JP6046694B2 - ウイルス感染治療用のピリミジン誘導体 - Google Patents

Description

本発明は、ピリミジン誘導体、それらの製造方法、医薬組成物、およびＨＢＶまたはＨＣＶのようなウイルス感染の治療におけるそれらの使用に関する。

本発明は、トール様受容体（ＴＬＲ）の調節または受容体活性化作用が関与する、ウイルス感染、免疫または炎症性疾患の治療におけるピリミジン誘導体の使用に関する。トール様受容体は、細胞外ロイシンリッチドメインと、保存領域を含む細胞質伸長（ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ）とを特徴とするＩ型（ｐｒｉｍａｒｙ）細胞膜貫通タンパク質である。自然免疫系は、ある種の免疫細胞の細胞表面に発現するこれらのＴＬＲにより病原体関連分子パターンを認識することができる。外来の病原体を認識すると、サイトカインの産生と食細胞上の共刺激分子のアップレギュレーションが活性化される。これは、Ｔ細胞挙動の調節に繋がる。

大部分の哺乳動物種は１０〜１５種類のトール様受容体を有すると推定されてきた。ヒトおよびマウスで合わせて１３種類のＴＬＲ（ＴＬＲ１〜ＴＬＲ１３と称される）が同定されており、他の哺乳動物種でもこれらの多くと同等の形態が発見されてきた。しかし、ヒトで発見された特定のＴＬＲの同等物が全ての哺乳動物に存在するわけではない。例えば、ヒトのＴＬＲ１０と類似のタンパク質をコードする遺伝子がマウスに存在するが、過去のある時点でレトロウイルスによって損傷を受けたように見受けられる。他方、マウスはＴＬＲ１１、ＴＬＲ１２、およびＴＬＲ１３を発現するが、そのどれもヒトには現れない。他の哺乳動物がヒトには見られないＴＬＲを発現することもある。トラフグ属のフグ（Ｔａｋｉｆｕｇｕ ｐｕｆｆｅｒｆｉｓｈ）に見られるＴＬＲ１４によって示されるように、他の非哺乳動物種が、哺乳動物とは異なるＴＬＲを有することもある。これにより、ヒトの自然免疫のモデルとして実験動物を使用する方法が複雑になることがある。

トール様受容体に関する詳細な概説については、次の雑誌論文を参照されたい。Ｈｏｆｆｍａｎｎ，Ｊ．Ａ．，Ｎａｔｕｒｅ，４２６，ｐ３３−３８，２００３；Ａｋｉｒａ，Ｓ．，Ｔａｋｅｄａ，Ｋ．，ａｎｄ Ｋａｉｓｈｏ，Ｔ．，Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２１，ｐ３３５−３７６，２００３；Ｕｌｅｖｉｔｃｈ，Ｒ．Ｊ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ：Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４，ｐ５１２−５２０，２００４．

国際公開第２００６／１１７６７０号パンフレットのプリン誘導体、国際公開第９８／０１４４８号パンフレットおよび国際公開第９９／２８３２１号パンフレットのアデニン誘導体、ならびに国際公開第２００９／０６７０８１号パンフレットのピリミジン類などのトール様受容体に対する活性を示す化合物が以前記載された。

しかし、従来技術の化合物と比較して、好ましい選択性、より高い効力、より高い代謝安定性、および改善された安全性を有する、新規なトール様受容体調節剤が強く求められている。

特定のウイルス感染の治療では、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）の場合のように、インターフェロン（ＩＦＮα）を定期的に注射投与することができる（Ｆｒｉｅｄ ｅｔ．ａｌ．Ｐｅｇｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ａｌｆａ ｐｌｕｓ ｒｉｂａｖｉｒｉｎ ｆｏｒ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２００２；３４７：９７５−８２）。経口投与可能な低分子ＩＦＮ誘導
物質は、免疫原性の低下と投与の簡便性という利点を提供し得る。従って、新規なＩＦＮ誘導物質は、ウイルス感染の治療に有効となり得る新種の薬物である。抗ウイルス作用を有する低分子ＩＦＮ誘導物質の文献中の例については、Ｄｅ Ｃｌｅｒｃｑ，Ｅ．；Ｄｅｓｃａｍｐｓ，Ｊ．；Ｄｅ Ｓｏｍｅｒ，Ｐ．Ｓｃｉｅｎｃｅ １９７８，２００，５６３−５６５を参照されたい。

ＩＦＮαはまた、ある種の癌の治療では他の薬物と併用投与される（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ４６， ２８４９−５７，ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９２，５２，１０５６）。ＴＬＲ７／８アゴニストは、明白なＴｈ１反応を誘導することができるため、ワクチンアジュバントとしても重要である（Ｈｕｍ．Ｖａｃｃｉｎｅｓ ２０１０，６，３２２−３３５；Ｈｕｍ．Ｖａｃｃｉｎｅｓ ２００９，５，３８１−３９４）。

本発明により、式（Ｉ）

の化合物、またはその薬学的に許容される塩、互変異性体、溶媒和物または多形が提供され、式中、
Ｒ_１は、水素、メチル、Ｃ_１〜２アルキル、シクロプロピル、メトキシ、ハロゲン、ヒドロキシル、トリフルオロメチル、またはジフルオロメチルであり、
Ｒ_２は、それぞれがハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、Ｃ_１〜６アルキル、ジ−（Ｃ_１〜６）アルキルアミノ、Ｃ_１〜６アルキルアミノ、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_１〜６アルコキシ、Ｃ_３〜６シクロアルキル、カルボン酸、カルボン酸エステル、カルボン酸アミド、複素環、アリール、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ニトリルから独立して選択される１つ以上の置換基で任意選択により置換されている、Ｃ_１〜８アルキル、（Ｃ_１〜４）アルコキシ−（Ｃ_１〜４）アルキル、Ｃ_３〜７シクロアルキル、Ｃ_４〜７複素環、芳香族、二環式複素環、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキルであり、
Ｒ_３は、それぞれがハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、Ｃ_１〜３アルキル、Ｃ_１〜３アルコキシまたはＣ_３〜６シクロアルキル、ニトリルから独立して選択される１つ以上の置換基で任意選択により置換されている、Ｃ_４〜８アルキル、Ｃ_４〜８アルコキシ、Ｃ_２〜６アルケニルまたはＣ_２〜６アルキニルである。

第１の実施形態では、本発明は、式（Ｉ）（式中、Ｒ_３はブチルまたはペンチルであり、Ｒ_２およびＲ_１は前述の通りである）の化合物を提供する。

別の実施形態では、本発明は、式（Ｉ）（式中、Ｒ_３はヒドロキシルで置換されたＣ_４〜８アルキルであり、Ｒ_２およびＲ_１は前述の通りである）の化合物に関する。

別の実施形態は、式（Ｉ）（式中、Ｒ_３は、ヒドロキシルで置換されたＣ_４〜８アルキルである場合、次、

のうちの１つである）の化合物に関する。

さらに、本発明は、式（Ｉ）（式中、Ｒ_１は水素または−ＣＨ_３であり、Ｒ_２およびＲ_３は前述の通りである）の化合物も提供する。

別の実施形態では、本発明は、式（Ｉ）（式中、Ｒ_２は、Ｃ_１〜３アルキル、ヒドロキシル、アルコキシ、ニトリル、複素環またはエステルで置換されたアリールアルキルまたはヘテロアリールアルキルであり、Ｒ_１およびＲ_３は前述の通りである）の化合物を提供する。

別の実施形態では、本発明は、式（Ｉ）（式中、Ｒ_２は、Ｃ_１〜３アルキル、アルコキシ、カルボン酸エステルまたはカルボン酸アミドでさらに置換されているアリール、複素環、またはヘテロアリールで置換されたＣ_１〜３アルキルであり、Ｒ_１およびＲ_３は前述の通りである）の化合物に関する。

さらに、本発明は、式（Ｉ）（式中、Ｒ_２は、Ｃ_１〜３アルキル、ヒドロキシル、アルコキシ、ニトリル、複素環またはエステルでさらに置換されていてもよい次の例のうちの１つである）の化合物に関する。

本発明の好ましい化合物は：

である。

式（Ｉ）の化合物およびそれらの薬学的に許容される塩、その互変異性体、溶媒和物または多形は、医薬としての、特に、トール様受容体（とりわけＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８）活性の調節剤としての活性を有する。

別の態様では、本発明は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物または多形を１種以上の薬学的に許容される医薬品添加物、賦形剤または担体と共に含む医薬組成物を提供する。

さらに、本発明による式（Ｉ）の化合物もしくはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形、または前記式（Ｉ）の化合物もしくはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形を含む医薬組成物は、医薬として使用することができる。

本発明の別の態様は、式（Ｉ）の化合物もしくはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形、または、前記式（Ｉ）の化合物もしくはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形を含む前記医薬組成物が、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８の調節が関与する障害または疾患の治療に適宜使用できることである。

「アルキル」という用語は、指定された数の炭素原子を含む直鎖または分岐鎖の飽和脂肪族炭化水素を指す。

「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素を指す。

「アルケニル」という用語は、少なくとも２個の炭素原子と少なくとも１個の炭素−炭素二重結合からなる前述のアルキルを指す。

「アルキニル」という用語は、少なくとも２個の炭素原子と少なくとも１個の炭素−炭素三重結合からなる前述のアルキルを指す。

「シクロアルキル」という用語は、指定された数の炭素原子を含む炭素環を指す。

「ヘテロアリール」という用語は、Ｎ、ＯおよびＳから、特にＮおよびＯから選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含む、「アリール」という用語について記載する芳香環構造を意味する。

「アリール」という用語は、Ｎ、ＯおよびＳから、特にＮおよびＯから選択される１個または２個のヘテロ原子を任意選択により含む、芳香環構造を意味する。前記芳香環構造は、４、５、６または７個の環原子を有してもよい。特に、前記芳香環構造は、５個または６個の環原子を有してもよい。

「二環式複素環」という用語は、縮合した２個の芳香環で構成された、「アリール」という用語について前述した芳香環構造を意味する。各環は、Ｎ、ＯおよびＳから、特にＮおよびＯから選択されるヘテロ原子で任意選択により構成される。

アリールアルキル」という用語は、アルキル基で任意選択により置換された、「アリール」という用語について前述した芳香環構造を意味する。

「ヘテロアリールアルキル」という用語は、アルキル基で任意選択により置換された、「ヘテロアリール」という用語について前述した芳香環構造を意味する。

「アルコキシ」という用語は、例えば、メトキシ基またはエトキシ基のような、酸素に単結合したアルキル（炭素と水素の鎖）基を指す。

複素環は、飽和または部分飽和であり、エチルオキサイド、テトラヒドロフラン、ジオキサンまたは他の環状エーテルを含む分子を指す。窒素を含む複素環としては、例えば、アゼチジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジンおよびピロリジン等が挙げられる。他の複素環としては、例えば、チオモルホリン、ジオキソリニル、および環状スルホンが挙げられる。

ヘテロアリール基は、芳香族の性質を有する複素環基である。これらは、Ｎ、ＯまたはＳから選択される１個以上のヘテロ原子を含む単環、二環、または多環である。ヘテロアリール基は、例えば、イミダゾリル、イソキサゾリル、フリル、オキサゾリル、ピロリル、ピリドニル、ピリジル、ピリダジニル、またはピラジニルであってもよい。

式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩には、その酸付加塩および塩基塩が含まれる。好適な酸付加塩は、無毒の塩を形成する酸から形成される。好適な塩基塩は、無毒の塩を形成する塩基から形成される。

本発明の化合物は、溶媒和していない形態および溶媒和した形態で存在することもできる。本明細書では、「溶媒和物」という用語は、本発明の化合物および１種以上の薬学的に許容される溶媒分子、例えば、エタノールを含む分子錯体を説明するのに使用される。

「多形」という用語は、２つ以上の形態または結晶構造で存在する本発明の化合物の能力を指す。

本発明の化合物は、結晶性または非晶質の生成物として投与することができる。それらは、例えば、沈殿、結晶化、凍結乾燥、噴霧乾燥、または蒸発乾固などの方法で、固体プラグ（ｓｏｌｉｄ ｐｌｕｇｓ）、粉末、またはフィルムとして得ることができる。それらは、単独で投与されても、または本発明の１種以上の他の化合物と併用投与されても、または他の１種以上の薬物と併用投与されてもよい。一般に、それらは、１種以上の薬学的に許容される医薬品添加物と共に製剤として投与される。「医薬品添加物」という用語は、本明細書では、本発明の化合物以外の任意の成分を説明するのに使用される。医薬品添加物の選択は、主に、特定の投与方法、溶解性および安定性に対する医薬品添加物の効果、ならびに剤形の種類などの要因に依存する。

