JP4855632B2 - 変更された性質を有するα−アミラーゼ突然変異体 - Google Patents
変更された性質を有するα−アミラーゼ突然変異体 Download PDFInfo
- Publication number
- JP4855632B2 JP4855632B2 JP2002516073A JP2002516073A JP4855632B2 JP 4855632 B2 JP4855632 B2 JP 4855632B2 JP 2002516073 A JP2002516073 A JP 2002516073A JP 2002516073 A JP2002516073 A JP 2002516073A JP 4855632 B2 JP4855632 B2 JP 4855632B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- amylase
- bacillus
- amino acid
- variant
- composition
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 title claims description 183
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 title claims description 173
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 title claims description 143
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 28
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 26
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 24
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 23
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 20
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 20
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 19
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 19
- 102220123717 rs759057581 Human genes 0.000 claims description 19
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 18
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims description 16
- 241000194108 Bacillus licheniformis Species 0.000 claims description 16
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 11
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims description 11
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 11
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims description 11
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims description 11
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000011575 calcium Substances 0.000 claims description 10
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 241000193744 Bacillus amyloliquefaciens Species 0.000 claims description 9
- 108010073178 Glucan 1,4-alpha-Glucosidase Proteins 0.000 claims description 8
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 8
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 8
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 claims description 7
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 claims description 7
- 241000193385 Geobacillus stearothermophilus Species 0.000 claims description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 7
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 7
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 7
- 102100022624 Glucoamylase Human genes 0.000 claims description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 5
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 4
- 238000004851 dishwashing Methods 0.000 claims description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 4
- 241000193752 Bacillus circulans Species 0.000 claims description 3
- 241000194109 Paenibacillus lautus Species 0.000 claims description 3
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 3
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 3
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 3
- 241000193749 Bacillus coagulans Species 0.000 claims description 2
- 241000193422 Bacillus lentus Species 0.000 claims description 2
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 claims description 2
- 241000193388 Bacillus thuringiensis Species 0.000 claims description 2
- 102100032487 Beta-mannosidase Human genes 0.000 claims description 2
- 241000193764 Brevibacillus brevis Species 0.000 claims description 2
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 claims description 2
- 108010022172 Chitinases Proteins 0.000 claims description 2
- 102000012286 Chitinases Human genes 0.000 claims description 2
- 108010025880 Cyclomaltodextrin glucanotransferase Proteins 0.000 claims description 2
- 108010029541 Laccase Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 claims description 2
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 claims description 2
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 claims description 2
- 230000003625 amylolytic effect Effects 0.000 claims description 2
- 229940054340 bacillus coagulans Drugs 0.000 claims description 2
- 229940097012 bacillus thuringiensis Drugs 0.000 claims description 2
- 108010055059 beta-Mannosidase Proteins 0.000 claims description 2
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 claims description 2
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 claims description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 claims description 2
- 108010011619 6-Phytase Proteins 0.000 claims 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims 1
- 108010061330 glucan 1,4-alpha-maltohydrolase Proteins 0.000 claims 1
- 229940085127 phytase Drugs 0.000 claims 1
- 102200080006 rs118204447 Human genes 0.000 claims 1
- 239000004753 textile Substances 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 37
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 29
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 26
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 19
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 19
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 18
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 18
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 18
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 18
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 16
- 102220276873 rs1060502036 Human genes 0.000 description 13
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 10
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 8
- 108010075550 termamyl Proteins 0.000 description 8
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 6
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 6
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 6
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 5
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 5
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 5
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 5
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 5
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 5
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 5
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 5
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 4
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 3
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 3
- 108010029675 Bacillus licheniformis alpha-amylase Proteins 0.000 description 3
- 239000006171 Britton–Robinson buffer Substances 0.000 description 3
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 3
- -1 SP690 Chemical compound 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 3
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 3
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 3
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 3
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 3
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 3
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 3
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 description 2
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 description 2
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 108010017826 DNA Polymerase I Proteins 0.000 description 2
- 102000004594 DNA Polymerase I Human genes 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 102100024295 Maltase-glucoamylase Human genes 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 241000187398 Streptomyces lividans Species 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- 108010028144 alpha-Glucosidases Proteins 0.000 description 2
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 2
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 2
- 238000009990 desizing Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 2
- 239000002657 fibrous material Substances 0.000 description 2
- 238000003348 filter assay Methods 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 2
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 2
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 2
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 2
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 2
- 150000002482 oligosaccharides Polymers 0.000 description 2
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 description 2
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 2
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 2
- 102220253319 rs1307934269 Human genes 0.000 description 2
- 102220213092 rs201163858 Human genes 0.000 description 2
- 102200148528 rs587776998 Human genes 0.000 description 2
- 102220059790 rs587782176 Human genes 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 101710081721 Alpha-amylase A Proteins 0.000 description 1
- 229920000856 Amylose Polymers 0.000 description 1
- 102000004580 Aspartic Acid Proteases Human genes 0.000 description 1
- 108010017640 Aspartic Acid Proteases Proteins 0.000 description 1
- 241000194107 Bacillus megaterium Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 102220622497 G protein-coupled receptor kinase 6_N9A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 101100001650 Geobacillus stearothermophilus amyM gene Proteins 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 101100175482 Glycine max CG-3 gene Proteins 0.000 description 1
- 102220466851 HLA class II histocompatibility antigen, DR beta 4 chain_V59A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 101100295959 Halobacterium salinarum (strain ATCC 700922 / JCM 11081 / NRC-1) arcB gene Proteins 0.000 description 1
- 241000066956 Heliophila Species 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 239000006142 Luria-Bertani Agar Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 229910021380 Manganese Chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L Manganese chloride Chemical compound Cl[Mn]Cl GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102100026367 Pancreatic alpha-amylase Human genes 0.000 description 1
- 108010029182 Pectin lyase Proteins 0.000 description 1
- 108010059820 Polygalacturonase Proteins 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 239000012614 Q-Sepharose Substances 0.000 description 1
- 241000959173 Rasamsonia emersonii Species 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000235403 Rhizomucor miehei Species 0.000 description 1
- 101000968489 Rhizomucor miehei Lipase Proteins 0.000 description 1
- 241000235346 Schizosaccharomyces Species 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 102220566132 Sickle tail protein homolog_S56A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 241001468239 Streptomyces murinus Species 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 101100157012 Thermoanaerobacterium saccharolyticum (strain DSM 8691 / JW/SL-YS485) xynB gene Proteins 0.000 description 1
- 102000005924 Triose-Phosphate Isomerase Human genes 0.000 description 1
- 108700015934 Triose-phosphate isomerases Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 102220515105 Vacuolar protein sorting-associated protein 4A_A30F_mutation Human genes 0.000 description 1
- 108010048241 acetamidase Proteins 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000001294 alanine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 101150069003 amdS gene Proteins 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229940025131 amylases Drugs 0.000 description 1
- 101150008194 argB gene Proteins 0.000 description 1
- 210000004507 artificial chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 1
- 230000010310 bacterial transformation Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001201 calcium disodium ethylene diamine tetra-acetate Substances 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 101150055766 cat gene Proteins 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 238000007621 cluster analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N dATP Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N dATP Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J dCTP(4-) Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)C1 RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J 0.000 description 1
- HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N dGTP Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 1
- NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N dTTP Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)C1 NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- MCPLVIGCWWTHFH-UHFFFAOYSA-M disodium;4-[4-[[4-(4-sulfoanilino)phenyl]-[4-(4-sulfonatophenyl)azaniumylidenecyclohexa-2,5-dien-1-ylidene]methyl]anilino]benzenesulfonate Chemical group [Na+].[Na+].C1=CC(S(=O)(=O)O)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[NH+]C=2C=CC(=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(NC=3C=CC(=CC=3)S([O-])(=O)=O)=CC=2)C=C1 MCPLVIGCWWTHFH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 108010093305 exopolygalacturonase Proteins 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 239000000446 fuel Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 125000001475 halogen functional group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 239000004179 indigotine Substances 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000010412 laundry washing Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 101150039489 lysZ gene Proteins 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011565 manganese chloride Substances 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 101150095344 niaD gene Proteins 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 108090000021 oryzin Proteins 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102220283291 rs1000113630 Human genes 0.000 description 1
- 102200074432 rs104894779 Human genes 0.000 description 1
