一种治疗结肠癌的杜仲靶向制剂及其制备方法
技术领域
本发明属于中药领域,具体涉及一种治疗结肠癌的杜仲靶向制剂及其制备方法。
背景技术
结肠癌(carcinomaofcolon)是消化道常见的恶性肿瘤,可发生于结肠的任何部位,以乙状结肠最为多见。据世界流行病学调查,结肠癌在北美、西欧、澳大利亚、新西兰等地的发病率最高,位居恶性肿瘤的前二、三位。在我国,据最新研究资料报道,结直肠癌发病率和死亡率呈逐年上升趋势,尤其在一些大城市,结直肠癌的发病率上升迅速,如上海,结直肠癌的发病率已从早前的第五位上升到第二位,已接近第一位肺癌的发病率。
由于结肠癌起病隐匿,早期临床症状不明显,到症状显现后,大多已属中晚期。迄今为止,国际上对结肠癌尚无有效的治疗方法,西医最有效的治疗手段仍以手术切除为早期结肠癌首选的治疗方法,辅以全身治疗(化疗、放疗、免疫治疗等)。但随之而来的术后综合症,复发、转移,及放化疗出现不同程度的毒副反应等,致使许多患者无法承受而被迫中断治疗,严重威胁患者的生命。此外,昂贵的治疗费用也让患者望而怯步。
近年来的研究表明,中医中药治疗结肠癌多学科综合疗法已被广泛应用,并在结肠癌的临证治疗中充分发挥其辩证施治和多靶点治疗的优势,尤其是对于不能耐受手术者,且伴有其他重要脏器疾病的中、晚期患者,多采用扶正固本、活血化瘀、止痛散结、清热解毒等辨证施治方法,疗效显著,不仅对控制疼痛、降低毒副作用,而且对提高患者生存期质量和延长生命等方面具有独特的优势。
杜仲为杜仲科植物杜仲EucommiaulmoidesOliv.的干燥树皮,别名思仙、木棉等,始载于《神农本草经》,列为中药上品,具有补肝肾、强筋骨、安胎等功效。现代研究表明杜仲含有多种活性成分,其中杜仲中木脂素类化合物、环烯醚萜类化合物、苯丙素类化合物及多糖均具有较好的抗肿瘤活性。由于目前中医临床对结肠癌的治疗大多采用口服、灌肠或两者皆用给药。一般口服给药入胃后极易发生分解,稳定性差,无法使药物以高浓度分散到作用部位发挥疗效。除此之外,肝脏首过效应,使得部分药物在肝脏分解,难以直达病变部位,未能发挥最大限度的治疗作用。
口服结肠靶向给药系统(oralcolontargeting-drugdeliverysystem,0CTDS),又称口服结肠定位给药系统。OCTDS是通过药物传递技术,使药物经口服后,在上消化道不释放,将药物运送到人体回盲部后开始崩解或蚀解并释放出来,从而使药物在人体结肠发挥局部或全身治疗作用。现今,以西药为原料的结肠靶向制剂研发已相当普遍,但中药及中药复方制剂的上市品种非常有限。
结肠是人类消化道细菌集中生存的地方,细菌数量可达1011-14个左右,而在胃和小肠处只有101-3个左右。这种独特的菌群分布可用于特殊给药设计,即,寻找和筛选可被微生物分解的药用材料包裹药物,当被包裹药物到达结肠部位时,结肠存在的特殊菌群将包裹材料分解,使被包裹药物从中释放,达到药物在结肠定位释放的目的。由于该给药载体在消化道转运过程中,只有遇到大量细菌的情况下才释放药物,所以它受消化道其它生理因素的影响很小,是一种机理很新颖的靶向给药技术。总之,菌群触发型结肠靶向给药系统是该领域目前最具前景的研究方向。
目前,人们对菌群触发型结肠给药系统的研究主要集中在两大方向上。方向之一是利用结肠菌丛产生的偶氮降解酶,采用药物合成手段将活性成分制成偶氮前体药物,临床应用较多的有5-氨基水杨酸偶氮磺胺嘧啶等。另一方向是选用多糖类大分子,采用药物制剂技术制备结肠递送载体,将活性成分靶向输送到结肠病灶部位,原因是多糖类大分子可作为结肠菌群的糖源而能被专一性降解。作为天然化合物,多糖不仅价廉易得,而且其安全性已经长期使用证实并多已被作为药用辅料收载入各国药典。这类化合物主要有:果胶、直链淀粉、葡聚糖、瓜耳豆胶、硫酸软骨素、环糊精、壳聚糖等。此方向由于具有不可比拟的优越性,正引起越来越多的关注。
中药靶向制剂是以中药为原料,提取其有效部位或单体,采用不同的载体制成的药物制剂。中药结肠靶向给药制剂能解决普通制剂口服后在到达结肠和直肠前被吸收或降解的问题,可使全结肠释药分布均匀,提高结肠病变部位药物浓度,减少服用剂量,降低对胃肠道的刺激和药物经吸收后引起的毒副作用,从而发挥最佳的疗效,利于治疗。此外,还可避免口服给药在胃肠道破坏及肝脏的首过效应,起到了增效减毒和提高患者用药的依从性,并可较大幅度地减轻患者医疗负担。此类制剂还能替代某些毒副作用大或需直肠给药的药物,尤其是对结肠癌等肠道疾病的治疗极为有利。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种用于治疗结肠癌的杜仲组合物,其具体由重量百分比为10~80%的杜仲苯丙素,10~80%的杜仲环烯醚萜和10~80%的杜仲多糖组成。
在本发明的实施方案中,所述杜仲组合物其重量百分比优选为:40%的杜仲苯丙素,30%的杜仲环烯醚萜和30%的杜仲多糖组成。
本发明的中药有效部位提取物可用现有技术自制或通过商业渠道获得,也可本发明列出的方法进行制备。
杜仲环烯醚萜的制备:杜仲皮烘干、粉碎、过筛,以杜仲鲜皮为佳。称取处理后的杜仲皮20千克,采用常规浸提,以15倍的液固比加入70%。乙醇-水溶液为提取剂,在60℃条件下提取2小时,重复3次。将提取液过滤、浓所,用盐酸调至pH2.5;采用正丁醇萃取,收集萃取液,浓缩液冷却到-10~-20℃,再置于冷冻干燥器中冷却到-45~-65℃,真空度<20Pa,时间24~48小时低温真空干燥,得到环烯醚萜活性部位675.3克,总环烯醚萜化合物含量为78.5%。
杜仲多糖制备:取杜仲药材100g粉碎后以95%乙醇冷浸提取三次,每次7天,滤过,药渣于室温下通风处晾干,然后用热水提取3次,滤过,合并提取液,浓缩,离心,上清液以三氯醋酸去游离蛋白,离心,上清液浓缩后流水透析3天,透析液浓缩至小体积后加乙醇至含醇量80%,沉淀用丙酮、乙醇洗涤后冷冻干燥即得总多糖提取物2.74g。
杜仲苯丙素的制备:杜仲药材粉碎,取5kg,投入微波提取罐,加30kg水微波提取25分钟,提取三次,合并提取液滤过用截留分子量2000的中空纤维素膜超滤,收集透过液加入截留分子量为300的中空纤维素膜系统浓缩。浓缩液加入活性炭柱(装300g颗粒活性炭),吸附结束后,取4BV50%的乙醇溶液洗脱杂质,再用5BV90%乙醇洗脱目标成分,收集目标成分,减压浓缩,真空干燥得杜仲苯丙素174.5g。
本发明的另一个目的是提供一种包含上述杜仲组合物的靶向制剂,其由杜仲组合物和辅料组成。
所述辅料选自果胶、果胶钙、聚丙烯酸树脂、壳聚糖、β-环糊精、乳糖、磷酸氢钙、葡聚糖、直链淀粉、瓜耳豆胶、硫酸软骨素、海藻酸钠、滑石粉、微粉硅胶、碳酸氢钙或硬脂酸镁中一种或多种。
在本发明的一个实施方案中,所述辅料优选为果胶钙、硫酸软骨素、直链淀粉、乳糖、和微粉硅胶。
在本发明的一个实施方案中,所述杜仲靶向制剂的重量份组成为:
在本发明的一个实施方案中,所述杜仲靶向制剂的重量份组成为:
在本发明的另一个实施方案中,所述杜仲靶向制剂的重量份组成为:
本发明的另一个目的是提供一种制备上述杜仲靶向制剂的方法,具体步骤如下:
(1)将杜仲组合物、果胶钙、硫酸软骨素、和乳糖搅拌混合15分钟;
(2)将直链淀粉用水配制成10%的溶液,加入到混合物中进行制粒,过16目筛,40℃干燥1小时,整粒,加入微粉硅胶混匀,按常规法压片,即得杜仲靶向片。
在本发明进一步地实施方案中,在所述杜仲靶向片外进行包衣,包衣溶液的组方重量比为:25份的优特奇(Eudragit)L,10份的优特奇(Eudragit)E,10份的滑石粉和450份的80%乙醇溶液。包衣方法为:将杜仲靶向片置于包衣锅内,喷入包衣溶液,进风温度50-60℃,包衣液流速为1.0ml/min,雾化压力为0.3MPa,转速为15r/min,进行包衣即得。
具体实施方式
下面将进一步的详细说明本发明。需要指出的是,以下说明仅仅是对本发明要求保护的技术方案的举例说明,并非对这些技术方案的任何限制。本发明的保护范围以所附权利要求书记载的内容为准。
实施例1杜仲组合物对人结肠癌细胞SW480增殖的影响
SW480培养于含10%的DMEM培养基中,培养3天后传代,待到对数生长期时收集细胞,铺入96孔板,将杜仲组合物溶于DMEM培养基中,加入到96孔板至终浓度50mg/L,对照组加入等量DMEM培养基,每组设5个复孔,杜仲组合物各组重量百分组成如下:
% |
杜仲苯丙素 |
杜仲环烯醚萜 |
杜仲多糖 |
给药组1 |
100 |
0 |
0 |
给药组2 |
0 |
100 |
0 |
给药组3 |
0 |
0 |
100 |
给药组4 |
20 |
20 |
60 |
给药组5 |
40 |
30 |
30 |
给药组6 |
20 |
30 |
40 |
培养48h后,采用CKK-8法检测SW480的增殖,测定450nm吸光度,计算各给药组抑制率,抑制率为(对照组-给药组)/对照组×100%,具体结果如下:
|
抑制率(%) |
给药组1 |
27.5±2.7 |
给药组2 |
35.2±2.3 |
给药组3 |
16.4±1.9 |
给药组4 |
59.8±3.1 |
给药组5 |
89.4±4.4 |
给药组6 |
64.7±3.5 |
实施例2杜仲靶向片的制备
将杜仲组合物、果胶钙、硫酸软骨素、和乳糖搅拌混合15分钟;将直链淀粉用水配制成10%的溶液,加入到混合物中进行制粒,过16目筛,40℃干燥1小时,整粒,加入微粉硅胶混匀,按常规法压片,即得杜仲靶向片,片重300mg。杜仲组合物组成为40%的杜仲苯丙素,30%的杜仲环烯醚萜和30%的杜仲多糖组成。
实施例3-5
除下表组成外,其他均与实施例2同,
g |
实施例3 |
实施例4 |
实施例5 |
杜仲组合物 |
400 |
400 |
400 |
果胶钙 |
150 |
250 |
250 |
硫酸软骨素 |
100 |
150 |
0 |
直链淀粉 |
100 |
150 |
150 |
乳糖 |
2 |
4 |
2 |
微粉硅胶 |
2 |
4 |
2 |
实施例6杜仲靶向片的释放度考察
采用转篮法测定释放度,转速为100rpm,温度37℃,在人工胃液中考察3小时,然后再将样品置于人工小肠液中考察4小时,再将样品置于人工结肠液中考察3小时,采用HPLC法检测测定前样品及各人工液中的绿原酸和京尼平苷的含量,计算各步人工液中的释放度,释放度=人工液中药物含量/测定前样品中药物含量×100%,具体结果如下:
实施例7杜仲靶向片的药代动力学研究
取SD大鼠,体重220g左右,灌胃给予杜仲靶向片500mg/kg,给药一次,给药后15min,30min,1h,2h,4h,6h,12h分别处死大鼠,分离组织,匀浆,萃取,HPLC测定大鼠心脏、肺、胃、结肠和肝脏部位绿原酸的药物浓度,通过DASver1.0软件对各组织药物浓度进行拟合和分析,计算绿原酸在各器官中的AUC,具体结果如下:
杜仲靶向片对相对摄取率(re)的影响
re |
实施例2 |
实施例3 |
实施例4 |
实施例5 |
心脏 |
1.96 |
3.81 |
4.98 |
7.79 |
肺 |
0.64 |
1.24 |
1.61 |
3.27 |
胃 |
0.02 |
0.27 |
0.32 |
0.38 |
结肠 |
12.17 |
6.30 |
7.61 |
3.65 |
相对摄取率(re)=AUC靶向组/AUC对照组,re值越大,说明对该靶器官靶向性越好,对照组为杜仲组合物普通制剂,辅料为淀粉440g、乳糖3g和微粉硅胶2g,其他制备同实施例2.
杜仲靶向片对相对靶向系数(te)的影响
te |
实施例2 |
实施例3 |
实施例4 |
实施例5 |
心脏 |
14.86364 |
3.954925 |
3.659004 |
1.123366 |
肺 |
11.76864 |
3.150266 |
2.935451 |
0.692695 |
胃 |
381.5 |
15.1859 |
15.15873 |
6.138393 |
肝脏 |
10.10596 |
2.340909 |
2.130112 |
0.49855 |
相对靶向系数(te)=AUC结肠/AUC其他器官,te值越大,说明对该靶器官靶向性越好
实施例8杜仲靶向片的包衣片制备
对实施例2-5制备的杜仲靶向片外进行包衣,包衣溶液的组方重量比为:25份的优特奇(Eudragit)L,10份的优特奇(Eudragit)E,10份的滑石粉和450份的80%乙醇溶液。包衣方法为:将杜仲靶向片置于包衣锅内,喷入包衣溶液,进风温度50-60℃,包衣液流速为1.0ml/min,雾化压力为0.3MPa,转速为15r/min,进行包衣即得,平均包衣增重5%。
本发明内容仅仅举例说明了要求保护的一些具体实施方案,其中一个或更多个技术方案中所记载的技术特征可以与任意的一个或多个技术方案相组合,这些经组合而得到的技术方案也在本申请保护范围内,就像这些经组合而得到的技术方案已经在本发明公开内容中具体记载一样。