本発明の化合物またはその任意の部分群を、投与の目的で、様々な医薬形態に製剤化することができる。適切な組成物として、薬物を全身投与するのに通常使用される全ての組成物を挙げることができる。本発明の医薬組成物を製造するために、有効成分として、特定の化合物、任意選択により付加塩の形態の特定の化合物を有効量、薬学的に許容される担体と均質に混合した状態に配合するが、その担体は投与に望ましい製剤の形態に応じて非常に様々な形態を取り得る。これらの医薬組成物は、例えば、経口投与、経腸投与、または経皮投与に好適な単位剤形であることが望ましい。例えば、経口剤形の組成物の製造において、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤、乳剤、および溶液剤などの経口液体製剤の場合、例えば、水、グリコール、油、およびアルコール等；または、散剤、丸剤、カプセル剤、および錠剤の場合、デンプン、糖類、カオリン、賦形剤、滑沢剤、結合剤、および崩壊剤等の固体担体などの、通常の医薬媒体のいずれかを使用することができる。投与が容易であるため、錠剤およびカプセル剤が最も有利な経口単位剤形であり、この場合、明らかに固体医薬担体が使用される。使用直前に、液体の形態に変換できる固体の形態の製剤も含まれる。経皮投与に好適な組成物では、担体は、浸透促進剤および／または好適
な湿潤剤を任意選択により含み、これに、皮膚に対する顕著な有害作用を生じさせない任意の種類の好適な添加剤が少量、任意選択により配合される。前記添加剤は皮膚への投与を促進し得るおよび／または所望の組成物の製造に有用となり得る。これらの組成物は、様々な方法で、例えば、経皮パッチとして、スポット・オン製剤（ｓｐｏｔ−ｏｎ）として、軟膏として投与することができる。本発明の化合物は、このような方法で投与されるように当該技術分野で使用される方法および製剤で、吸入または吸送により投与することもできる。従って、一般に、本発明の化合物は、溶液剤、懸濁剤または乾燥粉末の形態で肺に投与することができる。

投与の容易さと投与量の均一性のため、前述の医薬組成物を単位剤形に製剤化することがとりわけ有利である。本明細書で使用する場合、単位剤形とは、単位投与量として好適な物理的に別個の単位を指し、各単位は、所望の治療効果をもたらすように計算された所定量の有効成分を、必要な医薬担体と共に含有する。このような単位剤形の例としては、錠剤（割線入り錠剤およびコーティング錠を含む）、カプセル剤、丸剤、散剤分包（ｐｏｗｄｅｒ ｐａｃｋｅｔｓ）、カシェ剤、坐剤、注射用溶液剤または懸濁剤等、およびこれらのそれぞれの倍数（ｓｅｇｒｅｇａｔｅｄ ｍｕｌｔｉｐｌｅｓ ｔｈｅｒｅｏｆ）がある。

感染疾患を治療する当業者は、下記に示す試験結果から有効量を決定することができるであろう。一般に、有効治療１日量は、０．０１ｍｇ／ｋｇ体重〜５０ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇ体重〜１０ｍｇ／ｋｇ体重であろうと考えられる。必要な用量を、１日を通して２、３、または４以上の部分用量（ｓｕｂ−ｄｏｓｅｓ）として適切な間隔を空けて投与することが適切な場合がある。前記部分用量は、例えば、単位剤形当たり有効成分を１〜１０００ｍｇ、特に５〜２００ｍｇ含有する単位剤形として製剤化されてもよい。

正確な投与量および投与頻度は、当業者に周知のように、使用される式（Ｉ）の特定の化合物、治療される特定の症状、治療される症状の重症度、特定の患者の年齢、体重、および全身健康状態、ならびにその個体が摂取している可能性がある他の医薬に依存する。さらに、治療される対象の反応に応じておよび／または本発明の化合物を処方する医師の評価に応じて、前記有効量を増減し得ることが明らかである。従って、前述の有効量の範囲は、ガイドラインに過ぎず、決して本発明の範囲または使用を制限するものではない。

化合物の製造
式（Ｉ）（式中、Ｒ_１は水素原子である）の化合物はスキーム１に従って製造される。

スキーム１のタイプＡの化合物は、
（ｉ）複素環式アルコールとハロゲン化エステルおよび好適な塩基、例えば、炭酸カリウム、炭酸セシウム、または水素化ナトリウムとの反応。スキーム２ａに示す実施例。
（ｉｉ）好適な塩基、例えば、水素化ナトリウムを使用した、アルコールまたはヒドロキシエステル、例えば、酢酸２−ヒドロキシエチルと、ハロゲン化アルキルとの反応。スキーム２ｂに示す実施例。
のいずれかで製造される。

式（Ｉ）（式中、Ｒ_１はアルキル、シクロアルキル、トリフルオロメチル、またはアルコキシであり、Ｒ_２はアリールまたはヘテロアリールである）の化合物は、下記のスキーム３のように製造される。例えば、塩化チオニルを使用して、β−ケトエステル（Ｅ）を塩素化し、２−クロロ−β−ケトエステル中間体（Ｆ）を得ることができる。フェノールまたは複素芳香族アルコール（Ｒ２ＯＨ）を等モル比の水酸化ナトリウム水溶液と化合さ
せる。次いで、減圧下で溶媒を除去し、Ｒ２のフェノール塩または複素芳香族アルコール塩を得る。文献の手順に従ってこの塩を２−クロロ−β−ケトエステル中間体（Ｆ）と化合させ、中間体Ｇを得る。次いで、塩基と共にまたは塩基なしで、中間体Ｇを炭酸グアニジンと、適切な溶媒、例えば、エタノール中で化合させる。次いで、中間体Ｈをオキシ塩化リンと反応させてクロロピリミジン中間体（Ｊ）を生成する。次いで、過剰なアミンおよび任意選択により過剰な有機塩基、例えば、トリエチルアミンの存在下、高温で（Ｊ）を加熱する結果として生成物が生成する。これは当業者に既知の方法を使用する一般的スキームであり、例えば、Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ ｖｏｌｕｍｅ ３３，ｐ．４３（１９５３）を参照されたい。

式（Ｉ）（式中、Ｒ_１はアルキル、シクロアルキル、トリフルオロメチル、またはアルコキシであり、Ｒ_２は芳香族または脂肪族である）の化合物は、スキーム４に従って製造することができる。この反応スキームは、塩化アシルがエステル中間体Ａ（スキーム１に示す）と反応してスキーム３のような中間体（Ｇ）を生成する、交差クライゼン（ｃｒｏｓｓｅｄ−Ｃｌａｉｓｅｎ）反応で開始する。反応スキームは、中間体Ｇから、スキーム
３と同じ生成経路に従う。これは当業者に既知の方法を使用する一般的スキームであり、例えば、Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｖｏｌｕｍｅ １２７，ｐａｇｅ ２８５４（２００５）を参照されたい。

実験部分
中間体Ａ−１の合成。

グリコール酸エチル［６２３−５０−７］（２５０．００ｇ、２．４０ｍｏｌ）、ＮａＨ（１０５．６５ｇ、２．６４ｍｏｌ）、テトラブチルアンモニウムアイオダイド（ＴＢＡＩ）（８８．７０ｇ、２４０．１４ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（２Ｌ）に混合し、その混合物に、臭化ベンジル（４５１．８０ｇ、２．６４ｍｏｌ）を０℃で滴下した。得られた混合物を２５℃で１６時間撹拌した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液（１Ｌ）で反応停止し、水層を酢酸エチル（３×１Ｌ）で抽出した。合わせた有機層を飽和食塩水（１Ｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、固体を濾過により除去し、濾液の溶媒を減圧濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝６：１）で精製し、中間体Ａ−１（２００ｇ）を得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３ ４００ＭＨｚ）δ ｐｐｍ ７．３７−７．２７（ｍ，５Ｈ）；４．６２（ｓ，２Ｈ），４．２４−４．１９（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ）；４．０７（ｓ，２Ｈ）；１．２９−１．２５（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）．

中間体Ｂ−１の製造手順。

ＮａＨ（４５．３０ｇ、１．１３ｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（１．２Ｌ）に懸濁し、その撹拌懸濁液にギ酸エチル（１１４．４２ｇ、１．５４ｍｏｌ）を添加した。懸濁液を氷浴中で冷却した後、無水ＴＨＦ（３００ｍＬ）中の化合物Ａ−１（２００ｇ、１．０３ｍｏｌ）を滴下漏斗で滴下した。白色混合物を０℃〜室温で５時間撹拌した。この時間中、反応は発熱性であり、黄色になった。別のフラスコ中で、炭酸グアニジン［５９３−８５−１］（１１１．３１ｇ、０．６１８ｍｏｌ）を、Ｎａ（２８．４１ｇ、１．２４ｍｏｌ）を無水エタノール（７５０ｍＬ）に室温で慎重に添加することにより新たに製造したナトリウムエトキシド溶液で処理した。次いで、１時間撹拌した後に得られたオフホワイトのスラリーを、上記で製造した黄色の溶液に添加した。得られた淡黄色の反応混合物を１５時間加熱還流した。溶媒を除去した後、粗製残留物を水（１．５Ｌ）に溶解した。混合物を酢酸でｐＨ＝５に調節した。固体を回収し、水およびエタノールで十分に洗浄して、中間体Ｂ−１（１６０ｇ）を得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ ｐｐｍ ４．９０（ｓ，２Ｈ），６．３３（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），７．２５（ｓ，１Ｈ），７．２９−７．４２（ｍ，５Ｈ），１１．２１（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）

中間体Ｃ−１の製造手順。
反応スキーム：

中間体Ｂ−１（１６０ｇ、０．７４ｍｏｌ）のＰＯＣｌ_３（９００ｍＬ）懸濁液を、Ｎ_２下で撹拌しながら１００℃に５時間加熱した。反応混合物を室温に冷却した。過剰のＰＯＣｌ_３を減圧留去し、油状残留物を冷飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（２Ｌ）に注ぎ入れ、それを３０分間撹拌した。混合物を酢酸エチル（３×１．５Ｌ）で抽出した。合わせた有機層を分離し、飽和食塩水（１Ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、固体を濾過により除去し、濾液の溶媒を濃縮して中間体Ｃ−１（７０ｇ）を黄色個体として得た。生成物をさらに精製することなく次の工程に使用した。

化合物１の製造手順。

Ｃ−１（７０．００ｇ、２９７．０３ｍｍｏｌ）のエタノール（１．４Ｌ）懸濁液に、ｎ−ブチルアミン（２１７．２４ｇ、２．９７ｍｏｌ）およびトリエチルアミン（６０．１１ｇ、５９４．０５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１６時間加熱還流した。反応混合物を室温に冷却し、溶媒を減圧留去した。残留物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで、石油エーテルから酢酸エチルへの勾配を使用して精製し、１（２６ｇ）を淡黄色固体として得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ_４）δ ｐｐｍ ０．９６（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ），１．３２−１．４３（ｍ，２Ｈ），１．５２−１．６１（ｍ，２Ｈ），３．３８（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），５．０１（ｓ，２Ｈ），７．２８（ｓ，１Ｈ），７．３１−７．４６（ｍ，５Ｈ）

中間体Ｄ−１の製造。
磁気撹拌子を備えた１００ｍＬ丸底フラスコに、無水酢酸（４０ｍＬ）中の１（１ｇ、３．６７ｍｍｏｌ）を入れた。黄色溶液を１５時間還流撹拌した。溶媒を減圧留去した。粗製物をシリカゲルクロマトグラフィーで、ヘプタンから酢酸エチルへの勾配を使用して精製した。最良の画分を回収し、溶媒を減圧留去して、白色固体、Ｄ−１を得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ１_９Ｈ_２４Ｎ_４Ｏ_３の分析計算値：３５６．１９；実測値３５７［Ｍ＋Ｈ］^＋
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ ｐｐｍ ０．９４（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ），１．３１−１．４５（ｍ，２Ｈ），１．５０−１．６７（ｍ，２Ｈ），２．３１（ｓ，６Ｈ），３．４４（ｍ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），５．１２（ｓ，２Ｈ），５．４１−５．５２（ｍ，１Ｈ），７．４３（ｍ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，５Ｈ），７．７９（ｓ，１Ｈ）

中間体Ｄ−２の製造。

方法Ａ。磁気撹拌子を備えた２５０ｍＬエルレンマイヤーフラスコに中間体Ｄ−１（１ｇ）およびエタノール（１００ｍＬ）を入れた。フラスコに窒素を注入した後、１０％Ｐｄ−炭素（１００ｍｇ）を添加した。フラスコを密封し、大気を除去して、水素で置換した。反応を室温で１５時間撹拌した。充填されたセライトで不均質混合物を濾過し、濾液の溶媒を減圧留去して、Ｄ−２を定量的収量で得た。

