producción cAMP . 195. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-194, que tiene una potencia correspondiente a un EC50 a) debajo de 10000 pM, más preferiblemente debajo de 5000 pM, aún más preferiblemente debajo de 4000 pM, o lo más preferiblemente debajo de 3000 pM; b) en o debajo de 3000pM, preferiblemente debajo de 3000pM, más preferiblemente debajo de 2500pM, aún más preferiblemente debajo de 2000pM, o lo más preferiblemente debajo de 1500pM; c) debajo de 2000 pM, preferiblemente debajo de 1000 pM, más preferiblemente debajo de 800 pM, aún más preferiblemente debajo de 600 pM, o lo más preferiblemente debajo de 500 pM; c) debajo de 400 pM, preferiblemente debajo de 300 M, más preferiblemente debajo de 200 pM, aún más preferiblemente debajo de 150 pM, o lo más preferiblemente debajo de 100 pM; d) debajo de 80 pM, preferiblemente debajo de 60 pM, más preferiblemente debajo de 50 pM, aún más preferiblemente debajo de 40 pM, o lo más preferiblemente debajo de 30 pM; o que tiene una potencia correspondiente a un EC50 e) que es menos de 10 veces el EC50 de semaglútido, preferiblemente menos de 8 veces el EC50 de semaglútido, más preferiblemente menos de 6 veces el EC50 de semaglútido, aún más preferiblemente menos de 4 veces el EC50 de semaglútido, o lo más preferiblemente menos de 2 veces el EC50 de semaglútido; f) que es menos de 10 veces el EC50 de liraglútido, preferiblemente menos de 8 veces el EC50 de liraglútido, más preferiblemente menos de 6 veces el EC50 de liraglútido, aún más preferiblemente menos de 4 veces el EC50 de liraglútido, o lo más preferiblemente menos de 2 veces el EC50 de liraglútido; o g) que es menos de el EC50 de liraglútido, preferiblemente menos de 0.8 veces el EC50 de liraglútido, más preferiblemente menos de 0.6 veces el EC50 de liraglútido, aún más preferiblemente menos de 0.5 veces el EC50 de liraglútido, o lo más preferiblemente menos de o a 0.4 veces el EC50 de liraglútido. 196. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-195, en donde la potencia se determina como EC50 para la curva de respuesta a la dosis que muestra formación dependiente de dosis de cAMP en un medio que contiene el receptor GLP-l humano, preferiblemente usando una línea celular transfectada estable tal como BHK467-12A (tk-tsl3) , y/o usado para la determinación de cAMP un ensayo receptor funcional, por ejemplo basado en competencia entre cAMP endógenamente formado y cAMP etiquetado con biotina exógenamente agregado, en el cual el ensayo cAMP se captura más preferiblemente usando un anticuerpo específico, y/o en donde un ensayo aún más preferido es el ensayo AlphaScreen cAMP, más preferiblemente uno descrito en el Ejemplo 50. 197. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-196, para el cual la relación [afinidad de enlace del receptor GLP-l (IC50) en presencia de HSA al 2.0% (albúmina alta) , dividida por afinidad enlazada al receptor GLP-l (IC50) en presencia de HSA al 0.005% (albúmina baja)] es: a) al menos 0.5, preferiblemente al menos 1.0, más preferiblemente al menos 10, aún más preferiblemente al menos 20, o lo más preferiblemente al menos 30; b) al menos 40, preferiblemente al menos 50, más preferiblemente al menos 60, aún más preferiblemente al menos 70, o lo más preferiblemente al menos 80; c) al menos 90, preferiblemente al menos 100, más preferiblemente al menos 200, todavía más preferiblemente al menos 300, aún más preferiblemente al menos 400, o lo más preferiblemente al menos 500; d) al menos 120, preferiblemente al menos 140, aún más preferiblemente al menos 160, o lo más preferiblemente al menos 180; e) al menos 20% de la relación de semaglútido, preferiblemente al menos 50% de la relación de semaglútido, más preferiblemente al menos 75% de la relación de semaglútido, o lo más preferiblemente al menos igual a la relación de semaglútido; o f) al menos igual a la relación de liraglútido, preferiblemente al menos dos veces la relación de liraglútido, más preferiblemente al menos tres veces la relación de liraglútido, aún más preferiblemente al menos 4 veces la relación de liraglútido, o lo más preferiblemente al menos 5 veces la relación de liraglútido. 198. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-197, para el cual la afinidad enlazada al receptor GLP-1 (IC50) en presencia de HSA al 0.005% (albúmina baja) está a) debajo de 1000.00 nM, preferiblemente debajo de 600.00 nM, más preferiblemente debajo de 100.00 nM, o lo más preferiblemente debajo de 50.00 nM; o b) debajo de 20.00 nM, preferiblemente debajo de 10.00 nM, más preferiblemente debajo de 5.00 nM, aún más preferiblemente debajo de 2.00 nM, o lo más preferiblemente debajo de 1.00 nM. 199. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 198, para el cual la afinidad enlazada al receptor GLP-1 (IC50) en presencia de HSA al 2.0% (albúmina alta) está a) debajo de 1100.00 nM, preferiblemente en o debajo de 1000.00 nM, más preferiblemente debajo de 800.00 nM, o lo más preferiblemente debajo de 600 nM; o b) debajo de 400.00 nM, preferiblemente debajo de 300.00 nM, más preferiblemente debajo de 200.00 nM, aún más preferiblemente debajo de 100.00 nM, o lo más preferiblemente debajo de 50.00 nM. 200. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 199, en donde la afinidad de enlace al receptor GLP-1 se mide a manera de desplazamiento de 125I-GLP-1 del receptor, preferiblemente usando un ensayo de enlace SPA. 201. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-200, en donde el receptor GLP-1 se prepara usando una línea celular transfectada , estable, preferiblemente una línea celular de hámster, más preferiblemente una línea celular de riñon de hámster bebé, tal como BHK tk-tsl3. 202. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-201, en donde el valor IC5o se determina como la concentración que desplaza 50% de 125I-GLP-1 del receptor. 203. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-202, que tiene una biodisponibilidad oral, preferiblemente una biodisponibilidad oral absoluta, que es mayor que el de semaglútido . 204. El derivado de la modalidad 203, en donde la biodisponibilidad oral se mide in vivo en ratas, como se expone en plasma después de la inyección directa en el lumen intestinal . 205. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 204, para el cual la concentración de plasma (pM) del derivado, determinada 30 minutos después de la inyección de una solución del derivado en el yeyuno de rata, dividida por la concentración (µ?) de la solución inyectada (exposición corregida por dosis en 30 min) es al menos 40, preferiblemente al menos 50, más preferiblemente al menos 60, todavía más preferiblemente al menos 70, aún más preferiblemente al menos 80, o lo más preferiblemente al menos 100. 206. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 205, para el cual la concentración de plasma (pM) del derivado, determinada 30 minutos después de la inyección de una solución del derivado en el yeyuno de rata, dividida por la concentración (µ?) de la solución inyectada (exposición corregida por dosis en 30 min) es al menos 110, preferiblemente al menos 120, más preferiblemente al menos 130, todavía más preferiblemente al menos 140, aún más preferiblemente al menos 150, o lo más preferiblemente al menos 160. 207. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-206, para el cual la concentración de plasma (pM) del derivado, determinada 30 minutos después de la inyección de una solución del derivado en el yeyuno de rata, dividida por la concentración (µ?) de la solución inyectada (exposición corregida por dosis en 30 min) es al menos 180, preferiblemente al menos 190, más preferiblemente al menos 200, o lo más preferiblemente al menos 210. 208. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-207, en donde el derivado GLP-1 se prueba en una concentración de 1000 uM en mezcla con 55 mg^ml de caprato de sodio . 209. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 208, en donde se usan ratas Sprague Dawley macho, preferiblemente con un peso corporal de la llegada de aproximadamente 240 g. 210. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-209, en donde las ratas se ponen en ayuno durante aproximadamente 18 horas antes del experimento. 211. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-210, en donde las ratas se toman en anestesia general después de tener ayuno y antes de la inyección del derivado en el yeyuno . 212. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 211, en donde el derivado se administra en la parte próxima del yeyuno (10 cm de distal del duodeno) o en el intestino medio (50 cm próximo para el ciego) . 213. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 212, en donde 100 µ? del derivado se inyecta en el lumen yeyunal a través de un catéter con una jeringa de 1 mi , y posteriormente 200 µ? de aire se empujó en el lumen yeyunal con otra jeringa, que luego se dejó conectada al catéter para prevenir el flujo de nuevo en el catéter. 214. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 213, en donde las muestras de sangre (200 ul) se recolectan en tubos EDTA de la vena de la cola en intervalos deseados, tales como en veces 0, 10, 30, 60, 120 y 240 min, y centrifugaron 5 minutos, 10000G, a 4°C dentro de 20 minutos. 215. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 214, en donde plasma (75ul) se separa, inmediatamente congela, y mantiene a -20°C hasta que se analiza para concentración de plasma del derivado. 216. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 215, en donde se usa LOCI ( Inmunoensayo de Canalización de Oxígeno Luminiscente) para analizar la concentración de plasma del derivado. 217. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-216, en donde el derivado es efectivo al disminuir la glucosa en la sangre in vivo en ratones db/db. 218. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 217, en donde el derivado es efectivo al disminuir el peso corporal in vivo en ratones db/db. 219. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 218, en donde se tratan ratones db/db, s.c, con un intervalo adecuado de dosis del derivado GLP-1, y glucosa en la sangre y/o peso corporal se determinan en intervalos apropiados. 220. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-219, en donde la dosis del derivado GLP-1 es 0.3 nmol/kg, 1.0 nmol/kg, 3.0 nmol/kg, 10 nmol/kg, 30 nmol/kg, y 100 nmol/kg, en donde kg se refiere al peso corporal del ratón. 221. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-220, en donde un grupo de control se trata con vehículo, s.c, preferiblemente el medio en el cual el derivado GLP-1 se disuelve, por ejemplo con la siguiente composición: fosfato de sodio 50mM, cloruro de sodio 145 mM, tween 80 al 0.05%, pH 7.4. 222. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-221, en donde se determina la glucosa en la sangre, y/o los ratones se pesan, en tiempo -½h (media hora antes de la dosificación (t=0)), y a veces 1, 2, 4, 8, 24, 48, 72, y 96h. 223. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-222, en donde la concentración de glucosa se mide usando el método de glucosa oxidasa. 224. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 223, en donde (i) ED50 (peso corporal (PC)) se calcula como la dosis dando lugar a efecto medio-máximo en delta (por ejemplo, disminución) PC 24 horas después de la administración subcutánea del derivado; y/o (ii) ED50 (glucosa en la sangre (GS) ) se calcula como la dosis que da lugar al efecto medio-máximo en AUC (siglas en inglés de Área Bajo la Curva) delta (por ejemplo, disminución) GS 8 horas después de la administración subcutánea del derivado. 225. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 224, en donde existe una relación de respuesta a la dosis sigmoidal, preferiblemente con una definición clara de la respuesta máxima. 226. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 225, que tiene un perfil más prolongada de acción que liraglútido . 227. El derivado de la modalidad 226, en donde la prolongación significa vida media in vivo en una especie animal relevante, tal como ratones db/db, rata, cerdo, y/o, preferiblemente, minicerdos; en donde el derivado se administra i) s.c, y/o, preferiblemente, ii) s.c. 228. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-227, en donde la vida media terminal (T¾) después de administración i.v. en minicerdos es a) al menos 12 horas, preferiblemente al menos 24 horas, más preferiblemente al menos 36 horas, aún más preferiblemente al menos 48 horas, o lo más preferiblemente al menos 60 horas; b) al menos 7 horas, preferiblemente al menos 16 horas, más preferiblemente al menos 24 horas, aún más preferiblemente al menos 30 horas, o lo más preferiblemente al menos 40 horas; c) al menos 44 horas, preferiblemente al menos 55 horas, más preferiblemente al menos 66 horas, aún más preferiblemente al menos 77 horas, o lo más preferiblemente al menos 88 horas; o d) al menos 0.2 veces la vida media de semaglútido, preferiblemente al menos 0.4 veces la vida media de semaglútido, más preferiblemente al menos 0.6 veces la vida media de semaglútido, aún más preferiblemente al menos 0.8 veces la vida media de semaglútido, o lo más preferiblemente al menos lo mismo como la vida media de semaglútido. 229. El derivado de la modalidad 228, en donde los minicerdos son minicerdos Gottingen machos. 230. El derivado de cualquiera de las modalidades 227-229, en donde los minicerdos tienen 7-14 meses de edad, y preferiblemente pesan desde 16-35 kg. 231. El derivado de cualquiera de las modalidades 227-230, en donde los minicerdos se alojan individualmente, y se alimentan una vez o dos veces al día, preferiblemente con dieta para minicerdos SDS . 232. El derivado de cualquiera de las modalidades 227-231, en donde el derivado se dosifica, i.v., después de al menos 2 semanas de aclimatación. 233. El derivado de cualquiera de las modalidades 227- 232, en donde los animales se ponen en ayuno durante aproximadamente 18 h antes de la dosificación y durante al menos 4 h después de la dosificación, y tienen acceso ad libitum a agua durante el periodo completo. 234. El derivado de cualquiera de las modalidades 227- 233, en donde el derivado GLP-1 se disuelve en fosfato de sodio 50 mM, cloruro de sodio 145 mM, tween 80 al 0.05%, pH 7.4 a una concentración adecuada, preferiblemente desde 20-60 nmol/ml . 235. El derivado de cualquiera de las modalidades 227- 234, en donde las inyecciones intravenosas del derivado se dan en un volumen correspondiente a 1-2 nmol/kg. 236. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 235, que incrementa la secreción de insulina estimulada por glucosa en. minicerdos. 237. El derivado de la modalidad 236, en donde los minicerdos son minicerdos Gottingen macho. 238. El derivado de cualquiera de las modalidades 236-237, en donde los minicerdos tienen 7-14 meses de edad. 239. El derivado de cualquiera de las modalidades 236- 238, en donde los minicerdos se alojan en corrales sencillos, y se alimentan una vez o dos veces al día, preferiblemente con forraje de minicerdo SDS. 240. El derivado de cualquiera de las modalidades 236- 239, en donde una dosis sencilla, opcionalmente después de un periodo con escala de dosis, se da i.v., o s.c, en la piel delgada detrás de la oreja. 241. El derivado de cualquiera de las modalidades 236- 240, en donde los animales se ponen en ayuno durante aproximadamente 18 h antes de la dosificación. 242. El derivado de cualquiera de las modalidades 236- 241, en donde se tratan un grupo de línea base y un número de grupos de dosis derivados correspondientes a 2-6 niveles de concentración de plasma diferentes, en donde el grupo de línea base es a) vehículo tratado, o b) no tratado. .243. El derivado de cualquiera de las modalidades 236- 242, en donde el nivel de concentración de plasma es 3000-80000 pM. 244. El derivado de cualquiera de las modalidades 236- 243, en donde se realiza una prueba de tolerancia a la glucosa intravenosa de 1 o 2 horas (IVGTT) . 245. El derivado de cualquiera de las modalidades 236-244. en donde 0.3 g/kg de glucosa se da i.v. durante un periodo de 30 segundos, y muestras de sangre tomadas en puntos de tiempo adecuados, tales como los siguientes puntos de tiempo (t=0 corresponde al bolo de glucosa) : -10, -5, 0, 2, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, .90, 100, 110, 120 minutos. 246. El derivado de cualquiera de las modalidades 236-245, en donde se determina la concentración en plasma del derivado, glucosa, e insulina. 247. El derivado de cualquiera de las modalidades 236-246, en donde la concentración de derivado se mide en t= 0 min, y, opcionalmente , al final de la prueba (t=60 min, o t=120 min) . 248. El derivado de cualquiera de las modalidades 236- 247, en donde la glucosa se analiza usando el método de glucosa oxidasa. 249. El derivado de cualquiera de las modalidades 236- 248, en donde el área bajo la curva de insulina (AUCinsulina) se calcula y usa como una medición de secreción de insulina. 250. El derivado de cualquiera de las modalidades 236-249, en donde para al menos una concentración del mismo, la AUCinsulina es superior que la AUCinsulina de línea base, preferiblemente al menos 110% de la misma, más preferiblemente al menos 120% de la misma, aún más preferiblemente al menos 130% de la misma o lo más preferiblemente al menos 140% de la misma. 251. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-250, que provoca una ingesta alimenticia reducida en cerdos con relación a un control (preferiblemente vehículo tratado, o no tratado) ; opcionalmente la ingesta alimenticia (0-24h) puede ser 90% o inferior con relación al control tratado con vehículo, preferiblemente 80% o inferior, más preferiblemente 70% o inferior, aún más preferiblemente 60% o inferior, o lo más preferiblemente 50% o inferior; en donde la ingesta alimenticia (0-24h) se refiere a las primeras 24 horas después de la administración del derivado o vehículo. 252. El derivado de la modalidad 251, en donde los cerdos son cerdos Landrace Yorkshire Duroc (LYD) hembra. 253. El derivado de cualquiera de las modalidades 251- 252, en donde los cerdos tienen 3 meses de edad, y preferiblemente tienen un peso de 30-35 kg. 254. El derivado de cualquiera de las modalidades 251- 253, donde los animales se alujan en un grupo durante 1-2 semanas para aclimatación. 255. El derivado de cualquiera de las modalidades 251- 254, en donde durante el periodo experimental los animales se colocan en corrales individuales de Lunes hasta la tarde del Viernes para medición de ingesta de alimento individual. 256. El derivado de cualquiera de las modalidades 251-255, en donde los animales se alimentan ad libitum con forraje de cerdo (tal como Svinefoder, Antonio) . 257. El derivado de cualquiera de las modalidades 251- 256, en donde la ingesta de alimento se monitorea en línea por el registro del peso de forraje cada 15 minutos, preferiblemente usando el sistema Mpigwin. 258. El derivado de cualquiera de las modalidades 251- 257, que se dosifica 0.3, 1.0, 3.0, 10, o 30 nmol/kg, preferiblemente disuelve en una solución amortiguadora de fosfato (fosfato 50 mM, tween 80 al 0.05%, pH 8), más preferiblemente en concentraciones de 12, 40, 120, 400, o 1200 nmol/ml. 259. El derivado de cualquiera de las modalidades 251- 258, en donde la solución amortiguadora de fosfato sirve como vehículo. 260. El derivado de cualquiera de las modalidades 251- 259, en donde los animales se dosifican con una dosis subcutánea sencilla del derivado, o vehículo (preferiblemente con un volumen de dosis de 0.025 ml/kg) , en la mañana del día 1, y se mide la ingesta de alimento durante 4 días después de la dosificación. 261. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 260, que tiene una vida media in vitro (T¾) , en un extracto de intestinos delgados de la rata, dividido por la vida media correspondiente (T¾) de GLP-1 (7-37) , de al menos 0.4, preferiblemente arriba de 0.5, más preferiblemente arriba de 1.0, aún más preferiblemente arriba de 2.0, todavía más preferiblemente arriba de 3.0, o lo más preferiblemente arriba de 4.0. 262. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 261, que tiene una vida media in vitro (T¾) , en un extracto de los intestinos delgados de la rata, dividido por una vida media correspondiente (T¾) de GLP-1 (7-37) , de arriba de 5.0, preferiblemente arriba de 6.0, más preferiblemente arriba de 7.0, aún más preferiblemente arriba de 8.0, todavía más preferiblemente arriba de 9.0, o lo más preferiblemente arriba de 10.0. 263. El derivado de cualquiera de las modalidades 261- 262, en donde el extracto del intestino delgado de la rata se prepara como se describe en el Ejemplo 57, el derivado se incuba durante una hora a 37°C, la concentración del extracto se titula de manera que la vida media de GLP-1 (7-37) está en el intervalo de 10-20 minutos, por ejemplo 1.4ug/ml, las muestras resultantes se analizan por UPLC y/o MALDI-TOF, y/o la incubación y análisis se realiza como se describe en el Ejemplo 57. 264. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 263, para el cual una relación [vida media (T¾) in vitro en extracto del intestino delgado de rata, dividido por una vida media (T½) in vitro en el extracto del intestino delgado de la rata de GLP-l(7-37)] es al menos 0.5 veces la relación correspondiente de semaglútido, preferiblemente al menos 2 veces la relación de semaglútido, más preferiblemente al menos 3 veces la relación de semaglútido, aún más preferiblemente al menos 5 veces la relación de semaglútido, o lo más preferiblemente al menos 7 veces la relación de semaglútido . 265. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-264, para el cual una relación [vida media (T¾) en el extracto del intestino delgado de rata, dividido por una vida media (T¾) en el extracto del intestino delgado de rata de GLP-l(7-37)] es al menos 0.1 veces la relación correspondiente de liraglútido, preferiblemente al menos 0.4 veces la relación de liraglútido, más preferiblemente al menos 0.8 veces la relación de liraglútido, aún más preferiblemente al menos 1.2 veces la relación de liraglútido, o lo más preferiblemente al menos 1.5 veces la relación de liraglútido. 266. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-265, que tiene una vida media (T¾) in vivo en ratas después de la administración i.v. de al menos 4 horas, preferiblemente al menos 6 horas, aún más preferiblemente al menos 8 horas, o lo más preferiblemente al menos 10 horas. 267. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-266, que tiene una vida media (T½) in vivo en ratas después de administración i.v. de al menos 12 horas, preferiblemente al menos 15 horas, aún más preferiblemente al menos 18 horas, o lo más preferiblemente al menos 20 horas . 268. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-266, que tiene una vida media (T¾) in vivo en ratas después de administración i.v. de al menos 24 horas, preferiblemente al menos 26 horas, o lo más preferiblemente al menos 30 horas. 269. El derivado de cualquiera de las modalidades 266-268, en el cual las ratas son ratas Sprague Dawley macho con un peso corporal desde 300 hasta 600g. 270. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 269, que tiene una vida media (T¾) in vivo en ratas después de administración i.v. que es al menos la misma como la vida media de semaglútido, preferiblemente al menos 2 veces la vida media de semaglútido, más preferiblemente al menos 3 veces la vida media de semaglútido, aún' más preferiblemente al menos 4 veces la vida media de semaglútido, o lo más preferiblemente al menos 5 veces la vida media de semaglútido. 271. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 270, que no es el compuesto de los Ejemplos 17, 21, 33, 34, 35, y 36; preferiblemente no Química 36, Química 40, Química 52, Química 53, Química 54, y Química 55. 272. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-271, que no es el compuesto de los Ejemplos 22, 23, 27, y 41; preferiblemente no Química 41, Química 42, Química 46, y Química 60. 273. El derivado del Ejemplo 19; preferiblemente Química 38. 274. El derivado del Ejemplo 10; preferiblemente Química 29. 275. Un producto intermediario en la forma de un análogo GLP-1 que comprende las siguientes modificaciones como se compara con GLP-l(7-37) (SEQ ID NO: 1): (A) (i) (8Aib, 31H, 34Q, 37K); (ii) (des7-8, 34R, 37K, 38E) ; (iii) (des7-8, 34R, 37K); (iv) (8Aib, 9G, 34R, 37K) ; (v) (8Aib, 23R, 34R, 37K) ; (vi) (31H, 34Q, 37 ) ; (vii) (9Q, 34R, 37K) ; (iix) (30E, 34R, 37K); (ix) (34R, 37K, 38G) ; (x) (34R, 36G, 37K) ; o (xi) (34R, 37K, 38E) ; en donde el análogo preferiblemente se selecciona de los siguientes análogos de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1) : (B) (i-a) (8Aib, 31H, 34Q, 37K); (ii-a) (des7-8, 34R, 37K, 38E); (iii-a) (des7-8, 34R, 37K) ; (iv-a) (8Aib, 9G, 34R, 37K) ; (v-a) (8Aib, 23R, 34R, 37K) ; (vi-a) (31H, 34Q, 37K) ; (vii-a) (9Q, 34R, 37K); (iix-a) (30E, 34R, 37K) ; (ix-a) (34R, 37K, 38G); (x-a) (34R, 36G, 37K) ; (xi-a) (34R, 37K, 38E) ; (xii-a) (7Imp, 34R, 37K) ; (xiii-a) (8Aib, 34R, 37K) ; y (xiv-a) (34R, 37K) ; 1 o una sal farmacéuticamente aceptable, amida, o éster de cualquiera de los análogos de (A) o (B) . 276. El análogo de la modalidad 275, en donde la comparación con GLP-l(7-37) (SEQ ID NO: 1) se hace por escritura y inspección visual. 277. El análogo de la modalidad 275, en donde la comparación con GLP-l(7-37) (SEQ ID NO: 1) se hace por el uso de un programa de alineación de péptido o proteína estándar. 278. El análogo de la modalidad 277, en donde el programa de alineación es una alineación Needleman-Wunsch . 279. El análogo de cualquiera de la modalidad 277- 278, en donde se usa la matriz de registro por omisión y la matriz de identidad por omisión. 280. El análogo de cualquiera de las modalidades 277-279, en donde la matriz de registro es BLOSUM62. 281. El análogo de cualquiera de las modalidades 277-280, en donde la penalización para el primer residuo en un espacio es -10 (menos diez) . 282. El análogo de cualquiera de las modalidades 277-281, en donde las penalizaciones para residuos adicionales en un espacio es -0.5 (menos punto cinco) . 283. El análogo de cualquiera de las modalidades 277-282, que tiene actividad GLP-1. 284. El análogo de la modalidad 283, en donde la actividad GLP-1 se define como se describe en las modalidades 192-196. 285. Un producto intermediario que comprende una porción prolongada seleccionada de Química 2c, Química 3b, y Química 4b: Química 2c: HOOC-C6H4-0- (CH2)y-CO-PG Química 3b : R1-C6H4- (CH2) z-CO-PG Química 4b : HOOC-C4SH2- (CH2) w-CO-PG en la cual y es un entero en el intervalo de 3-17, z es un entero en el intervalo de 1-5, R1 es un grupo que tiene una masa molar no superior que 150 Da, w es un entero en el intervalo de 6-18, y *-PG es un grupo de protección; en donde, opcionalmente , el grupo *-COOH distal de la porción prolongada, si se presenta, también se protege; o una sal farmacéuticamente aceptable, amida o éster de la misma. 286. El producto intermediario de la modalidad 285, en donde *-C0-PG es i) *-C00H, o ii) un éster activado. 287. El producto intermediario de la modalidad 286, en donde el éster activado es un éster de p-nitrofenol ; 2 , 4 , 5-triclorofenol ; N-hidroxisuccinimida; N-hidroxisulfosuccinimida ; 3, 4-dihidro-3-hidroxi-l , 2,3-benzotriazin-4 -ona; 5 - cloro- 8 -hidroxiquinol ina ,- imida del ácido N-hidroxi-5-norbornen-2 , 3 -dicarboxílico ; pentafluorofenol ; p-sulfotetrafluorofenol ; N-hidroxiftalimida; 1-hidroxibenzotriazol ; l-hidroxi-7-azabenzotriazol ; N-hidroximaleimida ; ácido sulfónico de 4-hidroxi-3-nitrobenceno; o cualquier éster activado conocido en la técnica. 288. El producto intermediario de cualquiera de las modalidades 285-287, que comprende a) una porción prolongada seleccionada de Química 2, Química 3, y Química 4: Química 2: HOOC-C6H4-0- (CH2) y-C0-* Química 3: R1-C6H - (CH2) Z-C0-* Química 4: HOOC-C4SH2- (CH2) W-C0-* en la cual y es un entero en el intervalo de 3-17, z es un entero en el intervalo de 1-5, R1 es un grupo que tiene una masa molar no superior que 150 Da, y w es un entero en el intervalo de 6-18; y b) un ligador seleccionado de Química 5b, Química 6, y Química 7 : Química 5b: Químic Química 7a: en donde k es un entero en el intervalo de 1-5, y n es un entero en el intervalo de 1-5; y PG es un grupo de protección; en donde, opcionalmente , el grupo *-COOH de la porción prolongada, si se presente, preferiblemente también se protege como se conoce en la técnica, preferiblemente funcionalizado como un éster no reactivo; o una sal, amida, o éster farmacéuticamente aceptable del mismo 289. El producto intermediario de cualquiera de las modalidades 285-288, en donde el ligador es como se define en cualquiera de las modalidades 1-57. 290. El producto intermediario de cualquiera de las modalidades 285-289, en donde la porción prolongada es como se define en cualquiera de las modalidades 1-87. 291. Un producto intermediario que comprende, preferiblemente consiste de, a) una porción prolongada seleccionada de Química 2, Química 3, y Química 4: Química 2: HOOC-C6H4-0- (CH2) y-CO-* Química 3: í^-CeHi- (CH2) Z-C0-* Química 4 : HOOC-C4SH2- (CH2)„-CO- * en la cual y es un entero en el intervalo de 3-17, z es un entero en el intervalo de 1-5, R1 es un grupo que tiene una masa molar no superior que 150 Da, y w es un entero en el intervalo de 6-L8; y b) un ligador que comprende Química 5b: Química 5 : en donde k es un entero en el intervalo de 1-5, y- n es un entero en el intervalo de 1-5; y PG es un grupo de protección; en donde, opcionalmente , el grupo *-C00H distal de la porción prolongada, se hubiera, también se protege como se conoce en la técnica; preferiblemente bajo la formación de un éster no reactivo; m s preferiblemente i) un éster de un alcohol con una cadena lateral voluminosa, tal como un éster de un fenol, opcionalmente sustituido; o ii) un éster de alquilo ramificado, preferiblemente alquilo inferior; lo más preferiblemente protegido como OtBu, OBz, y similares; o una sal, amida, o éster farmacéuticamente aceptable del mismo 292. Un producto intermediario, preferiblemente de acuerdo a cualquiera de las modalidades 285-291, seleccionado de lo siguiente: Química 69: Química 70 Química 72: Química 73 : Química 75 Química 76 Química 77 Química 79: Química 80: Química 81: Química 82 : y Química 83: en donde, opcionalmente , uno o más de los grupos *- COOH, preferiblemente el grupo *-COOH distal de la porción prolongada también se protege. 293. Un derivado de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1-274, 'para uso como un medicamento. 294. Un derivado de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1-274, para uso en el tratamiento y/o prevención de todas las formas de diabetes y enfermedades relacionadas, tales como trastornos alimenticios, enfermedades cardiovasculares, enfermedades gastrointestinales, complicaciones diabéticas, enfermedad crítica, y/o síndrome de ovario poliquístico; y/o para mejorar parámetros de lípido, mejorar la función ce célula ß, y/o para retardar o prevenir el progreso de la enfermedad diabética. 295. El uso de un derivado de acuerdo con , cualquiera de las modalidades 1-274 en la fabricación de un medicamento para el tratamiento y/o prevención de todas las formas de diabetes y enfermedades relacionadas, tales como trastornos alimenticios, enfermedades cardiovasculares, enfermedades gastrointestinales, complicaciones diabéticas, enfermedad crítica, y/o síndrome de ovario poliquístico; y/o para mejorar parámetros de.lípido, mejorar la función de la célula ß, y/o para retrasar o prevenir el progreso de la enfermedad diabética. 296. Un método para tratar o prevenir todas las formas de diabetes y enfermedades relacionadas, tales como trastornos alimenticios, enfermedades cardiovasculares, enfermedades gastrointestinales, complicaciones diabéticas, enfermedad crítica, y/o síndrome de ovario poliquístico; y/o para mejorar parámetros de lípido, mejorar la función de la célula ß, y/o para retrasar o prevenir el progreso de la enfermedad diabética - al administrar una cantidad farmacéuticamente activa de un derivado de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1-274. 297. Un derivado de un análogo GLP-1, el cual comprende una porción prolongada seleccionada de Química 2, Química 3, y Química 4: Química 2: HOOC-C6H4-0- (CH2) y-C0- * Química 3: R1-^^- (CH2) Z-C0-* Química 4: H00C-C4SH2- (CH2)„-C0-* en la cual x es un entero en el intervalo de 6-18, y es un entero en el intervalo de 3-17, z es un entero en el intervalo de 1-5, R1 es un grupo que tiene una masa molar, no superior que 150 Da, y w es un entero en el intervalo de 6-18; o una sal, amida, o éster farmacéuticamente aceptable del mismo 298. El derivado de la modalidad 297, en donde el análogo GLP-1 es como se define en cualquiera de las modalidades 1-296. 299. El derivado de cualquiera de las modalidades 297-298, en donde la porción prolongada es como se define en cualquiera de las modalidades 1-296. 300. El derivado de cualquiera de las modalidades 297- 299, el cual comprende además un ligador, preferiblemente como se define en cualquiera de las modalidades 1-296.
