JPH0515398A - オキシダーゼ酵素の定量方法 - Google Patents
オキシダーゼ酵素の定量方法Info
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- JPH0515398A JPH0515398A JP17402091A JP17402091A JPH0515398A JP H0515398 A JPH0515398 A JP H0515398A JP 17402091 A JP17402091 A JP 17402091A JP 17402091 A JP17402091 A JP 17402091A JP H0515398 A JPH0515398 A JP H0515398A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 化学発光法によってオキシダーゼ酵素を定量
する方法であって、該定量方法がオキシダーゼ酵素に基
質を反応させ、次いで発光試薬として特定のウミホタル
ルシフェリン誘導体を反応させることを特徴とするオキ
シダーゼ酵素の定量方法。 【効果】本発明のオキシダーゼ酵素の定量方法は、オキ
シダーゼ酵素と基質とを反応させて得られる反応物と、
ウミホタルルシフェリン誘導体とを反応させるので、オ
キシダーゼ酵素が失活する迄、前記反応物が連続的に産
生され、発光の増幅が生じる。このため、簡便且つ温和
な条件下にて、高感度且つ高精度にオキシダ−ゼ酵素の
定量を行なうことができ、免疫抗体の検出、ＤＮＡプロ
−ブ等の生化学的な探査法等として利用することができ
る。
する方法であって、該定量方法がオキシダーゼ酵素に基
質を反応させ、次いで発光試薬として特定のウミホタル
ルシフェリン誘導体を反応させることを特徴とするオキ
シダーゼ酵素の定量方法。 【効果】本発明のオキシダーゼ酵素の定量方法は、オキ
シダーゼ酵素と基質とを反応させて得られる反応物と、
ウミホタルルシフェリン誘導体とを反応させるので、オ
キシダーゼ酵素が失活する迄、前記反応物が連続的に産
生され、発光の増幅が生じる。このため、簡便且つ温和
な条件下にて、高感度且つ高精度にオキシダ−ゼ酵素の
定量を行なうことができ、免疫抗体の検出、ＤＮＡプロ
−ブ等の生化学的な探査法等として利用することができ
る。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、化学発光法を利用した
オキシダーゼ酵素の定量方法に関する。
オキシダーゼ酵素の定量方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】発光を利用した定量分析法としては、化
学発光を利用した方法と生物発光を利用した方法とがあ
り、いずれも高感度な超微量定量分析法として利用され
ている。 前記化学発光を利用した定量方法としては、
ルミノールを発光体として、グルコ−スオキシダ−ゼに
よるグルコ−スの定量方法〔Ａｎａｌ，Ｃｈｅｍ．，４
７，４４７（１９７５）〕、アクリニジウムエステル誘
導体を発光体として抗体を定量する方法（特開昭６３−
１１２５６４号公報）、ジオキセタン誘導体を発光体と
して、アルカリホスフォダ−ゼを定量する方法（特開平
２−６９５９０号公報）等が提案されている。
学発光を利用した方法と生物発光を利用した方法とがあ
り、いずれも高感度な超微量定量分析法として利用され
ている。 前記化学発光を利用した定量方法としては、
ルミノールを発光体として、グルコ−スオキシダ−ゼに
よるグルコ−スの定量方法〔Ａｎａｌ，Ｃｈｅｍ．，４
７，４４７（１９７５）〕、アクリニジウムエステル誘
導体を発光体として抗体を定量する方法（特開昭６３−
１１２５６４号公報）、ジオキセタン誘導体を発光体と
して、アルカリホスフォダ−ゼを定量する方法（特開平
２−６９５９０号公報）等が提案されている。
【０００３】また生物発光を利用した定量方法として
は、ホタルの発光酵素ルシフェリン−ルシフェラーゼを
発光体としたＡＴＰの測定〔Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．，１４，２６１，（１９６６）〕や、エクオリンに
よる細胞遊離カルシウムイオンの測定〔Ｐｈａｒｍａｃ
ｏｌ．Ｒｅｖ．，２８，１（１９７６）〕等が知られて
いる。
は、ホタルの発光酵素ルシフェリン−ルシフェラーゼを
発光体としたＡＴＰの測定〔Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．，１４，２６１，（１９６６）〕や、エクオリンに
よる細胞遊離カルシウムイオンの測定〔Ｐｈａｒｍａｃ
ｏｌ．Ｒｅｖ．，２８，１（１９７６）〕等が知られて
いる。
【０００４】しかしながら、前記ルミノールを用いる方
法やアクリジウムエステル誘導体を用いる方法において
は、発光に際して用いる酸化剤による試料の分解や、酸
化剤自体の分解によって正確な測定ができないという欠
点があり、また発光させるにあたってアルカリを使用す
る必要があるため酵素が短時間で失活するという問題が
ある。またジオキセタン誘導体を用いる方法において
は、水系における発光が著しく低く、界面活性剤や蛍光
剤の添加が必要なため操作が煩雑になるという問題があ
る。更に生物発光を利用した定量方法は、化学発光に比
べると使用する酵素の入手が困難であり、また免疫測定
法に利用した場合には酵素が失活するなどという問題が
あり、簡便、且つ高精度な発光体を利用した定量方法は
未だ報告されていない。
法やアクリジウムエステル誘導体を用いる方法において
は、発光に際して用いる酸化剤による試料の分解や、酸
化剤自体の分解によって正確な測定ができないという欠
点があり、また発光させるにあたってアルカリを使用す
る必要があるため酵素が短時間で失活するという問題が
ある。またジオキセタン誘導体を用いる方法において
は、水系における発光が著しく低く、界面活性剤や蛍光
剤の添加が必要なため操作が煩雑になるという問題があ
る。更に生物発光を利用した定量方法は、化学発光に比
べると使用する酵素の入手が困難であり、また免疫測定
法に利用した場合には酵素が失活するなどという問題が
あり、簡便、且つ高精度な発光体を利用した定量方法は
未だ報告されていない。
【０００５】また発光を利用したオキシダ−ゼ酵素の定
量方法は、未だ報告されていないのが現状である。
量方法は、未だ報告されていないのが現状である。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】従って本発明の目的
は、高感度、高精度に、簡便かつ温和な条件下で、オキ
シダ−ゼ酵素の微量定量をすることができる、オキシダ
−ゼ酵素の定量方法を提供することにある。
は、高感度、高精度に、簡便かつ温和な条件下で、オキ
シダ−ゼ酵素の微量定量をすることができる、オキシダ
−ゼ酵素の定量方法を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明によれば、化学発