方法Ｂ。出発原料の０．１Ｍメタノール溶液を、１０％Ｐｄ／Ｃカートリッジを備えたＨ−ｃｕｂｅに０．５ｍＬ／分および水素圧３０バールで流した。ＬＣ−ＭＳは完全な変換を示す。溶媒を減圧留去した。粗製物をシリカゲルクロマトグラフィーで、ジクロロメタンから１０％メタノール／ジクロロメタンへの勾配を使用して精製した。最良の画分をプールし；溶媒を減圧留去して、白色固体、Ｄ−２を得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_１２Ｈ_１８Ｎ_４Ｏ_３の分析計算値：２６６．１４；実測値２６７［Ｍ＋Ｈ］^＋
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ ｐｐｍ ０．８７（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ），１．２８（ｄｄ，Ｊ＝１４．９，７．４Ｈｚ，２Ｈ），１．４９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．１５（ｓ，６Ｈ），３．２０−３．３７（ｍ，２Ｈ），７．０２−７．１２（ｍ，１Ｈ），７．５８（ｓ，１Ｈ），１０．２７（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）

中間体Ｄ−３の製造。

１００ｍＬ丸底フラスコに、１（１ｇ、３．６７ｍｍｏｌ）、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（７．５ｇ）、およびアセトニトリル（５０ｍＬ）を入れた。黄色の溶液を１６時間還流撹拌した。溶媒を減圧留去した。残留物をシリカクロマトグラフィーで、事前に充填された８０ｇシリカカラムおよびヘプタンから酢酸エチルへの勾配を使用し、２５４ｎｍで自動回収して精製した。最良の画分をプールし、黄色油状物、Ｄ−３を得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_２５Ｈ_３６Ｎ_４Ｏ_５の分析計算値：４７２．２６９；実測値４７３［Ｍ＋Ｈ］^＋
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ ｐｐｍ ０．９４（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ），１．３３−１．４２（ｍ，２Ｈ），１．４６（ｓ，１８Ｈ），１．５０−１．６５（ｍ，２Ｈ），３．３５−３．５１（ｍ，２Ｈ），５．０９（ｓ，２Ｈ），５．３１−５．３８（ｍ，１Ｈ），７．３６−７．４８（ｍ，５Ｈ），７．７５（ｓ，１Ｈ）

中間体Ｄ−４の製造。

中間体Ｄ−４は、中間体Ｄ−２の製造手順に従い、方法ＡまたはＢを使用して製造する。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_１８Ｈ_３０Ｎ_４Ｏ_５の分析計算値：３８２．２２２；実測値３８３［Ｍ＋Ｈ］^＋
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ ｐｐｍ ０．９５（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ），１．３９（ｓ，１８Ｈ），１．４０−１．４５（ｍ，２Ｈ），１．５３−１．６４（ｍ，２Ｈ），３．４２−３．５１（ｍ，２Ｈ），５．６６（ｓ，１Ｈ），７．４３（ｓ，１Ｈ）

化合物２の製造。

３０ｍＬバイアルに、中間体Ｄ−４（２００ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（５ｍＬ）、１−（３−ブロモプロピル）−４−メトキシベンゼン（１３０ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）、および炭酸セシウム（５０８ｍｇ、１．５６ｍｍｏｌ）を入れた。反応を室温で１５時間撹拌した。固体を濾過により除去した。濾液の溶媒を減圧留去し、粗製物をメタノール中で再構成し、それにＨＣｌ（６Ｍイソプロパノール溶液）を添加し、反応を室温で１５時間撹拌した。溶媒を減圧留去し、粗製物を逆相分離により精製し、２を遊離塩基として得た。

中間体Ｇ−１の製造。

Ａ−１（６０ｇ、３０９ｍｍｏｌ、１当量）および１−メチルイミダゾール（３０．４ｇ、３７０ｍｍｏｌ、１．２当量）をＣＨ_２Ｃｌ_２（１Ｌ）に溶解し、その撹拌溶液に塩化アセチル（２４．３ｇ、３０９ｍｍｏｌ、１当量）を−４５℃、Ｎ_２下で添加した。２０分間撹拌した後、ＴｉＣｌ_４（２１０ｇ、１．０８ｍｏｌ、３．５当量）およびトリブチルアミン（２３０ｇ、１．２４ｍｏｌ、４当量）を混合物に−４５℃、Ｎ_２下で添加し、−４５℃、Ｎ_２下で５０分間撹拌し続けた。終了後、水と酢酸エチルを添加した。有機層を分離し、水層を酢酸エチルで２回抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。固体を濾過により除去し、濾液の溶媒を減圧留去した。粗製物をシリカカラムクロマトグラフィーで、ヘプタンから酢酸エチルへの勾配を使用して精製し、淡黄色油状物、Ｇ−１を得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ ｐｐｍ １．３０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），２．２８（ｓ，３Ｈ），４．２７（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），４．４１（ｓ，１Ｈ），４．５８（ｄ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，１Ｈ），４．７５（ｄ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３２−７．４３（ｍ，５Ｈ）

中間体Ｈ−１の製造。

２０ｍＬマイクロ波用バイアルに、中間体Ｇ−１（５００ｍｇ，２．１２ｍｍｏｌ）、エタノール（５ｍＬ）、および炭酸グアニジン（２００ｍｇ、２．２２ｍｍｏｌ）を入れた。バイアルを密封し、撹拌しながら１２０℃で４時間反応させた。溶媒を減圧留去した。水（２５ｍＬ）を添加した。酢酸を慎重に添加することにより混合物をｐＨ＝５にした。沈殿物を濾過により単離して、白色固体、Ｈ−１を得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ ｐｐｍ １．８８（ｓ，３Ｈ），４．８５（ｓ，２Ｈ），６．３８（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），７．２４−７．４９（ｍ，５Ｈ），１１．１６（ｓ，１Ｈ）

中間体Ｇ−２の製造。

工程１。ナトリウムフェノラートは、１Ｌ丸底フラスコ内の等モル部のフェノールと水酸化ナトリウムをロータリーエバポレータで蒸発させることにより製造した。水の共沸除去にトルエンを使用した。

工程２。攪拌機と、滴下漏斗と、乾燥管を有する還流冷却器とを備えた２Ｌ三口フラスコに、工程１で製造したナトリウムフェノラート（１１６ｇ、１ｍｏｌ）とトルエン（１Ｌ）を入れた。懸濁液を加熱還流した後、撹拌しながらα−クロロアセト酢酸エチル（１６５ｇ、１ｍｏｌ）を滴下漏斗で添加し、反応を４時間加熱還流し続けた。淡褐色の懸濁液を室温に冷却し、水（２×５００ｍＬ）で抽出し、乾燥する（無水硫酸マグネシウム）。固体を濾過により除去し、濾液の溶媒を減圧留去した。粗製物を精製することなく次の工程に使用する。

中間体Ｈ−２の製造。

磁気撹拌子および還流冷却器を備えた１００ｍＬの丸底フラスコに、中間体Ｇ−２（１ｇ、４．５ｍｍｏｌ）、エタノール（５０ｍＬ）、および炭酸グアニジン［５９３−８５−１］（２０３ｍｇ、２．２５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１５時間還流する。溶媒を減圧留去した。水（２５ｍＬ）を添加した。酢酸を慎重に添加することにより、混合物をｐＨ＝５にした。沈殿物を濾過により単離して、白色固体、Ｈ−２を得た。これをさらに精製することなく次の工程に使用する。

中間体Ｊ−１の製造。

磁気撹拌子および還流冷却器を備えた５０ｍＬの丸底フラスコに、中間体Ｈ−２（５００ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）およびＰＯＣｌ_３（２０ｍＬ）を添加した。懸濁液を撹拌しながら６時間加熱還流した。溶媒を減圧留去し、粗製褐色油状物、Ｊ−１を得た。それ以上精製を行わなかった。化合物をそのまま後の工程に使用した。

３の製造。

磁気撹拌子を備えた５０ｍＬ封管に、中間体Ｊ−１（１５０ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）、ｎ−ブチルアミン（７０ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ）、塩基性アルミナ（１００ｍｇ）、
およびジオキサン（１０ｍＬ）を入れた。管を密封し、１２０℃の油浴に入れ、反応を撹拌しながら１５時間加熱した。容器を室温に冷却し、蓋を慎重に取り外した。内容物を丸底フラスコに注ぎ入れ、溶媒を減圧留去した。粗製物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで、ジクロロメタンから５％メタノール／ジクロロメタンへの勾配を使用して精製した。最良の画分をプールし、溶媒を減圧留去して、３を得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_１５Ｈ_２０Ｎ_４Ｏの分析計算値：２７２．１６；実測値２７３［Ｍ＋Ｈ］^＋
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ ｐｐｍ ０．８０（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ），１．２０（ｄｑ，Ｊ＝１５．０，７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．３３−１．４７（ｍ，２Ｈ），１．９８（ｓ，３Ｈ），３．２０−３．３４（ｍ，２Ｈ），４．７４（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），４．７９（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），６．７８−６．８４（ｍ，２Ｈ），６．９１−７．０１（ｍ，１Ｈ），７．１８−７．２８（ｍ，２Ｈ）

４の製造。

工程１。
２０ｍＬマイクロ波用バイアルに、市販の２，４−ジクロロ−５−メトキシピリミジン（３００ｍｇ、１．６８ｍｍｏｌ）、エタノール（５ｍＬ）、およびｎ−ブチルアミン（０．１６６ｍＬ、１．６８ｍｍｏｌ）を添加した。バイアルを密封した後、マイクロ波で１０分間、１２０℃で加熱した。ＬＣ−ＭＳは完全な変換を示す。溶媒を減圧留去した。粗製物をそのまま工程２に使用する。

工程２。
工程１の化合物をアンモニア水（１０ｍＬ）と共に２０ｍＬ圧力容器に入れ、これに炭酸水素アンモニウム（２００ｍｇ、２．６ｍｍｏｌ）およびＣｕＯ（２４ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ、０．１当量）を添加した。容器を密封し、混合物を撹拌しながら１２０℃に２４時間加熱した。反応混合物をジクロロメタン：メタノール（９：１）５ｍＬで３回抽出し、揮発性物質を減圧留去した。化合物をシリカで濾過し、ジクロロメタン：メタノール、９：１で溶出し、揮発性物質を減圧留去した。残留物を逆相クロマトグラフィーで精製した。
ＬＣ／ＭＳ：Ｃ_９Ｈ_１６Ｎ_４Ｏの分析計算値：１９６．１３；実測値１９７［Ｍ＋Ｈ］^＋１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ ｐｐｍ ０．９７（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ），１．３５−１．４８（ｍ，２Ｈ），１．５６−１．６８（ｍ，２Ｈ），３．４４−３．５２（ｍ，２Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），５．８６（ｓ，１Ｈ），５．９７（ｓ，２Ｈ），７．０７−７．１４（ｍ，１Ｈ）

５の製造。

工程１。
１６×１００試験管に、中間体Ｄ−２（１８０ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（５ｍＬ）、ヨウ化プロピル（１１１ｍｇ、０．６５６ｍｍｏｌ）、および炭酸セシウム（３２０ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）を入れた。反応を室温で１５時間撹拌した。固体を濾過により除去し、濾液の溶媒を減圧留去した。粗製物をシリカゲルクロマトグラフィーで、ジクロロメタンから１０％メタノール／ジクロロメタンへの勾配を使用して精製した。最良の画分をプールし、溶媒を減圧留去して、白色固体を得た。

工程２。
１０ｍＬマイクロ波用バイアルに、上記の白色固体（１００ｍｇ）、水酸化アンモニウム（１ｍＬ）およびエタノール（１ｍＬ）を入れた。バイアルを密封し、撹拌しながら１７５℃に１０分間加熱した。ＬＣ−ＭＳは生成物への完全な変換を示す。溶媒を減圧留去した。粗製物をシリカゲルクロマトグラフィーで、ジクロロメタンから１０％メタノール／ジクロロメタンへの勾配を使用して精製した。最良の画分をプールし、溶媒を減圧留去し、無色油状物を得た。１当量のＨＣｌ（５Ｎ〜６Ｎ ＨＣｌイソプロパノール溶液を使用）を添加することにより白色固体、５を得た。
ＬＣ／ＭＳ：Ｃ_１１Ｈ_２０Ｎ_４Ｏの分析計算値：２２４．１６；実測値２２５［Ｍ＋Ｈ］^＋
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ ｐｐｍ ０．９０（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ），０．９８（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ），１．２０−１．３５（ｍ，２Ｈ），１．５４（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），１．６９−１．７５（ｍ，２Ｈ），３．４０（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８７（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），７．４６（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），８．２８−８．３７（ｍ，１Ｈ）

