JP5325109B2 - 竹抽出物とコガネバナ抽出物とを含有するアトピー性皮膚炎治療用組成物 - Google Patents
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Description
1−1.竹酒精抽出物の製造
乾燥された竹20kgに、25%のエタノール200Lを加え、混合物を80℃で6時間加熱することによって抽出した。抽出液をろ過し、抽出液の体積が約5Lになるまで濃縮してエタノールを除去した。その後、濃縮された抽出液を室温に冷却した。沈澱物を回収し、乾燥して竹抽出物390gを得た。
乾燥された竹20kgに、重量対比10倍の水を加え、混合物を100℃で4時間加熱することによって抽出した。抽出液をろ過し、減圧下で濃縮した。濃縮された抽出液にエタノール10Lを加え、70℃で2時間撹拌した後、室温に冷却した。沈澱物をろ過し、減圧下で濃縮して竹抽出物350gを得た。
コガネバナ1kgに水8Lを加え、80℃で2時間還流することによって抽出した。抽出物を冷却、ろ過、濃縮してコガネバナ抽出粉末330gを得た。
上記実施例1と実施例2でそれぞれ得られた竹抽出物とコガネバナ抽出物を、それぞれ1:1、1:2、1:3又は2:1、3:1の割合で混合して混合組成物を製造した。
実験例1
肥満細胞からそれぞれの実施例に対するヒスタミン及びロイコトリエン放出阻害活性の測定
肥満細胞からヒスタミン及びロイコトリエンの放出は、アレルギー反応の重要な原因中の一つである。竹抽出物とコガネバナ抽出物との混合組成物が肥満細胞からのヒスタミン及びロイコトリエンの放出を阻害する効果を測定した。
雌のテンジクネズミ(guinea pigs)(200g)8匹から肺組織(3g/1匹)を分離して脂肪組織、気管支及び血液を除去した。分離された肺組織をCa2+、Mg2+及び0.1%ゼラチンが含有されたタイロード(Tyrode)緩衝液(TGCMバッファー)を使用して、15、15、25分間3回酵素処理(5mg/mLのコラゲナーゼ、1.8unit/27μGのエラスターゼ)をした。各酵素処理された肺組織をナイロンメッシュとメタルメッシュ(100μm)でろ過した後、遠心分離した(‘単分散肥満細胞’という)。沈澱物をCa2+、Mg2+−欠乏、0.1%ゼラチンを含有する緩衝液(TGバッファー)16mLに懸濁し、粗パーコール(1.041mg/mL密度)にロードして25分間、1,400rpmで遠心分離して沈澱物を得た。沈殿物をTG緩衝液(8mL)で再懸濁し、不連続パーコール(1.06〜1.10mg/mL密度)にロードし、25分間1,400rpmで遠心分離して、様々な細胞層を分離した。その中からの第3層及び第4層に、主に肥満細胞が存在するので、上記二つの層をTGCM緩衝液で2回洗浄した。全体細胞及び肥満細胞は、それぞれトリパンブルー及びアルシアンブルーで染色した。細胞数を算出することによって肥満細胞の純粋度を測定して、約80〜90%の肥満細胞を得た。
肥満細胞(4105細胞)を37℃で、45分間テンジクネズミIgG1抗体(anti−OVA 1mL/106細胞)で処理し、TGCM緩衝液で洗浄して肥満細胞膜に結合されないanti−OVA抗体を除去した。肥満細胞をTGCM緩衝液(1mL)で懸濁し、それぞれの試料を30μgの濃度で前処理した。肥満細胞をオボアルブミン(1.0μg/mL)を用いて感作して、10分間反応させ、氷冷し、遠心分離して上清からヒスタミンを測定した。
それぞれの試料中のロイコトリエンの量は、Aharoneyなど(Biochem. Biophys. Res. Commun., p574-579, 1983)の方法を用いて測定した。即ち、ロイコトリエン抗体を0.1%ゼラチンが含まれている5mM MES緩衝溶液で懸濁し、それぞれの実験チューブに、30μgの濃度で試料が処理された細胞の上清を100μLずつ添加した。ロイコトリエン抗体と[3H]ロイコトリエンD4(LTD4)を上清に添加し、4℃で2時間反応させた。反応を、デキストランコーティング活性炭を利用して中断し、阻害活性は液体閃光分光計(liquid scintillation spectrometry)を使用して測定した。その結果、竹抽出物及びコガネバナ抽出物、それぞれは阻害活性を示したことが示され、また、竹抽出物とびコガネバナ抽出物との混合組成物は強力な阻害活性を示した。 抽出物単独の投与に比べて混合投与時の相乗效果を測定し、コルビー式(COLBY S. R., Calculating synergistic and antagonistic response of herbicide combinations, Weeds 15, 20-22, 1967)を利用して確認した(表2)。
臨床実験
アトピー性皮膚炎から苦しんでいる重症度患者20人を対象とし、実験例1から選択された竹抽出物とコガネバナ抽出物との混合組成物を使用して、4週間臨床試験を実施した。膝窩(popliteal fossa)と前肘窩(antecubital fossa)に本発明の組成物を塗布し、結果を観察した。
Claims (13)
- 竹抽出物とコガネバナ抽出物との混合組成物を活性成分として含むアトピー性皮膚炎治療又は予防用薬剤学的組成物であって、竹抽出物:コガネバナ抽出物の重量比が1〜3:1〜3である、組成物。
- ヒスタミン又はロイコトリエンの放出を阻害するための、請求項1に記載の組成物。
- アトピー性皮膚炎の治療又は予防が、紅斑(Erythema)、浮腫(Edema)、丘疹(Papulation)、滲出(Oozing)、痂皮(Crust)、表皮剥離(Excoriation)、苔蘚化(Lichenification)、又は乾燥(Dryness)の改善である、請求項1に記載の組成物。
- アトピー性皮膚炎の治療又は予防が、経皮湿り損失量の低減である、請求項1に記載の組成物。
- 上記竹抽出物は、50〜90%エタノール抽出物である請求項1〜4のいずれかに1項に記載のアトピー性皮膚炎治療又は予防用組成物。
- 上記竹抽出物は、熱水抽出物のエタノール溶解性画分物である請求項1〜4のいずれか1項に記載のアトピー性皮膚炎治療又は予防用組成物。
- 上記コガネバナ抽出物は、水、メタノール、エタノール又はこれらの混合物で抽出される請求項5に記載のアトピー性皮膚炎治療又は予防用組成物。
- 上記コガネバナ抽出物は、水、メタノール、エタノール又はこれらの混合物で抽出される請求項6に記載のアトピー性皮膚炎治療又は予防用組成物。
- 竹抽出物とコガネバナ抽出物との混合組成物を用いることによる、アトピー性皮膚炎の治療又は予防用薬剤を製造する方法であって、竹抽出物:コガネバナ抽出物の重量比が1〜3:1〜3である、方法。
- 上記竹抽出物は、50〜90%エタノール抽出物である請求項9に記載の方法。
- 上記竹抽出物は、熱水抽出物のエタノール溶解性画分物である請求項9に記載の方法。
- 上記コガネバナ抽出物は、水、メタノール、エタノール又はこれらの混合物で抽出される請求項10に記載の方法。
- 上記コガネバナ抽出物は、水、メタノール、エタノール又はこれらの混合物で抽出される請求項11に記載の方法。
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