KR102329836B1 - 암 면역치료를 위한 항-CLL1 특이적 단일-체인 키메라 항원 수용체들(scCARS) - Google Patents

암 면역치료를 위한 항-CLL1 특이적 단일-체인 키메라 항원 수용체들(scCARS) Download PDF

Info

Publication number
KR102329836B1
KR102329836B1 KR1020177021615A KR20177021615A KR102329836B1 KR 102329836 B1 KR102329836 B1 KR 102329836B1 KR 1020177021615 A KR1020177021615 A KR 1020177021615A KR 20177021615 A KR20177021615 A KR 20177021615A KR 102329836 B1 KR102329836 B1 KR 102329836B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
epitope
seq
cll1
cells
delete delete
Prior art date
Application number
KR1020177021615A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20170135822A (ko
Inventor
줄리안 스미스
줄리안 발통
알렉산드레 줄리어릿
필리페 두차토
바브라 존슨 사수
아르빈드 라팔
Original Assignee
셀렉티스
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 셀렉티스 filed Critical 셀렉티스
Publication of KR20170135822A publication Critical patent/KR20170135822A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102329836B1 publication Critical patent/KR102329836B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001176—Heat shock proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
    • A61K39/4631—Chimeric Antigen Receptors [CAR]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70517—CD8
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70535—Fc-receptors, e.g. CD16, CD32, CD64 (CD2314/705F)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70578—NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70596—Molecules with a "CD"-designation not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2887—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD20
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3061—Blood cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/0081—Purging biological preparations of unwanted cells
    • C12N5/0093—Purging against cancer cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • C12N5/0638—Cytotoxic T lymphocytes [CTL] or lymphokine activated killer cells [LAK]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume, or surface-area of porous materials
    • G01N15/10—Investigating individual particles
    • G01N15/1031—Investigating individual particles by measuring electrical or magnetic effects thereof, e.g. conductivity or capacity
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume, or surface-area of porous materials
    • G01N15/10—Investigating individual particles
    • G01N15/14—Electro-optical investigation, e.g. flow cytometers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/515—Animal cells
    • A61K2039/5156—Animal cells expressing foreign proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/515—Animal cells
    • A61K2039/5158—Antigen-pulsed cells, e.g. T-cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/6056—Antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/64—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the architecture of the carrier-antigen complex, e.g. repetition of carrier-antigen units
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/53—Hinge
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells
    • G01N15/149—
    • G01N2015/016—
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume, or surface-area of porous materials
    • G01N15/10—Investigating individual particles
    • G01N2015/1006—Investigating individual particles for cytology
    • G01N2015/1028—

Abstract

본 발명은 CLL1 양성 세포들을 향한 반응성 및 면역 세포 특이성으로 방향전환할 수 있는 재조합 키메라 단백질들인 키메라 항원 수용체들 (CAR)에 대한 것이다. 이러한 CAR들을 지니고 있다고 여겨지는 조작된 면역 세포들은 암, 특히 백혈병의 치료를 위한 면역요법에 특히 적합하다.

Description

암 면역치료를 위한 항-CLL1 특이적 단일-체인 키메라 항원 수용체들(scCARS)
C-타입 렉틴(lectin)-유사(like) 분자(molecule)-1 (CLL1)은 정상적인 조혈 줄기 세포들 또는 다른 세포 타입들에 비하여, 가장 많은 급성(acute) 골수성(myeloid) 백혈병(leukemia) (AML) 줄기(stem) 세포들(cells) (LSC)에서 자주 과발현되는 것으로 확인되어 왔다. 본 발명은 선택된 막 항원 CLL1을 향한 반응성 및 면역 세포 특이성을 방향전환(redirect)할 수 있는 재조합 키메라 단백질들인, 키메라(Chimeric) 항원(Antigen) 수용체들(Receptors) (항 CLL1-CAR)를 이용한 CLL1 양성(positive) 악성 세포들을 타겟으로 하는 방법들에 대한 것이다. 이들 항-CLL1 CAR는 더욱 특히 몇몇 항-CLL1 단일클론 항체들으로부터 유래되는 scFV를 포함하는 세포외 리간드 결합(binding)을 포함한다. 이러한 CAR들을 갖고 있다고 생각되는 조작된 면역 세포들은 암 치료, 특히 더 높은 효율로 혈액 암들에 대한 여러가지 세포 요법들의 부분으로서 CLL1 양성 세포에 대항하여 입양 면역을 부여한다.
엑스 비보에서 생기는 항원-특이적 T 세포들의 이동을 수반하는 입양 면역요법은 바이러스 감염들 및 암을 치료하는 유망한 전략이다. 입양 면역요법에 사용되는 T 세포들은 유전자 조작을 통한 T 세포들의 방향 전환 또는 항원-특이적 T 세포들의 확장에 의하여 만들어질 수 있다 (Park, Rosenberg et al. 2011). 바이러스 항원 특이적 T 세포들의 이동은 이식 관련 바이러스 감염들 및 히귀한 바이러스-관련 악성종양들의 치료에 사용되는 잘 정립된 절차이다. 유사하게, 종양 특이적 T 세포들의 분리 및 이동은 흑색종의 치료에 성공적인 것으로 보여져 왔다.
T 세포들에서 신규한 특이성들은 이식유전자를 가진 T 세포 수용체들 또는 키메라 항원 수용체들 (scCARs)의 유전적 이동을 통하여 성공적으로 만들어져 왔다 (Jena, Dotti et al. 2010). scCAR들은 단일 융합 분자에서 하나 이상의 신호전달(signaling) 도메인들과 관련된 타겟팅 모이어티로 구성된 합성 수용체들이다. 일반적으로 scCAR의 결합 모이어티(moiety)는 단일(single)-체인(chain) 항체(antibody) (scFv)의 항원-결합 도메인으로 구성되는데, 이는 가요성(flexible) 링커(linker)에 의하여 연결된 단일클론 항체의 가벼운 그리고 가변 단편들을 포함한다. 수용체 또는 리간드 도메인들에 기반한 결합 모이어티들은 또한 성공적으로 사용되어 왔다. 일 세대 scCAR들을 위한 신호전달(signaling) 도메인들은 CD3제타(zeta) 또는 the Fc 수용체 감마 체인들의 세포질 영역으로부터 유래된다. 일 세대 scCAR들은 T 세포 세포독성을 성공적으로 방향전환하는 것으로 보여져 왔으나, 그것들은 인 비보에서 연장된 확장 및 항-종양 활성을 제공하는데는 실패하였다. CD28, OX-40 (CD134), 및 4-1BB (CD137)을 포함하는 공(co)-자극(stimulatory) 분자들로부터의 신호전달 도메인들은 scCAR 변형된 T 세포들의 증식을 증가시키고 생존을 증강시키기 위하여 (삼 세대) 조합하여 또는 단독으로 (이 세대) 첨가되어 왔다. scCAR들은 T 세포들이 림프종들 및 고형 종양들을 포함하는 여러가지 악성종양들로부터 종양 세포들의 표면에서 발현되는 항원들에 대항하여 방향전환되는 것을 성공적으로 가능하게 하였다 (Jena, Dotti et al. 2010).
그 동안, 급성 골수성 백혈병 (AML)의 유도 치료들은 거의 50 년 동안 크게 변하지 않고 남아 있으며, AML은 안 좋은 예측의 질병으로 남아 있다. AML은 골수에서 미성숙한 골수 세포들의 급격한 증식에 의하여 특징되는 질병으로, 이는 제대로 기능을 하지 않는 조혈을 야기한다. 표준 유도 화학요법이 완전한 차도를 유도할 수 있는데도 불구하고, 많은 환자들은 결국 재발하고, 질병으로 쓰러져, AML에 대한 신규 치료법의 개발이 필요하다. AML 세포들의 면역표현형에서 최근 발전들은 미래 치료들을 위한 타겟들로서 작용할 수 있는 몇몇 AML 관련 세포 표면 항원들을 드러내었다.
다른 것들 중에서, CLL1 (C-타입 렉틴-유사 분자-1)은 흥미로운 종양 항원 타겟으로 보이는데, 이는 그것이 분석되는 AML 환자들의 85-92%로부터 진단 시 백혈병 아세포들(blasts)에 의하여 발현되기 때문이다. 분자들의 그룹 V C-타입 렉틴-유사 수용체 패밀리의 75 kDa 멤버이다. 그룹 V 분자들은 비-당 리간드들에 결합하는 렉틴-유사 도메인을 갖는다. CLL1은 200 AA 세포외 도메인을 포함하는 265 아미노산 타입 II 막관통 당단백질이다 (Uniprot 데이터베이스: "엔트레즈(Entrez) 진(Gene)" 데이터베이스에서 유전자 n˚160364에 의하여 코드되는 인간 단백질에 대한 Q5QGZ9). CLL1은 또한 MICL, CLEC12 및 KLRL1로서 데이터베이스 및 문헌 상에서 참조된다.
Bakker et al, 2004는 CLL1 항원이 AML 줄기 세포들과 관련된다는 것을 보였다. (CD33과 같은) 몇몇 다른 항원들과 같이, CLL1은 정상적인 HSC 상에서 발현되지 않는 반면, 가장 많은 악성 림프성 줄기 세포들 (AML LSC) 상에서 특이적으로 발현되는 세포 표면 단백질이다 (Van Rhenen et al, 2007). 반면, CLL1은 AML에서 진단 마커로 드러났다 (Larsen et al, 2012). 항-CLL-1 항체들은 진단 및 차도 둘다에서 정상 줄기 세포들로부터 구별되는 악성 세포들로서, AML-특이적 줄기-세포 검출 및 아마 항원-타겟팅 둘다를 가능하게 한다 (van Rhenen et al, 2007). 그러나 이들 항체들 중 어느 것도 치료적 항체들로서 임상 시험들에서 테스트된 것으로 지금까지 보고되지 않았다.
단일클론 항체들은 림프종들을 치료하는데 자주 사용되어 왔으나, 백혈병들에서 그것들의 용도는 더 제한되어 왔다. 젬투주맙(Gemtuzumab) 오조가미신(ozogamicin) (Mylotarg®)은 그것에 부착된 세포 독을 갖는 단일클론 항체이다. 노인 환자들에서 AML을 치료하는 것으로 예전에 승인되었으며, 연구들이 제품과 관련된 상당한 독성들이 발견한 후, 시장에서 철수되었다 (press release of December 10, 2010 in PMLIVE "ASH: Pfizer eyes re-launch of Mylotarg"). 다른 단일클론 치료적 항체들이 지난 10 년 간 부작용들을 보여왔다 (Klastersky, J. (2006) "Adverse effects of the humanized antibodies used as cancer therapeutics" Current Opinion in Oncology. 18(4):316-320)
Zhang et al (2011)의 공개에서, CLL1-타겟팅하는 펩타이드들로 공유적으로 장식된(decorated) 미셀(micellar) 나노입자들은 타겟이 되는 약물 전달을 위하여 기재되어 왔다 (다우노루비신(daunorubicin)); 이들 "타겟팅하는 나노미셀들"은 인 비트로에서 임상 표본들로부터 분리된 LSC들 및 CLL1을 발현시키는 세포들의 내부로 약물 로드(load)를 이동시킨다. CLL1-타겟팅하는 나노미셀들이 백혈병 줄기 세포들로 타겟된 약물 전달에 사용될 잠재력을 가졌다는 것이 보여졌다. 그러나 치료적 효과들이 펩타이드를 타겟팅하는 CCL-1 자체들 덕분이라 볼 수는 없었다.
상기의 관점에서, 본 발명자들은 CLL1 양성 세포들을 향하여 면역 세포 특이성을 방향전환하는, 항-CLL1 단일클론 항체들에 기초한 특이적 키메라 항원 수용체들을 갖고 있다고 여겨지는 면역 세포들을 이용하여 CCL1을 타겟팅하는 새로운 접근을 추구하였다.
이 접근을 이용하여 그들이 수득한 조작된 면역 세포들은 CLL1 양성 악성 세포들을 제거하는데 입증된 약효를 갖는다. 특히, 그것들은 동종이계(allogeneic) TCR 음성 조작된 면역 세포들의 생산이라는 맥락에서 특히 유용한 것으로 나타나 왔는데, 이는 GvHD와 같은 부작용들의 감소를 가능하게 하였다.
이와 같이, 본 발명은 입양 면역요법을 이용하여 CLL1-발현시키는 세포들의 과잉에 의하여 특징되는 상태에 영향받는 환자들을 치료하는 길을 연다. 게다가, 본 발명은 "기성품인(off-the-shelf)" 동종이계 치료적 제품들로서 사용될 수 있는 조작된 동종이계 면역 세포들을 제공한다. 본 발명의 추가의 이점으로서, CAR 양성 조작된 세포들은 화학요법 또는 면역감소시키는(immunodepleting) 치료들로 양립가능하게(compatible)(즉, 저항성)으로 만들어질 수 있어, 이로써 화학요법 및 면역요법 사이의 시너지 효과들을 가능하게 한다.
도 1: 본 발명에 따른 조작된 면역 세포의 개략적 표시. 이 도면에 나타난 조작된 면역 세포는 CLL1-scCAR를 코드하는 레트로바이러스 벡터로 형질도입된 T-세포이다. 이 T-세포는 본 발명의 프레임 내에서 선택적인, 환자 내로 더 좋고 더 안전한 이식을 가능하게 하도록 더 조작되었다. X 유전자는 예를 들어 TCR (TCRalpha 또는 TCRbeta)의 요소를 발현시키는 유전자일 수 있고, Y는 (Campath에 관하여) CD52 또는 (6-티오구아닌에 관하여) HPRT 와 같은 면역-억제 약물들에 대한 T-세포들의 민감성에 관련된 유전자일 수 있다.
도 2: 하기 표 1에 나타난 요소들로 본 발명의 (항-CLL1 scCAR) 다른 scCAR 아키텍쳐 ((V1 내지 V6)의 개략적 표시.
도 3A 및 도 3B: T 세포 고갈을 위하여 태깅된 다른 mAb-에피토프, 특히 CAR 양성 세포들 주입과 관련된 가능한 부작용들을 경감시키기 위하여 설계된, CD20 미모토프(mimotope)(들)을 수반하는 본 발명에 따른 모범적 CLL1 특이적 CAR들의 개략적 표시.
(A) 세포들을 분류 또는 고갈시키기 위한 에피토프 태깅(tagging) 서열을 후반하지 않는 본 발명에 따른 CLL1 특이적 CAR 프로토타입: V1 및 v2 은 항체 결합 CLL1의 각각 VH 또는 VL 체인을 나타낸다, TM: 막관통 도메인, L: 링커, TM: 막관통(Transmembrane) 도메인 (바람직하게는 CD8α 막관통 도메인), 4-1BB: 세포내 공-자극 도메인, CD3 ITAM: 활성화 도메인.
(B) CAR의 세포외 리간드 결합 도메인에 삽입되는 적어도 하나의 에피토프를 더 포함하는 본 발명에 따른 CLL1 특이적 CAR 아키텍쳐들로, 이때 상기 에피토프는 VH 및 VL 체인들 사이에 삽입되고; 상기 에피토프는 다른 링커들에 의하여 가장자리를 이룬다.;
(C): 본 발명에 따른 CLL1 특이적 CAR 아키텍쳐들로, 이때 두 에피토프들이 CAR의 세포외 리간드 결합 도메인에 삽입되고, 하나는 CAR의 N- 말단 및 VH 체인 사이에 삽입되고, 상기 에피토프는 적어도 하나의 또는 두 개의 링커들에 의하여 가장자리를 이룬다; 두 번째 에피토프는 VH 및 VL 체인들 사이에 삽입되고, 상기 2 번째에피토프 또한 2 적어도 하나의 또는 두 개의 링커들에 의하여 가장자리를 이룬다. 여기에 설명된 아키텍쳐들은 2 번째 에피토프의 가장자리를 이루는데 사용된 링커들에 의하여 다르다.
(D): 본 발명에 따른 CLL1 특이적 CAR 아키텍쳐들로, 이때 두 에피토프들이 CAR의 세포외 리간드 결합 도메인에 삽입되고, 하나는 VH 및 VL 체인들 사이에 삽입된다; 다른 에피토프는 VL 체인 및 힌지 사이에 삽입되고, 각각의 상기 에피토프는 적어도 하나의 또는 두 개의 링커들에 의하여 가장자리를 이룬다. 여기에 설명된 아키텍쳐들은 1 번째 에피토프의 가장자리를 이루는데 사용된 링커들에 의하여 다르다.
(E): 본 발명에 따른 CLL1 특이적 CAR 아키텍쳐로, 이때 두 에피토프들이 CAR의 세포외 도메인에 삽입되고, 하나는 CAR의 N-말단 및 VH 체인 사이에 삽입되고, 상기 에피토프는 적어도 하나의 또는 두 개의 링커들에 의하여 가장자리를 이룬다; 두 번째 에피토프는 VL 체인 및 힌지 사이에 삽입되고, 상기 2 번째 에피토프 또한 이러한 링커들에 의하여 가장자리를 이룬다.
(F): 본 발명에 따른 CLL1 특이적 CAR 아키텍쳐들로, 이때 세 개의 에피토프들이 CAR의 세포외 도메인에 삽입되고, 하나는 CAR의 N-말단 및 VH 체인 사이에 삽입되고, 상기 에피토프는 적어도 하나의 또는 두 개의 링커들에 의하여 가장자리를 이룬다; 두 번째 에피토프는 VH 및 VL 체인들 사이에 삽입되고, 상기 에피토프 또한 이러한 링커들에 의하여 가장자리를 이루고, 그리고 세 번째 에피토프는 VL 체인 및 힌지 사이에 삽입된다. 이들 두 개의 아키텍쳐들은 두 번째 에피토프의 가장자리를 이루는데 사용된 링커들에 의하여 다르다.
(G): 본 발명에 따른 CLL1 특이적 CAR 아키텍쳐들로, 이때 적어도 두 개의 에피토프들 (바람직하게는 CD20 에피토프들)이 힌지 및 항 CLL1 VH 및 VL 체인들 사이의 세포외 리간드 결합 도메인에 삽입된다. 세 번째 모범적 아키텍쳐에서, 하나의 CD34 에피토프가 두 CD20 에피토프들 사이에 포함된다. 그리고 아키텍쳐들은 CD34가 임의의 다른 이전의 CD20 에피토프들을 대체하는 곳으로 고려될 수 있다.
(H): 본 발명에 따른 CLL1 특이적 CAR 아키텍쳐들로, 이때 적어도 두 개의 에피토프들이 세포외 리간드 결합 도메인의 맨 끝에 삽입된다.
<표 1>
Figure 112021007876386-pct00001

scFvs를 제외한 다른 scCAR 요소들의 서열
<표 2>
Figure 112021007876386-pct00002

Figure 112021007876386-pct00003

Figure 112021007876386-pct00004

Figure 112021007876386-pct00005

Figure 112021007876386-pct00006

모범적 항-CLL1 VH 및 VL 체인들의 가변 영역들 및 그것들의 각각의 CDR들의 서열
<표 3>
Figure 112021007876386-pct00007