ＡＡ−９を製造するための合成スキーム。

中間体ＡＡ−３の合成

バレルアルデヒド（４３ｇ、５００ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１Ｌ）溶液に、ＡＡ−２（２００ｇ、５３２ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で１６時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残留物を石油エーテルで希釈し、濾過した。濾液の溶媒を減圧留去し、残留物をシリカクロマトグラフィーで、石油エーテルから３％酢酸エチル／石油エーテルへの勾配を使用して精製し、ＡＡ−３（９０ｇ）を無色油状物として得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ｐｐｍ
６．８１−６．７７（ｍ，１Ｈ），５．６８−５．６４（ｔｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１５．６Ｈｚ，１Ｈ），２．１１−２．０９（ｍ，２Ｈ），１．４０６（ｓ，９Ｈ），１．３８−１．２６（ｍ，４Ｈ），０．８５−０．８１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．

化合物ＡＡ−５の合成

ＡＡ−４（１６５ｇ、７８１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（８００ｍＬ）に溶解し、その撹拌溶液に−７８℃でｎ−ブチルリチウム（２９０ｍＬ、７２５ｍｍｏｌ，１．５当量）を添加した。反応混合物を３０分間撹拌した後、ＴＨＦ（４００ｍＬ）中のＡＡ−３（９０ｇ、４８８．４ｍｍｏｌ）を添加し、反応−７８℃で２時間撹拌した。混合物を飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液で反応停止し、室温に加温した。生成物を酢酸エチルと水との間で分配した。有機相を飽和食塩水で洗浄し、乾燥し、蒸発させた。残留物をカラムクロマトグラフィーで、５％酢酸エチル／石油エーテルで溶出して精製し、無色油状物、ＡＡ−５（１３２ｇ）を得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ｐｐｍ ７．３６−７．１６（ｍ，１０Ｈ），３．７５−３．７０（ｍ，２Ｈ），３．４３−３．３９（ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，１Ｈ），３．３３−３．１５（ｍ，１Ｈ），１．８６−１．８０（ｍ，２Ｈ），１．４７−１．３７（ｍ，２Ｈ），１．３２（ｓ，９Ｈ），１．２６−１．１７（ｍ，７Ｈ），０．８３−０．７９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．

ＡＡ−６の合成

ＡＡ−５（１３０ｇ、３２８ ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１．５Ｌ）に溶解し、ＬＡＨ（２０ｇ、５２６ｍｍｏｌ）を０℃で少量ずつ添加した。得られた混合物を同じ温度で２時間撹拌した後、室温に加温した。混合物を飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液で反応停止した。生成物を酢酸エチルと水との間で分配した。有機相を飽和食塩水で洗浄し、乾燥し、蒸発させた。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、固体を濾過により除去し、濃縮して、粗製ＡＡ−６（１００ｇ）を得、これをさらに精製することなく次の工程に使用した。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ｐｐｍ ７．３３−７．１４（ｍ，１０Ｈ），３．９１−３．８６（ｍ，１Ｈ），３．８０−３．７７（ｄ，Ｊ＝１３．６Ｈｚ，１Ｈ），３．６３−３．６０（ｄ，Ｊ＝１３．６Ｈｚ，１Ｈ），３．４３−３．４２（ｍ，１Ｈ），３．１５−３．１０（ｍ，１Ｈ），２．７０−２．６３（ｍ，２Ｈ），１．６５−１．２８（ｍ，１０Ｈ），０．８９−０．８１（ｍ，３Ｈ）．

ＡＡ−９の合成

ＡＡ−６（３８ｇ、１１６．７５ｍｍｏｌ）および１０％Ｐｄ／Ｃのメタノール（２００ｍＬ）溶液を５０ＰＳＩの水素下、５０℃で２４時間水素化した。反応混合物を濾過し、溶媒を蒸発させて粗生成物ＡＡ７（１７ｇ）を得た。

粗生成物をジクロロメタン（２００ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（２６．１７ｇ、２５９．１ｍｍｏｌ）および二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（８４．７ｇ、１９４．４ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。得られた混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物をジクロロメタンと水との間で分配した。有機相を飽和食塩水で洗浄し、乾燥し、蒸発させた。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーで、２０％酢酸エチル／石油エーテルで溶出して精製し、ＡＡ−８（１３ｇ）を無色油状物として得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ｐｐｍ ４．０８−４．０３（ｂｒ，１Ｈ），３．６８（ｍ，１Ｈ），３．５８−３．５５（ｍ，２Ｈ），３．２０−２．９０（ｂｒ，１Ｈ），１．８０−１．７３（ｍ，１Ｈ），１．４２−１．１７（ｍ，１５Ｈ），０．８５−０．８２（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）．

ＡＡ−８（４２ｇ、０．１８２ｍｏｌ）をジオキサン（２００ｍＬ）に溶解し、ジオキサン／ＨＣｌ（４Ｍ、２００ｍＬ）を０℃で添加した。得られた混合物を室温で２時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、粗生成物を得た。ジクロロメタン／石油エーテル混合物（５０ｍＬ、１：１、ｖ／ｖ）を粗生成物に添加し、上清をデカントした。この手順を２回繰り返し、油状物、ＡＡ−９（２６．６ｇ）を得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ ｐｐｍ ８．０４（ｓ，３Ｈ），３．６０−３．４９（ｍ，２Ｈ），３．１６−３．１５（ｍ，１Ｈ），１．７１−１．６７（ｍ，２Ｈ），１．６０−１．５５（ｍ，２Ｈ），１．３３−１．２６（ｍ，４Ｈ），０．９０−０．８７（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）．

ＡＡ−１０の製造

ＡＡ−１０は、バレルアルデヒドの代わりにブチルアルデヒドを使用し、ＡＡ−９の製造に従って製造した。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ ｐｐｍ８．０７（ｓ，３Ｈ），４．８５（ｂｒ，１Ｈ），３．５７−３．４５（ｍ，２Ｈ），３．１４−３．１２（ｍ，１Ｈ），１．７０−１．６４（ｍ，２Ｈ），１．５６−１．４９（ｍ，２Ｈ），１．３８−１．３０（ｍ，２Ｈ），０．９０−０．８０（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）．

７４の製造

工程１。３，４−ジメトキシ桂皮酸（５ｇ、２４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１００ｍＬ）に溶解した。この溶液にＮ_２雰囲気下でラネーニッケルを添加した。反応混合物を水素雰囲気に暴露し、室温で１５時間撹拌した。珪藻土を充填したカートリッジで反応混合物を濾過し、濾液の溶媒を減圧留去した。残留物を次の工程にそのまま使用した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_１１Ｈ_１４Ｏ_４の分析計算値：２１０．０９；実測値２０９［Ｍ−Ｈ］

工程２。３−（３，４−ジメトキシフェニル）プロピオン酸をＴＨＦ（１００ｍＬ）に溶解した。ボランジメチルスルフィド錯体（２Ｍジエチルエーテル溶液、２０ｍＬ、４０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で終夜撹拌した。メタノールをゆっくり添加し、反応混合物を反応停止させた後、シリカを添加し、揮発性物質を減圧留去した。残留物をシリカで、ヘプタンから酢酸エチルへの勾配を使用して精製し、生成物を油状物として得た。これをそのまま次の工程に使用した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_１１Ｈ_１６Ｏ_３の分析計算値：１９６．１１；実測値１９５［Ｍ−Ｈ］

工程３。３−（３，４−ジメトキシフェニル）プロパン−１−オール（３．８ｇ、１９．５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（３．８ｍＬ、２７．３ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１５ｍＬ）に溶解した後、メタンスルホニルクロライド（１．５ｍＬ、１９．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で終夜振盪した。揮発性物質を減圧留去し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィーで、ヘプタンから酢酸エチルへの勾配を使用して精製し、生成物を透明な油状物として得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ ｐｐｍ １．９１−２．０１（ｍ，２Ｈ），２．５８−２．６４（ｍ，２Ｈ），３．１７（ｓ，３Ｈ），３．７２（ｓ，３Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ），４．１９（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），６．７１−６．７６（ｍ，１Ｈ），６．８１−６．８９（ｍ，２Ｈ）

工程４。Ｄ−４（４００ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（５１１ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）およびメタンスルホン酸３−（３，４−ジメトキシフェニル）プロピル（４３０ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）のアセトン（５０ｍＬ）溶液を５０℃に１５時間加熱した。反応混合物を遠心分離機に入れ、上清をデカントした後、蒸発乾固した。残留物をシリカカラムクロマトグラフィーで、ヘプタンから酢酸エチルへの勾配を使用して精製した。生成物を含入する画分をプールし、溶媒を減圧留去して、Ｄ−５を得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_２９Ｈ_４４Ｎ_４Ｏ_７の分析計算値：５６０．３２；実測値５６１［Ｍ＋Ｈ］^＋

工程５。ｂｏｃで保護された化合物をジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解し、６Ｍ ＨＣｌイソプロパノール溶液（３ｍＬ）を添加した。反応混合物を室温で１５時間撹拌した。揮発性物質を減圧留去した。エーテル（５ｍＬ）を添加して、沈殿を生成し、７４を濾過により単離した後、真空オーブンで１５時間乾燥した。

７５の製造

工程１。中間体Ｂ−２は、中間体Ｂ−１の製造について記載した方法に従って製造した。

工程２。Ｂ−２（１ｇ、３．６２ｍｍｏｌ）およびＤＢＵ（５．４ｍＬ、３６ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２０ｍＬ）溶液に、ＢＯＰ（２．０８ｇ、４．７１ｍｍｏｌ）を添加すると、反応混合物は透明になり、これを室温で１５分間撹拌した。ＡＡ−９（９１０ｍｇ、５．４３ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を５０℃で２日間撹拌した。揮発性物質を減圧留去し、残留物をシリカで、ジクロロメタンから１０％メタノール／ジクロロメタンへの勾配を使用して精製した。最良の画分をプールし、溶媒を減圧留去した。粗製物をジクロロメタン（２ｍＬ）中で再構成した後、ＨＣｌジエチルエーテル溶液を添加して、ＨＣｌ塩を生成した。沈殿物を濾過により単離し、真空オーブンで乾燥して、化合物７５を得た。

７６の製造

工程１。５００ｍＬのテフロン（ｔｅｆｌｏｎ）コート圧力容器内でアセトニトリル（２００ｍＬ）にＣ−１（２ｇ、８．４９ｍｍｏｌ）、Ｌ−ノルバリノール（ｎｏｒｖａｌｉｎｏｌ）（１．７５ｇ、１７ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（５．８５ｍＬ、３４ｍｍｏｌ）を溶解し、１３０℃に１５時間加熱した。混合物を室温に冷却し、揮発性物質を減圧留去し、粗製物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで、ジクロロメタンから１０％メタノール／ジクロロメタンへの勾配を使用して精製した。最良の画分をプールし、溶媒を減圧留去し、中間体Ｄ−６を得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_１６Ｈ_２２Ｎ_４Ｏ_２の分析計算値：３０２．１７；実測値３０３［Ｍ＋Ｈ］^＋

工程２。２５０ｍＬの丸底フラスコ内で無水酢酸（１００ｍＬ）にＤ−６（２ｇ、６．６１ｍｍｏｌ）を入れ、これを４時間加熱還流した。揮発性物質を減圧留去し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで、ヘプタンから酢酸エチルへの勾配を使用して精製し、黄色油状物、Ｄ７を得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_２２Ｈ_２８Ｎ_４Ｏ_５の分析計算値：４２８．２１；実測値４２９［Ｍ＋Ｈ］^＋

工程３。Ｄ−８は、中間体Ｄ−２の製造方法に従って製造した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_１５Ｈ_２２Ｎ_４Ｏ_５の分析計算値：３３８．１６；実測値３３９［Ｍ＋Ｈ］^＋

工程４。中間体Ｄ−９は、実施例７５に記載の方法に従って中間体Ｄ−４から製造した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_１５Ｈ_２２Ｎ_４Ｏ_５の分析計算値：３３８．１６；実測値３３９［Ｍ＋Ｈ］^＋

工程５。化合物５の工程２に記載の方法に従ってＤ−９の脱保護を行い、７６を得た。

化合物７７の製造

工程１。Ｄ−１０は、実施例５の製造方法に従ってＤ−４から製造し、シリカカラムでヘプタンから酢酸エチルへの勾配を用いて精製した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_２７Ｈ_３８Ｎ_４Ｏ_７の分析計算値：５３０．２７；実測値５３１［Ｍ＋Ｈ］^＋
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ ｐｐｍ ０．９３（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ），１．３７（ｄｄ，Ｊ＝１４．９，７．４Ｈｚ，２Ｈ），１．５３−１．６２（ｍ，２Ｈ），３．４０−３．５０（ｍ，２Ｈ），３．９２−３．９５（ｍ，３Ｈ），５．１３（ｓ，２Ｈ），５．３３（ｓ，１Ｈ），７．４６−７．５２（ｍ，１Ｈ），７．５６−７．６２（ｍ，１Ｈ），７．７３（ｓ，１Ｈ），８．０５（ｄｔ，Ｊ＝７．７，１．４Ｈｚ，１Ｈ），８．０９（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ）

工程２。Ｄ−１０（２．１４ｇ、３．９１ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（２５０ｍＬ）に溶解した。水素化リチウムアルミニウム（１Ｍ ＴＨＦ溶液、５．８７ｍＬ、５．８７ｍｍｏｌ）を滴下し、反応混合物を室温で３時間撹拌した。ＮＨ_４Ｃｌ（飽和水溶液）を反応混合物に滴下し、沈殿した塩を濾過により除去し、ＴＨＦで洗浄した。濾液を蒸発乾固し、粗製Ｄ−１１をそのまま次の工程に使用した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_２１Ｈ_３０Ｎ_４Ｏ_４の分析計算値：４０２．２３；実測値４０３［Ｍ＋Ｈ］^＋

工程３。Ｄ−１１（１．５７ｇ、３．９１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２０ｍＬ）に溶解し、それにＨＣｌ（６Ｍイソプロパノール溶液、５０ｍＬ）を添加した。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。揮発性物質を減圧留去し、粗製物をシリカカラムで、ジクロロメタンから１０％ジクロロメタン／メタノールへの勾配を使用して精製し、７７を油状物として得たが、これは放置すると凝固した。

７８の製造

工程１。Ｄ−４（０．５ｇ、１．３１ｍｍｏｌ）、３−ピリダジニルメタノール（１５８ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ）およびトリフェニルホスフィン（３７７ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（４ｍＬ）溶液を０℃に冷却し、ＤＩＡＤ（０．２８ｍＬ、１．４４ｍｍｏｌ）の溶液を０℃で滴下した。添加後、反応混合物を周囲温度で３時間撹拌した。溶媒を水（１０ｍＬ）で反応停止し、１０分間撹拌し、揮発性物質を減圧留去した。水層をジクロロメタンで抽出し、有機層を合わせ、溶媒を減圧留去した。粗製物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで、ヘプタンから酢酸エチルへの勾配を使用して精製した。最良の画分を合わせ、溶媒を減圧留去して、Ｄ−１２を得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_２３Ｈ_３４Ｎ_６Ｏ_５の分析計算値：４７４．２６；実測値４７５［Ｍ＋Ｈ］^＋

工程２。Ｄ−１１（６２０ｍｇ、１．３１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解し、それにＨＣｌ（６Ｍイソプロパノール溶液、１０ｍＬ）を添加した。反応混合物を室温で１５時間撹拌した。揮発性物質を減圧留去し、残留物を逆相クロマトグラフィーで精製し、７８を得た。

７９の製造

工程１。５００ｍＬフラスコ内で、無水酢酸（３００ｍＬ）にＢ−１（３０ｇ、１３８ｍｍｏｌ）および硫酸（３ｍＬ）を混合し、この混合物を９０℃に３時間加熱した。反応を室温に冷却し、沈殿物を濾過により単離し、ジイソプロピルエーテルで洗浄し、５０℃で減圧乾燥して、白色固体、Ｂ−５を得た。

工程２。４００ｍＬ ｍｕｌｔｉｍａｘ反応器内で、アセトニトリル（２４４ｍＬ）にＢ−５（２１．８ｇ、８４ｍｍｏｌ）を混合し、この混合物を３０℃で、穏やかな窒素流下で撹拌した。塩化ホスホリル（１８．１４ｍＬ、１９５ｍｍｏｌ）を５分間にわたり滴下した。添加後、反応混合物を４５℃に加熱し、混合物を１５分間撹拌した後、ＤＩＰＥＡ（３３ｍＬ、１９５ｍｍｏｌ）を１．５時間にわたりゆっくり添加した。終了する（ＬＣ−ＭＳで監視）まで反応を４５℃で撹拌した。２Ｌフラスコ内で酢酸ナトリウム（６５
ｇ）の水（７３２ｍＬ）溶液を３５℃に加熱し、この溶液に反応混合物を５分間にわたり少量ずつ入れた（ｐｏｒｔｉｏｎｅｄ）。外部冷却浴で温度を３５〜４０℃に維持する。混合物を周囲温度に到達させ、１時間撹拌し続けた。沈殿物を濾過により単離し、水で洗浄し、５０℃で減圧乾燥し、Ｃ−２を固体として得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_１３Ｈ_１２ＣｌＮ_３Ｏ_２の分析計算値：２７７．０６；実測値２７８［Ｍ＋Ｈ］^＋
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ ｐｐｍ ２．１１（ｓ，３Ｈ），５．３１（ｓ，２Ｈ），７．３３−７．３９（ｍ，１Ｈ），７．４３（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），７．４６−７．５１（ｍ，２Ｈ），８．５９（ｓ，１Ｈ），１０．６５（ｓ，１Ｈ）

工程３。中間体Ｃ−２（５．９ｇ、２１．２ｍｍｏｌ）、メチル（２Ｓ）−２−アミノヘキサノエート（５．７９ｇ、３１．９ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１４．８ｍＬ、１０６ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１００ｍＬ）溶液を４日間加熱還流した。反応混合物を室温に冷却し、溶媒を減圧留去した。残留物をジクロロメタンに溶解し、飽和食塩水で洗浄した。有機層を乾燥（硫酸マグネシウム）した後、シリカカラムでジクロロメタンから１０％メタノール／ジクロロメタンへの勾配を使用して直接精製した。最良の画分をプールし、溶媒を減圧留去し、Ｄ−１３を得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_２０Ｈ_２６Ｎ_４Ｏ_４の分析計算値：３８６．２０；実測値３８７［Ｍ＋Ｈ］^＋

工程２。Ｄ−１３（３．７ｇ、９．５７ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（１００ｍＬ）に溶解した。水素化リチウムアルミニウム（１Ｍ ＴＨＦ溶液、９．６ｍＬ、９．６ｍｍｏｌ）を滴下し、反応混合物を室温で３時間撹拌した。ＮＨ_４Ｃｌ（飽和水溶液）を反応混合物に滴下し、沈殿した塩を濾過により除去し、ＴＨＦで洗浄した。濾液を蒸発乾固し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで、ジクロロメタンから１０％メタノール／ジクロロメタンへの勾配を使用して精製した。最良の画分を合わせて、溶媒を減圧留去し、
Ｄ−１４を得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_１９Ｈ_２６Ｎ_４Ｏ_３の分析計算値：３５８．２０；実測値３５９［Ｍ＋Ｈ］^＋

工程３。Ｄ−１５は、中間体Ｄ−２について記載した方法に従って製造した。精製することなく次の工程に使用した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_１２Ｈ_２０Ｎ_４Ｏ_３の分析計算値：２６８．１５；実測値２６９［Ｍ＋Ｈ］^＋

工程４。Ｄ−１５（２１０ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）および炭酸セシウム（７６５ｍｇ、２．３５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２５ｍＬ）に混合し、この混合物を撹拌しながら６０℃に加熱した後、５−（クロロメチル）−１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール（１１３ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液を滴下した。反応混合物を６０℃で１時間撹拌した。固体を濾過により除去し、溶媒を減圧留去した。粗製Ｄ−１６をそのまま次の工程に使用した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_１８Ｈ_２８Ｎ_６Ｏ_３の分析計算値：３７６．２２；実測値３７７［Ｍ＋Ｈ］^＋

工程５。３０ｍＬガラス管に、Ｄ−１６（２９５ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）およびＮａＯＣＨ_３（３０％メタノール溶液、２ｍＬ）およびメタノール（２０ｍＬ）を入れ、混合物を６０℃で終夜撹拌した。反応混合物を逆相液体クロマトグラフィー（Ｓｕｎｆｉｒｅ
Ｐｒｅｐ Ｃ１８ ＯＢＤ １０ｍｍ、３０×１５０ｍｍ。移動相０．２５％ＮＨ_４ＯＡｃ水溶液、メタノール）で精製し、７９を遊離塩基として得た。

８０の製造

工程１。中間体Ｄ−１７は、Ｄ−１５のアルキル化によるＤ−１６に使用した方法に従って製造した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_１９Ｈ_２４Ｎ_６Ｏ_３の分析計算値：３８４．１９；実測値３８５［Ｍ＋Ｈ］^＋

工程２。３０ｍＬガラス管内で、Ｄ−１７（３０１ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）およびＮａＯＣＨ_３（３０％メタノール溶液、２ｍＬ）をメタノール（２０ｍＬ）に溶解し、６０℃で終夜撹拌した。水１０ｍＬを反応混合物に添加し、それを６０℃で２時間撹拌した。反応混合物を逆相液体クロマトグラフィー（Ｓｕｎｆｉｒｅ Ｐｒｅｐ Ｃ１８ ＯＢＤ
１０ｍｍ、３０×１５０ｍｍ。移動相０．２５％ＮＨ_４ＯＡｃ水溶液、メタノール）で精製し、８０を粉末として得た。

８１の製造

中間体Ｃ−２（２ｇ、７．２ｍｍｏｌ）、ＡＡ−９（３．０２ｇ、１８ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（５ｍＬ、３６ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（７５ｍＬ）溶液を６時間加熱還流した。反応混合物を冷却し、溶媒を減圧留去した。残留物をジクロロメタンに溶解し、飽和食塩水で洗浄した。有機層をシリカカートリッジにロードし、ジクロロメタンから１０％メタノール／ジクロロメタンへの勾配を適用した。生成物を含有する画分を蒸発乾固し、白色粉末、Ｄ−１８を得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_２０Ｈ_２８Ｎ_４Ｏ_３の分析計算値：３７２．２２；実測値３７３［Ｍ＋Ｈ］^＋
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ ｐｐｍ ０．７７−０．９２（ｍ，３Ｈ）１．１５−１．３６（ｍ，４Ｈ）１．４２−１．７２（ｍ，４Ｈ）２．１２（ｓ，３Ｈ）３．３５−３．４２（ｍ，２Ｈ）４．１１−４．２４（ｍ，１Ｈ）４．３５−４．５２（ｍ，１Ｈ）６．４２（ｄ，Ｊ＝８．８０Ｈｚ，１Ｈ）７．４２（ｓ，１Ｈ）９．６３（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）

Ｄ−１９は、中間体Ｄ−２に使用した方法に従って、Ｄ−１８から製造した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_１３Ｈ_２２Ｎ_４Ｏ_３の分析計算値：２８２．１；実測値２８３［Ｍ＋Ｈ］^＋

Ｄ−２０は、Ｄ−１７の製造方法に従ってＤ−１９から製造した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_１９Ｈ_３０Ｎ_６Ｏ_３の分析計算値：３９０．２４；実測値３９１［Ｍ＋Ｈ］^＋

８１は、化合物７９の製造方法に従ってＤ−２０から製造した。

８２の製造

工程１。中間体Ｂ−３は、Ｂ−１について記載した方法に従って製造した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_１３Ｈ_１５Ｎ_３Ｏ_２の分析計算値：２４５．１２；実測値２４６［Ｍ＋Ｈ］^＋
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ ｐｐｍ １．７９−１．９３（ｍ，２Ｈ），２．６６（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），３．７６（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），６．５４（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），７．１１−７．２１（ｍ，３Ｈ），７．２２−７．２９（ｍ，３Ｈ），１１．４６（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）

工程２。２５０ｍＬの丸底フラスコ内で、ＰＯＣｌ_３（１５０ｍＬ）にＢ−３（１５ｇ、６１．１５ｍｍｏｌ）を混合し、この混合物を加熱還流し、２時間撹拌した。反応を冷却し、溶媒を減圧留去した。残留画分をジイソプロピルエーテルでトリチュレートした。生成した沈殿物を濾過により単離し、ジイソプロピルエーテルで洗浄し、５０℃で減圧乾燥して、固体、Ｃ−３を得、これをそのまま次の工程に使用した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_１３Ｈ_１４ＣｌＮ_３Ｏの分析計算値：２６３．０８；実測値２６４［Ｍ＋Ｈ］^＋