MODALIDADES PARTICULARES ADICIONALES Lo siguiente son modalidades particulares adicionales de la invención: 1. Un derivado de un análogo GLP-1, en donde el análogo GLP-1 es K37-GLP-1 (7-37) o un análogo del mismo que tiene hasta seis residuos de aminoácido cambiados como se compara con GLP-l(7-37) (SEQ ID NO: 1), cuyo derivado tiene dos porciones enlazadas a albúmina unidas a K26 y K37, respectivamente, en donde la porción enlazada a albúmina comprende una porción prolongada seleccionada de HOOC-(CH2)n-C0-, HOOC-C6H4-0- (CH2)m-CO-, y R1-^!^- (CH2) p-C0- , en el cual n es un entero en el intervalo de 8-16, m es un entero en el intervalo de 7-17, p es un entero en el intervalo de 1-5, y R1 es un grupo que tiene una masa molar no superior que 150 Da; o una sal, amida, o éster farmacéuticamente aceptable del mismo 2. El derivado de la modalidad 1, en el cual n es un número par. 3. El derivado de la modalidad 2, en el cual n es 8, 10, 12, 14, o 16; preferiblemente 10, 12, o 14. 4. El derivado de la modalidad 1, en el cual m es un número impar. 5. El derivado de la modalidad 4, en el cual m es 7, 9, 11, 13, 15, o 17; preferiblemente 9, 11, o 15; lo más preferiblemente 9. 6. El derivado de la modalidad 1, en el cual p es un número impar. 7. El derivado de la modalidad 6, en el cual p es 1, 3, o 5, preferiblemente 3. 8. El derivado de cualquiera de las modalidades 1 y 4-5, en el cual el grupo COOH está en la posición meta- o para, preferiblemente en la posición para. 9. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-8, en el cual R1 tiene una masa molar no superior que 130 Da, preferiblemente no superior que 100 Da, más preferiblemente no superior que 75 Da, aún más preferiblemente no superior que 60 Da, o lo más preferiblemente no superior que 50 Da. 10. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-9, en el cual R1 tiene una masa molar no superior que 40 Da, preferiblemente no superior que 30 Da, más preferiblemente no superior que 20 Da, o lo más preferiblemente no superior que 15 Da. 11. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-10, en donde R1 se selecciona de halógeno, y alquilo de cadena recta o ramificada que tiene desde 1-5 átomos C. 12. El derivado de cualquiera de las modalidades 1 y 6-7, en el cual R1 es metilo o tert-butilo. 13. El derivado de la modalidad 12, en el cual R1 está en la posición para. 14. El derivado de cualquiera de las modalidades 1 y 6-7, en el cual R1 es -I. 15. El derivado de la modalidad 14, en el cual R1 está en la posición para. 16. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 15, en el cual el análogo GLP-1 tiene un máximo de cinco, preferiblemente un máximo de cuatro, más preferiblemente un máximo de tres, o lo más preferiblemente un máximo de dos cambios de aminoácido, como se compara con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1) . 17. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 16, en el cual el análogo GLP-1 tiene una amida de C-terminal. 18. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-16, en el cual el análogo GLP-1 tiene un grupo -C00H de C-terminal, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 19. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-18, en el cual el análogo GLP-1 comprende al menos una eliminación, como se compara con GLP-l(7-37) (SEQ ID NO: 1) . 20. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 19, en el cual uno o dos aminoácidos se han eliminado en la N- erminal del análogo GLP-1, de manera que el análogo preferiblemente comprende des7, des8, o (des7+des8) más preferiblemente des7, o (des7+des8) . 21. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 20, en donde el análogo GLP-1 es un análogo de GLP-1 (8-37) o GLP-1 (9-37) que tiene hasta seis residuos de aminoácido cambiados como se compara con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1) . 22. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-21, en donde el análogo GLP-1 se selecciona de lo siguiente: (i) K37-GLP-1 (7-37) , (ii) K37-GLP- 1 ( 8 -37 ) , (iii) K3 -GLP-1 (9-37), o (iv) un análogo de cualquiera de uno de (i) -(iii) que tiene hasta seis cambios de residuo de aminoácido como se compara con GLP-K7-37) (SEQ ID NO: 1). 23. El derivado de cualquiera de las modalidades 20-21 o 22(ii)-(iv), en donde un imitador His o un imitador His-Ala se ha agregado al nuevo aminoácido de N-terminal. 24. El derivado de cualquiera de las modalidades 20- 23, en donde un derivado de un imidazol con un grupo de ácido carboxílico libre se ha acoplado covalentemente a la N-terminal, preferiblemente por medio de formación de un enlace de amida entre el grupo de ácido carboxílico libre y el grupo amino de N-terminal. 25. El derivado de la modalidad 24, en donde el derivado de imidazol es un imidazol mono sustituido. 26. El derivado de la modalidad 25, en donde el imidazol está sustituido con un radical de ácido carboxílico de un alquilo inferior que tiene desde uno hasta seis átomos de carbono. 27. El derivado de la modalidad 26, en donde el radical de ácido carboxílico se selecciona de acetilo; y propionilo, butirilo, pentanoilo recto o ramificado; preferiblemente acetilo. 28. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 27, en donde el residuo de aminoácido en la posición 8 del análogo GLP-1 tiene 3H-Imidazol-4-il-acetilo unido a su átomo N. 29. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 28, en donde el residuo de aminoácido en la posición 8 del análogo GLP-1 es alanina. 30. El derivado de la modalidad 25, en donde el imidazol está sustituido con (metilcarbamoil ) -2-metil-propionilo, (etilcarbamoil) -2-metil-propionilo, (propilcarbamoil ) -2 -metil -propionilo, o (butilcarbamoil ) -2 -metil-propionilo . 31. El derivado de la modalidad 30, en donde el imidazol está sustituido con (metilcarbamoil) -2-metil-propionilo, (etilcarbamoil) -2-metil-propionilo, o (propilcarbamoil) -2-metil-propionilo, preferiblemente con (etilcarbamoil ) -2 -metil-propionilo . 32. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 31, en donde el residuo de aminoácido en la posición 9 del análogo GLP-1 tiene {2- [2- (lH-Imidazol-4-il) -etilcarbamoil] - 2-metil-propionilo} unido a su átomo N. 33. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 32, en donde el residuo de aminoácido en la posición 9 del análogo GLP-1 es ácido glutámico. 34. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-33, que, además de 37K, comprende al menos una de las siguientes sustituciones: 8Aib; 31H; 34E,Q,R; y/o 38E. 35. El derivado de la modalidad 34 que comprende 8Aib. 36. El derivado de la modalidad 34, que comprende 34E, 34Q, o 34R; preferiblemente 34R. 37. El derivado de la modalidad 35, que comprende además 34R. 38. El derivado de la modalidad 34, que comprende 31H. 39. El derivado de la modalidad 35, que comprende además 31H y/o 34Q, preferiblemente ambos. 40. El derivado de la modalidad 34, que comprende 34R. 41. El derivado de la modalidad 34, que comprende 38E. 42. El derivado de la modalidad 37, que comprende además 38E. 43. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-42 en el cual las dos porciones enlazadas a albúmina son similares; preferiblemente sustancialmente idénticas; o, lo más preferiblemente, idénticas. 44. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-43 en el cual las dos porciones prolongadas son similar; preferiblemente de forma sustancial idénticas; o, lo más preferiblemente, idénticas. 45. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-44 en el cual las dos porciones enlazadas a albúmina, y/o las dos porciones prolongadas tienen un porcentaje de identidad de al menos 80%, preferiblemente al menos 85%, más preferibleménte al menos 90%, o aún más preferiblemente al menos 95%, o lo más preferiblemente al menos 99%. 46. El derivado de la modalidad 45, en donde el porcentaje de identidad se determina usando modelado de datos con el coeficiente de similitud Tanimoto y las huellas digitales de conectividad extendida ECFP_6. 47. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-46, en el cual las porciones enlazadas a albúmina son unidas al grupo amino epsilon de los residuos de lisina en la posición 26 y 37, respectivamente, por medio de enlaces de amida, opcionalmente por medio de una porción de ligador. 48. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-47 en el cual la porción enlazada a albúmina comprende una porción de ligador, en la cual un extremo se enlaza, por medio de un enlace amida, al grupo C0- de la porción prolongada, y al otro extremo se enlaza, por medio de un enlace amida, para el grupo amino epsilon de los residuos de lisina en la posición 26 y 37, respectivamente. 49. El derivado de cualquiera de las modalidades 47-48 en el cual la porción de ligador tiene desde 5 hasta 30 átomos C, preferiblemente desde 5 hasta 25 átomos C, más preferiblemente desde 5 hasta 20 átomos C, o lo más preferiblemente desde 5 hasta 17 átomos C. 50. El derivado de cualquiera de las modalidades 47- 49 en el cual la porción de ligador tiene desde 4 hasta 20 heteroátomos, preferiblemente desde 4 hasta 18 heteroátomos, más preferiblemente desde 4 hasta 14 heteroátomos, o lo más preferiblemente desde 4 hasta 12 heteroátomos. 51. El derivado de la modalidad 50 en el cual los heteroátomos son átomos N, y/u 0. 52. El derivado de cualquiera de las modalidades 47- 51 en el cual la porción de ligador se selecciona de lo 53. El derivado de cualquiera de las modalidades 47-52, en el cual la porción, de ligador comprende al menos un radical OEG, y/o al menos un radical Glu (ácido glutámico) . 54. El derivado de la modalidad 53, en el cual el ligador consiste de un radical OEG, o un radical Glu, el grupo gamma-ácido carboxílico del cual preferiblemente forma un enlace amida con el grupo amino epsilon del residuo de lisina . . 55. El derivado de la modalidad 53, en el cual el ligador consiste de dos radicales OEG, o dos radicales Glu, los radicales están interconectados por medio de enlaces de amida, y de manera que, preferiblemente, en caso de dos radicales Glu, el grupo gamma-ácido carboxílico de un Glu forma un enlace amida con el grupo amino epsilon del residuo de lisina, o - más preferiblemente "y" - el grupo gamma-ácido carboxílico del otro Glu forma un enlace amida con el grupo amino del primer Glu. 56. El derivado de la modalidad 53, en el cual el ligador comprende al menos un radical OEG y al menos un radical Glu, preferiblemente uno de cada uno, más preferiblemente con el extremo carboxi del radical OEG que forma un enlace de amida con el grupo amino epsilon del residuo de lisina, y el extremo amino del radical OEG que forma un enlace amida con el grupo gamma-carboxi del radical Glu. 57. El derivado de la modalidad 56, en el cual el ligador consiste de un radical Glu y dos radicales OEG, preferiblemente seleccionados de lo siguiente: -Glu-OEG-OEG- , -OEG-Glu-OEG--, y -OEG-OEG-Glu- , en los cuales el grupo amino del radical más a la izquierda forma un enlace amida con la porción prolongada, y el grupo carboxi del radical más a la derecha forma un enlace amida con el grupo amino epsilon del residuo de lisina, preferiblemente, en caso de un radical Glu en el extremo más a la derecha, se usa su grupo gamma-carboxi para el enlace amida. 58. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-57 que tiene una potencia (EC50) en o debajo de* 3000pM, preferiblemente debajo de 3000pM, más preferiblemente debajo de 2500pM, aún más preferiblemente debajo de 2000pM, o lo más preferiblemente debajo de 1500pM. 59. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-58 que tiene una potencia (EC50) debajo de ??????, preferiblemente debajo de 800pM, más preferiblemente debajo de 600pM, aún más preferiblemente debajo de 400pM, o lo más preferiblemente debajo de 200pM. 60. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-59 que tiene una potencia (EC50) debajo de 180pM, preferiblemente debajo de 160pM, más preferiblemente debajo de 140pM, aún más preferiblemente debajo de l20pM, o lo más preferiblemente debajo de ?????. 61. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-60 que tiene una potencia (EC50) debajo de 80pM, preferiblemente debajo de 60pM, más preferiblemente debajo de 50pM, aún más preferiblemente en o debajo de 40pM, o lo más preferiblemente debajo de 30pM. 62. El derivado de cualquiera de las modalidades 58-61, en donde la potencia se determina como estimulación de la formación de cAMP en un medio que contiene el receptor GLP-1 humano, preferiblemente usando una línea celular transfectada estable tal como BHK467-12A (tk-tsl3) , y/o usando para la determinación de cAMP un ensayo receptor funcional, por ejemplo basado en competencia entre cAMP endógenamente formado y cAMP etiquetado con biotina exógenamente agregado, en el cual el ensayo cAMP se captura más preferiblemente usando un anticuerpo específico, y/o en donde un ensayo aún más preferido es el ensayo AlphaScreen cAMP, lo más preferiblemente uno descrito en el Ejemplo 50. 63. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 62, la potencia (EC50) que es menos de 10 veces la potencia de semaglútido, preferiblemente menos de 8 veces la potencia de semaglútido, más preferiblemente menos de 6 veces la potencia de semaglútido, aún más preferiblemente menos de 4 veces la potencia de semaglútido, o lo más preferiblemente menos de 2 veces la potencia de semaglútido. 64. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 63, la potencia (EC50) que es menos de 10 veces la potencia de liraglútido, preferiblemente menos de 8 veces la potencia de liraglútido, más preferiblemente menos de 6 veces la potencia de liraglútido, aún más preferiblemente menos de 4 veces la potencia de liraglútido, o lo más preferiblemente menos de 2 veces la potencia de liraglútido. 65. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 64, la potencia (EC50) que es menos de la potencia de liraglútido, preferiblemente menos de 0.8 veces la potencia de liraglútido, más preferiblemente menos de 0.6 veces la potencia de liraglútido, aún más preferiblemente menos de 0.5 veces la potencia de liraglútido, o lo más preferiblemente menos de o en 0.4 veces la potencia de liraglútido. 66. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 65, para el cual la relación [afinidad enlazada al receptor GLP-l (IC50) en presencia de albúmina de suero humana (HSA) al 2.0%, dividido por afinidad enlazada al receptor GLP-l (IC50) en presencia de HSA al 0.005%] es al menos 1, preferiblemente al menos 10, más preferiblemente al menos 20, aún más preferiblemente al menos 30, o lo más preferiblemente al menos 40. 67. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 66, para el cual la relación [afinidad enlazada al receptor GLP-1 (IC50) en presencia de albúmina de suero humana (HSA) al 2.0%, dividido por afinidad enlazada al receptor GLP-1 (IC50) en presencia de HSA al 0.005%] es al menos 50, preferiblemente al menos, 60, más preferiblemente al menos 70, aún más preferiblemente al menos 80, o lo más preferiblemente al menos 90. 68. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 67, para el cual la relación [afinidad enlazada al receptor GLP-1 (IC50) en presencia de albúmina de suero humana (HSA) al 2.0%, dividido por afinidad enlazada al receptor GLP-1 (IC50) en presencia de HSA al 0.005%] , es al menos 100, preferiblemente al menos 120, más preferiblemente al menos 140, todavía más preferiblemente al menos 160, aún más preferiblemente al menos 180, o lo más preferiblemente al menos 200. 69. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 68, la afinidad enlazada al receptor GLP-1 (IC50) de la cual se mide a manera de su capacidad para desplazar 125I -GLP-1 del receptor, el receptor preferiblemente se proporciona en la forma de membranas de una línea celular estable tal como BHK tk-tsl3 transfectada con el receptor GLP-1 humano; y/o usando un ensayo de enlace SPA, preferiblemente empleando partículas SPA tales como perlas SPA de aglutinina de germen de trigo, el ensayo de enlace que se realiza más preferiblemente como se describe en el Ejemplo 51. 70. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 69, para el cual la relación [afinidad enlazada al receptor GLP-1 (IC50) en presencia de albúmina de suero humana (HSA) al 2.0%, dividido por afinidad enlazada al receptor GLP-1 (IC50) en presencia de HSA al 0.005%] es al menos 20% de la relación de semaglútido, preferiblemente al menos 50% de la relación de semaglútido, más preferiblemente al menos 75% de la relación de semaglútido, o lo más preferiblemente al menos igual a la relación de semaglútido. 71. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 70, para el cual la relación [afinidad enlazada al receptor GLP-1 (IC50) en presencia de albúmina de suero humana (HSA, por sus siglas en inglés) al 2.0%, dividido por afinidad enlazada al receptor GLP-1 (IC50) en presencia de HSA al 0.005%] es al menos igual a la relación de liraglútido, preferiblemente al menos dos veces la relación de liraglútido, más preferiblemente al menos tres veces la relación de liraglútido, aún más preferiblemente al menos 4 veces la relación de liraglútido, o lo más preferiblemente al menos 5 veces la relación de liraglútido. 72. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-71, el cual tiene una vida media in vitro (T¾) , en un extracto de los intestinos delgados de la rata, dividido por la vida media correspondiente (T¾) de GLP-1 (7-37) , de arriba de 0.5, preferiblemente arriba de 1.0, más preferiblemente arriba de 2.0, aún más preferiblemente arriba de 3.0, o lo más preferiblemente arriba de 4.0. 73. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-72, el cual tiene una vida media in vitro (T¾) , en un extracto de los intestinos delgados de la rata, dividido por una vida media correspondiente (T¾) de GLP-1 (7-37), de arriba de 5.0, preferiblemente arriba de 6.0, más preferiblemente arriba de 7.0, o lo más preferiblemente arriba de 8.0. 74. El derivado de cualquiera de las modalidades 72- 73, en donde el extracto del intestino delgado de rata se prepara como se describe en el Ejemplo 57, el derivado se incuba durante una hora a 37 °C, la concentración del extracto se titula de manera que la vida media de GLP-1 (7-37) está en el intervalo de 10-20 minutos, por ejemplo 1.4ug/ml, las muestras resultantes se analizan por UPLC y/o MALDI-TOF, y/o la incubación y análisis se realizan como se describe en el Ejemplo 57. 75. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-74, para el cual una relación [vida media (T¾) in vitro en el extracto del intestino delgado de rata, dividido por una vida media (T¾) in vi tro en el extracto del intestino delgado de rata de GLP-l(7-37)] es al menos 0.5 veces la relación correspondiente de semaglútido, preferiblemente al menos 2 veces la relación de semaglútido, más preferiblemente al menos 3 veces la relación de semaglútido, aún más preferiblemente al menos 5 veces la relación de semaglútido, o lo más preferiblemente al menos 7 veces la relación de semaglútido . 76. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 75, para el cual una relación [vida media (T¾) en el extracto del intestino delgado de rata, dividido por una vida media (T¾) en el extracto del intestino delgado de rata de GLP-1(7-37)] es al menos 0.1 veces la relación correspondiente de liraglútido, preferiblemente al menos 0.4 veces la relación de liraglútido, más preferiblemente wal menos 0.8 veces la relación de liraglútido, aún más preferiblemente al menos 1.2 veces la relación de liraglútido, o lo más preferiblemente al menos 1.5 veces la relación de liraglútido. 76. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-75, que tiene una vida media (TM) in vivo en ratas después de administración i.v. de al menos 4 horas, preferiblemente al menos 6 horas, aún más preferiblemente al menos 8 horas, o lo más preferiblemente al menos 10 horas. 77. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 76, que tiene una vida media (T¾) in vivo en ratas después de administración i.v. de al menos 12 horas, preferiblemente al menos 15 horas, aún más preferiblemente al menos 18 horas, o lo más preferiblemente al menos 20 horas. 78. El derivado de cualquiera de las modalidades 76- 77, en el cual las ratas son ratas Sprague Dawley macho con un peso corporal desde 300 hasta 600g. 79. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-78, que tiene una vida media (T¾) in vivo en ratas después de administración i.v. que es al menos la misma como la vida media de semaglútido, preferiblemente al menos 2 veces la vida media de semaglútido, más preferiblemente al menos 3 veces la vida media de semaglútido, aún más preferiblemente al menos 4 veces la vida media de semaglútido, o lo más preferiblemente al menos 5 veces la vida media de semaglútido . 80. El derivado de cualquiera de las modalidades 1-79 que tiene una vida media (T¾) in vivo en minicerdos después de administración i.v. de al menos 12 horas, preferiblemente al menos 24 horas, más preferiblemente al menos 36 horas, aún más preferiblemente al menos 48 horas, o lo más preferiblemente al menos 60 horas. 81. El derivado de la modalidad 80, en el cual los minicerdos son minicerdos Góttingen macho. 82. El derivado de cualquiera de las modalidades 1- 81, que tiene una vida media (T¾) in vivo en minicerdos después de la administración i.v. que es al menos 0.2 veces la vida media de semaglútido, preferiblemente al menos 0.4 veces la vida media de semaglútido, más preferiblemente al menos 0.6 veces la vida media de semaglútido, aún más preferiblemente al menos 0.8 veces la vida media de semaglútido, o lo más preferiblemente al menos lo mismo como la vida media de semaglútido. 83. Un derivado GLP-1 seleccionado de lo siguiente: (i) lf26- [2- (2-{2- [10- (4- Carboxifenoxi ) decanoilamino] etoxi } etoxi ) acetilo] , tf37- [2- (2- {2- [10- (4 -Carboxifenoxi ) decanoilamino] etoxi}etoxi) acetil] - [Aib8 , Arg3 , Lys37] GLP-1 (7-37) -péptido : (ii) lf26{2 - [2- (2-{2- [2- (2-{ (S) -4 -Carboxi-4- [1 carboxifenoxi) decanoilamino] butirilamino} etoxi ) etoxi] acetilamino} etoxi) etoxi] acetilo} , Ne37-{2 - [2-(2-{2-[2-(2- 4-carboxi-4- [10- (4- carboxifenoxi) decanoilamino] butirilaminojetoxi) etoxi] acetilamino}etoxi) etoxi] acetil} - [Aib8 , Arg34 , Lys37] GLP-1 (7-37) - (iii) ü 26- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -Carboxi -4 - (15- carboxipentadecanoilamino) butirilamino] etoxi }etoxi) acetilamino] etoxi}etoxi) acetilo] , if37- [2- (2- {2- [2- (2-{2- [ (S) - 4-Carboxi-4- (15- carboxipentadecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi ) acetilamino] etoxi}etoxi) acetil] [Aib8, Arg34, Lys37] GLP-1 (7-37) - péptido : arboxitridecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi ) acetilamino] etoxi } etoxi ) acetilo] , lf37- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -Carboxi-4 -(13-carboxitridecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi ) acetilamino] etoxijetoxi) acetil] [ Aib8, Arg34 , Lys37] GLP-1 ( 7-37 ) -péptido : (v) lf26- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -Carboxi -4 - (11-carboxiundecanoilamino) butirilamino] etoxi }etoxi) acetilamino] etoxijetoxi) acetilo] , lf37- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -Carboxi-4 -(11-carboxiundecanoilamino) butirilamino] etoxi }etoxi) acetilamino] etoxijetoxi) acetil] [Aib8, Arg34, Lys37] GLP-1 (7-37) -péptido : (vi) lf26- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -Carboxi -4 - (15-carboxipentadecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi) acetilamino] etoxijetoxi) acetilo] , amida de N837- [2 - (2 - { 2 - [2¦ (2-{2- [ (S) -4 -Carboxi -4 - ( 15 - carboxipentadecanoilamino) butiri lamino] etoxi } etoxi) acetilamino] etoxi}etoxi) acetil] [Aib8, Arg34 , Lys37] GLP-1 (7-37) -péptido : (vii) l 2e- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -Carboxi-4 - (13-carboxitridecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi) acetilamino] etoxi } etoxi) acetilo] , amida de tf37- [2 - ( 2 - { 2 - [2 - ( 2 - { 2 - [ ( S) -4 -Carboxi-4- (13-carboxitridecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi ) acetilamino] etoxi}etoxi) acetil] [Aib8 , Arg34 , Lys37] GLP-1 (7-37) -péptido: (iix) tf26- [2-(2-{2- [2-(2-.{2- [(S) - 4 - Carboxi - 4 - (11-carboxiundecanoi lamino) but irilamino] etoxi } etoxi ) acet ilamin o] etoxi }etoxi) acetilo] , amida de if37- [2 - ( 2 - { 2 - [2 - ( 2 - { 2 - [ (S) -4-Carboxi-4- (11-carboxiundecanoi lamino) but irilamino] etoxi } etoxi ) acet ilamin o] etoxi Jetoxi) acetil] [Aib8, Arg34, Lys37] GLP-1 (7-37) - pépt ido : (ix) if26- [2- [2-(2-{2- [(S) -4-Carboxi-4- (13- carboxitridecanoi lamino) but irilamino] etoxi }etoxi)acetilo] , amida de iV*37- [2 - [2 - ( 2 - { 2 - [ ( S ) - 4 -Carboxi -4 - ( 13 - carboxitrideeanoi lamino) but irilamino] etoxi } e oxi ) acetil ] [Aib8 , Arg34 , Lys37] GLP -1(7-37) -pépt ido : (x) lf26- [2- {2- [ (S) -4-Carboxi carboxitridecanoilamino) butirilamino] ] , amida de {2- [ (S) -4-Carboxi-4- (13- carboxitridecanoilamino) butirilamino] ] [Aib , Arg , Lys ] GLP -1 (7-37) -péptido : (xi) l 26- (2- {2 - [2 - (2- {2 - [2 - (13-Carbox tridecanoilamino) etoxi] etoxi Jacetilamino) etoxi] etoxi}acetilo) amida de lf37- (2- {2- [2- (2- {2- [2- (13-Carbox tridecanoilamino) etoxi] etoxi } acetilamino) etoxi] etoxi } acetil ) [Aib8,Arg34,Lys37]GLP-l (7-37) -péptido: (xii) l 26-{2- [2- (2-{2- [2- (2-{ (S) -4 -Carboxi -4 - [4- (4-yodo- fenil) -butirilamino] -butirilamino} -etoxi ) -etoxi] - acetilamino} -etoxi) -etoxi] -acetilo} , iVf37-{2-[2-(2-{2-[2-(2- { (S) -4-Carboxi-4- [4- (4 -yodo-fenil) -butirilamino] - butirilamino} -etoxi) -etoxi] -acetilamino} -etoxi ) -etoxi] - acetil} [Aib8, Arg34 , Lys37] GLP- 1 (7-37) -péptido: (xiii) lf26- {2- [2-(2-{2-[2-(2-{(S) - -Carboxi -4 - [16- (4- carboxifenoxi) hexadecanoilamino] butirilamino} etoxi) etoxi] acetilamino} etoxi) etoxi] acetilo} , W437- {2 - [2 - (2- {2 - [2- (2 - { (S) - 4-Carboxi-4- [16- (4- carboxifenoxi ) hexadecanoilamino] butirilamino} etoxi ) etoxi] acetilaminojetoxi) etoxi] acetil} - [Aib8 ; Arg34 , Lys37] GLP-1 (7-37) - (xiv) ?e26-{2 - [2- (2-{2 - [2- (2-{ (S) -4 -Carboxi -4- [16- (3- carboxifenoxi ) hexadecanoilamino] butirilamino} etoxi ) etoxi] acetilamino } etoxi) etoxi] acetilo} , ?e37-{2- [2-(2-{2-[2-(2-{(S)- 4-Carboxi-4- [16- (3- carboxifenoxi) hexadecanoi lamino] butirilaminojetoxi) etoxi] acetilamino} etoxi) etoxi] acetil } - [Aib8, Arg3 , Lys37] GLP-1 (7-37) - péptido : (xv) lf26-{2- [2- (2-{ (S) -4-Carboxi-4- [10- (4- carboxifenoxi ) decanoilamino] butirilaminojetoxi) - etoxi] acetilo} , ?e37-{2- [2- (2- { (S) -4-Carboxi-4- [10- (4- carboxifenoxi ) decanoilamino] - butirilaminojetoxi) etoxi] acetil} [Aib8 , Arg34 , Lys37] GLP-1 (7-37) - (xvi) f26-{2- [2- (2-{2- [2- (2-{ (S) -4-Carboxi-4- [12- (3-carboxifenoxi ) dodecanoilamino] butirilaminojetoxi) etoxi] acetilamino} etoxi) etoxi] acetilo} , iV£37-{2 - [2- (2-{2 - [2 - (2-4-Carboxi-4- [12- (3-carboxifenoxi) dodecanoilamino] butirilamino} etoxi ) etoxi] acetilamino}etoxi) etoxi] acetil} [Aib8, Arg34, Lys37] GLP-1 (7-37) -péptido : (xvii) l 26- [2- (2- [2- (2- [2- (2- [4- (10- (4 Carboxifenoxi) decanoilamino) -4 (S) -carboxibutirilamino] etoxi) etoxi] acetilamino) etoxi] etoxi) acetil] -rf37- [2- (2- [2- (2- [2- (2- [4- (10- (4 -Carboxifenoxi) decanoilamino) -4 (S) -carboxibutirilamino] etoxi) etoxi] acetilamino) etoxi] etoxi) acetil] [Aib8 , His31 , Gln34 , Lys37] GLP-1 (7-37) -péptido: (iixx) l 26-{2- [2- (2-{2- [2- (2-{ (S) -4 -Carboxi -4 - [4- (4- metilfenil) utirilamino] butirilamino} etoxi) etoxi] acetilamino} etoxi) etoxi] acetilo} , i 37-{2- [2- (2-{2- [2- (2-{ (S) -4-Carboxi-4- [4- (4-metilfenil) butirilamino] butirilaminojetoxi) etoxi] - acetilaminojetoxi) etoxi] acetil} [Aib8,Arg34, Lys37] GLP-1 (7-37) - péptido : (ixx) lf36- ( (S) -4 -Carboxi -4 -{ (S) - -carboxi -4- [10- (4 - carbóxifenoxi) -decanoilamino] butirilamino}butirilo) , lf37- ( (S) -4-Carboxi-4- { (S) -4-carboxi-4- [10- (4 - carbóxifenoxi ) - decanoilamino] butirilaminojbutiril ) [Aib8 , Arg34 , Lys37] GLP-1 (7- 37) -péptido: (??) ?e26-{2- [2- (2-{2- [2- (2-{4-Carboxi-4- [10- (3-carboxifenoxi) decanoilamino] butirilamino}etoxi) etoxi] acetilamino}etoxi) etoxi] acetilo} , _\7e37-{2- [2- (2- {2- [2- (2-{4- Carboxi-4- [10- (3-carboxifenoxi) decanoilamino] butirilamino}etoxi) etoxi] acetilamino}etoxi) etoxi] acetilo} [Aib8,Arg34, Lys37] GLP-1 (7-37) -péptido: (xxi) if26- [2- (2- {2- [2- (2- {2- [ (S) -4-Carboxi-4- (11-carboxiundecanoilamino) butirilamino] etoxi Jetoxi) acetilamino] etoxi}etoxi) acetilo] , í37- [2- (2- {2- [2- (2- {2- [ (S) -4-Carboxi-4- (11-carboxiundecanoilamino) butirilamino] etoxi}etoxi) acetilamino] etoxi }etoxi) aceti1] [Aib8, His31, Gln34, Lys37] GLP-1(7-37) -péptido : (xxii) N9-{2- [2- (lH-Imidazol-4-il)etilcarbamoil] -2-metilpropionilo}, ?^6-{2- [2- (2- {2- [2- (2-{ (S) -4-Carboxi-4- [10- (4- carboxifenoxi) decanoilamino] butirilamino}etoxi) etoxi] acetilamino} etoxi) etoxi] acetilo} , I\7°7-{2- [2- (2- {2- [2- (2- { (S) -4- Carboxi-4- [10- (4-carboxifenoxi) decanoilamino] butirilamino} etoxi) etoxi] acetilamino} etoxi) etoxi] acetil} [Arg34, Lys37] GLP-1 (9- 37)Glu38-péptido: (xxiii) N9-{2- [2- (lH-Imidazol-4-il) etilcarbamoil] metilpropionil}-íVe26-{2- [2- (2- {2- [2- (2-{ (S) -4-Carboxi-4- [10- (4- carboxifenoxi) decanoilamino] butirilamino}etoxi) etoxi] acetilamino}etoxi) etoxi] acetilo} , -V°7-{2- [2- (2-{2- [2- (2-{ (S) Carboxi-4- [10- (4- carboxifenoxi) decanoilamino] butirilamino}etoxi) etoxi] acetilamino} etoxi) etoxi] acetil} [Arg34, Lys37]GLP-l (9-37) -péptido (xxiv) l 26- { 2 - [2- (2-{ (S) -4 -Carboxi-4 - [2 - (2 - { 2 - [ ( 13 carboxitridecanoilamino) ] etoxijetoxi) acetilamino] butirilaminojetoxi) etoxi] acetilo} , f37- {2- [2- (2- { (S) -4-Carboxi-4- [2- (2- (2- [(13-carboxitridecanoilamino) ] etoxi }etoxi) acetilamino] butirilaminojetoxi) etoxi] acetil} - [Aib8,Arg34, Lys37] GLP-1 (7-37) - péptido : (xxv) if26- [ (s) -4-Carboxi-4-{2- [2- (2- [2- (2-{2- [ (13- carboxitridecanoilamino) ] etoxijetoxi) acetilamino] etoxi) etoxi] acetilaminojbutirilo] , N°7- [ (S) -4-Carboxi-4- {2- [2- (2- [2- (2-{2- [ (13-carboxitridecanoilamino) ] etoxijetoxi) acetilamino] etoxi) etoxi] acetilaminojbutiril] [ Aib8,Arg34, Lys37] GLP-1 (7-37) - péptido: (xxvi) iVe26-{2- [2- (2-{2- [2- (2-{ (S) -4- [4- (4- tert-Butil-fenil) - butirilamino] -4 -carboxi-butirilamino}etoxi) etoxi] acetilamino} etoxi) etoxi] acetilo} , lf37-{2- [2- (2- {2- [2- (2- { (S) -4- [4- (4-fcert- Butil-fenil) -butirilamino] -4-carboxi-butirilamino} -etoxi) -etoxi] - acetilamino} -etoxi) -etoxi] -acetil} [Aib8, Arg34, Lys37] GLP-1 (7-37) - péptido: y (xxvii) ^-{2- [2- (lH-Imidazol-4-il) -etilcarbamoil] -2- metilpropionil}-i^£2e-{2- [2- (2- {2- [2- (2- { (S) -4- [4- (4-tert- Butilfenil) butirilamino] -4-carboxibutirilamino}etoxi) etoxi] acetilamino}etoxi) etoxi] acetilo}, iVa7-{2- [2- (2-{2- [2- (2-{ (S) -4- [4- (4 - 1ert-Buti1feni1) butirilamino] -4-carboxibuti ilamino} etoxi) etoxi] acetilamino}etoxi) etoxi] acetil} [Arg34, Lys37] GLP-1 (9- 37) -péptido : o una sal farmacéuticamente aceptable, amida, o éster de cualquiera de los derivados (i)-(xxvii) . 84. Un derivado de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1-83 para uso como un medicamento. 85. Un derivado de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1-83, para uso en el tratamiento y/o prevención de todas las formas de diabetes y enfermedades relacionadas, tales como trastornos alimenticios, enfermedades cardiovasculares, enfermedades gastrointestinales, complicaciones diabéticas, enfermedad crítica, y/o síndrome de ovario poliquístico; y/o para mejorar parámetros de lípido, mejorar la función de la célula ß, y/o para retrasar o prevenir el progreso de la enfermedad diabética. 86. El uso de un derivado de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1-83, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento y/o prevención de todas las formas de diabetes y enfermedades relacionadas, tales como trastornos alimenticios, enfermedades cardiovasculares, enfermedades gastrointestinales, complicaciones diabéticas, enfermedad crítica, y/o síndrome de ovario poliquístico; y/o para mejorar parámetros de lípido, mejorar la función de la célula ß, y/o para retrasar o prevenir el progreso de la enfermedad diabética . 87. Un método para tratar o prevenir todas las formas de diabetes y enfermedades relacionadas, tales como trastornos alimenticios, enfermedades cardiovasculares, enfermedades gastrointestinales, complicaciones diabéticas, enfermedad crítica, y/o síndrome de ovario poliquístico; y/o para mejorar parámetros de lípido, mejorar la función de la célula ß, y/o para retrasar o prevenir el progreso de la enfermedad diabética, al administrar ¦ una cantidad farmacéuticamente activa of un derivado de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1-83.
EJEMPLOS Esta parte experimental inicia con una lista de abreviaciones, y es seguida por una sección que incluye métodos generales para sintetizar y caracterizar análogos y derivados de la invención. Luego sigue un número de ejemplos que se relacionan con la preparación de derivados GLP-1 específicos, y al final un número de ejemplos que se han incluido con relación a la actividad y propiedades de estos análogos y derivados (sección titulada métodos farmacológicos) .
Los ejemplos sirven para ilustrar la invención.
Abreviaturas Las siguientes abreviaturas se usan en lo siguiente, en orden alfabética: Aib: ácido aminoisobutírico (ácido a-aminoisobutírico) API: Ingrediente Farmacéutico Activo AUC: Área Bajo la Curva GS: Glucosa en la Sangre BHK Riñon de Hámster Bebé PC: Peso Corporal Bom : benciloximetilo Boc : t-butiloxicarbonilo BSA: Albúmina de suero de bovino Bzl : bencilo Clt : 2 -clorotritilo colidina 2,4, 6 -trimetilpiridina DCM : diclorómetaño Dde: 1- (4 , 4-dimetil-2 , 6 -dioxociclohexiliden) etilo DIC: di isopropi lcarbodi imida DIPEA: diisopropiletilamina DMAP: 4 -dimetilaminopiridina DMEM: Medio de Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) EDTA: ácido etilendiamintetraacético EGTA : ácido de etilen glicol tetraacético FCS: Suero de Becerro Fetal Fmoc : 9-fluorenilmetiloxicarbonilo HATU : (hexafluoro-fosfato de O- (7-azabenzotriazol-l- il) -1,1,3, 3-tetrametiluronio) HBTU: (hexafluorofosfato de 2 - ( lH-benzotriazol- 1- il- ) - 1,1,3,3 tetrametiluronio) HEPES: ácido 4- (2-hidroxietil) - 1-piperazinetansulfónico HFIP 1,1,1,3,3, 3 -hexafluoro-2 -propanol o hexafluoroisopropanol HOAt : l-hidroxi-7-azabenzotriazol HOBt : 1-hidroxibenzotriazol HPLC : Cromatografía Líquida de Alto Desempeño HSA: Albúmina de Suero Humana IBMX: 3-isobutil-l-metilxantina Imp: ácido imidazopropiónico (también referido como des-amino histidina, DesH) i.v. intravenosamente ivDde : 1- (4 , 4-dimetil-2 , 6 -dioxociclohexiliden) -3 -metilbutilo IVGTT: Prueba de Tolerancia a la Glucosa Intravenosa LCMS : Espectroscopia de Masa de Cromatografía Líquida LYD: Landrace Yorkshire Duroc MALDI-MS: Ver ALDI-TOF MS MALDI-TOF MS : Tiempo de Desorción/Ionización Láser Asistida por Matriz de Espectroscopia de Masa de Vuelo MeOH: metanol Mmt : 4-metoxitritilo Mtt: 4-metiltritilo NMP: N-metil pirrolidona OBz: éster de benzoilo OEG: ácido 8 -amino-3 , 6 -dioxaoctánico OPfp: pentafluorofenoxi OPn : para-nitrofenoxi OSu: éster de O-succinimidilo (esteres de hidroxisuccinimida) OSuc : 2, 5-dioxo-pirrolidin-l-ilo OtBu: éster de tert butilo Pbf : 2,2,4,6, 7-pentametildihidrobenzofuran-5-sulfonilo PBS : solución amortiguadora salina de fosfato PD: farmacodinámico Pen/estrep : Pencilina/estreptomicina PK: farmacocinético FI : Fase Inversa RP-HPLC: Cromatografía Líquida de Alto Desempeño de Fase Inversa TA: Temperatura ambiente Tr: Tiempo de retención s . c . : Subcutáneamente SD: Desviación Estándar SEC-HPLC: Cromatografía Líquida de Alto Desempeño de Exclusión de Tamaño SE : Erro estándar de Medio SPA: Ensayo de Proximidad de Escintilación SPPS: Síntesis de Péptido de Fase Sólida tBu: tert. butilo TFA: ácido trifluoroacético TIS: triisopropilsilano TLC: Cromatografía de Capa Delgada Tos: tosilato (o pare-toluensulfonilo) Tris: tris (hidroximetil) aminometano o 2-amino-2- hidroximetil -propan- 1 , 3 -diol Trt : trifenilmetilo o tritilo Trx: ácido tranexámico UPLC: Cromatografía Líquida de Ultra Desempeño MÉTODOS DE PREPARACIÓN A. Métodos Generales Esta sección se refiere a métodos para síntesis de péptido de fase sólida (métodos SPPS, por sus siglas en inglés, incluyendo métodos para desprotección de aminoácidos, métodos para desdoblar el péptido de la resina, y para su purificación) , así como métodos para detectar y caracterizar el péptido resultante (métodos LCMS, MALDI, y UPLC) . La síntesis de la fase sólida de péptidos puede en algunos casos mejorarse por él uso de di -péptidos protegidos en el enlace de amida de di -péptido con un grupo que puede desdoblarse bajo condiciones ácidas tales como, pero no limitadas a, 2-Fmoc-oxi-4-metoxibencilo, o- 2 , 4 , 6-trimetoxibencilo. En casos donde una serina o una treonina se presentan en el péptido, se pueden usar di-péptidos de pseudoprolina (disponibles de, por ejemplo, Novabiochem, ver también W.R. Sampson (1999) , J. Pe . Sci . 5, 403) . Los derivados de aminoácido protegidos usados fueron aminoácidos Fmoc estándares (suministrados de por ejemplo Anaspec, IRIS, o Novabiochem) . El aminoácido de N-terminal fue Boc protegido en el grupo alfa amino (por ejemplo Boc-His (Boc) -OH, o Boc-His (Trt) -OH para péptidos con His en la N-terminal) . El grupo amino epsilon de lisinas en la secuencia fueron ya sea protegidos con Mtt, Mmt, Dde, ivDde, o Boc, dependiendo de la ruta para unión de la porción enlazada a albúmina y espaciador. La porción enlazada a albúmina y/o ligador se puede unir al péptido ya sea por acilación del péptido enlazado a la resina o por acilación en solución del péptido no protegido. En caso de unión de la porción enlazada a albúmina y/o ligador a la resina peptidilo protegida, la unión puede ser modular usando SPPS yc bloques de construcción adecuadamente protegidos tales como pero no limitados a Fmoc-Oeg-OH (ácido Fmoc-8-amino-3, 6-dioxaoctanoico) , Fmoc-Trx-OH (ácido Fmoc-tranexámico) , Fmoc-Glu-OtBu, éster de mono- ert-butilo del ácido octadecandioico, éster de mono-tert-butilo del ácido nonadecandioico, o éster de tert-butilo del ácido 4-(9-carboxinoniloxi ) benzoico . 1. Síntesis de péptido enlazado a la resina Método A de SPPS El método A de SPPS se refiere a la síntesis de una resina de peptidilo protegida usando química Fmoc en un sintetizador de péptido Applied Biosystems 433 (también designado sintetizador ABI433A) en escala de 0.25 mmol o 1.0 mmol usando los protocolos FastMoc UV del fabricante que emplean acoplamientos mediados por HBTU o HATU en NMP, y monitoreo UV de la desprotección del grupo de protección Fmoc .
La resina de inicio usada para la síntesis de amidas de péptido fue una resina Rink-Amida adecuada (para amidas de péptido) , o (para péptidos con una C-terminal carboxi) ya sea una resina Wang adecuada o una resina clorotritilo adecuada. Las resinas adecuadas están comercialmente disponibles de, por ejemplo, Novabiochem.
Método B de 5PPS El método B de SPPS se refiere a la síntesis de una resina de peptidilo protegida usando química Fmoc en un sintetizador de péptido Liberty basado en microondas (CEM Corp., Carolina del Norte) . Una resina adecuada es una resina Wang pre-cargada, de carga baja disponible de Novabiochem (por ejemplo resina Fmoc-Lys (Mtt) -Wang de carga baja, 0.35 mmol/g) . La desprotección Fmoc fue con piperidina al 5% en NMP en hasta 70 o 75°C. La química acoplada fue DIC/HOAt en NMP. Las soluciones de aminoácido/HOAt (0.3 M en NMP en un exceso molar de 3-10 veces) se agregaron a la resina seguido por el mismo equivalente molar de DIC (0.75M en NMP). Por ejemplo, las siguientes cantidades de solución aminoácido/HOAt 0.3M se usaron por acoplamiento para las siguientes reacciones, en escala: Escala/ml, 0.10 mmol/2.5 mi, 0.25 mmol/5 mi, 1 mmol/15 mi. Las temperaturas y veces de acoplamiento fueron generalmente ' 5 minutos en hasta 70 o 75°C. Se usaron veces de acoplamiento más largas para reacciones en escala más grandes, por ejemplo 10 min. Los aminoácidos de histidina se acoplaron dobles a 50°C, o acoplaron cuádruple si el aminoácido previo se dificultó estéricamente (por ejemplo Aib) . Los aminoácidos de arginina se acoplaron a TA durante 25 min luego calentaron hasta 70 o 75°C durante 5 min. Algunos aminoácidos tales como pero no limitados a Aib, fueron "acoplados dobles", significando que después del primer acoplamiento (por ejemplo 5 min a 75°C) , la resina se drena y. más reactivos se agregan (aminoácido, HOAt y DIC) , y la mezcla se calienta de nuevo (por ejemplo 5 min a 75°C) . Cuando una modificación química de una cadena lateral de lisina se deseó, la lisina se incorporó como Lys(Mtt) . El grupo Mtt se removió al lavar la resina con DCM y suspender la resina en hexafluoroisopropanol puro (no diluido) durante 20 minutos seguido por lavado con DCM y NMP. La modificación química de la lisina se realizó ya sea por síntesis manual (ver método D de SPPS) o por una o más etapas automáticas en el sintetizador de péptido Liberty como se describe arriba, usando bloques de construcción adecuadamente protegidos (ver métodos generales) , opcionalmente incluyendo un acoplamiento manual.
Método D de SPPS El método D de SPPS se refiere a la síntesis de la resina de peptidilo protegida usando química Fmoc manual. Esto típicamente se usó para la unión de las ligadores y cadenas laterales para la estructura de péptido. Las siguientes condiciones se emplearon en escala de síntesis de 0.25 mmol . La química acoplada fue DIC/HOAt/colidina en NMP en un exceso molar de 4-10 veces. Las condiciones de acoplamiento fueron 1-6 h a temperatura ambiente. Se realizó desprotección Fmoc con piperidina al 20-25% en NMP (3 x 20 mi, cada una 10 min) seguido por lavados NMP (4 x 20 mL) . se realizó desprotección Dde o ivDde con hidracina al 2% en NMP (2 x 20 mi, cada una 10 min) seguido por lavados NMP (4 x 20 mi) . Se realizó desprotección Mtt o Mmt con TFA al 2% y TIS al 2-3% en DCM (5 x 20 mi, cada uno 10 min) seguido por DCM (2 x 20 mi) , MeOH al 10% y DIPEA al 5% en DCM (2 x 20 mi) y lavados NMP (4 x 20 mi) , o por tratamiento con hexafluroisopropanol puro (5 x 20 mi, cada uno 10 min) seguido por lavados como arriba. La porción enlazada a albúmina y/o ligador pueden estar unidas al péptido ya sea por acilación del péptido enlazado a la resina o acilación en solución del péptido no protegido (ver las rutas descritas a continuación) . En caso de unión de la porción enlazada a albúmina y/o ligador a la resina de peptidilo protegida la unión puede ser modular usando SPPS y bloques de construcción adecuadamente protegidos (ver métodos generales) .
Unión para péptido enlazado a la resina - Ruta I: El ligador o porción enlazada a albúmina activada (anhídrido simétrico o éster activo) tal como éster de mono- (2 , 5-dioxo-pirrolidin-l-ilo) del ácido octadecandioico (Ebashi et al. EP511600, 4 equivalentes molares con relación a péptido enlazado a la resina) se disolvió en NMP (25 mL) , agregó a la resina y agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se filtró y la resina se lavó extensivamente con NMP, DCM, 2-propanol, metanol y dietil éter .
Unión para péptido enlazado a la resina - Ruta II: La porción enlazada a albúmina se disolvió en NMP/DCM (1:1, 10 mi) . El reactivo activado tal como HOBt (4 equivalentes molares con relación a la resina) y DIC (4 equivalentes molares con relación a la resina) se agregó y la solución se agitó durante 15 min. La solución se agregó a la resina y se agregó DIPEA (4 equivalentes molares con relación a la resina) . La resina se agitó 2 hasta 24 horas a temperatura ambiente. La resina se lavó con NMP (2 x 20 mi), . NMP/DCM (1:1, 2 x 20ml) y DCM (2 x 20 mi) .
Unión para péptido en solución - Ruta III: El ligador o porción enlazada a albúmina activada (anhídrido simétrico o éster activo) tal como éster de mono- (2 , 5-dioxo-pirrolidin-l-ilo) del ácido octadecandioico (Ebashi et al. EP511600) 1-1.5 equivalentes molares con relación al péptido se disolvió en un solvente orgánico tal como acetonitrilo, THF, DMF, DMSO o en una mezcla de solvente agua/orgánico (1-2 mi) y agregó a una solución del péptido en agua (10-20ml) junto con 10 equivalentes molares de DIPEA. En caso de grupos protectores en el residuo enlazado a la albúmina tal como tert-butilo, la mezcla de reacción se liofilizó durante la noche y el péptido crudo aislado se desprotege después. En caso de los grupos de protección de tert-butilo la desprotección se realizó al disolver el péptido en una mezcla de ácido trifluoroacético, agua y triisopropilsilano (90:5:5) . Después de 30min la mezcla se evaporó in vacuo y el péptido crudo se purifica por HPLC preparativa como se describe más tarde.
