JP2008511617A - シクロオキシゲナーゼ及び/又は5−リポキシゲナーゼ抑制組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
骨関節炎(変形性関節炎)は、体関節の退化がその原因であり、(尻、膝、首、腰、手、足の指関節などの)骨間の接合部の関節軟骨の磨耗又は損傷による痛みと炎症を伴う疾患をいう。一般的に、関節軟骨は破壊され、再生されるが、再生されるより破壊される軟骨の方が多くなれば、衝撃を吸収する関節軟骨の量が減少又は摩耗する。
さらに関節間の骨が互いに接触するようになり、激しい苦痛を伴う。このような関節軟骨の損傷が初期の骨関節炎であり、治療を受けない場合は、激しい苦痛をもたらす。
関節リュウマチ炎は、多くの関節に生じる多発性の炎症性自己免疫疾患である。関節炎の患者の場合、関節の滑膜組織が過形成されると同時に、マクロファージ細胞、樹状細胞及び活性化されたTリンパ球とBリンパ球が滑膜組織中へ移動し、多形核細胞は滑液内と軟骨の表面に蓄積され、炎症を誘発する。このような滑膜組織の炎症は、未だ解明されていないが、自己抗原に対するTリンパ球の反応により誘発されるものと推定されている。この反応に於いて、大部分の組織中に浸潤されたTリンパ球は細胞表面には活性化指標を示さず、サイトカインもまたほとんど発現しない。しかし、関節リュウマチ炎症状を持つ滑膜組織と滑液にはマクロファージ細胞由来のサイトカインが多量観察される。代表的なサイトカインには、滑膜繊維芽細胞の成長を促進すると知られるインターロイキン−1(IL−1)及び腫瘍壊死因子−α(TNF−α)を含む。このような実験結果から、Tリンパ球が滑膜組織の炎症の誘発に非常に重要な役割を担っており、以後の炎症症状は活性化された滑膜細胞由来のサイトカインによって保持されるという説を立証している[Carson D.A. et al., J. Clin. Invest., 87, pp379-383, 1991: Tighe H. et al., J. Exp. Med., 177, pp10-118, 1993: Burmester G. R. et al., Arthritis Rheum, 40, pp5-18, 1997: Panayi G. S., Curr. Opin. Rheumatol., 9, pp236-240, 1997]。
本発明のウンカリア属植物、コガネバナ及びチャノキ抽出物は水、有機溶媒、又はこれらの混合溶媒と共に抽出して使用できる。上記有機溶媒としては、従来の全ての溶媒が使用でき、好ましくは水、C1−4アルコールなどの極性溶媒、又はn−ヘキサン、ジクロロメタンなどの非極性溶媒、又はこれらの混合溶媒が用いられる。
実施例1:アセンヤク熱湯抽出物の調製
アセンヤクの若葉(50g)を蒸気で蒸した。そして、精製水を加えて抽出して葉汁を絞り、回収した汁液をゆっくり冷却し再結晶して、アセンヤク抽出粉末 7.87g(収率:15.74%)を得た。
アセンヤクの若葉(50g)をエタノールを加えて抽出し、葉汁を絞り、回収された汁液をゆっくり冷却させ再結晶させて、アセンヤク抽出粉末 7.65g(収率:15.3%)を得た。
コガネバナ(50g)を1L丸底フラスコに入れ、精製水(350ml)を加え、80℃で2時間、還流抽出した。抽出物を冷却、濾過及び濃縮して、コガネバナ抽出粉末 16.5g(収率:32.95%)を得た。
チャノキ(50g)を1L丸底フラスコに入れ、水溶性エタノール(500ml)を加えて、85℃で、3時間、還流して抽出した。抽出物を冷却、濾過及び濃縮して、チャノキ抽出粉末 13.5g(収率:27%)を得た。
釣藤鈎50gを1L丸底フラスコに入れ、精製水(500ml)を加えて、5時間、還流して抽出した。抽出物を冷却、濾過及び濃縮して、釣藤鈎抽出粉末7g(収率:14%)を得た。
実施例5:アセンヤク及びコガネバナ混合物の調製
アセンヤクとコガネバナの混合物は下記のように調製した。
アセンヤクとチャノキの混合物は下記のように調製した。
アセンヤク、コガネバナ及びチャノキ混合物を下記のように調製した。
コガネバナ及びチャノキ混合物を下記のように調製した。
1)COX及び/又は5−LO阻害活性試験
(1)COX阻害活性試験
1、試験材料:
−材料:COX分析キット(Cayman、 Cat#760111)、インドメタシン(Cayman、 Cat#70270)、AA−861(Biomol、 Cat#EI−216)、H2O2(Aldrich、 Cat#216763)
−試料:実施例1〜実施例8
−濃度:10、50、500、1000μg/mL
−計算式:
阻害率%=(100%−阻害率)/(100%−blank)×100
1、試験材料:
RPMI1640培地:sigma Cet#R8758
T75フラスコ:Corning(430641)
抗生物質:Gibco(15240−062)
FBS:biowhittaker(14−471QM)
マイクロチューブ:sarstedt(72.690)
PBS:biowhittaker(17−512F)
遠心分離機:Hanil(micro−12)
−試料:実施例1〜実施例8
−濃度:0.025、0.05、1、20μg/ml(実施例1〜3)0.005、0.05、0.5、5μg/ml(実施例4〜7)
−計算式:
阻害率%=[(NC−PC)−(NC−S)/(NC−PC)]×100
1、試験材料:
−試験動物:ICRマウス(大韓バイオリンク)
−炎症誘導:アラキドン酸(2mg/20μl)
−試料:実施例1〜実施例8
−陽性対照群:インドメタシン(25、50mg/kg)
−濃度:50、75、100mg/kg
1、試験材料:
−試験動物:DBA/1マウス((株)オリエンタル)
−陽性対照群:インドメタシン(50mg/kg)
−対照物質:グルコサミン(250mg/kg)
−試料:実施例5
−濃度:100、200mg/kg
(1)GAG分析
1、試験材料:
−材料:6-ウェルプレート(Corning 3516)、ダルベッコ改良イーグル培地(DMEM、Biowhittaker)、加熱不活性化されたウシ胎仔血清(FBS)、ペニシリン−ストレプトマイシン(Gibco)、IL−1 alpha(R&D200LA−002)及びBlyscanグリコサミノグリカン分析キット(Biocolor B1000)
−試料:実施例1〜8
−対照物質:グルコサミン
−濃度:5、50、500μg/mL
−試験動物:京畿道烏山市(Samtako)より提供のニュージーランド白ウサギ(2.0kg、9週齢)を利用した。
−軟骨移植片培養
9週齢ラビットから膝関節軟骨を採取した。次に採取した軟骨をDMEM(5%FBS、ペニシリン 100U/ml、ストレプトマイシン 100μg/ml)に入れ、37℃、24時間、CO2培養基で安定化させた。試料を処理する前に、全ての軟骨を一定のサイズにスライスして、24のウェルに入れた。準備した試料とIL−1alpha(5ng/ml)を処理した。処理試料を37℃、60時間、5%CO2培養基で反応させた後、上清を回収し、次の試験まで−20℃に保管した。
−GAG分析:上清のGAG分泌程度を測定するため、Blyscan分析キットを使用した。656nmで吸光度を測定し、対照群に対する試験群の相対活性を下記計算式により%で算出した。
−計算式:
計算式=[(PC−試料)−(PC−NC)]×100
NC:陰性対照群、PC:陽性対照群、S:試料
実施例1〜4及び実施例5〜8の関節保護効果を、各々図10及び図11に示した。
実施例6の抽出物 20g
砂糖 10g
異性化糖 10g
レモン香 適量
精製水を加えた後の総量 100ml
上記の成分を通常の液剤の調製方法によって混合し滅菌し、液剤を製造した。
実施例1の抽出物 30g
砂糖 10g
異性化糖 10g
レモン香 適量
精製水を加えた後の総量 100ml
上記の成分を通常の液剤の調製方法によって混合し滅菌し、液剤を製造した。
実施例7の抽出物 500mg
ラクトース 50mg
でんぷん 50mg
タルク 2mg
ステアリン酸マグネシウム 適量
上記の成分を混合して、通常のカプセル剤の調製方法によってゼラチンカプセルに充填し、カプセル剤を製造した。
実施例8の抽出物 500mg
ラクトース 50mg
でんぷん 50mg
タルク 2mg
ステアリン酸マグネシウム 適量
上記の成分を混合して、通常のカプセル剤の調製方法によってゼラチンカプセルに充填し、カプセル剤を製造した。
実施例5の抽出物 500mg
ラクトース 50mg
でんぷん 50mg
タルク 2mg
ステアリン酸マグネシウム 適量
上記の成分を混合して、通常のカプセル剤の調製方法によってゼラチンカプセルに充填し、カプセル剤を製造した。
実施例1の抽出物 700mg
ラクトース 50mg
でんぷん 50mg
タルク 2mg
ステアリン酸マグネシウム 適量
上記の成分を混合して、通常のカプセル剤の調製方法によってゼラチンカプセルに充填し、カプセル剤を製造した。
実施例5の抽出物 200g
白色ワセリン 100g
ステアリルアルコール 150g
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 40g
モノステアリン酸グリセリン 20g
プロピレングリコール 100g
パラオキシ安息香酸メチル 1g
パラオキシ安息香酸プロピル 1g
上記の成分を混合して、通常の軟膏剤調製方法によって軟膏剤を製造した。
(産業上利用可能性)
図2は本発明の実施例5〜8の抗炎症活性を示すグラフである。
図3は本発明の実施例5及び実施例1、3の抗炎症活性を示すグラフである。
図4は本発明の実施例6及び実施例1、4の抗炎症活性を示すグラフである。
図5は本発明の実施例7の抗炎症活性を示すグラフである。
図6は本発明の実施例8及び実施例3、4の抗炎症活性を示すグラフである。
図7は本発明の実施例5投与後のマウスの足浮腫変化を示す時系列のグラフである。
図8は本発明の実施例5投与後の関節炎指数の変化を示す時系列のグラフである。
図9は本発明の実施例5投与後のCIAマウス関節で軟骨組織図を示す写真である。
図10は本発明の実施例1〜4の関節保護効果を示すグラフである。
図11は本発明の実施例5〜8の関節保護効果を示すグラフである。
Claims (45)
- ウンカリア属植物又はその抽出物を含むシクロオキシゲナーゼ(COX)及び/又は5−リポキシゲナーゼ(5−LO)に介在される生理学的及び病理学的異常症状を予防又は治療するための組成物。
- COX及び/又は5−LOに介在される生理学的及び病理学的異常症状が、炎症疾患、月経痛、動脈硬化症、心臓発作、肥満、糖尿病、X症候群、認知機能低下、アルツハイマー疾患、呼吸器系アレルギー反応、慢性静脈不全、痔疾、全身性エリテマトーデス、乾癬、慢性緊張型頭痛、偏頭痛、炎症性腸疾患、ウイルス、バクテリア及び細菌による局部的感染症、日焼け、熱傷、伝染性皮膚炎、黒色腫及び癌腫よりなる群から選択される、請求項1に記載の組成物。
- COX及び/又は5−LOに介在される生理学的及び病理学的異常症状が炎症疾患である、請求項2に記載の組成物。
- 上記ウンカリア属植物が、アセンヤク(ガンビール)(Uncaria gambir)、U.attenuata Korth.、U.borneensis Havil.、U.callophylla Korth.、U.elliptica R.Br.、キャッツ・クロウ(ウンガリア・ギアネンシス)(U.guianensis(Aubl.)Gmel.)、U.homomalla Miq.、U.lanosa var.glabrata(Bl.)Ridsd.、U.macrophylla Wall.、カギカズラ(U.rhynchophylla Miq.)、チョトウコウ(釣藤鈎)(U.sinensis(Oliv.)Havil.)、キャッツ・クロウ(ウンガリア・トメントーサ)(U.tomentosa(Willd.)DC.)、U.yunnanensis Hsia K.C.、U.hirsuta Havil.及びU.lanosa var.appendiculata f.setiloba(Benth.)Ridsd.よりなる群から選択される、請求項1に記載の組成物。
- 上記ウンカリア属植物がアセンヤク(ガンビール)(Uncaria gambir)である、請求項4に記載の組成物。
- 更に、コガネバナ(スクテラリア・バイカレンシス)抽出物及び/又はチャノキ(カメリア・シネンシス)抽出物を含む、請求項1〜5のいずれかに記載の組成物。
- 上記抽出物が、水、アセトン又はC1−4アルコール及びイソプロピルアルコールよりなる群から選択される一つ又はそれ以上の極性溶媒で抽出された抽出物である、請求項6に記載の組成物。
- アセンヤク、コガネバナ、チャノキの重量比が、0.1〜10:0.1〜10:0.1〜10である、請求項6に記載の組成物。
- コガネバナ抽出物及びチャノキ抽出物を含む、COX及び/又は5−LOに介在される生理学的及び病理学的異常症状を予防又は治療するための組成物。
- COX及び/又は5−LOに介在される生理学的及び病理学的異常症状が、炎症疾患、月経痛、動脈硬化症、心臓発作、肥満、糖尿病、X症候群、認知機能低下、アルツハイマー疾患、呼吸器系アレルギー反応、慢性静脈不全、痔疾、全身性エリテマトーデス、乾癬、慢性緊張型頭痛、偏頭痛、炎症性腸疾患、ウイルス、バクテリア及び細菌による局部的感染症、日焼け、熱傷、伝染性皮膚炎、黒色腫及び癌腫よりなる群から選択される、請求項9に記載の組成物。
- COX及び/又は5−LOに介在される生理学的及び病理学的異常症状が、炎症疾患である請求項10に記載の組成物。
- 上記抽出物が、水、アセトン又はC1−4アルコール及びイソプロピルアルコールよりなる群から選択される一つ又はそれ以上の極性溶媒で抽出された抽出物である、請求項9に記載の組成物。
- コガネバナ、チャノキの重量比が、0.1〜10:0.1〜10である、請求項9に記載の組成物。
- 上記炎症疾患が骨関節炎又は関節リウマチである、請求項3又は11に記載の組成物。
- COX及び/又は5−LOに介在される生理学的及び病理学的異常症状を予防又は治療するための、ウンカリア属植物又はその抽出物の使用。
- COX及び/又は5−LOに介在される生理学的及び病理学的異常症状が、炎症疾患、月経痛、動脈硬化症、心臓発作、肥満、糖尿病、X症候群、認知機能低下、アルツハイマー疾患、呼吸器系アレルギー反応、慢性静脈不全、痔疾、全身性エリテマトーデス、乾癬、慢性緊張型頭痛、偏頭痛、炎症性腸疾患、ウイルス、バクテリア及び細菌による局部的感染症、日焼け、熱傷、伝染性皮膚炎、黒色腫及び癌腫よりなる群から選択される、請求項15に記載の使用。
- COX及び/又は5−LOに介在される生理学的及び病理学的異常症状が、炎症疾患である、請求項16に記載の用途。
- 上記ウンカリア属植物が、アセンヤク、U.attenuata Korth.、U.borneensis Havil.、U.callophylla Korth.、U.elliptica R.Br.、キャッツ・クロウ(ウンガリア ギアネンシス)(U.guianensis(Aubl.)Gmel.)、U.homomalla Miq.、U.lanosa var.glabrata(Bl.)Ridsd.、U.macrophylla Wall.、カギカズラ(U.rhynchophylla Miq.)、チョトウコウ(釣藤鈎)(U.sinensis(Oliv.)Havil.)、キャッツ・クロウ(ウンガリア トメントーサ)(U.tomentosa(Willd.)DC.)、U.yunnanensis HsiaK.C.、U.hirsuta Havil.及びU.lanosa var.appendiculataf.setiloba(Benth.)Ridsd.よりなる群から選択される、請求項15に記載の使用。
- 上記ウンカリア属植物がアセンヤクである、請求項18に記載の使用。
- COX及び/又は5−LOに介在される生理学的及び病理学的異常症状を予防又は治療するための、コガネバナ抽出物及びチャノキ抽出物を含む組成物の使用。
- COX及び/又は5−LOに介在される生理学的及び病理学的異常症状が、炎症疾患、月経痛、動脈硬化症、心臓発作、肥満、糖尿病、X症候群、認知機能低下、アルツハイマー疾患、呼吸器系アレルギー反応、慢性静脈不全、痔疾、全身性エリテマトーデス、乾癬、慢性緊張型頭痛、偏頭痛、炎症性腸疾患、ウイルス、バクテリア及び細菌による局部的感染症、日焼け、熱傷、伝染性皮膚炎、黒色腫及び癌腫よりなる群から選択される、請求項20に記載の使用。
- COX及び/又は5−LO回路に介在される生理学的及び病理学的異常症状が炎症疾患である、請求項21に記載の使用。
- 上記抽出物が、水、アセトン又はC1−4アルコール及びイソプロピルアルコールよりなる群から選択される一つ又はそれ以上の極性溶媒で抽出された抽出物である、請求項20に記載の使用。
- コガネバナ、チャノキの重量比が、0.1〜10:0.1〜10である、請求項20に記載の使用。
- 前記炎症疾患が骨関節炎又は関節リウマチである、請求項17又は22に記載の使用。
- COX及び/又は5−LOに介在される生理学的及び病理学的異常症状を予防又は治療するための、i)ウンカリア属植物又はその抽出物、及びii)コガネバナ抽出物及び/又はチャノキ抽出物を含む組成物の使用。
- 上記ウンカリア属植物がアセンヤクである、請求項26に記載の使用。
- アセンヤク、コガネバナ、チャノキの重量比は、0.1〜10:0.1〜10:0.1〜10である、請求項26に記載の使用。
- ウンカリア属植物又はその抽出物を含む組成物の治療有効量を、哺乳動物に投与することを含んでなる、COX及び/又は5−LOに介在される生理学的及び病理学的異常症状を予防又は治療する方法。
- COX及び/又は5−LOに介在される生理学的及び病理学的異常症状が、炎症疾患、月経痛、動脈硬化症、心臓発作、肥満、糖尿病、X症候群、認知機能低下、アルツハイマー疾患、呼吸器系アレルギー反応、慢性静脈不全、痔疾、全身性エリテマトーデス、乾癬、慢性緊張型頭痛、偏頭痛、炎症性腸疾患、ウイルス、バクテリア及び細菌による局部的感染症、日焼け、熱傷、伝染性皮膚炎、黒色腫及び癌腫よりなる群から選択される、請求項29に記載の方法。
- COX及び/又は5−LOに介在される生理学的及び病理学的異常症状が、炎症疾患である、請求項30に記載の方法。
- 上記ウンカリア属植物が、アセンヤク(ガンビール)(Uncaria gambir)、U.attenuata Korth.、U.borneensis Havil.、U.callophylla Korth.、U.elliptica R.Br.、キャッツ・クロウ(ウンガリア ギアネンシス)(U.guianensis(Aubl.)Gmel.)、U.homomalla Miq.、U.lanosa var.glabrata(Bl.)Ridsd.、U.macrophylla Wall.、カギカズラ(U.rhynchophylla Miq.)、チョトウコウ(釣藤鈎)(U.sinensis(Oliv.)Havil.)、キャッツ・クロウ(ウンガリア トメントーサ)(U.tomentosa(Willd.)DC.)、U.yunnanensis HsiaK.C.、U.hirsuta Havil.及びU.lanosa var.appendiculataf.setiloba(Benth.)Ridsd.よりなる群から選択される、請求項29に記載の方法。
- 上記ウンカリア属植物が、アセンヤクである、請求項32に記載の方法。
- 更に、上記組成物がコガネバナ抽出物及び/又はチャノキ抽出物を含む、請求項29〜33のいずれかに記載の方法。
- 上記抽出物が、水、アセトン又はC1−4アルコール及びイソプロピルアルコールよりなる群から選択される一つ又はそれ以上の極性溶媒で抽出された抽出物である、請求項34に記載の方法。
- アセンヤク、コガネバナ、チャノキの重量比が、0.1〜10:0.1〜10:0.1〜10である、請求項34に記載の方法。
- コガネバナ及びチャノキ抽出物を含む組成物の治療有効量を、哺乳動物に投与することを含んでなる、COX及び/又は5−LOに介在される生理学的及び病理学的異常症状を予防又は治療する方法。
- COX及び/又は5−LOに介在される生理学的及び病理学的異常症状が、炎症疾患、月経痛、動脈硬化症、心臓発作、肥満、糖尿病、X症候群、認知機能低下、アルツハイマー疾患、呼吸器系アレルギー反応、慢性静脈不全、痔疾、全身性エリテマトーデス、乾癬、慢性緊張型頭痛、偏頭痛、炎症性腸疾患、ウイルス、バクテリア及び細菌による局部的感染症、日焼け、熱傷、伝染性皮膚炎、黒色腫及び癌腫よりなる群から選択される、請求項37に記載の方法。
- COX及び/又は5−LOに介在される生理学的及び病理学的異常症状が炎症疾患である、請求項38に記載の方法。
- 上記抽出物が、水、アセトン又はC1-4アルコール及びイソプロピルアルコールよりなる群から選択される一つ又はそれ以上の極性溶媒で抽出された抽出物である、請求項37に記載の方法。
- コガネバナ、チャノキの重量比が、0.1〜10:0.1〜10である、請求項37に記載の方法。
- 上記炎症疾患が骨関節炎又は関節リウマチである、請求項31又は39に記載の方法。
- コガネバナ抽出物及び/又はチャノキ抽出物を0.1〜10:0.1〜10の重量比で含有する、ウンカリア属植物又はその抽出物を混合して、COX及び/又は5−LOに介在される生理学的及び病理学的異常症状の予防又は治療剤を製造する方法。
- アセンヤク、コガネバナ及びチャノキを0.1〜10:0.1〜10:0.1〜10の重量比で混合する、請求項43に記載の方法。
- コガネバナ抽出物及びチャノキ抽出物を0.1〜10:0.1〜10の重量比で混合して、COX及び/又は5−LOに介在される生理学的及び病理学的異常症状の予防又は治療剤を製造する方法。
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Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20110802 |
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A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20120124 |