工程３。２０ｍＬ管に、Ｃ−３（０．４５ｇ、１．０５ｍｍｏｌ）、Ｌ−２−アミノヘキサン酸−メチルエステルＨＣｌ（０．４８ｇ、２．６２ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（１．１８ｍＬ、６．８２ｍｍｏｌ）、およびアセトニトリル（５ｍＬ）を入れた。管を密封し、マイクロ波で１．５時間１２０℃で加熱した。反応を冷却し、溶媒を減圧留去した。

粗混合物を分取ＨＰＬＣにより（ＲＰ Ｖｙｄａｃ Ｄｅｎａｌｉ Ｃ１８−１０μｍ、２５０ｇ、５ｃｍ）で精製した。移動相（０．２５％ＮＨ_４ＯＡｃ水溶液、メタノール）、所望の画分を回収し、蒸発乾固した。残留画分をジクロロメタン／メタノールの混合物に溶解し、酸変性固相抽出カートリッジ（ＳＣＸ）上に注いだ。ＮＨ_３の７Ｎメタノール溶液を使用して、生成物を溶離した。回収した溶液を減圧濃縮し、所望の固体、８２を得た。

８３の製造

工程１。中間体Ｂ−４は、Ｂ−１の製造方法に従って製造した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_１４Ｈ_１７Ｎ_３Ｏ_３の分析計算値：２７５．１３；実測値２７６［Ｍ＋Ｈ］^＋
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ ｐｐｍ ３．６３（ｄｄ，Ｊ＝５．４，３．９Ｈｚ，２Ｈ），３．９５（ｄｄ，Ｊ＝５．４，３．６Ｈｚ，２Ｈ），４．５０（ｓ，２Ｈ），６．３３（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），７．２２−７．２９（ｍ，２Ｈ），７．３０−７．３６（ｍ，４Ｈ），１０．７１−１１．５８（ｍ，１Ｈ）

工程２。２５０ｍＬの丸底フラスコに、Ｂ−４（１０ｇ、３８．２７ｍｍｏｌ）およびＰＯＣｌ_３（７５ｍＬ）を入れた。混合物を加熱還流し、５時間撹拌した。反応混合物を室温に到達させ、１５時間撹拌した。溶媒を減圧留去した。粗製Ｃ−４をそのまま次の工程に使用した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_１２Ｈ_１２ＣｌＮ_３Ｏ_２の分析計算値：２６５．０６；実測値２６６［Ｍ＋Ｈ］^＋

工程３。５０ｍＬ管に、アセトニトリル（４０ｍＬ）中のＣ−４（１０ｇ、３５．７５ｍｍｏｌ）、ｎ−ブチルアミン（１０．６ｍＬ、１０７．２５ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（３０．８ｍＬ、１７８．７５ｍｍｏｌ）を入れた。混合物をマイクロ波照射して１２０℃に３時間加熱した。合わせた反応混合物を減圧濃縮し、残留油状物をジクロロメタンに溶解し、１Ｎ ＨＣｌおよび水で洗浄した。有機層を乾燥し（硫酸マグネシウム）、固体を濾過により除去し、濾液の溶媒を減圧留去し、赤茶色の泡状物、８３を得た。

８４の製造

工程１。５００ｍＬの丸底フラスコに、８３（１３．５ｇ、２５．６ｍｍｏｌ）、Ｂｏｃ無水物（２７．９４ｇ、１２８ｍｍｏｌ）およびアセトニトリル（１５０ｍＬ）を入れた。黄色溶液を１６時間還流撹拌した。溶媒を減圧留去した。残留画分をジクロロメタンに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液および水で洗浄した。有機層を乾燥し（硫酸マグネシウム）、固体を濾過により除去し、濾液の溶媒を減圧留去して、油状物、Ｄ−２０を得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_２２Ｈ_３２Ｎ_４Ｏ_４の分析計算値：４１６．２４；実測値４１７［Ｍ＋Ｈ］^＋

工程２。１Ｌエルレンマイヤーに、Ｎ_２気流下でメタノール（３５０ｍＬ）に１０％Ｐｄ／Ｃ（４ｇ）を懸濁した後、Ｄ−２０（１４．３ｇ、３４．３３ｍｍｏｌ）を添加した。１当量の水素が吸収されるまで、混合物を水素雰囲気下、５０℃で撹拌した。充填されたデカライトで濾過することにより触媒を除去した。濾液の溶媒を減圧留去し、油状物、Ｄ−２１を得た。残留物をそのまま次の工程に使用した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_１５Ｈ_２６Ｎ_４Ｏ_４の分析計算値：３２６．２０；実測値３２７［Ｍ＋Ｈ］^＋

工程３。１Ｌ丸底フラスコに、Ｄ−２１（８．７ｇ、２６．６６ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（７．４１ｍＬ、５３．３１ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（３００ｍＬ）溶液を周囲温度で撹拌し、メタンスルホニルクロライド（３．１ｍＬ、４０ｍｍｏｌ）を添加した。添加後、反応混合物を室温で１．５時間撹拌した。溶媒を減圧留去した。粗製物を酢酸エチルに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液で洗浄した。有機層を合わせ、乾燥し（硫酸マグネシウム）、固体を濾過により除去し、濾液の溶媒を蒸発乾固し、Ｄ−２２を油状物として得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_１６Ｈ_２８Ｎ_４Ｏ_６Ｓの分析計算値：４０４．１７；実測値４０５［Ｍ＋Ｈ］^＋

工程４。３０ｍＬガラス管に、アセトニトリル（１０ｍＬ）中の４−ヒドロキシピリジン（９４ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ）およびＣｓ_２ＣＯ_３（０．８ｇ、２．４７ｍｍｏｌ）の混合物を入れた。バイアルを密封し、周囲温度で１時間振盪した。Ｄ−２２（４００ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１０ｍＬ）溶液として反応混合物に添加し、室温でさらに１８時間振盪した。炭酸セシウム（３２０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で１日間振盪した。溶媒を減圧留去し、粗製物をジクロロメタン／メタノール、９５／５の混合物で処理し、１時間振盪した後、充填したシリカ２ｇで濾過した。濾液を減圧濃縮し、Ｄ−２３をそのまま次の工程に使用した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_２０Ｈ_２９Ｎ_５Ｏ_４の分析計算値：４０３．２２；実測値４０４［Ｍ＋Ｈ］^＋

工程５。７８の脱保護に使用した方法を用いてＤ−２３を脱保護し、８４を得た。

８５の製造

工程１。磁気撹拌子を備えた２５０ｍＬ丸底フラスコに、アセトニトリル（２０ｍＬ）中のＤ−４（０．３５ｇ、５．２３ｍｍｏｌ）および炭酸セシウム（０．８９ｇ、２．７５ｍｍｏｌ）を入れた。混合物を周囲温度で３０分間撹拌した。ハロゲン化アルキル（０．１９ｇ、１ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（５ｍＬ）溶液を添加し、反応混合物を室温で１日間撹拌した。反応を終了し、塩を濾過により除去した。濾液を減圧濃縮し、粗製物をシリカカラムクロマトグラフィーで、ヘプタンから酢酸エチルへの勾配を使用して精製し、中間体Ｄ−２４を得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_２４Ｈ_３７Ｎ_７Ｏ_７の分析計算値：５３５．２８；実測値５３６［Ｍ＋Ｈ］^＋

工程２。１００ｍＬエルレンマイヤーフラスコに、窒素ガスのブランケット下、チオフェン（０．２５ｍＬ）およびメタノール（２０ｍＬ）にＰｔ／Ｃ、５％（１００ｍｇ）を懸濁した後、Ｄ−２４（１３０ｍｇ、０．２４ ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を５０℃、水素雰囲気下で撹拌した。充填されたデカライトで濾過することにより触媒を除去した。濾液の溶媒を減圧留去し、Ｄ−２５を油状物として得、これをそのまま次の工程に使用した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_２４Ｈ_３９Ｎ_７Ｏ_５の分析計算値：５０５．３０；実測値５０６［Ｍ＋Ｈ］^＋

工程３。７８の製造に使用した方法に従って中間体Ｄ−２５を脱保護し、８５を得た。

８６の製造

工程１。１００ｍＬの丸底フラスコに、アジ化ナトリウム（６．８５ｇ、１０３．７６ｍｍｏｌ）の水（１２．５ｍＬ）溶液、次いでピルビン酸クロロメチル（１０．６ｇ、７０．３８ｍｍｏｌ）を入れ、９０℃で１６時間激しく撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、ジクロロメタン（２０ｍＬ）を添加した。有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、固体を濾過により除去し、濾液の溶媒を減圧留去し、Ａ−２を油状物として得た。ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_６Ｈ_１１Ｎ_３Ｏ_２の分析計算値：１５７．０９；実測値１５８［Ｍ＋Ｈ］^＋

工程２。２５ｍＬ管に、Ｄ−２６（１００ｍｇ、０．２３８ｍｍｏｌ）、Ａ−２（３７．９ｍｇ、０．２３８ｍｍｏｌ）、ｔ−ブタノール（２．５ｍＬ）および水（２．５ｍＬ）を入れた。管を密封し、混合物を周囲温度で撹拌した。硫酸銅（ＩＩ）五水和物（３ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）およびＬ−アスコルビン酸ナトリウム塩（１５．５ｍｇ、０．
０７９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１８時間撹拌した後、水（２．５ｍＬ）を添加した。沈殿物を濾過により単離し、水で洗浄し、６０℃で減圧乾燥し、白色粉末、Ｄ−２７を得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_２７Ｈ_４３Ｎ_７Ｏ_７の分析計算値：５７７．３２；実測値５７８［Ｍ＋Ｈ］^＋

工程３。１００ｍＬの丸底フラスコ内で、ＨＣｌ（５ｍＬ ６Ｍイソプロパノール溶液）およびジクロロメタン（５ｍＬ）にＤ−２７（０．１ｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を混合し、この混合物を周囲温度で１６時間撹拌した。反応を６５℃に加熱し、さらに１６時間撹拌した。溶媒を減圧留去した。

粗生成物を逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰ Ｖｙｄａｃ Ｄｅｎａｌｉ Ｃ１８−１０μｍ、２５０ｇ、５ｃｍ）で精製した。移動相（０．２５％ ＮＨ_４ＨＣＯ_３水溶液、メタノール）、所望の画分を回収し、蒸発させ、メタノールに溶解し、ＨＣｌの２Ｍエーテル溶液で処理した。固体を濾過により単離し、８６をＨＣｌ塩として得た。

８７の製造

工程１。１００ｍＬの丸底フラスコに、Ｃ−２（５００ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）、ＡＡ−１０（６９２ｍｇ、４．５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．７５ｍＬ、５．４ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（３０ｍＬ）溶液を入れた。混合物を撹拌しながら８０℃に１６時間加熱した。反応を冷却し、溶媒を減圧留去した。粗製物をジクロロメタンに溶解し、飽和食塩水で洗浄した。有機層を乾燥し（硫酸マグネシウム）、固体を濾過により除去し、濾液の溶媒を除去し、油状物、Ｄ−２８を得た。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_１９Ｈ_２６Ｎ_４Ｏ_３の分析計算値：３５８．２０；実測値３５９［Ｍ＋Ｈ］^＋
１Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ ｐｐｍ ０．８５（ｔ，Ｊ＝７．３２Ｈｚ，３Ｈ）１．１９−１．３７（ｍ，２Ｈ）１．３８−１．５３（ｍ，１Ｈ）１．５３−１．７５（ｍ，３Ｈ）２．１３（ｓ，３Ｈ）３．３８−３．４８（ｍ，２Ｈ）４．１９−４．３１（ｍ，１Ｈ）５．１６（ｓ，２Ｈ）６．６９（ｄ，Ｊ＝９．１５Ｈｚ，１Ｈ）７．２９−７．４１（ｍ，３Ｈ）７．４５−７．５３（ｍ，２Ｈ）７．６６（ｓ，１Ｈ）９．７７（ｓ，１Ｈ）

工程２。Ｄ−２９は、Ｄ−２１の製造に使用した方法に従って製造した。ＴＨＦを添加し、Ｄ−２９の溶解性を増加させた。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_１２Ｈ_２０Ｎ_４Ｏ_３の分析計算値：２６８．１５；実測値２６９［Ｍ＋Ｈ］^＋

