KR100545304B1

KR100545304B1 - 아선약을 포함하는 운카리아 속 식물, 또는 이의 황금및/또는 녹차의 배합물을 포함하는 사이클로옥시게나제및/또는 5-리폭시게나제 억제용 조성물

Info

Publication number: KR100545304B1
Application number: KR1020040069609A
Authority: KR
Inventors: 우성식; 조태형; 김동선; 성선영; 도선길; 이영철; 김종한; 김태우; 성희선; 이지수; 황보현정
Original assignee: 주식회사 유니젠
Priority date: 2004-09-01
Filing date: 2004-09-01
Publication date: 2006-05-08
Also published as: CA2577355A1; CN101785803A; BRPI0514785A; WO2006025696A3; JP2008511617A; WO2006025696A2; AU2005278258B2; CN101035552A; AU2005278258A1; US20070264361A1; EP1796704A2

Abstract

본 발명은 Uncaria속 식물, 특히 아선약, 또는 그의 추출물을 포함하는 사이클로옥시게나제(cyclooxygenase: COX) 및/또는 5-리폭시게나제(5-lipoxygenase: 5-LO)에 의해 매개되는 생리학적 및 병리학적 이상 증상을 예방 또는 치료하기 위한 조성물, 및 상기 Uncaria속 식물 추출물과 황금 및/또는 녹차 추출물의 배합 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 조성물은 우수한 COX 및/또는 5-LO 억제 효과를 나타내며, 특히, 골관절염 또는 류마티스 관절염을 포함하는 다양한 COX 경로 및/또는 5-LO 경로에 의해 매개되는 질병 및 이상 증상의 예방 또는 치료에 사용할 수 있다.

아선약, 사이클로옥시게나제, 5-리폭시게나제

Description

아선약을 포함하는 운카리아 속 식물, 또는 이의 황금 및/또는 녹차의 배합물을 포함하는 사이클로옥시게나제 및/또는 5-리폭시게나제 억제용 조성물{Composition comprising Uncaria genus plant having Uncaria gambir, or scutellaria Radix and/or green tea extract mixture for suppressing cyclooxygenase or 5-lipoxygenase}

도 1a는 본 발명의 실시예 1, 2의 항염 활성을 나타낸 그래프이고,

도 1b는 본 발명의 실시예 5∼8의 항염 활성을 나타낸 그래프이며,

도 1c는 본 발명의 실시예 5 및 실시예 1, 3의 항염 활성을 나타낸 그래프이고,

도 1d는 본 발명의 실시예 6 및 실시예 1, 4의 항염 활성을 나타낸 그래프이며,

도 1e는 본 발명의 실시예 7의 항염 활성을 나타낸 그래프이고,

도 1f는 본 발명의 실시예 8 및 실시예 3, 4의 항염 활성을 나타낸 그래프이며,

도 2a는 본 발명의 실시예 5 투여후의 시간의 경과에 따른 생쥐 발 부종 변화를 나타낸 그래프이고,

도 2b는 본 발명의 실시예 5 투여후의 시간 경과에 따른 관절염 지수의 변화 를 나타낸 그래프이며,

도 3은 본 발명의 실시예 5 투여 후의 CIA 마우스 관절에서 연골 조직도를 나타낸 사진이고,

도 4a는 본 발명의 실시예 1∼4의 관절보호 효과를 나타낸 그래프이며,

도 4b는 본 발명의 실시예 5∼8의 관절보호 효과를 나타낸 그래프이다.

본 발명은 Uncaria속 식물 또는 그의 추출물을 포함하는 사이클로옥시게나제(COX) 및/또는 5-리폭시게나제(5-LO)에 의해 매개되는 생리학적 및 병리학적 이상 증상을 예방 또는 치료하기 위한 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 Uncaria속 식물 단독 및 이에 추가적으로 황금 및/또는 녹차 추출물을 첨가한 COX 및/또는 5-LO에 의해 매개되는 생리학적 및 병리학적 이상 증상을 예방 또는 치료하기 위한 조성물에 관한 것이다.

경제사회 발전에 따른 생활수준의 향상과 생활양식의 변화 그리고 평균수명의 증가는 노인인구의 증가에 따라 질병 양상에도 많은 변화를 가져왔고 사망원인도 전염병에서 만성질환으로 그 비중이 높아지고 있다. 이러한 만성질환은 의료비의 증가, 요구하는 의료수준의 증가, 만성질환을 감소시킬 수 있는 방안마련 등 사회경제적으로 많은 관심을 증가시키고 있다. 가장 대표적인 만성질환으로는 관절염, 인지능 저하, 피부염, 위염, 고혈압, 당뇨병, 치주염 등을 들 수 있다.

관절염(Arthritis)은 사람의 일상생활에 있어서 활동에 제약을 주는 가장 중요한 원인이며 특히 노인과 여성들에서 발생 빈도가 높다. 이러한 관절염은 크게 골관절염(퇴행성 관절염, Osteoarthritis)과 류마티스 관절염(Rheumatoid arthritis)으로 구분된다.

골관절염(Osteoarthritis, 퇴행성 관절염)은 신체 관절의 퇴화가 그 원인이며 뼈와 뼈의 접합 부분 관절(엉덩이, 무릎, 목, 허리, 손가락 발가락 마디 등) 연골이 마모되거나 손상되어 고통과 염증이 수반되는 질병을 말한다. 즉, 관절 연골은 파괴되고 또 생성되는데 생성되는 것 보다 파괴되는 연골이 더 많으면 충격을 흡수하는 관절 연골의 양이 줄거나 없어져 관절사이의 뼈와 뼈가 닿는 상태가 되어 극심한 고통이 따르게 된다. 이러한 관절연골의 손상을 골관절염(Osteoarthritis)의 시작이라고 할 수 있으며 치료받지 않을 경우 심한 고통을 받게 된다.

류마티스성 관절염(Rheumatoid arthritis)은 여러 관절에 다발성으로 나타나는 염증성 자가면역질환이다. 관절염에 걸린 환자의 경우, 관절의 활막(synovial membrane) 조직이 증생(hyperplasia)되며 동시에 대식세포(macrophage), 수상세포(dendritic cell) 및 활성화된 T 림프구와 B 림프구가 활막 조직으로 이동하고, 다형핵 세포(polymorphonuclear cell)는 활액(synovial fluid) 내와 연골(cartilage) 표면에 축적되어 염증을 유발하게 된다. 이같은 활막조직의 염증은 지금까지 그 실체가 밝혀지지 않은 자가항원에 T 림프구가 반응하여 유발되는 것으로 추정되고 있다. 이러한 반응에서 대부분의 조직에 침윤된 T 림프구는 세포 표면에 활성화 표지를 나타내지 않으며 사이토카인(cytokine)도 거의 발현하지 않는다. 그러나 류마티 스성 관절염 증상을 가진 활막조직과 활액에는 대식세포(macrophage)에서 유래된 사이토카인들이 다량 관찰되며, 대표적인 사이토카인으로 활막 섬유세포의 성장을 촉진하는 것으로 알려진 인터루킨-1(IL-1)과 종양괴사인자-α(TNF-α) 등이 있다. 이러한 실험 결과들은 T 림프구가 활막 조직의 염증을 유발하는데 매우 중요한 역할을 하며, 이후의 염증 증상은 활성화된 활막 세포들로부터 유래된 사이토카인(Cytokine)에 의해 유지된다는 가설을 뒷받침하고 있다. [Carson D.A. et al., J. Clin. Invest. , 87 , pp379-383, 1991 : Tighe H. et al., J. Exp. Med. , 177 , pp10-118, 1993 : Burmester G. R. et al., Arthritis Rheum, 40, pp5-18, 1997 : Panayi G. S., Curr. Opin. Rheumatol. , 9 , pp236-240, 1997]

