JPH03240725A - メイラード反応阻害剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

（産業上の利用分野） 本発明はメイラード反応として知られたブドウ糖等の還
元糖によるタンパク質の劣化の防止に関し、詳しくはブ
ドウ糖がタンパク質に非酵素的に結合して生ずるアマト
リ転移生成物の生成阻害剤に関する。本発明は更に詳し
くは、黄ごんの特定抽出エキス又はパイカリンを含有す
ることを特徴とするメイラード反応阻害剤に関する。 （従来の技術） タンパク質がブドウ糖等の還元糖と非酵素的に反応（以
下「グリコジル化」という。）して褐色化する反応はメ
イラードによって１９１２年に報告［Ｍａｉｌｌａｒｄ
、　Ｌ、Ｃ，、Ｃｏｍｐｔ、　Ｒｅｎｄ、　Ｓｏｃ、　
Ｂｉｏｌ、。 ？２：　５９９（１９１２）］されて以来、食品化学の
分野においてはメイラード反応の名で広く知られてきた
。 すなわち、貯蔵又は加熱処理を受けた食品中でタンパク
質とブドウ糖とが反応して褐色化し、ついにはタンパク
質分子間に交差結合が生じることによりタンパク質の変
成が起こることか知られていた。その後、赤血球中にお
いてヘモグロビンの小成分であるＨｔ）Ｑｌｃが糖尿病
患者において増加しているとのラーバーの報告（Ｒａｈ
ｂａｒ、　Ｓ、、　Ｃｌ１ｎ。 Ｃｈｊｍ、　Ａｃｔａ、２２：　２９６（１９６ｇ））
を機に、生体内におけるブドウ糖とタンパク質との反応
が注目され、Ｈｔ）９．。の構造の解析を通じて、メイ
ラード反応が生体内においても起こっていることが確認
されるに至った。 生体中でのメイラード反応の機構はブラウンリー等によ
って報告されている［Ｂｒｏｖｎｌｅｅ、　Ｍ、　ｅｔ
ａｌ、、　５ｃｉｅｎｃｅ、　２３２：１６２９（１９
８６）］　、即ち、先ずブドウ糖の開環構造において存
するアルデヒド基が蛋白質分子中のアミノ基と反応して
シッフ塩基を形成する。このシッフ塩基は不安定である
ため速やかに分子内転移反応を起こして非酵素的にアマ
トリ転移生成物に変換される。タンパク質が長期間体内
に保持された場合、アマトリ転移生成物は徐々に脱水反
応を起こして新たなブドウ糖誘導体へと変化し、これが
タンパク質分子等の種々の分子と不可逆的に交差結合し
て架橋を形成することにより、主としてタンパク質の重
合体を形成する。 このような進行したグリフシル化生成物は通常Ａ　Ｇ　
Ｅ　（Ａｄｖａｎｃｅｄ　Ｇｌｙｃｏｓｉｌａｔｉｏｎ
　Ｅｎｄ　ｐｒｏｄｕｃｔ）と略称されるが、ＡＧＥの
生成に伴い、タンパク質の生物学的適応性が減弱し溶解
度が低下し、プロテアーゼの作用を受は難くなり、多く
は黄褐色化し蛍光を発するに至る。 メイラード反応は健常人においても認められる現象であ
るが、血糖上昇を特徴とする糖尿病に特に顕著、に認め
られる。また、メイラード反応は代謝回転の比較的緩徐
なタンパク質において顕著であり、例えばコラーゲンや
水晶体の構造タンパク質であるクリスタリン等において
特に著しい。また、糖尿病においては神経障害、白内障
、腎障害、網膜症、関節硬化症、アテローム性動脈硬化
症等種々の合併症が認められるが、これら糖尿病合併症
は老年期に多い疾病と酷似しており、正常な血糖値にあ
っても、ブドウ糖が代謝回転の緩徐なタンパク質をグリ
コジル化して徐々にＡＧＥを形成するものと考えられて
いる。 この様な背景のもとで、生体内におけるメイラード反応
を阻害する物質の探索が行なわれつつあり、例えば、前
記ブラウンリー等によりアミノグアニジンがインビトロ
（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）でメイラード反応を阻止すること
及び同物質の投与が糖尿病ラットの動脈壁におけるＡＧ
Ｈの生成を抑制する事を発表している。また特開昭６２
−１４２１１４号明細書においてアミノグアニジン、α
−ヒドラジノヒスチジン及びリジンがアマトリ転移生成
物中の活性カルボニル基と反応してこれを封鎖し、ＡＧ
Ｅ生成を阻害することが示唆されており、特開昭６４−
５６６１４号明細書において、例えばチオセミカルバジ
ド類、１．３−ジアミノクアニジン、ベンゾイルヒドラ
ジン等、及び特開昭６４８３０５９号明細書において各
種グアニジン誘導体がメイラード反応を抑制することが
開示されている。 （発明が解決しようとする課題） 上記各特開昭明細書においては、メイラード反応の最終
生成物であるＡＧＥの生成量を指標としてメイラード反
応の阻害剤の検討を行なっているが、本発明者はメイラ
ード反応におけるタンパク質の重合の段階における直接
的原因物質であるアマトリ転移生成物の生成自体を阻害
することにより極めて効果的なメイラード反応の阻害が
期待できるとの観点から、アマトリ転移生成物の生成阻
害作用の有無及び強さを実験上の指標とした。 タンパク質のりジン残基のε−アミノ基の非酵素的グリ
コジル化によって生成するアマトリ転移生成物である　
ｇ−Ｎ−（ｆｕｒｏｎｙｌ−ｍｅｔｈｙｌ）−Ｌ−１ｙ
ｓｉｎｅ　　（以下「フロシン」という。）の測定値を
タンパク質の非酵素的グリコジル化の指標となし得るこ
とは、　Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ等［Ｊ、　Ｂｒｕｇｇｅ
ｍａｎｎ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｌｅｂｅｎｓｍ、　Ｕｎｔ
ｅｒｓ、　Ｆｏｒｓｃｈ、、　１３７：　ｐ、１３７−
１４３　（１９６８〉コおよびＦｉｎｏｔ等［Ｐ、Ａ、
　Ｆｉｎｏｔ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｅｘｐｅｒｉｅｎｔｉ
ａ、　２４：　ｐ、Ｉ（１９７−１０９９（１９６ｇ＞
］によって報告されている。本発明者はブドウ糖含有タ
ンパク質水溶液を用いてフロシンを生成させることを試
み、適当な生成条件を求めて検討を重ね、それにより確
立した条件に従って種々の物質のフロシン生成阻害効果
の有無および強さについて検討した。その結果本発明者
は、黄ごん（Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａｅ　Ｒａｄｉｘ）
より水アルコール混合液等により加温下容易に抽出して
得られるエキスに強いフロシン生成阻害効果があること
を見いだし、更に検討を重ねて本発明を完成するに至っ
た。 （問題点を解決するための手段） すなわち、本発明は、黄ごんに含まれるフラボノイドを
薬理ン１性成分として含有することを特徴とするメイラ
ード反応阻害剤であり、また、黄ごんを水アルコール混
合液に加温しながら浸漬することにより得られる抽出液
に水を加えて析出させて採取することのできる、水に難
溶性の析出物よりなるエキス（以下「エキスＡ」という
。）を薬理活性成分として含有することを特徴とするメ
イラード反応阻害剤であり、更に、黄ごんに含有される
フラボノイドの一つであるパイカリンを含有する事を特
徴とするメイラード反応阻害剤である。 黄ごんはコバネバナ［Ｓ　ｃ　ｕ　ｔ　ｅ　Ｉ　Ｉ　ａ
　ｒ　ｉ　ａｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓ　Ｇｏｒｇｉ　（
Ｌａｂｉａｔａｅ）　］の周皮を除いた根であり、黄ご
ん湯、黄連解毒湯、小柴胡湯、犬柴胡湯その他多、数の
処方に配合されており、漢方薬において重用されている
生薬である。黄ごんには、パイカリン、バイカレイン、
オウゴニンその他のフラボノイドが含有されることが知
られている。黄ごんに含まれる成分の薬理作用としては
、黄ごんのエタノールエキス、パイカリン（ｂａｉｃａ
ｌｉｎ）及びパイカレイン（ｂａｉｃａｌｅｉｎ）に胆
汁排泄促進作用、利尿作用、緩下作用、抗アレルギー作
用が、メタノールエキスに抗炎症作用及び解熱作用が、
エーテルエキスには抗菌作用が、パイカリン及びパイ力
レインに網線血管透過性抑制作用、抗アセチルコリン作
用、抗アナフイラキシー作用、実験的喘息抑制作用、パ
イカリンには肝障害による血清ＧＯＴ、ＧＰＴ値上昇抑
制作用、フラボノイド成分に肝コレステロール、遊離脂
肪酸、トリグリセリド低下作用等が既に知られている（
以上第１１改正日本薬局方解説書、Ｄ−１１５，１９８
６年）。しかしながら、黄ごんの抽出エキス又はこれに
含有される各成分についてのメイラード反応阻害作用に
関する報告は未だなく、本発明者らの研究によって初め
て明らかにされたものである。 黄ごんに含まれるフラボノイドは、黄ごんを例えば水、
アルコールまたはこれらの混合液に浸漬し加熱すること
により、パイカリン、バイカレイン、オウゴニンの他事
数の成分を含む抽出物として得ることができる。 黄ごんよりエキスＡを得るには、例えば黄ごん末に精製
水を加えて２乃至３時間４ｏ乃至６０　℃に加温して前
処理した後、エタノール又はメタノール等の低級アルコ
ールを加えてアルコール濃度を約７０〜８０　ｗ　／　
ｖ％として加温下に更に浸漬し、加温下に濾過して、場
合により更に濾液にセルロースを加えて再度濾過し、濾
液に水を加えるか又はアルコールを減圧留去等により除
くことにより、アルコール濃度を約２５ｗ／ｖ％以下と
して放置し析出する結晶を濾取、乾燥することによって
得ることができる。エキスＡは主としてバイカレインを
含有し、他に少量のオウゴニンおよび微量のパイカリン
その他の塩化第二鉄メタノールによる液量色反応陽性の
物質を含有する。 本発明のメイラード反応阻害剤はメイラード反応を原因
として生ずると考えられる前述の諸疾患の治療又は予防
に用いることができる。 当該目的に供する場合、本発明のメイラード反応阻害剤
は経口的に又は非経口的に投与することができる。また
、非経口的投与の場合には例えば点眼剤等として局所的
に投与することもできる。 本発明のメイラード反応阻害剤の投与量は、経口投与に
おいては通常、１日ｆｉ　１　ｍ　ｇ−１０００ｍｇの
範囲、より好ましくは１日ｊ１５　ｍ　ｇ〜２００ｍｇ
の範囲で、また点眼液剤としての投与においては通常、
０．０５ｗ／ｖ％〜５　ｗ　／　ｖ％の範囲、より好ま
しくは０．１ｗ／ｖ％〜２．Ｏｗ／ｖ％の範囲の水性の
液として、投与を行なうことができる。ただし、投与量
はこれらの記載によって必ずしも限定されるものではな
く、疾患の種類、重篤度及び治療計画等により適宜設定
され得る。 本発明のメイラード反応阻害剤は、経口投与のための例
えば錠剤、乳剤、散剤、顆粒剤若しくはカプセル剤等ま
た点眼のための例えば点眼液剤、もしくは点眼軟膏剤等
の適宜の形態にすることができる。 本発明のメイラード反応阻害剤を経口投与用錠剤の形態
とするには、例えばヒドロキンプロピルセルロース、結
晶セルロース、コーンスターチ、ポリビニルピロリドン
、メタ珪酸アルミン酸マグネンウム等の希釈剤、ステア
リン酸マグネシウム等の滑沢剤、繊維素グルコン酸カル
シウム等の崩壊剤、グルタミン酸又はアスパラギン酸等
の溶解補助剤その他錠剤の製造に通常使用される成分を
加えることができる。また本発明のメイラード反応阻害
剤を点眼剤の形態とするには、例えば、リン酸塩、はう
酸塩、酢酸塩、クエン酸塩又はグルタミン酸等の緩衝剤
、クロロブタノール、クロルヘキシジンジグルコネート
、メチルパラベン、フロビルバラヘンまたは塩化ベンザ
ルコニウム等の保存剤、亜硫酸ナトリウム、重亜硫酸ナ
トリウム、チオ硫酸ナトリウム又はエデト酸二ナトリウ
ム等の安定化剤、塩化ナトリウム、塩化カリウム及びグ
リセリン、マンニトール、ソルビトール等の等張化剤、
又はポリソルベート８０．　　シフロブ牛ストリン等の
溶解補助剤、その他点眼剤の製造に通常使用される成分
を加えることができる。 （作用） 本発明のメイラード反応阻害剤は、メイラード反応にお
けるタンパク質分子間架橋形戊の直接の原因物質たるア
マトリ転移生成物の生成自体を阻害するので、種々の糖
尿病合併症、例えば冠動脈性心疾患、抹消循環障害、脳
血管障害、神経症、腎症、動脈硬化、関節硬化症、白内
障及び網膜症又は老化により引き起こされる同種の疾患
例えばアテローム性動脈硬化症、冠動脈性心疾患、脳血
管障害、老人性白内障等の治療又は予防に用いられる。 （実験例） 本発明のメイラード反応阻害剤の効果は下記の通りの実
験により確認した。 バイカリン、バイカレイン及びオウゴニンは市販のもの
（氷山薬品工業）を使用し、エキスＡは以下の方法によ
って調整して使用した。 エキスＡの調製 黄ごん末１０ｇに精製水６０ｍ２を加え、５０℃にて３
時間の浸漬により前処理した後、浸漬液にエタノール１
８０ｍＱを加えて、５０℃にて更に１時間浸漬すること
により抽出を行い、温時濾過して濾液を得る。加温下に
該濾液にセルロース約３０ｇを添加して撹拌した後濾過
し、濾液に濾液の液量の約２倍量相当するの精製水を加
え、４℃に冷却して放置し、析出物を濾取し乾燥して、
エキスＡとして黄色結晶０．５５ｇを得た。 エキスＡの組成 上記抽出によって得られたエキスＡは、薄層クロマトグ
ラフィー（シリカゲル　Ａｒｔ５７１５：メルク社製）
上、ｎ−ブタノール：酢酸：水（４０：１０：５０）の
混合液による展開後、塩化第二鉄メタノール液（１ｗ　
／　ｖ％温溶液の噴霧による呈色反応で、標品であるパ
イ力レイン（Ｒｆ値：０．８５）に対応する位置（Ｒｆ
値：０．８２）に強い呈色反応が、標品であるオウコ゛
ニン（Ｒｆ値：０．８８）に対応する位置（Ｒｆ値＝０
゜８８）に中等度の呈色反応が、標品であるノくイカリ
ン（Ｒｆ値：０．３５）に対応する位置（Ｒｆ値：０．
３５）に微弱な呈色反応が、並びにＲｆ値０．２８およ
びＲｆ値０．４３にそれぞれ微弱な呈色反応がみられた
。また同一試料、同一条件による展開についての５０％
硫酸噴霧による呈色反応によっても同様の結果が得られ
た。これらの結果から、エキスＡはバイカレインを主成
分とし、他にオウゴニンと微量の７＜イカリンその地歩
なくとも２種のフラボメイドと推定されるフェノール性
水酸基保有物質を含有する。 （実験方法） 牛血清アルブミン（Ｎｏ、　Ａ−８０２２：シグマ社）
（以下ｒＢｓＡＪと略記する。〉及びｐＨ７，３の５０
ｍＭ’Ｊン酸緩衝液及び表１に示す各試験試料及びアミ
ノグアニジンを用いて下記の通りのサンプル溶液を無菌
的に調製し、３７℃で４週間保存し、非酵素的グリコジ
ル化の進行に伴って生成するフロシンを５ｃｈｌｅｉｃ
ｈｅｒ等の方法［Ｅ、　５ｃｈｌｅｉ−ｃｈｅｒ　ｅｔ
　ａｌ、、　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、、　
１９：　ｐ、８ｌ−８７（１９８１）］に準じて高速液
体クロマトグラフィーにより定量した。すなわち、反応
後のサンプルを透析後、各１ｍｌを凍結乾燥し、６Ｎ塩
酸１ｍｌを加えて１００℃で２０時間加水分解を行い、
塩酸を留去した後、水１ｍｌを加えて０．４５μｍのフ
ィルターにて濾過し、高速液体クロマトグラフィー用の
試料とした。カラムには０ＤＳ−１２０Ｔ（東ソー）を
、溶離岐には７ｍＭのリン酸溶液を用い、検出波長２３
０ｎｍ及び２５４ｎｍにての吸収ピークの比が３，９：
１であるピークをフロシンのピークとした。 （リン酸緩衝液中の組成） （正常群）：　ＢＳＡ　　２０ｍｇ／ｍｌ（対照群）：
　ＢＳＡ　　２０ｍｇ／ｍ＋＋ブドウ糖０ｍＭ （被験群）：　ＢＳＡ　　２０ｍｇ／ｍｌ＋ブドウ糖５
０ｍＭ＋試料 試料濃度：エキスＡ；２ｍｇ／ｍｌ パイカリン；５ｍＭ アミノグアニジン；５ｍＭ 各群のサンプルのフロシン定量結果より、次の式を用い
て各被験物質のフロシン生成阻害率を算出した。 阻害率（％）＝　（ｃ−ｄ）　　：　　（ｃ−ｎ）　Ｘ
Ｉ　００但し、Ｃ：対照群のフロシンのピーク面積ｄ：
被験群のフロシンのピーク面積 ｎ：正常群のフロシンのピーク面積 （結果） 次の表１に示すとおり、エキスＡおよびパイカリンには
メイラード反応の公知の阻害剤たるアミノグアニジンに
較べてそれぞれ著しく強い阻害効果が認められた。 表１

【実施例】

本発明のメイラード反応阻害剤の製剤実施例を示す。 （実施例１）　内服錠 下記成分を１錠分として常法により製造する。 必要に応じ糖衣を施す。 エキスＡ　　　　　　　　　　　５０ｍｇ乳糖　　　　
　　　　　　　８０ｍｇ コーンスターチ　　　　　　　１７ｍｇステアリン　マ
グネシウム　　３ｍ （実施例２）　内服錠 下記成分を１錠分として常法により製造する。 必要に応じ糖衣を施す。 パイカリン コーンスターチ 乳糖 ヒドロキシブ０ビルセル０−ス ステアリン酸マグネシウム （実施例３）　カプセル剤 下記成分を常法に従って混和し、顆粒状としたものをカ
プセルに各１個１００ｍｇ充填する。 エキスＡ　　　　　　　　　　１０ｍｇコーンスターチ
　　　　　　４５ｍｇ 乳糖　　　　　　　　　　　　２０ｍｇ結晶セルロース
　　　　　　２４ｍｇ タルク　　　　　　　　　　　０．　５ｍｇ００ｍｇ 　０ｍｇ ０ｍｇ ５ｍｇ ５ｍ ステアリン酸マグネシウム　０．５ｍ （実施例４）　点眼剤 下記の成分を常法により混合撹拌して懸濁液とし、加熱
滅菌の後容器に無菌充填して製する。 エキスＡ　　　　　　　　　　００１ｇリン酸二水素ナ
トリウム　　　０．１ｇ塩化ナトリウム　　　　　　　
０．７ｇエデト酸二ナトリウム　　　　０．０２ｇクロ
ロブタノール　　　　　　０．２ｇポリソルベート８０
　　　　　０．　２ｇポリビニルピロリドンに３０　０
．１５ｇ亜硫酸ナトリウム　　　　　　０．２ｇＩＮ　
　ＮａＯＨ適量 滅菌　製水　　　　　　　　　　量 全　　　量　　ｐＨ６，５１００ｍｇ （実施例５）　点眼剤 下記成分を常法により混合して溶液とし、無菌濾過して
容器に充填して点眼剤とする。 パイカリン　　　　　　　　０．３ｇ 塩化ナトリウム　　　　　　０．３ｇ マンニトール　　　　　　　０．２ｇ 酢酸ナトリウム　　　　　　０．２ｇ エデト酸ナトリウム　　　　０．０２ｇポリソルベート
８０　　　　０．１ｇ クロロブタノール　　　　　０．２ｇ 亜硫酸ナトリウム　　　　　０．２ｇ Ｎ ＮａＯＨ

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）黄ごんに含まれるフラボノイドを薬理活性成分と
   して含有することを特徴とする、メイラード反応阻害剤
   。
2. （２）黄ごんを水と低級アルコールとの混合液に浸漬し
   て加温して得られる抽出液より、該抽出液量の２倍以上
   の水を加えるか又はアルコールを気散させることにより
   、アルコール濃度を約２５ｗ／ｖ％以下に低下させるこ
   とによって析出して得られるエキスを薬理活性成分とし
   て含有することを特徴とする、メイラード反応阻害剤。
3. （３）加温の温度が約４０℃乃至６０℃でかつ、水と低
   級アルコールの混合液が水約２０乃至３０重量部に対し
   メタノール又はエタノール約８０乃至７０重量部の混合
   液である、特許請求の範囲第２項記載のメイラード反応
   阻害剤。
4. （４）バイカリンを薬理活性成分として含有することを
   特徴とするメイラード反応阻害剤。