KR102280559B1

KR102280559B1 - 바이러스 감염 및 추가적인 질환의 치료를 위한 피리돈 유도체

Info

Publication number: KR102280559B1
Application number: KR1020157034542A
Authority: KR
Inventors: 고완 데이비드 크레이그 맥; 피에르 쟝-마리 베르나르 라보이송
Original assignee: 얀센 사이언시즈 아일랜드 언리미티드 컴퍼니
Priority date: 2013-05-24
Filing date: 2014-05-23
Publication date: 2021-07-22
Also published as: PH12015502564B1; US20190367474A1; JP6377139B2; KR20160013060A; CL2015003431A1; PH12015502564A1; EA034674B1; US20160108021A1; EP3004074A1; EA201592242A1; MX365848B; CA2912338C; BR112015028890B1; CN105377833B; NZ713679A; CA2912338A1; ES2657283T3; UA117586C2; BR112015028890A2; DK3004074T3

Abstract

본 발명은 피리돈 유도체, 그 제조 방법, 약학적 조성물 및 치료요법에서의 그들의 용도에 관한 것이다.

Description

바이러스 감염 및 추가적인 질환의 치료를 위한 피리돈 유도체{PYRIDONE DERIVATIVES FOR THE TREATMENT OF VIRAL INFECTIONS AND FURTHER DISEASES}

본 발명은 피리돈 유도체, 그 제조 방법, 약제학적 조성물 및 치료요법에서의 사용에 관한 것이다.

본 발명은 톨-유사 수용체(TLRs)의 조절 또는 작용이 관여하는 바이러스 감염, 면역 또는 염증 질환의 치료에서의 피리돈 유도체의 사용에 관한 것이다.

톨-유사 수용체는 세포외 루이신 풍부 도메인 및 보존 영역을 포함하는 세포질 확장을 특징으로 하는 1차 경막 단백질이다. 선천성 면역시스템은 특정 타입의 면역 세포의 세포 표면상에 발현된 이들 톨-유사 수용체들을 통해 병원체-관련 분자 패턴을 인식할 수 있다. 외래 병원체의 인식은 사이토킨의 생성 및 식세포상의 공-자극 분자의 상향 조절을 활성화한다. 이는 T 세포 행동의 조절을 이끈다.

대부분의 포유류 종은 10 내지 15개 타입의 톨-유사 수용체를 갖고 있는 것으로 추정되고 있다. 13개의 TLR들(간단히, TLR1 내지 TLR13로 명명)이 인간 및 마우스에서 확인되었으며, 이들 다수의 등가 형태가 다른 포유류 종에서 발견되었다. 그러나 인간에서 발견된 특정 TLR의 등가물들이 모든 포유류에 존재하는 것은 아니다. 예를 들면, 인간에서 TLR10과 유사한 단백질을 코딩하는 유전자가 마우스에 존재하지만, 레트로바이러스에 의해 과거 어떤 시점에서 손상된 것으로 보인다. 한편, 마우스는 TLR 11, 12 및 13을 발현하나, 이들 중 어떤 것도 인간에서는 나타나지 않는다. 다른 포유류는 인간에서 발견되지 않는 TLR들을 발현할 수 있다. 다른 비-포유류 종은, 타키푸구 복어에서 발견되는 TLR14에 의해 입증되는 바와 같이, 포유류와 다른 TLR들을 가질 수 있다. 이는 인간의 선천성 면역의 모델로서 실험 동물을 사용하는 과정을 복잡하게 할 수 있다.

톨 유사 수용체에 관한 자세한 리뷰는 하기 학술지 논문을 참조한다. Hoffmann, J.A., Nature, 426, p33-38, 2003; Akira, S., Takeda, K., and Kaisho, T., Annual Rev. Immunology, 21, p335-376, 2003; Ulevitch, R. J., Nature Reviews: Immunology, 4, p512-520, 2004.

WO 2006/117670에서의 퓨린 유도체, WO 98/01448 및 WO 99/28321에서의 아데닌 유도체 및 WO 2009/067081에서 피리미딘들과 같은 톨-유사 수용체에 대해 활성을 나타내는 화합물이 이전에 기술된 바 있다.