光法によってオキシダーゼ酵素を定量する方法であっ
て、該定量方法がオキシダーゼ酵素に基質を反応させ、
次いで発光試薬として下記一般式化１若しくは下記一般
式化２で表わされるウミホタルルシフェリン誘導体を反
応させることを特徴とするオキシダーゼ酵素の定量方法
が提供される。
光法によってオキシダーゼ酵素を定量する方法であっ
て、該定量方法がオキシダーゼ酵素に基質を反応させ、
次いで発光試薬として下記一般式化１若しくは下記一般
式化２で表わされるウミホタルルシフェリン誘導体を反
応させることを特徴とするオキシダーゼ酵素の定量方法
が提供される。
【０００８】
【化３】
【０００９】
【化４】
【００１０】以下本発明を更に詳細に説明する。
【００１１】本発明のオキシダーゼ酵素の定量方法で
は、先ず定量の対象であるオキシダーゼ酵素に基質を反
応させる。
は、先ず定量の対象であるオキシダーゼ酵素に基質を反
応させる。
【００１２】前記定量の対象となるオキシダーゼ酵素と
しては、具体的には例えば、クロロペルオキシダーゼ、
ラクトペルオキシダーゼ、ミエロペルオキシダーゼ、西
洋ワサビペルオキシダーゼ、マイクロペルオキシダー
ゼ、ペルオキシダーゼ、ＮＡＤＰＨオキシダーゼ、ＮＡ
ＤＨオキシダーゼ、キサンチンオキシダーゼ、アルデヒ
ドオキシダーゼ、ジアミンオキシダーゼ、ＮＡＤＰＨ−
シトクロムＰ４５０還元酵素、ＮＡＤＨ−シトクロムＰ
４５０還元酵素、ジヒドロオロット酸脱水素酵素、ＮＡ
ＤＨ脱水素酵素、ＮＡＤＰＨ脱水素酵素、ジヒドロポリ
アミド還元酵素、グルタチオン還元酵素、グリコレート
オキシダーゼ、マレートオキシダーゼ、グルコースオキ
シダーゼ、ヘキソースオキシダーゼ、コレステロールオ
キシダーゼ、アリールアルコールオキシダーゼ、Ｌ−グ
ロノラクトンオキシダーゼ、ガラクトースオキシダー
ゼ、ビラノースオキシダーゼ、Ｌ−ソルボースオキシダ
ーゼ、ビリドキシン−４−オキシダーゼ、アルコールオ
キシダーゼ、Ｌ−２−ヒドロキシ酸オキシダーゼ、セカ
ンダリーアルコールオキシダーゼ、ピルベートオキシダ
ーゼ、オキサレートオキシダーゼ、グリオキシレートオ
キシダーゼ、ラトステロールオキシダーゼ、Ｄ−アスパ
ルテートオキシダーゼ、Ｌ−アミノ酸オキシダーゼ、Ｄ
−アミノ酸オキシダーゼ、アミンオキシダーゼ、Ｄ−グ
ルタメートオキシダーゼ、エタノールアミンオキシダー
ゼ、チラミンオキシダーゼ、プトレッシンオキシダー
ゼ、シクロヘキシルアミンオキシダーゼ、Ｌ−リシンオ
キシダーゼ、Ｎ−メチルアミノ酸オキシダーゼ、Ｎ−メ
チルリシンオキシダーゼ、６−ヒドロキシ−Ｌ−ニコチ
ンオキシダーゼ、６−ヒドロキシ−Ｄ−ニコチンオキシ
ダーゼ、ニトロエタンオキシダーゼ、ウレ−トオキシダ
−ゼ、ラクテ−ト−２−モノオキシゲナ−ゼ、３−ヒド
ロキシアンスラニレ−トオキシダ−ゼ、ジヒドロオロテ
−トオキシダ−ゼ等を好ましく挙げることができる。
しては、具体的には例えば、クロロペルオキシダーゼ、
ラクトペルオキシダーゼ、ミエロペルオキシダーゼ、西
洋ワサビペルオキシダーゼ、マイクロペルオキシダー
ゼ、ペルオキシダーゼ、ＮＡＤＰＨオキシダーゼ、ＮＡ
ＤＨオキシダーゼ、キサンチンオキシダーゼ、アルデヒ
ドオキシダーゼ、ジアミンオキシダーゼ、ＮＡＤＰＨ−
シトクロムＰ４５０還元酵素、ＮＡＤＨ−シトクロムＰ
４５０還元酵素、ジヒドロオロット酸脱水素酵素、ＮＡ
ＤＨ脱水素酵素、ＮＡＤＰＨ脱水素酵素、ジヒドロポリ
アミド還元酵素、グルタチオン還元酵素、グリコレート
オキシダーゼ、マレートオキシダーゼ、グルコースオキ
シダーゼ、ヘキソースオキシダーゼ、コレステロールオ
キシダーゼ、アリールアルコールオキシダーゼ、Ｌ−グ
ロノラクトンオキシダーゼ、ガラクトースオキシダー
ゼ、ビラノースオキシダーゼ、Ｌ−ソルボースオキシダ
ーゼ、ビリドキシン−４−オキシダーゼ、アルコールオ
キシダーゼ、Ｌ−２−ヒドロキシ酸オキシダーゼ、セカ
ンダリーアルコールオキシダーゼ、ピルベートオキシダ
ーゼ、オキサレートオキシダーゼ、グリオキシレートオ
キシダーゼ、ラトステロールオキシダーゼ、Ｄ−アスパ
ルテートオキシダーゼ、Ｌ−アミノ酸オキシダーゼ、Ｄ
−アミノ酸オキシダーゼ、アミンオキシダーゼ、Ｄ−グ
ルタメートオキシダーゼ、エタノールアミンオキシダー
ゼ、チラミンオキシダーゼ、プトレッシンオキシダー
ゼ、シクロヘキシルアミンオキシダーゼ、Ｌ−リシンオ
キシダーゼ、Ｎ−メチルアミノ酸オキシダーゼ、Ｎ−メ
チルリシンオキシダーゼ、６−ヒドロキシ−Ｌ−ニコチ
ンオキシダーゼ、６−ヒドロキシ−Ｄ−ニコチンオキシ
ダーゼ、ニトロエタンオキシダーゼ、ウレ−トオキシダ
−ゼ、ラクテ−ト−２−モノオキシゲナ−ゼ、３−ヒド
ロキシアンスラニレ−トオキシダ−ゼ、ジヒドロオロテ
−トオキシダ−ゼ等を好ましく挙げることができる。
【００１３】また前記酵素と反応させる基質は、定量の
対象となる酵素によって異なり、具体的には例えば、キ
サチンオキシダーゼを定量する場合にはキサンチン、ヒ
ポキサンチン等；クロロペルオキシダ−ゼ、ラクトペル
オキシダーゼ、ミエロペルオキシダーゼ等を定量する場
合には、過酸化水素、ハロゲンイオン等；グルコースオ
キシダーゼ、ラクトースオキシダーゼ等を定量する場合
には、グルコース、ガラクトース等を好ましく挙げるこ
とができる。前記基質の使用量は、測定試料中の酸素１
モルに対して、１〜１０18モルの範囲とすることが好ま
しく、１〜１０10モルの範囲とするのが特に好ましい。
前記使用量が１モル未満の場合には、反応が十分に進行
せず、１０18モルを超えても定量の精度などが向上しな
いので経済上好ましくない。
対象となる酵素によって異なり、具体的には例えば、キ
サチンオキシダーゼを定量する場合にはキサンチン、ヒ
ポキサンチン等；クロロペルオキシダ−ゼ、ラクトペル
オキシダーゼ、ミエロペルオキシダーゼ等を定量する場
合には、過酸化水素、ハロゲンイオン等；グルコースオ
キシダーゼ、ラクトースオキシダーゼ等を定量する場合
には、グルコース、ガラクトース等を好ましく挙げるこ
とができる。前記基質の使用量は、測定試料中の酸素１
モルに対して、１〜１０18モルの範囲とすることが好ま
しく、１〜１０10モルの範囲とするのが特に好ましい。
前記使用量が１モル未満の場合には、反応が十分に進行
せず、１０18モルを超えても定量の精度などが向上しな
いので経済上好ましくない。
【００１４】前記酵素に基質を反応させることにより得
られる反応物は、酵素と基質との種類により異なるが、
例えばキサンチンオキシダーゼと、キサンチン又はヒポ
キサンチンとを反応させた系においてはスーパーオキシ
ドアニオン、またクロロペルオキシダーゼ、ラクトペル
オキシダーゼ又はミエロペルオキシダーゼと、過酸化水
素又はハロゲンイオンの系においては一重項酸素、さら
にグルコースオキシダーゼ又はガラクトースオキシダー
ゼと、グルコース又はガラクトースとの系においては過
酸化水素等が産生する。
られる反応物は、酵素と基質との種類により異なるが、
例えばキサンチンオキシダーゼと、キサンチン又はヒポ
キサンチンとを反応させた系においてはスーパーオキシ
ドアニオン、またクロロペルオキシダーゼ、ラクトペル
オキシダーゼ又はミエロペルオキシダーゼと、過酸化水
素又はハロゲンイオンの系においては一重項酸素、さら
にグルコースオキシダーゼ又はガラクトースオキシダー
ゼと、グルコース又はガラクトースとの系においては過
酸化水素等が産生する。
【００１５】本発明においては、次いで、前記ス−パ−
オキシドアニオン、１重項酸素、過酸化水素等の反応物
に、特定のウミホタルルシフェリン誘導体を反応させ
て、この際発生する光を測定することにより、オキシダ
−ゼ酵素を定量する。前記特定のウミホタルルシフェリ
ン誘導体は、前記反応物と反応して発光する成分であ
り、前記一般式化３若しくは化４で表わされるウミホタ
ルルシフェリン１である。この際、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4
又はＲ5の炭素数が２０を超える場合またはｎ1が４以上
の場合には、製造が困難である。前記Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、
Ｒ4及びＲ5としては、具体的には例えば、水素原子、メ
チル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉ−プロピル基、
ｎ−ブチル基、ｉ−ブチル基、グアニジノエチル基、グ
アニジノプロピル基、グアニジノブチル基、グアニジノ
ペンチル基、グアニジノヘキシル基、グアニジノヘプチ
ル基、ビニル基、１−プロペニル基、２−プロペニル
基、エチニル基、１−プロピニル基、２−プロピニル
基、フェニル基、ヒドロキシフェニル基、メトキシフェ
ニル基、ジメチルアミノフェニル基、ジメトキシフェニ
ル基、トリメトキシフェニル基、ナフチル基、アントラ
ニル基、フェナントリル基、インドリル基、ベンジル
基、フェネチル基、ヒドロキシベンジル基等を好ましく
挙げることができる。
オキシドアニオン、１重項酸素、過酸化水素等の反応物
に、特定のウミホタルルシフェリン誘導体を反応させ
て、この際発生する光を測定することにより、オキシダ
−ゼ酵素を定量する。前記特定のウミホタルルシフェリ
ン誘導体は、前記反応物と反応して発光する成分であ
り、前記一般式化３若しくは化４で表わされるウミホタ
ルルシフェリン１である。この際、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4
又はＲ5の炭素数が２０を超える場合またはｎ1が４以上
の場合には、製造が困難である。前記Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、
Ｒ4及びＲ5としては、具体的には例えば、水素原子、メ
チル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉ−プロピル基、
ｎ−ブチル基、ｉ−ブチル基、グアニジノエチル基、グ
アニジノプロピル基、グアニジノブチル基、グアニジノ
ペンチル基、グアニジノヘキシル基、グアニジノヘプチ
ル基、ビニル基、１−プロペニル基、２−プロペニル
基、エチニル基、１−プロピニル基、２−プロピニル
基、フェニル基、ヒドロキシフェニル基、メトキシフェ
ニル基、ジメチルアミノフェニル基、ジメトキシフェニ
ル基、トリメトキシフェニル基、ナフチル基、アントラ
ニル基、フェナントリル基、インドリル基、ベンジル
基、フェネチル基、ヒドロキシベンジル基等を好ましく
挙げることができる。
【００１６】前記ウミホタルルシフェリン１としては、
具体的には例えば、３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２
−ａ］ピラジン−３−オン、６−（３−インドリル）−
８−（４−ヒドロキシフェニル）−３，７−ジヒドロイ
ミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、２−フェニ
ル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン
−３−オン、６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ
［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、２，６−ジフェニ
ル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン
−３−オン、２，６，８−トリフェニル−３，７−ジヒ
ドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、２−
メチル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラ
ジン−３−オン、２，６−ジメチル−３，７−ジヒドロ
イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、２−メチ
ル−６−（２−ヒドロキシフェニル）−３，７−ジヒド
ロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、２−メ
チル−６−（４−ヒドロキシフェニル）−３，７−ジヒ
ドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、２−
メチル−６−（２−メトキシフェニル）−３，７−ジヒ
ドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、２−
メチル−６−（３−メトキシフェニル）−３，７−ジヒ
ドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、２−
メチル−６−（４−メトキシフェニル）−３，７−ジヒ
ドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、２−
メチル−６−（２，４−ジメトキシフェニル）−３，７
−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オ
ン、２−メチル−６−（２，４，６−トリメトキシフェ
ニル）−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラ
ジン−３−オン、２−メチル−６−（３，４，５−トリ
メトキシフェニル）−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，
２−ａ］ピラジン−３−オン、２−メチル−６−（４−
エトキシフェニル）−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，
２−ａ］ピラジン−３−オン、２−メチル−６−（４−
ｎ−プロポキシフェニル）−３，７−ジヒドロイミダゾ
［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、２−メチル−６−
（４−ｎ−ブトキシフェニル）−３，７−ジヒドロイミ
ダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、２−メチル−
６−（２−ナフチル）−３，７−ジヒドロイミダゾ
［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、２−メチル−６−
（３−インドリル）−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，
２−ａ］ピラジン−３−オン、２，８−ジメチル−６−
フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピ
ラジン−３−オン、２，８−ジメチル−６−（４−ヒド
ロキシフェニル）−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２
−ａ］ピラジン−３−オン、２，８−ジメチル−６−
（３，４，５−トリメトキシフェニル）−３，７−ジヒ
ドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、８−
ベンジル−２−メチル−６−フェニル−３，７−ジヒド
ロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、８−ベ
ンジル−２−メチル−６−（４−ヒドロキシフェニル）
−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−
３−オン、８−ベンジル−２−メチル−６−（４−メト
キシフェニル）−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−
ａ］ピラジン−３−オン、６−（３−インドリル）−８
−（４−ヒドロキシフェニル）−２−メチル−３，７−
ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、
２−イソプロピル−８−メチル−６−フェニル−３，７
−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オ
ン、２−イソプロピル−８−ベンジル−６−（４−ヒド
ロキシフェニル）−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２
−ａ］ピラジン−３−オン、２−イソブチル−６−フェ
ニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジ
ン−３−オン、２−イソブチル−６−（３−インドリ
ル）−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジ
ン−３−オン、２−イソブチル−６−（３−インドリ
ル）−８−（１−グアニジノエチル）−３，７−ジヒド
ロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、２−イ
ソブチル−６−（３−インドリル）−８−（１−グアニ
ジノプロピル）−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−
ａ］ピラジン−３−オン、２−イソブチル−６−（３−
インドリル）−８−（１−グアニジノブチル）−３，７
−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オ
ン、２−イソブチル−６−（３−インドリル）−８−
（１−グアニジノペンチル）−３，７−ジヒドロイミダ
ゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、２−イソブチル
−６−（３−インドリル）−８−（１−グアニジノヘキ
シル）−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラ
ジン−３−オン、２−イソブチル−６−（３−インドリ
ル）−８−（１−グアニジノヘプチル）−３，７−ジヒ
ドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、２−
イソブチル−６−（３−インドリル）−８−（１−アミ
ノプロピル）−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−
ａ］ピラジン−３−オン、２−イソブチル−６−フェニ
ル−８−（１−グアニジノプロピル）−３，７−ジヒド
ロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、２−
（４−ヒドロキシベンジル）−６−（４−ヒドロキシフ
ェニル）−８−ベンジル−３，７−ジヒドロイミダゾ
［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、２−（４−ヒドロ
キシベンジル）−６−（４−メトキシフェニル）−８−
ベンジル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピ
ラジン−３−オン、２−（４−ヒドロキシベンジル）−
６−（４−ジメチルアミノフェニル）−８−ベンジル−
３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３
−オン、２−（４−ヒドロキシベンジル）−６−（４−
ヒドロキシフェニル）−８−(α−ヒドロキシベンジ
ル）−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジ
ン−３−オン、２−（４−ヒドロキシベンジル）−５−
（１−ヒドロキシエチル）−６−(４−ヒドロキシフェ
ニル）−８−ベンジル−３，７−ジヒドロイミダゾ
［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、下記構造式化５、
化６、化７、化８で表わされる化合物等を好ましく挙げ
ることができる。
具体的には例えば、３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２
−ａ］ピラジン−３−オン、６−（３−インドリル）−
８−（４−ヒドロキシフェニル）−３，７−ジヒドロイ
ミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、２−フェニ
ル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン
−３−オン、６−フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ
［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、２，６−ジフェニ
ル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン
−３−オン、２，６，８−トリフェニル−３，７−ジヒ
ドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、２−
メチル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラ
ジン−３−オン、２，６−ジメチル−３，７−ジヒドロ
イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、２−メチ
ル−６−（２−ヒドロキシフェニル）−３，７−ジヒド
ロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、２−メ
チル−６−（４−ヒドロキシフェニル）−３，７−ジヒ
ドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、２−
メチル−６−（２−メトキシフェニル）−３，７−ジヒ
ドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、２−
メチル−６−（３−メトキシフェニル）−３，７−ジヒ
ドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、２−
メチル−６−（４−メトキシフェニル）−３，７−ジヒ
ドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、２−
メチル−６−（２，４−ジメトキシフェニル）−３，７
−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オ
ン、２−メチル−６−（２，４，６−トリメトキシフェ
ニル）−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラ
ジン−３−オン、２−メチル−６−（３，４，５−トリ
メトキシフェニル）−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，
２−ａ］ピラジン−３−オン、２−メチル−６−（４−
エトキシフェニル）−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，
２−ａ］ピラジン−３−オン、２−メチル−６−（４−
ｎ−プロポキシフェニル）−３，７−ジヒドロイミダゾ
［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、２−メチル−６−
（４−ｎ−ブトキシフェニル）−３，７−ジヒドロイミ
ダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、２−メチル−
６−（２−ナフチル）−３，７−ジヒドロイミダゾ
［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、２−メチル−６−
（３−インドリル）−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，
２−ａ］ピラジン−３−オン、２，８−ジメチル−６−
フェニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピ
ラジン−３−オン、２，８−ジメチル−６−（４−ヒド
ロキシフェニル）−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２
−ａ］ピラジン−３−オン、２，８−ジメチル−６−
（３，４，５−トリメトキシフェニル）−３，７−ジヒ
ドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、８−
ベンジル−２−メチル−６−フェニル−３，７−ジヒド
ロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、８−ベ
ンジル−２−メチル−６−（４−ヒドロキシフェニル）
−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−
３−オン、８−ベンジル−２−メチル−６−（４−メト
キシフェニル）−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−
ａ］ピラジン−３−オン、６−（３−インドリル）−８
−（４−ヒドロキシフェニル）−２−メチル−３，７−
ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、
２−イソプロピル−８−メチル−６−フェニル−３，７
−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オ
ン、２−イソプロピル−８−ベンジル−６−（４−ヒド
ロキシフェニル）−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２
−ａ］ピラジン−３−オン、２−イソブチル−６−フェ
ニル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジ
ン−３−オン、２−イソブチル−６−（３−インドリ
ル）−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジ
ン−３−オン、２−イソブチル−６−（３−インドリ
ル）−８−（１−グアニジノエチル）−３，７−ジヒド
ロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、２−イ
ソブチル−６−（３−インドリル）−８−（１−グアニ
ジノプロピル）−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−
ａ］ピラジン−３−オン、２−イソブチル−６−（３−
インドリル）−８−（１−グアニジノブチル）−３，７
−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オ
ン、２−イソブチル−６−（３−インドリル）−８−
（１−グアニジノペンチル）−３，７−ジヒドロイミダ
ゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、２−イソブチル
−６−（３−インドリル）−８−（１−グアニジノヘキ
シル）−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラ
ジン−３−オン、２−イソブチル−６−（３−インドリ
ル）−８−（１−グアニジノヘプチル）−３，７−ジヒ
ドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、２−
イソブチル−６−（３−インドリル）−８−（１−アミ
ノプロピル）−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−
ａ］ピラジン−３−オン、２−イソブチル−６−フェニ
ル−８−（１−グアニジノプロピル）−３，７−ジヒド
ロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、２−
（４−ヒドロキシベンジル）−６−（４−ヒドロキシフ
ェニル）−８−ベンジル−３，７−ジヒドロイミダゾ
［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、２−（４−ヒドロ
キシベンジル）−６−（４−メトキシフェニル）−８−
ベンジル−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピ
ラジン−３−オン、２−（４−ヒドロキシベンジル）−
６−（４−ジメチルアミノフェニル）−８−ベンジル−
３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３
−オン、２−（４−ヒドロキシベンジル）−６−（４−
ヒドロキシフェニル）−８−(α−ヒドロキシベンジ
ル）−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジ
ン−３−オン、２−（４−ヒドロキシベンジル）−５−
（１−ヒドロキシエチル）−６−(４−ヒドロキシフェ
ニル）−８−ベンジル−３，７−ジヒドロイミダゾ
［１，２−ａ］ピラジン−３−オン、下記構造式化５、
化６、化７、化８で表わされる化合物等を好ましく挙げ
ることができる。
【００１７】
【化５】
【００１８】
【化６】
【００１９】
【化７】
【００２０】
【化８】
【００２１】前記ウミホタルルシフェリン１の使用量
は、測定試料中に存在するオキシダ−ゼ酵素１モルに対
して、好ましくは１〜１０18モルの範囲、特に好ましく
は１〜１０10モルの範囲、更には１０2〜１０13モルの
範囲が好ましい。前記範囲外の場合には、発光量が著し
く低下するので好ましくない。
は、測定試料中に存在するオキシダ−ゼ酵素１モルに対
して、好ましくは１〜１０18モルの範囲、特に好ましく
は１〜１０10モルの範囲、更には１０2〜１０13モルの
範囲が好ましい。前記範囲外の場合には、発光量が著し
く低下するので好ましくない。
【００２２】本発明の定量方法を行なうには、前記オキ
シダ−ゼ酵素と基質とを反応させ、次いで該反応により
得られる反応物と、前記ウミホタルルシフェリン１との
反応による発光を、公知の化学発光測定装置「光量子計
数器（フォトンカウンター）」を用いて、発光スペクト
ルを測定することにより容易に定量することができる。
シダ−ゼ酵素と基質とを反応させ、次いで該反応により
得られる反応物と、前記ウミホタルルシフェリン１との
反応による発光を、公知の化学発光測定装置「光量子計
数器（フォトンカウンター）」を用いて、発光スペクト
ルを測定することにより容易に定量することができる。
【００２３】前記測定を行なう際のｐＨは、一般にｐＨ
４．０〜１０の範囲が好ましく、更に定量するオキシダ
−ゼ酸素によって最適のｐＨに調節して測定を行なうの
が好ましい。例えばキサンチンオキシダーゼにおいては
ｐＨ７〜９、ラクトペルオキシダーゼ、ペルオキシダー
ゼにおいてはｐＨ５〜７、ミエロペルオキシダーゼにお
いてはｐＨ６〜８で測定を行うことが好ましい。前記ｐ
Ｈの調整は、公知の中性から酸性の溶液または緩衝溶液
等により行なうことができる。前記溶液または緩衝溶液
としては、例えば塩酸、炭酸、酢酸、リン酸、ホウ酸水
溶液、酢酸ナトリウム緩衝液、トリスヒドロキシアミノ
メタン緩衝液、コハク酸緩衝液、２−ヒドロキシ−１，
２，３−プロパントリカルボン酸緩衝液、モノフタル酸
カリウム緩衝液、２−（Ｎ−モルノホリノ）エタンスル
ホン酸緩衝液、リン酸ナトリウム緩衝液、リン酸カリウ
ム緩衝液、炭酸水素ナトリウム緩衝液、イミダゾール緩
衝液等を挙げることができ、使用に際しては単独若しく
は混合物として用いることができる。
４．０〜１０の範囲が好ましく、更に定量するオキシダ
−ゼ酸素によって最適のｐＨに調節して測定を行なうの
が好ましい。例えばキサンチンオキシダーゼにおいては
ｐＨ７〜９、ラクトペルオキシダーゼ、ペルオキシダー
ゼにおいてはｐＨ５〜７、ミエロペルオキシダーゼにお
いてはｐＨ６〜８で測定を行うことが好ましい。前記ｐ
Ｈの調整は、公知の中性から酸性の溶液または緩衝溶液
等により行なうことができる。前記溶液または緩衝溶液
としては、例えば塩酸、炭酸、酢酸、リン酸、ホウ酸水
溶液、酢酸ナトリウム緩衝液、トリスヒドロキシアミノ
メタン緩衝液、コハク酸緩衝液、２−ヒドロキシ−１，
２，３−プロパントリカルボン酸緩衝液、モノフタル酸
カリウム緩衝液、２−（Ｎ−モルノホリノ）エタンスル
ホン酸緩衝液、リン酸ナトリウム緩衝液、リン酸カリウ
ム緩衝液、炭酸水素ナトリウム緩衝液、イミダゾール緩
衝液等を挙げることができ、使用に際しては単独若しく
は混合物として用いることができる。
【００２４】また測定温度は一般に０〜５０℃の範囲で
あることが望ましく。特に１５〜４０℃の範囲であるこ
とが望ましい。前記温度範囲以外では、測定が困難とな
るので好ましくない。また測定時間は、酵素に対して多
量の基質を用いるので酵素が失活するまで継続して測定
を行なうことができ、測定誤差を最小限に押さえること
ができる。
あることが望ましく。特に１５〜４０℃の範囲であるこ
とが望ましい。前記温度範囲以外では、測定が困難とな
るので好ましくない。また測定時間は、酵素に対して多
量の基質を用いるので酵素が失活するまで継続して測定
を行なうことができ、測定誤差を最小限に押さえること
ができる。
【００２５】
【発明の効果】本発明のオキシダーゼ酵素の定量方法
は、オキシダーゼ酵素と基質とを反応させて得られる反
応物と、ウミホタルルシフェリン誘導体とを反応させる
ので、オキシダーゼ酵素が失活する迄、前記反応物が連
続的に産生され、発光の増幅が生じる。このため、簡便
且つ温和な条件下にて、高感度且つ高精度にオキシダ−
ゼ酵素の定量を行なうことができ、免疫抗体の検出、Ｄ
ＮＡプロ−ブ等の生化学的な探査法等として利用するこ
とができる。
は、オキシダーゼ酵素と基質とを反応させて得られる反
応物と、ウミホタルルシフェリン誘導体とを反応させる
ので、オキシダーゼ酵素が失活する迄、前記反応物が連
続的に産生され、発光の増幅が生じる。このため、簡便
且つ温和な条件下にて、高感度且つ高精度にオキシダ−
ゼ酵素の定量を行なうことができ、免疫抗体の検出、Ｄ
ＮＡプロ−ブ等の生化学的な探査法等として利用するこ
とができる。
【００２６】
【実施例】以下本発明を実施例により更に詳しく説明す
るが本発明はこれらに限定されるものではない。
るが本発明はこれらに限定されるものではない。
【００２７】
【実施例１】０．２Ｍのリン酸バッファー（ｐＨ７．
６）中に溶解させたキサンチン（２００ｎｍｏｌ／ｍ
ｌ）８９０μｌと、下記一般式化９で表わされる２−メ
チル−６−（４−メトキシフェニル）−３，７−ジヒド
ロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オンの（１０
０ｎｍｏｌ／ｍｌ）水溶液１００μｌの混合溶液に、予
め表１に示す濃度に調製したキサンチンオキシダーゼ水
溶液１０μｌを添加し、測定試料を夫々調製した。次い
で夫々の測定試料について、商品名アロカルミネッセン
スリーダー「ＢＬＲ−２０１」（アロカ（株）製）を用
いて、２５℃の温度で発光強度を測定した。また発光測
定時間は１０分に設定した。結果を表１に、またキサン
チンオキシダーゼの濃度と発光強度との関係を図１に示
す。表１および図１の結果から明らかなように、本発明
の定量方法は極微量の酵素を定量できることが判る。
６）中に溶解させたキサンチン（２００ｎｍｏｌ／ｍ
ｌ）８９０μｌと、下記一般式化９で表わされる２−メ
チル−６−（４−メトキシフェニル）−３，７−ジヒド
ロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オンの（１０
０ｎｍｏｌ／ｍｌ）水溶液１００μｌの混合溶液に、予
め表１に示す濃度に調製したキサンチンオキシダーゼ水
溶液１０μｌを添加し、測定試料を夫々調製した。次い
で夫々の測定試料について、商品名アロカルミネッセン
スリーダー「ＢＬＲ−２０１」（アロカ（株）製）を用
いて、２５℃の温度で発光強度を測定した。また発光測
定時間は１０分に設定した。結果を表１に、またキサン
チンオキシダーゼの濃度と発光強度との関係を図１に示
す。表１および図１の結果から明らかなように、本発明
の定量方法は極微量の酵素を定量できることが判る。
【００２８】
【化９】
【００２９】
【表１】
【００３０】
【実施例２】２−メチル−６−（４−メトキシフェニ
ル）−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジ
ン−３−オンの（１００ｎｍｏｌ／ｍｌ）水溶液を２−
メチル−６−（２，４−ジメトキシフェニル）−３，７
−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オン
の（１００ｎｍｏｌ／ｍｌ）水溶液にした以外は、実施
例１と同様にして発光の測定を行った。結果を表２に、
またキサンチンオキシダーゼの濃度と発光強度との関係
を図２に示す。
ル）−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジ
ン−３−オンの（１００ｎｍｏｌ／ｍｌ）水溶液を２−
メチル−６−（２，４−ジメトキシフェニル）−３，７
−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−オン
の（１００ｎｍｏｌ／ｍｌ）水溶液にした以外は、実施
例１と同様にして発光の測定を行った。結果を表２に、
またキサンチンオキシダーゼの濃度と発光強度との関係
を図２に示す。
【００３１】
【表２】
【００３２】
【実施例３】２−メチル−６−（４−メトキシフェニ
ル）−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジ
ン−３−オンの（１００ｎｍｏｌ／ｍｌ）水溶液を下記
一般式化１０で示されるウミホタルルシフェリン誘導体
の（１００ｎｍｏｌ／ｍｌ）水溶液を用いた以外は実施
例１と同様にして発光の測定を行った。結果を表３に、
またキサンチンオキシダーゼの濃度と発光強度の関係を
図３に示す。
ル）−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジ
ン−３−オンの（１００ｎｍｏｌ／ｍｌ）水溶液を下記
一般式化１０で示されるウミホタルルシフェリン誘導体
の（１００ｎｍｏｌ／ｍｌ）水溶液を用いた以外は実施
例１と同様にして発光の測定を行った。結果を表３に、
またキサンチンオキシダーゼの濃度と発光強度の関係を
図３に示す。
【００３３】
【化１０】
【００３４】
【表３】
【００３５】
【実施例４】０．２Ｍのリン酸バッファー（ｐＨ７．
０）８８０μｌと、２−メチル−６−（４−メトキシフ
ェニル）−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピ
ラジン−３−オンの（１μｍｏｌ／ｍｌ）水溶液１００
μｌと、過酸化水素水溶液（２０μｍｏｌ／ｍｌ）１０
μｌとの混合溶液に、予め表４に示す濃度に調製したの
マイクロペルオキシダーゼ水溶液１０μｌを添加し、実
施例１と同様に発光の測定を行った。結果を表４に、ま
たマイクロペルオキシダーゼの濃度と発光強度との関係
を図４に示す。
０）８８０μｌと、２−メチル−６−（４−メトキシフ
ェニル）−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピ
ラジン−３−オンの（１μｍｏｌ／ｍｌ）水溶液１００
μｌと、過酸化水素水溶液（２０μｍｏｌ／ｍｌ）１０
μｌとの混合溶液に、予め表４に示す濃度に調製したの
マイクロペルオキシダーゼ水溶液１０μｌを添加し、実
施例１と同様に発光の測定を行った。結果を表４に、ま
たマイクロペルオキシダーゼの濃度と発光強度との関係
を図４に示す。
【００３６】
【表４】
【００３７】
【実施例５】０．２Ｍのリン酸バッファー（ｐＨ７．
０）８８０μｌと、２−メチル−６−（４−メトキシフ
ェニル）−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピ
ラジン−３−オンの（１００ｎｍｏｌ／ｍｌ）水溶液１
００μｌと、過酸化水素水溶液（２０μｍｏｌ／ｍｌ）
１０μｌとの混合溶液に、予め表５に示す濃度に調製し
た西洋ワサビペルオキシダーゼ水溶液１０μｌを添加
し、実施例１と同様に発光の測定を行った。結果を表５
に、また西洋ワサビペルオキシダーゼの濃度と発光強度
との関係を図５に示す。
０）８８０μｌと、２−メチル−６−（４−メトキシフ
ェニル）−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピ
ラジン−３−オンの（１００ｎｍｏｌ／ｍｌ）水溶液１
００μｌと、過酸化水素水溶液（２０μｍｏｌ／ｍｌ）
１０μｌとの混合溶液に、予め表５に示す濃度に調製し
た西洋ワサビペルオキシダーゼ水溶液１０μｌを添加
し、実施例１と同様に発光の測定を行った。結果を表５
に、また西洋ワサビペルオキシダーゼの濃度と発光強度
との関係を図５に示す。
【００３８】
【表５】
【００３９】
【比較例１】０．１Ｍクエン酸−リン酸バッファー（ｐ
Ｈ５．０）２５０μｌと、０．３重量％濃度の過酸化水
素を含む１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液６５０μｌの混合
溶液に、表６に示す各種濃度に調製したアクリジン［４
−（２−スクシンイミジロキシカルボニルエチル）フェ
ニル−１０−メチルアクリジニウム−９−カルボキシレ