관절염을 포함하여 일반적으로 통증을 완화하기 위해서 진통제나 소염제를 사용하고 있으며, 그 대표적인 약제로 COX 억제효과가 있는 비스테로이드성 항염증제(NSAIDs : Nonsteroidal Anti-Inflammatory Drugs)를 들 수 있다.[UK-1, R Braham, B Dawson, C Goodman, The effct of 글루코사민 supplementation on people experiencing regular knee pain, Br. J. Sports. Med. 2003; 37: 45-49]. 아스피린(Aspirin)과 같은 비스테로이드성 항염증제(NSAID : nonsteroidal anti-inflammatory drugs)는 가장 많이 판매되는 처방의약으로 항염, 해열 및 진통효과로 퇴행성관절염, 류마티스관절염, 두통치료를 위해 많이 사용된다. 그러나 이들 비스테로이드성 항염증제(NSAIDs)들을 관절염에 사용하는 경우, 증세를 약간 호전시키기는 하지만 관절부위의 연골 손실이나 질병의 진행을 막지는 못하며, 또한 위장관 장애와 같은 심각한 부작용을 나타내어 사용한 환자의 절반가량이 1년 이내에 복용을 중단하고 있다. 이 때문에, 새로운 개념의 치료제가 요구되어 왔고 COX-2(사이클로옥시게나제-2)의 선택적 억제제 또는 COX-2와 5-LOX(5-리폭시게나제)를 동시에 억제하는 치료제가 개발되었다.

염증 반응은 세포막으로부터 아라키돈산의 유리 및 대사 작용이 여러 가지 경로를 통해서 전-염증성(pro-inflammatory) 대사 산물을 생성함으로써 야기된다. 염증에 대한 두 가지 중요한 경로인 COX-2와 5-LOX는 아라키돈산(arachidonic acid; AA) 캐스캐이드에서 중요한 역할을 하는 효소이고, 이러한 경로들은 각각 염증성 반응의 개시와 진행에 중요한 역할을 하는 루코트리엔(leukotrienes)과 프로스타글란딘(prostaglandine)을 생성하는 경로들과 병행하여 일어난다. 사이클로옥시게나제(COX)는 세포막의 인지질이 아라키돈산로 변환된 후, 아라키돈산이 프로스타글란딘(prostaglandins, PGs)으로 변환되는 과정에서 촉매로 작용하는 효소이다. 이렇게 생성된 프로스타글란딘은 그 종류에 따라 평활근 수축을 자극하거나 동물에 따라서는 혈압을 낮추거나 또는 높이고, 혈액의 응집력을 감소 또는 증가시켜 준다. 또한 막에 대한 이온 수송을 촉진시키며, 염증을 자극하고 지방조직에서 지방분해를 방지하는 역할을 한다. 따라서, 이러한 염증 매개자 생성의 원인이 되는 효소가 류마티즘 관절염, 골관절염, 피부염, 인지능관련 질병 및 암 또는 퇴행성 질환의 발병의 원인이 되는 염증 치료를 목적으로 하는 많은 신약을 위한 표적이 되어 왔다.

사이클로옥시게나제(COX)는 COX-1과 COX-2의 두 가지가 알려져 있다. COX-1은 대부분의 조직에서 지속적으로 발현되고, "하우스 키핑(house keeping)" 역할을 한다. 즉, 위 점막에 존재하는 PG(Prostaglandin)의 생성이나 신장 기능을 유지하기 위한 혈관을 확장시키는 PG(Prostaglandin)의 생성 및 혈소판 트롬복산의 생성 등에 관여한다.

COX-2는 대부분의 정상 조직에서는 발현되지 않고 질병이나 생리적인 조건하에서 먼저 발현된 성장인자들에 의해서 유도된다. 특히 조염증(pro-inflammation)을 일으키는 사이토카인에 의해 광범위하게 유도되는 것으로 알려져 있다.

현재까지 염증치료에 사용된 비스테로이드성 항염증제제(NSAIDs)는 정상 조직에서 지속적으로 발현되는 COX-1까지도 저해하기 때문에 위 점막의 부식 및 궤양 등의 부작용이 나타났고, 최근에 이를 개선한 새로운 약물로 COX-2 선택적 억제제가 개발되었다. COX-2 선택적 억제제로 현재 임상에서 항염증제제 및 항암제로 이용 중인 대표적인 약물 중 하나가 셀레콕시브(CeleCOXib)이며, 골관절염 및 류마티스 관절염의 치료, 가족성 선종 폴립증(FAP : familial adenomatous polyposis)을 지닌 환자의 결장에 존재하는 폴립수를 줄이는 효과를 나타낸다.

염증반응에서 아라키돈산이 화학전달물질로 대사되는 과정에 관여하는 또 다른 효소는 리폭시게나제(lipoxygenase)이다. 리폭시게나제는 5- 12- 및 15-리폭시게나제의 3종류가 있으며 이들 중 5-리폭시게나제는 아라키돈산을 5-HPETE를 경유하여 류코트리엔(leukotriene) A₄, B₄, C₄, D₄, E₄(LTA₄, LTB₄, LTC₄, LTD₄, LTE₄) 등으로 합성하는 과정에 관여한다. Samuelsson 등에 의하면 이들 LTs(Leukotrienes) 중에서 LTB4는 염증반응 제 2기에 활동하는 백혈구 중, 주로 다형핵 백혈구 (polymophonuclear leukocyte, PMNL)에서 생합성되어 백혈구응집, 침윤, 주화성 및 라이소솜 효소의 유리 등의 작용을 나타내는 물질로 알려져 있다. 그 후 여러 학자들이 5-리폭시게나제의 활성에 관여하는 인자에 관한 연구와 그 활성을 억제하는 약물 개발에 관한 연구를 수행하였으나 결과는 미진하며, 현재까지 ETYA와 BW_755C등이 일부 약물로 개발되었다.[민경락, 신종만, 장윤숙, 김영수, 5-리폭시게나제의 활성과 류코트리엔 B4 생합성 억제물질, 약학회지 제 33권 제6호 319-323(1989)].

