KR20140078735A - 피롤로벤조디아제핀 및 그의 컨주게이트 - Google Patents

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토마스 필로
필립 윌슨 하워드
루크 마스터슨
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스피로즌 살
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Abstract

화학식 A의 컨주게이트:
Figure pct00075

상기 식에서,
점선은 C1과 C2 또는 C2와 C3 사이의 이중결합의 임의의 존재를 나타내며;
R2는 H, OH, =O, =CH2, CN, R, OR, =CH-RD, =C(RD)2, O-SO2-R, CO2R 및 COR로부터 독립적으로 선택되고, 임의로 할로 또는 디할로로부터 더 선택되며;
여기에서 RD는 R, CO2R, COR, CHO, CO2H, 및 할로로부터 독립적으로 선택되고;
R6 및 R9는 H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', NO2, Me3Sn 및 할로로부터 독립적으로 선택되며;
R7은 H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', NO2, Me3Sn 및 할로로부터 독립적으로 선택되고;
Y는 단일결합, 및 하기 화학식 A1 또는 A2의 그룹으로부터 선택되며:
Figure pct00076

여기에서 N은 상기 그룹이 PBD 부위의 N10에 결합하는 경우를 나타내고;
RL1 및 RL2는 H 및 메틸로부터 독립적으로 선택되거나, 이들이 결합된 탄소 원자와 함께 사이클로프로필렌 그룹을 형성하며;
CBA는 세포 결합제를 나타내고;
Q는 O, S 및 NH로 부터 독립적으로 선택되며;
R11은 H, 또는 R이거나, Q가 O인 경우에는, SO3M이고, 여기에서 M은 금속 양이온이며;
R 및 R'는 각각 독립적으로 임의로 치환된 C1-12 알킬, C3-20　헤테로사이클릴 및 C5 -20 아릴 그룹으로부터 선택되고, 임의로 그룹 NRR'와 관련하여 R 및 R'는 이들이 부착된 질소 원자와 함께 임의로 치환된 4-, 5-, 6- 또는 7-원 헤테로사이클릭 환을 형성하며;
여기에서 R12, R16, R19 및 R17은 각각 R2, R6, R9 및 R7에 대해서 정의한 바와 같고;
여기에서 R"는 C3-12 알킬렌 그룹이며, 이 쇄는 하나 또는 그 이상의 헤테로 원자, 예를 들어, O, S, N(H), NMe 및/또는 임의로 치환된 방향족 환, 예를 들어, 벤젠 또는 피리딘에 의해서 단속될 수 있고;
X 및 X'는 O, S 및 N(H)로부터 독립적으로 선택된다.

Description

피롤로벤조디아제핀 및 그의 컨주게이트{PYRROLOBENZODIAZEPINES AND CONJUGATES THEREOF}
본 발명은 세포 결합제에 대한 링커의 형태인 피롤로벤조디아제핀 (PBDs), 특히 불안정한 N10 보호 그룹을 갖는 피롤로벤조디아제핀에 관한 것이다.
피롤로벤조디아제핀
일부의 피롤로벤조디아제핀 (PBD)은 DNA의 특이적 서열을 인식하고, 그에 결합하는 능력을 가지며; 바람직한 서열은 PuGPu이다. 최초의 PBD 항종양 항생제인 안트라마이신은 1965 년에 발견되었다 [Lei㎎ruber, et al ., J. Am . Chem. Soc ., 87, 5793-5795 (1965); Lei㎎ruber, et al ., J. Am . Chem . Soc ., 87, 5791-5793 (1965)]. 그때 이후로, 다수의 천연적으로 존재하는 PBD가 보고되었으며, 10 개 이상의 합성경로는 다양한 유사체를 개발하였다 [Thurston, et al ., Chem . Rev . 1994, 433-465 (1994); Antonow, D. and Thurston, D.E., Chem. Rev. 2011 111 (4), 2815-2864)]. 패밀리 구성원에는 아베이마이신 (abbeymycin) [Hochlowski, et al., J. Antibiotics, 40, 145-148 (1987)], 치카마이신 (chicamycin) [Konishi, et al., J. Antibiotics , 37, 200-206 (1984)], DC-81 [일본 특허 58-180 487; Thurston, et al., Chem . Brit ., 26, 767-772 (1990); Bose, et al., Tetrahedron, 48, 751-758 (1992)], 마제트라마이신 (mazethramycin) [Kuminoto, et al., J. Antibiotics, 33, 665-667 (1980)], 네오트라마이신 (neothramycins) A 및 B [Takeuchi, et al., J. Antibiotics, 29, 93-96 (1976)], 포로트라마이신 (porothramycin) [Tsunakawa, et al., J. Antibiotics, 41, 1366-1373 (1988)], 프로트라카르신 (prothracarcin) [Shimizu, et al, J. Antibiotics, 29, 2492-2503 (1982); Langley and Thurston, J. Org . Chem ., 52, 91-97 (1987)], 시바노마이신 (sibanomicin) (DC-102) [Hara, et al ., J. Antibiotics, 41, 702-704 (1988); Itoh, et al ., J. Antibiotics, 41, 1281-1284 (1988)], 시비로마이신 (sibiromycin) [Leber, et al ., J. Am . Chem . Soc ., 110, 2992-2993 (1988)] 및 토마마이신 (tomamycin) [Arima, et al ., J. Antibiotics, 25, 437-444 (1972)]이 포함된다. PBD는 하기의 일반 구조를 갖는다:
Figure pct00001
이들은 치환체의 수, 형태 및 위치에서, 이들의 방향족 A 환 및 피롤로 C 환 둘 다에서, 및 C 환의 포화도에 있어서 상이하다. B-환에는 DNA를 알킬화하는데 책임이 있는 친전자성 중심인 N10-C11 위치에 이민 (N=C), 카비놀아민 (NH-CH(OH)), 또는 카비놀아민 메틸 에테르 (NH-CH(OMe))가 존재한다. 공지된 천연 생성물은 모두 C 환으로부터 A 환 쪽으로 볼 때 오른손 쪽으로의 트위스트를 갖는 생성물을 제공하는 것으로 키랄 C11a 위치에서 (S)-배열을 갖는다. 이것은 이들에게, 결합부위에서 적합한 스너그 (sug)를 유도하도록 B-형태 DNA의 작은 그루브 (minor groove)를 갖는 이소헬리시티 (isohelicity)를 위해서 적절한 삼차원 형상을 제공한다 [Kohn, In Antibiotics III. Springer-Verlag, New York, pp. 3-11 (1975); Hurley and Needham-VanDevanter, Acc. Chem. Res ., 19, 230-237 (1986)]. 작은 그루브 내에 부가물 (adduct)을 형성하는 그들의 능력은 이들이 DNA 처리 (processing)를 저해하고, 따라서 이들의 용도가 항종양제가 될 수 있도록 한다.
본 발명자들은 이전에 다음과 같이 C2 아릴 치환체를 보유하는 다이머성 PBD 화합물을 WO 2005/085251에 개시하였다:
Figure pct00002
이들 화합물은 매우 유용한 세포독성제인 것으로 나타났다.
특히 유리한 피롤로벤조디아제핀 화합물은 그레그손 (Gregson) 등 [Chem. Commun . 1999, 797-798]에 의해서 화합물 1로서, 및 그레그손 등 [J. Med. Chem . 2001, 44, 1161-1174]에 의해서 화합물 4a로서 기술되었다. SJG-136으로 또한 공지되어 있는 이 화합물은 다음과 같이 나타낸다:
Figure pct00003
본 발명자들은 이전에, PBD 화합물이 이들을 N10 위치에서 생체내 제거가능한 질소 보호 그룹에 의해서 보호함으로써 프로드럭으로 사용될 수 있음을 개시하였다 [WO 00/12507]. 이들 보호 그룹의 대부분은 카바메이트이며, 예를 들어, 다음과 같은 구조의 그룹이다:
Figure pct00004
여기에서 별표 (*)는 PBD의 N10 원자에 대한 부착점을 나타낸다.
본 발명자들은 또한, N10 위치에서 질소 카바메이트 보호 그룹을 갖는 PBD 화합물의 제조를 기술하였다 [WO 2005/023814]. 보호 그룹은 PBD 부위의 N10 위치로부터 N10-C11 이민 결합을 남기고 제거할 수 있다. 효소의 작용에 의해서 분해될 수 있는 그룹을 포함한 광범한 보호 그룹이 기술되었다.
WO 2007/085930은 항체와 같은 세포 결합제에 대한 연결을 위한 링커 그룹을 갖는 다이머 PBD 화합물의 제조를 기술하였다. 링커는 다이머의 모노머 PBD 단위를 연결시키는 브릿지 (bridge)로 존재한다.
항체-약물 컨주게이트
항체 요법은 암, 면역학적 및 혈관신생성 장애가 있는 환자의 표적화된 치료를 위해서 확립되었다 [Carter, P. (2006) Nature Reviews Immunology 6:343-357]. 세포독성제 또는 세포증식 억제제, 즉 암의 치료 시에 종양세포를 죽이거나 억제하는 약물의 국소 송달을 위한 항체-약물 컨주게이트 (ADC), 즉 면역컨주게이트의 사용은 종양에 대한 약물 부위의 송달 및 그 안에서의 세포내 축적을 표적으로 하는 반면에 이들 비컨주게이트된 약제의 전신 투여는 제거되어야 할 것으로 생각되는 종양세포뿐만 아니라 정상세포에 대해서도 허용할 수 없는 수준의 독성을 제공할 수 있다 [Xie et al (2006) Expert . Opin . Biol. Ther . 6(3):281-291; Kovtun et al (2006) Cancer Res . 66(6):3214-3121; Law et al (2006) Cancer Res . 66(4):2328-2337; Wu et al (2005) Nature Biotech . 23(9):1137-1145; Lambert J. (2005) Current Opin . in Pharmacol . 5:543-549; Hamann P. (2005) Expert Opin . Ther . Patents 15(9):1087-1103; Payne, G. (2003) Cancer Cell 3:207-212; Trail et al (2003) Cancer Immunol . Immunother . 52:328-337; Syrigos and Epenetos (1999) Anticancer Research 19:605-614].
이에 의해서 최소 독성을 갖는 최대 효능이 생각된다. ADC를 디자인하고 정제하기 위한 노력은 모노클로날 항체 (mAb)의 선택성뿐만 아니라 약물의 작용 기전, 약물-연결, 약물/항체 비율 (부하), 및 약물-방출 특성에 초점을 맞추었다 [Junutula, et al ., 2008b Nature Biotech., 26(8):925-932; Dornan et al (2009) Blood 114(13):2721-2729; US 7521541; US 7723485; WO2009/052249; McDonagh (2006) Protein Eng. Design & Sel. 19(7): 299-307; Doronina et al (2006) Bioconj. Chem. 17:114-124; Erickson et al (2006) Cancer Res . 66(8):1-8; Sanderson et al (2005) Clin . Cancer Res . 11:843-852; Jeffrey et al (2005) J. Med . Chem . 48:1344-1358; Hamblett et al (2004) Clin . Cancer Res . 10:7063-7070]. 약물 부위는 튜불린 결합, DNA 결합 또는 토포이소머라제 억제를 포함한 기전에 의한 그들의 세포독성 및 세포증식 억제 효과를 제공할 수 있다. 일부의 세포독성 약물은 큰 항체 또는 단백질 수용체 리간드에 컨주게이트되는 경우에 불활성이되거나 덜 활성이 되는 경향이 있다.
본 발명자들은 세포 결합제와의 PBD 컨주게이트, 특히 PBD 항체 컨주게이트를 형성시키는 새로운 접근방법을 개발하였다.
발명의 요약
일반적 관점에서, 본 발명은 특정의 황 링커를 경유하여 N10 위치를 통해서 세포 결합제에 연결된 PBD 다이머 화합물을 포함하는 컨주게이트를 제공한다. 세포 결합제는 바람직하게는 항체이다.
첫 번째 관점에서, 본 발명은 하기 화학식 A의 신규한 컨주게이트 화합물 및 그의 염 및 용매화물을 제공한다:
Figure pct00005
상기 식에서,
점선은 C1과 C2 또는 C2와 C3 사이의 이중결합의 임의의 존재를 나타내며;
R2는 H, OH, =O, =CH2, CN, R, OR, =CH-RD, =C(RD)2, O-SO2-R, CO2R 및 COR로부터 독립적으로 선택되고, 임의로 할로 또는 디할로로부터 더 선택되며;
여기에서 RD는 R, CO2R, COR, CHO, CO2H, 및 할로로부터 독립적으로 선택되고;
R6 및 R9는 H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', NO2, Me3Sn 및 할로로부터 독립적으로 선택되며;
R7은 H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', NO2, Me3Sn 및 할로로부터 독립적으로 선택되고;
Y는 단일결합, 및 하기 화학식 A1 또는 A2의 그룹으로부터 선택되며:
Figure pct00006
여기에서 N은 상기 그룹이 PBD 부위의 N10에 결합하는 경우를 나타내고;
RL1 및 RL2는 H 및 메틸로부터 독립적으로 선택되거나, 이들이 결합된 탄소 원자와 함께 사이클로프로필렌 그룹을 형성하며;
CBA는 세포 결합제를 나타내고;
Q는 O, S 및 NH로 부터 독립적으로 선택되며;
R11은 H, 또는 R이거나, Q가 O인 경우에는, SO3M이고, 여기에서 M은 금속 양이온이며;
R 및 R'는 각각 독립적으로 임의로 치환된 C1 -12 알킬, C3 -20　헤테로사이클릴 및 C5 -20 아릴 그룹으로부터 선택되고, 임의로 그룹 NRR'와 관련하여 R 및 R'는 이들이 부착된 질소 원자와 함께 임의로 치환된 4-, 5-, 6- 또는 7-원 헤테로사이클릭 환을 형성하며;
여기에서 R12, R16, R19 및 R17은 각각 R2, R6, R9 및 R7에 대해서 정의한 바와 같고;
여기에서 R"는 C3-12 알킬렌 그룹이며, 이 쇄는 하나 또는 그 이상의 헤테로 원자, 예를 들어, O, S, N(H), NMe 및/또는 임의로 치환된 방향족 환, 예를 들어, 벤젠 또는 피리딘에 의해서 단속(interrupt)될 수 있고;
X 및 X'는 O, S 및 N(H)로부터 독립적으로 선택된다.
따라서, 화학식 A는 Y에 따라서 하기 화학식 A-I, A-II 및 A-III으로부터 선택된다:
화학식 A의 화합물에서,
Figure pct00008
는 황 연결 그룹이다.
본 발명의 두 번째 관점은 표적 위치에서 하기 화학식 (B) 또는 (C)의 화합물 및 그의 염 및 용매화물을 제공하기 위한 첫 번째 관점의 컨주게이트의 용도에 관한 것이다:
Figure pct00009
상기 식에서,
상기 그룹들은 첫 번째 관점에서 정의된 바와 같고,
단, Q가 O, S 및 NH로부터 독립적으로 선택되며;
R11이 H 또는 R이거나, 또는 Q가 O인 경우에는, SO3M이고, 여기에서 M은 금속 양이온이다.
본 발명의 세 번째 관점은 또한, 본 발명의 컨주게이트 화합물의 제조에 사용하기 위한 화학식 (D)의 화합물 및 그의 염 및 용매화물을 제공한다:
Figure pct00010
여기에서 그룹들은 본 발명의 첫 번째 관점에서 정의한 바와 같다.
상기 화합물들에서,
Figure pct00011
및
Figure pct00012
로 표시된 5-원 환은 (a)
Figure pct00013
(E) (여기에서, R1 또는 R3 중의 하나와 R2는 이들이 부착된 C 환의 탄소 원자와 함께 임의로 치환된 벤젠 환을 형성하며; V 및 W는 각각 (CH2)n, O, S, NR, CHR, 및 CRR'로부터 선택되고, 여기에서 n은 1, 2 또는 3이며, 단 R1 및 R2가 이들이 부착된 C 환의 탄소 원자와 함께 임의로 치환된 벤젠 환을 형성하는 경우에 V는 C이며, R3 및 R2가 이들이 부착된 C 환의 탄소 원자와 함께 임의로 치환된 벤젠 환을 형성하는 경우에 W는 C이다); 및
(b)
Figure pct00014
(F) (여기에서, T는 CH2, NR, CO, BH, SO, 및 SO2로부터 선택되고; U는 CH2, NR, O 및 S로부터 선택되며; Y는 (CH2)n이고, 여기에서 n은 1, 2, 3 또는 4이며; 단 T, U 및 Y가 모두 CH2는 아니다)로부터 선택된 환에 의해서 대체될 수 있다.
본 발명은 특정화된 링커를 경유하여 PBD 부위 중의 하나 상의 N10 위치를 통해 세포 결합제에 연결된 PBD 다이머를 제공한다.
본 발명은 대상체에서 바람직한 부위에 PBD 화합물을 제공하는데 사용하기에 적합하다. 컨주게이트는 링커의 어떤 부분도 보유하지 않는 활성 PBD 화합물의 방출을 허용한다. 여기에는 PBD 화합물의 반응성에 영향을 미칠 수 있는 부분이 존재하지 않는다.
바람직한 대상
다음의 바람직한 대상은 상술한 바와 같은 본 발명의 모든 관점에 적용될 수 있거나, 단일 관점에 관한 것일 수 있다. 바람직한 대상은 어떤 조합으로나 함께 조합될 수 있다.
이중결합
한가지 실시양태에서, 여기에는 C1과 C2, 및 C2와 C3 사이에 어떤 이중결합도 존재하지 않는다.
한가지 실시양태에서, 점선은 이하에 나타낸 바와 같이 C2와 C3 사이에 이중결합이 임의로 존재함을 나타낸다:
Figure pct00015
한가지 실시양태에서, 이중결합은 R2가 C5 -20 아릴 또는 C1 -12 알킬인 경우에 C2와 C3 사이에 존재한다.
한가지 실시양태에서, 점선은 이하에 나타낸 바와 같이 C1과 C2 사이에 이중결합이 임의로 존재함을 나타낸다:
Figure pct00016
한가지 실시양태에서, 이중결합은 R2가 C5 -20 아릴 또는 C1 -12 알킬인 경우에 C1과 C2 사이에 존재한다.
R 2
한가지 실시양태에서, R2는 H, OH, =O, =CH2, CN, R, OR, =CH-RD, =C(RD)2, O-SO2-R, CO2R 및 COR로부터 독립적으로 선택되며, 임의로 할로 또는 디할로로부터 더 선택된다.
한가지 실시양태에서, R2는 H, OH, =O, =CH2, CN, R, OR, =CH-RD, =C(RD)2, O-SO2-R, CO2R 및 COR로부터 독립적으로 선택된다.
한가지 실시양태에서, R2는 H, =O, =CH2, R, =CH-RD, 및 =C(RD)2로부터 독립적으로 선택된다.
한가지 실시양태에서, R2는 독립적으로 H이다.
한가지 실시양태에서, R2는 독립적으로 =O이다.
한가지 실시양태에서, R2는 독립적으로 =CH2이다.
한가지 실시양태에서, R2는 독립적으로 =CH-RD이다. PBD 화합물 내에서, 그룹 =CH-RD는 이하에 나타낸 배열 중의 하나를 가질 수 있다:
Figure pct00017
한가지 실시양태에서, 배열은 배열 (I)이다.
한가지 실시양태에서, R2는 독립적으로 =C(RD)2이다.
한가지 실시양태에서, R2는 독립적으로 =CF2이다.
한가지 실시양태에서, R2는 독립적으로 R이다.
한가지 실시양태에서, R2는 독립적으로 임의로 치환된 C5 -20 아릴이다.
한가지 실시양태에서, R2는 독립적으로 임의로 치환된 C1 -12 알킬이다.
한가지 실시양태에서, R2는 독립적으로 임의로 치환된 C5 -20 아릴이다.
한가지 실시양태에서, R2는 독립적으로 임의로 치환된 C5 -7 아릴이다.
한가지 실시양태에서, R2는 독립적으로 임의로 치환된 C8 -10 아릴이다.
한가지 실시양태에서, R2는 독립적으로 임의로 치환된 페닐이다.
한가지 실시양태에서, R2는 독립적으로 임의로 치환된 티에닐이다.
한가지 실시양태에서, R2는 독립적으로 임의로 치환된 나프틸이다.
한가지 실시양태에서, R2는 독립적으로 임의로 치환된 피리딜이다.
한가지 실시양태에서, R2는 독립적으로 임의로 치환된 퀴놀리닐 또는 이소퀴놀리닐이다.
한가지 실시양태에서, R2는 1 내지 3 개의 치환체 그룹을 가지며, 여기에서 1 및 2 개가 더욱 바람직하고, 단일 치환된 그룹이 가장 바람직하다. 치환체는 어떤 위치에나 있을 수 있다.
R2가 C5 -7 아릴 그룹인 경우에, 단일 치환체는 바람직하게는 화합물의 나머지에 대한 결합에 인접하지 않는 환 원자 상에 존재하며, 즉 이것은 바람직하게는 화합물의 나머지에 대한 결합에 대해서 β 또는 γ이다. 따라서, C5 -7 아릴 그룹이 페닐인 경우에, 치환체는 바람직하게는 메타- 또는 파라-위치에 존재하고, 더욱 바람직하게는 파라-위치에 존재한다.
한가지 실시양태에서, R2는 다음의 그룹으로부터 선택된다:
Figure pct00018
여기에서 별표는 부착점을 나타낸다.
R2가 C8 -10 아릴 그룹, 예를 들어, 퀴놀리닐 또는 이소퀴놀리닐인 경우에, 이것은 퀴놀린 또는 이소퀴놀린 환의 어떤 위치에 어떤 수의 치환체라도 가질 수 있다. 일부의 실시양태에서, 이것은 1, 2 또는 3 개의 치환체를 가지며, 이들은 근위 및 원위 환 또는 둘 다 (하나를 초과하는 치환체인 경우)에 존재할 수 있다.
한가지 실시양태에서, R2가 임의로 치환된 경우에, 치환체는 이하의 치환체 항목에 제시된 치환체들로부터 선택된다.
R이 임의로 치환된 경우에, 치환체는 바람직하게는 할로, 하이드록실, 에테르, 포르밀, 아실, 카복시, 에스테르, 아실옥시, 아미노, 아미도, 아실아미도, 아미노카보닐옥시, 우레이도, 니트로, 시아노 및 티오에테르로부터 선택된다.
한가지 실시양태에서, R 또는 R2가 임의로 치환된 경우에, 치환체는 R, OR, SR, NRR', NO2, 할로, CO2R, COR, CONH2, CONHR, 및 CONRR'로 구성된 그룹으로부터 선택된다.
R2가 C1 -12 알킬인 경우에, 임의의 치환체는 추가로 C3 -20　헤테로사이클릴 및 C5-20 아릴 그룹을 포함할 수 있다.
R2가 C3 -20　헤테로사이클릴인 경우에, 임의의 치환체는 추가로 C1 -12 알킬 및 C5 -20 아릴 그룹을 포함할 수 있다.
R2가 C5 -20 이릴 그룹인 경우에, 임의의 치환체는 추가로 C3 -20　헤테로사이클릴 및 C1 -12 알킬 그룹을 포함할 수 있다.
용어 "알킬"은 서브-클래스인 알케닐 및 알키닐뿐만 아니라 사이클로알킬을 포함하는 것으로 이해된다. 따라서, R2가 임의로 치환된 C1 -12 알킬인 경우에, 알킬 그룹은 임의로, 컨주게이트된 시스템의 일부분을 형성할 수 있는 하나 또는 그 이상의 탄소-탄소 이중 또는 삼중결합을 함유하는 것으로 이해된다. 한가지 실시양태에서, 임의로 치환된 C1 -12 알킬 그룹은 적어도 하나의 탄소-탄소 이중 또는 삼중결합을 함유하며, 이 결합은 C1과 C2, 또는 C2와 C3 사이에 존재하는 이중결합과 컨주게이트된다. 한가지 실시양태에서, C1 -12 알킬 그룹은 포화된 C1 -12 알킬, C2 -12　알케닐, C2 -12 알키닐 및 C3 -12 사이클로알킬로부터 선택된 그룹이다.
R2 상의 치환체가 할로인 경우에, 이것은 바람직하게는 F 또는 Cl, 더욱 바람직하게는 F이다.
R2 상의 치환체가 에테르인 경우에, 이것은 일부의 실시양태에서 알콕시 그룹, 예를 들어, C1 -7 알콕시 그룹 (예를 들어, 메톡시, 에톡시)일 수 있거나, 이것은 일부의 실시양태에서 C5 -7 아릴옥시 그룹 (예를 들어, 페녹시, 피리딜옥시, 푸라닐옥시)일 수 있다.
R2 상의 치환체가 C1 -7 알킬인 경우에, 이것은 바람직하게는 C1 -4 알킬 그룹 (예를 들어, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸)일 수 있다.
R2 상의 치환체가 C3 -7 헤테로사이클릴인 경우에, 이것은 일부의 실시양태에서 C6 질소 함유 헤테로사이클릴 그룹, 예를 들어, 모르폴리노, 티오모르폴리노, 피페리디닐, 피페라지닐일 수 있다. 이들 그룹은 질소 원자를 통해서 PBD 부분의 나머지에 결합할 수 있다. 이들 그룹은 예를 들어, C1 -4 알킬 그룹에 의해서 더 치환될 수 있다.
R2 상의 치환체가 비스-옥시-C1 -3 알킬렌인 경우에, 이것은 바람직하게는 비스-옥시-메틸렌 또는 비스-옥시-에틸렌이다.
R2에 대해 특히 바람직한 치환체에는 메톡시, 에톡시, 플루오로, 클로로, 시아노, 비스-옥시-메틸렌, 메틸-피페라지닐, 모르폴리노 및 메틸-티에닐이 포함된다.
특히 바람직한 치환된 R2 그룹에는 4-메톡시-페닐, 3-메톡시페닐, 4-에톡시-페닐, 3-에톡시-페닐, 4-메틸-페닐, 4-플루오로-페닐, 4-클로로-페닐, 3,4-비스옥시메틸렌-페닐, 4-메틸티에닐, 4-시아노페닐, 4-페녹시페닐, 퀴놀린-3-일 및 퀴놀린-6-일, 이소퀴놀린-3-일 및 이소퀴놀린-6-일, 2-티에닐, 2-푸라닐, 메톡시나프틸, 및 나프틸이 포함되나, 이들로 제한되지 않는다.
한가지 실시양태에서, R2는 할로 또는 디할로이다. 한가지 실시양태에서, R2는 -F 또는 -F2이며, 이 치환체는 각각 식 (III) 및 (IV)로 이하에 예시된다:
Figure pct00019
일부의 실시양태에서, 여기에서는 C2 및 C3 사이에 이중결합이 존재하거나, C2 치환체가 이중결합에 의해서 PBD 환에 결합되는 것 (즉, C2에서의 C 원자는 sp2 중심이다)이 바람직하다.
R D
한가지 실시양태에서, RD는 R, CO2R, COR, CHO, CO2H, 및 할로로부터 독립적으로 선택된다.
한가지 실시양태에서, RD는 독립적으로 R이다.
한가지 실시양태에서, RD는 독립적으로 할로이다.
R 6
한가지 실시양태에서, R6는 H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', NO2, Me3Sn- 및 할로로부터 독립적으로 선택된다.
한가지 실시양태에서, R6는 H, OH, OR, SH, NH2, NO2 및 할로로부터 독립적으로 선택된다.
한가지 실시양태에서, R6는 H 및 할로로부터 독립적으로 선택된다.
한가지 실시양태에서, R6는 독립적으로 H이다.
한가지 실시양태에서, R6 및 R7은 함께 그룹 -O-(CH2)p-O-를 형성하며, 여기에서 p는 1 또는 2이다.
R 7
R7은 H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', NO2, Me3Sn 및 할로로부터 독립적으로 선택된다.
한가지 실시양태에서, R7은 독립적으로 OR이다.
한가지 실시양태에서, R7은 독립적으로 OR7A이며, 여기에서 R7A는 독립적으로 임의로 치환된 C1 -6　알킬이다.
한가지 실시양태에서, R7A는 독립적으로 임의로 치환된 포화 C1 -6 알킬이다.
한가지 실시양태에서, R7A는 독립적으로 임의로 치환된 C2 -4 알케닐이다.
한가지 실시양태에서, R7A는 독립적으로 Me이다.
한가지 실시양태에서, R7A는 독립적으로 CH2Ph이다.
한가지 실시양태에서, R7A는 독립적으로 알릴이다.
R 9
한가지 실시양태에서, R9는 H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', NO2, Me3Sn- 및 할로로부터 독립적으로 선택된다.
한가지 실시양태에서, R9는 독립적으로 H이다.
한가지 실시양태에서, R9는 독립적으로 R 또는 OR이다.
연결 그룹
연결 그룹은 화학식 A의 컨주게이트에서 PBD 부분의 N10 위치로부터 제거하여 이하에 예시된 바와 같은 N10-C11 이민 결합, 카비놀아민, 치환된 카비놀아민 (여기에서 QR11은 OSO3M이다), 비설파이트 부가물, 티오카비놀아민, 치환된 티오카보닐아민, 또는 치환된 카비날아민 (화학식 B 또는 C의 화합물)을 남길 수 있다:
Figure pct00020
여기에서 R 및 M은 본 발명의 컨주게이트에 대해서 정의된 바와 같다.
한가지 실시양태에서, 연결 그룹은 PBD 부분의 N10 위치로부터 제거되어 N10-C11 이민 결합을 남길 수 있다.
본 발명에서 PBD 다이머와 세포 결합제, 예를 들어, 항체 사이의 특정화된 연결은 바람직하게는 세포외적으로 안정하다. 세포 내로의 수송 또는 송달 전에, 항체-약물 컨주게이트 (ADC)는 바람직하게는 안정하며, 온전하게 유지되고, 즉 항체는 약물 부분에 연결된 채로 유지된다. 링커는 표적 세포 외부에서 안정하고, 세포 내부에서 약간의 효과적인 비율로 분해될 수 있다. 효과적인 링커는 (i) 항체의 특이적 결합 특성을 유지시키고; (ii) 컨주게이트 또는 약물 부분의 세포내 송달을 허용하고; (iii) 컨주게이트가 그의 표적 부위로 송달 또는 수송될 때까지 안정하고 온전하게 유지되며; (iv) PBD 약물 부분의 세포독성, 세포-사멸 효과 또는 세포증식억제 효과를 유지시킬 것이다. ADC의 안정성은 질량 분광분석, HPLC, 및 분리/분석 기술 LC/MS와 같은 표준 분석기술에 의해서 측정될 수 있다.
화학식 B 또는 C의 화합물의 송달은 연결 그룹에 대한 효소의 작용에 의해서 화학식 A의 컨주게이트의 바람직한 활성화 부위에서 달성된다. 화학식 A의 컨주게이트의 S는 디설파이드 결합에 의해서 세포 결합제 상의 유리 S (활성 티올)에 연결된다.
연결 그룹은 효소의 작용에 의해서 분해될 수 있다. 한가지 실시양태에서, 효소는 티오리덕타제이다.
특정의 항체는 환원가능한 쇄간 디설파이드, 즉 시스테인 브릿지를 갖는다. 항체는 DTT (디티오트레이톨)와 같은 환원제로 처리함으로써 링커 시약과의 컨주게이션에 대해 반응성으로 만들 수 있다. 따라서, 각각의 시스테인 브릿지는 이론적으로 2 개의 반응성 티올 친핵체를 형성할 수 있다. 추가의 친핵성 그룹은 아민의 티올로의 전환을 야기하는 리신과 2-이미노티올란 (트라우트 (Traut's) 시약)의 반응을 통해서 항체 내로 도입될 수 있다. 반응성 티올 그룹은 1, 2, 3, 4 또는 그 이상의 시스테인 잔기를 도입시킴으로써 (예를 들어, 하나 또는 그 이상의 비-천연 시스테인 아미노산 잔기를 포함하는 돌연변이체 항체를 제조함으로써) 항체 (또는 그의 단편) 내로 도입될 수 있다. US 7521541은 반응성 시스테인 아미노산의 도입에 의한 항체의 조작을 교시하였다.
RL1 및 RL2는 H 및 메틸로부터 선택되거나, 이들이 결합된 탄소 원자와 함께 사이클로프로필렌 그룹을 형성한다. 일부의 실시양태에서, 이들은 둘 다 H이다. 다른 실시양태에서, 이들은 둘다 메틸이다. 추가의 실시양태에서, 이들 중의 하나는 H이고, 다른 것은 메틸이며; 이들 실시양태에서, 이들이 결합된 탄소 원자는 키랄 중심이다.
일부의 실시양태에서, Y는 단일결합이다.
다른 실시양태에서, Y는
Figure pct00021
(A1)이다.
추가의 실시양태에서, Y는
Figure pct00022
(A2)이다.
Q
한가지 실시양태에서, Q는 O, S, 또는 N(H)로부터 선택된다.
바람직하게는, Q는 O이다.
R 11
한가지 실시양태에서, R11은 H, 또는 R이거나, Q가 O인 경우에는 SO3M이며, 여기에서 M은 금속 양이온이다.
한가지 실시양태에서, R11은 H이다.
한가지 실시양태에서, R11은 R이다.
한가지 실시양태에서, Q가 O인 경우에, R11은 SO3M이며, 여기에서 M은 금속 양이온이다. 상기 양이온은 Na+일 수 있다.
세포 결합제
세포 결합제는 어떤 종류의 것이라도 될 수 있으며, 펩타이드 및 비-펩타이드를 포함한다. 이들에는 항체 또는 적어도 하나 결합 부위를 함유하는 항체의 단편, 림포킨, 호르몬, 성장 인자, 영양소-수송 (nutrient-transport) 분자, 또는 그 밖의 다른 세포 결합 분자 또는 물질이 포함될 수 있다.
본 발명에서 용어 "항체"는 광범한 개념으로 사용되며, 구체적으로는 이들이 바람직한 생물학적 활성을 나타내는 한은 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 다이머, 멀티머, 다중특이성 (multispecific) 항체 (예를 들어, 이중특이성 항체), 및 항체 단편을 포함한다 [Miller et al (2003) Jour . of Immunology 170:4854-4861]. 항체는 쥐, 인간, 인간화, 키메릭 항체이거나, 또는 다른 종으로부터 유도된 것일 수 있다. 항체는 특이적 항체를 인식하고, 그에 대해 결합할 수 있는 면역 시스템에 의해서 생성된 단백질이다 [Janeway, C., Travers, P., Walport, M., Shlomchik (2001) Immuno Biology , 5 th Ed., Garland Publishing, New York]. 표적 항원은 일반적으로 다수의 항체 상의 CDRs에 의해서 인식되는 것으로, 에피토프 (epitope)로도 불리는 다수의 결합 부위를 갖는다. 상이한 에피토프에 특이적으로 결합하는 각각의 항체는 상이한 구조를 갖는다. 따라서, 하나의 항원은 하나 이상의 상응하는 항체를 가질 수 있다. 항체는 전체-길이 면역글로불린 분자 또는 전체-길이 면역글로불린 분자의 면역학적으로 활성인 부분, 즉 관심이 있는 표적의 항원 또는 그의 일부분 (이러한 표적은 자가면역 질병과 연관된 자가면역 항체를 생산하는 암세포 또는 세포들을 포함하나 이들로 제한되지 않는다)을 면역특이적으로 결합시키는 항원 결합 부위를 함유하는 분자를 포함한다. 면역글로불린은 어떤 타입 (예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, 및 IgA), 클래스 (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 서브클래스의 면역글로불린 분자라도 될 수 있다. 면역글로불린은 인간, 쥐 또는 토끼 기원을 포함하는 어떤 종으로부터라도 유도될 수 있다.
"항체 단편"은 일반적으로 그의 항원 결합 또는 가변 구역인 전체 길이 항체의 일부분을 포함한다. 항체 단편의 예로는 Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편; 디아바디 (diabodies); 선형 항체; 암세포 항원, 바이러스 항원 또는 미생물 항원에 면역특이적으로 결합하는 Fab 발현 라이브러리에 의해서 생산된 단편, 항-이디오타입 (안티-Id) 항체, CDR (상보성 결정 구역), 및 상기한 것 중의 어떤 것의 에피토프-결합 단편, 단일-쇄 항체 분자; 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이성 항체가 포함된다.
본 발명에서 사용된 것으로서 용어 "모노클로날 항체"는 실질적으로 균질한 항체의 집단으로부터 수득된 항체, 즉 소량으로 존재할 수 있는 천연적으로 존재하는 가능한 돌연변이를 제외하고는 동일한 집단을 포함하는 개별적인 항체를 나타낸다. 모노클로날 항체는 단일 항원 부위에 대해 유도되는 것으로서 매우 특이적이다. 더구나, 상이한 결정인자 (에피토프)에 대해 유도되는 상이한 항체를 포함하는 폴리클로날 항체 제제와는 대조적으로, 각각의 모노클로날 항체는 항원 상의 단일 결정인자에 대해 유도된다. 그들의 특이성 이외에도, 모노클로날 항체는 이들이 다른 항체에 의해서 오염되지 않고 합성될 수 있다는 점에서 유리하다. 수식어구 "모노클로날"은 항체의 실질적으로 균일한 집단으로부터 수득된 것으로서의 항체의 특징을 나타내며, 어떤 특별한 방법에 의한 항체의 생산을 필요로 하는 것으로 해석되지는 않는다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용될 모노클로날 항체는 코흘러 (Kohler) 등에 의해서 최초로 기술된 하이브리도마 방법 [Kohler et al (1975) Nature 256:495]에 의해서 제조될 수 있거나, 재조합 DNA 방법 (참조: US 4816567)에 의해서 제조될 수 있다. 모노클로날 항체는 또한, 문헌 [Clackson et al (1991) Nature, 352:624-628; Marks et al (1991) J. Mol. Biol., 222:581-597]에 기술된 기술을 사용하여 파지 항체 라이브러리로부터 분리될 수도 있다.
본 발명에서 모노클로날 항체는 구체적으로, 중쇄 및/또는 경쇄의 일부분이 특별한 종으로부터 유도되거나 특별한 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체 내의 상응하는 서열과 동일하거나 그와 상동성인 한편 쇄(들)의 나머지는 또 다른 종으로부터 유도되거나 또 다른 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체 내의 상응하는 서열과 동일하거나 그와 상동성인 "키메릭" 항체뿐만 아니라, 이들이 바람직한 생물학적 활성을 나타내는 한 이러한 항체의 단편을 포함한다 [US 4816567; and Morrison et al (1984) Proc . Natl . Acad . Sci. USA, 81:6851-6855]. 키메릭 항체는 비-인간 영장류로부터 유도된 가변 영역 항원-결합 서열 및 인간 불변 구역 서열을 포함하는 "영장류화된" 항체를 포함한다.
본 발명에서 "온전한 항체"는 VL 및 VH 영역뿐만 아니라 경쇄 불변 영역 (CL) 및 중쇄 불변 영역 CH1, CH2 및 CH3을 포함하는 것이다. 불변 영역은 천연 서열 불변 영역 (예를 들어, 인간 천연 서열 불변 영역) 또는 그의 아미노산 서열 변이체일 수 있다. 온전한 항체는 항체의 Fc 구역 (천연 서열 Fc 구역 또는 아미노산 서열 변이체 Fc 구역)에 기인하는 이들 생물학적 활성을 나타내는 하나 또는 그 이상의 "효과기 기능"을 가질 수 있다. 항체 효과기 기능의 예로는 C1q 결합; 보체 의존성 세포독성; Fc 수용체 결합; 항체-의존성 세포-매개 세포독성 (ADCC); 식작용; 및 B 세포 수용체 및 BCR과 같은 세포 표면 수용체의 하향 조절이 포함된다.
그들의 중쇄의 불변 영역의 아미노산 서열에 따라서, 온전한 항체는 상이한 "클래스"로 지정될 수 있다. 온전한 항체에는 5 가지의 주된 클래스 IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM가 있으며, 이들 중의 몇 가지는 "서브클래스" (이소타입), 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, 및 IgA2로 더 분류될 수 있다. 항체의 상이한 클래스에 상응하는 중쇄 불변 영역은 각각 α, δ, ε, γ 및 μ로 불린다. 면역글로불린의 상이한 클래스의 서브유니트 구조 및 삼차원 배열은 잘 알려져 있다.
세포 결합제의 예로는 본 명세서에 포함된 WO　2007/085930에서 사용하기 위해서 기술된 성분이 포함된다.
세포 결합제는 폴리펩타이드일 수 있거나, 폴리펩타이드를 포함할 수 있다. 폴리펩타이드는 사이클릭 폴리펩타이드일 수 있다. 세포 결합제는 항체일 수 있다. 따라서, 한가지 실시양태에서 본 발명은 항체-약물 컨주게이트 (ADC)를 제공한다.
약물 부하량
약물 부하량은 항체당 PBD 약물의 평균 수이다. 약물 부하량은 항체 (Ab)당 1 내지 8 개의 약물 (D)의 범위일 수 있으며, 즉 여기에서는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 및 8 개의 약물 부분이 항체에 공유적으로 부착된다. ADC의 조성물은 1 내지 8 개 범위의 약물과 컨주게이트된 항체의 수집물을 포함한다. 컨주게이션 반응으로부터의 ADC의 제제에서 항체당 약물의 평균 수는 질량 분광분석, ELISA 분석, 전기영동, 및 HPLC와 같은 통상적인 방법에 의해서 특정화될 수 있다. p의 관점에서의 ADC의 정량적 분포가 또한 결정될 수 있다. ELISA에 의해 ADC의 특별한 제제에서의 p의 평균값이 결정될 수 있다 [Hamblett et al (2004) Clin. Cancer Res. 10:7063-7070; Sanderson et al (2005) Clin. Cancer Res. 11:843-852]. 그러나, p (약물) 값의 분포는 항체-항원 결합 및 ELISA의 검출 한계에 의해서 식별할 수 없다. 또한, 항체-약물 컨주게이트의 검출을 위한 ELISA 분석은 약물 부분이 어디에서 중쇄 또는 경쇄 단편, 또는 특별한 아미노산 잔기와 같은 항체에 부착되는 지를 결정하지 못한다. 일부의 경우에, 다른 약물 부하량을 갖는 ADC로부터 p가 특정한 값인 균질한 ADC의 분리, 정제 및 특정화는 역상 HPLC 또는 전기영동과 같은 방법에 의해서 달성될 수 있다.
일부의 항체-약물 컨주게이트의 경우에, p는 항체 상의 부착 부위의 수에 의해서 제한될 수 있다. 예를 들어, 항체는 단지 한 개 또는 몇 개의 시스테인 티올 그룹을 가질 수 있거나, 링커가 그를 통해서 부착될 수 있는 단지 한 개 또는 몇 개의 충분히 반응성인 티올 그룹을 가질 수 있다. 더 큰 약물 부하량, 예를 들어, p >5는 특정의 항체-약물 컨주게이트의 응집, 불용성, 독성 또는 세포 투과성의 상실을 야기할 수 있다.
전형적으로는, 약물 부분의 이론적 최대량보다 더 적은 수가 컨주게이션 반응 중에 항체에 컨주게이트된다. 항체는 예를 들어, 약물-링커 중간체 (D-L) 또는 링커 시약과 반응하지 않는 다수의 리신 잔기를 함유할 수 있다. 가장 반응성인 리신 그룹만이 아민-반응성 링커 시약과 반응할 수 있다. 또한, 가장 반응성인 시스테인 티올 그룹만이 티올-반응성 링커 시약과 반응할 수 있다. 일반적으로, 항체는 약물 부분에 연결될 수 있는 유리 및 반응성 시스테인 티올 그룹을 있다고 하더라도 다수 함유하지 않는다. 화합물의 항체 내의 대부분의 시스테인 티올 잔기는 디설파이드 브릿지로서 존재하며, 부분적이거나 완전한 환원 조건 하에서 디티오트레이톨 (DTT) 또는 TCEP와 같은 환원제에 의해서 환원되어야 한다. ADC의 부하량 (약물/항체 비)은 (i) 항체에 대비한 약물-링커 중간체 (D-L) 또는 링커 시약의 몰과량의 제한, (ii) 컨주게이션 반응 시간 또는 온도의 제한, (iii) 시스테인 티올 변형을 위한 부분적이거나 제한적인 환원 조건을 포함한 몇 가지 상이한 방식으로 제어될 수 있다.
시스테인 아미노산은 항체 내의 반응성 부위에서 조작될 수 있고, 이것은 쇄내 또는 분자간 디설파이드 결합을 형성하지 않는다 [Junutula, et al., 2008b Nature Biotech., 26(8):925-932; Dornan et al (2009) Blood 114(13):2721-2729; US 7521541; US 7723485; WO2009/052249; Shen et al (2012) Nature Biotech., 30(2):184-191; Junutula et al (2008) Jour of Immun. Methods 332:41-52]. 조작된 시스테인 티올은 말레이미드 또는 알파-할로 아미드와 같은 티올-반응성 친전자성 그룹을 갖는 본 발명의 약물-링커 시약 또는 링커 시약과 반응하여 시스테인 조작된 항체 (ThioMabs)와 PBD 약물 부분을 갖는 ADC를 형성할 수 있다. 이렇게 하여 약물 부분의 위치는 디자인되고, 제어되고, 알려질 수 있다. 조작된 시스테인 티올 그룹은 전형적으로 고수율로 티올-반응성 링커 시약 또는 약물-링커 시약과 반응하기 때문에 약물 부하량이 제어될 수 있다. 중쇄 또는 경쇄 상의 단일 부위에서의 치환에 의해 시스테인 아미노산을 도입시켜 IgG 항체를 조작하는 것은 대칭적 항체 상에 2 개의 새로운 시스테인을 제공한다. 2에 가까운 약물 부하량이 달성되고, 컨주게이션 생성물 ADC의 균질성에 접근할 수 있다.
항체의 하나 이상의 친핵성 또는 친전자성 그룹이 약물-링커 중간체와 반응하거나, 링커 시약과 반응하고 이어서 약물 부분 시약과 반응하는 경우에, 생성된 생성물은 예를 들어, 1, 2, 3 개 등의 항체에 부착된 약물 부분의 분포를 갖는 ADC 화합물의 혼합물이다. 폴리머 역상 (PLRP) 및 소수성 상호작용 (HIC)과 같은 액체 크로마토그래피 방법은 약물 부하량 값에 의해 혼합물 내의 화합물을 분리시킬 수 있다. 단일 약물 부하량 값 (p)을 갖는 ADC의 제제가 분리될 수 있지만, 약물 부분은 항체 상의 상이한 부위에서 링커를 통해 부착될 수 있기 때문에 이들 단일 부하량 값 ADCs는 여전히 불균질한 혼합물일 수 있다.
따라서, 본 발명의 항체-약물 컨주게이트 조성물은 항체가 하나 또는 그 이상의 PBD 약물 부분을 갖는 경우 및 약물 부분이 다양한 아미노산 잔기에서 항체에 부착될 수 있는 경우에 항체-약물 컨주게이트 화합물의 혼합물을 포함한다.
한가지 실시양태에서, 세포 결합제당 다이머 피롤로벤조디아제핀 그룹의 평균 수는 1 내지 20의 범위이다. 일부의 실시양태에서, 상기 범위는 1 내지 8, 2 내지 8, 2 내지 6, 2 내지 4, 및 4 내지 8로부터 선택된다.
일부의 실시양태에서는, 세포 결합제당 하나의 다이머 피롤로벤조디아제핀 그룹이 존재한다.
펩타이드
한가지 실시양태에서, 세포 결합제는 4-20 개, 바람직하게는 6-20 개의 접속 아미노산 잔기를 포함하는 선형 또는 사이클릭 펩타이드이다. 이 실시양태에서, 하나의 세포 결합제는 하나의 모노머 또는 다이머 피롤로벤조디아제핀 화합물에 연결되는 것이 바람직하다.
한가지 실시양태에서, 세포 결합제는 인테그린 αvβ6에 결합하는 펩타이드를 포함한다. 펩타이드는 XYS에 비해 αvβ6에 대해서 선택적일 수 있다.
한가지 실시양태에서, 세포 결합제는 A20FMDV-Cys 폴리펩타이드를 포함한다. A20FMDV-Cys는 서열 NAVPNLRGDLQVLAQKVARTC를 갖는다. 대신으로, A20FMDV-Cys 서열의 변이체가 사용될 수 있으며, 여기에서는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 개의 아미노산 잔기가 또 다른 아미노산 잔기에 의해서 치환된다.
한가지 실시양태에서, 항체는 모노클로날 항체; 키메릭 항체; 인간화된 항체; 완전한 인간 항체; 또는 단일쇄 항체이다. 한가지 실시양태에서, 항체는 생물학적 활성을 갖는 이들 항체 중의 하나의 단편이다. 이러한 단편의 예로는 Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편이 포함된다.
이들 실시양태에서, 각각의 항체는 하나 또는 몇 개의 다이머 피롤로벤조디아제핀 그룹에 연결될 수 있다. 세포 결합제에 대한 피롤로벤조디아제핀의 바람직한 비는 상기에 제시된다.
항체는 영역 항체 (domain antibody; DAB)일 수 있다.
한가지 실시양태에서, 항체는 모노클로날 항체이다.
본 발명에서 사용하기 위한 항체에는 본 명세서에 포함된 WO 2005/082023에 기술된 항체가 포함된다. 특히 바람직한 것은 종양-연관된 항원에 대한 항체이다. 본 기술분야에서 공지된 이들 항원의 예로는 WO 2005/082023에 제시된 종양-연관된 항원이 포함되나 이들로 제한되지 않는다. 예를 들어, 41-55 면을 참조한다.
본 발명의 컨주게이트는 그들의 세포 표면 항원을 통해서 종양 세포를 표적화하도록 디자인된다. 항원들은 통상적으로 과발현되거나 비정상적인 시기에 발현된 정상적인 세포 표면 항원이다. 이상적으로는 표적 항원은 증식성 세포 (바람직하게는 종양 세포) 상에서만 발현되지만, 이것은 실제로는 거의 관찰되지 않는다. 결과적으로, 표적 항원은 통상적으로 증식성 조직과 건강한 조직 사이의 차등 발현을 기초로 하여 선택된다.
항체는 다음을 포함하는 특이적인 종양 관련 항원을 표적화하도록 유도되었다: Cripto, CD30, CD19, CD33, 당단백질 NMB, CanAg, Her2 (ErbB2/Neu), CD56 (NCAM), CD22 (Siglec2), CD33 (Siglec3), CD79, CD138, PSCA, PSMA (전립선 특이적 막 항원), BCMA, CD20, CD70, E-셀렉틴, EphB2, 멜라노트랜스페린 (Melanotransferin), Muc16 및 TMEFF2.
종양-연관된 항원 (TAA)은 본 기술분야에서 공지되어 있으며, 본 기술분야에서 잘 알려진 방법 및 정보를 사용하여 항체를 생성시키는데 사용하기 위해 제조될 수 있다. 암 진단 및 치료를 위한 효과적인 세포 표적을 발견하기 위한 시도에서, 연구자들은 하나 또는 그 이상의 정상적인 비-암성 세포(들) 상에서보다 하나 또는 그 이상의 특별한 타입(들)의 암세포의 표면 상에서 특이적으로 발현되는 경막성이거나 다른 점에서 종양-연관된 폴리펩타이드를 확인하도록 노력하였다. 종종, 이러한 종양-연관된 폴리펩타이드는 비-암성 세포의 표면 상에서보다 암세포의 표면 상에서 더 풍부하게 발현된다. 이러한 종양-연관된 세포 표면 항원 폴리펩타이드의 확인은 항체-기본 치료법을 통한 파괴를 위해서 암세포를 특이적으로 표적화하는 능력을 발생시켰다.
TAA의 예로는 이하에 열거된 TAA (1)-(36)이 포함되나 이들로 제한되지 않는다. 편의상, 모두 본 기술분야에서 공지되어 있는 이들 항원에 관한 정보는 이하에 열거되며, NCBI (National Center for Biotechnology Information)의 핵산 및 단백질 서열 확인 규정 다음에 명칭, 대체 명칭, 진뱅크 (Genbank) 수탁번호 및 주요 문헌(들)을 포함한다. TAA (1)-(36)에 상응하는 핵산 및 단백질 서열은 진뱅크와 같은 공용 데이터베이스에서 이용할 수 있다. 항체에 의해서 표적화된 종양-연관된 항원에는 인용된 문헌에서 확인된 서열에 대비하여 적어도 약 70%, 80%, 85%, 90%, 또는 95% 서열 동일성을 갖거나, 실질적으로 인용된 문헌에서 제공된 서열을 갖는 TAA와 동일한 생물학적 특성 또는 특징을 나타내는 모든 아미노산 서열 변이체 및 이소형태를 포함한다. 예를 들어, 변이체 서열을 갖는 TAA는 일반적으로, 열거된 상응하는 서열을 갖는 TAA에 특이적으로 결합하는 항체에 대해 특이적으로 결합할 수 있다. 본 발명에 구체적으로 열거된 문헌에서의 서열 및 설명은 명백하게 참고로 포함된다.
종양-연관된 항원 (1)-(36):
(1) BMPR1B (골형성 단백질 수용체-타입 IB, Genbank 수탁번호 NM_001203) ten Dijke,P., et al Science 264 (5155):101-104 (1994), Oncogene 14 (11):1377-1382 (1997)); WO2004/063362 (Claim 2); WO2003/042661 (Claim 12); US2003/134790-A1 (Page 38-39); WO2002/102235 (Claim 13; Page 296); WO2003/055443 (Page 91-92); WO2002/99122 (Example 2; Page 528-530); WO2003/029421 (Claim 6); WO2003/024392 (Claim 2; Fig 112); WO2002/98358 (Claim 1; Page 183); WO2002/54940 (Page 100-101); WO2002/59377(Page 349-350); WO2002/30268 (Claim 27; Page 376); WO2001/48204 (Example; Fig 4); NP_001194 골형성 단백질 수용체, 타입 IB /pid=NP_001194.1. 교차 참조: MIM:603248; NP_001194.1; AY065994
(2) E16 (LAT1, SLC7A5, Genbank 수탁번호 NM_003486) Biochem . Biophys. Res . Commun . 255 (2), 283-288 (1999), Nature 395 (6699):288-291 (1998), Gaugitsch, H.W., et al (1992) J. Biol . Chem . 267 (16):11267-11273); WO2004/048938 (Example 2); WO2004/032842 (Example IV); WO2003/042661 (Claim 12); WO2003/016475 (Claim 1); WO2002/78524 (Example 2); WO2002/99074 (Claim 19; Page 127-129); WO2002/86443 (Claim 27; Pages 222, 393); WO2003/003906 (Claim 10; Page 293); WO2002/64798 (Claim 33; Page 93-95); WO2000/14228 (Claim 5; Page 133-136); US2003/224454 (Fig 3); WO2003/025138 (Claim 12; Page 150); NP_003477 용질 담체 (solute carrier) 패밀리 7 (양이온성 아미노산 수송체, y+시스템), 멤버 5 /pid=NP_003477.3 - 호모 사피엔스 (Homo sapiens); 교차 참조: MIM:600182; NP_003477.3; NM_015923; NM_003486_1
(3) STEAP1 (전립선의 6 개의 경막 상피 항원, Genbank 수탁번호 NM_012449); Cancer Res . 61 (15), 5857-5860 (2001), Hubert, R.S., et al (1999) Proc . Natl . Acad. Sci . U.S.A. 96 (25):14523-14528); WO2004/065577 (Claim 6); WO2004/027049 (Fig 1L); EP1394274 (Example 11); WO2004/016225 (Claim 2); WO2003/042661 (Claim 12); US2003/157089 (Example 5); US2003/185830 (Example 5); US2003/064397 (Fig 2); WO2002/89747 (Example 5; Page 618-619); WO2003/022995 (Example 9; Fig 13A, Example 53; Page 173, Example 2; Fig 2A); NP_036581 전립선의 6 개의 경막 상피 항원; 교차 참조: MIM:604415; NP_036581.1; NM_012449_1
(4) 0772P (CA125, MUC16, Genbank 수탁번호 AF361486); J. Biol . Chem . 276 (29):27371-27375 (2001)); WO2004/045553 (Claim 14); WO2002/92836 (Claim 6; Fig 12); WO2002/83866 (Claim 15; Page 116-121); US2003/124140 (Example 16); 교차 참조: GI:34501467; AAK74120.3; AF361486_1
(5) MPF (MPF, MSLN, SMR, 거핵구 증강 인자, 메소텔린, Genbank 수탁번호 NM_005823) Yamaguchi, N., et al Biol . Chem . 269 (2), 805-808 (1994), Proc. Natl . Acad . Sci . U.S.A. 96 (20):11531-11536 (1999), Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A. 93 (1):136-140 (1996), J. Biol . Chem . 270 (37):21984-21990 (1995)); WO2003/101283 (Claim 14); (WO2002/102235 (Claim 13; Page 287-288); WO2002/101075 (Claim 4; Page 308-309); WO2002/71928 (Page 320-321); WO94/10312 (Page 52-57); 교차 참조: MIM:601051; NP_005814.2; NM_005823_1
(6) Napi3b (NAPI-3B, NPTIIb, SLC34A2, 용질 담체 패밀리 34 (인산나트륨), 멤버 2, 타입 II 나트륨-의존성 포스페이트 수송체 3b, Genbank 수탁번호 NM_006424) J. Biol . Chem . 277 (22):19665-19672 (2002), Genomics 62 (2):281-284 (1999), Feild, J.A., et al (1999) Biochem . Biophys . Res . Commun . 258 (3):578-582); WO2004/022778 (Claim 2); EP1394274 (Example 11); WO2002/102235 (Claim 13; Page 326); EP0875569 (Claim 1; Page 17-19); WO2001/57188 (Claim 20; Page 329); WO2004/032842 (Example IV); WO2001/75177 (Claim 24; Page 139-140); 교차 참조: MIM:604217; NP_006415.1; NM_006424_1
(7) Sema 5b (FLJ10372, KIAA1445, Mm.42015, SEMA5B, SEMAG, 세마포린 (Semaphorin) 5b Hlog, 세마 (sema) 영역, 7 개의 트롬보스폰딘 반복체 (타입 1 및 타입 1-유사), 경막 영역 (TM) 및 짧은 세포질 영역, (세마포린) 5B, Genbank 수탁번호 AB040878); Nagase T., et al (2000) DNA Res . 7 (2):143-150); WO2004/000997 (Claim 1); WO2003/003984 (Claim 1); WO2002/06339 (Claim 1; Page 50); WO2001/88133 (Claim 1; Page 41-43, 48-58); WO2003/054152 (Claim 20); WO2003/101400 (Claim 11); Accession: Q9P283; EMBL; AB040878; BAA95969.1. Genew; HGNC:10737
(8) PSCA hlg (2700050C12Rik, C530008O16Rik, RIKEN cDNA 2700050C12, RIKEN cDNA 2700050C12 유전자, Genbank 수탁번호 AY358628); Ross et al (2002) Cancer Res . 62:2546-2553; US2003/129192 (Claim 2); US2004/044180 (Claim 12); US2004/044179 (Claim 11); US2003/096961 (Claim 11); US2003/232056 (Example 5); WO2003/105758 (Claim 12); US2003/206918 (Example 5); EP1347046 (Claim 1); WO2003/025148 (Claim 20); 교차 참조: GI:37182378; AAQ88991.1; AY358628_1
(9) ETBR (엔도텔린 타입 B 수용체, Genbank 수탁번호 AY275463); Nakamuta M., et al Biochem . Biophys . Res . Commun . 177, 34-39, 1991; Ogawa Y., et al Biochem . Biophys . Res. Commun . 178, 248-255, 1991; Arai H., et al Jpn . Circ . J. 56, 1303-1307, 1992; Arai H., et al J. Biol . Chem . 268, 3463-3470, 1993; Sakamoto A., Yanagisawa M., et al Biochem . Biophys. Res . Commun . 178, 656-663, 1991; Elshourbagy N.A., et al J. Biol . Chem . 268, 3873-3879, 1993; Haendler B., et al J. Cardiovasc . Pharmacol . 20, s1-S4, 1992; Tsutsumi M., et al Gene 228, 43-49, 1999; Strausberg R.L., et al Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A. 99, 16899-16903, 2002; Bourgeois C., et al J. Clin . Endocrinol . Metab . 82, 3116-3123, 1997; Okamoto Y., et al Biol . Chem . 272, 21589-21596, 1997; Verheij J.B., et al Am . J. Med . Genet . 108, 223-225, 2002; Hofstra R.M.W., et al Eur . J. Hum . Genet . 5, 180-185, 1997; Puffenberger E.G., et al Cell 79, 1257-1266, 1994; Attie T., et al , Hum . Mol . Genet . 4, 2407-2409, 1995; Auricchio A., et al Hum . Mol . Genet . 5:351-354, 1996; Amiel J., et al Hum . Mol. Genet . 5, 355-357, 1996; Hofstra R.M.W., et al Nat . Genet . 12, 445-447, 1996; Svensson P.J., et al Hum . Genet . 103, 145-148, 1998; Fuchs S., et al Mol . Med . 7, 115-124, 2001; Pingault V., et al (2002) Hum . Genet . 111, 198-206; WO2004/045516 (Claim 1); WO2004/048938 (Example 2); WO2004/040000 (Claim 151); WO2003/087768 (Claim 1); WO2003/016475 (Claim 1); WO2003/016475 (Claim 1); WO2002/61087 (Fig 1); WO2003/016494 (Fig 6); WO2003/025138 (Claim 12; Page 144); WO2001/98351 (Claim 1; Page 124-125); EP0522868 (Claim 8; Fig 2); WO2001/77172 (Claim 1; Page 297-299); US2003/109676; US6518404 (Fig 3); US5773223 (Claim 1a; Col 31-34); WO2004/001004
(10) MSG783 (RNF124, 가상적 단백질 FLJ20315, Genbank 수탁번호 NM_017763); WO2003/104275 (Claim 1); WO2004/046342 (Example 2); WO2003/042661 (Claim 12); WO2003/083074 (Claim 14; Page 61); WO2003/018621 (Claim 1); WO2003/024392 (Claim 2; Fig 93); WO2001/66689 (Example 6); 교차 참조: LocusID:54894; NP_060233.2; NM_017763_1
(11) STEAP2 (HGNC_8639, IPCA-1, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, 전립선암 연관된 유전자 1, 전립선암 연관된 단백질 1, 전립선의 6 개의 경막 상피 항원 2, 6 개의 경막 전립선 단백질, Genbank 수탁번호 AF455138); Lab. Invest. 82 (11):1573-1582 (2002)); WO2003/087306; US2003/064397 (Claim 1; Fig 1); WO2002/72596 (Claim 13; Page 54-55); WO2001/72962 (Claim 1; Fig 4B); WO2003/104270 (Claim 11); WO2003/104270 (Claim 16); US2004/005598 (Claim 22); WO2003/042661 (Claim 12); US2003/060612 (Claim 12; Fig 10); WO2002/26822 (Claim 23; Fig 2); WO2002/16429 (Claim 12; Fig 10); 교차 참조: GI:22655488; AAN04080.1; AF455138_1
(12) TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, 일시적 수용체 잠재성 양이온 채널, 서브패밀리 M, 멤버 4, Genbank 수탁번호 NM_017636); Xu, X.Z., et al Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A. 98 (19):10692-10697 (2001), Cell 109 (3):397-407 (2002), J. Biol . Chem. 278 (33):30813-30820 (2003)); US2003/143557 (Claim 4); WO2000/40614 (Claim 14; Page 100-103); WO2002/10382 (Claim 1; Fig 9A); WO2003/042661 (Claim 12); WO2002/30268 (Claim 27; Page 391); US2003/219806 (Claim 4); WO2001/62794 (Claim 14; Fig 1A-D); 교차 참조: MIM:606936; NP_060106.2; NM_017636_1
(13) CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, 기형암종-유도된 성장인자, Genbank 수탁번호 NP_003203 or NM_003212); Ciccodicola, A., et al EMBO J. 8 (7):1987-1991 (1989), Am . J. Hum . Genet . 49 (3):555-565 (1991)); US2003/224411 (Claim 1); WO2003/083041 (Example 1); WO2003/034984 (Claim 12); WO2002/88170 (Claim 2; Page 52-53); WO2003/024392 (Claim 2; Fig 58); WO2002/16413 (Claim 1; Page 94-95, 105); WO2002/22808 (Claim 2; Fig 1); US5854399 (Example 2; Col 17-18); US5792616 (Fig 2); 교차 참조: MIM:187395; NP_003203.1; NM_003212_1
(14) CD21 (CR2 (보체 수용체 2) 또는 C3DR (C3d/엡스타인 바르 (Epstein Barr) 바이러스 수용체) 또는 Hs.73792 Genbank 수탁번호 M26004); Fujisaku et al (1989) J. Biol . Chem . 264 (4):2118-2125); Weis J.J., et al J. Exp . Med . 167, 1047-1066, 1988; Moore M., et al Proc . Natl. Acad . Sci . U.S.A. 84, 9194-9198, 1987; Barel M., et al Mol . Immunol . 35, 1025-1031, 1998; Weis J.J., et al Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A. 83, 5639-5643, 1986; Sinha S.K., et al (1993) J. Immunol . 150, 5311-5320; WO2004/045520 (Example 4); US2004/005538 (Example 1); WO2003/062401 (Claim 9); WO2004/045520 (Example 4); WO91/02536 (Fig 9.1-9.9); WO2004/020595 (Claim 1); Accession: P20023; Q13866; Q14212; EMBL; M26004; AAA35786.1.
(15) CD79b (CD79B, CD79b, IGb (면역글로불린-연관된 베타), B29, Genbank 수탁번호 NM_000626 또는 11038674); Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A. (2003) 100 (7):4126-4131, Blood (2002) 100 (9):3068-3076, Muller et al (1992) Eur . J. Immunol . 22 (6):1621-1625); WO2004/016225 (claim 2, Fig 140); WO2003/087768, US2004/101874 (claim 1, page 102); WO2003/062401 (claim 9); WO2002/78524 (Example 2); US2002/150573 (claim 5, page 15); US5644033; WO2003/048202 (claim 1, pages 306 및 309); WO 99/58658, US6534482 (claim 13, Fig 17A/B); WO2000/55351 (claim 11, pages 1145-1146); 교차 참조: MIM:147245; NP_000617.1; NM_000626_1
(16) FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAP1A (SH2 영역 함유 포스파타제 앵커 (anchor) 단백질 1a), SPAP1B, SPAP1C, Genbank 수탁번호 NM_030764, AY358130); Genome Res . 13 (10):2265-2270 (2003), Immunogenetics 54 (2):87-95 (2002), Blood 99 (8):2662-2669 (2002), Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A. 98 (17):9772-9777 (2001), Xu, M.J., et al (2001) Biochem. Biophys . Res. Commun . 280 (3):768-775; WO2004/016225 (Claim 2); WO2003/077836; WO2001/38490 (Claim 5; Fig 18D-1-18D-2); WO2003/097803 (Claim 12); WO2003/089624 (Claim 25); 교차 참조: MIM:606509; NP_110391.2; NM_030764_1
(17) HER2 (ErbB2, Genbank 수탁번호 M11730); Coussens L., et al Science (1985) 230(4730):1132-1139); Yamamoto T., et al Nature 319, 230-234, 1986; Semba K., et al Proc. Natl . Acad . Sci . U.S.A. 82, 6497-6501, 1985; Swiercz J.M., et al J. Cell Biol . 165, 869-880, 2004; Kuhns J.J., et al J. Biol . Chem . 274, 36422-36427, 1999; Cho H.-S., et al Nature 421, 756-760, 2003; Ehsani A., et al (1993) Genomics 15, 426-429; WO2004/048938 (Example 2); WO2004/027049 (Fig 1I); WO2004/009622; WO2003/081210; WO2003/089904 (Claim 9); WO2003/016475 (Claim 1); US2003/118592; WO2003/008537 (Claim 1); WO2003/055439 (Claim 29; Fig 1A-B); WO2003/025228 (Claim 37; Fig 5C); WO2002/22636 (Example 13; Page 95-107); WO2002/12341 (Claim 68; Fig 7); WO2002/13847 (Page 71-74); WO2002/14503 (Page 114-117); WO2001/53463 (Claim 2; Page 41-46); WO2001/41787 (Page 15); WO2000/44899 (Claim 52; Fig 7); WO2000/20579 (Claim 3; Fig 2); US5869445 (Claim 3; Col 31-38); WO9630514 (Claim 2; Page 56-61); EP1439393 (Claim 7); WO2004/043361 (Claim 7); WO2004/022709; WO2001/00244 (Example 3; Fig 4); Accession: P04626; EMBL; M11767; AAA35808.1. EMBL; M11761; AAA35808.1
(18) NCA (CEACAM6, Genbank 수탁번호 M18728); Barnett T., et al Genomics 3, 59-66, 1988; Tawaragi Y., et al Biochem . Biophys . Res . Commun . 150, 89-96, 1988; Strausberg R.L., et al Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A. 99:16899-16903, 2002; WO2004/063709; EP1439393 (Claim 7); WO2004/044178 (Example 4); WO2004/031238; WO2003/042661 (Claim 12); WO2002/78524 (Example 2); WO2002/86443 (Claim 27; Page 427); WO2002/60317 (Claim 2); Accession: P40199; Q14920; EMBL; M29541; AAA59915.1. EMBL; M18728
(19) MDP (DPEP1, Genbank 수탁번호 BC017023); Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A. 99 (26):16899-16903 (2002)); WO2003/016475 (Claim 1); WO2002/64798 (Claim 33; Page 85-87); JP05003790 (Fig 6-8); WO99/46284 (Fig 9); 교차 참조: MIM:179780; AAH17023.1; BC017023_1
(20) IL20Rα (IL20Ra, ZCYTOR7, Genbank 수탁번호 AF184971); Clark H.F., et al Genome Res . 13, 2265-2270, 2003; Mungall A.J., et al Nature 425, 805-811, 2003; Blumberg H., et al Cell 104, 9-19, 2001; Dumoutier L., et al J. Immunol . 167, 3545-3549, 2001; Parrish-Novak J., et al J. Biol . Chem . 277, 47517-47523, 2002; Pletnev S., et al (2003) Biochemistry 42:12617-12624; Sheikh F., et al (2004) J. Immunol . 172, 2006-2010; EP1394274 (Example 11); US2004/005320 (Example 5); WO2003/029262 (Page 74-75); WO2003/002717 (Claim 2; Page 63); WO2002/22153 (Page 45-47); US2002/042366 (Page 20-21); WO2001/46261 (Page 57-59); WO2001/46232 (Page 63-65); WO98/37193 (Claim 1; Page 55-59); Accession: Q9UHF4; Q6UWA9; Q96SH8; EMBL; AF184971; AAF01320.1.
(21) Brevican (BCAN, BEHAB, Genbank 수탁번호 AF229053); Gary S.C., et al Gene 256, 139-147, 2000; Clark H.F., et al Genome Res . 13, 2265-2270, 2003; Strausberg R.L., et al Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A. 99, 16899-16903, 2002; US2003/186372 (Claim 11); US2003/186373 (Claim 11); US2003/119131 (Claim 1; Fig 52); US2003/119122 (Claim 1; Fig 52); US2003/119126 (Claim 1); US2003/119121 (Claim 1; Fig 52); US2003/119129 (Claim 1); US2003/119130 (Claim 1); US2003/119128 (Claim 1; Fig 52); US2003/119125 (Claim 1); WO2003/016475 (Claim 1); WO2002/02634 (Claim 1)
(22) EphB2R (DRT, ERK, Hek5, EPHT3, Tyro5, Genbank 수탁번호 NM_004442); Chan,J. and Watt, V.M., Oncogene 6 (6), 1057-1061 (1991) Oncogene 10 (5):897-905 (1995), Annu. Rev. Neurosci. 21:309-345 (1998), Int. Rev. Cytol. 196:177-244 (2000)); WO2003042661 (Claim 12); WO200053216 (Claim 1; Page 41); WO2004065576 (Claim 1); WO2004020583 (Claim 9); WO2003004529 (Page 128-132); WO200053216 (Claim 1; Page 42); 교차 참조: MIM:600997; NP_004433.2; NM_004442_1
(23) ASLG659 (B7h, Genbank 수탁번호 AX092328); US2004/0101899 (Claim 2); WO2003104399 (Claim 11); WO2004000221 (Fig 3); US2003/165504 (Claim 1); US2003/124140 (Example 2); US2003/065143 (Fig 60); WO2002/102235 (Claim 13; Page 299); US2003/091580 (Example 2); WO2002/10187 (Claim 6; Fig 10); WO2001/94641 (Claim 12; Fig 7b); WO2002/02624 (Claim 13; Fig 1A-1B); US2002/034749 (Claim 54; Page 45-46); WO2002/06317 (Example 2; Page 320-321, Claim 34; Page 321-322); WO2002/71928 (Page 468-469); WO2002/02587 (Example 1; Fig 1); WO2001/40269 (Example 3; Pages 190-192); WO2000/36107 (Example 2; Page 205-207); WO2004/053079 (Claim 12); WO2003/004989 (Claim 1); WO2002/71928 (Page 233-234, 452-453); WO 01/16318
(24) PSCA (전립선 줄기세포 항원 전구체, Genbank 수탁번호 AJ297436); Reiter R.E., et al Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A. 95, 1735-1740, 1998; Gu Z., et al Oncogene 19, 1288-1296, 2000; Biochem . Biophys . Res . Commun . (2000) 275(3):783-788; WO2004/022709; EP1394274 (Example 11); US2004/018553 (Claim 17); WO2003/008537 (Claim 1); WO2002/81646 (Claim 1; Page 164); WO2003/003906 (Claim 10; Page 288); WO2001/40309 (Example 1; Fig 17); US2001/055751 (Example 1; Fig 1b); WO2000/32752 (Claim 18; Fig 1); WO98/51805 (Claim 17; Page 97); WO98/51824 (Claim 10; Page 94); WO98/40403 (Claim 2; Fig 1B); Accession: O43653; EMBL; AF043498; AAC39607.1
(25) GEDA (Genbank 수탁번호 AY260763); AAP14954 지방종 H㎎IC 융합-파트너-유사 단백질 /pid=AAP14954.1 - 호모 사피엔스 (인간); WO2003/054152 (Claim 20); WO2003/000842 (Claim 1); WO2003/023013 (Example 3, Claim 20); US2003/194704 (Claim 45); 교차 참조: GI:30102449; AAP14954.1; AY260763_1
(26) BAFF-R (B 세포-활성화 인자 수용체, BLyS 수용체 3, BR3, Genbank 수탁번호 AF116456); BAFF 수용체 /pid=NP_443177.1 - 호모 사피엔스: Thompson, J.S., et al Science 293 (5537), 2108-2111 (2001); WO2004/058309; WO2004/011611; WO2003/045422 (Example; Page 32-33); WO2003/014294 (Claim 35; Fig 6B); WO2003/035846 (Claim 70; Page 615-616); WO2002/94852 (Col 136-137); WO2002/38766 (Claim 3; Page 133); WO2002/24909 (Example 3; Fig 3); 교차 참조: MIM:606269; NP_443177.1; NM_052945_1; AF132600
(27) CD22 (B-세포 수용체 CD22-B 이소형태, BL-CAM, Lyb-8, Lyb8, SIGLEC-2, FLJ22814, Genbank 수탁번호 AK026467); Wilson et al (1991) J. Exp. Med . 173:137-146; WO2003/072036 (Claim 1; Fig 1); 교차 참조: MIM:107266; NP_001762.1; NM_001771_1
(28) CD79a (CD79A, CD79a, 면역글로불린-연관된 알파, Ig 베타 (CD79B)와 공유적으로 상호작용하고, Ig M 분자와 표면 상에서 컴플렉스를 형성하며, B-세포 분화에 연루된 시그날을 전달하는 B 세포-특이적 단백질), pI: 4.84, MW: 25028 TM: 2 [P] 유전자 염색체: 19q13.2, Genbank 수탁번호 NP_001774.10); WO2003/088808, US2003/0228319; WO2003/062401 (claim 9); US2002/150573 (claim 4, pages 13-14); WO99/58658 (claim 13, Fig 16); WO92/07574 (Fig 1); US5644033; Ha et al (1992) J. Immunol. 148(5):1526-1531; Muller et al (1992) Eur . J. Immunol .. 22:1621-1625; Hashimoto et al (1994) Immunogenetics 40(4):287-295; Preud'homme et al (1992) Clin . Exp . Immunol. 90(1):141-146; Yu et al (1992) J. Immunol . 148(2) 633-637; Sakaguchi et al (1988) EMBO J. 7(11):3457-3464
(29) CXCR5 (버킷 (Burkitt) 림프종 수용체 1, CXCL13 케모킨에 의해서 활성화되고, 림프구 이동 및 체액 방어에 작용하며, HIV-2 감염 및 아마도 AIDS, 림프종, 골수종 및 백혈병의 발생에 역할을 하는 G 단백질-커플링된 수용체); 372 aa, pI: 8.54 MW: 41959 TM: 7 [P] 유전자 염색체: 11q23.3, Genbank 수탁번호 NP_001707.1); WO2004/040000; WO2004/015426; US2003/105292 (Example 2); US6555339 (Example 2); WO2002/61087 (Fig 1); WO2001/57188 (Claim 20, page 269); WO2001/72830 (pages 12-13); WO2000/22129 (Example 1, pages 152-153, Example 2, pages 254-256); WO99/28468 (claim 1, page 38); US5440021 (Example 2, col 49-52); WO94/28931 (pages 56-58); WO92/17497 (claim 7, Fig 5); Dobner et al (1992) Eur . J. Immunol . 22:2795-2799; Barella et al (1995) Biochem . J. 309:773-779
(30) HLA-DOB (펩타이드에 결합하고, 이들을 CD4+ T 림프구에 제시하는 MHC 클래스 II 분자 (Ia 항원)의 베타 서브유니트); 273 aa, pI: 6.56, MW: 30820.TM: 1 [P] 유전자 염색체: 6p21.3, Genbank 수탁번호 NP_002111.1); Tonnelle et al (1985) EMBO J. 4(11):2839-2847; Jonsson et al (1989) Immunogenetics 29(6):411-413; Beck et al (1992) J. Mol . Biol . 228:433-441; Strausberg et al (2002) Proc . Natl . Acad . Sci USA 99:16899-16903; Servenius et al (1987) J. Biol . Chem . 262:8759-8766; Beck et al (1996) J. Mol. Biol . 255:1-13; Naruse et al (2002) Tissue Antigens 59:512-519; WO99/58658 (claim 13, Fig 15); US6153408 (Col 35-38); US5976551 (col 168-170); US6011146 (col 145-146); Kasahara et al (1989) Immunogenetics 30(1):66-68; Larhammar et al (1985) J. Biol . Chem . 260(26):14111-14119
(31) P2X5 (세포외 ATP에 의해서 개폐되는 이온 채널인 퓨린 작동성 수용체 P2X 리간드-개폐 이온 채널이 시냅스성 전달 및 신경발생에 연루될 수 있으며, 결핍은 특발성 배뇨근 불안정성의 병태생리학의 원인이 될 수 있다); 422 aa), pI: 7.63, MW: 47206 TM: 1 [P] 유전자 염색체: 17p13.3, Genbank 수탁번호 NP_002552.2); Le et al (1997) FEBS Lett . 418(1-2):195-199; WO2004/047749; WO2003/072035 (claim 10); Touchman et al (2000) Genome Res . 10:165-173; WO2002/22660 (claim 20); WO2003/093444 (claim 1); WO2003/087768 (claim 1); WO2003/029277 (page 82)
(32) CD72 (B-세포 분화 항원 CD72, Lyb-2); 359 aa, pI: 8.66, MW: 40225, TM: 1 [P] 유전자 염색체: 9p13.3, Genbank 수탁번호 NP_001773.1); WO2004042346 (claim 65); WO2003/026493 (pages 51-52, 57-58); WO2000/75655 (pages 105-106); Von Hoegen et al (1990) J. Immunol . 144(12):4870-4877; Strausberg et al (2002) Proc . Natl . Acad . Sci USA 99:16899-16903.
(33) LY64 (림프구 항원 64 (RP105), 류신 풍부 반복체 (LRR) 패밀리의 타입 I 막단백질, B-세포 활성화 및 세포소멸을 조절하며, 기능의 상실은 전신성 홍반성 루푸스가 있는 환자에게서 증가된 질병 활성과 연관된다); 661 aa, pI: 6.20, MW: 74147 TM: 1 [P] 유전자 염색체: 5q12, Genbank 수탁번호 NP_005573.1); US2002/193567; WO97/07198 (claim 11, pages 39-42); Miura et al (1996) Genomics 38(3):299-304; Miura et al (1998) Blood 92:2815-2822; WO2003/083047; WO97/44452 (claim 8, pages 57-61); WO2000/12130 (pages 24-26)
(34) FcRH1 (Fc 수용체-유사 단백질 1, C2 타입 Ig-유사 및 ITAM 영역을 함유하며, B-림프구 분화에 역할을 할 수 있는 면역글로불린 Fc 영역에 대한 추정상의 수용체); 429 aa, pI: 5.28, MW: 46925 TM: 1 [P] 유전자 염색체: 1q21-1q22, Genbank 수탁번호 NP_443170.1); WO2003/077836; WO2001/38490 (claim 6, Fig 18E-1-18-E-2); Davis et al (2001) Proc . Natl . Acad . Sci USA 98(17):9772-9777; WO2003/089624 (claim 8); EP1347046 (claim 1); WO2003/089624 (claim 7)
(35) IRTA2 (면역글로불린 슈퍼패밀리 수용체 전좌 연관된 2, B 세포 발생 및 림프종 형성에 가능한 역할을 갖는 추정상의 면역수용체; 전좌에 의한 유전자의 탈조절 (deregulation)은 일부의 B 세포 악성종양에서 나타난다); 977 aa, pI: 6.88, MW: 106468, TM: 1 [P] 유전자 염색체: 1q21, Genbank 수탁번호 인간:AF343662, AF343663, AF343664, AF343665, AF369794, AF397453, AK090423, AK090475, AL834187, AY358085; Mouse:AK089756, AY158090, AY506558; NP_112571.1; WO2003/024392 (claim 2, Fig 97); Nakayama et al (2000) Biochem . Biophys . Res . Commun . 277(1):124-127; WO2003/077836; WO2001/38490 (claim 3, Fig 18B-1-18B-2)
(36) TENB2 (TMEFF2, 토모레귤린 (tomoregulin), TPEF, HPP1, TR, 성장인자 및 폴리스타틴의 EGF/헤레귤린 (heregulin) 패밀리와 관련된 추정상의 경막 프로테오글리칸); 374 aa, NCBI Accession: AAD55776, AAF91397, AAG49451, NCBI RefSeq: NP_057276; NCBI 유전자: 23671; OMIM: 605734; SwissProt Q9UIK5; Genbank 수탁번호 AF179274; AY358907, CAF85723, CQ782436; WO2004/074320; JP2004113151; WO2003/042661; WO2003/009814; EP1295944 (pages 69-70); WO2002/30268 (page 329); WO2001/90304; US2004/249130; US2004/022727; WO2004/063355; US2004/197325; US2003/232350; US2004/005563; US2003/124579; Horie et al (2000) Genomics 67:146-152; Uchida et al (1999) Biochem . Biophys. Res . Commun . 266:593-602; Liang et al (2000) Cancer Res . 60:4907-12; Glynne-Jones et al (2001) Int J Cancer . Oct 15; 94(2):178-84.
모 항체는 또한 알부민-결합 펩타이드 (ABP) 서열을 포함하는 융합 단백질일 수 있다 [Dennis et al . (2002) "Albumin Binding As A General Strategy For Improving The Pharmacokinetics Of Proteins" J Biol Chem . 277:35035-35043; WO 01/45746]. 본 발명의 항체는 (i) Dennis et al (2002) J Biol Chem. 277:35035-35043 at Tables III and IV, page 35038; (ii) US 2004/0001827 at [0076]; 및 (iii) WO 01/45746 at pages 12-13 (이들은 모두 본 발명에 참고로 포함된다)에 의해서 교시된 ABP 서열을 갖는 융합 단백질을 포함한다.
한가지 실시양태에서, 항체는 종양 관련된 항원 αvβ6을 특이적으로 표적화하도록 유도되었다.
세포 결합제는 예를 들어, 컨주게이트, 또는 컨주게이트의 일부분으로 통합시키기 전에 세포 결합제의 검출 또는 정제를 돕기 위해서 표지될 수 있다. 라벨은 비오틴 라벨일 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 세포 결합제는 방사성 동위원소로 표지될 수 있다.
R 및 R'
한가지 실시양태에서, R은 임의로 치환된 C1 -12 알킬, C3 -20　헤테로사이클릴 및 C5 -20 아릴 그룹으로부터 독립적으로 선택된다. 이들 그룹은 각각 이하의 치환체 항목에서 정의된다.
한가지 실시양태에서, R은 독립적으로 임의로 치환된 C1 -12 알킬이다.
한가지 실시양태에서, R은 독립적으로 임의로 치환된 C3 -20　헤테로사이클릴이다.
한가지 실시양태에서, R은 독립적으로 임의로 치환된 C5 -20 아릴이다.
한가지 실시양태에서, R은 독립적으로 임의로 치환된 C1 -12 알킬이다.
R2에 관하여 상술한 것은 바람직한 알킬 및 아릴 그룹 및 임의의 치환체의 주체성 및 수에 관한 다양한 실시양태이다. R2에 대해 기술된 바람직한 사항은 이것이 R에 적용하는 것이기 때문에, 적절한 경우에 모든 다른 그룹 R, 예를 들어, R6, R7, R8 또는 R9가 R인 경우에 적용할 수 있다.
R에 대한 바람직한 사항은 또한 R'에도 적용한다.
본 발명의 일부의 실시양태에서는 치환체 그룹 -NRR'를 갖는 화합물이 제공된다. 한가지 실시양태에서, R 및 R'는 이들이 부착된 질소 원자와 함께 임의로 치환된 4-, 5-, 6- 또는 7-원 헤테로사이클릭 환을 형성한다. 상기의 환은 추가의 헤테로 원자, 예를 들어, N, O 또는 S를 함유할 수 있다.
한가지 실시양태에서, 헤테로사이클릭 환은 그 자체가 그룹 R에 의해서 치환된다. 추가의 N 헤테로 원자가 존재하는 경우에, 치환체는 N 헤테로 원자 상에 존재할 수 있다.
R"
R"는 C3 -12 알킬렌 그룹이며, 이 쇄는 하나 또는 그 이상의 헤테로 원자, 예를 들어, O, S, N(H), NMe 및/또는 임의로 치환된 방향족 환, 예를 들어, 벤젠 또는 피리딘에 의해서 단속될 수 있다.
한가지 실시양태에서, R"는 C3 -12 알킬렌 그룹이며, 이 쇄는 하나 또는 그 이상의 헤테로 원자 및/또는 방향족 환, 예를 들어, 벤젠 또는 피리딘에 의해서 단속될 수 있다.
한가지 실시양태에서, 알킬렌 그룹은 O, S, 및 NMe로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 헤테로 원자 및/또는 임의로 치환된 방향족 환에 의해서 임의로 단속된다.
한가지 실시양태에서, 방향족 환은 C5 -20 아릴렌 그룹이고, 여기에서 아릴렌이 방향족 화합물의 2 개의 방향족 환 원자로부터 2 개의 수소 원자를 제거함으로써 수득된 2 가 부분에 관한 것인 경우에, 이 부분은 5 내지 20 개의 환 원자를 갖는다.
한가지 실시양태에서, R"는 C3 -12 알킬렌 그룹이며, 이 쇄는 하나 또는 그 이상의 헤테로 원자, 예를 들어, O, S, N(H), NMe 및/또는 임의로 NH2에 의해서 치환된 방향족 환, 예를 들어, 벤젠 또는 피리딘에 의해서 단속될 수 있다.
한가지 실시양태에서, R"는 C3 -12 알킬렌 그룹이다.
한가지 실시양태에서, R"는 C3, C5, C7, C9 및 C11 알킬렌 그룹으로부터 선택된다.
한가지 실시양태에서, R"는 C3, C5 및 C7 알킬렌 그룹으로부터 선택된다.
한가지 실시양태에서, R"는 C3 및 C5 알킬렌 그룹으로부터 선택된다.
한가지 실시양태에서, R"는 C3 알킬렌 그룹이다.
한가지 실시양태에서, R"는 C5 알킬렌 그룹이다.
상기 열거된 알킬렌 그룹은 하나 또는 그 이상의 헤테로 원자 및/또는 임의로 치환된 방향족 환, 예를 들어, 벤젠 또는 피리딘에 의해서 임의로 단속될 수 있다.
상기 열거된 알킬렌 그룹은 하나 또는 그 이상의 헤테로 원자 및/또는 방향족 환, 예를 들어, 벤젠 또는 피리딘에 의해서 임의로 단속될 수 있다.
상기 열거된 알킬렌 그룹은 비치환된 선형 지방족 알킬렌 그룹일 수 있다.
X
한가지 실시양태에서, X는 O, S, 또는 N(H)로부터 선택된다.
바람직하게는 X는 O이다.
E
하나 또는 두 개의 C 환이 화학식 E의 환에 의해서 대체된 화합물은 그룹 R2를 갖는데, 이 R2는 R1 또는 R3 중의 하나와 이들이 부착된 C 환의 탄소 원자와 함께 임의로 치환된 벤젠 환을 형성한다. 임의로 치환된 벤젠 환은 피롤로벤조디아제핀의 C 환에 융합된 것으로 간주될 수 있다. 융합된 벤젠 환은 D 환으로 불릴 수 있다. 융합된 환의 구조는 이하에 예시된다:
Figure pct00023
여기에서 D1, D2, D3 및 D4의 각각은 H 또는 치환체를 나타낸다.
한가지 실시양태에서, 벤젠 환은 비치환된다.
한가지 실시양태에서, 벤젠 환은 OH, CN, R, OR, O-SO2-R, CO2R, COR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', NO2, Me3Sn 및 할로로부터 선택된 1, 2, 3 또는 4 개의 그룹에 의해서 임의로 치환된다.
한가지 실시양태에서, 벤젠 환은 일치환된다. 일치환체는 D1, D2, D3 또는 D4 중의 어느 하나일 수 있다 (나머지는 H이다). 한가지 실시양태에서, 벤젠 환은 D2에서 치환되고, D1, D3 및 D4는 각각 H이다. 한가지 실시양태에서, 벤젠 환은 D3에서 치환되고, D1, D2 및 D4는 각각 H이다.
한가지 실시양태에서, R2와 R1은 이들이 부착된 C 환의 탄소 원자와 함께 임의로 치환된 벤젠 환을 형성한다.
V 및 W에 대한 바람직한 사항은 이하에 설명된다.
F
하나 또는 둘 다의 C 환이 화학식 F의 환에 의해서 대체된 화합물에서:
한가지 실시양태에서, T가 NR, BH, SO, 또는 SO2인 경우에 U는 CH2이다.
한가지 실시양태에서, U가 NR, O 또는 S인 경우에 T는 CH2 또는 CO이다.
한가지 실시양태에서, T는 CH2 및 CO로부터 선택된다.
한가지 실시양태에서, U는 NR, O 및 S로부터 선택된다.
한가지 실시양태에서, Y는 (CH2)n이고, 여기에서 n은 1 또는 2이다.
한가지 실시양태에서, 화합물 A-B의 C 환은 이하에 나타낸 것으로부터 선택된 구조를 갖는다:
Figure pct00024
V 및 W
V 및 W는 각각 (CH2)n, O, S, NR, CHR, 및 CRR'로부터 선택되고, 여기에서 n은 2,3 또는 4이며, 단 R1 및 R2가 이들이 부착된 C 환의 탄소 원자와 함께 임의로 치환된 벤젠 환을 형성하는 경우에 V는 C이고, R3 및 R2가 이들이 부착된 C 환의 탄소 원자와 함께 임의로 치환된 벤젠 환을 형성하는 경우에 W는 C이다.
한가지 실시양태에서, V 및 W 중의 하나가 C인 경우에, V 및 W 중의 다른 것은 CH2 및 NR로부터 선택된다.
한가지 실시양태에서, V 및 W 중의 하나가 C인 경우에, V 및 W 중의 다른 것은 CH2이다.
바람직한 화합물
한가지 실시양태에서, 컨주게이트는 다이머이고, 여기에서 각각의 PBD 부분은 C2 메틸렌 그룹을 갖고, 즉 각각의 R2는 =CH2이다. 세포 결합제는 항체인 것이 바람직하다.
또 다른 실시양태에서, 컨주게이트는 다이머이고, 여기에서 각각의 모노머는 C2 아릴 그룹을 갖고, 즉 각각의 R2는 임의로 치환된 C5 -20 아릴이며, 여기에는 각각의 PBD 부분에서 C2와 C3 사이에 이중결합이 존재한다. 세포 결합제는 항체인 것이 바람직하다.
C2 알킬렌
한가지 실시양태에서, 컨주게이트는 하기의 화합물이며;
Figure pct00025
더욱 바람직하게는 하기 화합물이다:
Figure pct00026
여기에서 CBA는 항체 또는 사이클릭 또는 선형 펩타이드와 같은 세포 결합제이며, n은 0 또는 1이다. L1 및 L2는 이전에 정의한 바와 같으며, RE 및 RE"는 H 또는 RD로부터 각각 독립적으로 선택된다.
상기 각각의 화합물에 대해서, 경우에 따라 이하의 바람직한 사항이 적용될 수 있다:
n은 0이고;
n은 1이며;
RE는 H이고;
RE는 RD이며, 여기에서 RD는 임의로 치환된 알킬이고;
RE는 RD이며, 여기에서 RD는 메틸이고;
CBA는 항체이며;
CBA는 사이클릭 펩타이드이고;
RL1 및 RL2는 H이며;
RL1 및 RL2는 Me이다.
C2 아릴
한가지 실시양태에서, 컨주게이트는 다음의 화합물이며;
Figure pct00027
더욱 바람직하게는 다음의 화합물이다:
Figure pct00028
여기에서 CBA는 항체 또는 사이클릭 또는 선형 펩타이드와 같은 세포 결합제이며, Y, RL1 및 RL2는 이전에 정의된 바와 같고, Ar1 및 Ar2는 각각 독립적으로 임의로 치환된 C5 -20 아릴이며, n은 0 또는 1이다. Ar1 및 Ar2는 동일하거나 상이할 수 있다.
한가지 실시양태에서, 상기 각각의 실시양태에서 Ar1 및 Ar2는 임의로 치환된 페닐, 푸라닐, 티오페닐 및 피리딜로부터 각각 독립적으로 선택된다.
한가지 실시양태에서, 상기 각각의 실시양태에서 Ar1 및 Ar2는 임의로 치환된 페닐이다.
한가지 실시양태에서, 상기 각각의 실시양태에서 Ar1 및 Ar2는 임의로 치환된 티엔-2-일 또는 티엔-3-일이다.
한가지 실시양태에서, 상기 각각의 실시양태에서 Ar1 및 Ar2는 임의로 치환된 퀴놀리닐 또는 이소퀴놀리닐이다.
퀴놀리닐 또는 이소퀴놀리닐 그룹은 어떤 이용가능한 환 위치를 통해서라도 PBD 코어에 결합될 수 있다. 예를 들어, 퀴놀리닐은 퀴놀린-2-일, 퀴놀린-3-일, 퀴놀린-4-일, 퀴놀린-5-일, 퀴놀린-6-일, 퀴놀린-7-일 및 퀴놀린-8-일일 수 있다. 이들 중에서 퀴놀린-3-일 및 퀴놀린-6-일이 바람직할 수 있다. 이소퀴놀리닐은 이소퀴놀린-1-일, 이소퀴놀린-3-일, 이소퀴놀린-4-일, 이소퀴놀린-5-일, 이소퀴놀린-6-일, 이소퀴놀린-7-일 및 이소퀴놀린-8-일일 수 있다. 이들 중에서 이소퀴놀린-3-일 및 이소퀴놀린-6-일이 바람직할 수 있다.
C2 비닐
한가지 실시양태에서,, 컨주게이트는 다음의 화합물이고;
Figure pct00029
더욱 바람직하게는 다음의 화합물이다:
Figure pct00030
여기에서 CBA는 항체 또는 사이클릭 또는 선형 펩타이드와 같은 세포 결합제이며, Y, RL1 및 RL2는 이전에 정의한 바와 같고, RV1 및 RV2는 H, 메틸, 에틸 및 페닐 (이 페닐은 플루오로에 의해, 특히 4 위치에서 임의로 치환될 수 있다) 및 C5 -6 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되며, n은 0 또는 1이다. RV1 및 RV2는 동일하거나 상이할 수 있다.
한가지 실시양태에서, 컨주게이트는 다음의 화합물이다:
Figure pct00031
여기에서 CBA는 항체 또는 사이클릭 또는 선형 펩타이드와 같은 세포 결합제이며, L1, L2 및 G2는 이전에 정의한 바와 같고, RV1 및 RV2는 H, 메틸, 에틸 및 페닐 (이 페닐은 플루오로에 의해, 특히 4 위치에서 임의로 치환될 수 있다) 및 C5 -6 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되며, n은 0 또는 1이다. RV1 및 RV2는 동일하거나 상이할 수 있다.
상기 실시양태 중의 일부에서, RV1 및 RV2는 H, 페닐, 및 4-플루오로페닐로부터 독립적으로 선택될 수 있다.
바람직한 중간체
본 발명은 또한, 본 발명에 기술된 컨주게이트 화합물의 제조에 사용하기 위한 중간체를 제공한다.
바람직한 중간체는 이하에 기술되며, 상술한 바람직한 컨주게이트와 매우 일치한다.
한가지 실시양태에서, 중간체는 다음의 화합물이며;
Figure pct00032
더욱 바람직하게는 다음의 화합물이다:
Figure pct00033
여기에서 n은 0 또는 1이고, Y, RL1 및 RL2는 이전에 정의한 바와 같으며, RE 및 RE "는 H 또는 RD로부터 각각 독립적으로 선택된다.
한가지 실시양태에서, 중간체는 다음의 화합물이며;
Figure pct00034
더욱 바람직하게는 다음의 화합물이다:
Figure pct00035
여기에서 Y, RL1 및 RL2는 이전에 정의한 바와 같으며, Ar1 및 Ar2는 각각 독립적으로 임의로 치환된 C5 -20 아릴이고, n은 0 또는 1이다. Ar1 및 Ar2는 동일하거나 상이할 수 있다.
한가지 실시양태에서, 중간체는 다음의 화합물이며;
Figure pct00036
더욱 바람직하게는 다음의 화합물이다:
Figure pct00037
여기에서 Y, RL 1 및 RL 2는 이전에 정의한 바와 같으며, RV1 및 RV2는 H, 메틸, 에틸 및 페닐 (이 페닐은 플루오로에 의해, 특히 4 위치에서 임의로 치환될 수 있다) 및 C5 -6 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되며, n은 0 또는 1이다. RV1 및 RV2는 동일하거나 상이할 수 있다.
치환체
본 명세서에서 사용된 것으로서 문구 "임의로 치환된"은 비치환될 수 있거나 치환될 수 있는 모 그룹에 관한 것이다.
별도로 명시되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 것으로서 용어 "치환된"은 하나 또는 그 이상의 치환체를 갖는 모 그룹에 관한 것이다. 용어 "치환체"는 본 명세서에서 통상적인 개념으로 사용되며, 모 그룹에 공유적으로 부착되거나, 경우에 따라 모 그룹에 융합된 화학적 부분을 나타낸다. 광범한 종류의 치환체는 잘 알려져 있으며, 다양한 종류의 모 그룹에 대한 이들의 형성 및 도입을 위한 방법도 또한 잘 알려져 있다.
바람직한 실시양태에서, 본 명세서에 기술된 치환체 (임의의 치환체를 포함)는 세포 결합제에 대한 반응성이 없는 이들 그룹으로 제한된다. 본 발명의 경우에 세포 결합제에 대한 연결은 세포 결합제에 대해 링커 그룹 (예를 들어, L1, L2 및 A를 포함)을 통해서 PBD 화합물의 N10 위치로부터 형성된다. PBD 구조의 다른 부분에 위치하는 반응성 작용 그룹은 세포 결합제에 대한 추가의 결합을 형성할 수 있다 (이것은 교차결합으로 불릴 수 있다). 이들 추가의 결합은 컨주게이트의 수송 및 생물학적 활성을 변화시킬 수 있다. 따라서, 일부의 실시양태에서 추가의 치환체는 반응성 작용기를 결여하는 것으로 제한된다.
한가지 실시양태에서, 치환체는 R, OR, SR, NRR', NO2, 할로, CO2R, COR, CONH2, CONHR, 및 CONRR'로 구성된 그룹으로부터 선택된다.
한가지 실시양태에서, 치환체는 R, OR, SR, NRR', NO2, CO2R, COR, CONH2, CONHR, 및 CONRR'로 구성된 그룹으로부터 선택된다.
한가지 실시양태에서, 치환체는 R, OR, SR, NRR', NO2, 및 할로로 구성된 그룹으로부터 선택된다.
한가지 실시양태에서, 치환체는 R, OR, SR, NRR', 및 NO2로 구성된 그룹으로부터 선택된다.
상기 언급된 실시양태 중의 어느 하나는 본 발명에 기술된 치환체 중의 어느 하나에라도 적용될 수 있다. 대신으로, 치환체는 이하에 열거된 그룹 중의 하나 또는 그 이상으로부터 선택될 수 있다.
치환체의 예는 이하에 더 상세히 기술된다.
C1 -12 알킬: 본 명세서에서 사용된 것으로서 용어 "C1 -12 알킬"은 지방족 또는 지환족일 수 있고, 포화 또는 불포화 (예를 들어, 부분적으로 불포화, 완전히 불포화)될 수 있는 것으로서, 1 내지 12 개의 탄소 원자를 갖는 탄화수소 화합물의 탄소 원자로부터 수소 원자를 제거함으로써 수득된 일가 부분에 관한 것이다. 따라서, 용어 "알킬"은 이하에 거론된 서브-클래스 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬, 등을 포함한다.
포화된 알킬 그룹의 예로는 메틸 (C1), 에틸 (C2), 프로필 (C3), 부틸 (C4), 펜틸 (C5), 헥실 (C6) 및 헵틸 (C7)이 포함되나, 이들로 제한되지 않는다.
포화된 선형 알킬 그룹의 예로는 메틸 (C1), 에틸 (C2), n-프로필 (C3), n-부틸 (C4), n-펜틸 (아밀) (C5), n-헥실 (C6) 및 n-헵틸 (C7)이 포함되나, 이들로 제한되지 않는다.
포화되고 분지된 알킬 그룹의 예로는 이소-프로필 (C3), 이소-부틸 (C4), sec-부틸 (C4), tert-부틸 (C4), 이소-펜틸 (C5), 및 네오-펜틸　(C5)이 포함된다.
알킬 그룹은 O, N(H) 및 S로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 헤테로 원자에 의해서 임의로 단속될 수 있다. 이러한 그룹은 "헤테로알킬"로 불릴 수 있다.
C2 -20 헤테로알킬: 본 명세서에서 사용된 것으로서 용어 "C2 -12 헤테로알킬"은 2 내지 12 개의 탄소 원자, 및 O, N(H) 및 S, 바람직하게는 O 및 S로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 헤테로 원자를 갖는 탄화수소 화합물의 탄소 원자로부터 수소 원자를 제거함으로써 수득된 일가 부분에 관한 것이다.
헤테로알킬 그룹의 예로는 타입 -(OCH2CH2)-의 하나 또는 그 이상의 에틸렌 글리콜 유니트를 포함하는 것이 포함되나 이들로 제한되지 않는다. 헤테로알킬 그룹의 말단은 헤테로 원자의 일차 형태, 예를 들어, -OH, -SH 또는 -NH2일 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 말단은 -CH3이다.
C2 -12 알케닐: 본 명세서에서 사용된 것으로서 용어 "C2 -12 알케닐"은 하나 또는 그 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 갖는 알킬 그룹에 관한 것이다.
불포화된 알케닐 그룹의 예로는 에테닐 (비닐, -CH=CH2), 1-프로페닐 (-CH=CH-CH3), 2-프로페닐 (알릴, -CH-CH=CH2), 이소프로페닐 (1-메틸비닐, -C(CH3)=CH2), 부테닐 (C4), 펜테닐 (C5), 및 헥세닐 (C6)이 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
C2 -12 알키닐: 본 명세서에서 사용된 것으로서 용어 "C2 -12 알키닐"은 하나 또는 그 이상의 탄소-탄소 삼중 결합을 갖는 알킬 그룹에 관한 것이다.
불포화된 알키닐 그룹의 예로는 에티닐 (-C≡CH) 및 2-프로페닐 (프로파길, -CH2-C≡CH)이 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
C3 -12 사이클로알킬: 본 명세서에서 사용된 것으로서 용어 "C3 -12 사이클로알킬"은 또한 사이클릴 그룹인 알킬 그룹, 즉 사이클릭 탄화수소 (카보사이클릭) 화합물의 지환족 환 원자로부터 수소 원자를 제거함으로써 수득되는 것으로 3 내지 7 개의 환 원자를 포함한 3 내지 7 개의 탄소 원자를 갖는 일가 부분에 관한 것이다.
사이클로알킬 그룹의 예로는 다음으로부터 유도된 것이 포함되나 이들로 제한되지 않는다:
포화된 모노사이클릭 탄화수소 화합물:
사이클로프로판 (C3), 사이클로부탄 (C4), 사이클로펜탄 (C5), 사이클로헥산 (C6), 사이클로헵탄 (C7), 메틸사이클로프로판 (C4), 디메틸사이클로프로판 (C5), 메틸사이클로부탄 (C5), 디메틸사이클로부탄　(C6), 메틸사이클로펜탄 (C6), 디메틸사이클로펜탄　(C7) 및 메틸사이클로헥산　(C7);
불포화된 모노사이클릭 탄화수소 화합물:
사이클로프로펜　(C3), 사이클로부텐　(C4), 사이클로펜텐　(C5), 사이클로헥센 (C6), 메틸사이클로프로펜　(C4), 디메틸사이클로프로펜 (C5), 메틸사이클로부텐 (C5), 디메틸사이클로부텐 (C6), 메틸사이클로펜텐 (C6), 디메틸사이클로펜텐　(C7) 및 메틸사이클로헥센 (C7); 및
포화된 폴리사이클릭 탄화수소 화합물:
노르카레인 (C7), 노르피난 (C7), 노르보르난 (C7).
C3 -20 헤테로사이클릴: 본 명세서에서 사용된 것으로서 용어 "C3 -20 헤테로사이클릴"은 헤테로사이클릭 화합물의 환 원자로부터 수소 원자를 제거함으로써 수득되는 것으로서 3 내지 20 개의 환 원자 (이 중에서 1 내지 10 개는 환 헤테로 원자이다)를 갖는 일가 부분에 관한 것이다. 바람직하게는, 각각의 환은 3 내지 7 개의 환 원자를 가지며, 이 중에서 1 내지 4 개는 환 헤테로 원자이다.
이러한 관계에서, 접두사 (예를 들어, C3 -20, C3 -7, C5 -6 등)는 탄소 원자이든 헤테로 원자이든 환 원자의 수, 또는 환 원자의 수의 범위를 나타낸다. 예를 들어, 본 명세서에서 사용된 것으로서 용어 "C5 -6 헤테로사이클릴"은 5 또는 6 개의 환 원자를 갖는 헤테로사이클릴 그룹에 관한 것이다.
모노사이클릭 헤테로사이클릴 그룹의 예로는 다음으로부터 유도된 것이 포함되나 이들로 제한되지 않는다:
N1: 아지리딘 (C3), 아제티딘 (C4), 피롤리딘 (테트라하이드로피롤) (C5), 피롤린 (예를 들어, 3-피롤린, 2,5-디하이드로피롤) (C5), 2H-피롤 또는 3H-피롤 (이소피롤, 이소아졸) (C5), 피페리딘 (C6), 디하이드로피리딘 (C6), 테트라하이드로피리딘 (C6), 아제핀　(C7);
O1: 옥시란 (C3), 옥세탄 (C4), 옥솔란 (테트라하이드로푸란) (C5), 옥솔 (디하이드로푸란) (C5), 옥산 (테트라하이드로피란) (C6), 디하이드로피란 (C6), 피란 (C6), 옥세핀 (C7);
S1: 티이란 (C3), 티에탄 (C4), 티올란 (테트라하이드로티오펜) (C5), 티안 (테트라하이드로티오피란) (C6), 티에판 (C7);
O2: 디옥솔란 (C5), 디옥산 (C6), 및 디옥세판 (C7);
O3: 트리옥산 (C6);
N2: 이미다졸리딘 (C5), 피라졸리딘 (디아졸리딘) (C5), 이미다졸린 (C5), 피라졸린 (디하이드로피라졸) (C5), 피페라진 (C6);
N1O1: 테트라하이드로옥사졸 (C5), 디하이드로옥사졸 (C5), 테트라하이드로이속사졸 (C5), 디하이드로이속사졸 (C5), 모르폴린 (C6), 테트라하이드로옥사진 (C6), 디하이드로옥사진 (C6), 옥사진 (C6);
N1S1: 티아졸린 (C5), 티아졸리딘 (C5), 티오모르폴린　(C6);
N2O1: 옥사디아진 (C6);
O1S1: 옥사티올 (C5) 및 옥사티안 (티옥산) (C6); 및
N1O1S1: 옥사티아진 (C6).
치환된 모노사이클릭 헤테로사이클릴 그룹의 예로는 사이클릭 형태인 사카라이드, 예를 들어, 아라비노푸라노즈, 릭소푸라노즈, 리보푸라노즈 및 크실로푸라노즈와 같은 푸라노즈 (C5), 및 알로피라노즈, 알트로피라노즈, 글루코피라노즈, 만노피라노즈, 굴로피라노즈, 이도피라노즈, 갈락토피라노즈, 및 탈로피라노즈와 같은 피라노즈 (C6)로부터 유도된 것이 포함된다.
C5 -20 아릴: 본 명세서에서 사용된 것으로서 용어 "C5 -20 아릴"은 방향족 화합물의 방향족 환 원자로부터 수소 원자를 제거함으로써 수득된 것으로서 3 내지 20 개의 환 원자를 갖는 일가 부분에 관한 것이다. 바람직하게는, 각각의 환은 5 내지 7 개의 환 원자를 갖는다.
이러한 관계에서, 접두사 (예를 들어, C3 -20, C5 -7, C5 -6 등)는 탄소 원자이든 헤테로 원자이든 환 원자의 수, 또는 환 원자의 수의 범위를 나타낸다. 예를 들어, 본 명세서에서 사용된 것으로서 용어 "C5 -6 아릴"은 5 또는 6 개의 환 원자를 갖는 아릴 그룹에 관한 것이다.
환 원자는 "카보아릴 그룹"에서와 같이 모두 탄소 원자일 수 있다. 카보아릴 그룹의 예로는 벤젠 (즉, 페닐) (C6), 나프탈렌 (C10), 아줄렌 (C10), 안트라센 (C14), 페난트렌 (C14), 나프타센 (C18), 및 피렌 (C16)으로부터 유도된 것이 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
융합된 환 (이들 중의 적어도 하나는 방향족 환이다)을 포함하는 아릴 그룹의 예로는 인단 (예를 들어,　2,3-디하이드로-1H-인덴) (C9), 인덴 (C9), 이소인덴 (C9), 테트랄린 (1,2,3,4-테트라하이드로나프탈렌) (C10), 아세나프텐 (C12), 플루오렌 (C13), 페날렌 (C13), 아세페난트렌 (C15), 및 아세안트렌 (C16)으로부터 유도된 그룹이 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
대신으로, 환 원자는 "헤테로아릴 그룹"에서와 같이 하나 또는 그 이상의 헤테로 원자를 포함할 수 있다. 모노사이클릭 헤테로아릴 그룹의 예로는 다음으로부터 유도된 것이 포함되나 이들로 제한되지 않는다:
N1: 피롤 (아졸) (C5), 피리딘 (아진) (C6);
O1: 푸란 (옥솔) (C5);
S1: 티오펜 (티올) (C5);
N1O1: 옥사졸 (C5), 이속사졸 (C5), 이속사진 (C6);
N2O1: 옥사디아졸 (푸라잔) (C5);
N3O1: 옥사트리아졸 (C5);
N1S1: 티아졸 (C5), 이소티아졸 (C5);
N2: 이미다졸 (1,3-디아졸) (C5), 피라졸 (1,2-디아졸)　(C5), 피리다진 (1,2-디아진) (C6), 피리미딘 (1,3-디아진) (C6) (예를 들어, 사이토신, 티민, 우라실), 피라진 (1,4-디아진) (C6);
N3: 트리아졸 (C5), 트리아진 (C6); 및
N4: 테트라졸 (C5).
융합된 환을 포함하는 헤테로아릴의 예로는 다음이 포함되나 이들로 제한되지 않는다:
벤조푸란 (O1), 이소벤조푸란 (O1), 인돌 (N1), 이소인돌　(N1), 인돌리진 (N1), 인돌린 (N1), 이소인돌린 (N1), 퓨린 (N4) (예를 들어, 아데닌, 구아닌), 벤즈이미다졸 (N2), 인다졸 (N2), 벤즈옥사졸 (N1O1), 벤즈이속사졸 (N1O1), 벤조디옥솔 (O2), 벤조푸라잔 (N2O1), 벤조트리아졸 (N3), 벤조티오푸란 (S1), 벤조티아졸 (N1S1), 벤조티아디아졸　(N2S)로부터 유도된 C9 (2 개의 융합된 환을 가짐);
크로멘 (O1), 이소크로멘 (O1), 크로만 (O1), 이소크로만 (O1), 벤조디옥산 (O2), 퀴놀린 (N1), 이소퀴놀린 (N1), 퀴놀리진 (N1), 벤즈옥사진 (N1O1), 벤조디아진 (N2), 피리도피리딘 (N2), 퀴녹살린 (N2), 퀴나졸린 (N2), 신놀린 (N2), 프탈라진 (N2), 나프티리딘 (N2), 프테리딘 (N4)으로부터 유도된 C10 (2 개의 융합된 환을 가짐);
벤조디아제핀 (N2)으로부터 유도된 C11 (2 개의 융합된 환을 가짐);
카바졸 (N1), 디벤조푸란 (O1), 디벤조티오펜 (S1), 카볼린 (N2), 페리미딘 (N2), 피리도인돌 (N2)로부터 유도된 C13 (3 개의 융합된 환을 가짐); 및
아크리딘 (N1), 크산텐 (O1), 티오크산텐 (S1), 옥산트렌 (O2), 페녹사티인 (O1S1), 페나진 (N2), 페녹사진 (N1O1), 페노티아진 (N1S1), 티안트렌 (S2), 페난트리딘 (N1), 페난트롤린 (N2), 페나진 (N2)으로부터 유도된 C14 (3 개의 융합된 환을 가짐).
상기의 그룹은 단독으로든 또 다른 치환체의 일부이든 그들 자체가 그들 자체 및 이하에 열거된 추가의 치환체로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 그룹에 의해서 임의로 치환될 수 있다.
할로: -F, -Cl, -Br, 및 -I.
하이드록시: -OH.
에테르: -OR (여기에서, R은 에테르 치환체, 예를 들어, C1 -7 알킬 그룹 (또한, 이하에 거론된 C1 -7 알콕시 그룹으로 칭함), C3 -20 헤테로사이클릴 그룹 (또한, C3 -20 헤테로사이클릴옥시 그룹으로 칭함), 또는 C5 -20 아릴 그룹 (또한, C5-20 아릴옥시 그룹으로 칭함), 바람직하게는 C1 -7 알킬 그룹이다).
알콕시: -OR (여기에서, R은 알킬 그룹, 예를 들어, C1 -7 알킬 그룹이다). C1 -7 알콕시 그룹의 예로는 -OMe (메톡시), -OEt (에톡시), -O(nPr) (n-프로폭시), -O(iPr) (이소프로폭시), -O(nBu) (n-부톡시), -O(sBu) (sec-부톡시), -O(iBu) (이소부톡시), 및 -O(tBu) (tert-부톡시)가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
아세탈: -CH(OR1)(OR2) (여기에서, R1 및 R2는 독립적으로 아세탈 치환체, 예를 들어, C1 -7 알킬 그룹, C3 -20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5 -20 아릴 그룹, 바람직하게는 C1 -7 알킬 그룹이거나, "사이클릭" 아세탈 그룹의 경우에 R1 및 R2는 이들이 부착된 2 개의 산소 원자, 및 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 4 내지 8 개의 환 원자를 갖는 헤테로사이클릭 환을 형성한다). 아세탈 그룹의 예로는 -CH(OMe)2, -CH(OEt)2, 및 -CH(OMe)(OEt)가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
헤미아세탈: -CH(OH)(OR1) (여기에서, R1은 헤미아세탈 치환체, 예를 들어, C1 -7 알킬 그룹, C3 -20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5 -20 아릴 그룹, 바람직하게는 C1 -7 알킬 그룹이다). 헤미아세탈 그룹의 예로는 -CH(OH)(OMe) 및 -CH(OH)(OEt)가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
케탈: -CR(OR1)(OR2) (여기에서, R1 및 R2는 아세탈에 대해서 정의된 바와 같으며, R은 수소 이외의 케탈 치환체, 예를 들어, C1 -7 알킬 그룹, C3 -20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5 -20 아릴 그룹, 바람직하게는 C1 -7 알킬 그룹이다). 케탈 그룹의 예로는 -C(Me)(OMe)2, -C(Me)(OEt)2, -C(Me)(OMe)(OEt), -C(Et)(OMe)2, -C(Et)(OEt)2, 및 -C(Et)(OMe)(OEt)가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
헤미케탈: -CR(OH)(OR1) (여기에서, R1은 헤미아세탈에 대해서 정의된 바와 같으며, R은 수소 이외의 헤미케탈 치환체, 예를 들어, C1 -7 알킬 그룹, C3 -20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5 -20 아릴 그룹, 바람직하게는 C1 -7 알킬 그룹이다). 헤미아세탈 그룹의 예로는 -C(Me)(OH)(OMe), -C(Et)(OH)(OMe), -C(Me)(OH)(OEt), 및 -C(Et)(OH)(OEt)가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
옥소 (케토, -온): =O.
티온 (티오케톤): =S.
이미노 (이민): =NR (여기에서, R은 이미노 치환체, 예를 들어, 수소, C1-7 알킬 그룹, C3 -20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5 -20 아릴 그룹, 바람직하게는 수소 또는 C1 -7 알킬 그룹이다). 에스테르 그룹의 예로는 =NH, =NMe, =NEt, 및 =NPh가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
포르밀 (카브알데히드, 카복스알데히드): -C(=O)H.
아실 (케토): -C(=O)R (여기에서, R은 아실 치환체, 예를 들어, C1 -7 알킬 그룹 (또한 C1 -7 알킬아실 또는 C1 -7 알카노일로 칭함), C3 -20 헤테로사이클릴 그룹 (또한 C3 -20 헤테로사이클릴아실로 칭함), 또는 C5 -20 아릴 그룹 (또한, C5 -20 아릴아실로 칭함), 바람직하게는 C1 -7 알킬 그룹이다). 아실 그룹의 예로는 -C(=O)CH3 (아세틸), -C(=O)CH2CH3 (프로피오닐), -C(=O)C(CH3)3 (t-부티릴), 및 -C(=O)Ph (벤조일, 페논)가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
카복시 (카복실산): -C(=O)OH.
티오카복시 (티오카복실산): -C(=S)SH.
티올로카복시 (티올로카복실산): -C(=O)SH.
티오노카복시 (티오노카복실산): -C(=S)OH.
이미드산: -C(=NH)OH.
하이드록삼산: -C(=NOH)OH.
에스테르 (카복실레이트, 카복실산 에스테르, 옥시카보닐): -C(=O)OR (여기에서, R은 에스테르 치환체, 예를 들어, C1 -7 알킬 그룹, C3 -20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5 -20 아릴 그룹, 바람직하게는 C1 -7 알킬 그룹이다). 에스테르 그룹의 예로는 -C(=O)OCH3, -C(=O)OCH2CH3, -C(=O)OC(CH3)3, 및 -C(=O)OPh가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
아실옥시 (역 에스테르): -OC(=O)R (여기에서, R은 아실옥시 치환체, 예를 들어, C1 -7 알킬 그룹, C3 -20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5 -20 아릴 그룹, 바람직하게는 C1 -7 알킬 그룹이다). 아실옥시 그룹의 예로는 -OC(=O)CH3 (아세톡시), -OC(=O)CH2CH3, -OC(=O)C(CH3)3, -OC(=O)Ph, 및 -OC(=O)CH2Ph가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
옥시카보일옥시: -OC(=O)OR (여기에서, R은 에스테르 치환체, 예를 들어, C1-7 알킬 그룹, C3 -20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5 -20 아릴 그룹, 바람직하게는 C1 -7 알킬 그룹이다). 에스테르 그룹의 예로는 -OC(=O)OCH3, -OC(=O)OCH2CH3, -OC(=O)OC(CH3)3, 및 -OC(=O)OPh가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
아미노: -NR1R2 (여기에서, R1 및 R2는 독립적으로 아미노 치환체, 예를 들어, 수소, C1 -7 알킬 그룹 (또한 C1 -7 알킬아미노 또는 디-C1 -7 알킬아미노로 칭함), C3 -20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5 -20 아릴 그룹, 바람직하게는 H 또는 C1 -7 알킬 그룹이거나, "사이클릭" 아미노 그룹의 경우에 R1 및 R2는 이들이 부착된 질소 원자와 함께 4 내지 8 개의 환 원자를 갖는 헤테로사이클릭 환을 형성한다). 아미노 그룹은 일급 (-NH2), 이급 (-NHR1), 또는 삼급 (-NHR1R2)일 수 있고, 양이온 형태로는 4급 (-+NR1R2R3)일 수 있다. 아미노 그룹의 예로는 -NH2, -NHCH3, -NHC(CH3)2, -N(CH3)2, -N(CH2CH3)2, 및 -NHPh가 포함되나 이들로 제한되지 않는다. 사이클릭 아미노 그룹의 예로는 아지리디노, 아제티디노, 피롤리디노, 피페리디노, 피페라지노, 모르폴리노 및 티오모르폴리노가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
아미도 (카바모일, 카바밀, 아미노카보닐, 카복사미드): -C(=O)NR1R2 (여기에서, R1 및 R2는 독립적으로 아미노 그룹에 대해서 정의된 바와 같은 아미노 치환체이다). 아미도 그룹의 예로는 -C(=O)NH2, -C(=O)NHCH3, -C(=O)N(CH3)2, -C(=O)NHCH2CH3, 및 -C(=O)N(CH2CH3)2뿐만 아니라, R1 및 R2가 이들이 부착된 질소 원자와 함께 예를 들어, 피페리디노카보닐, 모르폴리노카보닐, 티오모르폴리노카보닐, 및 피페라지노카보닐에서와 같은 헤테로사이클릭 구조를 형성하는 아미도 그룹이 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
티오아미도 (티오카바밀): -C(=S)NR1R2 (여기에서, R1 및 R2는 독립적으로 아미노 그룹에 대해서 정의된 바와 같은 아미노 치환체이다). 아미도 그룹의 예로는 -C(=S)NH2, -C(=S)NHCH3, -C(=S)N(CH3)2, 및 -C(=S)NHCH2CH3가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
아실아미도 (아실아미노): -NR1C(=O)R2 (여기에서, R1은 아미드 치환체, 예를 들어, 수소, C1 -7 알킬 그룹, C3 -20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5 -20 아릴 그룹, 바람직하게는 수소 또는 C1 -7 알킬 그룹이고, R2는 아실 치환체, 예를 들어, C1-7 알킬 그룹, C3 -20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5 -20 아릴 그룹, 바람직하게는 수소 또는 C1 -7 알킬 그룹이다). 아실아미드 그룹의 예로는 -NHC(=O)CH3, -NHC(=O)CH2CH3, 및 -NHC(=O)Ph가 포함되나 이들로 제한되지 않는다. R1　및 R2는 함께 예를 들어, 석신이미딜, 말레이미딜 및 프탈이미딜에서와 같이 사이클릭 구조를 형성할 수 있다:
Figure pct00038
아미노카보닐옥시: -OC(=O)NR1R2 (여기에서, R1 및 R2는 독립적으로 아미노 그룹에 대해서 정의된 바와 같은 아미노 치환체이다). 아미노카보닐옥시 그룹의 예로는 -OC(=O)NH2, -OC(=O)NHMe, -OC(=O)NMe2, 및 -OC(=O)NEt2가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
우레이도: -N(R1)CONR2R3 (여기에서, R2 및 R3는 독립적으로 아미노 그룹에 대해서 정의된 바와 같은 아미노 치환체이며, R1은 우레이도 치환체, 예를 들어, 수소, C1 -7 알킬 그룹, C3 -20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5 -20 아릴 그룹, 바람직하게는 수소 또는 C1 -7 알킬 그룹이다). 우레이도 그룹의 예로는 -NHCONH2, -NHCONHMe, -NHCONHEt, -NHCONMe2, -NHCONEt2, -NMeCONH2, -NMeCONHMe, -NMeCONHEt, -NMeCONMe2, 및 -NMeCONEt2가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
구아니디노: -NH-C(=NH)NH2.
테트라졸릴: 4 개의 질소 원자 및 하나의 탄소 원자를 갖는 5-원 방향족 환
Figure pct00039
이미노: =NR (여기에서, R은 이미노 치환체, 예를 들어, 수소, C1 -7 알킬 그룹, C3 -20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5 -20 아릴 그룹, 바람직하게는 H 또는 C1-7 알킬 그룹이다). 이미노 그룹의 예로는 =NH, =NMe, 및 =NEt가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
아미딘 (아미디노): -C(=NR)NR2 (여기에서, 각각의 R은 아미딘 치환체, 예를 들어, 수소, C1 -7 알킬 그룹, C3 -20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5 -20 아릴 그룹, 바람직하게는 H 또는 C1 -7 알킬 그룹이다). 아미딘 그룹의 예로는 -C(=NH)NH2, -C(=NH)NMe2, 및 -C(=NMe)NMe2가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
니트로: -NO2.
니트로소: -NO.
아지도: -N3.
시아노 (니트릴, 카보니트릴): -CN.
이소시아노: -NC.
시아나토: -OCN.
이소시아나토: -NCO.
티오시아노 (티오시아나토): -SCN.
이소티오시아노 (이소티오시아나토): -NCS.
설프히드릴 (티올, 머캅토): -SH.
티오에테르 (설파이드): -SR (여기에서, R은 티오에테르 치환체, 예를 들어, C1 -7 알킬 그룹 (또한 C1 -7 알킬티오 그룹으로 칭함), C3 -20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5 -20 아릴 그룹, 바람직하게는 C1 -7 알킬 그룹이다). C1 -7 알킬티오 그룹의 예로는 -SCH3 및 -SCH2CH3가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
디설파이드: -SS-R (여기에서, R은 디설파이드 치환체, 예를 들어, C1 -7 알킬 그룹, C3 -20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5 -20 아릴 그룹, 바람직하게는 C1 -7 알킬 그룹 (또한, 여기에서는 C1 -7 알킬 디설파이드로 칭함)이다). C1 -7 알킬 디설파이드 그룹의 예로는 -SSCH3 및 -SSCH2CH3가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
설핀 (설피닐, 설폭사이드): -S(=O)R (여기에서, R은 설핀 치환체, 예를 들어, C1 -7 알킬 그룹, C3 -20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5 -20 아릴 그룹, 바람직하게는 C1 -7 알킬 그룹이다). 설핀 그룹의 예로는 -S(=O)CH3 및 -S(=O)CH2CH3가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
설폰 (설포닐): -S(=O)2R (여기에서, R은 설폰 치환체, 예를 들어, C1 -7 알킬 그룹, C3 -20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5 -20 아릴 그룹, 바람직하게는 불소화되거나 과불소화된 C1 -7 알킬 그룹을 포함한 C1 -7 알킬 그룹이다). 설폰 그룹의 예로는 -S(=O)2CH3 (메탄설포닐, 메실), -S(=O)2CF3 (트리플릴), -S(=O)2CH2CH3 (에실), -S(=O)2C4F9 (노나플릴), -S(=O)2CH2CF3 (트레실), -S(=O)2CH2CH2NH2 (타우릴), -S(=O)2Ph (페닐설포닐, 베실), 4-메틸페닐설포닐 (토실), 4-클로로페닐설포닐 (클로실), 4-브로모페닐설포닐 (브로실), 4-니트로페닐 (노실), 2-나프탈렌설포네이트 (나프실), 및 5-디메틸아미노-나프탈렌-1-일설포네이트 (단실)가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
설핀산 (설피노): -S(=O)OH, -SO2H.
설폰산 (설포): -S(=O)2OH, -SO3H.
설피네이트 (설핀산 에스테르): -S(=O)OR (여기에서, R은 설피네이트 치환체, 예를 들어, C1 -7 알킬 그룹, C3 -20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5 -20 아릴 그룹, 바람직하게는 C1 -7 알킬 그룹이다). 설피네이트 그룹의 예로는 -S(=O)OCH3 (메톡시설피닐; 메틸 설피네이트) 및 -S(=O)OCH2CH3 (에톡시설피닐; 에틸 설피네이트)가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
설포네이트 (설폰산 에스테르): -S(=O)2OR (여기에서, R은 설포네이트 치환체, 예를 들어, C1 -7 알킬 그룹, C3 -20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5 -20 아릴 그룹, 바람직하게는 C1 -7 알킬 그룹이다). 설포네이트 그룹의 예로는 -S(=O)2OCH3 (메톡시설포닐; 메틸 설포네이트) 및 -S(=O)2OCH2CH3 (에톡시설포닐; 에틸 설포네이트)가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
설피닐옥시: -OS(=O)R (여기에서, R은 설피닐옥시 치환체, 예를 들어, C1-7 알킬 그룹, C3 -20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5 -20 아릴 그룹, 바람직하게는 C1-7 알킬 그룹이다). 설피닐옥시 그룹의 예로는 -OS(=O)CH3 및 -OS(=O)CH2CH3가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
설포닐옥시: -OS(=O)2R (여기에서, R은 설포닐옥시 치환체, 예를 들어, C1-7 알킬 그룹, C3 -20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5 -20 아릴 그룹, 바람직하게는 C1-7 알킬 그룹이다). 설포닐옥시 그룹의 예로는 -OS(=O)2CH3 (메실레이트) 및 -OS(=O)2CH2CH3 (에실레이트)가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
설페이트: -OS(=O)2OR (여기에서, R은 설페이트 치환체, 예를 들어, C1 -7 알킬 그룹, C3 -20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5 -20 아릴 그룹, 바람직하게는 C1 -7 알킬 그룹이다). 설페이트 그룹의 예로는 -OS(=O)2OCH3 및 -SO(=O)2OCH2CH3가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
설파밀 (설파모일; 설핀산 아미드; 설핀아미드): -S(=O)NR1R2 (여기에서, R1 및 R2는 독립적으로 아미노 그룹에 대해서 정의된 바와 같은 아미노 치환체이다). 설파밀 그룹의 예로는 -S(=O)NH2, -S(=O)NH(CH3), -S(=O)N(CH3)2, -S(=O)NH(CH2CH3), -S(=O)N(CH2CH3)2, 및 -S(=O)NHPh가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
설폰아미도 (설피나모일; 설폰산 아미드; 설폰아미드): -S(=O)2NR1R2 (여기에서, R1 및 R2는 독립적으로 아미노 그룹에 대해서 정의된 바와 같은 아미노 치환체이다). 설폰아미도 그룹의 예로는 -S(=O)2NH2, -S(=O)2NH(CH3), -S(=O)2N(CH3)2, -S(=O)2NH(CH2CH3), -S(=O)2N(CH2CH3)2, 및 -S(=O)2NHPh가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
설파미노: -NR1S(=O)2OH (여기에서, R1은 아미노 그룹에 대해서 정의된 바와 같은 아미노 치환체이다). 설파미노 그룹의 예로는 -NHS(=O)2OH 및 -N(CH3)S(=O)2OH가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
설폰아미노: -NR1S(=O)2R (여기에서, R1은 아미노 그룹에 대해서 정의된 바와 같은 아미노 치환체이며, R은 설폰아미노 치환체, 예를 들어, C1 -7 알킬 그룹, C3 -20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5 -20 아릴 그룹, 바람직하게는 C1 -7 알킬 그룹이다). 설폰아미노 그룹의 예로는 -NHS(=O)2CH3 및 -N(CH3)S(=O)2C6H5가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
설핀아미노: -NR1S(=O)R (여기에서, R1은 아미노 그룹에 대해서 정의된 바와 같은 아미노 치환체이며, R은 설핀아미노 치환체, 예를 들어, C1 -7 알킬 그룹, C3 -20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5 -20 아릴 그룹, 바람직하게는 C1 -7 알킬 그룹이다). 설핀아미노 그룹의 예로는 -NHS(=O)CH3 및 -N(CH3)S(=O)C6H5가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
포스피노 (포스핀): -PR2 (여기에서, R은 포스피노 치환체, 예를 들어, -H, C1 -7 알킬 그룹, C3 -20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5 -20 아릴 그룹, 바람직하게는 -H, C1 -7 알킬 그룹, 또는 C5 -20 아릴 그룹이다). 포스피노 그룹의 예로는 -PH2, -P(CH3)2, -P(CH2CH3)2, -P(t-Bu)2, 및 -P(Ph)2가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
포스포: -P(=O)2.
포스피닐 (포스핀 옥사이드): -P(=O)R2 (여기에서, R은 포스피닐 치환체, 예를 들어, C1 -7 알킬 그룹, C3 -20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5 -20 아릴 그룹, 바람직하게는 C1 -7 알킬 그룹 또는 C5 -20 아릴 그룹이다). 포스피닐 그룹의 예로는 -P(=O)(CH3)2, -P(=O)(CH2CH3)2, -P(=O)(t-Bu)2, 및 -P(=O)(Ph)2가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
포스폰산 (포스포노): -P(=O)(OH)2.
포스포네이트 (포스포노 에스테르): -P(=O)(OR)2 (여기에서, R은 포스포네이트 치환체, 예를 들어, -H, C1 -7 알킬 그룹, C3 -20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5 -20 아릴 그룹, 바람직하게는 -H, C1 -7 알킬 그룹, 또는 C5 -20 아릴 그룹이다). 포스포네이트 그룹의 예로는 -P(=O)(OCH3)2, -P(=O)(OCH2CH3)2, -P(=O)(O-t-Bu)2, 및 -P(=O)(OPh)2가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
인산 (포스포노옥시): -OP(=O)(OH)2.
포스페이트 (포스포노옥시 에스테르): -OP(=O)(OR)2 (여기에서, R은 포스페이트 치환체, 예를 들어, -H, C1 -7 알킬 그룹, C3 -20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5 -20 아릴 그룹, 바람직하게는 -H, C1 -7 알킬 그룹, 또는 C5 -20 아릴 그룹이다). 포스페이트 그룹의 예로는 -OP(=O)(OCH3)2, -OP(=O)(OCH2CH3)2, -OP(=O)(O-t-Bu)2, 및 -OP(=O)(OPh)2가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
아인산: -OP(OH)2.
포스파이트: -OP(OR)2 (여기에서, R은 포스파이트 치환체, 예를 들어, -H, C1 -7 알킬 그룹, C3 -20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5 -20 아릴 그룹, 바람직하게는 -H, C1 -7 알킬 그룹, 또는 C5 -20 아릴 그룹이다). 포스파이트 그룹의 예로는 -OP(OCH3)2, -OP(OCH2CH3)2, -OP(O-t-Bu)2, 및 -OP(OPh)2가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
포스포르아미다이트: -OP(OR1)-NR2 2 (여기에서, R1 및 R2는 포스포르아미다이트 치환체, 예를 들어, -H, (임의로 치환된) C1 -7 알킬 그룹, C3 -20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5 -20 아릴 그룹, 바람직하게는 -H, C1 -7 알킬 그룹, 또는 C5 -20 아릴 그룹이다). 포스포르아미다이트 그룹의 예로는 -OP(OCH2CH3)-N(CH3)2, -OP(OCH2CH3)-N(i-Pr)2, 및 -OP(OCH2CH2CN)-N(i-Pr)2가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
포스포르아미데이트: -OP(=O)(OR1)-NR2 2 (여기에서, R1 및 R2는 포스포르아미데이트 치환체, 예를 들어, -H, (임의로 치환된) C1 -7 알킬 그룹, C3 -20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5 -20 아릴 그룹, 바람직하게는 -H, C1 -7 알킬 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹이다). 포스포르아미데이트 그룹의 예로는 -OP(=O)(OCH2CH3)-N(CH3)2, -OP(=O)(OCH2CH3)-N(i-Pr)2, 및 -OP(=O)(OCH2CH2CN)-N(i-Pr)2가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
알킬렌
C3 -12 알킬렌: 본 명세서에서 사용된 것으로서 용어 "C3 -12 알킬렌"은 지방족 또는 지환족일 수 있으며, 포화, 부분적으로 불포화, 또는 완전히 불포화될 수 있는 3 내지 12 개의 탄소 원자 (다른 식으로 명시되지 않는 한)를 갖는 탄화수소 화합물의 2 개의 수소 원자를, 둘 다 동일한 탄소 원자로부터 또는 2 개의 상이한 탄소 원자 각각으로부터 하나씩 제거함으로써 수득된 2 자리 (bidenate) 부분에 관한 것이다. 따라서, 용어 "알킬렌"은 이하에 거론되는 서브-클래스 알케닐렌, 알키닐렌, 사이클로알킬렌 등을 포함한다.
선형 포화 C3 -12 알킬렌 그룹의 예로는 -(CH2)n- (여기에서, n은 3 내지 12의 정수이다), 예를 들어, -CH2CH2CH2- (프로필렌), -CH2CH2CH2CH2- (부틸렌), -CH2CH2CH2CH2CH2- (펜틸렌) 및 -CH2CH2CH2CH-2CH2CH2CH2- (헵틸렌)이 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
분지된 포화 C3 -12 알킬렌 그룹의 예로는 -CH(CH3)CH2-, -CH(CH3)CH2CH2-, -CH(CH3)CH2CH2CH2-, -CH2CH(CH3)CH2-, -CH2CH(CH3)CH2CH2-, -CH(CH2CH3)-, -CH(CH2CH3)CH2-, 및 -CH2CH(CH2CH3)CH2-가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
선형의 부분적으로 불포화된 C3 -12 알킬렌 그룹 (C3 -12 알케닐렌, 및 알키닐렌 그룹)의 예로는 -CH=CH-CH2-, -CH2-CH=CH2-, -CH=CH-CH2-CH2-, -CH=CH-CH2-CH2-CH2-, -CH=CH-CH=CH-, -CH=CH-CH=CH-CH2-, -CH=CH-CH=CH-CH2-CH2-, -CH=CH-CH2-CH=CH-, -CH=CH-CH2-CH2-CH=CH-, 및 -CH2-C≡C-CH2-가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
분지되고 부분적으로 불포화된 C3 -12 알킬렌 그룹 (C3 -12 알케닐렌 및 알키닐렌 그룹)의 예로는 -C(CH3)=CH-, -C(CH3)=CH-CH2-, -CH=CH-CH(CH3)- 및 -C≡C-CH(CH3)-가 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
지환족 포화 C3 -12 알킬렌 그룹 (C3 -12 사이클로알킬렌)의 예로는 사이클로펜틸렌 (예를 들어, 사이클로펜트-1,3-일렌), 및 사이클로헥실렌 (예를 들어, 사이클로헥스-1,4-일렌)이 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
지환족의 부분적으로 불포화된 C3 -12 알킬렌 그룹 (C3 -12 사이클로알킬렌)의 예로는 사이클로펜테닐렌 (예를 들어, 4-사이클로펜텐-1,3-일렌), 사이클로헥세닐렌 (예를 들어, 2-사이클로헥센-1,4-일렌; 3-사이클로헥센-1,2-일렌; 2,5-사이클로헥사디엔-1,4-일렌)이 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
그 밖의 다른 형태를 포함
다른 식으로 명시되지 않는 한, 상기한 것에는 이들 치환체의 잘 알려진 이온, 염, 용매화물, 및 보호된 형태가 포함된다. 예를 들어, 카복실산 (-COOH)에 대한 언급은 또한 음이온 (카복실레이트) 형태 (-COO-), 그의 염 또는 용매화물뿐만 아니라 통상적인 보호된 형태를 포함한다. 마찬가지로, 아미노 그룹에 대한 언급은 양자화된 형태 (-N+HR1R2), 아미노 그룹의 염 또는 용매화물, 예를 들어, 하이드로클로라이드 염뿐만 아니라 아미노 그룹의 통상적인 보호된 형태를 포함한다. 마찬가지로, 하이드록실 그룹에 대한 언급은 또한 음이온 형태 (-O-), 그의 염 또는 용매화물뿐만 아니라 통상적인 보호된 형태를 포함한다.
염
활성 화합물의 상응하는 염, 예를 들어, 약제학적으로 허용되는 염을 제조, 정제 및/또는 취급하는 것이 편리하거나 바람직할 수 있다. 약제학적으로 허용되는 염의 예는 문헌 [Berge, et al ., J.　 Pharm . Sci ., 66, 1-19 (1977)]에 기술되어 있다.
예를 들어, 화합물이 음이온성이거나, 음이온성일 수 있는 작용 그룹을 갖는 경우에 (예를 들어, -COOH는 -COO-일 수 있다), 염은 적합한 양이온에 의해서 형성될 수 있다. 적합한 무기 양이온의 예로는 Na+ 및 K+와 같은 알칼리 금속 이온, Ca2+ 및 Mg2 +와 같은 알칼리 토금속 양이온, 및 Al+3과 같은 그 밖의 다른 양이온이 포함되나 이들로 제한되지 않는다. 적합한 유기 양이온의 예로는 암모늄 이온 (즉 NH4 +) 및 치환된 암모늄 이온 (예를 들어, NH3R+, NH2R2 +, NHR3 +, NR4 +)이 포함되나 이들로 제한되지 않는다. 일부의 적합한 치환된 암모늄 이온의 예는 에틸아민, 디에틸아민, 디사이클로헥실아민, 트리에틸아민, 부틸아민, 에틸렌디아민, 에탄올아민, 디에탄올아민, 피페라진, 벤질아민, 페닐벤질아민, 콜린, 메글루민, 및 트로메타민뿐만 아니라 리신 및 아르기닌과 같은 아미노산으로부터 유도된 것이다. 통상적인 4급 암모늄 이온의 예는 N(CH3)4 +이다.
화합물이 양이온성이거나 양이온성일 수 있는 작용 그룹을 갖는 경우에 (예를 들어, -NH2는 -NH3 +일 수 있다), 염은 적합한 음이온에 의해서 형성될 수 있다. 적합한 무기 음이온의 예로는 다음의 무기산으로부터 유도된 것이 포함되나 이들로 제한되지 않는다: 염산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 황산, 아황산, 질산, 아질산, 인산 및 아질산.
적합한 유기 음이온의 예로는 다음의 유기산으로부터 유도된 것이 포함되나 이들로 제한되지 않는다: 2-아세톡시벤조산, 아세트산, 아스코르브산, 아스파르트산, 벤조산, 캄포설폰산, 신남산, 시트르산, 에데트산, 에탄디설폰산, 에탄설폰산, 푸마르산, 글루켑톤산, 글루콘산, 글루탐산, 글리콜산, 하이드록시말레산, 하이드록시나프탈렌 카복실산, 이세티온산, 락트산, 락토비온산, 라우르산, 말레산, 말산, 메탄설폰산, 무스산, 올레산, 옥살산, 팔미트산, 파모산, 판토텐산, 페닐아세트산, 페닐설폰산, 프로피온산, 피루브산, 살리실산, 스테아르산, 석신산, 설파닐산, 타르타르산, 톨루엔설폰산, 트리플루오로아세트산 및 발레르산. 적합한 폴리머 유기 음이온의 예로는 다음의 폴리머산으로부터 유도된 것이 포함되나 이들로 제한되지 않는다: 탄닌산, 카복시메틸 셀룰로즈.
용매화물
활성 화합물의 상응하는 용매화물을 제조, 정제 및/또는 취급하는 것이 편리하거나 바람직할 수 있다. 용어 "용매화물"은 용질 (예를 들어, 활성 화합물, 활성 화합물의 염)과 용매의 컴플렉스를 나타내기 위한 통상적인 개념으로 본 명세서에서 사용된다. 용매가 물이면, 용매화물은 편리하게는 하이드레이트, 예를 들어, 모노-하이드레이트, 디-하이드레이트, 트리-하이드레이트 등으로 불릴 수 있다.
본 발명은 용매가 PBD 부분의 이민 결합을 가로질러서 부가된 화합물을 포함하며, 이것은 이하에 예시되고, 여기에서 용매는 물 또는 알콜 (RAOH, 여기에서 RA는 C1 -4 알킬이다)이다:
Figure pct00040
이들 형태는 PBD의 카비놀아민 및 카비놀아민 에테르 형태 (상기 R10에 관한 항목에 기술된 바와 같음)로 불릴 수 있다. 이들 평형상태의 균형은 화합물이 존재하는 조건뿐만 아니라 그 부분 자체의 성질에 따라 좌우된다.
이들 특별한 화합물은 예를 들어, 동결건조에 의해 고체 형태로 분리될 수 있다.
이성체
본 발명의 특정한 화합물은 시스- 및 트랜스-형태; E- 및 Z-형태; c-, t-, 및 r-형태; 엔도- 및 엑소-형태; R-, S-, 및 메소-형태; D- 및 L-형태; d- 및 l-형태; (+) 및 (-) 형태; 케토-, 에놀-, 및 에놀레이트-형태; syn- 및 안티 (anti)-형태; 향사 (synclinal)- 및 배사 (anticlinal)-형태; α- 및 β-형태; 축 및 수평 방향 형태; 보트-, 체어-, 트위스트-, 엔벨로프 (envelope)-, 및 핼프체어 (halfchair)-형태; 및 이들의 조합을 포함한 (단, 이들로 제한되지 않는다) 하나 또는 그 이상의 특별한 기하이성체, 광학이성체, 에난티오머, 부분입체이성체, 에피머, 회전장애 (atropic) 이성체, 입체이성체, 호변이성체, 형태이성체 또는 아노머 (anomeric) 형태로 존재할 수 있으며, 이하에서는 총괄적으로 "이성체" (또는 "이성체 형태") 로 칭한다.
용어 "키랄"은 거울상 파트너의 비-중첩성 (non-superimposability)의 특성을 갖는 분자를 나타내는 반면에, 용어 "아키랄 (achiral)"은 그들의 거울상 파트너 상에 중첩할 수 있는 분자를 나타낸다.
용어 "입체이성체"는 동일한 화학적 구성을 갖지만, 공간에서 원자 또는 그룹의 배열에 관해서는 상이한 화합물을 나타낸다.
"부분입체이성체"는 2 개 또는 그 이상의 키랄 중심을 가지며, 그의 분자가 서로의 거울상이 아닌 입체이성체를 나타낸다. 부분입체이성체는 상이한 물리적 특성, 예를 들어, 융점, 비점, 분광 특성 및 반응성을 갖는다. 부분입체이성체의 혼합물은 전기영동 및 크로마토그래피와 같은 고분할 분석절차에 따라 분리시킬 수 있다.
"에난티오머"는 서로의 비-중첩성 거울상인 화합물의 2 개의 입체이성체를 나타낸다.
본 명세서에서 사용된 입체화학적 정의 및 규약은 문헌 [S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York; and Eliel, E. and Wilen, S., "Stereochemistry of Organic Compounds", John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994]에 따른다. 본 발명의 화합물은 비대칭 또는 키랄 중심을 함유할 수 있으며, 따라서 상이한 입체이성체 형태로 존재할 수 있다. 부분입체이성체, 에난티오머 및 회전장애 이성체뿐만 아니라 라세미 혼합물과 같은 이들의 혼합물을 포함한 (단, 이들로 제한되지 않는다) 본 발명의 화합물의 모든 입체이성체 형태는 본 발명의 일부를 형성하는 것으로 한다. 다수의 유기 화합물은 광학적 활성 형태로 존재하며, 즉 이들은 평면-편광의 평면을 회전하는 능력을 갖는다. 광학적 활성 화합물을 기술하는 경우에, 접두어 D 및 L, 또는 R 및 S는 그의 키랄 중심(들)에 관한 분자의 절대배열을 나타내기 위해서 사용된다. 접두어 d 및 l 또는 (+) 및 (-)는 화합물에 의한 평면-편광의 회전의 사인을 지정하기 위해서 사용되는데, 여기에서 (-) 또는 l은 화합물이 좌선성인 것을 나타낸다. (+) 또는 d가 접두어인 화합물은 우선성이다. 소정의 화학적 구조에 대해서 이들 입체이성체는 이들이 서로의 거울상인 것을 제외하고는 동일하다. 특정의 입체이성체는 또한 에난티오머로 불릴 수 있으며, 이러한 이성체의 혼합물은 종종 에난티오머 혼합물로 칭할 수 있다. 에난티오머의 50:50 혼합물은 라세미 혼합물 또는 라세메이트로 불리며, 이것은 화학적 반응 또는 과정에서 입체선택성 또는 입체특이성이 없는 경우에 나타날 수 있다. 용어 "라세미 혼합물" 및 "라세메이트"는 광학적 활성이 없는 2 개의 에난티오머 종의 동몰성 혼합물을 나타낸다.
호변이성체 형태에 대해서 이하에 거론된 것을 제외하고, 특히 본 발명에서 사용된 용어 "이성체"로부터 구조 (또는 구성) 이성체 (즉, 단순히 공간에서의 원자의 위치에 의해서가 아니라 원자들 사이의 연결이 상이한 이성체)는 제외되는 것을 유의하여야 한다. 예를 들어, 메톡시 그룹 -OCH3에 대한 언급은 그의 구조 이성체인 하이드록시메틸 그룹 -CH2OH에 대한 언급으로 이해되지 않는다. 마찬가지로, 오르토-클로로페닐에 대한 언급은 그의 구조 이성체인 메타-클로로페닐에 대한 언급으로 이해되지 않는다. 그러나, 구조의 클래스에 대한 언급은 그 클래스 내에 속하는 구조적 이성체 형태를 역시 포함할 수 있다 (예를 들어, C1 -7 알킬은 n-프로필 및 이소-프로필을 포함하고; 부틸은 n-, 이소-, sec-, 및 tert-부틸을 포함하며; 메톡시페닐은 오르토-, 메타-, 및 파라-메톡시페닐을 포함한다).
상기의 배제사항은 예를 들어, 다음의 호변이성체 쌍에서와 같은 호변이성체 형태, 예를 들어, 케토-, 에놀-, 및 에놀레이트-형태에 관한 것은 아니다: 케토/에놀 (이하에 예시됨), 이민/엔아민, 아미드/이미노 알콜, 아미딘/아미딘, 니트로소/옥심, 티오케톤/에네티올, N-니트로소/하이드록시아조, 및 니트로/아시-니트로.
Figure pct00041
용어 "호변이성체" 또는 "호변이성체 형태"는 저에너지 장벽을 통해서 상호전환가능한 상이한 에너지의 구조 이성체를 나타낸다. 예를 들어, 양자 호변이성체 (또한 프로토트로픽 (prototropic) 호변이성체로 공지됨)는 케토-에놀 및 이민-엔아민 이성체화와 같은 양자의 이동을 통한 상호전환을 포함한다. 원자가 이성체는 결합 전자 중의 일부의 개편에 의한 상호전환을 포함한다.
용어 "이성체"에는 특히 하나 또는 그 이상의 동위원소 치환이 있는 화합물이 포함된다는 것을 유의하여야 한다. 예를 들어, H는 1H, 2H (D), 및 3H (T)를 포함한 어떤 동위원소 형태라도 될 수 있으며; C는 12C, 13C, 및 14C를 포함한 어떤 동위원소 형태라도 될 수 있고; O는 16O 및 18O을 포함한 어떤 동위원소 형태라도 될 수 있는 등이다.
본 발명의 화합물 내에 통합될 수 있는 동위원소의 예로는 2H (중수소, D), 3H (삼중수소), 11C, 13C, 14C, 15N, 18F, 31P, 32P, 35S, 36Cl, 및 125I와 같은 (단 이들로 제한되지 않는다) 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 불소 및 염소의 동위원소가 포함된다. 본 발명의 다양한 동위원소 표지된 화합물은 예를 들어, 3H, 13C, 및 14C와 같은 방사성 동위원소가 통합된 것이다. 이러한 동위원소 표지된 화합물은 약물 또는 기질 조직 분포시험을 포함한 양전자 방출 단층촬영 (PET) 또는 단일-양자 방출 컴퓨터 촬영 (SPECT)과 같은 대사 연구, 반응속도 연구, 검출 또는 영상화 기술에서, 또는 환자의 방사성 치료에서 유용할 수 있다. 본 발명의 중수소 표지되거나 치환된 치료학적 화합물은 분포, 대사 및 배설 (ADME)에 관한 개선된 DMPK (약물 대사 및 약력학) 특성을 가질 수 있다. 중수소와 같은 더 중질의 동위원소에 의한 치환은 더 큰 대사 안정성, 예를 들어, 증가된 생체내 반감기 또는 감소된 투약량 필요조건으로 인한 특정의 치료학적 이점을 제공할 수 있다. 18F 표지된 화합물은 PET 또는 SPECT 연구에 유용할 수 있다. 본 발명의 동위원소 표지된 화합물 및 그의 프로드럭은 일반적으로 반응식에, 또는 비-동위원소 표지된 시약을 쉽게 이용할 수 있는 동위원소 표지된 시약으로 치환시켜 이하에 기술된 실시예 및 제조예에 기술된 절차를 수행함으로써 제조될 수 있다. 또한, 더 중질의 동위원소, 특히 중수소 (즉, 2H 또는 D)에 의한 치환은 더 큰 대사 안정성, 예를 들어, 증가된 생체내 반감기 또는 감소된 투약량 필요조건 또는 치료지수의 개선으로 인한 특정의 치료학적 이점을 제공할 수 있다. 이러한 관계에서 중수소는 치환체로 간주되는 것으로 이해된다. 이러한 더 중질의 동위원소, 특히 중수소의 농도는 동위원소 부화계수 (isotopic enrichment factor)에 의해서 정의될 수 있다. 본 발명의 화합물에서, 특별한 동위원소로 구체적으로 지정되지 않은 어떤 원자는 그 원자의 모든 안정한 동위원소를 나타내는 것을 의미한다.
다른 식으로 명시되지 않는 한, 특별한 화합물에 대한 언급은 (전체적으로 또는 부분적으로) 라세미 및 그 밖의 다른 이들의 혼합물을 포함한 이러한 이성체 형태 모두를 포함한다. 이러한 이성체 형태의 제조 (예를 들어, 비대칭 합성) 및 분리 (예를 들어, 분별 결정화 및 크로마토그래피 방법)를 위한 방법은 본 기술분야에서 공지되어 있거나, 본 명세서에 교시된 방법 또는 공지된 방법을 공지된 방식으로 변경함으로써 쉽게 수득된다.
생물학적 활성
시험관내 세포 증식시험
일반적으로, 항체-약물 컨주게이트 (ADC)의 세포독성 또는 세포증식 억제활성은 수용체 단백질, 예를 들어, HER2를 갖는 포유동물 세포를 세포 배양 배지 내의 ADC의 항체에 노출시키고; 세포를 약 6 시간 내지 약 5일의 기간 동안 배양하고; 세포 생존도를 측정함으로써 측정된다. 세포-기반 시험관내 시험을 사용하여 본 발명의 ADC의 생존도 (증식), 세포독성, 및 세포소멸 (카스파제 활성화)의 유도를 측정한다.
항체-약물 컨주게이트의 시험관내 효력은 세포 증식시험에 의해서 측정될 수 있다. 셀타이터-글로 (CellTiter-Glo®) 발광 세포 생존도 시험은 콜레오프테라 (Coleoptera) 루시퍼라제의 재조합체 발현을 기초로 하는 상업적으로 이용할 수 있는 (Promega Corp., Madison, WI) 균질한 시험방법이다 (미국 특허 제 5583024; 5674713 및 5700670 호). 이 세포 증식시험은 대사적으로 활성인 세포의 지표인 존재하는 ATP의 정량화에 근거한 배양물 내의 생존 세포의 수를 결정한다 [Crouch et al (1993) J. Immunol . Meth . 160:81-88; US 6602677]. 셀타이터-글로 (CellTiter-Glo®) 시험은 자동화된 초고속 스크리닝 (HTS)에 따라서 96 웰 포맷 (format)으로 수행된다 [Cree et al (1995) AntiCancer Drugs 6:398-404]. 균질한 시험절차는 단일 시약 (CellTiter-Glo® 시약)을 혈청-보충된 배지에서 배양된 세포에 직접 첨가하는 것을 포함한다. 세포 세척, 배지의 제거 및 다수의 피펫팅 (pipetting) 단계는 필요하지 않다. 이 시스템은 시약을 첨가하고 혼합시킨 후 10 분 이내에 384-웰 포맷에서 겨우 15 세포/웰을 검출한다. 세포는 ADC에 의해서 연속적으로 처리할 수 있거나, 이들은 처리하고 ADC로부터 분리시킬 수 있다. 일반적으로, 간단히, 즉 3 시간 동안 처리된 세포는 연속적으로 처리된 세포와 동일한 효력 효과를 나타내었다.
균질한 "첨가-혼합-측정 (add-mix-measure)" 포맷은 세포 용해 및 존재하는 ATP의 양에 비례하는 발광 시그날의 생성을 제공한다. ATP의 양은 배양물 내에 존재하는 세포의 수에 정비례한다. 셀타이터-글로 (CellTiter-Glo®) 시험은 사용된 세포 타입 및 배지에 따라 일반적으로 5 시간보다 더 큰 반감기를 갖는 루시퍼라제 반응에 의해서 생산된 "글로-타입 (glow-type)" 발광 시그날을 생성시킨다. 생존 세포는 상대적 발광 유니트 (relative luminescence units; RLU)에 반영된다. 기질인 비틀 (Beetle) 루시페린은 재조합체 개똥벌레 루시퍼라제에 의해서 ATP의 AMP로의 동시 전환 및 양자의 생성과 함께 산화적으로 탈카복실화된다.
생체내 효능
본 발명의 항체-약물 컨주게이트 (ADC)의 생체내 효능은 마우스에서의 종양 이종이식 시험에 의해서 측정될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 안티-HER2 ADC의 생체내 효능은 고발현 HER2 유전자이식 외식편 마우스 모델에 의해서 측정될 수 있다. 동종이식편은 헤르셉틴 (HERCEPTIN®) 치료법에 대해서 반응하지 않거나 열등하게 반응하는 Fo5 mmtv 유전자이식 마우스로부터 증식된다. 대상체는 특정의 용량 수준 (㎎/㎏) 및 PBD 약물 노출 (㎍/㎡)로 ADC, 및 위약 완충액 대조군 (비히클)에 의해서 1 회 처리하고, 2 주일 또는 그 이상에 걸쳐서 모니터링하여 종양 배가, 로그 세포 사멸, 및 종양 위축까지의 시간을 측정하였다.
용도
본 발명의 컨주게이트를 사용하여 표적 위치에서 PBD 화합물을 제공할 수 있다.
표적 위치는 바람직하게는 증식성 세포 집단이다. 항체는 증식성 세포 집단에 존재하는 항원에 대한 항체이다.
한가지 실시양태에서, 항원은 증식성 세포 집단, 예를 들어, 종양 세포 집단에 존재하는 항원의 양에 비해 비-증식성 세포 집단에서는 부재하거나 감소된 수준으로 존재한다.
표적 위치에서 링커는 화학식 B 또는 C의 화합물을 방출하도록 분해될 수 있다. 따라서, 컨주게이트는 표적 위치에서 화학식 B 또는 C의 화합물을 선택적으로 제공하기 위해서 사용될 수 있다.
링커는 표적 위치에 존재하는 효소에 의해서 분해될 수 있다.
표적 위치는 시험관내, 생체내 또는 생체외일 수 있다.
본 발명의 항체-약물 컨주게이트 (ADC) 화합물은 항암 활성에 대한 유용성을 갖는 것이 포함된다. 특히, 화합물은 PBD 약물 부분, 즉 독소에 컨주게이트된, 즉 링커에 의해서 공유적으로 부착된 항체를 포함한다. 약물이 항체에 컨주게이트되지 않은 경우에, PBD 약물은 세포독성 효과를 갖는다. 따라서, PBD 약물 부분의 생물학적 활성은 항체에 대한 컨주게이션에 의해서 변조된다. 본 발명의 항체-약물 컨주게이트 (ADC)는 유효량의 세포독성제를 종양 조직에 선택적으로 송달함으로써 더 큰 선택성, 즉 더 작은 유효량이 달성될 수 있다.
따라서, 한가지 관점에서 본 발명은 치료에 사용하기 위한, 본 발명에 기술된 바와 같은 컨주게이트 화합물을 제공한다.
추가의 관점에서는 또한, 증식성 질환의 치료에서 사용하기 위한, 본 발명에 기술된 바와 같은 컨주게이트 화합물이 제공된다. 본 발명의 두 번째 관점은 증식성 질환을 치료하기 위한 의약의 제조에 있어서의 컨주게이트 화합물의 용도를 제공한다.
본 기술분야에서 통상적으로 숙련된 전문가는 후보 컨주게이트가 어떤 특별한 세포 타입에 대한 증식성 상태를 치료하는지 여부에 대해서 쉽게 결정할 수 있다. 예를 들어, 특별한 화합물에 의해서 제공되는 활성을 평가하기 위해서 편리하게 사용될 수 있는 시험방법은 이하의 실시예에 기술된다.
용어 "증식성 질환"은 시험관내이든 생체내이든, 신생물성 또는 과형성성 성장과 같은 바람직하지 않은 과도하거나 비정상적인 세포의 원치않거나 제어되지 않은 세포 증식에 관한 것이다.
증식성 상태의 예로는 신생물 및 종양 (예를 들어, 조직구종, 신경교종, 성상세포종, 골종), 암 (예를 들어, 폐암, 소세포 폐암, 위장암, 대장암, 결장암, 유방암, 난소암, 전립선암, 고환암, 간암, 신장암, 방광암, 췌장암, 뇌암, 육종, 골육종, 카포시 (Kaposi) 육종, 흑색종), 백혈병, 건선, 골질환, 섬유증식성 장애 (예를 들어, 결합조직의) 및 아테롬성 경화증을 포함한 (단, 이들로 제한되지 않는다) 양성, 전-악성 및 악성 세포 증식이 포함되나 이들로 제한되지 않는다. 특별히 관심이 있는 암에는 백혈병 및 난소암이 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
폐, 위장 (예를 들어, 대장, 결장을 포함), 유방 (유선), 난소, 전립선, 간 (간성), 신장 (신성), 방광, 췌장, 뇌 및 피부를 포함한 (단, 이들로 제한되지 않는다) 어떤 타입의 세포라도 치료될 수 있다.
한가지 실시양태에서, 치료는 췌장암의 치료이다.
한가지 실시양태에서, 치료는 세포의 표면 상에 αvβ6 인테그린을 갖는 종양의 치료이다.
본 발명의 항체-약물 컨주게이트 (ADC)는 예를 들어, 종양 항원의 과발현을 특징으로 하는 다양한 질환 또는 장애를 치료하기 위해서 사용될 수 있는 것으로 생각된다. 예시적인 상태 또는 과증식성 장애에는 양성 또는 악성 종양; 백혈병, 혈액학적 및 림프성 악성 종양이 포함된다. 그 밖의 다른 것에는 뉴론성, 신경교성, 성상세포성, 시상하부성, 선성, 대식세포성, 상피성, 기질성, 분할강성, 염증성, 혈관형성성, 및 자가면역을 포함한 면역학적 장애가 포함된다.
일반적으로, 치료될 질환 또는 장애는 암과 같은 과증식성 질환이다. 본 발명에서 치료될 암의 예로는 암종, 림프종, 아세포종, 육종 및 백혈병 또는 림프성 악성종양이 포함되나, 이들로 제한되지 않는다. 이러한 암의 더욱 특별한 예로는 편평세포암 (예를 들어, 상피 편평세포암), 소세포 폐암, 비-소세포 폐암, 폐의 선암, 및 폐의 편평세포 암종을 포함하는 폐암, 복막의 암, 간세포암, 위장암을 포함한 위 또는 위부의 암, 췌장암, 교아종, 경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간종양, 유방암, 결장암, 직장암, 결장직장암, 내피 또는 자궁 암종, 타액선 암종, 신장 또는 신성 암, 전립선암, 외음암, 갑상선암, 간암종, 항문함종, 음경암종뿐만 아니라 두경부암이 포함된다.
치료에 ADC 화합물이 사용될 수 있는 자가면역 질환에는 류마티스성 장애 (예를 들어, 류마티스성 관절염, 쇼그렌 (Sjogren) 증후군, 경피증, SLE 및 루푸스 신염과 같은 루푸스, 다발성근염/피부근염, 한랭글로불린혈증, 항-인지질 항체 증후군, 및 건선성 관절염), 골관절염, 자가면역 위장 및 간 장애 (예를 들어, 염증성 장 질환 (예를 들어, 궤양성 대장염 및 크론병), 자가면역 위염 및 악성 빈혈, 자가면역 간염, 원발성 담즙성 경화증, 원발성 경화성 담관염, 및 셀리악병), 맥관염 (예를 들어, 처그-스트라우스 (Churg-Strauss) 맥관염, 베게너 (Wegener) 육아종증 및 다발동맥염을 포함한 ANCA-관련된 맥관염),　자가면역 신경학적 장애 (예를 들어, 다발성 경화증, 안진전-근간대 증후군, 중증 근무력증, 신경성 척수염, 파킨슨병, 알츠하이머병, 및 자가면역 다발신경병증), 신장 장애 (예를 들어, 사구체신염, 굿파스춰 (Goodpasture) 증후군, ? 버거 (Berger)병), 자가면역 피부과적 장애 (예를 들어, 건선, 담마진, 두드러기, 심상성 천포창, 수포성 유천포창, 및 피부 홍반성 루푸스), 혈액학적 장애 (예를 들어, 혈소판감소성 자반병, 혈전성 혈소판감소성 자반병, 수혈-후 자반병, 및 가자면역 용혈성 빈혈), 아테롬성 경화증, 포도막염, 자가면역 청각 질환 (예를 들어, 내이 질환 및 청력 상실), 베체트 (Behcet)병, 레이노드 (Raynaud) 증후군, 기관 이식, 및 가자면역 내분비 장애 (예를 들어, 인슐린-의존성 진성 당뇨병 (IDDM)과 같은 당뇨병-관련 자가면역 질환, 애디슨 (Addison)병, 및 자가면역 갑상선 질환 (예를 들어, 그레이브스 (Graves)병 및 갑상선염))이 포함된다. 더욱 바람직한 이러한 질환에는 예를 들어, 류마티스성 관절염, 궤양성 대장염, ANCA-관련된 맥관염, 루푸스, 다발성 경화증, 쇼그렌 증후군, 그레이브스병, IDDM, 악성 빈혈, 갑상선염, 및 사구체신염이 포함된다.
치료의 방법
본 발명의 컨주게이트는 치료방법에서 사용될 수 있다. 또한, 치료가 필요한 대상체에게 본 발명의 컨주게이트 화합물의 치료학적 유효량을 투여하는 것을 포함하는 치료방법이 제공된다. 용어 "치료학적 유효량"은 환자에게 효과를 나타내는데 충분한 양이다. 이러한 효과는 적어도, 적어도 하나의 증상의 개선일 수 있다. 투여되는 실제량, 및 투여의 속도 및 경과는 치료되는 것의 성질 및 중증도에 따라 달라질 것이다. 치료의 처방, 예를 들어, 투약량에 대한 결정은 일반 개업의 및 그 밖의 다른 의사의 책임 하에 있다.
본 발명의 화합물은 단독으로 또는 다른 치료와 함께, 치료될 상태에 따라 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 치료 및 치료법의 예로는 화학요법 (예를 들어, 화학요법제와 같은 약물을 포함하는 활성 약제의 투여); 수술; 및 방사선 요법이 포함되나 이들로 제한되지 않는다.
"화학요법제"는 작용의 기전과는 관계가 없이 암의 치료에 유용한 화학적 화합물이다. 화학요법제의 클래스에는 알킬화제, 항대사산물, 스핀들 독 (spindle poison) 식물 알칼로이드, 세포독성/항종양 항생제, 토포이소머라제 억제제, 항체, 감광제, 및 키나제 억제제가 포함되나 이들로 제한되지 않는다. 화학요법제에는 "표적화 요법" 및 통상적인 화학요법에서 사용되는 화합물이 포함된다.
화학요법제의 예로는 다음이 포함된다: 에를로티닙 (erlotinib) (타르세바 (TARCEVA®), Genentech/OSI Pharm.), 도세탁셀 (탁소테레 (TAXOTERE®), Sanofi-Aventis), 5-FU (플루오로우라실, 5-플루오로우라실, CAS No. 51-21-8), 젬시타빈 (젬자르 (GEMZAR®), Lilly), PD-0325901 (CAS No. 391210-10-9, Pfizer), 시스플라틴 (시스-디아민, 디클로로플라티늄(II), CAS No. 15663-27-1), 카보플라틴 (CAS No. 41575-94-4), 파클리탁셀 (탁솔 (TAXOL®), Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.), 트라스투주맙 (trastuzumab) (헤르셉틴 (HERCEPTIN®), Genentech), 테모졸로미드 (4-메틸-5-옥소-2,3,4,6,8-펜트아자비사이클로[4.3.0]노나-2,7,9-트리엔-9-카복사미드, CAS No. 85622-93-1, 테모다르 (TEMODAR®), 테모달 (TEMODAL®), Schering Plough), 타목시펜 ((Z)-2-[4-(1,2-디페닐부트-1-에닐)페녹시]-N,N-디메틸에탄아민, 놀바덱스 (NOLVADEX®), 이스투발 (ISTUBAL®), 발로덱스 (VALODEX®)), 및 독소루비신 (아드리아마이신 (ADRIAMYCIN®)), Akti-1/2, HPPD, 및 라파마이신.
화학요법제의 추가의 예로는 다음이 포함된다: 옥살리플라틴 (엘록사틴 (ELOXATIN®), Sanofi), 보르테조밉 (bortezomib) (벨케이드 (VELCADE®), Millennium Pharm.), 수텐트 (수니티닙 (SUNITINIB®), SU11248, Pfizer), 레트로졸 (페마라 (FEMARA®), Novartis), 이마티닙 메실레이트 (글리벡 (GLEEVEC®), Novartis), XL-518 (Mek 억제제, 엑셀릭시스 (Exelixis), WO 2007/044515), ARRY-886 (Mek 억제제, AZD6244, Array BioPharma, Astra Zeneca), SF-1126 (PI3K 억제제, Semafore Pharmaceuticals), BEZ-235 (PI3K 억제제, Novartis), XL-147 (PI3K 억제제, Exelixis), PTK787/ZK 222584 (Novartis), 풀베스트란트 (파슬로덱스 (FASLODEX®), AstraZeneca), 류코보린 (폴린산), 라파마이신 (시롤리무스, 라파뮨 (RAPAMUNE®), Wyeth), 라파티닙 (타이커브 (TYKERB®), GSK572016, Glaxo Smith Kline), 로나파르닙 (사라사르 (SARASAR®), SCH 66336, Schering Plough), 소라페닙 (넥사바르 (NEXAVAR®), BAY43-9006, Bayer Labs), 제피티닙 (이레사 (IRESSA®), AstraZeneca), 이리노테칸 (캄프토사르 (CAMPTOSAR®), CPT-11, Pfizer), 티피파르닙 (자르네스트라 (ZARNESTRA™), Johnson & Johnson), 아브락산 (ABRAXANE™) (무-크레모포 (Cremophor)), 파클리탁셀의 알부민-조작된 나노입자 제제 (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Il), 반데타닙 (rINN, ZD6474, 작티마 (ZACTIMA®), AstraZeneca), 클로람부실, AG1478, AG1571 (SU 5271; Sugen), 템시롤리무스 (토리셀 (TORISEL®), Wyeth), 파조파닙 (GlaxoSmithKline), 칸포스파미드 (텐사이타 (TELCYTA®), Telik), 티오테파 및 사이클로포스파미드 (사이톡산 (CYTOXAN®), 네오사르 (NEOSAR®)); 부설판, 임프로설판 및 피포설판과 같은 알킬 설포네이트; 벤조도파, 카보쿠온, 메트유레도파 및 유레도파와 같은 아지리딘; 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에틸렌티오포스포르아미드 및 트리메틸로멜라민을 포함한 에틸렌이민 및 메틸라멜라민; 아세토게닌 (특히 불라타신 및 불라타시논); 캄프토테신 (합성 유사체 토포테칸을 포함); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065 (그의 아도젤레신, 카르젤레신 및 비젤레신 합성 유사체를 포함); 크립토피신 (특히 크립토피신 1 및 크립토피신 8); 돌라스타틴; 듀오카르마이신 (합성 유사체, KW-2189 및 CB1-TM1을 포함); 엘류테로빈; 판크래티스타틴; 사르코딕티인; 스폰지스타틴; 클로람부실, 클로르나파진, 클로로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥사이드 하이드로클로라이드, 멜파란, 노벰비친, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스타드와 같은 질소 머스타드; 카무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 및 라니무스틴과 같은 니트로소우레아; 항생제, 예를 들어, 엔디인 항생제 (예를 들어, 칼리케아미신, 칼리케아미신 감마1I, 칼리케아미신 오메가I1 [Angew Chem . Intl . Ed . Engl. (1994) 33:183-186]; 다이네미신, 다이네미신 A; 클로드로네이트와 같은 비포스포네이트; 에스페라미신뿐만 아니라 네오카르지노스타틴 크로모포어 및 관련된 크로모프로테인 엔디인 항생제 크로모포어), 아클라시노마이신, 액티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카르미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아자-5-옥소-L-노르류신, 모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신, 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 네모루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신 C와 같은 미토마이신, 마이코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포르피로마이신, 퓨로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 유베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실 (5-FU)과 같은 항-대사산물; 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트와 같은 엽산 유사체; 플루다라빈, 6-머캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌과 같은 퓨린 유사체; 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자유리딘, 카르모푸어, 사이타라빈, 디데옥시유리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록스유리딘과 같은 피리미딘 유사체; 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤과 같은 안드로겐; 아미노글루테트이미드, 미토테인, 트릴로스테인과 같은 항-아드레날 (anti-adrenals); 프롤린산과 같은 엽산 보충제; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 에닐루라실; 암사크린; 베스트라부실; 비스안트렌; 에다트렉세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포르니틴; 엘립티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 갈륨 니트레이트; 하이드록시우레아; 렌티난; 로니다이닌; 메이탄신 및 안사미토신과 같은 메이탄시노이드; 미토구아존; 미톡산트론; 모피단몰; 니트라에린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로속산트론; 포도필린산; 2-에틸하이드라지드; 프로카르바진; PSK® 폴라사카라이드 컴플렉스 (JHS Natural Products, Eugene, OR); 라족산; 리족신; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센 (특히 T-2 독소, 베라큐린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 우레탄; 빈데신; 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미톨락톨; 피포브로만; 가사이토신; 아라비노사이드 ("Ara-C"); 사이클로포스파미드; 티오테파; 6-티오구아닌; 머캅토퓨린; 메토트렉세이트; 시스플라틴 및 카보플라틴과 같은 백금 유사체; 빈블라스틴; 에토포시드 (VP-16); 이포스파미드; 미톡산트론; 빈크리스틴; 비노렐빈 (나벨빈 (NAVELBINE®)); 노반트론; 테니포시드; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 카페시타빈 (젤로다 (XELODA®), Roche); 이반드로네이트; CPT-11; 토포이소머라제 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴 (DMFO); 레티노산과 같은 레티노이드; 및 상기한 것 중의 어떤 것의 약제학적으로 허용되는 염, 산 및 유도체.
또한 "화학요법제"의 정의에는 다음이 포함된다: (i) 예를 들어, 타목시펜 (놀바덱스 (NOLVADEX®)를 포함; 타목시펜 시트레이트), 랄록시펜, 드롤록시펜, 4-하이드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤, 및 파레스톤 (FARESTON®) (토레미핀 시트레이트)을 포함하는, 항-에스트로겐 및 선택적 에스트로겐 수용체 변조물질 (SERMs)과 같이 종양에 대한 호르몬 작용을 조절하거나 억제하는 작용을 하는 항호르몬제; (ii) 예를 들어, 4(5)-이미다졸, 아미노글루테트이미드, 메가세 (MEGASE®) (메게스트롤 아세테이트), 아로마신 (AROMASIN®) (엑세메스탄; Pfizer), 포르메스타니, 파드로졸, 리비소르 (RIVISOR®) (보로졸), 페마라 (FEMARA®) (레트로졸; Novartis), 및 아리미덱스 (ARIMIDEX®) (아나스트로졸; AstraZeneca)와 같은, 부신에서 에스트로겐 생산을 조절하는 효소 아로마타제를 억제하는 아로마타제 억제제; (iii) 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 류프롤리드 및 고세렐린뿐만 아니라 트록사시타빈 (1,3-디옥솔란 뉴클레오사이드 시토신 유사체)과 같은 항-안드로겐; (iv) MEK 억제제 (WO 2007/044515)와 같은 단백질 키나제 억제제; (v) 지질 키나제 억제제; (vi) 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 특히 비정상적인 세포 증식에 연루된 시그날링 경로에서 유전자의 발현을 억제하는 것, 예를 들어, 오블리머센 (제나센스 (GENASENSE®), Genta Inc.)와 같은 PKC-알파, Raf 및 H-Ras; (vii) VEGF 발현 억제제 (예를 들어, 안지오자임 (ANGIOZYME®)) 및 HER2 발현 억제제와 같은 리보자임; (viii) 유전자 요법 백신, 예를 들어, 알로벡틴 (ALLOVECTIN®), 류벡틴 (LEUVECTIN®) 및 백시드 (VAXID®); 프로류킨 (PROLEUKIN®) rIL-2과 같은 백신; 류르토테칸 (LURTOTECAN®); 아바렐릭스 (ABARELIX®) rmRH와 같은 토포이소머라제 1 억제제; (ix) 베바시주맙 (아바스틴 (AVASTIN®), Genentech)과 같은 항-혈관형성제; 및 상기한 것 중의 어떤 것의 약제학적으로 허용되는 염, 산 및 유도체.
"화학요법제"의 정의에는 또한 알렘투주맙 (캄패스 (Campath)), 베바시주맙 (아바스틴 (AVASTIN®), Genentech); 세툭시맙 (에르비툭스 (ERBITUX®), Imclone); 파니투무맙 (벡티빅스 (VECTIBIX®), A㎎en), 리툭시맙 (리툭산 (RITUXAN®), Genentech/Biogen Idec), 퍼투주맙 (옴니타그 (OMNITARG®), 2C4, Genentech), 트라스투주맙 (헤르셉틴 (HERCEPTIN®), Genentech), 토시투모맙 (벡사르 (Bexxar), Corixia), 및 항체 약물 컨주게이트, 젬투주맙 오조가미신 (마일로타그 (MYLOTARG®), Wyeth)과 같은 치료학적 항체가 포함된다.
본 발명의 컨주게이트와 함께 화학요법제로서 치료학적 잠재력을 갖는 인간화된 모노클로날 항체에는 다음이 포함된다: 알렘투주맙, 아폴리주맙, 아셀리주맙, 아틀리주맙, 바피뉴주맙, 베바시주맙, 비바투주맙 메르탄신, 칸투주맙 메르탄신, 세델리주맙, 세르톨리주맙 페골, 시드푸시투주맙, 시드투주맙, 다클리주맙, 에쿨리주맙, 에팔리주맙, 에프라투주맙, 에를리주맙, 펠비주맙, 폰톨리주맙, 젬투주맙 오조가미신, 이노투주맙 오조가미신, 이필리무맙, 라베투주맙, 린투주맙, 마투주맙, 메폴리주맙, 모타비주맙, 모토비주맙, 나탈리주맙, 니모투주맙, 놀로비주맙, 누마비주맙, 오크렐리주맙, 오말리주맙, 팔리비주맙, 파스콜리주맙, 펙푸시투주맙, 펙투주맙, 퍼투주맙, 펙셀리주맙, 랄리비주맙, 라니비주맙, 레슬리비주맙, 레슬리주맙, 레시비주맙, 로벨리주맙, 루플리주맙, 시브로투주맙, 시플리주맙, 손투주맙, 타카투주맙 테트락세탄, 타도시주맙, 탈리주맙, 테피바주맙, 토실리주맙, 토랄리주맙, 트라스투주맙, 투코투주맙 셀모류킨, 투쿠시투주맙, 우마비주맙, 유르톡사주맙, 및 비실리주맙.
본 발명에 따르며 본 발명에 따라서 사용하기 위한 약제학적 조성물은 활성 성분, 즉 컨주게이트 화합물 이외에 본 기술분야에서 숙련된 전문가에게 잘 알려진 약제학적으로 허용되는 부형제, 담체, 완충제, 안정화제 또는 그 밖의 다른 물질을 포함할 수 있다. 이러한 물질은 비-독성이어야 하며, 활성 성분의 효능을 저해하지 않아야 한다. 담체 또는 다른 물질의 정확한 성질은 경구적이거나 주사, 예를 들어, 피부, 피하, 또는 정맥내 주사에 의한 것일 수 있는 투여의 경로에 따라 좌우될 것이다.
경구 투여를 위한 약제학적 조성물은 정제, 캅셀제, 분말 또는 액체 형태일 수 있다. 정제는 고체 담체 또는 보조제를 포함할 수 있다. 액체 약제학적 조성물은 일반적으로 물, 석유, 동물성 또는 식물성 오일, 광유 또는 합성유와 같은 액체 담체를 포함한다. 생리식염수 용액, 덱스트로즈 또는 그 밖의 다른 사카라이드 용액 또는 에틸렌 글리콜 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜과 같은 글리콜이 포함될 수 있다. 캅셀제는 젤라틴과 같은 고체 담체를 포함할 수 있다.
정맥내, 피부 또는 피하 주사, 또는 질병 부위에서의 주사의 경우에, 활성 성분은 발열성 물질이 없고, 적합한 pH, 등장성 및 안정성을 갖는 비경구적으로 허용되는 수용액의 형태일 수 있다. 본 기술분야에서 숙련된 전문가는 예를 들어, 염화나트륨 주사, 링커 주사, 락테이트화 링거 주사와 같은 등장성 비히클을 사용하여 적합한 용액을 잘 제조할 수 있다. 보존제, 안정화제, 완충제, 항산화제 및/또는 다른 첨가제가 필요에 따라 포함될 수 있다.
제형
컨주게이트 화합물은 단독으로 사용될 (예를 들어, 투여될) 수 있지만, 이것은 종종 조성물 또는 제형으로 존재하는 것이 바람직하다.
한가지 실시양태에서, 조성물은 본 발명에 기술된 바와 같은 컨주게이트 화합물, 및 약제학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물 (예를 들어, 제형, 제제, 의약)이다.
한가지 실시양태에서, 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체, 희석제, 부형제, 보조제, 충진제, 완충제, 보존제, 항산화제, 윤활제, 안정화제, 가용화제, 계면활성제 (예를 들어, 습윤제), 차폐제, 착색제, 향미제, 및 감미제를 포함하는 (단, 이들로 제한되지 않는다) 본 기술분야에서 숙련된 전문가에게 잘 알려진 하나 또는 그 이상의 다른 약제학적으로 허용되는 성분과 함께 본 발명에 기술된 바와 같은 적어도 하나의 컨주게이트 화합물을 포함하는 약제학적 조성물이다.
한가지 실시양태에서, 조성물은 추가로 다른 활성 약제, 예를 들어, 다른 치료학적 또는 예방적 약제를 포함한다.
적합한 담체, 희석제, 부형제 등은 표준 약제학 텍스트에서 확인될 수 있다 [참조: 예를 들어, Handbook of Pharmaceutical Additives, 2nd Edition (eds. M. Ash and I. Ash), 2001 (Synapse Information Resources, Inc., Endicott, New York, USA), Remington's Pharmaceutical Sciences, 20th edition, pub. Lippincott, Williams & Wilkins, 2000; 및 Handbook of Pharmaceutical Excipients, 2nd edition, 1994].
본 발명의 또 다른 관점은 본 발명에서 정의된 바와 같은 적어도 하나의 [11C]-방사성 표지된 컨주게이트 또는 컨주게이트-유사 화합물을 본 기술분야에서 숙련된 전문가에게 잘 알려진 하나 또는 그 이상의 다른 약제학적으로 허용되는 성분, 예를 들어, 담체, 희석제, 부형제 등과 함께 혼합시키는 것을 포함하여 약제학적 조성물을 제조하는 방법에 관한 것이다. 분리된 유니트 (예를 들어, 정제 등)으로 제형화되는 경우에, 각각의 유니트는 예정된 양 (투약량)의 활성 화합물을 함유한다.
본 명세서에서 사용된 것으로서 용어 "약제학적으로 허용되는"은 정상적인 의학적 판단의 범위 내에서, 이상적인 이익-위험 비 (benefit/risk ratio)와 균형을 이루어 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 다른 문제 또는 합병증이 없이 문제가 되는 대상체 (예를 들어, 인간)의 조직과 접촉시켜 사용하는데 적합한 화합물, 성분, 물질, 조성물, 투약형 등에 관한 것이다. 각각의 담체, 희석제, 부형제 등도 또한 제형의 다른 성분들과 상화적이라는 개념에서 반드시 "허용되어야" 한다.
제형은 약제학의 기술분야에서 잘 알려진 어떤 방법에 의해서라도 제조될 수 있다. 이러한 방법은 활성 화합물을 하나 또는 그 이상의 보조 성분을 구성하는 담체와 회합하도록 유도하는 단계를 포함한다. 일반적으로, 제형은 활성 화합물을 담체 (예를 들어, 액체 담체, 미분된 고체 담체 등)와 균일하고 긴밀하게 회합하도록 한 다음에, 필요한 경우에 생성물을 성형함으로써 제조된다.
제형은 빠르거나 느린 방출; 즉시, 지연, 정기적 (timed) 또는 지속 방출; 또는 이들의 조합을 제공하도록 제조될 수 있다.
비경구 투여 (예를 들어, 주사에 의함)에 적합한 제형은 활성 화합물이 용해되거나, 현탁되거나, 또는 다른 식으로 제공된 (예를 들어, 리포좀 또는 다른 미립자 내에) 수성 또는 비수성이며, 등장성이고, 무-발열성 물질인 멸균 액체 (예를 들어, 용액, 현탁액)를 포함한다. 이러한 액체는 추가로 항산화제, 완충제, 보존제, 안정화제, 정균제, 현탁화제, 농조화제, 및 제형이 계획된 수용주의 혈액 (또는 다른 적절한 체액)과 등장성이 되도록 하는 용질과 같은 그 밖의 다른 약제학적으로 허용되는 성분을 함유할 수 있다. 부형제의 예로는 예를 들어, 물, 알콜, 폴리올, 글리세롤, 식물유 등이 포함된다. 이러한 제형에서 사용하기에 적합한 등장성 담체의 예로는 염화나트륨 주사, 링거 용액, 또는 락테이트화 링거 주사가 포함된다. 전형적으로, 액체 내의 활성 성분의 농도는 약 1 ng/㎖ 내지 약 10 ㎍/㎖, 예를 들어, 약 10　ng/㎖ 내지 약 1 ㎍/㎖이다. 제형은 단위-용량 또는 수회-용량형 밀봉 용기, 예를 들어, 앰플 및 바이알 내에 제공될 수 있으며, 사용하기 직전에 단지 멸균 액체 담체, 예를 들어, 주사용 물을 첨가하는 것만을 필요로 하는 동결-건조된 (동결건조) 조건에서 저장될 수 있다. 즉석 주사 용액 및 현탁액은 멸균 분말, 과립 및 정제로부터 제조될 수 있다.
투약량
컨주게이트 화합물, 및 컨주게이트 화합물을 포함하는 조성물의 적절한 투약량이 환자에 따라서 달라질 수 있다는 것은 본 기술분야에서 숙련된 전문가에 의해서 인식될 수 있을 것이다. 최적 투약량을 결정하는 것은 일반적으로, 치료학적 이익의 수준을 모든 위험 또는 유해한 부작용에 대해서 균형이 잡히게 하는 것을 포함한다. 선택된 투약량 수준은 개별적인 화합물의 활성, 투여의 경로, 투여의 시기, 화합물의 배설률, 치료의 지속기간, 조합물 내의 그 밖의 다른 약물, 화합물 및/또는 물질, 상태의 중증도, 및 환자의 종, 성별, 연령, 체중, 상태, 일반적인 건강 및 선형 병력을 포함하는 (단, 이들로 제한되지 않는다) 다양한 인자에 따라 좌우될 수 있다. 화합물의 양 및 투여의 경로는 궁극적으로 의사, 수의사 또는 임상의의 판단에 의할 수 있지만, 투약량은 일반적으로, 작용 부위에서 실질적으로 위험하거나 해로운 부작용을 야기함이 없이 바람직한 효과를 달성하는 국소 농도를 달성하도록 선택될 것이다.
투여는 치료의 과정 전체에 걸쳐서 단일 용량으로 연속적으로 또는 간헐적으로 (예를 들어, 적절한 간격으로 분할된 용량으로) 이루어질 수 있다. 가장 효과적인 투여의 수단 및 투약량을 결정하는 방법은 본 기술분야에서 숙련된 전문가에게 잘 알려져 있으며, 치료에 사용된 제형, 치료의 목적, 치료될 표적 세포(들), 및 치료될 대상체에 따라 달라질 것이다. 단일 또는 수회 투여는 치료하는 의사, 수의사 또는 임상의에 의해서 선택되는 용량 수준 및 패턴으로 수행될 수 있다.
일반적으로, 활성 화합물의 적합한 용량은 1일에 대상체의 체중 킬로그램당 약 100　ng 내지 약 25 ㎎ (더욱 전형적으로 약 1 ㎍ 내지 약 10 ㎎)의 범위이다. 활성 화합물이 염, 에스테르, 아미드, 프로드럭 등인 경우에, 투여되는 양은 모화합물을 기준으로 계산되며, 따라서 사용되는 실중량은 비례해서 증가한다.
한가지 실시양태에서, 활성 화합물은 다음의 투약 레지멘에 따라 인간 환자에게 투여된다: 약 100 ㎎, 1일 3 회.
한가지 실시양태에서, 활성 화합물은 다음의 투약 레지멘에 따라 인간 환자에게 투여된다: 약 150 ㎎, 1일 2 회.
한가지 실시양태에서, 활성 화합물은 다음의 투약 레지멘에 따라 인간 환자에게 투여된다: 약 200 ㎎, 1일 2 회.
그러나, 한가지 실시양태에서 컨주게이트 화합물은 다음의 투약 레지멘에 따라 인간 환자에게 투여된다: 약 50 또는 약 75 ㎎, 1일 3 또는 4 회.
한가지 실시양태에서, 컨주게이트 화합물은 다음의 투약 레지멘에 따라 인간 환자에게 투여된다: 약 100 또는 약 125 ㎎, 1일 2 회.
상술한 투약량은 컨주게이트 (PBD 부분 및 항체에 대한 링커를 포함)에 대해서, 또는 제공된 PBD 화합물의 유효량, 예를 들어, 링커의 분해 후에 방출될 수 있는 화합물의 양에 대해서 적용할 수 있다.
질환의 예방 또는 치료를 위해서, 본 발명의 ADC의 적절한 투약량은 상기 정의된 바와 같은 치료될 질환의 타입, 질환의 중증도 및 과정, 분자가 예방 또는 치료 목적으로 투여되는지 여부, 선행 치료법, 항체에 대한 환자의 임상력 및 반응, 및 주치의의 판단에 따라 좌우될 것이다. 분자는 적합하게는 한꺼번에 또는 일련의 치료에 걸쳐서 환자에게 투여된다. 질환의 타입 및 중증도에 따라서 약 1 ㎍/㎏ 내지 15 ㎎/㎏ (예를 들어, 0.1-20 ㎎/㎏)의 분자가 예를 들어, 하나 또는 그 이상의 별도의 투여에 의해서든, 또는 연속 주입에 의해서든, 환자에게 투여하기 위한 일차 후보 투약량이다. 전형적인 1일 투약량은 상기 언급된 인자들에 따라서 약 1 ㎍/㎏ 내지 100 ㎎/㎏ 또는 그 이상의 범위일 것이다. 환자에게 투여될 ADC의 예시적인 투약량은 환자의 체중 ㎏당 약 0.1 내지 약 10 ㎎/kg의 범위이다. 며칠 또는 그 이상에 걸친 반복 투여의 경우에, 상태에 따라 치료는 질병 증상의 원하는 억제가 일어날 때까지 지속된다. 예시적인 투약 레지멘은 약 4 ㎎/㎏의 초기 부하용량에 이어서 ADC를 1 주일, 2 주일 또는 3 주일마다 추가의 용량으로 투여하는 과정을 포함한다. 그 밖의 다른 투약 레지멘도 유용할 수 있다. 이러한 치료법의 진행은 통상적인 기술 및 시험방법에 의해서 쉽게 모니터링된다.
치료
상태를 치료하는 것과 관련하여 본 명세서에서 사용된 용어 "치료"는 일반적으로 인간 또는 동물 (예를 들어, 수의과 분야에서)의 치료 및 치료법에 관한 것이며, 여기에서 일부의 바람직한 치료학적 효과, 예를 들어, 상태의 진행의 억제가 달성되고, 진행 속도의 감소, 진행 속도의 중단, 상태의 회귀, 상태의 개선, 및 상태의 치유를 포함한다. 예방적 수단 (즉, 예방, 방지)으로서의 치료가 또한 포함된다.
본 명세서에서 사용된 것으로서 용어 "치료학적 유효량"은 바람직한 치료 레지멘에 따라 투여되는 경우에 일부의 바람직한 치료학적 효과를 제공하는데 효과적이며, 이상적인 이익/위험 비에 적합한 활성 화합물, 또는 활성 화합물을 포함하는 물질, 조성물 또는 투약형의 양에 관한 것이다.
마찬가지로, 본 명세서에서 사용된 것으로서 용어 "예방적 유효량"은 바람직한 치료 레지멘에 따라 투여되는 경우에 일부의 바람직한 예방 효과를 제공하는데 효과적이며, 이상적인 이익/위험 비에 적합한 활성 화합물, 또는 활성 화합물을 포함하는 물질, 조성물 또는 투약형의 양에 관한 것이다.
항체 약물 컨주게이트의 제조
항체 약물 컨주게이트는 다음을 포함하여, 본 기술분야에서 숙련된 전문가에게 공지된 유기 화학, 반응, 조건 및 시약을 사용하는 몇 개의 경로에 의해서 제조될 수 있다: (1) 공유 결합을 통해서 항체-링커 중간체 Ab-L를 형성시키기 위한 항체의 친핵성 그룹과 2가 링커 시약의 반응에 이어서 활성화된 약물 부분 시약과의 반응; 및 (2) 공유 결합을 통해서 약물-링커 시약 D-L을 형성시키기 위한 약물 부분 시약과 링커 시약의 반응에 이어서 항체의 친핵성 그룹과의 반응. 컨주게이션 방법 (1) 및 (2)는 본 발명의 항체-약물 컨주게이트를 제조하기 위한 다양한 항체 및 링커와 함께 사용될 수 있다.
항체 상의 친핵성 그룹에는 측쇄 티올 그룹, 예를 들어, 시스테인이 포함되나, 이들로 제한되지는 않는다. 티올 그룹은 친핵성이며, 본 발명의 경우와 같은 링커 부분 상의 친전자성 그룹들과의 공유결합을 형성하도록 반응할 수 있다. 특정의 항체는 환원가능한 쇄간 디설파이드, 즉 시스테인 브릿지를 갖는다. 항체는 DTT (클리랜드 (Cleland) 시약, 디티오트레이톨) 또는 TCEP [트리스(2-카복시에틸)포스핀 하이드로클로라이드; Getz et al (1999) Anal. Biochem. Vol 273:73-80; Soltec Ventures, Beverly, MA]와 같은 환원제로 처리함으로써 링커 시약과의 컨주게이션에 대해서 반응성으로 만들 수 있다. 따라서, 각각의 시스테인 디설파이드 브릿지는 이론적으로 2 개의 반응성 티올 친핵체를 형성할 것이다. 추가의 친핵성 그룹은 아민을 티올로 전환시키는 리신과 2-이미노티올란 (트라우트 (Traut) 시약)과의 반응을 통해서 항체 내에 도입될 수 있다.
대상체 /환자
대상체/환자는 동물, 포유동물, 태반 포유동물, 유대류 포유동물 (예를 들어, 캥거루, 웜뱃 (wombat)), 단공류 동물 (예를 들어, 오리너구리 (duckbilled platypus)), 설치류 (예를 들어, 기니아피그, 햄스터, 랫트, 마우스), 쥣과의 동물 (예를 들어, 마우스), 토끼목 포유동물 (예를 들어, 토끼), 조류 (예를 들어, 새), 개과의 동물 (예를 들어, 개), 고양이과 동물 (예를 들어, 고양이), 말류 (예를 들어, 말), 돼지류 (예를 들어, 돼지), 양류 (예를 들어, 양), 소류 (예를 들어, 소), 영장류, 유인원류 (예를 들어, 원숭이 또는 유인원), 원숭이 (예를 들어, 명주원숭이 (marmoset), 개코원숭이 (baboon)), 유인원류　(예를 들어, 고릴라, 침팬지, 오랑우탕, 긴팔원숭이 (gibbon)), 또는 인간일 수 있다.
더구나, 대상체/환자는 발육 중인 그의 모든 형태, 예를 들어, 태아일 수 있다. 한가지 바람직한 실시양태에서, 대상체/환자는 인간이다.
한가지 실시양태에서, 환자는 각각의 환자가 세포의 표면 상에 αvβ6 인테그린을 갖는 종양이 있는 집단이다.
합성
화학식 VIII의 다이머 중간체에 대한 한가지 가능한 합성 경로는 이하에 나타내었다:
Figure pct00042
Figure pct00043

상기 반응식에서, RL은
Figure pct00044
를 나타낸다.
일반적으로, 그들의 N10-C11 결합에 관해서 비대칭인 다이머는 화학식 IV의 비스-아미노 화합물을 분자의 대칭성을 파괴하기 위해서 1 당량의 상업적으로 이용할 수 있는 (또는 쉽게 제조되는) 클로로포르메이트 시약으로 처리함으로써 제조될 수 있다. 그 후, 나머지 유리 아민은 독립적으로 작용화되어 연결 그룹 전구체 (RL)을 도입시킬 수 있다. 또한, PBD B-환에 근접시키기 위한 추가의 작용 그룹 조작으로 보호 그룹을 제거하여 표적 분자를 제공한다.
화학식 IV의 화합물은 전형적으로, 적합하게 작용화된 C-환 단편 (I)을 화학식 II의 A-환 함유 다이머 코어 (core)에 커플링시킴으로써 제조된다. C-환 단편은 공지의 카바메이트 보호된 메틸 4-옥소프롤리네이트 빌딩 블럭으로부터 제조될 수 있다. 위티그 (Wittig) 또는 호너-에몬스 (Horner-Emmons) 조건 하에서의 올레핀화를 사용하여 엔도- 또는 엑소-불포화된 알켄을 제공할 수 있다. C-환 및 A-환 단편은 A-환 단편의 산 클로라이드 유도체를 사용하여 트리에틸아민의 존재 하에 표준 조건 하에서 커플링시켜 화학식 III의 분자를 제공할 수 있다. 대칭성은 또한 상이한 C-환을 도입시킴으로써 이 단계에서 파괴될 수 있다. 타입 III의 화합물은 엔도 또는 엑소 C-환 불포화에 영향을 미치지 않고 아세트산 또는 포름산 중의 아연으로 환원시켜 화학식 IV의 분자를 제공할 수 있다.
대신으로, 적합한 4-하이드록시 피롤리딘 빌딩 블럭은 화학식 II의 다이머 코어에 커플링될 수 있다. 하이드록실 그룹은 케톤으로 산화된 다음에 에놀 트리플레이트로 전환될 수 있다. 수주키 커플링 (Suzuki coupling)을 사용하여 프로 C2 치환체 (예를 들어, 아릴, 알케닐 등)를 도입시킬 수 있다. 그 후, 니트로 그룹을 아민으로 환원시킬 수 있으며, 하나의 아민은 보호되고, 다른 것은 링커 그룹을 보유하도록 유리 상태로 남긴다.
타입 VI의 비대칭적 카바메이트는 타입 IV의 비스-아민을 피리딘 도는 트리에틸아민의 존재 하에서 1 당량의 상업적으로 이용할 수 있는 (또는 쉽게 제조되는) 클로로포르메이트로 처리함으로써 제조될 수 있다. 클로로포르메이트는 프로-링커 그룹 (RL)에서 사용된 것과 직교하는 적절한 카바메이트 기본 질소 보호 그룹 (ProtN)을 제공하도록 선택될 수 있다. RL 카바메이트는 나머지 아미노 그룹을 이소시아네이트로 전환시키고, 이것을 RL 알콜로 퀀칭함으로써 도입될 수 있다. 대신으로, RL 알콜은 클로로포르메이트 또는 작용성 등가물 (플루오로포르메이트, p-니트로카보네이트, 펜타플루오로카보네이트 또는 하이드록시벤조트리아졸 카보네이트)로 전환될 수 있다. 마지막으로, 나머지 아미노 그룹은 반응성 p-니트로카바메이트, 펜타플루오로카바메이트 또는 하이드록시벤조트리아졸 카바메이트로 전환시킬 수 있으며, 이들은 RL 알콜로 치환되어 화학식 VI의 분자를 제공할 수 있다.
화학식 VII의 분자는 화학식 VI의 분자로부터 실릴 보호 그룹을 예를 들어, 수성 아세트산으로 제거함으로써 제조될 수 있다. 데스-마틴 (Dess-Martin) 퍼요오디난 (또는 대신으로 TPAP/NMO, PDC 또는 스웨른 (Swern) 조건 하)에 의한 산화는 폐환된 생성물을 제공한다.
화학식 V의 컨주게이트는 화학식 VII의 분자로부터 카바메이트 기본 질소 보호 그룹을 제거함으로써 제조될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 화학식 XVIII의 컨주게이트는 반응식 2에 나타낸 바와 같이 화합물 IX로부터 제조될 수 있다.
화합물 II
화학식 (II)의 화합물의 합성은 본 출원인의 선행 출원인 WO 2006/111759에 기술되어 있으며, 또한 문헌 [Gregson et al., J. Med . Chem . 2001, 44, 1161-1174]에 의해서도 기술되었다. 여기에 기술된 바와 같은 화합물 (II)의 제조는 구체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.
문헌 [Antonow, D. and Thurston, D.E., Chem. Rev. 2011 111 (4), 2815-2864]에서 검토된 것을 포함한 PBD 다이머를 합성하는 공지된 방법에 대해서도 또한 언급된다.
추가의 관련된 기술내용은 WO 2010/091150에서 찾을 수 있다. WO 2010/091150에 기술된 중간체 화합물은 또한 상술한 방법에서 사용될 수 있다.
예를 들어, 단락 [164]에 나타낸 다이머 화합물 (15)는 상기 반응식 I에서 화합물 (III)으로 사용될 수 있다. 이러한 적용 및 추가의 적용은 본 기술분야에서 숙련된 전문가에게 명백할 것이다.
실시예
일반적인 실험 방법
선광도 (optical rotation)는 ADP 220 편광계 (Bellingham Stanley Ltd.) 상에서 측정되었으며, 농도 (c)는 g/100 ㎖로 제공된다. 융점은 디지탈 융점 장치 (Electrothermal)를 사용하여 측정하였다. IR 스펙트럼은 퍼킨-엘머 스펙트럼 (Perkin-Elmer Spectrum) 1000 FT IR 분광계 상에 기록하였다. 1H 및 13C NMR 스펙트럼은 각각 400 및 100 MHz에서 브루커 어밴스 (Bruker Avance) NMR 분광계를 사용하여 300 K에서 획득하였다. 화학적 이동은 TMS (δ = 0.0 ppm)에 대비하여 보고하며, 시그날은 헤르츠 (Hz)로 제공된 커플링 상수와 함께 s (단일선), d (이중선), t (삼중선), dt (이중 삼중선), dd (이중선의 이중선), ddd (이중선의 이중 이중선) 또는 m (다중선)으로 지정된다. 질량 분광학 (MS) 데이터는 워터스 (Waters) 2996 PDA를 갖는 워터스 (Waters) 2695 HPLC에 커플링된 워터스 마이크로매스 (Waters Micromass) ZQ 기구를 사용하여 수집하였다. 사용된 워터스 마이크로매스 ZQ 파라메터는 다음과 같았다: 모세관 (kV), 3.38; 콘 (Cone) (V), 35; 추출기 (Extractor) (V), 3.0; 공급 온도 (℃), 100; 탈용매화 (Desolvation) 온도 (℃), 200; 콘 유속 (L/h), 50; 탈용매화 유속 (L/h), 250. 고-분할 (High-resolution) 질량 분광학 (HRMS) 데이터는 샘플을 기구 내로 도입시키기 위한 금속-코팅된 보로실리케이트 유리 팁 (glass tip)을 사용하여 포지티브 W-모드로 워터스 마이크로매스 QTOF 글로발 (Waters Micromass QTOF Global) 상에 기록하였다. 박층 크로마토그래피 (TLC)는 실리카겔 알루미늄 플레이트 (Merck 60, F254) 상에서 수행되었으며, 섬광 (flash) 크로마토그래피는 실리카겔 (Merck 60, 230-400 메쉬 ASTM)을 이용하였다. HOBt (NovaBiochem) 및 고체-지지된 시약 (Argonaut)을 제외하고, 모든 다른 화학물질 및 용매는 Sigma-Aldrich로부터 구입하였으며, 더 정제하지 않고 공급된 채로 사용하였다. 무수 용매는 적절한 건조제의 존재 하에 건조 질소 대기 하에서 증류함으로써 제조하였으며, 4Å 분자체 또는 나트륨 와이어 상에 저장하였다. 석유 에테르는 40-60℃에서 비등하는 분획을 나타낸다.
일반적인 LC/MS 조건: HPLC (Waters Alliance 2695)는 물 (A) (포름산 0.1%) 및 아세토니트릴 (B) (포름산 0.1%)은 이동상을 사용하여 주행시켰다. 구배: 초기 조성은 1.0 분에 걸쳐서 5% B, 다음에는 3 분 이내에 5% B에서 95% B. 조성은 0.5 분 동안 95% B에서 유지시켰으며, 그 다음에는 0.3 분 이내에 5% B로 복귀시켰다. 총 구배 주행시간은 5 분에 해당한다. 유속은 3.0 ㎖/분이며, 400 ㎕를 제로 사적 티피스 (zero dead volume tee piece)를 경유하여 분할시켜 이것을 질량 분광계 내로 통과시킨다. 파장 검출 범위: 220 내지 400 ㎚. 기능 타입 (Function type): 다이오드 어레이 (535 scans). 칼럼: 페노메넥스 (Phenomenex®) 오닉스 모놀리틱 (Onyx Monolithic) C18 50×4.60 ㎜
실시예 1
(a) ( S )-2-(메톡시카보닐)-4-메틸렌피롤리디늄 클로라이드 ( 3 )
Figure pct00045
(i) ( S )-1-tert-부틸 2-메틸 4-메틸렌피롤리딘-1,2-디카복실레이트 ( 2 )
탄산칼륨 (19.92 g, 14 mmol, 3 당량)을 DMF (270 ㎖) 중의 카복실산 (1) (10.92 g, 48 mmol, 1 당량)의 교반된 용액에 첨가하였다. 생성된 백색 현탁액을실온에서 30 분 동안 교반하고, 이 시점에 요오도메탄 (21.48 g, 9.5 ㎖, 151 mmol, 3.15　당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3일 동안 교반하도록 하였다. 감압 하에서 회전 증발에 의해 DMF를 제거하여 황색 잔류물을 수득하고, 이것을 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배시켰다. 유기층을 분리하고, 수성상을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 합하여 물, 염수로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시켰다. 감압 하에서 회전 증발에 의해 에틸 아세테이트를 제거하여 황색 오일로서 조생성물을 제공하였다. 조생성물을 섬광 크로마토그래피 [85% n-헥산/15% 에틸 아세테이트]에 의해서 정제하여 무색 오일로서 생성물을 수득하였다 [공지 화합물 F Manfre et al., J. Org. Chem. 1992, 57, 2060-2065].
(ii) ( S )-2-(메톡시카보닐)-4-메틸렌피롤리디늄 클로라이드 ( 3 )
디옥산 중의 4 M 염산의 용액 (63 ㎖, 254.4 mmol, 4.5 당량)을 실온에서 Boc 보호된 C-환 단편 (2) (13.67 g, 56.6　mmol, 1　당량)에 첨가하였다. CO2의 유리 및 Boc 그룹의 제거를 나타내는 발포 (effervescence)가 관찰되었다. 생성물은 흰색 고체로 침전하였으며, 추가의 디옥산을 첨가하여 교반을 용이하게 하였다. 반응 혼합물을 1 시간 동안 교반하도록 한 다음에 에테르로 희석하였다. 침전된 생성물을 진공 여과에 의해서 수거하고, 추가의 에테르로 세척하였다. 공기 건조시켜 원하는 생성물을 흰색 분말로 수득하였다 (9.42 g, 94%) [P Herdwijn et al., Canadian Journal of Chemistry. 1982, 60, 2903-7].
(b) tert -부틸 (5-((5-(5-아미노-4-(( S )-2-((( tert - 부틸디메틸실릴 ) 옥시 ) 메틸 )-4- 메틸렌피롤리딘 -1- 카보닐 )-2- 메톡시페녹시 ) 펜틸 ) 옥시 )-2-(( S )-2-((( tert -부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-4-메틸렌피롤리딘-1-카보닐)-4-메톡시페닐)카바메이트 ( 9 )
Figure pct00046
(i) ( S )-(4,4'-(펜탄-1,5-디일비스(옥시))비스(5-메톡시-2-니트로-4,1-페닐렌))비스(((S)-2-(메톡시카보닐)-4-메틸렌피롤리딘-1-일)메타논) ( 5 )
촉매량의 무수 DMF (0.5 ㎖)를 실온에서 무수 DCM (180 ㎖) 중의 옥살릴 클로라이드 (9.1 g, 6.25 ㎖, 71.7 mmol, 3 당량) 및 다이머 코어 (4) (11.82 g, 23.9 mmol, 1 당량)의 교반된 현탁액에 첨가하였다. DMF를 첨가한 후에 격렬한 발포가 관찰되었으며, 반응 혼합물을 염화칼슘 건조 튜브 (drying tube)가 장착된 둥근 바닥 플라스크 내에서 18 시간 동안 교반하도록 하였다. 생성된 맑은 용액을 감압 하에서 증발시키고, 고체를 에테르와 함께 연마하였다. 고체 생성물을 진공 여과에 의해서 수거하고, 추가의 에테르로 세척하고, 진공 하에 40℃에서 1.5 시간 동안 건조시켰다. 그 후, 이 고체를 드라이아이스/아세토니트릴 욕의 도움을 받아 -40 내지 -50℃의 온도를 유지시키면서 TEA (12.08 g, 119.6 mmol, 5 당량) 및 무수 DCM (110 ㎖) 중의 C-환 (3)(9.35 g, 52.6 mmol, 2.2 당량)의 현탁액에 조금씩 나누어 첨가하였다. 반응 혼합물을 -40℃에서 1 시간 동안 교반하도록 한 다음에 실온으로 가온하였으며, 이 시점에 LCMS는 출발물질의 완전한 소비를 나타내었다. 반응 혼합물을 추가의 DCM으로 희석하고, 수성 염산 (1 M, 2 x 200 ㎖), 포화 수성 중탄산나트륨 (2 x 250 ㎖), 물 (250 ㎖), 염수 (250 ㎖)로 순차적으로 세척하고, 건조시시켰다 (MgSO4). DCM을 감압 하에서 회전증발에 의해 제거하여 황색 폼 (foam)으로서 생성물을 수득하였다 (13.94 g, 79%). 분석 데이터: RT 3.95 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 741 ([M + 1]+., 100).
(ii) ( S )-(4,4'-(펜탄-1,5-디일비스(옥시))비스(5-메톡시-2-니트로-4,1-페닐렌))비스((( S )-2-(하이드록시메틸)-4-메틸렌피롤리딘-1-일)메타논) ( 6 )
고체 리튬 보로하이드라이드 (0.093 g, 4.3 mmol, 3 당량)를 질소 대기 하에 0℃ (얼음욕)에서 무수 THF (10 ㎖) 중의 에스테르 (5) (1.05 g, 142 mmol, 1 당량)의 용액에 한꺼번에 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 30 분 동안 교반하도록 한 다음에, 실온으로 가온하였으며, 이 시점에 오렌지색 고무질 물질의 침전이 관찰되었다. 반응 혼합물을 실온에서 추가로 2 시간 동안 교반한 다음에, 얼음욕에서 냉각시키고, 물 (20 ㎖)로 처리하여 황색 현탁액을 수득하였다. 염산 (1 M)을 발포가 중지할 때까지 조심해서 첨가하였다 (격렬한 발포!). 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (4 x 50 ㎖)로 추출하고, 유기층을 합하여 물 (100 ㎖), 염수 (100 ㎖)로 세척하고, 건조시켰다 (MgSO4). 에틸 아세테이트를 감압 하에서 회전증발에 의해 제거하여 황색 폼으로서 생성물을 수득하였다 (0.96 g, 99%). 반응을 12.4 g 스케일로 반복하여 11.06 g의 생성물을 수득하였다 (96%). 분석 데이터: RT 3.37 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 685 ([M + H]+., 100).
(iii) ( S )-((펜탄-1,5-디일비스(옥시))비스(5-메톡시-2-니트로-4,1-페닐렌))비스((( S )-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-4-메틸렌피롤리딘-1-일)메타논) ( 7 )
아르곤 대기 하에서 무수 DMF (100 ㎖) 중의 비스-니트로 알콜 (6) (7.94 g, 11.6 mmol, 1 eq), tert-부틸디메틸실릴클로라이드 (4.54 g, 30.15 mmol, 2.6 eq) 및 이미다졸 (4.1 g, 60.3 mmol, 5.2 eq)의 용액을 실온에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (250 ㎖)로 희석하고, DCM (4 x 100 ㎖)으로 추출하였다. 추출물을 합하여 물 (200 ㎖), 포화 염수 (200 ㎖)로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 감압 하에서 증발시켰다. 잔류물을 섬광 칼럼 크로마토그래피 [10% 증분으로 50% 에틸 아세테이트/50% n-헥산으로부터 100% 에틸 아세테이트까지]에 의해서 정제하여 황색 폼으로 생성물을 수득하였다 (10.0 g, 94%). 분석 데이터: RT 4.57 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 913 ([M + H]+., 100).
(iv) ( S )-((펜탄-1,5-디일비스(옥시))비스(2-아미노-5-메톡시-4,1-페닐렌))비스((( S )-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-4-메틸렌피롤리딘-1-일)메타논) ( 8 )
포름산 용액 (5% v/v, 15 ㎖)을 에틸 아세테이트/에탄올 (80 ㎖/150 ㎖) 중의 아연 분말 (29.56 g, 0.45 mol, 40 당량) 및 화합물 (7) (10.34 g, 11.32 mmol, 1 당량)의 혼합물에 한꺼번에 첨가하였다. 12℃의 발열이 관찰되었다. 15 분 후에, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (과량)로 세척하면서 셀라이트를 통해서 여과하였다. 여액을 포화 중탄산나트륨 (3 x 150 ㎖), 물 (200 ㎖), 포화 염수 (200 ㎖)로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 감압 하에서 증발시켰다. 섬광 칼럼 크로마토그래피 [에틸 아세테이트]에 의해서 정제하여 흰색 폼으로서 생성물을 제공하였다 (8.09 g, 84%). 분석 데이터: RT 4.43 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 853 ([M + H]+., 100).
(v) tert-부틸 (5-((5-(5-아미노-4-((S)-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-4-메틸렌피롤리딘-1-카보닐)-2-메톡시페녹시)펜틸)옥시)-2-((S)-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-4-메틸렌피롤리딘-1-카보닐)-4-메톡시페닐)카바메이트 (9)
무수 THF (50 ㎖) 중의 비스-아닐린 (8) (6.02 g, 7.1 mmol, 1 당량) 및 디-t-부틸-디카보네이트 (1.54 g, 7.1 mmol, 1 당량)의 용액을 16 시간 동안 환류 하에 가열하였다. 용매를 감압 하에서 증발시키고, 잔류물을 섬광 칼럼 크로마토그래피 [40% 에틸 아세테이트/60% n-헥산으로부터 60% 에틸 아세테이트/40% n-헥산으로, 100% 에틸 아세테이트까지]에 의해서 정제하여 흰색 폼으로서 생성물을 제공하였다 (3.22 g, 48%). 분석 데이터: RT 4.27 분 MS (ES+) m/z (상대 강도) 953 ([M + H]+, 100), MS (ES-) m/z (상대 강도) 951 ([M - H])-, 100).
(c) (11 S ,11a S )-2-(피리딘-2-일디설파닐)에틸 11-하이드록시-7-메톡시-8-((5-((( S )-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-2-메틸렌-5-옥소-2,3,11,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)-카복실레이트 ( 14 )
Figure pct00047
화합물 10은 문헌 [Jones et al, J. Am. Chem. Soc., 2006, 128, 6526-6527]에 따라 제조하였다.
(i) tert-부틸 (2-(피리딘-2-일디설파닐)에틸) (( S )-(펜탄-1,5-디일비스(옥시))비스(2-(( S )-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-4-메틸렌피롤리딘-1-카보닐)-4-메톡시-5,1-페닐렌))디카바메이트 ( 11 )
트리에틸아민 (0.25 g, 0.34 ㎖, 2.42 mmol, 2.2 당량)을 아르곤 대기 하에 실온에서 무수 THF (10 ㎖) 중의 모노-Boc 보호된 비스-아닐린 (9) (1.05 g, 1.1 mmol, 1.0 당량) 및 트리포스겐 (0.117 g, 0.4 mmol, 0.36 당량)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃로 가열하고, 5 분 후에 샘플을 메탄올로 처리하고, LCMS에 의해서 메틸 카바메이트로 분석하였다. 분석 데이터: RT 4.37 분 MS (ES+) m/z (상대 강도) 1011 ([M + H]+, 100).
무수 THF (10 ㎖) 중의 2-(피리딘-2-일디설파닐)에탄올 (10) (0.31 g, 1.65 mmol, 1.5 당량) 및 트리에틸아민 (0.17 g, 0.23 ㎖, 1.65 mmol, 1.5 당량)의 용액을 신선하게 제조된 이소시아네이트에 적가하였다. 반응 혼합물을 1.5 시간 동안 40℃에서 가열한 후에, 추가량의 트리포스겐 (0.058 g, 0.2 mmol, 0.18 당량)을 첨가하였다. 추가로 30 분 후에, 반응 혼합물을 냉각시키고, 여과하여 트리에틸아민 하이드로클로라이드를 제거하고, 여액을 증발 건고시켜 황색 오일로서 조생성물을 수득하고, 이것을 섬광 칼럼 크로마토그래피 [60% n-헥산/40% 에틸 아세테이트를 55% n-헥산/45% 에틸 아세테이트로 변화시킴]에 의해서 정제하여 원하는 생성물을 무색 오일로 제공하였다 (0.63 g, 49%). 분석 데이터: RT 4.50 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 1166 ([M + H]+, 100), MS (ES-) m/z (상대 강도) 1164 ([M - H])-, 70).
(ii) tert-부틸 (2-(피리딘-2-일디설파닐)에틸) (( S )-(펜탄-1,5-디일비스(옥시))비스(2-(( S )-2-(하이드록시메틸)-4-메틸렌피롤리딘-1-카보닐)-4-메톡시-5,1-페닐렌))디카바메이트 ( 12 )
AcOH/H2O (3/1) (8 ㎖)를 THF (2 ㎖) 중의 화합물 (11) (0.37 g, 0.32 mmol, 1 당량)의 용액에 첨가하고, 생성된 용액을 실온에서 18 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 pH를 포화 NaHCO3 용액에 의해 pH 8로 조정하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (3 x 100 ㎖)로 추출하고, 추출물을 합하여 포화 NaHCO3 용액 (100 ㎖), 물 (100 ㎖), 포화 염수 (100 ㎖)로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 감압 하에서 증발시켰다. 섬광 칼럼 크로마토그래피 [구배 용출 클로로포름/메탄올 1% 증분으로 0% 내지 5%]에 의해서 정제하여 흰색 폼으로서 생성물을 제공하였다 (0.24 g, 81%). 분석 데이터: RT 3.08 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 938 ([M + H]+, 100), MS (ES-) m/z (상대 강도) 936 ([M - H])-, 100).
( iii ) (11 S ,11 a S )- tert -부틸 11- 하이드록시 -8-((5-(((11 S ,11 a S )-11- 하이드록 시-7- 메톡시 -2-메틸렌-5-옥소-10-((2-(피리딘-2- 일디설파닐 ) 에톡시 ) 카보닐 )-2,3,5,10,11,11a-헥사하이드로-1H- 피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀 -8-일) 옥시 ) 펜틸 ) 옥시 )-7- 메톡시 -2-메틸렌-5-옥소-2,3,11,11a- 테트라하이드로 -1H- 피롤로 [2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)-카복실레이트 ( 13 )
DCM (5 ㎖) 중의 DMSO (79 ㎎, 72 ㎕, 1.0 mmol, 4.4 당량)의 용액을 아르곤 대기 하에 -78℃ (드라이 아이스/아세톤)에서 DCM (5 ㎖) 중의 옥살릴 클로라이드 (62 ㎎, 42 ㎕, 0.49 mmol, 2.15 당량)의 용액에 적가하였다. 용액을 -78℃에서 15 분 동안 교반하였다. DCM (6 ㎖) 중의 화합물 (12) (0.214 g, 0.23 mmol, 1.0 당량)의 용액을 적가하고, 혼합물을 -78℃에서 45 분 동안 교반하였다. 트리에틸아민 (0.23 g, 0.32 ㎖, 2.28 mmol, 10 당량)을 첨가하고, 5 분 후에 반응 혼합물을 실온에 도달하도록 하였다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl 용액 (15 ㎖)으로 처리하고, 유기 부분을 분리하여 1 M 시트르산 용액 (3 x 50 ㎖), 포화 NaHCO3 용액 (100 ㎖), 물 (100 ㎖), 포화 염수 (100 ㎖)로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 감압 하에서 증발시켜 연황색 오일을 제공하였다. 섬광 칼럼 크로마토그래피에 의해서 정제하여 흰색 폼으로서 생성물을 제공하였다 (68 ㎎, 32%). 분석 데이터: RT 2.90 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 933 ([M + H]+, 50), MS (ES-) m/z (상대 강도) 935 ([M - H])-, 55).
(iv) (11 S ,11a S )-2-(피리딘-2-일디설파닐)에틸 11-하이드록시-7-메톡시-8-((5-((( S )-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-2-메틸렌-5-옥소-2,3,11,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)-카복실레이트 ( 14 )
95% 트리플루오로아세트산의 냉각 (얼음욕) 용액 (1 ㎖)을 얼음욕에서 냉각시킨 화합물 13에 첨가하였다. LCMS에 의해서 완료된 것으로 나타나면 용액을 0℃에서 15 분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음과 포화 NaHCO3 용액의 혼합물에 적가하여 트리플루오로아세트산 용액을 중화시켰다. 혼합물을 DCM (4 x 50 ㎖)으로 추출하고, 추출물을 합하여 포화 염수 (100 ㎖)로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 감압 하에서 증발시켜 흰색 폼으로서 생성물을 제공하였다 (26 ㎎, 96%). 분석 데이터: RT 2.72 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 816 ([M + H]+, 70), MS (ES-) m/z (상대 강도) 814 ([M - H])-, 40).
실시예 2
(a) ( R )-2-(피리딘-2-일디설파닐)프로판-1-올 ( 18 )
Figure pct00048
(i) ( R )- 메틸 2-( 아세틸티오 ) 프로파노에이트 ( 16 )
티오아세트산 (1.99 g, 1.86 ㎖, 26.1 mmol, 1.1 당량)을 무수 DMF (40 ㎖) 중의 탄산세슘 (7.73 g, 23.72 mmol, 1.0 당량)의 현탁액에 첨가하였다. 30 분 후에, (S)-메틸 2-클로로프로파노에이트 (15)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 디에틸 에테르 (150 ㎖)와 물 (150 ㎖) 사이에 분배시키고; 물을 분리시켜 추가량의 디에틸 에테르 (150 ㎖)로 세척하였다. 유기 부분을 합하여 물 (6 x 100 ㎖), 염수 (200 ㎖)로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 감압 하에서 증발시켰다. 섬광 칼럼 크로마토그래피 [10% 에틸 아세테이트/90% n-헥산]에 의해서 정제하여 무색 오일로서 생성물을 제공하였다 (3.01 g, 82%). 분석 데이터: RT 2.25 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 163 ([M + H]+, 10), 185([M + Na]+, 65); [α]t d = [+141]17.8℃ d (c, 2.26 CHCl3).
(ii) ( R )-2-머캅토프로판-1-올 ( 17 )
무수 THF (10 ㎖) 중의 티오아세테이트 (16) (0.57 g, 3.54 mmol, 1.0 당량)의 용액을 아르곤 대기 중의 환류 하에서 무수 THF (20 ㎖) 중의 리튬 알루미늄 하이드라이드 (0.54 g, 14.15 mmol, 4.0 당량)의 현탁액에 적가하였다. 1 시간 후에, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 발포가 중지될 때까지 30℃ 이하의 온도를 유지시키면서 2 M HCl을 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반한 다음에 THF (40 ㎖)로 세척하면서 셀라이트를 통해서 여과하였다. 용매를 증발시키고; 잔류물을 DCM에 재용해시키고, 건조시켰다 (MgSO4). 감압 하에서 DCM을 증발시키고, 이어서 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 [60% n-헥산/40% 에틸 아세테이트]하여 연황색 오일로서 생성물을 제공하였다 (0.193 g, 58%). 분석 데이터: [α]t d = [-22]17.2℃ d (c, 0.972 CHCl3).
(iii) ( R )-2-(피리딘-2-일디설파닐)프로판-1-올 ( 18 )
설푸릴 클로라이드 (DCM 중의 1 M, 2.0 ㎖, 2.0 mmol, 1.1 당량)를 아르곤 대기 하에 0℃에서 무수 DCM (5 ㎖) 중의 2-머캅토피리딘 (0.2 g, 1.81 mmol, 1.0 당량)의 용액에 적가하였다. 생성된 용액을 실온에서 2 시간 동안 교반하고, DCM을 감압 하에서 증발시켜 황색 고체를 수득하였다. 고체를 무수 DCM (10 ㎖)에 현탁시키고, 무수 DCM (5 ㎖) 중의 (R)-2-머캅토프로판-1-올 (17)(0.18 g, 1.95 mmol, 1.08 당량)의 용액을 적가하였다. 혼합물을 아르곤 대기 하에 실온에서 18 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여액을 감압 하에서 증발시켜 황색 고무상 물질을 제공하였다. 이 고무상 물질을 물에 재용해시키고, 용액을 수산화암모늄 용액으로 염기화하고, DCM (3 x 50 ㎖)으로 추출하고, 추출물을 합하여 물 (100 ㎖), 염수 (100 ㎖)로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 증발시켜 황색 오일을 제공하였다. 섬광 칼럼 크로마토그래피 [5% 증분으로 80% n-헥산/20% 에틸 아세테이트로부터 60% n-헥산/40% 에틸 아세테이트까지]에 의해서 정제하여 무색 오일로서 생성물을 제공하였다 (0.213 g, 59%). 분석 데이터: RT 2.43 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 202 ([M + H]+, 50); [α]t d = [+273]26.2℃ d (c, 0.28 CHCl3).
(b) (11S,11a S )-( R )-2-(피리딘-2-일디설파닐)프로필 11-하이드록시-7-메톡시-8-((5-((( S )-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-2-메틸렌-5-옥소-2,3,11,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)-카복실레이트 ( 22 )
Figure pct00049
(i) tert-부틸 (( R )-2-(피리딘-2-일디설파닐)프로필) (( S )-(펜탄-1,5-디일비스(옥시))비스(2-(( S )-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-4-메틸렌피롤리딘-1-카보닐)-4-메톡시-5,1-페닐렌))디카바메이트 ( 19 )
트리에틸아민 (0.28 g, 0.39 ㎖, 2.8 mmol, 2.2 당량)을 아르곤 대기 하에 실온에서 무수 THF (15 ㎖) 중의 모노-boc 보호된 비스-아닐린 (9) (1.21 g, 1.27 mmol, 1.0 당량) 및 트리포스겐 (0.136 g, 0.46 mmol, 0.36 당량)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃로 가열하고, 5 분 후에 샘플을 메탄올로 처리하고, LCMS에 의해 메틸 카바메이트로서 분석하였다. 분석 데이터: RT 4.30 분 MS (ES+) m/z (상대 강도) 1011 ([M + H]+, 100).
무수 THF (10 ㎖) 중의 (R)-2-(피리딘-2-일디설파닐)프로판-1-올 (18) (0.38 g, 1.91 mmol, 1.5 당량) 및 트리에틸아민 (0.19 g, 0.27 ㎖, 1.91 mmol, 1.5 당량)의 용액을 신선하게 제조된 이소시아네이트에 적가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 4 시간 동안 가열한 다음에 실온에서 18 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하여 트리에틸아민 하이드로클로라이드를 제거하고, 여액을 증발 건고시켜 황색 오일로서 조생성물을 수득하고, 이것을 섬광 칼럼 크로마토그래피 [5% 증분으로 60% n-헥산/40% 에틸 아세테이트로부터 40% n-헥산/60% 에틸 아세테이트까지]에 의해서 정제하여 흰색 폼으로서 원하는 생성물을 제공하였다 (0.75 g, 50%). 분석 데이터: RT 4.50 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 1180 ([M + H]+, 60); [α]t d = [-18]21℃ d (c, 0.28 CHCl3).
(ii) tert-부틸 (( R )-2-(피리딘-2-일디설파닐)프로필) (( S )-(펜탄-1,5-디일비스(옥시))비스(2-(( S )-2-(하이드록시메틸)-4-메틸렌피롤리딘-1-카보닐)-4-메톡시-5,1-페닐렌))디카바메이트 ( 20 )
아세트산/H2O (3/1, 16 ㎖)를 THF (4 ㎖) 중의 비스-실릴 에테르 (19) (0.72 g, 0.61 mmol, 1 당량)의 용액에 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물의 pH를 표준 중탄산나트륨 용액에 의해 pH 8로 조정하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (4 x 150 ㎖)로 추출하고, 추출물을 합하여 포화 중탄산나트륨 용액 (2 x 150 ㎖), 물 (150 ㎖), 염수 (150 ㎖)로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 감압 하에서 증발시켰다. 섬광 칼럼 크로마토그래피에 의해서 정제하여 흰색 폼으로서 생성물을 제공하였다 (0.56 g, 96%). 분석 데이터: RT 3.15 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 953 ([M + H]+, 100); [α]t d = [-13.5]26℃ d (c, 0.22 CHCl3).
(iii) (11 S ,11a S )-tert-부틸 11-하이드록시-8-((5-(((11 S ,11a S )-11-하이드록시-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-10-((( R )-2-(피리딘-2-일디설파닐)프로폭시)카보닐)-2,3,5,10,11,11a-헥사하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,11,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)-카복실레이트 ( 21 )
무수 DCM (5 ㎖) 중의 DMSO (91 ㎎, 83 ㎕, 1.16 mmol, 4.4 당량)의 용액을 아르곤 대기 하에 -40℃에서 무수 DCM (5 ㎖) 중의 옥살릴 클로라이드 (DCM 중의 2.0 M, 318 ㎕, 0.635 mmol, 2.4 당량)의 용액에 적가하였다. 용액을 -40℃에서 15 분 동안 교반하였다. 무수 DCM (10 ㎖) 중의 비스-알콜 (20) (0.252 g, 0.26 mmol, 1 당량)의 용액을 적가하고, 생성된 혼합물을 -40℃에서 45 분 동안 교반하였다. 이 시간 중에 온도는 -25℃에 도달하였다. 온도를 -35℃로 저하시키고, 트리에틸아민 (0.27 g, 0.36 ㎖, 2.6 mmol, 10 당량)을 적가하였다. 5 분 후에, 온도는 실온에 도달하였다. 반응 혼합물을 DCM (50 ㎖)으로 희석하고, 1 M 시트르산 용액 (3 x 150 ㎖), 포화 중탄산나트륨 용액 (150 ㎖), 물 (200 ㎖), 염수 (200 ㎖)로 추출하고, 건조시키고 (MgSO4), 감압 하에서 증발시켜 황색 폼을 제공하였다. 섬광 칼럼 크로마토그래피 [클로로포름/0.5% 증분으로 0%에서 2%까지의 메탄올]에 의해서 정제하여 흰색 폼으로서 생성물을 제공하였다 (0.137 g, 53%). 분석 데이터: RT 3.17 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 948 ([M + H]+, 100); [α]t d = [+170]26℃ d (c, 0.25 CHCl3).
(iv) (11S,11a S )-( R )-2-(피리딘-2-일디설파닐)프로필 11-하이드록시-7-메톡시-8-((5-((( S )-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-2-메틸렌-5-옥소-2,3,11,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)-카복실레이트 ( 22 )
95% 트리플루오로아세트산의 냉각 (얼음욕) 용액 (8.5 ㎖)을 얼음욕에서 냉각시킨 화합물 (21) (0.221 g, 0.23 mmol, 1 당량)에 첨가하였다. LCMS에 의해서 완료된 것으로 나타나면 용액을 0℃에서 25 분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음과 포화 중탄산나트륨 용액 (200 ㎖)의 혼합물에 적가하여 트리플루오로아세트산 용액을 중화시켰다. 혼합물을 DCM (4 x 75 ㎖)으로 추출하고, 추출물을 합하여 물 (100 ㎖), 포화 염수 (100 ㎖)로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 감압 하에서 증발시켜 조생성물을 제공하였다. 섬광 칼럼 크로마토그래피 [클로로포름/1% 증분으로 0%에서 3%까지의 메탄올]에 의해서 정제하여 흰색 폼으로서 생성물을 제공하였다 (0.192 g, 99%). 분석 데이터: RT 3.00 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 830 ([M + H]+, 75); [α]t d = [+444]22℃ d (c, 0.26 CHCl3).
실시예 3: 시험관내 세포독성의 결정
K562 인간 만성 골수성 백혈병 세포를 5% CO2를 함유하는 가습 대기 중의 37℃에서 10% 태아 송아지 혈청 및 2 mM 글루타민이 보충된 RPM1 1640 배지 내에서 유지시키고, 암소에서 37℃로 96 시간 동안 명시된 용량의 약물과 함께 배양하였다. 배양은 원심분리 (5 분, 300 g)에 의해서 종결시키고, 세포를 약물-비함유 배지로 1 회 세척하였다. 적절한 약물 처리 후에, 세포를 96-웰 미량역가 플레이트 (microtiter plates) (104 세포/웰, 8 웰/플레이트)에 옮겼다. 그 후, 플레이트를 5% CO2를 함유하는 가습 대기 중의 37℃, 암소에서 유지시켰다. 이 시험은 황색 가용성 테트라졸륨 염인 3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐-2H-테트라졸륨 브로마이드 (MTT, Aldrich-Sigma)를 불용성의 자주색 포르마잔 침전물로 환원시키는 생존 세포의 능력을 근거로 한다. 플레이트를 4일 동안 배양한 (대조 세포의 수가 약 10 배만큼 증가하도록 한) 후에, 20 ㎕의 MTT 용액 (포스페이트-완충 식염수 중의 5 ㎎/㎖)을 각각의 웰에 첨가하고, 플레이트를 5 시간 동안 더 배양하였다. 그 후, 플레이트를 300 g에서 5 분 동안 원심분리하고, 배지의 벌크를 웰당 10-20 ㎕를 남기면서 세포 펠릿으로부터 피펫팅하였다. DMSO (200 ㎕)를 각각의 웰에 첨가하고, 샘플을 완전한 혼합을 보장하도록 교반하였다. 그 후, 흡광도를 타이터테크 멀티스캔 (Titertek Multiscan) ELISA 플레이트 판독기 상의 550 ㎚의 파장에서 판독하고, 용량-반응 곡선은 작성하였다. 각각의 곡선에 대해서, IC50 값은 최종 흡광도를 대조값의 50%로 감소시키는데 필요한 용량으로서 판독하였다.
컨주게이션을 위한 ThioMab 의 환원/산화
CHO 세포에서 발현된 전체 길이 시스테인 조작된 모노클로날 항체 (ThioMabs - Junutula, et al., 2008b Nature Biotech., 26(8):925-932; Dornan et al (2009) Blood 114(13):2721-2729; US 7521541; US 7723485; WO2009/052249, Shen et al (2012) Nature Biotech., 30(2):184-191; Junutula et al (2008) Jour of Immun. Methods 332:41-52)를 37℃에서 3 시간 또는 실온에서 밤새, 2 mM EDTA를 함유하는 50 mM 트리스 pH 7.5 중의 약 20-40 배 과량의 TCEP (트리스(2-카복시에틸)포스핀 하이드로클로라이드) 또는 DTT (디티오트레이톨)에 의해서 환원시켰다 [Getz et al (1999) Anal . Biochem . Vol 273:73-80; Soltec Ventures, Beverly, MA]. 환원된 ThioMab를 희석하고, 10 mM 나트륨 아세테이트 (pH 5) 중의 하이트랩 (HiTrap) S 칼럼 상에 부하시키고, 0.3 M 염화나트륨을 함유하는 PBS로 용출시켰다. 대신으로, 항체를 1/20 배 용적의 10% 아세트산을 첨가하여 산성화시키고, 10 mM 석시네이트 pH 5로 희석하고, 칼럼 상에 부하시킨 다음에, 10 칼럼 용적의 석시네이트 완충액으로 세척하였다. 칼럼을 50 mM 트리스 pH7.5, 2 mM EDTA로 용출시켰다.
용출된 환원된 ThioMab을 15 배 몰과량의 DHAA (데하이드로아스코르빈산) 또는 200 nM 수성 황산구리 (CuSO4)로 처리하였다. 쇄간 디설파이드 결합의 산화반응은 약 3 시간 또는 그 이상 이내에 완료되었다. 주변 공기 산화도 또한 효과적이다. 재-산화된 항체를 20 mM 나트륨 석시네이트 pH 5, 150 mM NaCl, 2 mM EDTA 내로 투석하고, -20℃에서 동결 저장하였다.
항체-약물 컨주게이트를 제조하기 위한 Thio - Mab 와 화합물의 컨주게이션
탈차단되고 재산화된 티오-항체 (ThioMab)를, 반응 혼합물의 LC-MS 분석에 의해서 결정되는 바와 같이 반응이 완료될 때까지 (16-24 시간), 50 mM 트리스, pH 8 중에서 6-8 배 몰과량의 상기의 화합물 (14, 22)(20 mM 농도의 DMSO 저장액으로부터)과 반응시켰다.
그 후, 조 항체-약물 컨주게이트 (ADC)를 20 mM 나트륨 석시네이트, pH 5로 희석한 후에 양이온 교환 칼럼에 적용하였다. 이 칼럼을 적어도 10 칼럼 용적의 20 mM 나트륨 석시네이트, pH 5로 세척하고, 항체를 PBS로 용출시켰다. 항체-약물 컨주게이트를 겔여과 칼럼을 사용하여 240 mM 슈크로즈를 갖는 20 mM His/아세테이트 pH 5 내에서 제제화하였다. 항체-약물 컨주게이트를 단백질 농도를 결정하기 위한 UV 분광법, 응집 분석을 위한 분석용 SEC (크기-배제 크로마토그래피), 및 리신 C 엔도펩티다제로 처리하기 전 및 후의 LC-MS에 의해서 특정화하였다.
크기 배제 크로마토그래피는 0.25 mM 염화칼륨 및 15% IPA를 함유하는 0.2 M 인산칼륨 pH 6.2 중에서 쇼덱스 (Shodex) KW802.5 칼럼을 사용하여 0.75 ㎖/분의 유속으로 수행하였다. 컨주게이트의 응집 상태는 280 ㎚에서 용출된 피크 면적 흡광도의 적분에 의해서 결정되었다.
LC-MS 분석은 애질런트 (Agilent) QTOF 6520 ESI 기기를 사용하여 수행하였다. 예로서, 이 화학을 사용하여 생성된 항체-약물 컨주게이트를 37℃에서 30 분 동안 트리스, pH 7.5 중의 1:500 w/w 엔도프로테이나제 Lys C (Promega)로 처리하였다. 생성된 분해 단편을 80℃로 가열된 1000 Å, 8 ㎛ PLRP-S 칼럼 상에 부하시키고, 5 분 동안에 30% B 내지 40% B의 구배로 용출시켰다. 이동상 A는 0.05% TFA를 함유하는 H2O였고, 이동상 B는 0.04% TFA를 함유하는 아세토니트릴이었다. 유속은 0.5 ㎖/분이었다. 단백질 용출은 전기분무 이온화 (electrospray ionization) 및 MS 분석 전에 280 ㎚에서 UV 흡광도 검출에 의해서 모니터링하였다. 비컨주게이트된 Fc 단편, 잔류하는 비컨주게이트된 Fab 및 약물화된 (drugged) Fab의 크로마토그래피 분할이 달성되었다. 수득된 m/z 스펙트럼을 매스 헌터 (Mass Hunter™) 소프트웨어 (Agilent Technologies)를 사용해서 디컨볼루션 (deconvolution)하여 항체 단편의 질량을 계산하였다.
예를 들어, 22 (질량 부가=720 달톤)와 컨주게이트된 티오-Tmab에 대한 분자량 (MW). 관찰된 디컨볼루션 질량:
53,296 달톤은 비컨주게이트된 Fc 단편의 MW에 해당한다.
47,431 달톤은 비컨주게이트된 Fab 단편의 MW에 해당한다.
48,150 달톤은 약물화된 Fab 단편의 MW에 해당한다.
따라서, 48,150 달톤에서 관찰된 피크는 하나의 약물 22 (+720 달톤)를 갖는 예상된 Fab 단편 (47,431 달톤)에 해당한다.
22 와의 ADC 티오-컨주게이트
질량 부가 719.84
Figure pct00050
14 와의 ADC 티오-컨주게이트
질량 부가 705.81
Figure pct00051
이하의 시험관내 및 생체내 시험은 또한, 문헌 [Phillips et al (2008) Cancer Res. 68(22):9280-9290]에 기술되어 있다.
시험관내 세포 증식시험
ADC의 효능은 다음의 프로토콜을 사용하는 세포 증식시험에 의해서 측정하였다 [CellTiter Glo Luminescent Cell Viability Assay, Promega Corp. Technical Bulletin TB288; Mendoza et al (2002) Cancer Res. 62:5485-5488]. 모든 세포주는 American Type Culture Collection으로부터 수득하였다:
1. 배지 내에 약 104 세포 (예를 들어, KPL-4, 인간 유방암 세포주 (Kurebayashi et al (1999) Brit. Jour. Cancer 79(5-6):707-717), SKBR-3 또는 MCF7)를 함유하는 세포 배양액의 100 ㎕ 분취액을 96-웰의 불투명한 벽이 있는 플레이트의 각각의 웰에 침적시켰다.
2. 배지를 함유하고 세포가 없는 대조 웰을 준비하였다.
3. ADC를 실험 웰에 첨가하고, 3-5일 동안 배양하였다.
4. 플레이트를 약 30 분 동안 실온으로 평형화시켰다.
5. 각 웰에 존재하는 세포 배양 배지의 용적에 해당하는 용적의 셀타이터-글로 (CellTiter-Glo) 시약을 첨가하였다.
6. 내용물을 궤도 진탕기 (orbital shaker) 상에서 2 분 동안 혼합시켜 세포 용해를 유도하였다.
7. 플레이트를 실온에서 10 분 동안 배양하여 발광 시그날을 안정화시켰다.
8. 발광을 RLU = 상대 발광 유니트로서 기록하고 그래프에 보고하였다.
특정의 세포를 96-웰 플레이트 (50 ㎕/웰) 내에 1000-2000/웰 또는 2000-3000/웰로 접종하였다. 1 또는 2일 후에, ADC를 9000, 3000, 1000, 333, 111, 37, 12.4, 4.1, 또는 1.4 ng/㎖의 최종 농도까지 50 ㎕ 용적으로 첨가하며, "no ADC" 대조 웰은 배지만을 단독으로 수용한다. 조건은 이중 또는 삼중으로 한다. 3-5일 후에, 100 ㎕/웰의 셀타이터 글로 (Cell TiterGlo) II를 첨가하고 (루시퍼라제-기본 시험; ATP 수준에 의해서 측정된 증식), 세포수를 발광측정기 (luminometer)를 사용하여 결정한다. 데이터는 표준편차 오차 막대 (error bar)와 함께 중복된 각각의 세트에 대한 발광의 평균으로 도시한다. 프로토콜은 셀타이터 글로 발광 세포 생존도 시험 (CellTiter Glo Luminescent Cell Viability Assay (Promega))의 변형이다:
1. 50 ㎕/웰의 FBS/글루타민 배지 내에 1000 세포/웰을 플레이팅한다. 세포는 밤새 부착되도록 한다.
2. ADC를 18 ㎍/㎖ (이것은 9 ㎍/㎖의 최종 농도를 제공한다)의 작업 농도에서 시작하여 배지 내에서 1:3 계열희석한다. 50 ㎕의 희석된 ADC를 웰 내에 이미 있는 50 ㎕의 세포 및 배지에 첨가한다.
3. 72-96 시간 동안 배양한다 (표준은 72 시간이지만, 0 ㎍/㎖ 농도를 관찰하여 세포가 85-95% 합류 (confluent)한 때에 시험을 중지시킨다).
4. 100 ㎕/웰의 프로메가 셀타이터 글로 (Promega Cell Titer Glo) 시약을 첨가하고, 3 분 동안 진탕하고, 발광측정기 상에서 판독한다.
결과
항체-약물 컨주게이트, 트라스투주맙-14 (110) 및 트라스투주맙-22 (101)를 SK-BR-3, KPL-4, 및 MCF-7 (Levenson et al (1997) Cancer Res. 57(15):3071-3078) 세포에 대해서 시험하여 5일 연구에서의 시험관내 세포 생존도를 측정하였다. SK-BR-3에 대한 101에 관한 IC50 (㎍/㎖) 값은 22.12였다. SK-BR-3에 대한 110에 관한 IC50 값은 102.78이었다. SK-BR-3 세포는 HER2+ 발현성이며, 트라스투주맙 민감성이다. 101 및 110은 둘 다 HER2 비-발현성 인간 유방선암 세포주인 MCF-7에 대해서 효과적으로 불활성이다. 따라서, 컨주게이트 101 및 110은 표적화된 세포 사멸 효력을 나타낸다.
종양 성장 억제, 고발현성 HER2 유전자이식 외식편 마우스에서의 생체내 효능
유전자이식 실험에 적합한 동물은 Taconic (Germantown, N.Y.)과 같은 표준 상업적 공급원으로부터 수득될 수 있다. 다수의 스트레인이 적합하지만, FVB 암컷 마우스가 그들의 종양 형성에 대한 더 큰 감수성으로 인하여 바람직하다. FVB 수컷을 교배를 위해서 사용하였으며, 정관절제수술을 한 CD.1 스터드 (studs)를 사용하여 가임신을 자극하였다. 정관절제수술을 한 마우스는 어떤 상업적 공급자로부터라도 수득할 수 있다. 파운더 (founders)를 FVB 마우스 또는 129/BL6 x FVB p53 이형접합성 (heterozygous) 마우스와 교배하였다. p53 대립유전자에서 이형접합성을 갖는 마우스를 사용하여 종양 형성을 잠재적으로 증가시켰다. 그러나, 이것은 불필요한 것으로 판명되었다. 따라서, 일부의 F1 종양은 혼합 스트레인의 것이다. 파운더 종양은 FVB만이다. 동배자 (litters)를 갖지 않고 약간의 발육성 종양을 갖는 6 개의 파운더가 수득되었다.
종양 (Fo5 mmtv 유전자이식 마우스로부터 번식된 동종이식편)을 갖는 동물을 ADC의 IV 주사에 의해서 단일 또는 수회 용량으로 처리하였다. 종양 용적은 주사 후의 다양한 시점에 평가하였다.
종양은 HER2의 랫트 동족체인 neu의 돌연변이적으로 활성화된 형태를 발현하는 유전자이식 마우스에서 쉽게 발생하지만, 인간 유방암에서 과발현되는 HER2는 돌연변이되지 않고, 종양 형성은 비돌연변이된 HER2를 과발현하는 유전자이식 마우스에서 훨씬 덜 왕성하다 [Webster et al (1994) Semin . Cancer Biol . 5:69-76].
비돌연변이된 HER2에 의한 종양 형성을 개선시키기 위해서, 다른 식으로는 HER2의 진정한 하류 개시 코돈으로부터의 해독 개시의 빈도를 감소시킬 수 있는 상류 ATG 개시 코돈에서의 해독의 개시를 방지하기 위해서 상류 ATG가 결실된 HER2 cDNA 플라스미드를 사용하여 유전자이식 마우스를 생산하였다 [예를 들어, Child et al (1999) J. Biol . Chem . 274: 24335-24341 참조]. 추가로, 더 이전에 보고된 바와 같이 발현의 수준을 또한 증진시켜야 하는 키메릭 인트론 (chimeric intron)을 5' 말단에 첨가하였다 [Neuberger and Williams (1988) Nucleic Acids Res . 16:6713; Buchman and Berg (1988) Mol . Cell . Biol. 8:4395; Brinster et al (1988) Proc . Natl . Acad . Sci . USA 85:836]. 키메릭 인트론은 프로메가 (Promega) 벡터, Pci-neo 포유동물 발현 벡터 (bp 890-1022)로부터 유도되었다. cDNA 3'-말단은 인간 성장 호르몬 엑손 4 및 5, 및 폴리아데닐화 서열의 측면에 둔다. 또한, FVB 마우스가 종양 발생에 더 감수성이 있기 때문에, 이 스트레인이 사용되었다. MMTV-LTR로부터의 프로모터를 사용하여 유선에서의 조직-특이적 HER2 발현을 보장하였다. 동물에게는 종양 형성에 대한 감수성을 증가시키기 위해서 AIN 76A 식이를 급여하였다 [Rao et al (1997) Breast Cancer Res . and Treatment 45:149-158].
Fo5 쥐 유방 종양 모델
Fo5 모델은 쥐 유방 종양 바이러스 프로모터 (MMTV-HER2)의 전사조절 하에 인간 HER2 유전자가 유방 상피에서 과발현되는 유전자이식 마우스 모델이다. 상기의 과발현은 인간 HER2 수용체를 과발현하는 유방 종양의 자발적인 발생을 야기한다. 파운더 동물 중의 하나 (파운더 #5 [Fo5])의 유방 종양을 종양 단편의 일련의 이식에 의해서 FVB 마우스의 후속 세대에 전파하였다. 생체내 효능시험에 사용하기 전에, MMTV-HER2 Fo5 유전자이식 유방 종양을 대략 2×2 ㎜로 측정된 단편으로 nu/nu 마우스 (Charles River Laboratories로부터)의 No. 2/3 유방 지방 패드 (mammary fat pad) 내로 수술에 의해 이식하였다. 종양이 바람직한 용적에 도달하면, 종양-보유 마우스를 무작위로 분류하고, ADC의 IV 주사에 의해 단일 용량을 제공하였다.
결과
도 1은 다음의 물질로 제0일에 단일 iv 투여한 후에, CRL nu/nu 마우스 내에 접종된 유방암-모델 MMTV-HER2 Fo5 유방 동종이식편 종양에서 시간의 경과에 따른 생체내 평균 종양 용적 변화의 플롯을 나타낸다: (1) 비히클 20 mM 히스티딘 아세테이트, pH 5.5, 240 mM 슈크로즈, (2) 10 ㎎/㎏의 xCD22-22 (103), (3) 1 ㎎/㎏의 트라스투주맙-22 (101), (4) 3 ㎎/㎏의 트라스투주맙-22 (101), 및 (5) 10 ㎎/㎏의 트라스투주맙-22 (101). 도면에서 선은 다음의 심볼로 표시된다:
Figure pct00052
도 2는 다음의 물질로 제0일에 단일 iv 투여한 후에, CRL nu/nu 마우스 내에 접종된 유방암-모델 MMTV-HER2 Fo5 유방 동종이식편 종양에서 시간의 경과에 따른 생체내 평균 종양 용적 변화의 플롯을 나타낸다: (1) 비히클 20 mM 히스티딘 아세테이트, pH 5.5, 240 mM 슈크로즈, (2) 6 ㎎/㎏의 xCD22-14 (112), (3) 1 ㎎/㎏의 트라스투주맙-14 (110), (4) 3 ㎎/㎏의 트라스투주맙-14 (110), (5) 6 ㎎/㎏의 트라스투주맙-14 (110), 및 (6) 1 ㎎/㎏의 트라스투주맙-22 (101). 도면에서 선은 다음의 심볼로 표시된다:
Figure pct00053
약어
Figure pct00054
Figure pct00055
참고문헌
다음의 참고문헌들이 온전히 참고로 포함된다:
Figure pct00056
Figure pct00057
Figure pct00058
Figure pct00059
Figure pct00060
Figure pct00061
Figure pct00062
Figure pct00063
Figure pct00064
Figure pct00065

Claims (46)

  1. 화학식 A의 컨주게이트:
    Figure pct00066

    상기 식에서,
    점선은 C1과 C2 또는 C2와 C3 사이의 이중결합의 임의의 존재를 나타내며;
    R2는 H, OH, =O, =CH2, CN, R, OR, =CH-RD, =C(RD)2, O-SO2-R, CO2R 및 COR로부터 독립적으로 선택되고, 임의로 할로 또는 디할로로부터 더 선택되며;
    여기에서 RD는 R, CO2R, COR, CHO, CO2H, 및 할로로부터 독립적으로 선택되고;
    R6 및 R9는 H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', NO2, Me3Sn 및 할로로부터 독립적으로 선택되며;
    R7은 H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', NO2, Me3Sn 및 할로로부터 독립적으로 선택되고;
    Y는 단일결합, 및 하기 화학식 A1 또는 A2의 그룹으로부터 선택되며:
    Figure pct00067

    여기에서 N은 상기 그룹이 PBD 부위의 N10에 결합하는 경우를 나타내고;
    RL1 및 RL2는 H 및 메틸로부터 독립적으로 선택되거나, 이들이 결합된 탄소 원자와 함께 사이클로프로필렌 그룹을 형성하며;
    CBA는 세포 결합제를 나타내고;
    Q는 O, S 및 NH로 부터 독립적으로 선택되며;
    R11은 H, 또는 R이거나, Q가 O인 경우에는, SO3M이고, 여기에서 M은 금속 양이온이며;
    R 및 R'는 각각 독립적으로 임의로 치환된 C1-12 알킬, C3-20　헤테로사이클릴 및 C5 -20 아릴 그룹으로부터 선택되고, 임의로 그룹 NRR'와 관련하여 R 및 R'는 이들이 부착된 질소 원자와 함께 임의로 치환된 4-, 5-, 6- 또는 7-원 헤테로사이클릭 환을 형성하며;
    여기에서 R12, R16, R19 및 R17은 각각 R2, R6, R9 및 R7에 대해서 정의한 바와 같고;
    여기에서 R"는 C3-12 알킬렌 그룹이며, 이 쇄는 하나 또는 그 이상의 헤테로 원자, 예를 들어, O, S, N(H), NMe 및/또는 임의로 치환된 방향족 환, 예를 들어, 벤젠 또는 피리딘에 의해서 단속될 수 있고;
    X 및 X'는 O, S 및 N(H)로부터 독립적으로 선택된다.
  2. 제1항에 있어서, RL1 및 RL2가 둘 다 H인 컨주게이트.
  3. 제1항에 있어서, RL1 및 RL2가 둘 다 메틸인 컨주게이트.
  4. 제1항에 있어서, RL1 및 RL2 중의 하나가 H이고, 다른 것이 메틸인 컨주게이트.
  5. 제1항 내지 제4항 중의 어느 하나에 있어서, Y가 단일결합인 컨주게이트.
  6. 제1항 내지 제4항 중의 어느 하나에 있어서, Y가 하기 화학식 (A1)인 컨주게이트:
    Figure pct00068
    .
  7. 제1항 내지 제4항 중의 어느 하나에 있어서, Y가 하기 화학식 (A2)인 컨주게이트:
    Figure pct00069
  8. 제1항 내지 제7항 중의 어느 하나에 있어서, R9 및 R19가 H인 컨주게이트.
  9. 제1항 내지 제8항 중의 어느 하나에 있어서, R6 및 R16이 H인 컨주게이트.
  10. 제1항 내지 제9항 중의 어느 하나에 있어서, R7 및 R17이 둘 다 OR7A이며, 여기에서 R7A는 임의로 치환된 C1-4　알킬인 컨주게이트.
  11. 제10항에 있어서, R7A가 Me인 컨주게이트.
  12. 제1항 내지 제11항 중의 어느 하나에 있어서, X가 O인 컨주게이트.
  13. 제1항 내지 제12항 중의 어느 하나에 있어서, R11이 H인 컨주게이트.
  14. 제1항 내지 제13항 중의 어느 하나에 있어서, 각각의 모노머 단위 내의 C2와 C3 사이에 이중결합이 있는 컨주게이트.
  15. 제14항에 있어서, R2 및 R12가 H 및 R로부터 독립적으로 선택되는 컨주게이트.
  16. 제15항에 있어서, R2 및 R12가 독립적으로 R인 컨주게이트.
  17. 제16항에 있어서, R2 및 R12가 독립적으로 임의로 치환된 C5-20 아릴인 컨주게이트.
  18. 제1항 내지 제13항 중의 어느 하나에 있어서, R2 및 R12가 =O, =CH2, =CH-RD, 및 =C(RD)2로부터 독립적으로 선택되는 컨주게이트.
  19. 제18항에 있어서, R2 및 R12가 =CH2인 컨주게이트.
  20. 제1항 내지 제19항 중의 어느 하나에 있어서, R"가 C3 알킬렌 그룹 또는 C5 알킬렌 그룹인 컨주게이트.
  21. 제1항 내지 제20항 중의 어느 하나에 있어서, 세포 결합제가 항체 또는 그의 활성 단편인 컨주게이트.
  22. 제21항에 있어서, 항체 또는 항체 단편이 종양-연관된 항원에 대한 항체 또는 항체 단편인 컨주게이트.
  23. 제21항에 있어서, 항체 또는 항체 단편이 다음의 (1)-(36)으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 종양-연관된 항원 또는 세포-표면 수용체에 결합하는 항체인 컨주게이트:
    (1) BMPR1B (골형성 단백질 수용체-타입 IB);
    (2) E16 (LAT1, SLC7A5);
    (3) STEAP1 (전립선의 6 개의 경막 상피 항원);
    (4) 0772P (CA125, MUC16);
    (5) MPF (MPF, MSLN, SMR, 거핵구 증강 인자, 메소텔린);
    (6) Napi3b (NAPI-3B, NPTIIb, SLC34A2, 용질 담체 패밀리 34 (인산나트륨), 멤버 2, 타입 II 나트륨-의존성 포스페이트 수송체 3b);
    (7) Sema 5b (FLJ10372, KIAA1445, Mm.42015, SEMA5B, SEMAG, 세마포린 5b Hlog, 세마 영역, 7 개의 트롬보스폰딘 반복체 (타입 1 및 타입 1-유사), 경막 영역 (TM) 및 짧은 세포질 영역, (세마포린) 5B);
    (8) PSCA hlg (2700050C12Rik, C530008O16Rik, RIKEN cDNA 2700050C12, RIKEN cDNA 2700050C12 유전자);
    (9) ETBR (엔도텔린 타입 B 수용체);
    (10) MSG783 (RNF124, 가상적 단백질 FLJ20315);
    (11) STEAP2 (HGNC_8639, IPCA-1, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, 전립선암 연관된 유전자 1, 전립선암 연관된 단백질 1, 전립선의 6 개의 경막 상피 항원 2, 6 개의 경막 전립선 단백질);
    (12) TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, 일시적 수용체 잠재성 양이온 채널, 서브패밀리 M, 멤버 4);
    (13) CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, 기형암종-유도된 성장인자);
    (14) CD21 (CR2 (보체 수용체 2) 또는 C3DR (C3d/엡스타인 바르 바이러스 수용체) 또는 Hs 73792);
    (15) CD79b (CD79B, CD79b, IGb (면역글로불린-연관된 베타), B29);
    (16) FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAP1A (SH2 영역 함유 포스파타제 앵커 단백질 1a), SPAP1B, SPAP1C);
    (17) HER2;
    (18) NCA;
    (19) MDP;
    (20) IL20Ra;
    (21) Brevican;
    (22) EphB2R;
    (23) ASLG659;
    (24) PSCA;
    (25) GEDA;
    (26) BAFF-R (B 세포-활성화 인자 수용체, BLyS 수용체 3, BR3);
    (27) CD22 (B-세포 수용체 CD22-B 이소형태);
    (28) CD79a (CD79A, CD79a, 면역글로불린-연관된 알파);
    (29) CXCR5 (버킷 림프종 수용체 1);
    (30) HLA-DOB (MHC 클래스 II 분자의 베타 서브유니트 (Ia 항원));
    (31) P2X5 (퓨린작동성 수용체 P2X 리간드-개폐 이온 채널 5);
    (32) CD72 (B-세포 분화 항원 CD72, Lyb-2);
    (33) LY64 (림프구 항원 64 (RP105), 류신 풍부 반복체 (LRR) 패밀리의 타입 I 막단백질);
    (34) FcRH1 (Fc 수용체-유사 단백질 1);
    (35) IRTA2 (면역글로불린 슈퍼페밀리 수용체 전좌 연관된 2); 및
    (36) TENB2 (추정상의 경막 프로테오글리칸).
  24. 제21항에 있어서, 항체 또는 항체 단편이 시스테인-조작된 항체인 컨주게이트.
  25. 제21항 또는 제24항에 있어서, 항체 또는 항체 단편이 ErbB 수용체에 결합하는 항체인 컨주게이트.
  26. 제25항에 있어서, 항체가 트라스투주맙인 컨주게이트.
  27. 제21항 또는 제24항에 있어서, Ab가 안티-HER2, 안티-Steap1, 또는 안티-CD22 항체인 컨주게이트.
  28. 제21항에 있어서, 항체 (Ab)에 대한 약물 (D)의 약물 부하량 (p)이 1 내지 약 8의 정수인 컨주게이트.
  29. 제28항에 있어서, p가 1, 2, 3, 또는 4인 컨주게이트.
  30. 제28항에 있어서, 항체-약물 컨주게이트 화합물의 혼합물을 포함하며, 여기에서 항체-약물 컨주게이트 화합물의 혼합물 중 항체당 평균 약물 부하량이 약 2 내지 약 5인 컨주게이트.
  31. 제1항 내지 제30항 중의 어느 하나에 있어서, 치료법에서 사용하기 위한 컨주게이트.
  32. 제1항 내지 제30항 중의 어느 하나에 있어서, 대상체에서 증식성 질환의 치료에 사용하기 위한 컨주게이트.
  33. 제31항에 있어서, 질환이 암인 컨주게이트.
  34. 제1항 내지 제30항 중의 어느 하나의 컨주게이트, 약제학적으로 허용되는 희석제, 담체 또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
  35. 제34항에 있어서, 치료학적 유효량의 화학요법제를 더 포함하는 약제학적 조성물.
  36. 대상체에서 증식성 질환의 치료에 사용하기 위한 의약의 제조에 있어서의 제1항 내지 제30항 중의 어느 하나에 따른 컨주게이트의 용도.
  37. 제36항의 약제학적 조성물을 환자에게 투여하는 것을 포함하는 암의 치료 방법.
  38. 제37항에 있어서, 상기 환자에게 컨주게이트와 함께 화학요법제를 투여하는 방법.
  39. 표적 위치에서 화학식 (B)의 화합물 및 그의 염 및 용매화물을 제공하기 위한 제1항 내지 제30항 중의 어느 하나에 따른 컨주게이트의 용도:
    Figure pct00070
  40. 제39항에 있어서, 상기 표적 위치가 증식성 세포 집단인 용도.
  41. 표적 위치에서 화학식 (C)의 화합물 및 그의 염 및 용매화물을 제공하기 위한 제1항 내지 제30항 중의 어느 하나에 따르는 컨주게이트의 용도:
    Figure pct00071

    상기 식에서,
    Q는 O, S 및 NH로부터 독립적으로 선택되고;
    R11은 H, 또는 R이거나, Q가 O인 경우에 R11은 SO3M이며, 여기에서 M은 금속 양이온이다.
  42. 화학식 (E)의 화합물 및 그의 염 및 용매화물:
    Figure pct00072

    상기 식에서,
    점선은 C1과 C2 또는 C2와 C3 사이의 이중결합의 임의의 존재를 나타내며;
    R2, R6, R7, R9, R12, R16, R17, R19, X, X', R", Y, RL1 및 RL2는 제1항 내지 제20항 중의 어느 하나에서 정의된 바와 같다.
  43. 제42항에 있어서, 하기의 구조를 갖는 화합물:
    Figure pct00073
    .
  44. 제43항에 있어서, 하기의 구조를 갖는 화합물:
    Figure pct00074
    .
  45. 세포 결합제를 제42항 내지 제44항 중 어느 하나에서 정의한 바와 같은 화합물 (D)와 반응시키는 단계를 포함하여, 제1항 내지 제30항 중의 어느 하나에 따르는 컨주게이트를 제조하는 방법.
  46. 제35항의 약제학적 조성물; 용기; 및 상기 약제학적 조성물이 암을 치료하기 위해서 사용될 수 있음을 표시한 포장 인서트 또는 라벨을 포함하는 제품.
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