Método E de SPPS El método E de SPPS se refiere a síntesis del péptido por química Fmoc en un Sintetizador de Péptido de Fase Sólida Preludio de Protein Technologies (Tucson, AZ 85714 E.U.A.) . Una resina adecuada es una resina Wang pre-cargada, de carga baja disponible de Novabiochem (por ejemplo resina fmoc-Lys (Mtt ) -Wang de carga baja, 0.35 mmol/g) . La desprotección Fmoc fue con piperidina al 25% en NMP durante 2 x 10 min. La química acoplada fue DIC/HOAt/colidina en NMP. Las soluciones de aminoácido/HOAt (0.3 M en NMP en un exceso molar de 3-10 veces) se agregaron a la resina seguido por el mismo equivalente molar de DIC (3 M en NMP) y colidina (3 M en NMP) . Por ejemplo, las siguientes cantidades de solución aminoácido/HOAt 0.3M se usaron por acoplamiento para las siguientes reacciones en escala: Escala/ml, 0.10 mmol/2.5 mi, 0.25 mmol/5 mi. Las veces de acoplamiento fueron generalmente 60 minutos. Algunos aminoácidos incluyen, pero no se limitan a arginina, Aib o histidina fueron "acoplados dobles", lo que significa que después del primer acoplamiento (por ejemplo 60 min) , la resina se drena y más reactivos se agregan (aminoácido, HOAt, DIC, y colidina) , y la mezcla permite reaccionar la ganancia (por ejemplo 60 min) . Algunos aminoácidos y derivados de ácido graso incluyen pero no se limitan a Fmoc-0eg-0H, Fmoc-Trx-OH, Fmoc-Glu-OtBu, éster de mono-tert-butilo del ácido octadecandioico, éster de mono-tert-butilo del ácido nonadecandioico, o éster de tert-butilo del ácido 4 -( 9-carboxinoniloxi) benzoico se acoplaron durante tiempo prolongado, por ejemplo 6 horas. Cuando una modificación química de una cadena lateral de lisina se deseó, la lisina se incorporó como Lys(Mtt) . El grupo Mtt se removió al lavar la resina con DCM y suspender la resina en hexafluoroisopropanol/DCM (75:25) durante 3 x 10 minutos seguido por lavados con DCM, piperidina al 20% y NMP. La modificación química de la lisina se realizó ya sea por síntesis manual (ver Método D de SPPS) o por una o más etapas automáticas en el sintetizador de péptido preludio como se describe arriba de usando bloques de construcción adecuadamente protegidos (ver métodos generales) . 2. Desdoblamiento de péptido de la resina y purificación Después de la síntesis la resina se lavó con DCM, y el péptido se desdobló de la resina por un tratamiento de 2-3 horas con TFA/TIS/agua (95/2.5/2.5 o 92.5/5/2.5) seguido por precipitación con dietiléter. El péptido se disolvió en un solvente adecuado (tal como, por ejemplo, ácido acético al 30%) y purificó por RP-HPLC estándar en una columna C18, 5µ?, usando acetonitrilo/agua/TFA. Las fracciones se analizaron por una combinación de métodos UPLC, MALDI y , LCMS , y las fracciones apropiadas se agruparon y liofilizaron . 3. Métodos para detección y caracterización Métodos LCMS Método 1 de LCMS (LCMS1) Se usó espectrómetro de masa Agilent Technologies LC/MSD TOF (G1969Á) para identificar la masa de la muestra después de la elución de un sistema Agilent 1200 serie HPLC.
La desconvolución del espectro de proteína se calculó con software de confirmación de proteína de Agilent.
Eluyentes: A: ácido trifluoroacético al 0.1% en agua B: ácido trifluoroacético al 0.1% en acetonitrilo Columna: Zorbax 5u, 300SB-C3, 4.8x50mm Gradiente: acetonitrilo al 25% - 95 % durante 15 min Método 2 de LCMS (LC S2) Se un usó espectrómetro de masa Perkin Elmer Sciex API 3000 para identificar la masa de la muestra después de la elución de un sistema Perkin Elmer Serie 200 HPLC.
Eluyentes : A: ácido trifluoroacético al 0.05% en agua B: ácido trifluoroacético al 0.05% en acetonitrilo Columna: aters Xterra MS C-18 X 3 mm id 5 µ?? Gradiente: acetonitrilo al 5% - 90% durante 7.5 min en 1.5ml/min Método 3 LCMS (LCMS3 ) Se usó un espectrómetro de masa Waters Micromass ZQ para identificar la masa de la muestra después de la elución de un sistema Waters Alliance HT HPLC.
Eluyentes: A: ácido trifluoroacético al 0.1% en agua B: ácido trifluoroacético al 0.1% en acetonitrilo Columna: Phenomenex, Júpiter C4 50 X 4.60 mm id 5 um Gradiente: B al 10% - 90% durante 7.5 min en 1.0 ml/min Método 4 LCMS (LCMS4) Se realizó LCMS4 en una configuración que consiste de sistema Waters Acquity UPLC y espectrómetro de masa LCT Premier XE de Micromass. La bomba UPLC se conectó a dos reservorios de eluyente que contienen: A: ácido fórmico al 0.1% en agua B: ácido fórmico al 0.1% en acetonitrilo El análisis se realizó a TA al inyectar 'un volumen apropiado de la muestra (preferiblemente 2-10µ1) en la columna que se eluyó con un gradiente de A y B.
Las condiciones UPLC, ajustes del detector y ajustes del espectrómetro de masa fueron: Columna: Waters Acquity UPLC BEH, C-18, 1.7µp\, 2.1mm x 50mm Gradiente: acetonitrilo al 5% - 95% lineal durante 4.0 min (alternativamente 8.0 min) en 0.4ml/min Detección: 214 nm (salida de análogo de TUV (detector Tunable UV) ) Modo de ionización MS : API-ES Barrido: 100-2000 amu (alternativamente 500-2000 amu) , etapa 0.1 amu Métodos UPLC y HPLC Método 05 B5 1 UPLC (método 05_B5_l) : El análisis RP se realizó usando un sistema Waters UPLC fijado con un detector de banda doble.
Las detecciones UV en 214nm y 254nm se recolectaron usando una columna ACQUITY UPLC BEH130, C18, 130Á, 1.7um, 2.1 mm x 150 mm, 40°C.
El sistema UPLC se conectó a dos reservorios de eluyente que contienen: A: Na2S04 0.2 M, H3P04 0.04 M, CH3CN al 10 % (pH 3.5) B: CH3CN al 70%, H20 al 30 % El siguiente gradiente lineal se usó: A al 60%, B al 40% hasta A al 30%, B al 70% durante 8 minutos a una velocidad de flujo de 0.40 ml/min.
Método 05 B7 1 UPLC (método 05_B7_1) : El análisis RP se realizó usando un sistema Waters UPLC fijado con un detector de banda doble. Las detecciones UV en 2l4nm y 254nm se recolectaron usando una columna ACQUITY UPLC BEH130, C18, 130Á, 1.7um, 2.1 mm x 150 mm,. 40°C.
El sistema UPLC se conectó a dos reservorios de eluyente que contienen: A: Na2S04 0.2 M, H3P04 0.04 M, CH3CN al 10% (pH 3.5) B: CH3CN al 70%, H20 al 30% El siguiente gradiente lineal se usó: A al 80%, B al 20% hasta A al 40%, B al 60% durante 8 minutos a una velocidad de flujo de 0.40 ml/min.
Método 04 A2 1 UPLC (método 04_A2_1) : El análisis RP se realizó usando un sistema Waters UPLC fijado con un detector de banda doble. Las detecciones UV en 214nm y 254nm se recolectaron usando una columna ACQUITY UPLC BEH130, C18, 130Á, 1.7um> 2.1 mm x 150 mm, 40°C.
El sistema UPLC se conectó a dos reservorios de eluyente que contienen: A: H20 al 90%, CH3CN al 10%, bicarbonato de amonio 0.25 M B: CH3CN al 70%, H20 al 30% El siguiente gradiente lineal se usó: A al 90%, B al 10% hasta A al 60%, B al 40% durante 16 minutos a una velocidad de flujo de 0.40 ml/min.
Método 04 A3 1 UPLC (método 04_A3_1) : El análisis RP se realizó usando un sistema Waters UPLC fijado con un detector de banda doble. Las detecciones UV en 214nm y 254nm se recolectaron usando una columna ACQUITY UPLC BEH130, C18, 130Á, 1.7um, 2.1 mm x 150 mm, 40°C.
El sistema UPLC se conectó a dos reservorios de eluyente que contienen: A: H20 al 90%, CH3CN al 10%, bicarbonato de amonio 0.25 M B: CH3CN al 70%, H20 al 30% El siguiente gradiente lineal se usó: A al 75%, B al 25% hasta A al 45%, B al 55% durante 16 minutos a una velocidad de flujo de 0.40 ml/min.
Método 04 A4 1 UPLC (método 04_A4_1) : El análisis RP se realizó usando un sistema Waters UPLC fijado con un detector de banda doble.
Las detecciones UV en 214nm y 254nm se recolectaron usando una columna ACQUITY UPLC BEH130, C18, 130Á, 1.7um, 2.1 mm x 150 mm, 40°C.
El sistema UPLC se conectó a dos reservorios de eluyente que contienen: A: H20 al 90%, CH3CN al 10%, bicarbonato de amonio 0.25 M B: CH3CN al 70%, H20 al 30% El siguiente gradiente lineal se usó: A al 65%, B al 35% hasta A al 25%, B al 65% durante 16 minutos a una velocidad de flujo de 0.40 ml/min.
Método 08 B2 1 UPLC (método 08_B2_1) : El análisis RP se realizó usando un sistema Waters UPLC fijado con un detector de banda doble. Las detecciones UV en 214nm y 254nm se recolectaron usando una columna ACQUITY UPLC BEH130, C18, 130Á, 1.7um, 2.1 mm x 150 mm, 40°C.
El sistema UPLC se conectó a dos reservorios de eluyente que contienen: A: H20 al 99.95%, TFA al 0.05% B: CH3CN al 99.95%, TFA al 0.05% El siguiente gradiente lineal se usó: A al 95%, B al 5% hasta A al 40%, B al 60% durante 16 minutos a una velocidad de flujo de 0.40 ml/min.
Método 08 B4 1 UPLC (método 08_B4_1) : El análisis RP se realizó usando un sistema Waters UPLC fijado con un detector de banda doble. Las detecciones UV en 214nm y 254nm se recolectaron usando una columna ACQUITY UPLC BEH130, C18, 13 OÁ, 1.7um, 2.1 mm x 150 mm, 40°C.
El sistema UPLC se conectó a dos reservorios de eluyente que contienen: A: H20 al 99.95%, TFA al 0.05% B: CH3CN al 99.95%, TFA al 0.05% El siguiente gradiente lineal se usó: A al 95%, B al 5% hasta A al 95%, B al 5% durante 16 minutos a una velocidad de flujo de 0.40 ml/min.
Método 05 B10 1 UPLC (Método 05_B10_1) : Los análisis RP se realizaron usando un sistema Waters UPLC fijado con un detector de banda doble. Las detecciones UV en 214nm y 254nm se recolectaron usando una columna ACQUITY UPLC BEH130, C18, 130Á, 1.7um, 2.1 mm x 150 mm, 40°C.
El sistema UPLC se conectó a dos reservorios de eluyente que contienen: A : Na2S04 0.2 M, H3P04 0.04 M, CH3CN al 10% (pH 3.5) B: CH3CN al 70%, H20 al 30% El siguiente gradiente lineal se usó: A al 40%, B al 60% hasta A al 20%, B al 80% durante 8 minutos a una velocidad de flujo de 0.40 ml/min.
Método 01 A4 2 UPLC (Método 01_A4_2) : El análisis' RP se realizó usando un sistema Waters 600S fijado con un detector de formación de diodo waters 996. Las detecciones UV en 214nm y 254nm se recolectaron usando una columna Symmetry300 C18, 5um, 3.9 mm 150 mm, 42 °C. El sistema HPLC se conectó a tres reservorios de eluyente que contienen: A: H20 al 100%, B: CH3CN al 100%, C: ácido trifluoroacético al 1% en H20. El siguiente gradiente lineal se usó: A al 90%, B al 5%, C al 5% hasta A al 0%, B al 95%, C al 5% durante 15 minutos a una velocidad de flujo de 1.0 ml/min.
Método 09 B2 1 UPLC (Método 09_B2_1) : El análisis RP se realizó usando un sistema Waters UPLC fijado con un detector de banda doble. Las detecciones UV en 214nm y 254nm se recolectaron usando una columna ACQUITY UPLC BEH130, C18, 130Á, 1.7um, 2.1 mm x 150 mm, 40°C. El sistema UPLC se conectó a dos reservorios de eluyente que contienen: A: H20 al 99.95%, TFA al 0.05%; B: CH3CN al 99.95%, TFA al 0.05%. El siguiente gradiente lineal se usó: A al 95%, B al 5% hasta A al 40%, B al 60% durante 16 minutos a una velocidad de flujo de 0.40 ml/min.
Método 09 B4 1 UPLC (Método 09_B4_1) : El análisis RP se realizó usando un sistema Waters UPLC fijado con un detector de banda doble. Las detecciones UV en 214nm y 254nm se recolectaron, usando una columna ACQUITY UPLC BEH130, C18, 130Á, 1.7um, 2.1 mm x 150 mm, 40°C. El sistema UPLC se conectó a dos reservorios de eluyente que contienen: A: H20 al 99.95%, TFA al 0.05%; B: CH3CN al 99.95%, TFA al 0.05%. El siguiente gradiente lineal se usó: A al 95%, B al 5% hasta A al 5%, B al 95% durante 16 minutos a una velocidad de flujo de 0.40 ml/min.
Método 05 B8 1 UPLC (Método 05_B8_1) : El análisis RP se realizó usando un sistema Waters UPLC fijado con un detector de banda doble. Las detecciones UV en 214nm y 254nm se recolectaron usando una columna ACQUITY UPLC BEH130, C18, 13OÁ, 1.7um, 2.1 mm x 150 mm, 40°C. El sistema UPLC se conectó a dos reservorios de eluyente que contienen: A: Na2S040.2 M, H3P04 0.04 M, CH3CN al 10% (pH 3.5); B: CH3CN al 70%, H20 al 30%. El siguiente gradiente lineal se usó: A al 50%, B al 50% hasta A al 20%, B al 80% durante 8 minutos a una velocidad de flujo de 0.40 ml/min .
Método 10 B14 1 UPLC (Método 10_B14_1) : El análisis RP se realizó usando un sistema Waters UPLC fijado con un detector de banda doble. Las detecciones UV en 214nm y 254nm se recolectaron usando una columna ACQUITY UPLC BEH ShieldRP18, 1.7um, 2.1 mm x 150 mm, 50°C. El sistema UPLC se conectó a dos reservorios de eluyente que contienen: A: H20 al 99.95%, TFA al 0.05%; B: CH3CN al 99.95%, TFA al 0.05%. El siguiente gradiente lineal se usó: A al 70%, B al 30% hasta A al 40%, B al 60% durante 12 minutos a una velocidad de flujo de 0.40 ml/min.
Método 04 A6 1 UPLC (Método 04_A6_1) : El análisis RP se realizó usando un sistema Waters UPLC fijado con un detector de banda doble. Las detecciones UV en 214nm y 254nm se recolectaron usando una columna ACQUITY UPLC BEH130, C18, 130Á, 1.7um, 2.1 mm x 150 mm, 40°C. El sistema UPLC se conectó a dos reservorios de eluyente que contienen: A: TRIS 10 mM, sulfato de amonio 15 mM, H20 al 80%, 20%, pH 7.3; B: CH3CN al 80%, H20 al 20%. El siguiente gradiente lineal se usó: A al 95%, B al 5% hasta A al 10%, B al 90% durante 16 minutos a una velocidad de flujo de 0.35 ml/min.
Método 01 B4 1 HPLC (Método 01_B4_1) : El análisis RP se realizó usando un sistema Waters 600S fijado con un detector de formación de diodos Waters 996. Las detecciones UV se recolectaron usando una columna de Simetría Waters 3 mm x 150 mm 3.5um C-18. La columna se calentó hasta 42 °C y eluyó con un gradiente lineal de acetonitrilo al 5-95%, agua al 90-0%, y ácido trifluoroácético al 5% (1.0%) en agua durante 15 minutos a una velocidad de flujo de 1 ml/min.
Método MALDI-MS Se determinaron los pesos moleculares usando espectroscopia de masa de tiempo de vuelo de ionización y desorción láser asistida por matriz, registrados en un Microflex o Autoflex (Bruker) . Se usó una matriz de ácido alfa-ciano-4-hidroxi cinámico.
Método RMN Se registraron espectro RMN de protones usando un Brucker Avance DPX 300 (300 MHz) con tetrametilsilano como un estándar interno. Los cambios químicos (d) se dan en ppm y los patrones abiertos se designan como sigue: s, singlete; d, doblete; dd, doblete doble; dt, triplete doble t, triplete,. tt, triplete de tripletes; q, cuarteto; quint , quinteto; sext, sexteto; m, multiplete, y br = amplio.
B. Síntesis de intermediarios 1. Síntesis de mono ésteres de diácidos grasos Durante la noche el reflujo de los diácidos C12, C14 , C16 y C18 con Boc- anhídrido, DMAP, y t-butanol en tolueno da predominantemente el mono éster de t-butilo. Se obtiene después del trabajo de una mezcla de mono ácido, diácido y diéster. La purificación se lleva a cabo por lavado, cristalización y filtración de sílice de tapón corto. 2. Síntesis de 2- (l-Tritil-lH-imidazol-4-il) -etil amina Química 13: Se agitaron diclorohidrato de histamina (20.47 g; 0.111 mol) y trietilamina (48 mL; 0.345 mol) en metanol absoluto (400 mL) a temperatura ambiente durante 10 min. Se agregó gota a gota éster de etilo del ácido trifluoroacético (14.6 mL; 0.122 mol) en metanol (30 mL) durante 30 min a 0°C. Se agitó la mezcla de reacción durante 3.5 hrs a temperatura ambiente y luego se evaporó hasta secado in vacuo. El residuo se disolvió en diclorometano (450 mL) y se agregó trietilamina (31 mL; 0.222 mol) . Luego se agregó cloruro de tritilo (34.1 g; 0.122 mol) en trozos y la mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Se vaciaron cloroformo (400 mL) y agua (600 mL) en la mezcla de reacción. La capa acuosa se separó y extrajo con cloroformo (3 x 400 mL) . Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro. Se removió el solvente y el sólido beige se trituró con hexanos (1000 mL) . La suspensión se filtró para proporcionar 2 , 2 , 2-trifluoro-N- [2- (1-tritil-lH-imidazol-4-il) -etil] -acetamida como sólido blanco.
Rendimiento: 45.54 g (91%).
Espectro ¾ RM (300 MHz, CDC13/ d?) : 8.44 (bs, 1 H) ; 7.43 (s, 1 H) ; 7.41 -7.33 (m, 9 H) ; 7.19 - 7.10 (m, 6 H) ; 6.65 (s*, 1 H) ; 3.66 (q, J=5.9 Hz , 2 H) ; 2.79 (t, J=5.9 Hz , 2 H) .
La amida de arriba (45.54 g; 0.101 mmol) se disolvió en tetrahidrofurano (1000 mL) y metanol (1200 mL) . Se agregó una solución de hidróxido de sodio (20.26 g; 0.507 mol) en agua (500 mL) . Se agitó la mezcla durante 2 hrs a temperatura ambiente y luego se concentró in vacuo. El residuo se separó entre cloroformo (1200 mL) y agua (800 mL) . Se extrajo la capa acuosa con cloroformo (3 x 400 mL) . Las capas orgánicas se combinaron y secaron sobre sulfato de magnesio anhidro. La evaporación del solvente proporciona aceite café, que se secó durante 3 días in vacuo para dar el producto del título como sólido beige.
Rendimiento: 32.23 g (90 %).
Rendimiento general: 82%.
P. f . : 111-113°C.
Espectro 1H RM (300 MHz , CDCl3, d?) : 7.39 (d, J=1.3, 1 H) ; 7.38 - 7.32 (m, 9 H) ; 7.20 - 7.12 (m, 6 H) ; 6.61 (s, 1 H) ; 3.00 (t, J=6.6 Hz, 2 H) ; 2.70 (t, J=6.5 Hz , 2 H) ; 1.93 (bs, 2 H) . 3. Síntesis de ácido 2, 2-Dimetil-lV- [2- (1-tritil-lff-imidazol-4-il) -etil] -malonámico Química 14 : Una mezcla de ácido de Meldrum (5.52 g, 38.3 mmol) , carbonato de potasio. (26.5 g, 191 mmol) y yoduro de metilo (7.15 mL, 115 mmol) en acetonitrilo (75 mL) se calentó a 75°C en un tubo sellado durante 7 hrs . La mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, diluyó con diclorometano (300 mL) , filtró y el filtrado se evaporó hasta secado in vacuo. Se agregaron acetato de etilo (75 mL) , hexanos (75 mL) y agua (50 mL) y las fases se separaron. La capa orgánica se lavó con solución acuosa al 10% de tiosulfato de sodio (50 mL) y agua (50 mL) ; secó sobre sulfato de magnesio anhidro y el solvente se removió in vacuo para dar 2 , 2 , 5 , 5 -tetrametil -[1, 3] dioxan- , 6-diona como sólido blanco.
Rendimiento: 6.59 g (79%).
RF (Si02, cloroformo/acetato de etilo, 98:2): 0.60.
Espectro ¾ RMN (300 MHz, CDC13, d?) : 1-76 (s, 6 H) ; 1.65 (s, 6 H) .
Una solución de amina de 2- (l-Tritil-lH-imidazol-4-il) -etilo (5.00 g, 14.2 mmol) preparada como se describe arriba y trietilamina (9.86 mL, 70.7 mmol) en tolueno (80 mL) se agregó gota a gota durante 50 min a una solución del compuesto diona de arriba (3.65 g, 21.2 mmol) en tolueno (40 mL) a 75 °C. La mezcla se agitó a esta temperatura durante 3 hrs adicionales (hasta que la amina de inicio se detectó en TLC) , luego se evaporó hasta secado. El residuo se volvió a disolver en cloroformo (300 mL) y lavó con solución acuosa al 10% de ácido cítrico (200 mL) . La fase acuosa se extrajo con cloroformo (2 x 60 mL) ; las fases de cloroformo se combinaron, secaron sobre sulfato de magnesio anhidro y el solvente se removió in vacuo. El residuo se trituró con cloroformo caliente (140 mL) ; se agregaron hexanos (70 mL) y •la suspensión se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Los sólidos se filtraron completamente, lavaron con mezcla de cloroformo/hexanos (1:1, 2 x 50 mL) y secaron in vacuo para dar el producto del título.
Rendimiento: 6.73 g (88%).
P. f . : 161-162°C.
RF (Si02, cloroformo/metanol , 85:15): 0.40.
Espectro XH RMN (300 MHz , DMSO-d6, d?) : 12.45 (bs, 1 H) ; 7.66 (t, J=5.1 Hz, 1 H) ; 7.57-7.31 (m, 9 H) ; 7.26 (s, 1 H) ; 7.20-7.02 (m( 6 H) ; 6.66 (s, 1 H) ; 3.25 (m, 2 H) ; 2.57 (t, J=7.3 Hz, 2 H) ; 1.21 (s, 6 H) . 4. Síntesis de ácido 4 - (4 - ert-Butil- fenil) -butírico Química 15: Se agregó polvo de cloruro de aluminio (80.0 g, 600 mmol) en porciones a una mezcla agitada de terfc-butilbenceno (40.0 g, 300 mmol) y anhídrido succínico (26.7 g, 267 mmol) y 1 , 1 , 2 , 2 -tetracloroetano (100 mL) . Después de que todo el cloruro de aluminio se ha agregado, la mezcla se vació en una mezcla de hielo (500 mL) y ácido clorhídrico concentrado (100 mL) . La capa orgánica se separó, lavó con agua (500 mL) y el solvente se destiló completamente. El residuo sólido se disolvió en solución acuosa al 15% caliente de carbonato de sodio (1000 mL) , filtró, enfrió y el ácido se precipitó con ácido clorhídrico (acidificado hasta pH=l) . El ácido crudo se filtró, secó en aire y recristalizó de benceno (500 mL) para dar ácido 4 - (4 - ert-but il-fenil ) -4 -oxo-butírico como cristales incoloros.
Rendimiento: 36.00 g (58%) .
P. f . : 117-120°C.
Espectro 1H RMN (300 MHz , CDC13, d?) : 7.93 (dm, J=8.3 Hz, 2 H) ; 7.48 (dm, J=8.3 Hz, 2 H) ; 3.30 (t, J=6.6 Hz, 2 H) ; 2.81 (t, J=6.6 Hz, 2 H) ; 1.34 (s, 9 H) .
Una mezcla del ácido de arriba (36.0 g, 154 mmol) , hidróxido de potasio (25.8 g, 462 mmol) , hidrato de hidrazina (20 mL, 400 mmol) y etilen glicol (135 mL) se puso a reflujo durante 3 hrs, y luego se destiló hasta la temperatura del vapor que se ha elevado hasta 196-198°C. Después de un reflujo de 14 hrs adicional, la mezcla se permitió enfriar ligeramente, y luego se vació en agua fría (200 mL) . La mezcla se hizo ácida con ácido clorhídrico concentrado (hasta pH=l) y extrajo con diclorometano (2 x 400 mL) . Los extractos orgánicos se combinaron, secaron sobre sulfato de magnesio anhidro, el solvente se removió in vacuo y el residuo se purificó por cromatografía de columna (Silicagel 60A, 0.060-0.200 mm; eluyente: hexanos/acetato de etilo 10:1-6:1) para dar el producto del título como sólido blanco opaco.
Rendimiento: 16.25 g (48%) .
P.f . : 59-60°C.
RF (Si02, acetato de etilo) : 0.60.
Espectro ? RMN (300 MHz, CDC13, d?) : 7.31 (dm, J=8.1 Hz, 2 H) ; 7.12 (dm, J=8.1 Hz, 2 H) ; 2.64 (t, J=7.6 Hz, 2 H) ; 2.38 (t, J=7.4 Hz, 2 H) ; 1.96 (m, 2 H) ; 1.31 (s, 9 H) . 5. Síntesis de ácido 2 , 2 -Dimetil -JV- ( 1 - tri til- 1H- imidazol -4-ilmetil) -malonámico Química 16 : Se agregó clorhidrato de hidroxilamina (15.9 g, 229 mraol) a una solución de 4 ( 5 ) - imidazolcarboxaldehído (20.0 g, 209 mmol) y carbonato de sodio (12.1 g, 114 mmol) en agua (400 mL) y la solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se evaporó hasta 100 mL y enfrió en un baño de hielo. Los sólidos se separaron por filtración y el filtrado se concentró hasta 40 mL . Después del enfriamiento hasta 0°C, se obtuvo otra porción de de cristales. Los sólidos (23 g) se combinaron y recristalizaron de etanol (aprox. 160 mL) para proporcionar oxima de imidazol -4 ( 5 ) -carbaldehído como cristales incoloros.
Rendimiento: 15.98 g (69%) .
Espectro 1H RMN (300 MHz , acetona-d3+D20 , d?) : 7.78 (bs, 1 H) ; 7.74 (d, J=0.9 Hz, 1 H) ; 7.43 (s, 1 H) .
Se agregó gota a gota cloruro de acetilo (51.0 mL, 718 mmol) a metanol (670 mL) a 0°C bajo argón. Después de 30 min, el baño de enfriamiento se removió y se agregó la oxima de arriba (16.0 g, 144 mmol), seguido por paladio en carbono (5% en peso, 6.1 g) . La mezcla se hidrogenó a presión atmosférica durante 17 hrs, luego se filtró a través de Celite y el solvente se evaporó para dar diclorhidrato de 4 - (aminometil) -imidazol puro como cristales incoloros.
Rendimiento: 23.92 g (98%) .
Espectro :H RMN (300 MHz, D20, d?) : 8.72 (s, 1 H) ; 7.60 (s, 1 H) ; 4.33 (s, 2 H) .
El diclorhidrato de amina de arriba (18.9 g; 111 mmol) y trietilamina (93 mL; 667 mmol) en metanol (1000 mL) se agitaron a temperatura ambiente durante 10 min. Se agregó gota a gota éster de etilo del ácido trifluoroacético (13.3 mL; 111 mmol) en metanol (30 mL) durante 40 min a 0°C. La mezcla de reacción se agitó durante 18 hrs á temperatura ambiente y luego se evaporó hasta secado in vacuo. El residuo se disolvió en diclormetano seco (2000 mL) y se agregó trietilamina (31 mL; 222 mmol). Luego se agregó cloruro de tritilo (31.6 g; 113 mmol) y la mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Se vaciaron cloroformo (1000 mL) y agua (1000 mL) en la mezcla de reacción. La capa acuosa se separó y extrajo con cloroformo (2 x 300 mL) . Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro. Se removió el solvente y el sólido beige se trituró con hexanos (1000 mL) . La suspensión se filtró para proporcionar 2 , 2 , 2 - 1 rif luoro-N- ( 1 - trit il - 1H- imidazol -4 - ilmet il ) -acetamida como sólido blanco.