COX억제제의 반응 기작이 대부분의 통상적인 NSAIDs의 반응 기작과 일치하기 때문에, COX억제제는 염증이 중대한 역할을 하는 일시적 이상 증상과 만성질병에서 염증으로 인한 통증 및 부종(swelling)과 같은 많은 증상들을 치료하는데 사용된다. 일시적 이상 증상은 경미한 찰과상, 일광화상, 접촉성 피부염을 일으키는 염증성 치료 또는 두통, 생리통 등을 말한다. 만성질병은 인지능 저하, 류마티즘성 관절염, 골관절염 등을 말한다.

COX억제제는 전신 낭창 적백혈병(Systemic lupus erythromatosus, SLE., Goebel et al., Chem. Res. Tox., 12:488-500, 1999., Patrono et al., J. Clin. Invest., 76:1011-1018, 1985.)과 같은 질병뿐만 아니라, 피부경화증과 같은 피부 이상에까지 사용된다. 또한, COX억제제는 건선과 같은 류마티즘성이 아닌 염증성 피부 이상의 완화를 위해서도 사용되는데, 이는 프로스타글란딘의 과잉 생산으로 인한 염증을 감소시킴으로서 직접적인 효능을 발휘하는 것이다(Fogh et al., Acta Derm Venerologica, 73:191-193, 1993.)

COX억제제는 항염증성 약제로서의 용도 이외에도 암의 치료라는 잠재적 역할을 가진다. COX의 과잉 발현은 다양한 인간의 악성 종양에서 입증되었으며, COX억제제가 피부암, 유방암 및 방광암에 걸린 동물의 치료에 효과적임을 보인다. 그러한 반응기작은 완전히 이해되지는 않지만, COX의 과잉 발현이 세포 자살을 억제하고, 발암 세포형의 침입을 증가시킴을 보여왔다(Dempke et al., J. Can. Res. Clin. Oncol., 127:411-417, 2001., Moore and Simmons, Current Med. Chem., 7:1131-44, 2000.)

또한, 최근의 과학적 진보로 COX의 발현, 일반적인 염증 및 알츠하이머병의 발병학 사이의 상호관계가 확인되었다(Ho et al., Arch. Neurol., 58:487-92, 2001.). 동물 모델에서 COX효소를 과잉 발현하는 유전형질전환 쥐가 훨씬 손상되기 쉬운 뉴런을 갖는다. NIA(National Institute on Aging)는 NSAID가 알츠하이머병의 진행을 늦출 수 있는 지를 측정하기 위한 임상시험을 착수하였으며, 염증 작용시 발생하는COX를 억제함으로서 인지능 향상에 도움을 준다는 보고가 많이 되고 있다(Cernak I., Exp Brain Res., 147(2):193-9, 2002., Casolini P., J Neurosci Res., 68(3):337-43, 2002., Andreasson KI., J Neurosci., 21(20):8198-209, 2001.,). 또한, COX억제제들이 정신이상에 효과가 있음이 확인 되었다(Muller N., Expert Opin Investig Drugs, 13(8):1033-44, 2004.).

그리고, COX-2 및 5-LO를 모두 억제하는 저해제들은 쥐 모델의 노화한 심장에서 동맥 혈관 수축을 억제한다는 보고도 있다(Gok et al., Pharmacology, 60:41- 46, 2000).

아선약(Uncaria gambir, 아차, 아전약, 감비르)은 꼭두서니과에 속하는 식물로 동인도에서 널리 자생하며 말레이시아, 중국, 인도, 스마트라, 브루네이에서는 재배한다. 또한 감겨자라는 떨기나무로 닭알 모양잎이 마주 붙어 있고, 잎겨드랑이에 머리 모양 꽃차례를 이룬 흰꽃이 핀다. 꽃이 지면 꽃대는 갈구리처럼 구부러져 다른 식물에 감긴다. 아선약의 씨를 심어서 1년이 지났을 때 잎이 붙은 가지의 끝부분을 잘라서 채취하는 것이 물엑스로 4-8달에 한번씩 채취할 수 있다. 이 물엑스는 여섯 해 자란나무에서 가장 많이 채취할 수 있으며 15년 정도 자라면 밭을 갈아엎고 포기가름한다. 물엑스의 성분은 d- 및 dl-카테킨(카테콜), 탄닌질, 쿠에르쩨틴, 알칼로이드인 감비린으로 이루어졌다.

아선약 추출물은 약용으로 사용하며, 밤색물감이나 가죽 이김약으로도 많이 이용되며 특히, 빈랑자를 늘 먹는 동남아시아의 일부 민족들은 아선약을 물로 개서 빈랑자에 발라 먹는다. 물엑스는 수렴약으로 인단과 같이 씹는 약품을 만드는데 널리 쓰인다. 동의 치료의 기록에 의하면 수렴약이나 피 멎는약으로 상처, 입안이 헌데, 혈변, 피오줌, 토혈, 붕루대하, 기타 피부질병에 쓰였다.[한국식품의약품안전청] 또한, 동의보감에서는 생보명단(回生保命丹) 양매창, 천포창, 완창과 경분독으로 힘줄과 뼈가 부으면서 아픈 것을 치료하는데 사용하였으며 갓 생긴 것이나 오래된 것 모두를 낫게 한다고 기록되어 있다.

황금(Scutellariae Radix)은 순형과(Labiatae)에 속하는 다년생 초본인 Scutellaria baicalensis의 뿌리를 말한다. 이 식물은 다년생이고 2년생 이후부터 아주 진한 자주색의 순형화를 7월부터 9월 사이에 개화한다. 줄기는 곧게 선다고 하나 밀생하고 비옥한 토지에서는 비스듬이 올라가거나 심하면 눕기도 한다. 초고는 40~60cm 내외이고 잎은 대생하며 잎 자루는 없고 피침형(被針形)이며 톱니는 없거나 모연(毛緣)이다. 꽃은 총상화서로서 가지 끝에 모여피고 꽃모양은 순형이고 개구하고 있다. 과실은 개화 후에 결실하는데 수과(瘦果)이며 다소 둥근 모양을 한다. 뿌리는 식재 후 3~4년이 경과된 것을 가을이나 봄에 수집하여 주피를 제거하고 양건하여 약용하는데, 이때 색은 황색이다. 이 생약은 보통 목부(木部)가 부피하고 유조직도 부구해서 대부분의 경우 속이 빈 상태로 반원통상(半圓筒狀)하고 있어, 속썩은 풀이라는 속칭을 붙인적도 있다. 그러나 신선한 뿌리로 속이 충실한 것을 일본등지에서는 자금(子芩)이라 하고, 속이 비어 있는 것은 숙금(宿芩), 파쇠된 것은 편금(片金) 등의 이름으로 불리며 이외에 우리나라에서는 고금(枯芩), 원금(元芩), 경금(經芩), 공장(空腸) 등의 이름으로 불렸다.

중국의 의약 식물인 황금(Scutellaria baicalensis)은 바이칼레인(baicalein), 바이칼린(baicalin), 우고닌(wogonin) 및 바이칼레노사이드(baicalenoside)를 포함한 프리-비-링 플라보노이드를 상당량 함유한다. 전통적으로 황금은 해열(clearing away), 발열제거(purging fire), 댐프니스-웜(dampness-warm), 서머 피버 신드롬(summer fever syndromes), 고열로 인한 조갈증(polydipsia), 등창(carbuncle), 성홍열(scarlet fever), 이질(dysentery), 조혈제(hematemesis) 및 비출혈(코피, epistaxis)을 포함하는 이상 증상들을 치료하는 데 사용되었다. 또한, 유산을 예방하는 데도 사용되었다. 스쿠테랄리아는 현재 임상 적으로 소아기 박테리아성 설사(pediatric bacterial diarrhea), 고혈압(hypertension), 기관지의 천식(bronchial asthma) 및 상부 호흡기 감염(upper respiratory infections)과 같은 이상 증상들을 치료하는 데 사용된다. 기관지 천식을 치료하기 위한 스큐테랄리아 뿌리의 약리학적 효능은 프리-비-링 플라보노이드의 존재 및 호산구 점증과 관련 있는 에오탁신(eotaxin)의 억제와 연관이 있다고 보고 되었다.(Nakajima et al.(2001) Planta Med. 67(2) : 132-135).

녹차(Camellia sinensis)는 최근 건강식품으로 주목을 받고 있는 물질로 다양한 유용 성분을 포함하고 있으며, 그 중 항산화 효과가 큰 카테킨 화합물에 대한 많은 연구가 진행되고 있다. 녹차에 포함된 카테킨 화합물에는 에피갈로카테킨(epigallocatechin; EGC)과 에피카테킨(epicatechin; EC), 에피갈로카테킨 갈레이트(epigallocatechin gallate; EGCG), 에피카테킨 갈레이트(epicatechin gallate; ECG) 등이 있다. 상기 카테킨 화합물은 우수한 항산화 효과 외에 항암 효과, 면역체계강화, 피부암 예방, 항혈전 효과, 심장병 예방 및 콜레스테롤 예방 등의 효과를 갖는다. 따라서 녹차에 포함된 카테킨 화합물은 음료와 제약 분야에서 계속적인 연구가 수행되고 있다. 이러한 연구가 가장 활발하게 진행되고 있는 곳은 중국으로 이미 녹차에 관한 많은 제품들이 상품화되고 있으며 시밍산 천연 생물학적 생산품(주), 중국 티안바오 생화학 공장(Simingshan natural biological product Co., Ltd, China tianbao biochemical plant)과 헬스랜드 공급(주)(HealthLand Supplies Ltd.) 등의 회사들이 녹차 추출물 제품의 판매 및 연구를 수행하고 있다. 일본에서도 카테킨 화합물에 대한 연구 결과 大同藥品工業株式會社의 'β-카테킨' 과 三井農林株式會社와 三明株式會社의 '카테킨 화합물 분말'의 상업화가 이루어졌으며 보다 높은 수율 및 경제성 있는 공정 개발을 위해서 계속적인 연구와 투자를 아끼지 않고 있다.

녹차의 또 다른 유효성분인 폴리페놀 플라본(polyphenol flavones)은 COX-2, NFκB(Nuclear Factor kappaB), bcl-X(L) 유전자에 대한 mRNA 일정량에 의하여 암화 된 대장암(colonocytes)의 성장을 억제 한다. 프리-비-링(free-B-ring) 플라보논(flavones)과 프리-비-링 플라보놀(flavonols)은 하기에 도식된 기본 구조식에서 알 수 있는 바와 같이, 방향족들 중에서 비-링 구조에 치환체가 존재하지 않는 플라보노이드의 특정 계열의 화합물이다[공개특허 공개특허 10-2004-0025884].

상기와 같이, 아선약을 포함하는 Uncaria속 식물이 항염증성 약제로 사용될 수 있다는 보고는 없으며, 특히 아선약과 황금 및/또는 녹차의 배합물이 항염증성 약제, 특히 골관절염 또는 류마티스 관절염을 포함한 사이클로옥시게나제(COX) 경로 및/또는 5-리폭시게나제(5-LO) 경로에 의해 매개되는 질병 및 이상 증상의 예방 또는 치료를 위해 사용될 수 있다는 것은 알려져 있지 않다.

본 발명자들은 구미 선진국에서의 개발 전략과 차별화하여 천연물에서 새로운 COX 및/또는 5-LO 억제제를 개발하고자 천연물을 대상으로 연구를 반복하여 수 행하였고, 그 결과 아선약(Uncaria gambir)을 포함하는 Uncaria속 식물이 COX 및/또는 5-LO 억제 효과가 있음을 놀랍게도 확인하였다. 또한 상기 추출물과 상승효과를 나타낼 수 있는 생약을 탐지하기 위해 추가적으로 in vitro 실험(COX-1과 2, 5-LO)과 in vivo 실험(Swelling, CIA(Collagenase Induced Arthritis) model)을 이용한 실험 및 관절보호효능을 확인하기 위한 GAG 분석을 실시하였고, 그 결과 황금(Scutellaria baicalensis) 및/또는 녹차(Camellia sinensis) 추출물을 배합한 혼합물의 경우에 COX 및/또는 5-LO 억제 활성이 월등히 향상되는 상승 효과를 나타냄을 추가적으로 확인하고, 그 상승 효과의 측정은 콜비식(COLBY S. R., Calculating synergistic and antagonistic response of herbicide combinations, Weeds 15, 20-22, 1967)을 이용하여 확인하여 본 발명을 완성하기에 이르렀다.

따라서, 본 발명의 목적은 COX 및/또는 5-LO 억제 효과를 나타내는 새로운 식물 추출물, 즉 Uncaria속 식물, 또는 추가적으로 황금 및/또는 녹차 추출물을 포함하는 COX 및/또는 5-LO에 의해 매개되는 생리학적 및 병리학적 이상 증상을 예방 또는 치료하기 위한 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 운카리아(Uncaria)속 식물 또는 그의 추출물을 포함하는 COX 및/또는 5-LO에 의해 매개되는 생리학적 및 병리학적 이상 증상을 예방 또는 치료하기 위한 조성물을 제공한다.

상기 Uncaria속 식물은 바람직하게는 Uncaria gambir, U. attenuata Korth., U. borneensis Havil., U. callophylla Korth., U. elliptica R. Br., U. guianensis (Aubl.) Gmel., U. homomalla Miq., U. lanosa var. glabrata (Bl.) Ridsd., U. macrophylla Wall., U. rhynchophylla Miq., U. sinensis (Oliv.) Havil., U. tomentosa (Willd.) DC., U. yunnanensis Hsia K.C., U. hirsuta Havil. 및 U. lanosa var. appendiculata f. setiloba (Benth.)Ridsd.로 이루어진 군(plant species)으로 선택된 하나 이상의 식물 종을 사용할 수 있으며, 특히 바람직하게는 아선약(Uncaria gambir)을 사용할 수 있다.

또한 본 발명은 상기 Uncaria속 식물에 추가적으로 황금 및/또는 녹차 추출물을 포함하는 COX 및/또는 5-LO 억제용 조성물을 제공한다.

본 발명의 조성물에 있어, Uncaria속 식물 및 황금(Scutellaria baicalensis) 및 녹차(Camellia sinensis)는 상업적으로 구입할 수 있는 통상의 생약 원물을 사용할 수 있고, 이들 생약의 전초, 가지, 껍질, 잎, 순, 뿌리, 내피 등을 사용할 수 있고, 바람직하게 이를 분말화하거나, 추출물을 제조하여 사용할 수 있다.

본 발명의 Uncaria속 식물, 황금 및 녹차 추출물은 물 또는 유기용매, 또는 이들의 혼합용매로서 추출한 것을 사용할 수 있다. 상기 유기용매는 통상 사용할 수 있는 모든 용매가 가능하며, 바람직하게는 물, C_1-4알콜 등의 극성용매 또는 n-헥산, 디클로로메탄 등의 비극성 용매, 또는 이들의 혼합용매를 사용할 수 있다.

본 발명의 비극성 용매 추출물은 n-헥산, 디클로로메탄, 클로로포름 또는 에 틸아세테이트로부터 선택된 비극성 용매, 바람직하게는 n-헥산, 디클로로메탄, 에틸아세테이트로 추출한 것을 포함한다. 또한 본 발명의 극성용매 추출물은 아세톤, 물, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 등의 C_1-4알콜, 이소프로필알콜(Isopropylalcohol)로부터 선택된 극성용매로부터 추출한 것을 포함한다.

상기 추출은 열탕추출, 소니케이션 등 통상의 방법으로 수행할 수 있으며, 이 추출물의 동결건조물을 형성하여 본 발명의 조성물에 사용할 수도 있다.

또한 상기 추출물은 통상의 분획법 또는 크로마토그라피에 의해 보다 정제하여 사용할 수 있으며, 이러한 분획물 또는 정제물이 본 발명의 범위에 속함은 물론이다.

본 발명의 조성물은 우수한 COX 및/또는 5-LO 억제 효과를 나타내며, 천연생약을 사용함으로써 부작용 없이 특히 골관절염 또는 류마티스 관절염 등을 포함하는 댜앙한 사이클로옥시게나제(COX) 경로 및/또는 5-리폭시게나제(5-LO) 경로에 의해 매개되는 질병 및 이상 증상의 예방 또는 치료와 예방 또는 치료에 사용할 수 있다.

본 명세서에서 COX 및/또는 5-LO 경로에 의해 매개되는 생리학적 및 병리학적 이상 증상이라 함은 예컨대, 염증질환, 월경통, 동맥경화증, 심장마비, 비만, 당뇨병, X 증후군, 인지능저하, 알츠하이머 질환, 호흡기 알레르기 반응, 만성정맥부전, 치질, 전신성 홍반성 루푸스, 건선, 만성 긴장 두통, 편두통, 염증성 장 질환, 바이러스, 박테리아 및 균에 의한 국부적 전염병, 일광화상, 화상, 접촉성 피 부염, 치주염, 흑색종 및 암종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 질환 및 이상 증상을 포함한다.

본 발명의 조성물에 있어, Uncaria속 식물, 특히 아선약을 단독으로 사용할 수 있으나, 상기 Uncaria속 식물 또는 그의 추출물에 황금, 녹차, 또는 황금 및 녹차 추출물을 추가적으로 혼합하여 사용할 경우 상승 효과를 나타내어 특히 바람직하다.또한 황금, 녹차 추출물의 배합물도 COX 및/또는 5-LO 억제에 대한 상승효과를 나타내어 바람직하다.

특히 하기 실험 예에서 알 수 있는 바와 같이, 황금 추출물 단독으로는 COX 및/또는 5-LO 억제 효과를 거의 기대할 수 없었으나, 놀랍게도 Uncaria속, 특히 아선약 추출물과 이들에 황금 및/또는 녹차 추출물을 혼합하여 병용 투여할 경우, 또한 황금 및 녹차 배합물에서 효과의 상승을 나타내었다.

본 발명의 조성물에 있어서, 추출물 단독 처리시와 비교시 혼합물에 의한 상승 효과의 측정은 콜비식(COLBY S. R., Calculating synergistic and antagonistic response of herbicide combinations, Weeds 15, 20-22, 1967)을 이용하여 확인하였다.

상기와 같이 Uncaria속, 특히 아선약, 황금 및/또는 녹차 추출물을 병용하여 사용할 경우, 이들의 혼합비는 예컨대, 아선약, 황금 및 녹차 추출물을 0.1~10: 0.1~10: 0.1~10, 바람직하게는 1~10: 1~10: 1~10, 더욱 바람직하게는 1~7: 1~7: 1~7의 중량비로 혼합할 수 있다. 또한 황금 및 녹차 배합물의 경우는, 0.1~10: 0.1~10, 바람직하게는 1~10: 1~10, 더욱 바람직하게는 1~7: 1~7의 중량비로 혼합할 수 있다.

본 발명의 조성물은 약제학적 분야에서 공지의 방법의 의해 제제화할 수 있고, 추출물 자체 또는 약제학적으로 허용되는 담체, 부형제 등과 혼합하여 통상의 약학적 제제, 예를 들면 드링크제와 같은 액제, 시럽제, 캡슐제, 과립제, 정제, 분말, 환, 연고, 에멀젼, 겔 등과 같은 피부외용제 등으로 제제화할 수 있으며, 이들은 경구 또는 비경구로 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물은 빠른 효과를 위해서 캡슐제, 정제 드링크제로써 식전 및/또는 후에 경구 투여하는 것이 바람직하다.

상기 본 발명의 조성물을 포함하는 캡슐제, 정제, 분말, 과립제, 액제, 환, 등은 의약품 또는 건강기능식품으로 사용하는 것이 바람직하며, 본 발명에서 사용된, 상기 "건강기능식품"이라 함은 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상, 환 등의 형태로 제조 가공한 식품을 말한다.

본 발명의 조성물은 체내에서 활성성분의 흡수도, 배설속도, 환자의 연령 및 체중, 성별 및 상태, 치료할 질병의 중증정도 등에 따라 적절히 선택되나, 일반적으로 성인에게 1일 0.01∼500 mg/kg, 바람직하게는 0.1∼200 mg/kg으로 1일 1 내지 3회 투여하는 것이 바람직하다.

이하, 본 발명을 하기 실시예에 의하여 보다 구체적으로 설명하지만, 이들에 의해 본 발명의 범위가 어떤 식으로든 제한되는 것은 아니다.

실시예. 아선약, 황금 및 녹차 추출물 및 이들의 혼합물 제조

1) 추출물 제조

(1) 실시예 1 : 아선약 열수추출물의 제조

아선약 어린잎(50g)을 증기를 이용하여 쪘다. 그리고 정제수를 첨가하여 추출하고 잎으로부터 즙을 짜고, 회수된 즙액을 천천히 냉각시키면서 재결정화하여 아선약추출분말 7.87g(수율: 15.74%)을 얻었다.

(2) 실시예 2 : 아선약 에탄올추출물의 제조

아선약 어린잎(50g)을 증기를 이용하여 쪘다. 그리고 정제수를 첨가하여 추출하고 잎으로부터 즙을 짜고, 회수된 즙액을 천천히 냉각시키면서 재결정화하여 아선약추출분말 7.65g(수율: 15.3%)을 얻었다.

(3) 실시예 3 : 황금추출물의 제조

황금(50g)을 1 L 둥근바닥플라스크에 넣고 정제수(350ml)을 첨가하고, 80℃에서 2시간동안 환류추출하였다. 추출물을 냉각, 여과, 농축하여 황금추출분말 16.5g(수율 :32.95%)을 얻었다.

(4) 실시예 4 : 녹차추출물의 제조

녹차(50g)을 1 L 둥근바닥플라스크에 넣고 수용성 에탄올(500ml)을 가하고 85℃에서 3시간동안 환류추출 하였다. 추출물을 냉각, 여과, 농축하여 녹차추출분말 13.5g(수율 : 27%)을 얻었다.

(5) 실시예 9 : 다른 Uncaria속 식물의 추출

조구등(Uncaria sinensis(Olv.) Havil.) 50g을 1L 둥근바닥플라스크에 넣고 정제수 (500ml)를 첨가하고 5시간동안 환류추출하였다. 추출물을 냉각, 여과, 농축 하여 7 g( 수율: 14%)을 얻었다.

2) 혼합물 제조

(1) 실시예 5 : 아선약, 황금 혼합물 제조

원물	원료 투입량(g)	투입비율(%)
실시예 1	2.6	10.20
실시예 3	18.4	72.16
말토덱스트린	4.5	17.65
합계	25.5	100.0

(2) 실시예 6 : 아선약, 녹차 혼합물 제조

원물	원료 투입량(g)	투입비율(%)
실시예 1	2.60	10.20
실시예 4	15.30	60.0
말토덱스트린	7.60	29.8
합계	25.50	100.00

(3) 실시예 7 : 아선약, 황금, 녹차 혼합물 제조

원물	원료 투입량(g)	투입비율(%)
실시예 1	2.60	10.20
실시예 3	18.40	72.16
실시예 4	2.60	10.20
말토덱스트린	1.90	7.45
합계	25.50	100

(4) 실시예 8 : 황금, 녹차 혼합물 제조

원물	원료 투입량(g)	투입비율(%)
실시예 3	18.4	72.16
실시예 4	2.6	10.20
말토덱스트린	4.5	17.65
합계	25.5	100.0

실험예. COX 및/또는 5-LO 저해활성 및 항염활성 실험

1) COX 및/또는 5-LO 저해활성 실험

(1) COX 저해활성 실험

① 실험 재료 :

- 재료 : COX 분석 kit(Cayman, Cat# 760111), Indomethacin(Cayman, Cat#70270), AA-861(Biomol, Cat#EI-216), H₂O₂(Aldrich, Cat#216763)

- 시료 : 실시예 1∼실시예 8

- 농도 : 10, 50, 500, 1000μg/ml

② 실험 방법 : Background Wells은 분석 Buffer(160 ㎕)를 넣고 heme(10 ㎕)을 넣었다. 그리고 100% Initial Activity Wells은 분석 Buffer(150 ㎕), heme(10 ㎕), Enzyme(COX-1 or COX-2, 10 ㎕) 넣었다. 저해제 Wells은 분석 Buffer(150 ㎕), heme(10 ㎕), Enzyme(COX-1 or COX-2, 10 ㎕)을 넣었다. 저해제 wells에 DMSO에 녹여진 시료(10 ㎕)를 넣는다. 100% Initial Activity wells과 Background Wells에는 시료 대신 시료 녹인 용매(DMSO) 넣었다. 천천히 shaking 한 후 25℃에서 5분간 반응시켰다. 모든 well에 20 ㎕ colorimetric substrate를 넣었다. 그리고 모든 well에 20 ㎕ 아라키돈산을 넣었다(Final Conc. 100μM). 천천히 흔들어준 후 25℃에서 5분간 반응시켰다. 반응을 종료하고 590 nm(590~611nm)에서 흡광도를 측정하고, 대조군에 대한 실험군의 상대적 활성을 계산식에 의해 %로 계산하였다.

- 계산식 :

% of Inhibition ={(100%-inhibition)/(100%-blank)} × 100

③ 실험 결과 : 단일추출물 및 혼합물의 COX-1, 2에 대한 50% 저해활성(단위 : μg/ml)

	COX-1	COX-2
실시예 1	<10	25
실시예 2	13	22
실시예 3	>1000	730
실시예 5	260	260
실시예 6	15	26
실시예 7	150	175
실시예 8	200	220

④ 결론 : 단일 추출물의 COX 저해활성 실험에서 실시예 1 = 실시예 2 ≫ 실시예 3의 순으로 아선약추출물의 COX 저해활성이 우수함을 알 수 있다. 그리고 이들 단일추출물을 적정비율로 혼합한 조성물의 COX 저해활성은 실시예 6 > 실시예 7 > 실시예 8 > 실시예 5의 순이다.

상기 실험에서 알 수 있는 바와 같이, 아선약 조추출물(실시예 1, 2) 은 우수한 COX 저해활성을 나타내었지만, 황금 추출물의 COX 저해활성은 유의성이 없어 COX 저해활성을 기대할 수 없었다. 하지만 놀랍게도 상기 추출물의 혼합물의 경우 상승된 COX 저해활성을 나타내었다.

(2) 5-LO(LTB₄ 생성저해)

① 실험재료 :

RPMI1640 medium: sigma Cet# R8758

T75 flask: Corning(430641)

Antibiotics: Gibco(15240-062)

FBS: biowhittaker(14-471QM)

Micro tube: sarstedt(72.690)

PBS: biowhittaker(17-512F)

원심분리기: Hanil(micro -12)

- 시료 : 실시예 1∼실시예 8

- 농도 : 0.025, 0.05, 1, 20 μg/ml(실시예 1-3) 0.005, 0.05, 0.5, 5 μg/ml(실시예 4-7)

② 실험방법 : HT-29세포주(한국세포주 은행)는 T75 플라스크에서 RPMI 1640배지(10% FBS) 20mL, 5% CO₂, 37ㅀC조건에서 배양하였으며 일주일에 2-3번 계대배양 하였다. HT-29 cell을 6-웰 플레이트에 1.5-2.0*10^5/well/2ml로 분주한 후 5% CO₂, 37℃ 조건에서 60-70%정도 confluence 보일 때까지 배양하였다. 이후 배지를 버리고 PBS(biowhittaker, 17-512F)로 2-3번 세척한 후 새로운 배지(5% FBS, biowhittaker, 14-471QM) 2mL을 넣었다. 시료의 최종 농도를 0, 0.005, 0.05, 0.5, 5(μg/mL)이 되도록 처리하였다. 또한 LPS 최종 농도 1μg/mL이 되도록 처리하였다. 아무처리도 하지 않은 N-Control은 시료대신 시료를 녹인 용매(0.1% 이하 DMSO)를 처리하였다. P-Control에는 LPS만 처리하였다. 모든 시료를 하루 동안 5% CO₂, 37℃ 조건에서 반응 시켰다. 반응이 끝난 후 세포를 PBS로 2번 세척한 후 scraper로 긁어 micro tube에 담아 10,000rpm이상, 5분간 원심 분리하여 회수하였 다. 상층액을 버리고 pellet만 남은 tube에 lysis buffer를 넣어 ice에서 5분간 처리하여 세포를 파괴시킨다. 10,000 rpm이상, 5분간 원심 분리하여 cell debris는 남기고 상층액만 새 튜브에 회수하였다. 이 시료를 LTB₄ ELISA 분석 할 때까지 -70℃에서 보관하였다.