工程３。２５０ｍＬの丸底フラスコ内で、ＤＭＦ（８０ｍＬ）中のＤ−２９（５ｇ、１８．６ｍｍｏｌ）および炭酸セシウム（１８．２ｇ、５５．９ｍｍｏｌ）の混合物を周囲温度で３０分間撹拌した。混合物を６０℃に加熱し、２−クロロメチル−３，４−ジメトキシピリジン塩酸塩（３．９７ｇ、１７．７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（６０ｍＬ）溶液を滴下した。反応混合物を６０℃で２時間撹拌した。反応を冷却し、塩を濾過により除去した。反応混合物を減圧濃縮し、Ｄ−３０をそのまま次の工程に使用した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_２０Ｈ_２９Ｎ_５Ｏ_５の分析計算値：４１９．２２；実測値４２０［Ｍ＋Ｈ］^＋
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ ｐｐｍ ０．８３（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ），１．１８−１．３２（ｍ，２Ｈ），１．４１−１．７１（ｍ，４Ｈ），２
．１４（ｓ，３Ｈ），３．３４−３．４０（ｍ，２Ｈ），３．７８（ｓ，３Ｈ），３．９１（ｓ，３Ｈ），４．１７−４．２９（ｍ，１Ｈ），４．４１（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ），５．０９（ｓ，２Ｈ），６．７９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），７．７５（ｓ，１Ｈ），８．２４（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），９．７５（ｓ，１Ｈ）

工程４。８７は、７９の製造に使用したのと同じ方法に従って、中間体Ｄ−１６から製造した。８７を、逆相クロマトグラフィー（Ｈｙｐｅｒｐｒｅｐ Ｃ１８ ＨＳ ＢＤＳ、移動相（０．２５％炭酸水素アンモニウム水溶液９０％、アセトニトリル１０％から、０．２５％炭酸水素アンモニウム水溶液０％、アセトニトリル１００％への勾配）で精製した。最良の画分をプールし、溶媒を減圧留去し、メタノール中で再構成し、ＨＣｌの２Ｍエーテル溶液で処理した後、減圧濃縮し、白色固体、８７のＨＣｌ塩を得た。

逆相液体クロマトグラフィーで８７のＨＣｌ塩を単離すると、同時に８８が低収量で単離された。最良の画分をプールし、溶媒を減圧留去して、白色固体、８８を得た。

８９の製造

工程１。１００ｍＬの丸底フラスコに、ＡＡ−８（２ｇ、８．６５ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（６ｍＬ）、イソシアン酸エチル（１．６ｍＬ、１０．３８ｍｍｏｌ）、およびＤＭＡＰ（２１ｍｇ、０．１７３ｍｍｏｌ）を入れた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。溶媒を減圧留去し、ＡＡ−１２をさらに精製することなく後の工程に使用した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_１５Ｈ_３０Ｎ_２Ｏ_４の分析計算値：３０２．２２；実測値３０３［Ｍ＋Ｈ］^＋

工程２。１００ｍＬの丸底フラスコに、粗製ＡＡ−１２（２．６１ｇ、８．６５ｍｍｏｌ）、およびジクロロメタン（３０ｍＬ）を入れた。この溶液に、ＨＣｌ（２０ｍＬ、４Ｍジオキサン溶液）を添加した。反応を室温で３時間撹拌した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_１０Ｈ_２２Ｎ_２Ｏ_２の分析計算値：２０２．１７；実測値２０３［Ｍ＋Ｈ］^＋

工程３。磁気撹拌子を備えた１００ｍＬの丸底フラスコに、２−アミノ−４−ヒドロキシ−５−メトキシ−ピリミジン（５００ｍｇ、３．５４ｍｍｏｌ）、無水ＤＭＦ（３０ｍＬ）、ＡＡ−１３（１．２７ｇ、５．３１ｍｍｏｌ）、ＤＢＵ（２．１２ｍＬ、１４．１７ｍｍｏｌ）、およびＢＯＰ（１．９６ｇ、４．４３ｍｍｏｌ）を入れた。反応混合物を室温で３０分間、その後、５０℃で１６時間撹拌した。溶媒を減圧留去し、残留物を飽和食塩水と酢酸エチルとの間で分配した。有機層を合わせ、乾燥し（硫酸マグネシウム）、
固体を濾過により除去して、濾液の溶媒を減圧留去した。粗製物を逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰ Ｖｙｄａｃ Ｄｅｎａｌｉ Ｃ１８−１０μｍ、２５０ｇ、５ｃｍ。移動相０．２５％ＮＨ_４ＨＣＯ_３水溶液、メタノール）で精製し、最良の画分をプールし、溶媒を減圧留去し、８９を得た。

２６４の製造

工程１。ＡＡ−１４は、ＡＡ−１０の製造手順に従い、適切な出発アルデヒドを使用して製造した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_７Ｈ_１７ＮＯの分析計算値：１３１．１３；実測値１３２［Ｍ＋Ｈ］^＋
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ ｐｐｍ ０．８１−０．８９（ｍ，６Ｈ），１．１５−１．２５（ｍ，２Ｈ），１．３３−１．４７（ｍ，１Ｈ），１．５４−１．６９（ｍ，２Ｈ），２．７１（ｂｒ．ｓ．，３Ｈ），２．８８−２．９８（ｍ，１Ｈ），３．６９−３．８０（ｍ，２Ｈ）

工程２。Ｃ−５は、Ｃ−２の製造に使用した方法に従って、入手可能な出発原料から製造した。粗製物をさらに精製することなく使用した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_５Ｈ_６ＣｌＮ_３Ｏの分析計算値：１５９．０２；実測値１６０［Ｍ＋Ｈ］^＋

工程３。アセトニトリルを溶媒として使用したこと以外、化合物１の製造に使用した方法に従って、Ｃ−５をＡＡ−１４と化合させ、２６４を得た。

２７８の製造

工程１。ＡＡ−１５は、ＡＡ−１０の製造手順に従い、適切な出発アルデヒドを使用して製造した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_７Ｈ_１７ＮＯの分析計算値：１３１．１３；実測値１３２［Ｍ＋Ｈ］^＋
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ ｐｐｍ ０．８１−０．８９（ｍ，６Ｈ），１．０５−１．２０（ｍ，１Ｈ），１．２７−１．４０（ｍ，１Ｈ），１．４３−１．７７（ｍ，３Ｈ），３．０５−３．１９（ｍ，１Ｈ），３．４４−３．５７（ｍ，２Ｈ），４．８２（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝１８．６Ｈｚ，２Ｈ）

工程２。アセトニトリルを溶媒として使用したこと以外、化合物１の製造に使用した方法に従って、Ｃ−５をＡＡ−１５と化合させ、２７８を得た。

２９５の製造

工程１。Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．，２０１０，Ｖｏｌ．１１０，Ｎｏ．６，３６００−３７４０に概説する手順に従って、ＡＡ−１６を製造した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ_８Ｈ_１７Ｎの分析計算値：１２７．１４；実測値１２８［Ｍ＋Ｈ］^＋

工程２。アセトニトリルを溶媒として使用したこと以外、化合物１の製造に使用した方法に従って、Ｃ−５をＡＡ−１６と化合させ、２９５を得た。

３０４の製造

工程１。Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．，２０１０，Ｖｏｌ．１１０，Ｎｏ．６，３６００−３７４０に概説する手順に従って、ＡＡ−１７を製造した。
ＬＣ−ＭＳ：Ｃ８Ｈ１９ＮＯの分析計算値：１４５．１５；実測値１４６［Ｍ＋Ｈ］^＋

工程２。アセトニトリルを溶媒として使用したこと以外、化合物１の製造に使用した方法に従って、Ｃ−５をＡＡ−１７と化合させ、３０４を得た。

分析方法。
化合物は全て、ＬＣ−ＭＳで特性評価した。次のＬＣ−ＭＳ方法を使用した：

方法Ａ。ＰＤＡ検出器（２１０〜４００ｎｍ）およびデュアルモードイオン源ＥＳ＋／−を有するＷａｔｅｒｓ ＳＱＤを備えたＷａｔｅｒｓ Ａｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ。使用したカラムは、Ｈａｌｏ Ｃ１８、２．７μｍ、２．１×５０ｍｍであり、これを５０℃に加熱した。ギ酸水溶液（０．１％）９５％／アセトニトリル５％から、アセトニトリル１００％への勾配を１．５分間にわたり傾斜させ、０．６分間維持した後、ギ酸水溶液（０．１％）１００％に０．５分間戻した。流速は０．６ｍＬ／分であった。

方法Ｄ。逆相ＵＰＬＣ（超高速液体クロマトグラフィー）を、架橋エチルシロキサン／シリカハイブリッド（ＢＥＨ）Ｃ１８カラム（１．７μｍ，２．１×５０ｍｍ；Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ）で流速０．８ｍｌ／分にて行った。２種類の移動相（１０ｍＭ酢酸アンモニウムＨ_２Ｏ溶液／アセトニトリル、９５／５；移動相Ｂ：アセトニトリル）を使用して、Ａ９５％およびＢ５％から１．３分でＡ５％およびＢ９５％への勾配条件を実施し、０．７分間維持した。注入量０．７５μｌを使用した。コーン電圧は、正イオンモードでは３０Ｖであり、負イオンモードでは３０Ｖであった。

方法Ｅ。Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｋｉｎｅｔｅｘカラム（ＸＢ−Ｃ１８ ５０×４．６ｍｍ Ｉ．Ｄ．２．６ｕ）を使用し、３５℃に維持。ＭＳ検出：ＡＰＩ−ＥＳ正イオン化モード、質量範囲１００〜１２００。ＰＤＡ検出（λ＝１９０〜４００ｎｍ）。２μＬ注入で次の勾配を使用した：

方法Ｆ。ＹＭＣ ＯＤＳ−ＡＱ Ｃ−１８；５０×４．６ｍｍ、ＩＤ＝３μｍを使用し、３５℃に維持。ＭＳ検出：ＡＰＩ−ＥＳ正イオンモード、質量範囲１００〜１４００。ＰＤＡ検出（λ＝１９０〜４００ｎｍ）。２μＬ注入で次の勾配を使用した：

方法Ｇ。脱気装置付きクォータナリポンプ、オートサンプラー、カラムオーブン（４０
℃に設定）を備えるＡｌｌｉａｎｃｅ ＨＴ ２７９０（Ｗａｔｅｒｓ）システム。カラムからの流れをＭＳ分光計に分岐した。ＭＳ検出器はエレクトロスプレーイオン源と共に構成された。キャピラリーニードル電圧は３ｋＶであり、イオン源温度は１４０℃に維持した。窒素をネブライザーガスとして使用した。Ｘｔｅｒｒａ ＭＳ Ｃ１８カラム（３．５μｍ，４．６×１００ｍｍ）、流速１．６ｍＬ／分。３種類の移動相（移動相Ａ：２５ｍＭ酢酸アンモニウム９５％＋アセトニトリル５％；移動相Ｂ：アセトニトリル；移動相Ｃ：メタノール）を使用して、Ａ１００％から６．５分でＢ５０％およびＣ５０％に、０．５分でＢ１００％に変化させ、１分間Ｂ１００％の勾配条件を実施し、１．５分間Ａ１００％と再平衡化させた。１０μｌの注入量を使用した。

方法Ｈ。逆相ＵＰＬＣ（超高速液体クロマトグラフィー）を架橋エチルシロキサン／シリカハイブリッド（ＢＥＨ）Ｃ１８カラム（１．７μｍ，２．１×５０ｍｍ；Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ）で、流速０．８ ｍＬ／分にて行った。２種類の移動相（移動相Ａ：１０ｍＭ酢酸アンモニウムＨ_２Ｏ溶液／アセトニトリル、９５／５；移動相Ｂ：アセトニトリル）を使用して、Ａ９５％およびＢ５％から１．３分でＡ５％およびＢ９５％に変化させる勾配条件を実施し、０．２分間維持した。注入量０．５μｌを使用した。コーン電圧は、正イオンモードでは１０Ｖであり、負イオンモードでは２０Ｖであった。

式（Ｉ）の化合物の生物活性
生物学的アッセイの説明
ＴＬＲ７およびＴＬＲ８活性の評価
ＴＬＲ７またはＴＬＲ８発現ベクターおよびＮＦκＢ−ｌｕｃレポーター構成体で一過性トランスフェクションを行ったＨＥＫ２９３細胞を使用する細胞レポーターアッセイで、化合物のヒトＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８活性化能力を評価した。一例では、ＴＬＲ発現構成体は、各野生型配列、またはＴＬＲの第２のロイシンリッチリピートに欠失がある突然変異体配列を発現する。このような突然変異ＴＬＲタンパク質は、アゴニスト活性化をより受け易いことが以前示された（米国特許第７４９８４０９号明細書）。