Rendimiento: 46.59 g (96%) .
RF (Si02, diclorometano/metanol 95:5) : 0.35.
Espectro ? RMN (300 MHz , DMSO-d6, d?) : 9.77 (t, J=5.7 Hz, 1 H) ; 7.47-7.34 (m, 9 H) ; 7.33 (d, J=l .5 Hz , 1 H) ; 7.13-7.03 (m, 6 H) ; 6.80 (d, J=0.8 Hz , 1 H) ; 4.25 (d, J=5.7 Hz , 2 H) .
La amida de arriba (46.6 g; 107 mmol) se disolvió en tetrahidrofurano (600 mL) y etanol (310 mL) . Se agregó una solución de hidróxido de sodio (21.4 g; 535 mmol) en agua (85 mL) . La mezcla se agitó durante 5 hrs a temperatura ambiente y luego se concentró in vacuo. El residuo se separó entre cloroformo (1600 mL) y agua (800 mL) . La capa acuosa se extrajo con cloroformo (4 x 200 mL) . Las capas orgánicas se combinaron y secaron sobre sulfato de magnesio anhidro. La evaporación del solvente proporciona (l-tritil-lH-imidazol-4-il) -metilamina como sólido blanco opaco .
Rendimiento: 36.30 g (100%) .
Espectro XH RMN (300 MHz, CDC13, d?) : 7.38 (d, J=1.3, 1 H) ; 7.36-7.30 (m, 9 H) ; 7.18-7.10 (ra, 6 H) ; 6.69 (m, 1 H) ; 3.77 (s, 2 H) ; 1.80 (bs, 2 H) .
Una solución de la amina de arriba (10.0 g, 29.5 mmol) y trietilamina (20.5 mL, 147 mmol) en tolueno (220 mL) se agregó gota a gota durante 45 min a una solución de 2 , 2 , 5, 5-tetrametil- [1, 3] dioxan-4 , 6-diona (3.65 g, 21.2 mmol) en tolueno (80 mL) a 75°C. La mezcla se agitó a esta temperatura durante 3 hrs adicionales (hasta que la amina de inicio se detectó en TLC) , luego se evaporó hasta secado. El residuo se volvió a disolver en cloroformo (500 mL) y lavó con solución acuosa al 10% de ácido cítrico (300 mL) . La fase acuosa se extrajo con cloroformo (100 mL) ; las fases de cloroformo se combinaron, lavaron con agua (150 mL) secaron sobre sulfato de magnesio anhidro y el solvente se removió in vacuo. El residuo se purificó por cromatografía de columna de destello (gel de sílice Fluka 60, diclorometano/metanol 98:2 hasta 9:1) y cristalizó de mezcla de cloroformo/hexanos para dar el producto del título como cristales beige.
Rendimiento: 9.80 g (73%) .
P. f . : 174-175°C.
RF (Si02, cloroformo/metanol , 85:15) : 0.35.
Espectro XH RMN (300 MHz, CDCl3, d?) : 8.45 (t, J=5.8 Hz, 1 H) ; 7.53 (s, 1 H) ; 7.40-7.28 (m, 9 H) ; 7.14-7.01 (m, 6 H) ; 6.84 (s, 1 H) ; 4.39 (d, J=5.8 Hz, 2 H) ; 1.44 (s, 6 H) . 6. Síntesis de 3- (l-Tritil-lH-imidazol-4-il) -propil amina Química 17 : Se agregó gota a gota 3- (l-tritil-4-imidazolil) ropionato de etilo (93.0 g,223 mmol) en tetrahidrofurano/dietil éter (1:1, 100 mL) a una suspensión de hidruro de litio aluminio (17.0 g, 446 mmol) durante 1 hr. La mezcla se puso a reflujo durante 3 hrs, luego se trató con agua (100 mL) , hidróxido de sodio al 20% (100 mL) y agua (100 tnL) bajo enfriamiento con hielo/agua, filtró y el sólido se lavó con tetrahidrofurano . La fase orgánica se secó sobre carbonato de potasio anhidro, filtró y evaporó para dar 3-(l-tritil-4-imidazolil) propanol como sólido blanco.
Rendimiento: 68.0 g (82%) . p. f . : 127-129 °C.
Espectro XH R (300 MHz , CDC13, d?) : 7.40-7.24 (m, 10 H) ; 7.17-7.06 (m, 6 H) ; 6.55 (s, 1 H) ; 3.72 (t, J=5.3 Hz , 2 H) ; 2.68 (t, J=6.6 Hz, 2 H) ; 1.86 (m, 2 H) .
Se agregó cloruro de metansulfonilo (8 mL, 104 mmol) gota a gota a una solución del alcohol de arriba (32.0 g, . 86.8 mmol) en diclorometano (400 mL) y trietil amina (15.5 mL) a 0°C durante 1 hr. La mezcla se agitó sin enfriamiento durante 1 hr adicional; luego se lavó con bicarbonato de sodio al 5% y se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. Se evaporó diclorometano a 30 °C in vacuo y el mesilato aceitoso residual se usó directamente en la siguiente etapa.
Rendimiento: 31.2 g (80%).
Espectro H RMN (300 MHz , CDC13, d?) : 7.37-7.30 (m, 10 H) ; 7.16-7.09 (m, 6 H) ; 6.58 (s, 1 H) ; 4.24 (t, J=6.3 Hz , 2 H) ; 2.96 (s, 3 H) ; 2.6'7 (m, 2 H) ; 2.10 (m, 2 H) .
Una mezcla del mesilato de arriba (30.0 g, 67 mmol), ftalimida de potasio (18.0 g, 100 mmol), yoduro de sodio (4.0 g, 26.7 mmol) y dimetilformamida (200 mL) se agitó durante la noche a temperatura ambiente y luego se trató con agua (2 L) y benceno (2 L) . La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, filtró y el solvente se evaporó dando un residuo, que se recristalizó de benceno proporcionando 1-tritil-4- (3-ftalimidopropil ) imidazol como sólido blanco.
Rendimiento: 17.2 g (52%).
P. f . : 211-214°C.
Espectro XH RMN (300 MHz, CDCl3, d?) : 7.83 (m, 2 H) ; 7.72 (nv, 2 H) ; 7.39-7.27 (m, 10 H) ; 7.18-7.07 (m, 6 H) ; 6.60 (d, J=0.9 Hz, 1 H) ; 3.72 (t, J=7.4 Hz, 2 H) ; 2.60 (t, J=7.5 Hz, 2 H) ; 1.99 (m, 2 H) .
El derivado de imidazol de arriba (26.6 g, 53.5 mmol) se disolvió en etanol (300 mL) y tetrahidrofurano (150 mL) a 60°C, se agregó hidrato de hidracina (50 g, 1 mol) y la solución se puso a reflujo durante 6 hrs y luego se calentó a 70 °C durante la noche. El sólido se removió por filtración y el filtrado se trató con solución acuosa al 25% de amoniaco (2.5 1) y diclorometano (2.5 L) . La capa orgánica se secó sobre carbonato de potasio anhidro y se evaporó para dar un residuo, que se purificó por cromatografía de columna en gel de sílice (Fluka 60, cloroformo saturado con amoniaco/metanol) dando el compuesto del título como sólido blanco.
Rendimiento: 14.2 g (72%).
P.f . : 112-113°C.
RF (Si02, cloroformo saturado con amoniaco/metanol 9:1) : 0.30. Espectro H RMN (300 MHz, CDC13, d?) : 7.37-7.28 (m, 10 H) ; 7.18-7.09 (m, 6 H) ; 6.53 (d, J=1.3 Hz, 1 H) ; 2.74 (t, J=6.9 Hz, 2 H) ; 2.59 (t, J=7.4 Hz , 2 H) ; 1.95 (bs, 2 H) ; 1.78 (m, 2 H) . 7. Síntesis de ácido 2 , 2 -Dimetil-lV- [3 - ( 1- tritil - 12T- imidazol -4-il) -propil] -malonámico Química 18: Se hinchó resina de cloruro de 2-clorotritilo (2.3 g, 3.0 mmol) en DCM durante 20 mins y se filtró. Se disolvió ácido dimetilmalónico (2 eq; 6.0 mmol; 793 mg) i DCM : DMF 1:1 (10 mL) y agregó a la resina seguido por DIPEA (6 eq; 18.0 mmol; 3.14 mL) y DCM (10 mL) . La resina se agitó durante la noche a TA. La resina se filtró y lavó con DCM:MeOH:DIPEA (17:2:1), DCM, NMP og DCM (2 x 25 mL de cada uno). La resina se hinchó en DMF durante 20 mins y filtró. HOAt (3 eq; 9.0 mmol; 1.23 g) , DIC (3 eq; 9.0 mmol; 1.40 mL) y DMF (25 mL) se agregó y la resina se agitó durante 90 min a TA. La resina se filtró y se agregó 3- (l.-Tritil-lH-imidazol-4-il) -propil amina (1.8 eq; 5.40 mmol; 1.84 g) , DIPEA (4 eq; 6.0 mmol; 2.09 mL) , y DMF (10 mL) . La resina se agitó durante 2 días. La resina se filtró y lavó con NMP (5 x 20 mL) y DCM (10 x 20 mL) . Se agregó 2 , 2 , 2-Trifluoroetanol/diclormetano 1:1 (20 mL) a la resina y se agitó durante 2 hrs . La resina se lavó con 2,2,2-Trifluoroetanol/diclormetano 1:1 (10 mL) y los filtrados combinados se recolectaron y concentraron in vacuo para proporcionar el compuesto del título.
Rendimiento: 600 mg (41%) .
LCMS4: m/z = 482 (M+l) UPLC (método 02_B4_4) : Tr = 8.07 min Espectro ¾ RMN (300 MHz, DMSO-d6, d?) : 7.36-7.44 (9H, m) , 7.07-7.12 (6H, m) , 6.62 (1H, s) , 3.02-3.09 (2H, q) , 2.38-2.43 (2H, t), 1.61-1.69 (2H, m) , 1.26 (6H, s) . 8. Síntesis de ácido 2, 2-Dimetil-lV- [3- (1- tritil-lff-imidazol-4-il) -propil] -malonámico Síntesis de ácido 2 , 2-Dimetil-N-piridin-2-ilmetilmalonámico Química 19: Se hinchó resina de cloruro de clorotritilo (2.3 g, 3.0 mmol) en DCM durante 20 mins y se filtró. El ácido dimetilmalónico (2 eq; 6.0 mmol; 793 mg) se disolvió i DCM:NMP 1:1 (10 mL) y agregó a la resina seguido por DIPEA (6 eq; 18.0 mmol; 3.14 mL) y DCM (10 mL) . La resina se agitó durante la noche a TA. La resina se filtró y lavó con DCM: MeOH : DIPEA (17:2:1), DCM, NMP og DCM (2 x 25 mL de cada uno) . La resina se hinchó en NMP durante 20 mins y se filtró. HOAt (3 eq; 9.0 mmol; 1.23 g) , DIC (3 eq; 9.0 mmol; 1.40 mL) y NMP (25 mL) se agregó y la resina se agitó durante 90 min a TA. La resina se filtró y se agregó 2- (Aminometil ) piridina (2 eq; 6 mmol; 659 mg) , DIPEA (4 eq; 6.0 mmol; 2.09 mL) , y NMP (10 mL) . La resina se agitó durante la noche. La resina se filtró y lavó con NMP (5 x 20 mL) y DCM (10 x 20 mL) . Se agregó TFA/TIS/agua (95:2.5:2.5; 30 mL) a la resina y se agitó durante 1 hr, filtró y concentró in vacuo para proporcionar el compuesto del título.
Rendimiento: 600 mg (41%) .
LC S4: m/z = 223 (M+l) UPLC (método 08_B4_1) : Tr = 1.79 min B. Síntesis de los compuestos de la invención Ej emplo 1 if26- [2- (2-{2 - [10 - (4 -Carboxifenoxi) decanoilamino] etoxi } etoxi) acetilo] , N37- [2- (2- {2- [10- (4- Carboxifenoxi) decanoi lamino] etoxijetoxi) acetil] - [Aib8,Arg3 ,Lys3,7]GLP-l (7-37) -péptido Química 20: Método de preparación: Método B de SPPS, iniciando con resina Fmoc-Lys (Mtt ) -Wang de carga baja. Se usó Fmoc-Lys (Mtt ) -OH en la posición 26, y se usó Boc-His (trt) -OH en la posición 7. El Mtt se removió con HFIP, y ácido 8- (9- fluorenilmetiloxicarbonil -amino) -3 , 6-dioxaoctanoico (comercialmente disponible de Iris Biotech) y éster de tert-butilo del ácido 4- (9-carboxi-noniloxi) -benzoico (preparado como se describe en el Ejemplo 25, etapa 2 de WO 2006/082204) se acoplaron usando un método de acoplamiento doble en el sintetizado de Péptido Liberty UPLC (método 04_A3_1) : 10.51 min LCMS4: m/z = 1085.2 (M+4H) +, 1447.3 (M+3H) 3+ Ejemplo 2 ?e26{2- [2- (2-{2- [2- (2-{ (S) -4 -Carboxi -4 - [10- (4- carboxifenoxi) decanoilamino] butirilamino} etoxi) etoxi] acetilamino} etoxi) etoxi] acetil} , i\7£37-{2-[2-(2-{2-[2-(2-{(S)- 4-carboxi-4- [10- (4- carboxifenoxi) decanoilamino] butirilaminojetoxi) etoxi] acetilamino} etoxi ) etoxi] acetil } - [Aib8 , Arg34 , Lys37] GLP- 1 (7-37) - péptido Química 21: Método de preparación: Método B de SPPS, iniciando con resina Fmoc-Lys (Mtt ) -Wang de carga baja. Se usó Fmoc-Lys (Mtt ) -OH en la posición 26, y se usó Boc-His (Trt) -OH en la posición 7. El Mtt se removió con HFIP, y ácido 8- (9- fluorenilmetiloxicarbonil-amino) -3 , 6-dioxaoctanoico (comercialmente disponible de Iris Biotech) , Fmoc-Glu-OtBu, y éster de tert-butilo del ácido 4- (9-carboxi-noniloxi) -benzoico (preparado como se describe en el Ejemplo 25, etapa 2 de O 2006/082204) se acoplaron usando un método de acoplamiento doble en el sintetizador de Péptido Liberty.
UPLC (método 04_A3_1) : 7.19 min LCMS4:-m/z = 978.5 (M+5H) 5+, 1222.8 (M+4H) 4+ 1630.1 (M+3H) 3+ Ej em lo 3 lf26- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -Carboxi -4 - (15-carboxipentadecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi ) acetilamino] etoxi }etoxi) acetilo] , lf37- [2- (2- {2- [2- (2- {2- [ (S) -4-Carboxi-4- (15-carboxipentadecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi) acetilamino] etoxi }etoxi) acetil] [Aib8, Arg34, Lys37] GLP-1 (7-37) péptido Química 22: Método de preparación: El péptido se sintetizó en resina Lys (Mtt ) -Wang con una carga de 0.35 mmol/g. La síntesis se realizó en un sintetizador Liberty bajo condiciones de microondas usando 5 minutos de acoplamientos sencillos con DIC/HOAt en hasta 70°C, excepto para histidina que se acopló durante 20 minutos a hasta 50°C. Todos los aminoácidos se protegieron con grupos protectores estándares, excepto para lisinas para acetilarse (en este caso Lys26) que se protegió con Mtt. La desprotección fue con piperidina al 5% en NMP a 50°C durante 3 minutos. Después de que la síntesis se completó, la N-terminal se bloqueó con 10 equivalentes de carbonato Boc y 10 equivalentes de DIPEA durante 30 minutos. Los grupos Mtt se removieron por tratamiento con hexafluoroisopropanol puro (no diluido) durante 20 minutos y las cadenas laterales se construyeron en etapas en el Liberty usando el mismo protocolo como arriba usando ácido Fmoc-8-amino-3 , 6 -dioxaoctanoicó , Fmoc-Glu-OBut, y éster de mono- t-butilo del ácido hexadecandioico. El péptido se desdobló con TFA/agua/TIS (95:2.5:2.5) durante 2 horas y se aisló por precipitación con dietiléter. El péptido crudo se purificó por HPLC preparativa en una columna 20 mm x 250 mm empaquetada con ya sea sílice 5u o 7u C18. El péptido se disolvió en 5 mi de ácido acético al 50% y diluyó hasta 20 mi con H20 e inyectó en la columna que luego se eluyó con un gradiente de CH3CN al 40-60% en TFA al 0.1% 10 ml/min durante 50 min a 40°C. Las fracciones que contienen péptido se recolectaron y la pureza se evaluó por MALDI y UPLC . El péptido purificado se liofilizó después de la dilución del eluido con agua.
La masa molecular teórica de 4844.6 se confirmó por MALDI-MS .
UPLC (método 08_B4_1) : Tr 9.50 min UPLC (método 04_A3_1) : Tr 11.23 min Ejemplo 4 N26- [2-(2-{2- [2-(2-{2-[(S) -4-Carboxi-4- (13- carboxitridecanoilamino) but iri lamino] etoxi } etoxi ) acetilami no] etoxi} etoxi) acet i lo] , i^J7- [2-(2-{2- [2-(2-{2- [(S)-4- Carboxi-4- (13- carboxitrideeanoi lamino) but iri lamino] etoxi } etoxi ) acetilami no] etoxi}etoxi) acetil] [Aib8 , Arg34 , Lys37] GLP- 1 (7-37) -péptido Química 23 : Método de preparación: Como en el Ejemplo 3, excepto para el uso de éster de mono-t-butilo del ácido tetradecandioico en la cadena lateral .
La masa molecular teórica de 4788.5 se confirmó por MALDI-MS UPLC (método 08_B4_1) : Tr 8.74 min UPLC (método 04 A3 1) : Tr 9.39 min Ejemplo 5 íf2e- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4-Carboxi-4- (11- carboxiundecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi) acetilamino] etoxijetoxi) acetilo] , i^37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4 -Carboxi-4 - (11- carboxiundecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi ) acetilamino] etoxijetoxi) acetil] [Aib8, Arg34, Lys37] GLP-1 (7-37) -péptido Química 24 : Método de preparación: Como en el Ejemplo 3, excepto para el uso de éster de mono t-butilo del ácido dodecandioico en la cadena lateral .
La masa molecular teórica de 4732.4 se confirmó por MALDI-MS.
UPLC (método 08_B4_1) : Tr 8.19 min UPLC (método 04 A3 1): Tr 8.17 min Ejemplo 6 l 26- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4-Carboxí-4- (15- ¦ carboxipentadecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi) acetilamino] etoxi }etoxi) acetilo] , amida de íf37- [2- (2- {2- [2- (2-{2- [ (S) -4-Carboxi-4- (15- carboxipentadecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi ) acetilamino] etoxi} etoxi) acetil] [Aib8, Arg34, Lys37] GLP-1 (7-37) - péptido Química 25: Método de preparación: Como en el Ejemplo 3, excepto que la resina usada fue Tentagel S RAM con una carga de 0.24 mmol/g y el Fmoc-Lys (Mtt ) se usó tanto en posiciones 26 como 37.
La masa molecular teórica de 4843.6 se confirmó por MALDI-MS.
UPLC (método 08_B4_1) : Tr 9.43 min UPLC (método 04 A3 1) : Tr 11.88 min Ejemplo 7 fif26- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) -4-Carboxi-4- (13- carboxitridecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi ) acetilami no] etoxi } etoxi ) acetilo] , amida de fi 37- [ 2 - ( 2 - { 2 - [2 - ( 2 - { 2 - [ (S) -4-Carboxi-4- (13- carboxitridecanoilamino) butirilamino] etoxi } etoxi ) acetilami no] etoxi } etoxi) acetil] [Aib8, Arg34 , Lys37] GLP-1 (7-37) -péptido Química 26 : Método de preparación: Como en el Ejemplo 6, excepto para el uso de éster de mono-t-butilo del ácido tetradecandioico en la cadena lateral .
La masa molecular teórica de 4787.5 se confirmó por MALDI-MS.
UPLC (método 08_B4_1) : Tr 8.72 min UPLC (método 04 A3 1) : Tr 9.98 min Ej emplo 8 i 26- [2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S) - 4 - Carboxi - 4 - (11- carboxiundecanoilamino) butiri lamino] etoxi } etoxi ) acetilami no] etoxi } etoxi ) acetilo] , amida de 37- [2- ( 2 - { 2 - [2- ( 2 - { 2 - [ (S) -4-Carboxi-4- (11- carboxiundecanoilamino) butiri lamino] etoxi } etoxi ) acetilami no] etoxi jetoxi) acetil] [Aib8 , Arg34 , Lys37] GLP- 1 (7-37) - pépt ido Química 27: Método de preparación: Como en el Ejemplo 6, excepto para el uso de éster de mono-t-butilo del ácido dodecandioico en la cadena lateral.
La masa molecular teórica de 4731.4 se confirmó por MALDI-MS.
UPLC (método 08_B4_1) : Tr 8.16 min UPLC (método 04 A3 1) : Tr 8.83 min Ejemplo 9 f2S- [2-[2-(2-{2- [(S) -4-Carboxi-4- (13-carboxitridecanoi lamino) but iri lamino] etoxi } etoxi) acetilo] , amida de lf31- [2- [2- (2- {2- [ (S) - 4 -Carboxi -4 - (13-carboxitridecanoi lamino) but iri lamino] etoxi } etoxi) acetil] [Aib8, Arg34, Lys37] GLP-1 (7-37) -péptido Química 28: Método de preparación: Como en el Ejemplo 7.
La masa molecular teórica de 4497.2 se confirmó por MALDI-MS .
UPLC (método 08_B4_1) : Tr 8.85 min UPLC (método 04 A3 1) : Tr 10.27 min Ejemplo 10 lf26- [2- {2- [ (S) -4-Carboxi-4- (13- carboxitridecanoilamino) butirilamino] ] , amida de íf37-[2-{2- [ (S) -4-Carboxi-4- (13- carboxitridecanoilamino) butirilamino] ] [Aib8 , Arg34 , Lys37] GLP- 1 (7-37) -péptido Química 29: Método de preparación: Como en el Ejemplo 7.
La masa molecular teórica de 4206.8 se confirmó por MALDI-MS.
UPLC (método 08_B4_1) : Tr 9.04 min UPLC (método 04 A3 1): Tr 10.68 min Ejemplo 11 íf2e- (2-{2-[2-(2-{2-[2 - (13-Carboxi- tridecanoilamino) etoxi] etoxi }acetilamino) etoxi] etoxi } acetilo) , amida de lf37- (2- {2- [2- (2- {2- [2- (13-Carboxi - tridecanoilamino) etoxi] etoxijacetilamino) etoxi] etoxijacetil) [Aib8 , Arg34 , Lys37] GLP-1 (7-37) -péptido Química 30: Método de preparación: Como en el Ejemplo 7.
La masa molecular teórica de 4529.2 se confirmó por MALDI-MS .
UPLC (método 08_B4_1) : Tr 9.07 min UPLC (método 04 A3 1) : Tr 13.31 min Ejemplo 12 iV£26-{2- [2- (2- {2- [2- (2-{ (S) -4-Carboxi-4- [4- (4-yodo-fenil) -butirilamino] -butirilamino} -etoxi) -etoxi] -acetilamino} -etoxi) -etoxi] -acetilo}, if37-{2- [2- (2-{2- [2- (2-{ (S) -4-Carboxi-4- [4- (4 fenil) -butirilamino] -butirilamino} -etoxi) -etoxi] -acetilamino} -etoxi) -etoxi] -acetil} [Aib8,Arg34,Lys37] GLP-1 (7-37) -péptido Química 31: Método de preparación: Método B de SPPS, ácido 8- (9-fluorenilmetiloxicarbonil-amino) -3 , 6-dioxaoctanoico (comercialmente disponible de Iris Biotech) , ácido 4- (4-yodofenil) butírico (comercialmente disponible de Aldrich) y Fmoc-Glu-OtBu se acoplaron usando Método D de SPPS.
UPLC (método 04_A4_1) : Tr = 8.54 min UPLC (método 01_A4_2) : Tr = 10.23 min LCMS4: Tr = 2.4 min, m/z = 971 (m/5) 1213 (m/44) 1617 (m/3) Ejemplo 13 N£2e-{2 - [2-(2-{2-[2-(2-{(S) -4 -Carboxi-4 - [16- (4-carboxifenoxi) hexadecanoilamino] butirilaminojetoxi) etoxi] acet ilamino} etoxi) etoxi] acetilo} , tf37-{2- [2-(2-{2-[2-(2-{(S)-4-Carboxi-4- [16- (4-carboxifenoxi ) hexadecanoilamino] butirilaminojetoxi) etoxi] aceti lamino} etoxi) etoxi] acetil } - [Aib8, Arg34 , Lys37] GLP-1 (7-37) -péptido Método de preparación: Método B de SPPS . El producto final se caracterizó por UPLC analítico y LC-MS con la excepción de que una etapa limitada de anhídrido acético se realizó después del acoplamiento de los siguientes aminoácidos: Trp31, Ala25, Tyrl9, Phel2 y Aib8 (2¾ min, 65°C con anhídrido de ácido acético 1 N en NMP) . El éster de tert-butilo del ácido 4- (15-carboxi-pentadeciloxi) benzoico se puede preparar como se describe en el Ejemplo 17 en WO07128817.
UPLC (método 08_B4_1) : Tr = 11.272 min UPLC (método 05 B10 1) : Tr = 7.319 min LCMS4 : Tr = 2.37 min, m/z = 5054.48 PM calculado = 5056.82 Ejemplo 14 lf26- { 2 - [2-(2-{2-[2-(2-{(S) -4 -Carboxi-4 - [16- (3-carboxifenoxi ) hexadecanoilamino] butirilaminojetoxi) etoxi] acet ilamino} etoxi) etoxi] acetilo} , isf37- {2- [2-(2-{2-[2-(2-{(S)-4-Carboxi-4- [16- (3-carboxifenoxi) hexadecanoilamino] butirilaminojetoxi) etoxi] acetilamino}etoxi) etoxi] acetil} - [Aib8 , Arg34 , Lys37] GLP- 1 (7-37) -péptido Química 33: Preparación de áster de tert-butilo del ácido 3-Hidroxi-benzoico Una mezcla de ácido 3 -hidroxibenzoico (55.0 g, 400 mmol) , dicarbonato de di-tert-butilo (178 g, 820 mmol) , perclorato de magnesio (0.89 g, 4.0 mmol) y nitrometano seco (750 mL) se agitó a 40°C durante 96 hrs . Se agregó acetato de etilo (800 mL) y la capa orgánica se lavó con solución acuosa al 5% de bicarbonato de sodio (1500 mL) . La solución orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y luego se evaporó in vacuo. El residuo se sometió a cromatografía de columna (gel de sílice Fluka 60, hexanos/acetato de etilo 8:1) proporcionando el compuesto del título como sólido blanco. Rendimiento: 9.07 g (12%) P. f . : 94-96°C 1H espectro RM (300 MHz, CDC13 , d? (dH) ) : 7.61-7.53 (m, 2 H) ; 7.29 (t, J=8.1 Hz, 1 H) ; 7.05 (m, 1 H) ; 6.06 (bs, 1 H) ; 1.59 (s, 9 H) .