세포 용해질(cell lysate)은 kit에 있는 EIA buffer로 1/20 희석하였다. LTB₄ standard는 0, 0.04, 0.1, 0.2, 0.4, 1.0, 2.0, 4.0(ng/mL)이 되도록 준비하였다. 류코트리엔 C₄ enzyme conjugate는 EIA buffer로 1/50 희석하여 준비하였다. Antibody coating 96웰 플레이트에 standard 또는 시료를 50ul 를 넣고 diluted enzyme conjugate 50 ul 를 넣은 후 천천히 흔들었다. 뚜껑을 덮은 채로 실온에서 1시간 반응시켰다.

반응이 끝난 후 300ul wash buffer로 3번 plate를 씻어낸다. Substrate를 150 ul를 넣고 천천히 흔들면서 30분간 반응시켰다. 650nm에서 흡광도를 측정하고 대조군에 대한 실험군의 상대적 활성을 계산식에 의해 %로 계산하였다. 각각의 값은 Bradford 단백질 정량으로 standardization하였다.

- 계산식 :

계산식=[(NC-PC)-(NC-S)/(NC-PC)] × 100

NC: N-Control, PC: P-Control, S: Sample

③ 실험 결과 : 단일추출물 및 혼합물의 5-LO에 대한 50% 저해활성(단위 : μg/ml)

	5-LO
실시예 1	0.044
실시예 2	0.040
실시예 3	0.846
실시예 5	0.039
실시예 6	0.007
실시예 7	0.024
실시예 8	0.027

④ 결론 : 단일추출물의 5-LO 저해활성은 실시예 1 = 실시예 2 ≫ 실시예 3의 순서이다. 그리고 이들 단일추출물을 적정비율로 혼합한 혼합물의 5-LO 저해활성은 실시예 6 > 실시예 7 ≥ 실시예 8 > 실시예 5의 순이다. 상기 COX-1, 2에 관한 실험과 유사하게, 본 실험에서도 아선약 조추출물은 우수한 5-LO 저해활성을 나타내었지만, 황금 추출물의 5-LO 저해활성은 유의성이 없어 5-LO 저해활성을 기대할 수 없었다. 하지만 놀랍게도 상기 추출물의 혼합물의 경우 상승된 5-LO 저해활성을 나타내었다.

(3) 귀부종 억제 실험(부종억제 실험)

① 실험 재료

- 실험동물 : ICR 마우스(대한바이오링크)

- 염증유도 : 아라키돈산(2mg/20 ul)

- 시료 : 실시예 1∼실시예 8

- 양성 대조군 : 인도메타신(25, 50 mg/kg)

- 농도 : 50, 75, 100 mg/kg

② 실험방법 : 실험동물(ICR 마우스((주)대한바이오링크))에 시험물질을 부종 유도 24시간 및 1시간 전에 투여하였다. 다음으로 실험동물의 오른쪽 귀에는 아라키돈산 2mg/20ul 의 농도로 투여 하고 왼쪽 귀는 대조용매로 아세톤을 투여하고 캘리퍼스(calipers)를 이용하여 귀의 두께를 측정한 다음 용매 대조로 사용하였다. 대조물질로 NSAIDs(Non-Steroidal Anti-Inflmmatory Drugs)의 대표적인 항염 및 소염 진통제인 인도메타신을 아라키돈산 투여 24시간 및 1시간 전에 경구로 투여하였다. 아라키돈산과 아세톤이 투여된 실험동물의 귀의 두께를 1, 2, 3시간까지 측정하였다.

③ 실험결과

실시예 1, 2의 항염 활성을 도 1a에 나타내었다. 또한 실시예 5 및 실시예 1, 3의 항염 활성을 도 1c에 나타내었다. 또한 실시예 6 및 실시예 1, 4의 항염 활성을 도 1d에 나타내었다. 또한 실시예 7 및 실시예 1, 3, 4의 항염 활성을 도 1e에 나타내었다. 또한 실시예 8 및 실시예 1, 4의 항염 활성을 도 1f에 나타내었다(*:P < 0.05, **:P < 0.01).

상기 도 1a 내지 1f에서 알 수 있듯이, 아선약 단일추출물 및 이들의 혼합물에서 항염 효능을 확인할 수 있었다. 특히, 실시예 1이 실시예 3보다 강한 항염 효과를 보이며, 이들 혼합물인 실시예 5(100mg/kg)에서 단일추출물의 혼합에 의한 상승효과가 나타내었다. 또한 실시예 1, 3의 혼합물인 실시예 5는 농도 의존적으로 항염 활성이 증가하는 경향을 나타내었다.

상기와 같이, 실시예 1과 실시예 3 또는 실시예 4 그리고 실시예 3, 4를 혼합할 경우, 실시예 1 단독에 비해 조성물(실시예 5, 6, 7, 8)의 귀부종 억제효과가 향상되었다.

(4) CIA 모델을 이용한 항염 활성 확인

① 실험재료

- 실험동물 : DBA/1 마우스(오리엔탈)

- 양성 대조군 : 인도메타신(50mg/kg)

- 대조물질 : 글루코사민(250mg/kg)

- 시료 : 실시예 5

- 농도 : 100, 200 mg/kg

② 실험방법 :

8주령 DBA/1 마우스(((주)오리엔탈)를 사용하여 관절염을 유발시키기 위하여 CFA(Complete Ffreund's Adjuvant)와 현탁시킨 콜라겐(collagen) 100μg을 꼬리에 투여하여 면역화 시킨 다음 21일 후에 IFA(Incomplete Freund's Adjuvant)와 현탁시킨 콜라겐 100μg으로 관절염을 유발시켰다. 21일째부터 5마리씩 5그룹으로 나누어 제조된 엑기스를 56일까지 투여하였다. 주1회 체중과 부종을 일으킨 발의 두께 및 점수를 메기고(0:이상없음, 1:약한 붉은색, 2:발가락이 부종, 3:전체적으로 심한 부종, 4:발 전체와 관절의 가장 심한 부종) 56일째 체혈 후 부검하고 부종을 일 으킨 발을 고정과 탈회 과정을 거친 후 H & E(Hematozyline & Eosin) 염색 후 현미경을 통하여 관절 조직을 관찰하였다.

③ 실험 결과

콜라겐(Collagen) 투여 후 시간의 경과에 따른 생쥐 발 부종 변화 및 시간 경과에 따른 관절염 지수의 변화를 각각 도 2a 및 도 2b에 나타내었다(*p<0.05). 또한 실시예 5 투여 후의 CIA 마우스 관절에서 연골 조직도를 도 3에 나타내었다.

상기 도 2a, 도 2b 및 도 3에서 알 수 있듯이, 실시예 5 투여군은 대조군과 비교하여 약 20% 효능이 있었다. 실시예 5를 처리한 CIA 마우스 관절에서 연골 조직의 파괴와 면역세포의 침윤이 대조군 및 글루코사민 투여군과 비교하여 현격하게 감소되었음이 관찰되었다.

2) 관절보호 실험

(1) GAG 분석

① 실험재료

- 재료 : 6-웰 플레이트(Corning 3516), Dulbecco's modified Eagle's medium(DMEM Biowhittaker), Heated inactivated fetal bovine serum(FBS), Penicillin-streptomycin(Gibco), IL-1 alpha(R&D 200LA-002), Blyscan Glycosaminoglycan 분석 kit(Biocolor B1000)

- 시료 : 실시예 1∼8- 대조시료 : 글루코사민

- 농도 : 5, 50, 500 μg/ml

- 실험 동물 : 샘타코(경기도 오산시)에서 분양 New Zealand white rabbits(2.0kg, 9주령)을 이용하였다.

② 실험방법

- 관절세포 배양(Cartilage explant cultures)

9주령 래빗으로부터 무릎 관절 연골을 채취한다. 다음으로 채취한 연골은 DMEM(5% FBS, penicillin 100U/ml, streptomycin 100μg/ml)에 넣어 하루 동안 37℃, CO₂ 배양기에서 안정화시켰다. 시료를 처리하기 전 연골을 일정한 크기로 자른 후 24웰에 넣었다. 준비한 시료 및 IL-1 alpha(5ng/ml)를 처리한다. 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 60시간 동안 반응 시킨 후 상층액을 회수하여 다음 실험 때까지 -20℃에 보관하여 실험에 사용하였다.

- GAG 분석 : 상층액에 GAG분비 정도는 Blyscan 분석 kit를 사용하며 656nm에서 흡광도 측정하여 대조군에 대한 실험군의 상대적 활성을 계산식에 의해 %로 계산하였다.

- 계산식 :

계산식=[(PC-Sample)-(PC-NC)] × 100

NC: 음성 대조군(Negative-Control), PC: 양성 대조군(Positive-Control), S: 샘플(Sample)

③ 실험결과

실시예 1∼4의 관절보호 효과를 도 4a에 나타내었고, 실시예 5∼8의 관절보호 효과를 도 4b에 나타내었다.

④ 결론 : 특히 실시예 1∼4 및 5∼8에서 ≤ 50μg/ml의 농도에서 관절보호 효능이 있었다.

제제예 1: 액제의 제조

실시예 6의 추출물 20g

설탕 10g

이성화당 10g

레몬향 적량

정제수를 가하여 전체 100ml

상기의 성분을 통상의 액제의 제조방법에 따라서 혼합하고 멸균시켜 액제를 제조하였다.

제제예 2: 액제의 제조

실시예 1의 추출물 30g

설탕 10g

이성화당 10g

레몬향 적량

정제수를 가하여 전체 100ml

제제예 3: 캡슐제의 제조

실시예 7의 추출물 500mg

유당 50mg

전분 50mg

탈크 2mg

스테아린산마그네슘 적량

상기의 성분을 혼합하고 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충진하여 캡슐제를 제조하였다.

제제예 4: 캡슐제의 제조

실시예 8의 추출물 500mg

유당 50mg

전분 50mg

탈크 2mg

스테아린산마그네슘 적량

제제예 5: 캡슐제의 제조

실시예 5의 추출물 500mg

유당 50mg

전분 50mg

탈크 2mg

스테아린산마그네슘 적량

제제예 5: 캡슐제의 제조

실시예 1의 추출물 700mg

유당 50mg

전분 50mg

탈크 2mg

스테아린산마그네슘 적량

제제예 6: 연고제의 제조

실시예 5의 추출물 200 g

백색 바셀린 100 g

스테아릴알콜 150g

폴리옥시에칠렌경화피마자유 40g

모노스테아틴산글리세딘 20g

프로필렌글리콜 100g

파라옥시안식향산메칠 1g

파라옥시안식향산프로필 1g

상기의 성분을 혼합하여 통상의 연고제 제조방법에 따라서 제조하였다.

이상에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 아선약 추출물을 포함하는 조성물은 우수한 COX 및/또는 5-LO 억제 활성을 나타내며, 아선약 추출물에 황금 및/또는 녹차 추출물을 혼합한 경우 상승효과를 나타내었으며, 황금, 녹차 추출물의 배합물도 상승효과를 나타내었다. 이와 같이 본 발명의 조성물은 천연물질로부터 얻어지기 때문에 부작용의 위험성 없이 우수한 COX 및/또는 5-LO 억제 활성을 나타내어, 염증질환, 월경통, 동맥경화증, 심장마비, 비만, 당뇨병, X 증후군, 인지능저하, 알츠하이머 질환, 호흡기 알레르기 반응, 만성정맥부전, 치질, 전신성 홍반성 루푸스, 건선, 만성 긴장 두통, 편두통, 염증성 장 질환, 바이러스, 박테리아 및 균에 의한 국부적 전염병, 일광화상, 화상, 접촉성 피부염, 흑색종 또는 암종을 포함하는 질환의 예방 또는 치료에 사용할 수 있다. 또한 특히 골관절염 또는 류 마티스 관절염 등을 포함하는 다양한 염증 질환의 예방 또는 치료를 위해 사용할 수 있다.

Claims

아선약 또는 그의 추출물을 포함하는 알츠하이머 질환, 인지능저하, 만성 긴장 두통, 편두통, 월경통 또는 암의 예방 또는 치료용 조성물.
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1)아선약 또는 그의 추출물 및 2)황금 추출물 또는 녹차 추출물을 각각 0.1 ~10 : 0.1~10의 중량비로 포함하는 염증질환의 예방 또는 치료용 조성물.
제 6항에 있어서, 상기 추출물은 물 또는 C_1-4 알콜에서 선택되는 하나 이상의 극성용매로 추출된 것인 조성물.
제 6항에 있어서, 아선약, 황금 및 녹차 추출물을 0.1~10 : 0.1~10 : 0.1~10의 중량비로 포함하는 조성물.
황금 및 녹차 추출물을 0.1~10 : 0.1~10의 중량비로 포함하는 염증질환의 예방 또는 치료용 조성물.
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제 9항에 있어서, 상기 추출물은 물 또는 C_1-4 알콜에서 선택되는 하나 이상의 극성용매로 추출된 것인 조성물.
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제 6항 또는 제 9항에 있어서, 상기 염증질환이 골관절염 또는 류마티스 관절염인 것을 특징으로 하는 조성물.