ート］の０．１Ｍクエン酸−リン酸バッファー（ｐＨ
５．０）溶液１００μｌを添加し、実施例１と同様に発
光の測定を行った。この場合の発光は１分間で終了し
た。その結果を表６に、またアクリジンの濃度と発光強
度との関係を図６に示す。この結果より、同一濃度での
発光量はウミホタルルシフェリン誘導体を用いた方が高
いことが判る。
Ｈ５．０）２５０μｌと、０．３重量％濃度の過酸化水
素を含む１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液６５０μｌの混合
溶液に、表６に示す各種濃度に調製したアクリジン［４
−（２−スクシンイミジロキシカルボニルエチル）フェ
ニル−１０−メチルアクリジニウム−９−カルボキシレ
ート］の０．１Ｍクエン酸−リン酸バッファー（ｐＨ
５．０）溶液１００μｌを添加し、実施例１と同様に発
光の測定を行った。この場合の発光は１分間で終了し
た。その結果を表６に、またアクリジンの濃度と発光強
度との関係を図６に示す。この結果より、同一濃度での
発光量はウミホタルルシフェリン誘導体を用いた方が高
いことが判る。
【００４０】
【表６】
【００４１】
【実施例６】０．２Ｍのリン酸バッファー（ｐＨ７．
６）中にキサンチン（２００ｎｍｏｌ／ｍｌ）を溶解し
た溶液８９０μｌと、キサンチンオキシダーゼ水溶液
（４９５ｐｍｏｌ／ｍｌ）１０μｌの混合溶液に、表７
に示す濃度に調製した２−メチル−６−（４−メトキシ
フェニル）−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］
ピラジン−３−オンの水溶液１００μｌを添加し、実施
例１と同様に発光の測定を行った。その結果を表７に示
す。この結果によりキサンチンオキシダーゼ（酵素）に
対し、２−メチル−６−（４−メトキシフェニル）−
３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３
−オン（発光体）の最適濃度があることが判る。
６）中にキサンチン（２００ｎｍｏｌ／ｍｌ）を溶解し
た溶液８９０μｌと、キサンチンオキシダーゼ水溶液
（４９５ｐｍｏｌ／ｍｌ）１０μｌの混合溶液に、表７
に示す濃度に調製した２−メチル−６−（４−メトキシ
フェニル）−３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］
ピラジン−３−オンの水溶液１００μｌを添加し、実施
例１と同様に発光の測定を行った。その結果を表７に示
す。この結果によりキサンチンオキシダーゼ（酵素）に
対し、２−メチル−６−（４−メトキシフェニル）−
３，７−ジヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３
−オン（発光体）の最適濃度があることが判る。
【００４２】
【表７】
【図１】実施例１におけるキサンチンオキシダーゼ濃度
と発光強度との関係を示すグラフである。
と発光強度との関係を示すグラフである。
【図２】実施例２におけるキサンチンオキシダーゼ濃度
と発光強度との関係を示すグラフである。
と発光強度との関係を示すグラフである。
【図３】実施例３におけるキサンチンオキシダーゼ濃度
と発光強度との関係を示すグラフである。
と発光強度との関係を示すグラフである。
【図４】実施例４におけるマイクロペルオキシダーゼ濃
度と発光強度との関係を示すグラフである。
度と発光強度との関係を示すグラフである。
【図５】実施例５における西洋ワサビペルオキシダーゼ
濃度と発光強度との関係を示すグラフである。
濃度と発光強度との関係を示すグラフである。
【図６】比較例１におけるアクリジン濃度と発光強度と
の関係を示すグラフである。
の関係を示すグラフである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 【請求項１】 化学発光法によってオキシダーゼ酵素を
定量する方法であって、該定量方法がオキシダーゼ酵素
に基質を反応させ、次いで発光試薬として下記一般式化
１若しくは下記一般式化２で表わされるウミホタルルシ
フェリン誘導体を反応させることを特徴とするオキシダ
ーゼ酵素の定量方法。 【化１】 【化２】
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17402091A JPH0515398A (ja) | 1991-07-15 | 1991-07-15 | オキシダーゼ酵素の定量方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17402091A JPH0515398A (ja) | 1991-07-15 | 1991-07-15 | オキシダーゼ酵素の定量方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0515398A true JPH0515398A (ja) | 1993-01-26 |
Family
ID=15971240
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP17402091A Pending JPH0515398A (ja) | 1991-07-15 | 1991-07-15 | オキシダーゼ酵素の定量方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0515398A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2016145219A (ja) * | 2010-11-02 | 2016-08-12 | プロメガ コーポレイションＰｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ | 新規セレンテラジン基質及び使用法 |
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1991
- 1991-07-15 JP JP17402091A patent/JPH0515398A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2016145219A (ja) * | 2010-11-02 | 2016-08-12 | プロメガ コーポレイションＰｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ | 新規セレンテラジン基質及び使用法 |
| US9938564B2 (en) | 2010-11-02 | 2018-04-10 | Promega Corporation | Substituted imidazo[1,2-a]pyrazines for use in bioluminogenic methods |
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