Preparación de áster de metilo del ácido 16-Bromo-hexadecanoico Se disolvió ácido 16-Bromo-hexadecanoico (6.0 g) en MeOH (35 mL) , tolueno (100 mL) y trimetilortoformiato (20 mL) , luego se agregó Amberlyst 15 de Fluka (1.4 g) . La mezcla se agitó a 55 °C durante 16 h. La mezcla se evaporó hasta secado y secó bajo vacío durante 16 h para proporcionar 7.7g. El residuo se suspendió en MeOH (ca. 50 mL) y agitó durante ca ½ h. El amberlyst 15 se filtró completamente después de agitación con DCM (30 mL) durante ½ h. El filtrado se concentró para remover el DCM, y la solución clara se enfrió y se agregó más MeOH (ca 20 mL, total ca 40 mL) . El matraz se enfrió y más cristales se precipitaron y después agitaron durante 30 min, los cristales se filtraron completamente y lavaron con MeOH frío. Los cristales blancos se secaron bajo vacío para proporcionar 5.61 g.
Preparación de áster de tert-butilo del ácido 3- (15-Metoxicarbonil-pentadeciloxi) -benzoico Se disolvió áster de tert-butilo del ácido 3-Hidroxi-benzoico (1.79 g) en MeCN 75 mi, luego se agregó áster de metilo del ácido bromo-hexadecanoico (3.22 g) seguido por K2C03 (2.5 g) . La reacción se agitó durante 3 d a 80°C. Se filtró la mezcla de reacción. El filtrado se evaporó, y el residuo se disolvió en EtOAc 100 mi, y la capa EtOAc se lavó dos veces con 100 mi de salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgS04 filtrado y se removió el solvente por evaporación para dar 4.165 g (98 %) .
Preparación de áster de tert-butilo del ácido 3- (15-Carboxi-pentadeciloxi ) -benzoico Se disolvió áster de tert-butilo del ácido 3- (15-Metoxicarbonil-pentadeciloxi) -benzoico (4.165 g) en 50 mi de THF y 50 mi de MeOH. Se agregó agua (10 mL) seguido por LiOH (0.565g, 13.5 mmol) . La reacción fue durante 16 . h a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se evaporó y el residuo se disolvió en EtOAC 150 mi, y se agregó agua 80 y 20 mi de HCl 1 N. Las capas se separaron y la capa orgánica se secó sobre MgS04, filtraron y se removió el solvente por evaporación para dar un compuesto sólido blanco (3.91g, 97%) .
Método de preparación: Método B de SPPS y usando éster de tert-butilo del ácido 3- (15-Carboxi-pentadeciloxi) -benzoico en forma similar como en el Ejemplo 1. El producto final se caracterizó por UPLC analítico y LC-MS con la excepción de que una etapa limitada de anhídrido acético se realizó después del acoplamiento de los siguientes aminoácidos: Trp31, Ala25, Tyrl9, Phel2 y Aib8 (2½ min, 65 °C con anhídrido de ácido acético 1 N en NMP) .
UPLC (método 08_B4_1) : Tr = 11.201 min UPLC (método 05_B10_1) : Tr = 8.622 min LCMS4 : Tr = 2.37 min, m/z = 1011.88 (m/5) ; 1664.32 (m/4 ) ; 5053.28 PM calculado = 5056.82 Ejemplo 15 Ne2e-{2 - [2 - (2-{ (S) -4-Carboxi-4- [10- (4- carboxifenoxi ) decanoilamino] butirilamino}etoxi ) - etoxi] acetilo} , l 37-{2- [2- (2-{ (S) -4 -Carboxi -4 - [10- (4- carboxifenoxi) decanoilamino] - butirilamino}etoxi) etoxi] acetil} [Aib8 , Arg34 , Lys37] GLP-1 (7-37) - péptido Química 34: Método de preparación: Método B de SPPS, iniciando con resina Fmoc-Lys (Mtt ) - ang de carga baja. Se usó Fmoc-Lys (Mtt ) -OH en la posición 26, y se usó Boc-His (Trt ) -OH en la posición 7. El Mtt se removió con HFIP, y ácido 8 - (9- fluorenilmetiloxicarbonil-amino) -3 , 6-dioxaoctanoico (comercialmente disponible de Iris Biotech) , Fmoc-Glu-OtBu y éster de tert-butilo del ácido 4- (9 -carboxi -noniloxi) - benzoico (preparada como se describe en el Ejemplo 25, etapa 2 of WO 2006/082204) se acoplaron usando Método D de SPPS.
UPLC (método 08_B4_1) : Tr = 8.8 min UPLC (método 04_A3_1) : Tr = 9.6 min LCMS4: 4598.0 PM calculado = 4598.2 Ejemplo 16 ?e26-{2 - [2-(2-{2-[2-(2-{(S) -4-Carboxi-4- [12- (3- carboxifenoxi) dodecanoilamino] butirilaminojetoxi) etoxi] acetilamino} etoxi) etoxi] acetilo} , 37-{2-[2-(2-{2-[2-(2-{(3)- 4-Carboxi-4- [12- (3- carboxifenoxi) dodecanoilamino] butirilaminojetoxi) etoxi] acetilamino} etoxi ) etoxi] acetil } [Aib8, Arg34 , Lys37] GLP- 1 (7-37 ) - péptido Química 35: Método de preparación: Método B de SPPS . El éster de tert- butilo del ácido 3- (11-carboxi-undeciloxi) -benzoico se preparó en forma similar como se describe para éster de tert- butilo del ácido 3- ( 15 -Carboxi -pentadeciloxi ) -benzoico, empleando ácido 12 -bromo-dodecanoico . El producto final se caracterizó por UPLC analítico y LC-MS con la excepción de que una etapa limitada anhídrido acético se realizó después del acoplamiento de los siguientes aminoácidos: Trp31, Ala25, Tyrl9, Phel2 y Aib8 (2¾ min, 65 °C con anhídrido de ácido acético 1 N en NMP) UPLC (método 08_B4_1) : Tr = 9.449 min LCMS4: Tr = 2.37 min, m/z = m/z: 1011.88 (m/4); 1264.32 (m/3 ) ; 4942.24 P calculado = 4944.608 Ejemplo 17 if26- [2- (2- [2- (2- [2 - (2- [4- (10- (4 -Carboxifenoxi ) decanoilamino) - 4 (S) -carboxibutirilamino] etoxi) etoxi] acetilamino) etoxi] etoxi) acetil] - isf37- [2-(2-[2-(2-[2-(2-[4-(10- (4 -Carboxifenoxi) decanoilamino) - 4 (S) -carboxibutirilamino] etoxi) etoxi] acetilamino) etoxi] etoxi) acetil] [Aib8,His31,Gln34,Lys37]GLP-l (7-37) -péptido Química 36: Preparación: Método A de SPPS, iniciando con resina Fmoc- Lys (Mtt) -Wang ' de carga baja. Se usó Fmoc-Lys (Mtt ) -OH en la posición 26, y se usó Boc-His (Trt ) -OH en la posición 7. El Mtt se removió con HFIP, y ácido 8- (9- fluorenilmetiloxicarbonil -amino) -3 , 6-dioxaoctanoico (comercialmente disponible de Iris Biotech) se acopló dos veces seguido por Fmoc-Glu-OtBu y éster de tert-butilo del ácido 4- (9-carboxi-noniloxi) -benzoico (preparada como se describe en el Ejemplo 25, etapa 2 de WO 2006/082204) se acoplaron usando Método A de SPPS.
UPLC (método 05_B5_1) : Tr = 4.95 min (92%) LCMS4 : m/z = 4011, calculado = 4011 Ejemplo 18 lf26- {2-[2-(2-{2- [2-(2-{ (S) - 4 - Carboxi - 4 - [4- (4- metilfenil) but irilamino] but irilamino } etoxi ) etoxi ] acet i lam ino} etoxi) etoxi] acetilo}, 2V£37-{2-[2- (2-{2- [2-(2-{ (S) -4- Carboxi-4- [4- (4- metilfenil) but irilamino] but iri lamino } etoxi ) etoxi] - acet i lamino } etoxi ) etoxi] acetil} [Aib8, Arg34 , Lys37] GLP- 1(7- 37 ) -pépt ido Química 37 : Preparación: Método B de SPPS, ácido 8- (9 f luoreni lmeti loxicarbonil - amino) - 3 , 6 -dioxaoctanoico ( comercialmente disponible de Iris Biotech) , ácido 4- (4 met ilfenil ) but írico (comercialmente disponible de ABCR) Fmoc -Glu-OtBu se acoplaron usando Método D de SPPS.
UPLC (método 01_B4_1) : Tr = 9.93 min LCMS4 : Tr = 2.44 min, m/z = 926(m/5) 1157 (m/4) 1543 (m/3) Ejemplo 19 l 26- ( ( s ) - 4-Carboxi-4- { (S) - 4 - carboxi - 4 - [10- (4 -carboxifenoxi ) -decanoilamino] butirilamino}butirilo) , lf37 ( (S) -4 -Carboxi -4 - { (S) - 4 - carboxi - 4 - [10- ( 4 - carboxi fenoxi ) -decanoilamino] but iri lamino} but iril ) [Aib8 , Arg34 , Lys37] GLP-1(7-37) -péptido Química 38: Preparación: Método B de SPPS, iniciando con resina Fmoc-Lys (Mtt ) -Wang de carga baja. Se usó Fmoc-Lys (Mtt ) -OH en la posición 26, y se usó Boc -His (Trt ) -OH en la posición 7. El Mtt se removió con HFIP, y Fmoc-Glu-OtBu y éster de tert-butilo del ácido 4 - ( 9 - carboxi -noniloxi ) -benzoico (preparada como se describe en el Ejemplo 25, etapa 2 de WO 2006/082204) se acoplaron usando Método D de SPPS.
UPLC (método 08_B4_1) : Tr = 8.6 min UPLC (método 04_A3_1) : Tr = 7.9 min LCMS4 : 4565.0 PM calculado = 4566.1 Ejemplo 20 NE26-{2- [2- (2-{2- [2- (2- {4-Carboxi-4- [10- (3-carboxif enoxi) decanoilamino] butirilamino}etoxi) etoxi] acet i lamino} etoxi) etoxi] acetilo} , ]\7°7-{2- [2- (2-{2- [2- (2- {4-Carboxi- 4- [10- (3-carboxifenoxi) decanoilamino] butirilamino}etoxi) etoxi] ace t i lamino } etoxi ) etoxi ] ace t i 1 } [Aib8 , Arg34 , Lys37 ] GLP -1(7-37) -pépt ido Química 39: Preparación de éster de tert-butilo del ácido 3- (9-Carboxi-noniloxi) benzoico Se disolvió éster de tert-butilo del ácido 3-Hidroxi-benzoico (3 g) en acetonitrilo (50 mL) . Se agregó éster de metilo del ácido 10-Bromo decanoico de Aldrich (4.1g) en acetonitrilo (20 mL) y lavó el recipiente con acetonitrilo (30 mL) . Se agregó carbonato de potasio y la mezcla se puso a reflujo bajo nitrógeno, durante ca. 18 h. La reacción se enfrió y evaporó hasta secado. El residuo se disolvió en AcOEt (80 mL) y agua (30 mL) y se extrajo. La fase acuosa se lavó con AcOEt (30 mL) y las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua (50 mL) , NaCl sat. (30 mL) y secaron sobre MgS04 y el filtrado se concentró bajo vacío para proporcionar un sólido blanco (5.8 g). El residuo se disolvió en DCM (15 mL) y se agregó heptano (ca 60 mL) , y la solución se concentró hasta ca. 30 mL. después de agitación durante 30 min. los cristales comienzan a formarse, y la solución se enfrió con hielo. Los cristales se filtraron completamente y lavaron con heptano enfriado y secaron en bajo vacío para proporcionar 4.13 g (71%) de éster de tert-butilo del ácido 3- (9-metoxicarbonil-noniloxi) -benzoico.
Los cristales se disolvieron en THF (30 mL) y se agregó NaOH 1N (11 mL) . La solución turbia se agitó durante 16 h. La mezcla de reacción se concentró para remover la mayoría de THF, y la solución acuosa restante se extrajo con AcOEt (50 mL) . El pH de la solución acuosa se ajustó hasta 1-2 con ca. 12 mL HCl 1 N, y la fase acuosa se extrajo con AcOEt (25 mL) . Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua, secaron sobre MgS04, filtraron y concentraron para proporcionar un sólido semi-cristalino blanco (3.97 g) . LC S2: 401 (M+23) , H-NM (400 MHz, CDC13) : 7.56 (d, 1H) , 7.50 (m, 1H) , 7.26-7.32 (m, 1H) , 7.05 (dd, 1H),3.99 (t, 2H) , 2.35 (t, 2H) , 1.75-1.82 (m, 2H) , 1.62-1.65 (m, 2H) , 1.59 (s, 9H) , 1.42-1.47 (m, 2H) , 1.33 (br, 8H) .
Método de preparación: Método B de SPPS, iniciando con resina Fmoc-Lys (Mtt) -Wang de carga baja. Se usó Fmoc-Lys (Mtt) -OH en la posición 26, y se usó Boc-His (Trt) -OH en la posición 7. El Mtt se removió con HFIP, y ácido 8- (9-fluorenilmetiloxicarbonil-amino) -3, 6-dioxaoctanoico (comercialmente disponible de Iris Biotech) , Fmoc-Glu-OtBu, y éster de tert-butilo del ácido 3 - (9-carboxi-noniloxi) -benzoico se acoplaron usando un método de acoplamiento doble en el sintetizador de Péptido Liberty.
UPLC (método 04_A4_1) : 10.01 min UPLC (método 08_B4_1) : 8.81 min LCMS4 : m/z = 978.5 (M+5H)5+, 1222.8 (M+4H)4+, 1630.1 (M+3H) 3+ Ejemplo 21 i26- [2- (2-{2- [2- (2-{2- [ (S) -4-Carboxi-4- (11- carboxiundecanoilamino) butirilamino] etoxijetoxi) acetilamino] etoxijetoxi) acetilo] , i37- [2- (2- {2- [2- (2- {2- [(S) -4-Carboxi-4- carboxiundecanoilamino) butirilamino] etoxijetoxi) acetilamino] etoxi}etoxi) acetil] [Aib8,His31,Gln34, Lys37] GLP-1 (7-37) -péptido Química 40: Método de preparación: Como en el Ejemplo 5.
La masa molecular teórica de 4655.2 se confirmó por MALDI UPLC (método 08_B4_1) : Tr = 7.72 min UPLC (método 04 A3 1) : Tr = 5.70 min Ejemplo 22 N9- {2- [2- (lH-Imidazol-4-il) etilcarbamoil] -2-metilpropionilo} , üf26-{2 - [2-(2-{2-[2-(2-{(S) -4-Carboxi-4- [10- (4 - carboxifenoxi ) decanoilamino] butirilaminojetoxi) etoxi] acetilamino}etoxi) etoxi] acetilo} , íf37-{2- [2- (2-{2- [2- (2-{ (S) - 4-Carboxi-4- [10- (4- carboxifenoxi) decanoilamino] butirilaminojetoxi) etoxi] acetilamino}etoxi) etoxi] acetil} [Arg34, Lys37] GLP-1 (9-37) Glu38- péptido Química 41: Preparación: Método B de SPPS . Se acopló ácido 2, 2-Dimetil-N- [2- (l-tritil-lJí-imidazol-4-il) -etil] -malonámico usando la misma condición de acoplamiento como en aminoácidos Aib. El ácido 8- (9-fluorenilmetiloxicarbonil-amino) -3,6- dioxaoctanoico (comercialmente disponible de Iris Biotech) , Fmoc-Glu-OtBu, y éster de tert-butilo del ácido 4- (9-carboxi- noniloxi) -benzoico (preparada como se describe en el Ejemplo 25, etapa 2 of WO 2006/082204) se acoplaron usando Método D de SPPS.
UPLC (método 04_A3_1) : Tr = 9.32 min.
LCMS4: Tr = 2.29 min., m/z = 1669 (m/3) , 1252 (m/4) , 1001 (m/5) Ejemplo 23 N9-{2- [2- (lH-Imidazol-4-il) etilcarbamoil] -2-metilpropionil } - lf26-{2- [2- (2-{2- [2- (2-{ (S) -4 -Carboxi -4 - [10- (4- carboxifenoxi) decanoilamino] butirilaminojetoxi) etoxi] acetilamino} etoxi) etoxi] acetilo} , l 27- {2 - [2-(2-{2-[2-(2-{(S)- 4-Carboxi-4- [10- (4- carboxifenoxi ) decanoilamino] butirilaminojetoxi) etoxi] acetilamino}etoxi) etoxi] acetil} [Arg34 , Lys37] GLP-1 (9-37) - péptido Química 42: Preparación: Método B de SPPS, se acopló ácido 2 , 2 -Dimetil-N- [2- (l-tritil-lH-imidazol-4-il) -etil] -malonámico usando la misma condición de acoplamiento como en aminoácido Aib. El ácido 8- (9-fluorenilmetiloxicarbonil-amino) -3,6- dioxaoctanoico (comercialmente disponible de Iris Biotech) , Fmoc-Glu-OtBu y éster de tert-butilo del ácido 4- (9-carboxi- noniloxi) -benzoico (preparada como se describe en el Ejemplo 25, etapa 2 de WO 2006/082204) se acoplaron usando Método D de SPPS.
UPLC (método 08_B4_1 (TFA) ) : Tr = 8.81 min LCMS4 : Tr = 2.29 min, m/z = 1625 (m/3), 1219 (m/4), 975 (m/5) Ejemplo 24 l 26-{2 - [2- (2-{ (S) -4-Carboxi-4- [2 - (2- {2 - [ (13- carboxitridecanoilamino) ] etoxijetoxi) acetilamino] butirilamino} etoxi ) etoxi] acetilo} , lf37- (2 - [2 - (2-{ (S) -4- Carboxi-4- [2- (2- {2- [ (13- carboxitridecanoilamino) ] etoxi } etoxi) acetilamino] butirilamino} etoxi) etoxi] acetil } - [Aib8 , Arg34 , Lys37] GLP-1 (7-37) - péptido Química 43: Preparación: Método B de SPPS, iniciando con resina Fmoc- Lys (Mtt) - ang de carga baja. Se usó Fmoc-Lys (Mtt) -OH en la posición 26, y se usó Boc-His (Trt ) -OH en la posición 7. El Mtt se removió con HFIP manualmente, y ácido 8- (9-fluorenilmetiloxicarbonil-amino) -3 , 6 -dioxaoctanoico (comercialmente disponible de Iris Biotech) , Fmoc-Glu-OtBu y tetradecandioco se acoplaron usando un método de acoplamiento doble en el sintetizador de Péptido Liberty. La · masa molecular teórica se confirmó por MALDI-MS.
UPLC (método 08_B4_1) : Tr = 8.6 min UPLC (método 04_A3_1) : Tr = 9.7 min MALDI-MS: 4788 Ejemplo 25 f26_ [· (s) _4_carboxi-4- {2 - [2-(2-[2-(2-{2-[( 13-carboxitridecanoilamino) ] etoxi} etoxi) acetilamino] etoxi) etoxi] acetilamino}butirilo] , íf37- [ (S) -4-Carboxi-4- {2- [2- (2- [2- (2-{2- [ (13-carboxitridecanoilamino) ] etoxi}etoxi) acétilamino] etoxi) etoxi] acetilaminojbutiril] [Aib8 , Arg34 , Lys37] GLP-1 (7-37) -péptido Química 44 : Preparación: Método B de SPPS, iniciando con resina Fmoc-Lys (Mtt) -Wang de carga baja. Se usó Fmoc-Lys (Mtt) -OH en la posición 26, y se usó Boc-His (Trt ) -OH en la posición 7. El Mtt se removió con HFIP manualmente, y ácido 8- ( 9- fluorenilmet iloxicarbonil-amino) -3,6-dioxaoctanoico (comercialmente disponible de Iris Biotech) , Fmoc-Glu-OtBu y tetradecandioco se acoplaron usando un método de acoplamiento doble en el sintetizador de Péptido Liberty. La masa molecular teórica se confirmó por MALDI-MS.
UPLC (método 08_B4_1): Tr = 8.8 min UPLC (método 04_A3_1) : Tr = 10 min MALDI-MS: 4787 Ejemplo 26 ü 2S- {2- [2- (2-{2- [2-(2-{ (S) -4- [4 - ( 4 - tert -But i 1 - fenil ) - but irilamino] -4-carboxi- but irilamino } etoxi ) etoxi ] acet i lamino } etoxi ) etoxi] acetilo} N"7-{2- [2-(2-{2- [2-(2-{ (S) -4-[4- (4 - er -But i 1 - fenil ) - but irilamino] - 4 - carboxi -but iri lamino } -etoxi ) -etoxi] - acet i lamino} -etoxi) - etoxi] - acetil} [Aib8, Arg34, Lys37] GLP- 1(7-37) -péptido Química 45 : Preparación: Método B de SPPS, ácido 8- (9- f luoreni lmet i loxi carbóni 1 - amino) -3,6- dioxaoctanoico (comercialmente disponible de Iris Biotech) , ácido 4- (4- t-butilfenil) butírico y Fmoc -Glu-OtBu se acoplaron usando Método D de SPPS .
UPLC (método 08_B4_1) : Tr = 9.07 min LCMS4 : Tr = 2.29 min, m/z = 943 (m/5) 1179 (m/4) 1571 (m/3) Ejemplo 27 N9-{2- [2- (lH-Imidazol-4-il) -etilcarbamoil] -2-metilpropionil } - tf2e-{2 - [2-(2-{2-[2-(2-{(S)-4-[4- (4-tert- Butilfenil) butirilamino] -4 -carboxibutirilamino} etoxi ) etoxi] acetilamino} etoxi) etoxi] acetilo} , is37- {2- [2-(2-{2-[2-(2-{(S)- 4 - [4 - (4 - ert-Butilfenil ) butirilamino] -4 - carboxibutirilamino} etoxi ) etoxi] acetilaminojetoxi) etoxi] acetil} [Arg34, Lys37] GLP-1 (9-37) -péptido Química 46: Preparación: Método B de SPPS, se acopló ácido 2 , 2 -Dimetil-N- [2- (l-tritil-lií-imidazol-4-il) -etil] -malonámico usando la misma condición de acoplamiento como aminoácido Fmoc-Aib. El ácido 8- (9-fluorenilmetiloxicarbonil -amino) -3,6- dioxaoctanoico (comercialmente disponible de Iris Biotech) , Fmoc-Glu-OtBu y ácido 4 - (4 - t-butilfenil ) butírico se acoplaron usando Método D de SPPS .
UPLC (método 04_A4_1) : Tr = 10.56 min LCMS4 : Tr = 2.40 min. m/z = 940 (m/5), 1174 (m/4), 1565 (m/3) Ejemplo 28 ?e26- [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [ [ (4S) -4-carboxi-4- [10- (4- carboxifenoxi) decanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetilo] , ?e3 ?- [2 - [2 - [2 - [ [2 - [2 - [2 - [ [ (4S) -4-carboxi-4- [10- (4- carboxifenoxi) decanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetil] - [Imp7, Arg34, Lys37] -GLP-1- (7- 37) -péptido Método de preparación: Método B de SPPS LCMS4: Tr: 2.22 min, m/z: 4859.5; 1214.9 (M+4H)4+; 1619.8 (M+3H) 3+ UPLC (método: 08_B4_1) : Tr = 8.88 min UPLC (método: 04 A3 1) : Tr = 9.28 min Ejemplo 29 Nf26- [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [ [ (4S) -4-carboxi-4- [10- (4- carboxifenoxi) decanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetilo] , N"7- [2 - [2 - [2 - [ [2 - [2 - [ [ (4S) -4-carboxi-4- [10- (4 -carboxifenoxi) decanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetil] [Arg34,Lys37] -GLP-1- (7-37) -péptido Química 48:.
Método de preparación: Método B de SPPS UPLC (método 05_B5_1) : Tr=5.75 min UPLC (método 08_B2_1) : Tr=13.09 min LCMS4 (M/5)+l= 976; (M/4)+l= 1219; Masa exacta = 4874 Ejemplo 30 N£"26- [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [ [ (4S) - -carboxi -4 - [10- (4- carboxifenoxi) decanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetilo] , "7- [2 - [2 - [2 - [ [2 - [2 - [2 - [ [ (4S) -4 -carboxi -4- [10- (4 -carboxifenoxi) decanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetil] - [Aib8,Gly9,Arg34,Lys37] -GLP-1- (7-37) -péptido Química 49: Método de preparación: Método A de SPPS UPLC (método 09_B2_1) : Tr = 13.20 min UPLC (método 05_B5_1) : Tr = 6.05 min LCMS4: (M/5)+l = 964; (M/4)+l = 1204; Masa exacta = 4816 Ejemplo 31 N£2e- [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [ [ (4S) - -carboxi -4 - [10- (4- carboxifenoxi ) decanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetilo] , Nc37- [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [ [ (4S) -4-carboxi-4- [10- (4- carboxifenoxi ) decanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetil] - [Aib8 , Arg23 , Arg34 , Lys37] -GLP- 1- (7-37) -péptido Química 50: Método de preparación: Método B de SPPS LCMS4: Tr = 2.12 min, m/z: 4916.0 UPLC (método: 08_B2_1) : Tr = 12.59 min UPLC (método: 04 A3 1) : Tr = 10.57 min Ejemplo 32 N£ <J- [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [ [ (4S) -4-carboxi-4- (13- carboxitridecanoilamino) butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetilo] , N"7- [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [ [ (4S) -4- carboxi-4- ( 13 -carboxitridecanoilamino) butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetil] - [Arg34,Lys37] -GLP-1- (7-37) -péptido Química 51: Método de preparación: Método B de SPPS LCMS4: Tr = 2.12 min, m/z: 4774.4 UPLC (método: 09_B2_1) : Tr =12.87 min UPLC (método: 04 A3 1) : Tr = 8.86 min Ejemplo 33 N«3_ [2_ [2_ [2_ [ [2_ [2_ [2_ [ [ (4S) _4_carboxi-4- [10- (4- carboxifenoxi) decanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetilo] , N"7- [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [ [ (4S) -4-carboxi-4- [10- (4- carboxifenoxi ) decanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetil] - [His31, Gln34, Lys37] -GLP-1- (7- 37) -péptido Método de preparación: Método B de SPPS LCMS4: Tr: = 1.92 min, m/z: 4797.3; M/4 UPLC (método: 09_B4_1): Tr = 8.12 min UPLC (método: 05 B8 1): Tr = 2.03 min Ejemplo 34 N£2S- [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [ [ (4S) -4 -carboxi -4 - (13-carboxitridecanoilamino) butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetilo] , Ne37- [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [ [ (4S) T4-carboxi -4 - ( 13 -carboxitridecanoilamino) butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetil] - [His31, Gln34 , Lys37] -GLP-1- (7-37) -péptido Química 53 : Método de preparación: Método B de SPPS LCMS4: Tr = 1.99 min, m/z: 4697.0 UPLC (método: 09_B2_1) Tr =12.20 min UPLC (método: 05 B5 1): Tr = 5.31 min Ejemplo 35 N£- [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [ [ (4S) -4-carboxi-4- (11-carboxiundecanoilamino) butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetilo] , N' [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [ [ (4S) -4-carboxi-4- (11-carboxiundecanoilamino) butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetil] - [His31 , Gln34 , Lys37] -GLP-1- (7-37) -péptido Química 54 : Método de preparación: Método B de SPPS LCMS4: Tr = 1.89 min, m/z: 4641.2 UPLC (método: 09_B2_1) : Tr = 11.2 min UPLC (método: 05 B5 1): Tr = 4.00 min Ejemplo 36 N£2e- [ (4S) -4-carboxi-4- [ [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [10- (4- carboxifenoxi ) decanoilamino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] butanoilo] , Ne37- [ (4S) -4-carboxi-4- [ [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [10- (4-carboxifenoxi) decanoilamino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] butanoil] - [His31,Gln34,Lys37] -GLP-1- (7-37) -péptido Química 55: Método de preparación: Método B de SPPS LCMS4: Tr: 1.97 min, m/z: 4797.3; M/4 : 1199.8; M/3 : 1599.4 UPLC (método: 09_B4_1) : Tr = 8.24 min UPLC (método: 05 B8 1) : Tr = 2.88min Ejemplo 37 ?e2d- [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [ [ (4S) - -carboxi-4- [10- (4-carboxifenoxi) decanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetilo] , Nc37- [2 - [2 - [2 - [ [2 - [ [ (4S) -4-carboxi-4- [10- (4-carboxifenoxi) decanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetil] - [Gln9, Arg34, Lys37] -GLP-1 37) -péptido Química 56: Método de preparación: Método B de SPPS LCMS4: Tr = 1.06 min, m/z: 4873.3 UPLC (método: 09_B2_1) : Tr = 13.18 min UPLC (método: 05 B5 1) : Tr = 6.40 min Ejemplo 38 ?e26- [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [ [ (4S) -4-carboxi-4- [10- (4- carboxifenoxi ) decanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetilo] , Nf37- [2- [2- [2- [ [2- [2- [ [ (4S) -4-carboxi-4- [10- (4 -carboxifenoxi) decanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetil] [Glu30, Arg34,Lys37] -GLP-1- (7-37) -péptido Química 57: Método de preparación: Método B de SPPS LCMS4 : Tr = 2.13 min, m/z: 4932.7 UPLC (método: 09_B2_1) : Tr = 13.39 min UPLC (método: 04 A3 1): Tr = 8.20 min Ejemplo 39 N£26- [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [ [ (4S) -4-carboxi-4- [8- (4- carboxifenoxi) octanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetilo] , N"7- [2-[2-[2-[[2-[2-[2- [ [ (4S) -4-carboxi-4- [8- (4 -carboxifenoxi ) octanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetil] - [Aib8,Arg3\Lys37] -GLP-1- (7-37) -péptido Química 58: Método de preparación: Método B de SPPS LCMS4: Tr: 1.93 min, m/z: 4832.4; M/4 : 1208.5; M/3 : 1611.0 UPLC (método 09_B4_1) : Tr = 8.10 min UPLC (método 04_A3_1) : Tr = 8.15 min UPLC (método 05 B5 1) : Tr = 5.30 min Ejemplo 40 N£26- [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [ [ (4S) -4 -carboxi -4 - [8- (4- carboxifenoxi) octanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetilo] , ?e3 ?- [2 - [2 - [2 - [ [2 - [2 - [ [ (4S) -4 -carboxi -4- [8- (4 -carboxifenoxi) octanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetil] [Arg34,Lys37] -GLP-1- (7-37) -péptido Química 59: Método de preparación: Método B de SPPS LCMS4 : Tr: 1.92 min, m/z : 4818.4; M/4 : 1205.0; M/3 : 1606.7 UPLC (método 09_B4_1) : Tr = 8.06 min UPLC (método 04 A3 1) : Tr = 8.02 min Ejemplo 41 N{9} - [2 , 2-dimetil-3-oxo-3- (piridin-2-ilmetilamino)propanoilo] , H£26- [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [ [ (4S) -4-carboxi-4- [10- (4-carboxifenoxi) decanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetilo] , ?e3?- [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [ [ (4S) -4-carboxi-4- [10- (4 -carboxifenoxi ) decanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetil] - [Arg34 , Lys37] -GLP-1- (9-37) -péptido Química 60: Método de preparación: SSPS método B. Se acopló ácido 2,2-Dimetil-N-piridin-2-ilmetil-malonámico usando la misma condición de acoplamiento como se usó para ácido 2 , 2 -Dimetil-N- [2- (l-tritil-líí-imidazol-4-il) -etil] -malonámico en los ejemplos previos. Fmoc-Glu-OtBu y éster de tert-butilo del ácido 4- (9-carboxi-noniloxi) -benzoico (preparada como se describe en el Ejemplo 25, etapa 2 de WO 2006/082204) se acoplaron usando Método D de SPPS.
UPLC (método 08_B4_1) : Tr = 8.98 min LCMS4: Tr = 2.23 min. m/z = 1624 (m/3) , 1218 (m/4) Ejemplo 42 Nf2ff- [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [ [ (4S) -4-carboxi-4- [10- (4- carboxifenoxi) decanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetilo] , ?e37- [2 - [2 - [2 - [ [2 - [2 - [ [ (4S) -4-carboxi-4- [10- (4 -carboxifenoxi ) decanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetil] [Arg34,Lys37] -GLP-1- (7-37) -peptidil-Gly Química 61: Método de preparación: SSPS método B LCMS4: Tr: 2.05 min, m/z: 4931.5; M/ : 1233.3; M/3 : 1644.4 UPLC (método 09_B4_1) : Tr = 8.52 min UPLC (método 05_B5_1) : Tr = 5.18 min UPLC (método 04 A3 1) : Tr = 9÷24 min Ejemplo 43 N£2e- [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [ [ (4S) -4-carboxi-4- [10- (4- carboxifenoxi) decanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetilo] , Nf37- [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [ [ (4S) -4-carboxi-4- [10- (4 -carboxifenoxi ) decanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetil] - [Arg34,Gly36, Lys37] -GLP-1- (7-37) -péptido Química 62 : Método de preparación: SSPS método B LCMS4: Tr: 2.18 min, m/z: 4775.3; M/4 UPLC (método: 09_B4_1) : Tr = 9.01 min UPLC (método: 04_A3_1) : Tr = 9.60 min UPLC (método: 05 B5 1): Tr = 5.88 min 2 5 Ejemplo 44 Ne2e- [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [ [ (4S) -4-carboxi-4- [9- (4- carboxifenoxi) nonanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetilo] , Ne37- [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [ [ (4S) -4-carboxi-4- [9- (4 -carboxifenoxi) nonanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetil] - [Arg34,Lys37] -GLP-1- (7-37) -péptido Química 63 : Método de preparación: SSPS método B LCMS4 : Tr: 2.03 min, m/z: 4846.4; M/4 : 1212.3; M/3 : 1616.1 UPLC (método: 09_B4_1) : Tr = 8.27 min UPLC (método: 05 B5 1) : Tr = 5.09 min Ejemplo 45 Nf2S- [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [ [ (4S) -4 -carboxi -4 - [13- (5- carboxitiofen-2-il) tridecanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetilo] , N£37- [2- [2- [2- [ [2- [2- [ [ (4S) -4 -carboxi -4- [13- (5-carboxitiofen-2-il) tridecanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetil] - [Aib8,Arg34, Lys37] -GLP-1- (7-37) -péptido Química 64 : Método de preparación: SSPS método B. El ácido 8- (9- fluorenilmetiloxicarbonil-amino) -3 , 6 -dioxaoctanoico (comercialmente disponible de Iris Biotech) , Fmoc-Glu-OtBu, y éster de tert-butilo del ácido 5- (12-Carboxi-dodecil) -tiofen- 2 -carboxilico (preparada como se describe en el Ejemplo 6 de WO07128815) se acoplaron usando SSPS método D método en el sintetizador Liberty.
UPLC (método 08_B4_1) : Tr = 9.87 min LCMS4: m/z =1651 (ra/3) # 1239 (m/4), 991 (m/5) Ejemplo 46 ?e2ß- [ 2 - [2 - [2- [ [2- [2- [2- [ [ (4S) - -carboxi-4- [10- (4-carboxifenoxi) decanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetilo] , Ne37- [2- [2- [2- [ [2- [2- [ [ (4S) - -carboxi-4- [10- (4 -carboxifenoxi ) decanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetil] [Arg34, Lys37] -GLP-1- (7-37) -peptidil -Glu Química 65: Método de preparación: Método A de SPPS UPLC (método 10_B14_1) : Tr = 6.54 min LCMS4: (M/5)+l = 1001; (M/4)+l = 1251; Masa exacta = 5003.5 Ejemplo 47 ?e26- [ (4S) -4-carboxi-4- [ [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- (13- carboxitridecanoilamino) etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] butanoilo] , N"7- [ (4S) -4-carboxi-4- [ [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- ( 13 -carboxitridecanoilamino) etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] butanoil] - [Arg34 , Lys37] -GLP-1- (7-37) - péptido Química 66: Método de preparación: SSPS método B UPLC (método: 09_B4_1) : Tr = 8.76 min UPLC (método: 04_A6_1) : Tr = 6.02 min LCMS4: Tr = 2.12 min. m/z : 4775; M/4 Ejemplo 48 N£2S- [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [ [ (2S) -4 -carboxi - 2 - [10- (4-carboxifenoxi) decanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetilo] , N£37- [2 - [2 - [2 - [ [2 - [2 - [ [ (2S) -4-carboxi-2- [10- (4 -carboxifenoxi) decanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetil] [Aib8,Arg34,Lys37] -GLP-1- (7-37) -péptido Química 67: Método de preparación: SSPS método B UPLC (método: 08_B2_1) : Tr = 13.193 min UPLC (método: 05_B5_1) : Tr = 6.685 min LCMS4 : m/z: 4887; m/3:1630; m/4:1222; m/5:978 Ejemplo 49 N£2e- [2- [2- [2- [ [2- [2- [2- [ [ (4S) -4 -carboxi- - [8- (4- carboxifenoxi) octanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetilo] , NDDD- [2 - [2 - [2 - [ [2 - [2 - [ [ (4S) -4-carboxi-4- [8- (4- carboxifenoxi) octanoilamino] butanoil] amino] etoxi] etoxi] acetil] amino] etoxi] etoxi] acetil] - [Arg3 , Gly36 , Lys37] -GLP-1 (7-37) -péptido Química 68: Método de preparación: SSPS método B LCMS4: Tr: 2.07 min, m/z : 4719.2; M/4 : 1180.5; M/3 : 1573.7 UPLC (método: 08_B4_1) : Tr = 8.45 min UPLC (método: 05_B5_1) : Tr = 5.19 min MÉTODOS FARMACOLÓGICOS Ejemplo 50: Potencia in vi tro El propósito de este ejemplo es examinar la actividad, o potencia, de los derivados de GLP-1 in vitro.
Las potencias de, los derivados GLP-1 de Ejemplos 1-49 se determinaron como se describe a continuación, es decir como la estimulación de la formación de AMP (cAMP) cíclico en un medio que contiene membranas expresando el receptor humano GLP-1.
Principio Las membranas purificadas de plasma de una línea celular transfectada de forma estable, BHK467-12A (tk-tsl3) , expresando el receptor humano GLP-1 se estimularon con el análogo GLP-l° el derivado en cuestión, y la potencia de la producción cAMP se midió usando el kit de ensayo AlphaScreenTM cAMP de Perkin Elmer Life Sciences. El principio básico del ensayo AlphaScreen es una competencia entre cAMP endógeno y el biotin-cAMP exógenamente agregado. La captura de cAMP se logra usando un anticuerpo específico conjugado para las perlas de aceptor.
Cultivo de células y preparación de las membranas Una línea celular transfectada estable y un clon de expresión alto se seleccionaron para su proyección. Las células maduraron en 5% C02 en DMEM, 5% FCS, 1% Pen/Strep (Penicilina/estreptomicina) y 0.5 mg/ml del marcador de selección G418.
Las células en aproximadamente 80% de confluencia se lavaron 2X con PBS y se cosecharon con Versene (solución acuosa de sal de tetrasodio de ácido etilendiaminotetraacético) , se centrifugaron 5 min en 1000 rpm y se removió el sobrenadante. Todos los pasos adicionales se hicieron en hielo. El comprimido de célula se homogeneizó por el Ultrathurax por 20-30 sec. en 10 mi de Solución amortiguadora 1 (Na-HEPES 20 mM, EDTA 10 mM, pH=7.4) , se centrifugó 15 min en 20,000 rpm y el comprimido se resuspendió en 10 mi de Solución amortiguadora 2 (Na-HEPES 20 mM, EDTA 0.1 mM, pH=7.4) . La suspensión se homogeneizó 20-30 seg. y se centrifugó 15 min en 20,000 rpm. La suspensión en solución amortiguadora 2, la homogenización y centrifugación se repitieron una vez y las membranas se resuspendieron en Solución amortiguadora 2. Se determinó la concentración de proteína y las membranas se almacenaron en -80°C hasta su uso .
El ensayo se realizó en placas ½-área 96-pocillo, fondo plano (Costar cat . no:3693) . El volumen final por pocilio fue de 50 µ? .
Soluciones y reactivos El kit de ensayo AlphaScreen cAMP de Perkin Elmer Life Sciences (cat. No: 6760625M) ; contiene perlas de aceptor Anti-cAMP (10 U/µ?) , perlas de donante estreptavidina (10 U/µ?) y Biotinilado-cAMP (133 U/µ?) .
La solución amortiguadora AlphaScreen, pH=7.4: TRIS-HC1 50 mM (Sigma, cat. no: T3253); 5 mM HEPES (Sigma, cat. no: H3375) ; MgCl2 10 mM, 6H20 (Merck, cat. no: 5833); NaCl 150 mM (Sigma, cat.no: S9625) ; 0.01% Tween (Merck, cat. no: 822184) . Lo siguiente se agregó a la Solución amortiguadora AlphaScreen antes de su uso (concentraciones finales indicadas): BSA (Sigma, cat. no. A7906) : 0.1%; IBMX (Sigma, cat. no. 15879): 0.5 mM; ATP (Sigma, cat. no. A7699) : 1 mM; GTP (Sigma, cat. no. G8877) : 1 uM. cAMP estándar (factor de dilución en un ensayo = 5) : Solución cAMP : 5 µ? de a 5 mM cAMP-solución madre + 495 µ solución amortiguadora AlphaScreen.
Las series de solución idóneas de solución amortiguadora AlphaScreen se prepararon de cAMP estándar así como el análogo GLP-1 o el derivado para ser examinado, por ejemplo las siguientes ocho concentraciones del compuesto GLP-1: 10-7, 10-8, 10-9, 10-10, 10-11, 10-12, 10-13 y 10-14M, y una serie de, por ejemplo, 10-6 a 3x10-11 de cAMP .
Membrana/Perlas de aceptor Uso de membranas hGLP-l/ BHK 467-12A; 6 ug/pocillo correspondientes a 0.6 mg/ml (la cantidad de membranas utilizadas por pocilio pueden variar) "Sin membranas": Las perlas de aceptor (15 g/ml final) en solución amortiguadora AlphaScreen "6 g/membranas de pocilio" : membranas + Perlas de aceptor (15 g/ml final) en solución amortiguadora AlphaScreen Agregar 10 µ? "Sin membranas" al cAMP estándar (por pocilio en duplicados) y los controles positivo y negativo Agregar 10 µ? "6 µg/membranas pocilio" a GLP-1 y análogos (por pocilio en duplicados/triplicados) Control pos.: 10 µ? "sin membranas" + 10 µ? Solución amortiguadora AlphaScreen Control neg. : 10 µ? "sin membranas" + 10 µ? cAMP solución de madre (50µ ) Debido a que las perlas son sensibles a la luz directa, cualquier manejo se realizó en la oscuridad (tan oscuro como sea posible), o en luz verde. Todas las diluciones se hicieron en hielo.
Procedimiento 1. Hacer la solución amortiguadora AlphaScreen. 2. Disolver y diluir GLP- 1/Análogos/cAMP estándar en solución amortiguadora AlphaScreen. 3. hacer la solución de perlas donantes e incubar 30 min. en TA. 4. Agregar los cAMP/GLP-l/Análogos a la placa: 10 µ? por pocilio. 5. Preparar la membrana/solución de perlas de aceptor y agregar esta a las placas: 10 µ? por pocilio. 6. Agregar las perlas donantes: 30 µ? por pocilio. 7. Envolver la placa e incubar en el agitador por 3 horas (muy lentamente) en TA. 8. Contar en AlphaScreen cada placa pre incubada en AlphaScreen por 3 minutos antes de contar.
Resultados Los valores EC50 [pM] se calcularon usando el software Graph-Pad Prism (versión 5) .
Se confirmó la potencia de todos los derivados in vitro. 43 derivados tuvieron una buena potencia in vitro correspondiente a un EC50 debajo de 2000 pMo; 42 derivados incluso fueron más potentes teniendo un EC50 debajo de 1000 pMo; 35 derivados aún tuvieron además una mejora en la potencia correspondiente a un EC50 en o debajo de 500 pM; 19 derivados fueron muy potentes, correspondientes a un EC50 en o debajo de 200 pMo; y 10 derivados tuvieron una muy buena potencia correspondiente a un EC50 de debajo 100 pMo.
Para comparación, el componente no. 13 en la Tabla 1 de Journal of Medicinal Chemistry (2000), vol . 43, no. 9, p. 1664-669 (GLP-1 (7-37) acilado en K26'34 con bis-C12 -diacido) tuvo una potencia in vitro correspondiente a un EC50 de 1200 pM.
Si se desea, puede calcularse las veces de variación en relación a GLP-1 como EC50 (GLP-1)/ EC50 (análogo) - 3693.2.
Ejemplo 51: enlace receptor GLP-1 El propósito de este experimento es investigar el enlace del. receptor GLP-1 de los derivados GLP-1, y como es que el enlace es potencialmente influenciado por la presencia de albúmina. Esto se hace en un experimento in vitro como se describe a continuación.
La afinidad de enlace de los derivados GLP-1 de Ejemplos 1-49 al receptor humano GLP-1 se midió por medio de su capacidad de desplazar 125I -GLP-1 del receptor. Liraglutida y semaglutidesa se incluyeron como compuestos comparativos. Para examinar el enlace de los derivados a la albúmina, el ensayo se realizó con una baja concentración de albúmina (0.005% - correspondiente a la cantidad residual de la misma en el trazador) , así como con una alta concentración de albúmina (2.0% agregada) . Un desplazamiento en la afinidad de enlace, IC50, es una indicación de que el péptido en cuestión enlaza a la albúmina, y por lo tanto una predicción de perfil farmacocinético prolongado potencial del péptido en cuestión en modelos animales.
Condiciones Especies (in vitro) : Hámster Punto final biológico: Enlace receptor Método de ensayo: SPA Receptor: receptor GLP-1 Línea celular: BHK tk-tsl3 Cultivo de célula y purificación de membrana Una línea celular transfectada estable y un clon de expresión alto se seleccionaron para su proyección. Las células maduraron en C02 al 5% en DMEM, FCS al 10%, Pen/estrep (Penicilina/Estreptomicina) al 1% y 1.0 mg/ml del Marcador de selección G418.
Las células (aprox. 80% confluencia) se lavaron dos veces en PBS y se cosecharon con Versene (solución acuosa de sal de tetrasodio de ácido etilendiaminotetraacético) , después de esto se separaron por centrifugación en 1000 rpm por 5 min. El peletizado de célula/células debe mantenerse en hielo en la medida de lo posible en las etapas subsecuentes. El peletizado celular se homogeneizó con Ultrathurrax por 20-30 segundos en una cantidad idónea de Solución amortiguadora 1 (dependiendo de la cantidad de células, pero por ejemplo 10 mi). El homogenado se centrifugó en 20000 rpm por 15 minutos. El peletizado fue resuspendido (homogeneizado) en 10 mi de solución amortiguadora 2 y re-centrifugado. Esta etapa se repitió una vez más. El peletizado resultante fue resuspendido en Solución amortiguadora 2, y se determinó la concentración de proteína. Las membranas se almacenaron a menos 80°C.
Solución amortiguadora 1: Na-HEPES 20 mM + EDTA lOmM, pH 7.4 Solución amortiguadora 2: Na-HEPES 20 mM + EDTA O.lmM, pH 7.4 Ensayo de enlace: SPA: Los compuestos de prueba, membranas, partículas SPA y [125I] ] -GLP-1 (7-36)NH2 se diluyeron en un ensayo de solución amortiguadora. 25 ul (micro litros) de compuestos de prueba se agregaron a Optiplate. HSA (experimento de "alta albúmina" que contiene HSA al 2%) , o solución amortiguadora (experimento de "baja albúmina" que contiene HSA al 0.005%), se agregó (50 ul) . Se agregó 5-10 ug proteína/muestra (50ul) correspondientes a 0.1 - 0.2 mg proteína/ml (para ser preferentemente optimizados para cada preparación de membrana) . Las partículas SPA (perlas SPA de aglutinina de germen de trigo, Perkin Elmer, #RPNQ0001) se agregaron en una cantidad de 0.5 mg/pocillo (50ul) . La incubación se comenzó con [125I] -GLP-1] - (7-36)NH2 (concentración final 0.06 nM correspondiente a 49.880 DPM, 25ul) . Las placas se sellaron con PlateSealer y se incubaron por 120 minutos en 30°C mientras se agita. Las placas se centrifugaron (1500 rpm, lOmin) y se contaron en Topcounter.
Ensayo de solución amortiguadora : HEPES 50 mM EGTA 5 mM MgC12 5 mM Tween 20 al 0.005% pH 7.4 HSA fue SIGMA A1653.
Cálculos El valor IC5 se leyó de la curva ya que la concentración se desplaza 50% de 125I-GLP-1 del receptor, y la relación de [ ( IC50/nM) HSA alta] / [ (IC50/nM) HSA ultrabaja] fue determinada .
Generalmente, el enlace al receptor GLP-1 en la concentración de albúmina baja debe ser tan bueno como sea posible, correspondiendo al valor bajo IC50.
El valor IC50 en concentración alta de albúmina es una medida de la influencia de la albúmina en el enlace del derivado al receptor GLP-1. Como se sabe, los derivados de GLP-1 también enlazan a la albúmina. Este es generalmente un efecto deseable, el cual extiende su ciclo de vida en el plasma. Por lo tanto, el valor IC50 en alta albúmina generalmente será más alto que el valor IC50 en la albúmina baja, correspondiente a un enlace reducido al receptor GLP-1, causado por una competencia de enlace de albúmina al receptor GLP-1.
Por lo tanto, una relación alta (valor IC50 (alta albúmina) /valor IC50 (baja albúmina) ) puede tomarse como una indicación de que el derivado en cuestión enlaza bien a la albúmina (puede tener una vida media larga) , y también per se enlaza bien al receptor GLP-1 (el valor IC5o (alta albúmina) es alto, y el valor IC50 (baja albúmina) es bajo) .
Resultados Los siguientes resultados se obtuvieron, donde "relación" se refiere a [ (IC50/nM) HSA alta] / [(IC50/nM) HSA baja] ) : Todos menos dos derivados tenían una relación arriba de 1.0; 40 derivados estaban arriba de 10; 34 derivados estaban arriba de 25; 22 derivados estaban arriba de 50; 12 derivados arriba de 100; y 3 derivados tuvieron una relación arriba de 250.
Adicionalmente con respecto a IC50 (albúmina baja) , todos los derivados tuvieron un IC50 (albúmina baja) debajo de 600 nM; todos menos uno estuvieron debajo de 500 nM; 46 derivados estuvieron debajo de 100 nM; 44 derivados estuvieron debajo de 50.00 nM; 34 derivados estuvieron debajo de 10.00 nM; 23 derivados estuvieron debajo de 5.00 nM; y 7 derivados estuvieron debajo de 1.00 nM.
Finalmente con respecto a IC50 (albúmina alta) , todos los derivados tuvieron un IC50 (albúmina alta) en 1000.00 nM o debajo; 46 derivados estuvieron debajo de 1000.00 nM; 39 estuvieron debajo de 500.00 nM; 7 derivados estuvieron debajo de 100.00 nM; y 4 derivados estuvieron debajo de 50.00 nM. Ejemplo 52: Estimado de biodisponibilidad oral El propósito de este experimento es estimar la biodisponibilidad oral de los derivados de GLP-1.
A este extremo, la exposición en plasma después de la inyección directa en el lumen intestinal de derivados GLP-1 de Ejemplos 2, 15-17, 21, 25, 32, 36-39, y 42-48 se estudió en ratas in vivo, como se describe a continuación.
Los derivados de GLP-1 se probaron en una concentración de 1000 uM en una solución de 55 mg/ml de caprato de sodio. 32 ratas macho Sprague Dawley con un peso corporal durante la llegada de aproximadamente 240 g se obtuvieron de Taconic (Dinamarca) y se asignaron a diferentes tratamientos por sorteo sencillo, 4 ratas por grupo. Las ratas fueron sometidas a ayuno por aproximadamente 18 horas antes del experimento y pasaron por anestesia (Hypnorm/Dormicum) .
Los derivados de GLP-1 se administraron en el yeyuno ya 5 sea en la parte próxima (10 cm distal del duodeno) o en el intestino medio (50 cm próximo al intestino ciego) . Un PE50- catéter, de 10 cm de largo fue insertado en el yeyuno, seguido de al menos 1.5 cm en el yeyuno, y asegurado antes de la dosis por ligadura alrededor del intestino y el catéter 10 con sutura 3/0 distal a la punta para prevenir fuga o desplazamiento del catéter. El catéter se colocó sin jeringa y aguja y se administraron 2ml de salina en el abdomen antes de cerrar la incisión con broches de herida. 100 µ? del respectivo derivado GLP-1 se inyectó en el 15 lumen yeyunal a través del catéter con una jeringa de 1 mi.
Subsecuentemente, 200µ1 de aire se empujaron en el lumen yeyunal con otra jeringa para "vaciar" el catéter. Esta jeringa se dejó conectada al catéter para prevenir que el flujo regresara al catéter. 20 Las muestras de sangre (200 ul) se recolectaron en intervalos deseados (usualmente en tiempos de 0, 10, 30, 60, 120 y 240 min) en tubos EDTA de la vena de la cola y se centrifugaron 5 minutos, 10000G, en 4°C dentro de 20 minutos. El plasma (75ul) se separó a tubos Micronic, inmediatamente pe congelados, y se mantuvieron en -20°C hasta que se analizaron para la concentración de plasma del respectivo derivado GLP-1 con LOCI (Luminescent Oxygen Channeling Immunoassay) , generalmente como se describe para la determinación de insulina por Poulsen y Jensen en el Journal of Biomolecular Screening 2007, vol . 12, p. 240-247. Las perlas donantes se recubrieron con estreptavidina , mientras que las perlas de aceptor se conjugaron con un anticuerpo monoclonal reconociendo un epítopo medio/de C-terminal del de péptido. Otro anticuerpo monoclonal, específico para la N-terminal, fue biotinilado. Los tres reactivos se combinaron con el analito y formaron un complejo inmunitario de dos sitios. La iluminación del complejo libera átomos de oxígeno singlete de las perlas donantes, los cuales fueron conducidos a las perlas aceptoras y desencadenaron quimioluminescencia la cual se midió en un lector de placa Envision. La cantidad de luz fue proporcional a la cantidad de concentración del componente .
Después de tomar la muestra de sangre, las ratas fueron sacrificadas bajo anestesia y se les abrió el abdomen para verificar la colocación correcta del catéter.
Las concentraciones de plasma (n=4) medias (pmol/1) se determinó como una función de tiempo. La relación de concentración de plasma (pmol/1) dividida por la solución de la dosificación (µp???/?) se calculó para cada tratamiento, y los resultados para t = 30 min (30 minutos después de la inyección del componente en el yeyuno) se evaluaron (exposición de dosis correcta en 30 min) como una medida sustituta de biodisponibilidad intestinal. La exposición de dosis correcta se ha mostrado para correlacionarse significativamente con la biodisponibilidad actual.
Se obtuvieron los siguientes resultados, donde la exposición de dosis correcta en 30 min se refiere a (la concentración de plasma 30 minutos después de la inyección del compuesto en el yeyuno (pM) ) , dividida por (la concentración del compuesto en la solución de dosificación (µ?) ) : Todos los derivados tuvieron una exposición de dosis correcta en 30 min de arriba de 40; 17 fueron arriba de 50, 14 fueron arriba de 70; 11 fueron arriba de 100; 6 fueron arriba de 125; y 2 derivados fueron arriba de 150.
Para comparación, el compuesto no. 13 en la Tabla 1 de Journal of Medicinal Chemistry (2000) , vol . 43, no. 9, p. 1664-669 (GLP-K7-37) acilatado en K26'34 con bis-C12 -diácido) tuvo una exposición correcta de dosis en 30 min de debajo de 40, y la exposición de dosis correcta en 30 min para semaglutida estuvo en el mismo intervalo debajo de 40.
Ejemplo 53: Efecto sobre la glucosa en la sangre y peso corporal El propósito del estudio es verificar el efecto de los derivados de GLP-1 en la glucosa en la sangre (BG, por sus siglas en inglés) y peso corporal (BW, por sus siglas en inglés) en una composición diabética.
Los derivados GLP-1 de Ejemplos 2, 4-5, 17, y 29 se examinaron en un estudio de respuesta de dosis en un modelo de ratón diabético obeso (ratones db/db) como se describe a continuación .
Cincuenta ratones db/db (Taconic, Dinamarca) , alimentados desde su nacimiento con dieta NIH31 (NIH 31M Rodent Diet, comercialmente disponible en Taconic Farms, Inc., EUA, véase www.taconic.com), se enlistaron para el estudio en la edad de 7-9 semanas. A los ratones se les dio libre acceso a la comida estándar (por ejemplo Altromin 1324, Brogaarden, Gentofte, Dinamarca) y agua de grifo y se mantuvieron en 24°C. Después de 1-2 semanas de aclimatación, se evaluó la glucosa en la sangre basal dos veces en dos días consecutivos (es decir en 9 am) . Los 8 ratones con los valores de glucosa en la sangre más bajos se excluyeron de los experimentos. Con base en los valores de glucosa en la sangre medios, los 42 ratones restantes fueron seleccionados para una experimentación adicional y se asignaron a 7 grupos (n=6) con niveles alineados de glucosa en la sangre. Los ratones fueron usados en experimentos con duración de 5 días por hasta 4 veces. Después del último experimento a los ratones se les aplicó la eutanasia.
Los siete grupos recibieron tratamiento como sigue: 1: Vehículo, s.c. 2: derivado GLP-1, 0.3 nmol/kg, s.c. 3: derivado GLP-1, 1.0 nmol/kg, s.c. 4: derivado GLP-1, 3.0 nmol/kg, s.c. 5: derivado GLP-1, 10 nmol/kg, s.c. 6: derivado GLP-1, 30 nmol/kg, s.c. 7: derivado GLP-1, 100 nmol/kg, s.c.
Vehículo: fosfato de sodio 50mM, cloruro de sodio 145 mM, tween 80 al 0.05%, pH 7.4.
El derivado GLP-1 se disolvió en el vehículo, a concentraciones de 0.05, 0.17, 0.5, 1.7, 5.0 y 17.0 nmol/ml. Los animales fueron dosificados s.c. con un volumen de dosis de 6 ml/kg (es decir 300 µ? por 50 g de ratón) .
En el día de dosificación, la glucosa en la sangre fue aplicada en tiempo -½h (8.30 am) , donde después se pesaron los ratones. El derivado GLP-1 fue dosificado aproximadamente a las 9 am (tiempo 0) . En el día de la dosificación, la glucosa en la sangre se evaluó en tiempos 1, 2, 4 y 8 h (10 am, 11 am, 1 pm y 5 pm) .
En los días siguientes, la glucosa en la sangre se evaluó en tiempos 24, 48, 72, y 96h después de la dosificación (es decir a las 9 am en el día 2, 3, 4, 5) . En cada día, los ratones se pesaron seguido de la muestra de glucosa en la sangre.
Los ratones se pesaron individualmente en una báscula digital .
Las muestras para la medición de la glucosa en la sangre se obtuvieron de la punta de la cola capilarmente de ratones conscientes. La sangre, 10 µ? , fue recolectada en capilares heparinizados y transferidos a 500 µ? de solución amortiguadora de glucosa (solución de sistema EKF, Eppendorf, Alemania) . La concentración de glucosa se midió usando el método de oxidasa de glucosa (analizador de glucosa Biosen 5040, diagnóstico EKF, GmbH, Barleben, Alemania) . Las muestras se mantuvieron a temperatura ambiente por hasta 1 h hasta el análisis. Si el análisis tuvo que posponerse, las muestras se mantuvieron en 4°C por un máximo de 24 h.
ED50 es la dosis que da elevación a la mitad del efecto máximo en nmol /kg. Este valor se calcula con base en la capacidad de los derivados para reducir el peso corporal así como la capacidad de para disminuir la glucosa en la sangre, como se explica a continuación.
ED50 para peso corporal se calcula como la dosis que da la elevación a la mitad del efecto máximo en delta BW 24 horas después de la administración subcutánea del derivado. Por ejemplo, si la disminución máxima del peso corporal después de 24 horas es de 4.0 g, entonces la ED50 de peso corporal sería esa dosis en nmol/kg lo que da elevación hasta una disminución en el peso corporal después de 24 horas de 2.0g. Esta dosis (peso corporal ED50) puede leerse de la curva de respuesta de dosis.
ED50 para la glucosa en la sangre se calcula como la dosis que da elevación hasta el efecto máximo medio en AUC delta BG 8 horas después de la administración subcutánea del análogo .
El valor ED50 puede calcularse sólo si existe una relación de respuesta a la dosis sigmoidal apropiada con una definición clara de respuesta máxima. De esta manera, si este no fuera el caso, el derivado en cuestión se vuelve a probar en un intervalo diferente de dosificación hasta que se obtenga la relación de respuesta a la dosis sigmoidal.
Se obtuvieron los siguientes resultados: Los derivados examinados tuvieron el efecto esperado en la glucosa en la sangre así como en el peso corporal (una disminución en ambos casos) . Adicionalmente , se obtuvo una curva de respuesta de dosis sigmoidal que permite el cálculo de valores ED50 para la glucosa en la sangre y peso corporal, respectivamente, como se explicó anteriormente.
Ejemplo 54: Vida media en mini cerdos El propósito de este estudio es determinar la protracción in vivo de los derivados de GLP-1 después de la administración i.v. a los mini cerdos, es decir la prolongación de su tiempo de acción. Esto se hace en un estudio f rmacocinético (PK, por sus siglas en inglés) , donde la vida media terminal del derivado en cuestión se determina. 2 Por vida media terminal generalmente quiere decirse que es el periodo de tiempo que toma reducir a la mitad una cierta concentración de plasma, medida después de la fase de distribución inicial. Se usaron en los estudios mini cerdos machos Góttingen que se obtuvieron de Ellegaard Góttingen Minipigs (Dalmose, Dinamarca) aproximadamente de 7-14 meses de edad y que pesan aproximadamente de 16-35 kg. Los mini cerdos se alojaron individualmente y se alimentaron restringidamente una o dos veces al día con dieta para mini cerdo SDS (Special Diets Services, Essex, RU. Después de al menos dos semanas de aclimatación los catéteres venosos centrales permanentes se implantaron en vena cava caudalis o o craneal en cada animal. A los animales se les permitió 1 semana de recuperación después de la cirugía, y entonces se usaron para estudios farmacocinéticos repetidos con un periodo de lavado idóneo entre las dosificaciones.
Los animales fueron sometidos a ayuno aproximadamente 18 h antes de la dosificación y al menos 4 h después de la dosificación, pero tuvieron acceso libre a agua durante todo el periodo. Los derivados GLP-1 de Ejemplos 2, 4-5, 16-17, 25, 29, y 39 se disolvieron en fosfato de sodio 50 mM, cloruro de sodio 145 mM, tween 80 al 0.05%, pH 7.4 a una concentración usualmente de 20-60 nmol/ml. Las inyecciones intravenosas (el volumen correspondiente a usualmente 1-2 nmol/kg, por ejemplo 0.033ml/kg) de los compuestos se dieron a través de un catéter, y se hicieron las muestras de sangre en puntos de tiempo predefinidos de hasta 13 días después de la dosificación (preferiblemente a través del otro catéter) . Las muestras de sangre (por ejemplo 0.8 mi) se recolectaron en solución amortiguadora EDTA (8mM) y entonces se centrifugaron en 4°C y 1942G por 10 minutos. El plasma fue pipeteado en tubos Micronic sobre hielo seco, y se mantuvieron en -20°C hasta que se analizaron para la concentración de plasma del respectivo compuesto GLP-1 usando ELISA o un anticuerpo similar basado en el ensayo ó LC-MS. Los perfiles de tiempo de concentración de plasma individual fueron analizados por un modelo sin compartimentos en WinNonlin v. 5.0 (Pharsight Inc., Mountain View, CA, EUA) , y las vidas medias (medio armónico) terminales resultantes determinadas.
Resultados Todos menos uno de los derivados examinados tuvieron una vida media de al menos 12 horas, seis tuvieron una vida media de la menos 24 horas, cinco tuvieron una vida media de al menos 36 horas, tres tuvieron una vida media de al menos 48 horas, y dos tuvieron una vida media de al menos 60 horas. Ejemplo 55: Efecto en la secreción de insulina mediada en la glucosa El propósito de este ejemplo es probar el efecto de los derivados GLP-1 la secreción de insulina mediada en la glucosa.
Esto se hace en mini cerdos Góttingen usando la prueba de tolerancia a la glucosa intravenosa (IVGTT, por sus siglas en inglés) .
Se usaron en los estudios mini cerdos macho Góttingen (Ellegaard Góttingen Minipigs A/S, Dalmose, Dinamarca), de 7-14 meses de edad. Los animales se alojaron en corrales sencillos durante la aclimatación y durante los experimentos. Después de al menos dos semanas de aclimatación se implantaron dos catéteres venosos centrales permanentes en vena cava caudalis o craneal en cada animal. A los animales se les permitió 1 semana de recuperación después de la cirugía, y entonces se usaron para estudios repetidos con un periodo de lavado idóneo entre las dosificaciones.
Los cerdos fueron alimentados restringidamente 1-2 veces al día con SDS forraje para mini cerdos (Special Diets Services, Essex, RU) y se les permitió libre acceso al agua.
El efecto de los derivados GLP-1 se examinó después de una dosis sencilla o después de un periodo con intensificación de dosis para evitar efectos adversos de dosis altas agudas. Los derivados GLP-1 se dan ya sea i.v. o s.c. en la piel delgada detrás de la oreja.
Para cada derivado GLP-1 examinado hay un grupo base tratado (o no tratado) con vehículo y de 2-6 grupos de dosis GLP-1 correspondientes a 2-6 niveles de concentración en plasma diferentes, que usualmente son de alrededor de 3000-80000 pM (n=5-8) .
Para cada derivado GLP-1 se realiza una prueba de tolerancia a la glucosa intravenosa de 1 o 2 horas. Los cerdos se someten a ayuno aproximadamente 18 horas antes del experimento. Se verifica la permeabilidad de los catéteres venosos centrales, y se toman dos muestras de sangre base. Después de la muestra en 0 minutos se da 0.3 g/kg de glucosa (Glucosa 500 g/L, SAD) i.v. durante un periodo de 30 segundos y el catéter se lava con 20 mi de NaCl al 0.9 % estéril. Usualmente las muestras de sangre se toman en los siguientes puntos de tiempo en relación al bolo de glucosa: -10, -5, 0, 2, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120 minutos, y después de cada muestra de sangre el catéter se lava con 4 mi de solución estéril 0.9 % NaCl con 10 U/ml Heparina . Las muestras de sangre para concentraciones de insulina, glucosa y plasma de los derivados se transfieren a tubos recubiertos con EDTA. Los tubos se almacenan en hielo húmedo hasta la centrifugación dentro de 1 hora (4°C, 3000 rpm, 10 min) , el plasma se pipetea en tubos Micronic en hielo seco y se almacenan en -20° C hasta su análisis. Dependiendo de la vida media del derivado GLP-1 las concentraciones de plasma se miden en t = 0 min, o en t = 0 min y al final de la prueba (t = 60 min o t = 120 min) . La glucosa se analiza usando el método de glucosa oxidasa de acuerdo a las instrucciones del fabricante con 10 ]i de plasma en 500 µ-lj de solución amortiguadora (EBIO más autoanalizador y solución, Eppendorf, Alemania). La insulina se analiza usando un ensayo inmunométrico idóneo (como LOCI, véase por ejemplo Journal of Biomolecular Screening 2007, vol . 12, p. 240-247). La concentración en plasma del derivado GLP-1 se analiza usando ELISA o un anticuerpo similar basado en ensayo o LC- S.
Para cada estudio se calcula el área bajo la curva de insulina (AUCinsulina) y se usa , como una medida de secreción de insulina. Los diferentes grupos de dosis se comparan al respectivo grupo base/vehículo usando ANOVA de una vía u otro análisis estadístico apropiado. Un EC50 para AUCinsulina también puede calcularse.
Ejemplo 56: Efecto en la ingesta alimenticia El propósito de este experimento es investigar el efecto de los derivados GLP-1 en la ingesta alimenticia en cerdos. Esto se hace en un estudio farmacodinámico (PD, por sus siglas en inglés) como se describe a continuación, en el cual se mide la ingesta alimenticia 1, 2, 3, y 4 días después de la administración de una dosis sencilla del derivado GLP-1, en comparación con un grupo de control tratado con vehículo .
Se usan cerdos hembra Landrace Yorkshire Duroc (LYD, por sus siglas en inglés) , aproximadamente de 3 meses de edad, pesando aproximadamente 30-35 kg (n=3-4 por grupo) . Los animales se alojan en un grupo por 1-2 semanas durante la aclimatación a las instalaciones de los animales. Durante el periodo experimental se colocan en corrales individuales desde el Lunes por la mañana hasta el Viernes por la tarde para medir la ingesta alimenticia individual. Los animales se alimentan libremente con forraje para cerdos (Svinefoder, Antonio) todas las veces tanto durante la aclimatación como en el periodo experimental. La ingesta alimenticia es monitoreada en línea por medio del registro del peso del forraje cada 15 minutos. El sistema usado es Mpigwin (Ellegaard Systems, Faaborg, Dinamarca) .
Los derivados de GLP-1 se disuelven en una solución amortiguadora de fosfato (fosfato 50 mM, tween 80 al 0.05%, pH 8) en concentraciones de 12, 40, 120, 400 o 1200 nmol/ml correspondientes a las dosis de 0.3 , 1, 3, 10 o 30 nmol/kg. La solución amortiguadora de fosfato sirve como vehículo. Los animales se dosifican con una dosis subcutánea sencilla de derivado GLP-1 o vehículo (volumen de dosis 0.025 ml/kg) en la mañana del día 1, y la ingesta alimenticia se mide 4 días después de la dosificación. En el último día de cada estudio, 4 días después de la dosificación, una muestra de sangre para medición de la exposición de plasma del derivado GLP-1 se toma del corazón en animales anestesiados. Después los animales se someten a eutanasia por una sobredosis intracardiaca de pentobarbitona . El contenido de plasma de los derivados de GLP-1 se analiza usando ELISA o un ensayo basado en anticuerpo similar.
La ingesta alimenticia se calcula como media ± SEM 24 h de ingesta alimenticia en los 4 días.
Las comparaciones estadísticas de la ingesta alimenticia de las 24 horas en el vehículo vs el grupo derivado GLP-1 en los 4 días se dan usando medidas repetidas ANOVA de una vía o dos vías, seguido por prueba posterior Bonferroni.
Ejemplo 57: Estabilidad contra degradación por enzimas intestinales El propósito de este ejemplo es examinar la estabilidad contra degradación por enzimas intestinales. Se usó GLP-1 (7-37) en el ensayo como un tipo de estándar.
Se probaron todos los compuestos de ejemplo, excepto por los compuestos de Ejemplos 4, 6, 8, 34-35, y 49.
Las actividades proteolíticas más fuertes en el intestino son de origen pancreático e incluyen las serina endopeptidasas tripsina, quimotripsina y elastasa así como varios tipos de carboxipeptidasas .
Un ensayo con un extracto de intestino delgado de ratas fue desarrollado y usado como se describe a continuación.
Extractos de intestino delgado de rata Los intestinos delgados de ratas se prepararon y se lavaron con 8 mi de NaCl 150 mM, Hepes 20 mM pH 7.4. Las soluciones se centrifugaron por 15 min en 4,600 rpm en un centrífugo Heraeus Multifuge 3 S-R con un rotor 75006445. Los sobrenadantes se removieron y se filtraron a través una membrana de 0.22 µp? Millipore Millex GV PVDF. Los filtrados de varios animales se agruparon para calcular las diferencias individuales promedio.
El contenido de proteína de los extractos obtenidos fue determinado por el ensayo Bradford (véase por ejemplo Analytical Biochemistry (1976), vol . 72, p. 248-254, y Analytical Biochemistry (1996), vol. 236 p. 302-308) .
Ensayo de degradación Se incubaron 2.5 nmol de los derivados a probarse con el extracto de intestino en un volumen de 250 µ? en 37 °C durante un periodo de una hora. Se evaluaron muestras de intestino en presencia de Hepes 20 mM en pH 7.4. La concentración del extracto intestinal fue valorada en experimentos piloto de manera que la vida media (t½) de GLP-1(7-37) estuvo en el intervalo de 10-20 minutos. El extracto de intestino delgado se usó en una concentración de 1.4 µg/ml. Todos los componentes excepto por el extracto de intestino delgado se mezclaron y se precalentaron por diez minutos en 37°C. Inmediatamente después de la adición del extracto de intestino se tomó una muestra de 50 µ? y se mezcló con el mismo volumen de ácido trifluoroacetico al · 1% (TFA) . Se tomaron muestras adicionales en consecuencia después de 15, 30, y 60 minutos.
Análisis de muestra Análisis UPLC Se analizaron 10 µ? de las muestras por UPLC usando un sistema de Waters Acquity con una columna BEH C18 1.7 µt? 2.1 x 50 mm y un gradiente 30 a 65% de 0.1% TFA y 0.07% TFA en acetonitrilo durante 5 minutos en una relación de flujo de 0.6 ml/min. Después de la substracción de la línea base se determinaron los picos integrales de los compuestos intactos en el cromatograma HPLC registrado a una longitud de onda de 214 nm .
Análisis MALDI-TOF Se transfirió 1 µ? de cada muestra al objetivo Bruker/Eppendorf PAC HCCA 384 MALDI . El análisis se realizó con un espectrómetro de masa tiempo de vuelo (MALDI-TOF) - ionización y desorción láser asistida-matriz Bruker Autoflex usando el método predefinido "PAC_medida" con un intervalo de detección extendido de 500 a 5000 Da y el método de calibración predefinido "PAC_calibración" .
Análisis de datos Los picos integrales de los cromatogramas HPLC fueron colocados en gráfica contra el tiempo. La vida media del respectivo compuesto se calculó ajustando los datos por medio del uso del software SigmaPlot 9.0 y una ecuación para un decaimiento exponencial de 2 parámetros.
Para cada compuesto probado, la vida media relativa (T¾ relativa) se calculó como la vida media (TM) del compuesto en cuestión, dividido por la vida media (T¾) de GLP-1 (7-37) , determinado de la misma manera.
Resultados La vida media relativa de los compuestos conocidos liraglutida y semaglutida fue de 4.8 y 1.2, respectivamente.
Excepto para un compuesto, todos los derivados GLP-1 de la invención que fueron probados tuvieron una vida media relativa de al menos 1; treinta y uno tuvieron una vida media relativa de al menos 2; y diez tuvieron una vida media de al menos 5.
Ejemplo 58: Farmacocinéticos en rata El propósito de este ejemplo es investigar la vida media in vivo en ratas .
Se realizaron estudios farmacocinéticos in vivo en ratas dentro de derivados de GLP-1 (compuestos de los presentes ejemplos 2, 4-5, 16-17, 25, 29, 36, 39, y 43) de la invención, como se describe a continuación. Se incluyó semaglutida para comparación. Las ratas macho Sprague Dawley de la misma edad con un peso corporal de 400 a 600g se obtuvieron de Taconic (Dinamarca) y se asignaron a los tratamientos por sorteo sencillo sobre peso corporal, aproximadamente de 3-6 ratas por grupo, de manera que todos los animales en cada grupo fueron de peso corporal similar.
Los derivados de GLP-1 (aproximadamente 6 nmole/ml) se disolvieron en fosfato de sodio 50 mM, cloruro de sodio 145 mM, tween 80 0.05%, pH 7.4. Las inyecciones intravenosas (l.Oml/kg) de los compuestos se dieron a través de un catéter implantado en la vena yugular derecha. La sangre de la vena sublingualis fue muestreada por 5 días después de la dosificación. Las muestras de sangre (200 µ?) fueron recolectadas en solución amortiguadora EDTA (8mM) y entonces se centrifugaron en 4°C y 10000G por 5 minutos. Las muestras de plasma se mantuvieron en -20°C hasta su análisis para la concentración de plasma del respectivo compuesto GLP-1.
Las concentraciones de plasma de los compuestos GLP-1 se determinaron usando un Inmunoensayo de Canalización de Oxígeno Luminescente (LOCI, por sus siglas en inglés), generalmente como se describe para la determinación de insulina por Poulsen y Jensen en Journal of Biomolecular Screening 2007, vol . 12, p. 240-247. Las perlas donantes se recubrieron con estreptavidina, mientras que las perlas de aceptor se conjugaron con un anticuerpo monoclonal reconociendo un epítopo medio/C-terminal de péptido. Otro anticuerpo monoclonal, específico para la N-terminal, fue el biotinilado. Los tres reactivos .se combinaron con el analito y formaron un complejo inmunitario de dos sitios. La iluminación del complejo liberó átomos de oxígeno singlete de las perlas donantes, los cuales fueron conducidos a las perlas aceptoras y desencadenaron quimioluminescencia la cual se midió en un lector de placa Envision. La cantidad de luz fue proporcional a la cantidad de concentración del componente.
Los perfiléis de tiempo de concentración de plasma se analizaron usando Win onlin (ver. 5.0, Pharsight Inc., Mountain View, CA, EUA) , y la vida media (T¾) se calculó usando los perfiles de tiempo de concentración de plasma individual de cada animal .
Resultados La vida media de semaglutida fue de 4 horas.
Todos los diez derivados de la invención que fueron probados tuvieron una vida media de al menos 4 horas, todos menos uno tuvieron una vida media de al menso 8 horas, siete tuvieron una vida media de al menos 12 horas, seis tuvieron una vida media al menos 16 horas, y tres tuvieron una vida media de al menos 24 horas .
Aunque ciertas características de la invención han sido ilustradas y descritas en este documento, muchas modificaciones, substituciones, cambios, y equivalentes ahora ocurrirán a aquellos expertos en la técnica. Por lo tanto, debe entenderse que las reivindicaciones adjuntas pretenden cubrir todas las modificaciones y cambios como caen dentro del verdadero espíritu de la invención.
Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (14)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :
1. Un derivado de un análogo GLP-1, caracterizado porque el análogo comprende un primer residuo K en una posición que corresponde a la posición 37 de GLP-K7-37) (SEQ ID NO: 1), un segundo residuo K en una posición que corresponde a la posición 26 de GLP-1 (7-37), en donde el primer residuo K se designa K37, y el segundo residuo K se designa K26,el análogo tienen un máximo de diez modificaciones de aminoácido en comparación con GLP-1 (7-37) , que incluye k37 y , una Q o una R en una posición que corresponde a la posición 34 de GLP-1 (7-37) ; cuyo derivado comprende dos porciones enlazadas a albúmina unidas a K26 y K37, respectivamente, en donde la porción enlazada a albúmina comprende una porción prolongada de la formula Química 2a, en la cual y es un entero en el intervalo de 7-15; o una sal, amida, o éster farmacéuticamente aceptable del mismo.
2. El derivado de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el análogo tiene un máximo de cinco modificaciones de aminoácidos.
3. El derivado de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-2, caracterizado porque el análogo comprende Imp7 y/o Aib8'
4. El derivado de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, caracterizado porque el análogo comprende Aib8.
5. El derivado de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4, caracterizado porque el análogo no comprende (H31 y Q34) .
6. El derivado de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque el análogo comprende las siguientes modificaciones de aminoácidos en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO:l) : (8Aib, 34R, 37k) .
7. El derivado de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-6, caracterizado por que el análogo tiene las siguientes modificaciones de aminoácidos en comparación con GLP (7-37) (SEQ ID NO:l) : (8Aib, 34R,37K).
8. El derivado de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-7, caracterizado porque y es 9.
9. El derivado de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, caracterizado porque la porción enlazada a albúmina además comprende la fórmula Química 6 y/o la formula Química 5: en donde k es un entero en el intervalo de 1-5, y n es un entero en el intervalo de 1-5.
10. Un compuesto caracterizado porque se selecciona de lo siguiente: Química 20, Química 21, Química 32, Química 34, Química 36, Química 38, Química 42, Química 47, Química 48, Química 49, Química 50, Química 52, Química 55, Química 56, Química 57, Química 58, Química 59, Química 60, Química 61, Química 62, Química 63, Química 65, Química 67, y Química 68; o una sal, amida, o éster farmacéuticamente aceptable del mismo .
11. Um compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-10, para uso como un medicamento.
12. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-10, para uso en el tratamiento y/o prevención de todas las formas de diabetes y enfermedades relacionadas, tales como trastornos alimenticios, enfermedades cardiovasculares, enfermedades gastrointestinales, complicaciones diabéticas, enfermedad crítica, y/o síndrome de ovario poliquístico; y/o para mejorar parámetros de lípidos, función de célula ß mejorada, y/o para retardar o prevenir progreso de enfermedad diabética .
13. El uso de un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-10 en la fabricación de un medicamento para el tratamiento y/o prevención de todas las formas de diabetes y enfermedades relacionadas, tales como trastornos alimenticios, enfermedades cardiovasculares, enfermedades gastrointestinales, complicaciones diabéticas, enfermedad crítica, y/o síndrome de ovario poliquístico; y/o para mejorar parámetros de lípidos, función de célula ß mejorada, y/o para retardar o prevenir progreso de enfermedad diabética.
14. El método para tratar o prevenir todas las formas de diabetes y enfermedades relacionadas, tales como trastornos alimenticios, enfermedades cardiovasculares, enfermedades gastrointestinales, complicaciones diabéticas, enfermedad crítica, y/o síndrome de ovario poliquístico; y/o para mejorar parámetros de lípidos, función de célula ß mejorada, y/o para retardar o prevenir progreso de enfermedad diabética - caracterizado porque se les administra una cantidad farmacéuticamente activa de un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-10. RESUMEN DE LA INVENCIÓN La invención se refiere a un derivado de un análogo GLP-1, cuyo análogo comprende un primer residuo K en una posición que corresponde a la posición 37 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1) , un segundo residuo K en una posición que corresponde a la posición 26 de GLP-1 (7-37) , y un máximo de diez modificaciones de aminoácido en comparación con GLP-1 (7-37) , en donde el primer residuo K se designa K37, y el segundo residuo K se designa K26, cuyo derivado comprende dos porciones enlazadas a albúmina unidas a K26 y K37, respectivamente, en donde la porción enlazada a albúmina comprende una porción prolongada seleccionada de: Química 1: H00C- (CH2) X-C0-* Química 2: HOOC-C6H4-0- (CH2) y-CO-* Química 3: R1-C6H4- (CH2) z-CO- * Química 4: HOOG-C4SH2- (CH2) W-C0-* en la cual x es un entero en el intervalo de 6-18, y es un entero en el intervalo de 3-17, z es un entero en el intervalo de 1-5, R1 es un grupo que tiene una masa molar no mayor que 150 Da, y w es un entero en el intervalo de 6-18; con la condición de que cuando la porción prolongada es Química 1, la porción enlazada a albúmina comprende además un ligador de la fórmula Química 5: *-NH- (CH2)2- (0- (CH2)2)k-0- (CH2)n-C0-*, en donde k es un entero en el intervalo de 1-5, y n es un entero en el intervalo de 1-5; o una sal', amida, o éster farmacéuticamente aceptable del mismo. La invención también se refiere eal uso farmacéutico del mismo, por ejemplo en el tratamiento y/o prevención de todas las formas de diabetes y enfermedades relacionadas, así como a péptidos novedosos correspondientes e intermediarios de cadena lateral . Los derivados son adecuados para administración oral.
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