그러나, 선행기술의 화합물에 비해 바람직한 선택성, 및 개선된 안전성 프로파일을 갖는 신규한 톨-유사 수용체 조절제에 대한 강한 요구가 존재한다.

본 발명에 따르면, 화학식 (I)의 화합물, 그 약제학적으로 허용가능한 염, 용매화물 또는 다형이 제공되되,

[화학식 I]

R₁은, 아릴, 할로겐, 하이드록실, 아미노, 카르복실산, 카르복시 에스테르, 카르복시 아미드, 아실 설폰아미드, C_1-3알킬, C_3-6 사이클로알킬, 설폰, 설폭사이드, 설폰아미드, 헤테로사이클 또는 니트릴로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기에 의해 선택적으로 치환된 C_1-6알킬이고;

R₂, R₃, R₄, 및 R₅가 수소, 할로겐, C_1-3알킬, C_1-3알콕시, C_3-6 사이클로알킬, 아릴, -CF₃또는 헤테로사이클로부터 독립적으로 선택되거나;

R₂가 R₃와 융합되어 고리 구조를 형성하거나,

R₃가 R₄와 융합되어 고리 구조를 형성하거나,

R₄가 R₅와 융합되어 고리 구조를 형성한다.

제1 구현예에서, 본 발명은 화학식 (I)의 화합물을 제공하되, R₁은 n-부틸이고, R₂, R₃, R₄, 및 R₅는 수소이다.

추가의 일 구현예에서, 본 발명은 화학식 (I)의 화합물에 관한 것으로서, R₁은 n-부틸이고, R₂가 R₃와 융합되어 고리 구조를 형성하거나, R₃가 R₄와 융합되어 고리 구조를 형성하거나, R₄가 R₅와 융합되어 고리 구조를 형성한다.

화학식 (I)의 화합물 및 그 약제학적으로 허용가능한 염, 용매화물 또는 다형은 의약품, 특히 톨-유사 수용체 TLR7 및/또는 TLR8 활성, 특히 TLR7 활성의 조절제로서의 활성을 갖는다.

추가 측면에서, 본 발명은 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제, 희석제 또는 담체와 함께, 화학식 (I)의 화합물, 또는 그 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물 또는 다형을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

나아가, 본 발명에 따른 화학식 (I)의 화합물, 또는 그 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 또는 다형 또는 화학식 (I)의 화합물, 또는 그 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 또는 다형을 포함하는 약제학적 조성물은 약제로서 사용될 수 있다.

본 발명의 다른 측면은 화학식 (I)의 화합물, 또는 그 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 또는 다형 또는 상기 화학식 (I)의 화합물, 또는 그 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 또는 다형을 포함하는 약제학적 조성물을 TLR7 및/또는 TLR8의 조절에 관련된 임의의 질병의 치료에 사용할 수 있다는 것이다.

용어 "알킬"은 특정 수의 탄소 원자를 함유하는 직쇄, 또는 분지쇄 포화 지방족 탄화수소를 지칭한다.

용어 "할로겐"은 불소, 염소, 브롬 또는 요오드를 지칭한다.

용어 "사이클로알킬"은 특정 수의 탄소 원자를 함유하는 탄소환 고리를 지칭한다.

용어 "알콕시"는, 예를 들어 메톡시기 또는 에톡시기와 같이, 산소에 단일 결합된 알킬(탄소 및 수소 사슬)기를 지칭한다.

용어 "아릴"은 N, O 및 S, 특히 N 및 O로부터 선택된 하나 또는 2개의 헤테로원자를 선택적으로 포함하는 방향족 고리 구조를 의미한다. 상기 방향족 고리 구조는 5, 6 또는 7개의 고리 원자를 가질 수 있다. 특히, 상기 방향족 고리 구조는 5 또는 6개의 고리 원자를 가질 수 있다.

용어 "헤테로사이클"은 포화되거나 부분적으로 포화되고, 에틸옥사이드, 테트라하이드로퓨란, 디옥산 또는 다른 환형 에테르를 포함하는 분자를 지칭한다. 질소를 함유하는 헤테로사이클은, 예를 들어 아제티딘, 모폴린, 피페리딘, 피페라진, 피롤리딘 등을 포함한다. 다른 헤테로사이클은, 예를 들어, 티오모폴린, 디옥솔리닐, 및 환형 설폰을 포함한다.

용어 "고리 구조"는 5-7원, 바람직하게는 6-원인, 포화되거나 부분적으로 포화된 단일환 모이어티(질소, 산소 또는 황으로부터 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 선택적으로 포함함)를 의미한다.

화학식 (I)의 화합물의 약제학적으로 허용 가능한 염은 이들의 산부가염 및 염기염을 포함한다. 적당한 산부가염은 비-독성염을 형성하는 산으로부터 형성된다. 적당한 염기염은 비-독성 염을 형성하는 염기로부터 형성된다.

본 발명의 화합물은 또한 비용매화 및 용매화 형태로 존재할 수 있다. 용어 "용매화물"은 본원에 본 발명의 화합물 및 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 용매 분자, 예를 들면, 에탄올을 포함하는 분자 복합체를 기술하기 위해 사용된다.

용어 "다형"은 둘 이상의 형태 또는 결정 구조로 존재하는 본 발명의 화합물의 능력을 지칭한다.

본 발명의 화합물은 결정형 또는 무정형 산물로 투여될 수 있다. 이들은 예를 들면 침전, 결정화, 동결 건조, 분무 건조 또는 증발 건조와 같은 방법에 의해 예컨대 고체 플러그, 분말 또는 필름으로서 수득될 수 있다. 이들은 단독으로 또는 본 발명의 하나 이상의 다른 화합물과 조합하여 또는 하나 이상의 다른 약물과 조합하여 투여될 수 있다. 일반적으로 이들은 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 부형제와 함께 제제로서 투여될 것이다. 용어 "부형제"는 본 발명에서 본 발명의 화합물 이외의 임의의 성분을 기술하기 위해 사용된다. 부형제의 선택은 주로 특정 투여 모드, 용해도 및 안정성에 대한 부형제의 효과 및 제형의 성질과 같은 인자에 의존한다.

본 발명의 화합물 또는 이들의 임의의 하위그룹은 투여 목적에 따라 다양한 약제학적 형태로 제제화될 수 있다. 적합한 조성물로서 전신 투여 약물에 통상적으로 채용되는 모든 조성물이 인용될 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물을 제조하기 위하여, 유효량의 특정 화합물, 선택적으로 염 형태를 활성성분으로서 약제학적으로 허용가능한 담체와 친밀한 혼합에 의해 합하고, 이때 담체는 투여에 바람직한 제제 형태에 따라 다양한 형태를 가질 수 있다. 이들 약제학적 조성물은 바람직하게 예를 들면, 경구, 직장 또는 경피 투여에 적합한 단일 제형으로 존재한다. 예를 들면, 경구 제형의 조성물을 제조하는데 임의의 통상적인 약제학적 매질이 채용될 수 있으며, 현탁액, 시럽, 엘릭실, 에멀젼 및 용액과 같은 경구 액체 제제의 경우에는 예를 들면, 물, 글리콜, 오일, 알콜 등; 분말, 필, 캡슐 및 정제의 경우에는 전분, 슈가, 카올린, 희석제, 활택제, 결합제, 붕해제 등과 같은 고체 담체를 채용할 수 있다. 투여의 편의성 때문에, 정제 및 캡슐제는 가장 유용한 경구 복용 단위 형태를 대표하며, 이 경우 고체 약제학적 담체가 자명하게 채용된다. 또한 사용 직전 액체 형태로 전환될 수 있는 고체 형태 제제도 포함된다. 경피 투여에 적합한 조성물에서 담체는 선택적으로 투과 증강제 및/또는 적당한 습윤제를 포함하며, 선택적으로 피부에 상당한 유해효과를 일으키지 않는 적합한 임의의 성질의 첨가제를 부차적 비율로 조합할 수 있다. 상기 첨가제는 피부 투여를 촉진하며/하거나 원하는 조성물을 제조하는데 도움이 될 수 있다. 이들 조성물은 다양한 방식, 예컨대 경피 패치, 스폿-온, 연고로 투여될 수 있다. 본 발명의 화합물은 또한 흡입 또는 통기를 통해 이러한 방식으로 투여하기 위해 당업계에 사용되는 방법 및 제형으로 투여될 수 있다. 따라서, 일반적으로 본 발명의 화합물은 용액, 현탁액 또는 건조 분말의 형태로 폐에 투여될 수 있다.

투여 편의성 및 용량 균일성을 위해 전술한 약제학적 조성물을 단위 제형으로 제형화하는 것이 특히 유리하다. 본 발명에서 단위 제형은 요구되는 약제학적 담체와 함께 바람직한 치료학적 효과를 산출하도록 계산된 예정된 양의 활성 성분을 포함하는 단위로, 단위 용량으로서 적합한 물리적으로 구별되는 단위들을 지칭한다. 이러한 단위 제형의 예는 정제(분할선이 있는 정제 또는 코팅된 정제를 포함), 캡슐, 필, 분말 패킷, 웨이퍼, 좌제, 주사 가능한 용액 또는 현탁액 등 및 이들의 분리된 배수들이다.

감염 질환의 치료분야의 당업자는 후술하는 검사 결과로부터 유효량을 결정할 수 있다. 일반적으로 유효 일일량은 0.01 mg/체중 kg 내지 50　mg/체중 kg, 더 바람직하게 0.1 mg/체중 kg 내지 10 mg/체중 kg으로 사료된다. 요구되는 용량을 하루에 걸쳐 적합한 간격으로 둘, 셋, 넷 이상의 하위-용량으로 투여하는 것이 적합할 수 있다. 상기 하위-용량은 예컨대 단위 제형당 1 내지 1000 mg, 및 특히 5 내지 200　 mg의 활성성분을 포함하는 단위 제형으로서 제형화될 수 있다.

정확한 용량과 투여빈도는 당업자에 알려져 있는 바와 같이, 사용되는 특정 화학식 (I)의 화합물, 치료될 특정 병태, 치료될 병태의 심각도, 특정 환자의 나이, 체중 및 일반적인 신체적 상태 및 각자가 복용하고 있는 다른 약물에 좌우된다. 나아가, 치료되는 대상의 반응 및/또는 본 발명의 화합물을 처방하는 의사의 평가에 의존하여 유효량이 감소되거나 증가될 수 있음은 명백하다. 전술한 유효량 범위는 단지 가이드라인이며 본 발명의 범위나 사용을 임의의 정도로 제한하지 않는다.

화합물의 제조

화학식 (I)의 화합물은 도식 1에 따라 제조된다.

도식 1(여기서, 1의 제조는 하나의 예시로서 나타낸다):

도식 1에서 A형의 화합물은, 염기(예를 들어, 트리에틸아민)를 가지거나 가지지 않는, 극성 용매, 예를 들어 에탄올 중에서 온열 조건 하에 아민으로 기능화될 수 있다. B의 알데히드기는 극성 용매(예를 들어, 메탄올) 중 NaBH4와 같은 환원제를 통하여 알코올로 전환될 수 있다. C형의 화합물 내 염소는 수소 분위기 및 염기성 조건 하에 Pd/C를 사용하여 제거될 수 있다. 그런 다음, 알코올기를 표준 미츠노부(mitsunobu) 조건 하에 기능화하여 피리돈 최종 산물을 얻는다.

중간체 A 및 B의 제조는 문헌(Bioorganic and Medicinal Chemistry 11, 2003, p4161; J. Heterocyclic Chem., 20, 41 (1983); Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters 13 (2003) p217)에 기술되어 있다.

B의 제조

A(10.0 g, 52.08 mmol)를 에탄올(100 mL)에 첨가한 다음, n-부틸아민 (3.81 g, 52.08 mmol) 및 트리에틸아민(5.27 g, 52.08 mmol)을 용액에 첨가하였다. 혼합물을 가열하여 8시간 동안 환류시켰다. 용액이 0℃에 도달하도록 하였고, 여과를 통하여 고체를 분리하고, 에탄올로 세척한 다음, 진공 하에 건조시켜 B(10 g)를 얻었다.

LC-MS m/z = 229 (M+H); 1.20분

¹H NMR (400 MHz, d-클로로포름) δ ppm 0.95 (t, 3 H), 1.31 - 1.42 (m, 2 H), 1.53 - 1.65 (m, 2 H), 3.40 - 3.50 (m, 2 H), 5.11 (br. s., 2 H), 9.22 (br. s., 1 H), 10.07 (s, 1 H)

C의 제조

NaBH₄(4 g, 105.73 mmol)를 소량씩 0℃에서 메탄올 중 B(8.0 g, 35 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 상온에서 30분간 교반하였다. 혼합물을 0℃에서 천천히 포화 NaHCO₃(100 mL) 및 H₂O(100 mL)로 처리한 다음, 상온에서 10분간 교반하였다. 침전물을 여과하여 분리하고, 물(50 mL) 및 에틸 아세테이트: 메틸 t-부틸 에테르(1:5)로 세척하였다. 여과물을 에틸 아세테이트(2 x 200 mL)로 추출하였다. 취합한 유기층을 염수로 세척하고, 건조(Na₂SO₄)시켰고, 고체를 여과하여 제거하였고, 여과물의 용매를 감압 하에 제거하였다. 잔류물을 에틸 아세테이트: 메틸 t-부틸 에테르(1:5)로 처리하였다. 침전물을 여과하여 분리하고, 메틸 t-부틸 에테르로 세척하였다. 침전물들을 취합하고 건조(진공, 50℃, 30분)시켜서, C를 얻었다.

LC-MS m/z = 231 (M+H), 0.90분

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 0.90 (t, 3 H), 1.31 (m, 2 H), 1.50 (m, 2 H), 3.28 (m, 2 H), 4.4 (m, 2 H), 4.92 (m, 1 H), 6.29 (br. s., 2 H), 6.55 (m, 1 H)

D의 제조

상온에서 H₂O(5 mL) 중 NaOH(1.6 g, 40 mmol)의 용액을 에탄올(150 mL) 중 C(5.8 g, 21.37 mmol, 순도 85%)의 용액에 첨가하였다. 여기에, 10% Pd/C(0.6 g)를 첨가하였다. 플라스크를 밀봉하고 수소 기체에 15시간 동안 노출시켰다. 수소 기체를 제거하고 질소로 교체하였고, 촉매를 여과하여 제거하였으며, 여과물의 용매를 감압 하에 제거하였다. 에틸 아세테이트를 첨가하였고, 혼합물을 H₂O, 염수로 세척하였고, 건조(Na₂SO₄)시켰다. 여과를 통해 고체를 제거하였고, 여과물의 용매를 감압 하에 제거하였다. 잔류물을 메틸 t-부틸 에테르로 세척하였다. 침전물을 여과하여 분리하고, 메틸 t-부틸 에테르로 세척하였다. 고체를 수집하고, 건조(진공, 50℃, 30분)시켜서 D를 얻었다.

LC-MS m/z = 197 (M+H); 3.21분

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 0.90 (t, J=7.4 Hz, 3 H), 1.24 - 1.41 (m, 2 H), 1.41 - 1.59 (m, 2 H), 3.23 - 3.34 (m, 2 H), 4.21 (br. s., 2 H), 4.85 (br. s., 1 H), 5.87 (s, 2 H), 6.19 (t, J=5.3 Hz, 1 H), 7.50 (s, 1 H)

화합물 1의 제조

DIAD(1.3 g, 6.429 mmol)를 N₂ 분위기 하에 0℃에서 무수 THF(10 mL) 중 트리부틸포스핀(1.34 g, 6.62 mmol), 2-하이드록시피리딘(0.326 g, 3.43 mmol) 및 D(0.5 g, 2.29 mmol, 순도 90%)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 상온에서 밤새 교반한 다음, 3시간 동안 환류시켰다. 혼합물을 진공 하에 증발시켰다. 잔류물을 페트롤륨 에테르: 메틸 t-부틸 에테르(1:1)로 처리하였다. 혼합물을 감압 하에 증발시켰다. 메틸 t-부틸 에테르를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 20분간 교반하였다. 침전물을 여과하여 분리하고 메틸 t-부틸 에테르로 세척하였다. 고체를 수집하고 건조(진공, 50℃, 30분)시켜, 1을 얻었다.

분석 방법. 모든 화합물을 하기 방법을 사용한 LC-MS로 특성분석하였다:

화학식 (I)의 화합물의 생물학적 활성

생물학적 어세이의 기술

TLR7 및 TLR8 활성 평가

화합물의 인간 TLR7 및/또는 TLR8을 활성화시키는 능력을 TLR7 또는 TLR8 발현 벡터 및 NFВ-luc리포터 구축체로 일시적으로 트랜스펙션된 HEK293 세포를 사용하여 세포 리포터 어세이에서 평가하였다.

간략하게, HEK293 세포를 배양 매질(10% FCS 및 2 mM 글루타민으로 보충한 DMEM)에서 성장시켰다. 15 cm 접시에서 세포를 트랜스펙션하기 위해, 세포를 트립신-EDTA로 분리시키고, CMV-TLR7 또는 TLR8 플라즈미드(1700 ng), NFВ-luc 플라즈미드(850 ng) 및 트랜스펙션 시약의 믹스로 트랜스펙션하고, 습윤한 5% CO₂ 대기에서 48시간 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 이후 트랜스펙션된 세포를 PBS에서 세척하고, 트립신-EDTA로 분리시키고 매질 내 1.25 x 10⁵ 세포 /mL의 밀도로 재현탁하였다. 이후 100% DMSO 내 화합물 200 nL가 이미 존재하는 384-웰 플레이트의 각 웰에 40 마이크로리터의 세포를 분배하였다. 그 후 37℃, 5% CO₂에서 6시간 인큐베이션하고,15 μL의 스테디 라이트 플러스 기질(Perkin Elmer)을 각 웰에 가하고 ViewLux ultraHTS 마이크로플레이트 이마저(Perkin Elmer) 상에서 판독하여 루시퍼라제 활성을 측정하였다. 사중으로 수행된 측정으로부터 용량 반응 곡선을 생성하였다. 각 화합물에 대해 최저효과농도(LEC)값을 결정하였으며, LEC는 시험 표준편차의 적어도 두 배 위의 효과를 유발하는 농도로 정의된다.

병행하여, 화합물 독성은 384-웰 플레이트에서 유사한 일련의 화합물 희석액을 웰당 40 μL의 CMV-TLR7 구조체 단독(1.25 x 10⁵ 세포/mL)으로 트랜스팩션된 세포와 함께 사용하여 측정하였다. 세포 생육성은 웰당 15 μL의 ATP 라이트(Perkin Elmer)를 추가하고, 37℃, 5% CO₂에서 6시간 인큐베이션한 후 ViewLux ultraHTS 마이크로플레이트 이마저(Perkin Elmer)로 판독하여 측정하였다. 데이터는 CC₅₀로 나타내었다.

병행하여, 유사한 일련의 화합물 희석액(100% DMSO 내 200 nL의 화합물)을 웰당 40 μL의 NFκB-luc 리포터 구조체 단독(1.25 x 10⁵ cells/mL)으로 트랜스팩션된 세포와 함께 사용하였다. 37℃, 5% CO₂에서 6 시간 인큐베이션후, 15 μl의 Steady Lite Plus 기질(Perkin Elmer)을 각 웰에 가하여 루시퍼라제 활성을 측정하고, 판독은 ViewLux ultraHTS 마이크로플레이트 이마저(Perkin Elmer)상에서 수행하였다. 카운터스크린 데이터를 LEC로서 보고하였다.

ISRE 프로모터 요소의 활성화

화합물의 IFN-I 유도 잠재성도 평가되었으며, 이는 PBMC로부터의 조절된 매질에 의해 인터페론-자극 반응성 요소(ISRE)의 활성화를 측정하여 평가되었다. ISRE 요소의 서열 GAAACTGAAACT는 IFN-I 가 그 수용체 IFNAR (Clontech, PT3372-5W)에 결합시 활성화된 STAT1-STAT2-IRF9 전사 인자에 매우 반응성이 높다. 플라즈미드 pISRE-Luc(Clontech사 (ref. 631913))는 ISRE 요소 5 카피, 이어 개똥벌레 루시퍼라제 ORF를 함유한다. pISRE-Luc(HEK-ISREluc)가 안정하게 트랜스펙션된 HEK293 세포주는 조절된 PBMC 세포 배양 매질 프로파일을 수립하였다.

간략하게, 표준 피콜 원심분리 프로토콜을 사용하여 적어도 두 공여자의 버피코트로부터 PBMC를 제조하였다. 분리된 PBMC를 10% 인간 AB 혈청으로 보충된 RPMI 배지에 재현탁하고, 2 x 10⁵ 세포/웰을 화합물(70 μL 총부피)을 함유하는 384-웰 플레이트에 배분하였다. 밤새 인큐베이션 후, 30 μL내 5 x 10³ HEK-ISR Eluc 세포/웰을 함유하는 384-웰 플레이트(하루전 플레이트됨)에 상등액 10 μL를 이송하였다. 이어서 24 시간 동안 인큐베이션하고, 40 μL/웰 Steady Lite Plus 기질(Perkin Elmer)을 사용하여 루시퍼라제 활성을 어세이함으로써 ISRE 요소의 활성화를 측정하고, ViewLux ultraHTS 마이크로플레이트 이마저(Perkin Elmer)로 측정하였다. 각 화합물의 HEK-ISREluc 세포에 대한 자극 활성을 LEC값으로 나타내었다. LEC값은 시험 표준 편차의 적어도 두 배 위의 루시퍼라제 활성을 나타내는 PBMC에 적용된 화합물 농도로 정의된다. 차례로 LEC는 일정량의 PBMC 배양 배지의 이송의 ISRE 활성화 정도를 가리킨다. 재조합 인터페론 α-2a(Roferon-A)를 표준 대조 화합물로 사용하였다.

Claims

화학식 (I)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물:

상기 식에서,
R₁은, C_1-3알킬에 의해 선택적으로 치환된 C_1-6알킬이고,
R₂, R₃, R₄, 및 R₅는 독립적으로 수소, C_1-3알킬, 및 -CF₃로부터 선택되거나; 또는
R₂는 R₃와 융합되어 퀴놀린 환 구조를 형성한다.
제1항에 있어서, R₁은 n-부틸이고, R₂, R₃, R₄, 및 R₅는 수소인, 화학식 (I)의 화합물.
제1항에 있어서, R₁은 n-부틸이고, R₂는 R₃와 융합되어 퀴놀린 환 구조를 형성하는, 화학식 (I)의 화합물.
제1항에 있어서, R₁은 C_4-6 알킬인, 화학식 (I)의 화합물.
제1항에 있어서, R₅는 수소인, 화학식 (I)의 화합물.
제1항에 있어서, R₂는 R₃와 융합되어 퀴놀린 환 구조를 형성하고, R₄ 및 R₅는 각각 수소인, 화학식 (I)의 화합물.
제1항에 있어서, 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물:
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 화학식 (I)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물을, 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 부형제, 희석제 또는 담체와 함께 포함하는, 바이러스 감염, 면역 또는 염증 질환 치료용 약제학적 조성물.
바이러스 감염, 면역 또는 염증 질환 치료용 약제로 사용하기 위한, 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 화학식 (I)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물.
TLR7 및/또는 TLR8의 조절에 관련된 바이러스 감염, 면역 또는 염증 질환의 치료에 사용하기 위한, 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 화학식 (I)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 화학식 (I)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물을, TLR7 및/또는 TLR8의 조절에 관련된 바이러스 감염, 면역 또는 염증 질환의 치료용 약제의 제조에 사용하는 방법.
제8항에 있어서, TLR7 및/또는 TLR8의 조절에 관련된 바이러스 감염, 면역 또는 염증 질환의 치료용인, 약제학적 조성물.
화학식 A의 화합물을 화학식 A-1의 화합물과 반응시켜 화학식 B의 화합물을 형성하고;
화학식 B의 화합물을 환원시켜 화학식 D의 화합물을 형성하고;
화학식 D의 화합물을 화학식 D-1의 화합물과 반응시켜 화학식 (I)의 화합물을 형성하는 단계를 포함하는,
화학식 (I)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물의 제조 방법:

상기 식에서,
R₁은, C_1-3알킬에 의해 선택적으로 치환된 C_1-6알킬이고,
R₂, R₃, R₄, 및 R₅는 독립적으로 수소, C_1-3알킬, 및 -CF₃로부터 선택되거나; 또는
R₂는 R₃와 융합되어 퀴놀린 환 구조를 형성한다.
제13항에 있어서,
화학식 B의 화합물을 환원시켜 화학식 C의 화합물을 형성하고;
화학식 C의 화합물을 환원시켜 화학식 D의 화합물을 형성하는, 방법:
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