- 102220247651 rs1251834592 Human genes 0.000 description 1
- 102200096028 rs137852883 Human genes 0.000 description 1
- 102220204637 rs137852883 Human genes 0.000 description 1
- 102220227591 rs137852883 Human genes 0.000 description 1
- 102220283043 rs1555526506 Human genes 0.000 description 1
- 102200043446 rs281875252 Human genes 0.000 description 1
- 102220032811 rs367543159 Human genes 0.000 description 1
- 102220095094 rs876660608 Human genes 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M sodium nitrite Substances [Na+].[O-]N=O LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000020985 whole grains Nutrition 0.000 description 1
- 101150110790 xylB gene Proteins 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
- C12N9/2411—Amylases
- C12N9/2414—Alpha-amylase (3.2.1.1.)
- C12N9/2417—Alpha-amylase (3.2.1.1.) from microbiological source
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
- C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
- C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
- C11D3/16—Organic compounds
- C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
- C11D3/386—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
- Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
- Y02E50/10—Biofuels, e.g. bio-diesel
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Detergent Compositions (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
発明の分野
本発明は、親Termamyl様α−アミラーゼの変異体(変異体)に関する。この変異体は、α−アミラーゼ活性を有しかつ前記親α−アミラーゼに関して下記の性質の少なくとも1つにおいて変更を示す:例えば、特に高い温度および/または低いpH条件、特に低いカルシウム濃度における、安定性。本発明の変異体は、澱粉の変換、エタノール製造、洗濯、皿洗浄、硬質表面のクリーニング、繊維材料の糊抜き、および/または甘味剤の製造に適する。
【0002】
発明の背景
α−アミラーゼ(α−1,4−グルカン−4−グルカノヒドロラーゼ、E.C. 3.2.1.1) は、澱粉および他の直鎖状および分枝鎖状の1,4−グリコシドオリゴ−および多糖類の加水分解を触媒する、酵素のグループを構成する。
【0003】
発明の簡単な説明
本発明の目的は、親Termamyl様α−アミラーゼを提供することである。この変異体は、対応する親α−アミラーゼ、すなわち、非変異のα−アミラーゼに比較して、α−アミラーゼ活性を有しかつ前記親α−アミラーゼに関して下記の性質の少なくとも1つにおいて変更を示す:例えば、特に高い温度および/または低いpH条件、特に低いカルシウム濃度における、安定性。
【0004】
命名法
本発明の説明および特許請求の範囲において、アミノ酸残基についての慣用の1文字コードおよび3文字コードを使用する。言及を容易にするために、下記の命名法を使用することによって、本発明のα−アミラーゼ変異体を記載する:1または2以上のもとのアミノ酸;1または2以上の位置;1または2以上の置換されたアミノ酸。
【0005】
本発明によれば、例えば、位置30におけるアスパラギンによるアラニンの置換は次のように示される:
Ala30Asn または A30N
同一位置におけるアラニンの欠失は次のように示される:
Ala* またはA30*
そして追加のアミノ酸残基、例えば、リシンの挿入は次のように示される:
Ala30AlaLysまたはA30AK
アミノ酸残基、例えば、アミノ酸残基30〜33の構成的ストレッチの欠失は、(30−33)* または Δ(A30−N33) として示される。
【0006】
特定のα−アミラーゼが他のα−アミラーゼと比較して「欠失」を含有しかつこのような位置において挿入を行う場合、これは位置36におけるアスパラギン酸挿入について次のように示される:
*36Aspまたは *36D
多重変異はプラス符号による分離される、すなわち:
Ala30Asp + Glu34Ser または A30N+E64S
これは位置30および34において、それぞれ、アスパラギンおよびセリンによりアラニンおよびグルタミン酸を置換する変異を表す。
【0007】
1または2以上の内のいずれかのアミノ酸残基を所定の位置に挿入するとき、それは次のように示される:
A30N、Eまたは
A30NまたはA30E
さらに、変更に適当な位置は本明細書において特定の変更を示唆しないで同定されるとき、その位置に存在するアミノ酸残基を任意のアミノ酸残基で置換させることができることを理解すべきである。こうして、例えば、位置30におけるアラニンの変更を説明するが、特定せず、アラニンを欠失させるか、あるいは任意の他のアミノ酸、すなわち、R、N、D、A、C、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、P、S、T、W、Y、Vの任意の1つで置換することができることを理解すべきである。
【0008】
さらに、「30X」は下記の置換の任意の1つを意味する:A30R、A30N、A30D、A30C、A30Q、A30E、A30G、A30H、A30I、A30L、A30K、A30M、A30F、A30P、A30S、A30T、A30W、A30Y、またはA30V;または短縮して:A30R、N、D、C、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、P、S、T、W、Y、V。
親酵素 − ナンバリングに使用する − がその位置における置換のために示唆された問題のアミノ酸残基を既に有する場合、下記の命名法を使用する:
「X30N」または「X30N、V」、この場合において、例えば、NまたはVの1つが野生型で存在する。こうして、他の対応する親酵素が位置30において「Asn」または「Val」に置換されていることを意味する。
【0009】
発明の詳細な開示
本発明の目的は、親Termamyl様α−アミラーゼの変異体を提供することである。この変異体はα−アミラーゼ活性を有しかつ、高い温度および/または低いpH、特に低いカルシウム濃度において、変更された安定性を示す。
【0010】
Termamyl様α−アミラーゼ
バシラス(Bacillus)種による産生される多数のα−アミラーゼは、アミノ酸レベルで高度に相同性(同一性)である。既知のバシラス(Bacillus)α−アミラーゼの同一性を下記表1において見出すことができる:
【0011】
【表1】
【0012】
例えば、配列番号8に示すアミノ酸配列を含んでなるバシラス・リヘニフォルミス(B. licheniformis)α−アミラーゼ(TermamylTMとして商業的に入手可能である)は、配列番号10に示すアミノ酸配列を含んでなるバシラス・アムロリクファシエンス(B. amyloliquefaciens)α−アミラーゼと約81%相同性であり、そして配列番号6に示すアミノ酸配列を含んでなるバシラス・ステアロサーモフィラス(B. stearothermophilus)α−アミラーゼ(BSG)と約65%相同性である。
【0013】
さらに、相同的α−アミラーゼはWO 95/6397に開示されかつ、それぞれ、配列番号2および配列番号4に描写されているSP690およびSP722を包含する。他のアミロースはバシラス(Bacillus)種に由来し、配列番号12に示されているAA560、およびバシラス(Bacillus)種に由来し、配列番号13に示され、Tsukamoto他、Biochemical and Biophysical Research Communications 151(1988)、pp. 25−31に記載されている#707である。
KSM AP1378 α−アミラーゼはWO 97/00324(KAO Corporation)に開示されている。
【0014】
なお他の相同的α−アミラーゼは、EP 052666(ATCC 27811)に記載されているバシラス・リヘニフォルミス(B. licheniformis)株により産生されるα−アミラーゼ、およびWO 91/00353およびWO 94/18314において同定されているα-アミラーゼを包含する。他の商業的Termamyl様α−アミラーゼは下記の商品名で販売されている製品の中に含まれる:OptithermTMおよびTakathermTM (Solvay);MaxamylTM (Gist−brocades/ Genencor)、Spezym AATMおよびSpezyme Delta AATM (Genencorから入手可能である)、およびKeistaseTM (Daiwaから入手可能である)、Dex lo、GC 521(Genencorから入手可能である)およびUltraphlow(Enzyme Biosystemsから入手可能である)。
【0015】
これらのα−アミラーゼ間で見出される実質的な相同性のために、それらはα−アミラーゼの同一クラス、すなわち、「Termamyl様α−アミラーゼ」のクラスに属すると考えられる。
したがって、本発明の関係において、用語「Termamyl様α−アミラーゼ」は、アミノ酸レベルにおいて、TermamylTM、すなわち、本明細書において配列番号8に示すアミノ酸を有するバシラス・リヘニフォルミス(B. licheniformis)α−アミラーゼに対して実質的な同一性を示すα−アミラーゼ、特にバシラス(Bacillus)α−アミラーゼを示すことを意図する。
【0016】
換言すると、本明細書において配列番号2、4、6、8、10、12および13に示すアミノ酸配列を有する、すべての下記のα−アミラーゼは「Termamyl様α−アミラーゼ」であると考えられる。他のTermamyl様α−アミラーゼは、i) 配列番号2、4、6、8、10、12および13に示すアミノ酸配列の少なくとも1つと少なくとも60%、例えば、少なくとも70%、少なくとも75%、または少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%の相同性(同一性)を表示するα−アミラーゼ、および/または配列番号1、3、5、7、9から明らかであり、そしてこの明細書の上に特定したα−アミラーゼをコードするDNA配列に対してハイブリダイゼーションするDNA配列によりコードされるα−アミラーゼである(前記エンコーディング配列は、それぞれ、配列番号2、4、6、8、10および12に示すアミノ酸配列をコードする)。
【0017】
相同性
相同性は、第2配列から第1配列の由来を示す2つの配列間の同一性の程度として決定することができる。相同性は、この分野において知られているコンピュータープログラム、例えば、GCGプログラムパッケージで提供されるGAP(前述した)により決定することができる。こうして、Gap GCGv8を同一性についてのデフォルトスコアリングマトリックスおよび下記のデフォルトパラメーターとともに使用することができる:5.0のGAP発生ペナルティーおよび0.3のGAPエクステンションペナルティー、それぞれ核酸配列の比較のために、および3.0のGAP発生ペナルティーおよび0.1のGAPエクステンションペナルティー、それぞれタンパク質配列の比較のために。GAPはNeedlemanおよびWunsh、(1970)、J. Mol. Biol. 48、p. 443−453の方法を使用してアラインメントを作り、同一性を計算する。
【0018】
Termamyl(配列番号8)と、例えば、他のα−アミラーゼとの間の構造的アラインメントを使用して、他のTermamyl様α−アミラーゼ中の同等/対応位置を同定することができる。前記構造的アラインメントを得る1つの方法は、ギャップペナルティーのデフォルト値、すなわち、3.0のギャップ発生ペナルティーおよび0.1のギャップエクステンションペナルティーを用いて、GCGパッケージからパイル・アップ(Pile Up)プログラムを使用することである。他の構造的アラインメントは、疎水性クラスター分析(Gaboriaud他、(1987)、FEBS LETTERS 224、pp. 149−155)および逆スレッディング(reverse threading)(Hube, T;Torda, AE、PROTEIN SCIENCE Vol. 7、No. 1、pp. 142−149(1998))を包含する。
【0019】
ハイブリダイゼーション
上記Termamyl様α−アミラーゼの特性決定において使用するオリゴヌクレオチドプローブは、問題のα−アミラーゼの完全なまたは部分的ヌクレオチドまたはアミノ酸配列をベースとして適当に調製することができる。
ハイブリダイゼーションを試験するために適当な条件は、5×SSC中で前ソーキングし、および20%ホルムアミド、5×デンハルト溶液、50 mMリン酸ナトリウム、pH 6.8、および50 mgの変性超音波処理仔ウシ胸腺DNAの溶液の中で40 ℃において1時間プレハイブリダイゼーションし、次いで同一溶液に100 mM ATPを40 ℃において18時間補充し、次いで2×SSC、0.2%SDSの中で30分間40 ℃において(低いストリンジェンシイ)、好ましくは50 ℃において(中程度のストリンジェンシイ)、より好ましくは65℃において(高いストリンジェンシイ)、なおより好ましくは75 ℃において(非常に高いストリンジェンシイ)フィルターを3回洗浄することを包含する。ハイブリダイゼーション法について、下記の文献にいっそう詳細に記載されている:Sambrook他、Molecular Cloning : A Laboratory Manual、第2版、Cold Spring Harbor、1989。
【0020】
本発明の関係において、「に由来する」は問題の生物の株により産生されたまたは産生可能なα−アミラーゼばかりでなく、かつまたこのような株から単離されたDNA配列によりコードされ、前記DNA配列で形質転換された宿主生物の中で産生されたα−アミラーゼを示すことを意図する。最後に、この用語は、合成および/またはcDNA由来のDNA配列によりコードされかつ問題のα−アミラーゼの同定特性を有する、α−アミラーゼを示すことを意図する。また、この用語は、親α−アミラーゼが天然に存在するα−アミラーゼの変異体、すなわち、天然に存在するα−アミラーゼの1または2以上のアミノ酸残基の修飾(挿入、置換、欠失)の結果である変異体であることができることを示すことを意図する。
【0021】
親 Termamyl 様α−アミラーゼ
本発明によれば、上に定義したTermamyl様α−アミラーゼのすべてを親(すなわち、バックボーン)α−アミラーゼとして使用することができる。本発明の好ましい態様において、親α−アミラーゼはバシラス・リヘニフォルミス(B. licheniformis)、例えば、上に言及したもの1つ、例えば、配列番号8に示すアミノ酸配列を有するバシラス・リヘニフォルミス(B. licheniformis)α−アミラーゼに由来する。
【0022】
親ハイブリッドTermamyl様α−アミラーゼ
親α−アミラーゼ(すなわち、バックボーンα−アミラーゼ)は、また、ハイブリッドα−アミラーゼ、すなわち、少なくとも2つα−アミラーゼに由来する部分的アミノ酸配列の組み合わせを含んでなるα−アミラーゼであることができる。
【0023】
親ハイブリッドα−アミラーゼは、アミノ酸の相同性(同一性)および/またはDNAハイブリダイゼーション(上に定義した)をベースとして、Termamyl様α−アミラーゼのファミリーに属することを決定できるものであることができる。この場合において、ハイブリッドα−アミラーゼは典型的にはTermamyl様α−アミラーゼの少なくとも1つの部分と、微生物(細菌または真菌)および/または哺乳動物由来のTermamyl様α−アミラーゼまたは非Termamyl様α−アミラーゼから選択される1または2以上の他のα−アミラーゼの1または2以上の部分とから構成される。
【0024】
こうして、親ハイブリッドα−アミラーゼは、少なくとも2つTermamyl様α−アミラーゼから、または少なくとも1つのTermamyl様および少なくとも1つの非Termamyl様細菌α−アミラーゼからに由来する、部分的アミノ酸配列の組み合わせを含んでなることができる。部分的アミノ酸配列が由来するTermamyl様α−アミラーゼは、本明細書において言及する特定のTermamyl様α−アミラーゼの任意のものであることができる。
【0025】
例えば、親α−アミラーゼは、バシラス・リヘニフォルミス(B. licheniformis)の株に由来するα−アミラーゼのC末端部分と、バシラス・アムロリクファシエンス(B. amyloliquefaciens)の株またはバシラス・ステアロサーモフィラス(B. stearothermophilus)の株に由来するN末端部分とを含んでなる。例えば、親α−アミラーゼはバシラス・リヘニフォルミス(B. licheniformis)α−アミラーゼのC末端部分の少なくとも430アミノ酸残基を含んでなることができ、そして、例えば、下記のアミノ酸セグメントを含んでなることができる:
【0026】
a) 配列番号10に示すアミノ酸配列を有するバシラス・アミロリクファシエンス(B. amyloliquefaciens)α−アミラーゼの37 N末端アミノ酸残基に対応するアミノ酸セグメントおよび配列番号8に示すアミノ酸配列を有するバシラス・リヘニフォルミス(B. licheniformis)α−アミラーゼ、またはTermamyl配列と同一であるハイブリッドTermamyl様α−アミラーゼ、すなわち、配列番号8に示すバシラス・リヘニフォルミス(B. licheniformis)α−アミラーゼ、ただしN末端の35アミノ酸残基(成熟タンパク質の)はBAN(成熟タンパク質)のN末端の33残基により置換されている、すなわち、配列番号10に示すバシラス・アミロリクファシエンス(B. amyloliquefaciens)α−アミラーゼ、の445 C末端アミノ酸残基に対応するアミノ酸セグメント;または
【0027】
b) 配列番号6に示すアミノ酸配列を有するバシラス・ステアロサーモフィラス(B. stearothermophilus)α−アミラーゼの68 N末端アミノ酸残基に対応するアミノ酸セグメントおよび配列番号8に示すアミノ酸配列を有するバシラス・リヘニフォルミス(B. licheniformis)α−アミラーゼの415 C末端アミノ酸残基に対応するアミノ酸セグメント。
【0028】
他の適当な親ハイブリッドα−アミラーゼは、BAN、バシラス・アミロリクファシエンス(B. amyloliquefaciens)α−アミラーゼのN末端(成熟タンパク質のアミノ酸1〜300)およびTermamylからのC末端(成熟タンパク質のアミノ酸301〜483)を構築するWO 96/23874(Novo Nordiskから)に前に記載されたものである。
【0029】
本発明の好ましい態様において、親Termamyl様α−アミラーゼは配列番号8または配列番号10のハイブリッドα−アミラーゼである。詳しくは、親ハイブリッドTermamyl様α−アミラーゼは、配列番号8に示すバシラス・リヘニフォルミス(B. licheniformis)α−アミラーゼの445 C末端アミノ酸残基と、配列番号10に示すバシラス・アミロリクファシエンス(B. amyloliquefaciens)に由来するα−アミラーゼの37 N末端アミノ酸残基(これは適当には下記の突然変異体をさらに有することができる:H156Y+A181T+N190F+A209V+Q264S (配列番号8におけるナンバリングを使用する))とを含んでなるハイブリッドα−アミラーゼであることができる。後者の記載するハイブリッドは下記の実施例において使用し、LE174と呼ぶ。
【0030】
他の特別に意図する親α−アミラーゼは、より少ない変異を有するLE174、すなわち、下記のものを包含する:A181T+N190F+A209V+Q264S;N190F+A209V+Q264S;A209V+Q264S;Q264S;H156Y+N190F+A209V+Q264S;H156Y+A209V+Q264S;H156Y+Q264S;H156Y+A181T+A209V+Q264S; H156Y+A181T+Q264S;H156Y+Q264S;H156Y+A181T+N190F+Q264S; H156Y+A181T+N190F;H156Y+A181T+N190F+A209V。また、これらのハイブリッドは本発明の一部分である。
【0031】
好ましい態様において、親Termamyl様α−アミラーゼは、LE174、SP722、またはAA560であり、下記の任意のものを包含する:LE174+G48A+T49I+G107A+1210F;LE174+M197L;LE174+G48A+T49I+G107A+M197L+I201F;またはSP722+D183*+G184*;SP722+D183*+G184*+N195F;SP722+D183*+G184*+M202L;SP722+D183*+G184*+N195F+M202L;BSG+I181*+G182*;BSG+I181*+G182*+N193F;BSG+I181*+G182*+M200L;BSG+I181*+G182*+N193F+M200L;AA560+D183*+G184*;AA560+D183*+G184*+N195F;AA560+D183*+G184*+M202L;AA560+D183*+G184*+N195F+M202L。
【0032】
他の意図する親α−アミラーゼは、I201Fの中に追加の置換を有するLE174であるLE429を包含する。本発明によれば、LE335は、LE429に比較して、T49I+G107Aの中に追加の置換基を有するα−アミラーゼである;LE399はLE335+G48A、すなわち、G48A+T49I+G107A+I201Fを有するLE174である。
【0033】
変更された性質
下記の節において、本発明の変異体の中に存在する変異と、それから生ずる性質の望ましい変更(親Termamyl様α−アミラーゼの性質に関する)との間の関係を説明する。
前述したように、本発明は、特に高温においておよび/または低いpHにおいて、特に低いカルシウム濃度において、変更された性質(前述した)を有するTermamyl様α−アミラーゼに関する。
本発明の関係において、「高温」は70〜120 ℃、好ましくは80〜100 ℃、特に85〜95 ℃の温度を意味する。
【0034】
本発明の関係において、用語「低いpH」は4〜6、好ましくは4.2〜5.5、特に4.5〜5の範囲のpHを意味する。
本発明の関係において、用語「高いpH」は8〜11、特に8.5〜10.6の範囲のpHを意味する。
本発明の関係において、用語「低いカルシウム濃度」は60 ppm、好ましくは40 ppm、より好ましくは25 ppm、特に5 ppmより低いカルシウムの遊離カルシウムレベルを意味する。
特別に意図する変更された性質に関して特別に意図する親Termamyl様α−アミラーゼは、前述の親Termamyl様α−アミラーゼおよび親ハイブリッドTermamyl様α−アミラーゼである。
【0035】
TermamylTMα−アミラーゼは出発点として使用するが、例えば、SP722、BSG、BAN、AA560、SP690、KSM AP1378、および#707の中の対応する位置は開示した通りであり、特別にまた意図されると理解すべきである。
好ましい態様において、本発明の変異体は特に高温においておよび/または低いpHにおける変更された性質を有する。
1つの面において、本発明は、前述の変更された性質を有する変異体に関する。
【0036】
第1の面において、親Termamyl様α−アミラーゼの変異体は、49、60、104、132、161、170、176、179、180、181、183、200、203、204、207、212、237、239、250、280、298、318、374、385、393、402、406、427、430、440、444、447、482のグループから選択される1または2以上の位置(アミノ酸のナンバリングについて配列番号8を使用する)に変更を含んでなり、ここで
(a) 1または2以上の変更は独立的に
(i) 前記位置を占めるアミノ酸から下流のアミノ酸の挿入、
(ii) 前記位置を占めるアミノ酸の欠失、または
(iii) 前記位置を占めるアミノ酸の異なるアミノ酸による置換、
であり、
(b) 変異体はα−アミラーゼ活性を有し、そして
(c) 各位置は配列番号8に示すアミノ酸配列を有する親Termamyl様α−アミラーゼのアミノ酸配列の位置に対応する。
【0037】
TermamylTM (配列番号8) において、このような対応する位置は次の通りある:T49;D60;N104;E132;D161;K170;K176;G179;K180;A181;D183;D200;X203;D204;D207;X212;K237;S239;E250;N280;X298;L318;Q374;E385;Q393;Y402;H406;L427;D430;V440;N444;E447;Q482。
SP722 (配列番号4) において、対応する位置は次の通りある:T51;D62;N106;D134;D163;X172;K179;G184;K185;A186;D188;D205;M208;D209;X212;L217;K242;S244;N255;N285;S303;X323;D387;N395;Y404;H408;X429;D432;V442;X446;X449;X484。
他の親α−アミラーゼの中の対応する位置は前述したようにアラインメントによる見出すことができ、第1図におけるアラインメントに示す。
【0038】
好ましい態様において、本発明の変異体(ナンバリングについて配列番号8 (TermamylTM)を使用する) は、下記の置換の1または2以上を有する:T49I;D60N;N104D;E132A、V、P;D161N;K170Q;K176R;G179N;K180T;A181N;D183N;D200N;X203Y;D204S;D207V、E、L、G;X212I;K237P;S239W;E250G、F;N280S;X298Q;L318M;Q374R;E385V;Q393R;Y402F;H406L、W;L427I;D430N;V440A;N444R、K;E447Q;Q482K。
【0039】
好ましい態様において、本発明の変異体(ナンバリングについて配列番号4 (SP722)を使用する) は、下記の置換の1または2以上を有する:T51I;D62N;N106D;D134A、V、P;D163N;X172Q;K179R;G184N;K185T;A186N;D188N;D205N;M208Y;D209S;X212V、E、L、G;L217I;K242P;S244W;N255G、F;N285S;S303Q;X323M;D387V;N395R;Y404Y;H408L、W;X429I;D432N;V442A;X446R、K;X449Q、K;X484K、ここでナンバリングのために配列番号4(SP722)を使用する。
好ましい二重、三重および多重変異 − ナンバリングの基準として配列番号8を使用する − は、下記の変異から成る群から選択される:
【0040】
【化3】
【0041】
【化4】
【0042】
【化5】
【0043】
【化6】
【0044】
【化7】
【0045】
【化8】
【0046】
【化9】
【0047】
【化10】
【0048】
【化11】
【0049】
【化12】
【0050】
【化13】
【0051】
【化14】
【0052】
【化15】
【0053】
【化16】
【0054】
【化17】
【0055】
【化18】
【0056】
【化19】
【0057】
【化20】
【0058】
【化21】
ここでナンバリングのために配列番号8を使用する。
【0059】
好ましい態様において、変異体は下記の置換基を有する:K170Q+D207V+N280S;E132A+D207V;D207E+E250G+H406L+L427I;D207V+L318M;D60N+D207V+L318M;T49I+E132V+V440A;T49I+K176R+D207V+Y402F;Q374R+E385V+Q393R;N190F+A209V+Q264S;G48A+T49I+G107A+I201F;T49I+G107A+I201F;G48A+T49I+I201F;G48A+T49I+G107A;T49I+I201F;T49I+G107A;G48A+T49I;D161N+G179N+K180T+A181N+D183N+D200N+D204S+K237P+S239W+H406W+D430N+N444K+E447Q+Q482K、ここでナンバリングのために配列番号8を使用する。
特定の変異体は下記のものを包含す:LE399;LE174+G48A+T49I+G107A;LE174+G48A+T49I+I201F;LE174+G48A+G107A+I201F;LE174+T49I+G107A+I201F; LE174+G48A+T49I;LE174+G48A;LE174+G107A+I201F; LE174+I201F、これらは特に本発明の意図する変異体である。
【0060】
安定性
本発明の関係において、高温(すなわち、70〜120 ℃)および/または極端なpH (すなわち、それぞれ、低いまたは高いpH、すなわち、pH 4〜6またはpH 8〜11) において、特に60 ppm以下の遊離(すなわち、非結合、したがって溶液中の)カルシウム濃度において、変更された安定性、特に改良された安定性(すなわち、より高いまたはより低い)を達成することに関して重要な変異は、「変更された性質」の節において列挙した変異の任意のものを包含する。安定性は、下記の「材料および方法」の節に記載するように測定することができる。
【0061】
本発明の変異体における一般的変異
1つの態様において、本発明の変異体は、上に概説した修飾に加えて1または2以上の修飾を含んでなることができる。こうして、α−アミラーゼ変異体の一部分の中に存在する1または2以上のプロリン(Pro)は、非プロリン残基で修飾および/または置換されたことが好都合であることがある。このような非プロリン残基は、任意の可能な、天然に存在する非プロリン残基、好ましくはアラニン、グリシン、セリン、トレオニン、バリンまたはロイシンであることができる。
