CN105687826A - 一种竹叶提取物及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及医药学领域，特别是涉及一种竹叶提取物，它包含2～10wt％的竹叶总黄酮。本发明还公开了所述竹叶提取物的制备方法和用途。
Description
技术领域
本发明涉及医药保健品领域，特别是涉及一种植物提取物及其制备方法和用途。
背景技术
竹子在我国具有悠久的食用和药用历史，竹的医疗与保健作用早已为世人所知。据医书记载，竹叶具有凉心缓脾、清爽止渴、清热解毒之功能。
竹叶中含有大量的黄酮类化合物和生物活性多糖及其他有效成分，如酚酸类化合物、蒽醌类化合物、萜类内酯、特种氨基酸和活性肽、锰、锌、硒等物质。
目前常用的竹叶提取工艺有水煮提取、微波辅助提取、有机溶剂提取和大孔树脂纯化分离等，最终提取物主要为黄酮类。
发明内容
本发明的目的旨在提供一种竹叶提取物及其用途。
具体地说，本发明的第一方面是提供了一种竹叶提取物，所述竹叶提取物含有2～10wt％竹叶总黄酮。
在一优选例中，所述竹叶总黄酮的含量为5.8wt％。
在另一优选例中，所述竹叶提取物可由如下方法制得：
步骤一，将竹叶粉碎至20～100目，投入反应釜，加入竹叶粉重量2～4倍量的用乙醇与水按照2:1的体积比形成的混合溶液，浸泡4～12小时；
步骤二，在反应釜中加入竹叶粉重量2～4倍量的水，搅拌加热至反应釜内温度达到40～45℃，加入纤维素酶，所述纤维素酶的用量为每千克竹叶粉加入纤维素酶15～50万单位，以每分钟50～100转的转速搅拌，反应12～36小时，控制反应釜内温度在45～55℃之间；
步骤三，停止加热和搅拌，静置沉淀4～8小时，滤出浸出液M备用，保留固体残渣于反应釜中；
步骤四，在反应釜中加入与浸出液M等量的水，搅拌加热至反应釜内温度达到40～45℃，将相当于竹叶粉重量0.08～0.15倍量的糊精与水按照1:2的重量比混合，溶解，加入α淀粉酶，所述α淀粉酶的用量为每千克糊精加入α淀粉酶2万单位，搅拌均匀，将该混合物投入反应釜，以每分钟50～100转的转速搅拌，反应12～36小时，控制反应釜内温度在45～55℃之间；
步骤五，停止加热和搅拌，静置沉淀4～8小时，滤出浸出液N；
步骤六，将浸出液M和浸出液N混合，回收乙醇，浓缩，干燥。
本发明的第二方面是提供了一种制备上述竹叶提取物的方法，所述方法包括如下步骤：
步骤一，将竹叶粉碎至20～100目，投入反应釜，加入竹叶粉重量2～4倍量的用乙醇与水按照2:1的体积比形成的混合溶液，浸泡4～12小时；
步骤二，在反应釜中加入竹叶粉重量2～4倍量的水，搅拌加热至反应釜内温度达到40～45℃，加入纤维素酶，所述纤维素酶的用量为每千克竹叶粉加入纤维素酶15～50万单位，以每分钟50～100转的转速搅拌，反应12～36小时，控制反应釜内温度在45～55℃之间；
步骤三，停止加热和搅拌，静置沉淀4～8小时，滤出浸出液M备用，保留固体残渣于反应釜中；
步骤四，在反应釜中加入与浸出液M等量的水，搅拌加热至反应釜内温度达到40～45℃，将相当于竹叶粉重量0.08～0.15倍量的糊精与水按照1:2的重量比混合，溶解，加入α淀粉酶，所述α淀粉酶的用量为每千克糊精加入α淀粉酶2万单位，搅拌均匀，将该混合物投入反应釜，以每分钟50～100转的转速搅拌，反应12～36小时，控制反应釜内温度在45～55℃之间；
步骤五，停止加热和搅拌，静置沉淀4～8小时，滤出浸出液N；
步骤六，将浸出液M和浸出液N混合，回收乙醇，浓缩，干燥。
本发明的第三方面是提供了上述竹叶提取物在制备防治过敏性皮炎的药物或食品中的应用。
本发明还提供了上述竹叶提取物在制备防治肠脓毒血症的药物或食品中的应用。
本发明各个方面的细节将在随后的章节中得以详尽描述。通过下文以及权利要求的描述，本发明的特点、目的和优势将更为明显。
附图说明
图1本发明的竹叶提取物对小鼠过敏性皮炎的抑制率
图2本发明的竹叶提取物治疗小鼠肠脓毒血症的存活率
具体实施方式
本发明的问世部分是基于这样一个意外发现：用本发明的新工艺提取获得的竹叶提取物可以有效治疗小鼠过敏性皮炎和肠脓毒血症。因此，该植物提取物可有望开发成为一种预防或者治疗过敏性皮炎和肠脓毒血症的药物。
具体而言，本发明的竹叶提取物可通过本发明的如下新工艺从竹叶中提取获得：
步骤一，将竹叶粉碎至20～100目，投入反应釜，加入竹叶粉重量2～4倍量的用乙醇与水按照2:1的体积比形成的混合溶液，浸泡4～12小时；
步骤二，在反应釜中加入竹叶粉重量2～4倍量的水，搅拌加热至反应釜内温度达到40～45℃，加入纤维素酶，所述纤维素酶的用量为每千克竹叶粉加入纤维素酶15～50万单位，以每分钟50～100转的转速搅拌，反应12～36小时，控制反应釜内温度在45～55℃之间；
步骤三，停止加热和搅拌，静置沉淀4～8小时，滤出浸出液M备用，保留固体残渣于反应釜中；
步骤四，在反应釜中加入与浸出液M等量的水，搅拌加热至反应釜内温度达到40～45℃，将相当于竹叶粉重量0.08～0.15倍量的糊精与水按照1:2的重量比混合，溶解，加入α淀粉酶，所述α淀粉酶的用量为每千克糊精加入α淀粉酶2万单位，搅拌均匀，将该混合物投入反应釜，以每分钟50～100转的转速搅拌，反应12～36小时，控制反应釜内温度在45～55℃之间；
步骤五，停止加热和搅拌，静置沉淀4～8小时，滤出浸出液N；
步骤六，将浸出液M和浸出液N混合，回收乙醇，浓缩，干燥。
经检测证实，本发明的竹叶提取物中竹叶总黄酮的含量为2～10wt％，优选的含量为5.8wt％。
本发明的竹叶提取物可以单独使用或以药物组合物的形式使用。药物组合物包括作为活性成分的本发明的竹叶提取物及可药用载体。较佳地，本发明的药物组合物含有0.1-99.9％重量百分比的作为活性成分的本发明的竹叶提取物。“可药用载体”不会破坏本发明的竹叶提取物的药学活性，同时其有效用量，即能发挥药物载体作用时的用量对人体无毒。
所述可药用载体包括但不限于：软磷脂、硬脂酸铝、氧化铝、离子交换材料、自乳化药物传递系统、吐温或其他表面活化剂、血清蛋白、缓冲物质如磷酸盐、氨基乙酸、山梨酸、水、盐、电解质如硫酸盐精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、硅酸镁、饱和脂肪酸部分甘油酯混合物等。
其他常用的药物辅料如粘合剂(如微晶纤维素)、填充剂(如淀粉、葡萄糖、无水乳糖和乳糖珠粒)、崩解剂(如交联PVP、交联羧甲基淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、低取代羟丙基纤维素)、润滑剂(如硬脂酸镁)以及吸收促进剂、吸附载体、香味剂、甜味剂、赋形剂、稀释剂、润湿剂等。
本发明的竹叶提取物以及其药物组合物可按本领域常规方法制备并可以通过肠道或非肠道或局部途径给药。口服制剂包括胶囊剂、片剂、口服液、颗粒剂、丸剂、散剂、丹剂、膏剂等；非肠道给药制剂包括注射液等；局部给药制剂包括霜剂、贴剂、软膏剂、喷雾剂等。优选为口服制剂。
本发明的竹叶提取物以及其药物组合物的给药途径可以为口服、舌下、经皮、经肌肉或皮下、皮肤粘膜、静脉、尿道、阴道等。
除了制成药剂之外，亦可在本发明的竹叶提取物中加入抗氧化剂、色素、酶制剂等各种食品添加剂，按本领域的常规方法制成保健食品。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分数、比率、比例、或份数按重量计。
除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本专利说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。
实施例1制备竹叶提取物A
步骤一，将竹叶粉碎至40目，取120kg竹叶干粉投入反应釜，加入360kg稀释乙醇(醇:水＝2:1)，浸泡6小时；
步骤二，在反应釜中加入360kg水，搅拌加热至反应釜内温度达到45℃，加入纤维素酶6000万单位，以每分钟50转的转速搅拌，反应24小时，控制反应釜内温度在50℃；
步骤三，停止加热和搅拌，静置沉淀6小时，滤出浸出液M500kg备用，保留固体残渣于反应釜中；
步骤四，在反应釜中加入500kg水，搅拌加热至反应釜内温度达到45℃，将12kg糊精与24kg水混合，溶解，加入α淀粉酶24万单位，搅拌均匀，将该混合物投入反应釜，以每分钟50转的转速搅拌，反应24小时，控制反应釜内温度在50℃；
步骤五，停止加热和搅拌，静置沉淀6小时，滤出浸出液N450kg；
步骤六，将浸出液M和浸出液N混合，回收乙醇，浓缩，干燥得竹叶提取物18kg。
用分光光度法测定该竹叶提取物中总黄酮的含量：
称量13.2mg芦丁，用60％乙醇定容到25ml容量瓶作为标准溶液。
准确吸取0，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0ml芦丁标准溶液，放入10毫升容量瓶内(写明标记)，分别加入2.0、1.6、1.2、0.8、0.4、0ml的60％乙醇溶液；再加入5％亚硝酸钠溶液0.5ml摇匀，放置6min；加入10％硝酸铝溶液0.5ml，放置6min后；加入4％氢氧化钠溶液4.0ml，加60％乙醇定容，摇匀后，放置15min；(扫描找到最大吸收)在510nm处测定吸光度。用0.0ml作为空白，用芦丁含量的浓度作为横坐标，纵坐标作为一定浓度下所对应的吸光度，作标准曲线。
总黄酮提取与测定和计算
称取0.6～0.8g样品粉末，加入60ml60％乙醇放于100ml圆底烧瓶内，置于水浴锅上，70℃条件下回流提取60min。过滤、定容于100ml.
吸取样品量(根据样品的吸光度调整)1.0ml，放入10毫升容量瓶内(写明标记)，用60％乙醇加到2.0ml；加入5％亚硝酸钠溶液0.5ml摇匀，放置6min；加入10％硝酸铝，溶液0.5ml，放置6min后；加入4％氢氧化钠溶液4.0ml，摇匀后，加60％乙醇定容，放置15min；在510nm处测定吸光度。根据标准曲线计算总黄酮的含量。
总黄酮含量＝A/M*100×稀释倍数
A为标准曲线中的含量。
经检测，本发明的竹叶提取物含总黄酮1.05kg(5.8wt％)。
实施例2制备竹叶提取物B
步骤一，将竹叶粉碎至20目，取80kg竹叶干粉投入反应釜，加入320kg稀释乙醇(醇:水＝2:1)，浸泡4小时；
步骤二，在反应釜中加入320kg水，搅拌加热至反应釜内温度达到40℃，加入纤维素酶1200万单位，以每分钟80转的转速搅拌，反应12小时，控制反应釜内温度在45℃；
步骤三，停止加热和搅拌，静置沉淀4小时，滤出浸出液M450kg备用，保留固体残渣于反应釜中；
步骤四，在反应釜中加入450kg水，搅拌加热至反应釜内温度达到45℃，将6.4kg糊精与12.8kg水混合，溶解，加入α淀粉酶12.8万单位，搅拌均匀，将该混合物投入反应釜，以每分钟80转的转速搅拌，反应12小时，控制反应釜内温度在45℃；
步骤五，停止加热和搅拌，静置沉淀4小时，滤出浸出液N500kg；
步骤六，将浸出液M和浸出液N混合，回收乙醇，浓缩，干燥得竹叶提取物10.5kg。
经检测(方法同实施例1)，该竹叶提取物含总黄酮0.23kg(2.2wt％)。
实施例3制备竹叶提取物C
步骤一，将竹叶粉碎至100目，取100kg竹叶干粉投入反应釜，加入200kg稀释乙醇(醇:水＝2:1)，浸泡12小时；
步骤二，在反应釜中加入200kg水，搅拌加热至反应釜内温度达到40℃，加入纤维素酶3000万单位，以每分钟100转的转速搅拌，反应36小时，控制反应釜内温度在55℃；
步骤三，停止加热和搅拌，静置沉淀8小时，滤出浸出液M300kg备用，保留固体残渣于反应釜中；
步骤四，在反应釜中加入300kg水，搅拌加热至反应釜内温度达到45℃，将15kg糊精与30kg水混合，溶解，加入α淀粉酶30万单位，搅拌均匀，将该混合物投入反应釜，以每分钟100转的转速搅拌，反应36小时，控制反应釜内温度在55℃；
步骤五，停止加热和搅拌，静置沉淀8小时，滤出浸出液N350kg；
步骤六，将浸出液M和浸出液N混合，回收乙醇，浓缩，干燥得竹叶提取物12.5kg。
经检测(方法同实施例1)，该竹叶提取物含总黄酮1.2kg(9.6wt％)。
实施例4本发明的竹叶提取物抗过敏性皮炎试验
Ⅰ、动物准备
56只老鼠随机分成7组，每组8只，编号G1、G2、G3、G4、G5、G6和G7
Ⅱ、试验过程
将赛庚啶及本发明的竹叶提取物A、B和C(分别按实施例1、2和3制备)分别配成如下表1所列浓度，按同样的喂食量对5组小鼠分别喂食。小鼠麻醉后在左耳皮内注射(2μg/ml)AntiDNP(抗单克隆抗体)10μL，在右耳注入相同体积的生理盐水，24小时后，每只小鼠静脉注射白蛋白和伊文思蓝混合液0.25ml。
以95％二氧化碳将动物处死，收集每只小鼠的耳朵样本用于染料提取。每个耳朵经甲酰胺(1毫升)在65℃过夜提取，于8000rpm离心5min，在620nm处的吸光度测定伊文思蓝含量。
表1小鼠分组给药量
Ⅲ、实验结果
根据每组测得的伊文思蓝回收浓度平均值，计算出不同药物喂食后的抑制率如表2。
抑制率＝(模型组回收浓度-实验组回收浓度)/模型组回收浓度
表2实验结果
| 抑制率％ | 伊文思蓝回收浓度 | ||
| G1 | 模型组 | 0 | 8.3 |
| G2 | 赛庚啶(10mg/kg) | 63 | 3.05 |
| G3 | 竹叶提取物A(50mg/kg) | 50 | 4.14 |
| G4 | 竹叶提取物B(10mg/kg) | 53 | 3.85 |
| G5 | 竹叶提取物B(50mg/kg) | 59 | 3.35 |
| G6 | 竹叶提取物B(100mg/kg) | 62 | 3.13 |
| G7 | 竹叶提取物C(50mg/kg) | 61 | 3.31 |
Ⅳ、结论
研究结果显示：本发明的竹叶提取物分别以10mg/kg、50mg/kg、100mg/kg剂量喂食，对过敏性皮炎的抑制率均达到50％以上，具有明显的效果(图1)。
实施例5本发明的竹叶提取物抗小鼠肠脓毒血症试验
Ⅰ、试验准备
70只老鼠随机分成7组，每组10只，编号G1、G2、G3、G4、G5、G6和G7。
Ⅱ、试验过程
将小鼠麻醉后，在腹部中间开口手术，结扎盲肠后用21号针穿孔，挤出少量肠内容物于小鼠腹腔里，然后缝合伤口，制造肠脓毒血症模型。对五组小鼠分别使用空白对照、地塞米松、竹叶提取物喂食，喂食量见表3，观察小鼠生存状态。
表3小鼠分组给药量
Ⅲ、试验结果
造模后小鼠死亡数据统计如表4所示
表4不同用药组小鼠死亡统计表
Ⅳ、结论
研究证实：本发明的竹叶提取物在小鼠肠毒血症模型以10-100mg/kg剂量喂食，均有明显效果，尤其喂食量在50mg/kg以上时，造模后7天，一组小鼠10只死亡3只，存活7只，小鼠造模后7天的存活率达到70％，因此本发明的竹叶提取物对肠毒血症有治疗效果(图2)。
本发明所涉及的多个方面已做如上阐述。然而，应理解的是，在不偏离本发明精神之前提下，本领域专业人员可对其进行等同改变和修饰，所述改变和修饰同样落入本申请所附权利要求的覆盖范围。
Claims (6)
1.一种竹叶提取物，其特征在于，所述竹叶提取物含有2～10wt％竹叶总黄酮。
2.如权利要求1所述的竹叶提取物，其特征在于，所述竹叶总黄酮的含量为5.8wt％。
3.如权利要求1所述的竹叶提取物，其特征在于，所述竹叶提取物可由如下方法制得：
步骤一，将竹叶粉碎至20～100目，投入反应釜，加入竹叶粉重量2～4倍量的用乙醇与水按照2:1的体积比形成的混合溶液，浸泡4～12小时；
步骤二，在反应釜中加入竹叶粉重量2～4倍量的水，搅拌加热至反应釜内温度达到40～45℃，加入纤维素酶，所述纤维素酶的用量为每千克竹叶粉加入纤维素酶15～50万单位，以每分钟50～100转的转速搅拌，反应12～36小时，控制反应釜内温度在45～55℃之间；
步骤三，停止加热和搅拌，静置沉淀4～8小时，滤出浸出液M备用，保留固体残渣于反应釜中；
步骤四，在反应釜中加入与浸出液M等量的水，搅拌加热至反应釜内温度达到40～45℃，将相当于竹叶粉重量0.08～0.15倍量的糊精与水按照1:2的重量比混合，溶解，加入α淀粉酶，所述α淀粉酶的用量为每千克糊精加入α淀粉酶2万单位，搅拌均匀，将该混合物投入反应釜，以每分钟50～100转的转速搅拌，反应12～36小时，控制反应釜内温度在45～55℃之间；
步骤五，停止加热和搅拌，静置沉淀4～8小时，滤出浸出液N；
步骤六，将浸出液M和浸出液N混合，回收乙醇，浓缩，干燥。
4.一种制备如权利要求1所述的竹叶提取物的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
步骤一，将竹叶粉碎至20～100目，投入反应釜，加入竹叶粉重量2～4倍量的用乙醇与水按照2:1的体积比形成的混合溶液，浸泡4～12小时；
步骤二，在反应釜中加入竹叶粉重量2～4倍量的水，搅拌加热至反应釜内温度达到40～45℃，加入纤维素酶，所述纤维素酶的用量为每千克竹叶粉加入纤维素酶15～50万单位，以每分钟50～100转的转速搅拌，反应12～36小时，控制反应釜内温度在45～55℃之间；
步骤三，停止加热和搅拌，静置沉淀4～8小时，滤出浸出液M备用，保留固体残渣于反应釜中；
步骤四，在反应釜中加入与浸出液M等量的水，搅拌加热至反应釜内温度达到40～45℃，将相当于竹叶粉重量0.08～0.15倍量的糊精与水按照1:2的重量比混合，溶解，加入α淀粉酶，所述α淀粉酶的用量为每千克糊精加入α淀粉酶2万单位，搅拌均匀，将该混合物投入反应釜，以每分钟50～100转的转速搅拌，反应12～36小时，控制反应釜内温度在45～55℃之间；
步骤五，停止加热和搅拌，静置沉淀4～8小时，滤出浸出液N；
步骤六，将浸出液M和浸出液N混合，回收乙醇，浓缩，干燥。
5.如权利要求1所述的竹叶提取物在制备防治过敏性皮炎的药物或食品中的应用。
6.如权利要求1所述的竹叶提取物在制备防治肠脓毒血症的药物或食品中的应用。
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