JPH10501519A - インシュリンを肺に送給できる方法および組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 哺乳類宿主へのインシュリンの全身送給は、インシュリンの乾燥粉末の吸入によって遂行される。乾燥インシュリン粉末は肺胞領域から速やかに吸収されることが確認されている。

Description

【発明の詳細な説明】 インシュリンを肺に送給できる方法および組成物 本出願は、１９９４年３月７日に提出した特許出願第０８／２０７，４７２号 の一部継続出願であり、その開示全体を参照により本明細書に組み込む。 発明の背景 １．発明の分野 本発明は一般には糖尿病患者にインシュリンを呼吸送給する方法および組成物 に関する。さらに詳細には、本発明は肺を通して速やかに全身吸収するための乾 燥粉末インシュリン製剤の肺送給に関する。 インシュリンは、健常者（非糖尿病患者）の膵β細胞で産生される分子量約６ ，０００、アミノ酸５０個のポリペプチド・ホルモンである。インシュリンは血 糖値を降下させることにより炭水化物代謝を調節するのに必要であり、全身性欠 乏によって糖尿病が起こる。糖尿病患者の生存率は、許容血糖値を維持するため の頻繁かつ長期のインシュリン投与に左右される。 インシュリンは皮下注射により、通常は腹部または上大腿に最も一般的に投与 される。許容できる血糖値を維持するためには、多くの場合、インシュリンを１ 日に少なくとも１回または２回注射することが必要であり、必要に応じて即効性 インシュリンを補足注射する。患者が在宅診断用キットを使用して血糖値を厳密 に監視する場合、さらに頻繁な注射が糖尿病の積極的治療に必要なことさえある 。本発明は特に、１時間以内に血清インシュリン・ピークが得られ、９０分以内 に血糖最低値が得られる即効性インシュリンの投与に関する。 注射によるインシュリン投与は、幾つかの点で望ましくない。第１に、多くの 患者が許容血糖値を維持するのに必要なほど頻繁に自己注射することは難しく厄 介だと感じる。このように気が進まないと服薬基準を守らなくなり、最も深刻な 場合は生命を脅かす可能性もある。さらに、皮下注射によるインシュリンの全身 吸収は比較的緩慢であり、即効性インシュリン製剤を使用した時でさえ、４５〜 ９０分を要する場合が多い。したがって、自己注射の必要性をなくし、インシュ リンが速やかに全身で利用できるようにすることのできる代替インシュリン製剤 および投与経路を提供することが長年の目標であった。 鼻腔内、直腸内、膣内を含め、様々なこのような代替インシュリン投与経路が 提案されてきた。 これらの技法を使用すれば皮下注射に伴う苦痛および遵守の不徹底を避けられ るが、各々独自の欠点がある。直腸内および膣内は不便であり、不快であり、し かも後者は糖尿病患者全員が利用できるわけではない。鼻腔内送給であれば便利 であり、たぶん注射ほど不快ではないであろうが、高分子の通過し難い厚い上皮 層を特徴とする鼻粘膜を横切ってインシュリンを通過させるために潜在的に有毒 な「透過増進物質」の使用が必要である。本発明に特に関係があるのは、患者が インシュリン製剤を吸入すると肺胞領域の薄い上皮細胞層を通して全身吸収が起 こる肺インシュリン送給である。このような肺インシュリン送給を使用すれば、 皮下注射より速やかな全身利用性が得られ、針の使用が避けられる。しかし、肺 インシュリン送給は未だ広く受け入れられていない。これまで、肺送給は液体イ ンシュリン製剤の噴霧化によって遂行されることが最も多く、厄介な液体ネブラ イザの使用が必要であった。さらに、このようなネブライザで形成されたエーロ ゾルのインシュリン濃度は非常に低く、十分な投与量を得るためには多数回の吸 入が必要である。適切な水溶液中でのインシュリンの溶解度が低いため、インシ ュリン濃度が制限される。場合によっては、十分な投与量を達成するために８０ 回以上もの呼吸を必要とし、投与時間が１０〜２０分、あるいはそれ以上になる こともある。 肺インシュリン送給のための改良された方法および組成物を提供することが望 まれる。このような方法および組成物が、家庭から離れていても自己投与が可能 なほど便利であり、比較的少ない呼吸回数で、好ましくは１０回未満で、希望す る総投与量を送給することができれば、特に望ましい。このような方法および組 成物はまた、インシュリンの速やかな全身吸収をも行えねばならず、４５分以内 に血清ピークに達し、約１時間以内に糖最低値になることが好ましい。このよう な即効性製剤は、好ましくは間欠的で持効性のインシュリン注射を減少または排 除することができる、積極的治療プロトコルにおける使用に適する。本発明の組 成物はまた、適切な安定したものでなければならず、濃縮乾燥粉末製剤から成る ことが好ましい。 ２．背景技術の説明 エーロゾル化したインシュリン水溶液の呼吸性送給については、Ｇａｎｓｓｌ ｅｎ，Ｋｌｉｎ．Ｗｏｃｈｅｎｓｃｈｒ．４：７１（１９２５年）に始まり、Ｌ ａｕｂｅ ｅｔ ａｌ．，ＪＡＭＡ ２６９：２１０６−２１−９（１９９３年 ）、Ｅｌｌｉｏｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ａｕｓｔ．Ｐａｅｄｉａｔｒ．Ｊ．２３： ２９３−２９７（１９８７年）、Ｗｉｇｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅ ｓ２０：５５２−５５６（１９７１年）、Ｃｏｒｔｈｏｒｐｅ ｅｔ ａｌ．， Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ ９：７６４−７６８（１９９２年）、Ｇｏｖｉｎｄａ，Ｉ ｎｄｉａｎ Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３：１６１−１６７（ １９５９年）、Ｈａｓｔｉｎｇｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｈｙｓｉｏ ｌ．７３：１３１０−１３１６（１９９２年）、Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，ＪＡＭ Ａ２６９：２１０６−２１０９（１９９３年）、Ｎａｇａｎｏ ｅｔ ａｌ．， Ｊｉｋｅｉｋａｉ Ｍｅｄ．Ｊ．３２：５０３−５０６（１９８５年）、Ｓａｋ ｒ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒ．８６：１−７（１９９２年）、およびＹｏｓｈｉｄ ａ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｒｅｓ．３５：１６０−１６６（１９８７年）を 含め、幾つかの参考文献に記述されている。大きな粒子担体媒体中の、インシュ リンなどの乾燥粉末薬の肺送給については、米国特許第５，２５４，３３０号に 記述されている。噴射剤中に浮遊させた結晶性インシュリンを送給するための携 帯用定量噴霧式吸入器（ＭＤＩ）については、Ｌｅｅ ａｎｄ Ｓｃｉａｒａ， Ｊ．Ｐｈａｍ．Ｓｃｉ．６５：５６７−５７２（１９７６年）に記述されている 。吸入流量を調節するためにインシュリンをスペーサに送給するためのＭＤＩに ついては、米国特許第５，３２０，０９４号に記述されている。組換えインシュ リンの ｌ．，Ａｔｅｍｗ．Ｌｕｎｇｅｎｋｒｋｈ．１３：２３０−２３２（１９８７年 ） に簡潔に記述されている。増進物質の存在下における、インシュリンを始めとす る様々なポリペプチド類の、鼻腔内送給および呼吸性送給については、米国特許 第５，０１１，６７８号およびＮｇａｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｏｎｔｒ．Ｒｅ ｌ．１：１５−２２（１９８４年）に記述されている。増進物質の存在下での、 または放出調節製剤に含まれる、あるいはその両者の、インシュリンの鼻腔内送 給については、米国特許第５，２０４，１０８号、第４，２９４，８２９号、お よび第４，１５３，６８９号、ＰＣＴ出願ＷＯ／９３／０２７１２号、ＷＯ９１ ／０２５４５号、ＷＯ９０／０９７８０号、およびＷＯ８８／０４５５６号、英 ａｎ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．４７：２３３−２３８（１９８８年）に記述さ れている。アモルファスインシュリンの調製および安定性は、１９９３年１１月 １４〜１８日の、フロリダ州Ｌａｋｅ Ｂｕｅｎａ ＶｉｓｔａにおけるＡｍｅ ｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（アメリカ製薬科学協会、ＡＡＰＳ）でＲｉｇｓｂｅｅとＰｉ ｋａｌが発表している。薬剤を安定化するアモルファス構造を形成する担体中の ポリペプチド、ポリヌクレオチドおよび他の不安定な薬剤をスプレイ乾燥する方 法は、欧州特許出願第５２０７４８号に記述されている。 発明の概要 本発明によれば、哺乳類宿主、特に糖尿病に罹患している患者にインシュリン をエーロゾル化し全身送給するための方法および組成物は、皮下注射なしで、血 液循環への速やかな吸収を提供する。特に、本発明の方法は乾燥粉末状のインシ ュリンの肺送給を利用する。意外なことに、吸入された乾燥インシュリン粉末は 肺胞領域に付着し、肺胞領域の上皮細胞を通って血液循環に速やかに吸収される ことが判明した。したがって、インシュリン粉末の肺送給は皮下注射の有効な代 替投与になり得る。 本発明の最初の態様では、インシュリンは必ずではないが、通常は実質的にア モルファス状態の乾燥粉末として提供し、空気または他の生理学的に許容できる 気流に分散させて、エーロゾルを形成する。エーロゾルはマウスピースを備えた チャンバで捕捉され、その後にそれを患者が吸入する。以下にさらに詳細に記述 する通り、乾燥粉末インシュリンは、製薬上許容できる乾燥粉末担体と任意に組 み合わせられる。インシュリン粉末は好ましくは直径１０μｍ未満、さらに好ま しくは７．５μｍ未満、最も好ましくは５μｍ未満、通常は０．１〜０．５μｍ の範囲の粒子を含む。意外なことに、本発明の乾燥粉末インシュリン組成物は、 鼻粘膜や上気道による吸収に必要とされるような透過増進物質を使用しなくても 肺で吸収されることが判明した。 第２の態様では、本発明は本質的に、製薬上の担体と組み合わせることが可能 な平均粒子サイズ１０μｍ以下の乾燥粉末インシュリンから成るインシュリン組 成物を提供する。インシュリン組成物は好ましくは透過増進物質を含まず、直径 １０μｍ未満、好ましくは７．５μｍ未満であり、最も好ましくは５μｍ未満、 通常は０．１〜０．５μｍの範囲の粒子を含む。通常、インシュリン乾燥粉末は 組成物中に５〜９９重量％のインシュリンを含み、後でより詳細に述べる通り、 さらに通常は炭水化物、有機塩、アミノ酸、ペプチド、あるいは蛋白など、適切 な製薬上の担体中に１５〜８０％を含む。 本発明の第３の態様では、水性緩衝液にインシュリンを溶解して溶液を作成し 、溶液をスプレイ乾燥して、粒子サイズ１０μｍ未満、好ましくは７．５μｍ未 満最も好ましくは５μｍ未満で、通常は０．１〜０．５μｍの範囲の実質的にア モルファスの粒子を作成することにより、インシュリン乾燥粉末を調製する。任 意に、製薬上の担体も緩衝液に溶解して均質な溶液を作成し、溶液をスプレイ乾 燥すると、インシュリン、担体緩衝液、および溶液中に存在する他の任意の成分 を含む個々の粒子が形成される。担体は、スプレイ乾燥の際に実質的にアモルフ ァスの構造を形成する炭水化物、有機塩、アミノ酸、ペプチド、あるいは蛋白と することが好ましい。アモルファス担体はガラス質でもゴム質でもよく、保存中 のインシュリンの安定性を高める。