CN101616681B - 包含竹子和黄芩的提取物的用于治疗特应性皮炎的组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及包含植物提取物(特别地竹子提取物和黄芩提取物)作为活性组分的用于治疗和预防特应性皮炎(atopicdermatitis)的组合物。本发明是从植物获得的天然成分。本发明可通过抑制组胺和白三烯的释放来控制免疫反应，从而在过敏性疾病、炎性疾病和皮肤病，特别地特应性皮炎的治疗或预防中起作用。已通过临床试验证明本发明对于进行特应性皮炎的治疗是安全和有益的，因此可用于治疗和预防特应性皮炎。

Description

包含竹子和黄芩的提取物的用于治疗特应性皮炎的组合物
技术领域
本发明是包含植物提取物作为活性成分的用于治疗特应性皮炎的组合物，特别地包含竹子提取物和黄芩提取物的混合组合物。
背景技术
特应性皮炎是由因遗传、环境或免疫因素引起的和在干燥气候中加重的角质层(其为位于皮肤的最外部分的保护壁)缺陷而引发的过敏性疾病。许多人(明确地总人口的0.5-1％)患有特应性皮炎。在未成年人的情况下，5-10％的儿童患有特应性皮炎，50％的患者可在他们两岁时恢复，25％可在青春期时恢复。然而，25％将不恢复并且持续遭受特应性皮炎的痛苦，进入成人期。
特应性皮炎的主要症状是严重的瘙痒症、干皮病、出疹或皮肤渗出(oozing of the skin)、疖子、鳞样皮肤(鳞状皮肤)等。
特应性皮炎的发病机理还不完全明了，但遗传因素是大多数特应性皮炎病例的主要原因，并且发病机理与免疫反应相关。已显示特应性皮炎可通过干性皮肤(比一般人更易搔痒的皮肤)、由细菌、病毒、真菌等引起的感染以及情绪和环境因素的结合引起。
特别地，在天然清除物质(所述物质，当与身体接触或侵入身体时引起皮疹形成)的身体过程中，当该相同物质再次侵入身体，产生引起特应性皮炎的组胺时，由肥大细胞产生的抗体(IgE)引起过敏反应。肥大细胞广泛地遍布器官例如皮肤、呼吸器官、胃肠道的粘膜、淋巴管的周围(circum of lymphatic duct)、脑，并且已知为引起不同炎症和过敏反应的细胞。从肥大细胞释放的组胺通过诱导胃肠道和/或支气管道的平滑肌收缩、血管舒张、腺细胞的分泌、反应的加重等引起炎症和速发型过敏反应(immediate allergic reaction)，以及用作不同生物学效应例如粘液和局部蛋白(local protein)的分泌的媒介物。
药物疗法，例如类固醇、抗组胺剂、抗生素通常描述用于特应性皮炎。类固醇剂(肾上腺皮质激素剂)可用作抗炎药和免疫抑制剂并且在治疗疾病中具有积极效应，但如果长期使用，可产生副作用例如皮肤弱化(skin-weakening)、全身性激素的症状(symptom of systemichormone)、毒性。目前，已研究了免疫抑制剂和新型抗-组胺剂用于治疗特应性皮炎的用途。然而，抗-组胺剂不能完全抑制过敏反应，因为除了组胺以外其他化学递质也可诱导过敏反应。肥大细胞除了组胺以外还释放其他化学递质例如白三烯C4和白三烯B4。白三烯C4和组胺一样使支气管的平滑肌收缩，白三烯B4通过诱导嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞(eosinophil)引发慢性炎症并且损伤邻近的细胞。
因此，需要用于有效治疗特应性皮炎而无副作用的新型组合物。
竹子属于禾本科。全世界存在大约280种已知的竹子，大约70种天然生长在或栽培于韩国。竹子的代表性种类有11种；紫竹(Phyllostachys nigra)、桂竹(Phyllostachys bambusoides)(Cedrela sinesis)、毛竹(Phyllostachys edulis)(Phyllostachyspubescen)、Phyllostachys nigra for.Punctata、Sasa borealis var.gracilis、空心苦竹(Arundinaria simonii)、Sasa borealis var.chiisanensis、Sasa borealis、山白竹(Sasa albo-marginata)、矢竹(Pseudosasa japonica)等。其中，桂竹(Cedrela sinesis)、紫竹和毛竹是栽培的。根据东医宝鉴(Dongeui-Bogam)，本草纲目(Compendium of Materia Medica)和神农本草经(divine Farmer′sMateria Medica)，竹子在治疗麻痹和高血压中是有效的，并且用于治疗肺炎和支气管炎以退烧(bring down fever)、化痰(loosenphlegm)和用作退热剂(coolant)。最近，已报导竹子用于治疗高血压、动脉粥样硬化和心血管疾病。还已知竹子具有在癌症和衰老的预防中有效的抗氧化剂效应。另外，预期植物中的植物化学物质例如有机酸、膳食纤维(dietary fiber)、单宁酸、苯并呋喃促进预防循环系统的疾病。
关注于抗微生物活性的生物活性化合物的常规研究主要报导于韩国和日本。日本研究者发现在竹叶中作为抗微生物化合物的2，6-二甲基苯醌和苯甲酸，韩国专利10-0465113公开了竹子提取物在改善血液循环和预防炎症中的效应。日本专利申请H09-278662公开了具有抗过敏作用的脂肪和油包含通过使用索氏法(soxhlet method)利用醚作为溶剂而获得的竹子提取物，WO 2002/07745公开了通过使用水而获得的竹子提取物具有在治疗特应性皮炎中有效的止痒作用。
黄芩具有生物活性和药理性质，其在东方医学中用于治疗发烧和过敏症。其通过扩张血管和降低血压起作用并且抑制动脉粥样硬化。黄芩中包含的黄芩苷(Bicalin)是种黄酮类化合物，其通过抑制毛细管的渗透性来有效地镇静(sedate)或止血。另外，黄芩苷通过加固肥大细胞的细胞膜来抑制化学递质的释放，因此可进行抗过敏作用。特别地，已知黄芩的药理性质改善由过敏症引起的感染，抑制增加的血管渗透性且通过强抗炎作用减轻炎性排血和充血，这些药理性质来源于黄芩苷。黄芩苷被水解成黄芩素(Baicalein)和葡萄糖醛酸。黄芩素用作利尿剂，葡萄糖醛酸用作解毒剂(deintoxicant)。韩国专利申请1996-0003725公开了包含黄芩的黄酮类化合物成分的治疗剂。韩国专利申请1996-0040370公开了用于预防和治疗酒精障碍(alcohol disorder)的包含黄芩提取物和黄酮糖苷(flavoneglycoside)的组合物。韩国专利申请2002-0031608公开了具有积极的抗微生物作用的黄芩提取物，和用于制备所述提取物和所述提取物的药物组合物的方法。韩国专利申请10-0522579公开了具有抗应激作用的黄芩和Omija(五味子(Schizandra chinensia Baillon))的混合提取物。
竹子或黄芩的上述性质是已知的，但未曾报导使用包含竹子提取物和黄芩提取物的混合组合物治疗特应性皮炎的任何疗效。
本发明的发明者已研究了用于治疗特应性皮炎的新型化合物。结果，他们发现和确认了：包含竹子提取物和黄芩提取物的混合组合物可强烈地抑制组胺和白三烯的释放而无任何副作用，因而对特应性皮炎具有积极的治疗作用，从而实现了本发明。
本发明的公开内容
本发明的目的是提供包含植物提取物作为活性成分的组合物，所述组合物对治疗和预防特应性皮炎具有积极疗效而无任何副作用。
此外，本发明的目的是提供竹子提取物和黄芩提取物的混合组合物用于制备用于治疗和预防特应性皮炎的药物的用途。
此外，本发明的目的是提供通过对受试者施用治疗有效量的竹子提取物和黄芩提取物的混合组合物来治疗和预防特应性皮炎的方法。
附图概述
图1是显示在施用本提取物后，肘窝和腘窝上的临床试验项(clinical trial item)的改善率的图表。
图2是数码照片(digital steel photo)，其通过比较使用制品之前和之后拍摄的照片来显示本提取物的施用对特应性皮炎的改善率。
图3是显示在使用制品之前和使用制品之后，在腘窝和肘窝的10cm下部通过使用Tewameter TM300(Courage+Khazaka，Germany)测量的每单位面积和每单位时间发生的水分损失率(g/m2·h)的测量结果的图表。
发明详述
为了实现上述目的，本发明提供了用于治疗特应性皮炎的包含竹子提取物和黄芩提取物作为活性成分的组合物。
此外，本发明提供了竹子提取物和黄芩提取物的混合组合物用于制备用于治疗和预防特应性皮炎的药物的用途。
此外，本发明提供了通过对受试者施用治疗有效量的竹子提取物和黄芩提取物的混合组合物来治疗和预防特应性皮炎的方法。
在本发明的组合物中，竹子选自刚竹属(Phyllostachys)、赤竹属(Sasa)或矢竹属(Pseudosasa)，刚竹属优选选自毛竹、毛金竹(Phyllostachys nigra var.henonis)、紫竹、桂竹、P.pubescence、P.nigra for.Punctata和P.comprossa，赤竹属优选选自Sasacoreana Nakai、S.coreana、S.kurilensis、S.quelpaertensis、S.borealis、S.borealis var.chiisanensis和S.borealis var.gracilis，矢竹属优选选自矢竹和Pseudosasa japonica var.purpurascens。
在本发明的组合物中，对于竹子和黄芩，可使用商购获得的药草。可以使用，优选以粉剂或提取物的形式使用完整的药草、分枝、壳、叶、芽、根、内皮层等。
可通过用水、有机溶剂或其混合溶剂提取竹子和黄芩来使用本发明的竹子提取物和黄芩提取物。尽管所有常规溶剂可用作上述有机溶剂，但极性溶剂例如水、C1-4醇(例如甲醇、乙醇等)等或其混合溶剂是优选的。优选，50-90％的乙醇提取物的不溶于水的级分或热水提取物的溶于乙醇的级分可用作上述竹子提取物。
可通过常规方法例如热水提取、超声处理(sonication)等进行上述提取，且提取物的冻干制品可用于本发明的组合物。此外，所述提取物可通过常规分级分离法或色谱法进一步纯化，并且此类分级分离的材料或纯化的材料也在本发明的范围之内。
在本发明的组合物中，竹子或黄芩可单独使用，但优选使用另外地将竹子提取物与黄芩提取物混合(从而显示协同效应)的混合组合物。
在本发明的组合物中，通过使用COLBY公式(COLBY S.R.，Calculating synergistic and antagonistic response of herbicidecombinations，Weeds 15，20-22，1967)测量和确认与单独施用提取物相比，施用混合组合物的协同效应。
如上所示，当组合物以竹子提取物和黄芩提取物的组合形式使用时，其竹子∶黄芩的重量比可以为1-10∶1-10，但优选1-5∶1-5或更优选1-3∶1-3。
本发明的组合物可按照制药领域的常规方法配制成常规药物制剂，例如，通过将其与药学上可接受的载体、赋形剂等混合配制成溶液(例如饮料)、糖浆、胶囊剂、颗粒剂、片剂、粉剂、丸剂、软膏和乳剂、皮肤外用制剂例如凝胶等；和可口服或胃肠外施用。
可根据活性成分至身体内的吸收程度、排泄速率(excretionrate)、患者的年龄、重量、性别和状况、被治疗的疾病的严重程度等适当地施用本发明的组合物。然而，通常，用于成年人的剂量为在溶液中每天0.0001-100mg/kg或优选0.001-100mg/kg。其可以每天施用一次或每天数次。所述量不应当以任何方式限定本发明的范围。
在下文中，将参考下列实施例对本发明进行更详细地描述，但本发明的范围不应当以任何方式解释为限定于其。
实施例
实施例1.竹子提取物的制备
实施例1-1.竹子乙醇提取物的制备
通过加入25％的乙醇(200l)和在80℃下加热混合物6小时来提取干燥的竹子(20kg)。将提取物进行过滤和浓缩以除去乙醇，直至提取物体积达到5l。然后将浓缩的提取物冷却至室温。收集并干燥沉淀，从而获得竹子提取物(390g)。
实施例1-2.竹子热水提取物的制备
通过以等于10倍的干燥的竹子的重量的量加入水并且在100℃下加热混合物4小时来提取干燥的竹子(20kg)。将提取物进行过滤和在减压的情况下进行浓缩。将浓缩的提取物加入至乙醇(10l)，并且在70℃下搅拌2小时，然后冷却至室温。过滤和在减压的情况下浓缩沉淀，从而获得竹子提取物(350g)。
实施例2.黄芩提取物的制备
向水(8l)中加入黄芩(1Kg)，通过在80℃下回流2小时来进行提取。然后对提取物进行冷却，过滤和浓缩，从而获得黄芩提取物粉剂(330g)。
实施例3.混合组合物的制备
通过将从实施例1获得的竹子提取物和从实施例2获得的黄芩提取物混合来制备混合组合物。竹子提取物对黄芩提取物的重量比应当为1∶1、1∶2、1∶3或2∶1、3∶1。
实验
实验1.根据实施例进行的对组胺和白三烯从肥大细胞释放的抑制活性的测量
组胺和白三烯从肥大细胞的释放是过敏反应的主要原因之一。测量竹子提取物和黄芩提取物的混合组合物在抑制组胺和白三烯从肥大细胞释放中的效应。
实验1-1.肥大细胞从肝的分离
从8只雌性豚鼠(200g)分离肺组织(3g/1只豚鼠)，并且从肺组织中去除脂肪组织、支气管和血液。通过使用含有Ca2+、Mg2+和0.1％明胶的Tyrode TGCM缓冲液用酶(5mg/ml的胶原酶、1.8单位/27μl的弹性蛋白酶)处理分离的肺组织3次，进行15、15、25分钟。通过尼龙网和金属网(100μm)过滤各经酶处理的肺组织，然后离心(称为‘单分散的肥大细胞’)。用含有0.1％明胶但不含Ca2+和Mg2+的TG缓冲液(16ml)悬浮沉淀，然后通过加载至粗Percoll(1.041mg/ml的密度)以1,400rpm离心25分钟以获得沉淀。用TG缓冲液(8ml)重悬浮沉淀，然后通过加载至不连续Percoll(1.06-1.10mg/ml的密度)以1,400rpm离心25分钟以分离数个细胞层。在所述数个细胞层中，用TGCM缓冲液清洗第三和第四层2次，因为肥大细胞存在于第三和第四层。用台盼蓝和阿辛蓝对完整的细胞和肥大细胞进行染色。通过计算细胞的数目来测量肥大细胞的纯度，以获得大约80-90％的肥大细胞。
实验1-2.从肥大细胞释放组胺的抑制
用豚鼠IgG1抗体(抗-OVA 1ml/106个细胞)在37℃下处理肥大细胞(4105个细胞)45分钟，然后用TGCM缓冲液进行清洗以除去未与肥大细胞的细胞膜结合的抗-OVA抗体。用TGCM缓冲液(1ml)悬浮肥大细胞，然后用各试剂(30μg浓缩物)进行预处理。通过使用卵白蛋白(1.0μg/ml)敏化10分钟来使肥大细胞发生反应，然后在冰中对其进行冷却，然后离心以测量来自上清液的组胺。
通过改进Siraganian的方法以及使用自动连续流提取(automated continuous-flow extraction)和荧光分析仪(flourometic analyzer)(Astoria analyzer series 300，Astoria-pacific international，Oragon，USA)来测量各样品中组胺的量。制备1N-盐酸、0.73M磷酸、5N氢氧化钠、1N氢氧化钠、盐溶液稀释剂和采样器清洗液(sampler wash)，邻苯二甲醛溶液并且将其连接至与分析仪连接的管。将组胺的贮存液稀释至20ng、10ng、5ng、3ng和1ng，并获得标准曲线的浓度依赖性结果。然后，用2％的高氯酸稀释各样品，并测量组胺的量。结果显示，竹子提取物和黄芩提取物分别表现出抑制活性，并且竹子提取物和黄芩提取物的混合组合物还表现出高抑制活性。通过使用COLBY公式(COLBY S.R.，Calculating synergistic and antagonistic response of herbicidecombinations，Weeds 15，20-22，1967)测量和确认与单独施用提取物相比，施用混合组合物的协同效应(表1)。
[表1]
各提取物对从肥大细胞释放组胺的抑制活性。
样品   抑制活性(％)
对照   32.5±0.25
竹子提取物   22.4±0.09(31.1％)
黄芩提取物   26.4±0.11(18.8％)
混合组合物(竹子∶黄芩＝1∶1)   10.1±0.25(70.5％)
混合组合物(竹子∶黄芩＝1∶2)   15.4±0.46(52.6％)
混合组合物(竹子∶黄芩＝1∶3)   19.7±0.52(39.4％)
混合组合物(竹子∶黄芩＝2∶1)   9.3±0.32(71.3％)
混合组合物(竹子∶黄芩＝3∶1)   13.2±0.11(59.4％)
实验1-3.从肥大细胞释放白三烯的抑制
通过使用Aharoney等人的方法(Biochem.Biophys.Res.Commun.，p574-579，1983)测量各样品中白三烯的量。用5mM的含有0.1％的明胶的MES缓冲液悬浮白三烯抗体，并且向各试管中加入用试剂(30μg)处理的细胞的上清液(100μl)。向上清液中加入白三烯抗体和[3H]白三烯D4(LTD4)并且使其在4℃下反应2小时。通过使用葡聚糖包被的活性炭(dextran coated charcoal)终止反应，并通过使用液闪光谱法测量抑制活性。结果显示，竹子提取物和黄芩提取物分别表现出抑制活性，并且竹子提取物和黄芩提取物的混合组合物还表现出高抑制活性。通过使用COLBY公式(COLBY S.R.，Calculatingsynergistic and antagonistic response of herbicidecombinations，Weeds 15，20-22，1967)测量和确认与单独施用提取物相比，施用混合组合物的协同效应(表2)。
[表2]
各提取物对从肥大细胞释放白三烯的抑制活性。
样品   抑制活性(％)
对照   679.0±54.19
竹子提取物   449.0±40.47(33.8％)
黄芩提取物   569.4±32.89(16.1％)
混合组合物(竹子∶黄芩＝1∶1)   149.5±8.26(78.0％)
混合组合物(竹子∶黄芩＝1∶2)   282.1±47.55(58.5％)
混合组合物(竹子∶黄芩＝1∶3)   350.1±33.1(48.4％)
混合组合物(竹子∶黄芩＝2∶1)   147.5±11.92(78.3％)
混合组合物(竹子∶黄芩＝3∶1)   322.9±33.65(52.4％)
实验2.临床试验
通过使用选自实验1的竹子提取物和黄芩提取物的混合组合物来测试20个患有严重特应性皮炎的患者，进行4周。将本组合物涂敷在腘窝和肘窝上，然后研究结果。
在临床试验中，通过使用Local SCORAD指数评估使用制品之前和之后的效应。通过用4个评分标准(0＝不存在，1＝轻度，2＝中度，3＝严重)对腘窝和肘窝的右侧和左侧的6个强度项(红斑、水肿/丘疹形成(papulation)、渗出/结痂、表皮脱落、苔癣化、干燥)进行程度评级来评估结果，其然后用于显示改善率。
结果显示，在使用制品后存在改善效应，特别地在红斑、渗出/结痂和表皮脱落中存在超过50％的改善(图1)。在使用制品前和使用制品后使用数码相机(Digital Still Camera)(DSC-S75，Sony)拍摄结果(图2)。另外，在使用制品之前和使用制品之后，在腘窝和肘窝的10cm下部通过使用Tewameter TM300(Courage+Khazaka，Germany)来评估每单位面积和每单位时间发生的由于蒸发而引起的水分损失(g/m2·h)。在各时刻经皮的水分损失减少，特别地肘窝上的改善好于腘窝上的改善(图3)。
工业适用范围
本发明是从植物获得的天然成分，并且可通过抑制组胺和白三烯的释放来控制免疫反应。已证实，本发明对于治疗特应性皮炎是安全和有益的，因此，所述组合物可用于治疗和预防特应性皮炎。

Claims (14)

1.用于特应性皮炎的治疗和预防的药物组合物，
其活性成分为竹子提取物和黄芩提取物的混合物，
其中所述竹子提取物和所述黄芩提取物用极性溶剂进行提取，并且竹子提取物对黄芩提取物的重量比是1-10∶1-10，
其中所述极性溶剂选自水、C1-4醇和其混合物。
2.权利要求1的组合物，其中竹子提取物对黄芩提取物的重量比是1-5∶1-5。
3.权利要求1的组合物，其中竹子提取物对黄芩提取物的重量比是1-3∶1-3。
4.权利要求1-3中任一项的组合物，其中竹子提取物是50-90％的乙醇提取物。
5.权利要求1-3中任一项的组合物，其中竹子提取物是热水提取物的溶于乙醇的级分。
6.权利要求4的组合物，其中用水、甲醇、乙醇或其混合物提取黄芩提取物。
7.权利要求5的组合物，其中用水、甲醇、乙醇或其混合物提取黄芩提取物。
8.其活性成分为竹子提取物和黄芩提取物的混合物的组合物用于制备用于治疗和预防特应性皮炎的药物的用途，
其中所述竹子提取物和所述黄芩提取物用极性溶剂进行提取，并且竹子提取物对黄芩提取物的重量比是1-10∶1-10，
其中所述极性溶剂选自水、C1-4醇和其混合物。
9.权利要求8的用途，其中竹子提取物对黄芩提取物的重量比是1-5∶1-5。
10.权利要求8的用途，其中竹子提取物对黄芩提取物的重量比是1-3∶1-3。
11.权利要求8-10中任一项的用途，其中竹子提取物是50-90％的乙醇提取物。
12.权利要求8-10中任一项的用途，其中竹子提取物是热水提取物的溶于乙醇的级分。
13.权利要求11的用途，其中用水、甲醇、乙醇或其混合物提取黄芩提取物。
14.权利要求12的用途，其中用水、甲醇、乙醇或其混合物提取黄芩提取物。
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