EA019151B1 - Конъюгаты синтетических агонистов tlr и их применение - Google Patents

Конъюгаты синтетических агонистов tlr и их применение Download PDF

Info

Publication number
EA019151B1
EA019151B1 EA200901078A EA200901078A EA019151B1 EA 019151 B1 EA019151 B1 EA 019151B1 EA 200901078 A EA200901078 A EA 200901078A EA 200901078 A EA200901078 A EA 200901078A EA 019151 B1 EA019151 B1 EA 019151B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
alkyl
agonist
substituted
compound
conjugates
Prior art date
Application number
EA200901078A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200901078A1 (ru
Inventor
Деннис А. Карсон
Ховард Б. Коттам
Вольфганг Врасидло
Кристина С.Н. Ву
Грегори А. Дэниелс
Original Assignee
Дзе Регентс Оф Дзе Юниверсити Оф Калифорния
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Дзе Регентс Оф Дзе Юниверсити Оф Калифорния filed Critical Дзе Регентс Оф Дзе Юниверсити Оф Калифорния
Publication of EA200901078A1 publication Critical patent/EA200901078A1/ru
Publication of EA019151B1 publication Critical patent/EA019151B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/07—Bacillus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A61K31/52—Purines, e.g. adenine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/085—Staphylococcus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6905—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion
    • A61K47/6911—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion the form being a liposome
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6561—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings
    • C07F9/65616—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings containing the ring system having three or more than three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members, e.g. purine or analogs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Изобретение предусматривает фармацевтическую композицию, содержащую конъюгат TLR агониста и макромолекулы формулы А, в которой Rобозначает водород, (C-C)алкил или (C-C)алкил замещённый (C-С)алкокси и Rобозначает диолеоилфосфатидилэтаноламин (DOPE) или его фармацевтически приемлемую соль. Фармацевтические композиции изобретения пригодны для вакцин и для предотвращения, ингибирования или лечения различных нарушений, включая инфекцию, вызванную патогенами, и астму. Также изобретение относится к применению соединения формулы А для приготовления лекарственного средства для лечения млекопитающего, страдающего или восприимчивого к состоянию, опосредованному активностью толл-подобных рецепторов (TLR).

