ES2626013T3 - Derivados de GLP-1 - Google Patents

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ES2626013T3 ES12805429.3T ES12805429T ES2626013T3 ES 2626013 T3 ES2626013 T3 ES 2626013T3 ES 12805429 T ES12805429 T ES 12805429T ES 2626013 T3 ES2626013 T3 ES 2626013T3
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Paw Bloch
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Patrick Garibay
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Abstract

Un derivado de un péptido GLP-1, en donde el péptido tiene solo dos residuos de Lys, a saber, un primer y un segundo residuo de Lys, y un máximo de ocho cambios de aminoácidos en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3), en donde el derivado comprende dos restos de acción prolongada fijados al grupo amino épsilon de dicho primer y segundo residuo de Lys, respectivamente, a través de un enlazador, en el que el resto de acción prolongada se selecciona entre Chem. 15 y Chem. 16: Chem. 15: HOOC-(CH2)x-CO-* Chem. 16: HOOC-C6H4-O-(CH2)y-CO-* , en donde x es un número entero en el intervalo de 10-16 e y es un número entero en el intervalo de 8- 12; y el enlazador comprende un primer elemento de enlazador, Chem. 1: **Fórmula** o una sal, una amida o un éster farmacéuticamente aceptable de dicho derivado.

Description

Derivados de GLP-1
CAMPO TÉCNICO
La invención se refiere a derivados de GLP-1, más en particular, a péptidos GLP-1 que se acilan a través de un enlazador que comprende *-NH-CH(CH2OH)-CO-*. La invención también se refiere al uso farmacéutico de estos 5 derivados.
INCORPORACIÓN COMO REFERENCIA DE LA LISTA DE SECUENCIAS
La Lista de Secuencias, titulada "LISTA DE SECUENCIAS", tiene 3,77 KB, fue creada el 16-AGO-2012 y se incorpo-ra en esta memoria como referencia.
ANTECEDENTES 10
El documento de EE.UU. 5.525.491 A describe enlazadores peptídicos ricos en serina para enlazar dos o más domi-nios de proteína para formar una proteína fusionada.
El documento de EE.UU. 7.271.149 B2 describe enlazadores peptídicos ricos en glicina para proteínas de fusión de GLP-1.
El documento de EE.UU. 2007/0135338 A1 describe polipéptidos mimeticuerpos de GLP-1 con CH1 delecionado 15 que incorporan una secuencia enlazadora que contiene serina y glicina.
Los documentos de patente de EE.UU. 2010/0292133 A1 y 2011/0082079 A1 describen derivados de GLP-1 que incorporan como enlazador un aminoácido excepto Cys, o un dipéptido tal como Gly-Lys.
Knudsen Lotte et al., Journal of Medicinal Chemistry, American Chemical Society US., vol. 43, nº 9, 4 de mayo 2000 (04/05/2000), páginas 1664-1669, describen potentes derivados de péptido similar al glucagón de tipo 1 con propie-20 dades farmacocinéticas, adecuados para la administración una vez al día.
COMPENDIO
La invención se refiere a derivados de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3) o análogos de los mismos.
En estos derivados, las cadenas laterales que se unen a albúmina están fijadas covalentemente a dos o más resi-duos de Lys del péptido GLP-1, a saber, el grupo amino épsilon de Lys, cada uno a través de un enlazador que 25 comprende *-NH-CH(CH2OH)-CO-*, un dirradical del aminoácido serina.
Más en particular, la invención se refiere a un derivado de un péptido GLP-1, que tiene dos residuos de Lys, a saber, un primer y un segundo residuo de Lys y un máximo de ocho cambios de aminoácidos en comparación con GLP-1 (7 -37) (SEQ ID NO: 3), en donde el derivado comprende dos restos de acción prolongada fijados al grupo amino épsilon de dicho primer y segundo residuo de Lys, respectivamente, a través de un enlazador, en donde el resto de 30 acción prolongada se selecciona a partir de Chem. 15: HOOC-(CH2)x-CO-* y Chem. 16: HOOC-C6H4-O-(CH2)y-CO-*, en donde x es un número entero en el intervalo de 10-16, e y es un número entero en el intervalo de 8-12; y el enla-zador comprende un primer elemento enlazador:
La invención también se refiere a un péptido GLP-1 que comprende los siguientes cambios de aminoácidos en com-35 paración con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3): (8Aib, 34H, 37K); o (7Imp, 8Aib, 34R, 37K).
La invención también se refiere a un péptido GLP-1 que tiene los siguientes cambios de aminoácidos en compara-ción con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3): (8Aib, 34H, 37K); (7Imp, 8Aib, 34R, 37K); o (7Imp, 8Aib, 18K, 34Q).
El péptido o el derivado de la invención se puede usar como un medicamento, en particular para el tratamiento y/o la prevención de todas las formas de diabetes y enfermedades relacionadas, tales como trastornos de la alimentación, 40 enfermedades cardiovasculares, enfermedades gastrointestinales, complicaciones diabéticas, enfermedad crítica y/o síndrome de ovario poliquístico; y/o para mejorar los parámetros de lípidos, mejorar la función de las células β y/o para retrasar o prevenir la progresión de una enfermedad diabética.
Los derivados de la invención son biológicamente activos. En particular, son agonistas completos del receptor de GLP-1, tal y como se refleja por su capacidad para unirse al receptor de GLP-1 a una concentración relativamente baja, combinada con la capacidad para activar el receptor. Además, o alternativamente, tienen un perfil farmacociné-tico de acción prolongada. Además, o alternativamente, tienen una biodisponibilidad oral elevada. Además, o alter-nativamente, tienen una solubilidad acuosa y/o tasa de disolución elevada. 5
Estas propiedades tienen importancia en el desarrollo de compuestos de GLP-1 de nueva generación para una ad-ministración subcutánea, intravenosa y/u oral.
DESCRIPCIÓN
En lo que sigue, las letras griegas pueden estar representadas por su símbolo o el nombre escrito correspondiente, por ejemplo: α = alfa; β = beta; ε = épsilon; γ = gamma; ω = omega; etc. Además, la letra griega μ puede estar repre-10 sentada por "u", por ejemplo, en μl = ul, o en μM = uM.
Un asterisco (*) en una fórmula química designa i) un punto de fijación, ii) un radical y/o iii) un electrón no comparti-do.
La invención se refiere a un derivado de un péptido GLP-1, cuyo péptido tiene solo dos residuos de Lys, a saber, un primer y un segundo residuo de Lys, y un máximo de ocho cambios de aminoácidos en comparación con GLP-1 (7- 15 37) (SEQ ID NO: 3), cuyo derivado comprende dos restos de acción prolongada fijados al grupo amino épsilon de dicho primer y segundo residuo de Lys, respectivamente, a través de un enlazador, en donde el resto de acción prolongada se selecciona entre Chem. 15: HOOC-(CH2)x-CO-* y Chem. 16: HOOC-C6H4-O-(CH2)y-CO-*, en donde x es un número entero en el intervalo de 10-16, e y es un número entero en el intervalo de 8-12; y el enlazador com-prende un primer elemento enlazador, Chem. 1: 20
o una sal, una amida o un éster del mismo farmacéuticamente aceptable.
En una realización particular, Chem. 1 representa un dirradical del aminoácido serina (Ser).
En una realización particular adicional, el enlazador comprende además un segundo o un tercer elemento enlazador, Chem. 2 o Chem. 3, respectivamente: 25
Chem. 2 representa un dirradical del aminoácido glicina (Gly), y Chem. 3 un dirradical del aminoácido alanina (Ala).
En una realización aún más particular, el enlazador comprende además un cuarto elemento enlazador, Chem. 5:
en donde Chem. 5 representa un dirradical del aminoácido ácido gamma glutámico (resumido, gamma-Glu o gGlu).
En una realización adicional más, el enlazador comprende además un quinto elemento enlazador, Chem. 12: *-NH-(CH2)4-CH(NH2)-CO-*, que representa un dirradical del aminoácido épsilon-Lys, resumido eps-Lys.
Lo siguiente son ejemplos no limitantes de enlazadores para uso en el derivado de la invención, en donde Glu se 5 refiere a gamma-Glu y Lys a épsilon-Lys:
Por lo tanto, por ejemplo, SEQ ID NO: 9 se refiere a la siguiente secuencia (y, alternativamente, se puede escribir del modo siguiente): gGlu-Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly-eps-Lys. Lo mismo se aplica viceversa a las otras secuencias de la presente memoria, es decir, a cada una de SEQ ID NO: 2 y 6-13. 10
Péptidos GLP-1 y análogos
El término "péptido GLP-1", tal y como se emplea en esta memoria se refiere al péptido humano similar al glucagón de tipo 1 (GLP-1 (7-37)), cuya secuencia se incluye en la lista de secuencias como SEQ ID NO: 3, o un análogo del mismo, un análogo de GLP-1.
El péptido que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 3 también se puede designar GLP-1 natural. La expresión "análogo 15 de GLP-1" o "análogo de GLP-1", tal y como se emplea en esta memoria, se refiere a un péptido, o a un compuesto, que es una variante de GLP-1 humano natural (SEQ ID NO: 3).
En la lista de secuencias, al primer residuo de aminoácido de SEQ ID NO: 3 (histidina) se le asigna el nº 1. Sin em-bargo, en lo sucesivo - de acuerdo con la práctica establecida en la técnica - este residuo de histidina se conoce como nº 7, y los residuos de aminoácidos posteriores se numeran en consecuencia, terminando con glicina nº 37. 20 Por lo tanto, en general, cualquier referencia en este documento a un número de residuo de aminoácido o a un nú-mero de posición de la secuencia de GLP-1 (7-37), es para la secuencia que comienza con His en la posición 7 y termina con Gly en la posición 37.
Los análogos de GLP-1 de los derivados de la invención se pueden describir haciendo referencia a i) el número del residuo de aminoácido en GLP-1 natural (7-37) que se corresponde con el residuo de aminoácido que se cambia (es 25 decir, la posición correspondiente en GLP-1 natural), y a ii) el cambio real.
Un análogo de GLP-1 del derivado de la invención comprende al menos dos residuos de Lys. Por ejemplo, puede comprender un primer residuo de lisina en una posición correspondiente a la posición 18 de GLP-1 (7-37). Si la se-cuencia de aminoácidos de este análogo es, por lo demás, idéntica a la de GLP-1 natural, este análogo se puede designar K18-GLP-1(7-37). En consecuencia, esta designación representa la secuencia de aminoácidos de GLP-1 30 natural, en donde la serina en la posición 18 se ha sustituido por lisina. Como una observación adicional, este análo-go comprende un segundo residuo de Lys en la posición 26, y un tercer residuo de Lys en la posición 34 (concreta-mente, las lisinas naturales de GLP-1(7-37)).
Como otro ejemplo, el análogo que comprende un primer residuo de Lys en la posición 18, también puede compren-der una lisina en una o varias otras posiciones, por ejemplo, un residuo de Lys adicional en la posición 31. Un análo-35 go de este tipo se designaría K18,K31-GLP-1(7-37), siempre que, a excepción de las sustituciones K18 y K31, su se-cuencia de aminoácidos fuera idéntica a la de GLP-1 natural.
El análogo de GLP-1 que forma parte del derivado de la invención comprende, preferiblemente tiene, un máximo de ocho cambios de aminoácidos cuando se compara con GLP-1 natural (SEQ ID NO: 3) - en otras palabras, se trata de un péptido GLP-1 en el que se ha cambiado una serie de residuos de aminoácidos en comparación con GLP-1(7-40 37) natural (SEQ ID NO: 3). Estos cambios pueden representar, independientemente, una o varias sustituciones,
adiciones y/o deleciones de aminoácidos.
Lo siguiente son ejemplos no limitantes de una nomenclatura apropiada del análogo.
Por ejemplo, el análogo [Aib8,Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37) designa un péptido GLP-1(7-37) que, en comparación con GLP-1 natural, ha cambiado por las siguientes sustituciones: sustitución de alanina en la posición 8 por Aib (ácido α-aminoisobutírico), de serina en la posición 18 por lisina, de glicina en la posición 22 por 5 ácido glutámico, de alanina en la posición 25 por valina, de lisina en la posición 26 por arginina, de triptófano en la posición 31 por lisina y de lisina en la posición 34 por arginina. Este análogo también se puede denominar breve-mente (8Aib, 18K, 22E, 25V, 26R, 31K, 34R), en donde está implícita una referencia a GLP-1 (7-37).
Como otro ejemplo, el análogo [Arg34,Lys37,Glu38]-GLP-1(7-37) designa un péptido GLP-1 (7-37) que en compara-ción con GLP-1 natural, ha cambiado por la sustitución de lisina en la posición 34 por arginina, la sustitución de glici-10 na en la posición 37 por lisina y la adición de ácido glutámico en el extremo C-terminal. Este análogo también se puede denominar brevemente (34R, 37K, 38E), en donde está implícita una referencia a GLP-1 (7-37).
Como un ejemplo adicional, un análogo que comprende Aib8 se refiere a un péptido GLP-1 (7-37) que, en compara-ción con GLP-1 natural, comprende una sustitución de alanina en la posición 8 por ácido α-aminoisobutírico (Aib). Este análogo puede comprender más cambios en comparación con SEQ ID NO: 3. 15
Como se desprende de los ejemplos anteriores, los residuos de aminoácidos se pueden identificar por su nombre completo, su código de una letra y/o su código de tres letras. Estas tres formas son totalmente equivalentes.
Las expresiones "una posición equivalente a" o "posición correspondiente" se pueden utilizar para caracterizar el sitio del cambio en una secuencia de GLP-1, haciendo referencia a GLP-1 (7-37) natural (SEQ ID NO: 3). Las posi-ciones equivalentes o correspondientes se deducen fácilmente, por ejemplo, simplemente por la escritura a mano y 20 la inspección visual; y/o se puede emplear un programa convencional de alineamiento de proteínas o péptidos, tal como "align", que es un alineamiento de Needleman-Wunsch. El algoritmo se describe en Needleman, S.B. y Wunsch, C.D., (1970), Journal of Molecular Biology, 48: 443-453, y el programa align de Myers y W. Miller en "Opti-mal Alignments in Linear Space" CABIOS (computer applications in the biosciences) (1988) 4:11-17. Para el alinea-miento, se puede utilizar la matriz de puntuación por defecto BLOSUM62 y la matriz de identidad por defecto, y la 25 penalización por el primer residuo en un hueco se puede fijar en -10 (menos 10) y las penalizaciones por residuos adicionales en un hueco en -0,5 (menos 0,5).
A continuación se ha insertado un ejemplo de un alineamiento de este tipo, en donde Sequence_1 es SEQ ID NO: 3, y Sequence_2 es el análogo (34R, 37K, 38E) de la misma:
nº 1: Sequence_1 30
nº 2: Sequence_2
nº de matriz: EBLOSUM62
nº de penalizaciones por hueco: 10,0
nº de penalización por extensión: 0,5
nº de longitud: 32 35
nº de identidad: 29/32 (90,6%)
nº de similitud: 30/32 (93,8%)
nº de huecos: 1/32 (3,1%)
nº de puntuación: 150,0
nº ======================================= 40
En el caso de incluir en la secuencia, aminoácidos no naturales tales como Imp y/o Aib, se pueden sustituir por X, para los fines del alineamiento. Si se desea, X se puede corregir manualmente más tarde.
El término "péptido", tal como se utiliza, por ejemplo, en el contexto de enlazadores, así como de análogos de GLP-1 de los derivados de la invención, se refiere a un compuesto que comprende una serie de aminoácidos conectados 45
entre sí por enlaces amida (o péptido). Los enlazadores peptídicos comprenden al menos tres aminoácidos. Los péptidos GLP-1 comprenden al menos 10, preferiblemente al menos 15, más preferiblemente al menos 20, incluso más preferiblemente al menos 25 o lo más preferiblemente al menos 27 aminoácidos.
En realizaciones particulares, el péptido GLP-1 está compuesto por al menos 28, al menos 29, al menos 30, al me-nos 31 o al menos 32 aminoácidos. 5
En una realización aún más particular, el péptido consiste en aminoácidos interconectados por enlaces peptídicos.
Los aminoácidos son moléculas que contienen un grupo amina y un grupo ácido carboxílico y, opcionalmente, uno o varios grupos adicionales, denominados frecuentemente la cadena lateral del aminoácido.
El término "aminoácido" incluye aminoácidos proteogénicos (codificados por el código genético, que incluyen ami-noácidos naturales y aminoácidos convencionales), así como no proteogénicos (no se encuentran en las proteínas 10 y/o no están codificados por el código genético convencional) y aminoácidos sintéticos. Por lo tanto, los aminoácidos se pueden seleccionar a partir del grupo de aminoácidos proteinógenos, aminoácidos no proteinógenos y/o aminoá-cidos sintéticos.
Ejemplos no limitantes de aminoácidos que no están codificados por el código genético son gamma-carboxiglutamato, ornitina y fosfoserina. Ejemplos no limitantes de aminoácidos sintéticos son los isómeros D de 15 aminoácidos tales como D-alanina y D-leucina, Aib (ácido α-aminoisobutírico), β-alanina, y des-amino-histidina (desH, nombre alternativo ácido imidazopropiónico, abreviado Imp).
En lo que sigue, para cada aminoácido del péptido GLP-1 en el que no se indica el isómero óptico, se entiende que es el isómero L (a menos que se especifique lo contrario).
Los elementos de aminoácidos del enlazador (excepto Gly) pueden existir en cualquiera de las dos formas isómeras 20 ópticas. Por lo tanto, cada uno de Chem. 1 (Ser), Chem. 5 (gGlu), Chem. 7 (Ala) y/o Chem. 12 (eps-Lys) puede re-presentar la forma D, la forma L o una mezcla de las mismas (D/L). En una realización particular, cada uno de ellos es el isómero L. En otra realización particular, cada uno de ellos es el isómero D. En una realización particular adi-cional, cada uno de ellos es una mezcla de los isómeros D y L. En otras realizaciones adicionales particulares, i) al menos uno, preferentemente cada uno, de los residuos de Ser del enlazador está en la forma L; ii) al menos uno, 25 preferentemente cada uno, de los residuos de Ala del enlazador está en la forma L, iii) al menos uno, preferentemen-te cada uno, de los residuos de gGlu del enlazador está en la forma L; y/o iii) al menos uno, preferentemente cada uno, de los residuos de eps-Lys del enlazador está en la forma L.
Como es bien sabido, la convención L y D se refiere a la actividad óptica del isómero de gliceraldehído a partir de la cual se puede sintetizar el aminoácido en cuestión. Alternativamente, la nomenclatura (S) y (R) se puede utilizar 30 para definir la estereoquímica. Para los presentes fines, la designación L se corresponde a la designación (S) y la designación D a la designación (R).
Los derivados y análogos de GLP-1 de la invención tienen actividad de GLP-1. Este término se refiere a la capaci-dad para unirse al receptor de GLP-1 e iniciar una vía de transducción de señales que da como resultado la acción insulinotrópica u otros efectos fisiológicos, tal como se conoce en la técnica. Por ejemplo, los análogos y los deriva-35 dos de la invención se pueden someter a ensayo para estudiar la actividad de GLP-1 usando uno o varios de los ensayos descritos en los Ejemplos 32-33 de este documento. El ensayo de unión al receptor de GLP-1 descrito en el Ejemplo 34 en el presente documento, también se puede usar como una medida de la actividad de GLP-1.
Derivados de GLP-1
El término "derivado", tal y como se usa en el presente documento en el contexto de un péptido GLP-1 o un análogo, 40 significa un péptido GLP-1 o un análogo modificado químicamente, en el que uno o varios sustituyentes se han fijado covalentemente al péptido. El sustituyente también se puede denominar una cadena lateral.
En una realización particular, la cadena lateral es capaz de formar agregados no covalentes con albúmina, favore-ciendo con ello la circulación del derivado con la corriente sanguínea, y también tiene el efecto de prolongar el tiem-po de acción del derivado, debido al hecho de que el agregado del derivado de GLP-1 y la albúmina se desintegran 45 lentamente para liberar el principio activo farmacéutico. Por lo tanto, el sustituyente o la cadena lateral, como un todo, se puede denominar un resto que se une a albúmina.
En otra realización particular, el resto que se une a albúmina comprende una porción que es particularmente rele-vante para la unión a la albúmina y, por lo tanto, la acción retardada, dicha porción en consecuencia se puede de-nominar un resto de acción prolongada. El resto de acción prolongada puede estar en, o cerca de, el extremo opues-50 to del resto que se une a albúmina, con respecto a su punto de fijación al péptido.
En una realización aún más particular, el resto que se une a albúmina comprende una porción entre el resto de ac-ción prolongada y el punto de fijación al péptido, dicha porción se puede denominar un enlazador, un resto enlaza-dor, un espaciador o similares.
En realizaciones particulares, el resto de acción prolongada es lipofílico y/o está cargado negativamente a pH fisio-lógico (7,4).
El resto que se une a albúmina, el resto de acción prolongada o el enlazador pueden estar fijados covalentemente a un residuo de lisina del péptido GLP-1 mediante acilación.
En una realización preferida, un éster activo del resto que se une a albúmina, que comprende preferiblemente un 5 resto de acción prolongada y un enlazador, se une covalentemente a un grupo amino de un residuo de lisina, prefe-riblemente el grupo amino épsilon de la misma, con formación de un enlace amida (este proceso se conoce como acilación).
A menos que se indique lo contrario, cuando se hace referencia a una acilación de un residuo de lisina, se entiende que es el grupo amino épsilon de la misma. 10
Un derivado que tiene dos restos de acción prolongada fijados a un primer y segundo residuo de K (por ejemplo, a K18 y K31) a través de un enlazador, se puede denominar un derivado que se ha acilado dos veces, doblemente acilado o acilado dualmente en los grupos amino épsilon del primer y el segundo residuo de lisina, por ejemplo, en la posición 18 y 31, respectivamente, del péptido GLP-1.
Para los presentes fines, las expresiones "resto que se une a albúmina", "resto de acción prolongada" y "enlazador" 15 incluyen la molécula en sí, así como radicales de la misma. Si se refiere a una u otra forma se entiende claramente por el contexto en el que se utiliza la expresión. En una realización preferida, estas expresiones se refieren a radica-les. Los radicales son preferiblemente adecuados para formar uno o varios enlaces amida, es decir, con uno o dos electrones no compartidos (*) en relación con un grupo carbonilo y/o un grupo amino. Ejemplos de tales radicales son Chem. 1-Chem. 12, así como Chem. 15-16, cuyas estructuras se muestran a continuación. 20
En un aspecto de la invención, cada uno de los dos restos de acción prolongada comprende, o consiste en, un resto de acción prolongada seleccionado independientemente entre Chem. 15 y Chem. 16:
Chem. 15: HOOC-(CH2)x-CO-*
Chem. 16: HOOC-C6H4-O-(CH2)y-CO-*,
en donde x es un número entero en el intervalo de 10-16, e y es un número entero en el intervalo de 8-12. 25
En una realización, *-(CH2)x-* se refiere a alquileno lineal.
En otra realización, *-(CH2)y-* se refiere a alquileno lineal.
La nomenclatura es como es habitual en la técnica, por ejemplo, en las fórmulas anteriores *-COOH se refiere a carboxi, *-C6H4-* a fenileno y *-CO-* a carbonilo (O=C<**). En una realización particular, el radical fenoxi aromático es, independientemente, para. 30
En una realización particular, los dos restos que se unen a albúmina (es decir, la totalidad de las cadenas laterales) son similares, preferiblemente sustancialmente idénticos o, lo más preferiblemente, idénticos.
En otra realización particular, los dos restos de acción prolongada son similares, preferiblemente sustancialmente idénticos o, lo más preferiblemente, idénticos.
En una realización aún más particular, los dos enlazadores son similares, preferiblemente sustancialmente idénticos 35 o, lo más preferiblemente, idénticos.
La expresión "sustancialmente idéntico" incluye diferencias en la identidad que son debidas a la formación de una o más sales, ésteres y/o amidas; preferiblemente, la formación de una o más sales, ésteres metílicos y amidas sim-ples; más preferiblemente, la formación de no más de dos sales, ésteres metílicos y/o amidas simples; incluso más preferiblemente, la formación de no más de una sal, éster metílico y/o amida simple; o lo más preferiblemente, la 40 formación de no más de una sal.
En el contexto de compuestos químicos tales como restos que se unen a albúmina, restos de acción prolongada y enlazadores, la similitud y/o la identidad se puede determinar usando cualquier programa de ordenador y/o algoritmo adecuado, conocido en la técnica.
Por ejemplo, la similitud de dos restos de acción prolongada, dos enlazadores y/o dos cadenas laterales completas 45 se puede determinar adecuadamente usando huellas moleculares. La huella es un método matemático para repre-sentar una estructura química (véase, por ejemplo, Chemoinformatics: A textbook, Johann Gasteiger y Thomas En-gel (compiladores), Wiley-VCH Verlag, 2003).
Ejemplos de huellas adecuadas incluyen, sin limitación, las huellas UNITY, las huellas MDL y/o las huellas ECFP, tales como las huellas ECFP_6 (ECFP significa huellas con conectividad extendida, del inglés “extended-connectivity 50
fingerprints”).
La similitud de dos enlazadores de la invención también se puede determinar usando programas de alineamiento de péptidos, conocidos en la técnica, tales como "align", al que se ha hecho referencia anteriormente.
En realizaciones particulares, los dos restos de acción prolongada, los dos enlazadores y/o las dos cadenas latera-les completas se representan como a) huellas ECFP_6; b) huellas UNITY; y/o c) huellas MDL. 5
El coeficiente de Tanimoto se utiliza preferiblemente para el cálculo de la similitud de las dos huellas, según se em-plee a), b) o c).
En realizaciones particulares, si se emplea a), b) o c), los dos restos de acción prolongada, los dos enlazadores y/o las dos cadenas laterales completas, respectivamente, tienen una similitud de al menos 0,5 (50%); preferiblemente de al menos 0,6 (60%); más preferiblemente de al menos 0,7 (70%), o de al menos 0,8 (80%); incluso más preferi-10 blemente de al menos 0,9 (90%); o lo más preferiblemente de al menos 0,99 (99%), tal como una similitud de 1,0 (100%).
Las huellas UNITY se pueden calcular utilizando el programa de SYBYL (disponible en Tripos, 1699 South Hanley Road, St. Louis, MO 63144-2319 EE.UU.). Las huellas ECFP_6 y MDL se pueden calcular usando el programa Pipe-line Pilot (disponible en Accelrys Inc., 10188 Telesis Court, Suite 100, San Diego, CA 92121, EE.UU.). 15
Para más detalles, véase por ejemplo, J. Chem. Inf. Model. 2008, 48, 542-549; J. Chem. Inf. Comput. Sci. 2004, 44, 170-178; J. Med. Chem. 2004, 47, 2743-2749; J. Chem. Inf. Model. 2010, 50, 742-754; así como SciTegic Pipeline Pilot Chemistry Collection: Basic Chemistry User Guide, Marzo 2008, SciTegic Pipeline Pilot Data Modeling Collec-tion, 2008 - ambas de Accelrys Software Inc., San Diego EE.UU. y las guías http://www.tripos.com/tripos_resources/fileroot/pdfs/Unity_111408.pdf y 20 http://www.tripos.com/data/SYBYL/SYBYL_072505.pdf.
Se hace referencia al documento WO 2011/080103 en el que en la pág. 15 se incorpora un ejemplo de un cálculo de similitud en donde se compara una cadena lateral específica con un éster metílico de la misma.
En realizaciones particulares, dos enlazadores de la invención son al menos 90% idénticos, preferiblemente al me-nos 94% idénticos, más preferiblemente al menos 96% idénticos, aún más preferiblemente al menos 98% idénticos o 25 lo más preferiblemente al menos 99% idénticos.
En realizaciones alternativas, los dos enlazadores son al menos 50% idénticos, preferiblemente al menos 60% idén-ticos, más preferiblemente al menos 70% idénticos o lo más preferiblemente al menos 80% idénticos, en donde el programa "align" se utiliza con la configuración que se ha descrito anteriormente.
En el caso de dos cadenas laterales idénticas (restos que se unen a albúmina) se puede decir que el derivado es 30 simétrico.
En una realización particular, el enlazador utilizado en el derivado de la invención comprende los aminoácidos Ser y Gly. En una realización, el enlazador comprende el motivo tripéptido Ser-Ser-Gly. El motivo se puede repetir, por ejemplo, dos veces. Por lo tanto, en otra realización, el enlazador comprende el motivo hexa-péptido Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly (SEQ ID NO: 1). 35
El enlazador puede comprender además gGlu, es decir, por ejemplo, el motivo hepta-péptido gGlu-Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly (SEQ ID NO: 2).
En una realización particular, gGlu tiene la estructura de Chem. 5:
Este elemento enlazador también se puede denominar gamma-Glu, o brevemente gGlu, debido al hecho de que el 40 grupo carboxi gamma del aminoácido ácido glutámico es el que se utiliza ahí para la conexión con el extremo N-terminal de, por ejemplo, el elemento enlazador Ser, o con el grupo amino épsilon de lisina, etc., sea cual sea el caso.
Los derivados de la invención pueden existir en diferentes formas estereoisómeras que tienen la misma fórmula molecular y secuencia de átomos unidos, pero que difieren solo en la orientación tridimensional de sus átomos en el 45 espacio. La estereoisomería de los derivados ejemplificados de la invención se indica en la sección experimental, en
los nombres así como en las estructuras, usando la nomenclatura convencional. Salvo que se indique lo contrario, la invención se refiere a todas las formas estereoisómeras del derivado reivindicado.
La concentración en plasma de los derivados de GLP-1 de la invención se puede determinar utilizando cualquier método adecuado. Por ejemplo, se puede utilizar LC-MS (cromatografía líquida con espectroscopia de masas) o inmunoensayos, tales como RIA (“Radio Immuno Assay”), ELISA (“Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay”) y LOCI 5 (“Luminescence Oxygen Channeling Immunoasssay”). Los protocolos generales para los ensayos de RIA y ELISA adecuados se encuentran, por ejemplo, en el documento WO09/030738, en las págs. 116-118.
Sal, amida o éster farmacéuticamente aceptable
Los péptidos y derivados de la invención pueden estar en forma de una sal, una amida o un éster farmacéuticamen-te aceptable. 10
Las sales se forman, por ejemplo, mediante una reacción química entre una base y un ácido, por ejemplo: 2 NH3 + H2SO4 → (NH4)2SO4.
La sal puede ser una sal básica, una sal de ácido o puede no ser ninguna de las dos (es decir, una sal neutra). Las sales básicas producen iones de hidróxido y las sales ácidas iones de hidronio en agua.
Las sales se pueden formar con cationes o aniones añadidos que reaccionan con grupos aniónicos o catiónicos, 15 respectivamente. Estos grupos pueden estar situados en el resto del péptido y/o en la cadena lateral de los deriva-dos de la invención.
Ejemplos no limitantes de grupos aniónicos de los derivados de la invención incluyen grupos carboxílicos libres en la cadena lateral, en su caso, así como en el resto del péptido. El resto del péptido incluye frecuentemente un grupo de ácido carboxílico libre en el extremo C-terminal, y también puede incluir grupos carboxílicos libres en residuos de 20 aminoácidos ácidos internos, tales como Asp y Glu.
Ejemplos no limitantes de grupos catiónicos en el resto del péptido incluyen el grupo amino libre en el extremo N-terminal, si está presente, así como cualquier grupo amino libre de residuos de aminoácidos básicos internos, tales como His, Arg y Lys.
El éster, por ejemplo, puede estar formado por la reacción de un grupo ácido carboxílico libre con un alcohol o un 25 fenol, lo que conduce a la sustitución de al menos un grupo hidroxilo por un grupo alcoxi o ariloxi
La formación del éster puede implicar el grupo carboxílico libre en el extremo C-terminal del péptido y/o cualquier grupo carboxílico libre en la cadena lateral.
La amida de los derivados de la invención, por ejemplo, puede estar formada por la reacción de una forma activada de un grupo ácido carboxílico libre con una amina o una amina sustituida, o por la reacción de un grupo amino libre o 30 sustituido con una forma activada de un ácido carboxílico.
La formación de amidas puede implicar al grupo carboxílico libre en el extremo C-terminal del péptido, cualquier grupo carboxílico libre en la cadena lateral, el grupo amino libre en el extremo N-terminal del péptido y/o cualquier grupo amino libre o sustituido del péptido en el péptido y/o en la cadena lateral.
En una realización particular, el péptido o el derivado se encuentra en forma de una sal farmacéuticamente acepta-35 ble. En otra realización particular, el derivado está en forma de una amida farmacéuticamente aceptable, preferible-mente con un grupo amida en el extremo C-terminal del péptido. En una realización aún más particular, el péptido o el derivado está en forma de un éster farmacéuticamente aceptable.
Propiedades funcionales
En un primer aspecto, los derivados de la invención tienen una potencia muy buena. Además, o alternativamente, en 40 un segundo aspecto, se unen muy bien al receptor de GLP-1 a una concentración baja de albúmina. Preferiblemente son agonistas completos de los receptores de GLP-1, como se refleja por su capacidad para unirse fuertemente al receptor de GLP-1, en combinación con la capacidad para activar el receptor. Además, o alternativamente, en un tercer aspecto, tienen un perfil farmacocinético de acción prolongada. Además, o alternativamente, en un cuarto aspecto, tienen una biodisponibilidad oral elevada. Además, o alternativamente, en un quinto aspecto, tienen una 45 solubilidad acuosa y/o tasa de disolución elevada.
Actividad biológica (potencia)
De acuerdo con el primer aspecto, los derivados de la invención son biológicamente activos o potentes. De hecho, los derivados de la invención tienen una potencia sorprendente buena. Esto es así en particular cuando se compa-ran con el compuesto comparativo respectivo, considerado hasta ahora el mejor en su clase. Los compuestos com-50 parativos se describen en la parte experimental, en la sección titulada "Compuestos comparativos".
En una realización particular, la potencia y/o la actividad se refiere a la potencia in vitro, es decir, el rendimiento en un ensayo de receptor de GLP-1 funcional, más en particular, a la capacidad para activar el receptor de GLP-1 hu-mano.
La potencia in vitro, por ejemplo, se puede determinar en un medio que contiene membranas que expresan el recep-tor de GLP-1 humano y/o en un ensayo con células completas que expresan el receptor de GLP-1 humano. 5
Por ejemplo, las membranas plasmáticas purificadas a partir de una línea celular transfectada, estable que expresan el receptor de GLP-1 humano se pueden estimular con el análogo de GLP-1 o un derivado en cuestión, y medir la potencia de la producción de AMPc, por ejemplo, basándose en la competencia entre el AMPc formado endógena-mente y el AMPc marcado con biotina añadido de forma exógena, el cual se puede capturar utilizando un anticuerpo específico, por ejemplo, como se describe en el Ejemplo 32. 10
Además, o alternativamente, la respuesta del receptor de GLP-1 humano se puede medir en un ensayo de gen in-formador, por ejemplo, en una línea de células BHK transfectadas de forma estable que expresa el receptor de GLP-1 humano y contiene el ADN para el elemento de respuesta a AMPc (CRE) acoplado a un promotor y al gen de la luciferasa de luciérnaga (CRE luciferasa). Cuando el AMPc se produce como resultado de la activación del receptor de GLP-1, esto a su vez da como resultado que se exprese la luciferasa. La luciferasa se puede determinar median-15 te la adición de luciferina, que se convierte en oxiluciferina gracias a la enzima y produce bioluminiscencia, que se mide, y es una medida de la potencia in vitro. Un ejemplo no limitante de un ensayo de este tipo se describe en el Ejemplo 33.
La expresión, concentración efectiva media máxima (CE50) se refiere generalmente a la concentración que induce una respuesta que es la media entre el valor base y el máximo, haciendo referencia a la curva de respuesta frente a 20 la dosis. La CE50 se utiliza como una medida de la potencia de un compuesto y representa la concentración en la que se observa un 50% de su efecto máximo.
La potencia in vitro de los derivados de la invención se puede determinar como se ha descrito anteriormente, y se determina la CE50 del derivado en cuestión. Cuanto menor sea el valor de CE50, mejor será la potencia.
En una realización particular, el derivado de la invención tiene una potencia in vitro en el ensayo basado en mem-25 branas AlphaScreen que se corresponde a una CE50 de 500 pM o inferior, más preferiblemente menor de 400 pM, incluso más preferiblemente menor de 300 pM o lo más preferiblemente menor de 200 pM.
En una realización particular adicional, el derivado de la invención tiene una potencia in vitro en el ensayo de célula completa con CRE-luciferasa, correspondiente a una CE50 de 100 pM o inferior, preferiblemente menor de 75 pM, más preferiblemente menor de 50 pM, aún más preferiblemente menor de 25 pM o lo más preferiblemente menor de 30 10 pM.
En otra realización particular, los derivados de la invención son potentes in vivo, lo que se puede determinar como se conoce en la técnica, en cualquier modelo animal adecuado, así como en ensayos clínicos.
El ratón diabético db/db es un ejemplo de un modelo animal adecuado, y se puede determinar el efecto que dismi-nuye la glucosa en sangre, así como el efecto que disminuye el peso corporal en tales ratones in vivo, por ejemplo, 35 tal y como se describe en el Ejemplo 53 del documento WO 2011/080103.
Unión al receptor / albúmina baja
De acuerdo con el segundo aspecto, los derivados de la invención se unen muy bien con el receptor de GLP-1 a una concentración baja de albúmina. Esto se puede determinar tal y como se describe en el Ejemplo 34.
En general, la unión al receptor de GLP-1 a baja concentración de albúmina debe ser lo mejor posible, lo que co-40 rresponde a un valor bajo de concentración inhibidora media máxima (CI50).
A modo de ejemplo, en una realización particular de un derivado de la invención, la afinidad de la unión con el recep-tor de GLP-1 (CI50) en presencia de 0,001% de HSA (albúmina baja) es menor de 50 nM, preferiblemente menor de 20 nM, todavía más preferiblemente menor de 10 nM, aún más preferiblemente menor de 5,0 nM o lo más preferi-blemente menor de 1,0 nM. 45
Agonistas del receptor de GLP-1
Un agonista del receptor se puede definir como un análogo estructural que se une a un receptor y provoca una res-puesta típica del ligando natural. Un agonista completo se puede definir como uno que provoca una respuesta de la misma magnitud que el ligando natural (véase por ejemplo, "Principles of Biochemistry", AL Lehninger, DL Nelson, MM Cox, segunda edición, Worth Publishers, 1993, página 763). 50
En una realización particular, el derivado de la invención es un agonista del receptor de GLP-1 completo. Un agonis-ta del receptor de GLP-1 completo se puede definir, por ejemplo, como un análogo estructural de GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3) que (i) se une al receptor de GLP-1 con un valor de CI50 igual o inferior a 50 nM en un ensayo de afinidad
de la unión al receptor (tal como el del Ejemplo 34 en el presente documento); y (ii) activa el receptor con un valor de CE50 igual o inferior a 100 pM en un ensayo de gen informador (tal como el del Ejemplo 33 en el presente documen-to) y/o un valor de CE50 igual o inferior a 500 pM en un ensayo de AMPc (tal como el del Ejemplo 32 en el presente documento).
Acción prolongada - semivida in vivo en cerdos enanos 5
De acuerdo con el tercer aspecto, los derivados de la invención son de acción prolongada. En una realización parti-cular, la acción prolongada se puede determinar como la semivida terminal (T½) in vivo en cerdos enanos, después de la administración i.v., como se describe en el Ejemplo 54 del documento WO 2011/080103.
En una realización particular, el derivado de la invención tiene una semivida terminal (T½) después de la administra-ción i.v. en cerdos enanos de al menos 8 horas, preferiblemente de al menos 16 horas, más preferiblemente de al 10 menos 24 horas, incluso más preferiblemente de al menos 32 horas o lo más preferiblemente de al menos 40 horas.
En otras realizaciones adicionales particulares, el derivado de la invención tiene una semivida terminal (T½) después de la administración i.v. en cerdos enanos de al menos 50 horas, preferiblemente de al menos 55 horas, más prefe-riblemente de al menos 60 horas, aún más preferiblemente de al menos 65 horas o lo más preferiblemente de al menos 70 horas. 15
En otras realizaciones adicionales particulares, el derivado de la invención tiene una semivida terminal (T½) después de la administración i.v. en cerdos enanos de al menos 75 horas, preferiblemente de al menos 80 horas o lo más preferiblemente de al menos 85 horas.
Los derivados de acción prolongada de la invención, preferiblemente también tienen una potencia muy buena, como se define en realizaciones particulares y realizaciones particulares adicionales incluidas a continuación. 20
Los derivados de acción prolongada de la invención preferiblemente también tienen una unión muy buena al recep-tor de GLP-1, tal como se define en realizaciones particulares y realizaciones particulares adicionales incluidas a continuación.
Biodisponibilidad oral
De acuerdo con el cuarto aspecto, los derivados de la invención tienen una biodisponibilidad oral elevada. 25
La biodisponibilidad oral de los derivados comerciales de GLP-1 es muy baja. La biodisponibilidad oral de los deriva-dos de GLP-1 en desarrollo para administración i.v. o s.c. también es baja.
Por consiguiente, existe una necesidad en la técnica de derivados de GLP-1 de (con) una biodisponibilidad oral mejorada. Tales derivados podrían ser candidatos adecuados para la administración oral, siempre que su potencia sea principalmente en general satisfactoria y/o siempre que su semivida sea también en general satisfactoria. 30
Generalmente, el término biodisponibilidad se refiere a la fracción de una dosis administrada de un principio activo farmacéutico (API), tal como un derivado de la invención que llega a la circulación sistémica inalterado. Por defini-ción, cuando se administra un API por vía intravenosa, su biodisponibilidad es del 100%. Sin embargo, cuando se administra a través de otras vías (por ejemplo, por vía oral), su biodisponibilidad disminuye (debido a la degradación y/o absorción incompleta y al metabolismo de primer paso). Un conocimiento sobre la biodisponibilidad es importan-35 te en el cálculo de las dosificaciones para las rutas de administración no intravenosas.
Una concentración de API plasmático frente a un gráfico del tiempo, se realiza después de una administración tanto oral como intravenosa. La biodisponibilidad absoluta (F) es la (AUC-oral dividida por la dosis), dividida por la (AUC-intravenosa dividida por la dosis).
En una realización particular, el derivado de la invención tiene una biodisponibilidad oral absoluta que es más eleva-40 da que la de liraglutida y/o que la de semaglutida, preferiblemente al menos 10% superior, más preferiblemente al menos 20% superior, incluso más preferiblemente al menos 30% superior o lo más preferiblemente al menos 40% superior. En realizaciones particulares adicionales, tiene una biodisponibilidad oral absoluta que es al menos 1,5 veces la de liraglutida y/o la de semaglutida, preferiblemente al menos 2,0 veces, más preferiblemente al menos 3,0 veces, incluso más preferiblemente al menos 4,0 veces o lo más preferiblemente al menos 5,0 veces la de liraglutida 45 y/o la de semaglutida.
Antes de someter a ensayo la biodisponibilidad oral, los derivados de la invención se pueden formular conveniente-mente como se conoce en la técnica de formulaciones orales de compuestos insulinotrópicos, por ejemplo, utilizando una cualquiera o varias de las formulaciones descritas en el documento WO 2008/145728.
La biodisponibilidad oral, por ejemplo, se puede estimar en una inyección en el intestino de rata y/o en un estudio de 50 alimentación forzada oral, en una formulación con SNAC, como se describe en el Ejemplo 40 del documento PCT/EP2012/056642.
Hidrosolubilidad
Una administración con una concentración elevada a través de la vía oral es difícil de lograr para varios productos farmacéuticos peptídicos. Esto se puede deber al menos en parte, a la baja solubilidad. En un quinto aspecto, los derivados de la invención tienen una solubilidad acuosa y/o tasa de disolución elevada. Esta es una de varias pro-piedades de importancia para la obtención de un producto oral, farmacéuticamente eficaz. En una realización parti-5 cular, los derivados de esta invención tienen una solubilidad acuosa mayor en comparación con la técnica anterior más próxima. Además, o alternativamente, tienen una disolución más rápida en tampones acuosos. La solubilidad absoluta de un péptido se puede medir usando diferentes métodos conocidos en la técnica, véase por ejemplo, J. Pharm. Sci., 2008, 4155-66. Para la medición de la disolución y/o solubilidad de péptidos a una escala de miligra-mos, se pueden emplear, por ejemplo, los instrumentos de Pion Instruments (www.pion-inc.com), tales como el 10 μDISS Profiler®, que es un instrumento versátil para medir la concentración en tiempo real con espectroscopia de fibra UV.
Unas realizaciones particulares adicionales de los derivados de la invención se describen en las secciones tituladas "realizaciones particulares" y "realizaciones particulares adicionales" antes de la sección experimental.
PROCESOS DE PRODUCCIÓN 15
La producción de péptidos del tipo GLP-1 (7-37) y análogos de GLP-1 es bien conocida en la técnica.
El resto de GLP-1 de los derivados de la invención, a saber, K18-GLP-1(7-37) o un análogo del mismo, se puede producir, por ejemplo, mediante una síntesis clásica de péptidos, por ejemplo, síntesis de péptidos en fase sólida utilizando técnicas químicas de t-Boc o Fmoc u otras técnicas bien establecidas, véase, por ejemplo, Greene y Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley & Sons, 1999, Florencio Zaragoza Dörwald, "Organic Synthe-20 sis on solid Phase", Wiley-VCH Verlag GmbH, 2000, y "Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis", Editado por W.C. Chan y P.D. White, Oxford University Press, 2000.
Además, o alternativamente, se pueden producir por métodos recombinantes, a saber, cultivando una célula hospe-dadora que contiene una secuencia de ADN que codifica el análogo y es capaz de expresar el péptido en un medio nutritivo adecuado, en condiciones que permiten la expresión del péptido. Ejemplos no limitantes de células hospe-25 dadoras adecuadas para la expresión de estos péptidos son: Escherichia coli, Saccharomyces cerevisiae, así como líneas celulares BHK o CHO de mamífero.
Los derivados de la invención que incluyen aminoácidos no naturales y/o un mimético monopéptido o dipéptido fijado covalentemente al extremo N-terminal, por ejemplo, se pueden producir como se describe en la parte experimental. O, véase, por ejemplo, Hodgson et al: "The synthesis of peptides and proteins containing non-natural amino acids", 30 Chemical Society Reviews, vol. 33, nº 7 (2004), págs. 422-430; y el documento WO 2009/083549 A1 titulado "Semi-recombinant preparation of GLP-1 analogues".
Ejemplos específicos de métodos de preparación de una serie de los derivados de la invención, se incluyen en la parte experimental.
COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS 35
Las composiciones farmacéuticas que comprenden un derivado de la invención o una sal, una amida o un éster del mismo farmacéuticamente aceptable, y un excipiente farmacéuticamente aceptable, se pueden preparar como se conoce en la técnica.
El término "excipiente" se refiere en sentido amplio a cualquier componente que no sea el o los principios activos terapéuticos. El excipiente puede ser una sustancia inerte, una sustancia inactiva y/o una sustancia que no sea acti-40 va medicinalmente.
El excipiente puede servir para varios fines, por ejemplo, como un portador, vehículo, diluyente, ayuda para la for-mación de comprimidos y/o para mejorar la administración y/o la absorción de la sustancia activa.
La formulación de ingredientes farmacéuticamente activos con diversos excipientes se conoce en la técnica, véase por ejemplo, Remington: The Science and Practice of Pharmacy (por ejemplo, edición 19ª (1995), y cualquier edición 45 posterior).
Ejemplos no limitantes de excipientes son: disolventes, diluyentes, tampones, conservantes, agentes reguladores de la tonicidad, agentes quelantes y estabilizadores.
Los ejemplos de formulaciones incluyen formulaciones líquidas, es decir, formulaciones acuosas, es decir, formula-ciones que comprenden agua. Una formulación líquida puede ser una solución o una suspensión. Una formulación 50 acuosa comprende típicamente al menos 50% p/p de agua, o al menos 60%, 70%, 80% o incluso al menos 90% p/p de agua.
Alternativamente, una composición farmacéutica puede ser una formulación sólida, por ejemplo, una composición
liofilizada o secada por pulverización, que se puede utilizar tal cual, o a la que el médico o el paciente añaden disol-ventes y/o diluyentes antes del uso.
El pH en una formulación acuosa puede tener cualquier valor entre pH 3 y pH 10, por ejemplo, desde aproximada-mente 7,0 a aproximadamente 9,5; o desde aproximadamente 3,0 a aproximadamente 7,0.
Una composición farmacéutica puede comprender un tampón. El tampón se puede seleccionar, por ejemplo, a partir 5 del grupo que consiste en acetato de sodio, carbonato de sodio, citrato, glicilglicina, histidina, glicina, lisina, arginina, dihidrógeno fosfato de sodio, hidrógeno fosfato disódico, fosfato sódico y tris(hidroximetil)-aminometano, bicina, tricina, ácido málico, succinato, ácido maleico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido aspártico y mezclas de los mis-mos.
Una composición farmacéutica puede comprender un conservante. El conservante se puede seleccionar, por ejem-10 plo, a partir del grupo que consiste en fenol, o-cresol, m-cresol, p-cresol, p-hidroxibenzoato de metilo, p-hidroxibenzoato de propilo, 2-fenoxietanol, p-hidroxibenzoato de butilo, 2-feniletanol, alcohol bencílico, clorobutanol, y tiomerosal, bronopol, ácido benzoico, imidurea, clorohexidina, deshidroacetato de sodio, clorocresol, p-hidroxibenzoato de etilo, cloruro de bencetonio, clorfenesina (3p-clorofenoxipropano-1,2-diol) y mezclas de los mis-mos. El conservante puede estar presente en una concentración de 0,1 mg/ml a 20 mg/ml. 15
Una composición farmacéutica puede comprender un agente isotónico. El agente isotónico se puede seleccionar, por ejemplo, a partir del grupo que consiste en una sal (por ejemplo, cloruro de sodio), un azúcar o alcohol de azú-car, un aminoácido (por ejemplo, glicina, histidina, arginina, lisina, isoleucina, ácido aspártico, triptófano, treonina), un alditol (por ejemplo, glicerol (glicerina), 1,2-propanodiol (propilenglicol), 1,3-propanodiol, 1,3-butanodiol) polieti-lenglicol (por ejemplo, PEG400) y mezclas de los mismos. Se puede utilizar cualquier azúcar tal como mono-, di- o 20 polisacáridos, o glucanos hidrosolubles, incluyendo por ejemplo, fructosa, glucosa, manosa, sorbosa, xilosa, malto-sa, lactosa, sacarosa, trehalosa, dextrano, pululano, dextrina, ciclodextrina, HPCD alfa y beta, almidón soluble, hi-droxietil almidón y carboximetilcelulosa-Na. Alcohol de azúcar se define como un hidrocarburo C4-C8 que tiene al menos un grupo -OH e incluye, por ejemplo, manitol, sorbitol, inositol, galactitol, dulcitol, xilitol y arabitol.
Una composición farmacéutica puede comprender un agente quelante. El agente quelante se puede seleccionar, por 25 ejemplo, a partir de sales de ácido etilendiaminotetraacético (EDTA), ácido cítrico y ácido aspártico, y mezclas de los mismos.
Una composición farmacéutica puede comprender un estabilizador. El estabilizador puede ser, por ejemplo, uno o varios inhibidores de la oxidación, inhibidores de la agregación, tensioactivos y/o uno o varios inhibidores de protea-sas. 30
La expresión "formación de agregados" se refiere a una interacción física entre las moléculas de polipéptido que da como resultado la formación de oligómeros, que pueden permanecer solubles, o grandes agregados visibles que precipitan en la solución. La formación de agregados a través de un polipéptido durante el almacenamiento de una composición farmacéutica líquida, puede afectar adversamente a la actividad biológica de ese polipéptido, dando como resultado la pérdida de eficacia terapéutica de la composición farmacéutica. Además, la formación de agrega-35 dos puede causar otros problemas, tales como el bloqueo de tubos, membranas o bombas, cuando la composición farmacéutica que contiene el polipéptido se administra utilizando un sistema de infusión.
Una composición farmacéutica puede comprender una cantidad de una base de aminoácidos suficiente para dismi-nuir la formación de agregados del péptido durante el almacenamiento de la composición. La expresión "base de aminoácidos" se refiere a uno o a varios aminoácidos (tales como metionina, histidina, imidazol, arginina, lisina, 40 isoleucina, ácido aspártico, triptófano, treonina), o análogos de los mismos. Cualquier aminoácido puede estar pre-sente, ya sea en su forma de base libre o en su forma de sal. Cualquier estereoisómero (es decir, L, D, o una mezcla de los mismos) de la base de aminoácidos puede estar presente.
La metionina (u otros aminoácidos sulfúricos o análogos de aminoácidos) se puede añadir para inhibir la oxidación de residuos de metionina a sulfóxido de metionina, cuando el péptido es un polipéptido que comprende al menos un 45 residuo de metionina susceptible a tal oxidación. Se puede emplear cualquier estereoisómero de metionina (L o D) o combinaciones de los mismos.
Una composición farmacéutica puede comprender un estabilizador seleccionado a partir del grupo de polímeros de peso molecular elevado o compuestos de peso molecular bajo. El estabilizador se puede seleccionar, por ejemplo, a partir de polietilenglicol (por ejemplo, PEG 3350), poli(alcohol vinílico) (PVA), polivinilpirrolidona, carbo-50 xi/hidroxicelulosa o derivados de los mismos (por ejemplo, HPC, HPC-SL, HPC-L y HPMC), ciclodextrinas, sustan-cias que contienen azufre tales como monotioglicerol, ácido tioglicólico y 2-metiltioetanol, y diferentes sales (por ejemplo, cloruro de sodio).
Una composición farmacéutica puede comprender agentes estabilizantes adicionales, tales como, pero no limitados a, metionina y EDTA, que protegen al polipéptido frente a la oxidación de metionina, y un tensioactivo no iónico, que 55 protege al polipéptido frente a la agregación asociada con la congelación-descongelación o el cizallamiento mecáni-co.
Una composición farmacéutica puede comprender uno o varios tensioactivos, por ejemplo, un tensioactivo, al menos un tensioactivo o dos tensioactivos diferentes. El término "tensioactivo" se refiere a cualquier molécula o ion que se compone de una parte soluble en agua (hidrófila), y una parte soluble en grasa (lipófila). El tensioactivo se puede seleccionar, por ejemplo, a partir del grupo que consiste en tensioactivos aniónicos, tensioactivos catiónicos, ten-sioactivos no iónicos y/o tensioactivos de ion híbrido. 5
Una composición farmacéutica puede comprender uno o varios inhibidores de proteasas, tales como, por ejemplo, EDTA (ácido etilendiaminotetraacético) y/o benzamidinaHCl.
Los ingredientes adicionales, opcionales de una composición farmacéutica incluyen, por ejemplo, agentes humec-tantes, emulsionantes, antioxidantes, agentes de carga, iones metálicos, vehículos oleaginosos, proteínas (por ejemplo, albúmina de suero humana, gelatina) y/o un ion híbrido (por ejemplo, un aminoácido tal como betaína, 10 taurina, arginina, glicina, lisina e histidina).
Aún más, una composición farmacéutica se puede formular tal y como se conoce en la técnica de formulaciones orales de compuestos insulinotrópicos, por ejemplo, utilizando una cualquiera o varias de las formulaciones descritas en el documento WO 2008/145728.
Una dosis administrada puede contener de 0,01 mg - 100 mg del derivado, o de 0,01-50 mg, o de 0,01-20 mg, o de 15 0,01 mg - 10 mg del derivado.
El derivado se puede administrar en forma de una composición farmacéutica. Se puede administrar a un paciente que lo requiere en varios sitios, por ejemplo, en sitios tópicos, tales como la piel o sitios de la mucosa; en sitios en los que se evita una absorción, tales como en una arteria, en una vena o en el corazón; y en sitios que implican una absorción, tales como en la piel, debajo la piel, en un músculo o en el abdomen. 20
La vía de administración puede ser, por ejemplo, lingual; sublingual; bucal; en la boca; oral; en el estómago; en el intestino; nasal; pulmonar, tal como a través de los bronquiolos, los alvéolos o una combinación de los mismos; parenteral, epidérmica; dérmica; transdérmica; conjuntival; uretral; vaginal; rectal; y/u ocular. En una realización particular, la vía de administración es por vía oral.
Una composición se puede administrar en varias formas de dosificación, por ejemplo, como una solución; una sus-25 pensión; una emulsión; una microemulsión; emulsiones múltiples; una espuma; un ungüento; una pasta; una tirita; una pomada; un comprimido; un comprimido recubierto; una goma de mascar; un enjuague; una cápsula, tal como cápsulas de gelatina dura o blanda; un supositorio; una cápsula rectal; gotas; un gel; una pulverización; un polvo; un aerosol; un inhalante; gotas para los ojos; una pomada oftálmica; un enjuague oftálmico; un pesario vaginal; un anillo vaginal; una pomada vaginal; una solución para inyección; una solución de transformación in situ, tal como en gelifi-30 cado, sedimentación y precipitación in situ, y cristalización in situ; una solución para infusión; o como un implante. Una composición se puede preparar además en un sistema portador de fármacos o de administración de fármacos, por ejemplo, con el fin de mejorar la estabilidad, la biodisponibilidad y/o la solubilidad. Una composición se puede fijar a dicho sistema a través de interacciones covalentes, hidrófobas y/o electrostáticas. Los fines de tal preparación pueden ser, por ejemplo, disminuir los efectos adversos, conseguir una cronoterapia y/o mejorar el cumplimiento del 35 paciente.
Una composición también se puede emplear en la formulación de sistemas de administración de fármacos de tipo controlada, sostenida, de acción retardada, retrasada y/o de liberación lenta.
La administración parenteral se puede realizar mediante una inyección subcutánea, intramuscular, intraperitoneal o intravenosa por medio de una jeringa, opcionalmente una jeringa de tipo pluma, o por medio de una bomba de infu-40 sión.
Una composición se puede administrar por vía nasal en forma de una solución, una suspensión o un polvo; o se puede administrar por vía pulmonar en forma de una pulverización líquida o en polvo.
La administración transdérmica es otra opción adicional, por ejemplo, mediante una inyección sin aguja, a partir de un parche tal como un parche iontoforético, o por medio de una vía transmucosal, por ejemplo, por vía bucal. 45
Una composición puede ser una formulación estabilizada. La expresión "formulación estabilizada" se refiere a una formulación con una estabilidad física y/o química incrementada, preferiblemente ambas. En general, una formula-ción debe ser estable durante el uso y el almacenamiento (de conformidad con el uso recomendado y las condicio-nes de almacenamiento) hasta que se alcanza la fecha de caducidad.
La expresión "estabilidad física" se refiere a la tendencia del polipéptido a formar agregados biológicamente inactivos 50 y/o insolubles, como resultado de una exposición al estrés termomecánico y/o una interacción con interfases y su-perficies desestabilizantes (tales como superficies hidrofóbicas). La estabilidad física de una formulación de polipép-tido acuoso se puede evaluar por medio de una inspección visual y/o por mediciones de la turbidez después de la exposición a un estrés mecánico/físico (por ejemplo, agitación) a diferentes temperaturas, durante diversos períodos de tiempo. Alternativamente, la estabilidad física se puede evaluar usando un agente espectroscópico o una sonda 55
del estado conformacional del polipéptido, tal como por ejemplo, tioflavina T o sondas de "parche hidrófobo".
La expresión "estabilidad química" se refiere a cambios químicos (en particular covalentes) en la estructura del poli-péptido, que conducen a la formación de productos de degradación química, que tienen potencialmente una poten-cia biológica reducida y/o un aumento del efecto inmunogénico en comparación con el polipéptido intacto. La estabi-lidad química se puede evaluar midiendo la cantidad de productos de degradación química en varios puntos de 5 tiempo, después de la exposición a diferentes condiciones ambientales, por ejemplo, mediante SEC-HPLC y/o RP-HPLC.
El tratamiento con un derivado de acuerdo con la presente invención también se puede combinar con una o varias sustancias farmacológicamente activas adicionales, por ejemplo, seleccionadas a partir de agentes antidiabéticos, agentes antiobesidad, agentes reguladores del apetito, agentes antihipertensores, agentes para el tratamiento y/o la 10 prevención de complicaciones resultantes o asociadas con la diabetes y agentes para el tratamiento y/o la preven-ción de complicaciones y trastornos resultantes o asociados con la obesidad. Ejemplos de estas sustancias farmaco-lógicamente activas son: insulina, sulfonilureas, biguanidas, meglitinidas, inhibidores de glucosidasa, antagonistas de glucagón, inhibidores de DPP-IV (dipeptidil peptidasa-IV), inhibidores de enzimas hepáticas implicadas en la estimulación de la gluconeogénesis y/o la glucogenolisis, moduladores de la captación de glucosa, compuestos que 15 modifican el metabolismo de los lípidos, tales como agentes antihiperlipidémicos como los inhibidores de HMG CoA reductasa (estatinas), polipéptidos inhibidores gástricos (análogos de GIP), compuestos que reducen la ingesta de alimento, agonistas de RXR y agentes que actúan sobre el canal de potasio dependiente de ATP de las células β; colestiramina, colestipol, clofibrato, gemfibrozil, lovastatina, pravastatina, simvastatina, probucol, dextrotiroxina, ne-teglinida, repaglinida; betabloqueantes tales como alprenolol, atenolol, timolol, pindolol, propranolol y metoprolol, 20 inhibidores de ACE (enzima convertidora de angiotensina) tales como benazepril, captopril, enalapril, fosinopril, lisinopril, alatriopril, quinapril y ramipril, bloqueantes de los canales de calcio tales como nifedipina, felodipina, nicar-dipina, isradipina, nimodipina, diltiazem y verapamil, y alfabloqueantes tales como doxazosina, urapidil, prazosina y terazosina; agonistas de CART (transcrito regulado por cocaína y anfetamina), antagonistas de NPY (neuropéptido Y), agonistas de PYY, agonistas del receptor Y2, agonistas del receptor Y4, agonistas del receptor mixto Y2/Y4, 25 agonistas de MC4 (melanocortina 4), antagonistas de orexina, agonistas de TNF (factor de necrosis tumoral), ago-nistas de CRF (factor liberador de corticotropina), antagonistas de CRF BP (proteína que se une al factor liberador de corticotropina), agonistas de urocortina, agonistas de β3, oxintomodulina y análogos, agonistas de MSH (hormo-na estimulante de melanocitos), antagonistas de MCH (hormona concentradora de melanocitos), agonistas de CCK (colecistoquinina), inhibidores de la recaptación de serotonina, inhibidores de la recaptación de serotonina y nora-30 drenalina, compuestos mixtos de serotonina y noradrenérgicos, agonistas de 5HT (serotonina), agonistas de bombe-sina, antagonistas de galanina, hormona de crecimiento, compuestos liberadores de la hormona del crecimiento, agonistas de TRH (hormona liberadora de tireotropina), moduladores de UCP 2 o 3 (proteína de desacoplamiento 2 o 3), agonistas de leptina, agonistas de DA (bromocriptina, doprexina), inhibidores de lipasa/amilasa, moduladores de RXR (receptor retinoide X), agonistas de TR β; antagonistas de histamina H3, agonistas o antagonistas del poli-35 péptido inhibidor gástrico (análogos de GIP), gastrina y agonistas de gastrina.
El tratamiento con un derivado de acuerdo con esta invención también se puede combinar con una cirugía que influ-ye en los niveles de glucosa y/o la homeostasis de lípidos, tal como la banda gástrica o derivación gástrica.
INDICACIONES FARMACÉUTICAS
La presente invención también se refiere a un derivado de la invención para uso como un medicamento. 40
El derivado de la invención se puede usar para los siguientes tratamientos médicos, todos relacionados con prefe-rencia de una manera u otra con la diabetes:
(i) prevención y/o tratamiento de todas las formas de diabetes, tales como hiperglucemia, diabetes de tipo 2, to-lerancia alterada a la glucosa, diabetes de tipo 1, diabetes no dependiente de insulina, MODY (diabetes de la edad madura que se presenta en el joven), diabetes gestacional y/o para la reducción de HbA1 C; 45
(ii) retraso o prevención de la progresión de una enfermedad diabética, tal como la progresión de la diabetes de tipo 2, retraso de la progresión de la tolerancia alterada a la glucosa (IGT) en diabetes de tipo 2 que requiere insulina, y/o retraso de la progresión de la diabetes de tipo 2 que no requiere insulina en diabetes de tipo 2 que requiere insulina;
(iii) mejora de la función de las células β, tal como disminuyendo la apoptosis de las células β, aumentando la 50 función de las células β y/o la masa de las células β y/o para restaurar la sensibilidad a la glucosa de las célu-las β;
(iv) prevención y/o tratamiento de trastornos cognitivos;
(v) prevención y/o tratamiento de trastornos de la alimentación, tales como la obesidad, por ejemplo, mediante la disminución de la ingesta de alimentos, reducción del peso corporal, supresión del apetito, inducción de sa-55 ciedad; tratamiento o prevención del trastorno por atracón, bulimia nerviosa y/o la obesidad inducida por la ad-ministración de un antipsicótico o un esteroide; reducción de la motilidad gástrica; y/o retraso del vaciado gás-
trico;
(vi) prevención y/o tratamiento de complicaciones diabéticas, tales como neuropatía, incluyendo neuropatía pe-riférica; nefropatía; o retinopatía;
(vii) mejora de los parámetros lipídicos, tal como prevención y/o tratamiento de la dislipidemia, reducción de los lípidos séricos totales; reducción de HDL; reducción de LDL pequeña y densa; reducción de VLDL: reducción 5 de los triglicéridos; reducción del colesterol; aumento de HDL; reducción de los niveles plasmáticos de lipopro-teína a (Lp(a)) en un ser humano; inhibición de la generación de apolipoproteína a (apo(a)) in vitro y/o in vivo;
(viii) prevención y/o tratamiento de enfermedades cardiovasculares, como el síndrome X; aterosclerosis; infarto de miocardio; enfermedad coronaria; accidente cerebrovascular, isquemia cerebral; enfermedad cardiovascular temprana o cardiaca temprana, tal como hipertrofia ventricular izquierda; enfermedad de la arteria coronaria; 10 hipertensión esencial; emergencia por hipertensión aguda; cardiomiopatía; insuficiencia cardíaca; tolerancia al ejercicio; insuficiencia cardiaca crónica; arritmia; disritmia cardíaca; síncope; aterosclerosis; insuficiencia car-díaca crónica leve; angina de pecho; reoclusión de derivación cardíaca; claudicación intermitente (arterioescle-rosis obliterante); disfunción diastólica; y/o disfunción sistólica;
(ix) prevención y/o tratamiento de enfermedades gastrointestinales, tales como síndrome de intestino inflamato-15 rio; síndrome del intestino delgado, o enfermedad de Crohn; dispepsia; y/o úlceras gástricas;
(x) prevención y/o tratamiento de la enfermedad crítica, tal como el tratamiento de un paciente con enfermedad crítica, una polinefropatía del paciente crítico (CIPNP) y/o un paciente con CIPNP potencial; prevención de la enfermedad crítica o el desarrollo de CIPNP; prevención, tratamiento y/o curación del síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SIRS) en un paciente; y/o para la prevención o reducción de la probabilidad de que un 20 paciente padezca bacteriemia, septicemia y/o choque séptico durante una hospitalización; y/o
(xi) prevención y/o tratamiento del síndrome de ovario poliquístico (PCOS).
En una realización particular, la indicación se selecciona a partir del grupo que consiste en (i) - (iii) y (v) - (viii), tal como las indicaciones (i), (ii) y/o (iii); o la indicación (v), la indicación (vi), la indicación (vii) y/o la indicación (viii).
En otra realización particular, la indicación es (i). En una realización adicional particular, la indicación es (v). En una 25 realización aún más particular, la indicación es (viii).
Las siguientes indicaciones son particularmente preferidas: diabetes de tipo 2 y/u obesidad.
REALIZACIONES PARTICULARES
1. Un derivado de un péptido GLP-1,
cuyo péptido tiene dos residuos de Lys, a saber, un primer y un segundo residuo de Lys, y un máximo de ocho 30 cambios de aminoácidos en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3),
cuyo derivado tiene dos restos de acción prolongada unidos al grupo amino épsilon de dicho primer y segundo residuo de Lys, respectivamente, a través de un enlazador, en el que
el resto de acción prolongada se selecciona entre Chem. 15 y Chem. 16:
Chem. 15: HOOC-(CH2)x-CO-* 35
Chem. 16: HOOC-C6H4-O-(CH2)y-CO-*,
en donde x es un número entero en el intervalo de 10-16, e y es un número entero en el intervalo de 8-12.
el enlazador comprende un primer elemento de enlazador, Chem. 1:
Chem. 1:
o una sal, una amida o un éster farmacéuticamente aceptable de dicho derivado.
2. El derivado de la realización 1, en el que el enlazador comprende dos veces Chem. 1.
3. El derivado de la realización 1, en el que el enlazador comprende cuatro veces Chem. 1.
4. El derivado de la realización 1, en el que el enlazador comprende seis veces Chem. 1.
5. El derivado de la realización 1, en el que el enlazador comprende ocho veces Chem. 1.
6. El derivado de la realización 1, en el que el enlazador comprende doce veces Chem. 1. 5
7. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-3 o 5-6, en el que el enlazador comprende además un se-gundo elemento enlazador, Chem. 2:
8. El derivado de la realización 7, en el que el enlazador comprende una combinación del primer y segundo elementos de enlazador del modo siguiente, Chem. 3: 10
9. El derivado de cualquiera de las realizaciones 7-8, en el que el enlazador comprende una combinación del primer y segundo elementos de enlazador del modo siguiente, Chem. 4:
10. El derivado de cualquiera de las realizaciones 7-9, en el que el enlazador comprende una combinación del primer y segundo elementos de enlazador del modo siguiente, Chem. 10:
11. El derivado de cualquiera de las realizaciones 7-10, en el que el enlazador comprende una combinación del primer y segundo elementos de enlazador del modo siguiente, Chem. 11: 20
12. El derivado de la realización 7, en el que el enlazador comprende una combinación del primer y segundo elementos de enlazador del modo siguiente, Chem. 8:
13. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-3, en el que el enlazador comprende además un tercer elemento enlazador, Chem. 7:
14. El derivado de la realización 13, en el que el enlazador comprende una combinación del primer y tercer 5 elementos de enlazador del modo siguiente, Chem. 9:
15. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-14, en el que el enlazador comprende además un cuarto elemento enlazador, Chem. 5: 10
16. El derivado de la realización 15, en el que Chem. 5 está conectado en su extremo *-NH con el grupo carbo-nilo del resto de acción prolongada.
17. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-3, 7-9 o 15-16, en el que el enlazador comprende Chem. 6:
18. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-12 o 15-17, en el que el enlazador comprende además un quinto elemento enlazador, Chem. 12:
Chem. 12: *-NH-(CH2)4-CH(NH2)-CO-*.
19. El derivado de la realización 18, en el que Chem. 12 está conectado en su extremo CO-* con el grupo amino épsilon del primer o segundo residuo de Lys del péptido GLP-1. 20
20. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-3 o 13-16, que comprende una vez Chem. 5 y dos veces Chem. 9.
21. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-5, 7-10 o 15-16, que comprende una vez Chem. 5 y cuatro veces Chem. 3.
22. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-4 o 15-16, que comprende una vez Chem. 5 y seis veces Chem. 1.
23. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-3, 7-9, 15-16 o 18-19, que comprende una vez Chem. 5, 5 dos veces Chem. 3 y una vez Chem. 12.
24. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-5, 7-10, 15-16 o 18-19, que comprende una vez Chem. 5, cuatro veces Chem. 3 y una vez Chem. 12.
25. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-11, 15-16 o 18-19, que comprende una vez Chem. 5, seis veces Chem. 3 y una vez Chem. 12. 10
26. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-4, 15-16 o 18-19, que comprende una vez Chem. 5, seis veces Chem. 1 y una vez Chem. 12.
27. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-2, 7, 12, 15-16 o 18-19, que comprende una vez Chem. 5, una vez Chem. 8 y una vez Chem. 12.
28. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-3, 7-9 o 15-17, en el que el enlazador consiste en Chem. 6, 15 conectado en su extremo *-NH con el grupo carbonilo del resto de acción prolongada a través de un enlace amida, y en su extremo CO-* con el grupo amino épsilon del primero o el segundo residuo de Lys del péptido GLP-1 a través de una enlace amida.
29. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-3, 13-16 o 20, en el que el enlazador consiste en "Chem. 5 - Chem. 9 - Chem. 9", en el que los elementos de enlazador Chem. 5, Chem. 9 y Chem. 9 están interconecta-20 dos a través de enlaces amida, en la secuencia indicada (es decir, con el extremo *-NH a la izquierda y el ex-tremo CO-* a la derecha), y en el que el enlazador está conectado, además, en el extremo *-NH con el grupo carbonilo del resto de acción prolongada a través de un enlace amida, y en el extremo CO-* con el grupo amino épsilon del primero o el segundo residuo de Lys del péptido GLP-1.
30. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-5, 7-10, 15-16 o 21, en el que el enlazador consiste en 25 "Chem. 5 -. Chem. 3 - Chem. 3 - Chem. 3 - Chem. 3", en el que los elementos de enlazador Chem. 5, Chem. 3, Chem. 3, Chem. 3 y Chem. 3 están interconectados a través de enlaces amida, en la secuencia indicada (es decir, con el extremo *-NH a la izquierda y el extremo CO-* a la derecha), y en el que el enlazador está conec-tado, además, en el extremo *-NH con el grupo carbonilo del resto de acción prolongada a través de un enlace amida, y en el extremo CO-* con el grupo amino épsilon del primero o el segundo residuo de Lys del péptido 30 GLP-1.
31. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-4 o 15-16 o 22, en el que el enlazador consiste en "Chem. 5 - Chem. 1 - Chem. 1 - Chem. 1 - Chem. 1 - Chem. 1 - Chem. 1", en el que los elementos de enlazador Chem. 5, Chem. 1, Chem. 1, Chem. 1, Chem. 1, Chem. 1 y Chem. 1 están interconectados a través de enlaces amida, en la secuencia indicada (es decir, con el extremo *-NH a la izquierda y el extremo CO-* a la derecha), y en el 35 que el enlazador está conectado, además, en el extremo *-NH con el grupo carbonilo del resto de acción pro-longada a través de un enlace amida, y en el extremo CO-* con el grupo amino épsilon del primero o el segun-do residuo de Lys del péptido GLP-1.
32. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-3, 7-9, 15-16, 18-19 o 23, en el que el enlazador consiste en "Chem. 5 - Chem. 3 - Chem. 3 - Chem. 12", en el que los elementos de enlazador Chem. 5, Chem. 3, Chem. 40 3 y Chem. 12 están interconectados a través de enlaces amida, en la secuencia indicada (es decir, con el ex-tremo *-NH a la izquierda y el extremo CO-* a la derecha), y en el que el enlazador está conectado, además, en el extremo *-NH con el grupo carbonilo del resto de acción prolongada a través de un enlace amida, y en el ex-tremo CO-* con el grupo amino épsilon del primero o el segundo residuo de Lys del péptido GLP-1.
33. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-5, 7-10, 15-16, 18-19 o 24, en el que el enlazador consiste 45 en "Chem. 5 - Chem. 3 - Chem. 3 - Chem. 3 - Chem. 3 - Chem. 12", en el que los elementos de enlazador Chem. 5, Chem. 3, Chem. 3, Chem. 3, Chem. 3 y Chem. 12 están interconectados a través de enlaces amida, en la secuencia indicada (es decir, con el extremo *-NH a la izquierda y el extremo CO-* a la derecha), y en el que el enlazador está conectado, además, en el extremo *-NH con el grupo carbonilo del resto de acción pro-longada a través de un enlace amida, y en el extremo CO-* con el grupo amino épsilon del primero o el segun-50 do residuo de Lys del péptido GLP-1.
34. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-11, 15-16, 18-19 o 25, en el que el enlazador consiste en "Chem. 5 - Chem. 3 - Chem. 3 - Chem. 3 - Chem. 3 - Chem. 3 - Chem. 3 - Chem. 12", en el que los elementos de enlazador Chem. 5, Chem. 3, Chem. 3, Chem. 3, Chem. 3, Chem. 3, Chem. 3 y Chem. 12 están interconec-tados a través de enlaces amida, en la secuencia indicada (es decir, con el extremo *-NH a la izquierda y el ex-55
tremo CO-* a la derecha), y en el que el enlazador está conectado, además, en el extremo *-NH con el grupo carbonilo del resto de acción prolongada a través de un enlace amida, y en el extremo CO-* con el grupo amino épsilon del primero o el segundo residuo de Lys del péptido GLP-1.
35. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-4, 15-16, 18-19 o 26, en el que el enlazador consiste en "Chem. 5 - Chem. 1 - Chem. 1 - Chem. 1 - Chem. 1 - Chem. 1 - Chem. 1 - Chem. 12", en el que los elementos 5 de enlazador Chem. 5, Chem. 1, Chem. 1, Chem. 1, Chem. 1, Chem. 1, Chem. 1 y Chem. 12 están interconec-tados a través de enlaces amida, en la secuencia indicada (es decir, con el extremo *-NH a la izquierda y el ex-tremo CO-* a la derecha), y en el que el enlazador está conectado, además, en el extremo *-NH con el grupo carbonilo del resto de acción prolongada a través de un enlace amida, y en el extremo CO-* con el grupo amino épsilon del primero o el segundo residuo de Lys del péptido GLP-1. 10
36. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-2, 7, 12, 15-16, 18-19 o 27, en el que el enlazador consiste en "Chem. 5 - Chem. 8 - Chem. 12", en el que los elementos de enlazador Chem. 5, Chem. 8 y Chem. 12 están interconectados a través de enlaces amida, en la secuencia indicada (es decir, con el extremo *-NH a la iz-quierda y el extremo CO-* a la derecha), y en el que el enlazador está conectado, además, en el extremo *-NH con el grupo carbonilo del resto de acción prolongada a través de un enlace amida, y en el extremo CO-* con el 15 grupo amino épsilon del primero o el segundo residuo de Lys del péptido GLP-1.
37. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-36, en el que Chem. 1 es Ser.
38. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-37, en el que Chem. 2 es Gly.
39. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-38, en el que Chem. 3 es Ser-Ser-Gly.
40. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-39, en el que Chem. 4 es Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly (SEQ ID 20 NO: 1).
41. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-40, en el que Chem. 5 es gGlu.
42. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-41, en el que Chem. 6 es gGlu-Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly (SEQ ID NO: 2).
43. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-42, en el que Chem. 7 es Ala. 25
44. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-43, en el que Chem. 8 es Ser-Gly-Ser.
45. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-44, en el que Chem. 9 es Ser-Ser-Ala.
46. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-45, en el que Chem. 10 es Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly (SEQ ID NO: 4).
47. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-46, en el que Chem. 11 es Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly-Ser-30 Ser-Gly-Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly (SEQ ID NO: 5).
48. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-47, en el que Chem. 12 es eps-Lys.
49. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-3, 7-9, 15-17 o 28, en el que el enlazador es gGlu-Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly (SEQ ID NO: 2).
50. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-3, 13-16, 20 o 29, en el que el enlazador es gGlu-Ser-Ser-35 Ala-Ser-Ser-Ala (SEQ ID NO: 6).
51. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-5, 7-10, 15-16, 21 o 30, en el que el enlazador es gGlu-Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly-Ser -Ser-Gly (SEQ ID NO: 7).
52. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-4 o 15-16, 22 o 31, en el que el enlazador es gGlu-Ser-Ser-Ser-Ser-Ser-Ser (SEQ ID NO: 8). 40
53. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-3, 7-9, 15-16, 18-19, 23 o 32, en el que el enlazador es gGlu-Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly-eps-Lys (SEQ ID NO: 9).
54. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-5, 7-10, 15-16, 18-19, 24 o 33, en el que el enlazador es gGlu-Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly-Ser-Ser Gly-Ser-Ser-Gly-eps-Lys (SEQ ID NO: 10).
55. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-11, 15-16, 18-19, 25 o 34, en el que el enlazador es gGlu-45 Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly-eps-Lys (SEQ ID NO: 11).
56. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-4, 15-16, 18-19, 26 o 35, en el que el enlazador es gGlu-Ser-Ser-Ser-Ser-Ser-Ser-eps-Lys (SEQ ID NO: 12).
57. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-2, 7, 12, 15-16, 18-19, 27 o 36, en el que el enlazador es gGlu-Ser-Gly-Ser-eps-Lys (SEQ ID NO: 13).
58. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-57, en el que el péptido GLP-1 es GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3) o un análogo del mismo.
59. El derivado de la realización 58, en el que el análogo tiene un máximo de 8 cambios de aminoácidos en 5 comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3).
60. El derivado de cualquiera de las realizaciones 58-59, en el que el análogo tiene un máximo de 7 cambios de aminoácidos en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3).
61. El derivado de cualquiera de las realizaciones 58-60, en el que el análogo tiene un máximo de 6 cambios de aminoácidos en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3). 10
62. El derivado de cualquiera de las realizaciones 58-61, en el que el análogo tiene un máximo de 5 cambios de aminoácidos en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3).
63. El derivado de cualquiera de las realizaciones 58-62, en el que el análogo tiene un máximo de 4 cambios de aminoácidos en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3).
64. El derivado de cualquiera de las realizaciones 58-63, en el que el análogo tiene un máximo de 3 cambios 15 de aminoácidos en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3).
65. El derivado de cualquiera de las realizaciones 58-64, en el que el análogo tiene 7 cambios de aminoácidos en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3).
66. El derivado de cualquiera de las realizaciones 58-65, en el que el análogo tiene 4 cambios de aminoácidos en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3). 20
67. El derivado de cualquiera de las realizaciones 58-66, en el que el análogo tiene 3 cambios de aminoácidos en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3).
68. El derivado de cualquiera de las realizaciones 58-67, en el que el análogo tiene un mínimo de 3 cambios de aminoácidos en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3).
69. El derivado de cualquiera de las realizaciones 58-68, en el que el análogo tiene un mínimo de 4 cambios de 25 aminoácidos en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3).
70. El derivado de cualquiera de las realizaciones 58-69, en el que el análogo tiene un mínimo de 5 cambios de aminoácidos en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3).
71. El derivado de cualquiera de las realizaciones 58-70, en el que el análogo tiene un mínimo de 6 cambios de aminoácidos en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3). 30
72. El derivado de cualquiera de las realizaciones 58-71, en el que el análogo tiene un mínimo de 7 cambios de aminoácidos en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3).
73. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-72, en el que los cambios de aminoácidos se seleccionan, independientemente, a partir de sustituciones, deleciones y adiciones.
74. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-73, en el que los cambios de aminoácidos se seleccionan, 35 independientemente, a partir de sustituciones y adiciones.
75. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-74, en el que los cambios de aminoácidos son sustitucio-nes.
76. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-75, en el que el péptido GLP-1 comprende un péptido GLP-1 de Fórmula I: 40
Fórmula I: Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Xaa18-Xaa19-Xaa20-Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Xaa25-Xaa26-Xaa27-Phe-Ile-Xaa30-Xaa31-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38,
en donde
Xaa7 es L-histidina, imidazopropionil, α-hidroxi-histidina, D-histidina, desamino-histidina, 2-amino-histidina, β-hidroxi-histidina, homohistidina, Nα-acetil-histidina, Nα-formil-histidina, α-fluorometil-histidina, α-metil-45 histidina, 3-piridilalanina, 2-piridilalanina o 4-piridilalanina;
Xaa8 es Ala, Gly, Val, Leu, Ile, Thr, Ser, Lys, Aib, ácido (1-aminociclopropil) carboxílico, ácido (1-
aminociclobutil) carboxílico, ácido (1-aminociclopentil) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil) carboxílico, áci-do (1-aminocicloheptil) carboxílico o ácido (1-aminociclooctil) carboxílico;
Xaa16 es Val o Leu;
Xaa18 es Ser o Lys;
Xaa19 es Tyr o Gln; 5
Xaa20 es Leu o Met;
Xaa22 es Gly, Glu, Lys o Aib;
Xaa23 es Gln, Glu o Arg;
Xaa25 es Ala o Val;
Xaa26 es Val, His, Lys o Arg; 10
Xaa27 es Glu, Leu o Lys;
Xaa30 es Ala, Glu, Lys o Arg;
Xaa31 es Trp, Lys o His;
Xaa33 es Val o Lys;
Xaa34 es Lys, Glu, Asn, Gly, Gln, His, Arg, o está ausente; 15
Xaa35 es Gly, Aib, o está ausente;
Xaa36 es Arg, Gly, Lys, o está ausente;
Xaa37 es Gly, Ala, Glu, Pro, Lys, Arg, o está ausente; y
Xaa38 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys, Arg, o está ausente.
77. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-76, en el que el péptido GLP-1 es un péptido GLP-1 de 20 Fórmula I.
78. El derivado de cualquiera de las realizaciones 76-77, en el que el péptido de Fórmula I es un análogo de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3).
79. El derivado de cualquiera de las realizaciones 76-78, en el que, si Xaa37 está ausente, entonces Xaa38 tam-bién está ausente. 25
80. El derivado de cualquiera de las realizaciones 76-79, en el que, si Xaa36 está ausente, entonces Xaa37 y Xaa38 también están ausentes.
81. El derivado de cualquiera de las realizaciones 76-80, en el que, si Xaa35 está ausente, entonces Xaa36, Xaa37 y Xaa38 también están ausentes.
82. El derivado de cualquiera de las realizaciones 76-81, en el que, si Xaa34 está ausente, entonces Xaa35, 30 Xaa36, Xaa37 y Xaa38 también están ausentes.
83. El derivado de cualquiera de las realizaciones 76-82, en el que Xaa7 es L-histidina o imidazopropionilo; Xaa8 es Ala o Aib; Xaa16 es Val; Xaa18 es Ser o Lys; Xaa19 es Tyr; Xaa20 es Leu; Xaa22 es Gly o Glu; Xaa23 es Gln; Xaa25 es Ala o Val; Xaa26 es Lys o Arg; Xaa27 es Glu; Xaa30 es Ala; Xaa31 es Trp, Lys o His; Xaa33 es Val; Xaa34 es Lys, Gln, His o Arg; Xaa35 es Gly; Xaa36 es Arg; Xaa37 es Gly o Lys; y Xaa38 es Glu, Lys o está ausen-35 te.
84. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-83, en el que el péptido GLP-1 comprende His7.
85. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-83, en el que el péptido GLP-1 comprende Imp7.
86. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-85, en el que el péptido GLP-1 comprende Ala8.
87. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-85, en el que el péptido GLP-1 comprende Aib8. 40
88. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-87, en el que el péptido GLP-1 comprende Val16.
89. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-88, en el que el péptido GLP-1 comprende Ser18.
90. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-88, en el que el péptido GLP-1 comprende Lys18.
91. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-90, en el que el péptido GLP-1 comprende Tyr19.
92. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-91, en el que el péptido GLP-1 comprende Leu20.
93. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-92, en el que el péptido GLP-1 comprende Gly22. 5
94. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-92, en el que el péptido GLP-1 comprende Glu22.
95. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-94, en el que el péptido GLP-1 comprende Gln23.
96. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-95, en el que el péptido GLP-1 comprende Ala25.
97. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-95, en el que el péptido GLP-1 comprende Val25.
98. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-97, en el que el péptido GLP-1 comprende Lys26. 10
99. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-97, en el que el péptido GLP-1 comprende Arg26.
100. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-99, en el que el péptido GLP-1 comprende Glu27.
101. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-100, en el que el péptido GLP-1 comprende Ala30.
102. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-101, en el que el péptido GLP-1 comprende His31.
103. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-101, en el que el péptido GLP-1 comprende Trp31. 15
104. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-101, en el que el péptido GLP-1 comprende Lys31.
105. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-104, en el que el péptido GLP-1 comprende Val33.
106. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-105, en el que el péptido GLP-1 comprende Gln34.
107. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-105, en el que el péptido GLP-1 comprende Arg34.
108. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-105, en el que el péptido GLP-1 comprende His34. 20
109. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-105, en el que el péptido GLP-1 comprende Lys34.
110. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-109, en el que el péptido GLP-1 comprende Gly35.
111. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-110, en el que el péptido GLP-1 comprende Arg36.
112. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-111, en el que el péptido GLP-1 comprende Guy37.
113. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-111, en el que el péptido GLP-1 comprende Lys37. 25
114. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-113, en el que el péptido GLP-1 comprende Lys38.
115. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-113, en el que, en el péptido GLP-1, Xaa38 está ausente.
116. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-113, en el que el péptido GLP-1 comprende Glu38.
117. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-116, en el que el péptido GLP-1 tiene solo dos residuos de Lys. 30
118. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-117, en el que los dos residuos de Lys son Lys26 y Lys37.
119. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-117, en el que los dos residuos de Lys son Lys18 y Lys26.
120. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-117, en el que los dos residuos de Lys son Lys18 y Lys31.
121. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-117, en el que los dos residuos de Lys son Lys26 y Lys38.
122. El derivado de cualquiera de las realizaciones 117-121, en el que el péptido GLP-1 comprende Gln34, His34 35 o Arg34.
123. El derivado de cualquiera de las realizaciones 120 o 122, en el que el péptido GLP-1 comprende Arg26.
124. El derivado de la realización 123, en el que el péptido GLP-1 comprende Arg26 y Arg34.
125. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-124, en el que el péptido GLP-1 comprende los siguientes cambios de aminoácidos, en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3): (i) 8Aib, 34R, 37K; (ii) 8Aib, 31 H, 34Q, 37K; (iii) 31 H, 34Q, 37K; (iv) 34R, 37K, 38E; (v) 18K, 22E, 34Q; (vi) 8Aib, 18K, 22E, 25V, 26R, 31 K, 34R; (vii) 8Aib, 18K, 22E, 34Q; (viii) 8Aib, 18K, 34Q; (ix) 8Aib, 34Q, 37K; (x) 8Aib, 34H, 37K; (xi) 8Aib, 31 H, 34Q, 5 38K; (xii) 7Imp, 8Aib, 34R, 37K; o (xiii) 7Imp, 8Aib, 18K, 34Q.
126. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-125, en el que el péptido GLP-1 comprende los siguientes cambios de aminoácidos, en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3): (i) 8Aib, 34R, 37K; (ii) 8Aib, 31 H, 34Q, 37K; (iii) 31 H, 34Q, 37K; (iv) 34R, 37K, 38E; (v) 18K, 22E, 34Q; (vi) 8Aib, 18K, 22E, 25V, 26R, 31 K, 34R; (vii) 8Aib, 18K, 22E, 34Q; (ix) 8Aib, 34Q, 37K; (x) 8Aib, 34H, 37K; (xi) 8Aib, 31 H, 34Q, 38K; (xii) 7Imp, 8Aib, 10 34R, 37K; o (xiii) 7Imp, 8Aib, 18K, 34Q.
127. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-126, en el que el péptido GLP-1 tiene los siguientes cam-bios de aminoácidos, en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3): (i) 8Aib, 34R, 37K; (ii) 8Aib, 31 H, 34Q, 37K; (iii) 31 H, 34Q, 37K; (iv) 34R, 37K, 38E; (v) 18K, 22E, 34Q; (vi) 8Aib, 18K, 22E, 25V, 26R, 31 K, 34R; (vii) 8Aib, 18K, 22E, 34Q; (viii) 8Aib, 18K, 34Q; (ix) 8Aib, 34Q, 37K; (x) 8Aib, 34H, 37K; (xi) 8Aib, 31 H, 34Q, 15 38K; (xii) 7Imp, 8Aib, 34R, 37K; o (xiii) 7Imp, 8Aib, 18K, 34Q.
128. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-127, en el que el péptido GLP-1 tiene los siguientes cam-bios de aminoácidos, en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3): (i) 8Aib, 34R, 37K; (ii) 8Aib, 31 H, 34Q, 37K; (iii) 31 H, 34Q, 37K; (iv) 34R, 37K, 38E; (v) 18K, 22E, 34Q; (vi) 8Aib, 18K, 22E, 25V, 26R, 31 K, 34R; (vii) 8Aib, 18K, 22E, 34Q; (ix) 8Aib, 34Q, 37K; (x) 8Aib, 34H, 37K; (xi) 8Aib, 31 H, 34Q, 38K; (xii) 7Imp, 8Aib, 20 34R, 37K; o (xiii) 7Imp, 8Aib, 18K, 34Q.
129. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-128, en el que el péptido GLP-1 no tiene los siguientes cambios de aminoácidos, en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3): (viii) 8Aib, 18K, 34Q.
130. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-129, en el que el número de cambios de aminoácidos en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3) se identifica por escritura a mano e inspección visual. 25
131. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-130, en el que el tipo y la posición de los cambios de ami-noácidos son tal y como se comparan con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3), y se identifican por la escritura a mano y la inspección visual.
132. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-131, en el que el tipo y la posición de los cambios de ami-noácidos son tal y como se comparan con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3), y se identifican mediante el uso de 30 una proteína patrón o un programa de alineamiento de péptidos.
133. El derivado de la realización 132, en el que el programa de alineamiento es un alineamiento de Needle-man-Wunsch.
134. El derivado de cualquiera de las realizaciones 132-133, en el que se utiliza la matriz de puntuación por de-fecto y la matriz de identidad por defecto. 35
135. El derivado de cualquiera de las realizaciones 132-134, en el que la matriz de puntuación es BLOSUM62.
136. El derivado de cualquiera de las realizaciones 132-135, en el que la penalización por el primer residuo en un hueco es -10 (menos diez).
137. El derivado de cualquiera de las realizaciones 132-136, en el que las penalizaciones por los residuos adi-cionales en un hueco es -0,5 (menos cero coma cinco). 40
138. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-137, en el que x es un número par.
139. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-138, en el que x es 12 o 14.
140. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-139, en el que x es 12.
141. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-139, en el que x es 14.
142. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-141, en el que y es 9, 10 u 11. 45
143. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-142, en el que y es 9.
144. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-142, en el que y es 10.
145. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-142, en el que y es 11.
146. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-145, en el que el resto de acción prolongada es Chem. 15.
147. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-145, en el que el resto de acción prolongada es Chem. 16.
148. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-146, en el que Chem. 15 está representado por Chem. 5 15a:
149. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-145 o 147, en el que Chem. 16 está representado por Chem. 16a:
150. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-149, en el que los dos restos de acción prolongada son sustancialmente idénticos.
151. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-150, en el que los dos restos de acción prolongada tienen una similitud de al menos 0,5; preferiblemente al menos 0,6; más preferiblemente al menos 0,7 o al menos 0,8; 15 incluso más preferiblemente al menos 0,9; o lo más preferiblemente al menos 0,99, tal como una similitud de 1,0.
152. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-151, en el que los dos enlazadores son sustancialmente idénticos.
153. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-152, en el que los dos enlazadores tienen una similitud de 20 al menos 0,5; preferiblemente al menos 0,6; más preferiblemente al menos 0,7 o al menos 0,8; incluso más preferiblemente al menos 0,9; o lo más preferiblemente al menos 0,99, tal como una similitud de 1,0.
154. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-153, en el que las dos cadenas laterales que consisten en un resto de acción prolongada y un enlazador son sustancialmente idénticas.
155. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-154, en el que las dos cadenas laterales que consisten en 25 un resto de acción prolongada y un enlazador tienen una similitud de al menos 0,5; preferiblemente al menos 0,6; más preferiblemente al menos 0,7 o al menos 0,8; incluso más preferiblemente al menos 0,9; o lo más pre-feriblemente al menos 0,99, tal como una similitud de 1,0.
156. El derivado de cualquiera de las realizaciones 151, 153 o 155, en el que las dos estructuras químicas que se van a comparar se representan como huellas, tales como: a) huellas ECFP_6; b) huellas UNITY; y/o c) hue-30 llas MDL; y en el que para cada una de a), b) y c) el coeficiente de Tanimoto se utiliza preferiblemente para el cálculo de la similitud de las dos huellas.
157. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-156, en el que el enlazador es un péptido.
158. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-157, en el que el enlazador es un péptido que comprende 5-20 residuos de aminoácidos. 35
159. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-158, en el que el enlazador es un péptido que comprende de 3-7 residuos de aminoácidos.
160. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-159, en el que el enlazador es un péptido que consiste en 3-7 residuos de aminoácidos.
161. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-159, en el que el enlazador es un péptido que consiste en 40 5-20 restos de aminoácidos.
162. El derivado de cualquiera de las realizaciones 158 o 159, en el que el enlazador comprende 5, 7, 8, 13, 15 o 20 residuos de aminoácidos.
163. El derivado de la realización 162, en el que el enlazador consiste en 5, 7, 8, 13, 15 o 20 residuos de ami-noácidos.
164. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-163, en el que el enlazador está fijado al grupo amino ép-5 silon de cada residuo de Lys.
165. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-164, en el que el extremo C-terminal del enlazador está fi-jado al grupo amino épsilon de cada residuo de Lys.
166. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-165, en donde el resto de acción prolongada y el enlaza-dor están interconectados a través de un enlace amida. 10
167. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-166, en el que el extremo N-terminal del enlazador está fi-jado al extremo *-CO del resto de acción prolongada.
168. Un compuesto, preferiblemente de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-167, seleccionado a par-tir de los siguientes: Chem. 20, Chem. 21, Chem. 22, Chem. 23, Chem. 24, Chem. 25, Chem. 26, Chem. 27, Chem. 28, Chem. 29, Chem. 30, Chem. 31, Chem. 32, Chem. 33, Chem. 34, Chem. 35, Chem. 36, Chem. 37, 15 Chem. 38, Chem. 39, Chem. 40, Chem. 41, Chem. 42, Chem. 43, Chem. 44, Chem. 45, Chem. 46, Chem. 47, Chem. 48, Chem. 49 y Chem. 50; o una sal, una amida o un éster farmacéuticamente aceptable de cualquiera de Chem. 20- Chem. 50.
169. Un compuesto caracterizado por su nombre, y seleccionado a partir de una lista de cada uno de los nom-bres de los compuestos de los Ejemplos 1-31 en este documento; o una sal, una amida o un éster farmacéuti-20 camente aceptable de cualquiera de estos compuestos.
170. El compuesto de la realización 168, que es un compuesto de la realización 169.
171. Un péptido GLP-1 que comprende los siguientes cambios de aminoácidos en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3): (x) 8Aib, 34H, 37K; o (xii) 7Imp, 8Aib, 34R, 37K; o una sal, una amida o un éster farmacéu-ticamente aceptable de cualquiera de (x) o (xii). 25
172. Un péptido GLP-1 que tiene los siguientes cambios de aminoácidos en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3): (x) 8Aib, 34H, 37K; (xii) 7Imp, 8Aib, 34R, 37K; o (xiii) 7Imp, 8Aib, 18K, 34Q; o una sal, una amida o un éster farmacéuticamente aceptable de cualquiera de (x), (xii) o (xiii).
173. El péptido de la realización 172 que no tiene otras modificaciones de aminoácidos en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3). 30
174. El péptido de cualquiera de las realizaciones 171-173, en el que el tipo y la posición de los cambios de aminoácidos son tal y como se comparan con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3), y se identifican como se describe en cualquiera de las realizaciones 130-137.
175. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-174, que tiene actividad de GLP-1.
176. El derivado de la realización 175, en el que la actividad de GLP-1 se refiere a la capacidad de activar el 35 receptor de GLP-1 humano.
177. El derivado de la realización 176, en el que la activación del receptor de GLP-1 humano se mide en un en-sayo in vitro, como la potencia de la producción de AMPc.
178. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-177, que tiene una potencia correspondiente a una CE50
a) inferior a 3000 pM, preferiblemente inferior a 2600 pM, más preferiblemente inferior a 2400 pM, incluso 40 más preferiblemente inferior a 2000 pM o lo más preferiblemente inferior a 1500 pM;
b) inferior a 1000 pM, preferiblemente inferior a 1600 pM, más preferiblemente inferior a 1400 pM, incluso más preferiblemente inferior a 1200 pM o lo más más preferiblemente inferior a 900 pM;
c) inferior a 500 pM, preferiblemente inferior a 400 pM, más preferiblemente inferior a 300 pM, incluso más preferiblemente inferior a 250 pM o lo más preferiblemente inferior a 200 pM; o 45
d) inferior a 150 pM, preferiblemente inferior a 125 pM, más preferiblemente inferior a 100 pM, incluso más preferiblemente inferior a 60 pM o lo más preferiblemente inferior a 50 pM.
179. El derivado de la realización 178, en el que la potencia se determina como la CE50 para la estimulación de la formación de AMPc en un medio que contiene el receptor de GLP-1 humano.
180. El derivado de la realización 179, en el que se utiliza una línea celular transfectada estable tal como BHK467-12A (tk-ts13).
181. El derivado de cualquiera de las realizaciones 179-180, en el que se emplea un ensayo de receptor fun-cional para la determinación del AMPc.
182. El derivado de cualquiera de las realizaciones 179-181, en el que el ensayo se basa en la competencia 5 entre el AMPc formado endógenamente y AMPc biotinilado añadido exógenamente.
183. El derivado de cualquiera de las realizaciones 179-182, en el que el AMPc se captura usando un anticuer-po específico.
184. El derivado de cualquiera de las realizaciones 179-183, en el que el ensayo es el ensayo de AMPc Alp-haScreen, preferiblemente el descrito en el Ejemplo 32 en el presente documento. 10
185. El derivado de cualquiera de las realizaciones 176, en el que la activación del receptor de GLP-1 humano se mide en un ensayo de gen informador.
186. El derivado de la realización 186, en el que el ensayo de gen informador hace uso de una línea de células BHK transfectadas de forma estable que expresa el receptor de GLP-1 humano y contiene el ADN para el ele-mento de respuesta a AMPc (CRE) acoplado a un promotor y el gen de la luciferasa de luciérnaga (CRE lucife-15 rasa).
187. El derivado de la realización 186, en el que la Iuciferasa se determina mediante la adición de luciferina, que se convierte en oxiluciferina y produce bioluminiscencia, la cual se mide y es una medida de la potencia in vitro.
188. El derivado de cualquiera de las realizaciones 185-187, en el que el ensayo se describe en el Ejemplo 33. 20
189. El derivado de cualquiera de las realizaciones 185-188, que tiene una potencia in vitro correspondiente a una CE50 de o inferior a 100 pM, preferiblemente inferior a 75 pM, más preferiblemente inferior a 50 pM, incluso más preferiblemente inferior a 25 pM o lo más preferiblemente inferior a 10 pM.
190. El péptido de cualquiera de las realizaciones 171-174, que tiene actividad de GLP-1 como se define en cualquiera de las realizaciones 175-189. 25
191. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-189, para el cual la afinidad de la unión al receptor de GLP-1 (CI50) en presencia de 0,005%, preferiblemente de 0,001% de HSA (albúmina baja) es
a) inferior a 50 nM, preferiblemente inferior a 25 nM, aún más preferiblemente inferior a 20 nM, aún más preferiblemente inferior a 10 nM o lo más preferiblemente inferior a 5,0 nM; o
b) inferior a 1,0 nM o más preferiblemente inferior a 0,50 nM. 30
192. El derivado de la realización 191, en el que la afinidad de la unión al receptor de GLP-1 se mide por medio del desplazamiento de 125I-GLP-1 desde el receptor, preferiblemente usando un ensayo de unión a SPA.
193. El derivado de la realización 192, en el que el receptor de GLP-1 se prepara utilizando una línea celular transfectada, estable, preferiblemente una línea celular de hámster, más preferiblemente una línea celular de riñón de cría de hámster, tal como BHK tk-ts13. 35
194. El derivado de cualquiera de las realizaciones 191-193, en el que el valor de CI50 se determina como la concentración que desplaza el 50% de 125I-GLP-1 desde el receptor.
195. El péptido de cualquiera de las realizaciones 171-174 o 190, que es capaz de unirse al receptor de GLP-1 como se define en cualquiera de las realizaciones 191-194.
196. Una composición farmacéutica que comprende un péptido de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 40 171-174, 190 y/o 195, o un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-170, 175-189 y/o 191-194; y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
197. Un péptido de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 171-174, 190 y/o 195, o un derivado de acuer-do con cualquiera de las realizaciones 1-170, 175-189 y/o 191-194; para uso como un medicamento.
198. Un péptido de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 171-174, 190 y/o 195, o un derivado de acuer-45 do con cualquiera de las realizaciones 1-170, 175-189 y/o 191-194; para uso en el tratamiento y/o la prevención de todas las formas de diabetes y enfermedades relacionadas, tales como trastornos de la alimentación, en-fermedades cardiovasculares, enfermedades gastrointestinales, complicaciones diabéticas, enfermedad crítica y/o síndrome de ovario poliquístico; y/o para mejorar parámetros de lípidos, mejorar la función de células β y/o para retrasar o prevenir la progresión de una enfermedad diabética. 50
199. Un péptido de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 171-174, 190 y/o 195, o un derivado de acuer-do con cualquiera de las realizaciones 1-170, 175-189 y/o 191-194; para uso en la preparación de un medica-mento para el tratamiento y/o la prevención de todas las formas de diabetes y enfermedades relacionadas, ta-les como trastornos de la alimentación, enfermedades cardiovasculares, enfermedades gastrointestinales, complicaciones diabéticas, enfermedad crítica y/o síndrome de ovario poliquístico; y/o para mejorar los paráme-5 tros de lípidos, mejorar la función de las células β y/o para retrasar o prevenir la progresión de una enfermedad diabética.
REALIZACIONES PARTICULARES ADICIONALES
Las siguientes son realizaciones particulares, adicionales de la invención:
1. Un derivado de un péptido GLP-1 en donde el péptido comprende al menos dos residuos de Lys, en donde 10 un resto de acción prolongada está fijado al grupo amino épsilon de cada residuo de Lys, a través de un enla-zador que comprende Chem. 1:
2. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-2, en el que el enlazador comprende además Chem. 2:
3. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-2, en el que el enlazador comprende Chem. 3:
4. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-3, en el que el enlazador comprende Chem. 4:
5. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-4, en el que el enlazador comprende además Chem. 5:
6. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-5, en el que el enlazador comprende Chem. 6:
7. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-6, en el que el enlazador consiste en Chem. 6.
8. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-7, que comprende Ser.
9. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-8, en el que el enlazador comprende además Gly. 5
10. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-9, en el que el enlazador comprende Ser-Ser-Gly.
11. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-10, en el que el enlazador comprende Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly (SEQ ID NO: 1).
12. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-11, en el que el enlazador comprende además Glu.
13. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-12, en el que el enlazador comprende Glu-Ser-Ser-Gly-10 Ser-Ser-Gly (SEQ ID NO: 2).
14. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-3, en el que el enlazador consiste en Glu-Ser-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly (SEQ ID NO: 2).
15. El derivado de cualquiera de las realizaciones 12-14, en el que Glu es gGlu de Chem. 5.
16. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-15, en el que el péptido GLP-1 es GLP-1 (7-37) (SEQ ID 15 NO: 3) o un análogo del mismo.
17. El derivado de la realización 16, en el que el análogo tiene un máximo de 10 cambios de aminoácidos en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3).
18. El derivado de cualquiera de las realizaciones 16-17, en el que el análogo tiene un máximo de 9 cambios de aminoácidos en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3). 20
19. El derivado de cualquiera de las realizaciones 16-18, en el que el análogo tiene un máximo de 8 cambios de aminoácidos en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3).
20. El derivado de cualquiera de las realizaciones 16-19, en el que el análogo tiene un máximo de 7 cambios de aminoácidos en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3).
21. El derivado de cualquiera de las realizaciones 16-20, en el que el análogo tiene un máximo de 6 cambios 25 de aminoácidos en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3).
22. El derivado de cualquiera de las realizaciones 16-21, en el que el análogo tiene un máximo de 5 cambios de aminoácidos en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3).
23. El derivado de cualquiera de las realizaciones 16-22, en el que el análogo tiene un máximo de 4 cambios de aminoácidos en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3). 30
24. El derivado de cualquiera de las realizaciones 16-23, en el que el análogo tiene un máximo de 3 cambios de aminoácidos en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3).
25. El derivado de cualquiera de las realizaciones 16-20, en el que el análogo tiene 7 cambios de aminoácidos en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3).
26. El derivado de cualquiera de las realizaciones 16-23, en el que el análogo tiene 4 cambios de aminoácidos 35 en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3).
27. El derivado de cualquiera de las realizaciones 16-24, en el que el análogo tiene 3 cambios de aminoácidos en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3).
28. El derivado de cualquiera de las realizaciones 17-27, en el que los cambios se seleccionan, independien-temente, a partir de sustituciones, deleciones y adiciones. 40
29. El derivado de cualquiera de las realizaciones 17-28, en el que los cambios se seleccionan, independien-temente, a partir de sustituciones y adiciones.
30. El derivado de cualquiera de las realizaciones 17-29, en el que los cambios son sustituciones.
31. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-30, en el que el péptido GLP-1 comprende un péptido GLP-1 de Fórmula I: 5
Fórmula I: Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Lys-Xaa18-Xaa19-Xaa20-Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Xaa25-Xaa26-Xaa27-Phe-Ile-Xaa30-Xaa31 -Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38,
en donde
Xaa7 es L-histidina, imidazopropionil, α-hidroxi-histidina, D-histidina, desamino-histidina, 2-amino-histidina, β-hidroxi-histidina, homohistidina, Nα-acetil-histidina, Nα-formil-histidina, α-fluorometil-histidina, α-metil-10 histidina, 3-piridilalanina, 2-piridilalanina o 4-piridilalanina;
Xaa8 es Ala, Gly, Val, Leu, Ile, Thr, Ser, Lys, Aib, ácido (1-aminociclopropil) carboxílico, ácido (1-aminociclobutil) carboxílico, ácido (1-aminociclopentil) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil) carboxílico, áci-do (1-aminocicloheptil) carboxílico o ácido (1-aminociclooctil) carboxílico;
Xaa16 es Val o Leu; 15
Xaa18 es Ser o Lys;
Xaa19 es Tyr o Gln;
Xaa20 es Leu o Met;
Xaa22 es Gly, Glu, Lys o Aib;
Xaa23 es Gln, Glu o Arg; 20
Xaa25 es Ala o Val;
Xaa26 es Val, His, Lys o Arg;
Xaa27 es Glu, Leu o Lys;
Xaa30 es Ala, Glu, Lys o Arg;
Xaa31 es Trp, Lys o His; 25
Xaa33 es Val o Lys;
Xaa34 es Lys, Glu, Asn, Gly, Gln, His, Arg, o está ausente;
Xaa35 es Gly, Aib, o está ausente;
Xaa36 es Arg, Gly, Lys, o está ausente;
Xaa37 es Gly, Ala, Glu, Pro, Lys, Arg, o está ausente; y 30
Xaa38 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys, Arg, o está ausente.
32. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-31, en el que el péptido GLP-1 es un péptido GLP-1 de Fórmula I.
33. El derivado de cualquiera de las realizaciones 31-32, en el que el péptido de Fórmula I es un análogo de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3). 35
34. El derivado de cualquiera de las realizaciones 31-33, en el que, si Xaa37 está ausente, entonces Xaa38 tam-bién está ausente.
35. El derivado de cualquiera de las realizaciones 31-34, en el que, si Xaa36 está ausente, entonces Xaa37 y Xaa38 también están ausentes.
36. El derivado de cualquiera de las realizaciones 31-35, en el que, si Xaa35 está ausente, entonces Xaa36, 40 Xaa37 y Xaa38 también están ausentes.
37. El derivado de cualquiera de las realizaciones 31-36, en el que, si Xaa34 está ausente, entonces Xaa35,
Xaa36, Xaa37 y Xaa38 también están ausentes.
38. El derivado de cualquiera de las realizaciones 31-37, en el que Xaa7 es L-histidina; Xaa8 es Ala o Aib; Xaa16 es Val; Xaa18 es Ser o Lys; Xaa19 es Tyr; Xaa20 es Leu; Xaa22 es Gly o Glu; Xaa23 es Gln; Xaa25 es Ala o Val; Xaa26 es Lys o Arg; Xaa27 es Glu; Xaa30 es Ala; Xaa31 es Trp, Lys o His; Xaa33 es Val; Xaa34 es Lys, Gln o Arg; Xaa35 es Gly; Xaa36 es Arg; Xaa37 es Gly o Lys; y Xaa38 es Glu o está ausente. 5
39. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-38, en el que el péptido GLP-1 comprende Alb8.
40. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-39, en el que el péptido GLP-1 comprende Gln34.
41. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-40, en el que el péptido GLP-1 comprende Arg34.
42. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-41, en el que el péptido GLP-1 comprende Glu22.
43. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-42, en el que el péptido GLP-1 comprende dos residuos de 10 Lys.
44. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-43, en el que el péptido GLP-1 tiene solo dos residuos de Lys.
45. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-44, en el que el péptido GLP-1 comprende Lys26 y Lys37.
46. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-44, en el que el péptido GLP-1 comprende Lys18 y Lys26. 15
47. El derivado de cualquiera de las realizaciones 45 y 46, en el que el péptido GLP-1 comprende Gln34 o Arg34.
48. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-44, en el que el péptido GLP-1 comprende Lys18 y Lys31.
49. El derivado de la realización 48, en el que el péptido GLP-1 comprende Arg26 y Arg34.
50. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-49, en el que el péptido GLP-1 comprende los siguientes cambios de aminoácidos, en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3): (i) 8Aib, 34R, 37K; (ii) 8Aib, 31 H, 20 34Q, 37K; (iii) 31 H, 34Q, 37K; (iv) 34R, 37K, 38E; (v) 18K, 22E, 34Q; (vi) 8Aib, 18K, 22E, 25V, 26R, 31 K, 34R; (vii) 8Aib, 18K, 22E, 34Q; (viii) 8Aib, 18K, 22E, 34Q; (ix) 8Aib, 18K, 34Q; o (x) 8Aib, 34Q, 37K.
51. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-50, en el que el péptido GLP-1 tiene los siguientes cambios de aminoácidos, en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3): (i) 8Aib, 34R, 37K; (ii) 8Aib, 31 H, 34Q, 37K; (iii) 31 H, 34Q, 37K; (iv) 34R, 37K, 38E; (v) 18K, 22E, 34Q; (vi) 8Aib, 18K, 22E, 25V, 26R, 31 K, 34R; (vii) 25 8Aib, 18K, 22E, 34Q; (viii) 8Aib, 18K, 22E, 34Q; (ix) 8Aib, 18K, 34Q; o (x) 8Aib, 34Q, 37K.
52. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-51, en el que el número de cambios de aminoácidos en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3) se identifica por escritura a mano e inspección visual.
53. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-52, en el que el tipo y la posición de los cambios de ami-noácidos son tal y como se comparan con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3), y se identifican por escritura a mano e 30 inspección visual.
54. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-53, en el que el tipo y la posición de los cambios de ami-noácidos son tal y como se comparan con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3), y se identifican mediante el uso de una proteína patrón o un programa de alineamiento de péptidos.
55. El derivado de la realización 54, en el que el programa de alineamiento es un alineamiento de Needleman-35 Wunsch.
56. El derivado de cualquiera de las realizaciones 54-55, en el que se emplea la matriz de puntuación por de-fecto y la matriz de identidad por defecto.
57. El derivado de cualquiera de las realizaciones 54-56, en el que la matriz de puntuación es BLOSUM62.
58. El derivado de cualquiera de las realizaciones 54-57, en el que la penalización por el primer residuo en un 40 hueco es -10 (menos diez).
59. El derivado de cualquiera de las realizaciones 54-58, en el que las penalizaciones por residuos adicionales en un hueco es -0,5 (menos cero coma cinco).
60. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-59, en donde el resto de acción prolongada se selecciona entre Chem. 15 y Chem. 16: 45
Chem. 15: HOOC-(CH2)x-CO-*
Chem. 16: HOOC-C6H4-O-(CH2)y-CO-*,
en donde x es un número entero en el intervalo de 6-18 e y es un número entero en el intervalo de 3-11.
61. El derivado de la realización 60, en el que x es un número par.
62. El derivado de cualquiera de las realizaciones 60-61, en el que x es 12.
63. El derivado de cualquiera de las realizaciones 60-62, en el que y es un número impar. 5
64. El derivado de cualquiera de las realizaciones 60-63, en el que y es 7, 9 u 11.
65. El derivado de cualquiera de las realizaciones 60-64, en el que y es 9.
66. El derivado de cualquiera de las realizaciones 60-62, en el que y es un número par.
67. El derivado de la realización 66, en el que y es 10.
68. El derivado de cualquiera de las realizaciones 60-67, en el que el resto de acción prolongada es Chem. 15. 10
69. El derivado de cualquiera de las realizaciones 60-67, en el que el resto de acción prolongada es Chem. 16.
70. El derivado de cualquiera de las realizaciones 60-68, en el que Chem. 15 está representado por Chem. 15a:
71. El derivado de las realizaciones 60-67 y 69, en el que Chem. 16 está representado por Chem. 16a: 15
72. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-71, en el que al menos dos restos de acción prolongada son sustancialmente idénticos.
73. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-72, en el que al menos dos restos de acción prolongada tienen una similitud de al menos 0,5; preferiblemente al menos 0,6; más preferiblemente al menos 0,7 o al me-20 nos 0,8; incluso más preferiblemente al menos 0,9; o lo más preferiblemente al menos 0,99, tal como una simili-tud de 1,0.
74. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-73, en el que al menos dos enlazadores son sustancial-mente idénticos.
75. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-74, en el que al menos dos enlazadores tienen una simili-25 tud de al menos 0,5; preferiblemente al menos 0,6; más preferiblemente al menos 0,7 o al menos 0,8; incluso más preferiblemente al menos 0,9; o lo más preferiblemente al menos 0,99, tal como una similitud de 1,0.
76. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-75, en el que al menos dos cadenas laterales que consis-ten en un resto de acción prolongada y un enlazador son sustancialmente idénticas.
77. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-76, en el que al menos dos cadenas laterales que consis-30 ten en un resto de acción prolongada y un enlazador tienen una similitud de al menos 0,5; preferiblemente al menos 0,6; más preferiblemente al menos 0,7 o al menos 0,8; incluso más preferiblemente al menos 0,9; o lo más preferiblemente al menos 0,99, tal como una similitud de 1,0.
78. El derivado de cualquiera de las realizaciones 73, 75 y 77, en el que al menos las dos estructuras químicas que se van a comparar se representan como huellas, tales como: a) huellas ECFP_6; b) huellas UNITY; y/o c) 35 huellas MDL; y en donde para cada una de a), b) y c) el coeficiente de Tanimoto se utiliza preferiblemente para el cálculo de la similitud de las dos huellas.
79. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-78, en el que el enlazador es un péptido.
80. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-79, en el que el enlazador es un péptido que comprende 3-
7 residuos de aminoácidos.
81. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-80, en el que el enlazador es un péptido que consiste en 3-7 residuos de aminoácidos.
82. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-81, en el que el enlazador está fijado al grupo amino épsi-lon de cada residuo de Lys. 5
83. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-82, en el que el extremo C-terminal del enlazador está fija-do al grupo amino épsilon de cada residuo de Lys.
84. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-83, en el que el resto de acción prolongada y el enlazador están interconectados a través de un enlace amida.
85. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-84, en el que el extremo N-terminal del enlazador se fija al 10 extremo *-CO del resto de acción prolongada.
86. Un compuesto, preferiblemente de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-85, seleccionado a partir de los siguientes: Chem. 20, Chem. 21, Chem. 22, Chem. 23, Chem. 24, Chem. 25, Chem. 26, Chem. 27, Chem. 28 y Chem. 29; o una sal, una amida o un éster farmacéuticamente aceptable de los mismos.
87. Un compuesto caracterizado por su nombre, y seleccionado a partir de una lista de cada uno de los nom-15 bres de los compuestos de los Ejemplos 1-10 de este documento; o una sal, una amida o un éster farmacéuti-camente aceptable del mismo.
88. El compuesto de la realización 86, que es un compuesto de la realización 87.
89. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-82, que tiene actividad de GLP-1.
90. El derivado de la realización 89, en el que la actividad de GLP-1 se refiere a la capacidad de activar el re-20 ceptor de GLP-1 humano.
91. El derivado de la realización 90, en el que la activación del receptor de GLP-1 humano se mide en un ensa-yo in vitro, como la potencia de la producción de AMPc.
92. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-91, que tiene una potencia correspondiente a una CE50
a) inferior a 500 pM, preferiblemente inferior a 400 pM, más preferiblemente inferior a 300 pM, incluso más 25 preferiblemente inferior a 250 pM o lo más preferiblemente inferior a 200 pM; o
b) inferior a 150 pM, preferiblemente inferior a 125 pM, más preferiblemente inferior a 100 pM, incluso más preferiblemente inferior a 60 pM o lo más preferiblemente inferior a 50 pM.
93. El derivado de la realización 92, en el que la potencia se determina como la CE50 para la estimulación de la formación de AMPc en un medio que contiene el receptor de GLP-1 humano. 30
94. El derivado de la realización 93, en el que se utiliza una línea celular transfectada estable tal como BHK467-12A (tk-ts13).
95. El derivado de cualquiera de las realizaciones 93-94, en el que se emplea un ensayo de receptor funcional para la determinación de AMPc.
96. El derivado de cualquiera de las realizaciones 93-95, en el que el ensayo se basa en la competencia entre 35 el AMPc formado endógenamente y el AMPc añadido exógenamente, marcado con biotina.
97. El derivado de cualquiera de las realizaciones 93-96, en el que el AMPc es capturado usando un anticuerpo específico.
98. El derivado de cualquiera de las realizaciones 93-97, en el que el ensayo es el Ensayo de AMPc AlphaS-creen, preferiblemente el descrito en el Ejemplo 11 en el presente documento. 40
99. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-98, para el que la afinidad de la unión al receptor de GLP-1 (CI50) en presencia de 0,005% de HSA (albúmina baja), es
a) inferior a 50 nM, preferiblemente inferior a 25 nM, aún más preferiblemente inferior a 20 nM, incluso más preferiblemente inferior a 10 nM o lo más preferiblemente inferior a 5,0 nM; o
b) inferior a 1,0 nM o más preferiblemente inferior a 0,50 nM. 45
100. El derivado de la realización 99, en el que la afinidad de la unión al receptor de GLP-1 se mide por medio
de desplazamiento de 125I-GLP-1 desde el receptor, preferiblemente usando un ensayo de unión a SPA.
101. El derivado de la realización 100, en el que el receptor de GLP-1 se prepara utilizando una línea celular transfectada, estable, preferiblemente una línea de células de hámster, más preferiblemente una línea de célu-las de riñón de cría de hámster, tal como BHK tk-ts13.
102. El derivado de cualquiera de las realizaciones 99-101, en el que el valor de la CI50 se determina como la 5 concentración que desplaza el 50% de 125I-GLP-1 desde el receptor.
103. Una composición farmacéutica que comprende un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizacio-nes 1-102, y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
104. Un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-102, para uso como un medicamento.
105. Un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-102, para uso en el tratamiento y/o la pre-10 vención de todas las formas de diabetes y enfermedades relacionadas, tales como trastornos de la alimenta-ción, enfermedades cardiovasculares, enfermedades gastrointestinales, complicaciones diabéticas, enferme-dad crítica y/o síndrome de ovario poliquístico; y/o para mejorar los parámetros de lípidos, mejorar la función de las células β y/o para retrasar o prevenir la progresión de una enfermedad diabética.
106. Un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-92, para uso en la preparación de un medi-15 camento para el tratamiento y/o la prevención de todas las formas de diabetes y enfermedades relacionadas, tales como trastornos de la alimentación, enfermedades cardiovasculares, enfermedades gastrointestinales, complicaciones diabéticas, enfermedad crítica y/o síndrome de ovario poliquístico; y/o para mejorar los paráme-tros de lípidos, mejorar la función de las células β y/o para retrasar o prevenir la progresión de una enfermedad diabética. 20
Las siguientes son todavía otras realizaciones particulares de la invención:
i). Un derivado de un péptido GLP-1 en donde el péptido comprende al menos dos residuos de Lys, en donde un resto de acción prolongada está fijado al grupo amino épsilon de cada residuo de Lys, a través de un enla-zador que comprende Chem. 1:
ii). El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-2, en el que el enlazador comprende además Chem. 2:
iii). El derivado de cualquiera de las realizaciones i)-ii), en el que el enlazador comprende Chem. 3:
iv). El derivado de cualquiera de las realizaciones i)-iii) en el que el enlazador comprende Chem. 4: 30
v). El derivado de cualquiera de las realizaciones i)-iv), en el que el enlazador comprende además Chem. 5:
vi). El derivado de cualquiera de las realizaciones i)-v), en el que el enlazador comprende Chem. 6:
vii). El derivado de cualquiera de las realizaciones i)-vi), en el que el péptido GLP-1 es GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3) o un análogo del mismo que tiene un máximo de 10 cambios de aminoácidos en comparación con GLP 5 -1 (7-37) (SEQ ID NO: 3).
viii). El derivado de cualquiera de las realizaciones i)-vii), en el que el resto de acción prolongada se selecciona entre Chem. 15 y Chem. 16:
Chem. 15: HOOC-(CH2)x-CO-*
Chem. 16: HOOC-C6H4-O-(CH2)y-CO-*, 10
en donde x es un número entero en el intervalo de 6-18, e y es un número entero en el intervalo de 3-11.
ix). Un compuesto seleccionado a partir de los siguientes: Chem. 20, Chem. 21, Chem. 22, Chem. 23, Chem. 24, Chem. 25, Chem. 26, Chem. 27, Chem. 28 y Chem. 29; o una sal, una amida o un éster farmacéuticamente aceptable de los mismos.
x). Una composición farmacéutica que comprende un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 15 i)-ix), y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
xi). Un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones i)-ix), para uso como medicamento.
xii). Un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones i)-ix), para uso en el tratamiento y/o la preven-ción de todas las formas de diabetes y enfermedades relacionadas, tales como trastornos de la alimentación, enfermedades cardiovasculares, enfermedades gastrointestinales, complicaciones diabéticas, enfermedad crí-20 tica y/o síndrome de ovario poliquístico; y/o para mejorar los parámetros de lípidos, mejorar la función de las células β y/o para retrasar o prevenir la progresión de una enfermedad diabética.
xiii). Un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones i)-ix) para uso en la preparación de un medi-camento para el tratamiento y/o la prevención de todas las formas de diabetes y enfermedades relacionadas, tales como trastornos de la alimentación, enfermedades cardiovasculares, enfermedades gastrointestinales, 25 complicaciones diabéticas, enfermedad crítica y/o síndrome de ovario poliquístico; y/o para mejorar los paráme-tros de lípidos, mejorar la función de las células β y/o para retrasar o prevenir la progresión de una enfermedad diabética.
Ejemplos
Esta parte experimental comienza con una lista de abreviaturas, y continúa con una sección que incluye métodos 30 generales para la síntesis y la caracterización de análogos y derivados de la invención. A continuación, sigue una serie de ejemplos que se refieren a la preparación de derivados de GLP-1 específicos, y al final se ha incluido una serie de ejemplos relacionados con la actividad y las propiedades de estos análogos y derivados (sección titulada métodos farmacológicos).
Los ejemplos sirven para ilustrar la invención. 35
Lista de abreviaturas
Aib: Ácido α-aminoisobutírico
API: Principio activo farmacéutico
AUC: Área bajo la curva
BHK: Riñón de cría de hámster
Boc: t-butiloxicarbonilo
BSA: Albúmina de suero bovino
CAS: “Chemical Abstracts Service” (servicio de resúmenes de química)
Clt: 2-clorotritilo 5
colidina: 2,4,6-trimetilpiridina
DCM: diclorometano
DesH: des-amino histidina (también se puede denominar ácido imidazopropiónico, Imp)
DIC: diisopropilcarbodiimida
DIPEA: diisopropiletilamina 10
DMEM: Medio de Eagle Modificado por Dulbecco (DMEM)
EDTA: ácido etilendiaminotetracético
EGTA: ácido etilenglicol tetraacético
Fmoc: 9-fluorenilmetiloxicarbonilo
HATU: (hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio) 15
HBTU: (hexafluorofosfato de 2-(1H-benzotriazol-1-il-)-1,1,3,3-tetrametiluronio)
HEPES: ácido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazinetanosulfónico
HFIP: 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanol o hexafluoroisopropanol
HOAt: 1-hidroxi-7-azabenzotriazol
HPLC: Cromatografía líquida de alto rendimiento 20
HSA: Albúmina de suero humano
IBMX: 3-isobutil-1-metilxantina
Imp: ácido imidazopropiónico (también denominado des-amino histidina, DesH)
i.v.: por vía intravenosa
ivDde: 1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclohexiliden)-3-metilbutilo 25
LCMS: Cromatografía Líquida con Espectroscopía de Masas
MALDI-MS: Véase MALDI-TOF MS
MALDI-TOF MS: Espectroscopía de masas láser de desorción/ionización asistida por matriz con analizador de tiempo de vuelo
MeOH: metanol 30
Mmt: 4-metoxitritilo
Mtt: 4-metiltritilo
NMP: N-metil pirrolidona
OEG: ácido 8-amino-3,6-dioxaoctanoico
OtBu: éster terc butílico 35
Pbf: 2,2,4,6,7-pentametildihidrobenzofurano-5-sulfonilo
PBS: solución salina tamponada con fosfato
Pen/Strep: Penicilina/estreptomicina
RP: Fase inversa
RP-HPLC: Cromatografía líquida de alto rendimiento en fase inversa
RT: Temperatura ambiente
Rt: Tiempo de retención 5
s.c.: por vía subcutánea
SEC-HPLC: Cromatografía líquida de alto rendimiento de exclusión por tamaño
SPA: Ensayo de proximidad de centelleo
SPPS: Síntesis peptídica en fase sólida
tBu: terc. butilo 10
TFA: ácido trifluoroacético
TIS: triisopropilsilano
Tris: tris(hidroximetil)aminometano o 2-amino-2-hidroximetil-propano-1,3-diol
UPLC: Cromatografía líquida de ultra-alta resolución
Materiales y métodos 15
Materiales
Ácido N-α,N-β-di-Fmoc-L-2,3-diaminopropiónico (CAS 201473-90-7)
Ácido 3,5-di-terc-butil-4-hidroxibenzoico (CAS 1421-49-4)
Ácido 3,5-di-terc-butilbenzoico (CAS 16225-26-6)
Ácido Fmoc-8-amino-3,6-dioxaoctanoico (CAS 166108-71-0) 20
Ácido 17-(9-fluorenilmetiloxicarbonil-amino)-9-aza-3,6,12,15-tetraoxa-10-on-heptadecanoico (IRIS Biotech GmbH)
Éster 1-terc-butílico de ácido Fmoc-L-glutámico (CAS 84793-07-7)
Ácido 2-(2-metoxietoxi)acético (CAS 16024-56-9)
N-α,N-ε-bis(9-fluorenilmetiloxicarbonil)-L-lisina (CAS 78081-87-5) 25
Ácido 1-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]piperidina-4-carboxílico (CAS 148928-15-8)
Ácido FMOC-8-aminocaprílico (CAS 126631-93-4)
Ácido FMOC-6-aminohexanoico (CAS 88574-06-5)
Ácido FMOC-12-aminododecanoico (CAS 128917-74-8)
Éster terc-butílico de ácido 4-(9-carboxi-noniloxi)-benzoico (preparado como se describe en el Ejemplo 25, eta-30 pa 1 y 2 del documento WO 2006/082204)
Éster terc-butílico de ácido 4-(8-carboxi-octiloxi)-benzoico (P.f.: 71-72 °C).
1H RMN (300 MHz, CDCl3, δH): 7,93 (d, J=8,9 Hz, 2 H); 6,88 (d, J=8,9 Hz, 2 H); 4,00 (t, J=6,4 Hz, 2 H); 2,36 (t, J=7,4 Hz, 2 H); 1,80 (m, 2 H); 1,65 (m, 2 H); 1,59 (s, 9 H); 1,53-1,30 (m, 8 H) (preparado como se describe en el Ejemplo 25, etapa 1 y 2 del documento WO 2006/082204, sustituyendo 10-bromodecanoato de metilo con 9-35 bromononanoato de etilo (CAS 28598-81-4))
Éster terc-butílico de ácido 4-(7-carboxi-heptiloxi)-benzoico (espectro de 1H RMN (300 MHz, CDCl3, δH): 7,93 (d, J=9,0 Hz, 2 H); 6,88 (d, J=9,0 Hz, 2 H); 4,00 (t, J=6,5 Hz, 2 H); 2,37 (t, J=7,4 Hz, 2 H); 1,80 (m, 2 H); 1,64 (m, 2 H); 1,59 (s, 9 H); 1,53-1,33 (m, 6 H)) (preparado como se describe en el Ejemplo 25, etapa 1 y 2 del do-cumento WO 2006/082204, sustituyendo 10-bromodecanoato de metilo con 7-bromoheptanoato de etilo (CAS 40 29823-18-5))
Métodos químicos
Esta sección se divide en dos: la sección A que se refiere a métodos generales (de preparación (A1), y de detección y caracterización (A2)), y la sección B en la que se describe la preparación y la caracterización de una serie de com-puestos de los ejemplos específicos.
A. Métodos Generales 5
A1. Métodos de preparación
Esta sección se refiere a métodos para la síntesis de péptidos en fase sólida (métodos SPPS, incluyendo métodos para la desprotección de aminoácidos, métodos para escindir el péptido de la resina y para su purificación), así co-mo métodos para detectar y caracterizar el péptido resultante (métodos LCMS, MALDI y UPLC). La síntesis en fase sólida de péptidos se puede mejorar, en algunos casos, mediante el uso de dipéptidos protegidos en el enlace di-10 péptido amida con un grupo que se puede escindir en condiciones ácidas, tal como pero no limitado a, 2-Fmoc-oxi-4-metoxibencilo o 2,4,6-trimetoxibencilo. En los casos en que está presente en el péptido una serina o una treonina, se pueden emplear dipéptidos de seudoprolina (disponibles, por ejemplo, en Novabiochem, véase también W.R. Sam-pson (1999), J. Pep. Sci. 5, 403). Los derivados de aminoácidos protegidos con Fmoc usados eran los recomenda-dos convencionalmente: Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-15 Cys(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Met-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH o Fmoc-Val-OH etc. suministrados, por ejemplo, por Anaspec, Bachem, Iris Biotech o Novabiochem. Cuando no se especifica nada más, se emplea la forma L natural de los aminoácidos. El aminoácido N-terminal estaba protegido con Boc en el grupo amino alfa (por ejemplo, Boc-His(Boc)-OH o Boc-20 His(Trt)-OH para péptidos con His en el extremo N-terminal). En el caso de una fijación modular del resto que se une a albúmina usando SPPS, se emplearon los siguientes componentes fundamentales protegidos de forma adecuada, tales como, pero no limitados a ácido Fmoc-8-amino-3,6-dioxaoctanoico, ácido Fmoc-tranexámico, Fmoc-Glu-OtBu, éster mono-terc-butílico de ácido octadecanodioico, éster mono-terc-butílico de ácido nonadecanodioico, éster mono-terc-butílico de ácido tetradecanodioico o éster terc-butílico de ácido 4-(9-carboxinoniloxi)benzoico. Todas las 25 operaciones indicadas a continuación se realizaron a escala de síntesis a 250 µmol.
1. Síntesis de resina unida a la cadena principal peptídica protegida
Método: SPPS_A
La peptidil resina protegida se sintetizó según la estrategia Fmoc en un sintetizador de péptidos Applied Biosystems 433 a escala 250 µmol o 1000 µmol con un exceso de tres o de cuatro veces Fmoc-aminoácidos, usando los proto-30 colos FastMoc UV suministrados por el fabricante que emplean acoplamientos mediados por HBTU (hexafluorofosfa-to de 2-(1H-benzotriazol-1-il-)-1,1,3,3-tetrametiluronio) o HATU (hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio) en NMP y vigilancia con UV de la desprotección del grupo de protección Fmoc, en algunos casos se usaron acoplamientos dobles, lo que significa que después del primer acoplamiento, se drena la resina y se añaden más Fmoc-aminoácidos y reactivos. La resina de partida utilizada para la síntesis de las amidas de pépti-35 dos era una resina Rink-amida y una resina Wang cargada previamente (por ejemplo, Fmoc-Gly-Wang o Fmoc-Lys(Mtt)-Wang de carga baja) o una resina de clorotritilo para péptidos con un carboxi C-terminal. Los derivados de aminoácidos protegidos usados eran Fmoc-aminoácidos convencionales (suministrados, por ejemplo, por Anaspec o Novabiochem) suministrados en cartuchos pesados previamente, adecuados para el sintetizador ABI433A, con la excepción de aminoácidos no naturales tales como Fmoc-Aib-OH (ácido Fmoc-aminoisobutírico). El aminoácido N-40 terminal se protegió con Boc en el grupo amino alfa (por ejemplo, Boc-His(Boc)-OH o Boc-His(Trt)-OH se usó para péptidos con His en el extremo N-terminal). El grupo amino épsilon de las lisinas en la secuencia estaba protegido con Mtt, Mmt, Dde, ivDde o Boc, dependiendo de la ruta de fijación del resto que se une a albúmina y el espaciador. La síntesis de los péptidos se puede mejorar en algunos casos mediante el uso de dipéptidos protegidos en el enla-ce amida dipéptido con un grupo que se puede escindir en condiciones ácidas, tales como pero no limitados a 2-45 Fmoc-oxi-4-metoxibencilo o 2,4,6-trimetoxibencilo. En los casos en los que está presente en el péptido una serina o una treonina, se puede emplear el uso de dipéptidos de seudoprolina (véase por ejemplo, el catálogo de Novobio-chem 2009/2010 o una versión más nueva, o W.R. Sampson (1999), J. Pep. Sci. 5, 403).
Método: SPPS_P
SPPS_P se realizó en un sintetizador de péptidos en fase sólida Prelude de Protein Technologies (Tucson, AZ 50 85714 EE.UU.) a escala 250 µmol, utilizando un exceso de seis veces Fmoc-aminoácidos (300 mM en NMP con HOAt 300 mM u Oxyma Pure®) en relación con la carga de resina, por ejemplo, Fmoc-Gly-Wang con carga baja (0,35 mmol/g). La desprotección de Fmoc se realizó utilizando 20% de piperidina en NMP. El acoplamiento se reali-zó usando 3:3:3:4 aminoácido/(HOAt u Oxyma Pure®)/DIC/colidina en NMP. Los lavados superiores con NMP y DCM (7 ml, 0,5 min, 2 x 2 cada uno) se realizaron entre las etapas de desprotección y acoplamiento. Los tiempos de 55 acoplamiento fueron generalmente de 60 minutos. Algunos aminoácidos incluyendo, pero no limitados a Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Aib-OH o Boc-His(Trt)-OH estaban "doblemente acoplados", lo que significa que después del primer acoplamiento (por ejemplo, 60 min), la resina se drena y se añaden más reactivos (aminoácido, (HOAt u
Oxyma Pure®), DIC y colidina), y se permite que la mezcla reaccione de nuevo (por ejemplo, 60 min).
Método: SPPS_CS
La cadena principal peptídica se sintetizó de acuerdo con una estrategia convencional de Fmoc en un sintetizador de péptidos CS Bio preparado a medida, a escala 250 µmol a 6000 µmol, con un exceso de cuatro veces Fmoc-aminoácidos preactivados, utilizando protocolos que emplean acoplamientos mediados con 2-ciano-2-5 (hidroxiimino)acetato de etilo y diisopropilcarbodiimida en NMP. Se empleó la vigilancia con UV para asegurar una desprotección completa de Fmoc mediante tratamiento con 20% de piperidina en NMP. En algunos casos se usaron acoplamientos dobles, lo que significa que después del primer acoplamiento, la resina se drena y se añade más Fmoc-aminoácido preactivado. La resina de partida usada para la síntesis de las amidas de péptidos era una resina Rink-amida y una resina Wang cargada previamente (por ejemplo, Fmoc-Gly-Wang o Fmoc-Lys(Mtt)Wang de baja 10 carga) o resina de clorotritilo para péptidos con un carboxi C-terminal. Los derivados de aminoácidos protegidos usados eran Fmoc-aminoácidos convencionales (suministrados, por ejemplo, por Anaspec o Novabiochem). El ami-noácido N-terminal estaba protegido con Boc en el grupo amino alfa (por ejemplo, Boc-His(Boc)-OH o Boc-His(Trt)-OH se utilizaron para péptidos con His en el extremo N-terminal). El grupo amino épsilon de las lisinas en la secuen-cia estaba protegido con Mtt, Mmt, Dde, ivDde o Boc, dependiendo de la ruta de fijación del resto que se une a al-15 búmina y del espaciador. La síntesis de los péptidos se puede mejorar en algunos casos mediante el uso de dipépti-dos protegidos en el enlace amida dipéptido con un grupo que se puede escindir en condiciones ácidas, tales como pero no limitados a 2-Fmoc-oxi-4-metoxibencilo o 2,4,6-trimetoxibencilo. En los casos en los que está presente en el péptido una serina o una treonina, se puede emplear el uso de dipéptidos de seudoprolina (véase por ejemplo, el catálogo de Novobiochem 2009/2010 o una versión más nueva, o W.R. Sampson (1999), J. Pep. Sci. 5, 403). 20
Método: SPPS_L
SPPS_L se realizó en un sintetizador de péptidos Liberty basado en microondas de CEM Corp. (Matthews, NC 28106, EE.UU.) a escala 250 µmol o 100 µmol utilizando un exceso de seis veces Fmoc-aminoácidos (300 mM en NMP con HOAt 300 mM u Oxyma Pure®) en relación con la carga de resina, por ejemplo, Fmoc-Gly-Wang de carga baja (0,35 mmol/g). La desprotección de Fmoc se realizó utilizando 5% de piperidina en NMP hasta 75°C durante 30 25 segundos, en donde después la resina se drenó y se lavó con NMP y la desprotección de Fmoc se repitió esta vez durante 2 minutos a 75°C. El acoplamiento se realizó usando 1:1:1 aminoácido/(HOAt u Oxyma Pure®)/DIC en NMP. Los tiempos de acoplamiento y las temperaturas eran generalmente de 5 minutos hasta 75°C. Los tiempos de aco-plamiento más largos se utilizaron para reacciones a mayor escala, por ejemplo, 10 min. Los aminoácidos de histidi-na se acoplaron doblemente a 50°C, o de forma cuádruple si el aminoácido anterior estaba impedido estéricamente 30 (por ejemplo, Aib). Los aminoácidos de arginina se acoplaron a TA durante 25 minutos y después se calentaron a 75°C durante 5 min. Algunos aminoácidos tales como, pero no limitados a Aib, se "acoplaron de forma doble", lo que significa que después del primer acoplamiento (por ejemplo, 5 min a 75°C), la resina se drena y se añaden más reactivos (aminoácido, (HOAt u Oxyma Pure®) y DIC), y la mezcla se calienta de nuevo (por ejemplo, 5 min a 75°C). Los lavados con NMP (5 x 10 ml) se realizaron entre las etapas de desprotección y acoplamiento. 35
2. Síntesis de cadenas laterales
Monoésteres de diácidos grasos
El reflujo durante una noche de los diácidos C8, C10, C12, C14, C16 y C18 con Boc-anhídrido DMAP t-butanol en tolueno proporciona predominantemente el mono éster t-butílico. Después de la elaboración se obtiene una mezcla de monoácido, diácido y diéster. La purificación se lleva a cabo mediante lavado, filtración con tapón de sílice corta y 40 cristalización.
3. Fijación de las cadenas laterales a la resina unida a la cadena principal peptídica protegida
Cuando una acilación está presente en una cadena lateral de lisina, el grupo amino épsilon de la lisina que se va a acilar estaba protegido con Mtt, Mmt, Dde, ivDde o Boc, dependiendo de la ruta para la fijación del resto de acción prolongada y el enlazador. La desprotección de Dde o ivDde se realizó con 2% de hidrazina en NMP (2 x 20 ml, 45 cada vez 10 min) seguida de lavados con NMP (4 x 20 ml). La desprotección de Mtt o Mmt se realizó con 2% de TFA y 2-3% de TIS en DCM (5 x 20 ml, cada vez 10 min) seguida de lavados con DCM (2 x 20 ml), MeOH al 10% y DI-PEA al 5% en DCM (2 x 20 ml) y NMP (4 x 20 ml), o mediante tratamiento con hexafluoroisopropanol/DCM (75:25, 5 x 20 ml, cada vez 10 min) seguido de lavados como anteriormente. En algunos casos, el grupo Mtt se eliminó me-diante etapas automatizadas en el sintetizador de péptidos Liberty. La desprotección de Mtt se realizó con hexafluo-50 roisopropanol o hexafluoroisopropanol/DCM (75:25) a temperatura ambiente durante 30 min, seguida de lavado con DCM (7 ml x 5), seguido por lavados con NMP (7 ml x 5). El resto de acción prolongada y/o el enlazador se pueden fijar al péptido ya sea por acilación del péptido unido a la resina o por acilación en solución del péptido sin protec-ción. En caso de fijación del resto de acción prolongada y/o el enlazador a la peptidil resina protegida, la fijación puede ser modular utilizando SPPS y componentes fundamentales protegidos adecuadamente. 55
Método: SC_P
Si el grupo de protección de N-ε-lisina era Mtt, el grupo Mtt se eliminó con HFIP puro (3 x 15 min) seguido de lava-
dos con DCM y acilación realizada en un sintetizador de péptidos Prelude ((10 eq. de Fmoc-AA, 10 eq. de DIC y 10 eq. de HOAt, 10 eq. de colidina 30 min y 25% de piperidina en NMP para eliminar el grupo Fmoc). Fmoc-Glu-OtBu se acopló de forma doble durante 4 horas. El residuo terminal se fijó usando condiciones similares.
Método: SC_A
Si el grupo de protección de N-ε-lisina era Mtt, la desprotección de Mtt se realizó mediante tratamiento con hexafluo-5 roisopropanol (5 - 10 ml x 2, cada vez 10 min, escala 0,12-0,25 mmol) seguido de lavados con DCM (8 ml x 6). Los Fmoc-aminoácidos y el resto que se une a la albúmina estaban fijados al péptido mediante acilación del péptido unido a la resina usando la estrategia Fmoc en un sintetizador de péptidos Applied Biosystems 433 a escala 125 µmol o 250 µmol, con un exceso de cuatro veces Fmoc-aminoácidos y el resto que se une a la albúmina, usando los protocolos de FastMoc UV suministrados por el fabricante que emplean acoplamientos mediados por HBTU (hexa-10 fluorofosfato de 2-(1H-benzotriazol-1-il-)-1,1,3,3-tetrametiluronio) o HATU (hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio) en NMP (N-metil pirrolidona) y vigilancia con UV de la desprotección del grupo de protección Fmoc, en algunos casos se usaron acoplamientos dobles.
Método: SC_CS
El grupo de protección de N-ε-lisina se eliminó como se ha descrito anteriormente. La modificación química del resi-15 duo de lisina se sintetizó de acuerdo con la estrategia convencional de Fmoc en un sintetizador de péptidos CS Bio fabricado a medida, a escala 250 µmol hasta 6000 µmol con un exceso de cuatro veces Fmoc-aminoácidos preacti-vados, utilizando protocolos que emplean acoplamientos mediados por 2-ciano-2-(hidroxiimino)acetato de etilo y diisopropilcarbodiimida en NMP. Se empleó vigilancia con UV para asegurar una desprotección completa de Fmoc mediante tratamiento con 20% de piperidina en NMP. En algunos casos se usaron acoplamientos dobles, lo que 20 significa que después del primer acoplamiento, la resina se drena y se añade más Fmoc-aminoácido preactivado. Los derivados de aminoácidos protegidos usados eran Fmoc-aminoácidos convencionales (suministrados, por ejem-plo, por Anaspec o Novabiochem) o ácidos sintéticos preparados por síntesis orgánica convencional.
4. Escisión del péptido unido a la resina con o sin cadenas laterales fijadas y purificación Método: CP_M1
Después de la síntesis, la resina se lavó con DCM y el péptido se escindió de la resina mediante un tratamiento de 25 2-3 horas con TFA/TIS/agua (95/2,5/2,5 o 92,5/5/2,5), seguido de precipitación con éter dietílico. El péptido se disol-vió en un disolvente adecuado (tal como, por ejemplo, ácido acético al 30%) y se purificó por RP-HPLC convencional en una columna C18, 5 µM, usando acetonitrilo/agua/TFA. Las fracciones se analizaron mediante una combinación de métodos UPLC, MALDI y LCMS, y las fracciones apropiadas se agruparon y se liofilizaron.
A2. Métodos generales para la detección y caracterización 30
1. Métodos de LC-MS
Método: LCMS_4
LCMS_4 se realizó en una configuración que consistía en un sistema de UPLC de Waters Acquity y espectrómetro de masas LCT Premier XE de Micromass. Eluyentes: A: ácido fórmico al 0,1% en agua. B: ácido fórmico al 0,1% en acetonitrilo. El análisis se realizó a TA inyectando un volumen apropiado de la muestra (preferiblemente 2-10 μl) en 35 la columna que eluyó con un gradiente de A y B. Las condiciones de UPLC, los ajustes del detector y los ajustes del espectrómetro de masas eran: columna: Waters Acquity UPLC BEH, C-18, 1,7 μm, 2,1 mm x 50 mm. Gradiente: Lineal 5% - 95% de acetonitrilo durante 4,0 min (alternativamente 8,0 min) a 0,4 ml/min. Detección: 214 nm (salida analógica desde TUV (detector de UV sintonizable)) modo de ionización MS: barrido API-ES: 100-2000 amu (alter-nativamente 500-2000 amu), etapa 0,1 amu. 40
Método: LCMS_AP
LCMS_AP se realizó utilizando un espectrómetro de masas micro API de Micromass Quatro para identificar la masa de la muestra después de la elución a partir de un sistema de HPLC compuesto por un módulo de gradiente binario Waters 2525, estación de preparación de muestras Waters 2767, detector de matriz de fotodiodos Waters 2767 y detector ELS Waters 2420. Eluyentes: A: 0,1% de ácido trifluoroacético en agua; B: 0,1% de ácido trifluoroacético en 45 acetonitrilo. Columna: Phenomenex Synergi MAXRP, 4 um, 75x4,6 mm. Gradiente: 5% - 95% de B durante 7 min a 1,0 ml/min.
2. Métodos de UPLC
Método: B5_1
El análisis RP se realizó utilizando un sistema de UPLC de Waters equipado con un detector de banda dual. Las 50 detecciones con UV a 214 nm y 254 nm se recogieron usando una columna ACQUITY UPLC BEH130, C18, 130 Å, 1,7 um, 2,1 mm x 150 mm, 40°C. El sistema de UPLC se conectó a dos depósitos de eluyente que contenían: A: Na2SO4 0,2 M, H3PO4 0,04 M, 10% de CH3CN (pH 3,5); B: 70% de CH3CN, 30% de H2O. Se empleó el siguiente gradiente lineal: 60% de A, 40% de B hasta 30% de A, 70% de B durante 8 minutos con un caudal de 0,40 ml/min.
Método: B7_1
El análisis RP se realizó utilizando un sistema de UPLC de Waters equipado con un detector de banda dual. Las detecciones con UV a 214 nm y 254 nm se recogieron usando una columna ACQUITY UPLC BEH130, C18, 130 Å, 1,7 um, 2,1 mm x 150 mm, 40°C. El sistema de UPLC se conectó a dos depósitos de eluyente que contenían: A: Na2SO4 0,2 M, H3PO4 0,04 M, 10% de CH3CN (pH 3,5); B: 70% de CH3CN, 30% de H2O. Se empleó el siguiente 5 gradiente lineal: 80% de A, 20% de B hasta 40% de A, 60% de B durante 8 minutos con un caudal de 0,40 ml/min.
Método: A3_1
El análisis RP se realizó utilizando un sistema de UPLC de Waters equipado con un detector de banda dual. Las detecciones con UV a 214 nm y 254 nm se recogieron usando una columna ACQUITY UPLC BEH130, C18, 130 Å, 1,7 um, 2,1 mm x 150 mm, 40°C. El sistema de UPLC se conectó a dos depósitos de eluyente que contenían: A: 10 90% de H2O, 10% de CH3CN, bicarbonato de amonio 0,25 M; B: 70% de CH3CN, 30% de H2O. Se empleó el si-guiente gradiente lineal: 75% de A, 25% de B hasta 45% de A, 55% de B durante 16 minutos con un caudal de 0,40 ml/min.
Método: A6_1
El análisis RP se realizó utilizando un sistema de UPLC de Waters equipado con un detector de banda dual. Las 15 detecciones con UV a 214 nm y 254 nm se recogieron usando una columna ACQUITY UPLC BEH130, C18, 130 Å, 1,7 um, 2,1 mm x 150 mm, 40°C. El sistema de UPLC se conectó a dos depósitos de eluyente que contenían: A: TRIS 10 mM, sulfato de amonio 15 mM, 80% de H2O, 20% de CH3CN, pH 7,3; B: 80% de CH3CN, 20% de H2O. Se empleó el siguiente gradiente lineal: 95% de A, 5% de B hasta 10% de A, 90% de B durante 16 minutos con un cau-dal de 0,35 ml/min. 20
Método: B2_1
El análisis RP se realizó utilizando un sistema de UPLC de Waters equipado con un detector de banda dual. Las detecciones con UV a 214 nm y 254 nm se recogieron usando una columna ACQUITY UPLC BEH130, C18, 130 Å, 1,7 um, 2,1 mm x 150 mm, 40°C. El sistema de UPLC se conectó a dos depósitos de eluyente que contenían: A: 99,95% de H2O, 0,05% de TFA; B: 99,95% de CH3CN, 0,05% de TFA. Se utilizó el siguiente gradiente lineal: 95% de 25 A, 5% de B hasta 40% de A, 60% de B durante 16 minutos con un caudal de 0,40 ml/min.
Método: B14_1
El análisis RP se realizó utilizando un sistema de UPLC de Waters equipado con un detector de banda dual. Las detecciones con UV a 214 nm y 254 nm se recogieron usando una columna ACQUITY UPLC BEH ShieldRP18, 1,7 um, 2,1 mm x 150 mm, 50°C. El sistema de UPLC se conectó a dos depósitos de eluyente que contenían: A: 99,95% 30 de H2O, 0,05% de TFA; B: 99,95% de CH3CN, 0,05% de TFA. Se utilizó el siguiente gradiente lineal: 70% de A, 30% de B hasta 40% de A, 60% de B durante 12 minutos con un caudal de 0,40 ml/min.
Método: B31_1
El análisis RP se realizó utilizando un sistema de UPLC de Waters equipado con un detector de banda dual. Las detecciones con UV a 214 nm y 254 nm se recogieron usando una columna Kinetex 1,7 u C18, 100A, 2,1 x 150 mm, 35 60°C. El sistema de UPLC se conectó a dos depósitos de eluyente que contenían: A: 90% de agua, 10% de MeCN con (NH4)2HPO4 0,045 M, pH 3,6, B: 20% de isopropanol, 20% de agua y 60% de CH3CN. Se utilizó la siguiente etapa de gradiente: 25% de B y 75% de A durante 2 minutos, a continuación 25% de B, 75% de A hasta 55% de B, 45% de A durante 15 minutos, después 55% de B, 45% de A hasta 80% de B, 20% de A durante 3 minutos con un caudal de 0,5 ml/min. 40
Método: AP_B4_1
El análisis RP se realizó utilizando un sistema de UPLC de Waters equipado con un detector de banda dual. Las detecciones con UV a 214 nm y 254 nm se recogieron usando una columna ACQUITY UPLC BEH130, C18, 130 Å, 1,7 um, 2,1 mm x 150 mm, 30°C. El sistema de UPLC se conectó a dos depósitos de eluyente que contenían: A: 99,95% de H2O, 0,05% de TFA; B: 99,95% de CH3CN, TFA al 0,05%. Se utilizó el siguiente gradiente lineal: 95% de 45 A, 5% de B hasta 5% de A, 95% de B durante 16 minutos con un caudal de 0,40 ml/min.
Método: B4_1
El análisis RP se realizó utilizando un sistema de UPLC de Waters equipado con un detector de banda dual. Las detecciones con UV a 214 nm y 254 nm se recogieron usando una columna ACQUITY UPLC BEH130, C18, 130 Å, 1,7 um, 2,1 mm x 150 mm, 40°C. El sistema de UPLC se conectó a dos depósitos de eluyente que contenían: A: 50 99,95% de H2O, 0,05% de TFA; B: 99,95% de CH3CN, 0,05% de TFA. Se utilizó el siguiente gradiente lineal: 95% de A, 5% de B hasta 5% de A, 95% de B durante 16 minutos con un caudal de 0,40 ml/min.
Método: B29_1
El análisis RP se realizó utilizando un sistema de UPLC de Waters equipado con un detector de banda dual. Las detecciones con UV a 214 nm y 254 nm se recogieron usando una columna Kinetex 1,7 μm C18, 100 Å, 2,1 x 150 mm, 60°C. El sistema de UPLC se conectó a dos depósitos de eluyente que contenían: A: 90% de agua y 10% de CH3CN con (NH4)2HPO4 0,09 M, pH 3,6, B: 20% de isopropanol, 20% de agua y 60% de CH3CN. Se utilizó la si-guiente etapa de gradiente: 35% de B y 65% de A durante 2 minutos, a continuación 35% de B, 65% de A hasta 5 65% de B, 35% de A durante 15 minutos, después 65% de B, 35% de A hasta 80% de B, 20% de A durante 3 minu-tos con un caudal de 0,5 ml/min.
3. Método MALDI-MS
Método: MALDI_MS
Los pesos moleculares se determinaron utilizando espectroscopía de masas de desorción e ionización láser asistida 10 por matriz con analizador de tiempo de vuelo, registrados en un Microflex o Autoflex (Bruker). Se utilizó una matriz de ácido alfa-ciano-4-hidroxi cinámico.
B. Compuestos de Ejemplos específicos
Ejemplo 1
Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[10-(4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]-3-15 hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil],Nε37-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[10-(4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Aib8,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-péptido
Método de preparación: SPPS_A, SC_A, CP_M1
Método UPLC: B2_1: Rt = 12,52 min
Método UPLC: B5_1: Rt = 5,50 min
Método UPLC: A3_1: Rt = 9,20 min
Método LCMS: LCMS_4: Rt = 2,22 min; m/3:1744; m/4:1308; m/5:1347 25
Ejemplo 2
Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[10-(4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil],Nε37-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[10-(4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-30 hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Aib8,His31,Gln34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-péptido
Método de preparación: SPPS_A, SC_A, CP_M1
Método UPLC: B2_1: Rt = 11,57 min
Método UPLC: B7_1: Rt = 7,74 min
Método UPLC: A3_1: Rt = 6,56 min 5
Método LCMS: LCMS_4: Rt = 1,98 min; m/3:1718; m/4:1289; m/5:1032
Ejemplo 3
Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[10-(4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil],Nε37-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[10-(4-10 carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[His31,Gln34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-péptido
Método de preparación: SPPS_A, SC_A, CP_M1 15
Método UPLC: B14_1: Rt = 5,39 min
Método UPLC: A6_1: Rt = 4,15 min
Método LCMS: LCMS_4: Rt = 1,98 min; m/3:1713; m/4:1285; m/5:1028
Ejemplo 4
Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[10-(4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil],Nε37-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[10-(4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-5 hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-peptidil-Glu
Método de preparación: SPPS_A, SC_A, CP_M1
Método UPLC: B14_1: Rt = 10,77 min 10
Método UPLC: A6_1: Rt = 4,13 min
Método LCMS: LCMS_4: Rt = 2,06 min; m/3:1783; m/4:1337; m/5:1070
Ejemplo 5
Nε18-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[10-(4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-15 hidroxipropanoil]amino]acetil],Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[10-(4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Lys18,Glu22,Gln34]-GLP-1-(7-37)-péptido
Método de preparación: SPPS_A, SC_A, CP_M1
Método UPLC: B14_1: Rt = 6,77 min
Método UPLC: A6_1: Rt = 9,03 min
Método LCMS: LCMS_4: Rt = 2,06 min; m/3:1744; m/4:1308; m/5:1047 5
Ejemplo 6
Nε18-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-(13-carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil],Nε31-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-(13-carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-10 hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Aib8,Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-péptido
Método de preparación: SPPS_A, SC_A, CP_M1 15
Método UPLC: B14_1: Rt = 4,83 min
Método UPLC: A6_1: Rt = 5,45 min
Método LCMS: LCMS_4: Rt = 1,94 min; m/3:1725; m/4:1294; m/5:1035
Ejemplo 7
Nε18-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[10-(4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil],Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[10-(4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Aib8,Lys18,Glu22,Gln34]-GLP-1-(7-37)-péptido 5
Método de preparación: SPPS_A, SC_A, CP_M1
Método UPLC: B14_1: Rt = 6,69min,
Método LCMS: LCMS_4: Rt = 2,27min; m/3:1749; m/4:1312; m/5:1050 10
Ejemplo 8
Nε18-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-(13-carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil],Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-(13-carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-15 hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Aib8,Lys18,Glu22,Gln34]-GLP-1-(7-37)-péptido
Método de preparación: SPPS_A, SC_A, CP_M1
Método UPLC: B14_1: Rt = 6,46 min
Método LCMS: LCMS_4: Rt = 2,29 min; m/3:1716; m/4:1287; m/5:1030
Ejemplo 9
Nε18-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[10-(4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-5 hidroxipropanoil]amino]acetil],Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[10-(4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Aib8,Lys18,Gln34]-GLP-1-(7-37)-péptido
Método de preparación: SPPS_P, SC_P, CP_M1
Método UPLC: B31_1: Rt =14,9 min
Método UPLC: A6_1: Rt = 4,9 min
La masa molecular teórica de Pm 5174 se confirmó mediante:
Método: Maldi_MS: 5173 15
Ejemplo 10
Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-(13-carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil],Nε37-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-(13-carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-20 hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Aib8,Gln34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-péptido
Método de preparación: SPPS_A, SC_A, CP_M1
Método UPLC: B4_1: Rt = 8,51 min,
Método UPLC: A6_1: Rt = 6,36 min,
Método LCMS: LCMS_4: Rt = 2,27 min; m/3:1703; m/4:1277; m/5:1030 5
Ejemplo 11
Nα(Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[10-(4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Aib8,His31,Gln34]-GLP-1-(7-37)-peptidil)-Nε[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[10-(4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-10 hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]Lys
Método de preparación: SPPS_A, SC_A, CP_M1
Método UPLC: B2_1: Rt = 11,72 min 15
Método UPLC: A3_1: Rt = 6,46 min
Método LCMS: LCMS_4: Rt = 2,20 min; m/3:1738; m/4:1304; m/5:1043
Ejemplo 12
Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-(13-carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-20 hidroxipropanoil]amino]acetil], Nε37-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-(13-
carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Aib8,His34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-péptido
Método de preparación: SPPS_A, SC_A, CP_M1 5
Método UPLC: B4_1: Rt = 8,33 min
Método LCMS: LCMS_4: Rt = 2,13 min; m/3:1705; m/4:1279; m/5:1023
Ejemplo 13
Nε18-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-10 hidroxipropanoil]amino]acetil], Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Aib8,Lys18,Gln34]-GLP-1-(7-37)-péptido
Método de preparación: SPPS_P; SC_P; CP_M1
Método UPLC: AP_B4_1: Rt = 9,17 min
Método LCMS: LCMS_AP: m/3 = 1745
Ejemplo 14
Nε18-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil], Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-5 carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Aib8,Lys18,Gln34]-GLP-1-(7-37)-péptido
Método de preparación: SPPS_P, SC_P, CP_M1 10
Método UPLC: B4_1: Rt = 8,65 min
Método LCMS: LCMS_4: Rt = 2,33 min; m/3:1735; m/4:1302
Ejemplo 15
Nε18-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]propanoil]amino]-15 3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]propanoil], Nε26-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]propanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]propanoil]-[Aib8,Lys18,Gln34]-GLP-1-(7-37)-péptido
Método de preparación: SPPS_P, SC_P, CP_M1
Método UPLC: B4_1: Rt = 8,70 min
Método LCMS: LCMS_4: Rt = 2,33 min; m/3:1753; m/4:1315
Ejemplo 16 5
Nε18-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil], Nε26-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-10 hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]-[Aib8,Lys18,Gln34]-GLP-1-(7-37)-péptido
Método de preparación: SPPS_P, SC_P, CP_M1
Método UPLC: B4_1: Rt = 8,61 min
Método LCMS: LCMS_4: Rt = 2,33 min; m/3:1775; m/4:1331
Ejemplo 17
Nε18-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-5 carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil], Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-10 hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Aib8,Lys18,Gln34]-GLP-1-(7-37)-péptido
Método de preparación: SPPS_P, SC_P, CP_M1
Método UPLC: B4_1: Rt = 8,28 min
Método LCMS: LCMS_4: Rt = 2,50 min; m/4:1533; m/5:1226
Ejemplo 18
Nε18-[(2S)-2-amino-6-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-20 carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]hexanoil], Nε26-[(2S)-2-amino-6-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]hexanoil]-[Aib8,Lys18,Gln34]-GLP-1-(7-37)-péptido 25
Método de preparación: SPPS_P, SC_P, CP_M1
Método UPLC: B4_1: Rt = 8,11 min
Método LCMS: LCMS_AP: Rt = 4,79 min; m/3:1820; m/4:1365
Ejemplo 19 5
Nε18-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]hexanoil], Nε26-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-10 hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]hexanoil]-[Aib8,Lys18,Gln34]-GLP-1-(7-37)-péptido
Método de preparación: SPPS_P, SC_P, CP_M1 15
Método UPLC: B4_1: Rt = 8,61 min
Método LCMS: LCMS_4: Rt = 2,20 min; m/3:1860; m/4:1395; m/5:1117
Ejemplo 20
Nε18-[(2S)-2-amino-6-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]hexanoil], Nε26-[(2S)-2-amino-6-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-5 2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]hexanoil]-[Aib8,Lys18,Gln34]-GLP-1-(7-37)-péptido
Método de preparación: SPPS_P, SC_P, CP_M1
Método UPLC: B4_1: Rt = 7,85 min
Método LCMS: LCMS_4: Rt = 2,58 min; m/4:1597; m/5:1277
Ejemplo 21 15
Nε18-[(2S)-2-amino-6-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-20 hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]hexanoil], Nε26-[(2S)-2-amino-6-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-25 hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]hexanoil]-[Aib8,Lys18,Gln34]-GLP-1-(7-37)-péptido
Método de preparación: SPPS_P, SC_P, CP_M1
Método UPLC: B29_1: Rt = 8,42 min
Método LCMS: LCMS_4: Rt = 2,52 min; m/4:1828; m/5:1463
Ejemplo 22 5
Nε18-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-(13-carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil], Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-(13-carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Aib8,Lys18,Gln34]-GLP-1-(7-37)-péptido 10
Método de preparación: SPPS_P, SC_P, CP_M1
Método UPLC: B2_1: Rt = 8,27 min
Método UPLC: A6_1: Rt = 4,85 min 15
Método LCMS: LCMS_4: Rt = 2,4 min; m/4:1269
Ejemplo 23
Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-(15-carboxipentadecanoilamino)butanoil]amino]-3-
hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil], Nε37-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-(15-carboxipentadecanoilamino)butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Aib8,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-péptido
Método de preparación: SPPS_P, SC_A, CP_M1
Método UPLC: B4_1: Rt = 8,76 min
Método LCMS: LCMS_4: Rt = 2,27 min; m/3:1731; m/4:1298; m/5:1039
Ejemplo 24 10
Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil], Nε37-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Aib8,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-péptido 15
Método de preparación: SPPS_P, SC_A, CP_M1
Método UPLC: B4_1: Rt = 8,67 min
Método LCMS: LCMS_4: Rt = 2,40 min; m/3:1763; m/4:1322 20
Ejemplo 25
Nε26-[(2S)-2-amino-6-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-
carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]hexanoil], Nε37-[(2S)-2-amino-6-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]hexanoil]-[Aib8,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-péptido 5
Método de preparación: SPPS_L, SC_A, CP_M1
Método UPLC: B4_1: Rt = 8,70 min
Método LCMS: LCMS_4: Rt = 2,10 min; m/3:1849; m/4:1387; m/5:1110 10
Ejemplo 26
Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil], Nε37-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-15 hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Imp7,Aib8,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-péptido
Método de preparación: SPPS_P; SC_P; CP_M1
Método UPLC: B4_1: Rt = 8,9 min 20
Método LCMS: LCMS_4: Rt = 2,35 min; m/3 = 1758; m/4 = 1319; m/5 = 1055
Ejemplo 27
Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil], Nε37-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-5 carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Imp7,Aib8,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-péptido
Método de preparación: SPPS_P; SC_P; CP_M1 10
Método UPLC: AP_B4_1: Rt = 8,5 min
Método LCMS: LCMS_4: Rt = 2,28 min, m/3 = 1749; m/4 = 1312
Ejemplo 28
Nε18-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-15 hidroxipropanoil]amino]acetil], Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Imp7,Aib8,Lys18,Gln34]-GLP-1-(7-37)-péptido
Método de preparación: SPPS_P; SC_P; CP_M1
Método UPLC: AP_B4_1: Rt = 9,3 min
Método LCMS: LCMS_4: Rt = 2,45 min, m/3 = 1739; m/4 = 1305
Ejemplo 29 5
Nε26-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]hexanoil], Nε37-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]hexanoil]-[Aib8,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-péptido
Método de preparación: SPPS_P; SC_P; CP_M1
Método UPLC: AP_B4_1: Rt = 8,4 min
Método LCMS: LCMS_4: Rt = 2,15 min, m/3 = 1695; m/4 = 1271
Ejemplo 30 15
Nε26-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]-3-
hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]hexanoil], Nε37-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]hexanoil]-[Imp7,Aib8,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-péptido
Método de preparación: SPPS_P; SC_P; CP_M1
Método UPLC: AP_B4_1: Rt = 8,5 min
Método LCMS: LCMS_4: Rt = 2,2 min, m/3 = 1690; m/4 = 1268
Ejemplo 31
Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-10 3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil], Nε37-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Aib8,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-péptido
Método de preparación: SPPS_CS; SPPS_L; SC_CS; CP_M1
Método UPLC: B4_1: Rt = 8,47 min
Método LCMS: LCMS_4: Rt = 2,20 min; m/3:1754; m/4:1316; m/5:1053
Compuestos comparativos
En esta solicitud se hace referencia a una serie de compuestos comparativos.
La liraglutida, un derivado mono-acilado de GLP-1 para la administración una vez al día que está comercializado por Novo Nordisk A/S (nombre comercial VICTOZA®), se describe en el documento WO 98/08871 A1 (Ejemplo 37).
La semaglutida, un derivado mono-acilado de GLP-1 para la administración una vez por semana que está en desa-5 rrollo por Novo Nordisk A/S, se describe en el documento WO 06/097537 A2 (Ejemplo 4).
Los compuestos comparativos mencionados a continuación se describen en los documentos WO 2011/080103, WO 2011/080102 o WO 2012/062803. Son compuestos comparativos directos en el sentido de que se diferencian de los compuestos de la invención solamente en el enlazador. El enlazador de los compuestos comparativos se puede denominar el enlazador "gGlu-2xOEG". Este enlazador se ha utilizado con mucha frecuencia en el pasado y ha de-10 mostrado ser un enlazador muy bueno. El enlazador gGlu-2xOEG se describe en varias publicaciones previas, por ejemplo, en el documento WO 2011/080103, véase Chem. 5, 5a (OEG) y 6 (gGlu).
En cuanto a la nomenclatura utilizada en el presente documento, hemos añadido una "a" al número de los ejemplos comparativos. Por ejemplo, el comparador directo del compuesto del Ejemplo 1 es el compuesto del Ejemplo 1a; el comparador directo del compuesto del Ejemplo 2 es el compuesto del Ejemplo 2a, y así sucesivamente (subrayado 15 añadido). Diez de los compuestos de los ejemplos en el presente documento tienen un comparador directo como se ha descrito anteriormente, que se conoce en la técnica. Este no es el caso para los compuestos de los ejemplos restantes. Por consiguiente, para los compuestos restantes no hay compuestos comparadores directos correspon-dientes conocidos.
Ejemplo 1a 20
Compuesto del Ejemplo 2, Chem. 21, en el documento WO 2011/080103.
Ejemplo 2a
Compuesto del Ejemplo 17, Chem. 36, en el documento WO 2011/080103.
Ejemplo 3a
Compuesto del Ejemplo 33, Chem. 52, en el documento WO 2011/080103. 25
Ejemplo 4a
Compuesto del Ejemplo 46, Chem. 65, en el documento WO 2011/080103.
Ejemplo 5a
Compuesto del Ejemplo 38, Chem. 57, en el documento WO 2012/062803.
Ejemplo 6a 30
Compuesto del Ejemplo 74, Chem. 93, en el documento WO 2012/062803.
Ejemplo 7a
Compuesto del Ejemplo 2, Chem. 21, en el documento WO 2012/062803.
Ejemplo 9a
Compuesto del Ejemplo 92, Chem. 111, en el documento WO 2012/062803. 35
Ejemplo 22a
Compuesto del Ejemplo 141, Chem. 189, en el documento WO 2012/062803.
Ejemplo 23a
Compuesto del Ejemplo 3, Chem. 22, en el documento WO 2011/080103.
Métodos farmacológicos 40
Ejemplo 32: Potencia in vitro (AlphaScreen; membranas)
Los fines de este ejemplo es someter a ensayo la actividad, o la potencia, de los derivados de GLP-1 in vitro.
Las potencias de los derivados de GLP-1 de los Ejemplos 1-31 y de los Ejemplos comparativos 1a-7a, 9a, 22a y 23a se determinaron como se describe a continuación, es decir, como la estimulación de la formación de AMP cíclico (AMPc) en un medio que contiene membranas que expresan el receptor de GLP-1 humano.
Principio
Membranas plasmáticas purificadas procedentes de una línea celular transfectada estable, BHK467-12A (tk-ts13), 5 que expresaban el receptor de GLP-1 humano, se estimularon con el análogo de GLP-1 o un derivado en cuestión, y se midió la potencia de la producción de AMPc usando el kit del ensayo de AMPc AlphaScreenTM de Perkin Elmer Life Sciences. El principio básico del ensayo AlphaScreen es una competencia entre el AMPc endógeno y el AMPc biotinilado añadido exógenamente. La captura del AMPc se consigue mediante el uso de un anticuerpo específico conjugado con perlas aceptoras. 10
Cultivo celular y preparación de membranas
Se seleccionó una línea celular transfectada de manera estable y un clon con alta expresión para el escrutinio. Las células se cultivaron con 5% de CO2 en DMEM, 5% de FCS, 1% de Pen/Strep (penicilina/estreptomicina) y 0,5 mg/ml del marcador de selección G418.
Las células con aproximadamente un 80% de confluencia, se lavaron dos veces con PBS y se recogieron con Ver-15 sene (solución acuosa de la sal tetrasódica de ácido etilendiaminotetraacético), se centrifugaron 5 min a 1000 rpm y se eliminó el material sobrenadante. Las etapas adicionales se realizaron todas sobre hielo. El sedimento de las células se homogeneizó mediante el Ultrathurax durante 20-30 s en 10 ml de Tampón 1 (Na-HEPES 20 mM, EDTA 10 mM, pH = 7,4), se centrifugó 15 min a 20.000 rpm y el sedimento se resuspendió en 10 ml de Tampón 2 (Na-HEPES 20 mM, EDTA 0,1 mM, pH = 7,4). La suspensión se homogeneizó durante 20-30 s y se centrifugó 15 min a 20 20.000 rpm. La suspensión en Tampón 2, la homogeneización y la centrifugación se repitieron una vez y las mem-branas se resuspendieron en Tampón 2. Se determinó la concentración de proteína y las membranas se almacena-ron a -80°C hasta el uso.
El ensayo se realizó en placas de 96 pocillos de fondo plano (Costar nº de cat.: 3693). El volumen final por pocillo era de 50 µL. 25
Soluciones y reactivos
Kit del ensayo de AMPc AlphaScreen de Perkin Elmer Life Sciences (nº de cat.: 6760625M); que contiene perlas aceptoras anti-AMPc (10 U/µL), perlas donantes de estreptavidina (10 U/µL) y AMPc biotinilado (133 U/µL).
Tampón de AlphaScreen, pH = 7,4: Tris-HCl 50 mM (Sigma, nº de cat.: T3253); HEPES 5 mM (Sigma, nº de cat.: H3375); MgCl2 10 mM, 6H2O (Merck, nº de cat.: 5833); NaCl 150 mM (Sigma, nº de cat.: S9625); 0,01% de Tween 30 (Merck, nº de cat.: 822184). Se añadió lo siguiente al tampón de AlphaScreen antes del uso (concentraciones finales indicadas): BSA (Sigma, nº de cat. A7906): 0,1%; IBMX (Sigma, nº de cat. I5879): 0,5 mM; ATP (Sigma, nº de cat. A7699): 1 mM; GTP (Sigma, nº de cat. G8877): 1 µM.
Patrón de AMPc (factor de dilución en el ensayo = 5): solución de AMPc: 5 µL de una solución de reserva de AMPc 5 mM + 495 µL de tampón de AlphaScreen. 35
Se preparó una serie de diluciones adecuadas en tampón de AlphaScreen del patrón de AMPc así como del análogo de GLP-1 o un derivado que se iba a someter a ensayo, por ejemplo, las ocho concentraciones siguientes del com-puesto de GLP-1: 10-7, 10-8, 10-9, 10-10, 10-11, 10-12, 10-13 y 10-14 M, y una serie de, por ejemplo, 10-6 a 3x10-11 de AMPc.
Membrana/perlas aceptoras 40
Las membranas se prepararon a partir de células hGLP-1/BHK 467-12A con una concentración de 6 µg/pocillo, co-rrespondiente a 0,6 mg/ml (la cantidad de membranas usadas por pocillo puede variar)
"Sin membranas": perlas aceptoras (15 µg/ml final) en tampón de AlphaScreen
"6 µg/pocillo de membranas": membranas + perlas aceptoras (15 µg/ml final) en tampón de AlphaScreen
Se añadió una parte alícuota (10 µL) de "sin membranas" al patrón de AMPc (por pocillo por duplicado) y los 45 controles positivos y negativos
Una parte alícuota (10 µL) de "6 µg/pocillo de membranas" a GLP-1 y análogos (por pocillo en pocillos por du-plicado o triplicado)
Control pos.: 10 µL de "sin membranas" + 10 µL de tampón de AlphaScreen
Control neg.: 10 µL de "sin membranas" + 10 µL de solución de reserva de AMPc (50 µM) 50
Como las perlas son sensibles a la luz directa, todas las manipulaciones se realizaron en la oscuridad (lo más oscu-ro posible), o con luz verde. Todas las diluciones se realizaron sobre hielo.
Procedimiento
1. Preparar el tampón de AlphaScreen.
2. Disolver y diluir el GLP-1/análogos/patrón de AMPc en tampón de AlphaScreen. 5
3. Preparar la solución de perlas donantes mezclando perlas donantes con estreptavidina (2 unidades/pocillo) y AMPc biotinilado (1,2 unidades/pocillo) e incubar 20-30 min en la oscuridad a temperatura ambiente.
4. Añadir el AMPc/GLP-1/análogos a la placa: 10 µL por pocillo.
5. Preparar la solución de membrana/cuentas aceptoras y añadirla a las placas: 10 µL por pocillo.
6. Añadir las perlas donantes: 30 µL por pocillo. 10
7. Envolver la placa en papel de aluminio e incubar en el agitador durante 3 horas (muy lentamente) a tempera-tura ambiente.
8. Recuento en AlphaScreen - cada placa se incuba previamente en AlphaScreen durante 3 minutos antes del recuento.
Resultados 15
Los valores de CE50 [pM] se calcularon utilizando el programa informático Graph-Pad Prism (versión 5) y se mues-tran en la Tabla 1 a continuación. El valor de CE50 [pM] para cada compuesto de la invención puede estar relaciona-do con el compuesto comparativo respectivo mediante el cálculo de N:
N=100x(CE50 (compuesto comparativo)/CE50 (compuesto de la invención)).
El valor de N por lo tanto muestra el porcentaje de mejora de la potencia in vitro de los compuestos de la invención, 20 en relación con el compuesto comparativo respectivo.
Tabla 1
Ejemplo nº
Potencia in vitro (AlphaScreen AMPc; membranas) CE50 [pM]
1a
2a
3a
4a
5a
6a
7a
9a
Ejemplo nº
Potencia in vitro (AlphaScreen AMPc; membranas) CE50 [pM]
22a
23a
La potencia de todos los derivados sometidos a ensayo se confirmó in vitro.
Con una única excepción (el compuesto del Ejemplo 23), los derivados tenían una potencia in vitro sorprendente-mente buena, que se correspondía a una CE50 de 500 pM o menos. Diecisiete derivados eran incluso más potentes teniendo una CE50 de 200 pM o menor; y siete derivados tenían una potencia correspondiente muy buena a una 5 CE50 de 100 pM o menor.
Con la misma excepción única, la potencia in vitro de los compuestos de la invención se mejoraba generalmente 2-5 veces, en comparación con los compuestos comparativos.
Ejemplo 33: Potencia in vitro (CRE luciferasa; células completas)
Los fines de este ejemplo son someter a ensayo la actividad, o la potencia, de los derivados de GLP-1 in vitro. La 10 potencia in vitro es la medida de la activación del receptor de GLP-1 humano en un ensayo con células completas.
Se determinaron las potencias de los derivados de GLP-1 de los Ejemplos 1-31 y de los Ejemplos comparativos 1a-7a, 9a, 22a y 23a, tal como se describe a continuación.
Principio
La potencia in vitro se determinó midiendo la respuesta de un receptor de GLP-1 humano en un ensayo de gen in-15 formador. El ensayo se realizó en una línea de células BHK transfectadas de forma estable que expresa el receptor de GLP-1 humano y contiene el ADN para el elemento de respuesta al AMPc (CRE) acoplado a un promotor y el gen de la luciferasa de luciérnaga (CRE luciferasa). Cuando se activaba el receptor humano de GLP-1, daba como resul-tado la producción de AMPc, que a su vez se traducía en que se expresaba la proteína luciferasa. Después de com-pletar la incubación del ensayo, se añadió el sustrato de luciferasa (luciferina) y la enzima convertía la luciferina en 20 oxiluciferina y producía bioluminiscencia. La luminiscencia se midió y era la lectura para el ensayo.
Cultivo y preparación de las células
Las células utilizadas en este ensayo (clon FCW467-12A/KZ10-1) eran células BHK con BHKTS13 como línea celu-lar parental. Las células se obtuvieron a partir de un clon (FCW467-12A) que expresaba el receptor de GLP-1 hu-mano y se establecieron mediante una transfección adicional con CRE luciferasa para obtener el clon actual.
Las células se cultivaron con 5% de CO2 en medio de cultivo celular. Se tomaron partes alícuotas y se almacenaron en nitrógeno líquido. Antes de cada ensayo, se tomó una parte alícuota y se lavó dos veces en PBS antes de ser 5 suspendida en la concentración deseada en el tampón específico del ensayo. Para placas de 96 pocillos, se realizó la suspensión para proporcionar una concentración final de 5x103 células/pocillo.
Materiales
Los siguientes productos químicos se utilizaron en el ensayo: Pluronic F-68 (10%) (Gibco 2404), albúmina de suero humano (HSA) (Sigma A9511), ovoalbúmina (Sigma A5503), DMEM sin rojo de fenol (Gibco 11880-028), Hepes 1 M 10 (Gibco 15630), Glutamax 100x (Gibco 35050) y steadylite plus (PerkinElmer 6016757).
El medio de cultivo celular consistía en 10% de FBS (suero bovino fetal), 1 mg/ml de G418, MTX 240 nM (metotrexa-to) y 1% de pen/strep (penicilina/estreptomicina). El medio del ensayo consistía en DMEM sin rojo de fenol, Hepes 10 mM y 1x Glutamax. El tampón del ensayo al 1% consistía en 2% de ovoalbúmina, 0,2% de Pluronic F-68 y 2% de HSA en medio del ensayo. El tampón del ensayo al 0% consistía en 2% de ovoalbúmina y 0,2% de Pluronic F-68 en 15 medio del ensayo.
Procedimiento
1) Las reservas celulares se descongelaron en un baño de agua a 37°C.
2) Las células se lavaron tres veces en PBS.
3) Las células se contaron y se ajustaron a 5x103 células/50 µl (1x105 células/ml) en medio del ensayo. Una 20 parte alícuota de 50 µl de células se transfirió a cada pocillo en la placa del ensayo.
4) Las reservas de los compuestos del ensayo y los compuestos de referencia se diluyeron hasta una concen-tración de 0,2 µM en tampón del ensayo al 0% para el ensayo de luciferasa HSA CRE al 0% y tampón del en-sayo al 1% para el ensayo de luciferasa HSA CRE. Los compuestos se diluyeron 10 veces para proporcionar las siguientes concentraciones: 2x10-7 M, 2x10-8 M; 2x10-9 M, 2x10-10 M, 2x10-11 M, 2x10-12 M y 2x10-13 M. Para 25 cada compuesto también se incluyó un control de tampón de ensayo en blanco.
5) Una parte alícuota de 50 µl de compuesto o en blanco se transfirió por triplicado desde la placa de dilución a la placa del ensayo. Los compuestos se sometieron a ensayo con las siguientes concentraciones finales: 1x10-7 M, 1x10-8 M; 1x10-9 M, 1x10-10 M, 1x10-11 M, 1x10-12 M y 1x10-13 M.
6) La placa del ensayo se incubó durante 3 h en una incubadora con 5% de CO2 a 37°C. 30
7) La placa del ensayo se retiró de la incubadora y se dejó reposar a temperatura ambiente durante 15 min.
8) Una parte alícuota de 100 µl de reactivo steadylite plus se añadió a cada pocillo de la placa del ensayo (el reactivo era sensible a la luz).
9) Cada placa del ensayo se cubrió con papel de aluminio para protegerlo de la luz y se agitó durante 30 min a temperatura ambiente. 35
10) Cada placa del ensayo se leyó en un instrumento Packard TopCount NXT.
Cálculos y Resultados
Los datos del instrumento TopCount se transfirieron al programa informático GraphPad Prism 5. El programa infor-mático calcula el promedio de los valores para cada triplicado y realiza una regresión no lineal (log(agonista) frente a la respuesta-pendiente variable (cuatro parámetros)). Los valores de CE50 se calcularon con el programa informático 40 y se muestran en la Tabla 2 a continuación (en pM).
Tabla 2:
Ejemplo nº
Potencia in vitro (CRE-luciferasa) albúmina baja CE50 [pM]
4,3
1a
6,7
2a
Ejemplo nº
Potencia in vitro (CRE-luciferasa) albúmina baja CE50 [pM]
3a
8,0
4a
5,3
5a
7,5
6a
6,8
7a
9a
n.d.*
9,8
9,6
5,6
8,3
6,8
22a
6,1
23a
5,2
4,6
5,8
4,3
5,0
5,0
9,4
2,8
no disponible para la prueba
La potencia de todos los derivados sometidos a ensayo se confirmó in vitro.
Todos los derivados sometidos a ensayo tenían una potencia in vitro sorprendentemente buena, correspondiente a una CE50 de 100 pM o menor. Veintidós derivados eran incluso más potentes, teniendo una CE50 de 20 pM o menor; y diecinueve derivados tenían una potencia muy buena, correspondiente a una CE50 de 10 pM o menor.
La potencia in vitro de los compuestos de la invención mejoró generalmente de 2-8 veces, en comparación con los compuestos comparativos. 5
Ejemplo 34: Unión al receptor de GLP-1
Los fines de este experimento son investigar la unión al receptor de GLP-1 de los derivados de GLP-1. Esto se hace en un experimento in vitro tal y como se describe a continuación.
La afinidad de la unión de los derivados de GLP-1 de los Ejemplos 1-31 y de los Ejemplos comparativos 1a-7a, 9a, 22a y 23a con el receptor de GLP-1 humano se midió por medio de su capacidad para desplazar 125I-GLP-1 del 10 receptor. El ensayo se realizó con una concentración baja de albúmina (0,001% - correspondiente a la cantidad residual de la misma en el trazador).
Condiciones
Especies (in vitro): Hámster
Criterio de valoración biológico: Unión al receptor 15
Método de ensayo: SPA
Receptor: receptor de GLP-1
Línea Celular: BHK tk-ts13
Cultivo celular y purificación de la membrana
Se seleccionó una línea celular transfectada estable y un clon con expresión elevada para el escrutinio. Las células 20 se cultivaron con 5% de CO2 en DMEM, 10% de FCS, 1% de Pen/Strep (penicilina/estreptomicina) y 1,0 mg/ml de marcador de selección G418.
Las células (aprox. 80% de confluencia) se lavaron dos veces en PBS y se recogieron con Versene (solución acuosa de la sal tetrasódica de ácido etilendiaminotetraacético), después de lo cual se separaron por centrifugación a 1000 rpm durante 5 min. Las células/sedimento celular deben mantenerse en hielo en la medida de lo posible en las eta-25 pas subsiguientes. El sedimento celular se homogeneizó con Ultrathurrax durante 20-30 segundos en una cantidad adecuada de Tampón 1 (dependiendo de la cantidad de células, pero por ejemplo, 10 ml). El material homogeneiza-do se centrifugó a 20.000 rpm durante 15 minutos. El sedimento se resuspendió (homogeneizado) en 10 ml de Tam-pón 2 y se volvió a centrifugar. Esta etapa se repitió una vez más. El sedimento resultante se resuspendió en Tam-pón 2 y se determinó la concentración de proteína. Las membranas se almacenaron a menos 80°C. 30
Tampón 1: Na-HEPES 20 mM + EDTA 10 mM, pH 7,4
Tampón 2: Na-HEPES 20 mM + EDTA 0,1 mM, pH 7,4
Ensayo de la unión:
SPA:
Los compuestos del ensayo, las membranas, las partículas de SPA y [125I]]-GLP-1(7-36)NH2 se diluyeron en tampón 35 del ensayo. Se añadieron 50 ul (microlitros) de tampón (el experimento con "albúmina baja" que contenía 0,001% de HSA) a Optiplate, y se añadieron 25 ul de los compuestos del ensayo. Se añadieron 5-10 µg de la proteína/muestra de la membrana (50 µl) que correspondían a 0,1 - 0,2 mg de proteína/ml (para ser optimizada preferiblemente para cada preparación de membrana). Las partículas de SPA (perlas de SPA con aglutinina de germen de trigo, Perkin Elmer, nº RPNQ0001) se añadieron en una cantidad de 0,5 mg/pocillo (50 µl). La incubación comenzó con [125I]-40 GLP-1]-(7-36)NH2 (concentración final de 0,06 nM correspondiente a 49,880 DPM, 25 µl). Las placas se sellaron con PlateSealer y se incubaron durante 120 minutos a 30°C con agitación. Las placas se centrifugaron (1500 rpm, 10 min) y se hizo el recuento en Topcounter.
Tampón del ensayo:
HEPES 50 mM 45
EGTA 5 mM
MgCl2 5 mM
0,005% de Tween 20
pH 7,4
HSA era SIGMA A1653
Cálculos
El valor de CI50 se leyó a partir de la curva como la concentración que desplaza el 50% de 125I-GLP-1 del receptor. 5
En general, la unión al receptor de GLP-1 con una concentración baja de albúmina debe ser la mejor posible, lo que se corresponde con un valor bajo de CI50.
Resultados
El valor de CI50 [nM] para cada compuesto de la invención se muestra en la Tabla 3 a continuación, junto con el del compuesto comparativo respectivo. Puede estar relacionado con el del compuesto comparativo respectivo mediante 10 el cálculo de N:
N=100x(CI50 (compuesto comparativo)/CI50 (compuesto de la invención)).
El valor de N por lo tanto muestra el porcentaje de mejora de la unión al receptor de los compuestos de la invención, en relación con el compuesto comparativo respectivo.
Tabla 3 15
Ejemplo nº
CI50 [nM] (albúmina baja)
0,34
1a
2,27
8,99
2a
44,50
11,60
3a
51,50
0,58
4a
2,77
1,63
5a
5,80
0,43
6a
0,80
0,91
7a
7,03
8,50
1,55
9a
8,09
1,72
12,80
4,61
0,84
0,37
0,50
0,54
1,34
Ejemplo nº
CI50 [nM] (albúmina baja)
0,48
0,42
2,27
4,87
10,50
22a
48,40
0,43
23a
3,55
0,19
0,27
0,53
0,69
0,96
0,27
0,18
0,17
Todos los derivados sometidos a ensayo eran capaces de unirse al receptor de GLP-1 con una concentración baja de albúmina.
Todos los derivados de la invención se unían estrechamente al receptor con valores de CI50 (albúmina baja) inferio-res a 13 nM; veintiséis eran inferiores a 5,0 nM; y diecinueve eran inferiores a 1,0 nM. 5
Como se puede deducir de la Tabla 3, la unión de los compuestos de la invención al receptor mejoraba generalmen-te de 3-8 veces, en comparación con los compuestos comparativos.
LISTA DE SECUENCIAS
<110> Novo Nordisk A/S
<120> Derivados de GLP-1 10
<130> 8382.204-WO
<160> 13
<170> PatentIn versión 3.5
<210> 1 <211> 6 15 <212> PRT <213> Secuencia artificial
<220> <223> Enlazador peptídico
<400> 1 20
<210> 2 <211> 7 <212> PRT <213> Secuencia artificial
<220> 5 <223> Enlazador peptídico
<220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Glu es gamma-Glu 10
<400> 2
<210> 3 <211> 31 <212> PRT 15 <213> Homo sapiens
<400> 3
<210> 4 <211> 12 20 <212> PRT <213> Secuencia artificial
<220> <223> Enlazador peptídico
<400> 4 25
<210> 5 <211> 18 <212> PRT <213> Secuencia artificial 30
<220> <223> Enlazador peptídico
<400> 5
<210> 6 <211> 7 <212> PRT <213> Secuencia artificial
<220> 5 <223> Enlazador peptídico
<220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Glu es gamma-Glu 10
<400> 6
<210> 7 <211> 13 <212> PRT 15 <213> Secuencia artificial
<220> <223> Enlazador peptídico
<220> <221> MISC_FEATURE 20 <222> (1)..(1) <223> Glu es gamma-Glu
<400> 7
<210> 8 25 <211> 7 <212> PRT <213> Secuencia artificial
<220> <223> Enlazador peptídico 30
<220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Glu es gamma-Glu
<400> 8 35
<210> 9 <211> 8 <212> PRT <213> Secuencia artificial 40
<220> <223> Enlazador peptídico
<220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..() 5 <223> Glu es gamma-Glu
<220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> Lys es épsilon-Lys 10
<400> 9
<210> 10 <211> 14 <212> PRT 15 <213> Secuencia artificial
<220> <223> Enlazador peptídico
<220> <221> MISC_FEATURE 20 <222> (1)..(1) <223> Glu es gamma-Glu
<220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) 25 <223> Lys es épsilon-Lys
<400> 10
<210> 11 <211> 20 30 <212> PRT <213> Secuencia artificial
<220> <223> Enlazador peptídico
<220> 35 <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Glu es gamma-Glu
<220> <221> MISC_FEATURE 40 <222> (20)..(20) <223> Lys es épsilon-Lys
<400> 11
<210> 12 <211> 8 <212> PRT <213> Secuencia artificial 5
<220> <223> Enlazador peptídico
<220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) 10 <223> Lys es épsilon-Lys
<400> 12
<210> 13 <211> 5 15 <212> PRT <213> Secuencia artificial
<220> <223> Enlazador peptídico
<220> 20 <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Glu es gamma-Glu
<220> <221> MISC_FEATURE 25 <222> (5)..(5) <223> Lys es épsilon-Lys
<400> 13

Claims (13)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Un derivado de un péptido GLP-1,
    en donde el péptido tiene solo dos residuos de Lys, a saber, un primer y un segundo residuo de Lys, y un máximo de ocho cambios de aminoácidos en comparación con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3),
    en donde el derivado comprende dos restos de acción prolongada fijados al grupo amino épsilon de dicho primer y 5 segundo residuo de Lys, respectivamente, a través de un enlazador, en el que
    el resto de acción prolongada se selecciona entre Chem. 15 y Chem. 16:
    Chem. 15: HOOC-(CH2)x-CO-*
    Chem. 16: HOOC-C6H4-O-(CH2)y-CO-* ,
    en donde x es un número entero en el intervalo de 10-16 e y es un número entero en el intervalo de 8- 12; y 10
    el enlazador comprende un primer elemento de enlazador, Chem. 1:
    o una sal, una amida o un éster farmacéuticamente aceptable de dicho derivado.
  2. 2. El derivado según la reivindicación 1, en el que el enlazador comprende dos veces Chem. 1.
  3. 3. El derivado según cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en el que el enlazador comprende además un segundo 15 elemento enlazador, Chem. 2:
    o
    un tercer elemento enlazador, Chem. 7:
  4. 4. El derivado según cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que el enlazador comprende una combinación de un primer y un segundo elementos de enlazador del modo siguiente, Chem. 3:
  5. 5. El derivado según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en el que el enlazador comprende una combinación de un primer y un segundo elementos de enlazador del modo siguiente, Chem. 4: 25
  6. 6. El derivado según cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en el que el enlazador comprende además un cuarto elemento enlazador, Chem. 5:
  7. 7. El derivado según cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en el que el enlazador comprende Chem. 6: 5
  8. 8. El derivado según cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en el que el enlazador comprende además un quinto elemento enlazador, Chem. 12:
    *-NH-(CH2)4-CH(NH2)-CO-*.
  9. 9. El derivado según cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en el que el péptido GLP-1 comprende un péptido GLP-10 1 de Fórmula I:
    Fórmula I: Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Xaa18-Xaa19-Xaa20-Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Xaa25-Xaa26-Xaa27-Phe-Ile-Xaa30-Xaa31-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38,
    en donde
    Xaa7 es L-histidina, imidazopropionil, α-hidroxi-histidina, D-histidina, desamino-histidina, 2-amino-histidina, 15 β-hidroxi-histidina, homohistidina, Nα-acetil-histidina, Nα-formil-histidina, α-fluorometil-histidina, α-metil-histidina, 3-piridilalanina, 2-piridilalanina o 4-piridilalanina;
    Xaa8 es Ala, Gly, Val, Leu, Ile, Thr, Ser, Lys, Aib, ácido (1-aminociclopropil) carboxílico, ácido (1-aminociclobutil) carboxílico, ácido (1-aminociclopentil) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil) carboxílico, áci-do (1-aminocicloheptil) carboxílico o ácido (1-aminociclooctil) carboxílico; 20
    Xaa16 es Val o Leu;
    Xaa18 es Ser o Lys;
    Xaa19 es Tyr o Gln;
    Xaa20 es Leu o Met;
    Xaa22 es Gly, Glu, Lys o Aib; 25
    Xaa23 es Gln, Glu o Arg;
    Xaa25 es Ala o Val;
    Xaa26 es Val, His, Lys o Arg;
    Xaa27 es Glu, Leu o Lys;
    Xaa30 es Ala, Glu, Lys o Arg; 30
    Xaa31 es Trp, Lys o His;
    Xaa33 es Val o Lys;
    Xaa34 es Lys, Glu, Asn, Gly, Gln, His, Arg, o está ausente;
    Xaa35 es Gly, Aib, o está ausente;
    Xaa36 es Arg, Gly, Lys, o está ausente;
    Xaa37 es Gly, Ala, Glu, Pro, Lys, Arg, o está ausente; y 5
    Xaa38 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys, Arg, o está ausente.
  10. 10. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1-9, seleccionado a partir de los siguientes:
    Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[10-(4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]-3-10 hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil],Nε37-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[10-(4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Aib8,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-péptido;
    Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[10-(4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil],Nε37-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[10-(4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Aib8,His31,Gln34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-péptido; 20
    Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[10-(4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil],Nε37-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[10-(4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-5 hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[His31,Gln34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-péptido;
    Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[10-(4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil],Nε37-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[10-(4-10 carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-peptidil-Glu;
    Nε18-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[10-(4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil],Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[10-(4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-5 hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Lys18,Glu22,Gln34]-GLP-1-(7-37)-péptido;
    Nε18-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-(13-carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil],Nε31-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-(13-10 carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Aib8,Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Arg34]-GLP-1-(7-37)-péptido;
    Nε18-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[10-(4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil],Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[10-(4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-5 hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Aib8,Lys18,Glu22,Gln34]-GLP-1-(7-37)-péptido;
    Nε18-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-(13-carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-10 hidroxipropanoil]amino]acetil],Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-(13-carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Aib8,Lys18,Glu22,Gln34]-GLP-1-(7-37)-péptido;
    Nε18-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[10-(4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil],Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[10-(4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-5 hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Aib8,Lys18,Gln34]-GLP-1-(7-37)-péptido;
    Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-(13-carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil],Nε37-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-(13-10 carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Aib8,Gln34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-péptido;
    Nα (Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[10-(4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Aib8,His31,Gln34]-GLP-1-(7-37)-peptidil)- Nε[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[10-(4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]-3-5 hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]Lys;
    Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-(13-carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-10 hidroxipropanoil]amino]acetil], Nε37-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-(13-carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Aib8,His34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-péptido;
    Nε18-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil], Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-5 hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Aib8,Lys18,Gln34]-GLP-1-(7-37)-péptido;
    Nε18-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-10 hidroxipropanoil]amino]acetil], Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Aib8,Lys18,Gln34]-GLP-1-(7-37)-péptido;
    Nε18-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]propanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]propanoil], Nε26-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-5 hidroxipropanoil]amino]propanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]propanoil]-[Aib8,Lys18,Gln34]-GLP-1-(7-37)-péptido;
    Nε18-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-10 carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil], Nε26-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]-[Aib8,Lys18,Gln34]-GLP-1-(7-37)-péptido; 15
    Nε18-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-5 hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil], Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Aib8,Lys18,Gln34]-10 GLP-1-(7-37)-péptido;
    Nε18-[(2S)-2-amino-6-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-15 hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]hexanoil], Nε26-[(2S)-2-amino-6-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-
    3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]hexanoil]-[Aib8,Lys18,Gln34]-GLP-1-(7-37)-péptido;
    Nε18-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-5 hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]hexanoil], Nε26-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]hexanoil]-[Aib8,Lys18,Gln34]-GLP-1-(7-37)-péptido; 10
    Nε18-[(2S)-2-amino-6-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-15 hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]hexanoil], Nε26-[(2S)-2-amino-6-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-
    hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]hexanoil]-[Aib8,Lys18,Gln34]-GLP-1-(7-37)-péptido;
    Nε18-[(2S)-2-amino-6-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-5 hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]hexanoil], Nε26-[(2S)-2-amino-6-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-10 [[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]hexanoil]-15 [Aib8,Lys18,Gln34]-GLP-1-(7-37)-péptido;
    Nε18-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-(13-carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-20 hidroxipropanoil]amino]acetil], Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-(13-carboxitridecanoilamino)butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Aib8,Lys18,Gln34]-GLP-1-(7-37)-péptido;
    Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-(15-carboxipentadecanoilamino)butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil], Nε37-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-(15-carboxipentadecanoilamino)butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-5 hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Aib8,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-péptido;
    Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-10 hidroxipropanoil]amino]acetil], Nε37-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Aib8,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-péptido;
    Nε26-[(2S)-2-amino-6-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]hexanoil], Nε37-[(2S)-2-amino-6-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-5 3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]hexanoil]-[Aib8,Arg34,Lys37]]-GLP-1-(7-37)-péptido;
    Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-10 hidroxipropanoil]amino]acetil], Nε37-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Imp7,Aib8,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-péptido;
    Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil], Nε37-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-5 hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Imp7,Aib8,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-péptido;
    Nε18-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil], Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-10 carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Imp7,Aib8,Lys18,Gln34]-GLP-1-(7-37)-péptido;
    Nε26-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]hexanoil], Nε37-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]hexanoil]-[Aib8,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-péptido; 5
    Nε26-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]hexanoil], Nε37-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]hexanoil]-[Imp7,Aib8,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-péptido 10
    y
    Nε26-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil], Nε37-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]amino]-3-5 hidroxipropanoil]amino]-3-hidroxipropanoil]amino]acetil]-[Aib8,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-péptido;
    o una sal, una amida o un éster farmacéuticamente aceptable de los mismos.
  11. 11. Una composición farmacéutica que comprende un derivado según cualquiera de las reivindicaciones 1-9, y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
  12. 12. Un derivado según cualquiera de las reivindicaciones 1-10, para uso como un medicamento. 10
  13. 13. Un derivado según cualquiera de las reivindicaciones 1-10, para uso en el tratamiento y/o la prevención de todas las formas de diabetes, incluyendo trastornos de la alimentación, enfermedades cardiovasculares, enfermedades gastrointestinales, complicaciones de la diabetes y/o síndrome de ovario poliquístico; y/o para mejorar los paráme-tros de lípidos, mejorar la función de las células β y/o para retrasar o prevenir la progresión de una enfermedad dia-bética. 15
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