簡潔に言えば、ＨＥＫ２９３細胞を培養培地（１０％ＦＣＳおよび２ｍＭグルタミンを補ったＤＭＥＭ）中で増殖させた。１０ｃｍ皿内で細胞のトランスフェクションを行うために、トリプシン−ＥＤＴＡで細胞を剥離し、ＣＭＶ−ＴＬＲ７またはＴＬＲ８プラスミド（７５０ｎｇ）、ＮＦκＢ−ｌｕｃプラスミド（３７５ｎｇ）およびトランスフェクション試薬の混合物でトランスフェクションを行い、加湿した５％ＣＯ_２雰囲気中、３７℃で４８時間インキュベートした。次いで、トランスフェクション細胞をトリプシン−ＥＤＴＡで剥離し、ＰＢＳ中で洗浄し、１．６７×１０^５細胞／ｍＬの密度になるように培地に再懸濁した。次いで、４％ＤＭＳＯ中の化合物１０μＬが既に存在する３８４ウェルプレートの各ウェルに細胞３０マイクロリットルを分注した。３７℃、５％ＣＯ_２で６時間インキュベートした後、Ｓｔｅａｄｙ Ｌｉｔｅ Ｐｌｕｓ基質（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）１５μｌを各ウェウルに添加することによりルシフェラーゼ活性を測定し、ＶｉｅｗＬｕｘ ｕｌｔｒａＨＴＳマイクロプレートイメージャー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で読み取りを行った。クワドルプリケート（ｑｕａｄｒｕｐｌｉｃａｔｅｓ）で行った測定から用量反応曲線を生成した。アッセイの標準偏差を少なくとも２倍上回る効果をもたらす濃度と定義される最低有効濃度（ＬＥＣ）値を各化合物について測定した。

３８４ウェルプレート内で、同様の一連の希釈を行った化合物を、ＣＭＶ−ＴＬＲ７構成体単独（１．６７×１０^５細胞／ｍＬ）でトランスフェクションを行った細胞１ウェル当たり３０μＬと共に使用して、化合物の毒性を並行測定した。３７℃、５％ＣＯ_２で６時間インキュベートした後、１ウェル当たりＡＴＰ ｌｉｔｅ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）１５μＬを添加し、ＶｉｅｗＬｕｘ ｕｌｔｒａＨＴＳマイクロプレートイメージャー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で読み取ることにより、細胞生存度を測定した。データ
はＣＣ_５０として報告した。

ＨＣＶレプリコン複製の抑制
ヒトＴＬＲ７を活性化すると、ヒト血液中に存在する血漿細胞様樹枝状細胞によるインターフェロンの堅調な産生が起こる。末梢血単核球（ＰＢＭＣ）から調整培地でインキュベートした時のＨＣＶレプリコンシステムの抗ウイルス活性を調べることにより、化合物のインターフェロン誘導能力を評価した。ＨＣＶレプリコンアッセイは、Ｌｏｈｍａｎｎら（Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９９）２８５：１１０−１１３；Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（２００３）７７：３００７−１５ ３０１９）により記載のバイシストロニックな発現構成体に基づき、Ｋｒｉｅｇｅｒら（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（２００１）７５：４６１４−４６２４）により記載された変更を行った。アッセイは、レポーター遺伝子（ホタル−ルシフェラーゼ）および選択可能なマーカー遺伝子（ｎｅｏＲ、ネオマイシンリン酸転移酵素）により始まる、脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）由来の内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）から翻訳されるＨＣＶ１ｂ型の野生型ＮＳ３−ＮＳ５Ｂ領域を含むバイシストロニックな発現構成体をコードするＲＮＡを有する、安定トランスフェクション細胞株Ｈｕｈ−７ ｌｕｃ／ｎｅｏを使用した。構成体は、ＨＣＶ１ｂ型由来の５’および３’ＮＴＲ（非翻訳領域）に隣接する。Ｇ４１８（ｎｅｏＲ）の存在下でのレプリコン細胞の継代培養は、ＨＣＶ ＲＮＡの複製に依存する。とりわけルシフェラーゼをコードする、ＨＣＶ ＲＮＡを自律的に且つ高レベルに複製する安定トランスフェクションレプリコン細胞を、調整細胞培養培地のプロファイリングに使用した。

簡潔に言えば、ＰＢＭＣは、標準的Ｆｉｃｏｌｌ遠心分離手順を使用して、少なくとも２つのドナーのバフィーコートから製造した。単離されたＰＢＭＣを、１０％ヒトＡＢ血清を補ったＲＰＭＩ培地に再懸濁し、化合物（全量７０μＬ）の入った３８４ウェルプレートに２×１０^５細胞／ウェルを分注した。終夜インキュベートした後、３０μＬ中２．２×１０^３レプリコン細胞／ウェルの入った（前日に播種した）３８４ウェルプレートに上清１０μＬを移した。２４時間インキュベートした後、４０μＬ／ウェルのＳｔｅａｄｙ Ｌｉｔｅ Ｐｌｕｓ基質（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用してルシフェラーゼ活性をアッセイすることにより複製を測定し、ＶｉｅｗＬｕｘ ｕｌｔｒａＨＴＳマイクロプレートイメージャー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で測定した。Ｈｕｈ７−ｌｕｃ／ｎｅｏ細胞に対する各化合物の抑制活性を、ＥＣ_５０値として報告したが、これはＰＢＭＣに適用するとルシフェラーゼ活性が５０％低下する化合物濃度と定義され、これはまた、所定量のＰＢＭＣ培養培地を移した時のレプリコンＲＮＡの複製の程度を示す。組み換えインターフェロンα−２ａ（Ｒｏｆｅｒｏｎ−Ａ）を標準対照化合物として使用した。

式（Ｉ）の化合物の生物活性。前述のＨＥＫ ２９３ ＴＯＸアッセイで、化合物は全て＞２４ｕＭのＣＣ５０を示した。

ＩＳＲＥプロモーターエレメントの活性化
ＰＢＭＣから調整培地によるインターフェロン刺激応答エレメント（ＩＳＲＥ）の活性化を測定することにより、化合物のＩＦＮ−Ｉ誘導能力も評価した。配列ＧＡＡＡＣＴＧＡＡＡＣＴのＩＳＲＥエレメントはＳＴＡＴ１−ＳＴＡＴ２−ＩＲＦ９転写因子に対する応答性が高く、それはＩＦＮ−Ｉがその受容体ＩＦＮＡＲ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，ＰＴ３３７２−５Ｗ）に結合すると活性化される。Ｃｌｏｎｔｅｃｈ製のプラスミドｐＩＳＲＥ−Ｌｕｃ（ｒｅｆ．６３１９１３）は、このＩＳＲＥエレメントを５コピー、その後、ホタルルシフェラーゼＯＲＦを含有する。ｐＩＳＲＥ−Ｌｕｃで安定トランスフェクションを行ったＨＥＫ２９３細胞株（ＨＥＫ−ＩＳＲＥｌｕｃ）は、調整ＰＢＭＣ細胞培養培地のプロファイルに合うように樹立された。

簡潔に言えば、ＰＢＭＣは、標準的Ｆｉｃｏｌｌ遠心分離手順を使用して、少なくとも
２つのドナーのバフィーコートから製造された。単離されたＰＢＭＣを、１０％ヒトＡＢ血清を補ったＲＰＭＩ培地に再懸濁し、化合物（全量７０μＬ）の入った３８４ウェルプレートに２×１０^５細胞／ウェルを分注した。終夜インキュベートした後、３０μＬ中５×１０^３ＨＥＫ−ＩＳＲＥｌｕｃ細胞／ウェルの入った（前日に播種した）３８４ウェルプレートに上清１０μＬを移した。２４時間インキュベートした後、４０μＬ／ウェルのＳｔｅａｄｙ Ｌｉｔｅ Ｐｌｕｓ基質（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用してルシフェラーゼ活性をアッセイすることによりＩＳＲＥエレメントの活性を測定し、ＶｉｅｗＬｕｘ ｕｌｔｒａＨＴＳマイクロプレートイメージャー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で測定した。ＨＥＫ−ＩＳＲＥｌｕｃ細胞に対する各化合物の刺激活性をＬＥＣ値として報告したが、これはＰＢＭＣに適用するとアッセイの標準偏差を少なくとも２倍上回るルシフェラーゼ活性が得られる化合物濃度と定義された。ＬＥＣはまた、所定量のＰＢＭＣ培養培地を移した時のＩＳＲＥ活性の程度を示す。組み換えインターフェロンα−２ａ（Ｒｏｆｅｒｏｎ−Ａ）を標準対照化合物として使用した。

所与の化合物について、このアッセイから得られたＬＥＣ値は、「ＨＣＶ複製抑制のアッセイ」から得られたＥＣ_５０値と同じ範囲であった。従って、２つのアッセイのどちらかで測定された、ＰＢＭＣでＩＦＮ−Ｉを誘導する化合物の能力を比較することが可能である。

Claims (8)

1. 式（Ｉ）
   

   

   
   （式中、
   Ｒ₁は、水素、Ｃ₁〜₄アルキル、シクロプロピルまたはＣ₁〜₆アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシル、トリフルオロメチルであり、
   Ｒ₂は、それぞれがハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、Ｃ₁〜₆アルキル、ジ−（Ｃ₁〜₆）アルキルアミノ、Ｃ₁〜₆アルキルアミノ、Ｃ₁〜₆アルコキシ、Ｃ₃〜₆シクロアルキル、カルボン酸、カルボン酸エステル、カルボン酸アミド、複素環、アリール、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ニトリルから独立して選択される１つ以上の置換基で任意選択により置換されている、Ｃ₁〜₈アルキル、（Ｃ₁〜₄）アルコキシ−（Ｃ₁〜₄）アルキル、Ｃ₃〜₇シクロアルキル、Ｃ₄〜₇複素環、芳香族、二環式複素環、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキルであり、
   Ｒ₃は、それぞれがハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、Ｃ₁〜₃アルキル、Ｃ₁〜₃アルコキシまたはＣ₃〜₆シクロアルキル、ニトリルから独立して選択される１つ以上の置換基で任意選択により置換されている、Ｃ₄〜₈アルキル、Ｃ₄〜₈アルコキシ、Ｃ₂〜₆アルケニルまたはＣ₂〜₆アルキニルである）
   の化合物、またはその薬学的に許容される塩、互変異性体、溶媒和物または多形であって、但し、以下の化合物
   ２−アミノ−５−（４−クロロフェノキシ）−４−（４−ヒドロキシブチルアミノ）ピリミジン、
   ２−アミノ−５−（４−クロロフェノキシ）−４−（５−ヒドロキシペンチルアミノ）ピリミジン、
   ２−アミノ−５−（４−クロロフェノキシ）−４−（６−ヒドロキシヘキシルアミノ）ピリミジン、
   ２−アミノ−５−（４−クロロフェノキシ）−４−（１，１−ジメチル−２−ヒドロキシ（エチルアミノ））ピリミジン、
   ２−アミノ−５−（４−クロロフェノキシ）−４−（２−ヒドロキシ−１−ヒドロキシメチル−１−メチル（エチルアミノ））ピリミジン、
   ２−アミノ−５−（４−クロロフェノキシ）−４−（トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ）ピリミジン、
   ２−アミノ−５−（４−クロロフェノキシ）−４−（３，４−ジヒドロキシブチルアミノ）ピリミジン、
   ２−アミノ−５−（４−クロロフェノキシ）−４−（４−ヒドロキシペンチルアミノ）ピリミジン、
   ２−アミノ−５−（４−クロロフェノキシ）−４−（１，１−ジメチル−２−ヒドロキシエチル−アミノ）ピリミジン、および、
   ２−アミノ−５−（４−クロロフェノキシ）−４−（１−エチル−２−ヒドロキシエチルアミノ）ピリミジンＨＣｌ、
   を除く、上記化合物。
2. Ｒ₃がブチルまたはペンチルであり、Ｒ₂およびＲ₁が前述の通りである、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
3. Ｒ₃がヒドロキシルで置換されたＣ₄〜₈アルキルであり、Ｒ₂およびＲ₁が前述の通りである、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
4. Ｒ₃が、ヒドロキシルで置換されたＣ₄〜₈アルキルであるとき、次のうちの１つである、請求項３に記載の式（Ｉ）の化合物。
   

   
5. Ｒ₁が水素または−ＣＨ₃であり、Ｒ₂およびＲ₃が前述の通りである、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
6. 次式：
   

   

   
   または
   

   

   
   を有する、請求項１に記載の化合物。
7. 請求項１〜６のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、互変異性体、溶媒和物または多形を、１種以上の薬学的に許容される医薬品添加物、賦形剤または担体と共に含む、医薬組成物。
8. 医薬として使用される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物、もしくはその薬学的に許容される塩、互変異性体、溶媒和物もしくは多形、または請求項７に記載の医薬組成物。