Description

Сведения о предшествующем уровне техники
В последнее десятилетие стало многое известным о молекулярной основе распознавания микробных патогенов. Считается общепринятым, что многие соматические клетки экспрессируют ряд рецепторов распознавания, которые выявляют потенциальных патогенов независимо от адаптивной иммунной системы (см. 1апс\\ау с! а1., Аппи. Веу. 1ттипо1., 20: 197 (2002)). Полагают, что эти рецепторы взаимодействуют с патоген-ассоциированными молекулярными структурами (образами), заканчивающимися микробными компонентами (РАМРз). Примеры РАМРз включают пептидогликаны, липотейхоевые кислоты из грамположительных клеточных стенок, маннозу (которая обычно содержится в углеводах микробов, но редко встречается у людей), бактериальную ДНК, двухспиральную ДНК из вирусов и глюканы из клеточных стенок грибов. РАМРз обычно отвечают некоторым критериям, которые включают (а) их экспрессию микробами, но не их хозяевами-млекопитающими, (б) консервацию структуры в широком спектре патогенов и (в) способность стимулировать врожденный иммунитет. Толл-подобные рецепторы (ТЬК.8), как было установлено, играют центральную роль при обнаружении РАМРз и в раннем ответе на микробные инфекции (см. ИпбетЬШ е! а1., Сигг. Θρίη. 1ттипо1., 14: 103 (2002)). Были идентифицированы десять ТЬК.8 человека и ряд их агонистов. Например, ТБВ7 и ТБВ9 распознают и отвечают на наличие имиквода и иммуностимулирующих СрС олигонуклеотидов (Ιδδ-ΟΌΝ) соответственно. Синтетический иммуномодулятор В-848 (резиквимод) активирует как ТБР7. так и ТБВ9. В то время как стимуляция ТЬВ инициирует обычный сигнальный каскад (включающий участие адапторного белка МуО88, транскрипционного фактора ΝΡ-кВ и провоспалительных и эффекторных цитокинов), некоторые виды клеток имеют тенденцию к продуцированию некоторых ТЬК.8. Например, ТЬК.7 и ТЬК.9 обнаруживаются, в основном, на внутренних поверхностях эндосом в дендритных клетках (ОСз) и В-лимфоцитов (у людей; макрофаги у мышей экспрессируют ТЬК.8 и ТЬК.9). С другой стороны, ТЬК8 обнаружен в моноцитах крови человека (см. Нотпипд е! а1., 1. 1ттипо1., 168: 4531, (2002)).
Интерфероны (ΙΝΡδ) также участвуют в эффективной индукции иммунного ответа, особенно после вирусной инфекции (Втаззатб е! а1., 1. Ьеикос. Вю1., 71: 568 (2002)). Однако многие вирусы продуцируют множество белков, которые блокируют образование интерферонов или действие интерферонов на различных уровнях. Полагают, что антагонизм интерферона является частью общей стратегии для того, чтобы избежать возникновения врожденного, а также адаптивного иммунитета (см. Ьеуу е! а1., Су!окше Сго\\111 Рае!от Кеу., 12: 143 (2001). Хотя ТЬК агонисты могут быть достаточно активными при осуществлении различных методов лечения, в некоторых случаях антагонисты микробного интерферона могут смягчать вспомогательное действие синтетического агониста ТЬК.
Более специфический ответ на микробные инфекции основан на активной или пассивной иммунизации. Если универсальная иммунизация не считается эффективной для сокращения расходов (или фармакоэкономически жизнеспособной), идентификация населения с повышенным риском, которое выиграет от проведения иммунопрофилактики, может привести к сокращению расходов, хотя идентификация такой популяции может быть непростой. Тем не менее, существуют некоторые ярко выраженные популяции с повышенным риском получить некоторые бактериальные инфекции, такие как стафилококковые инфекции, включая больных, которым проведен диализ, больных с вентрикуло-перитонеальными шунтами, пациентов с повышенным риском заболеть инфекционным эндокардитом и резидентов домов для престарелых, все из которых страдают от хронических условий, которые приводят к тому, что их характеризует повышенный риск заболеть стафилококковыми инфекциями. Многие из этих пациентов рискуют в сильной степени заболеть связанной с медико-санитарной помощью метициллин-резистентной 8!арйу1ососси5 аитеиз (НА-МК8А). Однако блокирующая колонизация 81арйу1ососси5 может быть более успешной, чем защита от инфекции.
Пассивная иммунопрофилактика, использующая или поликлональные антитела (СарратеШ е! а1., АпйтктоЬ. АдепШ Сйето, 49: 4121, (2005)), или моноклональные антитела (шЛЬз) (тетете.Ью8упехи8.сот/ргобис!сапб1ба!е8.Ыт1), может обеспечить немедленную (хотя и кратковременную) защиту пациентов, которые или не могут ждать эффекта от действия вакцины или иммунные системы которых слишком повреждены, чтобы получить ответ на введение вакцины. Одним возможным показателем пассивной иммунопрофилактики является вспышка МКБА-ассоциируемой инфекции в больницах. В этих случаях отдельные субъекты могут выиграть от немедленной профилактики, в то время как индивидуумы, находящиеся в том же самом отделении, могут выиграть от активной иммунизации. Более того, пациенты в отделениях интенсивной терапии являются возможными получателями пассивной иммунопрофилактики, так как каждый из них может характеризоваться одним или несколькими факторами риска заболеть стафилококковыми инфекциями.
Сущность изобретения
Данное изобретение предусматривает конъюгаты синтетического ТЬК агониста, связанные при помощи стабильной ковалентной связи с макромолекулой, и композиции, содержащие эти конъюгаты, а также способы применения этих конъюгатов. Конъюгаты могут включать макромолекулы, непосредственно связанные с синтетическим ТЬК агонистом, например ТЬК7 или ТЬК9 агонистами, или связанные при помощи линкера с ТЬК агонистом, например, связанные при помощи аминогруппы, карбоксильной группы или сукцинамидной группы. Например, конъюгаты по изобретению включают синтетический
- 1 019151
ТЕК, агонист (фармакофор), ковалентно связанный с макромолекулой, такой как, например, молекулы пептида, полипетида, например их антитело- или антигенсвязывающим фрагментом, липида, полимера, такого как полиэтиленгликоль, с гранулой, такой как гранула полистирола или дендримера. Конъюгаты по изобретению представляют собой иммуностимуляторные агенты широкого спектра с длительным сроком действия и нетоксичные, которые пригодны для активации иммунной системы млекопитающего, например человека. В частности, конъюгаты по изобретению оптимизируют иммунный ответ, в то же время ограничивая нежелательные системные побочные эффекты, связанные с неконъюгированными ТЕК, агонистами.
Синтетический ТБК агонист может непосредственно способствовать связыванию с ТЕК внутри эндосом целевых клеток и облегчать доставку макромолекулы. Согласно одному варианту синтетический ТБК агонист является специфическим по отношению к эндосомальным ТБК. Согласно еще одному варианту ТБК агонист может быть ТШ7. ТЕК.8, ТЕКЗ или ТБК9 агонистом.
Более того, синтетический ТБК агонист может усиливать ответ на действие макромолекулы (например, иммунный ответ). Подобно этому макромолекула может быть пригодной для активности иммунной системы и/или может направлять конъюгат в конкретные клетки. Так, макромолекула, например макромолекула с первичной аминогруппой, которая связана с синтетическим ТЕК, агонистом, может усиливать активность синтетического ТБК агониста или иметь свою желательную активность. Например, макромолекула может усиливать активность ТЕК, агониста, способствуя направлению агониста к ТБК внутри эндосом целевых клеток, усиливая трансдукцию сигнала, индуцированную ТБК агонистом, или сшивая рецептор или же проявляя все эти указанные виды действия. Согласно одному варианту макромолекула представляет собой липид, который спонтанно введен в липосомы. Согласно еще одному варианту макромолекула представляет собой наночастицу, которая содержит на своей поверхности аминогруппы. В связанном с ТБК агонистом виде наночастица конъюгата с ТБК агонистом может иметь размер, например, около 100 нм, находясь (содержась) в эндосомах.
Приобретенные в условиях больницы инфекции 81арйу1ососси5 аигеик (8Л) являются основной причиной заболеваемости и смертности. Однако при острых вспышках инфекции вакцины не применяются, так как они действуют через слишком большое время и они не эффективны для пациентов с нарушенным иммунитетом. Данное изобретение предусматривает способ быстрой вакцинации пациентов с повышенным риском к заболеванию инфекцией грамположительными бактериями, например 8Л инфекциями, который использует агонисты толл-подобного рецептора-7 (ТБК.7) и один или более антигенов (иммуногенов) грамположительных бактерий. Применение вакцин по изобретению индуцирует иммунитет примерно через 6 дней, что позволяет использовать их в областях, где не применяется стандартная вакцинация (например, в случае острых вспышек).
Как описано в данной заявке, получают композицию, содержащую грамположительную бактерию ВаеШик ап111гае18 (ВА) и синтетический ТБК7 агонист. Композиция индуцировала секрецию 1Б12 и 1Б6 (показывающую наличие активации макрофагов, происходящих из костного мозга (ΒΜΌΜ)), ίη νίΐτο и защищала мышей от признаков последующей летальной внутрилегочной инфекции ВА ίη νίνο. В частности, введение композиции, содержащей конъюгат с ТЕК7 агонистом и иммуноген (ИС-1У199альбумин/облученные споры ВА), индуцировало защитный иммунитет к ВА в течение 6 дней. В противоположность этому инъекция животным спор ВА в отдельности или ВА в сочетании с обычным адъювантом, а именно токсином холеры (СТ), не защищает животных от летального исхода. Быстрота защитного иммунного ответа у ранее не подвергавшегося воздействию животного была неожиданной.
Таким образом, настоящее изобретение предусматривает иммуногенные композиции. По одному варианту иммуногенная композиция по изобретению включает синтетический ТЕК, агонист, такой как ТБК7 агонист, например ИС-1У199, связанный с грамположительной бактериальной клеткой, например связанный со свободными аминогруппами на мертвых 81арйу1ососси5 аигеик; синтетический ТБК агонист, такой как ТЕК7 агонист, связанный с бактериальным экстрактом изолированных грамположительных бактериальных антигенов; синтетический ТБК агонист, такой как ТБК7 агонист, связанный с изолированным грамположительным бактериальным белком, например рекомбинантным белком; или синтетический ТБК агонист, такой как ТБК7 агонист, связанный с изолированными грамположительными бактериальными углеводами. Например, синтетический ТЕК7 агонист может быть с бактериальными углеводами с применением методов присоединения 81арйу1ососси5 аигеик полисахаридов к белковым носителям (таким как те, которые используются для таксоида столбняка). Убитый бактериальный препарат может быть приготовлен с применением гамма-излучения, тепловой или химический обработки. Согласно другому варианту иммуногенная композиция по изобретению включает синтетический ТЕК агонист, такой как ТЕК7 агонист, связанный с адъювантом, и препарат, содержащий мертвые грамположительные бактериальные клетки; синтетический ТБК агонист, такой как ТБК7 агонист, связанный с адъювантом, и препарат, содержащий грамположительный бактериальный экстракт; или синтетический ТБК агонист, такой как ТЕК7 агонист, связанный с адъювантом, и препарат, содержащий изолированный грамположительный бактериальный антиген, например рекомбинантный белок. Например, иммуногенная композиция может включать ИС-1У199, связанный с альбумином, и препарат с убитыми грамположительными бактериями, например убитыми 81арйу1ососси5 аигеик. Согласно одному из вариантов им
- 2 019151 муногенная композиция по изобретению включает синтетический ТЬК7 агонист, связанный с адъювантом, и препарат, содержащий рекомбинантный грамположительный бактериальный антиген, такой как изолированный грамположительный бактериальный белок или его пептид, или изолированный грамположительный бактериальный углевод. По одному из вариантов единичная доза иммуногенной композиции может обладать очень высокой активностью, например она может обеспечить защитный иммунитет за короткий промежуток времени, например менее 10 дней. По одному из вариантов стерилизованную вакцину вводят субъекту за 0-7 дней до госпитализации. Согласно еще одному варианту вакцину вводят внутримышечно. Согласно еще одному варианту вакцину вводят с дозой между 10 мкг и 10 мг.
Применение конъюгатов синтетических ТЬК агонистов, таких как ТЬК.7 агонисты по изобретению, имеет преимущества вследствие их доступности и потому, что различные химические превращения позволяют связывание с любым антигеном и модифицируемые конъюгаты имеют определенную стереохимию. Получение конъюгатов является дорогим процессом, конъюгаты являются активными и поэтому обеспечивают быструю защиту, что делает возможным их применение в случае острых вспышек заболеваний, таких как травмы, ожоги, при подготовке хирургического вмешательства или в случае биотерроризма.
Соответственно предусмотрено соединение формулы (I)
где X1 обозначает -О-, -8- или -ΝΚ°;
где Υ обозначает 8 или ΝΗ;
где Кс обозначает водород, С1-10алкил или С1-10алкил, замещенный С3-6циклоалкилом, или Кс и К1, взятые вместе с атомом азота, могут образовать гетероциклическое кольцо или замещенное гетероциклическое кольцо, причем заместителями являются гидрокси, С1-6алкил, гидрокси-С1-6алкилен, С1-6алкокси, С1-6алкокси-С1-6алкилен или циано;
где К1 обозначает (С1-10)алкил, замещенный (С1-Сю)алкил, (С6-Сю)арил, замещенный (С6-С10)арил, С5-9гетероцикл, замещенный С5-9гетероцикл;
где каждый К2 обозначает независимо водород, ОН, (С1-6)алкил, замещенный (С1-С6)алкил, (С1С6)алкокси, замещенный (С1-С6)алкокси, -С(О)-(С1-С6)алкил (алканоил), замещенный -С(О)-(С1С6)алкил, -С(О)-(С6-С10)арил (ароил), замещенный -С(О)-(С6-С10)арил, -С(О)ОН (карбоксил), -С(О)О(С1С6)алкил (алкоксикарбонил), замещенный С(О)О(С1-С6)алкил, -ΝΚαΚ5, -С(О)МК.аКь (карбамоил), замещенный -С(О)ИКаКь-, галоид, нитро или циано;
где каждый Ка и Кь обозначает независимо водород, (С1-С6)алкил, (С3-С8)циклоалкил, (С1С6)алкокси, гало-(С1-С6)алкил, (С3-С8)циклоалкил(С1-С6)алкил, (С1-С6)алканоил, гидрокси(С1-С6)алкил, арил, арил(С1-С6)алкил, Не!, Не!-(С1-С6)алкил или (С1-С6)алкоксикарбонил;
где X2 обозначает связь или связывающую группу;
где К3 обозначает макромолекулу;
где η равен 1, 2, 3 или 4;
где т равен 1, 2, 3 или более, например 5, 10, 15 или более;
где с.| равен 1, 2, 3 или показателю, равному до примерно 1000, примерно 10000 или более, например примерно 105, примерно 106 или более;
или его фармацевтически приемлемая соль.
По одному из вариантов с.| равен 1 и т составляет от 1 до 20 или любое целое число в этом интервале. По другому варианту т равен 1 и с.| > 2. Согласно еще одному варианту т равен 1 и К3 может обозначать вирус, например лентивирус, отличный от обезьяньего вируса иммунодефицита (81У), ретровирус, вирус гриппа, риновирус, вирус папилломы, вирус герпеса и т.п., грамположительную бактерию или бактериальную спору, или наночастицу либо гранулу, например гранулу двуокиси кремния, и с.| равен 102, 103, 104, 105, 106 или более. Таким образом, конъюгат может включать мультимеры ТЬК агониста, макромолекулу или и то и другое. Мультимеры могут быть линейными или разветвленными.
По одному из вариантов К3 может быть макромолекулой, содержащей грамположительную бактерию, пептид грамположительной бактерии, белок грамположительной бактерии, углевод грамположительной бактерии или адъювант, такой как гетерологичный белок или пептид, то есть из источника, отличающегося от грамположительной бактерии, такого как белок клетки-хозяина, например альбумин или яичный альбумин, или гетерологичный липид, гетерологичная нуклеиновая кислота, гранула, такая как полистирольная гранула, наночастица или дендример.
Так, согласно различным вариантам т может быть равен 1 или 2; и с.| может быть равен 1 или 2. По
- 3 019151 некоторым вариантам т равен 1 и поверхность группы К3 связана с сотнями, тысячами или более группами с.|. Например, реактивные сайты частицы двуокиси кремния могут быть использованы для соединения частицы двуокиси кремния с фрагментами, указанными в описанной выше формуле. Для этой конфигурации К3 может быть любой другой макромолекулой, описанной в данной заявке, такой как наночастица, гранула, дендример, липид, спора или бактериальная клетка. Согласно другим вариантам соединение указанной формулы и группа К3 могут образовать чередующуюся цепь из примерно трех-десяти повторяющихся групп (например, соединение формулы - К3 - соединение формулы - К3 - соединение формулы - К3 и т.д.).
Макромолекула в конъюгатах по изобретению образует стабильную связь с ТЬК агонистом, то есть конъюгат не действует как пролекарство. Макромолекула может включать органические молекулы, состоящие из углерода, кислорода, водорода, азота, серы, фосфора или любой их комбинации, если макромолекула не является вредной для тканей организма (например, она нетоксична и/или не вызывает воспаления). Макромолекула позволяет осуществить таргетирование или обеспечить иммунный ответ, например макромолекула может быть антигеном, таким как меланома-специфичный пептид.
Согласно различным вариантам, когда в молекуле любой формулы, описанной в данной заявке, имеется более одного К3, все К3 могут быть одинаковыми или группы К3 могут отличаться друг от друга. Соответственно, когда содержится более одной группы К3, каждый К3 независимо обозначает группу, определение которой дано для каждой формулы.
Кроме того, данное изобретение предусматривает фармацевтическую композицию, содержащую по меньшей мере одно соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль в комбинации с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем.
Настоящее изобретение включает применение конъюгатов синтетического ТЬК агониста и макромолекулу, а также конъюгаты ТЬК агониста и другую молекулу. Конъюгат может быть применен для профилактики, ингибирования или лечения расстройств, включая, но без ограничения, аллергическую астму, инфекционные болезни, такие как респираторная вирусная инфекция, например инфекции, связанные с вирусом гриппа или респираторным синцитиальным вирусом (К8У), волчанкой и другими аутоиммунными болезнями, а также как вакцина, например, для раковых и инфекционных болезней. Согласно одному из вариантов единичная доза конъюгата может быть очень активной для стимулирования иммунного ответа. Более того, вследствие низкой токсичности конъюгатов в некоторых случаях могут вводиться более высокие дозы, например, системно, в то время как в других случаях могут вводиться меньшие дозы, например, благодаря локализации конъюгата. По одному из вариантов при введении в высоких дозах синтетические конъюгаты ТЬК агониста могут вызывать антагонистический ответ и поэтому могут применяться для ингибирования или лечения астмы или аутоиммунных болезней. Первая доза может вызывать гиперответ, который, в свою очередь, подавляет иммунный ответ, что позволяет избежать воспаления. Таким образом, применение более высоких доз и повторное введение могут привести к ингибированию иммунного ответа.
По одному из вариантов данное изобретение предусматривает способ предотвращения или ингибирования инфекции, вызванной грамположительными бактериями, у млекопитающего. Этот способ включает введение млекопитающему эффективного количества композиции, содержащей бактериальный антиген грамположительной бактерии и соединение, имеющее формулу (ΙΑ)
ΝΗ>
(Юл (ΙΑ) где X обозначает -О-, -8- или -ЫКС;
где КС обозначает водород, С1-10алкил или замещенный С1-10алкил или КС и К1, взятые вместе с атомом азота, могут образовать гетероциклическое кольцо или замещенное гетероциклическое кольцо, где заместители у алкильных, арильных или гетероциклических групп представляют собой гидрокси, С1-6алкил, гидрокси-С1-6алкилен, С1-6алкокси, С3-6циклоалкил, С1-6алкокси-С1-6алкилен, амино, циано, галоген или арил;
К1 обозначает водород, (С1-С10)алкил, замещенный (С1-С10)алкил, (С6-С10)арил или замещенный (С6С10)арил, С5-9гетероцикл, замещенный С5-9гетероцикл, где заместители у алкильных, арильных или гетероциклических групп представляют собой гидрокси, С1-6алкил, гидрокси-С1-6алкилен, С1-6алкокси, С3-6циклоалкил, С1-6алкокси-С1-6алкилен, амино, циано, галоген или арил;
каждый К2 обозначает независимо водород, ОН, (С1-С6)алкил, замещенный (С1-С6)алкил, (С1С6)алкокси, замещенный (С1-С6)алкокси, -С(О)-(С1-С6)алкил (алканоил), замещенный -С(О)-(С1С6)алкил, -С(О)-(С6-С10)арил (ароил), замещенный -С(О)-(С6-С10)арил, -С(О)ОН (карбоксил), -С(О)О(С1С6)алкил (алкоксикарбонил), замещенный -С(О)О(С1-С6)алкил, -НК.аКь, -С(О)ЖК:' (карбамоил), заме
- 4 019151 щенный -С(О)ЫЯаКь, галоид, нитро или циано; где заместители у алкильных, арильных или гетероциклических групп представляют собой гидрокси, С1-6алкил, гидрокси-С1-6алкилен, С1-6алкокси, С3-6циклоалкил, С1-6алкокси-С1-6алкилен, амино, циано, галоген или арил;
каждый К3 и Кь независимо обозначает водород, (С1-С6)алкил, (С3-С8)циклоалкил, (С1-С6)алкокси, гало(С1-С6)алкил, (С3-С8)циклоалкил(С1-С6)алкил, (С1-С6)алканоил, гидрокси-(С1-С6)алкил, арил, арил(С1-С6)алкил, Не!, Не!-(С1-С6)алкил или (С1-С6)алкоксикарбонил;
X2 обозначает связь или связывающую группу;
η равен 1, 2, 3 или 4 и
К3 обозначает макромолекулу, включающую гетерологичный пептид, гетерологичный белок, гетерологичный липид, гранулу, такую как полистирольную гранулу, молекулу гетерологичной нуклеиновой кислоты или дендример;
или его фармацевтически приемлемую соль, включая гидраты этого соединения.
Согласно некоторым вариантам определение группы К1 может быть заменено определением группы К1 для любой другой формулы, описанной в данной заявке.
Неограничивающие примеры макромолекул или линкеров для них включают не только атом кислорода, атом серы, атом азота или атом углерода (и подвешенные соответствующим образом атомы водорода, необходимые для заполнения валентностей), но и также макромолекулы или линкеры с боковыми цепями, которые повышают растворимость, такими как, например, группы, содержащие морфолиновые, пиперидиновые, пирролидиновые или пиперазиновые кольца и т.п.; аминокислоты, полимеры аминокислот (белки или пептиды), например дипептиды или трипептиды, и т.п.; углеводы (полисахариды), нуклеотиды, такие как, например, ПНК, РНК и ДНК и т.п.; полимеры органических веществ, такие как, например, полиэтиленгликоль, полилактид и т.п.; мономерные и полимерные липиды; нерастворимые органические наночастицы; нетоксичные вещества организма, такие как, например, клетки, липиды антигены, такие как, например, микробы, такие как, например, вирусы, бактерии, грибки и т.п. Антигены мо гут включать неактивированные целые организмы или их компоненты и т.п.
Предусмотрен также способ профилактики или ингибирования инфекции, вызванной грамположительными бактериями, у млекопитающего. Этот способ включает введение млекопитающему эффективного количества соединения, имеющего формулу (ΙΒ)
й Уон Р’-Х1 η N
(Н2), хг-к3 (ΙΒ) где X обозначает -О-, -8- или -ΝΚ°;
где Кс обозначает водород, С1-10алкил или замещенный С1-10алкил или Кс и К1, взятые вместе с атомом азота, могут образовать гетероциклическое кольцо или замещенное гетероциклическое кольцо, где заместители у алкильных, арильных или гетероциклических групп представляют собой гидрокси, С1-6алкил, гидрокси-С1-6алкилен, С1-6алкокси, С3-6циклоалкил, С1-6алкокси-С1-6алкилен, амино, циано, галоген или арил;
К1 обозначает водород, (С1-С10)алкил, замещенный (С1-С10)алкил, (С6-С10)арил или замещенный (С6Сю)арил, С5-9гетероцикл. замещенный С5-9гетероцикл. где заместители у алкильных, арильных или гетероциклических групп представляют собой гидрокси, С1-6алкил, гидрокси-С1-6алкилен, С1-6алкокси, С3-6циклоалкил, С1-6алкокси-С1-6алкилен, амино, циано, галоген или арил;
каждый К2 обозначает независимо водород, ОН, (С1-С6)алкил, замещенный (С1-С6)алкил, (С1С6)алкокси, замещенный (С1-С6)алкокси, -С(О)-(С1-С6)алкил (алканоил), замещенный -С(О)-(С1С6)алкил, -С(О)-(С6-С10)арил (ароил), замещенный С(О)-(С6-С10)арил, -С(О)ОН (карбоксил), -С(О)О(С1С6)алкил (алкоксикарбонил), замещенный -С(О)О(С1-С6)алкил, -ΝΕΈ1; -Ο^ΝΗ^ (карбамоил), замещенный -С(О)ИкаКь-, галоид, нитро или циано, где заместители у алкильных, арильных или гетероциклических групп представляют собой гидрокси, С1-6алкил, гидрокси-С1-6алкилен, С1-6алкокси, С3-6циклоалкил, С1-6алкокси-С1-6алкилен, амино, циано, галоген или арил;
каждый Ка и Кь независимо обозначает водород, (С1-С6)алкил, (С3-С8)циклоалкил, (С1-С6)алкокси, гало-(С1-С6)алкил, (С3-С8)циклоалкил-(С1-С6)алкил, (С1-С6)алканоил, гидрокси(С1-С6)алкил, арил, арил(С1-С6)алкил, Не!, Не!-(С1-С6)алкил или (С1-С6)алкоксикарбонил;
X2 обозначает связь или связывающую группу;
η равен 1, 2, 3 или 4 и
К3 обозначает грамположительную бактерию, изолированный антигенный белок или пептид грамположительной бактерии или выделенный полисахарид грамположительной бактерии;
или его фармацевтически приемлемой соли, включая его гидраты.
По одному из вариантов грамположительная бактерия представляет собой 8!арйу1ососси5.
Согласно одному из вариантов К3 обозначает изолированный антигенный белок или пептид 8!арйу
- 5 019151
1ососси§ и соединение вводится с препаратом убитого 81арйу1ососси5.
Данное изобретение предусматривает соединение по изобретению для применения в медицинской терапии (например, для профилактики бактериальных заболеваний, например, в виде вакцины). Соединения по изобретению могут быть также применены для биозащиты, например, от В. аиШгах.
Далее, предусмотрены композиции и соединение по изобретению для применения в медицинской терапии, например, для лечения астмы или вирусных инфекций или для профилактики вирусной инфекции, а также предложено применение конъюгатов для производства медикамента для лечения ТБВассоциируемого состояния или симптома либо такого заболевания, при котором показаны увеличенный иммунный ответ или угнетенный иммунный ответ.
Кроме того, данное изобретение также предусматривает фармацевтическую композицию, содержащую по меньшей мере одно соединение по изобретению или его фармацевтически приемлемую соль, в комбинации с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем, возможно в комбинации с препаратом выбранной грамположительной бактерии, например убитым препаратом или экстрактом или изолированным углеводом (полисахаридом) выбранной грамположительной бактерии или изолированным белком выбранной грамположительной бактерии.
Настоящее изобретение включает применение конъюгатов ТБВ7 агонистов и макромолекулы, например макромолекулы с первичной аминогруппой, которая усиливает активность агониста, например альбумина, или имеет свою желательную активность, например, антигена грамположительной бактерии. Конъюгаты могут включать макромолекулы, непосредственно связанные с ТЕВ7 агонистом или связанные с ТЕВ7 агонистом при помощи линкера. Конъюгаты могут оптимизировать иммунный ответ, ограничивая в то же время нежелательные системные побочные эффекты ТЕВ7 агонистов.
Согласно одному из вариантов данное изобретение предусматривает способ профилактики или лечения инфекции, вызванной грамположительными бактериями, у млекопитающего, такого как человек. Этот способ включает введение млекопитающему, нуждающемуся в такой терапии, эффективного количества соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, соединенных с адъювантом или по меньшей мере с одним антигеном грамположительной бактерии.
Предусмотрен также способ идентификации конъюгатов, пригодных для профилактики, ингибирования или лечения конкретного состояния или симптома, например, путем идентификации профиля цитокинов, вызванного конъюгатом ίη νίΙΐΌ или ίη у1уо или путем идентификации эндосомы, например, на ранней, средней или поздней стадии, содержащей ТЕК для ТЬВ агониста. Так как различные клетки содержат разные эндосомы, идентификация профилей эндосом в клетках может позволить осуществление таргетирования конъюгатов на специфические виды клеток или улучшение доступа конъюгатов к эндо сомам.
Более конкретно изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы А
или его фармацевтически приемлемую соль, где
В1 обозначает водород, (С1-Сю)алкил или (С1-Сю)алкил замещенный (С1-С6)алкокси;
В3 обозначает диолеоилфосфатидилэтаноламин (ΌΟΡΕ).
В одном из воплощений соединение формулы А имеет формулу В
В одном из воплощений в соединении формулы А или В В1 обозначает (С1-С1о)алкил, замещенный (С1-6)алкокси.
В одном из воплощений в соединении формулы А или В В1 обозначает -(СН2)2-ОСН3.
В одном из воплощений композиция содержит липосому.
Изобретение также относится к применению соединения формулы А для приготовления лекарственного средства, содержащего соединение формулы А, для лечения млекопитающего, страдающего или восприимчивого к состоянию, опосредованному активностью толл-подобных рецепторов (ТЕК).
В одном из воплощений соединение формулы А имеет формулу В
- 6 019151
В одном из воплощений в соединении формулы А или В В1 обозначает (С1-Сю)алкил, замещенный (С1_б)алкокси.
В одном из воплощений в соединении формулы А или В В1 обозначает -(СН2)2-ОСН3.
В одном из воплощений млекопитающее представляет собой человека.
В одном из воплощений состояние является воспалением.
В одном из воплощений состояние является раком.
В одном из воплощений лекарственное средство содержит антиген.
Краткое описание чертежей
На фиг. 1 показан конъюгат ТЬВ агонист/альфагалактозилкерамид.
На фиг. 2 показан ИС-1У150 конъюгат 61 РАМАМ с этилендиаминовым ядром.
На фиг. ЗА представлен линкер (8ΑΝΗ) для соединения макромолекулы и синтетического ТЬВ агониста.
Фиг. ЗВ иллюстрирует синтез ИС-1У150.
На фиг. ЗС показано сопряжение ИС-1У150 с Μ8Α. 200 мкл Μ8Α (25 мг/мл) смешивают со 100 мкл буфера сопряжения (1 М фосфат, рН 7,2) и 690 мкл РВ8. 844 мкг 8ΑΝΗ в 10 мл ΌΜΡ (40-молярный избыток по отношению к Μ8Α) добавляют к раствору белка (конечная концентрация ΝΡ в реакционной смеси составляет 5 мг/мл). После аккуратного перемешивания продолжают реакцию при комнатной температуре в течение 2 ч. Для удаления избытка 8ΑΝΗ реакционную смесь загружают на конический вращающийся фильтр (ΥΜ-3, ΜίΙΙίροτο) и концентрируют до объема около 70 мкл. 460 мкг ИС-1У150 растворенного в 10 мкл ΌΜΡ добавляют к Μ8Α, модифицированному 8ΑΝΗ, и реакционную смесь инкубируют при комнатной температуре в течение ночи. Для удаления избытка ИС-1У150 реакционную смесь вначале концентрируют до объема 50 мкл, используя конический вращающийся фильтр (ΜίΙΙίροΐΌ: ΥΜ3) и загружают во вращающуюся микроколонку 6-25 (6Е НеаНйеате).
На фиг. 4 приведена графическая иллюстрация абсорбционного профиля (при длине волны около 350 нм) соединения формулы (I) (конъюгат ϋνΑ/8ΑΝΗ/υθ-1Υ150).
Фиг. 5 иллюстрирует профиль абсорбции при реакции сопряжения синтетического ТЬВ7 агониста, ИС-1У150, с сывороточным альбумином мыши (Μ8Α). Отношение ИС-1У150 к Μ8Α составляет примерно 5:1.
На фиг. 6 показан конъюгат ТЬВ агонист/фосфолипид.
На фиг. 7 показан эффект от введения конъюгата ИС-1У199/липид в различных дозах в различное время.
Фиг. 8А и 8В показывают, что ИС-1У199/липид ингибирует сигналы ТЬВ7 и ТЬВ2.
Фиг. 9 иллюстрирует зависимость ответа от двухфазной дозы сильнодействующего ТЬВ7 агониста (пико/наномолекуляный агонист и микромолекулярный агонист).
Фиг. 10А и 10В иллюстрируют активацию как мышиных макрофагов из костного мозга (панель А), так и мононуклеарных клеток периферической крови человека (панель В) при введении конъюгатов ИС1Υ150/Μ8Α. Клетки инкубировали при различных концентрациях конъюгатов от 0,5 нМ до 10 мкМ с ΒΜΌΜ или от 0,1 до 10 мкМ с РВМС. Надосадочные жидкости собирали через 24 ч и определяли содержание цитокинов при помощи Ьишшех.
Фиг. 11 А, В и С иллюстрируют ίη νίνο эффективность конъюгата ТЬВ7 агониста. Мышам С57ВЬ/6 вводили инъекцией (внутривенно в хвостовую вену) различные количества ИС-1У150 (альдегидмодифицированный 8Μ-360320) или υС-1У150/Μ8Α. Образцы сыворотки собирали и определяли содержание цитокинов при помощи Ьишшех. Действие несопряженного синтетического ТЬВ7 агониста, 8Μ-360320, длилось только 2 ч, тогда как υС-1У150/Μ8Α характеризовался действием в течение по меньшей мере 6 ч.
На фиг. 12 показана ίη νίνο локальная активность конъюгата υС-1У150/Μ8Α без системного эффекта. Мышей С57ВЬ/6 анестезировали и вводили или (ί.ΐ.) 3 нмоль υС-1У150/Μ8Α. В указанные моменты времени мышей умерщвляли и отбирали ВАЬЕ и сыворотку. Соединяли результаты двух отдельных экспериментов (по меньшей мере 6 мышей в группе). Результаты показывают средние величины ± 8ΕΜ.
На фиг. 13 показана индукция цитокинов в ΒΜ^Μ, вызванные конъюгатом облученные споры сибирской язвы - ТЬВ7 агонист.
На фиг. 14 представлены графики выживаемости после иммунизации мышей υС-1У150/Μ8Α и введения спор. А) Подобранным по возрасту самкам мышей А/1 вводили интраназально один физиоло
- 7 019151 гический раствор или физиологический раствор, содержащий М8А (количество эквивалентно иС1У150/М8А), ИС-1У150 или ИС-1У150/М8А в количестве нмоль/мышь до инфицирования В. аиШташв и определяли выживаемость в течение до 13 дней. В) Мышам Ва1Ь/с вводили интраназально физиологический раствор или иС-1У150/М8Л в количестве 5 нмоль/мышь за 1 день до инфицирования вирусом гриппа и определяли выживаемость в течение 21 дня. В каждой модели получали кривые выживаемости Кар1аи-Ме1ег и проводили тесты 1од/гаик (однофакторные) для определения значимости. В каждой группе испытывали по меньшей мере 8 мышей.
На фиг. 15 показан график, иллюстрирующий выживаемость после единичной дозы вакцины с ТЬК7 агонистами и конъюгатами. ΙΒ8 - иммунная регуляторная последовательность.
На фиг 16 показано, что защита от действия спор сибирской язвы зависит от клеток 0Ό4+.
На фиг. 17 показан локальный цитокиновый профиль у мышей. Мышам С57ЬВ/6 вводили ί.ΐ. конъюгат ИС-1У150/М8А или несопряженный ИС-1У136 по 3 или 500 нмоль каждой мыши соответственно. В указанные моменты времени собирали ВАЬЕ и сыворотку и определяли содержание цитокинов методом мультиплексного иммуноанализа. Приведены средние величины, полученные по меньшей мере из 35 мышей ± 8ЕМ.
Фиг. 18 иллюстрирует спектр абсорбции для непосредственного связывания частиц 81У СИС1У150.
Фиг. 19 иллюстрирует индукцию цитокинов в ВМЛС, вызванную конъюгатом синтетического ТЬК7 агониста и вирусных частиц.
Фиг. 20А и 20В иллюстрируют действие конъюгата иС-1У150/инактивированный 81У (панель А) или иС-1У150/ОУЛ/ОП\ (панель В) на продуцирование 1Ь12. Миелоидные ВМЛС индуцировали в течение 24 ч при различных условиях при дозе 0,1 мкг/мл, как показано. Содержание 1Ь12 в клеточном супернатанте измеряли про помощи ЕБ18А.
Фиг. 21 является графической иллюстрацией стимуляции дендритных клеток из костного мозга (ВМЛС) при помощи ОУА/иС-1У150 или ОУА/ΟΌΝ (ΟΌΝ = олигодезоксинуклеотид).
Фиг. 22 отражает УФ-спектр двойного конъюгата (ΟVА/υС-1V150/Ο^N 1043).
Фиг. 23 иллюстрирует индукцию 1Ь12 в ВМЭС с применением конъюгатов ОУА/ОО^иС-1У150. ОУА/1043 и ОУА/1018 представляют собой конъюгаты ОЭК
Фиг. 24 является иллюстрацией сопряжения синтетического ТЬВ агониста с липидным компонентом липосомы. Самосборка конъюгата ТЬВ, сопряженного через спейсер-линкер с С-15 липидом, привела к образованию наночастиц размером 100 нм. ТЬВ агонист и ΝΗδ-эфир липида реагировали в эквимолярных количествах в ОМЕ и 1 экв. триэтиламина в течение 6 ч. Реакционную смесь очищали методом препаративной НРЬС в изократических условиях в смеси 50:50 ацетонитрил/вода.
На фиг. 25 схематически показан конъюгат ТЬВ агонист/липосома. Липосомы получены с холестерином: ПОРЕ:П8РС:тРЕС2000-П8РЕ:ТЕВ-О§РЕ:ВОП1Р¥-ООРЕ 30:30:30:5:5:1,5; Л8РСЕ = дистеароилфосфатидилэтаноламин; ПОРЕ = диолеоилфосфатидилэтаноламин; ВОЛ1РУ = 6-(((4-4-дифтор-5-(2тиенил)-4-бора-3а,4а-диаза-в-индацен-3-ил)стирилокси)ацетил)аминогексан-амидо-ЛОРЕ. Реагенты холестерин: ПОРЕ:П8РС:П8РЕ:ТЬВ агонист:Л8РЕ-тРЕС (в молярном отношении 1:1:1:0,16:0,16) в среде хлороформа помешали в стеклянные трубки для культур объемом 30 мл, высушивали в потоке газообразного азота и под вакуумом минимум в течение 6 ч для удаления остаточного органического растворителя. Высушенную липидную пленку гидратировали в стерильной деионизированной воде в объеме, равном 1 мл, минимум в течение 12 ч. Липосомы перемешивали на вортексе в течение 2-3 мин с целью удаления прилипшей липидной пленки и обрабатывали ультразвуком в ультразвуковой бане (иЬТКАвошс 28Х) в течение 2-3 мин при комнатной температуре с получением мультиламеллярных пузырьков (МЬУ). Затем МЬУ обрабатывали ультразвуком с Т1-зондом (используя прибор Вгаивои 450 со 100% рабочим циклом и мощностью 25 Вт) на ледяной бане в течение 1-2 мин с получением маленьких униламеллярных пузырьков (ЗИУв), о чем свидетельствует образование прозрачного раствора. Раствор фильтровали под давлением через нуклеопорные поликарбонатные мембраны (вначале 200 и затем 100 нм), получая наночастицы липосом размером 100 нм с фактором полидисперсности менее 0,1.
На фиг. 26 показан процесс синтеза липидного конъюгата νν-109. 0,45 мг (1 мкмоль) 1У199 добавляли к 100 мкл 10 мМ раствора ПОРЕ в хлороформе. К этому раствору добавляли 0,1 мг триэтиламина из раствора в хлороформе. Смесь реагировала при комнатной температуре в течение 24 ч и хлороформ выпаривали в роторном выпаривателе. Белый твердый остаток промывали 3 раза в смеси 60%/метанол/гексан и центрифугировали с получением твердого продукта белого цвета. Массспектроскопия показала, что т/ζ составил 1086 и соединение характеризовалось тах УФ-абсорбцией при длине волны 268 нм. Для получения аналогичных соединений могут быть применены жирные кислоты с цепями различной длины, включая С24-С22карбоновые кислоты с одним, двумя, тремя или четырьмя сайтами ненасыщенности, эпоксидирования, гидроксилирования или комбинации этих превращений в любых подходящих положениях в цепи карбоновой кислоты. По одному конкретному варианту жирная кислота представляет собой С^карбоновую кислоту с сайтом ненасыщенности в положении С8-С9. По другому варианту применяют С28карбоновые кислоты с сайтом ненасыщенности в положении С9-Сю. Карбоксильные группы каждой жирной кислоты могут быть одинаковыми или разными (см., например, фиг.
- 8 019151
6).
Фиг. 27 иллюстрирует схематическое изображение частицы двуокиси кремния с ТЬК агонистами, ковалентно связанными с этими частицами.
На фиг. 28 представлены примеры соединений для получения конъюгатов по изобретению или для применения при осуществлении способов по изобретению. Другие конъюгаты включают ТЬК агонисты, связанные с альбумином сыворотки человека, например Н8Л/иС-1У150 или ΌΘΡΕ/υθ-ΐνΐ99. ИС-1Х-51 повышает в 3 раза уровень ΤΝΕ-альфа (110 нг/мл).
Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения Определения
Применяемый в данной заявке термин антитело относится к белку, содержащему один или более полипептидов, кодированных генами иммуноглобулина или фрагментами генов иммуноглобулина. Распознанные гены иммуноглобулина включают гены каппа, лямбда, альфа, гамма, дельта, эпсилон и мю постоянного участка, а также большое количество генов вариабельного участка. Легкие цепи классифицируются как каппа или лямбда. Тяжелые цепи классифицируются как гамма, мю, альфа, дельта или эпсилон, что, в свою очередь, определяет классы иммуноглобулина Ю, 1дМ, 1дА, Ι§Ό и 1дЕ соответственно.
Как известно, основная структурная единица иммуноглобулина (антитело) включает тетрамер. Каждый тетрамер состоит из двух идентичных пар полипептидный цепей, при этом каждая пара имеет одну легкую (около 25 кД) и одну тяжелую цепь (около 50-70 кД). Ν-конец каждой цепи определяет вариабельный участок из примерно 100-110 или более аминокислот, в первую очередь, ответственный за распознавание антигена. Термины вариабельная легкая цепь (νΣ) и вариабельная тяжелая цепь (νΗ) относятся к этим легким и тяжелым цепям соответственно.
Антитела могут существовать как интактные иммуноглобулины или как модификации в различных формах, включая, например, ЕаЬЕс2, ЕаЬ, Εν, Еб, (ЕаЬ')2, при этом фрагмент Εν содержит только вариабельные участки легких и тяжелых цепей, а фрагмент ЕаЬ или (ЕаЬ')2 содержит вариабельные участки и части постоянных участков, одноцепное антитело, например ксЕм СЭЯ-привитые антитела и т.п. Тяжелая и легкая цепь Εν может быть из одного и того же антитела или разных антител с получением при этом химерного участка Εν. Антитело может быть животного (особенно мышиного или крысиного) или человеческого происхождения или может быть химерным или гуманизированным. Применяемый в данной заявке термин антитело включает эти различные формы.
Композиция состоит из практически одного конкретного соединения или из конкретной формы соединения (например, изомера), когда композиция содержит по меньшей мере примерно 90% и предпочтительно по меньшей мере примерно 95, 99 и 99,9% конкретного соединения по весу. Композиция содержит смесь соединений или форм одного и того же соединения, когда каждое соединение (например, изомер) составляет по меньшей мере примерно 10% от веса композиции. Аналог пурина по изобретению или его конъюгат может быть получен в виде кислой соли или в виде основной соли, а также в виде свободной кислоты или свободного основания. В растворе некоторые из соединений по изобретению могут существовать как цвиттерионы, и противоионы образуют сами молекулы растворителя или другие ионы, растворенные или суспендированные в растворителе.
Применяемый термин изолированный относится к ίη νίΐτο препарату, выделению и/или очистке нуклеиновой кислоты, пептида или белка или другой молекулы так, что она не связана с ίη νίνο веществами или находится в форме, отличающейся от той, которая обнаружена в природе. Так, термин изолированная, применяемый по отношению к нуклеиновой кислоте, в изолированном олигонуклеотиде или изолированном полинуклеотиде относится к последовательности нуклеиновой кислоты, которая идентифицируется и отделяется по меньшей мере от одного загрязняющего вещества, с которым она обычно содержится в источнике получения.
Изолированная нуклеиновая кислота находится в форме, которая отличается от формы, в которой она находится в природе. В противоположность этому, неизолированные нуклеиновые кислоты (например, ДНК и РНК) находятся в таком состоянии, в котором они существуют в природе. Например, последовательность ДНК (например, ген) находится на хромосоме клетки-хозяина вблизи от соседних генов; последовательности РНК (например, специфичная последовательность мРНК, кодирующая специфический белок) находятся в виде смеси с многочисленными другими мРНК, которые кодируют множество белков. Следовательно, в случае изолированной молекулы нуклеиновой кислоты, которая включает полинуклеотид геномной, кДНК или ДНК синтетического происхождения или некоторую их комбинацию, изолированная молекула нуклеиновой кислоты (1) не связана со всем полинуклеотидом или частью полинуклеотида, в которых изолированная молекула нуклеиновой кислоты находится в природе, (2) связана с полинуклеотидом, с которым не связана в природе, или (3) не встречается в природе как часть большей последовательности. Изолированная молекула нуклеиновой кислоты может находиться в однонитевой или двухнитевой форме. Когда нуклеиновая кислота должна быть использована для экспрессирования белка, нуклеиновая кислота содержит минимум смысловую или кодирующую нить (то есть нуклеиновая кислота может быть однонитевой), но может содержать как смысловую, так и антисмысловую нити (то есть нуклеиновая кислота может быть двухнитевой).
Термин аминокислота охватывает остатки природных аминокислот (например, А1а, Агд, Αδη. Акр,
- 9 019151
Су5, 61и, 61η, 61у, Н15, Ну1, Нур, 11е, Ьеи, Ьу5, Ме1, РЬе, Рго, 8ег, ТЬг, Тгр, Туг и Уа1) в Ό- или Ь-форме, а также неприродных аминокислот (например, фосфосерина, фосфотреонина, фосфотирозина, гидроксипролина, гамма-карбоксиглутамата, гиппуровой кислоты, октагидроиндола-2-карбоновой кислоты, статина, 1,2,3,4-тетрагидрохинолин-3-карбоновой кислоты, пеницилл-амина, орнитина, цитрулина, -метилаланина, п-бензоилфенилаланина, фенилглицина, пропаргилглицина, саркозина и третбутилглицина). Этот термин охватывает также природные и неприродные аминокислоты, содержащие обычную группу, защищающую аминогруппу (например, ацетил или бензил-оксикарбонил), а также природные и неприродные аминокислоты, защищенные на карбоксильном конце (например, (С1С6)алкилом, фениловым или бензиловым эфиром или амидом или метилбензиламидом)). Другие подходящие группы для защиты аминных и карбоксильных групп известны специалистам (см., например, Т.^. бгеепе, Рто1ес1шд бгоирк ίη Огдашс 8уп1йе515; \УПеу: Ыете Уотк, 1981 и ссылки, приведенные в этой книге). Например, аминокислота может быть связана с остатком соединения формулы (I) через карбоксильный конец, аминоконец или через любую другую подходящую точку присоединения, такую как, например, через серу цистеина.
Термин толл-подобный рецептор (ТЬК), применяемый в данной заявке, относится к члену семейства рецепторов, которые связываются с патоген-ассоциированными молекулярными структурами (РАМРк) и способствуют иммунному ответу у млекопитающего. Известны десять ТЬК.5, например ТЬК.110.
Термин толл-подобный агонист (ТЬК агонист) относится к молекуле, которая связывается с ТЬК. Синтетические ТЬК агонисты представляют собой химические соединения, которые сконструированы так, чтобы они связывались с ТЬК и активировали рецептор. Примеры синтетических ТЬК агонистов, предусмотренных в данной заявке, включают ТЬК-7 агонист, ТЬК агонист, ТЬК-3 агонист и ТЬК9 агонист. ТЬК агонисты включают имиквимод, резиквимод, бропримин и локсорибин. Термин нуклеиновая кислота, используемый в данной заявке, относится к ДНК, РНК, однонитевым, двухнитевым или более сильно агрегированным мотивам гибридизации и к их любым химическим модификациям. Модификации включают, но без ограничения, модификации, вводящие химические группы, которые придают дополнительный заряд, поляризуемость, водородное связывание, электростатическое взаимодействие и патологическое истечение лигандным основаниям нуклеиновой кислоты или лиганду нуклеиновой кислоты в целом. Такие модификации включают, без ограничения, нуклеиновые кислоты пептидов (ПНК), фосфодиэфирные модификации (например, фосфоротиоаты, метилфосфонаты), модифицированные в 2'-положении сахара, модифицированные в 5-положении пиримидины, модифицированные в 7положении пурины, модифицированные в 8-положении пурины, модифицированные в 9-положении пурины, модификации у экзоциклических аминов, замещенные 4-тиоуридина, замещенные 5-бром и 5иодурацилов; модифицированные по основной цепи соединения, метилированные производные, необычные спаривающие основания, комбинации, такие как изооснования, изоцитидин и изогуанидин и т.п. Нуклеиновые кислоты включают также неприродные основания, такие как, например, нитроиндол. Модификации могут также включать 3'- и 5'-модификации, такие как кэппирование с ВНО. флуорофором или другим фрагментом.
Применяемый в данной заявке термин фармацевтически приемлемые соли относится к производным описанных соединений, у которых родительское соединение модифицировано с образованием его кислых или основных солей. Примеры фармацевтически приемлемых солей включают, но без ограничения, соли минеральных или органических кислот и основных остатков, таких как амины, щелочные или органические соли кислых остатков, таких как остатки карбоновых кислот, и т.п. Фармацевтически приемлемые соли включают обычные нетоксичные соли или четвертичные аммониевые соли родительского соединения, например, полученные из нетоксичных неорганических и органических кислот. Например, такие обычные нетоксичные соли включают соли, полученные из неорганических кислот, таких как соляная, бромисто-водородная, серная, сульфаминовая, фосфорная, азотная и т.п.; и соли, полученные из органических кислот, таких как уксусная, пропионоавая, янтарная, гликолевая, стеариновая, молочная, яблочная, винная, лимонная, аскорбиновая, памовая, малеиновая, гидроксималеиновая, фенилуксусная, глутаминовая, бензойная, салициловая, сульфаниловая, 2-ацетоксибензойная, фумаровая, толуолсульфокислота, метансульфокислота, этандисульфокислота, щавелевая, изэтионовая кислота и т.п.
Фармацевтически приемлемые соли соединений, используемых согласно данному изобретению, могут быть синтезированы из родительского соединения, которое содержит основной или кислый фрагмент, обычными химическими способами. Обычно такие соли могут быть получены путем взаимодействия свободных кислых или основных форм этих соединений со стехиометрическим количеством соответствующего основания или кислоты в воде или в органическом растворителе или в смесях того и другого; обычно предпочтительной является неводная среда, такая как простой эфир, этилацетат, этанол, изопропанол или ацетонитрил. Перечни подходящих солей можно найти в Кеттд1оп'5 Рйаттасеи11са1 8с1епсе5, 174Ь еб., Маск РиЬйзЫпд Сотрапу. Еаз1оп, Р.А., р. 1418 (1985), содержание этого источника включено в качестве ссылки в данную заявку.
Выражение фармацевтически приемлемые относится к тем соединениям, материалам, композициям и/или лекарственным формам, которые, с точки зрения специалиста-медика, пригодны для приме
- 10 019151 нения для контактирования с тканями людей и животных без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергической реакции или другой проблемы или осложнения, при разумном отношении польза/риск.
В данном описании применяют следующие определения, если не указано иное: гало или галоген означает фтор, хлор, бром или йод. Алкил, алкокси, алкенил, алкинил и т.д. обозначают как линейные, так и разветвленные группы; но ссылка на отдельный радикал, такой как пропил, охватывает только линейный радикал, а на разветвленный изомер, такой как изопропил, дается особое указание. Арил обозначает фенильный радикал или орто-конденсированный бициклический карбоциклический радикал, содержащий примерно 9-10 атомов в кольце и по меньшей мере одно ароматическое кольцо. Не! может быть гетероарилом, который охватывает радикал, присоединенный через атом углерода моноциклического ароматического кольца, содержащего 5 или 6 атомов, являющихся атомами углерода и однимчетырьмя гетероатомами, каждый из которых выбран из группы, состоящей из неперекисного кислорода, серы и Ν(Χ), где X отсутствует или обозначает Н, О, (С1-С4)алкил, фенил или бензил; а также радикал орто-конденсированного бициклического гетероцикла примерно с 8-10 атомами в кольце, в частности бензпроизводное, или кольцо, полученное конденсированием с ним пропилена, триметилена или тетраметилена.
Специалистам очевидно, что соединения по изобретению, содержащие хиральный центр, могут существовать и могут быть выделены в оптически активной и рацемической формах. Некоторые соединения могут проявлять полиморфизм. Следует иметь в виду, что данное изобретение охватывает любую рацемическую, оптически активную, полиморфную или стереоизомерную форму или их смеси, соединения по изобретению, которые обладают полезными свойствами, описанными в данной заявке, при этом хорошо известно, как получить оптически активные формы (например, путем разрешения рацемической формы при перекристаллизации, путем синтеза из оптически активных исходных веществ, путем хирального синтеза или путем хроматографического разделения с применением хиральной стационарной фазы) и как определить активность агониста, применяя стандартные тесты, описанные в данной заявке, или другие похожие тесты, хорошо известные из уровня техники. Следует также иметь в виду, что, как известно специалистам в данной области соединения, описанные в данной заявке, включают различные таутомеры, которые могут существовать в различных состояниях равновесия друг с другом.
Термин терапевтически эффективное количество означает количество соединения, применяемого по изобретению, или количество комбинации заявленных соединений, пригодные, например, для лечения или профилактики болезни или расстройства или для лечения симптомов болезни или расстройства у хозяина. Применяемые термины лечение или лечить включают (ί) предотвращение патологического состояния от возникновения (например, профилактику); (ίί) ингибирование патологического состояния или остановку его развития; (ш) облегчение патологического состояния и/или уменьшение симптомов, связанных с патологическим состоянием.
Применяемый термин пациент относится к организмам, которые подвергаются лечению способами по изобретению. Такие организмы включают, без ограничения, млекопитающих, таких как люди. В контексте данного изобретения термин субъект обычно относится к индивидууму, который подвергается лечению или который уже прошел курс лечения (например, ему вводили соединение по изобретению).
Стабильное соединение и стабильная структура предназначены для обозначения соединения, которое настолько стабильно, чтобы быть выделенным из реакционной смеси с достаточной степенью чистоты и быть включенным в состав эффективного терапевтического вещества. Согласно данному изобретению заявляются только стабильные соединения.
ТЬЯ агонисты и конъюгаты по изобретению и их применение.
По одному из вариантов данное изобретение предусматривает терапевтический способ предотвращения или лечения патологических состояния или симптома у млекопитающего, такого как человек, когда используется активность ТЬЯ агониста и желательно его действие. Этот способ включает введение млекопитающему, нуждающемуся в такой терапии, эффективного количества соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли. Неограничивающие примеры патологических состояний или симптомов, которые пригодны для лечения, включают раковые болезни, воспалительные болезни желудочно-кишечного тракта, мозга, кожи, суставов и других тканей, бактериальные или вирусные заболевания, аутоиммунные болезни и болезнь Крона. Соединения по изобретению можно также применять для изготовления вакцин от бактерий, вирусов, раковых клеток или рак-специфичных пептидов или для активации противораковых моноклональных антител, таких как стимулянт ΟΝ8 (ЦНС), или биозащиты. Таким образом, соединение предусматривает соединения по изобретению для применения в медицинской терапии (например, для применения в качестве противоракового агента, для лечения бактериальных болезней, для лечения вирусных болезней, таких как гепатит С и гепатит В, для лечения болезни Крона и в качестве терапевтических агентов для лечения иммунологических болезней). Кроме того, соединения по изобретению могут предотвращать карциогенез, например, вызванный вирусами гепатита С и гепатита В, и могут быть применены для изготовления медикамента, пригодного для лечения рака, вирусной или бактериальной инфекции, болезни Крона и иммунологических нарушений у млекопитающего, такого как человек.
- 11 019151
По одному из вариантов данное изобретение предусматривает способ лечения вирусной инфекции у млекопитающего путем введения конъюгата ТЬК агониста по изобретению. Вирусная инфекция может быть вызвана вирусом РНК, продуктом вируса РНК, который действует как ТЬК агонист, и/или вирусом ДНК. Примером вируса ДНК является вирус гепатита В. Согласно одному из вариантов вирусная инфекция вызвана коронавирусом, который вызывает тяжелый острый респираторный синдром (8ЛК8), вирусом гепатита В или вирусом гепатита С.
По одному из вариантов данное изобретение предусматривает способ лечения рака путем введения эффективного количества конъюгата ТЬК агониста по изобретению. Раковая болезнь может представлять собой чувствительный к интерферону рак, такой как, например, лейкемия, лимфома, миелома, меланома или рак почек. Конкретные виды рака, которые можно подвергать лечению, включают меланому, поверхностный рак мочевого пузыря, старческий кератоз, интраэпителиальную неоплазию и карциному базальных клеток кожи, плоскоклеточный рак и т.п. Кроме того, способ по изобретению включает лечение предракового состояния, такого как, например, старческий кератоз или интраэпиталиальная неоплпзия, семейный полипоз (полипы), цервикальная дисплазия, рак шейных отделов, поверхностный рак мочевого пузыря и другие виды рака, связанные с инфекцией (например, лимфосаркома Капоши или лейкемия) и т.п.
Согласно другому варианту данное изобретение включает способ лечения аутоиммунной болезни путем введения терапевтически эффективного количества конъюгата ТЬК агониста по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли. Примеры аутоиммунных болезней включают рассеянный склероз, волчанку, ревматоидный артрит и т.д.
Согласно еще одному варианту данное изобретение предусматривает способ лечения болезни Крона путем введения конъюгата ТЬК агониста по изобретению.
Конъюгаты ТЬК агониста могут включать гомофункциональный полимер ТЬК агониста, например, образованный из ТЬК7 агониста или ТЬК3 агониста. ТЬК7 агонист может представлять собой 7-тиа-8оксогуанозиниловый (ТОО) фрагмент, 7-деазагуанозинильный (7ΌΟ) фрагмент, конъюгат ТЬК агониста может включать гетерофункциональный полимер ТЬК агониста. Гетерофункциональный полимер ТЬК агониста может включать ТЬК.7 агонист, или ТЬК3 агонист, или ТЬК9 агонист, или все три агониста. Гетерофункциональный полимер ТЬК агониста может включать ТЬК8 агонист или ТЬК9 агонист.
Данное изобретение включает ковалентное сопряжение синтетического ТЬК агониста с выбранными макромолекулами для достижения, например, желаемых молекулярной формы, размера и валентности с целью оптимизации иммунологических свойств получаемого конъюгата и/или таргетирования или доставки конъюгата в желаемые клетки и ткани. Как описано в данной заявке, конъюгаты имеют такое строение, что они пригодны для применения в различных медицинских областях, включая, но без ограничения, случаи аллергической астмы, респираторных вирусных инфекций (грипп и К8У), волчанки и других аутоиммунных болезней, и применения в качестве комбинаций антиген-адъювант для вакцин против раковых и инфекционных болезней. Конъюгаты обеспечивают оптимальный иммунный ответ, ограничивая при этом нежелательные системные побочные эффекты за счет привязывания иммунного активатора (синтетического ТЬК агониста) к макромолекуле при помощи прочной ковалентной связи. Макромолекула может служить в качестве таргетирующего фрагмента и/или интегральной части иммунного ответа, например, как антиген в конъюгате. Основное преимущество при введении стабильного конъюгата в локализованное окружение заключается в том, что только очень небольшие количества ТЬК агониста высвобождаются с течением времени в системной среде.
По одному из вариантов макромолекула выбирается из продуктов, таких как белки, липиды или дендримеры либо полимеры, содержащие на своей поверхности аминогруппы, такие как полистирольные аминогранулы, каждая из которых содержит первичные аминогруппы, доступные для сопряжения с линкером, таким как 8ΆΝΗ, или для непосредственного сопряжения с синтетическим ТЬК7 агонистом. Например, в случае сопряжения линкера и макромолекулы ТЬК7 агонист, такой как ИС-1У150, реагирует с ΝΗδ-эфиром конъюгата δΆΝΗ-макромолекула с получением конъюгата ТЬК7 агонист-δΛΝΗмакромолекула.
Обычно в случае острых вспышек болезни вакцины не используются, так как (1) они начинают действовать через длительное время и (2) они неэффективны для пациентов с нарушенным иммунитетом. Например, инфекции, вызванные 81арйу1ососси5 аитеик (8Л), являются основной причиной заболеваемости и смертности у госпитализированных пациентов. Группы с повышенным риском являются группами с подавленным иммунитетом вследствие ожогов, травм, введения катетеров, проведения диализа или пожилыми людьми в домах престарелых. Более того, многие штаммы 8Л в больницах являются устойчивыми к обычным антибиотикам.
Данное изобретение преодолевает два барьера в процессе лечения. Согласно изобретению предусмотрено применение композиций, включающих синтетические ТЬК агонисты и конъюгаты с синтетическими ТЬК агонистами в комбинации с грамположительными бактериальными антигенами. ТЬК7 лиганды обычно характеризуются слабой фармакокинетикой и быстрыми системными абсорбцией и выделением. Из-за системного диспергирования они приводят к появлению цитокинового синдрома. Эффективные адъюванты должны создавать иммунный градиент цитокинов и хемокинов. По одному из вариан
- 12 019151 тов связывание активных синтетических ТЬК7 агонистов с макромолекулами улучшает доставку, фармакокинетику и позволяет избежать системной токсичности путем локализованного воздействия.
Согласно еще одному варианту данное изобретение предусматривает способ предотвращения или ингибирования инфекции, вызванной грамположительными бактериями, у млекопитающего, включающий введение млекопитающему эффективного количества композиции, содержащей бактериальный антиген грамположительной бактерии и синтетический ТЬК.7 агонист. По другому варианту настоящее изобретение предусматривает способ предотвращения или ингибирования инфекции, вызванной грамположительными бактериями, у млекопитающего, включающий введение млекопитающему эффективного количества синтетического ТЬК.7 агониста, связанного с грамположительным бактериальным антигеном. Например, конъюгат 1У150-М8Л сохраняет активность ТЬК7 агониста, имеет повышенную активность и пониженную токсичность, вызывает локальную активацию врожденного иммунитета и индуцирует иммунную защиту, зависящую от Т-клеток, в течение 6 дней после одной вакцинации бактериальным анти геном.
По одному из вариантов синтетический ТЬК7 агонист вводится вместе с одним или более антигенами 8. аигеик или подвергается связыванию с этими антигенами. В табл. 1 приведены примеры антигенов для 8. аитеик для применения с синтетическими ТЬК7 агонистами, особенно в случае острых вспышек болезни. Вакцины по изобретению могут неожиданно обеспечить быстрый и эффективный иммунный ответ.
Таблица1
Иммуногены 81ар6у1ососсиз аигеиа
Средство__________________________________
Эксфолиативный токсин В
Эксфолиативный токсин А
Токсин токсического шокового синдрома Энтеротоксин А - Е, Н - и
Костный сиалобелок - связывающий белое Коллаген-связывающий белок Агглютинирующий фактор А Агглютинирующий фактор В а-гемолизин γ-гемолизин Белок А
Агглютинирующий фактор А Фибронектин-связывающий белок А Фибронектин-связывающий белок В Коллаген-связывающий белок Липотейхоевая кислота
Пептидогликан
Белок А
Фибронектин-связывающий белок В а-гемолизин
Лейкоцидин Пантон-Валентина Коллаген-связывающий белок Липотейхоевая кислота
Пептидогликан
Капсулярный полисахарид Агглютинирующий фактор А Белок А
Фибронектин-связывающий белок
Согласно одному из вариантов изобретение предусматривает следующие конъюгаты:
Соединение формулы (II)
Соединение формулы (III)
Тиазолпиримидины Пурины
X1 обозначает -О-, -8- или -ΝΚ°;
где Кс обозначает водород, Сщоалкил или С1-10алкил, замещенный С3-6циклоалкилом, или Кс и К1, взятые вместе с атомом азота, могут образовать гетероциклическое кольцо или замещенное гетероциклическое кольцо, причем заместителями являются гидрокси, С1-6алкил, гидрокси-С1-6алкилен, С1-6алкок
- 13 019151 си, С1-6алкокси-С1-6алкилен или циано;
где К1 обозначает (С1-С10)алкил, замещенный (С1-С10)алкил, (С6-10)арил, замещенный (С6-10)арил, С5-9гетероцикл, замещенный С5-9гетероцикл, причем заместители в алкильных, арильных и гетероарильных группах представляют собой гидрокси, С1-6алкил, гидрокси-С1-6алкилен, С1-6алкокси, С1-6алкокси-С1-6алкилен, амино, циано, галоген или арил;
каждый К2 независимо обозначает водород, ОН, (С1-С6)алкил, замещенный (С1-С6)алкил, (С1С6)алкокси, замещенный (С1-С6)алкокси, -С(О)-(С1-С6)алкил (алканоил), замещенный -С(О)-(С1С6)алкил, -С(О)-(С6-С10)арил (ароил), замещенный -С(О)-(С6-С10)арил, -С(О)ОН (карбоксил), -С(О)О(С1С6)алкил (алкоксикарбонил), замещенный -С(О)О(С1-С6)алкил, -ΝΕΈ1’, -С'ЧО^Е'К’ (карбамоил), -ОС(О)НКаКь, -(^-^алкилен-ИКК5, -(С1-С6)алкилен-С(О)НКаКь, галоид, нитро или циано;
где каждый Ка и Кь обозначает независимо водород, (С1-С6)алкил, (С3-С8)циклоалкил, (С1С6)алкокси, гало (С1-С6)алкил, (С3-С8)циклоалкил (С1-С6)алкил, (С1-С6)алканоил, гидрокси(С1-С6)алкил, арил, арил(С1-С6)алкил, Не!, Не!-(С1-С6)алкил или (С1-С6)алкоксикарбонил; где X обозначает связь или связывающую группу; К3 обозначает макромолекулу; где η равен 1, 2, 3 или 4; где т равен 1 или 2; где с.| равен 1-1000, 104, 105, 106 или более; или фармацевтически приемлемые соли этих соединений. Макромолекулы могут быть органическими молекулами, состоящими из углерода, кислорода, водорода, азота, серы, фосфора или их сочетаний, которые не являются вредными для тканей организма (например, они нетоксичны и/или не вызывают воспаления) и могут включать, без ограничения, дендримеры, белки, пептиды, липиды и их составы (например, липосомные наночастицы) с линкерами или без линкеров (группы X2) и аминомодифицированные полимеры, например полистирольные гранулы, а также αгалактозилкерамиды (см. фиг. 1).
Соединения по изобретению могут быть получены с применением соединений, имеющих формулу (ΙΑ-1)
<«*»,.
(ΙΑ-1) где X2 обозначает группу, которая может реагировать со специфической группой соединений, например, описанных в патенте США № 6329381 (Кипто!о и др.) или образовывать связь со связывающей группой, или реагировать с образованием связи с макромолекулой, остальные переменные величины имеют значения, указанные выше для формулы (ΙΑ). Неограничивающие примеры макромолекул включают макромолекулы с боковыми цепями, которые повышают растворимость, такие как, например, группы, содержащие морфолиновые, пиперидиновые, пирролидиновые или пиперазиновые кольца и т.п., аминокислоты, полимеры аминокислот (белки или пептиды), например дипептиды или трипептиды и т.п.; углеводы (полисахариды), нуклеотиды, такие как, например, ПНК, РНК и ДНК и т.п.; полимеры органических соединений, такие как, например, полиэтиленгликоль, полилактид и т.п.; мономерные и полимерные липиды; нерастворимые органические наночастицы; нетоксичные вещества из организма, такие как, например, вирусы, бактерии, грибки и т.п. Антигены могут включать целые инактивированные организмы или их компоненты, например клетки и т.п.
Согласно одному из вариантов соединение по изобретению имеет формулу (1С)
где X обозначает N или СКХ, где Кх обозначает водород, галоген, замещенный алкил, незамещенный алкил, замещенный гетероалкил или незамещенный гетероалкил;
Υ обозначает 8 или Ν;
прерывистые линии (-----) указывают возможные связи, при этом когда связь между Υ и атомом углерода, отмеченным звездочкой, является двойной, р2 отсутствует;
когда связь между р1 и атомом углерода, отмеченным звездочкой, является двойной, р1 обозначает О, 8, ΝΥ1 или ΝΝΥ2Υ3, и когда связь между р1 и атомом углерода, отмеченным звездочкой, является простой связью, Р обозначает водород, циано, нитро, Ρ-Υ , 8-Υ , ΝΥ Υ или ΝΥ ΝΥ Υ ;
Υ1 обозначает водород, замещенный алкил, незамещенный алкил, замещенный циклоалкил, незамещенный циклоалкил, замещенный гетероалкил или незамещенный гетероалкил, замещенный арил, незамещенный арил, замещенный гетероарил, незамещенный гетероарил, С(=О)-замещенный алкил, С(=О)-незамещенный алкил, С(=О)О-замещенный алкил, С(=О)О-незамещенный алкил, циано, нитро,
- 14 019151 гидрокси или Ο-Υ2;
Υ2, Υ3 и Υ4, каждый независимо, обозначают водород, замещенный алкил, незамещенный алкил, замещенный гетероалкил, незамещенный гетероалкил, замещенный арил, незамещенный арил, замещенный гетероарил, незамещенный гетероарил;
Ζ обозначает О, 8 или ΝΥ5, Υ5 где обозначает водород, замещенный алкил, незамещенный алкил, замещенный гетероалкил, незамещенный гетероалкил, замещенный арил, незамещенный арил, замещенный гетероарил, незамещенный гетероарил;
р2 и р3, каждый независимо, обозначает водород, замещенный алкил, незамещенный алкил, замещенный гетероалкил, незамещенный гетероалкил, замещенный арил, незамещенный арил, замещенный гетероарил, незамещенный гетероарил;
X1 обозначает -О-, -8- или -ΝΒΧ
Вс обозначает водород, С1-10алкил или замещенный С1-10алкил или Вс и В1, взятые вместе с атомом азота, могут образовать гетероциклическое кольцо или замещенное гетероциклическое кольцо;
В1 обозначает водород, С1-10алкил, замещенный С1-10алкил, С6-10арил или замещенный С6-10арил, С5-9гетероцикл или замещенный С5-9гетероцикл;
каждый В2 обозначает независимо водород, ОН, (С1-С6)алкил, замещенный (С1-С6)алкил, (С1С6)алкокси, замещенный (С1-С6)алкокси, С(О)-(С1-С6)алкил (алканоил), замещенный -С(О)-(С1-С6)алкил, -С(О)-(С6-С10)арил (ароил), замещенный С(О)-(С6-С10)арил, -С(О)ОН (карбоксил), -С(О)О(С1-С6)алкил (алкоксикарбонил), замещенный С(О)О(С1-С6)алкил, -ΝΕΎ, -ί'ΌΝΒ'Έ’ (карбамоил), -О-С(О^ВаВь, -(Ц-СДалкилен^В^5, -(С1-С6)алкилен-С(О)МВаВь, галоид, нитро или циано;
каждый Ва и Вь обозначает независимо водород, (С1-С6)алкил, (С3-С8)циклоалкил, (С1-С6)гетероалкил, (С1-С6)алкокси, гало-(С1-С6)алкил, (С3-С8)циклоалкил(С1-С6)алкил, (С1-С6)алканоил, гидрокси(С1-С6)алкил, арил, арил-(С1-С6)алкил, Не!, Не!-(С1-С6)алкил или (С1-С6)алкоксикарбонил;
при этом заместители у любого алкила, циклоалкила, аминогруппы, алкокси, алканоила, арила и гетероарила или гетероциклической группы представляют собой один или более заместителей (например, 1, 2, 3, 4, 5 или 6) из гидрокси, С1-6алкила, гидрокси(С1-С6)алкилена, С1-6алкокси, С3-6циклоалкила, С1-6алкокси-С1-6алкилена, амино, циано, галогена, гетероцикла (такого как пиперидинил или морфолинил) или арила;
X2 обозначает связь или связывающую группу;
к равен 1, 2, 3 или 4;
η равен 0, 1, 2, 3 или 4 и
В3 обозначает макромолекулу, представляющую собой клетку, вирус, витамин, кофактор, пептид, белок, нуклеиновую кислоту, липид, гранулу или частицу, такую как полистирольная гранула или наночастицы либо дендример;
или это может быть фармацевтически приемлемая соль, включая гидраты.
Согласно некоторым вариантам группы Х2-В3 могут образовать линкер со вторым фрагментом формулы (1С), образуя димер. Например, линкер может быть любым линкером, описанным в данной заявке, таким как, например, двухвалентный арил или гетероарил, бис-амидарил, бис-амидгетероарил, бисгидразидарил, бис-гидразидгетероарил или т.п. Альтернативно, р1 может образовать линкер для второго фрагмента формулы (1С) с образованием димера через дисульфидную связь; см., например, фиг. 28.
В тех случаях, когда соединения являются достаточно основными или кислыми, чтобы образовать кислые или основные соли, может быть пригодным применения соединений в виде солей. Примерами подходящих солей являются соли присоединения к органическим кислотам, образованные с кислотами, которые образуют физиологически приемлемый анион, например тозилат, метансульфонат, ацетат, цитрат, малонат, тартрат, сукцинат, бензоат, аскорбат, α-кето-глутарат и α-глицерофосфат. Могут быть также получены подходящие неорганические соли, включая гидрохлорид, сульфат, нитрат, бикарбонат и карбонат.
Приемлемые соли могут быть получены с применением стандартных методов, хорошо известных из уровня техники, например, путем взаимодействия достаточно основного соединения, такого как амин, с подходящей кислотой, которая образует физиологически приемлемый анион. Могут быть также получены щелочные (например, натриевые, калиевые или литиевые) или щелочно-земельные (например, кальциевые) соли карбоновых кислот.
Алкил включает линейные или разветвленные С1-10алкильные группы, например метил, этил, пропил, бутил, пентил, изопропил, изобутил, 1-метилпропил, 3-метилбутил, гексил и т.п.
Низший алкил включает линейные или разветвленные С1-6алкильные группы, например метил, этил, пропил, 1-метилэтил, бутил, 1-метилпропил, 2-метилпропил, 1,1-диметилэтил, пентил, 1метилбутил, 2-метилбутил, 3-метилбутил, 1,1-диметилпропил, 1,2-диметилпропил, 2,2-диметилпропил и т.п.
Термин алкилен относится к двухвалентной линейной или разветвленной углеводородной цепи (например, этилен: -СН2-СН2-).
С3-7Циклоалкил включает такие группы, как циклопропил, циклопентил, циклогексил, циклогептил и т.п. и алкилзамещенную С3-7циклоалкильную группу, предпочтительно линейную или разветвленную
- 15 019151
С1-6алкильную группу в качестве алкила, такую как метил, этил, пропил, бутил, пентил, и С5-7циклоалкильную группу, такую как циклопентил или циклогексил и т.п.
Низший алкокси включает С1-6алкоксигруппу, такую как метокси, этокси или пропокси и т.п.
Низший алканоил включает С1-6алканоильные группы, такие как формил, ацетил, пропаноил, бутаноил, пентаноил или гексаноил и т.п.
С7-11Ароил включает такие группы, как бензоил или нафтоил.
Низший алкоксикарбонил включает С2-7алкоксикарбонильные группы, такие как метоксикарбонил, этоксикарбонил или пропоксикарбонил и т.п.
Низшая алкиламиногруппа означает аминогруппу, замещенную С1-6алкильной группой, такую как метиламино, этиламино, пропиламино, бутиламино и т.п.
Ди(низший алкил)аминогруппа означает аминогруппу, замещенную одинаковыми или разными С1-6алкильными группами (например, диметиламино, диэтиламино, этилметиламино).
Низшая алкилкарбамоильная группа означает карбамоильную группу, замещенную С1-6алкильной группой (например, метилкарбамоил, этилкарбамоил, пропилкарбамоил, бутилкарбамоил).
Ди(низший алкил)карбамоильная группа означает карбамоильную группу, замещенную одинаковыми или разными С1-6алкильными группами (например, диметилкарбамоил, диэтилкарбамоил, этилметилкарбамоил).
Атом галогена означает такой атом, как фтор, хлор, бром или йод.
Термин арил относится к С6-10моноциклической или конденсированной циклической арильной группе, такой как фенил, инденил или нафтил, и т.п.
Гетероциклил или гетероцикл относится к моноциклическим насыщенным гетероциклическим группам или ненасыщенным моноциклическим или конденсированным гетероциклическим группам, содержащим по меньшей мере один гетероатом, например 0-3 атома азота (ΝΕ.'1, где Ка обозначает Н, алкил или Υ2, определение которого дано выше), 0-1 атома кислорода (-О-) и 0-1 атом серы (-8-). Неограничивающие примеры насыщенных моноциклических гетероциклических групп включают 5- или 6членную насыщенную гетероциклическую группу, такую как тетрагидрофуранил, пирролидинил, морфолинил, пиперидил, пиперазинил или пиразолидинил. Неограничивающие примеры ненасыщенной моноциклической гетероциклической группы включают 5- или 6-членную ненасыщенную гетероциклическую группу, такую как фурил, пирролил, пиразолил, имидазолил, тиазолил, тиенил, пиридил или пиримидинил. Неограничивающие примеры ненасыщенных конденсированных гетероциклических групп включают ненасыщенные бициклические гетероциклические группы, такие как индолил, изоиндолил, хинолил, бензтиазолил, хроманил, бензофуранил и т.п.
Не! может быть насыщенной гетероциклической группой или ненасыщенной гетероциклической группой, такой как гетероарильная группа.
КС и К1, взятые вместе с атомом азота, к которому они присоединены, могут образовать гетероциклическое кольцо. Неограничивающие примеры гетероциклических колец включают 5- или 6-членные насыщенные гетероциклические кольца, такие как 1-пирролидинил, 4-морфолинил, 1-пиперидил, 1пиперазинил или 1-пиразолинил, 5- или 6-членные ненасыщенные гетероциклические кольца, такие как 1-имидазолил, и т.п.
Алкильные, арильные, гетероциклические группы К1 могут быть замещены одним или более заместителями, при этом заместители могут быть одинаковыми или разными и включают низший алкил; циклоалкил, гидроксил, гидрокси-С1-6алкилен, такой как гидроксиметил, 2-гидроксиэтил или 3гидроксипропил; низший алкокси; С1-6алкокси-С1-6алкил, такой как 2-метоксиэтил, 2-этоксиэтил или 3метоксипропил; амино; алкиламино; диалкиламино; циано; нитро; ацил; карбоксил; низший алкоксикарбонил; галоген; меркапто; С1-6алкилтио, такой как метилтио, этилтио, припилтио или бутилтио; замещенный С1-6алкилтио, такой как метоксиэтилтио, метилтиоэтилтио, гидроксиэтилтио или хлорэтилтио; арил; замещенный С6-10моноциклический или конденсированный циклический арил, такой как 4гидроксифенил, 4-метоксифенил, 4-фторфенил, 4-хлорфенил или 3,4-дихлорфенил; 5-6-членный ненасыщенный гетероциклил, такой как фурил, пирролил, пиразолил, имидазолил, тиазолил, тиенил, пиридил или пиримидинил; и бициклический ненасыщенный гетероциклил, такой как индолил, изоиндолил, хинолил, бензтиазолил, хроманил, бензофуранил или фталимино. По некоторым вариантам одна или более указанных выше групп может быть исключена как заместитель различных других групп в соединении.
Согласно некоторым вариантам 5-членным кольцом является тиазольное кольцо, например, когда Υ в формуле (ΙΑ) выше обозначает 8 и О2 отсутствует.
Алкильные, арильные, гетероциклические группы в К2 могут быть замещены одним или несколькими заместителями, при этом заместители могут быть одинаковыми или разными и включают гидроксил; С1-6алкокси, такой как метокси, этокси или пропокси; карбоксил; С2-7алкоксикарбонил, такой как метоксикарбонил, этоксикарбонил или пропоксикарбонил; и галоген.
Алкил, арил, гетероцикл в КС могут быть замещены одним или несколькими заместителями, при этом заместители могут быть одинаковыми или разными и включают С3-6циклоалкил; гидроксил; С1-6алкокси; амино; циано; арил; замещенный арил, такой как 4-гидроксифенил, 4-метоксифенил, 4-хлорфенил или 3,4-дихлорфенил; нитро и галоген.
- 16 019151
Гетероциклическое кольцо образованное вместе Вс и В1 и атомом азота, к которому они присоединены, могут быть замещены одним или несколькими заместителями, одинаковыми или разными, которые включают С!-6алкил; гидрокси-С1-6алкилен; С1-6алкокси-С1-6алкилен; гидроксил; С!-6алкокси и циано.
Согласно некоторым вариантам, когда р1 обозначает 0-У2. Υ2 не является водородом.
Конкретное значение X представляет собой Ν.
Другое конкретное значение X представляет собой СН.
Конечно, в одной молекуле соединения указанной формулы может содержаться только одна из двух связей, указанных пунктирной линией. По одному из вариантов связь между Υ и атомом углерода, который отмечен звездочкой, является двойной. По другому варианту связь между р1 и атомом углерода, который отмечен звездочкой, представляет собой двойную связь.
В конкретном случае р1 обозначает О.
В другом конкретном случае р1 обозначает 8.
Еще одно значение р1 представляет собой ΝΥ1, например =ΝΗ.
Еще одно значение для р1 представляет собой ΝΝΥ2Υ3.
Согласно одному из вариантов связь между р1 и атомом углерода, отмеченным звездочкой, является простой связью.
Конкретное значение р1 представляет водород.
Другое конкретное значение р1 представляет собой ΝΗ2.
Еще одно конкретное значение р1 представляет собой Ο-Υ2
Конкретное значение Υ1 представляет водород.
Другим конкретным значением Υ1 является алкил, например (С1-С6)алкил, такой как метил.
Другим значением Υ1 является арил, например фенил.
Конкретное значение для каждого из Υ2, Υ3 и Υ4 представляет собой водород.
Другое конкретное значение для каждого из Υ2, Υ3 и Υ4 (независимо) представляет собой алкил, например (С1-С6)алкил, такой как метил.
Еще одно конкретное значение для Υ2, Υ3 и Υ4 (независимо) представляет собой арил, такой как фенил.
Конкретное значение для Ζ представляет собой О.
Другим конкретным значением для Ζ является 8.
Еще одним конкретным значением для Ζ является ΝΥ5, где Υ5 обозначает водород, метил или фенил.
Конкретное значение для р2 представляет собой водород.
В другом конкретном случае р3 может обозначать метил или фенил.
Конкретным значением для р3 является водород.
Другим конкретным значением для р3 является метил или фенил.
Конкретное значение для X1 представляет собой атом серы, атом кислорода или ΝΚΛ
Другим конкретным значением для X1 является атом серы.
Еще одним конкретным значением для X1 является атом кислорода.
Еще одним конкретным значением для X1 является NВс.
Еще одним конкретным значением для X1 является ΝΗ.
Конкретным значением для Υ является Н.
Другим конкретным значением для Υ является 8.
Конкретным значением для Вс является водород, С1-4алкил или замещенный С1-4алкил.
Конкретным значением для В1 и Вс, взятых вместе, является образование или гетероциклического кольца, или замещенного гетероциклического кольца.
Другим конкретным значением для В1 и Вс, взятых вместе, является замещенные или незамещенные морфолиновое, пиперидиновое, пирролидиновое или пиперазиновое кольцо.
Конкретным значением для В1 является водород, С1-4алкил или замещенный С1-4алкил.
Другим конкретным значением для В1 является 2-гидроксиэтил, 3-гидроксипропил, 4гидроксибутил, 2-аминоэтил, 3-аминопропил, 4-аминобутил, метоксиметил, 2-метоксиэил, 3метоксипропил, этоксиметил, 2-этоксиэтил, метилтиометил, 2-метилтиоэтил, 3-метилтиопропил, 2фторэтил, 3-фторпропил, 2,2,2-трифторэтил, цианометил, 2-цианоэтил, 3-цианопропил, метоксикарбонилметил, 2-метоксикарбонилэтил, 3-метоксикарбонилпропил, бензил, фенетил, 4-пиридилметил, циклогексилметил, 2-тиенилметил, 4-метоксифенилметил, 4-гидроксифенилметил, 4-фторфенилметил, 4хлорфенилметил.
Другим конкретным значением для В1 является водород, СН3-, СН3-СН2-, СН3СН2СН2-, гидроксиС1-4алкилен или С1-4алкокси-С1-4алкилен.
Другим конкретным значением для В1 является водород, СН3-, СН3-СН2-, СН3-О-СН2СН2- или СН3-СН2-О-СН2СН2-.
Конкретное значение для В представляет собой водород, галоген или С1-4алкил. Другое конкретное значение для В2 представляет собой водород, хлор, бром, СН3-или СН3-СН2-.
Конкретными заместителями алкила, арила или гетероарила являются гидрокси, С1-6алкил, гидро
- 17 019151 кси-С1-6алкилен, С1-6алкокси, С1-6алкокси-С1-6алкилен, С3-6циклоалкил, амино, циано, галоген или арил.
Конкретным значением для X2 является связь или цепь, содержащая до примерно 24 атомов, при этом атомы выбраны из группы, состоящей из углерода, азота, серы, неперекисного кислорода и фосфора.
Другим конкретным значением для X является связь или цепь, содержащая от примерно 4 до примерно 12 атомов.
Еще одним конкретным значением для X2 является связь или цепь, содержащая от примерно 6 до примерно 9 атомов.
Еще одним конкретным значением для X2 являются
Еще одним конкретным значением для X2 является
По некоторым вариантам линкер или группа X2 не являются линкером, описанным в заявке АО 2007/024707. Кроме того, по некоторым вариантам К3 не является радикалом, описанным в заявке АО 2007/024707.
Конкретная макромолекула представляет собой аминокислоту, углевод, пептид, белок, антиген, нуклеиновую кислоту, липид, дендример, вещество из организма или клетку, такую как микроб.
Конкретный пептид содержит от 2 до примерно 20 остатков аминокислот.
Другой конкретный пептид содержит от 10 до примерно 20 остатков аминокислот.
Конкретная макромолекула является углеводом.
Конкретная нуклеиновая кислота является ДНК, РНК или ПНК.
Конкретная макромолекула представляет собой клетку, липид, витамин, липид или кофактор.
Конкретным антигеном является микроб.
Конкретным микробом является вирус, бактерия или грибок.
Другим конкретным микробом является вирус или бактерия.
Конкретными бактериями являются ВасШиз ап!йгас1з, Ь1з!епа топосу!одепез, Егапс1зе11а !и1агепз1з, 8а1топе11а или 8!арйу1ососсиз.
Конкретными бактериями 8а1топе11а являются 8. 1ур1пншпит или 8. егИегШйз.
Конкретным 81арНу1ососснз является 8. ангенз.
Конкретные вирусы представляют собой вирусы РНК, включая К8У и вирус гриппа, продукт вируса РНК или вирус ДНК, включая вирус герпеса.
Конкретным вирусом ДНК является вирус гепатита В.
Согласно другим вариантам макромолекула не является аминокислотой, углеводом, пептидом, антигеном, таким как микроб, например вирус (например, вирусы РНК, например 81У, вирус гепатита С или коронавирус, продукт вируса РНК или вируса ДНК, такой как вирус гепатита В, грибки или бактерии, такие как ВасШиз апйгааз (ап!йгах), Ыз!епа топосу!одепез, Егапазе11а !и1агепз1з, или 8а1топе11а (например, !урЫтипит или еп!еп!Шз) нуклеиновой кислотой, такой как ДНК, РНК, ПНК или вещество организма, такое как клетка или липид.
Конкретная величина к представляет собой 0. Другой конкретной величиной к является 1. Другой конкретной величиной к является 2. По некоторым вариантам к не равен 1.
Конкретное соединение по изобретению представляет собой
- 18 019151
ΙΑ-Ь-А1;
ΙΑ-ΜΑ1^; ΙΑ-Ь-А’-А1;
ΙΑ-Ι.Α-Ε-Α1:
(ΓΑ'ε-Τ.-α'-Α1;
(ΙΑΕ-ί-Α'-ί-Α1;
(ΙΑ);.—Ю—Α\ или ((АМНА’Ъ;
где (ΙΑ) описана выше;
Ь отсутствует или является связывающей группой и каждая группа А1 независимо представляет собой макромолекулу.
Данное изобретение включает композиции соединения по изобретению, возможно, в комбинации с другими активными агентами, например рибавирином, лизорибином или микофенолятом мофетила. Другие известные неограничивающие примеры описаны в опубликованной заявке США на патент № 20050004144.
Другие варианты изобретения предусматривают способы получения соединений по изобретению, способы получения промежуточных соединений по изобретению. Промежуточные соединения, пригодные для получения соединений по изобретению, также предусмотрены как дальнейшие варианты изобретения.
Например, соединения (конъюгаты) по изобретению могут быть получены с применением стандартных способов синтеза, известных из уровня техники. Общий способ синтеза сложного эфира и альдегида показан ниже. ИС-1У150 был получен семистадийным методом из 2,6-дихлорпурина. Свободная альдегидная группа в бензильном фрагменте ИС-1У150 дала возможность осуществить сочетание агониста со многими различными химическими соединениями, включая белки, олигонуклеотиды, ароматические молекулы, липиды, вирусы и клетки при помощи молекулы линкера, которая содержала гидразиновую группу или аминогруппу.
Общая схема синтеза.
- 19 019151
Синтез альдегида
Литий Ν.Μ’-диметилецдиамино
4-[6-амино-8“метокси*2Ч2-метокси- 4-[6-амино8-гидрокси-2-(2-гидроксиэтокси)-пурин-9-илметил{-оензальдегид этокси>пурин-9-илметил]-бензальдегид
Химический способ получения ИС-1У150.
Синтез ИС-1У150 и получение указанных соединений 2-8 осуществляли следующим образом. Соединение 2. 4-(2,6-Дихлорпурин-9-илметил)бензонитрил.
2,6-Дихлор-9Н-пурин (1,16 мол) растворяли в ΌΜΤ (50 мл) с добавлением карбоната калия (50 ммоль) и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 16 ч после добавления α-бром-птолунитрила (22 ммоль). После фильтрации для удаления нерастворимых неорганических солей фильтрат вылили в воду (1500 мл) и экстрагировали этилацетатом (2x400 мл), сушили над сульфатом магния и выпаривали с получением остатка, который подвергали флэш-хроматографии на силикагеле, применяя смесь 1:2:10 этилацетат/ацетон/гексаны. Получали 3,33 г (69%). УФ, ЯМР и Μ8 подвердили получение указанного соединения.
Соединение 3. 4-(6-Амино-2-хлорпурин-9-илметил)бензонитрил.
Соединение 2 (1,9 г) помещали в стальной реакционный сосуд и добавляли метанольный раствор аммиака (80 мл, 7 Ν). Герметизированный сосуд нагревали в течение 12 ч при температуре 60°С, охлаждали на льду и отфильтровывали полученный продукт: выход 1,09 г. УФ, ЯМР и Μ8 подтвердили струк туру указанного продукта.
Соединение 4. 4-[6-Амино-2-(2-метоксиэтокси)пурин-9-илметил]бензонитрил.
Вначале получали натриевую соль 2-метоксиэтанола путем растворения металлического натрия (81 мг) в 2-метоксиэтаноле (30 мл) при нагревании и затем добавляли соединение 3 (1,0 г), растворенное в метоксиэтаноле (300 мл, при нагревании). Реакционную смесь нагревали в течение 8 ч при температуре бани, равной 115°С, концентрировали под вакуумом почти досуха и остаток распределяли между этилацетатом и водой. Путем флэш-хроматографии органического слоя с применением 5% метанола в дихлорметане получали 763 мг продукта. ЯМР подтверждала структуру полученного продукта.
Соединение 5. 4-[6-Амино-8-бром-2-(2-метоксэтокси)пурин-9-илметил]бензонитрил.
Соединение 4 (700 мг) растворяли в дихлорметане (400 мл) и по каплям добавляли бром (7 мл). Смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре и экстрагировали вначале водным раствором тиосульфата натрия (2 л, 0,1 М), затем водным раствором бикарбоната натрия (500 мл, насыщ.). Остаток от органического слоя подвергали хроматографии на силикагеле, применяя 3% раствор метанола в дихлорметане, получали 460 мг бромированного продукта. ЯМР, УФ и МС подтверждали структуру полученного продукта.
Соединение 6. 4-[6-Амино-8-метокси-2-(2-метоксиэтокси)пурин-9-илметил]бензонитрил.
Получали метоксид натрия по реакции металлического натрия (81 мг) в сухом метаноле (30 мл) и соединяли с раствором соединения 5 (700 мг), растворенного в сухом диметоксиэтане, и повышали температуру до 100°С. После проведения реакции в течение ночи смесь концентрировали под вакуумом и подвергали остаток хроматографии на силикагеле, применяя 5% раствор метанола в дихлорметане. Выход продукта составил 120 мг. ЯМР подтверждала структуру соединения.
Соединение 7. 4-[6-Амино-8-метокси-2-(2-метоксиэтокси)пурин-9-илметил]бензальдегид.
Соединение 6 (100 мг) растворяли в сухом ТГФ (3 мл) и охлаждали до 0°С в атмосфере аргона. Для превращения нитрильной группы в альдегидную применяли восстановитель у№-(диметилэтилендиамино)алюминийгидрид лития. Готовили 0,5 М раствор в сухом ТГФ и 0,72 мл этого раствора добавляли в реакционную колбу. Смесь перемешивали при температуре 0-5°С в течение 1 ч, обрывали реакцию путем добавления 3 М НС1, экстрагировали этилацетатом, затем дихлорметаном и после этого концентрировали под вакуумом, получая 85 мг продукта. ЯМР подтвердил структуру указанного продукта.
Соединение 8. 4-[6-Амино-8-гидрокси-2-(2-метоксиэтокси)пурин-9-илметил]бензальдегид (ИС1У150).
Соединение 7 (800 мг) соединяли с иодидом натрия (504 мг) и ацетонитрилом (40 мл) и медленно добавляли хлортриметилсилан (0,5 мл). Смесь нагревали при температуре 70°С в течение 3,5 ч, охлаждали и отфильтровывали. Твердый продукт промывали водой, затем простым эфиром, получали 406 мг указанного выше соединения. ЯМР, УФ и МС подтвердили структуру полученного продукта.
Ниже приведены дополнительные примеры получения конкретных соединений.
Как описано в приведенных примерах, получали растворимый ТЬК7 агонист, способный к ковалентному соединению с первичными аминами в физиологических условиях. Затем с использованием дендритных клеток (ЭС) костного мозга мыши или мононуклеарных клеток периферической крови была определена ίη νίΙΐΌ активность нескольких соединений и комплексов антиген-адъювант, это делали с целью получения характеристики созревания ОС и секреции цитокинов (например, 1Ь-12, 1Ь-6, ТСЕ-бета и ΓΕΝ-гамма). Иммунокомплементных мышей С57/В1 профилактически вакцинировали интрадермальны
- 20 019151 ми комплексами антиген-ТЬК7 агонист и вводили им опухолевые клетки меланомы В16, экспрессирующие трансген сΟVΑ.
Определяли эффективную концентрацию (ЕС50) для каждого соединения, обычно с последующим определением распределения расширенной формы при ингибирующих высоких дозах. Максимальная стимуляция происходила в интервале между 10 и 1000 нМ. Ковалентно связанные с ТЬК. агонистом молекулы адъюванта сохраняли активность, но при более низких ЕС50. Соединение иС-^199 с яичным овальбумином почти вдвое увеличило среднюю выживаемость от 22 до 35 дней после подкожного введения опухолевых клеток по сравнению с введением одного яичного овальбумина.
Таким образом, ковалентное связывание ТЬК7 агониста с опухолевым антигеном стимулировало продуцирование ОС цитокина и защищало мышей от действия опухолевых клеток. Применение подходящего ТЬК7 агониста, который сохраняет свои стимулирующие иммунитет свойства в физиологических условиях после связывания с макромолекулой, такой как антиген, может быть полезным при создании ίη δίΐιι вакцины для терапии твердых опухолей.
Было показано, что различные пурины, пиридины и имидазохинолины с молекулярными весами, равными 200-400 кД активируют ТЬК.7 и соединения, которые являются специфичными ТЬК.7 лигандами, оказались в 100-1000 раз более активными, чем имиквимод на молекулярной основе (Ьее с1 а1., ш£га). Вследствие того, что эти ТЬК7 агонисты в высокой степени структурно подобны обычному компоненту нуклеотидов, маловероятно, что они индуцируют иммунную реакцию гаптенов после повторного введения.
ТЬК7 фармакор на основе аденина может нуждаться в ковалентном связывании со вспомогательной группой (макромолекулой) для промотирования обратного захвата эндосомами дендритных клеток, где ТЬК7 экспрессируется, и для сохранения ТЬК7 агониста. Соответственно получали ТЬК7 агонист иС-т50 и его соединяли через его альдегидную группу и через линкер со свободными аминогруппами на различных белках, включая мышиный альбумин (М8А) (фиг. 3). Конъюгаты были в 100 раз более активными ίη νίίτο и ίη νίνο, чем несвязанный аналог аденина. Более того, введение в легкие мыши конъюгата альбумина (иС-^150/М8А) индуцировало локальное продуцирование цитокина в бронхиальной альвеолярной промывной жидкости (ВАЬЕ) без системного высвобождения цитокина. В противоположность этому доставка несвязанного лекарства в дыхательные пути быстро запускала высвобождение цитокина в кровь.
По одному из вариантов ТЬК.7 агонист увеличивает до максимума продуцирование ТН1стимулирующих цитокинов (интерфероны и 1Ь-12) по сравнению с ТНЕ-α и 1Ь-1. ТЬК7 локализован на внутренних поверхностях пузырьков в эндосомах, которые образуются постоянно и подвергаются созреванию в ОС. Например, для профилактики астмы предпочтительно введение стабильного и активного ТЬК агониста, который попадает в эндосомы дендритных клеток на ранней стадии и индуцирует в основном интерфероны типа I. ТЬК агонист был присоединен ковалентно к вспомогательной группе фосфолипида в надежде, что конъюгат, иС-^199/Ь (фиг. 6) будет быстро и стабильно внедряться в липидные мембраны клеток, в том числе эндосомальные везикулы. Примечательно, что такая маленькая доза, как пикомольное количество υθ-1ν199, индуцировала синтез цитоксинов в мононуклеарных клетках костного мозга мыши. На фиг. 7, 8 показан синтез 1Ь-12.
ТЬК7 лиганды, которые представляют собой пурины или имидазохинолины, имеют особое свойство, а именно характеризуются двухфазной кривой ответа. При высоких концентрациях лекарство не индуцирует синтез цитокинов. Двухфазный характер кривой наблюдается в очень чистых дендритных клетках и оказывается автономным для клеток. Однако замечательная активность иС-^199/Ь дала возможность снова изучить это явление с применением фармакологически приемлемых концентраций лекарства (фиг. 9). Максимальное продуцирование цитокинов наблюдалось при концентрации иС1ν199/Β равной 10 нМ, в то время как более высокие концентрации индуцировали все меньшее высвобождение 1Ь-12 (и Т№).
Известно, что высокие и пролонгированные концентрации ТЬК7 агонистов индуцируют рефрактерность к повторной стимуляции ТЬК, которая может длиться 24 ч или более. Такая сложная система регуляции является, очевидно, частью безотказного механизма, который предохраняет клетки и ткани от саморазрушения во время воспалительных реакций. Так, было интересно определить, могут ли концентрации иС-т99/Ь, которые не смогли индуцировать значительный синтез цитокинов, может, тем не менее, вызывать ТЬК толерантность. В действительности, когда мононуклеарные клетки из костного мозга подвергались действию неактивирующей концентрации иС-^199/Ь (1 мкМ) и затем их через 24 ч повторного стимулировали тем же самым соединением с иС-^150 или с рат3Сук (Р3С, трипальмитоилцистеин, активатор ТЬК2), они выявляли заметно сниженный ответ цитокинов. В противоположность этому клетки, обработанные иС-^199/Ь, сохраняли способность к реакции с лигандами ТЬК.3 и ТЬК4, которые проходят по ТК1Е пути (результаты не показаны). Предварительные опыты показали, что неспособность к реакции была вызвана также ίη νίνο. Таким образом, ежедневное введение иС-1 ν199^ и родственных лекарств может подавлять воспаление, вызванное МуО88-зависимыми раздражителями, без системных побочных эффектов, связанных с активацией ТЬК.
По одному из вариантов конъюгаты по изобретению могут быть полезными для профилактики, ин
- 21 019151 гибирования или лечения астмы. Астма характеризуется эпизодами чередующихся обратимого сжатия дыхательных путей, гиперплазии бронхиальных гладких мышц и хронического воспаления. Атопическое заболевание предрасполагает к астме, но для половины пациентов, пораженных болезнью, не являются атопическими. Другими факторами риска развития астмы являются табачный дым и вещества, загрязняющие воздух. Более того, вспышки болезни у больных астмой могут вызываться не только аллергенами, но также раздражителями дыхательных путей, изменениями температуры и инфекциями.
Начальное развитие аллергического ответа частично регулируется балансом между ТЫ и Т112лимфоцитами и их соответствующими цитокинами, особенно интерферонами и 1Б-4. Вакцинация животных аллергеном в сочетании с ТЬ2-смещенным адъювантом не быстро вызывает 1дЕ ответ. Мыши, которых вакцинировали антигеном и ТБК7 или ТБК9 агонистами, были устойчивы к астме во время опытов.
При лечении астмы ТБК агонистами требуется подход, который отличается от подхода при профилактике астмы. У пациентов, больных астмой, дыхательные пути и легочные ткани уже инфильтрованы различной популяцией воспалительных клеток, включая многие подвиды лимфоцитов, макрофагов, дендритных клеток, тучных клеток, эозинофилов и нейтрофилов. В этом случае ТБК агонисты могут активно усиливать болезнь при увеличении высвобождения воспалительных медиаторов, таких как Т№-альфа и 1Б-1. В действительности, способность различных микробных агентов к активации ТБКк может объяснить, почему они вызывают приступы астмы.
ТБК агонист для профилактики астмы предпочтительно ограничен легкими, но он также вызывает максимальное продуцирование Тй-1-стимулирующих цитокинов (интерфероны и 1Б-12) по сравнению с ΊΝΕ-альфа и 1Б-1. И ТБК7, и ТБК9 локализованы на внутренних поверхностях эндосомальных пузырьков, которые образуются постоянно и подвергаются созреванию в дендритных клетках. ТБК9активирующие олигонуклеотиды, которые представляют собой агрегированные фосфодиэфирные олигонуклеотиды, остаются дольше в ранних эндосомальных пузырьках и поэтому индуцируют большее количество интерферонов типа I, чем неагрегированные фосфоротиоатные олигонуклеотиды, которые поступают и вызывают созревание пузырьков. Результаты показывают, что пространственная организация ТБК агониста управляет его перемещением и его структурой индуцированного синтеза цитокинов. Для профилактики астмы предпочтительным является стабильный, активный и молекулярно охарактеризованный ТБК агонист, который поступает в эндосомы дендритных клеток на ранней стадии и в основном индуцирует образование интерферонов типа I.
Для изучения действия конъюгатов по изобретению на аллергическую астму воспаление дыхательных путей индуцируется путем сенсибилизации мышей при подкожной инъекции мыши 20 мкг овальбумина, абсорбированного 500 мг окиси алюминия в физиологическом растворе в день 0, и в день 7. На день 16 и 21 мышам вводили интраназально (ί.η.) по 5 мкг овальбумина. Конъюгаты вводили ί.η., перорально (р.о.) или внутривенно (ί.ν.) в разные моменты времени до первого введения овальбумина на день 16. Через 24 ч после последнего введения (день 22) определяли способность к реакции дыхательных путей мышей умерщвляли и отбирали БАБЕ клетки, образцы легких и селезенки. В качестве контрольных животных использовали мышей, не подвергнутых воздействию, и мышей, сенсибилизированных при помощи овальбумина/а1ит. Подсчитывали общее количество клеток в БАБЕ и окрашивали образцы при помощи \Упд111-С|ет5а для определения количества эозинофилов, лимфоцитов, нейтрофилов и тучных клеток. Уровень цитокинов в БАБЕ определяли методом Бцтшех. Способность дыхательных путей к реакции на метахолин определяли через 24 ч после последнего введения, применяя однокамерный плетизмограф. Для мониторинга способности к реакции дыхательных путей применяли Реп11. безразмерную величину, которая хорошо коррелирует с легочным сопротивлением, измеренным в обычном двухкамерном плетизмографе у мышей с насыщенной кислородом кровью.
Соединения по изобретению вводят в терапевтически эффективном количестве субъекту, нуждающемуся в таком лечении. Введение композиций по изобретению можно проводить любым из подходящих путей введения, в частности парентерально, например внутривенно, внутриартериально, интраперитонеально, внутриоболочечно, интравентрикулярно, интрауретрально, введение в грудину, интракраниально, внутримышечно или подкожно. Введение можно осуществить в виде одной инъекции болюса, множественной инъекции или путем кратковременной или длительной инфузии. Можно также применять имплантируемые устройства (например, имплантируемые инфузионные насосы), которые используют для периодической парентеральной доставки во времени, при этом количество доставляемого лекарства эквивалентно дозам конкретного состава или меняющимся дозам. Для такого парентерального введения соединения предпочтительно применяют в виде стерильного раствора в воде или другом подходящем растворителе или в смеси растворителей. Раствор может содержать другие вещества, такие как соли, сахара (особенно глюкозу или маннит), для получения раствора, который является изотоническим по отношению крови, буферные агенты, такие как уксусная, лимонная и/или фосфорная кислоты и их натриевые соли, и консерванты.
Соединения по изобретению могут входить в состав фармацевтических композиций и вводятся млекопитающему-хозяину, такому как человек, в виде различных форм, которые адаптированы для выбранного пути введения, а именно перорального или парентерального, внутривенного, внутримышечного, топического или подкожного введения.
- 22 019151
Так, указанные соединения могут быть введены системно, например перорально, в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, таким как инертный разбавитель или ассимилирующийся съедобный носитель. Они могут быть заключены в твердую или мягкую желатиновую капсулу, могут быть спрессованы с получением таблеток или могут быть введены непосредственно вместе с пищей, употребляемой пациентом. Для орального терапевтического введения активное соединение может быть соединено с одним или более эксципиентами и использовано в виде проглатываемых таблеток, буккальных таблеток, пастилок, капсул, эликсиров, суспензий, сиропов, облаток и т.п. Такие композиции и препараты должны содержать по меньшей мере 0,1% активного соединения. Конечно, содержание этого вещества в композициях и в препаратах может меняться и обычно может составлять от примерно 2 до примерно 60 вес.% от данной стандартной лекарственной формы. Количество активного соединения в таких терапевтически полезных композициях таково, что достигается уровень эффективной дозы.
Таблетки, пастилки, пилюли, капсулы и т.п. могут также содержать следующие ингредиенты: связующие, такие как смола трагаканта, смола акации, кукурузный крахмал, желатин; эксципиенты, такие как дикальцийфосфат; дезинтегрирующий агент, такой как кукурузный крахмал, картофельный крахмал, альгиновая кислота и т.п.; смазочный агент, такой как стеарат магния, и подсластитель, такой как сахароза, фруктоза, лактоза или аспартам, или ароматизатор, такой как перечная мята, масло виноградных косточек или вишневый ароматизатор. Когда стандартной лекарственной формой является капсула, она может содержать, в дополнение к веществам указанного выше типа, жидкий носитель, такой как растительное масло или полиэтиленгликоль. Другие различные вещества могут быть в виде покрытий или же могут иным образом модифицировать физическую форму твердой стандартной лекарственной формы. Например, таблетки, пилюли или капсулы могут быть покрыты желатином, воском, шеллаком или сахаром и т.п. Сироп или эликсир могут содержать активное соединение, сахарозу или фруктозу в качестве подсластителя, метил- или пропилпарабены в качестве консервантов, краситель и ароматизатор, такой как вещества, придающие вишневый или апельсиновый вкус. Конечно, любой материал, используемый при приготовлении любой стандартной лекарственной формы должен быть фармацевтически приемлемым и практически нетоксичным при введении в применяемых количествах. Кроме того, активное соединение может входить в состав препаратов и устройств с пролонгируемым высвобождением.
Активное соединение может также вводиться внутривенно или интраперитонеально путем инфузии или инъекции. Растворы активного соединения или его солей могут быть приготовлены в воде, которая может быть смешана с нетоксичным поверхностно-активным веществом. Можно также готовить дисперсии в глицерине, жидких полиэтиленгликолях, триацетине и их смесях, а также в маслах. При обычных условиях хранения и применения эти препараты содержат консервант для предотвращения роста микроорганизмов.
Фармацевтические лекарственные формы, пригодные для инъекции или инфузии, могут включать стерильные водные растворы или дисперсии или стерильные порошки, содержащие активный ингредиент, которые адаптированы для индивидуального приготовления стерильных растворов или дисперсий дли инфузии или инъекции, которые могут быть заключены в липосомы. Во всех случаях конечные лекарственные формы должны быть стерильными, жидкими и стабильными при условиях изготовления и хранения. Жидкий носитель или наполнитель может быть растворителем или жидкой дисперсионной средой, включающей, например, воду, этанол, полиол (например, глицерин, пропиленгликоль, жидкие полиэтиленгликоли и т.п.), растительные масла, нетоксичные эфиры глицерина и их подходящие смеси. Соответствующую текучесть можно поддерживать, например, путем образования липосом, путем поддержания требуемого размера частиц в случае дисперсий или путем применения поверхностно-активных веществ. Предотвращение действия микроорганизмов может быть достигнуто при помощи различных противобактериальных и противогрибковых агентов, например парабенов, хлорбутанола, фенола, сорбиновой кислоты, тимеросаля и т.п. Во многих случаях предпочтительно включать изотонические агенты, например сахара, буферные агенты или хлорид натрия. Пролонгированную абсорбцию инъецируемых композиций можно получить при применении в композициях агентов, замедляющих абсорбцию, например моностеарата алюминия и желатина.
Стерильные растворы для инъекции получают путем введения активного соединения в требуемом количестве в соответствующий растворитель с различными другими ингредиентами, перечисленными выше, если это требуется, с последующей фильтрацией в стерильных условиях. В случае стерильных порошков для приготовления стерильных растворов для инъекции предпочтительными методами приготовления являются сушка под вакуумом и сушка при замораживании, которые позволяют получить порошок активного ингредиента с любым дополнительным желаемым ингредиентом, находящимся в предварительно отфильтрованных в стерильных условиях растворах.
Для топического введения соединения по изобретению могут быть нанесены в чистом виде, то есть когда они являются жидкими. Однако обычно желательно вводить их в кожу в виде композиций или составов в сочетании с дерматологически приемлемым носителем, который может быть твердым или жидким.
Приемлемые твердые носители включают мелкодисперсные твердые вещества, такие как тальк, глина, микрокристаллическая целлюлоза, двуокись кремния, окись алюминия и т.п. Приемлемые жидкие
- 23 019151 носители включают воду, спирты или гликоли или смеси вода-спирт/гликоль, в которых соединения по изобретению могут быть растворены или диспергированы в эффективных количествах, возможно, при помощи нетоксичных поверхностно-активных веществ. Для оптимизации свойств для данного применения могут быть добавлены адъюванты, такие как отдушки и дополнительные антимикробные агенты. Получаемые жидкие композиции могут быть нанесены из абсорбирующих накладок, использованы для пропитки бинтов и других повязок или распылены на пораженную поверхность с применением распылителей насосного типа или распылителей для аэрозолей.
Вместе с жидкими носителями для приготовления намазываемых паст, гелей, мазей, мыла и т.п. и нанесения прямо на кожу пациента можно также применять загустители, такие как синтетические полимеры, жирные кислоты, соли и эфиры жирных кислот, алифатические спирты, модифицированные целлюлозы или модифицированные минеральные вещества.
Кроме того, по одному из вариантов данное изобретение предусматривает различные лекарственные составы на основе конъюгатов для доставки путем ингаляции. Например, составы могут быть получены для применения в виде аэрозоля в устройствах, таких как дозированные ингаляторы, ингаляторы с сухими порошками и небулайзеры.
Примеры приемлемых дерматологических композиций, которые могут быть применены для доставки соединений по изобретению в кожу, известны из уровня техники; например, см. Шсдие! е! а1. (патент США № 46086392), Села (патент США № 4992478), 8ιηί11ι е! а1. (патент США № 4559157) и Аойхтап (патент США № 4820508).
Применяемые дозы соединений по изобретению могут быть определены путем сравнения их ш νίΙΐΌ активности и ш у1уо активности в животных моделях. Методы экстраполяции эффективных доз для мышей и других животных на людей известны из уровня техники; см., например, патент США № 4938949. Способность соединения по изобретению действовать в качестве ТЬК агониста может быть определена при применении фармакологических моделей, которые хорошо известны из уровня техники, включая методы, описанные Ьее е! а1., Ргос. №!1. Асаб. 8ск И8А, 100: 6646 (2003).