구조체 V-1의 scCAR
<표 4>
Figure 112021007876386-pct00008

구조체 V-2의 scCAR
<표 5>
Figure 112021007876386-pct00009

구조체 V-3의 scCAR
<표 6>
Figure 112021007876386-pct00010

구조체 V-4의 scCAR
<표 7>
Figure 112021007876386-pct00011

구조체 V-5의 scCAR
<표 8>
Figure 112021007876386-pct00012

구조체 V-6의 scCAR
본 발명의 개요
본 발명은 항-CLL1 특이적 항체들로부터 유래된 다른 scFV를 포함하는 다른 설계를 갖는 CLL1 특이적 단일-체인 scCAR를 만들어 왔다.
특히, 본 발명자들은 다른 아키텍쳐들(architectures) 및 매우 특이적으로 확인되었고, 그리고 CLL1을 발현시키는 암 세포들을 선택적으로 파괴하고 CLL1을 발현시키는 세포들에 결합하는 매우 선택적인 scCAR들 컨스트럭션들(constructions)을 갖는, SC02-357, SC02-378, SCO2-161, M26, M31, G4, M22, M29, M2, M5, G12, 21.26 및 1075.7 항체들로부터 유래된 VL 및 VL 체인들을 포함하는 항-CLL1 특이적 단일-체인 CAR (scCAR)을 개발하여 왔다.
인 비트로에서 비-특이적 활성화 후 (예컨대, 항 CD3/CD28 코팅된 비드들 및 재조합 IL2), 기증자들로부터의 원발성(primary) T-세포들이 바이러스 형질도입(transduction)을 이용하여 이들 scCAR들을 발현시키는 폴리뉴클레오타이드들로 형질전환(transform)되어 왔다. 특정 예들에서, T-세포들은 더욱 특이적으로 이식편숙주(Graft versus host) 반응을 예방하기 위하여 TCR의 요소 (αβ-T-세포 수용체들)의 파괴에 의하여, 덜 또는 비-동종반응성(alloreactive) T-세포들을 만들기 위하여 더 조작되었다.
T-세포들은 상기 전통적인 항-암 약물들과 조합하여 사용되도록, 항-암 약물들에 내성인 T 세포들을 만들도록 더 조작되었다.
그 결과인 조작된 T-세포들은 다양한 정도로 CLL1 양성 세포들에 대항하여 인-비트로에서 반응성을 보였는데, 이는 본 발명의 scCAR들가 T-세포들의 항원 의존적 활성화, 및 또한 증식에 공헌하여, 그것들을 면역요법에 유용하게 만든다는 것을 보여준다.
그 결과인 조작된 T-세포들은 CLL1 양성 세포들에 대항하여 인-비보에서 반응성을 보였고, 암 세포들의 수를 인 비보에서 상당히 감소시킨다.
본 발명의 조작된 T-세포들은 CLL1 양성 세포들에 대항하여 인-비보에서 반응성을 보이도록 설계되며, 항-암 약물들과 조합하여 사용될 수 있고, 잘 견뎌진다. 특정 예에서, 본 발명의 조작된 T-세포들은 몇몇 투여들 후에도 효과적으로 남아 있으며, 이는 그것들은 첫 번째 치료로서 (유도), 강화(consolidation) 치료로서, 전통적인 항암 화학요법과 조합한 치료로서, 면역요법에 유용하게 만든다. 본 발명의 CAR들을 코드하는 폴리뉴클레오타이드 서열들 및 폴리펩타이드들은 본 명세서에 상세히 기재된다.
본 발명의 조작된 T-세포들은 급성 골수성 백혈병 (AML) 치료들과 같은 치료적 적용들에 특히 유용하다.
본 발명의 상세한 기재
여기에서 특이적으로 정의되지 않는 한, 사용되는 모든 기술적 및 과학적 용어들은 유전자 치료, 생화학, 유전학들 및 분자 생물학의 영역에서 당업자에 의하여 보통 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다.
여기에서 기재된 그 것들과 등가이거나 또는 유사한 모든 방법들 및 물질들은, 여기에 기재된 적합한 방법들 및 물질들과 함께, 본 발명을 실시 또는 시험하는데 사용될 수 있다. 여기에서 언급된 모든 공개들, 특허 출원들, 특허들 및 다른 참고문헌들은 그 전체가 참고로서 여기에 포함된다. 모순되는 경우, 정의들을 포함하는 본 명세서가 우선된다. 나아가, 물질들, 방법들, 및 예들은 설명을 위한 것일 뿐이며, 다르게 특정되지 않는한, 제한하는 것으로 의도되지 않는다.
본 발명의 실시는, 다르게 표시되지 않는 한, 당업계의 기술 내인 세포 생물학, 세포 배양, 분자 생물학, 유전자이식 생물학, 미생물학, 재조합 DNA, 및 면역학의 기존 기술들을 이용할 것이다. 이러한 기술들은 문헌 내에 완전히 설명된다. 예컨대, Current Protocols in Molecular Biology (Frederick M. AUSUBEL, 2000, Wiley and son Inc, Library of Congress, USA); Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Third Edition, (Sambrook et al, 2001, Cold Spring Harbor, New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press); Oligonucleotide Synthesis (M. J. Gait ed., 1984); Mullis et al. U.S. Pat. No. 4,683,195; Nucleic Acid Hybridization (B. D. Harries & S. J. Higgins eds. 1984); Transcription And Translation (B. D. Hames & S. J. Higgins eds. 1984); Culture Of Animal Cells (R. I. Freshney, Alan R. Liss, Inc., 1987); Immobilized Cells And Enzymes (IRL Press, 1986); B. Perbal, A Practical Guide To Molecular Cloning (1984); the series, Methods In ENZYMOLOGY (J. Abelson and M. Simon, eds.-in-chief, Academic Press, Inc., New York), specifically, Vols.154 and 155 (Wu et al. eds.) and Vol. 185, "Gene Expression Technology" (D. Goeddel, ed.); Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells (J. H. Miller and M. P. Calos eds., 1987, Cold Spring Harbor Laboratory); Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology (Mayer and Walker, eds., Academic Press, London, 1987); Handbook Of Experimental Immunology, Volumes I-IV (D. M. Weir and C. C. Blackwell, eds., 1986); 및 Manipulating the Mouse Embryo, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1986) 참조.
본 발명은 하기를 제공한다:
1. 적어도 하기를 포함하는 CLL1 특이적 키메라 항원 수용체 (항-CLL1 CAR):
- 세포 외 리간드 결합-도메인 항-CLL1,
- 막관통 도메인, 및
- 세포질의 신호전달(signaling) 도메인.
2. 제 1항에 있어서, 공-자극 도메인을 더 포함하는 CLL1 특이적 키메라 항원 수용체.
3. 제 1항에 있어서, CD28 또는 4-1BB 공-자극 도메인을 더 포함하는 CLL1 특이적 키메라 항원 수용체.
4. 제 1 내지 제 3의 예들 중 어느 하나에 있어서, 상기 막관통 도메인은 CD8α 막관통 도메인인 CLL1 특이적 키메라 항원 수용체.
5. 제 1 내지 제 4의 예들 중 어느 하나에 있어서, 힌지를 더 포함하는 CLL1 특이적 키메라 항원 수용체.
6. 제 1 내지 제 5의 예들 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포질의 신호전달(signaling) 도메인은 T-세포를 활성화시키는 도메인인 CLL1 특이적 키메라 항원 수용체.
7. 제 1 내지 제 6의 예들 중 어느 하나에 있어서, 상기 키메라 항원 수용체는 단일 폴리펩타이드의 형태로 발현되는 CLL1 특이적 키메라 항원 수용체.
8. 제 1 내지 제 7의 예들 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포 외 리간드 결합-도메인은 단일클론 항-CLL1 항체 유래인 CLL1 특이적 키메라 항원 수용체.
9. 제 8의 예에 있어서, 세포 외 리간드 결합-도메인은 단일클론 항-CLL1 항체(들)의 VH 및 VL 도메인들 유래의 CDR들을 포함하는 CLL1 특이적 키메라 항원 수용체.
10. 제 9의 예에 있어서, 상기 CDR들은 서열번호 109부터 190까지에서 선택되는 CLL1 특이적 키메라 항원 수용체.
11. 도 2에 개시된 대로 V1, V3 또는 V5로부터 선택되는 폴리펩타이드 구조체 중 하나를 갖고, 상기 구조체는 단일클론 항-CLL1 항체, 힌지, CD8α 막관통 도메인,4-1BB 공-자극 도메인 및 CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함ㅎ마는 세포질 도메인로부터의 VH 및 VL을 포함하는 세포 외 리간드 결합-도메인을 포함하는, 제 1 내지 제 10의 예들 중 어느 하나에 따른, CLL1 특이적 scCAR.
12. 제 1 내지 제 11의 예들 중 어느 하나에 있어서, 상기 구조체 V1는 FcγRIIIα 힌지 및 CD8α 막관통 도메인를 포함하는 CLL1 특이적 scCAR.
13. 제 1 내지 제 11의 예들 중 어느 하나에 있어서, 상기 구조체 V3는 CD8α 힌지 및 CD8α 막관통 도메인을 포함하는 CLL1 특이적 scCAR.
14. 제 1 내지 제 11의 예들 중 어느 하나에 있어서, 상기 구조체 V5는 IgG1 힌지 및 CD8α 막관통 도메인을 포함하는 CLL1 특이적 scCAR.
15. 제 1 내지 제 14의 예들 중 어느 하나에 있어서, 상기 VH 및 VL은 서열번호 11 부터 34 까지로부터 선택되는 폴리펩타이드 서열과 적어도 80 % 동일성(identity)을 갖는 CLL1 특이적 scCAR.
16. 제 1 내지 제 15의 예들 중 어느 하나에 있어서, 4-1BB 유래 공-자극 도메인은 서열번호 8과 적어도 80 % 동일성을 갖는 CLL1 특이적 scCAR.
17. 제 1 내지 제 16의 예들 중 어느 하나에 있어서, 상기 CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인은 서열번호 9과 적어도 80 % 동일성을 갖는 CLL1 특이적 scCAR.
18. 제 1 내지 제 12 또는 15 내지 17의 예들 중 어느 하나에 있어서, 상기 FcγRIIIα 힌지는 서열번호 3과 적어도 80 % 동일성을 갖는 CLL1 특이적 scCAR.
19. 제 1 내지 제 11, 13 또는 15 내지 17의 예들 중 어느 하나에 있어서, 상기 CD8α 힌지는 서열번호 4와 적어도 80 % 동일성을 갖는 CLL1 특이적 scCAR.
20. 제 1 내지 제 11 또는 14 내지 19의 예들 중 어느 하나에 있어서, 상기 IgG1 힌지는 서열번호 5와 적어도 80 % 동일성을 갖는 CLL1 특이적 scCAR.
21. 제 1 내지 제 20의 예들 중 어느 하나에 있어서, 상기 CD8α 막관통 도메인은 서열번호 6과 적어도 80 % 동일성을 갖는 CLL1 특이적 scCAR.
22. 제 1 내지 제 21의 예들 중 어느 하나에 있어서, CLL1에 특이적이지 않은 또다른 세포외 리간드 결합 도메인을 더 포함하는 CLL1 특이적 scCAR.
23. 제 1 내지 12, 15 내지 17 또는 21 내지 22의 예들 중 어느 하나에 있어서, 서열번호 35, 41, 47, 53, 59, 65, 71, 77, 83, 89, 95, 101 또는 107과 적어도 80% 동일성을 갖는 폴리펩타이드 서열을 포함하는 구조체 V1의 CLL1 특이적 scCAR.
24. 제 1 내지 11, 13, 15 내지 17 또는 21 내지 22의 예들 중 어느 하나에 있어서, 서열번호 37, 43, 49, 55, 61, 67, 73, 79, 85, 91, 97, 103 또는 109와 적어도 80% 동일성을 갖는 폴리펩타이드 서열을 포함하는 구조체 V3의 CLL1 특이적 scCAR.
25. 제 1 내지 11, 14 내지 19 또는 21 내지 22 의 예들 중 어느 하나에 있어서, 서열번호 39, 45, 51, 57, 63, 69, 75, 81, 87, 93, 99, 105 또는 111과 적어도 80% 동일성를 갖는 폴리펩타이드 서열을 포함하는 구조체(structure) V5의 CLL1 특이적 scCAR.
26. 제 1 내지 25의 예들 중 어느 하나에 있어서, 신호(signal) 펩타이드를 더 포함하는 CLL1 특이적 scCAR.
27. 제 26의 예에 있어서, 상기 신호 펩타이드는 서열번호 1 또는 서열번호 2와 적어도 80 % 서열 동일성를 갖는 CLL1 특이적 scCAR.
28. 제 1 내지 27의 예들 중 어느 하나에 있어서, 세포외 결합 도메인은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 mAb-특이적 에피토프들을 포함하는 폴리펩타이드.
29. 제 1 내지 28의 예들 중 어느 하나에 있어서, 세포외 결합 도메인은 1, 2, 3 또는, 4 mAb-특이적 에피토프들을 포함하는 폴리펩타이드.
30. 제 1 내지 29의 예들 중 어느 하나에 있어서, 세포외 결합 도메인은 2, 3 또는, 4 mAb-특이적 에피토프들을 포함하는 폴리펩타이드.
31. 제 1 내지 30의 예들 중 어느 하나에 있어서, 세포외 결합 도메인은 하기 서열을 포함하는 폴리펩타이드;
V1-L1-V2-(L)x-에피토프1-(L)x-;
V1-L1-V2-(L)x-에피토프1-(L)x-에피토프2-(L)x-;
V1-L1-V2-(L)x-에피토프1-(L)x-에피토프2-(L)x-에피토프3-(L)x-;
(L)x-에피토프1-(L)x-V1-L1-V2;
(L)x-에피토프1-(L)x-에피토프2-(L)x-V1-L1-V2;
Epitope1-(L)x-에피토프2-(L)x-에피토프3-(L)x-V1-L1-V2;
(L)x-에피토프1-(L)x-V1-L1-V2-(L)x-에피토프2-(L)x;
(L)x-에피토프1-(L)x-V1-L1-V2-(L)x-에피토프2-(L)x-에피토프3-(L)x-;
(L)x-에피토프1-(L)x-V1-L1-V2-(L)x-에피토프2-(L)x-에피토프3-(L)x-에피토프4-(L)x-;
(L)x-에피토프1-(L)x-에피토프2-(L)x-V1-L1-V2-(L)x-에피토프3-(L)x-;
(L)x-에피토프1-(L)x-에피토프2-(L)x-V1-L1-V2-(L)x-에피토프3-(L)x-에피토프4-(L)x-;
V1-(L)x-에피토프1-(L)x-V2;
V1-(L)x-에피토프1-(L)x-V2-(L)x-에피토프2-(L)x;
V1-(L)x-에피토프1-(L)x-V2-(L)x-에피토프2-(L)x-에피토프3-(L)x;
V1-(L)x-에피토프1-(L)x-V2-(L)x-에피토프2-(L)x-에피토프3-(L)x-에피토프4-(L)x;
(L)x-에피토프1-(L)x-V1-(L)x-에피토프2-(L)x-V2; 또는,
(L)x-에피토프1-(L)x-V1-(L)x-에피토프2-(L)x-V2-(L)x-에피토프3-(L)x;
이 때,
V1은 VL이고 V2는 VH이고, 또는 V1은 VH이고 V2은 VL이고;
L1은 VH 체인을 VL 체인에 연결하기에 적합한 링커이고;
L은 글리신 및 세린 잔기들을 포함하는 링커이고, 세포외 결합 도메인에서 L의 각각의 발생은 동일한 세포외 결합 도메인에서 L의 다른 발생과 동일하거나 또는 다를 수 있고, 그리고,
x는 0 또는 1이고, x의 각각의 발생은 다른 것들로부터 독립적으로 선택되고; 그리고,
에피토프 1, 에피토프 2 및 에피토프 3은 mAb-특이적 에피토프들이고 동일하거나 또는 다를 수 있다.
32. 제 31의 예 중 어느 하나에 있어서, 세포외 결합 도메인은 하기 서열을 포함하는 폴리펩타이드;
V1-L1-V2-L-에피토프1; V1-L1-V2-L-에피토프1-L; V1-L1-V2-L-에피토프1-L-에피토프2; V1-L1-V2-L-에피토프1-L-에피토프2-L; V1-L1-V2-L-에피토프1-L-에피토프2-L-에피토프3; V1-L1-V2-L-에피토프1-L-에피토프2-L-에피토프3-L; V1-L1-V2-에피토프1; V1-L1-V2-에피토프1-L; V1-L1-V2-에피토프1-L-에피토프2; V1-L1-V2-에피토프1-L-에피토프2-L; V1-L1-V2-에피토프1-L-에피토프2-L-에피토프3; V1-L1-V2-에피토프1-L-에피토프2-L-에피토프3-L; 에피토프1-V1-L1-V2; 에피토프1-L-V1-L1-V2; L-에피토프1-V1-L1-V2; L-에피토프1-L-V1-L1-V2; 에피토프1-L-에피토프2-V1-L1-V2; 에피토프1-L-에피토프2-L-V1-L1-V2; L-에피토프1-L-에피토프2-V1-L1-V2; L-에피토프1-L-에피토프2-L-V1-L1-V2; 에피토프1-L-에피토프2-L-에피토프3-V1-L1-V2; 에피토프1-L-에피토프2-L-에피토프3-L-V1-L1-V2; L-에피토프1-L-에피토프2-L-에피토프3-V1-L1-V2; L-에피토프1-L-에피토프2-L-에피토프3-L-V1-L1-V2; V1-L-에피토프1-L-V2; L-에피토프1-L-V1-L-에피토프2-L-V2; V1-L-에피토프1-L-V2-L-에피토프2-L; V1-L-에피토프1-L-V2-L-에피토프2-L-에피토프3; V1-L-에피토프1-L-V2-L-에피토프2-에피토프3; V1-L-에피토프1-L-V2-L-에피토프2-L-에피토프3-에피토프4; L-에피토프1-L-V1-L-에피토프2-L-V2-L-에피토프3-L; 에피토프1-L-V1-L-에피토프2-L-V2-L-에피토프3-L; L-에피토프1-L-V1-L-에피토프2-L-V2-L-에피토프3; L-에피토프1-L-V1-L1-V2-L-에피토프2-L; L-에피토프1-L-V1-L1-V2-L-에피토프2-L-에피토프3; L-에피토프1-L-V1-L1-V2-L-에피토프2-에피토프3, 또는 에피토프1-L-V1-L1-V2-L-에피토프2-L-에피토프3-에피토프4
이 때
V1은 VL이고 그리고 V2는 VH이고, 또는 V1은 VH이고 그리고 V2는 VL이고;
L1은 VH 체인을 VL 체인에 연결하는데 적합한 임의의 링커이고;
L은 글리신 및 세린 잔기들을 포함하는 링커이고, 세포외 결합 도메인에서 L의 각각의 발생은 동일한 세포외 결합 도메인에서 L의 다른 발생과 동일하거나 또는 다를 수 있고, 그리고,
에피토프 1, 에피토프 2 및 에피토프 3은 mAb-특이적 에피토프들이고, 동일하거나 또는 다를 수 있다.
33. 제 31 또는 32의 예에 있어서, L1은 글리신 및/또는 세린을 포함하는 링커인 폴리펩타이드.
34. 제 33의 예에 있어서, L1은 아미노산 서열 (Gly-Gly-Gly-Ser)n 또는 (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)n을 포함하는 링커이고, 이 때 n은 1, 2, 3, 4 또는 5인 폴리펩타이드.
35. 제 34의 예에 있어서, L1은 아미노산 서열 (Gly4Ser)4 또는 (Gly4Ser)3을 포함하는 링커인 폴리펩타이드.
36. 제 31 내지 제 35의 예들 중 어느 하나에 있어서, L은 글리신 및/또는 세린을 포함하는 링커인 폴리펩타이드.
37. 제 36의 예에 있어서, L은 SGG, GGS, SGGS, SSGGS, GGGG, SGGGG, GGGGS, SGGGGS, GGGGGS, SGGGGGS, SGGGGG, GSGGGGS, GGGGGGGS, SGGGGGGG, SGGGGGGGS, 또는 SGGGGSGGGGS로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 링커인 폴리펩타이드.
38. 제 37의 예에 있어서, L은 SGGGG, GGGGS 또는 SGGGGS인 폴리펩타이드.
39. 제 31 내지 제 38의 예들 중 어느 하나에 있어서, 에피토프 1, 에피토프 2, 에피토프 3 및 에피토프 4는 이브리투모맙(ibritumomab), 티우세탄(tiuxetan), 뮤노모나브(muromonab)-CD3, 토시투모마브(tositumomab), 아브식시마브(abciximab), 바실리시마브(basiliximab), 브렌툭시맙(brentuximab) 베도틴(vedotin), 세툭시맙(cetuximab), 인플릭시맙(infliximab), 리툭시맙(rituximab), 알렘투주맙(alemtuzumab), 베바시주맙(bevacizumab), 세르톨리주맙(certolizumab) 페골(pegol), 다클리주맙(daclizumab), 에쿨리주맙(eculizumab), 에팔리주맙(efalizumab), 젬투주맙(gemtuzumab), 나탈리주맙(natalizumab), 오말리주맙(omalizumab), 팔리비주맙(palivizumab), 라니비주맙(ranibizumab), 토실리주맙(tocilizumab), 트라스투주맙(trastuzumab), 베돌리주맙(vedolizumab), 아달리무맙(adalimumab), 벨리무맙(belimumab), 카나키누맙(canakinumab), 데노수맙(denosumab), 골리무맙(golimumab), 이필리무맙(ipilimumab), 오파투무맙(ofatumumab), 파니투무맙(panitumumab), QBEND-10, 알렘투주맙(alemtuzumab) 또는 우스테키누맙(ustekinumab)에 의하여 특히 인식되는 mAb-특이적 에피토프들로부터 독립적으로 선택되는 폴리펩타이드.
40. 제 31 내지 제 38의 예들 중 어느 하나에 있어서, 에피토프 1, 에피토프 2, 에피토프 3 및 에피토프 4는 서열번호 113, 서열번호 191, , 서열번호 192, 서열번호 193, 서열번호 194, 서열번호 195, 서열번호 195, 서열번호 196, 서열번호 197, 서열번호 198 또는 서열번호 199의 아미노산 서열을 갖는 mAb-특이적 에피토프들로부터 독립적으로 선택되는 폴리펩타이드.
41. 제 31 내지 제 40의 예들 중 어느 하나에 있어서, 에피토프 1은 서열번호 113의 아미노산 서열을 갖는 mAb-특이적 에피토프인 폴리펩타이드.
42. 제 31 내지 제 41의 예들 중 어느 하나에 있어서, 에피토프 2는 서열번호 113의 아미노산 서열을 갖는 mAb-특이적 에피토프인 폴리펩타이드.
43. 제 31 내지 제 42의 예들 중 어느 하나에 있어서, 에피토프 3은 서열번호 113, 서열번호 198 또는 서열번호 199의 아미노산 서열을 갖는 mAb-특이적 에피토프인 폴리펩타이드.
44. 제 31 내지 제 43의 예들 중 어느 하나에 있어서, 에피토프 4는 서열번호 113의 아미노산 서열을 갖는 mAb-특이적 에피토프인 폴리펩타이드.
45. 제 1 내지 제 44의 예들 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체를 코드하는(encoding) 폴리뉴클레오타이드.
46. 제 39의 예의 핵산을 포함하는 발현 벡터.
47. 제 1 내지 제 44의 예들 중 어느 하나의 항- CLL1 CAR를 세포 표면 막엣어 발현시키는 조작된 림프계(lymphoid) 면역 세포.
48. 제 41의 예에 있어서, 염증성 T-림프구들, 세포독성 T-림프구들, 조절성 T-림프구들 또는 헬퍼 T-림프구들로부터 유래된 조작된 림프계 면역 세포.
49. 제 47 또는 48의 예에 있어서, 치료에 사용되기 위한 조작된 세포.
50. 제 41 내지 제 43의 예들 중 어느 하나에 있어서, 환자는 인간인 조작된 세포.
51. 치료에 사용되기 위한 제 47 내지 제 50의 예들 중 어느 하나에 있어서, 질환은 CLL1-발현시키는 세포들에 의하여 특징되는 전-악성(pre-malignant) 또는 악성(malignant) 암 질환인 조작된 세포.
52. 치료에 사용되기 위한 제 47 내지 제 51의 예들 중 어느 하나에 있어서, 질환은 CLL1-발현시키는 세포들의 과잉에 의하여 특징되는 질환인 조작된 세포.
53. 치료에 사용되기 위한 제 51 내지 제 52의 예들 중 어느 하나에 있어서, 질환은 혈액학적 암 질환인 조작된 세포.
54. 치료에 사용되기 위한 제 53의 예에 있어서, 혈액학적 암 질환은 백혈병인 조작된 세포.
55. 치료에 사용되기 위한 제 54의 예에 있어서, 백혈병은 급성(acute) 골수성(myelogenous) 백혈병(leukemia) (AML)인 조작된 세포.
56. 제 47 내지 제 55의 예들 중 어느 하나에 있어서, TCR의 발현은 상기 면역 세포에서 억제되는 조작된 세포.
57. 제 47 내지 제 55의 예들 중 어느 하나에 있어서, 적어도 하나의 MHC 단백질의 발현은, 바람직하게는 β2m 또는 HLA는, 상기 면역 세포에서 억압(repressed) 또는 억제(suppressed)되는 조작된 세포.
58. 제 47 내지 제 57의 예들 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포는 적어도 하나의 면역 억제(suppressive) 또는 화학요법 약물에 내성을 부여하도록 돌연변이되는 조작된 세포.
59. 제 47 내지 제 58의 예들 중 어느 하나의 조작된 세포와 상기 세포를 접촉시키는 단계를 포함하며, 혈액학적 암 세포를, 상기 암 세포의 손상을 야기하기에 효과적인 양으로 손상시키는 방법.
60. (a) 면역 세포를 제공하는 단계,
(b) 제 1 내지 제 44의 예들 중 어느 하나의 적어도 하나의 CLL1 단일-체인 특이적 키메라 항원 수용체를 상기 세포의 표면에서 발현시키는 단계
를 포함하는, 면역 세포를 조작하는 방법.
61. 제 60의 예에 있어서,
(a) 면역 세포를 제공하는 단계,
(b) 상기 CLL1 단일-체인 특이적 키메라 항원 수용체를 코드하는 적어도 하나의 폴리뉴클레오타이드를 상기 세포에 도입하는 단계,
(c) 상기 세포 내로 상기 폴리뉴클레오타이드를 발현시키는 단계
를 포함하는, 면역 세포를 조작하는 방법.
62. 제 61의 예에 있어서,
(a) 면역 세포를 제공하는 단계,
(b) 상기 항-CLL1 단일-체인 특이적 키메라 항원 수용체를 코드하는 적어도 하나의 폴리뉴클레오타이드를 상기 세포 낸로 도입하는 단계,
(c) CLL1에 특이적이지 않은 적어도 하나의 다른 키메라 항원 수용체를 도입하는 단계
를 포함하는, 면역 세포를 조작하는 방법.
63. (a) 제 1 내지 제 44의 예들 중 어느 하나의 항-CLL1 단일-체인 특이적 키메라 항원 수용체를 표면에서 발현시키는 면역 세포를 제공하는 단계;
(b) 상기 환자에 상기 면역 세포들을 투여하는 단계
를 포함하는 그것을 필요로 하는 대상을 치료하는 방법.
64. 제 63의 예에 있어서, 상기 면역 세포는 기증자로부터 제공된 것인 방법.
65. 제 63의 예에 있어서, 상기 면역 세포는 환자 본인으로부터 제공된 것인 방법.
CLL1 단일-체인 특이적 키메라 항원 수용체들
본 발명은 CLL1 항원, 막관통 도메인 및 신호전달(signaling) 전달(transducing) 도메인의 한 부분에 대항하여 특이적으로 향해지는 세포외 리간드-결합 도메인을 포함하는 CLL1 특이적 키메라 항원 수용체에 대한 것이다.
키메라 항원 수용체 (CAR)에 의하여 타겟 세포 상에 존재하는 요소들에 대항하여 향해지는 세포외 결합 도메인, 예컨대, 바람직한 항원 (예컨대, 종양 항원)에 대한 항체-기반의 특이성과, 세포 면역 활성을 향한 활성화 또는 억제 신호를 전달할 키메라 단백질을 만들어내기 위하여 면역 세포 수용체 요소를 결합하는 분자들이 의도된다.
본 발명은 더욱 특히 적어도 하기를 포함하는 CLL1 특이적 키메라 항원 수용체 (항-CLL1 CAR)에 대한 것이다:
- 세포외 리간드 결합-도메인 항-CLL1,
- 막관통 도메인, 및
- 세포질의 신호전달(signaling) 도메인.
바람직하게는, 본 발명에 따른 CLL1 특이적 키메라 항원 수용체는 공-자극 도메인을, 더욱 바람직하게는 예컨대, Jena, B., G. Dotti, et al. (2010)에 기재된 대로 CD28 또는 4-1BB 공-자극 도메인을 더 포함한다. 그것은 또한 선택적 힌지 뿐 아니라, CD8α 막관통 도메인일 수 있는 막관통 도메인을 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 CAR의 신호 전달 도메인 또는 "세포질의 신호전달 도메인"은 세포외 리간드 결합 도메인이 타겟에 결합한 후 세포내 신호전달의 원인이 되고, 그 결과 면역 세포 및 면역 반응의 활성화 또는 억제를 야기한다. 다시 말해서, 신호 전달 도메인은 그 안에서 CAR가 발현되는 면역 세포의 정상적인 효과기(effector)의 적어도 하나의 활성화 또는 불활성화의 원인이 된다. 예를 들어 T 세포의 작용기 기능은 사이토카인의 분비를 포함하는 세포용해 활성 또는 헬퍼 활성일 수 있다. 이런 식으로, "세포질의 신호전달 도메인"은 효과기 신호 기능을 전달하고 전문화된 기능을 수행하기 위하여 세포로 향하는 단백질의 부분을 가리킨다.
바람직하게는 신호 전달 경로(들)에 관여되는 인간 단백질인, 세포질의 신호전달(signaling) 도메인은 신호전달의 유형에 따라 항-CLL1 CAR가 양성(positive) CAR (PCAR)인지 또는 음성(negative) CAR (NCAR)인지 여부를 결정한다. 각각, 인간 TCR 수용체으로부터 CD3제타와 같은 신호전달(signaling) 도메인이 면역 세포의 세포 면역 활성을 자극하는 효과를 가질 때 세포외 리간드 결합-도메인이 CLL1에 결합될 때 CAR는 PCAR이다. 역으로, 신호전달(signaling) 도메인이 인간 면역억제 수용체들 CTLA-4 및 PD-1의 신호전달(signaling) 도메인들과 같은 세포 면역 활성을 감소시키는 효과를 가질 때 항-CLL1 CAR는 NCAR 또는 억제성(inhibitory) CAR (iCAR)이다 (Federov et al., Sci Transl Med. 2013 Dec 11; 5 (215): 215ra172). 항-CLL1 CAR에서 사용을 위한 신호 전달 도메인의 바람직한 예들은 항원 수용체 참여(engagement) 후 신호 전달을 개시하는 것에 맞추어 작용하는 공-수용체들 및 T 세포 수용체의 세포질 서열들과 임의의 유도체 또는 이들 서열들의 변종 및 동일한 기능적 능력을 갖는 임의의 합성 서열일 수 있다. 신호 전달 도메인은 세포질의 신호전달 서열의 두 개의 구별되는 종류들, 이차 또는 공-자극 신호를 제공하기 위하여 항원-독립적 방식으로 작용하는 것들 및 항원-의존적 일차 활성화를 개시하는 것들을 포함한다. 일차 세포질 신호전달 서열은 ITAM들의 면역수용체 티로신-기반의 활성화 모티브들로 알려진 신호전달 모티브들을 포함할 수 있다. ITAM들은 syk/zap70 클래스 티로신 키나제들에 대한 결합 부위들의 역할을 하는 여러가지 수용체들의 세포질내 꼬리에서 발 견되는 잘 정의된 신호전달 모티브들이다. 본 발명에서 사용되는 ITAM의 예들은 제한되지 않는 예들로서, TCR제타(zeta), FcR감마(gamma), FcR베타(beta), FcR엡실론(epsilon), CD3감마(gamma), CD3델타(delta), CD3엡실론(epsilon), CD5, CD22, CD79a, CD79b 및 CD66d로부터 유래되는 것들을 포함할 수 있다. 바람직한 예에서, 항-CLL1 CAR의 신호전달(signaling) 전달(transducing) 도메인은 서열번호: 9로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 70%, 바람직하게는 적어도 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 90 %, 95 % 97 % 또는 99 % 또는 100 % 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 CD3제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함할 수 있다.
공-자극 분자는 효과적인 면역 반응에 요구되는 항원 수용체 또는 그것들의 리간드들 외 세포 표면 분자이다.
"공-자극 리간드"는 T-세포 상 동계(cognate) 공-자극 분자에 특이적으로 결합하여, 이로써 예컨대, TCR/CD3 복합체가 펩타이드가 로드(load)된 MHC 분자에 결합함으로써 제공되는 일차 신호에 추가하여, 증식 활성화, 분화 등을 포함하나 이에 제한되지 않는 T 세포 반응을 매개하는 신호를 제공하는 세포 상 분자를 가리킨다. 공-자극 리간드는 CD7, B7-1 (CD80), B7-2 (CD86), PD-L1, PD-L2, 4-1BBL, OX40L, 유도성(inducible) 공-자극 리간드 (ICOS-L), 세포간 부착 분자 (ICAM, CD30L, CD40, CD70, CD83, HLA-G, MICA, M1CB, HVEM, 림포톡신(lymphotoxin) 베타(beta) 수용체, 3/TR6, ILT3, ILT4, 작용제 또는 B7-H3에 특이적으로 결합하는 리간드 및 Toll 리간드 수용체에 결합하는 항체를 포함할 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. 공-자극 리간드는 또한 그 중에서도, CD27, CD28, 4-1BB, OX40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, 림프구(lymphocyte) 기능(function)-관련(associated) 항원-1 (LFA-1), CD2, CD7, LTGHT, NKG2C, B7-H3, CD83에 특이적으로 결합하는 리간드와 같은, 그러나 이에 제한되지 않는, T 세포 상에 존재하는 공-자극 분자와 특이적으로 결합하는 항체를 포함한다. "공-자극 분자"는 공-자극 리간드에 특이적으로 결합하여, 이로써 증식과 같은, 그러나 이에 제한되지 않는, 세포에 의한 공-자극 반응을 매개하는 T-세포 상 동계(cognate) 결합 파트너를 가리킨다. 공-자극 분자들은 MHC 클래스 I 분자, BTLA 및 Toll 리간드 수용체를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 공자극 분자들의 예들은 CD27, CD28, CD8, 4-1BB (CD137), OX40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, 림프구(lymphocyte) 기능(function)-관련(associated) 항원-1 (LFA-1), CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, B7-H3 및 CD83에 특이적으로 결합하는 리간드 등을 포함한다.
바람직한 예에서, 본 발명의 항-CLL1 CAR의 공-자극 도메인은 4-1BB (GenBank: AAA53133.) 및 CD28 (NP_006130.1)의 단편으로 구성되는 군으로부터 선택되는 공-자극 신호 분자의 부분을 포함한다. 특히 본 발명의 항-CLL1 CAR의 신호 전달 도메인은 서열번호: 8로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 70%, 바람직하게는 적어도 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 90 %, 95 % 97 % 또는 99 % 서열 동일성을 포함하는 아미노산 서열을 포함한다.
본 발명에 따른 항-CLL1 CAR는 보통 막관통 도메인 (TM)을 더 포함한다. 적합한 막관통 도메인들의 구별되는 특징들은 세포, 바람직하게는 본 발명에서 면역 세포, 특히 림프구 세포들 또는 자연살해 (NK) 세포들의 표면에서 발현되고, 미리 정한 타겟 세포에 대항하여 면역 세포의 세포 반응을 향하여 서로 상호작용하는 능력을 포함한다. 막관통 도메인은 합성 소스로부터 또는 자연으로부터 유래될 수 있다. 막관통 도메인은 임의의 막-결합 또는 막관통 단백질로부터 유래될 수 있다. 제한되지 않는 예들로서, 막관통 폴리펩타이드는 α, β, γ 또는 ζ와 같은 T-세포 수용체의 서브유닛, CD3 복합체를 이루는 폴리펩타이드, IL2 수용체 p55 (α 체인), p75 (β 체인) 또는 γ 체인, 특히 Fcγ 수용체 III 인 Fc 수용체들의 서브유닛 체인 또는 CD 단백질들일 수 있다. 대체하여, 막관통 도메인는 합성일 수 있고, 류신(leucine) 및 발린과 같은 뚜렷한 소수성 잔기들을 포함할 수 있다. 선호되는 예에서, 상기 막관통 도메인은 인간 CD8 알파 체인 (예컨대 NP_001139345.1)으로부터 유래된다. 막관통 도메인은 상기 세포외 리간드-결합 도메인 및 상기 막관통 도메인 사이의 힌지 영역을 더 포함할 수 있다.
여기에서 사용된 용어 "힌지 영역"은 보통 세포외 리간드-결합 도메인에 막관통 도메인을 연결하는 기능을 하는 임의의 올리고- 또는 폴리펩타이드를 의미한다. 특히, 힌지 영역은 세포외 리간드-결합 도메인에 대한 더 많은 가요성(flexibility) 및 접근성을 제공하는데 사용된다. 힌지 영역은 300 아미노산들까지, 바람직하게는 10 내지 100 아미노산들 그리고 가장 바람직하게는 25 내지 50 아미노산들을 포함할 수 있다. 힌지 영역은 CD8, CD4 또는 CD28의 세포외 영역의 전부 또는 일부, 또는 항체 불변 영역의 전부 또는 일부와 같은, 자연적으로 발생하는 분자들의 전부 또는 일부로부터 유래될 수 있다. 대체하여, 힌지 영역은 자연적으로 발생하는 힌지 서열에 상응하는 합성 서열일 수 있고, 또는 완전히 합성 힌지 서열일 수 있다. 바람직한 예에서, 상기 힌지 도메인은 이 명세서에서 서열번호 3, 서열번호 4 및 서열번호 5로 각각 언급되는 인간 CD8 알파 체인, FcγRIIIα 수용체 또는 IgG1의 부분, 또는 이들 폴리펩타이드들과 바람직하게는 적어도 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 90 %, 95 % 97 % 또는 99 % 서열 동일성을 보이는 힌지 폴리펩타이드들을 포함한다. 한 예에 따라, 힌지는 또한 인간 Ig (면역글로뷸린) 힌지, 예컨대, PD-1 힌지, IgG4 힌지일 수 있다.
바람직한 예에 따라, 본 발명에 따른 항-CLL1 CAR는 막관통 도메인 더욱 특히 서열번호 6 또는 7의 폴리펩타이드들과 동일성을 보이는 CD8α 및 4-1BB로부터 선택되는 막관통 도메인을 포함한다.
본 발명에 따른 항-CLL1 CAR는 보통 막관통 도메인 (TM) 더욱 특히 CD8α 및 4-1BB로부터 선택되는, 그리고 더욱 더 특히 서열번호 6 또는 7의 폴리펩타이드들과 동일성을 보이는 TM을 더 포함한다.
바람직한 예에서, 본 발명에 따른 항-CLL1 CAR는 서열번호 6을 가진 CD8α로부터의, 또는 서열번호 6과 적어도 90 %, 91%, 92%, 93%, 94%, 95 %, 96%, 97 %, 98% 또는 99 % 서열 동일성을 보이는, TM 도메인을 더 포함한다.
타겟 항원들의 하향조절 또는 돌연변이는 보통 항원-상실 탈출(escape) 변종들을 만들어내는, 암 세포들에서 관찰된다. 이런 식으로, 종양 탈출을 상쇄하고, 면역 세포를 타겟에 더욱 특이적으로 만들기 위하여, 본 발명에 따른 CLL1 specific 항-CLL1 CAR는, 타겟에서 다른 요소들에 동시에 결합하여, 이로써 면역 세포 활성화 및 기능을 증대시키기 위하여, 또다른 세포외 리간드-결합 도메인들을 포함할 수 있다. 한 예에서, 세포외 리간드-결합 도메인들은 동일한 막관통 폴리펩타이드 상에 나란히 위치할 수 있고, 그리고 선택적으로 링커에 의하여 분리될 수 있다. 또다른 예에서, 상기 다른 세포외 리간드-결합 도메인들을 항-CLL1 CAR을 포함하는 다른 막관통 폴리펩타이드들 상에 위치될 수 있다. 또다른 예에서, 본 발명은 각각 하나의 다른 세포외 리간드 결합 도메인들을 포함하는 항-CLL1 CAR들의 군에 대한 것이다. 특히, 본 발명은 면역 세포를 제공하는 단계 및 각각 하나가 다른 세포외 리간드 결합 도메인들을 포함하는 항-CLL1 CAR의 군을 상기 세포의 표면에 발현시키는 단계를 포함하는 면역 세포들을 조작하는 방법에 대한 것이다. 또다른 특정 예에서, 본 발명은 면역 세포를 제공하는 단계 및 각각 하나가 다른 세포외 리간드 결합 도메인들을 포함하는 항-CLL1 CAR의 군을 이루는 폴리펩타이드들을 코드하는 폴리뉴클레오타이드들을 상기 세포 내로 도입하는 단계를 포함하는 면역 세포들을 조작하는 방법에 대한 것이다. 항-CLL1 CAR들의 군(population)에 의하여, 각각 하나가 다른 세포외 리간드 결합 도메인들을 포함하는 적어도 둘, 셋, 넷, 다섯, 여섯 또는 그보다 많은 항-CLL1 CAR들이 의미된다. 본 발명에 따른 다른 세포외 리간드 결합 도메인들은 바람직하게는 타겟인 다른 요소들에 바람직하게는 동시에 결합하여, 이로써 면역 세포 활성화 및 기능을 증가시킬 수 있다. 본 발명은 또한 각각 하나가 다른 세포외 리간드 결합 도메인들을 포함하는 항-CLL1 CAR들의 군을 포함하는 단리된 면역 세포에 대한 것이다.
본 발명에 따른 CLL1 특이적 키메라 항원 수용체들은 다른 아키텍쳐들을 가질 수 있는데, 이는, 예를 들어, 적어도 하나의 이러한 키메라 단백질을 포함하는 몇몇 폴리펩타이드들의 형태(멀티-체인) 또는 단일-체인 키메라 단백질 (scCAR) 하, 발현될 수 있기 때문이다. 이러한 멀티-체인 CAR 아키텍쳐들은 여기에 참고로서 포함된 WO2014/039523, 특히 도 2 내지 4, 그리고 14 내지 21 페이지에 기재되어 있다.
일반적으로, 항-CLL1 CAR는 단일클론 항체의 특이성에 기초한 항원 인식으로 향하기 위하여, T 세포들에서 발현될 때, 능력을 가진, T-세포 항원 수용체 복합체 제타 체인 (scFv Fc:ζ)의 세포내 신호전달(signaling) 도메인에 융합된 세포외 단일 체인 항체 (scFv Fc)를 포함한다.
본 발명은 제한되지 않는 예로 아미노산 서열들 : 서열번호: 35 내지 112를 포함하는, CLL1 항원에 대항하여 향해지는 몇몇 항-CLL1 단일 체인 CAR를 개시한다.
본 발명의 CLL1 CAR는 또한 전술한 대로 "멀티(multi)-체인(chain) CAR들"이 될 수 있는데, 이는 세포외 결합 도메인 및 신호전달(signaling) 도메인들이 바람직하게는 다른 폴리펩타이드 체인들 상에 위치하는 반면, 공-자극 도메인들은 동일하거나 또는 세 번째 폴리펩타이드 상에 위치될 수 있다는 것을 의미한다. 이러한 멀티-체인 CAR들은 scFv와 같은 세포외 리간드-결합 도메인에 의하여 FcεRI 알파 체인의 높은 친화성 IgE 결합 도메인을 대체함으로써 FcεRI (Ravetch et al, 1989)로부터 유래될 수 있는 반면, FcεRI 베타 및/또는 감마 체인들의 N 및/또는 C-말단들은 각각 신호 전달 도메인들 및 공-자극 도메인들에 융합된다. 세포외 리간드 결합 도메인은 세포 타겟들을 향한 T-세포 특이성의 방향을 전환시키는 역할을 갖는 반면, 신호 전달 도메인들은 면역 세포 반응을 활성화 또는 감소시킨다. FcεRI로부터 알파, 베타 및 감마 폴리펩타이드들로부터 유래된 다른 폴리펩타이드들이 CAR들에 더 가요성 아키텍쳐를 제공하는 막인접(juxtamembrane) 위치에 있는 막관통 폴리펩타이드들이고, WO2014/039523에 기재된 대로 면역 세포들의 배경(background) 활성화를 감소시키고 타겟인 분자를 향한 특이성을 개선시킨다는 사실이다.
세포외 리간드-결합 도메인
여기에서 사용된 대로 용어 "세포외 리간드-결합 도메인"은 리간드에 결합할 수 있는 올리고- 또는 폴리펩타이드로 정의된다. 바람직하게는, 그 도메인은 세포 표면 분자와 상호작용할 수 있을 것이다. 예를 들어, 세포외 리간드-결합 도메인은 특정 질병 상태와 관련된 타겟 세포들 상에서 세포 표면 마커로서 작용하는 리간드를 인식하기 위하여 선택될 수 있다. 그것은 예를 들어 리간드, 수용체, 인간 또는 마우스들 항체들로부터 유래된 결합 도메인들 또는 낙타들 또는 연골 어류들로부터 유래된 항원 인식 도메인들일 수 있다.
바람직한 예에서, 상기 세포외 리간드-결합 도메인은 가요성 링커에 의하여 연결된 타겟 항원 특이적 단일클론 항 CLL1 항체의 가벼운(VL) 및 무거운 (VH) 가변 단편을 포함하는 단일 체인 항체 단편 (scFv)을 포함한다. 상기 VL 및 VH은 바람직하게는 WO2005/00894 (출원인: Crucell Holland BV)의 SCO02-357, SC02-378 및 SC02-161; WO2013/169625 (출원인: Cellerant Therapeutics)의 M26, M31, G4, M22, M29, M2, M5, G12; 및 WO2009/051974 (출원인: Nuvelo Inc .)의 21.26, 1075.7의 문헌에 언급된, 그리고 더욱 특히 하기 기재된 서열번호 119 내지 190로부터 선택된 단일클론 항-CLL1 항체들의 VH 및 VL 도메인들로부터의 CDR들을 포함하는 항체들로부터 선택된다.
단일클론 항-CLL1 항체로부터의 VH 체인의 CDR 서열들은 GSISSSNWWS (서열번호 119), WIGEIYHSGSPDY (서열번호 120),KVSTGGFFDY (서열번호 121), 및 GSISSSNWWS (서열번호 122), WIGEIYHSGSPNY (서열번호 123), RSSSGGFFDY (서열번호 124), 및 GSISSSNWWS (서열번호 125), WIGEIYHSGSPNY (서열번호 126), RQTTAGSFDY (서열번호 127), 및 GYTFTSYFIH (서열번호 131), WIGFINPYNDGSKY (서열번호 132), TRDDGYYGYAMDY (서열번호 133), 및 GYTFTSYVMH (서열번호 137), WIGYINPYNDGTKY (서열번호 138), ARPIYFDNDY (서열번호 139), 및 QQNNYDPW (서열번호 143), WIGPINPYNDGTI (서열번호 144), ARTDDYDDYTMDY (서열번호 145), 및 GYTFTRYWMH (서열번호 149), WIGNIDPSDTETHY (서열번호 150), AIYYGNPSYYAMDY (서열번호 151), 및 GYIFTSYVMY (서열번호 155), WIGYINPY (서열번호 156), ARYYDYDYYFDY (서열번호 157), 및 GYTFTSYFMH (서열번호 161), WIGFINPYNDGTKY (서열번호 162),TRDDGYYDYAMDY (서열번호 163), 및 GFNIKDDYIH (서열번호 167), WIGWIDPEKGDTAYA (서열번호 168), TLTGRFDY (서열번호 169), 및 GYTFPSSNIH (서열번호 173), WIGVIYPGNGDTSY (서열번호 174), AIYFVYNWHFDV (서열번호 175), 및 GYTFTRYWMH (서열번호 179), MIHPSSGSTSYNEKVK (서열번호 180), RDGDYYYGTGDY (서열번호 181), 및 GYSITSAYYWN (서열번호 185), YISYDGRNNYNPSLKN (서열번호 186) 및 AKEGDYDVGNYYAMDY (서열번호 187) 중에서 선택될 수 있다.
유사하게, 단일클론 항-CLL1 항체로부터의 VL 체인의 CDR 서열들은 QSISSYLN (서열번호 128), LLIYAASSLQS (서열번호 129), QQSYSTPP (서열번호 130), 및 QELSGYLS (서열번호 134), RLIYAASTLDS (서열번호 135), LQYAIYPY (서열번호 136), 및 ESVDSYGNSFMH (서열번호 140), LLIYLASNLES (서열번호 141), QQNNYDPW (서열번호 142), HDISNYLN (서열번호 146), LLIYYTSRLHS (서열번호 147), QQGKTLLW (서열번호 148), 및 QNLLNSGNQKKYLN (서열번호 152), LLIYWASTRES (서열번호 153), QNDYSYPF (서열번호 154), 및 QDINKYIA (서열번호 158), LLIHYTSTLQP (서열번호 159), LQYDYLW (서열번호 160), 및 QEISVYLS (서열번호 164), RLIYAASTLDS (서열번호 165), LQYASYPY (서열번호 166), 및 QSLLYSSNQKNNLA (서열번호 170), LLIYWASTRES (서열번호 171), QQYYSYR (서열번호 172), 및 ESVDGYGDIFML (서열번호 176), LLIYFASNLES (서열번호 177), QQNNEDPY (서열번호 178), 및 RASSSINYMH (서열번호 182), PWIFATSNLAS (서열번호 183), QQWRSDRALT (서열번호 184), 및 RASSNVISSYVH (서열번호 188), LWIYSTSNLAS (서열번호 189) 및 QQYSGYPLT (서열번호 190) 중에서 선택될 수 있다.
세포외 도메인 및 막관통 도메인은 바람직하게는 서열번호 10 서열을 포함하는 가요성 링커에 의하여 함께 연결된다. 다시 말해서, 상기 항-CLL1 CAR들은 우선적으로 서열번호: 11 내지 서열번호: 34로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 90 %, 95 % 97 % 또는 99 % 동일성을 보이는 폴리펩타이드 서열을 포함하는 세포외 리간드-결합 도메인을 포함한다(표 2 참조).
여기에서 사용된 대로 용어 "재조합 항체"는 예를 들어, 박테리오파지, 효모 발현 시스템 또는 a 포유류 세포 발현 시스템에 의하여 발현되는 항체 또는 항체 단편과 같은 재좋바 DNA 기술을 이용하여 만들어지는 항체 또는 항체 단편이 의미된다. 그 용어는 항체 또는 항체 단편을 코드하는 DNA 분자의 합성에 의하여 만들어진, 그리고 DNA 분자가 항체 또는 항체 단편 단백질, 또는 항체 또는 항체 단편을 지정하는(specify) 아미노산 서열을 발현시키고, 이때 그 DNA 또는 아미노산 서열은 당업계에 잘 알려지고 이용가능한 재조합 또는 합성 DNA 또는 아미노산 서열 기술을 이용하여 수득되는 것인, 항체 또는 항체 단편을 의미하는 것으로 이해되어야 한다.
본 발명은 상기 세포 외 리간드 결합-도메인이 인간화된 VH 및 VL 체인들을 포함하는, 상기 기재된, CLL1 특이적 단일-체인 키메라 항원 수용체 (항-CLL1 scCAR)을 개시한다.
여기에 기재된 대로 용어 "인간화된 항체"에 의하여, 폴리펩타이드들이 인간화된 중쇄 가변 영역 및 인간화된 경쇄 가변 영역을 포함하는 것이 의미된다. 예를 들어 폴리펩타이드들은 인간 항체의 경쇄 및 중쇄 가변 영역들의 프레임워크(framework) (FR) 영역들을 포함할 수 있는 반면, 부모(parental) 단일클론 항체의 항원-결합 특이성을 상당히 유지한다. 인간화된 중쇄 체인 가변 영역 및/또는 인간화된 경쇄 가변 영역은 상보성(complementary)-결정(determining) 영역들(regions) (CDR들)은 제외하고, 적어도 약 87% 인간화되고, 적어도 약 90% 인간화되고, 적어도 약 95% 인간화되고, 적어도 약 98% 인간화되고, 또는 적어도 약 100% 인간화된다. 항원-결합 폴리펩타이드들 분자들은 단일클론 항체 기증자들 (예컨대, 마우스 단일클론 항체 기증자들)로부터 유래될 수 있고, 단일클론 항체들로부터의 CDR들 (예컨대, 마우스 단일클론 CDR들)을 포함할 수 있다.
여기에서 사용된 대로 용어 "단일클론 항체"에 의하여 자연적인 항체보다 더 풍부하고 균일하며, CLL1 항원 상 단일 부위에 특이적으로 결합할 수 있는 바이러스-형질전환된 백혈구 또는 하이브리도마의, 실험실에서-자란 세포 클론에 의하여 생산된 항체가 의미된다. 그것들은 몇몇 다른 면역 세포들로부터 만들어진 폴리클로날 항체들과는 대조적으로, 고유의 부모 세포의 클론들 모두인 동일한 면역 세포들에 의하여 만들어진 단일특이적 항체들이다. 단일클론 항체들은, 그것들이 동일한 에피토프에 결합하는, 1가항체 친화성이 있다. 인간화에 적용되는 현재의 방법론은 Lefranc MP et al (Lefranc, MP, Ehrenmann F , Ginestoux C, Giudicelli V , Duroux P “Use of IMGT (®) databases and tools for antibody engineering and humanization”, Methods Mol Biol. 2012; 907: 3-37)에 따른다. 이들 4 개의 선형들(alignments)이 표시된다.
인간화된 항체는 CDR-그래프팅(grafting) (예컨대, 각각이 그 전체가 참조로서 여기에 포함된, European Patent No. EP 239,400; International Publication No. WO 91/09967; 및 U.S. Pat. Nos. 5,225,539, 5,530,101, 및 5,585,089 참조), 베니어링(veneering) 또는 재-표면작업(resurfacing) (예컨대, 각각이 그 전체가 참조로서 여기에 포함된, European Patent Nos. EP 592,106 and EP 519,596; Padlan, 1991, Molecular Immunology, 28(4/5):489-498; Studnicka et al., 1994, Protein Engineering, 7(6):805-814; and Roguska et al., 1994, PNAS, 91:969-973 참조), 체인 셔플링(shuffling) (예컨대, 그 전체가 참조로서 여기에 포함된, U.S. Pat. No. 5,565,332 참조), 및 예컨대, 각각이 그 전체가 참조로서 여기에 포함된, U.S. Patent Application Publication No. US2005/0042664, U.S. Patent Application Publication No. US2005/0048617, U.S. Pat. No. 6,407,213, U.S. Pat. No. 5,766,886, International Publication No. WO 9317105, Tan et al., J. Immunol., 169: 1119-25 (2002), Caldas et al., Protein Eng., 13(5):353-60 (2000), Morea et al., Methods, 20(3):267-79 (2000), Baca et al., J. Biol. Chem., 272(16): 10678-84 (1997), Roguska et al., Protein Eng., 9(10):895-904 (1996), Couto et al., Cancer Res., 55 (23 Supp):5973s-5977s (1995), Couto et al., Cancer Res., 55(8): 1717-22 (1995), Sandhu J S, Gene, 150(2):409-10 (1994), and Pedersen et al., J. Mol. Biol., 235(3):959- 73 (1994)에 개시된 기술들을 포함하나, 이에 제한되지 않는 당업계에 알려진 여러가지 기술들을 이용하여 생산될 수 있다. 자주, 프레임워크 영역들의 프레임워크 잔기들은 항원 결합을 변화, 예를 들어 개선시키기 위하여, CDR 기증자 항체로부터 대응되는 잔기로 치환될 것이다. 이들 프레임워크 치환들은, 예컨대, 특정 위치들에서 흔치 않은 프레임워크 잔기들을 확인하기 위하여 서열 비교 및 항원 결합에 중요한 프레임워크 잔기들을 확인하기 위한 CDR 및 프레임워크 잔기들의 상호작용의 모델링에 의하여, 업계에서 잘 알려진 방법들에 의하여 확인된다. (예컨대, 그 전체가 참조로서 여기에 포함된, Queen et al., U.S. Pat. No. 5,585,089; and Riechmann et al., 1988, Nature, 332:323 참조).
보존적 아미노산 치환들은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 가진 아미노산 잔기로 치환된 것들이다. 유사한 측쇄들을 가진 아미노산 잔기들의 패밀리들은 업계에서 정의되어 있다. 이들 패밀리들은 염기성 측쇄들 (예컨대, 리신(lysine), 알기닌(arginine), 히스티딘(histidine)), 산성 측쇄들 (예컨대, 아스파르트산(aspartic acid), 글루탐산(glutamic acid)), 전하를 띠고 있지 않은 극성 측쇄들 (예컨대, 글리신, 아스파라긴(asparagine), 글루타민(glutamine), 세린, 트레오닌(threonine), 티로신(tyrosine), 시스테인(cysteine), 트립토판(tryptophan)), 비극성 측쇄들 (예컨대, 알라닌(alanine), 발린(valine), 류신(leucine), 이소류신(isoleucine), 프롤린(proline), 페닐알라닌(phenylalanine), 메티오닌(methionine)), 베타(beta)-가지달린(branched) 측쇄들 (예컨대, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄들 (예컨대, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)을 가진 아미노산들을 포함한다. 이런 식으로, 본 발명의 항-CLL1 CAR 내 하나 이상의 아미노산 잔기들은 동일한 측쇄 패밀리로부터 다른 아미노산 잔기들도 대체될 수 있고, 변화된 항-CLL1 CAR는 여기에 기재된 기능 분석들을 이용하여 CLL1에 결합하는 능력을 테스트될 수 있다.
본 발명의 항-CLL1 CAR는 CAR를 지니고 있다고 여겨지는 면역 세포들을 대폭 감소시켜 결국 후에 인 비보에서 부작용들을 일으킬 것으로 의도되는 자살 도메인을 선택적으로 포함한다. 이러한 자살 도메인은 예를 들어, CAR 폴리펩타이드 서열 내로 CD20 미모토프(mimotope)의, 바람직하게는 서열 CPYSNPSLCS (서열번호 113)의, 두 개의 카피들을 포함시킴으로써 수득될 수 있다. CD20 미모토프(mimotope)의 상기 두 개의 카피들은 서로 그리고 또한 링커에 의하여 VL에 연결될 수 있다. 그것들은 또한 선택적 링커를 이용함으로써 (CD8알파와 같은) 힌지 및 항-CLL1 scFv 사이에 삽입될 수 있다. CD20 유사체들(mimetopes)은 리툭시맙(Rituximab) (McLaughlin P, et al. 1998)과 같은 항-CD20 항체들에 의하여 결합될 수 있다. 본 발명의 항-CLL1 CAR는 이런 식으로 CLL1 세포 표면 항원, 선택적으로 인간화된, 링커 L, 자살 도메인, 힌지 또는 그것의 부분, 막관통 도메인, 공-자극 도메인 및 자극성 도메인에 결합할 수 있는 VH 및 VL 체인들을 포함할 수 있다.
바람직한 예에서, 본 발명은 도 2 및 표 3-8들에 기재된 바와 같이, V1 내지 V6로부터 선택되는 폴리펩타이드 구조체 중 하나를 갖는 항-CLL1 특이적 단일-체인 키메라 항원 수용체 ("항-CLL1 scCAR" 또는 "scCAR")를 개시하는데, 상기 구조체는 단일클론 항-CLL1 항체로부터의 VH 및 VL을 포함하는 세포 외 리간드 결합-도메인, 힌지, 막관통 도메인, 신호전달(signaling) 도메인을 포함하는 세포질 도메인, 및 공-자극 도메인을 포함한다.
더 바람직한 예에서, 본 발명은 전술한 바와 같이 CLL1 특이적 scCAR를 개시하는데, 이때 상기 구조체 V1, V3 또는 V5는 FcγRIIIα, CD8 알파 또는 IgG1 힌지 및 CD8 알파 막관통 도메인를 포함한다.
또다른 더 바람직한 예에서, 상기 CLL1 특이적 scCAR는 공-자극 도메인 4-1BB 또는 the CD28, 또는 더욱 바람직하게는 4-1BB 공-자극 도메인을 포함한다.
본 발명은 전술한 바와 같이 CLL1 특이적 scCAR를 개시하는데, 이때 상기 구조체 V1, V3 또는 V5은 FcγRIIIα, CD8 알파 또는 IgG1 힌지 및 4-1BB 막관통 도메인를 포함한다.
본 발명은 전술한 바와 같이 CLL1 특이적 scCAR를 포함하는데, 이때 상기 구조체 V1, V3 또는 V5는 FcγRIIIα, CD8 알파 또는 IgG1, 4-1BB 세포질 도메인 및 CD8 알파 막관통 도메인을 포함한다.
바람직한 예에 따라, 본 발명의 항-CLL1 scCAR는, 도 2에 기재된 바와 같이, V1 내지 V6로부터 선택된 폴리펩타이드 구조체 중 하나를 갖고, 상기 구조체는 단일클론 항-CLL1 항체로부터의 VH 및 VL을 포함하는 세포 외 리간드 결합-도메인, 힌지, 막관통 도메인, CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하는 세포질 도메인 및 공-자극 도메인을 포함하고, 상기 CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인은 바람직하게는 서열번호 9 서열을 갖는다.
또다른 바람직한 예에 따라, 본 발명의 항-CLL1 scCAR는 도 2에 기재된 바와 같이, V1 내지 V6로부터 선택되는 폴리펩타이드 구조체 중 하나를 갖고, 상기 구조체는 단일클론 항-CLL1 항체로부터의 VH 및 VL을 포함하는 세포 외 리간드 결합-도메인, 힌지, 막관통 도메인, CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하는 세포질 도메인 및 4-1BB 공-자극 도메인을 포함하고, 상기 4-1BB 공-자극 도메인은 바람직하게는 서열번호 8 서열을 갖는다.
본 발명은 도 2에 기재된 대로, V1 내지 V6로부터 선택되는 폴리펩타이드 구조체 중 하나를 갖는 항-CLL1 scCAR를 개시하는데, 상기 구조체는 단일클론 항-CLL1 항체로부터의 VH 및 VL을 포함하는 세포 외 리간드 결합-도메인, FcγRIIIα 힌지, 바람직하게는 서열번호 6을 갖는, CD8α 막관통 도메인, CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하는 세포질 도메인 및 공-자극 도메인을 포함한다.
본 발명은 도 2에 기재된 대로, V1 내지 V6로부터 선택되는 폴리펩타이드 구조체 중 하나를 갖는 항-CLL1 scCAR를 개시하는데, 상기 구조체는 단일클론 항-CLL1 항체로부터의 VH 및 VL을 포함하는 세포 외 리간드 결합-도메인, CD8α 힌지, 바람직하게는 서열번호 6를 갖는 CD8α 막관통 도메인, CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하는 세포질 도메인 및 공-자극 도메인을 포함한다.
본 발명은 도 2에 기재된 대로, V1 내지 V6로부터 선택되는 폴리펩타이드 구조체 중 하나를 갖는 항-CLL1 scCAR를 개시하는데, 상기 구조체는 단일클론 항-CLL1 항체로부터의 VH 및 VL을 포함하는 세포 외 리간드 결합-도메인, IgG1 힌지, 바람직하게는 서열번호 6을 갖는 CD8α 막관통 도메인, CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하는 세포질 도메인 및 공-자극 도메인을 포함한다.
본 발명은 도 2에 기재된 대로, V1 내지 V6로부터 선택되는 폴리펩타이드 구조체 중 하나를 갖는 항-CLL1 scCAR를 개시하는데, 상기 구조체는 단일클론 항-CLL1 항체로부터의 VH 및 VL을 포함하는 세포 외 리간드 결합-도메인, FcγRIIIα 힌지, 바람직하게는 서열번호 7을 갖는 4-1BB 막관통 도메인, CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하는 세포질 도메인 및 공-자극 도메인을 포함한다.
본 발명은 도 2에 기재된 대로, V1 내지 V6로부터 선택되는 폴리펩타이드 구조체 중 하나를 갖는 항-CLL1 scCAR를 개시하는데, 상기 구조체는 단일클론 항-CLL1 항체로부터의 VH 및 VL을 포함하는 세포 외 리간드 결합-도메인, CD8α 힌지, 바람직하게는 서열번호 7을 갖는 4-1BB 막관통 도메인, CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하는 세포질 도메인 및 공-자극 도메인을 포함한다.
본 발명은 도 2에 기재된 대로, V1 내지 V6로부터 선택되는 폴리펩타이드 구조체 중 하나를 갖는 항-CLL1 scCAR를 개시하는데, 상기 구조체는 단일클론 항-CLL1 항체로부터의 VH 및 VL을 포함하는 세포 외 리간드 결합-도메인, IgG1 힌지, 바람직하게는 서열번호 7을 갖는 4-1BB 막관통 도메인, CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하는 세포질 도메인 및 공-자극 도메인을 포함한다.
특히, 본 발명은 도 2에 기재된 대로, V1 폴리펩타이드 구조체를 갖는 항-CLL1 특이적 scCAR를 개시하는데, 상기 구조체는 단일클론 항-CLL1 항체로부터의 VH 및 VL을 포함하는 세포 외 리간드 결합-도메인, 힌지 바람직하게는 서열번호 3을 갖는 FcγRIIIα 힌지, 바람직하게는 서열번호 6을 갖는 CD8α 막관통 도메인, 바람직하게는 서열번호 9를 갖는 CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하는 세포질 도메인 및 바람직하게는 서열번호 8을 갖는 4-1BB 공-자극 도메인을 포함한다.
더욱 특히, 본 발명은 도 2에 기재된 대로, V1 폴리펩타이드 구조체를 갖는 항-CLL1 특이적 scCAR를 개시하는데, 상기 구조체는 단일클론 항-CLL1 항체로부터의 VH 및 VL을 포함하는 세포 외 리간드 결합-도메인, 바람직하게는 서열번호 3을 갖는 FcγRIIIα 힌지, 바람직하게는 서열번호 6을 갖는 CD8α 막관통 도메인, 바람직하게는 서열번호 9를 갖는 CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인를 포함하는 세포질 도메인 및 바람직하게는 서열번호 8을 갖는 4-1BB 공-자극 도메인을 포함하고, 이때 상기 VH 체인은 서열번호 11-13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31 또는 33와 적어도 80% 동일성을 갖고, 상기 VL은 서열번호 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32 또는 34와 적어도 80% 동일성을 갖는다.
또다른 측면에서, 본 발명은 도 2에 기재된 대로, V3 폴리펩타이드 구조체를 갖는 항-CLL1 특이적 scCAR를 개시하는데, 상기 구조체는 단일클론 항-CLL1 항체로부터 VH 및 VL 을 포함하는 세포 외 리간드 결합-도메인, 바람직하게는 서열번호 4를 갖는 CD8α 힌지, 바람직하게는 서열번호 6을 갖는 CD8α 막관통 도메인, 바람직하게는 서열번호 9를 갖는 CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하는 세포질 도메인 및 바람직하게는 서열번호 8을 갖는 4-1BB 공-자극 도메인을 포함한다.
더욱 특이적으로, 본 발명은 도 2에 기재된 대로, V3 폴리펩타이드 구조체를 갖는 항-CLL1 특이적 scCAR를 개시하는데, 상기 구조체는 단일클론 항-CLL1 항체로부터의 VH 및 VL을 포함하는 세포 외 리간드 결합-도메인, 바람직하게는 서열번호 4를 갖는 CD8α 힌지, 바람직하게는 서열번호 6을 갖는 CD8α 막관통 도메인, 바람직하게는 서열번호 9를 갖는 CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하는 세포질 도메인, 및 바람직하게는 서열번호 8을 갖는 4-1BB 공-자극 도메인을 포함하고, 이때 상기 VH 체인은 서열번호 11-13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31 또는 33과 적어도 80% 동일성을 갖고, 상기 VL 체인은 서열번호 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32 또는 34과 적어도 80% 동일성을 갖는다.
더 또다른 특정 측면에서, 본 발명은 도 2에 기재된 대로, V5 폴리펩타이드 구조체를 갖는 항-CLL1 특이적 scCAR를 개시하며, 상기 구조체는 단일클론 항-CLL1 항체로부터의 VH 및 VL을 포함하는 세포 외 리간드 결합-도메인, 바람직하게는 서열번호 5를 갖는 IgG1 힌지, 바람직하게는 서열번호 6을 갖는 CD8α 막관통 도메인, 바람직하게는 서열번호 9를 갖는 CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인를 포함하는 세포질 도메인 및 바람직하게는 서열번호 8을 갖는 4-1BB 공-자극 도메인을 포함한다.
더욱 특이적으로, 본 발명은, 도 2에 기재된 대로, V5 폴리펩타이드 구조체를 갖는 항-CLL1 특이적 scCAR을 개시하며, 상기 구조체는 단일클론 항-CLL1 항체로부터의 VH 및 VL을 포함하는 세포 외 리간드 결합-도메인, 바람직하게는 서열번호 5를 갖는 IgG1 힌지, 바람직하게는 서열번호 6을 갖는 CD8α 막관통 도메인, 바람직하게는 서열번호 9를 갖는 CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하는 세포질 도메인 및 바람직하게는 서열번호 8을 갖는 4-1BB 공-자극 도메인을 포함하고, 이때 상기 VH 체인은 서열번호 11-13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31 또는 33과 적어도 80% 동일성을 갖고 상기 VL 체인은 서열번호 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32 또는 34와 적어도 80% 동일성을 갖는다.
본 발명은 도 2에 기재된 대로, V1 폴리펩타이드 구조체를 갖는 항-CLL1 특이적 scCAR을 개시하며, 상기 폴리펩타이드는 서열번호 35, 41, 47, 53, 59, 65, 71, 77, 83, 89, 95, 101 또는 107와 적어도 80% 동일성을 갖는다.
특히, 도 2에 기재된 대로, V1 폴리펩타이드 구조체를 갖는 상기 항-CLL1 특이적 scCAR는, 상기 구조체가 단일클론 항-CLL1 항체로부터의 VH 및 VL을 포함하는 세포 외 리간드 결합-도메인, 바람직하게는 서열번호 3을 갖는 FcγRIIIα 힌지, 바람직하게는 서열번호 6를 갖는 CD8α 막관통 도메인, 바람직하게는 서열번호 9를 갖는 CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하는 세포질 도메인, 바람직하게는 서열번호 8을 갖는 4-1BB 공-자극 도메인을 포함하고, 이때 상기 VH 체인은 서열번호 11,13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31 또는 33과 적어도 80% 동일성을 갖고, 상기 VL은 서열번호 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32 또는 34와 적어도 80% 동일성을 갖고, 그리고 이때 상기 폴리펩타이드는 서열번호 35, 41, 47, 53, 59, 65, 71, 77, 83, 89, 95, 101 또는 107과 적어도 80% 동일성을 갖는다.
본 발명은 도 2에 기재된 대로, 구조체 V3의 항-CLL1 특이적 scCAR을 개시하며, 상기 폴리펩타이드는 서열번호 37, 43, 49, 55, 61, 67, 73, 79, 85, 91, 97, 103 또는 109와 적어도 80% 동일성을 갖는다.
더욱 특이적으로, 본 발명은 도 2에 기재된 대로, V3 폴리펩타이드 구조체를 갖는 항-CLL1 특이적 scCAR를 개시하며, 상기 구조체는 단일클론 항-CLL1 항체로부터의 VH 및 VL를 포함하는 세포 외 리간드 결합-도메인, 바람직하게는 서열번호 4를 갖는 CD8α 힌지, 바람직하게는 서열번호 6을 갖는 CD8α 막관통 도메인, 바람직하게는 서열번호 9를 갖는 CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하는 세포질 도메인, 바람직하게는 서열번호 8을 갖는 4-1BB 공-자극 도메인을 포함하고, 이때 상기 VH 체인은 서열번호 11,13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31 또는 33과 적어도 80% 동일성을 갖고 상기 VL 체인은 서열번호 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32 또는 34와 적어도 80% 동일성을 갖고, 이때 상기 폴리펩타이드는 서열번호 37, 43, 49, 55, 61, 67, 73, 79, 85, 91, 97, 103 또는 109와 적어도 80% 동일성을 갖는다.
본 발명은 도 2에 기재된 대로, 구조체 V5의 항-CLL1 특이적 scCAR를 개시하며, 상기 폴리펩타이드는 서열번호 39, 45, 51, 57, 63, 69, 75, 81, 87, 93, 99, 105 또는 111과 적어도 80% 동일성을 갖는다.
더욱 특이적으로, 본 발명은 도 2에 기재된 대로, V5 폴리펩타이드 구조체를 갖는 항-CLL1 특이적 scCAR를 개시하며, 상기 구조체는 단일클론 항-CLL1 항체로부터의 VH 및 VL을 포함하는 세포 외 리간드 결합-도메인, 바람직하게는 서열번호 5를 갖는 IgG1 힌지, 바람직하게는 서열번호 6를 갖는 CD8α 막관통 도메인, 바람직하게는 서열번호 9를 갖는 CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하는 세포질 도메인, 및 바람직하게는 서열번호 8를 갖는 4-1BB 공-자극 도메인을 포함하며, 이때 상기 VH 체인은 서열번호 11,13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31 또는 33와 적어도 80% 동일성을 갖고 상기 VL 체인은 서열번호 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32 또는 34와 적어도 80% 동일성을 갖고, 그리고 이때 상기 폴리펩타이드는 서열번호 39, 45, 51, 57, 63, 69, 75, 81, 87, 93, 99, 105 또는 111과 적어도 80% 동일성을 갖는다.
본 발명은 더욱 특히 도 2에 기재된 대로 폴리펩타이드 구조체 V1, V3 또는 V5를 갖는 CLL1 단일-체인 특이적 키메라 항원 수용체 (scCAR)을 개시하고, 그리고 전술한 상기 구조체는 하기 CDR 서열들을 포함하는 단일클론 항-CLL1 항체로부터의 세포 외 리간드 결합-도메인 VH: GSISSSNWWS (서열번호 119), WIGEIYHSGSPDY (서열번호 120),KVSTGGFFDY (서열번호 121), 및 GSISSSNWWS (서열번호 122), WIGEIYHSGSPNY (서열번호 123), RSSSGGFFDY (서열번호 124), 및 GSISSSNWWS (서열번호 125), WIGEIYHSGSPNY (서열번호 126), RQTTAGSFDY (서열번호 127), 및 GYTFTSYFIH (서열번호 131), WIGFINPYNDGSKY (서열번호 132), TRDDGYYGYAMDY (서열번호 133), 및 GYTFTSYVMH (서열번호 137), WIGYINPYNDGTKY (서열번호 138), ARPIYFDNDY (서열번호 139), 및 QQNNYDPW (서열번호 143), WIGPINPYNDGTI (서열번호 144), ARTDDYDDYTMDY (서열번호 145), 및 GYTFTRYWMH (서열번호 149), WIGNIDPSDTETHY (서열번호 150), AIYYGNPSYYAMDY (서열번호 151), 및 GYIFTSYVMY (서열번호 155), WIGYINPY (서열번호 156), ARYYDYDYYFDY (서열번호 157), 및 GYTFTSYFMH (서열번호 161), WIGFINPYNDGTKY (서열번호 162),TRDDGYYDYAMDY (서열번호 163), 및 GFNIKDDYIH (서열번호 167), WIGWIDPEKGDTAYA (서열번호 168), TLTGRFDY (서열번호 169), 및 GYTFPSSNIH (서열번호 173), WIGVIYPGNGDTSY (서열번호 174), AIYFVYNWHFDV (서열번호 175), 및 GYTFTRYWMH (서열번호 179), MIHPSSGSTSYNEKVK (서열번호 180), RDGDYYYGTGDY (서열번호 181), 및 GYSITSAYYWN (서열번호 185), YISYDGRNNYNPSLKN (서열번호 186), AKEGDYDVGNYYAMDY (서열번호 187), 및 바람직하게는
하기 CDR 서열들을 포함하는 단일클론 항-CLL1 항체로부터의 세포 외 리간드 결합-도메인 VL: QSISSYLN (서열번호 128), LLIYAASSLQS (서열번호 129), QQSYSTPP (서열번호 130), 및 QELSGYLS (서열번호 134), RLIYAASTLDS (서열번호 135), LQYAIYPY (서열번호 136), and ESVDSYGNSFMH (서열번호 140), LLIYLASNLES (서열번호 141), QQNNYDPW (서열번호 142), HDISNYLN (서열번호 146), LLIYYTSRLHS (서열번호 147), QQGKTLLW (서열번호 148), 및 QNLLNSGNQKKYLN (서열번호 152), LLIYWASTRES (서열번호 153), QNDYSYPF (서열번호 154), 및 QDINKYIA (서열번호 158), LLIHYTSTLQP (서열번호 159), LQYDYLW (서열번호 160), 및 QEISVYLS (서열번호 164), RLIYAASTLDS (서열번호 165), LQYASYPY (서열번호 166), 및 QSLLYSSNQKNNLA (서열번호 170), LLIYWASTRES (서열번호 171), QQYYSYR (서열번호 172), 및 ESVDGYGDIFML (서열번호 176), LLIYFASNLES (서열번호 177), QQNNEDPY (서열번호 178), 및 RASSSINYMH (서열번호 182), PWIFATSNLAS (서열번호 183), QQWRSDRALT (서열번호 184), 및 RASSNVISSYVH (서열번호 188), LWIYSTSNLAS (서열번호 189), QQYSGYPLT (서열번호 190)를 포함하고,
- 그리고 이때 상기 구조체는 일반적으로:
힌지, 막관통 도메인 및 CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인를 포함하는 세포질 도메인 및 4-1BB로부터의 공-자극 도메인
을 포함한다.
본 발명은 상기와 같이 항-CLL1 단일-체인 특이적 키메라 항원 수용체 (항-CLL1 scCAR)를 개시하고, 이때 상기 세포 외 리간드 결합-도메인 VH 및 VL은 인간화된다.
본 발명은 전술한 바와 같이 CLL1 단일-체인 특이적 키메라 항원 수용체 (scCAR)을 개시하고, 이때 단일클론 항-CLL1 항체로부터의 상기 세포 외 리간드 결합-도메인 VH 는 하기 서열들 중 적어도 하나를 포함하고:
- QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCVVSGGSISSSNWWSWVRQPPGKGLEWIGEIYHSGSPNYNPSLKSRVTISVDKSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYSSSGGFFDYWGQGTLVTVSS (SC02-357에 대응한다),
- QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCVVSGGSISSSNWWSWVRQPPGKGLEWIGEIYHSGSPNYNPSLKSRVTISVDKSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARSSSGGFFDYWGQGTLVTVSS (SC02-378에 대응한다),
- QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCVVSGGSISSSNWWSWVRQPPGKGLEWIGEIYHSGSPNYNPSLKSRVTISVDKSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARQTTAGSFDYWGQGTLVTVSS (SC02-161에 대응한다),
- EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYFIHWVKQKPGQGLEWIGFINPYNDGSKYNEKFKGKATLTSDKSSSTAYMELSSLTSEDSAVYYCTRDDGYYGYAMDYWGQGTSVTVSS (M26에 대응한다),
- EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYVMHWVKQKPGQGLEWIGYINPYNDGTKYNEKFKGKATLTSDTSSSTAYMELNSLTSEDSAVYFCARPIYFDNDYFDYWGQGTTLKVSS (M31에 대응한다),
- EVQLQQSGPELVKPGASMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHEKNLEWIGPINPYNDGTIYNPNFKGKATLTVDKASSTAYMELLSLTSDDPAVYYCARTDDYDDYTMDYWGQGTSVTVSS (G4에 대응한다),
- QVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTRYWMHWVKQRPGQGLEWIGNIDPSDTETHYNQQFKDKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCAIYYGNPSYYAMDYWGQGTSVTVSS (M22에 대응한다),
- EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYIFTSYVMYWVKQKPGQGLEWIGYINPYNDGTKYNEKFKGKATLTSDKSSSTAYMELSSLTSEDSAVYYCARYYDYDYYFDYWGQGTTLTVSS (M29에 대응한다),
- EVQLRQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYFMHWVKQKPGQGLEWIGFINPYNDGTKYNEKFKGKATLTSDKSSSTAYMELNSLTSEDSAVYYCTRDDGYYDYAMDYWGQGTSVTVSS (M2에 대응한다),
- EVQLQQSGAELVRPGASVKLSCTASGFNIKDDYIHWVKQRPEQGLEWIGWIDPEKGDTAYASKFQDKATITSDTSSNTAYLQLSSLTSEDTAVYYCTLTGRFDYWGQGTTLTVSS (M5에 대응한다),
- QVQLQQPGAELVKPGASMKMSCKASGYTFPSSNIHWLKQTPGQGLEWIGVIYPGNGDTSYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAIYFCARVYNWHFDVWGAGTTVTVSS (G12에 대응한다),
- QVQLQQPGAELVKPGTSVKLSCKASGYTFTRYWMHWVKQRPGQGLEWIGMIHPSSGSTSYNEKVKNKATLTVDRSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARDGDYYYGTGDYWGQGTTLTVSS (21.26에 대응한다),
- DIQLQESGPGLVKPSQSLSLTCSVTGYSITSAYYWNWIRQFPGNKLEWMGYISYDGRNNYNPSLKNRISITRDTSKNQFFLKLNSVTTEDTATYYCAKEGDYDVGNYYAMDYWGQGTSVTVSS (1075.7에 대응한다),
그리고 단일클론 항-CLL1 항체로부터의 VL은 하기 서열들 중 적어도 하나를 포함한다:
- DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPPTFGQGTKVEIK (SC02-357, SC02-378 및 SC02161에 대응한다),
- DIQMTQSPSSLSASLGERVSLTCRATQELSGYLSWLQQKPDGTIKRLIYAASTLDSGVPKRFSGNRSGSDYSLTISSLESEDFADYYCLQYAIYPYTFGGGTKLEIKR (M26에 대응한다),
- TIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDSYGNSFMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEADDAATYYCQQNNYDPWTFGGGTKLEIK (M31에 대응한다),
- EIQMTQTPSSLSASLGDRVTISCRASHDISNYLNWYQQKPDGTLKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGKTLLWTFGGGTKLEIK (G4에 대응한다),
- DIVMTQSPSSLTVTAGEKVTMSCKSSQNLLNSGNQKKYLNWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYFCQNDYSYPFTFGAGTKLELK (M22에 대응한다),
- DIQMTQSPSSLSASLGGKVTITCKASQDINKYIAWYQHKPGKGPRLLIHYTSTLQPGIPSRFSGSGSGRDYSFSISNLEPEDIATYYCLQYDYLWTFGGGTKLEIK (M29에 대응한다),
- DIQMTQSPSSLSASLGERVSLTCRASQEISVYLSWLQQKPDGTIKRLIYAASTLDSGVPERFSGSRSGSDYSLTISSLESEDFADYYCLQYASYPYTFGGGTKLEIKR (M2에 대응한다),
- DIVMSQSPSSLAVSVGEKVTMSCKSSQSLLYSSNQKNNLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCQQYYSYRTFGGGTKLEIK (M5에 대응한다),
- NIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDGYGDIFMLWYQQKPGQPPKLLIYFASNLESGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEADDAATYYCQQNNEDPYTFGGGTKLEIKR (G12에 대응한다),
- QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSINYMHWYQQKPGSSPKPWIFATSNLASGVPSRFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWRSDRALTFGAGTKLEL (21.26에 대응한다),
- DIQLQESGPGLVKPSQSLSLTCSVTGYSITSAYYWNWIRQFPGNKLEWMGYISYDGRNNYNPSLKNRISITRDTSKNQFFLKLNSVTTEDTATYYCAKEGDYDVGNYYAMDYWGQGTSVTVSS (1075.7에 대응한다)
본 발명은 또한 전에 정의된 대로, CD33 항원, CD44 항원, CD47 항원, CD123 항원, CD96 항원 및 T-세포 면역글로불린(immunoglobulin) 뮤신(mucin)-3 (TIM-3)와 같은 CLL1에 특이적이지 않은 또다른 세포외 리간드 결합 도메인을 더 포함하는, CLL1 특이적 scCAR를 개시한다.
본 발명은 CAR 폴리펩타이드가 면역 세포의 막에 도달하게 돕기 위하여, 바람직하게는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 신호 펩타이드를 더 포함하는. 전술한 CLL1 특이적 scCAR를 개시한다.
본 발명은 전술한 CLL1 특이적 scCAR를 개시하는데, 이때 서열번호 10의 링커는 VH 및 VL 사이에 삽입된다.
폴리뉴클레오타이드들 , 벡터들:
본 발명은 또한 앞서 자세히 설명한 폴리펩타이드들 서열들을 코드하는 본 발명에 따른 항-CLL1 CAR의 세포들 내로 이종기원(heterologous) 발현을 가능하게 하는 폴리뉴클레오타이드들 및 벡터들에 대한 것이다.
폴리뉴클레오타이드들은 (예컨대 박테리아 숙주 세포 내로 도입을 위한 플라스미드, 또는 곤충 숙주 세포의 형질주입(transfection)을 위한 배큘로바이러스(baculovirus) 벡터와 같은 바이러스 벡터, 또는 포유류 숙주 세포의 형질주입을 위한 렌티바이러스(lentivirus)와 같은 바이러스 벡터) 발현 벡터 또는 발현 카세트에 포함될 수 있다.
특정 예에서, 다른 핵산 서열들은 2A 펩타이드를 코드하는 서열과 같은 라이보좀 스킵(skip) 서열을 코드하는 핵산 서열을 포함하는 벡터 또는 하나의 폴리뉴클레오타이드에 포함될 수 있다. 피코르나바이러스들(picornaviruses)의 아프토바이러스(Aphthovirus) 서브그룹(subgroup) 내로 확인된 2A 펩타이드들은 코돈들에 의하여 코드되는 두 개의 아미노산들 사이에 펩타이드 결합의 형성 없이 하나의 코돈에서 옆의 것으로 라이보좀 "스킵"을 야기한다 (((Donnelly and Elliott 2001; Atkins, Wills et al. 2007; Doronina, Wu et al. 2008) 참조). "코돈"에 의하여 하나의 아미노산 잔기 내로 라이보좀에 의하여 번역되는 mRNA 상 (또는 DNA 분자의 센스 가닥 상) 세 개의 뉴클레오타이드들이 의미된다. 이런 식으로, 두 개의 폴리펩타이드들이 폴리펩타이드들이 인 프레임(in frame)인 2A 올리고펩타이드 서열에 의하여 분리될 때 mRNA 내 단일의, 인접한 오픈 리딩 프레임으로부터 합성될 수 있다. 이러한 라이보좀 스킵 메커니즘들은 당업계에 잘 알려져 있으며, 단일 메신저 RNA에 의하여 코드되는 몇몇 단백질들의 발현을 위한 몇몇 벡터들에 의하여 사용되는 것으로 알려져 있다.
숙주 세포의 분비 경로 내로 막관통 폴리펩타이드를 향하기 위하여, 분비성 신호 서열(리더 서열, 프리프로(prepro) 서열 또는 프리(pre) 서열로도 알려짐)이 폴리뉴클레오타이드 서열 또는 벡터 서열에서 제공된다. 분비성 신호 서열은 막관통 핵산 서열로 작동적으로 연결되는데, 즉, 두 서열들이 올바른 리딩 프레임에서 연결(join)되고 숙주 세포의 분비성 경로 내로 새로 합성된 폴리펩타이드를 향하게 하기 위하여 위치된다. 분비성 신호 서열들은 특정 분비성 신호 서열들이 관심있는 핵산 서열 내 어디든 위치될 수 있는데도 불구하고, 관심있는 폴리펩타이드를 코드하는 핵산 서열로 5'에 보통 위치된다 (예컨대, Welch et al., U.S. Patent No. 5,037,743; Holland et al., U.S. Patent No. 5,143,830 참조). 선호되는 예에서, 신호 펩타이드는 아미노산 서열 서열번호: 1 및 2 또는 서열번호: 1 및/또는 2와 적어도 90 %, 95 % 97 % 또는 99 % 서열 동일성을 포함한다.
당업자는 유전 코드의 축퇴 관점에서, 상당한 서열 변이가 이들 폴리뉴클레오타이드 분자들 중에서 가능하다는 것을 인식할 것이다. 바람직하게는, 본 발명의 핵산 서열들은 포유류 세포들에서의 발현을 위하여, 바람직하게는 인간 세포들에서의 발현을 위하여 코돈-최적화된다. 코돈-최적화는, 교환되는 코돈들로써 아미노산들을 코드하는 이러한 코돈들과 같은, 이러한 종들의 고발현된 유전자들에서 보통 빈번한 코돈들에 의한 주어진 종들의 고 발현된 유전자들에서 보통 희귀한 코돈들의 흥미있는 서열에서의 교환을 가리킨다.
전달 방법들
본 발명은 면역 세포들에서 여기에 기재된 항-CLL1 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현시키기 위한 다른 수단들을 포함한다.
세포들 내로 폴리뉴클레오타이드 구조체를 도입하는 방법들은 당업계에 알려져 있고, 제한되지 않은 예들로서 상기 CAR를 코드하는 폴리뉴클레오타이드 구조체가 세포의 게놈 내로 통합되는 안정적인 형질전환(transformation) 방법들, 폴리뉴클레오타이드 구조체가 세포의 게놈 내로 통합되지 않는 일시적 형질전환(transformation) 방법들 및 바이러스 매개 방법들을 포함한다.
상기 폴리뉴클레오타이드들은 예를 들어, 재조합 바이러스 벡터들 (예컨대 레트로바이러스들, 아데노바이러스들), 리포좀(liposome) 등에 의하여 세포 내로 도입될 수 있다. 예를 들어, 일시적 형질전환(transformation) 방법들은 예를 들어 미세주입(microinjection), 전기천공법(electroporation) 또는 입자 총(particle bombardment), 세포 융합을 포함한다. 상기 폴리뉴클레오타이드들은 세포들에서 발현되는 관점에서, 벡터들, 더욱 특히 플라스미드들 또는 바이러스 내로 포함될 수 있다. 상기 플라스미드 벡터는 상기 벡터를 받는 세포들의 확인 및/또는 선택을 위하여 제공하는 선택 마커를 포함할 수 있다.
다른 이식유전자들(transgenes)은 하나의 벡터 내 포함될 수 있다. 상기 벡터는 2A 펩타이드를 코드하는 서열과 같은 라이보좀 스킵 서열을 코드하는 핵산 서열을 포함할 수 있다. 피코르나바이러스들(picornaviruses)의 아프트로바이러스(Aphthovirus) 서브그룹으로 확인된 2A 펩타이드들은 코돈들에 의하여 코드되는 두 아미노산들 사이에서 펩타이드 결합의 형성 없이 하나의 코돈에서 옆의 것으로 라이보좀 "스킵"을 야기한다 (Donnelly et al., J. of General Virology 82: 1013-1025 (2001); Donnelly et al., J. of Gen. Virology 78: 13-21 (1997); Doronina et al., Mol. And. Cell. Biology 28(13): 4227-4239 (2008); Atkins et al., RNA 13: 803-810 (2007) 참조).
"코돈"에 의하여 하나의 아미노산 잔기 내로 라이보좀에 의하여 번역되는 mRNA 상 (또는 DNA 분자의 센스 가닥 상) 세 개의 뉴클레오타이드들이 의미된다. 이런 식으로, 두 개의 폴리펩타이드들이 폴리펩타이드들이 인 프레임인 2A 올리고펩타이드 서열에 의하여 분리될 때, mRNA 내에서 단일의, 인접한 오픈 리딩 프레임으로부터 합성될 수 있다. 이러한 라이보좀 스킵 메커니즘들은 업계에 잘 알려져 있으며, 단일 메신저 RNA에 의하여 코드되는 몇몇 단백질들의 발현을 위한 몇몇 벡터들에 의하여 사용되는 것으로 알려져 있다.
본 발명의 더욱 바람직한 예에서, 본 발명에 따른 폴리펩타이드들를 코드하는 폴리뉴클레오타이드들은 예를 들어, 전기천공에 의하여 세포들 내로 직접 도입되는 mRNA일 수 있다. 본 발명자들은 T-세포에서 mRNA 전기천공을 위한 최적 조건을 결정하였다. 본 발명자는 세포들 내로 물질의 전달을 위하여 살아있는 세포들을 일시적으로 투과성으로 만드는 것을, 펄스된(pulsed) 전기장들의 이용에 의하여, 가능하게 하는 사이토펄스(cytoPulse) 기술을 사용하였다. PulseAgile (BTX Havard Apparatus, 84 October Hill Road, Holliston, MA 01746, USA)의 이용에 기초한 그 기술, 전기천공 파형들은 펄스 기간(duration), 강도와 더불어 펄스들 간의 간격(interval)의 자세한 통제를 허락한다 (U.S. patent 6,010,613 및 International PCT application WO2004083379). 이들 파라미터들 모두는 최소 치사율(mortality)로 높은 형질주입(transfection) 효율을 위한 최고의 조건들에 도달하기 위하여 변형될 수 있다. 기본적으로, 첫 번째 높은 전기장 펄스들은 포어(pore) 형성을 가능하게 하는 반면, 그 다음의 더 낮은 전기장 펄스들은 세포 내로 폴리뉴클레오타이드를 옮기는 것을 가능하게 한다.
전술한 다른 방법들은 세포 내로 scCAR을 도입하는 단계를 포함한다. 제한되지 않는 예로서, 상기 scCAR는 하나의 플라스미드 벡터에 의하여 코드되는 이식유전자들로서 도입될 수 있다. 상기 플라스미드 벡터는 또한 상기 벡터를 받는 세포들의 확인 및/또는 선택을 위하여 제공하는 선택 마커를 포함할 수 있다.
폴리펩타이드들은 세포 내로 상기 폴리펩타이드들을 코드하는 폴리뉴클레오타이드들의 도입의 결과로서 세포에서 인 시추(in situ)로 합성될 수 있다. 대체하여, 상기 폴리펩타이드들은 세포 밖에서 생산되고 그 다음에 거기로 도입될 수 있었다. 세포들 내로 폴리뉴클레오타이드 구조체(construct)을 도입하는 방법들은 업계에 알려져 있으며, 제한되지 않는 예들로, 폴리뉴클레오타이드 구조체가 세포의 게놈 내로 통합되는 안정적인 형질전환(transformation) 방법들, 폴리뉴클레오타이드 구조체가 세포 게놈 내로 통합되지 않는 일시적인 형질전환(transformation) 방법 및 바이러스 매개 방법들을 포함한다. 상기 폴리뉴클레오타이드들은 예를 들어, 재조합 바이러스 벡터들 (예컨대 레트로바이러스들, 아데노바이러스들), 리포좀(liposome) 등에 의하여 세포 내로 도입될 수 있다. 예를 들어, 일시적 형질전환 방법들은 미세주입, 전기천공법 또는 입자 총을 포함한다. 상기 폴리뉴클레오타이드들은 벡터들, 더욱 특히 세포들에서 발현되는 관점에서 플라스미드들 또는 바이러스 내 포함될 수 있다.
T-세포들의 활성화 및 확장
T-세포들의 유전적 변형 전 또는 후에, T-세포들은 예를 들어, 본 발명의 유전적으로 변형된 면역 세포들이 항원 결합 메커니즘들에 독립적으로 활성화되고 증식되는데도 불구하고, 면역 세포들, 특히 본 발명의 T-세포들은 예를 들어 U.S. 특허들 6,352,694; 6,534,055; 6,905,680; 6,692,964; 5,858,358; 6,887,466; 6,905,681; 7,144,575; 7,067,318; 7,172,869; 7,232,566; 7,175,843; 5,883,223; 6,905,874; 6,797,514; 6,867,041; 및 U.S. 특허 출원 공개 No. 20060121005 에 기재된 대로 방법들을 이용하여 일반적으로 더 활성화되고 확장될 수 있다. T-세포들은 인 비트로 또는 인 비보에서 확장될 수 있다.
일반적으로, 본 발명의 T 세포들은 T 세포를 위한 활성화 신호를 만들기 위하여, T-세포들의 표면 상 공-자극 분자 및 CD3 TCR 복합체를 자극하는 제제와의 접촉에 의하여 확장된다. 예를 들어, 칼슘 이노포어(ionophore) A23187, 포르볼(phorbol) 12-미리스테이트(myristate) 13-아세테이트(acetate) (PMA), 또는 피토헤마글루티닌(phytohemagglutinin) (PHA) 같은 분열촉진(mitogenic) 렉틴들(lectins)과 같은 화학물질들이 T-세포의 활성화 신호를 만들기 위하여 사용될 수 있다.
제한되지 않는 예들로서, T-세포 군집들(populations)은 항-CD3 항체 또는 그것의 항원-결합 단편과의 접촉에 의한 것과 같이 인 비트로로, 또는 표면에 고정된 항-CD2 항체, 또는 칼슘 이노포어와 함께 단백질 키나아제 C 활성화제(activator) (예컨대, 브리오스타틴(bryostatin))과의 접촉에 의하여, 자극될 수 있다. T-세포들의 표면에서 악세서리(accessory) 분자의 공-자극을 위하여, 악세서리 분자에 결합되는 리간드가 사용된다. 예를 들어, T-세포들의 군집은 T-세포들의 증식을 자극하기에 적합한 조건들 하, 항-CD3 항체 및 항-CD28 항체와 접촉될 수 있다. T 세포 배양에 적합한 조건들은 혈청 (예컨대, 소태아 또는 인간 혈청), 인터루킨-2 (IL-2), 인슐린, IFN-g, 1L-4, 1L-7, GM-CSF, -10, - 2, 1L-15, TGFp, 및 TNF- 또는 당업자에게 알려진 세포들의 성장을 위한 다른 임의의 첨가제들을 포함하는, 증식 및 생존 능력에 필요한 인자들을 포함할 수 있는, 적합한 배지(예컨대, 최소(Minimal) 필수(Essential) 배지(Media) 또는 RPMI Media 1640 또는, X-vivo 5, (Lonza))를 포함한다. 세포들의 성장을 위한 다른 첨가제들은 계면활성제, 플라스마네이트(plasmanate) 및 N-아세틸-시스테인(cysteine) 및 2-머캅토에탄올(mercaptoethanoi)과 같은 환원제들을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 배지는 RPMI 1640, A1M-V, DMEM, MEM, a-MEM, F-12, X-Vivo 1, 및 X-Vivo 20, 및 첨가된 아미노산들과 함께, Optimizer, 나트륨(sodium) 피루베이트(pyruvate) 및 비타민들, 혈청-없이, 또는 적합한 양의 혈청(또는 혈장)이 보충되어, 또는 호르몬들의 정의된 세트, 및/또는 T-세포들의 성장 및 확장에 충분한 양의 사이토카인(들)을 포함할 수 있다. 예컨대, 페니실린 및 스트렙토마이신과 같은 항생제들이 실험 배양에만 포함되고, 대상에 주입되는 세포들의 배양에는 포함되지 않는다. 타겟 세포들은 성장을 지지하는데 필요한 조건들, 예컨대, 적당한 온도 (즉, 37 ℃) 및 대기 (즉, 공기 플러스 5% C02) 하 유지된다. 여러가지 자극 시간들에 노출되어 온 T 세포들은 다른 특성들을 보일 수 있다.
또다른 특정 예에서, 상기 세포들은 조직 또는 세포들과 공-배양함으로써 확장될 수 있다. 상기 세포들은 또한 인 비보, 예를 들어 대상 내로 상기 세포를 투여한 후 대상의 혈액에서 확장될 수 있다.
조작된 면역 세포들
본 발명에 따른 "세포"는 일반적으로 타고난 그리고/또는 입양 면역 반응의 개시 및/또는 실행에 기능적으로 관여되는 조혈 기원의 세포를 가리킨다. 본 발명에 따른 세포는 바람직하게는 단리된 면역 세포, 그리고 더욱 바람직하게는 기증자로부터 수득된 T-세포이다. 본 발명에 따른 상기 면역 세포는 또한 줄기 세포로부터 유래될 수 있다. 줄기 세포들은 성체 줄기 세포들, 인간이 아닌 배아 줄기 세포들, 더욱 특히 인간이 아닌 줄기 세포들, 제대혈 줄기 세포들, 간세포들, 골수 줄기 세포들, 유도 다능성(pluripotent) 줄기 세포들, 전능(totipotent) 줄기 세포들 또는 조혈 줄기 세포들일 수 있다. 대표적인 인간 세포들은 CD34+ 세포들이다. 상기 단리된 세포는 또한 수지상 세포, 킬러 수지상 세포, 비만 세포, NK-세포, B-세포 또는 염증성 T-림프구들, 세포독성 T-림프구들, 조절성 T-림프구들 또는 헬퍼 T-림프구들로 구성된 군으로부터 선택된 T-세포일 수 있다. 또다른 예에서, 상기 세포는 CD4+ T-림프구들 및 CD8+ T-림프구들로 구성되는 군으로부터 유래될 수 있다. 본 발명의 세포들이 확장 및 유전적 변형 전, 세포들의 소스가 제한되지 않는 여러가지 방법들을 통하여 대상으로부터 수득될 수 있다. T-세포는 말초 혈액 단핵 세포들, 골수, 림프절 조직, 제대혈, 흉선 조직, 감염 부위로부터의 조직, 복수(ascites), 흉막(pleural) 삼출액(effusion), 비장(spleen) 조직, 및 종양들을 포함하는 여러가지 제한되지 않는 소스들로부터 수득될 수 있다. 본 발명의 특정 예들에서, 이용가능하고 업계에 알려진 많은 T 세포주들이 사용될 수 있다.
또다른 예에서, 상기 세포는 건강한 기증자, 암으로 진단받은 환자 또는 감염으로 진단받은 환자로부터 유래될 수 있다. 또다른 예에서, 상기 세포는 다른 표현형 특성들을 보이는 세포들의 혼합된 군집의 부분이다. 본 발명의 범위는 또한 전술한 방법에 따라 형질전환된 T- 세포로부터 수득된 세포주를 포함한다. 면역억제 치료에 내성이며 상기 방법에 의하여 수득될 수 있는 변형된 세포들은 본 발명의 범위에 포함된다.
바람직한 예에서, 본 발명은 환자들 내로 그것들의 동종이계 이식(transplantation)을 위한, CLL1 양성 세포들을 향하여 반응적인 그리고 기능적 TCR을 발현시키지 않는, 전술한 대로 CLL1 CAR을 지닌 것으로 여겨지는, 일차(primary) T-세포들의 군집 또는 T-세포들을 제공한다.
더 바람직한 예에서, 본 발명은 상기 선택된 약물로 치료된 환자들 내로 그것들의 동종이계 이식을 위하여, 선택된 약물에 내성이고 기능적 TCR을 발현시키지 않는, 전술한 대로의 CLL1 양성 세포들에 반응적이고 CLL1 scCAR을 지닌 것으로 여겨지는 T-세포들의 군집 또는 T-세포들을 제공한다. 본 발명은 여기에 참조로서 포함되며 WO2014/130635, WO2013176916, WO2013176915에 앞서 기재된 형질전환(transformation) 방법들에 따라 CLL1 CAR을 코드하는 벡터들 또는 폴리뉴클레오타이드들을 상기 면역 세포들 내로 엑스-비보로 도입하는 단계를 포함하는 면역요법을 위한 조작된 면역 세포들의 제조 방법을 포함한다.
바람직한 예에서, 상기 폴리뉴클레오타이드들은 세포 게놈에 안정적으로 통합되는 면에서 레트로바이러스 벡터들의 수단에 의하여 면역 세포들 내로 도입된다.
본 발명에 따른 CAR들을 지닌 것으로 여겨지는 면역 세포들의 조작 방법들
본 발명은 또한 동종이계 치료들에 사용되거나 (즉, 이식편대 숙주 반응의 감소된 위험을 가짐) 그리고/또는 여러가지 기준의 돌봄 치료들에 저항성으로 만들어질 수 있는) 덜 또는 비-동종반응성인, 항 CLL1 CAR를 지닌 것으로 여겨지는 면역 세포들을 생선하는 것을 목적으로 한다.
이 명세서에서 더 기재된 바와 같이, 상기 방법들은 적어도 하나의 엔도뉴클레아제(endonuclease)를 이용함으로써 상기 면역 세포를 유전적으로 변형시키는 단계를 더 포함할 수 있다.
- 용어 "엔도뉴클레아제"는 DNA 또는 RNA 분자, 바람직하게는 DNA 분자 내 핵산들 사이의 결합의 가수분해 (절단(cleavage))을 촉매화할 수 있는 임의의 야생형 또는 변종 효소를 가리킨다. 엔도뉴클레아제들은 그것의 서열에 관계 없이 DNA 또는 RNA 분자를 절단하지 않고, 특이적 폴리뉴클레오타이드 서열들에서 DNA 또는 RNA 분자를 인식하고 절단하는데, 이를 "타겟 서열들" 또는 "타겟 부위들"이라고 한다. 엔도뉴클레아제들은 12 염기쌍들(base pairs) (bp)보다 큰 길이, 더욱 바람직하게는 14-55 bp의 폴리뉴클레오타이드 인식 부위를 보통 가질 때, 희귀(rare)-절단(cutting) 엔도뉴클레아제들로 분류될 수 있다.
바람직하게는 본 발명의 방법들은 희귀 절단 엔도뉴클레아제를 수반한다. 희귀 절단 엔도뉴클레아제들은 예를 들어 호밍(homing) 엔도뉴클레아제 (Paques and Duchateau 2007), FokI (Porteus and Carroll 2005)와 같은 제한 효소의 촉매적 도메인과 조작된 징크-핑거 도메인들의 융합으로부터 생긴 키메라 징크(Zinc)-핑거(Finger) 뉴클레아제(nuclease) (ZFN), TALE-뉴클레아제(nuclease), 하기 (Gasiunas, Barrangou et al. 2012; Jinek, Chylinski et al. 2012; Cong, Ran et al. 2013; Mali, Yang et al. 2013)에 기재된 바와 같이 CRISPR 시스템으로부터의 Cas9 엔도뉴클레아제 또는 화학적 엔도뉴클레아제 (Eisenschmidt, Lanio et al. 2005; Arimondo, Thomas et al. 2006) 일 수 있다. 화학적 엔도뉴클레아제들에서, 화학적 또는 펩타이드 절단자(cleaver)는 핵산들의 폴리머에 또는 특이적 타겟 서열을 인식하는 또다른 DNA에 콘쥬게이트(conjugate)되어, 이로써 특이적 서열에 절단 활성을 타겟팅한다. 화학적 엔도뉴클레아제들은 또한 특이적 DNA 서열들에 결합하는 것으로 알려진, 오소페난트롤린(orthophenanthroline), DNA 절단(cleaving) 분자, 및 트리플렉스(triplex)-형성(forming) 올리고뉴클레오타이드들(oligonucleotides) (TFOs)의 콘쥬게이트들 같은 합성 뉴클레아제들을 포함한다. 희귀-절단 엔도뉴클레아제들은 상동(homologous) 재조합(recombination) (HR) 즉, 유전자 수선 메커니즘에 의하여 한 위치에서 DNA 이중(double)-가닥(strand) 손상들(breaks) (DSB들) 및 이 위치에서 외인성(exogeneous) DNA의 삽입의 유도에 의하여, 한 위치에서 유전자들을 불활성화시키거나 또는 이식유전자들을 통합시키는데 사용될 수 있다 (Perrin, Buckle et al. 1993; Rouet, Smih et al. 1994; Choulika, Perrin et al. 1995; Pingoud and Silva 2007).
- "TALE-뉴클레아제(nuclease)" (TALEN)에 의하여 핵산 타겟 서열을 절단하기 위하여 하나의 뉴클레아제 촉매적 도메인 및 전사(Transcription) 활성인자(Activator) 유사(Like) 효과기(Effector) (TALE)로부터 보통 유래된 핵산-결합 도메인으로 구성된 융합 단백질이 의도된다. 촉매적 도메인은 바람직하게는 뉴클레아제 도메인이고 더욱 바람직하게는 예를 들어 I-TevI, ColE7, NucA 및 Fok-I와 같은 엔도뉴클레아제 활성을 갖는 도메인이다. 특정 예에서, TALE 도메인은 예를 들어 I-CreI 및 I-OnuI 또는 그것의 기능적 변종(variant)과 같은 메가뉴클레아제(meganuclease)에 융합될 수 있다. 바람직한 예에서, 상기 뉴클레아제는 모노머인 TALE-뉴클레아제이다. 모노머인 TALE-뉴클레아제는 WO2012138927에 기재된 I-TevI의 촉매적 도메인과 조작된 TAL 반복들(repeats)의 융합과 같은, 특이적 인식 및 절단을 위한 다이머화를 요구하지 않는 TALE-뉴클레아제이다. 전사(Transcription) 활성인자(Activator) 유사(Like) 효과기(Effector) (TALE)은 박테리아 종 잔토모나스(Xanthomonas)로부터의 단백질로 각 반복이 핵산 타겟된 서열의 각 뉴클레오타이드 염기에 특이적인 위치 12 및 13 (RVD)에서 두(di)-잔기들을 포함하는, 다수의 반복된 서열들을 포함한다. 유사한 모듈식(modular) 염기 당 염기(base-per-base) 핵산(nucleic acid) 결합(binding) 특성들(properties) (MBBBD)을 가진 결합 도메인들은 또한 다른 박테리아 종들에서 본 출원인에 의하여 최근에 발견된 새로운 모듈식 단백질들로부터 유래될 수 있다. 새로운 모듈식 단백질들은 TAL 반복들보다 더 많은 서열 변동성을 보이는 이점을 가진다. 바람직하게는, 다른 뉴클레오타이드들의 인식과 관련된 RVD들은 C의 인식을 위한 D, T의 인식을 위한 NG, A의 인식을 위한 NI, G 또는 A의 인식을 위한 NN, A, C, G 또는 T의 인식을 위한 NS, T의 인식을 위한 HG, T의 인식을 위한 IG, G의 인식을 위한 NK, C의 인식을 위한 HA, C의 인식을 위한 ND, C의 인식을 위한 HI, G의 인식을 위한 HN, G의 인식을 위한 NA, G 또는 A의 인식을 위한 SN 및 T의 인식을 위한 YG, A의 인식을 위한 TL, A 또는 G의 인식을 위한 VT 및 A의 인식을 위한 SW이다. 또다른 예에서, 대단히 중요한 아미노산들 12 및 13은 뉴클레오타이드들 A, T, C 및 G를 향한 그것들의 특이성을 조절하기 위하여, 특히 이 특이성을 증강시키기 위하여 다른 아미노산 잔기들을 향해 돌연변이될 수 있다. TALE-뉴클레아제는 유전자 변형들 및 유전자 타겟팅을 자극하기 위하여 사용되고 이미 기재되어 왔다 (Boch, Scholze et al. 2009; Moscou and Bogdanove 2009; Christian, Cermak et al. 2010; Li, Huang et al. 2011). 조작된 TAL-뉴클레아제들은 TALENTM 상표로 이용 가능하고 (Cellectis, 8 rue de la Croix Jarry, 75013 Paris, France) Life Technologies (Carlsbad, California, USA)와 같은 제조업자로부터 주문될 수 있다.
타겟 서열을 인식하고 절단하는 선호되는 TALE-뉴클레아제들은 PCT/EP2014/075317에 기재되어 있다. 특히, 추가적인 촉매적 도메인이 타겟된 유전자들을 불활성화시키는 그것들의 능력을 증강시키기 위하여 돌연변이발생을 증가시키기 위하여 상기 희귀-절단 엔도뉴클레아제를 세포 내로 더 도입될 수 있다. 더 특이적으로, 상기 추가적 촉매적 도메인은 DNA 말단(end) 가공(processing) 효소(enzyme)이다. DNA 말단-가공 효소들의 제한되지 않는 예들은, 5-3' 엑소뉴클레아제들(exonucleases), 3-5' 엑소뉴클레아제들, 5-3' 알칼라인(alkaline) 엑소뉴클레아제들, 5' 플랩(flap) 엔도뉴클레아제들, 헬리카제들(helicases), 호스파타제(hosphatase), 하이드롤라제들(hydrolases) 및 주형-의존적 DNA 폴리메라제들이다. 이러한 촉매적 도메인의 제한되지 않는 예들은 hExoI (EXO1_HUMAN), 효모 ExoI (EXO1_YEAST), 대장균 ExoI, 인간 TREX2, 마우스 TREX1, 인간 TREX1, 소 TREX1, Rat TREX1, TdT (말단 디옥시뉴클레오티딜 트랜스페라제) 인간 DNA2, 효모 DNA2 (DNA2_효모)의 촉매적으로 활성인 유도체 또는 단백질 도메인을 포함한다. 바람직한 예에서, 상기 추가적인 촉매적 도메인은 3'-5'-엑소뉴클레아제 활성을 갖고, 그리고 더 바람직한 예에서, 상기 추가적 촉매적 도메인은 TREX이고, 더욱 바람직하게는 TREX2 촉매적 도메인이다 (WO2012/058458). 또다른 바람직한 예에서, 상기 촉매적 도메인은 단일 체인 TREX2 폴리펩타이드에 의하여 코드된다. 상기 추가적인 촉매적 도메인은 펩타이드 링커에 의하여 선택적으로 본 발명에 따른 뉴클레아제 융합 단백질 또는 키메라 단백질에 융합될 수 있다.
- "Cas9 엔도뉴클레아제"에 의하여 타입 II 원핵세포 CRISPR (클러스터된(Clustered) 정기적으로(Regularly) 사이에 공간이 남겨진(Interspaced) 짧은(Short) 회귀성(palindromic) 반복들(Repeats)) 입양 면역 시스템으로부터의 RNA-guided Cas9 뉴클레아제 (Gasiunas, Barrangou et al. 2012; Jinek, Chylinski et al. 2012; Cong, Ran et al. 2013; Mali, Yang et al. 2013)에 기초하여 개발된 임의의 게놈 조작 수단이 의미된다 ((Sorek, Lawrence et al. 2013) 리뷰 참조). CRISPR 관련(Associated) (Cas) 시스템은 박테리아에서 처음 발견되었으며 외래(foreign) DNA, 바이러스 또는 플라스미드에 대항하여 방어로서 기능한다. CRISPR-매개 게놈 조작은 짧은 서열 모티프에 의하여 자주 측면에 위치하는(flanked) 타겟 서열의 선택에 의하여 먼저 진행되는데, 이를 프로토(proto)-스페이서(spacer) 인접(adjacent) 모티프(motif (PAM)라고 부른다. 타겟 서열 선택 후, 타겟 서열에 상보적인 특이적 crRNA이 조작된다. CRISPR 타입 II 시스템들에 요구되는 트랜스(Trans)-활성화되는(activating) crRNA (tracrRNA)는 crRNA와 쌍을 이루고(pair) 제공되는 Cas9 단백질에 결합된다. Cas9는 cRNA와 tracRNA의 염기 쌍 형성을 가능하게 하는 모듈식 앵커(anchor)로 작용한다 (Deltcheva, Chylinski et al. 2011). 이 삼원(ternary) 복합체에서, 이중 tracrRNA:crRNA 구조들은 동족(cognate) 타겟 서열로 엔도뉴클레아제 Cas9을 향하게 하는 가이드 RNA로 작용한다. Cas9-tracrRNA:crRNA 복합체에 의한 타겟 인식은 타겟 서열 및 crRNA 사이의 상동성(homology)를 위한 타겟 서열의 스캐닝(scanning)에 의하여 개시된다. 타겟 서열-crRNA 상보성에 추가하여, DNA 타겟팅은 프로토스페이서(protospacer)에 인접한 짧은 모티프(프로토스페이서 인접 모티프 - PAM)의 존재를 요구한다. 이중(dual)-RNA 및 타겟 서열 사이의 쌍 형성(pairing) 후, Cas9는 그 뒤에 PAM 모티프의 3 염기들 업스트림에 무딘(blunt) 이중 가닥 파손(break)을 도입한다 (Garneau, Dupuis et al. 2010). 면역 세포들에서, 특히 T-세포들에서, Cas9의 사용은 WO2014191128에 이전에 기재되어 왔다.
T-세포 수용체 ( TCR ) 요소를 코드하는 적어도 하나의 유전자의 불활성화에 의한 T-세포의 변형
한 측면에 따라, 본 발명의 항-CLL1 CAR를 지니는 것으로 여겨지는 T-세포는 예를 들어, WO 2013/176915에 기재된 대로 T-세포 수용체 (TCR)의 하나 이상의 요소를 발현시키는 적어도 하나의 유전자를 불활성화시키ㅋ는 것에 의하여, 덜 동종반응성으로 만들어질 수 있다. 이 불활성화는 HLA 또는 β2m 단백질 발현을 조절하거나 또는 코드하는 유전자와 같은, 또다른 유전자의 그것에 조합될 수 있다. 따라서, 이식편 대 숙주 증후군 및 이식편 거부반응의 위험이 상당히 감소된다.
세포들을 덜 동종이계(allogenic)로 만드는 방법들은 T-세포(Cell) 수용체(Receptor) (TCR) 요소를 코드하는 적어도 하나의 유전자, 특히 TCR알파(alpha) 및/또는 TCR베타(beta) 유전자들을 불활성화시키는 단계를 포함할 수 있다.
T-세포 수용체 (TCR)의 하나 이상의 요소를 불활성화시킴으로써 동종이계 이식에 적합한 면역 세포를 발현시키는 CAR를 제조하는, WO2013/176915에 기재된 방법들은 여기에 참조로서 모두 포함된다.
본 발명은 T-세포 수용체 (TCR)의 하나 이상의 요소를 발현시키는 적어도 하나의 유전자가 불활성화된, 면역 세포를 발현시키는 항-CLL1 CAR를 포함한다. 이와 같이, 본 발명은 T-세포 수용체 (TCR)의 하나 이상의 요소를 발현시키는 적어도 하나의 유전자가 불활성화된, T 세포를 발현시키는 항-CLL1 CAR를 제공한다.
TCR 유전자를 불활성화시킴으로써 관심있는 유전자가 기능적 단백질 형태로 발현되지 않는 것이 의도된다. 특정 예들에서, 하나의 희귀-절단 엔도뉴클레아제의, 조작하기 위한 제공된 세포들에서 방법의 유전적 변형은 방법에 의존하여, 상기 희귀-절단 엔도뉴클레아제는 하나의 타겟인 유전자에서 특이적으로 절단을 촉매화하여, 이로써 상기 타겟인 유전자를 불활성화시킨다. 희귀-절단 엔도뉴클레아제에 의하여 핵산 가닥 손상들은 상동(homologous) 재조합(recombination) 또는 비상동(non-homologous) 말단(end)-결합(joining) (NHEJ)의 구별되는 메커니즘들을 통하여 보통 수선된다. 그러나, NHEJ는 절단 자리에서 DNA 서열에 절단을 자주 야기하는 완전하지 않은 수선 공정이다. 메커니즘들은 직접적인 재(re)-결찰(ligation) (Critchlow and Jackson 1998)을 통하여 또는 소위 미세상동성(microhomology)-매개 말단(end) 결합(joining) (Betts, Brenchley et al. 2003; Ma, Kim et al. 2003)에 의하여 두 개의 DNA 말단들의 남은 것들의 재결합을 수반한다. 비상동(non-homologous) 말단(end)-결합(joining) (NHEJ)을 통한 수선은 작은 삽입들 또는 결실들을 야기하며, 특이적 유전자 넉아웃들(knockouts)의 창작에 사용될 수 있다. 상기 변형은 적어도 하나의 뉴클레오타이드의 치환, 결실 또는 첨가일 수 있다. 절단-유도된 돌연변이생성(mutagenesis) 이벤트, 즉 NHEJ 이벤트에 연속적인 돌연변이생성 이벤트가 발생한 세포들은 당업계에서 잘 알려진 방법에 의하여 확인 및/또는 선택될 수 있다. 특정 예에서, 각각의 샘플의 세포들 내로 T-세포 수용체 (TCR)의 요소를 코드하는 적어도 하나의 유전자를 불활성화시키는 단계는 T-세포 수용체 (TCR)의 요소를 코드하는 적어도 하나의 유전자를 방해할(disrupt) 수 있는 희귀-절단 엔도뉴클레아제를 세포 내로 도입시키는 단계를 포함한다. 더욱 특이적 예에서, 각각의 샘플의 상기 세포들은 T-세포 수용체 (TCR)의 요소를 코드하는 적어도 하나의 유전자를 방해할 수 있는 희귀-절단 엔도뉴클레아제를 코드하는 핵산으로 형질전환되어, 상기 희귀-절단 엔도뉴클레아제이 상기 세포들 내로 발현된다.
바람직한 예에서, 면역 세포들을 더 조작하는 상기 방법은 상기 T 세포들 내로 DNA 절단에 의하여 상기 언급된 유전자들을 선택적으로 불활성화시키기 위하여 특이적 희귀-절단 엔도뉴클레아제를 코드하는, 폴리뉴클레오타이드들, 특히 mRNA들을 도입하는 단계를 포함한다. 더 바람직한 예에서, 상기 희귀-절단 엔도뉴클레아제들은 TALE-뉴클레아제들 또는 Cas9 엔도뉴클레아제이다. TAL-뉴클레아제들은 희귀-절단 엔도뉴클레아제들의 다른 타입들보다 더 높은 특이성 및 절단 효율을 갖는 것이 지금까지 입증되었는데, 이는 그것들을 변함없는 턴오버(turn-over)로 대규모로 조작된 면역 세포들의 생산용으로 선택되는 엔도뉴클레아제들로 만든다.
본 발명에 따라, 불활성화된 T-세포 수용체 (TCR)의 하나 이상의 요소를 갖는 항-CLL1 CAR 면역 세포들은 의약으로서 사용되는 것이 의도된다.
약물 내성(resistant) T-세포들
또다른 측면에 따라, 본 발명의 면역 세포들을 발현시키는 항-CLL1 CAR는 유전적으로 더 조작되어, 그것들을 면역억제 약물들 또는 화학요법 치료들에 내성(resistant)으로 만들 수 있는데, 이는 CLL1 양성 악성 세포, 특히 AML과 관련된 암의 치료에 표준 치료로 사용된다.
항-대사산물들, 알킬화제들, 안트라사이클린들(anthracyclines), DNA 메틸트랜스페라제 억제제들, 백금 화합물들 및 방추체 독들과 같은 몇몇 세포독성 제제들 (항-암 약물)들)이 암 세포들을 죽이기 위하여 개발되어 왔다. 그러나 면역치료들과 같은 신규 치료들과 함께 이들 제제들의 도입은 문제가 많다. 예를 들어, 화학치료 제제들은 제제의 비-특이적 독성 프로파일들 때문에 로버스트(robus) 항-종양 면역적격(immunocompetent) 세포들의 확립에 해로울 수 있다. 세포 증식 경로들을 타겟팅하는 작은 분자-기반의 치료들은 항-종양 면역력의 확립을 또한 방해할 수 있다. 만약 일시적으로 효과적인 화학요법 식이요법들(regimens)이 신규 면역적격 세포 요법들과 조합될 수 있으면, 그러면 항-신생 치료에서의 중요한 개선이 달성될 수 있다 ((Dasgupta, McCarty et al. 2011 리뷰).
동종이계 면역 세포들의 선택적 접목 및 암 치료를 개선하기 위하여, 약물 내성이 화학치료 제제들의 독성 부작용들로부터 그것들을 보호하기 위하여 상기 동종이계 세포들에 부여된다. 면역 세포들의 약물 내성은 또한 생체 내 또는 생체 외에서 그것들의 풍부를 가능하게 하는데, 이는 약물 내성 유전자를 발현시키는 T-세포들이 약물 민감성 세포들에 비례하여 크게 증가하고 생존할 것이기 때문이다.
화학요법 제제들에 내성인 면역세포들을 조작하는 방법들은, 여기에 참조로서 전체가 포함되는 PCT/EP2014/075317에 개시되어 있다.
특히, 본 발명은 면역요법에 적합한 동종이계 세포들을 조작하는 방법에 대한 것으로 이때 T-세포 수용체 (TCR) 요소를 코드하는 적어도 하나의 유전자가 불활성화되고 하나의 유전자가 약물 내성을 부여하도록 변형되며, 하기를 포함한다:
- 항-CLL1 scCAR를 발현시키는 T-세포를 제공하는 단계; T 세포를 발현시키는 단계,
- T-세포 수용체 (TCR) 요소를 코드하는 적어도 하나의 유전자를 불활성화시킴으로써 상기 항- CLL1 scCAR를 발현시키는 T-세포를 변형시키는 단계;
- 상기 항-CLL1 scCAR를 발현시키는, 바람직하게는 인간화된 CLL1 scCAR를 발현시키는 T-세포를 변형하여, 상기 항-CLL1 scCAR를 발현시키는 T-세포에 약물 내성을 부여하는 단계;
- 상기 약물의 존재 하 상기 조작된 항-CLL1 scCAR를 발현시키는 T-세포를 확장(expand)시키는 단계.
대체하여, 본 발명은 하기를 포함하는 방법에 대한 것이다:
- 항-CLL1 scCAR를; 바람직하게는 인간화된 CLL1 scCAR를 발현시키는 T-세포를 제공하는 단계;
- 상기 항-CLL1 scCAR를 발현시키는 T-세포를 변형하여, 상기 항-CLL1 scCAR를 발현시키는 T-세포에 약물 내성을 부여하는 단계;
- T-세포 수용체 (TCR) 요소를 코드하는 적어도 하나의 유전자를 불활성화시킴으로써 상기 항-CLL1 scCAR를 발현시키는 T-세포를 변형시키는 단계;
- 상기 약물의 존재 하 상기 조작된 항-CLL1 scCAR를 발현시키는 T-세포를 확장시키는 단계.
특히, 본 발명은 또한 면역요법에 적합한 동종이계 세포들을 조작하는 방법에 대한 것인데, 이때 T-세포 수용체 (TCR) 요소를 코드하는 적어도 하나의 유전자는 불활성화되고 하나의 유전자는 약물 내성을 부여하도록 변형되며, 하기를 포함한다:
- 항-CLL1 scCAR; 바람직하게는 인간화된 CLL1 scCAR를 발현시키는 T-세포를 제공하는 단계;
- T-세포 수용체 (TCR) 요소를 코드하는 적어도 하나의 유전자를 불활성화시킴으로써 상기 항-CLL1 scCAR를 발현시키는 T-세포를 변형시키는 단계;
- 상기 항-CLL1 scCAR를 발현시키는 T-세포를 변형시켜, 상기 항-CLL1 scCAR를 발현시키는 T-세포에 약물 내성을 부여하는 단계;
- 상기 약물의 존재 하 상기 조작된 항-CLL1 scCAR를 발현시키는 T-세포를 확장시키는 단계.
대체하여, 본 발명은 하기를 포함하는 방법에 대한 것이다:
- 항-CLL1 scCAR를; 바람직하게는 인간화된 CLL1 scCAR를 발현시키는 T-세포를 제공하는 단계;
- 상기 항-CLL1 scCAR를 발현시키는 T-세포를 변형하여 상기 항-CLL1 scCAR를 발현시키는 T-세포에 약물 내성을 부여하는 단계;
- T-세포 수용체 (TCR) 요소를 코드하는 적어도 하나의 유전자를 불활성화시킴으로써 상기 항-CLL1 scCAR를 발현시키는 T-세포를 변형시키는 단계;
- 상기 약물의 존재 하 상기 조작된 항-CLL1 scCAR를 발현시키는 T-세포를 확장시키는 단계.
항- CLL1 scCAR -발현시키는 면역 세포들에서 약물 내성 유전자들의 발현
특정 예에서, 상기 약물 내성(resistance)은 적어도 하나의 약물 내성 유전자의 발현에 의하여 T-세포에 부여될 수 있다. 상기 약물 내성 유전자는 화학요법 제제 (예컨대 메토트렉사트(methotrexate))와 같은 제제에 대한 "내성(resistance)"를 코드하는 핵산 서열을 가리킨다. 다시 말해서, 세포에서 약물 내성 유전자의 발현은 약물 내성 유전자가 없는 상응하는 세포의 증식보다 더 큰 정도로 제제의 존재 하 세포들의 증식을 가능하게 한다. 세포에서 약물 내성 유전자의 발현은 제제의 존재 하 세포들의 증식을 가능하게 하며, 그것의 활성에 영향을 미치지 않는다. 본 발명의 약물 내성 유전자는 항-대사산물, 메토트렉사트, 빈블라스틴(vinblastine), 시스플라틴(cisplatin), 알킬화제들, 안트라사이클린들(anthracyclines), 세포독성 항생제들, 항-이뮤노필린들(immunophilins), 그것들의 유사체들(analogs) 또는 유도체들 등에 대한 내성을 코드할 수 있다.
한 예에서, 본 발명의 약물 내성 유전자는 약물 (또는 제제), 특히 아라사이틴(aracytine), 사이토신(cytosine) 아라비노사이드(arabinoside), 암사크린, 다우노루비신(daunorubicine), 이다루비신(idarubicine), 노반트론(novantrone), 미톡산트론(mitoxantrone), 베페사이드(vepeside), 에토포시드(etoposide) (VP16), 삼산화비소(arsenic trioxyde), 트랜스레티노산(transretinoic acid), 삼산화비소(arsenic trioxyde), 트랜스레티노산(transretinoic acid)의 조합, 메클로레타민(mechlorethamine), 프로카르바진(procarbazine), 클로람부실(chlorambucil), 시타라빈(cytarabine), 안트라사이클린들, 6-티오구아닌(thioguanine), 수산화요소(hydroxyurea), 프레드니손(prednisone), 및 그 조합으로부터 선택된 항-암 약물에 내성을 부여할 수 있다.
몇몇 약물 내성 유전자들이 타겟인 세포들에 약물 내성을 잠재적으로 부여하기 위하여 사용될 수 있는 것으로 확인되었다 (Takebe, Zhao et al. 2001; Sugimoto, Tsukahara et al. 2003; Zielske, Reese et al. 2003; Nivens, Felder et al. 2004; Bardenheuer, Lehmberg et al. 2005; Kushman, Kabler et al. 2007).
약물 내성 유전자의 한 예는 또한 디하이드로엽산(Dihydrofolate) 환원효소(reductase) (DHFR)의 돌연변이 또는 변형된 형태일 수 있다. DHFR은 세포에서 테트라하이드로폴레이트(tetrahydrofolate)의 양을 조절하는데 관여되는 효소이며, DNA 합성에 필수적이다. 메토트렉사트 (MTX)와 같은 엽산 유사체들은 DHFR을 억제하고, 이런 식으로 임상에서 항-신생 제제들로 사용된다. 치료에서 사용되는 항-엽산들에 의한 억제에 증가된 내성을 갖는 DHFR의 다른 형태들이 기재되어 왔다. 특정 예에서, 본 발명에 따른 약물 내성 유전자는 인간 야생형 DHFR (GenBank: AAH71996.1)의 돌연변이 형태를 코드하는 핵산 서열일수 있는데, 이는 메토트렉사트와 같은 항-엽산 치료에 내성을 부여하는 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다. 특정 예에서, DHFR의 돌연변이 형태는 G15, L22, F31 또는 F34 위치에서, 바람직하게는 L22 또는 F31 위치들에서 적어도 하나의 돌연변이된 아미노산을 포함한다 (Schweitzer, Dicker et al. 1990); International application WO94/24277; US patent US6,642,043). 특정 예에서, 상기 DHFR 돌연변이 형태는 L22 및 F31 위치들에서 돌연변이된 두 개의 아미노산들을 포함한다. 여기에 기재된 아미노산 위치들의 관련성은 GenBank: AAH71996.1에서 제시된 야생형 DHFR 폴리펩타이드의 형태의 아미노산들의 위치들의 면에서 자주 표현된다. 특정 예에서, 15 위치에서 세린 잔기은 바람직하게는 트립토판 잔기로 대체된다. 또다른 특정 예에서, 22 위치의 류신 잔기는 바람직하게는 항엽산제들에 대한 돌연변이 DHFR의 결합을 방해할 아미노산으로, 바람직하게는 페닐알라닌 또는 티로신과 같은 전하를 띠지 않은 아미노산 잔기들로 대체된다. 또다른 특정 예에서, 31 또는 34 위치들에서 페닐알라닌 잔기는 알라닌, 세린 또는 글리신과 같은 작은 친수성 아미노산으로 대체된다.
여기에서 사용된 대로, "항엽산 제제" 또는 "엽산(folate) 유사체들"은 일정 레벨에서 엽산 대사 경로를 방해하도록 향해지는 분자를 가리킨다. 항엽산 제제들의 예들은, 예컨대, 메토트렉사트 (MTX); 아미노테린(aminopterin); 트리메트렉사트(trimetrexate) (뉴트렉신(Neutrexin)™); 에다트렉사트(edatrexate); N10-프로파길(propargyl)-5,8-디데아자폴릭산(dideazafolic acid) (CB3717); ZD1694 (Tumodex), 5,8-디데아자이소폴릭산(dideazaisofolic acid) (IAHQ); 5,10-디데아자테트라하이드로폴릭산(dideazatetrahydrofolic acid) (DDATHF); 5-데아자폴릭산(deazafolic acid); PT523 (N 알파-(4-아미노-4-디옥시테로일(deoxypteroyl))-N 델타-헤미프탈로일(hemiphthaloyl)-L-오르니틴(ornithine)); 10-에틸-10-데아자아미노프테린(deazaaminopterin) (DDATHF, lomatrexol); 피리트렉심(piritrexim); 10-EDAM; ZD1694; GW1843; 페메트렉사트(Pemetrexate) 및 PDX (10-프로파길(propargyl)-10-데아자아미노프테린( deazaaminopterin))을 포함한다.
약물 내성 유전자의 또다른 예는 또한 구아노신(guanosine 뉴클레오타이드들의 데노보(de novo) 합성에서의 속도(rate)-제한(limiting) 효소인, 이오니신(ionisine)-5'-모노포스페이트(monophosphate) 디하아드로게나제(dehydrogenase) II (IMPDH2)의 돌연변이 또는 변형된 형태일 수 있다. IMPDH2의 돌연변이 또는 변형된 형태는 IMPDH 억제제 내성 유전자이다. IMPDH 억제제들은 마이코페놀산(mycophenolic acid) (MPA) 또는 그것의 프로드러그인 마이코페놀레이트 모페틸(mycophenolate mofetil) (MMF)일 수 있다. 돌연변이 IMPDH2는 IMPDH 억제제에 대하여 상당히 증가된 내성을 이끄는 야생형 인간 IMPDH2 (NP_000875.2)의 MAP 결합 부위에서 적어도 하나, 바람직하게는 두 개의 돌연변이들을 포함할 수 있다. 돌연변이들은 바람직하게는 T333 및/또는 S351 위치들이다 (Yam, Jensen et al. 2006; Sangiolo, Lesnikova et al. 2007; Jonnalagadda, Brown et al. 2013). 특정 예에서, 333 위치에서 트레오닌 잔기는 이소류신 잔기로 대체되고 351 위치에서 세린 잔기는 티로신 잔기로 대체된다. 여기에 기재된 아미노산 위치들의 관련성은 NP_000875.2에 제시된 야생형 인간 IMPDH2 폴리펩타이드의 형태의 아미노산들의 위치들의 면에서 자주 표현된다.
또다른 약물 내성 유전자는 칼시뉴린(calcineurin)의 돌연변이 형태이다. 많은 생물학적 과정에 관여되는 아주 흔하게 발현되는 세린/트레오닌 단백질 포스파타제이며, T-세포 활성화의 중심인 칼시뉴린(PP2B). 칼시뉴린은 촉매성 서브유닛 (CnA; 세 개의 아이소형태들(isoforms)) 및 조절성 서브유닛 (CnB; 두 개의 아이소형태들)로 이루어진 헤테로다이머이다. T-세포 수용체의 참여 후, 칼시뉴린은 전사 인자 NFAT을 탈인산화하는데, 이는 그것이 핵 및 IL2와 같은 활성화된 주요 타겟 유전자로 이동하는 것을 가능하게 한다. FKBP12와 복합체인 FK506, 또는 CyPA와 복합체인 사이클로스포린(cyclosporine) A (CsA)는 NFAT가 칼시뉴린의 활성 부위로 접근하는 것을 막아, 그것의 탈인산화를 방지하고, 이로써 T-세포 활성화를 억제한다 (Brewin, Mancao et al. 2009). 본 발명의 약물 내성 유전자는 FK506 및/또는 CsA와 같은 칼시뉴린 억제제에 내성인 칼시뉴린의 돌연변이 형태를 코드하는 핵산 서열일 수 있다. 특정 예에서, 상기 돌연변이 형태는 위치들: V314, Y341, M347, T351, W352, L354, K360에서 야생형 칼시뉴린 헤테로다이머 a의 적어도 하나의 돌연변이된 아미노산, 바람직하게는 T351 및 L354 또는 V314 및 Y341 위치들에서 이중 돌연변이들을 포함할 수 있다. 특정 예에서, GenBank: ACX34092.1에 상응하는 서열의 341 위치의 발린 잔기는 리신 또는 알기닌 잔기로 대체될 수 있고, 341 위치의 티로신 잔기는 페닐알라닌 잔기로 대체될 수 있고, 347 위치의 메티오닌은 글루탐산, 알기닌 또는 트립토판(tryptophane) 잔기로 대체될 수 있고, 351 위치의 트레오닌은 글루탐산 잔기로 대체될 수 있고, 352 위치의 트립토판(tryptophane) 잔기는 시스테인, 글루탐산 또는 알라닌 잔기로 대체될 수 있고, 353 위치의 세린은 히스티딘 또는 아스파라긴들 잔기로 대체될 수 있고, 354 위치의 류신은 알라닌 잔기로 대체될 수 있고; 360 위치의 리신은 알라닌 또는 페닐알라닌 잔기로 대체될 수 있다. 여기에 기재된 아미노산 위치들의 관련성은 (GenBank: ACX34092.1)에 제시된 야생형 인간 칼시뉴린 헤테로다이머 a 폴리펩타이드의 형태의 아미노산들의 위치들의 면에서 자주 표현된다.
또다른 특정 예에서, 상기 돌연변이 형태는 V120, N123, L124 또는 K125 위치들에서 야생형 칼시뉴린 헤테로다이머 b의 적어도 하나의 돌연변이된 아미노산을, 바람직하게는 L124 및 K125 위치들에서 바람직하게는 이중 돌연변이들을 포함할 수 있다. 특정 예에서, GenBank: ACX34095.1에 상응하는 아미노산 서열에서 120 위치의 발린은 세린, 아스파르트산, 페닐알라닌 또는 류신 잔기로 대체될 수 있고; 123 위치의 아스파라긴은 트립토판, 리신, 페닐알라닌, 알기닌, 히스티딘 또는 세린으로 대체될 수 있고; 124 위치의 류신은 트레오닌 잔기로 대체될 수 있고; 125 위치의 리신은 알라닌, a 글루탐산, 트립토판으로 대체될 수 있거나, 또는 류신-알기닌 또는 이소류신-글루탐산과 같은 두 개 잔기들이 125 위치의 리신 뒤에 첨가될 수 있다. 여기에 기재된 아미노산 위치들의 관련성은 (GenBank: ACX34095.1)에 제시된 야생형 인간 칼시뉴린 헤테로다이머 b 폴리펩타이드의 형태의 아미노산들의 위치들의 면에서 자주 표현된다.
또다른 약물 내성 유전자는 인간 알킬(alkyl) 구아닌(guanine) 트랜스페라제(transferase) (hAGT)를 코드하는 0(6)-메틸구아닌(methylguanine) 메틸트랜스페라제(methyltransferase) (MGMT) 이다. AGT는 니트로소우레아들(nitrosoureas) 및 테모졸로미드(temozolomide) (TMZ)와 같은 알킬화제들의 세포독성 효과들에 내성을 부여하는 DNA 수선 단백질이다. 6-벤질구아닌(benzylguanine) (6-BG)은 니트로소우레아 독성을 강하게 하는 AGT의 억제제이며, 이 제제의 세포독성 효과들을 강하게 하기 위하여 TMZ와 함께 공-투여된다. AGT의 변종들을 코드하는 MGMT의 몇몇 돌연변이 형태들은 6-BG에 의한 불활성화에 매우 내성이지만, DNA 손상을 수선하는 그것들의 능력을 유지한다. 특정 예에서, AGT 돌연변이 형태는 P16455 참조 하 데이터베이스 Uniprot에 기재된 것과 같은 아미노산 서열에서, 야생형 AGT P140 위치의 돌연변이된 아미노산을 포함할 수 있다. 바람직한 예에서, 140 위치에서 상기 프롤린은 리신 잔기로 대체된다.
또다른 약물 내성 유전자는 다중약물(multidrug) 내성(resistance) 단백질 1 (MDR1) 유전자이다. 이 유전자는 세포 막을 가로지르는 대사 부산물들의 이동에 관여되는 P-당단백질(glycoprotein) (P-GP)로 알려진 막 당단백질을 코드한다. P-Gp 단백질은 몇몇 구조적으로 관련없는 화학요법 제제들을 향한 넓은 특이성을 보인다.
다중약물 내성 단백질 1을 과발현시키는 것은 미톡산트론과 같은 약물들에 대한 내성을 부여하는 것으로 기재되어 왔다 (Charles S. Morrow, Christina Peklak-Scott, Bimjhana Bishwokarma, Timothy E. Kute, Pamela K. Smitherman, and Alan J. Townsend. Multidrug Resistance Protein 1 (MRP1, ABCC1) Mediates Resistance to Mitoxantrone via Glutathione-Dependent Drug Efflux Mol Pharmacol April 2006 69:1499-1505).
이런 식으로, 약물 내성은 MDR-1 (NP_000918)을 코드하는 핵산 서열의 발현에 의하여 세포들에 부여될 수 있다.
약물 내성 세포들을 제조하는 또 다른 방법은 암사크린에 대한 내성을 부여하기 위하여, 인간(Human) 토포이소메라제(Topoisomerase) II 유전자에서 Arg486 및 Glu571에서의 돌연변이들과 같은 특이적 돌연변이(들)을 가진 세포들을 제조하는 것이다 (S. PATEL, B. A. KELLER, and L. M. FISHER. 2000. MOLECULAR PHARMACOLOGY. Vol 57: p784-791 (2000).
약물 내성 세포들을 제조하는 또 다른 방법은 다우노루비신에 대한 내성을 부여하기 위하여 microRNA-21을 과발현시키는 세포들을 제조하는 것이다 (Involvement of miR-21 in resistance to daunorubicine by regulating PTEN expression in the leukaemia K562 세포주 Bai, Haitao et al. FEBS Letters , Volume 585 , Issue 2 , 402 - 408).
바람직한 예에서, 약물 내성을 부여한 mRNA 또는 단백질을 갖는 세포들은 또한 그 발현이 조절된(conditioned) 억제성 mRNA 또는 유전자을 포함하는데, 이는 상기 약물의 투여 후 또는 상기 약물의 존재 하 상기 약물 내성 세포들의 선택적 파괴를 가능하게 한다.
약물 내성 유전자는 또한 세포독성 항생제들에 대한 내성을 부여할 수 있으며, ble 유전자 또는 mcrA 유전자일 수 있다. 면역 세포에서 ble 유전자 또는 mcrA의 이소성(ectopic) 발현은 각각 블레오마이신(bleomycine) 또는 마이토마이신(mitomycin) C인 화학요법 제제에 노출될 때, 선택적 이점을 준다.
유전자 치료로의 가장 실질적인 접근은 벡터들, 바람직하게는 바이러스 벡터로 효과적인 유전자 전달을 이용하여 T-세포를 조작하기 위한 유전자의 첨가이다. 이런 식으로, 특정 예에서, 상기 약물 내성 유전자는 세포 내로 바람직하게는 적어도 하나의 벡터에 의하여 코드되는 이식유전자의 도입에 의하여 세포에서 발현될 수 있다.
한 예에서, 약물에 대한 내성을 부여하는 약물 내성 유전자 또는 변형된 유전자를 가진 세포들은 또한 유도성 자살 유전자를 포함한다 - 그 유도는 세포사를 유발하고 - 이것은 그것들의 선택적 파괴를 가능하게 한다.
게놈 내로 유전자들의 무작위 삽입은 삽입 부위 인근의 유전자 또는 삽입된 유전자의 부적절한 발현을 이끌 수 있다. 게놈 내 특이적 부위들에 대한 유전자들을 타겟으로 하기 위하여 내생 서열들을 포함하는 외인성 핵산의 상동 재조합을 이용한 특이적 유전자 치료는 안전한 T-세포들을 조작하는 것을 가능하게 할 수 있다. 전술한 바와 같이, 방법의 유전적 변형 단계는 적어도 내생 유전자 및 외인성 핵산 사이에 발생하는 상동 재조합과 같은 내생 유전자의 부분 및 약물 내성 유전자를 코드하는 서열을 포함하는 외인성 핵산의 세포들 내로의 도입 단계를 포함할 수 있다. 특정 예에서, 상기 내생 유전자는 야생형 "약물 내성" 유전자일 수 있어, 상동 재조합 후, 야생형 유전자가 약물에 대한 내성을 부여하는 유전자의 돌연변이 형태에 의하여 대체된다.
엔도뉴클레오티릭(endonucleolytic) 손상들은 상동 재조합의 속도(rate)를 자극하는 것으로 알려져 있다. 이런 식으롱, 특정 예에서, 본 발명의 방법은 내생 유전자 내에서 타겟 서열을 절단하는 것이 가능한 희귀-절단 엔도뉴클레아제를 세포에서 발현시키는 단계를 더 포함한다. 상기 내생 유전자는 예컨대 DHFR, IMPDH2, 칼시뉴린 또는 AGT를 코드할 수 있다. 상기 희귀-절단 엔도뉴클레아제는 TALE-뉴클레아제, 징크 핑거 뉴클레아제, CRISPR/Cas9 엔도뉴클레아제, MBBBD-뉴클레아제 또는 메가뉴클레아제일 수 있다.
항- CLL1 CAR-발현시키는 면역 세포들에서 약물 민감성 유전자들의 불활성화
또다른 특정 예에서, 상기 약물 내성은 약물 민감성 유전자의 불활성화에 의하여 본 발명의 세포(항-CLL1 CAR 발현시키는 면역 세포,)에 부여될 수 있다.
본 발명자는 면역요법을 위하여 T-세포를 조작하기 위하여, 특히, 치료적 제제 (항-암 약물)과 조합하여 사용될 수 있는 항-CLL1 CAR를 발현시키는 면역 세포를 조작하기 위하여, 잠재적 약물 민감성 유전자를 불활성화시키는 것을 추구하였다.
유전자를 불활성화시킴으로써 관심있는 유전자가 기능적 단백질 형태로 발현되지 않는 것이 의도된다. 특정 예에서, 하나의 희귀-절단 엔도뉴클레아제의 조작되기 위하여 제공된 세포들에서 방법의 유전적 변형은 발현에 의존하여, 상기 희귀-절단 엔도뉴클레아제가 하나의 타겟인 유전자의 절단을 특이적으로 촉매화하며, 이로써 상기 타겟인 유전자를 불활성화시킨다. 특정 예에서, 적어도 하나의 약물 민감성 유전자를 불활성화시키는 단계는 적어도 하나의 약물 민감성 유전자를 방해할 수 있는 희귀-절단 엔도뉴클레아제를 세포 내로 도입하는 단계를 포함한다. 더 특정 예에서, 상기 세포들은 약물 민감성 유전자를 방해할 수 있는 희귀-절단 엔도뉴클레아제를 코드하는 핵산으로 형질전환되며, 상기 희귀-절단 엔도뉴클레아제는 상기 세포들 내로 발현된다. 상기 희귀-절단 엔도뉴클레아제는 메가뉴클레아제, 징크 핑거 뉴클레아제, CRISPR/Cas9 뉴클레아제, A MBBBD-뉴클레아제 또는 TALE-뉴클레아제일 수 있다. 바람직한 예에서, 상기 희귀-절단 엔도뉴클레아제는 TALE-뉴클레아제이다.
바람직한 예에서, T-세포에 약물 내성을 부여하기 위하여 불활성화될 수 있는 약물 민감성 유전자는 인간 디옥시사이티딘(deoxycytidine) 키나제(kinase) (dCK) 유전자이다. 이 효소는 디옥시리보뉴클레오사이드들(deoxyribonucleosides) 디옥시티딘(deoxycytidine) (dC), 디옥시구아노신(deoxyguanosine) (dG) 및 디옥시아데노신(deoxyadenosine) (dA)의 인산화에 요구된다. 퓨린(purine) 뉴클레오타이드 유사체들(analogs) (PNAs)는 dCK에 의하여 모노-, 디- 및 트리-포스페이트 PNA로 대사된다. 그것들의 삼인산염(triphosphate) 형태들 및 특히 클로파라빈(clofarabine) 트리포스페이트(triphosphate)는 DNA 합성을 위하여 ATP와 경쟁하며, 프로아폽토틱(proapoptotic) 제제로 작용하고, 트리뉴클레오타이드(trinucleotide) 생산에 관여하는 리보뉴클레오타이드(ribonucleotide) 환원효소(reductase) (RNR)의 강한 억제제들이다.
바람직하게는, T 세포들에서 dCK의 불활성화는 TALE 뉴클레아제에 의하여 매개된다. 이 목적을 달성하기 위하여, dCK TALE-뉴클레아제의 몇몇 쌍들이 설계되어 왔고, 폴리뉴클레오타이드 수준에서 조립되었고 시퀀싱에 의하여 입증되어 왔다. 본 발명에 따라 사용될 수 있는 TALE-뉴클레아제의 예들은 PCT/EP2014/075317에 기재된다.
T 세포들에서 이 dCK 불활성화는 클로파라빈, 플루다라빈 또는 데시타빈(decitabine) (Dacogen)과 같은, 퓨린 뉴클레오사이드 유사체들 (PNA들)에 대한 내성을 부여한다.
또다른 바람직한 예에서, T 세포들에서 dCK 불활성화는 이들 이중 넉아웃 (KO) T 세포들에 클로파라빈과 같은 약물에 대한 내성 및 덜 동종이계(allogeneic)를 부여하는 TRAC 유전자들의 불활성화와 조합된다. 이 이중 특성은 암 환자들의 치료를 위한 화학요법과 함께 면역요법을 위한 "기성품인(off-the-shelf)" 동종이계 세포들을 가능하게 하는 치료적 목적에 특히 유용하다. 이 이중 KO 불활성화 dCK/TRAC는 동시에 또는 연속적으로 수행될 수 있다. 본 발명에서 성공을 준 TALE-뉴클레아제 dCK/TRAC 쌍들이 한 예는 PCT/EP2014/075317, 특히 2 자리들(loci) (dCK 및 TRAC)의 타겟 서열들에 기재되어 있다.
불활성화될 수 있는 효소의 또다른 예는 인간 하이포잔틴(hypoxanthine)-구아닌(guanine) 포스포리보실(phosphoribosyl) 트랜스페라제(transferase) (HPRT) 유전자 (Genbank: M26434.1)이다. 특히 HPRT는 조작된 T-세포들에서 불활성화되어 세포분열억제(cytostatic) 대사산물(metabolite), HPRT에 의하여 세포독성 티오구아닌 뉴클레오타이드으로 전환되고, 암, 특히 백혈병들 환자들을 치료하는데 현재 사용되는, 6-티오구아닌 (6TG)에 대한 내성을 부여할 수 있다 (Hacke, Treger et al. 2013). 구아닌들 유사체들은 포스포리보실 모이어티의 첨가를 촉매화하고 6 머캅토퓨린(mercapthopurine) (6MP)의 형성을 가능하게 하는 HPRT 트랜스페라제에 의하여 대사되며, 6 티오구아닌 (6TG)은 보통 백형병들을 치료하기 위한 림프소모(ymphodepleting) 약물들로서 사용된다. 그것들은 포스포리보실 모이어티의 첨가를 촉매화하고 TGMP 형성을 가능하게 하는 HPRT (하이포잔틴 포스포리보실 트랜스페라제)에 의하여 대사된다. 그것들의 그 다음의 인산화들은 DNA 내로 결국 통합되는 그것들의 삼인산화된(triphosphorylated) 형태들의 형성으로 이끈다. DNA 내로 통합되면, 티오 GTP는 그것의 티올레이트(thiolate) 편성(groupment)를 통한 DNA 복제의 정확성을 손상시키고, 세포 온전성에 매우 유해한 무작위 점 돌연변이를 일으킨다.
이런 식으로, 본 발명은 항-CLL1 scCAR를 발현시키는 세포, 특히 an 항-CLL1 scCAR를 발현시키는 T 세포를 제공하는데, 이때 scCAR는 (선택적으로 인간화된) 서열번호 35 내지 112 에 따른 폴리펩타이드 서열을 갖고, 이때 dCK 유전자는 불활성화된다.
또다른 예에서, T-세포의 표면에서 보통 발현되는 CD3의 불활성화는 테플리주맙(teplizumab)과 같은 항-CD3 항체들에 대한 내성을 부여할 수 있다.
항- CLL1 scCAR -발현시키는 면역 세포들에서 다중 약물 내성
또다른 특정 예에서, 본 발명자들은 동종이계 T-세포들, 특히 환자가 다른 약물들로 치료될 때 조작된 T-세포들의 선택을 매개하기 위하여 다중 약물들에 내성인 동종이계(allogenic) 항-CLL1 scCAR를 발현시키는 T-세포를 이용하여 "기성품인" 면역요법 전략을 개발하는 것을 추구하였다. 치료적 효율은 다중 약물 내성 동종이계 T-세포들을 유전적으로 조작함으로써 상당히 증강될 수 있다. 이러한 전략은 시너지 효과들을 보이는 약물 조합에 대응하는 암들의 치료에 특히 효과적이다. 게다가 다중 내성인 조작된 T-세포들은 최소 용량의 약물 제제들을 이용하여 확장되고 선택될 수 있다.
이와 같이, 본 발명에 따른 방법은 T-세포를 변형시켜 상기 T-세포에 다중 약물 내성을 부여하는 단계를 포함할 수 있다. 상기 다중 약물 내성은 하나보다 많은 약물 내성 유전자를 발현시킴으로써 또는 하나보다 많은 약물 민감성 유전자를 불활성화시킴으로써 부여될 수 있다. 또다른 특정 예에서, 다중 약물 내성은 적어도 하나의 약물 내성 유전자를 발현시킴으로써 그리고 적어도 하나의 약물 민감성 유전자를 불활성화시킴으로써 상기 T-세포에 부여될 수 있다. 특히, 다중 약물 내성은 DHFR의 돌연변이 형태, IMPDH2의 돌연변이 형태, 칼시뉴린의 돌연변이 형태, MGMT의 돌연변이 형태, ble 유전자, 및 mcrA 유전자와 같은 적어도 하나의 약물 내성 유전자를 발현시킴으로써 그리고 HPRT 유전자와 같은 적어도 하나의 약물 민감성 유전자를 불활성화시킴으로써 상기 T-세포에 부여될 수 있다. 바람직한 예에서, 다중 약물 내성은 HPRT 유전자를 불활성화시키고 DHFR의 돌연변이 형태를 발현시킴으로써; 또는 HPRT 유전자를 불활성화시키고 IMPDH2의 돌연변이 형태를 발현시킴으로써; 또는 HPRT 유전자를 불활성화시키고 칼시뉴린의 돌연변이 형태를 발현시킴으로써; HPRT 유전자를 불활성화시키고 MGMT의 돌연변이 형태를 발현시킴으로써; HPRT 유전자를 불활성화시키고 ble 유전자를 발현시킴으로써; HPRT 유전자불활성화시키고 mcrA 유전자를 발현시킴으로써 부여될 수 있다.
한 예에서, 본 발명은 하나보다 많은 약물 내성 유전자를 발현시키는, 또는 이때 하나보다 많은 약물 민감성 유전자가 불활성화된, 동종이계(allogenic) 항-CLL1 scCAR 발현시키는 T-세포를 제공한다.
항- CLL1 scCAR -발현시키는 면역 세포들에서 자살 유전자들
몇몇 예들에서, 조작된 T-세포들이 투여 후 몇 년 동안 확장되고 지속될 수 있기 때문에, 투여된 T-세포들의 선택적 제거를 가능하게 하는 안전한 메커니즘을 포함하는 것이 바람직할 수 있다. 이런 식으로, 몇몇 예들에서, 본 발명의 방법은 재조합 자살 유전자로 상기 T-세포들의 형질전환을 포함할 수 있다. 상기 재조합 자살 유전자는 대상에 투여될 때, 상기 T-세포들의 직접적인 독성 및/또는 통제되지 않는 증식의 위험을 감소시키는데 사용된다 (Quintarelli C, Vera F, blood 2007; Tey SK, Dotti G. , Rooney CM, boil blood marrow transplant 2007). 자살 유전자들은 인 비보에서 형질전환된 세포들의 선택적 제거를 가능하게 한다. 특히 자살 유전자는 비-독성 프로(pro)-드러그(drug)를 세포독성 약물로 전환시키거나 또는 독성 유전자 발현 산물을 발현시키는 능력을 가진다. 다시 말해서, "자살 유전자"는 산물을 코드하는 핵산인데, 이때 산물은 그 자체로 또는 다른 화합물들의 존재 하 세포사를 야기한다.
이러한 자살 유전자의 대표적인 예는 헤르페스(herpes) 심플렉스(simplex) 바이러스의 타미딘(thymidine) 키나제를 코드하는 것이다. 추가적인 예들은 바리셀라(varicella) 조스터(zoster) 바이러스의 티미딘 키나제 및 5-플루오로사이토신을 매우 독성인 화합물 5-플루오로우라실로 변환시키는 박테리아 유전자 사이토신 디아미나제(deaminase)이다. 자살 유전자들은 또한 제한되지 않는 예들로서 카스파제(caspase)-9 또는 카스파제-8 또는 사이토신 디아미나제를 포함한다. 카스파제-9는 다이머화(dimerization)의 특이적 화학적(chemical) 유도제(inducer) (CID)를 이용하여 활성화될 수 있다. 자살 유전자들은 또한 세포 표면에서 발현되는 폴리펩타이드들일 수 있고, 세포들을 치료적 단일클론 항체들에 민감하게 만들 수 있다. 여기에서 사용된 대로 "프로드러그(prodrug)"는 독성 산물로 전환될 수 있는 본 발명의 방법들에서 유용한 임의의 화합물을 의미한다. 프로드러그는 본 발명의 방법에서 자살 유전자의 유전자 산물에 의하여 독성 산물로 전환된다. 이러한 프로드러그의 대표적인 예는 HSV-티미딘 키나제에 의하여 독성 화합물로 인 비보에서 전환되는 간시클로비르(ganciclovir)이다. 간시클로비르 파생물은 나중에 종양 세포들에 독성이다. 프로드러그들의 다른 대표적 예들은 아시클로비르(acyclovir), FIAU [1-(2-디옥시-2-플루오로-β-D-아라비노퓨라노실)-5-아이오도우라실(iodouracil)], VZV-TK을 위한 6-메톡시퓨린 아라비노사이드 및 사이토신 디아미나제를 위한 5-플루오로사이토신을 포함한다.
하나의 바람직한 자살 유전자 시스템은 항-CLL1 CAR로부터 독립적으로 발현되는, WO2013153391에 기재된 소위 RQR8 폴리펩타이드에서와 같은, 항-CD20 mAb 리툭시맙에 의하여 인식되는 항원 모티프, 특히 QBen10를 포함하는 재조합 항원 폴리펩타이드를 이용한다. 공인된 항체 약물인, 리툭시맙은 그 다음에 필요할 때 세포 소모에 이용될 수 있다.
한 예에서, 본 발명은 하나보다 많은 약물 내성 유전자를 발현시키거나 또는이때 하나보다 많은 약물 민감성 유전자가 불활성화되는, 동종이계(allogenic) 항-CLL1 scCAR를 발현시키는 T-세포, 및 상기 세포들이 파괴되도록 하는 자살 유전자를 제공한다.
특히, 본 발명은 동종이계 T-세포, 특히 동종이계 항-CLL1 scCAR를 발현시키는 T-세포, 그리고 바람직하게는 SC02-357, SC02-378, SCO2-161, M26, M31, G4, M22, M29, M2, M5, G12, 21.26 또는 1075.7 항체들로부터의 scfv와 80% 내지 100% 동일성을 갖는 펩타이드를 포함하는, 동종이계 항-CLL1 scCAR를 발현시키는 T-세포에 대한 것이고, SC02-357, SC02-378, SCO2-161, M26, M31, G4, M22, M29, M2, M5, G12, 21.26 및 1075.7 항체들로부터의 scfv와 80% 내지 100% 동일성을 갖는 펩타이드를 포함하는 상기 동종이계 항-CLL1 scCAR를 발현시키는 T-세포는 더욱 특히 약물에 내성이고, 면역요법에 특이적으로 적합하다.
약물의 내성은 약물 민감성 유전자들의 불활성화 또는 약물 내성 유전자들의 발현에 의하여 부여될 수 있다. 본 발명에 적합한 약물들의 몇몇 예들은 클로파라빈 또는 플루다라빈(fludarabine)과 같은 퓨린 뉴클레오사이드 유사체들 (PNAs) 또는 6-머카바토퓨린 (6MP) 및 6 티오-구아닌 (6TG)과 같은 다른 약물들이다.
한 측면에서, 본 발명은 클로로파라빈(clorofarabine) 또는 플루다라빈과 같은 퓨린 뉴클레오타이드 유사체들(analogs) (PNA)에 내성으로 만들기 위한 면역 세포들의 조작 방법들을 제공하여, 그것들은 이들 현재의 화학요법들로 미리(pre)-치료된(treated) 환자들에서 암 면역요법 치료들에 사용될 수 있다.
약물들에 내한 내성은 dcK 및/또는 HPRT 유전자들과 같은 약물에 민감성의 원인이 되는 하나 이상의 유전자(들) (약물 민감성 유전자(들))을 불활성화시킴으로써 T-세포들에 부여될 수 있다.
또다른 측면에 따라 약물들에 내한 내성은 약물 내성 유전자을 발현시킴으로써 T-세포에 부여될 수 있다. 디하이드로엽산(dihydrofolate) 환원효소(reductase) (DHFR), 이노신(inosine) 모노포스페이트(monophosphate) 디하이드로게나제(dehydrogenase) 2 (IMPDH2), 칼시뉴린 또는 메틸구아닌(methylguanine) 트랜스페라제 (MGMT) 과 같은 몇몇 유전자들의 여러가지 대립 유전자들(alleles)이 본 발명에 따라 세포에 약물 내성을 부여하는 것으로 확인되었다.
예를 들어, Campath® (알레투주맙) 또는 리툭시맙 및 글루코코티코이드들 치료들의 약물 타겟들인 CD52 및 글루코코티코이드(glucocorticoid) 수용체들 (GR)은 불활성화되어 세포들을 이들 치료들에 내성으로 만들고, 특이적 항-CLL1 scCAR들을 지니지 않은 것으로 여겨지는 환자 자신의 T-세포들에 대해 경쟁력 있는 이익을 줄 수 있다. CD3 유전자의 발현은 또한 억제되거나 감소되어 또다른 면역 억제 약물인 테플리주맙에 내성을 부여할 수 있다. HPRT의 발현은 또한 본 발명에 따라 억제되거나 또는 감소되어, 특히 급성 림프아구(lymphoblasic) 백혈병의 치료를 위하여 화학요법에서 흔히 사용되는 세포증식억제(cytostatic) 제제인, 6- 티오구아닌에 대한 내성을 부여할 수 있다.
면역 체크포인트들 조작된 세포들
본 발명의 추가적인 측면에 따라, 면역 세포들은 더 처리되어(manipulated) CTLA4, PPP2CA, PPP2CB, PTPN6, PTPN22, PDCD1, LAG3, HAVCR2, BTLA, CD160, TIGIT, CD96, CRTAM, LAIR1, SIGLEC7, SIGLEC9, CD244, TNFRSF10B, TNFRSF10A, CASP8, CASP10, CASP3, CASP6, CASP7, FADD, FAS, TGFBRII, TGFBRI, SMAD2, SMAD3, SMAD4, SMAD10, SKI, SKIL, TGIF1, IL10RA, IL10RB, HMOX2, IL6R, IL6ST, CSK, PAG1, SIT1, FOXP3, PRDM1 (orblimp1), BATF, GUCY1A2, GUCY1A3, GUCY1B2, GUCY1B3로부터 선택되는 하기 유전자와 같은, T-세포들 활성화의 조절인자들로서 작용하는 "면역 체크포인트들"로서 작용하는 단백질들을 코드하는 유전자들을 불활성화시킴으로써, 그것들을 더 활성으로 또는 만들거나 고갈을 제한할 수 있고, 바람직하게는 상기 유전자는 PDCD1 또는 CTLA-4이다. 발현이 감소되거나 억제될 수 있는 유전자들의 예들은 또한 표 9에 표시된다.
본 발명은 또한 항- CLL1 scCAR를 발현시키는 동종이계 T-세포들을 제공하는데, 이때 T-세포 수용체 (TCR)의 하나 이상의 요소를 발현시키는 적어도 하나의 유전자가 불활성화되고 그리고/또는 유전자들 CTLA4, PPP2CA, PPP2CB, PTPN6, PTPN22, PDCD1, LAG3, HAVCR2, BTLA, CD160, TIGIT, CD96, CRTAM, LAIR1, SIGLEC7, SIGLEC9, CD244, TNFRSF10B, TNFRSF10A, CASP8, CASP10, CASP3, CASP6, CASP7, FADD, FAS, TGFBRII, TGFBRI, SMAD2, SMAD3, SMAD4, SMAD10, SKI, SKIL, TGIF1, IL10RA, IL10RB, HMOX2, IL6R, IL6ST, CSK, PAG1, SIT1, FOXP3, PRDM1 (orblimp1), BATF, GUCY1A2, GUCY1A3, GUCY1B2, GUCY1B3로부터 선택되는 하나의 유전자가 WO2014/184741에 참조된 대로 불활성화된다.
한 예에서 상기 유전자는 베타 2 마이크로글로불린 단백질을 코드하는 T-세포들 활성화의 조절인자로서 작용하는 유전자이다.
본 발명의 추가의 측면에 따라, 본 발명의 항-CLL1 scCAR-면역 세포들은 더 처리되어 그것들을 약물에, 특히 암에, 특히 AML과 같은 CLL1-발현시키는 세포-매개된 암에, 대항한 화학요법 동안 사용되는 약물에, 내성으로 만들 수 있다. 이것은 상기 약물에 내성을 부여하는 유전자를 도입함으로써 달성될 수 있다. 이 동일한 유전자는 전술한 바와 같이 유전자 유도성 억제/발현 시스템을 이용함으로써 켜지고 꺼질 수 있다. (Garcia EL, Mills AA (2002) Getting around lethality with inducible Cre-mediated excision. Semin Cell Dev Biol 13:151-8 , Lewandoski M (2001) Conditional control of gene expression in the mouse. Nat Rev Genet 2:743-55 ; Scharfenberger L, Hennerici T, Kirly G et al. (2014) Transgenic mouse technology in skin biology: Generation of complete 또는 tissue-specific knockout mice. J Invest Dermatol 134:e16 ; Schwenk F, Kuhn R, Angrand PO et al. (1998) Temporally and spatially regulated somatic mutagenesis in mice. Nucleic Acids Res 26:1427-32
이런 식으로, (i) T-세포 수용체 (TCR)의 하나 이상의 요소를 발현시키는 적어도 하나의 유전자가 불활성화되고 (ii) 약물에 내성을 부여하는 적어도 하나의 유전자가 통합되거나 또는 상기 약물에 민감성을 부여하는 유전자가 결실되거나 또는 불활성화되도록 돌연변이되고 (iii) 하기 표 9에 개시된 유전자로부터 선택되는 또다른 유전자가 선택적으로 불활성화된 항-CLL1 scCAR-발현시키는 약물 내성 면역 세포가 본 발명의 목적이다.
본 발명은 본 발명의 방법에 의하여 수득가능한 단리된 항-CLL1 scCAR-면역 세포들 또는 세포주들, 더욱 특히 여기에 기재된 단백질들, 폴리펩타이드들, 대립형질(allelic) 변종들, 변화된(altered) 또는 결실된(deleted) 유전자들 또는 벡터들 중 임의의 것을 포함하는 단리된 세포들을 포함한다.
본 발명의 면역 세포들 또는 세포주들은 외인성 재조합 폴리뉴클레오타이드들, 특히 scCAR들 또는 자살 유전자들을 더 포함할 수 있고, 또는 그것들은 이상적으로는 "기성품인" 제품으로서, 치료적 제품으로서 그것들의 약효에 공헌하는, 그것들의 리간드들 또는 체크포인트 단백질들을 코드하는 변화된 또는 결실된 유전자들을 포함할 수 있다. 또다른 측면에서, 본 발명은 상기 방법들에 의하여 수득가능한 적어도 한 번 조작된 면역 세포를 투여함으로써 환자에게서 암을 예방 또는 치료하는 방법에 대한 것이다.
<표 9>
Figure 112017074439357-pct00013
면역 체크포인트 단백질들을 코드하는 유전자들의 리스트.
약물 내성 동종이계 ( allogenic ) scCAR T 세포들의 세포독성을 테스트하기 위한 CLL1+/luc+ 약물 내성 Daudi 세포들
본 발명은 또한 내성 유전자 및 scCAR T 세포들에 특이적인 표면 수용체 둘 다를 발현시키는 타겟 세포들의 제조 방법을 포함한다. 이들 타겟 세포들은 scCAR T 세포들의 세포독성을 테스트하는데 특히 유용하다. 이들 세포들은 임상적으로 유의미한 양의 클로파라빈에 쉽게 내성이고 루시페라제 활성을 갖는다. 이 특징들의 조합은 그것들을 마우스들 모델에서 인 비보에서 추적하는 것(traking)을 가능하게 하거나 필요할 때 그것들을 파괴한다.
더욱 특이적으로, 그것들은 클로파라빈 또는 다른 PNA들의 존재 하, 마우스들에서 세포독성 특성들 약물 내성 T 세포들을 평가하는데 사용될 수 있다. 클로파라빈 내성 Daudi 세포들은 약물 내성 B 세포 악성종양들을 갖는, 급성 골수성 백혈병 (AML) 환자들 재발 형태 유도 치료의 생리학적 상태를 모방한다. 이와 같이, 이들 세포들은 약물 내성 scCAR T 세포들의 세포독성 및 신뢰성을 평가하기 위하여 큰 관심이 있다. 바람직하게는, 이들 타겟 세포들은 CLL1+ Luciferase+ Daudi 세포들이다.
항-CLL1-단일 체인 CAR의 세포외 도메인에서 적어도 하나의 에피토프의 삽입
본 발명의 항-CLL1 CAR는 적어도 상기 CAR의 세포외 도메인에서 적어도 하나의 에피토프의 삽입을 포함할 수 있다. 이것은 사이토카인 발작(storm)과 같은 인 비보에서의 역효과들의 경우 CAR를 지닌 것으로 여겨지는 면역 세포들을 임시로(temptatively) 대폭 감소시키는 것이 의도된다. 에피토프 또는 "에피토프-꼬리달기(tagging)"의 이러한 삽입은 그것들의 제조 공정 동안 인-비트로에서 조작된 면역 세포들을 분류 또는 정제하는데 유용할 수 있다. 상기 적어도 하나의 에피토프는 이러한 펩타이드를 인식하는 특이적 항체에 의하여 결합되기에 충분히 면역원성인 임의의 항원 펩타이드일 수 있다. 예를 들어, 이것은 CAR 폴리펩타이드 서열 내로 바람직하게는 서열 CPYSNPSLCS (서열번호 113)의 적어도 하나, 그리고 바람직하게는 두 카피들의 CD20 미모토프(mimotope)의 삽입에 의하여 수득될 수 있다. 이후 간소화 목적을 위하여, N 말단(terminal end)로부터 C 말단까지의 scFvs의 순서는 하기와 같이 나타낸다: VH 체인 그리고 그 다음에 VL 체인. 그러나, 이 순서가 반대인 것이 본 발명의 범위에서 상상될 수 있다 : VL 체인 그리고 그 다음에 VL 체인.
본 발명의 항-CLL1 CAR 내 적어도 하나의 CD20 미모토프(mimotope)의 다른 위치들이 도 3에 도식화되어 있다. 상기 두 개 카피들의 CD20 미모토프(mimotope)는 서로서로 그리고 링커에 의하여 VL에 연결될 수 있다. 그것들은 또한 선택적 링커를 이용함으로써 항-CLL1 scFv 및 (CD8알파와 같은) 힌지 사이에 삽입될 수 있다. CD20 미모토프(mimotope)들은 리툭시맙과 같은 항-CD20 항체들에 의하여 결합될 수 있다 (McLaughlin P, et al. 1998).
따라서, 본 발명의 항-CLL1 CAR는 선택적으로 인간화된, CLL1 세포 표면 항원에 결합할 수 있는 VH 및 VL 체인들, 링커 L, 자살 도메인, 힌지 또는 그것의 부분, 막관통 도메인, 공-자극 도메인 및 자극성(stimulatory) 도메인을 포함할 수 있다.
또다른 예에 따라, 에피토프는 미모토프(mimotope)이다. 에피토프의 구조체를 모방한, 자주 펩타이드인, 거대분자(macromolecule)로서, 미모토프(mimotope)는 종래의 에피토프보다 더 작은 이점을 가지며, 그러므로 비(non)-배좌(conformational) 서열에 이로울 수 dT고, CAR와 같은 긴 폴리펩타이드에서 재생산되기 더 쉽다. 미모토프(mimotope)들은 두 세툭시맙(cetuximab)을 위한 두 개의 10 아미노산 펩타이드들 (Riemer et al., 2005), 또는 팔리비주맙(palivizumab)을 위한 24 아미노산 (Arbiza et al, 1992)과 같은 몇몇 약학적으로 승인된 mAb로 알려져 있다. 이들 미모토프(mimotope)들은 파아지 디스플레이에 의하여 확인될 수 있기 때문에, 동일한 mAb을 위한 scFv를 동요시키지(perturb) 않는 서열을 얻기 위하여 그것들을 몇몇 개 시도하는 것이 가능하다. 게다가, 그것들의 사용은 상보성(complement)-의존세포독성(dependentcytotoxicity) (CDC)을 증강시킬 수 있다.
그것들의 대응되는 결합 mAb를 갖는 이러한 에피토프들 및 미모토프(mimotope)들의 몇몇 예들은 하기 표 10에 나타나 있다.
<표 10>
Figure 112021007876386-pct00044
그것들의 대응되는 결합 mAb를 갖는 미모토프(mimotope)들 및 에피토프
바람직한 예에서, 키메라 scFv 내에 도입되는 에피토프는 CD20 미모토프(mimotope) (서열번호 113)이고 분류 및/또는 소모 목적(들)을 위하여 이 미모토프(mimotope)에 친화성을 보이는 주입된 mAb는 리툭시맙이다.
한 예에서, 상기 적어도 하나의 에피토프는 항-CLL1.1 CAR의 VH 및 VL 체인들 사이에 삽입되며, 하나의 링커에 의하여 상기 VH 및 VL 체인들에 선택적으로 연결된다.
한 예에서, scFv의 맥락에서 사용되는 대로의 용어 "링커"는 여러가지 중쇄 및 여러가지 경쇄 영역들을 서로 연결하기 위하여, 단독으로 또는 조합하여 사용되는 글리신 및/또는 세린 잔기들과 같은 아미노산들로 구성되는 펩타이드 링커를 가리킨다. 한 예에서, 가용성 폴리펩타이드 링커는 글라이신/세린 링커이고, 아미노산 서열 (Gly-Gly-Gly-Ser)n 또는 (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)n을 포함하는데, 이때 n은 1보다 크거나 동일한 양의 정수이다. 예를 들어, n=1, n=2, n=3, n=4, n=5, n=6, n=7, n=8, n=9 그리고 n=10이다. 한 예에서, 가용성 폴리펩타이드 링커들은 (Gly4Ser)4 또는 (Gly4Ser)3를 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또다른 예에서, 링커들은 (GlyxSer)n의 다량 반복들을 포함하는데, 이때 (GlySer), (Gly2Ser) 또는 (Gly5Ser)의 다량 반복과 같이, x=1, 2, 3, 4 또는 5 이고 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이다. 또한 본 발명의 범위 내에는, 여기에 참조로서 포함되는, WO2012/138475에 기재된 링커들이 포함된다.
바람직한 예에서, 상기 CLL1 특이적 키메라 항원 수용체 (항-CLL1 CAR)는 도 2에 도시된 대로, V1, V3 또는 V5로부터 선택되는 폴리펩타이드 구조체 중 하나를 가지며, 이때 하나의 CD20 미모토프(mimotope)는 항-CLL1.1 CAR의 VH 및 VL 체인들 사이에 삽입되고, 하나의 링커에 의하여 상기 VH 및 VL 체인들에 선택적으로 연결된다.
더 바람직한 예에서, 상기 CLL1 특이적 키메라 항원 수용체 (항-CLL1 CAR)는 도 2에 도시된 대로 버젼(version) V3의 폴리펩타이드 구조체 중 하나를 가지고, 상기 구조체는 적어도 an 항-CLL1 세포 외 리간드 결합-도메인, CD8α 막관통 도메인, 4-1BB 공-자극 도메인, CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하며, 이때 하나의 CD20 미모토프(mimotope)는 항-CLL1.1 CAR의 VH 및 VL 체인들 사이에 삽입되고, 하나의 링커에 의하여 상기 VH 및 VL 체인들에 선택적으로 연결된다.
또다른 예에서, 상기 적어도 하나의 에피토프는 - scFvs의 선행으로 - CAR의 N 말단에서 삽입되괴, 하나의 링커에 의하여 CAR의 N 말단에 그리고 VH 체인에 선택적으로 연결된다.
바람직한 예에서, 상기 CLL1 특이적 키메라 항원 수용체 (항-CLL1 CAR)는 도 2에 도시된 대로, V1, V3 또는 V5로부터 선택되는 폴리펩타이드 구조체 중 하나를 갖고, 상기 구조체는 적어도 항-CLL1 세포 외 리간드 결합-도메인, CD8α 막관통 도메인, 4-1BB 공-자극 도메인, CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인를 포함하고, 이때 하나의 에피토프가 -scFvs의 선행으로- CAR의 N 말단에서 삽입되고, 하나의 링커에 의하여 CAR의 N 말단에 그리고 VH 체인에 선택적으로 연결된다.
더 바람직한 예에서, 상기 CLL1 특이적 키메라 항원 수용체 (항-CLL1 CAR)는 도 2에 도시된 대로 버젼 V3의 폴리펩타이드 구조체 중 하나를 갖고, 상기 구조체는 적어도 항-CLL1 세포 외 리간드 결합-도메인, CD8α 막관통 도메인, 4-1BB 공-자극 도메인, CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인를 포함하고, 그리고 이때 하나의 에피토프가 -scFvs의 선행으로- CAR의 N 말단에 삽입되고, 하나의 링커에 의하여 CAR의 N 말단에 그리고 VH 체인에 선택적으로 연결된다.
또다른 예에서, 상기 적어도 하나의 에피토프는 CAR의 힌지 및 scFvs 사이에 삽입되고, 하나의 링커에 의하여 힌지에 그리고 VL 체인에 선택적으로 연결된다.
바람직한 예에서, 상기 CLL1 특이적 키메라 항원 수용체 (항-CLL1 CAR)는 도 2에 도시된 대로, V1, V3 또는 V5로부터 선택되는 폴리펩타이드 구조체 중 하나를 갖고, 상기 구조체는 적어도 항-CLL1 세포 외 리간드 결합-도메인, CD8α 막관통 도메인, 4-1BB 공-자극 도메인, CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하고, 이때 하나의 에피토프는 CAR의 힌지 및 scFvs 사이에 삽입되고 하나의 링커에 의하여 힌지에 그리고 VL 체인에 선택적으로 연결된다.
더 바람직한 예에서, 상기 CLL1 특이적 키메라 항원 수용체 (항-CLL1 CAR)는 도 2에 도시된 대로, 버젼 V3의 폴리펩타이드 구조체 중 하나를 갖고, 상기 구조체는 적어도 항-CLL1 세포 외 리간드 결합-도메인, CD8α 막관통 도메인, 4-1BB 공-자극 도메인, CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하고, 이때 하나의 에피토프는 CAR의 힌지 및 scFvs 사이에 삽입되고 하나의 링커에 의하여 힌지에 그리고 VL 체인에 선택적으로 연결된다.
바람직한 예에서, 적어도 두 개의 에피토프들이 본 발명의 항-CLL1 CAR의 세포외 도메인에서 삽입된다.
한 예에서, CLL1 특이적 키메라 항원 수용체 (항-CLL1 CAR)는 도 2에 도시된 대로, V1, V3 또는 V5로부터 선택되는 폴리펩타이드 구조체 중 하나를 갖고, 상기 구조체는 적어도 항-CLL1 세포 외 리간드 결합-도메인, CD8α 막관통 도메인, 4-1BB 공-자극 도메인, CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인, 및 두 개의 CD20 미모토프(mimotope)들,
CLL1 에 대항하여 향하는 VH 및 VL 체인들을 포함하는 상기 추가의(extra)-결합 도메인 및 FcγRIIIα 또는 CD8α 또는 IgG1 힌지;
이 때 scFvs 및 상기 힌지 사이에 나란히 삽입되는 상기 2 에피토프들, 그리고 선택적으로
2 에피토프들 사이 및/또는 VH 및 2 에피토프들 사이의 공간을 차지하는 링커 (서열번호 10)를 포함한다.
한 예에서, CLL1 특이적 키메라 항원 수용체 (항-CLL1 CAR)는 도 2에 도시된 대로, V1, V3 또는 V5로부터 선택되는 폴리펩타이드 구조체 중 하나를 포함하고, 상기 구조체는 적어도 항-CLL1 세포 외 리간드 결합-도메인, CD8α 막관통 도메인, 4-1BB 공-자극 도메인, CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인, 및 두 개의 CD20 미모토프(mimotope)들,
CLL1에 대항하여 향해지는 VH 및 VL 체인들을 포함하는 추가의-결합 도메인 및 FcγRIIIα 또는 CD8α 또는 IgG1 힌지;
이 때 scFvs에 선행하여 나란히 즉 CAR- 의 N 말단에서 삽입되는 상기 2 에피토프들
그리고 선택적으로, 2 에피토프들 사이 및/또는 CAR의 N 말단에서 공간을 차지하는 링커 (서열번호 10)를 포함한다.
한 예에 따라, 적어도 두 에피토프들이 VH가 그것들, 적어도 하나의 링커에 의하여 선택적으로 공간을 차지하는 이 들 요소들 모두, 사이에 위치되는 방식으로 세포외 도메인에 삽입된다.
바람직한 예에서, 상기 CLL1 특이적 키메라 항원 수용체 (항-CLL1 CAR)는 도 2에 도시된 대로, V1, V3 또는 V5로부터 선택되는 폴리펩타이드 구조체 중 하나를 갖고, 상기 구조체는 적어도 an 항-CLL1 세포 외 리간드 결합-도메인, CD8α 막관통 도메인, 4-1BB 공-자극 도메인, CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하고, 그리고 이 때 두 개의 에피토프들이, VH가 그것들, 적어도 하나의 링커에 의하여 선택적으로 공간을 차지하는 이들 요소들 모두, 사이에 위치되는 방식으로, 세포외 도메인에 삽입된다.
바람직한 예에서, 상기 CLL1 특이적 키메라 항원 수용체 (항-CLL1 CAR)는 도 2에 도시된 대로, 버젼 V3의 폴리펩타이드 구조체 중 하나를 갖고, 상기 구조체는 적어도 항-CLL1 세포 외 리간드 결합-도메인, CD8α 막관통 도메인, 4-1BB 공-자극 도메인, CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하고, 이때 두 개의 에피토프들이, VL이 그것들, 적어도 하나의 링커에 의하여 선택적으로 공간을 차지하는 이들 요소들 모두, 사이에 위치되는 방식으로, 세포외 도메인에 삽입된다.
또다른 예에 따라, 두 개의 에피토프들이 VL이 그것들, 적어도 하나의 링커에 의하여 선택적으로 공간을 차지하는 이들 요소들 모두, 사이에 위치되는 방식으로, 세포외 도메인에 삽입된다.
바람직한 예에서, 상기 CLL1 특이적 키메라 항원 수용체 (항-CLL1 CAR)는 도 2에 도시된 대로, V1, V3 또는 V5로부터 선택되는 폴리펩타이드 구조체 중 하나를 갖고, 상기 구조체는 적어도 항-CLL1 세포 외 리간드 결합-도메인, CD8α 막관통 도메인, 4-1BB 공-자극 도메인, CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하고, 이때 두 개의 에피토프들이 VL이 그것들, 적어도 하나의 링커에 의하여 선택적으로 공간을 차지하는 이들 요소들 모두, 사이에 위치되는 방식으로, 세포외 도메인에 삽입된다.
더 바람직한 예에서, 상기 CLL1 특이적 키메라 항원 수용체 (항-CLL1 CAR)는 도 2에 도시된 대로, 버젼 V3의 폴리펩타이드 구조체 중 하나를 갖고, 상기 구조체는 적어도 an 항-CLL1 세포 외 리간드 결합-도메인, CD8α 막관통 도메인, 4-1BB 공-자극 도메인, CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하고, 그리고 이때 두 개의 에피토프들이 VL이 그것들, 적어도 하나의 링커에 의하여 선택적으로 공간을 차지하는 이들 요소들 모두, 사이에 위치되는 방식으로, 세포외 도메인에 삽입된다.
또다른 예에 따라, 상기 CLL1 특이적 키메라 항원 수용체 (항-CLL1 CAR)는 세포외 결합 도메인을 포함하고 이때 적어도 두 개의 에피토프들이 VH 및 VL 체인들이 그것들, 적어도 하나의 링커에 의하여 선택적으로 공간을 차지하는 이들 요소들 모두, 사이에 위치되는 방식으로, 세포외 도메인에 삽입된다.
바람직한 예에서, 상기 CLL1 특이적 키메라 항원 수용체 (항-CLL1 CAR)는 도 2에 도시된 대로, V1, V3 또는 V5로부터 선택되는 폴리펩타이드 구조체 중 하나를 갖고, 상기 구조체는 적어도 an 항-CLL1 세포 외 리간드 결합-도메인, CD8α 막관통 도메인, 4-1BB 공-자극 도메인, CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하고, 그리고 이때 두 개의 에피토프들이, VH 및 VL 체인들이 그것들, 적어도 하나의 링커에 의하여 선택적으로 공간을 차지하는 이들 요소들 모두, 사이에 위치되는 방식으로, 세포외 도메인에 삽입된다.
더 바람직한 예에서, 상기 CLL1 특이적 키메라 항원 수용체 (항-CLL1 CAR)는 도 2에 도시된 대로, 버젼 V3의 폴리펩타이드 구조체 중 하나를 갖고, 상기 구조체는 적어도 항-CLL1 세포 외 리간드 결합-도메인, CD8α 막관통 도메인, 4-1BB 공-자극 도메인, CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하고, 그리고 이때 두 개의 에피토프들이, VH 및 VL 체인들이 적어도 하나의 링커에 의하여 선택적으로 공간을 차지하는 이들 요소들 모두, 사이에 위치되는 방식으로, 세포외 도메인에 삽입된다.
또다른 예에서, 세 개의 에피토프들이 본 발명의 항-CLL1 CAR의 세포외 도메인에 삽입된다.
특정 예에 따라, 본 발명의 상기 CLL1 특이적 CAR는 세포외 결합 도메인을 포함하고, 이때 세 개의 에피토프들은 VH 및 VL 체인들이 적어도 하나의 링커에 의하여 선택적으로 공간을 차지하는 이들 요소들 모두, 사이에 위치되는 방식으로, 세포외 도메인에 삽입된다.
바람직한 예에서, 상기 CLL1 특이적 키메라 항원 수용체 (항-CLL1 CAR)는 도 2에 도시된 대로, V1, V3 또는 V5로부터 선택되는 폴리펩타이드 구조체 중 하나를 갖고, 상기 구조체는 적어도 항-CLL1 세포 외 리간드 결합-도메인, CD8α 막관통 도메인, 4-1BB 공-자극 도메인, CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하고, 그리고 이때 세 개의 에피토프들이 VH 및 VL 체인들이 적어도 하나의 링커에 의하여 선택적으로 공간을 차지하는 이들 요소들 모두, 사이에 위치되는 방식으로, 세포외 도메인에 삽입된다.
더 바람직한 예에서, 상기 CLL1 특이적 키메라 항원 수용체 (항-CLL1 CAR)는 도 2에 도시된 대로, 버젼 V3의 폴리펩타이드 구조체 중 하나를 갖고, 상기 구조체는 적어도 세포외 리간드 결합-도메인 항-CLL1, CD8α 막관통 도메인, 4-1BB 공-자극 도메인, CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인을 포함하고, 그리고 이때 세 개의 에피토프들은, VH 및 VL 체인들이 적어도 하나의 링커에 의하여 선택적으로 공간을 차지하는 이들 요소들 모두, 사이에 위치되는 방식으로, 세포외 도메인에 삽입된다.
또다른 예에서, CLL1 특이적 키메라 항원 수용체 (항-CLL1 CAR)는 도 2에 도시된 대로 V1, V3 또는 V5로부터 선택되는 폴리펩타이드 구조체 중 하나를 갖고, 상기 구조체는 적어도 항-CLL1 세포 외 리간드 결합-도메인, CD8α 막관통 도메인, 4-1BB 공-자극 도메인, CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인, 및 세 개의 CD20 에피토프들,
FcγRIIIα 및 CLL1에 대항하여 향해지는 VH 및 VL 체인들을 포함하는 상기 추가의-결합 도메인 또는 CD8α 또는 IgG1 힌지;
이때 상기 3 에피토프들은 상기 힌지 및 scFvs 사이에 나란히 삽입되고, 그리고 선택적으로
3 에피토프들 사이 및/또는 VH 및 3 에피토프들 사이에 공간을 차지하는 링커 (서열번호 10)를 포함한다.
또다른 예에서, CLL1 특이적 키메라 항원 수용체 (항-CLL1 CAR)는 도 2에 도시된 대로, V1, V3 또는 V5로부터 선택되는 폴리펩타이드 구조체 중 하나를 갖고, 상기 구조체는 적어도 항-CLL1 세포 외 리간드 결합-도메인, CD8α 막관통 도메인, 4-1BB 공-자극 도메인, CD3 제타 신호전달(signaling) 도메인, 두 개의 CD20 에피토프들, 및 하나의 CD34 에피토프;
FcγRIIIα 및 CLL1에 대항하여 향해지는 VH 및 VL 체인들을 포함하는 상기 추가의-결합 도메인 또는 CD8α 또는 IgG1 힌지;
scFvs 및 상기 힌지 사이에 나란히 삽입되는 상기 2 에피토프들,
그리고 링커 (서열번호 10) 에 의하여 그것들 사이에 그리고 에피토프 사이에 링커 및 그리고 VH 및 3 에피토프들 사이에 모든 요소들이 공간을 차지하는, 상기 2 CD20 에피토프들 사이에 삽입되는 상기 CD34 에피토프를 포함한다.
에피토프-포함 항-CLL1 CAR들에 대한 상기 예들 모두에서, 세포외 결합 도메인으로 이용되는 VH 및 VL 체인들은 바람직하게는 인간 막 CLL1-1에 결합한다.
바람직한 예에서, 상기 항-CLL1 CAR들은 적어도 항-CLL1 단일클론 항체들로부터 유래되는 VH 및 VL 체인들을 포함하는 세포 외 리간드 결합-도메인을 포함한다.
더욱 특이적으로, 에피토프들은 하기와 같이 본 발명의 CAR 내로 포함될 수 있다:
몇몇 예들에서, 세포외 결합 도메인은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 mAb-특이적 에피토프들을 포함한다.
몇몇 예들에서, 세포외 결합 도메인은 적어도 1, 2 또는 3 mAb-특이적 에피토프들을 포함한다.
몇몇 예들에서, 세포외 결합 도메인이 몇몇 mAb-특이적 에피토프들을 포함할 때, mAb-특이적 에피토프들 모두가 동일하다.
몇몇 예들에서, 세포외 결합 도메인이 몇몇 mAb-특이적 에피토프들을 포함할 때, mAb-특이적 에피토프들을 동일하지 않다. 예를 들어, 세포외 결합 도메인은 세 개의 mAb-특이적 에피토프들을 포함할 수 있고, 그것들 중 둘은 동일하고 세 번째 것은 다르다.
몇몇 예들에서, 세포외 결합 도메인은 VH, a VL, 하나 이상의 mAb-특이적 에피토프들, 바람직하게는 1, 2 또는 3, 더욱 바람직하게는 2 또는 3 mAb-특이적 에피토프들을 포함한다.
몇몇 예들에서, 세포외 결합 도메인은 하기 서열을 포함한다 (N 말단을 왼편에 위치한다):
V1-L1-V2-(L)x-에피토프1-(L)x;
V1-L1-V2-(L)x-에피토프1-(L)x-에피토프2-(L)x;
V1-L1-V2-(L)x-에피토프1-(L)x-에피토프2-(L)x-에피토프3-(L)x;
(L)x-에피토프1-(L)x-V1-L1-V2;
(L)x-에피토프1-(L)x-에피토프2-(L)x-V1-L1-V2;
에피토프1-(L)x-에피토프2-(L)x-에피토프3-(L)x-V1-L1-V2;
(L)x-에피토프1-(L)x-V1-L1-V2-(L)x-에피토프2-(L)x;
(L)x-에피토프1-(L)x-V1-L1-V2-(L)x-에피토프2-(L)x-에피토프3-(L)x;
(L)x-에피토프1-(L)x-V1-L1-V2-(L)x-에피토프2-(L)x-에피토프3-(L)x-에피토프4-(L)x;
(L)x-에피토프1-(L)x-에피토프2-(L)x-V1-L1-V2-(L)x-에피토프3-(L)x;
(L)x-에피토프1-(L)x-에피토프2-(L)x-V1-L1-V2-(L)x-에피토프3-(L)x-에피토프4-(L)x;
V1-(L)x-에피토프1-(L)x-V2;
V1-(L)x-에피토프1-(L)x-V2-(L)x-에피토프2-(L)x;
V1-(L)x-에피토프1-(L)x-V2-(L)x-에피토프2-(L)x-에피토프3-(L)x;
V1-(L)x-에피토프1-(L)x-V2-(L)x-에피토프2-(L)x-에피토프3-(L)x-에피토프4-(L)x;
(L)x-에피토프1-(L)x-V1-(L)x-에피토프2-(L)x-V2;
(L)x-에피토프1-(L)x-V1-(L)x-에피토프2-(L)x-V2-(L)x-에피토프3-(L)x;
V1-L1-V2-L-에피토프1;
V1-L1-V2-L-에피토프1-L;
V1-L1-V2-L-에피토프1-L-에피토프2;
V1-L1-V2-L-에피토프1-L-에피토프2-L;
V1-L1-V2-L-에피토프1-L-에피토프2-L-에피토프3;
V1-L1-V2-L-에피토프1-L-에피토프2-L-에피토프3-L;
V1-L1-V2-에피토프1;
V1-L1-V2-에피토프1-L;
V1-L1-V2-에피토프1-L-에피토프2;
V1-L1-V2-에피토프1-L-에피토프2-L;
V1-L1-V2-에피토프1-L-에피토프2-L-에피토프3;
V1-L1-V2-에피토프1-L-에피토프2-L-에피토프3-L;
에피토프1-V1-L1-V2;
에피토프1-L-V1-L1-V2;
L-에피토프1-V1-L1-V2;
L-에피토프1-L-V1-L1-V2;
에피토프1-L-에피토프2-V1-L1-V2;
에피토프1-L-에피토프2-L-V1-L1-V2;
L-에피토프1-L-에피토프2-V1-L1-V2;
L-에피토프1-L-에피토프2-L-V1-L1-V2;
에피토프1-L-에피토프2-L-에피토프3-V1-L1-V2;
에피토프1-L-에피토프2-L-에피토프3-L-V1-L1-V2;
L-에피토프1-L-에피토프2-L-에피토프3-V1-L1-V2;
L-에피토프1-L-에피토프2-L-에피토프3-L-V1-L1-V2;
V1-L-에피토프1-L-V2;
L-에피토프1-L-V1-L-에피토프2-L-V2;
V1-L-에피토프1-L-V2-L-에피토프2-L;
V1-L-에피토프1-L-V2-L-에피토프2-L-에피토프3;
V1-L-에피토프1-L-V2-L-에피토프2-에피토프3;
V1-L-에피토프1-L-V2-L-에피토프2-L-에피토프3-에피토프4;
L-에피토프1-L-V1-L-에피토프2-L-V2-L-에피토프3-L;
에피토프1-L-V1-L-에피토프2-L-V2-L-에피토프3-L;
L-에피토프1-L-V1-L-에피토프2-L-V2-L-에피토프3;
L-에피토프1-L-V1-L1-V2-L-에피토프2-L;
L-에피토프1-L-V1-L1-V2-L-에피토프2-L-에피토프3;
L-에피토프1-L-V1-L1-V2-L-에피토프2-에피토프3, 또는,
에피토프1-L-V1-L1-V2-L-에피토프2-L-에피토프3-에피토프 4.
이때,
V1 및 V2는 ScFv의 VH 및 VL이고 (즉, V1은 VL이고 V2는 VH이거나 또는 V1은 VH이고 V2는 VL이다);
L1은 ScFv에서 VL 체인에 VH 체인을 연결시키기에 적합한 임의의 링커이고;
L은, 바람직하게는 글리신 및 세린 잔기들을 포함하는, 링커로, 세포외 결합 도메인에서 L의 각각의 발생은 동일한 세포외 결합 도메인의 L의 다른 발생과 동일하거나 다를 수 있고, 그리고,
x는 0 또는 1이고, x의 각각의 발생은 다른 것들과 독립적이고; 그리고,
에피토프 1, 에피토프 2 및 에피토프 3은 mAb-특이적 에피토프들이고, 그리고 동일하거나 다를 수 있다.
몇몇 예들에서, 세포외 결합 도메인은 하기 서열을 포함한다 (N 말단은 좌측에 위치한다):
VH-L1-VL-L-에피토프1-L-에피토프2-L;
L-에피토프1-L-VH-L-에피토프2-L-VL-L-에피토프3-L;
VL-L1-VH-L-에피토프1-L-에피토프2-L; 또는,
L-에피토프1-L-VL-L-에피토프2-L-VH-L-에피토프3-L.
이때, L, L1, 에피토프 1, 에피토프 2 및 에피토프 3은 앞서 정의된 바와 같다.
몇몇 예들에서, L1은 글리신 및/또는 세린을 포함하는 링커이다. 몇몇 예들에서, L1은 아미노산 서열 (Gly-Gly-Gly-Ser)n 또는 (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)n을 포함하는 링커이고, 이때 n은 1, 2, 3, 4 또는 5이다. 몇몇 예들에서, L1은 (Gly4Ser)4 또는 (Gly4Ser)3이다.
몇몇 예에서, L은 바람직하게는, 글리신 및/또는 세린을 포함하는, 가요성 링커이다. 몇몇 예들에서, L은 SGG, GGS, SGGS, SSGGS, GGGG, SGGGG, GGGGS, SGGGGS, GGGGGS, SGGGGGS, SGGGGG, GSGGGGS, GGGGGGGS, SGGGGGGG, SGGGGGGGS, 또는 SGGGGSGGGGS 바람직하게는 SGG, SGGS, SSGGS, GGGG, SGGGGS, SGGGGGS, SGGGGG, GSGGGGS 또는 SGGGGSGGGGS로부터 선택된다. 몇몇 예에서, 세포외 결합 도메인이 L의 몇몇 발생을 포함할 때, 모든 L들은 동일하다. 몇몇 예들에서, 세포외 결합 도메인이 L의 몇몇 발생을 포함할 때, L들은 모두 동일하지 않다. 몇몇 예들에서, L은 SGGGGS이다. 몇몇 예들에서, 세포외 결합 도메인이 L의 몇몇 발생을 포함하고 모든 L들은 SGGGGS이다.
몇몇 예들에서, 에피토프 1, 에피토프 2 및 에피토프 3은 동일하거나 또는 다르고, 서열번호 33 내지 서열번호 42 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 mAb-특이적 에피토프들로부터 선택된다.
몇몇 예들에서, 에피토프 1, 에피토프 2 및 에피토프 3은 동일하거나 또는 다르고, 이브리투모맙(ibritumomab), 티우세탄(tiuxetan), 뮤노모나브(muromonab)-CD3, 토시투모마브(tositumomab), 아브식시마브(abciximab), 바실리시마브(basiliximab), 브렌툭시맙(brentuximab) 베도틴(vedotin), 세툭시맙(cetuximab), 인플릭시맙(infliximab), 리툭시맙(rituximab), 알렘투주맙(alemtuzumab), 베바시주맙(bevacizumab), 세르톨리주맙(certolizumab) 페골(pegol), 다클리주맙(daclizumab), 에쿨리주맙(eculizumab), 에팔리주맙(efalizumab), 젬투주맙(gemtuzumab), 나탈리주맙(natalizumab), 오말리주맙(omalizumab), 팔리비주맙(palivizumab), 라니비주맙(ranibizumab), 토실리주맙(tocilizumab), 트라스투주맙(trastuzumab), 베돌리주맙(vedolizumab), 아달리무맙(adalimumab), 벨리무맙(belimumab), 카나키누맙(canakinumab), 데노수맙(denosumab), 골리무맙(golimumab), 이필리무맙(ipilimumab), 오파투무맙(ofatumumab), 파니투무맙(panitumumab), QBEND-10, 알렘투주맙(alemtuzumab) 또는 우스테키누맙(ustekinumab)에 의하여 특이적으로 인식되는 mAb-특이적 에피토프들로부터 선택된다.
몇몇 예에서, 에피토프 1은 서열번호 33의 아미노산 서열을 갖는 mAb-특이적 에피토프이다.
몇몇 예에서, 에피토프 2는 서열번호 35의 아미노산 서열을 갖는 mAb-특이적 에피토프이다.
몇몇 예에서, 에피토프 3은 서열번호 36의 아미노산 서열을 갖는 mAb-특이적 에피토프이다.
몇몇 예에서, 에피토프 4는 서열번호 37의 아미노산 서열을 갖는 mAb-특이적 에피토프이다.
몇몇 예에서, 에피토프 4는 서열번호 38의 아미노산 서열을 갖는 mAb-특이적 에피토프이다.
몇몇 예에서, 에피토프 2는 서열번호 33의 아미노산 서열을 갖는 mAb-특이적 에피토프이고 에피토프 3은 서열번호 41 또는 42의 아미노산 서열을 갖는 mAb-특이적 에피토프이다.
몇몇 예에서, 에피토프 1, 에피토프 2, 에피토프 3 및 에피토프 4 중 하나는 CD34 에피토프, 바람직하게는 서열번호 41 또는 42의 에피토프이다. 몇몇 예에서, 에피토프1, 에피토프 2, 에피토프 3 및 에피토프 4 중 하나는 CD34 에피토프이고, 바람직하게는 서열번호 41 또는 42의 에피토프이고, 그리고 다른 mAb 특이적 에피토프들은 CD20 미모토프(mimotope)들이고, 바람직하게는 서열번호 33의 미모토프(mimotope)이다.
CAR-발현시키는 면역 세포들을 격감시키는 방법
본 발명에 따른 CLL1 특이적 CAR를 발현시키는 면역 세포들은 전술한 바와 같은 그것들의 세포외 도메인에 에피토프(들)을 포함할 수 있어, 그것들은 상기 에피토프(들)에 특이적인 항체-바람직하게는 단일클론- 를 상기 환자에 투여함으로써 역반응(adverse) 또는 너무 급성인 면역 반응 (예컨대 사이토카인 발작)의 경우에 환자에게서 대폭 감소될수 있다.
본 발명에서 "인 비보에서 격감"에 의하여 억제 또는 제거에 의하여 CAR-발현시키는 면역 세포들의 증식을 중단시키려는 목적으로 포유류 생물에 치료의 투여가 의미된다.
본 발명의 한 측면은 전술한 바와 같은 m-Ab 특이적 에피토프를 포함하는 CAR를 발현시키는 조작된 면역 세포를 격감시키는 인 비보에서의 방법에 대한 것으로, 이는 적어도 하나의 에피토프-특이적 mAb들과 상기 조작된 면역 세포 또는 상기 CAR-발현시키는 면역 세포를 접촉시키는 단계를 포함한다. 본 발명의 또다른 측면은 에피토프-특이적 항체들과 상기 조작된 면역 세포를 접촉시킴으로써 (mAb-특이적 에피토프의 삽입에 의하여 형성되는) 상기 키메라 scFv를 포함하는 면역 CAR-발현시키는 면역 세포를 인 비보에서 격감시키는 방법에 대한 것이다.
바람직하게는, 상기 면역 세포들 T-세포들이고 그리고/또는 항체들은 단일클론이다.
한 예에 따라, 면역 조작된 세포의 인 비보 격감(depletion)은 발명의 인 비트로 방법을 이용하여 전에 분류된 조작된 면역 세포 상에서 수행된다. 이 경우, 이것은 사용되는 동일한 주입된 mAb일 것이다.
바람직한 예에 따라, mAb-특이적 항원은 CD20 항원이고, 에피토프-특이적 mAb은 리툭시맙이다.
몇몇 예들에서, 본 발명은 전술한 바와 같이, 적어도 하나의 에피토프-특이적 mAb들과 상기 CAR-발현시키는 면역 세포를 접촉시키는 단계를 포함하는, 환자에게서 mAb-특이적 에피토프를 포함하는 CAR를 발현시키는 조작된 면역 세포 (CAR-발현시키는 면역 세포)를 인 비보에서 격감시키는 방법에 대한 것이다.
몇몇 예에서, 상기 mAb-특이적 에피토프는 CD20 에피토프 또는 유사체(mimotope)이고, 바람직하게는 서열번호 35이고 에피토프-특이적 mAb들은 리툭시맙이다.
몇몇 예들에서, 상기 조작된 면역 세포 또는 상기 CAR-발현시키는 면역 세포을 적어도 하나의 에피토프-특이적 mAb 와 접촉시키는 단계는 에피토프-특이적 mAb, 바람직하게는 리툭시맙을 환자에게 주입하는 단계를 포함한다.
몇몇 예에서, mAb-특이적 에피토프를 포함하는 CAR를 발현시키는 면역 세포들(CAR-발현시키는 면역 세포들)이 에피토프 특이적 mAb를 이용한 CDC 분석에서 격감될 때, 바람직하게는 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%로, 독자생존 가능한 CAR-발현시키는 면역 세포들의 양이 감소한다. 바람직하게는 CDC 분석은 실시예 3, 실시예 4 또는 실시예 7.4에 개시된 분석이다. 몇몇 예에서, 상기 mAb-특이적 에피토프는 CD20 에피토프 또는 미모토프(mimotope)이고, 바람직하게는 서열번호 35이고, 그리고 에피토프-특이적 mAbs는 리툭시맙이다.
본 발명에 따른 면역 세포들을 인-비보에서 격감시키는 가능성 외에, CAR들의 세포외 도메인 내로 삽입되는 에피토프들은 그것들을 생산하는 방법의 부분으로서, 상기 CAR들을 발현시키는 면역 세포들을 분류 또는 정제하는 단계에 유용할 수 있다.
단리된 세포들
그 결과인 세포들은 전술한 바와 같이, 세포 표면 막에서 CLL1 특이적 키메라 항원 수용체을 발현시키는 조작된 면역 세포, 특히 일차(primary) T-림프구들로부터 유래된 특히 조작된 면역 세포들이며, 선택적으로 항-암 약물에 내성이고, 알파 TCR 또는 베타 TCR을 코드하는 유전자의 결실을 지닌다.
본 발명은 상기와 같은 조작된 면역 세포을 개시하는데, 이때 TCR의 발현이 억제된다.
본 발명은 상기와 같은 조작된 면역 세포을 개시하는데, 이때 상기 조작된 면역 세포에서 적어도 하나의 MHC 단백질, 바람직하게는 β2m 또는 HLA의 발현이 감소 또는 억제된다. β2m는 베타 2 마이크로글로불린을 나타내고 HLA는 인간 백혈구 항원을 나타낸다. MHC 단백질는 클래스 I 또는 클래스 II의 MHC 단백질이다.
본 발명은 상기와 같은 조작된 면역 세포을 개시하는데, 이때 상기 조작된 면역 세포는 돌연변이되어, 적어도 하나의 면역 억제 약물, 화학요법 약물 또는 항-암 약물에 내성을 부여한다.
본 발명은 치료에 사용을 위한 상기와 같은 조작된 면역 세포을 개시한다.
본 발명은 상기와 같이 치료에 사용을 위한 조작된 면역 세포을 개시하는데, 이때 환자는 인간이다.
본 발명은 상기와 같이 치료에 사용을 위한 조작된 면역 세포을 개시하는데, 이때 상태는 CLL1-발현시키는 세포들에 의하여 특징되는 전-악성(pre-malignant) 또는 악성 암 조건이다.
본 발명은 상기와 같이 치료에 사용을 위한 조작된 면역 세포을 개시하는데, 이때 상태는 CLL1-발현시키는 세포들의 과잉에 의하여 특징되는 상태이다.
본 발명은 상기와 같이 치료에 사용을 위한 조작된 면역 세포을 개시하는데, 이때 악성 암 상태는 혈액암 상태이다.
본 발명은 상기와 같이 치료에 사용을 위한 조작된 면역 세포을 개시하는데, 이때 혈액암 상태는 백혈병 또는 악성 림프구증식 질환들이다.
본 발명은 상기와 같이 치료에 사용을 위한 조작된 면역 세포을 개시하는데, 이때 상기 백혈병은 급성 골수성(myelogenous) 백혈병, 만성 골수성(myelogenous) 백혈병, 골수형성이상(myelodysplastic) 증후군, 급성 림프성(lymphoid) 백혈병, 만성 림프성 백혈병, 및 골수형성이상 증후군으로 구성되는 군으로부터 선택된다.
본 발명은 상기와 같이 치료에 사용을 위한 조작된 면역 세포을 개시하는데, 이때 백혈병은 급성(acute) 골수성(myelogenous) 백혈병 (AML)이다.
본 발명은 상기와 같이 치료에 사용을 위한 조작된 면역 세포을 개시하는데, 이때 상기 혈액암은 포유동물 림프구증식 질환이다.
본 발명은 상기와 같이 치료에 사용을 위한 조작된 면역 세포을 개시하는데, 이때 상기 악성 림프구증식 질환은 림프종이다.
본 발명은 상기와 같이 치료에 사용을 위한 조작된 면역 세포을 개시하는데, 이때 상기 림프종은 다발성 골수종, 비-호지킨(Hodgkin) 림프종, 버킷(Burkitt) 림프종, 및 여포성(follicular) 림프종 (작은 세포 및 큰 세포)로 구성되는 군으로부터 선택된다.
본 발명은 상기 암 세포의 손상을 야기하기에 효과적인 양으로, 상기 노출된 것과 같은 적어도 항-CLL1 CAR를 발현시키는, 조작된 세포와 상기 혈액암 세포를 접촉시키는 단계를 포함하는 혈액암 세포을 손상시키는 방법을 개시한다.
본 발명은 이런 식으로,
(a) 면역 세포를 제공하는 단계,
(b) 앞서 드러낸 것과 같이 상기 세포의 표면에서 적어도 하나의 CLL1 단일-체인 특이적 키메라 항원 수용체를 발현시키는 단계
를 포함하는 면역 세포를 조작하는 방법을 개시한다.
본 발명은 상기와 같이:
(a) 면역 세포를 제공하는 단계,
(b) 상기 CLL1 단일-체인 특이적 키메라 항원 수용체를 코드하는 적어도 하나의 폴리뉴클레오타이드를 상기 세포 내로 도입시키는 단계,
(c) 상기 세포 내로 상기 폴리뉴클레오타이드를 발현시키는 단계
를 포함하는 면역 세포를 조작하는 방법을 개시한다.
본 발명은 상기와 같이:
(a) 면역 세포를 제공하는 단계,
(b) 상기 CLL1 단일-체인 특이적 키메라 항원 수용체를 코드하는 적어도 하나의 폴리뉴클레오타이드를 상기 세포 내로 도입하는 단계,
(c) CLL1에 특이적이지 않은 적어도 하나의 다른 키메라 항원 수용체를 도입하는 단계
를 포함하는 면역 세포를 조작하는 방법을 개시한다.
본 발명은:
(a) 상기 드러낸 바와 같이, CLL1 단일-체인 특이적 키메라 항원 수용체를 표면에서 발현시키는 면역 세포를 제공하는 단계.
(b) 상기 환자에게 상기 면역 세포들을 투여하는 단계.
을 포함하는 그것을 필요로 하는 대상을 치료하는 방법을 개시한다.
본 발명은 상기와 같이 그것을 필요로 하는 대상을 치료하는 방법을 개시하며, 이때 상기 면역 세포는 기증자로부터 제공된다.
본 발명은 상기와 같이 그것을 필요로 하는 대상을 치료하는 방법을 개시하며, 이때 상기 면역 세포는 환자 자신으로부터 제공된다.
치료적 적용
또다른 예에서, 전술한 바와 같은 상기 단리된 세포로부터 유래된 세포주 또는 다른 방법들에 의하여 수득된 단리된 세포는 의약으로 사용될 수 있다.
또다른 예에서, 상기 의약은 그것을 필요로 하는 환자에게서 암을 치료하는 데, 특히 백혈병의 치료에 사용될 수 있다.
또다른 예에서, 본 발명에 따른 상기 단리된 세포 또는 상기 단리된 세포 유래의 세포주는 그것을 필요로 하는 환자에게서 암 치료를 위한 의약의 제조에 사용될 수 있다.
특정 예에서, T 세포를 발현시키는 항-CLL1 CAR는, AML의, AML 특수형(subtype)의, AML-관련 합병증의, AML-관련 상태의 치료를 위한 의약으로서 제공된다.
또다른 예에서, 상기 의약은 CLL1-발현시키는 세포-관련 병적인 상태 또는 CLL1-발현시키는 세포의 직접 또는 간접적 활성으로 특징되는 상태를 치료하는데 사용될 수 있다.
또다른 측면에서, 본 발명은 그것을 필요로 하는 환자들을 치료하는 방법들에 의존하며, 상기 방법은 하기 단계들 중 적어도 하나를 포함한다:
(a) 전술한 방법들 중 임의의 하나에 의하여 수득가능한 면역-세포를 제공하는 단계;
(b) 상기 환자에게 상기 형질전환된 면역 세포들을 투여하는 단계,
한 예에서, 본 발명의 상기 T 세포들은 활발한(robust) 인 비보에서 T 세포 확장을 겪을 수 있고, 연장된 시간 동안 계속할 수 있다.
상기 치료는 개선, 치유 또는 예방일 수 있다. 그것은 자가 면역요법의 일부 또는 동종이계(allogenic) 면역요법 치료의 일부일 수 있다. 자가에 의하여, 환자들을 치료하는데 사용되는 세포들, 세포주 또는 세포들의 군집이 상기 환자로부터 또는 인간(Human) 백혈구(Leucocyte) 항원(Antigen) (HLA) 양립성(compatible) 기증자로부터 유래된다는 것이 의미된다. 동종이계에 의하여, 환자들을 치료하는데 사용되는 세포들, 또는 세포들의 군집이 상기 환자가 아닌 기증자로부터 유래된다는 것이 의미된다.
개시된 방법들로 사용될 수 있는 세포들은 앞 부분에 기재되어 있다. 상기 치료는 진단된 환자들을 치료하는데 사용될 수 있고, 이때 CLL1-발현시키는 세포들, 특히 CLL1-발현시키는 세포들에 의하여, 특징되는 전-악성 또는 악성 암 상태이다. 이러한 상태들은 백혈병과 같은 혈액암들에서 발견된다.
한 예에서, 본 발명은 세포들-매개 질환, 특히 a CLL1 발현시키는 세포들 - 매개 혈액암의 치료에 그것의 사용을 위한 조성물을 제공하며, 상기 조성물은 본 발명의 상기 항-CLL1 scCAR 발현시키는 T 세포를 포함한다.
여기에 개시된 임의의 다른 CLL1-매개 또는 CLL1-관련 악성 림프구증식 질환들은 본 발명의 항-CLL1 CAR-발현시키는 세포들로 개성될 수 있다.
바람직한 예에서, 본 발명의 항-CLL1 CAR -발현시키는 세포들을 이용하여 치료되는 암은 백혈병, 백혈병과 관련된 질병, 또는 그것의 합병증이다.
본 발명의 항-CLL1 CAR -발현시키는 세포들을 이용하여 치료될 수 있는 백혈병들은 급성 골수성(myelogenous) 백혈병 (AML)일 수 있다. 본 발명의 항-CLL1 scCAR-발현시키는 세포들을 이용하여 치료될 수 있는 AML 또는 AML 특수형들은, 특히, 급성 골수아구성 백혈병, minimally differentiated 급성 골수아구성 백혈병, 급성 골수아구성 백혈병, 최소로 분화된 급성 급성 골수아구성 백혈병, 성숙이 없는 급성 골수아구성 백혈병, 과립구 성숙이 있는 급성 골수아구성 백혈병, 전골수성(promyelocytic) 또는 급성 전골수성 백혈병 (APL), 급성 골수단핵구성(myelomonocytic) 백혈병, 골수 호산백혈수 증가증과 함께 골수단핵구성, 급성 단핵모세포성(monoblastic) 백혈병 (M5a) 또는 급성 단핵세포성(monocytic) 백혈병 (M5b), 급성 적혈구성(erythroid) 백혈병들으로, 적백혈병 (M6a) 및 매우 희귀한 순수 적혈구성 백혈병 (M6b)을 포함하는 것, 급성 거핵아구성(megakaryoblastic) 백혈병, 급성 호염기성(basophilic) 백혈병, CLL1-양성 세포들을 수반하면, 골수섬유증을 가진 급성 골수증식증(panmyelosis)일 수 있다.
AML의 특수형은 또한 모양(hairy) 세포 백혈병, 필라델피아 염색체-양성 급성 림프모구(lymphoblastic) 백혈병을 포함한다. AML은 특이적 유전적 비정상들을 갖는 AML으로 분류될 수 있다. 분류는 유도 치료, 재발 위험, 생존에 대한 반응을 예상하는 핵형의 능력에 기초한다.
따라서, 본 발명의 항-CLL1 CAR-발현시키는 세포들을 이용하여 치료될 수 있는 AML은 염색체들 8 및 21 사이의 전좌 를 갖는 AML, 염색체 16에서 전좌 또는 역위(inversion)를 갖는 AML, 염색체들 9 및 11 사이에서 전좌를 갖는 AML, 염색체들 15 및 17 사이에서 전좌를 갖는 AML (M3), 염색체들 6 및 9 사이에서 전좌를 갖는 AML, 염색체 3에서 전좌 또는 역위를 갖는 AML, 염색체들 1 및 22 사이에서 전좌를 갖는 AML (거핵모구의(megakaryoblastic))일 수 있다.
본 발명은 이들 특정 세포유전학적 마커들과 관련된 AML의 치료에 특히 유용하다.
본 발명은 또한 고-용량 시타라빈의 반복적 복용량을 이용하여 확인된 t(8;21)(q22;q22) 또는 inv(16)(p13q22)/t(16;16)(p13;q22)을 갖는 환자들의 치료를 위하여, 그리고 올(all)-트랜스(trans) 레티노산(retinoic acid) (ATRA)16-19을 이용하여 확인된 t(15;17)(q22;q21)을 가진 환자들과 같은, AML의 특이적 세포유전학적 하위집합으로 환자들의 치료를 위하여 항-CLL1 CAR를 발현시키는 T 세포를 제공한다.
바람직하게는 본 발명은 열등한 완전 저하(remission) 비율 및 생존을 갖는 것으로 보여져 온, -5/del(5q), -7, 3q의 비정상, 또는 복합적 핵형과 같은 이상들을 갖는 환자들의 치료를 위한, 항-CLL1 CAR를 발현시키는 T 세포를 제공한다.
여기에서 사용되는 용어들 "치료적 제제", "화학요법 제제". 또는 "약물" 또는 "항-암 약물"은 의약, 바람직하게는 암 세포와 상호작용하여, 세포의 증식 상황을 감소시키키고 그리고/또는 세포를 죽일 수 있는 화합물 또는 그 유도체를 가리킨다. 화학요법 제제 또는 "항-암 약물"의 예들은 알킬화제들 (예컨대, 부설판(busulfan), 카보플라틴(carboplatine), 클로람부실, 시스플라틴(cisplatine), 사이클로포스파미드(cyclophosphamide), 이포스파미드(ifosfamide), 멜팔란(melphalan), 메클로레타민, 옥살리플라틴(oxaliplatine), 우라무스틴(uramustine), 테모졸로미드(temozolomide), 포테무스틴(fotemustine)), 대사 길항제들(antagonists) (예컨대, 클로파라빈, 플루다라빈 또는 2'-디옥시아데노신, 메토트렉사트 (MTX), 5-플루오로우라실 또는 그 유도체들, 아자티오프린(azathioprine), 카페시타빈(capecitabine), 시타라빈, 플록수리딘(floxuridine), 플루오로우라실(fluorouracile), 젬시타빈(gemcitabine), 메토트렉사트, 페메트렉세드(pemetrexed)와 같은 퓨린 뉴클레오사이드 항대사물질), 항종양 항생제들 (예컨대, 마이토마이신, 아드리아마이신(adriamycin), 블레오마이신, 다우노루비신(daunorubicine), 독소루비신(doxorubicine), 에피루비신(epirubicine), 수산화요소, 이다루비신, 마이토마이신 C, 미톡산트론), 식물=유래 항종양 제제들 (예컨대, 빈크리스틴(vincristine), 빈데신(vindesine), 탁솔(taxol), 빈블라스틴, 비노렐빈(vinorelbine), 도세탁셀(docetaxel), 파클리탁셀(paclitaxel)), 토포이소메라제(topoisomerase) 억제제 (이리노테칸(irinotecan), 토포테칸(topotecan), 에토포시드)을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
바람직한 예에서, 여기에서 사용된 대로 치료적 제제, 화학요법 약물은 암을 치료하는데, 특히 조혈 암 세포 그리고 더욱 특히 AML을 치료하는데 사용되어, 이로써 암 세포의 증식 상황을 감소시키고 그리고/또는 암 세포를 죽일 수 있는 화합물 또는 그 유도체를 가리킨다. 화학요법 제제들의 예들은 아라사이틴(aracytine), 사이토카인 아라비노사이드(arabinoside), 암사크린, 다우노루비신(daunorubicine), 이다루비신, 노반트론, 미톡산트론, 베페사이드, 에토포시드 (VP16), 삼산화비소(arsenic trioxyde), 트랜스레티노산(transretinoic acid), 메클로레타민, 프로카르바진, 클로람부실, 및 그 조합을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 다른 예들에서, 본 발명의 세포들은 아라사이틴(aracytine), 사이토신 아라비노사이드, 암사크린, 다우노루비신(daunorubicine), 이다루비신, 노반트론, 미톡산트론, 베페사이드, 에토포시드 (VP16), 삼산화비소(arsenic trioxyde), 트랜스레티노산(transretinoic acid), 시타라빈, 안트라사이클린들, 6-티오구아닌, 수산화요소, 프레드니손, 및 그 조합으로부터 선택된 약물 (또는 제제)와 함께 환자에 투여된다.
이러한 제제들은 항-암 제제들 트리메토트리사트(TRIMETHOTRIXATE)™ (TMTX), 테모졸로미드(TEMOZOLOMIDE)™, 랄트리트렉세드(RALTRITREXED)™, S-(4-나이트로벤질(Nitrobenzyl))-6-티오이노신(thioinosine) (NBMPR), 6-벤지구아니딘(benzyguanidine) (6-BG), 비스(bis)-클로로니트로소우레아(chloronitrosourea) (BCNU) 및 캠프토테신(CAMPTOTHECIN)™, 또는 그것의 임의의 치료적 유도체를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
더 바람직한 예에서, 항-CLL1 scCAR를 발현시키는 T 세포는 아라사이틴(aracytine), 사이토신 아라비노사이드, 암사크린, 다우노루비신(daunorubicine), 이다루비신, 노반트론, 미톡산트론, 베페사이드, 에토포시드 (VP16), 삼산화비소(arsenic trioxyde), 트랜스레티노산 및 그 조합으로부터 선택되는 적어도 하나의 치료적 제제와 조합하여, 환자에게 투여된다.
여기에서 사용되는 대로, 제제에 "내성 또는 잘 견디는" 세포는 유전적으로 변형되어, 변형 없이 세포의 증식을 억제 또는 방지하는 상당량의 제제의 존재 하, 세포가 증식하는 세포를 의미한다.
환자들의 그룹
바람직한 예에서, 본 발명은 20세 미만의 환자들 또는 60세 초과의 환자들에서 AML 치료를 제공한다.
더 바람직한 예에서, 본 발명은 소아과 치료, 특히 AML에 대항한 소아과 치료, 또는 AML-관련 질환들 또는 합병증들을 제공한다.
또다른 바람직한 예에서, 본 발명은 다시 말해서 5년 생존율 미만의 예상되는 생존인 낮은, 나쁜 또는 선호되지 않는 상황을 가진 AML 환자들의 치료로 사용된다. 이 그룹에서, 하기 세포유전학적 특성들: -5; 5q; -7; 7q-;11q23; 비(non) t(9;11); inv(3); t(3;3); t(6;9); t(9;22)을 가진 AML으로 고통받는 환자들은 나쁜-우험 상황과 관련되고 (Byrd J.C. et al., December 15, 2002; Blood: 100 (13)본 발명의 목적으로 또는 본 발명에 따라 치료될 것으로 특히 예상된다.
한 예에서, 본 발명의 항-CLL1 CAR를 발현시키는 T 세포는 AML을 가진 환자에서 유도 치료로서, AML 후(post) 차도(remission)치료로서 또는 강화요법으로서 사용될 수 있다.
한 예에서, 본 발명의 항-CLL1 CAR를 발현시키는 T 세포는 AML 재발의 경우에, 또는 난치성 또는 내성 AML의 경우에, 그리고 더 바람직하게는, 적어도 하나의 다른 항-암 약물과 조합하여 사용될 수 있다.
또다른 바람직한 예에서, 본 발명의 적어도 하나의 항-CLL1 CAR를 발현시키는 세포는 특히 항-암 치료 후, 골수 고갈 동안, 또는 골수 파괴 후 골수 이식 전 발생하는 암 세포들 발달을 예방하는데 사용된다.
AML 합병증들
또다른 특정 예에서, 본 발명은 환자, 특히 AML 관련 합병증을 겪는 환자의 건강 상태를 개선하는 의약을 제공한다. 더 바람직하게는, 본 발명의 상기 조작된 항-CLL1 CAR를 발현시키는 T 세포는 본 발명의 적어도 하나의 항-CLL1 CAR를 발현시키고 AML 관련 합병증의 치료용 의약으로서 사용된다.
합병증 또는 AML 관련 질환은 앞선(preceding) 척수형성이상(myelodysplasia) 기(phase), 이차(secondary) 백혈병, 특히 이차(secondary) AML, 높은 백혈구 수, 및 아우어(Auer) 막대들의 부재를 포함할 수 있다. 다른 것들 중에서, 백혈구울혈 및 중추신경계 (CNS)의 관련, 백혈구 증가, 잔존 질병은 또한 AML 관련 질환 또는 합병증으로 고려된다.
AML 관련 질환들
한 예에서, 본 발명은 또한 AML 관련 병적인 상황의 치료를 위하여 항-CLL1 CAR를 발현시키는 T 세포을 제공한다.
본 발명은 급성 골수성 백혈병 및 골수형성이상 증후군을 위한, AML 관련 골수성(myeloid) 신생물들(neoplasms)을 위한 치료, 재발된 또는 난치성 급성 골수성 백혈병의 치료, 성인들에서 재발된 또는 난치성 급성 전골수성 백혈병의 치료, 급성 예비골수(promyeloid) 백혈병(leukaemia)의 치료, 60세 초과의 성인들에서, 급성 골수성 백혈병의 치료를 제공한다.
또다른 측면에 따라, 본 발명은 AML 관련 질환들, 특히 AML 관련 혈액학적 악성종양(malignancy)의 치료용 조성물을 제공한다.
AML 질병들 관련 혈액학적 악성종양은 AML에 대한 형질전환의 위험 및 골수 혈액 세포들의 비효과적인 생산 (또는 형성장애)에 의하여 결속되는 혈액학적 질병들의 다양한 종류인 척수형성이상(myelodysplasia) 증후군들(syndromes) (MDS, 예전에는 "전백혈병"으로 알려짐) 을 포함한다.
AML의 위험과 관련된 다른 병적인 상태들 또는 유전적 증후군들은 본 발명의 적절한 사용으로 개선될 수 있고, 상기 유전적 증후군들은 다운 증후군, 삼염색체성(trisomy), 판코니(Fanconi) 빈혈(anemia), 블룸(Bloom) 증후군, 모세혈관확장성 운동실조(Ataxia-telangiectasia), 블랙팬 다이아몬드(Diamond-Blackfan) 빈혈, 슈바흐만(Schwachman)-다이아몬드(Diamond) 증후군, 리프라우메니(Li-Fraumeni) 증후군, 신경섬유종증(Neurofibromatosis) 타입 1, 심각한(Severe) 선천적 호중구감소증(congenital neutropenia) (코스트만(Kostmann) 증후군으로도 불림)을 포함한다.
다른 CLL1 - 매개된 병적인 상태들
또다른 측면에 따라, 본 발명은 CLL1+세포-매개된 질환들의 치료용 조성물을 제공한다. 이들 CLL1+세포 매개된 질환들은 류머티스(rheumatoid) 관절염(arthitis)과 같은 염증을 포함한다.
특히, 본 발명은 염증 및 더욱 특히 류머티스 관절염과 같은 CLL1+세포 매개된 질환들의 치료에 사용될 수 있다.
조성물들
본 발명은 또한 그것의 사용을 위한 본 발명에 따른 조작된 T 세포들을 포함하는 조성물 또는 질병을 치료하는 방법을 제공한다.
한 측면에서, 질병은 혈액암, 특히 (급성 골수성(myelogenous) 백혈병 (AML)과 같은 백혈병 또는 그것의 합병증을 포함하나 이에 제한되지 않는 줄기 세포 암이다.
본 발명은 또한 환자에게서 CLL1-발현시키는 세포 군집 또는 활성을 감소시키거나 또는 증식을 억제하는 방법 또는 그것의 사용을 위한 조성물을 제공한다. 예시적 방법은 CLL1-발현시키는 세포를 포함하는 세포들의 군집을 항-CLL1 CART 세포, 그리고 특히 CLL1-발현시키는 세포에 결합하는 본 발명의 scCART과 접촉시키는 단계를 포함한다.
더 특이적 측면에서, 본 발명은 환자에서 CLL1을 발현시키는 암 세포들의 군집을 감소시키거나 또는 증식을 억제하는 방법 도는 그것의 사용을 위한 조성물을 제공하며, 방법들은 CLL1-발현시키는 암 세포 군집을 항-CLL1 CART 세포, 그리고 특히 CLL1-발현시키는 세포에 결합하는 본 발명의 scCART과 접촉시키는 단계, 항-CLL1 CAR 세포, 그리고 특히 본 발명의 scCART를 CLL1-발현시키는 암 세포에 결합시켜, CLL1-발현시키는 암 세포들의 파괴를 야기하는 단계를 포함한다.
특정 측면들에서, 항-CLL1 CART 세포, 그리고 특히 본 발명의 scCART는 음성 대조군에 비하여, 골수성 백혈병 또는 CLL1-발현시키는 세포들과 관련된 다른 암에 대한 동물 모델 또는 이를 갖는 대상에서 세포들 및/또는 암 세포들의 양(quantity), 수, 총량(amount) 또는 퍼센트를 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 65%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% (검출할 수 없는 수준까지)까지 감소시킨다.
본 발명은 CLL1-발현시키는 세포들과 관련된 장애 또는 질병 (예컨대, 혈액암 관련)을 예방, 치료 및/또는 관리하는 방법 또는 그것의 사용을 위ㅎ나 조성물을 제공하며, 방법들은 항-CLL1 CART 세포, 그리고 특히, CLL1-발현시키는 세포에 결합하는 본 발명의, scCART를 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함한다. 한 측면에서, 대상은 인간이다. CLL1-발현시키는 세포들과 관련된 장애들의 제한되지 않는 예들은 (류머티스 관절염과 같은) 염증성 장애들 및 (혈액암들, 특히 AML 또는 AML 합병증들과 같은) 암들을 포함한다.
본 발명은 또한 CLL1-발현시키는 세포들과 관련된 질환의 예방, 치료 및/또는 관리 방법 또는 그것의 사용을 위한 조성물을 제공하며, 방법은 항-CLL1 CART 세포, 그리고 특히, CLL1-발현시키는 세포에 결합하는 본 발명의, scCART를 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함한다. 한 측면에서, 대상은 인간이다. CLL1-발현시키는 세포들과 관련된 질환들의 제한되지 않는 에들은 특히 급성 골수성 백혈병 (AML)을 포함한다.
본 발명은 CLL1-발현시키는 세포들과 관련된 암의 치료 또는 예방 방법 또는 그것의 사용을 위한 조성물을 제공하며, 방법은 항-CLL1 CART 세포, 그리고 특히, CLL1-발현시키는 세포에 결합하는 본 발명의, scCART를 그것을 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함한다. 또다른 측면에서, 방법들은 효과적인 양의 항 CLL1 CART 세포, 및 특히, 또다른 치료의 효과적인 양과 조합하여 CLL1-발현시키는 세포에 결합하는 본 발명의, scCART를 그것을 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함한다.
한 측면에서, CLL1은 AML에서 "암 줄기 세포" 마커로 고려된다. 그러므로, 항-CLL1 CART 세포, 그리고 특히 본 발명의 scCART는 AML의 재발을 예방할 수 있고, 또는 CLL1+ 세포들 (CLL1-발현시키는 세포들)의 "줄기" 군집과 함께 주로 CLL1-음성인 AML을 치료도 할 수 있다.
한 측면에서, 본 발명은 CD 19의 높은 발현 수준들과 관련된 질환 또는 장애의 치료를 겪어 온 대상을 치료하기 위한 방법들 및 조성물들을 제공하며, CLL1의 높은 수준들과 관련된 질환 또는 장애를 보여준다.
본 발명에 따른 조작된 면역 세포들로 하는 치료는 항체들 치료, chemotherapy, 사이토카인들 치료, 수지상 세포 치료, 유전자 치료, 호르몬 치료, 레이저 광 치료 및 방사선 요법의 군으로부터 선택되는 암에 대항한 하나 이상의 치료들과 조합될 수 있다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 조작된 면역 세포들로 하는 치료는 아라사이틴(aracytine), 사이토신 아라비노사이드, 암사크린, 다우노루비신(daunorubicine), 이다루비신, 노반트론, 미톡산트론, 베페사이드, 에토포시드 (VP16), 삼산화비소(arsenic trioxyde), 트랜스레티노산(transretinoic acid), 삼산화비소(arsenic trioxyde)의 조합, 트랜스레티노산(transretinoic acid), 메클로레타민, 프로카르바진, 클로람부실, 및 그것의 조합으로부터 선택되는 암에 대항한 하나 이상의 치료들과 (예컨대, 그 전, 동시에 또는 그 후에) 조합으로 투여될 수 있다.
본 발명의 바람직한 예에 따라, 상기 치료는 면역억제제 치료를 겪는 환자들에게 투여될 수 있다. 정말로, 본 발명은 바람직하게는 이러한 면역억제 제제와 같은 수용체를 코드하는 유전자의 불활성화 때문에 적어도 하나의 면역억제 제제에 내성으로 만들어진, 세포들 또는 세포들의 군집에 의존한다. 이 측면에서, 면역억제 치료는 선택 및 환자 내에서 본 발명에 따른 T-세포들의 확장을 도와야 한다.
본 발명에 따른 세포들 또는 세포들의 군집의 투여는 에어로졸 흡입, 주사, 섭취, 투입(transfusion), 임플란트(implantation) 또는 이식(transplantation)을 포함하는, 임의의 종래 방식으로 수행될 수 있다. 여기에서 기재된 조성물들은 환자에게 피하로, 피내로, 종양내로, 절내로(intranodally), 척수내로(intramedullary), 근육내로, 정맥 또는 림프절(intralymphatic) 주사에 의하여, 또는 복강내로 환자에게 투여될 수 있다. 한 예에서, 본 발명의 세포 조성물들은 바람직하게는 정맥 주사에 의하여 투여된다. 세포들 또는 세포들의 군집의 투여는 kg 체중 당 104-109 세포들, 바람직하게는 그 범위 내 세포 수들의 모든 정수 값들을 포함하는 105 내지 106 세포들/kg 체중의 투여로 구성될 수 있다. 세포들 또는 세포들의 군집은 하나 이상의 투여량으로 투여될 수 있다. 또다른 예에서, 상기 효과적인 양의 세포들은 일회량으로 투여된다. 또다른 예에서, 상기 효과적인 양의 세포들은 일정 시간의 기간 동안 한 복용량보다 많이 투여된다. 투여 타이밍은 담당 의사의 판단 내이며, 환자의 임상적 상태에 의존한다. 세포들 또는 세포들의 군집은 혈액 은행 또는 기증자와 같은, 임의의 소스로부터 수득될 수 있다. 개인의 필요들이 다른 반면, 당업계에서 특정 질병 또는 질환들에 대한 정해진 세포 타입의 효과적인 양의 최적 범위의 결정. 효과적인 양은 치료적 또는 예방적(prophylactic) 이점을 제공하는 양을 의미한다. 투여되는 복용량은 받는 사람(recipient)의 연령, 건강 및 무게, 함께 이루어지는 치료의 종류, 만약 있다면, 치료의 빈도 및 바람직한 효과의 특성에 의존할 것이다.
또다른 예에서, 상기 효과적인 양의 세포들 또는 그 세포들을 포함하는 조성물은 비경구로 투여된다. 상기 투여는 정맥 투여일 수 있다. 상기 투여는 종양 내로 주사에 의하여 직접적으로 이루어질 수 있다.
본 발명의 특정 예들에서, 세포들은 항바이러스 치료, 시도포비르 및 인터루킨-2와 같은 제제들로 하는 치료, MS 환자들을 위한 나탈리지맙(natalizimab) 또는 시트라빈 (ARA-C로도 알려짐) 치료 또는 건선 환자들을 위한 에팔리즈티맙(efaliztimab) 치료 또는 PML 환자들을 위한 다른 치료들을 포함하나 이에 제한되지 않는 많은 관련 치료 양식들과 함께 (예컨대, 그 전, 동시에 또는 그 후) 환자에게 투여된다. 추가의 예들에서, 본 발명의 T 세포들은 사이클로스포린, 아자티오프린, 메토트렉사트, 마이코페놀레이트(mycophenolate), 및 FK506, 항체들과 같은, 면역억제 제제들, 방사선, 화학요법, 또는 CAMPATH과 같은 다른 면역제거 제제들, 항-CD3 항체들 또는 다른 항체 요법들, 사이톡신, 플루다라빈, 사이클로스포린, FK506, 라파마이신(rapamycin), 마이코프리에놀산(mycoplienolic acid), 스테로이드들, FR901228, 사이토카인들, 및 방사선요법과 조합하여 사용될 수 있다. 이들 약물들은 칼슘 의존적 포스파타제 칼시뉴린 (사이클로스포린 및 FK506)을 억제하거나 또는 성장인자 유도된 신호전달에 중요한 p70S6 키나제 (라파마이신)을 억제한다 (Henderson, Naya et al. 1991; Liu, Albers et al. 1992; Bierer, Hollander et al. 1993).
추가의 예에서, 본 발명의 세포 조성물들은 플루다라빈과 같은 화학요법 제제들, 외부-빔 방사 요법(XRT), 사이클로포스파미드, 또는 CAMPATH 또는 OKT3와 같은 항체들을 이용한 T 세포 제거 요법, 골수 이식과 함께 (예컨대, 그 전, 동시에 또는 그 후) 환자에 투여된다.
또다른 예에서, 본 발명의 세포 조성물들은 CD20와 반응하는 제제들과 같은, 예컨대, Rituxan, B-세포 제거 요법 후 투여된다. 예를 들어, 한 예에서, 대상은 고용량 화학요법으로 표준 치료를 겪을 수 있고 뒤이어 말초혈액 줄기 세포 이식이 이어진다. 특정 예들에서, 이식 후, 대상은 본 발명의 확장된 면역 세포들의 주입을 받는다. 추가적인 예에서, 확장된 세포들은 수술 전 또는 후에 투여된다.
본 발명의 특정 예들에서, 항-CLL1 scCAR 발현시키는 세포들은 아라사이틴(aracytine), 사이토신 아라비노사이드, 암사크린, 다우노루비신(daunorubicine), 이다루비신, 노반트론, 미톡산트론, 베페사이드, 에토포시드 (VP16), 삼산화비소(arsenic trioxyde), 트랜스레티노산(transretinoic acid), 삼산화비소(arsenic trioxyde)의 조합, 트랜스레티노산(transretinoic acid), 메클로레타민, 프로카르바진, 클로람부실, 및 그 조합으로부터 선택되는 약물과 함께 (예컨대, 그 전, 동시에 또는 그 후) 환자에 투여된다. 이들 예들에서, 항-CLL1 scCAR을 발현시키는 세포들은 특정 약물 또는 항-CLL1 scCAR를 발현시키는 세포들과 함께 투여되는 약물들의 조합에 내성일 수 있다.
본 발명의 다른 예들에서, 항-CLL1 scCAR를 발현시키는 세포들은 시타라빈, 안트라사이클린들, 6-티오구아닌, 수산화요소, 프레드니손, 및 그 조합으로부터 선택되는 약물과 함께 환자에 투여된다.
다른 정의들
- 다르게 특정되지 않는 한, "하나(a)", "하나(an)", "그(the)" 및 "적어도 하나"는 교환가능하게 사용되며 하나보다는 하나 이상을 의미한다. - 폴리펩타이드 서열에서 아미노산 잔기들은 한-문자 코드에 따라 여기에 설계되며, 여기에서 예를 들어, Q는 Gln 또는 글루타민(Glutamine) 잔기를 의미하고, R은 Arg 또는 알기닌(Arginine) 잔기를 의미하고 그리고 D는 Asp 또는 아스파르트산(Aspartic acid) 잔기를 의미한다.
- 아미노산 치환은 하나의 아미노산 잔기의 또다른 것으로의 대체를 의미하며, 예를 들어 펩타이드 서열에서 알기닌 잔기의 글루타민 잔기로의 대체는 아미노산 치환이다.
- 뉴클레오타이드들은 하기와 같이 설계된다: 일-문자 코드가 뉴클레오사이드의 염기를 지시하는데 사용된다: A는 아데닌, T는 티민, C는 사이토신 그리고 G는 구아닌이다. 축퇴된 뉴클레오타이드들에 대하여, r은 g 또는 a (퓨린 뉴클레오타이드들)을 나타내고, k는 g 또는 t를 나타내고, s는 g 또는 c를 나타내고, w는 a 또는 t를 나타내고, m은 a 또는 c를 나타내고, y는 t 또는 c (피리미딘 뉴클레오타이드들)를 나타내고, d는 g, a 또는 t를 나타내고, v는 g, a 또는 c를 나타내고, b는 g, t 또는 c를 나타내고, h는 a, t 또는 c를 나타내고, 그리고 n은 g, a, t 또는 c를 나타낸다.
- 여기에서 사용된 대로, "핵산" 또는 "폴리뉴클레오타이드들"은 디옥시리보핵산 (DNA) 또는 리보핵산 (RNA), 올리고뉴클레오타이드들, 폴리메라제 체인 반응 (PCR)에 의하여 만들어지는 단편들, 라이게이션, 분리(scission), 엔도뉴클레아제 작용, 및 엑소뉴클레아제 작용 중 임의의 것에 의하여 만들어진 단편들과 같은, 뉴클레오타이드들 및/또는 폴리뉴클레오타이드들을 가리킨다. 핵산 분자들은 (DNA 및 RNA와 같은) 자연적으로-발생하는 뉴클레오타이드들, 또는 자연적으로-발생하는 뉴클레오타이드들 (예컨대, 자연적으로-발생하는 뉴클레오타이드들의 거울상이성질체 형태들), 또는 그 둘의 조합인 모노머들로 이루어질 수 있다. 변형된 뉴클레오타이드들은 당 모이어티들 및/또는 피리미딘 또는 퓨린 염기 모이어티들에서 변형을 가질 수 있다. 당 변형들은 예를 들어, 하나 이상의 하이드록실기들의 할로겐들, 알킬기들, 아민들, 및 아다이도(azido) 기들로의 대체를 포함하고, 또는 당들은 에테르 또는 에스터들과 같이 기능적일 수 있다. 게다가, 전체 당 모이어티는 아자(aza)-당들 및 카르복실 당 유사체들과 같은, 입체구조적으로 그리고 전기적으로 유사한 구조들로 대체될 수 있다. 염기 모이어티에서의 변형들의 예들은 알킬화된 퓨린들 및 피리미딘들, 아크릴화된 퓨린들 또는 피리미딘들, 또는 다른 잘 알려진 헤테로사이클릭 치환들을 포함한다. 핵산 모노머들은 포스포다이에스터 연결들 또는 이러한 연결들의 유사체들에 의하여 연결될 수 있다. 핵산들은 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있다.
- "전달 벡터" 또는 "전달 벡터들"에 의하여 본 발명에서 필요로 하는, 제제들/화학물질들 및 분자들 (단백질들 또는 핵산들)을 세포 접촉 내로 넣기 위하여 (즉, "접촉하는") 또는 세포들 또는 세포이하(subcellular) 구획들(compartments) (즉, "도입하는") 내로 전달하기 우히ㅏ여 본 발명에서 사용될 수 있는 임의의 전달 벡터가 의도된다. 그것은 리포좀 전달 벡터들, 바이러스 전달 벡터들, 약물 전달 벡터들, 화학적 담체들, 폴리머 담체들, 리포플렉스들(ipoplexes), 폴리플렉스들(polyplexes), 덴드리머들, 마이크로버블들 (초음파 조영제들), 나노입자들, 에멀젼들 또는 다른 wjrekdf한 이동(transfer) 벡터들을 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다. 이들 전달 벡터들은 분자들, 화학물질들, 거대분자들 (유전자들, 단백질들), Diatos에 의하여 개발된 펩타이드들, 플라스미드들과 같은 다른 벡터들의 전달을 가능하게 한다. 이들 경우들에서, 전달 벡터들은 분자 담체들이다. "전달 벡터" 또는 "전달 벡터들"에 의하여, 형질주입을 수행하는 전달 방법들이 또한 의도된다.
- 용어들 "벡터" 또는 "벡터들"은 그것이 연결된 또다른 핵산을 이동시킬 수 있는 핵산 분자를 가리킨다. 본 발명에서 "벡터"는 염색체, 비(non) 염색체, 반-합성 또는 합성 핵산들로 구성될 수 있는 선형 또는 원형 DNA 또는 RNA 분자, 바이러스 벡터, a 플라스미드, a RNA 벡터를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 바람직한 벡터들은 그것들이 연결되는 핵산들의 발현 (발현 벡터들) 및/또는 자동적인 복제 (에피솜 벡터)가 가능한 것들이다. 많은 수의 적당한 벡터들이 당업자들에게 알려져 있고 상업적으로 이용가능하다.
바이러스 벡터들은 예컨대, 레트로바이러스, 아데노바이러스, 파보바이러스 (예컨대 아데노관련 바이러스들), 코로나바이러스, 오르소믹소바이러스(orthomyxovirus) (예컨대, 인플루엔자 바이러스)와 같은 음성 가닥 RNA 바이러스들, 랍도바이러스(rhabdovirus) (예컨대, 광견병 및 수포성 구내염(vesicular stomatitis) 바이러스), 파라믹소바이러스(paramyxovirus) (예컨대 홍역 및 센다이), 피코르나바이러스 및 알파바이러스와 같은 양성 가닥 RNA 바이러스들, 및 including 아데노바이러스 헤르페스바이러스 (예컨대, 헤르페스 심브ㅍ렉스 바이러스 타입들 1 및 2을 포함하는 이중 가닥 DNA 바이러스들, 엡스타인(Epstein)-바(Barr) 바이러스, 시토메갈로바이러스(cytomegalovirus)), 및 수두 방이러스 (예컨대, 우두, 계두 및 카나리아두창)을 포함한다. 다른 바이러스들은 노워크(Norwalk) 바이러스, 토가바이러스 플라비바이러스, 레오바이러스들(reociruses), 파포바바이러스(papovavirus), 헤파드나바이러스(hepadnavirus), 및 간염 바이러스를 포함한다. 레트로바이러스들의 예들은 하기를 포함한다: 새의 백혈증 육종, 포유류 C-타입, B-타입 바이러스들, D 타입 바이러스들, HTLV-BLV 그룹, 렌티바이러스, 스푸마바이러스(spumavirus)(Coffin, J. M., Retroviridae: The viruseses and their replication, In Fundamental Virology, Third Edition, B. N. Fields, et al., Eds., Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, 1996).
- "렌티바이러스 벡터"에 의하여 그것들의 상대적으로 큰 포장 용량, 감소된 면역원성 및 넓은 범위의 다른 세포 타입들에 높은 효율로 안정적으로 형질도입시킬 수 있는 그것들의 능력 때문에 유전자 전달을 위한 매우 유망한 HIV-기반의 렌티바이러스 벡터들이 의미된다. 렌티바이러스 벡터들은 생산자 세포들 내로 셋 (포장, 봉투(envelope) 및 이동) 또는 그보다 많은 플라스미드들의 일시적 형질주입(transfection) 후 보통 만들어진다. HIV처럼, 렌티바이러스 벡터들은 세포 표면 상 수용체들과 바이러스 표면 당단백질들의 상호작용을 통하여 타겟 세포에 들어간다. 들어가면, 바이러스 RNA는 바이러스 역전사효소 복합체에 의하여 매개되는, 역전사를 겪는다. 역전사 산물은 감염된 세포들의 DNA에 바이러스 통합의 기질인, 이중가닥 선형 바이러스 DNA이다. "통합하는(integrative) 렌티바이러스 벡터들 (또는 LV)"에 의하여, 제한되지 않는 예로서, 타겟 세포의 게놈에 통합될 수 있는 이렇나 벡터들이 의미된다. "통합하지 않는(non-integrative) 렌티바이러스 벡터들 (또는 NILV)"에 의하여 반대로 바이러스 인테그라제(integrase)의 작용을 통한 타겟 세포의 게놈에 통합되지 않는 효과적인 유전자 전달 벡터들이 의미된다.
- 전달 벡터들 및 벡터들은 초음파천공(sonoporation) 또는 전기천공 또는 이들 기술들의 유도체들과 같은 임의의 세포 투과화와 조합 또는 관련될 수 있다.
- 세포 또는 세포들에 의하여 임의의 진핵 살아있는 세포들, 인 비트로 배양들을 위한 이들 생물들로부터 유래되는 일차(primary) 세포들 및 세포주들이 의도된다.
- "일차(primary) 세포" 또는 "일차(primary) 세포들"에 의하여 살아있는 조직에서 직접 취해지고 (즉, 생검 물질) 인 비트로에서 성장을 위하여 확립된, 매우 적은 개체군 배가들을 겪고, 그리고, 그러므로, 연속적인 종양형성성인(tumorigenic) 또는 인공적으로 불멸화된 세포주들에 비교하여, 그것들이 유래된 조직의 특성들 및 주된 기능적 요소들의 더 대표적인, 세포들이 의도된다.
제한되지 않는 예들로서, 세포주들은 CHO-K1 세포들; HEK293 세포들; Caco2 세포들; U2-OS 세포들; NIH 3T3 세포들; NSO 세포들; SP2 세포들; CHO-S 세포들; DG44 세포들; K-562 세포들, U-937 세포들; MRC5 세포들; IMR90 세포들; Jurkat 세포들; HepG2 세포들; HeLa 세포들; HT-1080 세포들; HCT-116 세포들; Hu-h7 세포들; Huvec 세포들; Molt 4 세포들로 구성되는 군으로부터 선택될 수 있다.
이들 세포주들 모두는 본 발명의 방법에 의하여 변형되어 생산, 발현, 정성화, 검출, 관심있는 유전자 또는 단백질 연구를 위한 세포주 모델들을 제공할 수 있고; 이들 모델들은 또한 제한되지 않는 예들로서 화학물질들, 바이오연료들, 치료법들 및 농업경제학들과 같은 여러가지 영역들에서 생산 및 연구에서 관심있는 생물학적으로 활성인 분자들을 스크리닝하는데 사용될 수 있다.
- "돌연변이"에 의하여 폴리뉴클레오타이드 (cDNA, gene) 또는 폴리펩타이드 서열에서 하나, 둘, 셋, 넷, 다섯, 여섯, 일곱, 여덟, 아홉, 열, 열하나, 열둘, 열셋, 열넷, 열다섯, 스물, 스물다섯, 서른, 마흔, 쉰, 또는 그보다 많은 뉴클레오타이드들/아미노산들의 치환, 결실, 삽입이 의도된다. 돌연변이는 유전자의 서열 또는 그것의 조절 서열을 코드하는데 영향을 미칠 수 있다. 그것은 또한 코드되는 mRNA의 구조/안정성 또는 게놈 서열의 구조체에 영향을 미칠 수 있다.
- 변종(들)"에 의하여 부모 분자의 아미노산 서열에서 적어도 하나의 잔기의 대체 또는 돌연변이에 의하여 수득되는 폴리펩타이드 변종, 반복 변종, 변종, DNA 결합 변종, TALE-뉴클레아제 변종이 의도된다.
- "기능적 변종"에 의하여 단백질 또는 단백질 도메인의 촉매적으로 활성인 돌연변이체가 의도된다; 이러한 돌연변이체는 그것의 부모 단백질 또는 단백질 도메인에 비하여 동일한 활성 또는 추가적인 특성들, 또는 더 높은 또는 더 낮은 활성을 가질 수 있다.
- "동일성"은 두 핵산 분자들 또는 폴리펩타이드들 사이의 서열 동일성(identity)이 가리킨다. 동일성은 비교 목적으로 정렬될 수 있는 각 서열에서의 위치의 비교에 의하여 결정될 수 있다. 비교되는 서열에서의 위치가 동일 염기에 의하여 차지될 때, 그러면 분자들은 그 위치에서 동일하다. 핵산 또는 아미노산 서열들 사이에서 유사도(similarity) 또는 동일성(identity)의 정도는 핵산 서열들에 의하여 공유되는 위치들에서 동일하거나 또는 매칭되는 뉴클레오타이드들의 수의 기능이다. 여러가지 정렬 알고리즘들 및/또는 프로그램들이 두 서열들 사이의 동일성을 계산하는데 사용될 수 있고, GCG 서열 분석 패키지의 부분으로서 이용가능한 BLAST 또는 FASTA를 포함하고 (University of Wisconsin, Madison, Wis.), 에컨대, 디폴트 세팅으로 사용될 수 있다. 예컨대, 여기에 기재된 특정 폴리펩타이드들에 적어도 70%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 동일성을 갖고 바람직하게는 이러한 폴리펩타이드들를 코드하는 폴리뉴클레오타이드와 더불어, 대체로 동일한 기능들을 보여주는 폴리펩타이드들이 고려된다.
- "유사도"는 둘 또는 이보다 많은 폴리펩타이드들의 아미노산 서열들 사이의 관계를 기재한다. BLASTP는 BLOSUM45, BLOSUM62 또는 BLOSUM80와 같은 유사도 매트릭스를 이용하여 참조 아미노산 서열에 대하여 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 87.5%, 90%, 92.5%, 95%, 97.5%, 98%, 99% 서열 유사도를 갖는 아미노산 서열을 확인하는데 사용될 수 있다. 다르게 표시하지 않는 한, 유사도 지수는 BLOSUM62의 이용에 기초할 것이다. BLASTP이 사용될 때 퍼센트 유사도는 BLASTP 양성 지수에 기초하고 퍼센트 서열 동일성은 BLASTP 동일성들 지수에 기초한다. BLASTP "동일성들"은 동일한 지수가 높은 서열쌍들에서 총 잔기들의 부분(fraction) 및 수를 보여준다; 그리고 BLASTP "양성들"은 그것들을 위한 정렬 지수들이 서로 유사하고 양성 값들을 갖는 잔기들의 부분 및 수를 보여준다. 여기에 개시된 아미노산 서열들의 유사도의 동일성의 임의의 중간 정도 또는 동일성 또는 유사도의 이들 정도를 갖는 아미노산 서열들이 고려되고 이 공개에 포함된다. 유사한 폴리펩타이드들의 폴리뉴클레오타이드 서열들은 유전적 코드를 이용하여 도출되고 종래 수단들에 의하여 수득될 수 있다. 예를 들어, pTalpha의 기능적 변종은, WO2013176916에 개시된 것과 같이 서열번호 : 107의 아미노산 서열에 70%, 75%, 80%, 85%, 87.5%, 90%, 92.5%, 95%, 97.5%, 98%, 99% 서열 유사도를 가질 수 있다. 이러한 기능적 변종을 코드하는 폴리뉴클레오타이드은 유전적 코드를 이용하여 그것의 아미노산 서열를 역번역함으로써 생산될 수 있을 것이다.
여기에서 사용된 대로 용어 "대상" 또는 "환자"는 인간이 아닌 영장류들 및 인간들을 포함하는 동물계의 모든 멤버들을 포함한다.
용어 "재발된"은 치료 후 암의 차도가 있었으나 암 세포들이 복귀한, 대상 또는 포유동물에서의 상황을 가리킨다.
용어 "난치성(refractory) 또는 내성"은 집중 치료 후에도, 그 신체 내에 잔여 암 세포들을 가진 대상 또는 포유동물에서의 정황을 가리킨다.
용어 "약물 내성"은 질병들이 약물 또는 약물들의 치료에 반응하지 않을 때 상태를 가리킨다. 약물 내성은 내재적(intrinsic) (또는 주로 내성)일 수 있는데, 이는 질병이 약물 또는 약물들에 응답적인 적 없었던 것을 의미하고, 또는 그것은 수득될 수 있는데, 이는 전에는 질병이 응답하였던 약물 또는 약물들에 대하여 질병이 반응을 멈춘 것을 의미한다(이차 내성). 특정 예들에서, 약물 내성은 내재적이다. 특정 예들에서, 약물 내성은 수득된다.
용어 "혈액 악성종양(hematologic malignancy)" 또는 “혈액암"은 신체의 혈액 골수 - 골수 및/또는 림프조직의 암을 가리킨다. 혈액 악성종양들의 예들은, 특히 급성 골수성 백혈병 (AML), 삼계통(trilineage) 척추형성이상증(myelodysplasia)을 지닌 AML (AML/TMDS), 혼합된(mixed) 계통(lineage) 백혈병 (MLL), 및 다른 AM- 관련 병적 측면들을 포함한다.
용어 "백혈병"은 특히 급성 골수성 백혈병 또는 급성 골수성(myelogenous) 백혈병 (AML)을 포함하는, 혈액 형성 조직들의 악성 신생물들을 가리킨다.
본 발명의 상기 기재된 기재는 그것을 만들고 이용하는 공정 및 방식을 제공하여, 당업자가 이를 만들고 사용하는 것을 가능하게 하는 것이며, 이 구현은 특히 원래 기재의 부분을 이루는, 첨부된 특허청구범위의 주제를 위하여, 제공된다.
숫자 제한 또는 범위가 여기에 기재될 때, 그 단점들(endpoints)이 포함된다. 또한 숫자 제한 또는 범위 내 모든 값들 및 하위범위들은 명백히 적혀있는 것처럼, 특이적으로 포함된다.
상기 기재는 당업자가 본 발명을 이용하고 만드는 것을 가능하게 하도록 제시되며, 특정 적용 및 그것의 요구들의 맥락에서 제공된다. 바람직한 예들에 대한 여러가지 변형들이 당업자에게 쉽게 분명할 것이며, 여기에 정의된 유전적 원칙들은 본 발명의 범위 및 정신에서 벗어나는 것 없이 다른 예들 및 적용들에 적용될 수 있다. 이런 식으로 이 발명은 보여지는 예들로 제한되는 것으로 의도되지 않고, 여기에 개시된 특성들 및 원칙들과 일치하는 가장 넓은 범위에 따른다.
이 발명에 일반적으로 기재된 것, 추가의 이해가 특정 특이적 예들을 참조로 하여 수득될 수 있는데, 이는 설명 목적을 위하여만 여기에 제공되는 것이며, 다르게 명시하지 않는 한 제한하는 것으로 의도되지 않는다.
실시예들
일반적 방법들
일차 T-세포 배양들
T 세포들들은 Ficoll 농도 구배 배지를 이용하여 EFS (Etablissement Francais du Sang, Paris, France)에 의하여 제공된 버피 코트 샘플들로부터 정제되었다. PBMC 층이 제거되었고 T 세포들이 상업적으로 이용가능한 T-세포 풍부 키트를 이용하여 정제되었다. 정제된 T 세포들이 비드: 세포 비율 1:1에서 20ng/mL 인간 IL-2, 5% Human, 및 Dynabeads 인간 T 활성인자 CD3/CD28로 보충된 X-VivoTM-15 배지 (Lonza)에서 활성화되었다 (Life Technologies).
scCAR mRNA 형질주입(transfection)
형질주입은 -세포 정제 및 활성화 4일 또는 11일 후에 이루어졌다. 5 백만의 세포들이 다른 scCAR 구조체들을 코드하는 mRNA 15μg으로 형질주입되었다. scCAR mRNA들은 두 개의 0.1 mS 펄스들을 3000V/cm 에서 적용하고, 뒤이어 최종 부피 200μl의 "사이토포레이션(Cytoporation) 버퍼 T" (BTX Harvard Apparatus)에서 0.4cm 갭 큐벳에서 네 개의 0.2 mS 펄스들 at 325V/cm이 이어짐으로써 Cytopulse 기술을 이용한 T7 mRNA 폴리메라제 형질주입들을 이용하여 생산되었다. 세포들은 X-VivoTM-15 배지에서 즉시 희석되었고 5% CO2와 37℃에서 배양되었다. IL-2가 20ng/mL에서 전기천공 2 시간 후 첨가되었다.
탈과립화 분석 ( CD107a 동원)
T-세포들은 여러가지 수준들의 CLL1 단백질을 발현시키는 동일한 양의 세포들과 함께 96-웰 플레이트들 (40,000 세포들/웰)에서 배양되었다. 공-배양은 5% CO2로 37 ℃에서 6 시간 동안 최종 부피 100μl의 X-VivoTM-15 배지 (Lonza)에서 유지되었다. CD107a 염색은, 1μg/ml의 항-CD49d, 1μg/ml의 항-CD28, 및 1x Monensin 용액과 함께, 공-배양의 시작부터 형광 항-CD107a 항체의 첨가에 의하여, 세포 자극 동안 이루어졌다. 6 시간 배양 기간 후, 세포들은 고정가능한 생존능력(viability) 염료 및 플루오로크롬(fluorochrome)-콘쥬게이트된 항-CD8으로 염색되었고 유동세포 분석법에 의하여 분석되었다. 탈과립화 활성은 CD8+/CD107a+ 세포들의 %로서 그리고 CD8+ 세포들 중 CD107a 염색을 위한 평균(mean) 형광(fluorescence) 강도(intensity) 신호(signal) (MFI)을 결정함으로써 결정되었다. 탈과립화 분석들은 mRNA 형질주입(transfection) 24 시간 후 수행되었다.
IFN 감마 방출 분석
T-세포들은 여러 수준들의 CLL1 단백질을 발현시키는 세포주들과 함께 96-웰 플레이트들 (40,000 세포들/웰)에서 배양되었다. 공-배양들은 최종 부피 100μl의 X-VivoTM-15 배지 (Lonza)에서 5% CO2와 37 ℃에서 24 시간 동안 유지되었다. 이 배양 기간 후, 플레이트들은 5 분 동안 1500 rpm에서 원심분리되었고 상청액들이 새 플레이트에서 회수되었다. 세포 배양 상청액들에서 IFN 감마 검출은 ELISA 분석에 의하여 이루어졌다. IFN 감마 방출 분석들은 mRNA 형질주입 24시간 후 세포 공-배양을 시작함으로써 수행되었다.
세포독성 분석
T-세포들은 동일한 웰에서 10,000 대조군 (CLL1neg) 세포들 및 (CLL1을 발현시키는) 10,000 타겟 세포들과 함께 96-웰 플레이트들 (100,000 세포들/웰)에서 배양되었다. 타겟 및 대조군 세포들은 cCAR+ T-세포들과 그것들의 공-배양 전에 형광 세포내 염료들 (CFSE 또는 Cell Trace Violet)로 표지되었다. 공-배양들은 5% CO2와 37 ℃에서 4 시간 동안 배양되었다. 이 배양 기간 후, 세포들은 고정가능한 생존능 염료로 염색되었고 유동세포 분석법에 의하여 분석되었다. 각 세포 군집의 생존능 (타겟 세포들 또는 CLL1neg 대조군 세포들)이 결정되었고 특이적 세포 용해의 %가 계산되었다. 세포독성 분석들은 mRNA 형질주입 48 시간 후 수행되었다.
T-세포 형질도입
scCAR를 발현시키는 재조합 렌티바이러스 벡터들로 하는 T-세포들의 형질도입은 T-세포 정제/활성화 3일 후 수행되었다. T-세포들의 표면에서 scCAR 검출은 쥐 IgG1 Fc 단편과 함께 인간 CLL1 단백질의 세포외 도메인의 융합으로 구성되는 재조합 단백질을 이용하여 이루어졌다. scCAR 분자에의 이 단백질의 결합은 단백질의 마우스 Fc 부분을 타겟팅하는 플루오로크롬-콘쥬게이트된 이차 항체로 검출되었고, 유동세포 분석법에 의하여 분석되었다.
항-종양 마우스 모델
면역결핍 NOG 마우스들이 AML 이종이식 마우스 모델로서 (CLL1 발현시키는_MOLM13-루시페라제 세포들로 정맥주사되었다(iv). 선택적으로, 마우스들은 항-암 치료를 받았다. 마우스들은 그 다음에 테스트되는 scCAR+ T-세포들을 다른 용량들로 또는 scCAR 렌티바이러스 벡터로 형질도입되지 않는 T-세포들로 (종양 세포주의 주입 2일 또는 7일 후) 정맥주사 주입되었다. 생물발광 신호들이 다른 동물들에서 종양 진행을 따라잡기 위하여 T-세포 주입일 (D0)에, T-세포 주입 7, 14, 21, 28 및 40일에, 결정되었다.
실시예 1: CLL1 - scCAR를 발현시키는 TCR알파 불활성화된 세포들의 증식
T-세포 수용체 알파 불변(constant) 체인 영역 (TRAC) 유전자 내 15-bp 스페이서(spacer)에 의하여 분리된 (반(half) 타겟들로 불리는) 두 개의 17-bp 길이 서열들을 타겟팅하는 헤테로다이머 TALE-뉴클레아제가 설계되었고 생산되었다. 각각의 반 타겟은 표 10에 목록화된 반 TALE-뉴클레아제들의 반복들에 의하여 인식된다.
<표 10>
Figure 112017074439357-pct00015
: TCR알파 유전자를 타겟팅하는 TAL-뉴클레아제들
각 TALE-뉴클레아제 구조체가 T7 프로모터의 통제 하 포유류 발현 벡터에서 제한효소 소화를 이용하여 서브클로닝(subclone)되었다. TRAC 게놈 서열을 절단하는 TALE-뉴클레아제을 코드하는 mRNA가 T7 프로모터로부터 코딩 서열 다운스트림을 나르는 플라스미드로부터 합성되었다.
항CD3/CD28 코팅된 비드들로 72 시간 동안 미리 활성화된(preactivated) 정제된 T 세포들이 반 TRAC_T01 TALE-뉴클레아제들 둘다를 코드하는 2 개의 mRNA들 각각으로 형질주입되었다. 형질주입 48 시간 후, 동일 기증자로부터의 T 세포들의 다른 그룹들이 각각 전술한 항-CLL1 scCAR 중 하나를 코드하는 렌티바이러스 벡터로 형질도입되었다 (서열번호: 35 내지 112). 형질도입 2 일 후, CD3NEG 세포들이 항-CD3 자성 비드들을 이용하여 정제되었고, 형질도입 5 일 후, 가용성 항-CD28 (5 μg/ml)으로 재활성화되었다.
계산하면 매주 2 배 세포로, 재활성화 30일 후까지 세포 증식이 이어졌다. 특히 항-CD28로 재활성화될 때, CLL1 scCAR들을 발현시키는 TCR 알파 불활성화된 세포들에서 증가된 증식이 형질도입되지 않은 세포들에 비하여 관찰되었다.
CLL1-scCAR를 발현시키는 인간 T 세포들이 활성화 상태를 보이는지 여부를 조사하기 위하여, 활성화 마커 CD25의 발현이 형질도입 7일 후 FACS에 의하여 분석된다. 형질도입되지 않은 세포들에 비하여 그것들의 활성화를 평가하기 위하여 그것들의 표면에서 CD25 발현에 대하여 분석된 CLL1 scCAR을 코드하는 렌티바이러스 벡터로 형질도입된 정제된 세포들. 증가된 CD25 발현이 CD28 재활성화 또는 재활성화 없는 조건들 둘 다에서 예상된다.
실시예 2: 항- CLL1 항체 단편들을 이용한 CLL1 scCAR의 구축
Primary T-세포 cultures
T 세포들은 Ficoll 농도 구배 배지 (Ficoll Paque PLUS / GE Healthcare Life Sciences)를 이용하여 EFS (Etablissement Francais du Sang, Paris, France)에 의하여 제공된 버피 코트 샘플들로부터 정제되었다. PBMC 층이 회수되었고 T 세포들이 상업적으로 이용가능한 T-세포 풍부 키트 (Stem Cell Technologies)를 이용하여 정제되었다. 정제된 T 세포들이, 비드: 세포 비율 1:1 에서 20ng/mL 인간 IL-2 (Miltenyi Biotech), 5% 인간 혈청 (Sera Laboratories), 및 Dynabeads 인간 T 활성인자 CD3/CD28로 보충된 X-VivoTM-15 배지 (Lonza) 에서 활성화되었다 (Life Technologies). 활성화 후 세포들이 20ng/mL 인간 IL-2 (Miltenyi Biotec) 및 5% 인간 혈청 (Sera Laboratories)으로 보충된 X-VivoTM-15 배지 (Lonza)에서 자라고 유지되었다.
scCAR mRNA 형질주입(transfection)
형질주입들은 세포 정제 및 활성화 4일 또는 11일 후 이루어졌다. 5 백만 세포들이 다른 scCAR 구조체들을 코드하는 mRNA 15μg으로 형질주입되었다. scCAR mRNA들은 mMESSAGE mMACHINE T7 Kit (Life Technologies)를 이용하여 생산되었고 RNeasy Mini Spin Columns (Qiagen)을 이용하여 정제되었다. 형질주입들은 최종 부피 200μl의 "사이토포레이션 버퍼 T" (BTX Harvard Apparatus)에서 0.4cm 갭 큐벳들에서 두 개의 0.1 mS 펄스들을 3000V/cm에서 그리고 뒤이어 네 개의 0.2 mS 펄스들을 325V/cm에서 적용함으로써 Cytopulse 기술을 이용하여 이루어졌다. 세포들은 즉시 X-VivoTM-15 배지들 (Lonza)에서 희석되었고 37 ℃ 에서 5% CO2로 배양되었다. (Miltenyi Biotec로부터의) IL-2이 20ng/mL에서 전기천공 2 시간 후 첨가되었다.
탈과립화 분석 ( CD107a 동원)
T-세포들은 CLL1 단백질을 발현시키거나 또는 발현시키지 않는 동일한 양의 세포들과 함께 96-웰 플레이트들 (40,000 세포들/웰)에서 배양되었다. 공-배양들이 37 ℃에서 5% CO2와 6 시간 동안 최종 부피 100μl의 X-VivoTM-15 배지 (Lonza)에서 유지되었다. CD107a 염색이, 공-배양 시작 시, 1μg/ml의 항-CD49d (BD Pharmingen), 1μg/ml의 항-CD28 (Miltenyi Biotec), 및 1x Monensin 용액 (eBioscience)와 함께 (Miltenyi Biotec으로부터의 APC 콘쥬게이트된) 형광 항-CD107a 항체의 첨가에 의하여, 세포 자극 동안 이루어졌다. 배양 기간 6 시간 후, 세포들이 고정가능한 생존능 염료 (eFluor 780, eBioscience로부터) 및 플루오로크롬-콘쥬게이트된 항-CD8 (PE 콘쥬게이트된 Miltenyi Biotec)로 염색되었고 유동세포 분석법에 의하여 분석되었다. 탈과립 활성이 CD8+/CD107a+ 세포들의 % 로서, 그리고 CD8+ 세포들 중 CD107a 염색을 위한 평균 형광 강도 신호 (MFI)를 결정함으로써 결정되었다. 탈과립화 분석이 mRNA 형질주입 24 시간 후 수행되었다.
IFN감마 방출 분석
T-세포들은 CLL1 단백질을 발현시키거나 또는 발현시키지 않는 세포주들과 함께 96-웰 플레이트들 (40,000 세포들/웰)에서 배양되었다. 공-배양들은 5% CO2와 37 ℃에서 24 시간 동안 최종 부피 100μl의 X-VivoTM-15 배지 (Lonza)에서 유지되었다. 이 배양 기간 후 플레이트들은 5 분 동안 1500 rpm에서 원심분리되었고 상청액들이 새 플레이트에서 회수되었다. 세포 배양 상청액들에서 IFN 감마 검출은 ELISA 분석 (Human IFN-gamma Quantikine ELISA Kit, from R&D Systems)에 의하여 이루어졌다. IFN 감마 방출 분석은 mRNA 형질주입 24시간 후 세포 공-배양을 시작함으로써 수행되었다.
세포독성 분석
T-세포들은 동일한 웰에서 10,000 타겟 세포들 (CLL1을 발현시킴) 및 10,000 대조군 (CLL1neg) 세포들과 함께 96-웰 플레이트들 (100,000 세포들/웰)에서 배양되었다. 타겟 및 대조군 세포들이 scCAR+ T-세포들과 그것들을 공-배양시키기 전에 형광 세포내 염료 (CFSE 또는 Cell Trace Violet, Life Technologies로부터)으로 표지되었다. 공-배양들이 37℃에서 5% CO2으로 4 시간 동안 배양되었다. 이 배양 기간 후, 세포들은 고정가능한 생존능 염료 (eBioscience, eFluor 780)로 표지되었고 유동세포 분석법에 의하여 분석되었다. 각 세포 군집 (타겟 세포들 또는 CLL1neg 대조군 세포들)의 생존능이 결정되었고 특이적 세포 용해의 %가 계산되었다. 세포독성 분석들은 mRNA 형질주입 48 시간 후 수행되었다.
모범적인 항- CLL1 단일 체인 키메라 항원 수용체들
Figure 112017074439357-pct00016
Figure 112017074439357-pct00017
Figure 112017074439357-pct00018
Figure 112017074439357-pct00019
Figure 112017074439357-pct00020
Figure 112017074439357-pct00021
Figure 112017074439357-pct00022
Figure 112017074439357-pct00023
Figure 112017074439357-pct00024
Figure 112017074439357-pct00025
Figure 112017074439357-pct00026
Figure 112017074439357-pct00027
Figure 112017074439357-pct00028
Figure 112017074439357-pct00029
Figure 112017074439357-pct00030
Figure 112017074439357-pct00031
Figure 112017074439357-pct00032
Figure 112017074439357-pct00033
Figure 112017074439357-pct00034
Figure 112017074439357-pct00035
Figure 112017074439357-pct00036
Figure 112017074439357-pct00037
Figure 112017074439357-pct00038
Figure 112017074439357-pct00039
참고자료들
Arbiza J., Taylor G., Lopez J.A., Furze J., Wyld S., Whyte P., Stott E.J., Wertz G., Sullender W., Trudel M. , et al. (1992), Characterization of two antigenic sites recognized by neutralizing monoclonal antibodies directed against the fusion glycoprotein of human respiratory syncytial virus. J Gen Virol.;73 (9):2225-34).
Arimondo, P. B., C. J. Thomas, et al. (2006). "Exploring the cellular activity of camptothecin-triple-helix-forming oligonucleotide conjugates." Mol Cell Biol 26(1): 324-33.
Atkins, J. F., N. M. Wills, et al. (2007). "A case for "StopGo": reprogramming translation to augment codon meaning of GGN by promoting unconventional termination (Stop) after addition of glycine and then allowing continued translation (Go)." Rna 13(6): 803-10.
Bakker AB, Van den Oudenrijn S, Bakker AQ, Feller N, van Meijer M, Bia JA, Jongeneelen MA, Visser TJ, Bijl N, Geuijen CA, Marissen WE, Radosevic K, Throsby M, Schuurhuis GJ, Ossenkoppele GJ, de Kruif J, Goudsmit J, Kruisbeek AM, (2004) “C-type lectin-like molecule-1: a novel myeloid cell surface marker associated with acute myeloid leukemia”, Cancer Res. 64(22):8443-50).
Bardenheuer, W., K. Lehmberg, et al. (2005). "Resistance to cytarabine and gemcitabine and in vitro selection of transduced cells after retroviral expression of cytidine deaminase in human hematopoietic progenitor cells." Leukemia 19(12): 2281-8.
Betts, M. R., J. M. Brenchley, et al. (2003). "Sensitive and viable identification of antigen-specific CD8+ T cells by a flow cytometric assay for degranulation." J Immunol Methods 281(1-2): 65-78.
Bierer, B. E., G. Hollander, et al. (1993). "Cyclosporin A and FK506: molecular mechanisms of immunosuppression and probes for transplantation biology." Curr Opin Immunol 5(5): 763-73.
Boch, J., H. Scholze, et al. (2009). "Breaking the code of DNA binding specificity of TAL-type III effectors." Science 326(5959): 1509-12.
Brewin, J., C. Mancao, et al. (2009). "Generation of EBV-specific cytotoxic T cells that are resistant to calcineurin inhibitors for the treatment of posttransplantation lymphoproliferative disease." Blood 114(23): 4792-803.
Choulika, A., A. Perrin, et al. (1995). "Induction of homologous recombination in mammalian chromosomes by using the I-SceI system of Saccharomyces cerevisiae." Mol Cell Biol 15(4): 1968-73.
Christian, M., T. Cermak, et al. (2010). "Targeting DNA double-strand breaks with TAL effector nucleases." Genetics 186(2): 757-61.
Cong, L., F. A. Ran, et al. (2013). "Multiplex genome engineering using CRISPR/Cas systems." Science 339(6121): 819-23.
Critchlow, S. E. and S. P. Jackson (1998). "DNA end-joining: from yeast to man." Trends Biochem Sci 23(10): 394-8.
Dasgupta, A., D. McCarty, et al. (2011). "Engineered drug-resistant immunocompetent cells enhance tumor cell killing during a chemotherapy challenge." Biochem Biophys Res Commun 391(1): 170-5.
Deltcheva, E., K. Chylinski, et al. (2011). "CRISPR RNA maturation by trans-encoded small RNA and host factor RNase III." Nature 471(7340): 602-7.
Deng, D., C. Yan, et al. (2012). "Structural basis for sequence-specific recognition of DNA by TAL effectors." Science 335(6069): 720-3.
Donnelly, M. and G. Elliott (2001). "Nuclear localization and shuttling of herpes simplex virus tegument protein VP13/14." J Virol 75(6): 2566-74.
Doronina, V. A., C. Wu, et al. (2008). "Site-specific release of nascent chains from ribosomes at a sense codon." Mol Cell Biol 28(13): 4227-39.
Eisenschmidt, K., T. Lanio, et al. (2005). "Developing a programmed restriction endonuclease for highly specific DNA cleavage." Nucleic Acids Res 33(22): 7039-47.
Garneau, J. E., M. E. Dupuis, et al. (2010). "The CRISPR/Cas bacterial immune system cleaves bacteriophage and plasmid DNA." Nature 468(7320): 67-71.
Gasiunas, G., R. Barrangou, et al. (2012). "Cas9-crRNA ribonucleoprotein complex mediates specific DNA cleavage for adaptive immunity in bacteria." Proc Natl Acad Sci U S A 109(39): E2579-86.
Geissler, R., H. Scholze, et al. (2011). "Transcriptional activators of human genes with programmable DNA-specificity." PLoS One 6(5): e19509.
Hacke, K., J. A. Treger, et al. (2013). "Genetic modification of mouse bone marrow by lentiviral vector-mediated delivery of hypoxanthine-Guanine phosphoribosyltransferase short hairpin RNA confers chemoprotection against 6-thioguanine cytotoxicity." Transplant Proc 45(5): 2040-4.
Henderson, D. J., I. Naya, et al. (1991). "Comparison of the effects of FK-506, cyclosporin A and rapamycin on IL-2 production." Immunology 73(3): 316-21.
Huang, P., A. Xiao, et al. (2011). "Heritable gene targeting in zebrafish using customized TALENs." Nat Biotechnol 29(8): 699-700.
Jena, B., G. Dotti, et al. (2010). "Redirecting T-cell specificity by introducing a tumor-specific chimeric antigen receptor." Blood 116(7): 1035-44.
Jinek, M., K. Chylinski, et al. (2012). "A programmable dual-RNA-guided DNA endonuclease in adaptive bacterial immunity." Science 337(6096): 816-21.
Jonnalagadda, M., C. E. Brown, et al. (2013). "Engineering human T cells for resistance to methotrexate and mycophenolate mofetil as an in vivo cell selection strategy." PLoS One 8(6): e65519.
Kalish, J. M. and P. M. Glazer (2005). "Targeted genome modification via triple helix formation." Ann N Y Acad Sci 1058: 151-61.
Kushman, M. E., S. L. Kabler, et al. (2007). "Expression of human glutathione S-transferase P1 confers resistance to benzo[a]pyrene or benzo[a]pyrene-7,8-dihydrodiol mutagenesis, macromolecular alkylation and formation of stable N2-Gua-BPDE adducts in stably transfected V79MZ cells co-expressing hCYP1A1." Carcinogenesis 28(1): 207-14.
Larsen HØ, Roug AS, Just T, Brown GD, Hokland P (2012), “Expression of the hMICL in acute myeloid leukemia-a highly reliable disease marker at diagnosis and during follow-up”. Cytometry B Clin Cytom. 82(1):3-8).
Li, L., M. J. Piatek, et al. (2012). "Rapid and highly efficient construction of TALE-based transcriptional regulators and nucleases for genome modification." Plant Mol Biol 78(4-5): 407-16.
Li, T., S. Huang, et al. (2011). "TAL nucleases (TALNs): hybrid proteins composed of TAL effectors and FokI DNA-cleavage domain." Nucleic Acids Res 39(1): 359-72.
Li, T., S. Huang, et al. (2011). "Modularly assembled designer TAL effector nucleases for targeted gene knockout and gene replacement in eukaryotes." Nucleic Acids Res 39(14): 6315-25.
Liu, J., M. W. Albers, et al. (1992). "Inhibition of T cell signaling by immunophilin-ligand complexes correlates with loss of calcineurin phosphatase activity." Biochemistry 31(16): 3896-901.
Ma, J. L., E. M. Kim, et al. (2003). "Yeast Mre11 and Rad1 proteins define a Ku-independent mechanism to repair double-strand breaks lacking overlapping end sequences." Mol Cell Biol 23(23): 8820-8.
Mahfouz, M. M., L. Li, et al. (2012). "Targeted transcriptional repression using a chimeric TALE-SRDX repressor protein." Plant Mol Biol 78(3): 311-21.
Mahfouz, M. M., L. Li, et al. (2011). "De novo-engineered transcription activator-like effector (TALE) hybrid nuclease with novel DNA binding specificity creates double-strand breaks." Proc Natl Acad Sci U S A 108(6): 2623-8.
Mak, A. N., P. Bradley, et al. (2012). "The crystal structure of TAL effector PthXo1 bound to its DNA target." Science 335(6069): 716-9.
Mali, P., L. Yang, et al. (2013). "RNA-guided human genome engineering via Cas9." Science 339(6121): 823-6.
McLaughlin P, et al. (1998) Rituximab chimeric anti-CD20 monoclonal antibody therapy for relapsed indolent lymphoma: half of patients respond to a four-dose treatment program. J Clin Oncol. 16(8):2825-33
Miller, J. C., S. Tan, et al. (2011). "A TALE nuclease architecture for efficient genome editing." Nat Biotechnol 29(2): 143-8.
Morbitzer, R., P. Romer, et al. (2011). "Regulation of selected genome loci using de novo-engineered transcription activator-like effector (TALE)-type transcription factors." Proc Natl Acad Sci U S A 107(50): 21617-22.
Moscou, M. J. and A. J. Bogdanove (2009). "A simple cipher governs DNA recognition by TAL effectors." Science 326(5959): 1501.
Mussolino, C., R. Morbitzer, et al. (2011). "A novel TALE nuclease scaffold enables high genome editing activity in combination with low toxicity." Nucleic Acids Res 39(21): 9283-93.
Nivens, M. C., T. Felder, et al. (2004). "Engineered resistance to camptothecin and antifolates by retroviral coexpression of tyrosyl DNA phosphodiesterase-I and thymidylate synthase." Cancer Chemother Pharmacol 53(2): 107-15.
Paques, F. and P. Duchateau (2007). "Meganucleases and DNA double-strand break-induced recombination: perspectives for gene therapy." Curr Gene Ther 7(1): 49-66.
Park, T. S., S. A. Rosenberg, et al. (2011). "Treating cancer with genetically engineered T cells." Trends Biotechnol 29(11): 550-7.
Peipp, M., D. Saul, et al. (2004). "Efficient eukaryotic expression of fluorescent scFv fusion proteins directed against CD antigens for FACS applications." J Immunol Methods 285(2): 265-80.
Perrin, A., M. Buckle, et al. (1993). "Asymmetrical recognition and activity of the I-SceI endonuclease on its site and on intron-exon junctions." Embo J 12(7): 2939-47.
Pingoud, A. and G. H. Silva (2007). "Precision genome surgery." Nat Biotechnol 25(7): 743-4.
Porteus, M. H. and D. Carroll (2005). "Gene targeting using zinc finger nucleases." Nat Biotechnol 23(8): 967-73.
Ravetch, J.V., Perussia, B., (1989). "Alternative membrane forms of Fc gamma RIII(CD16) on human natural killer cells and neutrophils. Cell type-specific expression of two genes that differ in single nucleotide substitutions". J. Exp. Med. 170, 481-497.
Riemer A.B., Kurz H., Klinger, M., Scheiner, O., Zielinski, C., and Jensen-Jarolim, E. (2005), Vaccination with cetuximab mimotopes and biological properties of induced anti-epidermal growth factor receptor antibodies, J Natl Cancer Inst.;97(22):1663-70
)Rouet, P., F. Smih, et al. (1994). "Introduction of double-strand breaks into the genome of mouse cells by expression of a rare-cutting endonuclease." Mol Cell Biol 14(12): 8096-106.
Sander, J. D., L. Cade, et al. (2011). "Targeted gene disruption in somatic zebrafish cells using engineered TALENs." Nat Biotechnol 29(8): 697-8.
Sangiolo, D., M. Lesnikova, et al. (2007). "Lentiviral vector conferring resistance to mycophenolate mofetil and sensitivity to ganciclovir for in vivo T-cell selection." Gene Ther 14(21): 1549-54.
Schweitzer, B. I., A. P. Dicker, et al. (1990). "Dihydrofolate reductase as a therapeutic target." Faseb J 4(8): 2441-52.
Sorek, R., C. M. Lawrence, et al. (2013). "CRISPR-mediated Adaptive Immune Systems in Bacteria and Archaea." Annu Rev Biochem.
Stoddard, B. L. (2005). "Homing endonuclease structure and function." Q Rev Biophys 38(1): 49-95.
Sugimoto, Y., S. Tsukahara, et al. (2003). "Drug-selected co-expression of P-glycoprotein and gp91 in vivo from an MDR1-bicistronic retrovirus vector Ha-MDR-IRES-gp91." J Gene Med 5(5): 366-76.
Takebe, N., S. C. Zhao, et al. (2001). "Generation of dual resistance to 4-hydroperoxycyclophosphamide and methotrexate by retroviral transfer of the human aldehyde dehydrogenase class 1 gene and a mutated dihydrofolate reductase gene." Mol Ther 3(1): 88-96.
Tesson, L., C. Usal, et al. (2011). "Knockout rats generated by embryo microinjection of TALENs." Nat Biotechnol 29(8): 695-6.
Van Rhenen A, van Dongen GA, Kelder A, Rombouts EJ, Feller N, Moshaver B, Stigter-van Walsum M, Zweegman S, Ossenkoppele GJ, Jan Schuurhuis G Blood. (2007) “The novel AML stem cell associated antigen CLL-1 aids in discrimination between normal and leukemic stem cells. Blood, 110(7):2659-66.
Weber, E., R. Gruetzner, et al. (2011). "Assembly of designer TAL effectors by Golden Gate cloning." PLoS One 6(5): e19722.
Yam, P., M. Jensen, et al. (2006). "Ex vivo selection and expansion of cells based on expression of a mutated inosine monophosphate dehydrogenase 2 after HIV vector transduction: effects on lymphocytes, monocytes, and CD34+ stem cells." Mol Ther 14(2): 236-44.
Zhang Hongyong , Luo Juntao, Li Yuanpei, Henderson Paul T, Wachsmann-Hogiu Sebastian, Lam Kit S. , and Pan Chong-xian (2011) ≪ Characterization of high-affinity peptides and their feasibility for use in nanotherapeutics targeting leukemia stem cells” Nanomedicine; 8(7): 1116-1124.
Zhang, F., L. Cong, et al. (2011). "Efficient construction of sequence-specific TAL effectors for modulating mammalian transcription." Nat Biotechnol 29(2): 149-53.
Zielske, S. P., J. S. Reese, et al. (2003). "In vivo selection of MGMT(P140K) lentivirus-transduced human NOD/SCID repopulating cells without pretransplant irradiation conditioning. "J Clin Invest 112(10)1561-70.
<110> CELLECTIS;RINAT <120> ANTI-CLL1 SPECIFIC SINGLE-CHAIN CHIMERIC ANTIGEN RECEPTORS (scCARS) FOR CANCER IMMUNOTHERAPY <130> P81504846PCT00 <150> PA201570044 <151> 2015-01-26 <160> 199 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> signal peptide <400> 1 Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro 1 5 10 15 Gly Ser Thr Gly 20 <210> 2 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> signal peptide <400> 2 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro 20 <210> 3 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(16) <223> FcgRIIIa hinge <400> 3 Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln 1 5 10 15 <210> 4 <211> 45 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(45) <223> CD8alpha hinge <400> 4 Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala 1 5 10 15 Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly 20 25 30 Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp 35 40 45 <210> 5 <211> 231 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(231) <223> IgG1 hinge <400> 5 Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 1 5 10 15 Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 20 25 30 Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 35 40 45 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 50 55 60 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 65 70 75 80 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 85 90 95 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 100 105 110 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 115 120 125 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys 130 135 140 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 145 150 155 160 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 165 170 175 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 180 185 190 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 195 200 205 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 210 215 220 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 225 230 <210> 6 <211> 24 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(24) <223> CD8alpha transmembrane domain <400> 6 Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu 1 5 10 15 Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys 20 <210> 7 <211> 27 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(27) <223> 41BB transmembrane domain <400> 7 Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu 1 5 10 15 Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val 20 25 <210> 8 <211> 42 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(42) <223> Fragment of 4-1BB (residues 214-255) <400> 8 Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met 1 5 10 15 Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe 20 25 30 Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu 35 40 <210> 9 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(112) <223> fragment of T-cell surface glycoprotein CD3 zeta chain <400> 9 Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly 1 5 10 15 Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 20 25 30 Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 35 40 45 Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 50 55 60 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 65 70 75 80 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 85 90 95 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 100 105 110 <210> 10 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> linker <400> 10 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 11 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SC02-357 heavy chain variable region <400> 11 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Val Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser 20 25 30 Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Ser Pro Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Ser 85 90 95 Ser Ser Gly Gly Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 12 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SC02-378 heavy chain variable region <400> 12 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Val Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser 20 25 30 Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Ser Pro Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Ser Ser Gly Gly Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 13 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SC02-161 heavy chain variable region <400> 13 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Val Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser 20 25 30 Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Ser Pro Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gln Thr Thr Ala Gly Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 14 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SC02-357 & SC02-378 & SC02-161 light chain variable region <400> 14 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 15 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M26 heavy chain variable region <400> 15 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Phe Ile His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Phe Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Asp Asp Gly Tyr Tyr Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 16 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M26 light chain variable region <400> 16 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Ser Leu Thr Cys Arg Ala Thr Gln Glu Leu Ser Gly Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Leu Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Ile Lys Arg Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Lys Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Asn Arg Ser Gly Ser Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ala Ile Tyr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 17 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M31 heavy chain variable region <400> 17 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Pro Ile Tyr Phe Asp Asn Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Leu Lys Val Ser Ser 115 120 <210> 18 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M31 light chain variable region <400> 18 Thr Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr 20 25 30 Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp 65 70 75 80 Pro Val Glu Ala Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn 85 90 95 Tyr Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 19 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> G4 heavy chain variable region <400> 19 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Glu Lys Asn Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Pro Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Ile Tyr Asn Pro Asn Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ala Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Asp Asp Pro Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Thr Asp Asp Tyr Asp Asp Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 20 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> G4 light chain variable region <400> 20 Glu Ile Gln Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser His Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Leu Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Lys Thr Leu Leu Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 21 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M22 heavy chain variable region <400> 21 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Thr Glu Thr His Tyr Asn Gln Gln Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ile Tyr Tyr Gly Asn Pro Ser Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 22 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M22 light chain variable region <400> 22 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Asn Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Lys Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Asn 85 90 95 Asp Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu 100 105 110 Lys <210> 23 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M29 heavy chain variable region <400> 23 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Val Met Tyr Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Tyr Asp Tyr Asp Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 24 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M29 light chain variable region <400> 24 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Gly Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Lys Tyr 20 25 30 Ile Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Gly Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 His Tyr Thr Ser Thr Leu Gln Pro Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Arg Asp Tyr Ser Phe Ser Ile Ser Asn Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Tyr Leu Trp Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 25 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M2 heavy chain variable region <400> 25 Glu Val Gln Leu Arg Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Phe Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Phe Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Asp Asp Gly Tyr Tyr Asp Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 26 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M2 light chain variable region <400> 26 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Ser Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Glu Ile Ser Val Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Leu Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Ile Lys Arg Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Glu Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Arg Ser Gly Ser Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ala Ser Tyr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 27 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M5 heavy chain variable region <400> 27 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Asp 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Trp Ile Asp Pro Glu Lys Gly Asp Thr Ala Tyr Ala Ser Lys Phe 50 55 60 Gln Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ser Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Leu Thr Gly Arg Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 28 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M5 light chain variable region <400> 28 Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Val Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser 20 25 30 Ser Asn Gln Lys Asn Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Tyr Tyr Ser Tyr Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 29 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> G12 heavy chain variable region <400> 29 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Met Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Pro Ser Ser 20 25 30 Asn Ile His Trp Leu Lys Gln Thr Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Val Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Val Tyr Asn Trp His Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr Thr 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 30 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> G12 light chain variable region <400> 30 Asn Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Gly Tyr 20 25 30 Gly Asp Ile Phe Met Leu Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Phe Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp 65 70 75 80 Pro Val Glu Ala Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn 85 90 95 Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 110 <210> 31 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 21.26 heavy chain variable region <400> 31 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Thr 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Met Ile His Pro Ser Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Glu Lys Val 50 55 60 Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Arg Ser Ser Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Gly Asp Tyr Tyr Tyr Gly Thr Gly Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 32 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 21.26 light chain variable region <400> 32 Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Ile Asn Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Phe 35 40 45 Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu 65 70 75 80 Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Arg Ser Asp Arg Ala Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu 100 105 <210> 33 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 1075.7 heavy chain variable region <400> 33 Asp Ile Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Ala 20 25 30 Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp 35 40 45 Met Gly Tyr Ile Ser Tyr Asp Gly Arg Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Asn Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe 65 70 75 80 Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Glu Gly Asp Tyr Asp Val Gly Asn Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 34 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 1075.7 light chain variable region <400> 34 Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Asn Val Ile Ser Ser 20 25 30 Tyr Val His Trp Tyr Gln Gln Arg Ser Gly Ala Ser Pro Lys Leu Trp 35 40 45 Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu 65 70 75 80 Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Gly Tyr Pro 85 90 95 Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu 100 105 <210> 35 <211> 455 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SC02-357 scCAR-v1 polypeptide <400> 35 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu 20 25 30 Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Val Val Ser Gly Gly 35 40 45 Ser Ile Ser Ser Ser Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly 50 55 60 Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Ser Pro Asn 65 70 75 80 Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser 85 90 95 Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Ser Ser Gly Gly Phe Phe Asp Tyr 115 120 125 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser 130 135 140 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln 145 150 155 160 Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr 165 170 175 Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln 180 185 190 Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu 195 200 205 Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp 210 215 220 Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 225 230 235 240 Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr 245 250 255 Lys Val Glu Ile Lys Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser Phe Phe 260 265 270 Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys 275 280 285 Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly 290 295 300 Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val 305 310 315 320 Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu 325 330 335 Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp 340 345 350 Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn 355 360 365 Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg 370 375 380 Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly 385 390 395 400 Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu 405 410 415 Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu 420 425 430 Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His 435 440 445 Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 450 455 <210> 36 <211> 458 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SC02-357 scCAR-v2 polypeptide <400> 36 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu 20 25 30 Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Val Val Ser Gly Gly 35 40 45 Ser Ile Ser Ser Ser Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly 50 55 60 Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Ser Pro Asn 65 70 75 80 Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser 85 90 95 Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Ser Ser Gly Gly Phe Phe Asp Tyr 115 120 125 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser 130 135 140 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln 145 150 155 160 Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr 165 170 175 Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln 180 185 190 Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu 195 200 205 Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp 210 215 220 Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 225 230 235 240 Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr 245 250 255 Lys Val Glu Ile Lys Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser Phe Phe 260 265 270 Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr 275 280 285 Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val 290 295 300 Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met 305 310 315 320 Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe 325 330 335 Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg 340 345 350 Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn 355 360 365 Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg 370 375 380 Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro 385 390 395 400 Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala 405 410 415 Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His 420 425 430 Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp 435 440 445 Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 450 455 <210> 37 <211> 484 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SC02-357 scCAR-v3 polypeptide <400> 37 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu 20 25 30 Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Val Val Ser Gly Gly 35 40 45 Ser Ile Ser Ser Ser Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly 50 55 60 Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Ser Pro Asn 65 70 75 80 Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser 85 90 95 Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Ser Ser Gly Gly Phe Phe Asp Tyr 115 120 125 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser 130 135 140 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln 145 150 155 160 Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr 165 170 175 Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln 180 185 190 Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu 195 200 205 Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp 210 215 220 Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 225 230 235 240 Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr 245 250 255 Lys Val Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro 260 265 270 Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys 275 280 285 Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala 290 295 300 Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu 305 310 315 320 Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys 325 330 335 Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr 340 345 350 Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly 355 360 365 Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala 370 375 380 Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg 385 390 395 400 Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu 405 410 415 Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn 420 425 430 Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met 435 440 445 Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly 450 455 460 Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala 465 470 475 480 Leu Pro Pro Arg <210> 38 <211> 487 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SC02-357 scCAR-v4 polypeptide <400> 38 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu 20 25 30 Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Val Val Ser Gly Gly 35 40 45 Ser Ile Ser Ser Ser Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly 50 55 60 Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Ser Pro Asn 65 70 75 80 Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser 85 90 95 Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Ser Ser Gly Gly Phe Phe Asp Tyr 115 120 125 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser 130 135 140 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln 145 150 155 160 Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr 165 170 175 Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln 180 185 190 Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu 195 200 205 Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp 210 215 220 Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 225 230 235 240 Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr 245 250 255 Lys Val Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro 260 265 270 Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys 275 280 285 Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala 290 295 300 Cys Asp Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu 305 310 315 320 Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly 325 330 335 Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val 340 345 350 Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu 355 360 365 Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp 370 375 380 Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn 385 390 395 400 Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg 405 410 415 Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly 420 425 430 Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu 435 440 445 Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu 450 455 460 Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His 465 470 475 480 Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 485 <210> 39 <211> 670 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SC02-357 scCAR-v5 polypeptide <400> 39 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu 20 25 30 Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Val Val Ser Gly Gly 35 40 45 Ser Ile Ser Ser Ser Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly 50 55 60 Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Ser Pro Asn 65 70 75 80 Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser 85 90 95 Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Ser Ser Gly Gly Phe Phe Asp Tyr 115 120 125 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser 130 135 140 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln 145 150 155 160 Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr 165 170 175 Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln 180 185 190 Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu 195 200 205 Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp 210 215 220 Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 225 230 235 240 Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr 245 250 255 Lys Val Glu Ile Lys Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His Thr Cys 260 265 270 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 275 280 285 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val 290 295 300 Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe 305 310 315 320 Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 325 330 335 Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 340 345 350 Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 355 360 365 Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala 370 375 380 Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 385 390 395 400 Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 405 410 415 Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 420 425 430 Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 435 440 445 Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln 450 455 460 Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 465 470 475 480 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Tyr Ile Trp 485 490 495 Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile 500 505 510 Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys 515 520 525 Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys 530 535 540 Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val 545 550 555 560 Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn 565 570 575 Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val 580 585 590 Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg 595 600 605 Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys 610 615 620 Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg 625 630 635 640 Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys 645 650 655 Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 660 665 670 <210> 40 <211> 673 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SC02-357 scCAR-v6 polypeptide <400> 40 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu 20 25 30 Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Val Val Ser Gly Gly 35 40 45 Ser Ile Ser Ser Ser Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly 50 55 60 Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Ser Pro Asn 65 70 75 80 Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser 85 90 95 Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Ser Ser Gly Gly Phe Phe Asp Tyr 115 120 125 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser 130 135 140 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln 145 150 155 160 Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr 165 170 175 Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln 180 185 190 Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu 195 200 205 Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp 210 215 220 Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 225 230 235 240 Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr 245 250 255 Lys Val Glu Ile Lys Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His Thr Cys 260 265 270 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 275 280 285 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val 290 295 300 Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe 305 310 315 320 Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 325 330 335 Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 340 345 350 Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 355 360 365 Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala 370 375 380 Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 385 390 395 400 Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 405 410 415 Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 420 425 430 Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 435 440 445 Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln 450 455 460 Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 465 470 475 480 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Ile Ser Phe 485 490 495 Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu 500 505 510 Thr Leu Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr 515 520 525 Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu 530 535 540 Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu 545 550 555 560 Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln 565 570 575 Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu 580 585 590 Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly 595 600 605 Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln 610 615 620 Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu 625 630 635 640 Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr 645 650 655 Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro 660 665 670 Arg <210> 41 <211> 455 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SC02-378 scCAR-v1 polypeptide <400> 41 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu 20 25 30 Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Val Val Ser Gly Gly 35 40 45 Ser Ile Ser Ser Ser Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly 50 55 60 Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Ser Pro Asn 65 70 75 80 Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser 85 90 95 Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Ser Ser Gly Gly Phe Phe Asp Tyr 115 120 125 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser 130 135 140 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln 145 150 155 160 Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr 165 170 175 Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln 180 185 190 Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu 195 200 205 Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp 210 215 220 Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 225 230 235 240 Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr 245 250 255 Lys Val Glu Ile Lys Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser Phe Phe 260 265 270 Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys 275 280 285 Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly 290 295 300 Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val 305 310 315 320 Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu 325 330 335 Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp 340 345 350 Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn 355 360 365 Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg 370 375 380 Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly 385 390 395 400 Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu 405 410 415 Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu 420 425 430 Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His 435 440 445 Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 450 455 <210> 42 <211> 458 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SC02-378 scCAR-v2 polypeptide <400> 42 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu 20 25 30 Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Val Val Ser Gly Gly 35 40 45 Ser Ile Ser Ser Ser Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly 50 55 60 Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Ser Pro Asn 65 70 75 80 Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser 85 90 95 Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Ser Ser Gly Gly Phe Phe Asp Tyr 115 120 125 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser 130 135 140 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln 145 150 155 160 Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr 165 170 175 Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln 180 185 190 Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu 195 200 205 Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp 210 215 220 Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 225 230 235 240 Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr 245 250 255 Lys Val Glu Ile Lys Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser Phe Phe 260 265 270 Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr 275 280 285 Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val 290 295 300 Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met 305 310 315 320 Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe 325 330 335 Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg 340 345 350 Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn 355 360 365 Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg 370 375 380 Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro 385 390 395 400 Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala 405 410 415 Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His 420 425 430 Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp 435 440 445 Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 450 455 <210> 43 <211> 484 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SC02-378 scCAR-v3 polypeptide <400> 43 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu 20 25 30 Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Val Val Ser Gly Gly 35 40 45 Ser Ile Ser Ser Ser Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly 50 55 60 Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Ser Pro Asn 65 70 75 80 Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser 85 90 95 Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Ser Ser Gly Gly Phe Phe Asp Tyr 115 120 125 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser 130 135 140 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln 145 150 155 160 Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr 165 170 175 Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln 180 185 190 Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu 195 200 205 Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp 210 215 220 Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 225 230 235 240 Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr 245 250 255 Lys Val Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro 260 265 270 Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys 275 280 285 Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala 290 295 300 Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu 305 310 315 320 Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys 325 330 335 Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr 340 345 350 Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly 355 360 365 Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala 370 375 380 Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg 385 390 395 400 Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu 405 410 415 Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn 420 425 430 Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met 435 440 445 Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly 450 455 460 Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala 465 470 475 480 Leu Pro Pro Arg <210> 44 <211> 487 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SC02-378 scCAR-v4 polypeptide <400> 44 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu 20 25 30 Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Val Val Ser Gly Gly 35 40 45 Ser Ile Ser Ser Ser Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly 50 55 60 Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Ser Pro Asn 65 70 75 80 Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser 85 90 95 Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Ser Ser Gly Gly Phe Phe Asp Tyr 115 120 125 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser 130 135 140 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln 145 150 155 160 Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr 165 170 175 Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln 180 185 190 Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu 195 200 205 Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp 210 215 220 Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 225 230 235 240 Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr 245 250 255 Lys Val Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro 260 265 270 Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys 275 280 285 Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala 290 295 300 Cys Asp Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu 305 310 315 320 Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly 325 330 335 Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val 340 345 350 Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu 355 360 365 Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp 370 375 380 Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn 385 390 395 400 Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg 405 410 415 Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly 420 425 430 Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu 435 440 445 Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu 450 455 460 Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His 465 470 475 480 Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 485 <210> 45 <211> 670 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SC02-378 scCAR-v5 polypeptide <400> 45 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu 20 25 30 Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Val Val Ser Gly Gly 35 40 45 Ser Ile Ser Ser Ser Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly 50 55 60 Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Ser Pro Asn 65 70 75 80 Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser 85 90 95 Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Ser Ser Gly Gly Phe Phe Asp Tyr 115 120 125 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser 130 135 140 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln 145 150 155 160 Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr 165 170 175 Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln 180 185 190 Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu 195 200 205 Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp 210 215 220 Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 225 230 235 240 Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr 245 250 255 Lys Val Glu Ile Lys Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His Thr Cys 260 265 270 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 275 280 285 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val 290 295 300 Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe 305 310 315 320 Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 325 330 335 Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 340 345 350 Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 355 360 365 Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala 370 375 380 Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 385 390 395 400 Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 405 410 415 Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 420 425 430 Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 435 440 445 Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln 450 455 460 Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 465 470 475 480 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Tyr Ile Trp 485 490 495 Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile 500 505 510 Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys 515 520 525 Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys 530 535 540 Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val 545 550 555 560 Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn 565 570 575 Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val 580 585 590 Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg 595 600 605 Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys 610 615 620 Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg 625 630 635 640 Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys 645 650 655 Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 660 665 670 <210> 46 <211> 673 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SC02-378 scCAR-v6 polypeptide <400> 46 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu 20 25 30 Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Val Val Ser Gly Gly 35 40 45 Ser Ile Ser Ser Ser Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly 50 55 60 Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Ser Pro Asn 65 70 75 80 Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser 85 90 95 Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Ser Ser Gly Gly Phe Phe Asp Tyr 115 120 125 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser 130 135 140 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln 145 150 155 160 Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr 165 170 175 Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln 180 185 190 Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu 195 200 205 Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp 210 215 220 Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 225 230 235 240 Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr 245 250 255 Lys Val Glu Ile Lys Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His Thr Cys 260 265 270 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 275 280 285 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val 290 295 300 Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe 305 310 315 320 Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 325 330 335 Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 340 345 350 Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 355 360 365 Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala 370 375 380 Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 385 390 395 400 Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 405 410 415 Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 420 425 430 Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 435 440 445 Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln 450 455 460 Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 465 470 475 480 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Ile Ser Phe 485 490 495 Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu 500 505 510 Thr Leu Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr 515 520 525 Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu 530 535 540 Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu 545 550 555 560 Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln 565 570 575 Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu 580 585 590 Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly 595 600 605 Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln 610 615 620 Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu 625 630 635 640 Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr 645 650 655 Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro 660 665 670 Arg <210> 47 <211> 455 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SC02-161 scCAR-v1 polypeptide <400> 47 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu 20 25 30 Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Val Val Ser Gly Gly 35 40 45 Ser Ile Ser Ser Ser Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly 50 55 60 Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Ser Pro Asn 65 70 75 80 Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser 85 90 95 Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gln Thr Thr Ala Gly Ser Phe Asp Tyr 115 120 125 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser 130 135 140 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln 145 150 155 160 Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr 165 170 175 Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln 180 185 190 Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu 195 200 205 Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp 210 215 220 Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 225 230 235 240 Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr 245 250 255 Lys Val Glu Ile Lys Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser Phe Phe 260 265 270 Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys 275 280 285 Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly 290 295 300 Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val 305 310 315 320 Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu 325 330 335 Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp 340 345 350 Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn 355 360 365 Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg 370 375 380 Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly 385 390 395 400 Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu 405 410 415 Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu 420 425 430 Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His 435 440 445 Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 450 455 <210> 48 <211> 458 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SC02-161 scCAR-v2 polypeptide <400> 48 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu 20 25 30 Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Val Val Ser Gly Gly 35 40 45 Ser Ile Ser Ser Ser Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly 50 55 60 Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Ser Pro Asn 65 70 75 80 Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser 85 90 95 Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gln Thr Thr Ala Gly Ser Phe Asp Tyr 115 120 125 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser 130 135 140 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln 145 150 155 160 Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr 165 170 175 Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln 180 185 190 Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu 195 200 205 Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp 210 215 220 Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 225 230 235 240 Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr 245 250 255 Lys Val Glu Ile Lys Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser Phe Phe 260 265 270 Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr 275 280 285 Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val 290 295 300 Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met 305 310 315 320 Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe 325 330 335 Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg 340 345 350 Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn 355 360 365 Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg 370 375 380 Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro 385 390 395 400 Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala 405 410 415 Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His 420 425 430 Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp 435 440 445 Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 450 455 <210> 49 <211> 484 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SC02-161 scCAR-v3 polypeptide <400> 49 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu 20 25 30 Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Val Val Ser Gly Gly 35 40 45 Ser Ile Ser Ser Ser Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly 50 55 60 Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Ser Pro Asn 65 70 75 80 Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser 85 90 95 Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gln Thr Thr Ala Gly Ser Phe Asp Tyr 115 120 125 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser 130 135 140 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln 145 150 155 160 Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr 165 170 175 Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln 180 185 190 Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu 195 200 205 Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp 210 215 220 Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 225 230 235 240 Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr 245 250 255 Lys Val Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro 260 265 270 Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys 275 280 285 Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala 290 295 300 Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu 305 310 315 320 Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys 325 330 335 Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr 340 345 350 Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly 355 360 365 Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala 370 375 380 Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg 385 390 395 400 Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu 405 410 415 Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn 420 425 430 Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met 435 440 445 Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly 450 455 460 Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala 465 470 475 480 Leu Pro Pro Arg <210> 50 <211> 487 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SC02-161 scCAR-v4 polypeptide <400> 50 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu 20 25 30 Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Val Val Ser Gly Gly 35 40 45 Ser Ile Ser Ser Ser Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly 50 55 60 Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Ser Pro Asn 65 70 75 80 Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser 85 90 95 Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gln Thr Thr Ala Gly Ser Phe Asp Tyr 115 120 125 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser 130 135 140 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln 145 150 155 160 Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr 165 170 175 Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln 180 185 190 Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu 195 200 205 Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp 210 215 220 Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 225 230 235 240 Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr 245 250 255 Lys Val Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro 260 265 270 Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys 275 280 285 Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala 290 295 300 Cys Asp Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu 305 310 315 320 Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly 325 330 335 Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val 340 345 350 Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu 355 360 365 Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp 370 375 380 Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn 385 390 395 400 Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg 405 410 415 Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly 420 425 430 Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu 435 440 445 Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu 450 455 460 Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His 465 470 475 480 Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 485 <210> 51 <211> 670 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SC02-161 scCAR-v5 polypeptide <400> 51 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu 20 25 30 Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Val Val Ser Gly Gly 35 40 45 Ser Ile Ser Ser Ser Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly 50 55 60 Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Ser Pro Asn 65 70 75 80 Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser 85 90 95 Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gln Thr Thr Ala Gly Ser Phe Asp Tyr 115 120 125 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser 130 135 140 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln 145 150 155 160 Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr 165 170 175 Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln 180 185 190 Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu 195 200 205 Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp 210 215 220 Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 225 230 235 240 Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr 245 250 255 Lys Val Glu Ile Lys Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His Thr Cys 260 265 270 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 275 280 285 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val 290 295 300 Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe 305 310 315 320 Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 325 330 335 Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 340 345 350 Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 355 360 365 Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala 370 375 380 Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 385 390 395 400 Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 405 410 415 Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 420 425 430 Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 435 440 445 Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln 450 455 460 Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 465 470 475 480 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Tyr Ile Trp 485 490 495 Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile 500 505 510 Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys 515 520 525 Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys 530 535 540 Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val 545 550 555 560 Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn 565 570 575 Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val 580 585 590 Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg 595 600 605 Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys 610 615 620 Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg 625 630 635 640 Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys 645 650 655 Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 660 665 670 <210> 52 <211> 673 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SC02-161 scCAR-v6 polypeptide <400> 52 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu 20 25 30 Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Val Val Ser Gly Gly 35 40 45 Ser Ile Ser Ser Ser Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly 50 55 60 Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Ser Pro Asn 65 70 75 80 Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser 85 90 95 Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gln Thr Thr Ala Gly Ser Phe Asp Tyr 115 120 125 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser 130 135 140 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln 145 150 155 160 Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr 165 170 175 Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln 180 185 190 Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu 195 200 205 Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp 210 215 220 Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 225 230 235 240 Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr 245 250 255 Lys Val Glu Ile Lys Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His Thr Cys 260 265 270 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 275 280 285 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val 290 295 300 Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe 305 310 315 320 Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 325 330 335 Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 340 345 350 Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 355 360 365 Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala 370 375 380 Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 385 390 395 400 Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 405 410 415 Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 420 425 430 Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 435 440 445 Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln 450 455 460 Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 465 470 475 480 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Ile Ser Phe 485 490 495 Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu 500 505 510 Thr Leu Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr 515 520 525 Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu 530 535 540 Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu 545 550 555 560 Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln 565 570 575 Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu 580 585 590 Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly 595 600 605 Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln 610 615 620 Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu 625 630 635 640 Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr 645 650 655 Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro 660 665 670 Arg <210> 53 <211> 458 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M26 scCAR-v1 polypeptide <400> 53 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Ser Tyr Phe Ile His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Phe Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Asp Gly Tyr Tyr Gly Tyr Ala Met 115 120 125 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly 130 135 140 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met 145 150 155 160 Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val Ser 165 170 175 Leu Thr Cys Arg Ala Thr Gln Glu Leu Ser Gly Tyr Leu Ser Trp Leu 180 185 190 Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Ile Lys Arg Leu Ile Tyr Ala Ala Ser 195 200 205 Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Lys Arg Phe Ser Gly Asn Arg Ser Gly 210 215 220 Ser Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser Glu Asp Phe Ala 225 230 235 240 Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ala Ile Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly 245 250 255 Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser 260 265 270 Ser Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala 275 280 285 Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys 290 295 300 Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met 305 310 315 320 Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe 325 330 335 Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg 340 345 350 Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn 355 360 365 Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg 370 375 380 Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro 385 390 395 400 Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala 405 410 415 Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His 420 425 430 Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp 435 440 445 Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 450 455 <210> 54 <211> 461 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M26 scCAR-v2 polypeptide <400> 54 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Ser Tyr Phe Ile His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Phe Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Asp Gly Tyr Tyr Gly Tyr Ala Met 115 120 125 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly 130 135 140 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met 145 150 155 160 Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val Ser 165 170 175 Leu Thr Cys Arg Ala Thr Gln Glu Leu Ser Gly Tyr Leu Ser Trp Leu 180 185 190 Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Ile Lys Arg Leu Ile Tyr Ala Ala Ser 195 200 205 Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Lys Arg Phe Ser Gly Asn Arg Ser Gly 210 215 220 Ser Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser Glu Asp Phe Ala 225 230 235 240 Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ala Ile Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly 245 250 255 Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser 260 265 270 Ser Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu 275 280 285 Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe 290 295 300 Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln 305 310 315 320 Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser 325 330 335 Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys 340 345 350 Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln 355 360 365 Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu 370 375 380 Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg 385 390 395 400 Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met 405 410 415 Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly 420 425 430 Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp 435 440 445 Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 450 455 460 <210> 55 <211> 487 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M26 scCAR-v3 polypeptide <400> 55 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Ser Tyr Phe Ile His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Phe Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Asp Gly Tyr Tyr Gly Tyr Ala Met 115 120 125 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly 130 135 140 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met 145 150 155 160 Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val Ser 165 170 175 Leu Thr Cys Arg Ala Thr Gln Glu Leu Ser Gly Tyr Leu Ser Trp Leu 180 185 190 Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Ile Lys Arg Leu Ile Tyr Ala Ala Ser 195 200 205 Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Lys Arg Phe Ser Gly Asn Arg Ser Gly 210 215 220 Ser Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser Glu Asp Phe Ala 225 230 235 240 Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ala Ile Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly 245 250 255 Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro 260 265 270 Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro 275 280 285 Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu 290 295 300 Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys 305 310 315 320 Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly 325 330 335 Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val 340 345 350 Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu 355 360 365 Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp 370 375 380 Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn 385 390 395 400 Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg 405 410 415 Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly 420 425 430 Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu 435 440 445 Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu 450 455 460 Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His 465 470 475 480 Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 485 <210> 56 <211> 490 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M26 scCAR-v4 polypeptide <400> 56 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Ser Tyr Phe Ile His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Phe Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Asp Gly Tyr Tyr Gly Tyr Ala Met 115 120 125 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly 130 135 140 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met 145 150 155 160 Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val Ser 165 170 175 Leu Thr Cys Arg Ala Thr Gln Glu Leu Ser Gly Tyr Leu Ser Trp Leu 180 185 190 Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Ile Lys Arg Leu Ile Tyr Ala Ala Ser 195 200 205 Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Lys Arg Phe Ser Gly Asn Arg Ser Gly 210 215 220 Ser Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser Glu Asp Phe Ala 225 230 235 240 Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ala Ile Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly 245 250 255 Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro 260 265 270 Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro 275 280 285 Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu 290 295 300 Asp Phe Ala Cys Asp Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr 305 310 315 320 Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val 325 330 335 Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met 340 345 350 Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe 355 360 365 Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg 370 375 380 Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn 385 390 395 400 Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg 405 410 415 Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro 420 425 430 Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala 435 440 445 Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His 450 455 460 Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp 465 470 475 480 Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 485 490 <210> 57 <211> 673 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M26 scCAR-v5 polypeptide <400> 57 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Ser Tyr Phe Ile His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Phe Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Asp Gly Tyr Tyr Gly Tyr Ala Met 115 120 125 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly 130 135 140 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met 145 150 155 160 Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val Ser 165 170 175 Leu Thr Cys Arg Ala Thr Gln Glu Leu Ser Gly Tyr Leu Ser Trp Leu 180 185 190 Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Ile Lys Arg Leu Ile Tyr Ala Ala Ser 195 200 205 Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Lys Arg Phe Ser Gly Asn Arg Ser Gly 210 215 220 Ser Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser Glu Asp Phe Ala 225 230 235 240 Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ala Ile Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly 245 250 255 Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr 260 265 270 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 275 280 285 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr 290 295 300 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 305 310 315 320 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 325 330 335 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 340 345 350 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 355 360 365 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 370 375 380 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 385 390 395 400 Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 405 410 415 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 420 425 430 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 435 440 445 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 450 455 460 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 465 470 475 480 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile 485 490 495 Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser 500 505 510 Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr 515 520 525 Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu 530 535 540 Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu 545 550 555 560 Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln 565 570 575 Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu 580 585 590 Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly 595 600 605 Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln 610 615 620 Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu 625 630 635 640 Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr 645 650 655 Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro 660 665 670 Arg <210> 58 <211> 676 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M26 scCAR-v6 polypeptide <400> 58 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Ser Tyr Phe Ile His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Phe Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Asp Gly Tyr Tyr Gly Tyr Ala Met 115 120 125 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly 130 135 140 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met 145 150 155 160 Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val Ser 165 170 175 Leu Thr Cys Arg Ala Thr Gln Glu Leu Ser Gly Tyr Leu Ser Trp Leu 180 185 190 Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Ile Lys Arg Leu Ile Tyr Ala Ala Ser 195 200 205 Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Lys Arg Phe Ser Gly Asn Arg Ser Gly 210 215 220 Ser Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser Glu Asp Phe Ala 225 230 235 240 Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ala Ile Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly 245 250 255 Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr 260 265 270 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 275 280 285 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr 290 295 300 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 305 310 315 320 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 325 330 335 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 340 345 350 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 355 360 365 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 370 375 380 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 385 390 395 400 Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 405 410 415 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 420 425 430 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 435 440 445 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 450 455 460 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 465 470 475 480 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile 485 490 495 Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu 500 505 510 Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys 515 520 525 Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr 530 535 540 Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly 545 550 555 560 Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala 565 570 575 Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg 580 585 590 Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu 595 600 605 Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn 610 615 620 Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met 625 630 635 640 Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly 645 650 655 Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala 660 665 670 Leu Pro Pro Arg 675 <210> 59 <211> 463 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M31 scCAR-v1 polypeptide <400> 59 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Ser Tyr Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Thr Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Phe Ser Cys Cys Ala Arg Pro Ile Tyr Phe Asp Asn Asp 115 120 125 Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Lys Val Ser Ser Gly 130 135 140 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Thr Ile 145 150 155 160 Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Gln Arg 165 170 175 Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr Gly Asn 180 185 190 Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu 195 200 205 Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe 210 215 220 Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp Pro Val 225 230 235 240 Glu Ala Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn Tyr Asp 245 250 255 Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Leu Ala 260 265 270 Val Ser Thr Ile Ser Ser Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Tyr Ile 275 280 285 Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val 290 295 300 Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe 305 310 315 320 Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly 325 330 335 Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg 340 345 350 Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln 355 360 365 Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp 370 375 380 Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro 385 390 395 400 Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp 405 410 415 Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg 420 425 430 Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr 435 440 445 Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 450 455 460 <210> 60 <211> 466 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M31 scCAR-v2 polypeptide <400> 60 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Ser Tyr Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Thr Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Phe Ser Cys Cys Ala Arg Pro Ile Tyr Phe Asp Asn Asp 115 120 125 Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Lys Val Ser Ser Gly 130 135 140 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Thr Ile 145 150 155 160 Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Gln Arg 165 170 175 Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr Gly Asn 180 185 190 Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu 195 200 205 Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe 210 215 220 Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp Pro Val 225 230 235 240 Glu Ala Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn Tyr Asp 245 250 255 Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Leu Ala 260 265 270 Val Ser Thr Ile Ser Ser Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Ile Ser 275 280 285 Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe 290 295 300 Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu 305 310 315 320 Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu 325 330 335 Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys 340 345 350 Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln 355 360 365 Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu 370 375 380 Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly 385 390 395 400 Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu 405 410 415 Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly 420 425 430 Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser 435 440 445 Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro 450 455 460 Pro Arg 465 <210> 61 <211> 492 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M31 scCAR-v3 polypeptide <400> 61 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Ser Tyr Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Thr Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Phe Ser Cys Cys Ala Arg Pro Ile Tyr Phe Asp Asn Asp 115 120 125 Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Lys Val Ser Ser Gly 130 135 140 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Thr Ile 145 150 155 160 Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Gln Arg 165 170 175 Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr Gly Asn 180 185 190 Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu 195 200 205 Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe 210 215 220 Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp Pro Val 225 230 235 240 Glu Ala Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn Tyr Asp 245 250 255 Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr Thr Thr 260 265 270 Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro 275 280 285 Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val 290 295 300 His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro 305 310 315 320 Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu 325 330 335 Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro 340 345 350 Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys 355 360 365 Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe 370 375 380 Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu 385 390 395 400 Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp 405 410 415 Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys 420 425 430 Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala 435 440 445 Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys 450 455 460 Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr 465 470 475 480 Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 485 490 <210> 62 <211> 495 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M31 scCAR-v4 polypeptide <400> 62 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Ser Tyr Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Thr Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Phe Ser Cys Cys Ala Arg Pro Ile Tyr Phe Asp Asn Asp 115 120 125 Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Lys Val Ser Ser Gly 130 135 140 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Thr Ile 145 150 155 160 Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Gln Arg 165 170 175 Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr Gly Asn 180 185 190 Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu 195 200 205 Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe 210 215 220 Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp Pro Val 225 230 235 240 Glu Ala Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn Tyr Asp 245 250 255 Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr Thr Thr 260 265 270 Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro 275 280 285 Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val 290 295 300 His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Ile Ser Phe Phe Leu 305 310 315 320 Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu 325 330 335 Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe 340 345 350 Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly 355 360 365 Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg 370 375 380 Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln 385 390 395 400 Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp 405 410 415 Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro 420 425 430 Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp 435 440 445 Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg 450 455 460 Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr 465 470 475 480 Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 485 490 495 <210> 63 <211> 678 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M31 scCAR-v5 polypeptide <400> 63 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Ser Tyr Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Thr Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Phe Ser Cys Cys Ala Arg Pro Ile Tyr Phe Asp Asn Asp 115 120 125 Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Lys Val Ser Ser Gly 130 135 140 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Thr Ile 145 150 155 160 Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Gln Arg 165 170 175 Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr Gly Asn 180 185 190 Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu 195 200 205 Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe 210 215 220 Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp Pro Val 225 230 235 240 Glu Ala Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn Tyr Asp 245 250 255 Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Glu Pro Lys 260 265 270 Ser Pro Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 275 280 285 Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 290 295 300 Met Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 305 310 315 320 His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 325 330 335 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr 340 345 350 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 355 360 365 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 370 375 380 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 385 390 395 400 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val 405 410 415 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 420 425 430 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 435 440 445 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 450 455 460 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 465 470 475 480 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 485 490 495 Ser Pro Gly Lys Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly 500 505 510 Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg 515 520 525 Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln 530 535 540 Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu 545 550 555 560 Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala 565 570 575 Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu 580 585 590 Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp 595 600 605 Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu 610 615 620 Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile 625 630 635 640 Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr 645 650 655 Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met 660 665 670 Gln Ala Leu Pro Pro Arg 675 <210> 64 <211> 681 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M31 scCAR-v6 polypeptide <400> 64 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Ser Tyr Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Thr Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Phe Ser Cys Cys Ala Arg Pro Ile Tyr Phe Asp Asn Asp 115 120 125 Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Lys Val Ser Ser Gly 130 135 140 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Thr Ile 145 150 155 160 Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Gln Arg 165 170 175 Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr Gly Asn 180 185 190 Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu 195 200 205 Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe 210 215 220 Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp Pro Val 225 230 235 240 Glu Ala Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn Tyr Asp 245 250 255 Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Glu Pro Lys 260 265 270 Ser Pro Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 275 280 285 Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 290 295 300 Met Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 305 310 315 320 His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 325 330 335 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr 340 345 350 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 355 360 365 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 370 375 380 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 385 390 395 400 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val 405 410 415 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 420 425 430 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 435 440 445 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 450 455 460 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 465 470 475 480 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 485 490 495 Ser Pro Gly Lys Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala 500 505 510 Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val Lys 515 520 525 Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg 530 535 540 Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro 545 550 555 560 Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser 565 570 575 Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu 580 585 590 Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg 595 600 605 Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln 610 615 620 Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr 625 630 635 640 Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp 645 650 655 Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala 660 665 670 Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 675 680 <210> 65 <211> 459 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> G4 scCAR-v1 polypeptide <400> 65 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Ser Phe Thr Gly Tyr Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Glu Lys 50 55 60 Asn Leu Glu Trp Ile Gly Pro Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Ile 65 70 75 80 Tyr Asn Pro Asn Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ala 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Asp Asp Pro 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Ser Cys Cys Ala Arg Thr Asp Asp Tyr Asp Asp Tyr 115 120 125 Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly 130 135 140 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile 145 150 155 160 Gln Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg 165 170 175 Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser His Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn 180 185 190 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Leu Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr 195 200 205 Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly 210 215 220 Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln Glu Asp 225 230 235 240 Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Lys Thr Leu Leu Trp Thr Phe 245 250 255 Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile 260 265 270 Ser Ser Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu 275 280 285 Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr 290 295 300 Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe 305 310 315 320 Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg 325 330 335 Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser 340 345 350 Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr 355 360 365 Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys 370 375 380 Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn 385 390 395 400 Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu 405 410 415 Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly 420 425 430 His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr 435 440 445 Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 450 455 <210> 66 <211> 462 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> G4 scCAR-v2 polypeptide <400> 66 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Ser Phe Thr Gly Tyr Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Glu Lys 50 55 60 Asn Leu Glu Trp Ile Gly Pro Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Ile 65 70 75 80 Tyr Asn Pro Asn Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ala 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Asp Asp Pro 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Ser Cys Cys Ala Arg Thr Asp Asp Tyr Asp Asp Tyr 115 120 125 Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly 130 135 140 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile 145 150 155 160 Gln Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg 165 170 175 Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser His Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn 180 185 190 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Leu Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr 195 200 205 Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly 210 215 220 Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln Glu Asp 225 230 235 240 Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Lys Thr Leu Leu Trp Thr Phe 245 250 255 Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile 260 265 270 Ser Ser Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala 275 280 285 Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg 290 295 300 Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys 305 310 315 320 Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys 325 330 335 Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val 340 345 350 Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn 355 360 365 Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val 370 375 380 Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg 385 390 395 400 Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys 405 410 415 Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg 420 425 430 Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys 435 440 445 Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 450 455 460 <210> 67 <211> 488 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> G4 scCAR-v3 polypeptide <400> 67 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Ser Phe Thr Gly Tyr Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Glu Lys 50 55 60 Asn Leu Glu Trp Ile Gly Pro Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Ile 65 70 75 80 Tyr Asn Pro Asn Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ala 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Asp Asp Pro 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Ser Cys Cys Ala Arg Thr Asp Asp Tyr Asp Asp Tyr 115 120 125 Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly 130 135 140 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile 145 150 155 160 Gln Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg 165 170 175 Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser His Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn 180 185 190 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Leu Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr 195 200 205 Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly 210 215 220 Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln Glu Asp 225 230 235 240 Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Lys Thr Leu Leu Trp Thr Phe 245 250 255 Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg 260 265 270 Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg 275 280 285 Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly 290 295 300 Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr 305 310 315 320 Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg 325 330 335 Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro 340 345 350 Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu 355 360 365 Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala 370 375 380 Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu 385 390 395 400 Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly 405 410 415 Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu 420 425 430 Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser 435 440 445 Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly 450 455 460 Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu 465 470 475 480 His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 485 <210> 68 <211> 491 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> G4 scCAR-v4 polypeptide <400> 68 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Ser Phe Thr Gly Tyr Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Glu Lys 50 55 60 Asn Leu Glu Trp Ile Gly Pro Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Ile 65 70 75 80 Tyr Asn Pro Asn Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ala 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Asp Asp Pro 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Ser Cys Cys Ala Arg Thr Asp Asp Tyr Asp Asp Tyr 115 120 125 Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly 130 135 140 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile 145 150 155 160 Gln Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg 165 170 175 Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser His Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn 180 185 190 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Leu Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr 195 200 205 Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly 210 215 220 Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln Glu Asp 225 230 235 240 Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Lys Thr Leu Leu Trp Thr Phe 245 250 255 Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg 260 265 270 Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg 275 280 285 Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly 290 295 300 Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser 305 310 315 320 Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val 325 330 335 Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe 340 345 350 Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg 355 360 365 Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser 370 375 380 Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr 385 390 395 400 Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys 405 410 415 Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn 420 425 430 Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu 435 440 445 Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly 450 455 460 His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr 465 470 475 480 Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 485 490 <210> 69 <211> 674 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> G4 scCAR-v5 polypeptide <400> 69 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Ser Phe Thr Gly Tyr Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Glu Lys 50 55 60 Asn Leu Glu Trp Ile Gly Pro Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Ile 65 70 75 80 Tyr Asn Pro Asn Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ala 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Asp Asp Pro 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Ser Cys Cys Ala Arg Thr Asp Asp Tyr Asp Asp Tyr 115 120 125 Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly 130 135 140 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile 145 150 155 160 Gln Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg 165 170 175 Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser His Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn 180 185 190 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Leu Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr 195 200 205 Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly 210 215 220 Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln Glu Asp 225 230 235 240 Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Lys Thr Leu Leu Trp Thr Phe 245 250 255 Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys 260 265 270 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser 275 280 285 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg 290 295 300 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 305 310 315 320 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 325 330 335 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 340 345 350 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 355 360 365 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 370 375 380 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 385 390 395 400 Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 405 410 415 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 420 425 430 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 435 440 445 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 450 455 460 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 465 470 475 480 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 485 490 495 Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu 500 505 510 Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu 515 520 525 Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu 530 535 540 Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys 545 550 555 560 Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln 565 570 575 Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu 580 585 590 Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly 595 600 605 Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu 610 615 620 Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly 625 630 635 640 Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser 645 650 655 Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro 660 665 670 Pro Arg <210> 70 <211> 677 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> G4 scCAR-v6 polypeptide <400> 70 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Ser Phe Thr Gly Tyr Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Glu Lys 50 55 60 Asn Leu Glu Trp Ile Gly Pro Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Ile 65 70 75 80 Tyr Asn Pro Asn Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ala 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Asp Asp Pro 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Ser Cys Cys Ala Arg Thr Asp Asp Tyr Asp Asp Tyr 115 120 125 Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly 130 135 140 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile 145 150 155 160 Gln Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg 165 170 175 Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser His Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn 180 185 190 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Leu Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr 195 200 205 Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly 210 215 220 Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln Glu Asp 225 230 235 240 Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Lys Thr Leu Leu Trp Thr Phe 245 250 255 Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys 260 265 270 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser 275 280 285 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg 290 295 300 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 305 310 315 320 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 325 330 335 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 340 345 350 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 355 360 365 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 370 375 380 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 385 390 395 400 Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 405 410 415 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 420 425 430 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 435 440 445 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 450 455 460 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 465 470 475 480 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 485 490 495 Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu 500 505 510 Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys 515 520 525 Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr 530 535 540 Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu 545 550 555 560 Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro 565 570 575 Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly 580 585 590 Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro 595 600 605 Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr 610 615 620 Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly 625 630 635 640 Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln 645 650 655 Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln 660 665 670 Ala Leu Pro Pro Arg 675 <210> 71 <211> 464 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M22 scCAR-v1 polypeptide <400> 71 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Arg Tyr Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Thr Glu Thr His 65 70 75 80 Tyr Asn Gln Gln Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ile Tyr Tyr Gly Asn Pro Ser Tyr Tyr Ala 115 120 125 Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly 130 135 140 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val 145 150 155 160 Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly Glu Lys Val 165 170 175 Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Asn Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln 180 185 190 Lys Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys 195 200 205 Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg 210 215 220 Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser 225 230 235 240 Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Asn Asp Tyr Ser 245 250 255 Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Gly Leu 260 265 270 Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Tyr 275 280 285 Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu 290 295 300 Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile 305 310 315 320 Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp 325 330 335 Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu 340 345 350 Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly 355 360 365 Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 370 375 380 Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 385 390 395 400 Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 405 410 415 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 420 425 430 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 435 440 445 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 450 455 460 <210> 72 <211> 467 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M22 scCAR-v2 polypeptide <400> 72 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Arg Tyr Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Thr Glu Thr His 65 70 75 80 Tyr Asn Gln Gln Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ile Tyr Tyr Gly Asn Pro Ser Tyr Tyr Ala 115 120 125 Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly 130 135 140 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val 145 150 155 160 Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly Glu Lys Val 165 170 175 Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Asn Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln 180 185 190 Lys Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys 195 200 205 Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg 210 215 220 Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser 225 230 235 240 Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Asn Asp Tyr Ser 245 250 255 Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Gly Leu 260 265 270 Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Ile 275 280 285 Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe 290 295 300 Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu 305 310 315 320 Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln 325 330 335 Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly 340 345 350 Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr 355 360 365 Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg 370 375 380 Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met 385 390 395 400 Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu 405 410 415 Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys 420 425 430 Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu 435 440 445 Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu 450 455 460 Pro Pro Arg 465 <210> 73 <211> 493 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M22 scCAR-v3 polypeptide <400> 73 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Arg Tyr Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Thr Glu Thr His 65 70 75 80 Tyr Asn Gln Gln Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ile Tyr Tyr Gly Asn Pro Ser Tyr Tyr Ala 115 120 125 Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly 130 135 140 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val 145 150 155 160 Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly Glu Lys Val 165 170 175 Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Asn Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln 180 185 190 Lys Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys 195 200 205 Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg 210 215 220 Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser 225 230 235 240 Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Asn Asp Tyr Ser 245 250 255 Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Thr Thr 260 265 270 Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln 275 280 285 Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala 290 295 300 Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala 305 310 315 320 Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr 325 330 335 Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln 340 345 350 Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser 355 360 365 Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys 370 375 380 Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln 385 390 395 400 Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu 405 410 415 Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg 420 425 430 Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met 435 440 445 Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly 450 455 460 Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp 465 470 475 480 Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 485 490 <210> 74 <211> 496 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M22 scCAR-v4 polypeptide <400> 74 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Arg Tyr Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Thr Glu Thr His 65 70 75 80 Tyr Asn Gln Gln Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ile Tyr Tyr Gly Asn Pro Ser Tyr Tyr Ala 115 120 125 Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly 130 135 140 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val 145 150 155 160 Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly Glu Lys Val 165 170 175 Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Asn Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln 180 185 190 Lys Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys 195 200 205 Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg 210 215 220 Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser 225 230 235 240 Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Asn Asp Tyr Ser 245 250 255 Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Thr Thr 260 265 270 Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln 275 280 285 Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala 290 295 300 Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Ile Ser Phe Phe 305 310 315 320 Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr 325 330 335 Leu Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile 340 345 350 Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp 355 360 365 Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu 370 375 380 Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly 385 390 395 400 Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 405 410 415 Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 420 425 430 Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 435 440 445 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 450 455 460 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 465 470 475 480 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 485 490 495 <210> 75 <211> 679 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M22 scCAR-v5 polypeptide <400> 75 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Arg Tyr Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Thr Glu Thr His 65 70 75 80 Tyr Asn Gln Gln Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ile Tyr Tyr Gly Asn Pro Ser Tyr Tyr Ala 115 120 125 Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly 130 135 140 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val 145 150 155 160 Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly Glu Lys Val 165 170 175 Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Asn Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln 180 185 190 Lys Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys 195 200 205 Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg 210 215 220 Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser 225 230 235 240 Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Asn Asp Tyr Ser 245 250 255 Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Glu Pro 260 265 270 Lys Ser Pro Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro 275 280 285 Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 290 295 300 Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 305 310 315 320 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 325 330 335 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 340 345 350 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 355 360 365 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 370 375 380 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 385 390 395 400 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln 405 410 415 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 420 425 430 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 435 440 445 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 450 455 460 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 465 470 475 480 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 485 490 495 Leu Ser Pro Gly Lys Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys 500 505 510 Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly 515 520 525 Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val 530 535 540 Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu 545 550 555 560 Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp 565 570 575 Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn 580 585 590 Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg 595 600 605 Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly 610 615 620 Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu 625 630 635 640 Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu 645 650 655 Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His 660 665 670 Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 675 <210> 76 <211> 682 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M22 scCAR-v6 polypeptide <400> 76 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Arg Tyr Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Thr Glu Thr His 65 70 75 80 Tyr Asn Gln Gln Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ile Tyr Tyr Gly Asn Pro Ser Tyr Tyr Ala 115 120 125 Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly 130 135 140 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val 145 150 155 160 Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly Glu Lys Val 165 170 175 Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Asn Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln 180 185 190 Lys Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys 195 200 205 Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg 210 215 220 Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser 225 230 235 240 Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Asn Asp Tyr Ser 245 250 255 Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Glu Pro 260 265 270 Lys Ser Pro Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro 275 280 285 Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 290 295 300 Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 305 310 315 320 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 325 330 335 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 340 345 350 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 355 360 365 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 370 375 380 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 385 390 395 400 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln 405 410 415 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 420 425 430 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 435 440 445 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 450 455 460 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 465 470 475 480 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 485 490 495 Leu Ser Pro Gly Lys Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr 500 505 510 Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val 515 520 525 Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met 530 535 540 Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe 545 550 555 560 Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg 565 570 575 Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn 580 585 590 Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg 595 600 605 Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro 610 615 620 Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala 625 630 635 640 Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His 645 650 655 Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp 660 665 670 Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 675 680 <210> 77 <211> 457 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M29 scCAR-v1 polypeptide <400> 77 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Ile Phe Thr Ser Tyr Val Met Tyr Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Ser Cys Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Tyr Asp Tyr Tyr 115 120 125 Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly 130 135 140 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln 145 150 155 160 Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Gly Lys Val 165 170 175 Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Lys Tyr Ile Ala Trp 180 185 190 Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Gly Pro Arg Leu Leu Ile His Tyr Thr 195 200 205 Ser Thr Leu Gln Pro Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 210 215 220 Gly Arg Asp Tyr Ser Phe Ser Ile Ser Asn Leu Glu Pro Glu Asp Ile 225 230 235 240 Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Tyr Leu Trp Thr Phe Gly Gly 245 250 255 Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser 260 265 270 Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly 275 280 285 Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys 290 295 300 Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg 305 310 315 320 Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro 325 330 335 Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser 340 345 350 Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu 355 360 365 Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg 370 375 380 Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln 385 390 395 400 Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr 405 410 415 Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp 420 425 430 Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala 435 440 445 Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 450 455 <210> 78 <211> 460 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M29 scCAR-v2 polypeptide <400> 78 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Ile Phe Thr Ser Tyr Val Met Tyr Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Ser Cys Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Tyr Asp Tyr Tyr 115 120 125 Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly 130 135 140 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln 145 150 155 160 Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Gly Lys Val 165 170 175 Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Lys Tyr Ile Ala Trp 180 185 190 Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Gly Pro Arg Leu Leu Ile His Tyr Thr 195 200 205 Ser Thr Leu Gln Pro Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 210 215 220 Gly Arg Asp Tyr Ser Phe Ser Ile Ser Asn Leu Glu Pro Glu Asp Ile 225 230 235 240 Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Tyr Leu Trp Thr Phe Gly Gly 245 250 255 Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser 260 265 270 Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr 275 280 285 Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser 290 295 300 Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro 305 310 315 320 Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys 325 330 335 Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe 340 345 350 Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu 355 360 365 Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp 370 375 380 Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys 385 390 395 400 Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala 405 410 415 Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys 420 425 430 Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr 435 440 445 Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 450 455 460 <210> 79 <211> 486 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M29 scCAR-v3 polypeptide <400> 79 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Ile Phe Thr Ser Tyr Val Met Tyr Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Ser Cys Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Tyr Asp Tyr Tyr 115 120 125 Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly 130 135 140 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln 145 150 155 160 Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Gly Lys Val 165 170 175 Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Lys Tyr Ile Ala Trp 180 185 190 Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Gly Pro Arg Leu Leu Ile His Tyr Thr 195 200 205 Ser Thr Leu Gln Pro Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 210 215 220 Gly Arg Asp Tyr Ser Phe Ser Ile Ser Asn Leu Glu Pro Glu Asp Ile 225 230 235 240 Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Tyr Leu Trp Thr Phe Gly Gly 245 250 255 Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro 260 265 270 Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu 275 280 285 Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp 290 295 300 Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly 305 310 315 320 Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg 325 330 335 Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln 340 345 350 Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu 355 360 365 Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala 370 375 380 Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu 385 390 395 400 Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp 405 410 415 Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu 420 425 430 Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile 435 440 445 Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr 450 455 460 Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met 465 470 475 480 Gln Ala Leu Pro Pro Arg 485 <210> 80 <211> 489 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M29 scCAR-v4 polypeptide <400> 80 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Ile Phe Thr Ser Tyr Val Met Tyr Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Ser Cys Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Tyr Asp Tyr Tyr 115 120 125 Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly 130 135 140 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln 145 150 155 160 Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Gly Lys Val 165 170 175 Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Lys Tyr Ile Ala Trp 180 185 190 Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Gly Pro Arg Leu Leu Ile His Tyr Thr 195 200 205 Ser Thr Leu Gln Pro Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 210 215 220 Gly Arg Asp Tyr Ser Phe Ser Ile Ser Asn Leu Glu Pro Glu Asp Ile 225 230 235 240 Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Tyr Leu Trp Thr Phe Gly Gly 245 250 255 Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro 260 265 270 Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu 275 280 285 Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp 290 295 300 Phe Ala Cys Asp Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala 305 310 315 320 Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val Lys 325 330 335 Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg 340 345 350 Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro 355 360 365 Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser 370 375 380 Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu 385 390 395 400 Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg 405 410 415 Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln 420 425 430 Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr 435 440 445 Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp 450 455 460 Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala 465 470 475 480 Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 485 <210> 81 <211> 672 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M29 scCAR-v5 polypeptide <400> 81 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Ile Phe Thr Ser Tyr Val Met Tyr Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Ser Cys Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Tyr Asp Tyr Tyr 115 120 125 Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly 130 135 140 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln 145 150 155 160 Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Gly Lys Val 165 170 175 Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Lys Tyr Ile Ala Trp 180 185 190 Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Gly Pro Arg Leu Leu Ile His Tyr Thr 195 200 205 Ser Thr Leu Gln Pro Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 210 215 220 Gly Arg Asp Tyr Ser Phe Ser Ile Ser Asn Leu Glu Pro Glu Asp Ile 225 230 235 240 Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Tyr Leu Trp Thr Phe Gly Gly 245 250 255 Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His 260 265 270 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe 275 280 285 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro 290 295 300 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 305 310 315 320 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 325 330 335 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 340 345 350 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 355 360 365 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 370 375 380 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 385 390 395 400 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 405 410 415 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 420 425 430 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 435 440 445 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 450 455 460 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 465 470 475 480 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Tyr 485 490 495 Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu 500 505 510 Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile 515 520 525 Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp 530 535 540 Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu 545 550 555 560 Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly 565 570 575 Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 580 585 590 Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 595 600 605 Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 610 615 620 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 625 630 635 640 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 645 650 655 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 660 665 670 <210> 82 <211> 675 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M29 scCAR-v6 polypeptide <400> 82 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Ile Phe Thr Ser Tyr Val Met Tyr Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Ser Cys Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Tyr Asp Tyr Tyr 115 120 125 Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly 130 135 140 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln 145 150 155 160 Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Gly Lys Val 165 170 175 Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Lys Tyr Ile Ala Trp 180 185 190 Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Gly Pro Arg Leu Leu Ile His Tyr Thr 195 200 205 Ser Thr Leu Gln Pro Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 210 215 220 Gly Arg Asp Tyr Ser Phe Ser Ile Ser Asn Leu Glu Pro Glu Asp Ile 225 230 235 240 Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Tyr Leu Trp Thr Phe Gly Gly 245 250 255 Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His 260 265 270 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe 275 280 285 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro 290 295 300 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 305 310 315 320 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 325 330 335 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 340 345 350 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 355 360 365 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 370 375 380 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 385 390 395 400 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 405 410 415 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 420 425 430 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 435 440 445 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 450 455 460 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 465 470 475 480 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Ile 485 490 495 Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe 500 505 510 Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu 515 520 525 Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln 530 535 540 Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly 545 550 555 560 Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr 565 570 575 Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg 580 585 590 Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met 595 600 605 Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu 610 615 620 Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys 625 630 635 640 Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu 645 650 655 Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu 660 665 670 Pro Pro Arg 675 <210> 83 <211> 458 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M2 scCAR-v1 polypeptide <400> 83 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Arg Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Ser Tyr Phe Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Phe Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Asp Gly Tyr Tyr Asp Tyr Ala Met 115 120 125 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly 130 135 140 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met 145 150 155 160 Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val Ser 165 170 175 Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Glu Ile Ser Val Tyr Leu Ser Trp Leu 180 185 190 Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Ile Lys Arg Leu Ile Tyr Ala Ala Ser 195 200 205 Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly 210 215 220 Ser Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser Glu Asp Phe Ala 225 230 235 240 Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ala Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly 245 250 255 Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser 260 265 270 Ser Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala 275 280 285 Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys 290 295 300 Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met 305 310 315 320 Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe 325 330 335 Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg 340 345 350 Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn 355 360 365 Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg 370 375 380 Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro 385 390 395 400 Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala 405 410 415 Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His 420 425 430 Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp 435 440 445 Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 450 455 <210> 84 <211> 461 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M2 scCAR-v2 polypeptide <400> 84 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Arg Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Ser Tyr Phe Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Phe Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Asp Gly Tyr Tyr Asp Tyr Ala Met 115 120 125 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly 130 135 140 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met 145 150 155 160 Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val Ser 165 170 175 Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Glu Ile Ser Val Tyr Leu Ser Trp Leu 180 185 190 Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Ile Lys Arg Leu Ile Tyr Ala Ala Ser 195 200 205 Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly 210 215 220 Ser Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser Glu Asp Phe Ala 225 230 235 240 Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ala Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly 245 250 255 Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser 260 265 270 Ser Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu 275 280 285 Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe 290 295 300 Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln 305 310 315 320 Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser 325 330 335 Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys 340 345 350 Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln 355 360 365 Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu 370 375 380 Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg 385 390 395 400 Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met 405 410 415 Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly 420 425 430 Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp 435 440 445 Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 450 455 460 <210> 85 <211> 487 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M2 scCAR-v3 polypeptide <400> 85 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Arg Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Ser Tyr Phe Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Phe Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Asp Gly Tyr Tyr Asp Tyr Ala Met 115 120 125 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly 130 135 140 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met 145 150 155 160 Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val Ser 165 170 175 Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Glu Ile Ser Val Tyr Leu Ser Trp Leu 180 185 190 Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Ile Lys Arg Leu Ile Tyr Ala Ala Ser 195 200 205 Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly 210 215 220 Ser Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser Glu Asp Phe Ala 225 230 235 240 Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ala Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly 245 250 255 Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro 260 265 270 Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro 275 280 285 Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu 290 295 300 Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys 305 310 315 320 Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly 325 330 335 Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val 340 345 350 Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu 355 360 365 Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp 370 375 380 Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn 385 390 395 400 Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg 405 410 415 Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly 420 425 430 Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu 435 440 445 Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu 450 455 460 Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His 465 470 475 480 Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 485 <210> 86 <211> 490 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M2 scCAR-v4 polypeptide <400> 86 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Arg Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Ser Tyr Phe Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Phe Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Asp Gly Tyr Tyr Asp Tyr Ala Met 115 120 125 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly 130 135 140 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met 145 150 155 160 Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val Ser 165 170 175 Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Glu Ile Ser Val Tyr Leu Ser Trp Leu 180 185 190 Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Ile Lys Arg Leu Ile Tyr Ala Ala Ser 195 200 205 Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly 210 215 220 Ser Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser Glu Asp Phe Ala 225 230 235 240 Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ala Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly 245 250 255 Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro 260 265 270 Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro 275 280 285 Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu 290 295 300 Asp Phe Ala Cys Asp Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr 305 310 315 320 Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val 325 330 335 Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met 340 345 350 Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe 355 360 365 Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg 370 375 380 Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn 385 390 395 400 Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg 405 410 415 Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro 420 425 430 Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala 435 440 445 Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His 450 455 460 Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp 465 470 475 480 Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 485 490 <210> 87 <211> 673 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M2 scCAR-v5 polypeptide <400> 87 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Arg Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Ser Tyr Phe Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Phe Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Asp Gly Tyr Tyr Asp Tyr Ala Met 115 120 125 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly 130 135 140 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met 145 150 155 160 Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val Ser 165 170 175 Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Glu Ile Ser Val Tyr Leu Ser Trp Leu 180 185 190 Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Ile Lys Arg Leu Ile Tyr Ala Ala Ser 195 200 205 Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly 210 215 220 Ser Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser Glu Asp Phe Ala 225 230 235 240 Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ala Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly 245 250 255 Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr 260 265 270 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 275 280 285 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr 290 295 300 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 305 310 315 320 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 325 330 335 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 340 345 350 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 355 360 365 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 370 375 380 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 385 390 395 400 Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 405 410 415 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 420 425 430 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 435 440 445 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 450 455 460 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 465 470 475 480 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile 485 490 495 Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser 500 505 510 Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr 515 520 525 Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu 530 535 540 Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu 545 550 555 560 Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln 565 570 575 Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu 580 585 590 Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly 595 600 605 Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln 610 615 620 Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu 625 630 635 640 Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr 645 650 655 Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro 660 665 670 Arg <210> 88 <211> 676 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M2 scCAR-v6 polypeptide <400> 88 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Arg Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Ser Tyr Phe Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Phe Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Asp Gly Tyr Tyr Asp Tyr Ala Met 115 120 125 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly 130 135 140 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met 145 150 155 160 Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val Ser 165 170 175 Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Glu Ile Ser Val Tyr Leu Ser Trp Leu 180 185 190 Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Ile Lys Arg Leu Ile Tyr Ala Ala Ser 195 200 205 Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly 210 215 220 Ser Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser Glu Asp Phe Ala 225 230 235 240 Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ala Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly 245 250 255 Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr 260 265 270 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 275 280 285 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr 290 295 300 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 305 310 315 320 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 325 330 335 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 340 345 350 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 355 360 365 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 370 375 380 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 385 390 395 400 Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 405 410 415 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 420 425 430 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 435 440 445 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 450 455 460 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 465 470 475 480 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile 485 490 495 Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu 500 505 510 Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys 515 520 525 Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr 530 535 540 Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly 545 550 555 560 Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala 565 570 575 Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg 580 585 590 Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu 595 600 605 Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn 610 615 620 Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met 625 630 635 640 Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly 645 650 655 Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala 660 665 670 Leu Pro Pro Arg 675 <210> 89 <211> 457 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M5scCAR-v1 polypeptide <400> 89 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu 20 25 30 Val Arg Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe 35 40 45 Asn Ile Lys Asp Asp Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Trp Ile Asp Pro Glu Lys Gly Asp Thr Ala 65 70 75 80 Tyr Ala Ser Lys Phe Gln Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ser Asp Thr Ser 85 90 95 Ser Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Leu Thr Gly Arg Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 115 120 125 Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 130 135 140 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser 145 150 155 160 Ser Leu Ala Val Ser Val Gly Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser 165 170 175 Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gln Lys Asn Asn Leu Ala Trp 180 185 190 Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala 195 200 205 Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser 210 215 220 Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu 225 230 235 240 Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Tyr Arg Thr Phe Gly Gly 245 250 255 Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser 260 265 270 Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly 275 280 285 Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys 290 295 300 Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg 305 310 315 320 Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro 325 330 335 Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser 340 345 350 Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu 355 360 365 Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg 370 375 380 Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln 385 390 395 400 Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr 405 410 415 Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp 420 425 430 Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala 435 440 445 Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 450 455 <210> 90 <211> 460 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M5 scCAR-v2 polypeptide <400> 90 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu 20 25 30 Val Arg Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe 35 40 45 Asn Ile Lys Asp Asp Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Trp Ile Asp Pro Glu Lys Gly Asp Thr Ala 65 70 75 80 Tyr Ala Ser Lys Phe Gln Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ser Asp Thr Ser 85 90 95 Ser Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Leu Thr Gly Arg Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 115 120 125 Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 130 135 140 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser 145 150 155 160 Ser Leu Ala Val Ser Val Gly Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser 165 170 175 Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gln Lys Asn Asn Leu Ala Trp 180 185 190 Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala 195 200 205 Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser 210 215 220 Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu 225 230 235 240 Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Tyr Arg Thr Phe Gly Gly 245 250 255 Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser 260 265 270 Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr 275 280 285 Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser 290 295 300 Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro 305 310 315 320 Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys 325 330 335 Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe 340 345 350 Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu 355 360 365 Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp 370 375 380 Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys 385 390 395 400 Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala 405 410 415 Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys 420 425 430 Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr 435 440 445 Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 450 455 460 <210> 91 <211> 486 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M5 scCAR-v3 polypeptide <400> 91 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu 20 25 30 Val Arg Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe 35 40 45 Asn Ile Lys Asp Asp Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Trp Ile Asp Pro Glu Lys Gly Asp Thr Ala 65 70 75 80 Tyr Ala Ser Lys Phe Gln Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ser Asp Thr Ser 85 90 95 Ser Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Leu Thr Gly Arg Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 115 120 125 Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 130 135 140 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser 145 150 155 160 Ser Leu Ala Val Ser Val Gly Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser 165 170 175 Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gln Lys Asn Asn Leu Ala Trp 180 185 190 Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala 195 200 205 Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser 210 215 220 Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu 225 230 235 240 Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Tyr Arg Thr Phe Gly Gly 245 250 255 Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro 260 265 270 Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu 275 280 285 Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp 290 295 300 Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly 305 310 315 320 Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg 325 330 335 Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln 340 345 350 Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu 355 360 365 Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala 370 375 380 Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu 385 390 395 400 Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp 405 410 415 Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu 420 425 430 Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile 435 440 445 Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr 450 455 460 Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met 465 470 475 480 Gln Ala Leu Pro Pro Arg 485 <210> 92 <211> 489 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M5 scCAR-v4 polypeptide <400> 92 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu 20 25 30 Val Arg Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe 35 40 45 Asn Ile Lys Asp Asp Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Trp Ile Asp Pro Glu Lys Gly Asp Thr Ala 65 70 75 80 Tyr Ala Ser Lys Phe Gln Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ser Asp Thr Ser 85 90 95 Ser Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Leu Thr Gly Arg Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 115 120 125 Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 130 135 140 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser 145 150 155 160 Ser Leu Ala Val Ser Val Gly Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser 165 170 175 Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gln Lys Asn Asn Leu Ala Trp 180 185 190 Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala 195 200 205 Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser 210 215 220 Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu 225 230 235 240 Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Tyr Arg Thr Phe Gly Gly 245 250 255 Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro 260 265 270 Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu 275 280 285 Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp 290 295 300 Phe Ala Cys Asp Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala 305 310 315 320 Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val Lys 325 330 335 Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg 340 345 350 Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro 355 360 365 Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser 370 375 380 Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu 385 390 395 400 Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg 405 410 415 Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln 420 425 430 Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr 435 440 445 Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp 450 455 460 Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala 465 470 475 480 Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 485 <210> 93 <211> 672 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M5 scCAR-v5 polypeptide <400> 93 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu 20 25 30 Val Arg Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe 35 40 45 Asn Ile Lys Asp Asp Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Trp Ile Asp Pro Glu Lys Gly Asp Thr Ala 65 70 75 80 Tyr Ala Ser Lys Phe Gln Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ser Asp Thr Ser 85 90 95 Ser Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Leu Thr Gly Arg Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 115 120 125 Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 130 135 140 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser 145 150 155 160 Ser Leu Ala Val Ser Val Gly Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser 165 170 175 Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gln Lys Asn Asn Leu Ala Trp 180 185 190 Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala 195 200 205 Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser 210 215 220 Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu 225 230 235 240 Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Tyr Arg Thr Phe Gly Gly 245 250 255 Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His 260 265 270 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe 275 280 285 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro 290 295 300 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 305 310 315 320 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 325 330 335 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 340 345 350 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 355 360 365 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 370 375 380 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 385 390 395 400 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 405 410 415 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 420 425 430 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 435 440 445 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 450 455 460 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 465 470 475 480 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Tyr 485 490 495 Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu 500 505 510 Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile 515 520 525 Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp 530 535 540 Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu 545 550 555 560 Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly 565 570 575 Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 580 585 590 Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 595 600 605 Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 610 615 620 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 625 630 635 640 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 645 650 655 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 660 665 670 <210> 94 <211> 675 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M5 scCAR-v6 polypeptide <400> 94 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu 20 25 30 Val Arg Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe 35 40 45 Asn Ile Lys Asp Asp Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Trp Ile Asp Pro Glu Lys Gly Asp Thr Ala 65 70 75 80 Tyr Ala Ser Lys Phe Gln Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ser Asp Thr Ser 85 90 95 Ser Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Leu Thr Gly Arg Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 115 120 125 Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 130 135 140 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser 145 150 155 160 Ser Leu Ala Val Ser Val Gly Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser 165 170 175 Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gln Lys Asn Asn Leu Ala Trp 180 185 190 Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala 195 200 205 Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser 210 215 220 Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu 225 230 235 240 Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Tyr Arg Thr Phe Gly Gly 245 250 255 Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His 260 265 270 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe 275 280 285 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro 290 295 300 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 305 310 315 320 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 325 330 335 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 340 345 350 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 355 360 365 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 370 375 380 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 385 390 395 400 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 405 410 415 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 420 425 430 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 435 440 445 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 450 455 460 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 465 470 475 480 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Ile 485 490 495 Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe 500 505 510 Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu 515 520 525 Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln 530 535 540 Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly 545 550 555 560 Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr 565 570 575 Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg 580 585 590 Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met 595 600 605 Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu 610 615 620 Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys 625 630 635 640 Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu 645 650 655 Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu 660 665 670 Pro Pro Arg 675 <210> 95 <211> 461 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> G12 scCAR-v1 polypeptide <400> 95 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Met Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Pro Ser Ser Asn Ile His Trp Leu Lys Gln Thr Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Val Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser 65 70 75 80 Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Ile Tyr Phe Ser Cys Cys Ala Arg Val Tyr Asn Trp His Phe Asp 115 120 125 Val Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly 130 135 140 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Ile Val Leu Thr 145 150 155 160 Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile 165 170 175 Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Gly Tyr Gly Asp Ile Phe Met 180 185 190 Leu Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 195 200 205 Phe Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 210 215 220 Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp Pro Val Glu Ala Asp 225 230 235 240 Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn Glu Asp Pro Tyr Thr 245 250 255 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Gly Leu Ala Val Ser 260 265 270 Thr Ile Ser Ser Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Tyr Ile Trp Ala 275 280 285 Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr 290 295 300 Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln 305 310 315 320 Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser 325 330 335 Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys 340 345 350 Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln 355 360 365 Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu 370 375 380 Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg 385 390 395 400 Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met 405 410 415 Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly 420 425 430 Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp 435 440 445 Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 450 455 460 <210> 96 <211> 464 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> G12 scCAR-v2 polypeptide <400> 96 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Met Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Pro Ser Ser Asn Ile His Trp Leu Lys Gln Thr Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Val Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser 65 70 75 80 Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Ile Tyr Phe Ser Cys Cys Ala Arg Val Tyr Asn Trp His Phe Asp 115 120 125 Val Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly 130 135 140 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Ile Val Leu Thr 145 150 155 160 Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile 165 170 175 Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Gly Tyr Gly Asp Ile Phe Met 180 185 190 Leu Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 195 200 205 Phe Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 210 215 220 Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp Pro Val Glu Ala Asp 225 230 235 240 Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn Glu Asp Pro Tyr Thr 245 250 255 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Gly Leu Ala Val Ser 260 265 270 Thr Ile Ser Ser Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Ile Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr 290 295 300 Leu Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile 305 310 315 320 Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp 325 330 335 Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu 340 345 350 Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly 355 360 365 Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 370 375 380 Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 385 390 395 400 Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 405 410 415 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 420 425 430 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 435 440 445 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 450 455 460 <210> 97 <211> 490 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> G12 scCAR-v3 polypeptide <400> 97 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Met Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Pro Ser Ser Asn Ile His Trp Leu Lys Gln Thr Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Val Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser 65 70 75 80 Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Ile Tyr Phe Ser Cys Cys Ala Arg Val Tyr Asn Trp His Phe Asp 115 120 125 Val Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly 130 135 140 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Ile Val Leu Thr 145 150 155 160 Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile 165 170 175 Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Gly Tyr Gly Asp Ile Phe Met 180 185 190 Leu Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 195 200 205 Phe Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 210 215 220 Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp Pro Val Glu Ala Asp 225 230 235 240 Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn Glu Asp Pro Tyr Thr 245 250 255 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Thr Thr Pro Ala 260 265 270 Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser 275 280 285 Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr 290 295 300 Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala 305 310 315 320 Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys 325 330 335 Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met 340 345 350 Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe 355 360 365 Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg 370 375 380 Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn 385 390 395 400 Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg 405 410 415 Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro 420 425 430 Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala 435 440 445 Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His 450 455 460 Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp 465 470 475 480 Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 485 490 <210> 98 <211> 493 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> G12 scCAR-v4 polypeptide <400> 98 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Met Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Pro Ser Ser Asn Ile His Trp Leu Lys Gln Thr Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Val Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser 65 70 75 80 Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Ile Tyr Phe Ser Cys Cys Ala Arg Val Tyr Asn Trp His Phe Asp 115 120 125 Val Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly 130 135 140 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Ile Val Leu Thr 145 150 155 160 Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile 165 170 175 Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Gly Tyr Gly Asp Ile Phe Met 180 185 190 Leu Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 195 200 205 Phe Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 210 215 220 Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp Pro Val Glu Ala Asp 225 230 235 240 Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn Glu Asp Pro Tyr Thr 245 250 255 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Thr Thr Pro Ala 260 265 270 Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser 275 280 285 Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr 290 295 300 Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu 305 310 315 320 Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe 325 330 335 Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln 340 345 350 Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser 355 360 365 Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys 370 375 380 Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln 385 390 395 400 Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu 405 410 415 Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg 420 425 430 Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met 435 440 445 Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly 450 455 460 Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp 465 470 475 480 Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 485 490 <210> 99 <211> 676 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> G12 scCAR-v5 polypeptide <400> 99 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Met Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Pro Ser Ser Asn Ile His Trp Leu Lys Gln Thr Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Val Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser 65 70 75 80 Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Ile Tyr Phe Ser Cys Cys Ala Arg Val Tyr Asn Trp His Phe Asp 115 120 125 Val Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly 130 135 140 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Ile Val Leu Thr 145 150 155 160 Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile 165 170 175 Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Gly Tyr Gly Asp Ile Phe Met 180 185 190 Leu Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 195 200 205 Phe Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 210 215 220 Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp Pro Val Glu Ala Asp 225 230 235 240 Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn Glu Asp Pro Tyr Thr 245 250 255 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Glu Pro Lys Ser Pro 260 265 270 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly 275 280 285 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 290 295 300 Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 305 310 315 320 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 325 330 335 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 340 345 350 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 355 360 365 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 370 375 380 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 385 390 395 400 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 405 410 415 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 420 425 430 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 435 440 445 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 450 455 460 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 465 470 475 480 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 485 490 495 Gly Lys Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu 500 505 510 Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys 515 520 525 Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr 530 535 540 Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly 545 550 555 560 Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala 565 570 575 Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg 580 585 590 Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu 595 600 605 Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn 610 615 620 Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met 625 630 635 640 Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly 645 650 655 Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala 660 665 670 Leu Pro Pro Arg 675 <210> 100 <211> 679 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> G12 scCAR-v6 polypeptide <400> 100 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Ala Ser Met Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Pro Ser Ser Asn Ile His Trp Leu Lys Gln Thr Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Val Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser 65 70 75 80 Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser 85 90 95 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Ile Tyr Phe Ser Cys Cys Ala Arg Val Tyr Asn Trp His Phe Asp 115 120 125 Val Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly 130 135 140 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asn Ile Val Leu Thr 145 150 155 160 Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile 165 170 175 Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Gly Tyr Gly Asp Ile Phe Met 180 185 190 Leu Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 195 200 205 Phe Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 210 215 220 Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp Pro Val Glu Ala Asp 225 230 235 240 Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn Glu Asp Pro Tyr Thr 245 250 255 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Glu Pro Lys Ser Pro 260 265 270 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly 275 280 285 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 290 295 300 Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 305 310 315 320 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 325 330 335 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 340 345 350 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 355 360 365 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 370 375 380 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 385 390 395 400 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 405 410 415 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 420 425 430 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 435 440 445 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 450 455 460 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 465 470 475 480 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 485 490 495 Gly Lys Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu 500 505 510 Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly 515 520 525 Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val 530 535 540 Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu 545 550 555 560 Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp 565 570 575 Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn 580 585 590 Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg 595 600 605 Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly 610 615 620 Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu 625 630 635 640 Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu 645 650 655 Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His 660 665 670 Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 675 <210> 101 <211> 456 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 21.26 scCAR-v1 polypeptide <400> 101 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Thr Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Arg Tyr Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Met Ile His Pro Ser Ser Gly Ser Thr Ser 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Val Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Arg Ser 85 90 95 Ser Thr Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Gly Asp Tyr Tyr Tyr Gly Thr Gly 115 120 125 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly 130 135 140 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ile Val Leu 145 150 155 160 Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr 165 170 175 Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Ile Asn Tyr Met His Trp Tyr Gln 180 185 190 Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Phe Ala Thr Ser Asn 195 200 205 Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr 210 215 220 Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr 225 230 235 240 Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Arg Ser Asp Arg Ala Leu Thr Phe Gly Ala 245 250 255 Gly Thr Lys Leu Glu Leu Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser Phe 260 265 270 Phe Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr 275 280 285 Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg 290 295 300 Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro 305 310 315 320 Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu 325 330 335 Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala 340 345 350 Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu 355 360 365 Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly 370 375 380 Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu 385 390 395 400 Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser 405 410 415 Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly 420 425 430 Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu 435 440 445 His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 450 455 <210> 102 <211> 459 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 21.26 scCAR-v2 polypeptide <400> 102 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Thr Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Arg Tyr Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Met Ile His Pro Ser Ser Gly Ser Thr Ser 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Val Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Arg Ser 85 90 95 Ser Thr Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Gly Asp Tyr Tyr Tyr Gly Thr Gly 115 120 125 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly 130 135 140 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ile Val Leu 145 150 155 160 Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr 165 170 175 Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Ile Asn Tyr Met His Trp Tyr Gln 180 185 190 Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Phe Ala Thr Ser Asn 195 200 205 Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr 210 215 220 Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr 225 230 235 240 Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Arg Ser Asp Arg Ala Leu Thr Phe Gly Ala 245 250 255 Gly Thr Lys Leu Glu Leu Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser Phe 260 265 270 Phe Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser 275 280 285 Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val 290 295 300 Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe 305 310 315 320 Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg 325 330 335 Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser 340 345 350 Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr 355 360 365 Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys 370 375 380 Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn 385 390 395 400 Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu 405 410 415 Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly 420 425 430 His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr 435 440 445 Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 450 455 <210> 103 <211> 485 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 21.26 scCAR-v3 polypeptide <400> 103 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Thr Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Arg Tyr Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Met Ile His Pro Ser Ser Gly Ser Thr Ser 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Val Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Arg Ser 85 90 95 Ser Thr Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Gly Asp Tyr Tyr Tyr Gly Thr Gly 115 120 125 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly 130 135 140 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ile Val Leu 145 150 155 160 Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr 165 170 175 Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Ile Asn Tyr Met His Trp Tyr Gln 180 185 190 Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Phe Ala Thr Ser Asn 195 200 205 Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr 210 215 220 Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr 225 230 235 240 Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Arg Ser Asp Arg Ala Leu Thr Phe Gly Ala 245 250 255 Gly Thr Lys Leu Glu Leu Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr 260 265 270 Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala 275 280 285 Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe 290 295 300 Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val 305 310 315 320 Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys 325 330 335 Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr 340 345 350 Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu 355 360 365 Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro 370 375 380 Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly 385 390 395 400 Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro 405 410 415 Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr 420 425 430 Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly 435 440 445 Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln 450 455 460 Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln 465 470 475 480 Ala Leu Pro Pro Arg 485 <210> 104 <211> 488 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 21.26 scCAR-v4 polypeptide <400> 104 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Thr Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Arg Tyr Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Met Ile His Pro Ser Ser Gly Ser Thr Ser 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Val Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Arg Ser 85 90 95 Ser Thr Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Gly Asp Tyr Tyr Tyr Gly Thr Gly 115 120 125 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly 130 135 140 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ile Val Leu 145 150 155 160 Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr 165 170 175 Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Ile Asn Tyr Met His Trp Tyr Gln 180 185 190 Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Phe Ala Thr Ser Asn 195 200 205 Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr 210 215 220 Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr 225 230 235 240 Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Arg Ser Asp Arg Ala Leu Thr Phe Gly Ala 245 250 255 Gly Thr Lys Leu Glu Leu Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr 260 265 270 Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala 275 280 285 Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe 290 295 300 Ala Cys Asp Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu 305 310 315 320 Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val Lys Arg 325 330 335 Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro 340 345 350 Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu 355 360 365 Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala 370 375 380 Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu 385 390 395 400 Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly 405 410 415 Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu 420 425 430 Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser 435 440 445 Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly 450 455 460 Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu 465 470 475 480 His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 485 <210> 105 <211> 671 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 21.26 scCAR-v5 polypeptide <400> 105 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Thr Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Arg Tyr Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Met Ile His Pro Ser Ser Gly Ser Thr Ser 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Val Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Arg Ser 85 90 95 Ser Thr Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Gly Asp Tyr Tyr Tyr Gly Thr Gly 115 120 125 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly 130 135 140 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ile Val Leu 145 150 155 160 Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr 165 170 175 Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Ile Asn Tyr Met His Trp Tyr Gln 180 185 190 Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Phe Ala Thr Ser Asn 195 200 205 Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr 210 215 220 Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr 225 230 235 240 Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Arg Ser Asp Arg Ala Leu Thr Phe Gly Ala 245 250 255 Gly Thr Lys Leu Glu Leu Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His Thr 260 265 270 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu 275 280 285 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro Glu 290 295 300 Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 305 310 315 320 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 325 330 335 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 340 345 350 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 355 360 365 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 370 375 380 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 385 390 395 400 Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 405 410 415 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 420 425 430 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 435 440 445 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 450 455 460 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 465 470 475 480 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Tyr Ile 485 490 495 Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val 500 505 510 Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe 515 520 525 Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly 530 535 540 Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg 545 550 555 560 Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln 565 570 575 Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp 580 585 590 Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro 595 600 605 Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp 610 615 620 Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg 625 630 635 640 Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr 645 650 655 Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 660 665 670 <210> 106 <211> 674 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 21.26 scCAR-v6 polypeptide <400> 106 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu 20 25 30 Val Lys Pro Gly Thr Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Arg Tyr Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Met Ile His Pro Ser Ser Gly Ser Thr Ser 65 70 75 80 Tyr Asn Glu Lys Val Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Arg Ser 85 90 95 Ser Thr Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Gly Asp Tyr Tyr Tyr Gly Thr Gly 115 120 125 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly 130 135 140 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ile Val Leu 145 150 155 160 Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr 165 170 175 Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Ile Asn Tyr Met His Trp Tyr Gln 180 185 190 Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Phe Ala Thr Ser Asn 195 200 205 Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr 210 215 220 Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr 225 230 235 240 Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Arg Ser Asp Arg Ala Leu Thr Phe Gly Ala 245 250 255 Gly Thr Lys Leu Glu Leu Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His Thr 260 265 270 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu 275 280 285 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro Glu 290 295 300 Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 305 310 315 320 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 325 330 335 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 340 345 350 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 355 360 365 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 370 375 380 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 385 390 395 400 Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 405 410 415 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 420 425 430 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 435 440 445 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 450 455 460 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 465 470 475 480 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Ile Ser 485 490 495 Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe 500 505 510 Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu 515 520 525 Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu 530 535 540 Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys 545 550 555 560 Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln 565 570 575 Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu 580 585 590 Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly 595 600 605 Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu 610 615 620 Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly 625 630 635 640 Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser 645 650 655 Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro 660 665 670 Pro Arg <210> 107 <211> 460 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 1075.7 scCAR-v1 polypeptide <400> 107 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu 20 25 30 Val Lys Pro Ser Gln Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr 35 40 45 Ser Ile Thr Ser Ala Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly 50 55 60 Asn Lys Leu Glu Trp Met Gly Tyr Ile Ser Tyr Asp Gly Arg Asn Asn 65 70 75 80 Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Asn Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser 85 90 95 Lys Asn Gln Phe Phe Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr 100 105 110 Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Lys Glu Gly Asp Tyr Asp Val Gly Asn Tyr 115 120 125 Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 130 135 140 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu 145 150 155 160 Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu 165 170 175 Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Asn Val Ile Ser Ser Tyr 180 185 190 Val His Trp Tyr Gln Gln Arg Ser Gly Ala Ser Pro Lys Leu Trp Ile 195 200 205 Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly 210 215 220 Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Ala 225 230 235 240 Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Gly Tyr Pro Leu 245 250 255 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Gly Leu Ala Val Ser Thr 260 265 270 Ile Ser Ser Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Tyr Ile Trp Ala Pro 275 280 285 Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu 290 295 300 Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro 305 310 315 320 Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys 325 330 335 Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe 340 345 350 Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu 355 360 365 Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp 370 375 380 Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys 385 390 395 400 Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala 405 410 415 Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys 420 425 430 Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr 435 440 445 Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 450 455 460 <210> 108 <211> 463 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 1075.7 scCAR-v2 polypeptide <400> 108 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu 20 25 30 Val Lys Pro Ser Gln Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr 35 40 45 Ser Ile Thr Ser Ala Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly 50 55 60 Asn Lys Leu Glu Trp Met Gly Tyr Ile Ser Tyr Asp Gly Arg Asn Asn 65 70 75 80 Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Asn Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser 85 90 95 Lys Asn Gln Phe Phe Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr 100 105 110 Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Lys Glu Gly Asp Tyr Asp Val Gly Asn Tyr 115 120 125 Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 130 135 140 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu 145 150 155 160 Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu 165 170 175 Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Asn Val Ile Ser Ser Tyr 180 185 190 Val His Trp Tyr Gln Gln Arg Ser Gly Ala Ser Pro Lys Leu Trp Ile 195 200 205 Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly 210 215 220 Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Ala 225 230 235 240 Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Gly Tyr Pro Leu 245 250 255 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Gly Leu Ala Val Ser Thr 260 265 270 Ile Ser Ser Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Ile Ser Phe Phe Leu 275 280 285 Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu 290 295 300 Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe 305 310 315 320 Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly 325 330 335 Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg 340 345 350 Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln 355 360 365 Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp 370 375 380 Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro 385 390 395 400 Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp 405 410 415 Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg 420 425 430 Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr 435 440 445 Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 450 455 460 <210> 109 <211> 489 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 1075.7 scCAR-v3 polypeptide <400> 109 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu 20 25 30 Val Lys Pro Ser Gln Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr 35 40 45 Ser Ile Thr Ser Ala Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly 50 55 60 Asn Lys Leu Glu Trp Met Gly Tyr Ile Ser Tyr Asp Gly Arg Asn Asn 65 70 75 80 Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Asn Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser 85 90 95 Lys Asn Gln Phe Phe Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr 100 105 110 Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Lys Glu Gly Asp Tyr Asp Val Gly Asn Tyr 115 120 125 Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 130 135 140 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu 145 150 155 160 Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu 165 170 175 Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Asn Val Ile Ser Ser Tyr 180 185 190 Val His Trp Tyr Gln Gln Arg Ser Gly Ala Ser Pro Lys Leu Trp Ile 195 200 205 Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly 210 215 220 Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Ala 225 230 235 240 Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Gly Tyr Pro Leu 245 250 255 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Thr Thr Thr Pro Ala Pro 260 265 270 Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu 275 280 285 Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg 290 295 300 Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly 305 310 315 320 Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys 325 330 335 Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg 340 345 350 Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro 355 360 365 Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser 370 375 380 Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu 385 390 395 400 Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg 405 410 415 Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln 420 425 430 Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr 435 440 445 Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp 450 455 460 Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala 465 470 475 480 Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 485 <210> 110 <211> 492 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 1075.7 scCAR-v4 polypeptide <400> 110 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu 20 25 30 Val Lys Pro Ser Gln Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr 35 40 45 Ser Ile Thr Ser Ala Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly 50 55 60 Asn Lys Leu Glu Trp Met Gly Tyr Ile Ser Tyr Asp Gly Arg Asn Asn 65 70 75 80 Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Asn Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser 85 90 95 Lys Asn Gln Phe Phe Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr 100 105 110 Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Lys Glu Gly Asp Tyr Asp Val Gly Asn Tyr 115 120 125 Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 130 135 140 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu 145 150 155 160 Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu 165 170 175 Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Asn Val Ile Ser Ser Tyr 180 185 190 Val His Trp Tyr Gln Gln Arg Ser Gly Ala Ser Pro Lys Leu Trp Ile 195 200 205 Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly 210 215 220 Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Ala 225 230 235 240 Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Gly Tyr Pro Leu 245 250 255 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Thr Thr Thr Pro Ala Pro 260 265 270 Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu 275 280 285 Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg 290 295 300 Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr 305 310 315 320 Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser 325 330 335 Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro 340 345 350 Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys 355 360 365 Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe 370 375 380 Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu 385 390 395 400 Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp 405 410 415 Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys 420 425 430 Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala 435 440 445 Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys 450 455 460 Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr 465 470 475 480 Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 485 490 <210> 111 <211> 675 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 1075.7 scCAR-v5 polypeptide <400> 111 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu 20 25 30 Val Lys Pro Ser Gln Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr 35 40 45 Ser Ile Thr Ser Ala Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly 50 55 60 Asn Lys Leu Glu Trp Met Gly Tyr Ile Ser Tyr Asp Gly Arg Asn Asn 65 70 75 80 Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Asn Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser 85 90 95 Lys Asn Gln Phe Phe Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr 100 105 110 Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Lys Glu Gly Asp Tyr Asp Val Gly Asn Tyr 115 120 125 Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 130 135 140 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu 145 150 155 160 Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu 165 170 175 Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Asn Val Ile Ser Ser Tyr 180 185 190 Val His Trp Tyr Gln Gln Arg Ser Gly Ala Ser Pro Lys Leu Trp Ile 195 200 205 Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly 210 215 220 Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Ala 225 230 235 240 Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Gly Tyr Pro Leu 245 250 255 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Glu Pro Lys Ser Pro Asp 260 265 270 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro 275 280 285 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ala 290 295 300 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 305 310 315 320 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 325 330 335 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 340 345 350 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 355 360 365 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 370 375 380 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 385 390 395 400 Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 405 410 415 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 420 425 430 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 435 440 445 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 450 455 460 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 465 470 475 480 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 485 490 495 Lys Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu 500 505 510 Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu 515 520 525 Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln 530 535 540 Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly 545 550 555 560 Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr 565 570 575 Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg 580 585 590 Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met 595 600 605 Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu 610 615 620 Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys 625 630 635 640 Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu 645 650 655 Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu 660 665 670 Pro Pro Arg 675 <210> 112 <211> 678 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 1075.7 scCAR-v6 polypeptide <400> 112 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu 20 25 30 Val Lys Pro Ser Gln Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr 35 40 45 Ser Ile Thr Ser Ala Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly 50 55 60 Asn Lys Leu Glu Trp Met Gly Tyr Ile Ser Tyr Asp Gly Arg Asn Asn 65 70 75 80 Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Asn Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser 85 90 95 Lys Asn Gln Phe Phe Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr 100 105 110 Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Lys Glu Gly Asp Tyr Asp Val Gly Asn Tyr 115 120 125 Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 130 135 140 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu 145 150 155 160 Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu 165 170 175 Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Asn Val Ile Ser Ser Tyr 180 185 190 Val His Trp Tyr Gln Gln Arg Ser Gly Ala Ser Pro Lys Leu Trp Ile 195 200 205 Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly 210 215 220 Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Ala 225 230 235 240 Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Gly Tyr Pro Leu 245 250 255 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Glu Pro Lys Ser Pro Asp 260 265 270 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro 275 280 285 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ala 290 295 300 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 305 310 315 320 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 325 330 335 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 340 345 350 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 355 360 365 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 370 375 380 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 385 390 395 400 Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 405 410 415 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 420 425 430 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 435 440 445 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 450 455 460 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 465 470 475 480 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 485 490 495 Lys Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe 500 505 510 Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg 515 520 525 Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln 530 535 540 Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu 545 550 555 560 Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala 565 570 575 Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu 580 585 590 Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp 595 600 605 Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu 610 615 620 Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile 625 630 635 640 Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr 645 650 655 Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met 660 665 670 Gln Ala Leu Pro Pro Arg 675 <210> 113 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CD20 mimotope <400> 113 Cys Pro Tyr Ser Asn Pro Ser Leu Cys Ser 1 5 10 <210> 114 <211> 49 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Target TALEN TRAC_T01 <400> 114 ttgtcccaca gatatccaga accctgaccc tgccgtgtac cagctgaga 49 <210> 115 <211> 530 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TAL binding domain TRAC_T01-L <400> 115 Leu Thr Pro Gln Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Asn Gly Gly Gly Lys 1 5 10 15 Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala 20 25 30 His Gly Leu Thr Pro Gln Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Asn Asn Gly 35 40 45 Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys 50 55 60 Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Gln Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Asn 65 70 75 80 Gly Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val 85 90 95 Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala 100 105 110 Ser His Asp Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu 115 120 125 Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala 130 135 140 Ile Ala Ser His Asp Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg 145 150 155 160 Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val 165 170 175 Val Ala Ile Ala Ser His Asp Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val 180 185 190 Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu 195 200 205 Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Asn Ile Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu 210 215 220 Thr Val Gln Ala Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr 225 230 235 240 Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser His Asp Gly Gly Lys Gln Ala 245 250 255 Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly 260 265 270 Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Asn Ile Gly Gly Lys 275 280 285 Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Ala Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala 290 295 300 His Gly Leu Thr Pro Gln Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Asn Asn Gly 305 310 315 320 Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys 325 330 335 Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Asn 340 345 350 Ile Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Ala Leu Leu Pro Val 355 360 365 Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Gln Gln Val Val Ala Ile Ala 370 375 380 Ser Asn Gly Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu 385 390 395 400 Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala 405 410 415 Ile Ala Ser Asn Ile Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Ala 420 425 430 Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Gln Gln Val 435 440 445 Val Ala Ile Ala Ser Asn Gly Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val 450 455 460 Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu 465 470 475 480 Gln Val Val Ala Ile Ala Ser His Asp Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu 485 490 495 Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr 500 505 510 Pro Gln Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Asn Gly Gly Gly Arg Pro Ala 515 520 525 Leu Glu 530 <210> 116 <211> 530 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TAL binding domain TRAC_T01-R <400> 116 Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser His Asp Gly Gly Lys 1 5 10 15 Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala 20 25 30 His Gly Leu Thr Pro Gln Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Asn Gly Gly 35 40 45 Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys 50 55 60 Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser His 65 70 75 80 Asp Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val 85 90 95 Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala 100 105 110 Ser Asn Ile Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Ala Leu Leu 115 120 125 Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Gln Gln Val Val Ala 130 135 140 Ile Ala Ser Asn Asn Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg 145 150 155 160 Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val 165 170 175 Val Ala Ile Ala Ser His Asp Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val 180 185 190 Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Gln 195 200 205 Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Asn Gly Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu 210 215 220 Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr 225 230 235 240 Pro Gln Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Asn Asn Gly Gly Lys Gln Ala 245 250 255 Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly 260 265 270 Leu Thr Pro Gln Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Asn Asn Gly Gly Lys 275 280 285 Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala 290 295 300 His Gly Leu Thr Pro Gln Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Asn Gly Gly 305 310 315 320 Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys 325 330 335 Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Asn 340 345 350 Ile Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Ala Leu Leu Pro Val 355 360 365 Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala Ile Ala 370 375 380 Ser His Asp Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Arg Leu Leu 385 390 395 400 Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val Val Ala 405 410 415 Ile Ala Ser Asn Ile Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val Gln Ala 420 425 430 Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Glu Gln Val 435 440 445 Val Ala Ile Ala Ser His Asp Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu Thr Val 450 455 460 Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr Pro Gln 465 470 475 480 Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Asn Asn Gly Gly Lys Gln Ala Leu Glu 485 490 495 Thr Val Gln Arg Leu Leu Pro Val Leu Cys Gln Ala His Gly Leu Thr 500 505 510 Pro Gln Gln Val Val Ala Ile Ala Ser Asn Gly Gly Gly Arg Pro Ala 515 520 525 Leu Glu 530 <210> 117 <211> 2814 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> polynucleotide encoding TRAC_T01-L TALEN <400> 117 atgggcgatc ctaaaaagaa acgtaaggtc atcgattacc catacgatgt tccagattac 60 gctatcgata tcgccgatct acgcacgctc ggctacagcc agcagcaaca ggagaagatc 120 aaaccgaagg ttcgttcgac agtggcgcag caccacgagg cactggtcgg ccacgggttt 180 acacacgcgc acatcgttgc gttaagccaa cacccggcag cgttagggac cgtcgctgtc 240 aagtatcagg acatgatcgc agcgttgcca gaggcgacac acgaagcgat cgttggcgtc 300 ggcaaacagt ggtccggcgc acgcgctctg gaggccttgc tcacggtggc gggagagttg 360 agaggtccac cgttacagtt ggacacaggc caacttctca agattgcaaa acgtggcggc 420 gtgaccgcag tggaggcagt gcatgcatgg cgcaatgcac tgacgggtgc cccgctcaac 480 ttgacccccc agcaggtggt ggccatcgcc agcaatggcg gtggcaagca ggcgctggag 540 acggtccagc ggctgttgcc ggtgctgtgc caggcccacg gcttgacccc ccagcaggtg 600 gtggccatcg ccagcaataa tggtggcaag caggcgctgg agacggtcca gcggctgttg 660 ccggtgctgt gccaggccca cggcttgacc ccccagcagg tggtggccat cgccagcaat 720 ggcggtggca agcaggcgct ggagacggtc cagcggctgt tgccggtgct gtgccaggcc 780 cacggcttga ccccggagca ggtggtggcc atcgccagcc acgatggcgg caagcaggcg 840 ctggagacgg tccagcggct gttgccggtg ctgtgccagg cccacggctt gaccccggag 900 caggtggtgg ccatcgccag ccacgatggc ggcaagcagg cgctggagac ggtccagcgg 960 ctgttgccgg tgctgtgcca ggcccacggc ttgaccccgg agcaggtggt ggccatcgcc 1020 agccacgatg gcggcaagca ggcgctggag acggtccagc ggctgttgcc ggtgctgtgc 1080 caggcccacg gcttgacccc ggagcaggtg gtggccatcg ccagcaatat tggtggcaag 1140 caggcgctgg agacggtgca ggcgctgttg ccggtgctgt gccaggccca cggcttgacc 1200 ccggagcagg tggtggccat cgccagccac gatggcggca agcaggcgct ggagacggtc 1260 cagcggctgt tgccggtgct gtgccaggcc cacggcttga ccccggagca ggtggtggcc 1320 atcgccagca atattggtgg caagcaggcg ctggagacgg tgcaggcgct gttgccggtg 1380 ctgtgccagg cccacggctt gaccccccag caggtggtgg ccatcgccag caataatggt 1440 ggcaagcagg cgctggagac ggtccagcgg ctgttgccgg tgctgtgcca ggcccacggc 1500 ttgaccccgg agcaggtggt ggccatcgcc agcaatattg gtggcaagca ggcgctggag 1560 acggtgcagg cgctgttgcc ggtgctgtgc caggcccacg gcttgacccc ccagcaggtg 1620 gtggccatcg ccagcaatgg cggtggcaag caggcgctgg agacggtcca gcggctgttg 1680 ccggtgctgt gccaggccca cggcttgacc ccggagcagg tggtggccat cgccagcaat 1740 attggtggca agcaggcgct ggagacggtg caggcgctgt tgccggtgct gtgccaggcc 1800 cacggcttga ccccccagca ggtggtggcc atcgccagca atggcggtgg caagcaggcg 1860 ctggagacgg tccagcggct gttgccggtg ctgtgccagg cccacggctt gaccccggag 1920 caggtggtgg ccatcgccag ccacgatggc ggcaagcagg cgctggagac ggtccagcgg 1980 ctgttgccgg tgctgtgcca ggcccacggc ttgacccctc agcaggtggt ggccatcgcc 2040 agcaatggcg gcggcaggcc ggcgctggag agcattgttg cccagttatc tcgccctgat 2100 ccggcgttgg ccgcgttgac caacgaccac ctcgtcgcct tggcctgcct cggcgggcgt 2160 cctgcgctgg atgcagtgaa aaagggattg ggggatccta tcagccgttc ccagctggtg 2220 aagtccgagc tggaggagaa gaaatccgag ttgaggcaca agctgaagta cgtgccccac 2280 gagtacatcg agctgatcga gatcgcccgg aacagcaccc aggaccgtat cctggagatg 2340 aaggtgatgg agttcttcat gaaggtgtac ggctacaggg gcaagcacct gggcggctcc 2400 aggaagcccg acggcgccat ctacaccgtg ggctccccca tcgactacgg cgtgatcgtg 2460 gacaccaagg cctactccgg cggctacaac ctgcccatcg gccaggccga cgaaatgcag 2520 aggtacgtgg aggagaacca gaccaggaac aagcacatca accccaacga gtggtggaag 2580 gtgtacccct ccagcgtgac cgagttcaag ttcctgttcg tgtccggcca cttcaagggc 2640 aactacaagg cccagctgac caggctgaac cacatcacca actgcaacgg cgccgtgctg 2700 tccgtggagg agctcctgat cggcggcgag atgatcaagg ccggcaccct gaccctggag 2760 gaggtgagga ggaagttcaa caacggcgag atcaacttcg cggccgactg ataa 2814 <210> 118 <211> 2832 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> polynucleotide encoding TRAC_T01-R TALEN <400> 118 atgggcgatc ctaaaaagaa acgtaaggtc atcgataagg agaccgccgc tgccaagttc 60 gagagacagc acatggacag catcgatatc gccgatctac gcacgctcgg ctacagccag 120 cagcaacagg agaagatcaa accgaaggtt cgttcgacag tggcgcagca ccacgaggca 180 ctggtcggcc acgggtttac acacgcgcac atcgttgcgt taagccaaca cccggcagcg 240 ttagggaccg tcgctgtcaa gtatcaggac atgatcgcag cgttgccaga ggcgacacac 300 gaagcgatcg ttggcgtcgg caaacagtgg tccggcgcac gcgctctgga ggccttgctc 360 acggtggcgg gagagttgag aggtccaccg ttacagttgg acacaggcca acttctcaag 420 attgcaaaac gtggcggcgt gaccgcagtg gaggcagtgc atgcatggcg caatgcactg 480 acgggtgccc cgctcaactt gaccccggag caggtggtgg ccatcgccag ccacgatggc 540 ggcaagcagg cgctggagac ggtccagcgg ctgttgccgg tgctgtgcca ggcccacggc 600 ttgacccccc agcaggtggt ggccatcgcc agcaatggcg gtggcaagca ggcgctggag 660 acggtccagc ggctgttgcc ggtgctgtgc caggcccacg gcttgacccc ggagcaggtg 720 gtggccatcg ccagccacga tggcggcaag caggcgctgg agacggtcca gcggctgttg 780 ccggtgctgt gccaggccca cggcttgacc ccggagcagg tggtggccat cgccagcaat 840 attggtggca agcaggcgct ggagacggtg caggcgctgt tgccggtgct gtgccaggcc 900 cacggcttga ccccccagca ggtggtggcc atcgccagca ataatggtgg caagcaggcg 960 ctggagacgg tccagcggct gttgccggtg ctgtgccagg cccacggctt gaccccggag 1020 caggtggtgg ccatcgccag ccacgatggc ggcaagcagg cgctggagac ggtccagcgg 1080 ctgttgccgg tgctgtgcca ggcccacggc ttgacccccc agcaggtggt ggccatcgcc 1140 agcaatggcg gtggcaagca ggcgctggag acggtccagc ggctgttgcc ggtgctgtgc 1200 caggcccacg gcttgacccc ccagcaggtg gtggccatcg ccagcaataa tggtggcaag 1260 caggcgctgg agacggtcca gcggctgttg ccggtgctgt gccaggccca cggcttgacc 1320 ccccagcagg tggtggccat cgccagcaat aatggtggca agcaggcgct ggagacggtc 1380 cagcggctgt tgccggtgct gtgccaggcc cacggcttga ccccccagca ggtggtggcc 1440 atcgccagca atggcggtgg caagcaggcg ctggagacgg tccagcggct gttgccggtg 1500 ctgtgccagg cccacggctt gaccccggag caggtggtgg ccatcgccag caatattggt 1560 ggcaagcagg cgctggagac ggtgcaggcg ctgttgccgg tgctgtgcca ggcccacggc 1620 ttgaccccgg agcaggtggt ggccatcgcc agccacgatg gcggcaagca ggcgctggag 1680 acggtccagc ggctgttgcc ggtgctgtgc caggcccacg gcttgacccc ggagcaggtg 1740 gtggccatcg ccagcaatat tggtggcaag caggcgctgg agacggtgca ggcgctgttg 1800 ccggtgctgt gccaggccca cggcttgacc ccggagcagg tggtggccat cgccagccac 1860 gatggcggca agcaggcgct ggagacggtc cagcggctgt tgccggtgct gtgccaggcc 1920 cacggcttga ccccccagca ggtggtggcc atcgccagca ataatggtgg caagcaggcg 1980 ctggagacgg tccagcggct gttgccggtg ctgtgccagg cccacggctt gacccctcag 2040 caggtggtgg ccatcgccag caatggcggc ggcaggccgg cgctggagag cattgttgcc 2100 cagttatctc gccctgatcc ggcgttggcc gcgttgacca acgaccacct cgtcgccttg 2160 gcctgcctcg gcgggcgtcc tgcgctggat gcagtgaaaa agggattggg ggatcctatc 2220 agccgttccc agctggtgaa gtccgagctg gaggagaaga aatccgagtt gaggcacaag 2280 ctgaagtacg tgccccacga gtacatcgag ctgatcgaga tcgcccggaa cagcacccag 2340 gaccgtatcc tggagatgaa ggtgatggag ttcttcatga aggtgtacgg ctacaggggc 2400 aagcacctgg gcggctccag gaagcccgac ggcgccatct acaccgtggg ctcccccatc 2460 gactacggcg tgatcgtgga caccaaggcc tactccggcg gctacaacct gcccatcggc 2520 caggccgacg aaatgcagag gtacgtggag gagaaccaga ccaggaacaa gcacatcaac 2580 cccaacgagt ggtggaaggt gtacccctcc agcgtgaccg agttcaagtt cctgttcgtg 2640 tccggccact tcaagggcaa ctacaaggcc cagctgacca ggctgaacca catcaccaac 2700 tgcaacggcg ccgtgctgtc cgtggaggag ctcctgatcg gcggcgagat gatcaaggcc 2760 ggcaccctga ccctggagga ggtgaggagg aagttcaaca acggcgagat caacttcgcg 2820 gccgactgat aa 2832 <210> 119 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR1 of SC02-357 heavy chain variable region <400> 119 Gly Ser Ile Ser Ser Ser Asn Trp Trp Ser 1 5 10 <210> 120 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR2 of SC02-357 heavy chain variable region <400> 120 Trp Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Ser Pro Asp Tyr 1 5 10 <210> 121 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR3 of SC02-357 heavy chain variable region <400> 121 Lys Val Ser Thr Gly Gly Phe Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 122 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR1 of SC02-378 heavy chain variable region <400> 122 Gly Ser Ile Ser Ser Ser Asn Trp Trp Ser 1 5 10 <210> 123 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR2 of SC02-378 heavy chain variable region <400> 123 Trp Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Ser Pro Asn Tyr 1 5 10 <210> 124 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR3 of SC02-378 heavy chain variable region <400> 124 Arg Ser Ser Ser Gly Gly Phe Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 125 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR1 of SC02-161 heavy chain variable region <400> 125 Gly Ser Ile Ser Ser Ser Asn Trp Trp Ser 1 5 10 <210> 126 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR2 of SC02-161 heavy chain variable region <400> 126 Trp Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Ser Pro Asn Tyr 1 5 10 <210> 127 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR3 of SC02-161 heavy chain variable region <400> 127 Arg Gln Thr Thr Ala Gly Ser Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 128 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR1 of SC02-357 & SC02-378 & SC02-161 light chain variable region <400> 128 Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn 1 5 <210> 129 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR2 of SC02-357 & SC02-378 & SC02-161 light chain variable region <400> 129 Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 10 <210> 130 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR3 of SC02-357 & SC02-378 & SC02-161 light chain variable region <400> 130 Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro 1 5 <210> 131 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR1 of M26 heavy chain variable region <400> 131 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Phe Ile His 1 5 10 <210> 132 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR2 of M26 heavy chain variable region <400> 132 Trp Ile Gly Phe Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr 1 5 10 <210> 133 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR3 of M26 heavy chain variable region <400> 133 Thr Arg Asp Asp Gly Tyr Tyr Gly Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 134 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR1 of M26 light chain variable region <400> 134 Gln Glu Leu Ser Gly Tyr Leu Ser 1 5 <210> 135 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR2 of M26 light chain variable region <400> 135 Arg Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Asp Ser 1 5 10 <210> 136 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR3 of M26 light chain variable region <400> 136 Leu Gln Tyr Ala Ile Tyr Pro Tyr 1 5 <210> 137 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR1 of M31 heavy chain variable region <400> 137 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Val Met His 1 5 10 <210> 138 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR2 of M31 heavy chain variable region <400> 138 Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr 1 5 10 <210> 139 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR3 of M31 heavy chain variable region <400> 139 Ala Arg Pro Ile Tyr Phe Asp Asn Asp Tyr 1 5 10 <210> 140 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR1 of M31 light chain variable region <400> 140 Glu Ser Val Asp Ser Tyr Gly Asn Ser Phe Met His 1 5 10 <210> 141 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR2 of M31 light chain variable region <400> 141 Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser 1 5 10 <210> 142 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR3 of M31 light chain variable region <400> 142 Gln Gln Asn Asn Tyr Asp Pro Trp 1 5 <210> 143 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR1 of G4 heavy chain variable region <400> 143 Gln Gln Asn Asn Tyr Asp Pro Trp 1 5 <210> 144 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR2 of G4 heavy chain variable region <400> 144 Trp Ile Gly Pro Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Ile Tyr 1 5 10 <210> 145 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR3 of G4 heavy chain variable region <400> 145 Ala Arg Thr Asp Asp Tyr Asp Asp Tyr Thr Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 146 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR1 of G4 light chain variable region <400> 146 His Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 <210> 147 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR2 of G4 light chain variable region <400> 147 Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser 1 5 10 <210> 148 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR3 of G4 light chain variable region <400> 148 Gln Gln Gly Lys Thr Leu Leu Trp 1 5 <210> 149 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR1 of M22 heavy chain variable region <400> 149 Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Trp Met His 1 5 10 <210> 150 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR2 of M22 heavy chain variable region <400> 150 Trp Ile Gly Asn Ile Asp Pro Ser Asp Thr Glu Thr His Tyr 1 5 10 <210> 151 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR3 of M22 heavy chain variable region <400> 151 Ala Ile Tyr Tyr Gly Asn Pro Ser Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 152 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR1 of M22 light chain variable region <400> 152 Gln Asn Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Lys Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 153 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR2 of M22 light chain variable region <400> 153 Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser 1 5 10 <210> 154 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR3 of M22 light chain variable region <400> 154 Gln Asn Asp Tyr Ser Tyr Pro Phe 1 5 <210> 155 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR1 of M29 heavy chain variable region <400> 155 Gly Tyr Ile Phe Thr Ser Tyr Val Met Tyr 1 5 10 <210> 156 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR2 of M29 heavy chain variable region <400> 156 Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr 1 5 <210> 157 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR3 of M29 heavy chain variable region <400> 157 Ala Arg Tyr Tyr Asp Tyr Asp Tyr Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 158 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR1 of M29 light chain variable region <400> 158 Gln Asp Ile Asn Lys Tyr Ile Ala 1 5 <210> 159 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR2 of M29 light chain variable region <400> 159 Leu Leu Ile His Tyr Thr Ser Thr Leu Gln Pro 1 5 10 <210> 160 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR3 of M29 light chain variable region <400> 160 Leu Gln Tyr Asp Tyr Leu Trp 1 5 <210> 161 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR1 of M2 heavy chain variable region <400> 161 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Phe Met His 1 5 10 <210> 162 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR2 of M2 heavy chain variable region <400> 162 Trp Ile Gly Phe Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr 1 5 10 <210> 163 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR3 of M2 heavy chain variable region <400> 163 Thr Arg Asp Asp Gly Tyr Tyr Asp Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 164 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR1 of M2 light chain variable region <400> 164 Gln Glu Ile Ser Val Tyr Leu Ser 1 5 <210> 165 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR2 of M2 light chain variable region <400> 165 Arg Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Asp Ser 1 5 10 <210> 166 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR3 of M2 light chain variable region <400> 166 Leu Gln Tyr Ala Ser Tyr Pro Tyr 1 5 <210> 167 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR1 of M5 heavy chain variable region <400> 167 Gly Phe Asn Ile Lys Asp Asp Tyr Ile His 1 5 10 <210> 168 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR2 of M5 heavy chain variable region <400> 168 Trp Ile Gly Trp Ile Asp Pro Glu Lys Gly Asp Thr Ala Tyr Ala Ser 1 5 10 15 <210> 169 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR3 of M5 heavy chain variable region <400> 169 Thr Leu Thr Gly Arg Phe Asp Tyr 1 5 <210> 170 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR1 of M5 light chain variable region <400> 170 Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gln Lys Asn Asn Leu Ala 1 5 10 <210> 171 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR2 of M5 light chain variable region <400> 171 Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser 1 5 10 <210> 172 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR3 of M5 light chain variable region <400> 172 Gln Gln Tyr Tyr Ser Tyr Arg 1 5 <210> 173 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR1 of G12 heavy chain variable region <400> 173 Gly Tyr Thr Phe Pro Ser Ser Asn Ile His 1 5 10 <210> 174 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR2 of G12 heavy chain variable region <400> 174 Trp Ile Gly Val Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr 1 5 10 <210> 175 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR3 of G12 heavy chain variable region <400> 175 Ala Ile Tyr Phe Val Tyr Asn Trp His Phe Asp Val 1 5 10 <210> 176 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR1 of G12 light chain variable region <400> 176 Glu Ser Val Asp Gly Tyr Gly Asp Ile Phe Met Leu 1 5 10 <210> 177 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR2 of G12 light chain variable region <400> 177 Leu Leu Ile Tyr Phe Ala Ser Asn Leu Glu Ser 1 5 10 <210> 178 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR3 of G12 light chain variable region <400> 178 Gln Gln Asn Asn Glu Asp Pro Tyr 1 5 <210> 179 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR1 of 21.26 heavy chain variable region <400> 179 Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Trp Met His 1 5 10 <210> 180 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR2 of 21.26 heavy chain variable region <400> 180 Met Ile His Pro Ser Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Glu Lys Val Lys 1 5 10 15 <210> 181 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR3 of 21.26 heavy chain variable region <400> 181 Arg Asp Gly Asp Tyr Tyr Tyr Gly Thr Gly Asp Tyr 1 5 10 <210> 182 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR1 of 21.26 light chain variable region <400> 182 Arg Ala Ser Ser Ser Ile Asn Tyr Met His 1 5 10 <210> 183 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR2 of 21.26 light chain variable region <400> 183 Pro Trp Ile Phe Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser 1 5 10 <210> 184 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR3 of 21.26 light chain variable region <400> 184 Gln Gln Trp Arg Ser Asp Arg Ala Leu Thr 1 5 10 <210> 185 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR1 of 1075.7 heavy chain variable region <400> 185 Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Ala Tyr Tyr Trp Asn 1 5 10 <210> 186 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR2 of 1075.7 heavy chain variable region <400> 186 Tyr Ile Ser Tyr Asp Gly Arg Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Asn 1 5 10 15 <210> 187 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR3 of 1075.7 heavy chain variable region <400> 187 Ala Lys Glu Gly Asp Tyr Asp Val Gly Asn Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 188 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR1 of 1075.7 light chain variable region <400> 188 Arg Ala Ser Ser Asn Val Ile Ser Ser Tyr Val His 1 5 10 <210> 189 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR2 of 1075.7 light chain variable region <400> 189 Leu Trp Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser 1 5 10 <210> 190 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR3 of 1075.7 light chain variable region <400> 190 Gln Gln Tyr Ser Gly Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 191 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Epitope for palivizumab <400> 191 Asn Ser Glu Leu Leu Ser Leu Ile Asn Asp Met Pro Ile Thr Asn Asp 1 5 10 15 Gln Lys Lys Leu Met Ser Asn Asn 20 <210> 192 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Mimotope 1 for cetuximab <400> 192 Cys Gln Phe Asp Leu Ser Thr Arg Arg Leu Lys Cys 1 5 10 <210> 193 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Mimotope 2 for cetuximab <400> 193 Cys Gln Tyr Asn Leu Ser Ser Arg Ala Leu Lys Cys 1 5 10 <210> 194 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Mimotope 3 for cetuximab <400> 194 Cys Val Trp Gln Arg Trp Gln Lys Ser Tyr Val Cys 1 5 10 <210> 195 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Mimotope 4 for cetuximab <400> 195 Cys Met Trp Asp Arg Phe Ser Arg Trp Tyr Lys Cys 1 5 10 <210> 196 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Epitope 1 for nivolumab <400> 196 Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp 1 5 10 15 Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg 20 25 <210> 197 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Epitope 2 for nivolumab <400> 197 Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln 1 5 10 15 Ile Lys Glu <210> 198 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Epitope 1 for CD34 <400> 198 Thr Phe Ser Asn Val Ser Thr Asn Val Ser Tyr Gln Glu Thr 1 5 10 <210> 199 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Epitope 2 for CD34 <400> 199 Asn Thr Asn Ser Ser Val Gln Ser Gln Thr Ser Val Ile Ser 1 5 10

Claims (65)

  1. 적어도 하기를 포함하는 CLL1 특이적 키메라 항원 수용체 (항-CLL1 CAR):
    - 가요성(flexible) 링커에 의하여 연결(join)된 단일클론 항-CLL1 항체 M26 또는 M2의 무거운 (VH) 및 가벼운 (VL) 가변 단편을 포함하는 단일 체인 항체 단편 (scFv)을 포함하는 항-CLL1 세포 외 리간드 결합-도메인으로, 각각, 이때 상기 VH는 서열번호 131, 서열번호 132 및 서열번호 133의 CDR들을 포함하고 상기 VL은 서열번호 134, 서열번호 135 및 서열번호 136의 CDR들을 포함하거나, 또는 이때 상기 VH는 서열번호 161, 서열번호 162 및 서열번호 163의 CDR들을 포함하고 상기 VL은 서열번호 164, 서열번호 165 및 서열번호 166의 CDR들을 포함하는, 항-CLL1 세포 외 리간드 결합-도메인,
    - 막관통 도메인,
    - 세포질의 신호전달(signaling) 도메인; 및
    - 공-자극(co-stimulatory) 도메인.
  2. 제 1항에 있어서,
    공-자극 도메인은 CD28 또는 4-1BB 공-자극 도메인인, CLL1 특이적 키메라 항원 수용체.
  3. 제 1항에 있어서,
    상기 막관통 도메인은 CD8α 막관통 도메인인, CLL1 특이적 키메라 항원 수용체.
  4. 제 1항에 있어서,
    힌지를 더 포함하는, CLL1 특이적 키메라 항원 수용체.
  5. 제 1항에 있어서,
    각각, 이때 상기 VH는 서열번호 15의 폴리펩타이드 서열과 적어도 80% 동일성(identity)을 갖고 상기 VL은 서열번호 16의 폴리펩타이드 서열과 적어도 80% 동일성을 갖거나; 또는 이때 상기 VH는 서열번호 25의 폴리펩타이드 서열과 적어도 80% 동일성을 갖고 상기 VL은 서열번호 26의 폴리펩타이드 서열과 적어도 80% 동일성을 갖는, CLL1 특이적 키메라 항원 수용체.
  6. 제 1항에 있어서,
    세포외 결합 도메인은 서열번호: 113, 서열번호: 192, 서열번호: 193, 서열번호: 194 또는 서열번호: 195의 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 mAb-특이적 미모토프(mimotope)를 포함하는, CLL1 특이적 키메라 항원 수용체.
  7. 제 6항에 있어서,
    세포외 결합 도메인은 1, 2, 3 또는 4 개의 상기 mAb-특이적 미모토프들을 포함하는, CLL1 특이적 키메라 항원 수용체.
  8. 제 1항에 있어서,
    세포외 결합 도메인은 적어도 하나의 CD20 미모토프를 포함하는, CLL1 특이적 키메라 항원 수용체.
  9. 제 8항에 있어서,
    CD20 미모토프는 리툭시맙에 의하여 특이적으로 인식되는, CLL1 특이적 키메라 항원 수용체.
  10. 제 8항에 있어서,
    상기 CD20 미모토프는 서열번호: 113의 아미노산 서열을 갖는, CLL1 특이적 키메라 항원 수용체.
  11. 제 1항에 있어서,
    세포외 결합 도메인은 하기 서열을 포함하고
    V1-L1-V2-(L)x-에피토프1-(L)x-;
    V1-L1-V2-(L)x-에피토프1-(L)x-에피토프2-(L)x-;
    V1-L1-V2-(L)x-에피토프1-(L)x-에피토프2-(L)x-에피토프3-(L)x-;
    (L)x-에피토프1-(L)x-V1-L1-V2;
    (L)x-에피토프1-(L)x-에피토프2-(L)x-V1-L1-V2;
    에피토프1-(L)x-에피토프2-(L)x-에피토프3-(L)x-V1-L1-V2;
    (L)x-에피토프1-(L)x-V1-L1-V2-(L)x-에피토프2-(L)x;
    (L)x-에피토프1-(L)x-V1-L1-V2-(L)x-에피토프2-(L)x-에피토프3-(L)x-;
    (L)x-에피토프1-(L)x-V1-L1-V2-(L)x-에피토프2-(L)x-에피토프3-(L)x-에피토프4-(L)x-;
    (L)x-에피토프1-(L)x-에피토프2-(L)x-V1-L1-V2-(L)x-에피토프3-(L)x-;
    (L)x-에피토프1-(L)x-에피토프2-(L)x-V1-L1-V2-(L)x-에피토프3-(L)x-에피토프4-(L)x-;
    V1-(L)x-에피토프1-(L)x-V2;
    V1-(L)x-에피토프1-(L)x-V2-(L)x-에피토프2-(L)x;
    V1-(L)x-에피토프1-(L)x-V2-(L)x-에피토프2-(L)x-에피토프3-(L)x;
    V1-(L)x-에피토프1-(L)x-V2-(L)x-에피토프2-(L)x-에피토프3-(L)x-에피토프4-(L)x;
    (L)x-에피토프1-(L)x-V1-(L)x-에피토프2-(L)x-V2; 또는,
    (L)x-에피토프1-(L)x-V1-(L)x-에피토프2-(L)x-V2-(L)x-에피토프3-(L)x;
    이때,
    V1 은 VL 이고 V2 는 VH 이거나 또는 V1 은 VH 이고 V2 은 VL이고;
    L1은 VL 체인에 VH 체인을 연결하기에 적합한 링커이고;
    L은 글리신 및 세린 잔기들을 포함하는 링커이고, 그리고 세포외 결합 도메인에서 L의 각각의 발생은 동일한 세포외 결합 도메인에서 L의 다른 발생과 동일하거나 또는 다를 수 있고, 그리고,
    x는 0 또는 1이고 x의 각각의 발생은 다른 것들로부터 독립적으로 선택되고; 그리고
    에피토프 1, 에피토프 2, 에피토프 3 및 에피토프 4는 서열번호: 113, 서열번호: 191, 서열번호: 192, 서열번호: 193, 서열번호: 194, 서열번호: 195, 서열번호: 196, 서열번호: 197, 서열번호: 198 또는 서열번호: 199의 아미노산 서열을 포함하는 mAb-특이적 에피토프들로부터 독립적으로 선택되는,
    CLL1 특이적 키메라 항원 수용체.
  12. 제 11항에 있어서,
    에피토프 1은 서열번호 113의 아미노산 서열을 갖는 mAb-특이적 에피토프인, CLL1 특이적 키메라 항원 수용체.
  13. 제 11항에 있어서,
    에피토프 2는 서열번호 113의 아미노산 서열을 갖는 mAb-특이적 에피토프인, CLL1 특이적 키메라 항원 수용체.
  14. 제 11항에 있어서,
    에피토프 3은 서열번호 113, 서열번호 198 또는 서열번호 199의 아미노산 서열을 갖는 mAb-특이적 에피토프인, CLL1 특이적 키메라 항원 수용체.
  15. 제 11항에 있어서,
    에피토프 4는 서열번호 113의 아미노산 서열을 갖는 mAb-특이적 에피토프인, CLL1 특이적 키메라 항원 수용체.
  16. 제 11항에 있어서,
    에피토프 1, 에피토프 2 및 에피토프 4는 서열번호 113의 아미노산 서열을 갖는 mAb-특이적 에피토프이고 그리고 에피토프 3은 서열번호 113, 서열번호 198 또는 서열번호 199의 아미노산 서열을 갖는 mAb-특이적 에피토프인, CLL1 특이적 키메라 항원 수용체.
  17. 제 1항 내지 제 16항 중 어느 한 항에 따른 항-CLL1 CAR를 세포 표면 막에서 발현하는 조작된 림프계(lymphoid) 면역 세포.
  18. 염증성 T-림프구들, 세포독성 T-림프구들, 조절성 T-림프구들 또는 헬퍼 T-림프구들로부터 유래되는 제 17항에 따른 조작된 림프계 면역 세포.
  19. 제 17항에 있어서,
    TCR의 발현이 상기 면역 세포에서 억제되는(suppressed), 조작된 림프계 면역 세포.
  20. 제 17항에 있어서,
    적어도 하나의 MHC 단백질의 발현이 상기 면역 세포에서 억압되거나(repressed) 또는 억제되는(suppressed), 조작된 림프계 면역 세포.
  21. 제 20항에 있어서,
    상기 적어도 하나의 MHC 단백질은 β2m 및 HLA로부터 선택되는, 조작된 림프계 면역 세포.
  22. CLL1-발현하는 세포들에 의하여 특징되는 혈액암 질환(haematological cancer condition)의 치료(therapy)에서 사용을 위한 제 17항에 따른 조작된 림프계 면역 세포.
  23. 제 22항에 있어서,
    혈액암 질환은 백혈병인, 사용을 위한 조작된 림프계 면역 세포.
  24. 제 22항에 있어서,
    혈액암 질환은 급성 골수성(myelogenous) 백혈병 (AML)인, 사용을 위한 조작된 림프계 면역 세포.



  25. 삭제
  26. 삭제
  27. 삭제
  28. 삭제
  29. 삭제
  30. 삭제
  31. 삭제
  32. 삭제
  33. 삭제
  34. 삭제
  35. 삭제
  36. 삭제
  37. 삭제
  38. 삭제
  39. 삭제
  40. 삭제
  41. 삭제
  42. 삭제
  43. 삭제
  44. 삭제
  45. 삭제
  46. 삭제
  47. 삭제
  48. 삭제
  49. 삭제
  50. 삭제
  51. 삭제
  52. 삭제
  53. 삭제
  54. 삭제
  55. 삭제
  56. 삭제
  57. 삭제
  58. 삭제
  59. 삭제
  60. 삭제
  61. 삭제
  62. 삭제
  63. 삭제
  64. 삭제
  65. 삭제
KR1020177021615A 2015-01-26 2016-01-25 암 면역치료를 위한 항-CLL1 특이적 단일-체인 키메라 항원 수용체들(scCARS) KR102329836B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DKPA201570044 2015-01-26
DKPA201570044 2015-01-26
PCT/EP2016/051469 WO2016120218A1 (en) 2015-01-26 2016-01-25 ANTI-CLL1 SPECIFIC SINGLE-CHAIN CHIMERIC ANTIGEN RECEPTORS (scCARS) FOR CANCER IMMUNOTHERAPY

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20170135822A KR20170135822A (ko) 2017-12-08
KR102329836B1 true KR102329836B1 (ko) 2021-11-19

Family

ID=52396337

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020177021615A KR102329836B1 (ko) 2015-01-26 2016-01-25 암 면역치료를 위한 항-CLL1 특이적 단일-체인 키메라 항원 수용체들(scCARS)
KR1020177023078A KR20170135824A (ko) 2015-01-26 2016-01-25 출아형 원형질 세포의 수지상 세포 신생물 또는 재발된/난치성 급성 골수성 림프종의 치료를 위한 cd123에 결합하는 키메라 항원 수용체들을 지닌 것으로 여겨지는, t 세포 수용체 넉 아웃 조작된 면역 세포들

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020177023078A KR20170135824A (ko) 2015-01-26 2016-01-25 출아형 원형질 세포의 수지상 세포 신생물 또는 재발된/난치성 급성 골수성 림프종의 치료를 위한 cd123에 결합하는 키메라 항원 수용체들을 지닌 것으로 여겨지는, t 세포 수용체 넉 아웃 조작된 면역 세포들

Country Status (14)

Country Link
US (5) US20180000914A1 (ko)
EP (5) EP3250605A1 (ko)
JP (5) JP2018504143A (ko)
KR (2) KR102329836B1 (ko)
CN (5) CN113968915A (ko)
AU (5) AU2016212160B2 (ko)
BR (3) BR112017013981A2 (ko)
CA (5) CA2973642A1 (ko)
DK (2) DK3250606T3 (ko)
ES (2) ES2869972T3 (ko)
IL (3) IL252937B (ko)
MX (3) MX2017009181A (ko)
RU (3) RU2732925C2 (ko)
WO (5) WO2016120219A1 (ko)

Families Citing this family (136)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9950282B2 (en) 2012-03-15 2018-04-24 Flodesign Sonics, Inc. Electronic configuration and control for acoustic standing wave generation
US10967298B2 (en) 2012-03-15 2021-04-06 Flodesign Sonics, Inc. Driver and control for variable impedence load
US10704021B2 (en) 2012-03-15 2020-07-07 Flodesign Sonics, Inc. Acoustic perfusion devices
US9458450B2 (en) 2012-03-15 2016-10-04 Flodesign Sonics, Inc. Acoustophoretic separation technology using multi-dimensional standing waves
CN105939767B (zh) 2014-01-08 2018-04-06 弗洛设计声能学公司 具有双声电泳腔的声电泳装置
TR201910814T4 (tr) * 2014-03-19 2019-08-21 Cellectis Kanser immünoterapisi için cd123 spesifik kimerik antijen reseptörleri.
PE20171653A1 (es) 2015-04-13 2017-11-13 Pfizer Receptores del antigeno quimerico dirigidos al antigeno de maduracion de celulas b
US11708572B2 (en) 2015-04-29 2023-07-25 Flodesign Sonics, Inc. Acoustic cell separation techniques and processes
US11021699B2 (en) 2015-04-29 2021-06-01 FioDesign Sonics, Inc. Separation using angled acoustic waves
US11377651B2 (en) 2016-10-19 2022-07-05 Flodesign Sonics, Inc. Cell therapy processes utilizing acoustophoresis
US11459540B2 (en) 2015-07-28 2022-10-04 Flodesign Sonics, Inc. Expanded bed affinity selection
US11474085B2 (en) 2015-07-28 2022-10-18 Flodesign Sonics, Inc. Expanded bed affinity selection
AU2016307050A1 (en) * 2015-08-11 2018-02-15 Cellectis Cells for immunotherapy engineered for targeting CD38 antigen and for CD38 gene inactivation
CA3002674A1 (en) * 2015-10-30 2017-05-04 Aleta Biotherapeutics Inc. Compositions and methods for treatment of cancer
KR20180083868A (ko) 2015-10-30 2018-07-23 알레타 바이오쎄라퓨틱스, 인크. 종양 형질도입용 조성물 및 방법
CN105331586B (zh) * 2015-11-20 2020-09-15 上海细胞治疗研究院 一种包含高效杀伤启动机制的肿瘤精准t细胞及其用途
CA3004743A1 (en) 2015-11-24 2017-06-01 Cellerant Therapeutics, Inc. Humanized anti-cll-1 antibodies
EP3202783A1 (en) * 2016-02-02 2017-08-09 Ecole Polytechnique Federale de Lausanne (EPFL) Engineered antigen presenting cells and uses thereof
JP7250519B2 (ja) * 2016-03-23 2023-04-03 ヘルムホルツ ツェントゥルム ミュンヘン ドイチェス フォルシュングスツェントゥルム フューア ゲズントハイト ウント ウムヴェルト （ゲーエムベーハー） Ｐｄ－１及び４－１ｂｂの融合タンパク質
JP2019513836A (ja) 2016-04-04 2019-05-30 ヘモジェニックス リミテッド ライアビリティ カンパニー 二重特異性抗体を使用して患者の造血幹細胞／造血前駆細胞（ｈｓｃ／ｈｐ）を除去する方法
US11104738B2 (en) 2016-04-04 2021-08-31 Hemogenyx Pharmaceuticals Llc Monoclonal antibodies to human FLT3/FLK2 receptor protein
US11214789B2 (en) 2016-05-03 2022-01-04 Flodesign Sonics, Inc. Concentration and washing of particles with acoustics
US11085035B2 (en) 2016-05-03 2021-08-10 Flodesign Sonics, Inc. Therapeutic cell washing, concentration, and separation utilizing acoustophoresis
WO2017214333A1 (en) 2016-06-08 2017-12-14 Intrexon Corporation Cd33 specific chimeric antigen receptors
CA3029761A1 (en) 2016-07-06 2018-01-11 Cellectis Sequential gene editing in primary immune cells
KR20190038919A (ko) * 2016-08-19 2019-04-09 얀센 바이오테크 인코포레이티드 항-nkg2d 항체로 크론병을 치료하는 방법
WO2018057915A1 (en) 2016-09-23 2018-03-29 The Regents Of The University Of Michigan Engineered lymphocytes
JP6887492B6 (ja) 2016-10-04 2021-07-14 プレシジョン バイオサイエンシズ，インク． 遺伝子改変細胞で使用するための共刺激ドメイン
WO2018073394A1 (en) 2016-10-19 2018-04-26 Cellectis Cell death inducing chimeric antigen receptors
WO2018073393A2 (en) 2016-10-19 2018-04-26 Cellectis Tal-effector nuclease (talen) -modified allogenic cells suitable for therapy
EP3529347A1 (en) 2016-10-19 2019-08-28 Flodesign Sonics, Inc. Affinity cell extraction by acoustics
US11236171B2 (en) 2016-12-21 2022-02-01 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Human monoclonal antibodies specific for FLT3 and uses thereof
WO2018115189A1 (en) 2016-12-21 2018-06-28 Cellectis Stably enginereed proteasome inhibitor resistant immune cells for immunotherapy
CN108250301A (zh) * 2016-12-29 2018-07-06 天津天锐生物科技有限公司 一种多靶点嵌合抗原受体
KR20190130608A (ko) 2017-03-22 2019-11-22 노파르티스 아게 면역종양학을 위한 조성물 및 방법
CN110382542B (zh) * 2017-03-29 2023-06-09 豪夫迈·罗氏有限公司 针对共刺激性tnf受体的双特异性抗原结合分子
EP3592380A1 (en) * 2017-03-31 2020-01-15 Cellectis New universal chimeric antigen receptor t cells specific for cd22
MX2019011679A (es) * 2017-04-01 2019-11-01 Avm Biotechnology Llc Reemplazo de un pre-acondicionamiento citotoxico antes de una inmunoterapia celular.
US11166985B2 (en) 2017-05-12 2021-11-09 Crispr Therapeutics Ag Materials and methods for engineering cells and uses thereof in immuno-oncology
JP7356354B2 (ja) 2017-05-12 2023-10-04 クリスパー セラピューティクス アクチェンゲゼルシャフト 細胞の操作のための材料及び方法並びに免疫腫瘍学におけるその使用
EP3630837A1 (en) 2017-06-02 2020-04-08 Pfizer Inc Chimeric antigen receptors targeting flt3
IL270990B2 (en) 2017-06-07 2024-02-01 Precigen Inc Expression of new cell markers
US20220233588A1 (en) 2017-06-30 2022-07-28 Cellectis Cellular immunotherapy for repetitive administration
JP7305613B2 (ja) * 2017-07-09 2023-07-10 バイオサイト リミテッド 併用がん療法
CA3070409A1 (en) 2017-07-20 2019-01-24 H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. Compositions and methods for targeting cd33-expressing cancers
WO2019016360A1 (en) 2017-07-21 2019-01-24 Cellectis MODIFIED IMMUNE CELLS RESISTANT TO TUMOR MICRO-ENVIRONMENT
TW201908335A (zh) * 2017-07-25 2019-03-01 美國德州系統大學評議委員會 增強之嵌合抗原受體及其用途
WO2019020733A1 (en) 2017-07-26 2019-01-31 Cellectis METHODS OF IMMUNE CELL SELECTION OF THE ANTIGEN-DEPENDENT CHIMERIC ANTIGENIC RECEPTOR (CAR)
CA3075806A1 (en) * 2017-09-27 2019-04-04 University Of Southern California Novel platforms for co-stimulation, novel car designs and other enhancements for adoptive cellular therapy
WO2019072824A1 (en) 2017-10-09 2019-04-18 Cellectis IMPROVED ANTI-CD123 CAR IN UNIVERSAL MODIFIED IMMUNE T LYMPHOCYTES
US11649294B2 (en) 2017-11-14 2023-05-16 GC Cell Corporation Anti-HER2 antibody or antigen-binding fragment thereof, and chimeric antigen receptor comprising same
CN109837303A (zh) * 2017-11-25 2019-06-04 深圳宾德生物技术有限公司 一种敲除pd1的靶向cd317的嵌合抗原受体t细胞及其制备方法和应用
CN109836496A (zh) * 2017-11-25 2019-06-04 深圳宾德生物技术有限公司 一种靶向cd317的单链抗体、嵌合抗原受体t细胞及其制备方法和应用
WO2019106163A1 (en) 2017-12-01 2019-06-06 Cellectis Reprogramming of genetically engineered primary immune cells
AU2018385759B2 (en) 2017-12-14 2021-10-21 Flodesign Sonics, Inc. Acoustic transducer driver and controller
WO2019129850A1 (en) 2017-12-29 2019-07-04 Cellectis Off-the-shelf engineered cells for therapy
CN109608548A (zh) * 2017-12-29 2019-04-12 郑州大学第附属医院 基于人源cd20抗体的嵌合抗原受体、慢病毒表达载体及其应用
WO2019129851A1 (en) 2017-12-29 2019-07-04 Cellectis Method for improving production of car t cells
BR112020013954A2 (pt) 2018-01-09 2020-12-01 H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute Inc. composições e métodos para alvejamento de cânceres que expressam clec12a
US11377500B2 (en) 2018-02-01 2022-07-05 Pfizer Inc. Antibodies specific for CD70 and their uses
JP7404247B2 (ja) 2018-02-01 2023-12-25 ファイザー・インク Ｃｄ７０を標的とするキメラ抗原受容体
KR20200128054A (ko) 2018-03-02 2020-11-11 알로젠 테라퓨틱스 인코포레이티드 유도성 키메라 사이토카인 수용체
SG11202008796VA (en) * 2018-03-14 2020-10-29 The United States Of America As Represented By The Secretary Anti-cd33 chimeric antigen receptors and their uses
JP2021518411A (ja) * 2018-03-21 2021-08-02 デイナ ファーバー キャンサー インスティチュート，インコーポレイテッド Ｆｃバリアント組成物およびその使用方法
CN108530536B (zh) * 2018-03-27 2021-08-13 刘爽 Cart-cd123及其制备与应用
CN108531457A (zh) * 2018-04-10 2018-09-14 杭州荣泽生物科技有限公司 一种Cas9/RNP敲除T细胞PD-1和LAG3基因及制备CAR-T细胞的方法
CA3096500A1 (en) 2018-04-13 2019-10-17 Sangamo Therapeutics France Chimeric antigen receptor specific for interleukin-23 receptor
EP3790629A1 (en) 2018-05-11 2021-03-17 CRISPR Therapeutics AG Methods and compositions for treating cancer
US20210139607A1 (en) * 2018-05-23 2021-05-13 The Jackson Laboratory Anti-ngly-1 antibodies and methods of use
WO2019233842A1 (en) 2018-06-08 2019-12-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Peptidic linker with reduced post-translational modification
EP3806888B1 (en) 2018-06-12 2024-01-31 Obsidian Therapeutics, Inc. Pde5 derived regulatory constructs and methods of use in immunotherapy
WO2019246593A2 (en) * 2018-06-22 2019-12-26 Fred Hutchinson Cancer Research Center Compositions and methods to target cll-1 and cd123 for the treatment of acute myeloid leukemia and related disorders
US20210268028A1 (en) 2018-07-02 2021-09-02 Cellectis Chimeric antigen receptors (car)-expressing cells and combination treatment for immunotherapy of patients with relapse refractory adverse genetic risk aml
WO2020033585A1 (en) * 2018-08-07 2020-02-13 The Broad Institute, Inc. Methods for combinatorial screening and use of therapeutic targets thereof
JP2022520138A (ja) * 2018-08-28 2022-03-29 ブイオーアール バイオファーマ インコーポレーテッド 遺伝子操作された造血幹細胞およびそれらの使用
CN109503716B (zh) * 2018-10-08 2021-04-27 浙江生研生物科技有限公司 一种双特异性嵌合抗原受体分子及其在肿瘤治疗上的应用
WO2020083406A1 (zh) * 2018-10-26 2020-04-30 科济生物医药（上海）有限公司 靶向cll1的抗体及其应用
TW202039544A (zh) 2018-12-01 2020-11-01 美商艾洛基因醫療公司 靶定ｂ細胞成熟抗原之嵌合抗原受體及其使用之方法
EP3930744A1 (en) 2019-03-01 2022-01-05 Allogene Therapeutics, Inc. Dll3 targeting chimeric antigen receptors and binding agents
JP2022522654A (ja) 2019-03-01 2022-04-20 アロジーン セラピューティクス，インコーポレイテッド Ｐｄ－１外部ドメインを担持するキメラサイトカイン受容体
PE20211902A1 (es) 2019-03-01 2021-09-27 Allogene Therapeutics Inc Receptores de citocinas quimericos constitutivamente activos
EP3773918A4 (en) 2019-03-05 2022-01-05 Nkarta, Inc. CD19 DIRECTED CHIMERIC ANTIGEN RECEPTORS AND THEIR USES IN IMMUNOTHERAPY
EP3937974A1 (en) * 2019-03-11 2022-01-19 Leucid Bio Ltd Muc1 parallel car (pcar) therapeutic agents
US20200317780A1 (en) 2019-03-21 2020-10-08 Allogene Therapeutics, Inc. METHODS FOR ENHANCING TCRab+ CELL DEPLETION
CN113661180A (zh) * 2019-03-27 2021-11-16 宾夕法尼亚大学董事会 Tn-MUC1嵌合抗原受体(CAR)T细胞疗法
AU2020271123A1 (en) 2019-04-10 2021-11-25 Elevatebio Technologies, Inc. FLT3-specific chimeric antigen receptors and methods of using the same
DK3959235T3 (da) 2019-04-26 2023-10-16 Allogene Therapeutics Inc Rituximab-resistente kimære antigenreceptorer og anvendelser deraf
CA3132509A1 (en) 2019-04-26 2020-10-29 Allogene Therapeutics, Inc. Methods of manufacturing allogeneic car t cells
US20220249558A1 (en) 2019-04-30 2022-08-11 Crispr Therapeutics Ag Allogeneic cell therapy of b cell malignancies using genetically engineered t cells targeting cd19
CN114222763A (zh) * 2019-06-19 2022-03-22 尤利乌斯·马克西米利安维尔茨堡大学 在嵌合抗原受体设计中实现的超模块化IgG3间隔区结构域和多功能位点
CN112111013A (zh) * 2019-06-22 2020-12-22 南京北恒生物科技有限公司 一种靶向claudin 18.2的通用型嵌合抗原受体T细胞、构建方法及其用途
CN114829399A (zh) * 2019-07-09 2022-07-29 海默珍科医药有限责任公司 使用双特异性抗体消除患者中的造血干细胞/造血祖细胞(hsc/hp)的方法
BR112022003553A2 (pt) 2019-08-30 2022-05-24 Allogene Therapeutics Inc Receptores de citocina quiméricos compreendendo domínios de ligação a tgf beta
EP4038190A1 (en) 2019-10-03 2022-08-10 Artisan Development Labs, Inc. Crispr systems with engineered dual guide nucleic acids
EP3808766A1 (en) 2019-10-15 2021-04-21 Sangamo Therapeutics France Chimeric antigen receptor specific for interleukin-23 receptor
MX2022007833A (es) 2019-12-23 2022-09-23 Cellectis Nuevos receptores de antigenos quimericos (car) especificos de mesotelina para inmunoterapia de cancer de tumores solidos.
US20230112444A1 (en) 2020-01-16 2023-04-13 Springworks Therapeutics, Inc. Combination therapies of chimeric antigen receptors targeting b-cell maturation antigen and gamma secretase inhibitors
IL295470A (en) 2020-02-24 2022-10-01 Allogene Therapeutics Inc bcma car-t cells with enhanced activities
AU2021357520A1 (en) 2020-03-05 2022-09-29 Neotx Therapeutics Ltd. Methods and compositions for treating cancer with immune cells
IL296176A (en) * 2020-03-06 2022-11-01 Purdue Research Foundation Methods, compounds and compositions for altering car-t cell activity
MX2022011335A (es) * 2020-03-18 2022-10-07 Kindred Biosciences Inc Anticuerpos del receptor anti-interleucina 4 para uso veterinario.
JP2023523890A (ja) * 2020-03-27 2023-06-08 ボード オブ リージェンツ，ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム Ｈｓｐ７０を標的とするモノクローナル抗体およびその治療的使用
EP4146812A1 (en) 2020-05-06 2023-03-15 Cellectis S.A. Methods for targeted insertion of exogenous sequences in cellular genomes
EP4148065A1 (en) * 2020-05-08 2023-03-15 SMT Bio Co., Ltd. Chimeric antigen receptor for treatment of cancer
CN113735973B (zh) * 2020-05-28 2023-05-09 中国科学院微生物研究所 一种抗SIRPα抗体及其应用
US20230228739A1 (en) 2020-07-03 2023-07-20 Cellectis S.A. Method for determining potency of chimeric antigen receptor expressing immune cells
AU2021312871A1 (en) 2020-07-21 2023-02-09 Allogene Therapeutics, Inc. Chimeric antigen receptors with enhanced signaling and activities and uses thereof
WO2022018262A1 (en) 2020-07-24 2022-01-27 Cellectis S.A. T-cells expressing immune cell engagers in allogenic settings
KR20230065251A (ko) * 2020-08-07 2023-05-11 네오진 테라퓨틱스 비.브이. 유전적으로 조작된 t 세포를 풍부화시키기 위한 방법
CN112079927B (zh) * 2020-09-18 2021-12-28 西安桑尼赛尔生物医药有限公司 一种cd123结合蛋白、含其的car及其应用
WO2022061837A1 (en) * 2020-09-27 2022-03-31 Jiangsu Cell Tech Medical Research Institute Co., Ltd. Fibronectin extra domain b (edb) -specific car-t for cancer
CN113980134B (zh) * 2020-12-11 2022-05-31 广州百暨基因科技有限公司 抗cll1抗体及其应用
CN113234169B (zh) * 2020-12-11 2022-11-01 广州百暨基因科技有限公司 靶向cll1嵌合抗原受体及其应用
CN113248622B (zh) * 2020-12-11 2022-11-01 广州百暨基因科技有限公司 一种靶向cll1和nkg2d配体的双靶点嵌合抗原受体及其应用
US20220184124A1 (en) 2020-12-14 2022-06-16 Allogene Therapeutics, Inc. Methods and reagents for characterizing car t cells for therapies
US11883432B2 (en) 2020-12-18 2024-01-30 Century Therapeutics, Inc. Chimeric antigen receptor system with adaptable receptor specificity
WO2022140388A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 Allogene Therapeutics, Inc. Protease-activating cd45-gate car
AU2021414400A1 (en) 2020-12-31 2023-08-17 Innate Pharma Multifunctional natural killer (nk) cell engagers binding to nkp46 and cd123
CN112694532B (zh) * 2021-01-12 2023-04-18 倍而达药业（苏州）有限公司 抗Siglec-15的抗体或其抗原结合片段及应用
CN112661816B (zh) * 2021-01-13 2022-10-11 江西省人民医院 用于利妥昔单抗血药浓度检测的人工抗原及试剂盒
CA3204357A1 (en) 2021-01-28 2022-08-04 Todd LUMAN Methods for transducing immune cells
IL303853A (en) 2021-01-29 2023-08-01 Allogene Therapeutics Inc Knockdown or knockout of one or more TAP2, NLRC5, B2m, TRAC, RFX5, RFXAP, and RFXANK to reduce T cell recognition of allogeneic cell products
IL308012A (en) * 2021-04-30 2023-12-01 Cellectis Sa Anti-MUC1 for novel chimeric antigen receptors and genetically engineered immune cells for solid tumor immunotherapy
WO2022256448A2 (en) 2021-06-01 2022-12-08 Artisan Development Labs, Inc. Compositions and methods for targeting, editing, or modifying genes
WO2022266075A1 (en) 2021-06-14 2022-12-22 Caribou Biosciences, Inc. Methods and materials for treating cancer using car constructs with an intracellular domain comprising a stap domain and a kinase domain or a stap domain and a phosphatase domain
WO2022266203A1 (en) 2021-06-15 2022-12-22 Allogene Therapeutics, Inc. Selective targeting of host cd70+ alloreactive cells to prolong allogeneic car t cell persistence
CN115477705B (zh) * 2021-06-16 2024-02-23 四川大学华西医院 一种基于颗粒酶b构建的嵌合抗原受体免疫细胞制备及其应用
CN115477704B (zh) * 2021-06-16 2024-02-23 四川大学华西医院 一种基于lox1构建的嵌合抗原受体免疫细胞制备及其应用
CA3223311A1 (en) 2021-06-18 2022-12-22 Andrea BARGHETTI Compositions and methods for targeting, editing or modifying human genes
WO2023020471A1 (en) * 2021-08-16 2023-02-23 Utc Therapeutics (Shanghai) Co., Ltd. Cd123-targetting antibodies and uses thereof in cancer therapies
WO2023125289A1 (zh) * 2021-12-31 2023-07-06 上海宏成药业有限公司 抗pd-1抗体及其用途
WO2023167882A1 (en) 2022-03-01 2023-09-07 Artisan Development Labs, Inc. Composition and methods for transgene insertion
WO2023192895A1 (en) 2022-03-29 2023-10-05 Allogene Therapeutics Inc. Chimeric switch receptors for the conversion of immunesuppressive signals to costimulatory signals
WO2023201238A1 (en) 2022-04-11 2023-10-19 Vor Biopharma Inc. Binding agents and methods of use thereof
WO2024026445A1 (en) 2022-07-29 2024-02-01 Allogene Therapeutics Inc. Engineered cells with reduced gene expression to mitigate immune cell recognition
WO2024051751A1 (zh) * 2022-09-06 2024-03-14 河北森朗生物科技有限公司 抗cd123的纳米抗体、嵌合抗原受体及其应用

Family Cites Families (128)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR901228A (fr) 1943-01-16 1945-07-20 Deutsche Edelstahlwerke Ag Système d'aimant à entrefer annulaire
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
GB8611832D0 (en) 1986-05-15 1986-06-25 Holland I B Polypeptide
US4975278A (en) 1988-02-26 1990-12-04 Bristol-Myers Company Antibody-enzyme conjugates in combination with prodrugs for the delivery of cytotoxic agents to tumor cells
US5037743A (en) 1988-08-05 1991-08-06 Zymogenetics, Inc. BAR1 secretion signal
US6352694B1 (en) 1994-06-03 2002-03-05 Genetics Institute, Inc. Methods for inducing a population of T cells to proliferate using agents which recognize TCR/CD3 and ligands which stimulate an accessory molecule on the surface of the T cells
US6905680B2 (en) 1988-11-23 2005-06-14 Genetics Institute, Inc. Methods of treating HIV infected subjects
US5858358A (en) 1992-04-07 1999-01-12 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
US6534055B1 (en) 1988-11-23 2003-03-18 Genetics Institute, Inc. Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
US20040049014A1 (en) 1988-12-28 2004-03-11 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
EP0519596B1 (en) 1991-05-17 2005-02-23 Merck & Co. Inc. A method for reducing the immunogenicity of antibody variable domains
ES2206447T3 (es) 1991-06-14 2004-05-16 Genentech, Inc. Anticuerpo humanizado para heregulina.
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
ES2202310T3 (es) 1991-12-13 2004-04-01 Xoma Corporation Metodos y materiales para la preparacion de dominios variables de anticuerpos modificados y sus usos terapeuticos.
GB9203459D0 (en) 1992-02-19 1992-04-08 Scotgen Ltd Antibodies with germ-line variable regions
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
WO1994024277A1 (en) 1993-04-13 1994-10-27 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Protection of human bone marrow from high dose antifolate therapy using mutated human dihydrofolate reductase dna
US7175843B2 (en) 1994-06-03 2007-02-13 Genetics Institute, Llc Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US7067318B2 (en) 1995-06-07 2006-06-27 The Regents Of The University Of Michigan Methods for transfecting T cells
US6692964B1 (en) 1995-05-04 2004-02-17 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Methods for transfecting T cells
US6010613A (en) 1995-12-08 2000-01-04 Cyto Pulse Sciences, Inc. Method of treating materials with pulsed electrical fields
WO1997033988A1 (en) 1996-03-12 1997-09-18 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Double mutants of dihydrofolate reductase and methods of using same
US6797514B2 (en) 2000-02-24 2004-09-28 Xcyte Therapies, Inc. Simultaneous stimulation and concentration of cells
US7572631B2 (en) 2000-02-24 2009-08-11 Invitrogen Corporation Activation and expansion of T cells
US6867041B2 (en) 2000-02-24 2005-03-15 Xcyte Therapies, Inc. Simultaneous stimulation and concentration of cells
WO2001062895A2 (en) 2000-02-24 2001-08-30 Xcyte Therapies, Inc. Simultaneous stimulation and concentration of cells
US7517948B2 (en) 2000-09-13 2009-04-14 Multimmune Gmbh Hsp70 peptide stimulating natural killer (NK) cell activity and uses thereof
JP5312721B2 (ja) 2000-11-07 2013-10-09 シティ・オブ・ホープ Ｃｄ１９特異的再指向免疫細胞
CN1294148C (zh) 2001-04-11 2007-01-10 中国科学院遗传与发育生物学研究所 环状单链三特异抗体
US20090257994A1 (en) 2001-04-30 2009-10-15 City Of Hope Chimeric immunoreceptor useful in treating human cancers
US7514537B2 (en) 2001-04-30 2009-04-07 City Of Hope Chimeric immunoreceptor useful in treating human gliomas
US7446190B2 (en) 2002-05-28 2008-11-04 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Nucleic acids encoding chimeric T cell receptors
MXPA05004712A (es) 2002-11-07 2005-11-23 Immunogen Inc Anticuerpos anti-cd33 y metodo para tratamiento de leucemia mieloide aguda utilizando los mismos.
DE60332957D1 (de) * 2002-12-16 2010-07-22 Genentech Inc Immunoglobulinvarianten und deren verwendungen
JP4753119B2 (ja) 2003-03-14 2011-08-24 セレクティス ソシエテ アノニム 大量処理の生体外エレクトロポレーション法
CA2526284C (en) * 2003-06-25 2014-11-18 Crucell Holland B.V. Binding molecules for the treatment of myeloid cell malignancies
JP5026072B2 (ja) 2003-07-01 2012-09-12 イミューノメディクス、インコーポレイテッド 二重特異性抗体の多価キャリヤー
EP2272566A3 (en) 2003-08-18 2013-01-02 MedImmune, LLC Humanisation of antibodies
EP1660534A2 (en) 2003-08-22 2006-05-31 MedImmune, Inc. Humanization of antibodies
US20130266551A1 (en) 2003-11-05 2013-10-10 St. Jude Children's Research Hospital, Inc. Chimeric receptors with 4-1bb stimulatory signaling domain
US7435596B2 (en) 2004-11-04 2008-10-14 St. Jude Children's Research Hospital, Inc. Modified cell line and method for expansion of NK cell
EP1706423B8 (en) 2003-12-05 2009-07-08 multimmune GmbH Therapeutic and diagnostic anti-hsp 70 antibodies
SI1716178T1 (sl) * 2004-02-16 2010-11-30 Micromet Ag Manj imunogene vezne molekule
JP2008512352A (ja) 2004-07-17 2008-04-24 イムクローン システムズ インコーポレイティド 新規な四価の二重特異性抗体
GB0505971D0 (en) 2005-03-23 2005-04-27 Isis Innovation Delivery of molecules to a lipid bilayer
RU2515108C2 (ru) 2005-08-19 2014-05-10 Эббви Инк Иммуноглобулин с двойными вариабельными доменами и его применения
JP2009508517A (ja) * 2005-09-22 2009-03-05 コーエン，イルン，アール Ｔ細胞受容体定常ドメインの免疫原性断片及びそれに由来するペプチド
AU2008217579A1 (en) 2007-02-20 2008-08-28 Oxford Nanopore Technologies Limited Formation of lipid bilayers
AU2008233051B2 (en) 2007-03-30 2014-04-10 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Constitutive expression of costimulatory ligands on adoptively transferred T lymphocytes
WO2009051974A1 (en) * 2007-10-17 2009-04-23 Nuvelo, Inc. Antibodes to cll-1
EP2072527A1 (en) * 2007-12-21 2009-06-24 Altonabiotec AG Fusion polypeptides comprising a SHBG dimerization component and uses thereof
WO2009091826A2 (en) 2008-01-14 2009-07-23 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Compositions and methods related to a human cd19-specific chimeric antigen receptor (h-car)
US8822647B2 (en) 2008-08-26 2014-09-02 City Of Hope Method and compositions using a chimeric antigen receptor for enhanced anti-tumor effector functioning of T cells
DE102009045006A1 (de) 2009-09-25 2011-04-14 Technische Universität Dresden Anti-CD33 Antikörper und ihre Anwendung zum Immunotargeting bei der Behandlung von CD33-assoziierten Erkrankungen
US8956828B2 (en) * 2009-11-10 2015-02-17 Sangamo Biosciences, Inc. Targeted disruption of T cell receptor genes using engineered zinc finger protein nucleases
EP2332994A1 (en) 2009-12-09 2011-06-15 Friedrich-Alexander-Universität Erlangen-Nürnberg Trispecific therapeutics against acute myeloid leukaemia
WO2011082400A2 (en) * 2010-01-04 2011-07-07 President And Fellows Of Harvard College Modulators of immunoinhibitory receptor pd-1, and methods of use thereof
ES2656414T3 (es) 2010-09-08 2018-02-27 Chemotherapeutisches Forschungsinstitut Georg-Speyer-Haus Receptores de antígenos quiméricos con una región bisagra optimizada
EP2614151B1 (en) 2010-09-08 2019-07-24 Chemotherapeutisches Forschungsinstitut Georg-Speyer-Haus Interleukin 15 as selectable marker for gene transfer in lymphocytes
WO2012050374A2 (en) 2010-10-13 2012-04-19 Innocell, Inc. Immunotherapy for solid tumors
SG189482A1 (en) 2010-10-27 2013-05-31 Cellectis Method for increasing the efficiency of double-strand break-induced mutagenesis
TW201708251A (zh) * 2010-10-27 2017-03-01 巴克斯歐塔公司 用於免疫耐受誘導及免疫診斷之ｆｖｉｉｉ胜肽
KR102062407B1 (ko) 2010-12-09 2020-01-03 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실바니아 암을 치료하기 위한 키메릭 항원 수용체 변형 t 세포의 용도
SG192010A1 (en) 2011-01-18 2013-08-30 Univ Pennsylvania Compositions and methods for treating cancer
CA2826942C (en) 2011-02-11 2021-08-03 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Hla-restricted, peptide-specific antigen binding proteins
US8968539B2 (en) 2011-03-08 2015-03-03 Electronic Biosciences, Inc. Methods for voltage-induced protein incorporation into planar lipid bilayers
BR112013024395B1 (pt) * 2011-03-23 2021-10-26 Fred Hutchinson Cancer Research Center Composições adotivas de imunoterapia celular e método para fabricação da dita composição
US9181308B2 (en) 2011-03-28 2015-11-10 St. Jude Children's Research Hospital Methods and compositions employing immunogenic fusion proteins
US20140115726A1 (en) 2011-04-05 2014-04-24 Cellectis New tale-protein scaffolds and uses thereof
EP2694549B1 (en) 2011-04-08 2018-08-15 The United States of America, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services Anti-epidermal growth factor receptor variant iii chimeric antigen receptors and use of same for the treatment of cancer
US9285592B2 (en) 2011-08-18 2016-03-15 Google Inc. Wearable device with input and output structures
WO2013040557A2 (en) 2011-09-16 2013-03-21 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Rna engineered t cells for the treatment of cancer
EP2765193B1 (en) 2011-10-07 2017-08-09 Mie University Chimeric antigen receptor
EP2766382B1 (en) * 2011-10-10 2020-05-06 City of Hope Meditopes and meditope-binding antibodies and uses thereof
CA2851795C (en) 2011-10-20 2018-11-13 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Anti-cd22 chimeric antigen receptors
ES2861435T3 (es) 2011-11-03 2021-10-06 Univ Pennsylvania Composiciones específicas de B7-H4 aisladas y métodos de uso de las mismas
WO2013070468A1 (en) 2011-11-08 2013-05-16 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Glypican-3-specific antibody and uses thereof
MX357655B (es) * 2011-11-15 2018-07-18 Walter & Eliza Hall Inst Medical Res Mediador soluble.
US10391126B2 (en) 2011-11-18 2019-08-27 Board Of Regents, The University Of Texas System CAR+ T cells genetically modified to eliminate expression of T-cell receptor and/or HLA
ES2774160T3 (es) 2012-02-13 2020-07-17 Seattle Childrens Hospital D/B/A Seattle Childrens Res Institute Receptores de antígenos quiméricos biespecíficos y usos terapéuticos de los mismos
JP2015509716A (ja) 2012-02-22 2015-04-02 ザ トラスティーズ オブ ザ ユニバーシティ オブ ペンシルバニア 第二世代キメラ抗原受容体におけるｃｄ２シグナル伝達ドメインの使用
WO2013126726A1 (en) 2012-02-22 2013-08-29 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Double transgenic t cells comprising a car and a tcr and their methods of use
WO2013126733A1 (en) 2012-02-22 2013-08-29 The Trustees Of University Of Pennsylvania Use of icos-based cars to enhance antitumor activity and car persistence
CN104159909A (zh) * 2012-02-22 2014-11-19 宾夕法尼亚大学董事会 产生用于癌症治疗的t细胞持续性群体的组合物和方法
CA2869562C (en) * 2012-04-11 2023-09-12 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Chimeric antigen receptors targeting b-cell maturation antigen
GB201206559D0 (en) 2012-04-13 2012-05-30 Ucl Business Plc Polypeptide
US9163090B2 (en) * 2012-05-07 2015-10-20 Cellerant Therapeutics, Inc. Antibodies specific for CLL-1
US20130309223A1 (en) 2012-05-18 2013-11-21 Seattle Genetics, Inc. CD33 Antibodies And Use Of Same To Treat Cancer
EP3964567A1 (en) 2012-05-25 2022-03-09 Cellectis Methods for engineering allogeneic and immunosuppressive resistant t cell for immunotherapy
US20150017136A1 (en) 2013-07-15 2015-01-15 Cellectis Methods for engineering allogeneic and highly active t cell for immunotherapy
CN103483452B (zh) * 2012-06-12 2021-08-13 上海细胞治疗集团有限公司 双信号独立的嵌合抗原受体及其用途
US20150140019A1 (en) 2012-07-13 2015-05-21 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and Methods for Regulating CAR T Cells
MX2015000426A (es) 2012-07-13 2015-07-14 Univ Pennsylvania Incremento de actividad de celulas t car mediante cointroduccion de un anticuerpo biespecifico.
AU2013312838B2 (en) * 2012-09-04 2018-11-29 Cellectis Multi-chain chimeric antigen receptor and uses thereof
AU2013204922B2 (en) 2012-12-20 2015-05-14 Celgene Corporation Chimeric antigen receptors
US9573988B2 (en) * 2013-02-20 2017-02-21 Novartis Ag Effective targeting of primary human leukemia using anti-CD123 chimeric antigen receptor engineered T cells
AU2014236726A1 (en) 2013-03-14 2015-09-17 Bellicum Pharmaceuticals, Inc. Methods for controlling T cell proliferation
US9657105B2 (en) 2013-03-15 2017-05-23 City Of Hope CD123-specific chimeric antigen receptor redirected T cells and methods of their use
EP2970426B1 (en) 2013-03-15 2019-08-28 Michael C. Milone Targeting cytotoxic cells with chimeric receptors for adoptive immunotherapy
AU2014240083C1 (en) 2013-03-15 2019-10-24 Celgene Corporation Modified T lymphocytes
TWI654206B (zh) 2013-03-16 2019-03-21 諾華公司 使用人類化抗－ｃｄ１９嵌合抗原受體治療癌症
KR102248157B1 (ko) 2013-05-13 2021-05-03 셀렉티스 Ｃｄ19 특이적 키메라 항원 수용체 및 이의 용도
MX2015015638A (es) 2013-05-13 2016-10-28 Cellectis Metodos para diseñar celulas t altamente activas para inmunoterapia.
US9890393B2 (en) * 2013-05-29 2018-02-13 Cellectis Methods for engineering T cells for immunotherapy by using RNA-guided CAS nuclease system
ES2883131T3 (es) 2013-05-29 2021-12-07 Cellectis Métodos para la modificación de células T para inmunoterapia utilizando el sistema de nucleasa CAS guiado por ARN
EA035475B1 (ru) * 2013-06-10 2020-06-23 Дана-Фарбер Кэнсер Инститьют, Инк. Способы и композиции для снижения иммуносупрессии опухолевыми клетками
GB201317929D0 (en) 2013-10-10 2013-11-27 Ucl Business Plc Chimeric antigen receptor
RU2717984C2 (ru) 2013-11-21 2020-03-27 ЮСиЭл БИЗНЕС ЛТД Клетка
WO2015075195A1 (en) 2013-11-22 2015-05-28 Cellectis Method of engineering chemotherapy drug resistant t-cells for immunotherapy
MY178233A (en) * 2013-12-20 2020-10-07 Hutchinson Fred Cancer Res Tagged chimeric effector molecules and receptors thereof
AU2014368383B2 (en) 2013-12-20 2020-01-16 Cellectis Method of engineering multi-input signal sensitive T cell for immunotherapy
PT3105317T (pt) 2014-02-14 2019-02-27 Cellectis Células para imunoterapia manipuladas para atuar sobre antigénios presentes tanto em células imunitárias como em células patológicas
EP3104866A4 (en) 2014-02-14 2017-08-02 Bellicum Pharmaceuticals, Inc. Methods for activating t cells using an inducible chimeric polypeptide
KR102228828B1 (ko) 2014-03-11 2021-03-16 셀렉티스 동종이형 이식에 양립성인 t-세포들을 만들어내는 방법
EP3593812A3 (en) 2014-03-15 2020-05-27 Novartis AG Treatment of cancer using chimeric antigen receptor
TR201910814T4 (tr) * 2014-03-19 2019-08-21 Cellectis Kanser immünoterapisi için cd123 spesifik kimerik antijen reseptörleri.
AU2015248956B2 (en) * 2014-04-14 2020-06-25 Cellectis BCMA (CD269) specific chimeric antigen receptors for cancer immunotherapy
CN106687483B (zh) 2014-07-21 2020-12-04 诺华股份有限公司 使用人源化抗-bcma嵌合抗原受体治疗癌症
TWI718992B (zh) * 2014-07-21 2021-02-21 瑞士商諾華公司 使用cll-1嵌合抗原受體治療癌症
EP2990416B1 (en) * 2014-08-29 2018-06-20 GEMoaB Monoclonals GmbH Universal chimeric antigen receptor expressing immune cells for targeting of diverse multiple antigens and method of manufacturing the same and use of the same for treatment of cancer, infections and autoimmune disorders
CA2969704C (en) 2014-12-05 2023-05-02 City Of Hope Cs1 targeted chimeric antigen receptor-modified t cells
PE20171653A1 (es) 2015-04-13 2017-11-13 Pfizer Receptores del antigeno quimerico dirigidos al antigeno de maduracion de celulas b
US9668192B2 (en) 2015-10-12 2017-05-30 Telefonaktiebolaget Lm Ericsson (Publ) Cell boundary crossing in a unidirectional SFN for high speed trains

Also Published As

Publication number Publication date
AU2016212162A1 (en) 2017-07-13
CN113968914A (zh) 2022-01-25
EP3250607A1 (en) 2017-12-06
WO2016120218A1 (en) 2016-08-04
EP3250602A1 (en) 2017-12-06
RU2017129592A3 (ko) 2019-07-17
IL252937B (en) 2021-09-30
KR20170135822A (ko) 2017-12-08
AU2016212158A1 (en) 2017-07-13
RU2017129455A3 (ko) 2019-08-15
RU2017129591A3 (ko) 2019-08-05
WO2016120220A1 (en) 2016-08-04
KR20170135824A (ko) 2017-12-08
IL253049B (en) 2022-01-01
ES2842212T3 (es) 2021-07-13
CN113968915A (zh) 2022-01-25
AU2016212160A1 (en) 2017-07-13
RU2017129592A (ru) 2019-02-28
RU2017129591A (ru) 2019-03-04
AU2016212159A1 (en) 2017-07-13
US11014989B2 (en) 2021-05-25
CN107438618A (zh) 2017-12-05
CA2973525A1 (en) 2016-08-04
CA2973525C (en) 2021-12-14
AU2016212160B2 (en) 2021-04-15
JP2018504144A (ja) 2018-02-15
MX2017009349A (es) 2017-09-26
US20180000914A1 (en) 2018-01-04
WO2016120216A1 (en) 2016-08-04
RU2017129455A (ru) 2019-03-04
EP3250604A1 (en) 2017-12-06
IL253049A0 (en) 2017-08-31
IL253012A0 (en) 2017-08-31
DK3250606T3 (da) 2021-01-04
CA2973642A1 (en) 2016-08-04
MX2017009182A (es) 2018-04-20
BR112017015453A2 (pt) 2018-01-23
JP2018504143A (ja) 2018-02-15
WO2016120219A1 (en) 2016-08-04
US20180002435A1 (en) 2018-01-04
MX2017009181A (es) 2017-11-22
JP6884709B2 (ja) 2021-06-09
WO2016120217A1 (en) 2016-08-04
JP2018504458A (ja) 2018-02-15
IL252937A0 (en) 2017-08-31
DK3250604T3 (da) 2021-07-12
JP2018504145A (ja) 2018-02-15
CA2973532A1 (en) 2016-08-04
KR20170134331A (ko) 2017-12-06
CN107406516A (zh) 2017-11-28
US20180009895A1 (en) 2018-01-11
EP3250606B1 (en) 2020-11-25
US20180051089A1 (en) 2018-02-22
AU2016212158B2 (en) 2021-06-03
CA2973529A1 (en) 2016-08-04
CA2973524A1 (en) 2016-08-04
EP3250606A1 (en) 2017-12-06
ES2869972T3 (es) 2021-10-26
EP3250604B1 (en) 2021-04-21
US20180002427A1 (en) 2018-01-04
CN107531801B (zh) 2021-11-12
RU2732925C2 (ru) 2020-09-24
BR112017014547A2 (pt) 2018-01-16
JP2018504459A (ja) 2018-02-15
CN107406516B (zh) 2021-11-23
AU2016212161A1 (en) 2017-07-13
RU2731543C2 (ru) 2020-09-04
BR112017013981A2 (pt) 2018-01-02
CN107531801A (zh) 2018-01-02
JP6779909B2 (ja) 2020-11-04
EP3250605A1 (en) 2017-12-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102329836B1 (ko) 암 면역치료를 위한 항-CLL1 특이적 단일-체인 키메라 항원 수용체들(scCARS)
US11498971B2 (en) BCMA (CD269) specific chimeric antigen receptors for cancer immunotherapy
US11919961B2 (en) CD123 specific chimeric antigen receptors for cancer immunotherapy

Legal Events

Date Code Title Description
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant