ES2646538T3 - Derivados de GLP-1 y sus usos - Google Patents

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ES2646538T3 ES14731951.1T ES14731951T ES2646538T3 ES 2646538 T3 ES2646538 T3 ES 2646538T3 ES 14731951 T ES14731951 T ES 14731951T ES 2646538 T3 ES2646538 T3 ES 2646538T3
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Steffen Reedtz-Runge
Per Sauerberg
Jacob Kofoed
Ingrid Pettersson
Christian Wenzel Tornøe
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Novo Nordisk AS
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Abstract

Un derivado de un péptido GLP-1, en donde el péptido GLP-1 tiene la fórmula I: Fórmula I: Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Xaa12-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Xaa18-Xaa19-Xaa20-Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Xaa25- Xaa26Xaa27-Phe-Ile-Xaa30-Xaa31-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38-Xaa39-Xaa40-Xaa41-Xaa42-Xaa43, en donde Xaa7 es L-histidina, ácido (S)-2-hidroxi-3-(1H-imidazol-4-il)-propiónico, D-histidina, desamino-histidina, homohistidina, Nα-acetil-histidina, Nα-formil-histidina, α-metil-histidina, 3-piridilalanina, 2-piridilalanina o 4-piridilalanina; Xaa8 es Ala, Gly, Ser, Aib, ácido (1-aminociclopropil) carboxílico o ácido (1-aminociclobutil) carboxílico; Xaa12 es Phe o Leu; Xaa16 es Val o Leu; Xaa18 es Ser, Val, Lys, Arg o Leu; Xaa19 es Tyr o Gln; Xaa20 es Leu o Met; Xaa22 es Gly o Glu; Xaa23 es Gln, Glu o Arg; Xaa25 es Ala o Val; Xaa26 es Arg o Lys; Xaa27 es Glu, Lys o Leu; Xaa30 es Ala, Glu o Arg; Xaa31 es Trp o His; Xaa33 es Val, Lys o Arg; Xaa34 es Arg, Lys, His, Asn o Gin; Xaa35 es Gly o Ala; Xaa36 es Arg o Gly; Xaa37 es Gly, Pro o Lys; Xaa38 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o está ausente; Xaa39 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o está ausente; Xaa40 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o está ausente; Xaa41 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o está ausente; Xaa42 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o está ausente; y Xaa43 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o está ausente; en donde el péptido GLP-1 comprende un residuo de Lys en una posición correspondiente a la posición 27, 37, 38, 39, 40, 41, 42 o 43 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1); cuyo derivado comprende un primer y un segundo resto de acción prolongada seleccionado a partir de Chem. 1 y Chem. 1 a: Chem. 1: HOOC-(CH2)18-CO-*, y Chem. 1 a: HOOC-(CH2)20-CO-*; un enlazador ramificado de fórmula Chem. 2:**Fórmula** en donde R1 es -(CH2)q-NH-*, en donde q es un número entero en el intervalo de 0-5, R2 es -(CH2)w-NH-*, en donde w es un número entero en el intervalo de 0-5, con la condición de que cuando w es 0, q es un número entero en el intervalo de 1-5 y cuando q es 0, w es un número entero en el intervalo de 1-5; y un primer y un segundo enlazador adicional, comprendiendo cada uno un elemento_1 de fórmula Chem. 3:**Fórmula** en la que k es un número entero en el intervalo de 1-15 y n es un número entero en el intervalo de 1-5; en donde el primer resto de acción prolongada está fijado en su extremo *-CO a un primer extremo *-NH del enlazador ramificado, a través del primer enlazador adicional, el segundo resto de acción prolongada está fijado en su extremo *-CO a un segundo extremo *-NH del enlazador ramificado, a través del segundo enlazador adicional; y el enlazador ramificado está fijado en su extremo *-CO al grupo amino épsilon del residuo Lys del péptido GLP-1; o una sal, una amida o un éster farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

DESCRIPCION
Derivados de GLP-1 y sus usos CAMPO DE LA TECNICA
La presente invencion se refiere a derivados de analogos de peptido similar al glucagon 1 (GLP-1), mas en particular 5 a derivados de GLP-1 con una acilacion ramificada y a su uso farmaceutico.
ANTECEDENTES
El documento WO 2005/027978 A2 da a conocer una serie de derivados de GLP-1, incluyendo algunos con una acilacion ramificada de los acidos grasos C12 o C14.
El documento WO 2009/030771 A1 da a conocer una serie de derivados de GLP-1 monoacilados, incluyendo algunos 10 que estan acilados con diacidos grasos C20, a traves de diversas combinaciones de elementos enlazadores.
El documento WO 2012/062803 A1 da a conocer una serie de derivados de GLP-1 doblemente acilados, incluyendo algunos que estan acilados con diacidos grasos C18.
COMPENDIO
La liraglutida es un derivado de GLP-1 para la administracion una vez al dfa. Se distribuye bajo el nombre comercial 15 VICTOZA® por Novo Nordisk AS.
La semaglutida es un derivado de GLP-1 para la administracion una vez a la semana. Esta en desarrollo por Novo Nordisk A/S. Este compuesto se da a conocer en el documento WO 2006/097537 Ejemplo 4.
La invencion se refiere a derivados de GLP-1 que tienen potencial para administrarse una vez al mes.
En un aspecto, la invencion se refiere a un derivado de un analogo de GLP-1 que se acila en un residuo de Lys con 20 dos cadenas de acilo, a traves de uno y el mismo enlazador bis-amino (tambien llamado un enlazador ramificado). El analogo de GLP-1 se puede extender C-terminalmente, en comparacion con el GLP-1 natural. Cada una de las cadenas de acilo se compone de dos diacidos grasos largos, que estan conectados con el enlazador ramificado a traves de un enlazador adicional que comprende un elemento enlazador del tipo OEG (acido amino-dioxa-carboxflico) y op- cionalmente elementos enlazadores adicionales.
25 En un segundo aspecto, la invencion se refiere a composiciones farmaceuticas que comprenden tales derivados y excipientes farmaceuticamente aceptables, asf como al uso medico de los derivados.
En un tercer aspecto, la invencion se refiere a productos intermedios en forma de nuevos analogos de GLP-1, que se pueden incorporar en los derivados de GLP-1 de la invencion. Tales analogos pueden comprender los siguientes cambios de aminoacidos cuando se comparan con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1): iii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39G, 30 40G, 41S, 42K) (SEQ ID NO: 2), iv) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39G, 40S, 41 K) (SEQ ID NO: 3), v) (8Aib, 22E, 26R,
34R, 38G, 39S, 40K) (SEQ ID NO: 4), vii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39K) (SEQ ID NO: 5), viii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39S, 40G, 41A, 42P, 43K) (SEQ ID NO: 9), ix) (8Aib, 26R, 34R, 38K) (SEQ ID NO: 8), x) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38A, 39E, 40A, 41 P, 42K) (SEQ ID NO: 11), xi) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38E, 39P, 40P, 41G, 42K) (SEQ ID NO: 12), xii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38P, 39A, 40E, 41 E, 42K) (SEQ ID NO: 13), xiii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39S, 40P, 41A, 35 42A, 43K) (SEQ ID NO: 14), xiv) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39S, 40A, 41 E, 42G, 43K) (SEQ ID NO: 15), xv) (8Aib,
22E, 26R, 34R, 38S, 39S, 40E, 41A, 42E, 43K) (SEQ ID NO: 16), xvi) (7Imp, 8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39K) (SEQ ID NO: 17) o xvii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 37P, 38K) (SEQ ID NO: 18).
La secuencia de aminoacidos de GLP-1 (7-37) humano natural esta incluida en la lista de secuencias como SEQ ID NO: 1. SEQ ID NOs 2-18 son analogos de gLp-1 espedficos de los derivados de GLP-1 de la invencion y SEQ ID 40 NO: 19 es un analogo de GLP-1 que se incorpora en dos compuestos comparativos.
Los derivados de la invencion representan un salto notable en la busqueda de derivados de GLP-1 con semividas muy largas y todavfa con una potencia muy buena.
BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS
La estructura de los derivados de la invencion se explica con mas detalle en los dibujos, en los que
45 la Fig. 1 muestra la estructura del derivado del Ejemplo 18 con recuadros y lmeas anadidas que muestran la termino-
logfa utilizada en este documento para las diversas partes de la molecula.
DESCRIPCION
En lo que sigue, las letras griegas pueden estar representadas por su sfmbolo o el nombre escrito correspondiente, por ejemplo: a = alfa; p = beta; £ = epsilon; y = gamma; 6 = delta; w = omega; etc. Ademas, la letra griega p puede
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estar representada por "u", por ejemplo, en pl = ul o en pM = uM.
Un asterisco (*) en una formula qmmica designa i) un punto de fijacion, ii) un radical y/o iii) un electron no compartido.
En su primer aspecto, la invencion se refiere a un derivado de un peptido GLP-1, en el que el peptido GLP-1 tiene la formula I:
Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Xaai2-Thr-Ser-Asp-Xaai6-Ser-Xaai8-Xaai9-Xaa20-Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Xaa25-Xaa26-Xaa27-
Phe-Ne-Xaa30-Xaa3i-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38-Xaa39-Xaa40-Xaa4i-Xaa42-Xaa43,
en donde
Xaa7 es L-histidina, acido (S)-2-hidroxi-3-(1H-imidazol-4-il)-propionico, D-histidina, desamino-histidina, homohis- tidina, Na-acetil-histidina, Na-formil-histidina, a-metil-histidina, 3-piridilalanina, 2-piridilalanina o 4-piridilalanina; Xaa8 es Ala, Gly, Ser, Aib, acido (1-aminociclopropil) carbox^lico o acido (1-aminociclobutil) carbox^lico; Xaai2 es Phe o Leu; Xaai6 es Val o Leu; Xaai8 es Ser, Val, Lys, Arg o Leu; Xaai9 es Tyr o Gin; Xaa20 es Leu o Met; Xaa22 es Gly o Glu; Xaa23 es Gln, Glu o Arg; Xaa25 es Ala o Val; Xaa26 es Arg o Lys; Xaa27 es Glu, Lys o Leu; Xaa30 es Ala, Glu o Arg; Xaa3i es Trp o His; Xaa33 es Val, Lys o Arg; Xaa34 es Arg, Lys, His, Asn o Gin; Xaa35 es Gly o Ala; Xaa36 es Arg o Gly; Xaa37 es Gly, Pro o Lys; Xaa38 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente; Xaa39 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente; Xaa40 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente; Xaa4i es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente; Xaa42es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente; y Xaa43 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente; ese peptido GLP-1 comprende un residuo de Lys en una posicion correspondiente a la posicion 27, 37, 38, 39, 40, 41, 42 o 43 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1); cuyo derivado comprende un primer y un segundo resto de accion prolongada seleccionado a partir de Chem. 1 y Chem. 1 a:
Chem. 1: HOOC-(CH2)18-CO-*,
y
Chem. 1 a: HOOC-(CH2)20-CO-*;
un enlazador ramificado de formula Chem. 2:
imagen1
en donde R1 es -(CH2)q-NH-*, en donde q es un numero entero en el intervalo de 0-5, R2 es -(CH2)w-NH-*, en donde w es un numero entero en el intervalo de 0-5, con la condicion de que cuando w es 0, q es un numero entero en el intervalo de 1-5 y cuando q es 0, w es un numero entero en el intervalo de 1-5; y un primer y un segundo enlazador adicional, comprendiendo cada uno un elemento_1 de formula Chem. 3:
imagen2
en la que k es un numero entero en el intervalo de 1-15 y n es un numero entero en el intervalo de 1-5; en donde el primer resto de accion prolongada esta fijado en su extremo *-CO a un primer extremo *-NH del enlazador ramificado, a traves del primer enlazador adicional, el segundo resto de accion prolongada esta fijado en su extremo *-CO a un segundo extremo *-NH del enlazador ramificado, a traves del segundo enlazador adicional; y el enlazador ramificado esta fijado en su extremo *-CO al grupo amino epsilon del residuo de Lys del peptido GLP-1; o una sal, una amida o un ester farmaceuticamente aceptable del mismo.
En su segundo aspecto, la invencion se refiere a una composicion farmaceutica que comprende un derivado de la invencion y un excipiente farmaceuticamente aceptable; y al uso del derivado o analogo de la invencion como un medicamento, en particular para uso en (i) la prevencion y/o el tratamiento de todas las formas de diabetes, tales como hiperglucemia, diabetes de tipo 2, tolerancia alterada a la glucosa, diabetes de tipo 1, diabetes no dependiente de insulina, MODY (diabetes de la edad madura que se presenta en el joven), diabetes gestacional, y/o para la reduccion de la HbA1C; (ii) retrasar o prevenir la progresion de una enfermedad diabetica, tal como la progresion en diabetes de tipo 2, retrasando la progresion de la tolerancia alterada a la glucosa (IGT) a diabetes de tipo 2 que requiere insulina, retrasar o prevenir la resistencia a la insulina, y/o retrasar la progresion de la diabetes de tipo 2 que no requiere insulina a diabetes de tipo 2 que requiere insulina; (iii) mejorar la funcion de las celulas p, tal como disminuyendo la apoptosis de las celulas p, incrementando la funcion de las celulas p y/o la masa de las celulas p, y/o para restaurar la sensibilidad
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a la glucosa de las celulas p; (iv) la prevencion y/o el tratamiento de trastornos cognitivos y/o trastornos neurodegene- rativos, tales como enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson y/o esclerosis multiple; (v) la prevencion y/o el tratamiento de trastornos de la alimentacion, tales como la obesidad, por ejemplo, disminuyendo la ingesta de ali- mentos, reduciendo el peso corporal, suprimiendo el apetito, induciendo saciedad; tratando o evitando el trastorno por atracon, la bulimia nerviosa y/o la obesidad inducida por la administracion de un antipsicotico o un esteroide; reduccion de la motilidad gastrica; retrasando el vaciado gastrico; incrementando la movilidad ffsica; y/o la prevencion y/o el tratamiento de comorbilidades de la obesidad, tales como la osteoartritis y/o la incontinencia urinaria; (vi) la prevencion y/o el tratamiento de complicaciones diabeticas, tales como angiopatfa; neuropatfa, incluyendo neuropatfa periferica; nefropatia; y/o retinopatfa; (vii) mejorando los parametros lip^dicos, como la prevencion y/o el tratamiento de la dislipi- demia, reduciendo los lfpidos sericos totales; incrementado la HDL; reduciendo la LDL pequena densa; reduciendo la VLDL; reduciendo los trigliceridos; reduciendo el colesterol; reduciendo los niveles plasmaticos de lipoprotema a (Lp(a)) en un ser humano; inhibiendo la generacion de apolipoprotema a (apo(a)) in vitro y/o in vivo; (viii) la prevencion y/o el tratamiento de enfermedades cardiovasculares, tales como smdrome X, aterosclerosis, infarto de miocardio, enfermedad cardiaca coronaria, lesion por reperfusion, apoplejfa, isquemia cerebral, enfermedad cardiaca temprana o cardiovascular temprana, hipertrofia ventricular izquierda, enfermedad arterial coronaria, hipertension, hipertension esencial, urgencia hipertensiva aguda, cardiomiopatfa, insuficiencia cardiaca, intolerancia al ejercicio, insuficiencia cardiaca aguda y/o cronica, arritmia, trastornos del ritmo cardfaco, smcope, angina de pecho, reoclusion de una deri- vacion y/o una endoprotesis ca^aca, claudicacion intermitente (aterosclerosis oblitterens), disfuncion diastolica y/o disfuncion sistolica; y/o reduccion de la presion sangumea, tal como una reduccion de la presion arterial sistolica; (ix) la prevencion y/o el tratamiento de enfermedades gastrointestinales, tales como enfermedad intestinal inflamatoria, smdrome de intestino corto o enfermedad de Crohn o colitis; dispepsia; y/o ulceras gastricas; y/o inflamacion, tal como psoriasis, artritis psoriatica, artritis reumatoide y/o lupus eritematoso sistemico; (x) la prevencion y/o el tratamiento de una enfermedad cntica, tal como el tratamiento de un paciente cnticamente enfermo, un paciente con poli-nefropatfa de enfermedad cntica (CIPNP), y/o un paciente con CIPNP potencial; prevencion del desarrollo de una enfermedad cntica o CIPNP; prevencion, tratamiento y/o curacion de un smdrome de respuesta inflamatoria sistemica (SIRS) en un paciente; prevencion o reduccion de la probabilidad de que un paciente padezca bacteriemia, septicemia y/o choque septico durante una hospitalizacion; y/o estabilizacion de la glucosa en sangre, equilibrio de la insulina y opcionalmente el metabolismo en pacientes en unidades de cuidados intensivos con enfermedad aguda; (xi) la prevencion y/o el tratamiento del smdrome de ovario poliqmstico (PCOS); (xii) la prevencion y/o el tratamiento de una enfermedad cerebral, tal como isquemia cerebral, hemorragia cerebral y/o lesion cerebral traumatica; (xiii) la prevencion y/o el tratamiento de la apnea del sueno; y/o (xiv) la prevencion y/o el tratamiento de abuso, tal como abuso de alcohol y/o abuso de drogas.
En su tercer aspecto, la invencion se refiere a un producto intermedio en forma de un analogo de GLP-1, que com- prende los siguientes cambios de aminoacidos en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1):
iii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39G, 40G, 41S, 42K) (SEQ ID NO: 2), iv) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39G, 40S, 41 K) (SEQ ID NO: 3), v) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39S, 40K) (SEQ ID NO: 4), vii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39K) (SEQ ID NO: 5), viii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39S, 40G, 41A, 42P, 43K) (SEQ ID NO: 9), ix) (8Aib, 26R, 34R, 38K) (SEQ ID NO: 8), x) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38A, 39E, 40A, 41 P, 42K) (SEQ ID NO: 11), xi) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38E, 39P, 40P, 41 G, 42K) (SEQ ID NO: 12), xii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38P, 39A, 40E, 41 E, 42K) (SEQ ID NO: 13), xiii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39S, 40P, 41A, 42A, 43K) (SEQ ID NO: 14), xiv) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39S, 40A, 41 E, 42G, 43K) (SEQ ID NO: 15), xv) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39S, 40E, 41A, 42E, 43K) (SEQ ID NO: 16), xvi) (7Imp, 8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39K) (SEQ ID NO: 17), o xvii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 37P, 38K) (SEQ ID nO: 18); o que se selecciona a partir de los siguientes analogos de GlP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1):
i) (8Aib, 22E, 26R, 27K, 34R) (SEQ ID NO: 10), iii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39G, 40G, 41S, 42K) (SEQ ID NO: 2), iv) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39G, 40S, 41K) (SEQ ID NO: 3), v) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39S, 40K) (SEQ ID NO: 4), vii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39K) (SEQ ID NO: 5), viii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39S, 40G, 41A, 42P, 43K) (SEQ ID NO: 9), ix) (8Aib, 26R, 34R, 38K) (SEQ ID NO: 8), x) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38A, 39E, 40A, 41 P, 42K) (SEQ ID NO: 11), xi) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38E, 39P, 40P, 41 G, 42K) (SEQ ID NO: 12), xii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38P, 39A, 40E, 41E, 42K) (SEQ ID NO: 13), xiii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39S, 40P, 41A, 42A, 43K) (SEQ ID NO: 14), xiv) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39S, 40A, 41 E, 42G, 43K) (SEQ ID NO: 15), xv) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39S, 40E, 41A, 42E, 43K) (SEQ ID NO: 16), xvi) (7Imp, 8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39K) (SEQ ID NO: 17) y xvii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 37P, 38K) (SEQ ID NO: 18).
Agonista del receptor de GLP-1
Un agonista de un receptor se puede definir como un analogo que se une a un receptor y que provoca una respuesta tfpica del ligando natural. Un agonista completo se puede definir como uno que provoca una respuesta de la misma magnitud que el ligando natural (vease, por ejemplo, "Principles of Biochemistry", AL Lehninger, DL Nelson, MM Cox, Segunda Edicion, Worth Publishers, 1993, pagina 763).
Asf, por ejemplo, un "agonista del receptor de GLP-1" se puede definir como un compuesto que es capaz de unirse al receptor de GLP-1 y es capaz de activarlo. Y un agonista del receptor de GLP-1 "completo" se puede definir como un
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agonista del receptor de GLP-1 que es capaz de provocar una magnitud de respuesta del receptor de GLP-1 que es similar a la del gLP-1 natural.
CARACTER^STICAS ESTRUCTURALES
Peptidos GLP-1 y analogos
El termino "peptido GLP-1", tal como se usa en esta memoria se refiere a un analogo (o variante) del peptido similar al glucagon 1 humano (GLP-1 (7-37)), cuya secuencia se incluye en el lista de secuencias como SEQ ID NO: 1. El peptido que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 1 tambien se puede designar GLP-1 "natural".
El peptido GLP-1 de la invencion se puede definir por la siguiente formula I:
Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Xaa12-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Xaa18-Xaa19-Xaa20-Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Xaa25--Xaa26Xaa27-
Phe-Ile-Xaa30-Xaa31-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38-Xaa39-Xaa40-Xaa41-Xaa42-Xaa43,
en la que Xaa7 es L-histidina, acido (S)-2-hidroxi-3-(1H-imidazol-4-il)-propionico, D-histidina, desamino-histidina, ho- mohistidina, Na-acetil-histidina, Na-formil-histidina, a-metil-histidina, 3-piridilalanina, 2-piridilalanina o 4-piridilalanina; Xaa8 es Ala, Gly, Ser, Aib, acido (1-aminociclopropil) carboxflico o acido (1-aminociclobutil) carboxflico; Xaa12 es Phe
0 Leu; Xaa-i6 es Val o Leu; Xaa-is es Ser, Val, Lys, Arg o Leu; Xaa-i9 es Tyr o Gln; Xaa20 es Leu o Met; Xaa22 es Gly o Glu; Xaa23 es Gln, Glu o Arg; Xaa25 es Ala o Val; Xaa26 es Arg o Lys; Xaa27 es Glu, Lys o Leu; Xaa30 es Ala, Glu o Arg; Xaa31 es Trp o His; Xaa33 es Val, Lys o Arg; Xaa34 es Arg, Lys, His, Asn o Gin; Xaa35 es Gly o Ala; Xaa36 es Arg o Gly; Xaa37 es Gly, Pro o Lys; Xaa38 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente; Xaa39 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente; Xaa40 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente; Xaa41 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente; Xaa42 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente; y Xaa43 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente; en donde un residuo de Lys esta presente en una posicion correspondiente a la posicion 27, 37, 38, 39, 40, 41,42 o 43 de GLP-
1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
En esta formula, la numeracion de los residuos de aminoacidos sigue la practica establecida en la tecnica para GLP- 1 natural, a saber, que el primer residuo de aminoacido (N-terminal) se numera o concuerda con la posicion n° 7 y los residuos de aminoacidos subsiguientes aguas abajo hacia el extremo C-terminal estan numerados 8, 9, 10 y asf su- cesivamente, hasta el ultimo residuo de aminoacido (C-terminal) que, en GLP-1 natural, es Gly con el numero 37, sin embargo, el peptido de formula I puede tener una cola o una extension C-terminal, tal como se define en la formula, hasta y que incluye la posicion 43.
La numeracion se realiza de manera diferente en la lista de secuencias, en donde al primer residuo de aminoacido de SEQ ID NO: 1 (His) se le asigna el n° 1 y al ultimo (Gly) el n° 31. Sin embargo, en el presente documento se sigue la practica de numeracion establecida en la tecnica, como se ha explicado anteriormente.
Cada uno de los analogos de GLP-1 de los derivados de la invencion se puede describir haciendo referencia a i) el numero del residuo de aminoacido en GLP-1 natural (7-37), que se corresponde con el residuo de aminoacido que esta cambiado (es decir, la posicion correspondiente en GLP-1 natural) y a ii) el cambio real.
En otras palabras, el analogo de GLP-1 de la invencion se puede describir haciendo referencia al peptido GLP-1 (737) natural, es decir, como una variante del mismo en la que se ha cambiado una serie de residuos de aminoacidos en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1) natural. Estos cambios pueden representar, independientemente, una o varias sustituciones, adiciones y/o deleciones de aminoacidos.
Los ejemplos siguientes son ejemplos no limitantes con una nomenclatura analoga adecuada.
El analogo de GLP-1 incorporado en el derivado del Ejemplo 20 en el presente documento, se puede denominar (8Aib, 22E, 26R, 27K, 34R) GLP-1 (7-37). Cuando este analogo del Ejemplo 20 se alinea con GLP-1 natural, el aminoacido en la posicion en el analogo que se corresponde, de acuerdo con el alineamiento, con la posicion 8 en GLP-1 natural es Aib, el aminoacido en la posicion en el analogo que se corresponde con la posicion 22 en GLP-1 natural es E, el aminoacido en la posicion en el analogo que se corresponde con la posicion 26 en GLP-1 natural es R, el aminoacido en la posicion en el analogo que se corresponde con la posicion 27 en GLP-1 natural es K y el aminoacido en la posicion en el analogo que se corresponde con la posicion 34 en GLP-1 natural es R. Todos los demas aminoacidos en ese analogo son identicos a los aminoacidos correspondientes en GLP-1 natural.
A modo de otro ejemplo, el analogo de GLP-1 que se incorpora en el derivado del Ejemplo 2 en el presente documento, se puede denominar (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39G, 40S, 41K) GLP-1 (7-37). Esto ha de entenderse de manera similar a como se ha descrito anteriormente para los aminoacidos en esas posiciones en el analogo que se corres- ponden con las posiciones 8, 22, 26 y 34 de GLP-1 natural, es decir, como un tipo de sustituciones, en comparacion con GLP-1 natural. Las designaciones posteriores han de entenderse como un tipo de adiciones C-terminales, en comparacion con GLP-1 natural. Por ejemplo, 38G se refiere al aminoacido G que se encuentra en el extremo C- terminal del peptido, en la posicion siguiente a la posicion que corresponde a la posicion 37 en GLP-1 natural, cuando el analogo se alinea con GLP-1 natural. Y despues en la siguiente posicion de forma C-terminal tambien sigue una G en la posicion en el analogo que corresponded a la posicion 39 de GLP-1 natural; y una S en la posicion posterior de
forma C-terminal en la posicion en el analogo que corresponded a la posicion 40 de GLP-1 natural; y por ultimo una K en la posicion que corresponded a la posicion 41 de GLP-1 natural.
La formula I general, ha de entenderse de una manera similar.
Los analogos "que comprenden" ciertos cambios especificados pueden comprender cambios adicionales, en compa- 5 racion con SEQ ID NO: 1. En una realizacion particular, el analogo "tiene" los cambios especificados.
Como se desprende de los ejemplos anteriores, los residuos de aminoacidos se pueden identificar por su nombre completo, su codigo de una letra y/o su codigo de tres letras. Estas tres formas son totalmente equivalentes.
Las expresiones "una posicion equivalente a" o "posicion correspondiente" se pueden utilizar para caracterizar el sitio de cambio en una secuencia de una variante de GLP-1 (7-37), haciendo referencia a una secuencia de referencia, tal 10 como GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1) natural. Posiciones equivalentes o correspondientes, asf como el numero de cambios, se deducen facilmente, por ejemplo, mediante simple escritura a mano e inspeccion visual; y/o se puede emplear un programa convencional de alineamiento de protemas o peptidos, tal como "align", que se basa en un algoritmo de Needleman-Wunsch. Este algoritmo se describe en Needleman, S.B. y Wunsch, C.D., (1970), Journal of Molecular Biology, 48: 443-453 y el programa align de Myers y W. Miller en "Optimal Alignments in Linear Space" 15 CABIOS (computer applications in the biosciences) (1988) 4:11-17. Para el alineamiento, se puede utilizar la matriz de puntuacion por defecto BLOSUM62 y la matriz de identidad por defecto y la penalizacion por el primer residuo en un hueco se puede fijar en -12 o preferiblemente en -10 y las penalizaciones por residuos adicionales en un hueco en -2 o preferiblemente en -0,5.
Se ha insertado a continuacion un ejemplo de tal alineamiento, en el que la secuencia n° 1 es SEQ ID NO: 1 y la 20 secuencia n° 2 es el analogo (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39S, 40G, 41A, 42P, 43K) de la misma:
n° de secuencias alineadas: 2
n° 1: 1
n° 2: 2
n° de matriz: EBLOSUM62 25 valor de la penalizacion por hueco: 10,0
valor de la penalizacion por extension: 0,5 valor de la longitud: 37 n° de identidades: 27/37 (73,0%) n° de similitudes: 29/37 (78,4%)
30 n° de huecos: 6/37 (16,2%)
n° de la puntuacion: 143,0
1 1 HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG----- 31
. I I I I I I I I I I I I I . I I I : I I I I I I I : I I I
2 1 HXEGTFTSDVSSYLEEQAAREFIAWLVRGRGSSGAPK 37
Cuando se anade 6 a los numeros de posicion que se muestran en este alineamiento (es decir, a "1" y "31" en la secuencia 1 y a "1" y "37" en la secuencia 2) se obtiene la numeracion de la posicion, tal como se usa en esta memoria. 35 Por ejemplo, en la secuencia 1 (que es identica a SEQ ID NO: 1), el aminoacido N-terminal (H) tiene el numero de posicion 7 y el aminoacido C-terminal (G) tiene el numero 37. En cuanto a la secuencia 2, el aminoacido N-terminal (H) tiene el numero 7 y el aminoacido C-terminal (K) tiene el numero 43.
En caso de que residuos de aminoacidos espedficos o similares sin codon de una letra (como Aib) esten incluidos en la secuencia, estos pueden, con fines de alineamiento, estar sustituidos con, por ejemplo, X, como se muestra en el 40 alineamiento anterior. Si se desea, X se puede corregir manualmente mas adelante.
Los siguientes son ejemplos no limitantes de lo que se puede deducir del alineamiento anterior:
Como un ejemplo se puede inferir que la secuencia 2 tiene 10 cambios de aminoacidos en comparacion con la secuencia 1 (a saber, en todas aquellas posiciones en las que un punto ("."), dos puntos (":") o un guion horizontal ("-") se muestren en el alineamiento).
45 Como otro ejemplo, se puede inferir que, por ejemplo, la secuencia n° 2 comprende 38S, ya que tiene una S en la
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posicion que se corresponde de acuerdo con el alineamiento, con la posicion 38 en la secuencia de referencia (se- cuencia 1, SEQ ID NO: 1).
Y del mismo modo, todos los otros cambios en la secuencia 2, en comparacion con la secuencia 1, se pueden deducir del alineamiento.
El termino "peptido", tal y como se emplea por ejemplo, en el contexto de los analogos de GLP-1 de los derivados de la invencion, se refiere a un compuesto que comprende una serie de aminoacidos interconectados por enlaces amida (o peptido).
Los peptidos de la invencion comprenden al menos i) 31, ii) 32, iii) 33, iv) 34, v) 35, vi) 36 o vii) 37 aminoacidos.
En realizaciones particulares, el peptido se compone de i) 31, ii) 32, iii) 33, iv) 34, v) 35, vi) 36 o vii) 37 aminoacidos.
En realizaciones particulares adicionales, el peptido consiste en i) 31, ii) 32, iii) 33, iv) 34, v) 35, vi) 36 o vii) 37 ami- noacidos.
En una realizacion aun mas particular, el peptido consiste en aminoacidos interconectados por enlaces peptidicos.
Los aminoacidos son moleculas que contienen un grupo amino y un grupo acido carboxflico y, opcionalmente, uno o varios grupos, referidos frecuentemente como cadena lateral.
El termino "aminoacido" incluye aminoacidos proteogenicos (o naturales) (entre los que se encuentran los 20 aminoacidos estandar), asf como aminoacidos no proteogenicos (o no naturales). Los aminoacidos proteogenicos son aque- llos que se incorporan naturalmente en las protemas. Los aminoacidos estandar son aquellos codificados por el codigo genetico. Los aminoacidos no proteogenicos o bien no se encuentran en las protemas o no son producidos por la maquinaria celular convencional (por ejemplo, se pueden haber sometido a una modificacion post-traduccional). Ejem- plos no limitantes de aminoacidos no proteogenicos son Aib (acido a-aminoisobutmco o acido 2-aminoisobutmco), desamino-histidina (nombre alternativo acido imidazopropionico o acido 3-(imidazol-5-il)propanoico, abreviado Imp), asf como los isomeros D de los aminoacidos proteogenicos.
En lo que sigue, todos los aminoacidos del peptido GLP-1 para los que no se indica el isomero optico, se entiende en el sentido de isomero L (a menos que se especifique lo contrario).
Los derivados y analogos de GLP-1 de la invencion tienen actividad de GLP-1. Este termino se refiere a la capacidad de unirse al receptor de GLP-1 e iniciar una via de transduccion de senal que resulta en una accion insulinotropica u otros efectos fisiologicos, tal como se conoce en la tecnica. Por ejemplo, los analogos y los derivados de la invencion se pueden someter a ensayo para estudiar la actividad de GLP-1 usando los ensayos descritos en los Ejemplos 35, 36, 38 o 39 en el presente documento.
Derivados de GLP-1
El termino "derivado", tal como se usa en el presente documento en el contexto de un peptido o analogo de GLP-1, significa un peptido GLP-1 modificado qmmicamente, en el que uno o varios sustituyentes se han fijado covalente- mente al peptido. El sustituyente tambien se puede denominar cadena lateral. En una realizacion particular, la cadena lateral de los derivados de la invencion tiene una estructura ramificada con dos piernas.
En una realizacion particular, la cadena lateral es capaz de formar complejos no covalentes con albumina, promo- viendo con ello la circulacion del derivado con la corriente sangumea y teniendo tambien el efecto de prolongar el tiempo de accion del derivado, debido al hecho de que el complejo de derivado de GLP-1 y albumina solo se desintegra lentamente para liberar el ingrediente farmaceutico activo. Por lo tanto, el sustituyente o la cadena lateral, como un todo, se conoce preferiblemente como resto que se une a la albumina.
En otra realizacion particular, el resto que se une a la albumina comprende una porcion que es particularmente rele- vante para la union a la albumina y, por lo tanto, para la accion prolongada, cuya porcion en consecuencia se puede denominar un resto de accion prolongada. El resto de accion prolongada puede estar cerca, preferiblemente en el extremo terminal (o distal o libre) del resto que se une a la albumina, en relacion con su punto de fijacion al peptido. El resto que se une a la albumina se fija al peptido mediante la acilacion de un residuo de lisina del peptido, en particular, mediante la acilacion con el grupo amino epsilon del residuo de lisina.
Los derivados ramificados de la invencion comprenden un primer y un segundo resto de accion prolongada de formula Chem. 1: HOOC-(CH2)18-CO-* o Chem. 1 a: hOoC-(CH2)2o-CO-*; el cual tambien puede ser denominado diacido C20 o diacido C22, respectivamente.
En una realizacion aun mas particular, el resto que se une a la albumina comprende una porcion entre el resto de accion prolongada y el punto de fijacion al peptido, en donde la porcion puede denominarse un enlazador, resto enla- zador, espaciador o similares. Los derivados ramificados de la invencion comprenden un enlazador bivalente bis- amino o ramificado de formula Chem. 2:
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en la que R1 es -(CH2)q-NH-* en donde q es un numero entero en el intervalo de 0-5, R2 es -(CH2VNH-* en donde w es un numero entero en el intervalo de 0-5, con la condicion de que cuando w es 0, q es un numero entero en el intervalo de 1-5 y cuando q es 0, w es un numero entero en el intervalo de 1-5.
En una realizacion particular, cuando q = 4 y w = 0, Chem. 2 representa un radical-bis amino de Lys, que tambien se puede denominar eps-Lys(Bis), en donde eps representa epsilon, que a su vez se refiere al hecho de que el atomo C en la ramificacion R1 de Chem. 2 al que esta unido el grupo NH-*, se define como el atomo £. Asimismo, cuando w = 4 y q = 0, Chem. 2 representa tambien eps-Lys(Bis).
En una realizacion particular, el enlazador ramificado esta fijado al grupo amino epsilon de un residuo de Lys en el peptido GLP-1 en su extremo CO-*, bajo la formacion de un enlace amida y a cada uno del primer y segundo resto de accion prolongada en cada uno de sus extremos NH-*, respectivamente, a traves de un enlazador adicional que com- prende un elemento_1 de formula Chem. 3:
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en la que k es un numero entero en el intervalo de 1-15 y n es un numero entero en el intervalo de 1-5 y, opcionalmente, uno o varios elementos adicionales de enlazador, tambien bajo de la formacion de enlaces amida.
En una realizacion particular, cuando k = 1 y n = 1, el elemento_1 de Chem. 3 se puede designarOEG o un di-radical de acido 8-amino-3,6-dioxaoctanoico.
Estos son ejemplos adicionales no limitantes de realizaciones particulares del grupo del elemento_1 de Chem. 3:
Cuando k = 3 y n = 2, el elemento_1 se puede designar dPEG4; cuando k = 5 y n = 2, el elemento_1 se puede designar dPEG6; cuando k = 11 y n = 2, el elemento_1 se puede designar dPEG12; y cuando k = 15 y n = 2, el elemento_1 se puede designar dPEG16.
Cada una de las dos cadenas de acilo comprende un resto de accion prolongada como se ha definido anteriormente, fijado a uno o al otro grupo NH-* del enlazador ramificado a traves de un enlazador adicional, en cada una de las dos piernas. Los dos restos de accion prolongada y los dos enlazadores adicionales se pueden denominar primer y segundo resto de accion prolongada y primer y segundo enlazador adicional, respectivamente.
Cada uno de estos enlazadores adicionales comprende el elemento_1 de tipo OEG de Chem.3. Pueden comprender este elemento mas de una vez y pueden comprender elementos enlazadores adicionales, en varias combinaciones.
Cada vez que se dice que el enlazador adicional "comprende" un determinado elemento, puede contener ademas otro elemento enlazador, mientras que el termino "incorpora" se entiende que significa lo mismo que "tiene" o "incluye solamente". Por lo tanto, un enlazador adicional que "incorpora" cinco elementos_1 de formula Chem. 3 tiene solo cinco de esos elementos en su estructura.
En una realizacion particular, cada uno de los enlazadores adicionales del derivado puede comprender, independien- temente, un elemento enlazador de elemento_2, que es un di-radical de Glu de formula Chem. 4:
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El di-radical Glu tambien se puede incluir una o varias veces. Se puede denominar gamma-Glu o brevemente gGlu, debido al hecho de que es el grupo gamma carboxi del aminoacido acido glutamico el que aqrn se utiliza para la conexion con otro elemento enlazador o con el grupo amino epsilon de lisina, como puede ser el caso.
En otras realizaciones adicionales en particular, cada uno de los enlazadores adicionales del derivado puede comprender, independientemente, uno o varios elementos enlazadores adicionales, tales como un elemento_3 de formula Chem. 5, que se puede designar Trx (para el acido tranexamico) o un elemento_4 de formula Chem. 6, que se puede
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designar Inp (acido isonipecotico).
Varias combinaciones particulares de elementos enlazadores se describen con mas detalle a continuacion en la sec- cion titulada "Realizaciones particulares". La secuencia en la que se indican los elementos en esta memoria, es gene- ralmente desde el extremo N-terminal al C-terminal.
Como se ha explicado anteriormente, los derivados de GLP-1 de la invencion estan ramificados con dos piernas, en donde cada una de las cuales se puede denominar en su totalidad restos que se unen a albumina.
En una realizacion particular, los dos restos que se unen a albumina (es decir, las dos piernas) son similares, preferi- blemente sustancialmente identicos o, lo mas preferiblemente, identicos.
En otra realizacion particular, los dos restos de accion prolongada son similares, preferiblemente sustancialmente identicos o, lo mas preferiblemente, identicos.
En una realizacion aun mas particular, los dos enlazadores adicionales son similares, preferiblemente sustancialmente identicos o, lo mas preferiblemente identicos.
La expresion "sustancialmente identico" incluye diferencias en la identidad que son debidas a la formacion de uno o varios esteres y/o amidas; preferentemente la formacion de uno o varios esteres metilicos y amidas simples; mas preferiblemente, la formacion de no mas de dos esteres metflicos y/o amidas simples; o lo mas preferiblemente la formacion de no mas de un ester metflico y/o una amida simple.
En el contexto de compuestos qrnmicos tales como los restos que se unen a la albumina, restos de accion prolongada y enlazadores, la similitud y/o la identidad se puede determinar usando cualquier programa informatico y/o algoritmo adecuado, conocido en la tecnica.
Por ejemplo, la similitud de dos restos de accion prolongada, dos enlazadores y/o dos cadenas laterales completas, se puede determinar adecuadamente usando huellas moleculares. Las huellas es un metodo matematico para repre- sentar una estructura qrnmica (vease, por ejemplo, Chemoinformatics: A textbook, Johann Gasteiger y Thomas Engel (compiladores), Wiley-VCH Verlag, 20O3).
Ejemplos de huellas adecuadas incluyen, sin limitacion, huellas UNITY, huellas MDL y/o huellas ECFP, tales como huellas ECFP_6 (ECFP significa huellas de conectividad extendida).
En realizaciones particulares, los dos restos de accion prolongada, los dos enlazadores y/o las dos cadenas laterales completas se representan como a) huellas ECFP_6; b) huellas UNITY; y/o c) huellas MDL.
El coeficiente de Tanimoto se utiliza preferiblemente para el calculo de la similitud de las dos huellas, ya sea si se emplea a), b) o c).
En realizaciones particulares, si se emplea a), b) o c), los dos restos de accion prolongada, los dos enlazadores y/o las dos cadenas laterales completas, respectivamente, tienen una similitud de al menos 0,5 (50%); preferiblemente al menos 0,6 (60%); mas preferiblemente al menos 0,7 (70%) o al menos 0,8 (80%); incluso mas preferiblemente al menos 0,9 (90%); o mas preferiblemente al menos 0,99 (99%), tal como una similitud de 1,0 (100%).
Las huellas UNITY se pueden calcular utilizando el programa de SYBYL (disponible en Tripos, 1699 South Hanley Road, St. Louis, MO 63144-2319 EE.UU.). Las huellas ECFP_6 y MDL se pueden calcular usando el programa Pipeline Pilot (disponible en Accelrys Inc., 10188 Telesis Corte, Suite 100, San Diego, CA 92121, EE.UU.).
Para mas detalles, vease por ejemplo, J. Chem. Inf. Model. 2008, 48, 542-549; J. Chem. Inf. Comput. Sci. 2004, 44, 170-178; J. Med. Chem. 2004, 47, 2743-2749; J. Chem. Inf. Model. 2010, 50, 742-754; asf como SciTegic Pipeline Pilot Chemistry Collection: Basic Chemistry User Guide, Marzo 2008, SciTegic Pipeline Pilot Data Modeling Collection, 2008 - ambas de Accelrys Software Inc., San Diego, US y las grnas
http://www.tripos.com/tripos_re- sources/fileroot/pdfs/Unity_111408.pdf y
http://www.tripos.com/data/SYBYL/SYBYL_072505.pdf.
Un ejemplo de un calculo de similitud se inserta a continuacion, en el que una cadena lateral completa conocida de un derivado conocido de GLP-1 se comparo con un ester metilico del mismo:
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Con el uso de a) huellas ECFP_6 la similitud es de 0,798, utilizando b) huellas UNITY la similitud es de 0,957; y con el uso de huellas MDL la similitud es de 0,905.
En el caso de dos cadenas laterales identicas (restos que se unen a albumina) el derivado se puede designarsimetrico.
En realizaciones particulares, el coeficiente de similitud es al menos 0,80, preferiblemente al menos 0,85, mas prefe- riblemente al menos 0,90, incluso mas preferiblemente al menos 0,95 o mas preferiblemente al menos 0,99.
Los derivados de la invencion pueden existir en diferentes formas estereoisomericas que tienen la misma formula molecular y la secuencia de atomos unidos, pero que difieren solo en la orientacion tridimensional de sus atomos en el espacio. La estereoisomena de los derivados ejemplificados de la invencion se indica en la seccion experimental, en los nombres asf como en las estructuras, usando la nomenclatura convencional. Salvo que se indique lo contrario, la invencion se refiere a todas las formas estereoisomericas del derivado reivindicado.
La concentracion en plasma de los derivados de GLP-1 de la invencion se puede determinar utilizando cualquier metodo adecuado. Por ejemplo, LC-MS (cromatograffa lfquida con espectroscopia de masas) o inmunoensayos, tales como RIA (radioinmunoensayo, del ingles “Radio Immuno Assay”), ELISA (ensayo por inmunoadsorcion ligado a en- zimas, del ingles “Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay”) y LOCI (inmunoensayo luminiscente de canalizacion de oxfgeno, del ingles “Luminescence Oxygen Channeling Immunoasssay”). Los protocolos generales para los ensayos de RIA y ELISA adecuados se encuentran, por ejemplo, en el documento WO 2009/030738, en las pags. 116-118. Un ensayo preferido es el ensayo LOCI, en donde LOCI se refiere al inmunoensayo luminiscente de canalizacion de oxfgeno, que generalmente ha sido descrito para la determinacion de la insulina por Poulsen y Jensen en Journal of Biomolecular Screening 2007, vol. 12, p. 240-247. Las perlas donantes se recubrieron con estreptavidina, mientras que las perlas aceptoras se conjugaron con un anticuerpo monoclonal que reconoda un epftopo medio/C-terminal del peptido. Otro anticuerpo monoclonal, espedfico para el extremo N-terminal, estaba biotinilado. Los tres reactivos se combinaron con el analito y formaron un inmunocomplejo de dos sitios. La iluminacion del complejo liberaba atomos de oxfgeno singletes a partir de las perlas donantes, que se canalizaron en las perlas aceptoras y provocaron una quimioluminiscencia que se midio en un lector de placas Envision. La cantidad de luz era proporcional a la concentra- cion del compuesto.
Sal, amida o ester farmaceuticamente aceptable
Los derivados, analogos y productos intermedios de la invencion pueden estar en forma de una sal, una amida o un ester farmaceuticamente aceptable.
Las sales se forman, por ejemplo, mediante una reaccion qmmica entre una base y un acido, por ejemplo: 2NH3 + H2SO4 ^ (NH4)2SO4.
La sal puede ser una sal basica, una sal acida o puede que no sea ninguna de las dos (es decir, una sal neutra). Las sales basicas producen iones hidroxido y las sales acidas iones hidronio en agua.
Las sales de los derivados de la invencion se pueden formar con cationes o aniones anadidos entre grupos anionicos o cationicos, respectivamente. Estos grupos pueden estar situados en el resto del peptido, y/o en la cadena lateral de los derivados de la invencion.
Ejemplos no limitantes de grupos anionicos de los derivados de la invencion incluyen grupos carboxflicos libres en la cadena lateral, en su caso, asf como en el resto del peptido. El resto del peptido incluye frecuentemente un grupo de acido carboxflico libre en el extremo C-terminal y tambien puede incluir grupos carboxflicos libres en residuos de ami- noacidos acidos internos, tales como Asp y Glu.
Ejemplos no limitantes de grupos cationicos en el resto del peptido incluyen el grupo amino libre en el extremo N- terminal, si esta presente, asf como cualquier grupo amino libre, de residuos de aminoacidos basicos internos, tales como His, Arg y Lys.
En una realizacion particular, los derivados y los analogos de la invencion son sales basicas. Las sales, por ejemplo, se pueden formar entre grupos anionicos en el resto del peptido y anadir cationes de sodio o de potasio.
El ester de los derivados de la invencion se puede formar, por ejemplo, mediante la reaccion de un grupo de acido carboxflico libre con un alcohol o un fenol, lo que conduce a la sustitucion de al menos un grupo hidroxilo por un grupo alcoxi o ariloxi
La formacion de un ester puede implicar el grupo carboxflico libre en el extremo C-terminal del peptido, y/o cualquier grupo carboxflico libre en la cadena lateral.
La amida de los derivados de la invencion se puede formar, por ejemplo, mediante la reaccion de un grupo de acido carboxflico libre con una amina o una amina sustituida, o mediante la reaccion de un grupo amino libre o sustituido con un acido carboxflico.
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La formacion de amidas puede implicar el grupo carboxflico libre en el extremo C-terminal del peptido, cualquier grupo carboxflico libre en la cadena lateral, el grupo amino libre en el extremo N-terminal del peptido, y/o cualquier grupo amino libre o sustituido del peptido, en el peptido y/o en la cadena lateral.
En una realizacion particular, el peptido o el derivado se encuentra en forma de una sal farmaceuticamente aceptable. En otra realizacion particular, el derivado esta en forma de una amida farmaceuticamente aceptable, preferiblemente con un grupo amida en el extremo C-terminal del peptido. En una realizacion aun mas particular, el peptido o el derivado esta en forma de un ester farmaceuticamente aceptable.
PROPIEDADES FUNCIONALES
En una realizacion particular, los derivados de la invencion tienen una semivida muy larga y al mismo tiempo una potencia muy buena in vitro e in vivo, que los hace potencialmente adecuados para administrarlos una vez al mes.
Por lo tanto, en un primer aspecto funcional, los derivados de la invencion tienen una buena potencia. Ademas o alternativamente, en un segundo aspecto, se unen muy bien al receptor de GLP-1, por ejemplo, a una concentracion elevada de albumina. Preferiblemente son totalmente agonistas del receptor de GLP-1 como se refleja por su capaci- dad para unirse fuertemente al receptor de GLP-1 en combinacion con la capacidad para activar el receptor. Ademas o alternativamente, en un tercer aspecto funcional, han mejorado las propiedades farmacocineticas.
Actividad biologica - potencia in vitro
De acuerdo con el primer aspecto funcional, los derivados de la invencion, asf como los peptidos constituyentes de GLP-1 como tales, son biologicamente activos o potentes.
En una realizacion particular, la potencia y/o la actividad se refiere a la potencia in vitro, es decir, el rendimiento en un ensayo de receptor de GLP-1 funcional, mas en particular, a la capacidad de activar el receptor de GLP-1 humano.
La potencia in vitro se puede determinar, por ejemplo, en un medio que contiene membranas que expresan el receptor de GLP-1 humano, y/o en un ensayo con celulas completas que expresan el receptor de GLP-1 humano.
Por ejemplo, la respuesta del receptor de GLP-1 humano se puede medir en un ensayo de gen informador, por ejemplo, en una lmea de celulas BHK transfectadas de forma estable que expresa el receptor de GLP-1 humano y contiene el ADN para el elemento de respuesta de AMPc (CRE) acoplado a un promotor y el gen de la luciferasa de luciernaga (CRE luciferasa). Cuando se produce el AMPc como resultado de la activacion del receptor de GLP-1, esto a su vez da como resultado que la luciferasa se exprese. La luciferasa se puede determinar mediante la adicion de luciferina, la cual se convierte en oxiluciferina a traves de la enzima y produce bioluminiscencia, la cual se mide y es una medida de la potencia in vitro. Un ejemplo no limitante de un ensayo de este tipo se describe en el Ejemplo 35.
La expresion concentracion media eficaz maxima (CE50) se refiere generalmente a la concentracion que induce una respuesta a mitad de camino entre la lmea base y el maximo, haciendo referencia a la curva de respuesta a la dosis. La CE50 se utiliza como una medida de la potencia de un compuesto y representa la concentracion con la que se observa un 50% de su efecto maximo.
La potencia in vitro de los derivados de la invencion se puede determinar como se ha descrito anteriormente y determinar la CE50 del derivado en cuestion. Cuanto menor sea el valor de CE50, mejor sera la potencia.
En una realizacion particular, los derivados de la invencion son muy potentes, a pesar del hecho de que tienen semi- vidas muy largas. En una realizacion particular, el derivado de la invencion tiene una potencia in vitro determinada utilizando el metodo del Ejemplo 35, correspondiente a una CE50 de 300 pM o inferior.
Actividad biologica - farmacologia in vivo
En otra realizacion particular, los derivados de la invencion, asf como los peptidos constituyentes de GLP-1 como tales, son potentes in vivo, lo que se puede determinar como se conoce en la tecnica en cualquier modelo animal adecuado, asf como en ensayos clmicos.
El raton db/db diabetico es un ejemplo de un modelo animal adecuado y el efecto reductor de la glucosa en sangre y/o del peso corporal se pueden determinar en tales ratones in vivo, por ejemplo, como se describe en el Ejemplo 38. En una realizacion particular, los derivados de la invencion son capaces de disminuir la glucosa en sangre y el peso corporal en ratones db/db durante al menos hasta 96 horas.
El cerdo LYD es otro ejemplo de un modelo animal adecuado y la reduccion de la ingesta de alimentos se puede determinar en un estudio pD en tales cerdos en vivo, por ejemplo, como se describe en el Ejemplo 39.
En una realizacion particular, los derivados de la invencion son muy potentes in vivo y durante un largo tiempo, lo cual se evidencia por los resultados que se encuentran en la parte experimental y tambien a los que se hace referencia en la seccion titulada "Realizaciones particulares".
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Actividad biologica - union del receptor in vitro
De acuerdo con el segundo aspecto funcional, los derivados de la invencion, as^ como los peptidos constituyentes de GLP-1 como tales se unen muy bien al receptor de GLP-1, por ejemplo, a una concentracion elevada de albumina. Esto se puede determinar como se describe en el Ejemplo 36.
En general, la union al receptor de GLP-1 a una concentracion baja de albumina debe lo mejor posible, lo que corres- ponde a un valor de CI50 bajo.
El valor de CI50 a una concentracion alta de albumina refleja la influencia de la seroalbumina sobre la union del derivado con el receptor de GLP-1. Como es sabido, los derivados de GLP-1 se pueden unir a la seroalbumina y, si este es el caso, entonces el valor de CI50 a una seroalbumina elevada, sera mas alto que el valor de Cl50"con menos albumina. Un aumento del valor de CI50 con seroalbumina elevada representa una disminucion de la una union al receptor de GLP-1, causada porque la union a la seroalbumina compite con la union al receptor de GLP-1.
En una realizacion particular, los derivados de la invencion se unen muy bien con el receptor de GLP-1 a una concen- tracion baja de albumina, pero tambien se unen muy bien a una concentracion elevada de albumina.
A modo de ejemplo, en una realizacion particular, la afinidad de la union al receptor de GLP-1 (CI50) de los derivados de la invencion en presencia de 2,0% de HSA (albumina alta) es de 300 nM o inferior.
Perfil farmacocinetico
De acuerdo con el tercer aspecto funcional, los derivados de la invencion tienen propiedades farmacocineticas mejo- radas, tales como un aumento de la semivida terminal, y/o una disminucion del aclaramiento.
El aumento de la semivida terminal y/o la disminucion del aclaramiento significa que el compuesto en cuestion se elimina mas lentamente del cuerpo. Para los derivados de la invencion esto implica una duracion prolongada del efecto farmacologico.
Las propiedades farmacocineticas de los derivados de la invencion se pueden determinar adecuadamente in vivo en estudios farmacocineticos (PK). Tales estudios se llevan a cabo para evaluar como se absorben, distribuyen y se eliminan en el cuerpo los compuestos farmaceuticos y como afectan esos procesos a la concentracion del compuesto en el cuerpo, en el transcurso del tiempo.
En el descubrimiento y la fase preclmica del desarrollo de farmacos farmaceuticos, los modelos animales tales como raton, rata, mono, perro o cerdo se pueden utilizar para realizar esta caracterizacion. Cualquiera de estos modelos se puede utilizar para someter a ensayo las propiedades farmacocineticas de los derivados de la invencion.
En esos estudios, a los animales se les administra tfpicamente una dosis unica del farmaco, ya sea por via intravenosa (i.v.), subcutanea (s.c.) o por via oral (p.o.) en una formulacion relevante. Se toman muestras de sangre en puntos de tiempo predefinidos despues de la dosificacion y las muestras se analizan para estudiar la concentracion del farmaco con un ensayo cuantitativo relevante. Basandose en estas mediciones, se representan graficamente los perfiles de tiempo-concentracion en plasma para el compuesto de estudio y se realiza un analisis farmacocinetico de los datos denominado no compartimentalizado.
Para la mayona de los compuestos, la parte terminal de los perfiles de concentracion-plasma sera lineal cuando se represente en un grafico semilogantmico, lo que refleja que despues de la absorcion y la distribucion inicial, el farmaco se elimina del cuerpo con una tasa fraccional constante. La tasa (lambda Z o Az) es igual a menos la pendiente de la parte terminal del grafico. A partir de esta tasa, tambien se puede calcular una semivida terminal, como t1^ = In(2)/Az (vease, por ejemplo, Johan Gabrielsson y Daniel Weiner: Pharmacokinetics and Pharmacodynamic Data Analysis. Concepts & Applications, 3a ed., Swedish Pharmaceutical Press, Estocolmo (2000)).
El aclaramiento se puede determinar despues de una administracion i.v. y se define como la dosis (D) dividida por el area bajo la curva (AUC) de la concentracion plasmatica frente al perfil de tiempo (Rowland, M y Tozer TN: Clinical Pharmacokinetics: Concepts and Applications, 3a edicion, 1995 Williams Wilkins).
La estimacion de la semivida terminal y/o el aclaramiento es relevante para la evaluacion de los regfmenes de dosifi- cacion y un parametro importante en el desarrollo de farmacos, en la evaluacion de nuevos compuestos de farmacos.
Perfil farmacocinetico - semivida in vivo en cerdos enanos
De acuerdo con el tercer aspecto funcional, los derivados de la invencion han mejorado las propiedades farmacocine- ticas.
En una realizacion particular, las propiedades farmacocineticas se pueden determinar como la semivida terminal (Ty2) in vivo en cerdos enanos despues de una administracion i.v., por ejemplo, como se describe en el Ejemplo 37 en el presente documento.
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En una realizacion particular, los derivados de la invencion tienen una excelente semivida terminal en cerdos enanos que los hace adecuados para la administracion una vez al mes. En una realizacion particular, la semivida terminal de los derivados de la invencion en cerdos enanos despues de una administracion i.v., es de al menos 100 horas.
Realizaciones particulares adicionales de los derivados de la invencion se describen en la seccion titulada "Realiza- ciones particulares" antes de la seccion experimental.
PROCESOS DE PRODUCCION
La produccion de peptidos de tipo GLP-1 (7-37) y analogos de GLP-1 es bien conocida en la tecnica.
El resto GLP-1 de los derivados de la invencion (o sus fragmentos) se puede producir, por ejemplo, mediante smtesis clasica de peptidos, por ejemplo, smtesis de peptidos en fase solida usando qmmica t-Boc o Fmoc u otras tecnicas bien establecidas, vease, por ejemplo, Greene y Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley & Sons, 1999, Florencio Zaragoza Dorwald, "Organic Synthesis on solid Phase", Wiley-VCH Verlag GmbH, 2000 y "Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis", compilado por W.C. Chan y P.D. White, Oxford University Press, 2000.
Ademas, o alternativamente, se pueden producir por metodos recombinantes, a saber, cultivando una celula hospe- dadora que contiene una secuencia de ADN que codifica el analogo y es capaz de expresar el peptido en un medio nutriente adecuado, en condiciones que permiten la expresion del peptido. Ejemplos no limitantes de celulas hospe- dadoras adecuadas para la expresion de estos peptidos son: Escherichia coli, Saccharomyces cerevisiae, asf como lmeas celulares BHK o CHO de mairnfero.
Los derivados de la invencion que incluyen aminoacidos no naturales y/o un mimetico monopeptido o dipeptido fijado covalentemente al extremo N-terminal, por ejemplo, se pueden producir como se describe en la parte experimental. O, vease, por ejemplo, Hodgson et al.: "The synthesis of peptides and proteins containing non-natural amino acids", Chemical Society Reviews, vol. 33, n° 7 (2004), pags. 422-430; y el documento WO 2009/083549 A1 titulado "Semirecombinant preparation of GLP-1 analogues".
Ejemplos espedficos de metodos de preparacion de una serie de los derivados de la invencion, se incluyen en la parte experimental.
COMPOSICIONES FARMACEUTICAS
La invencion tambien se refiere a composiciones farmaceuticas que comprenden un derivado de la invencion o una sal, una amida o un ester farmaceuticamente aceptable del mismo y un excipiente farmaceuticamente aceptable. Tales composiciones se pueden preparar como se conoce en la tecnica.
El termino "excipiente" se refiere en sentido amplio a cualquier componente que no sea el o los ingredientes activos terapeuticos. El excipiente puede ser una sustancia inerte, una sustancia inactiva y/o una sustancia que no es medi- cinalmente activa.
El excipiente puede servir para varios fines, por ejemplo, como un portador, vehmulo, diluyente, ayuda para la forma- cion de comprimidos y/o para mejorar la administracion y/o la absorcion de la sustancia activa.
La formulacion de ingredientes farmaceuticamente activos con diversos excipientes se conoce en la tecnica, vease por ejemplo, Remington: The Science and Practice of Pharmacy (por ejemplo, la edicion 19a (1995) y cualquier edicion posterior).
Ejemplos no limitantes de excipientes son: disolventes, diluyentes, tampones, conservantes, agentes reguladores de la tonicidad, agentes quelantes y estabilizadores.
Los ejemplos de formulaciones incluyen formulaciones lfquidas, es decir, formulaciones acuosas que comprenden agua. Una formulacion lfquida puede ser una solucion o una suspension. Una formulacion acuosa comprende tfpica- mente al menos 50% p/p de agua, o al menos 60%, 70%, 80% o incluso al menos 90% p/p de agua.
Alternativamente, una composicion farmaceutica puede ser una formulacion solida, por ejemplo, una composicion liofilizada o secada por pulverizacion, que se puede utilizar tal cual, o a la que el medico o el paciente anaden disolventes y/o diluyentes antes del uso.
El pH en una formulacion acuosa puede tener cualquier valor entre pH 3 y pH 10, por ejemplo, desde aproximadamente 7,0 a aproximadamente 9,5; o desde aproximadamente 3,0 a aproximadamente 7,0.
Una composicion farmaceutica puede comprender un tampon. El tampon se puede seleccionar, por ejemplo, a partir de acetato de sodio, carbonato de sodio, citrato, glicilglicina, histidina, glicina, lisina, arginina, dihidrogeno fosfato de sodio, hidrogeno fosfato disodico, fosfato sodico y tris(hidroximetil)-aminometano, bicina, tricina, acido malico, succi- nato, acido maleico, acido fumarico, acido tartarico, acido aspartico y mezclas de los mismos.
Una composicion farmaceutica puede comprender un conservante. El conservante se puede seleccionar, por ejemplo,
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a partir defenol, o-cresol, m-cresol, p-cresol, p-hidroxibenzoato de metilo, p-hidroxibenzoato de propilo, 2-fenoxietanol, p-hidroxibenzoato de butilo, 2-feniletanol, alcohol bendlico, clorobutanol y tiomerosal, bronopol, acido benzoico, imi- durea, clorohexidina, deshidroacetato de sodio, clorocresol, p-hidroxibenzoato de etilo, cloruro de bencetonio, clorfe- nesina (3p-clorofenoxipropano-1,2-diol) y mezclas de los mismos. El conservante puede estar presente en una con- centracion de 0,1 mg/ml a 20 mg/ml. Una composicion farmaceutica puede comprender un agente isotonico. El agente isotonico se puede seleccionar, por ejemplo, a partir de una sal (por ejemplo, cloruro de sodio), un azucar o alcohol de azucar, un aminoacido (por ejemplo, glicina, histidina, arginina, lisina, isoleucina, acido aspartico, triptofano, treo- nina), un alditol (por ejemplo, glicerol (glicerina), 1,2-propanodiol (propilenglicol), 1,3-propanodiol, 1,3-butanodiol) po- lietilenglicol (por ejemplo, PEG400) y mezclas de los mismos. Se puede utilizar cualquier azucar tal como mono-, dio polisacaridos, o glucanos hidrosolubles, incluyendo por ejemplo, fructosa, glucosa, manosa, sorbosa, xilosa, mal- tosa, lactosa, sacarosa, trehalosa, dextrano, pululano, dextrina, ciclodextrina, HPCD alfa y beta, almidon soluble, hi- droxietil almidon y carboximetilcelulosa-Na. Alcohol de azucar se define como un hidrocarburo C4-C8 que tiene al menos un grupo -OH e incluye, por ejemplo, manitol, sorbitol, inositol, galactitol, dulcitol, xilitol y arabitol. En una reali- zacion, el alcohol de azucar es manitol.
Una composicion farmaceutica puede comprender un agente quelante. El agente quelante se puede seleccionar, por ejemplo, a partir de sales de acido etilendiaminotetraacetico (EDTA), acido dtrico y acido aspartico y mezclas de los mismos.
Una composicion farmaceutica puede comprender un estabilizador. El estabilizador puede ser, por ejemplo, uno o varios inhibidores de la oxidacion, inhibidores de la agregacion, tensioactivos y/o uno o varios inhibidores de proteasas. Ejemplos no limitantes de estos varios tipos de inhibidores se describen a continuacion.
La expresion "formacion de agregados" se refiere a una interaccion ffsica entre las moleculas de polipeptido, lo que da como resultado la formacion de oligomeros, que pueden permanecer solubles, o grandes agregados visibles que precipitan desde la solucion. La formacion de agregados a traves de un polipeptido durante el almacenamiento de una composicion farmaceutica lfquida, puede afectar adversamente a la actividad biologica de ese polipeptido, proporcio- nando como resultado la perdida de eficacia terapeutica de la composicion farmaceutica. Ademas, la formacion de agregados puede causar otros problemas, tales como el bloqueo de tubos, membranas o bombas, cuando la composicion farmaceutica que contiene el polipeptido se administra utilizando un sistema de infusion.
Una composicion farmaceutica puede comprender una cantidad de una base de aminoacidos suficiente para disminuir la formacion de agregados del polipeptido durante el almacenamiento de la composicion. La expresion "base de aminoacidos" se refiere a uno o a varios aminoacidos (tales como metionina, histidina, imidazol, arginina, lisina, isoleucina, acido aspartico, triptofano, treonina), o analogos de los mismos. Cualquier aminoacido puede estar presente ya sea en su forma de base libre o en su forma de sal. Cualquier estereoisomero (es decir, L, D, o una mezcla de los mismos) de la base de aminoacidos puede estar presente.
La metionina (u otros aminoacidos sulfuricos o analogos de aminoacidos) se puede anadir para inhibir la oxidacion de residuos de metionina a sulfoxido de metionina, cuando el polipeptido que actua como agente terapeutico es un poli- peptido que comprende al menos un residuo de metionina susceptible a tal oxidacion. Se puede emplear cualquier estereoisomero de metionina (L o D) o combinaciones de los mismos.
Una composicion farmaceutica puede comprender un estabilizador seleccionado a partir de polfmeros de peso molecular elevado o compuestos de peso molecular bajo. El estabilizador se puede seleccionar, por ejemplo, a partir de polietilenglicol (por ejemplo, PEG 3350), poli(alcohol vimlico) (PVA), polivinilpirrolidona, carboxi/hidroxicelulosa o deri- vados de los mismos (por ejemplo, HPC, HPC-SL, HPC-L y HPMC), ciclodextrinas, sustancias que contienen azufre tales como monotioglicerol, acido tioglicolico y 2-metiltioetanol y diferentes sales (por ejemplo, cloruro de sodio). Una composicion farmaceutica puede comprender agentes estabilizantes adicionales, tales como, pero no limitados a, metionina y EDTA, que protegen al polipeptido frente a una oxidacion de la metionina y un tensioactivo no ionico, que protege al polipeptido frente a una agregacion asociada con la congelacion-descongelacion o el cizallamiento meca- nico.
Una composicion farmaceutica puede comprender uno o varios tensioactivos. El termino "tensioactivo" se refiere a cualquier molecula o ion que se compone de una parte soluble en agua (hidrofila) y una parte soluble en grasa (lipofila). El tensioactivo se puede seleccionar, por ejemplo, a partir de tensioactivos anionicos, tensioactivos cationicos, tensioactivos no ionicos y/o tensioactivos de ion hubrido.
Una composicion farmaceutica puede comprender uno o varios inhibidores de proteasas, tales como, por ejemplo, EDTA (acido etilendiaminotetraacetico) y/o benzamidinaHCl.
Los ingredientes adicionales, opcionales de una composicion farmaceutica incluyen, por ejemplo, agentes humectan- tes, emulsionantes, antioxidantes, agentes de carga, iones metalicos, vehfculos oleaginosos, protemas (por ejemplo, albumina serica humana, gelatina) y/o un ion hfbrido (por ejemplo, un aminoacido tal como betama, taurina, arginina, glicina, lisina e histidina).
Aun mas, una composicion farmaceutica se puede formular tal y como se conoce en la tecnica de formulaciones orales de compuestos insulinotropicos, por ejemplo, utilizando una cualquiera o varias de las formulaciones descritas en el
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documento WO 2008/145728.
Una dosis administrada puede contener de 0,1 mg-100 mg del derivado, de 1-100 mg del derivado o de 1-50 mg del derivado.
El derivado se puede administrar en forma de una composicion farmaceutica. Se puede administrar a un paciente que lo requiere en varios sitios, por ejemplo, en sitios topicos, tales como la piel o sitios de la mucosa; en sitios en los que se evita una absorcion, tales como en una arteria, en una vena o en el corazon; y en sitios que implican una absorcion, tales como en la piel, debajo la piel, en un musculo o en el abdomen.
La via de administracion puede ser, por ejemplo, lingual; sublingual; bucal; en la boca; oral; en el estomago; en el intestino; nasal; pulmonar, tal como a traves de los bronquiolos, los alveolos o una combinacion de los mismos; parenteral, epidermica; dermica; transdermica; conjuntival; uretral; vaginal; rectal; y/u ocular. Una composicion puede ser una composicion oral y la via de administracion es por via oral.
Una composicion se puede administrar en varias formas de dosificacion, por ejemplo, como una solucion; una suspension; una emulsion; una microemulsion; emulsiones multiples; una espuma; un unguento; una pasta; una tirita; una pomada; un comprimido; un comprimido recubierto; una goma de mascar; un enjuague; una capsula, tal como capsu- las de gelatina dura o blanda; un supositorio; una capsula rectal; gotas; un gel; una pulverizacion; un polvo; un aerosol; un inhalante; gotas para los ojos; una pomada oftalmica; un enjuague oftalmico; un pesario vaginal; un anillo vaginal; una pomada vaginal; una solucion para inyeccion; una solucion de transformacion in situ, tal como un gelificado in situ, sedimentacion, precipitacion y cristalizacion in situ; una solucion para infusion; o como un implante.
Una composicion puede ser un comprimido, opcionalmente recubierto, una capsula o una goma de mascar.
Una composicion se puede preparar ademas en un sistema portador de farmacos o de administracion de farmacos, por ejemplo, con el fin de mejorar la estabilidad, la biodisponibilidad y/o la solubilidad. En una realizacion particular, una composicion se puede fijar a tal sistema a traves de interacciones covalentes, hidrofobas y/o electrostaticas. Los fines de tal preparacion pueden ser, por ejemplo, disminuir los efectos adversos, conseguir una cronoterapia y/o mejorar el cumplimiento del paciente.
Una composicion tambien se puede emplear en la formulacion de sistemas de administracion de farmacos de tipo controlada, sostenida, de accion retardada, retrasada y/o de liberacion lenta.
La administracion parenteral se puede realizar mediante una inyeccion subcutanea, intramuscular, intraperitoneal o intravenosa por medio de una jeringa, opcionalmente una jeringa de tipo pluma, o por medio de una bomba de infusion.
Una composicion se puede administrar por via nasal en forma de una solucion, una suspension o un polvo; o se puede administrar por via pulmonar en forma de una pulverizacion ffquida o en polvo.
La administracion transdermica es otra opcion adicional, por ejemplo, mediante una inyeccion sin aguja, a partir de un parche tal como un parche iontoforetico, o por medio de una via transmucosal, por ejemplo, por via bucal.
Una composicion puede ser una formulacion estabilizada. La expresion "formulacion estabilizada" se refiere a una formulacion con una estabilidad ffsica y/o qmmica incrementadas, preferiblemente ambas. En general, una formulacion debe ser estable durante el uso y el almacenamiento (de conformidad con el uso recomendado y las condiciones de almacenamiento) hasta que se alcanza la fecha de caducidad.
La expresion "estabilidad ffsica" se refiere a la tendencia del polipeptido a formar agregados biologicamente inactivos y/o insolubles, como resultado de una exposicion a estres termomecanico y/o una interaccion con interfases y superficies desestabilizantes (tales como superficies hidrofobicas). La estabilidad ffsica de una formulacion de polipeptido acuoso se puede evaluar por medio de una inspeccion visual y/o por mediciones de la turbidez despues de la exposicion a un estres mecanico/ffsico (por ejemplo, agitacion) a diferentes temperaturas, durante diversos penodos de tiempo. Alternativamente, la estabilidad ffsica se puede evaluar usando un agente espectroscopico o una sonda del estado conformacional del polipeptido, tal como por ejemplo, sondas de tioflavina T o "parche hidrofobo".
La expresion "estabilidad qmmica" se refiere a cambios qmmicos (en particular covalentes) en la estructura del poli- peptido, que conducen a la formacion de productos de degradacion qmmica, que tienen potencialmente una potencia biologica reducida y/o un aumento del efecto inmunogenico, en comparacion con el polipeptido intacto. La estabilidad qmmica se puede evaluar midiendo la cantidad de productos de degradacion qmmica en varios puntos de tiempo, despues de la exposicion a diferentes condiciones ambientales, por ejemplo, mediante SEC-HPLC y/o RP-HPLC.
El tratamiento con un derivado de acuerdo con la presente invencion tambien se puede combinar con una o varias sustancias farmacologicamente activas adicionales, por ejemplo, seleccionadas a partir de agentes antidiabeticos, agentes antiobesidad, agentes reguladores del apetito, agentes antihipertensores, agentes para el tratamiento y/o la prevencion de complicaciones resultantes o asociadas con la diabetes y agentes para el tratamiento y/o la prevencion de complicaciones y trastornos resultantes o asociados con la obesidad. Ejemplos de estas sustancias farmacologi-
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camente activas son: insulina, sulfonilureas, biguanidas, meglitinidas, inhibidores de glucosidasa, antagonistas de glucagon, inhibidores de DPP-IV (dipeptidil peptidasa-IV), inhibidores de enzimas hepaticas implicadas en la estimulacion de la gluconeogenesis y/o la glucogenolisis, moduladores de la captacion de glucosa, compuestos que modifican el metabolismo de los Kpidos, tales como agentes antihiperlipidemicos como los inhibidores de HMG CoA (estatinas), polipeptidos inhibidores gastricos (analogos de GIP), compuestos que reducen la ingesta de alimento, agonistas de RXR y agentes que actuan sobre el canal de potasio dependiente de ATP de las celulas p; colestiramina, colestipol, clofibrato, gemfibrozil, lovastatina, pravastatina, simvastatina, probucol, dextrotiroxina, neteglinida, repaglinida; p-blo- queantes tales como alprenolol, atenolol, timolol, pindolol, propranolol y metoprolol, inhibidores de aCe (enzima con- vertidora de angiotensina) tales como benazepril, captopril, enalapril, fosinopril, lisinopril, alatriopril, quinapril y ramipril, bloqueantes de los canales de calcio tales como nifedipina, felodipina, nicardipina, isradipina, nimodipina, diltiazem y verapamil y a-bloqueantes tales como doxazosina, urapidil, prazosina y terazosina; agonistas de CART (transcrito regulado por cocama y anfetamina), antagonistas de NPY (neuropeptido Y), agonistas de PYY, agonistas del receptor Y2, agonistas del receptor Y4, agonistas del receptor mixto Y2/Y4, agonistas de MC4 (melanocortina 4), antagonistas de orexina, agonistas de TNF (factor de necrosis tumoral), agonistas de CRF (factor liberador de corticotropina), antagonistas de CRF BP (protema que se une al factor liberador de corticotropina), agonistas de urocortina, agonistas de p3, oxintomodulina y analogos, agonistas de MSH (hormona estimulante de melanocitos), antagonistas de MCH (hormona concentradora de melanocitos), agonistas de CCK (colecistoquinina), inhibidores de la recaptacion de sero- tonina, inhibidores de la recaptacion de serotonina y noradrenalina, compuestos mixtos de serotonina y noradrenergi- cos, agonistas de 5HT (serotonina), agonistas de bombesina, factor de crecimiento de fibroblastos 21 (EGF-21), antagonistas de galanina, hormona de crecimiento, compuestos liberadores de la hormona del crecimiento, agonistas de TRH (hormona liberadora de tireotropina), moduladores de UCP 2 o 3 (protema de desacoplamiento 2 o 3), agonistas de leptina, agonistas de DA (bromocriptina, doprexina), inhibidores de lipasa/amilasa, moduladores de RXR (receptor retinoide X), p agonistas de TR; antagonistas de histamina H3, agonistas o antagonistas del polipeptido inhibidor gastrico (analogos de GIP), gastrina y analogos de gastrina.
El tratamiento con un derivado de acuerdo con esta invencion tambien se puede combinar con una cirugfa que influye en los niveles de glucosa y/o la homeostasis de lfpidos, tal como la banda gastrica o derivacion gastrica
INDICACIONES FARMACEUTICAS
La presente invencion tambien se refiere a un derivado de la invencion, para uso como un medicamento.
En realizaciones particulares, el derivado de la invencion se puede usar para los siguientes tratamientos medicos:
(i) prevencion y/o tratamiento de todas las formas de diabetes, tales como hiperglucemia, diabetes de tipo 2, tolerancia alterada a la glucosa, diabetes de tipo 1, diabetes no dependiente de insulina, MODY (diabetes de la edad madura que se presenta en el joven), diabetes gestacional y/o para la reduccion de HbAIC;
(ii) retraso o prevencion de la progresion de una enfermedad diabetica, tal como la progresion en diabetes de tipo 2, retraso de la progresion de la tolerancia alterada a la glucosa (IGT) a diabetes de tipo 2 que requiere insulina, retraso o prevencion de la resistencia a la insulina y/o retraso de la progresion de la diabetes de tipo 2 que no requiere insulina a diabetes de tipo 2 que requiere insulina;
(iii) mejora de la funcion de las celulas p, tal como disminuyendo la apoptosis de las celulas p, aumentando la funcion de las celulas p y/o la masa de las celulas p y/o para restaurar la sensibilidad a la glucosa de las celulas
p;
(iv) prevencion y/o tratamiento de trastornos cognitivos y/o trastornos neurodegenerativos, tales como enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson y/o esclerosis multiple;
(v) prevencion y/o tratamiento de trastornos de la alimentacion, tales como la obesidad, por ejemplo, mediante una disminucion de la ingesta de alimentos, reduccion del peso corporal, supresion del apetito, induccion de saciedad; tratamiento o prevencion del trastorno por atracon, bulimia nerviosa y/u obesidad inducida por la ad- ministracion de un antipsicotico o un esteroide; reduccion de la motilidad gastrica; retraso del vaciado gastrico; aumento de la movilidad ffsica; y/o prevencion y/o tratamiento de comorbilidades de la obesidad, tales como la osteoartritis y/o incontinencia urinaria;
(vi) prevencion y/o tratamiento de complicaciones diabeticas, tales como angiopatfa; neuropatfa, incluyendo neu- ropatfa periferica; nefropatfa; y/o retinopatfa;
(vii) mejora de los parametros lipfdicos, tal como prevencion y/o tratamiento de la dislipidemia, reduccion de los lfpidos sericos totales; incremento de HDL; reduccion de LDL pequena y densa; reduccion de VLDL; reduccion de los trigliceridos; reduccion del colesterol; reduccion de los niveles plasmaticos de lipoprotema a (Lp(a)) en un ser humano; inhibicion de la generacion de apolipoprotema a (apo(a)) in vitro y/o in vivo;
(viii) prevencion y/o tratamiento de enfermedades cardiovasculares, como el smdrome X; aterosclerosis; infarto de miocardio; enfermedad cardiaca coronaria; lesion por reperfusion, accidente cerebrovascular, isquemia cerebral; una enfermedad cardiovascular temprana o cardiaca temprana, hipertrofia ventricular izquierda; enfermedad
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arterial coronaria; hipertension; hipertension esencial; emergencia por hipertension aguda; cardiomiopatia; insu- ficiencia ca^aca; intolerancia al ejercicio; insuficiencia cardiaca aguda y/o cronica; arritmia; trastorno del ritmo cardfaco; smcope; angina de pecho; reoclusion de una derivacion y/o una endoprotesis ca^aca; claudicacion intermitente (arterioesclerosis obliterante); disfuncion diastolica; y/o disfuncion sistolica; y/o reduccion de la pre- sion sangumea, tal como reduccion de la presion sangumea sistolica;
(ix) prevencion y/o tratamiento de enfermedades gastrointestinales, tales como smdrome de intestino inflamato- rio; smdrome del intestino delgado, o enfermedad de Crohn o colitis; dispepsia; y/o ulceras gastricas; y/o infla- macion, tal como psoriasis, artritis psoriatica, artritis reumatoide y/o lupus eritematoso sistemico;
(x) prevencion y/o tratamiento de enfermedad cntica, tal como el tratamiento de un paciente con enfermedad cntica, una polinefropatfa del paciente cntico (CIPNP) y/o un paciente con CIPNP potencial; prevencion del desa- rrollo de enfermedad cntica o CIPNP; prevencion, tratamiento y/o curacion del smdrome de respuesta inflamato- ria sistemica (SIRS) en un paciente; prevencion o reduccion de la probabilidad de que un paciente padezca bacteriemia, septicemia y/o choque septico durante una hospitalizacion; y/o estabilizacion de la glucosa en san- gre, equilibrio de la insulina y opcionalmente el metabolismo en pacientes de unidades de cuidados intensivos con enfermedad aguda;
(xi) prevencion y/o tratamiento del smdrome de ovario poliqrnstico (PCOS).
(xii) prevencion y/o tratamiento de enfermedad cerebral, tal como isquemia cerebral, hemorragia cerebral y/o lesion cerebral traumatica;
(xiii) prevencion y/o tratamiento de la apnea del sueno; y/o
(xiv) prevencion y/o tratamiento de abuso, tal como abuso de alcohol y/o abuso de drogas.
En una realizacion particular, la indicacion se selecciona a partir del grupo que consiste en (i)-(xiv), tal como las indi- caciones (i)-(viii), (x)-(xiii) y/o (xiv) y se refiere de un modo u otro a la diabetes.
En otra realizacion particular, la indicacion se selecciona a partir del grupo que consiste en (i)-(iii) y (v)-(viii), tal como las indicaciones (i), (ii) y/o (iii); o la indicacion (v), indicacion (vi), indicacion (vii), y/o la indicacion (viii).
En una realizacion aun mas particular, la indicacion es (i). En una realizacion adicional particular, la indicacion es (v). En una realizacion aun mas particular, la indicacion es (viii).
Las siguientes indicaciones son particularmente preferidas: diabetes de tipo 2 y/u obesidad.
REALIZACIONES PARTICULARES
Las siguientes son realizaciones particulares de la invencion:
1. Un derivado de un peptido GLP-1, en el que el peptido GLP-1 tiene la formula I:
Formula I: Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Xaa12-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Xaa18-Xaa1g-Xaa20-Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Xaa25-
Xaa26Xaa27-Phe-Ne-Xaa30-Xaa31-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38-Xaa39-Xaa40-Xaa42-Xaa42-Xaa43,
en donde
Xaa7 es L-histidina, acido (S)-2-hidroxi-3-(1H-imidazol-4-il)-propionico, D-histidina, desamino-histidina, homohis- tidina, Na-acetil-histidina, Na-formil-histidina, a-metil-histidina, 3-piridilalanina, 2-piridilalanina o 4-piridilalanina;
Xaa8 es Ala, Gly, Ser, Aib, acido (1-aminociclopropil) carboxflico o acido (1-aminociclobutil) carboxflico;
Xaa12
es Phe o Leu;
Xaa16
es Val o Leu;
Xaa18
es Ser, Val, Lys, Arg o Leu
Xaa1g
es Tyr o Gin;
Xaa20
es Leu o Met;
Xaa22
es Gly o Glu;
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es Gln, Glu o Arg;
Xaa25
es Ala o Val;
Xaa26
es Arg o Lys;
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Xaa27 es Glu, Lys o Leu;
Xaa30 es Ala, Glu o Arg;
Xaa3i es Trp o His;
Xaa33 es Val, Lys o Arg;
Xaa34 es Arg, Lys, His, Asn o Gin;
Xaa35 es Gly o Ala;
Xaa36 es Arg o Gly;
Xaa37 es Gly, Pro o Lys;
Xaa38 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente;
Xaa39 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente;
Xaa40 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente;
Xaa4i es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente;
Xaa42 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente; y
Xaa43 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente;
en donde el peptido GLP-1 comprende un residuo de Lys en una posicion correspondiente a la posicion 27, 37, 38, 39, 40, 41, 42 o 43 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1); cuyo derivado comprende
un primer y un segundo resto de accion prolongada seleccionado a partir de Chem. 1 y Chem. 1 a:
Chem. 1: HOOC-(CH2)18-CO-*, y
Chem. 1 a: HOOC-(CH2)20-CO-*;
un enlazador ramificado de formula Chem. 2:
imagen7
en donde
R1 es -(CH2)q-NH-*, en donde q es un numero entero en el intervalo de 0-5,
R2 es -(CH2)w-NH-*, en donde w es un numero entero en el intervalo de 0-5,
con la condicion de que cuando w es 0, q es un numero entero en el intervalo de 1-5 y cuando q es 0, w es un numero entero en el intervalo de 1-5; y
un primer y un segundo enlazador adicional, comprendiendo cada uno un elemento_1 de formula Chem. 3:
imagen8
en la que k es un numero entero en el intervalo de 1-15 y n es un numero entero en el intervalo de 1-5; en donde
el primer resto de accion prolongada esta fijado en su extremo *-CO a un primer extremo *-NH del enlazador ramificado, a traves del primer enlazador adicional,
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el segundo resto de accion prolongada esta fijado en su extremo *-CO a un segundo extremo *-NH del enlazador ramificado, a traves del segundo enlazador adicional; y
el enlazador ramificado esta fijado en su extremo *-CO al grupo amino epsilon del residuo de Lys del peptido GLP-1; o una sal, una amida o un ester farmaceuticamente aceptable del mismo.
2. El derivado de la realizacion 1, en el que q = 4 y w = 0.
3. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-2, en donde Chem. 2 representa eps-Lys(Bis).
4. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-3, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno comprende al menos un elemento_1 de formula Chem. 3.
5. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-4, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno comprende al menos dos elementos_1 de formula Chem. 3.
6. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-5, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno comprende al menos tres elementos_1 de formula Chem. 3.
7. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-6, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno comprende al menos cuatro elementos_1 de formula Chem. 3.
8. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-7, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno comprende al menos cinco elementos_1 de formula Chem. 3.
9. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-8, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno comprende al menos seis elementos_1 de formula Chem. 3.
10. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-9, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno incorpora un elemento_1 de formula Chem. 3.
11. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-10, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno incorpora dos elementos_1 de formula Chem. 3.
12. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-11, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno incorpora tres elementos_1 de formula Chem. 3.
13. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-12, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno incorpora cuatro elementos_1 de formula Chem. 3.
14. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-13, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno incorpora cinco elementos_1 de formula Chem. 3.
15. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-14, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno incorpora seis elementos_1 de formula Chem. 3.
16. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-15, en el que n es 1 o 2.
17. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-16, en el que k es 1, 3, 5, 11 o 15.
18. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-17, en el que k = 1 y n = 1.
19. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-18, en el que Chem. 3 representa OEG.
20. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-19, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno incorpora 2xOEG, 3xOEG, 4xOEG, 5xOeG o 6xOEG.
21. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-20, en el que n = 2 y k = 3.
22. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-21, en el que Chem. 3 representa dPEG4.
23. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-22, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno incorpora 3xdPEG4.
24. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-23, en el que n = 2 y k = 5.
25. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-24, en el que Chem. 3 representa dPEG6.
26. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-25, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno incorpora 2xdPEG6.
5
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30
27. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-26, en el que n = 2 y k = 11.
28. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-27, en el que Chem. 3 representa dPEG12.
29. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-28, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno incorpora 1xdPEG12.
30. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-29, en el que n = 2 y k = 15.
31. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-30, en el que Chem. 3 representa dPEG16.
32. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-31, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno incorpora 1xdPEG16.
33. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-32, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno incorpora un grupo *-NH o *-N y un grupo *-CO.
34. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-33, en el que
un enlace amida conecta el extremo *-CO del primer resto de accion prolongada con el extremo *-NH o *-N del primer enlazador adicional y un enlace amida conecta el extremo *-CO del primer enlazador adicional con el primer extremo *-NH del enlazador ramificado; y un enlace amida conecta el extremo *-CO del segundo resto de accion prolongada con el extremo *-NH o *-N del segundo enlazador adicional y un enlace amida conecta el extremo *-CO del segundo enlazador adicional con el segundo extremo *-NH del enlazador ramificado.
35. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-34, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno comprende un elemento_2 de formula Chem. 4:
imagen9
36. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-35, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno incorpora un elemento_2 de formula Chem. 4:
imagen10
37. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-36, en el que Chem. 4 representa gGlu.
38. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-37, en el que Chem. 4 representa la forma L de gGlu.
39. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-38, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno comprende un elemento_3 de formula Chem. 5:
imagen11
40. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-39, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno incorpora un elemento_3 de formula Chem. 5:
Chem. 5:
5
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imagen12
41. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-40, en el que Chem. 5 representa Trx.
42. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-41, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno comprende un elemento_4 de formula Chem. 6:
imagen13
43. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-42, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno incorpora un elemento_4 de formula Chem. 6:
imagen14
44. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-43, en el que Chem. 6 representa Inp.
45. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-44, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno consiste en un elemento_2 de formula Chem. 4 y dos elementos_1 de formula Chem. 3, en donde k = 1 y n = 1, interconectados a traves de enlaces amida y en la secuencia indicada.
46. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-45, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno consiste en un elemento_4 de formula Chem. 6, un elemento_2 de formula Chem. 4 y dos elemen- tos_1 de formula Chem. 3 en donde k = 1 y n = 1, interconectados a traves de enlaces amida y en la secuencia indicada.
47. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-46, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno consiste en un elemento_3 de formula Chem. 5, un elemento_2 de formula Chem. 4 y dos elemen- tos_1 de formula Chem. 3 en donde k = 1 y n = 1, interconectados a traves de enlaces amida y en la secuencia indicada.
48. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-47, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno consiste en un elemento_3 de formula Chem. 5, un elemento_2 de formula Chem. 4 y tres elemen- tos_1 de formula Chem. 3 en donde k = 1 y n = 1, interconectados a traves de enlaces amida y en la secuencia indicada.
49. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-48, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno consiste en un elemento_3 de formula Chem. 5, un elemento_2 de formula Chem. 4 y cuatro elementos_1 de formula Chem. 3 en donde k = 1 y n = 1, interconectados a traves de enlaces amida y en la secuencia indicada.
50. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-49, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno consiste en un elemento_3 de formula Chem. 5, un elemento_2 de formula Chem. 4 y cinco ele- mentos_1 de formula Chem. 3 en donde k = 1 y n = 1, interconectados a traves de enlaces amida y en la secuencia indicada.
51. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-50, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno consiste en un elemento_3 de formula Chem. 5, un elemento_2 de formula Chem. 4 y seis elemen- tos_1 de formula Chem. 3 en donde k = 1 y n = 1, interconectados a traves de enlaces amida y en la secuencia indicada.
52. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-51, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador
5
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50
adicional cada uno consiste en un elemento_3 de formula Chem. 5, un elemento_2 de formula Chem. 4 y tres elemen- tos_1 de formula Chem. 3 en donde k = 3 y n = 2, interconectados a traves de enlaces amida y en la secuencia indicada.
53. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-52, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno consiste en un elemento_3 de formula Chem. 5, un elemento_2 de formula Chem. 4 y dos elemen- tos_1 de formula Chem. 3 en donde k = 5 y n = 2, interconectados a traves de enlaces amida y en la secuencia indicada.
54. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-53, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno consiste en un elemento_3 de formula Chem. 5, un elemento_2 de formula Chem. 4 y un elemental de formula Chem. 3 en donde k = 11 y n = 2, interconectados a traves de enlaces amida y en la secuencia indicada.
55. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-54, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno consiste en un elemento_3 de formula Chem. 5, un elemento_2 de formula Chem. 4 y un elemental de formula Chem. 3 en donde k = 15 y n = 2, interconectados a traves de enlaces amida y en la secuencia indicada.
56. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-55 que comprende un residuo de Lys en una posicion correspon- diente a la posicion 27 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
57. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-56 que comprende un residuo de Lys en una posicion correspon- diente a la posicion 37 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
58. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-57 que comprende un residuo de Lys en una posicion correspon- diente a la posicion 38 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
59. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-58 que comprende un residuo de Lys en una posicion correspon- diente a la posicion 39 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
60. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-59 que comprende un residuo de Lys en una posicion correspon- diente a la posicion 40 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
61. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-60 que comprende un residuo de Lys en una posicion correspon- diente a la posicion 41 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
62. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-61 que comprende un residuo de Lys en una posicion correspon- diente a la posicion 42 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
63. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-62 que comprende un residuo de Lys en una posicion correspon- diente a la posicion 43 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
64. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-63, en el que cada uno del primer y el segundo resto de accion prolongada es Chem. 1.
65. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-64, en el que cada uno del primer y el segundo resto de accion prolongada es Chem. 1 a.
66. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-65, en el que en la Formula I:
(i) Xaayes L-histidina, acido (S)-2-hidroxi-3-(1H-imidazol-4-il)-propionico, D-histidina, desamino-histidina, Na-ace- til-histidina, Na-formil-histidina, a-metil-histidina; Xaas es Ala, Gly, Ser, Aib, acido (1-aminociclopropil) carboxflico o acido (1-aminociclobutil) carboxflico; Xaa-i2 es Phe; Xaa-i6 es Val o Leu; Xaa-ia es Ser, Lys o Arg; Xaa-ig es Tyr o Gin; Xaa20 es Leu o Met; Xaa22 es Gly o Glu; Xaa23 es Gln, Glu o Arg; Xaa25 es Ala o Val; Xaa26 es Arg o Lys; Xaa27 es Glu, Lys o Leu; Xaa30 es Ala o Glu; Xaa31 es Trp o His; Xaa33 es Val, Lys o Arg; Xaa34 es Arg, Lys, His o Asn; Xaa35 es Gly; Xaa36 es Arg o Gly; Xaa37 es Gly, Pro o Lys; Xaa38 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente; Xaa39 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente; Xaa40 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente; Xaa41 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente; Xaa42 es Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente; y Xaa43 es Lys o esta ausente;
o, preferiblemente,
(ii) Xaa7 es L-histidina o desamino-histidina; Xaa8 es Aib; Xaa-i2 es Phe; Xaa-i6 es Val; Xaa-i8 es Ser; Xaa-^ es Tyr; Xaa20 es Leu; Xaa22 es Gly; Xaa23 es Gin; Xaa25 es Ala; Xaa26 es Arg; Xaa27 es Glu o Lys; Xaa30 es Ala; Xaa31 es Trp; Xaa33 es Val; Xaa34 es Arg; Xaa35 es Gly; Xaa36 es Arg; Xaa37 es Gly, Pro o Lys; Xaa38 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente; Xaa39 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente; Xaa40 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente; Xaa41 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente; Xaa42 es Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente; y Xaa43 es Lys o esta ausente.
5
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67. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-66, en el que
i) si Xaa42 esta ausente, entonces Xaa43 tambien esta ausente; y/o
ii) si Xaa4i esta ausente, entonces Xaa42 y Xaa43 tambien estan ausentes.
68. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-67, en el que si Xaa40 esta ausente, entonces Xaa4i, Xaa42 y Xaa43 tambien estan ausentes.
69. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-68, en el que si Xaa39 esta ausente, entonces Xaa40, Xaa41, Xaa42 y Xaa43 tambien estan ausentes.
70. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-69, en el que si Xaa38 esta ausente, entonces Xaa39, Xaa40, Xaa41, Xaa42 y Xaa43 tambien estan ausentes.
71.
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-70, en el que Xaa7 es His.
72.
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-71, en el que Xaa7 es desamino-histidina
73.
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-72, en el que Xaa8 es Aib.
74.
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-73, en el que Xaa12 es Phe.
75.
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-74, en el que Xaa16 es Val.
CD
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-75, en el que Xaa18 es Ser.
77.
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-76, en el que Xaa19 es Tyr.
78.
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-77, en el que Xaa20 es Leu.
79.
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-78, en el que Xaa22 es Gly.
80.
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-79, en el que Xaa22 es Glu.
81.
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-80, en el que Xaa23 es Gin.
82.
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-81, en el que Xaa25 es Ala.
CO CO
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-82, en el que Xaa26 es Arg.
84.
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-83, en el que Xaa27 es Glu.
85.
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-84, en el que Xaa27 es Lys.
CD CO
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-85, en el que Xaa30 es Ala.
CO
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-86, en el que Xaa31 es Trp.
OO CO
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-87, en el que Xaa33 es Val.
89.
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-88, en el que Xaa34 es Arg.
CD o
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-89, en el que Xaa35 es Gly.
91.
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-90, en el que Xaa36 es Arg.
92.
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-91, en el que Xaa37 es Gly.
93.
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-92, en el que Xaa37 es Lys.
CD 4^
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-93, en el que Xaa37 es Pro.
95.
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-94, en el que Xaa38 es Ser.
CD O)
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-95, en el que Xaa38 es Gly.
CD ^1
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-96, en el que Xaa38 es Lys.
CD CO
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-97, en el que Xaa38 esta ausente.
99.
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-98, en el que Xaa38 es Ala.
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35
100. El derivado de
101. El derivado de
102. El derivado de
103. El derivado de
104. El derivado de
105. El derivado de
106. El derivado de
107. El derivado de
108. El derivado de
109. El derivado de
110. El derivado de
111. El derivado de
112. El derivado de
113. El derivado de
114. El derivado de
115. El derivado de
116. El derivado de
117. El derivado de
118. El derivado de
119. El derivado de
120. El derivado de
121. El derivado de
122. El derivado de
123. El derivado de
124. El derivado de
125. El derivado de
126. El derivado de
127. El derivado de
128. El derivado de
129. El derivado de
130. El derivado de
131. El derivado de de aminoacidos, en
132. El derivado de de aminoacidos, en
133. El derivado de de aminoacidos, en
134. El derivado de
cualquiera de cualquiera de cualquiera de cualquiera de cualquiera de cualquiera de cualquiera de cualquiera de cualquiera de cualquiera de cualquiera de cualquiera de cualquiera de cualquiera de cualquiera de cualquiera de cualquiera de cualquiera de cualquiera de cualquiera de cualquiera de cualquiera de cualquiera de cualquiera de cualquiera de cualquiera de cualquiera de cualquiera de cualquiera de cualquiera de cualquiera de cualquiera de
cualquiera de
cualquiera de
as realizaciones 1-99, en e as realizaciones 1-100, en as realizaciones 1-101, en as realizaciones 1-102, en as realizaciones 1-103, en as realizaciones 1-104, en as realizaciones 1-105, en as realizaciones 1-106, en as realizaciones 1-107, en as realizaciones 1-108, en as realizaciones 1-109, en as realizaciones 1-110, en as realizaciones 1-111, en as realizaciones 1-112, en as realizaciones 1-113, en as realizaciones 1-114, en as realizaciones 1-115, en as realizaciones 1-116, en as realizaciones 1-117, en as realizaciones 1-118, en as realizaciones 1-119, en as realizaciones 1-120, en as realizaciones 1-121, en as realizaciones 1-122, en as realizaciones 1-123, en as realizaciones 1-124, en as realizaciones 1-125, en as realizaciones 1-126, en as realizaciones 1-127, en as realizaciones 1-128, en as realizaciones 1-129, en
l que Xaa38 es Glu. la que Xaa38 es Pro. la que Xaa39 es Ser. la que Xaa39 es Gly. la que Xaa39 es Lys. la que Xaa39 esta ausente. la que Xaa39 es Ala. la que Xaa39 es Glu. la que Xaa39 es Pro. la que Xaa40 es Ser. la que Xaa40 es Gly. la que Xaa40 es Lys. la que Xaa40 esta ausente. la que Xaa40 es Ala. la que Xaa40 es Glu. la que Xaa40 es Pro. la que Xaa41 es Ser. la que Xaa41 es Ala. la que Xaa41 es Lys. la que Xaa41 esta ausente. la que Xaa41 es Gly. la que Xaa41 es Glu. la que Xaa41 es Pro. la que Xaa42 es Pro. la que Xaa42 es Lys. la que Xaa42 esta ausente. la que Xaa42 es Gly. la que Xaa42 es Ala. la que Xaa42 es Glu. la que Xaa43 es Lys. la que Xaa43 esta ausente.
as realizaciones 1-130, en el que el peptido GLP-1 tiene un maximo de 12 cambios
comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
as realizaciones 1-131, en el que el peptido GLP-1 tiene un maximo de 11 cambios
comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
as realizaciones 1-132, en el que el peptido GLP-1 tiene un maximo de 10 cambios
comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
cualquiera de las realizaciones 1-133, en el que el peptido GLP-1 tiene un maximo de 9 cambios
5
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25
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40
45
de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
135. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-134, en el que el peptido GLP-1 tiene un maximo de 8 cambios de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
136. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-135, en el que el peptido GLP-1 tiene un maximo de 7 cambios de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
137. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-136, en el que el peptido GLP-1 tiene un maximo de 6 cambios de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
138. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-137, en el que el peptido GLP-1 tiene un maximo de 5 cambios de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
139. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-138, en el que el peptido GLP-1 tiene un maximo de 4 cambios de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
140. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-139, en el que el peptido GLP-1 tiene un maximo de 3 cambios de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
141. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-140, en el que el peptido GLP-1 tiene un maximo de 2 cambios de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
142. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-141, en el que el peptido GLP-1 tiene un maximo de 1 cambio de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
143. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-142, en el que el peptido GLP-1 tiene un mmimo de 1 cambio de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
144. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-143, en el que el de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
145. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-144, en el que el de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
146. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-145, en el que el de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
147. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-146, en el que el de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
148. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-147, en el que el de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
149. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-148, en el que el de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
150. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-149, en el que el de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
151. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-150, en el que el de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
152. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-151, en el que el peptido GLP-1 tiene un mmimo de 10 cambios de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
153. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-152, en el que el peptido GLP-1 tiene 4 cambios de aminoacidos, en comparacion con GlP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
154. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-153, en el que el peptido GLP-1 tiene 5 cambios de aminoacidos, en comparacion con GlP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
155. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-154, en el que el peptido GLP-1 tiene 6 cambios de aminoacidos, en comparacion con GlP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
156. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-155, en el que el peptido GLP-1 tiene 7 cambios de aminoacidos, en comparacion con GlP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
157. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-156, en el que el peptido GLP-1 tiene 8 cambios de aminoacidos, en comparacion con GlP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
peptido GLP-1 tiene un mmimo de 2 cambios peptido GLP-1 tiene un mmimo de 3 cambios peptido GLP-1 tiene un mmimo de 4 cambios peptido GLP-1 tiene un mmimo de 5 cambios peptido GLP-1 tiene un mmimo de 6 cambios peptido GLP-1 tiene un mmimo de 7 cambios peptido GLP-1 tiene un mmimo de 8 cambios peptido GLP-1 tiene un mmimo de 9 cambios
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158. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-157, en el que el peptido GLP-1 tiene 9 cambios de aminoacidos, en comparacion con GLp-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
159. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-158, en el que el peptido GLP-1 tiene 10 cambios de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
160. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-159, en el que el peptido GLP-1 incorpora solo una Lys.
161. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-160, en el que el peptido GLP-1 se selecciona a partir de los siguientes analogos de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1): i) (8Aib, 22E, 26R, 27K, 34R) (SEQ ID NO: 10), ii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 37K) (SEQ ID NO: 6), iii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39G, 40G, 41 S, 42K) (SEQ ID NO: 2), iv) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39G, 40S, 41 K) (SEQ ID NO: 3), v) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39S, 40K) (SEQ ID NO: 4), vi) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38K) (SEQ ID NO: 7), vii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39K) (SEQ ID NO: 5), viii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39S, 40G, 41A, 42P, 43K) (SEQ ID NO: 9), ix) (8Aib, 26R, 34R, 38K) (SEQ ID NO: 8), x) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38A, 39E, 40A, 41 P, 42K) (SEQ ID NO: 11), xi) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38E, 39P, 40P, 41G, 42K) (SEQ ID NO: 12), xii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38P, 39A, 40E, 41 E, 42K) (SEQ ID NO: 13), xiii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39S, 40P, 41A, 42A, 43K) (SEQ ID NO: 14), xiv) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39S, 40A, 41 E, 42G, 43K) (SEQ ID NO: 15), xv) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39S, 40E, 41A, 42E, 43K) (SEQ ID NO: 16), xvi) (7Imp, 8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39K) (SEQ ID NO: 17) y xvii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 37P, 38K) (SEQ ID NO: 18).
162. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-161 en forma de una sal; preferiblemente una sal basica o acida tal como una sal de acetato acida, una sal de sodio basica o una sal de potasio basica; mas preferiblemente una sal basica tal como una sal de sodio de potasio; lo mas preferiblemente una sal de sodio.
163. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-162 que es un agonista del receptor de GLP-1.
164. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-163, que es un agonista del receptor de GLP-1 completo.
165. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-164, que es biologicamente activo in vitro.
166. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-165, que es potente in vitro.
167. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-166, que es capaz de activar el receptor de GLP-1 humano.
168. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-167 que es capaz de activar el receptor de GLP-1 humano en un ensayo con celulas completas que expresan el receptor de GLP-1 humano, en donde el ensayo se realiza en ausencia de HSA (0% de HSA), y/o en presencia de HSA (HSA al 1%), preferiblemente en ausencia de HSA.
169. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-168, en donde la respuesta del receptor de GLP-1 humano se mide en un ensayo de gen informador, como el ensayo del Ejemplo 35.
170. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-169, en el que la actividad biologica, o la potencia, in vitro se determina esencialmente como se describe en el Ejemplo 35.
171. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-170, que tiene una potencia in vitro correspondiente a una CE50 de 300 pM o menor.
172. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-171, que tiene una potencia in vitro correspondiente a una CE50 de 200 pM o menor.
173. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-172, que tiene una potencia in vitro correspondiente a una CE50 de 100 pM o menor.
174. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-173, que tiene una potencia in vitro correspondiente a una CE50 de 75 pM o menor.
175. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-174, que tiene una potencia in vitro correspondiente a una CE50 de 50 pM o menor.
176. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-175, que tiene una potencia in vitro correspondiente a una CE50 de 25 pM o menor.
177. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-176, que tiene una potencia in vitro correspondiente a una CE50 de 15 pM o menor.
178. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-177, que tiene una potencia in vitro correspondiente a una CE50 de 10 pM o menor.
179. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-178, en el que la CE50 se determina esencialmente como se describe en el Ejemplo 35.
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180. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-179, que tiene una potencia in vitro correspondiente a una CE50 menor de 30 veces la CE50 de semaglutida, en donde la CE50 de semaglutida se determina de la misma manera que la CE50 del derivado.
181. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-180, que tiene una potencia in vitro correspondiente a una CE50 menor de 20 veces la CE50 de semaglutida, en donde la CE50 de semaglutida se determina de la misma manera que la CE50 del derivado.
182. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-181, que tiene una potencia in vitro correspondiente a una CE50 menor de 10 veces la CE50 de semaglutida, en donde la CE50 de semaglutida se determina de la misma manera que la CE50 del derivado.
183. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-182, que tiene una potencia in vitro correspondiente a una CE50 menor de 7,5 veces la CE50 de semaglutida, en donde la CE50 de semaglutida se determina de la misma manera que la CE50 del derivado.
184. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-183, que tiene una potencia in vitro correspondiente a una CE50 menor de 5 veces el CE50 de semaglutida, en donde la CE50 de semaglutida se determina de la misma manera que la CE50 del derivado.
185. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-184, que tiene una potencia in vitro correspondiente a una CE50 menor de 2,5 veces la CE50 de semaglutida, en donde la CE50 de semaglutida se determina de la misma manera que la CE50 del derivado.
186. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-185, que tiene una potencia in vitro correspondiente a una CE50 menor de 1,5 veces la CE50 de semaglutida, en donde la CE50 de semaglutida se determina de la misma manera que la CE50 del derivado.
187. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-186, en el que la CE50 se determina esencialmente como se describe en el Ejemplo 35.
188. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-187, que es capaz de unirse al receptor de GLP-1.
189. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-188, que es capaz de unirse al receptor de GLP-1 a una concentracion baja de HSA (max. 0,001% de concentracion final del ensayo).
190. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-189, que es capaz de unirse al receptor de GLP-1 a una concentracion alta de HSA (2,0% de concentracion final del ensayo).
191. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-190, en el que la union al receptor de GLP-1 humano se mide en un ensayo de union competitiva, tal como el ensayo del Ejemplo 36.
192. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-191, en el que la union al receptor de GLP-1 humano in vitro se determina esencialmente como se describe en el Ejemplo 36.
193. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-192, que a al receptor de GLP-1 humano con una CI50 de 5,0 nM o menor.
194. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-193, que a al receptor de GLP-1 humano con una CI50 de 3,0 nM o menor.
195. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-194, que a al receptor de GLP-1 humano con una CI50 de 2,0 nM o menor.
196. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-195, que a al receptor de GLP-1 humano con una CI50 de 1,0 nM o menor.
197. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-196, que a al receptor de GLP-1 humano con una CI50 de 0,5 nM o menor.
198. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-197, en el que la CI50 se determina esencialmente como se describe en el Ejemplo 36, en una reaccion con max. 0,001% de hSa (concentracion final del ensayo).
199. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-198, que a una concentracion baja de HSA es capaz de unirse al receptor de GLP-1 humano con una CI50 menor de 10 veces la CI50 de semaglutida, en donde la CI50 de semaglutida se determina de la misma manera que la CI50 del derivado.
200. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-199, que a una concentracion baja de HSA es capaz de unirse al receptor de GLP-1 humano con una CI50 menor de 8 veces la CI50 de semaglutida, en donde la CI50 de semaglutida se determina de la misma manera que la CI50 del derivado.
una concentracion baja de HSA es capaz de unirse una concentracion baja de HSA es capaz de unirse una concentracion baja de HSA es capaz de unirse una concentracion baja de HSA es capaz de unirse una concentracion baja de HSA es capaz de unirse
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201. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-200, que a una concentracion baja de HSA es capaz de unirse al receptor de GLP-1 humano con una CI50 menor de 6 veces la CI50 de semaglutida, en donde la CI50 de semaglutida se determina de la misma manera que la CI50 del derivado.
202. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-201, que a una concentracion baja de HSA es capaz de unirse al receptor de GLP-1 humano con una CI50 menor de 4 veces la CI50 de semaglutida, en donde la CI50 de semaglutida se determina de la misma manera que la CI50 del derivado.
203. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-202, que a una concentracion baja de HSA es capaz de unirse al receptor de GLP-1 humano con una CI50 menor de 2 veces la CI50 de semaglutida, en donde la CI50 de semaglutida se determina de la misma manera que la CI50 del derivado.
204. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-203, que a una concentracion baja de HSA es capaz de unirse al receptor de GLP-1 humano con una CI50 menor de 1,5 veces la CI50 de semaglutida, en donde la CI50 de semaglutida se determina de la misma manera que la CI50 del derivado.
205. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-204, que a una concentracion baja de HSA es capaz de unirse al receptor de GLP-1 humano con una CI50 menor de 1 vez la CI50 de semaglutida, en donde la CI50 de semaglutida se determina de la misma manera que la CI50 del derivado.
206. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-205, que a una concentracion baja de HSA es capaz de unirse al receptor de GLP-1 humano con una CI50 menor de 0,6 veces la CI50 de semaglutida, en donde la CI50 de semaglutida se determina de la misma manera que la CI50 del derivado.
207. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-206, en el que la CI50 se determina esencialmente como se describe en el Ejemplo 36, en una reaccion con max. 0,001% de hSa (concentracion final del ensayo).
208. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-207, que con 2,0% de HSA (concentracion final del ensayo) es capaz de unirse al receptor de GLP-1 humano con una CI50 de 300 nM o inferior.
209. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-208, que con 2,0% de HSA (concentracion final del ensayo) es capaz de unirse al receptor de GLP-1 humano con una CI50 de 125 nM o inferior.
210. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-209, que con 2,0% de HSA (concentracion final del ensayo) es capaz de unirse al receptor de GLP-1 humano con una CI50 de 75 nM o inferior.
211. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-210, que con 2,0% de HSA (concentracion final del ensayo) es capaz de unirse al receptor de GLP-1 humano con una CI50 de 50 nM o inferior.
212. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-211, en el que la CI50 se determina esencialmente como se describe en el Ejemplo 36, en una reaccion con 2,0% de HSA (concentracion final del ensayo).
213. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-137, que con 2,0% de HSA (concentracion final del ensayo) es capaz de unirse al receptor de GLP-1 humano con una CI50 menor de 1 vez la CI50 de semaglutida, en donde la CI50 de semaglutida se determina de la misma manera que la CI50 del derivado.
214. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-138, que con 2,0% de HSA (concentracion final del ensayo) es capaz de unirse al receptor de GLP-1 humano con una CI50 menor de 0,5 veces la CI50 de semaglutida, en donde la CI 50 de semaglutida se determina de la misma manera que la CI50 del derivado.
215. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-139, que con 2,0% de HSA (concentracion final del ensayo) es capaz de unirse al receptor de GLP-1 humano con una CI50 menor de 0,25 veces la CI50 de semaglutida, en donde la CI 50 de semaglutida se determina de la misma manera que la CI50 del derivado.
216. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-140, que con 2,0% de HSA (concentracion final del ensayo) es capaz de unirse al receptor de GLP-1 humano con una CI50 menor de 0,17 veces la CI50 de semaglutida, en donde la CI 50 de semaglutida se determina de la misma manera que la CI50 del derivado.
217. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-216, en el que la CI50 se determina esencialmente como se describe en el Ejemplo 36, en una reaccion con 2,0% de HSA (concentracion final del ensayo).
218. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-217, que tiene propiedades farmacocineticas mejoradas.
219. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-218, que tiene una semivida incrementada y/o un aclaramiento
reducido.
220. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-219, que es adecuado para la administracion una vez al mes.
221. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-220, para la administracion s.c.
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222. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-221, en donde el derivado se somete a ensayo in vivo en estudios farmacocineticos (PK).
223. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-222, en donde el derivado se somete a ensayo en cualquier modelo animal adecuado, tal como raton, rata, mono, perro o cerdo.
224. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-223, que se compara con semaglutida.
225. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-224, que tiene una semivida terminal (T1^) mejorada in vivo en cerdos enanos despues de una administracion i.v. en comparacion con semaglutida.
226. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-225, en el que la semivida terminal se determina in vivo en cerdos enanos despues de la administracion i.v., utilizando cualquier protocolo de estudio adecuado, tal como el descrito en el Ejemplo 37.
227. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-226, en el que la semivida terminal se determina in vivo en cerdos enanos despues de la administracion i.v., esencialmente como se describe en el Ejemplo 37.
228. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-227, que tiene una semivida terminal (T1^) in vivo en cerdos enanos despues de una administracion i.v. de al menos 100 horas.
229. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-228, que tiene una semivida terminal (T1^) in vivo en cerdos enanos despues de una administracion i.v. de al menos 125 horas.
230. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-229, que tiene una semivida terminal (T1^) in vivo en cerdos enanos despues de una administracion i.v. de al menos 150 horas.
231. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-230, que tiene una semivida terminal (T1^) in vivo en cerdos enanos despues de una administracion i.v. de al menos 175 horas.
232. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-231, que tiene una semivida terminal (T1^) in vivo en cerdos enanos despues de una administracion i.v. de al menos 2,1 veces la semivida terminal de semaglutida, determinada de la misma manera.
233. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-232, que tiene una semivida terminal (T1^) in vivo en cerdos enanos despues de una administracion i.v. de al menos 2,5 veces la semivida terminal de semaglutida, determinada de la misma manera.
234. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-233, que tiene una semivida terminal (T1^) in vivo en cerdos enanos despues de una administracion i.v. de al menos 2,8 veces la semivida terminal de semaglutida, determinada de la misma manera.
235. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-234, que tiene una semivida terminal (T1^) in vivo en cerdos enanos despues de una administracion i.v. de al menos 3,3 veces la semivida terminal de semaglutida, determinada de la misma manera.
236. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-235, que es potente in vivo.
237. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-236, que es potente in vivo cuando se determina en cualquier modelo animal adecuado, tal como raton o cerdo.
238. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-237, en el que el modelo animal es un raton db/db.
239. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-238, en el que se determina el efecto reductor de la glucosa en sangre.
240. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-239, en el que se determina el efecto de disminucion del peso corporal.
241. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-240, en el que se determina el efecto reductor de la glucosa en sangre y/o de disminucion del peso corporal in vivo en un raton db/db usando cualquier protocolo y metodologfa de estudio adecuado, por ejemplo, como se describe en el Ejemplo 38.
242. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-241, en el que el efecto reductor de la glucosa en sangre y/o el efecto de disminucion del peso corporal se determinan in vivo en un raton db/db, esencialmente como se describe en el Ejemplo 38.
243. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-242, que tiene el efecto in vivo de reducir la glucosa en sangre despues de 48 horas, determinado en un estudio de dosis unica en un modelo de raton db/db.
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244. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-243, en el que la glucosa en sangre se reduce en al menos un 15%, en comparacion con el nivel de glucosa en sangre antes de la administracion del derivado.
245. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-244, en el que la glucosa en sangre se reduce en al menos un 30%, en comparacion con el nivel de glucosa en sangre antes de la administracion del derivado.
246. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-245, en el que la glucosa en sangre se reduce en al menos un 45%, en comparacion con el nivel de glucosa en sangre antes de la administracion del derivado.
247. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-246, en el que la glucosa en sangre se reduce en al menos un 60%, en comparacion con el nivel de glucosa en sangre antes de la administracion del derivado.
248. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-247, que tiene el efecto in vivo de reducir la glucosa en sangre despues de 72 horas, determinado en un estudio de dosis unica en un modelo de raton db/db.
249. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-248, que tiene el efecto in vivo de reducir la glucosa en sangre despues de 96 horas, determinado en un estudio de dosis unica en un modelo de raton db/db.
250. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-249, en el que la glucosa en sangre se reduce en al menos un 15%, en comparacion con el nivel de glucosa en sangre antes de la administracion del derivado.
251. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-250, en el que la glucosa en sangre se reduce en al menos un 10%, en comparacion con el nivel de glucosa en sangre antes de la administracion del derivado.
252. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-251, en el que la glucosa en sangre se reduce en al menos un 15%, en comparacion con el nivel de glucosa en sangre antes de la administracion del derivado.
253. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-252, en el que la glucosa en sangre se reduce en al menos un 20%, en comparacion con el nivel de glucosa en sangre antes de la administracion del derivado.
254. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-253, en el que la glucosa en sangre se reduce en al menos un 40%, en comparacion con el nivel de glucosa en sangre antes de la administracion del derivado.
255. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-254, que tiene el efecto in vivo de reducir el peso corporal despues de 48 horas, determinado en un estudio de dosis unica en un modelo de raton db/db.
256. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-255, en el que el peso corporal se reduce en al menos un 2%, en comparacion con el peso corporal antes de la administracion del derivado.
257. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-256, en el que el peso corporal se reduce en al menos un 4%, en comparacion con el peso corporal antes de la administracion del derivado.
258. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-257, en el que el peso corporal se reduce en al menos un 5%, en comparacion con el peso corporal antes de la administracion del derivado.
259. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-258, en el que el peso corporal se reduce en al menos un 6%, en comparacion con el peso corporal antes de la administracion del derivado.
260. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-259, que tiene el efecto in vivo de reducir el peso corporal despues de 72 horas, determinado en un estudio de dosis unica en un modelo de raton db/db.
261. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-260, que tiene el efecto in vivo de reducir el peso corporal despues de 96 horas, determinado en un estudio de dosis unica en un modelo de raton db/db.
262. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-261, en el que el peso corporal se reduce en al menos un 1%, en comparacion con el peso corporal antes de la administracion del derivado.
263. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-262, en el que el peso corporal se reduce en al menos un 3%, en comparacion con el peso corporal antes de la administracion del derivado.
264. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-263, en el que el peso corporal se reduce en al menos un 4%, en comparacion con el peso corporal antes de la administracion del derivado.
265. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-264, en el que el peso corporal se reduce en al menos un 5%, en comparacion con el peso corporal antes de la administracion del derivado.
266. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-265, en el que el peso corporal se reduce en al menos un 6%, en comparacion con el peso corporal antes de la administracion del derivado.
267. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-266, en el que el modelo animal es un cerdo.
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268. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-267, en el que el modelo animal es un cerdo LYD.
269. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-268, en el que la reduccion en la ingesta de alimentos se deter-
mina en un estudio farmacodinamico (PD) in vivo.
270. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-269, en el que la reduccion en la ingesta de alimentos se deter-
mina in vivo en un cerdo, utilizando cualquier protocolo y metodologfa de estudio adecuado, por ejemplo, como se
describe en el Ejemplo 39.
271. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-270, en el que la reduccion en la ingesta de alimentos se deter- mina in vivo en un cerdo, utilizando cualquier protocolo y metodologfa de estudio adecuado, esencialmente como se describe en el Ejemplo 39.
272. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-271, que tiene el efecto in vivo de reducir la ingesta de alimentos durante un primer periodo de 24 horas (0-24 horas) despues de la administracion de una dosis unica del derivado, en donde la ingesta de alimentos se determina en un estudio de dosis unica en un modelo de cerdo LYD.
273. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-272, que tiene el efecto in vivo de reducir la ingesta de alimentos durante un segundo penodo de 24 horas (24-48 horas) despues de la administracion de una dosis unica del derivado, en donde la ingesta de alimentos se determina en un estudio de dosis unica en un modelo de cerdo LYD.
274. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-273, que tiene el efecto in vivo de reducir la ingesta de alimentos durante un tercer periodo de 24 horas (48-72 horas) despues de la administracion de una dosis unica del derivado, en donde la ingesta de alimentos se determina en un estudio de dosis unica en un modelo de cerdo LYD.
275. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-274, que tiene el efecto in vivo de reducir la ingesta de alimentos durante un cuarto periodo de 24 horas (72-96 horas) despues de la administracion de una dosis unica del derivado, en donde la ingesta de alimentos se determina en un estudio de dosis unica en un modelo de cerdo LYD.
276. Un derivado de GLP-1 seleccionado a partir de los siguientes: Chem. 21, Chem. 22, Chem. 23, Chem. 24, Chem. 25, Chem. 26, Chem. 27, Chem. 28, Chem. 29, Chem. 30, Chem. 31, Chem. 32, Chem. 33, Chem. 34, Chem. 35, Chem. 36, Chem. 37, Chem. 38, Chem. 39, Chem. 40, Chem. 41, Chem. 42, Chem. 43, Chem. 44, Chem. 45, Chem. 46, Chem. 47, Chem. 48, Chem. 49, Chem. 50, Chem. 51, Chem. 52, Chem. 53 y Chem. 54; o una sal, una amida o un ester farmaceuticamente aceptable de los mismos.
277. Un derivado de GLP-1 seleccionado a partir de las estructuras qmmicas mostradas en cualquiera de los Ejemplos 1-34, preferiblemente 1-20; o una sal, una amida o un ester farmaceuticamente aceptable del mismo.
278. Un derivado de GLP-1 seleccionado a partir de los nombres de derivados de GLP-1 mostrados en cualquiera de los Ejemplos 1-34, preferiblemente 1-20; o una sal, una amida o un ester farmaceuticamente aceptable del mismo.
279. El derivado de cualquiera de las realizaciones 276-278, que es un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-275.
280. Un producto intermedio en forma de un analogo de GLP-1, que comprende los siguientes cambios de aminoaci- dos en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1): iii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39G, 40G, 41S, 42K) (SEQ ID NO: 2), iv) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39G, 40S, 41 K) (SEQ ID NO: 3), v) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39S, 40K) (SEQ ID NO: 4), vii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39K) (SEQ ID NO: 5), viii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39S, 40G, 41A, 42P, 43K) (SEQ ID NO: 9), ix) (8Aib, 26R, 34R, 38K) (SEQ ID NO: 8), x) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38A, 39E, 40A, 41 P, 42K) (SEQ ID NO: 11), xi) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38E, 39P, 40P, 41 G, 42K) (SEQ ID NO: 12), xii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38P, 39A, 40E, 41 E, 42K) (SEQ ID NO: 13), xiii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39S, 40P, 41A, 42A, 43K) (SEQ ID NO: 14), xiv) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39S, 40A, 41 E, 42G, 43K) (SEQ ID NO: 15), xv) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39S, 40E, 41A, 42E, 43K) (SEQ ID NO: 16), xvi) (7lmp, 8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39K) (SEQ ID NO: 17), o xvii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 37P, 38K) (SEQ ID NO: 18).
281. Un producto intermedio en forma de un analogo de GLP-1, que comprende los siguientes cambios de aminoaci- dos en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1): 40K, 41 K, 42K o 43K.
282. El producto intermedio de cualquiera de las realizaciones 280-281, que es un peptido GLP-1 de formula I como se define en la realizacion 1.
283. El producto intermedio de cualquiera de las realizaciones 280-282, que es un peptido GLP-1 como se define en cualquiera de las realizaciones 66-162.
284. Un producto intermedio en forma de un analogo de GLP-1, seleccionado a partir de los siguientes analogos de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1): i) (8Aib, 22E, 26R, 27K, 34R) (SEQ ID NO: 10), iii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39G, 40G, 41S, 42K) (SEQ ID NO: 2), iv) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39G, 40S, 41 K) (SEQ ID NO: 3), v) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39S, 40K) (SEQ ID NO: 4), vii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39K) (SEQ ID NO: 5), viii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39S, 40G, 41A, 42P, 43K) (SEQ ID NO: 9), ix) (8Aib, 26R, 34R, 38K) (SEQ ID NO: 8), x) (8Aib, 22E, 26R, 34R,
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38A, 39E, 40A, 41 P, 42K) (SEQ ID NO: 11), xi) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38E, 39P, 40P, 41 G, 42K) (SEQ ID NO: 12),
xii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38P, 39A, 40E, 41 E, 42K) (SEQ ID NO: 13), xiii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39S, 40P, 41A, 42A, 43K) (SEQ ID NO: 14), xiv) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39S, 40A, 41 E, 42G, 43K) (SEQ ID NO: 15), xv) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39S, 40E, 41A, 42E, 43K) (SEQ ID NO: 16), xvi) (7lmp, 8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39K) (SEQ ID NO: 17) y xvii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 37P, 38K) (SEQ ID NO: 18).
285. Una composicion farmaceutica que comprende un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1279 o un analogo de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 280-284 y un excipiente farmaceuticamente acepta- ble.
286. Un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-279 o un analogo de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 280-284, para uso como un medicamento.
287. Un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-279 o un analogo de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 280-284, para uso en
(i) prevencion y/o tratamiento de todas las formas de diabetes, tales como hiperglucemia, diabetes de tipo 2, tolerancia alterada a la glucosa, diabetes de tipo 1, diabetes no dependiente de insulina, MODY (diabetes de la edad madura que se presenta en el joven), diabetes gestacional y/o para la reduccion de HbA1C;
(ii) retraso o prevencion de la progresion de una enfermedad diabetica, tal como la progresion en diabetes de tipo 2, retraso de la progresion de la tolerancia alterada a la glucosa (IGT) a diabetes de tipo 2 que requiere insulina, retraso o prevencion de la resistencia a la insulina y/o retraso de la progresion de la diabetes de tipo 2 que no requiere insulina a diabetes de tipo 2 que requiere insulina;
(iii) mejora de la funcion de las celulas p, tal como disminuyendo la apoptosis de las celulas p, aumentando la funcion de las celulas p y/o la masa de las celulas p y/o para restaurar la sensibilidad a la glucosa de las celulas
p;
(iv) prevencion y/o tratamiento de trastornos cognitivos y/o trastornos neurodegenerativos, tales como enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson y/o esclerosis multiple;
(v) prevencion y/o tratamiento de trastornos de la alimentacion, tales como la obesidad, por ejemplo, mediante una disminucion de la ingesta de alimentos, reduccion del peso corporal, supresion del apetito, induccion de saciedad; tratamiento o prevencion del trastorno por atracon, bulimia nerviosa y/u obesidad inducida por la ad- ministracion de un antipsicotico o un esteroide; reduccion de la motilidad gastrica; retraso del vaciado gastrico; aumento de la movilidad ffsica; y/o prevencion y/o tratamiento de comorbilidades de la obesidad, tales como la osteoartritis y/o la incontinencia urinaria;
(vi) prevencion y/o tratamiento de complicaciones diabeticas, tales como angiopatfa; neuropatfa, incluyendo neu- ropatfa periferica; nefropatfa; y/o retinopatfa;
(vii) mejora de los parametros lipfdicos, tal como prevencion y/o tratamiento de la dislipidemia, reduccion de los lfpidos sericos totales; incremento de HDL; reduccion de LDL pequena y densa; reduccion de VLDL; reduccion de los trigliceridos; reduccion del colesterol; reduccion de los niveles plasmaticos de lipoprotema a (Lp(a)) en un ser humano; inhibicion de la generacion de apolipoprotema a (apo(a)) in vitro y/o in vivo;
(viii) prevencion y/o tratamiento de enfermedades cardiovasculares, como el smdrome X; aterosclerosis; infarto de miocardio; enfermedad cardiaca coronaria; lesion por reperfusion, accidente cerebrovascular, isquemia cerebral; una enfermedad cardiovascular temprana o cardiaca temprana, hipertrofia ventricular izquierda; enfermedad arterial coronaria; hipertension; hipertension esencial; emergencia por hipertension aguda; cardiomiopatfa; insu- ficiencia cardiaca; intolerancia al ejercicio; insuficiencia cardiaca aguda y/o cronica; arritmia; trastorno del ritmo cardfaco; smcope; angina de pecho; reoclusion de una derivacion y/o una endoprotesis cardiaca; claudicacion intermitente (arterioesclerosis obliterante); disfuncion diastolica; y/o disfuncion sistolica; y/o reduccion de la pre- sion sangumea, tal como la reduccion de la presion sangumea sistolica;
(ix) prevencion y/o tratamiento de enfermedades gastrointestinales, tales como smdrome de intestino inflamato- rio; smdrome del intestino delgado, o enfermedad de Crohn o colitis; dispepsia; y/o ulceras gastricas; y/o infla- macion, tal como psoriasis, artritis psoriatica, artritis reumatoide y/o lupus eritematoso sistemico;
(x) prevencion y/o tratamiento de enfermedad cntica, tal como el tratamiento de un paciente con enfermedad cntica, una polinefropatfa del paciente cntico (CIPNP) y/o un paciente con CIPNP potencial; prevencion del desa- rrollo de enfermedad cntica o CIPNP; prevencion, tratamiento y/o curacion del smdrome de respuesta inflamato- ria sistemica (SIRS) en un paciente; prevencion o reduccion de la probabilidad de que un paciente padezca bacteriemia, septicemia y/o choque septico durante una hospitalizacion; y/o estabilizacion de la glucosa en san- gre, equilibrio de la insulina y opcionalmente el metabolismo en pacientes de unidades de cuidados intensivos con enfermedad aguda;
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(xi) prevencion y/o tratamiento del smdrome de ovario poliqmstico (PCOS).
(xii) prevencion y/o tratamiento de enfermedad cerebral, tal como isquemia cerebral, hemorragia cerebral y/o lesion cerebral traumatica;
(xiii) prevencion y/o tratamiento de la apnea del sueno; y/o
(xiv) prevencion y/o tratamiento de abuso, tal como abuso de alcohol y/o abuso de drogas.
288. Uso de un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-279 o un analogo de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 280-284, en la preparacion de un medicamento para
(i) prevencion y/o tratamiento de todas las formas de diabetes, tales como hiperglucemia, diabetes de tipo 2, tolerancia alterada a la glucosa, diabetes de tipo 1, diabetes no dependiente de insulina, MODY (diabetes de la edad madura que se presenta en el joven), diabetes gestacional y/o para la reduccion de HbAIC;
(ii) retraso o prevencion de la progresion de una enfermedad diabetica, tal como la progresion en diabetes de tipo 2, retraso de la progresion de la tolerancia alterada a la glucosa (IGT) a diabetes de tipo 2 que requiere insulina, retraso o prevencion de la resistencia a la insulina y/o retraso de la progresion de la diabetes de tipo 2 que no requiere insulina a diabetes de tipo 2 que requiere insulina;
(iii) mejora de la funcion de las celulas p, tal como disminuyendo la apoptosis de las celulas p, aumentando la funcion de las celulas p y/o la masa de las celulas p y/o para restaurar la sensibilidad a la glucosa de las celulas
p;
(iv) prevencion y/o tratamiento de trastornos cognitivos y/o trastornos neurodegenerativos, tales como enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson y/o esclerosis multiple;
(v) prevencion y/o tratamiento de trastornos de la alimentacion, tales como la obesidad, por ejemplo, mediante una disminucion de la ingesta de alimentos, reduccion del peso corporal, supresion del apetito, induccion de saciedad; tratamiento o prevencion del trastorno por atracon, bulimia nerviosa y/u obesidad inducida por la ad- ministracion de un antipsicotico o un esteroide; reduccion de la motilidad gastrica; retraso del vaciado gastrico; aumento de la movilidad ffsica; y/o prevencion y/o tratamiento de comorbilidades de la obesidad, tales como la osteoartritis y/o la incontinencia urinaria;
(vi) prevencion y/o tratamiento de complicaciones diabeticas, tales como angiopatfa; neuropatfa, incluyendo neu- ropatfa periferica; nefropatia; y/o retinopatfa;
(vii) mejora de los parametros lipfdicos, tal como prevencion y/o tratamiento de la dislipidemia, reduccion de los lfpidos sericos totales; incremento de HDL; reduccion de LDL pequena y densa; reduccion de VLDL; reduccion de los trigliceridos; reduccion del colesterol; reduccion de los niveles plasmaticos de lipoprotema a (Lp(a)) en un ser humano; inhibicion de la generacion de apolipoprotema a (apo(a)) in vitro y/o in vivo;
(viii) prevencion y/o tratamiento de enfermedades cardiovasculares, como el smdrome X; aterosclerosis; infarto de miocardio; enfermedad cardiaca coronaria; lesion por reperfusion, accidente cerebrovascular, isquemia cerebral; una enfermedad cardiovascular temprana o cardiaca temprana, hipertrofia ventricular izquierda; enfermedad arterial coronaria; hipertension; hipertension esencial; emergencia por hipertension aguda; cardiomiopatfa; insu- ficiencia cardiaca; intolerancia al ejercicio; insuficiencia cardiaca aguda y/o cronica; arritmia; trastorno del ritmo cardfaco; smcope; angina de pecho; reoclusion de una derivacion y/o una endoprotesis cardiaca; claudicacion intermitente (arterioesclerosis obliterante); disfuncion diastolica; y/o disfuncion sistolica; y/o reduccion de la pre- sion sangumea, tal como la reduccion de la presion sangumea sistolica;
(ix) prevencion y/o tratamiento de enfermedades gastrointestinales, tales como smdrome de intestino inflamato- rio; smdrome del intestino delgado, o enfermedad de Crohn o colitis; dispepsia; y/o ulceras gastricas; y/o infla- macion, tal como psoriasis, artritis psoriatica, artritis reumatoide y/o lupus eritematoso sistemico;
(x) prevencion y/o tratamiento de enfermedad cntica, tal como el tratamiento de un paciente con enfermedad cntica, una polinefropatfa del paciente cntico (CIPNP) y/o un paciente con CIPNP potencial; prevencion del desa- rrollo de enfermedad cntica o CIPNP; prevencion, tratamiento y/o curacion del smdrome de respuesta inflamato- ria sistemica (SIRS) en un paciente; prevencion o reduccion de la probabilidad de que un paciente padezca bacteriemia, septicemia y/o choque septico durante una hospitalizacion; y/o estabilizacion de la glucosa en san- gre, equilibrio de la insulina y opcionalmente el metabolismo en pacientes de unidades de cuidados intensivos con enfermedad aguda;
(xi) prevencion y/o tratamiento del smdrome de ovario poliqmstico (PCOS).
(xii) prevencion y/o tratamiento de enfermedad cerebral, tal como isquemia cerebral, hemorragia cerebral y/o lesion cerebral traumatica;
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(xiii) prevencion y/o tratamiento de la apnea del sueno; y/o
(xiv) prevencion y/o tratamiento de abuso, tal como abuso de alcohol y/o abuso de drogas.
289. Un metodo para
(i) prevencion y/o tratamiento de todas las formas de diabetes, tales como hiperglucemia, diabetes de tipo 2, tolerancia alterada a la glucosa, diabetes de tipo 1, diabetes no dependiente de insulina, MODY (diabetes de la edad madura que se presenta en el joven), diabetes gestacional y/o para la reduccion de HbAIC;
(ii) retraso o prevencion de la progresion de una enfermedad diabetica, tal como la progresion en diabetes de tipo 2, retraso de la progresion de la tolerancia alterada a la glucosa (IGT) a diabetes de tipo 2 que requiere insulina, retraso o prevencion de la resistencia a la insulina y/o retraso de la progresion de la diabetes de tipo 2 que no requiere insulina a diabetes de tipo 2 que requiere insulina;
(iii) mejora de la funcion de las celulas p, tal como disminuyendo la apoptosis de las celulas p, aumentando la funcion de las celulas p y/o la masa de las celulas p y/o para restaurar la sensibilidad a la glucosa de las celulas
p;
(iv) prevencion y/o tratamiento de trastornos cognitivos y/o trastornos neurodegenerativos, tales como enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson y/o esclerosis multiple;
(v) prevencion y/o tratamiento de trastornos de la alimentacion, tales como la obesidad, por ejemplo, mediante una disminucion de la ingesta de alimentos, reduccion del peso corporal, supresion del apetito, induccion de saciedad; tratamiento o prevencion del trastorno por atracon, bulimia nerviosa y/u obesidad inducida por la ad- ministracion de un antipsicotico o un esteroide; reduccion de la motilidad gastrica; retraso del vaciado gastrico; aumento de la movilidad ffsica; y/o prevencion y/o tratamiento de comorbilidades de la obesidad, tales como la osteoartritis y/o la incontinencia urinaria;
(vi) prevencion y/o tratamiento de complicaciones diabeticas, tales como angiopatfa; neuropatfa, incluyendo neu- ropatfa periferica; nefropatia; y/o retinopatfa;
(vii) mejora de los parametros lipfdicos, tal como prevencion y/o tratamiento de la dislipidemia, reduccion de los lfpidos sericos totales; incremento de HDL; reduccion de LDL pequena y densa; reduccion de VLDL; reduccion de los trigliceridos; reduccion del colesterol; reduccion de los niveles plasmaticos de lipoprotema a (Lp(a)) en un ser humano; inhibicion de la generacion de apolipoprotema a (apo(a)) in vitro y/o in vivo;
(viii) prevencion y/o tratamiento de enfermedades cardiovasculares, como el smdrome X; aterosclerosis; infarto de miocardio; enfermedad cardiaca coronaria; lesion por reperfusion, accidente cerebrovascular, isquemia cerebral; una enfermedad cardiovascular temprana o cardiaca temprana, hipertrofia ventricular izquierda; enfermedad arterial coronaria; hipertension; hipertension esencial; emergencia por hipertension aguda; cardiomiopatfa; insu- ficiencia cardiaca; intolerancia al ejercicio; insuficiencia cardiaca aguda y/o cronica; arritmia; trastorno del ritmo cardfaco; smcope; angina de pecho; reoclusion de una derivacion y/o una endoprotesis cardiaca; claudicacion intermitente (arterioesclerosis obliterante); disfuncion diastolica; y/o disfuncion sistolica; y/o reduccion de la pre- sion sangumea, tal como la reduccion de la presion sangumea sistolica;
(ix) prevencion y/o tratamiento de enfermedades gastrointestinales, tales como smdrome de intestino inflamato- rio; smdrome del intestino delgado, o enfermedad de Crohn o colitis; dispepsia; y/o ulceras gastricas; y/o infla- macion, tal como psoriasis, artritis psoriatica, artritis reumatoide y/o lupus eritematoso sistemico;
(x) prevencion y/o tratamiento de enfermedad cntica, tal como el tratamiento de un paciente con enfermedad cntica, una polinefropatfa del paciente cntico (CIPNP) y/o un paciente con CIPNP potencial; prevencion del desa- rrollo de enfermedad cntica o CIPNP; prevencion, tratamiento y/o curacion del smdrome de respuesta inflamato- ria sistemica (SIRS) en un paciente; prevencion o reduccion de la probabilidad de que un paciente padezca bacteriemia, septicemia y/o choque septico durante una hospitalizacion; y/o estabilizacion de la glucosa en san- gre, equilibrio de la insulina y opcionalmente el metabolismo en pacientes de unidades de cuidados intensivos con enfermedad aguda;
(xi) prevencion y/o tratamiento del smdrome de ovario poliqrnstico (PCOS).
(xii) prevencion y/o tratamiento de enfermedad cerebral, tal como isquemia cerebral, hemorragia cerebral y/o lesion cerebral traumatica;
(xiii) prevencion y/o tratamiento de la apnea del sueno; y/o
(xiv) prevencion y/o tratamiento de abuso, tal como abuso de alcohol y/o abuso de drogas;
en el que se administra una cantidad farmaceuticamente activa de un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-279 o un analogo de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 280-284.
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REALIZACIONES PARTICULARES ADICIONALES
Los siguientes son conjuntos particulares adicionales de realizaciones particulares de la invencion:
i). Un derivado de un peptido GLP-1, en donde el peptido GLP-1 tiene la formula I:
Formula I: Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Xaai2-Thr-Ser-Asp-Xaai6-Ser-Xaai8-Xaaig-Xaa20-Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Xaa25-
Xaa26-Xaa27-Phe-Ile-Xaa30-Xaa3i-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38-Xaa39-Xaa40-Xaa4i-Xaa42-Xaa43,
en la que Xaa7 es L-histidina, acido (S)-2-hidroxi-3-(iH-imidazol-4-il)-propi6nico, D-histidina, desamino-histidina, ho- mohistidina, Na-acetil-histidina, Na-formil-histidina, a-metil-histidina, 3-piridilalanina, 2-piridilalanina o 4-piridilalanina; Xaa8 es Ala, Gly, Ser, Aib, acido (i-aminociclopropil) carboxflico o acido (i-aminociclobutil) carboxflico; Xaai2 es Phe o Leu; Xaai6 es Val o Leu; Xaai8 es Ser, Val, Lys, Arg o Leu; Xaaig es Tyr o Gin; Xaa20 es Leu o Met; Xaa22 es Gly o Glu; Xaa23 es Gln, Glu o Arg; Xaa25 es Ala o Val; Xaa26 es Arg o Lys; Xaa27 es Glu, Lys o Leu; Xaa30 es Ala, Glu o Arg; Xaa3i es Trp o His; Xaa33 es Val, Lys o Arg; Xaa34 es Arg, Lys, His, Asn o Gin; Xaa35 es Gly o Ala; Xaa36 es Arg o Gly; Xaa37 es Gly, Pro o Lys; Xaa38 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente; Xaa39 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente; Xaa40 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente; Xaa4i es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente; Xaa42 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente; y Xaa43 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente; en donde el peptido GLP-i comprende un residuo de Lys en una posicion correspondiente a la posicion 27, 37, 38, 39, 40, 4i, 42 o 43 de GLP-i (7-37) (SEQ ID NO: i); cuyo derivado comprende un primer y un segundo resto de accion prolongada de formula Chem. i:
Chem. i: HOOC-(CH2)i8-CO-*; un enlazador ramificado de formula Chem. 2:
imagen15
en donde
Ri es -(CH2)q-NH-*, en donde q es un numero entero en el intervalo de 0-5,
R2 es -(CH2)w-NH-*, en donde w es un numero entero en el intervalo de 0-5,
con la condicion de que cuando w es 0, q es un numero entero en el intervalo de i-5 y cuando q es 0, w es un numero entero en el intervalo de i-5; y
un primer y un segundo enlazador adicional, comprendiendo cada uno un elemento_i de formula Chem. 3:
imagen16
en la que k es un numero entero en el intervalo de i-5 y n es un numero entero en el intervalo de i-5; en donde
el primer resto de accion prolongada esta fijado en su extremo *-CO a un primer extremo *-NH del enlazador ramificado, a traves del primer enlazador adicional,
el segundo resto de accion prolongada esta fijado en su extremo *-CO a un segundo extremo *-NH del enlazador ramificado, a traves del segundo enlazador adicional; y
el enlazador ramificado esta fijado en su extremo *-CO al grupo amino epsilon del residuo de Lys del peptido GLP-i;
o una sal, una amida o un ester farmaceuticamente aceptable del mismo.
ii). El derivado de la realizacion i) i, en el que q = 4 y w = 0.
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iii). El derivado de cualquiera de las realizaciones i)-ii), en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno comprende un elemento_2 de formula Chem. 4:
imagen17
iv). El derivado de cualquiera de las realizaciones i)-iii), en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno comprende un elemento_3 de formula Chem. 5:
imagen18
v). El derivado de cualquiera de las realizaciones i)-iii), en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno comprende un elemento_4 de formula Chem. 6:
imagen19
vi) . El derivado de cualquiera de las realizaciones i)-v), que comprende un residuo de Lys en una posicion correspon- diente a la posicion 27 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
vii) . El derivado de cualquiera de las realizaciones i)-v), que comprende un residuo de Lys en una posicion correspon- diente a la posicion 37 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
viii) . El derivado de cualquiera de las realizaciones i)-v), que comprende un residuo de Lys en una posicion correspon- diente a la posicion 27 o 37 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1) y que incorpora cinco elementos_1 de formula Chem. 3.
ix) . El derivado de cualquiera de las realizaciones i)-v), en el que el peptido GLP-1 se selecciona a partir de los si- guientes analogos de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1): i) (8Aib, 22E, 26R, 27K, 34R), ii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 37K), iii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39G, 40G, 41 S, 42K), iv) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39G, 40S, 41 K), v) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39S, 40K), vi) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38K), vii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39K), viii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39S, 40G, 41A, 42P, 43K) y ix) (8Aib, 26R, 34R, 38K).
x) . Un derivado de GLP-1 seleccionado a partir de los siguientes: Chem. 21, Chem. 22, Chem. 23, Chem. 24, Chem. 25, Chem. 26, Chem. 27, Chem. 28, Chem. 29, Chem. 30, Chem. 31, Chem. 32, Chem. 33, Chem. 34, Chem. 35, Chem. 36, Chem. 37, Chem. 38, Chem. 39 y Chem. 40; o una sal, una amida o un ester farmaceuticamente aceptable del mismo.
xi) . El derivado de cualquiera de las realizaciones i)-x), en forma de una sal de sodio o potasio del mismo.
xii) . Un producto intermedio en forma de un analogo de GLP-1, que comprende los siguientes cambios de aminoacidos en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1): iii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39G, 40G, 41 S, 42K), iv) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39G, 40S, 41 K), v) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39S, 40K), vii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39K) y viii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39S, 40G, 41A, 42P, 43K).
xiii) . Un producto intermedio en forma de un analogo de GLP-1, seleccionado a partir de los siguientes analogos de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1): i) (8Aib, 22E, 26R, 27K, 34R), iii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39G, 40G, 41 S, 42K), iv) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39G, 40S, 41 K), v) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39S, 40K), vii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39K) y viii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39S, 40G, 41A, 42P, 43K).
xiv) . Un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones i)-xi) o un analogo de acuerdo con cualquiera de las realizaciones xii)-xiii), para uso como un medicamento.
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xv). Un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones i)-xi) o un analogo de acuerdo con cualquiera de las realizaciones xii)-xiii), para uso en
(i) prevencion y/o tratamiento de todas las formas de diabetes, tales como hiperglucemia, diabetes de tipo 2, tolerancia alterada a la glucosa, diabetes de tipo 1, diabetes no dependiente de insulina, MODY (diabetes de la edad madura que se presenta en el joven), diabetes gestacional y/o para la reduccion de HbAIC;
(ii) retraso o prevencion de la progresion de una enfermedad diabetica, tal como la progresion en diabetes de tipo 2, retraso de la progresion de la tolerancia alterada a la glucosa (IGT) a diabetes de tipo 2 que requiere insulina, retraso o prevencion de la resistencia a la insulina y/o retraso de la progresion de la diabetes de tipo 2 que no requiere insulina a diabetes de tipo 2 que requiere insulina;
(iii) mejora de la funcion de las celulas p, tal como disminuyendo la apoptosis de las celulas p, aumentando la funcion de las celulas p y/o la masa de las celulas p y/o para restaurar la sensibilidad a la glucosa de las celulas
p;
(iv) prevencion y/o tratamiento de trastornos cognitivos y/o trastornos neurodegenerativos, tales como enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson y/o esclerosis multiple;
(v) prevencion y/o tratamiento de trastornos de la alimentacion, tales como la obesidad, por ejemplo, mediante una disminucion de la ingesta de alimentos, reduccion del peso corporal, supresion del apetito, induccion de saciedad; tratamiento o prevencion del trastorno por atracon, bulimia nerviosa y/u obesidad inducida por la ad- ministracion de un antipsicotico o un esteroide; reduccion de la motilidad gastrica; retraso del vaciado gastrico; aumento de la movilidad ffsica; y/o prevencion y/o tratamiento de comorbilidades de la obesidad, tales como la osteoartritis y/o la incontinencia urinaria;
(vi) prevencion y/o tratamiento de complicaciones diabeticas, tales como angiopatfa; neuropatfa, incluyendo neu- ropatfa periferica; nefropatia; y/o retinopatfa;
(vii) mejora de los parametros lipfdicos, tal como prevencion y/o tratamiento de la dislipidemia, reduccion de los lfpidos sericos totales; incremento de HDL; reduccion de LDL pequena y densa; reduccion de VLDL; reduccion de los trigliceridos; reduccion del colesterol; reduccion de los niveles plasmaticos de lipoprotema a (Lp(a)) en un ser humano; inhibicion de la generacion de apolipoprotema a (apo(a)) in vitro y/o in vivo;
(viii) prevencion y/o tratamiento de enfermedades cardiovasculares, como el smdrome X; aterosclerosis; infarto de miocardio; enfermedad cardiaca coronaria; lesion por reperfusion, accidente cerebrovascular, isquemia cerebral; una enfermedad cardiovascular temprana o cardiaca temprana, hipertrofia ventricular izquierda; enfermedad arterial coronaria; hipertension; hipertension esencial; emergencia por hipertension aguda; cardiomiopatfa; insu- ficiencia cardiaca; intolerancia al ejercicio; insuficiencia cardiaca aguda y/o cronica; arritmia; trastorno del ritmo cardfaco; smcope; angina de pecho; reoclusion de una derivacion y/o una endoprotesis cardiaca; claudicacion intermitente (arterioesclerosis obliterante); disfuncion diastolica; y/o disfuncion sistolica; y/o reduccion de la pre- sion sangumea, tal como la reduccion de la presion sangumea sistolica;
(ix) prevencion y/o tratamiento de enfermedades gastrointestinales, tales como smdrome de intestino inflamato- rio; smdrome del intestino delgado, o enfermedad de Crohn o colitis; dispepsia; y/o ulceras gastricas; y/o infla- macion, tal como psoriasis, artritis psoriatica, artritis reumatoide y/o lupus eritematoso sistemico;
(x) prevencion y/o tratamiento de enfermedad cntica, tal como el tratamiento de un paciente con enfermedad cntica, una polinefropatfa del paciente cntico (CIPNP) y/o un paciente con CIPNP potencial; prevencion del desa- rrollo de enfermedad cntica o CIPNP; prevencion, tratamiento y/o curacion del smdrome de respuesta inflamato- ria sistemica (SIRS) en un paciente; prevencion o reduccion de la probabilidad de que un paciente padezca bacteriemia, septicemia y/o choque septico durante una hospitalizacion; y/o estabilizacion de la glucosa en san- gre, equilibrio de la insulina y opcionalmente el metabolismo en pacientes de unidades de cuidados intensivos con enfermedad aguda;
(xi) prevencion y/o tratamiento del smdrome de ovario poliqrnstico (PCOS).
(xii) prevencion y/o tratamiento de enfermedad cerebral, tal como isquemia cerebral, hemorragia cerebral y/o lesion cerebral traumatica;
(xiii) prevencion y/o tratamiento de la apnea del sueno; y/o
(xiv) prevencion y/o tratamiento de abuso, tal como abuso de alcohol y/o abuso de drogas.
1. Un derivado de un peptido GLP-1,
en el que el peptido GLP-1 tiene la formula I:
Formula I: Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Xaai2-Thr-Ser-Asp-Xaai6-Ser-Xaai8-Xaaig-Xaa20-Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Xaa25-
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Xaa26Xaa27-Phe-Ne-Xaa30-Xaa3i-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38-Xaa39-Xaa40-Xaa4i-Xaa42-Xaa43, en donde
Xaa7 es L-histidina, acido (S)-2-hidroxi-3-(1H-imidazol-4-il)-propi6nico, D-histidina, desamino-histidina, homohis- tidina, Na-acetil-histidina, Na-formil-histidina, a-metil-histidina, 3-piridilalanina, 2-piridilalanina o 4-piridilalanina;
Xaa8 es Ala, Gly, Ser, Aib, acido (1-aminociclopropil) carbox^lico o acido (1-aminociclobutil) carbox^lico;
Xaai2 es Phe o Leu;
Xaai6 es Val o Leu;
Xaai8 es Ser, Val, Lys, Arg o Leu;
Xaai9 es Tyr o Gln;
Xaa20 es Leu o Met;
Xaa22 es Gly o Glu;
Xaa23 es Gln, Glu o Arg;
Xaa25 es Ala o Val;
Xaa26 es Arg o Lys;
Xaa27 es Glu, Lys o Leu;
Xaa30 es Ala, Glu o Arg;
Xaa3i es Trp o His;
Xaa33 es Val, Lys o Arg;
Xaa34 es Arg, Lys, His, Asn o Gin;
Xaa35 es Gly o Ala;
Xaa36 es Arg o Gly;
Xaa37 es Gly, Pro o Lys;
Xaa38 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente;
Xaa39 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente;
Xaa40 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente;
Xaa4i es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente;
Xaa42 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente; y
Xaa43 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente;
en donde el peptido GLP-1 comprende un residuo de Lys en una posicion correspondiente a la posicion 27, 37, 38, 39, 40, 41, 42 o 43 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1);
cuyo derivado comprende
un primer y un segundo resto de accion prolongada de formula Chem. 1:
Chem. 1 HOOC-(CH2)18-CO-*; un enlazador ramificado de formula Chem. 2:
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en donde
R1 es -(CH2)q-NH-*, en donde q es un numero entero en el intervalo de 0-5,
R2 es -(CH2)w-NH-*, en donde w es un numero entero en el intervalo de 0-5,
con la condicion de que cuando w es 0, q es un numero entero en el intervalo de 1-5 y cuando q es 0, w es un numero entero en el intervalo de 1-5; y
un primer y un segundo enlazador adicional, comprendiendo cada uno un elemento_1 de formula Chem. 3:
imagen21
en la que k es un numero entero en el intervalo de 1-5 y n es un numero entero en el intervalo de 1-5; en donde
el primer resto de accion prolongada esta fijado en su extremo *-CO a un primer extremo *-NH del enlazador ramificado, a traves del primer enlazador adicional,
el segundo resto de accion prolongada esta fijado en su extremo *-CO a un segundo extremo *-NH del enlazador ramificado, a traves del segundo enlazador adicional; y
el enlazador ramificado esta fijado en su extremo *-CO al grupo amino epsilon del residuo Lys del peptido GLP- 1;
o una sal, una amida o un ester farmaceuticamente aceptable del mismo.
2. El derivado de la realizacion 1, en el que q = 4 y w = 0.
3. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-2, en el que Chem. 2 representa eps-Lys(Bis).
4. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-3, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno comprende al menos un elemento_1 de formula Chem. 3.
5. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-4, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno comprende al menos dos elementos_1 de formula Chem. 3.
6. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-5, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno comprende al menos tres elementos_1 de formula Chem. 3.
7. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-6, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno comprende al menos cuatro elementos_1 de formula Chem. 3.
8. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-7, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno comprende al menos cinco elementos_1 de formula Chem. 3.
9. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-5, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional incorpora cada uno dos elementos_1 de formula Chem. 3.
10. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-6, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional incorpora cada uno tres elementos_1 de formula Chem. 3.
11. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-7, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional incorpora cada uno cuatro elementos_1 de formula Chem. 3.
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12. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-8, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional incorpora cada uno cinco elementos_1 de formula Chem. 3.
13. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-12, en el que k = 1 y n = 1.
14. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-13, en el que Chem. 3 representa OEG.
15. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-14, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional incorpora cada uno un grupo *-NH o *-N y un grupo *-CO.
16. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-15, en el que
un enlace amida conecta el extremo *-CO del primer resto de accion prolongada con el extremo *-NH o *-N del primer enlazador adicional y un enlace amida conecta el extremo *-CO del primer enlazador adicional con el primer extremo *-NH del enlazador ramificado; y
un enlace amida conecta el extremo *-CO del segundo resto de accion prolongada con el extremo *-NH o *-N del segundo enlazador adicional y un enlace amida conecta el extremo *-CO del segundo enlazador adicional con el segundo extremo *-NH del enlazador ramificado.
17. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-16, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno comprende un elemento_2 de formula Chem. 4:
imagen22
18. El derivado de la realizacion 17, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional incorpora cada uno un elemento 2 de formula Chem. 4:
imagen23
las realizaciones 17-18, en el que Chem. 4 representa gGlu.
las realizaciones 17-19, en el que Chem. 4 representa la forma L de gGlu.
21. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-20, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno comprende un elemento_3 de formula Chem. 5:
imagen24
19. El derivado de cualquiera de
20. El derivado de cualquiera de
22. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-21, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional incorpora cada uno un elemento_3 de formula Chem. 5:
imagen25
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23. El derivado de cualquiera de las realizaciones 21-22, en el que Chem. 5 representa Trx.
24. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-23, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno comprende un elemento_4 de formula Chem. 6:
imagen26
25. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-24, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional incorpora cada uno un elemento_4 de formula Chem. 6:
imagen27
26. El derivado de cualquiera de las realizaciones 24-25, en el que Chem. 6 representa Inp.
27. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-26, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador
adicional cada uno consiste en un elemento_2 de formula Chem. 4 y dos elementos_1 de formula Chem. 3 en donde k = 1 y n = 1, interconectados a traves de enlaces amida y en la secuencia indicada.
28. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-26, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno consiste en un elemento_4 de formula Chem. 6, un elemento_2 de formula Chem. 4 y dos elemen- tos_1 de formula Chem. 3 en donde k = 1 y n = 1, interconectados a traves de enlaces amida y en la secuencia indicada.
29. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-26, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno consiste en un elemento_3 de formula Chem. 5, un elemento_2 de formula Chem. 4 y dos elemen- tos_1 de formula Chem. 3 en donde k = 1 y n = 1, interconectados a traves de enlaces amida y en la secuencia indicada.
30. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-26, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno consiste en un elemento_3 de formula Chem. 5, un elemento_2 de formula Chem. 4 y tres elemen- tos_1 de formula Chem. 3 en donde k = 1 y n = 1, interconectados a traves de enlaces amida y en la secuencia indicada.
31. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-26, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador
adicional cada uno consiste en un elemento_3 de formula Chem. 5, un elemento_2 de formula Chem. 4 y cuatro
elementos_1 de formula Chem. 3 en donde k = 1 y n = 1, interconectados a traves de enlaces amida y en la secuencia indicada.
32. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-26, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno consiste en un elemento_3 de formula Chem. 5, un elemento_2 de formula Chem. 4 y cinco ele- mentos_1 de formula Chem. 3 en donde k = 1 y n = 1, interconectados a traves de enlaces amida y en la secuencia indicada.
33. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-32 que comprende un residuo de Lys en una posicion correspon- diente a la posicion 27 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
34. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-32 que comprende un residuo de Lys en una posicion correspon- diente a la posicion 37 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
35. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-32 que comprende un residuo de Lys en una posicion correspon- diente a la posicion 38 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
36. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-32 que comprende un residuo de Lys en una posicion correspon- diente a la posicion 39 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
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37. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-32 que comprende un residuo de Lys en una posicion correspon- diente a la posicion 40 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
38. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-32 que comprende un residuo de Lys en una posicion correspon- diente a la posicion 41 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
39. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-32 que comprende un residuo de Lys en una posicion correspon- diente a la posicion 42 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
40. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-32 que comprende un residuo de Lys en una posicion correspon- diente a la posicion 43 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
41. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-32 que comprende un residuo de Lys en una posicion correspon- diente a la posicion 27 o 37 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1) y que incorpora cinco elementos_1 de formula Chem. 3.
42. El derivado de la realizacion 41 que incorpora ademas un elemento_2 de formula Chem. 4.
43. El derivado de cualquiera de las realizaciones 41 o 42 que incorpora ademas un elemento_3 de formula Chem. 5.
44. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-32 que comprende un residuo de Lys en una posicion correspon- diente a la posicion 38, 39, 40, 41, 42 o 43 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1) y que incorpora de dos a cuatro elemen- tos_1 de formula Chem. 3.
45. El derivado de la realizacion 44 que incorpora ademas un elemento_2 de formula Chem. 4.
46. El derivado de cualquiera de las realizaciones 44 o 45 que incorpora ademas un elemento_3 de formula Chem. 5 o un elemento_4 de formula Chem. 6.
47. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-46, en el que si Xaa42 esta ausente, entonces Xaa43 tambien esta ausente.
48. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-47, en el que si Xaa41 esta ausente, entonces Xaa42 y Xaa43 tambien estan ausentes.
49. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-48, en el que si Xaa40 esta ausente, entonces Xaa41, Xaa42 y Xaa43 tambien estan ausentes.
50. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-49, en el que si Xaa39 esta ausente, entonces Xaa40, Xaa41, Xaa42 y Xaa43 tambien estan ausentes.
51. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-50, en el que si Xaa38 esta ausente, entonces Xaa39, Xaa40, Xaa41, Xaa42 y Xaa43 tambien estan ausentes.
52.
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-51, en el que Xaa7 es His.
53.
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-52, en el que Xaa8 es Aib.
cn
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-53, en el que Xaa-12 es Phe
55.
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-54, en el que Xaa-16 es Val.
CD LO
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-55, en el que Xaa-18 es Ser.
cn
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-56, en el que Xaa-19 es Tyr.
cn co
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-57, en el que Xaa20 es Leu
59.
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-58, en el que Xaa22 es Gly.
o CD
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-58, en el que Xaa22 es Glu.
61.
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-60, en el que Xaa23 es Gin.
c\i CD
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-61, en el que Xaa25 es Ala.
62a. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-62, en el que Xaa26 es Arg
63. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-62a, en
64. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-62, en e
a que Xaa27 es Glu. que Xaa27 es Lys.
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LO CD
El derivado de cualquiera de las realizaciones CD en el que Xaa30 es Ala.
CD CD
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-65, en el que Xaa31 es Trp.
CD
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-66, en el que Xaa33 es Val.
CO CD
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-67, en el que Xaa34 es Arg.
69.
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-68, en el que Xaa35 es Gly.
70.
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-69, en el que Xaa36 es Arg.
71.
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-70, en el que Xaa37 es Gly.
72.
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-70, en el que Xaa37 es Lys.
73.
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-72, en el que Xaa38 es Ser.
74.
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-72, en el que Xaa38 es Gly.
75.
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-72, en el que Xaa38 es Lys.
CD
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-72, en el que Xaa38 esta ausente
77.
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-76, en el que Xaa39 es Ser.
0°
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-76, en el que Xaa39 es Gly.
79.
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-76, en el que Xaa39 es Lys.
OO O
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-76, en el que Xaa39 esta ausente
81.
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-80, en el que Xaa40 es Ser.
c\i CO
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-80, en el que Xaa40 es Gly.
cd CO
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-80, en el que Xaa40 es Lys.
CO
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-80, en el que Xaa40 esta ausente
id CO
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-84, en el que Xaa41 es Ser.
CD CO
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-84, en el que Xaa41 es Ala.
CO
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-84, en el que Xaa41 es Lys.
00 CO
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-84, en el que Xaa41 esta ausente
89.
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-88, en el que Xaa42 es Pro.
CD o
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-88, en el que Xaa42 es Lys.
91.
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-88, en el que Xaa42 esta ausente
92.
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-91, en el que Xaa43 es Lys.
93.
El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-91, en el que Xaa43 esta ausente
93a. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-93, en el que el peptido GLP-1 tiene un maximo de 12 cambios de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
93b. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-93a, en el que el peptido GLP-1 tiene un maximo de 11 cambios
de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
93c. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-93b, en el que el peptido GLP-1 tiene un maximo de 10 cambios
de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
93d. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-93c, en el que el peptido GLP-1 tiene un maximo de 9 cambios de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
93e. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-93d, en el que el peptido GLP-1 tiene un maximo de 8 cambios de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
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93f. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-93e, en el que el peptido GLP-1 tiene un maximo de 7 cambios de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
93g. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-93f, en el que el peptido GLP-1 tiene un maximo de 6 cambios de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
93h. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-93g, en el que el peptido GLP-1 tiene un maximo de 5 cambios de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
93i. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-93i, en el que el peptido GLP-1 tiene un maximo de 4 cambios de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
93j. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-93j, en el que el peptido GLP-1 tiene un maximo de 3 cambios de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
93k. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-93k, en el que el peptido GLP-1 tiene un maximo de 2 cambios de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
93l. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-93l, en el que el peptido GLP-1 tiene un maximo de 1 cambio de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
93m. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-93l, en el que el peptido GLP-1 tiene un mmimo de 1 cambio de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
93n. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-93m, en el que el peptido GLP-1 tiene un mmimo de 2 cambios de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
93o. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-93n, en el que el peptido GLP-1 tiene un mmimo de 3 cambios de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
93p. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-93o, en el que el peptido GLP-1 tiene un mmimo de 4 cambios de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
93q. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-93p, en el que el peptido GLP-1 tiene un mmimo de 5 cambios de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
93r. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-93q, en el que el peptido GLP-1 tiene un mmimo de 6 cambios de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
93s. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-93r, en el que el peptido GLP-1 tiene un mmimo de 7 cambios de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
93t. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-93s, en el que el peptido GLP-1 tiene un mmimo de 8 cambios de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
93u. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-93t, en el que el peptido GLP-1 tiene un mmimo de 9 cambios de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
93v. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-93u, en el que el peptido GLP-1 tiene un mmimo de 10 cambios de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
93w. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-93v, en el que el peptido GLP-1 tiene 4 cambios de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
93x. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-93w, en el que el peptido GLP-1 tiene 5 cambios de aminoacidos, en comparacion con GlP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
93y. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-93x, en el que el peptido GLP-1 tiene 6 cambios de aminoacidos, en comparacion con GlP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
93z. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-93y, en el que el peptido GLP-1 tiene 7 cambios de aminoacidos, en comparacion con GlP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
93®. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-93z, en el que el peptido GLP-1 tiene 8 cambios de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
930. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-93®, en el que el peptido GLP-1 tiene 9 cambios de aminoacidos, en comparacion con GlP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
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93a. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-930, en el que el peptido GLP-1 tiene 10 cambios de aminoaci- dos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
94. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-93a, en el que el peptido GLP-1 incorpora solo una Lys.
95. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-94, en el que el peptido GLP-1 se selecciona a partir de los siguientes analogos de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1): i) (8Aib, 22E, 26R, 27K, 34R), ii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 37K), iii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39G, 40G, 41 S, 42K), iv) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39G, 40S, 41 K), v) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39S, 40K), vi) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38K), vii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39K), viii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39S, 40G, 41A, 42P, 43K) y ix) (8Aib, 26R, 34R, 38K).
96. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-95, en forma de una sal de sodio o potasio del mismo.
96. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-95, que es un agonista del receptor de GLP-1.
97. El derivado de la realizacion 96, que es un agonista del receptor de GLP-1 completo.
98. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-97, que es biologicamente activo in vitro.
99. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-98, que es potente in vitro.
100. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-99, que es capaz de activar el receptor de GLP-1 humano.
101. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-100 que es capaz de activar el receptor de GLP-1 humano en un ensayo con celulas completas que expresan el receptor de GLP-1 humano, en donde el ensayo se realiza en ausencia de HSA (0% de HSA) y/o en presencia de HSA (1% de HSA).
102. El derivado de la realizacion 101, en donde se mide la respuesta del receptor de GLP-1 humano en un ensayo de gen informador, tal como el ensayo del Ejemplo 35.
103. El derivado de cualquiera de las realizaciones 98-102, en el que la actividad biologica o la potencia in vitro se determina esencialmente como se describe en el Ejemplo 35.
104. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-103, que tiene una potencia in vitro correspondiente a una CE50 de 300 pM o menor.
105. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-104, que tiene una potencia in vitro correspondiente a una CE50 de 200 pM o menor.
106. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-105, que tiene una potencia in vitro correspondiente a una CE50 de 100 pM o menor.
107. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-106, que tiene una potencia in vitro correspondiente a una CE50 de 75 pM o menor.
108. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-107, que tiene una potencia in vitro correspondiente a una CE50 de 50 pM o menor.
109. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-108, que tiene una potencia in vitro correspondiente a una CE50 de 25 pM o menor.
110. El derivado de cualquiera de las realizaciones 104-109, en el que la CE50 se determina esencialmente como se describe en el Ejemplo 35.
111. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-110, que tiene una potencia in vitro correspondiente a una CE50 menor de 30 veces la CE50 de semaglutida, en donde la CE50 de semaglutida se determina de la misma manera que la CE50 del derivado.
112. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-111, que tiene una potencia in vitro correspondiente a una CE50 menor de 20 veces la CE50 de semaglutida, en donde la CE50 de semaglutida se determina de la misma manera que la CE50 del derivado.
113. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-112, que tiene una potencia in vitro correspondiente a una CE50 menor de 10 veces la CE50 de semaglutida, en donde la CE50 de semaglutida se determina de la misma manera que la CE50 del derivado.
114. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-113, que tiene una potencia in vitro correspondiente a una CE50 menor de 7,5 veces la CE50 de semaglutida, en donde la CE50 de semaglutida se determina de la misma manera que la CE50 del derivado.
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115. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-114, que tiene una potencia in vitro correspondiente a una CE50 menor de 5 veces el CE50 de semaglutida, en donde la CE50 de semaglutida se determina de la misma manera que la CE50 del derivado.
116. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-115, que tiene una potencia in vitro correspondiente a una CE50 menor de 2,5 veces la CE50 de semaglutida, en donde la CE50 de semaglutida se determina de la misma manera que la CE50 del derivado.
117. El derivado de cualquiera de las realizaciones 111-116, en el que la CE50 se determina esencialmente como se describe en el Ejemplo 35.
118. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-117, que es capaz de unirse al receptor de GLP-1.
119. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-118, que es capaz de unirse al receptor de GLP-1 a una concentracion baja de HSA (max. 0,001% de concentracion final del ensayo).
120. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-119, que es capaz de unirse al receptor de GLP-1 a una concentracion alta de HSA (2,0% de concentracion final del ensayo).
121. El derivado de cualquiera de las realizaciones 118-120, en el que la union al receptor de GLP-1 humano se mide en un ensayo de union competitiva, tal como el ensayo del Ejemplo 36.
122. El derivado de cualquiera de las realizaciones 118-121, en el que la union al receptor de GLP-1 humano in vitro se determina esencialmente como se describe en el Ejemplo 362.
123. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-122, que a una unirse al receptor de GLP-1 humano con una CI50 de 3,0 nM o menor.
124. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-123, que a una unirse al receptor de GLP-1 humano con una CI50 de 2,0 nM o menor.
125. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-124, que a una unirse al receptor de GLP-1 humano con una CI50 de 1,0 nM o menor.
126. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-125, que a una unirse al receptor de GLP-1 humano con una CI50 de 0,5 nM o menor.
127. El derivado de cualquiera de las realizaciones 123-126, en el que la CI50 se determina esencialmente como se describe en el Ejemplo 36, en una reaccion con max. 0,001% de HSA (concentracion final del ensayo).
128. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-127, que a una concentracion muy baja de HSA es capaz de unirse al receptor de GLP-1 humano con una CI50 menor de 2 veces la CI50 de semaglutida, en donde la CI50 de semaglutida se determina de la misma manera que la CI50 del derivado.
129. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-128, que a una concentracion muy baja de HSA es capaz de unirse al receptor de GLP-1 humano con una CI50 menor de 1,5 veces la CI50 de semaglutida, en donde la CI50 de semaglutida se determina de la misma manera que la CI50 del derivado.
130. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-129, que a una concentracion muy baja de HSA es capaz de unirse al receptor de GLP-1 humano con una CI50 menor de 1 vez la CI50 de semaglutida, en donde la CI50 de semaglutida se determina de la misma manera que la CI50 del derivado.
131. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-130, que a una concentracion muy baja de HSA es capaz de unirse al receptor de GLP-1 humano con una CI50 menor de 0,6 veces la CI50 de semaglutida, en donde la CI50 de semaglutida se determina de la misma manera que la CI50 del derivado.
132. El derivado de cualquiera de las realizaciones 123-131, en el que la CI50 se determina esencialmente como se describe en el Ejemplo 36, en una reaccion con max. 0,001% de HSA (concentracion final del ensayo).
133. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-132, que con 2,0% de HSA (concentracion final del ensayo) es capaz de unirse al receptor de GLP-1 humano con una CI50 de 300 nM o inferior.
134. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-133, que con 2,0% de HSA (concentracion final del ensayo) es capaz de unirse al receptor de GLP-1 humano con una CI50 de 125 nM o inferior.
135. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-134, que con 2,0% de HSA (concentracion final del ensayo) es capaz de unirse al receptor de GLP-1 humano con una CI50 de 75 nM o inferior.
136. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-135, que con 2,0% de HSA (concentracion final del ensayo) es capaz de unirse al receptor de GLP-1 humano con una CI50 de 50 nM o inferior.
concentracion muy baja de HSA es capaz de concentracion muy baja de HSA es capaz de concentracion muy baja de HSA es capaz de concentracion muy baja de HSA es capaz de
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137. El derivado de cualquiera de las realizaciones 133-136, en el que la CI50 se determina esencialmente como se describe en el Ejemplo 36, en una reaccion con 2,0% de HSA (concentracion final del ensayo).
138. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-137, que con 2,0% de HSA (concentracion final del ensayo) es capaz de unirse al receptor de GLP-1 humano con una CI50 menor de 1 vez la CI50 de semaglutida, en donde la CI50 de semaglutida se determina de la misma manera que la CI50 del derivado.
139. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-138, que con 2,0% de HSA (concentracion final del ensayo) es capaz de unirse al receptor de GLP-1 humano con una CI50 menor de 0,5 veces la CI50 de semaglutida, en donde la CI 50 de semaglutida se determina de la misma manera que la CI50 del derivado.
140. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-139, que con 2,0% de HSA (concentracion final del ensayo) es capaz de unirse al receptor de GLP-1 humano con una CI50 menor de 0,25 veces la CI50 de semaglutida, en donde la CI 50 de semaglutida se determina de la misma manera que la CI50 del derivado.
141. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-140, que con 2,0% de HSA (concentracion final del ensayo) es capaz de unirse al receptor de GLP-1 humano con una CI50 menor de 0,17 veces la CI50 de semaglutida, en donde la CI 50 de semaglutida se determina de la misma manera que la CI50 del derivado.
142. El derivado de cualquiera de las realizaciones 138-141, en el que la CI50 se determina esencialmente como se describe en el Ejemplo 36, en una reaccion con 2,0% de HSA (concentracion final del ensayo).
143. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-142, que tiene propiedades farmacocineticas mejoradas.
144. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-143, que tiene una semivida mas larga y/o un aclaramiento reducido.
145. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-144, que es adecuado para la administracion una vez al mes.
146. El derivado de la realizacion 145, para la administracion s.c.
147. El derivado de cualquiera de las realizaciones 143-146, donde el derivado se somete a ensayo in vivo en estudios farmacocineticos (PK).
148. El derivado de la realizacion 147, donde el derivado se somete a ensayo en cualquier modelo animal adecuado, tal como raton, rata, mono, perro o cerdo.
149. El derivado de cualquiera de las realizaciones 143-148, que se compara con semaglutida.
150. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-149, que tiene una semivida terminal (T1^) mejorada in vivo en cerdos enanos despues de una administracion i.v. en comparacion con semaglutida.
151. El derivado de cualquiera de las realizaciones 143-150, en el que la semivida terminal se determina in vivo en cerdos enanos despues de una administracion i.v. utilizando cualquier protocolo de estudio adecuado, tal como el descrito en el Ejemplo 37.
152. El derivado de cualquiera de las realizaciones 143-151, en el que la semivida terminal se determina in vivo en cerdos enanos despues de la administracion i.v., esencialmente como se describe en el Ejemplo 37.
153. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-152, que tiene una semivida terminal (T1^) in vivo en cerdos enanos despues de una administracion i.v. de al menos 100 horas.
154. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-153, que tiene una semivida terminal (T1^) in vivo en cerdos enanos despues de una administracion i.v. de al menos 125 horas.
155. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-154, que tiene una semivida terminal (T1^) in vivo en cerdos enanos despues de una administracion i.v. de al menos 150 horas.
156. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-155, que tiene una semivida terminal (T1^) in vivo en cerdos enanos despues de una administracion i.v. de al menos 175 horas.
157. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-156, que tiene una semivida terminal (T1^) in vivo en cerdos enanos despues de una administracion i.v. de al menos 2,1 veces la semivida terminal de semaglutida, determinada de la misma manera.
158. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-157, que tiene una semivida terminal (T1^) in vivo en cerdos enanos despues de una administracion i.v. de al menos 2,5 veces la semivida terminal de semaglutida, determinada de la misma manera.
159. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-158, que tiene una semivida terminal (T1^) in vivo en cerdos
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enanos despues de una administracion i.v. de al menos 2,8 veces la semivida terminal de semaglutida, determinada de la misma manera.
160. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-159, que tiene una semivida terminal (T1^) in vivo en cerdos enanos despues de una administracion i.v. de al menos 3,3 veces la semivida terminal de semaglutida, determinada de la misma manera.
161. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-160, que es potente in vivo.
162. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-161, que es potente in vivo cuando se determina en cualquier modelo animal adecuado, tal como un raton o un cerdo.
163. El derivado de la realizacion 162, en el que el modelo animal es un raton db/db.
164. El derivado de cualquiera de las realizaciones 161-163, en el que se determina el efecto reductor de la glucosa en sangre.
165. El derivado de cualquiera de las realizaciones 161-164, en el que se determina el efecto de disminucion del peso corporal.
166. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-165, en el que el efecto reductor de la glucosa en sangre y/o del peso corporal se determina in vivo en un raton db/db usando cualquier protocolo y metodologfa de estudio adecuados, por ejemplo, como se describe en el Ejemplo 38.
167. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-166, en el que el efecto reductor de la glucosa en sangre y/o el efecto reductor del peso corporal se determinan in vivo en un raton db/db, esencialmente como se describe en el Ejemplo 38.
168. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-167, que tiene el efecto in vivo de reducir la glucosa en sangre despues de 48 horas, determinado en un estudio de dosis unica en un modelo de raton db/db.
169. El derivado de la realizacion 168, en el que la glucosa en sangre se reduce en al menos 15%, en comparacion con el nivel de glucosa en sangre antes de la administracion del derivado.
170. El derivado de cualquiera de las realizaciones 168-169, en el que la glucosa en sangre se reduce en al menos 30%, en comparacion con el nivel de glucosa en sangre antes de la administracion del derivado.
171. El derivado de cualquiera de las realizaciones 168-170, en el que la glucosa en sangre se reduce en al menos 37%, en comparacion con el nivel de glucosa en sangre antes de la administracion del derivado.
172. El derivado de cualquiera de las realizaciones 168-171, en el que la glucosa en sangre se reduce en al menos 47%, en comparacion con el nivel de glucosa en sangre antes de la administracion del derivado.
173. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-172, que tiene el efecto in vivo de disminuir la glucosa en sangre despues de 72 horas, determinado en un estudio de dosis unica en un modelo de raton db/db.
174. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-173, que tiene el efecto in vivo de disminuir la glucosa en sangre despues de 96 horas, determinado en un estudio de dosis unica en un modelo de raton db/db.
175. El derivado de la realizacion 174, en el que la glucosa en sangre se reduce en al menos un 5%, en comparacion con el nivel de glucosa en sangre antes de la administracion del derivado.
176. El derivado de cualquiera de las realizaciones 174-175, en el que la glucosa en sangre se reduce en al menos un 10%, en comparacion con el nivel de glucosa en sangre antes de la administracion del derivado.
177. El derivado de cualquiera de las realizaciones 174-176, en el que la glucosa en sangre se reduce en al menos un 15%, en comparacion con el nivel de glucosa en sangre antes de la administracion del derivado.
178. El derivado de cualquiera de las realizaciones 174-177, en el que la glucosa en sangre se reduce en al menos un 20%, en comparacion con el nivel de glucosa en sangre antes de la administracion del derivado.
179. El derivado de cualquiera de las realizaciones 174-178, en el que la glucosa en sangre se reduce en al menos un 25%, en comparacion con el nivel de glucosa en sangre antes de la administracion del derivado.
180. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-179, que tiene el efecto in vivo de disminuir el peso corporal despues de 48 horas, determinado en un estudio de dosis unica en un modelo de raton db/db.
181. El derivado de la realizacion 180, en el que el peso corporal se reduce en al menos un 3%, en comparacion con el peso corporal antes de la administracion del derivado.
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182. El derivado de cualquiera de las realizaciones 180-181, en el que el peso corporal se reduce en al menos un 4%, en comparacion con el peso corporal antes de la administracion del derivado.
183. El derivado de cualquiera de las realizaciones 180-182, en el que el peso corporal se reduce en al menos un 5%, en comparacion con el peso corporal antes de la administracion del derivado.
184. El derivado de cualquiera de las realizaciones 180-183, en el que el peso corporal se reduce en al menos un 6%, en comparacion con el peso corporal antes de la administracion del derivado.
185. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-184, que tiene el efecto in vivo de disminuir el peso corporal
despues de 72 horas, determinado en un estudio de dosis unica en un modelo de raton db/db.
186. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-185 que tiene el efecto in vivo de disminuir el peso corporal
despues de 96 horas, determinado en un estudio de dosis unica en un modelo de raton db/db.
187. El derivado de la realizacion 186, en el que el peso corporal se reduce en al menos un 2%, en comparacion con el peso corporal antes de la administracion del derivado.
188. El derivado de cualquiera de las realizaciones 186-187, en el que el peso corporal se reduce en al menos un 3%, en comparacion con el peso corporal antes de la administracion del derivado.
189. El derivado de cualquiera de las realizaciones 186-188, en el que el peso corporal se reduce en al menos un 4%, en comparacion con el peso corporal antes de la administracion del derivado.
190. El derivado de cualquiera de las realizaciones 186-189, en el que el peso corporal se reduce en al menos un 5%, en comparacion con el peso corporal antes de la administracion del derivado.
191. El derivado de cualquiera de las realizaciones 186-190, en el que el peso corporal se reduce en al menos un 6%, en comparacion con el peso corporal antes de la administracion del derivado.
192. El derivado de la realizacion 162, en el que el modelo animal es un cerdo.
193. El derivado de la realizacion 192, en el que el modelo animal es un cerdo LYD.
194. El derivado de cualquiera de las realizaciones 192-193, en el que la reduccion en la ingesta de alimentos se determina en un estudio farmacodinamico (PD) in vivo.
195. El derivado de cualquiera de las realizaciones 192-194, en el que la reduccion en la ingesta de alimentos se determina in vivo en cerdos utilizando cualquier protocolo y metodologfa de estudio adecuados, por ejemplo, como se describe en el Ejemplo 39.
196. El derivado de cualquiera de las realizaciones 192-195, en el que la reduccion en la ingesta de alimentos se determina in vivo en cerdos utilizando cualquier protocolo y metodologfa de estudio adecuados, esencialmente como se describe en el Ejemplo 39.
197. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-196, que tiene el efecto in vivo de reducir la ingesta de alimentos durante un primer periodo de 24 horas (0-24 horas) despues de la administracion de una dosis unica del derivado, en donde la ingesta de alimentos se determina en un estudio de dosis unica en un modelo de cerdo LYD.
198. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-197, que tiene el efecto in vivo de reducir la ingesta de alimentos durante un segundo penodo de 24 horas (24-48 horas) despues de la administracion de una dosis unica del derivado, en donde la ingesta de alimentos se determina en un estudio de dosis unica en un modelo de cerdo LYD.
199. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-198, que tiene el efecto in vivo de reducir la ingesta de alimentos durante un tercer periodo de 24 horas (48-72 horas) despues de la administracion de una dosis unica del derivado, en donde la ingesta de alimentos se determina en un estudio de dosis unica en un modelo de cerdo LYD.
200. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-199, que tiene el efecto in vivo de reducir la ingesta de alimentos durante un cuarto periodo de 24 horas (72-96 horas) despues de la administracion de una dosis unica del derivado, en donde la ingesta de alimentos se determina en un estudio de dosis unica en un modelo de cerdo LYD.
201. Un derivado de GLP-1 seleccionado a partir de los siguientes: Chem. 21, Chem. 22, Chem. 23, Chem. 24, Chem. 25, Chem. 26, Chem. 27, Chem. 28, Chem. 29, Chem. 30, Chem. 31, Chem. 32, Chem. 33, Chem. 34, Chem. 35, Chem. 36, Chem. 37, Chem. 38, Chem. 39 y Chem. 40; o una sal, una amida o un ester farmaceuticamente aceptable del mismo.
202. Un derivado de GLP-1 seleccionado a partir de las estructuras qmmicas mostradas en cualquiera de los Ejemplos 1-34, preferiblemente 1-20; o una sal, una amida o un ester farmaceuticamente aceptable del mismo.
203. Un derivado de GLP-1 seleccionado a partir de los nombres de derivados de GLP-1 mostrados en cualquiera de
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los Ejemplos 1-34, preferiblemente 1-20; o una sal, una amida o un ester farmaceuticamente aceptable del mismo.
204. El derivado de cualquiera de las realizaciones 201-203, que es un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-200.
205. Un producto intermedio en forma de un analogo de GLP-1, que comprende los siguientes cambios de aminoaci- dos en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1): iii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39G, 40G, 41 S, 42K), iv) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39G, 40S, 41 K), v) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39S, 40K), vii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39K) o viii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39S, 40G, 41A, 42P, 43K).
205a. Un producto intermedio en forma de un analogo de GLP-1, que comprende los siguientes cambios de aminoa- cidos en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1): 40K, 41K, 42Ko 43K.
205b. El producto intermedio de la realizacion 205a, que es un peptido GLP-1 de formula I como se ha definido en la realizacion 1.
205c. El producto intermedio de cualquiera de las realizaciones 205a-205b, que es un peptido GLP-1 como se ha definido en cualquiera de las realizaciones 33-40,
205d. El producto intermedio de cualquiera de las realizaciones 205a-205c, que es un peptido GLP-1 como se ha definido en cualquiera de las realizaciones 47-95,
206. Un producto intermedio en forma de un analogo de GLP-1, seleccionado a partir de los siguientes analogos de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1): i) (8Aib, 22E, 26R, 27K, 34R), iii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39G, 40G, 41 S, 42K), iv) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39G, 40S, 41 K), v) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38G, 39S, 40K), vii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39K) y viii) (8Aib, 22E, 26R, 34R, 38S, 39S, 40G, 41A, 42P, 43K).
207. Una composicion farmaceutica que comprende un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1204 o un analogo de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 205-206 incluyendo 205a-205d y un excipiente farmaceuticamente aceptable.
208. Un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-204 o un analogo de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 205-206 incluyendo 205a-205d, para uso como un medicamento.
209. Un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-204 o un analogo de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 205-206 incluyendo 205a-205d, para uso en
(i) prevencion y/o tratamiento de todas las formas de diabetes, tales como hiperglucemia, diabetes de tipo 2, tolerancia alterada a la glucosa, diabetes de tipo 1, diabetes no dependiente de insulina, MODY (diabetes de la edad madura que se presenta en el joven), diabetes gestacional y/o para la reduccion de HbA1C;
(ii) retraso o prevencion de la progresion de una enfermedad diabetica, tal como la progresion en diabetes de tipo 2, retraso de la progresion de la tolerancia alterada a la glucosa (IGT) a diabetes de tipo 2 que requiere insulina, retraso o prevencion de la resistencia a la insulina y/o retraso de la progresion de la diabetes de tipo 2 que no requiere insulina a diabetes de tipo 2 que requiere insulina;
(iii) mejora de la funcion de las celulas p, tal como disminuyendo la apoptosis de las celulas p, aumentando la funcion de las celulas p y/o la masa de las celulas p y/o para restaurar la sensibilidad a la glucosa de las celulas
p;
(iv) prevencion y/o tratamiento de trastornos cognitivos y/o trastornos neurodegenerativos, tales como enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson y/o esclerosis multiple;
(v) prevencion y/o tratamiento de trastornos de la alimentacion, tales como la obesidad, por ejemplo, mediante una disminucion de la ingesta de alimentos, reduccion del peso corporal, supresion del apetito, induccion de saciedad; tratamiento o prevencion del trastorno por atracon, bulimia nerviosa y/u obesidad inducida por la ad- ministracion de un antipsicotico o un esteroide; reduccion de la motilidad gastrica; retraso del vaciado gastrico; aumento de la movilidad ffsica; y/o prevencion y/o tratamiento de comorbilidades de la obesidad, tales como la osteoartritis y/o incontinencia urinaria;
(vi) prevencion y/o tratamiento de complicaciones diabeticas, tales como angiopatfa; neuropatfa, incluyendo neu- ropatfa periferica; nefropatfa; y/o retinopatfa;
(vii) mejora de los parametros lipfdicos, tal como prevencion y/o tratamiento de la dislipidemia, reduccion de los lfpidos sericos totales; incremento de HDL; reduccion de LDL pequena y densa; reduccion de VLDL; reduccion de los trigliceridos; reduccion del colesterol; reduccion de los niveles plasmaticos de lipoprotema a (Lp(a)) en un ser humano; inhibicion de la generacion de apolipoprotema a (apo(a)) in vitro y/o in vivo;
(viii) prevencion y/o tratamiento de enfermedades cardiovasculares, como el smdrome X; aterosclerosis; infarto
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de miocardio; enfermedad cardiaca coronaria; lesion por reperfusion, accidente cerebrovascular, isquemia cerebral; una enfermedad cardiovascular temprana o cardiaca temprana, hipertrofia ventricular izquierda; enfermedad arterial coronaria; hipertension; hipertension esencial; emergencia por hipertension aguda; cardiomiopatia; insu- ficiencia ca^aca; intolerancia al ejercicio; insuficiencia cardiaca aguda y/o cronica; arritmia; trastorno del ritmo cardfaco; smcope; angina de pecho; reoclusion de una derivacion y/o una endoprotesis ca^aca; claudicacion intermitente (arterioesclerosis obliterante); disfuncion diastolica; y/o disfuncion sistolica; y/o reduccion de la pre- sion sangumea, tal como reduccion de la presion sangumea sistolica;
(ix) prevencion y/o tratamiento de enfermedades gastrointestinales, tales como smdrome de intestino inflamato- rio; smdrome del intestino delgado, o enfermedad de Crohn o colitis; dispepsia; y/o ulceras gastricas; y/o infla- macion, tal como psoriasis, artritis psoriatica, artritis reumatoide y/o lupus eritematoso sistemico;
(x) prevencion y/o tratamiento de enfermedad cntica, tal como el tratamiento de un paciente con enfermedad cntica, una polinefropatfa del paciente cntico (CIPNP) y/o un paciente con CIPNP potencial; prevencion del desa- rrollo de enfermedad cntica o CIPNP; prevencion, tratamiento y/o curacion del smdrome de respuesta inflamato- ria sistemica (SIRS) en un paciente; prevencion o reduccion de la probabilidad de que un paciente padezca bacteriemia, septicemia y/o choque septico durante una hospitalizacion; y/o estabilizacion de la glucosa en san- gre, equilibrio de la insulina y opcionalmente el metabolismo en pacientes de unidades de cuidados intensivos con enfermedad aguda;
(xi) prevencion y/o tratamiento del smdrome de ovario poliqmstico (PCOS).
(xii) prevencion y/o tratamiento de enfermedad cerebral, tal como isquemia cerebral, hemorragia cerebral y/o lesion cerebral traumatica;
(xiii) prevencion y/o tratamiento de la apnea del sueno; y/o
(xiv) prevencion y/o tratamiento de abuso, tal como abuso de alcohol y/o abuso de drogas.
210. Uso de un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-204 o un analogo de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 205-206 incluyendo 205a-205d, en la preparacion de un medicamento para
(i) prevencion y/o tratamiento de todas las formas de diabetes, tales como hiperglucemia, diabetes de tipo 2, tolerancia alterada a la glucosa, diabetes de tipo 1, diabetes no dependiente de insulina, MODY (diabetes de la edad madura que se presenta en el joven), diabetes gestacional y/o para la reduccion de HbAIC;
(ii) retraso o prevencion de la progresion de una enfermedad diabetica, tal como la progresion en diabetes de tipo 2, retraso de la progresion de la tolerancia alterada a la glucosa (IGT) a diabetes de tipo 2 que requiere insulina, retraso o prevencion de la resistencia a la insulina y/o retraso de la progresion de la diabetes de tipo 2 que no requiere insulina a diabetes de tipo 2 que requiere insulina;
(iii) mejora de la funcion de las celulas p, tal como disminuyendo la apoptosis de las celulas p, aumentando la funcion de las celulas p y/o la masa de las celulas p y/o para restaurar la sensibilidad a la glucosa de las celulas
p;
(iv) prevencion y/o tratamiento de trastornos cognitivos y/o trastornos neurodegenerativos, tales como enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson y/o esclerosis multiple;
(v) prevencion y/o tratamiento de trastornos de la alimentacion, tales como la obesidad, por ejemplo, mediante una disminucion de la ingesta de alimentos, reduccion del peso corporal, supresion del apetito, induccion de saciedad; tratamiento o prevencion del trastorno por atracon, bulimia nerviosa y/u obesidad inducida por la ad- ministracion de un antipsicotico o un esteroide; reduccion de la motilidad gastrica; retraso del vaciado gastrico; aumento de la movilidad ffsica; y/o prevencion y/o tratamiento de comorbilidades de la obesidad, tales como la osteoartritis y/o incontinencia urinaria;
(vi) prevencion y/o tratamiento de complicaciones diabeticas, tales como angiopatfa; neuropatfa, incluyendo neu- ropatfa periferica; nefropatfa; y/o retinopatfa;
(vii) mejora de los parametros lipfdicos, tal como prevencion y/o tratamiento de la dislipidemia, reduccion de los lfpidos sericos totales; incremento de HDL; reduccion de LDL pequena y densa; reduccion de VLDL; reduccion de los trigliceridos; reduccion del colesterol; reduccion de los niveles plasmaticos de lipoprotema a (Lp(a)) en un ser humano; inhibicion de la generacion de apolipoprotema a (apo(a)) in vitro y/o in vivo;
(viii) prevencion y/o tratamiento de enfermedades cardiovasculares, como el smdrome X; aterosclerosis; infarto de miocardio; enfermedad cardiaca coronaria; lesion por reperfusion, accidente cerebrovascular, isquemia cerebral; una enfermedad cardiovascular temprana o cardiaca temprana, hipertrofia ventricular izquierda; enfermedad arterial coronaria; hipertension; hipertension esencial; emergencia por hipertension aguda; cardiomiopatfa; insuficiencia cardiaca; intolerancia al ejercicio; insuficiencia cardiaca aguda y/o cronica; arritmia; trastorno del ritmo cardfaco; smcope; angina de pecho; reoclusion de una derivacion y/o una endoprotesis cardiaca; claudicacion
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intermitente (arterioesclerosis obliterante); disfuncion diastolica; y/o disfuncion sistolica; y/o reduccion de la presion sangumea, tal como reduccion de la presion sangumea sistolica;
(ix) prevencion y/o tratamiento de enfermedades gastrointestinales, tales como smdrome de intestino inflamato- rio; smdrome del intestino delgado, o enfermedad de Crohn o colitis; dispepsia; y/o ulceras gastricas; y/o infla- macion, tal como psoriasis, artritis psoriatica, artritis reumatoide y/o lupus eritematoso sistemico;
(x) prevencion y/o tratamiento de enfermedad cntica, tal como el tratamiento de un paciente con enfermedad cntica, una polinefropatfa del paciente cntico (CIPNP) y/o un paciente con CIPNP potencial; prevencion del desa- rrollo de enfermedad cntica o CIPNP; prevencion, tratamiento y/o curacion del smdrome de respuesta inflamato- ria sistemica (SIRS) en un paciente; prevencion o reduccion de la probabilidad de que un paciente padezca bacteriemia, septicemia y/o choque septico durante una hospitalizacion; y/o estabilizacion de la glucosa en san- gre, equilibrio de la insulina y opcionalmente el metabolismo en pacientes de unidades de cuidados intensivos con enfermedad aguda;
(xi) prevencion y/o tratamiento del smdrome de ovario poliqmstico (PCOS).
(xii) prevencion y/o tratamiento de enfermedad cerebral, tal como isquemia cerebral, hemorragia cerebral y/o lesion cerebral traumatica;
(xiii) prevencion y/o tratamiento de la apnea del sueno; y/o
(xiv) prevencion y/o tratamiento de abuso, tal como abuso de alcohol y/o abuso de drogas.
211. Un metodo para
(i) prevencion y/o tratamiento de todas las formas de diabetes, tales como hiperglucemia, diabetes de tipo 2, tolerancia alterada a la glucosa, diabetes de tipo 1, diabetes no dependiente de insulina, MODY (diabetes de la edad madura que se presenta en el joven), diabetes gestacional y/o para la reduccion de HbAIC;
(ii) retraso o prevencion de la progresion de una enfermedad diabetica, tal como la progresion en diabetes de tipo 2, retraso de la progresion de la tolerancia alterada a la glucosa (IGT) a diabetes de tipo 2 que requiere insulina, retraso o prevencion de la resistencia a la insulina y/o retraso de la progresion de la diabetes de tipo 2 que no requiere insulina a diabetes de tipo 2 que requiere insulina;
(iii) mejora de la funcion de las celulas p, tal como disminuyendo la apoptosis de las celulas p, aumentando la funcion de las celulas p y/o la masa de las celulas p y/o para restaurar la sensibilidad a la glucosa de las celulas
p;
(iv) prevencion y/o tratamiento de trastornos cognitivos y/o trastornos neurodegenerativos, tales como enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson y/o esclerosis multiple;
(v) prevencion y/o tratamiento de trastornos de la alimentacion, tales como la obesidad, por ejemplo, mediante una disminucion de la ingesta de alimentos, reduccion del peso corporal, supresion del apetito, induccion de saciedad; tratamiento o prevencion del trastorno por atracon, bulimia nerviosa y/u obesidad inducida por la ad- ministracion de un antipsicotico o un esteroide; reduccion de la motilidad gastrica; retraso del vaciado gastrico; aumento de la movilidad ffsica; y/o prevencion y/o tratamiento de comorbilidades de la obesidad, tales como la osteoartritis y/o incontinencia urinaria;
(vi) prevencion y/o tratamiento de complicaciones diabeticas, tales como angiopatfa; neuropatfa, incluyendo neu- ropatfa periferica; nefropatfa; y/o retinopatfa;
(vii) mejora de los parametros lipfdicos, tal como prevencion y/o tratamiento de la dislipidemia, reduccion de los lfpidos sericos totales; incremento de HDL; reduccion de LDL pequena y densa; reduccion de VLDL; reduccion de los trigliceridos; reduccion del colesterol; reduccion de los niveles plasmaticos de lipoprotema a (Lp(a)) en un ser humano; inhibicion de la generacion de apolipoprotema a (apo(a)) in vitro y/o in vivo;
(viii) prevencion y/o tratamiento de enfermedades cardiovasculares, como el smdrome X; aterosclerosis; infarto de miocardio; enfermedad cardiaca coronaria; lesion por reperfusion, accidente cerebrovascular, isquemia cerebral; una enfermedad cardiovascular temprana o cardiaca temprana, hipertrofia ventricular izquierda; enfermedad arterial coronaria; hipertension; hipertension esencial; emergencia por hipertension aguda; cardiomiopatfa; insu- ficiencia cardiaca; intolerancia al ejercicio; insuficiencia cardiaca aguda y/o cronica; arritmia; trastorno del ritmo cardfaco; smcope; angina de pecho; reoclusion de una derivacion y/o una endoprotesis cardiaca; claudicacion intermitente (arterioesclerosis obliterante); disfuncion diastolica; y/o disfuncion sistolica; y/o reduccion de la presion sangumea, tal como reduccion de la presion sangumea sistolica;
(ix) prevencion y/o tratamiento de enfermedades gastrointestinales, tales como smdrome de intestino inflamato- rio; smdrome del intestino delgado, o enfermedad de Crohn o colitis; dispepsia; y/o ulceras gastricas; y/o infla- macion, tal como psoriasis, artritis psoriatica, artritis reumatoide y/o lupus eritematoso sistemico;
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(x) prevencion y/o tratamiento de enfermedad cntica, tal como el tratamiento de un paciente con enfermedad cntica, una polinefropatfa del paciente cntico (CIPNP) y/o un paciente con CIPNP potencial; prevencion del desa- rrollo de enfermedad cntica o CIPNP; prevencion, tratamiento y/o curacion del smdrome de respuesta inflamato- ria sistemica (SIRS) en un paciente; prevencion o reduccion de la probabilidad de que un paciente padezca bacteriemia, septicemia y/o choque septico durante una hospitalizacion; y/o estabilizacion de la glucosa en san- gre, equilibrio de la insulina y opcionalmente el metabolismo en pacientes de unidades de cuidados intensivos con enfermedad aguda;
(xi) prevencion y/o tratamiento del smdrome de ovario poliqmstico (PCOS).
(xii) prevencion y/o tratamiento de enfermedad cerebral, tal como isquemia cerebral, hemorragia cerebral y/o lesion cerebral traumatica;
(xiii) prevencion y/o tratamiento de la apnea del sueno; y/o
(xiv) prevencion y/o tratamiento de abuso, tal como abuso de alcohol y/o abuso de drogas;
en el que se administra una cantidad farmaceuticamente activa de un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-204 o un analogo de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 205-206 incluyendo 205a-205d.
Ejemplos
Esta parte experimental comienza con una lista de abreviaturas y continua con una seccion que incluye metodos generales para la smtesis y la caracterizacion de analogos y derivados de la invencion. A continuacion, sigue una serie de ejemplos que se refieren a la preparacion de derivados de GLP-1 espedficos y al final se ha incluido una serie de ejemplos relacionados con la actividad y las propiedades de estos analogos y derivados (seccion titulada metodos farmacologicos).
Los ejemplos sirven para ilustrar la invencion.
Lista de abreviaturas
Aib:
Acido a-aminoisobutmco (acido 2-aminoisobutmco)
AcOH:
Acido acetico
API:
Ingrediente farmaceutico activo
AUC:
Area bajo la curva
BG:
Glucosa en sangre
BHK:
Rinon de cna de hamster
BW:
Peso corporal
Boc:
f-butiloxicarbonilo
Bom:
benciloximetilo
BSA:
Seroalbumina bovina
Bzl:
bencilo
CAS:
Chemical Abstracts Service
Clt:
2-clorotritilo
colidina:
2,4,6-trimetilpiridina
DCM:
diclorometano
Dde:
1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclohexiliden)etilo
DesH:
des-amino histidina (acido imidazopropionico o acido 3-(imidazol-5-il)propanoico Imp)
DIC:
diisopropilcarbodiimida
DIPEA:
diisopropiletilamina
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DMEM:
Medio de Eagle Modificado por Dulbecco (DMEM)
EDTA:
acido etilendiaminotetracetico
EGTA:
acido etilenglicol tetraacetico
FCS:
Suero de ternera fetal
Fmoc:
9-fluorenilmetiloxicarbonilo
HATU:
(hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio)
HBTU:
(hexafluorofosfato de 2-(1H-benzotriazol-1-il-)-1,1,3,3-tetrametiluronio)
HEPES:
acido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazinetanosulfonico
HFIP:
1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanol o hexafluoroisopropanol
HOAt:
1-hidroxi-7-azabenzotriazol
HOBt:
1-hidroxibenzotriazol
HPLC:
Cromatograffa Kquida de alto rendimiento
HSA:
Albumina serica humano
IBMX:
3-isobutil-1-metilxantina
Imp:
acido imidazopropionico o acido 3-(imidazol-5-il)propanoico (tambien denominado des-amino histidina, DesH)
Inp:
acido isonipecotico
i.v.:
por via intravenosa
ivDde:
1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclohexiliden)-3-metilbutilo
IVGTT:
Prueba de tolerancia a la glucosa intravenosa
LCMS:
Cromatograffa Lfquida con Espectroscop^a de Masas
LYD:
Raza Landrace Yorkshire Duroc
MALDI-MS:
Vease MALDI-TOF MS
MALDI-TOF MS:
Espectroscopfa de masas laser de desorcion/ionizacion asistida por matriz con analizador de tiempo de vuelo
MeOH:
metanol
Mmt:
4-metoxitritilo
Mtt:
4-metiltritilo
NMP:
N-metil pirrolidona
OBz:
ester de benzoflo
OEG:
acido 8-amino-3,6-dioxaoctanoico
OPfp:
pentafluorofenoxi
OPnp:
para-nitrofenoxi
OSu:
esteres de O-succinimidilo (esteres de hidroxisuccinimida)
OtBu:
ester terc bufflico
Oxyma Pure®:
ester efflico de acido ciano-hidroxiimino-acetico
Pbf:
2,2,4,6,7-pentametildihidrobenzofurano-5-sulfonilo
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PBS:
solucion salina tamponada con fosfato
PD:
Farmacodinamico
Pen/Strep:
Penicilina/estreptomicina
PK:
Farmacocinetico
RP:
Fase inversa
RP-HPLC:
Cromatograffa Kquida de alto rendimiento en fase inversa
TA:
Temperatura ambiente
Rt:
Tiempo de retencion
s.c.:
por via subcutanea
SD:
Desviacion estandar
SEC-HPLC:
Cromatograffa ffquida de alto rendimiento de exclusion por tamano
SEM:
Error estandar de la media
SPA:
Ensayo de centelleo por proximidad
SPPS:
Smtesis pepffdica en fase solida
tBu:
terc. butilo
TFA:
acido trifluoroacetico
TIS:
triisopropilsilano
TLC:
Cromatograffa en capa fina
Tos:
tosilato (o para-toluensulfonilo)
Tris:
tris(hidroximetil)aminometano o 2-amino-2-hidroximetil-propano-1,3-diol
Trt:
trifenilmetilo (tritilo)
Trx:
acido tranexamico
UPLC:
Cromatograffa lfquida de ultra-alta resolucion
Materiales y metodos
Ester mono-terc-bufflico de acido eicosanodioico
Ester mono-terc-bufflico de acido docosanodioico
Acido Fmoc-8-amino-3,6-dioxaoctanoico
Acido Fmoc-tranexamico
Acido Fmoc-isonipecotico
Fmoc-Lys(Fmoc)-OH
Fmoc-Glu-OtBu
Acido Fmoc-21-amino-4,7,10,13,16,19-hexaoxahenoicosanoico Acido Fmoc-15-amino-4,7,10,13-tetraoxapentadecanoico
Acido 1 -(9-fluorenilmetiloxicarbonil)amino-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36-dodecaoxanonatriacontan-39-oico Alfa-(9-fluorenilmetiloxicarbonil)amino-omega-carboxi hexadeca(etilenglicol)
Metodos quimicos
Esta seccion se divide en dos: la seccion A que se refiere a los metodos generales (de preparacion (A1) y de deteccion
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y caracterizacion (A2)) y la seccion B, en la que se describe la preparacion y caracterizacion de una serie de com- puestos de ejemplos espedficos.
A. Metodos Generales
A1. Metodos de preparacion
Esta seccion se refiere a metodos para la smtesis de peptidos en fase solida (metodos SPPS, incluyendo metodos para la desproteccion de aminoacidos, metodos para escindir el peptido de la resina y para su purificacion), as^ como a metodos para detectar y caracterizar el peptido resultante (metodos LCMS, MALDI y UPLC). La smtesis de peptidos en fase solida se puede mejorar, en algunos casos mediante el uso de dipeptidos protegidos en el enlace amida di- peptido con un grupo que puede escindirse en condiciones acidas, tal como, pero no limitado a, 2-Fmoc-oxi-4-metoxi- bencilo o 2,4,6-trimetoxibencilo. En los casos en los que esta presente en el peptido una serina o una treonina, se pueden utilizar di-peptidos de pseudoprolina (disponibles, por ejemplo, en Novabiochem, vease tambien W.R. Sampson (1999), J. Pep. Sci. 5, 403). Los derivados de aminoacidos protegidos con Fmoc usados fueron el patron reco- mendado: Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc- Gln(Trt)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)- OH, Fmoc-Met-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH o Fmoc-Val-OH, etc. proporcionados, por ejemplo, por Anaspec, Bachem, Iris Biotech o Novabio- chem. Cuando no se especifica nada mas, se emplea la forma L natural de los aminoacidos. El aminoacido N-terminal era Boc protegido en el grupo alfa amino (por ejemplo, Boc-His(Boc)-OH o Boc-His(Trt)-OH para peptidos con His en el extremo N-terminal). En caso de una fijacion de una cadena lateral modular o un resto que se une a albumina empleando SPPS, se utilizaron los siguientes bloques protegidos de forma adecuada, tales como, pero no limitados a acido Fmoc-8-amino-3,6-dioxaoctanoico, acido Fmoc-tranexamico, Fmoc-Glu-OtBu y ester mono-terc-butflico de acido eicosanodioico. Todas las operaciones indicadas a continuacion se realizaron a una escala de smtesis 250 pmol.
1. Smtesis del peptido de la estructura principal protegido unido a la resina Metodo: SPPS_P
SPPS_P se realizo en un sintetizador de peptidos en fase solida Prelude de Protein Technologies (Tucson, AZ 85714 EE.UU.) a escala 250 pmol, utilizando un exceso de seis veces de Fmoc-aminoacidos (300 mM en NMP con HOAt 300 mM u Oxyma Pure®) con respecto a la resina cargando, por ejemplo, Fmoc-Gly-Wang de carga baja (0,35 mmol/g). La desproteccion de Fmoc se realizo utilizando 20% de piperidina en NMP. El acoplamiento se realizo usando 3: 3: 3: 4 aminoacido/(HOAt u Oxyma Pure®)/DIC/colidina en nMP. Los lavados superiores con NMP y DCM (7 ml, 0,5 min, 2 x 2 cada uno) se realizaron entre las etapas de desproteccion y acoplamiento. Los tiempos de acoplamiento eran generalmente de 60 minutos. Algunos aminoacidos incluyendo, pero no limitados a Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Aib-OH o Boc-His(Trt)-OH estaban "doblemente acoplados", lo que significa que despues del primer acoplamiento, la resina se drenaba y se anadfan mas reactivos (aminoacido, (HOAt u Oxyma Pure®), DIC y colidina), y se permitia que la mezcla reaccionara de nuevo (por ejemplo, 60 min).
Metodo: SPPS_L
SPPS_L se realizo en un sintetizador de peptidos Liberty basado en microondas de CEM Corp. (Matthews, NC 28106, EE.UU.) a escala 250 pmol o 100 pmol, utilizando un exceso de seis veces de Fmoc-aminoacidos (300 mM en NMP con HOAt 300 mM u Oxyma Pure®) con respecto a la resina cargando, por ejemplo, Fmoc-Gly-Wang de carga baja (0,35 mmol/g). La desproteccion de Fmoc se realizo utilizando 5% de piperidina en NMP hasta 75°C durante 30 se- gundos, en donde, despues de drenar la resina y lavar con NMP, se repitio la desproteccion de Fmoc, esta vez durante 2 minutos a 75°C. El acoplamiento se realizo usando 1: 1: 1 aminoacido/(HOAt u Oxyma Pure®/DIC en NMP. Los tiempos de acoplamiento y las temperaturas eran generalmente desde 5 minutos hasta 75°C. Tiempos de acoplamiento mas largos se utilizaron para reacciones a mayor escala, por ejemplo 10 min. Los aminoacidos de histidina se acoplaron de forma doble a 50°C, o de forma cuadruple si el aminoacido anterior estaba impedido estericamente (por ejemplo, Aib). Los aminoacidos de arginina se acoplaron a TA durante 25 minutos y despues se calentaron a 75°C durante 5 min. Algunos aminoacidos tales como Aib, pero no limitados a los mismos, estaban "doblemente acoplados", lo que significa que despues del primer acoplamiento (por ejemplo, 5 min a 75°C), la resina se drena y se anaden mas reactivos (aminoacido, (HOAt u Oxyma Pure®) y DIC) y la mezcla se calienta de nuevo (por ejemplo, 5 min a 75°C). Los lavados con NMP (5 x 10 ml) se realizaron entre las etapas de desproteccion y acoplamiento.
2. Smtesis de ligante albumina (cadena lateral)
El ester mono-terc-butflico de acido eicosanodioico se puede preparar como se conoce en la tecnica. Para un metodo, se puede consultar el documento WO 2010102886 A1.
El ester mono-terc-butflico de acido docosanodioico se puede preparar como se ejemplifica a continuacion:
Se anadio gota a gota una solucion 1 M de complejo borano-tetrahidrofurano en tetrahidrofurano (94,1 ml, 94,1 mmol) a una solucion de ester mono-terc-butflico de acido icosanedioico (25,0 g, 62,7 mmol) en tetrahidrofurano seco (140 ml) a 0°C bajo argon. La solucion resultante se agito a 0°C durante 2 horas, despues se retiro el bano
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de enfriamiento y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante una noche. Se anadio solucion acuosa saturada de bicarbonato de sodio (300 ml) y agua (100 ml) y la mezcla resultante se extrajo con diclorometano (250 ml, 2 x 100 ml). Los extractos organicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se evapo- raron hasta sequedad. El residuo se purifico por cromatograffa en columna sobre gel de sflice (eluyente: dicloro- metano/metanol 99:1). Las fracciones con producto puro se evaporaron, el residuo se cromatografio de nuevo (eluyente: diclorometano/metanol 99:1). Los productos se combinaron y se secaron a vado produciendo ester terc-butilico de acido 20-hidroxi-icosanoico como un solido blanco.
Rendimiento: 16,50 g (68%).
Espectro de RMN 1H (300 MHz, CDCls, deltas 3,64 (t, J=6,6 Hz, 2 H), 2,20 (t, J=7,5 Hz, 2 H); 1,65-1,51 (m, 4 H); 1,45 (s, 9 H); 1,36-1,21 (m, 30 H).
El alcohol preparado anteriormente (16,5 g, 42,9 mmol) se disolvio en diclorometano seco (90 ml). Se anadio trietila- mina (9,00 ml, 64,4 mmol), la mezcla de reaccion se enfrio a 0°C y se anadio gota a gota cloruro de mesilo (4,00 ml, 51,5 mmol). Despues de 1 hora, se dejo que la mezcla de reaccion se calentara a temperatura ambiente y se agito durante una noche. Se anadio agua (1,5 ml) y la mezcla se agito durante 30 minutos. Los disolventes se evaporaron, se anadio acetato de etilo (200 ml) y la mezcla se extrajo con acido clorlddrico 1 M (2 x 100 ml), solucion al 5% de carbonato de sodio (2 x 100 ml) y agua (100 ml). Despues de secar con sulfato de sodio anhidro, filtracion y evapora- cion de los disolventes, se obtuvo ester terc-butflico de acido 20-metanosulfoniloxi-icosanoico como un solido blanco.
Rendimiento: 19,80 g (100%).
Espectro de RMN 1H (300 MHz, CDCla, deltaH): 4,22 (t, J=6,6 Hz, 2 H); 3,01 (s, 3 H); 2,20 (t, J=7,5 Hz, 2 H); 1,81-1,68 (m, 2 H); 1,63-1,51 (m, 2 H); 1,44 (s, 9 H); 1,34-1,22 (m, 30 H).
El mesilato preparado anteriormente (17,8 g, 38,5 mmol) se disolvio en acetona (250 ml) y se anadio bromuro de litio (6,69 g, 77,0 mmol) y la mezcla de reaccion se sometio a reflujo durante una noche. Despues de enfriar, el disolvente se evaporo, se anadio acetato de etilo (300 ml) y la mezcla se extrajo con solucion al 5% de bicarbonato de sodio (3 x 170 ml). Los extractos organicos combinados se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se evaporaron. El producto se seco a vacfo para proporcionar ester terc-butflico de acido 20-bromo-icosanoico como un solido blanco. Rendimiento: 17,10 g (99%).
Espectro de RMN 1H (300 MHz, CDCh, deltaH): 3,41 (t, J=6,9 Hz, 2 H); 2,20 (t, J=7,4 Hz, 2 H); 1,90-1,77 (m, 2 H); 1,64-1,50 (m, 2 H); 1,43 (s, 9 H); 1,34-1,13 (m, 30 H).
Hidruro sodico (dispersion al 60% en aceite mineral, 3,96 g, 99,0 mmol) se disolvio en W,W-dimetilformamida (100 ml) bajo nitrogeno. Se anadio malonato de dimetilo (22,6 ml, 198 mmol) y la mezcla de reaccion se calento brevemente a 100°C, despues se enfrio a temperatura ambiente y se anadio la solucion de ester terc-butflico de acido 20-bromo- icosanoico (14,8 g, 33,0 mmol) preparada anteriormente en N,N-dimetilformamida (150 ml). La mezcla de reaccion se calento a 100°C durante 4 horas. Despues de enfriar a temperatura ambiente, se anadio acetato de etilo (150 ml) y la solucion organica se lavo con cloruro de amonio acuoso saturado (3 x 100 ml) y salmuera (100 ml), se seco sobre sulfato de sodio anhidro y se evaporo hasta sequedad. El residuo se purifico por cromatograffa en columna sobre gel de sflice (eluyente: hexano/acetato de etilo 96:4 a 93:7) proporcionando ester 1-metflico de ester 22-terc-butflico de acido 2-metoxicarbonil-docosanodioico como un solido blanco.
Rendimiento: 16,10 g (97%).
Espectro de RMN 1H (300 MHz, CDCh, deltaH): 3,74 (s, 6 H); 3,36 (t, J=7,5 Hz, 1 H); 2,20 (t, J=7,5 Hz, 2 H); 1,95-1,84 (m, 2 H); 1,64-1,51 (m, 2 H); 1,44 (s, 9 H); 1,34-1,21 (m, 32 H).
El ester 1-metflico de ester 22-terc-butflico de acido 2-metoxicarbonil-docosanodioico preparado anteriormente (16,1 g, 32,3 mmol) se disolvio en tetrahidrofurano (85 ml) y se anadio una solucion de hidroxido de litio monohidrato (4,07 g, 96,9 mmol) en agua (75 ml). La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante una noche, despues se acidifico con acido clorhfdrico 1 M y se extrajo con acetato de etilo (4 x 150 ml). Los extractos organicos se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se evaporaron. El producto se seco a vaco para proporcionar ester 22-terc-butflico de acido 2-carboxi-docosanodioico como un solido blanco.
Rendimiento: 14,50 g (95%).
Espectro de RMN 1H (300 MHz, CDCh, deltaH): 3,44 (t, J=7,4 Hz, 1 H); 2,22 (t, J=7,5 Hz, 2 H); 2,00-1,89 (m, 2 H); 1,63-1,52 (m, 2 H); 1,45 (s, 9 H); 1,37-1,20 (m, 32 H).
El ester 22-terc-butflico de acido 2-carboxi-docosanodioico (14,5 g, 30,8 mmol) se disolvio en tolueno (170 ml) y se calento a reflujo a 110°C durante 48 h. El disolvente se evaporo, el residuo se purifico por cromatograffa en columna sobre gel de sflice (eluyente: diclorometano/metanol 97:3) proporcionando el compuesto del tttulo en forma de solido blanco.
Rendimiento: 5,25 g (40%).
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Rendimiento total: 5,25 g (25%)
Espectro de RMN 1H (300 MHz, CDCI3, deltaH): 2,35 (t, J=7,5 Hz, 2 H); 2,21 (t, J=7,5 Hz, 2 H); 1,68-1,53 (m, 4 H); 1,45 (s, 9 H); 1,35-1,22 (m, 32 H).
3. Fiiacion de cadenas laterales al peptido de la estructura principal protegido unido a la resina
Cuando esta presente una acilacion en una cadena lateral de lisina, el grupo amino epsilon de la lisina que se iba a acilar, estaba protegido ya fuera con Mtt, Mmt, Dde, ivDde o Boc, dependiendo de la ruta para la fijacion del resto de accion prolongada y el enlazador. La desproteccion de Dde o ivDde se realizo con 2% de hidrazina en NMP (2 x 20 ml, cada uno 10 min) seguida de lavados con NMP (4 x 20 ml). La desproteccion de Mtt o Mmt se realizo con 2% de TFA y 2-3% de TIS en DCM (5 x 20 ml, cada uno 10 min) seguida de dCm (2 x 20 ml), 10% de MeOH y 5% de DIPEA en lavados con DCM (2 x 20 ml) y NMP (4 x 20 ml) o mediante tratamiento con hexafluoroisopropanol/DCM (75:25, 5 x 20 ml, cada uno 10 min) seguido de lavados como anteriormente. En algunos casos, el grupo Mtt se elimino mediante etapas automatizadas en el sintetizador de peptidos Liberty. La desproteccion de Mtt se realizo con hexafluoroisopro- panol o hexafluoroisopropanol/DCM (75:25) a temperatura ambiente durante 30 min, seguida de un lavado con DCM (7 ml x 5), seguido por lavados con NMP (7 ml x 5). El resto de accion prolongada y/o el enlazador se pueden fijar al peptido ya sea por acilacion del peptido unido a la resina o por acilacion en solucion del peptido sin proteccion. En caso de fijacion del resto de accion prolongada y/o el enlazador a la peptidil resina protegida, la fijacion puede ser modular utilizando SPPS y componentes fundamentales protegidos adecuadamente.
Metodo: SC_P
El grupo protector N-e-lisina se elimino como se ha descrito anteriormente y la modificacion qmmica de la lisina se realizo a traves de una o varias etapas automatizadas en el sintetizador de peptidos Prelude, usando componentes fundamentales adecuadamente protegidos, como se ha descrito anteriormente. Se llevaron a cabo acoplamientos dobles como se ha descrito en SPPS_P con 3 horas por acoplamiento.
Metodo: SC_L
El grupo protector N-e-lisina se elimino como se ha descrito anteriormente y la modificacion qmmica de la lisina se realizo a traves de una o varias etapas automatizadas en el sintetizador de peptidos Liberty, usando componentes fundamentales adecuadamente protegidos como se ha descrito anteriormente. Se llevaron a cabo acoplamientos dobles como se ha descrito en SPPs_L.
4. Escision del peptido unido a la resina con o sin cadenas laterales fiiadas y purificacion Metodo: CP_M1
Despues de la smtesis, la resina se lavo con DCM y el peptido se escindio de la resina mediante un tratamiento de 23 horas con TFA/TIS/agua (95/2,5/2,5 o 92,5/5/2,5), seguido de precipitacion con eter dietflico. El peptido se disolvio en un disolvente adecuado (tal como, por ejemplo, acido acetico al 30%) y se purifico mediante RP-HPLC estandar en una columna C18, de 5 pm, usando acetonitrilo/agua/TFA. Las fracciones se analizaron mediante una combinacion de metodos UPLC, MALDl y LCMS y las fracciones apropiadas se reunieron y se liofilizaron.
Si se desea, el contraion del peptido se puede intercambiar con sodio utilizando los metodos conocidos en la tecnica. A modo de ejemplo, aprox. 2 g de peptido se disolvieron en 250 ml de acetonitrilo/agua (50/50) y se cargaron en una columna Waters X-Bridge C8, 5 pM, de 50x250 mm, en un sistema de RP-HPLC preparativa. Despues de la carga, la columna se lavo con agua durante 8 minutos con un caudal de 60 ml/min y NaOH 0,01 N pH 11 con un caudal de 60 ml/min durante 2 x 8 min. La sal de sodio del peptido eluyo usando un flujo isocratico de agua a 60 ml/min durante 10 min, seguido de un gradiente lineal de 5% a 85% de acetonitrilo durante 30 min.
Metodo: CP_M2
Despues de la smtesis, la resina se lavo con DCM y el peptido se escindio de la resina mediante un tratamiento de 23 horas con TFA/TIS/agua (95/2,5/2,5 o 92,5/5/2,5), seguido de precipitacion con eter dietflico. El peptido se disolvio en un disolvente adecuado (tal como, por ejemplo, acido acetico al 30%) y se purifico mediante RP-HPLC estandar en una columna C18 Kinetex de 5 pm, eluyendo con una mezcla binaria de diamoniohidrogenofosfato 0,09 M en agua/acetonitrilo (90:10, pH 3,0) y acetonitrilo/2-propanol/agua (60:20:20). El peptido se purifico adicionalmente mediante RP-HPLC estandar en una columna C18, de 5 pm, usando acetonitrilo/agua/TFA. Las fracciones se analizaron mediante una combinacion de metodos UPLC, MALDI y LCMS y las fracciones apropiadas se reunieron y se liofilizaron.
Si se desea, el contraion del peptido se puede intercambiar con sodio utilizando los metodos conocidos en la tecnica. A modo de ejemplo, aprox. 2 g de peptido se disolvieron en 250 ml de acetonitrilo/agua (50/50) y se cargaron en una columna Waters X-Bridge C8, 5 pM, 50x250 mm, en un sistema de RP-HPLC preparativa. Despues de la carga, la columna se lavo con agua durante 8 minutos con un caudal de 60 ml/min y NaOH 0,01 N pH 11 con un caudal de 60 ml/min durante 2 x 8 min. La sal de sodio del peptido eluyo usando un flujo isocratico de agua a 60 ml/min durante 10 min, seguido de un gradiente lineal de 5% a 85% de acetonitrilo durante 30 min.
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A2. Metodos generales para la deteccion y caracterizacion
1. Metodos LC-MS
Metodo: LCMS01v1
LCMS01v1 se realizo con una configuracion que consistia en un sistema de UPLC de Waters Acquity y un espectro- metro de masas LCT Premier XE de Micromass. Eluyentes: A: 0,1% de acido formico en agua; B: 0,1% de acido formico en acetonitrilo. El analisis se realizo a TA inyectando un volumen apropiado de la muestra (preferiblemente 21 pl) sobre la columna, la cual eluyo con un gradiente de A y B. Las condiciones de la UPLC, los ajustes del detector y los ajustes del espectrometro de masas eran: Columna: Waters Acquity UPLC BEH, C-18, 1,7 pm, 2,1 mm x 50 mm. Gradiente: Lineal 5% - 95% de acetonitrilo durante 4,0 min (alternativamente 8,0 min) a 0,4 ml/min. Deteccion: 214 nm (salida de analogo desde TUV (detector de UV sintonizable)) Modo de ionizacion MS: API-ES. Barrido: 100-2000 amu (alternativamente 500-2000 amu), etapa 0,1 amu.
2. Metodo UPLC
Metodo: UPLC02v01
El analisis RP se realizo utilizando un sistema de UPLC de Waters equipado con un detector de banda dual. Las detecciones de UV a 214 nm y 254 nm se recogieron usando una columna ACQUITY UPLC BEH130, C18, 130 A, 1,7 um, 2,1 mm x 150 mm, 40°C. El sistema de UPLC estaba conectado a dos depositos de eluyente que conteman A: 99,95% de H2O, 0,05% de TFA; B: 99,95% de CH3CN, 0,05% de TFA. Se utilizo el siguiente gradiente lineal: 95% de
A, 5% de B hasta 95% de A, 5% de B durante 16 minutos con un caudal de 0,40 ml/min.
3. Metodo MALDI-MS Metodo: MALDI01v01
Los pesos moleculares se determinaron utilizando espectroscopfa de masas laser de desorcion e ionizacion asistida por matriz con analizador de tiempo de vuelo, registrados en un Microflex o Autoflex (Bruker). Se utilizo una matriz de acido alfa-ciano-4-hidroxi cinamico.
B. Sintesis de compuestos de la invencion Ejemplo 1
[Aib8,Glu22,Arg26,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptidil-Gly-Gly-Gly-Ser-N{Epsilon}[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-car-
boxi-4-[[4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]ace-
til]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]Lys
imagen28
Metodo de sintesis: SPPS_P; SC_P; CP_M1 UPLC02v01: Rt = 11,8 min
LCMS01v01: Rt = 2,7 min, m/3 = 1927; m/4= 1445; m/5 = 1156 Ejemplo 2
[Aib8,Glu22,Arg26,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptidil-Gly-Gly-Ser-N{Epsilon}[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4SM-carboxi- 4-[[4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]buta- 5 noil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]Lys
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El peptido es SEQ ID NO: 3.
Metodo de smtesis: SPPS_P; SC_P; CP_M1 UPLC02v01: Rt = 11,3 min
10 LCMS01v01: Rt = 2,6 min, m/3 = 1908; m/4 = 1431; m/5 = 1145 Ejemplo 3
[Aib8,Glu22,Arg26,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptidil-Gly-Ser-N{Epsilon}[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-
[[4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]buta-
noil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]Lys
15 Chem. 23:
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El peptido es SEQ ID NO: 4.
Metodo de smtesis: SPPS_P; SC_P; CP_M1 UPLC02v01: Rt = 11,3 min
5 LCMS01v01: Rt = 2,6 min, m/3 = 1889; m/4 = 1417; m/5 = 1134 Ejemplo 4
[Aib8,Glu22,Arg26,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptidil-Ser-N{Epsilon}[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[[4-
[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]buta-
noil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]Lys
10 Chem. 24:
imagen31
El peptido es SEQ ID NO: 5.
Metodo de smtesis: SPPS_P; SC_P; CP_M1 UPLC02v01: Rt =11,4 min
15 LCMS01v01: Rt =2,8 min, m/4 = 1403; m/5 = 1122
Ejemplo 5
N{Epsilon-37H(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[[4-[(19-carboxinonadecanoilairiino)iTietil]cidohexa-
nocarboml]amino]butanoil]airimo]etoxi]etoxi]acetil]aiTiino]etoxi]etoxi]acetil]aiTiino]hexanoil]-
[Aib8,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-peptido
5 Chem. 25:
imagen32
El peptido es SEQ ID NO: 6.
Metodo de smtesis: SPPS_P; SC_L; CP_M1 UPLC02v01: Rt = 11,4 min
10 LCMS01v01: Rt = 2,5 min, m/3 = 1822; m/4 = 1367; m/5 = 1094 Ejemplo 6
N{Epsilon-37}-[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)buta-
noil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]-[Aib8,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-
peptido
15 Chem. 26:
imagen33
El peptido es SEQ ID NO: 6.
Metodo de smtesis: SPPS_L; SC_L; CP_M1 UPLC02v01: Rt = 10,7 min
5 LCMS01v01: Rt = 2,6 min, m/3 = 1729; m/4 = 1297; m/5 = 1038 Ejemplo 7
N{Alfa}([Aib8,Glu22,Arg26,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptidil)-N{Epsilon}[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-
[[4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]buta-
noil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]Lys
10 Chem. 27:
imagen34
El peptido es SEQ ID NO: 7.
Metodo de smtesis: SPPS_P; SC_P; CP_M1 UPLC02v01: Rt = 11,3 min
LCMS01v01: Rt = 2,7 min, m/3 = 1841; m/4 = 1381; m/5 = 1105 Ejemplo 8
N{Alfa}([Aib8,Arg26,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptidil)-N{Epsilon}[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[[4-[(19- carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]buta- 5 noil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]Lys
Chem. 28:
imagen35
El peptido es SEQ ID NO: 8.
Metodo de smtesis: SPPS_P; SC_P; CP_M1
10 UPLC02v01: Rt = 11,4 min
LCMS01v01: Rt = 2,7 min, m/3 = 1817; m/4 = 1363; m/5 = 1090 Ejemplo 9
N{Alfa}([Aib8,Glu22,Arg26,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptidil)-N{Epsilon}[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-
(19-carboxinonadecanoilamino)butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]Lys
15 Chem. 29:
imagen36
El peptido es SEQ ID NO: 7.
Metodo de smtesis: SPPS_P; SC_P; CP_M1 UPLC02v01: Rt = 10,8 min
5 LCMS01v01: Rt = 2,6 min, m/3 = 1748; m/4 = 1311; m/5 = 1049 Ejemplo 10
N{Epsilon-37}-[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[[4-[(19-carboxinonadecanoil-
amino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]buta-
noil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]a 10 cetil]amino]hexanoil]-[Aib8,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-peptido
Chem. 30:
imagen37
El peptido es SEQ ID NO: 6.
Metodo de smtesis: SPPS_P; SC_P; CP_M1 UPLC02v01: Rt = 9,7 min
LCMS01v01: Rt = 2,7 min, m/4 =1584; m/5 = 1268; m/6 = 1056 Ejemplo 11
5 N{Alfa}([Aib8,Arg26,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptidil)-N{Epsilon}[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-(19-car-
boxinonadecanoilamino)butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]Lys
Chem. 31:
imagen38
El peptido es SEQ ID NO: 8.
10 Metodo de smtesis: SPPS_P; SC_P; CP_M1
UPLC02v01: Rt = 10,8 min
LCMS01v01: Rt = 2,6, m/3 = 1725; m/4 = 1294; m/5 = 1035 Ejemplo 12
[Aib8,Glu22,Arg26,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptidil-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-N{Epsilon}[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)- 15 4-carboxi-4-[[4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]buta-
noil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]Lys
Chem. 32:
5
10
15
imagen39
El peptido es SEQ ID NO: 9.
Metodo de smtesis: SPPS_P; SC_P; CP_M1 UPLC02v01: Rt = 11,2 min
LCMS01v01: Rt = 2,7 min, m/4 = 1481; m/5 = 1186; m/6 = 988 Ejemplo 13
N{Epsilon-27H(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[[4-[(19-carboxinonadecanoila-
mino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]buta-
noil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]-
[Aib8,Glu22,Arg26,Lys27,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptido
Chem. 33:
imagen40
El peptido es SEQ ID NO: 10.
Metodo de smtesis: SPPS_P; SC_P; CP_M1 UPLC02v01: Rt = 11,1 min
LCMS01v01: Rt = 2,5 min, m/3 = 1991; m/4 = 1493; m/5 = 1195 Ejemplo 14
N{Epsilon-27}-[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[[4-[(19-carboxinonadecanoil-
amino)irietil]cidohexanocarboml]aiTiino]buta-
noil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]a
cetil]ammo]hexanoilHAib8,Glu22,Arg26,Lys27,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptido
Chem. 34:
imagen41
El peptido es SEQ ID NO: 10.
Metodo de smtesis: SPPS_P; SC_P; CP_M1 UPLC02v01: Rt = 11,0 min
LCMS01v01: Rt = 2,5 min, m/4 = 1566; m/4 = 1253; m/5 = 1045
5
10 Ejemplo 15
N{Epsilon-37H(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[[4-[(19-carboxinonadecanoilammo)metil]ddo-
hexanocarbonil]amino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexa-
noil]-[Aib8,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-peptido
Chem. 35:
imagen42
El peptido es SEQ ID NO: 6.
Metodo de smtesis: SPPS_P; SC_P; CP_M1 UPLC02v01: Rt = 11,1 min
5 LCMS01v01: Rt = 2,1, m/3 = 1918; m/4 = 1439,3; m/5 = 1151 Ejemplo 16
N{Epsilon-37H(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[[4-[(19-carboxinonadecanoila-
mino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]buta-
noil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]- 10 [Aib8,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-peptido
Chem. 36:
imagen43
El peptido es SEQ ID NO: 6.
Metodo de smtesis: SPPS_P; SC_P; CP_M1 UPLC02v01: Rt = 12,4 min
5 LCMS01v01: Rt = 2,1, m/4 = 1512; m/5 = 1210; m/6 = 1008 Ejemplo 17
N{Alfa}([Aib8,Arg26,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptidil)-N{Epsilon}[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[[1-(19-
carboxinonadecanoil)piperidina-4-carbonil]amino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexa-
noil]Lys
10 Chem. 37:
imagen44
El peptido es SEQ ID NO: 8.
Metodo de smtesis: SPPS_P; SC_P; CP_M1 UPLC02v01: Rt = 11,2 min
5 LCMS01v01: Rt = 2,7 min, m/3 = 1798; m/4 = 1349; m/5 = 1079 Ejemplo 18
N{AlfaX[Aib8,Glu22,Arg26,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptidil)-N{Epsilon}[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-
[[1-(19-carboxinonadecanoil)piperidina-4-carbonil]amino]buta-
noil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]Lys
10 Chem. 38:
imagen45
El peptido es SEQ ID NO: 7.
10
15
Metodo de smtesis: SPPS_P; SC_P; CP_M1 UPLC02v01: Rt = 11,2 min
MALDI01v01: calc. m/z = 5464; observado m/z = 5464 Ejemplo 19
N{Epsilon-27H(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[[4-[(19-carboxmonadecanoilammo)metil]ciclohexano-
carboml]ammo]butanoil]ammo]etoxi]etoxi]acetil]ammo]etoxi]etoxi]acetil]ammo]hexanoil]-
[Aib8,Glu22,Arg26,Lys27,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptido
Chem. 39:
imagen46
Metodo de smtesis: SPPS_P; SC_P; CP_M1 UPLC02v01: Rt = 10,8 min
LCMS01v01: Rt = 2,6 min, m/4 = 1798; m/4 = 1349; m/5 = 1079 Ejemplo 20:
N{Epsilon-27H(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[[4-[(19-carboxmonadecanoilammo)metil]ciclo-
hexanocarbonil]amino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexa-
noil]-[Aib8,Glu22,Arg26,Lys27,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptido
Chem. 40:
imagen47
El peptido es SEQ ID NO: 10.
Metodo de smtesis: SPPS_P; SC_P; CP_M1 UPLC02v01: Rt = 10,5 min
5 LCMS01v01: Rt = 2,6 min, m/4 = 1894; m/4 = 1421; m/5 = 1137 Ejemplo 21:
N{Epsilon-27}-[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[[4-[(21-carboxihemcosanoil-
amino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]buta-
noil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]a 10 cetil]amino]hexanoil]-[Aib8,Glu22,Arg26,Lys27,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptido
Chem. 41:
imagen48
El peptido es SEQ ID NO: 10.
Metodo de smtesis: SPPS_P; SC_P; CP_M1 UPLC02v01: Rt = 11,9 min
5 LCMS01v01: Rt = 2,8 min; m/4 = 1580; m/5 = 1265 Ejemplo 22:
N{Epsilon-37H(2S)-2,6-bis[3-[2-[2-[2-[2-[3-[2-[2-[2-[2-[3-[2-[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[[4-[(19-carboxinonadecanoila-
mino)irietil]cidohexanocarboml]aiTiino]butanoil]aiTiino]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]propanoilaiTiino]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]pro-
panoilamino]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]propanoilamino]hexanoil]-[Aib8,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-peptido
10 Chem. 42:
5
10
imagen49
Metodo de smtesis: SPPS_P; SC_P; CP_M2 UPLC02v01: Rt = 11,0 min LCMS01v01: Rt = 2,4; m/4 = 1593; m/5 = 1274 Ejemplo 23:
N{Epsilon-37H(2S)-2,6-bis[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[[4-[(19-carboxinonadecanoil-
amino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]propanoila-
mino]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]propanoilamino]hexanoil]-[Aib8,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-pep-
tido
Chem. 43:
imagen50
El peptido es SEQ ID NO: 6.
Metodo de smtesis: SPPS_P; SC_P; CP_M2 UPLC02v01 : Rt = 11,1 min LCMS01v01: Rt = 2,4; m/4 = 1556; m/5 = 1246 5 Ejemplo 24:
N{Epsilon-37}-[(2S)-2,6-bis[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[[4-[(19-carboxinonadecanoila-
mino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]buta-
noil]amino]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]propanoilamino]hexanoil]-
[Aib8,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-peptido
Chem. 44:
10
imagen51
Metodo de smtesis: SPPS_P; SC_P; CP_M2 UPLC02v01: Rt = 11,3 min
15 LCMS01v01: Rt = 2,7; m/4 = 1521; m/5 = 1217 Ejemplo 25:
N{Epsilon-37}-[(2S)-2,6-bis[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[[4-[(19-carboxinon-
adecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]buta-
noil]amino]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]propanoila- 20 mino]hexanoil]-[Aib8,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-peptido
Chem. 45:
5
10
imagen52
El peptido es SEQ ID NO: 6.
Metodo de smtesis: SPPS_P; SC_P; CP_M1 UPLC02v01: Rt = 11,2 min LCMS01v01: Rt = 2,8, m/4 = 1288, m/5 = 1609 Ejemplo 26:
[Aib8,Glu22,Arg26,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptidil-Ala-Glu-Ala-Pro-N{Epsilon}[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4SM-car-
boxi-4-[[4-[(19-carboxmonadecanoilammo)metil]ciclohexanocarboml]ammo]buta-
noil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]Lys
imagen53
Metodo de smtesis: SPPS_P; SC_P; CP_M1 UPLC02v01: Rt = 11,2 min LCMS01v01: Rt = 2,7; m/4 = 1473; m/5 = 1179 15 Ejemplo 27:
[Aib8,Glu22,Arg26,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptidil-Glu-Pro-Pro-Gly-N{Epsilon}[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-
carboxi-4-[[4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]buta-
noil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]Lys
imagen54
El peptido es SEQ ID NO: 12.
Metodo de smtesis: SPPS_P; SC_P; CP_M1 UPLC02v01: Rt = 11,2 min 5 LCMS01v01: Rt = 2,8; m/4 = 1476; m/5 = 1181 Ejemplo 28:
[Aib8,Glu22,Arg26,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptidil-Pro-Ala-Glu-Glu-N{Epsilon}[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4SM-
carboxi-4-[[4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]buta-
noil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]Lys
10 Chem. 48:
imagen55
El peptido es SEQ ID NO: 13.
Metodo de smtesis: SPPS_P; SC_P; CP_M1 UPLC02v01: Rt = 11,2 min
15 LCMS01v01: Rt = 2,8; m/4 = 1488; m/5 = 1190 Ejemplo 29:
[Aib8,Glu22,Arg26,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptidil-Ser-Ser-Pro-Ala-Ala-N{Epsilon}[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-
4-carboxi-4-[[4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]buta-
noil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]Lys
5
10
imagen56
Metodo de smtesis: SPPS_P; SC_P; CP_M1 UPLC02v01: Rt = 11,2 min LCMS01v01: Rt = 2,8; m/4 = 1484; m/5 = 1188 Ejemplo 30:
[Aib8,Glu22,Arg26,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptidil-Ser-Ser-Ala-Glu-Gly-N{Epsilon}[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-
4-carboxi-4-[[4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarboml]amino]buta-
noil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]Lys
imagen57
Metodo de smtesis: SPPS_P; SC_P; CP_M1 UPLC02v01: Rt = 11,2 min LCMS01v01: Rt = 2,8; m/4 = 1489; m/5 = 1191 15 Ejemplo 31:
[Aib8,Glu22,Arg26,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptidil-Ser-Ser-Glu-Ala-Glu-N{Epsilon}[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-
4-carboxi-4-[[4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]buta-
noil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]Lys
imagen58
Metodo de smtesis: SPPS_P; SC_P; CP_M1 UPLC02v01: Rt = 11,19 min 5 LCMS01v01: Rt = 2,8; m/4 = 1506; m/5 = 1205 Ejemplo 32:
N{Epsilon-37}-[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[[4-[(19-carboxinon-
adecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]buta-
noil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]a 10 cetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]-[Aib8,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-peptido
Chem. 52:
imagen59
Metodo de smtesis: SPPS_P; SC_P; CP_M1 UPLC02v01: Rt = 10,8 min 5 LCMS01v01: Rt = 2,7; m/4 = 1657; m/5 = 1326 Ejemplo 33:
[Imp7,Aib8,Glu22,Arg26,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptidil-Gly-N{Epsilon}[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2- [[(4S)-4-carboxi-4-[[4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]buta- noil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexa- 10 noil]Lys
imagen60
El peptido es SEQ ID NO: 17.
Metodo de smtesis: SPPS_P; SC_P; CP_M1 UPLC02v01: Rt = 10,5 min 5 LCMS01v01: Rt = 2,8; m/4 = 1537; m/5 = 1229 Ejemplo 34:
N{Alfa}([Aib8,Glu22,Arg26,Arg34,Pro37]-GLP-1-(7-37)-peptidil)-N{Epsilon}[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2- [2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[[4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]buta- noil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]a 10 cetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]Lys
imagen61
Metodo de smtesis: SPPS_P; SC_P; CP_M1 UPLC02v01: Rt = 10,8 min 5 LCMS01v01: Rt = 2,7; m/4 = 1682; m/5 = 1345 Ejemplo comparativo 1:
N{Epsilon-37H2-[2-[2-[[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-(dodecanoilairiino)etoxi]etoxi]acetil]aiTiino]hexa- noil]amino]etoxi]etoxi]acetil]-[Aib8,Aib22,Aib35,Lys37]-GLP-1-(7-37)-peptido amida
imagen62
El peptido es SEQ ID NO: 19.
Este es el compuesto del Ejemplo 8 del documento WO2005/027978 A2. Metodo de smtesis: SPPS_P; SC_P; CP_M1
5 UPLC02v01: Rt = 11,4 min
LCMS01v01: Rt = 2,7; m/4 = 1107; m/5 = 886 Ejemplo comparativo 2:
N{Epsilon-37H2-[2-[2-[[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-(tetradecanoilammo)etoxi]etoxi]acetil]ammo]hexa- noil]amino]etoxi]etoxi]acetil]-[Aib8,Aib22,Aib35,Lys37]-GLP-1-(7-37)-peptido amida
10 Chem. 56:
imagen63
El peptido es SEQ ID NO: 19.
Este es el compuesto del Ejemplo 9 del documento WO2005/027978 A2. Metodo de smtesis: SPPS_P; SC_P; CP_M1 15 UPLC02v01: Rt = 12,9 min
5
10
15
20
25
30
35
40
45
LCMS01v01: Rt = 2,9; m/3 = 1494; m/4 = 1121 Metodos farmacologicos
Ejemplo 35: Potencia in vitro
Los fines de este ejemplo son someter a ensayo la actividad, o la potencia, de los derivados de GLP-1 in vitro. La potencia in vitro es la medida de la activacion del receptor de GLP-1 humano en un ensayo de celulas completas.
Las potencias de los derivados de GLP-1 de los Ejemplos 1-32 y de los Ejemplos Comparativos 1 y 2 se determinaron como se describe a continuacion. La semaglutida se incluye a modo de comparacion.
Principio
La potencia in vitro se determino midiendo la respuesta del receptor de GLP-1 humano en un ensayo de gen informa- dor. El ensayo se realizo en una lmea de celulas BHK transfectadas de forma estable que expresa el receptor de GLP- 1 humano y contiene el ADN para el elemento de respuesta de AMPc (CRE) acoplado a un promotor y el gen de la luciferasa de luciernaga (CRE luciferasa). Cuando se activa el receptor humano de GLP-1, se produce como resultado la produccion de AMPc, que a su vez se traduce en que se expresa la protema luciferasa. Despues de completar la incubacion del ensayo, el sustrato de luciferasa (luciferina) se anade y la enzima convierte la luciferina en oxiluciferina para producir bioluminiscencia. La luminiscencia se mide como la lectura para el ensayo.
Cultivo y preparacion de las celulas
Las celulas utilizadas en este ensayo (clon FCW467-12A/KZ10-1) eran celulas BHK con BHKTS13 como lmea de celulas parentales. Las celulas se obtuvieron a partir de un clon (FCW467-12A) que expresa el receptor de GLP-1 humano y se establecieron mediante una transfeccion adicional con luciferasa CRE para obtener el clon actual.
Las celulas se cultivaron con 5% de CO2 en Medio de Cultivo Celular. Se dividieron en partes almuotas y se almace- naron en nitrogeno lfquido. Antes de cada ensayo, se tomo una parte almuota y se lavo dos veces en PBS antes de ser suspendida a la concentracion deseada en el tampon espedfico del ensayo. Para placas de 96 pocillos se hizo la suspension para proporcionar una concentracion final de 5x103 celulas/pocillo.
Materiales
Se emplearon los siguientes productos qrnmicos en el ensayo: Pluronic F-68 (10%) (Gibco 2404), albumina serica humana (HSA) (Sigma A9511), ovoalbumina (Sigma A5503), DmEM con o sin rojo de fenol (Gibco 11880-028), Hepes 1 M (Gibco 15630), Glutamax 100x (Gibco 35050) y steadylite plus (PerkinElmer 6016757).
Tampones
El Medio de Cultivo Celular consistfa en medio DMEM con 10% de FBS (suero bovino fetal; Invitrogen 16140-071), 1 mg/ml de G418 (Invitrogen 15140-122), MTX 240 nM (metotrexato; Sigma M9929) y 1% de pen/strep (penicilina/es- treptomicina; Invitrogen 15140-122).
El Medio de Ensayo consistio en DMEM con o sin rojo de fenol, Hepes 10 mM y 1x Glutamax. El Tampon de Ensayo consistio en 2% de ovoalbumina y 0,2% de Pluronic F-68 en Medio de Ensayo.
Procedimiento
1) Las reservas celulares se descongelaron en un bano de agua a 37°C.
2) Las celulas se lavaron tres veces en PBS.
3) Las celulas se contaron y se ajustaron a 5x103 celulas/50 pl (1x105 6 celulas/ml) en Medio de Ensayo. Una parte almuota de 50 pl de celulas se transfirio a cada pocillo en la placa de ensayo.
4) Las reservas de los compuestos del ensayo y los compuestos de referencia se diluyeron hasta una concentracion de 0,2 pM en Tampon de Ensayo. Los compuestos se diluyeron 10 veces para proporcionar las siguientes concentraciones: 2x10'7 M, 2x10'8 M; 2x10'9 M, 2x10'1° M, 2x10'11 M, 2x10'12 M, 2x10'13 M y 2x10'14 M.
5) Una parte almuota de 50 pl de compuesto o en blanco se transfirio desde la placa de dilucion a la placa del ensayo. Los compuestos se sometieron a ensayo a las siguientes concentraciones finales: 1x10'7 M, 1x10'8 M; 1x10'9 M, 1x10-10 M, 1x10-11 M, 1x10'12 M, 1x10'13 M y 1x10'14 M.
6) La placa del ensayo se incubo durante 3 h en una incubadora con 5% de CO2 a 37°C.
7) La placa del ensayo se retiro de la incubadora y se dejo reposar a temperatura ambiente durante 15 min.
8) Una parte almuota de 100 pl de reactivo steadylite plus se anadio a cada pocillo de la placa de ensayo (el
reactivo era sensible a la luz).
9) Cada placa del ensayo se cubrio con papel de aluminio para protegerla de la luz y se agito durante 30 min a temperature ambiente.
10) Cada placa del ensayo se leyo en un instrumento Packard TopCount NXT.
5 Calculos y Resultados
Los datos del instrumento TopCount se transfirieron al programa informatico GraphPad Prism. El programa informatico realiza una regresion no lineal (log(agonista) frente a respuesta). Los valores de CE50 que se calcularon con el programa informatico y se indicaron en pM, se muestran en la Tabla 1 a continuacion.
Se midio un mmimo de dos duplicaciones para cada muestra. Los valores indicados son los promedios de las dupli- 10 caciones.
Tabla 1: Potencia in vitro
Ejemplo n°
CE50 (pM)
1
94
2
87
3
51
4
44
5
23
6
15
7
70
8
95
9
25
10
37
11
50
12
99
13
19
14
16
15
50
16
38
17
64
18
55
19
58
20
35
21
48
22
6,4
23
10
24
7,4
25
8,5
26
13
27
15
28
14
29
22
30
12
5
10
15
20
25
30
35
40
Ejemplo n°
CE50 (pM)
31
19
32
8,6
33
16
34
12
Ejemplo comparativo 1
6,0
Ejemplo comparativo 2
4,6
semaglutida
8,3
Todos los compuestos tienen una potencia muy satisfactoria lo que confirma que todos ellos son agonistas del receptor de GLP-1.
Ejemplo 36: Union al receptor de GLP-1
El proposito de este ejemplo es someter a ensayo la union al receptor de los derivados de GLP-1 in vitro. La union al receptor es una medida de la afinidad de un derivado hacia el receptor de GLP-1 humano.
Principio
La union al receptor de los derivados de GLP-1 de los Ejemplos 1-32 y los Ejemplos Comparativos 1-2 con el receptor de GLP-1 humano se midio en un ensayo de union competitiva. En este tipo de ensayo, un ligando marcado (en este caso 125I-GLP-1) esta unido al receptor. Cada derivado se anade en una serie de concentraciones a membranas aisladas que contienen el receptor de GLP-1 humano y se supervisa el desplazamiento del ligando marcado. La union al receptor se indica como la concentracion a la que la mitad del ligando marcado se desplaza desde el receptor, el valor de CI50. La semaglutida se incluyo como compuesto comparativo. Para poner a prueba la union de los derivados con la albumina, el ensayo se realiza a una concentracion baja de albumina serica (max. 0,001% de la concentracion final del ensayo, asf como en presencia de una concentracion considerablemente mas alta de albumina serica (2,0% de la concentracion final del ensayo). Un aumento del valor de CI50 en presencia de albumina serica indica una afinidad hacia la albumina serica y representa un metodo para predecir un perfil farmacocinetico de accion prolongada de la sustancia del ensayo en modelos animales.
Materiales
Los siguientes productos qmmicos se utilizaron en el ensayo: albumina serica humana (HSA) (Sigma A1653), DMEM con o sin rojo de fenol (Gibco 11880-028), penicilina/estreptomicina (Invitrogen 15140-122), G418 (Invitrogen 10131 - 027), Hepes 1 M (Gibco 15630), EDTA (invitrogen 15575-038), PBS (Invitrogen 14190-094), suero de ternera fetal (Invitrogen 16140-071), EGTA, MgCh (Merck 1.05832.1000), Tween 20 (Amresco 0850C335), partfculas de SPA (per- las de SPA de aglutinina de germen de trigo (WGA), Perkin Elmer RPNQ0001), [125I]-GLP-1]-(7-36)NH2 (producido en nuestro laboratorio), OptiPlate®-96 (Packard 6005290).
El tampon 1 consistfa en Na-HEPES 20 mM mas EDTA 10 mM y el pH se ajusto a 7,4. El tampon 2 consistfa en Na- HEPES 20 mM mas EDTA 0,1 mM y el pH se ajusto a 7,4. El tampon del ensayo consistfa en HEPES 50 mM comple- mentado con EGTA 5 mM, MgCh 5 mM, 0,005% de Tween 20 y el pH se ajusto a 7,4. Un 8% de reserva de albumina consistfa en HSA disuelta en 8% (p/v) en tampon del ensayo. Un 0,02% de reserva de albumina consistfa en HSA disuelta en 0,02% (p/v) en tampon del ensayo.
Cultivo celular y preparacion de membranas
Las celulas utilizadas en este ensayo (clon FCW467-12A) eran celulas BHK con BHKTS13 como lmea celular parental. Las celulas expresan el receptor de GLP-1 humano.
Las celulas se cultivaron con 5% de CO2 en DMEM, 10% de suero de ternera fetal, 1% Pen/Strep (penicilina/estreptomicina) y 1,0 mg/ml del marcador de seleccion G418.
Para realizar una preparacion de las membranas, las celulas se cultivaron hasta aproximadamente 80% de confluen- cia. Las celulas se lavaron dos veces en solucion salina tamponada con fosfato y se recogieron. Las celulas se sedi- mentaron mediante una centrifugacion breve y el sedimento celular se mantuvo sobre hielo. El sedimento celular se homogeneizo con un instrumento de dispersion ULTRA-THURRAX® durante 20-30 segundos en una cantidad ade- cuada de tampon 1 (por ejemplo, 10 ml). El material homogeneizado se centrifugo durante 15 minutos. El sedimento se volvio a suspender (homogeneizado) en 10 ml de tampon 2 y se centrifugo. Esta etapa se repitio una vez mas. El sedimento resultante se resuspendio en tampon 2 y se determino la concentracion de protema. Las membranas se dividieron en partes alfcuotas y se almacenaron a menos 80°C.
5
10
15
20
25
Procedimiento
1. Para el ensayo de union al receptor en presencia de HSA baja (0,005%), se anadieron 50 |jl de tampon del ensayo a cada pocillo de una placa de ensayo. El ensayo continuo con la etapa 3.
2. Para el ensayo de union al receptor en presencia de HSA alta (2%), 50 jl de la reserva de albumina al 8% se anadieron a cada pocillo de una placa de ensayo. El ensayo continuo con la etapa 3.
3. Los compuestos del ensayo se diluyeron en serie para proporcionar las siguientes concentraciones: 8x10-7 M, 8x10-8 M, 8x10-9 M, 8x10-10 M, 8x10-11 M, 8x10-12 M y 8xl0-13 M. Se anadieron 25 jl a los pocillos apropiados en la placa del ensayo.
4. Partes alfcuotas de la membrana celular se descongelaron y se diluyeron hasta su concentracion de trabajo. Se anadieron 50 jl a cada pocillo en la placa del ensayo.
5. Las perlas WGA SPA se suspendieron en tampon del ensayo a 20 mg/ml. La suspension se diluyo hasta 10 mg/ml en tampon de ensayo justo antes de la adicion a la placa del ensayo. Se anadieron 50 jl a cada pocillo en la placa del ensayo.
6. La incubacion se inicio mediante la adicion de 25 jl de solucion 480 pM de [125I]-GLP-1]-(7-36)NH2 a cada pocillo de la placa del ensayo. Una parte alfcuota de 25 jl se reservo para la medicion de los recuentos tota- les/pocillo.
7. La placa del ensayo se incubo durante 2 h a 30°C.
8. La placa del ensayo se centrifugo durante 10 min.
9. La placa del ensayo se leyo en un instrumento Packard TopCount NXT.
Calculos
Los datos del instrumento TopCount se transfirieron al programa informatico GraphPad Prism. El programa informatico realiza el promedio de los valores de las duplicaciones y se realiza una regresion no lineal. Los valores de CI50 se calcularon con el programa informatico y se indicaron en nM.
Resultados
Se obtuvieron los siguientes resultados:
Tabla 2: Union al receptor de GLP-1
Ejemplo n°
CI50 con HSA baja (nM) CI50 con HSA alta (nM)
1
1,64 175
2
1,93 59
3
0,74 25
4
0,61 83
5
1,11 103
6
0,65 64
7
0,90 78
8
1,86 132
9
0,45 64
10
0,62 58
11
1,06 117
12
0,99 28
13
0,34 110
14
0,25 101
15
0,66 99
16
0,41 43
5
10
15
20
25
Ejemplo n°
CI50 con HSA baja (nM) CI50 con HSA alta (nM)
17
1,72 138
18
0,76 68
19
0,53 220
20
0,48 149
21
0,97 4,9
22
0,60 39
23
0,75 46
24
0,73 52
25
0,86 38
26
1,7 27
27
2,9 50
28
2,9 68
29
4,8 51
30
3,2 63
31
3,1 85
32
1,2 84
33
0,91 54
34
0,57 84
Ejemplo comparativo 1
0,39 0,14
Ejemplo comparativo 2
1,9 0,68
semaglutida
0,56 326
Todos los compuestos muestran una union muy buena al receptor de GLP-1 tanto en ausencia como en presencia de albumina.
Ejemplo 37: Estudio farmacocinetico en cerdos enanos
Los fines de este estudio es determinar la accion prolongada in vivo de los derivados de GLP-1 despues de una administracion i.v. a cerdos enanos, es decir, la prolongacion de su tiempo en el cuerpo y, por lo tanto, de su tiempo de accion. Esto se hace en un estudio farmacocinetico (PK), en el que se determina la semivida terminal del derivado en cuestion. Por semivida terminal se entiende el tiempo que se tarda en reducir a la mitad una concentracion plas- matica determinada en la fase de eliminacion terminal.
Los derivados de los Ejemplos 1-6 fueron dosificados a 2 nmol/kg, el derivado de los Ejemplos 7 y 24, asf como los derivados de los Ejemplos Comparativos 1 y 2 se dosificaron a 5 nmol/kg, y los derivados de los Ejemplos 8-10, 12, 14-16, 18 y 21 se dosificaron a 15 nmol/kg. La semaglutida se incluyo a modo de comparacion (1,5 nmol/kg).
Los cerdos enanos macho Gottingen se obtuvieron de Ellegaard Gottingen Minipigs (Dalmose, Dinamarca), aproxima- damente con 7-14 meses de edad y se emplearon en los estudios con un peso aproximado de 16-35 kg. Los cerdos enanos estaban alojados de forma individual (cerdos con cateteres permanentes) o en un grupo y se alimentaron restrictivamente una vez o dos veces al dfa con una dieta SDS para cerdos enanos (Special Diets Services, Essex, Reino Unido).
Despues de al menos 2 semanas de aclimatacion, se implantaron dos cateteres venosos centrales permanentes en la vena cava caudal o craneal en cada animal. Se permitio que los animales se recuperaran durante 1 semana despues de la cirugfa y luego se utilizaron para estudios farmacocineticos repetidos con un penodo de reposo farmacologico adecuado entre las dosificaciones sucesivas de los derivados de GLP-1.
Los derivados de GLP-1 de los Ejemplos 1-10, 12, 14-16 y 18 se disolvieron en fosfato de sodio 50 mM, cloruro de sodio 145 mM, 0,05% de Tween 80, pH 7,4, los derivados de GLP-1 de los Ejemplos 21 y 24 se disolvieron en fosfato de sodio 50 mM, cloruro de sodio 70 mM, 0,05% de polisorbato 80, pH 7,4 y los derivados de GLP-1 de los Ejemplos Comparativos 1 y 2 se disolvieron en acetato de sodio 2 mM, glicerol 250 mM y 0,025% de polisorbato 20, pH 4,0,
todos ellos a una concentracion de, por lo general, 20-60 nmol/ml.
Las inyecciones intravenosas (el volumen correspondiente, por ejemplo, a 0,050-0,125 ml/kg) de los compuestos se administraron a traves de un cateter o a traves de un cateter venoso periferico y se tomaron muestras de sangre en puntos de tiempo predefinidos hasta 25 dtes despues de la dosificacion (preferentemente a traves del otro cateter o 5 por puncion venosa). Se recogieron muestras de sangre (por ejemplo 0,8 ml) en tampon de EDTA (8 mM) y despues se centrifugaron a 4°C y 1942G durante 10 minutos.
El plasma se pipeteo en tubos Micronic sobre hielo seco y se mantuvo a -20°C hasta que se analizo la concentracion en plasma del compuesto de GLP-1 respectivo, usando LOCI. Los perfiles de concentracion-tiempo en plasma individuals se analizaron por un metodo farmacocinetico no compartimentalizado en Phoenix v. 6.2 (Pharsight Inc., Moun- 10 tain View, CA, EE.uU.) o cualquier otro programa informatico relevante para el analisis PK y se determinaron las semividas terminales resultantes (media armonica).
Resultados
Tabla 3: Estudio farmacocinetico en cerdos enanos (i.v.)
Ejemplo n°
Semivida terminal (h)
1
138
2
133
3
122
4
164
5
141
6
128
7
116
8
139
9
131
10
141
12
169
14
133
15
184
16
131
18
140
21
140
24
179
Ejemplo comparativo 1
3
Ejemplo comparativo 2
3
semaglutida
55
15 Los derivados de la invencion sometidos a ensayo tienen semividas termmales muy largas (al menos dos veces la de semaglutida y al menos cuarenta veces la de los compuestos del ejemplo comparativo).
Ejemplo 38: Estudio farmacodinamico en ratones db/db
El objetivo del estudio es verificar el efecto agudo de los derivados de GLP-1 sobre la glucosa en sangre (BG) y el peso corporal (BW) en un entorno diabetico.
20 Los derivados de GLP-1 de los Ejemplos 1-10, 12, 14-16, 18, 21-23 y 25 se sometieron a ensayo en un estudio de dosis unica en un modelo de raton obeso diabetico (ratones db/db) como se describe a continuacion. Los derivados se sometieron a ensayo con una dosis de 10 nmol/kg (Ejemplos 21-23, 25), 30 nmol/kg (Ejemplos 5, 9, 12, 14-16, 18) y 100 nmol/kg (Ejemplos 1-4, 6-8, 10).
Seis ratones db/db por compuesto que se iba a someter a ensayo (de Taconic, Dinamarca), alimentados desde el
5
10
15
20
25
30
nacimiento con la dieta NIH31 (NIH 31M Rodent Diet, disponible comercialmente en Taconic Farms, Inc., EE.UU., vease
www.taconic.com), fueron incluidos en el estudio a la edad de aproximadamente 10 semanas. Los ratones teman acceso libre a pienso estandar (por ejemplo, Altromin 1324, Brogaarden, Gentofte, Dinamarca) y agua corriente, y se mantuvieron a 24°C. Despues de 1-2 semanas de aclimatacion, se determino la glucosa en sangre basal dos veces en dos dfas consecutivos (es decir, a las 9 a.m.). Los ratones se asignaron a grupos de tratamiento basados en la coincidencia de los niveles de glucosa en sangre y los pesos corporales. Los ratones fueron utilizados en experiments con una duracion de 120 horas y se volvieron a utilizar durante un maximo de 2 veces. Despues del ultimo experimento, los ratones se sometieron a eutanasia.
Los animales se agruparon para recibir el tratamiento del modo siguiente: Vehtulo, s.c. o derivado de GLP-1, s.c., en donde el vehtulo era fosfato de sodio 50 mM, cloruro de sodio 70 mM, 0,05% de polisorbato 80, pH 7,4.
El derivado de GLP-1 se disolvio en el vehtulo, hasta una concentracion de dosificacion de 1,7-17 nmol/ml depen- diente de la dosis respectiva. Los animales se dosificaron una vez, al comienzo del experimento, por via s.c. con una dosis-volumen de 6 ml/kg (es decir, 300 pl por 50 g de raton).
El dfa de la dosificacion, la glucosa en sangre se determino en el momento -1^h (8:30 a.m.), los ratones se pesaron despues de ello. El derivado de GLP-1 se dosifico aproximadamente a las 9 a.m. (tiempo 0). El dfa de la dosificacion, la glucosa en sangre se determino en los momentos 1, 2, 4 y 8 h (10 a.m., 11 a.m., 1 p.m. y 5 p.m.) despues de la dosificacion.
Los dfas siguientes, la glucosa en sangre se determino a las 24 h, 48 h, 72 h y 96 h. Cada dfa, los ratones se pesaron despues de la toma de muestras de glucosa en sangre.
Los ratones se pesaron individualmente en una balanza digital.
Las muestras para la medicion de glucosa en sangre se obtuvieron de forma capilar a partir de la punta de la cola de ratones conscientes. Se recogieron 10 pl de sangre en capilares heparinizados y se transfirieron a 500 pl de tampon glucosa (solucion del sistema EKF, Eppendorf, Alemania). La concentracion de glucosa se midio usando el metodo de la glucosa oxidasa (analizador de glucosa Biosen 5040, EKF Diagnostic, GmbH, Barleben, Alemania). Las muestras se mantuvieron a temperatura ambiente durante 1 h hasta el analisis. Si el analisis se tema que posponer, las muestras se mantuvieron a 4°C durante un maximo de 24 h.
Los datos se presentan como porcentaje de cambio en la glucosa en sangre o peso corporal medido a las 48 h y 96 h. Por ejemplo, el porcentaje de cambio en el nivel de glucosa en sangre a las 48 h para cada individuo, se calcula del modo siguiente: [[(nivel de glucosa en sangre a las 48 h) - (nivel de glucosa en sangre basal)]/(nivel de glucosa en sangre basal)] x100%], en donde el nivel de glucosa en sangre basal se refiere al nivel antes de la administracion de cualquier tratamiento - y viceversa para el cambio de peso corporal. Un valor negativo se refiere a un % de reduccion.
Se obtuvieron los siguientes resultados (promedio de todas las determinaciones individuales correspondientes al tratamiento respectivo):
Tabla 4: Efecto sobre la glucosa en sangre y el peso corporal en ratones db/db
Ejemplo n°
% de cambio en la glucosa en sangre % de cambio en el peso corporal
48 h 96 h 48 h 96 h
1
-53 -30 -7 -5
2
-64 -50 -7 -6
3
-62 -41 -7 -5
4
-61 -42 -6 -5
5
-22 -12 -2 -3
6
-59 -33 -7 -5
7
-61 -46 -7 -6
8
-67 -42 -7 -5
9
-55 -25 -7 -5
10
-64 -50 -7 -6
12
-36 -11 -4 -2
14
-39 -20 -3 -3
15
-54 -21 -5 -4
5
10
15
20
25
30
35
Ejemplo n°
% de cambio en la glucosa en sangre % de cambio en el peso corporal
48 h 96 h 48 h 96 h
16
-45 -34 -5 -4
18
-36 -14 -4 -3
21
-20 -4 -4 -2
22
-50 -29 -4 -1
23
-47 -7 -5 -2
25
-22 -1 -4 -3
Todos los derivados sometidos a ensayo mostraron un efecto in vivo de reduccion de la BG, as^ como el BW despues de 48 h, as^ como despues de 96 h.
Ejemplo 39: Estudio farmacodinamico en cerdo LYD
El objetivo de este experimento es investigar el efecto de los derivados GLP-1 sobre la ingesta de alimento en los cerdos. Esto se realiza en un estudio farmacodinamico (PD) como se describe a continuacion, en el que se mide la ingesta de alimento 1 a 4 dfas despues de la administracion de una sola dosis del derivado de GLP-1, en comparacion con un grupo de control tratado con vehnculo.
Se emplean cerdos hembra Landrace Yorkshire Duroc (LYD), de aproximadamente 3 meses de edad, que pesan aproximadamente 30-35 kg (n = 3-4 por grupo). Los animales se alojan en un grupo durante aproximadamente 1 semana durante la aclimatacion a las instalaciones animales. Durante el penodo experimental, los animales se colocan en jaulas individuales, al menos 2 dfas antes de la dosificacion y durante todo el experimento para medir la ingesta de alimento individual. Los animales se alimentan a voluntad con pienso para cerdos (Svinefoder, Danish Top o HRC Sow y Weaner Diet) en todo momento, tanto durante el periodo de aclimatacion como el experimental. La ingesta de alimento se controla en lmea, registrando el peso del alimento cada 15 minutos, o manualmente. El peso del alimento se registra diariamente para cada animal (penodos de 24 h) desde el dfa -2 hasta el dfa 6 (120 horas) despues de la dosis, incluyendo la administracion.
Los derivados de GLP-1 se disuelven primero en un tampon fosfato (fosfato 50 mM, 0,05% de Tween 80, pH 8; o fosfato 50 mM, cloruro de sodio 145 mM, 0,05% de Tween 80, pH 7,4) a la concentracion deseada (tal como, 12, 40, 120, 400 o 1200 nmol/ml correspondiente a dosis de 10, 15 o 30 nmol/kg). El tampon fosfato sirve como vehnculo. Los animales se dosifican con una dosis subcutanea unica del derivado de GLP-1 o del vehnculo (volumen de la dosis usual 0,025 ml/kg) por la manana del dfa 1 y se mide la ingesta de alimento durante 1-4 dfas despues de la dosificacion. El ultimo dfa de cada estudio, 1-4 dfas despues de la dosificacion, se toma una muestra de sangre para medir la exposicion plasmatica del derivado de GLP-1, de la yugular/vena cava anterior. Los animales se vuelven a utilizar en tres experimentos. El contenido en plasma de los derivados de GLP-1 se analiza usando LOCI.
La ingesta de alimento se calcula como la media de 24 h de ingesta de alimento en intervalos de 24 horas (0-24 h, 2448 h, 48-72 h y 72-96 h) y se puede indicar, por ejemplo, como el porcentaje de la ingesta de alimento del grupo vehfculo en el mismo intervalo de tiempo.
Las comparaciones estadfsticas de la ingesta de alimento en intervalos de 24 horas en el vehfculo frente al grupo de derivados de GLP-1, se realizan usando mediciones repetidas de ANOVA de dos vfas, seguidas por una prueba posterior de Bonferroni.
<110> Novo Nordisk A/S
<120> Derivados del peptido GLP-1 y sus usos
<130> 8705WO01
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<170> Novo Nordisk A/S PatSeq 1.0.5.5 <210> 1 <211> 31
5
10
15
20
25
<212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 1
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 15 10 15
Gin Ala Ala Lys Glu Phe lie Ala Tip Leu Val Lys Gly Arg Gly 20 25 30
<210>2 <211> 36 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Analogo de GLP-1 <220>
<221> Mod_Res <222> (2)..(2)
<223> /mod_res= "Aib (acido 2-aminoisobutmco)"
<400> 2
His Xaa Glu Gly 1
Sin Ala Ala Arg
20
Gly Gly Ser Lys 35
<210> 3 <211> 35 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Analogo de GLP-1 <220>
<221> Mod_Res <222> (2)..(2)
Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 5 10 15
Glu Phe lie Ala Trp Leu Val Arg Gly Arg Gly Gly 25 30
5
10
15
20
25
<223> /mod_res= "Aib (acido 2-aminoisobutmco)"
<400>3
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 15 10 15
Gin Ala Ala Arg Glu Phe lie Ala Trp Leu Val Arg Gly Arg Gly Gly 20 25 30
Gly Ser Lys 35
<210>4 <211> 34 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Analogo de GLP-1 <220>
<221> Mod_Res <222> (2)..(2)
<223> /mod_res= "Aib (acido 2-aminoisobutmco)"
<400> 4
His Xaa Glu Gly 1
Gin Ala Ala Arg 20
Ser Lys
<210> 5 <211> 33 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Analogo de GLP-1 <220>
<221> Mod_Res <222> (2)..(2)
Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 5 10 15
Glu Phe lie Ala Trp Leu Val Arg Gly Arg Gly Gly 25 30
5
10
15
20
25
His Xaa Glu Gly 1
Gin Ala Ala Arg 20
Lys
<210>6 <211> 31 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220>
<223> Analogo de GLP-1 <220>
<221> Mod_Res <222> (2)..(2)
<223> /mod_res= "Aib (acido 2-aminoisobutmco)"
<400> 6
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 15 10 15
Gin Ala Ala Arg Glu Phe lie Ala Trp Leu Val Arg Gly Arg Lys 20 25 30
<210>7 <211> 32 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Analogo de GLP-1 <220>
<221> Mod_Res <222> (2)..(2)
<223> /mod_res= "Aib (acido 2-aminoisobutmco)"
<400> 7
Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 5 10 15
Glu Phe lie Ala Trp Leu Val Arg Gly Arg Gly Ser 25 30
10
15
20
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 15 10 15
Gin Ala Ala Arg Glu Phe lie Ala Trp Leu Val Arg Gly Arg Gly Lys 20 25 30
<210>8 <211> 32 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Analogo de GLP-1 <220>
<221> Mod_Res <222> (2)..(2)
<223> /mod_res= "Aib (acido 2-aminoisobutmco)"
<400>8
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 15 10 15
Gin Ala Ala Arg Glu Phe lie Ala Trp Leu Val Arg Gly Arg Gly Lys 20 25 30
<210>9 <211> 37 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Analogo de GLP-1 <220>
<221> Mod_Res <222> (2)..(2)
<223> /mod_res= "Aib (acido 2-aminoisobutmco)"
<400> 9
5
10
15
20
25
His Xaa Glu Gly 1
Gin Ala Ala Arg 20
Ser Gly Ala Pro 35
<210> 10 <211> 31 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220>
<223> Analogo de GLP-1 <220>
<221> Mod_Res <222> (2)..(2)
<223> /mod_res= "Aib (acido 2-aminoisobutmco)"
<400> 10
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 5 10 15
Glu Phe lie Ala Trp Leu Val Arg Gly Arg Gly Ser 25 30
Lys
15 10 15
Gin Ala Ala Arg Lys Phe lie Ala Trp Leu Val Arg Gly Arg Gly 20 25 30
<210> 11 <211> 36 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Analogo de GLP-1 <220>
<221> Mod_Res <222> (2)..(2)
5
10
15
20
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 15 10 15
Gin Ala Ala Arg Glu Phe lie Ala Trp Leu Val Arg Gly Arg Gly Ala 20 25 30
Glu Ala Pro Lys 35
<210> 12 <211> 36 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Analogo de GLP-1 <220>
<221> Mod_Res <222> (2)..(2)
<223> /mod_res= "Aib (acido 2-aminoisobutmco)"
<400> 12
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 15 10 15
Gin Ala Ala Arg Glu Phe lie Ala Trp Leu Val Arg Gly Arg Gly Glu 20 25 30
Pro Pro Gly Lys 35
<210> 13 <211> 36 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Analogo de GLP-1 <220>
<221> Mod_Res <222> (2)..(2)
5
10
15
20
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 15 10 15
Gin Ala Ala Arg Glu Phe lie Ala Trp Leu Val Arg Gly Arg Gly Pro 20 25 30
Ala Glu Glu Lys 35
<210> 14 <211> 37 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Analogo de GLP-1 <220>
<221> Mod_Res <222> (2)..(2)
<223> /mod_res= "Aib (acido 2-aminoisobutmco)"
<400> 14
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 15 10 15
Gin Ala Ala Arg Glu Phe lie Ala Trp Leu Val Arg Gly Arg Gly Ser 20 25 30
Ser Pro Ala Ala Lys 35
<210> 15 <211> 37 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Analogo de GLP-1 <220>
<221> Mod_Res <222> (2)..(2)
5
10
15
20
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 15 10 15
Gin Ala Ala Arg Glu Phe lie Ala Trp Leu Val Arg Gly Arg Gly Ser 20 25 30
Ser Ala Glu Gly Lys 35
<210> 16 <211> 37 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Analogo de GLP-1 <220>
<221> Mod_Res <222> (2)..(2)
<223> /mod_res= "Aib (acido 2-aminoisobutmco)"
<400> 16
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 15 10 15
Gin Ala Ala Arg Glu Phe lie Ala Trp Leu Val Arg Gly Arg Gly Ser 20 25 30
Ser Glu Ala Glu Lys 35
<210> 17 <211> 33 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Analogo de GLP-1 <220>
<221> Mod_Res <222> (1)..(1)
5
10
15
20
25
<221> Mod_Res <222> (2)..(2)
<223> /mod_res= "Aib (acido 2-aminoisobutmco)"
<400> 17
Xaa Xaa Glu Gly
1
Gin Ala Ala Arg 20
Lys
<210> 18 <211> 32 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220>
<223> Analogo de GLP-1 <220>
<221> Mod_Res <222> (2)..(2)
<223> /mod_res= "Aib (acido 2-aminoisobutmco)"
<400> 18
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 15 10 15
Gin Ala Ala Arg Glu Phe lie Ala Trp Leu Val Arg Gly Arg Pro Lys 20 25 30
<210> 19 <211> 31 <212> PRT
<213> Secuencia artificial <220>
<223> Analogo de GLP-1 <220>
<221> Mod Res
Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 5 10 15
Glu Phe lie Ala Trp Leu Val Arg Gly Arg Gly Gly 25 30
10
15
<223> /mod_res= "Aib (acido 2-aminoisobutmco)"
<220>
<221> Mod_Res <222> (16)..(16)
<223> /mod_res= "Aib (acido 2-aminoisobutmco)"
<220>
<221> Mod_Res <222> (29)..(29)
<223> /mod_res= "Aib (acido 2-aminoisobutmco)"
<220>
<221> Mod_Res <222> (31)..(31)
<223> /mod_res= "Amidacion"
<400> 19
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Xaa 15 10 15
Gin Ala Ala Lys Glu Phe lie Ala Trp Leu Val Lys Xaa Arg Lys 20 25 30

Claims (12)

  1. 5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    1. Un derivado de un peptido GLP-1, en donde el peptido GLP-1 tiene la formula I:
    Formula I: Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Xaa12-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Xaa18-Xaa1g-Xaa20-Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Xaa25-
    Xaa26Xaa27-Phe-Ne-Xaa30-Xaa31-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38-Xaa39-Xaa40-Xaa41-Xaa42-Xaa43,
    en donde
    Xaa7 es L-histidina, acido (S)-2-hidroxi-3-(1H-imidazol-4-il)-propi6nico, D-histidina, desamino-histidina, homohis- tidina, Na-acetil-histidina, Na-formil-histidina, a-metil-histidina, 3-piridilalanina, 2-piridilalanina o 4-piridilalanina;
    Xaa8 es Ala, Gly, Ser, Aib, acido (1-aminociclopropil) carbox^lico o acido (1-aminociclobutil) carbox^lico;
    Xaa12 es Phe o Leu;
    Xaa16 es Val o Leu;
    Xaa18 es Ser, Val, Lys, Arg o Leu;
    Xaa1g es Tyr o Gln;
    Xaa20 es Leu o Met;
    Xaa22 es Gly o Glu;
    Xaa23 es Gln, Glu o Arg;
    Xaa25 es Ala o Val;
    Xaa26 es Arg o Lys;
    Xaa27 es Glu, Lys o Leu;
    Xaa30 es Ala, Glu o Arg;
    Xaa31 es Trp o His;
    Xaa33 es Val, Lys o Arg;
    Xaa34 es Arg, Lys, His, Asn o Gin;
    Xaa35 es Gly o Ala;
    Xaa36 es Arg o Gly;
    Xaa37 es Gly, Pro o Lys;
    Xaa38 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente;
    Xaa39 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente;
    Xaa40 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente;
    Xaa41 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente;
    Xaa42 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente; y
    Xaa43 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente;
    en donde el peptido GLP-1 comprende un residuo de Lys en una posicion correspondiente a la posicion 27, 37, 38, 39, 40, 41, 42 o 43 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1);
    cuyo derivado comprende
    un primer y un segundo resto de accion prolongada seleccionado a partir de Chem. 1 y Chem. 1 a:
    Chem. 1: HOOC-(CH2>i8-CO-*, y
    Chem. 1 a: HOOC-(CH2)20-CO-*;
    un enlazador ramificado de formula Chem. 2:
    5
    10
    15
    20
    imagen1
    en donde
    R1 es -(CH2)q-NH-*, en donde q es un numero entero en el intervalo de 0-5,
    R2 es -(CH2)w-NH-*, en donde w es un numero entero en el intervalo de 0-5,
    con la condicion de que cuando w es 0, q es un numero entero en el intervalo de 1-5 y cuando q es 0, w es un numero entero en el intervalo de 1-5; y
    un primer y un segundo enlazador adicional, comprendiendo cada uno un elemento_1 de formula Chem. 3:
    imagen2
    en la que k es un numero entero en el intervalo de 1-15 y n es un numero entero en el intervalo de 1-5; en donde
    el primer resto de accion prolongada esta fijado en su extremo *-CO a un primer extremo *-NH del enlazador ramificado, a traves del primer enlazador adicional,
    el segundo resto de accion prolongada esta fijado en su extremo *-CO a un segundo extremo *-NH del enlazador ramificado, a traves del segundo enlazador adicional; y
    el enlazador ramificado esta fijado en su extremo *-CO al grupo amino epsilon del residuo Lys del peptido GLP-1;
    o una sal, una amida o un ester farmaceuticamente aceptable del mismo.
  2. 2. El derivado segun la reivindicacion 1, en el que q = 4 y w = 0.
  3. 3. El derivado segun cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno comprende un elemento_2 de formula Chem. 4:
    imagen3
  4. 4. El derivado segun cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que Xaa8 es Aib.
  5. 5. El derivado segun cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en el que
    i) si Xaa42 esta ausente, entonces Xaa43 tambien esta ausente;
    ii) si Xaa41 esta ausente, entonces Xaa42 y Xaa43 tambien estan ausentes;
    iii) si Xaa40 esta ausente, entonces Xaa41, Xaa42 y Xaa43 tambien estan ausentes;
    iv) si Xaa39 esta ausente, entonces Xaa40, Xaa41, Xaa42 y Xaa43 tambien estan ausentes; y/o
    v) si Xaa38 esta ausente, entonces Xaa39, Xaa40, Xaa41, Xaa42 y Xaa43 tambien estan ausentes.
  6. 6. El derivado segun cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en el que Xaa7 es L-histidina, acido (S)-2-hidroxi-3-(1H-
    imidazol-4-il)-propi6nico, D-histidina, desamino-histidina, Na-acetil-histidina, Na-formil-histidina o a-metil-histidina; Xaa8 es Ala, Gly, Ser, Aib, acido (1-aminociclopropil) carbox^lico o acido (1-aminociclobutil) carbox^lico; Xaai2 es Phe; Xaai6 es Val o Leu; Xaa18 es Ser, Lys o Arg; Xaa-ig es Tyr o Gln; Xaa20 es Leu o Met; Xaa22 es Gly o Glu; Xaa23 es Gln, Glu o Arg; Xaa25 es Ala o Val; Xaa26 es Arg o Lys; Xaa27 es Glu, Lys o Leu; Xaa30 es Ala o Glu; Xaa3i es Trp o His; Xaa33 5 es Val, Lys o Arg; Xaa34 es Arg, Lys o Asn; Xaa35 es Gly; Xaa36 es Arg o Gly; Xaa37 es Gly, Pro o Lys; Xaa38 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente; Xaa39 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente; Xaa40 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente; Xaa4i es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente; Xaa42 es Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o esta ausente; y Xaa43 es Lys o esta ausente.
  7. 7. El derivado segun cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en el que el peptido GLP-1 tiene un maximo de 12 cambios 10 de aminoacidos, en comparacion con GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 1).
  8. 8. El derivado segun cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en el que el primer enlazador adicional y el segundo enlazador adicional cada uno comprende un elemento_3 de formula Chem. 5:
    imagen4
  9. 9. El derivado segun cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en el que el primer enlazador adicional y el segundo 15 enlazador adicional cada uno comprende un elemento_4 de formula Chem. 6:
    imagen5
    [Aib8,Glu22,Arg26,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptidil-Gly-Gly-Gly-Ser-N{Epsilon}[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-car- boxi-4-[[4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]ace- 20 til]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]Lys,
    imagen6
    [Aib8,Glu22,Arg26,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptidil-Gly-Gly-Ser-N{Epsilon}[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-
    4-[[4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]ace-
    til]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]Lys,
    imagen7
    [Aib8,Glu22,Arg26,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptidil-Gly-Ser-N{Epsilon}[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4- [[4-[(19-carboxinonadecanoilammo)metil]ciclohexanocarboml]amino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]ace- til]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]Lys,
    5 Chem. 23:
    imagen8
    [Aib8,Glu22,Arg26,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptidil-Ser-N{Epsilon}[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[[4-
    [(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]ace-
    til]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]Lys,
    imagen9
    N{Epsilon-37}-[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[[4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexano- carboml]amino]butanoN]aiTiino]etoxi]etoxi]acetN]aiTiino]etoxi]etoxi]acetN]aiTiino]hexanoN]- [Aib8,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-peptido,
    5 Chem. 25:
    imagen10
    N{Epsilon-37}-[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-(19-carboxinonadecanoilamino)buta- noil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]-[Aib8,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)- peptido,
    imagen11
    N{Alfa}([Aib8,Glu22,Arg26,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptidil)-N{Epsilon}[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4- [[4-[(l9-carboxinonadecanoilammo)metil]ciclohexanocarboml]amino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]ace- til]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]Lys,
    5 Chem. 27:
    imagen12
    N{Alfa}([Aib8,Arg26,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptidil)-N{Epsilon}[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[[4-[(19-
    carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]ace-
    til]amino]hexanoil]Lys,
    5
    imagen13
    N{AlfaX[Aib8,Glu22,Arg26,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptidN)-N{EpsNon}[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-
    (19-carboxinonadecanoilamino)butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]Lys,
    Chem. 29:
    imagen14
    N{EpsNon-37H(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[[4-[(19-carboxinonadecanoi- lamino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]ace- til]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]- [Aib8,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-peptido,
    5
    imagen15
    N{Alfa}([Aib8,Arg26,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptidN)-N{EpsNon}[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-(19-car-
    boxinonadecanoilamino)butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]Lys,
    Chem. 31:
    imagen16
    [Aib8,Glu22,Arg26,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptidil-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-N{Epsilon}[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-
    4-carboxi-4-[[4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]ace-
    til]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]Lys,
    imagen17
    N{EpsNon-27}-[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[[4-[(19-carboxinonadecanoila-
    mino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]ace-
    til]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]-[Aib8,Glu22,Arg26,Lys27,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptido,
    5 Chem. 33:
    imagen18
    N{EpsNon-27H(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[[4-[(19-carboxinonadecanoi- lamino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]ace- til]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]- 10 [Aib8,Glu22,Arg26,Lys27,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptido,
    Chem. 34:
    imagen19
    N{EpsNon-37H(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[[4-[(19-carboxinonadecanoNamino)metN]ci- clohexanocarbonil]amino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexa- noil]-[Aib8,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-peptido,
    5 Chem. 35:
    imagen20
    N{Epsilon-37H(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[[4-[(19-carboxinonadecanoila-
    iTiino)iTietN]ddohexanocarboml]aiTimo]butanoil]aiTiino]etoxi]etoxi]acetil]aiTimo]etoxi]etoxi]acetil]aiTiino]etoxi]etoxi]ace-
    til]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]-[Aib8,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-peptido,
    Chem. 36
    5
    imagen21
    N{Alfa}([Aib8,Arg26,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptidil)-N{Epsilon}[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[[1-(19-
    carboxinonadecanoil)piperidina-4-carbonil]amino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexa-
    noil]Lys,
    Chem. 37:
    imagen22
    N{AlfaX[Aib8,Glu22,Arg26,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptidN)-N{EpsNon}[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4- [[1-(19-carboxinonadecanoil)piperidina-4-carbonil]amino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]ace- til]amino]hexanoil]Lys,
    5 Chem. 38:
    imagen23
    N{Epsilon-27}-[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[[4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexano- carbonil]amino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]- [Aib8,Glu22,Arg26,Lys27,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptido,
    10 Chem. 39:
    imagen24
    N{EpsNon-27H(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[[4-[(19-carboxmonadecanoNamino)metN]ci- clohexanocarbonil]amino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexa- noil]-[Aib8,Glu22,Arg26,Lys27,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptido,
    5 Chem. 40:
    imagen25
    N{EpsNon-27H(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[[4-[(21-carboxihenicosanoi- lamino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]ace- til]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]- 5 [Aib8,Glu22,Arg26,Lys27,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptido,
    Chem. 41:
    imagen26
    N{EpsNon-37H(2S)-2,6-bis[3-[2-[2-[2-[2-[3-[2-[2-[2-[2-[3-[2-[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[[4-[(19-carboxinonadecanoila- mino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]propanoilamino]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]pro- panoilamino]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]propanoilamino]hexanoil]-[Aib8,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-peptido,
    5 Chem. 42:
    imagen27
    N{Epsilon-37}-[(2S)-2,6-bis[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[[4-[(19-carboxinonadecanoil-
    amino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]propanoila-
    mino]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]propanoilamino]hexanoil]-[Aib8,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-pep-
    tido,
    Chem. 43:
    imagen28
    N{EpsNon-37}-[(2S)-2,6-bis[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[[4-[(19-carboxinonadecanoNa- mino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]buta-
    noil]amino]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]propanoilamino]hexanoil]- [Aib8,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-peptido,
    Chem. 44:
    10
    imagen29
    N{Epsilon-37}-[(2S)-2,6-bis[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[[4-[(19-carboxinonadeca- noilamino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]buta-
    noil]amino]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]propanoilamino]he- 15 xanoil]-[Aib8,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-peptido,
    Chem. 45
    imagen30
    [Aib8,Glu22,Arg26,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptidN-Ala-Glu-Ala-Pro-N{EpsNon}[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4- carboxi-4-[[4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]cidohexanocarbonil]amino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]ace- 5 til]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]Lys,
    imagen31
    [Aib8,Glu22,Arg26,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptidil-Glu-Pro-Pro-Gly-N{EpsNon}[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-
    carboxi-4-[[4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]ace-
    til]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]Lys,
    imagen32
    [Aib8,Glu22,Arg26,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptidil-Pro-Ala-Glu-Glu-N{Epsilon}[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-
    carboxi-4-[[4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]cidohexanocarbonil]amino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]ace-
    til]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]Lys,
    Chem. 48:
    imagen33
    5 [Aib8,Glu22,Arg26,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptidil-Ser-Ser-Pro-Ala-Ala-N{Epsilon}[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-
    4-carboxi-4-[[4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]ace- til]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]Lys,
    imagen34
    [Aib8,Glu22,Arg26,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptidil-Ser-Ser-Ala-Glu-Gly-N{Epsilon}[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)- 10 4-carboxi-4-[[4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]ace- til]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]Lys,
    imagen35
    [Aib8,Glu22,Arg26,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptidil-Ser-Ser-Glu-Ala-Glu-N{Epsilon}[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)- 4-carboxi-4-[[4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]ace- 15 til]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]Lys,
    imagen36
    N{Epsilon-37}-[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[[4-[(19-carboxino- nadecanoilamino)metil]cidohexanocarbonil]amino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]ace- til]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]- 5 [Aib8,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]-GLP-1-(7-37)-peptido,
    Chem. 52:
    imagen37
    [Imp7,Aib8,Glu22,Arg26,Arg34]-GLP-1-(7-37)-peptidN-Gly-N{EpsNon}[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2- [[(4S)-4-carboxi-4-[[4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]ace- 10 til]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]Lys,
    imagen38
    N{Alfa}([Aib8,Glu22,Arg26,Arg34,Pro37]-GLP-1-(7-37)-peptidil)-N{Epsilon}[(2S)-2,6-bis[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2- [2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[[4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil]amino]buta- noil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]ace- 5 til]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]Lys, y
    5
    10
    imagen39
    o una sal, una amida o un ester farmaceuticamente aceptable del mismo.
  10. 11. Una composicion farmaceutica que comprende un derivado segun cualquiera de las reivindicaciones 1-10 y un excipiente farmaceuticamente aceptable.
  11. 12. Un derivado segun cualquiera de las reivindicaciones 1-10 para uso como un medicamento.
  12. 13. Un derivado segun cualquiera de las reivindicaciones 1-10 para uso en
    (i) prevencion y/o tratamiento de todas las formas de diabetes, tales como hiperglucemia, diabetes de tipo 2, tolerancia alterada a la glucosa, diabetes de tipo 1, diabetes no dependiente de insulina, MODY (diabetes de la edad madura que se presenta en el joven), diabetes gestacional y/o para la reduccion de HbA1C;
    (ii) retraso o prevencion de la progresion de una enfermedad diabetica, tal como la progresion en diabetes de tipo 2, retraso de la progresion de la tolerancia alterada a la glucosa (IGT) a diabetes de tipo 2 que requiere insulina, retraso o prevencion de la resistencia a la insulina y/o retraso de la progresion de la diabetes de tipo 2 que no requiere insulina a diabetes de tipo 2 que requiere insulina;
    (iii) mejora de la funcion de las celulas p, tal como disminuyendo la apoptosis de las celulas p, aumentando la funcion de las celulas p y/o la masa de las celulas, p y/o para restaurar la sensibilidad a la glucosa de las celulas
    p;
    5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    (iv) prevencion y/o tratamiento de trastornos cognitivos y/o trastornos neurodegenerativos, tales como enferme- dad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson y/o esclerosis multiple;
    (v) prevencion y/o tratamiento de trastornos de la alimentacion, tales como la obesidad, por ejemplo, mediante una disminucion de la ingesta de alimentos, reduccion del peso corporal, supresion del apetito, induccion de saciedad; tratamiento o prevencion del trastorno por atracon, bulimia nerviosa y/u obesidad inducida por la ad- ministracion de un antipsicotico o un esteroide; reduccion de la motilidad gastrica; retraso del vaciado gastrico; aumento de la movilidad ffsica; y/o prevencion y/o tratamiento de comorbilidades de la obesidad, tales como osteoartritis y/o incontinencia urinaria;
    (vi) prevencion y/o tratamiento de complicaciones diabeticas, tales como angiopatia; neuropatfa, incluyendo neu- ropatfa periferica; nefropatia; y/o retinopatia;
    (vii) mejora de los parametros lip^dicos, tal como prevencion y/o tratamiento de la dislipidemia, reduccion de los lfpidos sericos totales; incremento de HDL; reduccion de LDL pequena y densa; reduccion de VLDL; reduccion de los trigliceridos; reduccion del colesterol; reduccion de los niveles plasmaticos de lipoprotema a (Lp(a)) en un ser humano; inhibicion de la generacion de apolipoprotema a (apo(a)) in vitro y/o in vivo;
    (viii) prevencion y/o tratamiento de enfermedades cardiovasculares, como el smdrome X; aterosclerosis; infarto de miocardio; enfermedad cardiaca coronaria; lesion por reperfusion, accidente cerebrovascular, isquemia cerebral; una enfermedad cardiovascular temprana o cardiaca temprana, hipertrofia ventricular izquierda; enfermedad arterial coronaria; hipertension; hipertension esencial; emergencia por hipertension aguda; cardiomiopatfa; insu- ficiencia cardiaca; intolerancia al ejercicio; insuficiencia cardiaca aguda y/o cronica; arritmia; trastorno del ritmo cardfaco; smcope; angina de pecho; reoclusion de una derivacion y/o una endoprotesis ca^aca; claudicacion intermitente (arterioesclerosis obliterante); disfuncion diastolica; y/o disfuncion sistolica; y/o reduccion de la pre- sion sangu^nea, tal como reduccion de la presion sangumea sistolica;
    (ix) prevencion y/o tratamiento de enfermedades gastrointestinales, tales como smdrome de intestino inflamato- rio; smdrome del intestino delgado o enfermedad de Crohn o colitis; dispepsia y/o ulceras gastricas; y/o inflama- cion, tal como psoriasis, artritis psoriatica, artritis reumatoide y/o lupus eritematoso sistemico;
    (x) prevencion y/o tratamiento de enfermedad cntica, tal como el tratamiento de un paciente con enfermedad cntica, una polinefropatfa del paciente cntico (CIPNP) y/o un paciente con CIPNP potencial; prevencion del desa- rrollo de enfermedad cntica o CIPNP; prevencion, tratamiento y/o curacion del smdrome de respuesta inflamato- ria sistemica (SIRS) en un paciente; prevencion o reduccion de la probabilidad de que un paciente padezca bacteriemia, septicemia y/o choque septico durante una hospitalizacion; y/o estabilizacion de la glucosa en san- gre, equilibrio de la insulina y opcionalmente el metabolismo en pacientes de unidades de cuidados intensivos con enfermedad aguda;
    (xi) prevencion y/o tratamiento del smdrome de ovario poliqrnstico (PCOS).
    (xii) prevencion y/o tratamiento de enfermedad cerebral, tal como isquemia cerebral, hemorragia cerebral y/o lesion cerebral traumatica;
    (xiii) prevencion y/o tratamiento de la apnea del sueno; y/o
    (xiv) prevencion y/o tratamiento de abuso, tal como abuso de alcohol y/o abuso de drogas.
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