Обычно концентрация соединения(ий) по изобретению в жидкой композиции, такой как лосьон, составляет примерно 0,1-25 вес.%, предпочтительно примерно 0,5-10 вес.%. Концентрация в полутвердой или твердой композиции, такой как гель или порошок, обычно равна примерно 0,1-5 вес.%, предпочтительно примерно 0,5-2,5 вес.%.
Для достижения пиковых концентраций активного соединения в плазме активное вещество может быть введено в количестве от примерно 0,5 до примерно 75 мкМ, предпочтительно примерно 1-50 мкМ, наиболее предпочтительно от примерно 2 до примерно 30 мкМ. Этого можно достичь, например, путем внутривенной инъекции 0,05-5%-ного раствора активного ингредиента, возможно в физиологическом растворе или путем орального введения в виде болюса, содержащего примерно 1-100 мг активного вещества. Желательные уровни в крови можно поддерживать путем непрерывной инфузии для обеспечения примерно 0,01-5,9 мг/кг/ч или путем чередующихся инфузий с дозой 0,4-15 мг активного ингредиента(ов) на 1 кг.
Количество соединения, его соли или производного, требующееся для применения при лечении, будет меняться не только в зависимости от вида выбранной соли, но и от пути введения, природы состояния больного, возраста и состояния пациента и в конечном счете определяется лечащим врачом или клиницистом. В общем, однако, подходящая доза находится в интервале от примерно 0,5 до примерно 100 мг/кг, например от примерно 10 до примерно 75 мг/кг веса в день, например от 3 до примерно 50 мг на 1 кг веса пациента в день, предпочтительно в интервале 6-90 мг/кг/день, наиболее предпочтительно в интервале 15-60 мг/ кг/ день.
Соединение обычно вводят в виде стандартной лекарственной формы, например, содержащей 51000 мг, обычно 10-750 мг, наиболее часто 50-500 мг активного ингредиента на эту стандартную форму.
Желательная доза может вводиться в виде одной дозы или в виде разделенных доз, вводимых с соответствующими интервалами, например в виде двух, трех, четырех или более поддоз в день. Сама поддоза может быть также разделена, например, на какое-то количество дискретных доз для введения; например, ряд ингаляций из порошковдувателя или какого-то количества капель, вводимых в глаз. Доза и, вероятно, частота введения доз будут также меняться в соответствии с возрастом, весом, состоянием и реакцией индивидуального пациента. В общем, общая дневная доза соединения или соединений формулы (Ι) для состояний, описанных в данной заявке, может быть равна от примерно 50 до примерно 5000 мг, она вводится как одна доза или в виде разделенных доз. Предпочтительно, чтобы величина дневной дозы составляла от примерно 100 до примерно 4000 мг, наиболее предпочтительно примерно 1000-3000 мг, в виде одной дозы или в виде разделенных доз, например, вводится 750 мг соединения перорально каждые 6 ч. Это позволит достигнуть содержание в плазме, равное примерно 500-750 мкМ, что может быть эффективным для гибели раковых клеток. При лечении пациента терапию следует начинать с более низких доз и увеличивать их в зависимости от общей реакции пациента.
Как описано выше, композиции, которые содержат соединение по изобретению, пригодны для лечения или профилактики болезни или расстройства, например, у людей или других млекопитающих (например, рогатого скота, лошадей, собак, кошек, овец и свиней), а также, возможно, и других животных.
- 24 019151
В зависимости от конкретного соединения композиция, например, будет пригодна для лечения рака, инфекции, повышения адаптивного иммунитета (например, продуцирования антител, активации Е-клеток и т.д.), для получения вакцин и/или стимуляции центральной нервной системы.
Далее данное изобретение будет описано в следующих неограничивающих примерах.
Пример 1.
Способы получения соединений формулы (I) приведены в качестве дальнейших вариантов изобретения и проиллюстрированы следующими методиками, в которых общие радикалы имеют значения, указанные выше, если не указано иное.
Общая химия. Реагенты и растворители приобретали в А1бпс11, Мйтаикее, ^1. Нескорректированные точки плавления определяли в приборе для определения температуры плавления в капилляре ЬаЬота1огу Эеу1се Ме1-Тетр II. Спектры протонного ядерного магнитного резонанса записывали на спектрофотометре Уапап Ипйу 500 ЯМК при частоте 499,8 МГц или на спектрофотометре Уапап Метситу ЯМК при частоте 400,06 МГц. Химические сдвиги указаны в м.д. на шкале от указанного стандарта.
Масс-спектры в случае положительных и отрицательных ионов снимали в Эераг1теп1 о£ СЬет151гу ЕС51Г 8ап О1едо, СА. Элементный анализ проводили в ЫиМеда Кекопапсе ЬаЬк, 8ап О1едо, СА. Хроматографию на колонке осуществляли с силикагелем Е Мегск (230-400 меш) с указанной системой растворителей. Аналитическую тонкослойную хроматографию (ТЬС) проводили на пластинах силикагеля 60Е254 (ЕМ Кеадеп15).
Получение 4-(2,6-дихлорпурин-9-илметил)бензонитрила.
2,6-дихлор-9Н-пурин (16 ммоль) растворяли в ЭМЕ (50 мл) и добавляли карбонат калия (50 ммоль). Затем добавляли α-бром-п-толуиленнитрил (22 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. После фильтрования с целью удаления нерастворимых неорганических солей фильтрат выливали в воду (1500 мл) и обрабатывали этилацетатом (2x400 мл), сушили над сульфатом магния и выпаривали, получая остаток, который подвергали флэш-хроматографии на силикагеле, применяя смесь 1:2:10 этилацетат/ацетон/гексаны. Выход составил 3,33 г (69%). УФ, ЯМР и М8 подтвердили получение целевого соединения.
Получение 4-(6-амино-2-хлорпурин-9-илметил)бензонитрила.
Полученный, как указано выше, продукт (1,9 г) помещали в стальной реакционный сосуд и добавляли метанольный раствор аммиака (80 мл, 7 Ν) Герметизированный сосуд нагревали при температуре 60°С в течение 12 ч, охлаждали на льду и отфильтровывали твердый продукт. Выход был равен 1,09. УФ, ЯМР и МС подтвердили получение целевого продукта.
Получение 4-[6-амино-2-(2-метоксиэтокси)пурин-9-илметил]бензонитрила.
Путем растворения металлического натрия (81 мг) в 2-метоксиэтаноле (30 мл) при нагревании получали 2-метоксиэтанолат натрия. К этому раствору добавляли продукт из примера 2 (1,0 г), растворенный в метоксиэтаноле (300 мл, при нагревании). Реакционную смесь нагревали в течение 8 ч при температуре бани, равной 115°С, концентрировали под вакуумом почти досуха и распределяли между этилацетатом и водой. Флэш-хроматография органического слоя с применением 5% метанола в дихлорметане привела к получению 763 мг целевого продукта. ЯМР подтвердила получение этого соединения.
Получение 4-[6-амино-8-бром-2-(2-метоксиэтокси)пурин-9-илметил]бензонитрила.
Продукт, полученный выше (700 мг), растворяли в дихлорметане (400 мл) и по каплям добавляли бром (7 мл). Смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре и обрабатывали водным раствором тиосульфата натрия (2 л, 0,1 М) и затем водным раствором бикарбоната натрия (500 мл, насыщ.). Остаток от органического слоя подвергали хроматографии на силикагеле (применяя 3% метанола в дихлорметане), с получением 460 мг бромсодержащего продукта. ЯМР, УФ и МС подтвердили получение целевого продукта.
Получение 4-[6-амино-8-метокси-2-(2-метоксиэтокси)пурин-9-илметил]бензонитрила.
Метоксид натрия получали по реакции металлического натрия (81 мг) в сухом метаноле (30 мл). Продукт, полученный выше (700 мг), растворяли в сухом диметоксиэтане и повышали температуру до 100°С. После проведения реакции в течение ночи смесь концентрировали под вакуумом и полученный остаток подвергали хроматографии на силикагеле, применяя 5% метанола в дихлорметане. Выход полученного продукта был равен 120 мг. ЯМР подтвердил получение целевого продукта.
Получение Я,Я'-(диметилэтилендиамино)алюминийгидрида лития.
Этот восстановитель применяли для превращения нитрильной группы в альдегидную, его получали в основном как описано в Ви11. Когеап СЬет. 8ос., 23: 1697 (2002). Готовили 0,5 раствор в сухом ТНЕ.
Получение 4-[6-амино-8-метокси-2-(2-метоксиэтокси)пурин-9-илметил]бензальдегида.
4-[6-Амино-8-метокси-2-(2-метоксиэтокси)пурин-9-илметил]бензонитрил (100 мг) растворяли в сухом ТГФ (3 мл) и охлаждали до 0°С в атмосфере аргона. Гидрид алюминия, полученный выше (0,72 мл), добавляли в реакционную колбу и перемешивали смесь при температуре 0-5°С в течение 1 ч и затем обрывали реакцию при помощи 3 М НС1. Затем смесь обрабатывали этилацетатом и затем дихлорметаном и концентрировали под вакуумом, получая 85 мг. ЯМР подтвердил получение целевого продукта.
- 25 019151
Получение 4-[6-амино-8-гидрокси-2-(2-метоксиэтокси)пурин-9-илметил]бензальдегида (ИС-1У150).
Продукт, полученный выше (800 мг), соединяли с иодидом натрия (504 мг) и ацетонитрилом (40 мл) и затем медленно добавляли хлортриметилсилан (0,5 мл). Смесь нагревали при температуре 70°С в течение 3,5 ч, охлаждали и фильтровали. Твердый продукт промывали водой, затем простым эфиром с получением 406 мг соединения. ЯМР, УФ и М8 подтвердили строение целевого продукта. Это соединение подходило для реакций сопряжения между линкерами и макромолекулами.
Получение метил-4-[6-амино-8-метокси-2-(2-метоксиэтокси)пурин-9-илметил)бензоата.
Методика, применяемая в этом примере, описана 1ауасййга е! а1., 8уп111. Сотт., 33: 3461 (2003). 4[6-амино-8-метокси-2-(2-метоксиэтокси)пурин-9-илметил]бензонитрил (1 ммоль) растворяли в сухом метаноле (5 мл) и к этому раствору добавляли свежеотогнанный эфират ВР3 (4 ммоль). Полученную смесь нагревали с обратным холодильником в атмосфере аргона в течение 20 ч. Растворитель удаляли под вакуумом и остаток отбирали дихлорметаном (10 мл), экстрагировали разбавленным водным раствором бикарбоната натрия (2х 10 мл) и высушивали органический слой над сульфатом магния. После выпаривания продукт очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле, применяя 5% метанола в дихлорметане, получали 0,8 ммоль продукта.
Получение 4-[6-амино-8-гидрокси-2-(2-метоксиэтокси)пурин-9-илметил]бензойной кислоты. 4-[6Амино-8-метокси-2-(2-метоксиэтокси)пурин-9-илметил]бензоат (100 мг) соединяли с иодидом натрия (63 мг) и ацетонитрилом (10 мл) и затем медленно добавляют хлортриметилсилан (120 мл). Смесь нагревали при 70°С в течение 6 ч, охлаждали и отфильтровывали. Твердый продукт промывали водой и затем простым эфиром, получая 51 мг.
Получение 2,5-диоксопирролидин-1-ил-4-[6-амино-8-гидрокси-2-(2-метоксиэтокси)пурин-9илметил]бензоата.
4-[6-Амино-8-метокси-2-(2-метоксиэтокси)пурин-9-илметил]бензоат (2 ммоль) растворяли в дихлорметане или диоксане (10 мл) и добавляли БОС (2 ммоль). К этому раствору добавляли Νгидроксисукцинимид (2 ммоль) и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Смесь высушивали досуха под вакуумом и сырой продукт очищали методом хроматографии на силикагеле с получением 2 ммоль продукта, который можно применять для реакций сопряжения с участием первичных аминов.
Пример ΙΙ.
Соединение ИС-1У150 ковалентно соединяли с линкером М8А, модифицированным сукцинимидил-6-гидразиноникотинамида ацетонгидразона (8ΑΝΗ), с получением стабильной молекулы с измененным УФ-спектром. Конъюгат ИС-1У150/М8А идентифицировали по пику УФ-абсорбции при длине волны 342 нм, обусловленному образованием гидразона, адсорбция самого 8ΑΝΗ имела место при длине волны 322 нм. Количественный выход конъюгата ИС-1У150/М8А экстраполировали из стандартной кривой ИС-1У150-8АЫН (фиг. 1). Конъюгаты ИС-1У150/М8А получали при отношении около 5:1. Биологические исследования, описанные в данной заявке, проводили при отношении 5:1 ИС-1У150/М8А.
Модификация М8А при помощи 8ΑNΗ.
200 мкл М8А (25 мг/мл) смешивали с 100 мкл буфера сопряжения (1 М №1Ре рН 7,2) и 690 мкл РВ8. 844 мкг 8АЫН в 10 мкл ОРМ (40-мольный избыток по отношению к М8А) добавляли к раствору белка (конечная концентрация М8А в реакционной смеси составляла 5 мг/мл). После аккуратного перемешивания реакцию продолжали при комнатной температуре в течение 2 ч. Для удаления избытка 8АЫН реакционную смесь загружали в колонку NΑР-10, уравновешенную РВ8, и элюировали модифицированный М8А при помощи 1,5 мл РВ8.
Присоединение 1У150 к М8А, модифицированному 8ΑNΗ.
460 мкг 1У150, растворенного в 10 мкл ЭМЕ, добавляли к М8А, модифицированному 8ΑNΗ, и реакционную смесь инкубировали при комнатной температуре в течение ночи. Для удаления избытка 1У150 реакционную смесь вначале концентрировали до объема, равного 1 мл, применяя колонку Мюго8ρΐη (М1Шроге: В1ОМАХ 5К), и загружали в колонку NΑР-10, как описано выше.
ТБЯ7 агонисты соединяли также с олигодезоксинуклеотидами (ΟΌ№) (фиг. 20, 21), вирусом (фиг. 18, 19) и с липидным компонентом, который затем может быть введен в липосому (фиг. 24, 25).
Синтез пространственно стабилизированного ТБЯ7 агониста.
Каждый конъюгат получают по стандартным методикам, хорошо известным в химии биосопряжения. Характеризация каждого конъюгата количественными УФ, БС/М8 и РАСЕ методами позволяет определить валентность или отношение ТЬЯ агониста к его вспомогательной группе (макромолекуле). Имея эту информацию, легко определить размер и форму конъюгатов путем применения методов моделирования. Разнообразие размеров, формы и валентности конъюгатов обеспечивается путем выбора макромолекулы, обозначенной в структурной формуле как Я3. Например, когда Я3 обозначает дендример, такой как обычные поли(амидоамины), количество поверхностных функциональных групп для присоединения ТЬЯ агониста, определяется точно на основе количества точек разветвления или генераций этого конкретного дендримера. Первая генерация (С1) имеет 8 поверхностных аминогрупп, С2 имеет 16 и т.д., это приводит к возможности контроля валентности и размера конъюгатов (см. фиг. 2). Кроме того, некоторые наночастицы дендримера могут содержать и таргетирующий лиганд, и ТБЯ7 агонист. Конъю
- 26 019151 гаты ТЬК7 агонист-липид могут также иметь разнообразные валентности в зависимости от выбора липидов. Например, активный конъюгат ИУ-1У199/Ь (фиг. 6) получали путем сопряжения карбоксильного производного ТЬК7 агониста (ИС-1У199) с этаноламинной группой коммерчески доступного диолеоилфосфатидилэтаноламина (ΌΟΡΕ).
Эти липидные конъюгаты включают в различные липосомные наночастицы, имеющие гидродинамический диаметр, равный примерно 100 нм (фиг. 24, 25). Гексагоны на чертежах представляют ИС1У199/Ь и связанный ТЬК7 агонист с фосфолипидными хвостами.
ТЬК7 агонисты и димеры, а также ТЬК конъюгаты имеют, как это было показано, цитокинвысвобождающую и/или цитокиновую активность ίη νίνο по данным проведенных анализов, таких как описанные в данной заявке. Например, имиквимод, бропиримин, ИС-1У138, ИС-1У136, ИС-1У150, ИС1X105, ИС-1У199, ИС-1№236, ИС-1Х51, ИС-1№247, ИС-1Х113, ИС-1У199/Ь, ИС-1У150/В8А, конъюгаты ИС-1У150 с линкером или без него и с М8А, ОУА, вирионами и/или ΟΌΝ, конъюгаты ИС-1У199 и ΌΟΡΕ, двуокисью кремния, липидом или облученными спорами, и конъюгаты ИС-1У1043 и ИС-1У1018 с ОУА все имеют активность.
Пример III.
Материалы и методы.
Оценка соединения ίη νίίτο.
Способность ТЬК7 конъюгатов к стимуляции и/или ингибированию продуцирования цитокинов оценивалась с применением мононуклеарных клеток, полученных из костного мозга мышей (ВМЭМ), которые в высокой степени обогащены дендритными клетками, а также с применением мононуклеарных клеток периферической крови человека (РВМС). ВМЭМ помещали в лунки 96-луночного планшета и обрабатывали (по 3 раза) носителем или различными дозами соединений, начиная от 10 мкМ, разбавленными с трехразовыми инкрементами до пикомольных концентраций. Через 24 ч собирали надосадочные жидкости и анализировали, определяя до 30 различных цитокинов, хемокинов и других медиаторов, применяя систему Ьишшех и коммерчески доступные реагенты. ЕЫ8А данные о цитокинах/хемокинах дополняли количественным измерением экспрессии мРНК и двухмерными определениями фосфопротеина, чтобы можно было изучить объем и механизм индукции переносимости. В момент сбора надосадочной жидкости средства помещали в лунки с МТТ (3-[4,5-диметилтиазол-2-ил]-2,5-дифенилтетразолия бромид), что дало возможность колориметрически оценить выживаемость клеток. Человеческие РВМС выделяли из коммерческой крови и обрабатывали подобным образом.
Для оценки трафика нанолипосом и дендромеров, сопряженных с ТЬК агонистом, соответствующие наночастицы нагружают или модифицируют флуорохромом. Подклеточная локализация определяется микроскопически, в некоторых случаях в клетках, которые были обработаны ингибиторами созревания эндосом.
Для сравнения противовоспалительной активности ТЬК конъюгатов с различными вспомогательными группами ВМОМ вначале обрабатывали наиболее активными соединениями при предварительно определенных концентрациях, которые обеспечивали минимальное действие на стимуляцию воспалительных цитокинов (ΪΝΕα, 1Ь-1). Через 24 ч среду заменяли и обрабатывали клетки активирующими лигандами различных членов семейства ТЬК (РашЭСук для ТЬК2, ро1у (1:С) для ТЬК3, ЬР§ (липополисахарид) для ТЬК4, флагеллин для ТЬК5, Ма1р-2 для ТЬК6, ИС-1У150 для ТЬК7, К848 для ТЬК7/8, СрО олигонуклеотиды для ТЬК9 и т.п.) при концентрациях, которые эффективно вызывают продуцирование цитокинов в суррогатно-обработанных клетках. Клетки оценивали методами мультиплексного иммуноанализа, количественной РСК и блоттинга фосфопротеина. Для лучшего понимания кинетики индуцирования и поддержания переносимости клетки, примированные ТЬК-конъюгатом, также стимулировали в различные интервалы времени и анализировали на механизм продуцирования цитокинов.
Ιη νίνο оценка соединения.
Оценивали продуцирование бронхоальвеолярной промывной жидкости (ВАЬР) в зависимости от наличия системных цитокинов после введения в дыхательные пути мышей. Анестезированным самкам мышей С57ВЬ/6, подобранным по возрасту, интраназально (ί.η.), орально (р.о.) или внутривенно (ί.ν.) вводили различные количества ТЬК7 конъюгатов, описанных выше, с липосомами или с дендримерами в подходящих носителях. После выделения и в различные моменты времени отбирали сыворотку и ВАЬР и анализировали их на наличие цитокинов и хемокинов, применяя метод анализа Ьиштех. Записывали вес, температуру и величину поглощения жидкости у подвергнутых воздействию животных как клинический суррогат системного цитокинового синдрома.
Дальнейшие эксперименты оценивали способность различных агентов к продуцированию локальной и системной рефракторности (ТЬК переносимость) к активации ТЬК после введения высоких доз ί.η., р.о. или ί.ν., как определено цитокинами сыворотки и ВАЬР. Высокие дозы различных конъюгатов ТЬК7, которые не индуцируют значительное количество цитокинов ίη νίνο и не приводят к появлению клинических признаков цитокинового синдрома, отбирались. Мышам вводили выбранные высокие дозы различными методами введения и затем стимулировали их активаторами различных ТЬК§ в различные моменты времени. Отбирали сыворотку и ВАЬР, анализировали и фиксировали клинические симптомы. Противовоспалительная активность конъюгатов подтверждалась в модели летального шока, ранее ис
- 27 019151 пользованной для изучения ЬР8 и СрС. В этой модели мыши Ва1Ь/с, которым ранее вводили путем внутривенной 1.р. инъекции Ό-галактозамин, погибали после системного стимулирования различными ТЬК активаторами вследствие стимуляции цитокинов и поражения печени. Активные противовоспалительные лекарства не индуцируют клинические симптомы у сенсибилизированных животных, а также предотвращают шок, вызванный другими ТЬК лигандами. До определенной степени эта модель особенно полезна для определения кинетики и продолжительности ТЬК переносимости (толерантности).
Пример IV.
Материалы и методы.
Мыши.
Самки мышей С57ВЬ/6 (возраст 5-6 недель) были получены в Наг1аи \Уев1 Соав! (Сегтап1о\\п. СА), а самки мышей А/1 (возраст 6-8 недель) были куплены в Тйе 1асквои ЬаЬога!опев (Ваг НагЬог, МЕ). Мышей АД использовали для инфицирования штаммом Шете В. аи!йгаав (Кеппеу е! а1., 1. 1пГес1. Όίβ., 190: 774 (2004)). Мыши были выведены и выдерживались в стандартных условиях в университете Тйе Ьшуегвйу оГ СайГогтаа а! 8аи О|едо Ашта1 Еасбйу, который аккредитован Тйе Атепсаи Аввошайои Гог АссгебЬ !абои оГ ЬаЬога!огу Ашта1 Саге. Все протоколы получили предварительное одобрение в 1и51йи1юиа1 Ке\те\у ^агб. При изучении гриппа Η1Ν1 самок мышей ВАЬВ/с (16-18 г) получали из Сйаг1ев Кйег ЬаЬога1ог1ез (^11т1ид1ои, МА) и выдерживали в Тйе Атепса1 Аввос1а!юи Гог Ассгебйайои оГ ЬаЬога!огу Атта1 Саге-ассгебйеб ЬаЬога!огу Атта1 Кевеагсй Сеи!ег оГ Ыай 81а1е Итуегвйу.
1и уйго стимуляция ВМИМ.
ВМИМ выделяли из различных штаммов мышей и высевали в 96-луночные планшеты с плотностью 5х104 кл/лунку. Соединения добавляли к 10-дневным культурам при конечной концентрации, равной от 0,01 до 10 мкМ, или как указано иначе. После 24 ч инкубации собирали надосадочные жидкости и определяли индукцию цитокинов при помощи или ЕЫ8А (ВО Рйаттюдеи, 8аи О1едо, СА), или мультиплексного анализа Ьиттех (Аивйи, ТХ) с применением набора Веаб1у!е Мойве МиЙ1Су!окте (Ирв!а!е, Сйаг1ойевуб1е, VА и еВюваеисев, 8аи П1едо, СА) в соответствии с инструкциями производителя.
Введение соединений мышам.
Самкам подобранных по возрасту мышей С57ВБ/6 вводили инъекцией в хвостовую вену 100 мкл физиологического раствора, содержащего υθ’-1ν150 или ИС-^150/М8А, при этом каждый раствор содержал эквивалент 0,38-8 нмоль фармакора. Для внутрилегочного введения мышей анестезировали 1.р. раствором Ауейш и выбривали область шеи. Трахеи обнажали путем небольшого надреза и инъецировали мышам 50 мкл физиологического раствора, содержащего различные количества ИС-^150/М8А или несопряженного лекарства. После того как мыши пришли в себя, в различные моменты времени собирали сыворотку и ВАЬЕ и анализировали на наличие 1Ь-6, 1Ь-12р40, ΙΕΝ-γ, КАЫТЕ8 и МСР-1 методом анализа Ьиттех. В других опытах мышей анестезировали при помощи внутримышечной инъекции раствора кетамина в ксилоле и вводили им то же самое количество ИС-^150/М8А ί.!. в дозе 50 мкл или 1.и. в дозе 20 мкл. Поскольку через 24 ч после введения любым методом наблюдались одинаковые уровни цитокинов для изучения модели, инфекции выбирали более удобный интраназальный (1.и.) путь.
Инфицирование мышей АД спорами В. аи!йгас1в.
Споры были приготовлены из штамма 8!егие В. аи!йгас1в (рХ01+ рХ02-), как описано ранее (8аЬе! е! а1., ЕЕМ8 1ттиио1. Меб. МюгоЬюЕ, 47: 369 (2006); 6шб1-Кои1ат е! а1., Мо1. МюгоЬюй, 42: 931 (2001)). Очищенные споры хранили в РВ8 при 4°С при концентрации 1х108-4х108 КОЕ/мл. Перед инъекцией споры нагревали до 65°С в течение 30 мин для инициирования всхожести (зарождения). Мышей АД анестезировали внутримышечно вводимым раствором кетамина в ксилоле и вводили каждой мыши 1.и. 0,75 нмоль ИС-М50 или ИС-^150/М8А за 1 день до инфицирования аи!йгах. Контрольные мыши получали только физиологический раствор или физиологический раствор, содержащий М8А, в эквивалентных количествах по отношению к ЬС-^150/М8А. Инфицирование проводили 1.и. 2х105-8х105 спорами В. аи!йгас1в в 20 мкл. Наблюдали за выживаемостью в течение 13 дней, так как большинство мышей, которым вводили физиологический раствор, погибали в течение 3-6 дней. Результаты получали для групп, состоящих из 8 мышей.
Инфицирование мышей Ва1Ь/с вирусом гриппа.
Вирус гриппа А/№\\' Са1ебота/20/99 (Η1Ν1) получали из Сеи!егв Гог И1веаве Сои!го1 аиб Ргеуеийои (Абаи1а, СА). Размножение вируса проводили дважды в клетках почки собак Мабт ИагЬу (МОСК), затем осуществляли пассажи 7 раз в мышах для получения вирулентного вируса и затем другой пассаж в клеточной культуре с целью его амплификации. Мышей анестезировали 1.р. кетамином (100 мг/кг) и инфицировали 1.и. вирусом при инфицирующих дозах клеточной культуры примерно 105'0 каждой мыши в 50 мкл инокулята. До введения вируса каждой мыши вводили одну интраназальную дозу, равную 75 мкл, или в физиологическом растворе или в этом растворе, содержащем ИС-^150/М8А до 5 нмоль. Затем в течение 21 дня наблюдали за выживаемостью десяти инфицированных мышей в группе и двадцати контрольных мышей.
Статистика.
Уровень цитокинов сравнивали, применяя И-критерий Манна-Уитни с р<0,05 для определения ста
- 28 019151 тистической значимости. Получали кривые выживаемости Каплана-Майера и проводили тесты функций выживания (1ο§ гапк 1ез1з), используя 4 версию программы бгарРРай Рпзт (8ап Эге^, СА) для сравнения разницы в выживаемости.
Результаты.
Активное ίη νίΐτο и ίη νίνο высвобождение цитокинов в ответ на действие конъюгатов ИС1У150^8А. Инкубирование макрофагов костного мозга ^ΜΌΜ) с одним ИС-1У150 стимулировало высвобождение цитокинов (фиг. 10). В случае конъюгата с Μ8Α были обнаружены похожие или более высокие уровни цитокинов при меньшей (в 10 раз) эквивалентной концентрации ТЬВ7 агониста. Опыты с трансформантами ТЬВ, проведенные, как описано выше, подтвердили, что ИС-1У150, подобно соединению, у которого отсутствует альдегидная группа (ИС-1У136), является специфичным ТЬВ7 агонистом (Ьее е! а1., Ргос. ИаИ. Асай. 8с1. И8А, 103: 1828 (2006)). После ί.ν. введения мышкам ИС-1У150 приводил к уровню цитокинов, который, достигая максимума примерно через 2 ч после инъекции, затем быстро уменьшался почти до первоначального значения (данные не приведены). Сравнение профилей продуцирования при помощи ИС-1У150 цитокинов по сравнению с υС-1У150/Μ8Α через 2 ч после ί.ν. инъекции при различных дозах показало, что конъюгат с Μ8Α увеличивал активность в 10-100 раз (фиг. 11). Сыворотка из физиологического раствора или от мышей, получивших Μ8Α, содержала небольшое количество цитокинов или вообще незначительное их количество (данные не приведены).
Конъюгаты υС-1У150/Μ8Α обеспечивают пролонгированную и локализованную легочную активность. Для обеспечения адекватной доставки ТЬВ7 агонистов в дыхательную систему лекарства вначале вводили непосредственно в трахеи. Значительная индукция цитокинов была обнаружена в бронхиальной альвеолярной промывной жидкости (ΈΑΡΡ), экстрагированной у мышей, которым проводили интратрахеальное (ί.ΐ.) введение υС-1У150/Μ8Α, в то время как уровень цитокинов в сыворотке был очень низким и составляя почти фоновое значение у тех же самых животных (фиг. 12). В противоположность этому похожие величины содержания цитокина были выявлены и в ΒΑ^Ρ, и в сыворотке крови у мышей, которым вводили путем инъекции ТЬВ7 агонисты с малыми молекулами, что иногда приводило к поведенческим изменениям, таким как вставание шерсти дыбом и дрожь, что предполагает наличие цитокинового синдрома (табл. 2). Последующие исследования с ИС-1У150 показали, что интраназальная (ί.η.) доставка также индуцировала селективное продуцирование цитокинов в ΒΑ^Ρ, вероятно, вследствие аспирации лекарства. Соответственно ί.η. введение использовали для оценки конъюгатов ИС-1У150 в двух моделях инфицирования пневмонии у животных. Мыши, которым предварительно ί.η. вводили ИС^150/Μ8Α за день до инфицирования спорами В. аййтааз, выживали 7,5 дней по сравнению с контрольными мышами, которые жили в течение 5 дней (Р<0,025) (фиг. 14А). В противоположность этому не было значительной разницы между мышами, которым вводили или физиологический раствор, в количестве эквивалентном количеству Μ8Α, или только ИС-1У150. Эти данные подтвердили, что конъюгат ИС-1У150, но не свободная форма лекарства, обладал внутрилегочным иммунотерапевтическим действием. Таким образом, сопряжение ТЬВ7 агониста с Μ8Α усиливало его активность и снижало его токсичность после локальной доставки в дыхательные пути.
В другом опыте мышам ВЛЬВ/с предварительно ί.η. вводили конъюгат υС-1У150/Μ8Α за 1 день до инфицирования вирусом гриппа (штамм Н1М). Средняя продолжительность выживания этих мышей увеличилась до 11,5 дней по сравнению с 7 дней у контрольных мышей (Р<0,0001) (фиг. 14В). Вместе эти результаты позволяют предположить, что сопряжение ТЬВ7 агониста с Μ8Α увеличивает его активность и уменьшает его токсичность после локальной доставки в дыхательный тракт.
υС-1У150/Μ8Α вводили ί.η. до инфицирования аййгах и затем вводили ципрофлоксацин (25 мг/кг) на день 4. Введение плацебо с последующим введением ципрофлоксацина обеспечило 15-25%-ную выживаемость, в то время как лечение конъюгатом и ципрофлоксацином обеспечило 90%-ную выживаемость. Таким образом, конъюгат особенно полезен как коадъювант с вакциной против аййтах.
Обсуждение.
Соединение ИС-1У150 является одним из самых активных и многосторонних синтетических ТЬВ7 лигандов с малыми молекулами, который создан потому, что (ί) он является активным в наномолярных концентрациях; (ίί) он может соединяться с различными макромолекулами с повышением активности в некоторых случаях и (ίίί) его фармакокинетические свойства могут быть изменены путем модификации вспомогательных групп. Конъюгат ТЬВ7-белок, υС-1У150/Μ8Α, был охарактеризован как имеющий примерно пять малых молекул, ковалентно связанных с каждой молекулой Μ8Α. Конъюгат сохранил активность ТЬВ7 агониста и действительно является более активным и имеет большую продолжительность действия по сравнению со свободной формой мономерного лекарства. Более того, этот конъюгат может быть эффективно доставлен в дыхательные пути методом ί.η. или ί.ΐ. введения. Доставка лекарства интраназальным (ί.η.) путем оказалась эффективной в мышиной модели бактериальной инфекции. Что касается доставки в дыхательные пути, то потенциально важное преимущество приготовления ТЬВ7 агонистов в виде конъюгатов макромолекул состоит в том, что при этом можно избежать возникновения системных побочных эффектов за счет ограничения иммуностимуляторной активности в локальной среде (слизистая оболочка).
Следует ожидать, что макромолекулярный конъюгат будет абсорбироваться системной циркуляци
- 29 019151 ей медленнее, чем свободная форма лекарства и, в действительности, сильно захватываться остаточными макрофагами и дендритными клетками, экспрессирующими ТЬК7. Соответственно конъюгат будет смягчать вид серьезных побочных эффектов, которые ассоциируются с системной доставкой ТБК7/8 агонистов. Конъюгат ИС-1У150/М8А может также обеспечить благоприятную иммунотерапевтическую активность при введении в сайты слизистой оболочки, такие как мочеполовой и желудочно-кишечный тракты, для контроля за инфекционными, аллергическими и злокачественными болезнями. Макромолекулярный носитель ТЬК7 агониста может также обеспечить усовершенствованный подход к селективной доставке иммунотерапевтического агента в конкретные орган или ткань. Например, липидные конъюгаты ИС-1У150 могут быть введены в липосомы различного размера и состава, в то время как белковые конъюгаты ТЬК7 агониста могут таргетировать различные подвиды дендритных клеток. Различие во внеклеточном проходе конъюгата ИС-1У150 может индуцировать разные паттерны продуцирования цитокинов, аналогично эффектам, наблюдаемым в случае ТЬК9-активирующими олигонуклеотидами (КоШепГиввег е! а1., Нит. 1ттипо1., 63: 111 (2002)).
Одной из возможных проблем, которые уже наблюдались в случае лекарств, соединенных с белками, является создание антител против гаптеноподобной части молекулы с низким молекулярным весом. Однако ИС-1У150 в отличие от конъюгатов вакцины ТБК7/8, изученных ранее, имеет простую аденинподобную структуру, которая вряд ли может вызвать гиперчувствительные реакции. В действительности антитела к ИС-1У150 не наблюдались после введения белковых конъюгатов, за исключением случая повторяющегося введения носителя гемоцианина морского моллюска в полном адъюванте Фрейда (неопубликованные данные).
Существует необходимость в новых агентах для профилактики и лечения инфекций, вызванных вирусами гриппа, особенно в связи с распространением патогенных в высшей степени штаммов из Азии. Заболеваемость и смертность, вызванные обычно циркулирующими штаммами, очень высоки.
Лечение инфекции может осуществляться при помощи одобренных противовирусных лекарств, которые имеют умеренную эффективность, если лечение начинают на ранней стадии. Укрепление иммунной системы также исследовалось как стратегия, которая может привести к ускорению защитных противовирусных ответов, особенно у пациентов с ослабленным иммунитетом. Возможно, что системная иммунная активация путем сигналов ТЬК не приводит к созданию локального цитокинового и хемокинового градиента, требуемого для мобилизации иммунных клеток в сайте инфекции. Эту гипотезу подтверждает тот факт, что несопряженный ИС-1У150, который быстро абсорбируется слизистой оболочкой, не смог защитить мышей от инфекции В. ап!Ьгас1в, в то время как ИС-1У150 в виде конъюгата был эффективным.
В. ап!1гас1в превратился в средство биотерроризма. Быстрый ответ на микробные патогены является критическим для эффективной биозащиты. В общем, антитело или клеточный иммунный ответ может защитить от этих патогенов; однако генерирование этих защитных ответов быстро требует предварительное введение специфичных антигенов для каждого организма. Хотя известно, что вирус гриппа вовлекает ТЬК7 (ВагсЬе! е! а1., Еиг. 1. 1ттипо1., 35: 360 (2005)), бактериальная сибирская язва может с вероятностью вовлекать ТЬК2, ТЬК4 и ТЬК9. В дополнение к тому, что МуЭ88 является обычным сигнальным промежуточным агентом для ТЬКв, он, как было показано, является необходимым для наличия сопротивляемости инфекции в мышиной модели сибирской язвы (ап!1гах) (НцдЕев е! а1., 1пГес!. 1ттип., 73: 7535, 2005). В виду того что конъюгат ИС-1У150 работает эффективно в качестве адъюванта в случае инфекций, которые используют различные пути метаболизма, он может применяться для биозащиты, причем эта стратегия не нуждается в том, чтобы быть специфичной по отношению к антигенам конкретного микроба и будет полезно использовать конъюгат для воздействия только им одним или в смеси с другими агентами.
Пример V.
Не существует 8А вакцины, которая является достаточно активной или которая может действовать достаточно быстро для предотвращения 8А инфекций у пациентов, находящихся в группе риска, до госпитализации. Одна инъекция активного ТЬК7 агониста и убитых грамположительных бактерий, например 8А или ее подвида, может запустить возникновение защитного иммунитета от бактерий в течение одной недели. Эта инъекция может включать, например, (1) ТЬК7 агонист, такой как υί.'-1ν199, сопряженный непосредственно со свободными аминогруппами на убитых грамположительных бактериях, (2) ТЬК7 агонист, такой как υί.'-1ν199, сопряженный с альбумином в комбинации с убитыми грамположительными бактериями, (3) ТЬК7 агонист, такой как υί.'-1ν199, сопряженный с рекомбинантным белком грамположительной бактерии, или (4) ТЬК7 агонист, такой как υί.'-1ν199, сопряженный с полисахаридами грамположительных бактерий (например, через линкер, известный из уровня техники, такой как используемый 81ар1Уа.х®).
Как описано выше, ТЬК7 агонист был сопряжен с летально облученными спорами штамма 8!егпе вакцины ВасШив ап!1гас1в (ВА). Как и 8А, ВА представляет собой грамположительные бактерии. По сравнению с одними спорами сопряженная бактерия является активным активатором макрофагов костного мозга у мышей (ВМЭМ) по данным о секреции цитокинов (1Б-12 и 1Ь-6). В другом опыте одна инъекция мышам летально облученных спор штамма 8!егпе ВА, смешанных с ТЬК7 агонистом, сопряжен- 30 019151 ным с мышиным альбумином (М8А), защитила животных от летального внутрилегочного воздействия ВА, осуществленного только через 6 дней позднее. В противоположность этому инъекция животным только спор ВА или ВА в сочетании с обычным адъювантом, токсином холеры (СТ), не защитила животных. Таким образом, вакцина, содержащая ТЬК7-агонист/альбумин/облученные споры, привела к возникновению защитного иммунитета от ВасШиз ап!йгааз через 6 дней. Эта быстрота ответа у животного, не подвергавшегося воздействию, была совершенно неожиданной. Такое же введение вакцины может защитить людей от инфекции, вызванной 8А, приобретенной в госпитале.
Все публикации, патенты и патентные документы, цитировавшиеся в описании, включены в него в качестве ссылок. В случае любого несоответствия данное описание, включая любые определения, содержащиеся в нем, будет превалировать. Данное изобретение было описано со ссылкой на различные конкретные и предпочтительные варианты и методики. Однако следует иметь в виду, что могут быть осуществлены различные изменения и модификации в рамках и объеме данного изобретения.

Claims (13)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы А или его фармацевтически приемлемую соль, где
    К1 обозначает водород, (С1-С10)алкил или (С1-С10)алкил, замещенный (С1-С6)алкокси;
    К3 обозначает диолеоилфосфатидилэтаноламин (ИОРЕ).
  2. 2. Фармацевтическая композиция по п.1, в которой соединение имеет формулу В
  3. 3. Фармацевтическая композиция по п.1 или 2, где К1 обозначает (С1-С10)алкил, замещенный (С1-6)алкокси.
  4. 4. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1-3, где К1 обозначает -(СН2)2-ОСН3.
  5. 5. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1-4, включающая липосому.
  6. 6. Применение соединения формулы А, охарактеризованного в п.1, для приготовления лекарственного средства, содержащего соединение формулы А, для лечения млекопитающего, страдающего или восприимчивого к состоянию, опосредованному активностью толл-подобных рецепторов (ТЬК).
  7. 7. Применение по п.6, где соединение имеет формулу В
  8. 8. Применение по п.6 или 7, где К1 обозначает (С1-С10)алкил, замещенный (С1-6)алкокси.
  9. 9. Применение по любому из пп.6-8, где К1 обозначает -(СН2)2-ОСН3.
  10. 10. Применение по любому из пп.6-9, где млекопитающее представляет собой человека.
  11. 11. Применение по любому из пп.6-10, где состояние является воспалением.
  12. 12. Применение по любому из пп.6-11, где состояние является раком.
  13. 13. Применение по любому из пп.6-12, где лекарственное средство содержит антиген.
EA200901078A 2007-02-07 2008-02-07 Конъюгаты синтетических агонистов tlr и их применение EA019151B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US88869907P 2007-02-07 2007-02-07
PCT/US2008/001631 WO2008115319A2 (en) 2007-02-07 2008-02-07 Conjugates of synthetic tlr agonists and uses therefor

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200901078A1 EA200901078A1 (ru) 2010-06-30
EA019151B1 true EA019151B1 (ru) 2014-01-30

Family

ID=39766655

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200901078A EA019151B1 (ru) 2007-02-07 2008-02-07 Конъюгаты синтетических агонистов tlr и их применение

Country Status (19)

Country Link
US (3) US8357374B2 (ru)
EP (2) EP2125007B9 (ru)
JP (2) JP5425642B2 (ru)
KR (1) KR20090109121A (ru)
CN (1) CN101790380B (ru)
AU (1) AU2008227128B2 (ru)
BR (1) BRPI0807196A2 (ru)
CA (1) CA2677733A1 (ru)
DK (1) DK2510946T3 (ru)
EA (1) EA019151B1 (ru)
ES (2) ES2552471T3 (ru)
HK (2) HK1138767A1 (ru)
HU (1) HUE025555T2 (ru)
IL (1) IL200240A (ru)
PL (2) PL2510946T3 (ru)
PT (1) PT2510946E (ru)
SI (1) SI2510946T1 (ru)
WO (1) WO2008115319A2 (ru)
ZA (1) ZA200906094B (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2684644C1 (ru) * 2013-12-09 2019-04-11 Юсб Байофарма Спрл Производные пурина в качестве модуляторов активности tnf

Families Citing this family (116)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2577514T3 (es) * 2005-08-22 2016-07-15 The Regents Of The University Of California Antagonistas de TLR
CA2653941C (en) 2006-05-31 2013-01-08 The Regents Of The University Of California Substituted amino purine derivatives and uses thereof
SI2510946T1 (sl) 2007-02-07 2015-12-31 The Regents Of The University Of California Konjugati sintetičnih agonistov TLR in njihove uporabe
EP2211841A4 (en) * 2007-10-15 2013-03-13 Cooperative Res Ct For Asthma PROPHYLAXIS METHOD AND AGENTS FOR USE IN THIS METHOD
EA201001264A1 (ru) * 2008-02-07 2011-04-29 Дзе Регентс Оф Дзе Юниверсити Оф Калифорния Способ лечения заболеваний мочевого пузыря с помощью активатора tlr7
WO2010088924A1 (en) 2009-02-06 2010-08-12 Telormedix Sa Pharmaceutical compositions comprising imidazoquinolin(amines) and derivatives thereof suitable for local administration
MX2011008500A (es) 2009-02-11 2011-09-26 Univ California Moduladores del receptor tipo toll y tratamiento de enfermedades.
US8629151B2 (en) * 2009-05-27 2014-01-14 Selecta Biosciences, Inc. Immunomodulatory agent-polymeric compounds
CN102666541B (zh) 2009-10-22 2015-11-25 吉里德科学公司 用于治疗特别是病毒感染的嘌呤或脱氮嘌呤的衍生物
US20130202629A1 (en) * 2010-04-30 2013-08-08 The Regents Of The University Of California Uses of phospholipid conjugates of synthetic tlr7 agonists
AU2011247359A1 (en) * 2010-04-30 2012-11-15 Telormedix Sa Methods for inducing an immune response
US9050319B2 (en) 2010-04-30 2015-06-09 Telormedix, Sa Phospholipid drug analogs
KR20130056249A (ko) 2010-04-30 2013-05-29 텔로메딕스 에스에이 인지질 약물 유사체
EP2575773A4 (en) 2010-05-26 2014-06-25 Selecta Biosciences Inc SYNTHETIC NANOTRÄGERKOMBINATIONSIMPFSTOFFE
US20120083473A1 (en) 2010-09-21 2012-04-05 Johanna Holldack Treatment of conditions by toll-like receptor modulators
US20140031250A1 (en) 2010-10-07 2014-01-30 David Tsai Ting Biomarkers of Cancer
EA201390660A1 (ru) 2010-11-05 2013-11-29 Селекта Байосайенсиз, Инк. Модифицированные никотиновые соединения и связанные способы
US9422250B2 (en) 2011-04-08 2016-08-23 Janssen Sciences Ireland Uc Pyrimidine derivatives for the treatment of viral infections
JP6415979B2 (ja) 2011-06-03 2018-10-31 スリーエム イノベイティブ プロパティズ カンパニー ヒドラジノ１ｈ−イミダゾキノリン−４−アミン及びこれから調製された複合体
MX347240B (es) 2011-06-03 2017-04-20 3M Innovative Properties Co Ligadores heterobifuncionales con segmentos polietilenglicol y conjugados modificadores de la respuesta inmunitaria elaborados a partir de los mismos.
CN103702687A (zh) 2011-07-29 2014-04-02 西莱克塔生物科技公司 产生体液和细胞毒性t淋巴细胞（ctl）免疫应答的合成纳米载体
PT2776439T (pt) 2011-11-09 2018-11-02 Janssen Sciences Ireland Uc Derivados de purina para o tratamento de infeções virais
US9107904B2 (en) 2012-04-05 2015-08-18 Massachusetts Institute Of Technology Immunostimulatory compositions and methods of use thereof
AU2013288600B2 (en) 2012-07-13 2017-06-29 Janssen Sciences Ireland Uc Macrocyclic purines for the treatment of viral infections
CN103566377A (zh) * 2012-07-18 2014-02-12 上海博笛生物科技有限公司 癌症的靶向免疫治疗
WO2014052828A1 (en) 2012-09-27 2014-04-03 The Regents Of The University Of California Compositions and methods for modulating tlr4
CN111420045B (zh) * 2012-10-10 2023-03-31 深圳大学 免疫受体调节剂偶联体及其制备方法和应用、制备其的偶联前体以及合成偶联前体的化合物
KR102217111B1 (ko) 2012-10-10 2021-02-18 얀센 사이언시즈 아일랜드 언리미티드 컴퍼니 바이러스 감염 및 다른 질환 치료를 위한 피롤로[3,2-d]피리미딘 유도체
NZ706226A (en) 2012-11-16 2019-09-27 Janssen Sciences Ireland Uc Heterocyclic substituted 2-amino-quinazoline derivatives for the treatment of viral infections
EP2958900B1 (en) 2013-02-21 2019-04-10 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company 2-aminopyrimidine derivatives for the treatment of viral infections
EP2958889B1 (en) * 2013-02-25 2017-03-22 The Scripps Research Institute Neoseptins: small molecule adjuvants
WO2014152092A2 (en) * 2013-03-14 2014-09-25 Rongfu Wang Methods and compositions for modulating regulatory t cell function
US20140328898A1 (en) * 2013-03-15 2014-11-06 Children's National Medical Center Nano-Liposomal Formulations and Methods of Use
EA202090547A3 (ru) * 2013-03-29 2020-12-30 Янссен Сайенсиз Айрлэнд Юси Макроциклические деаза-оксипурины для лечения вирусных инфекций
ES2657283T3 (es) 2013-05-24 2018-03-02 Janssen Sciences Ireland Uc Derivados de piridona para el tratamiento de infecciones virales y enfermedades adicionales
SG10201803331PA (en) 2013-06-27 2018-06-28 Janssen Sciences Ireland Uc Pyrrolo[3,2-d]pyrimidine derivatives for the treatment of viral infections and other diseases
BR112016001570B1 (pt) 2013-07-30 2020-12-15 Janssen Sciences Ireland Uc Derivados de tieno[3,2-d]pirimidinas e composição farmacêutica que os compreende para o tratamento de infecções virais
EP3033089A2 (en) * 2013-08-16 2016-06-22 The Regents of The University of California Uses of phospholipid conjugates of synthetic tlr7 agonists
GB201321242D0 (en) 2013-12-02 2014-01-15 Immune Targeting Systems Its Ltd Immunogenic compound
EP3092254A4 (en) 2014-01-10 2017-09-20 Birdie Biopharmaceuticals Inc. Compounds and compositions for treating her2 positive tumors
DK3166976T3 (da) 2014-07-09 2022-04-11 Birdie Biopharmaceuticals Inc Anti-pd-l1-kombinationer til behandling af tumorer
US9918959B2 (en) 2014-08-06 2018-03-20 The Board Of Regents Of The University Of Texas System TLR-independent small molecule adjuvants
CN110759916B (zh) * 2014-08-15 2021-02-19 正大天晴药业集团股份有限公司 作为tlr7激动剂的吡咯并嘧啶化合物
CN112546238A (zh) 2014-09-01 2021-03-26 博笛生物科技有限公司 用于治疗肿瘤的抗-pd-l1结合物
US10632151B2 (en) 2015-01-22 2020-04-28 University Of Massachusetts Cancer immunotherapy
CA2986961C (en) 2015-05-26 2023-07-25 Ohio State Innovation Foundation Nanoparticle based vaccine strategy against swine influenza virus
CA2990852A1 (en) 2015-06-26 2016-12-29 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Cancer therapy targeting tetraspanin 33 (tspan33) in myeloid derived suppressor cells
EP3355933B1 (en) * 2015-09-29 2020-05-06 Sumitomo Dainippon Pharma Co., Ltd. Adenine conjugate compounds and their use as vaccine adjuvants
CN105311032B (zh) * 2015-11-09 2018-09-25 深圳大学 Tlr7激动剂与酪氨酸激酶抑制剂联用在制备抗肿瘤药物中的应用
CN105315281B (zh) * 2015-11-16 2017-04-19 深圳大学 化合物i和化合物ii及其制备方法和应用
CN106943598A (zh) 2016-01-07 2017-07-14 博笛生物科技（北京）有限公司 用于治疗肿瘤的抗-her2组合
CN115554406A (zh) 2016-01-07 2023-01-03 博笛生物科技有限公司 用于治疗肿瘤的抗-cd20组合
CN106943597A (zh) 2016-01-07 2017-07-14 博笛生物科技（北京）有限公司 用于治疗肿瘤的抗-egfr组合
CA3023672A1 (en) * 2016-05-16 2017-11-23 Infectious Disease Research Institute Pegylated liposomes and methods of use
US11697851B2 (en) 2016-05-24 2023-07-11 The Regents Of The University Of California Early ovarian cancer detection diagnostic test based on mRNA isoforms
SG11201811448RA (en) 2016-07-01 2019-01-30 Janssen Sciences Ireland Unlimited Co Dihydropyranopyrimidines for the treatment of viral infections
US10300145B2 (en) 2016-07-15 2019-05-28 Massachusetts Institute Of Technology Synthetic nanoparticles for delivery of immunomodulatory compounds
AU2017335205B2 (en) 2016-09-29 2021-11-04 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company Pyrimidine prodrugs for the treatment of viral infections and further diseases
WO2018077385A1 (en) * 2016-10-25 2018-05-03 Biontech Rna Pharmaceuticals Gmbh Dose determination for immunotherapeutic agents
EP3532638A4 (en) 2016-10-31 2020-07-29 University of Massachusetts TARGETING MICROARN-101-3 P IN CARCINOTHERAPY
US11471515B2 (en) 2016-11-09 2022-10-18 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Restoration of tumor suppression using MRNA-based delivery system
EP3551046B1 (en) 2016-12-07 2023-07-19 Biora Therapeutics, Inc. Gastrointestinal tract detection methods, devices and systems
EP3554344A1 (en) 2016-12-14 2019-10-23 Progenity, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with a tlr modulator
JP7161760B2 (ja) * 2017-02-03 2022-10-27 国立大学法人東北大学 複素環化合物
CN108794467A (zh) 2017-04-27 2018-11-13 博笛生物科技有限公司 2-氨基-喹啉衍生物
CA3067268A1 (en) 2017-06-23 2018-12-27 Birdie Biopharmaceuticals, Inc. Crystalline resiquimod monosulfate anhydrate and its preparation and uses
WO2019012107A1 (en) 2017-07-13 2019-01-17 Danmarks Tekniske Universitet CATIONIC LIPOSOMES
US10508115B2 (en) 2017-08-16 2019-12-17 Bristol-Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having heteroatom-linked aromatic moieties, conjugates thereof, and methods and uses therefor
US10487084B2 (en) 2017-08-16 2019-11-26 Bristol-Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having a heterobiaryl moiety, conjugates thereof, and methods and uses therefor
US10494370B2 (en) 2017-08-16 2019-12-03 Bristol-Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having a pyridine or pyrazine moiety, conjugates thereof, and methods and uses therefor
US10472361B2 (en) 2017-08-16 2019-11-12 Bristol-Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having a benzotriazole moiety, conjugates thereof, and methods and uses therefor
US10457681B2 (en) 2017-08-16 2019-10-29 Bristol_Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having a tricyclic moiety, conjugates thereof, and methods and uses therefor
US11814623B2 (en) 2018-01-30 2023-11-14 University Of Massachusetts Methods of treating a wound using epigenetic regulation
CA3090652A1 (en) 2018-02-06 2019-08-15 The General Hospital Corporation Repeat rna as biomarkers of tumor immune response
TW201945003A (zh) 2018-03-01 2019-12-01 愛爾蘭商健生科學愛爾蘭無限公司 ２，４－二胺基喹唑啉衍生物及其醫學用途
CN110317202B (zh) * 2018-03-30 2021-12-24 江苏恒瑞医药股份有限公司 氰基吡咯并杂芳基类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用
CN115192726A (zh) * 2018-04-03 2022-10-18 深圳大学 免疫激动剂靶向化合物的合成及其应用
WO2019196918A1 (zh) * 2018-04-13 2019-10-17 罗欣药业(上海)有限公司 五元杂环并嘧啶类化合物、药物组合物及用途
EP3774806A1 (en) * 2018-04-13 2021-02-17 GlaxoSmithKline Biologicals SA Tlr7 and / or tlr8 agonists
US11485741B2 (en) 2018-04-24 2022-11-01 Bristol-Myers Squibb Company Macrocyclic toll-like receptor 7 (TLR7) agonists
US11554120B2 (en) 2018-08-03 2023-01-17 Bristol-Myers Squibb Company 1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidine compounds as toll-like receptor 7 (TLR7) agonists and methods and uses therefor
WO2020041720A1 (en) 2018-08-24 2020-02-27 Codiak Biosciences, Inc. Extracellular vesicles targeting dendritic cells and uses thereof
AU2019400340A1 (en) * 2018-12-17 2021-05-20 Eisai R&D Management Co., Ltd. Formulation comprising liposomes
KR20210142097A (ko) 2019-02-04 2021-11-24 코디악 바이오사이언시즈, 인크. 엑소좀 조작용 막단백질 스캐폴드
SG11202109587TA (en) 2019-03-21 2021-10-28 Codiak Biosciences Inc Extracellular vesicle conjugates and uses thereof
WO2020191369A1 (en) 2019-03-21 2020-09-24 Codiak Biosciences, Inc. Process for preparing extracellular vesicles
CN114080232A (zh) 2019-03-21 2022-02-22 科迪亚克生物科学公司 用于疫苗递送的细胞外囊泡
WO2021003445A1 (en) 2019-07-03 2021-01-07 Codiak Biosciences, Inc. Extracellular vesicles targeting t cells and uses thereof
WO2021053163A1 (en) 2019-09-19 2021-03-25 Danmarks Tekniske Universitet Immune stimulating micelle composition
MX2022003570A (es) 2019-09-25 2022-07-11 Codiak Biosciences Inc Composiciones de vesícula extracelular.
AU2020407871A1 (en) 2019-12-20 2022-06-30 Nammi Therapeutics, Inc. Formulated and/or co-formulated liposome compositions containing toll-like receptor ("TLR") agonist prodrugs useful in the treatment of cancer and methods thereof
US20230122249A1 (en) 2020-01-27 2023-04-20 Bristol-Myers Squibb Company 1H-PYRAZOLO[4,3-d]PYRIMIDINE COMPOUNDS AS TOLL-LIKE RECEPTOR 7 (TLR7) AGONISTS
EP4097101A1 (en) 2020-01-27 2022-12-07 Bristol-Myers Squibb Company 1h-pyrazolo[4,3-d]pyrimidine compounds as toll-like receptor 7 (tlr7) agonists
CN115210236A (zh) 2020-01-27 2022-10-18 百时美施贵宝公司 作为Toll样受体7(TLR7)激动剂的1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶化合物
CN115279765A (zh) 2020-01-27 2022-11-01 百时美施贵宝公司 作为Toll样受体7(TLR7)激动剂的1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶化合物
EP4097106A1 (en) 2020-01-27 2022-12-07 Bristol-Myers Squibb Company 1h-pyrazolo[4,3-d]pyrimidine compounds as toll-like receptor 7 (tlr7) agonists
CN115135654A (zh) 2020-01-27 2022-09-30 百时美施贵宝公司 作为Toll样受体7(TLR7)激动剂的1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶化合物
US20230140430A1 (en) 2020-01-27 2023-05-04 Bristol-Myers Squibb Company 1H-PYRAZOLO[4,3-d]PYRIMIDINE COMPOUNDS AS TOLL-LIKE RECEPTOR 7 (TLR7) AGONISTS
EP4097100A1 (en) 2020-01-27 2022-12-07 Bristol-Myers Squibb Company 1h-pyrazolo[4,3-d]pyrimidine compounds as toll-like receptor 7 (tlr7) agonists
WO2021154667A1 (en) 2020-01-27 2021-08-05 Bristol-Myers Squibb Company C3-SUBSTITUTED 1H-PYRAZOLO[4,3-d]PYRIMIDINE COMPOUNDS AS TOLL-LIKE RECEPTOR 7 (TLR7) AGONISTS
WO2021168274A1 (en) 2020-02-21 2021-08-26 Silverback Therapeutics, Inc. Nectin-4 antibody conjugates and uses thereof
US20230107927A1 (en) 2020-02-28 2023-04-06 First Wave Bio, Inc. Methods of treating iatrogenic autoimmune colitis
WO2021184017A1 (en) 2020-03-13 2021-09-16 Codiak Biosciences, Inc. Extracellular vesicles for treating neurological disorders
JP2023518414A (ja) 2020-03-20 2023-05-01 コディアック バイオサイエンシーズ， インコーポレイテッド 治療のための細胞外小胞
EP4149550A4 (en) * 2020-05-15 2024-07-03 Univ Leland Stanford Junior TOLL-LIKE RECEPTOR (TLR) AGONIST NANOPARTICLES AND THEIR USES
WO2021237100A1 (en) 2020-05-21 2021-11-25 Codiak Biosciences, Inc. Methods of targeting extracellular vesicles to lung
US20230220068A1 (en) 2020-06-05 2023-07-13 Codiak Biosciences, Inc. Anti-transferrin extracellular vesicles
CN111892648B (zh) * 2020-06-08 2022-08-26 中国科学院上海药物研究所 偶联tlr7激动剂的新型冠状病毒多肽疫苗及其应用
EP4175673A1 (en) 2020-07-01 2023-05-10 ARS Pharmaceuticals Inc. Anti-asgr1 antibody conjugates and uses thereof
EP4175640A1 (en) 2020-07-02 2023-05-10 VIIV Healthcare Company Method of achieving hiv viral remission using long-acting antiretroviral agents
CA3192470A1 (en) 2020-09-23 2022-03-31 Tim SOOS Methods of producing extracellular vesicles
US20240241020A1 (en) 2020-09-23 2024-07-18 Lonza Sales Ag Process for preparing extracellular vesicles
WO2022066883A1 (en) 2020-09-23 2022-03-31 Codiak Biosciences, Inc. Extracellular vesicles comprising kras antigens and uses thereof
WO2022200553A2 (en) 2021-03-25 2022-09-29 Danmarks Tekniske Universitet Immune stimulating nanoparticle composition
AU2021447099A1 (en) * 2021-05-27 2023-02-16 Cas Lamvac (Guangzhou) Biomedical Technology Co., Ltd. Method and kit for analyzing phenotype and function of CD303
CN118574618A (zh) * 2021-11-03 2024-08-30 艾德森特克斯治疗股份有限公司 药物偶联物及其制备与使用方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050004144A1 (en) * 2003-04-14 2005-01-06 Regents Of The University Of California Combined use of IMPDH inhibitors with toll-like receptor agonists
WO2005060966A1 (fr) * 2003-12-19 2005-07-07 Sanofi Pasteur Composition immunostimulante comprenant au moins un agoniste des recepteurs toll-like 7 ou du recepteur toll-like 8 et un agoniste du recepteur toll-like 4

Family Cites Families (87)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4559157A (en) 1983-04-21 1985-12-17 Creative Products Resource Associates, Ltd. Cosmetic applicator useful for skin moisturizing
LU84979A1 (fr) 1983-08-30 1985-04-24 Oreal Composition cosmetique ou pharmaceutique sous forme aqueuse ou anhydre dont la phase grasse contient un polyether oligomere et polyethers oligomeres nouveaux
CA1271477A (en) 1983-11-18 1990-07-10 John F. Gerster 1h-imidazo[4,5-c]quinolin-4-amines
IL73534A (en) 1983-11-18 1990-12-23 Riker Laboratories Inc 1h-imidazo(4,5-c)quinoline-4-amines,their preparation and pharmaceutical compositions containing certain such compounds
US4820508A (en) 1987-06-23 1989-04-11 Neutrogena Corporation Skin protective composition
US4992478A (en) 1988-04-04 1991-02-12 Warner-Lambert Company Antiinflammatory skin moisturizing composition and method of preparing same
US4938949A (en) 1988-09-12 1990-07-03 University Of New York Treatment of damaged bone marrow and dosage units therefor
US5238944A (en) 1988-12-15 1993-08-24 Riker Laboratories, Inc. Topical formulations and transdermal delivery systems containing 1-isobutyl-1H-imidazo[4,5-c]quinolin-4-amine
US5736553A (en) 1988-12-15 1998-04-07 Riker Laboratories, Inc. Topical formulations and transdermal delivery systems containing 1-isobutyl-1H-imidazo 4,5-C!quinolin-4-amine
US4929624A (en) 1989-03-23 1990-05-29 Minnesota Mining And Manufacturing Company Olefinic 1H-imidazo(4,5-c)quinolin-4-amines
US5037986A (en) 1989-03-23 1991-08-06 Minnesota Mining And Manufacturing Company Olefinic 1H-imidazo[4,5-c]quinolin-4-amines
NZ232740A (en) 1989-04-20 1992-06-25 Riker Laboratories Inc Solution for parenteral administration comprising a 1h-imidazo(4,5-c) quinolin-4-amine derivative, an acid and a tonicity adjuster
ATE121088T1 (de) 1990-10-05 1995-04-15 Minnesota Mining & Mfg Verfahren zur herstellung von imidazo(4,5- c>chinolin-4-aminen.
US5175296A (en) 1991-03-01 1992-12-29 Minnesota Mining And Manufacturing Company Imidazo[4,5-c]quinolin-4-amines and processes for their preparation
IL105325A (en) 1992-04-16 1996-11-14 Minnesota Mining & Mfg Immunogen/vaccine adjuvant composition
US5395937A (en) 1993-01-29 1995-03-07 Minnesota Mining And Manufacturing Company Process for preparing quinoline amines
US5648516A (en) 1994-07-20 1997-07-15 Minnesota Mining And Manufacturing Company Fused cycloalkylimidazopyridines
US5352784A (en) 1993-07-15 1994-10-04 Minnesota Mining And Manufacturing Company Fused cycloalkylimidazopyridines
US5525606A (en) 1994-08-01 1996-06-11 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Substituted 06-benzylguanines and 6(4)-benzyloxypyrimidines
DE19505168A1 (de) 1995-02-16 1996-08-22 Boehringer Mannheim Gmbh Spezifische Lipidkonjugate von Nucleosid-Diphosphonaten und deren Verwendung als Arzneimittel
US5624677A (en) 1995-06-13 1997-04-29 Pentech Pharmaceuticals, Inc. Controlled release of drugs delivered by sublingual or buccal administration
US5741908A (en) 1996-06-21 1998-04-21 Minnesota Mining And Manufacturing Company Process for reparing imidazoquinolinamines
US5693811A (en) 1996-06-21 1997-12-02 Minnesota Mining And Manufacturing Company Process for preparing tetrahdroimidazoquinolinamines
DE19637209B4 (de) 1996-09-12 2006-12-14 Siemens Ag Verfahren zum Steuern des Antriebsstrangs eines Kraftfahrzeugs und integrierte Antriebsstrangsteuerung
CA2269072C (en) 1996-10-25 2006-02-14 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. Vascular endothelial growth factor (vegf) nucleic acid ligand complexes
KR100518903B1 (ko) 1996-10-25 2005-10-06 미네소타 마이닝 앤드 매뉴팩춰링 캄파니 Ｔｈ2 매개 질병 및 관련 질병의 치료용 면역 반응 조절 화합물
JPH10298181A (ja) 1997-04-25 1998-11-10 Sumitomo Pharmaceut Co Ltd タイプ２ヘルパーｔ細胞選択的免疫応答抑制剤
DE69824632T2 (de) 1997-11-12 2005-06-09 Mitsubishi Chemical Corp. Purinderivate und medikamente, welche dieselben als aktiven bestandteil enthalten
CA2311742C (en) 1997-11-28 2009-06-16 Sumitomo Pharmaceuticals Co., Ltd. 6-amino-9-benzyl-8-hydroxypurine derivatives
JP4189048B2 (ja) 1997-12-26 2008-12-03 大日本住友製薬株式会社 複素環化合物
US7001609B1 (en) 1998-10-02 2006-02-21 Regents Of The University Of Minnesota Mucosal originated drug delivery systems and animal applications
NZ512628A (en) 1999-01-08 2004-03-26 3M Innovative Properties Co Formulations and methods for treatment of mucosal associated conditions with an immune response modifier
US6486168B1 (en) 1999-01-08 2002-11-26 3M Innovative Properties Company Formulations and methods for treatment of mucosal associated conditions with an immune response modifier
US20020058674A1 (en) 1999-01-08 2002-05-16 Hedenstrom John C. Systems and methods for treating a mucosal surface
CZ27399A3 (cs) 1999-01-26 2000-08-16 Ústav Experimentální Botaniky Av Čr Substituované dusíkaté heterocyklické deriváty, způsob jejich přípravy, tyto deriváty pro použití jako léčiva, farmaceutická kompozice a kombinovaný farmaceutický přípravek tyto deriváty obsahující a použití těchto derivátů pro výrobu léčiv
WO2001044260A2 (en) 1999-12-17 2001-06-21 Ariad Pharmaceuticals, Inc. Novel purines
AU2441701A (en) 1999-12-17 2001-06-25 Ariad Pharmaceuticals, Inc. Purine derivatives
AU3540101A (en) 2000-01-07 2001-07-16 Universitaire Instelling Antwerpen Purine derivatives, process for their preparation and use thereof
US6733764B2 (en) 2000-06-14 2004-05-11 Alain Martin Immunostimulator anti-cancer compounds and methods for their use in the treatment of cancer
JP2004510961A (ja) 2000-09-15 2004-04-08 ビルコ・ビーブイビーエイ 疾患の処置のための薬物療法を最適化するシステムおよび方法
GB0023008D0 (en) 2000-09-20 2000-11-01 Glaxo Group Ltd Improvements in vaccination
AU2002211602A1 (en) 2000-10-11 2002-04-22 Johns Hopkins University Polymer controlled delivery of a therapeutic agent
US20020127224A1 (en) 2001-03-02 2002-09-12 James Chen Use of photoluminescent nanoparticles for photodynamic therapy
PT1385823E (pt) 2001-04-09 2007-01-31 Novartis Vaccines & Diagnostic Compostos de guanidino como agonistas do receptor de melanocortina-4 (r-mc4)
JP4331944B2 (ja) 2001-04-17 2009-09-16 大日本住友製薬株式会社 新規アデニン誘導体
EP2415486B1 (en) 2001-05-18 2017-02-22 Sirna Therapeutics, Inc. Conjugates and compositions for cellular delivery
US6770651B2 (en) 2001-06-29 2004-08-03 Venkata Palle A2B adenosine receptor antagonists
EP2336133A1 (en) 2001-10-30 2011-06-22 Conforma Therapeutics Corporation Purine analogs having HSP90-inhibiting activity
GB0206461D0 (en) 2002-03-19 2002-05-01 Glaxo Group Ltd Improvements in vaccination
EP2269632B1 (en) 2002-08-15 2014-01-01 3M Innovative Properties Co. Immunostimulatory compositions and methods of stimulating an immune response
US7754728B2 (en) 2002-09-27 2010-07-13 Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. Adenine compound and use thereof
JP2004137157A (ja) 2002-10-16 2004-05-13 Sumitomo Pharmaceut Co Ltd 新規アデニン誘導体を有効成分として含有する医薬
JP2006519784A (ja) 2003-01-28 2006-08-31 シャンハイ、サンウエイ、バイアテク、カムパニ、リミティド 原発癌および転移癌に対する治療（ａ２）温熱療法と腫瘍溶解の同時治療（ａ３）
US20040265351A1 (en) 2003-04-10 2004-12-30 Miller Richard L. Methods and compositions for enhancing immune response
US20050059613A1 (en) 2003-07-08 2005-03-17 Bahram Memarzadeh Compositions and methods for the enhanced uptake of therapeutic agents through the bladder epithelium
US20070161582A1 (en) 2003-08-08 2007-07-12 Dusan Mijikovic Pharmaceutical compositions and methods for metabolic modulation
AU2004271972B2 (en) 2003-09-05 2010-06-03 Anadys Pharmaceuticals, Inc. TLR7 ligands for the treatment of hepatitis C
JP2005089334A (ja) 2003-09-12 2005-04-07 Sumitomo Pharmaceut Co Ltd ８−ヒドロキシアデニン化合物
EA010160B1 (ru) 2003-09-18 2008-06-30 Конформа Терапьютикс Корпорейшн Новые гетероциклические соединения - ингибиторы hsp90 и способы их получения
EP1722762A2 (en) 2004-03-02 2006-11-22 Massachusetts Institute of Technology Nanocell drug delivery system
TWI414525B (zh) 2004-03-26 2013-11-11 Dainippon Sumitomo Pharma Co ９-取代-８-氧基腺嘌呤化合物
US20070225303A1 (en) * 2004-03-26 2007-09-27 Haruhisa Ogita 8-Oxoadenine Compound
WO2006054129A1 (en) 2004-11-19 2006-05-26 Institut Gustave Roussy Improved treatment of cancer by double-stranded rna
ATE555799T1 (de) 2004-12-07 2012-05-15 Univ Miami Von blutzellen abstammende mikropartikel als blutstillende mittel zur kontrolle von blutungen und behandlung von blutungsstörungen
ES2346687T3 (es) 2005-03-21 2010-10-19 Ferrer Internacional, S.A. Metodo para la fabricacion de 1h-imidazo(4,5-c)quinolin-4-aminas 1-sustituidas y sus intermedios.
US20070292418A1 (en) 2005-04-26 2007-12-20 Eisai Co., Ltd. Compositions and methods for immunotherapy
ES2577514T3 (es) * 2005-08-22 2016-07-15 The Regents Of The University Of California Antagonistas de TLR
US20090105212A1 (en) 2005-09-22 2009-04-23 Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. a corporation of Japan Novel adenine compound
WO2007034817A1 (ja) * 2005-09-22 2007-03-29 Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. 新規アデニン化合物
CA2623764A1 (en) 2005-09-27 2007-04-05 Coley Pharmaceutical Gmbh Modulation of tlr-mediated immune responses using adaptor oligonucleotides
US20070100146A1 (en) 2005-11-03 2007-05-03 Trevor Dzwiniel Process for the preparation of imidazo[4,5-c]-quinolin-4-amines
CA2653941C (en) 2006-05-31 2013-01-08 The Regents Of The University Of California Substituted amino purine derivatives and uses thereof
AU2007269557B2 (en) 2006-07-07 2013-11-07 Gilead Sciences, Inc. Modulators of toll-like receptor 7
US7902187B2 (en) 2006-10-04 2011-03-08 Wyeth Llc 6-substituted 2-(benzimidazolyl)purine and purinone derivatives for immunosuppression
AR063142A1 (es) 2006-10-04 2008-12-30 Pharmacopeia Inc Derivados de 2-(bencimidazolil) purina y purinonas 6-sustituidas utiles como inmunosupresores,y composiciones farmaceuticas que los contienen.
SI2510946T1 (sl) 2007-02-07 2015-12-31 The Regents Of The University Of California Konjugati sintetičnih agonistov TLR in njihove uporabe
MX2009013832A (es) 2007-06-29 2010-03-10 Gilead Sciences Inc Derivados de purina y su uso como moduladores del receptor 7 similar a un puente.
CA2702644A1 (en) 2007-10-16 2009-04-23 Gilead Palo Alto, Inc. A3 adenosine receptor antagonists
EA201001264A1 (ru) 2008-02-07 2011-04-29 Дзе Регентс Оф Дзе Юниверсити Оф Калифорния Способ лечения заболеваний мочевого пузыря с помощью активатора tlr7
WO2010088924A1 (en) 2009-02-06 2010-08-12 Telormedix Sa Pharmaceutical compositions comprising imidazoquinolin(amines) and derivatives thereof suitable for local administration
MX2011008500A (es) 2009-02-11 2011-09-26 Univ California Moduladores del receptor tipo toll y tratamiento de enfermedades.
CN102666541B (zh) 2009-10-22 2015-11-25 吉里德科学公司 用于治疗特别是病毒感染的嘌呤或脱氮嘌呤的衍生物
AU2011247359A1 (en) 2010-04-30 2012-11-15 Telormedix Sa Methods for inducing an immune response
US20130202629A1 (en) 2010-04-30 2013-08-08 The Regents Of The University Of California Uses of phospholipid conjugates of synthetic tlr7 agonists
KR20130056249A (ko) 2010-04-30 2013-05-29 텔로메딕스 에스에이 인지질 약물 유사체
EA201390341A1 (ru) 2010-09-01 2013-08-30 Новартис Аг Адсорбция иммунопотенциаторов на нерастворимых солях металлов
US20120083473A1 (en) 2010-09-21 2012-04-05 Johanna Holldack Treatment of conditions by toll-like receptor modulators

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050004144A1 (en) * 2003-04-14 2005-01-06 Regents Of The University Of California Combined use of IMPDH inhibitors with toll-like receptor agonists
WO2005060966A1 (fr) * 2003-12-19 2005-07-07 Sanofi Pasteur Composition immunostimulante comprenant au moins un agoniste des recepteurs toll-like 7 ou du recepteur toll-like 8 et un agoniste du recepteur toll-like 4

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JIN ET AL.: "Synthesis and immunostimulatory activity of 8-substituted amino 9-benzyladenines as potent Toll-like receptor 7 agonists", BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS, PERGAMON, ELSEVIER SCIENCE, GB, vol. 16, no. 17, 1 September 2006 (2006-09-01), pages 4559-4563, XP005593685, ISSN: 0960-894X, the whole document *
WILLE-REECE ULRIKE ET AL.: "HIV Gag protein conjugated to a toll-like receptor 7/8 agonist improves the magnitude and quality of Th1 and CD8(+) T cell responses in nonhuman primates", PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA, vol. 102, no. 42, October 2005 (2005-10), pages 15190-15194, XP002500309, ISSN: 0027-8424 page 15190, right-hand column, paragraph 3 - page 15191, left-hand column, paragraph 1 - page 15191, right-hand column, paragraph 4 - page 15194, right-hand column, paragraph 1 *
WU CHRISTINA С.N. ET AL.: "Immunotherapeutic activity of a conjugate of a Toll-like receptor 7 ligand", PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA, vol. 104, no. 10, March 2007 (2007-03), pages 3990-3995, XP002500310, ISSN: 0027-8424, the whole document *
ZAKS KAREN ET AL.: "Efficient immunization and cross-priming by vaccine adjuvants containing TLR3 or TLR9 agonists complexed to cationic liposomes", JOURNAL OF IMMUNOLOGY, AMERICAN ASSOCIATION OF IMMUNOLOGISTS, US, vol. 176, no. 12, 15 June 2006 (2006-06-15), pages 7335-7345, XP002485614, ISSN: 0022-1767, page 7336, left-hand column, paragraph 3 - right-hand column, paragraph 3 - page 7341, right-hand column, paragraph 2 - paragraph 3 - page 7342, right-hand column, paragraph 2 - page 7344, right-hand column, paragraph 1 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2684644C1 (ru) * 2013-12-09 2019-04-11 Юсб Байофарма Спрл Производные пурина в качестве модуляторов активности tnf

Also Published As

Publication number Publication date
JP2013127004A (ja) 2013-06-27
IL200240A (en) 2014-04-30
ES2456964T3 (es) 2014-04-24
AU2008227128B2 (en) 2012-12-06
AU2008227128A1 (en) 2008-09-25
ZA200906094B (en) 2011-12-28
EP2125007B1 (en) 2014-01-08
PT2510946E (pt) 2015-11-23
US20140302120A1 (en) 2014-10-09
CN101790380A (zh) 2010-07-28
PL2510946T3 (pl) 2015-12-31
US20130156807A1 (en) 2013-06-20
HK1177886A1 (zh) 2013-08-30
JP5425642B2 (ja) 2014-02-26
WO2008115319A2 (en) 2008-09-25
CN101790380B (zh) 2013-07-10
US8790655B2 (en) 2014-07-29
EP2510946A1 (en) 2012-10-17
EP2510946B1 (en) 2015-08-05
EP2125007A2 (en) 2009-12-02
WO2008115319A3 (en) 2009-03-05
PL2125007T3 (pl) 2014-07-31
EP2125007B9 (en) 2014-04-16
CA2677733A1 (en) 2008-09-25
SI2510946T1 (sl) 2015-12-31
KR20090109121A (ko) 2009-10-19
BRPI0807196A2 (pt) 2014-06-03
DK2510946T3 (en) 2015-11-02
US20120148660A1 (en) 2012-06-14
EA200901078A1 (ru) 2010-06-30
ES2456964T9 (es) 2014-07-17
HK1138767A1 (en) 2010-09-03
HUE025555T2 (en) 2016-02-29
ES2552471T3 (es) 2015-11-30
US8357374B2 (en) 2013-01-22
IL200240A0 (en) 2010-04-29
US9050376B2 (en) 2015-06-09
JP2010518082A (ja) 2010-05-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA019151B1 (ru) Конъюгаты синтетических агонистов tlr и их применение
JP2014129425A (ja) Ｔｌｒ７活性化物質による膀胱の疾患の治療
US8846697B2 (en) Purine analogs
US20130202629A1 (en) Uses of phospholipid conjugates of synthetic tlr7 agonists
JP2013040209A (ja) Ｔｌｒアゴニスト
JP2012517428A (ja) Ｔｏｌｌ様レセプター調節因子および疾患の処置
TW201615694A (zh) 主鏈型聚胺類