都合のよいことに、このような安定化した製 剤はまた、肺胞領域に吸入されたときに、インシュリンを効果的に血流に送給す ることができる。 本発明の性質および長所の更なる理解は、本明細書の以下の部分および図面の 参照によって明らかになるであろう。 図面の簡単な説明 第１図は、本発明の方法に従って１回量のインシュリンをエーロゾル化するシ ステムの略図である。 第２図は、第１図のシステムからエーロゾル化されたインシュリンを吸入する 患者の略図である。 第３Ａ図および第３Ｂ図は、ラットにおける組換えヒト・インシュリンの吸収 および異なる３種類の乾燥粉末製剤のエーロゾル化後に生じる糖反応を表すグラ フである。各ポイントは、異なるラット３匹の平均値を表す。時間０に、乾燥粉 末エーロゾル発生装置をオンにした。５分、１４分および２０分に、それぞれ８ ７％インシュリン／クエン酸塩、２０％インシュリン−マンニトール／クエン酸 塩および２０％インシュリン−ラフィノース／クエン酸塩のエーロゾル化を完了 した。動物を一晩絶食させた。 第４Ａ図および第４Ｂ図は、カニクイザルでそれぞれエーロゾル投与と皮下投 与を比較する平均血清時間−濃度インシュリンおよび平均血清時間−濃度グルコ ースの概要を表すグラフである。エーロゾル群の場合、サル３匹の平均値を報告 し、皮下投与の場合、サル４匹の平均値を報告した。 第５Ａ図は、ヒトにおける皮下注射（○）と３パフの吸入（●）の、時間に対 する平均インシュリン濃度を表すグラフである。 第５Ｂ図は、第５Ａ図のインシュリン濃度に対応する平均グルコース濃度を表 すグラフである。 第６Ａ図は、ヒトにおける皮下注射（○）と３パフのエーロゾル投与（●）の 結果としての、時間に対する血清インシュリン濃度を表すグラフである。 第６Ｂ図は、第６Ａ図のインシュリン濃度に対応する血清グルコース濃度を表 すグラウである。 第７Ａ図および第７Ｂ図は、皮下注射（○）とエーロゾル投与（●）の、血清 インシュリン濃度（７Ａ）とグルコース濃度（７Ｂ）の被験体間の変動性の比較 を提供するグラフである。 第８Ａ図、第８Ｂ図，および第８Ｃ図はヒト・インシュリンのｒｐＨＰＬＣク ロマトグラムを示す図である。第８Ａ図は２５℃の１０ｍＭ ＨＣｌ中でストレ スを加えたインシュリン標準のクロマトグラフであって、２３．８７分で溶出す るヒト・インシュリンおよび３０．４７分で溶出する脱アミドインシュリンを示 す。第８Ｂ図はヒト・インシュリン標準の類似のクロマトグラムを示す図である 。第８Ｃ図は、溶解した、本発明に従って調製したスプレイ乾燥インシュリン製 剤の類似のクロマトグラムを示す図である。 第９図は、スプレイ乾燥前とスプレイ乾燥後のインシュリン製剤の紫外スペク トルを示す図である。可視スペクトルで光の散乱は何もみられず、スプレイ乾燥 過程でインシュリンが凝集しないことを示した。 特定の実施形態の詳細な説明 本発明によれば、インシュリンは乾燥粉末として提供される。「乾燥粉末」と は、粉末の水分含有量が約１０重量％以下であることを意味し、通常は約５重量 ％以下、好ましくは約３重量％以下である。「粉末」とは、インシュリンが、肺 胞に透過できるように選択されたサイズの自由に流動する粒子を含むことを意味 し、好ましくは直径１０μｍ未満、より好ましくは７．５μｍ未満、最も好まし くは５μｍ未満、通常は直径０．１〜５μｍの範囲である。 本発明は少なくとも部分的に宿主の肺を通って容易にかつ速やかに吸収される ことに基づいたものである。インシュリン粒子のような水溶性薬物は吸湿性であ ることがわかっているため、乾燥粉末インシュリンが肺胞領域に到達することが できることは意外であった。例えば、Ｂｙｒｏｎ編、Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ（１ ９９０年）、ｐ．１５０を参照されたい。このように、粒子は肺の気道（３７℃ で相対湿度が９９％を超える）を通過するため、個々の粒子が水分を吸収し、本 発明の上限である１０μｍより大きい有効粒子サイズになる傾向があるだろうと 予測された。インシュリン粒子の大部分が目標サイズ範囲より大きければ、粒子 は肺胞領域よりむしろ肺の中心気道内に付着することになり、したがって送給お よびその後の全身吸収を制限することになる。さらに、肺の上皮細胞上の流動層 は非常に薄く、通常は送給されるインシュリン粉末の直径の何分の１かである。 したがって、乾燥インシュリン粒子が肺胞領域内に付着したときに溶解するかど うかを、本発明以前に予測することはできなかった。意外なことに、乾燥インシ ュリン粉末は、肺胞領域内に付着すると、その後は肺胞領域に透過することも溶 解することも明らかに可能である。溶解したインシュリンは、上皮細胞を横切っ て循環内に入ることができる。 現在、有効なインシュリン吸収は、肺胞内張りの極薄の（０．１μｍ未満）流 動層における速やかな溶解に起因すると考えられている。したがって、本発明の 粒子の平均粒子直径は肺流動層より１０〜５０倍大きいため、速やかに粒子が溶 解し、インシュリンが全身的に吸収されることは予想外である。それどころか、 下記の実験の部に示す通り、本発明の乾燥インシュリン製剤は、現在、最も一般 的な投与形式である皮下注射によって与えられるよりも速やかな血清インシュリ ン・ピークおよびグルコース最低値を提供することさえできる。しかし、本明細 書に記述されている本発明を実施するのに、正確なメカニズムの理解は必要では ない。 本発明による好ましい組成物は透過増進物質を実質的に含まない。「透過増進 物質」とは、粘膜または面被覆層を通ってインシュリン（または他の薬物）の透 過を促進する表面活性化合物であり、鼻腔内薬物製剤、直腸内薬物製剤、および 膣内薬物製剤における使用について提案されている。例示的な透過増進物質とし ては、タウロコール酸塩、グリココール酸塩、デオキシコール酸塩などの胆汁塩 、タウロデヒドロフシジン酸塩などのフシジン酸塩、Tweens、Laureth-9などの 生体適合洗剤などがある。しかし、肺用製剤に透過増進物質を使用すると、この ような表面活性化合物により肺の上皮血液関門が有害作用を受ける可能性がある ため、一般に好ましくない。意外なことに、本発明の乾燥粉末インシュリン組成 物は透過増進物質を使用する必要なしに肺で容易に吸収されることが判明した。 本発明で使用するのに適するインシュリン乾燥粉末としては、アモルファスイ ンシュリン、結晶性インシュリン、およびアモルファスインシュリンと結晶性イ ンシュリンの混合物などがある。乾燥粉末インシュリンは、実質的に粒子サイズ が上述の範囲内のアモルファス粉末になる条件で、スプレイ乾燥によって調製す ることが好ましい。その代わりに、アモルファス構造を形成する条件で、適当な インシュリン溶液を凍結乾燥、真空乾燥、あるいは蒸発乾燥することによりアモ ルファスインシュリンを調製することも可能であろう。このようにして形成した アモルファスインシュリンを粉砕または摩砕して望ましいサイズ範囲内の粒子を 形成することができる。結晶性乾燥粉末インシュリンは、原薬結晶性インシュリ ンを粉砕またはジェット摩砕することによって形成することができる。望ましい サイズ範囲の粒子を含むインシュリン粉末を形成する方法はスプレイ乾燥であり 、純粋な場合、（通常は結晶型の）原薬インシュリンを生理的に許容できる水性 緩衝液、一般にはｐＨが約２〜９の範囲のクエン酸緩衝液に先ず溶解する。イン シュリンは、０．０１重量％から１重量％、通常は０．１〜０．２％の濃度に溶 解する。Ｂｕｃｈｉ，Ｎｉｒｏなど、従来式の市販のスプレイ乾燥装置で溶液を スプレイ乾燥すると、実質的にアモルファスの粒状生成が得られる。 乾燥インシュリン粉末は、本質的に必要なサイズの範囲のインシュリン粒子か ら成り、他の生物学的に活性な成分、製薬上の担体などを実質的に含まないこと が可能である。このような「純粋な」製剤は、少量、一般には１０重量％、通常 は５重量％以下、存在する保存料など、重要でない成分を含んでもよい。このよ うな純粋な製剤を使用すると、高用量の場合でさえ、必要な吸入回数を実質的に 減少させることができ、多くの場合、ただ１回の呼吸に減少させることができる 。 本発明のインシュリン粉末は、呼吸性投与および肺投与に適した製薬上の担体 または賦形剤と任意に組み合わせることが可能である。患者に送給しようとする 粉末中のインシュリン濃度を低下させたいとき、このような担体は単に賦形剤の 役割をすることもあるが、インシュリン組成物の安定性を高め、より能率的で再 現性のあるインシュリン送給を提供するために粉末分散装置内の粉末の分散性を 改善したり、製造や粉末充填を容易にするために流動性や硬度など、インシュリ ンの取り扱い特性を改善するのに役立つこともある。 適する担体材料は、アモルファス粉末、結晶性粉末、あるいはアモルファス粉 末と結晶性粉末の配合物の形でもよい。適切な材料としては、（ａ）炭水化物、 例えばフルクトース、ガラクトース、グルコース、Ｄ−マンノース、ソルボース などの単糖類、ラクトース、トレハロース、セロビノースなどの二糖類、２−ヒ ドロキシプロピル−β−シクロデキストリンのようなシクロデキストリン類、ラ フィノース、各マルトデキストリン、デキストランのような多糖類、（ｂ）グリ シン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、システイン、リシンなどの 各アミノ酸類、（ｃ）クエン酸ナトリウム、アスコルビン酸ナトリウム、グルコ ン酸マグネシウム、グルコン酸ナトリウム、塩酸トロメタミンなど、有機酸と塩 基から調製した有機塩、（ｄ）アスパルテーム、ヒト血清アルブミン、ゼラチン などの各ペプチドおよび各蛋白、（ｅ）マンニトール、キシリトールなどの各ア ルディトールなどがある。好ましい担体群としては、ラクトース、トレハロース 、ラフィノース、各マルトデキストリン、グリシン、クエン酸ナトリウム、塩酸 トロメタミン、ヒト血清アルブミン、およびマンニトールなどがある。 このような担体材料は、スプレイ乾燥の前に、すなわち、スプレイ乾燥用に調 製される緩衝液に担体材料を加えることによって、インシュリンと混合すること が可能である。このようにすると、インシュリン粒子と同時に、またインシュリ ン粒子の一部として、担体材料が形成される。一般に、スプレイ乾燥によって担 体をインシュリンと一緒に形成するとき、インシュリンは５〜９５重量％、好ま しくは２０〜８０重量％の範囲で、各々、個々の粒子中に存在することになる。 粒子の残りは主として担体材料である（一般に５〜９５重量％、通常は２０〜８ ０重量％である）が、緩衝液も含み、上述のような他の成分を含むこともある。 肺胞領域に送給される粒子中に担体材料が存在しても（すなわち、１０μｍ以下 の必要サイズ範囲のもの）、インシュリンの全身吸収を有意に妨害しないことが 判明している。 代わりに、担体を乾燥粉末の形で別々に調製し、混合することによってインシ ュリン乾燥粉末と組み合わせることも可能である。別々に調製される粉末担体は 、（水分吸収を避けるため）通常は結晶であるが、場合によっては、アモルファ スまたは結晶とアモルファスの混合物であってもよい。担体粒子のサイズはまた 、インシュリン粉末の流動性を改善するように選択することが可能であり、一般 には２５〜１００μｍの範囲である。このサイズ範囲の担体粒子は一般に肺胞領 域内に透過しないため、吸入前に送給装置内のインシュリンから分離する場合が 多い。したがって、肺胞領域内に透過する粒子は本質的にインシュリンと緩衝液 で構成される。好ましい担体材料は、サイズが上述の範囲内の結晶性マンニトー ルである。 本発明の乾燥インシュリン粉末は、他の有効成分と組み合わせることも可能で ある。例えば、糖尿病の治療を改善するために、インシュリン粉末中で少量のア ミリンまたは活性アミリン類縁体と組み合わせることも望ましいと思われる。ア ミリンは健常者（非糖尿病患者）の膵β細胞からインシュリンと一緒に分泌され るホルモンである。アミリンは生体内でのインシュリン活性を調節すると考えら れ、アミリンとインシュリンを同時に投与すると、血糖調節が改善されると提案 されている。本発明の組成物中で乾燥粉末アミリンとインシュリンを組み合わせ ると、このような同時投与を達成するのに特に便利な生成物が得られる。アミリ ンは、（１回量のインシュリンの総重量に基づいて）０．１〜１０重量％、好ま しくは０．５〜２．５重量％を、インシュリンと組み合わせることが可能である 。アミリンは、Ａｍｙｌｉｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａなどから市販のものを入手することが可能であり、本発明 の組成物中に容易に調合することができる。例えば、アミリンをインシュリンお よび任意に担体と共に水溶液または他の適する溶液に溶解し、この溶液をスプレ イ乾燥して粉末産物を生成することも可能である。 本発明の乾燥粉末インシュリン組成物は、従来の方式で流動空気または他の生 理学的に許容できる気流に分散することによってエーロゾル化することが好まし い。このような分散に適する１つのシステムは、ＷＯ９３／００９５１号として 発行されている、同時係属出願第０７／９１０，０４８号に記述されており、そ の開示全体を参照により本明細書に組み込む。本明細書の第１図を説明すると、 自由に流動するインシュリン粉末を高速気流またはガス流に導入し、その結果生 じる分散物を保持チャンバ１０に導入する。保持チャンバ１０は、空気粉末分散 物の入り口とは反対側の端部にマウスピース１２を備える。チャンバ１０の容積 は希望する用量を捕捉できるほど大きく、封じ込めを促進するためのバッフルま たは一方向弁を任意に備えることも可能である。インシュリン粉末の１回量をチ ャンバ１０で捕捉した後、患者Ｐ（第２図）はマウスピース１２で吸入して、エ ーロゾル化した分散物を肺に吸い込む。患者Ｐが吸入するにつれて、接線方向に 位置する空気入り口１４を通って調合空気が導入され、それによって一般に渦巻 状に空気が流れ、チャンバから患者の肺にエーロゾル化されたインシュリンを押 し出す。チャンバの容積およびエーロゾル化される用量は、患者がエーロゾル化 されたインシュリン全量を完全に吸入した後、インシュリンが確実に低肺胞領域 に到達するのに十分な空気を吸入できるものである。 このようなエーロゾル化されたインシュリン粉末は、糖尿病およびそれに関連 するインシュリン欠乏症の治療において、即効性インシュリンの皮下注射の代わ りに特に有用である。意外なことに、乾燥粉末インシュリンをエーロゾル投与す ると、皮下注射によって達成されるよりもインシュリン吸収および糖反応が有意 に速やかであることが判明している。したがって、本発明の方法および組成物は 、患者が血糖値を頻繁に監視し、目標血清濃度を維持するために必要に応じてイ ンシュリンを投与する治療プロトコルに特に有益であるが、インシュリン全身投 与が必要なときはいつも有用である。患者は、まさしく記述した通り、適量のイ ンシュリンを吸入することにより希望の用量を達成することができる。まさしく 記述した方法によるインシュリン全身送給の効率は、一般に約１５〜３０％の範 囲になり、個々の投与量（吸入当たりのベースで）は、一般に約０．５〜１０mg である。通常、１回の呼吸投与中の望ましいインシュリン総用量は約０．５〜１ ５mgの範囲になる。したがって、患者が１パフ〜４パフを服用することにより、 望ましい投与量が有効であると考えられる。 次にあげる各例は例示のためのものであり、限定的なものではない。 実験 材料と方法 材料 結晶性ヒト亜鉛インシュリン２６．３単位／ｍｇ（Ｌｉｌｌｙロット＃７８４ ＫＫ２）は、Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｄｉａｎａｐ ｏｌｉｓ，ＩＮから入手し、ｒｐＨＰＬＣで測定したとき、９９％を超える純度 であった。米国薬局方（ＵＳＰ）マンニトールは、Ｒｏｑｕｅｔｔｅ Ｃｏｒｐ ｏｒａｔｉｏｎ（Ｇｕｒｎｅｅ，ＩＬ）から入手した。ラフィノースは、Ｐｆａ ｎｓｔｉｅｈｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗａｕｋｅｇａｎ，ＩＬ）から購 入した。米国薬局方、アメリカ化学協会（ＡＣＳ）クエン酸ナトリウム・２水和 物および米国薬局方クエン酸１水和物は、Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ（Ｐｈｉｌｌｉｐ ｓｂｕｒｇ，ＮＪ）から入手した。 粉末の生成 インシュリン粉末は、賦形剤（マンニトール、またはラフィノース）を含むか 、何も含まないクエン酸ナトリウム緩衝液に原薬結晶性インシュリンを溶解して 、最終固形濃度７．５ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ６．７±０．３にすることにより作成し た。スプレイ乾燥機は、入り口温度１１０〜１２０℃、液体給送速度５ｍｌ／分 で操作し、結果として出口温度は７０〜８０℃になった。溶液を、０．２２μｍ のフィルタを通過させ、Ｂｕｃｈｉ Ｓｐｒａｙ Ｄｒｙｅｒでスプレイ乾燥し て、細かい白色のアモルファス粉末を生成した。その結果得られた粉末は、乾燥 条件下、しっかりフタをした容器内で保存した（相対湿度１０％未満）。 粉末の分析 粉末の粒子サイズ分布は、Ｓｅｄｉｓｐｅｒｓｅ Ａ−１１（Ｍｉｃｒｏｍｅ ｒｉｔｉｃ，Ｎｏｒｃｒｏｓｓ，ＧＡ）で粉末を分散させた後、Ｈｏｒｉｂａ ＣＡＰＡ−７００ Ｐａｒｔｉｃｌｅ ｓｉｚｅ Ａｎａｌｙｚｅｒ（粒子サイ ズ・アナライザ）で液体遠心分離沈降により測定した。粉末の水分含有量は、Ｍ ｉｔｓｕｂｉｓｈｉ ＣＡ−０６ Ｍｏｉｓｔｕｒｅ Ｍｅｔｅｒ（水分計）を 使用してカールフィッシャー（Ｋａｒｌ Ｆｉｓｃｈｅｒ）法で測定した。 粉末処理前および粉末処理後のインシュリンの完全性は、重量を測定した粉末 の一部を蒸留水に再溶解し、再溶解した溶液をスプレイ乾燥機に入れた最初の溶 液と比較することにより、ヒト・インシュリンの参考標準と対照して測定した。 ｒｐＨＰＬＣによる保持時間およびピーク面積を使用して、処理中にインシュリ ン分子が化学的に修飾または分解されていたかどうかを決定した。紫外線吸光度 を使用してインシュリン濃度（２７８ｎｍ）および不溶性凝集物の有無（４００ ｎｍ）を決定した。さらに、出発溶液および再溶解溶液の各ｐＨを測定した。イ ンシュリン粉末のアモルファス性は、偏光光学顕微鏡で確認した。 ラットエーロゾル暴露 エーロゾル暴露室でラット実験を実施した。メス・ラット（２８０〜３００ｇ ｍ）を一晩絶食させた。動物（２１〜２４匹／実験）をプレキシガラス（Ｐｌｅ ｘｉｇｌａｓ）管に入れ、４８穴、鼻専用エーロゾル暴露チャンバ（Ｉｎ−Ｔｏ ｘ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ａｌｂｕｑｕｅｒｑｕｅ，ＮＭ）に入れた。呼吸帯域へ の気流を７．２〜９．８リットル／分に維持し、マグナヘリック・ゲージで測定 したとき、チャンバに僅かな負圧（〜１．５ｃｍ Ｈ₂Ｏ）があるように、真空 によって除去した。エーロゾル暴露時間は、チャンバに給送される粉末の量に応 じて５〜２０分であった。粉末は、小さなベンチュリ・ノズルに手で送り込み、 そこで粉末粒子を分散させて細かいエーロゾル雲を形成した。ベンチュリ・ノズ ルは、１．０５ｋｇ／ｃｍ²（１５ｐｓｉｇ）を超える圧で操作し、気流は７． ２〜９．８リットル／分に設定した。ベンチュリ・ノズルは透き通ったプレキシ ガラス分散チャンバ（７５０ｍｌ）の底部に取り付け、そこからエーロゾルを鼻 専用暴露チャンバ内に直接通過させた。 ラット・エーロゾル・チャンバの較正 ２リットル／分の真空流で、Ｉｎ−Ｔｏｘフィルタ・ホルダを用いて、呼吸帯 域における複数の定期フィルタ・サンプルを採取して呼吸帯域の粉末濃度を測定 した。動物がいる場合と動物がいない場合の両者で、チャンバを較正した。粉末 質量は、重量測定法で決定した。呼吸帯域における粉末の粒子サイズは、呼吸穴 に設置し、２リットル／分の流量で操作したカスケード衝撃装置（Ｉｎ Ｔｏｘ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）を用いて測定した。各段階の粉末質量は、重量測定法で決 定した。 各粉末試験で２１〜２４匹のラットを使用し、エーロゾル暴露は５〜２０分間 持続した。ゼロタイムおよびエーロゾル暴露停止後〜７分、１５分、３０分、６ ０分、９０分、１２０分、１８０分および２４０分にラット３匹を屠殺した。動 物に麻酔をかけ、開腹し、腹側大動脈から多量の血液サンプルを採取した。次に 、頚椎脱臼法で屠殺した。 血液を室温で３０分間凝固させ、血清分離管内で、３５００rpmで２０分間、 遠心分離した。血清は、直ちに分析するか、あるいは分析するまで−８０℃で凍 結した。エーロゾル化停止後できるかぎり早く（０〜７分）ラット３匹を屠殺し 、その血液を採取し、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）のリンス液５mlで６回、肺を 洗浄した。生体内利用率の算出において、最終的にプールされた洗浄サンプルの インシュリン量を、ラットのエーロゾル化量として使用した。 霊長類暴露システム 若い、野生のオス・カニクイザルＭａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ種 （２〜５ｋｇ）（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｐｒｉｍａｔｅｓ，Ｉｎｃ．） を、霊長類エーロゾル試験に使用した（３〜４匹／群）。動物にＨｕｍｕｌｉｎ （Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，Ｉｎｄｉａｎａ）を皮下注 射をするか、インシュリンの粉末エーロゾルを暴露させた。各々の動物を頭専用 暴露ユニットに入れ、動物の最小酸素要求を供給するのに十分な流量（７リット ル／分）で試験大気の新鮮供給を与えるため、各々の動物を頭専用暴露ユニット に入れた。動物を垂直坐位に据えるイス様装置に拘束した。フードは透き通って おり、動物はその環境を見ることができた。いつでも血液を採取できるように、 留置カテーテルを脚に入れた。処置中、サルは完全に目覚めており、平静なよう であった。霊長類血液は、ラットと同様に処理した（上記参照）。 霊長類エーロゾル暴露システムは、各々のサルが吸入した空気の量を測定でき る呼吸モニタを備えている。吸気中のインシュリン濃度の測定値と結びつけて、 この値から、各動物が吸入した正確なインシュリン量を計算することが可能であ る。 ヒトの治験 皮下注射ならびにエーロゾル化した乾燥インシュリン粉末の吸入により、イン シュリンを正常被験者２４名に投与した。各皮下注射は１０．４単位のＨｕｍｉ ｌｉｎ Ｒ、１００単位／ｍｌ（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉ ｓ，Ｉｎｄｉａｎａ）からなるものであった。乾燥インシュリン粉末はアモルフ ァスで、上述の通りにスプレイ乾燥によって調製し、２０重量％のマンニトール 賦形剤を含んでいた。インシュリン乾燥粉末の投与量（５ｍｇ）を高速気流に分 散して、チャンバに捕捉される細かいエーロゾルを形成した。各被験者は、各エ ーロゾル・ボーラスのゆっくりした、深呼吸または「パフ」によりエーロゾル粉 末を吸入した。粉末は、３パフで投与した（投与量３１．９単位の場合）。下記 の通りに、血清インシュリン濃度および血清グルコース濃度を経時的に測定した 。 血清分析 ヒト・インシュリン用のＣｏａｔ−Ａ−Ｃｏｕｎｔラジオ・イムノアッセイ・ キット（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ， Ｌｏｓ Ａｎｇｅｌｅｓ，ＣＡ）を使用してラット、霊長類、およびヒトの血清 インシュリン濃度を測定した。標準曲線は、各バッチのサンプルを使用して実行 した。分析の感度は約４３ｐｇ／ｍｌであった。アッセイ内変動（％ＣＶ）は５ ％未満である。グルコース分析は、カリフォルニア州Ｗｅｓｔ Ｓａｃｒａｍｅ ｎｔｏのＣａｌｉｆｏｒｎｉａ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ s，ＩｎｃがＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ／Ｈｉｔａｃｈｉ ７４ ７ Ａｎａｌｙｚｅｒ用のグルコース／ＨＫ試薬システム・パック（Ｇｌｕｃｏ ｓｅ／ＨＫ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｓｙｓｔｅｍ Ｐａｃｋ）を使用して実施した。 検定内変動（％ＣＶ）は３％未満である。 速度実験で、濃度−時間プロフィールの投与量調整免疫反応インシュリン（Ｉ ＲＩ）曲線下面積（ＡＵＣ）を、皮下注射で得られたものと比較することによっ て、エーロゾルの相対生体内利用率を算出した。ラットの場合、洗浄した総イン シュリン質量をエーロゾル化量として使用した。肺を洗浄する前に若干のインシ ュリンが吸収されたため、この方法で推定された投与量はたぶん総付着量より僅 かに過小評価されたものである。この推定される損失の補正は行わなかった。 サルの実験で、洗浄した肺インシュリンをエーロゾル化量として使用する代わ りに、吸入されたインシュリン総量を使用したこと以外は、上記ラットと同様に 、相対生体内利用率を算出した。ラットでは、鼻流路および咽頭に付着したイン シュリンではなく、肺に付着した材料だけを投与量推定に含めた。サルでは、動 物に入ったすべてのインシュリンを投与量推定に含めた。 ラットにおけるインシュリン吸収の結果 動物試験に使用したインシュリン粉末はすべて、粒子サイズ（質量中位径）が １〜３μｍで水分含有量が３％未満であった。ｒｐＨＰＬＣで測定した粉末のイ ンシュリン純度は９７％を超えていた。２０％インシュリン製剤の代表的クロマ トグラフを、第８Ｃ図に示す。純粋な水で溶解したとき、粉末は澄明な溶液とな り、４００nｍにおける紫外線吸光度は０．０１未満であり、ｐＨは６．７±０ ３であった。２０％インシュリン製剤の代表的紫外線（ＵＶ）スペクトルを第９ 図に示す。 次の３種類のインシュリン粉末製剤を、Ｉｎ−Ｔｏｘ４８穴暴露チャンバ内の エーロゾルとして、ラットで試験した。 １．８７．９％インシュリン、１１．５％クエン酸ナトリウム、０．６％ク エン酸。 ２．２０％インシュリン、６６％マンニトール、１２．４％クエン酸ナトリ ウム、０．６％クエン酸。 ３．２０％インシュリン、６６％ラフィノース、１２．４％クエン酸ナトリ ウム、０．６％クエン酸。 表１は、呼吸帯域におけるエーロゾルの特徴付けやチャンバ操作条件を含め、 異なる３種類のラット暴露試験における重要な測定値の一覧表である。粉末給送 中に粉末がぎっしり詰め込まれ、粉末の分散が不完全であったため、壁で損失し たので、ベンチュリ・ノズルに給送した粉末の一部がラットの呼吸帯域に到達し た（３４〜６７％）。しかし、呼吸帯域におけるエーロゾルの粒子サイズは肺付 着にとって理想的であり（１．３〜１．９μｍ）、より大きな粒子が動物暴露チ ャンバで選択的に失われたため、最初の製剤粒子サイズ（２．０〜２．８μｍ） よりいくらか小さかった。 表２は、３種類のエーロゾル試験と１種類の皮下注射試験の、ラット血清イン シュリンおよび血清グルコースの結果を示す。第３Ａ図および第３Ｂ図は、エー ロゾル化した３種類の製剤の血清免疫反応インシュリン（ＩＲＩ）濃度−時間プ ロフィールおよびグルコース濃度−時間プロフィールを示す図である。表３は、 異なる試験のインシュリンｔ_max、およびグルコースｔ_min、ならびに皮下注射と 比較したエーロゾルの相対生体内利用率を示す表である。 ３種類の製剤はすべて、ラット全身循環に速やかに吸収されるインシュリンを 提供した（第３Ａ図および第３Ｂ図）。多くの反復実験を実施しなければ、差が 有意であったかどうかは不明であるが、２０％インシュリン／マンニトール粉末 の生体内利用率および糖反応が高かった（表３）。 霊長類の結果 エーロゾルの結果と比較する皮下データを得るために、ヒトの治験で使用され た投与量と同じ投与量（０．２単位／kg、〜２７μg／サル）をサル４匹に注射 した（第４Ａ図および第４Ｂ図）。表４は、サルのエーロゾル暴露データを表す 。表５は、エーロゾル暴露試験および皮下試験の平均血清インシュリンおよび平 均血清グルコースを示す。エーロゾル化で強力なインシュリンおよびグルコース 反 応が得られた（高用量）。第４図は、２種類のエーロゾル試験および１種類の皮 下試験の平均血清インシュリン・プロフィールの比較を示す図である。これらの プロフィールのＡＵＣから、エーロゾル・インシュリンの相対生体内利用率は１ ２％であると算出された。 ヒトの結果 呼吸送給と皮下注射の比較成績を以下の表５に示す。呼吸エーロゾル送給は（ ２０分でピーク）注射（６０分でピーク）より速やかに吸収され、糖反応（６０ 分で最低値）も注射（９０分で最低値）より速やかであった。再現性は、インシ ュリンと糖反応の両者で注射よりエーロゾルの方が良くはないとしても、同じく らい良好であった。注射用量は、体重に関して注意深く調節し、エーロゾル用量 は調節しなかった。グルコース反応に基づく、注射と比較したエーロゾル・イン シュリンの生物学的活性は２８〜３６％であった。３パフ群の、インシュリン曲 線下面積に基づく、注射と比較したエーロゾル・インシュリンの生体内利用率は ２２．８％であった。 ヒト治験の結果を、さらに第５Ａ図〜第５Ｂ図に表す。第５Ａ図は、皮下注射 （○）、吸入（３パフ、●）の、経時的平均血清インシュリンを示す図である。 平均血清グルコース濃度を、同様に第５Ｂ図に表す。インシュリン・ピークおよ びグルコース最低値を、それぞれ第６Ａ図および第６Ｂ図に示し、血清インシュ リンおよびグルコースの被験者間変動を、それぞれ第７Ａ図および第７Ｂ図に示 す。 さらに、エーロゾル暴露中のサルの浅呼吸（換気性呼吸）は、深肺付着にとっ て最適呼吸操作を意味しなかった。予想通り、最適呼吸操作を使用したとき、お よび鼻吸入よりむしろ経口吸入でエーロゾル・ボーラスを服用したときに、ヒト の生体内利用率が高かった（表５）。 前述の発明は、理解しやすいように、例示および実施例によって幾らか詳細に 記述してきたが、添付の特許請求の範囲内で、ある一定の変更および修正を加え ることができることは明白であろう。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＢＲ，ＣＡ，ＣＮ，Ｃ Ｚ，ＦＩ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＲ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ ，ＲＵ (72)発明者 フォスター，リンダ・シイ アメリカ合衆国 94070 カリフォルニア 州・サニー ヴェイル・カロライナ アヴ ェニュ・733 (72)発明者 プラッツ，ロバート・エム アメリカ合衆国 94019 カリフォルニア 州・ハーフ ムーン ベイ・ヴァルドズ アヴェニュ・324

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．インシュリンの１回量をエーロゾル化する方法であって、 乾燥粉末としてインシュリンを供給する段階と、 一定量の乾燥粉末をガス流に分散してエーロゾルを形成する段階と、 その後の患者の吸入のためのマウスピースを備えたチャンバにエーロゾルを捕 捉させる段階と を含む方法。 ２．インシュリンが実質的に透過増進物質を含まないことを特徴とする請求項 １に記載の方法。 ３．約５〜９９％の範囲の重量濃度のインシュリンが乾燥粉末担体中に存在す ることを特徴とする請求項１に記載の方法。 ４．粉末担体が炭水化物、有機塩、アミノ酸、ペプチド、あるいは蛋白を含む ことを特徴とする請求項３に記載の方法。 ５．インシュリン乾燥粉末が、平均サイズ１０μｍ以下の粒子からなることを 特徴とする請求項１に記載の方法。 ６．乾燥粉末がインシュリンと担体材料の両者を含む個々の粒子を含むことを 特徴とする請求項１に記載の方法。 ７．個々の粒子中に、インシュリンが５〜９９重量％存在することを特徴とす る請求項６に記載の方法。 ８．インシュリンを乾燥粉末として送給することを含むことを特徴とするイン シュリンの呼吸性送給のための改良された方法。 ９．インシュリンが実質的に透過増進物質を含まないことを特徴とする請求項 ８に記載の改良された方法。 １０．約１０〜９９％の範囲の重量濃度のインシュリンが乾燥粉末中に存在す ることを特徴とする請求項８に記載の改良された方法。 １１．粉末担体が炭水化物、有機塩、アミノ酸、ペプチド、あるいは蛋白を含 むことを特徴とする請求項１０に記載の改良された方法。 １２．インシュリン乾燥粉末が、平均サイズが１０μｍ以下の粒子からなるこ とを特徴とする請求項８に記載の改良された方法。 １３．乾燥粉末がインシュリンと担体材料の両者を含む個々の粒子を含むこと を特徴とする請求項８に記載の改良された方法。 １４．個々の粒子中に、インシュリンが５〜９９重量％存在することを特徴と する請求項１３に記載の改良された方法。 １５．安定した、乾燥インシュリン組成物を調製する方法であって、 インシュリンを水性緩衝液に溶解して溶液を形成する段階と、 前記溶液をスプレイ乾燥して、平均サイズが１０μｍ以下の実質的にアモル ファス粒子を形成する段階とを含む方法。 １６．インシュリンを製薬上の担体と一緒に水性緩衝液に溶解し、スプレイ乾 燥した時に個々の粒子中に、インシュリンが５〜９９重量％存在する乾燥粉末が 生成されることを特徴とする請求項１５に記載の方法。 １７．製薬担体が、スプレイ乾燥した時に粉末を生成する炭水化物、有機塩、 アミノ酸、ペプチド、あるいは蛋白であることを特徴とする請求項１６に記載の 方法。 １８．前記炭水化物がマンニトール、ラフィノース、ラクトース、マルトデキ ストリンおよびトレハロースから成るグループから選択されることを特徴とする 請求項１７に記載の方法。 １９．前記有機塩が、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、およびアスコル ビン酸ナトリウムから成るグループから選択されることを特徴とする請求項１７ に記載の方法。 ２０．製薬担体材料中に５〜９９％存在するインシュリンを含み、かつサイズ が１０μｍ以下である粒子を含む、肺送給用インシュリン組成物。 ２１．前記組成物が実質的に透過増進物質を含まないことを特徴とする請求項 ２０に記載のインシュリン組成物。 ２２．製薬担体材料がマンニトール、ラフィノース、ラクトース、マルトデキ ストリンおよびトレハロースから成るグループから選択された炭水化物を含むこ とを特徴とする請求項２０に記載のインシュリン組成物。 ２３．製薬担体材料がクエン酸ナトリウム、グルコン酸ナトリウム、およびア スコルビン酸ナトリウムから成るグループから選択された有機塩を含むことを特 徴とする請求項２０に記載のインシュリン組成物。 ２４．請求項１５の方法で生成されたインシュリン組成物。 ２５．実質的に、平均粒子サイズ１０μｍ以下の乾燥粉末インシュリンから成 るインシュリン組成物。