【0062】
同様に、1つの態様において、親α−アミラーゼの中に存在する1または2以上のシステイン残基を非システイン残基、例えば、セリン、アラニン、トレオニン、グリシン、バリンまたはロイシンで置換することができる。
さらに、配列番号10のアミノ酸フラグメント185〜209に対応するアミノ酸フラグメントの中に存在する1または2以上のAspおよび/またはGluが、それぞれ、Asnおよび/またはGlnで置換されるように、本発明の変異体を、唯一の修飾としてまたは上に概説した修飾の任意と組み合わせて、修飾することができる。また、配列番号10のアミノ酸フラグメント185〜209に対応するアミノ酸フラグメントの中に存在する1または2以上のLys残基を、Termamyl様α−アミラーゼにおいて、Argで置換することも重要である。
【0063】
本発明は、上に概説した修飾の一または2以上を組込んだ変異体を包含することを理解すべきである。
さらに、下記の位置(ナンバリングのために配列番号8 (Termamyl)を使用する):M15、V128、A111、H133、W138、T149、M197、N188、A209、A210、H405、T412の1または2以上の中に、下記の単一、二重または三重または多重の変異を導入することが有利であることがある:M15X、特にM15T、L;V128X、特にV128E;H133X、特にH133Y;N188X、特にN188S、T、P;M197X、特にM197T、L;A209X、特にA209V;M197/W138F;M197T/W138Y;M15T/H133Y/N188S;M15/V128E/H133Y/N188S;E199C/S130C;D124C/R127C;H133Y/T149I;G475R、H133Y/S187D;H133Y/A209V。
【0064】
本発明のα−アミラーゼ変異体を製造する方法
遺伝子の中に変異を導入するいくつかの方法がこの分野において知られている。α−アミラーゼをコードするDNA配列のクローニングを簡単に説明した後、α−アミラーゼをコードする配列内の特異的部位において変異を発生させる方法を説明する。
【0065】
α−アミラーゼをコードするDNA配列のクローニング
この分野においてよく知られている種々の方法を使用して、問題のα−アミラーゼを産生する任意の細胞または微生物から、親α−アミラーゼをコードするDNA配列を単離することができる。第1に、研究すべきα−アミラーゼを産生する生物からの染色体DNAまたはメッセンジャーRNAを使用して、ゲノムDNAおよび/またはcDNAライブラリーを構成すべきである。
【0066】
次いで、α−アミラーゼのアミノ酸配列が知られている場合、均質な、標識化α−アミラーゼコード配列を合成し、問題の生物から調製したゲノムライブラリーからα−アミラーゼコードクローンを同定するために使用することができる。選択的に、低いストリンジェンシイのハイブリダイゼーションおよび洗浄条件下に、α−アミラーゼコードクローンを同定するプローブとして、既知のα−アミラーゼ遺伝子に対して相同的な配列を含有する標識化オリゴヌクレオチドプローブを使用することができる。
【0067】
α−アミラーゼコードクローンを同定するなお他の方法は、ゲノムDNAのフラグメントを発現ベクター、例えば、プラスミドの中に挿入し、生ずるゲノムDNAライブラリーでα−アミラーゼ陰性細菌を形質転換し、次いでα−アミラーゼの基質を含有する寒天上に、形質転換された細菌をプレートし、これにより同定すべきα−アミラーゼをクローンに発現させることを包含する。
【0068】
選択的に、酵素を発現するDNA配列を確立された標準的法、例えば、S. L. BeaucageおよびM. H. Caruthers、Tetrahedron Letters 22、1981、pp. 1859−1869に記載されているホスホロアミダイト法、またはMatthes他、The EMBO J. 3、1984、pp. 801−805に記載されている方法により合成的に調製することができる。ホスホロアミダイト法において、オリゴヌクレオチドを、例えば、自動化DNA合成装置中で合成し、精製し、アニールし、結合させ、適当なベクター中でクローニングする。
【0069】
最後に、DNA配列は混合ゲノムおよび合成起源、混合合成およびcDNA起源または混合ゲノムおよびcDNA起源であることができ、標準的技術に従い、合成、ゲノムまたはcDNA起源のフラグメント(適当ならば、全体のDNA配列の種々の部分に対応するフラグメント)をすることによって調製することができる。また、DNA配列は、例えば、下記の文献に記載されているように、特定のポリマーを使用するポリメラーゼ連鎖反応(PCR)により調製することができる:米国特許第4,683,202号またはR. K. Saiki他、Science 239、1988、pp. 487−491。
【0070】
位置指定変異誘発
いったんα−アミラーゼコードDNA配列が単離され、そして望ましい変異部位が同定されると、合成オリゴヌクレオチドを使用して変異を導入することができる。これらのオリゴヌクレオチドは所望の変異部位をフランクするヌクレオチド配列を含有する;ある種の方法において、α−アミラーゼ遺伝子を保持するベクターの中に、α−アミラーゼコード配列を架橋する、DNAの一本鎖ギャップをつくる。次いで、所望の変異を支持する合成ヌクレオチドを一本鎖DNAの相同的部分に対してアニールする。
【0071】
次いで残留するギャップをDNAポリメラーゼI (クレノウフラグメント)で充填し、T4ポリメラーゼを使用して構築物を結合する。この方法の特定の例はMorinaga他、(1984) に記載されている。米国特許第4,760,025号には、カセットの小さい変更を実施することによって、多重変異をコードするオリゴヌクレオチドを導入することが記載されている。しかしながら、種々の長さの多数のオリゴヌクレオチドを導入することができるので、Morinaga法によりなおより大きい種類の変異を一度に導入することができる。
【0072】
α−アミラーゼコードDNA配列の中に変異を導入する他の方法は、NelsonおよびLong (1989) に記載されている。それは、PCR反応におけるプライマーの1つとして、化学的に合成されたDNA鎖を使用することによって、導入された所望の変異を含有するPCRフラグメントを発生させる3工程方法を包含する。PCR発生フラグメントから、制限エンドヌクレアーゼを使用する切断により、変異を保持するDNAフラグメントを単離し、発現プラスミドの中に再挿入する。
【0073】
本発明の変異体を製造する別法は、例えば、WO 95/22625(Affymax Technologies N.V.)またはWO 96/00343(Novo Nordisk A/S)に記載するような、遺伝子シャフリング、あるいは1または2以上の問題の変異、例えば、1または2以上の置換および/または1または2以上の欠失を含んでなるハイブリッドを生ずる他の対応する技術を包含する。本発明による1または2以上の所望の変異を有するハイブリッドを提供するために適当に使用できる、親α−アミラーゼの例は、EP 1,002,334(引用することによって本明細書の一部とされる)に開示されているKSM−K36およびKSM−K38α−アミラーゼを包含する。
【0074】
α−アミラーゼ変異体の発現
本発明によれば、前述の方法により、またはこの分野において知られている任意の他の方法により製造された変異体をコードするDNA配列は、発現ベクターを使用して、酵素形態で発現させることができる。発現ベクターは、典型的には、制御配列、例えば、プロモーター、オペレーター、リボソーム結合部位、翻訳開始シグナル、および、必要に応じてリプレッサー遺伝子または種々のアクチベーター遺伝子を含む。
【0075】
本発明のα−アミラーゼ変異体をコードするDNA配列を保持する組換え発現ベクターは、組換えDNA手順に好都合に付すことができる、任意のベクターであることができ、そしてベクターの選択はベクターを導入する宿主細胞にしばしば依存するであろう。こうして、ベクターは自律的に置換するベクター、すなわち、その複製が染色体の複製に対して独立である、染色体外実在物、例えば、プラスミド、バクテリオファージまたは染色体外因子、ミニクロモソームまたは人工染色体として存在するベクターであることができる。選択的に、ベクターは、宿主細胞の中に導入したとき、宿主細胞ゲノムの中に組込まれ、それが組込まれた1または2以上の染色体と一緒に複製できるものであることができる。
【0076】
ベクターにおいて、DNA配列は適当なプロモーター配列に操作可能に結合されるべきである。プロモーターは、選択した宿主細胞において転写活性を示す、任意のDNA配列であることができ、そして宿主細胞に対して相同的または異質であるタンパク質をコードする遺伝子に由来することができる。特に細菌宿主において、本発明のα−アミラーゼ変異体をコードするDNA配列の転写を指令するために適当なプロモーターの例は、次の通りである:
【0077】
大腸菌(E. coli)のlacオペロンのプロモーター、バシラス・リヘニフォルミス(B. licheniformis)α−アミラーゼ遺伝子(amyL)のプロモーター、バシラス・ステアロサーモフィラス(B. stearothermophilus)α−アミラーゼ遺伝子(amyM)のプロモーター、バシラス・アミロリクファシエンス(B. amyloliquefaciens)α−アミラーゼ遺伝子(amyQ)のプロモーター、バシラス・ズブチリス(Bacillus subtilis)のxylAおよびxylB遺伝子のプロモーター、およびその他。
【0078】
真菌宿主における転写に有効なプロモーターは、下記の酵素をコードする遺伝子に由来するものである:アスペルギルス・オリゼ(Aspergillus oryze)TAKAアミラーゼ、リゾムコル・ミエヘイ(Rhizomucor miehei)アスパラギン酸プロテイナーゼ、アスペルギルス・ニガー(A. niger)中性α−アミラーゼ、アスペルギルス・ニガー(A. niger)酸安定性α−アミラーゼ、アスペルギルス・ニガー(A. niger)グルコアミラーゼ、リゾムコル・ミエヘイ(Rhizomucor miehei)リパーゼ、アスペルギルス・オリゼ(A. oryze)アルカリ性プロテアーゼ、アスペルギルス・オリゼ(A. oryze)トリオースホスフェートイソメラーゼまたはアスペルギルス・ニヅランス(A. nidulanns)アセトアミダーゼ。
【0079】
また、本発明の発現ベクターは、適当な転写ターミネーターと、真核生物において、本発明のα−アミラーゼ変異体をコードするDNA配列に操作可能に結合したポリアデニル化配列を含んでなることができる。停止およびポリアデニル化配列は、適当にはプロモーターと同一源に由来することができる。
さらに、ベクターは、問題の宿主細胞におけるベクターの発現を可能とするDNA配列を含むことができる。このような配列は、プラスミドpUC19、pACYC177、pUB110、pE194、pAMB1およびpIJ702の複製起点である。
【0080】
また、ベクターは、選択可能なマーカー、例えば、その産物が宿主細胞中の欠陥を補足する遺伝子、例えば、バシラス・ズブチリス(B. subtilis)またはバシラス・リヘニフォルミス(B. licheniformis)からのdal遺伝子、または抗生物質耐性、例えば、アンピシリン、カナマイシン、クロラムフェニコールまたはテトラサイクリン耐性を付与する遺伝子を含むことができる。さらに、ベクターはアンピシリン選択マーカー、例えば、amdS、argB、niaDおよびsC、ヒグロマイシン耐性を発生させるマーカーを含むことができるか、あるいは選択は、例えば、WO 91/17243に記載されているように、共トランスフォーメーションにより達成させることができる。
【0081】
細胞内発現はいくつかの関係において、例えば、ある種の細菌を宿主細胞として使用するとき、好都合であることがあるが、発現は細胞外であることが一般に好ましい。一般に、本明細書に記載するバシラス(Bacillus)α−アミラーゼは発現されたプロテアーゼを培地の中に分泌させる前領域(preregion)を含む。望ましい場合、この前領域は異なる前領域またはシグナル配列で置換することができ、それぞれの前領域をコードするDNA配列の置換により好都合に達成することができる。
【0082】
それぞれ、α−アミラーゼ変異体をコードするDNA構築物、プロモーター、ターミネーターおよび他の因子を結合し、かつ複製に必要な情報を含有する適当なベクターの中にそれらを挿入する手順は当業者によく知られており、(例えば、下記の文献を参照のこと: Sambrook他、Molecular Cloning : A Laboratory Manual、第2版、Cold Spring Harbor、1989)。
【0083】
上に定義した本発明のDNA構築物または発現ベクターを含んでなる、本発明の細胞は、本発明のα−アミラーゼ変異体の組換え体の産生において宿主細胞として好都合に使用される。好都合には、宿主染色体の中にDNA構築物(1または2以上のコピーで)組込むことによって、変異体をコードする本発明のDNA構築物で細胞を形質転換することができる。DNA配列は細胞の中で安定に維持される可能性が高いので、この組込み一般に1つの利点であると考えられる。宿主染色体の中へのDNA構築物の組込みは、慣用法に従い、例えば、相同的または異質的組換えにより実施することができる。選択的に、異なる型の宿主細胞に関して前述したように発現ベクターで細胞を形質転換することができる。
【0084】
本発明の細胞は、高等生物、例えば、哺乳動物または昆虫の細胞であることがあるが、好ましくは微生物細胞、例えば、細菌または真菌(酵母を包含する)細胞である。
【0085】
適当な細菌の例は次の通りである:グラム陽性細菌、例えば、バシラス・ズブチリス(B. subtilis)、バシラス・リヘニフォルミス(Bacillus licheniformis)、バシラス・レンツス(Bacillus lentus)、バシラス・ブレビス(Bacillus brevis)、バシラス・ステアロサーモフィラス(Bacillus sterothermophillus)、バシラス・アルカロフィルス(Bacillus alkalophilus)、バシラス・アミロリクファシエンス(Bacillus amyloliquefaciens)、
【0086】
バシラス・コアギュランス(Bacillus coagulans)、バシラス・サーキュランス(Bacillus circulans)、バシラス・ラウツス(Bacillus lautus)、バシラス・メガテリウム(Bacillus megaterium)、バシラス・スリンジェンシス(Bacillus thuringiensis)、またはストレプトマイセス・リビダンス(Streptomyces lividans)またはストレプトマイセス・ムリヌス(Streptomyces murinus)、またはグラム陰性菌、例えば、大腸菌(E. coli)。細菌の形質転換は、例えば、プロトプラストの形質転換により、またはそれ自体知られている方法においてコンピテント細胞を使用することによって実施することができる。
【0087】
酵母生物は、サッカロマイセス(Saccharomyces)またはシゾサッカロマイセス(Schizosaccharomyces)、例えば、サッカロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisae)の種から好適に選択される。フィラメント状真菌は好都合にはアスペルギルス(Aspergillus)の種、例えば、アスペルギルス・オリゼ(Aspergillus oryze)またはアスペルギルス・ニガー(Aspergillus niger)に属する。真菌細胞は、プロトプラストを形成し、プロトプラストを形質転換し、次いでそれ自体知られている方法に従い細胞壁を再生することを包含するプロセスにより形質転換することができる。アスペルギルス(Aspergillus)宿主細胞を形質転換する適当な手順は、EP 238 023に記載されている。
【0088】
なお他の面において、本発明は、本発明のα−アミラーゼ変異体を製造する方法に関し、この方法は変異体の産生を促進する条件下に前述の宿主細胞を培養し、細胞および/または培地から変異体を回収することを含む。
細胞の培養に使用する培地は、問題の宿主細胞を成長させ、そして本発明のα−アミラーゼ変異体を発現させるために適当な、任意の慣用の培地を包含する。適当な培地は商業的供給会社から入手可能であるか、あるいは発表された処方に従い調製することができる(例えば、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション(American Type Culture Collection)のカタログに記載されているように)。
【0089】
宿主細胞から分泌されるα−アミラーゼ変異体は、よく知られている手順により培地から好都合に回収することができる。このような手順は、遠心または濾過により培地から細胞を分離し、硫酸アンモニウムのような塩により培地のタンパク質成分を沈降させ、次いでクロマトグラフィー、例えば、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、またはその他の使用を包含する。
【0090】
工業的応用
本発明のα−アミラーゼ変異体は、種々の工業的応用を可能とする価値のある性質を有する。特に、本発明の酵素変異体は洗浄、皿洗浄、および硬質表面のクローニング用洗浄剤組成物の成分として使用することができる。
変更された性質を有する本発明の変異体は、澱粉プロセス、特に澱粉の変換、特に澱粉の液化において使用することができる(例えば、下記文献を参照のこと、米国特許第3,912,590号、EP特許公開No. 252 730および63 909、WO 99/19467、およびWO 96/28567、すべての参考文献は引用することによって本明細書の一部とされる)。また、本発明の変異体に加えて、AMG、プルラナーゼ、および他のα-アミラーゼを含んでなる、澱粉を変換する組成物が意図される。
【0091】
さらに、本発明の変異体は、澱粉および全穀粒から甘味料およびエタノール(例えば、米国特許第5,231,017号を参照のこと、引用することによって本明細書の一部とされる)、例えば、燃料、飲料および工業用エタノールを製造するとき、特に有用である。
また、本発明の変異体は、繊維材料の糊抜きに使用することができる(例えば、下記文献を参照のこと、WO 95/21247、米国特許第4,643,736号、引用することによって本明細書の一部とされる)。
【0092】
洗浄剤組成物
前述したように、本発明の変異体は洗浄剤組成物の中に適当に混入することができる。洗浄剤組成物に関係する成分(例えば、洗濯または皿洗浄用洗浄剤)、このような洗浄剤組成物の中に変異体を配合するために適当な方法、および洗浄剤組成物の関係する型の例についてのそれ以上の詳細については、例えば、下記の文献を参照のこと:WO 96/23874およびWO 97/07202。
【0093】
本発明の変異体を含んでなる洗浄剤組成物は、下記の他の酵素の1または2以上をさらに含んでなることができる:プロテアーゼ、リパーゼ、ペルオキシダーゼ、他のデンプン分解酵素、グルコアミラーゼ、マルトジェニックアミラーゼ、CGTアーゼおよび/またはセルラーゼ、マンナナーゼ(例えば、MannawayTM、Novozymes、デンマーク国)、ペクチナーゼ、ペクチンリアーゼ、キチナーゼ、ラッカーゼ、および/または他のα−アミラーゼ。
本発明のα−アミラーゼ変異体は好都合に使用される濃度において洗浄剤の中に混入することができる。本発明の変異体は、慣用レベルの洗浄剤を使用するとき、洗浄/皿洗浄液の1リットル当たり0.00001〜10 mg(純粋な、活性酵素タンパク質として計算する)のα−アミラーゼに対応する量で混入されることが現在考えられる。
【0094】
組成物
本発明は、また、本発明の変異体、および好ましい態様において、また、バシラス・ステアロサーモフィラス(B. stearothermophilus)α−アミラーゼ(BSG)、特にそれらの変異体を含んでなる組成物に関する。
【0095】
他の態様において、組成物は、本発明の変異体に加えて、下記の酵素を含んでなる:グルコアミラーゼ、特にアスペルギルス・ニガー(Aspergillus niger)に由来するグルコアミラーゼ(例えば、G1またはG2アスペルギルス・ニガー(A. niger)AMGは下記の文献に開示されている:Boel他(1984)、「アスペルギルス・ニガー(Aspergillus niger)からのグルコアミラーゼG1またはG2は2つの異なるが、精密に関係するmRNAから合成される」、EMBO J. 3(5)、p. 1097−1102)、またはそれらの変異体、特にWO 00/04136またはWO 01/04273に開示されている変異体またはWO 99/28448に開示されているタラロマイセス・エメルソニイ(Talaromyces emersonii)AMG。
【0096】
特定の組み合わせは、LE399およびWO 00/04136またはWO 01/04273に開示されている変異体、特に下記の置換の1または2以上を有する変異体:N9A、S56A、V59A、A119P、A246T、N313G、E342T、A393R、S394R、Y402F、E408R、特にすべての変異を有する変異体である。
ある態様において、本発明の組成物は、また、プルラナーゼ、特にバシラス(Bacillus)プルラナーゼを含んでなる。
【0097】
材料および方法
酵素:
pDN1528は、Termamylをコードする完全な遺伝子amyLを含有し、その発現はそれ自身のプロモーターにより指令される。さらに、このプラスミドはプラスミドpUB110からの複製起点oriと、クロラムフェニコールに対する耐性を付与するpC194からのcat遺伝子を含有する。pDN1528はWO 96/3874の第9図に示されている。
【0098】
方法:
低pHフィルターアッセイ
10μg/mlのクロラムフェニコールを含むTY寒天プレート上の酢酸セルロース(OE 67、Schleicher & Schuell、ドイツ国ダッセル)およびニトロセルロースフィルター(Protran−Ba 85、Schleicher & Schuell、ドイツ国ダッセル)のサンドイッチ上に、37℃において少なくとも21時間バシラス(Bacillus)ライブラリーをプレートする。酢酸セルロース層をTY寒天プレート上に配置する。
【0099】
各フィルターサンドイッチにプレーティング後であるが、インキュベーション前に針でしるしをつけて、フィルター上に陽性の変異体を局在化できるようにし、クエン酸塩緩衝液、pH 4.5を含む容器に、結合した変異体を有するニトロセルロースフィルターを移し、80 ℃において20分間(野生型バックボーン中の変異体についてスクリーニングするとき)または85 ℃において60分間(LE399バックボーン中の変異体をスクリーニングするとき)インキュベートした。コロニーを有する酢酸セルロースフィルターを温室においてTYプレート上で使用するまで貯蔵する。
【0100】
インキュベーション後、クエン酸塩緩衝液、pH 6.0中に1%アガロース、0.2%澱粉を含有するアッセイプレート上で、残留活性を検出する。フィルターサンドイッチと同一方法でニトロセルロースフィルターを有するアッセイプレートにしるしをつけ、50 ℃において2時間インキュベートした。フィルターを除去した後、アッセイプレートを10%ルゴール溶液で染色する。澱粉分解性変異体を暗青色バッ上にクグラウンド白色スポットとして検出し、次いで貯蔵プレート上で同定する。陽性変異体を第1スクリーンと同一条件下に2回再スクリーニングする。
【0101】
二次スクリーニング
再スクリーニング後、陽性形質転換体を貯蔵プレートから取り上げ、二次プレートアッセイにおいて試験する。陽性形質転換体を5 mlのLB+クロラムフェニコール中で37℃において22時間成長させる。各陽性形質転換体のバシラス(Bacillus)培養物および対照として対応するバックボーンを発現するクローンをクエン酸塩緩衝液、pH 4.5中で90 ℃においてインキュベートし、0、10、20、30、40、60および580分に試料を取る。3μlの試料をアッセイプレート上にスポッティングする。アッセイプレートを10%ルゴール溶液で染色する。改良された変異体はバックボーンよりも高い残留活性(アッセイプレート上でハローとして検出される)を有する変異体として見られる。改良された変異体をヌクレオチド配列決定により決定する。
【0102】
未精製変異体の安定性アッセイ
分析すべき変異体を発現するバシラス(Bacillus)培養物を、10 mlのLB+クロラムフェニコール中で37℃において21時間成長させる。800μlの培養物を200μlのクエン酸塩緩衝液、pH 4.5と混合する。試料の時点数に対応する数の70μlのアリコートをPCR管中で作り、PCR装置中で種々の時点(典型的には5、10、15、20、25および30分)について70 ℃(野生型バックボーン中の変異体について)または90 ℃(LE399中の変異体について)においてインキュベートする。
【0103】
0分の試料は高温においてインキュベートしない。「α−アミラーゼ活性についてのアッセイ」において後述するように、20 μlを200μlのα−アミラーゼPNP−G7基質MPR(Boehringer MannheimのカタログNo. 1660730)に移すことによって、試料中の活性を測定する。結果を活性百分率(0時点に関して)対時間としてプロットするか、あるいはある時間インキュベートした後の残留活性百分率として記載する。
【0104】
α−アミラーゼ変異体の発酵および精製
−80 ℃のストックからの10μg/mlのカナマイシンを含むLB寒天上に、関係する発現プラスミドを収容するバシラス・ズブチリス(B. subtilis)株をストリークし、37℃において一夜成長させる。500 mlの震蘯フラスコ内の10μg/mlのクロラムフェニコールを示す100 mlのPS−1培地に、コロニーを移す。
PS−1培地の組成:
パール糖 100 g/l
ダイズ荒粉 40 g/l
Na2HPO4・12 H2O 10 g/l
PluronicTM PE 6100 0.1 g/l
CaCO3 5 g/l
培養物を37℃において270 rpmで5日間震蘯する。
【0105】
4500 rpmにおいて20〜25分間遠心することによって、細胞を細胞デブリを発酵槽から除去する。次いで、上清を濾過して完全に透明な溶液を得る。濾液を濃縮し、UFフィルター(10000カットオフ膜)上で洗浄し、緩衝液を20 mM酢酸塩pH 5.5に交換する。UF濾液をS−セファローズF.F.上に適用し、同一緩衝液中の0.2 M NaClを使用する段階的溶離により溶離を実施する。溶出液を10 mM Tris、pH 9.0に対して透析し、Q−セファローズF.F.上に適用し、6カラム体積の直線勾配0〜0.3 M NaClで溶離する。活性を含有する分画(Phadebasアッセイ)をプールし、pHをpH 7.5に調節し、0.5%w/v活性炭で5分間で処理することによって残留する色を除去する。
【0106】
精製された変異体の安定性の測定
同一構成を使用して、精製された変異体のすべての安定性の試験を実施する。この方法は次の通りである:酵素を関係する条件下にインキュベートする(1〜4)。試料が種々の時点において、すなわち、0、5、10、15および30分後に取り、アッセイ緩衝液(0.1 mlの50 mM Britton緩衝液pH 7.3)中の25倍に希釈し(すべての採取した試料について同一)、標準的条件pH 7.3、37 ℃においてファデバス(Phadebas)アッセイ(Pharmacia)を使用して活性を測定する。
インキュベーション前(0分)に測定した活性を参照(100%)として使用する。百分率の傾斜をインキュベーション時間の関数として計算する。例えば、30分のインキュベーション後の残留活性を表に示す。
【0107】
比活性の測定
ファデバス (Phadebas)アッセイ(Pharmacia)を使用して活性/mg酵素として、比活性を測定する。製造業者の使用説明書に従う(また、「α−アミラーゼ活性についてのアッセイ」参照)。
【0108】
α−アミラーゼ活性についてのアッセイ
1.ファデバスアッセイ
基質としてファデバス(PhadebasTM)錠剤を使用する方法により、α−アミラーゼ活性を測定する。ファデバス錠剤(PhadebasTM、Pharmacia Diagnosticにより供給される)は、ウシ血清アルブミンおよび緩衝物質と混合され、錠剤化された、架橋した青色澱粉ポリマーを含有する。
【0109】
単一の測定毎に、5 mlの50 mM Britton−Robinson緩衝液、0.1 mM CaCl2、pHをNaOHで問題の値に調節する)を含有する管中に、1つの錠剤を懸濁させる。試験を問題の温度において水浴中で実施する。試験すべきα−アミラーゼをx mlの50 mM Britton−Robinson緩衝液の中に希釈する。1 mlのこのα−アミラーゼ溶液を5 mlの50 mM Britton−Robinson緩衝液に添加する。澱粉をα−アミラーゼで加水分解して、可溶性の青色フラグメントを得る。α−アミラーゼ活性の関数として、生ずる青色溶液の吸収を620 nmにおいて分光光度測定的に測定する。
【0110】
10または15分のインキュベーション(試験時間)後に測定する620 nmにおける吸収は620 nmにおいて0.2〜2.0吸収の範囲であることが重要である。この吸収範囲において、活性と吸収との間に線形性が存在する(ランバート−ベールの法則)。したがって、酵素の希釈をこの基準に適合するように調節しなくてはならない。特定した組の条件 (温度、pH 、反応時間、緩衝条件)下に、1 mgの所定のα−アミラーゼはある量の基質を加水分解し、青色が発生するであろう。色強度を620 nmにおいて測定する。測定した吸収は、所定の組の条件下における問題のα−アミラーゼの比活性(活性/mgの純粋なα−アミラーゼタンパク質)に直接比例する。
【0111】
2.別法
PNP−G7基質を使用する法により、α−アミラーゼ活性を測定する。PNP−G7は、p−ニトロフェニル−α,D−メトヘプタオシドの略号であり、エンド−アミラーゼにより切断することができるブロックドオリゴ糖である。切断後、キットの中に含まれているα−グルコシダーゼは基質を加水分解して遊離PNP分子を解放し、この分子は黄色を有し、λ=405 nm(400〜420 nm)における可視分光測定により測定することができる。PNP−G7基質およびα−グルコシダーゼを含有するキットは、Boehringer Mannheim(カタログNo. 1054635)により製造されている。
【0112】
試薬溶液を調製するために、供給業者が推奨するように、10 mlの基質/緩衝液を50 mlの酵素/緩衝液に添加する。20μlの試料を96ウェルのマイクロタイタープレートに移し、25 ℃においてインキュベートすることによって、アッセイを実施する。25 ℃に前もって平衡化した200μlの試薬溶液を添加する。この溶液を混合し、1分間前インキュベートし、OD 405 nmにおける吸収を30秒毎に4分間にわたってELISAリーダーにより測定する。
時間従属的吸収曲線の勾配は、所定の条件下に問題のα−アミラーゼの活性に直接比例する。
【0113】
実施例
実施例 1.
親酵素と比較した、低いpH 、高温および低いカルシウムイオン濃度において改良された安定性を有するバシラス・リヘニフォルミス(Bacillus licheniformis)α−アミラーゼ変異体の、誤りがちのPCR変異誘発による、構築。
【0114】
誤りがちの PCR 変異誘発およびライブラリーの構築
親バシラス・リヘニフォルミス(Bacillus licheniformis)α−アミラーゼの低いpHおよび低いカルシウム濃度における安定性を改良するために、誤りがちのPCR変異誘発を実施した。野生型バシラス・リヘニフォルミス(Bacillus licheniformis)α−アミラーゼ遺伝子をコードするプラスミドpDN1528を鋳型として使用して、誤差の割合の増加がランダム点変異に導くPCR条件下に、下記のプライマーを使用して、この遺伝子を増幅した:22149:5’−CGA TTG CTG ACG CTG TTA TTT GCG−3’ (配列番号14)および24814:5’−GAT CAC CCG CGA TAC CGT C−3’ (配列番号15)。利用したPCR条件は次の通りであった:10 mM Tris HCl、pH 8.3、50 mM KCl、4 mM MgCl2、0.3 mM MnCl2、0.1 mM dGTP/dATP、0.5 mM dTTP/dCTP、および2.5単位のTaqポリメラーゼ/100μlの反応。
【0115】
生ずるPCRフラグメントをゲル上で精製し、下記のプライマーを使用するpDN1528のPCR増幅によりつくられたゲル精製ベクターフラグメントとともにPCRをベースとするマルチマー化工程において使用て、挿入フラグメントに対するオーバーラップを形成した:#24:5’−GAA TGT ATG TCG GCC GGC AAA ACG CCG GTG A−3’ (配列番号16)および#27:5’−GCC GCC GCT GCT GCA GAA TGA GGC AGC AAG−3’ (配列番号17)。マルチマー化反応を引き続いてバシラス・ズブチリス(B. subtilis)の中に導入した(Shafikhani他、Biotechniques、23(1997)、304−310)。
【0116】
スクリーニング
前述の誤りがちのライブラリーを低pHフィルターアッセイにおいてスクリーニングした(「材料および方法」参照)。再スクリーニング時に陽性と試験されるクローンを二次スクリーニングに付して、材料および方法に記載されている液体アッセイにおいて安定性についてスクリーニングした。
【0117】
結果:
【表2】
【0118】
【表3】
【0119】
【表4】
【0120】
実施例 2.
親酵素と比較して、低いpHおよび低いカルシウムイオン濃度において改良された安定性への実施例1から新しい(非野生型)バックボーンへの変異の選択の、位置指定変異誘発による、転移。
【0121】
位置指定変異誘発
KE493(K176R+D207V+Y402F)からの変異をLE399に転移させて、LE495を生成した。これはオーバーラップPCR法による実施した(KirchhoffおよびDesrosiers、PCR Methods and Applications、2(1933)、301−304)。
【0122】
下記のプライマーを使用するLE399鋳型の増幅により、2つのオーバーラップPCRフラグメントを発生させた:フラグメントA:#312 Mut176 5’−CCC GAA AGC TGA ACC GCA TCT ATA GGT TTC AAG GGA AGA CTT GGG ATT−3’ (配列番号18)(変異したコドンをボールドフェースで示す)および290 D207オーバーラップ 5’−AGG ATG GTC ATA ATC AAA GTC GG−3’ (配列番号19);フラグメントB:#313 Mut207 5’−CCG ACT TTG ATT ATG ACC ATC CTG TTG TCG TAG CAG AGA TTA AGA GAT GGG G−3’ (配列番号20)および#314 Mut4025’−CGA CAA TGT CAT GGT GGT CGA AAA AAT CAT GCT GTG CTC CGT ACG−3’ (配列番号21)。
【0123】
フラグメントAおよびBを等モル比で混合し、引き続いて外部のプライマーを使用して全長フラグメントを増幅した:#312 Mut176および#314 Mut402。前述したように鋳型LE399上でプライマー#296 Y402multi 5’−TTT CGA CCA CCA TGA CAT TGT CG−3’ (配列番号22)および#305 399Multi176 5’−TAT AGA TGA GGT TCA GCT TTC GGG−3’ (配列番号23)を使用してつくられたベクターPCRフラグメントとのマルチマー化反応において、このフラグメントを使用した。マルチマー化反応を引き続いてバシラス・ズブチリス(B. subtilis)の中に形質転換した。
【0124】
クローンを前述のアッセイにおいて安定性についてスクリーニングした。安定性が増加したいくつかのクローンにおけるLE493からの変異の存在を配列決定により確認した。
LE399をコードする鋳型をプライマー#312 Mut176および#314 Mut402を使用して増幅し、プライマー#296 Y402multiおよび#305 399Multi176を使用してLE399鋳型をPCR増幅して得られたベクターフラグメントとのマルチマー化反応において、生ずるPCRフラグメントを使用することによって、LE497を得た。
結果:
【0125】
【表5】
【図面の簡単な説明】
【図1】 第1図は、5つの親Termamyl様α−アミラーゼのアミノ酸配列のアラインメントである。一番左の番号は、次のように代表的アミノ酸配列を表示する:
1:配列番号4 (SP722)
2:配列番号2 (SP690)
3:配列番号10 (BAN)
4:配列番号8 (BLS)
5:配列番号6 (BSG)
【配列表】
Claims (20)
- 親α−アミラーゼの変異体α−アミラーゼにおいて、当該親α−アミラーゼは、配列番号:8に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも90%の同一性を有するアミノ酸配列を含んで成り、そしてα−アミラーゼ活性を有し、そして変異体α−アミラーゼは、下記の修飾:
D207V、
K170Q+D207V+N280S、
E132A+D207V、
D207E+E250G+H406L+L427I、
D60N+D207V+L318M、
T49I+E132V+V440A、
T49I+K176R+D207V+Y402F、
Q374R+E385V+Q393R、
N190F+A209V+Q264S、
E132P、
D207L、
D207G、
E250F、
K176R+D207+Y402F、又は
K176R+Y402F、
のいずれか1つを含み、そしてpH 4.5、5ppmのカルシウム濃度、及び90℃の温度においてインキュベーションした後、親α−アミラーゼのα−アミラーゼ活性より高いα−アミラーゼ活性を維持する、ことを特徴とする変異体α−アミラーゼ。 - 請求項1に記載のα−アミラーゼ変異体をコードするDNA配列を含んでなるDNA構築物。
- 請求項2に記載のDNA構築物を保持する組換え発現ベクター。
- 請求項2に記載のDNA構築物または請求項3に記載のベクターで形質転換された細胞。
- 微生物である、請求項4に記載の細胞。
- 前記微生物が細菌または真菌である、請求項5に記載の細胞。
- 前記細菌がグラム陽性細菌である、請求項6に記載の細胞。
- 前記グラム陽性細菌が、バシラス・ズブチリス(Bacillus subtilis)、バシラス・リヘニフォルミス(Bacillus licheniformis)、バシラス・レンツス(Bacillus lentus)、バシラス・ブレビス(Bacillus brevis)、バシラス・ステアロサーモフィラス(Bacillus sterothermophillus)、バシラス・アルカロフィルス(Bacillus alkalophilus)、バシラス・アミロリクファシエンス(Bacillus amyloliquefaciens)、バシラス・コアギュランス(Bacillus coagulans)、バシラス・サーキュランス(Bacillus circulans)、バシラス・ラウツス(Bacillus lautus)またはバシラス・スリンジェンシス(Bacillus thuringiensis)である、請求項7に記載の細胞。
- 請求項1に記載のα−アミラーゼ変異体を含んでなる組成物。
- バシラス・ステアロサーモフィラス(B. stearothermophilus)(BSG)α−アミラーゼを更に含んでなる、請求項9に記載の組成物。
- 前記α−アミラーゼ変異体と前記バシラス・ステアロサーモフィラス(B. stearothermophilus)(BSG)α−アミラーゼとの比が、1:10〜10:1である、請求項10に記載の組成物。
- 前記の比が1:2である、請求項11に記載の組成物。
- グルコアミラーゼ、プルラナーゼおよび/またはフィターゼを更に含んでなる、請求項9〜12のいずれか1項に記載の組成物。
- 請求項1に記載のα−アミラーゼ変異体を含んでなる洗浄剤組成物。
- 他の酵素を更に含んでなる、請求項14に記載の洗浄剤組成物。
- 前記他の酵素が、プロテアーゼ、リパーゼ、ペルオキシダーゼ、他のデンプン分解酵素、グルコアミラーゼ、マルトジェニックアミラーゼ、CGTアーゼ、マンナナーゼ、キチナーゼ、ラッカーゼおよび/またはセルラーゼである、請求項15に記載の洗浄剤組成物。
- 澱粉を液化のための、請求項1に記載のα−アミラーゼ変異体または請求項9〜16のいずれかに記載の組成物の使用。
- エタノールを製造するための、請求項1に記載のα−アミラーゼ変異体または請求項9〜16のいずれかに記載の組成物の使用。
- 洗浄および/または皿洗浄のための、請求項1に記載のα−アミラーゼ変異体または請求項9〜16のいずれかに記載の組成物の使用。
- 繊維材料を洗浄するための、請求項1に記載のα−アミラーゼ変異体または請求項9〜16のいずれかに記載の組成物の使用。
Applications Claiming Priority (9)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DKPA200001160 | 2000-08-01 | ||
DKPA200001160 | 2000-08-01 | ||
DKPA200001354 | 2000-09-12 | ||
DKPA200001354 | 2000-09-12 | ||
DKPA200001687 | 2000-11-10 | ||
DKPA200001687 | 2000-11-10 | ||
DKPA200100655 | 2001-04-26 | ||
DKPA200100655 | 2001-04-26 | ||
PCT/DK2001/000488 WO2002010355A2 (en) | 2000-08-01 | 2001-07-12 | Alpha-amylase mutants with altered stability |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2011161957A Division JP2011224015A (ja) | 2000-08-01 | 2011-07-25 | 変更された性質を有するα−アミラーゼ突然変異体 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2004508815A JP2004508815A (ja) | 2004-03-25 |
JP4855632B2 true JP4855632B2 (ja) | 2012-01-18 |
Family
ID=27439820
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2002516073A Expired - Fee Related JP4855632B2 (ja) | 2000-08-01 | 2001-07-12 | 変更された性質を有するα−アミラーゼ突然変異体 |
JP2011161957A Pending JP2011224015A (ja) | 2000-08-01 | 2011-07-25 | 変更された性質を有するα−アミラーゼ突然変異体 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2011161957A Pending JP2011224015A (ja) | 2000-08-01 | 2011-07-25 | 変更された性質を有するα−アミラーゼ突然変異体 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
EP (6) | EP1370648A2 (ja) |
JP (2) | JP4855632B2 (ja) |
CN (2) | CN101857858A (ja) |
AR (2) | AR028979A1 (ja) |
AU (1) | AU2001278415A1 (ja) |
CA (3) | CA2416967C (ja) |
WO (1) | WO2002010355A2 (ja) |
Families Citing this family (463)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU2002210380A1 (en) * | 2000-10-13 | 2002-04-22 | Novozymes A/S | Alpha-amylase variant with altered properties |
EP1975229A3 (en) * | 2000-10-13 | 2009-03-18 | Novozymes A/S | Alpha-amylase variant with altered properties |
EP1423513B1 (en) | 2001-05-15 | 2009-11-25 | Novozymes A/S | Alpha-amylase variant with altered properties |
EP2500423B1 (en) * | 2003-02-26 | 2015-06-17 | Danisco US Inc. | Amylases producing an altered immunogenic response and methods of making and using the same |
US7579177B2 (en) | 2003-05-30 | 2009-08-25 | Novozymes A/S | Alcohol product processes |
DE102004048591A1 (de) * | 2004-04-27 | 2005-11-24 | Henkel Kgaa | Reinigungsmittel mit Klarspültensid und einer speziellen α-Amylase |
DK1781790T3 (en) * | 2004-07-05 | 2016-01-18 | Novozymes As | ALFA-amylase variants WITH CHANGED PROPERTIES |
CN101437999A (zh) * | 2004-12-02 | 2009-05-20 | 诺维信北美公司 | 脱浆方法 |
ATE489404T1 (de) | 2004-12-22 | 2010-12-15 | Novozymes As | Hybridenzyme, bestehend aus einer ersten endoamylaseaminosäuresequenz und einem kohlenhydratbindenden modul als zweiter aminosäuresequenz |
ES2552635T3 (es) | 2004-12-22 | 2015-12-01 | Novozymes A/S | Polipéptidos con actividad de glucoamilasa y codificación de polinucleótidos |
CN100415879C (zh) * | 2005-06-22 | 2008-09-03 | 天津科技大学 | 耐酸耐高温的α-淀粉酶及其制备方法 |
EP1941049A4 (en) | 2005-09-20 | 2011-12-21 | Novozymes North America Inc | PROCESS FOR PRODUCING A FERMENTATION PRODUCT |
EP1966386A4 (en) | 2005-12-22 | 2009-06-17 | Novozymes North America Inc | METHOD FOR PRODUCING A FERMENTATION PRODUCT |
DE102006038448A1 (de) * | 2005-12-28 | 2008-02-21 | Henkel Kgaa | Enzym-haltiges Reinigungsmittel |
WO2007109750A2 (en) | 2006-03-22 | 2007-09-27 | Novozymes North America, Inc. | Fermentation processes |
JP5394922B2 (ja) | 2006-08-11 | 2014-01-22 | ノボザイムス バイオロジカルズ,インコーポレイティド | 菌培養液及び菌培養液含有組成物 |
MX307871B (es) * | 2007-02-07 | 2013-03-13 | Danisco Us Inc Genencor Div | Hidrolisis de almidon utilizando fitasa con una alfa amilasa. |
RU2009137386A (ru) | 2007-03-09 | 2011-04-20 | ДАНИСКО ЮЭс ИНК., ДЖЕНЕНКОР ДИВИЖН (US) | Варианты амилазы алкалифильных видов bacillus, композиции, содержащие варианты амилазы, и способы применения |
CA2680370C (en) | 2007-03-23 | 2017-03-14 | Sarah Mchatton | Preventing and reducing biofilm formation and planktonic proliferation |
WO2008118377A2 (en) | 2007-03-23 | 2008-10-02 | Danisco Us, Inc., Genencor Division | Enhanced amylase production by n-terminal addition to mature amylase protein |
DK3219804T3 (da) | 2007-04-24 | 2019-09-30 | Novozymes North America Inc | Afgiftning af forbehandlede lignocelluloseholdige materialer |
CN101796247B (zh) | 2007-09-03 | 2014-01-22 | 诺维信公司 | 脱毒和再循环在含木素纤维素材料的预处理中使用的洗涤溶液 |
NZ584434A (en) | 2007-11-05 | 2011-12-22 | Danisco Us Inc | VARIANTS OF BACILLUS sp. TS-23 ALPHA-AMYLASE WITH ALTERED PROPERTIES |
NZ584366A (en) * | 2007-11-05 | 2012-03-30 | Danisco Us Inc | Variants of bacillus licheniformis alpha-amylase with increased thermostability and/or decreased calcium dependence |
JP2011505121A (ja) | 2007-11-05 | 2011-02-24 | ダニスコ・ユーエス・インク | 改変された性質を有するアルファ−アミラーゼ |
MX2010008359A (es) | 2008-02-04 | 2010-08-30 | Danisco Us Inc | Variantes de alfa-amilasa ts23 con propiedades alteradas. |
EP2100947A1 (en) * | 2008-03-14 | 2009-09-16 | The Procter and Gamble Company | Automatic dishwashing detergent composition |
EP2100948A1 (en) * | 2008-03-14 | 2009-09-16 | The Procter and Gamble Company | Automatic dishwashing detergent composition |
CN102083991A (zh) | 2008-06-23 | 2011-06-01 | 诺维信公司 | 生产发酵产物的方法 |
EP2149786A1 (en) | 2008-08-01 | 2010-02-03 | Unilever PLC | Improvements relating to detergent analysis |
BRMU8903145Y1 (pt) | 2008-09-12 | 2017-05-09 | Unilever Nv | produto de lavagem embalado |
CA2736428A1 (en) | 2008-09-30 | 2010-04-08 | Novozymes North America, Inc. | Improvement of enzymatic hydrolysis of pre-treated lignocellulose-containing material with distillers dried grains |
EP2358878B1 (en) | 2008-11-20 | 2014-10-15 | Novozymes Inc. | Polypeptides having amylolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
EP2202290A1 (en) | 2008-12-23 | 2010-06-30 | Unilever PLC | A flowable laundry composition and packaging therefor |
EP2384365A2 (en) | 2008-12-30 | 2011-11-09 | Novozymes North America, Inc. | Improvement of enzymatic hydrolysis of pretreated lignocellulose-containing material with dissolved air flotation sludge |
WO2010078392A2 (en) | 2008-12-31 | 2010-07-08 | Novozymes North America, Inc. | Processes of producing fermentation products |
MX2012000322A (es) | 2009-07-17 | 2012-02-08 | Novozymes As | Metodo de analisis del decaimiento de la celulosa en la hidrolisis del material celulosico. |
AU2010276470B2 (en) | 2009-11-30 | 2015-05-14 | Novozymes A/S | Polypeptides having glucoamylase activity and polynucleotides encoding same |
AU2010276468B2 (en) | 2009-11-30 | 2015-05-14 | Novozymes A/S | Polypeptides having glucoamylase activity and polynucleotides encoding same |
DK2507371T3 (en) | 2009-12-01 | 2015-05-11 | Novozymes As | Polypeptides with glucoamylase activity and polynucleotides encoding them |
WO2011076123A1 (en) | 2009-12-22 | 2011-06-30 | Novozymes A/S | Compositions comprising boosting polypeptide and starch degrading enzyme and uses thereof |
EP2521773A1 (en) | 2010-01-04 | 2012-11-14 | Novozymes A/S | Alpha-amylases |
CN102884197A (zh) | 2010-01-29 | 2013-01-16 | 诺维信公司 | 具有酶预处理的沼气生产方法 |
WO2011100161A1 (en) | 2010-02-09 | 2011-08-18 | Novozymes North America, Inc. | Addition of alpha - glucosidase and cobalt for producing fermentation products from starch |
EP2357220A1 (en) * | 2010-02-10 | 2011-08-17 | The Procter & Gamble Company | Cleaning composition comprising amylase variants with high stability in the presence of a chelating agent |
CN113186178A (zh) | 2010-02-10 | 2021-07-30 | 诺维信公司 | 在螯合剂存在下具有高稳定性的变体和包含变体的组合物 |
US8883456B2 (en) | 2010-03-30 | 2014-11-11 | Novozymes North America, Inc. | Processes of producing a fermentation product |
EP2558484B1 (en) | 2010-04-14 | 2016-01-13 | Novozymes A/S | Polypeptides having glucoamylase activity and polynucleotides encoding same |
CN103140586A (zh) | 2010-08-02 | 2013-06-05 | 诺维信北美公司 | 产生发酵产物的方法 |
GB201015672D0 (en) | 2010-09-20 | 2010-10-27 | Unilever Plc | Improvements relating to fabric treatment compositions comprising targeted benefit agents |
DK2637515T3 (da) | 2010-11-08 | 2017-11-27 | Novozymes As | Polypeptider med glucoamylaseaktivitet og polynukleotider, som koder for dem |
WO2012064351A1 (en) | 2010-11-08 | 2012-05-18 | Novozymes A/S | Polypeptides having glucoamylase activity and polynucleotides encoding same |
CN103797125B (zh) | 2010-11-19 | 2016-12-07 | 诺维信北美公司 | 用于在氨基酸氧化酶、精氨酸酶和/或天冬酰胺酶的存在下产生发酵产物的方法 |
US20130330797A1 (en) | 2011-01-04 | 2013-12-12 | Novozymes A/S | Process for Producing Biogas from Pectin and Lignocellulose Containing Material |
US9677094B2 (en) | 2011-02-07 | 2017-06-13 | Novozymes A/S | Process of producing a fermentation product |
WO2012112718A1 (en) | 2011-02-15 | 2012-08-23 | Novozymes Biologicals, Inc. | Mitigation of odor in cleaning machines and cleaning processes |
MX2013014236A (es) | 2011-06-28 | 2014-01-23 | Novozymes As | Biogas a partir de bagazo tratado con enzimas. |
CN112662734B (zh) * | 2011-06-30 | 2024-09-10 | 诺维信公司 | 用于筛选α-淀粉酶的方法 |
CN103649307B (zh) * | 2011-06-30 | 2020-03-27 | 诺维信公司 | α-淀粉酶变体 |
EP2540824A1 (en) * | 2011-06-30 | 2013-01-02 | The Procter & Gamble Company | Cleaning compositions comprising amylase variants reference to a sequence listing |
CN103781910B (zh) | 2011-07-06 | 2019-04-23 | 诺维信公司 | α淀粉酶变体及其编码多核苷酸 |
CN109022518A (zh) | 2011-07-22 | 2018-12-18 | 诺维信北美公司 | 用于预处理纤维素材料和改进其水解的方法 |
CA2846690A1 (en) | 2011-08-26 | 2013-03-07 | Novozymes A/S | Polypeptides having glucoamylase activity and polynucleotides encoding same |
DK2748315T3 (en) | 2011-09-06 | 2018-02-05 | Novozymes North America Inc | GLUCOAMYLASE VARIETIES AND POLYNUCLEOTIDES CODING THEM |
EP2766490B1 (en) | 2011-10-11 | 2017-04-12 | Novozymes North America, Inc. | Liquefaction process for producing fermentation products |
ES2638669T3 (es) | 2011-10-11 | 2017-10-23 | Novozymes A/S | Variantes de glucoamilasa y polinucleótidos que las codifican |
EP3495479A1 (en) | 2011-10-17 | 2019-06-12 | Novozymes A/S | Alpha-amylase variants and polynucleotides encoding same |
HUE039835T2 (hu) | 2011-10-17 | 2019-02-28 | Novozymes As | Alfa-amiláz variánsok és az azokat kódoló polinukleotidok |
BR112014010045B1 (pt) | 2011-10-28 | 2021-12-21 | Danisco Us Inc | Polipeptídeo de alfa-amilase variante formadoras de malto-hexaose, composição compreendendo o mesmo, célula hospedeira, e métodos para remover uma mancha ou sujeira amilácea, para sacarificar uma composição que compreende amido, produção de uma composição alimentícia de desengomagem de um têxtil |
CA2857963C (en) | 2011-12-02 | 2022-08-30 | Novozymes North America, Inc. | Processes for producing fermentation products |
WO2013083801A2 (en) | 2011-12-09 | 2013-06-13 | Novozymes A/S | Biogas from substrates comprising animal manure and enzymes |
US20150017670A1 (en) | 2011-12-21 | 2015-01-15 | Novozymes, Inc. | Methods For Determining The Degradation Of A Biomass Material |
AU2013213601B8 (en) | 2012-01-26 | 2018-01-18 | Novozymes A/S | Use of polypeptides having protease activity in animal feed and detergents |
EP4209595A1 (en) | 2012-03-30 | 2023-07-12 | Novozymes North America, Inc. | A method of dewatering whole stillage |
AR090971A1 (es) | 2012-05-07 | 2014-12-17 | Novozymes As | Polipeptidos que tienen actividad de degradacion de xantano y polinucleotidos que los codifican |
US20150132831A1 (en) | 2012-05-16 | 2015-05-14 | Novozymes A/S | Compositions Comprising Lipase and Methods of Use Thereof |
US20150140165A1 (en) | 2012-06-20 | 2015-05-21 | Novozymes A/S | Use of polypeptides having protease activity in animal feed and detergents |
WO2014027062A1 (en) | 2012-08-17 | 2014-02-20 | Novozymes A/S | Thermostable asparaginase variants and polynucleotides encoding same |
WO2014029819A1 (en) | 2012-08-22 | 2014-02-27 | Novozymes A/S | Metalloprotease from exiguobacterium |
WO2014029821A1 (en) | 2012-08-22 | 2014-02-27 | Novozymes A/S | Metalloproteases from alicyclobacillus sp. |
WO2014087011A1 (en) | 2012-12-07 | 2014-06-12 | Novozymes A/S | Preventing adhesion of bacteria |
US9551042B2 (en) | 2012-12-21 | 2017-01-24 | Novozymes A/S | Polypeptides having protease activity and polynucleotides encoding same |
US9902946B2 (en) | 2013-01-03 | 2018-02-27 | Novozymes A/S | Alpha-amylase variants and polynucleotides encoding same |
WO2014173980A2 (en) | 2013-04-23 | 2014-10-30 | Novozymes A/S | Liquid automatic dish washing detergent compositions |
WO2014177541A2 (en) | 2013-04-30 | 2014-11-06 | Novozymes A/S | Glucoamylase variants and polynucleotides encoding same |
EP2992092B1 (en) | 2013-04-30 | 2018-04-04 | Novozymes A/S | Glucoamylase variants and polynucleotides encoding same |
JP7020778B2 (ja) | 2013-05-03 | 2022-02-16 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | 洗剤酵素のマイクロカプセル化 |
RU2712877C2 (ru) | 2013-05-14 | 2020-01-31 | Новозимс А/С | Моющие композиции |
WO2014183921A1 (en) | 2013-05-17 | 2014-11-20 | Novozymes A/S | Polypeptides having alpha amylase activity |
EP3004342B1 (en) | 2013-05-29 | 2023-01-11 | Danisco US Inc. | Novel metalloproteases |
EP3882346A1 (en) | 2013-05-29 | 2021-09-22 | Danisco US Inc. | Novel metalloproteases |
WO2014194034A2 (en) | 2013-05-29 | 2014-12-04 | Danisco Us Inc. | Novel metalloproteases |
EP3004314B1 (en) | 2013-05-29 | 2018-06-20 | Danisco US Inc. | Novel metalloproteases |
CN114634921B (zh) | 2013-06-06 | 2024-09-10 | 诺维信公司 | α-淀粉酶变体以及对其进行编码的多核苷酸 |
US20160130489A1 (en) | 2013-06-12 | 2016-05-12 | Novozymes A/S | Dust suppressant |
US10617135B2 (en) | 2013-06-26 | 2020-04-14 | Novozymes A/S | Process for manufacturing a feed composition |
US10378001B2 (en) | 2013-06-27 | 2019-08-13 | Novozymes A/S | Subtilase variants and compositions comprising same |
EP3013955A1 (en) | 2013-06-27 | 2016-05-04 | Novozymes A/S | Subtilase variants and polynucleotides encoding same |
US20160152925A1 (en) | 2013-07-04 | 2016-06-02 | Novozymes A/S | Polypeptides Having Anti-Redeposition Effect and Polynucleotides Encoding Same |
EP3022300B1 (en) | 2013-07-17 | 2018-07-11 | Novozymes A/S | Pullulanase chimeras and polynucleotides encoding same |
RU2670946C9 (ru) | 2013-07-29 | 2018-11-26 | Новозимс А/С | Варианты протеазы и кодирующие их полинуклеотиды |
WO2015014803A1 (en) | 2013-07-29 | 2015-02-05 | Novozymes A/S | Protease variants and polynucleotides encoding same |
US9951364B2 (en) | 2013-09-11 | 2018-04-24 | Novozymes A/S | Processes for producing fermentation products |
WO2015049370A1 (en) | 2013-10-03 | 2015-04-09 | Novozymes A/S | Detergent composition and use of detergent composition |
EP3514230B1 (en) | 2013-12-13 | 2021-09-22 | Danisco US Inc. | Serine proteases of bacillus species |
DK3080263T3 (da) | 2013-12-13 | 2019-10-07 | Danisco Us Inc | Serinproteaser af bacillus gibsonii-clade |
EP3083704B1 (en) | 2013-12-16 | 2022-08-17 | Nutrition & Biosciences USA 4, Inc. | Use of poly alpha-1,3-glucan ethers as viscosity modifiers |
EP3789407B1 (en) | 2013-12-18 | 2024-07-24 | Nutrition & Biosciences USA 4, Inc. | Cationic poly alpha-1,3-glucan ethers |
US10030239B2 (en) | 2013-12-20 | 2018-07-24 | Novozymes A/S | Polypeptides having protease activity and polynucleotides encoding same |
CN103834606A (zh) * | 2014-01-16 | 2014-06-04 | 北京中科星冠生物技术有限责任公司 | 一种表达耐酸高温α-淀粉酶基因突变体的工程菌株 |
CA2932239C (en) | 2014-01-22 | 2023-03-14 | Novozymes A/S | Pullulanase variants and polynucleotides encoding same |
US20150232785A1 (en) | 2014-02-14 | 2015-08-20 | E I Du Pont De Nemours And Company | Polysaccharides for viscosity modification |
CN103789285B (zh) * | 2014-02-19 | 2016-01-20 | 江南大学 | 一种热稳定性提高的淀粉酶突变体及其构建方法和应用 |
CN103805579B (zh) * | 2014-02-19 | 2016-05-18 | 江南大学 | 一种热稳定的淀粉酶突变体及其制备方法和应用 |
US20160348035A1 (en) | 2014-03-05 | 2016-12-01 | Novozymes A/S | Compositions and Methods for Improving Properties of Non-Cellulosic Textile Materials with Xyloglucan Endotransglycosylase |
US20160333292A1 (en) | 2014-03-05 | 2016-11-17 | Novozymes A/S | Compositions and Methods for Improving Properties of Cellulosic Textile Materials with Xyloglucan Endotransglycosylase |
US9695253B2 (en) | 2014-03-11 | 2017-07-04 | E I Du Pont De Nemours And Company | Oxidized poly alpha-1,3-glucan |
WO2015143144A1 (en) | 2014-03-19 | 2015-09-24 | Novozymes A/S | Method for enhancing activity of an x143 polypeptide |
EP3587569B1 (en) | 2014-03-21 | 2022-08-03 | Danisco US Inc. | Serine proteases of bacillus species |
EP3126479A1 (en) | 2014-04-01 | 2017-02-08 | Novozymes A/S | Polypeptides having alpha amylase activity |
EP3129478B1 (en) * | 2014-04-10 | 2019-03-27 | Novozymes A/S | Alpha-amylase variants and polynucleotides encoding same |
CN112899086A (zh) | 2014-04-11 | 2021-06-04 | 诺维信公司 | 洗涤剂组合物 |
EP3760713A3 (en) | 2014-05-27 | 2021-03-31 | Novozymes A/S | Lipase variants and polynucleotides encoding same |
CN106459937B (zh) | 2014-05-27 | 2024-09-10 | 诺维信公司 | 用于产生脂肪酶的方法 |
US20170121695A1 (en) | 2014-06-12 | 2017-05-04 | Novozymes A/S | Alpha-amylase variants and polynucleotides encoding same |
WO2015189372A1 (en) * | 2014-06-12 | 2015-12-17 | Novozymes A/S | Alpha-amylase variants |
US9714403B2 (en) | 2014-06-19 | 2017-07-25 | E I Du Pont De Nemours And Company | Compositions containing one or more poly alpha-1,3-glucan ether compounds |
EP3158043B1 (en) | 2014-06-19 | 2021-03-10 | Nutrition & Biosciences USA 4, Inc. | Compositions containing one or more poly alpha-1,3-glucan ether compounds |
WO2016001319A1 (en) | 2014-07-03 | 2016-01-07 | Novozymes A/S | Improved stabilization of non-protease enzyme |
EP3878960A1 (en) | 2014-07-04 | 2021-09-15 | Novozymes A/S | Subtilase variants and polynucleotides encoding same |
EP3739029A1 (en) | 2014-07-04 | 2020-11-18 | Novozymes A/S | Subtilase variants and polynucleotides encoding same |
EP3207129B1 (en) | 2014-10-17 | 2019-11-20 | Danisco US Inc. | Serine proteases of bacillus species |
DK3209788T3 (da) | 2014-10-23 | 2019-08-26 | Novozymes As | Glucoamylasevarianter og polynukleotider, som koder for dem |
EP3212781B1 (en) | 2014-10-27 | 2019-09-18 | Danisco US Inc. | Serine proteases |
EP3212782B1 (en) | 2014-10-27 | 2019-04-17 | Danisco US Inc. | Serine proteases |
EP3212783B1 (en) | 2014-10-27 | 2024-06-26 | Danisco US Inc. | Serine proteases |
DK3212662T3 (da) | 2014-10-27 | 2020-07-20 | Danisco Us Inc | Serinproteaser |
US20180010074A1 (en) | 2014-10-27 | 2018-01-11 | Danisco Us Inc. | Serine proteases of bacillus species |
WO2016079110A2 (en) | 2014-11-19 | 2016-05-26 | Novozymes A/S | Use of enzyme for cleaning |
CN107075489A (zh) | 2014-11-20 | 2017-08-18 | 诺维信公司 | 脂环酸芽孢杆菌变体以及编码它们的多核苷酸 |
CN107075493B (zh) | 2014-12-04 | 2020-09-01 | 诺维信公司 | 枯草杆菌酶变体以及编码它们的多核苷酸 |
EP4067485A3 (en) | 2014-12-05 | 2023-01-04 | Novozymes A/S | Lipase variants and polynucleotides encoding same |
EP3234121A1 (en) | 2014-12-15 | 2017-10-25 | Henkel AG & Co. KGaA | Detergent composition comprising subtilase variants |
CN107002049A (zh) | 2014-12-16 | 2017-08-01 | 诺维信公司 | 具有n‑乙酰基葡萄糖胺氧化酶活性的多肽 |
EP3034590A1 (en) | 2014-12-17 | 2016-06-22 | The Procter and Gamble Company | Method of automatic dishwashing |
EP3034596B2 (en) | 2014-12-17 | 2021-11-10 | The Procter & Gamble Company | Detergent composition |
EP3034589A1 (en) | 2014-12-17 | 2016-06-22 | The Procter and Gamble Company | Detergent composition |
EP3034588B1 (en) | 2014-12-17 | 2019-04-24 | The Procter and Gamble Company | Detergent composition |
EP3034592A1 (en) | 2014-12-17 | 2016-06-22 | The Procter and Gamble Company | Method of automatic dishwashing |
EP3034597A1 (en) | 2014-12-17 | 2016-06-22 | The Procter and Gamble Company | Detergent composition |
EP3034591A1 (en) | 2014-12-17 | 2016-06-22 | The Procter and Gamble Company | Method of automatic dishwashing |
WO2016097352A1 (en) | 2014-12-19 | 2016-06-23 | Novozymes A/S | Protease variants and polynucleotides encoding same |
EP3234123B1 (en) | 2014-12-19 | 2020-06-03 | Novozymes A/S | Protease variants and polynucleotides encoding same |
AU2015369965B2 (en) | 2014-12-23 | 2020-01-30 | Nutrition & Biosciences USA 4, Inc. | Enzymatically produced cellulose |
CN107636134A (zh) | 2015-04-10 | 2018-01-26 | 诺维信公司 | 洗涤剂组合物 |
CN107567489A (zh) | 2015-04-10 | 2018-01-09 | 诺维信公司 | 衣物洗涤方法,dna酶和洗涤剂组合物的用途 |
WO2016183509A1 (en) | 2015-05-13 | 2016-11-17 | Danisco Us Inc. | AprL-CLADE PROTEASE VARIANTS AND USES THEREOF |
WO2016184944A1 (en) | 2015-05-19 | 2016-11-24 | Novozymes A/S | Odor reduction |
EP3287513A1 (en) | 2015-06-04 | 2018-02-28 | The Procter & Gamble Company | Hand dishwashing liquid detergent composition |
ES2670044T3 (es) | 2015-06-04 | 2018-05-29 | The Procter & Gamble Company | Composición detergente líquida para lavado de vajillas a mano |
EP3101107B1 (en) | 2015-06-05 | 2019-04-24 | The Procter and Gamble Company | Compacted liquid laundry detergent composition |
EP3101102B2 (en) | 2015-06-05 | 2023-12-13 | The Procter & Gamble Company | Compacted liquid laundry detergent composition |
ES2666186T3 (es) | 2015-06-05 | 2018-05-03 | The Procter & Gamble Company | Composición detergente líquida compactada para lavado de ropa |
WO2016201040A1 (en) | 2015-06-09 | 2016-12-15 | Danisco Us Inc. | Water-triggered enzyme suspension |
EP3307427B1 (en) | 2015-06-09 | 2023-08-16 | Danisco US Inc. | Osmotic burst encapsulates |
WO2016201069A1 (en) | 2015-06-09 | 2016-12-15 | Danisco Us Inc | Low-density enzyme-containing particles |
US10858637B2 (en) | 2015-06-16 | 2020-12-08 | Novozymes A/S | Polypeptides with lipase activity and polynucleotides encoding same |
EP3310911B1 (en) | 2015-06-17 | 2023-03-15 | Danisco US Inc. | Bacillus gibsonii-clade serine proteases |
EP3310688A1 (en) | 2015-06-17 | 2018-04-25 | Novozymes A/S | Container |
US10676727B2 (en) | 2015-06-18 | 2020-06-09 | Novozymes A/S | Polypeptides having trehalase activity and the use thereof in process of producing fermentation products |
EP3106508B1 (en) | 2015-06-18 | 2019-11-20 | Henkel AG & Co. KGaA | Detergent composition comprising subtilase variants |
EP3310912B1 (en) | 2015-06-18 | 2021-01-27 | Novozymes A/S | Subtilase variants and polynucleotides encoding same |
WO2016135351A1 (en) | 2015-06-30 | 2016-09-01 | Novozymes A/S | Laundry detergent composition, method for washing and use of composition |
EP3317407B1 (en) | 2015-07-01 | 2021-05-19 | Novozymes A/S | Methods of reducing odor |
EP3950939A3 (en) | 2015-07-06 | 2022-06-08 | Novozymes A/S | Lipase variants and polynucleotides encoding same |
CA2991114A1 (en) | 2015-09-17 | 2017-03-23 | Novozymes A/S | Polypeptides having xanthan degrading activity and polynucleotides encoding same |
EP3350303B1 (en) | 2015-09-17 | 2020-04-08 | Henkel AG & Co. KGaA | Detergent compositions comprising polypeptides having xanthan degrading activity |
CA2994356A1 (en) | 2015-10-07 | 2017-04-13 | Novozymes A/S | Compositions comprising dnase polypeptides |
CN108291215A (zh) | 2015-10-14 | 2018-07-17 | 诺维信公司 | 具有蛋白酶活性的多肽以及编码它们的多核苷酸 |
US10675589B2 (en) | 2015-10-14 | 2020-06-09 | Novozymes A/S | Cleaning of water filtration membranes |
US10479981B2 (en) | 2015-10-14 | 2019-11-19 | Novozymes A/S | DNase variants |
JP6997082B2 (ja) | 2015-10-28 | 2022-02-03 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | プロテアーゼおよびアミラーゼ変異体を含む洗剤組成物 |
CN108603183B (zh) | 2015-11-05 | 2023-11-03 | 丹尼斯科美国公司 | 类芽孢杆菌属物种和芽孢杆菌属物种甘露聚糖酶 |
CN109072208A (zh) | 2015-11-05 | 2018-12-21 | 丹尼斯科美国公司 | 类芽孢杆菌属物种甘露聚糖酶 |
EP3374488B1 (en) | 2015-11-13 | 2020-10-14 | DuPont Industrial Biosciences USA, LLC | Glucan fiber compositions for use in laundry care and fabric care |
US10844324B2 (en) | 2015-11-13 | 2020-11-24 | Dupont Industrial Biosciences Usa, Llc | Glucan fiber compositions for use in laundry care and fabric care |
JP2019504932A (ja) | 2015-11-13 | 2019-02-21 | イー・アイ・デュポン・ドウ・ヌムール・アンド・カンパニーE.I.Du Pont De Nemours And Company | 洗濯ケアおよび織物ケアにおいて使用するためのグルカン繊維組成物 |
EP3380608A1 (en) | 2015-11-24 | 2018-10-03 | Novozymes A/S | Polypeptides having protease activity and polynucleotides encoding same |
WO2017093318A1 (en) | 2015-12-01 | 2017-06-08 | Novozymes A/S | Methods for producing lipases |
EP3387125B1 (en) | 2015-12-07 | 2022-10-12 | Henkel AG & Co. KGaA | Dishwashing compositions comprising polypeptides having beta-glucanase activity and uses thereof |
CN108779448B (zh) | 2015-12-09 | 2023-08-18 | 丹尼斯科美国公司 | α-淀粉酶组合变体 |
US20180362946A1 (en) | 2015-12-18 | 2018-12-20 | Danisco Us Inc. | Polypeptides with endoglucanase activity and uses thereof |
US10597645B2 (en) | 2015-12-22 | 2020-03-24 | Novozymes A/S | Process of extracting oil from thin stillage |
US20190002819A1 (en) | 2015-12-28 | 2019-01-03 | Novozymes Bioag A/S | Heat priming of bacterial spores |
MX2018008051A (es) | 2016-01-29 | 2018-08-23 | Novozymes As | Variantes de beta-glucanasa y polinucleotidos que las codifican. |
BR112018069220A2 (pt) | 2016-03-23 | 2019-01-22 | Novozymes As | uso de polipeptídeo que tem atividade de dnase para tratamento de tecidos |
WO2017174769A2 (en) | 2016-04-08 | 2017-10-12 | Novozymes A/S | Detergent compositions and uses of the same |
JP6959259B2 (ja) | 2016-04-29 | 2021-11-02 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | 洗剤組成物およびその使用 |
WO2017192692A1 (en) | 2016-05-03 | 2017-11-09 | Danisco Us Inc | Protease variants and uses thereof |
WO2017192300A1 (en) | 2016-05-05 | 2017-11-09 | Danisco Us Inc | Protease variants and uses thereof |
US11661567B2 (en) | 2016-05-31 | 2023-05-30 | Danisco Us Inc. | Protease variants and uses thereof |
EP3464538A1 (en) | 2016-05-31 | 2019-04-10 | Novozymes A/S | Stabilized liquid peroxide compositions |
CN109715792A (zh) | 2016-06-03 | 2019-05-03 | 诺维信公司 | 枯草杆菌酶变体和对其进行编码的多核苷酸 |
EP3472313B1 (en) | 2016-06-17 | 2022-08-31 | Danisco US Inc. | Protease variants and uses thereof |
EP3257931A1 (en) | 2016-06-17 | 2017-12-20 | The Procter and Gamble Company | Detergent composition |
WO2017220422A1 (en) | 2016-06-23 | 2017-12-28 | Novozymes A/S | Use of enzymes, composition and method for removing soil |
MX2018016037A (es) | 2016-06-30 | 2019-05-30 | Novozymes As | Variantes de lipasa y composiciones que comprenden tensioactivo y variante de lipasa. |
WO2018002261A1 (en) | 2016-07-01 | 2018-01-04 | Novozymes A/S | Detergent compositions |
WO2018007573A1 (en) | 2016-07-08 | 2018-01-11 | Novozymes A/S | Detergent compositions with galactanase |
WO2018011276A1 (en) | 2016-07-13 | 2018-01-18 | The Procter & Gamble Company | Bacillus cibi dnase variants and uses thereof |
US11326152B2 (en) | 2016-07-18 | 2022-05-10 | Novozymes A/S | Lipase variants, polynucleotides encoding same and the use thereof |
EP3284805B1 (en) | 2016-08-17 | 2020-02-19 | The Procter & Gamble Company | Cleaning composition comprising enzymes |
WO2018037065A1 (en) | 2016-08-24 | 2018-03-01 | Henkel Ag & Co. Kgaa | Detergent composition comprising gh9 endoglucanase variants i |
US11072765B2 (en) | 2016-08-24 | 2021-07-27 | Novozymes A/S | GH9 endoglucanase variants and polynucleotides encoding same |
WO2018037061A1 (en) | 2016-08-24 | 2018-03-01 | Novozymes A/S | Xanthan lyase variants and polynucleotides encoding same |
AU2017317563B8 (en) | 2016-08-24 | 2023-03-23 | Henkel Ag & Co. Kgaa | Detergent compositions comprising xanthan lyase variants I |
EP3519548A1 (en) | 2016-09-29 | 2019-08-07 | Novozymes A/S | Use of enzyme for washing, method for washing and warewashing composition |
WO2018060475A1 (en) | 2016-09-29 | 2018-04-05 | Novozymes A/S | Spore containing granule |
WO2018077938A1 (en) | 2016-10-25 | 2018-05-03 | Novozymes A/S | Detergent compositions |
EP3535377B1 (en) | 2016-11-01 | 2022-02-09 | Novozymes A/S | Multi-core granules |
EP3535365A2 (en) | 2016-11-07 | 2019-09-11 | Danisco US Inc. | Laundry detergent composition |
US10889836B2 (en) | 2016-11-23 | 2021-01-12 | Novozymes A/S | Yeast for ethanol production |
KR20190086540A (ko) | 2016-12-01 | 2019-07-22 | 바스프 에스이 | 조성물 중 효소의 안정화 |
WO2018108865A1 (en) | 2016-12-12 | 2018-06-21 | Novozymes A/S | Use of polypeptides |
US11946081B2 (en) | 2016-12-21 | 2024-04-02 | Danisco Us Inc. | Bacillus gibsonii-clade serine proteases |
CN110312795B (zh) | 2016-12-21 | 2024-07-23 | 丹尼斯科美国公司 | 蛋白酶变体及其用途 |
EP3577219B1 (en) | 2017-02-01 | 2023-08-23 | Novozymes A/S | Alpha-amylase variants |
WO2018169750A1 (en) | 2017-03-15 | 2018-09-20 | Danisco Us Inc | Trypsin-like serine proteases and uses thereof |
WO2018177938A1 (en) | 2017-03-31 | 2018-10-04 | Novozymes A/S | Polypeptides having dnase activity |
CN110662836B (zh) | 2017-03-31 | 2024-04-12 | 丹尼斯科美国公司 | α-淀粉酶组合变体 |
EP3601549A1 (en) | 2017-03-31 | 2020-02-05 | Novozymes A/S | Polypeptides having dnase activity |
EP3601515A1 (en) | 2017-03-31 | 2020-02-05 | Danisco US Inc. | Delayed release enzyme formulations for bleach-containing detergents |
US11149233B2 (en) | 2017-03-31 | 2021-10-19 | Novozymes A/S | Polypeptides having RNase activity |
EP3606936B1 (en) | 2017-04-03 | 2021-10-20 | Novozymes A/S | Recovery process |
CN114480034A (zh) | 2017-04-04 | 2022-05-13 | 诺维信公司 | 糖基水解酶 |
EP3607040A1 (en) | 2017-04-04 | 2020-02-12 | Novozymes A/S | Polypeptide compositions and uses thereof |
WO2018185150A1 (en) | 2017-04-04 | 2018-10-11 | Novozymes A/S | Polypeptides |
ES2728758T3 (es) | 2017-04-05 | 2019-10-28 | Henkel Ag & Co Kgaa | Composiciones de detergente que comprenden mananasas bacterianas |
EP3385362A1 (en) | 2017-04-05 | 2018-10-10 | Henkel AG & Co. KGaA | Detergent compositions comprising fungal mannanases |
MX2019011764A (es) | 2017-04-06 | 2019-11-28 | Novozymes As | Composiciones limpiadoras y usos de las mismas. |
WO2018184818A1 (en) | 2017-04-06 | 2018-10-11 | Novozymes A/S | Cleaning compositions and uses thereof |
EP3626809A1 (en) | 2017-04-06 | 2020-03-25 | Novozymes A/S | Cleaning compositions and uses thereof |
CA3058520A1 (en) | 2017-04-06 | 2018-10-11 | Novozymes A/S | Detergent compositions and uses thereof |
EP3607042A1 (en) | 2017-04-06 | 2020-02-12 | Novozymes A/S | Cleaning compositions and uses thereof |
US20200190437A1 (en) | 2017-04-06 | 2020-06-18 | Novozymes A/S | Cleaning compositions and uses thereof |
EP3607043A1 (en) | 2017-04-06 | 2020-02-12 | Novozymes A/S | Cleaning compositions and uses thereof |
WO2018184816A1 (en) | 2017-04-06 | 2018-10-11 | Novozymes A/S | Cleaning compositions and uses thereof |
EP3619304A1 (en) | 2017-05-05 | 2020-03-11 | Novozymes A/S | Compositions comprising lipase and sulfite |
EP3401385A1 (en) | 2017-05-08 | 2018-11-14 | Henkel AG & Co. KGaA | Detergent composition comprising polypeptide comprising carbohydrate-binding domain |
WO2018206535A1 (en) | 2017-05-08 | 2018-11-15 | Novozymes A/S | Carbohydrate-binding domain and polynucleotides encoding the same |
US20200157581A1 (en) | 2017-06-02 | 2020-05-21 | Novozymes A/S | Improved Yeast For Ethanol Production |
WO2018224544A1 (en) | 2017-06-08 | 2018-12-13 | Novozymes A/S | Compositions comprising polypeptides having cellulase activity and amylase activity, and uses thereof in cleaning and detergent compositions |
DK3645555T3 (da) | 2017-06-28 | 2022-03-07 | Novozymes As | Polypeptider med trehalaseaktivitet og polynukleotider, der koder for disse |
EP3645696A1 (en) | 2017-06-30 | 2020-05-06 | Danisco US Inc. | Low-agglomeration, enzyme-containing particles |
CN111108183A (zh) | 2017-06-30 | 2020-05-05 | 诺维信公司 | 酶浆液组合物 |
CA3070281A1 (en) | 2017-08-08 | 2019-02-14 | Novozymes A/S | Polypeptides having trehalase activity and the use thereof in process of producing fermentation products |
CN111212906B (zh) * | 2017-08-18 | 2024-02-02 | 丹尼斯科美国公司 | α-淀粉酶变体 |
WO2019038060A1 (en) | 2017-08-24 | 2019-02-28 | Henkel Ag & Co. Kgaa | DETERGENT COMPOSITION COMPRISING XANTHANE LYASE II VARIANTS |
US11624059B2 (en) | 2017-08-24 | 2023-04-11 | Henkel Ag & Co. Kgaa | Detergent compositions comprising GH9 endoglucanase variants II |
CN111278971A (zh) | 2017-08-24 | 2020-06-12 | 诺维信公司 | Gh9内切葡聚糖酶变体以及编码它们的多核苷酸 |
EP3673057A1 (en) | 2017-08-24 | 2020-07-01 | Novozymes A/S | Xanthan lyase variants and polynucleotides encoding same |
WO2019055455A1 (en) | 2017-09-15 | 2019-03-21 | Novozymes A/S | MIXTURES OF ENZYMES AND METHODS FOR IMPROVING THE NUTRITIONAL QUALITY OF ANIMAL FEED |
EP3684897A1 (en) | 2017-09-20 | 2020-07-29 | Novozymes A/S | Use of enzymes for improving water absorption and/or whiteness |
US11414814B2 (en) | 2017-09-22 | 2022-08-16 | Novozymes A/S | Polypeptides |
EP3461892A3 (en) | 2017-09-27 | 2019-06-12 | The Procter & Gamble Company | Detergent compositions comprising lipases |
US11332725B2 (en) | 2017-09-27 | 2022-05-17 | Novozymes A/S | Lipase variants and microcapsule compositions comprising such lipase variants |
CN111373036A (zh) | 2017-10-02 | 2020-07-03 | 诺维信公司 | 具有甘露聚糖酶活性的多肽和编码它们的多核苷酸 |
US11746310B2 (en) | 2017-10-02 | 2023-09-05 | Novozymes A/S | Polypeptides having mannanase activity and polynucleotides encoding same |
CN111542589A (zh) | 2017-10-16 | 2020-08-14 | 诺维信公司 | 低粉化颗粒 |
WO2019076800A1 (en) | 2017-10-16 | 2019-04-25 | Novozymes A/S | CLEANING COMPOSITIONS AND USES THEREOF |
EP3697881A1 (en) | 2017-10-16 | 2020-08-26 | Novozymes A/S | Low dusting granules |
EP3701037A1 (en) | 2017-10-23 | 2020-09-02 | Novozymes A/S | Processes for reducing lactic acid in a biofuel fermentation system |
WO2019081515A1 (en) | 2017-10-24 | 2019-05-02 | Novozymes A/S | COMPOSITIONS COMPRISING POLYPEPTIDES HAVING MANNANASE ACTIVITY |
EP3476936B1 (en) | 2017-10-27 | 2022-02-09 | The Procter & Gamble Company | Detergent compositions comprising polypeptide variants |
EP3701017A1 (en) | 2017-10-27 | 2020-09-02 | Novozymes A/S | Dnase variants |
DE102017125559A1 (de) | 2017-11-01 | 2019-05-02 | Henkel Ag & Co. Kgaa | Reinigungszusammensetzungen, die dispersine ii enthalten |
WO2019086532A1 (en) | 2017-11-01 | 2019-05-09 | Novozymes A/S | Methods for cleaning medical devices |
DE102017125558A1 (de) | 2017-11-01 | 2019-05-02 | Henkel Ag & Co. Kgaa | Reinigungszusammensetzungen, die dispersine i enthalten |
EP3704219B1 (en) | 2017-11-01 | 2024-01-10 | Novozymes A/S | Polypeptides and compositions comprising such polypeptides |
EP3704240A1 (en) | 2017-11-01 | 2020-09-09 | Novozymes A/S | Polypeptides and compositions comprising such polypeptides |
DE102017125560A1 (de) | 2017-11-01 | 2019-05-02 | Henkel Ag & Co. Kgaa | Reinigungszusammensetzungen, die dispersine iii enthalten |
CN111373039A (zh) | 2017-11-29 | 2020-07-03 | 丹尼斯科美国公司 | 具有改善的稳定性的枯草杆菌蛋白酶变体 |
JP2021504546A (ja) | 2017-11-29 | 2021-02-15 | ビーエイエスエフ・ソシエタス・エウロパエアBasf Se | 組成物、その製造方法および使用方法 |
EP3720954A1 (en) | 2017-12-04 | 2020-10-14 | Novozymes A/S | Lipase variants and polynucleotides encoding same |
CN111742041B (zh) | 2017-12-21 | 2023-06-06 | 丹尼斯科美国公司 | 包含耐热干燥剂的含酶的热熔细粒 |
CA3089135A1 (en) | 2018-01-29 | 2019-08-01 | Novozymes A/S | Microorganisms with improved nitrogen utilization for ethanol production |
WO2019154954A1 (en) | 2018-02-08 | 2019-08-15 | Novozymes A/S | Lipase variants and compositions thereof |
WO2019156670A1 (en) | 2018-02-08 | 2019-08-15 | Danisco Us Inc. | Thermally-resistant wax matrix particles for enzyme encapsulation |
WO2019154951A1 (en) | 2018-02-08 | 2019-08-15 | Novozymes A/S | Lipases, lipase variants and compositions thereof |
CA3107124A1 (en) | 2018-02-15 | 2019-08-22 | Novozymes A/S | Improved yeast for ethanol production |
KR20200124258A (ko) | 2018-02-23 | 2020-11-02 | 헨켈 아게 운트 코. 카게아아 | 크산탄 리아제 및 엔도글루카나제 변이체를 포함하는 세제 조성물 |
CN111770788B (zh) | 2018-03-13 | 2023-07-25 | 诺维信公司 | 使用氨基糖低聚物进行微囊化 |
WO2019180111A1 (en) | 2018-03-23 | 2019-09-26 | Novozymes A/S | Subtilase variants and compositions comprising same |
WO2019201793A1 (en) | 2018-04-17 | 2019-10-24 | Novozymes A/S | Polypeptides comprising carbohydrate binding activity in detergent compositions and their use in reducing wrinkles in textile or fabric. |
WO2019201785A1 (en) | 2018-04-19 | 2019-10-24 | Novozymes A/S | Stabilized cellulase variants |
US11661592B2 (en) | 2018-04-19 | 2023-05-30 | Novozymes A/S | Stabilized endoglucanase variants |
EP3784779A1 (en) | 2018-04-26 | 2021-03-03 | Basf Se | Lipase enzymes |
EP3788145A1 (en) | 2018-05-03 | 2021-03-10 | Basf Se | Amylase enzymes |
BR112020024347A2 (pt) | 2018-05-31 | 2021-02-23 | Novozymes A/S | processos para aumentar o crescimento e a produtividade de levedura |
WO2019238761A1 (en) | 2018-06-15 | 2019-12-19 | Basf Se | Water soluble multilayer films containing wash active chemicals and enzymes |
WO2019245705A1 (en) | 2018-06-19 | 2019-12-26 | Danisco Us Inc | Subtilisin variants |
EP3810767A1 (en) | 2018-06-19 | 2021-04-28 | Danisco US Inc. | Subtilisin variants |
CN112368363A (zh) | 2018-06-28 | 2021-02-12 | 诺维信公司 | 洗涤剂组合物及其用途 |
EP3814489A1 (en) | 2018-06-29 | 2021-05-05 | Novozymes A/S | Subtilase variants and compositions comprising same |
EP3814473A1 (en) | 2018-06-29 | 2021-05-05 | Novozymes A/S | Detergent compositions and uses thereof |
CN112352039B (zh) | 2018-07-02 | 2022-11-15 | 诺维信公司 | 清洁组合物及其用途 |
EP3818138A1 (en) | 2018-07-03 | 2021-05-12 | Novozymes A/S | Cleaning compositions and uses thereof |
WO2020008043A1 (en) | 2018-07-06 | 2020-01-09 | Novozymes A/S | Cleaning compositions and uses thereof |
WO2020008024A1 (en) | 2018-07-06 | 2020-01-09 | Novozymes A/S | Cleaning compositions and uses thereof |
EP3827088A1 (en) | 2018-07-25 | 2021-06-02 | Novozymes A/S | Enzyme-expressing yeast for ethanol production |
WO2020028443A1 (en) | 2018-07-31 | 2020-02-06 | Danisco Us Inc | Variant alpha-amylases having amino acid substitutions that lower the pka of the general acid |
US20210189295A1 (en) | 2018-08-30 | 2021-06-24 | Danisco Us Inc | Enzyme-containing granules |
EP3856882A1 (en) | 2018-09-27 | 2021-08-04 | Danisco US Inc. | Compositions for medical instrument cleaning |
US20210340466A1 (en) | 2018-10-01 | 2021-11-04 | Novozymes A/S | Detergent compositions and uses thereof |
WO2020070009A1 (en) | 2018-10-02 | 2020-04-09 | Novozymes A/S | Endonuclease 1 ribonucleases for cleaning |
WO2020070014A1 (en) | 2018-10-02 | 2020-04-09 | Novozymes A/S | Cleaning composition comprising anionic surfactant and a polypeptide having rnase activity |
WO2020070011A1 (en) | 2018-10-02 | 2020-04-09 | Novozymes A/S | Cleaning composition |
WO2020070209A1 (en) | 2018-10-02 | 2020-04-09 | Novozymes A/S | Cleaning composition |
WO2020070199A1 (en) | 2018-10-03 | 2020-04-09 | Novozymes A/S | Polypeptides having alpha-mannan degrading activity and polynucleotides encoding same |
WO2020070249A1 (en) | 2018-10-03 | 2020-04-09 | Novozymes A/S | Cleaning compositions |
JP7531965B2 (ja) | 2018-10-05 | 2024-08-13 | ベーアーエスエフ・エスエー | 液体中のヒドロラーゼを安定化する化合物 |
EP3861116A1 (en) | 2018-10-05 | 2021-08-11 | Basf Se | Compounds stabilizing hydrolases in liquids |
BR112021006317A2 (pt) | 2018-10-05 | 2021-07-06 | Basf Se | preparação de enzima, processo para preparar uma preparação de enzima estável, métodos para reduzir perda da atividade amiolítica, de preparação de uma formulação detergente, para remover manchas sensíveis à amilase e para aumentar a estabilidade no armazenamento de uma formulação detergente líquida, usos de um composto e da preparação de enzima, e, formulação detergente |
EP3677676A1 (en) | 2019-01-03 | 2020-07-08 | Basf Se | Compounds stabilizing amylases in liquids |
CA3114783A1 (en) | 2018-10-08 | 2020-04-16 | Novozymes A/S | Enzyme-expressing yeast for ethanol production |
WO2020074545A1 (en) | 2018-10-11 | 2020-04-16 | Novozymes A/S | Cleaning compositions and uses thereof |
WO2020077331A2 (en) | 2018-10-12 | 2020-04-16 | Danisco Us Inc | Alpha-amylases with mutations that improve stability in the presence of chelants |
EP3647397A1 (en) | 2018-10-31 | 2020-05-06 | Henkel AG & Co. KGaA | Cleaning compositions containing dispersins iv |
EP3647398B1 (en) | 2018-10-31 | 2024-05-15 | Henkel AG & Co. KGaA | Cleaning compositions containing dispersins v |
CN109439607B (zh) * | 2018-11-22 | 2020-09-04 | 湖南汇升生物科技有限公司 | 一种麦芽糖淀粉酶生产菌株的应用 |
US20230028935A1 (en) | 2018-11-28 | 2023-01-26 | Danisco Us Inc | Subtilisin variants having improved stability |
US20220056379A1 (en) | 2018-12-03 | 2022-02-24 | Novozymes A/S | Powder Detergent Compositions |
EP3891264A1 (en) | 2018-12-03 | 2021-10-13 | Novozymes A/S | LOW pH POWDER DETERGENT COMPOSITION |
EP3898962A2 (en) | 2018-12-21 | 2021-10-27 | Novozymes A/S | Polypeptides having peptidoglycan degrading activity and polynucleotides encoding same |
WO2020127775A1 (en) | 2018-12-21 | 2020-06-25 | Novozymes A/S | Detergent pouch comprising metalloproteases |
BR112021014873A2 (pt) | 2019-01-31 | 2021-10-05 | Novozymes A/S | Polipeptídeo, combinação de enzimas, polinucleotídeo, construto de ácido nucleico ou vetor de expressão recombinante, célula hospedeira recombinante, método de produção de um polipeptídeo, e, processo de produção de um produto de fermentação |
US20220186177A1 (en) | 2019-02-20 | 2022-06-16 | Basf Se | Industrial fermentation process for bacillus using defined medium and magnesium feed |
CN114127256A (zh) | 2019-02-20 | 2022-03-01 | 巴斯夫欧洲公司 | 用确定成分培养基和微量元素补料的芽孢杆菌工业发酵工艺 |
EP3702452A1 (en) | 2019-03-01 | 2020-09-02 | Novozymes A/S | Detergent compositions comprising two proteases |
BR112021018731A2 (pt) | 2019-03-21 | 2021-12-21 | Novozymes As | Variantes de alfa-amilase e polinucleotídeos codificando as mesmas |
WO2020193532A1 (en) | 2019-03-25 | 2020-10-01 | Basf Se | Cleaning composition having amylase enzymes |
US20220170001A1 (en) | 2019-03-25 | 2022-06-02 | Basf Se | Amylase Enzymes |
WO2020193535A2 (en) | 2019-03-25 | 2020-10-01 | Basf Se | Amylase enzymes |
EP3947701A1 (en) | 2019-04-02 | 2022-02-09 | Novozymes A/S | Process for producing a fermentation product |
CN113785039B (zh) | 2019-04-03 | 2024-06-18 | 诺维信公司 | 具有β-葡聚糖酶活性的多肽、编码其的多核苷酸及其在清洁和洗涤剂组合物中的用途 |
WO2020207944A1 (en) | 2019-04-10 | 2020-10-15 | Novozymes A/S | Polypeptide variants |
US20220186151A1 (en) | 2019-04-12 | 2022-06-16 | Novozymes A/S | Stabilized glycoside hydrolase variants |
WO2020229480A1 (en) | 2019-05-14 | 2020-11-19 | Basf Se | Compounds stabilizing hydrolases in liquids |
WO2020242858A1 (en) | 2019-05-24 | 2020-12-03 | Danisco Us Inc | Subtilisin variants and methods of use |
WO2020247582A1 (en) | 2019-06-06 | 2020-12-10 | Danisco Us Inc | Methods and compositions for cleaning |
EP3983425A1 (en) | 2019-06-13 | 2022-04-20 | Basf Se | Method of recovering a protein from fermentation broth using a divalent cation |
EP3994255A1 (en) | 2019-07-02 | 2022-05-11 | Novozymes A/S | Lipase variants and compositions thereof |
WO2021004830A1 (en) | 2019-07-05 | 2021-01-14 | Basf Se | Industrial fermentation process for microbial cells using a fed-batch pre-culture |
CN114364778B (zh) | 2019-07-12 | 2024-08-13 | 诺维信公司 | 用于洗涤剂的酶性乳剂 |
EP4004029A1 (en) | 2019-07-26 | 2022-06-01 | Novozymes A/S | Microorganisms with improved nitrogen transport for ethanol production |
EP4009807A1 (en) | 2019-08-05 | 2022-06-15 | Novozymes A/S | Enzyme blends and processes for producing a high protein feed ingredient from a whole stillage byproduct |
CA3143527A1 (en) | 2019-08-06 | 2021-02-11 | Novozymes A/S | Fusion proteins for improved enzyme expression |
CN114364795A (zh) | 2019-08-22 | 2022-04-15 | 巴斯夫欧洲公司 | 淀粉酶变体 |
WO2021037895A1 (en) | 2019-08-27 | 2021-03-04 | Novozymes A/S | Detergent composition |
US20240294852A1 (en) | 2019-08-27 | 2024-09-05 | Novozymes A/S | Composition comprising a lipase |
WO2021055395A1 (en) | 2019-09-16 | 2021-03-25 | Novozymes A/S | Polypeptides having beta-glucanase activity and polynucleotides encoding same |
WO2021053127A1 (en) | 2019-09-19 | 2021-03-25 | Novozymes A/S | Detergent composition |
EP4038170A1 (en) | 2019-10-03 | 2022-08-10 | Novozymes A/S | Polypeptides comprising at least two carbohydrate binding domains |
EP4045625A1 (en) | 2019-10-18 | 2022-08-24 | Basf Se | Storage-stable hydrolase containing liquids |
US20220403359A1 (en) | 2019-10-24 | 2022-12-22 | Danisco Us Inc | Variant maltopentaose/maltohexaose-forming alpha-amylases |
BR112021021050A2 (pt) | 2019-11-29 | 2022-09-13 | Basf Se | Composição, uso de uma composição, polímero, processo para preparar polímeros, e, método para melhorar o desempenho de limpeza de uma composição líquida de detergente |
WO2021115912A1 (en) | 2019-12-09 | 2021-06-17 | Basf Se | Formulations comprising a hydrophobically modified polyethyleneimine and one or more enzymes |
CN115175923A (zh) | 2019-12-10 | 2022-10-11 | 诺维信公司 | 用于改善的戊糖发酵的微生物 |
MX2022006438A (es) | 2019-12-16 | 2022-06-22 | Novozymes As | Procesos para obtener productos de fermentacion. |
US20230048546A1 (en) | 2019-12-20 | 2023-02-16 | Henkel Ag & Co. Kgaa | Cleaning compositions comprising dispersins vi |
CN114846128A (zh) | 2019-12-20 | 2022-08-02 | 汉高股份有限及两合公司 | 包含分散蛋白viii的清洁组合物 |
EP4077619A1 (en) | 2019-12-20 | 2022-10-26 | Henkel AG & Co. KGaA | Cleaning composition coprising a dispersin and a carbohydrase |
EP4077617A1 (en) | 2019-12-20 | 2022-10-26 | Novozymes A/S | Stabilized liquid boron-free enzyme compositions |
US20220411773A1 (en) | 2019-12-20 | 2022-12-29 | Novozymes A/S | Polypeptides having proteolytic activity and use thereof |
WO2021151536A1 (en) | 2020-01-29 | 2021-08-05 | Unilever Ip Holdings B.V. | Laundry detergent product |
EP4097226A1 (en) | 2020-01-31 | 2022-12-07 | Novozymes A/S | Mannanase variants and polynucleotides encoding same |
CN115052981A (zh) | 2020-01-31 | 2022-09-13 | 诺维信公司 | 甘露聚糖酶变体以及编码它们的多核苷酸 |
US20240228996A1 (en) | 2020-02-10 | 2024-07-11 | Novozymes A/S | Polypeptides having alpha-amylase activity and polynucleotides encoding same |
EP3892708A1 (en) | 2020-04-06 | 2021-10-13 | Henkel AG & Co. KGaA | Cleaning compositions comprising dispersin variants |
MX2022011948A (es) | 2020-04-08 | 2022-10-21 | Novozymes As | Variantes de modulos de union a carbohidratos. |
WO2021214059A1 (en) | 2020-04-21 | 2021-10-28 | Novozymes A/S | Cleaning compositions comprising polypeptides having fructan degrading activity |
EP3907271A1 (en) | 2020-05-07 | 2021-11-10 | Novozymes A/S | Cleaning composition, use and method of cleaning |
EP4158011A1 (en) | 2020-05-26 | 2023-04-05 | Novozymes A/S | Subtilase variants and compositions comprising same |
WO2021259099A1 (en) | 2020-06-24 | 2021-12-30 | Novozymes A/S | Use of cellulases for removing dust mite from textile |
EP3936593A1 (en) | 2020-07-08 | 2022-01-12 | Henkel AG & Co. KGaA | Cleaning compositions and uses thereof |
WO2022008732A1 (en) | 2020-07-10 | 2022-01-13 | Basf Se | Enhancing the activity of antimicrobial preservatives |
WO2022023250A1 (en) | 2020-07-27 | 2022-02-03 | Unilever Ip Holdings B.V. | Use of an enzyme and surfactant for inhibiting microorganisms |
CN116323889A (zh) | 2020-08-25 | 2023-06-23 | 诺维信公司 | 家族44木葡聚糖酶变体 |
US20240034960A1 (en) | 2020-08-27 | 2024-02-01 | Danisco Us Inc | Enzymes and enzyme compositions for cleaning |
MX2023002095A (es) | 2020-08-28 | 2023-03-15 | Novozymes As | Variantes de proteasa con solubilidad mejorada. |
WO2022058322A1 (en) | 2020-09-15 | 2022-03-24 | Novozymes A/S | Animal feed comprising insects or insect meal |
CN116057066A (zh) | 2020-09-22 | 2023-05-02 | 巴斯夫欧洲公司 | 包含肽醛的液体组合物 |
US20240240114A1 (en) | 2020-09-22 | 2024-07-18 | Basf Se | Improved Combination of Protease and Protease Inhibitor with Secondary Enzyme |
EP4225905A2 (en) | 2020-10-07 | 2023-08-16 | Novozymes A/S | Alpha-amylase variants |
EP4232539A2 (en) | 2020-10-20 | 2023-08-30 | Novozymes A/S | Use of polypeptides having dnase activity |
US20230399588A1 (en) | 2020-10-28 | 2023-12-14 | Novozymes A/S | Use of lipoxygenase |
WO2022090361A2 (en) | 2020-10-29 | 2022-05-05 | Novozymes A/S | Lipase variants and compositions comprising such lipase variants |
US20230399632A1 (en) | 2020-11-02 | 2023-12-14 | Novozymes A/S | Glucoamylase Variants and Polynucleotides Encoding Same |
WO2022103725A1 (en) | 2020-11-13 | 2022-05-19 | Novozymes A/S | Detergent composition comprising a lipase |
WO2022106404A1 (en) | 2020-11-18 | 2022-05-27 | Novozymes A/S | Combination of proteases |
WO2022106400A1 (en) | 2020-11-18 | 2022-05-27 | Novozymes A/S | Combination of immunochemically different proteases |
EP4015629A1 (en) | 2020-12-18 | 2022-06-22 | Basf Se | Polymer mixtures for increasing stability and performance of hydrolase-containing detergents |
WO2023225459A2 (en) | 2022-05-14 | 2023-11-23 | Novozymes A/S | Compositions and methods for preventing, treating, supressing and/or eliminating phytopathogenic infestations and infections |
EP4032966A1 (en) | 2021-01-22 | 2022-07-27 | Novozymes A/S | Liquid enzyme composition with sulfite scavenger |
EP4284905A1 (en) | 2021-01-28 | 2023-12-06 | Novozymes A/S | Lipase with low malodor generation |
CN116997642A (zh) | 2021-01-29 | 2023-11-03 | 丹尼斯科美国公司 | 清洁组合物及其相关的方法 |
EP4039806A1 (en) | 2021-02-04 | 2022-08-10 | Henkel AG & Co. KGaA | Detergent composition comprising xanthan lyase and endoglucanase variants with im-proved stability |
EP4291646A2 (en) | 2021-02-12 | 2023-12-20 | Novozymes A/S | Alpha-amylase variants |
EP4291625A1 (en) | 2021-02-12 | 2023-12-20 | Novozymes A/S | Stabilized biological detergents |
MX2023009756A (es) | 2021-02-22 | 2023-09-04 | Basf Se | Variantes de amilasa. |
EP4047088A1 (en) | 2021-02-22 | 2022-08-24 | Basf Se | Amylase variants |
WO2022189521A1 (en) | 2021-03-12 | 2022-09-15 | Novozymes A/S | Polypeptide variants |
EP4060036A1 (en) | 2021-03-15 | 2022-09-21 | Novozymes A/S | Polypeptide variants |
US20240060061A1 (en) | 2021-03-15 | 2024-02-22 | Novozymes A/S | Dnase variants |
WO2022199418A1 (en) | 2021-03-26 | 2022-09-29 | Novozymes A/S | Detergent composition with reduced polymer content |
CN117795089A (zh) | 2021-06-07 | 2024-03-29 | 诺维信公司 | 用于改善的乙醇发酵的工程化微生物 |
WO2022268885A1 (en) | 2021-06-23 | 2022-12-29 | Novozymes A/S | Alpha-amylase polypeptides |
WO2023278297A1 (en) | 2021-06-30 | 2023-01-05 | Danisco Us Inc | Variant lipases and uses thereof |
CN117916354A (zh) | 2021-09-03 | 2024-04-19 | 丹尼斯科美国公司 | 用于清洁的衣物洗涤组合物 |
WO2023039270A2 (en) | 2021-09-13 | 2023-03-16 | Danisco Us Inc. | Bioactive-containing granules |
CN118679252A (zh) | 2021-12-16 | 2024-09-20 | 丹尼斯科美国公司 | 枯草杆菌蛋白酶变体和使用方法 |
CA3241094A1 (en) | 2021-12-16 | 2023-06-22 | Jonathan LASSILA | Variant maltopentaose/maltohexaose-forming alpha-amylases |
CN118715318A (zh) | 2021-12-16 | 2024-09-27 | 丹尼斯科美国公司 | 枯草杆菌蛋白酶变体及其用途 |
EP4448751A2 (en) | 2021-12-16 | 2024-10-23 | Danisco US Inc. | Subtilisin variants and methods of use |
WO2023117895A1 (en) | 2021-12-21 | 2023-06-29 | Basf Se | Chemical product passport for production data |
WO2023116569A1 (en) | 2021-12-21 | 2023-06-29 | Novozymes A/S | Composition comprising a lipase and a booster |
EP4206309A1 (en) | 2021-12-30 | 2023-07-05 | Novozymes A/S | Protein particles with improved whiteness |
EP4234664A1 (en) | 2022-02-24 | 2023-08-30 | Evonik Operations GmbH | Composition comprising glucolipids and enzymes |
WO2023168234A1 (en) | 2022-03-01 | 2023-09-07 | Danisco Us Inc. | Enzymes and enzyme compositions for cleaning |
CN118660951A (zh) | 2022-03-02 | 2024-09-17 | 诺维信公司 | 木葡聚糖酶用于改善洗涤剂的可持续性的用途 |
AU2023228020A1 (en) | 2022-03-04 | 2024-07-11 | Novozymes A/S | Dnase variants and compositions |
AU2023250091A1 (en) | 2022-04-08 | 2024-10-03 | Novozymes A/S | Hexosaminidase variants and compositions |
WO2023233025A1 (en) | 2022-06-03 | 2023-12-07 | Unilever Ip Holdings B.V. | Liquid detergent product |
WO2023247348A1 (en) | 2022-06-21 | 2023-12-28 | Novozymes A/S | Mannanase variants and polynucleotides encoding same |
WO2023250301A1 (en) | 2022-06-21 | 2023-12-28 | Danisco Us Inc. | Methods and compositions for cleaning comprising a polypeptide having thermolysin activity |
WO2023247664A2 (en) | 2022-06-24 | 2023-12-28 | Novozymes A/S | Lipase variants and compositions comprising such lipase variants |
WO2024012894A1 (en) | 2022-07-15 | 2024-01-18 | Basf Se | Alkanolamine formates for enzyme stabilization in liquid formulations |
WO2024033136A1 (en) | 2022-08-11 | 2024-02-15 | Basf Se | Amylase variants |
WO2024033135A2 (en) | 2022-08-11 | 2024-02-15 | Basf Se | Amylase variants |
WO2024050346A1 (en) | 2022-09-02 | 2024-03-07 | Danisco Us Inc. | Detergent compositions and methods related thereto |
WO2024050339A1 (en) | 2022-09-02 | 2024-03-07 | Danisco Us Inc. | Mannanase variants and methods of use |
WO2024050343A1 (en) | 2022-09-02 | 2024-03-07 | Danisco Us Inc. | Subtilisin variants and methods related thereto |
WO2024094732A1 (en) | 2022-11-04 | 2024-05-10 | Basf Se | Polypeptides having protease activity for use in detergent compositions |
WO2024094733A1 (en) | 2022-11-04 | 2024-05-10 | Basf Se | Polypeptides having protease activity for use in detergent compositions |
WO2024094735A1 (en) | 2022-11-04 | 2024-05-10 | Basf Se | Polypeptides having protease activity for use in detergent compositions |
WO2024102698A1 (en) | 2022-11-09 | 2024-05-16 | Danisco Us Inc. | Subtilisin variants and methods of use |
WO2024121070A1 (en) | 2022-12-05 | 2024-06-13 | Novozymes A/S | Protease variants and polynucleotides encoding same |
WO2024121057A1 (en) | 2022-12-05 | 2024-06-13 | Novozymes A/S | A composition for removing body grime |
WO2024126483A1 (en) | 2022-12-14 | 2024-06-20 | Novozymes A/S | Improved lipase (gcl1) variants |
WO2024137252A1 (en) | 2022-12-19 | 2024-06-27 | Novozymes A/S | Process for reducing syrup viscosity in the backend of a process for producing a fermentation product |
WO2024137250A1 (en) | 2022-12-19 | 2024-06-27 | Novozymes A/S | Carbohydrate esterase family 3 (ce3) polypeptides having acetyl xylan esterase activity and polynucleotides encoding same |
WO2024137246A1 (en) | 2022-12-19 | 2024-06-27 | Novozymes A/S | Carbohydrate esterase family 1 (ce1) polypeptides having ferulic acid esterase and/or acetyl xylan esterase activity and polynucleotides encoding same |
WO2024137248A1 (en) | 2022-12-19 | 2024-06-27 | Novozymes A/S | Compositions comprising arabinofuranosidases and a xylanase, and use thereof for increasing hemicellulosic fiber solubilization |
WO2024137704A2 (en) | 2022-12-19 | 2024-06-27 | Novozymes A/S | Processes for producing fermentation products using fiber-degrading enzymes with engineered yeast |
EP4389864A1 (en) | 2022-12-20 | 2024-06-26 | Basf Se | Cutinases |
WO2024131880A2 (en) | 2022-12-23 | 2024-06-27 | Novozymes A/S | Detergent composition comprising catalase and amylase |
WO2024146919A1 (en) | 2023-01-05 | 2024-07-11 | Basf Se | Use of foldases to improve heterologous expression of secreted molecules |
WO2024156628A1 (en) | 2023-01-23 | 2024-08-02 | Novozymes A/S | Cleaning compositions and uses thereof |
WO2024163584A1 (en) | 2023-02-01 | 2024-08-08 | Danisco Us Inc. | Subtilisin variants and methods of use |
EP4410938A1 (en) | 2023-02-02 | 2024-08-07 | AMSilk GmbH | Automatic dishwashing composition comprising a structural polypeptide |
WO2024186819A1 (en) | 2023-03-06 | 2024-09-12 | Danisco Us Inc. | Subtilisin variants and methods of use |
WO2024191711A1 (en) | 2023-03-16 | 2024-09-19 | Nutrition & Biosciences USA 4, Inc. | Brevibacillus fermentate extracts for cleaning and malodor control and use thereof |
WO2024194245A1 (en) | 2023-03-21 | 2024-09-26 | Novozymes A/S | Detergent compositions based on biosurfactants |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1999019467A1 (en) * | 1997-10-13 | 1999-04-22 | Novo Nordisk A/S | α-AMYLASE MUTANTS |
WO2000029560A1 (en) * | 1998-11-16 | 2000-05-25 | Novozymes A/S | α-AMYLASE VARIANTS |
JP2000184882A (ja) * | 1998-12-21 | 2000-07-04 | Kao Corp | 新規アミラーゼ |
JP2000508914A (ja) * | 1996-04-30 | 2000-07-18 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | α―アミラーゼ変異体 |
JP2001054392A (ja) * | 1999-06-10 | 2001-02-27 | Kao Corp | 変異α−アミラーゼ |
Family Cites Families (31)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3912590A (en) | 1973-01-03 | 1975-10-14 | Novo Industri As | Procedure for liquefying starch |
FR2498783B1 (fr) | 1981-01-23 | 1988-03-04 | Decis Mario | Dispositif de controle automatique de presence |
JPS57174089A (en) | 1981-04-20 | 1982-10-26 | Novo Industri As | Chain dividing enzyme product |
FR2543181B1 (fr) | 1983-03-22 | 1985-07-26 | Ugine Kuhlmann | Procede ameliore de desencollage-blanchiment simultane des tissus |
US4760025A (en) | 1984-05-29 | 1988-07-26 | Genencor, Inc. | Modified enzymes and methods for making same |
US4683202A (en) | 1985-03-28 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying nucleic acid sequences |
DK122686D0 (da) | 1986-03-17 | 1986-03-17 | Novo Industri As | Fremstilling af proteiner |
DK311186D0 (da) | 1986-06-30 | 1986-06-30 | Novo Industri As | Enzymer |
DK166460B1 (da) | 1986-07-09 | 1993-05-24 | Novo Nordisk As | Blandinger af alfa-amylaser og deres anvendelse til stivelsesforflydning |
BR9006818A (pt) | 1989-06-29 | 1991-08-06 | Gist Brocades Nv | Amilases microbianas mutantes com maior estabilidade termica,acida e/ou alcalina |
EP0531372B2 (en) | 1990-05-09 | 2004-04-14 | Novozymes A/S | A cellulase preparation comprising an endoglucanase enzyme |
US5231017A (en) | 1991-05-17 | 1993-07-27 | Solvay Enzymes, Inc. | Process for producing ethanol |
DK0867504T4 (da) | 1993-02-11 | 2011-08-29 | Genencor Int | Oxidativ stabil alfa-amylase |
WO1995010603A1 (en) | 1993-10-08 | 1995-04-20 | Novo Nordisk A/S | Amylase variants |
MY111537A (en) | 1994-02-02 | 2000-07-31 | Novo Nordisk As | A combined desizing and bleaching process. |
US5605793A (en) | 1994-02-17 | 1997-02-25 | Affymax Technologies N.V. | Methods for in vitro recombination |
US5824531A (en) | 1994-03-29 | 1998-10-20 | Novid Nordisk | Alkaline bacilus amylase |
DE4422198C2 (de) | 1994-06-24 | 1997-08-28 | Audi Ag | Verfahren zum Steuern der elektrischen Beheizung eines Katalysators |
CA2211316C (en) * | 1995-02-03 | 2013-10-01 | Novo Nordisk A/S | Method of designing alpha-amylase mutants with predetermined properties |
AR000862A1 (es) * | 1995-02-03 | 1997-08-06 | Novozymes As | Variantes de una ó-amilasa madre, un metodo para producir la misma, una estructura de adn y un vector de expresion, una celula transformada por dichaestructura de adn y vector, un aditivo para detergente, composicion detergente, una composicion para lavado de ropa y una composicion para la eliminacion del |
KR19980702782A (ko) | 1995-03-09 | 1998-08-05 | 혼 마가렛 에이. | 녹말 액화 방법 |
JP3025627B2 (ja) | 1995-06-14 | 2000-03-27 | 花王株式会社 | 液化型アルカリα−アミラーゼ遺伝子 |
JP4068142B2 (ja) | 1995-08-11 | 2008-03-26 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | 新規の脂肪分解酵素 |
US6080568A (en) * | 1997-08-19 | 2000-06-27 | Genencor International, Inc. | Mutant α-amylase comprising modification at residues corresponding to A210, H405 and/or T412 in Bacillus licheniformis |
CN1261567C (zh) | 1997-11-26 | 2006-06-28 | 诺维信公司 | 热稳定的葡糖淀粉酶 |
KR100764528B1 (ko) | 1998-07-15 | 2007-10-09 | 노보자임스 에이/에스 | 글루코아밀라제 변이체 |
US6403355B1 (en) | 1998-12-21 | 2002-06-11 | Kao Corporation | Amylases |
BRPI0009362B8 (pt) * | 1999-03-30 | 2019-08-20 | Novozymes As | variante de uma alfa-amilase precursora, e, uso de uma variante de alfa-amilase |
CA2365446C (en) | 1999-03-31 | 2012-07-10 | Novozymes A/S | Polypeptides having alkaline alpha-amylase activity and nucleic acids encoding same |
WO2001004273A2 (en) | 1999-07-09 | 2001-01-18 | Novozymes A/S | Glucoamylase variant |
AU2002210380A1 (en) | 2000-10-13 | 2002-04-22 | Novozymes A/S | Alpha-amylase variant with altered properties |
-
2001
- 2001-07-12 EP EP01956424A patent/EP1370648A2/en not_active Withdrawn
- 2001-07-12 EP EP10181142A patent/EP2308979A3/en not_active Withdrawn
- 2001-07-12 EP EP09176569A patent/EP2204446A1/en not_active Withdrawn
- 2001-07-12 EP EP09178946A patent/EP2180035A1/en not_active Ceased
- 2001-07-12 EP EP10181953A patent/EP2298903A3/en not_active Withdrawn
- 2001-07-12 CN CN201010145645A patent/CN101857858A/zh active Pending
- 2001-07-12 JP JP2002516073A patent/JP4855632B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2001-07-12 CA CA2416967A patent/CA2416967C/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-07-12 CA CA2702204A patent/CA2702204C/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-07-12 WO PCT/DK2001/000488 patent/WO2002010355A2/en active Application Filing
- 2001-07-12 EP EP10181164A patent/EP2308980A3/en not_active Withdrawn
- 2001-07-12 AU AU2001278415A patent/AU2001278415A1/en not_active Abandoned
- 2001-07-12 CN CNA018156800A patent/CN1529752A/zh active Pending
- 2001-07-12 CA CA2778199A patent/CA2778199A1/en not_active Abandoned
- 2001-08-01 AR ARP010103669A patent/AR028979A1/es not_active Application Discontinuation
-
2010
- 2010-06-01 AR ARP100101923A patent/AR076940A2/es unknown
-
2011
- 2011-07-25 JP JP2011161957A patent/JP2011224015A/ja active Pending
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2000508914A (ja) * | 1996-04-30 | 2000-07-18 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | α―アミラーゼ変異体 |
WO1999019467A1 (en) * | 1997-10-13 | 1999-04-22 | Novo Nordisk A/S | α-AMYLASE MUTANTS |
WO2000029560A1 (en) * | 1998-11-16 | 2000-05-25 | Novozymes A/S | α-AMYLASE VARIANTS |
JP2000184882A (ja) * | 1998-12-21 | 2000-07-04 | Kao Corp | 新規アミラーゼ |
JP2001054392A (ja) * | 1999-06-10 | 2001-02-27 | Kao Corp | 変異α−アミラーゼ |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2004508815A (ja) | 2004-03-25 |
EP2308979A2 (en) | 2011-04-13 |
AR028979A1 (es) | 2003-05-28 |
EP1370648A2 (en) | 2003-12-17 |
CN101857858A (zh) | 2010-10-13 |
AU2001278415A1 (en) | 2002-02-13 |
EP2180035A1 (en) | 2010-04-28 |
WO2002010355A2 (en) | 2002-02-07 |
CA2778199A1 (en) | 2002-02-07 |
JP2011224015A (ja) | 2011-11-10 |
EP2308979A3 (en) | 2011-05-04 |
CA2416967C (en) | 2014-02-18 |
CA2702204C (en) | 2011-09-06 |
EP2308980A2 (en) | 2011-04-13 |
AR076940A2 (es) | 2011-07-20 |
CA2416967A1 (en) | 2002-02-07 |
EP2298903A2 (en) | 2011-03-23 |
EP2204446A1 (en) | 2010-07-07 |
CN1529752A (zh) | 2004-09-15 |
CA2702204A1 (en) | 2002-02-07 |
WO2002010355A3 (en) | 2003-09-12 |
EP2308980A3 (en) | 2011-04-27 |
EP2298903A3 (en) | 2011-10-05 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4855632B2 (ja) | 変更された性質を有するα−アミラーゼ突然変異体 | |
US7713723B1 (en) | Alpha-amylase mutants with altered properties | |
RU2231547C2 (ru) | Варианты альфа-амилазы | |
US10113157B2 (en) | Alpha-amylase variants | |
DK1781790T3 (en) | ALFA-amylase variants WITH CHANGED PROPERTIES | |
EP1263942B1 (en) | Variants with altered properties | |
EP1676913A2 (en) | Alpha-amylase variants | |
US7601527B2 (en) | α-amylase variants | |
WO2001088107A2 (en) | Alpha-amylase variants with altered 1,6-activity | |
US20020068352A1 (en) | Alpha-amylase variants with altered 1, 6-activity |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20080709 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20110125 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20110422 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20110502 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20110725 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20111004 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20111027 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20141104 Year of fee payment: 3 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |