CN109477094B - 肽化合物 - Google Patents
肽化合物 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109477094B CN109477094B CN201780045657.1A CN201780045657A CN109477094B CN 109477094 B CN109477094 B CN 109477094B CN 201780045657 A CN201780045657 A CN 201780045657A CN 109477094 B CN109477094 B CN 109477094B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- gly
- nmp
- arg
- aib
- solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Abstract
本发明涉及一种可用于治疗或预防肥胖症、糖尿病等的肽化合物。更具体地来说，本发明涉及一种由式(I)表示的肽化合物：P1‑Tyr‑Aib‑Glu‑Gly‑Thr‑α‑MePhe‑Thr‑Ser‑Asp‑Lys(‑Gly‑Gly‑Gly‑Gly‑RA10)‑A11‑A12‑Aib‑Leu‑A15‑Lys‑Gln‑A18‑Gln‑Iva‑Glu‑Phe‑Val‑Arg‑His‑Leu‑Leu‑Asn‑Lys‑Aib‑Thr‑Arg‑Gln‑Arg‑A35‑NH2其中每个符号如说明书中所定义；以及使用所述肽化合物治疗或预防肥胖症、糖尿病等。
Description
技术领域
本说明书包括作为本申请优先权基础的日本特愿2016-103011号(于2016年5月24日提交)的说明书所记载的内容。
[发明领域]
本发明涉及一种肽化合物，所述肽化合物可基于其对Y2受体、GLP-1受体和GIP受体的活化作用而适用于治疗或预防肥胖症、糖尿病等。
[发明背景]
肽YY(PYY)是由36个氨基酸残基组成的肽，其分离自猪小肠上段。PYY与从猪脑中分离的神经肽Y(NPY)一起属于胰多肽(PP)家族(专利文献1和专利文献2)。
已知PYY伴随饮食摄取从胃肠道的内分泌细胞(L细胞)分泌，并通过Y2受体表现出摄食抑制作用。已经报道了经由下丘脑弓状核表达NPY/AgRP的神经细胞的Y2受体的肠/下丘脑途径以及经由迷走神经末梢的Y2受体的迷走神经传入途径作为这种作用的途径。
还据报道，涉及饮食模式紊乱的神经性厌食症(AN)患者在脑脊液中具有高PYY浓度，并且神经性贪食症(BN)患者与健康个体相比表现出血液中PYY浓度的非常缓慢的餐后升高。此外，已知肥胖症患者血液中的PYY浓度低于健康个体血液中的PYY浓度。
胰高血糖素样肽-1(GLP-1)和葡萄糖依赖性促胰岛素多肽(GIP)两者均是称为肠降血糖素的肽。GLP-1和GIP分别自小肠L细胞和K细胞分泌。GLP-1通过GLP-1受体起作用，并且已知具有糖依赖性促胰岛素作用和摄食抑制作用。另一方面，已知GIP通过GIP受体具有糖依赖性促胰岛素作用，但其对摄食的影响尚不清楚。
GLP-1受体/GIP受体共激动剂肽据报道显示出比单独GLP-1受体激动剂更强的降血糖作用和体重降低作用(专利文献3)。此外，还已经尝试寻找具有GLP-1受体/GIP受体共激动剂活性的肽，并且基于天然胰高血糖素、GIP或GLP-1的结构将这些肽开发为抗肥胖药物或用于糖尿病的治疗药物(专利文献3至6)。
[引用列表]
[专利文献]
[PTL 1]WO2006/049681
[PTL 2]WO2011/002066
[PTL 3]WO2010/011439
[PTL 4]WO2013/164483
[PTL 5]WO2014/192284
[PTL 6]WO2016/084826
本发明的目的是提供一种肽化合物，所述肽化合物对Y2受体、GLP-1受体和GIP受体具有活化作用并且可用作预防或治疗肥胖症和糖尿病等的剂。
发明内容
本发明人已经进行了关于肽化合物的深入研究，所述肽化合物可基于其对Y2受体、GLP-1受体和GIP受体的活化作用而适用作预防或治疗肥胖症和糖尿病等的剂；并且因此发现具有由下文所示的式(I)表示的序列的肽化合物可基于其对Y2受体、GLP-1受体和GIP受体的活化作用而适用于预防或治疗肥胖症或糖尿病，这使得完成了本发明。
因此，本发明涉及以下[1]至[17]：
[1]一种由式(I)表示的肽：
P1-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-α-MePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-RA10)-A11-A12-Aib-Leu-A15-Lys-Gln-A18-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-A35-NH2
(SEQ ID NO:1)
或其盐(下文有时缩写为化合物(I))，
其中
P1是由下式表示的基团：
-RA1，
-CO-RA1，
-CO-ORA1，
-CO-CORA1，
-SO-RA1，
-SO2-RA1，
-SO2-ORA1，
-CO-NRA2RA3，
-SO2-NRA2RA3，
或
-C(＝NRA1)-NRA2RA3
其中RA1、RA2和RA3各自独立地是氢原子、任选取代的烃基团或任选取代的杂环基团；
RA10是Pal或Oda；
A11是Aib、Ala或Ser(A11优选是Aib，在替代实施方案中优选是Ala，并且在替代实施方案中优选是Ser)；
A12是Ile或Lys；
A15是Asp或Glu；
A18是Ala或Arg；并且
A35是Tyr或Phe(2-F)，
[2]根据上述[1]所述的肽或其盐，其中P1是氢原子或甲基。
[3]根据上述[1]所述的肽或其盐，其中RA10是Pal。
[4]根据上述[1]所述的肽或其盐，其中A12是Ile。
[5]根据上述[1]所述的肽或其盐，其中A15是Glu。
[6]根据上述[1]所述的肽或其盐，其中A18是Arg。
[7]根据上述[1]所述的肽或其盐，其中A35是Tyr。
[8]H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Glu-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2或其盐。
[9]H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ala-Ile-Aib-Leu-Glu-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2或其盐。
[10]Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ser-Ile-Aib-Leu-Glu-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
或其盐。
[11]一种药物，其包含根据上述[1]所述的肽或其盐。
[12]根据上述[11]所述的药物，其是Y2受体、GLP-1受体和GIP受体的活化剂。
[13]根据上述[11]所述的药物，其是肥胖症或糖尿病的预防或治疗剂。
[14]一种用于预防或治疗哺乳动物的肥胖症或糖尿病的方法，所述方法包括向所述哺乳动物施用有效量的根据上述[1]所述的肽或其盐。
[15]一种用于活化哺乳动物的Y2受体、GLP-1受体和GIP受体的方法，所述方法包括向所述哺乳动物施用有效量的根据上述[1]所述的肽或其盐。
[16]根据上述[1]所述的肽或其盐用于制造肥胖症或糖尿病的预防或治疗剂的用途。
[17]根据上述[1]所述的肽或其盐，其用于预防或治疗肥胖症或糖尿病。
化合物(I)可基于其对Y2受体、GLP-1受体和GIP受体的活化作用而在体内具有摄食抑制作用和体重降低作用。因此，化合物(I)可适用作预防和/或治疗肥胖症或糖尿病的剂。
附图说明
图1示出实施例41的化合物(P41)在DIO小鼠中的抗肥胖作用。每种化合物每天一次皮下施用至每只小鼠持续4周。图1A示出体重的每日变化。图1B示出累积食物摄入的抑制％。图1C示出在EchoMRI中测量的体脂肪质量。图1D示出瘦体重。图1E示出脂肪垫重量。图1F示出肝脏重量。图1G示出肝脏TG含量。图1H示出肝脏切片的苏木精-伊红染色。图1I示出每种基因的表达。相较于媒介物，*p<0.025，**p<0.005，***p<0.0005(Shirley-Williams检验)。相较于媒介物，#p<0.025，##p<0.005，###p<0.0005(Williams检验)。数据表示平均值±SD(N＝6)；
图2示出p41在ob/ob小鼠中的抗肥胖和抗糖尿病作用。每种化合物每天一次皮下施用至每只小鼠持续4周。图2A示出GHb。图2B示出血浆葡萄糖。图2C示出血浆胰岛素。图2D示出体重的每日变化。图2E示出累积食物摄入的抑制％。图2F示出组织重量。图2G示出肝脏TG含量。相较于媒介物，#p<0.025，##p<0.005，###p<0.0005(Shirley-Williams检验)。数据表示平均值±SD(N＝5或7)。对于施用媒介物的组，N＝5。对于施用P41的组，N＝7；
图3示出P41在雄性KKAy小鼠中的抗肥胖和抗糖尿病作用。每种化合物每天一次皮下施用至每只小鼠持续4周。图3A示出体重的每日变化。图3B示出累积食物摄入的抑制％。图3C示出ΔGHb。图3D示出血浆葡萄糖。图3E示出血浆胰岛素。图3F示出肝脏重量。图3G示出肝脏TG含量。图3H示出白色脂肪重量。相较于媒介物，*p<0.025，**p<0.005，***p<0.0005(Williams检验)。相较于媒介物，#p<0.025，##p<0.005，###p<0.0005(Shirley-Williams检验)。数据表示平均值±SD(N＝7)；
图4示出P41对条件性味觉厌恶的作用。每只小鼠每周两次接受与化合物配对的0.1％糖精。在第二次调节后两天，向小鼠提供0.1％糖精和自来水3小时，并测量两种流体的摄入量以计算糖精偏好率。相较于媒介物，***p<0.001(Dunnett检验)。数据表示平均值±SD(N＝7)；并且
图5示出P41在食蟹猴中的摄食抑制作用。在给药后大约8小时食用正常饮食。在给药后24小时未观察到呕吐。N＝2(雄性：1，雌性：1)
[具体实施方式]
以下详细描述本说明书中使用的每种取代基的定义。除非另有说明，否则每种取代基具有以下定义。
在本说明书中，“卤素原子”的实例包括氟、氯、溴和碘。
在本说明书中，“C1-6烷基”的实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基、1-乙基丙基、己基、异己基、1,1-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、3,3-二甲基丁基和2-乙基丁基。
在本说明书中，“任选卤化的C1-6烷基”的实例包括任选具有1至7、优选1至5个卤素原子的C1-6烷基。其具体实例包括甲基、氯甲基、二氟甲基、三氯甲基、三氟甲基、乙基、2-溴乙基、2,2,2-三氟乙基、四氟乙基、五氟乙基、丙基、2,2-二氟丙基、3,3,3-三氟丙基、异丙基、丁基、4,4,4-三氟丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基、5,5,5-三氟戊基、己基和6,6,6-三氟己基。
在本说明书中，“C2-6烯基”的实例包括乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、3-甲基-2-丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、4-甲基-3-戊烯基、1-己烯基、3-己烯基和5-己烯基。
在本说明书中，“C2-6炔基”的实例包括乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、4-戊炔基、1-己炔基、2-己炔基、3-己炔基、4-己炔基、5-己炔基和4-甲基-2-戊炔基。
在本说明书中，“C3-10环烷基”的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、双环[2.2.1]庚基、双环[2.2.2]辛基、双环[3.2.1]辛基和金刚烷基。
在本说明书中，“任选卤化的C3-10环烷基”的实例包括任选具有1至7、优选1至5个卤素原子的C3-10环烷基。其具体实例包括环丙基、2,2-二氟环丙基、2,3-二氟环丙基、环丁基、二氟环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。
在本说明书中，“C3-10环烯基”的实例包括环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基、环己烯基、环庚烯基和环辛烯基。
在本说明书中，“C6-14芳基”的实例包括苯基、1-萘基、2-萘基、1-蒽基、2-蒽基和9-蒽基。
在本说明书中，“C7-16芳烷基”的实例包括苄基、苯乙基、萘基甲基和苯基丙基。
在本说明书中，“C1-6烷氧基”的实例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基和己氧基。
在本说明书中，“任选卤化的C1-6烷氧基”的实例包括任选具有1至7、优选1至5个卤素原子的C1-6烷氧基。其具体实例包括甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、乙氧基、2,2,2-三氟乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、4,4,4-三氟丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、戊氧基和己氧基。
在本说明书中，“C3-10环烷氧基”的实例包括环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基、环庚氧基和环辛氧基。
在本说明书中，“C1-6烷硫基”的实例包括甲硫基、乙硫基、丙硫基、异丙硫基、丁硫基、仲丁硫基、叔丁硫基、戊硫基和己硫基。
在本说明书中，“任选卤化的C1-6烷硫基”的实例包括任选具有1至7、优选1至5个卤素原子的C1-6烷硫基。其具体实例包括甲硫基、二氟甲硫基、三氟甲硫基、乙硫基、丙硫基、异丙硫基、丁硫基、4,4,4-三氟丁硫基、戊硫基和己硫基。
在本说明书中，“C1-6烷基-羰基”的实例包括乙酰基、丙酰基、丁酰基，2-甲基丙酰基、戊酰基、3-甲基丁酰基、2-甲基丁酰基、2,2-二甲基丙酰基、己酰基和庚酰基。
在本说明书中，“任选卤化的C1-6烷基-羰基”的实例包括任选具有1至7、优选1至5个卤素原子的C1-6烷基-羰基。其具体实例包括乙酰基、氯乙酰基、三氟乙酰基、三氯乙酰基、丙酰基、丁酰基、戊酰基和己酰基。
在本说明书中，“C1-6烷氧基-羰基”的实例包括甲氧基羰基、乙氧基羰基、丙氧基羰基、异丙氧基羰基、丁氧基羰基、异丁氧基羰基、仲丁氧基羰基、叔丁氧基羰基、戊氧基羰基和己氧基羰基。
在本说明书中，“C6-14芳基-羰基”的实例包括苯甲酰基、1-萘甲酰基和2-萘甲酰基。
在本说明书中，“C7-16芳烷基-羰基”的实例包括苯基乙酰基和苯基丙酰基。
在本说明书中，“5至14元芳族杂环基羰基”的实例包括烟酰基、异烟酰基、噻吩甲酰基和呋喃甲酰基。
在本说明书中，“3至14元非芳族杂环基羰基”的实例包括吗啉基羰基、哌啶基羰基和吡咯烷基羰基。
在本说明书中，“单-或二-C1-6烷基-氨基甲酰基”的实例包括甲基氨基甲酰基、乙基氨基甲酰基、二甲基氨基甲酰基、二乙基氨基甲酰基和N-乙基-N-甲基氨基甲酰基。
在本说明书中，“单-或二-C7-16芳烷基-氨基甲酰基”的实例包括苄基氨基甲酰基和苯乙基氨基甲酰基。
在本说明书中，“C1-6烷基磺酰基”的实例包括甲基磺酰基、乙基磺酰基、丙基磺酰基、异丙基磺酰基、丁基磺酰基、仲丁基磺酰基和叔丁基磺酰基。
在本说明书中，“任选卤化的C1-6烷基磺酰基”的实例包括任选具有1至7、优选1至5个卤素原子的C1-6烷基磺酰基。其具体实例包括甲基磺酰基、二氟甲基磺酰基、三氟甲基磺酰基、乙基磺酰基、丙基磺酰基、异丙基磺酰基、丁基磺酰基、4,4,4-三氟丁基磺酰基、戊基磺酰基和己基磺酰基。
在本说明书中，“C6-14芳基磺酰基”的实例包括苯基磺酰基、1-萘基磺酰基和2-萘基磺酰基。
在本说明书中，“取代基”的实例包括卤素原子、氰基、硝基、任选取代的烃基团、任选取代的杂环基团、酰基、任选取代的氨基、任选取代的氨基甲酰基、任选取代的硫代氨基甲酰基、任选取代的氨磺酰基、任选取代的羟基、任选取代的硫烷基(sulfanyl)(SH)和任选取代的甲硅烷基。
在本说明书中，“烃基团”(包括“任选取代的烃基团”的“烃基团”)的实例包括C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-10环烷基、C3-10环烯基、C6-14芳基和C7-16芳烷基。
在本说明书中，“任选取代的烃基团”的实例包括任选地具有选自以下取代基组A的一个或多个取代基的烃基团。
[取代基组A]
(1)卤素原子，
(2)硝基，
(3)氰基，
(4)氧代基团，
(5)羟基，
(6)任选卤化的C1-6烷氧基，
(7)C6-14芳氧基(例如，苯氧基、萘氧基)，
(8)C7-16芳烷氧基(例如，苄氧基)，
(9)5至14元芳族杂环基氧基(例如，吡啶氧基)，
(10)3至14元非芳族杂环基氧基(例如，吗啉基氧基、哌啶基氧基)，
(11)C1-6烷基-羰基氧基(例如，乙酰氧基、丙酰氧基)，
(12)C6-14芳基-羰基氧基(例如，苯甲酰氧基、1-萘甲酰氧基、2-萘甲酰氧基)，
(13)C1-6烷氧基-羰基氧基(例如，甲氧基羰基氧基、乙氧基羰基氧基、丙氧基羰基氧基、丁氧基羰基氧基)，
(14)单-或二-C1-6烷基-氨基甲酰氧基(例如，甲基氨基甲酰氧基、乙基氨基甲酰氧基、二甲基氨基甲酰氧基、二乙基氨基甲酰氧基)，
(15)C6-14芳基-氨基甲酰氧基(例如，苯基氨基甲酰氧基、萘基氨基甲酰氧基)，
(16)5至14元芳族杂环基羰基氧基(例如，烟酰基氧基)，
(17)3至14元非芳族杂环基羰基氧基(例如，吗啉基羰基氧基、哌啶基羰基氧基)，
(18)任选卤化的C1-6烷基磺酰基氧基(例如，甲基磺酰基氧基、三氟甲基磺酰基氧基)，
(19)任选地被C1-6烷基取代的C6-14芳基磺酰基氧基(例如，苯基磺酰基氧基、甲苯磺酰基氧基)，
(20)任选卤化的C1-6烷硫基，
(21)5至14元芳族杂环基团，
(22)3至14元非芳族杂环基团，
(23)甲酰基，
(24)羧基，
(25)任选卤化的C1-6烷基-羰基，
(26)C6-14芳基-羰基，
(27)5至14元芳族杂环基羰基，
(28)3至14元非芳族杂环基羰基，
(29)C1-6烷氧基-羰基，
(30)C6-14芳氧基-羰基(例如，苯氧基羰基、1-萘氧基羰基、2-萘氧基羰基)，
(31)C7-16芳烷氧基-羰基(例如，苄氧基羰基、苯乙氧基羰基)，
(32)氨基甲酰基，
(33)硫代氨基甲酰基，
(34)单或二-C1-6烷基-氨基甲酰基，
(35)C6-14芳基-氨基甲酰基(例如，苯基氨基甲酰基)，
(36)5至14元芳族杂环基氨基甲酰基(例如，吡啶基氨基甲酰基、噻吩基氨基甲酰基)，
(37)3至14元非芳族杂环基氨基甲酰基(例如，吗啉基氨基甲酰基、哌啶基氨基甲酰基)，
(38)任选卤化的C1-6烷基磺酰基，
(39)C6-14芳基磺酰基，
(40)5至14元芳族杂环基磺酰基(例如，吡啶基磺酰基、噻吩基磺酰基)，
(41)任选卤化的C1-6烷基亚磺酰基，
(42)C6-14芳基亚磺酰基(例如，苯基亚磺酰基、1-萘基亚磺酰基、2-萘基亚磺酰基)，
(43)5至14元芳族杂环基亚磺酰基(例如，吡啶基亚磺酰基、噻吩基亚磺酰基)，
(44)氨基，
(45)单或二-C1-6烷基氨基(例如，甲基氨基、乙基氨基、丙基氨基、异丙基氨基、丁基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、二丙基氨基、二丁基氨基、N-乙基-N-甲基氨基)，
(46)单或二-C6-14芳基氨基(例如，苯基氨基)，
(47)5至14元芳族杂环基氨基(例如，吡啶基氨基)，
(48)C7-16芳烷基氨基(例如，苄基氨基)，
(49)甲酰基氨基，
(50)C1-6烷基-羰基氨基(例如，乙酰基氨基、丙酰基氨基、丁酰基氨基)，
(51)(C1-6烷基)(C1-6烷基-羰基)氨基(例如，N-乙酰基-N-甲基氨基)，
(52)C6-14芳基-羰基氨基(例如，苯基羰基氨基、萘基羰基氨基)，
(53)C1-6烷氧基-羰基氨基(例如，甲氧基羰基氨基、乙氧基羰基氨基、丙氧基羰基氨基、丁氧基羰基氨基、叔丁氧基羰基氨基)，
(54)C7-16芳烷氧基-羰基氨基(例如，苄氧基羰基氨基)，
(55)C1-6烷基磺酰基氨基(例如，甲基磺酰基氨基、乙基磺酰基氨基)，
(56)任选地被C1-6烷基取代的C6-14芳基磺酰基氨基(例如，苯基磺酰基氨基，甲苯磺酰基氨基)，
(57)任选卤化的C1-6烷基，
(58)C2-6烯基，
(59)C2-6炔基，
(60)C3-10环烷基，
(61)C3-10环烯基以及
(62)C6-14芳基。
“任选取代的烃基团”中的上述取代基的数目是例如1至5，优选1至3。当取代基的数目是两个或更多个时，相应取代基可相同或不同。
在本说明书中，“杂环基团”(包括“任选取代的杂环基团”的“杂环基团”)的实例包括(i)芳族杂环基团、(ii)非芳族杂环基团和(iii)7至10元桥联杂环基团，除碳原子外各自含有1至4个选自氮原子、硫原子和氧原子的杂原子作为成环原子。
在本说明书中，“芳族杂环基团”(包括“5至14元芳族杂环基团”)的实例包括除碳原子外含有1至4个选自氮原子、硫原子和氧原子的杂原子作为成环原子的5至14元(优选5至10元)芳族杂环基团。
“芳族杂环基团”的优选实例包括5或6元单环芳族杂环基团，如噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、1,2,4-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、三唑基、四唑基、三嗪基等；以及
8至14元稠合多环(优选双环或三环)芳族杂环基团，如苯并苯硫基、苯并呋喃基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、苯并三唑基、咪唑并吡啶基、噻吩并吡啶基、呋喃并吡啶基、吡咯并吡啶基、吡唑并吡啶基、噁唑并吡啶基、噻唑并吡啶基、咪唑并吡嗪基、咪唑并嘧啶基、噻吩并嘧啶基、呋喃并嘧啶基、吡咯并嘧啶基、吡唑并嘧啶基、噁唑并嘧啶基、噻唑并嘧啶基、吡唑并三嗪基、萘并[2,3-b]噻吩基、吩噁噻基、吲哚基、异吲哚基、1H-吲唑基、嘌呤基、异喹啉基、喹啉基、酞嗪基、萘啶基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、咔唑基、β-咔啉基、菲啶基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基等。
在本说明书中，“非芳族杂环基团”(包括“3至14元非芳族杂环基团”)的实例包括除碳原子外含有1至4个选自氮原子、硫原子和氧原子的杂原子作为成环原子的3至14元(优选4至10元)非芳族杂环基团。
“非芳族杂环基团”的优选实例包括3至8元单环非芳族杂环基团，如氮丙啶基、环氧乙烷基、硫杂环丙烷基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、四氢噻吩基、四氢呋喃基、吡咯啉基、吡咯烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、噁唑啉基、噁唑烷基、吡唑啉基、吡唑烷基、噻唑啉基、噻唑烷基、四氢异噻唑基、四氢噁唑基、四氢异噁唑基、哌啶基、哌嗪基、四氢吡啶基、二氢吡啶基、二氢噻喃基、四氢嘧啶基、四氢哒嗪基、二氢吡喃基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、吗啉基、硫代吗啉基、氮杂环庚烷基、二氮杂环庚烷基、氮杂卓基、氧杂环庚烷基、氮杂环辛烷基、二氮杂环辛烷基等；以及
9至14元稠合多环(优选双环或三环)非芳族杂环基团，如二氢苯并呋喃基、二氢苯并咪唑基、二氢苯并噁唑基、二氢苯并噻唑基、二氢苯并异噻唑基、二氢萘并[2,3-b]噻吩基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、4H-喹嗪基、二氢吲哚基、异二氢吲哚基、四氢噻吩并[2,3-c]吡啶基、四氢苯并氮杂卓基、四氢喹喔啉基、四氢菲啶基、六氢吩噻嗪基、六氢吩噁嗪基、四氢酞嗪基、四氢萘啶基、四氢喹唑啉基、四氢噌啉基、四氢咔唑基、四氢-β-咔啉基、四氢吖啶基、四氢吩嗪基、四氢噻吨基、八氢异喹啉基等。
在本说明书中，“7至10元桥联杂环基团”的优选实例包括奎宁环基和7-氮杂双环[2.2.1]庚烷基。
在本说明书中，“含氮杂环基团”的实例包括含有至少一个氮原子作为成环原子的“杂环基团”。
在本说明书中，“任选取代的杂环基团”的实例包括任选地具有选自上述取代基组A的一个或多个取代基的杂环基团。
“任选取代的杂环基团”中的取代基的数目是例如1至3。当取代基的数目是两个或更多个时，相应取代基可相同或不同。
在本说明书中，“酰基”的实例包括甲酰基、羧基、氨基甲酰基、硫代氨基甲酰基、亚磺基、磺基、氨磺酰基和膦酰基，各自任选地具有“1或2个选自C1-6烷基、C2-6烯基、C3-10环烷基、C3-10环烯基、C6-14芳基、C7-16芳烷基、5至14元芳族杂环基团和3至14元非芳族杂环基团的取代基，其各自任选地具有1至3个选自卤素原子、任选卤化的C1-6烷氧基、羟基、硝基、氰基、氨基和氨基甲酰基的取代基”。
“酰基”的实例还包括烃-磺酰基、杂环基磺酰基、烃-亚磺酰基和杂环基亚磺酰基。
在此，烃-磺酰基是指烃基团键合的磺酰基，杂环基磺酰基是指杂环基团键合的磺酰基，烃-亚磺酰基是指烃基团键合的亚磺酰基，并且杂环基亚磺酰基是指杂环基团-键合的亚磺酰基。
“酰基”的优选实例包括甲酰基、羧基、C1-6烷基-羰基、C2-6烯基-羰基(例如，巴豆酰基)、C3-10环烷基-羰基(例如，环丁烷羰基、环戊烷羰基、环己烷羰基、环庚烷羰基)、C3-10环烯基-羰基(例如，2-环己烯羰基)、C6-14芳基-羰基、C7-16芳烷基-羰基、5至14元芳族杂环基羰基、3至14元非芳族杂环基羰基、C1-6烷氧基-羰基、C6-14芳氧基-羰基(例如，苯氧基羰基、萘氧基羰基)、C7-16芳烷氧基-羰基(例如，苄氧基羰基、苯乙氧基羰基)、氨基甲酰基、单-或二-C1-6烷基-氨基甲酰基、单-或二-C2-6烯基-氨基甲酰基(例如，二烯丙基氨基甲酰基)、单-或二-C3-10环烷基-氨基甲酰基(例如，环丙基氨基甲酰基)、单-或二-C6-14芳基-氨基甲酰基(例如，苯基氨基甲酰基)、单-或二-C7-16芳烷基-氨基甲酰基、5至14元芳族杂环基氨基甲酰基(例如，吡啶基氨基甲酰基)、硫代氨基甲酰基、单-或二-C1-6烷基-硫代氨基甲酰基(例如，甲基硫代氨基甲酰基)、N-乙基-N-甲基硫代氨基甲酰基)、单-或二-C2-6烯基-硫代氨基甲酰基(例如，二烯丙基硫代氨基甲酰基)、单-或二-C3-10环烷基-硫代氨基甲酰基(例如，环丙基硫代氨基甲酰基、环己基硫代氨基甲酰基)、单-或二-C6-14芳基-硫代氨基甲酰基(例如，苯基硫代氨基甲酰基)、单-或二-C7-16芳烷基-硫代氨基甲酰基(例如，苄基硫代氨基甲酰基、苯乙基硫代氨基甲酰基)、5至14元芳族杂环基硫代氨基甲酰基(例如，吡啶基硫代氨基甲酰基)、亚磺基、C1-6烷基亚磺酰基(例如，甲基亚磺酰基、乙基亚磺酰基)、磺基、C1-6烷基磺酰基、C6-14芳基磺酰基、膦酰基和单-或二-C1-6烷基膦酰基(例如，二甲基膦酰基、二乙基膦酰基、二异丙基膦酰基、二丁基膦酰基)。
在本说明书中，“任选取代的氨基”的实例包括任选地具有“1或2个选自C1-6烷基、C2-6烯基、C3-10环烷基、C6-14芳基、C7-16芳烷基、C1-6烷基-羰基、C6-14芳基-羰基、C7-16芳烷基-羰基、5至14元芳族杂环基羰基、3至14元非芳族杂环基羰基、C1-6烷氧基-羰基、5至14元芳族杂环基团、氨基甲酰基、单-或二-C1-6烷基-氨基甲酰基、单-或二-C7-16芳烷基-氨基甲酰基、C1-6烷基磺酰基和C6-14芳基磺酰基的取代基的氨基，所述取代基各自任选地具有1至3个选自取代基组A的取代基”。
任选取代的氨基的优选实例包括氨基、单-或二-(任选卤化的C1-6烷基)氨基(例如，甲基氨基、三氟甲基氨基、二甲基氨基、乙基氨基、二乙基氨基、丙基氨基、二丁基氨基)、单-或二-C2-6烯基氨基(例如，二烯丙基氨基)、单-或二-C3-10环烷基氨基(例如，环丙基氨基、环己基氨基)、单-或二-C6-14芳基氨基(例如，苯基氨基)、单-或二-C7-16芳烷基氨基(例如，苄基氨基、二苄基氨基)、单-或二-(任选卤化的C1-6烷基)-羰基氨基(例如，乙酰基氨基、丙酰基氨基)、单-或二-C6-14芳基-羰基氨基(例如，苯甲酰基氨基)、单-或二-C7-16芳烷基-羰基氨基(例如，苄基羰基氨基)、单-或二-5至14元芳族杂环基羰基氨基(例如，烟酰基氨基、异烟酰基氨基)、单-或二-3至14元非芳族杂环基羰基氨基(例如，哌啶基羰基氨基、单-或二-C1-6烷氧基-羰基氨基(例如，叔丁氧基羰基氨基)、5至14元芳族杂环基氨基(例如，吡啶基氨基)、氨基甲酰基氨基、(单-或二-C1-6烷基-氨基甲酰基)氨基(例如，甲基氨基甲酰基氨基)、(单-或二-C7-16芳烷基-氨基甲酰基)氨基(例如，苄基氨基甲酰基氨基)、C1-6烷基磺酰基氨基(例如，甲基磺酰基氨基、乙基磺酰基氨基)、C6-14芳基磺酰基氨基(例如，苯基磺酰基氨基)、(C1-6烷基)(C1-6烷基-羰基)氨基(例如，N-乙酰基-N-甲基氨基)和(C1-6烷基)(C6-14芳基-羰基)氨基(例如，N-苯甲酰基-N-甲基氨基)。
在本说明书中，“任选取代的氨基甲酰基”的实例包括任选地具有“1或2个选自C1-6烷基、C2-6烯基、C3-10环烷基、C6-14芳基、C7-16芳烷基、C1-6烷基-羰基、C6-14芳基-羰基、C7-16芳烷基-羰基、5至14元芳族杂环基羰基、3至14元非芳族杂环基羰基、C1-6烷氧基-羰基、5至14元芳族杂环基团、氨基甲酰基、单-或二-C1-6烷基-氨基甲酰基和单-或二-C7-16芳烷基-氨基甲酰基的取代基的氨基甲酰基，所述取代基各自任选地具有1至3个选自取代基组A的取代基”。
任选取代的氨基甲酰基的优选实例包括氨基甲酰基、单-或二-C1-6烷基-氨基甲酰基、单-或二-C2-6烯基-氨基甲酰基(例如，二烯丙基氨基甲酰基)、单-或二-C3-10环烷基-氨基甲酰基(例如，环丙基氨基甲酰基、环己基氨基甲酰基)、单-或二-C6-14芳基-氨基甲酰基(例如，苯基氨基甲酰基)、单-或二-C7-16芳烷基-氨基甲酰基、单-或二-C1-6烷基-羰基-氨基甲酰基(例如，乙酰基氨基甲酰基、丙酰基氨基甲酰基)、单-或二-C6-14芳基-羰基-氨基甲酰基(例如，苯甲酰基氨基甲酰基)和5至14元芳族杂环基氨基甲酰基(例如，吡啶基氨基甲酰基)。
在本说明书中，“任选取代的硫代氨基甲酰基”的实例包括任选地具有“1或2个选自C1-6烷基、C2-6烯基、C3-10环烷基、C6-14芳基、C7-16芳烷基、C1-6烷基-羰基、C6-14芳基-羰基、C7-16芳烷基-羰基、5至14元芳族杂环基羰基、3至14元非芳族杂环基羰基、C1-6烷氧基-羰基、5至14元芳族杂环基团、氨基甲酰基、单-或二-C1-6烷基-氨基甲酰基和单-或二-C7-16芳烷基-氨基甲酰基的取代基的硫代氨基甲酰基，所述取代基各自任选地具有1至3个选自取代基组A的取代基”。
任选取代的硫代氨基甲酰基的优选实例包括硫代氨基甲酰基、单-或二-C1-6烷基-硫代氨基甲酰基(例如，甲基硫代氨基甲酰基、乙基硫代氨基甲酰基、二甲基硫代氨基甲酰基、二乙基硫代氨基甲酰基、N-乙基-N-甲基硫代氨基甲酰基)、单-或二-C2-6烯基-硫代氨基甲酰基(例如，二烯丙基硫代氨基甲酰基)、单-或二-C3-10环烷基-硫代氨基甲酰基(例如，环丙基硫代氨基甲酰基、环己基硫代氨基甲酰基)、单-或二-C6-14芳基-硫代氨基甲酰基(例如，苯基硫代氨基甲酰基)、单-或二-C7-16芳烷基-硫代氨基甲酰基(例如，苄基硫代氨基甲酰基、苯乙基硫代氨基甲酰基)、单-或二-C1-6烷基-羰基-硫代氨基甲酰基(例如，乙酰基硫代氨基甲酰基、丙酰基硫代氨基甲酰基)、单-或二-C6-14芳基-羰基-硫代氨基甲酰基(例如，苯甲酰基硫代氨基甲酰基)和5至14元芳族杂环基硫代氨基甲酰基(例如，吡啶基硫代氨基甲酰基)。
在本说明书中，“任选取代的氨磺酰基”的实例包括任选地具有“1或2个选自C1-6烷基、C2-6烯基、C3-10环烷基、C6-14芳基、C7-16芳烷基、C1-6烷基-羰基、C6-14芳基-羰基、C7-16芳烷基-羰基、5至14元芳族杂环基羰基、3至14元非芳族杂环基羰基、C1-6烷氧基-羰基、5至14元芳族杂环基团、氨基甲酰基、单-或二-C1-6烷基-氨基甲酰基和单-或二-C7-16芳烷基-氨基甲酰基的取代基的氨磺酰基，所述取代基各自任选地具有1至3个选自取代基组A的取代基”。
任选取代的氨磺酰基的优选实例包括氨磺酰基、单-或二-C1-6烷基-氨磺酰基(例如，甲基氨磺酰基、乙基氨磺酰基、二甲基氨磺酰基、二乙基氨磺酰基、N-乙基-N-甲基氨磺酰基)、单-或二-C2-6烯基-氨磺酰基(例如，二烯丙基氨磺酰基)、单-或二-C3-10环烷基-氨磺酰基(例如，环丙基氨磺酰基、环己基氨磺酰基)、单-或二-C6-14芳基-氨磺酰基(例如，苯基氨磺酰基)、单-或二-C7-16芳烷基-氨磺酰基(例如，苄基氨磺酰基、苯乙基氨磺酰基)、单-或二-C1-6烷基-羰基-氨磺酰基(例如，乙酰基氨磺酰基、丙酰基氨磺酰基)、单-或二-C6-14芳基-羰基-氨磺酰基(例如，苯甲酰基氨磺酰基)和5至14元芳族杂环基氨磺酰基(例如，吡啶基氨磺酰基)。
在本说明书中，“任选取代的羟基”的实例包括任选地具有“选自C1-6烷基、C2-6烯基、C3-10环烷基、C6-14芳基、C7-16芳烷基、C1-6烷基-羰基、C6-14芳基-羰基、C7-16芳烷基-羰基、5至14元芳族杂环基羰基、3至14元非芳族杂环基羰基、C1-6烷氧基-羰基、5至14元芳族杂环基团、氨基甲酰基、单-或二-C1-6烷基-氨基甲酰基、单-或二-C7-16芳烷基-氨基甲酰基、C1-6烷基磺酰基和C6-14芳基磺酰基的取代基的羟基，所述取代基各自任选地具有1至3个选自取代基组A的取代基”。
任选取代的羟基的优选实例包括羟基、C1-6烷氧基、C2-6烯氧基(例如，烯丙氧基、2-丁烯氧基、2-戊烯氧基、3-己烯氧基)、C3-10环烷氧基(例如，环己氧基)、C6-14芳氧基(例如，苯氧基、萘氧基)、C7-16芳烷氧基(例如，苄氧基、苯乙氧基)、C1-6烷基-羰基氧基(例如，乙酰氧基、丙酰氧基、丁酰氧基、异丁酰氧基、新戊酰氧基)、C6-14芳基-羰基氧基(例如，苯甲酰氧基)、C7-16芳烷基-羰基氧基(例如，苄基羰基氧基)、5至14元芳族杂环基羰基氧基(例如，烟酰基氧基)、3至14元非芳族杂环基羰基氧基(例如，哌啶基羰基氧基)、C1-6烷氧基-羰基氧基(例如，叔丁氧基羰基氧基)、5至14元芳族杂环基氧基(例如，吡啶氧基)、氨基甲酰氧基、C1-6烷基-氨基甲酰氧基(例如，甲基氨基甲酰氧基)、C7-16芳烷基-氨基甲酰氧基(例如，苄基氨基甲酰氧基)、C1-6烷基磺酰基氧基(例如甲基磺酰基氧基、乙基磺酰基氧基)和C6-14芳基磺酰基氧基(例如，苯基磺酰基氧基)。
在本说明书中，“任选取代的硫烷基”的实例包括任选具有“选自C1-6烷基、C2-6烯基、C3-10环烷基、C6-14芳基、C7-16芳烷基、C1-6烷基-羰基、C6-14芳基-羰基和5至14元芳族杂环基团的取代基的硫烷基，所述取代基各自任选地具有1至3个选自取代基组A的取代基”和卤化硫烷基。
任选取代的硫烷基的优选实例包括硫烷基(-SH)、C1-6烷硫基、C2-6烯硫基(例如，烯丙硫基、2-丁烯硫基、2-戊烯硫基、3-己烯硫基)、C3-10环烷硫基(例如，环己硫基)、C6-14芳硫基(例如，苯硫基、萘硫基)、C7-16芳烷硫基(例如，苄硫基、苯乙硫基)、C1-6烷基-羰硫基(例如，乙酰硫基、丙酰硫基、丁酰硫基、异丁酰硫基、新戊酰硫基)、C6-14芳基-羰硫基(例如，苯甲酰硫基)、5至14元芳族杂环硫基(例如，吡啶硫基)和卤化硫代基团(例如，五氟硫代)。
在本说明书中，“任选取代的甲硅烷基”的实例包括任选地具有“1至3个选自C1-6烷基、C2-6烯基、C3-10环烷基、C6-14芳基和C7-16芳烷基的取代基的甲硅烷基，所述取代基各自任选地具有1至3个选自取代基组A的取代基”。
任选取代的甲硅烷基的优选实例包括三-C1-6烷基甲硅烷基(例如，三甲基甲硅烷基、叔丁基(二甲基)甲硅烷基)。
以下详细描述式(I)中每个符号的定义。
P1是由下式表示的基团：
-RA1，
-CO-RA1，
-CO-ORA1，
-CO-CORA1，
-SO-RA1，
-SO2-RA1，
-SO2-ORA1，
-CO-NRA2RA3，
-SO2-NRA2RA3，或
-C(＝NRA1)-NRA2RA3
其中RA1、RA2和RA3各自独立地是氢原子、任选取代的烃基团或任选取代的杂环基团。
P1优选地是氢原子或甲基。
由(-Gly-Gly-Gly-Gly-RA10)表示的接头-烷基链部分与10位Lys的ε-氨基键合以呈现以下结构：
[式1]
这种接头-烷基链的存在可实现化合物(I)的作用的持久性。RA10是Pal或Oda。
RA10优选地是Pal。
A11是Aib、Ala或Ser。
A11优选地是Aib。
在替代实施方案中，A11优选地是Ala。
在替代实施方案中，A11优选地是Ser。
A12是Ile或Lys。
A12优选地是Ile。
A15是Asp或Glu。
A15优选地是Glu。
A18是Ala或Arg。
A18优选地是Arg。
A35是Tyr或Phe(2-F)。
A35优选地是Tyr。
化合物(I)的优选实例包括以下肽或其盐。
[化合物A]
化合物(I)，其是肽，或其盐，其中
P1是甲基；
RA10是Pal或Oda；
A11是Aib、Ala或Ser(A11优选是Aib，在替代实施方案中优选是Ala，并且在替代实施方案中优选是Ser)；
A12是Ile；
A15是Glu；
A18是Arg；并且
A35是Tyr。
[化合物B]
化合物(I)，其是在实施例31中描述的肽(SEQ ID NO:40)或其盐。
化合物(I)，其是在实施例35中描述的肽(SEQ ID NO:44)或其盐。
化合物(I)，其是在实施例41中描述的肽(SEQ ID NO:50)或其盐。
化合物(I)可根据本身已知的肽合成方法来制备。肽合成的方法可以是例如固相合成方法和液相合成方法中的任一种。即，可根据所需序列通过重复缩合能够构成化合物(I)的部分肽或氨基酸和剩余部分(可由两个或更多个氨基酸构成)来产生目标肽。当具有所希望序列的产物具有保护基团时，可通过消除保护基团来产生目标肽。已知的保护基团的缩合方法和消除方法的实例包括以下(1)-(5)中描述的方法。
(1)M.Bodanszky和M.A.Ondetti:Peptide Synthesis,IntersciencePublishers,New York(1966)
(2)Schroeder和Luebke:The Peptide,Academic Press,New York(1965)
(3)Nobuo Izumiya,等人:Peptide Gosei no Kiso to Jikken(Basics andexperiments of peptide synthesis),由Maruzen Co.出版(1975)
(4)Haruaki Yajima和Shunpei Sakakibara:Seikagaku Jikken Koza(Biochemical Experiment)1,Tanpakushitsu no Kagaku(Chemistry of Proteins)IV,205(1977)
(5)Haruaki Yajima,编:Zoku Iyakuhin no Kaihatsu(A sequel toDevelopment of Pharmaceuticals),第14卷,Peptide Synthesis,由Hirokawa Shoten出版
在反应后，可使用常规纯化方法纯化并分离化合物(I)，所述纯化方法如溶剂萃取、蒸馏、柱色谱法、液相色谱法、重结晶等、其组合。当通过上述方法获得的肽呈游离形式时，可通过已知方法将其转化为合适的盐；相反，当以盐的形式获得肽时，可通过已知的方法将所述盐转化为游离形式。
起始化合物也可以是盐。这种盐的实例包括例示为下文提及的化合物(I)的盐的那些。
对于受保护的氨基酸或肽的缩合，可使用可用于肽合成的各种活化试剂，所述活化试剂特别优选地是三鏻盐、四甲基脲盐、碳二亚胺等。三鏻盐的实例包括苯并三唑-1-基氧基三(吡咯嗪并)鏻六氟磷酸盐(PyBOP)、溴代三(吡咯嗪并)鏻六氟磷酸盐(PyBroP)、7-氮杂苯并三唑-1-基氧基三(吡咯嗪并)鏻六氟磷酸盐(PyAOP)，四甲基脲盐的实例包括2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)、2-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)、2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸盐(TBTU)、2-(5-降冰片烷-2,3-二羧基酰亚胺)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸盐(TNTU)、O-(N-琥珀酰亚胺基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸盐(TSTU)，并且碳二亚胺的实例包括DCC、N,N'-二异丙基碳二亚胺(DIPCDI)、N-乙基-N'-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCI.HCl)等。对于使用这些的缩合，优选添加外消旋化抑制剂(例如，HONB、HOBt、HOAt、HOOBt等)。待用于缩合的溶剂可从已知可用于肽缩合反应的那些溶剂中适当选择。例如，可使用酸酰胺如无水或含水N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮等；卤化烃如二氯甲烷、氯仿等；醇类如三氟乙醇、苯酚等；亚砜类如二甲基亚砜等；叔胺类如吡啶等；醚类如二噁烷、四氢呋喃等；腈类如乙腈、丙腈等；酯类如乙酸甲酯、乙酸乙酯等；这些的适当混合物等。反应温度适当地选自已知可用于肽结合反应的范围，并且通常选自约-20℃至50℃的范围。通常使用1.5至6倍过量的活化的氨基酸衍生物。在相合成中，当使用茚三酮反应的测试揭示缩合不充分时，可通过重复缩合反应而不消除保护基团来进行充分缩合。如果即使在重复反应后缩合仍然不充分，则可用乙酸酐、乙酰基咪唑等酰化未反应的氨基酸，以使得可避免对随后反应的影响。
用于起始氨基酸的氨基的保护基团的实例包括Z、Boc、叔戊氧基羰基、异冰片基氧基羰基、4-甲氧基苄氧基羰基、Cl-Z、Br-Z、金刚烷基氧基羰基、三氟乙酰基、邻苯二甲酰基、甲酰基、2-硝基苯基亚磺酰基、二苯基硫膦基(diphenylphosphinothioyl)、Fmoc、三苯甲基等。
除上文提及的C1-6烷基、C3-10环烷基、C7-14芳烷基外，用于起始氨基酸的羧基保护基团的实例还包括烯丙基、2-金刚烷基、4-硝基苄基、4-甲氧基苄基、4-氯苄基、苯甲酰甲基和苄氧基羰基酰肼、叔丁氧基羰基酰肼、三苯甲基酰肼等。
丝氨酸或苏氨酸的羟基可通过例如酯化或醚化来保护。适于酯化的基团的实例包括低级(C2-4)烷酰基如乙酰基等，芳酰基如苯甲酰基等，以及衍生自有机酸的基团等。此外，适于醚化的基团的实例包括苄基、四氢吡喃基、叔丁基(But)、三苯甲基(Trt)等。
用于酪氨酸的酚羟基的保护基团的实例包括Bzl、2,6-二氯苄基、2-硝基苄基、Br-Z、叔丁基等。
用于组氨酸的咪唑的保护基团的实例包括Tos、4-甲氧基-2,3,6-三甲基苯磺酰基(Mtr)、DNP、Bom、Bum、Boc、Trt、Fmoc等。
用于精氨酸的胍基的保护基团的实例包括Tos、Z、4-甲氧基-2,3,6-三甲基苯磺酰基(Mtr)、对甲氧基苯磺酰基(MBS)、2,2,5,7,8-五甲基色满-6-磺酰基(Pmc)、均三甲苯-2-磺酰基(Mts)、2,2,4,6,7-五甲基二氢苯并呋喃-5-磺酰基(Pbf)、Boc、Z、NO2等。
用于赖氨酸的侧链氨基的保护基团的实例包括Z、Cl-Z、三氟乙酰基、Boc、Fmoc、Trt、Mtr、4,4-二甲基-2,6-二氧代环亚己基(Dde)等。
用于色氨酸的吲哚基的保护基团的实例包括甲酰基(For)、Z、Boc、Mts、Mtr等。
用于天冬酰胺和谷氨酰胺的保护基团的实例包括Trt、氧杂蒽基(Xan)、4,4'-二甲氧基二苯甲基(Mbh)、2,4,6-三甲氧基苄基(Tmob)等。
起始材料中的活化羧基的实例包括相应的酸酐、叠氮化物、活性酯[与醇的酯(例如，五氯苯酚、2,4,5-三氯苯酚、2,4-二硝基苯酚、氰基甲醇，对硝基苯酚、HONB、N-羟基琥珀酰亚胺、1-羟基苯并三唑(HOBt)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(HOAt))]等。起始材料中的活化氨基的实例包括相应的磷酰胺。
用于除去(消除)保护基团的方法的实例包括在催化剂如Pd-黑或Pd-碳存在下催化还原氢气流；使用无水氟化氢、甲磺酸、三氟甲磺酸、三氟乙酸酯、三甲磺酰基甲硅烷基溴(TMSBr)、三甲基甲硅烷基三氟甲磺酸酯、四氟硼酸、三(三氟)硼酸、三溴化硼或其混合物溶液的酸处理；使用二异丙基乙胺、三乙胺、哌啶、哌嗪等的碱处理；以及在液氨中用钠还原等。通过上述酸处理的消除反应通常在-20℃至40℃的温度下进行；通过添加阳离子清除剂如苯甲醚、苯酚、苯甲硫醚、间甲酚和对甲酚；二甲基硫醚、1,4-丁二硫醇、1,2-乙二硫醇等有效地进行酸处理。此外，通过苯硫酚处理除去用作组氨酸的咪唑的保护基团的2,4-二硝基苯基；通过在1,2-乙二硫醇、1,4-丁二硫醇等存在下的酸处理以及通过用稀氢氧化钠、稀氨水等碱处理脱保护来除去用作色氨酸的吲哚的保护基团的甲酰基。
不应参与起始材料和保护基团的反应的官能团的保护、保护基团的消除、参与反应的官能团的活化等可从已知的保护基团和已知的手段中适当选择。
在制备肽的酰胺的方法中，通过使用用于酰胺合成的树脂的固相合成形成酰胺，或者使羧基末端氨基酸的α-羧基酰胺化，并且使肽链朝向氨基侧延长至所需的肽长度，此后制备其中仅除去肽链的N末端α-氨基的保护基团的肽和其中仅除去肽链的C末端羧基的保护基团的肽，并且所述两种肽在上述混合溶剂中缩合。关于缩合反应的细节，上述同样适用。在纯化通过缩合获得的受保护的肽后，可通过上述方法除去所有保护基团以得到所需的粗多肽。通过使用各种公知的纯化手段纯化此粗肽，并冷冻干燥主要级分，可制备所述肽的所需酰胺。
可例如通过以下方法产生化合物(I)：首先，通过本身已知的肽合成方法产生化合物(II)，其中化合物(I)的Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-RA10)部分是Lys。化合物(II)可由树脂负载。在此，构成化合物(II)的氨基酸和P1优选用适当的保护基团保护，以便不会不利地影响化合物(I)的产生。保护基团的实例包括参考实施例和后面提及的实施例中使用的保护基团。化合物(II)中的Lys在其侧链氨基处用正交保护基团(例如，ivDde；在本说明书中，(1-(4,4-二甲基-2,6-二氧代环己-1-亚基)-3-甲基丁基)有时缩写为ivDde)保护。随后，在选择性条件下除去化合物(II)中Lys的正交保护基团，并且通过本身已知的方法使对应于(-Gly-Gly-Gly-Gly-H)的氨基酸连续缩合以得到化合物(III)。化合物(III)可由树脂负载。
P1-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-α-MePhe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Aib-Lys-Aib-Leu-Asp-A16-A17-Ala-A19-Ala-Glu-Phe-Val-A24-Trp-Leu-Leu-A28-Gly
(II)
(SEQ ID NO:1)
其中每个符号如上文所定义。
P1-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-α-MePhe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Aib-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-H)-Aib-Leu-Asp-A16-A17-Ala-A19-Ala-Glu-Phe-Val-A24-Trp-Leu-Leu-A28-Gly(III)
(SEQ ID NO:1)
其中每个符号如上文所定义。
与化合物(II)一样，构成化合物(III)的氨基酸和P1优选用适当的保护基团保护。
通过本身已知的方法将化合物(III)与化合物(IV)缩合，并且除去所有保护基团以得到化合物(I)(在一些情况下，通过从树脂上裂解)。与化合物(II)和(III)一样，构成化合物(IV)的RA10优选用适当的保护基团(下文中有时缩写为P)保护。
HO-RA10(IV)
其中RA10是Oda或Pal。
由P表示的保护基团的实例包括用于羧基的上述保护基团(优选叔丁基)。例如，可使用可商购产品作为化合物(IV)。
也可通过本身已知的方法通过使由与上述方法类似的方法产生的片段肽连续缩合来产生化合物(I)。
与化合物(II)一样，构成片段肽的氨基酸和P1可用适当的保护基团保护。此外，所述片段肽可由树脂负载。
当化合物(I)作为诸如对映异构体、非对映异构体等、构象异构体等的构型异构体存在时，它们也涵盖于化合物(I)中，并且各自可根据需要通过本身已知的手段或以上分离和纯化方法进行分离。此外，当化合物(I)呈外消旋体形式时，可通过常规光学拆分将其分离成S-形式和R-形式。
当化合物(I)包括立体异构体时，单独异构体和每种异构体的混合物两者也涵盖于化合物(I)中。
可根据本身已知的方法和使用聚乙二醇对化合物(I)进行化学修饰。例如，可通过将聚乙二醇与化合物(I)的Cys残基、Asp残基、Glu残基、Lys残基等共轭地键合来产生化学修饰的化合物(I)。此外，化合物(I)与聚乙二醇之间可存在接头结构。
通过聚乙二醇(PEG)修饰的化合物(I)可产生例如促进治疗和诊断上重要的肽的生物活性、延长其血液循环时间、降低其免疫原性、增强其溶解性以及增强其对代谢的抗性的作用。
PEG的分子量没有特别限制，并且通常是约1K至约1000K道尔顿、优选约10K至约100K道尔顿、更优选约20K至约60K道尔顿。
可使用本领域熟知的方法作为通过PEG修饰化合物(I)的方法，并且例如可使用下文描述的方法。
(1)使具有活性酯的聚乙二醇化试剂(例如，SUNBRIGHT MEGC-30TS(商品名)，NOFCorp.)与化合物(I)的氨基键合。
(2)使具有醛的聚乙二醇化试剂(例如，SUNBRIGHT ME-300AL(商品名)，NOFCorp.)与化合物(I)的氨基键合。
(3)使二价交联剂(例如，GMBS(Dojindo Laboratories)、EMCS(DojindoLaboratories)、KMUS(Dojindo Laboratories)、SMCC(Pierce))与化合物(I)键合，然后将具有硫醇基团的聚乙二醇化试剂(例如，SUNBRIGHT ME-300-SH(商品名)，NOF Corp.)键合至其。
(4)使用SH引入剂(例如，D-半胱氨酸残基、L-半胱氨酸残基、特劳特(Traut)试剂)将硫醇基团引入化合物(I)，并且使此硫醇基团与具有马来酰亚胺基团的聚乙二醇化试剂(例如，SUNBRIGHT ME-300MA(商品名)，NOF Corp.)反应。
(5)使用SH引入剂(例如，D-半胱氨酸残基、L-半胱氨酸残基、特劳特(Traut)试剂)将硫醇基团引入化合物(I)，并且使此硫醇基团与具有碘乙酰胺基团的聚乙二醇化试剂(例如，SUNBRIGHT ME-300IA(商品名)，NOF Corp.)反应。
(6)将ω-氨基羧酸、α-氨基酸等作为接头引入化合物(I)的N-末端氨基，并且使源自此接头的氨基与具有活性酯的聚乙二醇化试剂(例如，SUNBRIGHT MEGC-30TS(商品名)，NOF Corp.)反应。
(7)将ω-氨基羧酸、α-氨基酸等作为接头引入化合物(I)的N-末端氨基，并且使源自此接头的氨基与具有醛基团的聚乙二醇化试剂(例如，SUNBRIGHT ME-300AL(商品名)，NOF Corp.)反应。
此外，化合物(I)可以是溶剂合物(例如，水合物)或非溶剂合物(例如，非水合物)。
可用同位素(例如，3H、14C、35S、125I)等标记化合物(I)。
此外，化合物(I)可以是氘转化形式，其中1H被转化为2H(D)。
用同位素标记或取代的化合物(I)可用作例如用于正电子发射断层扫描(PET)的示踪剂(PET示踪剂)，并且可适用于医学诊断等领域。
对于本文提及的肽，根据常规肽标记，左端是N末端(氨基末端)并且右端是C末端(羧基末端)。肽的C末端可以是酰胺(-CONH2)、羧基(-COOH)、羧酸根(-COO-)、烷基酰胺(-CONHRa)和酯(-COORa)中的任一种。特别地，酰胺(-CONH2)是优选的。
化合物(I)可呈盐形式。这种盐的实例包括金属盐、铵盐、与有机碱形成的盐、与无机酸形成的盐、与有机酸形成的盐、与碱性或酸性氨基酸形成的盐等。
金属盐的优选实例包括碱金属盐，如钠盐、钾盐等；碱土金属盐，如钙盐、镁盐、钡盐等；铝盐等。
与有机碱形成的盐的优选实例包括与三甲胺、三乙胺、吡啶、甲基吡啶、2,6-二甲基吡啶、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、环己胺、二环己胺、N,N-二苄基乙二胺等形成的盐。
与无机酸形成的盐的优选实例包括与盐酸、氢溴酸、硝酸、硫酸、磷酸等形成的盐。
与有机酸形成的盐的优选实例包括与甲酸、乙酸、三氟乙酸、邻苯二甲酸、富马酸、草酸、酒石酸、马来酸、柠檬酸、琥珀酸、苹果酸、甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸等形成的盐。
与碱性氨基酸形成的盐的优选实例包括与精氨酸、赖氨酸、鸟氨酸等形成的盐。与酸性氨基酸形成的盐的优选实例包括与天冬氨酸、谷氨酸等形成的盐。
在上述盐中，药学上可接受的盐是优选的。例如，当化合物具有酸性官能团时，无机盐如碱金属盐(例如，钠盐、钾盐等)、碱土金属盐(例如，钙盐、镁盐、钡盐等)等、铵盐等是优选的；并且当化合物具有碱性官能团时，例如与无机酸如盐酸、氢溴酸、硝酸、硫酸、磷酸等形成的盐，或与有机酸如乙酸、邻苯二甲酸、富马酸、草酸、酒石酸、马来酸、柠檬酸、琥珀酸、甲磺酸、对甲苯磺酸等形成的盐是优选的。
化合物(I)可呈前药形式。
前药是指在生物体内的生理条件下通过由于酶、胃酸等的反应而转化为化合物(I)的化合物，即，根据酶通过氧化、还原、水解等转化为化合物(I)的化合物；由于胃酸等通过水解等转化为化合物(I)的化合物。
化合物(I)的前药的实例包括其中化合物(I)的氨基被酰化、烷基化或磷酸化的化合物(例如，其中化合物(I)的氨基被二十烷酰化、丙氨酰化、戊基氨基羰基化、(5-甲基-2-氧代-1,3-二氧杂环戊烯-4-基)甲氧基羰基化、四氢呋喃基化、吡咯烷基甲基化、新戊酰氧基甲基化或叔丁基化等的化合物)；其中化合物(I)的羟基被酰化、烷基化、磷酸化或硼酸化的化合物(例如，其中化合物(I)的羟基被乙酰化、棕榈酰化、丙酰化、新戊酰化、琥珀酰化、富马酰化、丙氨酰化或二甲基氨基甲基羰基化的化合物)；其中化合物(I)的羧基被酯化或酰胺化的化合物(例如，其中化合物(I)的羧基被C1-6烷基酯化、苯基酯化、羧甲基酯化、二甲基氨基甲基酯化、新戊酰氧基甲基酯化、乙氧基羰基氧基乙基酯化、酞基酯化、(5-甲基-2-氧代-1,3-二氧杂环戊烯-4-基)甲基酯化、环己基氧基羰基乙基酯化或甲基酰胺化的化合物)等。其中，优选使用其中化合物(I)的羧基被C1-6烷基如甲基、乙基、叔丁基等酯化的化合物。这些化合物可通过本身已知的方法由化合物(I)产生。
化合物(I)的前药也可以是在生理条件下转化为化合物(I)的前药，如IYAKUHINno KAIHATSU(Development of Pharmaceuticals),第7卷,Design of Molecules,第163-198页,由HIROKAWA SHOTEN出版(1990)中描述的那些。
在本说明书中，前药可形成盐。这种盐的实例包括作为化合物(I)的盐例示的那些。
化合物(I)可以是晶体。化合物(I)中还包括具有单一晶形或多种晶形的混合物的晶体。可通过根据本身已知的结晶方法使化合物(I)结晶来产生晶体。
此外，化合物(I)可以是药学上可接受的共晶体或共晶体盐。在此，共晶体或共晶体盐是指由两种或更多种在室温下为固体的特定物质组成的结晶物质，所述特定物种各自具有不同的物理性质(例如，结构、熔点、熔化热、吸湿性、溶解性、稳定性等)。共晶体和共晶体盐可通过本身已知的共结晶来产生。
化合物(I)的晶体可在物理化学性质(例如，熔点、溶解性、稳定性)和生物学性质(例如，药代动力学(吸收、分布、代谢、排泄)、功效表达)方面优异，并且因此它可非常适用作药物。
化合物(I)及其前药(下文有时缩写为本发明的化合物)可对Y2受体、GLP-1受体和GIP受体具有活化作用。
本发明的化合物可对Y2受体、GLP-1受体和GIP受体具有高活化作用，特别是在体内。
由于Y2受体具有摄食抑制作用，因此具有Y2受体活化作用的肽可适用于预防或治疗与进食障碍(包括肥胖症和糖尿病)相关的症状。GLP-1和GIP是称为肠降血糖素的肠激素，并且具有促进自胰腺分泌胰岛素的作用。由于肠降血糖素与葡萄糖代谢密切相关，因此对GLP-1受体和GIP受体具有活化作用的化合物可适用于预防或治疗与葡萄糖代谢病症(包括糖尿病和肥胖症)相关的症状。
因此，本发明的化合物可具有摄食抑制作用、体重减轻作用等。
本发明的化合物具有高生物和化学稳定性，并且可预期具有其体内效应的持久性。
GLP-1受体激动剂在临床上已知具有恶心和呕吐的副作用。与GLP-1受体激动剂相比，本发明的化合物可减少这种催吐作用。
本发明的化合物可用作Y2受体、GLP-1受体和GIP受体的活化剂。
在本发明中，Y2受体、GLP-1受体和GIP受体的活化剂是指具有Y2受体活化作用(Y2受体激动剂作用)、GLP-1受体活化作用(GLP-1受体激动剂作用)和GIP受体活化作用(GIP受体激动剂作用)的剂。
本发明的化合物具有低毒性(例如，急性毒性、慢性毒性、遗传毒性、生殖毒性、心脏毒性、致癌性)，显示出一些副作用，并且可作为预防或治疗下文提及的各种疾病的剂安全地施用于哺乳动物(例如人、牛、马、狗、猫、猴、小鼠、大鼠)等。
凭借对GLP-1受体和GIP受体的上述活化作用，本发明的化合物可用作治疗或预防各种疾病(包括糖尿病和肥胖症)的剂。本发明的化合物可用作预防或治疗例如以下疾病的剂：症状性肥胖症、基于单纯性肥胖的肥胖症、与肥胖症相关的疾病状态或疾病、进食障碍、糖尿病(例如，1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠期糖尿病、肥胖性糖尿病)、高脂血症(例如，高甘油三酯血症、高胆固醇血症、高LDL-胆固醇血症、低HDL-胆固醇血症、餐后高脂血症)、高血压、心力衰竭、糖尿病并发症[例如，神经病、肾病、视网膜病变、糖尿病性心肌病、白内障、大血管病变、骨质减少、高渗性糖尿病昏迷、感染性疾病(例如，呼吸道感染、尿路感染、胃肠道感染、真皮软组织感染、下肢感染)、糖尿病性坏疽、口腔干燥症、听觉减退、脑血管病症、外周血液循环病症]、代谢综合征(具有3种或更多种选自以下的疾病状态：高甘油三酯(TG)血症、低HDL胆固醇(HDL-C)血症、高血压、腹部肥胖和葡萄糖耐量受损(impaired glucosetolerance))、肌肉减少症等。
症状性肥胖症的实例包括内分泌性肥胖症(例如，库欣综合征、甲状腺功能减退症、胰岛瘤、肥胖II型糖尿病、假性甲状旁腺功能减退症、性腺机能减退症)、中心性肥胖症(例如，下丘脑性肥胖、额叶综合征、克莱恩-莱文(Kleine-Levin)综合征)、遗传性肥胖症(例如，普拉德-威利(Prader-Willi)综合征、劳穆比三氏综合征(Laurence-Moon-Biedlsyndrome))、药物诱导的肥胖症(例如，类固醇、吩噻嗪、胰岛素、磺酰脲(SU)剂、β-阻断剂诱导的肥胖症)等。
与肥胖症相关的疾病状态或疾病的实例包括葡萄糖耐量障碍、糖尿病(特别是2型糖尿病、肥胖性糖尿病)、脂质代谢异常(与上述高脂血症同义)、高血压、心力衰竭、高尿酸血症/痛风、脂肪肝(包括非酒精性脂肪性肝炎)、冠心病(心肌梗塞、心绞痛)、脑梗塞(脑血栓形成、短暂性脑缺血发作)、骨/关节病(膝骨关节炎、髋骨关节炎、变形性脊椎炎、腰痛)、睡眠呼吸暂停综合征/匹克威克综合征、月经紊乱(月经周期异常、月经量和周期异常、闭经、月经异常症状)、代谢综合征等。
日本糖尿病学会于1999年报道了关于糖尿病诊断标准的新诊断标准。
根据此报道，糖尿病是指满足以下中任一项的状态：空腹血糖水平(静脉血浆中的葡萄糖浓度)为126mg/dl或更高、在75g口服葡萄糖耐量测试(75g OGTT)中2小时值(静脉血浆中的葡萄糖浓度)为200mg/dl或更高以及偶然血糖水平(静脉血浆中的葡萄糖浓度)为200mg/dl或更高。此外，不适用于上述糖尿病并且不是表现出“空腹血糖水平(静脉血浆中的葡萄糖浓度)低于110mg/dl或在75g口服葡萄糖耐量测试(75g OGTT)中2小时值(静脉血浆中的葡萄糖浓度)低于140mg/dl”(正常型)的状态被称为“临界型”。
此外，美国糖尿病协会(ADA)于1997年和世界卫生组织(WHO)于1998年报道了关于糖尿病诊断标准的新诊断标准。
根据这些报道，糖尿病是指满足以下的状态：空腹血糖水平(静脉血浆中的葡萄糖浓度)为126mg/dl或更高并且在75g口服葡萄糖耐量测试中2小时值(静脉血浆中的葡萄糖浓度)为200mg/dl或更高。
根据上述报道，葡萄糖耐量受损是指满足以下的状态：空腹血糖水平(静脉血浆中的葡萄糖浓度)低于126mg/dl并且在75g口服葡萄糖耐量测试中2小时值(静脉血浆中的葡萄糖浓度)为140mg/dl或更高且低于200mg/dl。根据ADA的报道，表现出110mg/dl或更高且低于126mg/dl的空腹血糖水平(静脉血浆中的葡萄糖浓度)的状态被称为IFG(空腹血糖受损(Impaired Fasting Glucose))。在另一方面，根据WHO的报道，在75g口服葡萄糖耐量测试中表现出低于140mg/dl的2小时值(静脉血浆中的葡萄糖浓度)的IFG(空腹血糖受损)的状态被称为IFG(空腹血糖异常(Impaired Fasting Glycemia))。
本发明的化合物还可用作预防或治疗根据上述新诊断标准、临界型糖尿病、葡萄糖耐量受损、IFG(空腹血糖受损)和IFG(空腹血糖异常)确定的糖尿病的剂。此外，本发明的化合物可预防边界型、萄糖耐量受损、IFG(空腹血糖受损)或IFG(空腹血糖异常)进展为糖尿病。
基于体重降低作用，本发明的化合物可用作哺乳动物的体重降低剂。经受施加本发明化合物的哺乳动物可以是希望减轻体重的哺乳动物。哺乳动物可以是具有超重遗传风险的哺乳动物，或者可以是受生活方式相关疾病如糖尿病、高血压和/或高脂血症影响的哺乳动物。超重可归因于过多饮食摄入或不均衡饮食，或者可能是源自伴随药物(例如，具有PPARγ激动剂样作用的胰岛素增敏剂，如曲格列酮、罗格列酮、恩格列酮、环格列酮、吡格列酮等)的超重。或者，超重可以是在达到肥胖症之前超重，或者可以是肥胖症患者中的超重。在此，肥胖症被定义为对于日本人身体质量指数(BMI：体重(kg)÷[身高(m)]2)为25或更高(根据日本肥胖研究学会的标准)并且对于西方人BMI为30或更多(根据WHO的标准)。
本发明的化合物还可用作预防或治疗代谢综合征的剂。与患有单一生活方式相关疾病的患者相比，心血管疾病的发病率在代谢综合征患者中显著较高。因此，预防或治疗代谢综合征对于预防心血管疾病非常重要。
代谢综合征的诊断标准由WHO于1999年和NCEP于2001年公布。根据WHO的诊断标准，患有高胰岛素血症或异常葡萄糖耐量(作为要求)以及内脏型肥胖症、血脂异常(高TG或低HDL)和高血压中的两种或更多种的个体被诊断为患有代谢综合征(世界卫生组织：糖尿病及其并发症的定义、诊断和分类。第I部分：糖尿病的诊断和分类，世界卫生组织，日内瓦，1999)。根据美国国家胆固醇教育计划(缺血性心脏病指南)的成人治疗小组III的诊断标准，患有内脏型肥胖症、高甘油三酯血症、低HDL-胆固醇血症、高血压和葡萄糖耐量异常中的三种或更多种的个体被诊断为患有代谢综合征(国家胆固醇教育计划：关于成人高血胆固醇的检测、评估和治疗(成人治疗小组III)的国家胆固醇教育计划(NCEP)专家小组的第三次报告的执行摘要。The Journal of the American Medical Association,第285卷,2486-2497,2001)。
本发明的化合物还可用作预防或治疗例如以下疾病的剂：骨质疏松症、恶病质(例如，癌性恶病质、结核性恶病质、糖尿病恶病质、与血液疾病相关的恶病质、与内分泌疾病相关的恶病质、与由获得性免疫缺陷综合征引起的感染性疾病或恶病质相关的恶病质)、脂肪肝、多囊卵巢综合征、肾病(例如，慢性肾衰竭、糖尿病性肾病、肾小球肾炎、肾小球硬化症、肾病综合征、高血压性肾硬化、终末期肾病)、肌营养不良症、心肌梗塞、心绞痛、脑血管病症(例如，脑梗塞、中风)、阿尔茨海默病、帕金森病、焦虑症、痴呆症、胰岛素抗性综合征、X综合征、高胰岛素血症、由高胰岛素血症引起的感觉异常、急性或慢性腹泻、炎性疾病(例如，慢性类风湿性关节炎、变形性脊椎炎等、变形性关节炎、腰痛、痛风、术后或创伤后炎症、胃气胀、神经痛、喉咽炎、膀胱炎、肝炎(包括非酒精性脂肪性肝炎)、肺炎、胰腺炎、肠炎、炎性肠病(包括炎性大肠病)、溃疡性结肠炎、胃粘膜损伤(包括由阿司匹林引起的胃粘膜损伤))、小肠粘膜损伤、吸收不良、睾丸功能障碍、内脏型肥胖综合征和肌肉减少症。
此外，本发明的化合物还可用作预防或治疗各种癌症(特别是乳腺癌(例如，浸润性导管乳腺癌、非浸润性导管乳腺癌、炎性乳腺癌等)、前列腺癌(例如，激素依赖性前列腺癌、激素非依赖性前列腺癌等)、胰腺癌(例如，导管胰腺癌等)、胃癌(例如，乳头状腺癌、粘液腺癌、腺鳞癌等)、肺癌(例如，非小细胞肺癌、小细胞肺癌、恶性间皮瘤等)、结肠癌(例如，胃肠道间质瘤等)、直肠癌(例如，胃肠道间质瘤等)、结肠直肠癌(例如，家族性结肠直肠癌、遗传性非息肉性结肠直肠癌、胃肠道间质瘤等)、小肠癌(例如，非霍奇金氏淋巴瘤、胃肠道间质瘤等)、食道癌、十二指肠癌、舌癌、咽癌(例如，鼻咽癌、口咽癌、下咽癌等)、唾液腺癌、脑肿瘤(例如，松果体星形细胞瘤、毛细胞型星形细胞瘤、弥漫性星形细胞瘤、间变性星形细胞瘤等)、神经鞘瘤、肝癌(例如，原发性肝癌、肝外胆管癌等)、肾癌(例如，肾细胞癌、肾盂和输尿管移行细胞癌等)、胆管癌、子宫内膜癌、子宫宫颈癌、卵巢癌(例如，上皮性卵巢癌、性腺外生殖细胞肿瘤、卵巢生殖细胞肿瘤、低度恶性潜能的卵巢肿瘤等)、膀胱癌、尿道癌、皮肤癌(例如，眼内(眼)黑色素瘤、梅克尔细胞癌等)、血管瘤、恶性淋巴瘤、恶性黑色素瘤、甲状腺癌(例如，甲状腺髓样癌等)、甲状旁腺癌、鼻腔癌、窦癌、骨肿瘤(例如，骨肉瘤、尤文瘤、子宫肿瘤、软组织肉瘤等)、血管纤维瘤、视网膜肉瘤、阴茎癌、睾丸肿瘤、儿科实体瘤(例如，维尔姆斯瘤、儿童肾肿瘤等)、卡波济氏肉瘤、由AIDS引起的卡波济氏肉瘤、上颌窦肿瘤、纤维组织细胞瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、白血病(例如，急性骨髓性白血病、急性成淋巴细胞性白血病等)等)的剂。
本发明的化合物还可用于二级预防或抑制上述各种疾病(例如，心血管事件如心肌梗塞等)的进展。此外，本发明的化合物还可用作摄食抑制剂和体重降低剂。本发明的化合物还可与饮食疗法(例如，用于糖尿病的饮食疗法)和运动疗法组合使用。
含有本发明化合物的药物显示出低毒性并且根据通常用作药物制剂的生产方法的本身已知的方法(例如，日本药典中描述的方法)使用单独或与药理学上可接受的载体混合的本发明化合物获得，并且可作为药物制剂口服或肠胃外(例如，局部、直肠、静脉内施用)安全地施用，所述药物制剂例如片剂(包括糖包衣片剂、薄膜包衣片剂、舌下片剂、口服崩解片剂)、粉末、颗粒剂、胶囊(包括软胶囊、微胶囊)、液体、锭剂、糖浆、乳液、悬浮液、注射液(例如，皮下注射液、静脉内注射液、肌内注射液、腹膜内注射液等)、外用制剂(例如，经鼻制剂、皮肤制剂、软膏)、栓剂(例如，直肠栓剂、阴道栓剂)、丸剂、鼻用制剂、肺部制剂(吸入剂)、输血等。
这些制剂可以是控制释放制剂，如快速释放制剂、持续释放制剂等(例如，持续释放微胶囊)。
药物制剂中本发明化合物的含量是整个制剂的约0.01-约100wt％。
上述药学上可接受的载体可由常规用作制剂材料的各种有机或无机载体材料例示，例如，用于固体制剂的赋形剂、润滑剂、粘合剂和崩解剂；或用于液体制剂的溶剂、增溶剂、悬浮剂、等渗剂、缓冲剂、舒缓剂等。此外，如果需要，也可适当地以合适的量使用一般添加剂，如防腐剂、抗氧化剂、着色剂、甜味剂、吸附剂、润湿剂等。
赋形剂的实例包括乳糖、蔗糖、D-甘露醇、淀粉、玉米淀粉、结晶纤维素、轻质无水硅酸等。
润滑剂的实例包括硬脂酸镁、硬脂酸钙、滑石、胶体二氧化硅等。
粘合剂的实例包括结晶纤维素、蔗糖、D-甘露醇、糊精、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、淀粉、蔗糖、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠等。
崩解剂的实例包括淀粉、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙、羧甲基淀粉钠、L-羟丙基纤维素等。
溶剂的实例包括注射用水、醇、丙二醇、聚乙二醇(Macrogol)、芝麻油、玉米油、橄榄油等。
增溶剂的实例包括聚乙二醇、丙二醇、D-甘露醇、苯甲酸苄酯、乙醇、三氨基甲烷、胆固醇、三乙醇胺、碳酸钠、柠檬酸钠等。
悬浮剂的实例包括表面活性剂，如硬脂基三乙醇胺、月桂基硫酸钠、月桂基氨基丙酸、卵磷脂、苯扎氯铵、苄索氯铵、单硬脂酸甘油酯等；亲水性聚合物如聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素等；等。
等渗剂的实例包括葡萄糖、D-山梨醇、氯化钠、甘油、D-甘露醇等。
缓冲剂的实例包括缓冲溶液，如磷酸盐、乙酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐等。
舒缓剂的实例包括苯甲醇等。
防腐剂的实例包括对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苄醇、苯乙醇、脱氢乙酸、山梨酸等。
抗氧化剂的实例包括亚硫酸盐、抗坏血酸、a-生育酚等。
着色剂的实例包括水溶性食用煤焦油染料(例如，食用染料，如食品红2号和3号、食品黄4号和5号、食品蓝1号和2号等)、水不溶性色淀染料(例如，上述水溶性食用煤焦油染料的铝盐)、天然染料(例如，β-胡萝卜素、叶绿素、氧化铁红)等。
甜味剂的实例包括糖精钠、甘草酸二钾、阿斯巴甜、甜叶菊等。
吸附剂的实例包括多孔淀粉、硅酸钙(商品名：Florite RE)、硅酸铝镁(商品名：Neusilin)和轻质无水硅酸(商品名：Sylysia)。
润湿剂的实例包括丙二醇单硬脂酸酯、脱水山梨醇单油酸酯、二乙二醇单月桂酸酯和聚氧乙烯月桂醚。
在口服制剂的生产过程中，可出于掩蔽味道、肠溶性或持久性的目的根据需要施加包衣。
待用于包衣的包衣基质的实例包括糖包衣基质、水性薄膜包衣基质、肠溶薄膜包衣基质和缓释薄膜包衣基质。
作为糖包衣基质，使用蔗糖。此外，可组合使用选自滑石、沉淀碳酸钙、明胶、阿拉伯树胶、支链淀粉、巴西棕榈蜡等的一种或多种。
水性薄膜包衣基质的实例包括纤维素聚合物，如羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、甲基羟乙基纤维素等；合成聚合物，如聚乙烯醇缩醛二乙基氨基乙酸酯、甲基丙烯酸氨基烷基酯共聚物E[Eudragit E(商品名)]、聚乙烯吡咯烷酮等；以及多糖如支链淀粉等。
肠溶薄膜包衣基质的实例包括纤维素聚合物，如邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、乙酸琥珀酸羟丙基甲基纤维素、羧甲基乙基纤维素、乙酸邻苯二甲酸纤维素等；丙烯酸聚合物如甲基丙烯酸共聚物L[Eudragit L(商品名)]、甲基丙烯酸共聚物LD[Eudragit L-30D55(商品名)]、甲基丙烯酸共聚物S[Eudragit S(商品名)]等；以及天然存在的物质，如虫胶等。
缓释薄膜包衣基质的实例包括纤维素聚合物，如乙基纤维素等；和丙烯酸聚合物如甲基丙烯酸氨基烷基酯共聚物RS[Eudragit RS(商品名)]、丙烯酸乙酯-甲基丙烯酸甲酯共聚物悬浮液[Eudragit NE(商品名)]等。
上述包衣基质可在以适当的比例与其两种或更多种混合后使用。对于包衣，例如，可使用诸如氧化钛、氧化铁红等的遮光剂。
根据施用对象、症状、施用方法等适当地确定本发明化合物的剂量。例如，当将本发明化合物口服施用至肥胖症或糖尿病患者(体重60kg)时，本发明化合物的每日剂量是约0.1至100mg、优选约1.0至50mg、更优选约1.0至20mg。当将本发明化合物肠胃外施用至肥胖症或糖尿病患者(体重60kg)时，本发明化合物的每日剂量是约0.001至30mg、优选约0.01至20mg、更优选约0.1至10mg。这些量可以每天约1至若干部分施用。
本发明化合物可例如每2天、每3天、每4天、每5天、每6天、每周、每周两次、每隔一周、每3周、每月、每2个月、每3个月、每4个月、每5个月或每6个月施用。
本发明的化合物可出于例如促进本发明化合物的作用(对肥胖症、糖尿病等的治疗作用)、减少本发明化合物的剂量等与不会不利地影响本发明化合物的其他药物组合使用。
可与本发明化合物组合使用的药物(下文有时缩写为伴随药物)的实例包括抗肥胖剂、用于的糖尿病治疗剂、用于糖尿病并发症的治疗剂、用于高脂血症的治疗剂、抗高血压药、利尿剂、化学治疗剂、免疫治疗剂、抗炎药、抗血栓形成剂、用于骨质疏松症的治疗剂、维生素、抗痴呆药物、勃起功能障碍药物、用于尿频或尿失禁的治疗性药物、用于排尿困难的治疗剂等。伴随药物的具体实例包括下文提及的那些。
抗肥胖剂的实例包括单胺摄取抑制剂(例如，芬特明、西布曲明、马吲哚、氟西汀、特索芬辛)、血清素2C受体激动剂(例如，氯卡色林)、血清素6受体拮抗剂、组胺H3受体调节剂、GABA调节剂(例如，托吡酯)、神经肽Y拮抗剂(例如，韦利贝特)、大麻素受体拮抗剂(例如，利莫那班、泰伦那班)、生长素释放肽(ghrelin)拮抗剂、生长素释放肽受体拮抗剂、生长素释放肽酰化酶抑制剂、阿片受体拮抗剂(例如，GSK-1521498)、食欲素受体拮抗剂、黑皮质素4受体激动剂、11β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂(例如，AZD-4017)、胰脂肪酶抑制剂(例如，奥利司他、新利司他)、β3激动剂(例如，N-5984)、二酰基甘油酰基转移酶1(DGAT1)抑制剂、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)抑制剂、硬脂酰-辅酶A去饱和酶抑制剂、微粒体甘油三酯转移蛋白抑制剂(例如，R-256918)、Na-葡萄糖协同转运蛋白抑制剂(例如，JNJ-28431754、瑞格列净)、NFκ抑制剂(例如，HE-3286)、PPAR激动剂(例如，GFT-505、DRF-11605)、磷酸酪氨酸磷酸酶抑制剂(例如，钒酸钠、曲度奎明(Trodusquemin))、GPR119激动剂(例如，PSN-821、MBX-2982、APD597)、葡糖激酶活化剂(例如，AZD-1656)、瘦蛋白、瘦蛋白衍生物(例如，美曲普汀)、CNTF(睫状神经营养因子)、BDNF(脑源性神经营养因子)、胆囊收缩素激动剂、淀粉不溶素制剂(例如，普兰林肽、AC-2307)、神经肽Y激动剂(例如，PYY3-36、PYY3-36的衍生物、奥尼匹肽(obineptide)、TM-30339、TM-30335)、胃泌酸调节素制剂：FGF21制剂(例如，从牛或猪的胰腺中提取的动物FGF21制剂；使用大肠杆菌或酵母遗传合成的人FGF21制剂；FGF21的片段或衍生物)、食欲减退剂(例如，P-57)等。
在此，作为糖尿病的治疗剂，可提及例如胰岛素制剂(例如，从牛或猪的胰腺中提取的动物胰岛素制剂；使用大肠杆菌或酵母遗传合成的人胰岛素制剂；锌胰岛素；鱼精蛋白锌胰岛素；胰岛素的片段或衍生物(例如，INS-1)、口服胰岛素制剂)、胰岛素增敏剂(例如，吡格列酮或其盐(优选盐酸盐)、罗格列酮或其盐(优选马来酸盐)、美他达森(Metaglidasen)、AMG-131、巴格列酮、MBX-2044、利格列酮、阿格列扎、西格列竣、洛贝格列酮、PLX-204、PN-2034、GFT-505、THR-0921，在WO2007/013694、WO2007/018314、WO2008/093639或WO2008/099794中描述的化合物)、a-葡糖苷酶抑制剂(例如，伏格列波糖、阿卡波糖、米格列醇、乙格列酯)、双胍类(例如，二甲双胍、丁双胍或其盐(例如，盐酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐))、胰岛素促分泌素(例如，磺酰脲类(例如，甲苯磺丁脲、格列本脲、格列齐特、氯磺丙脲、妥拉磺脲、醋磺己脲、格列吡脲、格列美脲、格列吡嗪、格列丁唑)、瑞格列奈、纳格列奈、米格列奈或其钙盐水合物)、二肽基肽酶IV抑制剂(例如，阿格列汀或其盐(优选苯甲酸盐)、维达列汀、西他列汀、沙格列汀、BI1356、GRC8200、MP-513、PF-00734200、PHX1149、SK-0403、ALS2-0426、TA-6666、TS-021、KRP-104、曲格列汀或其盐(优选琥珀酸酯))、β3激动剂(例如，N-5984)、GPR40激动剂(例如，Fasiglifam或其水合物，在WO2004/041266、WO2004/106276、WO2005/063729、WO2005/063725、WO2005/087710、WO2005/095338、WO2007/013689或WO2008/001931中描述的化合物)、SGLT2(钠-葡萄糖协同转运蛋白2)抑制剂(例如，达格列净、AVE2268、TS-033、YM543、TA-7284、瑞格列净、ASP1941)、SGLT1抑制剂、11β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂(例如，BVT-3498、INCB-13739)、脂联素或其激动剂、IKK抑制剂(例如，AS-2868)、瘦蛋白抵抗改善药物、生长抑素受体激动剂、葡糖激酶活化剂(例如，吡格列丁、AZD1656、AZD6370、TTP-355，在WO2006/112549、WO2007/028135、WO2008/047821、WO2008/050821、WO2008/136428或WO2008/156757中描述的化合物)、GPR119激动剂(例如，PSN821、MBX-2982、APD597)、FGF21、FGF类似物、ACC2抑制剂等。
作为糖尿病并发症的治疗剂，可提及醛糖还原酶抑制剂(例如，托瑞司他、依帕司他、唑泊司他、非达司他、CT-112、雷尼司他(AS-3201)、利多司他)、神经营养因子及其增加剂(例如，NGF、NT-3、BDNF、在WO01/14372中描述的神经营养生成/分泌促进剂(例如，4-(4-氯苯基)-2-(2-甲基-1-咪唑基)-5-[3-(2-甲基苯氧基)丙基]噁唑)、在WO2004/039365中描述的化合物)、PKC抑制剂(例如，甲磺酸鲁伯斯塔)、AGE抑制剂(例如，ALT946、N-苯甲酰甲基溴化噻唑鎓(ALT766)、EXO-226、Pyridorin、吡哆胺)、GABA受体激动剂(例如，加巴喷丁、普瑞巴林)、血清素和去甲肾上腺素再摄取抑制剂(例如，度洛西汀)、钠通道抑制剂(例如，拉科酰胺)、活性氧清除剂(例如，硫辛酸)、脑血管扩张剂(例如，tiapuride、美西律)、生长抑素受体激动剂(例如，BIM23190)、细胞凋亡信号调控激酶-1(ASK-1)抑制剂等。
作为高脂血症的治疗剂，可提及HMG-COA还原酶抑制剂(例如，普伐他汀、辛伐他汀、洛伐他汀、阿托伐他汀、氟伐他汀、罗苏伐他汀、匹伐他汀或其盐(例如，钠盐、钙盐))、角鲨烯合成酶抑制剂(例如，在WO97/10224中描述的化合物，例如，N-[[(3R,5S)-1-(3-乙酰氧基-2,2-二甲基丙基)-7-氯-5-(2,3-二甲氧基苯基)-2-氧代-1,2,3,5-四氢-4,1-苯并氧氮杂卓-3-基]乙酰基]哌啶-4-乙酸)、贝特类化合物(例如，苯扎贝特、氯贝丁酯、双贝特、克利贝特)、阴离子交换树脂(例如，考来烯胺)、普罗布考、烟酸药物(例如，尼可莫尔、戍四烟酯(niceritrol)、niaspan)、二十碳五烯酸乙酯、植物甾醇(例如，豆固醇、γ谷维素(γ-谷维素))、胆固醇吸收抑制剂(例如，zechia)、CETP抑制剂(例如，达塞曲匹、安塞曲匹)、ω-3脂肪酸制剂(例如，ω-3-脂肪酸乙酯90(ω-3-酸乙酯90))等。
抗高血压剂的实例包括血管紧张素转化酶抑制剂(例如，卡托普利、依那普利、地拉普利等)、血管紧张素II拮抗剂(例如，坎地沙坦酯、坎地沙坦、氯沙坦、氯沙坦钾、依普沙坦、缬沙坦、替米沙坦、厄贝沙坦、他索沙坦、奥美沙坦、奥美沙坦酯、阿齐沙坦、阿齐沙坦酯等)、钙拮抗剂(例如，马尼地平、硝苯地平、氨氯地平、依福尼平、尼卡地平、西尼地平等)、β阻断剂(例如，美托洛尔、阿替洛尔、普萘洛尔、卡维地洛、吲哚洛尔等)、可乐定等。
作为利尿剂，可提及例如黄嘌呤衍生物(例如，可可碱水杨酸钠、可可碱水杨酸钙等)、噻嗪类制剂(例如，乙噻嗪、环戊噻嗪、三氯甲噻嗪、氢氯噻嗪、氢氟噻嗪、苄基氢氯噻嗪、戊氟噻嗪、聚5噻嗪、甲氯噻嗪等)、抗醛固酮制剂(例如，螺内酯、氨苯蝶啶等)、碳酸酐酶抑制剂(例如，乙酰唑胺等)、氯苯磺酰胺剂(例如，氯噻酮、美夫西特、吲达帕胺等)、阿佐塞米、异山梨醇、依他尼酸、吡咯他尼、布美他尼、呋塞米等。
化学治疗剂的实例包括烷化剂(例如，环磷酰胺、异环磷酰胺)、抗代谢药(例如，甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶)、抗癌抗生素(例如，丝裂霉素、阿霉素)、植物源性的抗癌剂(例如，长春新碱、长春地辛、紫杉醇)、顺铂、卡铂、依托泊苷等。其中，5-氟尿嘧啶衍生物氟铁龙(Furtulon)或新氟铁龙(Neofurtulon)等是优选的。
免疫治疗剂的实例包括微生物或细菌组分(例如，胞壁酰二肽衍生物、毕西巴尼(Picibanil))、具有免疫增强活性的多糖(例如，香菇多糖、西佐喃、云芝多糖(Krestin))、通过遗传工程改造方法获得的细胞因子(例如，干扰素、白细胞介素(IL))、集落刺激因子(例如，粒细胞集落刺激因子、促红细胞生成素)等。其中，白细胞介素如IL-1、IL-2、IL-12等是优选的。
抗炎药物的实例包括非类固醇抗炎药如阿司匹林、对乙酰氨基酚、吲哚美辛等。
作为抗血栓形成剂，可提及例如肝素(例如，肝素钠、肝素钙、依诺肝素钠、达肝素钠)、华法林(例如，华法林钾)、抗凝血酶药物(例如，阿加曲班(aragatroban)、达比加群)、FXa抑制剂(例如，利伐沙班、阿哌沙班、依多沙班、YM150，在WO02/06234、WO2004/048363、WO2005/030740、WO2005/058823或WO2005/113504中描述的化合物)、血栓溶解剂(例如，尿激酶、硫激酶、阿替普酶、那替普酶、孟替普酶、帕米普酶)、血小板聚集抑制剂(例如，盐酸噻氯匹定、氯吡格雷、普拉格雷、E5555、SHC530348、西洛他唑、二十碳五烯酸乙酯、贝前列素钠、盐酸沙格雷酯)等。
用于骨质疏松症的治疗剂的实例包括阿法骨化醇、骨化三醇、依降钙素、鲑鱼降钙素、雌三醇、依普黄酮、帕米膦酸二钠、阿仑膦酸钠水合物、因卡膦酸二钠、利塞膦酸二钠等。
维生素的实例包括维生素B1、维生素B12等。
抗痴呆药物的实例包括他克林、多奈哌齐、卡巴拉汀、加兰他敏等。
勃起功能障碍药物的实例包括阿扑吗啡、柠檬酸西地那非等。
用于尿频或尿失禁的治疗性药物的实例包括盐酸黄酮哌酯、盐酸奥昔布宁、盐酸丙哌维林等。
用于排尿困难的治疗剂的实例包括乙酰胆碱酯酶抑制剂(例如，地斯的明)等。
此外，确认在动物模型或临床上具有恶病质改善作用的药物，即环氧合酶抑制剂(例如，吲哚美辛)、孕酮衍生物(例如，醋酸甲地孕酮)、糖皮质激素(例如，地塞米松)、甲氧氯普胺药物、四氢大麻酚药物、用于改善脂肪代谢的剂(例如，二十碳五烯酸)、生长激素、IGF-1或针对恶病质诱导因子TNF-α、LIF、IL-6或制瘤素M等的抗体也可与本发明的化合物组合使用。
或者，糖化抑制剂(例如，ALT-711)、促进神经再生药物(例如，Y-128、VX853、prosaptide)、抗抑郁药(例如，地昔帕明、阿米替林、丙咪嗪)、抗癫痫药物(例如，拉莫三嗪、曲莱(Trileptal)、开浦兰(Keppra)、佐能安(Zonegran)、普加巴林、Harkoseride、卡马西平)、抗心律失常药物(例如，美西律)、乙酰胆碱受体配体(例如，ABT-594)、内皮素受体拮抗剂(例如，ABT-627)、单胺摄取抑制剂(例如，曲马多)、麻醉镇痛药(例如，吗啡)、GABA受体激动剂(例如，加巴喷丁、加巴喷丁的MR制剂)、α2受体激动剂(例如，可乐定)、局部镇痛药(例如，辣椒素)、抗焦虑药物(例如，苯并硫氮杂卓)、磷酸二酯酶抑制剂(例如，西地那非)、多巴胺受体激动剂(例如，阿扑吗啡)、咪达唑仑、酮康唑等可与本发明化合物组合使用。
施用本发明化合物和伴随药物的时间不受限制，并且它们可同时或以交错方式施用至施用对象。
此类施用模式的实例包括以下：
(1)施用通过同时加工本发明化合物和伴随药物获得的单一制剂，(2)通过同一施用途径同时施用已经单独生产的本发明化合物和伴随药物的两种制剂，(3)以交错方式通过同一施用途径施用已经单独生产的本发明化合物和伴随药物的两种制剂，(4)通过不同的施用途径同时施用已经单独生产的本发明化合物和伴随药物的两种制剂，(5)以交错方式通过不同的施用途径施用已经单独生产的本发明化合物和伴随药物的两种制剂(例如，按照本发明化合物和伴随药物的顺序或按相反顺序施用)等。
可基于临床情况中使用的剂量适当地确定伴随药物的剂量。本发明化合物与伴随药物的混合比例可根据施用对象、症状、施用方法、目标疾病、组合等适当地确定。当施用对象是人时，例如，相对于1重量份的本发明化合物，可使用0.01-100重量份的伴随药物。
通过组合本发明化合物和伴随药物：
(1)与单一施用本发明化合物或伴随药物相比，可减少本发明化合物或伴随药物的剂量，
(2)可根据患者的病状(轻度、重度等)选择待与本发明化合物组合使用的药物，
(3)可通过选择具有与本发明化合物的作用和机制不同的作用和机制的伴随药物来设定更长的治疗期，
(4)可通过选择具有与本发明化合物的作用和机制不同的作用和机制的伴随药物来设计持续治疗作用，并且
(5)可通过组合使用本发明化合物和伴随药物来提供协同作用。
实施例
本说明书中使用的缩写表示以下(表1-1、表1-2和表1-3)。可省略如本文所述的诸如α-MePhe等的术语中的连字符，并且省略的情况也表示相同的含义。
本说明书中使用的氨基酸序列表示N末端在左侧且C末端在右侧。
[表1-1]
[表1-2]
[表1-3]
在本说明书中，其中碱基、氨基酸等由它们的代码表示，它们是基于根据IUPAC-IUB生物化学命名委员会的常规代码或本领域的通用代码，其实例如下所示。对于可能具有光学异构体的氨基酸，除非另有指明，否则呈现L-形式(例如，“Ala”是Ala的L-形式)。此外，“D-”是指D-形式(例如，“D-Ala”是Ala的D-形式)，并且“DL-”是指D-形式和L-形式的外消旋物(例如，“DL-Ala”是Ala的DL外消旋物)。
TFA：：三氟乙酸
Gly或G：：甘氨酸
Ala或A：：丙氨酸
Val或V：：缬氨酸
Leu或L：：亮氨酸
Ile或I：：异亮氨酸
Ser或S：：丝氨酸
Thr或T：：苏氨酸
Cys或C：：半胱氨酸
Met或M：：甲硫氨酸
Glu或E：：谷氨酸
Asp或D：：天冬氨酸
Lys或K：：赖氨酸
Arg或R：：精氨酸
His或H：：组氨酸
Phe或F：：苯丙氨酸
Tyr或Y：：酪氨酸
Trp或W：：色氨酸
Pro或P：：脯氨酸
Asn或N：：天冬酰胺
Gln或Q：：谷氨酰胺
pGlu：：焦谷氨酸
α-MeTyr：：α-甲基酪氨酸
下文通过参考以下参考实施例、实施例、实验实施例和制剂实施例详细解释了本发明，所述实施例仅是实施方案并且不应解释为限制性的。此外，在不脱离本发明范围的情况下，可修改本发明。
以下实施例中的术语“室温”表示通常约10℃至约35℃的范围。至于“％”，产率是按mol/mol％计，用于色谱法的溶剂是按体积％计，并且其他“％”是按重量％计。
THF：四氢呋喃
DMF：N,N-二甲基甲酰胺
WSC：1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐
HOBt：1-羟基苯并三唑一水合物
参考实施例1
H-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe(2-F)-Sieber酰胺树脂的合成
(SEQ ID NO:2)
将Sieber酰胺树脂(0.71meq/g，352mg)添加至反应管，然后将其负载到肽合成仪中。根据Fmoc/DCC/HOBt方案使氨基酸连续缩合。进行双偶联以引入29位Lys(Boc)。在最终步骤中，除去N-末端Fmoc基团。在缩合终止后，用MeOH洗涤树脂，并在减压下干燥。结果，获得1384mg(0.181meq/g)的目标受保护的肽树脂。
参考实施例2
H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Ala-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe(2-F)-Sieber酰胺树脂的合成
(SEQ ID NO:3)
将在参考实施例1中制备的H-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe(2-F)-Sieber酰胺树脂(0.181meq/g，276mg)添加至反应管，然后将其负载到肽合成仪中。根据Fmoc/DIPCDI/OxymaPure方案使氨基酸连续缩合。进行双偶联以引入19位Gln(Trt)、18位Ala、12位Ile和5位Thr(tBu)。在最终步骤中，除去N-末端Fmoc基团。在缩合终止后，用MeOH洗涤树脂，并在减压下干燥。结果，获得389mg(0.129meq/g)的目标受保护的肽树脂。
参考实施例3
H-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe(2-F)-Rink酰胺AM树脂的合成
(SEQ ID NO:4)
将Rink酰胺AM树脂(0.29meq/g，862mg)添加至反应管，然后将其负载到肽合成仪中。根据Fmoc/DCC/HOBt方案使氨基酸连续缩合。进行双偶联以引入29位Lys(Mtt)。在最终步骤中，除去N-末端Fmoc基团。在缩合终止后，用MeOH洗涤树脂，并在减压下干燥。结果，获得1788mg(0.140meq/g)的目标受保护的肽树脂。
参考实施例4
H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe(2-F)-Rink酰胺AM树脂的合成
(SEQ ID NO:5)
将在参考实施例3中制备的H-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe(2-F)-Rink酰胺AM树脂(0.140meq/g，357mg)添加至反应管，然后将其负载到肽合成仪中。根据Fmoc/DIPCDI/OxymaPure方案使氨基酸连续缩合。进行双偶联以引入19位Gln(Trt)、18位Arg(Pbf)、12位Ile和5位Thr(tBu)。在最终步骤中，除去N-末端Fmoc基团。在缩合终止后，用MeOH洗涤树脂，并在减压下干燥。结果，获得452mg(0.111meq/g)的目标受保护的肽树脂。
参考实施例5
H-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂的合成
(SEQ ID NO:6)
将Rink酰胺AM树脂(0.29meq/g，690mg)添加至反应管，然后将其负载到肽合成仪中。根据Fmoc/DCC/HOBt方案使氨基酸连续缩合。进行双偶联以引入29位Lys(Mtt)。在最终步骤中，除去N-末端Fmoc基团。在缩合终止后，用MeOH洗涤树脂，并在减压下干燥。结果，获得1449mg(0.138meq/g)的目标受保护的肽树脂。
参考实施例6
H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂的合成
(SEQ ID NO:7)
将在参考实施例5中制备的H-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂(0.138meq/g，290mg)添加至反应管，然后将其负载到肽合成仪中。根据Fmoc/DIPCDI/OxymaPure方案使氨基酸连续缩合。进行双偶联以引入19位Gln(Trt)、18位Arg(Pbf)、12位Ile和5位Thr(tBu)。在最终步骤中，除去N-末端Fmoc基团。在缩合终止后，用MeOH洗涤树脂，并在减压下干燥。结果，获得417mg(0.096meq/g)的目标受保护的肽树脂。
参考实施例7
H-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber酰胺树脂的合成
(SEQ ID NO:8)
将Sieber酰胺树脂(0.71meq/g，352mg)添加至反应管，然后将其负载到肽合成仪中。根据Fmoc/DCC/HOBt方案使氨基酸连续缩合。进行双偶联以引入29位Lys(Boc)。在最终步骤中，除去N-末端Fmoc基团。在缩合终止后，用MeOH洗涤树脂，并在减压下干燥。结果，获得1373mg(0.182meq/g)的目标受保护的肽树脂。
参考实施例8
H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Ala-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber酰胺树脂的合成
(SEQ ID NO:9)
将在参考实施例7中制备的H-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber酰胺树脂(0.182meq/g，275mg)添加至反应管，然后将其负载到肽合成仪中。根据Fmoc/DIPCDI/OxymaPure方案使氨基酸连续缩合。进行双偶联以引入19位Gln(Trt)、18位Ala、12位Ile和5位Thr(tBu)。在最终步骤中，除去N-末端Fmoc基团。在缩合终止后，用MeOH洗涤树脂，并在减压下干燥。结果，获得409mg(0.122meq/g)的目标受保护的肽树脂。
实施例1
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Ala-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Phe(2-F)-NH2
(SEQ ID NO:10)
将在参考实施例2中制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Ala-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe(2-F)-Sieber酰胺树脂(0.129meq/g，97mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Pal-OSu(35.4mg)和DIPEA(17.4μL)的NMP溶液(200μL)添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，将树脂用MeOH洗涤并在减压下干燥以得到101.3mg的Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Ala-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe(2-F)-Sieber酰胺树脂。
向101.3mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：56/44-46/54线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到23.1mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4606.1(计算值：4605.5)
HPLC洗脱时间：17.4分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例2
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Ala-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Phe(2-F)-NH2
(SEQ ID NO:11)
将在参考实施例2中制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Ala-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe(2-F)-Sieber酰胺树脂(0.129meq/g，97mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。重复这种Fmoc氨基酸缩合-Fmoc脱保护循环以使Gly-Gly-Gly和Oda(OtBu)连续缩合。将树脂用MeOH洗涤并在减压下干燥以得到94.6mg的Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(tBu))-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Ala-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe(2-F)-Sieber酰胺树脂。
向94.6mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：60/40-50/50线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到21.4mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4664.4(计算值：4663.6)
HPLC洗脱时间：15.4分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例3
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Phe(2-F)-NH2
(SEQ ID NO:12)
将在参考实施例4中制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe(2-F)-Rink酰胺AM树脂(0.111meq/g，89.3mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Pal-OSu(35.4mg)和DIPEA(17.4μL)的NMP溶液(200μL)添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，将树脂用MeOH洗涤并在减压下干燥以得到110.2mg的Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe(2-F)-Rink酰胺AM树脂。
向110.2mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：58/42-48/52线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到9.3mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4691.1(计算值：4690.6)
HPLC洗脱时间：16.9分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例4
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Phe(2-F)-NH2
(SEQ ID NO:13)
将在参考实施例4中制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe(2-F)-Rink酰胺AM树脂(0.111meq/g，89.3mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。重复这种Fmoc氨基酸缩合-Fmoc脱保护循环以使Gly-Gly-Gly和Oda(OtBu)连续缩合。将树脂用MeOH洗涤，且然后在减压下干燥以得到109.6mg的Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe(2-F)-Rink酰胺AM树脂。
向109.6mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：61/39-51/49线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到9.5mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4749.1(计算值：4748.6)
HPLC洗脱时间：14.9分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例5
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Phe(2-F)-NH2
(SEQ ID NO:14)
将在参考实施例4中制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe(2-F)-Rink酰胺AM树脂(0.111meq/g，89.3mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Pal-OSu(35.4mg)和DIPEA(17.4μL)的NMP溶液(200μL)添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，将树脂用MeOH洗涤并在减压下干燥以得到135.1mg的Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe(2-F)-Rink酰胺AM树脂。
向135.1mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：57/43-47/53线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到10.8mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4705.1(计算值：4704.6)
HPLC洗脱时间：16.9分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例6
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Phe(2-F)-NH2
(SEQ ID NO:15)
将在参考实施例4中制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe(2-F)-Rink酰胺AM树脂(0.111meq/g，89.3mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。重复这种Fmoc氨基酸缩合-Fmoc脱保护循环以使Gly-Gly-Gly和Oda(OtBu)连续缩合。将树脂用MeOH洗涤，且然后在减压下干燥以得到121.2mg的Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe(2-F)-Rink酰胺AM树脂。
向121.2mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：61/39-51/49线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到9.1mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4763.3(计算值：4762.6)
HPLC洗脱时间：14.9分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例7
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
(SEQ ID NO:16)
将在参考实施例6中制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂(0.096meq/g，104mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Pal-OSu(35.4mg)和DIPEA(17.4μL)的NMP溶液(200μL)添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，将树脂用MeOH洗涤并在减压下干燥以得到109.1mg的Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂。
向109.1mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：57/43-47/53线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到7.9mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4689.4(计算值：4688.6)
HPLC洗脱时间：16.6分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例8
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
(SEQ ID NO:17)
将在参考实施例6中制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂(0.096meq/g，104mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。重复这种Fmoc氨基酸缩合-Fmoc脱保护循环以使Gly-Gly-Gly和Oda(OtBu)连续缩合。将树脂用MeOH洗涤，且然后在减压下干燥以得到104.1mg的Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂。
向104.1mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：61/39-51/49线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到7.7mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4747.5(计算值：4746.6)
HPLC洗脱时间：14.6分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例9
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
(SEQ ID NO:18)
将在参考实施例6中制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂(0.096meq/g，104mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Pal-OSu(35.4mg)和DIPEA(17.4μL)的NMP溶液(200μL)添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，将树脂用MeOH洗涤并在减压下干燥以得到99.6mg的Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂。
向99.6mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：57/43-47/53线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到8.3mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4703.5(计算值：4702.6)
HPLC洗脱时间：16.6分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例10
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
(SEQ ID NO:19)
将在参考实施例6中制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂(0.096meq/g，104mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。重复这种Fmoc氨基酸缩合-Fmoc脱保护循环以使Gly-Gly-Gly和Oda(OtBu)连续缩合。将树脂用MeOH洗涤，且然后在减压下干燥以得到110.6mg的Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂。
向110.6mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：61/39-51/49线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到7.9mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4761.5(计算值：4760.6)
HPLC洗脱时间：14.6分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例11
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ala-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
(SEQ ID NO:20)
将通过类似于参考实施例6的方法制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ala-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂(0.089meq/g，112mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Pal-OSu(35.4mg)和DIPEA(17.4μL)的NMP溶液(200μL)添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，将树脂用MeOH洗涤并在减压下干燥以得到103.9mg的Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ala-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂。
向103.9mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：56/44-46/54线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到8.8mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4675.5(计算值：4674.6)
HPLC洗脱时间：16.6分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例12
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)-Ala-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
(SEQ ID NO:21)
将通过类似于参考实施例6的方法制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ala-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂(0.089meq/g，112mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。重复这种Fmoc氨基酸缩合-Fmoc脱保护循环以使Gly-Gly-Gly和Oda(OtBu)连续缩合。将树脂用MeOH洗涤，且然后在减压下干燥以得到103.2mg的Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Ala-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂。
向103.2mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：60/40-50/50线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到8.5mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4732.1(计算值：4732.6)
HPLC洗脱时间：14.5分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例13
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ala-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
(SEQ ID NO:22)
将通过类似于参考实施例6的方法制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ala-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂(0.089meq/g，112mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Pal-OSu(35.4mg)和DIPEA(17.4μL)的NMP溶液(200μL)添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，将树脂用MeOH洗涤并在减压下干燥以得到99.9mg的Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ala-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂。
向99.9mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：56/44-46/54线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到8.8mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4688.4(计算值：4688.6)
HPLC洗脱时间：16.6分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例14
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)-Ala-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
(SEQ ID NO:23)
将通过类似于参考实施例6的方法制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ala-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂(0.089meq/g，112mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。重复这种Fmoc氨基酸缩合-Fmoc脱保护循环以使Gly-Gly-Gly和Oda(OtBu)连续缩合。将树脂用MeOH洗涤，且然后在减压下干燥以得到111.4mg的Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Ala-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂。
向111.4mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：60/40-50/50线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到7.0mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4746.2(计算值：4746.6)
HPLC洗脱时间：14.5分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例15
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ser-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
(SEQ ID NO:24)
将通过类似于参考实施例6的方法制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ser(tBu)-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂(0.088meq/g，113mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Pal-OSu(35.4mg)和DIPEA(17.4μL)的NMP溶液(200μL)添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，将树脂用MeOH洗涤并在减压下干燥以得到100.5mg的Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ser(tBu)-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂。
向100.5mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：56/44-46/54线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到7.8mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4690.3(计算值：4690.6)
HPLC洗脱时间：16.6分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例16
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)-Ser-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
(SEQ ID NO:25)
将通过类似于参考实施例6的方法制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ser(tBu)-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂(0.088meq/g，113mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。重复这种Fmoc氨基酸缩合-Fmoc脱保护循环以使Gly-Gly-Gly和Oda(OtBu)连续缩合。将树脂用MeOH洗涤，且然后在减压下干燥以得到96.8mg的Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Ser(tBu)-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂。
向96.8mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：60/40-50/50线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到7.5mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4748.5(计算值：4748.6)
HPLC洗脱时间：14.5分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例17
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ser-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
(SEQ ID NO:26)
将通过类似于参考实施例6的方法制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ser(tBu)-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂(0.088meq/g，113mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Pal-OSu(35.4mg)和DIPEA(17.4μL)的NMP溶液(200μL)添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，将树脂用MeOH洗涤并在减压下干燥以得到96.4mg的Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ser(tBu)-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂。
向96.4mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：56/44-46/54线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到7.9mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4704.3(计算值：4704.6)
HPLC洗脱时间：16.6分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例18
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)-Ser-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
(SEQ ID NO:27)
将通过类似于参考实施例6的方法制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ser(tBu)-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂(0.088meq/g，113mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。重复这种Fmoc氨基酸缩合-Fmoc脱保护循环以使Gly-Gly-Gly和Oda(OtBu)连续缩合。将树脂用MeOH洗涤，且然后在减压下干燥以得到115.1mg的Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Ser(tBu)-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂。
向115.1mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：60/40-50/50线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到7.0mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4762.7(计算值：4762.6)
HPLC洗脱时间：14.5分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例19
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Lys-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
(SEQ ID NO:28)
将通过类似于参考实施例6的方法制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Lys(Boc)-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂(0.093meq/g，108mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Pal-OSu(35.4mg)和DIPEA(17.4μL)的NMP溶液(200μL)添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，将树脂用MeOH洗涤并在减压下干燥以得到105.4mg的Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Lys(Boc)-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂。
向105.4mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：57/43-47/53线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到10.0mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4703.5(计算值：4703.6)
HPLC洗脱时间：16.0分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例20
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)-Aib-Lys-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
(SEQ ID NO:29)
将通过类似于参考实施例6的方法制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Lys(Boc)-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂(0.093meq/g，108mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。重复这种Fmoc氨基酸缩合-Fmoc脱保护循环以使Gly-Gly-Gly和Oda(OtBu)连续缩合。将树脂用MeOH洗涤，且然后在减压下干燥以得到101.6mg的Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Aib-Lys(Boc)-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂。
向101.6mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：61/39-51/49线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到8.9mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4761.3(计算值：4761.6)
HPLC洗脱时间：13.9分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例21
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Lys-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
(SEQ ID NO:30)
将通过类似于参考实施例6的方法制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Lys(Boc)-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂(0.093meq/g，108mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Pal-OSu(35.4mg)和DIPEA(17.4μL)的NMP溶液(200μL)添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，将树脂用MeOH洗涤并在减压下干燥以得到106mg的Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Lys(Boc)-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂。
向106mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：57/43-47/53线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到9.9mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4717.2(计算值：4717.6)
HPLC洗脱时间：16.0分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例22
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)-Aib-Lys-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
(SEQ ID NO:31)
将通过类似于参考实施例6的方法制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Lys(Boc)-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂(0.093meq/g，108mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。重复这种Fmoc氨基酸缩合-Fmoc脱保护循环以使Gly-Gly-Gly和Oda(OtBu)连续缩合。将树脂用MeOH洗涤，且然后在减压下干燥以得到98.4mg的Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Aib-Lys(Boc)-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂。
向98.4mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：61/39-51/49线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到8.8mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4775.5(计算值：4775.6)
HPLC洗脱时间：13.9分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例23
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ser-Lys-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
(SEQ ID NO:32)
将通过类似于参考实施例6的方法制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂(0.084meq/g，119mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Pal-OSu(35.4mg)和DIPEA(17.4μL)的NMP溶液(200μL)添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，将树脂用MeOH洗涤并在减压下干燥以得到111.3mg的Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂。
向111.3mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：57/43-47/53线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到9.3mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4705.3(计算值：4705.6)
HPLC洗脱时间：16.0分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例24
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)-Ser-Lys-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
(SEQ ID NO:33)
将通过类似于参考实施例6的方法制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂(0.084meq/g，119mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。重复这种Fmoc氨基酸缩合-Fmoc脱保护循环以使Gly-Gly-Gly和Oda(OtBu)连续缩合。将树脂用MeOH洗涤，且然后在减压下干燥以得到101.8mg的Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂。
向101.8mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：61/39-51/49线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到8.5mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4763.4(计算值：4763.6)
HPLC洗脱时间：13.9分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例25
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ser-Lys-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
(SEQ ID NO:34)
将通过类似于参考实施例6的方法制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂(0.084meq/g，119mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Pal-OSu(35.4mg)和DIPEA(17.4μL)的NMP溶液(200μL)添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，将树脂用MeOH洗涤并在减压下干燥以得到104.3mg的Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂。
向104.3mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：57/43-47/53线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到8.2mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4719.7(计算值：4719.6)
HPLC洗脱时间：16.0分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例26
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)-Ser-Lys-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
(SEQ ID NO:35)
将通过类似于参考实施例6的方法制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂(0.084meq/g，119mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。重复这种Fmoc氨基酸缩合-Fmoc脱保护循环以使Gly-Gly-Gly和Oda(OtBu)连续缩合。将树脂用MeOH洗涤，且然后在减压下干燥以得到125.9mg的Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink酰胺AM树脂。
向125.9mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：61/39-51/49线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到10.6mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4777.5(计算值：4777.6)
HPLC洗脱时间：13.9分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例27
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Ala-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
(SEQ ID NO:36)
将在参考实施例8中制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Ala-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber酰胺树脂(0.122meq/g，102.3mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Pal-OSu(35.4mg)和DIPEA(17.4μL)的NMP溶液(200μL)添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，将树脂用MeOH洗涤并在减压下干燥以得到104.5mg的Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Ala-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber酰胺树脂。
向104.5mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：57/43-47/53线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到13.3mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4604.3(计算值：4603.6)
HPLC洗脱时间：17.1分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例28
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Ala-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
(SEQ ID NO:37)
将在参考实施例8中制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Ala-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber酰胺树脂(0.122meq/g，102.3mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。重复这种Fmoc氨基酸缩合-Fmoc脱保护循环以使Gly-Gly-Gly和Oda(OtBu)连续缩合。将树脂用MeOH洗涤，且然后在减压下干燥以得到109.1mg的Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Ala-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber酰胺树脂。
向109.1mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：60/40-50/50线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到12.4mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4662.3(计算值：4661.6)
HPLC洗脱时间：15.1分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例29
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Ala-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
(SEQ ID NO:38)
将在参考实施例8中制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Ala-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber酰胺树脂(0.122meq/g，102.3mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Pal-OSu(35.4mg)和DIPEA(17.4μL)的NMP溶液(200μL)添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，将树脂用MeOH洗涤并在减压下干燥以得到105.8mg的Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Ala-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber酰胺树脂。
向105.8mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：56/44-46/54线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到14.3mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4618.2(计算值：4617.6)
HPLC洗脱时间：17.1分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例30
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Ala-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
(SEQ ID NO:39)
将在参考实施例8中制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Ala-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber酰胺树脂(0.122meq/g，102.3mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。重复这种Fmoc氨基酸缩合-Fmoc脱保护循环以使Gly-Gly-Gly和Oda(OtBu)连续缩合。将树脂用MeOH洗涤，且然后在减压下干燥以得到118mg的Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Ala-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber酰胺树脂。
向118mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：60/40-50/50线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到12.1mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4676.2(计算值：4675.6)
HPLC洗脱时间：15.1分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例31
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Glu-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
(SEQ ID NO:40)
将通过类似于参考实施例8的方法制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber酰胺树脂(0.115meq/g，108.3mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Pal-OSu(35.4mg)和DIPEA(17.4μL)的NMP溶液(200μL)添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，将树脂用MeOH洗涤并在减压下干燥以得到131.4mg的Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber酰胺树脂。
向131.4mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：57/43-47/53线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到12.4mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4703.2(计算值：4702.6)
HPLC洗脱时间：16.5分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例32
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)-Aib-Ile-Aib-Leu-Glu-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
(SEQ ID NO:41)
将通过类似于参考实施例8的方法制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber酰胺树脂(0.115meq/g，108.3mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。重复这种Fmoc氨基酸缩合-Fmoc脱保护循环以使Gly-Gly-Gly和Oda(OtBu)连续缩合。将树脂用MeOH洗涤，且然后在减压下干燥以得到104.3mg的Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Aib-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber酰胺树脂。
向104.3mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：61/39-51/49线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到12.0mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4761.3(计算值：4760.6)
HPLC洗脱时间：14.5分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例33
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Glu-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
(SEQ ID NO:42)
将通过类似于参考实施例8的方法制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber酰胺树脂(0.115meq/g，108.3mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Pal-OSu(35.4mg)和DIPEA(17.4μL)的NMP溶液(200μL)添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，将树脂用MeOH洗涤并在减压下干燥以得到108.5mg的Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Ly s(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sie ber酰胺树脂。
向108.5mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：57/43-47/53线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到12.0mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4717.4(计算值：4716.6)
HPLC洗脱时间：16.6分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例34
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)-Aib-Ile-Aib-Leu-Glu-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
(SEQ ID NO:43)
将通过类似于参考实施例8的方法制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber酰胺树脂(0.115meq/g，108.3mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。重复这种Fmoc氨基酸缩合-Fmoc脱保护循环以使Gly-Gly-Gly和Oda(OtBu)连续缩合。将树脂用MeOH洗涤，且然后在减压下干燥以得到117.9mg的Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Aib-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Ar g(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber酰胺树脂。
向117.9mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：61/39-51/49线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到8.6mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4775.3(计算值：4774.7)
HPLC洗脱时间：14.5分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例35
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gl y-Pal)-Ala-Ile-Aib-Leu-Glu-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
(SEQ ID NO:44)
将通过类似于参考实施例8的方法制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ala-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber酰胺树脂(0.116meq/g，108.1mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Pal-OSu(35.4mg)和DIPEA(17.4μL)的NMP溶液(200μL)添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，将树脂用MeOH洗涤并在减压下干燥以得到120.1mg的Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ala-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber酰胺树脂。
向120.1mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：57/43-47/53线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到10.9mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4689.1(计算值：4688.6)
HPLC洗脱时间：16.5分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例36
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gl y-Oda)-Ala-Ile-Aib-Leu-Glu-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
(SEQ ID NO:45)
将通过类似于参考实施例8的方法制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ala-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber酰胺树脂(0.116meq/g，108.1mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。重复这种Fmoc氨基酸缩合-Fmoc脱保护循环以使Gly-Gly-Gly和Oda(OtBu)连续缩合。将树脂用MeOH洗涤，且然后在减压下干燥以得到107.9mg的Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Ala-Ile-Aib-Leu-Glu(Ot Bu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber酰胺树脂。
向107.9mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：61/39-51/49线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到9.2mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4747.3(计算值：4746.6)
HPLC洗脱时间：14.5分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例37
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ala-Ile-Aib-Leu-Glu-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
(SEQ ID NO:46)
将通过类似于参考实施例8的方法制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ala-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber酰胺树脂(0.116meq/g，108.1mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Pal-OSu(35.4mg)和DIPEA(17.4μL)的NMP溶液(200μL)添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，将树脂用MeOH洗涤并在减压下干燥以得到117.8mg的Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ala-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber酰胺树脂。
向117.8mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：57/43-47/53线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到11.4mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4703.3(计算值：4702.6)
HPLC洗脱时间：16.5分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例38
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)-Ala-Ile-Aib-Leu-Glu-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
(SEQ ID NO:47)
将通过类似于参考实施例8的方法制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ala-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber酰胺树脂(0.116meq/g，108.1mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。重复这种Fmoc氨基酸缩合-Fmoc脱保护循环以使Gly-Gly-Gly和Oda(OtBu)连续缩合。将树脂用MeOH洗涤，且然后在减压下干燥以得到116mg的Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Ala-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber酰胺树脂。
向116mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：61/39-51/49线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到11.0mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4761.2(计算值：4760.6)
HPLC洗脱时间：14.5分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例39
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ser-Ile-Aib-Leu-Glu-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
(SEQ ID NO:48)
将通过类似于参考实施例8的方法制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ser(tBu)-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber酰胺树脂(0.116meq/g，107.5mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Pal-OSu(35.4mg)和DIPEA(17.4μL)的NMP溶液(200μL)添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，将树脂用MeOH洗涤并在减压下干燥以得到124mg的Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ser(tBu)-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber酰胺树脂。
向124mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：57/43-47/53线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到8.9mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4705.1(计算值：4704.6)
HPLC洗脱时间：16.6分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例40
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)-Ser-Ile-Aib-Leu-Glu-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
(SEQ ID NO:49)
将通过类似于参考实施例8的方法制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ser(tBu)-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber酰胺树脂(0.116meq/g，107.5mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。重复这种Fmoc氨基酸缩合-Fmoc脱保护循环以使Gly-Gly-Gly和Oda(OtBu)连续缩合。将树脂用MeOH洗涤，且然后在减压下干燥以得到116.8mg的Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Ser(tBu)-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber酰胺树脂。
向116.8mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：61/39-51/49线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到13.1mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4763.0(计算值：4762.6)
HPLC洗脱时间：14.5分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例41
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ser-Ile-Aib-Leu-Glu-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
(SEQ ID NO:50)
将通过类似于参考实施例8的方法制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ser(tBu)-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber酰胺树脂(0.116meq/g，107.5mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。将Pal-OSu(35.4mg)和DIPEA(17.4μL)的NMP溶液(200μL)添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，将树脂用MeOH洗涤并在减压下干燥以得到104.3mg的Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ser(tBu)-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber酰胺树脂。
向104.3mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：57/43-47/53线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到11.3mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4719.3(计算值：4718.6)
HPLC洗脱时间：16.6分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
实施例42
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)-Ser-Ile-Aib-Leu-Glu-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
(SEQ ID NO:51)
将通过类似于参考实施例8的方法制备的H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ser(tBu)-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber酰胺树脂(0.116meq/g，107.5mg)称量到反应管中并用NMP溶胀。在通过过滤除去NMP后，将Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向所获得的树脂添加2％肼的NMP溶液，并将混合物振荡3小时。滤出溶液，并且然后再次向其添加2％肼的NMP溶液，并使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。将Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M于NMP中的OxymaPure(200μL)和二异丙基碳二亚胺(15.9μL)依次添加至所获得的树脂，且然后使混合物振荡过夜。滤出反应溶液，并且然后用NMP洗涤树脂6次。在Kaiser试验中确认阴性后，向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡1分钟。滤出溶液，并且然后再次向其添加20％哌啶的NMP溶液，并将混合物振荡20分钟。滤出溶液，并且然后用NMP洗涤树脂10次。重复这种Fmoc氨基酸缩合-Fmoc脱保护循环以使Gly-Gly-Gly和Oda(OtBu)连续缩合。将树脂用MeOH洗涤，且然后在减压下干燥以得到109.1mg的Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Ser(tBu)-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber酰胺树脂。
向109.1mg所获得的树脂中添加1mL的TFA:间甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三异丙基硅烷(80:5:5:5:2.5:2.5)，并将混合物搅拌1.5小时。将二乙醚添加至反应溶液以获得沉淀物，并且通过重复三次操作来洗涤沉淀物以在离心后除去上清液。用50％乙酸水溶液萃取残余物，并且通过过滤除去树脂，然后使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm柱(250×20mm内径)进行制备型HPLC。[溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，流速8mL/分钟，A/B：61/39-51/49线性浓度梯度洗脱(60分钟)]。收集含有目标产物的级分，并且冷冻干燥以得到10.5mg的白色粉末。
质谱法，(M+H)+4777.2(计算值：4776.6)
HPLC洗脱时间：14.5分钟
洗脱条件：
柱：YMC Triart C8(100×4.6mm内径)
洗脱液：使用溶液A：0.1％TFA-水，溶液B：含0.1％TFA的乙腈，A/B：80/20-30/70线性浓度梯度洗脱(25分钟)。
流速：1.0mL/分钟
测试实施例1
使用细胞内cAMP浓度变化作为指标评价针对人NPY2R、人GIPR和人GLP-1R的激动剂活性
(1)表达人NPY2R基因的细胞的构建
将具有与GenBank登录号AC104407的序列相同的序列的人NPY2R基因克隆到pAKKO1114载体中以制备hNPY2R/pAKKO1114。接下来，将pGL4.29(Promega)引入CHO-K1细胞中，然后用潮霉素筛选所述细胞以构建Cre-luc报告细胞。用hNPY2R/pAKKO1114和pcDNA3.1(Life Technologies Corp.)共转染这些细胞，并用遗传霉素筛选所述细胞。接下来，通过添加人PYY(3-36)从获得的转化体中选择被诱导表达荧光素酶的细胞系，即pAKKO1114/hNPY2R#481 88号细胞。
(2)表达人GIPR基因的细胞的构建
将具有与GenBank登录号U39231的序列相同的序列的人GIPR基因克隆到pMSRα-neo载体中以制备hGIPR/pMSRα-neo。将此载体引入(1)中获得的Cre-luc报告细胞中以获得转化体。接下来，通过添加GIP从获得的转化体中选择被诱导表达荧光素酶的细胞系，即hGIPR/CHO-K1细胞。
(3)表达人GLP-1R基因的细胞的构建
将具有与GenBank登录号NM_002062的序列相同的序列的人GLP-1R基因克隆到pIRESneo3载体(Clontech Laboratories,Inc.)中以制备hGLP-1R/pIRESneo3。将此载体引入(1)中获得的Cre-luc报告细胞中以获得转化体。接下来，通过添加人GLP-1(7-37)肽从获得的转化体中选择被诱导表达荧光素酶的细胞系，即hGLP-1R/Crel细胞。
(4)人NPY2R基因的报告测定
将pAKKO1114/hNPY2R#481 88号细胞以25μL/孔(5,000个细胞/孔)的细胞密度接种到384孔白色板(Corning,3570)中，并在37℃的CO2孵育箱中在含有10％胎牛血清、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的Ham F12培养基中培养过夜。第二天，除去培养基，并且将含有毛喉素(最终浓度：1.2μM)的测定培养基(含有0.1％BSA、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的Ham F12培养基)以25μL/孔的浓度添加至细胞。接下来，将含有测试化合物的测定培养基以5μL/孔的浓度添加至细胞，并将所得细胞在37℃的CO2孵育箱中孵育4小时以得到1μM的最终浓度。向其添加浓度为30μL/孔的SteadyGlo(Promega)，并在避光情况下将混合物静置20分钟。使用酶标仪Envision(PerkinElmer)测量荧光素酶活性。来自添加DMSO的荧光素酶活性被定义为100％，并且来自添加1μM人PYY(3-36)而不是测试化合物的荧光素酶活性被定义为0％。以细胞内cAMP浓度降低作为指标来计算NPY2R激动剂活性。结果在表2中示出。
(5)人GIPR和GLP-1R基因的报告测定
将hGIPR/CRE-LUC/CHO-K1细胞或hGLP-1R/Crel细胞以25μL/孔(5,000个细胞/孔)的细胞密度接种到384孔白色板(Corning,3570)中，并在37℃的CO2孵育箱中在含有10％胎牛血清、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的Ham F12培养基中培养过夜。第二天，将含有测试化合物的测定培养基以5μL/孔的浓度添加至细胞，并将所得细胞在37℃的CO2孵育箱中孵育4小时以得到1μM的最终浓度。向其添加浓度为30μL/孔的SteadyGlo(Promega)，并在避光情况下振荡混合物。在30分钟后，使用酶标仪Envision(PerkinElmer)测量荧光素酶活性。对于GIPR激动剂活性，在10μM GIP存在下的荧光素酶活性被定义为100％，并且来自添加DMSO而不是测试化合物的荧光素酶活性被定义为0％。以细胞内cAMP浓度的升高作为指标来计算GIPR激动剂活性。结果在表2中示出。
对于GLP-1R激动剂活性，使用hGLP-1R/Crel细胞进行与上述类似的测定。在10μMGLP-1存在下的荧光素酶活性被定义为100％，并且来自添加DMSO而不是测试化合物的荧光素酶活性被定义为0％。以细胞内cAMP浓度的升高作为指标来计算GLP-1R激动剂活性。结果在表2中示出。
[表2]
单位：M
测试实施例2单剂量施用后的摄食抑制作用的评价
通过下文描述的方法检查测试化合物的摄食抑制活性。
将测试化合物以30或100nmol/2mL的浓度溶解在溶剂(含10％DMSO的生理盐水)中。将测试化合物溶液以2mL/kg的剂量皮下施用于8-9周龄的每只雄性C57BL/6J小鼠的背部(20℃-26℃，允许随意取得食物和水；以12小时明亮-12小时黑暗周期饲养)。施用每天进行一次持续3天。在施用后，将小鼠在饲养笼中单独饲养，并给予先前称重的食物；测量施用开始后3天的食物消耗。通过从开始施用当天给予的食物的重量中减去剩余食物的量来计算食物消耗量。当仅接受溶剂施用的对照组的食物消耗被认为是0％的抑制率时，基于施用开始后3天的累积食物消耗来评价每种测试化合物的摄食抑制活性。将测试化合物的食物摄入抑制率(％)定义为(对照组的食物消耗量-测试化合物施用组的食物消耗量)/对照组的食物消耗量×100。
如表3中所示，本发明的化合物具有食物摄入抑制作用。
[表3]
测试实施例3
饮食诱导的肥胖(DIO)小鼠中的重复给药研究
重复给药研究
基于体重、食物摄入和血浆参数的数据将雄性DIO C57BL/6J小鼠(40周龄)分组。将媒介物或实施例41的化合物(P41)皮下施用，每天一次持续4周。在研究期间监测体重和食物摄入。将化合物溶解于10％DMSO/盐水中。在研究后，收集血液并测量血浆参数。在第29天，通过EchoMRI(Hitachi Aloka Medical,Ltd.,Japan)测量身体组成，并将动物处死。对于苏木精和伊红(HE)染色，在以上体重研究部分中描述的4周药物施用后，从DIO小鼠解剖肝脏。将肝脏固定在4％多聚甲醛中，包埋在石蜡中，切片并用HE染色。在处理后，固定切片且然后通过光学显微镜(NanoZoomer,Hamamatsu Photonics)检查。
定量实时PCR
使用QIAzol试剂(QIAGEN Japan,Tokyo,Japan)从肝脏分离总RNA，并使用高容量cDNA逆转录试剂盒(Applied Biosystems,CA,USA)合成cDNA。使用ABI Prism 7900序列检测系统与EXPRESS qPCR Super Mix(Thermo Fisher Scientific Inc.MA.USA)进行定量RT-PCR。引物和探针的混合物(Applied Biosystems)用于mRNA的检测(表4)。将表达水平标准化为β-肌动蛋白和肽基异构酶A的表达水平。
[表4]
| 基因 | 符号 |
| 肽基脯氨酰异构酶A | PPIA |
| β-肌动蛋白 | ACTB |
| I型胶原α1 | Col1a |
| 肉碱棕榈酰转移酶1A | CPT1 |
| 金属肽酶的组织抑制剂抑制因子1 | Timp1 |
| C-C基序趋化因子配体2 | Ccl2 |
| 白介素-1β | IL-1b |
| 转化生长因子β | TGFb |
| 肿瘤坏死因子α | TNFa |
| 基质金属蛋白酶2 | MMP2 |
测量
通过自动分析仪7180(Autoanalyzer 7180)(Hitachi High-TechnologiesCorporation,Japan)分析血浆葡萄糖、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)。用自动GHb分析仪(HLC-723G8,Tosoh,Tokyo,Japan)测量血液糖化血红蛋白(GHb)。如下测量肝脏甘油三酯含量：使一块组织在盐水中均质化，并通过添加己烷:异丙醇(3:2)溶液提取脂质。收集脂质相，干燥且然后溶解于异丙醇中。通过甘油三酯E-试验(Wako Pure Chemical Industries,Ltd,Japan)测量甘油三酯的浓度，并计算每g肝脏的甘油三酯含量。用ELISA测定试剂盒(Shibayagi Co.Ltd.,Japan)测量血浆胰岛素。
P41在DIO小鼠中的抗肥胖作用
在DIO小鼠中进行四周重复给药研究以评价P41的抗肥胖作用。与媒介物组相比，每日注射剂量为3、10和30nmol/kg的P41分别使体重减轻14.6％、30.0％和37.1％(图1a)。在P41处理组中观察到累积食物摄入以剂量依赖性方式的类似减少(图1b)。通过使用EchoMRI的身体组成分析，与P41处理组中瘦体重的细微减少相比，观察到脂肪质量以剂量依赖性方式的急剧减少(图1c.d)。与观察结果一致，P41以剂量依赖性方式显著降低腹股沟、肠系膜和附睾脂肪垫的重量(图1e)。在生化参数中，在所有P41处理组中TC和血浆胰岛素水平显著且剂量依赖性地改善。关于对肝脂肪变性的影响，P41以剂量依赖性方式显著降低肝脏重量(图1f)、肝脏TG含量(图1g)、血浆AST和ALT(表5)。通过肝脏切片的HE染色观察到肝脂滴的减少(图1h)。肝基因表达分析揭示，与纤维化有关的基因如金属肽酶的组织抑制剂抑制因子1(Timp1)、I型胶原α1(Col1a)和炎症如C-C基序趋化因子配体2(CCl2)趋于减少并且纤维化抑制剂例如基质金属肽酶2(MMP2)趋于增加(图1i)。总之，用P41处理4周显示出有效的抗肥胖作用，伴随DIO小鼠中肝脂肪变性的改善。
[表5]
通过Shirley-William检验，相较于媒介物，*p＜0.025，**p＜0.005，***p＜0.0005。
通过Williams检验，相较于媒介物，###p＜0.0005。数据表示平均值±SD(N＝6)。
测试实施例4
ob/ob小鼠中的重复给药研究
基于体重、食物摄入和血浆参数的数据将雄性ob/ob小鼠(9周龄)分组。将媒介物或P41皮下施用，每天一次持续4周。在研究期间监测体重和食物摄入。将化合物溶解于10％DMSO/盐水中。在研究后，收集血液并测量血浆参数。在第29天，将动物处死。
测量
通过自动分析仪7180(Hitachi High-Technologies Corporation，Japan)分析血浆葡萄糖、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)。用自动GHb分析仪(HLC-723G8，Tosoh，Tokyo，Japan)测量血液糖化血红蛋白(GHb)。如下测量肝脏甘油三酯含量：将一块组织在盐水中均质化，并通过添加己烷：异丙醇(3∶2)溶液提取脂质。收集脂质相，干燥且然后溶解于异丙醇中。通过甘油三酯E-试验(Wako PureChemical Industries，Ltd，Japan)测量甘油三酯的浓度，并计算每g肝脏的甘油三酯含量。用ELISA测定试剂盒(Shibayagi Co.Ltd.，Japan)测量血浆胰岛素。
P41在ob/ob小鼠中的抗肥胖和抗糖尿病作用
接下来，测量了P41对ob/ob小鼠的抗肥胖和抗糖尿病的影响。在用10、30和100nmol/kg剂量的P41处理4周后，化合物显示GHb(图2a)和血浆葡萄糖水平(图2b)的显著降低。在P41处理组中也观察到血浆胰岛素水平的剂量依赖性降低(图2c)。关于抗肥胖作用，P41显示比媒介物更有效的剂量依赖性体重和累积食物摄入减少(图2d，e)。P41与体重减轻一致以剂量依赖性方式降低肝脏和肠系膜、附睾和腹股沟脂肪组织重量和肝脏TG含量(图2f，g)。在生化参数中，血浆TC、TG、AST和ALT在P41处理组中显著且剂量依赖性地改善(表6)。
[表6]
在ob/ob小鼠中处理4周后的血浆生化参数
相较于媒介物，＃p＜0.025，##p＜0.005，###p＜0.0005(Shirley-Williams检验)。数据表示平均值±SD(N＝5或7)。对于施用媒介物的组，N＝5。对于施用P41的组，N＝7。
测试实施例5
KKAy小鼠中P41的重复施用
基于体重、食物摄入、糖化血红蛋白(GHb)和血浆参数的数据将雄性KKAy小鼠(10周龄)分组。将P41皮下施用，每天一次持续4周。将化合物溶解于10％DMSO/盐水中。在研究期间监测体重和食物摄入。在研究后，收集血液并测量GHb和血浆参数。将动物处死，并解剖肝脏和脂肪组织且称重。从一块肝脏组织中提取脂质并测量肝脏甘油三酯(TG)含量。
测量
通过自动分析仪7180(Hitachi High-Technologies Corporation,Japan)测量血糖和TG。用自动GHb分析仪(HLC-723G8,Tosoh,Tokyo,Japan)测量血液GHb。用ELISA测定试剂盒(Shibayagi Co.Ltd.,Japan)测量血浆胰岛素。如下测量肝脏TG含量：将一块组织在盐水中均质化，并通过添加己烷:异丙醇(3:2)溶液提取脂质。收集脂质相，干燥且然后溶解于异丙醇中。通过甘油三酯E-试验(Wako Pure Chemical Industries)测量TG的浓度，并计算每g肝脏的TG含量。
雄性KKAy小鼠中P41的4周重复剂量研究。
在KKAy小鼠中进行四周重复给药研究以评价P41的抗肥胖和抗糖尿病作用。与媒介物组相比，每日皮下注射剂量为10、30和100nmol/kg的P41分别使体重减轻4.2％、9.8％和30.1％(图3a)。在P41处理组中观察到累积食物摄入的类似剂量依赖性减少(图3b)。关于抗糖尿病作用，P41显示出GHb、PG和血浆胰岛素水平的剂量依赖性和显著降低(图3c-e)。
与体重减轻一致在P41处理组中观察到肝脏组织重量的可比较的减少(图3f)。
[表7]
KKAy小鼠中的血浆生化参数
通过williams检验，相较于媒介物，**p＜0.005。
通过Shirley-Williams检验，相较于#p＜0.025，###p＜0.0005。
数据表示平均值±SD(N＝7)。
测试实施例6
条件性味觉厌恶(CTA)测试
使雄性C57BL/6J(9周龄)小鼠习惯于限时瓶装水供应(2-3小时/天)和皮下注射盐水持续1周。基于体重和水摄入量的数据将小鼠分组。根据以下方案进行CTA测试。在第一次调节的第1天，给予小鼠0.1％糖精钠溶液饮用3小时。在供应糖精溶液后10分钟，皮下施用媒介物、利拉鲁肽和P41。利拉鲁肽具有GLP-1受体共激动剂活性。在第2天，给予小鼠自来水3小时并在供水后皮下注射盐水。在第3天，第二次调节按照与第1天使用的相同程序进行。在第4天，给予小鼠自来水3小时而无皮下注射。在第5天，将自来水和糖精溶液供给小鼠3小时而无皮下注射，并测量每种流体的摄入量。根据以下等式计算糖精偏好率(％)：{(糖精摄入量)/(糖精摄入量+水摄入量)}x 100。
小鼠中的条件性味觉厌恶
进行了CTA测试以评价催吐作用。10nmol/kg剂量的利拉鲁肽显著降低糖精偏好率，从而表明CTA的诱导，P41在3nmol/kg下不诱导CTA；所述剂量在DIO小鼠中显示出比利拉鲁肽更有效的抗肥胖作用(图7)。
[表8]
P41对条件性味觉厌恶的作用。
通过Dunmett检验，相较于媒介物，***p＜0.001。数据表示平均值±SD(N＝7)。
测试实施例7
食蟹猴中的研究
使用一只雄性和一只雌性食蟹猴(年龄：4岁，体重：雄性3.9kg，雌性2.7kg)。将猴子圈养在单独的笼子中，在22℃-27℃下进行12小时:12小时光暗日程安排，并且每天一次给予100g的颗粒饮食(Oriental Yeast Co.Ltd)。在给药当天给药后8小时，在完成临床观察后提供饮食。在实验期期间的其他日子，在完成检查后每天提供饮食，并在第二天早晨取出剩余的饮食。将P41溶解于0.5w/v％甘露醇溶液中。在第1天皮下施用0.05mg/kg的化合物，且然后在第4天0.15mg/kg。在给药前期间和第1、4、8、11和15天测量体重一次。在实验期期间每天测量食物摄入量。
P41在食蟹猴中增强了饱腹感而没有不适。在食蟹猴中研究了P41对食物摄入的影响，以证实对灵长类动物的功效和催吐作用。以递增剂量(0.05和0.15mg/kg；约10和30nmol/kg)皮下施用P41。在两剂量给药后，P41几乎完全消除了雄性和雌性的食物消耗。食物消耗的抑制作用持续至少2天(图8)。P41在整个实验期间未诱导呕吐，从而表明在小鼠中观察到的P41的有效厌食作用和少量CTA作用转化至非人灵长类动物。
制剂实施例1
将实施例1的化合物(10.0mg)和硬脂酸镁(3.0mg)用水溶性淀粉溶液(0.07ml)(7.0mg，以可溶性淀粉形式)制粒，干燥并与乳糖(70.0mg)和玉米淀粉(50.0mg)混合。将混合物压缩以得到片剂。
制剂实施例2
(1)实施例1的化合物5.0mg
(2)氯化钠20.0mg
(3)蒸馏水至总量2ml
将实施例1的化合物(5.0mg)和氯化钠(20.0mg)溶解于蒸馏水中，并且将水添加至2.0ml的总量。将溶液过滤，并在无菌条件下装入2ml安瓿中。将安瓿灭菌并紧密密封以得到注射用溶液。
[工业适用性]
本发明化合物对Y2受体、GLP-1受体和GIP受体具有活化作用，并且可用作预防或治疗与Y2受体、GLP-1受体和GIP受体相关的各种疾病(例如，肥胖症和糖尿病)的药物。
本文引用的所有出版物、专利和专利申请都以引用的方式整体并入本文。
[序列表的自由文本]
SEQ ID NO:1:人工序列(合成肽(式(I)、式(II)或式(III)))
SEQ ID NO:2:人工序列(合成肽(参考实施例1))
SEQ ID NO:3:人工序列(合成肽(参考实施例2))
SEQ ID NO:4:人工序列(合成肽(参考实施例3))
SEQ ID NO:5:人工序列(合成肽(参考实施例4))
SEQ ID NO:6:人工序列(合成肽(参考实施例5))
SEQ ID NO:7:人工序列(合成肽(参考实施例6))
SEQ ID NO:8:人工序列(合成肽(参考实施例7))
SEQ ID NO:9:人工序列(合成肽(参考实施例8))
SEQ ID NO:10:人工序列(合成肽(实施例1))
SEQ ID NO:11:人工序列(合成肽(实施例2))
SEQ ID NO:12:人工序列(合成肽(实施例3))
SEQ ID NO:13:人工序列(合成肽(实施例4))
SEQ ID NO:14:人工序列(合成肽(实施例5))
SEQ ID NO:15:人工序列(合成肽(实施例6))
SEQ ID NO:16:人工序列(合成肽(实施例7))
SEQ ID NO:17:人工序列(合成肽(实施例8))
SEQ ID NO:18:人工序列(合成肽(实施例9))
SEQ ID NO:19:人工序列(合成肽(实施例10))
SEQ ID NO:20:人工序列(合成肽(实施例11))
SEQ ID NO:21:人工序列(合成肽(实施例12))
SEQ ID NO:22:人工序列(合成肽(实施例13))
SEQ ID NO:23:人工序列(合成肽(实施例14))
SEQ ID NO:24:人工序列(合成肽(实施例15))
SEQ ID NO:25:人工序列(合成肽(实施例16))
SEQ ID NO:26:人工序列(合成肽(实施例17))
SEQ ID NO:27:人工序列(合成肽(实施例18))
SEQ ID NO:28:人工序列(合成肽(实施例19))
SEQ ID NO:29:人工序列(合成肽(实施例20))
SEQ ID NO:30:人工序列(合成肽(实施例21))
SEQ ID NO:31:人工序列(合成肽(实施例22))
SEQ ID NO:32:人工序列(合成肽(实施例23))
SEQ ID NO:33:人工序列(合成肽(实施例24))
SEQ ID NO:34:人工序列(合成肽(实施例25))
SEQ ID NO:35:人工序列(合成肽(实施例26))
SEQ ID NO:36:人工序列(合成肽(实施例27))
SEQ ID NO:37:人工序列(合成肽(实施例28))
SEQ ID NO:38:人工序列(合成肽(实施例29))
SEQ ID NO:39:人工序列(合成肽(实施例30))
SEQ ID NO:40:人工序列(合成肽(实施例31))
SEQ ID NO:41:人工序列(合成肽(实施例32))
SEQ ID NO:42:人工序列(合成肽(实施例33))
SEQ ID NO:43:人工序列(合成肽(实施例34))
SEQ ID NO:44:人工序列(合成肽(实施例35))
SEQ ID NO:45:人工序列(合成肽(实施例36))
SEQ ID NO:46:人工序列(合成肽(实施例37))
SEQ ID NO:47:人工序列(合成肽(实施例38))
SEQ ID NO:48:人工序列(合成肽(实施例39))
SEQ ID NO:49:人工序列(合成肽(实施例40))
SEQ ID NO:50:人工序列(合成肽(实施例41))
SEQ ID NO:51:人工序列(合成肽(实施例42))
序列表
<110> 武田药品工业株式会社(Takeda Pharmaceutical Company Limited)
<120> 肽化合物(Peptide Compound)
<130> PT38-9015WO
<140> CN2017800456571
<141> 2017-05-23
<150> JP2016-103011
<151> 2016-05-24
<160> 51
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (式 (I)/(II)/(III))
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N末端用P1修饰
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> 在式 (I) 和 (III)的情况下, (Gly-Gly-Gly-Gly-X) 中所示的连接烷基链连接至赖氨酸残基的ε氨基; 式 (I)中， X = Oda 或 Pal， 式 (III)中，X=H
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa 代表 Aib, Ala或Ser
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (12)..(12)
<223> Xaa 代表 Ile 或 Lys
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (15)..(15)
<223> Xaa 代表 Asp 或 Glu
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (18)..(18)
<223> Xaa 代表 Ala 或 Arg
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (35)..(35)
<223> Xaa 代表 Tyr 或 Phe(2-F)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (35)..(35)
<223> 酰胺化
<400> 1
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Lys
1 5 10 15
Gln Xaa Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Xaa
35
<210> 2
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (参考实施例 1)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(15)
<223> 官能团在位置2, 5, 6, 9, 10, 12, 13, 14
和 15 被保护
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(16)
<223> 2-氟 -l-苯基丙氨酸
<400> 2
Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg Gln Arg Phe
1 5 10 15
<210> 3
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (参考实施例 2)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(33)
<223> 官能团在位置 2, 4, 6, 7, 8 ,9, 14, 15,
16, 18, 20, 23, 24, 27, 28, 30, 31, 32 和 33被保护
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (12)..(12)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (19)..(19)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29)..(29)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (34)..(34)
<223> 2-氟 -l-苯基丙氨酸
<400> 3
Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Xaa Ile Xaa Leu Asp Lys Gln
1 5 10 15
Ala Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg Gln
20 25 30
Arg Phe
<210> 4
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (参考实施例 3)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(15)
<223> 官能团在位置2, 5, 6, 9, 10, 12, 13, 14
和 15被保护
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(16)
<223> 2-氟 -l-苯基丙氨酸
<400> 4
Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg Gln Arg Phe
1 5 10 15
<210> 5
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (参考实施例 4)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(33)
<223> 官能团在位置2, 4, 6, 7, 8, 9, 14, 15,
16, 17, 18, 20, 23, 24, 27, 28, 30, 31, 32 和 33被保护
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (12)..(12)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (19)..(19)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29)..(29)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (34)..(34)
<223> 2-氟 -l-苯基丙氨酸
<400> 5
Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Xaa Ile Xaa Leu Asp Lys Gln
1 5 10 15
Arg Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg Gln
20 25 30
Arg Phe
<210> 6
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (参考实施例 5)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(16)
<223> 官能团在位置 2, 5, 6, 9, 10, 12, 13, 14,
15 和 16被保护
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 6
Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg Gln Arg Tyr
1 5 10 15
<210> 7
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (参考实施例 6)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(34)
<223> 官能团在位置2, 4, 6, 7, 8, 9, 14, 15,
16, 17, 18, 20, 23, 24, 27, 28, 30, 31, 32, 33 和 34被保护
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (12)..(12)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (19)..(19)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29)..(29)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 7
Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Xaa Ile Xaa Leu Asp Lys Gln
1 5 10 15
Arg Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg Gln
20 25 30
Arg Tyr
<210> 8
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (参考实施例7)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(16)
<223> 官能团在位置2, 5, 6, 9, 10, 12, 13, 14,
15 和 16被保护
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 8
Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg Gln Arg Tyr
1 5 10 15
<210> 9
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (参考实施例 8)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(34)
<223> 官能团在位置2, 4, 6, 7, 8, 9, 14, 15,
16, 18, 20, 23, 24, 27, 28, 30, 31, 32, 33 和 34被保护
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (12)..(12)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (19)..(19)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29)..(29)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 9
Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Xaa Ile Xaa Leu Asp Lys Gln
1 5 10 15
Ala Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg Gln
20 25 30
Arg Tyr
<210> 10
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 1)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (35)..(35)
<223> 2-氟 -l-苯基丙氨酸
<400> 10
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Xaa Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Gln Ala Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Phe
35
<210> 11
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 2)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (35)..(35)
<223> 2-氟 -l-苯基丙氨酸
<400> 11
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Xaa Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Gln Ala Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Phe
35
<210> 12
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 3)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (35)..(35)
<223> 2-氟 -l-苯基丙氨酸
<400> 12
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Xaa Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Gln Arg Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Phe
35
<210> 13
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 4)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (35)..(35)
<223> 2-氟 -l-苯基丙氨酸
<400> 13
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Xaa Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Gln Arg Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Phe
35
<210> 14
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 5)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N-末端 甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (35)..(35)
<223> 2-氟 -l-苯基丙氨酸
<400> 14
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Xaa Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Gln Arg Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Phe
35
<210> 15
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 6)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N-末端 甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (35)..(35)
<223> 2-氟 -l-苯基丙氨酸
<400> 15
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Xaa Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Gln Arg Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Phe
35
<210> 16
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 7)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 16
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Xaa Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Gln Arg Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Tyr
35
<210> 17
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 8)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 17
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Xaa Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Gln Arg Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Tyr
35
<210> 18
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 9)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N-末端 甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 18
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Xaa Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Gln Arg Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Tyr
35
<210> 19
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 10)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N-末端 甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 19
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Xaa Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Gln Arg Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Tyr
35
<210> 20
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 11)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 20
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ala Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Gln Arg Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Tyr
35
<210> 21
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 12)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 21
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ala Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Gln Arg Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Tyr
35
<210> 22
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 13)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N-末端 甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 22
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ala Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Gln Arg Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Tyr
35
<210> 23
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 14)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N-末端 甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 23
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ala Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Gln Arg Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Tyr
35
<210> 24
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 15)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 24
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Gln Arg Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Tyr
35
<210> 25
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 16)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 25
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Gln Arg Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Tyr
35
<210> 26
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 17)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N-末端 甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 26
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Gln Arg Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Tyr
35
<210> 27
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 18)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N-末端 甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 27
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Gln Arg Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Tyr
35
<210> 28
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 19)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 28
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Xaa Lys Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Gln Arg Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Tyr
35
<210> 29
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 20)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 29
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Xaa Lys Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Gln Arg Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Tyr
35
<210> 30
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 21)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N-末端 甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 30
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Xaa Lys Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Gln Arg Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Tyr
35
<210> 31
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 22)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N-末端 甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 31
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Xaa Lys Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Gln Arg Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Tyr
35
<210> 32
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 23)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 32
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Gln Arg Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Tyr
35
<210> 33
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 24)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 33
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Gln Arg Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Tyr
35
<210> 34
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 25)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N-末端 甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 34
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Gln Arg Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Tyr
35
<210> 35
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 26)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N-末端 甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 35
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Gln Arg Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Tyr
35
<210> 36
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 27)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 36
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Xaa Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Gln Ala Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Tyr
35
<210> 37
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 28)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 37
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Xaa Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Gln Ala Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Tyr
35
<210> 38
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 29)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N-末端 甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 38
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Xaa Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Gln Ala Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Tyr
35
<210> 39
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 30)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N-末端 甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 39
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Xaa Ile Xaa Leu Asp Lys
1 5 10 15
Gln Ala Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Tyr
35
<210> 40
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 31)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 40
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Xaa Ile Xaa Leu Glu Lys
1 5 10 15
Gln Arg Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Tyr
35
<210> 41
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 32)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 41
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Xaa Ile Xaa Leu Glu Lys
1 5 10 15
Gln Arg Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Tyr
35
<210> 42
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 33)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N-末端 甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 42
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Xaa Ile Xaa Leu Glu Lys
1 5 10 15
Gln Arg Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Tyr
35
<210> 43
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 34)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N-末端 甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 43
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Xaa Ile Xaa Leu Glu Lys
1 5 10 15
Gln Arg Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Tyr
35
<210> 44
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 35)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 44
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ala Ile Xaa Leu Glu Lys
1 5 10 15
Gln Arg Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Tyr
35
<210> 45
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 36)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 45
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ala Ile Xaa Leu Glu Lys
1 5 10 15
Gln Arg Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Tyr
35
<210> 46
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 37)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N-末端 甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 46
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ala Ile Xaa Leu Glu Lys
1 5 10 15
Gln Arg Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Tyr
35
<210> 47
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 38)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N-末端 甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 47
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ala Ile Xaa Leu Glu Lys
1 5 10 15
Gln Arg Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Tyr
35
<210> 48
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 39)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 48
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Ile Xaa Leu Glu Lys
1 5 10 15
Gln Arg Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Tyr
35
<210> 49
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 40)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 49
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Ile Xaa Leu Glu Lys
1 5 10 15
Gln Arg Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Tyr
35
<210> 50
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 41)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N-末端 甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 50
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Ile Xaa Leu Glu Lys
1 5 10 15
Gln Arg Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Tyr
35
<210> 51
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽 (实施例 42)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N-末端 甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)中所示的连接烷基链连接至赖氨酸的ε氨基
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 代表 Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa 代表 Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa 代表 Aib
<400> 51
Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Ile Xaa Leu Glu Lys
1 5 10 15
Gln Arg Gln Xaa Glu Phe Val Arg His Leu Leu Asn Lys Xaa Thr Arg
20 25 30
Gln Arg Tyr
35
Claims (14)
1.一种由式(I)表示的肽：
P1-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-α-MePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-RA10)-A11-A12-Aib-Leu-A15-Lys-Gln-A18-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-A35-NH2
或其盐，
其中
P1是氢原子或甲基，
RA10是Pal或Oda；
A11是Aib、Ala或Ser；
A12是Ile或Lys；
A15是Asp或Glu；
A18是Ala或Arg；并且
A35是Tyr或Phe(2-F)。
2.根据权利要求1所述的肽或其盐，其中RA10是Pal。
3.根据权利要求1所述的肽或其盐，其中A12是Ile。
4.根据权利要求1所述的肽或其盐，其中A15是Glu。
5.根据权利要求1所述的肽或其盐，其中A18是Arg。
6.根据权利要求1所述的肽或其盐，其中A35是Tyr。
7.一种肽，其表示为H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Glu-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
或其盐。
8.一种肽，其表示为H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ala-Ile-Aib-Leu-Glu-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
或其盐。
9.一种肽，其表示为Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ser-Ile-Aib-Leu-Glu-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2
或其盐。
10.一种药物，其包含根据权利要求1-9中任一项所述的肽或其盐。
11.根据权利要求10所述的药物，其是Y2受体、GLP-1受体和GIP受体的活化剂。
12.根据权利要求10所述的药物，其是肥胖症或糖尿病的预防或治疗剂。
13.根据权利要求1-9中任一项所述的肽或其盐用于制造哺乳动物的Y2受体、GLP-1受体和GIP受体的活化剂的用途。
14.根据权利要求1-9中任一项所述的肽或其盐用于制造肥胖症或糖尿病的预防或治疗剂的用途。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2016103011 | 2016-05-24 | ||
| JP2016-103011 | 2016-05-24 | ||
| PCT/JP2017/019220 WO2017204219A1 (ja) | 2016-05-24 | 2017-05-23 | ペプチド化合物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN109477094A CN109477094A (zh) | 2019-03-15 |
| CN109477094B true CN109477094B (zh) | 2022-04-26 |
Family
ID=60411392
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201780045657.1A Active CN109477094B (zh) | 2016-05-24 | 2017-05-23 | 肽化合物 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US10501516B2 (zh) |
| EP (1) | EP3467106A4 (zh) |
| JP (1) | JP6995042B2 (zh) |
| CN (1) | CN109477094B (zh) |
| CA (1) | CA3024962A1 (zh) |
| WO (1) | WO2017204219A1 (zh) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JOP20180028A1 (ar) | 2017-03-31 | 2019-01-30 | Takeda Pharmaceuticals Co | مركب ببتيد |
| MX2020007410A (es) | 2018-01-23 | 2020-11-09 | Gila Therapeutics Inc | Formulaciones, composiciones y métodos farmacéuticos de péptido yy. |
| JP7173429B2 (ja) * | 2018-03-23 | 2022-11-16 | Ａｇｃ株式会社 | 合わせガラス |
| CA3125774A1 (en) * | 2019-01-07 | 2020-07-16 | Vitalixir (Beijing) Co., Ltd | Novel peptides and their therapeutic applications |
| KR102446310B1 (ko) | 2020-07-22 | 2022-09-23 | 노보 노르디스크 에이/에스 | 경구 전달에 적합한 glp-1 및 gip 수용체에서의 공-작용제 |
| TW202330584A (zh) | 2022-01-20 | 2023-08-01 | 丹麥商諾佛 儂迪克股份有限公司 | 前藥及其用途 |
| KR20230138832A (ko) * | 2022-03-24 | 2023-10-05 | (주)케어젠 | 항당뇨 활성을 갖는 펩타이드 복합체 및 이의 용도 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014192284A1 (en) * | 2013-05-28 | 2014-12-04 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Peptide compound |
| WO2015067716A1 (en) * | 2013-11-06 | 2015-05-14 | Zealand Pharma A/S | Glucagon-glp-1-gip triple agonist compounds |
Family Cites Families (40)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| UA65549C2 (uk) | 1996-11-05 | 2004-04-15 | Елі Ліллі Енд Компані | Спосіб регулювання ожиріння шляхом периферійного введення аналогів та похідних glp-1 (варіанти) та фармацевтична композиція |
| ATE289517T1 (de) | 1996-11-12 | 2005-03-15 | Novo Nordisk As | Verwendung von glp-1 peptiden |
| WO1999047161A1 (en) | 1998-03-19 | 1999-09-23 | Bionebraska, Inc. | Human appetite control by glucagon-like peptide receptor binding compounds |
| WO2000007617A1 (en) | 1998-07-31 | 2000-02-17 | Novo Nordisk A/S | Use of glp-1 and analogues for preventing type ii diabetes |
| CN100334109C (zh) | 1998-12-07 | 2007-08-29 | 研究及应用科学协会股份有限公司 | 胰高血糖素样肽－1的类似物 |
| WO2001087341A1 (fr) | 2000-05-16 | 2001-11-22 | Sanwa Kagaku Kenkyusho Co.,Ltd. | Agents permettant de prevenir ou d'ameliorer l'insulino-resistance et/ou l'obesite |
| JP5685355B2 (ja) | 2002-07-04 | 2015-03-18 | ジーランド ファーマ アクティーゼルスカブ | Ｇｌｐ−１および糖尿病の処置方法 |
| US20090105122A1 (en) * | 2003-11-25 | 2009-04-23 | Bayer Pharmaceuticals Corporation | Selective neuropeptide y2 receptor agonists |
| JP2007536214A (ja) | 2003-12-16 | 2007-12-13 | ソシエテ・ドゥ・コンセイユ・ドゥ・ルシェルシュ・エ・ダプリカーション・シャンティフィック・エス・ア・エス | Ｇｌｐ−１類似体 |
| WO2006049681A2 (en) | 2004-08-30 | 2006-05-11 | Bayer Pharmaceuticals Corporation | Selective neuropeptide y2 receptor agonists |
| EP1853627A2 (en) | 2005-02-11 | 2007-11-14 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Gip analog and hybrid polypeptides with selectable properties |
| WO2006136374A2 (en) | 2005-06-20 | 2006-12-28 | Develogen Aktiengesellschaft | Use of gip and/or vitamin d3 analogues thereof for enhancing stem or progenitor cell differentiation into insulin producing cells |
| EP2051725A4 (en) | 2006-07-11 | 2011-06-15 | Harkness Pharmaceuticals Inc | METHOD FOR THE TREATMENT OF GRAIN WITH SATURATION FACTORS |
| WO2008021560A2 (en) | 2006-08-17 | 2008-02-21 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Dpp-iv resistant gip hybrid polypeptides with selectable properties |
| PE20080840A1 (es) | 2006-09-13 | 2008-08-27 | Smithkline Beecham Corp | Metodos para administrar agentes hipoglucemiantes de larga duracion |
| EP1972349A1 (en) | 2007-03-21 | 2008-09-24 | Biocompatibles UK Limited | GLP-1 fusion peptides conjugated to polymer(s), their production and use |
| US8710002B2 (en) | 2007-11-23 | 2014-04-29 | Michael Rothkopf | Methods of enhancing diabetes resolution |
| ES2650038T3 (es) | 2008-06-17 | 2018-01-16 | Indiana University Research And Technology Corporation | Agonistas mixtos a base de GIP para el tratamiento de trastornos metabólicos y obesidad |
| KR20110043689A (ko) | 2008-08-07 | 2011-04-27 | 입센 파마 에스.에이.에스 | Ｎ-말단이 변형된 포도당 의존적인 인슐린 분비 자극성 폴리펩타이드(ｇｉｐ)의 유사체 |
| SI2373681T1 (sl) | 2008-12-10 | 2017-05-31 | Glaxosmithkline Llc Corporation Service Company | Farmacevtski sestavki albiglutida |
| JP5887265B2 (ja) | 2009-06-16 | 2016-03-16 | インディアナ・ユニバーシティ・リサーチ・アンド・テクノロジー・コーポレーション | Ｇｉｐ受容体活性グルカゴン化合物 |
| JP5767582B2 (ja) | 2009-07-02 | 2015-08-19 | 武田薬品工業株式会社 | ペプチド及びその用途 |
| AR080592A1 (es) | 2010-03-26 | 2012-04-18 | Lilly Co Eli | Peptido con actividad para el gip-r y glp-1-r, formulacion famaceutica que lo comprende, su uso para preparar un medicamento util para el tratamiento de diabetes mellitus y para inducir la perdida de peso |
| CA2822617A1 (en) | 2010-12-22 | 2012-06-28 | Marcadia Biotech, Inc. | Methods for treating metabolic disorders and obesity with gip and glp-1 receptor-active glucagon-based peptides |
| US9790262B2 (en) | 2011-04-05 | 2017-10-17 | Longevity Biotech, Inc. | Compositions comprising glucagon analogs and methods of making and using the same |
| US9453062B2 (en) | 2011-06-10 | 2016-09-27 | Beijing Hanmi Pharmaceutical Co., Ltd. | Glucose dependent insulinotropic polypeptide analogs, pharmaceutical compositions and use thereof |
| WO2012168431A2 (en) | 2011-06-10 | 2012-12-13 | Novo Nordisk A/S | Polypeptides |
| WO2013003449A2 (en) | 2011-06-27 | 2013-01-03 | Phasebio Pharmaceuticals, Inc. | Methods of treatment with glp-1 receptor agonists |
| JP6126097B2 (ja) | 2011-09-06 | 2017-05-10 | ノヴォ ノルディスク アー／エス | Ｇｌｐ−１誘導体 |
| EP2830646B1 (en) | 2012-03-27 | 2018-03-07 | NGM Biopharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods of use for treating metabolic disorders |
| WO2013164483A1 (en) | 2012-05-03 | 2013-11-07 | Zealand Pharma A/S | Gip-glp-1 dual agonist compounds and methods |
| JP6250034B2 (ja) | 2012-05-08 | 2017-12-20 | ノヴォ ノルディスク アー／エス | 二重アシル化されたｇｌｐ−１誘導体 |
| SG11201408491SA (en) | 2012-06-21 | 2015-01-29 | Univ Indiana Res & Tech Corp | Analogs of glucagon exhibiting gip receptor activity |
| MX2014015558A (es) | 2012-06-21 | 2015-03-05 | Univ Indiana Res & Tech Corp | Analogos de glucagon que exhiben actividad del receptor gip. |
| EP2935318A1 (en) | 2012-12-19 | 2015-10-28 | Novo Nordisk A/S | Novel glp-1 receptor agonists with cholesterol efflux activity |
| UA116553C2 (uk) | 2012-12-21 | 2018-04-10 | Санофі | Пептидна сполука - агоніст рецептора glp-1 i glp |
| WO2014140222A1 (en) * | 2013-03-14 | 2014-09-18 | Medimmune Limited | Pegylated glucagon and glp-1 co-agonists for the treatment of obesity |
| CN104262481B (zh) * | 2013-08-09 | 2018-02-09 | 天津药物研究院有限公司 | 一种侧链修饰的长效glp‑1类似物的制备方法及其应用 |
| TW201625668A (zh) * | 2014-04-07 | 2016-07-16 | 賽諾菲公司 | 作為胜肽性雙重ｇｌｐ－１／昇糖素受體激動劑之艾塞那肽－４衍生物 |
| JP2018012644A (ja) * | 2014-11-26 | 2018-01-25 | 武田薬品工業株式会社 | ペプチド化合物 |
-
2017
- 2017-05-23 CA CA3024962A patent/CA3024962A1/en active Pending
- 2017-05-23 US US16/303,975 patent/US10501516B2/en active Active
- 2017-05-23 EP EP17802805.6A patent/EP3467106A4/en active Pending
- 2017-05-23 CN CN201780045657.1A patent/CN109477094B/zh active Active
- 2017-05-23 JP JP2018519562A patent/JP6995042B2/ja active Active
- 2017-05-23 WO PCT/JP2017/019220 patent/WO2017204219A1/ja unknown
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014192284A1 (en) * | 2013-05-28 | 2014-12-04 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Peptide compound |
| CN105209485A (zh) * | 2013-05-28 | 2015-12-30 | 武田药品工业株式会社 | 肽化合物 |
| WO2015067716A1 (en) * | 2013-11-06 | 2015-05-14 | Zealand Pharma A/S | Glucagon-glp-1-gip triple agonist compounds |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2017204219A1 (ja) | 2017-11-30 |
| EP3467106A4 (en) | 2020-02-26 |
| US10501516B2 (en) | 2019-12-10 |
| JPWO2017204219A1 (ja) | 2019-03-22 |
| US20190202883A1 (en) | 2019-07-04 |
| CA3024962A1 (en) | 2017-11-30 |
| CN109477094A (zh) | 2019-03-15 |
| EP3467106A1 (en) | 2019-04-10 |
| JP6995042B2 (ja) | 2022-02-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6570705B2 (ja) | ペプチド化合物 | |
| US11174301B2 (en) | Peptide compound | |
| CN109477094B (zh) | 肽化合物 | |
| WO2016084826A1 (ja) | ペプチド化合物 | |
| TWI770085B (zh) | 胜肽化合物 | |
| BR112015027596B1 (pt) | Peptídeo, sequência, medicamento, e, uso de um peptídeo | |
| EA042684B1 (ru) | Пептид, активирующий рецептор гип | |
| EA044242B1 (ru) | Пептидное соединение |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |