KR20130084312A - 오플로포러스-유래된 루시퍼라아제, 신규 코엘렌테라진 기질, 및 사용 방법 - Google Patents

오플로포러스-유래된 루시퍼라아제, 신규 코엘렌테라진 기질, 및 사용 방법 Download PDF

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Abstract

변형된 루시퍼라아제 폴리펩타이드를 인코딩하는 단리된 폴리뉴클레오타이드 및 기질. OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 서열번호: 1에 대해 적어도 60% 아미노산 서열 동일성 및 서열번호: 1에서의 아미노산에 상응하는 위치에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 갖는다. OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 야생형 오플로포러스 루시퍼라아제의 상응하는 폴리펩타이드에 관해 증대된 발광, 증대된 신호 안정성, 및 증대된 단백질 안정성 중 적어도 하나를 갖는다.

Description

오플로포러스-유래된 루시퍼라아제, 신규 코엘렌테라진 기질, 및 사용 방법 {OPLOPHORUS-DERIVED LUCIFERASES, NOVEL COELENTERAZINE SUBSTRATES, AND METHODS OF USE}
관련 출원들의 교차참조
본원은 미국 가출원 번호 61/409,422 (2010년 11월 2일 출원)을 우선권으로 주장하고, 이는 그 전체가 참고로 본원에 통합되어 있다.
심해 새우 오플로포러스 그라실리로스트리스로부터의 루시퍼라아제 분비는 많은 흥미있는 특징, 예컨대 높은 활성, 높은 양자 수율, 및 넓은 기질 특이성 (예를 들면, 코엘렌테라진 뿐만 아니라 다양한 코엘렌테라진 유사물 포함)을 갖는 것을 보여졌다. 오플로포러스의 생물발광 반응은, 분자 산소에 의한 코엘렌테라진 (기질)의 산화가 오플로포러스 루시퍼라아제에 촉진될 때 일어나고, 462 nm에서 최대 세기의 광 및 생성물 CO2 및 코엘렌테라마이드가 생긴다 (Shimomura 등, Biochemistry, 17:994 (1978)). 최적 발광은 pH 9에서 0.05-0.1 M NaCl의 존재에서 40℃에서 일어나고, 열에 대한 이 효소의 특이한 내성으로 인해, 가시광 발광은 고순도 효소가 사용될 때 50℃ 초과의 온도에서 일어나거나 부분적으로 정제된 효소가 사용될 때에는 70℃ 초과에서 일어난다. pH 8.7에서, 원상태 루시퍼라아제는 대략 130 kDa의 분자량을 갖는 것으로 Shimomura 등 (1978)에 의해 보고되었고, 31 kDa의 4개의 모노머 각각을 명백히 포함하고; 낮은 pH에서, 원상태 루시퍼라아제는 중합하는 경향이 있다.
후반 작업은, 오플로포러스 그라실리로스트리스 루시퍼라아제가 원상태 35 kDa 및 19 kDa 단백질의 복합물, 즉, 2개의 19 kDa 성분 및 2개의 35 kDa 성분으로 이루어진 헤테로사량체라는 것을 보여주었다. Inouye 등 (2000)은 오플로포러스 루시퍼라아제의 35 kDa 및 19 kDa 단백질을 인코딩하는 cDNAs의 분자 클로닝, 및 발광 반응을 촉진하는 단백질 성분의 확인을 보고했다. 단백질을 인코딩하는 cDNAs는 박테리아 및 포유류 세포에서 발현되었고, 19 kDa 단백질은 코엘렌테라진의 발광 산화를 촉진할 수 있는 성분으로서 확인되었다 (Inouye 등, 2000).
오플로포러스 루시퍼라아제의 19 kDa 단백질 (유전자은행 수탁 BAB13776, 196 아미노산)은 루시퍼라아제 기능을 갖는 최소 촉매 성분인 것으로 보이고, 그의 일차 구조 이미다조피라지논 루시퍼라아제를 포함하는 임의의 보고된 루시퍼라아제와의 유의미한 유사성을 갖지 않는다 (Lorenz 등, PNAS USA, 88:4438 (1991); Thompson 등, PNAS USA, 86:6567 (1989)). 이. 콜리에서 19 kDa 단백질의 발현으로 함유체가 형성된다 (Inouye 및 Sasaki, Protein Expression and Purification , 56:261-268 (2007)). 함유체의 형성은 단백질의 안정성에서 기인하는 것 같다.
오플로포러스 루시퍼라아제의 기질 특이성은 예상외로 폭넓다 (Inouye 및 Shimomura. BBRC, 223:349 (1997)). 예를 들면, 코엘렌테라진의 유사물인 비스데옥시코엘렌테라진 (즉, 코엘렌테라진-hh)의 유사물은 코엘렌테라진에 필적하는 오플로포러스 루시퍼라아제에 대한 탁월한 기질이다 (Nakamura 등, Tetrahedron Lett., 38:6405 (1997)). 또한, 오플로포러스 루시퍼라아제는 광을 방출하기 위해 이미다조피라지논-유형 루시페린을 또한 사용하는 해양 오스트라코드 키프리디나 (바르굴라) 힐겐도르피이의 루시퍼라아제와 같은 분비 효소이다(Johnson 및 Shimomura, Meth . Enzyme, 57:331 (1978)).
요약
일 측면에서, 본 개시내용은 하기 식 (Ia) 또는 (Ib)의 화합물에 관한 것이다:
Figure pct00001
또는
Figure pct00002
여기서 R2는
Figure pct00003
, 또는 C2-5 직쇄 알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
R6은 -H, -OH, -NH2 , -OC(O)R 또는 -OCH2OC(O)R로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
R8는
Figure pct00004
, H 또는 저급 사이클로알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
여기서 R3 및 R4 모두는 H이거나 둘 모두는 C1 -2 알킬이고;
W는 -NH2, 할로, -OH, -NHC(O)R, -CO2R이고;
X는 -S-, -O- 또는 -NR22-이고;
Y는 -H, -OH, 또는 -OR11이고;
Z는 -CH- 또는 -N-이고;
각각의 R11은 독립적으로 -C(O)R" 또는 -CH2OC(O)R"이고;
R22는 H, CH3 또는 CH2CH3이고;
각각의 R은 독립적으로 C1 -7 직쇄 알킬 또는 C1 -7 분지형 알킬이고;
R"는 C1 -7 직쇄 알킬 또는 C1 -7 분지형 알킬이고;
상기 파선 결합은 포화 또는 불포화일 수 있는 임의의 고리의 존재를 나타내고;
단, R2가
Figure pct00005
또는
Figure pct00006
일 때, R8은
Figure pct00007
이 아니고;
단, R2가
Figure pct00008
일 때, R8은
Figure pct00009
또는 저급 사이클로알킬이고;
단, R6이 NH2일 때, R2는
Figure pct00010
, 또는 C2-5 알킬이고;
또는 R8은
Figure pct00011
이 아니다.
또 하나의 측면에서, 본 개시내용은 하기로부터 선택된 화합물에 관한 것이다:
Figure pct00012
일 측면에서, 본 개시내용은 하기 식의 화합물에 관한 것이다:
Figure pct00013
또는
Figure pct00014
일 측면에서, 본 개시내용은 서열번호: 1에서의 아미노산에 상응하는 위치에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는 서열번호: 1에 대한 적어도 60% 아미노산 서열 동일성을 갖는 OgLuc 변이체 폴리펩타이드를 인코딩하는 단리된 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이고, 여기서 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 증대된 발광을 갖는다.
일 측면에서, 본 개시내용은 서열번호: 1에서의 아미노산에 상응하는 위치에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는 서열번호: 1에 대한 적어도 60% 아미노산 서열 동일성을 갖는 OgLuc 변이체 폴리펩타이드를 인코딩하는 단리된 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이고, 여기서 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 서열번호: 3의 OgLuc 폴리펩타이드에 관해서 항샹된 발광을 가지며, 단, 상기 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩되는 폴리펩타이드는 표 47에서 열거된 것들 중의 하나가 아니다.
일 측면에서, 본 개시내용은 서열번호: 1에서의 아미노산에 상응하는 위치에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는 서열번호: 1에 대한 적어도 60% 아미노산 서열 동일성을 갖는 OgLuc 변이체 폴리펩타이드를 인코딩하는 단리된 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이고, 여기서 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 서열번호: 31의 폴리펩타이드에 관해 증대된 발광을 가지며, 단, 상기 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩되는 폴리펩타이드는 서열번호: 3 또는 15가 아니다.
일 측면에서, 본 개시내용은 서열번호: 1에서의 아미노산에 상응하는 위치에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는 서열번호: 1에 대한 적어도 60% 아미노산 서열 동일성을 갖는 OgLuc 변이체 폴리펩타이드를 인코딩하는 단리된 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이고, 여기서 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 서열번호: 29의 폴리펩타이드에 대해 증대된 발광을 가지며, 단, 상기 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩되는 폴리펩타이드는 서열번호: 3 또는 15가 아니다.
일 측면에서, 본 개시내용은 서열번호: 1에 상응하는 아미노산 치환 A4E, Q11R, A33K, V44I, P115E, Q124K, Y138I, N166R, I90V, F54I, Q18L, F68Y, L72Q, 및 M75K을 포함하는 서열번호: 1의 OgLuc 폴리펩타이드에 대해 적어도 80% 아미노산 서열 동일성을 갖는 OgLuc 변이체 폴리펩타이드를 인코딩하는 단리된 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이고 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 루시퍼라아제 활성을 갖는다.
일 측면에서, 본 개시내용은 서열번호: 1의 OgLuc 폴리펩타이드에 대해 적어도 80% 아미노산 서열 동일성을 갖는 OgLuc 변이체 폴리펩타이드를 인코딩하는 단리된 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이고, 여기서 위치 4에 있는 아미노산은 글루타메이트이고, 위치 11에 있는 것은 아르기닌이고, 위치 18에 있는 것은 류신이고, 위치 33에 있는 것은 라이신이고, 위치 44에 있는 것은 이소류신이고, 위치 54에 있는 것은 이소류신이고, 위치 68에 있는 것은 티로신이고, 위치 72에 있는 것은 글루타민이고, 위치 75에 있는 것은 라이신이고, 위치 90에 있는 것은 발린이고, 위치 115에 있는 것은 글루타메이트이고, 위치 124에 있는 것은 라이신이고, 위치 138에 있는 것은 이소류신이고, 위치 166에 있는 것은 아르기닌이고, 이들은 서열번호: 1에 상응하고, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 루시퍼라아제 활성을 갖는다.
일 측면에서, 본 개시내용은 서열번호: 1에 상응하는 아미노산 치환 A4E, Q11R, A33K, V44I, P115E, Q124K, Y138I, N166R, Q18L, F54I, L92H, 및 Y109F를 포함하는 서열번호: 1의 OgLuc 폴리펩타이드에 대해 적어도 80% 아미노산 서열 동일성을 갖는 OgLuc 변이체 폴리펩타이드를 인코딩하는 단리된 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이고, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 루시퍼라아제 활성을 갖는다.
일 측면에서, 본 개시내용은 서열번호: 1에 상응하는 아미노산 치환 A4E, Q11R, A33K, V44I, A54I, F77Y, I90V, P115E, Q124K, Y138I 및 N166R을 포함하는 서열번호: 1의 OgLuc 폴리펩타이드에 대해 적어도 80% 아미노산 서열 동일성을 갖는 OgLuc 변이체 폴리펩타이드를 인코딩하는 단리된 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이고, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 루시퍼라아제 활성을 갖는다.
일 측면에서, 본 개시내용은 서열번호: 1의 OgLuc 폴리펩타이드에 대해 적어도 80% 아미노산 서열 동일성을 갖는 OgLuc 변이체 폴리펩타이드를 인코딩하는 단리된 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이고, 여기서 위치 4에 있는 아미노산은 글루타메이트이고, 위치 11에 있는 것은 아르기닌이고, 위치 18에 있는 것은 류신이고, 위치 33에 있는 것은 라이신이고, 위치 44에 있는 것은 이소류신이고, 위치 54에 있는 것은 이소류신이고, 위치 92에 있는 것은 히스티딘이고, 위치 109에 있는 것은 페닐알라닌이고, 위치 115에 있는 것은 글루타메이트이고, 위치 124에 있는 것은 라이신이고, 위치 138에 있는 것은 이소류신이고, 위치 166에 있는 것은 아르기닌이고, 이들은 서열번호: 1에 상응하고, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 루시퍼라아제 활성을 갖는다.
일 측면에서, 본 개시내용은 서열번호: 1의 OgLuc 폴리펩타이드에 대해 적어도 80% 아미노산 서열 동일성을 갖는 OgLuc 변이체 폴리펩타이드를 인코딩하는 단리된 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이고, 여기서 위치 4에 있는 아미노산은 글루타메이트이고, 위치 11에 있는 것은 아르기닌이고, 위치 33에 있는 것은 라이신이고, 위치 44에 있는 것은 이소류신이고, 위치 54에 있는 것은 이소류신이고, 위치 77에 있는 것은 티로신이고, 위치 90에 있는 것은 발린이고, 위치 115에 있는 것은 글루타메이트이고, 위치 124에 있는 것은 라이신이고, 위치 138에 있는 것은 이소류신이고, 위치 166에 있는 것은 아르기닌이고, 이들은 서열번호: 1에 상응하고, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 루시퍼라아제 활성을 갖는다.
일 측면에서, 본 개시내용은 서열번호: 19의 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 단리된 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다.
일 측면에서, 본 개시내용은 서열번호: 18, 서열번호: 24, 서열번호: 25, 서열번호: 42, 서열번호: 88, 또는 서열번호: 92의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 단리된 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다.
일 측면에서, 본 개시내용은 서열번호: 1에 대해 적어도 30% 아미노산 서열 동일성을 갖는 십각류 절지동물 루시퍼라아제 폴리펩타이드를 인코딩하는 단리된 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이고, 상기 폴리펩타이드는 식 (VII)의 서열 패턴에 상응하고 5 이하의 차이를 포함하는 서열 패턴을 포함하고, 여기서 상기 차이는 표 4에서 열거된 OgLuc 패턴에 따른 식 (VII)에 대한 패턴 위치 1, 2, 3, 5, 8, 10, 12, 14, 15, 17, 또는 18로부터의 차이 뿐만 아니라 표 4에서 열거된 OgLuc 패턴에 따른 식 (VII)의 임의의 패턴 위치 사이의 갭 또는 삽입을 포함하고, 여기서 상기 십각류 절지동물 루시퍼라아제는 코엘렌테라진의 존재에서 발광을 생산한다.
일 측면에서, 본 개시내용은 서열번호: 2를 갖는 모 핵산 서열에 대해 80% 또는 그 미만 핵산 서열 동일성을 갖고 서열번호: 22, 서열번호: 23, 서열번호: 24, 또는 서열번호: 25에 대해 90% 또는 그 초과 핵산 서열 동일성을 갖는 적어도 100개의 뉴클레오타이드의 단편 또는 그의 보체를 포함하는 OgLuc 변이체 폴리펩타이드를 인코딩하는 합성 뉴클레오타이드 서열에 관한 것이고, 여기서 상기 감소된 서열 동일성은 모 핵산 서열 중 코돈에 대해 합성 뉴클레오타이드 서열에서 상이한 코돈의 결과이고, 여기서 상기 합성 뉴클레오타이드 서열은 모 핵산 서열에 의해 인코딩된 상응하는 루시퍼라아제에 대해 적어도 85% 아미노산 서열 동일성을 갖는 OgLuc 변이체를 인코딩하고, 여기서 상기 합성 뉴클레오타이드 서열은 모 핵산 서열에 대해 조절 서열의 감소된 수를 갖는다.
일 측면에서, 본 개시내용은 서열번호: 14를 갖는 모 핵산 서열에 대해 80% 또는 그 미만 핵산 서열 동일성을 갖고 서열번호: 22 또는 서열번호: 23에 대해 90% 또는 그 초과 핵산 서열 동일성을 갖는 적어도 300개의 뉴클레오타이드의 단편 또는 그의 보체를 포함하는 OgLuc 변이체 폴리펩타이드를 인코딩하는 합성 뉴클레오타이드 서열에 관한 것이고, 여기서 상기 감소된 서열 동일성은 모 핵산 서열 중 코돈에 대해 합성 뉴클레오타이드 서열에서 상이한 코돈의 결과이고, 여기서 상기 합성 뉴클레오타이드 서열은 모 핵산 서열에 의해 인코딩된 상응하는 루시퍼라아제에 대해 적어도 85% 아미노산 서열 동일성을 갖는 개똥벌레 루시퍼라아제를 인코딩하고, 여기서 상기 합성 뉴클레오타이드 서열은 모 핵산 서열에 대해 조절 서열의 감소된 수를 갖는다.
일 측면에서, 본 개시내용은 서열번호: 18을 갖는 모 핵산 서열에 대해 80% 또는 그 미만 핵산 서열 동일성을 가지며 서열번호: 24 또는 서열번호: 25에 대해 90% 또는 그 초과 핵산 서열 동일성을 갖는 적어도 100개의 뉴클레오타이드의 단편 또는 그의 보체를 포함하는 OgLuc 변이체 폴리펩타이드를 인코딩하는 합성 뉴클레오타이드 서열에 관한 것이고, 여기서 상기 감소된 서열 동일성은 모 핵산 서열 중 코돈에 대해 합성 뉴클레오타이드 서열에서 상이한 코돈의 결과이고, 여기서 상기 합성 뉴클레오타이드 서열은 모 핵산 서열에 의해 인코딩된 상응하는 루시퍼라아제에 대해 적어도 85% 아미노산 서열 동일성을 갖는 OgLuc 변이체를 인코딩하고, 여기서 상기 합성 뉴클레오타이드 서열은 모 핵산 서열에 대해 조절 서열의 감소된 수를 갖는다.
일 측면에서, 본 개시내용은 이종성 단백질에 융합된 오플로포러스 그라실리로스트리스로부터 신호 펩타이드을 포함하는 융합 펩타이드에 관한 것이고, 여기서 상기 신호 펩타이드는 서열번호: 54이고, 여기서 상기 융합 펩타이드는 세포에서 발현되고 상기 세포로부터 분비된다.
일 측면에서, 본 개시내용은 하기를 포함하는, OgLuc 변이체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 산출하는 방법에 관한 것이다: (a) 모 OgLuc 폴리펩타이드 및 적어도 하나 이종성 폴리펩타이드를 포함하는 모 융합 단백질 구조물을 사용하여 변이체 융합 단백질의 라이브러리를 산출하는 단계; 및 (b) 모 융합 단백질 구조물에 관해 증대된 발광, 증대된 효소 안정성 또는 증대된 생체적합성 중 적어도 하나에 대한 라이브러리를 스크리닝하는 단계.
일 측면에서, 본 개시내용은 하기를 포함하는, 유기체에 사용하기 위한 루시퍼라아제를 인코딩하는 코돈-최적화된 폴리뉴클레오타이드를 산출하는 방법에 관한 것이다: 루시퍼라아제에서 각 아미노산에 대해, 코돈을, 아미노산을 위해 코딩하기 위한 유기체에서 사용된 2개의 가장 통상적으로 사용된 코돈으로부터 무작위로 선택하여 제1 코돈-최적화된 폴리뉴클레오타이드를 생산한다.
본 발명의 다른 측면은 상세한 설명 및 수반되는 도면들의 고려에 의해 분명할 것이다.
도 1은 원상태 코엘렌테라진, 공지된 비스-코엘렌테라진 (코엘렌테라진-hh), 및 공지된 코엘렌테라진-h의 화학 구조를 보여주고, 여기서 R2, R6 및 R8은 변형이 있는 분자의 영역을 나타낸다.
도 2는 신규 코엘렌테라진 PBI-3939, PBI-3889, PBI-3945, PBI-4002, PBI-3841, PBI-3897, PBI-3896, PBI-3925, PBI-3894, PBI-3932, 및 PBI-3840의 화학 구조를 보여준다.
도 3은 PBI-3939의 Km 측정을 보여준다.
도 4는 본 발명의 다양한 신규 코엘렌테라진의 화학 구조를 보여준다.
도 5A-G은 본상태, 공지된, 및 신규 코엘렌테라진을 기질로서 사용하여 C1+A4E를 발현시키는 용해된 박테리아 세포로부터 생성된 발광 (RLUs)을 보여준다. 도 5A, 5C-5G는 원상태 코엘렌테라진을 비교로서 사용하여 공지된 및 신규 코엘렌테라진을 갖는 C1+A4E에 의해 행성된 RLU에서 발광을 측정하는 독립적인 실험을 보여준다. 도 5B는 원상태 코엘렌테라진과 비교하여 도 5A에서 보여진 기질을 사용하여 C1+4AE에서 생성된 발광의 폴드-감소를 보여준다.
도 6A-D는 원상태 코엘렌테라진 ("코엘렌테"), 공지된 코엘렌테라진-h ("h"), 공지된 코엘렌테라진-hh ("h,h"), 공지된 2-메틸 코엘렌테라진 ("2-me"), 공지된 코엘렌테라진-v ("v"), 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3840, PBI-3897, PBI-3889, PBI-3899, PBI-3900, PBI-3912, PBI-3913, PBI-3925, PBI-3897, PBI-3899, PBI-3889, PBI-3939, PBI-3933, PBI-3932, PBI-3946, PBI-3897, PBI-3841, PBI-3896, PBI-3925, 및 PBI-3945을 기질로서 사용하여 다양한 OgLuc 변이체를 발현시키는 용해된 박테리아 세포로부터 생성된 발광을 보여준다.
도 7은 다양한 OgLuc 변이체에서 아미노산 치환을 보여준다.
도 8A-B는 원상태 코엘렌테라진 ("코엘렌테라진"), 공지된 코엘렌테라진-h ("H"), 공지된 코엘렌테라진-hh ("h,h"), 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3840, PBI-3925, PBI-3912, PBI-3889, PBI-3939, PBI-3933, PBI-3932, PBI-3946, PBI-3941, 및 PBI-3896을 기질로서 사용하여 도 7에서 열거된 OgLuc 변이체를 발현시키는 용해된 박테리아 세포로부터 생성된 발광을 보여준다.
도 9는 원상태 코엘렌테라진 ("코엘렌테라진"), 공지된 코엘렌테라진-hh ("h,h"), 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3939, PBI-3945, PBI-3840, PBI-3932, PBI-3925, PBI-9894, 및 PBI-3896을 기질로서 사용하여 다양한 OgLuc 변이체를 발현시키는 용해된 박테리아 세포로부터 생성된 발광을 보여준다.
도 10은 다양한 OgLuc 변이체에서 아미노산 치환을 보여준다.
도 11는 원상태 코엘렌테라진 ("코엘렌테라진"), 공지된 코엘렌테라진-hh ("h,h"), 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3939, PBI-3945, PBI-3840, PBI-3932, PBI-3925, PBI-3894, 및 PBI-3896을 기질로서 사용하여 도 10에서 열거된 OgLuc 변이체를 발현시키는 용해된 박테리아 세포로부터 생성된 발광을 보여준다.
도 12는 원상태 코엘렌테라진 ("코엘렌테라진"), 공지된 코엘렌테라진-hh ("h,h"), 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3939, PBI-3945, PBI-3889, PBI-3840, PBI-3932, PBI-3925, PBI-3894, PBI-3896, 및 PBI-3897을 기질로서 사용하여 OgLuc 변이체를 발현시키는 용해된 박테리아 세포로부터 생성된 발광을 보여준다.
도 13는 원상태 코엘렌테라진 ("코엘렌테라진"), 공지된 코엘렌테라진-hh ("H,H"), 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3897, PBI-3896, 및 PBI-3894을 기질로서 사용하여 OgLuc 변이체를 발현시키는 용해된 박테리아 세포로부터 생성된 발광을 보여준다.
도 14는 다양한 OgLuc 변이체에서 아미노산 치환을 보여준다.
도 15는 원상태 코엘렌테라진 ("코엘렌테라진"), 공지된 코엘렌테라진-hh ("h,h"), 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3897, PBI-3841, PBI-3896, 및 PBI-3894을 기질로서 사용하여 도 14에서 열거된 OgLuc 변이체를 발현시키는 용해된 박테리아 세포로부터 생성된 발광을 보여준다.
도 16은 원상태 코엘렌테라진 ("코엘렌테라진"), 공지된 코엘렌테라진-h ("H"), 공지된 코엘렌테라진-hh ("HH"), 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3841 및 PBI-3897을 기질로서 사용하여 OgLuc 변이체를 발현시키는 용해된 박테리아 세포로부터 생성된 발광을 보여준다.
도 17은 원상태 코엘렌테라진 ("코엘"), 공지된 코엘렌테라진-hh ("h,h"), 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3897 및 PBI-3841을 기질로서 사용하여 다양한 OgLuc 변이체 및 인간화 레닐라 루시퍼라아제 (hRL)를 발현시키는 용해된 박테리아 세포로부터 생성된 발광을 보여준다.
도 18은 원상태 코엘렌테라진 ("코엘렌테라진"), 공지된 코엘렌테라진-hh ("h,h"), 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3939, PBI-3945, PBI-3889, 및 PBI-4002을 기질로서 사용하여 다양한 OgLuc 변이체를 발현시키는 용해된 박테리아 세포로부터 생성된 발광을 보여준다.
도 19은 원상태 코엘렌테라진 ("코엘렌테라진"), 공지된 코엘렌테라진-h ("H"), 공지된 코엘렌테라진-hh ("h,h"), 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3939, PBI-3945, PBI-3889, 및 PBI-4002을 기질로서 사용하여 다양한 OgLuc 변이체를 발현시키는 용해된 박테리아 세포로부터 생성된 발광을 보여준다.
도 20은 다양한 OgLuc 변이체에서 아미노산 치환을 보여준다.
도 21는 원상태 코엘렌테라진 ("코엘렌테라진"), 공지된 코엘렌테라진-h ("H"), 공지된 코엘렌테라진-hh ("h,h"), 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3939, PBI-3945, PBI-4002, PBI-3932, 및 PBI-3840을 기질로서 사용하여 도 20에서 열거된 OgLuc 변이체를 발현시키는 용해된 박테리아 세포로부터 생성된 발광을 보여준다.
도 22는 다양한 OgLuc 변이체에서 아미노산 치환을 보여준다.
도 23는 원상태 코엘렌테라진 ("코엘렌테라진"), 공지된 코엘렌테라진-h ("H"), 공지된 코엘렌테라진-hh ("h,h"), 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3939, PBI-3945, PBI-3889, PBI-4002, PBI-3932, 및 PBI-3840을 기질로서 사용하여 도 22에서 열거된 OgLuc 변이체를 발현시키는 용해된 박테리아 세포로부터 생성된 발광을 보여준다.
도 24는 원상태 코엘렌테라진 ("코엘렌테라진"), 공지된 코엘렌테라진-h ("H"), 공지된 코엘렌테라진-hh ("H,H"), 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3939 및 PBI-3945을 기질로서 사용하여 다양한 OgLuc 변이체 및 hRL ("레닐라")를 발현시키는 용해된 박테리아 세포로부터 생성된 발광을 보여준다.
도 25는 원상태 코엘렌테라진 ("코엘렌테라진"), 공지된 코엘렌테라진-hh ("h,h"), 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3939, PBI-3945, PBI-3889, 및 PBI-4002을 기질로서 사용하여 다양한 OgLuc 변이체 및 hRL ("레닐라")를 발현시키는 용해된 박테리아 세포로부터 생성된 발광을 보여준다.
도 26은 다양한 OgLuc 변이체에서 아미노산 치환을 보여준다.
도 27은 원상태 코엘렌테라진 ("코엘렌테라진"), 공지된 코엘렌테라진-h ("H"), 공지된 코엘렌테라진-hh ("h,h"), 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3939, PBI-3945, PBI-3889, 및 PBI-4002을 기질로서 사용하여 도 26에서 열거된 OgLuc 변이체를 발현시키는 용해된 박테리아 세포로부터 생성된 발광을 보여준다.
도 28은 원상태 코엘렌테라진 ("코엘."), 공지된 코엘렌테라진-h ("H"), 공지된 코엘렌테라진-hh ("H,H"), 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3939, PBI-3945, PBI-3889, 및 PBI-4002을 기질로서 사용하여 다양한 OgLuc 변이체 및 hRL ("레닐라")를 발현시키는 용해된 박테리아 세포로부터 생성된 발광을 보여준다.
도 29는 원상태 코엘렌테라진 및 PBI-3939을 기질로서 사용하는 박테리아 용해물에서 9B8 opt 및 9B8 opt+K33N의 발광 및 원상태 코엘렌테라진과 비교된 PBI-3939에 대한 이들 변이체의 상대 특이도를 보여준다.
도 30A-D는 원상태 코엘렌테라진 (도 30A), 코엘렌테라진-h (도30B), 및 PBI-399 (도 30C)를 사용하여 위치 166에서 돌연변이 분석을 보여준다.
도 31은 OgLuc 변이체 L27V에서 다양한 결실의 발광을 보여주고 여기서 (-)은 기계 배경이다.
도 32는 원상태 코엘렌테라진을 기질로서 사용하는 hRL ("레닐라"), 루시페린 (BRIGHT-GLOTM 검정 시약)을 기질로서 사용하는 개똥벌레 루시퍼라아제 (Luc2), 및 신규 PBI-3939을 기질로서 사용하는 다양한 OgLuc 변이체를 발현시키는 용해된 HEK293 세포로부터 생성된 정규화 발광을 보여준다.
도 33은 신규 코엘렌테라진 PBI-3945을 기질로서 사용하는 박테리아 용해물에서 IV 및 15C1 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3889을 기질로서 사용하는 박테리아 용해물에서 IV 및 9B8의 신호 안정성을 보여준다.
도 34A-B는 개똥벌레 (Fluc) 및 레닐라 (Rluc) 루시퍼라아제와 비교하여 OgLuc 변이체 L27V의 더 높은 활성 (도 34A) 및 신호 안정성 (도 34B)을 보여준다.
도 35는 신규 코엘렌테라진 PBI-3939을 기질로서 사용하여 박테리아 용해물에서 다양한 OgLuc 변이체에 대한 Vmax (RLU/sec) 및 Km (μM) 값을 보여준다.
도 36은 신규 코엘렌테라진 PBI-3939을 기질로서 사용하여 박테리아 용해물에서 다양한 OgLuc 변이체에 대한 Vmax (RLU/sec) 및 Km (μM) 값을 보여준다.
도 37은 신규 코엘렌테라진 PBI-3939을 기질로서 사용하는 박테리아 용해물에서 9B8 opt 및 9B8 opt+K33N 모두에 대한 Vmax (RLU/sec) 및 Km (μM) 값을 보여준다.
도 38은 t=0 및 반감기(분)에서 기질로서 원상태 코엘렌테라진을 사용하는 박테리아 용해물에서 다양한 OgLuc 변이체의 50℃에서 단백질 안정성을 보여준다.
도 39A-B는 레닐라 (hRL) 및 개똥벌레 루시퍼라아제 (Luc2)와 비교하여 25℃ (도 39A) 및 37℃ (도 39B)에서 다양한 OgLuc 변이체의 박테리아 용해물에서 구조 온전성 (SDS-PAGE 분석에서 보여진 바와 같이 발현, 안정성, 및 용해도에 의해 측정된)을 보여준다.
도 40A-B는 경시적으로 (도 40A) 및 반감기 (시)로서 (도 40B) 발광 (RLU에서)의 자연 로그 (ln)로서 신규 코엘렌테라진 PBI-3939을 기질로서 사용하여 9B8 opt 및 9B8 opt+K33N의 박테리아 용해물에서 60℃에서 단백질 안정성을 보여준다.
도 41은 60℃에서 OgLuc 변이체 9B8 및 L27V의 퍼센트 활성을 보여준다.
도 42A-B는 다양한 pH (도 42A) 및 염 농도 (도 42B)에서 OgLuc 변이체 L27V의 단백질 안정성을 보여준다.
도 43A-B는 정제된 C1+A4E (도 43A) 및 9B8 (도 43B)의 겔 여과 크로마토그래피 분석을 보여준다.
도 44는 OgLuc 변이체 L27V가 모노머 형태로 존재한다는 것을 설명하는 겔 여과 크로마토그래피 분석을 보여준다.
도 45A-B는 SDS-PAGE (도45A) 및 정규화 단백질 발현 수준 (도 45B)에 의해 분석된 미희석 및 1:1 희석된 박테리아 용해물 샘플에서 다양한 OgLuc 변이체-HALOTAG® (HT7) 융합 단백질의 단백질 발현 수준을 보여준다.
도 46A-B는 단백질 발현 (도 46A) 및 OgLuc 변이체 9B8 opt, V2 및 L27V의 용해도 (도 46B)를 보여준다.
도 47은 원상태 코엘렌테라진 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3939을 기질로서 사용하여 IV, 9B8, 및 hRL ("레닐라")를 발현시키는 용해된 HEK293 세포로부터 생성된 RLUs에서 정규화 발현을 보여준다.
도 48은 PBI-3939, 루시페린 (Bright-GloTM 검정 시약), 및 원상태 코엘렌테라진, 각각을 기질로서 사용하여 pF4Ag-Ogluc-9B8-HT7, pF4Ag-Luc2-HT7 및 pF4Ag-레닐라-HT7를 발현시키는 용해된 HEK293 세포로부터 생성된 RLUs에서 정규화 발광을 보여준다.
도 49는 신규 코엘렌테라진 PBI-3939을 기질로서 사용하여9B8 opt 또는 9B8 opt+K33N ("K33N")를 인코딩하는 30 또는 100 ng의 플라스미드 DNA를 발현시키는 용해된 HEK293 세포로부터 생성된 발광을 보여준다.
도 50A-E는 HEK 293 (도 50A) 및 HeLa 세포 (비-융합) (도 50B)에서 개똥벌레 루시퍼라아제 (Luc2)와 비교된 OgLuc 변이체 L27V의 발광, OgLuc 변이체 L27V (도 50C) 및 개똥벌레 루시퍼라아제 (Luc2) (도 50D)와 비교된 HaloTag® 융합의 발광, 및 HEK 293 ("HEK") 및 HeLa 세포 ("HeLa")에서 HaloTag®-개똥벌레 루시퍼라아제 (Luc2)와 비교된 HaloTag®-OgLuc L27V의 단백질 발현을 보여준다.
도 51은 부정확한 상호작용에 대한 그의 감수성을 측정하기 위해 LOPAC 라이브러리에 대항하는 OgLuc 변이체 9B8 및 L27V의 억제 분석을 보여준다.
도 52A-E는 수라민 및 Tyr ag 835(도 52A-C)에 의한 OgLuc 변이체 9B8 및 L27V의 억제 분석 및 수라민 (도 52D) 및 Tyr ag 835 (도 52E)의 화학 구조를 보여준다.
도 53은 비-특이적 단백질 상호작용에 대한 내성을 측정하기 위해 BSA의 존재에서 분석된 OgLuc 변이체 9B8 및 L27V의 활성을 보여준다.
도 54는 플라스틱에 대한 반응성을 측정하기 위해 OgLuc 변이체 9B8 및 L27V의 퍼센트 활성을 보여준다.
도 55는 포르스콜린 처리 유("유도") 또는 무("기초")에 따라 공지된 코엘렌테라진-h을 기질로서 사용하는 hRL ("레닐라")와 비교된 IV cAMP 전사 리포터를 발현시키는 용해된 HEK293 세포로부터 생성된 발광 및 포르스콜린 처리 ("폴드")로 인한 폴드 유도 (반응)을 보여준다.
도 56은 ("+FSK") 있는 또는 ("-FSK") 없는 포르스콜린 처리에 따라 기질로서 PBI-3939 (9B8 및 9B8 opt에 대해), 원상태 코엘렌테라진 (hRL에 대해) 또는 루시페린 (BRIGHT-GLOTM 검정 시약; Luc2에 대해)를 사용하여 9B8, 9B8 opt, hRL ("레닐라") 또는 개똥벌레 루시퍼라아제 ("Luc2") cAMP 전사 리포터를 발현시키는 용해된 HEK293 세포로부터 생성된 정규화 발광 및 포르스콜린 처리 ("폴드")로 인한 폴드 유도 (반응)을 보여준다.
도 57은 포르스콜린 처리 유("유도") 또는 무("기초")에 따라 신규 코엘렌테라진 PBI-3939을 기질로서 사용하는 9B8 opt 및 9B8 opt+K33N ("K33N") cAMP 전사 리포터를 발현시키는 용해된 HEK293 세포로부터 생성된 발광 및 포르스콜린 처리로 인한 폴드 유도 ("폴드 유도")을 보여준다.
도 58A-C는 다중 세포 유형에서 다중 경로에 대한 OgLuc 변이체 9B8 및 L27V 용해 리포터 구조물의 발광을 보여준다.
도 59A-C는 다양한 세포주에서 그리고 다양한 반응 요소와 함께 OgLuc 변이체 L27V의 발광 리포터 구조물을 보여준다.
도 60A-B는 CMV 프로모터 (도 60A) 또는 NFkB 반응 요소 (도 60B)를 갖는 메트리디아 롱거 루시퍼라아제와 비교된 OgLuc 변이체 L27V 분비성 리포터의 발광을 보여준다.
도 61A-F는 절대 발광 (도 61A 및 61B), 정규화 발광 (도 61C 및 61D) 및 HeLa 세포에서 발현된 L27V (L27V00)와 비교된 L27V (L27V01, L27V02 및 L27V03)의 최적화된 버전의 폴드 반응 (도 61E 및 61F)을 보여준다.
도 62A-B는 분비된 OgLuc 변이체 L27V02 (IL-6 분비 신호를 함유) 리포터 (도 62A) 및 L27V02 ("L27V(02)"), L27V02P ("L27V(02)P(01)")의 발광 및 다양한 용량의 rhTNFα ("TNFα")로 처리된 HepG2 세포에서 발현된 luc2 ("Fluc") 리포터 (도 62A)의 발광을 보여준다.
도 63은 원상태 코엘렌테라진을 기질로서 사용하여 분비 신호 서열 무 또는 무의 hRL ("레닐라")와 비교된 기질로서 신규 PBI-3939를 사용하는 분비 신호 서열이 유 또는 무인 코돈 최적화된 변이체 IV opt를 발현시키는 HEK293 세포의 배치 및 용해물 샘플로부터 생성된 발광을 보여준다.
도 64A-D는 CHO 세포 (도 64A 및 64B) 및 HeLa (도 64C 및 64D)에서 발현된 분비된 OgLuc 변이체 9B8, V2 및 L27V 리포터의 발광을 보여준다.
도 65A-B는 Ready-to-GlowTM를 기질로서 사용하는 메트리디아 롱거의 분비 루시퍼라아제의 발광에 대한, PBI-3939를 기질로서 사용하는 분비된 OgLuc 변이체 9B8 및 V2로부터의 발광의 비교를 수치로 (도 65A) 및 그래프로 (도 65B) 보여준다.
도 66A-B는 코엘렌테라진 유도체 EnduRenTM (도 66A) 및 ViviRenTM (도 66B) 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3939 (도 66B)을 기질로서 사용하는 hRL ("Ren") 및 9B8 opt를 발현시키는 HEK293 세포로부터 생성된 배경에 대한 발광의 폴드-증가를 보여준다.
도 67A-D는 L27V-HALOTAG® 융합 (도 67A) 또는 IL6-L27V 융합 (도 67B-D)를 일시적으로 발현시키는 U2OS 세포의 초점공유 이미지를 보여준다. 기준자 = 20μm.
도 68은 원상태 코엘렌테라진을 기질로서 사용하여 샌드위치 배경 ("pF4Ag")의 존재("샌드") 또는 부재에서 다양한 OgLuc 변이체 및 hRL ("레닐라")를 발현시키는 용해된 박테리아 세포로부터 생성된 발광을 보여준다.
도 69는 원상태 코엘렌테라진을 기질로서 사용하여 샌드위치 배경의 존재로 인해 다양한 OgLuc 변이체 및 hRL ("레닐라")의 활성의 폴드-감소를 보여준다.
도 70은 신규 코엘렌테라진 PBI-3939을 기질로서 사용하여 샌드위치 배경의 존재로 인해 박테리아 용해물 중 9B8 opt 및 9B8 opt+K33N의 활성의 폴드-감소를 보여준다.
도 71은 OgLuc 변이체 L27V의 스펙트럼 프로파일을 보여준다.
도 72는 링커 없이 또는 5, 10, 또는 20 아미노산 링커와 함께 OgLuc 변이체 L27V, CP84 및 CP95의 2개의 순환 치환 (CP) 버전의 발광을 보여준다.
도 73A-G는 밀 배아 추출물 (도 73A-D), 이. 콜리 (도 73F-G) 및 HEK 293 세포 (도 73H)에서 발현된 다양한 CP-TEV 프로테아제 L27V 구조물의 발광을 보여준다. 도 73A-D는 TEV 첨가 전에 다양한 CP-TEV 프로테아제 L27V 구조물의 기초 발광을 보여준다. 도 73E는 도 73A-D의 CP-TEV 프로테아제 L27V 구조물의 반응을 보여준다.
도 74는 다양한 단백질 상보성 L27V 쌍의 폴드 반응을 보여준다.
도 75A-C는 다양한 단백질 상보성 (PCA) L27V 쌍의 발광 (각 쌍의 하나의 L27V 단편은 1/4 배열 (도 75A) 또는 2/3 배열 (도 75B)를 사용하여 FKBP 또는 FRB에 융합된다), 및 HEK 293 세포에서 모니터링된 FKBP 및 FRB의 상호작용을 보여준다. 다양한 단백질 상보성 (PCA) 음성 대조군의 발광이 또한 모니터링되었다 (도 75C).
도 76A-H는 다양한 단백질 상보성 (PCA) L27V 쌍의 발광 (각 쌍의 하나의 L27V 단편은 2/3 배열 (도 76A 및 76C) 또는 1/4 배열 (도 76B 및 76D)을 사용하는FKBP 또는 FRB에 융합되었다), 및 밀 배아 추출물 (도 76A 및 76B) 및 토끼 망상적혈구 용해물 (RRL) (도 76C 및 76D)을 사용하는 FKBP 또는 FRB에서 모니터링된 FKBP 및 FRB의 상호작용을 보여준다. 다양한 단백질 상보성 (PCA) 음성 대조군의 발광은 무세포 시스템(도 76E)에서 또한 측정되었다. 1/4 배열은 무세포 시스템 (도 76F), HEK293 세포 (도 76G) 및 용해 시스템 (도 76H)에서 사용되었다.
도 77A-C는 FK506 및 라파마이신 (도 77A)로 처리된 다양한 단백질 상보성 L27V 쌍의 발광 및 FK506 (도 77A) 및 라파마이신 (도 77B)의 화학 구조를 보여준다.
도 78은 포르스콜린 처리에 의한 OgLuc 변이체 9B8 cAMP 바이오센서의 활성을 보여준다.
도 79A-D는 토끼 망상적혈구 용해물 (도 79A-B) 및 HEK293 세포 (도 79C-D)에서 순환 치환 (도 79A 및 79C) 및 곧은 분할 (도 79B 및 79D) L27V 변이체의 발광을 보여준다.
도 80A-B는 다양한 노출 시간 동안 U2OS 세포에서 OgLuc 변이체 L27V (도 80A) 및 대조군 벡터 pGEM3ZF (도 80B)의 준세포 분포를 보여준다.
도 81A-C는 비융합된 L27V 대조군 (도 81A)와 비교된 전사 인자 Nrf2 (도 81B) 또는 GPCR (도 81C)에 융합된 OgLuc 변이체 L27V의 준세포 위치를 보여준다.
도 82A-C는 PBI-4377 (도 82A)를 사용하여 세포내 신호전달 경로를 모니터링하기 위해 OgLuc 변이체 9B8 opt의 사용을 보여준다. 9B8 opt 루시퍼라아제는 IkB (도 82B) 또는 ODD (Hif-1α의 산소-의존성 분해 도메인) (도 82C)에 융합되었고, 자극 (IkB의 TNFα 및 ODD의 펜안트롤린)에 대한 폴드 반응은 발광을 통해 모니터링되었다.
도 83A-C는 OgLuc 변이체 (도 83A), L27V02 (도 83B), 또는 레닐라 루시퍼라아제 (Rluc) (도 83C)를 사용하여 산화 스트레스 신호 경로의 모니터링을 보여준다.
도 84A-B는 Nrf2-L27V02 센서 (도 84A) 및 Nrf2(ARE)-Luc2P 리포터 (도 84B)의 비교를 보여준다.
도 85A-B는 1 μM TMR (도 85A) 또는 10 μM 로다민 110 (도 85B)를 HT7의 리간드로서 및 코엘렌테라진-h를 IV의 기질로서 사용하여, 리간드가 있거나 없는 IV-HT7의 방출 스펙트럼을 보여준다.
도 86은 프로-코엘렌테라진 기질을 사용하여 ("+ 카스파제")와 혼합되거나 ("무 카스파제") 카스파제-3가 없는 9B8 opt를 발현시키는 용해된 박테리아 세포로부터 생성된 발광을 보여준다.
도 87A-C는 라파마이신 처리가 있는 (도 87B) 또는 없는 (도시되지 않음)의 기질로서 그리고 라파마이신 처리로 인한 반응 (도 87C)으로서 PBI-3939를 사용하는 순환 치환, 곧은 분할 L27V 변이체 CP84 및 CP103로부터 생성된 발광을 보여준다. 순환 치환 곧은 분할 변이체의 개념은 도 87A에서 보여진다.
도 88은 다양한 양의 우레아에의 노출 후 L27V 변이체의 잔류 퍼센트 활성을 보여준다.
도 89는 L27V 변이체의 활성에 대한 3M 우레아의 효과를 보여준다.
도 90A-B는 PBI-3939 기질을 사용하는 OgLuc 융합의 호르몬-유도 핵 수용체 (NR) 전좌의 생물발광 이미지화를 보여준다.
도 91A-B는 PBI-3939 기질을 사용하는 OgLuc 융합의 포르볼 에스테르-유도 단백질 키나아제 C 알파 (PKC 알파) 전좌의 생물발광 이미지화를 보여준다.
도 92A-B는 PBI-3939 기질을 사용하는 OgLuc 융합의 오토파고좀 단백질 전위의 생물발광 이미지화를 보여준다.
상세한 설명
본 발명의 임의의 구현예를 상세히 설명하기에 앞서, 본 발명이 그 적용에 있어서 하기 명세서에 제시되거나 하기 도면에 도식화된 성분들의 구조, 합성, 및 배열의 세부사항에 한정되는 것은 아닌 것으로 이해되어야 한다. 본 발명이 특정 구현예 및 기술과 관련하여 설명되었지만, 본 발명은 다른 구현예가 가능하며 다양한 방식으로 실행되거나 수행될 수 있다.
본 발명의 방법의 하기 설명에서, 공정 단계는 달리 명시하지 않는 한 실온(약 22℃) 및 대기압에서 수행된다. 또한 본원에 언급된 임의의 수치 범위는 하한치부터 상한치까지의 모든 값을 포함하는 것으로 명확히 이해된다. 예를 들어, 농도 범위나 유익한 효과 범위가 1% 내지 50%로 언급되는 경우, 2% 내지 40%, 10% 내지 30%, 또는 1% 내지 3% 등과 같은 값들이 본 명세서에 명백히 열거되는 것으로 의도된다. 마찬가지로, 서열 동일성 범위가, 예컨대 60%에서 <100% 사이로 제시되는 경우, 65%, 75%, 85%, 90%, 95% 등과 같은 중간값이 본 명세서에 명백히 열거되는 것으로 의도된다. 이들은 명확히 의도된 것의 예에 불과하며, 최저치에서부터 최고치까지의 모든 가능한 수치들이 본원에 명백히 언급된 것으로 간주된다.
달리 명백히 명시되지 않는 한, 용어 "포함하는"는 본원의 문맥에서 "포함하는"에 의해 도입된 리스트의 멤버 외에 추가 멤버가 임의로 존재할 수 있음을 가리키기 위해 사용된다. 그러나, 용어 "포함하는"은 추가 멤버가 존재하지 않을 가능성을 포함하며, 즉 이 구현예의 목적을 위해, "포함하는"은 "이루어지는"의 의미를 갖는 것으로 이해되어야 한다는 것이 본 발명의 특정 구현예로서 고려된다.
하기 상세한 설명은 본 발명의 각 특징들의 특정하고/거나 바람직한 변형을 개시한다. 본 발명은 특히 바람직한 구현예로서 본 발명의 둘 이상의 특징을 위해 설명된 둘 이상의 특정하고/거나 바람직한 변형을 조합함으로써 생성된 구현예들을 고려한다.
달리 명백히 명시하지 않는 한, 본원에서 상대적인 함량의 모든 표시는 중량/중량 기준으로 이뤄진다. 총칭을 특징으로 하는 성분의 상대적인 함량의 표시는 상기 총칭에 의해 포함되는 모든 특정 변형 또는 멤버의 총량을 지칭하는 것을 의미한다. 만약 총칭에 의해 정의된 소정의 성분이 소정의 상대적 함량으로 존재하는 것으로 명시되면, 그리고 만약 이 성분이 총칭에 의해 포함되는 특정 변형 또는 멤버인 것을 추가 특징으로 하면, 상기 총칭에 의해 포함되는 다른 변형 또는 멤버가 부가적으로 존재하지 않아서 상기 총칭에 의해 포함되는 성분들의 전체적인 상대적인 함량은 명시된 상대적인 함량을 초과한다는 것을 의미한다. 더욱 바람직하게는, 상기 총칭에 의해 포함되는 다른 변형 또는 멤버가 전혀 존재하지 않는다.
개관
다양한 측면에서, 본 발명은 신규 화합물, 신규 루시퍼라아제, 및 이들의 조합에 관한 것이다. 본 발명은 신규 화합물, 신규 루시퍼라아제, 및/또는 이들의 조합을 포함하는 방법, 조성물, 및 키트를 포함한다.
신규 화합물은, 루시퍼라아제 및 다양한 해양 유기체 예컨대 자포동물 (예를 들면, 레닐라 루시퍼라아제), 해파리 (예를 들면, 아에쿠오레아 해파리로부터의 에쿼린) 및 십각류 절지동물 루시퍼라아제 (예를 들면, 오플로포러스 그라실리로스트리스의 루시퍼라아제 복합물)에서 발견된 광단백질을 비제한적으로 포함하는, 발광을 생성하기 위해 코엘렌테라진을 이용하는 단백질에 의해 기질로서 사용될 수 있는 신규 코엘렌테라진이다. 다양한 구현예에서, 본 발명의 신규 코엘렌테라진은 하기 중 적어도 하나를 갖는다: 증대된 물리 안정성 (예를 들면, 증대된 코엘렌테라진 안정성), 감소된 자체발광, 및 원상태 코엘렌테라진에 대한 세포와의 증가된 생체적합성 (예를 들면, 세포에 대한 더 적은 독성, 이종성 세포 유형을 포함).
본원에 개시된 신규 루시퍼라아제는 십각류 절지동물 루시퍼라아제의 활성 서브유닛의 변이체를 포함한다. 신규 루시퍼라아제는 원상태 및 공지된 코엘렌테라진 뿐만 아니라 본 발명의 신규 코엘렌테라진을 비제한적으로 포함하는, 다양한 코엘렌테라진을 기질로서 이용할 수 있다. 신규 루시퍼라아제는 하기 중 적어도 하나를 나타낸다: 증대된 발광 (증가된 휘도, 증대된 신호 안정성 및/또는 신호 지속시간 포함); 증대된 효소 안정성 (즉, 고온에 대한 증대된 내성, pH 변화, 억제제, 변성제, 및/또는 세제을 포함하는 증대된 효소 활성); 변화된 기질 특이성 (즉, 상대 기질 특이성의 변화); 및 증대된 생체적합성 (세포의 개선된 발현, 감소된 독성, 및/또는 세포 스트레스 중 적어도 하나 포함). 다양한 구현예에서, 본 발명은 다른 분자 (예를 들면, 융합 단백질)에 화학적으로 결합되거나 단단한 표면 (예를 들면, 입자, 모세혈관, 또는 검정 튜브 또는 플레이트) 상에 부착된 가용성 활성 모노머로서 용액에 존재하는 신규 루시퍼라아제를 포함한다.
신규 코엘렌테라진 및 신규 루시퍼라아제의 어떤 조합은 증대된 발광을 포함하는 생물발광 검정에 대한 유의미한 기술 이점을 제고하고, 여기서 증대된 발광은 증대된 신호 안정성 및 증대된 코엘렌테라진 안정성을 하나 이상의 인자로 인한 것일 수 있다. 또한, 많은 신규 코엘렌테라진은 상업적으로-이용가능한 및/또는 공지된 코엘렌테라진보다 더 작도록 설계되었다. 일부 경우에서, 본 발명의 신규 루시퍼라아제는 바람직하게는 상업적으로-이용가능한 및/또는 공지된 더 큰 코엘렌테라진에 대해 신규의 더 작은 코엘렌테라진을 이용한다.
본 발명은 하기의 조합을 포함한다: 신규 코엘렌테라진을 갖는 신규 루시퍼라아제 변이체; 공지된 또는 원상태 코엘렌테라진을 갖는 신규 루시퍼라아제 변이체; 및 코엘렌테라진을 기질로서 사용하는 임의의 공지된 또는 원상태 단백질 (예를 들면, 루시퍼라아제 또는 광단백질)을 갖는 신규 코엘렌테라진.
용어 "코엘렌테라진"은 그의 개시내용이 참고로 본원에 포함되어 있는 WO 2003/040100 및 미국 출원 시리즈 번호 12/056,073 (단락 [0086]) 외에 천연 생성 ("본상태") 코엘렌테라진 뿐만 아니라 코엘렌테라진-n, 코엘렌테라진-f, 코엘렌테라진-h, 코엘렌테라진-hcp, 코엘렌테라진-cp, 코엘렌테라진-c, 코엘렌테라진-e, 코엘렌테라진-fcp, 비스-데옥시코엘렌테라진 ("코엘렌테라진-hh"), 코엘렌테라진-i, 코엘렌테라진-icp, 코엘렌테라진-v, 및 2-메틸 코엘렌테라진을 포함하는 그의 유사물을 의미한다. 용어 "코엘렌테라진"은 또한 본원에 개시된 신규 코엘렌테라진 (참고 이하)을 의미한다. 용어 "공지된 코엘렌테라진"은 본 발명 이전에 공지된 코엘렌테라진 유사물을 의미한다.
용어 "OgLuc"는 코엘렌테라진의 존재에서 광을 산출하는 십각류 절지동물 루시퍼라아제 단백질, 또는 그와 같은 단백질의 변이체를 의미한다. OgLuc 단백질은그의 천연 생성 형태로 모노머일 수 있거나 단백질 복합체의 서브유닛일 수 있다. 본원에 기재된 예시적인 구현예에서 사용된 OgLuc는 오플로포러스 그라실리로스트리스의 로시퍼라아제 복합물로부터 19 kDa 서브유닛이지만, 다른 십각류 절지동물 종 (다른 오플로포러스 종 포함)로부터 필적하는 폴리펩타이드가 또한 이용될 수 있고 본 발명 내에 포함된다 (참고 R.D. Dennell, Observations on the luminescence of bathypelagic Crustacea decapoda of the Bermuda area, Zool . J. Linn. Soc ., Lond . 42 (1955), 페이지 393-406; 참고 또한 Poupin et al. Sept 1999. Inventaire documente des espeies et bilan des formes les + communes de la mer d'Iroise. Rapport Scientifique du Laboratoire d'Ocenographie de lEole Navale ( LOEN ), Brest (83pgs), 이들 각각은 참고로 본원에 포함된다); 그 예는 비제한적으로 하기를 포함한다: 플레시오페나에우스 코루스칸스를 포함하는 아리스테이다에 과의 루시퍼라아제; 헤테로카르푸스 및 파라판달러스 리차르디 를 포함하는 판달리데아 패밀리, 히메노페나아에우스 데빌리스 및 메소페나에우스 트로피칼리스 를 포함하는 솔레노세리다에 과; 루시퍼 티푸스 를 포함하는 루시페리다에 과; 세르게스테스 아틀란티쿠스 , 세르게스테스 아르크티쿠스, 세르게스테스 아르마투스, 세르게스테스 페디포르미스 , 세르게스테스 코르누투스 , 세르게스테스 에드와르드시 , 세르게스테스 헨세니 , 세르게스테스 펙티나투스 , 세르게스테스 사르가시 , 세르게스테스 시밀리스 , 세르게스테스 비길락스 , 세르지아 챌렌게리 , 세르지아 그란디스 , 세르지아 루센스 , 세르지아 프레헨실리스 , 세르지아 포텐스 , 세르지아 로부스타 , 세르지아 스신틸란스 , 및 세르지아 스플렌덴스 를 포함하는 세르게스티다에 과; 글라이퍼스 마르수피알리스 , 렙토켈라 베르무덴시스 , 파라파시파에 설카티프론스 , 및 파시페아 타르다 를 포함하는 파시파에이다에 과; 아칸테피라 아칸티델소니스 , 아칸테피라 아쿠티프론스 , 아칸테피라 브레비로스트리스 , 아칸테피라 쿠컬라타 , 아칸테피라 쿠르티로스트리스 , 아칸테피라 엑시미아 , 아칸테피라 그라실리페스 , 아칸테피라 킹스레이이 , 아칸테피라 메디아, 아칸테피라 마이크로프탈마 , 아칸테피라 펠라지카 , 아칸테피라 프리오노타 , 아칸테피라 푸르푸레아, 아칸테피라 산구이네아 , 아칸테피라 시보가에 , 아칸테피라 스틸로로스트라티스 , 에피리나 바이피다 , 에피리나 피구에이라이 , 에피리나 코스키니이 , 에피리나 옴반고 , 히메노도라 갈라시알리스 , 히메노도라 그라실리스 , 메닌고도라 믹실라 , 메닌고도라 몰리스 , 메닌고도라 베스카 , 노토스토무스 깁보서스 , 노토스토무스 아루리쿨란투스 , 오플로포러스 그라실리로스트리스 , 오플로포러스 그리말디이 , 오플로포러스 노바에제알란디아에 , 오플로포러스 스피니카우다 , 오플로포러스 폴리아세우스 , 오플로포러스 스피노서스 , 오플로포러스 타이푸스 , 시스텔라스피스 브라우에리 , 시스텔라스피스 크리스타타 , 시스텔라스피스 데빌리스 , 및 시스텔라스피스 펠루시다 를 포함하는 오플로포리다에 과; 및 클로로토코이데스 스피니카우다 , 탈라스소카리스 크리니타 , 및 탈라스소카리스 루시다 를 포함하는 탈라스소카리다에 과.
오플로포러스 그라실리로스트리스 루시퍼라아제 (즉, BAB 13776의 169 아미노산, 잔기 28 내지 196)의 천연 생생 형태의 성숙 (즉, 신호 서열 없음) 19 kDa 서브유닛의 폴리펩타이드 서열은 서열번호: 1에서 주어진다. 다양한 구현예에서, 메티오닌 잔기 및 발린 잔기는 이종성 시스템의 클로닝 및 발형을 용이하게 하기 위해 합성 OgLuc 서열 (예를 들면, C1+A4E 폴리펩타이드 서열, 서열번호: 3에서 나타냄)의 초기에 삽입된다. 그럼에도 불구하고, 일관성을 위해, 본원에서 언급된 다양한 아미노산 치환의 위치 수는 오플로포러스 그라실리로스트리스 루시퍼라아제 단백질 복합체의 원상태 19 kDa 서브유닛인 서열번호: 1, 즉, 성숙 (신호 서열 없음)의 폴리펩타이드 서열 "에 대해" 구체화된다.
구체적으로, 단백질은, 서열번호: 1을 갖는 그의 아미노산 서열의 정렬시, 서열 동일성은 > 30%, 바람직하게는 > 40%, 및 가장 바람직하게는 > 50%이면, 십각류 절지동물 루시퍼라아제이고, 단백질은 발광의 방출을 촉진하기 위해 기질로서 코엘렌테라진을 이용할 수 있고, 서열번호: 1의 위치 8에 상응하는 위치에서 시작하는 아미노산 서열은, 5 이하의 차이, 또는 더 바람직하게는 4, 3, 2, 또는 1 이하의 차이, 또는 가장 바람직하게는 차이 없음과 함께 하기이다:
[GSAIVK]-{FE}-[FYW]-x-[LIVMFSYQ]-x-x-{K}-x-[NHGK]-x-[DE]-x-[LIVMFY]-[LIVMWF]-x-{G}-[LIVMAKRG] (서열번호 330) (VII),
여기서 상기 차이는 표 4에 따른 식 (VII)의 패턴 위치 1, 2, 3, 5, 8, 10, 12, 14, 15, 17, 또는 18에 상응하는 위치에서 생긴다. 차이는 표 4의 패턴 위치 사이의 갭 또는 삽입을 또한 포함할 수 있다.
용어 "변이체"는 개시 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드 서열의 변형된 버전을 의미한다. 용어 "모"는 변형된 개시 서열을 의미하는 상대적인 용어이다. 모 서열은 예를 들면, 모 및 변형된 서열에 의해 인코딩된 활성 수준 또는 다른 특성을 비교하기 위해 수득한 변형된 서열에 의해 인코딩된 단백질의 참조로서 일반적으로 사용된다. 개시 서열은 천연 생성 (즉, 원상태 또는 야생형) 서열일 수 있다. 개시 서열은 또한 추가 변형된 변이체 서열일 수 있다. 폴리펩타이드 서열은, (천연 생성 또는 합성일 수 있는) 하나 이상의 아미노산이 서열의 초반, 중간, 및/또는 끝에서 치환, 결실, 및/또는 부가될 때 "변형된다". 폴리뉴클레오타이드 서열은, 하나 이상의 뉴클레오타이드는 서열의 초반, 중간, 및/또는 끝에서 치환, 결실, 및/또는 부가되지만, 서열에 의해 인코딩된 아미노산을 변경시키거나 그렇지 않을 수 있을 때 "변형된다". 일부 구현예에서, 변형은 특정한 OgLuc 또는 OgLuc 변이체의 기능적 단편인 변이체를 생성한다. 기능적 단편은 전체길이 모 서열과 동일한 기능적 활성을 갖는 전체길이 모 서열보다 더 적은 단편이다. 기능적 활성은 발광을 나타내는 능력이다. 일부 구현예에서, 변형은 모 서열의 재배치된 서열, 예컨대 결실 및/또는 삽입을 포함하는 순환 치환 서열 및 재배치된 서열인 변이체를 생성한다.
본원에 개시된 몇 개의 OgLuc 변이체는 고찰을 용이하게 하기 위해 속기 명칭 할당되었다. 용어 "C1+A4E" ("C1A4E"로도 칭함)은 서열번호: 1 (서열번호: 2 및 3)에 대해 아미노산 치환 A4E, Q11R, A33K, V44I, A54F, P115E, Q124K, Y138I, 및 N166R에 의한 특정한 OgLuc 변이체를 의미한다 (여기서 포맷 "x#y"는 변이체 아미노산 'y'로 변화된 위치 '#'에서 모 아미노산 'x'를 나타낸다). 본원에 제공된 C1+A4E OgLuc 변이체의 변이체는 달리 지적되지 않으면 C1+A4E에서 발견된 적어도 아미노산 치환을 함유한다. 용어 "IVY"는 서열번호: 1 (서열번호: 8 및 9)에 대해 추가 아미노산 치환 F54I, I90V, 및 F77Y을 갖는 C1+A4E OgLuc 변이체의 변이체를 의미한다. 용어 "IV"는 서열번호: 1 (서열번호: 14 및 15)에 대해 추가 아미노산 치환 F54I 및 I90V를 갖는 또 하나의 C1+A4E OgLuc 변이체의 변이체. 용어 "QC27"는 서열번호: 1 (서열번호: 4 및 5)에 대해 추가 아미노산 치환 Q18L, F54I, L92H, 및 Y109F를 갖는 또 하나의 C1+A4E OgLuc 변이체의 변이체를 의미한다. 용어 "QC27-9a"는 서열번호: 1 (서열번호: 6 및 7)에 대해 추가 아미노산 치환 V21L, F68Y, L72Q, M75K, H92R, 및 V158F를 갖는 QC27 OgLuc 변이체의 변이체를 의미한다. 용어 "9B8"는 서열번호: 1 (서열번호: 18 및 19)에 대해 추가 아미노산 치환 Q18L, F68Y, L72Q, 및 M75K를 갖는 IV OgLuc 변이체의 변이체를 의미한다. 용어 "9B8 opt"는 9B8 변이체 (서열번호: 24)의 코돈 최적화된 버전을 의미한다. 용어 "9B8 opt+K33N"는 서열번호: 1 (서열번호: 42 및 43)에 대해 추가 아미노산 치환 K33N를 갖는 9B8 opt 변이체의 변이체를 의미한다. 용어 "9B8 opt+K33N+170G"는 서열번호: 1 (서열번호: 68 및 69)에 대해 변이체, 즉, 170G의 C-말단에 첨부된 추가 글리신을 갖는 "9B8 opt+K33N" 변이체의 변이체를 의미한다. 용어들 "L27V+T39T+K43R+Y68D" 및 "L27V"는 서열번호: 1 (서열번호: 88 및 89)에 대해 추가 아미노산 치환 L27V, T39T, K43R, 및 Y68D를 갖는 9B8 opt+K33N" 변이체의 변이체를 의미한다. 용어들 "T39T+K43R+Y68D" 및 "V2"는 서열번호: 1 (서열번호: 92 및 93)에 대해 추가 아미노산 치환 T39T, K43R, 및 Y68D에 의한 "9B8 opt+K33N" 변이체의 변이체를 의미한다.
일반적으로, "증대된"는, 특정한 특성 (예를 들면, 발광, 신호 안정성, 생체적합성, 단백질 안정성 (예를 들면, 효소 안정성), 또는 단백질 발현)이 고려 중 참조 루시퍼라아제 + 코엘렌테라진 조합 또는 루시퍼라아제에 대해 증가된다는 것을 의미하고, 여기서 증가는 참조 루시퍼라아제 + 코엘렌테라진 조합 또는 루시퍼라아제보다 적어도 1%, 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 50%, 적어도 75%, 적어도 90%, 적어도 100%, 적어도 200%, 적어도 500%, 또는 적어도 1000% 더 크다.
용어 "발광"은, 예를 들면, 적당한 기질 예컨대 코엘렌테라진의 존재에서 적절한 조건 하 OgLuc 변이체의 광 출력을 의미한다. 광 출력은 코엘렌테라진 기질의 부가시 개시될 수 있는 발광 반응의 개시에서 광 출력 (때때로 통칭 "T=0" 발광 또는 "플래시")의 즉각적인 또는 즉각에 가까운 측정으로서 측정될 수 있다. 발광 반응은 다양한 구현예에서 용액에서 수행된다. 다른 구현예에서, 발광 반응은 고형 지지체 상에서 수행된다. 용액은, 예를 들면 진핵 또는 원핵 발현 시스템 중 세포로부터의 용해물을 함유할 수 있다. 다른 구현예에서, 발현은 무세포 시스템 상에서 일어나거나, 루시퍼라아제 단백질은 세포외 배지에 분비되고, 이로써, 후자의 경우에, 용해물을 생산할 필요는 없다. 일부 구현예에서, 반응은 적절한 물질, 예를 들면, 코엘렌테라진, 버퍼, 등을 발광 단백질을 함유하는 반응 챔버 (예를 들면, 다중웰 플레이트 예컨대 96-웰 플레이트의 웰)에 주입하여 개시된다. 또 다른 구현예에서, OgLuc 변이체 및/또는 신규 코엘렌테라진은 숙주에 도입되고 발광은 전체 유기체 또는 세포, 그의 조직, 외식편, 또는 추출물을 포함할 수 있는 숙주 또는 그의 부분 상에서 측정된다. 반응 챔버는 광 출력, 예를 들면, 발광분석기 또는 광증폭기를 사용하여 광 출력을 측정할 수 있는 판독 디바이스에서 위치할 수있다. 광 출력 또는 발광은, 예를 들면 초, 분, 시간, 등의 기간 동안에 동일한 반응 챔버에서 경시적으로 또한 측정될 수 있다. 광 출력 또는 발광은 경시적인 평균, 신호의 감퇴의 반감기, 기간에 걸친 신호의 합, 또는 피크 출력으로서 보고될 수 있다. 발광은 상대 광 단위 (RLU)로 측정될 수 있다.
OgLuc 변이체의 "증대된 발광"은 하나 이상의 하기 특징 중 하나 이상에 기인할 수 있다: 증대된 광 출력 (즉, 휘도), 증대된 기질 특이성, 증대된 신호 안정성, 및/또는 증대된 신호 지속시간. 증대된 신호 안정성은, 루시퍼라아제로부터의 신호가, 예를 들면, 시간경과 내에 신호의 감퇴의 반감기에 의해 측정되는 바와 같이 발광을 얼마나 오래 계속하는 가를 포함한다. 증대된 발광은, 하기의 실시에에서 보여진 바와 같이, 본상태, 공지된, 또는 신규 기질과 조합된 루시퍼라아제 예컨대 야생형 OgLuc, OgLuc 변이체 단백질, 레닐라 루시퍼라아제 (예를 들면, hRluc), 또는 개똥벌레 루시퍼라아제 (예를 들면, 포티누스 피랄리스 로부터의 Luc2 루시퍼라아제)의 필적하는 특성에 대해 측정될 수 있다. 예를 들면, 특정한 코엘렌테라진 (본상태, 공지된, 또는 신규 코엘렌테라진 포함)과 조합된 주어진 OgLuc 변이체의 발광은 하기 실시예에 개시된 하나 이상의 검정을 사용하여 임의의 본상태, 공지된, 또는 본원에 개시된 신규 코엘렌테라진과 조합된 OgLuc 변이체 C1+A4E, IV, 또는 IVY 중 하나의 특성과 비교될 수 있다. 특히, 증대된 발광은 기질, PBI-3939을 갖는 문제의 OgLuc 변이체를 함유하는 박테리아 용해물의 인큐베이션으로부터 얻은 발광 신호 (RLU)를 측정하여 결정될 수 있다. Glo-유사 동력학을 제공하기 위해 TERGITOLTM을 함유하는 시약에서 측정되고, 예를 들면, 여기서 효소 불활성화는 느리고, 발광 신호는 안정되는데, 이는 본원의 다른 것에 기재되어 있다. 일부 구현예에서, 어떤 화합물, 예를 들면, PBI-3939을 갖는 일부 루시퍼라아제 변이체, 예를 들면, L27V는 TERGITOLTM의 존재에서 발광 방출, 또는 글로우-유사 동력학의 늘어난 지속시간을 제공한다. 발광 신호는 참조점 예컨대 코엘렌테라진 또는 코엘렌테라진-h을 갖는 C1+A4E 변이체 또는 원상태 코엘렌테라진을 갖는 레닐라 루시퍼라아제의 신호와 비교될 수 있다 .
"효소 안정성"은 효소 활성의 안정성 (즉, 반응 조건에 대한 효소 활성의 내성)을 의미한다. 증대된 효소 안정성은 효소 활성의 증대된 안정성 (즉, 반응 조건에 대한 증대된 내성)을 의미한다. 증대된 효소 안정성은 증대된 열 안정성 (예를 들면, 고온 안정성) 및 화학적 안정성 (예를 들면, 예를 들면, TritonTM X-100을 포함하는 억제제 또는 변성제 예컨대 세제의 존재에서의 안정성)을 포함한다. 효소 안정성은, 특히 단백질 구조의 붕괴로 공지된 조건, 예컨대 고온 또는 화학적 변성제의 존재 하에서 단백질 안정성의 측정으로서 사용될 수 있다. 특히, 증대된 단백질 안정성은 출원 어디(예를 들면, 실시예 28)에 기재된 열 분석을 사용하여 측정될 수 있다. 발광 신호는 코엘렌테라진 또는 코엘렌테라진-h를 갖는 C1+A4E 변이체 또는 원상태 코엘렌테라진을 갖는 레닐라 루시퍼라아제의 참조점과 비교될 수 있다.
"생체적합성"은 루시퍼라아제 및/또는 코엘렌테라진 화합물에 대한 세포 (예를 들면, 진핵 또는 원핵)의 내성을 의미한다. 루시퍼라아제의 생체적합성 및/또는 코엘렌테라진 화합물은 숙주세포 상에서 생기는 스트레스에 관한 것이다. 예를 들면, 세포에 의해 견디지 못하는 것 루시퍼라아제 (즉, 세포에 스트레스를 주는 것)는 효율적으로 세포 내에서 발현될 수 없고, 예를 들면, 루시퍼라아제는 세포 내에서 발현될 수 있지만, 발현된 단백질에 의한 함유체의 형성에 기인하여 감소된 활성을 나타낸다. 루시퍼라아제의 생체적합성은 외부 유전자, 즉, 루시퍼라아제 또는 그의 단편을 인코딩하는 유전자를 함유하는 이식유전자의 삽입을 견디는 세포의 능력과 관련되고, 그것에 의하여 이식유전자를 갖는 세포는 스트레스 반응 경로, 감소된 성장률, 및/또는 감소된 생존력의 유도 (예를 들면, 살아있는 세포, 감소된 막 온전성, 또는 세포자멸사의 증가율의 감소된 수)를 포함하는 스트레스? 징후를 나타내지 않는다. 세포 스트레스의 다른 조짐은 유전자 발현, 신호전달 경로, 및/또는 조절 경로의 변화를 포함할 수 있다. OgLuc 변이체의 증대된 생체적합성은 인자 예컨대 증대된 단백질 발현 및/또는 감소된 세포 스트레스에서 기인할 수 있다. OgLuc 변이체를 인코딩하는 특정한 폴리뉴클레오타이드에 대한 발광의 증대된 발현은 코돈-최적화된 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 야생형 OgLuc 또는 OgLuc 변이체 단백체을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 대한 발광 발현 수준에 대해 결정될 수 있과 여기서, 발광 활성은 단백질 발현 수준을 모니터하기 위한 수단으로서 사용될 수 있다.
특히, OgLuc 변이체, 신규 코엘렌테라진 화합물 및/또는 이들의 조합의 증대된 생체적합성은 세포의 세포 생존력 및/또는 성장률을 측정하여 결정될 수 있다. 예를 들면, OgLuc 변이체의 증대된 생체적합성은 상용성 및/또는 독성 루시퍼라아제가 세포에 어떻게 적용되는 지를 측정하기 위해 임의의 코엘렌테라진 화합물의 부재에서, 개똥벌레 또는 레닐라 루시퍼라아제를 함유하거나 루시퍼라아제를 함유하지 않는 세포와 비교하여 OgLuc 변이체를 함유하는 세포 생존력 및/또는 세포의 성장률을 측정하여 결정될 수 있다. 신규 코엘렌테라진 화합물의 증대된 생체적합성은 상용성 및/또는 독성 코엘렌테라진 화합물이 세포에 어떻게 적용되는 지를 측정하기 위해 천연 또는 공지된 코엘렌테라진과 비교하여 신규 코엘렌테라진 화합물에 노출될 세포의 루시퍼라아제 발현의 부재에서 세포 생존력을 측정하여 결정될 수 있다. OgLuc 변이체와 신규 코엘렌테라진 화합물과의 조합의 증대된 생체적합성은 개똥벌레 또는 레닐라 루시퍼라아제를 함유하거나 루시퍼라아제를 함유하지 않으며 천연 또는 공지된 코엘렌테라진에 노출될 세포와 비교된, OgLuc 변이체를 함유하고 신규 코엘렌테라진에 노출된 세포의 세포 생존력 및/또는 성장률을 측정하여 결정될 수 있다.
특히, 증대된 생체적합성은 적용의 어디에 기재된 세포 생존력 분석 (예를 들면, 실시예 18에 기재된 CellTiter-Glo® 검정 또는 세포자멸사 검정을 사용 예컨대 제조자의 설명서에 따라 카스파제-Glo® 기술을 사용) 또는 당해기술에 공지된 것을 사용하여 결정될 수 있다. 세포 생존력 또는 세포자멸사에 대한 OgLuc 변이체의 효과는 참조 루시퍼라아제, 예컨대 C1+A4E 변이체, 개똥벌레 루시퍼라아제 또는 레닐라 루시퍼라아제의 효과와 비교될 수 있다. 세포 생존력 또는 세포자멸사에 대한 신규 코엘렌테라진 화합물의 효과는 세포 생존력 또는 세포자멸사에 대한 천연 또는 공지된 코엘렌테라진 화합물의 효과와 비교될 수 있다.
증대된 생체적합성은 세포 성장 또는 유전자 발현에 대한 OgLuc 변이체 및/또는 신규 코엘렌테라진 화합물의 효과를 측정하여 결정될 수 있다. 예를 들면, OgLuc 변이체의 증대된 생체적합성은 기간 동안 세포 수를 측정하거나 또 하나의 루시퍼라아제를 함유하거나 루시퍼라아제를 함유하지 않는 세포와 비교하여 OgLuc 변이체를 함유하는 세포의 샘플에서 스트레스 반응 유전자의 발현을 측정하여 결정될 수 있다. 신규 코엘렌테라진 화합물의 증대된 생체적합성은 천연 또는 공지된 코엘렌테라진에 노출되거나 코엘렌테라진 없는 세포와 비교하여 신규 코엘렌테라진 화합물에 노출될 세포의 샘플에서 스트레스 반응 유전자의 발현을 측정하여 결정될 수 있다. 세포 성장 또는 유전자 발현에 대한 OgLuc 변이체의 효과는 참조 루시퍼라아제, 예컨대 C1+A4E 변이체, 개똥벌레 루시퍼라아제 또는 레닐라 루시퍼라아제와 비교될 수 있다. 세포 성장 또는 유전자 발현에 대한 신규 코엘렌테라진의 효과는 천연 또는 공지된 코엘렌테라진과 비교될 수 있다.
세포질에서 또는 분비 형태로서 본 발명의 OgLuc 변이체를 발현시키는 강력한, 안정한 세포주의 확인은 루시퍼라아제 및 작은 크기의 OgLuc 유전자의 밝은 신호에 의해 촉진될 수 있다. 비교적 작은 유전자 서열은 외래 DNA의 세포의 게놈으로의 통합으로부터 얻은 유전자 불안정성의 가능성을 감소시키는 것으로 기대된다. 본 발명의 OgLuc 변이체 및/또는 신규 코엘렌테라진의 증가된 휘도의 결과로서, 전달감염에 필요한 더 적은 단백질 발현, 및 이로써 더 적은 DNA는 OgLuc 변이체 및/또는 신규 코엘렌테라진에 대해 증대된 생체적합성에 기여하는 다른 공지된 루시퍼라아제 예컨대 원상태 OgLuc, 개똥벌레, 또는 레닐라 루시퍼라아제와 비교하여 주어진 수준의 휘도를 생산할 수 있다. OgLuc 변이체의 증대된 생체적합성은 DNA 또는 시약, 예를 들면, 다른 루시퍼라아제, 예를 들면, 원상태 OgLuc, 개똥벌레 또는 레닐라 루시퍼라아제로 전달감염된 세포와 동일한 수준의 발광을 갖는 세포를 산출하기 위해 일시적인 전달감염이 필요한 전달감염 화합물질의 양에 의해 측정될 수 있다. 일부 구현예에서, 전달감염에 필요한 OgLuc 변이체 DNA 또는 시약의 양은 다른 루시퍼라아제로 얻은 동일한 수준의 발광을 갖는 전달감염된 세포를 산출하기 위해 또 하나의 루시퍼라아제, 예를 들면, 원상태 OgLuc, 개똥벌레, 또는 레닐라 루시퍼라아제에 대해 필요한 양보다 더 적다. OgLuc 변이체의 증대된 생체적합성은 전달감염 후 세포의 회복 시간에 의해 측정될 수 있다. 일부 구현예에서, 변이체에 의한 전달감염 후 회복에 필요한 시간의 양은 또 하나의 루시퍼라아제, 예를 들면, 원상태 OgLuc, 개똥벌레 또는 레닐라 루시퍼라아제에 대해 필요한 시간 보다 더 적다.
"상대 기질 특이성"은 시험 코엘렌테라진 기질의 존재에서 루시퍼라아제의 발광을 참조 코엘렌테라진 기질의 존재에서 루시퍼라아제의 발광으로 나누어서 측정된다. 예를 들면, 상대 특이도는 본 발명의 신규 코엘렌테라진을 갖는 루시퍼라아제의 발광을 상이한 코엘렌테라진 (예를 들면, 천연 또는 공지된 코엘렌테라진, 참고 도 1 예를 들면, 또는 상이한 본 발명의 신규 코엘렌테라진)을 갖는 루시퍼라아제의 발광으로 나누어서 측정될 수 있다. 비교된 시험 코엘렌테라진 기질 및 참조 코엘렌테라진 기질은 상대 기질 특이성을 측정하기 위한 비교 기질 쌍인 것으로 고려된다.
"상대 기질 특이성의 변화"는 비교 기질 상을 사용하는 시험 루시퍼라아제의 상대 기질 특이성을 동일한 비교 기질 쌍을 사용하는 참조 루시퍼라아제의 상대 기질 특이성으로 나누어서 측정된다. 예를 들면, 상대 특이도의 변화는 상이한 코엘렌테라진 (예를 들면, 천연 또는 공지된 코엘렌테라진 또는 상이한 본 발명의 신규 코엘렌테라진)과 비교된 본 발명의 신규 코엘렌테라진을 갖는 시험 루시퍼라아제의 상대기질 특이성을 시험 루시퍼라아제에 사용된 동일한 상이한 코엘렌테라진과 비교된 동일한 본 발명의 신규 코엘렌테라진을 갖는 참조 루시퍼라아제의 상대 기질 특이성을 나누어서 측정될 수 있다.　
일부 구현예에서, 하나의 신규 코엘렌테라진에 의한 발광은 상이한 신규 코엘렌테라진에 의한 발광과 비교된다. 일부 구현예에서, 하나의 천연 또는 공지된 코엘렌테라진에 의한 발광은 또 하나의 천연 또는 공지된 코엘렌테라진에 의한 발광과 비교된다. 또 다른 구현예에서, 하나의 천연 또는 공지된 코엘렌테라진에 의한 발광은 신규 코엘렌테라진에 의한 발광과 비교된다.
본 발명의 신규 코엘렌테라진은 특성 예컨대 증대된 물리 안정성 (예를 들면, 증대된 코엘렌테라진 안정성) 또는 감소된 자체발광을 포함한다. 코엘렌테라진의 물리 안정성은 코엘렌테라진이 어떤 상태에서 어떻게 안정한가를 의미하고, 이로써 루시퍼라아제에 의해 기질로서 사용될 때 발광하는 능력을 유지한다. 루시퍼라아제 또는 광단백질의 활성에 의존하지 않는 발광을 자체발광이라 한다. 자체발광은 부패 또는 분해 동안에 광의 형태로 방출되는 에너지에 의해 생성된 물질의 발광이다. 예를 들면, 자체발광은 발광 기질 코엘렌테라진의 동시산화에 의해 야기될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, "순수한" 또는 "정제된"는 존배하는 지배적인 종에서 대상 종을 의미하고 (즉, 몰 및/또는 질량 기준으로, 조성물 중 물, 용매, 버퍼, 또는 수성 시스템의 다른 공통 성분을 제외하고 임의의 다른 개별적인 종보다 더 풍부하다), 일부 구현예에서, 정제된 분획은 조성물이고, 여기서 상기 대상 종은 존재하는 모든 거대분자 종의 적어도 약 50% (몰 기준)를 포함한다. 일반적으로, "실질적으로 순수한" 조성물은 조성물에 존재하는 모든 거대분자 종의 약 80% 초과, 일부 구현예에서 약 85% 초과, 약 90% 초과, 약 95% 초과, 또는 약 99% 초과를 포함할 것이다. 일부 구현예에서, 대상 종은 필수 동종물 (오염 종은 종래의 검출 방법에 의해 조성물에서 검출될 수 없다)로 정제되고, 여기서 조성물은 단일 거대분자 종으로 본질적으로 이루어진다.
코엘렌테라진 유도체
일부 구현예에서, 본 발명은 식 (Ia) 또는 (Ib)의 신규 코엘렌테라진 유도체를 제공한다:
Figure pct00015

또는
Figure pct00016

여기서 R2는
Figure pct00017
, 또는 C2-5 직쇄 알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
R6은 -H, -OH, -NH2 , -OC(O)R 또는 -OCH2OC(O)R로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
R8는
Figure pct00018
, H 또는 저급 사이클로알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
여기서 R3 및 R4 모두는 H이거나 둘 모두는 C1 -2 알킬이고;
W는 -NH2, 할로, -OH, -NHC(O)R, -CO2R이고;
X는 -S-, -O- 또는 -NR22-이고;
Y는 -H, -OH, 또는 -OR11이고;
Z는 -CH- 또는 -N-이고;
각각의 R11은 독립적으로 -C(O)R" 또는 -CH2OC(O)R"이고;
R22는 H, CH3 또는 CH2CH3이고;
각각의 R은 독립적으로 C1 -7 직쇄 알킬 또는 C1 -7 분지형 알킬이고;
R"는 C1 -7 직쇄 알킬 또는 C1 -7 분지형 알킬이고;
상기 파선 결합은 포화 또는 불포화일 수 있는 임의의 고리의 존재를 나타내고;
단, R2가
Figure pct00019
또는
Figure pct00020
일 때, R8은
Figure pct00021
이 아니고;
단, R2가
Figure pct00022
일 때, R8은
Figure pct00023
또는 저급 사이클로알킬이고;
단, R6이 NH2일 때, R2는
Figure pct00024
또는 C2-5 알킬이고;
또는 R8은
Figure pct00025
이 아니다.
용어 "알킬"은, 본원에서 사용된 바와 같이, 탄화수소 화합물로부터 수소 원자를 제거하여 얻고, 포화, 부분 불포화, 또는 완전 불포화일 수 있는 1가 모이어티에 속한다. 알킬 그룹은 직쇄 또는 분지형일 수 있다. 알킬 그룹은, 예를 들면, 할로로 임의 치환될 수 있다. 직쇄 알킬 그룹의 예는 비제한적으로 하기를 포함한다: 에틸, n-프로필, n-부틸, 및 n-프로필, n-헥실 및 n-헵틸. 하나 이상의 탄소-탄소 이중결합을 갖는 불포화 알킬 그룹의 예는 비제한적으로 하기를 포함한다: 에테닐 (비닐,-CH=CH2), 2-프로페닐 (알릴, -CH-CH=CH2), 및 부테닐. 하나 이상의 탄소-탄소 삼중결합을 갖는 불포화 알킬의 예는 비제한적으로 하기를 포함한다: 에티닐 및 2-프로피닐 (프로파르길). 분지형 알킬 그룹의 예는 이소프로필, 이소-부틸, sec-부틸, t-부틸 및 이소-펜틸을 포함한다.
용어 "저급 사이클로알킬"은, 본원에서 사용된 바와 같이, 3 내지 5 탄소 원자를 갖는 탄화수소 화합물로부터 수소 원자를 제거하여 얻는 1가 모이어티에 속한다. 포화 저급 사이클로알킬 그룹의 예는 비제한적으로 하기를 포함한다: 그룹 예컨대 사이클로프로필, 사이클로부틸 및 사이클로펜틸. 하나 이상의 탄소-탄소 이중결합을 갖는 불포화 저급 사이클로알킬 그룹의 예는 비제한적으로 하기를 포함한다: 그룹 예컨대 사이클로프로페닐, 사이클로부테닐 및 사이클로펜테닐.
용어 "할로"는, 본원에서 사용된 바와 같이, 할로겐, 예컨대 Cl, F, Br 또는 I에 속한다.
일부 구현예에서, R2는
Figure pct00026
이고; X는 O 또는 S이다. 다른 구현예에서, R2는 C2 -5 직쇄 알킬이다. 어떤 구현예에서, R8은
Figure pct00027
저급 사이클로알킬 또는 H이다. 다른 구현예에서, R8는 벤질이다. 일부 구현예에서, R"는 -C(CH3)3, -CH(CH3)2, -CH2C(CH3)3, 또는 -CH2CH(CH3)2이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 식 (IIa) 또는 (IIb)에 따른 화합물을 제공한다:
Figure pct00028

또는
Figure pct00029

여기서 X는 O 또는 S이고, R6은 H 또는 OH이고, R11는 상기에서 정의된 바와 같고, 상기 파선 결합은 임의 고리의 존재를 나타낸다.
일부 구현예에서, 본 발명은 식 (IIIa) 또는 (IIIb)에 따른 화합물을 제공한다:
Figure pct00030

또는
Figure pct00031

여기서 R12는 C2 -5 직쇄 알킬, 푸릴 또는 티에닐이고, R6은 H 또는 OH이고, R11는 상기에서 정의된 바와 같고, 상기 파선 결합은 임의 고리의 존재를 나타낸다.
일부 구현예에서, 본 발명은 식 (IVa) 또는 (IVb)에 따른 화합물을 제공한다:
Figure pct00032

또는
Figure pct00033

여기서 X는 O 또는 S이고, R6은 H 또는 OH이고, R18은 H,
Figure pct00034
또는 저급 사이클로알킬이고, R3, R4 및 R11는 상기에서 정의된 바와 같고, 상기 파선 결합은 임의 고리의 존재를 나타낸다.
일부 구현예에서, 본 발명은 식 (Va) 또는 (Vb)에 따른 화합물을 제공한다:
Figure pct00035

또는
Figure pct00036

여기서 R8은 벤질이고, R11는 상기에서 정의된 바와 같고, 상기 파선 결합은 임의 고리의 존재를 나타낸다.
일부 구현예에서, 본 발명은 식 (VIa) 또는 (VIb)의 신규 코엘렌테라진 유도체를 제공한다:
Figure pct00037

또는
Figure pct00038

여기서 R2는
Figure pct00039
또는 C2-5 직쇄 알킬 로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
R6은 -H, -OH, -NH2, -OC(O)R 또는 -OCH2OC(O)R로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
R8는
Figure pct00041
H 또는 저급 사이클로알킬 로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
여기서 R3 및 R4 모두는 H이거나 둘 모두는 C1 -2 알킬이고;
W는 -NH2, 할로, -OH, -NHC(O)R, -CO2R이고;
X는 -S-, -O- 또는 -NH-이고;
Y는 -H, -OH, 또는 -OR11이고;
Z는 -CH- 또는 -N-이고;
각각의 R11은 독립적으로 -C(O)R" 또는 -CH2OC(O)R"이고;
각각의 R은 독립적으로 C1 -7 직쇄 알킬 또는 C1 -7 분지형 알킬이고;
R"는 C1 -7 직쇄 알킬 또는 C1 -7 분지형 알킬이고;
상기 파선 결합은 포화 또는 불포화일 수 있는 임의의 고리의 존재를 나타내고;
단, R2 가
Figure pct00042
Figure pct00043
또는
Figure pct00044
일 때, R8은
Figure pct00045
이 아니고;
단, R2가
Figure pct00046
일 때, R8은
Figure pct00047
또는 저급 사이클로알킬이고;
단, R6이 NH2일 때, R2는
Figure pct00048
또는 C2-5 알킬이고;
또는 R8은
Figure pct00049
이 아니다.
본 발명에 따른 적당한 화합물은 하기를 포함한다:
Figure pct00050

이성질체, 염 및 보호된 형태
어떤 화합물은 하나 이상의 특별한 기하학적, 광학, 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 에피머, 입체이성질체, 호변체, 구조, 또는 아노머 형태로 존재할 수 있고, 이들은 비제한적으로, 시스- 및 트랜스-형태; E- 및 Z-형태; c-, t-, 및 r-형태; 엔도 및 엑소-형태; R-, S-, 및 메소-형태; D- 및 L-형태; d- 및 l-형태; (+) 및 (-) 형태; 케토-, 엔올-, 및 엔올레이트- 형태; 신- 및 안티-형태; 향사- 및 배사-형태; α- 및 β-형태; 축방향 및 적도방향 형태; 보트-, 체어-, 트위스트-, 엔빌로프-, 및 하프-체어 형태; 및 이들의 조합을 포함하고, 이하 집합적으로 "이성질체" (또는 "이성질체 형태")라 칭한다.
호변체 형태에 대해 이하에서 논의 것 외에, 구체적으로 용어 "이성질체"는, 본원에서 사용된 바와 같이, 구조 (또는 구조상) 이성질체 (즉, 단지 공간의 원자들의 위치에 의해서보다 원자 사이의 연결이 차이가 있는 이성질체)라는 것에 주목한다. 예를 들면, 메톡시 그룹, 즉 -OCH3,에 대한 언급은 그의 구조 이성질체, 하이드록시메틸 그룹, -CH2OH의 언급으로서 이해되지 않아야 한다. 마찬가지로, 오르토-클로로페닐에 대한 언급은 구조 이성질체, 메타-클로로페닐에 대한 언급으로서 이해되지 않아야 한다. 그러나, 구조의 부류에 대한 언급은 그 부류 내의 구조적 이성질체 형태를 포함할 수 있다 (예를 들면, C1 -7 알킬은 n-프로필 및 이소-프로필을 포함하고; 부틸은 n-, 이소-, sec-, 및 tert-부틸을 포함하고; 메톡시페닐은 오르토-, 메타-, 및 파라메톡시페닐을 포함한다).
하나 이상의 동위원소 치환를 갖는 화합물은 용어 "이성질체"에 구체적으로 포함되는 것을 주목한다. 예를 들면, H는 1H, 2H (D), 및 3H (T)을 포함하는 임의의 동위원소 형태일 수 있고; C는 12C, 13C, 및 14C을 포함하는 임의의 동위원소 형태일 수 있다; O는 16O 및 18O 등을 포함하는 임의의 동위원소 형태일 수 있다.
달리 구체화되지 않으면, 특정한 화합물에 대한 언급은 (전체적으로 또는 부분적으로) 라세미 및 다른 그의 혼합물을 포함하는 모든 그와 같은 이성질체 형태를 포함한다. 그와 같은 이성질체 형태의 제조 방법 (예를 들면, 비대칭 합성) 및 분리 (예를 들면, 분별 결정 및 크로마토그래픽 수단)은 당해기술에서 공지되어 있거나 공지된 방식으로 본원에서 교시된 방법, 또는 공지된 방법들을 채택하여 쉽게 얻는다.
달리 구체화되지 않으면, 특정한 화합물에 대한 언급은, 예를 들면 이하에서 논의된 바와 같이 그의 이온성, 염, 용매화물, 및 보호된 형태를 또한 포함한다. 활성 화합물의 상응하는 염을, 예를 들면, 약제학적으로-허용가능한 염을 제조, 정제, 및/또는 취급하는 것이 편리 또는 바람직할 수 있다. 약제학적으로 허용가능한 염의 에는 하기에서 논의되어 있다: Berge 등, J. Pharm. Sci ., 66:1-19 (1977).
예를 들면, 화합물이 음이온성이거나, 음이온성 (예를 들면, -COOH는 -COO-일 수 있다)일 수 있는 작용 그룹을 가지면, 이때 염은 적당한 양이온으로 형성될 수 있다. 적당한 무기 양이온의 예는 비제한적으로 하기를 포함한다: 알칼리 금속 이온 예컨대 Na+ 및 K+, 알칼리토 양이온 예컨대 Ca2 + 및 Mg2 +, 및 다른 양이온 예컨대 Al3 +. 적당한 유기 양이온의 예는 비제한적으로 하기를 포함한다: 암모늄 이온 (즉, NH4 +) 및 치환된 암모늄 이온 (예를 들면, NH3R+, NH2R2 +, NHR3 +, NR4 +). 일부 적당한 치환된 암모늄 이온의 예는 하기로부터 유래된 것이다: 에틸아민, 디에틸아민, 디사이클로헥실아민, 트리에틸아민, 부틸아민, 에틸렌디아민, 에탄올아민, 디에탄올아민, 피페라진, 벤질아민, 페닐벤질아민, 콜린, 메글루민, 및 트로메타민, 뿐만 아니라 아미노산, 예컨대 라이신 및 아르기닌. 공통 사급 암모늄 이온의 예는 N(CH3)4 +이다.
화합물이 양이온성이거나, 양이온성 (예를 들면, -NH2는 -NH3 +일 수 있다)일 수 있는 작용 그룹을 가지면, 이때 염은 적당한 음이온으로 형성될 수 있다. 적당한 무기 음이온의 예는 비제한적으로 하기를 포함한다: 하기 무기산으로부터 유래된 것: 염산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 황산, 아황산, 질산, 아질산, 인산, 및 아인산. 적당한 유기 음이온의 예는 비제한적으로 하기를 포함한다: 하기 유기산으로부터 유래된 것: 아세트산, 프로피온산, 석신산, 글라이콜산, 스테아르, 팔미트, 락트산, 말산, 파모산, 타르타르산, 시트르산, 글루콘산, 아스코르브산, 말레산, 하이드록시말레산, 페닐아세트산, 글루탐산, 아스파르트산, 벤조산, 신남산, 피루브산, 살리실산, 설파닐산, 2-아세톡시벤조산, 푸마르산, 페닐설폰산, 톨루엔설폰산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, 에탄 디설폰산, 옥살산, 판토텐산, 이세티온산, 발레르산, 락토바이온산, 및 글루콘산. 적당한 폴리머 음이온의 예는 비제한적으로 하기를 포함한다: 하기 폴리머 산으로부터 유래된 것: 탄닌산, 카복시메틸 셀롤루오스.
활성 화합물의 상응하는 용매화물을 제조, 정제, 및/또는 취급하는 것이 편리하거나 바람직할 수 있다. 용어 "용매화물"은 종래의 의미로 용질 (예를 들면, 활성 화합물, 활성 화합물의 염) 및 용매의 복합물을 의미하도록 본원에서 사용된다. 용매가 물이면, 용매화물은 수화물, 예를 들면, 모노-히드레이트, 디-히드레이트, 트리-히드레이트, 등의 의미하는 것이 편리할 수 잇다.
화학적으로 보호된 형태로 활성 화합물을 제조, 정제, 및/또는 취급하는 것이 편리하거나 바람직할 수 있다. 용어 "화학적으로 보호된 형태"는, 본원에서 사용된 바와 같이, 하나 이상의 반응성 작용 그룹이 바람직하지 않은 화학적 반응으로부터 보호되고, 즉, 보호된 또는 보호 그룹 (차폐된 또는 차폐 또는 차단된 또는 차단 그룹으로도 공지됨)의 형태인 화합물에 속한다. 반응성 작용 그룹을 보호하여, 다른 비보호된 반응성 작용 그룹을 수반하는 반응은 보호된 그룹에 영향을 주지 않으면서 수행될 수 있고; 보호 그룹은 분자의 나머지에 실질적으로 영향을 주지 않으면서 그 후의 단계에서 통상 제거될 수 있다. 참고, 예를 들면, Protectve Groups Organic Synthesis (T. GREEN 및 P. Wuts, Wiley, 1999).
예를 들면, 하이드록시 그룹은 하기의 예와 같은 에테르 (-OR) 또는 에스테르 (-OC(=O)R)로서 보호될 수 있다: t-부틸 에테르; 벤질, 벤즈히드릴 (디페닐메틸), 또는 트리틸 (트리페닐메틸) 에테르; 트리메틸실릴 또는 t-부틸디메틸실릴 에테르; 또는 아세틸 에스테르 (-OC(=O)CH3, -OAc). 예를 들면, 알데하이드 또는 케톤 그룹은 아세탈 또는 케탈, 각각으로서 보호될 수 있고, 여기서 상기 카보닐 그룹 (>C=O)는, 예를 들면, 일차 알코올과의 반응에 의해 디에테르 (>C(OR)2)로 전환된다. 알데하이드 또는 케톤 그룹은 산의 존재에서 과잉의 물을 사용하여 가수분해에 의해 쉽게 재생된다. 예를 들면, 아민 그룹은, 예를 들면, 하기의 예와 같은 아마이드 또는 우레탄로서 보호될 수 있다: 메틸 아마이드 (-NHCO-CH3); 벤질옥시 아마이드 (-NHCO-OCH2C6H5, -NHCbz); t-부톡시 아마이드 (-NHCO-OC(CH3)3, -NH-Boc); 2-바이페닐-2-프로폭시 아마이드 (-NHCO-OC(CH3)2C6H4C6H5, -NH-Bpoc), 9-플루오레닐메톡시 아마이드 (-NH-Fmoc), 6-니트로베라트릴옥시 아마이드 (-NH-Nvoc), 2-트리메틸실릴에틸옥시 아마이드 (-NH-Teoc), 2,2,2-트리클로로에틸옥시 아마이드 (-NH-Troc), 알릴옥시 아마이드 (-NH-Alloc), 2(-페닐설포닐)에틸옥시 아마이드 (-NH-Psec); 또는, 적당한 경우에, N-옥사이드.
예를 들면, 카복실산 그룹은 하기의 예와 같은 에스테르ㄹ서 보호될 수 있다: C1 -7 알킬 에스테르 (예를 들면, 메틸 에스테르; t-부틸 에스테르); C1 -7 할로알킬 에스테르 (예를 들면, C1 -7 트리할로알킬에스테르); 트리C1 -7 알킬실릴-C1 -7 알킬 에스테르; 또는 C5 -20 아릴-C1 -7 알킬 에스테르 (예를 들면, 벤질 에스테르; 니트로벤질 에스테르); 또는 아마이드, 예를 들면, 메틸 아마이드.
예를 들면, 티올 그룹은 하기의 예와 같은티오에테르 (-SR)로서 보호될 수 있다: 벤질 티오에테르; 아세트아미도메틸 에테르 (-S-CH2NHC(=O)CH3).
코엘렌테라진 유도체의 합성
본 발명에 따른 코엘렌테라진 유도체는 실시예 1-16에 상술된 방법에 따라 합성될 수 있다.
돌연변이체 오플로포러스 루시퍼라아제
본 발명의 구현예에서, 본원에 기재된 다양한 기술은 개선된 합성 OgLuc 폴리펩타이드를 생산하기 위해 아미노산 치환용 부위를 확이하기 위해 사용되었다. 추가 기술은 폴리펩타이드이 발현을 증대시키기 위해 다양한 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클로오타이드의 코돈을 최적화하기 위해 사용되었다. 하나 이상의 아미노산 치환을 단독 또는 다양한 조합으로 제조하는 것은 증대된 발광 (예를 들면, 증대된 휘도, 증대된 신호 안정성, 증대된 효소 안정성, 및/또는 상대 기질 특이성의 변화)을 갖는 합성 OgLuc-유형 폴리펩타이드를 생산했다는 것을 발견했다. 또한, 다양한 합성 OgLuc 변이체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에서 하나 이상의 코돈 최적화 치환을 포함하는 다양한 원핵 및 진핵 발현 시스템에서 폴리펩타이드의 증대된 발현을 얻었다. 본 발명의 하나의 구현예는, 원핵 및/또는 진핵세포에서 발현될 때 모노머 형태에서 가용성이고 활성인 합성 OgLuc 변이체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드이다.
본 발명의 OgLuc 변이체는 관심 임의의 단백질 또는 관심 분자에 결합될 수 있다. 일부 구현예에서, 변이체는 융합 단백질이고, 예를 들면 일부 변이체는 N-말단 또는 C-말단에서 부착된 HaloTag® 폴리펩타이드에 커플링된다. 달리 지적되지 않으면, HaloTag® 융합을 포함하는 변이체는 명칭, 예를 들면, 'IVY-HT7'의 부분으로서 'HT7'를 포함한다. 일부 구현예에서, 신호 서열 (예를 들면, 천연 생성 오 플로포러스 그라실리로스트리스 신호 서열)은 세포로부터 융합 단백질의 분비를 촉진하기 위해 융합 단백질의 N-말단에 부착된다. OgLuc 루시퍼라아제의 천연 생성 신호 서열 이외의 신호 서열은, 포유류 세포 또는 다른 세포 유형에서 단백질 분비를 촉진하는 것으로 당해기술에 공지되어 있다. 신호 서열은, 막 고착 서열와 조합하여, 세포막의 외표면 상에 OgLuc 변이체의 위치를 정하고 그것을 나타내기 위해 사용될 수 있다. 당해기술에 공지된 다른 방법은 막에 대한 OgLuc 변이체의 위치를 정하거나 세포 내의 위치를 정하기 위해 또한 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명은 상응하는 모 변이체 십각류 절지동물 루시퍼라아제에 대해 증대된 발광을 갖는 변형된 십각류 절지동물 루시퍼라아제를 제공한다. 예를 들면, 모, 변이체 OgLuc는 C1+A4E, IVY, IV, QC27, QC27-9a, 9B8, 9B8 opt+K33N, 9B8 opt+K33N+170G, V2 또는 "L27V"다. 또 하나의 구현예에서, 본 발명은 신규 코엘렌테라진을 이용하는 변형된 십각류 절지동물 루시퍼라아제를 제공한다. 일 구현예에서, 변형된 십각류 절지동물 루시퍼라아제는 본상태, 공지된 또는 신규 코엘렌테라진에 대해 상대 특이도의 변화를 갖는다. 일 구현예에서, 변형된 십각류 절지동물 루시퍼라아제는 상응하는 모, 변이체 십각류 절지동물 루시퍼라아제에 관해서 상대 특이도의 변화를 갖는다.
일부 구현예에서, 상응하는 모, 변이체 십각류 절지동물 루시퍼라아제는 하기의 루시퍼라아제를 비제한적으로 포함하는 십각류 절지동물 목 내의 과로부터 다양한 종을 포함하는 십각류 절지동물 종이다: 플레시오페나에우스 코루스칸스 를 포함하는 아리스테이다에 과; 헤테로카르푸스 및 파라판달러스 리차르디 를 포함하는 판달리데아 과, 히메노페나아에우스 데빌리스 및 메소페나에우스 트로피칼리스를 포함하는 솔레노세리다에 과; 루시퍼 티푸스 를 포함하는 루시페리다에 과; 세르게스테스 아틀란티쿠스, 세르게스테스 아르크티쿠스, 세르게스테스 아르마투스, 세르게스테스 페디포르미스 , 세르게스테스 코르누투스 , 세르게스테스 에드와르드시 , 세르게스테스 헨세니 , 세르게스테스 펙티나투스 , 세르게스테스 사르가시 , 세르게스테스 시밀리스 , 세르게스테스 비길락스 , 세르지아 챌렌게리 , 세르지아 그란디스 , 세르지아 루센스 , 세르지아 프레헨실리스 , 세르지아 포텐스 , 세르지아 로부스타 , 세르지아 스신틸란스 , 및 세르지아 스플렌덴스를 포함하는 세르게스티다에 과; 글라이퍼스 마르수피알리스 , 렙토켈라 베르무덴시스 , 파라파시파에 설카티프론스 , 및 파시페아 타르다 를 포함하는 파시파에이다에 과; 아칸테피라 아칸티델소니스, 아칸테피라 아쿠티프론스 , 아칸테피라 브레비로스트리스 , 아칸테피라 쿠컬라타 , 아칸테피라 쿠르티로스트리스 , 아칸테피라 엑시미아 , 아칸테피라 그라실리페스 , 아칸테피라 킹스레이이 , 아칸테피라 메디아, 아칸테피라 마이크로프탈마 , 아칸테피라 펠라지카 , 아칸테피라 프리오노타 , 아칸테피라 푸르푸레아 , 아칸테피라 산구이네아 , 아칸테피라 시보가에 , 아칸테피라 스틸로로스트라티스 , 에피리나 바이피다 , 에피리나 피구에이라이 , 에피리나 코스키니이, 에피리나 옴반고 , 히메노도라 갈라시알리스, 히메노도라 그라실리스 , 메닌고도라 믹실라 , 메닌고도라 몰리스 , 메닌고도라 베스카 , 노토스토무스 깁보서스 , 노토스토무스 아루리쿨란투스 , 오플로포러스 그라실리로스트리스 , 오플로포러스 그리말디이 , 오플로포러스 노바에제알란디아에 , 오플로포러스 스피니카우다 , 오플로포러스 폴리아세우스 , 오플로포러스 스피노서스 , 오플로포러스 타이푸스 , 시스텔라스피스 브라우에리 , 시스텔라스피스 크리스타타 , 시스텔라스피스 데빌리스 , 및 시스텔라스피스 펠루시다를 포함하는 오플로포리다에 과; 및 클로로토코이데스 스피니카우다 , 탈라스소카리스 크리니타 , 및 탈라스소카리스 루시다를 포함하는 탈라스소카리다에 과. 어떤 구현예에서, 변형된 루시퍼라아제는 상응하는 야생형 루시퍼라아제에 대해 원핵세포 및/또는 진핵세포에서 증가된 발광 방출, 예를 들면, 적어도 1.3-배, 적어도 2-배, 또는 적어도 4-배를 갖는다. 일부 구현예에서, 변형된 십각류 절지동물 루시퍼라아제의 하나 이상의 특성은 또 하나의 종, 예를 들면, 개똥벌레 루시퍼라아제 또는 레닐라 루시퍼라아제로부터 루시퍼라아제의 필적하는 특성과 비교된다.
일부 구현예에서, OgLuc 변이제는 서열번호: 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 27, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 56, 58, 60, 62, 64, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 또는 95에 대해 적어도 60%, 예를 들면, 적어도 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%, 또는 100%, 아미노산 서열 동일성을 갖는다. 일부 구현예에서, OgLuc 변이체, 또는 그의 기능적 단편은 5 이하의 차이, 또는 더 바람직하게는, 4, 3, 2, 또는 1 이하 차이, 또는 가장 바람직하게는 차이 없음을 갖는다, 여기서 상기 차이는 표 4에 따른 식 (VII)의 패턴 위치 1, 2, 3, 5, 8, 10, 12, 14, 15, 17, 또는 18에 상응하는 위치에서 생긴다. 차이는 표 4의 패턴 위치 사이의 갭 또는 삽입을 또한 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 OgLuc 변이체는 관심 분자와 임의로 직접적으로 또는 간접적으로 상호작용하는 N-말단, C-말단, 또는 둘 모두 (융합 폴리펩타이드 예컨대 에피토프 또는 융합 태그를 갖는 것)에서 하나 이상의 이종성 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 이종성 서열(들)의 존재는 관심 분자와의 상호작용 전 또는 후에 OgLuc 변이체의 발광을 실질적으로 변경하지 않는다. 일부 구현예에서, 이종성 아미노산 서열은 에피토프 태그이다. 일부 구현예에서, 이종성 아미노산 서열은, 관심 분자의 상호작용 동안 또는 후에, OgLuc 변이체의 활성을 차례로 변경하는 구조상 변화를 경험하는 것이고, 예를 들면, 그와 같은 아미노산 서열을 갖는 OgLuc 변이체는 알로스테릭 상호작용을 검출하는데 유용하다. OgLuc 변이체 또는 그의 단편을 갖는 OgLuc 변이체 또는 융합은 리포터로서 이용될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 OgLuc 변이체의 단편은 이종성 아미노산 서열에 융합되고, 그렇게 함으로써 상기 융합은 베타-배럴을 형성하고, 그의 융합 단백질은 천연 생성 코엘렌테라진 또는 본원에서 논의된 다양한 공지된 코엘렌테라진을 포함하는 그의 유사물, 또는 본 발명의 신규 코엘렌테라진으로부터 발광을 산출할 수 있다.
본 발명의 OgLuc 변이체 또는 그의 융합을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드, 폴리뉴클레오타이드 또는 OgLuc 변이체 또는 그의 융합을 갖는 단리된 숙주세포, 및 본 발명의 폴리뉴클레오타이드, OgLuc 변이체 또는 그의 융합 또는 숙주세포를 사용하는 방법이 또한 제공된다.
용어 "동일성"은, 2개 이상 핵산 또는 폴리펩타이드 서열의 맥락에서, 비교될 때 동일하고 임의의 수의 서열 비교 알고리즘를 사용하여 또는 매뉴얼 정렬 및 시력 검사에 의해 측정되는 바와 같이 비교 윈도우 또는 지정 영역에 대해 최대 관련성에 대해 정령된 아미노산 잔기 또는 뉴클레오타이드의 특정 백분율을 갖거나 동일한 2개 이상 서열 또는 하위서열을 의미한다. 비교용 서열의 정렬 방법은 당해기술에 잘 공지되어 있다. 비교용 서열의 최적의 정렬은 하기에 의해 수행될 수 있다: Smith 등의 알고리즘 (J. Mol . Biol . 147:195-197 (1981)), Needleman 및 Wunsch의 상동성 정렬 알고리즘 (J. Mol . Biol ., 48:443-453 (1970)), Pearson 및 Lipman의 유사성 방법의 탐색 (Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 85:2444-2448 (1988)), 알고리즘의 컴퓨터화된 실행 예를 들면, FASTA, SSEARCH, GGSEARCH (University of Virginia FASTA 서버William R. Pearson http://fasta.bioch.virginia.edu/fasta_www2/fasta_intro.shtml에서 이용가능), 클러스탈 시리즈의 프로그램 (Chenna 등, Nucl . Acids Red . 31(13):3497-3500 (2003); http://www.ebi.ac.uk 또는 http://www.ch.embnet.org에서 이용가능한 예), 또는 다른 서열 분석 소프트웨어. 유의미한 서열 변경 (예를 들면, 변경된 도메인 순서, 도메인 누락/부가, 반복된 도메인, 셔플링된 도메인, 원형 치환)을 갖는 폴리펩타이드 서열 사이의 최대 관련성을 갖는 정렬의 산출은 특화된 방법, 예컨대 ABA 방법 (Raphael 등, Genome Res . 14(11):2336-2346 (2004)), 다른 적당한 방법, 또는 폴리펩타이드 서열의 2개의 열결된 동일한 복제물을 갖는 정렬의 수행의 사용을 수반할 수 있다는 것을 당해기술에 공지되어 있다.
용어 "핵산 분자", "폴리뉴클레오타이드" 또는 "핵산 서열"은, 본원에서 사용된 바와 같이, 폴리펩타이드 또는 단백질 전구체의 생산에 필요한 서열을 코딩하는 것을 포함하는, DNA 또는 RNA 포함 핵산을 의미한다. 코딩된 폴리펩타이드는 전체길이 폴리펩타이드, 그의 단편 (전체길이 미만), 또는 전체길이 폴리펩타이드 또는 융합 폴리펩타이드를 산출하는 또 하나의 폴리펩타이드를 갖는 그의 단편의 융합일 수 있다.
단백질 또는 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 유전자의 코딩 영역을 인코딩하는 핵산 서열, 또는 환언하면, 유전자 생성물을 인코딩하는 핵산 서열을 의미한다. 코딩 영역은 cDNA, 게놈 DNA 또는 RNA 형태에서 존재할 수 있다. DNA 형태로 존재할 때, 올리고뉴클레오타이드는 단일 가닥 (예를 들면, 센스 가닥) 또는 이중가닥일 수 있다. 적당한 조절 요소 예컨대 인핸서/프로모터, 스플라이스 접합, 폴리아데닐화 신호 등은 일차 RNA 전사체의 전사 개시 및/또는 정확한 처리를 허용하는데 필요하다면 유전자의 코딩 영역 부근에 위지할 수 있다. 다른 조절 또는 조절 요소는 비제한적으로 하기를 포함한다: 전사 인자 결합 부위, 스플라이싱 신호, 폴리아데닐화 신호, 종료 신호 및 인핸서 요소.
"펩타이드", "단백질" 및 "폴리펩타이드"란 후-번역 변형과 무관하게 가변 길이의 아미노산 사슬을 의미한다 (예를 들면, 글라이코실화 또는 인산화). 본 발명의 핵산 분자는, 유도된 모 단백질의 아미노산 서열에 대해 적어도 60%, 예를 들면, 적어도 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%, 아미노산 서열 동일성인 아미노산 서열을 갖는 사람이 만든 (즉, 합성) 변이체 단백질 또는 폴리펩타이드 그의 단편의 변이체를 인코딩하고, 여기서 모 단백질은 천연 생성 (원상태 또는 야생형) 서열 또는 순차적으로 추가 변형되는 변이체 서열일 수 있다. 용어 "융합 폴리펩타이드" 또는 "융합 단백질"은 N- 및/또는 C-말단에서 하나 이상의 이종성 서열 (예를 들면, 비-OgLuc 폴리펩타이드)에 결합된 참조 단백질 (예를 들면, OgLuc 변이체)을 함유하는 키메라 단백질을 의미한다. 이종성 서열은 비제한적으로 하기를 포함할 수 있다: 리포터 단백질 예컨대 HaloTag® 융합 단백질 (Promega Corp.), 플래시 (플루오레신 비소 헬릭스 바인더), 및 ReAsH (적색 비소 헬릭스 바인더) (예를 들면, LumioTM 태그 인지 서열 (Invitrogen)), 클로르암페니콜 아세틸트랜스페라제 (CAT), β-갈락토시다아제 (β-Gal), 락타마제 (P-gal), 네오마이신 내성 (Neo), GUS, 갈락토피라노사이드, 녹색 형광 단백질 (GFP), 루시퍼라아제 (예를 들면, 레닐라 레니포르미스 루시퍼라아제, 개똥벌레 루시퍼라아제 (예를 들면, 포티누스 피랄리스 또는 포투리스 펜실바니카), 또는 방아벌레 루시퍼라아제 (예를 들면, 피로포러스 플라지오프탈라무스 또는 피레아리누스 테르미틸루미난스) 또는 개똥벌레 유충 루시퍼라아제 (예를 들면, 프릭소트릭스 히르투스), 크실로시다제, 티미딘 키나아제, 아라비노시다제 및 SNAP-태그, CLIP-태그, ACP-태그 및 MCP-태그 (New England Biolabs). 일 구현예에서, 키메라 단백질은 N-말단에서 HaloTag® 융합 단백질 (Promega Corp.)에 결합된 OgLuc 변이체를 함유한다. 또 하나의 구현예에서, 키메라 단백질은 C-말단에서 HaloTag® 융합 단백질에 결합된 OgLuc 변이체를 함유한다.
야생형 서열에 대해 특정한 염기 위치에서 뉴클레오타이드의 서열에서의 변경을 의미하는 "돌연변이"의 상이한 유형을 함유하는 핵산이 공지되어 있다. 돌연변이는 하나 이상의 염기의 삽입 또는 결실을 또한 의미할 수 있고 이로써 핵산 서열은 참조, 예를 들면, 야생형 서열, 또는 정지 코돈과의 교체로부터 상이하다. "치환"는 서열에서 특정한 위치에서 아미노산의 변화, 예를 들면, 위치 4에서 A로부터 E의 변화를 의미한다.
용어 "벡터"는, DNA의 단편이 삽입되거나 클로닝될 수 있고 DNA 세그먼트(들)를 세포로 이동시키고 세포에서 복체를 가능하게 하기 위해 사용될 수 있는 핵산 분자를 의미한다. 벡터는 플라스미드, 박테리오파지, 바이러스, 코스미드, 등으로부터 유래될 수 있다.
용어 "야생형" 또는 "본상태"는, 본원에서 사용된 바와 같이, 천연 생성 공급원으로부터 단리된 유전자 생성물 또는 유전자의 특징을 갖는 유전자 생성물 또는 유전자를 의미한다. 야생형 유전자는 모집단에서 아주 자주 관찰되고 따라서 유전자의 "야생형" 형태로 임의 지정된 것이다. 반대로, 용어 "돌연변이체"는, 야생형 유전자 또는 유전자 생성물와 비교할 때, 서열 및/또는 기능적 특성 (즉, 변경된 특징)의 변형을 나타내는 유전자 또는 유전자 생성물을 의미한다. 천연 생성 돌연변이체가 단리될 수 있다는 것을 주목하고; 이들은, 야생형 유전자 또는 유전자 생성물와 비교할 때 변경될 특징을 갖는 사실에 의해 확인된다.
예시적인 폴리뉴클레오타이드 및 단백질
본 발명은 OgLuc 변이체 또는 그의 단백질 단편, 예를 들면, 결실, 예를 들면 1 내지 약 5개의 잔기의 결실을 갖는 것, 및 야생형 OgLuc에 대해 적어도 하나의 아미노산 치환을 갖는 그의 키메라 (융합) (참고 미국 특허 공보 번호 2009/0253131 및 WIPO 공보 번호 WO 2007/120522, 이의 개시내용은 참고로 본원에 포함되어 있다)을 포함하고, 그 치환으로 증대된 안정성, 증대된 발광, 예를 들면, 증가된 발광 방출, 발광 동력학의 더 큰 안정성, 및/또는 변경된 발광 색상을 갖는 OgLuc 변이체가 생긴다. OgLuc 변이체의 서열은 상응하는 야생형 OgLuc의 아미노산 서열과 실질적으로 동일하다. 실질적으로 동일한 서열을 갖는 폴리펩타이드 또는 펩타이드는, 아미노산 서열이 주로이지만 전적으로는 아니며, 동일하며, 관련된 서열의 기능적 활성을 유지한다는 것을 의미한다. 일반적으로, 2개의 아미노산 서열은, 적어도 60%, 예를 들면, 적어도 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%, 이지만 100% 미만의 아미노산 서열 동일성이면 실질적으로 동일하다. 일부 구현예에서, OgLuc 변이체는 재조합 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩된다. 일부 구현예에서, OgLuc 변이체, 또는 그의 기능적 단편은, 5 이하의 차이, 또는 더 바람직하게는 4, 3, 2, 또는 1 이하 차이, 또는 가장 바람직하게는 차이 없음을 갖고, 여기서 상기 차이는 표 4에 따른 식 (VII)의 패턴 위치 1, 2, 3, 5, 8, 10, 12, 14, 15, 17, 또는 18에 상응하는 위치에서 생긴다. 차이는 표 4의 패턴 위치 사이의 갭, 삽입, 또는 치환을 또한 포함할 수 있다.
본 발명의 OgLuc 변이체 단백질 또는 융합 단백질은 재조합 방법 또는 고체상 화학적 펩타이드 합성 방법에 의해 제조될 수 있다. 그와 같은 방법은 당해기술에 공지되어 있다.
사용 방법 및 키트
본 발명의 화합물 및 단백질은, 루시퍼라아제 및 루시퍼라아제 기질, 예를 들면, 코엘렌테라진이 사용되었던 어떤 식으로든 사용될 수 있다. 예를 들면, 샘플, 예를 들면, 효소, 효소 반응에 대한 보조인자, 효소 기질, 효소 억제제, 효소 활성제, 또는 OH 라디칼, 또는 하나 이상의 조건, 예를 들면, 산화환원 조건에서 하나 이상의 분자를 검출하기 위해 코엘렌테라진의 유사물을 이용하는 생물발광 방법에서 사용될 수 있다. 샘플은 동물 (예를 들면, 척추동물), 식물, 균류, 생체 유체 (예를 들면, 혈액, 혈장, 소변, 점액 분비 등), 세포, 세포 용해물, 세포 상청액, 또는 세포의 정제된 분획 (예를 들면, 준세포 분획)을 포함할 수 있다. 그와 같은 분자의 존재, 양, 스펙트럼 분포, 방출 동력학, 또는 비활성은 검출 또는 정량화될 수 있다. 분자는 다중상 용액 (예를 들면, 에멀젼 또는 서스펜션)을 포함하는 용액에서, 또는 고형 지지체 (예를 들면, 입자, 모세혈관, 또는 검정 용기) 상에서 검출 또는 정량화될 수 있다. 일부 구현예에서 OgLuc 변이체는 관심 효소, 예를 들면, CYP450 효소, MAO A 또는 B 효소, 카스파제, 등을 검출하기 위해 발광-기반 검정에서 사용될 수 있다. 신규 코엘렌테라진은 광단백질 예컨대 에쿼린, 오벨린, 또는 iPhotina와 함께 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, OgLuc 변이체는 또 하나의 분자 (예를 들면, 형광단, 발색단, 또는 나노입자)에 대한 에너지 공여체로서 사용될 수 있다.
본 발명은 또한, 전사 리포터를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 제공한다. 일부 구현예에서, OgLuc 변이체 또는 그의 단편은 전사 조절 서열, 예를 들면, 하나 이상의 인핸서, 프로모터, 전사 종결 서열 또는 이들의 조합에 작동하능하게 연결되어, 발현 카세트를 형성할 수 있다. 예를 들면, OgLuc 변이체는 최소 프로모터 및 cAMP-반응 요소 (CRE)에 작동가능하게 연결될 수 있다.
본 발명의 단백질은 바이오센서, 예를 들면, 또 하나의 분자 (예를 들면, 하나 이상의 관심 분자)의 존재에서, 또는 어떤 조건 하에서, 하나 이상의 변경된 활성을 갖는 OgLuc 변이체로서 사용될 수 있다. 관심 분자와의 상호작용시 또는 어떤 조건의 적용하에서, 바이오센서는 구조상 변화를 경험하거나 화학적으로 변경되는데, 이는 효소 활성 또는 발광, 예를 들면, 비활성, 스펙트럼 분포, 또는 방출 동력학의 변경을 야기한다. 예를 들면, 본 발명의 OgLuc 변이체, 예를 들면 순환 치환 변이체는 관심 분자에 대해 상호작용 도메인을 포함할 수 있다. 대안적으로, 예를 들면, OgLuc 변이체는 에너지 수용체, 예를 들면 형광 단백질에 커플링될 수 있고, 효소로부터 에너지 수용체로의 에너지 전달의 효율을 변경시키는 상호작용 도메인을 포함한다. 예를 들면, 바이오센서는 적당한 센서 영역의 OgLuc 변이체 서열로의 삽입에 의해 프로테아제, 키나제, 리간드, 결합 단백질 예컨대 항체, 사이클릭 뉴클레오타이드 예컨대 cAMP 또는 cGMP, 또는 금속 예컨대 칼슘를 검출하기 위해 발생될 수 있다. 하나 이상의 센서 영역은 C-말단, N-말단에서, 및/또는 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상의 적당한 위치에서 삽입될 수 있고, 여기서 센서 영역은 하나 이상의 아미노산을 포함한다. 순환 치환 OgLuc 변이체의 경우에, 센서 영역은 모 OgLuc 변이체의 N- 및 C-말단 사이에 삽입될 수 있다. 또한, 하나 또는 모든 삽입된 센서 영역은OgLuc 변이체 폴리펩타이드의 잔기에 센서를 커플링하기 위해 링커 아미노산을 포함할 수 있다. 루시퍼라아제 바이오센서의 예는 하기에 개시되어 있다: 미국 특허 출원 공보 번호 2005/0153310 및 2009/0305280 및 PCT 공개 번호 WO 2007/120522 A2, 이들 각각은 참고로 본원에 포함된다.
다양한 구현예에서, 본원에 개시된 OgLuc 변이체는 예를 들면 생물발광 공명 에너지 전달 (BRET) 분석에서 에너지를 에너지 수용체에서 이동시키기 위해 사용될 수 있다. 예를 들면, BRET 분석에 사용된 OgLuc 변이체는, 2개의 분자가 서로 결합할 수 있는 지를 측정하거나 세포에서 공-국한시키기 위해 사용될 수 있고. 예를 들면, OgLuc 변이체는 제1 융합 단백질을 창출하기 위해 관심 분자 또는 단백질와 결합된 생물발광 공여체 분자로서 사용될 수 있다. 다양한 구현예에서, 제1 융합 단백질은 관심 OgLuc 변이체 및 단백질을 함유한다. 다양한 구현예에서, OgLuc 변이체를 함유하는 제1 융합 단백질은 세포 용해물, 무손상 세포, 및 살아있는 동물을 비제한적으로 포함하는 시스템에서 단백질/단백질 상호작용을 검출하기 위해 BRET 분석에서 사용될 수 있다. 다양한 구현예에서, HaloTag®는 형광 수용체 분자로서 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, HALOTAG®는 관심 제2 단백질 또는 OgLuc 변이체에 융합될 수 있다. 예를 들면, OgLuc 변이체는 HaloTag®에 융합되고, 세포 또는 동물에서 발현되고, 형광 HaloTag® 리간드 예컨대 HaloTag® TMR 리간드로 표지될 수 있다. 융합은 세포 침투 OgLuc 기질의 존재에서 형광을 내기 위해 순차적으로 여기될 수 있다. 일부 구현예에서, BRET는 몇 개의 비제한적인 예를 명명하기 위해, 녹색 형광 단백질 (GFP) 또는 적색 형광 단백질 (RFP)을 비제한적으로 포함하는 형광 단백질, 또는 플루오레신, 로다민 그린, 오레곤 그린, 또는 Alexa 488을 포함하는 형광 표지와 조합하여 OgLuc 변이체를 사용하여 수행될 수 있다.
다양한 구현예에서, 본 발명의 OgLuc 변이체 및/또는 신규 코엘렌테라진은 2개의 생체분자, 예를 들면, 폴리펩타이드의 상호작용을 검출하기 위해 단백질 상보성 검정 (PCA)에서 사용될 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 OgLuc 변이체는 분리에 견디는 부위(들)에서, 2개의 단편으로 분리될 수 있고, 분리된 OgLuc 변이체의 각 단편은 예를 들면 FKBP 및 FRB와 상호작용하는 것으로 믿는 한 쌍의 관심 폴리펩타이드의 하나에 융합될 수 있다. 2개의 관심 폴리펩타이드가 사실상 상호작용하면, 이때 OgLuc 단편은 기능적, 활성 OgLuc 변이체를 재구성하기 위해 서로 인접하게 된다. 일부 구현예에서, 그 다음 재구성된 OgLuc 변이체의 활성은 검출될 수 있고 천연 또는 공지된 코엘렌테라진 또는 본 발명의 신규 코엘렌테라진을 사용하여 측정될 수 있다. 일부 구현예에서, 분할 OgLuc 변이체는 lac-Z (Langley 등, PNAS 72:1254-1257 (1975)) 또는 리보뉴클레아제 S (Levit 및 Berger, J. Biol . Chem . 251:1333 -1339 (1976))와 유사한 더 일반적인 상보 시스템에서 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 또 하나의 OgLuc 변이체 단편 ("B")를 보완하는 것으로 공지된 OgLuc 변이체 단편 ( "A"로 지칭)는 표적 단백질에 융합될 수 있고, 수득한 융합은 단편 B를 함유하는 세포 또는 세포 용해물에서 발광을 통해 모니터링될 수 있다. 일부 구현예에서, 단편 B의 공급원은 동일한 세포 (예를 들면, 단편 B에 대한 유전자가 세포의 게놈에 통합되거나 세포 내의 또 하나의 플라스미드 상에 함유되면)일 수 있거나 또 하나의 세포로부터 유래된 용해물 또는 정제된 단백질일 수 있다. 일부 구현예에서, 이러한 동일한 융합 단백질 (단편 A)는 단편 B와, 폴리펩타이드 예컨대 고형 지지체에 부착될 수 있는 HaloTag® 사이의 융합을 사용하여 포획 또는 고정화될 수 있다. 일부 구현예에서, 발광은 성공적인 포획을 실증하거나 포획된 물질의 양을 정량화하기 위해 사용될 수 있다.
다양한 구현예에서, 본 발명의 OgLuc 변이체 및/또는 신규 코엘렌테라진은 코엘렌테라진을 정량화하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 코엘렌테라진 (예를 들면, 천연 또는 공지된 코엘렌테라진, 또는 본 발명의 신규 코엘렌테라진)은 특이적 생화학적 활성, 예를 들면, 세포자멸사 및 의약품 대사의 프로브로서 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 코엘렌테라진 농도는 특이적 관심 효소에 의해 영향을 받을 수 있는 "프로-코엘렌테라진" 또는 "전-기질"에 의해 특이적 효소 활성에 커플링된다. 일부 구현예에서, 프로-코엘렌테라진은 루시퍼라아제와 결합될 때 발광을 직접적으로 지지할 수 없지만, 특이적 관심 효소 프로세싱을 통해 코엘렌테라진으로 전환될 수 없는 분자이다. 일부 구현예에서, 접근법은 효소 예컨대 의약품 대사에 사용되는 것, 예를 들면, 사이토크롬 P450 효소, 모노아민 옥시다제, 및 글루타티온 S-트랜스페라제; 및 세포자멸사, 예를 들면, 카스파제를 위해 사용될 수 있다. 예를 들면, 코엘렌테라진 (예를 들면, 천연 또는 공지된 코엘렌테라진, 또는 본 발명의 신규 코엘렌테라진)은 변형되어 절단가능 그룹, 예컨대 6'-O-메틸을 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 특이적 사이토크롬 P450 효소와 함께 인큐베이팅될 때, 6'O-메틸는 절단되고, 프로-코엘렌테라진은 본 발명의 OgLuc 변이체로 검출될 수 있는 코엘렌테라진으로 전환된다. 일부 구현예에서, 프로-코엘렌테라진은 단일 시약 및 균질 검정을 제공하기 위해 발광을 지지하는데 필요한 다른 성분, 예를 들면, 발광 단백질 예컨대 본 발명의 OgLuc 변이체와 조합될 수 있다. 예를 들면, 시약이 샘플에 부가될 때, 발광은, 프로-코엘렌테라진이 코엘렌테라진으로 전환됨에 따라 산출된다. 다양한 구현예에서, 유사한 검정은 다른 효소, 작은 분자, 또는 프로-코엘렌테라진으로부터 코엘렌테라진의 산출에 연결될 수 있는 다른 세포 과정을 위해 개발될 수 있다.
다양한 구현예에서, 본 발명의 OgLuc 변이체 및/또는 신규 코엘렌테라진은 유전자 전사 리포터 시스템로서 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, OgLuc 변이체는 상이한 파장에서 광을 방출하는 루시퍼라아제, 예를 들면, 대유동 방아벌레 루시퍼라아제 (Chroma-LucTM Promega Corp.)와 다중화될 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 OgLuc 변이체가 기능적 리포터로서 사용된다면, 이때 레드 Chroma-LucTM 루시퍼라아제는 유전자 조절에 대한 비-특이적 효과를 조절하거나 전달감염 효율을 정상화하기 위해 사용될 수 있었다. 일부 구현예에서, OgLuc 변이체 (대략 460 nm) 및 레드 Chroma-LucTM (대략 610 nm)로부터 산출될 발광은 파장-식별 필터를 갖는 발광분석기로 쉽게 분해될 수 있는데, 이는 동일한 샘플로부터 신호 둘 모두의 측정을 가능하게 한다. 또 하나의 예에서, 본 발명의 OgLuc 변이체는 전사 리포터로서 사용될 수 있고 검정 시약에 함유된 상이한 파장에서 광을 방출하는 루시퍼라아제와 쌍을 이룰 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 OgLuc 변이체는 전사 리포터로서 사용될 수 있고 단일 샘플에서 다중 경로를 검출하기 위해 에쿼린 또는 cAMP 순환 치환 개똥벌레 루시퍼라아제 바이오센서, 또는 둘 모두와 동시에 쌍을 이룰 수 있다. 그와 같은 시스템에서, 예를 들면, 에쿼린은 칼슘의 검출 및/또는 측정을 위해 사용되고, 바이오센서는 cAMP의 검출 및/또는 측정을 위해 사용되고, OgLuc 변이체는 다운스트림 유전자 발현의 모니터링을 위해 사용될 수 있다. 또 하나의 예에서, OgLuc 변이체는 하나 이상의 추가 루시퍼라아제와 함께 사용될 수 있고, 여기서 각 루시퍼라아제의 발광은 선택적 효소 억제제의 사용을 통해 별개로 측정될 수 있다. 예를 들면, 제1 루시퍼라아제의 발광은 적절한 기질 및 버퍼의 부가 시에 측정될 수 있고, 그 다음 제2 루시퍼라아제는 적절한 기질 및 버퍼 및 제1 루시퍼라아제에 대해 선택적인 하나 이상의 억제제의 그 후의 부가 시에 측정될 수 있다. 또 하나의 예에서, 검정 시약에 함유된 루시퍼라아제는 세포 생리학의 특이적 측면, 예를 들면 세포 생존력을 추정하기 위한 ATP, 또는 세포 자멸사를 추정하기 위한 카스파제 활성을 측정하기 위해 사용될 수 있다.
다양한 구현예에서, 본 발명의 OgLuc 변이체는 세포주를 전달감염시키는데 어려울 때 또는 아마 비-분리 일차 세포, 예를 들면, 줄기세포 또는 HepG2 세포에서도 리포터로서 사용될 수 있다. 그의 높은 신호 세기로 인해, 본 발명의 OgLuc 변이체는 전달감염 효율이 낮을 때 검출가능 발광을 가능하게 할 것이다. 일부 구현예에서, OgLuc 변이체는 전달감염과 연관된 조건에 특히 민감하고, 예를 들면, 높은 DNA 농도 또는 전달감염 시약의 부가에 민감한 세포에서 리포터로서 사용될 수 있다. 따라서, 다양한 구현예에서, 본 발명의 OgLuc 변이체의 증대된 발광에 기인하여, 적절한 수준의 발광은 검정 개시 전의 더 낮은 DNA 농도, 더 적은 전달감염 시약, 및/또는 더 짧은 후-전달감염 시간을 사용하여 달성될 수 있고 이로써 감수성 세포에 대한 감소된 독성 부담이 있다. 다양한 구현예에서, 증대된 OgLuc 변이체의 발광은 또한, 신호가 훨씬 나중 시점에서 검출되도록 할 것이다. 또 다른 구현예에서, OgLuc 변이체는 단일-복사 원상태 프로모터에 대한 리포터로서 사용될 수 있다.
다양한 구현예에서, 본 발명의 OgLuc 변이체는 표적 단백질이 세포내 수준을 모니터링하기 위한 방식으로서 관심 표적 단백질에 대한 융합 태그로서 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, OgLuc 변이체는, 다양한 유형의 자극이 이들 경로에서 하는 역할을 증명하기 위한 방식으로서 세포 중 스트레스 반응 경로 (예를 들면, DNA 손상, 산화 스트레스, 염증)과 연관된 특이 단백질을 모니터링하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, OgLuc 변이체는 또한 표적 단백질의 세포 추적을 모니터링하기위한 수단으로서 사용될 수 있다. 예를 들면, OgLuc 변이체는 또한 바이러스 게놈 (예를 들면, HIV, HCV)에 융합될 수 있고, 이로써 역가 수준, 즉, 감염성은 잠재적인 항바이러스제에 의한 치료 다음에 치료에서 모니터링될 수 있다. 일부 구현예에서, 변이체는 또한 높은 발현 클론을 확인하기 위해 형광 활성화 세포 분류 (FACS)를 위해 녹색 형광 단백질 (GFP) 또는 HaloTag® (표적 단백질에 부가하여)에 융합될 수 있다.
다양한 구현예에서, 세포질에서 또는 분비 형태로서 본 발명의 OgLuc 변이체를 발현시키는 강력한, 안정한 세포주의 확인은 OgLuc 변이체 및 작은 크기의 OgLuc 유전자의 증대된 신호에 의해 용이하게 될 수 있다. 비교적 작은 유전자 서열은 외래 DNA의 세포의 게놈으로의 통합으로부터 생기는 유전적 불안정성의 가능성을 감소시켜야 한다.
다양한 구현예에서, 본 발명의 OgLuc 변이체는 다양한 상이한 면역검정 개념에 통합될 수 있다. 예를 들면, OgLuc 변이체는 특정한 분석대상물에 대한 검출 방법을 제공하기 위해 일차 또는 2차 항체에 융합될 수 있다. 또 하나의 예로서, OgLuc 변이체는 단백질 A 또는 단백질 G에 융합될 수 있고, 그 다음 융합은 특정한 분석대상물에 결합된 특이적 항체를 검출하기 위해 사용될 수 있다. 또 하나의 예로서, OgLuc 변이체는 스트렙타비딘에 융합될 수 있고 특정한 분석대상물에 결합된 특이적 바이오틴 부착 항체를 검출하기 위해 사용될 수 있다. 또 하나의 예로서, OgLuc 변이체의 상보적 단편은 일차 및 2차 항체에 융합될 수 있고, 여기서 일차 항체는 특정한 분석대상물을 인식하고, 2차 항체는 일차 항체를 인식한다. 일부 구현예에서, OgLuc 변이체 활성은 분석대상물의 존재에서 재구성된다. 또 하나의 예로서, OgLuc 변이체는 분석대상물 (예를 들면, 프로스타글란딘)에 콘주케이트화될 수 있고 경쟁적 샌드위치 ELISA 포맷에서 사용될 수 있다. 분석대상물에 대해 콘주게이트된 OgLuc 변이체는 분석대상물을 결합할 수 있는 항체를 검출하기 위해 또한 사용될 수 있고, 여기서 결합 활성은, OgLuc 변이체가 항체에 선택적으로 연결될 수 있도록 한다. 항원 표적에 대한 환자 항체 역라를 정량적으로 측정하기 위해 레닐라 루시퍼라아제를 사용하는 예는 루시퍼라아제 면역침전 시스템이다 (Burbelo 등, Expert Review of Vaccines 9(6):567-578 (2010))
다양한 구현예에서, 본 발명의 OgLuc 변이체 및 신규 기질은 살아있는 세포에서 발광을 검출하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, OgLuc 변이체는 세포 (리포터 또는 다른 것으로서), 및 배양에서 세포에서 침투하고, OgLuc 변이체와 반응하고 발광을 산출할 코엘렌테라진, 예를 들면, 신규 코엘렌테라진 예컨대 PBI-3939로 처리된 세포에서 발현될 수 있다. 세포 침투에 부가하여, PBI-3939는 세포 생존력의 관점에서 원상태 코엘렌테라진에 대한 필적하는 생체적합성을 보여준다. 일부 구현예에서, 배지에서 원상태 코엘렌테라진의 안정성을 증가시키는 것으로 공지된 화학적 변형물을 함유하는 PBI-3939의 버전은 합성될 수 있고 더 강력한, 살아있는 세포 OgLuc 변이체-기반 리포터 검정에 사용될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 OgLuc 변이체 및/또는 신규 코엘렌테라진을 함유하는 샘플 (세포, 조직, 동물, 등 포함)은 다양한 현미경관찰법 및 이미지화 기술을 사용하여 검정될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 분비가능한 OgLuc 변이체는 살아있는 세포 리포터 시스템의 일부로서 세포에서 발현된다.
다양한 구현예에서, OgLuc 변이체 및/또는 본원에 개시된 신규 코엘렌테라진은 키트의 일부로서 제공될 수 있다. 키트는 사용자가 검정 예컨대 본원에 개시된 것들을 수행할 수 있도록 적당한 시약 및 설명서와 함께 본원에 개시된 하나 이상의 OgLuc 변이체 (폴리펩타이드, 폴리뉴클레오타이드, 또는 둘 모두의 형태) 및/또는 코엘렌테라진을 포함할 수 있다. 코엘렌테라진은 임의의 본상태, 공지된, 또는 본원에 개시된 신규 코엘렌테라진일 수 있다. 키트는 하나 이상의 버퍼, 예컨대 본원에 개시된 것들을 또한 포함할 수 있다.
변형된 루시퍼라아제 또는 그의 융합물을 인코딩하는 벡터 및 숙주세포
OgLuc 변이체 또는 그의 단편, 예컨대 발광 활성을 갖거나 발광 활성이 생기도록 또 하나의 분자에 의해 보완될 수 있는 것, 또는 발광 활성을 갖는 그의 융합물을 인코딩하는 바람직한 핵산 분자가 일단 준비되면, OgLuc 변이체 또는 그의 단편, 예를 들면, 보완하기 위한 것, 또는 발광 활성을 갖는 그의 융합물을 인코딩하는 발현 카세트가 제조될 수 있다. 예를 들면, OgLuc 변이체를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 핵산 분자는 전사 조절 서열, 예를 들면, 하나 이상의 인핸서, 프로모터, 전사 종결 서열 또는 이들의 조합에 작동가능하게 임의로 연결되어, 발현 카세트를 형성한다. 핵산 분자 또는 발현 카세트는 벡터, 예를 들면, 플라스미드 또는 바이러스 벡터에 도입될 수 있고, 이는 선택가능한 마커 유전자, 및 관심 세포, 예를 들면, 원핵세포 예컨대 이. 콜리 , 스트렙토마이세스 에스피피 ., 바실루스 에스피피 ., 스타필로코쿠스 에스피피 . 등, 뿐만 아니라 식물 (디코트 또는 모노코트), 균류 (효모, 예를 들면, 피치아 , 사카로마이세스 또는 쉬조사카로마이세스 포함), 또는 포유류 세포를 포함하는 진핵세포, 그의 용해물에, 또는 시험관내 전사/번역 혼합물에 도입된 벡터를 임의로 포함한다. 포유류 세포는 비제한적으로 하기를 포함한다: 소, 염소, 양, 개, 고양이, 비-인간 영장류, 예를 들면, 유인원, 및 인간 세포. 포유류 세포주는 비제한적으로 CHO, COS, HEK293, HeLa, CV-1, SH-SY5Y, 및 NIH 3T3 세포를 포함하지만, 수많은 다른 세포주가 또한 사용될 수 있다.
인코딩된 OgLuc 변이체의 발현은 합성 프로모터를 포함하는 진핵세포 및 원핵세포에서 발현할 수 있는 임의의 프로모터에 의해 조절될 수 있다. 진핵 프로모터는 비제한적으로 SP6, T7, T5, tac, bla, trp, gal, lac 또는 말토오스 프로모터를 포함하고 프로모터 활성을 갖는 임의의 단편을 포함한다. 원핵 프로모터는 비제한적으로 항시성 프로모터, 예를 들면, 바이러스 프로모터 예컨대 CMV, SV40 및 RSV 프로모터, 뿐만 아니라 조절가능 프로모터, 예를 들면, 유도성 또는 억제성 프로모터 예컨대 tet 프로모터, hsp70 프로모터 및 CRE에 의해 조절된 합성 프로모터를 포함하고, 프로모터 활성을 갖는 임의의 단편을 포함한다. 인코딩된 OgLuc 변이체의 발현은 후-전사 과정에 의해, 예컨대 RNA 처리의 조절 또는 번역의 조절에 의해, 예를 들면 RNAi, miRNA, shRNA, siRNA에 의해, 또는 RNA 또는 단백질 분해에 의해 또한 조절될 수 있다. 본 발명의 핵산 분자, 발현 카세트 및/또는 벡터는 칼슘-매개 변형, 전기천공, 미세주입, 리포펙션, 등을 비제한적으로 포함하는 임의의 방법에 의해 세포에 도입될 수 있다.
최적화된 서열, 및 OgLuc 변이체를 인코딩하는 벡터 및 숙주세포
본 발명의 OgLuc 변이체, 그의 기능적 단편 또는 그의 융합 단백질을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 단리된 핵산 분자 (폴리뉴클레오타이드)가 또한 제공된다. 일부 구현예에서, 단리된 핵산 분자는 숙주로부터 선택된 적어도 하나에서 발현을 위해 최적화된 핵산 서열을 포함한다. 최적화된 서열은 코작 서열 및/또는 인트론을 부가하고/하거나 바람직하지 않은 서열, 예를 들면, 잠재적인 전사 인자 결합 부위를 변형시키기 위해 최적화된 코돈, 즉, 또 하나의 유기체, 예를 들면, 멀리 관련된 유기체에 대한 하나의 유기체, 뿐만 아니라 변형에서 더 자주 이용되는 코돈인 서열을 포함한다. 그와 같은 최적화된 서열은, 숙주세포에 도입될 때, 증대된 발현, 예를 들면, 증가된 수준의 단백질 발현을 제공할 수 있다. 최적화된 서열의 예는 하기에 개시되어 있다: 미국 특허 번호 7,728,118 및 미국 특허 출원 공보 번호 2008/0070299, 2008/0090291, 및 2006/0068395, 이들 각각은 참고로 본원에 포함된다.
일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 본 발명의 OgLuc 변이체를 인코딘하는 핵산 서열을 포함하고, 그 핵산 서열은 포유류 숙주세포에서 발현을 위해 최적화된다. 일부 구현예에서, 최적화된 폴리뉴클레오타이드는 상응하는 비-최적화된 서열과 더 이상 혼성화되지 않고, 예를 들면, 배지 또는 높은 엄중 조건 하에서 비-최적화된 서열과 혼성화되지 않는다. 용어 "엄중"은, 핵산 하이브리드화가 수행되는 하에서 온도, 이온성 강도, 및 다른 화합물의 존재의 조건에 관하여 사용된다. "높은 엄중" 조건과 함께, 핵산 염기 짝짓기는 높은 빈도의 상보적 염기 서열을 갖는 핵산 단편 사이에서만 일어날 것이다. 따라서, "배지" 또는 "낮은" 엄중의 조건은, 서로에 대해 완전히 상보적이지 않은 핵산이 함께 혼성화되거나 어널링되는 것이 바람직할 때, 종종 사용된다. 수많은 동등 조건이 배지 또는 낮은 엄중 조건을 포함하도록 이용될 수 있다는 것은 당해기술에 공지되어 있다.
일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 상응하는 비-최적화된 서열에 대한 90% 미만, 예를 들면, 80% 미만, 핵산 서열 동일성을 가지며 비-최적화된 서열에 의해 인코딩된 폴리펩타이드와 함께 적어도 60%, 예를 들면, 적어도 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%, 아미노산 서열 동일성을 갖는 폴리펩타이드를 임의로 인코딩한다. 구조물, 예를 들면, 발현 카세트, 및, 예를 들면 최적화된 핵산 서열과 함께 단리된 핵산 분자를 포함하는 벡터, 뿐만 아니라 단리된 핵산 분자, 구조물 또는 벡터를 포함하는 키트가 또한 제공된다.
본 발명의 OgLuc 변이체, 그의 단편 또는 그의 융합을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 핵산 분자는 특정한 숙주세포에서 발현을 위해 임의로 최적화되고 또한 전사 조절 서열, 예를 들면, 하나 이상의 인핸서, 프로모터, 전사 종결 서열 또는 이들의 조합에 임의로 작동가능하게 연결되어 발현 카세트를 형성한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 OgLuc 변이체, 그의 단편 또는 그의 융합물을 인코딩하는 핵산 서열은 모 OgLuc 서열 중 코돈, 예를 들면, 코돈의 적어도 25%를 특정한 (선택된) 세포에서 바람직하게 이용되는 코돈으로 대체하여 최적화된다. 바람직한 코돈은 선택된 세포에서 상대적으로 높은 코돈 사용 빈도를 가지며, 바람직하게는 그의 도입으로 선택된 숙주세포에서 존재하는 전사 입자에 대한 비교적 적은 전사 인자 결합 부위, 및 비교적 적은 다른 바람직하지 않은 구조 속성로 된다. 바람직하지 않은 구조 속성의 예는 비제한적으로 하기를 포함한다: 제한 효소 부위, 원핵 서열 요소, 척추동물 프로모터 모듈 및 전사 인자 결합 부위, 반응 요소, 이. 콜리 서열 요소, mRNA 2차 구조. 따라서, 최적화된 핵산 생성물은 개선된 코돈 사용 빈도에 기인한 개선된 발현의 수준, 및 바람직하지 않은 전사 조절 서열의 감소된 수에 기인하여 부적절한 전사 거동의 감소된 위험을 갖는다.
단리된 및 최적화된 핵산 분자는 코돈의 30%, 35%, 40% 초과 또는 그 초과 than 45% 초과, 예를 들면, 50%, 55%, 60% 또는 그 초과에서 상응하는 야생형 핵산 서열의 조성과 상이한 코돈 조성을 가질 수 있다. 본 발명에서 사용하기 위한 예시적인 코돈은 특정한 유기체에서 동일한 아미노산에 대해 적어도 하나의 다른 코돈보다 더 자주 이용되고, 일부 구현예에서, 핵산 분자의 발현에 대해 클로닝 또는 스크리닝하기 위해 사용되는 유기체에서 저사용 코돈이 아닌 것이다. 또한, 어떤 아미노산 (즉, 3 또는 그 초과 코돈을 갖는 아미노산)에 대한 코돈은 다른 (비-바람직한) 코돈(들)보다 더 자주 이용되는 2개 이상 코돈을 포함할 수 있다. 또 하나의 유기체에서보다 하나의 유기체에서 더 자주 이용되는 핵산 분자 중 코돈의 존재로, 더 자주 코돈을 이용하는 유기체의 세포에 도입될 때, 세포에서 야생형 또는 모 핵산 서열의 발현보다 더 큰 수준으로 세포에서 발현되는 핵산 분자로 된다.
본 발명의 일부 구현예에서, 상이한 코돈은 포유동물에서 더 자주 이용되는 것이지만, 또 다른 구현예에서, 상이한 코돈은 식물에서 더 자주 이용되는 것이다. 상이한 유기체에 대한 바람직한 코돈은 예를 들면 하기에서 공지되어 있다: 참고 http://www.kazusa.or.jp./codon/. 특정한 유형의 포유류, 예를 들면, 인간은 또 하나의 유형의 포유류보다 상이한 세트의 바람직한 코돈을 가질 수 있다. 마찬가지로, 특정한 유형의 식물은 또 하나의 유형의 식물보다 상이한 세트의 바람직한 코돈을 가질 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 상이한 대다수의 코돈은 원하는 숙주세포에서 바람직한 코돈이다. 유기체 포함 포유류 (예를 들면, 인간) 및 식물에 바람직한 코돈은 당해기술에 공지되어 있다 (예를 들면, Wada 등, Nucl . Acids Red ., 18:2367 (1990); Murray 등, Nucl . Acids Red ., 17:477 (1989)).
실시예
참조 실시예 1 - α- 아미노니트릴 (화합물 1)의 합성:
Figure pct00051

플라스크에 나트륨 바이설파이트 (71.4 mmol) 및 17 mL의 물을 충전했다. 이것에, 14 mL의 테트라하이드로푸란 (THF) 중 알데하이드 (69.3 mmol)의 용액을 내부 온도를 60℃ 미만으로 유지하는 속도로 적가했다. 수득한 서스펜션을 주위 온도에서 40 분 동안 교반하고, 암모늄 하이드록사이드 용액 (4.85 mL)을 2분에 걸쳐 첨가했다. 수득한 용액을 오일 배쓰 60℃에서 1시간 동안 가열 하면서 자속 교반하고 그 다음 주위 온도에서 밤새 정치했다. 용액을 내부 온도를 5℃ 미만에서 측정될 때까지 얼음/소금 배쓰에서 냉각했다. 이것에, 14 mL의 물 중 나트륨 시아나이드 (71.4 mmol)의 용액을 30분에 걸쳐 적가했다. 수득한 혼합물을 대략 10℃에서 20분 동안, 30℃ 2시간 동안, 및 주위 온도에서 18시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 3부분의 200 mL의 디에틸 에테르로 추출하고, 결합된 추출물 무수 나트륨 설페이트 상에서 건조시켰다. 혼합물을 여과하고, 용액을 빙욕에서 20분 동안 냉각시켰다. 교반된 용액에, 염화수소 가스를 침전이 멈출 때까지 첨가하고 서스펜션을 1시간 동안 교반했다. 고형물을 여과로 단리하고 3부분의 50 mL의 디에틸 에테르로 헹구었다. 물질을 진공 하에서 건조시키고, 6.4 g (47.5 mmol)의 백색 고형물을 얻었다 (69%). 절차를 하기로부터 조정했다: Freifelder 및 Hasbrouck, "Synthesis of Primary 1,2-Diamines by Hydrogenation of alpha-Aminonitriles," Journal of the American Chemical Society , 82(3):696-698 (1960).
참조 실시예 2 - 2-옥소-2- 페닐아세트알데하이드 옥심 (화합물 2)의 합성:
Figure pct00052

플라스크에 칼륨 tert-부톡사이드 (58 mmol) 및 63 mL의 tert-부틸 알코올을 충전했다. 혼합물을 용액이 형성될 때까지 교반하고, 35 mL의 tert-부틸 알코올 중 적절한 벤조펜온 (50 mmol)의 용액을 15분에 걸쳐 적가했다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 순수한 이소아밀 니트라이트 (75 mmol)을 5분에 걸쳐 첨가했다. 반응 혼합물을 완료를 위해 모니터링하고 그 다음 100 mL의 헵탄으로 희석했다. 수득한 고형물 (38 mmol)을 흡입 여과를 통해 수집하고 진공 하에서 일정한 중량으로 건조시켰다. 절차를 하기로부터 조정했다: Hagedorn 등, Chem . Ber., 98:193 (1965).
참조 실시예 3 - 피라진 유도체 (화합물 3)의 합성
Figure pct00053

3목 플라스트에 온도계, 격막, 및 아르곤 라인을 설치했다. 이것에, 아미노니트릴 (47.5 mmol), 건조 피리딘 (190 mL), 및 옥심 (61.75 mmol)을 첨가했다. 혼합물을 15분 동안 잘 교반하고, 테트라-클로로(비스-피리딜)티타늄 착물 (94.9 mmol)을 35분에 걸쳐 5부분으로 첨가하여 내부 온도를 40℃ 미만에서 유지되도록 했다. 첨가의 완료 후, 반응 혼합물을 밤새 주위 온도에서 교반했다. 반응 혼합물을 서서히 나트륨 바이카보네이트 (174 mL 물 중 21.75 g)의 용액을 소량씩 첨가했다. 수득한 혼합물을 15분 동안 잘 교반하고 80 g의 셀라이트를 첨가했다. 서스펜션을 30분 동안 교반하고 부크너 깔때기를 통해 여과했다. 여과물을 분별 깔때기로 제거하고, 필터 케이크를 400 mL의 메탄올에서 현탁시켰다. 혼합물을 30분 동안 교반하고 다시 여과했다. 이 과정을 총 4 회 반복했다. 메탄올성 여과물을 조합하고, 농축하고, 잔여물 200 mL의 에틸 아세테이트 (EtOAc)에서 용해시켰다. 용액을 최초 여과물을 함유하는 분별 깔때기에 첨가하고, 혼합물을 3부분의 100 mL의 EtOAc로 추가 추출했다. 조합된 추출물을 2부분의 100 mL의 포화 나트륨 카보네이트 및 2부분의 100 mL의 염수 용액으로 세정했다. 유기 용매를 증발시키고 조 피라진 -옥사이드를 갈색 오일로서 얻었다. 물질을 3 mL의 메탄올에서 용해시키고, 89 mL의 디클로로메탄 (DCM)을 첨가했다. 이 용액에, 아연 분진 (80.7 mmol)을 첨가하고, 혼합물 내부 온도가 15℃에 도달할 때까지 빙욕에서 냉각시켰다. 혼합물을 빙초산 (3 mL)으로 처리하고 오일 배쓰에서 40분 동안 30℃의 내부 온도로 따뜻하게 했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 셀라이트의 패드를 통해 여과했다. 필터 케이크를 DCM으로 헹구고, 조합된 여과물을 포화 나트륨 바이카보네이트의 수용액으로 세정했다. 조 생성물을, 헵탄/EtOAc 구배를 사용하는 실리카겔상 크로마토그래피로 정제했다. 이것으로 2.9 g (29%)의 피라진을 갈색 고형물로서 얻었다. 절차를 하기로부터 조정했다: Kishi 등, "The structure confirmation of the light-emitting moiety of bioluminescent jellyfish." Tetrahedron Lett ., 13(27):2747 (1972).
참조 실시예 4 - 코엘렌테라진의 합성
방법 A: (하기 화합물은 방법 A에 의해 합성될 수 있다: 화합물 PBI-3840, PBI-3886, PBI-3857, PBI-3887, PBI-3913, PBI-3894, PBI-3896, PBI-3897, PBI-3841 및 PBI-3842)
Figure pct00054

플라스크에 피라진 (8.25 mmol), 피루브산 (14.0 mmol), 캄포르 설폰산 (0.8 mmol), 및 무수 2-메틸 THF (150 mL)를 충전했다. 플라스크에 콘덴서, 및 4-옹스트롬 분자체가 충번된 속슬레 추출기를 설치하고, 반응 혼합물 오일 배쓰에서 110℃에서 18시간 동안 가열했다. 체를 새로운 것으로 대체하고, 24시간 동안 환류를 계속했다. 반응 혼합물을 여과하고, 농축하고, 잔여물을 EtOAc (200 mL)에서 용해시켰다. 이 용액을 3부분의 25 mL의 포화 나트륨 바이카보네이트 용액, 100 mL의 0.1 M 나트륨 아세테이트 버퍼, pH 5, 및 100 mL의 염수 용액으로 세정했다. 용액을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축하여 2.3 g (6.2 mmol, 75%)의 조 에나민/산을 얻었다. 이 물질을 무수 THF (30 mL)에서 용해시키고, 용액을 얼음/물 배쓰에서 10분 동안 냉각시켰다. 이것에, 카보디이마이드 (9.0 mmol) 및 순수한 디이소프로필에틸 아민 (14.9 mmol)을 첨가했다. 차가운 배쓰를 10 분 후 제거하고, 반응 혼합물을 주위 온도에서 3시간 동안 교반했다. 반응 혼합물에, 50 mL의 0.1 M 나트륨 아세테이트 버퍼, pH 5를 첨가하고, 혼합물 10분 동안 잘 교반했다. 2상 혼합물을 3부분의 100 mL의 EtOAc로 추출하고, 결합된 추출물을 염수 용액으로 세정했다. 유기 용액을 농축하고, 잔여물을 DCM/메탄올 구배를 사용하는 실리카겔상 크로마토그래피로 정제했다. 이것으로 336 mg (0.94 mmol, 16%)의 데하이드로코엘렌테라진을 적색 고형물로서 얻었다. 이 물질을 10 mL의 메탄올에서 현탁시키고, 혼합물을 빙욕에서 냉각시켰다. 이것에, 나트륨 보로하이드라이드 (100 mg, 2.6 mmol)을 1시간에 걸쳐 3부분으로 첨가했다. 반응 혼합물을 추가 30 분 동안 교반하고, 순수한 빙초산을 pH 5에 도달할 때까지 적가했다. 용액을 농축하고, 잔여물을 15 mL의 물로 분쇄했다. 고형물을 흡입 여과를 통해 분리하고 진공 하에서 몇 시간 동안 건조하여 318 mg (94%)의 조 코엘렌테라진을 황색 고형물로서 얻었다. 절차를 하기로부터 조정했다: Kakoi 및 Inoue, Chem . Lett . 11(3):299-300 (1980).
방법 B: (하기 화합물은 방법 B에 의해 합성될 수 있다: 화합물 PBI-3882, PBI-3932, PBI-3881)
Figure pct00055

플라스크에 글라이옥살 (2.2 mmol), 아미노피라진 (1.1 mmol), 에탄올 (20 mL), 12N HCl (0.6 mL), 및 물 (1 mL)을 충전했다. 반응 혼합물을 24시간 동안 가열 환류하고 농축했다. 잔여물을 DCM/메탄올 구배를 사용하는 칼럼 실리카겔상 크로마토그래피로 정제했다. 이것으로 100 mg (0.25 mmol, 23%)의 코엘렌테라진 생성물을 흑색 고형물로서 얻었다. 절차를 하기로부터 조정했다: Inoue 등 " Squid bioluminescence. II. Isolation from Watasenia scintillans and synthesis of 2-(p-hydroxybenzyl)-6-(p-hydroxyphenyl)-3,7-dihydroimidazo[1,2-a]pyrazin-3-one." Chem . Lett ., 4(2):141-4 (1975).
방법 C: 신규 코엘렌테라진의 합성 (하기 화합물은 방법 C에 의해 합성될 수 있다: PBI-3939, PBI-3945, PBI-3889, PBI-4002)
화합물 4-(5-아미노-6-벤질피라진-2-일)페놀은 이전에 기재된 방법에 따라 제조될 수 있다 (Kishi 등, Tetrahedron Lett ., 13:2747 (1972);　Mosrin et al., Organic Letters , 11:3406 (2009); Kakoi, Chem . Pharm . Bull ., 50:301 (2002)).
2-아미노-3-벤질-5- 페닐피라진의 합성. 둥근바닥 플라스트에 5 g (33.5 mmol)의 2-이소니트로소아세토페논, 6.7 g (36.8 mmol)의 2-아미노-3-페닐프로판니트릴 하이드로클로라이드 및 100 mL의 건조 피리딘을 충전했다. 혼합물을 -20℃로 냉각시키고 4.6 mL (40.0 mmol)의 TiCl4을 적가했다. 반응을 -20℃에서 30분 동안 유지하고 80℃로 2.5시간 동안 가열했다. 용매를 증발시키고 잔여물을 1 L의 DCM에서 취했다. 이 용액을 포화 NaHCO3 및 염수로 세정했다. 모든 휘발성물질을 증발시키고 잔여물을 에탄올 (400 mL)에서 재용해시켰다. 라니 Ni (2.0 g, 수성 서스펜션)을 첨가하고, 반응을 5 일 동안 1 기압의 수소 하에서 교반했다. 혼합물을 셀라이트를 통과시키고, 휘발성물질을 제거했다. 잔여물을 실리카겔 (헵탄/DCM) 상에서 크로마토그래피를 수행하여 2.5 g (29%)의 2-아미노-3-벤질-5-페닐피라진을 얻었다.
2-아미노-3- 페닐프로판니트릴 하이드로클로라이드의 합성. 둥근바닥 플라스트에 65 g (0.624 mol)의 나트륨 수소설파이트 및 150 mL의 물를 충전했다. 150 mL의 THF 중 75 g (0.624 mol)의 페닐아세트알데하이드의 용액을 적가했다. 20분 동안 교반 후, 37 mL의 14 M 암모늄 하이드록사이드를 한번에 첨가하고, 혼합물 60℃로 60 분 동안 가열했다. 0℃로 냉각한 후, 혼합물을 150 mL의 물로 희석하고, 100 mL의 물 중 나트륨 시아나이드 (27.5 g, 0.560 mol)의 용액을 내부 온도를 10℃ 미만으로 유지하면서 적가했다. 첨가 시, 혼합물을 30℃로 2시간 동안 가열하고 에테르로 추출했다. 나트륨 설페이트로 건조한 후, 모든 휘발성물질을 증발시키고 잔여물을 3.5 L의 에테르에서 용해시키고, 400 mL의 3.3 M 에탄올성 HCl로 처리했다. 수득한 침전물을 여과하고, 진공에서 건조하여 55 g (60%)의 생성물을 얻었다.
3-(푸란-2-일)-2- 옥소프로판산의 합성. 100 mL 플라스크에, 3-(푸란-2-일)-2-옥소프로파노에이트 (940 mg)을 23 mL 차가운 6N NaOH와 함께 첨가했다. 불용성 혼합물을 용해될 때까지 90℃ 배쓰에서 5 분 동안 교반했다. 차가운 1N HCl을 용액 산성이 산성일 때까지 첨가했다 (대략 120 mL). 용액을 2 x 50 mL EtOAc로 추출했다. 조합된 유기 층을 40 mL 염수로 세정하고 Na2SO4로 건조시켰다. 용액을 증발시켜 540 mg 갈색 고형물을 산출했다. 고형물을 97% 수성 트리플루오로아세트산 (TFA)로부터 아세토니트릴 (ACN)로 램핑하여 역상 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC)로 추가 정제했다.
에틸 3-(푸란-2-일)-2- 옥소프로파노에이트의 합성. 이성질체 (E/Z)-에틸 2-포름아미도-3-(푸란-2-일)아크릴레이트 (5.0 g)의 혼합물을 함유하는 500 mL 플라스크에, 50/50 에탄올/물 중 220 mL 1.4M (5%) HCl의 냉가된 용액을 첨가했다. 5시간 후, 반응을 200 mL의 EtOAc 및 30 mL 염수 사이에서 분할했다. 수성 층을 2 x 50 mL EtOAc로 추출했다. 조합된 유기 층을 1 x 50 mL 물, 및 1 x 50 mL 염수로 세정하고 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 유기 층을 26 g 셀라이트로 공증발시키고 헵탄으로부터 EtOAc로 램핑시켜 80 g 실리카 금 상에서 용출했다. 적절한 조합된 분획을을 증발시켜 2.1 g을 얻었다.
(E/Z)-에틸 2- 포름아미도 -3-(푸란-2-일) 아크릴레이트의 합성. 500 mL 플라스크에, 50 mL 디에틸 에테르, Cu2O (320 mg), 및 푸릴 알데하이드 (5.2 mL)을 첨가했다. 플라스크를 빙욕에서 냉각시키고, 에틸 2-이소시아노아세테이트 (5.3 mL) 첨가했다. 1.5시간 후, 칼륨 tert-부톡사이드 (5 g)을 반응에 첨가했다. 4시간 후, 이질적 반응물을 여과했다. 60 mL 30% 시트르산 및 20 mL EtOAc을 첨가하고 10분 동안. 수성 층을 50 mL EtOAc로 추출했다. 조합된 유기 층을 무수 나트륨 설페이트 상에서 건조시켰다. EtOAc 층을 24 g 셀라이트로 공증발시키고 헵탄으로부터 EtOAc로 램핑하여 80 g 실리카 금 상에서 용출했다. 황색 시럽을 추가 정제없이 사용했다.
2-옥소-3-(티오펜-2-일) 프로판산의 합성. 250 mL 플라스크에, (E/Z)-5-(티오펜-2-일메틸렌)이미다졸리딘-2,4-디온 (5.0 g) 및 100 mL의 차가운 6N NaOH을 첨가했다. 혼합물을 100℃로 1시간 동안 가열했다. 농축 HCl을 산성일 때까지 냉각된 용액에 첨가했다 (pH=1). 혼합물을 8 x 50 mL 디에틸에테르로 추출했다. 결합된 에테르 층을 50 mL 염수로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 증발시켜 3.36 g 고형물을 얻었다. 샘플을 α,α,α-트리플루오로톨루엔에 의한 재결정화로 추가 정제하여 1.63 g을 얻었다.
(E/Z)-5-(티오펜-2- 일메틸렌 ) 이미다졸리딘 -2,4-디온의 합성. 250 mL 플라스크에, 히단토인 (9.8 g) 및 티오펜-2-카브알데하이드 (10 g)을 첨가했다. 혼합물에 피페리딘 (9.6 mL)을 방울로 떨어뜨렸다. 혼합물을 100℃로 1시간 동안 가열하고 그 다음 300 mL의 1N HCl에 부었다. 고형물을 여과하고, 물로 세정하고 진공에서 건조시켜 4.9 g 고형물을 얻었다.
Figure pct00056

단계 1- 마이크로웨이브 비알 (10 mL)에서, 적절한 페닐피라진-2-아민 (100 mg), 적절한 피루브산 (2 당량), DCM (1 mL), 및 1,1,1-트리플루오로에탄올 (1 mL)을 30분 동안 80℃에서 교반과 함께 가열했다. 반응물을 2 그램의 셀라이트 상에 공흡착시키고, 용매 진공에서 제거했다. 셀라이트를 24 g의 구형 실리카겔 상에 로딩하고 헵탄에서 에틸아세테이트로의 램핑으로 용출했다. 적절한 분획을 조합하고, 증발시켰다.
단계 2 - THF (0.5 mL)에서 용해된 단계 1에서 분리된 물질을 빙욕에서 냉각시켰다. 아세트산 무수물 (25 μL), 디메틸아미노피리딘 (8.5 mg), 및 트리에틸아민 (25 μL)을 첨가했다. 2 시간 후, 대다수의 THF를 진공에서 제거했다. 생성물을 30% 시트르산 (2 mL)의 수용액으로 침전시켰다. 고형물을 물 (2 mL)에서 세정하고 그 다음 3 mL DCM에서 용해시켰다. DCM을 1 x 2 mL 물 그 다음 1 x 2 mL 염수로 세정했다. DCM 층을 2 그램의 셀라이트 상에서 공흡착시키고, 용매 진공에서 제거했다. 셀라이트를 12 g의 구형 실리카겔 상에 로딩하고 헵탄으로부터 DCM로의 램핑으로 용출했다. 적절한 분획을 조합하고, 증발시켰다.
단계 3 - DCM (1 mL)에서 용해된 단계 2로부터의 물질을 빙욕에서 냉각시켰다. 용액에, 디글라임 (325 μL의 0.5 M) 중 메탄올 (0.5 mL) 및 나트륨 보로하이드라이드 용액을 첨가했다. 2 시간 후, 아세트산 (10 μL)을 첨가하고, 용액을 30% 시트르산 (1 mL) 및 DCM (2 mL)의 수용액 사이에서 빠르게 분할했다. DCM 층을 1 그램의 셀라이트 상에 공흡착시키고, 용매 진공에서 제거했다. 셀라이트를 4 g의 구형 실리카겔 상에 로딩하고 DCM으로부터 EtOAc로의 램핑으로 용출했다. 적절한 분획을 조합하고, 증발시켰다.
단계 4 (단지 R" = OAc이면) - 단계 3의 물질을 THF (200 μL)에서 용해시키고 빙욕에서 냉각시켰다. THF 중 1 당량의 1.35 M 칼륨 메톡사이드를 용액에 첨가했다. 30 분 후, 반응을 DCM (1 mL) 및 30% 시트르산 (1 mL) 사이에서 분할했다. DCM 층을 0.5 g 셀라이트 상에 공흡착시키고, 용매 진공에서 제거했다. 셀라이트를 4 g의 구형 실리카겔 상에 로딩하고 DCM으로부터 EtOAc로의 램핑으로 용출했다. 적절한 분획을 조합하고, 증발시켰다.
방법 D: (하기 화합물은 방법 D에 의해 합성될 수 있다: 화합물 PBI-3899, PBI-3900, PBI-3925, PBI-3933, PBI-3946) - 일반적으로, 아미노피라진을 2 당량의 2-옥소산과 함께 수소의 분위기 하에서 팔라듐 촉매의 존재에서 농축시켰다. 생성된 알파-아미노산을 정제하고 순차적으로 분자내 축합을 위해 활성화시켜 상응하는 이미다조피라지논을 얻었다.
Figure pct00057

실시예 5 - 8-벤질-6-(4- 하이드록시페닐 )-2- 프로필이미다조[1,2-a]피라진 -3(7H)-온의 합성
2-((3-벤질-5-(4- 하이드록시페닐 )피라진-2-일)아미노) 펜탄산. 4-(5-아미노-6-벤질피라진-2-일)페놀 (100 mg, 0.36 mmol)을 에탄올 (20 mL) 중 2-옥소발레르산 (84 mg, 0.72 mmol)와 혼합했다. Pd/C (활성 탄소 중 10% 팔라듐, 40 mg)을 첨가하고, 반응 혼합물을 65℃로 가열했다. N2 가스로 공기 거품을 일으키고, 수소 밸룬을 반응 플라스크에 적용했다. 반응을 지속적으로 4시간 동안 교반했다. 냉각시킨 후, 여과하고, 수득한 용액을 플래시 크로마토그래피 (용출 용매: 헵탄 중 50% EtOAc)로 정제하여 생성물을 황색 분말로서 얻었다 (70 mg, 52%). 1H NMR (300 MHz, CD2Cl2, δ): 8.31 (s, 1H), 7.82 (d, 2H, J = 9.0Hz), 7.31 (m, 5H), 6.92 (d, 2H, J = 9.0Hz), 5.34 (s, 2H), 4.20 (m, 1H), 1.10 (m, 2H), 0.98 (m, 2H), 0.87 (t, 3H); MS (ESI) m/z 378.3 (M+1).
8-벤질-6-(4- 하이드록시페닐 )-2- 프로필이미다조[1,2-a]피라진 -3(7H)-온. 2-((3-벤질-5-(4-하이드록시페닐)피라진-2-일)아미노)펜탄산 (49 mg, 0.13 mmol)을 DCM (10 mL)에서 용해시켰다. 피리딘 (0.5 mL)을, 그 다음 N,N'-디사이클로헥실카보디이마이드 (54 mg, 0.26 mmol)을 첨가했다. 반응 혼합물을 서서히 실온에서 1시간 동안 교반했다. 용매를 증발시키고 잔여물을 플래시 크로마토그래피 (용출 용매: DCM 중 EtOAc 대 DCM 대 10% 메탄올)로 정제하여 생성물을 황색 분말로서 정제했다 (40 mg, 86%). 1H NMR (300 MHz, CD3OD, δ): 7.35 (m, 8H), 6.88 (d, J = 9.0Hz, 2H), 4.40 (s, 2H), 2.81 (t, J = 7.5Hz, 2H), 1.81 (m, 2H), 1.02 (t, J = 7.5Hz, 3H); MS (ESI) m/z 359.0.
실시예 6 - 8-벤질-2-부틸-6-(4- 하이드록시페닐 ) 이미다조 [1,2-a]피라진-3(7H)-온의 합성
2-((3-벤질-5-(4- 하이드록시페닐 )피라진-2-일)아미노) 헥산산 . 4-(5-아미노-6-벤질피라진-2-일)페놀 (200 mg, 0.72 mmol)을 에탄올 (20 mL) 중 2-케토헥산산 나트륨 염 (220 mg, 1.44 mmol)과 혼합했다. Pd/C (활성 탄소 중 10% 팔라듐, 100 mg)을 몇 방울의의 아세트산와 함께 첨가하고, 반응 혼합물을 65℃로 가열했다. N2 가스로 공기 거품을 일으키고, 수소 밸룬을 반응 플라스크에 적용했다. 반응을 지속적으로 4시간 동안 교반했다. 냉각시킨 후, 그것을 여과하고, 수득한 용액을 플래시 크로마토그래피 (용출 용매: 헵탄 중 50% EtOAc)로 정제하여 생성물을 황색 분말로서 정제했다 (130 mg, 46%). MS (ESI): m/z 392.2 (M+1).
8-벤질-2-부틸-6-(4- 하이드록시페닐 ) 이미다조 [ 1,2-a]피라진 -3(7H)-온. 2-((3-벤질-5-(4-하이드록시페닐)피라진-2-일)아미노)헥산산 (130 mg, 0.33 mmol)을 DCM (10 mL)에서 용해시켰다. 피리딘 (0.5 mL)을 그 다음 N,N'-디사이클로헥실카보디이마이드 (137 mg, 0.67 mmol)을 첨가했다. 반응 혼합물을 서서히 실온에서 1시간 동안 교반했다. 용매를 증발시키고 잔여물을 플래시 크로마토그래피 (용출 용매: DCM 중 EtOAc 대 DCM 대 10% 메탄올)로 정제하여 생성물을 황색 분말로서 정제했다 (110 mg, 89%). 1H NMR (300 MHz, CD3OD, δ): 7.30 (m, 8H), 6.88 (d, 2H), 4.40 (s, 2H), 2.84 (t, 2H), 1.77 (m, 2H), 1.51 (m, 2H), 0.89 (m, 3H); MS (ESI) m/z 374.3 (M + 1).
실시예 7 - 8-벤질-2-에틸-6- 페닐이미다조[1,2-a]피라진 -3(7H)-온 ( PBI -3925)의 합성
2-((3-벤질-5- 페닐피라진 -2-일)아미노)부탄산. 3-벤질-5-페닐피라진-2-아민 (200 mg, 0.77 mmol)을 에탄올 (20 mL) 중 2-옥소부티르산 (157 mg, 1.54 mmol)와 함께 혼합했다. Pd/C (활성 탄소 중 10% 팔라듐, 100 mg)을 첨가하고, 반응 혼합물을 65℃로 가열했다. N2 가스로 공기 거품을 일으키고, 수소 밸룬을 반응 플라스크에 적용했다. 반응을 지속적으로 4시간 동안 교반했다. 냉각시킨 후, 그것을 여과하고, 수득한 용액을 플래시 크로마토그래피 (용출 용매: 헵탄 중 50% EtOAc)로 정제하여 생성물을 황색 분말로서 정제했다 (90 mg, 34%). 1H NMR (300 MHz, CD2Cl2, δ): 7.72 (s, 1H), 7.32-7.48 (m, 10H), 4.46 (s, 2H), 4.20 (m, 2H), 2.25 (q, 2H), 0.99 (t, 3H); MS (ESI): m/z 348.3 (M+1).
2-((3-벤질-5-페닐피라진-2-일)아미노)부탄산을 DCM (10 mL)에서 용해시켰다. 피리딘 (0.5 mL)을 그 다음 N,N'-디사이클로헥실카보디이마이드 (137 mg, 0.67 mmol)을 첨가했다. 반응 혼합물을 서서히 실온에서 1시간 동안 교반했다. 용매를 증발시키고 잔여물을 플래시 크로마토그래피 (용출 용매: DCM 중 EtOAc 대 DCM 대 10% 메탄올)로 정제하여 생성물을 황색 분말로서 정제했다 (110 mg, 89%). 1H NMR (300 MHz, CD3OD, δ): 7.26 (m, 3H), 6.84-7.07 (m, 8H), 4.03 (s, 2H), 2.47 (q, J = 9.0Hz, 2H), 0.96 (t, J = 9.0Hz, 3H); MS (ESI): m/z 330.2 (M+1).
실시예 8 - 8-벤질-6- 페닐 -2-(3,3,3- 트리플루오로프로필 ) 이미다조 [1,2-a]피라진-3(7H)-온의 합성
Figure pct00058

5,5,5- 트리플루오로 -2- 옥소펜탄산 . 에틸 4,4,4-트리플루오로부티레이트 (1 g, 5.88 mmol) 및 디에틸 옥살레이트 (3.87 g, 26.5 mmol)을 에탄올에서 용해시켰다. 나트륨 에톡사이드 (에탄올 중 21%, 2.09 g)을 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 0.5시간 동안 교반했다. 용매를 증류시키고, 잔여물을 EtOAc/물로 추출했다. 유기 층들을 수집하고 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 여과 후, 용매를 제거하여 깨끗한 액체를 얻었다. MS (ESI): m/z 269.1 (M-1). 그 다음 액체를 3N HCl (20 mL)에서 용해시키고, 반응 혼합물을 4시간 동안 환류시켰다. 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 EtOAc로 추출했다. 유기 층들을 수집하고 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 여과 후, 용매를 제거하고, 잔여물을 다음 단계에서 직접 사용했다. MS (ESI): m/z 169.7 (M-1).
5,5,5- 트리플루오로 -2-((3-벤질-5- 페닐피라진 -2-일)아미노)부탄산. 3-벤질-5-페닐피라진-2-아민 (240 mg, 0.92 mmol)을 에탄올 (20 mL) 중 5,5,5-트리플루오로-2-옥소펜탄산 (150 mg, 0.88 mmol)와 함께 혼합했다. Pd/C (활성 탄소 중 10% 팔라듐, 100 mg)을 첨가하고, 반응 혼합물을 65℃로 가열했다. N2 가스로 공기 거품을 일으키고, 수소 밸룬을 반응 플라스크에 적용했다. 반응을 지속적으로 4시간 동안 교반했다. 냉각시킨 후, 그것을 여과하고, 수득한 용액을 플래시 크로마토그래피 (용출 용매: 헵탄 중 50% EtOAc)로 정제하여 생성물을 황색 분말로서 정제했다 (200 mg, 54%). 1H NMR (300 MHz, CD2Cl2, δ): 11.45 (s, 1H), 10.20 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.34 (m, 10H), 5.34 (s, 2H), 3.96-4.23 (m, 2H), 3.02-3.28 (m, 2H); FNMR: -76.3; MS (ESI): m/z 416.1 (M+1).
코엘렌테라진 ( R 1 = H, R 2 = - CH 2 CH 2 CF 3 ). 5,5,5-트리플루오로-2-((3-벤질-5-페닐피라진-2-일)아미노)부탄산 (100 mg, 0.24 mmol)을 DCM (10 mL)에서 용해시켰다. 피리딘 (0.5 mL)을 그 다음 N,N'-디사이클로헥실카보디이마이드 (100 mg, 0.48 mmol)을 첨가했다. 반응 혼합물을 서서히 실온에서 1시간 동안 교반했다. 용매를 증발시키고 잔여물을 플래시 크로마토그래피 (용출 용매: DCM 중 EtOAc 대 DCM 대 10% 메탄올)로 정제하여 생성물을 황색 분말로서 정제했다 (80 mg, 87%). 1H NMR (300 MHz, CD2Cl2, δ): 7.36 (m, 11H), 3.43 (s, 2H), 1.60-1.92 (m, 4H); FNMR: 67.4 (t, J = 18Hz); MS (ESI): m/z 398.2 (M+1).
실시예 9 - 8-벤질-2-(푸란-2- 일메틸 )-6- 페닐이미다조[1,2-a]피라진 -3(7H)-온 ( PBI -3939)의 합성
Figure pct00059

8-벤질-2-(푸란-2- 일메틸 )-6- 페닐이미다조[1,2-a]피라진 -3(7H)-온: 3-(푸란-2-일)-2-옥소프로판산 및 3-벤질-5-페닐피라진-2-아민을 개시 물질로서 사용하여. 방법 C로부터 합성했다. 1H NMR (300 MHz, dmso) δ 8.88 (s, 1H), 8.02 (d, J = 7.9, 2H), 7.61 - 7.38 (m, 6H), 7.37 - 7.14 (m, 3H), 6.38 (s, 1H), 6.26 (d, J = 3.2, 1H), 4.64 (s, 3H), 4.40 (s, 3H); C24H20N3O2 +에 대한 정확한 질량 계산치 m/z+ 382.16, 실측치 m/z+ 382.
실시예 10 - 8-벤질-6- 페닐 -2-(티오펜-2- 일메틸 ) 이미다조 [1,2-a]피라진-3(7H)-온 (PBI-3889)의 합성
Figure pct00060

8-벤질-6- 페닐 -2-(티오펜-2- 일메틸 ) 이미다조 [1,2-a]피라진-3(7H)-온: 2-옥소-3-(티오펜-2-일)프로판산 및 3-벤질-5-페닐피라진-2-아민을 개시 물질로서 사용하여 방법 C로부터 합성했다. 1H NMR (300 MHz, dmso) δ 8.85 (s, 1H), 7.99 (d, J = 6.8, 2H), 7.63 - 7.02 (m, 10H), 6.94 (dd, J = 3.5, 5.1, 1H), 4.62 (s, 2H), 4.58 (s, 2H), 2.69 (contaminate); C24H20N3OS+에 대한 정확한 질량 계산치 m/z+ 398.13, 실측치 m/z+ 398.
실시예 11 - 8- 사이클로프로필 -2-(4- 하이드록시벤질 )-6- 페닐이미다 조[ 1,2-a]피라진 -3(7H)-온 ( PBI -3897)의 합성
Figure pct00061

8- 사이클로프로필 -2-(4- 하이드록시벤질 )-6-페닐이미다조[ 1,2-a]피라진 -3(7H)-온: 3-사이클로프로필-5-페닐피라진-2-아민 및 3-(4-하이드록시페닐)-2-옥소프로판산을 개시 물질로서 갖는 방법 A를 사용하여 합성했다. C22H18N3O2 -에 대한 정확한 질량 계산치 m/z- 356.14, 실측치 m/z- 356.
실시예 12 - 8-벤질-2- 메틸 -6- 페닐이미다조[1,2-a]피라진 -3(7H)-온 ( PBI -3932)의 합성
Figure pct00062

8-벤질-2- 메틸 -6- 페닐이미다조[1,2-a]피라진 -3(7H)-온: 1,1-디메톡시프로판-2-온 및 3-벤질-5-페닐피라진-2-아민을 개시 물질로서 갖는 방법 B를 사용하여 합성했다. C20H18N3O+에 대한 정확한 질량 계산치 m/z+ 316.14, 실측치 m/z+ 316.
실시예 13 - 2-(4- 하이드록시벤질 )-8- 메틸 -6- 페닐이미다조[1,2-a]피라진 -3(7H)-온 ( PBI -3896)의 합성
Figure pct00063

2-(4- 하이드록시벤질 )-8- 메틸 -6- 페닐이미다조[1,2-a]피라진 -3(7H)-온: 3-메틸-5-페닐피라진-2-아민 및 3-(4-하이드록시페닐)-2-옥소프로판산을 개시 물질로서 갖는 방법 A를 사용하여 합성했다. 1H NMR (300 MHz, dmso) δ 8.84 (s, 1H), 8.00 (d, J = 7.6, 2H), 7.47 (dd, J = 8.6, 16.2, 3H), 7.17 (d, J = 7.3, 2H), 6.69 (d, J = 8.4, 2H), 6.26 (s, 4H), 4.17 (s, 2H), 2.86 (s, 3H), 2.48 (s, 1H).
실시예 14 - 8-벤질-2-(4- 하이드록시벤질 )-6- 페닐이미다조[1,2-a]피라진 -3(7H)-온 ( PBI -3840)의 합성
Figure pct00064

8-벤질-2-(4- 하이드록시벤질 )-6- 페닐이미다조[1,2-a]피라진 -3(7H)-온: 3-(4-하이드록시페닐)-2-옥소프로판산 및 3-벤질-5-페닐피라진-2-아민을 개시 물질로서 를 갖는 방법 A를 사용하여 합성했다. C26H22N3O2 +에 대한 정확한 질량 계산치 m/z+ 408.17, 실측치 m/z+ 408.
실시예 15 - 보호된 코엘렌테라진 (안정된) ( PBI -4377)의 합성
디메틸포름아마이드 (DMF) 중 PBI-3939, 칼륨 카보네이트 (1.1 당량) 및 칼륨 아이오다이드 (1.1 당량)의 혼합물에, 아르곤 분위기 하에서, 1 당량의 클로로메틸 피발레이트를 실온에서 첨가했다. 반응 진행을 박층 크로마토그래피로 모니터링하고, 완료 시, 반응 혼합물을 빙욕에서 몇 분 동안 냉각시키고, 반응 용적과 같은 물의 용적을 첨가했다. 수득한 혼합물을 적당한 유기 용매 (예를 들면, EtOAc)로 추출하고, 추출물을 농축하여 조 생성물을 얻었다. 물질을 실리카겔상 크로마토그래피로 추가 정제했다.
실시예 16 - 8-벤질-2-((1- 메틸 -1H- 이미다조 l-2-일)메틸)-6- 페닐이미다조[1,2-a]피라진 -3(7H)-온 ( PBI -4525), 8-벤질-6-(4- 하이드록시페닐 )-2-((1- 메틸 -1H- 이미다조 l-2-일) 메틸 )-6- 페닐이미다조[1,2-a]피라진 -3(7H)-온 (PBI-4540) 및 2-((1H- 이미다조 l-2-일) 메틸 )-8-벤질-6- 페닐이미다조[1,2-a]피라진 -3(7H)-온 ( PBI -4541)의 합성
Figure pct00065

아르곤 분위기 하에서 10 mmol의 2-메틸 이미다졸 유도체 1 또는 2를 함유하는 플라스크에, 20 mL의 건조 THF를 첨가하고, 용액을 드라이아이스/아세톤 배쓰에서 대략 -78℃로 냉각시켰다. 차가운 혼합물에, 9.3 mmol의 n-부틸리튬 (헥산 중 2.46 M)의 용액을 몇 분에 걸쳐 적가했다. 수득한 용액을 대략 -78℃에서 30 분 동안 교반하고, 6.7 mmol의 화합물 3을 주사기로 첨가했다. 반응 혼합물을 3시간 동안 교반하고 20 mL 포화 암모늄 클로라이드 용액 및 20 mL의 포화 나트륨 바이카보네이트 용액의 첨가로 켄칭했다. 차가운 배쓰를 제거하고, 실온으로 따뜻하게 한 후, 혼합물을 3 x 100 mL의 EtOAc로 추출했다. 조합된 추출물을 상에서 건조시키고 (MgSO4), 진공에서 농축하고, 조 화합물 4 또는 5를 실리카겔 (EtOAc/헵탄)을 사용하는 칼럼 크로마토그래피로 정제했다.
마이크로웨이브 비알에 100 mg (1 당량)의 화합물 6 또는 7 및 2 당량의 화합물 8 또는 9을 충전했다. 혼합물에, 4.5 mL의 에탄올 및 0.25 mL의 농축 HCl을 첨가했다. 반응 혼합물을 마이크로웨이브에서 100℃에서 1.5시간 동안 가열했다. 수득한 혼합물을 50 mL의 EtOAc에 첨가하고 순차적으로 20 mL의 포화 나트륨 바이카보네이트 용액 및 20 mL의 염수로 세정했다. 유기 상을 진공에서 농축하고, 잔여물을 실리카겔 (메탄올/디클로로메탄)를 사용하는 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 10-12를 얻었다.
실시예 17 -신규 코엘렌테라진의 안정성 및 자체발광 특성화
신규 코엘렌테라진 PBI-3939, PBI-3889, PBI-3945, PBI-4002, 또는 PBI-3896의 안정성 및 자체발광 특성화를 측정했다. 더 높은 안정성 및 더 적은 자체발광은 기질/시약에서 매력적인 기술 특징이다.
안정성을 측정하기 위해, 20 μM의 신규 코엘렌테라진 PBI-3939, PBI-3889, PBI-3945, PBI-4002, 또는 PBI-3896, 30 μM 원상태 코엘렌테라진, 또는 22 μM의 공지된 코엘렌테라진-h 또는 공지된 코엘렌테라진-hh을 50 mM CDTA, 150 mM KCl, 50 mM DTT, 35 mM 티오우레아, 1% TERGITOL® NP-9 (v/v), 및 0.1% MAZU® DF 204를 함유하는 리포터 시약 버퍼에 두었다. 복제 샘플을 실온에서 (즉, 22-24 ℃) 다양한 시간의 길이 동안 인큐베이팅하고 그 다음 -70℃로 바꾸었다. 모든 샘플을 수집하고 냉동시킨 후, 해빙시키고 페놀 레드 + 0.1% PRIONEX®없이 40 μL의 DMEM 중 OgLuc 변이체 IV를 함유하는 10 μL의 박테리아 세포 용해물과 혼합했다. 샘플의 발광을 IV 첨가후 5분에 판독했다.
"T90"는 주위 온도, 즉, 22 ℃에서 10% (즉, 10% 까지의 활성 손실)까지 감퇴시키기 위한 발광 신호에 대한 시간의 양을 나타낸다. 발광 신호의 감퇴율 ("T90")을 ln RLU 대 시간으로서 플랏팅된 데이터의 선형 적합의 기울기로부터 측정했고, 이것을 하기 방정식: t = ln (A/A0) ÷ (-k)으로부터 계산했고, 여기서 A = 시간 t에서의 세기, A0 = 0 시간에서의 세기, 및 k = 감퇴율. 표 1에서 보여진 바와 같이, 공지된 코엘렌테라진-h 및 -hh, 신규 코엘렌테라진 PBI-3939, PBI-3889, PBI-3945, PBI-4002, 및 PBI-3896에 대한 T90 값은 원상태 코엘렌테라진에 대해서보다 더 높았는데, 이는, 이들 코엘렌테라진이 원상태 코엘렌테라진보다 더 안정한 화합물이라는 것을 나타낸다.
자체발광 특성화를 측정하기 위해, HEK293 세포를 DMEM + 10% FBS + 피루베이트 중 15,000 세포 / 웰에서 밤새 성장시켰다. 배지를 제거하고 도 2에서 보여진 20 μM 각각의 신규 코엘렌테라진, 즉, PBI-3939, PBI-3889, PBI-3945, PBI-4002, PBI-3841, PBI-3897, PBI-3896, PBI-3925, PBI-3894, PBI-3932, 및 PBI-3840, 원상태 코엘렌테라진 및 공지된 코엘렌테라진, 코엘렌테라진-h 및 코엘렌테라진-hh로 대체했고, 이들은 CO2 독립 배지 + 10% FBS로 희석되었다. 발광을 GloMax® 발광분석기 (1 sec/웰) 상에 기질 첨가 직후 측정했다. 배경 발광을 154±15 RLU였다. 표 1은 원상태 코엘렌테라진으로 정규화된 자체발광 특성화를 보여준다 ("자체발광 (기준 대 코엘)"). 코엘렌테라진-h는 원상태 코엘렌테라진보다 더 많은 자체발광을 갖지만, 시험된 모든 다른 코엘렌테라진은 더 적은 자체발광을 가졌다.
표 1: 다양한 코엘렌테라진에 의한 IV 의 안정성 실험 및 자체발광 특성화.
Figure pct00066

실시예 18 - 신규 코엘렌테라진의 독성
신규 코엘렌테라진의 독성을 HEK293 세포에서 조사했다. HEK293 세포를 DMEM + 10% FBS + 피루베이트 중 15,000 세포 / 웰에서 밤새 성장시켰다. 배지를 제거하고 CO2 독립 배지 + 10% FBS에 희석된 신규 코엘렌테라진 화합물 (또는 DMSO 대조군)으로 대체했다. 세포 생존력을, 제조자의 설명서에 따라 CellTiter-Glo® 검정 시약 (Promega Corp.)을 사용하여 화합물 첨가 24시간 후에 측정하고 발광을 GLOMAX® 발광분석기 (1 sec/웰) 상에서 측정했다. 표 2는 HEK293 세포 중 원상태 코엘렌테라진, 공지된 코엘렌테라진-h 및 코엘렌테라진-hh, 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3939, PBI-3889, PBI-3841, PBI-3897, PBI-3945, PBI-4002, 및 PBI-3840의 독성을 보여준다. PBI-3840을 제외하고, 신규 코엘렌테라진은 코엘렌테라진-hh와 적어도 동일한 독성을 가졌다. 신규 코엘렌테라진의 일부는 원상태 코엘렌테라진 및 코엘렌테라진-h와동일한 독성을 가졌다.
표 2: CellTiter - Glo ®를 기초로 한 HEK293 세포 중 다양한 코엘렌테라진의 독성
Figure pct00067

실시예 19 - PBI -3939의 Km
PBI-3939의 Km을 측정하기 위해, OgLuc 변이체 L27V (실시예 26에서 기재됨)을 제조자의 설명서에 따라 HaloTag® 단백질 정제 시스템을 사용하여 HALOTAG® 융합물을 통해 정제하고 페놀 레드 및 0.1% PRIONEX®없이 DMEM에서 희석했다. 50 μL 검정 버퍼 (100 mM MES pH 6, 35 mM 티오우레아, 0.5% TERGITOL® NP-9 (v/v), 1 mM CDTA, 2 mM DTT 및 150 mM KCl)을 가변량의 PBI-3939과 함께 50 μL 희석된 효소 (대략 20 pM 최종 효소 농도)에 첨가하고, 발광을 3분에서 22 ℃에서 측정했다. 도 3의 데이터가 증명하는 바와 같이, the PBI-3939의 Km은 대략 10 μM이다.
실시예 20 - 화합물 PBI -4525, PBI -4540 및 PBI -4541의 특성화
화합물 PBI-4525, PBI-4540 및 PBI-4541을 발광을 검출하기 위해 그 능력에 대해 스크리닝했다. 분석하기 위해, 20 μM의 각 화합물을 검정 버퍼 (100 mM MES pH 6, 35 mM 티오우레아, 0.5% TERGITOL® NP-9 (v/v), 1 mM CDTA, 2 mM DTT 및 150 mM KCl)에 첨가했고 이것은 검정 시약을 만들기 위해 100 mM HEPES pH 7로 pH 7로 조정되었다. 그 다음 검정 시약을 페놀 레드 및 0.1% PRIONEX®없이 DMEM 중에서36 pM 정제된 L27V02 효소 (실시예 25B에 기재됨)와 혼합했다. 대조군으로서, 20 μM PBI-3939 또는 PBI-4528을 갖는 검정 버퍼를 사용했다. 발광을 효소 혼합물에 첨가후 3분에 이전에 기재된 바와 같이 측정했다. 표 3은, 화합물 PBI-4525, PBI-4540 및 PBI-4541이 코엘렌테라진-이용 루시퍼라아제로부터 발광을 검출하기 위해 사용될 있다는 것을 증명한다.
표 3
Figure pct00068

실시예 21 - OgLuc 패턴 서열
상이한 클래스의 루시퍼라아제를 포함하는 효소 과는 일반적인 3차원 구조 및 한정된 촉매 활성을 가짐으로써 인식될 수 있다. 효소 과가 진화론적 역사를 다른 효소 과와 공유하기 때문에, 그의 3차원 구조에서 또한 유사성을 나타낼 것이다. 다양한 수단의 구조 및 기능적 분석을 통해, 발명자들은, 십각류 절지동물 루시퍼라아제의 대표로서 OgLuc가 진화론적 역사의 공통성을 포함하는 지방산 결합 단백질 (FABP)와 유사한 3차원 구조를 갖는다는 것을 측정했다. 따라서, 십각류 절지동물 루시퍼라아제는 FABP와 유사한 특징적인 3차원 구조를 가지며 발광의 방출을 촉진하기 위해 기질로서 코엘렌테라진을 이용하는 것으로 한정될 수 있다. 다른 루시퍼라아제, 예를 들면, 개똥벌레 루시퍼라아제, 레닐라 루시퍼라아제, 박테리아 루시퍼라아제 등은 분명히 뚜렷한 3차원 구조를 갖는데, 이는 상이한 효소 과에서 속하고 진화론적 역사를 공유하지 않는다는 것을 나타낸다. 디노플라겔레이트 루시퍼라아제는 공유된 진화론적 역사를 제안하는 FABP에 대해 일부 유사성을 나타내는 3차원 구조를 가지지만, 코엘렌테라진을 기질로서 이용하지 않고, 따라서 십각류 절지동물 루시퍼라아제와 동일한 효소 과에 속하지 않는다.
아미노산 서열이 3차원 구조로서 또한 보존되지 않기 때문에, 서열 비교 만을 기반으로하는 효소 과를 정의하는 것은 어려울 수 있다. 예를 들면, FABP 모두가 특징적인 통 모양 3차원 형상을 가질지라도, 그의 아미노산 서열의 비교가 종종 아주 낮은 수준의 서열 동일성을 드러낸다. 그럼에도 불구하고, 서열 동일성은 3차원 구조의 공통성을 증명하기 위해 사용될 수 있다. 2개의 단백질은, 그의 아미노산 서열이 > 30% 서열 동일성, 바람직하게는 > 40% 서열 동일성, 및 가장 바람직하게는 > 50% 서열 동일성을 드러내기 위해 정렬될 수 있지만, 유사한 3차원 구조를 가질 것이다 (Chothia 및 Lesk, EMBO J. 5(4):823-826 (1986); Tramontano, Genomics, 4:402-405 (2003)). 따라서, 단백질은, OgLuc의 서열을 갖는 그의 아미노산 서열의 정렬시, 서열 동일성은 > 30%, 바람직하게는 > 40%, 및 가장 바람직하게는 > 50%이면, 십각류 절지동물 루시퍼라아제이고, 단백질은 발광의 방출을 촉진하기 위해 코엘렌테라진을 기질로서 이용할 수 있다.
효소 과의 특징적인 3차원 구조를 지속하는데 필요한 구조 제약 때문에, 효소 과 중 아미노산 서열의 일부는 다량의 보존을 나타낸다 (즉, 더 큰 수준의 서열 동일성). 따라서, 이들 보존된 용역은 2개의 단백질 사이에 공유된 공통 3차원 구조의 추가 증거로서 쓰일 수 있다. 서명, 모티프, 또는 핑거 프린트로도 불리는 보존된 서열 패턴은 당해기술에서 공지된 매뉴얼 또는 컨퓨터를 이용한 방법에 의해 산출될 수 있다. 패턴은 하기에서 발견될 수 있다: 공공 데이타염기 예컨대 프로사이트 (http://expasy.org/prosite; Sigrist 등, Nucleic Acids Res. 38(suppl 1):D161-D166 (2010)).
예를 들면, 보존된 아미노산의 패턴은 다수의 공지된 FABP의 시험시에 발견될 수 있다. 프로사이트 (05-옥트-2010의 방출 20.67)은 FABP 패턴을 함유한다 (승인 번호 PS00214, 창작된 Apr-1990, 데이타 업데이트된 Apr-2006). 이러한 FABP 패턴은 18개의 아미노산 위치를 포괄하고 하기와 같이 정의된다:
[GSAIVK]-{FE}-[FYW]-x-[LIVMF]-x-x-{K}-x-[NHG]-[FY]-[DE]-x-[LIVMFY]- [LIVM]-{N}-{G}-[LIVMAKR] (서열번호: 329) (VI),
여기서:
아미노산에 대한 표준 IUPAC 한 글자 코드가 사용된다.
기호 'x'는 어떤 아미노산이 허용되는 위치에 대해 사용된다.
위치에서의 대안적인 아미노산은 대괄호 '[]' 사이의 아미노산을 열거하여 나타낸다 (예를 들면: [ALT]은 위치에서 Ala, Leu, 또는 Thr의 가능성을 나타낸다).
위치에서의 특정 아미노산의 부재는 중괄호 '{}'로 나타낸다 (예를 들면: {AM}은 Ala 및 Met를 제외한 위치에서 임의의 아미노산을 나타낸다).
각 서열 위치 (또는 패턴에서의 요소)은 '-'에 의해 그의 이웃으로부터 분리된다.
각 서열 위치는 "패턴 위치"라 칭하고, 예를 들면 [GSAIVK]는 식 (VI)의 패턴 위치 1인 것으로 간주되고, {FE}는 식 (VI) 등의 패턴 위치 2인 것으로 간주된다.
보존된 서열 패턴이 공통 근원적인 3차원 구조로부터 생길지라도, 서열 패턴에 대한 일부 변화는 3차원 구조에 대한 붕괴없이 허용될 수 있다. 예를 들면, FABP 패밀리의 일부 멤버에 대해, 차이는 프로사이트 패턴에서 4개의 부위에서 발견된다. FABP 패밀리의 이들 추가 멤버는 거짓 음성 히트로서 프로사이트에 열거된 5개의 단백질을 포함하고, 즉, FABP 단백질 패밀리 멤버는 FABP 패턴 (UniProt 데이타베이스 승인 번호 FBP12_HUMAN, FABP1_FASGI, FABP2_FASHE, FABPL_SCHBI, RET5_BOVIN) 및 FABP 폴드를 갖는 것으로 공지된 하나의 단백질 (단백질 데이타 은행 승인 번호 2A02)에 의해 회복되지 않는다. OgLuc는 유사한 3차원 구조를 FABP와 공유하지만, 원상태 및 변이체 아미노산 서열의 서열 패턴은 또한 약간 상이하고, 프로사이트 패턴으로부터 5 위치에서 차이를 갖는다. 다양한 구현예에서, OgLuc의 패턴은 서열번호: 1의 위치 8에 상응하는 위치에서 시작한다. 아미노산 치환, 결실, 또는 삽입 서열 패턴는 차이로서 카운트된다.
이들 추가 FABP 및 OgLuc 변이체로부터의 서열 정보를 조합하여, 개선된 서열 패턴이 유도될 수 있다:
[GSAIVK]-{FE}-[FYW]-x-[LIVMFSYQ]-x-x-{K}-x-[NHGK]-x-[DE]-x-[LIVMFY]-[LIVMWF]-x-{G}-[LIVMAKRG] (서열번호: 330) (VII).
이러한 패턴을 유도하기 위해 사용된 서열 정보는 표 4에서 보여진다. 칼럼 1은 패턴 위치를 확인하고 (열기된 N- 내지 C-말단; 패턴 길이는 18개의 아미노산이다), 칼럼 6은 OgLuc에서 상응하는 서열 위치를 확인한다 (서열번호: 1에 따른 넘버링). 칼럼 2는 각 패턴 위치에 대한 프로사이트 FABP 패턴 (식 (VI)) 요서를 보여준다. 칼럼 3은 프로사이트 FABP 패턴에 의해 나타나지 않는6개의 FABP 패밀리 멤버에 존재하는 아미노산을 열거한다. 칼럼 4는 프로사이트 패턴에 의해 나타나지 않는 OgLuc (서열번호: 1) 또는 OgLuc 변이체에 존재하는 아미노산을 열거한다. 칼럼 5는 칼럼 2, 3, 및 4로부터 패턴 정보를 합쳐서 만든 개선된 패턴 ("OgLuc 패턴") (식 (VII))를 열거한다. 칼럼 7은 프로사이트 FABP 패턴 위치에 상응하는 OgLuc (서열번호: 1)에서 아미노산을 열거한다. 칼럼 8은 개선된 패턴에 상응하는 위치에서 디노플라겔레이트 루시퍼라아제 서열 (8 상이한 종)에서 발견된 아미노산을 열거한다 (유전자은행 수탁 번호 2021262A, AAA68491, AAC36472, AAV35379, AAV35380, AAL40676, AAL40677, AAV35378, AAV35377, AAV35381, 및 단백질 데이타 은행 승인 번호 1VPR).
개선된 패턴 (식 (VII))은 FABP 및 OgLuc 사이에서 공유되는 3차원 단백질 구조의 조짐(즉, 핑거 프린트)으로서 쓰인다. 그러나, 이러한 패턴에 의한 엄격한 동의는 3차원 구조의 공통성을 나타낼 필요는 없다. 본원에 주어진 실시예로부터, 공통 3차원 구조는 패턴에서 5개의 변화만큼 많이 존재할 수 있다. 또한, 예를 들면, 디노플라겔레이트 루시퍼라아제가 FABP 및 OgLuc와 유사한 3차원 구조를 갖지만, 개선된 패턴으로부터 4개의 차이를 갖는다.
따라서, 단백질이 발광용 코엘렌테라진의 서열 유사성 및 이용을 기반으로 한 십각류 절지동물 루시퍼라아제인 것으로 인식될 수 있지만, 개선된 서열 패턴를 가짐으로써 또한 인식될 수 있다. 구체적으로, 단백질은, 서열번호: 1 또는 그의 변이체를 갖는 그의 아미노산 서열의 정렬시, 서열 동일성은 > 30%, 바람직하게는 > 40%, 및 가장 바람직하게는 > 50%이면, 십각류 절지동물 루시퍼라아제이고, 단백질은 발광의 방출을 촉진하기 위해 코엘렌테라진을 기질로서 이용할 수 있고, 서열번호: 1의 위치 8에 상응하는 위치에서 시작하는 아미노산 서열은5 이하의 차이, 또는 더 바람직하게는 4, 3, 2, 또는 1 이하의 차이, 또는 가장 바람직하게는 차이없음와 함께 하기이다:
[GSAIVK]-{FE}-[FYW]-x-[LIVMFSYQ]-x-x-{K}-x-[NHGK]-x-[DE]-x-[LIVMFY]-[LIVMWF]-x-{G}-[LIVMAKRG] (서열번호: 330) (VII),
여기서 상기 차이는 표 4에 따른 식 (VII)의 패턴 위치 1, 2, 3, 5, 8, 10, 12, 14, 15, 17, 또는 18에 상응하는 위치에서 생긴다. 차이는 표 4의 패턴 위치 사이의 갭 또는 삽입을 또한 포함할 수 있다.
표 4: 단백질 서열 패턴
Figure pct00069

실시예 22 - OgLuc 변이체의 산출
실험 세부사항
달리 언급되지 않으면, 랜덤 치환을 갖는 개시 OgLuc 변이체 서열의 추가 변이체는 제조자의 설명서에 따른 오류유발, 돌열변이유발 PCR-기반 시스템 GeneMorph II 랜덤 돌연변이유발 키트 (Stratagene; Daughtery, PNAS USA, 97(5):2029 (2000)), 및 NNK 위치 포화 (Zheng 등, Nucleic Acids Research, 32:e115 (2004))을 사용하여 산출되었다.
특이 돌연변이를 갖는 개시 OgLuc 변이체의 추가 변이체는 제조자의 설명서에 따라 올리고-기반 위치지향적 돌연변이유발 키트 QuikChange Site-Directed Mutagenesis Kit (Stratagene; Kunkel, PNAS USA, 82(2):488 (1985))를 사용하여 산출되었다.
수득한 변이체는 T7 프로모터-기반 발현용 pF1K Flexi® 벡터 (Promega Corp.)의 맥락에서 구성되었다. 대안적으로, 수득한 변이체는 pF4Ag 벡터 상업적으로-이용가능한 pF4A의 버젼 (Promega Corp.)의 맥락에서 구성되었고, 이는 융합 단백질을 산출하기 위해 C-말단 HaloTag® (Promega Corp.; 이하 통칭 "HT7") (Ohana 등, Protein Expression and Purification , 68:110-120 (2009)) 유무와 함께 이. 콜리 리보솜-결합 부위를 함유하도록 변형된 T7 및 CMV 프로모터를 함유한다. 예를 들면, C1+A4E 변이체를 얻기 위해, NNK 포화 돌연변이유발 실험은 pF1K 벡터 배경에서 수행되었다. C1+A4E 라이브러리는 HT7 없이 pF4Ag 벡터 배경에서 산출되었다. QC27, QC27-9a, 및 IVY 라이브러리는 C-말단 HT7와 함께 pF4Ag 벡터 배경에서 산출되었다. IV-기반 변이체는 HT7 없이 pF4Ag 벡터 배경에서 산출되었다. 수득한 벡터는 당해기술에 공지된 기술을 사용하여 KRX 이. 콜리 를 변형하도록 사용되었다.
산출된 OgLuc 변이체는 변이체에서 확인된 아미노산 치환 및/또는 변이체에 함유된 이. 콜리 클론에 대해 명명되고, 예를 들면, 도 6A는, 다른 결과 중에서, 이. 콜리 클론 16C5가 치환 Q20R을 갖는다는 것을 보여준다.
스크리닝 세부사항
얻어진 라이브러리를 대장균에서 발현시키고, 상응하는 출발 OgLuc 변이체와 비교하여 증가된 광 출력(즉, 증가된 발광, 증가된 밝기, 또는 증가된 빛 방출) 또는 상대적 특이성의 변화를 갖는 OgLuc 변이체를 로보트 시스템으로 1차 스크리닝하였다. 상기 로보트 1차 스크리닝을 하기와 같이 수행하였다: 생성된 라이브러리로부터 얻은 개별적인 콜로니를 사용하여 96-웰 플레이트 내의 최소 배지에 접종하고 37℃에서 17 내지 20시간 동안 성장시켰다("M1 배양물"). 상기 M1 배양물을 신선한 최소 배지로 1:20으로 희석하고 37℃에서 17-20시간 동안 성장시켰다("M2 배양물"). 상기 M2 배양물을 유도 배지 내로 1:20으로 희석하고 워크-어웨이(walk-away) 유도, 즉, 자기 유도(autoinduction)로 25℃에서 17-20시간 동안 성장시켰다(Schagat et al., "KRX Autoinduction Protocol: A Convenient Method for Protein Expression." Promega Notes , 98:16-18 (2008)). 상기 유도 배지는, 신규 코엘렌테라진 PBI-3841, PBI-3842, PBI-3857, PBI-3880, PBI-3881, PBI-3886, PBI-3887, PBI-3897, PBI-3896, 또는 PBI-3894가 1차 스크리닝에서 기질로서 사용되는 경우. 람노스 및 글루코오스를 함유하지 않았다. 상기 유도 배지는 코엘렌테라진-h로 알려진 원상태 코엘렌테라진, 또는 신규 코엘렌테라진 PBI-3840, PBI-3889, PBI-3899, 또는 PBI-3900이 일차 스크린에서 기질로서 사용되는 경우 람노스 또는 글루코오스를 함유하지 않았다. 상이한 유도 배지의 사용을 C1+A4E 및 신규 코엘렌테라진 사이에서 생성된 발광에 기초하여 결정하였고, 즉, C1+A4E를 이용한 다른 신규 코엘렌테라진과 비교하여 C1+A4E를 이용하여 적은 발광을 생성한 신규 코엘렌테라진에 대해, 람노스 및 글루코오스를 함유하는 유도 배지를 사용하였다.
10 μL의 유도된 세포를 300 mM HEPES pH 8.0, 300 mM 티오우레아, 0.3X 패시브 세포용해 버퍼("PLB"; Promega Corp. Cat. No. E194A), 0.3 mg/mL 리소자임, 및 0.003 U/μL RQ1 DNase를 함유하는 60 μL 용해 버퍼를 이용하여 용해시키고, 150 mM KCl, 1 mM CDTA, 10 mM DTT, 0.5% TERGITOL® NP-9(v/v), 및 기질로서 20 μM의 원상태 코엘렌테라진, 공지된 코엘렌테라진, 또는 신규 코엘렌테라진을 함유하는 50 μL 분석 버퍼로 발광을 측정하였다. 시약 첨가 3분 후에 각각의 변이체에 대한 발광을 측정하고, 상대적 발광 단위(RLU) 값을 각 플레이트에 대한 상응하는 출발 OgLuc 변이체의 8개의 대조군 웰의 평균에 대하여 정규화하였다. Tecan® 로보트 시스템 상에서 분석을 완료하였다.
상기 각각의 변이체에서의 임의의 부가적인 아미노산 치환을 확인하기 위하여, 목적하는 OgLuc 변이체를 본 기술분야에 공지된 표준 서열분석 기술을 이용하여 서열분석하였다. 목적하는 변이체 클론에 대해 비-로보트(매뉴얼) 시스템을 이용하여 2차 스크리닝을 수행하였다. 수동 스크리닝을 하기와 같이 수행하였다: 변이체 클론을 삼반복으로 96-웰 플레이트에서 성장시키고, 발현시키고, 분석 버퍼를 멀티채널 피펫을 이용하여 손으로 첨가하는 것을 제외하고 자동 분석을 위해 기술된 대로 분석하였다. 각 변이체의 경우, 발광을 측정하고, 평균을 내고, 상응하는 출발 OgLuc 변이체에 대해 정규화하였다. TECAN® INFINITE® F500 발광분석기를 이용하여 발광을 측정하였다.
상대적 특이성 변화의 결정
시험 코엘렌테라진 기질의 존재시의 루시퍼라아제의 발광을 참조 코엘렌테라진 기질의 존재시의 루시퍼라아제의 발광으로 나눔으로써, 상대적 기질 특이성을 결정하였다. 예를 들어, 본 발명의 신규 코엘렌테라진을 이용한 루시퍼라아제의 발광을 상이한 코엘렌테라진(예를 들어, 원상태 또는 공지된 코엘렌테라진, 또는 본 발명의 다른 신규 코엘렌테라진)을 이용한 루시퍼라아제의 발광으로 나눔으로써, 상대적 특이성을 결정하였다. 비교된 시험 코엘렌테라진 기질 및 참조 코엘렌테라진 기질은 상대적 기질 특이성을 결정하기 위한 비교 기질 쌍으로 간주되었다.
비교 기질 쌍을 이용한 시험 루시퍼라아제의 상대적 기질 특이성을 동일한 비교 기질 쌍을 이용한 참조 루시퍼라아제의 상대적 기질 특이성으로 나눔으로써, 상대적 기질 특이성의 변화를 결정하였다. 예를 들어, 상이한 코엘렌테라진(예를 들어, 원상태 또는 공지된 코엘렌테라진 또는 본 발명의 상이한 신규 코엘렌테라진)과 비교한 본 발명의 신규 코엘렌테라진을 이용한 시험 루시퍼라아제의 상대적 기질 특이성을 시험 루시퍼라아제를 위해 사용된 동일한 상이한 코엘렌테라진과 비교한 본 발명의 동일한 신규 코엘렌테라진을 이용한 참조 루시퍼라아제의 상대적 기질 특이성으로 나눔으로써, 상대적 특이성 변화를 결정하였다.
하나의 신규 코엘렌테라진을 이용한 발광을 상이한 신규 코엘렌테라진을 이용한 발광과 비교하였다. 하나의 원상태 또는 공지된 코엘렌테라진을 이용한 발광을 또 다른 원상태 또는 공지된 코엘렌테라진을 이용한 발광과 비교하였다. 하나의 원상태 또는 공지된 코엘렌테라진을 이용한 발광을 신규 코엘렌테라진을 이용한 발광과 비교하였다.
신규 코엘렌테라진을 위한 상응하는 출발 OgLuc 주형과 비교하여 OgLuc 변이체에 대한 발광(RLU)의 증가 및 참조 코엘렌테라진에 대한 발광의 감소 또는 무변화는 상대적 특이성의 변화를 보여주었다. 상응하는 출발 OgLuc와 비교하여 두 가지 신규 및 참조 코엘렌테라진에 대한 OgLuc 변이체의 발광의 감소(하지만, 신규 코엘렌테라진을 이용한 OgLuc 변이체의 발광이 더 감소함)는 또한 상대적 특이성의 변화를 보여주었다. 신규 및 참조 코엘렌테라진에 대한 상응하는 출발 OgLuc와 비교하여 OgLuc 변이체의 발광의 증가는 활성/안정성/발현의 개선을 보여주었다. 만약 신규 및 참조 코엘렌테라진을 이용한 OgLuc 변이체의 발광이 증가하였지만, 신규 코엘렌테라진을 이용한 발광의 증가가 더 크면, 이는 OgLuc 변이체의 상대적 특이성의 증가 및 활성/안정성/발현의 개선을 보여주었다.
A. C1 +A4E 변이체
미국 출원 제12/773,002호(미국 출원공개 제2010/0281552호)에 앞서 기술된 C1+A4E(서열번호: 2 및 3)를 부가적인 합성 OgLuc 변이체를 생성하기 위한 일차 출발 서열(즉, 모 서열)로서 사용하였다. C1+A4E는 서열번호: 1에 대해 하기 아미노산 치환을 갖는다: A4E, Q11R, A33K, V44I, A54F, P115E, Q124K, Y138I, 및 N166R. 기질로서 실시예 1-14(예를 들어, 도 4 참고)에 기술된 신규 코엘렌테라진을 이용하여, 박테리아 용해물을 함유하는 C1+A4E의 발광을 종래에 기술된 대로 측정하고, 기질로서 원상태 및 공지된 코엘렌테라진을 사용한 발광과 비교하였다(도 5A-G). 도 5A는 기질로서 원상태 코엘렌테라진("코엘렌테라진"), 공지된 PBI-3880, 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3842, PBI-3857, PBI-3881, PBI-3882, PBI-3886, 및 PBI-3887을 사용한 C1+A4E의 발광을 보여준다. 공지된 및 신규 코엘렌테라진을 사용한 발광 측정값을 원상태 코엘렌테라진을 사용한 C1+A4E의 발광에 대하여 정규화하였고 및 배수-감소를 원상태 코엘렌테라진과 비교하였다(도 5B). 도 5C-E는 각각 원상태 코엘렌테라진 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3945, PBI-3894, 및 PBI-4002를 사용한 C1+A4E의 발광을 보여준다. 도 5F는 원상태 코엘렌테라진 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3840, PBI-3897, PBI-3889, PBI-3899, 및 PBI-3900을 사용한 C1+A4E의 발광을 보여준다. 도 5G는 원상태 코엘렌테라진, 공지된 코엘렌테라진 PBI-3912 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3913, PBI-3925, PBI-3939, PBI-3933, PBI-3932, PBI-3946, PBI-3841, 및 PBI-3896을 사용한 C1+A4E의 발광을 보여준다. 상기 데이터는 C1+A4E 변이체가 상기 신규 코엘렌테라진 각각을 기질로서 이용할 수 있음을 보여준다.
달리 표시하지 않는 한, C1+A4E에서 확인된 최소한의 아미노산 치환을 갖는 C1+A4E 변이체를 생성하였다. C1+A4E의 4400개의 변이체 클론의 라이브러리(라이브러리 1)를 종래 기술된 대로 무작위 돌연변이유발에 의해 생성하고, 상대적 특이성 변화 및/또는 활성 변화, 예컨대, 밝기의 개선에 대해 종래에 기술된 대로 스크리닝하였다. 상기 변이체들을 기질로서 원상태 코엘렌테라진, 공지된 코엘렌테라진-h, 공지된 PBI-3880, 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3840, PBI-3841, PBI-3842, PBI-3857, PBI-3881, PBI-3886, PBI-3887, PBI-3889, PBI-3897, 및 PBI-3900을 사용하여 1차 스크리닝하였다. 또한, 변이체 절반을 기질로서 신규 코엘렌테라진 PBI-3896 및 PBI-3894을 사용하여 스크리닝하였다. 이전의 신규 화합물 스크리닝으로부터 확인된 목적하는 공지된 돌연변이를 갖는 변이체를 함유하는 플레이트를 선택하였다. 1차 스크린에서 시험된 하나 이상의 신규 코엘렌테라진에 대해 개선(상대적 특이성 변화 또는 활성 변화 중 하나)을 나타낸 변이체를 분리하고, 서열분석하고, 2차 스크리닝하였다.
2차 수동 스크리닝에서, 변이체를 공지된 코엘렌테라진 PBI-3912, 코엘렌테라진-h, 코엘렌테라진-hh, 2-메틸 코엘렌테라진, 및 코엘렌테라진 v; 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3840, PBI-3897, PBI-3889, PBI-3899, PBI-3900, PBI-3925, PBI-3944, PBI-3932, PBI-3945, PBI-3913, 및 PBI-3896을 기질로서 사용하여 시험하였다. 도 6A-D는 변이체("클론")를 위해 C1+A4E에 대해 정규화된 평균 발광을 요약한다. 도 6A-D는 이들 변이체("AA 서열")에서의 치환을 요약하며, 이는 하기 부가적인 아미노산 치환 중 적어도 하나를 갖는다: A14V, G15R, Q18L, Q20R, L22I, E23K, L27V, L27M, K33N, T39I, E49K, F54S, F54I, D55G, I56V, V58I, V58L, I59T, S66T, G67S, F68S, L72Q, M75K, I76N, F77T, F77C, K89E, I90V, I90T, L92H, H93R, M106K, Y109F, P113T, I117F, T126R, V127A, L136M, D139G, P145L, S148T, C164S, 또는 A169V.
위치 54, 92, 및 109에서의 아미노산 치환은 관심대상이었는데, 도 6A-C에 나타난 바와 같이, 이들 위치에서의 치환이 더 큰 광 출력 또는 개선된 상대적 특이성, 즉 원상태 코엘렌테라진으로부터 벗어나고 적어도 하나의 신규 코엘렌테라진에 가까운 특이성을 제공하였기 때문이다. 클론 29H7에서의 아미노산 치환 F54I는 원상태 코엘렌테라진 및 몇 가지 신규 코엘렌테라진을 이용한 더 큰 광 출력을 제공하였다. 클론 40H11에서의 아미노산 치환 Q18L, 클론 04A12에서의 아미노산 치환 L92H, 및 클론 43F9에서의 아미노산 치환 Y109F는 개선된 상대적 특이성을 제공하였다.
표 5는 종래 기술된 대로 생성된, 위치 77, 92, 또는 109에서의 부가적인 아미노산 치환("AA 변화")을 갖는 C1+A4E 변이체를 열거한다. 이들 변이체에 대하여 종래 기술된 대로 증가된 광 출력을 분석하였고, 즉, 기질로서 원상태 코엘렌테라진, 공지된 코엘렌테라진-hh, 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3939, PBI-3894, PBI-3896, PBI-3897, PBI-3932, 또는 PBI-3925을 사용하여, C1+A4E보다 최소 1.3x 더 밝은 변이체를 스크리닝하였다. 하기 부가적인 치환은 C1+A4E보다 적어도 1.3x 더 밝은 변이체를 생성하였다: L92G, L92Q, L92S, L92A, L92M, L92H, L92Y, F77W, F77Y, F77S, F77T, F77V,, F77A, F77G, F77C, F77D, F77M, 및 Y109F. 표 5에 나타난 바와 같이, L92H, F77W 및 F77A 치환이 PBI-3897, PBI-3896, 및 PBI-3932에 대해 가장 인상적인 개선을 가지고 있었다.
표 5: 위치 77, 92 및 109의 부위 포화
Figure pct00070

서열번호: 1: 18, 20, 54, 59, 72, 77, 89, 92, 109, 113, 127, 136, 또는 164에 대한 하기 아미노산 위치 중 적어도 하나에서 부가적인 치환을 갖도록 종래 기술된 대로 위치지향적 돌연변이유발에 의해 부가적인 C1+A4E 변이체(그룹 A)를 생성하였다. 라이브러리 1의 1차 및 2차 스크리닝에 기초하여, 이들 위치에서의 치환이 하기 중 적어도 하나를 기질로서 사용한 C1+A4E와 비교하여 증가된 총 광 출력을 가지고 있었기 때문에 이들 아미노산 위치를 선택하였다: 신규 코엘렌테라진 PBI-3841, PBI-3896, PBI-3897, PBI-3894, PBI-3925, 또는 PBI-3932, 또는 공지된 코엘렌테라진 2-메틸 코엘렌테라진 또는 PBI-3912. 도 7은 변이체("클론") 및 각 변이체에 함유된 부가적인 아미노산 치환을 열거한다. 변이체 클론을 종래 기술된 2차 수동 스크리닝에 대해 기술된 대로 삼반복으로 분석하였고, C1+A4E에 대해 정규화하였다. 도 8A-B 및 9는 다양한 코엘렌테라진을 기질로서 이용한 도 7에 열거된 변이체의 정규화된 평균 발광을 보여준다. 도 8A-B 및 9는 C1+A4E와 비교하여 상기 열거된 신규 화합물에 대하여 큰 발광 증가 또는 C1+A4E와 비교하여 공지된 코엘렌테라진에 대해 발광의 무변화 또는 감소를 갖는 변이체를 보여준다. 부가적인 아미노산 치환 Q18L, F54I, L92H, 및 Y109F를 갖는 클론 QC27은 C1+A4E와 비교하여 PBI-3896에 대해 561.32배의 발광 증가, PBI-3894에 대하여 392.98배 증가, 및 PBI-3896에 대해 283.85배 증가를 가지고 있었다. 이 데이터는 Q18L, L92H, 및 Y109F가 서로 그리고 부가적인 치환과 조합되어 개선된 상대적 특이성을 갖는 변이체를 야기할 수 있음을 보여준다.
라이브러리 1로부터 확인된 목적하는 다른 치환들을 조합하여 부가적인 변이체(그룹 B)를 생성하였다(도 10). 서열번호: 1: 18, 20, 54, 71, 77, 90, 92, 109, 또는 127에 대해 하기 아미노산 위치 중 적어도 하나에 부가적인 아미노산 치환을 수행하였다. 이들 치환은 기질로서 하기 신규 코엘렌테라진 중 적어도 하나에 대해 개선을 나타내었다: PBI-3841, PBI-3896, PBI-3897, PBI-3894, PBI-3925, 또는 PBI-3932. 원상태 코엘렌테라진, 공지된 코엘렌테라진-hh, 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3939, PBI-3945, PBI-3840, PBI-3932, PBI-3925, PBI-3894, 및 PBI-3896을 이용하여 이들 변이체를 그룹 A 변이체에 대해 전술한 바와 같이 분석하였다. 변이체 클론을 종래 기술된 2차 수동 스크리닝에 대해 기술된 바와 같이 삼반복으로 분석하였고 C1+A4E에 대해 정규화하였다. 도 11은 다양한 코엘렌테라진을 기질로서 이용한 도 10에 열거된 변이체의 정규화된 평균 발광을 보여준다. 도 11은 C1+A4E와 비교하여 상기 열거된 신규 코엘렌테라진에 대하여 큰 발광 증가 또는 C1+A4E와 비교하여 원상태 및 공지된 코엘렌테라진에 대하여 발광의 무변화 또는 감소를 갖는 변이체를 보여준다.
부가적인 아미노산 치환 I90V 및/또는 Y109F(그룹 C)를 갖는 부가적인 변이체를 생성하고, 그룹 A 또는 B로부터 생성된 변이체와 비교하였다(도 12 참고). I90V 치환("I90V"), Y109F 치환("Y109F"), 또는 두 치환("LE2")을 갖는 변이체를 함유하는 클론들을 기질로서 원상태 코엘렌테라진, 공지된 코엘렌테라진-hh, 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3939, PBI-3945, PBI-3889, PBI-3840, PBI-3925, PBI-3932, PBI-3894, PBI-3896, 및 PBI-3897을 이용하여 그룹 A 재조합체에 대해 기술된 분석을 이용하여 클론 QC #27, QC#2 E7, QC#2 F4, 및 QC#1 A11과 비교하였다(도 12). 변이체 클론을 종래 기재된 2차 수동 스크린에 대해 기술된 대로 삼반복하여 분석하고, C1+A4E에 대해 정규화하였다(도 12). 도 12는 C1+A4E과 비교하여 상기 열거된 신규 코엘렌테라진에 대하여 큰 발광 증가 및 C1+A4E와 비교하여 원상태 또는 공지된 코엘렌테라진에 대하여 발광의 무변화 또는 감소 중 어느 하나를 갖는 변이체를 보여준다. 도 12는 I90V가 원상태 코엘렌테라진 및 몇 가지 신규 기질에 대하여 더 큰 광 출력을 제공하였음을 보여준다.
B. QC27 변이체
부가적인 아미노산 치환 Q18L, F54I, L92H, 및 Y109F을 갖는, A로부터의 변이체 QC27(서열번호: 4 및 5)을 종래 기술된 대로 pF4변형된 벡터 내로 클로닝하여 C-말단 HT7(Promega Corp.) 융합 단백질("QC27-HT7")(서열번호: 44 및 45)을 제조하였다. QC27-HT7(라이브러리 2)의 4400개 변이체를 생성하고 종래 기술된 대로 무작위 돌연변이유발에 의해 생성하고, 기질로서 원상태 코엘렌테라진 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3896 및 PBI-3897을 사용하여 종래 기술된 대로 증가된 상대적 특이성 변화에 대해 1차 스크리닝하였다. 변이체 클론을 선택하고, 서열분석하고, 기질로서 원상태 코엘렌테라진, 공지된 코엘렌테라진-hh, 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3897, PBI-3896, 및 PBI-3894을 사용하여 종래 기술된 대로 2차 수동 스크리닝으로 분석하였다.
도 13은 이들 변이체("샘플")에서 확인된 부가적인 아미노산 치환("서열"), 및 상응하는 출발 QC27-HT7에 대해 정규화된 2차 스크리닝에서 기질로서 원상태 코엘렌테라진, 공지된 코엘렌테라진-hh, 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3897, PBI-3896, 및 PBI-3894을 사용한 변이체의 발광을 열거한다. 도 14에서의 변이체들은 하기 부가적인 아미노산 치환 중 적어도 하나를 가지고 있었다: F1I, R11Q, L18I, L18Q, V21L, V21M, L22F, F31I, Q32H, V45E, L46Q, S47P, G48R, E49D, G51E, D55E, G67S, F68Y, F68L, Q69H, L72Q, E74K, E74I, M75K, I76F, I76V, H86R, I90T, H92Q, H92R, T96A, V98F, I99V, I99T, V102M, M106I, F109Y, L142V, V158I, T159S, L168F, 또는 G170R(G170R은 HT7 및 OgLuc 변이체 사이의 링커 영역 안에 위치한다).
변이체 24B12에서의 아미노산 치환 F68Y, 변이체 29C4에서의 L72Q, 및 변이체 3H11에서의 M75K 각각은 원상태 코엘렌테라진 및 몇 가지 신규 기질에 대해 더 높은 광 출력을 제공하였다. 변이체 25A11에서의 아미노산 치환 V21L 및 변이체 1B6에서의 H92R은 개선된 상대적 특이성을 제공하였다. 이들 치환 둘은 발광 신호가 신규 코엘렌테라진을 기질로서 사용하여 하향되었지만 원상태 및 공지된 코엘렌테라진을 기질로서 사용하여 더 하향된 경우였다.
종래 기술된 대로 위치지향적 돌연변이유발을 이용하여 특정 아미노산 치환을 갖는 부가적인 QC27-HT7 변이체를 생성하였다(도 14). 부가적인 치환은 서열번호: 1: 21, 68, 72, 75, 76, 90, 92, 및 158에 대해 하기 아미노산 위치 중 적어도 하나에서 이뤄졌는데, 이들 위치가 도 14에 나타난 바와 같이 상대적 특이성 변화의 개선을 나타내었기 때문이다. 도 15는 상응하는 출발 QC27-HT7에 대해 정규화된 원상태 코엘렌테라진, 공지된 코엘렌테라진-hh, 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3897, PBI-3841, PBI-3896, 및 PBI-3894을 이용한 QC27-HT7 변이체의 발광을 보여준다. 도 15에서 관찰된 바와 같이, 예를 들어 변이체 QC27#1에서와 같이, 3개의 아미노산 치환 F68Y, L72Q, 및 M75K을 V158I와 조합하는 것은 각 시험된 코엘렌테라진에 대해 더 큰 광 출력을 제공하였다.
C. QC27 -9a 변이체
부가적인 아미노산 치환 V21L, H29R, F68Y, L72Q, M75K, 및 V158I을 갖는 QC27-HT7 융합 단백질인, B로부터 얻은 변이체 QC27-9a(서열번호: 6 및 7)를 개시 서열로 사용하여 라이브러리를 생성하였다. QC27-9a(라이브러리 3)의 4400개 변이체를 종래 기술된 대로 무작위 돌연변이유발에 의해 생성하고, 원상태 코엘렌테라진 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3841 및 PBI-3897을 이용하여 증가된 상대적 특이성 변화에 대해 스크리닝하였다. 변이체 클론을 선택하고, 서열분석하고, 기질로서 원상태 코엘렌테라진, 공지된 코엘렌테라진-hh, 공지된 코엘렌테라진-h, 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3841 및 PBI-3897을 사용하여 종래 기술된 대로 2차 수동 스크린으로 분석하였다. 도 16은 상기 변이체("샘플")에서 확인된 부가적인 치환("AA 변화"), 및 상응하는 출발 QC27-9a에 대해 정규화된 2차 스크리닝에서 기질로서 원상태 코엘렌테라진, 공지된 코엘렌테라진-hh, 공지된 코엘렌테라진-h, 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3841 및 PBI-3897을 사용한 변이체의 평균 발광을 열거한다. 상대적 특이성의 증가는, 개시 주형과 비교하여 신규, 원상태, 및 공지된 코엘렌테라진을 이용한 변이체의 경우 발광이 감소하였지만, 원상태 및 공지된 코엘렌테라진을 이용한 발광은 더 감소한 경우를 나타낸다. 예를 들어, 아미노산 치환 L22F를 갖는 변이체 30D12는 신규 코엘렌테라진 PBI-3841 및 PBI-3897에 대해 대략 3배의 활성 손실을 가지고 있었다. 그러나, 원상태 코엘렌테라진, 공지된 코엘렌테라진-h, 및 공지된 코엘렌테라진-hh에 대해, 변이체 30D12의 발광은 10배 이상 감소하였다.
도 17은 원상태 코엘렌테라진, 공지된 코엘렌테라진-hh, 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3841 및 PBI-3897을 기질로서 사용한 인간화 레닐라 루시퍼라아제(본원에서 "hRL"로 지칭됨)(서열번호: 30 및 31)과 비교한, C1+A4E, QC27-HT7 및 QC27-9a의 발광의 비교를 보여준다. PBI-3897과 QC27-9a의 반응이 PBI-3841과 QC27-9a의 반응보다 더 밝았음에도 불구하고(도 17 참고), 상기 진화 추세, 즉, 발광 개선 크기는 PBI-3841의 경우 가장 컸다(표 6). 상기 발광 개선(440배)을 원상태 코엘렌테라진에 대한 발광 감소(800배)와 조합하는 것은 원상태 코엘렌테라진과 비교하여 PBI-3841을 사용한 QC27-9a의 상대적 특이성의 변화(350,000배)를 보여주었다.
표 6: 원상태 코엘렌테라진 및 코엘렌테라진 - hh 와 비교하여 PBI -3897 및 PBI-3841에 대한 OgLuc 변이체의 상대적 특이성의 변화.
Figure pct00071

D. IVY 변이체
부가적인 아미노산 치환 F54I, I90V, 및 F77Y을 갖는 C1+A4E 변이체인 IVY(서열번호: 8 및 9)를 종래 기술된 대로 pF4변형된 벡터 내로 클로닝하여 C-말단 HT7 융합 단백질("IVY-HT7")을 제조하였다. IVY-HT7(라이브러리 4)의 4400개 변이체를 무작위 돌연변이유발에 의해 생성하고, 기질로서 원상태 코엘렌테라진, 공지된 코엘렌테라진-hh, 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3840, PBI-3889, PBI-3925, PBI-3932, 및 PBI-3945를 사용하여 증가된 광 출력(즉, 증가된 밝기) 및 증가된 상대적 특이성에 대해 스크리닝하였다. 변이체 클론을 선택하고, 서열분석하고, 기질로서 원상태 코엘렌테라진, 공지된 코엘렌테라진-hh, 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3889, PBI-3939, PBI-3945, 및 PBI-4002를 사용하여 종래 기술된 대로 2차 스크리닝으로 삼반복으로 분석하였다. 도 18 및 19는 상기 변이체("샘플")에서 확인된 부가적인 치환("AA 변화") 및 2차 스크리닝에서 기질로서 원상태 코엘렌테라진, 공지된 코엘렌테라진-hh, 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3889, PBI-3939, PBI-3945, 및 PBI-4002를 사용한 IVY-HT7에 대해 정규화된 변이체의 평균 발광을 열거한다. 도 18은 PBI-3945를 이용한 성능에 기초하여 선택된 변이체(그룹 A)를 열거하며, 이들은 하기 아미노산 치환 중 적어도 하나를 가지고 있었다: Q18H, D19N, Q20P, Q32P, K33N, V38I, V38F, K43N, I44F, E49G, I60V, Q69H, I76N, Y77N, Y94F, G95S, G95D, F110I, V119M, K124M, L149I, 또는 R152S. 도 19는 PBI-3889를 이용한 성능에 기초하여 선택된 변이체(그룹 B)를 열거하며, 이들은 하기 아미노산 치환 중 적어도 하나를 가지고 있었다: F6Y, Q18L, L27V, S28Y, Q32L, K33N, V36E, P40T, Q42H, N50K, G51R, H86L, N135D, 또는 I155T.
종래 기술된 대로 위치지향적 돌연변이유발을 이용하여 부가적인 특정 아미노산 치환을 갖는 부가적인 IVY-HT7 변이체를 생성하였다. 도 20은 서열번호: 1: 19, 20, 27, 32, 38, 43, 49, 58, 77, 95, 110, 및 149에 대해 하기 부가적인 아미노산 위치 중 적어도 하나를 갖는 변이체를 열거하는데, 이들 치환이 도 18의 변이체에서 PBI-3945 및 PBI-4002에 대한 특이성을 나타낸 것으로 확인되었기 때문이다. 도 21은 원상태 코엘렌테라진, 공지된 코엘렌테라진-h, 공지된 코엘렌테라진-hh, 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3939, PBI-3945, PBI-4002, PBI-3932 및 PBI-3840을 기질로서 사용하여 IVY-HT7에 대해 정규화된 도 20에 열거된 변이체의 발광을 보여준다. 상기 변이체 중 어느 것도 IVY-HT7에 비해 개선을 나타내지 않았지만, 원상태 또는 공지된 코엘렌테라진을 이용한 발광이 약 3-4 로그 감소하였으나, PBI-3945 및 PBI-4002를 이용한 발광이 단지 2배 감소한, 변이체 C5.19(서열번호: 12 및 13)와 같은 경우가 존재하였다. 변이체 C5.19는 부가적인 아미노산 치환 L27V, V38I, 및 L149I를 갖는다.
도 22는 서열번호: 1, 6, 18, 27, 28, 33, 34, 36, 40, 50, 51, 135, 및 155에 대해 하기 부가적인 아미노산 위치 중 적어도 하나를 갖는 변이체를 열거하는데, 이들 치환이 도 19의 변이체에서 PBI-3889 및 PBI-3939에 대해 특이성을 나타내는 것으로 확인되었기 때문이다. 도 23은 IVY-HT7에 대해 정규화된, 원상태 코엘렌테라진, 공지된 코엘렌테라진-h, 공지된 코엘렌테라진-hh, 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3939, PBI-3945, PBI-3889, PBI-4002, PBI-3932, 및 PBI-3840을 기질로서 사용한 도 21에 열거된 변이체의 발광을 보여준다. IVY-HT7와 비교하여 각 변이체의 경우 발광이 감소하였다. 변이체 C1.3(서열번호: 10 및 11)은 원상태 또는 공지된 코엘렌테라진보다 PBI-3939p 대하여 약 2000배 큰 발광을 가지고 있었다. 변이체 C1.3은 부가적인 아미노산 치환 F6Y, K33N, N135D, 및 I155T를 갖는다.
hRL 및 IVY-HT7과 비교하여 상대적 특이성 변화에 대한 최상의 IVY-HT7 변이체는 PBI-3945에 대해 최상의 발광을 갖는 C5.19, 및 PBI-3889에 대해 최상의 발광을 갖는 C1.3였다. 도 24는 원상태 코엘렌테라진, 공지된 코엘렌테라진-h, 공지된 코엘렌테라진-hh, 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3939 및 PBI-3945를 이용한 hRL, IVY-HT7, C5.19(C-말단 HT7 융합), 및 C1.3(C-말단 HT7 융합)의 발광을 보여준다.
E. IV 변이체
부가적인 아미노산 치환 F54I 및 I90V를 갖는 C1+A4E 변이체인 IV(서열번호: 14 및 15)를 종래 기술된 대로 생성하였다. 전사 리포터로서의 사용을 위한 가장 밝은 변이체를 결정하기 위해, 기질로서 원상태 코엘렌테라진, 공지된 코엘렌테라진-hh, 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3939, PBI-3945, PBI-3889, 및 PBI-4002를 사용하여 C1+A4E(서열번호: 2 및 3), IVY(서열번호: 8 및 9), 및 IV(서열번호: 14 및 15)에 대해 종래 기술된 대로 발광을 측정하였다. hRL을 대조군으로 사용하였다. 도 25에서 관찰된 바와 같이, IV는 C1+A4E 및 IVY보다 더 밝았다. IV에서의 아미노산 치환 F54I는 원상태 코엘렌테라진 및 몇 가지 신규 기질에 대해 더 큰 광 출력을 제공하였다. 3개의 모든 변이체들은 시험된 코엘렌테라진에 대해 hRL보다 더 밝았다.
다양한 코엘렌테라진에 대해 증가된 광 출력(즉, 증가된 밝기)을 갖는 부가적인 아미노산 치환을 결정하기 위해, A, B 및 D로부터 얻은 데이터(즉, 개시 서열로서 C1+A4E, IVY, 및 QC27로부터 생성된 라이브러리의 스크리닝)를 검토하였다. 원상태 코엘렌테라진에 대하여 2 내지 10배까지 감소된 특이성을 갖는 부가적인 치환을 갖는 IV 변이체를 종래 기술된 대로 생성하였다. 도 26에 열거된 바와 같이, IV 변이체("클론")는 하기 아미노산 치환 중 적어도 하나의 부가적인 아미노산 치환("서열")을 가지고 있었다: F1I, E4K, Q18L, L27V, K33N, V38I, F68Y, M70V, L72Q, M75K, 또는 V102E.
아미노산 치환의 모든 조합을 위해 16개 플레이트의 변이체 클론을 1차 스크리닝하고, 기질로서 원상태 코엘렌테라진, 공지된 코엘렌테라진-h, 공지된 코엘렌테라진-hh, 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3889 및 PBI-3945를 사용하여 종래 기술된 자동 로봇 방법을 이용하여 분석하였다. 개선된 발광을 갖는 변이체를 선택하고, 서열분석하고, 종래 기술된 대로 수동 스크리닝을 이용하여 삼반복으로 분석하였다. 원상태 코엘렌테라진, 공지된 코엘렌테라진-h, 공지된 코엘렌테라진-hh, 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3889, PBI-3939, PBI-3945, 및 PBI-4002을 기질로서 사용하여 발광을 측정하였다. 상응하는 출발 서열 IV 및 hRL을 대조군으로 사용하였다.
도 26은 변이체, 및 상기 변이체에서 확인된 부가적인 아미노산 치환을 열거한다. 도 27은 IV에 대해 정규화된 2차 스크리닝에서의 변이체의 평균 발광을 보여준다. 부가적인 아미노산 치환 F1I, L27V, 및 V38I을 갖는 변이체 8A3(서열번호: 26 및 27)은 신규 코엘렌테라진에 대해 개선된 상대적 특이성을 가지고 있었지만, IV보다 밝지는 않았다. 부가적인 아미노산 치환 L27V를 갖는 변이체 8F2(서열번호: 46 및 47)는 사용된 4개의 신규 코엘렌테라진 중 3개에 대해 개선된 상대적 특이성 및 밝기를 제공하였다. 부가적인 아미노산 치환 Q18L, F68Y, L72Q, 및 M75K을 갖는 변이체 9B8(서열번호: 18 및 19)은 모든 기질에 대해 더 밝았으며, 또한 원상태 코엘렌테라진에 대해 일부 상대적 특이성 이점을 제공하였다. 부가적인 아미노산 치환 Q18L, L27V, V38I, F68Y, L72Q, 및 M75K를 갖는 변이체 9F6(서열번호: 20 및 21)는 8F2에서 관찰된 것과 같은 유사한 개선을 나타내었다. 부가적인 아미노산 치환 E4K, K33N, F68Y, L72Q, 및 M75K를 갖는 변이체 15C1(서열번호: 16 및 17)은 모든 신규 코엘렌테라진에 대하여 더 밝았으나, 어떠한 개선된 상대적 특이성 이점을 가지고 있지 않았다. 변이체 1D6에서의 아미노산 치환 Q18L은 개선된 상대적 특이성, 즉, IV의 맥락에서 원상태 코엘렌테라진로부터 벗어나고 신규 기질에 가까운, 개선된 상대적 특이성을 제공하였다. 일반적으로, 아미노산 치환 L27V는 IV의 맥락에서 개선된 상대적 특이성을 제공하였다.
도 28은 IV 및 hRL과 비교하여 기질로서 원상태 코엘렌테라진, 공지된 코엘렌테라진-hh, 공지된 코엘렌테라진-h, 및 신규 코엘렌테라진 PBI-3939, PBI-3945, PBI-3889, 및 PBI-4002를 사용한 2차 스크리닝에서 8A3, 9B8, 9F6, 및 15C1 변이체의 발광을 보여준다. 변이체 8A3은 IV와 비교하여 원상태 코엘렌테라진에 대해 2 로그 밝기 감소를 가지고 있었다. 변이체 9F6은 IV와 비교하여 원상태 코엘렌테라진에 대해 1 로그 밝기 감소를 가지고 있었다. PBI-3945에 대한 변이체 15C1이 가장 밝았지만, 신호 반감기는 짧았다(실시예 27 참고).
F. 9B8 변이체
E에서 얻은 9B8 변이체를 더 변이시켜 PBI-3939에 대해 증가된 광 방출 및/또는 개선된 상대적 특이성을 갖는 추가 변이체를 생성하였다. 아미노산 치환 L72Q는 증가된 광 방출(즉, 밝기)을 위한 유익한 아미노산 치환인 것으로 보이는데, 이 치환이 변이체 9B8, 9F6, 및 15C1에서 모두 개선된 광 방출을 나타낸 것으로 확인되었기 때문이다. 위치 72에서의 다른 아미노산 치환이 유사한 밝기 증가를 제공할 것인지를 결정하기 위해, 위치 72를 대안적인 잔기로 포화시킴으로써 종래 기술된 대로 9B8의 부가적인 변이체를 생성하였다. 대장균 용해물의 4개의 복제물(replicate)을 제조하고, 분석 버퍼가 10 mM CDTA, 150 mM KCl, 10 mM DTT, 100 mM HEPES, pH 7.0, 35 mM 티오우레아, 및 0.5% TERGITOL® NP-9(v/v)를 함유하는 것을 제외하고, 기질로서 PBI-3939를 사용하여 종래 기술된 대로 밝기를 분석하였다. 표 7은 9B8에 대해 정규화된 발광("(9B8에 대해 정규화된) RLU")으로 표시된 바와 같이 9B8과 비교하여 유사하거나 개선된 발광, 즉 배수 개선을 갖는 9B8 변이체("변이체")를 열거한다. 위치 72에서의 A, G, N, R, 및 M의 아미노산 치환은 아미노산 Q와 최소 동일한 밝기 이점, 즉, 1배를 제공하였다.
표 7: 변이체 9B8과 비교하여 유사한 발광을 갖는 변이체 .
Figure pct00072

변이체 9B8에서 아미노산 위치 18, 68, 72, 75, 및 90을 포화시킴으로써 신규 PBI-3939에 대해 개선된 상대적 특이성을 갖는 부가적인 변이체를 종래 기술된 대로 생성하였다. 대장균 용해물을 제조하고, 기질로서 원상태 코엘렌테라진 및 신규 PBI-3939을 사용하여 종래 기술된 대로 밝기를 분석하였다. 9B8의 상응하는 발광 비율로 정규화된, 원상태 코엘렌테라진을 이용한 변이체의 발광에 대한 PBI-3939를 이용한 변이체의 발광의 비율로부터 상대적 특이성을 결정하였다. 표 8은 PBI-3939에 대한 상대적 특이성에서 적어도 1.1X 배 증가를 갖는 9B8 변이체("변이체")를 열거한다. 상기 결과는 각각의 부위에서의 적어도 하나의 부가적인 변화가 원상태 코엘렌테라진 대비 PBI-3939에 대하여 개선된 상대적 특이성을 제공하였음을 입증한다. 위치 18에서 아미노산 치환 K, D, F, G, Y, W, 및 H를 갖는 9B8 변이체는 상대적 특이성에서 최고 배수 개선을 가지고 있었다.
표 8: PBI -3939에 대해 개선된 상대적 특이성을 갖는 변이체
Figure pct00073

Figure pct00074

G. 9B8 + K33N 변이체
밝기, 상대적 특이성, 및 열 안정성을 위한 아미노산 치환 K33N의 이점을 조사하기 위해, 부가적인 변이체인 9B8 opt+K33N(서열번호: 42 및 43)을 생성하였다. 9B8 opt+K33N을 조사하고, 다양한 적용에서 9B8 opt(실시예 25A에 기술됨)와 비교하였다.
변이체 9B8 opt 또는 9B8 opt+K33N을 함유하는 대장균 용해물을 제조하고, 분석 버퍼가 0.1% TERGITOL® NP-9(v/v)을 함유하는 것을 제외하고 종래 기술된 대로 분석하였다. 용해물로부터 생성된 발광을 기질로서 신규 PBI-3939 및 원상태 코엘렌테라진을 사용하여 측정하였다. PBI-3939 및 원상태 코엘렌테라진에 대한 변이체의 상대적 특이성을 종래 기술된 대로 계산하였다. 9B8 opt+K33N("K33N")은 9B8 opt와 비교하여 원상태 코엘렌테라진보다 PBI-3939에 대해 더 큰 광 출력(RLU) 및 더 높은 상대적 특이성을 가지고 있었으며(도 29), 이는 K33N 치환이 더 큰 광 출력 및 개선된 상대적 특이성을 제공하였음을 가리킨다.
개시 주형으로서 9B8opt+K33N을 사용하여 새로운 OgLuc 라이브러리를 제조하였다. DIVERSIFY® PCR 랜덤 돌연변이유발 키트(ClonTech; 카탈로그 # 630703)를 사용하여 무작위 라이브러리를 제조하였다. 조건 5(사용자 매뉴얼에 열거된 바와 같음)를 사용하여 부가적인 변이체를 생성하고, 83개의 무작위로 선택된 클론으로부터 서열 데이터를 편집함으로써 평균 돌연변이 비율은 유전자당 2.6개 돌연변이인 것으로 계산되었다. 이 PCR 라이브러리를 종래 기술된 pF4Ag-기반의 비융합 벡터 백그라운드 및 샌드위치 백그라운드, 즉, Id-OgLuc-HT7(실시예 45에 기술됨) 내로 클로닝하였다. pF4Ag-기반 비융합 벡터 백그라운드에서의 변이체를 (NF)로 명명한다. 샌드위치 벡터 백그라운드에서의 변이체를 (F)로 명명한다. PCR 생성물을 두 가지 벡터 내로 클로닝하기 위해, 아미노산, 즉, 글리신을 pF4Ag 내의 변이체 서열에 부가하여, OgLuc 변이체 내에 새로운 위치 170("170G")을 생성하였다. 170G가 샌드위치 구조물 내에 존재하지만, 이 경우 OgLuc 및 HT7 사이에 링커의 일부인 것으로 간주되다. 각각의 라이브러리의 경우, 4,400개의 대장균 클론을 하기 예외를 가지고 종래 기술된 대로 분석하였다. 용해 버퍼는 HEPES 대신에 300 mM MES pH 6.0, 및 0.5% TERGITOL® NP-9(v/v)를 함유하였지만, 티오우레아를 함유하지는 않는다. 분석 버퍼는 HEPES 대신에 100 mM MES pH 6.0, 및 35 mM 티오우레아를 함유하였다. 분석 부피는 다음과 같았다: 10 μL 세포, 40 μL 용해 버퍼, 및 50 μL 분석 버퍼.
pF4Ag-기반의 비융합 백그라운드에서의 PCR 라이브러리를 대상으로 9B8 opt+K33N+170G(서열번호: 68 및 69)와 비교하여 증가된 발광을 갖는 부가적인 변이체를 스크리닝하였다. 이후, 선택된 변이체를 HEK293 및 NIH3T3 세포 내에서 분석하였다. 각 세포 유형의 경우, 15,000개의 세포를 도말하고, 37℃에서 밤새 성장시켰다. 다음날, 형질감염 대조군으로서 10 ng pGL4.13(Promega Corp.) 및 100 ng의 OgLuc 시험 DNA를 이용하여 실시예 25에 기술된 대로 세포를 형질감염시켰다. 배지를 제거하고, 용해 버퍼가 HEPES 대신에 100 mM MES pH 6.0을 함유하는 것을 제외하고, 실시예 25에 기술된 대로 세포를 100 μL의 세포용해 버퍼로 용해시키고, GLOMAX® 발광분석기를 이용하여 발광을 측정하였다. 각 샘플의 경우, 10 μL의 용해물을 20 μM PBI-3939를 함유하는 50 μL의 용해 버퍼를 이용하여 분석하였다. 형질감염 대조군의 경우, 10 μL의 용해물을 50 μL의 Bright-GloTM 분석 시약을 이용하여 분석하였다.
표 9는 대장균, HEK293, 및 NIH3T3 세포에서의 변이체의 발광 배수-증가 및 상기 변이체에서 발견되는 아미노산 치환을 보여준다. 변이체 27A5(NF)(서열번호: 70 및 71), 23D4(NF)(서열번호: 72 및 73) 및 24C2(NF)(서열번호: 74 및 75)는 대장균 및 HEK293 세포에서 적어도 1.3배 증가된 발광을 가지고 있었다.
표 9: 대장균, HEK293 및 NIH3T3 세포에서 9B8 opt + K33N +170G와 비교하여 OgLuc 변이체에 의해 생성된 발광의 증가
Figure pct00075

상기 데이터에 기초하여, 170G 없는 pF4Ag-기반의 비융합 벡터 백그라운드의 맥락에서 추가 조합 변이체를 고안하고 생성하였다(표 10 참고). 상기 변이체를 전술한 바와 같이 대장균, HEK293 및 NIH3T3 세포에서 분석하고, 9B8 opt+K33N과 비교하였다. 또한 변이체를 대상으로 원상태 코엘렌테라진에 대한 발광을 조사하였다. 표 10은 대장균, HEK293, 및 NIH3T3 세포에서 변이체의 발광에서의 배수 증가, 및 상기 변이체("샘플")에서 발견되는 아미노산 치환을 보여준다. 접두어 "9B8 opt+K33N"에 변이체 내의 부가적인 아미노산 치환을 덧붙임으로써 변이체를 명명하였다. 표 11은 대장균, NIH3T3, 및 HEK293 세포에서 PBI-3939와 비교하여 원상태 코엘렌테라진에 대한 상이한 변이체의 상대적 특이성을 보여준다. 표 10에 나타난 바와 같이, 변이체 9B8 opt+K33N+T39T+K43R+Y68D("V2"; 서열번호: 92 및 93)는 대장균에서 개선된 발광 및 NIH3T3 세포에서 약간 개선된 발광을 가지고 있었다. 변이체 9B8 opt+K33N+L27V+K43R+Y68D("L27V, K43R, Y68D")는 발광에서 중립적인 개선(표 10) 및 조사된 3개의 세포 유형에서 9B8 opt+K33N에 비해 5X 배수 증가된 상대적 특이성을 가지고 있었다(표 11).
표 10: 대장균, NIH3T3 및 HEK293 세포에서 9B8 opt + K33N 과 비교하여 OgLuc 조합 변이체에 의해 생성된 발광의 증가
Figure pct00076

표 11: 대장균, NIH3T3 및 HEK293 세포에서 원상태 코엘렌테라진과 비교하여 PBI -3939에 대한 OgLuc 조합 변이체의 상대적 특이성의 변화
Figure pct00077

서열번호: 1에 대해 하기의 부가적인 아미노산 치환 중 적어도 하나를 함유하는 부가적인 OgLuc 변이체를 생성하였다: L27V, T39T, K43R, Y68D, 또는 S66N(변이체에서의 아미노산 치환에 대해 표 12에서의 "샘플" 참고). 접두어 "9B8 opt+K33N" 이후에 변이체에서의 부가적인 아미노산 치환을 덧붙임으로써 변이체를 명명하였다. 전술한 이들 부가적인 변이체 및 변이체 9B8 opt+K33N+L27V+Y68D("L27V, Y68D"), 9B8 opt+K33N+L27V+K43R+Y68D("L27V, K43R, Y68D"), 9B8 opt+K33N+L27V+K43R+S66N("L27V, K43R, S66N"), 및 9B8 opt+K33N+T39T+K43R+Y68D("T39T, K43R, Y68D"; "V2"로도 알려짐)를 대상으로 밝기, 상대적 특이성, 신호 안정성 및 열 안정성을 조사하였다. 상기 변이체를 변이체 9B8 opt("9B8") 및 9B8 opt+K33N("K33N")과 비교하였다.
상기 변이체를 함유하는 대장균 용해물을 제조하고 종래 기술된 대로 분석하였다. 용해물로부터 생성된 발광을 기질로서 신규 PBI-3939 및 원상태 코엘렌테라진을 사용하여 측정하였다. 변이체의 발광을 9B8 opt에 의해 생성된 발광에 대하여 정규화하였다(표 12). 기질로서 PBI-3939를 사용한 변이체의 발광을 기질로서 원상태 코엘렌테라진을 사용한 변이체의 발광으로 나눔으로써, PBI-3939 및 원상태 코엘렌테라진에 대한 변이체의 상대적 특이성을 계산하였다(표 12). 이 데이터는 아미노산 치환 L27V가 원상태 코엘렌테라진에 대한 특이성을 낮춘다는 것을 보여준다.
표 12: 박테리아 용해물에서 9B8와 비교하여 OgLuc 변이체에 의해 생성된 발광의 증가 및 원상태 코엘렌테라진과 비교하여 PBI -3939에 대한 OgLuc 변이체의 특이성의 변화
Figure pct00078

H. V2 변이체
주형으로서 V2(부가적인 아미노산 치환 K33N+T39T+K43R+Y68D을 갖는 9B8opt)을 사용하여 하나의 세트의 부가적인 변이체를 설계하였다. 표 13에 나타난 치환을, 1) 28개의 지방산 결합 단백질(1VYF, 1FDQ, 2A0A, 1O8V, 1BWY, 2ANS, 1VIV, 1PMP, 1FTP, 2HNX, 1JJJ, 1CBR, 2CBS, 1LPJ, 1KQW, 2RCQ, 1EII, 1CRB, 1IFC, 2PYI, 2JU3, 1MVG, 2QO4, 1P6P, 2FT9, 1MDC, 1O1U, 1EIO; 미국 출원공개 제2010/0281552호)의 구조-기반 정렬에 따른 공지된 다양성, 또는 2) 기질 특이성에 중요한 역할을 하는 것으로 종래에 확인된 위치에서의 대안적인 잔기의 탐색(probing)에 기초하여 설계하였다. 표 13에 "공통(consensus)" 하에 열거된 변화는 정렬된 전술한 지방산 결합 단백질 중 적어도 50%에서 확인된 잔기에 관한 것이다. "두드러진 소수(Predominant Minority)" 하에 열거된 변화는 전술한 많은 지방산 결합 단백질에서 확인되었지만, 상기 정렬된 서열 중 50% 미만에서 발견되지 않은 잔기에 관한 것이다. "다른(Other)" 하에 열거된 변화는 상기 정렬된 서열 내에 제시된 위치에 있는 두드러진 소수 잔기보다 덜 빈번하게 확인된 잔기에 관한 것이다. 마지막으로, "특이성(Specificity)" 하에 열거된 변화는 코엘렌테라진 또는 코엘렌테라진 유사체에 대한 변이체의 특이성을 결정하는데 관련된 것으로 의심되는 위치에 관한 것이다. 예를 들어, 위치 27(모 서열, 즉 V2에서의 류신 잔기)에서의 계획된 특이성 변화가 대체가능한 화학을 대표하는 다른 소수성 잔기 또는 아미노산(예를 들어, 고리를 함유하는 다른 소수성 잔기, 변화하지 않은 극성 측쇄를 함유하는 잔기, 또는 전하를 띤 측쇄를 함유하는 잔기)으로 바뀌었으며; 위치 40(모 서열에서의 프롤린)서의 계획된 특이성 변화가 상이한 화학(화학(예를 들어, 고리를 함유하는 다른 소수성 잔기, 변화하지 않은 극성 측쇄를 함유하는 잔기, 또는 전하를 띤 측쇄를 함유하는 잔기); 글리신, 글루타민, 이소류신, 및 류신은 상기 정렬된 지방산 결합 단백질의 이 위치에서 확인됨에 유의한다)의 샘플링이었다.
표 13
Figure pct00079

표준 위치지향적 돌연변이유발 프로토콜(이전 예시 참고)을 이용하여 변이체를 제작하고, 수득한 플라스미드를 분석을 위해 대장균 내로 형질전환시켰다. 배양물을 종래 기술된 대로 최소 배지에서 표준 워크 어웨이 유도에 따라 성장시켰다. 10 μL의 배양된 형질전환된 대장균 세포에, 40 μL의 용해 버퍼(100 mM MES pH 6.0, 0.3X PLB, 0.3 mg/mL 리소자임, 0.003 U/μL RQ1 DNaseI 및 0.25% TERGITOL® NP-9(v/v))를 첨가한 다음, 동량(50 μL)의 분석 시약(1 mM CDTA, 150 mM KCl, 2 mM DTT, 20 μM PBI-3939 또는 원상태 코엘렌테라진, 100 mM MES pH 6.0, 35 mM 티오우레아, 및 0.5% TERGITOL® NP-9(v/v))을 첨가하였다. 발광을 GLOMAX® 96 마이크로플레이트 발광분석기(Promega Corp.) 상에서 측정하였다.
표 14는 상기 분석에서 확인된 상이한 아미노산 치환을 요약한다. 상기 데이터는 두 가지 PBI-3939 및 원상태 코엘렌테라진에 대해 측정된 발광과 관련하여 모 클론(V2)에 대해 정규화된 것으로서 제시되어 있다. 원상태 코엘렌테라진과 관련하여 PBI-3939에 대한 상대적 특이성 변화가 또한 나타나 있다.
표 14
Figure pct00080

I. L27V 변이체
개시 주형, 즉, 출발 서열 또는 모 서열로서 OgLuc 변이체 L27V를 이용하여, 부가적인 변이체들을 제조하였고, 여기에서 L27V 변이체 내의 일부 아미노산(표 15)은 서열번호: 1의 원상태 OgLuc 루시퍼라아제에서 발견되는 아미노산으로 복귀되었다. 상기 변이체들은 종래 기술된 대로 위치지향적 돌연변이유발에 의해 제작하였다. 이후, 변이체를 대상으로 원상태 코엘렌테라진 또는 PBI-3939를 이용한 상대적 활성에 대하여 종래 기술된 대로 스크리닝하였다. 기질/분석 시약(H에 기술된 바와 같음)을 첨가하고 5분 후 TECAN® INFINITE® F500 상에서 발광을 측정하고 L27V 변이체 출발 주형에 대해 정규화하였다. 용해물들의 SDS-PAGE 분석은 대등한 발현 수준을 보여준다(데이터 미제시).
표 15는 원상태 코엘렌테라진 또는 PBI-3939를 이용한 L27V 변이체의 상대적 활성을 보여준다. 1 미만인 상대적 활성은 상기 복귀가 L27V 변이체 내 상기 부위에서의 잔기와 비교하여 해롭다는 것을 가리킨다. 1을 초과하는 상대 활성은 상기 복귀가 L27V 변이체 내 상기 부위에서의 잔기와 비교하여 활성에 유리하다는 것을 가리킨다. 이들 돌연변이체에 대한 일부 추가 데이터는 하기를 보여주었다: 166K, 54F, 54A 및 L27V에 대하여 열 안정성을 시험하였다. 166K, 54F, 및 54A에 대한 T1/2 60℃는 각각 87, 74, 및 33%였고, 이는 이들 치환이 열 안정성 감소를 야기한다는 것을 보여준다. 이들 동일한 4개의 변이체에 대한 Km 값은 하기와 같았다: 원상태 코엘렌테라진에 대해, L27V은 16 μM, 54A는 23 μM, 54F는 40 μM, 및 166K는 21 μM이었고; PBI-3939에 대해, L27V는 18 μM, 54A는 62 μM, 54F는 163 μM, 및 166K는 23 μM이었다. 이는 L27V, 특히 위치 54 치환의 경우 더 높은 기질 친화도를 보여준다.
표 15
Figure pct00081

실시예 23 - 위치 166의 돌연변이 분석
A. 루시퍼라아제 활성에 대한 위치 166에서의 상이한 아미노산의 효과를 평가하기 위해, 위치 166에서의 아르기닌(R) 잔기를 pF4Ag 벡터의 맥락에서(즉, 야생형 OgLuc 서열 서열번호: 1의 맥락에서) 종래 기술된 대로 위치지향적 돌연변이유발을 이용하여 다른 19개의 아미노산 각각으로 치환하였다. 그리고 나서, 이들 위치 166 변이체를 종래 기술된 대로 대장균에서 발현시켰다.
용해물을 제조하기 위해, 50 μL 0.5X FASTBREAKTM 세포 용해물 시약(Promega Corp.)을 950 μl의 유도된 배양물에 첨가하고, 혼합물을 22℃에서 30분 동안 배양하였다. 분석을 위해, 50 μL의 용해물을 100 μM PBI-3939, 30 μM 원상태 코엘렌테라진, 또는 22 μM 코엘렌테라진-h를 갖는 50 μL의 검정 시약(실시예 22H에서 종래 기술된 바와 같음)에서 분석하였다. 종래 기재된 대로 발광을 측정하였다(도 30A-C). 도 30A-C는 N166 돌연변이체의 상대적 활성을 보여준다. 웨스턴 분석은 모든 변이체의 대등한 발현을 확인시켜 주었다(데이터 미제시).
B. 특정 단일 아미노산 치환 L27V, A33N, K43R, M75K, T39T, L72Q 및 F68D를 야생형 OgLuc 또는 N166R 백그라운드에서 평가하였다. 종래 기술된 대로 위치지향적 돌연변이유발을 통해 단일 아미노산 치환을 생성하고, 종래 기술된 대로 대장균에서 발현시키고, 22 μM 원상태 코엘렌테라진을 갖는 분석 시약(실시예 22H에 종래 기술됨)을 이용하여 발광을 측정하였다(도 30D). 웨스턴 분석은 모든 변이체의 대등한 발현을 확인시켜 주었다(데이터 미제시).
실시예 24 - 결실 변이체
L27V 변이체에 대한 결실을 하기와 같이 수행하였다:
표 16
Figure pct00082

OgLuc 변이체 L27V의 N-말단은 메티오닌, 발린 및 페닐알라닌, 즉, MVF이다. 번호 붙이기 목적을 위해, 상기 페닐알라닌을 첫번째 아미노산으로 간주하였다. "Val-1"은 "MVF"에서 발린이 결실되었음을 가리킨다. "MVF" 중 메티오닌을 이들 결실에 포함시켰다. L27 결실 변이체를 pF4Ag 벡터에 클로닝하고 종래 기술된 대로 대장균 KRX 세포에서 발현시켰다. 유도 및 용해물 제조를 전술한 바와 같이 수행하고, 용해물을 분석 시약(이전에 기술됨; 100 μM PBI-3939)을 이용하여 분석하고, 종래 기술된 대로 발광을 측정하였다(도 31). 상기 데이터는 OgLuc 변이체의 더 작은 단편이 또한 발광을 생성할 수 있음을 입증한다.
실시예 25 - OgLuc 변이체의 코돈 최적화
A. IV 및 9B8
IV 및 9B8 OgLuc 변이체를 코돈 최적화를 위한 주형으로 사용하였다. 본 기술분야의 숙련자에 의해 이해되는 바와 같이, 목표는 두 배였다: 1) OgLuc 변이체의 조절 또는 발현을 잠재적으로 방해할 수 있는, 공지된 전사 인자 결합 부위, 또는 다른 조절 서열, 예를 들어, 프로모터 모듈, 스플라이스 공여체/수용체 부위, 스플라이스 침묵자(silencer), 코작(Kozak) 서열, 및 폴리-A 신호를 제거하는 것, 및 2) 대장균, 인간, 다른 포유류, 또는 다른 원핵 생물의 세포에서, 드물게 사용되는 코돈을 제거하고 가장 흔하게 사용되는 코돈을 선호하도록, DNA 서열을 변경시키는 것(단백질 서열을 변화시키지 않는 침묵 돌연변이를 통함)(Wada et al ., Nucleic Acids Res ., 18:2367(1990)).
각각의 변이체를 위해, opt(aka optA) 및 optB로 지칭된 IV 및 9B8에 대한 2개의 상이한 최적화된 서열을 설계하였다. 각 부위에 대한 두 개의 최상, 즉 가장 흔한 인간 코돈을 확인한 다음(표 17 참고), 각 부위에 도입하기 위해 두 개 중 하나를 무작위로 선택함으로써 첫번째 최적화된 서열, 즉, 각 변이체를 위한 opt/optA를 설계하였다. optB 형태의 경우, 이전의, 코돈-사용(codon-usage), 최적화된 형태, 즉, opt/optA를 개시 주형으로 사용하였고, 각 코돈을 이 코돈-최적화 전략에 대해 확인된 두 개의 최상의 인간 코돈 중 하나로 대체하였다. 한 가지 예로서, IV 또는 9B8 서열 내의 위치 3에 있는 류신은 코돈 TTG에 의해 코딩된다. TTG는 인간 세포에서 류신을 위한 두 가지 가장 흔한 코돈 중 하나가 아니며, 따라서 상기 코돈을 류신을 위한 대안적인 보다 흔한 코돈인 CTC(opt/optA) 또는 CTG(optB)로 바꾸었다. 이러한 동일한 과정을 서열 내의 모든 류신에 대해 반복하였고, 상기 접근법의 무작위 특성으로 인해, CTC 코돈은 optB에서 종결될 수 있고 CTG는 optA에서 종결될 수 있다. 최적화에 대한 이 두 가지 코돈-사용 접근법으로 인해, 서열 opt/optA 및 opt B가 최고로 코돈이 뚜렸하였다.
표 17: 코돈 최적화에 사용된 코돈
Figure pct00083

이후, 4개의 서열(IV opt, IV optB; 9B8 opt, 9B8 optB) 각각을 대상으로 전술한 바와 같이 전사 인자 결합 부위 또는 다른 조절 서열의 존재 여부를 분석하고(Genomatrix Software, Germany), 이들 바람직하지 않은 서열을 침묵 뉴클레오타이드 변화를 통해 파괴하였다. 인간 및 대장균 모두에 대해 드물지 않은 다른 코돈들이 존재하는 일부 경우에, 이들이 선택#1 또는 선택#2가 아닐지라도, 이들 코돈 중 하나로 바꿈으로써 전사 인자 결합 부위 또는 다른 조절 요소를 제거하였다(표 18 참고). 전사 인자 결합 부위 또는 다른 조절 요소를 제거하는 것이 드문 코돈을 도입하는 것을 수반할 경우, 통상적으로 상기 전사 결합 부위(또는 다른 조절 요소)를 바꾸지 않았다.
표 18: 전사 인자 결합 부위 및 다른 조절 요소를 제거하기 위해 사용된 부가적인 코돈
Figure pct00084

IV("IV opt"(서열번호: 22) 및 "IV optB"(서열번호: 23)) 및 9B8("9B8 opt"(서열번호: 24) 및 "9B8 optB"(서열번호: 25))의 코돈 최적화된 형태를 생성하고 본 기술분야에 공지된 방법에 의해 pF4Ag 내로 클로닝하였다. HEK293 세포를 96-웰 플레이트에 15,000 세포/웰로 도말하고 37℃에서 밤새 성장시켰다. 다음날, 세포를 pF4Ag 내의 코돈 최적화된 형태를 코딩하는 100 ng의 플라스미드 DNA와 함께 TRANSIT®-LT1 형질감염 시약(Mirus Bio)을 이용하여 6웰 복제물로 일시적으로 형질감염시키고 37℃에서 밤새 성장시켰다. HEK293 세포를 pGL4.13(Luc2/SV40)(Paguio et al ., "pGL4 Vectors: A New Generation of Luciferase Reporter Vectors" Promega Notes , 89:7-10 (2005)) 또는 pGL4.73(hRL/SV40)(Id .)으로 형질감염시켜 형질감염 효율에서의 차이에 대해 정규화하였다. 10 ng/형질감염 또는 10%의 형질감염된 총 DNA를 사용하였다. 배지를 제거하고, 세포를 10 mM CDTA, 150 mM KCl, 10 mM DTT, 100 mM HEPES, pH 7.0, 35 mM 티오우레아, 및 0.5% TERGITOL® NP-9(v/v)를 함유한 100 μL 용해 버퍼로 용해시켜 용해물 샘플을 제조하였다. 용해물 샘플의 발광을 하기와 같이 TECAN® INFINITE® F500 발광분석기 상에서 측정하였다: hRL 및 OgLuc 변이체의 경우, 20 μM의 기질(hRL의 경우 원상태 코엘렌테라진 및 OgLuc 변이체의 경우 PBI-3939)을 함유하는 50 μL의 용해 버퍼를 이용하여 10 μL의 용해물 샘플에 대해 발광을 분석하였다. 개똥벌레 루시퍼라아제인 Luc2(서열번호: 28 및 29)의 경우, 50 μL의 Bright-GloTM루시퍼라아제 분석 시약(Promega Corp.)을 이용하여 10 μL의 용해물 샘플에 대해 발광을 분석하였다.
도 32는 hRL 및 Luc2와 비교하여 OgLuc 변이체의 코돈 최적화된 형태를 함유하는 용해물에 대해 측정된 발광의 비교를 보여준다. hRL 및 OgLuc 변이체를 pGL4.13에 대해 정규화하고 Luc2를 본 기술분야에 공지된 방법을 이용하여 pGL4.73에 대해 정규화하였다. 도 32에 나타난 바와 같이, Luc2는 hRL보다 약 14배 높은 발광을 가지고 있었다. OgLuc 변이체는 Luc2 및 hRL과 비교하여 더 높은 발광을 가지고 있었다. IV이 코돈 최적화된 형태("IV opt" 및 "IV optB") 및 9B8의 코돈 최적화된 형태("9B8 opt")는 비-최적화된 형태와 비교하여 증가된 발광을 나타내었다.
이 최적화의 결과로서, "opt/optA" 형태는 그의 모 서열보다 인간 HEK293 세포에서 더 잘 발현된 반면, "optB" 버전은 모 서열과 비교하여 HEK293 세포에서 발현되지 않았다.
B. L27V
공통된 척추동물 반응 요소(제노매트릭스 데이터베이스 내의 임의의 전사 인자 결합 부위(TFBS))의 출현을 최소화하기 위해 L27V 변이체(서열번호: 88)를 최적화하였다. L27V 변이체의 3개의 상이한 최적화된 형태를 제조하였다:
1. L27V01 - 형태 1(서열번호: 319) - 프로모터 모듈 및 모든 다른 원하지 않는 서열 요소(하기에 부가적인 세부사항)를 개별적인 TFBS를 제외한 뉴클레오타이드 치환에 의해 제거하였다.
2. L27V02 - 형태 2 - L27V01을 개시, 즉, 모 서열로서 사용하였고, 높은 엄격성 일치 기준(더 높은 엄격성은 결합 부위에 대한 더 좋은 일치를 포함하며 따라서 낮은 엄격성보다 더 적은 일치를 찾을 것이다)을 이용하여 가능한 한 많은 TFBS를 제거하였다. L27V02를 위해 제조된, 두 가지 형태 A(서열번호: 322) & B(서열번호: 318)가 존재하였다. 각 형태에 대한 상이한 코돈을 선택하여 원하지 않는 서열 요소를 제거함으로써 이들 두 가지 형태를 제조하였다. 더 낮은 엄격성으로 TFBS를 탐색함으로써 두 가지 형태들을 분석하였다.
3. L27V03 - 형태 3(서열번호: 325) - L27V02B(서열번호: 318)을 개시 서열로 사용하였다. 가능한 경우, 더 낮은 엄격성 TFBS 일치를 제거하였다. L27V02A와 코돈이 구별되도록, L27V03을 제조하였다.
하기 기준을 사용하여 L27V 최적화된 변이체를 제조하였다:
1. 코돈 사용: 바람직하게는, 각 아미노산에 대해 최상의 두 가지 인간 코돈을 사용하였고(IV 변이체에 대해 수행된 바와 같음), 드문 인간 코돈(HS; 아미노산 중 10% 미만을 코딩함)의 사용을 회피하였다(표 19). 필요한 경우, 원하지 않는 서열 요소를 제거하기 위해, 드문 대장균 코돈(EC)의 사용을 사용하였다.
표 19
Figure pct00085

2. 가능한 경우 제거된 원하지 않는 서열 요소
A. 제한 효소(RE) 부위: 클로닝에 유용하고 그렇지 않은 경우 오픈 리딩 프레임(ORF) 내에 존재하지 않을 RE 부위를 제거하였다.
B. 원핵 서열 요소:(+) mRNA 가닥 내의 스플라이스 공여체 및 수용체 부위, 스플라이스 침묵자, 코작 서열 및 폴리A 서열을 제거하였다.
C. 척추동물 프로모터 모듈(PM)(제노매트릭스 카테고리 내: 척추동물)을 제거하였다.
D. 가능한 경우 척추동물 TFBS(제노매트릭스 카테고리 내: 척추동물, 일반적인 코어 프로모터 요소, 및 기타 다른 서열)를 제거하였다. 이는 단지 L27V 최적화된 형태 2 및 3에만 적용되었고, 형태 1에는 적용되지 않았다.
E. 대장균 서열 요소: 대장균 프로모터를 제거하였다.
F. mRNA 2차 구조: 5' 말단 근처의 강한 2차 구조(높은 mRNA 폴딩 에너지)(Zuker, Nucleic Acids Res . 31(13): 3406-3415(2003)) 및 다른 강한 헤어핀 구조를 제거하였다.
서열 비교, 퍼센트 쌍 서열 동일성이 표 20에 제공된다("()"는 뉴클레오타이드 차이의 수를 표시한다).
표 20
Figure pct00086

실시예 26 - OgLuc 변이체의 신호 안정성
A. 15 C1 , 9B 및 IV
PBI-3945에 대한 15C1 및 PBI-3889에 대한 9B8의 신호 안정성을 측정하고 IV와 비교하였다. 15C1, 9B8, 또는 IV를 코딩하는 플라스미드 DNA를 함유하는 대장균을 성장시키고 종래 기술된 대로 8-웰 복제물 내에서 유도하였다. 세포를 300 mM HEPES pH 8.0, 0.3X 패시브 세포용해 버퍼("PLB"; Promega Corp. Cat. 번호 E194A), 0.3 mg/mL 리소자임, 및 0.003 U/μL RQ1 DNase를 함유하는 용해 버퍼를 이용하여 용해시켰다. 용해물을 용해 버퍼에서 1:1000으로 희석하고 TECAN® INFINITE® F500 발광분석기를 이용하여 발광을 측정하였다. 150 mM KCl, 1 mM CDTA, 10 mM DTT, 100 mM 티오우레아, 0.5% TERGITOL® NP-9(v/v), 및 20 μM의 신규 코엘렌테라진 PBI-3945 또는 PBI 3889를 함유한, 50 μL의 "Glo" 0.5% TERGITOL 분석 버퍼("0.5% TERGITOL")를 10 μL의 희석된 용해물 샘플에 첨가한 후 즉시 측정하였다.
샘플에 분석 버퍼를 첨가한 후 30초마다 일정 기간 동안 플레이트를 재판독하여 변이체의 신호 안정성을 결정하였다. 본 기술분야에 공지된 방법을 이용하여 이들 측정값으로부터 신호 반감기를 결정하였다. 변이체와 IV 사이에서 평균 신호 반감기를 비교하였다. 15C1 및 9B8 모두 최소 30분의 신호 반감기를 가지고 있었다(도 33). PBI-3945를 이용하여 분석된 15C1이 t=0에서 더 높은 발광을 가지고 있었음에도 불구하고, PBI-3889로 분석된 변이체 9B8보다 신호가 더 빠르게 쇠퇴하였다. t=10 분에, PBI-3945를 이용한 15C1 및 9B8에 대한 발광은 동등하였다.
B. 9B8 opt + K33N
9B8 opt + K33N 변이체의 신호 안정성을 조사하였다. 변이체를 함유하는 대장균 용해물을 제조하고, 분석 버퍼가 0.25% TERGITOL® NP-9(v/v), 100 mM MES pH 6.0, 1 mM CDTA, 150 mM KCl, 35 mM 티오우레아, 2 mM DTT, 및 20 μM PBI-3939를 함유하는 것을 제외하고 종래 기술된 대로 분석하였다. 표 22는 변이체의 신호 반감기(분)을 보여주며, 아미노산 치환 L27V가 신호 안정성을 개선한다는 것을 보여준다. .
표 22: 박테리아 용해물에서의 OgLuc 변이체의 신호 안정성
Figure pct00087

L27V 변이체(9B8+K33N+L27V+T39T+K43R+Y68D; 서열번호: 88 및 89)의 신호 활성 및 안정성을 측정하고, 개똥벌레 루시퍼라아제(Luc2) 및 레닐라 루시퍼라아제와 비교하였다. L27V 변이체, Luc2 및 레닐라 루시퍼라아제를 HALOTAG®에 융합시키고 대장균에서 발현시켰다. 제조사의 프로토콜(pFN18A; HALOTAG® 단백질 정제 시스템)에 따라 정제 태그로서 HALOTAG®를 사용하여 루시퍼라아제를 정제하였다. 그리고 나서, 10 pM의 각 정제된 루시퍼라아제(0.01% PRIONEX®를 함유하는 페놀 레드가 없는 DMEM으로 희석함)를 동량의 분석 시약(L27V 변이체의 경우, 100 mM MES pH 6, 35 mM 티오우레아, 0.5% TERGITOL® NP-9(v/v), 1 mM CDTA, 2 mM DTT, 150 mM KCl, 및 100 μM PBI-3939; 개똥벌레 루시퍼라아제의 경우 ONE-GLOTM 루시퍼라아제 분석 시스템(Promega Corp.); 및 레닐라 루시퍼라아제의 경우 레닐라-GLOTM 루시퍼라아제 분석 시스템(Promega Corp.))과 혼합하고, 시간(3, 10, 20, 30, 45 및 60분)에 따른 발광을 관찰하였다. 도 34A-B는 개똥벌레 및 레닐라 루시퍼라아제와 비교하여 L27V 변이체의 높은 비활성(도 34A) 및 신호 안정성(도 34B)을 입증한다.
실시예 27 - OgLuc 변이체의 효소 동력학
A. IV , 15 C1 , 9B8, 9F6 및 9A3
본 기술분야에 공지된 방법을 이용하여, IV 및 IV 변이체 15C1, 9B8, 9F6, 및 9A3을 함유하는 대장균 용해물에 대해, 발광을 측정하는 효소 동력학 분석을 수행하였다. 용해 버퍼가 pH 7.5를 갖는 것을 제외하고, 실시예 26에 기술된 대로 세포를 유도하고, 용해시키고, 희석하였다. 실시예 26에서 전술된 분석 버퍼에서의 PBI-3939의 2배 연속 희석물에 대하여 희석된 용해물을 이용하여 분석하였다. 도 35는 IV 및 변이체 15C1, 9B8, 9F6, 및 9A3에 대한 쌍곡선 피트(hyperbolic fit)를 이용하여 계산된 Km 및 Vmax 값을 보여준다. 변이체 9B8 및 9F6은 IV와 비교하여 더 높은 Km 값을 가진 반면, 다른 변이체에 대한 Km 값은 변하지 않았다. 변이체 15C1, 9B8, 및 9F6 모두 더 높은 Vmax 값을 가진 반면, 8A3은 IV와 비교하여 더 낮은 Vmax 값을 가지고 있었다.
PBI-3945에 대해 가장 높은 발광을 가지고 있었던 15C1은 아미노산 치환 K33N을 함유하였으며, 이는 K33N이 증가된 발광을 제공하였음을 보여준다. 이 변이체에 대해 발광 개선을 제공하기 위해 이 부가적인 치환을 갖는 9B8 변이체를 생성하였다. 아미노산 치환 K33N 또는 V38I 중 적어도 하나를 갖는 9B8 및 9F6의 부가적인 변이체("9B8+K33N+V38I" 및 "9F6+K33N")를 생성하였다. 광 출력 및 안정성을 증가시키기 위한 위치 68, 72, 및 75에서의 아미노산 치환의 중요성을 강조하기 위해, 변이체 1D6을 사용하였다. 도 36은 IV 및 변이체 9B8, 9B8+K33N+V38I, 9F6, 9F6+K33N, 및 1D6에 대한 쌍곡선 피트를 이용하여 계산된 Km 및 Vmax 값을 보여준다. 9B8 및 9F6에 대하여 도 35 및 36 사이의 실제 Km 값이 상이하였지만, 상기 변이체 간의 일반적인 추세는 일치하였다.
효소 동력학, 즉, Vmax 및 Km 값을 결정하고, 대장균 용해물을 1 mM CTDA, 150 mM KCl, 2 mM DTT, 100 mM MES pH 6.0, 35 mM 티오우레아, 0.25% TERGITOL® NP-9(v/v), 10 mg/mL 2-하이드록시프로필-β-사이클로덱스트린, 및 20 μM PBI-3939를 함유하는 버퍼로 분석하는 것을 제외하고, 전술한 바와 같이 변이체 9B8 opt 및 9B8 opt+K33N과 비교하였다. TECAN® INFINITE® F500 발광분석기 상에서 발광을 측정하였다. 도 37에 나타난 바와 같이, 9B8 opt+K33N에 대한 Vmax 및 Km 값은 9B8 opt보다 더 높았으며, 이는 이 클론이 더 밝으며 기질에 대해 더 낮은 친화도를 가짐을 보여준다..
B. 9B8 opt + K33N 변이체
발광을 GLOMAX® 발광분석기를 이용하여 측정하는 것을 제외하고, 종래 기술된 대로 OgLuc 변이체에 대한 효소 동력학 값을 결정하였다. 각 변이체에 대하여 3개의 복제물을 사용하였다. 표 23은 HYPER.EXE, 버전 1.0을 이용하여 계산된 표준 편차를 갖는 평균 Km 및 Vmax 값(각각 "Km(+/-)" 및 "Vmax(+/-)")을 보여준다.
표 23: OgLuc 변이체에 대한 Vmax ( RLU /0.5초) 및 Km (μM) 값
Figure pct00088

실시예 28 - OgLuc 변이체의 단백질 안정성
루시퍼라아제 단백질의 안정성은 발광에 영향을 미치는 또 다른 인자이므로, 변이체의 단백질 안정성, 즉, 열 안정성을 결정하였다.
A. 15 C1 , 9B8, 9F6, 8A3 및 IV
15C1, 9B8, 9F6, 8A3 또는 IV를 함유하는 대장균 및 hRL(서열번호: 30 및 31)을 발현하는 대장균의 용해물을 종래 기술된 대로 유도된 배양물로부터 제조하였다. 용해물 샘플을 0.1% 젤라틴을 갖는 10 mM HEPES pH 7.5를 함유하는 버퍼로 1:1000으로 희석하였다. 2개의 96-웰 플레이트 내의 희석된 용해물(100 μL) 샘플을 50℃에서 배양하였다. 상이한 시점에, 플레이트를 -70℃에 두었다. 종래 기술된 대로 발광을 측정하기에 앞서, 각각의 플레이트를 실온, 즉, 22℃에서 10분 동안 해동시켰다. 샘플(10 μL의 각각 해동된 샘플)을 원상태 코엘렌테라진을 기질로서 사용하여 분석하였다. 각 시점의 플레이트에 대해 분석 버퍼를 첨가한 후 즉시 발광을 측정하였다. 단백질 안정성을 나타내는 단백질의 반감기를 본 기술분야에 공지된 방법을 이용하여 각 시점에 대한 발광 데이터로부터 계산하였다. .
표 24는 각각 630.1(10.5), 346.6(5.8), 770.2(12.8) 및 65.4(1.1)의 반감기(분)를 갖는 변이체 15C1, 9B8, 9F6, 및 8A3의 단백질 안정성을 보여준다. 비교해보면, hRL은 9.6분의 반감기를 가진데 반해, IV는 27.2. 분의 반감기를 가지고 있었다. 표 24는 또한 4시간에 15C1, 9B8, 및 9F6의 79%, 61%, 및 80%가 각각 활성을 유지하였음을 보여준다.
표 24: 50℃에서의 OgLuc 변이체의 단백질 안정성
Figure pct00089

B. 1 D6 , 9B8, 9B8+ K33N + V38I , 9F6, 9F6+ K33N , 및 IV
1D6, 9B8, 9B8+K33N+V38I, 9F6, 9F6+K33N, 또는 IV를 함유하는 대장균의 용해물을 유도된 배양물로부터 제조하고, 종래 기술된 대로 발광을 분석하였다. 상기 용해물의 단백질 안정성, 즉, 열 안정성을 본 실시예에서 전술한 바와 같이 분석하였다. 도 38은 50℃에서의 변이체의 반감기(분), 및 원상태 코엘렌테라진을 기질로서 사용하여, 배양 기간의 시작점, 즉 t=0에 측정된 샘플의 발광을 보여준다. 변이체 9B8+33+38 및 9F6 간의 차이는 하나의 아미노산 치환 L27V였으며, 이는 이 아미노산 치환이 안정성을 증가시켰음을 보여준다. 위치 68, 72, 및 75에서의 "활성/발현" 치환의 부가는 안정성을 증가시켰다. 도 38은 K33N이 변이체 9F6에 대해 더 높은 열 안정성을 제공하였다는 것과 변이체 9B8이 변이체 1D6보다 더 큰 광 출력 및 안정성을 가지고 있었음을 보여준다. 이들 두 가지 변이체 간의 차이, 즉, 9B8이 부가적인 아미노산 치환 F68Y, L72Q, 및 M75K를 함유한다는 점은 이들 3가지 치환의 중요성을 보여주었다.
열 안정성 외에도, 발현, 안정성, 및 용해도에 의해 결정된 구조 온전성이 또한 발광에 영향을 미칠 수 있다. 개선된 변이체의 구조 온전성을 추가로 실험하기 위한 방안으로서, pF4Ag-기반의(즉, HT7 없음) OgLuc 변이체 N166R(미국 출원 제12/773,002호(미국 공개 제2010/0281552호)에 기술됨), C1+A4E, IV, 9B8, 및 9F6를 함유하는 KRX 대장균을 루리아 액체배지(LB)에서 37℃에서 OD600=0.6까지 성장시킨 다음, 람노스(0.2% 최종 농도)를 첨가하여 과발현을 유도하였다. 그리고 나서, 상기 유도된 배양물 2개를 25 또는 37℃에서 17시간 동안에서 성장시키고, 그 시간에 총(T) 및 가용성(S) 분획을 준비하고 겔을 염색하는 SIMPLYBLUETM SafeStain(Invitrogen)을 이용gkdu SDS-PAGE에 의해 분석하였다(도 39A-B). hRL 및 Luc2를 대조군으로 사용하였다.
OgLuc 변이체, hRL 및 Luc2는 25℃에서 유도가 일어난 경우 잘 발현되었고 가용성이었다(도 39A; N166R 변이체를 제외한, OgLuc 변이체에 대한 "가용성" 분획 내의 약 19 kDa 어두운 밴드, 및 hRL 및 Luc2 각각에 대해 "가용성" 분획 내의 약 36 및 64 kDa 밴드에 유의). 대조적으로, C1+A4E, IV, 9B8, 및 9F6가 37℃에서 잘 발현되었음에도 불구하고("총" 분획에서 나타난 바와 같이, hRL 또는 Luc2보다 유의하게 더 좋음), 상승된 유도 온도가 사용된 경우 9B8 및 9F6 변이체 만이 가용성이었다(도 39B 참고; 9B8 및 9F6에 대한 "가용성" 분획 내의 약 19 kDa 어두운 밴드에 유의). 이들 results tracked with the 열 안정성 데이터 shown in 표 24 및 도 38.
C. 9B8 opt 및 9B8 opt + K33N
변이체 9B8 opt 및 9B8 opt+K33N의 열 안정성을 비교하였다. 변이체 9B8 opt 또는 9B8 opt+K33N을 함유하는 대장균 용해물을 제조하고, 하기 예외를 가지고 종래 기술된 대로 분석하였다: 용해물을 종래 기술된 용해 버퍼에서 1:100으로 희석하고 2개의 희석된 용해물을 써모사이클러 내에서 60℃에서 배양하였다. 상이한 시점에 분취량을 제거하고 드라이아이스 상에 두어 샘플을 냉동시켰다. 냉동된 용해물을 22℃에서 해동시키고 20 mM CDTA, 150 mM KCl, 10 mM DTT, 20 μM PBI-3939, 100 mM HEPES pH 7.0, 35 mM 티오우레아, 및 0.1% TERGITOL® NP-9(v/v)을 함유하는 버퍼로 분석하였다. GLOMAX® 발광분석기(Promega Corp.) 상에서 발광을 측정하였다. 도 40A는 시간(분)에 따른 RLU로 측정된 발광의 자연 로그(ln) 값의 광 출력 시간 경과를 보여준다. 도 40B에 나타난 바와 같이, 9B8 opt+K33N은 60℃에서 6.8시간의 반감기를 가지고 있었으며, 이는 9B8 opt의 5.7시간 반감기보다 더 길었다.
표 25는 9B8 opt 및 9B8 opt+K33N의 60℃에서의 열 안정성("T1 /2(60℃)"), 및 배양 시간의 초기(즉, t=0)에의 발광("RLU") 데이터를 보여준다. 9B8 opt+K33N은 9B8 opt보다 더 안정하였고 대략 1.8배 더 밝았으며, 이는 아미노산 치환 K33N이 더 큰 광 출력 및 더 높은 열 안정성울 제공하였음을 보여준다.
표 25: 9B8 opt 및 9B8 opt + K33N 에 대한 열 안정성 및 발광 데이터
Figure pct00090

D. 9B8 + K33N 변이체
분석 버퍼가 HEPES 대신에 100 mM MES pH 6.0을 함유한 것을 제외하고 전술한 바와 같이 60℃에서의 변이체의 열 안정성을 조사하였다. 표 26 및 도 41은 60℃에서에서의 변이체의 반감기(hr)를 보여준다. 상기 데이터는 아미노산 치환 L27V가 열 안정성을 개선한다는 것을 보여준다.
표 26: 60℃에서의 OgLuc 변이체의 열 안정성
Figure pct00091

변이체 9B8 및 V2(9B8+K33N+T39T+K43R+Y68D)을 또한 HEK293 세포에서 스크리닝하여 그의 안정성을 결정하였다. 변이체를 pF4Ag 내로 클로닝하고 종래 기술된 대로 HEK293 세포(15,000 세포/웰) 내로 형질감염시켰다. 형질감염 후, 세포를 분석 시약(종래 기재된 바와 같음; PBI-3939 없음)에 용해시키고, 20 μM PBI-3939를 갖는 분석 시약을 이용하여 발광을 측정하였다. 9B8은 5.2시간의 반감기를 가진 반면, V2는 16.8시간의 반감기를 가지고 있었다. 이는 대장균에서의 이들 변이체에 대해 관찰된 반감기와 일치하였다(표 26).
E. L27V 변이체
다양한 pH 및 상이한 염 조건에서 L27V 변이체(9B8+K33N+L27V+T39T+K43R+Y68D)의 활성을 평가하였다. 9B8 및 9B8+K33N은 pH 6 및 pH 7에서 유사한 안정성을 갖는 것으로 종래 나타났다(데이터 미제시). 다양한 염 조건에서 활성을 평가하기 위해, 20 μM PBI-3939를 갖는 50 μL의 분석 버퍼 및 다양한 양의 KCl 또는 NaCl을 L27V(pF4Ag)로 일시적으로 형질감염된 50 μL의 HEK293 세포와 혼합하였다. 발광을 측정하고, 퍼센트 활성(무염(no salt)에 대한 발광의 비율)을 결정하였다(도 42B). 다양한 pH에서의 활성을 평가하기 위해, 다양한 pH 값으로 적정화된, 100 mM 시트레이트, 100 mM MES, 100 mM 파이프, 100 mM HEPES, 100 mM TAPS, 0.5% TERGITOL® NP-9(v/v), 0.05 % MAZU® DF 204, 1 mM CDTA, 및 1 mM DTT를 함유하는 시약을 제조하였다. 분석 시약 내의 362 pM L27V 를 기질 100 μM PBI-3939와 혼합하고 발광을 측정하였다(도 42A).
실시예 29 - OgLuc 변이체의 겔 여과 크로마토그래피 분석
A. C1+A4E 및 9B8
겔 여과 분석은 이론값에 기초하여 정제된 OgLuc 단백질의 예측 분자량을 확인하고, 결과적으로 그의 올리고머 상태를 결정하는데 사용했다. OgLuc 변이체 C1+A4E 및 9B8의 상대 유체역학적 용적 사이의 비교는 겔 여과 크로마토그래피에 의해 이루어졌다. 이러한 분석을 위해, OgLuc 변이체 C1+A4E 및 9B8의 뉴클레오타이드 서열을 HQ-태그된 FLEXI® 벡터 (Promega Corp.) 내에서 클로닝하여 이. 콜리 KRX 세포에서 과발현되는 HQHQHQ N-말단 태그된 단백질을 생성했다. 과발현된 단백질을 제조자의 설명서에 따라 HISLINK™ 단백질 정제 시스템 (Promega Corp.)을 사용하여 정제했다. 각각의 개별적인 표준 및 샘플 단백질의 샘플들을 겔 여과 크로마토그래피로 분석하였으며, 이것은 0.25 mL/min의 유속으로 Superdex 200 5/150 GL 칼럼 (GE Healthcare)을 사용하여 Agilent 1200 HPLC 상에서 24 ℃에서 수행했다(도 43A-B). 이동상(즉, 러닝 버퍼 (running buffer))은 50 mM Tris 및 150 mM NaCl, pH 7.5로 이루어졌다. 단백질 용출을 214 및 280 nm에서 모니터링했다. 표준 교정 곡선을 1) 난백알부민, 43 kDa (GE Healthcare), 2) 탄산탈수소효소, 29 kDa (Sigma) 및 3) 미오글로빈, 17 kDa (말 심장, Sigma)을 사용하여 생성했다. 정제된 단백질의 분자량을 상기 교정 곡선으로부터 직접적으로 계산했다.
이 칼럼에서 관측된 단백질의 상대 용출은 7.98 분에서 난백알부민, 8.65 분에서 탄산탈수소효소, 8.97 분에서 9B8, 및 9.06 분에서 미오글로빈이었다(도 43A-B). 도 43B에서 보여주는 바와 같이, 9B8는 9B8 변이체가 모노머로서 존재함을 지시하는 21 kDa 단백질(예측 MW는 대략 19 kDa이다)로서 용출된 반면, C1+A4E는 C1+A4E가 멀티머, 예를 들면, 가능하게는 사량체 복합체 또는 이보다 더 큰 멀티머로서 발현되고 존재함을 지시하는, 대략 4.3 분에서 용출됐다 (도 43A).
B. L27V 변이체
OgLuc 변이체 L27V가 모노머 상태로 존재함을 입증하기 위해, 겔 여과 분석이 이론값에 기초하여 정제된 L27V 단백질의 예측 분자량을 확인하고, 결과적으로 그의 올리고머 상태를 결정하는데 사용했다. L27V 변이체의 상대 유체역학적 용적은 겔 여과 크로마토그래피에 의해 이루어졌다. 이러한 분석을 위해, L27V 변이체의 뉴클레오타이드 서열을 HALOTAG® 벡터 pFN18A (Promega Corp.) 내에서 클로닝하여 이. 콜리 KRX 세포 (Promega Corp.)에서 과발현되는 HALOTAG®-말단 태그된 단백질을 생성했다. 과발현된 단백질을 제조자의 설명서에 따라 HALOTAG® 단백질 정제 시스템 (Promega Corp.)을 사용하여 정제했다. 각각의 개별적인 표준 및 샘플 단백질의 샘플들을 0.25 mL/min의 유속으로 Superdex 200 5/150 GL 칼럼 (GE Healthcare)을 사용하여 Agilent 1200 HPLC 상에서 24 ℃에서 수행된 겔 여과 크로마토그래피로 분석했다 (도 56). 이동상 (즉, 러닝 버퍼)은 50 mM Tris 및 150 mM NaCl, pH 7.5로 이루어졌다. 단백질 용출을 214 및 280 nm에서 모니터링했다. 표준 교정 곡선을 1) 난백알부민, 43 kDa (GE Healthcare), 2) 미오글로빈, 17 kDa (말 심장, Sigma), 및 3) 리보뉴클레아제, 14 kDa (소 췌장, GE Healthcare)을 사용하여 생성했다. 도 44에서 보여주는 바와 같이, L27V 변이체는 이것이 모노머로서 존재함을 지시하는 24 kDa 단백질(예측 MW는 대략 19 kDa이다)로서 용출됐다.
실시예 30 - OgLuc 변이체의 단백질 발현 수준
A. IV , 8A3, 8F2, 9B8, 9F6 및 15 C1
단백질 발현의 규격화는 비활성에 있어서의 잠재적 차이에 대한 정보를 제공한다. 단백질 발현을 정량화하기 위한 수단을 제공하기 위해, OgLuc 변이체를 C-말단 HT7을 함유하는 pF4Ag 벡터 내에서 클로닝하여 이전에 기술된 바와 같은 OgLuc 변이체-HT7 융합 단백질을 생성했다. 하기 융합 단백질을 생성했다: IV-HT7 (서열번호: 48 및 49), 8A3-HT7 (서열번호: 34 및 35), 8F2-HT7 (서열번호: 50 및 51), 9B8-HT7 (서열번호: 36 및 37), 9F6-HT7 (서열번호: 38 및 39), 및 15C1-HT7 (서열번호: 52 및 53). OgLuc 변이체-HT7 융합체를 함유하는 이. 콜리를 성장시키고 이전에 기술된 바와 같이 유도했다. 900 μL의 세포 배양물을 100 μL의 10X FASTBREAK™ 세포 용해물 시약 (Promega Corp.)으로 용해시켰다. HALOTAG® TMR-리간드 (Promega Corp.)를 각각의 박테리아 용해물 샘플에 첨가하여 0.5 μM의 최종 농도를 수득했다. 박테리아 용해물을 제조 설명서에 따라 실온에서 30 분 동안 HALOTAG® TMR-리간드와 인큐베이션했다. 10 μL의 각각의 샘플을 1X FASTBREAK™과 1:1로, 즉, 10 μL 샘플 대 10 μL 1XFASTBREAK™으로 희석했다. 15 μL의 용해물 및 15 μL의 각각의 샘플에 대한 1:1 희석물을 SDS PAGE로 분석했다. 표지된 융합 단백질을 SDS-PAGE에 의해 분리하고, SIMPLYBLUE™ SafeStain (도 45A)으로 염색하고 플루오르이미지화했다(fluorimaged) (GE Healthcare Typhoon). 밴드들을 Imagequant 소프트웨어 (GE Healthcare)를 사용하여 정량화했다. 도 45B는 IV-HT7로 규격화된, IV-HT7 ("IV"), 15C1-HT7 ("15C1"), 9B8-HT7 ("9B8"), 9F6-HT7 ("9F6"), 및 8F2-HT7 ("8F2")에 대해 도 45A로부터 측정된 밴드 용적을 보여준다. 당해 데이타는 IV 변이체가 IV와 비교하여 더 잘 발현되었음을 보여준다.
B. 9B8 opt , V2 및 L27V
9B8 opt, V2 및 L27V의 발현 수준 및 용해도를 비교했다. pF4Ag 배경의 맥락에서 이들 3개의 변이체는 이. 콜리 KRX 세포를 형질전환하는데 사용했다. 수득한 클론을 발현 실험에 사용했으며, 상기 발현 실험에서는 단일 콜로니를 30 ℃에서 밤새 성장시키고, LB에 1:100으로 희석시키고, 대략 0.5의 OD600으로 성장시키고, 그 다음 25 ℃에서 18시간 동안 0.2% 람노스로 유도했다. 그 다음, 세포를 0.5X FASTBREAK™ 용해물 시약 (Promega Corp.)의 존재하에 실온에서 30 분 동안 인큐베이션하고, 수득한 용해물을 -20 ℃에서 저장했다. 얼음에서 저해동 후, 가용성 분획물을 4 ℃에서 10 분 동안 고속 원심분리에 의해 제조했다. 그 다음, 조악한 총 (T) 및 가용성 (S) 분획물은 SDS-PAGE + 심플리 블루 염색 (도 46A)을 사용하고 발광을 측정함 (도 46B)으로써 발현 수준을 분석했다. 발광을 측정하기 위해, 96-웰 미세적정 플레이트 중의 50 μL의 가용성 용해물을 50 μL 검정 시약 (이전에 기재됨; 40 μM PBI-3939)과 혼합하고, TECAN® INFINITE® F500 다중-검출 플레이트 판독기를 사용하여 발광을 측정했다. 이들 결과는, 이들 3개의 변이체에 대한 등급이 이들의 발현 수준 및 용해도의 측면에서 L27V > V2 > 9B8opt임을 지시한다.
실시예 31 - 포유류 세포에서 발현된 OgLuc 변이체의 휘도
A. IV 및 9B8
pF4Ag 벡터 (즉, HT7 없음) 중의 IV 및 9B8 변이체는 HEK293 세포에서 휘도를 측정했다. hRL을 대조군으로서 사용했다. 간단히 말해서, 96-웰 플레이트 중에서 15,000 세포/웰로 플레이팅된 HEK293 세포는 다양한 변이체 및/또는 대조군 서열을 암호화하는 플라스미드 DNA와 함께 TRANSIT®-LT1을 사용하여 일시적으로 전달감염됐다. 세포를 실시예 25에서 기술된 바와 같이 성장시키고 용해시키고 처리했다. 세포를 전달감염 대조군으로서 pGL4.13 (Promega Corp.)과 공-전달감염시켰다 (10 ng/전달감염 또는 총 전달감염된 DNA 10%가 사용됐다). hRL에 대한 기질로서 원상태 코엘렌테라진을 사용하거나 OgLuc 변이체에 대한 기질로서 PBI-3939를 사용하여 이전에 기재된 바와 같이 측정했다. OgLuc 변이체 데이타를 Luc2 발광을 사용하여 전달감염 효율에 대해 수집했다 (즉, 루시페린 기질의 부가 후 발광을 측정함). OgLuc 변이체 IV 및 9B8은 hRL ("레닐라")과 비교하여 더 큰 발광을 가졌다 (도 47).
포유류 세포에서 몰당 기준으로 휘도를 비교하기 위해, 실시예 30에 기재된 변이체 9B8의 C-말단 HT7 융합 단백질 ("pF4Ag-OgLuc-9B8-HT7")을 분석하고 C-말단 HT7-hRL 융합 단백질 ("pF4Ag-레닐라-HT7") 및 C-말단 HT7-Luc2 융합 단백질 ("pF4Ag-Luc2-HT7")과 비교했다. HEK293 세포 (15,000)를 플레이팅하고 37 ℃에서 밤새 성장시켰다. 이들 세포를 pF4Ag-레닐라-HT7, pF4Ag-Luc2-HT7, 또는 pF4Ag-OgLuc-9B8-HT7로부터의 DNA 100 ng으로 전달감염시키고 37 ℃에서 밤새 성장시켰다. 배지를 제거하고 세포를 이전에 기재된 바와 같이 용해시켰다. 10 μL의 각각의 샘플은, Luc2에 대해 50 μL BRIGHT-GLO™, hRL에 대해 50 μL의 20 μM 원상태 코엘렌테라진, 및 변이체 9B8에 대해 50 μL의 20 μM PBI-3939를 사용하여 발광 (RLU)을 검정했다.
6개 웰로부터의 용해물을 풀링하고 실시예 30에 기재된 HALOTAG® TMR-리간드로 표지했다. 표지된 융합 단백질을 SDS-PAGE로 분리하고 플루오르이미지화했다 (GE Healthcare Typhoon). 밴드 밀도를 각각의 루시퍼라아제 효소에 대해 존재하는 상대 몰수를 정량화하여 측정했으며, 각각의 샘플에 대한 RLU 값은 각각의 단백질의 발현 수준을 정규화하기 위해 계산된 밴드 밀도에 의해 정규화했다. 즉, RLU는 TMR 표지 정량화를 사용하여 정규화했다 (도 48). 몰-대-몰 기준에 있어서, 9B8 변이체는 Luc2보다 대략 15배 더 밝으며, hRL보다 >100-배 더 밝았다. 이 데이타는 비활성의 차이를 나타냈다.
B. 9B8 opt 및 9B8 opt + K33N
HEK293 세포에서 발현된 변이체 9B8 opt 및 9B8 opt+K33N의 휘도를 측정하고 실시예 31에서 HT7 비함유 변이체에 대해 기재된 것과 비교했다. 변이체 DNA를 함유하는 플라스미드 DNA 30 및 100 ng을 HEK293 세포를 전달감염시키기 위해 사용했다. 실시예 31에 기재된 바와 같이 세포를 성장시키고 유도시켰지만, 단, 세포를 1 mM CTDA, 150 mM KCl, 2 mM DTT, 100 mM MES pH 6.0, 35 mM 티오우레아, 0.25% TERGITOL® NP-9 (v/v), 및 10 mg/mL 2-하이드록시프로필-β-사이클로덱스트린을 함유하는 세포용해 버퍼로 용해시켰다. 용해물을 20 μM PBI-3939를 함유하는 세포용해 버퍼로 검정했으며, 발광을 TECAN® GENIOS™ Pro 발광분석기 상에서 측정했다. 도 49에서 보여주는 바와 같이, 9B8 opt+K33N은 HEK293 세포에서 9B8 opt와 비교하여 더 큰 발광을 가졌으며. 이는 표 25 및 도 29에서의 박테리아 발현 데이타와 결부된다.
C. 9B8+K33N 변이체
HEK293 및 NIH3T3 세포에서 발현된 변이체의 휘도를 이전에 기술된 바와 같이 측정했다. 상기 변이체의 발광은 9B8 opt에 의해 발생된 발광으로 정규화했다 (표 27).
표 27: NIH3T3 및 HEK293 세포에서 OgLuc 조합 변이체에 의해 발생된 발광의 증가
Figure pct00092

D. L27V
단독 및 융합물로서의 개똥벌레 루시퍼라아제에 대한 L27V 변이체의 발광의 비교를 수행했다. HEK293 및 HeLa 세포를 12-웰 플레이트 중의 웰 내로 각각 15,000 및 10,000 세포/웰로 플레이팅하고, 37 ℃, 5% CO2에서 밤새 인큐베이션했다. 그 다음, 세포를 L27V 또는 Luc2를 함유하는 pF4Ag의 연속 희석물로 전달감염시켰다. 20 ng의 pGL4.13 (Promega Corp.)을 L27V로 공-전달감염시키고, 20 ng의 pGL4.73 (Promega Corp.)을, L27V 또는 Luc2 플라스미드 DNA의 더 낮은 희석물에 대한 담체 DNA로서 작용하는 Luc2로 공-전달감염시켰다. 그 다음, 플라스미드 DNA를 제조자의 설명서에 따라 TRANSIT®-LTI 전달감염 시약을 사용하여 세포 내로 전달감염시켰다 (각각의 세포 유형에 대한 각각의 희석물에 대해 6개의 복제물). 그 다음, 상기 세포를 37 ℃, 5% CO2에서 24시간 동안 인큐베이션했다.
전달감염 후, 배지를 세포로부터 제거하고, 0.5% TERGITOL® NP-9 (v/v)를 포함하는 100 μL PBS를 첨가하고, 실온에서 10 분 동안 진탕했다. 10 μL의 각각의 세포 용해물을 ONE-GLOTM 루시퍼라아제 검정 시스템 (Promega Corp.; Luc2) 또는 검정 시약 (20μM PBI-3939를 포함하는 실시예 22H; OgLuc)을 사용하여 검정했다. 발광을 HEK293 (도 50A) 및 HeLa 세포 (도 50B)에 대해 이전에 기재된 바와 같이 측정했다.
융합 파트너로서 L27V 및 Luc2의 비교를 상기에서 기재된 바와 같이 수행했다. L27V 및 Luc2를 pF4Ag에서 HALOTAG® 단백질에 융합시켰다. 도 50C-D는 HEK293 (도 50C) 및 HeLa 세포 (도 50D)에서의 상이한 융합물로 측정된 발광을 보여준다.
발광 측정에 부가하여, 단백질 발현을 또한 분석했다. 전달감염을 상기에서 기재된 바와 같이 수행했다. 전달감염 후, 배지를 세포로부터 제거하고, 세포를 1X PBS로 세척했다. 1 μM HALOTAG®TMR 리간드 (Promega Corp.) 및 20 U DNase I을 함유하는 0.1X 포유류 세포용해 버퍼 (Promega Corp.) 100 μL를 첨가하고, 세포를 실온에서 45 분 동안 느리게 진탕시키면서 인큐베이션했다. 그 다음, 세포 샘플을 -20 ℃에서 동결시켰다. 단백질 분석을 위해, 32.5 μL 4X SDS 로딩 염료를 각각의 샘플에 첨가하고, 샘플을 2 분 동안 95 ℃에서 가열했다. 그 다음, 10 μL의 샘플을 SDS-PAGE 겔 상에 로딩하고, 이전에 기재된 바와 같이 Typhoon 스캐너 상에서 이미지화했다 (도 50E).
실시예 32 - 개똥벌레 루시퍼라아제와 비교한 정제된 OgLuc 변이체의 휘도
9B8 OgLuc 변이체를 실시예 33에 기재된 바와 같이 과발현시키고 정제했다. 희석된 효소 및 기질 사이의 반응을 하기 2X 버퍼/검정 시약을 사용하여 수행했다: 100 mM MES pH 6.0, 1 mM CDTA, 150 mM KCl, 35 mM 티오우레아, 2 mM DTT, 0.25% TERGITOL® NP-9 (v/v), 0.025% MAZU® DF 204, 10 mg/mL 2-하이드록시-β-사이클로덱스트린, 및 20 μM PBI-3939. 정제된 효소 및 기질의 최종 검정 농도는 각각 0.5 pM 및 10 μM이었다. 동시에, 희석된 정제 개똥벌레 루시퍼라아제 (즉, QUANTILUM® 재조합 루시퍼라아제 (Promega Corp.)) 및 루시페린 사이의 반응을 분석했다. 개똥벌레 루시퍼라아제 반응에 대한 검정 버퍼/시약은 BRIGHT-GLO™이었으며, 최종 검정 농도는 0.5 pM 효소 및 500 μM 루시페린이었다. 각각의 반응에 대한 버퍼/시약이 "글로우(glow)" 동력학을 제공하는 것으로 공지됨으로써, 15 분 시점이 발광 데이타를 수집하는데 사용됐다. 이 실험으로부터의 결과는 PBI-3939를 사용한 9B8 opt (19,200 RLU)가 BRIGHT-GLO™를 사용한 QUANTILUM® 재조합 루시퍼라아제 (2,300 RLU)보다 대략 8배 더 밝다는 것을 보여주었다.
실시예 33 - 억제 분석
OgLuc 변이체의 부정확한 상호작용에 대한 감수성을 측정하기 위해, 9B8 및 L27V 변이체의 활성을 LOPAC (약리적으로 활성 화합물의 라이브러리) 라이브러리에 대해 스크리닝했다. LOPAC 1280 라이브러리 (Sigma)는 화합물을 DMSO 중에서 1 mM로 희석시켜 제조했다. 검정하는 날, 화합물을 1X PBS 중에서 20 μM로 희석시키고, 10 μL를 96-웰, 백색 플레이트로 옮겼다. 각 웰에, Glo 세포용해 버퍼 (Promega Corp.) 중에 10-4로 희석된 10 μL의 정제된 9B8, L27V 또는 개똥벌레 루시퍼라아제 (Luc2) 효소를 첨가하고, 실온에서 2 분 동안 인큐베이션했다. 각 샘플에, 20 μL 검정 시약 (1 mM CDTA, 150 mM KCl, 2 mM DTT, 100 mM MES pH 6.0, 35 mM 티오우레아, 0.5% TERGITOL® NP-9 (v/v) 및 60 μM PBI-3939)을 첨가하고, 3 분 동안 인큐베이션하고, TECAN® GENIOS™ Pro 발광분석기 상에서 발광을 측정했다. 개똥벌레 루시퍼라아제를 검정하기 위해, BRIGHT-GLO™ 검정 시약 (Promega Corp.)을 제조자의 프로토콜에 따라 사용했다. 음성 대조군으로서, 각각의 플레이트의 8개 웰은 1X PBS + 2% 글리세롤을 함유했다. 양성 대조군으로서, 각각의 플레이트의 8개 웰은 2% DMSO 중의 2 mM 수라민 또는 2% DMSO 중의 2 mM 루시퍼라아제 억제제 1을 함유했다. OgLuc의 억제제인 수라민을 LOPAC 라이브러리의 예비 스크린에서 확인했다. (즉, LOPAC 라이브러리는 20 μM 미만의 기질 농도를 갖는 9B8 변이체를 사용하여 스크리닝했다)
도 51에서의 결과는 LOPAC 라이브러리에서의 화합물 및 L27V 사이의 부정확한 상호작용의 일반적인 낮은 빈도를 지시한다. 이것은 살아있는 세포 기반 포맷 (예를 들면, 고효율 스크리닝)을 포함하는, 다양한 화학물질 및 치료 후보의 큰 라이브러리에 대한 스크리닝 도구로서 L27V에 대한 가능한 사용을 시시한다.
억제 내성을 추가로 시험하기 위해, 정제된 9B8 및 L27V를 다양한 농도의 수라민 (Sigma S-2671) 및 티르포스틴 AG 835 ("Tyr ag 835") (Sigma T-5568)에 대해 스크리닝했다 (도 52A-C). 도 52E-D는 각각 수라민 및 Tyr ag 835에 대한 화학 구조를 보여준다. 정제된 9B8 및 L27V를 상기에서 기재된 바와 같이 제조했다. 억제제의 연속 희석물 (0, 2 μM, 6 μM, 20 μM, 60 μM, 200 μM 및 2 mM)을 2% DMSO를 포함하는 1X PBS 중에서 제조했다. 96-웰, 백색 검정 플레이트의 웰에, 10 μL의 희석된 효소 및 10 μL의 희석된 억제제를 첨가하고, 실온에서 2 분 동안 인큐베이션했다. 20 μL 검정 시약 (상기에 기재됨)을 첨가하고, GLOMAX®-96 발광분석기 상에서 발광을 측정했다 (도 52A-C). 도 52A-B는 9B8 및 L27V의 수라민 (도 52A) 및 Tyr ag 835 (도 52B)에 대한 용량 반응 곡선을 보여준다. 도 52C는 9B8 및 L27V에 대한 수라민 및 Tyr ag 835의 절반 최대 억제 농도 (IC50)를 보여준다. 데이타는 L27V가 다양한 화학물질 및/또는 치료 후보의 큰 라이브러리에 대한 스크리닝 도구로서 사용될 수 있는 강력한 리포터임을 지시한다.
실시예 34 - 비-특이적 단백질 상호작용에 대한 내성
1. 정제된 9B8 및 L27V 효소를 0.5 mg/mL BSA의 존재 또는 부재하에 버퍼 (1X PBS, 1 mM DTT, 및 0.005% IGEPAL® CA-630) 중에서 1:10으로 연속 희석하고 (4 세트의 각각의 희석물), 희석물 200 μL를 PCR 박리 튜브 내에 첨가했다. 샘플을 60 ℃에서 인큐베이션했고, 여기서, 0, 2, 4, 및 6 시간에 각각의 변이체에 대한 한 세트의 희석물을 -70 ℃로 옮겼다.
활성을 분석하기 위해, 샘플을 수욕 중에서 실온으로 해동시켰다. 50 μL 검정 시약 (이전에 기재됨, 100 μM PBI-3939 포함)을 첨가하고, 발광을 TECAN® INFINITE® F500 플레이트 판독기 상에서 30 분 동안 매분 측정했다. 활성을 1x106 및 1x107 희석물의 평균 발광을 사용하여 계산했다 (도 53).
2. OgLuc 변이체의 플라스틱에 대한 반응성을 입증하기 위해, 정제된 9B8 및 L27V를 폴리스티렌 플레이트에 노출시키고, 이들의 활성을 측정했다.
0.1% PRIONEX®를 포함하고 페놀 레드를 포함하지 않는 DMEM 중의 50 μL 정제된 9B8 (45.3 pM) 및 L27V (85.9 pM)를 60, 40, 20 및 0 분에 96-웰, 폴리스티렌 미세적정 플레이트의 웰 내에 넣었다. 샘플에, 20 μM PBI-3939를 함유하는 50 μL 검정 시약 (상기에 기재됨)을 첨가하고, 실온에서 5 분 동안 인큐베이션했다. 이전에 기재된 바와 같이 발광을 측정하고, 퍼센트 활성을 결정했다 (도 54; 시간 0에 대한 발광의 비).
실시예 35 - 번역후 변형
OgLuc 변이체가 포유류 세포에서 발현되는 경우 임의의 번역후 변형을 겪는지를 결정하기 위해, 9B8 및 L27V 변이체를 포유류 세포 및 이. 콜리 둘 모두에서 발현시키고, 질량 분광분석법 (MS)을 통해 분석했다.
9B8 및 L27V 변이체를 HEK293 및 이. 콜리 KRX (Promega Corp.) 세포들에서 N-말단 HALOTAG® 융합물 (이. 콜리에 대해 pFN18K; HEK293 세포에 대해 pFN21K)로서 발현시키고, 제조 설명서에 따라 HALOTAG® 단백질 정제 시스템 (Promega Corp.)을 사용하여 정제했다. 대략 5 pmol의 정제된 효소를 LTQ Orbitrap Velos 질량 분광분석기 (Thermo Scientific)에 연결된, C4 칼럼 (Waters Xbridge BEH300, 3.5μm)을 사용하는 LC/MS를 통해 분석했다. 데이타를 검출용 LTQ를 사용하여 600-2000 m/z로부터 획득하였으며, MagTran v1.03 소프트웨어를 사용하여 처리했다 (Zhang 등, J. Am . Soc . Mass Spectrom ., 9 :225-233 (1998)). 정제된 효소들 둘 모두는 변형되지 않은 OgLuc 변이체, 즉, 어떠한 변역후 변형도 부재한 OgLuc 변이체의 계산된 질량 19,665 Da과 비교하여, 19,666 Da의 실험적으로 측정된 질량을 가졌다.
실시예 36 - 전사 리포터로서의 OgLuc 변이체의 평가
A. IV
전사 리포터로서의 OgLuc 변이체의 용도를 시험했다. cAMP의 전사 리포터를 발생시키기 위해, hRL 및 IV를 당해분야에서 공지된 방법을 사용하여 관심 DNA 단편에 의해 대체된, 바르나제 서열을 함유하는 변형된 pGL4 벡터 (Promega Corp.) 내로 서브클로닝했다. 변형된 pGL4의 선도 서열은 최소 프로모터 및 cAMP-반응 요소 (CRE; 서열번호: 96)를 함유하여서, cAMP 작용제 예컨대 포르스콜린 (FSK)으로 자극시, 세포 축적 cAMP는 리포터를 활성화시키고 발광했다. 이 실험에서, hRL 또는 IV 전사 리포터 구조물 중의 어느 것의 DNA 2 ng을 실시예 25에서 기술된 바와 같이 HEK293 세포로 전달감염시키는데 사용했다. 24시간 전달감염후에, 세포를 100 μM FSK로 처리했다. FSK로 처리되지 않은 세포를 대조군으로서 사용했다. 6시간 후, 리포터 시약을 처리된 세포 및 대조군 세포에 첨가했다. hRL에 대해, 리포터 시약은 레닐라-Glo™ 시약 (Promega Corp.)이었다. IV에 대해, 리포터 시약은 1 mM CDTA pH 5.5, 150 mM KCl, 10 mM DTT, 0.5% TERGITOL® NP-9 (v/v), 20 μM 코엘렌테라진-h, 및 150 mM 티오우레아를 함유했다. 10 분 후, 발광을 Varioskan® 플래시 (Thermo Scientific) 상에서 판독했다.
도 55는 hRL ("레닐라"), 또는 FSK로 처리된 IV 전사 리포터 ("+FSK") 또는 FSK로 처리되지 않은 IV 전사 리포터 ("-FSK")를 함유하는 HEK293 세포의 정규화 발광을 보여준다. 반응, 즉, 발광의 폴드-유도 또는 폴드-증가 ("폴드")는 처리된 세포 (+FSK)로부터의 발광을 대조군 세포 (-FSK)로부터의 발광으로 나누어 결정했다. 도 55에서 보여주는 바와 같이, hRL에 대한 반응은 <50인 반면, IV에 대한 반응은 >300이었으며, 이는 전사 리포터로서의 IV의 용도를 입증했다.
B. 9B8 및 9B8 opt
전사 리포터로서의 변이체 9B8 및 9B8 opt의 용도를 또한 시험하고, 하기 변형을 갖는 IV 전사 리포터에 대해 이전에 기재된 바와 같이 hRL 및 Luc2 전사 리포터와 비교했다. 변이체 9B8 또는 9B8 opt 중의 어느 것을 함유하는 cAMP의 전사 리포터를 상기에서 기재된 바와 같이 생성했다. FSK 유도 6시간 후, 배지를 세포로부터 제거하고, 실시예 25에 기재된 100 μL의 세포용해 버퍼로 대체하여 용해물을 생성했다. FSK로 처리되거나 처리되지 않은 전달감염된 세포의 용해물을 실시예 25에 기재된 바와 같이 발광에 대해 검정했다. 10 μL의 Luc2 용해물을 50 μL의 BRIGHT-GLO™ 루시퍼라아제 검정 시약으로 검정했다. 10 μL의 hRL 용해물을 20 μM 원상태 코엘렌테라진을 함유하는 50 μL의 세포용해 버퍼로 검정했다. 10 μL의 변이체 9B8 및 9B8 opt 용해물을 20 μM PBI-3939를 함유하는 50 μL의 세포용해 버퍼로 검정했다.
도 56은 9B8, 9B8 opt, hRL, 또는 FSK로 처리된 Luc2 전사 리포터 ("유도") 또는 FSK로 처리되지 않은 Luc2 전사 리포터 ("기초")를 함유하는 HEK293 세포의 정규화 발광을 보여준다. 반응, 즉, 발광의 폴드-유도 또는 폴드-증가 ("폴드")를 유도된 발광을 기초 발광으로 나누어 결정했다 (도 56). 폴드 유도 값이 Luc2를 제외한 각각의 리포터들에 대해 유사하더라도, 유도된 9B8 opt 전사 리포터에 의해 발생된 발광은 유도된 레닐라 전사 리포터보다 대략 2.5 log 더 높고, Luc2 전사 리포터보다 대략 1.5 log 더 높았다. 도 56은 전사 리포터로서의 9B8 및 9B8 opt의 용도를 입증했다.
C. 9B8 opt 및 9B8 opt + K33N
변이체 9B8 opt 및 9B8 opt+K33N을 용해 전사 리포터 검정에서 비교했다. 변이체 9B8 opt+K33N을 당해분야에서 공지된 방법을 사용하여 사이클릭 AMP 반응 요소 (CRE)를 함유하는 pGL4.29 벡터 (Promega Corp.) 내로 클로닝했다. 9B8 opt+K33N 전사 리포터를 HEK293 세포에서 상기에서 기재된 바와 같이 시험하고, 9B8 opt 전사 리포터와 비교했다. 전사 리포터 버전의 변이체를 함유하는 플라스미드 DNA 30 및 100 ng을 HEK293 세포로 전달감염시키는데 사용했다. 세포를 발광을 측정하기 전에 FSK로 5시간 동안 유도했다. 세포를 1 mM CTDA, 150 mM KCl, 2 mM DTT, 100 mM MES pH 6.0, 35 mM 티오우레아, 0.25% TERGITOL® NP-9 (v/v), 및 10 mg/mL 2-하이드록시프로필-β-사이클로덱스트린을 함유하는 세포용해 버퍼로 용해시켰다. TECAN® GENIOS™ Pro 발광분석기 상에서 발광을 측정했다. 용해물을 20 μM PBI-3939를 함유하는 세포용해 버퍼로 검정했다. 도 57은 FSK로 처리된 9B8 opt 또는 9B8 opt+K33N 전사 리포터 구조물 ("유도") 또는 FSK로 처리되지 않은 9B8 opt 또는 9B8 opt+K33N 전사 리포터 구조물 ("기초")을 발현시키는 HEK293 세포의 정규화 발광 (정확한 전달감염)을 보여준다. 도 57에서 보여주는 바와 같이, 9B8 opt에 대한 폴드-유도는 30 ng의 DNA가 전달감염에 사용된 경우 360이었고, 100 ng의 DNA가 전달감염에 사용된 경우 109인 반면, 9B8 opt+K33N에 대한 폴드-유도는 각각 275 및 147이었다. 더 많은 양의 DNA가 전달감염에 사용된 경우, K33N은 더 큰 반응을 제공했다.
D. L27V
1. L27V를 본 실시예의 C에 기술된 바와 같이 CRE, NFkB 또는 HSE (열충격 요소) 반응 요소를 함유하는 리포터 벡터 내로 클로닝했다. 그 다음, 리포터 구조물을 이전에 기재된 바와 같이 HEK293 세포 또는 HeLa 세포 내로 전달감염시켰다. 그 다음, 세포를 CRE에 대해 FSK를 사용하거나, NFkB에 대해 TNFα를 사용하거나 HSE에 대해 17-AAG를 사용하여 유도했다. 발광은 이전에 기재된 바와 같이 20 μM PBI-3939를 포함하는 검정 시약을 사용하여 측정했다 (도 58A-C). 리포터 구조물을 모두 HEK293, HeLa, NIH3T3, U2OS 및 Jurkat 세포주에서 검증했다 (데이타는 보여주지 않음).
2. L27V02 및 L27V02P (PEST 서열을 함유; 서열번호: 323)를 본 실시예의 C에 기재된 바와 같이 리포터 벡터 (pGL4.32 기반) 내로 클로닝했다. PEST 서열을 함유하는 다른 OgLuc 변이체는 L27V01-PEST00 및 L27V03-PEST02 (각각 서열번호: 320 및 326)를 포함한다. 그 다음, 리포터 구조물을 이전에 기재된 바와 같이 HEK293 세포 내로 전달감염시켰다. 그 다음, 세포를 FSK를 사용하여 유도하고, 이전에 기재된 바와 같이 20 μM PBI-3939를 포함하는 검정 시약을 사용하여 발광을 측정했다 (도 59A-B). 다양한 다른 리포터 구조물을 또한 생성했고, 다양한 세포주에서 시험했다 (도 59C). 도 59A는 HEK293 세포에서 CRE 시스템에 대한 완전 용량 반응을 보여준다. 도 59B는 도 59B를 요약한다. 도 59C는 도 59A-B에서의 데이타를 요약하며, NFkB 반응 요소에 대한 동일한 유형의 데이타를 보여준다. CRE 및 NFkB 리포트 구조물 둘 모두를 HEK293, HeLa, HepG2, Jurkat, ME180, HCT116, 및 U2OS 세포주에서 시험했다.
3. HEK293 세포 (T25 플라스크 중의 0.9x106 세포)를 제조자의 설명서에 따라 FUGENE® HD (Promega Corp.)를 사용하여 pNFkB-L27V 분비 구조물 (서열번호: 463 & 464; 여기서 IL-6 분비 서열 (서열번호: 461 및 462)은 원상태 OgLuc 분비 서열 서열번호: 54를 대체했다), 메트리디아 롱거 (Clontech), pNFkB-L27V (원상태 분비 서열; 서열번호: 465 및 466) 또는 개똥벌레 루시퍼라아제 (Luc2; pGL4.32-기반) 플라스미드 DNA로 전달감염시켰다. 세포를 37 ℃, 5% CO2에서 8시간 동안 인큐베이션하고, 그 다음 0.5 mL TrypLE (Invitrogen) 중에서 트립신화했다. 그 다음, 용해물을 10% FBS, 1X NEAA 및 1X 나트륨 피루베이트를 포함하는 DMEM 8 mL 중에 재서스펜션시켰다. 그 다음, 100 μL의 재서스펜션된 샘플을 96-웰 플레이트의 웰에 첨가하고, 37 ℃, 5% CO2에서 16시간 동안 인큐베이션했다.
인큐베이션 후, 배지를 세포로부터 제거하고, (연속 희석된) TNFα를 포함하거나 포함하지 않는 새로운 배지 100 μL로 대체했다. 분비를 검정하기 위해, 3 및 6 시간에 5 μL의 배지 (3회)를 세포로부터 제거하고, PBS를 사용하여 50 μL로 되게 하고, 50 μL 검정 시약 (이전에 기재됨, 100 μM PBI-3939 포함)과 혼합했다. 발광을 이전에 기재된 바와 같이 0 및 10 분에 측정했다 (도 60).
메트리디아 롱거 ( Metridia longa ) 루시퍼라아제 활성을 측정하기 위해, Ready-To-GlowTM 분비 루시퍼라아제 시스템 (Clontech)을 제조자의 프로토콜에 따라 사용했다. 간단히 말해서, 5 μL Ready-To-GlowTM 시약을 5 μL의 샘플과 45 μL의 PBS에 첨가했다. 발광을 시약 부가 직후 측정했다 (도 60).
E. L27V 최적화된 변이체 .
플라스미드 DNA (pGL4.32-L27V00, pGL4.32-L27V01, pGL4.32-L27V02, pGL4.32-L27V03, 및 pGL4.13)를 제조자의 프로토콜에 따라 FUGENE® HD를 사용하여 전달감염용으로 제조했다. pGL4.32 벡터 (Promega Corp.)는 NF-κB 반응 요소를 함유한다. L27V 코돈 최적화된 서열은 상기 벡터에서 Luc2P 서열을 대체했다. pGL4.13 벡터 (Promega Corp.)는 SV40 프로모터에 의해 유도된 Luc2 유전자를 함유한다.
그 다음, 300 μL의 DNA 전달감염 혼합물을 6 mL의 HeLa 세포 서스펜션 (2×105 세포/mL)과 혼합하고, 균질화시키고, 100 μL를 96-웰 플레이트의 웰 내로 플레이팅했다. 그 다음, 세포를 37 ℃, 5% CO2에서 밤새 인큐베이션했다. 인큐베이션 후, BSA를 포함하는 DPBS 중의 10X rhTNFα 10 μL를 상기 웰에 첨가하고, 37 ℃, 5% CO2에서 4.5 시간 동안 인큐베이션했다. 6개의 웰에는 비히클만을 제공했다. 그 다음, 세포를 실온에서 20 분 동안 평형화시키고, 그 다음 100 μL 검정 시약 (이전에 기재됨, 100 μM PBI-3939 포함)을 첨가했다. Luc2를 발현시키거나 비히클만으로 처리한 세포에 100 μL의 ONE-GLO™ 루시퍼라아제 검정 시약을 첨가했다. 발광을 이전에 기재된 바와 같이 12 분 후-검정 시약 부가로 측정했다. 도 61A-B는 절대 발광을 보여주고, 도 61C-D는 정규화 발광을 보여주고, 도 61E-F는 폴드 반응을 보여준다.
실시예 37 - 전사 리포터 검정에서의 OgLuc 변이체
전사 리포터로서 사용되는 본 발명의 OgLuc 변이체의 능력을 입증하기 위해, OgLuc 변이체 9B8 opt를 정방향 전달감염, 역방향 전달감염, 및 벌크 전달감염에 전사 리포터로서 사용했다. 이들 방법의 전달감염은 이들이 유전자 전사 리포터의 일시적 발현에 통상적으로 사용되는 접근법들 중에 대표적인 것이기 때문에 선택됐다.
정방향 전달감염
cAMP 반응 요소 (CRE)와, 9B8 opt 또는 PEST 단백질 분해 서열 (9B8 opt-P)을 추가로 포함하는 9B8 opt를 함유하는 전사 리포터를 pGL4.29 (Promega Corp.) 주쇄에서 제조했다. 즉, pGL4.29 벡터의 luc2P 유전자를 9B9 opt (서열번호: 24) 또는 9B8 opt-P (서열번호: 65)로 대체했다. pGL4.29를 대조군/기준으로서 사용했다.
HEK293 세포를 6개의 96-웰 조직 배양판에 15,000 세포/웰로 플레이팅했다. 세포를 100 μL의 DMEM + 10% FBS + 1X 비-필수 아미노산 (NEAA) 중에서 성장시키고, 37 ℃에서 밤새 인큐베이션했다. 세포를 10 ng 또는 100 ng 플라스미드 DNA/웰의 pGL4.29 9B8 opt, pGL4.29 9B8 opt-P, 또는 pGL4.29 중의 어느 것으로 일시적으로 전달감염시켰다. 플라스미드 DNA를 850 μL의 OPTI-MEM® (Invitrogen) 및 32.4 μL의 FUGENE® HD 전달감염 시약 (Promega Corp.)과 혼합하고 실온에서 10 분 동안 인큐베이션했다. 8 μL의 전달감염/리포터 DNA 혼합물을 적합한 웰에 첨가했다 (2 구조물/플레이트). 세포를 37 ℃에서 4시간 동안 인큐베이션했다. 배지를 OPTI-MEM® + 0.5% 투석된 FBS + 1X NEAA + 1X 나트륨 피루베이트 + 1X Penn-Strep로 대체하고 37 ℃에서 밤새 인큐베이션했다.
인큐베이션 후, OPTI-MEM® 중의 10 nM 또는 10 μM FSK (10X 스톡으로부터)를 세포에 첨가하고, 37 ℃에서 3시간 동안 인큐베이션했다. 100 mM MES pH 6.1, 1 mM CDTA, 150 mM KCl, 35 mM 티오우레아, 2 mM DTT, 0.25% TERGITOL® NP-9 (v/v), 0.025% MAZU® DF 204, 및 20 μM PBI-3939를 함유하는 세포용해물 시약을 pGL4.29 9B8 opt 또는 pGL4.29 9B8 opt-P를 함유하는 세포에 첨가하고, 실온에서 10 분 동안 인큐베이션했다 (100 μL 세포용해물 시약을 100 μL 세포에 첨가했다). ONE-GLO™ 검정 시약 (Promega Corp.)을 pGL4.29를 함유하는 세포에 첨가하고 제조자의 프로토콜에 따라 사용했다 (100 μL 시약을 100 μL 세포에 첨가했다). 발광을 GLOMAX® 발광분석기 상에서 측정했다. 표 26은 10 nM ("기준") 또는 10 mM FSK로 처리된 CRE를 함유하는 전사 리포터를 발현시키는 HEK293 세포의 발광, 및 FSK에 대한 반응을 보여준다 (즉, 10 mM FSK 처리된 세포에 의해 발생된 발광을 10 nM FSK 처리된 세포의 발생된 발광에 의해 나누었다).
표 28에서 보여주는 이러한 결과는 9B8 opt 및 9B8 opt-P가 luc2P보다 더 밝았고, 모든 루시퍼라아제 리포터가 100 ng의 DNA가 전달감염에 사용되는 경우 FSK에 반응했다는 것을 지시한다. 그러나, 10ng의 DNA만이 전달감염에 사용되는 경우 luc2P 리포터에 대한 발광은 발광분석기의 검출 수준 미만이었다.
표 28: HEK293 세포에서 CRE 를 함유하는 전사 리포터 (3 h 시점)
Figure pct00093

역방향 전달감염
항산화제 반응 요소 (ARE)와 9B8 opt 또는 9B8 opt-P를 함유하는 전사 리포터를 pGL4.29 (Promega Corp.) 주쇄에서 제조했다. 즉, 당해분야에서 공지된 방법을 사용하여 pGL4.29 벡터의 luc2P 유전자를 9B9 opt 또는 9B8 opt-P로 대체하고, CRE를 2X ARE (서열번호: 66)로 대체했다.
HEK293 세포를 트립신화하고 (T75 플라스크, 3 mL 트립신), DMEM + 10% FBS + 1X NEAA를 함유하는 배지 중에서 1x105 세포/mL (대략 8.9x106 총 세포)로 재서스펜션시켰다. 각각의 전사 리포터는, 1.2 mL OPTI-MEM®, 12 μL 전사 리포터 DNA (100 ng) 및 36 μL FUGENE® HD 전달감염 시약을 함께 혼합함으로써 전달감염용으로 제조되고, 실온에서 35 분 동안 인큐베이션했다. 인큐베이션 후, 624μL의 전달감염/리포터 DNA 혼합물을 12 mL의 세포 서스펜션에 첨가하고, 인버전에 의해 혼합했다. 혼합 후, 100 μL의 세포/DNA 혼합물을 96-웰 플레이트의 웰에 첨가했다 (2 구조물/플레이트). 세포를 37 ℃에서 22시간 동안 인큐베이션했다. OPTI-MEM® 중의 3급-부틸하이드로퀴논 (Nrf2 안정제; tBHQ; 1 μM ("기준") 또는 20 μM) 또는 설포라판 (Nrf2를 활성화시키는 것으로 공지된 유기황 항산화제; 1 μM ("기준") 또는 20 μM)을 각 웰에 첨가하고, 37 ℃에서 24시간 동안 인큐베이션했다 세포를 정방향 전달감염에 대해 상기에서 기재된 바와 같이 100 μL 세포용해물 시약으로 용해시켰다. 발광을 GLOMAX® 발광분석기 상에서 측정했다.
표 29는 1 μM ("기준") 또는 20 μM 설포라판으로 처리된 ARE를 함유하는 전사 리포터를 발현시키는 HEK293 세포의 발광, 및 설포라판에 대한 반응을 보여준다 (즉, 1 μM 설포라판 처리된 세포에 의해 발생된 발광을 20 μM 설포라판 처리된 세포의 발생된 발광으로 나누었다). 표 30은 1 μM ("기준") 또는 20 μM tBHQ로 처리된 ARE를 함유하는 전사 리포터를 발현시키는 HEK293 세포의 발광, 및 tBHQ에 대한 반응을 보여준다 (즉, 1 μM tBHQ 처리된 세포에 의해 발생된 발광을 20 μM tBHQ 처리된 세포의 발생된 발광으로 나누었다). 표 29 및 30은 9B8 opt 및 9B8 opt-P가 ARE에 대한 2개의 상이한 공지된 자극의 존재를 보고할 수 있음을 보여준다.
표 29: HEK293 세포에서 ARE 를 함유하는 전사 리포터 (24 h 시점)
Figure pct00094

표 30: HEK293 세포에서 ARE 를 함유하는 전사 리포터 (24 h 시점)
Figure pct00095

벌크 전달감염
정방향 전달감염에 기재된, CRE와 9B8 opt 또는 9B8 opt-P를 함유하는 전사 리포터를 HEK293 및 NIH3T3 세포의 벌크 전달감염에 사용했다. 열충격 반응 요소 (HRE; 서열번호: 67) 및 9B8 opt 또는 9B8 opt-P를 함유하는 전사 리포터를 pGL4.29 (Promega Corp.) 주쇄에서 제조했다. 즉, pGL4.29 벡터의 luc2P 유전자를 9B9 opt 또는 9B8 opt-P로 대체하고, CRE를 HRE로 대체했다. HRE 및 9B8 opt-P를 함유하는 전사 리포터를 HeLa 세포의 벌크 전달감염에 사용했다.
HEK293, NIH3T3, 또는 HeLa 세포를, HEK293 세포에 대해서는 3 mL 완전 배지 (DMEM + 10% FBS + 1X NEAA + 1X 나트륨 피루베이트) 중에서 4.5x105 세포/웰의 밀도로, NIH3T3 세포에 대해서는 3 mL 완전 배지 (DMEM + 10% 태아소 혈청 (FCS) + 1X NEAA+1X 나트륨 피루베이트) 중의 3x105 세포/웰의 밀도로, 또는 HeLa 세포에 대해서는 3 mL 완전 배지 (DMEM + 10% FBS + 1X NEAA) 중의 9.9x105 세포/웰의 밀도로 전달감염 전날 6-웰 조직 배양판의 단일 웰에 플레이팅했다. 세포를 37 ℃에서 밤새 성장시켰다.
155 μL OPTI-MEM® 중의 3,300 ng의 리포터 플라스미드 DNA를 9.9 μL FUGENE® HD 전달감염 시약과 혼합하고, 짧게 와동시키고, 실온에서 10 분 동안 인큐베이션했다. CRE 전사 리포터를 HEK293 및 NIH3T3 세포로 전달감염시키는데 사용했다. HRE 전사 리포터를 HeLa 세포로 전달감염시키는데 사용했다. 리포터 혼합물을 세포에 첨가하고 약한 흔들림으로 혼합하고, 그 다음 37 ℃에서 6시간 동안 (HEK293 및 NIH3T3) 또는 3시간 동안 (HeLa) 인큐베이션했다. 그 다음, 세포를 트립신화하고, 배지 (HEK293 세포에 대해서는 DMEM + 10% FBS + 1X NEAA + 1X 나트륨 피루베이트, NIH3T3 세포에 대해서는 DMEM + 10% FCS + 1X NEAA + 1X 나트륨 피루베이트, 또는 HeLa 세포에 대해서는 DMEM + 10% FBS + 1X NEAA) 중에서 재서스펜션시키고, 그 다음 96-웰 플레이트의 개별적인 웰에 플레이팅 (HEK293에 대해서는 20,000 세포/100 μL, NIH3T3에 대해서는 10,000 세포/100 μL, 또는 HeLa에 대해서는 13,000 세포/μL)하고, 37 ℃에서 밤새 인큐베이션했다.
OPTI-MEM® 중의 FSK (CRE 자극인자) 또는 17-AAG (HRE 자극인자; 17-알릴아미노-데메톡시 겔다나마이신)를 세포에 첨가하고 (FSK에 대해 10 nM 또는 10 μM 최종 농도; 17-AAG에 대해 1 nM 또는 1 μM 최종 농도), 37 ℃에서 4시간 동안 (FSK) 또는 6시간 동안 (17-AAG) 인큐베이션했다. 플레이트를 인큐베이터로부터 제거하고, 25 분 동안 실온으로 평형화시켰다. 세포를 정방향 전달감염에 대해 상기에서 기재된 바와 같이 100 μL 세포용해물 시약으로 용해시켰다. 발광을 GLOMAX® 발광분석기 상에서 측정했다.
표 31은 10 nM ("기준") 또는 10 mM FSK로 처리된 CRE를 함유하는 전사 리포터를 발현시키는 HEK293 세포의 발광, 및 FSK에 대한 반응을 보여준다. 표 32는 10 nM ("기준") 또는 10 mM FSK로 처리된 CRE를 함유하는 전사 리포터를 발현시키는 NIH3T3 세포의 발광, 및 FSK에 대한 반응을 보여준다. 표 33은 10 nM ("기준") 또는 10 mM 17-AAG로 처리된 HRE를 함유하는 전사 리포터를 발현시키는 HeLa 세포의 발광, 및 17-AAG에 대한 반응을 보여준다.
표 29-31은 1) 2개의 상이한 세포주 HEK293 및 NIH3T3의 맥락에서 9B8opt OgLuc 변이체의 모든 버전은 FSK의 존재 및 CRE에 대한 FSK의 자극 효과를 보고할 수 있고, 2) HeLa 세포의 맥락에서 9B8 optP는 17-AAG의 존재 및 HRE에 대한 17-AAG의 자극 효과를 보고할 수 있음을 보여준다.
표 31: HEK293 세포에서 CRE 를 함유하는 전사 리포터 (4 h 시점)
Figure pct00096

표 32: NIH3T3 세포에서 CRE 를 함유하는 전사 리포터 (4 h 시점)
Figure pct00097

표 33: HeLa 세포에서 HRE 를 함유하는 전사 리포터 (6 h 시점)
Figure pct00098

실시예 38 - 세포를 발현시키기 어려운 세포용해 리포터 및 분비성 리포터
HepG2 세포 (세포 서스펜션 중의 1x105 세포/mL)를 제조자의 설명서에 따라 FUGENE® HD를 사용하여 L27V02, luc2P (Promega Corp.), luc2 (Promega Corp.) 또는 L27V02-IL6 (IL-6 분비 서열로 대체된 원상태 분비 서열을 갖는 L27V02; ("IL601-L27V02A"; 서열번호: 324)을 함유하는 플라스미드 DNA (pGL4.32 주쇄; Promega Corp.)로 역방향 전달감염시켰다 (1:20 DNA-전달감염 혼합물 대 세포). 그 다음, 100 μL 세포 서스펜션을 96-웰 플레이트의 웰 내로 플레이팅하고, 37 ℃, 5% CO2에서 22시간 동안 인큐베이션했다. IL-6 분비 서열로 대체된 원상태 분비 서열을 갖는 다른 OgLuc 구조물은 IL601-L27V01 및 IL602-L27V03 (각각 서열번호: 321 및 327)을 포함한다.
분비 분석을 위해, 배지를 세포로부터 제거하고, 세포를 100 μL DPBS로 세척했다. 100 μL 완전 배지 (DMEM + 10% FBS+ 1X NEAA)를 4.5 h 동안 rhTNFα ("TNFα")의 용량 (1 pg/mL - 100 ng/mL)을 가변시키면서 첨가했다. 그 다음, 10 μL의 배지를 제거하고, 90 μL 완전 배지에 첨가하고, 100 μL 검정 시약 (이전에 기재됨; 100 μM PBI-3939)을 첨가했다. 발광을 이전에 기재된 바와 같이 측정했다 (도 62A).
세포용해 분석, 이후 플레이팅을 위해, 세포를 37 ℃, 5% CO2에서 4.5 시간 동안 인큐베이션했다. 그 다음, 세포를 20 분 동안 실온으로 평형화시켰다. 검정 시약 (이전에 기재됨; 100 μM PBI-3939)을 세포에 첨가하고, 발광을 이전에 기재된 바와 같이 측정했다 (도 62B).
실시예 39 - 추가의 세포용해 리포터 특징
세포 기반, 용해 전사 리포터의 맥락에서 본 발명의 OgLuc 변이체는 다량의 발광 신호를 제공하여 상기 신호가 다른 루시퍼라아제에서의 신호보다 더 일찍 나타날 것이다. 밝은 발광은 또한 시험될 약한 프로모터를 허용해야 한다.
실시예 40 - 포유류 세포 전달감염
본 발명의 OgLuc 변이체를 세포주, 예를 들면, Jurkat, HepG2, 일차 세포, 비-분화 일차 세포, 또는 줄기세포를 전달감염시키기에 어려운 리포터로서 사용했다. (예를 들면, 도 59C 참고) OgLuc 변이체는, 그의 높은 신호 세기로 인해, 전달감염 효율이 낮은 경우 검출가능한 발광을 가능하게 한다. OgLuc 변이체는 또한 전달감염과 관련된 조건, 즉, DNA 농도, 전달감염 시약 부가에 특히 민감한 세포에서 리포터로서 사용될 수 있다. OgLuc 변이체의 휘도로 인해, 적합한 수준의 발광이 더 낮은 DNA 농도, 더 적은 전달감염 시약, 및 아마도 검정을 개시하기 전 더 짧은 후-전달감염 시간을 사용하여 성취될 수 있다. 이것은 다르게 감수성 세포인 것에 대해 독성 부담이 덜할 것이다. OgLuc 변이체의 밝은 발광은 또한 이러한 산출물이 바람직한 경우에 매우 오랜 시점에서 측정될 신호를 허용해야 한다. 또 다른 예로서, OgLuc 변이체는 단일 카피 원상태 프로모터, 예를 들면, HSB 티미딜레이트 키나아제 (TK) 프로모터, HOX 유전자, 또는 LIN28에 대한 리포터로서 사용될 수 있다.
실시예 41 - 안정한 세포주
세포질에서 또는 분비 형태로서 본 발명의 OgLuc 변이체를 발현시키는 강력하고 안정한 세포주의 확인은 루시퍼라아제 및 작은 크기의 OgLuc 유전자의 밝은 신호에 의해 촉진될 수 있다. 비교적 작은 유전자 서열은 외래 DNA의 통합으로부터 유래되는 유전자 불안정성의 가능성을 감소시킬 것이다.
본 발명의 OgLuc 변이체를 사용한 안정한 세포주를 생성하기 위해, OgLuc 변이체에 대한 뉴클레오타이드 서열 및 선택가능한 마커 유전자, 예를 들면, 네오마이신, 하이그로마이신, 또는 퓨로마이신을 포함하는 플라스미드 DNA를 관심 세포주, 예를 들면, HEK293 세포로 전달감염시키는데 사용했다. 초기 계대 횟수의 세포, 예를 들면, 10 계대 미만의 세포를 T25 (1x106) 또는 T75 (3x106) 조직 배양 플라스크 내로 플레이팅하고, 대략 75 밀집도%로 밤새 성장시킨다. 그 다음, 세포를 상기 플라스미드 DNA 및 적합한 전달감염 시약, 예를 들면, TRANSIT®-LT1 또는 FUGENE® HD를 사용하여 전달감염시킨다. 전달감염 48시간 후, 배지를 선택 의약품, 예를 들면, G418, 하이그로마이신 또는 퓨로마이신을 함유하는 선택 배지로 전달감염되지 않은 세포를 사멸시키는 것으로 이전에 결정된 농도로 세포에서 교체한다. 플라스미드 DNA를 함유하는 세포의 선택은 2-4주에 걸쳐서 일어난다. 이 시간 동안, 세포를 T25 또는 T75 조직 배양 플라스크 내의 다양한 농도의 선택 배지 중에서 재플레이팅한다. 재플레이팅된 세포에 대한 배지를 2-3주 동안 매 3-4일 신선한 선택 배지로 교체한다. 플라스크를 살아있는 세포 콜로니의 형성에 대해 모니터링한다. 결국, 플라스크는 많은 큰 콜로니 및 근소한 사멸 세포를 함유할 것이다.
플라스크 내의 안정한 콜로니의 풀(pool)로부터, 단일 콜로니를 단리하고 단일 24-웰 조직 배양판 내로 팽창시킨다. 간단히 말해서, 세포를 트립신/EDTA 방법을 사용하여 수집했다. 즉, 세포를 Ca2 + 및 Mg2 + 비함유 PBS로 세정하면서 매질을 제거함으로써 수집하고 트립신/EDTA로 처리하여 박리시켰다. 세포를 혈구계를 사용하여 계수하고, 완전 배지 중에서 1x105로 희석했다. 그 다음, 세포를 완전 배지 중에서 100 세포/mL, 33 세포/mL, 10 세포/mL, 및 3.3 세포/mL로 희석했다. 100 μL의 각각의 희석물을 96-웰 조직 배양판의 모든 웰 내로 플레이팅하고 (각각의 희석물에 대해 1개의 플레이트) 50 μL의 선택 배지를 세포에 첨가한 후 4-5일 성장시킨다. 대략 플레이팅 1주일 후, 세포를 콜로니 성장에 대해 육안으로 스크리닝하고, 또 다른 50 μL의 선택 배지를 첨가했다. 세포를 단일 콜로니가 웰 영역의 40-60%를 덮을 때까지 모니터링을 지속한다. 콜로니가 팽창 및 스크리닝할 준비가 된 경우, 콜로니를 트립신/EDTA 방법을 사용하여 수집한다. 각각의 콜로니를 하기와 같은 선택 배지로 옮긴다: 1) 기능적 검정, 예를 들면, 발광 검출을 위해 96-웰 검정 플레이트의 6개 웰 내로 1:10으로 희석; 2) 세포 생존력 검정, 예를 들면, CELLTITER-GLO® 발광 세포 생존력 검정 (Promega Corp.)을 위해 투명 바닥 96-웰 검정 플레이트의 3개 웰 내로 1:10으로 희석; 및 3) 팽창을 위해 24-웰 조직 배양판 내로 1:10으로 희석. 그 다음, 기능적 및 세포 생존력 검정을 위한 플레이트 중의 세포를 2-3일 성장시키고 기능적 및 세포 생존력 검정을 수행했다. 24-웰 플레이트 중의 양성 클론은 기능적 및 세포 생존력 검정뿐만 아니라 적어도 20 계대 동안 발현 및 반응의 안정성, 정규 성장률 형태에 대해 추가로 시험되고, 가능한 한 초기 계대에서 추후 사용을 위해 동결된다.
실시예 42 - OgLuc 분비 신호 분석
A. IV opt
야생형 OgLuc는 절단된 분비 신호 서열을 갖는 성숙 단백질 내로 합성 후 처리된다. 분비 신호 서열이 OgLuc 변이체의 분비를 촉진시키는 지를 결정하기 위해, 실시예 25의 IV opt 변이체 및 hRL을 N-말단 OgLuc 분비 신호 (서열번호: 54)를 함유하는 pF4Ag 내로 클로닝했다. 10% 우태혈청 (FBS)을 포함하는 둘베코 변형 이글 배지 ("DMEM") 100 μL 중의 HEK293 세포 (15,000)를 분비 신호의 존재 또는 부재하에 100 ng의 플라스미드 DNA, 즉, hRL 또는 IV opt로 실시예 25에 기재된 바와 같이 전달감염시키고, 37 ℃에서 밤새 성장시킨다. 50 μL의 배지를 신규 플레이트로 옮기고, "배지" 샘플을 생성하는 후기 검정을 위해 남겨두었다. 배지의 나머지를 제거하고, 세포를 실시예 25에 기술된 100 μL의 세포용해 버퍼로 용해시켜 "용해물" 샘플을 생성한다. 10 μL의 배지 샘플 및 10 μL의 용해물 샘플을 발광에 대해 검정했다 (도 63). OgLuc 분비 신호 서열을 갖는 hRL ("레닐라 sig") 또는 OgLuc 분비 신호 서열을 갖지 않는 hRL ("레닐라")에 대한 샘플을 20 μM 원상태 코엘렌테라진을 함유하는 세포용해 버퍼 50 μL를 사용하여 측정했다. OgLuc 분비 신호 서열을 갖는 IV opt ("IV opt sig") 또는 OgLuc 분비 신호 서열을 갖지 않는 IV opt ("IV opt")에 대한 샘플을 20 μM PBI-3939를 함유하는 세포용해 버퍼 50 μL를 사용하여 측정했다.
도 63에서, 채워진 바는 임의의 세포용해물 시약의 부재하에 매질로부터 측정되는 빛의 양을 나타낸다. 오픈 바는 세포용해물 시약의 부가시 측정되는 총 빛 (분비 + 비-분비)을 나타낸다. 도 63은 IV opt가 HEK293 세포로부터 성장 배지 내로 분비되었고, 분비 신호 서열이 포유류 세포에서 기능적이었음을 보여준다. "IV opt sig"는 유의미한 양의 루시퍼라아제가 배지에서 검출되는 상황에서만 나타낸다. 상기 결과는 또한 이 특별한 신호 펩타이드가 hRL의 분비를 촉진시키지 않음을 지시한다.
B. 9B8, V2 및 L27V
OgLuc의 분비 신호 서열이 그것의 분비를 촉진시키는 지를 결정하기 위해, OgLuc 변이체 9B8, V2 및 L27V를 N-말단 OgLuc 분비 신호 서열을 함유하는 pF4Ag 내로 클로닝했다. 변이체를 또한 분비 신호 서열이 없는 벡터 내로 클로닝했다. 그 다음, CHO 또는 HeLa 세포를 12-웰 플레이트 내로 10% FBS 및 1X 나트륨 피루베이트를 포함하는 F12 배지 (CHO 세포) 또는 10% FBS 및 1X 나트륨 피루베이트를 포함하는 DMEM (HeLa 세포) 1 mL 중에서 100,000 세포/웰로 플레이팅하고, 37 ℃, 5% CO2에서 밤새 인큐베이션했다.
밤새 인큐베이션 후, 세포를 TRANSIT®-LT1 전달감염 시약 (Mirus Bio) 및 OPTI-MEM® 배지 (Invitrogen)를 사용하여 분비 신호 서열을 갖거나 갖지 않는 9B8, V2, 또는 L27V를 함유하는 플라스미드 DNA 1μg으로 전달감염시켰다. 세포를 다시 37 ℃, 5% CO2에서 밤새 인큐베이션했다.
제2 밤새 인큐베이션 후, 배지를 제거하고 분석을 위해 남겨두었다. 세포에 1 mL의 검정 버퍼 (1 mM CDTA, 150 mM KCl, 2 mM DTT, 100 mM MES pH 6.0, 35 mM 티오우레아 및 0.5% TERGITOL® NP-9 (v/v))를 첨가하여 세포 용해물을 생성했다. 각각의 샘플로부터의 세포 용해물 또는 남겨둔 배지 10 μL에, 40 μM PBI-3939를 포함하는 검정 버퍼 50 μL를 첨가하고, 발광을 상기에서 기재된 바와 같이 측정했다. 도 64A-D는 9B8, V2 및 L27V 변이체가 분비성 시스템에 사용될 수 있음을 입증한다.
분비 변이체의 안정성을 결정하기 위해, 각각의 샘플로부터 남겨둔 매질의 분취량 150 μL를 37 ℃ 또는 50 ℃에 두었다. 그 다음, 분취량은 상이한 시점 (0, 1, 2, 3, 5, 6, 및 7 분)에서 제거되고, 드라이아이스 위에서 동결시키고, 검정할 때까지 -20 ℃에서 유지시켰다. 안정성에 대해 검정하기 위해, 매질 분취량을 실온으로 해동시키고, 10 μL의 각각의 분취량을 상기에서 기재된 바와 같이 PBI-3939 (pH 6.0)를 포함하는 검정 버퍼와 혼합했다. 발광을 상기와 같이 측정하고, 반감기 (t50)를 결정했다 (표 34).
표 34
Figure pct00099

C. 메트리디아 롱거의 분비 루시퍼라아제에 대한 9B8 및 V2 비교
OgLuc 변이체 9B8 및 V2의 분비는 메트리디아 롱거로부터의 분비 루시퍼라아제의 분비와 비교했다. CHO 세포를 6-웰 플레이트의 웰 내로 10% FBS를 포함하는 F12 배지 3 mL 중에서 300,000 세포/웰로 플레이팅하고, 37 ℃, 5% CO2에서 밤새 인큐베이션했다. 그 다음, 세포를 제조자의 설명서에 따라 TRANSIT®-LTI를 사용하여 10 또는 100 ng의 각각의 변이체 또는 메트리디아 루시퍼라아제 (Clontech) 플라스미드 DNA로 전달감염시키고, 37 ℃, 5% CO2에서 20시간 동안 인큐베이션했다. 전달감염 후, 배지를 세포로부터 제거하고 검정했다. OgLuc 변이체에 대해, 50 μL의 배지를 50 μL의 검정 시약 (이전에 기재됨; 40 μM PBI-3939)으로 검정했다. 메트리디아 루시퍼라아제에 대해, 배지를 제조 프로토콜에 따라 Ready-to-Glo™ 분비 루시퍼라아제 리포터 시스템 (Clontech)을 사용하여 검정했다. 간단히 말해서, 5 μL의 1X 기질/반응 버퍼를 50 μL의 배지 샘플에 첨가했다. 그 다음, 발광을 이전에 기재된 바와 같이 측정했다 (도 65A-B).
실시예 43 - 살아있는 세포에서 OgLuc 변이체 및 신규 코엘렌테라진의 평가
A. 살아있는 세포에서 OgLuc 변이체 및 PBI-3939의 용도를 시험했다. HEK293 세포를 96-웰 플레이트 중에서 15,000 세포/웰로 플레이팅하고, 37 ℃에서 밤새 성장시켰다. 다음날, 세포를 TRANSIT®-LT1을 사용하여 3개의 복제물로 pF4Ag에서의 hRL 또는 9B8 opt 100 ng으로 일시적으로 전달감염시키고, 37 ℃에서 밤새 성장시켰다. 다음날 성장 배지를 제거하고, hRL 및 9B8 opt 전달감염된 세포 둘 모두에 대해 60 μM VIVIREN™ 살아있는 세포 기질 (Promega Corp.), 60 μM ENDUREN™ 살아있는 세포 기질 (Promega Corp.), 또는 60 μM PBI-3939를 함유하는 배지로 교체했다. 비-전달감염된 세포를 배경 대조군으로서 사용했다. 플레이트를 37 ℃에서 하루 동안 인큐베이션하고, 주기적으로, 즉, 24 시간에 걸쳐 11회 TECAN® GENIOS™ Pro 발광분석기 상에서 측정했다. 도 66A-B는 각각의 기질에 대해 비-전달감염된 세포의 발광에 의해 나눠진 전달감염된 세포의 발광, 즉, 신호 대 배경 비를 보여준다. 상기 데이타는 9B8 opt가 세포를 VIVIREN™, ENDUREN™ 또는 PBI-3939와 함께 인큐베이션함으로써 살아있는 세포 세팅에서 발광했음 (즉, 세포용해되지 않음)을 보여준다. 상기 데이타는 또한 PBI-3939가 배양시 세포를 침투할 수 있고, OgLuc 변이체와 반응하여 발광하며, 따라서 그것이 살아있는 세포 검정에서의 사용과 상용할 수 있음을 입증했다.
OgLuc 변이체를 사용한 살아있는 세포 분석을 입증하기 위해, L27V를 HALOTAG®에 융합시키고 살아있는 세포에서 발현시키고 모니터링했다. U2OS 세포를 이미지화 챔버 웰 내로 40,000 세포/mL로 플레이팅하고, 37 ℃, 5% CO2에서 밤새 인큐베이션했다. 그 다음, 세포를 제조자의 프로토콜에 따라 FUGENE® HD를 사용하여 L27V를 함유하는 플라스미드 pFC14K, pFN21K 또는 pF4Ag (모두 Promega Corp.), 또는 원상태 또는 IL-6 분비 서열을 갖는 L27V를 함유하는 pF4Ag로 전달감염시켰다. 그 다음, 세포를 37 ℃, 5% CO2에서 24시간 동안 인큐베이션했다.
인큐베이션 후, 세포를 HALOTAG® TMR 리간드 (Promega Corp.)에 노출시키고, 이미지화하고, 고정시켰다. 그 다음, 면역세포화학 (ICC)을 HALOTAG® 기술: 이미지화에 포커스 기술 매뉴얼 (Promega Corp.; TM260)에서 ICC 프로토콜에 따라 수행했다. 사용된 일차 항체는 폴리클로날 토끼, 안티-OgLuc 9B8 항체 (1:1000)였다. 사용된 2차 항체는 Alexa 488 콘주게이트된 2차 항체 (녹색)였다 (도 67A). 도 67A는 녹색 형광 통로를 보여주고, 도 67B는 차등 간섭 콘트라스트 (DIC)를 보여준다. 이미지는 37 ℃ + CO2 환경 챔버 (Solent Scientific Ltd., UK)가 갖춰진 Olympus Fluoview FV500 초점공유 현미경 (Olympus, USA)을 사용하여 획득했다.
도 67B-D는 원상태 또는 IL-6 분비 서열에서의 ICC 이미지를 보여준다. 신호 서열 둘 모두는 핵에서 효소의 양을 극적으로 감소시킨다. 세포질에서의 표지의 중단 특성(punctuate nature)은 분비 과정 동안 일어나는 것으로 예측되는 수포 형성을 지시한다. 상기 데이타는 신호 펩타이드의 존재가 핵에서 루시퍼라아제의 양을 감소시킴을 입증한다.
C. 상기에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 OgLuc 변이체 및 신규 기질은 생체적합하다. OgLuc 변이체가 관심 프로모터를 갖는 발현 벡터 내로 클로닝되고 리포터 단백질로서 세포에서 발현되는 리포터 시스템이 구상된다. 그 다음, 세포를 PBI-3939로 처리하며, PBI-3939는 배양시 세포를 침투하고 OgLuc 변이체와 반응하여 발광할 것이다.
세포 침투에 더하여, PBI-3939는 세포 생존력의 측면에서 원상태 코엘렌테라진과 필적하는 생체적합성을 보여준다. 매질에서 원상태 코엘렌테라진의 안정성을 증가시키는 것으로 공지된 화학적 변형을 함유하는 화합물 3939의 버전을 합성할 수 있고, 더 강력한, 살아있는 세포 OgLuc 변이체-기반 리포터 검정에 사용할 수 있다. 살아있는 세포 리포팅 (live cell reporting)의 또 다른 예는 리포터로서의 분비성 OgLuc 변이체의 사용을 포함한다. 원상태 분비 신호 펩타이드 (또는 다른 공지된 분비 신호 펩타이드)는 OgLuc 변이체의 N-말단에 융합될 수 있어서 융합물이 포유류 세포에서 발현되는 경우 그것의 일부가 세포 막을 거쳐 배양 배지 내로 분비될 것이다. 기질의 부가시, 발광한다.
실시예 44 - 단백질 융합 리포터
본 발명의 OgLuc 변이체는 관심 표적 단백질의 세포내 수준을 모니터링하는 방법으로서 표적 단백질에 대한 융합 태그로서 사용될 수 있다. 스트레스 반응 경로, 예를 들면, DNA 손상, 산화 스트레스, 염증에 수반되는 특정 단백질은 그 역할을 조사하는 방법으로서 세포에서 모니터링될 수 있으며, 다양한 유형의 자극이 이들 경로에 작용할 수 있다. 변이체는 또한 표적 단백질의 세포 추적을 모니터링하기 위한 수단으로서 사용될 수 있다. 변이체는 또한 바이러스 게놈 (예를 들면, HIV, HCV)에 융합될 수 있어서 역가 수준, 즉, 감염력이 가능한 항바이러스제로의 처리 후 세포에서 모니터링될 수 있다. 변이체는 (표적 단백질에 더하여) 녹색 형광 단백질 (GFP) 또는 HALOTAG®에 융합될 수 있어서 고발현 클론을 확인하고 국소화 정보를 제공하는데 FACS가 사용될 수 있다.
실시예 45 - 3-성분 융합 단백질 ("샌드위치")에서의 OgLuc 변이체의 평가
3-성분 융합 단백질, 또는 "샌드위치" 융합물은 BRET에 기반한 바이오센서의 최적화를 위해 서로 근접하게 생물발광 및 형광 단백질을 배열하는데 사용될 수 있다.
A. C1 +4 AE, IV, 9B8 및 9F6
OgLuc 변이체 C1+4AE (서열번호: 55 및 56), IV (서열번호: 57 및 58), 9B8 (서열번호: 61 및 62), 및 9F6 (서열번호: 63 및 64), 및 hRL (서열번호: 32 및 33)을, 불량한 융합 파트너인 것으로 공지된 N-말단 Id (Benezra 등, Cell , 61(1):49-59 (1990)), 및 정상화를 위해 사용되는 C-말단 HT7을 갖는 pF4Ag 융합 벡터 내로 클로닝했다. 관심 유전자를 Id 및 HT7 사이에 "샌드위치" 시켰다. 즉, Id-루시퍼라아제-HT7. pF4Ag 또는 pF4Ag 샌드위치 배경에서 변이체 구조물을 함유하는 이. 콜리 용해물을 실시예 26에 기재된 바와 같이 제조하고, 그 다음 실시예 25에 기재된 버퍼 중의 20 μM 원상태 코엘렌테라진으로 검정했다.
도 68은 pF4Ag 또는 pF4Ag 샌드위치 배경 ("샌드") 중의 어느 것에서 각각의 변이체에 대한 발광을 보여준다. 도 69는 Id 및 HT7의 존재로 인한 발광의 폴드-감소를 보여주고, pF4Ag에서의 변이체의 발광을 pF4Ag-샌드위치에서의 변이체의 발광으로 나눔으로써 결정됐다. 최고값을 갖는 샘플은 불량한 융합 파트너 Id에 대해 최고의 민감도를 보여주었다. 변이체 9B8은 샌드위치 맥락에서 가장 밝았다.
B. 9B8 OPT 및 9B8 OPT+K33N
변이체 9B8 opt 및 9B8 opt+K33N을 상기에서 기재된 바와 같이 샌드위치 배경에서 분석했다. 9B8 opt (서열번호: 40 및 41) 및 9B8 opt+K33N (서열번호: 59 및 60)에 대한 샌드위치 구조물을 상기에서 기재된 바와 같이 생성했다. 이. 콜리 용해물을 도 40을 발생시키기 위해 사용된 것과 동일한 검정 버퍼 및 발광분석기를 사용하여 검정하고 측정했다. 도 70은 샌드위치 배경의 존재하에 폴드-감소를 나타내며, 이는 9B8 opt+K33N이 9B8 opt보다 불량한 융합 파트너 Id에 대해 덜 민감함을 지시한다.
C. 23 D2 및 24 C2
변이체 23D4 (NF) 및 24C2 (NF)를 Id-OgLuc-HT7 샌드위치 배경 내로 서브클로닝하고, 이. 콜리에서 검정했다. 샌드위치 변이체, 23D4 (F) (서열번호: 76 및 77) 및 24C2 (F) (서열번호: 78 및 79)를 샌드위치 배경에서의 9B8 opt+K33N (서열번호: 59 및 60)과 비교했다. 표 35는 상기 변이체가 샌드위치 배경 맥락에서의 9B8 opt+K33N과 적어도 동일한 발광을 가졌음을 보여준다.
표 35: 샌드위치 배경에서의 9B8 opt + K33N +170G와 비교한 OgLuc 변이체에 의해 생성된 발광의 증가
Figure pct00100

D. 1F7 및 15 H1
Id-OgLuc-HT7 샌드위치 배경에서의 PCR 라이브러리를 샌드위치 배경에서의 9B8 opt+K33N과 비교하여 발광이 증가하는 추가의 변이체에 대해 스크리닝했다. 그 다음, 선택된 변이체를 HEK293 및 NIH3T3 세포에서 검정했다. 표 36은 이. 콜리 , HEK293 및 NIH3T3 세포에서 샌드위치 변이체의 발광의 폴드-증가, 및 변이체에서 발견된 아미노산 치환을 보여준다. 1F7 (F) (서열번호: 84 및 85) 및 15H1 (F) (서열번호: 86 및 87)은 이. 콜리에서 발광이 적어도 1.3 폴드-증가했다. 1F7 (F)은 HEK293 및 NIH3T3 세포에서 샌드위치 배경에서의 9B8 opt+K33N보다 더 밝았다.
표 36: 샌드위치 배경에서의 9B8 opt + K33N 과 비교한 OgLuc 변이체에 의해 생성된 발광의 증가
Figure pct00101

샌드위치 변이체를 pF4Ag-기반 비-융합 배경 벡터 내로 서브클로닝하여 1F7 (NF) (서열번호: 80 및 81) 및 15H1 (NF) (서열번호: 82 및 83)을 생성하고, 상기에서 기재된 바와 같이 분석하고, 9B8 opt+K33N과 비교했다. 표 37은 이. 콜리 , HEK293 및 NIH3T3 세포에서 변이체의 발광의 폴드-증가를 보여준다. 1F7 (NF) 및 15H1 (F)은 이. 콜리 및 HEK293 세포에서 발광이 적어도 1.3 폴드-증가했다.
표 37: 9B8 opt + K33N +170G와 비교한 OgLuc 변이체에 의해 생성된 발광의 증가
Figure pct00102

E. V2, 9B8 opt + K33N + L27V + K43R + Y68D, 9B8 opt + K33N + L27V + T39T + K43R + S66N 및 L27V
변이체 9B8 opt+K33N+T39T+K43R+Y68D ("V2"; 서열번호: 92 및 93), 9B8 opt+K33N+L27V+K43R+Y68D (서열번호: 339 및 340), 9B8 opt+K33N+L27V+T39T+K43R+S66N (서열번호: 341 및 342), 및 9B8 opt+K33N+L27V+T39T+K43R+Y68D ("L27V"; 서열번호: 88 및 89)를 상기에서 기재된 바와 같이 Id-OgLuc-HT7 샌드위치 배경 내로 서브클로닝하고, 상기에서 기재된 바와 같이 HEK293 및 NIH3T3 세포에서 검정했다. 샌드위치된 변이체에 의해 발생된 발광을 9B9 opt+K33N 샌드위치 (서열번호: 59 및 60)에 의해 발생된 발광과 비교했다 (표 38). L27V 샌드위치 (서열번호: 90 및 91) 및 V2 샌드위치 (서열번호: 94 및 95)는 HEK293 및 NIH3T3 세포에서 발광이 적어도 1.3X 폴드-증가했다.
표 38: 샌드위치 배경에서의 9B8 opt + K33N 과 비교한 샌드위치 배경에서의 OgLuc 변이체에 의해 생성된 발광의 증가
Figure pct00103

변이체 V2, 9B8 opt+K33N+L27V+K43R+Y68D, 9B8 opt+K33N+L27V+T39T+K43R+S66N, 및 L27V의 샌드위치 및 비-샌드위치 버전을 실시예 37에 기재된 바와 같이 HEK293 및 NIH3T3 세포 중에서 검정했다. 비-샌드위치된 변이체에 의해 발생된 발광을 샌드위치된 변이체에 의해 발생된 발광과 비교했다 (표 39). 표 39에 나타낸 데이타는 포유류 세포에서 9B8 opt+K33N 샌드위치에 대한 발광의 폴드-감소가 도 70에 나타낸 이. 콜리 세포에서의 것보다 더 적었음을 지시한다.
표 39: 샌드위치 배경의 존재하에 OgLuc 변이체의 발광의 폴드 -감소
Figure pct00104

실시예 46 - 다중화
변이체 9B8 opt를 발현하는 이. 콜리의 용해물을 실시예 27에서 이전에 기재된 바와 같이 제조하고 페놀 레드 + 0.1% PRIONEX®이 들어있지 않은 DMEM 속에 1000-배 희석하였다. 6.3 ㎍/mL의 정제된 대유동 방아벌레 루시퍼라아제 및 변이체 9B8 opt를 발현하는 이. 콜리 용해물을 함유하는 샘플로부터의 발광을 변형된 DUAL-GLO®루시퍼라아제 검정 시스템(Promega Corp.)을 사용하여 검출하였다. 20 μM 코엘렌테라진-h를 함유하는 DUAL-GLO® STOP&GLO® 시약 및 20 μM PBI 3939를 함유하는 DUAL-GLO® STOP&GLO® 시약을 제조자의 프로토콜에 따라 사용하여, 단일 샘플로부터의 유동 방아벌레 루시퍼라아제 및 OgLuc 변이체 9B8 루시퍼라아제를 검출하였다. 3회 반복을 수행하였다.
발광을 Turner MODULUSTM 발광분석기 위에서 검출하였다. 표 40은 대유동 방아벌레 루시퍼라아제("방아벌레")에 의해 생성된 평균 발광, 및 9B8 opt("Ogluc")와 코엘렌테라진-h("coel h") 또는 PBI-3939("3939")에 의해 생성된 발광을 나타낸다. 표준 편차("+/-") 및 변이 계수("CV")를 또한 나타낸다. "비 코엘렌테라진" 조절을 수행하여 코엘렌테라진의 부재하에서 DUAL-GLO® 루시퍼라아제 검정 시스템의 DUAL-GLO® STOP&GLO® 시약에 의한 대유동 방아벌레 시그날의 켄칭의 양을 나열하였다. "비 코엘렌테라진" 대조군은 349-배 켄칭을 수득하였다. 표 40은, 대유동 방아벌레 및 OgLuc 변이체 9B8 둘다로부터의 큰 발광 신호가 단일 샘플 속에서 검출되었음을 나타낸다. 이는, 각각의 신호가 2-단계 검정에서 순차적으로 판독될 수 있으며, 제1 효소로부터의 신호가 제2 효소로부터의 신호에 대해 유의미하게 기여하지 않도록 충분히 켄칭될 수 있음을 입증한다.
표 40. 변형된 DUAL - LUCIFERASE TM 리포터 검정을 사용한 대유동 방아벌레 및 9B8 opt 루시퍼라아제에 의해 생성된 평균 발광
Figure pct00105

B. 위에서 기술된 다중 리포터 검정은 역으로 수행될 수 있음을, 즉, OgLuc 발광이 먼저 검출되고, 켄칭되고 제2 발광이 검출될 수 있음을 입증하기 위하여, 예를 들면, 대유동 방아벌레 또는 개똥벌레 루시퍼라아제, 다양한 레닐라 루시퍼라아제 억제제(참고 미국 공개 출원 번호 2008/0248511)를 OgLuc를 또한 억제하는 이들의 능력에 대해 스크리닝하였다. 이전에 확인된 2개의 상이한 레닐라 억제제, PBI-3077 및 1424를 다양한 농도(참고 표 41)에서 변이체 9B8(위에서와 같이 희석함)을 발현하는 이. 콜리 용해물 샘플 및 100 mM MES pH 6.0, 1 mM CDTA, 150 mM KCl, 35 mM 티오우레아, 2 mM DTT, 0.25% TERGITOL® NP-9 (v/v), 0.025% MAZU® DF 204, 및 20μM PBI-3939를 함유하는 버퍼에 가하였다. 발광을 GLOMAX®-Multi 마이크로플레이트 발광분석기(Promega Corp.; 또한 Turner MODULUSTM으로 공지됨)를 사용하여 측정하는 것을 제외하고는 이전에 기술된 바와 같이 측정하였다. 표 41에 나타낸 바와 같이, 화합물 둘다는 OgLuc 발광을 억제할 수 있었다. 이는, OgLuc 변이체가 또 하나의 루시퍼라아제를 사용하는 리포터 검정에서 다중화될 수 있음을 입증하며 여기서 OgLuc 변이체로부터의 발광이 리포터 검정에서 우선 검출된다.
표 41. 기질로서 PBI -3939를 사용하는 9B8 opt 를 발현하는 박테리아 용해물에 의해 생성된 발광에 있어서 PBI -3077 및 PBI -1424의 효과
Figure pct00106

C. OgLuc 변이체 L27V 및 개똥벌레 루시퍼라아제 (Fluc) 사이의 스펙트럼 분할을 분석했다. 페놀 레드 + 0.1% PRIONEX®가 들어있지 않은 DMEM 중 정제된 L27V(이전에 기재됨; 9.54 pM)를 20 μM PBI-3939를 함유하는 검정 시약(이전에 기재됨)과 혼합하였다. 동일한 배지 중 정제된 개똥벌레 루시퍼라아제 효소(QUANTILUM® 재조합 루시퍼라아제; Promega Corp.; 271 ng/mL)를 시험 시약(100 mM HEPES, pH 7.4, 1 mM CDTA, 16 mM MgSO4, 1% TERGITOL® NP-9 (v/v), 0.1% MAZU® DF 204, 5 mM ATP, 50 mM DTT, 333 μM 루시페린)과 혼합하였다. 1X 레닐라 루시퍼라아제 검정 세포용해 버퍼(Promega Corp.) 중 정제된 레닐라 루시퍼라아제 (5 ng/mL GST-레닐라)를 레닐라 루시퍼라아제 검정 버퍼 중 10.5 μM 원상태 코엘렌테라진과 혼합하였다. 발광을 L27V 및 Fluc에 대해 3분 후 및 레닐라 루시퍼라아제에 대해 10분 후 측정하였다(도 71).
D. 또 하나의 예로서, 본 발명의 OgLuc 변이체를 전사 리포터로서 사용하여 에쿼린 또는 cAMP 순환 순열 개똥벌레 루시퍼라아제 바이오센서(또는 둘 모두 동시에)와 쌍을 이루어 단일 샘플 중 다중 경로, 예를 들면, 칼슘의 검출 및/또는 측정을 위해 에쿼린을, cAMP의 검출 및/또는 측정을 위해 바이오센서를, 및 다운스트림 유전자 발현의 모니터링을 위해 OgLuc 변이체를 검출할 수 있었다.
E. 본 발명의 OgLuc 변이체와의 다중화를 위한 다른 예는 다음을 포함한다:
i) 본 발명의 OgLuc 변이체 및 개똥벌레 루시퍼라아제를 함유하는 구조물을 사용하여 세포를 전달감염시킨다. 전달감염 후, 제1 시약을 가하여 세포를 용해시킬 뿐만 아니라 기질을 제공하여 제1 루시퍼라아제에 대한 발광을 생성시킬 수 있다. 제1 루시퍼라아제로부터의 발광을 이후에 측정할 수 있다. 이후에, 제2 시약을 가하여 제1 루시퍼라아제로부터의 발광을 켄칭시킬 뿐만 아니라 기질을 제공하여 제2 루시퍼라아제로부터의 발광을 생성시켰다. 이후에, 제2 루시퍼라아제로부터의 발광을 측정할 수 있다. 우선 측정하기 위한 루시퍼라아제의 선택은 제2 시약를 사용하여 제1 루시퍼라아제로부터의 발광을 켄칭하는 능력에 의존할 수 있다. 당해 실시예에서, 높은 농도의 루시페린(개똥벌레 루시퍼라아제에 대한 기질)이 OgLuc 변이체 활성을 억제하는 것으로 밝혀졌으므로 OgLuc 변이체로부터의 발광을 우선 측정할 수 있다.
ii) 본 발명의 OgLuc 변이체 및 개똥벌레 루시퍼라아제를 함유하는 구조물을 사용한 세포의 전달감염. 전달감염 후, 생 세포 기질을 함유한 제1 시약을 가하여제1 루시퍼라아제에 대한 발광을 생성할 수 있다. 이후에, 제1 루시퍼라아제로부터의 발광을 측정할 수 있다. 이후에, 제2 시약을 용해물 세포에 가하고, 제1 루시퍼라아제로부터의 발광을 켄칭하고 기질을 제공하여 제2 루시퍼라아제로부터의 발광을 생성할 수 있다. 이후에, 제2 루시퍼라아제로부터의 발광을 측정할 수 있다. 이는, 세포 용해물이 생 세포 기질의 사용을 추가로 제한할 것이며 제1 루시퍼라아제로부터의 발광의 켄칭에 기여할 것이라는 것을 제외하고는 i)와 유사하다.
iii) 본 발명의 OgLuc 변이체 및 개똥벌레 루시퍼라아제를 함유하는 구조물을 사용한 세포의 전달감염. 전달감염 후, 기질을 함유하여 루시퍼라아제 둘다로부터 발광을 생성하지만, 각각의 루시퍼라아제로부터의 발광이 스펙트럼적으로 상이한 1개의 시약을 가할 수 있었다. OgLuc 변이체로부터의 방출 최대치는 대략 460 nm이고, 개똥벌레 루시퍼라아제에 대한 특정 기질, 예를 들면, 5'-클로로루시페린 및 5'-메틸루시페린은 대략 610 nm의 방출 최대치를 수득할 수 있다. 따라서, 청색 방출로부터 적색 방출로의 오우버랩이 있을 수 있다고 해도, 적색 방출의 청색 방출로의 오우버랩이 없음은, 수학적 수정이 거의 또는 전혀 포함되지 않을 수 있음을 제안한다.
iv) 본 발명의 OgLuc 변이체 및 개똥벌레 루시퍼라아제를 함유하는 구조물을 사용한 세포의 전달감염. 전달감염 후, 생 세포 기질들을 함유한 1개의 시약을 가하여 루시퍼라아제 둘다로부터 발광을 생성할 수 있다. 당해 예의 유일한 특징은, 개똥벌레 발광이 살아있는 세포 검정 온도, 예를 들면, 37℃에서 적색-편이(red-shift)하는 경향이 있다는 것이며, 따라서, 수많은 상이한 루시페린 유도체를 개똥벌레 루시퍼라아제에 대한 살아있는 세포 기질로서 선택하여 OgLuc 변이체의 것과는 스펙트럼적으로 상이한 발광을 생성할 수 있었다.
v) 본 발명의 OgLuc 변이체 및 레닐라 루시퍼라아제를 함유하는 구조물을 사용한 세포의 전달감염. 전달감염 후, 제1 시약을 가하여 세포를 용해할 뿐만 아니라 뿐만 아니라 기질을 제공하여 제1 루시퍼라아제에 대한 발광을 생성할 수 있었다. 이후에, 제1 루시퍼라아제로부터의 발광을 측정할 수 있었다. 이후에, 제2 시약을 가하여 제1 루시퍼라아제로부터의 발광을 켄칭할 뿐만 아니라 기질을 제공하여 제2 루시퍼라아제로부터의 발광을 생성할 수 있었다. 이후에 제2 루시퍼라아제로부터의 발광을 측정할 수 있었다. 우선 측정하기 위한 루시퍼라아제의 선택은 단지 제2 시약을 사용하여 제1 루시퍼라아제로부터의 발광을 켄칭하는 능력에 의존할 수 있었다. 당해 예의 경우 OgLuc 변이체 또는 레닐라 루시퍼라아제 발광을 켄칭하기 위한 억제제를 사용하는 것이 요구될 수 있다.
vi) 본 발명의 OgLuc 변이체 및 방아벌레 루시퍼라아제를 함유한 구조물을 사용한 세포의 전달감염. 전달감염 후, 기질들을 함유하여 루시퍼라아제 둘다로부터 발광을 생성하지만, 방아벌레 루시퍼라아제가 원상태 루시페린과 함께 적색-편이 발광을 생성하므로 각각의 루시퍼라아제로부터의 발광은 스펙트럼적으로 상이하다.
실시예 47 - 순환 순열
L27V 변이체의 2개의 순환 순열 (CP) 버전: CP84 및 CP95를 제조하였다. 번호 지정은 N-말단 잔기를 말한다(예를 들면, "84"는 CP 버전의 신규 N-말단을 나타낸다).
순환 순열을 생성하기 위하여, 선행의 N- 및 C-말단을 링커없이 ("CP84 링커 부재"(서열번호: 97 및 98) 및 "CP95 링커 부재"(서열번호: 105 및 106)) 또는 5 ("CP84 5AA 링커"(서열번호: 99 및 100) 및 "CP95 5AA 링커"(서열번호: 107 및 108), 10("CP84 10AA 링커"(서열번호: 101 및 102) 및 "CP95 10AA 링커"(서열번호: 109 및 110), 또는 20("CP84 20AA 링커"(서열번호: 103 및 104) 및 "CP95 20AA 링커"(서열번호: 111 및 112) 아미노산 링커, (GSSGG)n (서열번호: 113)과 함께 N- 및 C-말단 사이에 융합시킨다(주석: L27V는 N-말단에서 페닐알라닌으로 출발하며, 즉, MVF이다. "MV"는 "링커 부재" 구조물에 존재하지만, "링커" 구조물들에는 존재하지 않는다). 순환 순열시, CP L27V 변이체는 pF1K 벡터내로 클로닝되었다. 이후에, 이. 콜리 세포를 CP 벡터로 전달감염시키고 이전에 기재된 표준 웍 어웨이(walk away) 유도 프로토콜을 사용하여 최소 배지 속에서 성장시켰다. 각각의 CP 구조물의 경우, 세포를 96-웰 플레이트 중 8개 웰 속에서 성장시켰다. 유도 후, 각각의 샘플로부터의 8개 웰들을 혼주시키고, 10 μL를 40 μL의 세포용해 버퍼 (100 mM MES pH 6.0, 0.3X PLB, 0.3 mg/mL 리소자임, 0.003 U/μL DNase I, 및 0.25% TERGITOL® NP-9 (v/v)) 속에 용해시켰다. 이후에, 용해물을 세포용해 버퍼 속에 1:100(링커를 지닌 CP 버전) 또는 1:1000(비-CP 버전)으로 희석시켰다. 링커가 없는 CP 버전은 희석시키지 않았다. 용해물 또는 용해물 희석물을 50 μL의 검정 시약(이전에 기재됨) 속에서 3회 검정하였다. 발광을 이전에 기재된 바와 같이 측정하였다(도 72).
실시예 48 - 순환 순열에 대한 추가 부위의 확인
추가 CP 부위들을 확인하고, 루시퍼라아제 활성에 있어서 CP 부위들의 영향을 측정하고 단편들 사이의 "테써(tether)"의 용도를 시험하기 위해, CP 구조물들을 L27V 변이체의 대략 매 3번째 부위(즉, 아미노산)에서 제조된 순환 순열을 사용하여 제조하였다(참고: 도 73E). 당해 분야의 숙련가는, 다른 부위들, 예를 들면, 제1 및 제2 부위가 또한 시험될 수 있고 본원에 기술된 방법을 사용하여 본원에 기술된 순환 순열 OgLuc 변이체들에서 사용될 수 있음을 이해할 수 있었다. 예를 들면, L27V 변이체는 순환 순열, 특히 비교적 큰 결합 도메인이 치환된 단편(예를 들면 cAMP / RIIbB -기반 센서들) 사이에 위치하는 상황들에 대해 특히 내성인 것으로 밝혀졌다. 각각의 부위에서, 링커 GSSGG-GSSGG-EPTT-ENLYFQS-DN-GSSGG-GSSGG(서열번호: 328)을 첨가했다. 밑줄 표시 서열은 TEV 프로테아제 인지 부위를 말한다. 링커의 목적은 2개의 변이체 단편들 사이에 충분히 긴 테써를 제공함으로써 이들이 기능적 루시퍼라아제 효소를 생산하도록 하는 방식으로 연합될 수 있도록 하는 것이다. TEV 프로테아제 인지 부위를 사용하여 테써(TEV 프로테아제의 존재하에)를 파괴하는 수단들을 제공함으로써 유지 활성에 대한 이의 중요성은 시험할 수 있다. TEV 프로테아제 인지 부위의 사용은, 어떠한 CP 부위가 단백질 상보성 검정 (PCA) 또는 바이오센서 적용(예를 들면, CP 부위들 사이에 반응 요소의 삽입)에 유용할 수 있는지를 예측하기 위한 유형을 생성하였다.
TEV 절단 이전에 관찰된 활성은, 변이체 효소의 2개의 반분이 테써드 상태로 행동하는 방법을 나타낸다. 인지 부위에 대한 TEV 결합은 절단을 유발함으로써, 변이체 효소의 2개의 반분을 분리한다. TEV로 절단된 샘플은 유도되지 않은 상태를 나타내며 얼마나 많은 배경의 지표를 예측할 수 있었는지를 제공한다. TEV 절단 후 보다 낮은 활성은, 2개의 반분이 유도없이 함께 올 수 없음을 나타낸다. TEV 절단 후 큰 활성 손실을 나타내는 샘플은 PCA 및 바이오센서 적용시 기능할 수 있는 부위들을 나타낸다. PCA의 경우에, 변이체 효소의 2개의 반분을 유도된 결합 현상 후 함께(테써) 합칠 수 있는 결합 파트너들에 융합될 수 있다. 바이오센서의 경우, 2개의 반분은, 결합-유도된 구조적 변화가 발생한 후 "테써"될 수 있다. PCA에 대한 1가지 예는 FRB에 대한 L27V의 1개의 반분 및 FKBP에 대한 다른 반분에 융합시키는 것일 수 있다. 2개의 반분들은 라파마이신에 대한 노출과 함께 근접시킬 수 있다[참조: Banaszynski et al., J. Am. Chem. Soc, 127(13):4715-4721(2005)]. 바이오센서 적용의 1가지 예는 사이클릭 AMP 결합 도메인(예를 들면, RIIbB)를 CP 부위들 사이에 삽입시키고 결합 도메인에 사이클릭 AMP를 결합시킴으로써 구조적 변화를 유도할 수 있다.
각각의 CP L27V 구조물이 제조되면, CP 효소를 밀 배아, 이. 콜리 및 포유류 세포들내에서 발현시키고 TEV 프로테아제로 분해하여 루시퍼라아제 활성을 시험하였다.
1. 밀 배아에서의 분석의 경우, CP 구조물을 TnT® T7 커플링된 밀 배아 추출물 시스템(Promega Corp.)을 사용하여 제조 설명서에 따라 발현시켰다. 이후에, TnT® 반응물을 1X PBS + 0.1% 젤라틴 속에서 1:100으로 희석시키고, 20 μL를 25 μL의 TEV 반응 시약(5 μL의 20X ProTEV 버퍼 (Promega Corp.), 1 μL의 100 mM DTT, 및 2 μL의 10 U ProTEV Plus (Promega Corp.))에 가하였다. 소화 반응물의 용적을, 물을 사용하여 100 μL가 되도록 하고 30℃에서 60분 동안 인큐베이션하였다. TEV 프로테아제를 함유하지 않는 대조군 샘플을 또한 제조하였다. 이후에, 10 μL의 분해된 샘플을 40 μl의 DMEM에 가하여 최종 용적이 50 μL가 되도록 하고 50 μL의 검정 시약(이전에 기재된 바와 같이; 100 μM PBI-3939) 속에서 검정하였다. 발광을 이전에 기재된 바와 같이 측정하였다(도 73a-d).
2. 포유류 세포내에서 분석을 위해, HEK293 세포를 역방향 전달감염 프로토콜을 사용하여 CP L27V 변이체로 전달감염시켰다. 간단히 말해서, 1 ng의 CP L27V 플라스미드 DNA를 1μg의 담체 DNA와 혼합하고 12-웰 플레이트의 웰내 세포에 가하였다. 이후에, 세포를 16시간 동안 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션하였다. 이후에, 세포 용해물을 세포로부터 배지를 제거하고, 이들을 1X PBS 속에서 세척하며, 1 mL의 1X PLB를 가하여 제조하였다. 이후에, 용해물을 0.1% 젤라틴이 들어있는 1X PBS 속에서 1:10으로 희석시켰다. 이후에, 40 μL의 희석된 용해물을 TEV 프로테아제 분해시 상기에서 기재된 바와 같이 사용하였다. 10 μL의 분해물을 페놀 레드의 부재하에 40μL의 DMEM과 혼합하고, 50 μL의 검정 시약(이전에 기재됨; 100 μM의 PBI-3939)을 첨가하였다. 발광을 이전에 기재된 바와 같이 측정하였다(도 73h).
3. 이. 콜리내에서 분석을 위해, CP L27V 변이체를 발현하는 이. 콜리 배양물을 밤새 30℃에서 성장시켰다. 이들 배양물을 사용하여(LB + 항생제 속에서 1:100으로 희석시킴) 궁극적인 유도를 위한 신규 종균 배양물들(starter cultures)을 제조하였다. 종균 배양물들을 37℃에서 2.5시간 동안(OD600는 대략 0.5이다) 진탕시켜 인큐베이션하였다. 람노스(0.2%의 최종 농도)를 첨가하고, 배양물들을 25℃로 옮기고, 18시간 동안 진탕시키면서 인큐베이션하였다.
용해물을 생성하기 위하여, 50μL의 0.5X FASTBREAKTM 세포 용해물 시약 (Promega Corp.)을 950 μL의 유도된 배양물에 가하고, 혼합물을 30분 동안 22℃에서 인큐베이션하였다. 이후에, 50 μL의 용해된 배양물을 TEV 프로테아제로 상기에서 기재된 바와 같이 분해하고 실온에서 2시간 동안 인큐베이션하였다.
분석하기 위해, 용해물을 HaloTag® 포유류 정제 버퍼(Promega Corp.) 속에서 1:10,000으로 희석시키고, 50 μL를 50 μL의 검정 시약(이전에 기재된 바와 같음; 100 μM PBI-3939) 속에서 검정하였다. 기저 및 TEV 유도된 발광을 5분 시점(도 73f)에서 측정하고 반응(도 73g)을 이전에 기재된 바와 같이 측정하였다.
도 73a 내지 d는, 밀 배아 추출물에서 발현된 다양한 CP-TEV 프로테아제 L27V 구조물들의 기초 발광을 나타낸다. 도 73e는 TEV 프로테아제에 대해 반응하는(반응은 배 감소이다) 유도된 CP 변이체를 요약하며, CP 변이체가 TEV 센서들로 사용될 수 있음을, 즉, 이들이 "테써 의존성"의 지표임을 나타낸다. 적어도 1.2-배 변화를 나타내는 변이체를 또한 스튜던츠 시험(쌍으로 되지 않은 p 값; 0.03의 신뢰 수준)을 사용하여 유의성인 것으로 추가로 입증되었다. 이들 결과는, 각각의 CP 변이체가 발광을 생성할 수 있음을 나타낸다.
다양한 CP-TEV 프로테아제 L27V 구조물이 HEK293 세포내에서 발현되었다. 이전에 기재된 역방향 전달감염 프로토콜을 사용하여 1 ng DNA /웰을 1 μg의 담체 DNA로 전달감염시켰다. 각각의 세포 샘플을 12 웰 플레이트내에서 1 mL의 배지에서 성장시켰다. 세포 용해물을 배지를 제거하고 1 mL의 1X PLB를 첨가하여 제조하였다. 샘플을 1X PBS+0.1% 젤라틴 속에서 1:10으로 희석시켰다. 40 μL의 희석 샘플을 TEV 소화를 위해 설정하였다. 10 μL의 소화 반응물을 이전에 기재된 바와 같은 페놀 레드 및 50 μL의 PBI-3939가 들어있지 않은 40 μL의 DMEM에 가하였다. 도 73h는 HEK293 세포들내에서 발현된 다양한 CP-TEV 프로테아제 L27V 구조물들의 발광을 나타낸다.
도 73a 내지 h의 데이타는, L27V 변이체가 다양한 부위들에서 순환 순열될 수 있으며, 상이한 부위들은 테써 길이와 관련하여 상이한 의존성들을 가짐을 입증한다. 포유류 세포 데이타 및 밀 배아 데이타는 TEV 절단에 있어서 유사한 배 감소를 나타낸다. 테써에 보다 의존성인, 즉, TEV 프로테아제 절단에 대해 보다 민감성인 CP L27V 변이체는 PCA를 위한 강력한 후보물이다. 테써에 의존성이지 않은 CP L27V 변이체는 자기-상보성/이량체화 검정에 대한 강력한 후보물들이다.
실시예 49 - 단백질 상보성 검정
단백질 상보성 검정(PCA)은 2개의 생분자들, 예를 들면, 폴리펩타이드들의 상호작용을 검출하기 위한 수단을 제공한다. PCA는 서로 근접한 경우 기능적인, 활성 단백질로 재구성할 수 있는 동일한 단백질, 예를 들면, 효소의 2개의 단편들을 이용한다. 본 발명의 OgLuc 변이체는 분리에 대해 내성인 부위(들)에서 2개의 단편들로 분리될 수 있다. 이후에, 분리된 OgLuc 변이체의 각각의 단편은 상호작용하는 것으로 여겨지는 한 쌍의 관심 폴리펩타이드들, 예를 들면, FKBP 및 FRB 중 하나에 융합될 수 있다. 2개의 관심 폴리펩타이드들이 실제로 상호작용하는 경우, 이후에 OgLuc 단편들은 서로 근접하게 되어 기능적인, 활성 OgLuc 변이체를 재구성한다. 재구성된 OgLuc 변이체의 활성은 이후에 천연 또는 공지된 코엘렌테라진 또는 본 발명의 신규 코엘렌테라진을 사용하여 검출하고 측정할 수 있다. 또 하나의 예에서, 분할된 OgLuc 변이체는 lac-Z에 대해(Langley et al., PNAS, 72:1254-1257 (1975)) 또는 리보뉴클레아제 S(Levit and Berger, J. Biol. Chem., 251:1333-1339 (1976))와 유사한 보다 일반적인 상보성 시스템에 사용될 수 있다. 구체적으로, 또 하나의 OgLuc 변이체 단편("B")와의 상보체에 대해 공지된 OgLuc 변이체 단편("A"로 지정됨)을 표적 단백질에 융합시킬 수 있으며, 수득한 융합체를 단편 B를 함유하는 세포 또는 세포 용해물내에서 발광을 통해 모니터링할 수 있다. 단편 B의 공급원은 동일한 세포(염색체 또는 또 하나의 플라스미드에서)일 수 있거나, 이는 또 하나의 세포로부터 기원한 용해물 또는 정제된 단백질일 수 있다. 당해 동일한 융합 단백질((단편 A)는 단편 B와 폴리펩타이드, 예컨대 고형 지지체에 부착할 수 있는 HALOTAG® 사이의 융합체를 사용하여 포획하거나 고정시킬 수 있다. 이후에, 발광을 사용하여 성공적인 포획을 입증하거나 포획된 물질의 양을 정량할 수 있다. 단백질 상보성을 위한 방법은 미국 공개 출원 번호 제2005/0153310호에 따라 수행할 수 있으며, 이는 참고로 본원에 통합되어 있다.
1. 9B8 opt PC구조체들은 하기와 같이 제조되었다:
-p9B8PCA 1/4 = pF5A/Met-[9B8 opt (51-169)]-GGGGSGGGSS-FRB (서열번호: 331 및 332) & pF5A/FKBP-GGGSSGGGSG-[9B8 opt (1-50)] (서열번호: 337 및 338)
-p9B8PCA 1/2 = pF5A/Met-[9B8 opt (51-169)]-GGGGSGGGSS-FRB (서열번호: 331 및 332) & pF5A/[9B8 opt (1-50)]-GGGGSGGGSS-FRB (서열번호: 333 및 334)
-p9B8PCA 2/3 = pF5A/[9B8 opt (1-50)]-GGGGSGGGSS-FRB (서열번호: 333 및 334) & pF5A/FKBP-GGGSSGGGSG-[9B8 opt (51-169)] (서열번호: 335 및 336)
-p9B8PCA 3/4 = pF5A/FKBP-GGGSSGGGSG-[9B8 opt (51-169)] (서열번호: 335 및 336) & pF5A/FKBP-GGGSSGGGSG-[9B8 opt (1-50)] (서열번호: 337 및 338)
PCA 구조체들은 96-웰 플레이트내의 HEK293 세포(15,000세포/웰)내로 FUGENE® HD를 사용하여 제조자의 설명서에 따라 전달감염시켰다. 이후에, 세포를 밤새 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션하였다. 전달감염 후, 세포상의 배지를 10% FBS가 들어있는 CO2-독립 배지로 대체하였다. 이후에, 20 μM PBI-3939가 들어있는 검정 시약을 첨가하고, 발광을 Varioskan 플래시 위에서 28℃에서 측정하였다. 이후에, 100 μM의 라파마이신을 웰에 가하고, 발광을 1시간 동안 지속적으로 측정하였다. 배 반응을 주어진 웰의 모든 발광을 동일한 웰에 대한 전-라파마이신 처리 발광으로 나누어 계산하였다(도 74).
2. PCA에서 OgLuc 변이체의 용도를 입증하기 위하여, L27V02A 변이체 단편들을 FKBP 또는 FRB로 보충하고, FKBP과 FRB 사이의 상호작용을 측정하였다.
표 42는 제조하여 시험한 다양한 단백질 상보성(PCA) 구조물들을 나열한다. "2/3"은 변이체 상보성 쌍들을 지정하며, 여기서 1) L27V02A의 "올드(old)" C-말단("올드" = L27V02A의 원래의 C-말단)은 FKBP의 C-말단 파트너이고; 2) L27V02A의 "올드" N-말단은 FRB의 N-말단 파트너이다. "1/4"는 변이체 쌍들을 지정하며, 여기서 1) L27V02A의 "올드" N-말단은 FKBP의 C-말단 파트너이고; 2) L27V02A의 "올드" C-말단은 FRB의 N-말단 파트너이다. 모든 구조물들의 경우, FKBP는 L27V02A 단편의 N-말단에 위치하며, FRB는 L27V02A 단편의 C-말단에 위치하였다. 예를 들면, PC구조물들은 157번 위치(참고: 표 42, "2/3" 및 "1/4" #s 11 및 12번 위치(서열번호: 288-295)), 103번 위치(참고: 표 42, "2/3" 및 "1/4" #s 9 및 10(서열번호: 296-303)), 및 84번 위치(참고: 표 42, "2/3" 및 "1/4" #s 7 및 8(서열번호: 304-315))에서 분할 부위들로 제조되었다. 다른 PCA 구조물들도 제조되었다(서열번호: 343-426 및 428-440) (참고 표 21).
표 42
Figure pct00107

표 21
Figure pct00108

Figure pct00109

Figure pct00110

표 42에 기술된 상보성 쌍들을 이전에 기재된 바와 같이 pF4Ag 벡터내로 클로닝하였다. 이후에, PCA 구조물들(900 μL)을 토끼 망상적혈구 용해물(RRL; Promega Corp.) 또는 밀 배아 추출물 (Promega Corp.)내에서 제조 설명서에 따라 발현시켰다. 각각의 PCA 쌍에 대한 1.25 μL의 발현 반응물을 10 μL의 2X 결합 버퍼(100 mM HEPES, 200 mM NaCl, 0.2% CHAPS, 2 mM EDTA, 20% 글리세롤, 20 mM DTT, pH 7.5) 및 7.5 μL의 물과 혼합하고, 18 μL를 96-웰 플레이트의 웰로 이전시켰다. 2 μL의 5 μM 라파마이신(최종 농도 0.5 μM)을 첨가하고 10분 동안 실온에서 인큐베이션하였다.
인큐베이션 후, 100 μL의 PBI-3939(검정 버퍼에서 1X로 희석된 50X 스톡)를 3 분 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 발광을 이전에 기재된 바와 같이 측정하였다(도 76a-b: 밀 배아; 도 76c-d: 토끼 망상적혈구; 도 76e-f: 무세포 시스템[당해 시스템 "WG 또는 RRL"]; 도 76g: HEK293 세포들).
도 76a 내지 g는 다양한 단백질 상보성(PCA) L27V 쌍들의 발광을 나타낸다: 각각의 쌍의 1개의 L27V 단편을 FKBP 또는 FRB에 기술된 바와 같은 2/3 배열(도 76a 및 76c) 또는 1/4 배열(도 76b 및 76d)을 사용하여 융합시키고, FKBP 및 FRB의 상호작용을 밀 배아 추출물(도 76a 및 76b) 및 토끼 망상적혈구 용해물 (RRL)(도 76c 및 76d)에서 모니터링하고; 다양한 단백질 상보성 (PCA) 음성 대조군 (도 76e)의 발광을 모니터링하였다. 다양한 단백질 상보성 L27V의 발광을 무세포 시스템 (RRL)(도 76f) 및 HEK293 세포(도 76g)내에서 1/4 배열을 사용하여 측정하였다. 도 76a-g에서 데이타는, 다양한 상이한 결실들, 즉, L27V 변이체의 작은 단편들이 기능적임을 입증한다.
3. 세포 기반 PCA에 대한 PCA 구조물들의 용도를 입증하기 위하여, 구조물들을 HEK293 세포들내로 전달감염시키고 PBI-4377로 분석하였다. 각각의 PCA 쌍(6, 12, 55, 84, 및 103)으로부터의 플라스미드 DNA (5 ng)를 40 ng의 담체 DNA (pGEM-3fz) 및 5 μL의 Opti-MEM®과 혼합하고 실온에서 5분 동안 인큐베이션하였다. 이후에, FUGENE® HD (0.15 μL)을 다시 첨가하고 실온에서 15분 동안 인큐베이션하였다. DNA 전달감염 혼합물들을 10% FBS(항생제 없음)가 들어있는 DMEM 중 100 μL의 HEK293 세포들(1.5x105 세포들/mL)에 가하고, 96-웰 플레이트의 웰로 전달시키고, 밤새 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션하였다.
전달감염 후, 배지를 제거하고 CO2-독립 배지를 20 μM 또는 50X PBI-4377로 대체하고 37℃에서 CO2 조절없이 2시간 동안 인큐베이션하였다. 발광을 측정하고, 10 μL의 라파마이신 첨가하고, 발광을 다시 매 2분마다 2시간 동안 측정하였다(도 76a 내지 c).
4. 단백질-단백질 상호작용들의 억제제들을 확인하기 위한 PCA구조물들의 용도를 입증하기 위해, 당해 실시예의 #2에 기술된 구조물들을 사용하였다.
표 42에 기술된 상보성 쌍들, 103 "2/3", 157 "2/3", 103 "1/4" 및 157 "1/4"를 이전에 기재된 바와 같이 pF4Ag 벡터내로 클로닝하였다. 이후에 PCA 구조물들(25 μL)을 토끼 망상적혈구 용해물 (RRL; Promega Corp.)내에서 제조 설명서에 따라 발현시켰다. 각각의 PCA 쌍에 대한 1.25 μL의 발현 반응물들을 10 μL의 2X 결합 버퍼(100 mM HEPES, 200 mM NaCl, 0.2% CHAPS, 2 mM EDTA, 20% 글리세롤, 20 mM DTT, pH 7.5) 및 7.5 μL의 물과 혼합하고, 16.2 μL를 96-웰 플레이트의 웰로 전달하였다. 라파마이신을 다양한 양의 FK506로 시험하였다. 반응물에, FRB-FKBP 결합 억제제, FK506 (10X)을 첨가하고, 반응물을 실온에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 15 nM의 라파마이신 (10X 스톡 용액)을 가하여 1.5 nM 라파마이신의 최종 농도를 수득하고 2시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 100 μL의 PBI-3939 (검정 버퍼 속에 1X로 희석된 50X 스톡)를 3분 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 발광을 GLOMAX® 발광분석기 상에서 측정하였다. 도 77은, 본원에 기재된 PCA 구조물들을 사용하여 단백질-단백질 상호작용들의 억제제들을 확인할 수 있음을 입증한다.
5. 용해물 양식의 PCA 구조물들의 용도를 입증하기 위하여, 상보성 쌍들, 103 "2/3", 157 "2/3", 및 103 "1/4"를 HEK293 세포내로 전달감염시키고 PBI-3939로 분석하였다. 각각의 PCA 쌍으로부터 0.5 ng 플라스미드를 5 μL의 OPTI-MEM® 및 49 ng pGEM-3zf(Promega Corp.)와 혼합하였다. 샘플 혼합물을 실온에서 5분 동안 인큐베이션하였다. 이후에 0.15 μL의 FUGENE® HD를 각 샘플 혼합물에 가하고 실온에서 15분 동안 인큐베이션하였다. 10% FBS(항생제 없음)가 들어있는 DMEM 중 100 μL의 HEK293 세포들을 1.5x105 세포들/mL 농도에서 각각의 샘플 혼합물에 가하였다. 이후에, 세포 샘플을 96-웰 플레이트의 웰에 전달하고 37℃, 5% CO2에서 밤새 인큐베이션하였다.
다음날, 11.1 μL의 10 μM 라파마이신(최종 농도 1 μM)을 웰의 1/2에 가하고 11.1 μL의 물을 웰의 다른 1/2에 가하였다. 96-웰 플레이트들을 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 100 μL의 검정 시약 + PBI-3939 (2 μL의 50X PBI-3939를 이전에 기재된, 98 μL의 검정 시약과 혼합하였다)를 각 웰에 가하고 플레이트들을 37℃에서 4분 동안 인큐베이션하였다. 발광을 GLOMAX® 발광분석기 상에서 37℃에서 0.5s 적분 시간 및 1회 판독으로 측정하였다(도 76h).
실시예 50 - OgLuc cAMP 바이오센서
본 발명의 OgLuc 변이체들을 농축을 통해서만이 아니라 효소 활성의 조절을 통해 광 출력에 연결시킬 수 있다. 예를 들면, cAMP 바이오센서는 단백질 키나아제 A로부터의 cAMP-결합 도메인을 순환 순열 OgLuc 변이체내로 혼입시켜 개발할 수 있다. 본 발명의 OgLuc 변이체는 당해분야에서 공지된 방법(예를 들면, 미국 공개 출원 번호 2005/0153310)에 의해 이러한 순환순열에 대해 내성인 부위(들)에서 순환적으로 치환시킬 수 있다. 수득한 순환 순열 OgLuc 변이체 키메라 단백질은, 포유류 세포들내에서 발현되는 경우 cAMP에 대한 세포내 바이오센서로서 기능할 수 있다. 바이오센서에 대한 cAMP의 결합시, 바이오센서는 활성 루시퍼라아제 효소를 생성하는 구조 변화를 겪는다. 세포를 아데닐레이트 사이클라제에 대한 활성제인 포르스콜린으로 처리하는 것은 증가하는 농도의 포르스콜린을 사용한 발광에 있어서의 증가를 초래할 수 있다. 칼슘(Ca+2), cGMP, 및 프로테아제, 예컨대 카스파제 및 담배 에치(etch) 바이러스(TEV)를 포함하나 이에 한정되지 않는 표적들에 대한 유사한 바이오센서들은 각각에 대한 적절한 결합 도메인 또는 절단 부위를 순환 순열 OgLuc 변이체내로 혼입시켜 개발할 수 있다.
바이오센서로서 OgLuc의 유용성은 cAMP 센서의 맥락에서 변이체 9B8 opt의 분석으로 입증하였다. OgLuc 변이체 서열들에 의해 플랭킹된 단백질 키나아제-A의 RIIβB 서브유닛을 함유하는 순환 순열 구조물들을 제조하고 원형 순열에 대한 부위들을 하기 기술한 바와 같이 선택하는 것을 제외하고는, 무세포 시스템내에서 PCT 출원 제PCT/US2007/008176호에 기술된 바와 같이 발현시켰다. 초기 단백질을 cAMP의 존재 및 부재하에 검정하였다. cAMP에 대한 반응은 활성 (+) cAMP/(-) cAMP의 비로 정의한다.
OgLuc에 대한 구조 모델을 PCT/US2010/33449에 이전에 기재된, 공지된 구조의 특정 지방산 결합 단백질들에 대한 유사성을 기초로 생성하였다. 모델은 표준 단백질 구조 모티프들; α-나선형 및 β-시트의 정렬된 서열을 예측한다. 순환 순열 부위들로서 이들 구조 성분들 사이의 전이 영역들을 선택하였다(참고 표 43).
1. 바이오센서 구조물들의 발현을 위한 주형은: 플라스미드 pF5(Promega Corp.)내 C-말단 OgLuc 서열-RIIβB 서열-N-말단 OgLuc 서열로 이루어졌다. TNT® T7 커플링된 밀 배아 추출물 시스템(Promega Part #L4140)을 사용하여 구조물을 해독하였다. TNT® 밀 배아 추출물 반응은 25 μL의 TNT® 밀 배아 추출물 (L411A), 2 μL의 TNT® 반응 버퍼 (L462A), 1 μL의 아미노산 혼합물, 완전한 (L446A), 1 μL의 RNasin® (40 U/μL) (N2615), 1 μL의 TNT® T7 RNA 폴리머라제 (L516A), 1.0 μg의 DNA 주형 및 총 용적이 50 μL가 되도록 하는 뉴클레아제가 없는 물을 포함하였다. 반응 혼합물을 30℃에서 120 분 동안 인큐베이션하였다.
OgLuc 활성 검정을 50 μL의 OgLuc 해독 혼합물, 50 μL의 OgLuc Glo 시약 (100 mM MES (pH 6.0), 1 mM CDTA, 150 mM KCl, 35 mM 티오우레아, 2 mM DTT, 0.25% TERGITOL® NP-9 (v/v), 0.025% MAZU® DF 204, 및 20μM PBI-3939)에 100 μM cAMP의 존재 또는 부재하에 첨가하고, 역학적 판독을 30분 동안(TECAN® INFINITE® F500 플레이트 리더) 수행함으로써 수행하였다. 반응은 cAMP의 존재하에 바이오센서에 의해 생성된 발광을 cAMP의 부재하에 바이오센서에 의해 생성된 발광으로 나누어 측정한다(표 43).
표 43. cAMP 에 대한 순환-순열의 OgLuc 바이오센서의 반응
Figure pct00111

2. CP-부위 51에서 순환 순열된 9B8opt의 cAMP 바이오센서를 1에 기술된 바와 같이 생성시켰다. 이후에, 바이오센서를 HEK293 세포(15,000 세포/웰)내로 FUGENE® HD를 사용하여 제조자의 설명서에 따라 96-웰 플레이트내로 전달감염시키고, 밤새 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션하였다. 전달감염 후, 배지를 제거하고 10% FBS가 들어있는 CO2-독립 배지로 대체하였다. 이후에, 세포를 2시간 동안 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션한 후 가변량의 FSK를 첨가하였다. 이후에, 세포를 3시간 동안 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션하였다. 이후에, 6μM PBI-3939를 첨가하고, 발광을 13분 후 측정하였다(도 78).
3. 순환 순열("CP"; 예를 들면, CP6은 Met 이후에 신규 1번 잔기인 구 6번 잔기를 말한다) 및 곧은 분할(Straight Split)("SS"; 예를 들면, SS6은 다음과 같이 배향된 센서를 말한다: L27V의 OgLuc(1-6)-RIIβb 결합 부위(서열번호: 441 및 442) -OgLuc(7-169)) 버전을 cAMP 바이오센서들(서열번호: 467 내지 574)로 사용하였다. L27V 변이체의 CP (서열번호: 467-498 및 555-574) 및 SS(서열번호: 499-554) 버전들은 이전에 기재된 바와 같이 기원하였으며 토끼 망상적혈구 용해물(RRL; Promega Corp.)내에서 제조 설명서에 따라 발현시켰다. RIIβb 결합 부위의 C-말단과 OgLuc 루시퍼라아제 서열 사이의 링커 서열은 GGGTCAGGTGGATCTGGAGGTAGCTCTTCT (서열번호: 575)이다. RIIβb 결합 부위의 N-말단과 OgLuc 루시퍼라아제 서열 사이의 링커 서열은 AGCTCAAGCGGAGGTTCAGGCGGTTCCGGA (서열번호: 576)이다. 3.75 μL의 발현 반응물을 1.25 μL의 4X cAMP (최종 농도 1 nM 내지 0.1 mM)와 혼합하고, 실온에서 15분 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 100 μL의 PBI-3939(검정 버퍼 속에서 1X로 희석시킨 50X 스톡)를 3분 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 발광을 GLOMAX® 발광분석기(도 79a-b) 상에서 측정하였다. 발광을 또한 HEK293 세포들에서 발현되고 이전에 기재된 바와 같이 포르스콜린으로 처리된 L27V 변이체의 CP 및 SS 버전에 대해 측정하였다(도 79c 내지 d). 도 79a 내지 d는, 본원에 기재된 OgLuc 변이체의 순환 순열 및 곧은 분할 버전들이 바이오센서들로서 사용될 수 있음을 입증한다.
실시예 51 - 세포아래 분포 및 국재화( Localization )
세포아래 분포를 분석하기 위해, U2OS 세포들을 2x104 세포들/cm2에서 유리 바닥 배양 접시들내로 10% FBS를 함유하는 맥코이 5A 배지(Invitrogen) 내에서 플레이팅하였다. 이후에 세포를 24시간 동안 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션하였다. 이후에, 세포를 1/20 용적의 전달감염 혼합물 (FUGENE® HD 및 pF5A-CMV-L27V(CMV 프로모터를 지닌 pF5A 벡터내로 클로닝된 L27V 변이체 (서열번호: 88)(Promega Corp.)) 또는 pGEM3ZF (Promega Corp.; 음성 대조군))내로 전달감염시키고 24시간 동안 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 세포 배지를 0.5% FBS 및 100 μM PBI-4378이 들어있는 CO2-독립 배지로 교체하였다. 37℃에서 30분 인큐베이션한 후, 여과되지 않은 상들을 25, 100, 1000, 및 5000 ms에 대해 60X 대물렌즈를 사용하는 Olympus LV200 생물발광 현미경(도 80a-b) 상에서 포획하였다.
세포내 위치정보를 분석하기 위해, GPCR AT1R (안지오텐신 유형 1 수용체 (서열번호: 459 및 460))과 IL-6 분비 서열 (서열번호: 461 및 462) 또는 전사 인자, Nrf2 (서열번호: 317)를 지닌 N-말단 L27V 융합체들을 GSSG 링커(서열번호: 457 및 458)를 사용하여 제조하고 U2OS 세포들내로 상기에서 기재된 바와 같이 전달감염시켰다(도 81a 내지 c). 도 81c("GPRC")는, IL6 신호 서열이 L27V 변이체 서열의 업스트림(upstream)에 위치하고 AT1R이 L27V 변이체 서열의 다운스트림에 위치하는 구조물의 발현을 나타낸다. L27V 변이체 만을 또한 전달감염("융합되지 않음")시켰다. 37℃, 5% CO2에서 24시간 인큐베이션한 후, 세포 배지를 0.5% FBS가 들어있는 CO2-독립 배지로 교체하고 1시간 동안 37℃에서 비-CO2-조절된 분위기 속에서 평형화하였다. 이후에, 동등한 용적의 배지 + 200 μM의 PBI-3939를 첨가하고, 여과되지 않은 이미지를 60X 또는 150X 대물렌즈(도 81a 내지 c)를 사용하는 Olympus LV200 생물발광 현미경 위에서 즉시 포획하였다. L27V 단독을 발현하는 세포들의 경우, PBI-3939를 세척하여 이미지 캡쳐 직전에 세포들을 제거하였다.
실시예 52 - 세포내 신호 경로들의 모니터링
당해 실시예는 단백질 수준(전사 활성화를 나타내는 반응 요소 예들과 반대되는 것으로서)에서 세포내 신호 경로들을 모니터링하기 위해 사용되는 신규 루시퍼라아제의 2개의 예들을 제공한다. 변이체 9B8opt(서열번호: 24)를 IkB(Gross et al., Nature Methods 2(8):607-614 (2005)(C-말단, 즉, N-IkB-(9B8opt)-C에서) 또는 ODD(Hif-1-α의 산소-의존성 분해 도메인(Moroz et al., PLoS One 4(4):e5077 (2009)) (N-말단, 즉, N-(9B8opt)-ODD-C에서)에 융합시켰다. IKB는 세포내에서 TNFα를 사용한 자극시 세포내에서 분해되는 것으로 알려져 있으므로; IKB-(9B8opt) 구조물은 생 세포 TNFα 센서로서 사용될 수 있었다. ODD(Hif-1-α)는 저산소증을 유도하는 화합물을 사용한 자극시 세포들내에 축적되는 것으로 알려져 있으므로; ODD-(9B8opt) 구조물을 생 세포 저산소증 센서로서 사용할 수 있었다.
IkB를 지닌 융합물들 또는 9B8opt(pF5A)를 지닌 ODD를 함유하는 구조물들을 HEK293 세포들내에서 역방향 전달감염(5 ng (IkB) 또는 0.05 ng (ODD) DNA(담체 DNA와 혼합되어 총 50 ng을 제공))을 통해 이전에 기재된 바와 같이 발현시키고 24시간 동안 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션하였다. 전달감염 후, 배지를 0.5% FBS 및 20 μM PBI-4377를 함유하는 신선한 CO2-독립 배지로 대체하고 4시간 동안 37℃, 대기 CO2에서 인큐베이션하였다. 이후에, 세포를 IkB 융합물을 발현하는 세포들의 경우 TNFα 및 ODD 융합물을 발현하는 세포들의 경우 펜안트롤린에 대한 자극에 노출시켰다. DMSO(비히클)을 대조군 세포들에 가하였다. TNFα/IKB 샘플들의 경우, 100 μg/mL의 사이클로헥시마이드를 자극을 가하여 신규 단백질의 합성을 방지하기 전 대략 15분째에 가하였다. 처리 후 지시된 시점에서, 세포들을 발광에 대해 검정하였다. 데이타 정상화를 위해, 제공된 시점에서 각각의 샘플의 RLU를 자극 직후 동일한 샘플로부터의 RLU로 나누었다. 각각의 센서에 대한 배 반응을 이후에 측정하였다(도 82a 내지 c).
B. L27V를 사용하여 산화 스트레스 신호 경로들을 단백질 수준에서 모니터링하였다. L27V 또는 레닐라 루시퍼라아제 (Rluc)를 pF5K 발현 벡터내 Nrf2/NFE2L2(C-말단에서; 즉, N-Nrf2-(L27V)-C 또는 N-Nrf2-(Rluc)-C)에 융합시켰다. Keap1은 Nrf2(서열번호: 217)의 음성 조절인자이다. Nrf2-L27V02 단백질 수준들의 조절을 양호하게 나타내기 위하여, Keap1을 동시-발현시켜 Nrf2 수준을 낮게(우비퀴틴화를 통해) 유지하였다.
Nrf2-L27V 또는 Nrf2-Rluc (5 ng, pF5K) 및 HALOTAG®- Keap1 융합 단백질 (pFN21-HT7-Keap1 (서열번호: 316); 50 ng)을 이전에 기재된 바와 같이 96-웰 플레이트내로 씨딩(seeding) 시기에 세포의 전달감염에 의해 HEK293 세포들내에서 발현시키고 24시간 동안 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션하였다. 전달감염 후, 배지를 L27V의 경우 0.5% FBS 및 20μM의 PBI-4377이 들어있거나 레닐라 푸시퍼라아제의 경우 20μM의 ENDURENTM(Promega Corp.)이 들어있는 신선한 CO2-독립 배지로 교체하고, 세포들을 4시간 동안 37℃에서 대기 CO2하에 평형화하였다. 역학적 분석을 위해, 20μM의 D,L 설포라판 또는 비히클 (DMSO)을 사용하였다. 도 83a에서, 발광을 이전에 기재된 바와 같이 처리 후 지시된 시점에서 측정하였다. 데이타 정상화를 위해, 주어진 시점에서 각각의 샘플의 발광을 자극 직후 동일한 샘플로부터의 발광으로 나누었다(도 83b-c).
C. B에 기술된 Nrf2 센서 및 Nrf2(ARE)-Luc2P 리포터(Promega Corp.)의 반응의 비교를 수행하였다. Nrf2 센서 및 리포터 둘다를 상기 B 단락에 기술된 바와 같이 스크리닝하였다. 개똥벌레 (Luc2P) 리포터 유전자 검정을 위해, ONE-GLOTM 검정 시약을 사용하였다. 도 84a 내지 b는 2 시간째에 Nrf2-L27V 및 16시간째에 Nrf2(ARE)-Luc2P의 정규화 반응을 제공한다.
실시예 53 - BRET 를 사용한 생물발광 리포터로서 OgLuc 변이체의 평가
생물발광 공명 에너지 전달 (BRET)은 단백질-단백질 상호작용들의 모니터링을 허용한다. 분자내 에너지 전달을 IV 및 HT7 융합 파트너 사이에서 시험하였으며 여기서 HT7은 형광단, 즉, TMR(여기/방출 (ex/em) 파장 = 555/585 nm) 또는 로다민 110 (여기/방출 파장 = 502/527 nm)으로 먼저 표지되었다. 50 μL의 실시에 34의 IV-HT7 융합 단백질을 함유하는 박테리아 세포 용해물을 0.001-10 μM 형광단 리간드의 존재 또는 부재하에 1시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 50 μL의 22 μM 코엘렌테라진-h를 함유하는 RENILLA-GLOTM을 50 μL의 효소-리간드 혼합물에 가하고, 방출 스펙트럼을 5분째에 기록하였다. TMR (도 83a) 또는 로다민 110("Rhod110")을 사용한 IV-HT7의 실시예 스펙트럼(도 85b)을 나타내며, 이는, BRET가, 리간드의 ex/em이 OgLuc의 460 nm 발광 피크에 근접한 경우, 즉, 로다민 110보다 큰 경우 더 컸다. 당해 데이타는, 분자내 에너지 전달이 융합 단백질에서 OgLuc 변이체 및 형광단 사이에서 발생할 수 있음을 나타낸다. 3개의 상이한 대조군들을 비교(데이타는 나타내지 않음)를 위해 사용하였다: 1) 비-HT 융합물, 2) HT 리간드로 표지되지 않은 HT-융합물, 및 3) OgLuc과 HT 사이에서 TEV 부위(이는 근거리/먼거리의 포함을 나타낸다)에서 단백질분해적으로 절단된 표지된 HT-융합물. BRET는 3개의 상이한 대조군들에서 관찰되지 않았으며, 이는, HT가 BRET를 달성하는데 관여하였음을 제안한다. BRET는 N-말단 HT7과 비교하여 C1+A4E 및 C-말단 HT7을 지닌 IV의 경우 보다 더 컸다.
실시예 54 - 생 세포 또는 용해 포맷을 위한 단백질 근거리 검정
하나의 실시예에서, 순환 순열 (CP) 또는 곧은 분할(SS) OgLuc 융합 단백질들을 단백질 근거리의 측정들에 적용시킨다. OgLuc를 프로테아제 기질 아미노산 서열(예를 들면, TEV)의 삽입을 통해 배치하거나 분할시켜 저 생물발광을 생성하였다. 불활성 루시퍼라아제는 모니터 단백질에 테써된다(예를 들면, 유전적 융합을 통해). 잠재적인 상호작용 단백질을 프로테아제(예를 들면, TEV)에 테써(예를 들면, 유전적 융합을 통해)시켰다. 2개의 모니터 단백질들이 상호작용하거나 충분한 근거리에 존재하는 경우(예를 들면, 구성적 상호작용, 의약품 자극 또는 경로 반응을 통해), 루시퍼라아제를 절단하여 증가된 생물발광 활성을 생성한다. 당해 실시예를 세포 또는 생화학적 검정에서 단백질 근거리의 측정들에 적용시킬 수 있다. 또한, OgLuc 변이체 루시퍼라아제의 높은 열 안정성은 용해된 세포들 또는 생화학적 검정에서 항체-항원 상호작용들의 측정들을 가능하도록 할 수 있었다.
실시예 55 - 생물발광 검정
1. 카스파제-3 효소를 검출하기 위한 생물발광 검정에서 OgLuc 변이체의 용도를 입증하기 위해, 9B8 opt 변이체를 DEVD 카스파제-3 절단 서열을 포함하는 프로-코엘렌테라진 기질을 사용하는 생물발광 검정에서 사용하였다. 정제된 카스파제-3 효소를 실시예 27에서 기술한 바와 같이 제조되고, 100 mM의 MES pH 6.0, 1 mM의 CDTA, 150 mM의 KCl, 35 mM의 티오우레아, 2 mM의 DTT, 0.25% TERGITOL® NP-9 (v/v), 0.025% MAZU® DF 204을, 23.5 μM z-DEVD-코엘렌테라진-h의 존재 또는 부재하에 100 mM HEPES pH 7.5 속에서 함유하는 버퍼 속에서 10-배 희석된 변이체 9B8 opt를 발현하는 이. 콜리 용해물 샘플과 혼합하였다. 카스파제-3 효소를 용해물 샘플과 3시간 동안 실온에서 인큐베이션하고, 발광을 다양한 시점들에서 Turner MODULUSTM 발광분석기에서 검출하였다. 박테리아 용해물 만을 함유하는 샘플 및 카스파제-3 만을 함유하는 샘플을 대조군으로서 사용하였다. 3개의 반복물을 사용하였다. 도 86 및 표 44는, 9B8 opt, 및 따라서 본 발명의 다른 OgLuc 변이체들을 생물발광 검정에서 프로-코엘렌테라진 기질과 함께 사용하여 목적한 효소를 검출할 수 있음을 입증한다.
표 44: 기질로서 z- DEVD - 코엘렌테라진 -h를 사용하여 정제된 카스파제 -3의 존재 또는 부재하에 인큐베이션된 9B8 opt 변이체를 발현하는 박테리아 용해물로부터 생성된 RLU 에 있어서 평균 발광
Figure pct00112

2. L27V 변이체를 DEVD 카스파제-3 절단 서열을 포함하는 프로-코엘렌테라진 기질을 사용하는 생물발광 검정에서 사용하였다. 100 mM MES pH 6 (50 μL) 중 정제된 카스파제-3 효소(1mg/mL)를 검정 버퍼 (50 μL) 중 227 nM L27V02 변이체 및 47 μM PBI-3741(z-DEVD-코엘렌테라진-h)과 혼합하였다. 반응물을 3시간 동안 실온에서 인큐베이션하고, 이전에 기재된 바와 같이 발광을 검출하였다. L27V 변이체를 사용한 검정을 검정의 개똥벌레 루시퍼라아제 버전, CASPASE-GLO® 3/7- 검정 시스템 (Caspase-Glo; Promega Corp.)에 대해 비교하였다. 표 45는, L27V 변이체, 및 따라서 본 발명의 다른 OgLuc 변이체가 프로-코엘렌테라진 기질을 사용하는 생물발광 검정에서 목적한 효소를 검출하는데 사용될 수 있음을 입증한다.
표 45
Figure pct00113

실시예 56 - 면역검정
본 발명의 OgLuc 변이체들을 다양한 상이한 면역검정 개념들로 통합시켰다. 예를 들면, OgLuc 변이체를 일차 또는 2차 항체에 유전적으로-융합시키거나 화학적으로 콘주게이트화시켜 특수 분석대상물에 대한 검출 방법을 제공한다. 또 하나의 예로서, OgLuc 변이체를 단백질 A, 단백질 G, 단백질 L, 또는 임의의 다른 펩타이드 또는 Ig 단편들에 결합하는 것으로 공지된 단백질에 유전적으로-융합시키거나 화학적으로 콘주게이트화시킨 후, 이를 특수 분석대상물에 결합된 특이적 항체를 검출하는데 사용하였다. 또 하나의 예로서, OgLuc 변이체를 스트렙타비딘에 유전적으로-융합시키거나 화학적으로 콘주게이트화시켜 특수한 분석대상물에 결합된 특이적 바이오틴 부착 항체를 검출하는데 사용하였다. 또 하나의 예로서, OgLuc 변이체의 상보적 단편들을 일차 및 2차 항체들에 유전적으로-융합시키거나 화학적으로 콘주게이트화시켰으며, 여기서 일차 항체는 특수한 고정된 분석대상물을 인식하고, 2차 항체는 일차 항체를 인식하며, 모두 ELISA-유사 포맷이다. OgLuc 변이체 활성, 즉, 발광을 고정된 분석대상물의 존재하에 재구성하고 분석대상물을 정량화하기 위한 수단으로 사용하였다.
또 하나의 예로서, OgLuc 변이체의 상보적 단편들을 2개의 항체들에 융합시킬 수 있으며, 여기서 1개의 항체는 하나의 에피토프에서 특수 분석대상물을 인식하고, 제2 항체는 별도의 에피토프에서 분석대상물을 인식한다. OgLuc 변이체 활성은 분석대상물의 존재시 재구성될 수 있다. 당해 방법은 복합체 환경, 예컨대 세포 용해물 또는 세포 배지에서 분석대상물 정량화의 측정을 위해 정정될 수 있다. 또 하나의 예로서, OgLuc 변이체의 상보적 단편들을 2개의 항체들에 융합시킬 수 있으며, 여기서 1개의 항체는 변형에 상관없이 특수 분석대상물을 인식하며, 제2 항체는 변형된 분석대상물 만을 인식한다(예를 들면, 해독후 변형 후). OgLuc 변이체 활성은 변형되는 경우에만 분석대상물의 존재시 재구성될 수 있다. 당해 방법은 세포 용해물과 같은 복합체 환경에서 변형된 분석대상물의 측정들에 대해 정정될 수 있다. 또 하나의 예로서, OgLuc 변이체를 분석대상물(예를 들면, 프로스타글란딘)에 콘주게이트화시키고 경쟁적 샌드위치 ELISA 포맷에서 사용할 수 있다.
실시예 57 - 이량체화 검정
당해 실시예는, 전체길이 순환 순열 OgLuc 변이체들이 각각의 결합 파트너들, 예를 들면, FRB 및 FKBP에 융합될 수 있고, 단백질 상보성-형 검정에 사용될 수 있음을 입증한다. 본원에 기재된 방법과 종래의 단백질 상보성 사이의 주요 차이는, 상보성이 존재하지 않지만, 2개의 전체 길이 효소들, 예를 들면, 순환 순열 OgLuc 변이체의 이량체화가 존재하였다는 것이다.
간단히 말해서, 저 활성을 위해 유사하게 설정된 순환 순열 리포터 단백질을 융합 단백질 파트너(참고 도 87a) 둘다에 융합시켰다. 예를 들면, 각각의 융합 파트너를 동일하게 구조화되고, 치환된 리포터들에 연결시킬 수 있다. 융합 파트너들의 상호작용은 치환된 리포터들은 근접한 부근으로 근접시킴으로써 더 높은 활성을 가진 하이브리드 리포터의 재구성을 허용한다. 신규 하이브리드 리포터는 각각의 순환 순열 리포터들 중 일부들을 구조적 제약을 감소시키는 방식으로 포함하였다.
순환 순열, 곧은 분할 L27V 변이체들 CP84 및 CP103 (N-(SS-169)-(1-SS1)-FRB-C 및 C-(1-SS1)-(SS-169)-FKBP)을 이전에 기재된 바와 같이 클로닝하고 토끼 망상적혈구 용해물(RRL; Promega Corp.)내에서 제조 설명서에 따라 발현(25 μL)시켰다. 각각의 이량체화 쌍에 대한 1.25 μL의 발현 반응물들을 10 μL의 2X 결합 버퍼 (100 mM HEPES, 200 mM NaCl, 0.2% CHAPS, 2 mM EDTA, 20% 글리세롤, 20 mM DTT, pH 7.5) 및 7.5 μL의 물과 혼합하고, 18 μL를 96-웰 플레이트의 웰에 전달하였다. 반응물에, 2μL의 라파마이신(최종 농도 0 및 0.1-1000 nM)을 첨가하고, 반응물들을 실온에서 10분 동안 항온처리하였다. 인큐베이션 후, 100 μL의 PBI-3939 (검정 버퍼 속에서 1X로 희석된 50X 스톡)를 3 분 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 발광을 GLOMAX® 발광분석기(도 87b)에서 측정하고 반응을 측정하였다(도 87c). 도 87b-c는, 본 발명의 OgLuc 변이체들을 사용하여 PCA-유형 이량체화 검정을 통해 단백질-단백질 상호작용들을 검출할 수 있음을 입증한다.
실시예 58 - 세포간 반감기
OgLuc 변이체 9B8, 9B8+K33N, V2, L27V, 및 V2+L27M의 세포내 반감기를 측정했다. 10% FBS 및 1X 나트륨 피루베이트가 들어있는 F12 배지 중 15-100 mm 플레이트들 내 CHO 세포 (500,000)를 30μL의 9B8, 9B8+K33N, V2, L27V("V2+L27V") 또는 V2+L27M(모두 pF4A 벡터 배경내에 있음)를 함유하는 100 ng/μL 플라스미드 DNA로 TRANSIT®-LT1(Mirus)을 사용하여 제조 설명서에 따라 전달감염시켰다. 이후에, 세포들을 6시간 동안 항온처리하였다.
인큐베이션 후, 배지를 제거하고 1 mL의 트립신을 가하여 플레이트로부터 세포들을 해리시켰다. 이후에, 3 mL의 F12 배지를 첨가하고, 세포 카운트하였다. 이후에, 세포를 10,000 세포/웰에서 96-웰 플레이트의 6개 웰(6 웰/변이체)에 플레이팅하고 밤새 37℃에서 인큐베이션하였다. 샘플들을 3개의 플레이트들에 걸쳐 분포시켰다. 각각의 플레이트는 상이한 시점 측정들을 위해 6개 반복물들을 가졌다.
밤새 인큐베이션한 후, 배지를 세포로부터 t=0 샘플들을 위해 제거하고, 100 μL의 검정 버퍼(이전에 기재됨; 기질 없음)을 첨가했다. 샘플을 드라이아이스에서 동결시키고 -20℃에서 저장하였다. 사이클로헥시마이드(100 mg/mL)을 OPTI-MEM® 속에서 1 mg/mL의 최종 농도로 1:100으로 희석시켰다. DMSO(100%)를 또한 OPTI-MEM® 속에서 1:100(최종 농도 1%)로 희석시켰다. 희석된 사이클로헥시마이드(1 mg/mL)(11 μL)를 각각의 전달감염된 변이체 샘플의 3개 복제물들에 가하고 11 μL의 희석된 DMSO(1%)를 다른 3개의 복제물들에 가하였다. 이후에, 세포들을 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션하고 다양한 시점(즉, 0, 0.5, 0.9, 2.5, 4.3, 및 6.2 시간)에서 제거하고 t=0 샘플로서 진행시켰다.
분석하기 위해, 샘플을 실온으로 해동시키고, 10 μL를 50 μL의 검정 시약 속에서 분석하였다. 발광을 GLOMAX® 발광분석기 상에서 측정하였다. 각각의 시점에서, 발광을 처리되지 않은 및 사이클로헥시마이드-처리된 샘플들에 대해 측정하였다. 사이클로헥시마이드로 처리한 세포들에 대한 RLU를 처리되지 않은 세포들에 대한 RLU로 일반화하였다.
각각의 변이체의 세포내 반감기를 사이클로헥시마이드 (CHX)-처리되지 않은 발광에 대해 처리된 발광의 비를 각 시점에서 측정함으로써 계산하였다. 이후에, 당해 비를 ln(처리되지 않은 발광에 대한 처리된 발광의 %)를 시간에 걸쳐 플롯팅하고, 반감기를 계산하였다(표 46). OgLuc 변이체들은 전체 강도 CMV 프로모터를 사용하여 대략 6-9시간의 세포내 반감기들을 갖지만, 반감기들은 CMV 결실 변이체(d2)로 감소되지 않았다. 전체 강도 CMV 프로모터와 결합된 PEST 분해 신호의 존재는 유의미하게 반감기를 감소시킨다.
표 46
Figure pct00114

또 하나의 실험을 HEK293 세포들(데이타는 나타내지 않음)를 사용한 실시예 52에 기술된 역 전달감염 프로토콜을 사용하여 완료하였다. 당해 실험으로부터의 결과들은, PEST를 사용한 L27V 변이체에 대한 세포내 반감기가 10분임을 나타낸다. 당해 실험에서 사용된 분해 신호가 없는 L27V 변이체는 당해 실험의 과정에 걸쳐 감쇠를 나타내지 않았다. 이 경우, 감쇄는 t=0에서 처리되지 않은 세포들에 대해 일반화하였다.
실시예 59 - 우레아에 대한 OgLuc 변이체들의 노출
개똥벌레 루시퍼라아제는 비교적 불안정한 것으로 공지되어 있으므로, 이는 우레아 노출에 대해 보다 더 민감성이다. 이것이 또한 OgLuc 변이체들을 사용한 경우인지를 측정하기 위하여, 우레아에 대한 OgLuc의 민감도를 측정하였다. 5 μL의 45.3 μM L27V 효소를 100 μL의 우레아 용액 (100 mM MOPS, pH 7.2, 100 mM NaCl, 1 mM CDTA, 5% 글리세롤 및 다양한 농도의 우레아)와 혼합하고 30분 동안 실온에서 항온처리하였다. 5 μL의 우레아+L27V 효소 용액을 페놀 레드 + 0.1% PRIONEX®가 들어있지 않은 DMEM내로 10,000-배 희석시키고, 50 μL를 50 μL의 100 μM PBI-3939를 함유하는 검정 시약(이전에 기재됨)과 혼합하고 발광을 10분째에 판독하였다(도 88). 도 88은, L27V가 우레아에 대해 내성이거나 우레아의 제거시 기능적 효소에 대해 매우 빠르게 재폴딩됨을 나타낸다. 이는, 화학적 변성 조건이 포함되는 경우, 예를 들면, 변성제가 사용되어 OgLuc 변이체-기반 반응 전에 효소 반응을 중지시키는 조건에서 다중화하는 경우, L27V가 리포터 효소로서 사용될 수 있음을 시사한다.
0.31 mg/mL 스톡의 정제된 L27V 변이체를 버퍼 (PBS + 1 mM DTT + 0.005% IGEPAL) 내로 100,000-배 희석시키고 3 M 우레아를 사용하여 30분 동안 25℃에서 인큐베이션한 다음 100 μM의 PBI-3939(이전에 기재됨)를 함유하는 검정 시약과 1:1 (50 μL + 50 μL)로 혼합하였다. 반응들을 TECAN® INFINITE® F500 발광분석기 위에서 이전에 기술한 바와 같이 판독하였다(100분의 경우; 1분 판독 간격)(도 89). 당해 결과들은, 3M 우레아가 L27V 변이체의 활성을 대략 50% 까지 감소시키지만, 우레아를 2-배(1.5 M의 최종 농도 까지)까지 희석시킬 시 활성이 아마도 재폴딩으로 인하여, 증가함을 나타낸다.
실시예 60 - OgLuc 융합 단백질들의 이미지화
당해 실시예는 형광 여기에 대한 요구없이 생 세포내에서 단백질 전위를 모니터링하기 위한 OgLuc 및 OgLuc 변이체들의 용도를 입증한다. OgLuc 변이체들을 인간 글루코코르티코이드 수용체(GR; 서열번호: 451 및 452), 인간 단백질 키나아제 C 알파(PKCa; 서열번호: 449 및 450) 또는 LC3 (서열번호: 577 및 578)에 융합시켰다. 생물발광 이미지화를 사용하여 세포아래 단백질 전위를 분석하기 위해, HeLa 세포를 2x104 세포/cm2에서 유리 바닥 배양 접시들(MatTek)내로 10% FBS를 함유하는 DMEM 배지(Invitrogen) 속에 플레이팅하였다. 이후에, 세포들을 24시간 동안 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션하였다. 이후에, 세포들을 1/20 용적 전달감염 혼합물(FUGENE® HD 및 pF5A 벡터(Promega Corp.)내로 클로닝된 L27V02-GR(서열번호: 453 및 454) 또는 L27V02-PKC 알파(서열번호: 455 및 456)를 암호화하는 DNA)로 전달감염시켰다. L27V02-GR에 대한 플라스미드 DNA를 pGEM-3ZF(Promega Corp.)내로 1:20으로 희석시켜 적절한 발현 수준의 L27V02-GR을 달성하였다. L27V02-LC3 및 L27V02-PKC 알파에 대한 플라스미드 DNA는 희석시키지 않았다. 이후에, 세포들을 24시간 동안 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션하였다. GR 융합 단백질로 전달감염된 세포들은 GR 작용제를 20시간 동안 1% 목탄/덱스트란-처리된 FBS로 보충된 MEM 배지(Invitrogen)를 사용하여 고갈시켰다. 24 시간 전달감염 후(PKC 알파 측정들의 경우) 또는 48 시간 전달감염 후(GR 측정들의 경우), 세포 배지를 100 μM의 PBI-3939를 함유하는 CO2-독립 배지로 이미지화 직전에 교체하였다. 여과되지 않은 이미지들을 150X 대물렌즈를 사용하는 Olympus LV200 생물발광 현미경 위에 즉시 포획하였다.
L27V02-GR 융합 단백질의 원형질-대-핵 전위를 0.5 mM의 덱사메타존을 15분 동안 자극하여 달성하였다. L27V02-PKC 알파 융합 단백질의 원형질-대-혈장막 전위는 100 nM PMA를 사용한 자극을 통해 20분 동안 달성하였다. L27V02-LC3 융합 단백질 전달감염된 세포들을 10% FBS를 함유하는 DMEM 배지(Invitrogen) 속에서 50 mM 클로로퀸으로 처리하거나 처리하지 않은 채로 두었다.
L27V02 -글루코코르티코이드 수용체
글루코코르티코이드들의 부재하에, 글루코코르티코이드 수용체(GR)를 원형질내Hsp90 단백질들 및 잔사와 복합체화하였다. GR의 글루코코르티코이드들, 예컨대 덱사메타존과의 상호작용시, GR 단백질들은 이들 단백질 복합체들로부터 해리되며 핵에 전위되어 유전자 전사를 조절하였다. 도 90a 내지 b는 HeLa 세포들내에서 PBI-3939 기질을 사용하여 L27V02-글루코코르티코이드 수용체 (GR) 융합 단백질들의 핵 수용체 (NR) 전위에 대한 덱사메타존-유도 원형질의 생물발광 이미지화를 보여준다.
L27V02 - PKCa
포르볼 에스테르들을 사용한 처리시, PKC 알파 단백질들을 원형질막에 보충시키고 막 동력학 및 신호 변환을 포함하는 세포 반응들을 조절한다. 도 91a 내지 b는 U-2 OS 세포들내에서 PBI3939 기질을 사용하여 OgLuc L27V02-PKC 알파 융합물들의 혈장막 전위에 대한 포르볼 에스테르-유도 단백질 키나아제 C 알파 (PKC 알파) 원형질의 생물발광 이미지화를 보여준다.
L27V - LC3
프로세싱된 LC-3 단백질들과 오토파고좀들의 연합은 자가소화작용시 홀마크 단계를 나타낸다. 클로로퀸 처리는 당해 단계에서 오토파아지 유동을 정지시켜, 오토파고좀들 상에 LC-3 단백질의 축적(점상 세포아래 분포를 생산)을 초래한다. 도 92a 내지 b는 2개의 대표적인 HeLa 세포 샘플들내에서 PBI-3939 기질을 사용하여 OgLuc L27V-LC3 융합 단백질(서열번호: 592 및 593)의 클로로퀸-유도 오토파고좀 단백질 전위의 생물발광 이미지화를 보여준다.
표 27 - 단서 목록
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SEQUENCE LISTING <110> PROMEGA CORPORATION <120> OPLOPHORUS-DERIVED LUCIFERASES, NOVEL COELENTERAZINE SUBSTRATES, AND METHODS OF USE <130> 016026-9523-WO00 <150> US 61/409,422 <151> 2010-11-02 <160> 593 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 169 <212> PRT <213> Oplophorus gracilirostris <400> 1 Phe Thr Leu Ala Asp Phe Val Gly Asp Trp Gln Gln Thr Ala Gly Tyr 1 5 10 15 Asn Gln Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Leu Ser Ser Leu Phe Gln 20 25 30 Ala Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Lys Val Val Leu Ser Gly 35 40 45 Glu Asn Gly Leu Lys Ala Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly 50 55 60 Leu Ser Gly Phe Gln Met Gly Leu Ile Glu Met Ile Phe Lys Val Val 65 70 75 80 Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Ile Ile Leu His Tyr Gly Thr 85 90 95 Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg 100 105 110 Pro Tyr Pro Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Gln Ile Thr Val Thr 115 120 125 Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Tyr Asp Glu Arg Leu Ile Asn 130 135 140 Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val Thr Gly 145 150 155 160 Trp Arg Leu Cys Glu Asn Ile Leu Ala 165 <210> 2 <211> 513 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 2 atggtgttta cattggagga tttcgttgga gactggcggc agacagctgg atacaaccaa 60 gatcaagtgt tagaacaagg aggattgtct agtctgttcc aaaagctggg agtgtcagtc 120 accccaatcc agaaaattgt gctgtctggg gagaatgggt taaaatttga tattcatgtc 180 atcatccctt acgagggact cagtggtttt caaatgggtc tgattgaaat gatcttcaaa 240 gttgtttacc cagtggatga tcatcatttc aagattattc tccattatgg tacactcgtt 300 attgacggtg tgacaccaaa catgattgac tactttggac gcccttacga gggaattgct 360 gtgtttgacg gcaagaagat cacagttact ggaactctgt ggaacggcaa caagatcatt 420 gatgagcgcc tgatcaaccc agatggttca ctcctcttcc gcgttactat caatggagtc 480 accggatggc gcctttgcga gcgtattctt gcc 513 <210> 3 <211> 171 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 3 Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp 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agtctgttcc aaaagctggg agtgtcagtc 120 accccaatcc agaaaattgt gctgtctggg gagaatgggt taaaaattga tattcatgtc 180 atcatccctt acgagggact cagtggtttt caaatgggtc tgattgaaat gatcttcaaa 240 gttgtttacc cagtggatga tcatcatttc aagattattc accattatgg tacactcgtt 300 attgacggtg tgacaccaaa catgattgac ttctttggac gcccttacga gggaattgct 360 gtgtttgacg gcaagaagat cacagttact ggaactctgt ggaacggcaa caagatcatt 420 gatgagcgcc tgatcaaccc agatggttca ctcctcttcc gcgttactat caatggagtc 480 accggatggc gcctttgcga gcgtattctt gcc 513 <210> 5 <211> 171 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 5 Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala 1 5 10 15 Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Leu Ser Ser Leu 20 25 30 Phe Gln Lys Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Lys Ile Val Leu 35 40 45 Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr 50 55 60 Glu Gly Leu Ser Gly Phe Gln Met Gly Leu Ile Glu Met Ile Phe Lys 65 70 75 80 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gcaagaagat cacagttact ggaactctgt ggaacggcaa caagatcatt 420 gatgagcgcc tgatcaaccc agatggttca ctcctcttcc gcgttactat caatggaatc 480 accggatggc gcctttgcga gcgtattctt gcc 513 <210> 7 <211> 171 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 7 Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala 1 5 10 15 Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Leu Leu Glu Gln Gly Gly Leu Ser Ser Leu 20 25 30 Phe Gln Lys Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Lys Ile Val Leu 35 40 45 Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr 50 55 60 Glu Gly Leu Ser Gly Tyr Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys 65 70 75 80 Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Ile Ile Arg His Tyr 85 90 95 Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Phe Phe 100 105 110 Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr 115 120 125 Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu 130 135 140 Ile Asn Pro Asp Gly Ser Leu 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atacaaccaa 60 gatcaagtgt tagaacaagg aggattgtct agtctgttcc aaaatctggg agtgtcagtc 120 accccaatcc agaaaattgt gctgtctggg gagaatgggt taaaaattga tattcatgtc 180 atcatccctt acgagggact cagtggttat caaatgggtc agattgaaaa gatcttcaaa 240 gttgtttacc cagtggatga tcatcatttc aaggttattc tccattatgg tacactcgtt 300 attgacggtg tgacaccaaa catgattgac tactttggac gcccttacga gggaattgct 360 gtgtttgacg gcaagaagat cacagttact ggaactctgt ggaacggcaa caagatcatt 420 gatgagcgcc tgatcaaccc agatggttca ctcctcttcc gcgttactat caatggagtc 480 accggatggc gcctttgcga gcgtattctt gcc 513 <210> 17 <211> 171 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 17 Met Val Phe Thr Leu Lys Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala 1 5 10 15 Gly Tyr Asn Gln Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Leu Ser Ser Leu 20 25 30 Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Lys Ile Val Leu 35 40 45 Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr 50 55 60 Glu Gly Leu Ser Gly Tyr Gln 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Synthetic polypeptide <400> 21 Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala 1 5 10 15 Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu 20 25 30 Phe Gln Lys Leu Gly Val Ser Ile Thr Pro Ile Gln Lys Ile Val Leu 35 40 45 Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr 50 55 60 Glu Gly Leu Ser Gly Tyr Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys 65 70 75 80 Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr 85 90 95 Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe 100 105 110 Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr 115 120 125 Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu 130 135 140 Ile Asn Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val 145 150 155 160 Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala 165 170 <210> 22 <211> 513 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 22 atggtgttta cactcgaaga tttcgtaggg gactggcggc agacagccgg ctacaaccaa 60 gaccaagtcc ttgagcaggg cggtctgtcc agtttgtttc agaaactcgg ggtgtccgta 120 acaccgatcc aaaagattgt cctgagcggt gaaaacggcc tgaagatcga catccatgtc 180 atcatcccgt atgaaggtct gagcggcttc cagatgggcc tcattgagat gatctttaag 240 gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgattc tgcactatgg cacactggta 300 atcgacgggg ttacgccgaa catgatcgac tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc 360 gtgttcgacg gcaaaaagat cactgtaacc gggaccctgt ggaacggcaa caaaattatc 420 gacgagcgcc tgatcaaccc cgacggctcc ctgctgttcc gcgtaaccat caacggagtg 480 accggctggc ggctgtgcga gcgcattttg gcg 513 <210> 23 <211> 513 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 23 atggtattca cactggagga ttttgtcggt gattggcggc aaaccgctgg gtacaaccag 60 gaccaggttc tcgaacaagg gggcctcagc tccctgtttc aaaaactggg tgttagcgtt 120 acacctattc aaaaaatcgt gctctccggg gaaaacgggc tcaaaatcga tattcatgtg 180 attatccctt acgaagggct ctccgggttt cagatggggc tgatcgaaat gatctttaag 240 gtcgtctatc ccgtagatga tcaccacttc aaggtgatcc tccactacgg gaccctcgta 300 attgatggcg tgacccccaa catgatcgac tattttgggc gcccttacga ggggattgct 360 gtcttcgatg gcaaaaaaat tacagtgaca ggcacactct ggaacgggaa taagatcatt 420 gatgagcgcc tgattaatcc cgatgggagc ctgctctttc gggtgacaat taacggcgta 480 acaggctggc gcctctgtga acggattctg gcg 513 <210> 24 <211> 513 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 24 atggtgttta cactcgaaga tttcgtaggg gactggcggc agacagccgg ctacaacctg 60 gaccaagtcc ttgagcaggg cggtctgtcc agtttgtttc agaaactcgg ggtgtccgta 120 acaccgatcc aaaagattgt cctgagcggt gaaaacggcc tgaagatcga catccatgtc 180 atcatcccgt atgaaggtct gagcggctat cagatgggcc agatcgaaaa aatttttaag 240 gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgattc tgcactatgg cacactggta 300 atcgacgggg ttacgccgaa catgatcgac tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc 360 gtgttcgacg gcaaaaagat cactgtaacc gggaccctgt ggaacggcaa caaaattatc 420 gacgagcgcc tgatcaaccc cgacggctcc ctgctgttcc gcgtaaccat caacggagtg 480 accggctggc ggctgtgcga gcgcattttg gcg 513 <210> 25 <211> 513 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 25 atggtattca cactggagga ttttgtcggt gattggcggc aaaccgctgg gtacaacctc 60 gaccaggttc tcgaacaagg gggcctcagc tccctgtttc aaaaactggg tgttagcgtt 120 acacctattc aaaaaatcgt gctctccggg gaaaacgggc tcaaaatcga tattcatgtg 180 attatccctt acgaagggct ctccgggtat cagatggggc agatcgaaaa aatctttaag 240 gtcgtctatc ccgtagatga tcaccacttc aaggtgatcc tccactacgg gaccctcgta 300 attgatggcg tgacccccaa catgatcgac tattttgggc gcccttacga ggggattgct 360 gtcttcgatg gcaaaaaaat tacagtgaca ggcacactct ggaacgggaa taagatcatt 420 gatgagcgcc tgattaatcc cgatgggagc ctgctctttc gggtgacaat taacggcgta 480 acaggctggc gcctctgtga acggattctg gcg 513 <210> 26 <211> 513 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 26 atggtgatta cattggagga tttcgttgga gactggcggc agacagctgg atacaaccaa 60 gatcaagtgt tagaacaagg aggagtgtct agtctgttcc aaaagctggg agtgtcaatc 120 accccaatcc agaaaattgt gctgtctggg gagaatgggt taaaaattga tattcatgtc 180 atcatccctt acgagggact cagtggtttt caaatgggtc tgattgaaat gatcttcaaa 240 gttgtttacc cagtggatga tcatcatttc aaggttattc tccattatgg tacactcgtt 300 attgacggtg tgacaccaaa catgattgac tactttggac gcccttacga gggaattgct 360 gtgtttgacg gcaagaagat cacagttact ggaactctgt ggaacggcaa caagatcatt 420 gatgagcgcc tgatcaaccc agatggttca ctcctcttcc gcgttactat caatggagtc 480 accggatggc gcctttgcga gcgtattctt gcc 513 <210> 27 <211> 171 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 27 Met Val Ile Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala 1 5 10 15 Gly Tyr Asn Gln Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu 20 25 30 Phe Gln Lys Leu Gly Val Ser Ile Thr Pro Ile Gln Lys Ile Val Leu 35 40 45 Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr 50 55 60 Glu Gly Leu Ser Gly Phe Gln 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aggacggctg gctgcacagc 1260 ggcgacatcg cctactggga cgaggacgag cacttcttca tcgtggaccg gctgaagagc 1320 ctgatcaaat acaagggcta ccaggtagcc ccagccgaac tggagagcat cctgctgcaa 1380 caccccaaca tcttcgacgc cggggtcgcc ggcctgcccg acgacgatgc cggcgagctg 1440 cccgccgcag tcgtcgtgct ggaacacggt aaaaccatga ccgagaagga gatcgtggac 1500 tatgtggcca gccaggttac aaccgccaag aagctgcgcg gtggtgttgt gttcgtggac 1560 gaggtgccta aaggactgac cggcaagttg gacgcccgca agatccgcga gattctcatt 1620 aaggccaaga agggcggcaa gatcgccgtt 1650 <210> 29 <211> 550 <212> PRT <213> Photinus pyralis <400> 29 Met Glu Asp Ala Lys Asn Ile Lys Lys Gly Pro Ala Pro Phe Tyr Pro 1 5 10 15 Leu Glu Asp Gly Thr Ala Gly Glu Gln Leu His Lys Ala Met Lys Arg 20 25 30 Tyr Ala Leu Val Pro Gly Thr Ile Ala Phe Thr Asp Ala His Ile Glu 35 40 45 Val Asp Ile Thr Tyr Ala Glu Tyr Phe Glu Met Ser Val Arg Leu Ala 50 55 60 Glu Ala Met Lys Arg Tyr Gly Leu Asn Thr Asn His Arg Ile Val Val 65 70 75 80 Cys Ser Glu Asn Ser Leu Gln Phe Phe Met Pro Val Leu Gly Ala Leu 85 90 95 Phe 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ggagttcgct 600 gcctacctgg agccattcaa ggagaagggc gaggttagac ggcctaccct ctcctggcct 660 cgcgagatcc ctctcgttaa gggaggcaag cccgacgtcg tccagattgt ccgcaactac 720 aacgcctacc ttcgggccag cgacgatctg cctaagatgt tcatcgagtc cgaccctggg 780 ttcttttcca acgctattgt cgagggagct aagaagttcc ctaacaccga gttcgtgaag 840 gtgaagggcc tccacttcag ccaggaggac gctccagatg aaatgggtaa gtacatcaag 900 agcttcgtgg agcgcgtgct gaagaacgag cag 933 <210> 31 <211> 311 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 31 Met Ala Ser Lys Val Tyr Asp Pro Glu Gln Arg Lys Arg Met Ile Thr 1 5 10 15 Gly Pro Gln Trp Trp Ala Arg Cys Lys Gln Met Asn Val Leu Asp Ser 20 25 30 Phe Ile Asn Tyr Tyr Asp Ser Glu Lys His Ala Glu Asn Ala Val Ile 35 40 45 Phe Leu His Gly Asn Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Trp Arg His Val Val 50 55 60 Pro His Ile Glu Pro Val Ala Arg Cys Ile Ile Pro Asp Leu Ile Gly 65 70 75 80 Met Gly Lys Ser Gly Lys Ser Gly Asn Gly Ser Tyr Arg Leu Leu Asp 85 90 95 His Tyr Lys Tyr 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caccgaccca tcgctgcatt gctccagacc tgatcggtat gggcaaatcc 1620 gacaaaccag acctgggtta tttcttcgac gaccacgtcc gcttcatgga tgccttcatc 1680 gaagccctgg gtctggaaga ggtcgtcctg gtcattcacg actggggctc cgctctgggt 1740 ttccactggg ccaagcgcaa tccagagcgc gtcaaaggta ttgcatttat ggagttcatc 1800 cgccctatcc cgacctggga cgaatggcca gaatttgccc gcgagacctt ccaggccttc 1860 cgcaccaccg acgtcggccg caagctgatc atcgatcaga acgtttttat cgagggtacg 1920 ctgccgatgg gtgtcgtccg cccgctgact gaagtcgaga tggaccatta ccgcgagccg 1980 ttcctgaatc ctgttgaccg cgagccactg tggcgcttcc caaacgagct gccaatcgcc 2040 ggtgagccag cgaacatcgt cgcgctggtc gaagaataca tggactggct gcaccagtcc 2100 cctgtcccga agctgctgtt ctggggcacc ccaggcgttc tgatcccacc ggccgaagcc 2160 gctcgcctgg ccaaaagcct gcctaactgc aaggctgtgg acatcggccc gggtctgaat 2220 ctgctgcaag aagacaaccc ggacctgatc ggcagcgaga tcgcgcgctg gctgtctact 2280 ctggagattt ccggt 2295 <210> 33 <211> 765 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 33 Met 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atcatccctt acgagggact cagtggtttt caaatgggtc tgattgaaat gatcttcaaa 240 gttgtttacc cagtggatga tcatcatttc aaggttattc tccattatgg tacactcgtt 300 attgacggtg tgacaccaaa catgattgac tactttggac gcccttacga gggaattgct 360 gtgtttgacg gcaagaagat cacagttact ggaactctgt ggaacggcaa caagatcatt 420 gatgagcgcc tgatcaaccc agatggttca ctcctcttcc gcgttactat caatggagtc 480 accggatggc gcctttgcga gcgtattctt gccggatatc tcgagccaac cactgaggat 540 ctgtactttc agagcgataa cgatggatcc gaaatcggta ctggctttcc attcgacccc 600 cattatgtgg aagtcctggg cgagcgcatg cactacgtcg atgttggtcc gcgcgatggc 660 acccctgtgc tgttcctgca cggtaacccg acctcctcct acgtgtggcg caacatcatc 720 ccgcatgttg caccgaccca tcgctgcatt gctccagacc tgatcggtat gggcaaatcc 780 gacaaaccag acctgggtta tttcttcgac gaccacgtcc gcttcatgga tgccttcatc 840 gaagccctgg gtctggaaga ggtcgtcctg gtcattcacg actggggctc cgctctgggt 900 ttccactggg ccaagcgcaa tccagagcgc gtcaaaggta ttgcatttat ggagttcatc 960 cgccctatcc cgacctggga cgaatggcca gaatttgccc gcgagacctt ccaggccttc 1020 cgcaccaccg acgtcggccg caagctgatc atcgatcaga acgtttttat cgagggtacg 1080 ctgccgatgg gtgtcgtccg cccgctgact gaagtcgaga tggaccatta ccgcgagccg 1140 ttcctgaatc ctgttgaccg cgagccactg tggcgcttcc caaacgagct gccaatcgcc 1200 ggtgagccag cgaacatcgt cgcgctggtc gaagaataca tggactggct gcaccagtcc 1260 cctgtcccga agctgctgtt ctggggcacc ccaggcgttc tgatcccacc ggccgaagcc 1320 gctcgcctgg ccaaaagcct gcctaactgc aaggctgtgg acatcggccc gggtctgaat 1380 ctgctgcaag aagacaaccc ggacctgatc ggcagcgaga tcgcgcgctg gctgtctact 1440 ctggagattt ccggt 1455 <210> 35 <211> 485 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 35 Met Val Ile Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala 1 5 10 15 Gly Tyr Asn Gln Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu 20 25 30 Phe Gln Lys Leu Gly Val Ser Ile Thr Pro Ile Gln Lys Ile Val Leu 35 40 45 Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr 50 55 60 Glu Gly Leu Ser Gly Phe Gln Met Gly Leu Ile Glu Met Ile Phe Lys 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Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 36 atggtgttta cattggagga tttcgttgga gactggcggc agacagctgg atacaaccta 60 gatcaagtgt tagaacaagg aggattgtct agtctgttcc aaaagctggg agtgtcagtc 120 accccaatcc agaaaattgt gctgtctggg gagaatgggt taaaaattga tattcatgtc 180 atcatccctt acgagggact cagtggttat caaatgggtc agattgaaaa gatcttcaaa 240 gttgtttacc cagtggatga tcatcatttc aaggttattc tccattatgg tacactcgtt 300 attgacggtg tgacaccaaa catgattgac tactttggac gcccttacga gggaattgct 360 gtgtttgacg gcaagaagat cacagttact ggaactctgt ggaacggcaa caagatcatt 420 gatgagcgcc tgatcaaccc agatggttca ctcctcttcc gcgttactat caatggagtc 480 accggatggc gcctttgcga gcgtattctt gccggatatc tcgagccaac cactgaggat 540 ctgtactttc agagcgataa cgatggatcc gaaatcggta ctggctttcc attcgacccc 600 cattatgtgg aagtcctggg cgagcgcatg cactacgtcg atgttggtcc gcgcgatggc 660 acccctgtgc tgttcctgca cggtaacccg acctcctcct acgtgtggcg caacatcatc 720 ccgcatgttg caccgaccca tcgctgcatt gctccagacc tgatcggtat gggcaaatcc 780 gacaaaccag acctgggtta tttcttcgac gaccacgtcc gcttcatgga tgccttcatc 840 gaagccctgg gtctggaaga ggtcgtcctg gtcattcacg actggggctc cgctctgggt 900 ttccactggg ccaagcgcaa tccagagcgc gtcaaaggta ttgcatttat ggagttcatc 960 cgccctatcc cgacctggga cgaatggcca gaatttgccc gcgagacctt ccaggccttc 1020 cgcaccaccg acgtcggccg caagctgatc atcgatcaga acgtttttat cgagggtacg 1080 ctgccgatgg gtgtcgtccg cccgctgact gaagtcgaga tggaccatta ccgcgagccg 1140 ttcctgaatc ctgttgaccg cgagccactg tggcgcttcc caaacgagct gccaatcgcc 1200 ggtgagccag cgaacatcgt cgcgctggtc gaagaataca tggactggct gcaccagtcc 1260 cctgtcccga agctgctgtt ctggggcacc ccaggcgttc tgatcccacc ggccgaagcc 1320 gctcgcctgg ccaaaagcct gcctaactgc aaggctgtgg acatcggccc gggtctgaat 1380 ctgctgcaag aagacaaccc ggacctgatc ggcagcgaga tcgcgcgctg gctgtctact 1440 ctggagattt ccggt 1455 <210> 37 <211> 485 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 37 Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala 1 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gtccgcgccc cgctcagcac cctgaacggc 300 gagatcagtg ccttggcggc cgaggcggca tgtgttccag ccgacgatcg catcttgtgt 360 cgcgtttctc ttgagaatct ttattttcag gcgtctggag gtggtggcgg agcgatcgcc 420 atggtgttta cactcgaaga tttcgtaggg gactggcggc agacagccgg ctacaacctg 480 gaccaagtcc ttgagcaggg cggtctgtcc agtttgtttc agaaactcgg ggtgtccgta 540 acaccgatcc aaaagattgt cctgagcggt gaaaacggcc tgaagatcga catccatgtc 600 atcatcccgt atgaaggtct gagcggctat cagatgggcc agatcgaaaa aatttttaag 660 gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgattc tgcactatgg cacactggta 720 atcgacgggg ttacgccgaa catgatcgac tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc 780 gtgttcgacg gcaaaaagat cactgtaacc gggaccctgt ggaacggcaa caaaattatc 840 gacgagcgcc tgatcaaccc cgacggctcc ctgctgttcc gcgtaaccat caacggagtg 900 accggctggc ggctgtgcga gcgtattctt gccggatatc tcgagccaac cactgaggat 960 ctgtactttc agagcgataa cgatggatcc gaaatcggta ctggctttcc attcgacccc 1020 cattatgtgg aagtcctggg cgagcgcatg cactacgtcg atgttggtcc gcgcgatggc 1080 acccctgtgc tgttcctgca cggtaacccg acctcctcct acgtgtggcg caacatcatc 1140 ccgcatgttg caccgaccca tcgctgcatt gctccagacc tgatcggtat gggcaaatcc 1200 gacaaaccag acctgggtta tttcttcgac gaccacgtcc gcttcatgga tgccttcatc 1260 gaagccctgg gtctggaaga ggtcgtcctg gtcattcacg actggggctc cgctctgggt 1320 ttccactggg ccaagcgcaa tccagagcgc gtcaaaggta ttgcatttat ggagttcatc 1380 cgccctatcc cgacctggga cgaatggcca gaatttgccc gcgagacctt ccaggccttc 1440 cgcaccaccg acgtcggccg caagctgatc atcgatcaga acgtttttat cgagggtacg 1500 ctgccgatgg gtgtcgtccg cccgctgact gaagtcgaga tggaccatta ccgcgagccg 1560 ttcctgaatc ctgttgaccg cgagccactg tggcgcttcc caaacgagct gccaatcgcc 1620 ggtgagccag cgaacatcgt cgcgctggtc gaagaataca tggactggct gcaccagtcc 1680 cctgtcccga agctgctgtt ctggggcacc ccaggcgttc tgatcccacc ggccgaagcc 1740 gctcgcctgg ccaaaagcct gcctaactgc aaggctgtgg acatcggccc gggtctgaat 1800 ctgctgcaag aagacaaccc ggacctgatc ggcagcgaga tcgcgcgctg gctgtctact 1860 ctggagattt ccggtt 1876 <210> 41 <211> 625 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial 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gctgtctggg gagaatgggt taaaaattga tattcatgtc 180 atcatccctt acgagggact cagtggtttt caaatgggtc tgattgaaat gatcttcaaa 240 gttgtttacc cagtggatga tcatcatttc aagattattc accattatgg tacactcgtt 300 attgacggtg tgacaccaaa catgattgac ttctttggac gcccttacga gggaattgct 360 gtgtttgacg gcaagaagat cacagttact ggaactctgt ggaacggcaa caagatcatt 420 gatgagcgcc tgatcaaccc agatggttca ctcctcttcc gcgttactat caatggagtc 480 accggatggc gcctttgcga gcgtattctt gccggatatc tcgagccaac cactgaggat 540 ctgtactttc agagcgataa cgatggatcc gaaatcggta ctggctttcc attcgacccc 600 cattatgtgg aagtcctggg cgagcgcatg cactacgtcg atgttggtcc gcgcgatggc 660 acccctgtgc tgttcctgca cggtaacccg acctcctcct acgtgtggcg caacatcatc 720 ccgcatgttg caccgaccca tcgctgcatt gctccagacc tgatcggtat gggcaaatcc 780 gacaaaccag acctgggtta tttcttcgac gaccacgtcc gcttcatgga tgccttcatc 840 gaagccctgg gtctggaaga ggtcgtcctg gtcattcacg actggggctc cgctctgggt 900 ttccactggg ccaagcgcaa tccagagcgc gtcaaaggta ttgcatttat ggagttcatc 960 cgccctatcc cgacctggga cgaatggcca gaatttgccc gcgagacctt ccaggccttc 1020 cgcaccaccg acgtcggccg caagctgatc atcgatcaga acgtttttat cgagggtacg 1080 ctgccgatgg gtgtcgtccg cccgctgact gaagtcgaga tggaccatta ccgcgagccg 1140 ttcctgaatc ctgttgaccg cgagccactg tggcgcttcc caaacgagct gccaatcgcc 1200 ggtgagccag cgaacatcgt cgcgctggtc gaagaataca tggactggct gcaccagtcc 1260 cctgtcccga agctgctgtt ctggggcacc ccaggcgttc tgatcccacc ggccgaagcc 1320 gctcgcctgg ccaaaagcct gcctaactgc aaggctgtgg acatcggccc gggtctgaat 1380 ctgctgcaag aagacaaccc ggacctgatc ggcagcgaga tcgcgcgctg gctgtctact 1440 ctggagattt ccggt 1455 <210> 45 <211> 485 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 45 Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala 1 5 10 15 Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Leu Ser Ser Leu 20 25 30 Phe Gln Lys Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Lys Ile Val Leu 35 40 45 Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr 50 55 60 Glu Gly Leu Ser 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taaaaattga tattcatgtc 180 atcatccctt acgagggact cagtggtttt caaatgggtc tgattgaaat gatcttcaaa 240 gttgtttacc cagtggatga tcatcatttc aaggttattc tccattatgg tacactcgtt 300 attgacggtg tgacaccaaa catgattgac tactttggac gcccttacga gggaattgct 360 gtgtttgacg gcaagaagat cacagttact ggaactctgt ggaacggcaa caagatcatt 420 gatgagcgcc tgatcaaccc agatggttca ctcctcttcc gcgttactat caatggagtc 480 accggatggc gcctttgcga gcgtattctt gccggatatc tcgagccaac cactgaggat 540 ctgtactttc agagcgataa cgatggatcc gaaatcggta ctggctttcc attcgacccc 600 cattatgtgg aagtcctggg cgagcgcatg cactacgtcg atgttggtcc gcgcgatggc 660 acccctgtgc tgttcctgca cggtaacccg acctcctcct acgtgtggcg caacatcatc 720 ccgcatgttg caccgaccca tcgctgcatt gctccagacc tgatcggtat gggcaaatcc 780 gacaaaccag acctgggtta tttcttcgac gaccacgtcc gcttcatgga tgccttcatc 840 gaagccctgg gtctggaaga ggtcgtcctg gtcattcacg actggggctc cgctctgggt 900 ttccactggg ccaagcgcaa tccagagcgc gtcaaaggta ttgcatttat ggagttcatc 960 cgccctatcc cgacctggga cgaatggcca gaatttgccc gcgagacctt ccaggccttc 1020 cgcaccaccg acgtcggccg caagctgatc atcgatcaga acgtttttat cgagggtacg 1080 ctgccgatgg gtgtcgtccg cccgctgact gaagtcgaga tggaccatta ccgcgagccg 1140 ttcctgaatc ctgttgaccg cgagccactg tggcgcttcc caaacgagct gccaatcgcc 1200 ggtgagccag cgaacatcgt cgcgctggtc gaagaataca tggactggct gcaccagtcc 1260 cctgtcccga agctgctgtt ctggggcacc ccaggcgttc tgatcccacc ggccgaagcc 1320 gctcgcctgg ccaaaagcct gcctaactgc aaggctgtgg acatcggccc gggtctgaat 1380 ctgctgcaag aagacaaccc ggacctgatc ggcagcgaga tcgcgcgctg gctgtctact 1440 ctggagattt ccggt 1455 <210> 49 <211> 485 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 49 Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala 1 5 10 15 Gly Tyr Asn Gln Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Leu Ser Ser Leu 20 25 30 Phe Gln Lys Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Lys Ile Val Leu 35 40 45 Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr 50 55 60 Glu Gly Leu Ser Gly Phe Gln Met Gly 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tgatcggtat gggcaaatcc 780 gacaaaccag acctgggtta tttcttcgac gaccacgtcc gcttcatgga tgccttcatc 840 gaagccctgg gtctggaaga ggtcgtcctg gtcattcacg actggggctc cgctctgggt 900 ttccactggg ccaagcgcaa tccagagcgc gtcaaaggta ttgcatttat ggagttcatc 960 cgccctatcc cgacctggga cgaatggcca gaatttgccc gcgagacctt ccaggccttc 1020 cgcaccaccg acgtcggccg caagctgatc atcgatcaga acgtttttat cgagggtacg 1080 ctgccgatgg gtgtcgtccg cccgctgact gaagtcgaga tggaccatta ccgcgagccg 1140 ttcctgaatc ctgttgaccg cgagccactg tggcgcttcc caaacgagct gccaatcgcc 1200 ggtgagccag cgaacatcgt cgcgctggtc gaagaataca tggactggct gcaccagtcc 1260 cctgtcccga agctgctgtt ctggggcacc ccaggcgttc tgatcccacc ggccgaagcc 1320 gctcgcctgg ccaaaagcct gcctaactgc aaggctgtgg acatcggccc gggtctgaat 1380 ctgctgcaag aagacaaccc ggacctgatc ggcagcgaga tcgcgcgctg gctgtctact 1440 ctggagattt ccggt 1455 <210> 51 <211> 485 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 51 Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly 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gaaatcggta ctggctttcc attcgacccc 1020 cattatgtgg aagtcctggg cgagcgcatg cactacgtcg atgttggtcc gcgcgatggc 1080 acccctgtgc tgttcctgca cggtaacccg acctcctcct acgtgtggcg caacatcatc 1140 ccgcatgttg caccgaccca tcgctgcatt gctccagacc tgatcggtat gggcaaatcc 1200 gacaaaccag acctgggtta tttcttcgac gaccacgtcc gcttcatgga tgccttcatc 1260 gaagccctgg gtctggaaga ggtcgtcctg gtcattcacg actggggctc cgctctgggt 1320 ttccactggg ccaagcgcaa tccagagcgc gtcaaaggta ttgcatttat ggagttcatc 1380 cgccctatcc cgacctggga cgaatggcca gaatttgccc gcgagacctt ccaggccttc 1440 cgcaccaccg acgtcggccg caagctgatc atcgatcaga acgtttttat cgagggtacg 1500 ctgccgatgg gtgtcgtccg cccgctgact gaagtcgaga tggaccatta ccgcgagccg 1560 ttcctgaatc ctgttgaccg cgagccactg tggcgcttcc caaacgagct gccaatcgcc 1620 ggtgagccag cgaacatcgt cgcgctggtc gaagaataca tggactggct gcaccagtcc 1680 cctgtcccga agctgctgtt ctggggcacc ccaggcgttc tgatcccacc ggccgaagcc 1740 gctcgcctgg ccaaaagcct gcctaactgc aaggctgtgg acatcggccc gggtctgaat 1800 ctgctgcaag aagacaaccc ggacctgatc 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tattcatgtc 600 atcatccctt acgagggact cagtggttat caaatgggtc agattgaaaa gatcttcaaa 660 gttgtttacc cagtggatga tcatcatttc aaggttattc tccattatgg tacactcgtt 720 attgacggtg tgacaccaaa catgattgac tactttggac gcccttacga gggaattgct 780 gtgtttgacg gcaagaagat cacagttact ggaactctgt ggaacggcaa caagatcatt 840 gatgagcgcc tgatcaaccc agatggttca ctcctcttcc gcgttactat caatggagtc 900 accggatggc gcctttgcga gcgtattctt gccgtttctc tcgagccaac cactgaggat 960 ctgtactttc agagcgataa cgatggatcc gaaatcggta ctggctttcc attcgacccc 1020 cattatgtgg aagtcctggg cgagcgcatg cactacgtcg atgttggtcc gcgcgatggc 1080 acccctgtgc tgttcctgca cggtaacccg acctcctcct acgtgtggcg caacatcatc 1140 ccgcatgttg caccgaccca tcgctgcatt gctccagacc tgatcggtat gggcaaatcc 1200 gacaaaccag acctgggtta tttcttcgac gaccacgtcc gcttcatgga tgccttcatc 1260 gaagccctgg gtctggaaga ggtcgtcctg gtcattcacg actggggctc cgctctgggt 1320 ttccactggg ccaagcgcaa tccagagcgc gtcaaaggta ttgcatttat ggagttcatc 1380 cgccctatcc cgacctggga cgaatggcca gaatttgccc gcgagacctt ccaggccttc 1440 cgcaccaccg acgtcggccg caagctgatc atcgatcaga acgtttttat cgagggtacg 1500 ctgccgatgg gtgtcgtccg cccgctgact gaagtcgaga tggaccatta ccgcgagccg 1560 ttcctgaatc ctgttgaccg cgagccactg tggcgcttcc caaacgagct gccaatcgcc 1620 ggtgagccag cgaacatcgt cgcgctggtc gaagaataca tggactggct gcaccagtcc 1680 cctgtcccga agctgctgtt ctggggcacc ccaggcgttc tgatcccacc ggccgaagcc 1740 gctcgcctgg ccaaaagcct gcctaactgc aaggctgtgg acatcggccc gggtctgaat 1800 ctgctgcaag aagacaaccc ggacctgatc ggcagcgaga tcgcgcgctg gctgtctact 1860 ctggagattt ccggt 1875 <210> 62 <211> 625 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 62 Met Leu Gly Leu Ser Glu Gln Ser Val Ser Ile Ser Arg Cys Ala Gly 1 5 10 15 Thr Arg Leu Pro Ala Leu Leu Asp Glu Gln Gln Val Asn Val Leu Leu 20 25 30 Tyr Asp Met Asn Gly Cys Tyr Ser Arg Leu Lys Glu Leu Val Pro Thr 35 40 45 Leu Pro Gln Asn Arg Lys Val Ser Lys Val Glu Ile Leu Gln His Val 50 55 60 Ile Asp Tyr Ile Arg Asp Leu Gln Leu Glu Leu Asn 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taatcgacta catcagggac ctgcagctgg agctgaactc ggagtctgaa 240 gtcgggacca ccggaggccg gggactgcct gtccgcgccc cgctcagcac cctgaacggc 300 gagatcagtg ccttggcggc cgaggcggca tgtgttccag ccgacgatcg catcttgtgt 360 cgcgtttctc ttgagaatct ttattttcag gcgtctggag gtggtggcgg agcgatcgcc 420 atggtgttta cattggagga tttcgttgga gactggcggc agacagctgg atacaaccta 480 gatcaagtgt tagaacaagg aggagtgtct agtctgttcc aaaagctggg agtgtcaatc 540 accccaatcc agaaaattgt gctgtctggg gagaatgggt taaaaattga tattcatgtc 600 atcatccctt acgagggact cagtggttat caaatgggtc agattgaaaa gatcttcaaa 660 gttgtttacc cagtggatga tcatcatttc aaggttattc tccattatgg tacactcgtt 720 attgacggtg tgacaccaaa catgattgac tactttggac gcccttacga gggaattgct 780 gtgtttgacg gcaagaagat cacagttact ggaactctgt ggaacggcaa caagatcatt 840 gatgagcgcc tgatcaaccc agatggttca ctcctcttcc gcgttactat caatggagtc 900 accggatggc gcctttgcga gcgtattctt gccgtttctc tcgagccaac cactgaggat 960 ctgtactttc agagcgataa cgatggatcc gaaatcggta ctggctttcc attcgacccc 1020 cattatgtgg aagtcctggg cgagcgcatg cactacgtcg atgttggtcc gcgcgatggc 1080 acccctgtgc tgttcctgca cggtaacccg acctcctcct acgtgtggcg caacatcatc 1140 ccgcatgttg caccgaccca tcgctgcatt gctccagacc tgatcggtat gggcaaatcc 1200 gacaaaccag acctgggtta tttcttcgac gaccacgtcc gcttcatgga tgccttcatc 1260 gaagccctgg gtctggaaga ggtcgtcctg gtcattcacg actggggctc cgctctgggt 1320 ttccactggg ccaagcgcaa tccagagcgc gtcaaaggta ttgcatttat ggagttcatc 1380 cgccctatcc cgacctggga cgaatggcca gaatttgccc gcgagacctt ccaggccttc 1440 cgcaccaccg acgtcggccg caagctgatc atcgatcaga acgtttttat cgagggtacg 1500 ctgccgatgg gtgtcgtccg cccgctgact gaagtcgaga tggaccatta ccgcgagccg 1560 ttcctgaatc ctgttgaccg cgagccactg tggcgcttcc caaacgagct gccaatcgcc 1620 ggtgagccag cgaacatcgt cgcgctggtc gaagaataca tggactggct gcaccagtcc 1680 cctgtcccga agctgctgtt ctggggcacc ccaggcgttc tgatcccacc ggccgaagcc 1740 gctcgcctgg ccaaaagcct gcctaactgc aaggctgtgg acatcggccc gggtctgaat 1800 ctgctgcaag aagacaaccc ggacctgatc ggcagcgaga tcgcgcgctg gctgtctact 1860 ctggagattt ccggt 1875 <210> 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cactgtaacc gggaccctgt ggaacggcaa caaaattatc 420 gacgagcgcc tgatcaaccc cgacggctcc ctgctgttcc gcgtaaccat caacggagtg 480 accggctggc ggctgtgcga gcgcattttg gcggga 516 <210> 69 <211> 172 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 69 Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala 1 5 10 15 Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Leu Ser Ser Leu 20 25 30 Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Lys Ile Val Leu 35 40 45 Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr 50 55 60 Glu Gly Leu Ser Gly Tyr Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys 65 70 75 80 Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr 85 90 95 Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe 100 105 110 Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr 115 120 125 Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu 130 135 140 Ile Asn Pro Asp Gly Ser Leu Leu 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gaccaagtcc ttgagcaggg cggcctgtcc agtttgtttc agaatctcgg ggtgtccgta 120 acaccgatcc aaaagattgt cctgagcggt gaaaacggcc tgaagatcga catccatgtc 180 atcatcccgt atgaaggtct gagcggctat cagatgggcc agatcgaaaa aatttttaag 240 gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgattc tgcactatgg cacactggta 300 atcgacgggg ttacgccgaa cttgatcgac tatttcggac gtccgtatga aggcatcgcc 360 gtgttcgacg gcaaaaagat cactgtaacc gggaccctgt ggaacggcaa caaaattatc 420 gacgagcgcc tgatcaaccc cgacggctcc ctgctgttcc gcgtaaccat caacggagtg 480 accggctggc ggctgtgcga gcgcattttg gcggga 516 <210> 73 <211> 172 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 73 Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala 1 5 10 15 Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Leu Ser Ser Leu 20 25 30 Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Lys Ile Val Leu 35 40 45 Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr 50 55 60 Glu Gly Leu Ser Gly Tyr Gln Met Gly Gln 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tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc 360 gtgttcgacg gcaaaaagat cactgtaacc gggaccctgt ggaacggcaa caaaattatc 420 gacgagcgcc tgatcaaccc cgacggctcc ctgctgttcc gcgtaaccat caacggagtg 480 accggctggc ggctgtgcga gcgcattttg gcggga 516 <210> 75 <211> 172 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 75 Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Gln Gln Thr Ala 1 5 10 15 Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Leu Ser Ser Leu 20 25 30 Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Lys Ile Val Leu 35 40 45 Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr 50 55 60 Glu Gly Leu Ser Gly Tyr Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys 65 70 75 80 Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr 85 90 95 Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe 100 105 110 Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr 115 120 125 Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp 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atcatcccgt atgaaggtct gagcggctat cagatgggcc agatcgaaaa aatttttaag 660 gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgattc tgcactatgg cacactggta 720 atcgacgggg ttacgccgaa cttgatcgac tatttcggac gtccgtatga aggcatcgcc 780 gtgttcgacg gcaaaaagat cactgtaacc gggaccctgt ggaacggcaa caaaattatc 840 gacgagcgcc tgatcaaccc cgacggctcc ctgctgttcc gcgtaaccat caacggagtg 900 accggctggc ggctgtgcga gcgcattttg gcgggatatc tcgagccaac cactgaggat 960 ctgtactttc agagcgataa cgatggatcc gaaatcggta ctggctttcc attcgacccc 1020 cattatgtgg aagtcctggg cgagcgcatg cactacgtcg atgttggtcc gcgcgatggc 1080 acccctgtgc tgttcctgca cggtaacccg acctcctcct acgtgtggcg caacatcatc 1140 ccgcatgttg caccgaccca tcgctgcatt gctccagacc tgatcggtat gggcaaatcc 1200 gacaaaccag acctgggtta tttcttcgac gaccacgtcc gcttcatgga tgccttcatc 1260 gaagccctgg gtctggaaga ggtcgtcctg gtcattcacg actggggctc cgctctgggt 1320 ttccactggg ccaagcgcaa tccagagcgc gtcaaaggta ttgcatttat ggagttcatc 1380 cgccctatcc cgacctggga cgaatggcca gaatttgccc gcgagacctt ccaggccttc 1440 cgcaccaccg acgtcggccg caagctgatc atcgatcaga acgtttttat cgagggtacg 1500 ctgccgatgg gtgtcgtccg cccgctgact gaagtcgaga tggaccatta ccgcgagccg 1560 ttcctgaatc ctgttgaccg cgagccactg tggcgcttcc caaacgagct gccaatcgcc 1620 ggtgagccag cgaacatcgt cgcgctggtc gaagaataca tggactggct gcaccagtcc 1680 cctgtcccga agctgctgtt ctggggcacc ccaggcgttc tgatcccacc ggccgaagcc 1740 gctcgcctgg ccaaaagcct gcctaactgc aaggctgtgg acatcggccc gggtctg 1797 <210> 77 <211> 599 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 77 Met Leu Gly Leu Ser Glu Gln Ser Val Ser Ile Ser Arg Cys Ala Gly 1 5 10 15 Thr Arg Leu Pro Ala Leu Leu Asp Glu Gln Gln Val Asn Val Leu Leu 20 25 30 Tyr Asp Met Asn Gly Cys Tyr Ser Arg Leu Lys Glu Leu Val Pro Thr 35 40 45 Leu Pro Gln Asn Arg Lys Val Ser Lys Val Glu Ile Leu Gln His Val 50 55 60 Ile Asp Tyr Ile Arg Asp Leu Gln Leu Glu Leu Asn Ser Glu Ser Glu 65 70 75 80 Val Gly Thr Thr Gly Gly Arg Gly Leu Pro Val Arg Ala Pro Leu Ser 85 90 95 Thr Leu Asn 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tgccttcatc 1260 gaagccctgg gtctggaaga ggtcgtcctg gtcattcacg actggggctc cgctctgggt 1320 ttccactggg ccaagcgcaa tccagagcgc gtcaaaggta ttgcatttat ggagttcatc 1380 cgccctatcc cgacctggga cgaatggcca gaatttgccc gcgagacctt ccaggccttc 1440 cgcaccaccg acgtcggccg caagctgatc atcgatcaga acgtttttat cgagggtacg 1500 ctgccgatgg gtgtcgtccg cccgctgact gaagtcgaga tggaccatta ccgcgagccg 1560 ttcctgaatc ctgttgaccg cgagccactg tggcgcttcc caaacgagct gccaatcgcc 1620 ggtgagccag cgaacatcgt cgcgctggtc gaagaataca tggactggct gcaccagtcc 1680 cctgtcccga agctgctgtt ctggggcacc ccaggcgttc tgatcccacc ggccgaagcc 1740 gctcgcctgg ccaaaagcct gcctaactgc aaggctgtgg acatcggccc gggtctgaat 1800 ctgctgcaag aagacaaccc ggacctgatc ggcagcgaga tcgcgcgctg gctgtctact 1860 ctggagattt ccggt 1875 <210> 79 <211> 625 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 79 Met Leu Gly Leu Ser Glu Gln Ser Val Ser Ile Ser Arg Cys Ala Gly 1 5 10 15 Thr Arg Leu Pro Ala Leu Leu Asp Glu Gln Gln 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atggtgttta cactcgaaga tttcgtaggg gactggcggc agacagccgg ctacaacctg 60 gaccaagtcc ttgagcaggg cggtctgtcc agtttgtttc agaatctcgg ggtgtccgta 120 acaccgatcc aaaggattgt cctgagcggt gaaaacggcc tgaagatcga catccatgtc 180 atcatcccgt atgaaggtct gagcggcgat cagatgggcc agatcgaaaa aatttttaag 240 gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgattc tgcactatgg cacactggta 300 atcgacgggg ttacgccgaa catgatcgac tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc 360 gtgttcgacg gcaaaaagat cactgtaacc gggaccctgt ggaacggcaa caaaattatc 420 gacgagcgcc tgatcaaccc cgacggctcc ctgctgttcc gcgtaaccat caacggagtg 480 accggctggc ggctgtgcga gcgcattttg gcggga 516 <210> 81 <211> 172 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 81 Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala 1 5 10 15 Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Leu Ser Ser Leu 20 25 30 Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Leu 35 40 45 Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His 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aaggtgattc tgcactatgg cacactggta 300 atcgacgggg ttacgccgaa catgatcgac tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc 360 gtgttcgacg gcaaaaagat cactgtaacc gggaccctgt ggaacggcaa caaaattatc 420 gacgagcgcc tgatcaaccc cgacggctcc ctgctgttcc gcgtaaccat caacggagtg 480 accggctggc ggctgtgcga gcgcattttg gcggga 516 <210> 83 <211> 172 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 83 Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala 1 5 10 15 Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Leu Ser Ser Leu 20 25 30 Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Lys Ile Val Leu 35 40 45 Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr 50 55 60 Glu Gly Leu Asn Gly Tyr Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys 65 70 75 80 Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr 85 90 95 Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe 100 105 110 Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys 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Sequence: Synthetic polypeptide <400> 89 Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala 1 5 10 15 Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu 20 25 30 Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Leu 35 40 45 Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr 50 55 60 Glu Gly Leu Ser Gly Asp Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys 65 70 75 80 Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr 85 90 95 Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe 100 105 110 Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr 115 120 125 Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu 130 135 140 Ile Asn Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val 145 150 155 160 Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala 165 170 <210> 90 <211> 1875 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 90 atgcttggtc 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ccaggcgttc tgatcccacc ggccgaagcc 1740 gctcgcctgg ccaaaagcct gcctaactgc aaggctgtgg acatcggccc gggtctgaat 1800 ctgctgcaag aagacaaccc ggacctgatc ggcagcgaga tcgcgcgctg gctgtctact 1860 ctggagattt ccggt 1875 <210> 91 <211> 625 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 91 Met Leu Gly Leu Ser Glu Gln Ser Val Ser Ile Ser Arg Cys Ala Gly 1 5 10 15 Thr Arg Leu Pro Ala Leu Leu Asp Glu Gln Gln Val Asn Val Leu Leu 20 25 30 Tyr Asp Met Asn Gly Cys Tyr Ser Arg Leu Lys Glu Leu Val Pro Thr 35 40 45 Leu Pro Gln Asn Arg Lys Val Ser Lys Val Glu Ile Leu Gln His Val 50 55 60 Ile Asp Tyr Ile Arg Asp Leu Gln Leu Glu Leu Asn Ser Glu Ser Glu 65 70 75 80 Val Gly Thr Thr Gly Gly Arg Gly Leu Pro Val Arg Ala Pro Leu Ser 85 90 95 Thr Leu Asn Gly Glu Ile Ser Ala Leu Ala Ala Glu Ala Ala Cys Val 100 105 110 Pro Ala Asp Asp Arg Ile Leu Cys Arg Val Ser Leu Glu Asn Leu Tyr 115 120 125 Phe Gln Ala Ser Gly Gly Gly Gly Gly Ala Ile Ala Met Val Phe Thr 130 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caacggagtg 480 accggctggc ggctgtgcga gcgcattttg gcg 513 <210> 93 <211> 171 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 93 Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala 1 5 10 15 Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Leu Ser Ser Leu 20 25 30 Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Leu 35 40 45 Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr 50 55 60 Glu Gly Leu Ser Gly Asp Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys 65 70 75 80 Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr 85 90 95 Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe 100 105 110 Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr 115 120 125 Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu 130 135 140 Ile Asn Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val 145 150 155 160 Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala 165 170 <210> 94 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tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc 780 gtgttcgacg gcaaaaagat cactgtaacc gggaccctgt ggaacggcaa caaaattatc 840 gacgagcgcc tgatcaaccc cgacggctcc ctgctgttcc gcgtaaccat caacggagtg 900 accggctggc ggctgtgcga gcgcattttg gcgggatatc tcgagccaac cactgaggat 960 ctgtactttc agagcgataa cgatggatcc gaaatcggta ctggctttcc attcgacccc 1020 cattatgtgg aagtcctggg cgagcgcatg cactacgtcg atgttggtcc gcgcgatggc 1080 acccctgtgc tgttcctgca cggtaacccg acctcctcct acgtgtggcg caacatcatc 1140 ccgcatgttg caccgaccca tcgctgcatt gctccagacc tgatcggtat gggcaaatcc 1200 gacaaaccag acctgggtta tttcttcgac gaccacgtcc gcttcatgga tgccttcatc 1260 gaagccctgg gtctggaaga ggtcgtcctg gtcattcacg actggggctc cgctctgggt 1320 ttccactggg ccaagcgcaa tccagagcgc gtcaaaggta ttgcatttat ggagttcatc 1380 cgccctatcc cgacctggga cgaatggcca gaatttgccc gcgagacctt ccaggccttc 1440 cgcaccaccg acgtcggccg caagctgatc atcgatcaga acgtttttat cgagggtacg 1500 ctgccgatgg gtgtcgtccg cccgctgact gaagtcgaga tggaccatta ccgcgagccg 1560 ttcctgaatc ctgttgaccg cgagccactg tggcgcttcc 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atggatgatc atcactttaa ggtgattctg cactatggca cactggtaat cgacggggtt 60 acgccgaaca tgatcgacta tttcggacgg ccgtatgaag gcatcgccgt gttcgacggc 120 aaaaagatca ctgtaaccgg gaccctgtgg aacggcaaca aaattatcga cgagcgcctg 180 atcaaccccg acggctccct gctgttccgc gtaaccatca acggagtgac cggctggcgg 240 ctgtgcgagc gcattttggc gggaagttct ggtggaggga gctccggtgg aggaagttct 300 ggtggaggga gctccggtgg aatggtgttt acactcgaag atttcgtagg ggactggcgg 360 cagacagccg gctacaacct ggaccaagtc cttgagcagg gcggtgtgtc cagtttgttt 420 cagaatctcg gggtgtccgt aactccgatc caaaggattg tcctgagcgg tgaaaacggc 480 ctgaagatcg acatccatgt catcatcccg tatgaaggtc tgagcggcga tcagatgggc 540 cagatcgaaa aaatttttaa ggtggtgtac cctgtg 576 <210> 104 <211> 192 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 104 Met Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr Gly Thr Leu Val 1 5 10 15 Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr 20 25 30 Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile 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ttatcgacga gcgcctgatc aaccccgacg gctccctgct gttccgcgta 180 accatcaacg gagtgaccgg ctggcggctg tgcgagcgca ttttggcgat ggtgtttaca 240 ctcgaagatt tcgtagggga ctggcggcag acagccggct acaacctgga ccaagtcctt 300 gagcagggcg gtgtgtccag tttgtttcag aatctcgggg tgtccgtaac tccgatccaa 360 aggattgtcc tgagcggtga aaacggcctg aagatcgaca tccatgtcat catcccgtat 420 gaaggtctga gcggcgatca gatgggccag atcgaaaaaa tttttaaggt ggtgtaccct 480 gtggatgatc atcactttaa ggtgattctg cactat 516 <210> 106 <211> 172 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 106 Met Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr 1 5 10 15 Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile 20 25 30 Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg 35 40 45 Leu Ile Asn Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly 50 55 60 Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala Met Val Phe Thr 65 70 75 80 Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln 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gcctgaagat cgacatccat 420 gtcatcatcc cgtatgaagg tctgagcggc gatcagatgg gccagatcga aaaaattttt 480 aaggtggtgt accctgtgga tgatcatcac tttaaggtga ttctgcacta t 531 <210> 108 <211> 177 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 108 Met Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr 1 5 10 15 Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile 20 25 30 Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg 35 40 45 Leu Ile Asn Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly 50 55 60 Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala Gly Ser Ser Gly 65 70 75 80 Gly Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr 85 90 95 Ala Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser 100 105 110 Leu Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val 115 120 125 Leu Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro 130 135 140 Tyr Glu Gly Leu Ser Gly Asp Gln Met 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Sequence: Synthetic polypeptide <400> 110 Met Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr 1 5 10 15 Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile 20 25 30 Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg 35 40 45 Leu Ile Asn Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly 50 55 60 Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala Gly Ser Ser Gly 65 70 75 80 Gly Gly Ser Ser Gly Gly Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly 85 90 95 Asp Trp Arg Gln Thr Ala Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln 100 105 110 Gly Gly Val Ser Ser Leu Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro 115 120 125 Ile Gln Arg Ile Val Leu Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile 130 135 140 His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Gly Asp Gln Met Gly Gln 145 150 155 160 Ile Glu Lys Ile Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe 165 170 175 Lys Val Ile Leu His Tyr 180 <210> 111 <211> 576 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 111 atgggcacac tggtaatcga cggggttacg ccgaacatga tcgactattt cggacggccg 60 tatgaaggca tcgccgtgtt cgacggcaaa aagatcactg taaccgggac cctgtggaac 120 ggcaacaaaa ttatcgacga gcgcctgatc aaccccgacg gctccctgct gttccgcgta 180 accatcaacg gagtgaccgg ctggcggctg tgcgagcgca ttttggcggg aagttctggt 240 ggagggagct ccggtggagg aagttctggt ggagggagct ccggtggaat ggtgtttaca 300 ctcgaagatt tcgtagggga ctggcggcag acagccggct acaacctgga ccaagtcctt 360 gagcagggcg gtgtgtccag tttgtttcag aatctcgggg tgtccgtaac tccgatccaa 420 aggattgtcc tgagcggtga aaacggcctg aagatcgaca tccatgtcat catcccgtat 480 gaaggtctga gcggcgatca gatgggccag atcgaaaaaa tttttaaggt ggtgtaccct 540 gtggatgatc atcactttaa ggtgattctg cactat 576 <210> 112 <211> 192 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 112 Met Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr 1 5 10 15 Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile 20 25 30 Thr Val 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Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 114 atggatttcg taggggactg gcggcagaca gccggctaca acctggacca agtccttgag 60 cagggcggtg tgtccagttt gtttcagaat ctcggggtgt ccgtaactcc gatccaaagg 120 attgtcctga gcggtgaaaa cggcctgaag atcgacatcc atgtcatcat cccgtatgaa 180 ggtctgagcg gcgatcagat gggccagatc gaaaaaattt ttaaggtggt gtaccctgtg 240 gatgatcatc actttaaggt gattctgcac tatggcacac tggtaatcga cggggttacg 300 ccgaacatga tcgactattt cggacggccg tatgaaggca tcgccgtgtt cgacggcaaa 360 aagatcactg taaccgggac cctgtggaac ggcaacaaaa ttatcgacga gcgcctgatc 420 aaccccgacg gctccctgct gttccgcgta accatcaacg gagtgaccgg ctggcggctg 480 tgcgagcgca ttttggcggg aagttctggt ggaggaagtt ctggtggaga gcctactact 540 gagaacttgt acttccagag cgataacgga agttctggtg gaggaagttc tggtggaatg 600 gtgtttacac tcgaa 615 <210> 115 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 115 Met Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala Gly Tyr Asn Leu Asp 1 5 10 15 Gln Val Leu Glu Gln Gly 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<400> 116 atgttcgtag gggactggcg gcagacagcc ggctacaacc tggaccaagt ccttgagcag 60 ggcggtgtgt ccagtttgtt tcagaatctc ggggtgtccg taactccgat ccaaaggatt 120 gtcctgagcg gtgaaaacgg cctgaagatc gacatccatg tcatcatccc gtatgaaggt 180 ctgagcggcg atcagatggg ccagatcgaa aaaattttta aggtggtgta ccctgtggat 240 gatcatcact ttaaggtgat tctgcactat ggcacactgg taatcgacgg ggttacgccg 300 aacatgatcg actatttcgg acggccgtat gaaggcatcg ccgtgttcga cggcaaaaag 360 atcactgtaa ccgggaccct gtggaacggc aacaaaatta tcgacgagcg cctgatcaac 420 cccgacggct ccctgctgtt ccgcgtaacc atcaacggag tgaccggctg gcggctgtgc 480 gagcgcattt tggcgggaag ttctggtgga ggaagttctg gtggagagcc tactactgag 540 aacttgtact tccagagcga taacggaagt tctggtggag gaagttctgg tggaatggtg 600 tttacactcg aagat 615 <210> 117 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 117 Met Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala Gly Tyr Asn Leu Asp Gln 1 5 10 15 Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Phe Gln Asn Leu Gly 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gacagccggc tacaacctgg accaagtcct tgagcagggc 60 ggtgtgtcca gtttgtttca gaatctcggg gtgtccgtaa ctccgatcca aaggattgtc 120 ctgagcggtg aaaacggcct gaagatcgac atccatgtca tcatcccgta tgaaggtctg 180 agcggcgatc agatgggcca gatcgaaaaa atttttaagg tggtgtaccc tgtggatgat 240 catcacttta aggtgattct gcactatggc acactggtaa tcgacggggt tacgccgaac 300 atgatcgact atttcggacg gccgtatgaa ggcatcgccg tgttcgacgg caaaaagatc 360 actgtaaccg ggaccctgtg gaacggcaac aaaattatcg acgagcgcct gatcaacccc 420 gacggctccc tgctgttccg cgtaaccatc aacggagtga ccggctggcg gctgtgcgag 480 cgcattttgg cgggaagttc tggtggagga agttctggtg gagagcctac tactgagaac 540 ttgtacttcc agagcgataa cggaagttct ggtggaggaa gttctggtgg aatggtgttt 600 acactcgaag atttc 615 <210> 119 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 119 Met Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val 1 5 10 15 Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser 20 25 30 Val Thr Pro Ile Gln 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gtccgtaact ccgatccaaa ggattgtcct gagcggtgaa 120 aacggcctga agatcgacat ccatgtcatc atcccgtatg aaggtctgag cggcgatcag 180 atgggccaga tcgaaaaaat ttttaaggtg gtgtaccctg tggatgatca tcactttaag 240 gtgattctgc actatggcac actggtaatc gacggggtta cgccgaacat gatcgactat 300 ttcggacggc cgtatgaagg catcgccgtg ttcgacggca aaaagatcac tgtaaccggg 360 accctgtgga acggcaacaa aattatcgac gagcgcctga tcaaccccga cggctccctg 420 ctgttccgcg taaccatcaa cggagtgacc ggctggcggc tgtgcgagcg cattttggcg 480 ggaagttctg gtggaggaag ttctggtgga gagcctacta ctgagaactt gtacttccag 540 agcgataacg gaagttctgg tggaggaagt tctggtggaa tggtgtttac actcgaagat 600 ttcgtagggg actgg 615 <210> 123 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 123 Met Arg Gln Thr Ala Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly 1 5 10 15 Gly Val Ser Ser Leu Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile 20 25 30 Gln Arg Ile Val Leu Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His 35 40 45 Val Ile Ile Pro 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gggccagatc 180 gaaaaaattt ttaaggtggt gtaccctgtg gatgatcatc actttaaggt gattctgcac 240 tatggcacac tggtaatcga cggggttacg ccgaacatga tcgactattt cggacggccg 300 tatgaaggca tcgccgtgtt cgacggcaaa aagatcactg taaccgggac cctgtggaac 360 ggcaacaaaa ttatcgacga gcgcctgatc aaccccgacg gctccctgct gttccgcgta 420 accatcaacg gagtgaccgg ctggcggctg tgcgagcgca ttttggcggg aagttctggt 480 ggaggaagtt ctggtggaga gcctactact gagaacttgt acttccagag cgataacgga 540 agttctggtg gaggaagttc tggtggaatg gtgtttacac tcgaagattt cgtaggggac 600 tggcggcaga cagcc 615 <210> 127 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 127 Met Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser 1 5 10 15 Leu Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val 20 25 30 Leu Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro 35 40 45 Tyr Glu Gly Leu Ser Gly Asp Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe 50 55 60 Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe 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tgatcatcac tttaaggtga ttctgcacta tggcacactg 240 gtaatcgacg gggttacgcc gaacatgatc gactatttcg gacggccgta tgaaggcatc 300 gccgtgttcg acggcaaaaa gatcactgta accgggaccc tgtggaacgg caacaaaatt 360 atcgacgagc gcctgatcaa ccccgacggc tccctgctgt tccgcgtaac catcaacgga 420 gtgaccggct ggcggctgtg cgagcgcatt ttggcgggaa gttctggtgg aggaagttct 480 ggtggagagc ctactactga gaacttgtac ttccagagcg ataacggaag ttctggtgga 540 ggaagttctg gtggaatggt gtttacactc gaagatttcg taggggactg gcggcagaca 600 gccggctaca ac 612 <210> 129 <211> 204 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 129 Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Phe Gln Asn 1 5 10 15 Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Leu Ser Gly Glu 20 25 30 Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu 35 40 45 Ser Gly Asp Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys Val Val Tyr 50 55 60 Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr Gly Thr Leu 65 70 75 80 Val Ile 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cggcaacaaa attatcgacg agcgcctgat caaccccgac 360 ggctccctgc tgttccgcgt aaccatcaac ggagtgaccg gctggcggct gtgcgagcgc 420 attttggcgg gaagttctgg tggaggaagt tctggtggag agcctactac tgagaacttg 480 tacttccaga gcgataacgg aagttctggt ggaggaagtt ctggtggaat ggtgtttaca 540 ctcgaagatt tcgtagggga ctggcggcag acagccggct acaacctgga ccaagtcctt 600 gagcagggcg gt 612 <210> 135 <211> 204 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 135 Val Ser Ser Leu Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln 1 5 10 15 Arg Ile Val Leu Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val 20 25 30 Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Gly Asp Gln Met Gly Gln Ile Glu 35 40 45 Lys Ile Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val 50 55 60 Ile Leu His Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met 65 70 75 80 Ile Asp Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly 85 90 95 Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile 100 105 110 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actactgaga acttgtactt ccagagcgat aacggaagtt ctggtggagg aagttctggt 480 ggaatggtgt ttacactcga agatttcgta ggggactggc ggcagacagc cggctacaac 540 ctggaccaag tccttgagca gggcggtgtg tccagtttgt ttcagaatct cggggtgtcc 600 gtaactccga tccaa 615 <210> 141 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 141 Met Arg Ile Val Leu Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His 1 5 10 15 Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Gly Asp Gln Met Gly Gln Ile 20 25 30 Glu Lys Ile Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys 35 40 45 Val Ile Leu His Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn 50 55 60 Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp 65 70 75 80 Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile 85 90 95 Ile Asp Glu Arg Leu Ile Asn Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val 100 105 110 Thr Ile Asn Gly Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala 115 120 125 Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly 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gtgtttacac tcgaagattt cgtaggggac tggcggcaga cagccggcta caacctggac 540 caagtccttg agcagggcgg tgtgtccagt ttgtttcaga atctcggggt gtccgtaact 600 ccgatccaaa ggatt 615 <210> 145 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 145 Met Val Leu Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile 1 5 10 15 Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Gly Asp Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys 20 25 30 Ile Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile 35 40 45 Leu His Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile 50 55 60 Asp Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys 65 70 75 80 Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp 85 90 95 Glu Arg Leu Ile Asn Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile 100 105 110 Asn Gly Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala Gly Ser 115 120 125 Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Glu Pro Thr Thr Glu Asn Leu Tyr 130 135 140 Phe Gln Ser Asp Asn Gly Ser Ser 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cggcagacag ccggctacaa cctggaccaa 540 gtccttgagc agggcggtgt gtccagtttg tttcagaatc tcggggtgtc cgtaactccg 600 atccaaagga tt 612 <210> 147 <211> 204 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 147 Met Leu Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile 1 5 10 15 Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Gly Asp Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile 20 25 30 Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu 35 40 45 His Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp 50 55 60 Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys 65 70 75 80 Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu 85 90 95 Arg Leu Ile Asn Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn 100 105 110 Gly Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala Gly Ser Ser 115 120 125 Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Glu Pro Thr Thr Glu Asn Leu Tyr Phe 130 135 140 Gln Ser Asp Asn Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Met Val 145 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Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 157 Met Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu 1 5 10 15 Ser Gly Asp Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys Val Val Tyr 20 25 30 Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr Gly Thr Leu 35 40 45 Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg Pro 50 55 60 Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly 65 70 75 80 Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Asn Pro 85 90 95 Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val Thr Gly Trp 100 105 110 Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser 115 120 125 Gly Gly Glu Pro Thr Thr Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Ser Asp Asn Gly 130 135 140 Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Met Val Phe Thr Leu Glu Asp 145 150 155 160 Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val 165 170 175 Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser 180 185 190 Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile 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Synthetic polypeptide <400> 159 Met Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser 1 5 10 15 Gly Asp Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys Val Val Tyr Pro 20 25 30 Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr Gly Thr Leu Val 35 40 45 Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr 50 55 60 Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr 65 70 75 80 Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Asn Pro Asp 85 90 95 Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val Thr Gly Trp Arg 100 105 110 Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly 115 120 125 Gly Glu Pro Thr Thr Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Ser Asp Asn Gly Ser 130 135 140 Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe 145 150 155 160 Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu 165 170 175 Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val 180 185 190 Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Leu Ser Gly Glu Asn Gly 195 200 205 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Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Gly 1 5 10 15 Asp Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys Val Val Tyr Pro Val 20 25 30 Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr Gly Thr Leu Val Ile 35 40 45 Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu 50 55 60 Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu 65 70 75 80 Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Asn Pro Asp Gly 85 90 95 Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val Thr Gly Trp Arg Leu 100 105 110 Cys Glu Arg Ile Leu Ala Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly 115 120 125 Glu Pro Thr Thr Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Ser Asp Asn Gly Ser Ser 130 135 140 Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val 145 150 155 160 Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu 165 170 175 Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr 180 185 190 Pro Ile Gln Arg Ile Val Leu Ser Gly Glu Asn Gly Leu 195 200 205 <210> 162 <211> 615 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 162 atgatcgaca tccatgtcat catcccgtat gaaggtctga gcggcgatca gatgggccag 60 atcgaaaaaa tttttaaggt ggtgtaccct gtggatgatc atcactttaa ggtgattctg 120 cactatggca cactggtaat cgacggggtt acgccgaaca tgatcgacta tttcggacgg 180 ccgtatgaag gcatcgccgt gttcgacggc aaaaagatca ctgtaaccgg gaccctgtgg 240 aacggcaaca aaattatcga cgagcgcctg atcaaccccg acggctccct gctgttccgc 300 gtaaccatca acggagtgac cggctggcgg ctgtgcgagc gcattttggc gggaagttct 360 ggtggaggaa gttctggtgg agagcctact actgagaact tgtacttcca gagcgataac 420 ggaagttctg gtggaggaag ttctggtgga atggtgttta cactcgaaga tttcgtaggg 480 gactggcggc agacagccgg ctacaacctg gaccaagtcc ttgagcaggg cggtgtgtcc 540 agtttgtttc agaatctcgg ggtgtccgta actccgatcc aaaggattgt cctgagcggt 600 gaaaacggcc tgaag 615 <210> 163 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 163 Met Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Gly Asp 1 5 10 15 Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp 20 25 30 Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp 35 40 45 Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly 50 55 60 Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp 65 70 75 80 Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Asn Pro Asp Gly Ser 85 90 95 Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys 100 105 110 Glu Arg Ile Leu Ala Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Glu 115 120 125 Pro Thr Thr Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Ser Asp Asn Gly Ser Ser Gly 130 135 140 Gly Gly Ser Ser Gly Gly Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly 145 150 155 160 Asp Trp Arg Gln Thr Ala Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln 165 170 175 Gly Gly Val Ser Ser Leu Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro 180 185 190 Ile Gln Arg Ile Val Leu Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys 195 200 205 <210> 164 <211> 615 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 164 atggacatcc atgtcatcat cccgtatgaa ggtctgagcg gcgatcagat gggccagatc 60 gaaaaaattt ttaaggtggt gtaccctgtg gatgatcatc actttaaggt gattctgcac 120 tatggcacac tggtaatcga cggggttacg ccgaacatga tcgactattt cggacggccg 180 tatgaaggca tcgccgtgtt cgacggcaaa aagatcactg taaccgggac cctgtggaac 240 ggcaacaaaa ttatcgacga gcgcctgatc aaccccgacg gctccctgct gttccgcgta 300 accatcaacg gagtgaccgg ctggcggctg tgcgagcgca ttttggcggg aagttctggt 360 ggaggaagtt ctggtggaga gcctactact gagaacttgt acttccagag cgataacgga 420 agttctggtg gaggaagttc tggtggaatg gtgtttacac tcgaagattt cgtaggggac 480 tggcggcaga cagccggcta caacctggac caagtccttg agcagggcgg tgtgtccagt 540 ttgtttcaga atctcggggt gtccgtaact ccgatccaaa ggattgtcct gagcggtgaa 600 aacggcctga agatc 615 <210> 165 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 165 Met Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Gly Asp Gln 1 5 10 15 Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp 20 25 30 His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly 35 40 45 Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile 50 55 60 Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn 65 70 75 80 Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Asn Pro Asp Gly Ser Leu 85 90 95 Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu 100 105 110 Arg Ile Leu Ala Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Glu Pro 115 120 125 Thr Thr Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Ser Asp Asn Gly Ser Ser Gly Gly 130 135 140 Gly Ser Ser Gly Gly Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp 145 150 155 160 Trp Arg Gln Thr Ala Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly 165 170 175 Gly Val Ser Ser Leu Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile 180 185 190 Gln Arg Ile Val Leu Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile 195 200 205 <210> 166 <211> 614 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 166 atgatccatg tcatcatccc gtatgaaggt ctgagcggcg atcagatggg ccagatcgaa 60 aaaattttta aggtggtgta ccctgtggat gatcatcact ttaaggtgat tctgcactat 120 ggcacactgg taatcgacgg ggttacgccg aacatgatcg actatttcgg acggccgtat 180 gaaggcatcg ccgtgttcga cggcaaaaag atcactgtaa ccgggaccct gtggaacggc 240 aacaaaatta tcgacgagcg cctgatcaac cccgacggct ccctgctgtt ccgcgtaacc 300 atcaacggag tgaccggctg gcggctgtgc gagcgcattt tggcgggaag ttctggtgga 360 ggaagttctg gtggagagcc tactactgag aacttgtact tccagagcga taacggaagt 420 tctggtggag gaagttctgg tggaatggtg tttacactcg aagatttcgt aggggactgg 480 cggcagacag ccggctacaa cctggaccaa gtccttgagc agggcggtgt gtccagtttg 540 tttcagaatc tcggggtgtc cgtaactccg atccaaagga ttgtcctgag cggtgaaaac 600 ggcctgaaga tcga 614 <210> 167 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 167 Met Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Gly Asp Gln Met 1 5 10 15 Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His 20 25 30 His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val 35 40 45 Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala 50 55 60 Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly 65 70 75 80 Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Asn Pro Asp Gly Ser Leu Leu 85 90 95 Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu Arg 100 105 110 Ile Leu Ala Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Glu Pro Thr 115 120 125 Thr Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Ser Asp Asn Gly Ser Ser Gly Gly Gly 130 135 140 Ser Ser Gly Gly Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp 145 150 155 160 Arg Gln Thr Ala Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly 165 170 175 Val Ser Ser Leu Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln 180 185 190 Arg Ile Val Leu Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp 195 200 205 <210> 168 <211> 615 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 168 atggtcatca tcccgtatga aggtctgagc ggcgatcaga tgggccagat cgaaaaaatt 60 tttaaggtgg tgtaccctgt ggatgatcat cactttaagg tgattctgca ctatggcaca 120 ctggtaatcg acggggttac gccgaacatg atcgactatt tcggacggcc gtatgaaggc 180 atcgccgtgt tcgacggcaa aaagatcact gtaaccggga ccctgtggaa cggcaacaaa 240 attatcgacg agcgcctgat caaccccgac ggctccctgc tgttccgcgt aaccatcaac 300 ggagtgaccg gctggcggct gtgcgagcgc attttggcgg gaagttctgg tggaggaagt 360 tctggtggag agcctactac tgagaacttg tacttccaga gcgataacgg aagttctggt 420 ggaggaagtt ctggtggaat ggtgtttaca ctcgaagatt tcgtagggga ctggcggcag 480 acagccggct acaacctgga ccaagtcctt gagcagggcg gtgtgtccag tttgtttcag 540 aatctcgggg tgtccgtaac tccgatccaa aggattgtcc tgagcggtga aaacggcctg 600 aagatcgaca tccat 615 <210> 169 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 169 Met Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Gly Asp Gln Met Gly Gln 1 5 10 15 Ile Glu Lys Ile Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe 20 25 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atcgaaaaaa tttttaaggt ggtgtaccct 60 gtggatgatc atcactttaa ggtgattctg cactatggca cactggtaat cgacggggtt 120 acgccgaaca tgatcgacta tttcggacgg ccgtatgaag gcatcgccgt gttcgacggc 180 aaaaagatca ctgtaaccgg gaccctgtgg aacggcaaca aaattatcga cgagcgcctg 240 atcaaccccg acggctccct gctgttccgc gtaaccatca acggagtgac cggctggcgg 300 ctgtgcgagc gcattttggc gggaagttct ggtggaggaa gttctggtgg agagcctact 360 actgagaact tgtacttcca gagcgataac ggaagttctg gtggaggaag ttctggtgga 420 atggtgttta cactcgaaga tttcgtaggg gactggcggc agacagccgg ctacaacctg 480 gaccaagtcc ttgagcaggg cggtgtgtcc agtttgtttc agaatctcgg ggtgtccgta 540 actccgatcc aaaggattgt cctgagcggt gaaaacggcc tgaagatcga catccatgtc 600 atcatcccgt atgaa 615 <210> 171 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 171 Met Gly Leu Ser Gly Asp Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys 1 5 10 15 Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr 20 25 30 Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly 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catcacttta aggtgattct gcactatggc acactggtaa tcgacggggt tacgccgaac 120 atgatcgact atttcggacg gccgtatgaa ggcatcgccg tgttcgacgg caaaaagatc 180 actgtaaccg ggaccctgtg gaacggcaac aaaattatcg acgagcgcct gatcaacccc 240 gacggctccc tgctgttccg cgtaaccatc aacggagtga ccggctggcg gctgtgcgag 300 cgcattttgg cgggaagttc tggtggagga agttctggtg gagagcctac tactgagaac 360 ttgtacttcc agagcgataa cggaagttct ggtggaggaa gttctggtgg aatggtgttt 420 acactcgaag atttcgtagg ggactggcgg cagacagccg gctacaacct ggaccaagtc 480 cttgagcagg gcggtgtgtc cagtttgttt cagaatctcg gggtgtccgt aactccgatc 540 caaaggattg tcctgagcgg tgaaaacggc ctgaagatcg acatccatgt catcatcccg 600 tatgaaggtc tgagc 615 <210> 173 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 173 Met Gly Asp Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys Val Val Tyr 1 5 10 15 Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr Gly Thr Leu 20 25 30 Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg Pro 35 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atcgacgggg ttacgccgaa catgatcgac 120 tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc gtgttcgacg gcaaaaagat cactgtaacc 180 gggaccctgt ggaacggcaa caaaattatc gacgagcgcc tgatcaaccc cgacggctcc 240 ctgctgttcc gcgtaaccat caacggagtg accggctggc ggctgtgcga gcgcattttg 300 gcgggaagtt ctggtggagg aagttctggt ggagagccta ctactgagaa cttgtacttc 360 cagagcgata acggaagttc tggtggagga agttctggtg gaatggtgtt tacactcgaa 420 gatttcgtag gggactggcg gcagacagcc ggctacaacc tggaccaagt ccttgagcag 480 ggcggtgtgt ccagtttgtt tcagaatctc ggggtgtccg taactccgat ccaaaggatt 540 gtcctgagcg gtgaaaacgg cctgaagatc gacatccatg tcatcatccc gtatgaaggt 600 ctgagcggcg atcag 615 <210> 175 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 175 Met Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp 1 5 10 15 Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp 20 25 30 Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly 35 40 45 Ile Ala Val Phe Asp Gly 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cggccgtatg aaggcatcgc cgtgttcgac ggcaaaaaga tcactgtaac cgggaccctg 180 tggaacggca acaaaattat cgacgagcgc ctgatcaacc ccgacggctc cctgctgttc 240 cgcgtaacca tcaacggagt gaccggctgg cggctgtgcg agcgcatttt ggcgggaagt 300 tctggtggag gaagttctgg tggagagcct actactgaga acttgtactt ccagagcgat 360 aacggaagtt ctggtggagg aagttctggt ggaatggtgt ttacactcga agatttcgta 420 ggggactggc ggcagacagc cggctacaac ctggaccaag tccttgagca gggcggtgtg 480 tccagtttgt ttcagaatct cggggtgtcc gtaactccga tccaaaggat tgtcctgagc 540 ggtgaaaacg gcctgaagat cgacatccat gtcatcatcc cgtatgaagg tctgagcggc 600 gatcagatgg gccag 615 <210> 177 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 177 Met Ile Glu Lys Ile Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His 1 5 10 15 Phe Lys Val Ile Leu His Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr 20 25 30 Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val 35 40 45 Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn 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atcactgtaa ccgggaccct gtggaacggc 180 aacaaaatta tcgacgagcg cctgatcaac cccgacggct ccctgctgtt ccgcgtaacc 240 atcaacggag tgaccggctg gcggctgtgc gagcgcattt tggcgggaag ttctggtgga 300 ggaagttctg gtggagagcc tactactgag aacttgtact tccagagcga taacggaagt 360 tctggtggag gaagttctgg tggaatggtg tttacactcg aagatttcgt aggggactgg 420 cggcagacag ccggctacaa cctggaccaa gtccttgagc agggcggtgt gtccagtttg 480 tttcagaatc tcggggtgtc cgtaactccg atccaaagga ttgtcctgag cggtgaaaac 540 ggcctgaaga tcgacatcca tgtcatcatc ccgtatgaag gtctgagcgg cgatcagatg 600 ggccagatcg aaaaa 615 <210> 179 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 179 Met Ile Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val 1 5 10 15 Ile Leu His Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met 20 25 30 Ile Asp Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly 35 40 45 Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile 50 55 60 Asp Glu Arg Leu Ile Asn 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atcgacgagc gcctgatcaa ccccgacggc tccctgctgt tccgcgtaac catcaacgga 240 gtgaccggct ggcggctgtg cgagcgcatt ttggcgggaa gttctggtgg aggaagttct 300 ggtggagagc ctactactga gaacttgtac ttccagagcg ataacggaag ttctggtgga 360 ggaagttctg gtggaatggt gtttacactc gaagatttcg taggggactg gcggcagaca 420 gccggctaca acctggacca agtccttgag cagggcggtg tgtccagttt gtttcagaat 480 ctcggggtgt ccgtaactcc gatccaaagg attgtcctga gcggtgaaaa cggcctgaag 540 atcgacatcc atgtcatcat cccgtatgaa ggtctgagcg gcgatcagat gggccagatc 600 gaaaaaattt ttaag 615 <210> 181 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 181 Met Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His 1 5 10 15 Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr 20 25 30 Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile 35 40 45 Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg 50 55 60 Leu Ile Asn Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn 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ctgctgttcc gcgtaaccat caacggagtg 240 accggctggc ggctgtgcga gcgcattttg gcgggaagtt ctggtggagg aagttctggt 300 ggagagccta ctactgagaa cttgtacttc cagagcgata acggaagttc tggtggagga 360 agttctggtg gaatggtgtt tacactcgaa gatttcgtag gggactggcg gcagacagcc 420 ggctacaacc tggaccaagt ccttgagcag ggcggtgtgt ccagtttgtt tcagaatctc 480 ggggtgtccg taactccgat ccaaaggatt gtcctgagcg gtgaaaacgg cctgaagatc 540 gacatccatg tcatcatccc gtatgaaggt ctgagcggcg atcagatggg ccagatcgaa 600 aaaattttta aggtg 615 <210> 183 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 183 Met Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr 1 5 10 15 Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe 20 25 30 Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr 35 40 45 Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu 50 55 60 Ile Asn Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val 65 70 75 80 Thr Gly Trp Arg 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agttctggtg gaggaagttc tggtggagag 300 cctactactg agaacttgta cttccagagc gataacggaa gttctggtgg aggaagttct 360 ggtggaatgg tgtttacact cgaagatttc gtaggggact ggcggcagac agccggctac 420 aacctggacc aagtccttga gcagggcggt gtgtccagtt tgtttcagaa tctcggggtg 480 tccgtaactc cgatccaaag gattgtcctg agcggtgaaa acggcctgaa gatcgacatc 540 catgtcatca tcccgtatga aggtctgagc ggcgatcaga tgggccagat cgaaaaaatt 600 tttaaggtgg tgtac 615 <210> 187 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 187 Met Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr Gly Thr 1 5 10 15 Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg 20 25 30 Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr 35 40 45 Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Asn 50 55 60 Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val Thr Gly 65 70 75 80 Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser 85 90 95 Ser Gly Gly 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cggcagacag ccggctacaa cctggaccaa 420 gtccttgagc agggcggtgt gtccagtttg tttcagaatc tcggggtgtc cgtaactccg 480 atccaaagga ttgtcctgag cggtgaaaac ggcctgaaga tcgacatcca tgtcatcatc 540 ccgtatgaag gtctgagcgg cgatcagatg ggccagatcg aaaaaatttt taaggtggtg 600 taccctgtgg atgat 615 <210> 195 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 195 Met His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp 1 5 10 15 Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly 20 25 30 Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp 35 40 45 Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Asn Pro Asp Gly Ser 50 55 60 Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys 65 70 75 80 Glu Arg Ile Leu Ala Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Glu 85 90 95 Pro Thr Thr Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Ser Asp Asn Gly Ser Ser Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Ser Gly Gly Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly 115 120 125 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cttgagcagg gcggtgtgtc cagtttgttt cagaatctcg gggtgtccgt aactccgatc 480 caaaggattg tcctgagcgg tgaaaacggc ctgaagatcg acatccatgt catcatcccg 540 tatgaaggtc tgagcggcga tcagatgggc cagatcgaaa aaatttttaa ggtggtgtac 600 cctgtggatg atcat 615 <210> 197 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 197 Met His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly 1 5 10 15 Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile 20 25 30 Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn 35 40 45 Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Asn Pro Asp Gly Ser Leu 50 55 60 Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu 65 70 75 80 Arg Ile Leu Ala Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Glu Pro 85 90 95 Thr Thr Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Ser Asp Asn Gly Ser Ser Gly Gly 100 105 110 Gly Ser Ser Gly Gly Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp 115 120 125 Trp Arg Gln Thr Ala Gly Tyr Asn Leu Asp 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aatctcgggg tgtccgtaac tccgatccaa 480 aggattgtcc tgagcggtga aaacggcctg aagatcgaca tccatgtcat catcccgtat 540 gaaggtctga gcggcgatca gatgggccag atcgaaaaaa tttttaaggt ggtgtaccct 600 gtggatgatc atcac 615 <210> 199 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 199 Met Phe Lys Val Ile Leu His Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val 1 5 10 15 Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala 20 25 30 Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly 35 40 45 Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Asn Pro Asp Gly Ser Leu Leu 50 55 60 Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu Arg 65 70 75 80 Ile Leu Ala Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Glu Pro Thr 85 90 95 Thr Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Ser Asp Asn Gly Ser Ser Gly Gly Gly 100 105 110 Ser Ser Gly Gly Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp 115 120 125 Arg Gln Thr Ala Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly 130 135 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ctgagcggtg aaaacggcct gaagatcgac atccatgtca tcatcccgta tgaaggtctg 540 agcggcgatc agatgggcca gatcgaaaaa atttttaagg tggtgtaccc tgtggatgat 600 catcacttta aggtg 615 <210> 201 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 201 Met Ile Leu His Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn 1 5 10 15 Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp 20 25 30 Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile 35 40 45 Ile Asp Glu Arg Leu Ile Asn Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val 50 55 60 Thr Ile Asn Gly Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala 65 70 75 80 Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Glu Pro Thr Thr Glu Asn 85 90 95 Leu Tyr Phe Gln Ser Asp Asn Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly 100 105 110 Gly Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr 115 120 125 Ala Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser 130 135 140 Leu Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser 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atcatcccgt atgaaggtct gagcggcgat 540 cagatgggcc agatcgaaaa aatttttaag gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt 600 aaggtgattc tgcacg 616 <210> 203 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 203 Met Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp 1 5 10 15 Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys 20 25 30 Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu 35 40 45 Arg Leu Ile Asn Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn 50 55 60 Gly Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala Gly Ser Ser 65 70 75 80 Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Glu Pro Thr Thr Glu Asn Leu Tyr Phe 85 90 95 Gln Ser Asp Asn Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Met Val 100 105 110 Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala Gly Tyr 115 120 125 Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Phe Gln 130 135 140 Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Leu Ser Gly 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atgggccaga tcgaaaaaat ttttaaggtg gtgtaccctg tggatgatca tcactttaag 600 gtgattctgc actat 615 <210> 205 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 205 Met Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr 1 5 10 15 Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile 20 25 30 Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg 35 40 45 Leu Ile Asn Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly 50 55 60 Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala Gly Ser Ser Gly 65 70 75 80 Gly Gly Ser Ser Gly Gly Glu Pro Thr Thr Glu Asn Leu Tyr Phe Gln 85 90 95 Ser Asp Asn Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Met Val Phe 100 105 110 Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala Gly Tyr Asn 115 120 125 Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Phe Gln Asn 130 135 140 Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Leu Ser Gly Glu 145 150 155 160 Asn Gly Leu Lys Ile Asp 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Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 213 Met Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly 1 5 10 15 Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp 20 25 30 Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Asn Pro Asp Gly Ser 35 40 45 Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys 50 55 60 Glu Arg Ile Leu Ala Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Glu 65 70 75 80 Pro Thr Thr Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Ser Asp Asn Gly Ser Ser Gly 85 90 95 Gly Gly Ser Ser Gly Gly Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly 100 105 110 Asp Trp Arg Gln Thr Ala Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln 115 120 125 Gly Gly Val Ser Ser Leu Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro 130 135 140 Ile Gln Arg Ile Val Leu Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile 145 150 155 160 His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Gly Asp Gln Met Gly Gln 165 170 175 Ile Glu Lys Ile Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe 180 185 190 Lys Val 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Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 215 Met Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile 1 5 10 15 Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn 20 25 30 Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Asn Pro Asp Gly Ser Leu 35 40 45 Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu 50 55 60 Arg Ile Leu Ala Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Glu Pro 65 70 75 80 Thr Thr Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Ser Asp Asn Gly Ser Ser Gly Gly 85 90 95 Gly Ser Ser Gly Gly Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp 100 105 110 Trp Arg Gln Thr Ala Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly 115 120 125 Gly Val Ser Ser Leu Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile 130 135 140 Gln Arg Ile Val Leu Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His 145 150 155 160 Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Gly Asp Gln Met Gly Gln Ile 165 170 175 Glu Lys Ile Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys 180 185 190 Val Ile Leu His Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp 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<211> 612 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 218 atgaacatga tcgactattt cggacggccg tatgaaggca tcgccgtgtt cgacggcaaa 60 aagatcactg taaccgggac cctgtggaac ggcaacaaaa ttatcgacga gcgcctgatc 120 aaccccgacg gctccctgct gttccgcgta accatcaacg gagtgaccgg ctggcggctg 180 tgcgagcgca ttttggcggg aagttctggt ggaggaagtt ctggtggaga gcctactact 240 gagaacttgt acttccagag cgataacgga agttctggtg gaggaagttc tggtggaatg 300 gtgtttacac tcgaagattt cgtaggggac tggcggcaga cagccggcta caacctggac 360 caagtccttg agcagggcgg tgtgtccagt ttgtttcaga atctcggggt gtccgtaact 420 ccgatccaaa ggattgtcct gagcggtgaa aacggcctga agatcgacat ccatgtcatc 480 atcccgtatg aaggtctgag cggcgatcag atgggccaga tcgaaaaaat ttttaaggtg 540 gtgtaccctg tggatgatca tcactttaag gtgattctgc actatggcac actggtaatc 600 gacggggtta cg 612 <210> 219 <211> 204 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 219 Met Asn Met Ile 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<220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 220 atgatgatcg actatttcgg acggccgtat gaaggcatcg ccgtgttcga cggcaaaaag 60 atcactgtaa ccgggaccct gtggaacggc aacaaaatta tcgacgagcg cctgatcaac 120 cccgacggct ccctgctgtt ccgcgtaacc atcaacggag tgaccggctg gcggctgtgc 180 gagcgcattt tggcgggaag ttctggtgga ggaagttctg gtggagagcc tactactgag 240 aacttgtact tccagagcga taacggaagt tctggtggag gaagttctgg tggaatggtg 300 tttacactcg aagatttcgt aggggactgg cggcagacag ccggctacaa cctggaccaa 360 gtccttgagc agggcggtgt gtccagtttg tttcagaatc tcggggtgtc cgtaactccg 420 atccaaagga ttgtcctgag cggtgaaaac ggcctgaaga tcgacatcca tgtcatcatc 480 ccgtatgaag gtctgagcgg cgatcagatg ggccagatcg aaaaaatttt taaggtggtg 540 taccctgtgg atgatcatca ctttaaggtg attctgcact atggcacact ggtaatcgac 600 ggggttacgc cgaac 615 <210> 221 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 221 Met Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val 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Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 222 atgtatttcg gacggccgta tgaaggcatc gccgtgttcg acggcaaaaa gatcactgta 60 accgggaccc tgtggaacgg caacaaaatt atcgacgagc gcctgatcaa ccccgacggc 120 tccctgctgt tccgcgtaac catcaacgga gtgaccggct ggcggctgtg cgagcgcatt 180 ttggcgggaa gttctggtgg aggaagttct ggtggagagc ctactactga gaacttgtac 240 ttccagagcg ataacggaag ttctggtgga ggaagttctg gtggaatggt gtttacactc 300 gaagatttcg taggggactg gcggcagaca gccggctaca acctggacca agtccttgag 360 cagggcggtg tgtccagttt gtttcagaat ctcggggtgt ccgtaactcc gatccaaagg 420 attgtcctga gcggtgaaaa cggcctgaag atcgacatcc atgtcatcat cccgtatgaa 480 ggtctgagcg gcgatcagat gggccagatc gaaaaaattt ttaaggtggt gtaccctgtg 540 gatgatcatc actttaaggt gattctgcac tatggcacac tggtaatcga cggggttacg 600 ccgaacatga tcgac 615 <210> 223 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 223 Met Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys 1 5 10 15 Lys Ile Thr Val Thr Gly 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<400> 224 atgcggccgt atgaaggcat cgccgtgttc gacggcaaaa agatcactgt aaccgggacc 60 ctgtggaacg gcaacaaaat tatcgacgag cgcctgatca accccgacgg ctccctgctg 120 ttccgcgtaa ccatcaacgg agtgaccggc tggcggctgt gcgagcgcat tttggcggga 180 agttctggtg gaggaagttc tggtggagag cctactactg agaacttgta cttccagagc 240 gataacggaa gttctggtgg aggaagttct ggtggaatgg tgtttacact cgaagatttc 300 gtaggggact ggcggcagac agccggctac aacctggacc aagtccttga gcagggcggt 360 gtgtccagtt tgtttcagaa tctcggggtg tccgtaactc cgatccaaag gattgtcctg 420 agcggtgaaa acggcctgaa gatcgacatc catgtcatca tcccgtatga aggtctgagc 480 ggcgatcaga tgggccagat cgaaaaaatt tttaaggtgg tgtaccctgt ggatgatcat 540 cactttaagg tgattctgca ctatggcaca ctggtaatcg acggggttac gccgaacatg 600 atcgactatt tcgga 615 <210> 225 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 225 Met Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr 1 5 10 15 Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg 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cgacggcaaa aagatcactg taaccgggac cctgtggaac 60 ggcaacaaaa ttatcgacga gcgcctgatc aaccccgacg gctccctgct gttccgcgta 120 accatcaacg gagtgaccgg ctggcggctg tgcgagcgca ttttggcggg aagttctggt 180 ggaggaagtt ctggtggaga gcctactact gagaacttgt acttccagag cgataacgga 240 agttctggtg gaggaagttc tggtggaatg gtgtttacac tcgaagattt cgtaggggac 300 tggcggcaga cagccggcta caacctggac caagtccttg agcagggcgg tgtgtccagt 360 ttgtttcaga atctcggggt gtccgtaact ccgatccaaa ggattgtcct gagcggtgaa 420 aacggcctga agatcgacat ccatgtcatc atcccgtatg aaggtctgag cggcgatcag 480 atgggccaga tcgaaaaaat ttttaaggtg gtgtaccctg tggatgatca tcactttaag 540 gtgattctgc actatggcac actggtaatc gacggggtta cgccgaacat gatcgactat 600 ttcggacggc cgtat 615 <210> 227 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 227 Met Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly 1 5 10 15 Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Asn Pro 20 25 30 Asp Gly Ser Leu Leu 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gcctactact 180 gagaacttgt acttccagag cgataacgga agttctggtg gaggaagttc tggtggaatg 240 gtgtttacac tcgaagattt cgtaggggac tggcggcaga cagccggcta caacctggac 300 caagtccttg agcagggcgg tgtgtccagt ttgtttcaga atctcggggt gtccgtaact 360 ccgatccaaa ggattgtcct gagcggtgaa aacggcctga agatcgacat ccatgtcatc 420 atcccgtatg aaggtctgag cggcgatcag atgggccaga tcgaaaaaat ttttaaggtg 480 gtgtaccctg tggatgatca tcactttaag gtgattctgc actatggcac actggtaatc 540 gacggggtta cgccgaacat gatcgactat ttcggacggc cgtatgaagg catcgccgtg 600 ttcgacggca aaaag 615 <210> 237 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 237 Met Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp 1 5 10 15 Glu Arg Leu Ile Asn Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile 20 25 30 Asn Gly Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala Gly Ser 35 40 45 Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Glu Pro Thr Thr Glu Asn Leu Tyr 50 55 60 Phe Gln Ser Asp Asn Gly Ser Ser Gly Gly Gly 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ttctggtgga ggaagttctg gtggaatggt gtttacactc 240 gaagatttcg taggggactg gcggcagaca gccggctaca acctggacca agtccttgag 300 cagggcggtg tgtccagttt gtttcagaat ctcggggtgt ccgtaactcc gatccaaagg 360 attgtcctga gcggtgaaaa cggcctgaag atcgacatcc atgtcatcat cccgtatgaa 420 ggtctgagcg gcgatcagat gggccagatc gaaaaaattt ttaaggtggt gtaccctgtg 480 gatgatcatc actttaaggt gattctgcac tatggcacac tggtaatcga cggggttacg 540 ccgaacatga tcgactattt cggacggccg tatgaaggca tcgccgtgtt cgacggcaaa 600 aagatcactg taacc 615 <210> 239 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 239 Met Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile 1 5 10 15 Asn Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val Thr 20 25 30 Gly Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala Gly Ser Ser Gly Gly Gly 35 40 45 Ser Ser Gly Gly Glu Pro Thr Thr Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Ser Asp 50 55 60 Asn Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Met Val Phe Thr Leu 65 70 75 80 Glu 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tacactcgaa 240 gatttcgtag gggactggcg gcagacagcc ggctacaacc tggaccaagt ccttgagcag 300 ggcggtgtgt ccagtttgtt tcagaatctc ggggtgtccg taactccgat ccaaaggatt 360 gtcctgagcg gtgaaaacgg cctgaagatc gacatccatg tcatcatccc gtatgaaggt 420 ctgagcggcg atcagatggg ccagatcgaa aaaattttta aggtggtgta ccctgtggat 480 gatcatcact ttaaggtgat tctgcactat ggcacactgg taatcgacgg ggttacgccg 540 aacatgatcg actatttcgg acggccgtat gaaggcatcg ccgtgttcga cggcaaaaag 600 atcactgtaa ccggg 615 <210> 241 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 241 Met Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Asn 1 5 10 15 Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val Thr Gly 20 25 30 Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser 35 40 45 Ser Gly Gly Glu Pro Thr Thr Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Ser Asp Asn 50 55 60 Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Met Val Phe Thr Leu Glu 65 70 75 80 Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala 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gacagccggc tacaacctgg accaagtcct tgagcagggc 300 ggtgtgtcca gtttgtttca gaatctcggg gtgtccgtaa ctccgatcca aaggattgtc 360 ctgagcggtg aaaacggcct gaagatcgac atccatgtca tcatcccgta tgaaggtctg 420 agcggcgatc agatgggcca gatcgaaaaa atttttaagg tggtgtaccc tgtggatgat 480 catcacttta aggtgattct gcactatggc acactggtaa tcgacggggt tacgccgaac 540 atgatcgact atttcggacg gccgtatgaa ggcatcgccg tgttcgacgg caaaaagatc 600 actgtaaccg ggacc 615 <210> 243 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 243 Met Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Asn Pro 1 5 10 15 Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val Thr Gly Trp 20 25 30 Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser 35 40 45 Gly Gly Glu Pro Thr Thr Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Ser Asp Asn Gly 50 55 60 Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Met Val Phe Thr Leu Glu Asp 65 70 75 80 Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val 85 90 95 Leu 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cggcctgaag 360 atcgacatcc atgtcatcat cccgtatgaa ggtctgagcg gcgatcagat gggccagatc 420 gaaaaaattt ttaaggtggt gtaccctgtg gatgatcatc actttaaggt gattctgcac 480 tatggcacac tggtaatcga cggggttacg ccgaacatga tcgactattt cggacggccg 540 tatgaaggca tcgccgtgtt cgacggcaaa aagatcactg taaccgggac cctgtggaac 600 ggcaacaaaa ttatcgacga gcgc 624 <210> 249 <211> 208 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 249 Met Asp Glu Arg Leu Ile Asn Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val 1 5 10 15 Thr Ile Asn Gly Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala 20 25 30 Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Glu Pro Thr Thr Glu Asn 35 40 45 Leu Tyr Phe Gln Ser Asp Asn Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly 50 55 60 Gly Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr 65 70 75 80 Ala Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser 85 90 95 Leu Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val 100 105 110 Leu Ser Gly Glu Asn 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gacatccatg tcatcatccc gtatgaaggt ctgagcggcg atcagatggg ccagatcgaa 420 aaaattttta aggtggtgta ccctgtggat gatcatcact ttaaggtgat tctgcactat 480 ggcacactgg taatcgacgg ggttacgccg aacatgatcg actatttcgg acggccgtat 540 gaaggcatcg ccgtgttcga cggcaaaaag atcactgtaa ccgggaccct gtggaacggc 600 aacaaaatta tcgac 615 <210> 251 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 251 Met Glu Arg Leu Ile Asn Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr 1 5 10 15 Ile Asn Gly Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala Gly 20 25 30 Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Glu Pro Thr Thr Glu Asn Leu 35 40 45 Tyr Phe Gln Ser Asp Asn Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly 50 55 60 Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala 65 70 75 80 Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu 85 90 95 Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Leu 100 105 110 Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His 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agcggcgatc agatgggcca gatcgaaaaa 420 atttttaagg tggtgtaccc tgtggatgat catcacttta aggtgattct gcactatggc 480 acactggtaa tcgacggggt tacgccgaac atgatcgact atttcggacg gccgtatgaa 540 ggcatcgccg tgttcgacgg caaaaagatc actgtaaccg ggaccctgtg gaacggcaac 600 aaaattatcg acgag 615 <210> 253 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 253 Met Arg Leu Ile Asn Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile 1 5 10 15 Asn Gly Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala Gly Ser 20 25 30 Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Glu Pro Thr Thr Glu Asn Leu Tyr 35 40 45 Phe Gln Ser Asp Asn Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Met 50 55 60 Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala Gly 65 70 75 80 Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Phe 85 90 95 Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Leu Ser 100 105 110 Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu 115 120 125 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tttaaggtgg tgtaccctgt ggatgatcat cactttaagg tgattctgca ctatggcaca 480 ctggtaatcg acggggttac gccgaacatg atcgactatt tcggacggcc gtatgaaggc 540 atcgccgtgt tcgacggcaa aaagatcact gtaaccggga ccctgtggaa cggcaacaaa 600 attatcgacg agcgc 615 <210> 255 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 255 Met Leu Ile Asn Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn 1 5 10 15 Gly Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala Gly Ser Ser 20 25 30 Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Glu Pro Thr Thr Glu Asn Leu Tyr Phe 35 40 45 Gln Ser Asp Asn Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Met Val 50 55 60 Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala Gly Tyr 65 70 75 80 Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Phe Gln 85 90 95 Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Leu Ser Gly 100 105 110 Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly 115 120 125 Leu Ser Gly Asp Gln Met Gly Gln Ile Glu 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ttcggacggc cgtatgaagg catcgccgtg 540 ttcgacggca aaaagatcac tgtaaccggg accctgtgga acggcaacaa aattatcgac 600 gagcgcctga tcaac 615 <210> 261 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 261 Met Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val Thr 1 5 10 15 Gly Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala Gly Ser Ser Gly Gly Gly 20 25 30 Ser Ser Gly Gly Glu Pro Thr Thr Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Ser Asp 35 40 45 Asn Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Met Val Phe Thr Leu 50 55 60 Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala Gly Tyr Asn Leu Asp 65 70 75 80 Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Phe Gln Asn Leu Gly 85 90 95 Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Leu Ser Gly Glu Asn Gly 100 105 110 Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Gly 115 120 125 Asp Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys Val Val Tyr Pro Val 130 135 140 Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr Gly Thr Leu Val Ile 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Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 273 Met Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu 1 5 10 15 Arg Ile Leu Ala Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Glu Pro 20 25 30 Thr Thr Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Ser Asp Asn Gly Ser Ser Gly Gly 35 40 45 Gly Ser Ser Gly Gly Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp 50 55 60 Trp Arg Gln Thr Ala Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly 65 70 75 80 Gly Val Ser Ser Leu Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile 85 90 95 Gln Arg Ile Val Leu Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His 100 105 110 Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Gly Asp Gln Met Gly Gln Ile 115 120 125 Glu Lys Ile Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys 130 135 140 Val Ile Leu His Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn 145 150 155 160 Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp 165 170 175 Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile 180 185 190 Ile Asp Glu Arg Leu Ile Asn Pro Asp Gly Ser 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polypeptide <400> 275 Met Thr Ile Asn Gly Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu 1 5 10 15 Ala Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Glu Pro Thr Thr Glu 20 25 30 Asn Leu Tyr Phe Gln Ser Asp Asn Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser 35 40 45 Gly Gly Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln 50 55 60 Thr Ala Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser 65 70 75 80 Ser Leu Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile 85 90 95 Val Leu Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile 100 105 110 Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Gly Asp Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile 115 120 125 Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu 130 135 140 His Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp 145 150 155 160 Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys 165 170 175 Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu 180 185 190 Arg Leu Ile Asn Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val 195 200 205 <210> 276 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Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 278 atgggagtga ccggctggcg gctgtgcgag cgcattttgg cgggaagttc tggtggagga 60 agttctggtg gagagcctac tactgagaac ttgtacttcc agagcgataa cggaagttct 120 ggtggaggaa gttctggtgg aatggtgttt acactcgaag atttcgtagg ggactggcgg 180 cagacagccg gctacaacct ggaccaagtc cttgagcagg gcggtgtgtc cagtttgttt 240 cagaatctcg gggtgtccgt aactccgatc caaaggattg tcctgagcgg tgaaaacggc 300 ctgaagatcg acatccatgt catcatcccg tatgaaggtc tgagcggcga tcagatgggc 360 cagatcgaaa aaatttttaa ggtggtgtac cctgtggatg atcatcactt taaggtgatt 420 ctgcactatg gcacactggt aatcgacggg gttacgccga acatgatcga ctatttcgga 480 cggccgtatg aaggcatcgc cgtgttcgac ggcaaaaaga tcactgtaac cgggaccctg 540 tggaacggca acaaaattat cgacgagcgc ctgatcaacc ccgacggctc cctgctgttc 600 cgcgtaacca tcaac 615 <210> 279 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 279 Met Gly Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu 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Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 280 atggtgaccg gctggcggct gtgcgagcgc attttggcgg gaagttctgg tggaggaagt 60 tctggtggag agcctactac tgagaacttg tacttccaga gcgataacgg aagttctggt 120 ggaggaagtt ctggtggaat ggtgtttaca ctcgaagatt tcgtagggga ctggcggcag 180 acagccggct acaacctgga ccaagtcctt gagcagggcg gtgtgtccag tttgtttcag 240 aatctcgggg tgtccgtaac tccgatccaa aggattgtcc tgagcggtga aaacggcctg 300 aagatcgaca tccatgtcat catcccgtat gaaggtctga gcggcgatca gatgggccag 360 atcgaaaaaa tttttaaggt ggtgtaccct gtggatgatc atcactttaa ggtgattctg 420 cactatggca cactggtaat cgacggggtt acgccgaaca tgatcgacta tttcggacgg 480 ccgtatgaag gcatcgccgt gttcgacggc aaaaagatca ctgtaaccgg gaccctgtgg 540 aacggcaaca aaattatcga cgagcgcctg atcaaccccg acggctccct gctgttccgc 600 gtaaccatca acgga 615 <210> 281 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 281 Met Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala Gly Ser Ser 1 5 10 15 Gly Gly Gly 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polynucleotide <400> 282 atgggctggc ggctgtgcga gcgcattttg gcgggaagtt ctggtggagg aagttctggt 60 ggagagccta ctactgagaa cttgtacttc cagagcgata acggaagttc tggtggagga 120 agttctggtg gaatggtgtt tacactcgaa gatttcgtag gggactggcg gcagacagcc 180 ggctacaacc tggaccaagt ccttgagcag ggcggtgtgt ccagtttgtt tcagaatctc 240 ggggtgtccg taactccgat ccaaaggatt gtcctgagcg gtgaaaacgg cctgaagatc 300 gacatccatg tcatcatccc gtatgaaggt ctgagcggcg atcagatggg ccagatcgaa 360 aaaattttta aggtggtgta ccctgtggat gatcatcact ttaaggtgat tctgcactat 420 ggcacactgg taatcgacgg ggttacgccg aacatgatcg actatttcgg acggccgtat 480 gaaggcatcg ccgtgttcga cggcaaaaag atcactgtaa ccgggaccct gtggaacggc 540 aacaaaatta tcgacgagcg cctgatcaac cccgacggct ccctgctgtt ccgcgtaacc 600 atcaacggag tgacc 615 <210> 283 <211> 205 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 283 Met Gly Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala Gly Ser Ser Gly Gly 1 5 10 15 Gly Ser Ser Gly Gly Glu Pro Thr Thr Glu Asn 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gcactacacc gggatgcttg aagatggaaa gaaatttgat tcctcccggg 120 acagaaacaa gccctttaag tttatgctag gcaagcagga ggtgatccga ggctgggaag 180 aaggggttgc ccagatgagt gtgggtcaga gagccaaact gactatatct ccagattatg 240 cctatggtgc cactgggcac ccaggcatca tcccaccaca tgccactctc gtcttcgatg 300 tggagcttct aaaactggaa ggaggaggga gctccggtgg aggcagcggt ggagtgaccg 360 gctggcggct gtgcgaacgc attctggcg 389 <210> 289 <211> 130 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 289 Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe Pro 1 5 10 15 Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu Asp 20 25 30 Gly Lys Lys Phe Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys Phe 35 40 45 Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val Ala 50 55 60 Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp Tyr 65 70 75 80 Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala Thr 85 90 95 Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Gly 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gcccccagac tctgaaggaa 660 acatccttta atcaggccta tggtcgagat ttaatggagg cccaagagtg gtgcaggaag 720 tacatgaaat cagggaatgt caaggacctc acccaagcct gggacctcta ttatcatgtg 780 ttccgacgaa tctca 795 <210> 291 <211> 265 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 291 Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala 1 5 10 15 Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu 20 25 30 Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Leu 35 40 45 Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr 50 55 60 Glu Gly Leu Ser Gly Asp Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys 65 70 75 80 Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr 85 90 95 Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe 100 105 110 Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr 115 120 125 Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu 130 135 140 Ile Asn 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cagggaccct gtggaacggc aacaaaatta tcgacgagcg cctgatcaac 480 cccgacggct ccctgctgtt ccgagtaacc atcaacggag tgaccggctg gcggctgtgc 540 gaacgcattc tggc 554 <210> 297 <211> 184 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 297 Met Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe 1 5 10 15 Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu 20 25 30 Asp Gly Lys Lys Phe Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys 35 40 45 Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val 50 55 60 Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp 65 70 75 80 Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala 85 90 95 Thr Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Gly Gly Gly Ser 100 105 110 Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg 115 120 125 Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr 130 135 140 Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp 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aggtgtgtcc agtttgtttc agaatctcgg ggtgtccgta 120 actccgatcc aaaggattgt cctgagcggt gaaaatgggc tgaagatcga catccatgtc 180 atcatcccgt atgaaggtct gagcggcgac caaatgggcc agatcgaaaa aatttttaag 240 gtggtgtacc ctgtgggagg aggtggctca ggtggaggga gctccgtggc catcctctgg 300 catgagatgt ggcatgaagg cctggaagag gcatctcgtt tgtactttgg ggaaaggaac 360 gtgaaaggca tgtttgaggt gctggagccc ttgcatgcta tgatggaacg gggcccccag 420 actctgaagg aaacatcctt taatcaggcc tatggtcgag atttaatgga ggcccaagag 480 tggtgcagga agtacatgaa atcagggaat gtcaaggacc tcacccaagc ctgggacctc 540 tattatcatg tgttccgacg aatctca 567 <210> 307 <211> 189 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 307 Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala 1 5 10 15 Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu 20 25 30 Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Leu 35 40 45 Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr 50 55 60 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gcacccaggc atcatcccac cacatgccac tctcgtcttc 300 gatgtggagc ttctaaaact ggaaggagga gggagctccg gtggaggcag cggtatggtc 360 ttcacactcg aagatttcgt tggggactgg cgacagacag ccggctacaa cctggaccaa 420 gtccttgaac agggaggtgt gtccagtttg tttcagaatc tcggggtgtc cgtaactccg 480 atccaaagga ttgtcctgag cggtgaaaat gggctgaaga tcgacatcca tgtcatcatc 540 ccgtatgaag gtctgagcgg cgaccaaatg ggccagatcg aaaaaatttt taaggtggtg 600 taccctgtg 609 <210> 313 <211> 203 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 313 Met Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe 1 5 10 15 Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu 20 25 30 Asp Gly Lys Lys Phe Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys 35 40 45 Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val 50 55 60 Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp 65 70 75 80 Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala 85 90 95 Thr Leu 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Gly Glu Arg Asn Val Lys Gly Met Phe Glu 115 120 125 Val Leu Glu Pro Leu His Ala Met Met Glu Arg Gly Pro Gln Thr Leu 130 135 140 Lys Glu Thr Ser Phe Asn Gln Ala Tyr Gly Arg Asp Leu Met Glu Ala 145 150 155 160 Gln Glu Trp Cys Arg Lys Tyr Met Lys Ser Gly Asn Val Lys Asp Leu 165 170 175 Thr Gln Ala Trp Asp Leu Tyr Tyr His Val Phe Arg Arg Ile Ser 180 185 190 <210> 316 <211> 2838 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 316 atggcagaaa tcggtactgg ctttccattc gacccccatt atgtggaagt cctgggcgag 60 cgcatgcact acgtcgatgt tggtccgcgc gatggcaccc ctgtgctgtt cctgcacggt 120 aacccgacct cctcctacgt gtggcgcaac atcatcccgc atgttgcacc gacccatcgc 180 tgcattgctc cagacctgat cggtatgggc aaatccgaca aaccagacct gggttatttc 240 ttcgacgacc acgtccgctt catggatgcc ttcatcgaag ccctgggtct ggaagaggtc 300 gtcctggtca ttcacgactg gggctccgct ctgggtttcc actgggccaa gcgcaatcca 360 gagcgcgtca aaggtattgc atttatggag ttcatccgcc ctatcccgac ctgggacgaa 420 tggccagaat ttgcccgcga gaccttccag gccttccgca ccaccgacgt cggccgcaag 480 ctgatcatcg atcagaacgt ttttatcgag ggtacgctgc cgatgggtgt cgtccgcccg 540 ctgactgaag tcgagatgga ccattaccgc gagccgttcc tgaatcctgt tgaccgcgag 600 ccactgtggc gcttcccaaa cgagctgcca atcgccggtg agccagcgaa catcgtcgcg 660 ctggtcgaag aatacatgga ctggctgcac cagtcccctg tcccgaagct gctgttctgg 720 ggcaccccag gcgttctgat cccaccggcc gaagccgctc gcctggccaa aagcctgcct 780 aactgcaagg ctgtggacat cggcccgggt ctgaatctgc tgcaagaaga caacccggac 840 ctgatcggca gcgagatcgc gcgctggctg tcgacgctcg agatttccgg cgagccaacc 900 actgaggatc tgtactttca gagcgataac gcgatcgctt tcgaaggaga tagaaccatg 960 cagccagatc ccaggcctag cggggctggg gcctgctgcc gattcctgcc cctgcagtca 1020 cagtgccctg agggggcagg ggacgcggtg atgtacgcct ccactgagtg caaggcggag 1080 gtgacgccct cccagcatgg caaccgcacc ttcagctaca ccctggagga tcataccaag 1140 caggcctttg gcatcatgaa cgagctgcgg ctcagccagc agctgtgtga cgtcacactg 1200 caggtcaagt accaggatgc accggccgcc cagttcatgg cccacaaggt ggtgctggcc 1260 tcatccagcc ctgttttcaa 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tcaatattgg ccattagcca tattattcat tggttatata gcataaatca atattggcta 60 ttggccattg catacgttgt atctatatca taatatgtac atttatattg gctcatgtcc 120 aatatgaccg ccatgttggc attgattatt gactagttat taatagtaat caattacggg 180 gtcattagtt catagcccat atatggagtt ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc 240 gcctggctga ccgcccaacg acccccgccc attgacgtca ataatgacgt atgttcccat 300 agtaacgcca atagggactt tccattgacg tcaatgggtg gagtatttac ggtaaactgc 360 ccacttggca gtacatcaag tgtatcatat gccaagtccg ccccctattg acgtcaatga 420 cggtaaatgg cccgcctggc attatgccca gtacatgacc ttacgggact ttcctacttg 480 gcagtacatc tacgtattag tcatcgctat taccatggtg atgcggtttt ggcagtacac 540 caatgggcgt ggatagcggt ttgactcacg gggatttcca agtctccacc ccattgacgt 600 caatgggagt ttgttttggc accaaaatca acgggacttt ccaaaatgtc gtaataaccc 660 cgccccgttg acgcaaatgg gcggtaggcg tgtacggtgg gaggtctata taagcagagc 720 tggtttagtg aaccgtcaga tcactagaag ctttattgcg gtagtttatc acagttaaat 780 tgctaacgca gtcagtgctt ctgacacaac agtctcgaac ttaagctgca gaagttggtc 840 gtgaggcact gggcaggtaa 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gtaatcgacg gggttacgcc gaacatgatc gactatttcg 1740 gacggccgta tgaaggcatc gccgtgttcg acggcaaaaa gatcactgta accgggaccc 1800 tgtggaacgg caacaaaatt atcgacgagc gcctgatcaa ccccgacggc tccctgctgt 1860 tccgcgtaac catcaacgga gtgaccggct ggcggctgtg cgagcgcatt ttggcgtaag 1920 gccgcgactc tagagtcgac ctgcaggcat gcaagctgat ccggctgcta acaaagcccg 1980 aaaggaagct gagttggctg ctgccaccgc tgagcaataa ctagcataac cccttggggc 2040 ggccgcttcg agcagacatg ataagataca ttgatgagtt tggacaaacc acaactagaa 2100 tgcagtgaaa aaaatgcttt atttgtgaaa tttgtgatgc tattgcttta tttgtaacca 2160 ttataagctg caataaacaa gttaacaaca acaattgcat tcattttatg tttcaggttc 2220 agggggagat gtgggaggtt tttttaagca agtaaaacct ctacaaatgt ggtaaaatcg 2280 aattttaaca aaatattaac gcttacaatt tcctgatgcg gtattttctc cttacgcatc 2340 tgtgcggtat ttcacaccgc atacgcggat ctgcgcagca ccatggcctg aaataacctc 2400 tgaaagagga acttggttag gtaccttctg aggcggaaag aaccagctgt ggaatgtgtg 2460 tcagttaggg tgtggaaagt ccccaggctc cccagcaggc agaagtatgc aaagcatgca 2520 tctcaattag tcagcaacca ggtgtggaaa gtccccaggc tccccagcag gcagaagtat 2580 gcaaagcatg catctcaatt agtcagcaac catagtcccg cccctaactc cgcccatccc 2640 gcccctaact ccgcccagtt ccgcccattc tccgccccat ggctgactaa ttttttttat 2700 ttatgcagag gccgaggccg cctcggcctc tgagctattc cagaagtagt gaggaggctt 2760 ttttggaggc ctaggctttt gcaaaaagct taattaactg ttgacaatta atcatcggca 2820 tagtatatcg gcatagtata atacgacaag gtgaggaact aaacccagga ggcagatcat 2880 gattgaacaa gatggattgc acgcaggttc tccggccgct tgggtggaga ggctattcgg 2940 ctatgactgg gcacaacaga caatcggctg ctctgatgcc gccgtgttcc ggctgtcagc 3000 gcaggggcgc ccggttcttt ttgtcaagac cgacctgtcc ggtgccctga atgaactgca 3060 ggacgaggca gcgcggctat cgtggctggc cacgacgggc gttccttgcg cagctgtgct 3120 cgacgttgtc actgaagcgg gaagggactg gctgctattg ggcgaagtgc cggggcagga 3180 tctcctgtca tctcaccttg ctcctgccga gaaagtatcc atcatggctg atgcaatgcg 3240 gcggctgcat acgcttgatc cggctacctg cccattcgac caccaagcga aacatcgcat 3300 cgagcgagca cgtactcgga tggaagccgg tcttgtcgat caggatgatc tggacgaaga 3360 gcatcagggg ctcgcgccag 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5064 <210> 318 <211> 513 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 318 atggtcttca cactcgaaga tttcgtaggt gactggcgac agacagccgg ctacaacctg 60 gaccaagtcc ttgaacaggg tggtgtgtcc agtttgtttc agaatctcgg ggtgtccgta 120 actccgatcc aaaggattgt cctgagcggt gaaaatgggc tgaagatcga catccatgtc 180 atcatcccgt atgaaggtct gagcggcgac caaatgggcc agatcgaaaa aatttttaag 240 gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgatcc tgcactatgg cacactggta 300 atcgacgggg ttacgccgaa catgatcgac tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc 360 gtgttcgacg gcaaaaagat cactgtaact gggaccctgt ggaacggcaa caaaattatc 420 gacgagcgcc tgatcaaccc cgacggctcc ctgctgttcc gagtaaccat caacggagtg 480 accggctggc ggctgtgcga acgcattctg gcg 513 <210> 319 <211> 513 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 319 atggtgttta cactcgaaga tttcgtaggg gactggcggc agacagccgg ctacaacctg 60 gaccaagtcc ttgaacaggg cggtgtgtcc agtttgtttc 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catgatcgac tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc 360 gtgttcgacg gcaaaaagat cactgtaacc gggaccctgt ggaacggcaa caaaattatc 420 gacgagcgcc tgatcaaccc cgacggctcc ctgctgttcc gcgtaaccat caacggagtg 480 accggctggc ggctgtgcga gcgcattttg gcgaattcac acggctttcc gcccgaggtt 540 gaagagcaag ccgccggtac attgcctatg tcctgcgcac aagaaagcgg tatggaccgg 600 cacccagccg cttgtgcttc agctcgcatc aacgtc 636 <210> 321 <211> 597 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 321 atgaactcct tctccacaag cgccttcggt ccagttgcct tctccctggg cctgctcctg 60 gtgttgcctg ctgccttccc tgccccagtg tttacactcg aagatttcgt aggggactgg 120 cggcagacag ccggctacaa cctggaccaa gtccttgaac agggcggtgt gtccagtttg 180 tttcagaatc tcggggtgtc cgtaactccg atccaaagga ttgtcctgag cggtgaaaac 240 ggcctgaaga tcgacatcca tgtcatcatc ccgtatgaag gtctgagcgg cgatcaaatg 300 ggccagatcg aaaaaatttt taaggtggtg taccctgtgg atgatcatca ctttaaggtg 360 atcctgcact atggcacact ggtaatcgac ggggttacgc cgaacatgat cgactatttc 420 ggacggccgt atgaaggcat cgccgtgttc gacggcaaaa agatcactgt aaccgggacc 480 ctgtggaacg gcaacaaaat tatcgacgag cgcctgatca accccgacgg ctccctgctg 540 ttccgcgtaa ccatcaacgg agtgaccggc tggcggctgt gcgagcgcat tttggcg 597 <210> 322 <211> 513 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 322 atggtcttca cactcgaaga tttcgttggg gactggcgac agacagccgg ctacaacctg 60 gaccaagtcc ttgaacaggg aggtgtgtcc agtttgtttc agaatctcgg ggtgtccgta 120 actccgatcc aaaggattgt cctgagcggt gaaaatgggc tgaagatcga catccatgtc 180 atcatcccgt atgaaggtct gagcggcgac caaatgggcc agatcgaaaa aatttttaag 240 gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgatcc tgcactatgg cacactggta 300 atcgacgggg ttacgccgaa catgatcgac tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc 360 gtgttcgacg gcaaaaagat cactgtaaca gggaccctgt ggaacggcaa caaaattatc 420 gacgagcgcc tgatcaaccc cgacggctcc ctgctgttcc gagtaaccat caacggagtg 480 accggctggc ggctgtgcga acgcattctg gcg 513 <210> 323 <211> 636 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 323 atggtcttca cactcgaaga tttcgttggg gactggcgac agacagccgg ctacaacctg 60 gaccaagtcc ttgaacaggg aggtgtgtcc agtttgtttc agaatctcgg ggtgtccgta 120 actccgatcc aaaggattgt cctgagcggt gaaaatgggc tgaagatcga catccatgtc 180 atcatcccgt atgaaggtct gagcggcgac caaatgggcc agatcgaaaa aatttttaag 240 gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgatcc tgcactatgg cacactggta 300 atcgacgggg ttacgccgaa catgatcgac tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc 360 gtgttcgacg gcaaaaagat cactgtaaca gggaccctgt ggaacggcaa caaaattatc 420 gacgagcgcc tgatcaaccc cgacggctcc ctgctgttcc gagtaaccat caacggagtg 480 accggctggc ggctgtgcga acgcattctg gcgaattctc acggctttcc gcctgaggtt 540 gaagagcaag ccgccggtac attgcctatg tcctgcgcac aagaaagcgg tatggaccgg 600 cacccagccg cttgtgcttc agctcgcatc aacgtc 636 <210> 324 <211> 597 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 324 atgaactcct tctccacaag cgccttcggt ccagttgcct tctccctggg cctgctcctg 60 gtgttgcctg ctgccttccc tgccccagtc ttcacactcg aagatttcgt tggggactgg 120 cgacagacag ccggctacaa cctggaccaa gtccttgaac agggaggtgt gtccagtttg 180 tttcagaatc tcggggtgtc cgtaactccg atccaaagga ttgtcctgag cggtgaaaat 240 gggctgaaga tcgacatcca tgtcatcatc ccgtatgaag gtctgagcgg cgaccaaatg 300 ggccagatcg aaaaaatttt taaggtggtg taccctgtgg atgatcatca ctttaaggtg 360 atcctgcact atggcacact ggtaatcgac ggggttacgc cgaacatgat cgactatttc 420 ggacggccgt atgaaggcat cgccgtgttc gacggcaaaa agatcactgt aacagggacc 480 ctgtggaacg gcaacaaaat tatcgacgag cgcctgatca accccgacgg ctccctgctg 540 ttccgagtaa ccatcaacgg agtgaccggc tggcggctgt gcgaacgcat tctggcg 597 <210> 325 <211> 513 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 325 atggtcttca cactcgaaga tttcgtaggt gactggcgac agacagccgg ctacaacctg 60 gaccaagttc ttgaacaggg tggtgtgtcc agtttgtttc agaatctcgg ggtgtccgta 120 actccaatcc agaggatagt cctgagtggt gaaaatgggc tgaagatcga catccatgtc 180 atcatccctt atgaaggtct gagcggcgat cagatggggc agatcgaaaa aatttttaag 240 gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgatcc tgcactatgg cacactggta 300 atcgacggtg ttacgccgaa catgatcgac tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc 360 gtgttcgacg gcaaaaagat tactgtcact ggaaccctgt ggaatgggaa caaaattatc 420 gacgagcgcc tgatcaaccc cgacggctca ctgctgttcc gagtaaccat caatggtgtt 480 accggctggc ggctctgcga acgcattcta gca 513 <210> 326 <211> 636 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 326 atggtcttca cactcgaaga tttcgtaggt gactggcgac agacagccgg ctacaacctg 60 gaccaagttc ttgaacaggg tggtgtgtcc agtttgtttc agaatctcgg ggtgtccgta 120 actccaatcc agaggatagt cctgagtggt gaaaatgggc tgaagatcga catccatgtc 180 atcatccctt atgaaggtct gagcggcgat cagatggggc agatcgaaaa aatttttaag 240 gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgatcc tgcactatgg cacactggta 300 atcgacggtg ttacgccgaa catgatcgac tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc 360 gtgttcgacg gcaaaaagat tactgtcact ggaaccctgt ggaatgggaa caaaattatc 420 gacgagcgcc tgatcaaccc cgacggctca ctgctgttcc gagtaaccat caatggtgtt 480 accggctggc ggctctgcga acgcattcta gcaaatagtc acggctttcc gcctgaggtt 540 gaagagcaag ccgccggtac attgcctatg tcctgcgcac aagaaagcgg tatggaccgg 600 cacccagccg cttgtgcttc agctcgcatc aacgtc 636 <210> 327 <211> 573 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 327 atgaactcct tctccacaag cgccttcggt ccagtcgcct tctccctggg cctgctcctg 60 gtgttgcccg ctgcctttcc tgccccagtc ttcacactcg aagatttcgt aggtgactgg 120 cgacagacag ccggctacaa cctggaccaa gttcttgaac agggtggtgt gtccagtttg 180 tttcagaatc tcggggtgtc cgtaactcca atccagagga tagtcctgag tggtgaaaat 240 gggctgaaga tcgacatcca tgtcatcatc ccttatgaag gtctgagcgg cgatcagatg 300 gggcagatcg aaaaaatttt taaggtggtg taccctgtgg atgatcatca ctttaaggtg 360 atcctgcact atggcacact ggtaatcgac ggtgttacgc cgaacatgat cgactatttc 420 ggacggccgt atgaaggcat cgccgtgttc gacggcaaaa agattactgt cactggaacc 480 ctgtggaatg ggaacaaaat tatcgacgag cgcctgatca accccgacgg ctcactgctg 540 ttccgagtaa ccatcaatgg tgttaccggc tgg 573 <210> 328 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 328 Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Glu Pro Thr Thr Glu Asn 1 5 10 15 Leu Tyr Phe Gln Ser Asp Asn Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly 20 25 30 Gly <210> 329 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic FABP consensus peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Gly, Ser, Ala, Ile, Val, or Lys <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Any amino acid except Phe or Glu <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Phe, Tyr, or Trp <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Any amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (5)..(5) <223> Leu, Ile, Val, Met, or Phe <220> <221> MOD_RES <222> (6)..(7) <223> Any amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (8)..(8) <223> Any amino acid except Lys <220> <221> MOD_RES <222> (9)..(9) <223> Any amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Asn, His, or Gly <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> Phe or Tyr <220> <221> MOD_RES <222> (12)..(12) <223> Asp or Glu <220> <221> MOD_RES <222> (13)..(13) <223> Any amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (14)..(14) <223> Leu, Ile, Val, Met, Phe, or Tyr <220> <221> MOD_RES <222> (15)..(15) <223> Leu, Ile, Val, or Met <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Any amino acid except Asn <220> <221> MOD_RES <222> (17)..(17) <223> Any amino acid except Gly <220> <221> MOD_RES <222> (18)..(18) <223> Leu, Ile, Val, Met, Ala, Lys, or Arg <400> 329 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa <210> 330 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic OGLUC consensus peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Gly, Ser, Ala, Ile, Val, or Lys <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Any amino acid except Phe or 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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa <210> 331 <211> 672 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 331 atgggcctga agatcgacat ccatgtcatc atcccgtatg aaggtctgag cggctatcag 60 atgggccaga tcgaaaaaat ttttaaggtg gtgtaccctg tggatgatca tcactttaag 120 gtgattctgc actatggcac actggtaatc gacggggtta cgccgaacat gatcgactat 180 ttcggacggc cgtatgaagg catcgccgtg ttcgacggca aaaagatcac tgtaaccggg 240 accctgtgga acggcaacaa aattatcgac gagcgcctga tcaaccccga cggctccctg 300 ctgttccgcg taaccatcaa cggagtgacc ggctggcggc tgtgcgagcg cattttggcg 360 ggaggaggtg gctcaggtgg agggagctcc gtggccatcc tctggcatga gatgtggcat 420 gaaggcctgg aagaggcatc tcgtttgtac tttggggaaa ggaacgtgaa aggcatgttt 480 gaggtgctgg agcccttgca tgctatgatg gaacggggcc cccagactct gaaggaaaca 540 tcctttaatc aggcctatgg tcgagattta atggaggccc aagagtggtg caggaagtac 600 atgaaatcag ggaatgtcaa ggacctcacc caagcctggg acctctatta tcatgtgttc 660 cgacgaatct ca 672 <210> 332 <211> 224 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 332 Met Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu 1 5 10 15 Ser Gly Tyr Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys Val Val Tyr 20 25 30 Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr Gly Thr Leu 35 40 45 Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg Pro 50 55 60 Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly 65 70 75 80 Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Asn Pro 85 90 95 Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val Thr Gly Trp 100 105 110 Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 115 120 125 Ser Ser Val Ala Ile Leu Trp His Glu Met Trp His Glu Gly Leu Glu 130 135 140 Glu Ala Ser Arg Leu Tyr Phe Gly Glu Arg Asn Val Lys Gly Met Phe 145 150 155 160 Glu Val Leu Glu Pro Leu His Ala Met Met Glu Arg Gly Pro Gln Thr 165 170 175 Leu Lys Glu Thr Ser Phe Asn Gln Ala 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polypeptide <400> 334 Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala 1 5 10 15 Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Leu Ser Ser Leu 20 25 30 Phe Gln Lys Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Lys Ile Val Leu 35 40 45 Ser Gly Glu Asn Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ser Val Ala 50 55 60 Ile Leu Trp His Glu Met Trp His Glu Gly Leu Glu Glu Ala Ser Arg 65 70 75 80 Leu Tyr Phe Gly Glu Arg Asn Val Lys Gly Met Phe Glu Val Leu Glu 85 90 95 Pro Leu His Ala Met Met Glu Arg Gly Pro Gln Thr Leu Lys Glu Thr 100 105 110 Ser Phe Asn Gln Ala Tyr Gly Arg Asp Leu Met Glu Ala Gln Glu Trp 115 120 125 Cys Arg Lys Tyr Met Lys Ser Gly Asn Val Lys Asp Leu Thr Gln Ala 130 135 140 Trp Asp Leu Tyr Tyr His Val Phe Arg Arg Ile Ser 145 150 155 <210> 335 <211> 711 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 335 atgggagtgc aggtggaaac catctcccca ggagacgggc gcaccttccc caagcgcggc 60 cagacctgcg tggtgcacta caccgggatg 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180 atcatcccgt atgaaggtct gagcggcgat cagatgggcc agatcgaaaa aatttttaag 240 gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgattc tgcactatgg cacactggta 300 atcgacgggg ttacgccgaa catgatcgac tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc 360 gtgttcgacg gcaaaaagat cactgtaacc gggaccctgt ggaacggcaa caaaattatc 420 gacgagcgcc tgatcaaccc cgacggctcc ctgctgttcc gcgtaaccat caacggagtg 480 accggctggc ggctgtgcga gcgcattttg gcg 513 <210> 340 <211> 171 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 340 Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala 1 5 10 15 Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu 20 25 30 Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Leu 35 40 45 Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr 50 55 60 Glu Gly Leu Ser Gly Asp Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys 65 70 75 80 Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr 85 90 95 Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly 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Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 344 Met Val Leu Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile 1 5 10 15 Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Gly Asp Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys 20 25 30 Ile Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile 35 40 45 Leu His Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile 50 55 60 Asp Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys 65 70 75 80 Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp 85 90 95 Glu Arg Leu Ile Asn Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile 100 105 110 Asn Gly Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala Gly Gly 115 120 125 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ser Val Ala Ile Leu Trp His Glu Met 130 135 140 Trp His Glu Gly Leu Glu Glu Ala Ser Arg Leu Tyr Phe Gly Glu Arg 145 150 155 160 Asn Val Lys Gly Met Phe Glu Val Leu Glu Pro Leu His Ala Met Met 165 170 175 Glu Arg Gly Pro Gln Thr Leu Lys Glu Thr Ser Phe Asn Gln Ala Tyr 180 185 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Sequence: Synthetic polypeptide <400> 346 Met Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe 1 5 10 15 Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu 20 25 30 Asp Gly Lys Lys Phe Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys 35 40 45 Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val 50 55 60 Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp 65 70 75 80 Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala 85 90 95 Thr Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Gly Gly Gly Ser 100 105 110 Ser Gly Gly Gly Ser Gly Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly 115 120 125 Asp Trp Arg Gln Thr Ala Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln 130 135 140 Gly Gly Val Ser Ser Leu Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro 145 150 155 160 Ile Gln Arg Ile <210> 347 <211> 687 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 347 atgctgagcg gtgaaaatgg gctgaagatc gacatccatg 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tcggggtgtc cgtaactccg 480 atccaaagga ttgtcctgag cggtgaaaat gggctgaaga tcgacatcca tgtcatcatc 540 ccgtatgaag gtctgagcgg cgaccaaatg ggccagatcg aaaaaatttt taaggtggtg 600 taccctgtgg atgatcatca ctttaaggtg atcctgcact atggcacact ggtaatc 657 <210> 354 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 354 Met Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe 1 5 10 15 Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu 20 25 30 Asp Gly Lys Lys Phe Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys 35 40 45 Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val 50 55 60 Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp 65 70 75 80 Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala 85 90 95 Thr Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Gly Gly Gly Ser 100 105 110 Ser Gly Gly Gly Ser Gly Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly 115 120 125 Asp Trp Arg Gln Thr Ala Gly Tyr Asn 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tcctttaatc aggcctatgg tcgagattta 420 atggaggccc aagagtggtg caggaagtac atgaaatcag ggaatgtcaa ggacctcacc 480 caagcctggg acctctatta tcatgtgttc cgacgaatct ca 522 <210> 356 <211> 174 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 356 Met Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu 1 5 10 15 Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu 20 25 30 Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Asn Pro Asp Gly 35 40 45 Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val Thr Gly Trp Arg Leu 50 55 60 Cys Glu Arg Ile Leu Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ser 65 70 75 80 Val Ala Ile Leu Trp His Glu Met Trp His Glu Gly Leu Glu Glu Ala 85 90 95 Ser Arg Leu Tyr Phe Gly Glu Arg Asn Val Lys Gly Met Phe Glu Val 100 105 110 Leu Glu Pro Leu His Ala Met Met Glu Arg Gly Pro Gln Thr Leu Lys 115 120 125 Glu Thr Ser Phe Asn Gln Ala Tyr Gly Arg Asp Leu Met Glu Ala Gln 130 135 140 Glu Trp Cys Arg Lys Tyr Met Lys Ser 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Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 360 Met Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly 1 5 10 15 Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp 20 25 30 Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Asn Pro Asp Gly Ser 35 40 45 Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys 50 55 60 Glu Arg Ile Leu Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ser Val 65 70 75 80 Ala Ile Leu Trp His Glu Met Trp His Glu Gly Leu Glu Glu Ala Ser 85 90 95 Arg Leu Tyr Phe Gly Glu Arg Asn Val Lys Gly Met Phe Glu Val Leu 100 105 110 Glu Pro Leu His Ala Met Met Glu Arg Gly Pro Gln Thr Leu Lys Glu 115 120 125 Thr Ser Phe Asn Gln Ala Tyr Gly Arg Asp Leu Met Glu Ala Gln Glu 130 135 140 Trp Cys Arg Lys Tyr Met Lys Ser Gly Asn Val Lys Asp Leu Thr Gln 145 150 155 160 Ala Trp Asp Leu Tyr Tyr His Val Phe Arg Arg Ile Ser 165 170 <210> 361 <211> 663 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 361 atgggagtgc aggtggaaac catctcccca ggagacgggc gcaccttccc caagcgcggc 60 cagacctgcg tggtgcacta caccgggatg cttgaagatg gaaagaaatt tgattcctcc 120 cgggacagaa acaagccctt taagtttatg ctaggcaagc aggaggtgat ccgaggctgg 180 gaagaagggg ttgcccagat gagtgtgggt cagagagcca aactgactat atctccagat 240 tatgcctatg gtgccactgg gcacccaggc atcatcccac cacatgccac tctcgtcttc 300 gatgtggagc ttctaaaact ggaaggagga gggagctccg gtggaggcag cggtatggtc 360 ttcacactcg aagatttcgt tggggactgg cgacagacag ccggctacaa cctggaccaa 420 gtccttgaac agggaggtgt gtccagtttg tttcagaatc tcggggtgtc cgtaactccg 480 atccaaagga ttgtcctgag cggtgaaaat gggctgaaga tcgacatcca tgtcatcatc 540 ccgtatgaag gtctgagcgg cgaccaaatg ggccagatcg aaaaaatttt taaggtggtg 600 taccctgtgg atgatcatca ctttaaggtg atcctgcact atggcacact ggtaatcgac 660 ggg 663 <210> 362 <211> 221 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 362 Met Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr 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396 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 363 atgatcaacc ccgacggctc cctgctgttc cgagtaacca tcaacggagt gaccggctgg 60 cggctgtgcg aacgcattct ggcgggagga ggtggctcag gtggagggag ctccgtggcc 120 atcctctggc atgagatgtg gcatgaaggc ctggaagagg catctcgttt gtactttggg 180 gaaaggaacg tgaaaggcat gtttgaggtg ctggagccct tgcatgctat gatggaacgg 240 ggcccccaga ctctgaagga aacatccttt aatcaggcct atggtcgaga tttaatggag 300 gcccaagagt ggtgcaggaa gtacatgaaa tcagggaatg tcaaggacct cacccaagcc 360 tgggacctct attatcatgt gttccgacga atctca 396 <210> 364 <211> 132 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 364 Met Ile Asn Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly 1 5 10 15 Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala Gly Gly Gly Gly 20 25 30 Ser Gly Gly Gly Ser Ser Val Ala Ile Leu Trp His Glu Met Trp His 35 40 45 Glu Gly Leu Glu Glu Ala Ser Arg Leu Tyr Phe Gly Glu Arg 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ttctggcggg aggaggtggc tcaggtggag ggagctccgt ggccatcctc 120 tggcatgaga tgtggcatga aggcctggaa gaggcatctc gtttgtactt tggggaaagg 180 aacgtgaaag gcatgtttga ggtgctggag cccttgcatg ctatgatgga acggggcccc 240 cagactctga aggaaacatc ctttaatcag gcctatggtc gagatttaat ggaggcccaa 300 gagtggtgca ggaagtacat gaaatcaggg aatgtcaagg acctcaccca agcctgggac 360 ctctattatc atgtgttccg acgaatctca 390 <210> 368 <211> 130 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 368 Met Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val Thr 1 5 10 15 Gly Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly 20 25 30 Gly Gly Ser Ser Val Ala Ile Leu Trp His Glu Met Trp His Glu Gly 35 40 45 Leu Glu Glu Ala Ser Arg Leu Tyr Phe Gly Glu Arg Asn Val Lys Gly 50 55 60 Met Phe Glu Val Leu Glu Pro Leu His Ala Met Met Glu Arg Gly Pro 65 70 75 80 Gln Thr Leu Lys Glu Thr Ser Phe Asn Gln Ala Tyr Gly Arg Asp Leu 85 90 95 Met Glu Ala Gln Glu Trp Cys Arg Lys Tyr Met 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Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 373 atgggagtgc aggtggaaac catctcccca ggagacgggc gcaccttccc caagcgcggc 60 cagacctgcg tggtgcacta caccgggatg cttgaagatg gaaagaaatt tgattcctcc 120 cgggacagaa acaagcactt taagtttatg ctaggcaagc aggaggtgat ccgaggctgg 180 gaagaagggg ttgcccagat gagtgtgggt cagagagcca aactgactat atctccagat 240 tatgcctatg gtgccactgg gcacccaggc atcatcccac cacatgccac tctcgtcttc 300 gatgtggagc ttctaaaact ggaaggagga gggagctccg gtggaggcag cggtatggtc 360 ttcacactcg aagatttcgt tggggactgg cgacagacag ccggctacaa cctggaccaa 420 gtccttgaac agggaggtgt gtccagtttg tttcagaatc tcggggtgtc cgtaactccg 480 atccaaagga ttgtcctgag cggtgaaaat gggctgaaga tcgacatcca tgtcatcatc 540 ccgtatgaag gtctgagcgg cgaccaaatg ggccagatcg aaaaaatttt taaggtggtg 600 taccctgtgg atgatcatca ctttaaggtg atcctgcact atggcacact ggtaatcgac 660 ggggttacgc cgaacatgat cgactatttc ggacggccgt atgaaggcat cgccgtgttc 720 gacggcaaaa agatcactgt aacagggacc ctgtggaacg gcaacaaaat tatcgacgag 780 cgcctgatca accccgac 798 <210> 374 <211> 266 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Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 376 Met Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val Thr Gly Trp Arg 1 5 10 15 Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser 20 25 30 Ser Val Ala Ile Leu Trp His Glu Met Trp His Glu Gly Leu Glu Glu 35 40 45 Ala Ser Arg Leu Tyr Phe Gly Glu Arg Asn Val Lys Gly Met Phe Glu 50 55 60 Val Leu Glu Pro Leu His Ala Met Met Glu Arg Gly Pro Gln Thr Leu 65 70 75 80 Lys Glu Thr Ser Phe Asn Gln Ala Tyr Gly Arg Asp Leu Met Glu Ala 85 90 95 Gln Glu Trp Cys Arg Lys Tyr Met Lys Ser Gly Asn Val Lys Asp Leu 100 105 110 Thr Gln Ala Trp Asp Leu Tyr Tyr His Val Phe Arg Arg Ile Ser 115 120 125 <210> 377 <211> 801 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 377 atgggagtgc aggtggaaac catctcccca ggagacgggc gcaccttccc caagcgcggc 60 cagacctgcg tggtgcacta caccgggatg cttgaagatg gaaagaaatt tgattcctcc 120 cgggacagaa acaagccctt taagtttatg ctaggcaagc aggaggtgat ccgaggctgg 180 gaagaagggg ttgcccagat gagtgtgggt cagagagcca aactgactat atctccagat 240 tatgcctatg gtgccactgg gcacccaggc atcatcccac cacatgccac tctcgtcttc 300 gatgtggagc ttctaaaact ggaaggagga gggagctccg gtggaggcag cggtatggtc 360 ttcacactcg aagatttcgt tggggactgg cgacagacag ccggctacaa cctggaccaa 420 gtccttgaac agggaggtgt gtccagtttg tttcagaatc tcggggtgtc cgtaactccg 480 atccaaagga ttgtcctgag cggtgaaaat gggctgaaga tcgacatcca tgtcatcatc 540 ccgtatgaag gtctgagcgg cgaccaaatg ggccagatcg aaaaaatttt taaggtggtg 600 taccctgtgg atgatcatca ctttaaggtg atcctgcact atggcacact ggtaatcgac 660 ggggttacgc cgaacatgat cgactatttc ggacggccgt atgaaggcat cgccgtgttc 720 gacggcaaaa agatcactgt aacagggacc ctgtggaacg gcaacaaaat tatcgacgag 780 cgcctgatca accccgacgg c 801 <210> 378 <211> 267 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 378 Met Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe 1 5 10 15 Pro Lys Arg Gly Gln Thr 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cgacagacag ccggctacaa cctggaccaa 420 gtccttgaac agggaggtgt gtccagtttg tttcagaatc tcggggtgtc cgtaactccg 480 atccaaagga ttgtcctgag cggtgaaaat gggctgaaga tcgacatcca tgtcatcatc 540 ccgtatgaag gtctgagcgg cgaccaaatg ggccagatcg aaaaaatttt taaggtggtg 600 taccctgtgg atgatcatca ctttaaggtg atcctgcact atggcacact ggtaatcgac 660 ggggttacgc cgaacatgat cgactatttc ggacggccgt atgaaggcat cgccgtgttc 720 gacggcaaaa agatcactgt aacagggacc ctgtggaacg gcaacaaaat tatcgacgag 780 cgcctgatca accccgacgg ctccctgctg ttccgagtaa ccatc 825 <210> 382 <211> 275 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 382 Met Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe 1 5 10 15 Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu 20 25 30 Asp Gly Lys Lys Phe Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys 35 40 45 Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val 50 55 60 Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro 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Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 383 atggtgaccg gctggcggct gtgcgaacgc attctggcgg gaggaggtgg ctcaggtgga 60 gggagctccg tggccatcct ctggcatgag atgtggcatg aaggcctgga agaggcatct 120 cgtttgtact ttggggaaag gaacgtgaaa ggcatgtttg aggtgctgga gcccttgcat 180 gctatgatgg aacggggccc ccagactctg aaggaaacat cctttaatca ggcctatggt 240 cgagatttaa tggaggccca agagtggtgc aggaagtaca tgaaatcagg gaatgtcaag 300 gacctcaccc aagcctggga cctctattat catgtgttcc gacgaatctc a 351 <210> 384 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 384 Met Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala Gly Gly Gly 1 5 10 15 Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ser Val Ala Ile Leu Trp His Glu Met Trp 20 25 30 His Glu Gly Leu Glu Glu Ala Ser Arg Leu Tyr Phe Gly Glu Arg Asn 35 40 45 Val Lys Gly Met Phe Glu Val Leu Glu Pro Leu His Ala Met Met Glu 50 55 60 Arg Gly Pro Gln Thr Leu Lys Glu Thr Ser Phe Asn Gln Ala Tyr Gly 65 70 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Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 389 atgggagtgc aggtggaaac catctcccca ggagacgggc gcaccttccc caagcgcggc 60 cagacctgcg tggtgcacta caccgggatg cttgaagatg gaaagaaatt tgattcctcc 120 cgggacagaa acaagccctt taagtttatg ctaggcaagc aggaggtgat ccgaggctgg 180 gaagaagggg ttgcccagat gagtgtgggt cagagagcca aactgactat atctccagat 240 tatgcctatg gtgccactgg gcacccaggc atcatcccac cacatgccac tctcgtcttc 300 gatgtggagc ttctaaaact ggaaggagga gggagctccg gtggaggcag cggtatggtc 360 ttcacactcg aagatttcgt tggggactgg cgacagacag ccggctacaa cctggaccaa 420 gtccttgaac agggaggtgt gtccagtttg tttcagaatc tcggggtgtc cgtaactccg 480 atccaaagga ttgtcctgag cggtgaaaat gggctgaaga tcgacatcca tgtcatcatc 540 ccgtatgaag gtctgagcgg cgaccaaatg ggccagatcg aaaaaatttt taaggtggtg 600 taccctgtgg atgatcatca ctttaaggtg atcctgcact atggcacact ggtaatcgac 660 ggggttacgc cgaacatgat cgactatttc ggacggccgt atgaaggcat cgccgtgttc 720 gacggcaaaa agatcactgt aacagggacc ctgtggaacg gcaacaaaat tatcgacgag 780 cgcctgatca accccgacgg ctccctgctg 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Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 398 Met Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly 1 5 10 15 Leu Ser Gly Asp Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys Val Val 20 25 30 Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr Gly Thr 35 40 45 Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg 50 55 60 Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr 65 70 75 80 Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Asn 85 90 95 Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val Thr Gly 100 105 110 Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Ser Val Ala Ile Leu Trp His Glu Met Trp His Glu Gly Leu 130 135 140 Glu Glu Ala Ser Arg Leu Tyr Phe Gly Glu Arg Asn Val Lys Gly Met 145 150 155 160 Phe Glu Val Leu Glu Pro Leu His Ala Met Met Glu Arg Gly Pro Gln 165 170 175 Thr Leu Lys Glu Thr Ser Phe Asn Gln Ala Tyr Gly Arg Asp Leu Met 180 185 190 Glu Ala Gln Glu Trp Cys Arg 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<212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 400 Met Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe 1 5 10 15 Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu 20 25 30 Asp Gly Lys Lys Phe Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys 35 40 45 Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val 50 55 60 Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp 65 70 75 80 Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala 85 90 95 Thr Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Gly Gly Gly Ser 100 105 110 Ser Gly Gly Gly Ser Gly Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly 115 120 125 Asp Trp Arg Gln Thr Ala Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln 130 135 140 Gly Gly Val Ser Ser Leu Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro 145 150 155 160 Ile Gln Arg Ile Val Leu Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile 165 170 175 His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Gly Asp Gln Met 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polypeptide <400> 402 Met Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr Gly Thr Leu 1 5 10 15 Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg Pro 20 25 30 Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly 35 40 45 Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Asn Pro 50 55 60 Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val Thr Gly Trp 65 70 75 80 Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 85 90 95 Ser Ser Val Ala Ile Leu Trp His Glu Met Trp His Glu Gly Leu Glu 100 105 110 Glu Ala Ser Arg Leu Tyr Phe Gly Glu Arg Asn Val Lys Gly Met Phe 115 120 125 Glu Val Leu Glu Pro Leu His Ala Met Met Glu Arg Gly Pro Gln Thr 130 135 140 Leu Lys Glu Thr Ser Phe Asn Gln Ala Tyr Gly Arg Asp Leu Met Glu 145 150 155 160 Ala Gln Glu Trp Cys Arg Lys Tyr Met Lys Ser Gly Asn Val Lys Asp 165 170 175 Leu Thr Gln Ala Trp Asp Leu Tyr Tyr His Val Phe Arg Arg Ile Ser 180 185 190 <210> 403 <211> 612 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 403 atgggagtgc aggtggaaac catctcccca ggagacgggc gcaccttccc caagcgcggc 60 cagacctgcg tggtgcacta caccgggatg cttgaagatg gaaagaaatt tgattcctcc 120 cgggacagaa acaagccctt taagtttatg ctaggcaagc aggaggtgat ccgaggctgg 180 gaagaagggg ttgcccagat gagtgtgggt cagagagcca aactgactat atctccagat 240 tatgcctatg gtgccactgg gcacccaggc atcatcccac cacatgccac tctcgtcttc 300 gatgtggagc ttctaaaact ggaaggagga gggagctccg gtggaggcag cggtatggtc 360 ttcacactcg aagatttcgt tggggactgg cgacagacag ccggctacaa cctggaccaa 420 gtccttgaac agggaggtgt gtccagtttg tttcagaatc tcggggtgtc cgtaactccg 480 atccaaagga ttgtcctgag cggtgaaaat gggctgaaga tcgacatcca tgtcatcatc 540 ccgtatgaag gtctgagcgg cgaccaaatg ggccagatcg aaaaaatttt taaggtggtg 600 taccctgtgg at 612 <210> 404 <211> 204 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 404 Met Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe 1 5 10 15 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polynucleotide <400> 405 atggatcatc actttaaggt gatcctgcac tatggcacac tggtaatcga cggggttacg 60 ccgaacatga tcgactattt cggacggccg tatgaaggca tcgccgtgtt cgacggcaaa 120 aagatcactg taacagggac cctgtggaac ggcaacaaaa ttatcgacga gcgcctgatc 180 aaccccgacg gctccctgct gttccgagta accatcaacg gagtgaccgg ctggcggctg 240 tgcgaacgca ttctggcggg aggaggtggc tcaggtggag ggagctccgt ggccatcctc 300 tggcatgaga tgtggcatga aggcctggaa gaggcatctc gtttgtactt tggggaaagg 360 aacgtgaaag gcatgtttga ggtgctggag cccttgcatg ctatgatgga acggggcccc 420 cagactctga aggaaacatc ctttaatcag gcctatggtc gagatttaat ggaggcccaa 480 gagtggtgca ggaagtacat gaaatcaggg aatgtcaagg acctcaccca agcctgggac 540 ctctattatc atgtgttccg acgaatctca 570 <210> 406 <211> 190 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 406 Met Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr Gly Thr Leu Val Ile 1 5 10 15 Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu 20 25 30 Gly Ile Ala Val Phe Asp 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atcaaccccg acggctccct gctgttccga gtaaccatca acggagtgac cggctggcgg 120 ctgtgcgaac gcattctggc gggaggaggt ggctcaggtg gagggagctc cgtggccatc 180 ctctggcatg agatgtggca tgaaggcctg gaagaggcat ctcgtttgta ctttggggaa 240 aggaacgtga aaggcatgtt tgaggtgctg gagcccttgc atgctatgat ggaacggggc 300 ccccagactc tgaaggaaac atcctttaat caggcctatg gtcgagattt aatggaggcc 360 caagagtggt gcaggaagta catgaaatca gggaatgtca aggacctcac ccaagcctgg 420 gacctctatt atcatgtgtt ccgacgaatc tca 453 <210> 414 <211> 151 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 414 Met Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile 1 5 10 15 Asp Glu Arg Leu Ile Asn Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr 20 25 30 Ile Asn Gly Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala Gly 35 40 45 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ser Val Ala Ile Leu Trp His Glu 50 55 60 Met Trp His Glu Gly Leu Glu Glu Ala Ser Arg Leu Tyr Phe Gly Glu 65 70 75 80 Arg Asn Val Lys Gly Met Phe Glu 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480 atccaaagga ttgtcctgag cggtgaaaat gggctgaaga tcgacatcca tgtcatcatc 540 ccgtatgaag gtctgagcgg cgaccaaatg ggccagatcg aaaaaatttt taaggtggtg 600 taccctgtgg atgatcatca ctttaaggtg atcctgcact atggcacact ggtaatcgac 660 ggggttacgc cgaacatgat cgactatttc ggacggccgt atgaaggcat cgccgtgttc 720 gacggcaaaa agatcactgt aacagggacc ctgtggaacg gcaacaaaat tatcgacgag 780 cgcctgatca accccgacgg ctccctgctg ttccgagtaa ccatcaacgg agtgaccggc 840 tggcggctgt gcgaacgcat tctg 864 <210> 416 <211> 864 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 416 atgggagtgc aggtggaaac catctcccca ggagacgggc gcaccttccc caagcgcggc 60 cagacctgcg tggtgcacta caccgggatg cttgaagatg gaaagaaatt tgattcctcc 120 cgggacagaa acaagccctt taagtttatg ctaggcaagc aggaggtgat ccgaggctgg 180 gaagaagggg ttgcccagat gagtgtgggt cagagagcca aactgactat atctccagat 240 tatgcctatg gtgccactgg gcacccaggc atcatcccac cacatgccac tctcgtcttc 300 gatgtggagc ttctaaaact ggaaggagga gggagctccg gtggaggcag cggtatggtc 360 ttcacactcg aagatttcgt tggggactgg cgacagacag ccggctacaa cctggaccaa 420 gtccttgaac agggaggtgt gtccagtttg tttcagaatc tcggggtgtc cgtaactccg 480 atccaaagga ttgtcctgag cggtgaaaat gggctgaaga tcgacatcca tgtcatcatc 540 ccgtatgaag gtctgagcgg cgaccaaatg ggccagatcg aaaaaatttt taaggtggtg 600 taccctgtgg atgatcatca ctttaaggtg atcctgcact atggcacact ggtaatcgac 660 ggggttacgc cgaacatgat cgactatttc ggacggccgt atgaaggcat cgccgtgttc 720 gacggcaaaa agatcactgt aacagggacc ctgtggaacg gcaacaaaat tatcgacgag 780 cgcctgatca accccgacgg ctccctgctg ttccgagtaa ccatcaacgg agtgaccggc 840 tggcggctgt gcgaacgcat tctg 864 <210> 417 <211> 288 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 417 Met Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe 1 5 10 15 Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu 20 25 30 Asp Gly Lys Lys Phe Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys 35 40 45 Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile 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polynucleotide <400> 422 atgattctgg cgggaggagg tggctcaggt ggagggagct ccgtggccat cctctggcat 60 gagatgtggc atgaaggcct ggaagaggca tctcgtttgt actttgggga aaggaacgtg 120 aaaggcatgt ttgaggtgct ggagcccttg catgctatga tggaacgggg cccccagact 180 ctgaaggaaa catcctttaa tcaggcctat ggtcgagatt taatggaggc ccaagagtgg 240 tgcaggaagt acatgaaatc agggaatgtc aaggacctca cccaagcctg ggacctctat 300 tatcatgtgt tccgacgaat ctca 324 <210> 423 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 423 Met Ile Leu Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ser Val Ala 1 5 10 15 Ile Leu Trp His Glu Met Trp His Glu Gly Leu Glu Glu Ala Ser Arg 20 25 30 Leu Tyr Phe Gly Glu Arg Asn Val Lys Gly Met Phe Glu Val Leu Glu 35 40 45 Pro Leu His Ala Met Met Glu Arg Gly Pro Gln Thr Leu Lys Glu Thr 50 55 60 Ser Phe Asn Gln Ala Tyr Gly Arg Asp Leu Met Glu Ala Gln Glu Trp 65 70 75 80 Cys Arg Lys Tyr Met Lys Ser Gly Asn Val Lys Asp Leu Thr Gln Ala 85 90 95 Trp Asp Leu Tyr 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gtctgagcgg cgaccaaatg ggccagatcg aaaaaatttt taaggtggtg 600 taccctgtgg atgatcatca ctttaaggtg atcctgcact atggcacact ggtaatcgac 660 ggggttacgc cgaacatgat cgactatttc ggacggccgt atgaaggcat cgccgtgttc 720 gacggcaaaa agatcactgt aacagggacc ctgtggaacg gcaacaaaat tatcgacgag 780 cgcctgatca accccgacgg ctccctgctg ttccgagtaa ccatcaacgg agtgaccggc 840 <210> 434 <211> 280 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 434 Met Gly Val Gln Val Glu Thr Ile Ser Pro Gly Asp Gly Arg Thr Phe 1 5 10 15 Pro Lys Arg Gly Gln Thr Cys Val Val His Tyr Thr Gly Met Leu Glu 20 25 30 Asp Gly Lys Lys Phe Asp Ser Ser Arg Asp Arg Asn Lys Pro Phe Lys 35 40 45 Phe Met Leu Gly Lys Gln Glu Val Ile Arg Gly Trp Glu Glu Gly Val 50 55 60 Ala Gln Met Ser Val Gly Gln Arg Ala Lys Leu Thr Ile Ser Pro Asp 65 70 75 80 Tyr Ala Tyr Gly Ala Thr Gly His Pro Gly Ile Ile Pro Pro His Ala 85 90 95 Thr Leu Val Phe Asp Val Glu Leu Leu Lys Leu Glu Gly Gly Gly Ser 100 105 110 Ser Gly 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accccagcag tgtgcttgct 60 caggagaggg gagatgtgat ggacttctat aaaaccctaa gaggaggagc tactgtgaag 120 gtttctgcgt cttcaccctc actggctgtc gcttctcaat cagactccaa gcagcgaaga 180 cttttggttg attttccaaa aggctcagta agcaatgcgc agcagccaga tctgtccaaa 240 gcagtttcac tctcaatggg actgtatatg ggagagacag aaacaaaagt gatgggaaat 300 gacctgggat tcccacagca gggccaaatc agcctttcct cgggggaaac agacttaaag 360 cttttggaag aaagcattgc aaacctcaat aggtcgacca gtgttccaga gaaccccaag 420 agttcagcat ccactgctgt gtctgctgcc cccacagaga aggagtttcc aaaaactcac 480 tctgatgtat cttcagaaca gcaacatttg aagggccaga ctggcaccaa cggtggcaat 540 gtgaaattgt ataccacaga ccaaagcacc tttgacattt tgcaggattt ggagttttct 600 tctgggtccc caggtaaaga gacgaatgag agtccttgga gatcagacct gttgatagat 660 gaaaactgtt tgctttctcc tctggcggga gaagacgatt cattcctttt ggaaggaaac 720 tcgaatgagg actgcaagcc tctcatttta ccggacacta aacccaaaat taaggataat 780 ggagatctgg ttttgtcaag ccccagtaat gtaacactgc cccaagtgaa aacagaaaaa 840 gaagatttca tcgaactctg cacccctggg gtaattaagc aagagaaact gggcacagtt 900 tactgtcagg caagctttcc tggagcaaat ataattggta ataaaatgtc tgccatttct 960 gttcatggtg tgagtacctc tggaggacag atgtaccact atgacatgaa tacagcatcc 1020 ctttctcaac agcaggatca gaagcctatt tttaatgtca ttccaccaat tcccgttggt 1080 tccgaaaatt ggaataggtg ccaaggatct ggagatgaca acttgacttc tctggggact 1140 ctgaacttcc ctggtcgaac agttttttct aatggctatt caagccccag catgagacca 1200 gatgtaagct ctcctccatc cagctcctca acagcaacaa caggaccacc tcccaaactc 1260 tgcctggtgt gctctgatga agcttcagga tgtcattatg gagtcttaac ttgtggaagc 1320 tgtaaagttt tcttcaaaag agcagtggaa ggacagcaca attacctatg tgctggaagg 1380 aatgattgca tcatcgataa aattcgaaga aaaaactgcc cagcatgccg ctatcgaaaa 1440 tgtcttcagg ctggaatgaa cctggaagct cgaaaaacaa agaaaaaaat aaaaggaatt 1500 cagcaggcca ctacaggagt ctcacaagaa acctctgaaa atcctggtaa caaaacaata 1560 gttcctgcaa cgttaccaca actcacccct accctggtgt cactgttgga ggttattgaa 1620 cctgaagtgt tatatgcagg atatgatagc tctgttccag actcaacttg gaggatcatg 1680 actacgctca acatgttagg agggcggcaa gtgattgcag cagtgaaatg ggcaaaggca 1740 ataccaggtt tcaggaactt acacctggat gaccaaatga ccctactgca gtactcctgg 1800 atgtttctta tggcatttgc tctggggtgg agatcatata gacaatcaag tgcaaacctg 1860 ctgtgttttg ctcctgatct gattattaat gagcagagaa tgactctacc ctgcatgtac 1920 gaccaatgta aacacatgct gtatgtttcc tctgagttac acaggcttca ggtatcttat 1980 gaagagtatc tctgtatgaa aaccttactg cttctctctt cagttcctaa ggacggtctg 2040 aagagccaag agctatttga tgaaattaga atgacctaca tcaaagagct aggaaaagcc 2100 attgtcaaga gggaaggaaa ctccagccag aactggcagc ggttttatca actgacaaaa 2160 ctcttggatt ctatgcatga agtggttgaa aatctcctta actattgctt ccaaacattt 2220 ttggataaga ccatgagtat tgaattcccc gagatgttag ctgaaatcat caccaatcag 2280 ataccaaaat attcaaatgg aaatatcaaa aaacttctgt ttcatcaaaa ggtt 2334 <210> 452 <211> 778 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 452 Met Asp Ser Lys Glu Ser Leu Thr Pro Gly Arg Glu Glu Asn Pro Ser 1 5 10 15 Ser Val Leu Ala Gln Glu Arg Gly Asp Val Met Asp Phe Tyr Lys Thr 20 25 30 Leu Arg Gly Gly Ala Thr Val Lys Val Ser Ala Ser Ser Pro Ser Leu 35 40 45 Ala Val Ala Ser 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Synthetic oligonucleotide <400> 455 tctctcggtg gttcaggtgg tggcgggagc ggtggaggga gcagcggtgg a 51 <210> 456 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 456 Ser Leu Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly 1 5 10 15 Gly <210> 457 <211> 11 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 457 gctcgagcgg a 11 <210> 458 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 458 Gly Ser Ser Gly 1 <210> 459 <211> 1080 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 459 atgattctca actcttctac tgaagatggt attaaaagaa tccaagatga ttgtcccaaa 60 gctggaaggc ataattacat atttgtcatg attcctactt tatacagtat catctttgtg 120 gtgggaatat ttggaaacag cttggtggtg atagtcattt acttttatat gaagctgaag 180 actgtggcca gtgtttttct tttgaattta gcactggctg acttatgctt tttactgact 240 ttgccactat gggctgtcta cacagctatg gaataccgct 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polypeptide <400> 464 Met Asn Ser Phe Ser Thr Ser Ala Phe Gly Pro Val Ala Phe Ser Leu 1 5 10 15 Gly Leu Leu Leu Val Leu Pro Ala Ala Phe Pro Ala Pro Val Phe Thr 20 25 30 Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala Gly Tyr Asn Leu 35 40 45 Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Phe Gln Asn Leu 50 55 60 Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Leu Ser Gly Glu Asn 65 70 75 80 Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser 85 90 95 Gly Asp Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys Val Val Tyr Pro 100 105 110 Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr Gly Thr Leu Val 115 120 125 Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr 130 135 140 Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr 145 150 155 160 Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Asn Pro Asp 165 170 175 Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val Thr Gly Trp Arg 180 185 190 Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala 195 <210> 465 <211> 591 <212> DNA <213> 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atgttcgttg gggactggcg acagacagcc ggctacaacc tggaccaagt ccttgaacag 60 ggaggtgtgt ccagtttgtt tcagaatctc ggggtgtccg taactccgat ccaaaggatt 120 gtcctgagcg gtgaaaatgg gctgaagatc gacatccatg tcatcatccc gtatgaaggt 180 ctgagcggcg accaaatggg ccagatcgaa aaaattttta aggtggtgta ccctgtggat 240 gatcatcact ttaaggtgat cctgcactat ggcacactgg taatcgacgg ggttacgccg 300 aacatgatcg actatttcgg acggccgtat gaaggcatcg ccgtgttcga cggcaaaaag 360 atcactgtaa cagggaccct gtggaacggc aacaaaatta tcgacgagcg cctgatcaac 420 cccgacggct ccctgctgtt ccgagtaacc atcaacggag tgaccggctg gcggctgtgc 480 gaacgcattc tggctagctc aagcggaggt tcaggcggtt ccggaatgta tgaaagcttt 540 attgagtcac tgccattcct taaatctttg gagttttctg cacgcctgaa agtagtagat 600 gtgataggca ccaaagtata caacgatgga gaacaaatca ttgctcaggg agattcggct 660 gattcttttt tcattattga atctggagaa gtgaaaatta ctatgaaaag aaagggtaaa 720 tcagaagtgg aagagaatgg tgcagtagaa atcgctcgat gctcgcgggg acagtacttt 780 ggagagcttg ccctggtaac taacaaacct cgagcagctt ctgcccacgc cattgggact 840 gtcaaatgtt tagcaatgga tgtgcaagca tttgaaaggc ttctgggacc ttgcatggaa 900 attatgaaaa ggaacatcgc tacctatgaa gaacagttag ttgccctgta tggaacgaac 960 atggatattg tagggtcagg tggatctgga ggtagctctt ctatggtctt cacactcgaa 1020 gat 1023 <210> 468 <211> 341 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 468 Met Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala Gly Tyr Asn Leu Asp Gln 1 5 10 15 Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Phe Gln Asn Leu Gly Val 20 25 30 Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Leu Ser Gly Glu Asn Gly Leu 35 40 45 Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Gly Asp 50 55 60 Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp 65 70 75 80 Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp 85 90 95 Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly 100 105 110 Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp 115 120 125 Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Asn Pro Asp Gly Ser 130 135 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Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 469 atgcagacag ccggctacaa cctggaccaa gtccttgaac agggaggtgt gtccagtttg 60 tttcagaatc tcggggtgtc cgtaactccg atccaaagga ttgtcctgag cggtgaaaat 120 gggctgaaga tcgacatcca tgtcatcatc ccgtatgaag gtctgagcgg cgaccaaatg 180 ggccagatcg aaaaaatttt taaggtggtg taccctgtgg atgatcatca ctttaaggtg 240 atcctgcact atggcacact ggtaatcgac ggggttacgc cgaacatgat cgactatttc 300 ggacggccgt atgaaggcat cgccgtgttc gacggcaaaa agatcactgt aacagggacc 360 ctgtggaacg gcaacaaaat tatcgacgag cgcctgatca accccgacgg ctccctgctg 420 ttccgagtaa ccatcaacgg agtgaccggc tggcggctgt gcgaacgcat tctggctagc 480 tcaagcggag gttcaggcgg ttccggaatg tatgaaagct ttattgagtc actgccattc 540 cttaaatctt tggagttttc tgcacgcctg aaagtagtag atgtgatagg caccaaagta 600 tacaacgatg gagaacaaat cattgctcag ggagattcgg ctgattcttt tttcattatt 660 gaatctggag aagtgaaaat tactatgaaa agaaagggta aatcagaagt ggaagagaat 720 ggtgcagtag aaatcgctcg atgctcgcgg ggacagtact ttggagagct tgccctggta 780 actaacaaac ctcgagcagc ttctgcccac gccattggga ctgtcaaatg tttagcaatg 840 gatgtgcaag catttgaaag gcttctggga ccttgcatgg aaattatgaa aaggaacatc 900 gctacctatg aagaacagtt agttgccctg tatggaacga acatggatat tgtagggtca 960 ggtggatctg gaggtagctc ttctatggtc ttcacactcg aagatttcgt tggggactgg 1020 cga 1023 <210> 470 <211> 341 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 470 Met Gln Thr Ala Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly 1 5 10 15 Val Ser Ser Leu Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln 20 25 30 Arg Ile Val Leu Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val 35 40 45 Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Gly Asp Gln Met Gly Gln Ile Glu 50 55 60 Lys Ile Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val 65 70 75 80 Ile Leu His Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met 85 90 95 Ile Asp Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly 100 105 110 Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys 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acgccattgg gactgtcaaa 720 tgtttagcaa tggatgtgca agcatttgaa aggcttctgg gaccttgcat ggaaattatg 780 aaaaggaaca tcgctaccta tgaagaacag ttagttgccc tgtatggaac gaacatggat 840 attgtagggt caggtggatc tggaggtagc tcttctatgg tcttcacact cgaagatttc 900 gttggggact ggcgacagac agccggctac aacctggacc aagtccttga acagggaggt 960 gtgtccagtt tgtttcagaa tctcggggtg tccgtaactc cgatccaaag gattgtcctg 1020 agc 1023 <210> 472 <211> 341 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 472 Met Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr 1 5 10 15 Glu Gly Leu Ser Gly Asp Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys 20 25 30 Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr 35 40 45 Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe 50 55 60 Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr 65 70 75 80 Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu 85 90 95 Ile Asn Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe 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atgctcgcgg ggacagtact ttggagagct tgccctggta 660 actaacaaac ctcgagcagc ttctgcccac gccattggga ctgtcaaatg tttagcaatg 720 gatgtgcaag catttgaaag gcttctggga ccttgcatgg aaattatgaa aaggaacatc 780 gctacctatg aagaacagtt agttgccctg tatggaacga acatggatat tgtagggtca 840 ggtggatctg gaggtagctc ttctatggtc ttcacactcg aagatttcgt tggggactgg 900 cgacagacag ccggctacaa cctggaccaa gtccttgaac agggaggtgt gtccagtttg 960 tttcagaatc tcggggtgtc cgtaactccg atccaaagga ttgtcctgag cggtgaaaat 1020 ggg 1023 <210> 474 <211> 341 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 474 Met Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser 1 5 10 15 Gly Asp Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys Val Val Tyr Pro 20 25 30 Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr Gly Thr Leu Val 35 40 45 Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr 50 55 60 Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr 65 70 75 80 Leu Trp Asn Gly 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gaagtgaaaa ttactatgaa aagaaagggt aaatcagaag tggaagagaa tggtgcagta 600 gaaatcgctc gatgctcgcg gggacagtac tttggagagc ttgccctggt aactaacaaa 660 cctcgagcag cttctgccca cgccattggg actgtcaaat gtttagcaat ggatgtgcaa 720 gcatttgaaa ggcttctggg accttgcatg gaaattatga aaaggaacat cgctacctat 780 gaagaacagt tagttgccct gtatggaacg aacatggata ttgtagggtc aggtggatct 840 ggaggtagct cttctatggt cttcacactc gaagatttcg ttggggactg gcgacagaca 900 gccggctaca acctggacca agtccttgaa cagggaggtg tgtccagttt gtttcagaat 960 ctcggggtgt ccgtaactcc gatccaaagg attgtcctga gcggtgaaaa tgggctgaag 1020 atc 1023 <210> 476 <211> 341 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 476 Met Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Gly Asp Gln 1 5 10 15 Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp 20 25 30 His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly 35 40 45 Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile 50 55 60 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agtatacaac gatggagaac aaatcattgc tcagggagat 420 tcggctgatt cttttttcat tattgaatct ggagaagtga aaattactat gaaaagaaag 480 ggtaaatcag aagtggaaga gaatggtgca gtagaaatcg ctcgatgctc gcggggacag 540 tactttggag agcttgccct ggtaactaac aaacctcgag cagcttctgc ccacgccatt 600 gggactgtca aatgtttagc aatggatgtg caagcatttg aaaggcttct gggaccttgc 660 atggaaatta tgaaaaggaa catcgctacc tatgaagaac agttagttgc cctgtatgga 720 acgaacatgg atattgtagg gtcaggtgga tctggaggta gctcttctat ggtcttcaca 780 ctcgaagatt tcgttgggga ctggcgacag acagccggct acaacctgga ccaagtcctt 840 gaacagggag gtgtgtccag tttgtttcag aatctcgggg tgtccgtaac tccgatccaa 900 aggattgtcc tgagcggtga aaatgggctg aagatcgaca tccatgtcat catcccgtat 960 gaaggtctga gcggcgacca aatgggccag atcgaaaaaa tttttaaggt ggtgtaccct 1020 gtg 1023 <210> 480 <211> 341 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 480 Met Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr Gly Thr Leu Val 1 5 10 15 Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met 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gtagtagatg tgataggcac caaagtatac aacgatggag aacaaatcat tgctcaggga 360 gattcggctg attctttttt cattattgaa tctggagaag tgaaaattac tatgaaaaga 420 aagggtaaat cagaagtgga agagaatggt gcagtagaaa tcgctcgatg ctcgcgggga 480 cagtactttg gagagcttgc cctggtaact aacaaacctc gagcagcttc tgcccacgcc 540 attgggactg tcaaatgttt agcaatggat gtgcaagcat ttgaaaggct tctgggacct 600 tgcatggaaa ttatgaaaag gaacatcgct acctatgaag aacagttagt tgccctgtat 660 ggaacgaaca tggatattgt agggtcaggt ggatctggag gtagctcttc tatggtcttc 720 acactcgaag atttcgttgg ggactggcga cagacagccg gctacaacct ggaccaagtc 780 cttgaacagg gaggtgtgtc cagtttgttt cagaatctcg gggtgtccgt aactccgatc 840 caaaggattg tcctgagcgg tgaaaatggg ctgaagatcg acatccatgt catcatcccg 900 tatgaaggtc tgagcggcga ccaaatgggc cagatcgaaa aaatttttaa ggtggtgtac 960 cctgtggatg atcatcactt taaggtgatc ctgcactatg gcacactggt aatcgacggg 1020 gtt 1023 <210> 482 <211> 341 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 482 Met Thr Pro 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aatctttgga gttttctgca 240 cgcctgaaag tagtagatgt gataggcacc aaagtataca acgatggaga acaaatcatt 300 gctcagggag attcggctga ttcttttttc attattgaat ctggagaagt gaaaattact 360 atgaaaagaa agggtaaatc agaagtggaa gagaatggtg cagtagaaat cgctcgatgc 420 tcgcggggac agtactttgg agagcttgcc ctggtaacta acaaacctcg agcagcttct 480 gcccacgcca ttgggactgt caaatgttta gcaatggatg tgcaagcatt tgaaaggctt 540 ctgggacctt gcatggaaat tatgaaaagg aacatcgcta cctatgaaga acagttagtt 600 gccctgtatg gaacgaacat ggatattgta gggtcaggtg gatctggagg tagctcttct 660 atggtcttca cactcgaaga tttcgttggg gactggcgac agacagccgg ctacaacctg 720 gaccaagtcc ttgaacaggg aggtgtgtcc agtttgtttc agaatctcgg ggtgtccgta 780 actccgatcc aaaggattgt cctgagcggt gaaaatgggc tgaagatcga catccatgtc 840 atcatcccgt atgaaggtct gagcggcgac caaatgggcc agatcgaaaa aatttttaag 900 gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgatcc tgcactatgg cacactggta 960 atcgacgggg ttacgccgaa catgatcgac tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc 1020 gtg 1023 <210> 484 <211> 341 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 484 Met Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly 1 5 10 15 Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Asn Pro Asp Gly Ser Leu Leu 20 25 30 Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu Arg 35 40 45 Ile Leu Ala Ser Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Met Tyr Glu 50 55 60 Ser Phe Ile Glu Ser Leu Pro Phe Leu Lys Ser Leu Glu Phe Ser Ala 65 70 75 80 Arg Leu Lys Val Val Asp Val Ile Gly Thr Lys Val Tyr Asn Asp Gly 85 90 95 Glu Gln Ile Ile Ala Gln Gly Asp Ser Ala Asp Ser Phe Phe Ile Ile 100 105 110 Glu Ser Gly Glu Val Lys Ile Thr Met Lys Arg Lys Gly Lys Ser Glu 115 120 125 Val Glu Glu Asn Gly Ala Val Glu Ile Ala Arg Cys Ser Arg Gly Gln 130 135 140 Tyr Phe Gly Glu Leu Ala Leu Val Thr Asn Lys Pro Arg Ala Ala Ser 145 150 155 160 Ala His Ala Ile Gly Thr Val Lys Cys Leu Ala Met Asp Val Gln Ala 165 170 175 Phe Glu Arg Leu Leu Gly Pro Cys Met Glu Ile Met Lys Arg Asn Ile 180 185 190 Ala Thr 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aacgcattct ggctagctca agcggaggtt caggcggttc cggaatgtat 180 gaaagcttta ttgagtcact gccattcctt aaatctttgg agttttctgc acgcctgaaa 240 gtagtagatg tgataggcac caaagtatac aacgatggag aacaaatcat tgctcaggga 300 gattcggctg attctttttt cattattgaa tctggagaag tgaaaattac tatgaaaaga 360 aagggtaaat cagaagtgga agagaatggt gcagtagaaa tcgctcgatg ctcgcgggga 420 cagtactttg gagagcttgc cctggtaact aacaaacctc gagcagcttc tgcccacgcc 480 attgggactg tcaaatgttt agcaatggat gtgcaagcat ttgaaaggct tctgggacct 540 tgcatggaaa ttatgaaaag gaacatcgct acctatgaag aacagttagt tgccctgtat 600 ggaacgaaca tggatattgt agggtcaggt ggatctggag gtagctcttc tatggtcttc 660 acactcgaag atttcgttgg ggactggcga cagacagccg gctacaacct ggaccaagtc 720 cttgaacagg gaggtgtgtc cagtttgttt cagaatctcg gggtgtccgt aactccgatc 780 caaaggattg tcctgagcgg tgaaaatggg ctgaagatcg acatccatgt catcatcccg 840 tatgaaggtc tgagcggcga ccaaatgggc cagatcgaaa aaatttttaa ggtggtgtac 900 cctgtggatg atcatcactt taaggtgatc ctgcactatg gcacactggt aatcgacggg 960 gttacgccga acatgatcga 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Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 489 atgatcactg taacagggac cctgtggaac ggcaacaaaa ttatcgacga gcgcctgatc 60 aaccccgacg gctccctgct gttccgagta accatcaacg gagtgaccgg ctggcggctg 120 tgcgaacgca ttctggctag ctcaagcgga ggttcaggcg gttccggaat gtatgaaagc 180 tttattgagt cactgccatt ccttaaatct ttggagtttt ctgcacgcct gaaagtagta 240 gatgtgatag gcaccaaagt atacaacgat ggagaacaaa tcattgctca gggagattcg 300 gctgattctt ttttcattat tgaatctgga gaagtgaaaa ttactatgaa aagaaagggt 360 aaatcagaag tggaagagaa tggtgcagta gaaatcgctc gatgctcgcg gggacagtac 420 tttggagagc ttgccctggt aactaacaaa cctcgagcag cttctgccca cgccattggg 480 actgtcaaat gtttagcaat ggatgtgcaa gcatttgaaa ggcttctggg accttgcatg 540 gaaattatga aaaggaacat cgctacctat gaagaacagt tagttgccct gtatggaacg 600 aacatggata ttgtagggtc aggtggatct ggaggtagct cttctatggt cttcacactc 660 gaagatttcg ttggggactg gcgacagaca gccggctaca acctggacca agtccttgaa 720 cagggaggtg tgtccagttt gtttcagaat ctcggggtgt ccgtaactcc gatccaaagg 780 attgtcctga gcggtgaaaa tgggctgaag atcgacatcc atgtcatcat cccgtatgaa 840 ggtctgagcg gcgaccaaat gggccagatc gaaaaaattt ttaaggtggt gtaccctgtg 900 gatgatcatc actttaaggt gatcctgcac tatggcacac tggtaatcga cggggttacg 960 ccgaacatga tcgactattt cggacggccg tatgaaggca tcgccgtgtt cgacggcaaa 1020 aag 1023 <210> 490 <211> 341 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 490 Met Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp 1 5 10 15 Glu Arg Leu Ile Asn Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile 20 25 30 Asn Gly Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala Ser Ser 35 40 45 Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Met Tyr Glu Ser Phe Ile Glu Ser 50 55 60 Leu Pro Phe Leu Lys Ser Leu Glu Phe Ser Ala Arg Leu Lys Val Val 65 70 75 80 Asp Val Ile Gly Thr Lys Val Tyr Asn Asp Gly Glu Gln Ile Ile Ala 85 90 95 Gln Gly Asp Ser Ala Asp Ser Phe Phe Ile Ile Glu Ser Gly Glu Val 100 105 110 Lys Ile Thr Met Lys Arg Lys Gly Lys Ser Glu Val Glu Glu Asn Gly 115 120 125 Ala Val Glu 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agtttgtttc agaatctcgg ggtgtccgta actccgatcc aaaggattgt cctgagcggt 780 gaaaatgggc tgaagatcga catccatgtc atcatcccgt atgaaggtct gagcggcgac 840 caaatgggcc agatcgaaaa aatttttaag gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt 900 aaggtgatcc tgcactatgg cacactggta atcgacgggg ttacgccgaa catgatcgac 960 tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc gtgttcgacg gcaaaaagat cactgtaaca 1020 ggg 1023 <210> 492 <211> 341 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 492 Met Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Asn 1 5 10 15 Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val Thr Gly 20 25 30 Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala Ser Ser Ser Gly Gly Ser Gly 35 40 45 Gly Ser Gly Met Tyr Glu Ser Phe Ile Glu Ser Leu Pro Phe Leu Lys 50 55 60 Ser Leu Glu Phe Ser Ala Arg Leu Lys Val Val Asp Val Ile Gly Thr 65 70 75 80 Lys Val Tyr Asn Asp Gly Glu Gln Ile Ile Ala Gln Gly Asp Ser Ala 85 90 95 Asp Ser Phe Phe Ile Ile Glu Ser Gly Glu Val Lys Ile Thr Met 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acctggacca agtccttgaa 660 cagggaggtg tgtccagttt gtttcagaat ctcggggtgt ccgtaactcc gatccaaagg 720 attgtcctga gcggtgaaaa tgggctgaag atcgacatcc atgtcatcat cccgtatgaa 780 ggtctgagcg gcgaccaaat gggccagatc gaaaaaattt ttaaggtggt gtaccctgtg 840 gatgatcatc actttaaggt gatcctgcac tatggcacac tggtaatcga cggggttacg 900 ccgaacatga tcgactattt cggacggccg tatgaaggca tcgccgtgtt cgacggcaaa 960 aagatcactg taacagggac cctgtggaac ggcaacaaaa ttatcgacga gcgcctgatc 1020 aac 1023 <210> 494 <211> 341 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 494 Met Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val Thr 1 5 10 15 Gly Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala Ser Ser Ser Gly Gly Ser 20 25 30 Gly Gly Ser Gly Met Tyr Glu Ser Phe Ile Glu Ser Leu Pro Phe Leu 35 40 45 Lys Ser Leu Glu Phe Ser Ala Arg Leu Lys Val Val Asp Val Ile Gly 50 55 60 Thr Lys Val Tyr Asn Asp Gly Glu Gln Ile Ile Ala Gln Gly Asp Ser 65 70 75 80 Ala Asp Ser Phe Phe Ile Ile Glu Ser Gly 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tggaggtagc tcttctatgg tcttcacact cgaagatttc 600 gttggggact ggcgacagac agccggctac aacctggacc aagtccttga acagggaggt 660 gtgtccagtt tgtttcagaa tctcggggtg tccgtaactc cgatccaaag gattgtcctg 720 agcggtgaaa atgggctgaa gatcgacatc catgtcatca tcccgtatga aggtctgagc 780 ggcgaccaaa tgggccagat cgaaaaaatt tttaaggtgg tgtaccctgt ggatgatcat 840 cactttaagg tgatcctgca ctatggcaca ctggtaatcg acggggttac gccgaacatg 900 atcgactatt tcggacggcc gtatgaaggc atcgccgtgt tcgacggcaa aaagatcact 960 gtaacaggga ccctgtggaa cggcaacaaa attatcgacg agcgcctgat caaccccgac 1020 ggc 1023 <210> 496 <211> 341 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 496 Met Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val Thr Gly Trp Arg 1 5 10 15 Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala Ser Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser 20 25 30 Gly Met Tyr Glu Ser Phe Ile Glu Ser Leu Pro Phe Leu Lys Ser Leu 35 40 45 Glu Phe Ser Ala Arg Leu Lys Val Val Asp Val Ile Gly Thr Lys Val 50 55 60 Tyr Asn Asp Gly Glu Gln 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cttgccctgg taactaacaa acctcgagca 360 gcttctgccc acgccattgg gactgtcaaa tgtttagcaa tggatgtgca agcatttgaa 420 aggcttctgg gaccttgcat ggaaattatg aaaaggaaca tcgctaccta tgaagaacag 480 ttagttgccc tgtatggaac gaacatggat attgtagggt caggtggatc tggaggtagc 540 tcttctcaga cagccggcta caacctggac caagtccttg aacagggagg tgtgtccagt 600 ttgtttcaga atctcggggt gtccgtaact ccgatccaaa ggattgtcct gagcggtgaa 660 aatgggctga agatcgacat ccatgtcatc atcccgtatg aaggtctgag cggcgaccaa 720 atgggccaga tcgaaaaaat ttttaaggtg gtgtaccctg tggatgatca tcactttaag 780 gtgatcctgc actatggcac actggtaatc gacggggtta cgccgaacat gatcgactat 840 ttcggacggc cgtatgaagg catcgccgtg ttcgacggca aaaagatcac tgtaacaggg 900 accctgtgga acggcaacaa aattatcgac gagcgcctga tcaaccccga cggctccctg 960 ctgttccgag taaccatcaa cggagtgacc ggctggcggc tgtgcgaacg cattctggct 1020 <210> 502 <211> 340 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 502 Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Ser 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tattgaatct ggagaagtga aaattactat gaaaagaaag 300 ggtaaatcag aagtggaaga gaatggtgca gtagaaatcg ctcgatgctc gcggggacag 360 tactttggag agcttgccct ggtaactaac aaacctcgag cagcttctgc ccacgccatt 420 gggactgtca aatgtttagc aatggatgtg caagcatttg aaaggcttct gggaccttgc 480 atggaaatta tgaaaaggaa catcgctacc tatgaagaac agttagttgc cctgtatgga 540 acgaacatgg atattgtagg gtcaggtgga tctggaggta gctcttctgg tgtgtccagt 600 ttgtttcaga atctcggggt gtccgtaact ccgatccaaa ggattgtcct gagcggtgaa 660 aatgggctga agatcgacat ccatgtcatc atcccgtatg aaggtctgag cggcgaccaa 720 atgggccaga tcgaaaaaat ttttaaggtg gtgtaccctg tggatgatca tcactttaag 780 gtgatcctgc actatggcac actggtaatc gacggggtta cgccgaacat gatcgactat 840 ttcggacggc cgtatgaagg catcgccgtg ttcgacggca aaaagatcac tgtaacaggg 900 accctgtgga acggcaacaa aattatcgac gagcgcctga tcaaccccga cggctccctg 960 ctgttccgag taaccatcaa cggagtgacc ggctggcggc tgtgcgaacg cattctggct 1020 <210> 504 <211> 340 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 504 Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala 1 5 10 15 Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Ser Ala Ser Gly Gly 20 25 30 Ser Gly Gly Ser Gly Met Tyr Glu Ser Phe Ile Glu Ser Leu Pro Phe 35 40 45 Leu Lys Ser Leu Glu Phe Ser Ala Arg Leu Lys Val Val Asp Val Ile 50 55 60 Gly Thr Lys Val Tyr Asn Asp Gly Glu Gln Ile Ile Ala Gln Gly Asp 65 70 75 80 Ser Ala Asp Ser Phe Phe Ile Ile Glu Ser Gly Glu Val Lys Ile Thr 85 90 95 Met Lys Arg Lys Gly Lys Ser Glu Val Glu Glu Asn Gly Ala Val Glu 100 105 110 Ile Ala Arg Cys Ser Arg Gly Gln Tyr Phe Gly Glu Leu Ala Leu Val 115 120 125 Thr Asn Lys Pro Arg Ala Ala Ser Ala His Ala Ile Gly Thr Val Lys 130 135 140 Cys Leu Ala Met Asp Val Gln Ala Phe Glu Arg Leu Leu Gly Pro Cys 145 150 155 160 Met Glu Ile Met Lys Arg Asn Ile Ala Thr Tyr Glu Glu Gln Leu Val 165 170 175 Ala Leu Tyr Gly Thr Asn Met Asp Ile Val Gly Ser Gly Gly Ser Gly 180 185 190 Gly Ser Ser Ser Gly Val Ser Ser Leu Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser 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Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 511 atggtcttca cactcgaaga tttcgttggg gactggcgac agacagccgg ctacaacctg 60 gaccaagtcc ttgaacaggg aggtgtgtcc agtttgtttc agaatctcgg ggtgtccgta 120 actccgatcc aaaggattgt cctgagcggt gaaaatgggc tgaagatcag cgctagcgga 180 ggttcaggcg gttccggaat gtatgaaagc tttattgagt cactgccatt ccttaaatct 240 ttggagtttt ctgcacgcct gaaagtagta gatgtgatag gcaccaaagt atacaacgat 300 ggagaacaaa tcattgctca gggagattcg gctgattctt ttttcattat tgaatctgga 360 gaagtgaaaa ttactatgaa aagaaagggt aaatcagaag tggaagagaa tggtgcagta 420 gaaatcgctc gatgctcgcg gggacagtac tttggagagc ttgccctggt aactaacaaa 480 cctcgagcag cttctgccca cgccattggg actgtcaaat gtttagcaat ggatgtgcaa 540 gcatttgaaa ggcttctggg accttgcatg gaaattatga aaaggaacat cgctacctat 600 gaagaacagt tagttgccct gtatggaacg aacatggata ttgtagggtc aggtggatct 660 ggaggtagct cttctgacat ccatgtcatc atcccgtatg aaggtctgag cggcgaccaa 720 atgggccaga tcgaaaaaat ttttaaggtg gtgtaccctg tggatgatca tcactttaag 780 gtgatcctgc actatggcac actggtaatc 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atctggaggt agctcttctg tggatgatca tcactttaag 780 gtgatcctgc actatggcac actggtaatc gacggggtta cgccgaacat gatcgactat 840 ttcggacggc cgtatgaagg catcgccgtg ttcgacggca aaaagatcac tgtaacaggg 900 accctgtgga acggcaacaa aattatcgac gagcgcctga tcaaccccga cggctccctg 960 ctgttccgag taaccatcaa cggagtgacc ggctggcggc tgtgcgaacg cattctggct 1020 <210> 514 <211> 340 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 514 Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala 1 5 10 15 Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu 20 25 30 Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Leu 35 40 45 Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr 50 55 60 Glu Gly Leu Ser Gly Asp Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys 65 70 75 80 Val Val Tyr Pro Ser Ala Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Met Tyr 85 90 95 Glu Ser Phe Ile Glu Ser Leu Pro Phe Leu Lys Ser Leu Glu Phe Ser 100 105 110 Ala Arg Leu Lys 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ggaacatcgc tacctatgaa gaacagttag ttgccctgta tggaacgaac 720 atggatattg tagggtcagg tggatctgga ggtagctctt ctgatgatca tcactttaag 780 gtgatcctgc actatggcac actggtaatc gacggggtta cgccgaacat gatcgactat 840 ttcggacggc cgtatgaagg catcgccgtg ttcgacggca aaaagatcac tgtaacaggg 900 accctgtgga acggcaacaa aattatcgac gagcgcctga tcaaccccga cggctccctg 960 ctgttccgag taaccatcaa cggagtgacc ggctggcggc tgtgcgaacg cattctggct 1020 <210> 516 <211> 340 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 516 Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala 1 5 10 15 Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu 20 25 30 Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Leu 35 40 45 Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr 50 55 60 Glu Gly Leu Ser Gly Asp Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys 65 70 75 80 Val Val Tyr Pro Val Ser Ala Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Met 85 90 95 Tyr Glu Ser 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actgtcaaat gtttagcaat ggatgtgcaa gcatttgaaa ggcttctggg accttgcatg 660 gaaattatga aaaggaacat cgctacctat gaagaacagt tagttgccct gtatggaacg 720 aacatggata ttgtagggtc aggtggatct ggaggtagct cttctgatca tcactttaag 780 gtgatcctgc actatggcac actggtaatc gacggggtta cgccgaacat gatcgactat 840 ttcggacggc cgtatgaagg catcgccgtg ttcgacggca aaaagatcac tgtaacaggg 900 accctgtgga acggcaacaa aattatcgac gagcgcctga tcaaccccga cggctccctg 960 ctgttccgag taaccatcaa cggagtgacc ggctggcggc tgtgcgaacg cattctggct 1020 <210> 518 <211> 340 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 518 Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala 1 5 10 15 Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu 20 25 30 Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Leu 35 40 45 Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr 50 55 60 Glu Gly Leu Ser Gly Asp Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys 65 70 75 80 Val 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agaagtggaa 540 gagaatggtg cagtagaaat cgctcgatgc tcgcggggac agtactttgg agagcttgcc 600 ctggtaacta acaaacctcg agcagcttct gcccacgcca ttgggactgt caaatgttta 660 gcaatggatg tgcaagcatt tgaaaggctt ctgggacctt gcatggaaat tatgaaaagg 720 aacatcgcta cctatgaaga acagttagtt gccctgtatg gaacgaacat ggatattgta 780 gggtcaggtg gatctggagg tagctcttct gacggggtta cgccgaacat gatcgactat 840 ttcggacggc cgtatgaagg catcgccgtg ttcgacggca aaaagatcac tgtaacaggg 900 accctgtgga acggcaacaa aattatcgac gagcgcctga tcaaccccga cggctccctg 960 ctgttccgag taaccatcaa cggagtgacc ggctggcggc tgtgcgaacg cattctggct 1020 <210> 520 <211> 340 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 520 Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala 1 5 10 15 Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu 20 25 30 Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Leu 35 40 45 Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr 50 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cggaggttca ggcggttccg gaatgtatga aagctttatt 360 gagtcactgc cattccttaa atctttggag ttttctgcac gcctgaaagt agtagatgtg 420 ataggcacca aagtatacaa cgatggagaa caaatcattg ctcagggaga ttcggctgat 480 tcttttttca ttattgaatc tggagaagtg aaaattacta tgaaaagaaa gggtaaatca 540 gaagtggaag agaatggtgc agtagaaatc gctcgatgct cgcggggaca gtactttgga 600 gagcttgccc tggtaactaa caaacctcga gcagcttctg cccacgccat tgggactgtc 660 aaatgtttag caatggatgt gcaagcattt gaaaggcttc tgggaccttg catggaaatt 720 atgaaaagga acatcgctac ctatgaagaa cagttagttg ccctgtatgg aacgaacatg 780 gatattgtag ggtcaggtgg atctggaggt agctcttcta cgccgaacat gatcgactat 840 ttcggacggc cgtatgaagg catcgccgtg ttcgacggca aaaagatcac tgtaacaggg 900 accctgtgga acggcaacaa aattatcgac gagcgcctga tcaaccccga cggctccctg 960 ctgttccgag taaccatcaa cggagtgacc ggctggcggc tgtgcgaacg cattctggct 1020 <210> 526 <211> 340 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 526 Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp 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Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 528 Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala 1 5 10 15 Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu 20 25 30 Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Leu 35 40 45 Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr 50 55 60 Glu Gly Leu Ser Gly Asp Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys 65 70 75 80 Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr 85 90 95 Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe 100 105 110 Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Ser Ala Ser Gly Gly Ser Gly 115 120 125 Gly Ser Gly Met Tyr Glu Ser Phe Ile Glu Ser Leu Pro Phe Leu Lys 130 135 140 Ser Leu Glu Phe Ser Ala Arg Leu Lys Val Val Asp Val Ile Gly Thr 145 150 155 160 Lys Val Tyr Asn Asp Gly Glu Gln Ile Ile Ala Gln Gly Asp Ser Ala 165 170 175 Asp Ser Phe Phe Ile Ile Glu Ser Gly Glu Val Lys Ile Thr Met Lys 180 185 190 Arg Lys Gly Lys Ser Glu Val Glu Glu Asn Gly 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tgaagatcga catccatgtc 180 atcatcccgt atgaaggtct gagcggcgac caaatgggcc agatcgaaaa aatttttaag 240 gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgatcc tgcactatgg cacactggta 300 atcgacgggg ttacgccgaa catgatcgac tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc 360 gtgttcgacg gcagcgctag cggaggttca ggcggttccg gaatgtatga aagctttatt 420 gagtcactgc cattccttaa atctttggag ttttctgcac gcctgaaagt agtagatgtg 480 ataggcacca aagtatacaa cgatggagaa caaatcattg ctcagggaga ttcggctgat 540 tcttttttca ttattgaatc tggagaagtg aaaattacta tgaaaagaaa gggtaaatca 600 gaagtggaag agaatggtgc agtagaaatc gctcgatgct cgcggggaca gtactttgga 660 gagcttgccc tggtaactaa caaacctcga gcagcttctg cccacgccat tgggactgtc 720 aaatgtttag caatggatgt gcaagcattt gaaaggcttc tgggaccttg catggaaatt 780 atgaaaagga acatcgctac ctatgaagaa cagttagttg ccctgtatgg aacgaacatg 840 gatattgtag ggtcaggtgg atctggaggt agctcttcta aaaagatcac tgtaacaggg 900 accctgtgga acggcaacaa aattatcgac gagcgcctga tcaaccccga cggctccctg 960 ctgttccgag taaccatcaa cggagtgacc ggctggcggc tgtgcgaacg 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atggtcttca cactcgaaga tttcgttggg gactggcgac agacagccgg ctacaacctg 60 gaccaagtcc ttgaacaggg aggtgtgtcc agtttgtttc agaatctcgg ggtgtccgta 120 actccgatcc aaaggattgt cctgagcggt gaaaatgggc tgaagatcga catccatgtc 180 atcatcccgt atgaaggtct gagcggcgac caaatgggcc agatcgaaaa aatttttaag 240 gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgatcc tgcactatgg cacactggta 300 atcgacgggg ttacgccgaa catgatcgac tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc 360 gtgttcgacg gcaaaaagag cgctagcgga ggttcaggcg gttccggaat gtatgaaagc 420 tttattgagt cactgccatt ccttaaatct ttggagtttt ctgcacgcct gaaagtagta 480 gatgtgatag gcaccaaagt atacaacgat ggagaacaaa tcattgctca gggagattcg 540 gctgattctt ttttcattat tgaatctgga gaagtgaaaa ttactatgaa aagaaagggt 600 aaatcagaag tggaagagaa tggtgcagta gaaatcgctc gatgctcgcg gggacagtac 660 tttggagagc ttgccctggt aactaacaaa cctcgagcag cttctgccca cgccattggg 720 actgtcaaat gtttagcaat ggatgtgcaa gcatttgaaa ggcttctggg accttgcatg 780 gaaattatga aaaggaacat cgctacctat gaagaacagt tagttgccct gtatggaacg 840 aacatggata ttgtagggtc aggtggatct ggaggtagct cttctatcac tgtaacaggg 900 accctgtgga acggcaacaa aattatcgac gagcgcctga tcaaccccga cggctccctg 960 ctgttccgag taaccatcaa cggagtgacc ggctggcggc tgtgcgaacg cattctggct 1020 <210> 534 <211> 340 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 534 Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala 1 5 10 15 Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu 20 25 30 Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Leu 35 40 45 Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr 50 55 60 Glu Gly Leu Ser Gly Asp Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys 65 70 75 80 Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr 85 90 95 Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe 100 105 110 Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ser Ala 115 120 125 Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Met Tyr Glu Ser Phe Ile Glu Ser 130 135 140 Leu 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<220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 535 atggtcttca cactcgaaga tttcgttggg gactggcgac agacagccgg ctacaacctg 60 gaccaagtcc ttgaacaggg aggtgtgtcc agtttgtttc agaatctcgg ggtgtccgta 120 actccgatcc aaaggattgt cctgagcggt gaaaatgggc tgaagatcga catccatgtc 180 atcatcccgt atgaaggtct gagcggcgac caaatgggcc agatcgaaaa aatttttaag 240 gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgatcc tgcactatgg cacactggta 300 atcgacgggg ttacgccgaa catgatcgac tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc 360 gtgttcgacg gcaaaaagat cactgtaaca gggagcgcta gcggaggttc aggcggttcc 420 ggaatgtatg aaagctttat tgagtcactg ccattcctta aatctttgga gttttctgca 480 cgcctgaaag tagtagatgt gataggcacc aaagtataca acgatggaga acaaatcatt 540 gctcagggag attcggctga ttcttttttc attattgaat ctggagaagt gaaaattact 600 atgaaaagaa agggtaaatc agaagtggaa gagaatggtg cagtagaaat cgctcgatgc 660 tcgcggggac agtactttgg agagcttgcc ctggtaacta acaaacctcg agcagcttct 720 gcccacgcca ttgggactgt caaatgttta gcaatggatg tgcaagcatt tgaaaggctt 780 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ggtaactaac 720 aaacctcgag cagcttctgc ccacgccatt gggactgtca aatgtttagc aatggatgtg 780 caagcatttg aaaggcttct gggaccttgc atggaaatta tgaaaaggaa catcgctacc 840 tatgaagaac agttagttgc cctgtatgga acgaacatgg atattgtagg gtcaggtgga 900 tctggaggta gctcttctaa aattatcgac gagcgcctga tcaaccccga cggctccctg 960 ctgttccgag taaccatcaa cggagtgacc ggctggcggc tgtgcgaacg cattctggct 1020 <210> 538 <211> 340 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 538 Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala 1 5 10 15 Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu 20 25 30 Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Leu 35 40 45 Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr 50 55 60 Glu Gly Leu Ser Gly Asp Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys 65 70 75 80 Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr 85 90 95 Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp 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cacactggta 300 atcgacgggg ttacgccgaa catgatcgac tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc 360 gtgttcgacg gcaaaaagat cactgtaaca gggaccctgt ggaacggcaa caaaattatc 420 gacgagcgcc tgatcaaccc cgacggctcc ctgctgttcc gagtaaccat caacagcgct 480 agcggaggtt caggcggttc cggaatgtat gaaagcttta ttgagtcact gccattcctt 540 aaatctttgg agttttctgc acgcctgaaa gtagtagatg tgataggcac caaagtatac 600 aacgatggag aacaaatcat tgctcaggga gattcggctg attctttttt cattattgaa 660 tctggagaag tgaaaattac tatgaaaaga aagggtaaat cagaagtgga agagaatggt 720 gcagtagaaa tcgctcgatg ctcgcgggga cagtactttg gagagcttgc cctggtaact 780 aacaaacctc gagcagcttc tgcccacgcc attgggactg tcaaatgttt agcaatggat 840 gtgcaagcat ttgaaaggct tctgggacct tgcatggaaa ttatgaaaag gaacatcgct 900 acctatgaag aacagttagt tgccctgtat ggaacgaaca tggatattgt agggtcaggt 960 ggatctggag gtagctcttc tggagtgacc ggctggcggc tgtgcgaacg cattctggct 1020 <210> 550 <211> 340 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 550 Met Val 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gaaaatgggc tgaagatcga catccatgtc 180 atcatcccgt atgaaggtct gagcggcgac caaatgggcc agatcgaaaa aatttttaag 240 gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgatcc tgcactatgg cacactggta 300 atcgacgggg ttacgccgaa catgatcgac tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc 360 gtgttcgacg gcaaaaagat cactgtaaca gggaccctgt ggaacggcaa caaaattatc 420 gacgagcgcc tgatcaaccc cgacggctcc ctgctgttcc gagtaaccat caacggagtg 480 accggctggc ggctgtgcga aagcgctagc ggaggttcag gcggttccgg aatgtatgaa 540 agctttattg agtcactgcc attccttaaa tctttggagt tttctgcacg cctgaaagta 600 gtagatgtga taggcaccaa agtatacaac gatggagaac aaatcattgc tcagggagat 660 tcggctgatt cttttttcat tattgaatct ggagaagtga aaattactat gaaaagaaag 720 ggtaaatcag aagtggaaga gaatggtgca gtagaaatcg ctcgatgctc gcggggacag 780 tactttggag agcttgccct ggtaactaac aaacctcgag cagcttctgc ccacgccatt 840 gggactgtca aatgtttagc aatggatgtg caagcatttg aaaggcttct gggaccttgc 900 atggaaatta tgaaaaggaa catcgctacc tatgaagaac agttagttgc cctgtatgga 960 acgaacatgg atattgtagg gtcaggtgga tctggaggta 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gactggcgac agacagccgg ctacaacctg 780 gaccaagtcc ttgaacaggg aggtgtgtcc agtttgtttc agaatctcgg ggtgtccgta 840 actccgatcc aaaggattgt cctgagcggt gaaaatgggc tgaagatcga catccatgtc 900 atcatcccgt atgaaggtct gagcggcgac caaatgggcc agatcgaaaa aatttttaag 960 gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgatcc tgcactatgg cacactggta 1020 atcgac 1026 <210> 560 <211> 342 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 560 Met Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr 1 5 10 15 Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr 20 25 30 Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Asn Pro Asp 35 40 45 Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val Thr Gly Trp Arg 50 55 60 Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala Ser Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser 65 70 75 80 Gly Met Tyr Glu Ser Phe Ile Glu Ser Leu Pro Phe Leu Lys Ser Leu 85 90 95 Glu Phe Ser Ala Arg Leu Lys Val Val Asp Val Ile Gly Thr Lys Val 100 105 110 Tyr Asn Asp Gly 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ctgtatggaa cgaacatgga tattgtaggg tcaggtggat ctggaggtag ctcttctatg 720 gtcttcacac tcgaagattt cgttggggac tggcgacaga cagccggcta caacctggac 780 caagtccttg aacagggagg tgtgtccagt ttgtttcaga atctcggggt gtccgtaact 840 ccgatccaaa ggattgtcct gagcggtgaa aatgggctga agatcgacat ccatgtcatc 900 atcccgtatg aaggtctgag cggcgaccaa atgggccaga tcgaaaaaat ttttaaggtg 960 gtgtaccctg tggatgatca tcactttaag gtgatcctgc actatggcac actggtaatc 1020 gacggg 1026 <210> 562 <211> 342 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 562 Met Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu 1 5 10 15 Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu 20 25 30 Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Asn Pro Asp Gly 35 40 45 Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val Thr Gly Trp Arg Leu 50 55 60 Cys Glu Arg Ile Leu Ala Ser Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly 65 70 75 80 Met Tyr Glu Ser Phe Ile Glu Ser Leu Pro Phe Leu Lys Ser Leu 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gatgtgcaag catttgaaag gcttctggga 600 ccttgcatgg aaattatgaa aaggaacatc gctacctatg aagaacagtt agttgccctg 660 tatggaacga acatggatat tgtagggtca ggtggatctg gaggtagctc ttctatggtc 720 ttcacactcg aagatttcgt tggggactgg cgacagacag ccggctacaa cctggaccaa 780 gtccttgaac agggaggtgt gtccagtttg tttcagaatc tcggggtgtc cgtaactccg 840 atccaaagga ttgtcctgag cggtgaaaat gggctgaaga tcgacatcca tgtcatcatc 900 ccgtatgaag gtctgagcgg cgaccaaatg ggccagatcg aaaaaatttt taaggtggtg 960 taccctgtgg atgatcatca ctttaaggtg atcctgcact atggcacact ggtaatcgac 1020 ggggtt 1026 <210> 564 <211> 342 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 564 Met Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly 1 5 10 15 Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp 20 25 30 Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Asn Pro Asp Gly Ser 35 40 45 Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys 50 55 60 Glu Arg Ile Leu Ala Ser Ser Ser 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tgcatggaaa ttatgaaaag gaacatcgct acctatgaag aacagttagt tgccctgtat 540 ggaacgaaca tggatattgt agggtcaggt ggatctggag gtagctcttc tatggtcttc 600 acactcgaag atttcgttgg ggactggcga cagacagccg gctacaacct ggaccaagtc 660 cttgaacagg gaggtgtgtc cagtttgttt cagaatctcg gggtgtccgt aactccgatc 720 caaaggattg tcctgagcgg tgaaaatggg ctgaagatcg acatccatgt catcatcccg 780 tatgaaggtc tgagcggcga ccaaatgggc cagatcgaaa aaatttttaa ggtggtgtac 840 cctgtggatg atcatcactt taaggtgatc ctgcactatg gcacactggt aatcgacggg 900 gttacgccga acatgatcga ctatttcgga cggccgtatg aaggcatcgc cgtgttcgac 960 ggcaaaaaga tcactgtaac agggaccctg tggaacggca acaaaattat cgacgagcgc 1020 ctgatc 1026 <210> 566 <211> 342 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 566 Met Ile Asn Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly 1 5 10 15 Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala Ser Ser Ser Gly 20 25 30 Gly Ser Gly Gly Ser Gly Met Tyr Glu Ser Phe Ile Glu Ser Leu Pro 35 40 45 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atcgctcgat gctcgcgggg acagtacttt ggagagcttg ccctggtaac taacaaacct 360 cgagcagctt ctgcccacgc cattgggact gtcaaatgtt tagcaatgga tgtgcaagca 420 tttgaaaggc ttctgggacc ttgcatggaa attatgaaaa ggaacatcgc tacctatgaa 480 gaacagttag ttgccctgta tggaacgaac atggatattg tagggtcagg tggatctgga 540 ggtagctctt ctatggtctt cacactcgaa gatttcgttg gggactggcg acagacagcc 600 ggctacaacc tggaccaagt ccttgaacag ggaggtgtgt ccagtttgtt tcagaatctc 660 ggggtgtccg taactccgat ccaaaggatt gtcctgagcg gtgaaaatgg gctgaagatc 720 gacatccatg tcatcatccc gtatgaaggt ctgagcggcg accaaatggg ccagatcgaa 780 aaaattttta aggtggtgta ccctgtggat gatcatcact ttaaggtgat cctgcactat 840 ggcacactgg taatcgacgg ggttacgccg aacatgatcg actatttcgg acggccgtat 900 gaaggcatcg ccgtgttcga cggcaaaaag atcactgtaa cagggaccct gtggaacggc 960 aacaaaatta tcgacgagcg cctgatcaac cccgacggct ccctgctgtt ccgagtaacc 1020 atcaac 1026 <210> 570 <211> 342 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 570 Met Asn Gly 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tttttcatta ttgaatctgg agaagtgaaa 240 attactatga aaagaaaggg taaatcagaa gtggaagaga atggtgcagt agaaatcgct 300 cgatgctcgc ggggacagta ctttggagag cttgccctgg taactaacaa acctcgagca 360 gcttctgccc acgccattgg gactgtcaaa tgtttagcaa tggatgtgca agcatttgaa 420 aggcttctgg gaccttgcat ggaaattatg aaaaggaaca tcgctaccta tgaagaacag 480 ttagttgccc tgtatggaac gaacatggat attgtagggt caggtggatc tggaggtagc 540 tcttctatgg tcttcacact cgaagatttc gttggggact ggcgacagac agccggctac 600 aacctggacc aagtccttga acagggaggt gtgtccagtt tgtttcagaa tctcggggtg 660 tccgtaactc cgatccaaag gattgtcctg agcggtgaaa atgggctgaa gatcgacatc 720 catgtcatca tcccgtatga aggtctgagc ggcgaccaaa tgggccagat cgaaaaaatt 780 tttaaggtgg tgtaccctgt ggatgatcat cactttaagg tgatcctgca ctatggcaca 840 ctggtaatcg acggggttac gccgaacatg atcgactatt tcggacggcc gtatgaaggc 900 atcgccgtgt tcgacggcaa aaagatcact gtaacaggga ccctgtggaa cggcaacaaa 960 attatcgacg agcgcctgat caaccccgac ggctccctgc tgttccgagt aaccatcaac 1020 ggagtg 1026 <210> 572 <211> 342 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 572 Met Val Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala Ser Ser Ser 1 5 10 15 Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Met Tyr Glu Ser Phe Ile Glu Ser Leu 20 25 30 Pro Phe Leu Lys Ser Leu Glu Phe Ser Ala Arg Leu Lys Val Val Asp 35 40 45 Val Ile Gly Thr Lys Val Tyr Asn Asp Gly Glu Gln Ile Ile Ala Gln 50 55 60 Gly Asp Ser Ala Asp Ser Phe Phe Ile Ile Glu Ser Gly Glu Val Lys 65 70 75 80 Ile Thr Met Lys Arg Lys Gly Lys Ser Glu Val Glu Glu Asn Gly Ala 85 90 95 Val Glu Ile Ala Arg Cys Ser Arg Gly Gln Tyr Phe Gly Glu Leu Ala 100 105 110 Leu Val Thr Asn Lys Pro Arg Ala Ala Ser Ala His Ala Ile Gly Thr 115 120 125 Val Lys Cys Leu Ala Met Asp Val Gln Ala Phe Glu Arg Leu Leu Gly 130 135 140 Pro Cys Met Glu Ile Met Lys Arg Asn Ile Ala Thr Tyr Glu Glu Gln 145 150 155 160 Leu Val Ala Leu Tyr Gly Thr Asn Met Asp Ile Val Gly Ser Gly Gly 165 170 175 Ser Gly Gly Ser Ser Ser Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly 180 185 190 Asp Trp Arg Gln Thr Ala Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln 195 200 205 Gly Gly Val Ser Ser Leu Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro 210 215 220 Ile Gln Arg Ile Val Leu Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile 225 230 235 240 His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly Leu Ser Gly Asp Gln Met Gly Gln 245 250 255 Ile Glu Lys Ile Phe Lys Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe 260 265 270 Lys Val Ile Leu His Tyr Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro 275 280 285 Asn Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe 290 295 300 Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys 305 310 315 320 Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Asn Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg 325 330 335 Val Thr Ile Asn Gly Val 340 <210> 573 <211> 1026 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 573 atgcgcattc tggctagctc aagcggaggt tcaggcggtt ccggaatgta tgaaagcttt 60 attgagtcac tgccattcct taaatctttg gagttttctg cacgcctgaa agtagtagat 120 gtgataggca ccaaagtata caacgatgga gaacaaatca ttgctcaggg agattcggct 180 gattcttttt tcattattga atctggagaa gtgaaaatta ctatgaaaag aaagggtaaa 240 tcagaagtgg aagagaatgg tgcagtagaa atcgctcgat gctcgcgggg acagtacttt 300 ggagagcttg ccctggtaac taacaaacct cgagcagctt ctgcccacgc cattgggact 360 gtcaaatgtt tagcaatgga tgtgcaagca tttgaaaggc ttctgggacc ttgcatggaa 420 attatgaaaa ggaacatcgc tacctatgaa gaacagttag ttgccctgta tggaacgaac 480 atggatattg tagggtcagg tggatctgga ggtagctctt ctatggtctt cacactcgaa 540 gatttcgttg gggactggcg acagacagcc ggctacaacc tggaccaagt ccttgaacag 600 ggaggtgtgt ccagtttgtt tcagaatctc ggggtgtccg taactccgat ccaaaggatt 660 gtcctgagcg gtgaaaatgg gctgaagatc gacatccatg tcatcatccc gtatgaaggt 720 ctgagcggcg accaaatggg ccagatcgaa aaaattttta aggtggtgta ccctgtggat 780 gatcatcact ttaaggtgat cctgcactat ggcacactgg taatcgacgg ggttacgccg 840 aacatgatcg actatttcgg acggccgtat gaaggcatcg ccgtgttcga cggcaaaaag 900 atcactgtaa cagggaccct gtggaacggc aacaaaatta tcgacgagcg cctgatcaac 960 cccgacggct ccctgctgtt ccgagtaacc atcaacggag tgaccggctg gcggctgtgc 1020 gaacgc 1026 <210> 574 <211> 342 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 574 Met Arg Ile Leu Ala Ser Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Met 1 5 10 15 Tyr Glu Ser Phe Ile Glu Ser Leu Pro Phe Leu Lys Ser Leu Glu Phe 20 25 30 Ser Ala Arg Leu Lys Val Val Asp Val Ile Gly Thr Lys Val Tyr Asn 35 40 45 Asp Gly Glu Gln Ile Ile Ala Gln Gly Asp Ser Ala Asp Ser Phe Phe 50 55 60 Ile Ile Glu Ser Gly Glu Val Lys Ile Thr Met Lys Arg Lys Gly Lys 65 70 75 80 Ser Glu Val Glu Glu Asn Gly Ala Val Glu Ile Ala Arg Cys Ser Arg 85 90 95 Gly Gln Tyr Phe Gly Glu Leu Ala Leu Val Thr Asn Lys Pro Arg Ala 100 105 110 Ala Ser Ala His Ala Ile Gly Thr Val Lys Cys Leu Ala Met Asp Val 115 120 125 Gln Ala Phe Glu Arg Leu Leu Gly Pro Cys Met Glu Ile Met Lys Arg 130 135 140 Asn Ile Ala Thr Tyr Glu Glu Gln Leu Val Ala Leu Tyr Gly Thr Asn 145 150 155 160 Met Asp Ile Val Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Ser Ser Met Val 165 170 175 Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala Gly Tyr 180 185 190 Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Phe Gln 195 200 205 Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Leu Ser Gly 210 215 220 Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly 225 230 235 240 Leu Ser Gly Asp Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys Val Val 245 250 255 Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr Gly Thr 260 265 270 Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg 275 280 285 Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr 290 295 300 Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Asn 305 310 315 320 Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val Thr Gly 325 330 335 Trp Arg Leu Cys Glu Arg 340 <210> 575 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 575 gggtcaggtg gatctggagg tagctcttct 30 <210> 576 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 576 agctcaagcg gaggttcagg cggttccgga 30 <210> 577 <211> 377 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 577 atgccgtccg agaagacctt caaacagcgc cggagcttcg aacaaagagt ggaagatgtc 60 cggctcatcc gggagcagca ccccaccaag atcccagtga ttatagagcg atacaagggt 120 gagaagcagc tgcccgtcct ggacaagacc agttccttgt acctgatcac gtgaatatga 180 gcgaactcat caagataatt agaaggcgcc tgcagctcaa tgctaaccaa gccttcttcc 240 tcctggtgaa tgggcacagc atggtgagtg tgtccacacc catctctgaa gtgtacgaga 300 gcgagagaga tgaagacggc ttcctgtaca tggtctatgc ctcccaggag acgttcggga 360 cagcactggc tgtgtaa 377 <210> 578 <211> 125 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 578 Met Pro Ser Glu Lys Thr Phe Lys Gln Arg Arg Ser Phe Glu Gln Arg 1 5 10 15 Val Glu Asp Val Arg Leu Ile Arg Glu Gln His Pro Thr Lys Ile Pro 20 25 30 Val Ile Ile Glu Arg Tyr Lys Gly Glu Lys Gln Leu Pro Val Leu Asp 35 40 45 Lys Thr Lys Phe Leu Val Pro Asp His Val Asn Met Ser Glu Leu Ile 50 55 60 Lys Ile Ile Arg Arg Arg Leu Gln Leu Asn Ala Asn Gln Ala Phe Phe 65 70 75 80 Leu Leu Val Asn Gly His Ser Met Val Ser Val Ser Thr Pro Ile Ser 85 90 95 Glu Val Tyr Glu Ser Glu Arg Asp Glu Asp Gly Phe Leu Tyr Met Val 100 105 110 Tyr Ala Ser Gln Glu Thr Phe Gly Thr Ala Leu Ala Val 115 120 125 <210> 579 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 579 Met Lys Ala Leu 1 <210> 580 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 580 His Gln His Gln His Gln 1 5 <210> 581 <211> 4 <212> PRT <213> Unknown <220> <223> Description of Unknown: Caspase-3 cleavage sequence <400> 581 Asp Glu Val Asp 1 <210> 582 <400> 582 000 <210> 583 <400> 583 000 <210> 584 <400> 584 000 <210> 585 <400> 585 000 <210> 586 <400> 586 000 <210> 587 <400> 587 000 <210> 588 <400> 588 000 <210> 589 <400> 589 000 <210> 590 <400> 590 000 <210> 591 <400> 591 000 <210> 592 <211> 936 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 592 atggtgttta cactcgaaga tttcgtaggg gactggcggc agacagccgg ctacaacctg 60 gaccaagtcc ttgagcaggg cggtgtgtcc agtttgtttc agaatctcgg ggtgtccgta 120 actccgatcc aaaggattgt cctgagcggt gaaaacggcc tgaagatcga catccatgtc 180 atcatcccgt atgaaggtct gagcggcgat cagatgggcc agatcgaaaa aatttttaag 240 gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgattc tgcactatgg cacactggta 300 atcgacgggg ttacgccgaa catgatcgac tatttcggac ggccgtatga aggcatcgcc 360 gtgttcgacg gcaaaaagat cactgtaacc gggaccctgt ggaacggcaa caaaattatc 420 gacgagcgcc tgatcaaccc cgacggctcc ctgctgttcc gcgtaaccat caacggagtg 480 accggctggc ggctgtgcga gagaattttg gcgggctcga gcggaggtgg aggttcaggt 540 ggtggcggga gcggtggaat gccgtccgag aagaccttca aacagcgccg gagcttcgaa 600 caaagagtgg aagatgtccg gctcatccgg gagcagcacc ccaccaagat cccagtgatt 660 atagagcgat acaagggtga gaagcagctg cccgtcctgg acaagaccaa gttccttgta 720 cctgatcacg tgaatatgag cgaactcatc aagataatta gaaggcgcct gcagctcaat 780 gctaaccaag ccttcttcct cctggtgaat gggcacagca tggtgagtgt gtccacaccc 840 atctctgaag tgtacgagag cgagagagat gaagacggct tcctgtacat ggtctatgcc 900 tcccaggaga cgttcgggac agcactggct gtgtaa 936 <210> 593 <211> 311 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 593 Met Val Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala 1 5 10 15 Gly Tyr Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu 20 25 30 Phe Gln Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Leu 35 40 45 Ser Gly Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr 50 55 60 Glu Gly Leu Ser Gly Asp Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys 65 70 75 80 Val Val Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr 85 90 95 Gly Thr Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe 100 105 110 Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr 115 120 125 Val Thr Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu 130 135 140 Ile Asn Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val 145 150 155 160 Thr Gly Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala Gly Ser Ser Gly Gly 165 170 175 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Met Pro Ser Glu Lys Thr 180 185 190 Phe Lys Gln Arg Arg Ser Phe Glu Gln Arg Val Glu Asp Val Arg Leu 195 200 205 Ile Arg Glu Gln His Pro Thr Lys Ile Pro Val Ile Ile Glu Arg Tyr 210 215 220 Lys Gly Glu Lys Gln Leu Pro Val Leu Asp Lys Thr Lys Phe Leu Val 225 230 235 240 Pro Asp His Val Asn Met Ser Glu Leu Ile Lys Ile Ile Arg Arg Arg 245 250 255 Leu Gln Leu Asn Ala Asn Gln Ala Phe Phe Leu Leu Val Asn Gly His 260 265 270 Ser Met Val Ser Val Ser Thr Pro Ile Ser Glu Val Tyr Glu Ser Glu 275 280 285 Arg Asp Glu Asp Gly Phe Leu Tyr Met Val Tyr Ala Ser Gln Glu Thr 290 295 300 Phe Gly Thr Ala Leu Ala Val 305 310

Claims (131)

  1. 서열번호: 1에서의 아미노산에 상응하는 위치에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는 서열번호: 1에 대해 적어도 60% 아미노산 서열 동일성을 갖는 OgLuc 변이체 폴리펩타이드를 인코딩하는 단리된 폴리뉴클레오타이드로서, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 비-오플로포러스 루시퍼라아제에 관해 증대된 발광을 갖는 단리된 폴리뉴클레오타이드.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 비-오플로포러스 루시퍼라아제는 레닐라 루시퍼라아제인 폴리뉴클레오타이드.
  3. 청구항 1에 있어서, 상기 비-오플로포러스 루시퍼라아제는 개똥벌레 루시퍼라아제인 폴리뉴클레오타이드.
  4. 서열번호: 1에서의 아미노산에 상응하는 위치에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는 서열번호: 1에 대해 적어도 60% 아미노산 서열 동일성을 갖는 OgLuc 변이체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드로서, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 서열번호: 3의 OgLuc 폴리펩타이드에 관해서 항샹된 발광을 가지며, 단, 상기 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩되는 폴리펩타이드는 표 47에서 열거된 것들 중의 하나가 아닌 폴리뉴클레오타이드.
  5. 서열번호: 1에서의 아미노산에 상응하는 위치에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는 서열번호: 1에 대해 적어도 60% 아미노산 서열 동일성을 갖는 OgLuc 변이체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드로서, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 서열번호: 31의 폴리펩타이드에 관해 증대된 발광을 가지며, 단, 상기 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩되는 폴리펩타이드는 서열번호: 3 또는 15가 아닌 폴리뉴클레오타이드.
  6. 서열번호: 1에서의 아미노산에 상응하는 위치에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는 서열번호: 1에 대해 적어도 60% 아미노산 서열 동일성을 갖는 OgLuc 변이체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드로서, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 서열번호: 29의 폴리펩타이드에 관해 증대된 발광을 가지며, 단, 상기 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩되는 폴리펩타이드는 서열번호: 3 또는 15가 아닌 폴리뉴클레오타이드.
  7. 청구항 1 내지 6 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 서열번호: 1에 대해 적어도 80% 아미노산 서열 동일성을 갖는 폴리뉴클레오타이드.
  8. 청구항 1 내지 7 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 서열번호: 1에 대해 적어도 90% 아미노산 서열 동일성을 갖는 폴리뉴클레오타이드.
  9. 청구항 1 내지 8 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 서열번호: 3의 폴리펩타이드에 관해 증대된 단백질 안정성 또는 증대된 생체적합성 중 적어도 하나를 갖는 폴리뉴클레오타이드.
  10. 청구항 1 내지 9 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 레닐라 루시퍼라아제에 관해 증대된 효소 안정성 또는 증대된 생체적합성을 갖는 폴리뉴클레오타이드.
  11. 청구항 1 내지 10 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 개똥벌레 루시퍼라아제에 관해 증대된 효소 안정성 또는 증대된 생체적합성을 갖는 폴리뉴클레오타이드.
  12. 청구항 1 내지 11 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 코엘렌테라진의 존재에서 서열번호: 3의 폴리펩타이드에 관해 증대된 발광을 갖는 폴리뉴클레오타이드.
  13. 청구항 1 내지 12 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 하기 식 (Ia) 또는 (Ib)의 화합물의 존재에서 서열번호: 3의 폴리펩타이드에 관해 증대된 발광을 갖는 폴리뉴클레오타이드:
    Figure pct00239
    또는
    Figure pct00240

    여기서 R2는
    Figure pct00241
    또는 C2-5 직쇄 알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    R6는 -H, -OH, -NH2 , -OC(O)R 또는 -OCH2OC(O)R로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    R8는
    Figure pct00242
    , H 또는 저급 사이클로알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    여기서 R3 및 R4 모두는 H이거나 둘 모두는 C1 -2 알킬이고;
    W는 -NH2, 할로, -OH, -NHC(O)R, -CO2R이고;
    X는 -S-, -O- 또는 -NR22-이고;
    Y는 -H, -OH, 또는 -OR11이고;
    Z는 -CH- 또는 -N-이고;
    각각의 R11은 독립적으로 -C(O)R" 또는 -CH2OC(O)R"이고;
    R22는 H, CH3 또는 CH2CH3이고;
    각각의 R은 독립적으로 C1 -7 직쇄 알킬 또는 C1 -7 분지형 알킬이고;
    R"는 C1 -7 직쇄 알킬 또는 C1 -7 분지형 알킬이고;
    상기 파선 결합은 포화 또는 불포화일 수 있는 임의의 고리의 존재를 나타내고;
    단, R2 가
    Figure pct00243
    또는
    Figure pct00244
    일 때, R8은
    Figure pct00245
    이 아니고;
    단, R2가
    Figure pct00246
    일 때, R8은
    Figure pct00247
    또는 저급 사이클로알킬이고;
    단, R6이 NH2일 때, R2는
    Figure pct00248
    , 또는 C2-5 알킬이고;
    또는 R8은
    Figure pct00249
    이 아니다.
  14. 청구항 1 내지 13 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 상이한 코엘렌테라진과 비교하여 코엘렌테라진의 존재에서 서열번호: 3의 폴리펩타이드에 관해서 상대 기질 특이성의 변화를 갖는 폴리뉴클레오타이드.
  15. 청구항 1 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 천연 또는 공지된 코엘렌테라진과 비교하여 하기 식 (Ia) 또는 (Ib)의 화합물의 존재에서 서열번호: 3의 폴리펩타이드에 관해서 상대 기질 특이성의 변화를 갖는 폴리뉴클레오타이드:
    Figure pct00250
    또는
    Figure pct00251

    여기서 R2는
    Figure pct00252
    , 또는 C2-5 직쇄 알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    R6는 -H, -OH, -NH2 , -OC(O)R 또는 -OCH2OC(O)R로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    R8는
    Figure pct00253
    H 또는 저급 사이클로알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    여기서 R3 및 R4 모두는 H이거나 둘 모두는 C1 -2 알킬이고;
    W는 -NH2, 할로, -OH, -NHC(O)R, -CO2R이고;
    X는 -S-, -O- 또는 -NR22-이고;
    Y는 -H, -OH, 또는 -OR11이고;
    Z는 -CH- 또는 -N-이고;
    각각의 R11은 독립적으로 -C(O)R" 또는 -CH2OC(O)R"이고;
    R22는 H, CH3 또는 CH2CH3이고;
    각각의 R은 독립적으로 C1 -7 직쇄 알킬 또는 C1 -7 분지형 알킬이고;
    R"는 C1 -7 직쇄 알킬 또는 C1 -7 분지형 알킬이고;
    상기 파선 결합은 포화 또는 불포화일 수 있는 임의의 고리의 존재를 나타내고;
    단, R2가
    Figure pct00254
    또는
    Figure pct00255
    일 때, R8은
    Figure pct00256
    이 아니고;
    단, R2가
    Figure pct00257
    일 때, R8은
    Figure pct00258
    또는 저급 사이클로알킬이고;
    단, R6이 NH2일 때, R2는
    Figure pct00259
    , 또는 C2-5 알킬이고;
    또는 R8은
    Figure pct00260
    이 아니다.
  16. 청구항 1 내지 15 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 서열번호: 3의 폴리펩타이드에 관해서 증대된 생체적합성을 갖는 폴리뉴클레오타이드.
  17. 청구항 1 내지 16 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 코엘렌테라진의 존재에서 레닐라 루시퍼라아제에 관해 증대된 발광을 갖는 폴리뉴클레오타이드.
  18. 청구항 1 내지 17 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 하기 식 (Ia) 또는 (Ib)의 화합물의 존재에서 레닐라 루시퍼라아제에 관해 증대된 발광을 갖는 폴리뉴클레오타이드:
    Figure pct00261
    또는
    Figure pct00262

    여기서 R2는
    Figure pct00263
    , 또는 C2-5 직쇄 알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    R6는 -H, -OH, -NH2 , -OC(O)R 또는 -OCH2OC(O)R로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    R8는
    Figure pct00264
    H 또는 저급 사이클로알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    여기서 R3 및 R4 모두는 H이거나 둘 모두는 C1 -2 알킬이고;
    W는 -NH2, 할로, -OH, -NHC(O)R, -CO2R이고;
    X는 -S-, -O- 또는 -NR22-이고;
    Y는 -H, -OH, 또는 -OR11이고;
    Z는 -CH- 또는 -N-이고;
    각각의 R11은 독립적으로 -C(O)R" 또는 -CH2OC(O)R"이고;
    R22는 H, CH3 또는 CH2CH3이고;
    각각의 R은 독립적으로 C1 -7 직쇄 알킬 또는 C1 -7 분지형 알킬이고;
    R"는 C1 -7 직쇄 알킬 또는 C1 -7 분지형 알킬이고;
    상기 파선 결합은 포화 또는 불포화일 수 있는 임의의 고리의 존재를 나타내고;
    단, R2가
    Figure pct00265
    또는
    Figure pct00266
    일 때, R8은
    Figure pct00267
    이 아니고;
    단, R2가
    Figure pct00268
    일 때, R8은
    Figure pct00269
    또는 저급 사이클로알킬이고;
    단, R6이 NH2일 때, R2는
    Figure pct00270
    , 또는 C2-5 알킬이고;
    또는 R8은
    Figure pct00271
    이 아니다.
  19. 청구항 1 내지 18 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 상이한 코엘렌테라진과 비교하여 코엘렌테라진의 존재에서 레닐라 루시퍼라아제에 관해 상대 기질 특이성의 변화를 갖는 폴리뉴클레오타이드.
  20. 청구항 1 내지 19 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 천연 또는 공지된 코엘렌테라진과 비교하여 하기 식 (Ia) 또는 (Ib)의 화합물의 존재에서 레닐라 루시퍼라아제에 관해 상대 기질 특이성의 변화를 갖는 폴리뉴클레오타이드:
    Figure pct00272
    또는
    Figure pct00273

    여기서 R2는
    Figure pct00274
    , 또는 C2-5 직쇄 알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    R6는 -H, -OH, -NH2 , -OC(O)R 또는 -OCH2OC(O)R로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    R8는
    Figure pct00275
    , H 또는 저급 사이클로알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    여기서 R3 및 R4 모두는 H이거나 둘 모두는 C1 -2 알킬이고;
    W는 -NH2, 할로, -OH, -NHC(O)R, -CO2R이고;
    X는 -S-, -O- 또는 -NR22-이고;
    Y는 -H, -OH, 또는 -OR11이고;
    Z는 -CH- 또는 -N-이고;
    각각의 R11은 독립적으로 -C(O)R" 또는 -CH2OC(O)R"이고;
    R22는 H, CH3 또는 CH2CH3이고;
    각각의 R은 독립적으로 C1 -7 직쇄 알킬 또는 C1 -7 분지형 알킬이고;
    R"는 C1 -7 직쇄 알킬 또는 C1 -7 분지형 알킬이고;
    상기 파선 결합은 포화 또는 불포화일 수 있는 임의의 고리의 존재를 나타내고;
    단, R2가
    Figure pct00276
    또는
    Figure pct00277
    일 때, R8은
    Figure pct00278
    이 아니고;
    단, R2가
    Figure pct00279
    일 때, R8은
    Figure pct00280
    또는 저급 사이클로알킬이고;
    단, R6이 NH2일 때, R2는
    Figure pct00281
    , 또는 C2-5 알킬이고;
    또는 R8은
    Figure pct00282
    이 아니다.
  21. 청구항 1 내지 20 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 레닐라 루시퍼라아제에 관해 증대된 생체적합성을 갖는 폴리뉴클레오타이드.
  22. 청구항 1 내지 21 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 루시페린의 존재에서 개똥벌레 루시퍼라아제에 관해 코엘렌테라진의 존재에서 증대된 발광을 갖는 폴리뉴클레오타이드.
  23. 청구항 1 내지 22 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 루시페린의 존재에서 개똥벌레 루시퍼라아제에 관해 하기 식 (Ia) 또는 (Ib)의 화합물의 존재에서 증대된 발광을 갖는 폴리뉴클레오타이드:
    Figure pct00283

    또는
    Figure pct00284

    여기서 R2는
    Figure pct00285
    , 또는 C2-5 직쇄 알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    R6는 -H, -OH, -NH2 , -OC(O)R 또는 -OCH2OC(O)R로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    R8는
    Figure pct00286
    , H 또는 저급 사이클로알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    여기서 R3 및 R4 모두는 H이거나 둘 모두는 C1 -2 알킬이고;
    W는 -NH2, 할로, -OH, -NHC(O)R, -CO2R이고;
    X는 -S-, -O- 또는 -NR22-이고;
    Y는 -H, -OH, 또는 -OR11이고;
    Z는 -CH- 또는 -N-이고;
    각각의 R11은 독립적으로 -C(O)R" 또는 -CH2OC(O)R"이고;
    R22는 H, CH3 또는 CH2CH3이고;
    각각의 R은 독립적으로 C1 -7 직쇄 알킬 또는 C1 -7 분지형 알킬이고;
    R"는 C1 -7 직쇄 알킬 또는 C1 -7 분지형 알킬이고;
    상기 파선 결합은 포화 또는 불포화일 수 있는 임의의 고리의 존재를 나타내고;
    단, R2가
    Figure pct00287
    또는
    Figure pct00288
    일 때, R8은
    Figure pct00289
    이 아니고;
    단, R2가
    Figure pct00290
    일 때, R8은
    Figure pct00291
    또는 저급 사이클로알킬이고;
    단, R6이 NH2일 때, R2는
    Figure pct00292
    , 또는 C2-5 알킬이고;
    또는 R8은
    Figure pct00293
    이 아니다.
  24. 청구항 1 내지 23 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 개똥벌레 루시퍼라아제에 관해 증대된 생체적합성을 갖는 폴리뉴클레오타이드.
  25. 청구항 1 내지 24 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 오플로포러스 그라실리로스트리스, 오플로포러스 그리말디이, 오플로포러스 스 피니카우다, 오플로포러스 폴리아세우스, 오플로포러스 노바에질란디아에, 오플로 포러스 타이푸스, 또는 오플로포러스 스피노서스로부터 유래하는 폴리뉴클레오타이드.
  26. 청구항 1 내지 25 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 아미노산 치환은 서열번호: 1의 위치 1, 4, 6, 10, 11, 14, 15, 16, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 27, 28, 31, 32, 33, 34, 36, 38, 39, 40, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 54, 55, 56, 58, 59, 60, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 74, 75, 76, 77, 86, 87, 89, 90, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 102, 106, 109, 110, 111, 112, 113, 117, 119, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 135, 136, 138, 139, 142, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 152, 154, 155, 158, 159, 163, 164, 166, 168, 또는 169, 또는 이들의 조합에 상응하는 위치에 있는 폴리뉴클레오타이드.
  27. 청구항 1 내지 26 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인코딩된 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 서열번호: 1에 상응하는 F1I, E4K, F6Y, W10Y, R11Q, A14V/S, G15R, Y16E, Q18D/F/G/H/I/K/L/M/N/P/R/S/V/W/Y, D19N, Q20P/R, V21L/M, L22I/F, E23K, Q24A, G25L, L27M/V/A/D/G/I, S28Y, F31I, Q32H/L/P, A33N/M, L34M, V36E/M, V38F/I, T39I, P40T/I/L/Q, Q42H, K43N/R, I44F, V45E, L46Q, S47P, G48R, E49D/G/K, N50K/S, G51E/R/V, A54I/S, D55E/G, I56V, V58I/L, I59T, I60V, S66T/N, G67D/S, F68L/S/W/Y/D, Q69H, M70V, G71D, L72A/C/F/G/H/I/M/N/P/Q/R/S/T/V/W/Y, E74I/K, M75F/K, I76F/N/V, F77A/C/D/G/M/N/S/T/V/W/Y, H86L/R, H87N/T, K89E, I90D/K/P/Q/R/T/V/Y, L92A/G/H/M/Q/R/S/Y, H93R, Y94F, G95D/S, T96A, L97E, V98F, I99T/V, D100I, V102E/M/T, M106I/K, Y109F, F110I, G111N, R112C, P113H/T/K, I117F, V119M, K124M, I125L, T126R, V127A, T128A/S, G129Q, T130K, N135D/Y, L136M, I138S, D139G, L142V/E/K/W, P145L/Q, D146G, G147N, S148T, L149I/M, L150V, R152H/S/E/T, T154S, I155T, V158I, T159I/S, L163I, C164S, N166I/F/E, L168F, 또는 A169V, 또는 이들의 조합의 적어도 하나에 상응하는 치환을 추가로 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
  28. 청구항 1 내지 27 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩되는 폴리펩타이드는 하기 아미노산: 위치 1에 있는 이소류신, 위치 4에 있는 라이신, 위치 6에 있는 티로신, 위치 10에 있는 티로신, 위치 11에 있는 글루타민, 위치 14에 있는 발린 또는 세린, 위치 15에 있는 아르기닌, 위치 16에 있는 글루타메이트, 위치 18에 있는 아스파르테이트, 페닐알라닌, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 라이신, 류신, 메티오닌, 아스파라긴, 프롤린, 아르기닌, 세린, 발린, 트립토판, 또는 티로신, 위치 19에 있는 아스파라긴, 위치 20에 있는 아르기닌 또는 프롤린, 위치 21에 있는 류신 또는 메티오닌, 위치 22에 있는 이소류신 또는 페닐알라닌, 위치 23에 있는 라이신, 위치 24에 있는 알라닌, 위치 25에 있는 류신, 위치 27에 있는 발린, 메티오닌, 알라닌, 아스파르테이트, 글리신 또는 이소류신, 위치 28에 있는 티로신, 위치 31에 있는 이소류신, 위치 32에 있는 프롤린, 히스티딘, 또는 류신, 위치 33에 있는 아스파라긴 또는 메티오닌, 위치 34에 있는 메티오닌, 위치 36에 있는 메티오닌 또는 글루타메이트, 위치 38에 있는 이소류신 또는 페닐알라닌, 위치 39에 있는 이소류신, 위치 40에 있는 트레오닌, 이소류신, 류신 또는 글루타민, 위치 42에 있는 히스티딘, 위치 43에 있는 아스파라긴 또는 아르기닌, 위치 44에 있는 페닐알라닌, 위치 45에 있는 글루타메이트, 위치 46에 있는 글루타민, 위치 47에 있는 프롤린, 위치 48에 있는 아르기닌, 위치 49에 있는 아스파르테이트, 글리신, 또는 라이신, 위치 50에 있는 라이신 또는 세린, 위치 51에 있는 글루타메이트, 아르기닌, 또는 발린, 위치 54에 있는 세린 또는 이소류신, 위치 55에 있는 글리신 또는 글루타메이트, 위치 56에 있는 발린, 위치 58에 있는 이소류신 또는 류신, 위치 59에 있는 트레오닌, 위치 60에 있는 발린, 위치 66에 있는 트레오닌 또는 아스파라긴, 위치 67에 있는 세린 또는 아스파르테이트, 위치 68에 있는 류신, 아스파르테이트, 세린, 티로신 또는 트립토판, 위치 69에 있는 발린, 위치 70에 있는 발린, 위치 71에 있는 아스파르테이트, 위치 72에 있는 글루타민, 알라닌, 시스테인, 페닐알라닌, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 메티오닌, 아스파라긴, 프롤린, 아르기닌, 세린, 트레오닌, 발린, 트립토판, 또는 티로신, 위치 74에 있는 라이신 또는 이소류신, 위치 75에 있는 라이신 또는 페닐알라닌, 위치 76에 있는 아스파라긴, 페닐알라닌, 또는 발린, 위치 77에 있는 알라닌, 시스테인, 아스파르테이트, 글리신, 아스파라긴, 메티오닌, 세린, 트레오닌, 발린, 트립토판, 또는 티로신, 위치 86에 있는 아르기닌 또는 류신, 위치 87에 있는 아스파라긴 또는 트레오닌, 위치 89에 있는 글루타메이트, 위치 90에 있는 아스파르테이트, 라이신, 프롤린, 글루타민, 아르기닌, 트레오닌, 발린, 또는 티로신, 위치 92에 있는 알라닌, 글리신, 히스티딘, 메티오닌, 글루타민, 아르기닌, 세린, 또는 티로신, 위치 93에 있는 아르기닌, 위치 94에 있는 페닐알라닌, 위치 95에 있는 세린 또는 아스파르테이트, 위치 96에 있는 알라닌, 위치 97에 있는 글루타메이트, 위치 98에 있는 페닐알라닌, 위치 99에 있는 트레오닌 또는 발린, 위치 100에 있는 이소류신, 위치 102에 있는 메티오닌, 글루타메이트, 또는 트레오닌, 위치 106에 있는 이소류신 또는 라이신, 위치 109에 있는 페닐알라닌, 위치 110에 있는 이소류신, 위치 111에 있는 아스파라긴, 위치 112에 있는 시스테인, 위치 113에 있는 히스티딘, 트레오닌, 또는 라이신, 위치 117에 있는 페닐알라닌, 위치 119에 있는 메티오닌, 위치 124에 있는 메티오닌, 위치 125에 있는 류신, 위치 126에 있는 아르기닌, 위치 127에 있는 알라닌, 위치 128에 있는 알라닌 또는 세린, 위치 129에 있는 글루타민, 위치 130에 있는 라이신, 위치 135에 있는 아스파르테이트 또는 티로신, 위치 136에 있는 메티오닌, 위치 138에 있는 세린, 위치 139에 있는 글리신, 위치 142에 있는 발린, 글루타메이트, 라이신 또는 트립토판, 위치 145에 있는 류신 또는 글루타민, 위치 146에 있는 글리신, 위치 147에 있는 아스파라긴, 위치 148에 있는 트레오닌, 위치 149에 있는 이소류신 또는 메티오닌, 위치 150에 있는 발린, 위치 152에 있는 히스티딘, 세린, 글루타메이트 또는 트레오닌, 위치 154에 있는 세린, 위치 155에 있는 트레오닌, 위치 158에 있는 이소류신, 위치 159에 있는 세린 또는 이소류신, 위치 163에 있는 이소류신, 위치 164에 있는 세린, 위치 168에 있는 페닐알라닌, 또는 위치 169에 있는 발린, 또는 이들의 조합 중 적어도 하나를 포함하고, 이들은 서열번호: 1에 상응하는 폴리뉴클레오타이드.
  29. 청구항 1 내지 28 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 서열번호: 1에 상응하는 아미노산 치환 A4E, Q11R, A33K, V44I, A54F, P115E, Q124K, Y138I 및 N166R, 및 서열번호: 1의 위치 1, 4, 6, 11, 14, 15, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 27, 28, 31, 32, 33, 34, 36, 38, 39, 40, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 54, 55, 56, 58, 59, 60, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 74, 75, 76, 77, 86, 89, 90, 92, 93, 94, 95, 96, 98, 99, 102, 106, 109, 110, 112, 113, 117, 119, 124, 126, 127, 128, 135, 136, 138, 139, 142, 145, 148, 149, 152, 154, 155, 158, 159, 163, 164, 168, 또는 169, 또는 이들의 조합에 상응하는 위치에서 적어도 하나의 추가 아미노산 치환을 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
  30. 청구항 1 내지 29 중 어느 한 항에 있어서, 상기 위치 4에 있는 아미노산은 글루타메이트이고, 위치 11에 있는 것은 아르기닌이고, 위치 33에 있는 것은 라이신이고, 위치 44에 있는 것은 이소류신이고, 위치 54에 있는 것은 페닐알라닌이고, 위치 115에 있는 것은 글루타메이트이고, 위치 124에 있는 것은 라이신이고, 위치 138에 있는 것은 이소류신이고, 위치 166에 있는 것은 아르기닌이고, 이들은 서열번호: 1, 및 서열번호: 1의 위치 1, 4, 6, 11, 14, 15, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 27, 28, 31, 32, 33, 34, 36, 38, 39, 40, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 54, 55, 56, 58, 59, 60, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 74, 75, 76, 77, 86, 89, 90, 92, 93, 94, 95, 96, 98, 99, 102, 106, 109, 110, 112, 113, 117, 119, 124, 126, 127, 128, 135, 136, 138, 139, 142, 145, 148, 149, 152, 154, 155, 158, 159, 163, 164, 168, 또는 169, 또는 이들의 조합에 상응하는 위치에서 적어도 하나의 추가 아미노산 치환에 상응하는 폴리뉴클레오타이드.
  31. 청구항 29 또는 30에 있어서, 상기 적어도 하나의 아미노산 치환은 하기 중 적어도 하나에 상응하는 폴리뉴클레오타이드: 서열번호: 1에 상응하는 F1I, E4K, F6Y, R11Q, A14V, G15R, Q18D/F/G/H/I/K/L/M/N/P/R/S/V/W/Y, D19N, Q20P/R, V21L/M, L22I/F, E23K, L27M/V, S28Y, F31I, Q32H/L/P, A33N/M, L34M, V36E/M, V38F/I, T39I, P40T, Q42H, K43N/R, I44F, V45E, L46Q, S47P, G48R, E49D/G/K, N50K/S, G51E/R/V, A54I/S, D55E/G, I56V, V58I/L, I59T, I60V, S66T/N, G67D/S, F68L/S/W/Y/D, Q69H, M70V, G71D, L72A/C/F/G/H/I/M/N/P/Q/R/S/T/V/W/Y, E74I/K, M75F/K, I76F/N/V, F77A/C/D/G/M/N/S/T/V/W/Y, H86L/R, K89E, I90D/K/P/Q/R/T/V/Y, L92A/G/H/M/Q/R/S/Y, H93R, Y94F, G95D/S, T96A, V98F, I99T/V, V102E/M, M106I/K, Y109F, F110I, R112C, P113H/T, I117F, V119M, K124M, T126R, V127A, T128A/S, N135D/Y, L136M, I138S, D139G, L142V, P145L/Q, S148T, L149I, R152H/S, T154S, I155T, V158I, T159I/S, L163I, C164S, L168F, 또는 A169V, 또는 이들의 조합.
  32. 청구항 29 또는 30에 있어서, 상기 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩되는 폴리펩타이드는 하기 아미노산: 위치 1에 있는 이소류신, 위치 4에 있는 라이신, 위치 6에 있는 티로신, 위치 11에 있는 글루타민, 위치 14에 있는 발린, 위치 15에 있는 아르기닌, 위치 18에 있는 아스파르테이트, 페닐알라닌, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 라이신, 류신, 메티오닌, 아스파라긴, 프롤린, 아르기닌, 세린, 발린, 트립토판, 또는 티로신, 위치 19에 있는 아스파라긴, 위치 20에 있는 아르기닌 또는 프롤린, 위치 21에 있는 류신 또는 메티오닌, 위치 22에 있는 이소류신 또는 페닐알라닌, 위치 23에 있는 라이신, 위치 27에 있는 발린 또는 메티오닌, 위치 28에 있는 티로신, 위치 31에 있는 이소류신, 위치 32에 있는 프롤린, 히스티딘, 또는 류신, 위치 33에 있는 아스파라긴 또는 메티오닌, 위치 34에 있는 메티오닌, 위치 36에 있는 메티오닌 또는 글루타메이트, 위치 38에 있는 이소류신 또는 페닐알라닌, 위치 39에 있는 이소류신, 위치 40에 있는 트레오닌, 위치 42에 있는 히스티딘, 위치 43에 있는 아스파라긴 또는 아르기닌, 위치 44에 있는 페닐알라닌, 위치 45에 있는 글루타메이트, 위치 46에 있는 글루타민, 위치 47에 있는 프롤린, 위치 48에 있는 아르기닌, 위치 49에 있는 아스파르테이트, 글리신, 또는 라이신, 위치 50에 있는 라이신 또는 세린, 위치 51에 있는 글루타메이트, 아르기닌, 또는 발린, 위치 54에 있는 세린 또는 이소류신, 위치 55에 있는 글리신 또는 글루타메이트, 위치 56에 있는 발린, 위치 58에 있는 이소류신 또는 류신, 위치 59에 있는 트레오닌, 위치 60에 있는 발린, 위치 66에 있는 트레오닌 또는 아스파라긴, 위치 67에 있는 세린 또는 아스파르테이트, 위치 68에 있는 아스파르테이트, 세린, 티로신 또는 트립토판, 위치 69에 있는 히스티딘, 위치 70에 있는 발린, 위치 71에 있는 아스파르테이트, 위치 72에 있는 글루타민, 알라닌, 시스테인, 페닐알라닌, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 메티오닌, 아스파라긴, 프롤린, 아르기닌, 세린, 트레오닌, 발린, 트립토판, 또는 티로신, 위치 74에 있는 라이신 또는 이소류신, 위치 75에 있는 라이신 또는 페닐알라닌, 위치 76에 있는 아스파라긴, 페닐알라닌, 또는 발린, 위치 77에 있는 알라닌, 시스테인, 아스파르테이트, 글리신, 아스파라긴, 메티오닌, 세린, 트레오닌, 발린, 트립토판, 또는 티로신, 위치 86에 있는 아르기닌 또는 류신, 위치 89에 있는 글루타메이트, 위치 90에 있는 아스파르테이트, 라이신, 프롤린, 글루타민, 아르기닌, 트레오닌, 발린, 또는 티로신, 위치 92에 있는 알라닌, 글리신, 히스티딘, 메티오닌, 글루타민, 아르기닌, 세린, 또는 티로신, 위치 93에 있는 아르기닌, 위치 94에 있는 페닐알라닌, 위치 95에 있는 세린 또는 아스파르테이트, 위치 96에 있는 알라닌, 위치 98에 있는 페닐알라닌, 위치 99에 있는 트레오닌 또는 발린, 위치 102에 있는 메티오닌 또는 글루타메이트, 위치 106에 있는 이소류신 또는 라이신, 위치 109에 있는 페닐알라닌, 위치 110에 있는 이소류신, 위치 112에 있는 시스테인, 위치 113에 있는 히스티딘 또는 트레오닌, 위치 117에 있는 페닐알라닌, 위치 119에 있는 메티오닌, 위치 124에 있는 메티오닌, 위치 126에 있는 아르기닌, 위치 127에 있는 알라닌, 위치 128에 있는 알라닌 또는 세린, 위치 135에 있는 아스파르테이트 또는 티로신, 위치 136에 있는 메티오닌, 위치 138에 있는 세린, 위치 139에 있는 글리신, 위치 142에 있는 발린, 위치 145에 있는 류신 또는 글루타민, 위치 148에 있는 트레오닌, 위치 149에 있는 이소류신, 위치 152에 있는 히스티딘 또는 세린, 위치 154에 있는 세린, 위치 155에 있는 트레오닌, 위치 158에 있는 이소류신, 위치 159에 있는 세린 또는 이소류신, 위치 163에 있는 이소류신, 위치 164에 있는 세린, 위치 168에 있는 페닐알라닌, 또는 위치 169에 있는 발린, 또는 이들의 조합 중 적어도 하나를 포함하고, 이들은 서열번호: 1에 상응하는 폴리뉴클레오타이드.
  33. 청구항 1 내지 26 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 서열번호: 1에 상응하는 아미노산 치환 A4E, Q11R, A33K, V44I, A54F, P115E, Q124K, Y138I 및 N166R, 및 서열번호: 1의 위치 1, 4, 14, 15, 18, 20, 22, 23, 27, 33, 38, 39, 43, 49, 54, 55, 56, 58, 59, 66, 67, 68, 70, 71, 72, 75, 76, 77, 89, 90, 92, 93, 102, 106, 109, 113, 117, 126, 127, 136, 139, 145, 148, 163, 164, 또는 169, 또는 이들의 조합에 상응하는 위치에서 적어도 하나의 아미노산을 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
  34. 청구항 1 내지 26 중 어느 한 항에 있어서, 위치 4에 있는 아미노산은 글루타메이트이고, 위치 11에 있는 것은 아르기닌이고, 위치 33에 있는 것은 라이신이고, 위치 44에 있는 것은 이소류신이고, 위치 54에 있는 것은 페닐알라닌이고, 위치 115에 있는 것은 글루타메이트이고, 위치 124에 있는 것은 라이신이고, 위치 138에 있는 것은 이소류신이고, 위치 166에 있는 것은 아르기닌이고, 이들은 서열번호: 1, 및 서열번호: 1의 위치 1, 4, 14, 15, 18, 20, 22, 23, 27, 33, 38, 39, 43, 49, 54, 55, 56, 58, 59, 66, 67, 68, 70, 71, 72, 75, 76, 77, 89, 90, 92, 93, 102, 106, 109, 113, 117, 126, 127, 136, 139, 145, 148, 163, 164, 또는 169, 또는 이들의 조합에 상응하는 위치에서 적어도 하나의 추가 아미노산 치환에 상응하는 폴리뉴클레오타이드.
  35. 청구항 33 또는 34에 있어서, 상기 인코딩된 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 하기 중 적어도 하나에 상응하는 치환을 추가로 포함하는 폴리뉴클레오타이드: 서열번호: 1에 상응하는 F1I, E4K, A14V, G15R, Q18D/F/G/H/I/K/L/M/N/P/R/S/W/Y, Q20R, L22I, E23K, L27M/V, A33N, V38I, T39I, K43R, E49K, A54I/S, D55G, I56V, V58I/L, I59T, S66T/N, G67S, F68S/W/Y/D, M70V, G71D, L72A/C/F/G/H/I/M/N/P/Q/R/S/T/V/W/Y, M75F/K, I76N, F77A/C/D/G/M/S/T/V/W/Y, K89E, I90D/K/P/Q/R/T/V/Y, L92A/G/H/M/Q/S/Y, H93R, V102E, M106K, Y109F, P113T, I117F, T126R, V127A, L136M, D139G, P145L, S148T, L163I, C164S, 또는 A169V, 또는 이들의 조합.
  36. 청구항 33 또는 34에 있어서, 상기 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩되는 폴리펩타이드는 하기 아미노산: 위치 1에 있는 이소류신, 위치 4에 있는 라이신, 위치 14에 있는 발린, 위치 15에 있는 아르기닌, 위치 18에 있는 아스파르테이트, 페닐알라닌, 글리신, 히스티딘, 라이신, 류신, 메티오닌, 아스파라긴, 프롤린, 아르기닌, 세린, 트립토판, 또는 티로신, 위치 20에 있는 아르기닌, 위치 22에 있는 이소류신, 위치 23에 있는 라이신, 위치 27에 있는 발린 또는 메티오닌, 위치 33에 있는 아스파라긴, 위치 38에 있는 이소류신, 위치 39에 있는 이소류신, 위치 43에 있는 아르기닌, 위치 49에 있는 라이신, 위치 54에 있는 세린 또는 이소류신, 위치 55에 있는 글리신, 위치 56에 있는 발린, 위치 58에 있는 이소류신 또는 류신, 위치 59에 있는 트레오닌, 위치 66에 있는 트레오닌 또는 아스파라긴, 위치 67에 있는 세린, 위치 68에 있는 아스파르테이트, 세린, 티로신 또는 트립토판, 위치 70에 있는 발린, 위치 71에 있는 아스파르테이트, 위치 72에 있는 글루타민, 알라닌, 시스테인, 페닐알라닌, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 메티오닌, 아스파라긴, 프롤린, 아르기닌, 세린, 트레오닌, 발린, 트립토판, 또는 티로신, 위치 75에 있는 라이신 또는 페닐알라닌, 위치 76에 있는 아스파라긴, 위치 77에 있는 트립토판, 티로신, 세린, 트레오닌, 발린, 알라닌, 글리신, 시스테인, 아스파르테이트 또는 메티오닌, 위치 89에 있는 글루타메이트, 위치 90에 있는 아스파르테이트, 라이신, 프롤린, 글루타민, 아르기닌, 트레오닌, 발린, 또는 티로신, 위치 92에 있는 알라닌, 글리신, 히스티딘, 메티오닌, 글루타민, 세린, 또는 티로신, 위치 93에 있는 아르기닌, 위치 102에 있는 글루타메이트, 위치 106에 있는 라이신, 위치 109에 있는 페닐알라닌, 위치 113에 있는 트레오닌, 위치 117에 있는 페닐알라닌, 위치 126에 있는 아르기닌, 위치 127에 있는 알라닌, 위치 136에 있는 메티오닌, 위치 139에 있는 글리신, 류신 at 위치 145에 있는, 위치 148에 있는 트레오닌, 위치 163에 있는 이소류신, 위치 164에 있는 세린, 또는 위치 169에 있는 발린, 또는 이들의 조합 중 적어도 하나를 포함하고, 이들은 서열번호: 1에 상응하는 폴리뉴클레오타이드.
  37. 청구항 1 내지 26 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 서열번호: 1에 상응하는 아미노산 치환 A4E, Q11R, A33K, V44I, A54F, P115E, Q124K, Y138I 및 N166R, 및 서열번호: 1에 상응하는 위치 1, 4, 6, 11, 18, 19, 20, 21, 22, 27, 28, 31, 32, 33, 34, 36, 38, 40, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 54, 55, 58, 60, 66, 67, 68, 69, 70, 72, 74, 75, 76, 77, 86, 90, 92, 94, 95, 96, 98, 99, 102, 106, 109, 110, 112, 113, 119, 124, 128, 135, 138, 142, 145, 149, 152, 154, 155, 158, 159, 또는 168, 또는 이들의 조합에 상응하는 위치에서 적어도 하나의 추가 아미노산 치환을 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
  38. 청구항 1 내지 26 중 어느 한 항에 있어서, 위치 4에 있는 아미노산은 글루타메이트이고, 위치 11에 있는 것은 아르기닌이고, 위치 33에 있는 것은 라이신이고, 위치 44에 있는 것은 이소류신이고, 위치 54에 있는 것은 페닐알라닌이고, 위치 115에 있는 것은 글루타메이트이고, 위치 124에 있는 것은 라이신이고, 위치 138에 있는 것은 이소류신이고, 위치 166에 있는 것은 아르기닌이고, 이들은 서열번호: 1, 및 서열번호: 1에 상응하는 위치 1, 4, 6, 11, 18, 19, 20, 21, 22, 27, 28, 31, 32, 33, 34, 36, 38, 40, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 54, 55, 58, 60, 66, 67, 68, 69, 70, 72, 74, 75, 76, 77, 86, 90, 92, 94, 95, 96, 98, 99, 102, 106, 109, 110, 112, 113, 119, 124, 128, 135, 138, 142, 145, 149, 152, 154, 155, 158, 159, 또는 168, 또는 이들의 조합에 상응하는 위치에서 적어도 하나의 추가 아미노산 치환에 상응하는 폴리뉴클레오타이드.
  39. 청구항 37 또는 38에 있어서, 상기 인코딩된 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 하기 중 적어도 하나에 상응하는 치환을 추가로 포함하는 폴리뉴클레오타이드: 서열번호: 1에 상응하는 F1I, E4K, F6Y, R11Q, Q18H/I/LV, D19N, Q20P, V21L/M, L22F, L27V, S28Y, F31I, Q32 H/L/P, A33N/M, L34M, V36E/M, V38F/I, P40T, Q42H, K43N/R, I44F, V45E, L46Q, S47P, G48R, E49D/G, N50K/S, G51E/R/V, A54I, D55E, V58I, I60V, S66N, G67D/S, F68L/Y/D, Q69H, M70V, L72Q, E74I/K, M75K, I76F/N/V, F77N/Y, H86L/R, I90T/V, L92Q/R, Y94F, G95D/S, T96A, V98F, I99T/V, V102E/M, M106I, Y109F, F110I, R112C, P113H, V119M, K124M, T128A/S, N135D/Y, I138S, L142V, P145Q, L149I, R152H/S, T154S, I155T, V158I, T159I/S, 또는 L168F, 또는 이들의 조합.
  40. 청구항 37 또는 38에 있어서, 상기 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩되는 폴리펩타이드는 하기 아미노산: 위치 1에 있는 이소류신, 위치 4에 있는 라이신, 위치 6에 있는 티로신, 위치 11에 있는 글루타민, 위치 18에 있는 히스티딘, 이소류신, 류신, 또는 발린, 위치 19에 있는 아스파라긴, 위치 20에 있는 프롤린, 위치 21에 있는 류신 또는 메티오닌, 위치 22에 있는 페닐알라닌, 위치 27에 있는 발린, 위치 28에 있는 티로신, 위치 31에 있는 이소류신, 위치 32에 있는 프롤린, 히스티딘, 또는 류신, 위치 33에 있는 아스파라긴 또는 메티오닌, 위치 34에 있는 메티오닌, 위치 36에 있는 메티오닌 또는 글루타메이트, 위치 38에 있는 이소류신 또는 페닐알라닌, 위치 40에 있는 트레오닌, 위치 42에 있는 히스티딘, 위치 43에 있는 아스파라긴 또는 아르기닌, 위치 44에 있는 페닐알라닌, 위치 45에 있는 글루타메이트, 위치 46에 있는 글루타민, 위치 47에 있는 프롤린, 위치 48에 있는 아르기닌, 위치 49에 있는 아스파르테이트 또는 글리신, 위치 50에 있는 라이신 또는 세린, 위치 51에 있는 글루타메이트, 위치 54에 있는 아르기닌, 또는 발린, 이소류신, 위치 55에 있는 글루타메이트, 위치 58에 있는 이소류신, 위치 60에 있는 발린, 위치 66에 있는 아스파라긴, 위치 67에 있는 세린 또는 아스파르테이트, 위치 68에 있는 아스파르테이트, 류신, 또는 티로신, 위치 69에 있는 히스티딘, 위치 70에 있는 발린, 위치 72에 있는 글루타민, 위치 74에 있는 라이신 또는 이소류신, 위치 75에 있는 라이신, 위치 76에 있는 아스파라긴, 페닐알라닌, 또는 발린, 위치 77에 있는 아스파라긴 또는 티로신, 위치 86에 있는 아르기닌 또는 류신, 위치 90에 있는 트레오닌 또는 발린, 위치 92에 있는 아르기닌 또는 글루타민, 위치 94에 있는 페닐알라닌, 위치 95에 있는 세린 또는 아스파르테이트, 위치 96에 있는 알라닌, 위치 98에 있는 페닐알라닌, 위치 99에 있는 트레오닌 또는 발린, 위치 102에 있는 메티오닌 또는 글루타메이트, 위치 106에 있는 이소류신, 위치 109에 있는 페닐알라닌, 위치 110에 있는 이소류신, 위치 112에 있는 시스테인, 위치 113에 있는 히스티딘, 위치 119에 있는 메티오닌, 위치 124에 있는 메티오닌, 위치 128에 있는 알라닌 또는 세린, 위치 135에 있는 아스파르테이트 또는 티로신, 위치 138에 있는 세린, 위치 142에 있는 발린, 위치 145에 있는 글루타민, 위치 149에 있는 이소류신, 위치 152에 있는 히스티딘 또는 세린, 위치 154에 있는 세린, 위치 155에 있는 트레오닌, 위치 158에 있는 이소류신, 위치 159에 있는 세린 또는 이소류신, 또는 위치 168에 있는 페닐알라닌, 또는 이들의 조합 중 적어도 하나를 포함하고, 이들은 서열번호: 1에 상응하는 폴리뉴클레오타이드.
  41. 청구항 1 내지 26 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 서열번호: 1에 상응하는 아미노산 치환 A4E, Q11R, A33K, V44I, F54I, I90V, P115E, Q124K, Y138I 및 N166R, 및 서열번호: 1의 위치 1, 4, 10, 14, 16, 18, 24, 25, 27, 33, 38, 40, 68, 70, 72, 75, 87, 90, 97, 100, 102, 111, 113, 125, 129, 130, 142, 146, 147, 149, 150, 152, 또는 166, 또는 이들의 조합에 상응하는 위치에서 적어도 하나의 추가 아미노산 치환을 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
  42. 청구항 1 내지 26 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 아미노산 치환을 포함하고 위치 4에 있는 아미노산은 글루타메이트이고, 위치 11에 있는 것은 아르기닌이고, 위치 33에 있는 것은 라이신이고, 위치 44에 있는 것은 이소류신이고, 위치 54에 있는 것은 이소류신이고, 위치 90에 있는 것은 발린이고, 위치 115에 있는 것은 글루타메이트이고, 위치 124에 있는 것은 라이신이고, 위치 138에 있는 것은 이소류신이고, 위치 166에 있는 것은 아르기닌이고, 이들은 서열번호: 1, 및 서열번호: 1의 위치 1, 4, 10, 14, 16, 18, 24, 25, 27, 33, 38, 40, 68, 70, 72, 75, 87, 90, 97, 100, 102, 111, 113, 125, 129, 130, 142, 146, 147, 149, 150, 152, 또는 166, 또는 이들의 조합에 상응하는 위치에서 적어도 하나의 추가 아미노산 치환에 상응하는 폴리뉴클레오타이드.
  43. 청구항 41 또는 42에 있어서, 상기 적어도 하나의 아미노산 치환은 하기 중 적어도 하나에 상응하는 폴리뉴클레오타이드: 서열번호: 1에 상응하는 F1I, E4K, W10Y, A14S, Y16E, Q18D/F/G/H/K/L/M/N/P/R/S/W/Y, Q24A, G25L, L27M/A/D/G/I, A33N, V38I, P40I/L/Q, F68W/Y, M70V, L72A/C/F/G/H/I/M/N/P/R/S/T/V/W/Y, M75F/K, H87N/T, I90D/K/P/Q/R/Y, L97E, D100I, V102E/T, G111N, P113K, I125L, G129Q, T130K, L142E/K/W, D146G, G147N, L149M, L150V, R152E/T, 또는 N166I/F/E, 또는 이들의 조합.
  44. 청구항 41 또는 42에 있어서, 상기 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩되는 폴리펩타이드는 하기 아미노산: 위치 1에 있는 이소류신, 위치 4에 있는 라이신, 위치 10에 있는 티로신, 위치 14에 있는 세린, 위치 16에 있는 글루타메이트, 위치 18에 있는 아스파르테이트, 페닐알라닌, 글리신, 히스티딘, 라이신, 류신, 메티오닌, 아스파라긴, 프롤린, 아르기닌, 세린, 트립토판, 또는 티로신, 위치 24에 있는 알라닌, 위치 25에 있는 류신, 위치 27에 있는 메티오닌, 알라닌, 아스파르테이트, 글리신 또는 이소류신, 위치 33에 있는 아스파라긴, 위치 38에 있는 이소류신, 위치 40에 있는 이소류신, 류신 또는 글루타민, 위치 68에 있는 티로신 또는 트립토판, 위치 70에 있는 발린, 위치 72에 있는 알라닌, 시스테인, 페닐알라닌, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 메티오닌, 아스파라긴, 프롤린, 아르기닌, 세린, 트레오닌, 발린, 트립토판, 또는 티로신, 위치 75에 있는 라이신 또는 페닐알라닌, 위치 87에 있는 아스파라긴 또는 트레오닌, 위치 90에 있는 아스파르테이트, 라이신, 프롤린, 글루타민, 아르기닌, 또는 티로신, 위치 97에 있는 글루타메이트, 위치 100에 있는 이소류신, 위치 102에 있는 글루타메이트 또는 트레오닌, 위치 111에 있는 아스파라긴, 위치 113에 있는 라이신, 위치 125에 있는 류신, 위치 129에 있는 글루타민, 위치 130에 있는 라이신, 위치 142에 있는 글루타메이트, 라이신 또는 트립토판, 위치 146에 있는 글리신, 위치 147에 있는 아스파라긴, 위치 149에 있는 메티오닌, 위치 150에 있는 발린, 위치 152에 있는 글루타메이트 또는 트레오닌, 또는 위치 166에 있는 이소류신, 페닐알라닌, 또는 글루타메이트, 또는 이들의 조합 중 적어도 하나를 포함하고, 이들은 서열번호: 1에 상응하는 폴리뉴클레오타이드.
  45. 청구항 1 내지 26 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 서열번호: 1에 상응하는 아미노산 치환 A4E, Q11R, A33K, V44I, P115E, Q124K, Y138I, N166R, I90V, F54I, Q18L, F68Y, L72Q, 및 M75K를 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
  46. 청구항 1 내지 26 중 어느 한 항에 있어서, 위치 4에 있는 아미노산은 글루타메이트이고, 위치 11에 있는 것은 아르기닌이고, 위치 18에 있는 것은 류신이고, 위치 33에 있는 것은 라이신이고, 위치 44에 있는 것은 이소류신이고, 위치 54에 있는 것은 이소류신이고, 위치 68에 있는 것은 티로신이고, 위치 72에 있는 것은 글루타민이고, 위치 75에 있는 것은 라이신이고, 위치 90에 있는 것은 발린이고, 위치 115에 있는 것은 글루타메이트이고, 위치 124에 있는 것은 라이신이고, 위치 138에 있는 것은 이소류신이고, 위치 166에 있는 것은 아르기닌이고, 이들은 서열번호: 1에 상응하는 폴리뉴클레오타이드.
  47. 청구항 45 또는 46에 있어서, 상기 서열번호: 1의 33에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환은 아스파라긴인 폴리뉴클레오타이드.
  48. 청구항 47에 있어서, 위치 39는 코돈 ACT에 의해 인코딩되고, 위치 39에 있는 아미노산은 트레오닌이고, 위치 43에 있는 것은 아르기닌이고, 위치 68에 있는 것은 아스파르테이트이고 이들은 서열번호: 1에 상응하고, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 루시퍼라아제 활성을 갖는 폴리뉴클레오타이드.
  49. 청구항 48에 있어서, 상기 위치 27에 있는 아미노산은 서열번호: 1에 상응하는 발린이고, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 루시퍼라아제 활성을 갖는 폴리뉴클레오타이드.
  50. 청구항 1 내지 26 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호: 19의 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
  51. 청구항 1 내지 26 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호: 18, 서열번호: 24, 서열번호: 25, 서열번호: 42, 서열번호: 88, 또는 서열번호: 92의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
  52. 청구항 37 내지 40 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인코딩된 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 서열번호: 1에 상응하는 아미노산 치환 Q18L, F54I, L92H, 및 Y109F를 추가로 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
  53. 청구항 52에 있어서, 상기 인코딩된 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 서열번호: 1에 상응하는 아미노산 치환 V21L, F68Y, L72Q, M75K, H92R 및 V158I를 추가로 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
  54. 청구항 37 내지 40 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인코딩된 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 서열번호: 1에 상응하는 아미노산 치환 F54I, I90V 및 F77Y를 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
  55. 청구항 37 내지 40 중 어느 한 항에 있어서, 위치 18에 있는 아미노산은 류신이고, 위치 54에 있는 것은 이소류신이고, 위치 92에 있는 것은 히스티딘이고, 위치 109에 있는 것은 페닐알라닌이고, 이들은 서열번호: 1에 상응하는 폴리뉴클레오타이드.
  56. 청구항 55에 있어서, 위치 21에 있는 아미노산은 류신이고, 위치 68에 있는 것은 티로신이고, 위치 72에 있는 것은 글루타민이고, 위치 75에 있는 것은 라이신이고, 위치 92에 있는 것은 아르기닌이고, 위치 158에 있는 것은 이소류신이고, 이들은 서열번호: 1에 상응하는 폴리뉴클레오타이드.
  57. 청구항 37 내지 40 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 위치 54에 있는 것은 이소류신이고, 위치 90에 있는 것은 발린이고, 위치 77에 있는 것은 티로신이고, 이들은 서열번호: 1에 상응하는 폴리뉴클레오타이드.
  58. 청구항 52 내지 57 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인코딩된 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 하기 중 적어도 하나에 상응하는 치환을 추가로 포함하는 폴리뉴클레오타이드: 서열번호: 1에 상응하는 F1I, E4K, F6Y, R11Q, Q18H/I/V, D19N, Q20P, V21M, L22F, L27V, S28Y, F31I, Q32 H/L/P, A33N/M, L34M, V36E/M, V38F/I, P40T, Q42H, K43N/R, I44F, V45E, L46Q, S47P, G48R, E49D/G, N50K/S, G51E/R/V, D55E, V58I, I60V, S66N, G67D/S, F68L/D, Q69H, M70V, E74I/K, I76F/N/V, F77N, H86L/R, I90T, Y94F, G95D/S, T96A, V98F, I99T/V, V102E/M, M106I, F110I, R112C, P113H, V119M, K124M, T128A/S, N135D/Y, I138S, L142V, P145Q, L149I, R152H/S, T154S, I155T, T159I/S, 또는 L168F, 또는 이들의 조합.
  59. 청구항 52 내지 57 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩되는 폴리펩타이드는 하기 아미노산: 위치 1에 있는 이소류신 아미노산, 위치 4에 있는 라이신, 위치 6에 있는 티로신, 위치 11에 있는 글루타민, 위치 18에 있는 히스티딘, 이소류신, 또는 발린, 위치 19에 있는 아스파라긴, 위치 20에 있는 프롤린, 위치 21에 있는 메티오닌, 위치 22에 있는 페닐알라닌, 위치 27에 있는 발린, 위치 28에 있는 티로신, 위치 31에 있는 이소류신, 위치 32에 있는 프롤린, 히스티딘, 또는 류신, 위치 33에 있는 아스파라긴 또는 메티오닌, 위치 34에 있는 메티오닌, 위치 36에 있는 메티오닌 또는 글루타메이트, 위치 38에 있는 이소류신 또는 페닐알라닌, 위치 40에 있는 트레오닌, 위치 42에 있는 히스티딘, 위치 43에 있는 아스파라긴 또는 아르기닌, 위치 44에 있는 페닐알라닌, 위치 45에 있는 글루타메이트, 위치 46에 있는 글루타민, 위치 47에 있는 프롤린, 위치 48에 있는 아르기닌, 위치 49에 있는 아스파르테이트 또는 글리신, 위치 50에 있는 라이신 또는 세린, 위치 51에 있는 글루타메이트, 아르기닌, 또는 발린, 위치 55에 있는 글루타메이트, 위치 58에 있는 이소류신, 위치 60에 있는 발린, 위치 66에 있는 아스파라긴, 위치 67에 있는 세린 또는 아스파르테이트, 위치 68에 있는 류신 또는 아스파르테이트, 위치 69에 있는 히스티딘, 위치 70에 있는 발린, 위치 74에 있는 라이신 또는 이소류신, 위치 76에 있는 아스파라긴, 페닐알라닌, 또는 발린, 위치 77에 있는 아스파라긴, 위치 86에 있는 아르기닌 또는 류신, 위치 90에 있는 트레오닌, 위치 92에 있는 글루타민, 위치 94에 있는 페닐알라닌, 위치 95에 있는 세린 또는 아스파르테이트, 위치 96에 있는 알라닌, 위치 98에 있는 페닐알라닌, 위치 99에 있는 트레오닌 또는 발린, 위치 102에 있는 메티오닌 또는 글루타메이트, 위치 106에 있는 이소류신, 위치 110에 있는 이소류신, 위치 112에 있는 시스테인, 위치 113에 있는 히스티딘, 위치 119에 있는 메티오닌, 위치 124에 있는 메티오닌, 위치 128에 있는 알라닌 또는 세린, 위치 135에 있는 아스파르테이트 또는 티로신, 위치 138에 있는 세린, 위치 142에 있는 발린, 위치 145에 있는 글루타민, 위치 149에 있는 이소류신, 위치 152에 있는 히스티딘 또는 세린, 위치 154에 있는 세린, 위치 155에 있는 트레오닌, 위치 159에 있는 세린 또는 이소류신, 또는 위치 168에 있는 페닐알라닌, 또는 이들의 조합 중 적어도 하나를 포함하고, 이들은 서열번호: 1에 상응하는 폴리뉴클레오타이드.
  60. 서열번호: 1에 상응하는 아미노산 치환 A4E, Q11R, A33K, V44I, P115E, Q124K, Y138I, N166R, I90V, F54I, Q18L, F68Y, L72Q, 및 M75K를 포함하는 서열번호: 1의 OgLuc 폴리펩타이드에 대해 적어도 80% 아미노산 서열 동일성을 갖는 OgLuc 변이체 폴리펩타이드를 인코딩하고 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 루시퍼라아제 활성을 갖는 폴리뉴클레오타이드.
  61. 서열번호: 1의 OgLuc 폴리펩타이드에 대해 적어도 80% 아미노산 서열 동일성을 갖는 OgLuc 변이체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드로서, 위치 4에 있는 아미노산은 글루타메이트이고, 위치 11에 있는 것은 아르기닌이고, 위치 18에 있는 것은 류신이고, 위치 33에 있는 것은 라이신이고, 위치 44에 있는 것은 이소류신이고, 위치 54에 있는 것은 이소류신이고, 위치 68에 있는 것은 티로신이고, 위치 72에 있는 것은 글루타민이고, 위치 75에 있는 것은 라이신이고, 위치 90에 있는 것은 발린이고, 위치 115에 있는 것은 글루타메이트이고, 위치 124에 있는 것은 라이신이고, 위치 138에 있는 것은 이소류신이고, 위치 166에 있는 것은 아르기닌이고, 이들은 서열번호: 1에 상응하고, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 루시퍼라아제 활성을 갖는 폴리뉴클레오타이드.
  62. 청구항 60 또는 61에 있어서, 상기 서열번호: 1의 33에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환은 아스파라긴인 폴리뉴클레오타이드.
  63. 청구항 62에 있어서, 위치 39는 코돈 ACT에 의해 인코딩되고, 위치 39에 있는 아미노산은 트레오닌이고, 위치 43에 있는 것은 아르기닌이고, 위치 68에 있는 것은 아스파르테이트이고, 이들은 서열번호: 1에 상응하고, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 루시퍼라아제 활성을 갖는 폴리뉴클레오타이드.
  64. 청구항 63에 있어서, 상기 위치 27에 있는 아미노산은 서열번호: 1에 상응하는 발린이고, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 루시퍼라아제 활성을 갖는 폴리뉴클레오타이드.
  65. 서열번호: 1에 상응하는 아미노산 치환 A4E, Q11R, A33K, V44I, P115E, Q124K, Y138I, N166R, Q18L, F54I, L92H, 및 Y109F를 포함하는 서열번호: 1의 OgLuc 폴리펩타이드에 대해 적어도 80% 아미노산 서열 동일성을 갖는 OgLuc 변이체 폴리펩타이드를 인코딩하고 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 루시퍼라아제 활성을 갖는 폴리뉴클레오타이드.
  66. 청구항 65에 있어서, 서열번호: 1에 상응하는 아미노산 치환 V21L, F68Y, L72Q, M75K, H92R, 및 V158F를 추가로 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
  67. 서열번호: 1에 상응하는 아미노산 치환 A4E, Q11R, A33K, V44I, A54I, F77Y, I90V, P115E, Q124K, Y138I 및 N166R를 포함하는 서열번호: 1의 OgLuc 폴리펩타이드에 대해 적어도 80% 아미노산 서열 동일성을 갖는 OgLuc 변이체 폴리펩타이드를 인코딩하고 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 루시퍼라아제 활성을 갖는 폴리뉴클레오타이드.
  68. 서열번호: 1의 OgLuc 폴리펩타이드에 대해 적어도 80% 아미노산 서열 동일성을 갖는 OgLuc 변이체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드로서, 위치 4에 있는 아미노산은 글루타메이트이고, 위치 11에 있는 것은 아르기닌이고, 위치 18에 있는 것은 류신이고, 위치 33에 있는 것은 라이신이고, 위치 44에 있는 것은 이소류신이고, 위치 54에 있는 것은 이소류신이고, 위치 92에 있는 것은 히스티딘이고, 위치 109에 있는 것은 페닐알라닌이고, 위치 115에 있는 것은 글루타메이트이고, 위치 124에 있는 것은 라이신이고, 위치 138에 있는 것은 이소류신이고, 위치 166에 있는 것은 아르기닌이고, 이들은 서열번호: 1에 상응하고, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 루시퍼라아제 활성을 갖는 폴리뉴클레오타이드.
  69. 청구항 68에 있어서, 위치 21에 있는 아미노산은 류신이고, 위치 68에 있는 것은 티로신이고, 위치 72에 있는 것은 글루타민이고, 위치 75에 있는 것은 라이신이고, 위치 92에 있는 것은 아르기닌이고, 위치 158에 있는 것은 이소류신이고, 이들은 서열번호: 1에 상응하는 폴리뉴클레오타이드.
  70. 서열번호: 1의 OgLuc 폴리펩타이드에 대해 적어도 80% 아미노산 서열 동일성을 갖는 OgLuc 변이체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드로서, 위치 4에 있는 아미노산은 글루타메이트이고, 위치 11에 있는 것은 아르기닌이고, 위치 33에 있는 것은 라이신이고, 위치 44에 있는 것은 이소류신이고, 위치 54에 있는 것은 이소류신이고, 위치 77에 있는 것은 티로신이고, 위치 90에 있는 것은 발린이고, 위치 115에 있는 것은 글루타메이트이고, 위치 124에 있는 것은 라이신이고, 위치 138에 있는 것은 이소류신이고, 위치 166에 있는 것은 아르기닌이고, 이들은 서열번호: 1에 상응하고, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 루시퍼라아제 활성을 갖는 폴리뉴클레오타이드.
  71. 서열번호: 19의 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
  72. 서열번호: 18, 서열번호: 24, 서열번호: 25, 서열번호: 42, 서열번호: 88, 또는 서열번호: 92의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
  73. 서열번호: 1에 대해 적어도 30% 아미노산 서열 동일성을 갖는 십각류 절지동물 루시퍼라아제 폴리펩타이드를 인코딩하는 단리된 폴리뉴클레오타이드로서, 상기 폴리펩타이드 식 (VII)의 서열 패턴에 상응하는 서열 패턴을 포함하고 5 이하의 차이를 포함하고, 상기 차이는 표 4에서 열거된 OgLuc 패턴에 따른 식 (VII)에 대한 패턴 위치 1, 2, 3, 5, 8, 10, 12, 14, 15, 17, 또는 18로부터의 차이 뿐만 아니라 표 4에서 열거된 OgLuc 패턴에 따른 식 (VII)의 임의의 패턴 위치 사이의 갭 또는 삽입을 포함하고, 상기 십각류 절지동물 루시퍼라아제는 코엘렌테라진의 존재에서 발광을 생산하는 단리된 폴리뉴클레오타이드.
  74. 청구항 73에 있어서, 상기 십각류 절지동물 루시퍼라아제는 표 4에서 열거된 OgLuc 패턴에 따른 식 (VII)의 서열 패턴으로부터 4 이하의 차이를 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
  75. 청구항 73에 있어서, 상기 십각류 절지동물 루시퍼라아제는 표 4에서 열거된 OgLuc 패턴에 따른 식 (VII)의 서열 패턴으로부터 3 이하의 차이를 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
  76. 청구항 73에 있어서, 상기 십각류 절지동물 루시퍼라아제는 표 4에서 열거된 OgLuc 패턴에 따른 식 (VII)의 서열 패턴으로부터 2 이하의 차이를 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
  77. 청구항 73에 있어서, 상기 십각류 절지동물 루시퍼라아제는 표 4에서 열거된 OgLuc 패턴에 따른 식 (VII)의 서열 패턴으로부터 4 이하의 차이를 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
  78. 청구항 73에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 표 4에서 열거된 OgLuc 패턴에 따른 식 (VII)에 상응하는 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
  79. 청구항 73에 있어서, 상기 십각류 절지동물 루시퍼라아제는 아리스테이다에, 판달리데아, 솔레노세리다에, 루시페리다에, 세게스티다에, 파시파에이다에, 오플로포리다에, 또는 탈라스소카리다에 패밀리로부터인 폴리뉴클레오타이드.
  80. 청구항 79에 있어서, 상기 십각류 절지동물 루시퍼라아제는 오플로포리다에 패밀리로부터 유래하는 폴리뉴클레오타이드.
  81. 청구항 80에 있어서, 상기 십각류 절지동물 루시퍼라아제는 오플로포러스 종으로부터인 폴리뉴클레오타이드.
  82. 청구항 79에 있어서, 상기 십각류 절지동물 루시퍼라아제는 플레시오페나에우스 코루스칸스, 헤테로카르푸스 종, 파라판달러스 종, 히메노페나아에우스 데빌리스 , 메소페나에우스 트로피칼리스, 루시퍼 티푸스, 세르게스테스 아틀란티쿠스 , 세르게스테스 아르크티쿠스, 세르게스테스 아르마투스, 세르게스테스 페디포르미스 , 세르게스테스 코르누투스 , 세르게스테스 에드와르드시 , 세르게스테스 헨세니 , 세르게스테스 펙티나투스 , 세르게스테스 사르가시 , 세르게스테스 시밀리스 , 세르게스테스 비길락스 , 세르지아 챌렌게리 , 세르지아 그란디스 , 세르지아 루센스 , 세르지아 프레헨실리스 , 세르지아 포텐스 , 세르지아 로부스타 , 세르지아 스신틸란스 , 세르지아 스플렌덴스, 글라이퍼스 마르수피알리스 , 렙토켈라 베르무덴시스 , 파라파시파에 설카티프론스 , 파시페아 타르다, 아칸테피라 아칸티델소니스 , 아칸테피라 아쿠티프론스, 아칸테피라 브레비로스트리스 , 아칸테피라 쿠컬라타 , 아칸테피라 쿠르티로스트리스 , 아칸테피라 엑시미아 , 아칸테피라 그라실리페스 , 아칸테피라 킹스레이이 , 아칸테피라 메디아, 아칸테피라 마이크로프탈마 , 아칸테피라 펠라지카 , 아칸테피라 프리오노타 , 아칸테피라 푸르푸레아 , 아칸테피라 산구이네아 , 아칸테피라 시보가에, 아칸테피라 스틸로로스트라티스 , 에피리나 바이피다 , 에피리나 피구에이라이 , 에피리나 코스키니이 , 에피리나 옴반고 , 히메노도라 갈라시알리스 , 히메노도라 그라실리스 , 메닌고도라 믹실라 , 메닌고도라 몰리스 , 메닌고도라 베스카 , 노토스토무스 깁보서스 , 노토스토무스 아루리쿨란투스 , 오플로포러스 그라실리로스트리스 , 오플로포러스 그리말디이 , 오플로포러스 노바에제알란디아에 , 오플로포러스 스피니카우다 , 오플로포러스 폴리아세우스 , 오플로포러스 스피노서스 , 오플로포러스 타이푸스, 시스텔라스피스 브라우에리 , 시스텔라스피스 크리스타타 , 시스텔라스피스 데빌리스 , 시스텔라스피스 펠루시다 , 클로로토코이데스 스피니카우다 , 탈라스소카리스 크리니타 , 또는 탈라스소카리스 루시다로부터의 루시퍼라아제인 폴리뉴클레오타이드.
  83. 청구항 73에 있어서, 상기 식 (VII)의 서열 패턴은 서열번호: 1의 잔기 8에서 개시하는 서열번호: 1에 맞추어 조정되는 폴리뉴클레오타이드.
  84. 청구항 1 내지 83 중 어느 한 항에 있어서, 상기 서열은 코돈-최적화된 폴리뉴클레오타이드.
  85. 청구항 84에 있어서, 상기 폴리뉴클레오타이드는 서열번호: 22, 서열번호: 23, 서열번호: 24, 또는 서열번호: 25를 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
  86. 청구항 1 내지 85 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리뉴클레오타이드는 OgLuc 변이체 폴리펩타이드에 연결된 관심 폴리펩타이드를 추가로 인코딩하고, 상기 관심 폴리펩타이드 및 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 융합 단백질로서 발현될 수 있는 폴리뉴클레오타이드.
  87. 청구항 1 내지 86 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터.
  88. 청구항 96에 있어서, 상기 폴리뉴클레오타이드는 프로모터에 작동가능하게 연결된 벡터.
  89. 청구항 1 내지 86 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드 또는 청구항 87 또는 88의 벡터를 포함하는 세포.
  90. 청구항 89의 세포를 포함하는 비-인간 이식유전자 동물.
  91. 청구항 1 내지 86 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드 또는 청구항 87 또는 88의 벡터를 포함하는 비-인간 이식유전자 동물.
  92. 청구항 1 내지 86 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩되는 OgLuc 변이체 폴리펩타이드.
  93. 청구항 1 내지 86 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩되는 폴리펩타이드.
  94. 청구항 1 내지 86 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩되는 OgLuc 변이체 폴리펩타이드를 포함하는 융합 단백질.
  95. OgLuc 변이체 폴리펩타이드의 발현을 허용하는 조건 하에서 청구항 89의 세포를 성장시키는 것을 포함하는, OgLuc 변이체 폴리펩타이드의 생산 방법.
  96. OgLuc 변이체 폴리펩타이드의 발현을 허용하는 조건 하에서 청구항 87 또는 88의 벡터를 세포에 도입하는 것을 포함하는, OgLuc 변이체 폴리펩타이드의 생산 방법.
  97. 청구항 1 내지 86 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드 또는 청구항 87 또는 88의 벡터를 포함하는 키트.
  98. 청구항 92의 OgLuc 변이체 폴리펩타이드를 포함하는 키트.
  99. 청구항 97 또는 98에 있어서, 하기 중 적어도 하나를 추가로 포함하는 키트:
    (a) 하기 식 (Ia) 또는 (Ib)의 화합물:
    Figure pct00294
    또는
    Figure pct00295

    여기서 R2는
    Figure pct00296
    , 또는 C2-5 직쇄 알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    R6는 -H, -OH, -NH2 , -OC(O)R 또는 -OCH2OC(O)R로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    R8는
    Figure pct00297
    , H 또는 저급 사이클로알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    여기서 R3 및 R4 모두는 H이거나 둘 모두는 C1 -2 알킬이고;
    W는 -NH2, 할로, -OH, -NHC(O)R, -CO2R이고;
    X는 -S-, -O- 또는 -NR22-이고;
    Y는 -H, -OH, 또는 -OR11이고;
    Z는 -CH- 또는 -N-이고;
    각각의 R11은 독립적으로 -C(O)R" 또는 -CH2OC(O)R"이고;
    R22는 H, CH3 또는 CH2CH3이고;
    각각의 R은 독립적으로 C1 -7 직쇄 알킬 또는 C1 -7 분지형 알킬이고;
    R"는 C1 -7 직쇄 알킬 또는 C1 -7 분지형 알킬이고;
    상기 파선 결합은 포화 또는 불포화일 수 있는 임의의 고리의 존재를 나타내고;
    단, R2가
    Figure pct00298
    또는
    Figure pct00299
    일 때, R8은
    Figure pct00300
    이 아니고;
    단, R2가
    Figure pct00301
    일 때, R8은
    Figure pct00302
    또는 저급 사이클로알킬이고;
    단, R6이 NH2일 때, R2는
    Figure pct00303
    , 또는 C2-5 알킬이고;
    또는 R8은
    Figure pct00304
    이 아니다.
    (b) 버퍼 시약.
  100. 화합물
    Figure pct00305
    또는
    Figure pct00306
    및 청구항 60 내지 64 또는 71 또는 72 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드 또는 청구항 60 내지 64 또는 71 또는 72 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩되는 폴리펩타이드를 포함하는 키트.
  101. 청구항 1 내지 86 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드; 청구항 87 또는 88의 벡터; 청구항 89의 세포; 청구항 90 또는 91의 동물; 청구항 92의 OgLuc 변이체 폴리펩타이드; 청구항 93의 폴리펩타이드; 및 청구항 94의 융합 단백질 중 적어도 하나를 사용하는 생물발광의 측정 방법.
  102. 서열번호: 2를 갖는 모 핵산 서열에 대해 80% 또는 그 미만 핵산 서열 동일성을 갖고 서열번호: 22, 서열번호: 23, 서열번호: 24, 또는 서열번호: 25에 대해 90% 또는 그 초과 핵산 서열 동일성을 갖는 적어도 100개의 뉴클레오타이드의 단편 또는 그의 보체를 포함하는 OgLuc 변이체 폴리펩타이드를 인코딩하는 합성 뉴클레오타이드 서열로서, 상기 감소된 서열 동일성은 모 핵산 서열 중 코돈에 대해 합성 뉴클레오타이드 서열에서 상이한 코돈의 결과이고, 상기 합성 뉴클레오타이드 서열은 모 핵산 서열에 의해 인코딩된 상응하는 루시퍼라아제에 대해 적어도 85% 아미노산 서열 동일성을 갖는 OgLuc 변이체를 인코딩하고, 상기 합성 뉴클레오타이드 서열은 모 핵산 서열에 대해 조절 서열의 감소된 수를 갖는 합성 뉴클레오타이드 서열.
  103. 서열번호: 14를 갖는 모 핵산 서열에 대해 80% 또는 그 미만 핵산 서열 동일성을 갖고 서열번호: 22 또는 서열번호: 23에 대해 90% 또는 그 초과 핵산 서열 동일성을 갖는 적어도 300개의 뉴클레오타이드의 단편 또는 그의 보체를 포함하는 OgLuc 변이체 폴리펩타이드를 인코딩하는 합성 뉴클레오타이드 서열로서, 상기 감소된 서열 동일성은 모 핵산 서열 중 코돈에 대해 합성 뉴클레오타이드 서열에서 상이한 코돈의 결과이고, 상기 합성 뉴클레오타이드 서열은 모 핵산 서열에 의해 인코딩된 상응하는 루시퍼라아제에 대해 적어도 85% 아미노산 서열 동일성을 갖는 개똥벌레 루시퍼라아제를 인코딩하고, 상기 합성 뉴클레오타이드 서열은 모 핵산 서열에 대해 조절 서열의 감소된 수를 갖는 합성 뉴클레오타이드 서열.
  104. 서열번호: 18을 갖는 모 핵산 서열에 대해 80% 또는 그 미만 핵산 서열 동일성을 가지며 서열번호: 24 또는 서열번호: 25에 대해 90% 또는 그 초과 핵산 서열 동일성을 갖는 적어도 100개의 뉴클레오타이드의 단편 또는 그의 보체를 포함하는 OgLuc 변이체 폴리펩타이드를 인코딩하는 합성 뉴클레오타이드 서열로서, 상기 감소된 서열 동일성은 모 핵산 서열 중 코돈에 대해 합성 뉴클레오타이드 서열에서 상이한 코돈의 결과이고, 상기 합성 뉴클레오타이드 서열은 모 핵산 서열에 의해 인코딩된 상응하는 루시퍼라아제에 대해 적어도 85% 아미노산 서열 동일성을 갖는 OgLuc 변이체를 인코딩하고, 상기 합성 뉴클레오타이드 서열은 모 핵산 서열에 대해 조절 서열의 감소된 수를 갖는 합성 뉴클레오타이드 서열.
  105. 청구항 1 내지 86 중 어느 한 항에 있어서, 상기 OgLuc 변이체 폴리펩타이드는 가용성 모노머인 폴리뉴클레오타이드.
  106. 청구항 86에 있어서, 상기 융합 단백질 OgLuc 변이체 폴리펩타이드의 N-말단에서 신호 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
  107. 청구항 106에 있어서, 상기 융합 단백질은 세포로부터 분비되는 폴리뉴클레오타이드.
  108. 이종성 단백질에 융합된 오플로포러스 그라실리로스트리스로부터 신호 펩타이드을 포함하는 융합 펩타이드로서, 상기 신호 펩타이드는 서열번호: 54이고, 상기 융합 펩타이드는 세포에서 발현되고 상기 세포로부터 분비되는 융합 펩타이드.
  109. 하기를 포함하는 생물발광 공명 에너지 전달 (BRET) 시스템: 제1 표적 단백질 및 생물발광 공여체 분자를 포함하는 제1 융합 단백질로서, 상기 생물발광 공여체 분자는 청구항 10 내지 88 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩된 OgLuc 변이체인 제1 융합 단백질; 제2 표적 단백질 및 형광 수용체 분자를 포함하는 제2 융합 단백질; 및 OgLuc 기질.
  110. 청구항 109에 있어서, 상기 OgLuc 기질은 천연 또는 공지된 코엘렌테라진인 BRET 시스템.
  111. 청구항 109에 있어서, 상기 OgLuc 기질은 하기 식 (Ia) 또는 (Ib)의 화합물인 BRET 시스템:
    Figure pct00307
    또는
    Figure pct00308

    여기서 R2는
    Figure pct00309
    , 또는 C2-5 직쇄 알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    R6는 -H, -OH, -NH2 , -OC(O)R 또는 -OCH2OC(O)R로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    R8는
    Figure pct00310
    , H 또는 저급 사이클로알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    여기서 R3 및 R4 모두는 H이거나 둘 모두는 C1 -2 알킬이고;
    W는 -NH2, 할로, -OH, -NHC(O)R, -CO2R이고;
    X는 -S-, -O- 또는 -NR22-이고;
    Y는 -H, -OH, 또는 -OR11이고;
    Z는 -CH- 또는 -N-이고;
    각각의 R11은 독립적으로 -C(O)R" 또는 -CH2OC(O)R"이고;
    R22는 H, CH3 또는 CH2CH3이고;
    각각의 R은 독립적으로 C1 -7 직쇄 알킬 또는 C1 -7 분지형 알킬이고;
    R"는 C1 -7 직쇄 알킬 또는 C1 -7 분지형 알킬이고;
    상기 파선 결합은 포화 또는 불포화일 수 있는 임의의 고리의 존재를 나타내고;
    단, R2가
    Figure pct00311
    또는
    Figure pct00312
    일 때, R8은
    Figure pct00313
    이 아니고;
    단, R2가
    Figure pct00314
    일 때, R8은
    Figure pct00315
    또는 저급 사이클로알킬이고;
    단, R6이 NH2일 때, R2는
    Figure pct00316
    , 또는 C2-5 알킬이고;
    또는 R8은
    Figure pct00317
    이 아니다.
  112. 청구항 109에 있어서, 상기 OgLuc 기질은 화합물
    Figure pct00318
    또는
    Figure pct00319
    인 BRET 시스템.
  113. 발광 단백질, 탈보호된 효소, 및 보호된 발광단을 접촉시키는 단계; 및 상기 조성물로부터 생산된 빛을 검출하는 단계를 포함하는 발광 단백질의 효소 활성의 측정 방법으로서, 상기 발광 단백질은 청구항 1 내지 86 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩된 OgLuc 변이체이고 상기 발광단은 하기 식 (Ia) 또는 (Ib)의 화합물인 방법:
    Figure pct00320
    또는
    Figure pct00321

    여기서 R2는
    Figure pct00322
    , 또는 C2-5 직쇄 알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    R6는 -H, -OH, -NH2 , -OC(O)R 또는 -OCH2OC(O)R로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    R8는
    Figure pct00323
    H 또는 저급 사이클로알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    여기서 R3 및 R4 모두는 H이거나 둘 모두는 C1 -2 알킬이고;
    W는 -NH2, 할로, -OH, -NHC(O)R, -CO2R이고;
    X는 -S-, -O- 또는 -NR22-이고;
    Y는 -H, -OH, 또는 -OR11이고;
    Z는 -CH- 또는 -N-이고;
    각각의 R11은 독립적으로 -C(O)R" 또는 -CH2OC(O)R"이고;
    R22는 H, CH3 또는 CH2CH3이고;
    각각의 R은 독립적으로 C1 -7 직쇄 알킬 또는 C1 -7 분지형 알킬이고;
    R"는 C1 -7 직쇄 알킬 또는 C1 -7 분지형 알킬이고;
    상기 파선 결합은 포화 또는 불포화일 수 있는 임의의 고리의 존재를 나타내고;
    단, R2가
    Figure pct00324
    또는
    Figure pct00325
    일 때, R8은
    Figure pct00326
    이 아니고;
    단, R2가
    Figure pct00327
    일 때, R8은
    Figure pct00328
    또는 저급 사이클로알킬이고;
    단, R6이 NH2일 때, R2는
    Figure pct00329
    , 또는 C2-5 알킬이고;
    또는 R8은
    Figure pct00330
    이 아니다.
  114. 청구항 113에 있어서, 상기 효소 활성은 살아있는, 온전한 비-인간 동물에서 측정되는 방법.
  115. 하기를 포함하는 관심 비-발광 효소의 활성을 측정하는 방법: (a) 발광 분자를 제공하는 단계로서, 상기 분자는 관심 비-발광 효소에 대한 기질 및 청구항 1 내지 86 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩된 OgLuc 변이체의 전-기질인 단계; (b) 상기 발광 분자를 적어도 하나의 관심 비-발광 효소 및 적어도 하나의 OgLuc 변이체와 접촉시켜 반응 혼합물을 생산하는 단계; 및 (c) 반응 혼합물의 발광을 측정하여 관심 비-발광 효소의 활성을 측정하는 단계.
  116. 청구항 115에 있어서, 상기 발광 분자는 하기 식 (Ia) 또는 (Ib)의 화합물의 변형인 방법:
    Figure pct00331
    또는
    Figure pct00332

    여기서 R2는
    Figure pct00333
    , 또는 C2-5 직쇄 알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    R6는 -H, -OH, -NH2 , -OC(O)R 또는 -OCH2OC(O)R로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    R8는
    Figure pct00334
    , H 또는 저급 사이클로알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    여기서 R3 및 R4 모두는 H이거나 둘 모두는 C1 -2 알킬이고;
    W는 -NH2, 할로, -OH, -NHC(O)R, -CO2R이고;
    X는 -S-, -O- 또는 -NR22-이고;
    Y는 -H, -OH, 또는 -OR11이고;
    Z는 -CH- 또는 -N-이고;
    각각의 R11은 독립적으로 -C(O)R" 또는 -CH2OC(O)R"이고;
    R22는 H, CH3 또는 CH2CH3이고;
    각각의 R은 독립적으로 C1 -7 직쇄 알킬 또는 C1 -7 분지형 알킬이고;
    R"는 C1 -7 직쇄 알킬 또는 C1 -7 분지형 알킬이고;
    상기 파선 결합은 포화 또는 불포화일 수 있는 임의의 고리의 존재를 나타내고;
    단, R2가
    Figure pct00335
    또는
    Figure pct00336
    일 때, R8은
    Figure pct00337
    이 아니고;
    단, R2가
    Figure pct00338
    일 때, R8은
    Figure pct00339
    또는 저급 사이클로알킬이고;
    단, R6이 NH2일 때, R2는
    Figure pct00340
    , 또는 C2-5 알킬이고;
    또는 R8은
    Figure pct00341
    이 아니다.
  117. 청구항 115 또는 116에 있어서, 상기 관심 비-발광 효소는 프로테아제 효소, 사이토크롬 P450 효소, 모노아민 옥시다제 효소, 또는 글루타티온 S-트랜스페라제 효소인 방법.
  118. 청구항 115 내지 117 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비-발광 효소의 활성은 살아있는, 온전한 동물에서 측정되는 방법.
  119. 하기를 포함하는, 샘플에서 적어도 2개 분자의 존재를 검출하는 방법: 상기 샘플을, 청구항 1 내지 86 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩된 OgLuc 변이체를 포함하는 제1 리포터 분자와 접촉시키는 단계로서, 상기 제1 리포터 분자는 상기 샘플의 제1 성분에 작동가능하게 연결되는 단계; 상기 샘플을 제2 리포터 분자와 접촉시키는 단계로서, 상기 제2 리포터 분자는 상기 샘플의 제2 성분에 작동가능하게 연결되는 단계; 상기 제1 및 제2 리포터 분자의 존재를 검출하여 샘플에서 상기 제1 및 제2 성분의 존재 및/또는 양을 측정하는 단계.
  120. 하기를 포함하는, 세포에서 적어도 2개 분자의 존재를 검출하는 방법: 상기 세포를, 청구항 1 내지 86 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩된 OgLuc 변이체를 포함하는 제1 리포터 분자와 접촉시키는 단계로서, 상기 제1 리포터 분자는 상기 샘플의 제1 성분에 작동가능하게 연결되는 단계; 상기 샘플을 제2 리포터 분자와 접촉시키는 단계로서, 상기 제2 리포터 분자는 상기 샘플의 제2 성분에 작동가능하게 연결되는 단계; 상기 제1 및 제2 리포터 분자의 존재를 검출하여 샘플에서 상기 제1 및 제2 성분의 존재 및/또는 양을 측정하는 단계.
  121. 하기를 포함하는, OgLuc 변이체 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드의 생산 방법:
    (a) 모 OgLuc 폴리펩타이드 및 적어도 하나의 이종성 폴리펩타이드를 포함하는 모 융합 단백질 구조물을 사용하여 변이체 융합 단백질의 라이브러리를 산출하는 단계; 및
    (b) 모 융합 단백질 구조물에 관해 증대된 발광, 증대된 효소 안정성 또는 증대된 생체적합성 중 적어도 하나에 대한 라이브러리를 스크리닝하는 단계.
  122. 청구항 121에 있어서, 상기 이종성 폴리펩타이드는 OgLuc 폴리펩타이드에 대해 C-말단인 방법.
  123. 청구항 121에 있어서, 상기 이종성 폴리펩타이드는 OgLuc 폴리펩타이드에 대해 N-말단인 방법.
  124. 청구항 121 내지 123 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이종성 폴리펩타이드는 HALOTAG®인 방법.
  125. 청구항 121에 있어서, 상기 융합 단백질 구조물은 2개의 이종성 폴리펩타이드를 포함하는 방법.
  126. 청구항 125에 있어서, 상기 이종성 폴리펩타이드 중 하나는 OgLuc 폴리펩타이드에 대해 N-말단이고 다른 이종성 폴리펩타이드는 OgLuc 폴리펩타이드에 대해 C-말단인 방법.
  127. 청구항 125 또는 126에 있어서, 상기 이종성 폴리펩타이드는 HALOTAG® 및 Id인 방법.
  128. 청구항 1 내지 86 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드, 또는 그의 단편을 포함하는 벡터.
  129. 청구항 1 내지 86 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드 또는 그의 단편에 의해 인코딩되는 폴리펩타이드를 포함하는 순환 치환된 루시퍼라아제.
  130. 하기를 포함하는, 유기체에 사용하기 위한 루시퍼라아제를 인코딩하는 코돈-최적화된 폴리뉴클레오타이드를 산출하는 방법: 루시퍼라아제에서 각 아미노산에 대해, 코돈을, 아미노산을 위해 코딩하기 위한 유기체에서 사용된 2개의 가장 통상적으로 사용된 코돈으로부터 무작위로 선택하여 제1 코돈-최적화된 폴리뉴클레오타이드를 생산하는 단계.
  131. 청구항 130에 있어서, 아미노산을 위해 코딩하기 위한 유기체에서 사용된 2개의 가장 통상적으로 사용된 코돈의 다른 것을 선택하여 제2 코돈-최적화된 폴리뉴클레오타이드를 생산하는 것을 추가로 포함하는 코돈 최적화 방법.
KR1020137014102A 2010-11-02 2011-11-02 오플로포러스-유래된 루시퍼라아제, 신규 코엘렌테라진 기질, 및 사용 방법 KR101538624B1 (ko)

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WO (2) WO2012061529A1 (ko)

Families Citing this family (80)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1673459B1 (en) 2003-10-10 2012-06-27 Promega Corporation Luciferase biosensor
EP2327768B1 (en) 2006-04-03 2015-09-09 Promega Corporation Permuted and nonpermuted luciferase biosensors
JP6110591B2 (ja) 2008-05-19 2017-04-05 プロメガ コーポレイションＰｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ｃＡＭＰのためのルシフェラーゼバイオセンサー
JP6038649B2 (ja) 2009-05-01 2016-12-07 プロメガ コーポレイションＰｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ 増大した光出力を有する合成オプロフォルスルシフェラーゼ
US9290794B2 (en) * 2010-05-11 2016-03-22 Promega Corporation Mutant protease biosensors with enhanced detection characteristics
WO2011143339A1 (en) 2010-05-11 2011-11-17 Promega Corporation Mutant protease biosensors with enhanced detection characteristics
SG10202103336SA (en) 2010-11-02 2021-04-29 Promega Corp Novel coelenterazine substrates and methods of use
WO2012061477A1 (en) 2010-11-02 2012-05-10 Promega Corporation Coelenterazine derivatives and methods of using same
EP2782916B1 (en) 2011-11-21 2018-02-28 Promega Corporation Carboxy x rhodamine analogs
EP2932267B1 (en) * 2012-12-12 2020-05-06 Promega Corporation Recognition of cellular target binding by a bioactive agent using intracellular bioluminescence resonance energy transfer
US10067149B2 (en) 2012-12-12 2018-09-04 Promega Corporation Recognition of cellular target binding by a bioactive agent using intracellular bioluminescence resonance energy transfer
CN104853767B (zh) 2012-12-12 2017-04-05 普洛麦格公司 用于捕获生物活性剂的细胞标靶的组合物和方法
JP6511720B2 (ja) * 2013-02-28 2019-05-15 Jnc株式会社 コドン最適化変異エビルシフェラーゼ遺伝子およびその使用方法
US10168323B2 (en) 2013-03-15 2019-01-01 Promega Corporation Compositions and methods for capture of cellular targets of bioactive agents
US11072812B2 (en) 2013-03-15 2021-07-27 Promega Corporation Substrates for covalent tethering of proteins to functional groups or solid surfaces
SG10201601929YA (en) * 2013-03-15 2016-04-28 Promega Corp Activation Of Bioluminescence By Structural Complementation
US9340817B2 (en) 2013-03-27 2016-05-17 Sample6 Technologies, Inc. Methods of making recombinant phage, compositions and articles of manufacture of same for bacterial detection
JP6040846B2 (ja) 2013-04-08 2016-12-07 Jnc株式会社 セレンテラジン類縁体
EP3011062A4 (en) * 2013-06-19 2017-06-14 Sample6 Technologies Inc. Phage-based bacterial detection assay
EP3019620A4 (en) * 2013-07-12 2017-01-18 The Children's Hospital of Philadelphia Aav vector and assay for anti-aav (adeno-associated virus) neutralizing antibodies
AU2013394649B2 (en) 2013-07-18 2020-07-16 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) Means and methods for bioluminescence resonance energy transfer (BRET) analysis in a biological sample
JP6484987B2 (ja) 2013-10-21 2019-03-20 Jnc株式会社 エビルシフェラーゼの触媒蛋白質の変異遺伝子とその使用法
WO2015067302A1 (en) 2013-11-05 2015-05-14 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) Sensor molecules and uses thereof
JP6442825B2 (ja) * 2013-12-26 2018-12-26 Jnc株式会社 エビルシフェラーゼの触媒蛋白質の変異遺伝子とその使用法
WO2015116867A1 (en) 2014-01-29 2015-08-06 Promega Corporation Quinone-masked probes as labeling reagents for cell uptake measurements
JP6588917B2 (ja) 2014-01-29 2019-10-09 プロメガ コーポレイションＰｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ 生細胞への適用のためのプロ基質
JP6256118B2 (ja) 2014-03-11 2018-01-10 Jnc株式会社 エビルシフェラーゼの触媒蛋白質のキメラ遺伝子及びその使用法
JP6265020B2 (ja) 2014-04-16 2018-01-24 Jnc株式会社 エビルシフェラーゼの触媒蛋白質の変異遺伝子とその使用法
SG11201609382WA (en) 2014-05-23 2016-12-29 Promega Corp Compositions and methods for stabilizing luminogenic substrates
WO2016040788A1 (en) 2014-09-11 2016-03-17 Promega Corporation Luciferase sequences utilizing infrared-emitting substrates to produce enhanced luminescence
EP3191601B1 (en) * 2014-09-12 2022-11-02 Promega Corporation Internal protein tags
US11365402B2 (en) * 2014-09-12 2022-06-21 Promega Corporation Internal protein tags
US20190054117A1 (en) * 2014-12-19 2019-02-21 Novartis Ag Dimerization switches and uses thereof
WO2016127100A1 (en) 2015-02-05 2016-08-11 Promega Corporation Luciferase-based thermal shift assays
WO2016196956A1 (en) 2015-06-05 2016-12-08 Promega Corporation Cell-permeable, cell-compatible, and cleavable linkers for covalent tethering of functional elements
EP3313846B1 (en) 2015-06-25 2020-05-06 Promega Corporation Thienopyrrole compounds and uses thereof as inhibitors of oplophorus-derived luciferases
US20170029798A1 (en) * 2015-07-27 2017-02-02 Cellivery Therapeutics, Inc. Development of Improved Cell-Permeable (iCP) Parkin Recombinant Protein as a Protein-Based Anti-Neurodegenerative Agent for the Treatment of Parkinson's Disease-Associated Phenotypes by Utilizing BBB-Penetrating Protein Delivery System MITT, Enabled by Advanced Macromolecule Transduction Domain (aMTD)
EP4086261A1 (en) * 2016-02-15 2022-11-09 Promega Corporation Process for the preparation of coelenterazine analogues
JP6441534B2 (ja) 2016-03-11 2018-12-19 国立研究開発法人産業技術総合研究所 発光酵素タンパク質
US10634680B2 (en) 2016-04-26 2020-04-28 University Of Utah Research Foundation Target-binding activated split reporter systems for analyte detection and related components and methods
CN105968114B (zh) * 2016-05-27 2018-11-09 山东大学 一种腔肠素类似物及其制备方法与应用
WO2018022865A1 (en) 2016-07-28 2018-02-01 Promega Corporation Coelenterazine analogues
US10202584B2 (en) * 2016-09-01 2019-02-12 The Regents Of The University Of California Red-shifted luciferase-luciferin pairs for enhanced bioluminescence
JP6978492B2 (ja) 2016-09-09 2021-12-08 プロメガ コーポレイションPromega Corporation 二重保護されたプロセレンテラジン基質
EP3535270B1 (en) 2016-11-01 2022-07-27 Promega Corporation Coelenterazine analogues tethered to energy acceptors
EP4279490A3 (en) * 2016-12-01 2024-04-10 Promega Corporation Cell impermeable coelenterazine analogues
JP7104702B2 (ja) * 2016-12-01 2022-07-21 プロメガ コーポレイション ５，５－二置換ルシフェリン及びルシフェラーゼ系アッセイにおけるそれらの使用
WO2018125992A1 (en) 2016-12-28 2018-07-05 Promega Corporation Functionalized nanoluc inhibitors
US11959121B2 (en) 2017-05-30 2024-04-16 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Sensors, methods and kits for detecting NADPH based on resonance energy transfer
JP7204728B2 (ja) * 2017-07-06 2023-01-16 プロメガ コーポレイション 血清中で安定なプロセレンテラジン類似体
CN108107209B (zh) * 2017-09-19 2020-07-24 中国中医科学院医学实验中心 一种检测分泌型报告蛋白含量的优化方法及其所用生物材料
US11655247B2 (en) 2018-05-01 2023-05-23 Promega Corporation Nanoluc suicide substrates
JP7432529B2 (ja) 2018-05-30 2024-02-16 プロメガ コーポレイション 広域スペクトルキナーゼ結合剤
EP3802514B1 (en) 2018-06-01 2022-08-03 Promega Corporation Inhibitors of oplophorus luciferase-derived bioluminescent complexes
US10962538B2 (en) 2018-06-14 2021-03-30 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Assays using arrestin recruitment and unmodified receptors
WO2020023871A1 (en) 2018-07-27 2020-01-30 Promega Corporation Quinone-containing conjugates
US11691976B2 (en) 2018-08-23 2023-07-04 Promega Corporation Coelenterazine analogues
EP4015644A1 (en) 2018-10-03 2022-06-22 Promega Corporation Compositions and methods for stabilizing coelenterazine and analogs and derivatives thereof
JP2022509200A (ja) 2018-11-28 2022-01-20 プロメガ コーポレイション 反応性ペプチド標識付け
EP3891503A2 (en) 2018-12-04 2021-10-13 Promega Corporation Broad spectrum gpcr binding agents
WO2020176755A1 (en) * 2019-02-27 2020-09-03 University Of Virginia Patent Foundation Atp-independent bioluminescent reporter variants to improve in vivo imaging
JP2022526907A (ja) 2019-03-20 2022-05-27 プロメガ コーポレイション 光親和性プローブ
US11360096B2 (en) 2019-05-16 2022-06-14 Duke University Complex BRET technique for measuring biological interactions
CN114450326A (zh) 2019-06-24 2022-05-06 普罗美加公司 用于将生物分子递送到细胞中的改性聚胺聚合物
JP2023503653A (ja) 2019-11-27 2023-01-31 プロメガ コーポレイション 多分子ルシフェラーゼペプチド及びポリペプチド
WO2021119149A1 (en) 2019-12-10 2021-06-17 Promega Corporation Compositions and methods for bioluminescent detection using multifunctional probes
EP3882632A1 (en) 2020-03-18 2021-09-22 Universite De Bordeaux Novel ion conducting channel fusion subunits and methods of use thereof
CN113527231A (zh) * 2020-04-15 2021-10-22 深圳华大生命科学研究院 杂环取代腔肠素类化合物的合成方法
EP3904508A1 (en) 2020-04-27 2021-11-03 Institut Pasteur Luciferase linked immunosorbent assay
WO2021237118A2 (en) 2020-05-22 2021-11-25 Promega Corporation Enhancement of kinase target engagement
US20220064696A1 (en) 2020-08-28 2022-03-03 Promega Corporation Target engagement assay for ras proteins
KR20230124938A (ko) 2020-12-25 2023-08-28 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 복수의 표적 분자와 함께 복합체를 형성할 수 있는후보 분자의 스크리닝 방법
CN115161296A (zh) * 2021-04-01 2022-10-11 深圳华大生命科学研究院 一种刺虾荧光素酶Nluc的突变体及其应用
WO2023025816A1 (en) * 2021-08-24 2023-03-02 Institut Pasteur Luminescent based antigen assay
WO2023215452A2 (en) 2022-05-04 2023-11-09 Promega Corporation Split modified dehalogenase variants
WO2023215505A1 (en) 2022-05-04 2023-11-09 Promega Corporation Modified dehalogenase with extended surface loop regions
WO2023215432A1 (en) 2022-05-04 2023-11-09 Promega Corporation Circularly permuted dehalogenase variants
WO2023215497A1 (en) 2022-05-04 2023-11-09 Promega Corporation Photoactivatable compounds and uses thereof
CN115349611B (zh) * 2022-08-05 2023-10-24 江南大学 一种改善南美白对虾虾糜凝胶品质的方法
CN116068198B (zh) * 2022-11-30 2024-01-09 深圳湾实验室 Ppi原位检测方法及其载体、诊断试剂、试剂盒和应用

Family Cites Families (69)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3477549D1 (en) 1983-08-17 1989-05-11 Allied Signal Inc Gas generator and method of generating gas
JPH0515398A (ja) 1991-07-15 1993-01-26 Nippon Oil & Fats Co Ltd オキシダーゼ酵素の定量方法
US5368484A (en) 1992-05-22 1994-11-29 Atari Games Corp. Vehicle simulator with realistic operating feedback
US6387675B1 (en) 1994-01-03 2002-05-14 Promega Corporation Mutant luciferases
EP0689587B1 (en) 1994-01-03 2008-04-09 Promega Corporation Mutant luciferases
GB9501170D0 (en) 1994-03-23 1995-03-08 Secr Defence Luciferases
JP3648763B2 (ja) 1994-08-23 2005-05-18 日本油脂株式会社 ウミホタルルシフェリン誘導体および糖加水分解酵素の定量方法
GB9417593D0 (en) 1994-09-01 1994-10-19 Secr Defence Luciferase labelling method
US5670356A (en) 1994-12-12 1997-09-23 Promega Corporation Modified luciferase
JP4342608B2 (ja) 1995-01-20 2009-10-14 スリーエム イノベイティブ プロパティーズ カンパニー 突然変異体ルシフェラーゼ
JPH08294397A (ja) 1995-04-27 1996-11-12 Nippon Oil & Fats Co Ltd 免疫学的活性物質の測定方法
US5998204A (en) 1997-03-14 1999-12-07 The Regents Of The University Of California Fluorescent protein sensors for detection of analytes
GB9707486D0 (en) 1997-04-11 1997-05-28 Secr Defence Enzyme assays
CA2285571C (en) 1997-04-16 2008-12-02 Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute Immunomodulatory molecules and process for producing the same
US6602677B1 (en) 1997-09-19 2003-08-05 Promega Corporation Thermostable luciferases and methods of production
EP1015601B1 (en) 1997-09-19 2015-01-07 Promega Corporation Thermostable luciferases and methods of production
GB9823468D0 (en) 1998-10-28 1998-12-23 Secr Defence Novel enzyme
JP3694181B2 (ja) * 1999-01-05 2005-09-14 キッコーマン株式会社 変異型ルシフェラーゼ、変異型ルシフェラーゼ遺伝子、新規な組み換え体ｄｎａ及び変異型ルシフェラーゼの製造法
GB9925161D0 (en) 1999-10-26 1999-12-22 Secr Defence Novel enzyme
AU772485C (en) 1999-10-26 2004-11-18 Promega Corporation Novel enzyme
US20010046687A1 (en) 2000-03-31 2001-11-29 Dicesare Joseph L. Method for the enhancement of luminescence intensity from a reaction between adenosine triphosphate (ATP) and a luciferase/luciferin reactant system
JP4613441B2 (ja) * 2000-04-26 2011-01-19 チッソ株式会社 新規ルシフェラーゼおよび発光蛋白質
DE60142761D1 (de) 2000-04-26 2010-09-23 Chisso Corp Oplophorus Luciferase
US7118878B1 (en) 2000-06-09 2006-10-10 Promega Corporation Method for increasing luminescence assay sensitivity
US7879540B1 (en) 2000-08-24 2011-02-01 Promega Corporation Synthetic nucleic acid molecule compositions and methods of preparation
US7268229B2 (en) * 2001-11-02 2007-09-11 Promega Corporation Compounds to co-localize luminophores with luminescent proteins
US7148030B2 (en) 2002-02-01 2006-12-12 Promega Corporation Bioluminescent protease assay
WO2004027378A2 (en) 2002-09-20 2004-04-01 Promega Corporation Luminescence-based methods and probes for measuring cytochrome p450 activity
ES2237643T3 (es) * 2002-10-21 2005-08-01 Axxam S.R.L. Fotoproteina con bioluminiscencia mejorada.
EP2325329B1 (en) 2002-12-23 2014-02-12 Promega Corporation Improved luciferase-based assays
EP2455457B1 (en) 2003-01-31 2015-03-11 Promega Corporation Covalent tethering of functional groups to proteins
US7429472B2 (en) 2003-01-31 2008-09-30 Promega Corporation Method of immobilizing a protein or molecule via a mutant dehalogenase that is bound to an immobilized dehalogenase substrate and linked directly or indirectly to the protein or molecule
JP2006517413A (ja) 2003-02-12 2006-07-27 プロメガ　コーポレイション 光を発光反応から消失させる二重酵素アッセイの方法及びキット
US20040178545A1 (en) 2003-03-14 2004-09-16 Cates Larry E. System for optically analyzing a molten metal bath
EP1673459B1 (en) 2003-10-10 2012-06-27 Promega Corporation Luciferase biosensor
ATE443070T1 (de) 2004-01-08 2009-10-15 Univ Zuerich Metallkomplexe mit vitamin b12 als ligand
US7416854B2 (en) 2004-01-22 2008-08-26 Promega Corporation Luminogenic and nonluminogenic multiplex assay
US7553632B2 (en) 2004-01-22 2009-06-30 Promega Corporation Luminogenic and nonluminogenic multiplex assay
US20070087400A1 (en) 2004-07-30 2007-04-19 Aldis Darzins Covalent tethering of functional groups to proteins and substrates therefor
EP3179252B1 (en) 2004-07-30 2018-11-14 Promega Corporation Covalent tethering of functional groups to proteins and substrates therefor
US7425436B2 (en) 2004-07-30 2008-09-16 Promega Corporation Covalent tethering of functional groups to proteins and substrates therefor
US7728118B2 (en) 2004-09-17 2010-06-01 Promega Corporation Synthetic nucleic acid molecule compositions and methods of preparation
JP4639904B2 (ja) 2005-03-30 2011-02-23 チッソ株式会社 蛍光活性を有するルシフェラーゼの活性増強方法
JP3844082B2 (ja) * 2005-04-08 2006-11-08 キッコーマン株式会社 耐熱性ホタルルシフェラーゼ、耐熱性ホタルルシフェラーゼ遺伝子、新規な組み換え体ｄｎａ及び耐熱性ホタルルシフェラーゼの製造法
EP1935986B1 (en) 2005-05-31 2014-04-16 Promega Corporation Luminogenic and fluorogenic compounds and methods to detect molecules or conditions
EP2778234B1 (en) 2005-05-31 2017-09-27 Promega Corporation Luminogenic and fluorogenic compounds and methods to detect molecules or conditions
US7495579B2 (en) 2005-06-13 2009-02-24 Sirota J Marcos Traffic light status remote sensor system
CA2616930A1 (en) 2005-08-17 2007-02-22 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods and compositions for determining a level of biologically active serum paraoxonase
JP4999341B2 (ja) * 2005-09-06 2012-08-15 株式会社バイオエネックス 変異型ホタルルシフェラーゼ、遺伝子、組換えベクター、形質転換体、及び変異型ホタルルシフェラーゼの製造方法
EP2327768B1 (en) 2006-04-03 2015-09-09 Promega Corporation Permuted and nonpermuted luciferase biosensors
JP2007306871A (ja) 2006-05-19 2007-11-29 Chisso Corp 封入体可溶化方法及び精製方法
EP2374875B1 (en) 2006-10-30 2015-09-02 Promega Corporation Mutant hydrolase proteins with enhanced kinetics and funcitional expression
WO2008086035A2 (en) 2007-01-10 2008-07-17 Promega Corporation Split mutant hydrolase fusion reporter and uses thereof
WO2008118445A1 (en) 2007-03-26 2008-10-02 Promega Corporation Methods to quench light from optical reactions
US20090253131A1 (en) 2007-11-05 2009-10-08 Promega Corporation Hybrid fusion reporter and uses thereof
JP6110591B2 (ja) 2008-05-19 2017-04-05 プロメガ コーポレイションＰｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ｃＡＭＰのためのルシフェラーゼバイオセンサー
CN103983634A (zh) 2008-07-22 2014-08-13 普罗美加公司 基于adp检测的发光磷酸转移酶或atp水解酶测定
TWI375901B (en) 2008-08-05 2012-11-01 Elan Microelectronics Corp Touch screen and method for positioning coordinate
US8546568B2 (en) * 2009-02-09 2013-10-01 Jnc Corporation Coelenterazine analogs and manufacturing method thereof
EP2420573A1 (en) 2009-04-17 2012-02-22 National Institute of Advanced Industrial Science And Technology Stable artificial bioluminescent enzyme having super-high brightness
JP6038649B2 (ja) * 2009-05-01 2016-12-07 プロメガ コーポレイションＰｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ 増大した光出力を有する合成オプロフォルスルシフェラーゼ
WO2011038219A1 (en) 2009-09-24 2011-03-31 Promega Corporation Proteases having improved stability, solubility and activity
JP5605727B2 (ja) * 2010-04-06 2014-10-15 Ｊｎｃ株式会社 セレンテラジン類縁体及びセレンテラミド類縁体
WO2011143339A1 (en) 2010-05-11 2011-11-17 Promega Corporation Mutant protease biosensors with enhanced detection characteristics
WO2012030960A1 (en) 2010-09-01 2012-03-08 Promega Corporation Oxidized glutathione assay
US9284188B2 (en) 2010-09-03 2016-03-15 The Regents Of The University Of California Cytosolic delivery of materials with endosome-disrupting colloids
SG10202103336SA (en) 2010-11-02 2021-04-29 Promega Corp Novel coelenterazine substrates and methods of use
WO2012061477A1 (en) 2010-11-02 2012-05-10 Promega Corporation Coelenterazine derivatives and methods of using same
JP6067019B2 (ja) 2011-09-02 2017-01-25 プロメガ コーポレイションＰｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ 代謝的に活性な細胞の酸化還元状態を評価するための化合物及び方法、ならびにｎａｄ（ｐ）／ｎａｄ（ｐ）ｈを測定するための方法

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